EP0888191B1 - Testbesteck und seine verwendung - Google Patents

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EP0888191B1
EP0888191B1 EP97906969A EP97906969A EP0888191B1 EP 0888191 B1 EP0888191 B1 EP 0888191B1 EP 97906969 A EP97906969 A EP 97906969A EP 97906969 A EP97906969 A EP 97906969A EP 0888191 B1 EP0888191 B1 EP 0888191B1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
blister
test kit
test
siphon
blisters
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
EP97906969A
Other languages
English (en)
French (fr)
Other versions
EP0888191A1 (de
Inventor
Gabriel Emödi
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Intex Pharmazeutische Produkte AG
Original Assignee
Intex Pharmazeutische Produkte AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Intex Pharmazeutische Produkte AG filed Critical Intex Pharmazeutische Produkte AG
Publication of EP0888191A1 publication Critical patent/EP0888191A1/de
Application granted granted Critical
Publication of EP0888191B1 publication Critical patent/EP0888191B1/de
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

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    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/505—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes flexible containers not provided for above
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L1/00—Enclosures; Chambers
    • B01L1/52—Transportable laboratories; Field kits
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/06—Auxiliary integrated devices, integrated components
    • B01L2300/0627—Sensor or part of a sensor is integrated
    • B01L2300/0663—Whole sensors
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0809—Geometry, shape and general structure rectangular shaped
    • B01L2300/0816—Cards, e.g. flat sample carriers usually with flow in two horizontal directions

Definitions

  • the present invention relates to test kits with Test vessels, which have been shaped accordingly Plastic film and the welding of these molded Foil are formed on a base, and their use for performing analytical tests, in particular of immunological tests.
  • the blister technology is primarily used for packaging used by tablets or pills of all kinds. But it is also used for packaging biological and technical products; e.g. Bulbs or screws blistered.
  • elongated Bags made of two welded plastic foils educated; the bags are at the bottom at a point tapered and left open at the top. After filling e.g. the opening is welded to a serum sample. The tip is cut to remove the sample or slit on the side.
  • the bags are supposed to used for storing, centrifuging or sending samples become.
  • U.S. Patent No. US-A-3,660,033 (L.L. Schwartz) describes a flexible polyethylene bag for analysis e.g. one Urine sample.
  • the bag sequentially includes a sample inlet, a reservoir chamber that can be closed compared to the former and a reaction chamber which holds a reagent for contains the sample and with the reservoir chamber through a narrow, lockable channel is connected.
  • a part of Sample is fed from the reservoir into the reaction chamber, the rest can be kept or used for further testing become; for this, the connection openings are closed and the reservoir chamber along the cutting lines severed.
  • Patent application WO-A-91/16086 (Target Research Inc.) describes a clear plastic bag for analysis of physiological fluids. On the top half the edge of the bag is open for sample loading; the lower half is made up of several compartments, which are open towards the top half, but closable, at the bottom to a cutable Tips are tapered and individually, along the weld lines can be separated. In the compartments, which are arranged on at least one of the bag halves, individual samples are taken and with chemical reagents brought into contact.
  • test strip is used for many analytical tests, on porous material (e.g. cellulose, nitrocellulose) contains agents necessary for the test. In the course some test procedures the test strip has to be used once or washed several times with washing solution.
  • porous material e.g. cellulose, nitrocellulose
  • test kit eg for an ELISA test (E nzyme- L inked I mmuno S orbent A ssay) is described.
  • blister technology does not use this test kit.
  • It consists of a test strip in the form of a column made up of several layers, for example made of filter paper or plastic, which sits in a glass tube that is open at both ends.
  • One or more layers of the column carry a reagent bound to them, in particular a known antigen or the corresponding antibody; they are kept apart by inert separating layers.
  • the solution to be tested, as well as any washing solutions are drawn into the tube by applying a vacuum to the upper end of the tube.
  • the solutions are removed from the tube by applying positive pressure.
  • Patent application WO-A-93/07474 (Hawaii Chemtect International) describes an analysis kit for testing Food, in particular for the detection of fish toxins. It includes a stiff, yet flexible, non-porous, preferably waterproof pad on one to blister deformed clear plastic film is attached.
  • the Blisters contain liquid reagents. Wear halfway up Foil and underlay a crease line, which at the same time runs through the top of the blister. Will the cutlery Bent back along this line, it takes the form of a Gable roofs and can therefore stand upright be used; at the same time, the blisters disclosed at their upper ends and the reagents contained accessible for the intended reaction.
  • Offside Blisters are provided from the fold line, which are used for the Proof required test strips included. For washing the test strip becomes a "wash compartment" Blister reveals that is constructed in the same way as the reaction blister.
  • the object is achieved by a Test kit, consisting of a waterproof pad and glued or welded to a transparent one Plastic film, which to one or more, blisters arranged parallel to one another are deformed, wherein this test kit is characterized in that a Blister is shaped so that it functions as a siphon can exercise.
  • the transparent plastic film from which the Blisters are formed are suitable Polystyrene, polyvinyl chloride, Polyvinyl carbonate or polyethylene.
  • the material the film advantageously consists of hydrophobic or hydrophobic made plastic to fill the solutions to facilitate.
  • the formation of the film into blisters depends on the intended Application of the test kit.
  • the blister before the reaction as a container of an unused Test strip or after the reaction for storage of the used test strip as evidence, so to speak to archive the test strip, act; in this In this case, they preferably have an elongated shape.
  • the blister is a solid component, e.g. a sodium bicarbonate pill as Buffer substance, they can contain, at least for the part provided as a container, a round shape or a have an elongated shape other than that already mentioned.
  • the material from which the pad is made is impermeable to water.
  • the impermeability to water results from the fact that in most cases the Solutions contained in blisters are aqueous solutions or the reactions taking place in water or in an aqueous Medium take place.
  • Examples of the material of the underlay are aluminum foil, plastics such as PVC, and plasticized paper or cardboard. These materials are opaque, which is probably the more common case; however, the opacity to light is not imperative Texture characteristic of the underlay.
  • the base can in particular have a square shape exhibit.
  • the base and the film can optionally be made of consist of the same material, at least their materials should be selected such that they can be welded together and / or can be glued and when welding or glue a tight connection.
  • test kit shapeing the film and connecting to the base
  • known methods see e.g. the textbook “Packaging with plastics” by Günther Kühne, publisher Carl Hanser, Kunststoff 1974.
  • test kit according to the invention is suitable by name for performing analytical tests with test strips in e.g. chemistry, clinical chemistry, enzymology, molecular biology, cell biology and in particular of immunology.
  • Siphon blister called those intended for reactions Blisters are called reaction blisters in the following.
  • FIG. 1 shows a test kit according to the invention with only just one siphon blister 1 open at both ends 1.
  • 2a, 2b and 2c illustrate the washing process that is carried out on a test strip in the siphon blister 1.
  • FIG 3 shows a test kit according to the invention, at which the siphon blister 1 is closed before the test and for prior storage of one or more test strips 2 serves.
  • FIG. 4 shows a test kit according to the invention with a Siphon blister 1 and three reaction blisters 3, 4 and 5, with the siphon blister open and the reaction blister are closed.
  • FIG. 5a and 5b show test kits according to the invention, where test strips 2 are stored in one of the reaction blisters and the siphon blister is already open (Fig. 5a), or one or more test strips 2 in the still closed Siphon blister 1 are stored (Fig. 5b).
  • the cutlery comprises just the one siphon blister 1, which is open at both ends Container part can be enlarged to facilitate the handling of test strips).
  • the elongated, flat container part 11 of the siphon blister 1 is elongated and bent at the end facing away from the removal part 12 by a flushing part 13, so that the container part 11 and flushing part 13 together form a siphon.
  • the siphon blister is shown in an open form at the removal part 12 and at the end of the rinsing part 13, since here it mostly serves only to carry out the washing step and therefore no sterility of the siphon blister is necessary.
  • For washing FIGGS.
  • the test strip 2 is introduced into the container part 11 and, with the container part 11 at least approximately vertically aligned, washing solution is supplied, which can then flow off again via the rinsing part 13.
  • the test strip 2 is washed either with a flowing or standing washing solution, in the latter case initially only enough washing solution is poured into the container part 11 that no solution escapes via the rinsing part 13 (FIG. 2a).
  • the siphon is then emptied by adding even more washing solution (FIG. 2b) due to the siphon effect (FIG. 2c).
  • This washing method can be used for all embodiments of the test kit according to the invention.
  • the siphon blister can also initially be used to carry out a reaction by filling in a reagent solution and immersing a test strip in it.
  • test strip 1 In a second embodiment of the test kit according to the invention (FIG. 3), only one siphon blister 1 is also provided. However, it is now used to store one or more test strips 2 before the test and is initially closed.
  • the test strip (s) are placed in the preformed film and this is only then connected to the base.
  • the test strip 2 consists, for example, of a plastic strip 21 which is so long that it extends beyond the end of the container part 11 into the removal part 12, and on one side of which is at least partially an absorbent material 22, for example cellulose, nitrocellulose or very fine Glass wool, is applied.
  • the antibodies, antigens or other reaction partners required for the respective test are arranged thereon, and one or more test areas can be formed.
  • both ends of the siphon blister are cut.
  • the test kit can be pre-perforated along lines 3, 3 ', which lie at the upper or lower end of the test kit.
  • a third embodiment of the Test kits are next to the container part 11 of the Siphon blisters 1 closed reaction blisters 4, 5, 6 arranged. They each consist of a flat reaction part 41, 51, 61 and a filler 42, 52, 62 with an in Comparison to the reaction part 41, 51, 61 enlarged cross section.
  • the filler 42, 52, 62 allows the Test strips 2 by hand in the reaction part 41, 51, 61 introduce and remove it again.
  • the filler parts are preferably located 42, 52, 62 of the reaction blister and the filler 12 of the siphon blister side by side and can go along be cut in a single straight line.
  • the reaction blister 4, 5, 6 can in the range the filler parts 42, 52, 62 with printed numbers be provided and next to them or on them in the Area of the reaction parts 41, 51, 61 volumetric measuring scales be printed with which the filling level of the Reaction blister 4, 5, 6 can be determined.
  • the reaction blister can be stored before or before the test serve liquid test reagents. Test strips required if necessary can either be in one of the reaction blisters 4, 5, 6 are stored (Fig. 5a), or they can be stored in the siphon blister, which is then preferably initially is closed (Fig. 5b). One embodiment with at least one of the blisters a test strip contains is preferred.
  • the particularly preferred embodiment is in Fig. 5b shown.
  • the siphon blister 1 is initially the storage container for one or more test strips and is closed.
  • the film which is shaped into blisters, consists of polyvinyl chloride and the base from an aluminum foil. Slide and Underlay are with a usual in blister technology Glue glued.
  • the reaction blisters 4, 5, 6 can solid or liquid reagents must be stored.
  • the reaction parts 41, 51, 61 are with measuring scales (e.g. in microliter units) volumetrically calibrated and labeled that identify any reagents stored in them or the reaction blister a specific reaction step assign in the test.
  • the filler parts 42, 52, 62 are funnel-shaped.
  • the test kit has a label on which the type of sample and e.g.
  • the Date of the test can be noted.
  • the test kit along a pre-perforated Line 3 cut or broken open.
  • the siphon blister can, as it is only open at the top, as a reaction blister serve.
  • the test kit is also along a pre-perforated line 3 'cut through. After performing the test, you can the test strip e.g. im completely through the siphon effect empty siphon blister.
  • the invention also relates to the use of the Test kits for an analytical test from immunology, especially for an ELISA test.
  • the immunological tests are based on the basic reaction of an antigen with its antibody.
  • ELISA technique E L inked I mmuno S orbent A ssay nzyme
  • analyte present in the sample is then bound by an immunological reaction with this test strip-adsorbed reaction partner.
  • the unbound material is removed in a washing step.
  • test strip in the blister siphon introduced the test kit according to the invention and washed with the washing medium in the flow or in the standing washing solution incubated. It can be an embodiment of the test kit with just one siphon blister can be selected, with the test reactions then in separate Sample containers are carried out. However, it will be advantageous selected an embodiment that also reaction blister having.
  • Another immunological reagent to the washing step added that reacts with the analyte.
  • This immunological Reagent comes with an easy-to-measure label Mistake. Radioactive substances, Chromophores, fluorochromes and luminescence generating Substances used. Is particularly suitable as a marker the use of the indicator enzyme peroxidase from horseradish.
  • Peroxidase Under the influence of one bound to a test strip Peroxidase is in an aqueous solution of 4-chloro-1-naphthol, Hydrogen peroxide and buffer substance (This can be done if a test kit with reaction blisters is used, previously in one of the reaction blisters 4, 5, 6 be stored) insoluble 1,4-naphthoquinone and fixed in the test strip. Subsequent to another Washing step in the siphon blister 1 is the proportion of mark immunologically bound to the solid phase.
  • the test strips can be mono-indicators or multi-indicators his.
  • the test areas are for the mono indicators so sensitized with the immunological reaction partner, that only a single analyte is detected from the sample or quantified.
  • Such test strips are Particularly suitable for total IgE in serum or plasma samples to demonstrate and quantify.
  • the multi-indicators wear different ones on their various test areas immunological reactants with the appropriate Analytes react, so with this test strip two or more substances can be detected and quantified can.
  • the test strip for total IgE contains on the Position 1 the negative control, positions 2 and 3 the fields for the patient sample, at position 4 to 7 the IgE standards 400 kU / l, 100 kU / l, 20 kU / l and 5 kU / l.
  • test strip 2 is then in the siphon blister 1 transferred and washed with distilled water.
  • the first step is to rinse with distilled water, then the test strip is in distilled water incubated at RT for 10 minutes so that the excess (monoclonal mouse) anti human IgE antibody-peroxidase conjugate diffuse out of the pores of the nitrocellulose can, then again in the siphon blister with distilled Flushed water.
  • test strip 2 is distilled with fresh Water-filled siphon blister 1 for 5 minutes Incubated 22 ° C to the excess chromogen hydrogen peroxide solution to remove.
  • test strip is removed from the siphon blister and lightly dabbed with a soft paper towel remove any remaining liquid.
  • the dried test strip (after 30 minutes) will - according to the device instructions - in the densitometer inserted and the color intensity of the individual color spots (Dots) measured.
  • the measured color intensity of the two dots with the Analysis sample (positions 2 and 3) is through the densitometer automatically averaged and based on the color intensity of the IgE standard values carried is that present in the sample IgE concentration calculated.
  • the N.N. contains 20 kU / l IgE.
  • the reagents of the IgE inhalation allergen test set are brought to room temperature (22 ° C / 30 min.), a The blister card according to FIG. 5b is removed, according to lines 3 and 3 'cut open and the blister card and an associated Patient card labeled with the patient's name.
  • test strip 2 is then in the siphon blister 1 washed with distilled water. It will be first rinsed with distilled water, then is the test strip in distilled water for 10 minutes incubated at RT so that the unbound material of the Diffuse patient serum out of the pores of nitrocellulose can. Then it is distilled again in the siphon blister Flushed water.
  • the Dropper bottle of anti human IgE peroxidase test solution [(monoclonal Mouse) anti-human IgE-antibody-peroxidase conjugate (SBAI, Prod. N ° 9160-05) in TRIS-HCl buffer of pH 7.6 with the additives 500 ml / l heat-inactivated (56 ° C / 30 Min.) Fetal calf serum, 1 g / l phenol and 0.16 ml / l Kathon 886 wt, 14%)] up to the upper mark.
  • the washed test strip is in blister 5 during one Incubated at 22 ° C for one hour.
  • test strip 2 is then in the siphon blister 1 washed with distilled water. It will be first rinsed with distilled water, then is the test strip in distilled water for 10 minutes incubated at RT so that the unbound material of the Diffuse patient serum out of the pores of nitrocellulose can. Then it is distilled again in the siphon blister Flushed water.
  • the third blister 6 Blister card Chromogen solution [3 g / l 4-chloro-1-naphthol (Fluka, Order No. 25328) in methanol p.a. (Jannsen)] to filled in to the lower mark and then to the second Marking "substrate buffer" (11 mmol / l hydrogen peroxide in 10 mmol / l TRIS / HCl, pH 7.6 with 150 mmol / l NaCl and 0.2 g / l Kathon 886) added.
  • the test strip is made from the Siphon blister removed and with a soft paper towel dab lightly to remove the remaining wash water. With the test strip in the third blister 6 by moving the chromogen and substrate buffer solutions up and down well mixed; then the Test strips incubated in this solution for 15 minutes at RT.
  • test strip is distilled in the siphon blister Incubate water for 5 minutes at RT to remove the excess Remove chromogen.
  • test strip is removed from the siphon blister and lightly dabbed with a soft paper towel, to remove the remaining liquid.
  • the dried test strip is dried (RT / 30 min) and - according to the device instructions - placed in the densitometer and the color intensity of the individual dots is measured.
  • the N.N. patient serum contains:
  • the reagents of the IgE food allergen test set are brought to room temperature (RT / 30 min.), a blister card acc. 5b is removed, according to lines 3 and 3 ' cut open and the blister card and a corresponding Patient card labeled with the patient's name.
  • test strip 2 is then in the siphon blister 1 washed with distilled water. It will be first rinsed with distilled water, then is the test strip in distilled water for 10 minutes incubated at RT so that the unbound material of the Diffuse patient serum out of the pores of nitrocellulose can. Then it is distilled again in the siphon blister Flushed water.
  • the Dropper bottle of anti human IgE peroxidase test solution [(monoclonal Mouse, anti human IgE antibody-peroxidase conjugate (Company SBAI, Prod. No. 9160-05) in TRIS / HCl buffer of pH 7.6 with the additives 500 ml / l heat-inactivated (56 ° C / 30 Min.) Fetal calf serum, 1 g / l phenol and 0.16 ml / l Kathon 886 wt, 14%)] up to the upper mark.
  • the Washed test strips are removed from the siphon blister and incubated in blister 5 for one hour at RT.
  • test strip is then reinserted into the Siphon blister 1 transferred and washed with distilled water.
  • the first step is to rinse with distilled water, the test strip is then distilled Incubate water at RT for 10 minutes so that the excess (monoclonal mouse) anti human IgE antibody-peroxidase conjugate diffuse out of the pores of the nitrocellulose then distilled again Flushed water.
  • the third blister 6 the blister card Chromogen solution [3 g / l 4-chloro-1-naphthol (Fluka, Order No. 25328) in methanol p.a. (Jannsen)] to filled in to the lower mark and then to the second Label substrate buffer (11 mmol / l hydrogen peroxide in 10 mmol / l TRIS / HCl, pH 7.6 with 150 mmol NaCl and 0.2 g / l Kathon 886) added.
  • the test strip is made from the siphon blister 1 removed and with a soft paper towel dab lightly to remove the remaining wash water. With the test strip in the blister 6 by opening and closing Moves the chromogen and substrate buffer solutions well mixed; then the test strip is in incubated this solution for 15 minutes at RT.
  • test strip is incubated in the siphon blister filled with fresh distilled water for 5 minutes at 22 ° C. to remove the excess chromogen.
  • the test strip is removed from the siphon blister and dabbed lightly with a soft paper towel to remove the remaining liquid.
  • the test strip is dried (RT / 30 min) and - according to the device instructions - placed in the densitometer and the color intensity of the individual dots is measured. Based on the color intensity of the positive control, the measured color intensities on the different allergen spots can be calculated in RAST classes 0 - 4.
  • the patient serum NN contains:

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Description

GEBIET DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft Testbestecke mit Testgefässen, die durch entsprechende Ausformung einer Kunststoff-Folie und die Verschweissung dieser geformten Folie auf eine Unterlage gebildet sind, sowie deren Verwendung für die Durchführung von analytischen Tests, insbesonders von immunologischen Tests.
Gefässe, die wie oben beschrieben durch Verformen einer Kunststoffolie und Verschweissen dieser Folie mit einer Unterlage gebildet sind, werden in der Technik als "Blister" bezeichnet. Die Blistertechnik wird vor allem zur Konfektionierung von Tabletten oder Pillen aller Art verwendet. Sie wird aber auch eingesetzt zum Verpacken von biologischen und technischen Produkten; so werden z.B. Blumenzwiebeln oder Schrauben verblistert.
STAND DER TECHNIK
In der Analytik wurde die Blistertechnik bereits zur Durchführung von verschiedenartigen Tests eingesetzt. In der Literatur über solche Tests werden die Blister dabei allerdings nicht unter ihren modernen Namen, sondern als Beutel, Blase und dergleichen bezeichnet.
So werden gemäss FR-A-2 351 022 (R. Boutroy) längliche Beutel aus zwei aneinander verschweissten Kunststofffolien gebildet; die Beutel sind am unteren Ende zu einer Spitze verjüngt und am oberen Ende offen belassen. Nach dem Einfüllen z.B. einer Serumprobe wird die Öffnung zugeschweisst. Zur Entnahme der Probe wird die Spitze durchgeschnitten oder seitlich aufgeschlitzt. Die Beutel sollen zum Lagern, Zentrifugieren oder Versand von Proben verwendet werden.
Das US-Patent Nr. US-A-3 660 033 (L.L. Schwartz) beschreibt einen biegsamen Polyethylenbeutel zur Analyse z.B. einer Urinprobe. Der Beutel umfasst nacheinander eine Probeeinlassöffnung, eine gegenüber ersterer verschliessbare Reservoirkammer und eine Reaktionskammer, welche ein Reagens für die Probe enthält und mit der Reservoirkammer durch einen engen, verschliessbaren Kanal verbunden ist. Ein Teil der Probe wird aus der Reservoir- in die Reaktionskammer geleitet, der Rest kann aufbewahrt oder für weitere Tests verwendet werden; dazu werden die Verbindungsöffnungen verschlossen und die Reservoirkammer den Schnittlinien entlang abgetrennt.
Die Patentanmeldung WO-A-91/16086 (Target Research Inc.) beschreibt einen durchsichtigen Kunststoffbeutel zur Analyse von physiologischen Flüssigkeiten. An der oberen Hälfte des Beutels ist die Kante zum Einfüllen von Proben offen; die untere Hälfte ist zu mehreren Kompartimenten ausgebildet, welche zur oberen Hälfte hin offen, jedoch verschliessbar, am unteren Ende zu einer durchschneidbaren Spitze verjüngt sind und einzeln, den Schweisslinien entlang abgetrennt werden können. In die Kompartimente, welche auf mindestens einer der Beutelhälften angeordnet sind, werden einzelne Proben aufgenommen und mit chemischen Reagenzien in Kontakt gebracht.
Für viele analytische Tests wird ein Teststreifen verwendet, der auf porösem Material (z.B. Cellulose, Nitrocellulose) für den Test notwendige Agentien enthält. Im Verlauf mancher Testverfahren muss der Teststreifen einmal oder mehrere Male mit Waschlösung gewaschen werden.
In EP-A-0 139 373 (The Regents of the University of California) wird ein Testbesteck u.a. für einen ELISA-Test (Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay) beschrieben. Dieses Testbesteck verwendet die Blistertechnik allerdings nicht. Es besteht aus einem Teststreifen in Form einer Säule aus mehreren Schichten z.B. aus Filterpapier oder Kunststoff, die in einem an beiden Enden offenen Glasröhrchen sitzt. Eine oder mehrere Schichten der Säule tragen ein daran gebundenes Reagens, insbesondere ein bekanntes Antigen bzw. den entsprechenden Antikörper; sie werden durch inerte Trennschichten voneinander in Abstand gehalten. Die zu prüfende Lösung, wie auch allfällige Waschlösungen, werden durch Anlegen eines Vakuums am oberen Ende des Röhrchens in das Röhrchen aufgesogen. Die Lösungen werden durch Anlegen eines Überdrucks aus dem Röhrchen entfernt.
Die Patentanmeldung WO-A-93/07474 (Hawaii Chemtect International) beschreibt ein Analysebesteck zur Prüfung von Nahrungsmitteln, insbesondere zum Nachweis von Fischtoxinen. Es umfasst eine steife, jedoch biegsame, nicht poröse, vorzugsweise wasserfeste Unterlage auf der eine zu Blistern verformte durchsichtige Kunststofffolie befestigt ist. Die Blister enthalten flüssige Reagenzien. Auf halber Höhe tragen Folie und Unterlage eine Knicklinie, welche zugleich durch den oberen Teil der Blister läuft. Wird das Besteck entlang dieser Linie zurückgebogen, nimmt es die Form eines Giebeldaches und kann somit in aufrecht stehender Haltung verwendet werden; gleichzeitig werden dadurch die Blister an deren oberen Enden offengelegt und die enthaltenen Reagenzien für die vorgesehene Reaktion zugänglich. Abseits von der Knicklinie sind Blister vorgesehen, die die für den Nachweis benötigten Teststreifen enthalten. Zur Waschung der Teststreifen wird ein als "Waschkompartiment" bezeichneter Blister offenbart, der gleich gebaut ist wie die Reaktionsblister.
Allgemein erweist sich bei Untersuchungen mit einem Teststreifen der Waschschritt als problematisch, da während der Inkubation die Probe und allfällige weitere Testlösungen in die Poren des porösen Trägermaterials eindringen. Zur Abtrennung des nicht gebundenen Materials genügt ein einfaches Abwaschen des Teststreifens mit Waschflüssigkeit oder ein Eintauchen in die Waschflüssigkeit nicht. Das in EP 0 139 373 beschriebene Waschverfahren lässt durch pulsierendes Vakuum die Waschlösung mehrmals am Teststreifen auf- und abfliessen, ist jedoch technisch aufwendig. Das Waschkompartiment aus WO 93/07474 erlaubt nur Waschen des Teststreifens durch statisches Inkubieren in Waschlösung, wobei zum Wechseln der Waschlösung das gesamte Analysebesteck, inklusive der Reaktionsblister mit Reaktionslösungen, ausgeleert werden müsste.
Es ergibt sich also die Aufgabe, ein einfaches, auf der Blistertechnik beruhendes Testbesteck für Tests mit einem Teststreifen zu finden, wobei bei diesem Testbesteck zwei Varianten des Waschens des Teststreifens, das Fliessen der Waschlösung zu deren stetiger Erneuerung wie auch die Inkubation des Teststreifens im Waschmilieu zur Ermöglichung der Diffusion in die Poren, möglich sein sollen.
BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Die Aufgabe wird erfindungsgemäss gelöst durch ein Testbesteck, bestehend aus einer wasserundurchlässigen Unterlage und darauf verklebt oder verschweisst einer durchsichtigen Kunststoffolie, welche zu einem oder mehreren, parallel zueinander angeordneten Blistern verformt ist, wobei dieses Testbesteck dadurch gekennzeichnet ist, dass ein Blister so ausgeformt ist, dass er die Funktion eines Siphons ausüben kann.
Für die durchsichtige Kunststofffolie, aus welcher die Blister gebildet sind, eignen sich u.a. Polystyrol, Polyvinylchlorid, Polyvinylcarbonat oder Polyethylen. Das Material der Folie besteht mit Vorteil aus hydrophobem oder hydrophob gemachtem Kunststoff, um das Einfüllen der Lösungen zu erleichtern.
Die Ausformung der Folie zu Blistern hängt von der vorgesehenen Anwendung des Testbestecks ab. Beispielsweise können die Blister vor der Reaktion als Behälter eines unverbrauchten Teststreifens oder nach der Reaktion zum Aufbewahren des verbrauchten Teststreifens als Beleg, sozusagen zum Archivieren des Teststreifens, fungieren; in diesem Fall weisen sie vorzugsweise eine längliche Form auf. Wenn die Blister eine in fester Form vorliegende Reaktionskomponente, z.B. eine Natriumhydrogencarbonatpille als Puffersubstanz, enthalten, können sie, mindestens für den als Behälter vorgesehenen Teil, eine runde Form oder eine andere als die bereits erwähnte längliche Form aufweisen.
Das Material, aus welchem die Unterlage besteht, ist wasserundurchlässig. Die Undurchlässigkeit für Wasser ergibt sich daraus, dass in den meisten Fällen die in den Blistern enthaltenen Lösungen wässrige Lösungen sind bzw. die erfolgenden Reaktionen in Wasser oder in einem wässrigen Medium stattfinden. Beispiele für das Material der Unterlage sind Aluminiumfolie, Kunststoffe wie etwa PVC, und plastifiziertes Papier oder Karton. Diese Materialien sind lichtundurchlässig, was wohl den üblicheren Fall darstellt; die Undurchlässigkeit für das Licht ist jedoch kein zwingendes Beschaffenheitsmerkmal der Unterlage.
Die Unterlage kann insbesondere eine viereckige Form aufweisen.
Die Unterlage und die Folie können gegebenenfalls aus demselben Material bestehen, jedenfalls sollen deren Materialien derart ausgewählt sein, dass sie miteinander verschweissbar und/oder verklebbar sind und beim Verschweissen oder Verkleben eine dichte Verbindung eingehen.
Die Herstellung des erfindungsgemässen Testbestecks (Ausformen der Folie und Verbinden mit der Unterlage) erfolgt nach bekannten Verfahren; siehe z.B. das Lehrbuch "Verpacken mit Kunststoffen" von Günther Kühne, Verlag Carl Hanser, München 1974.
Das erfindungsgemässe Testbesteck ist geeignet namentlich für die Durchführung von analytischen Tests mit Teststreifen in z.B. der Chemie, der klinischen Chemie, der Enzymologie, der Molekularbiologie, der Zellbiologie und insbesondere der Immunologie.
Der Blister mit Siphon-Funktion wird im Folgenden als Siphonblister bezeichnet, die für Reaktionen vorgesehenen Blister werden im Folgenden Reaktionsblister genannt.
ERLAEUTERUNG DER FIGUREN
Fig.1 zeigt ein erfindungsgemässes Testbesteck mit nur gerade einem, an beiden Enden offenen Siphonblister 1.
Fig. 2a, 2b und 2c illustrieren das Waschverfahren, das an einem Teststreifen im Siphonblister 1 durchgeführt wird.
Fig. 3 zeigt ein erfindungsgemässes Testbesteck, bei dem der Siphonblister 1 vor dem Test verschlossen ist und zur vorgängigen Lagerung eines oder mehrerer Teststreifen 2 dient.
Fig. 4 zeigt ein erfindungsgemässes Testbesteck mit einem Siphonblister 1 und drei Reaktionsblistern 3, 4 und 5, wobei der Siphonblister offen ist und die Reaktionsblister verschlossen sind.
Fig. 5a und 5b zeigen erfindungsgemässe Testbestecke, bei denen Teststreifen 2 in einem der Reaktionsblister gelagert sind und der Siphonblister schon offen ist (Fig. 5a), oder ein oder mehrere Teststreifen 2 im noch verschlossenen Siphonblister 1 gelagert sind (Fig 5b).
BESCHREIBUNG BEVORZUGTER AUSFUEHRUNGSFORMEN
In einer ersten Ausführungsform der Erfindung (Fig. 1) umfasst das Besteck nur gerade den einen, an beiden Enden offenen Siphonblister 1. Dessen nach oben weisender Ast besteht aus einem Behälterteil 11 und, oben anschliessend, einem Entnahmeteil 12 (dessen Querschnitt gegenüber demjenigen des Behälterteils vergrössert sein kann, um die Handhabung von Teststreifen zu erleichtern). Der langgezogene, flache Behälterteil 11 des Siphonblisters 1 ist an dem dem Entnahmeteil 12 abgewandten Ende durch einen Spülteil 13 S-förmig verlängert und verbogen, so dass Behälterteil 11 und Spülteil 13 zusammen einen Siphon bilden. Der Siphonblister ist in einer am Entnahmeteil 12 und am Ende des Spülteils 13 offenen Form gezeigt, da er hier meistens nur zur Durchführung des Waschschritts dient und deshalb keine Sterilität des Siphonblisters notwendig ist. Zur Waschung (Fig. 2a, 2b, 2c) wird der Teststreifen 2 in den Behälterteil 11 eingeführt und bei zumindest annähernd vertikaler Ausrichtung des Behälterteils 11 Waschlösung zugeführt, die dann über den Spülteil 13 wieder abfliessen kann. Die Waschung des Teststreifens 2 erfolgt entweder bei durchfliessender oder bei stehender Waschlösung, wobei im letzteren Fall vorerst nur soviel Waschlösung in den Behälterteil 11 eingefüllt wird, dass über den Spülteil 13 keine Lösung entweicht (Fig. 2a). In einem zweiten Schritt wird dann der Siphon durch Einfüllen von noch mehr Waschlösung (Fig. 2b) aufgrund des Siphon-Effektes entleert (Fig. 2c). Dieses Waschverfahren ist für sämtliche Ausführungsformen des erfindungsgemässen Testbestecks anwendbar.
   Der Siphonblister kann allerdings auch vorerst zur Durchführung einer Reaktion verwendet werden, indem eine Reagenzlösung eingefüllt und darin ein Teststreifen eingetaucht wird.
In einer zweiten Ausführungsform des erfindungsgemässen Testbestecks (Fig. 3) ist ebenfalls nur gerade ein Siphonblister 1 vorgesehen. Er dient jedoch jetzt gleichzeitig zur Aufbewahrung eines oder mehrerer Teststreifen 2 vor dem Test und ist zunächst verschlossen. Bei der Herstellung dieses Testbestecks wird, analog zur Verblisterung sonstiger Waren, der oder die Teststreifen in die vorgeformte Folie gelegt und diese erst dann mit der Unterlage verbunden.
   Der Teststreifen 2 besteht beispielsweise aus einem Kunststoffstreifen 21, der so lange ist, dass er sich über das Ende des Behälterteils 11 hinaus in den Entnahmeteil 12 erstreckt, und auf dessen einer Seite zumindest teilweise ein saugfähiges Material 22, z.B. Celluloe, Nitrocellulose oder sehr feine Glaswatte, aufgetragen ist. Darauf sind die für den jeweiligen Test benötigten Antikörper, Antigene oder andersartigen Reaktionspartner angeordnet, wobei eine oder mehrere Testflächen ausgebildet sein können.
   Um beim eigentliche Test als Siphon funktionieren zu können, werden beide Enden des Siphonblisters durchgeschnitten. Zur Durchführung einer Reaktion im Siphonblister kann auch zuerst nur sein nach oben weisender Ast geöffnet werden. Um das Durchschneiden des Siphonblisters zu erleichtern kann das Testbesteck entlang Linien 3, 3', die am oberen bzw. unteren Ende des Testbestecks liegen, vorperforiert sein.
In einer dritten Ausführungsform des erfindungsgemässen Testbestecks (Fig. 4) sind neben dem Behälterteil 11 des Siphonblisters 1 geschlossene Reaktionsblister 4, 5, 6 angeordnet. Sie bestehen je aus einem flachen Reaktionsteil 41, 51, 61 und einem Einfüllteil 42, 52, 62 mit einem im Vergleich zum Reaktionsteil 41, 51, 61 vergrösserten Querschnitt. Der Einfüllteil 42, 52, 62 ermöglicht es, den Teststreifen 2 von Hand in den Reaktionsteil 41, 51, 61 einzuführen und diesem wieder zu entnehmen. Vorteilhafterweise ist er zur Erleichterung des Einfüllens von Reagenzien trichterförmig ausgebildet. Vorzugsweise liegen die Einfüllteile 42, 52, 62 der Reaktionsblister und das Einfüllteil 12 des Siphonblisters nebeneinander und können entlang einer einzigen Geraden durchgeschnitten werden. Die Gerade kann auf dem Testbesteck durch eine vorperforierte Linie 3 markiert sein. Die Reaktionsblister 4, 5, 6 können im Bereich der Einfüllteile 42, 52, 62 mit aufgedruckten Nummern versehen sein und es können neben ihnen oder auf ihnen im Bereich der Reaktionsteile 41, 51, 61 volumetrische Messskalen aufgedruckt sein, mit welchen der Füllungsstand der Reaktionsblister 4, 5, 6 bestimmt werden kann. Die Reaktionsblister können vor dem Test zur Aufbewahrung fester oder flüssiger Testreagenzien dienen. Allenfalls benötigte Teststreifen können wahlweise entweder in einem der Reaktionsblister 4, 5, 6 gelagert werden (Fig. 5a), oder sie können im Siphonblister gelagert werden, der dann vorzugsweise zunächst verschlossen ist (Fig. 5b). Eine Ausführungsform, bei der mindestens einer der Blister einen Teststreifen enthält, ist bevorzugt.
Die besonders bevorzugte Ausführungsform ist in Fig. 5b gezeigt. Der Siphonblister 1 ist zunächst der Lagerbehälter für einen oder mehrere Teststreifen und ist verschlossen. Die zu Blistern verformte Folie besteht aus Polyvinylchlorid und die Unterlage aus einer Aluminiumfolie. Folie und Unterlage sind mit einem in der Blistertechnik üblichen Klebstoff verklebt. In den Reaktionsblistern 4, 5, 6 können feste oder flüssige Reagenzien gelagert sein. Die Reaktionsteile 41, 51, 61 sind mit Messskalen (z.B. in Mikroliter-Einheiten) volumetrisch geeicht und weisen Beschriftungen auf, die allenfalls darin gelagerte Reagenzien identifizieren oder den Reaktionsblister einem bestimmten Reaktionsschritt im Test zuweisen. Die Einfüllteile 42, 52, 62 sind trichterförmig ausgebildet. Das Testbesteck weist ein Beschriftungsfeld auf, auf dem die Art der Probe und z.B. das Datum des Tests vermerkt werden kann. Zur Durchführung des Tests wird das Testbesteck entlang einer vorperforierten Linie 3 durchgeschnitten oder aufgebrochen. Der Siphonblister kann, da er nur oben offen ist, nun als Reaktionsblister dienen. Um seine Siphon-Funktion erfüllen zu könnnen, wird das Testbesteck auch entlang einer vorperforierten Linie 3' durchgeschnitten. Nach Durchführung des Test kann der Teststreifen z.B. im durch den Siphon-Effekt vollständig entleerten Siphonblister aufbewahrt werden.
Gegenstand der Erfindung ist auch die Verwendung des Testbestecks für einen analytischen Test aus der Immunologie, namentlich für einen ELISA-Test.
Die immunologischen Tests basieren auf der Grundreaktion eines Antigens mit seinem Antikörper. Für die ELISA-Technik (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) wird einer dieser Reaktionspartner (Antigen oder Antikörper) an einen Teststreifen gebunden. Anschliessend wird der in der Probe vorhandene Analyt durch eine immunologische Reaktion mit diesem teststreifen-adsorbierten Reaktionspartner gebunden. Das nicht gebundene Material wird in einem Waschschritt entfernt.
Zum Abtrennen von nicht gebundenem Material nach der immunologischen Reaktion wird der Teststreifen in dem Blister-Siphon des erfindungsgemässen Testbestecks eingeführt und mit dem Waschmilieu im Durchfluss gewaschen oder in der stehenden Waschlösung inkubiert. Es kann eine Ausführungsform des Testbestecks mit nur gerade einem Siphonblister gewählt werden, wobei dann die Testreaktionen in separaten Probebehältern durchgeführt werden. Vorteilhaft wird jedoch eine Ausführungsform gewählt, die auch Reaktionsblister aufweist.
Zum Nachweis der Antigen-Antikörper-Reaktion wird gleichzeitig mit der ersten Immunreaktion oder anschliessend an den Waschschritt ein weiteres immunologisches Reagens zugegeben, das mit dem Analyt reagiert. Dieses immunologische Reagens ist mit einer leicht zu messenden Markierung versehen. Als Markierung werden radioaktive Substanzen, Chromophore, Fluorochrome und Lumineszenz erzeugende Substanzen verwendet. Als Markierung besonders geeignet ist die Verwendung des Indikator-Enzyms Peroxidase aus Meerrettich. Unter der Einwirkung einer an einen Teststreifen gebundenen Peroxidase wird in einer wässrige Lösung von 4-Chlor-1-naphthol, Wasserstoffperoxid und Puffersubstanz (diese kann, wenn ein Testbesteck mit Reaktionsblistern verwendet wird, vorgängig in einem der Reaktionblister 4, 5, 6 gelagert sein) unlösliches 1,4-Naphthochinon gebildet und im Teststreifen fixiert. Anschliessend an einen weiteren Waschschritt im Siphon-Blister 1 wird der Anteil der immunologisch an die Festphase gebundenen Markierung gemessen.
Die Teststreifen können dabei Monoindikatoren oder Multiindikatoren sein. Bei den Monoindikatoren sind die Testflächen so mit dem immunologischen Reaktionspartner sensibilisiert, dass nur ein einziger Analyt aus der Probe nachgewiesen oder quantifiziert wird. Solche Teststreifen sind besonders geeignet, um in Serum- oder Plasmaproben das Gesamt-IgE nachzuweisen und zu quantifizieren. Die Multindikatoren tragen auf ihren diversen Testflächen verschiedene immunologische Reaktionspartner, die mit den entsprechenden Analyten reagieren, so dass mit diesem Teststreifen zwei oder mehrere Substanzen nachgewiesen und quantifiziert werden können.
Die nachfolgenden Beispiele erläutern die Erfindung; darin wird das Testbesteck mit dem durch das Laborpersonal verwendeten Name "Blisterkarte" bezeichnet.
Beispiel 1 Patientenprobe N.N. Bestimmung von Gesamt-IgE mit einer erfindungsgemässen Blisterkarte
Die Reagenzien des Gesamt-IgE-Testsets werden auf Raumtemperatur (RT = 15 bis 30°C/30 Min.) gebracht, eine Blisterkarte gemäss Fig. 5b wird entnommen, nach Linien 3 und 3' aufgeschnitten und die Blisterkarte sowie eine dazugehörige Patientenkarte mit dem Namen des Patienten (N.N.) beschriftet. Der Teststreifen für Gesamt-IgE enthält auf der Position 1 die negative Kontrolle, auf den Positionen 2 und 3 die Felder für die Patientenprobe, auf der Position 4 bis 7 die IgE-Standards 400 kU/l, 100 kU/l, 20 kU/l und 5 kU/l.
In den ersten Blister 4 der Blisterkarte werden mit einer Pipette 300 µl Patientenserum eingefüllt und mit der Tropfflasche werden 300 µl Anti human IgE-Peroxidase-Testlösung [(monoklonale Maus), Anti human IgE Antikörper-Peroxidasekonjugat (Firma SBAI, Prod. N° 9160-05) in TRIS/HCl-Puffer vom pH 7,6 mit den Zusätzen 500 ml/l hitzeinaktiviertes (56°C/30 Min.) foetales Kälberserum, 1 g/l Phenol und 0,16 ml/l Kathon 886 WT,14 %)] zum vorgelegten Serum zugegeben. Mit dem Teststreifen für Gesamt-IgE werden durch Auf- und Ab-Bewegungen im Blister die beiden Lösungen gut gemischt; anschliessend wird der Teststreifen in dieser Lösung während einer Stunde bei RT inkubiert.
Anschliessend wird der Teststreifen 2 in den Siphon-Blister 1 überführt und mit destilliertem Wasser gewaschen. Dabei wird zuerst mit destilliertem Wasser durchgespült, anschliessend wird der Teststreifen im destillierten Wasser während 10 Minuten bei RT inkubiert, damit das überschüssige (monoklonale Maus) Anti human IgE Antikörper-Peroxidasekonjugat aus den Poren der Nitrocellulose herausdiffundieren kann, dann wird nochmals im Siphonblister mit destilliertem Wasser durchgespült.
Während des Waschschritts (Fig. 2a, 2b, 2c) wird im zweiten Blister 5 der Blisterkarte Chromogen-Lösung [3 g/l 4-Chlor-1-naphthol (Fluka, Best. Nr. 25328) in Methanol pro analysi (Janssen)] bis zur unteren Markierung eingefüllt und dann bis zur zweiten Markierung "Substratpuffer" (11 mMol/l Wasserstoffperoxid in 10 mMol/l TRIS/HCl, pH 7,6 mit 150 mMol/l NaCl und 0,2 g/l Kathon 886) zugegeben. Der Teststreifen 2 wird aus dem Siphon-Blister 1 entnommen und mit einem weichen Papiertuch leicht abgetupft, um das restliche Waschwasser zu entfernen. Mit dem Teststreifen werden im dritten Blister 6 durch Auf- und Abbewegungen die Chromogen- und die Substratpuffer-Lösung gut gemischt; anschliessend wird der Teststreifen in dieser Lösung während 15 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert.
Der Teststreifen 2 wird in dem mit frischem destilliertem Wasser gefüllten Siphon-Blister 1 während 5 Minuten bei 22°C inkubiert, um die überschüssige Chromogen-Wasserstoffperoxid-Lösung zu entfernen.
Der Teststreifen wird aus dem Siphon-Blister entnommen und mit einem weichen Papiertuch leicht abgetupft, um die restliche Flüssigkeit zu entfernen.
Der getrocknete Teststreifen (nach 30 Minuten) wird - entsprechend der Geräteanleitung - in den Densitometer eingelegt und die Farbintensität der einzelnen Farbflecken (Dots) gemessen.
Die gemessene Farbintensität der beiden Dots mit der Analysenprobe (Position 2 und 3) wird durch den Densitometer automatisch gemittelt und an Hand der Farbintensität der mitgeführten IgE-Standardwerten die in der Probe vorhandene IgE-Konzentration berechnet.
Ergebnis: Das Patientenserum N.N. enthält 20 kU/l IgE.
Beispiel 2 Patientenprobe N.N. Nachweis von Inhalations-Allergen - spezifischem IgE mit einer erfindungsgemässen Blisterkarte zur serologischen Diagnose einer allergischen Erkrankung:
Die Reagenzien des IgE Inhalationsallergene-Testsets werden auf Raumtemperatur (22°C/30 Min.) gebracht, eine Blisterkarte gemäss Fig. 5b wird entnommen, nach Linien 3 und 3' aufgeschnitten und die Blisterkarte sowie eine dazugehörige Patientenkarte mit dem Namen des Patienten beschriftet. Der Teststreifen für Inhalationsallergene-IgE enthält: Position 1 = Negative Kontrolle, Position 2 = Positive Kontrolle, Position 3 = Lieschgras, Position 4 = Bleifuss, Position 5 = Ragweed, Position 6 = Roggen, Position 7 = Birke, Position 8 = Alternaria, Position 9 = Dermatophagoides pteronyssinus, Position 10 = Dermatophagoides farinae, Position 11 = Hundeepithel und Position 12 = Katzenepithel.
In den ersten Blister 4 der Blisterkarte werden mit einer Pipette 800 µl vom zu untersuchenden Patientenserum eingefüllt und der Teststreifen 2 wird in diesem Patientenserum wärend vier Stunden bei RT inkubiert.
Anschliessend wird der Teststreifen 2 in dem Siphonblister 1 mit destilliertem Wasser gewaschen. Dabei wird zuerst mit destilliertem Wasser gespült, anschliessend wird der Teststreifen in destilliertem Wasser während 10 Minuten bei RT inkubiert, damit das nicht gebundene Material des Patientenserums aus den Poren der Nitrocellulose herausdiffundieren kann. Dann wird im Siphonblister nochmals mit destilliertem Wasser durchgespült.
In den zweiten Blister 5 der Blisterkarte wird mit der Tropfflasche Anti human IgE-Peroxidase-Testlösung [(monoklonale Maus) Anti human IgE-Antikörper-Peroxidasekonjugat (Firma SBAI, Prod. N° 9160-05) in TRIS-HCl-Puffer vom pH 7,6 mit den Zusätzen 500 ml/l hitzeinaktiviertes (56°C/30 Min.) foetales Kälberserum, 1 g/l Phenol und 0,16 ml/l Kathon 886 WT, 14 %)] bis zur oberen Markierung zugegeben. Der gewaschene Teststreifen wird im Blister 5 während einer Stunde bei 22°C inkubiert.
Anschliessend wird der Teststreifen 2 in dem Siphonblister 1 mit destilliertem Wasser gewaschen. Dabei wird zuerst mit destilliertem Wasser gespült, anschliessend wird der Teststreifen in destilliertem Wasser während 10 Minuten bei RT inkubiert, damit das nicht gebundene Material des Patientenserums aus den Poren der Nitrocellulose herausdiffundieren kann. Dann wird im Siphonblister nochmals mit destilliertem Wasser durchgespült.
Während des Waschschritts wird im dritten Blister 6 der Blisterkarte Chromogen-Lösung [3 g/l 4-Chlor-1-naphthol (Fluka, Best. Nr. 25328) in Methanol p.a. (Jannsen)] bis zur unteren Markierung eingefüllt und dann bis zur zweiten Markierung "Substratpuffer" (11 mmol/l Wasserstoffperoxid in 10 mmol/l TRIS/HCl, pH 7,6 mit 150 mMol/l NaCl und 0,2 g/l Kathon 886) zugegeben. Der Teststreifen wird aus dem Siphonblister herausgenommen und mit einem weichen Papiertuch leicht abgetupft, um das restliche Waschwasser zu entfernen. Mit dem Teststreifen werden im dritten Blister 6 durch Auf- und Abbewegungen die Chromogen- und die Substratpuffer-Lösung gut gemischt; anschliessend wird der Teststreifen in dieser Lösung während 15 Minuten bei RT inkubiert.
Der Teststreifen wird im Siphonblister mit destilliertem Wasser während 5 Minuten bei RT inkubiert, um das überschüssige Chromogen zu entfernen.
Der Teststreifen wird aus dem Siphonblister herausgenommen und mit einem weichen Papiertuch leicht abgetupft, um die restliche Flüssigkeit zu entfernen.
Der getrocknete Teststreifen wird getrocknet (RT/30 min) und - entsprechend der Geräteanleitung - in den Densitometer eingelegt und die Farbintensität der einzelnen Dots gemessen. An Hand der Farbintensität der Positiv Kontrolle können die gemessenen Farbintensitäten auf den verschiedenen Allergen-Spots die RAST-Klassen 0 - 4 berechnet werden (RAST = Radiological Allergy Sorbent Test).
Resultate: Das Patientenserum N.N.enthält:
Lieschgras = RAST-Klasse 1
Bleifuss = RAST-Klasse 0
Ragweed = RAST-Klasse 3
Roggen = RAST-Klasse 1
Birke = RAST-Klasse 0
Alternaria = RAST-Klasse 0
Dermatophagoides pteronyssinus = RAST-Klasse 0
Dermatophagoides farinae = RAST-Klasse 0
Hundeepithel = RAST-Klasse 1
Katzenepithel = RAST-Klasse 4
Beispiel 3 Patientenprobe N.N. Nachweis von Nahrungsmittel-Allergen - spezifischem IgE mit einer erfindungsgemässen Blisterkarte zur serologischen Diagnose einer allergischen Erkrankung:
Die Reagenzien des IgE Nahrungsmittelallergene-Testsets werden auf Raumtemperatur (RT/30 Min.) gebracht, eine Blisterkarte gem. Fig 5b wird entnommen, nach Linien 3 und 3' aufgeschnitten und die Blisterkarte sowie eine dazugehörige Patientenkarte mit dem Namen des Patienten beschriftet. Der Teststreifen für Nahrungsmittelallergene-IgE enthält: Position 1 = Negative Kontrolle, Position 2 = Positive Kontrolle, Position 3 = Weizen, Position 4 = Sojabohnen, Position 5 = Mais, Position 6 = Haselnuss, Position 7 = Erdnuss, Position 8 = Milch, Position 9 = Ei, Position 10 = Kabeljau, Position 11 = Tomate und Position 12 = Orange.
In den ersten Blister 4 der Blisterkarte werden mit einer Pipette 800 µl vom zu untersuchenden Patientenserum eingefüllt; anschliessend wird der Teststreifen 2 in diesem Patientenserum während vier Stunden bei RT inkubiert.
Anschliessend wird der Teststreifen 2 in dem Siphonblister 1 mit destilliertem Wasser gewaschen. Dabei wird zuerst mit destilliertem Wasser gespült, anschliessend wird der Teststreifen in destilliertem Wasser während 10 Minuten bei RT inkubiert, damit das nicht gebundene Material des Patientenserums aus den Poren der Nitrocellulose herausdiffundieren kann. Dann wird im Siphonblister nochmals mit destilliertem Wasser durchgespült.
In den zweiten Blister 5 der Blisterkarte wird mit der Tropfflasche Anti human IgE-Peroxidase-Testlösung [(monoklonale Maus, Anti human IgE Antikörper-Peroxidasekonjugat (Firma SBAI, Prod. Nr. 9160-05) in TRIS/HCI-Puffer vom pH 7,6 mit den Zusätzen 500 ml/l hitzeinaktiviertes (56°C/30 Min.) foetales Kälberserum, 1 g/l Phenol und 0,16 ml/l Kathon 886 WT, 14%)] bis zur oberen Markierung zugegeben. Der gewaschene Teststreifen wird aus dem Siphonblister entnommen und im Blister 5 während einer Stunde bei RT inkubiert.
Anschliessend wird der Teststreifen von neuem in den Siphon-Blister 1 überführt und mit destilliertem Wasser gewaschen. Dabei wird zuerst mit destilliertem Wasser durchgespült, anschliessend wird der Teststreifen im destillierten Wasser während 10 Minuten bei RT inkubiert, damit das überschüssige (monoklonale Maus) Anti human IgE Antikörper-Peroxidasekonjugat aus den Poren der Nitrocellulose herausdiffundieren kann, dann wird nochmals mit destilliertem Wasser durchgespült.
Während des Waschschrittes wird im dritten Blister 6 der Blisterkarte Chromogen-Lösung [3 g/l 4-Chlor-1-naphthol (Fluka, Best. Nr. 25328) in Methanol p.a. (Jannsen)] bis zur unteren Markierung eingefüllt und dann bis zur zweiten Markierung Substratpuffer (11 mMol/l Wasserstoffperoxid in 10 mMoll/l TRIS/HCl, pH 7,6 mit 150 mMol NaCl und 0,2 g/l Kathon 886) zugegeben. Der Teststreifen wird aus dem Siphon-Blister 1 entnommen und mit einem weichen Papiertuch leicht abgetupft, um das restliche Waschwasser zu entfernen. Mit dem Teststreifen werden im Blister 6 durch Aufund Abbewegungen die Chromogen- und die Substratpuffer-Lösung gut gemischt; anschliessend wird der Teststreifen in dieser Lösung während 15 Minuten bei RT inkubiert.
Der Teststreifen wird in dem mit frischem destilliertem Wasser gefüllten Siphon-Blister während 5 Minuten bei 22°C inkubiert, um das überschüssige Chromogen zu entfernen.
   Der Teststreifen wird aus dem Siphon-Blister entnommen und mit einem weichen Papiertuch leicht abgetupft, um die restliche Flüssigkeit zu entfernen.
   Der Teststreifen wird getrocknet (RT / 30 min) und - entsprechend der Geräteanleitung - in den Densitometer eingelegt und die Farbintensität der einzelnen Dots gemessen. An Hand der Farbintensität der Positivkontrolle können die gemessenen Farbintensitäten auf den verschiedenen Allergen-Spots die RAST-Klassen 0 - 4 berechnet werden.
Resultat: Das Patientenserum N.N. enthält:
Weizen = RAST-Klasse 2
Sojabohnen = RAST-Klasse 2
Mais = RAST-Klasse 1
Haselnuss = RAST-Klasse 2
Erdnuss = RAST-Klasse 3
Milch = RAST-Klasse 0
Ei = RAST-Klasse 0
Kabeljau = RAST-Klasse 0
Tomate = RAST-Klasse 1
Orange = RAST-Klasse 1

Claims (10)

  1. Testbesteck zur Durchführung analytischer Tests, bestehend aus einer wasserundurchlässigen Unterlage und darauf verklebt oder verschweisst einer durchsichtigen Kunststofffolie, welche zu einem oder mehreren, parallel zueinander angeordneten Blistern verformt ist, dadurch gekennzeichnet, dass ein Blister so ausgeformt ist, dass er die Funktion eines Siphons ausüben kann.
  2. Testbesteck nach Anspruch 1, wobei mindestens einer der Blister einen Teststreifen 2 enthält.
  3. Testbesteck nach Anspruch 2, wobei der oben weisende Ast des Blisters 1 mit Funktion eines Siphons aus einem Behälterteil 11 und, oben anschliessend, einem Entnahmeteil 12 mit gegenüber dem Behälterteil 11 vergrössertem Querschnitt besteht.
  4. Testbesteck nach Anspruch 2 oder 3, wobei die übrigen Blister, welche nicht die Funktion eines Siphons ausüben können, aus einem unteren, langgezogenen Reaktionsteil sowie einem oberen Einfüllteil mit gegenüber dem Reaktionsteil vergrössertem, vorzugsweise trichterförmigem Querschnitt bestehen.
  5. Testbesteck nach Anspruch 4, wobei der Entnahmeteil 12 des Blisters 1 mit Funktion eines Siphons und die Einfüllteile nebeneinander liegen und entlang einer einzigen Geraden durchgeschnitten werden können.
  6. Testbesteck nach Anspruch 5, wobei das Durchschneiden mittels einer vorperforierten Linie 3 entlang der besagten Geraden erleichtert ist.
  7. Testbesteck nach einem der Ansprüche 1 bis 6, wobei neben oder auf den Blistern, die nicht die Funktion eines Siphons haben können, im Bereich der Reaktionsteile volumetrische Messkalen aufgedruckt sind.
  8. Testbesteck nach einem der Ansprüche 2 bis 6, wobei der Teststreifen (2) einen Indikator zum Nachweis bzw. zur Quantifizierung von Gesamt-IgE, von gegenüber Inhalantien-Allergen spezifischem IgE oder von gegenüber Nahrungsmittel-Allergen spezifischem IgE trägt.
  9. Testbesteck nach einem der Ansprüche 1 bis 7, wobei die Folie, aus welcher die Blister verformt sind, aus einem hydrophoben oder hydrophob gemachten Kunststoff besteht.
  10. Verwendung des Testbestecks nach Anspruch 1 zur Durchführung eines ELISA-Tests.
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