EA038773B1 - Индольные производные и их применение в качестве ингибиторов протеинкиназы - Google Patents

Индольные производные и их применение в качестве ингибиторов протеинкиназы Download PDF

Info

Publication number
EA038773B1
EA038773B1 EA201892020A EA201892020A EA038773B1 EA 038773 B1 EA038773 B1 EA 038773B1 EA 201892020 A EA201892020 A EA 201892020A EA 201892020 A EA201892020 A EA 201892020A EA 038773 B1 EA038773 B1 EA 038773B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
methyl
phenyl
amino
carboxylate
methylene
Prior art date
Application number
EA201892020A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201892020A1 (ru
Inventor
Иэн Уолтерс
Луиз Бёрч
Стефен Пол Коллингвуд
Кристофер Скотт Стивенсон
Original Assignee
Респиверт Лимитед
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Респиверт Лимитед filed Critical Респиверт Лимитед
Publication of EA201892020A1 publication Critical patent/EA201892020A1/ru
Publication of EA038773B1 publication Critical patent/EA038773B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/30—Indoles; Hydrogenated indoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/32—Oxygen atoms
    • C07D209/34—Oxygen atoms in position 2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A61K31/4045—Indole-alkylamines; Amides thereof, e.g. serotonin, melatonin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4412—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/454—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pimozide, domperidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/527—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim spiro-condensed
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/54—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame
    • A61K31/541—Non-condensed thiazines containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/63—Compounds containing para-N-benzenesulfonyl-N-groups, e.g. sulfanilamide, p-nitrobenzenesulfonyl hydrazide
    • A61K31/635—Compounds containing para-N-benzenesulfonyl-N-groups, e.g. sulfanilamide, p-nitrobenzenesulfonyl hydrazide having a heterocyclic ring, e.g. sulfadiazine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C205/00—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton
    • C07C205/49—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups
    • C07C205/57—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups having nitro groups and carboxyl groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/04—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms
    • C07D295/14—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D295/145—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals with the ring nitrogen atoms and the carbon atoms with three bonds to hetero atoms attached to the same carbon chain, which is not interrupted by carbocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/10—Spiro-condensed systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

Изобретение относится к соединениям формулы (А),к композициям, содержащим их, способу получения соединений и к применению соединений для лечения, например при лечении фиброзных заболеваний или интерстициальных заболеваний легких, в частности идиопатического легочного фиброза.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится inter alia к новым соединениям, которые ингибируют протеинкиназы, и к их применению в терапии, в частности для лечения фиброзных заболеваний или интерстициальных легочных заболеваний, особенно идиопатического легочного фиброза и респираторных заболеваний. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим соединения.
Предшествующий уровень техники изобретения
Интерстициальные легочные заболевания (ILD) характеризуются рубцеванием легкого, что приводит к легочной дисфункции, которая, в конечном итоге, вызывает респираторную недостаточность. Существует множество ILD с неизвестной причиной, которые называют идиопатическими. Идиопатический легочный фиброз (IPF) является наиболее распространенным типом ILD. IPF поражает около 170000 человек в Европе и 130000 человек в Соединенных Штатах Америки, при этом каждый год только в США диагностируют приблизительно 48000 новых случаев, и ежегодно в США умирают 40000 человек. Показатели смертности от IPF очень высоки с медианой выживаемости 3-5 лет от постановки диагноза и с зарегистрированной 5-летней выживаемостью менее 30%, что на уровне показателей наиболее летальных злокачественных опухолей. Как показали до настоящего времени, немногие варианты лечения, отличные от трансплантации легкого, являлись эффективными, и лечение для большинства пациентов представляло собой контроль симптомов и паллиативную помощь.
IPF является хроническим и фатальным заболеванием, главным образом характеризуемым прогрессирующим снижением легочной функции, вызванным рубцеванием легочной ткани, что приводит к усугублению одышки. Фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), фактор роста фибробластов (FGF) и тромбоцитарный фактор роста (PDGF) являются известными мощными митогенами для фибробластных клеток, которые впоследствии замещают нормальную ткань в легких при возникновении фиброза.
Доказательство патогенной роли PDGF, VEGF и FGF в ILD продемонстрировали клинически. Первичными участком поражения является интерстиций, ткань между альвеолярными мешками в легком, но также поражаются легочные ткани, периферические дыхательные пути и сосуды. Считают, что процесс заболевания инициируется рядом микроповреждений альвеолярного эпителия в легком. После повреждения повышенная сосудистая проницаемость приводит к образованию сгустка, и резидентные эпителиальные клетки пролиферируют, пытаясь заменить те клетки, которые погибли в результате повреждения. Этот процесс инициирует высвобождение различных факторов роста (например, PDGF, VEGF, FGF и трансформирующего фактора роста β (TGFe)), что приводит к аберрантной активации эпителиальных клеток, аномальному сосудистому ремоделированию и, что особенно важно, пролиферации и миграции фибробластов в легкое. Факторы роста также индуцируют трансформацию резидентных клеток в миофибробласты, которые вместе с фибробластами организуются в очаги (King Т.Е. Jr. et al., Lancet, 2011, 3; 378(9807): 1949-61; Selman M. et al., Ann. Intern. Med., 2001, 16; 134(2): 136-51). Такие клеточные изменения приводят к нарушению базальной мембраны и к чрезмерному накоплению белков внеклеточного матрикса в интерстициальном пространстве. Результатом является возможное разрушение нормальной архитектуры альвеолярно-капиллярной единицы и рубцевание легкого. Патологии, которые определяют обычный интерстициальный паттерн (UIP) фиброза, характерный для IPF, представляют собой гетерогенный паттерн чередующихся участков нормального легкого, интерстициального воспаления, плотного фиброза, фибробластических очагов и сотовых структур, особенно в субплевральной области легкого (Du Bois R.M., Nat. Rev. Drug Discov., 2010, 9(2): 129-40; Selman M. et al., Ann. Intern. Med., 2001, 16; 134(2):136-51; King Т.Е. Jr. et al., Lancet, 2011, 3; 378(9807): 1949-61). Потеря нормальной архитектуры и рубцевание интерстициального пространства приводит к значительному снижению способности к газообмену, что вызывает развитие классических симптомов заболевания, а именно одышки, хронического кашля, инспираторных хрипов при аскультации, и к аномальной спирометрии (Castriotta R.J. et al., Chest, 2010, 138(3):693-703). В то время как течение заболевания является неоднородным, медиана выживаемости составляет приблизительно 3-5 лет, и наиболее распространенной причиной смерти является респираторная недостаточность из-за прогрессирующих патологий, которые нарушают нормальное функционирование легких и газообмен.
Для достижения лучшей переносимости, а также лучшей эффективности в лечении легочных нарушений может быть целесообразным доставка лекарственного средства непосредственно на участок действия в легкое. Это позволяет достичь более высоких концентраций лекарственного средства на участке действия, что обеспечивает снижение суммарной дозы, а, следовательно, и снижение системных побочных эффектов.
Нинтеданиб, ингибитор протеинкиназы, был одобрен FDA в 2014 году для лечения IPF путем перорального введения. Однако он ассоциируется с существенными системными неблагоприятными событиями, в том числе с абдоминальной болью, рвотой и диарей. В WO 2006/067165 описывают, что ингибиторы VEGFR, FGFR и PDGFR, такие как нинтеданиб, могут быть, как предполагают, применимы в лечении фиброзных заболеваний, таких как IPF. В Fehrenbach H. et al., Virchows Arch., 1999, 435(1):20-31, раскрывается, что VEGFR связывают с причиной легочного фиброза. В Lindroos P., Am. J. Physio Lung Cell Mol. Physiol., 2001, 280:L354-L362, описывается, что активация рецептора PDGF является механизмом гиперплазии миофибробластов при легочном фиброзе. В WO 01/27081 показали, что соединения,
- 1 038773 обладающие ингибирующими эффектами в отношении киназ, в том числе VEGFR, PDGFR и FGFR, являются подходящими для лечения фиброзных заболеваний, и раскрыли ряд замещенных по 6-положению индолинонов. Подобным образом, в WO 2006/067165 и WO 2006/067168 также раскрываются замещенные по 6-положению индолиноны для применения в качестве медицинских препаратов для лечения или предупреждения фиброзных заболеваний.
В уровне техники сохраняется потребность в разработке дополнительных соединений, особенно соединений, которые переносятся лучше, чем нинтеданиб, для лечения фиброзных заболеваний и интерстициальных легочных заболеваний, таких как IPF. Желательно, чтобы такие соединения имели низкую дозу, длительную продолжительность действия, подходящую для введения дозы один раз, два раза или три раза в сутки, а также хорошую эффективность и переносимость, особенно при доставке местным путем в легкое. Соединения формулы (I), описываемые в документе, призваны решить эту задачу.
Краткое описание изобретения
Согласно изобретению представлено соединение формулы (А)
где R1 представляет собой Me, Et, СН=СН2, С=С-Н или С=С-Ме;
один из R2 и R3 представляет собой группу, выбранную из Н, -C1-С6алкила, C1-С6алкокси, -С3-С8циклоалкила, -СН2-(С3-С8циклоалкил), галогена и циано, а другой представляет собой группу -Z-Rx;
Z представляет собой СО или SO2;
Rx представлен формулой (iv)
где V представляет собой СО;
где v представляет собой 0 или 1;
где n представляет собой 0, 1 или 2, при условии, что если v представляет собой 1, n представляет собой 1 или 2;
m представляет собой 1 или 2;
X представляет собой СН или N, при условии, что если n представляет собой 0 или 1, X представляет собой СН;
Y представляет собой СН или N;
W представляет собой группу, выбранную из -С1-С4алкила, -С1-С4гидроксиалкила, С1-С4алкокси(С1-С4)алкил-, -C1-С4алкиленСОNR20R21, -C1-С4алкиленNR20СОR21, -SO2(C1-С4)алкил, -СО(С1-С4)алкила, галогена, CN, ОН и NR22R23, при условии, что если W представляет собой NR22R23, -С1алкиленNR20СОR21 или галоген, Y представляет собой СН;
R20, R21, R22, R23, R24 и R25 независимо представляют собой Н или -С1-С4алкил;
или соединение, выбранное из группы, состоящей из
- 2 038773
или его фармацевтически приемлемая соль (далее соединения по настоящему изобретению или соединение по настоящему изобретению).
Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции для лечения фиброзных заболеваний или интерстициальных заболеваний легких, содержащая соединение по настоящему изобретению в комбинации с одним или более фармацевтически приемлемыми разбавителями или носителями.
Кроме того, изобретение относится к применению соединения по настоящему изобретению для изготовления лекарственного средства для лечения фиброзных заболеваний или интерстициальных заболеваний легких, выбранных из идиопатического легочного фиброза (IPF), гигантоклеточной интерстициальной пневмонии, саркоидоза, кистозного фиброза, респираторного дистресс-синдрома, индуцированного лекарственным средством легочного фиброза, гранулематоза, силикоза, асбестоза, вызванного вирусом гепатита С цирроза печени; или заболеваний кожи с фиброзным компонентом, выбранных из склеродермии, саркоидоза и системной красной волчанки; или заболеваний, характеризующихся гиперпролиферацией клеток, выбранных из рака, или респираторных нарушений, выбранных из хронической обструктивной болезни лёгких (COPD), хронического бронхита и эмфиземы, астмы, ринита и синусита.
- 3 038773
Изобретение также относится к применению соединения по настоящему изобретению для изготовления лекарственного средства для лечения фиброзных заболеваний, выбранных из легочного фиброза, ассоциированного с ревматоидным артритом, респираторного дистресс-синдрома, острого повреждения легкого, вызванного облучением легочного фиброза или пневмонита, хронического гиперчувствительного пневмонита, системного склероза, синдрома Шегрена, интерстициальных легочных заболеваний, и легочной артериальной гипертензии (РАН); или с заболеваний кожи с фиброзным компонентом, выбранных из гипертрофированного рубцевания и келоидов; или глазных заболеваний, компонентом которых является фиброз, выбранных из глаукомы, возрастной дегенерации желтого пятна, диабетического отека желтого пятна, заболевания сухости глаз и диабетической ретинопатии; или фиброза в кишечнике, ассоциированного с воспалительным заболеванием кишечника.
Настоящее изобретение также относится к применению соединения по настоящему изобретению в комбинации с нинтеданибом или пирфенидоном для лечения фиброзных заболеваний или интерстициальных заболеваний легких, выбранных из идиопатического легочного фиброза (IPF), гигантоклеточной интерстициальной пневмонии, саркоидоза, кистозного фиброза, респираторного дистресс-синдрома, индуцированного лекарственным средством легочного фиброза, гранулематоза, силикоза, асбестоза, вызванного вирусом гепатита С цирроза печени; или заболеваний кожи с фиброзным компонентом, выбранных из склеродермии, саркоидоза и системной красной волчанки; или заболеваний, характеризующихся гиперпролиферацией клеток, выбранных из рака; или респираторных нарушений, выбранных из хронической обструктивной болезни лёгких (COPD), хронического бронхита и эмфиземы, астмы, ринита и синусита.
Настоящее изобретение также относится к применению соединения по настоящему изобретению в комбинации с нинтеданибом или пирфенидоном для лечения фиброзных заболеваний, выбранных из легочного фиброза, ассоциированного с ревматоидным артритом, респираторного дистресс-синдрома, острого повреждения легкого, вызванного облучением легочного фиброза или пневмонита, хронического гиперчувствительного пневмонита, системного склероза, синдрома Шегрена, интерстициальных легочных заболеваний, и легочной артериальной гипертензии (РАН); или заболеваний кожи с фиброзным компонентом, выбранных из гипертрофированного рубцевания и келоидов; или глазных заболеваний, компонентом которых является фиброз, выбранных из глаукомы, возрастной дегенерации желтого пятна, диабетического отека желтого пятна, заболевания сухости глаз и диабетической ретинопатии; или фиброза в кишечнике, ассоциированного с воспалительным заболеванием кишечника.
Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (IXb)
где R1 представляет собой Me, Et, СН=СН2, С-С-Н или С-С-Ме; и R3 независимо представляет собой Н, C1-С6алкил, C1-С6алкокси, С3-С8циклоалкил, -СН2-(С3-С8циклоалкил), галоген или циано; или его соли. Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (Xb)
где R1 представляет собой Me, Et, СН=СН2, С-С-Н или С-С-Ме; и
R3 независимо представляет собой Н, C1-С6алкил, C1-С6αлкокси, С3-С8циклоалкил, -СН2-(Сз-С8циклоалкил), галоген или циано;
или его соли.
Настоящее изобретение также относится к способу получения соединения формулы (А) или его фармацевтически приемлемой соли.
Краткое описание графических материалов
На фиг. 1 показана проницаемость искусственной мембраны для соединений типичных примеров (3-12, 17-22, 25-27, 29-40, 43-49) в соответствии с настоящим изобретением и нинтеданиба (см. результа- 4 038773 ты анализа проницаемости РАМРА и табл. 7: при повторении эксперимента использовали средние значения для соединений);
на фиг. 2 - общее воздействие на легкое внутривенного и внутритрахеального введения соединений примеров в соответствии с настоящим изобретением или нинтеданиба у крыс (см. результаты фармакокинетических измерений на грызунах);
на фиг. 3 - общее воздействие на легкое внутривенного и внутритрахеального введения соединений примеров в соответствии с настоящим изобретением или нинтеданиба у крыс (см. результаты фармакокинетических измерений на грызунах).
Подробное описание изобретения
Алкильные группы могут быть с разветвленной или неразветвленной цепью, ^^алкильные группы могут, например, представлять собой C1.6алкил, С1-4алкил или С1_3алкил. Приводимые в качестве примера алкильные группы включают в себя метил, этил, н-пропил, изо-пропил, н-бутил, трет-бутил и CH2CHMe2. Согласно одному варианту осуществления алкил относится к алкилу с неразветвленной цепью. Алкилен описан таким же образом, что и алкил, за исключением того, что он представляет собой двухвалентную группу.
Используемый в настоящем описании алкокси означает -Оалкил и включает в себя алкокси с неразветвленной или разветвленной цепью, например метокси, этокси, пропокси, бутокси.
Гидроксиалкил означает алкил с гидроксильным заместителем в любом положении. Примеры включают в себя гидроксиметил, 2-гидроксиэтил, 3-гидрокси-н-пропил и 4-гидрокси-н-бутил.
Галогены соответственно могут представлять собой Br, Cl или F, в частности Cl или F, в особенности F.
Примеры алифатических 4-8-членных гетероциклических колец, содержащих один или несколько гетероатомов, независимо выбранных из N, О и S, включают в себя азетидин, пирролидин, пиперидин, пиперазин, морфолин, диоксан, тетрагидрофуран, тиоморфолин, тетрагидропиран и диазепан. Соответствующим образом гетероциклические кольцо включает в себя 1 или 2, в частности 1 гетероатом. Такие кольца могут содержать карбонил, и примеры включают в себя пирролидинон, пиперазинон, диазепанон и пиперидинон. Такие кольца, которые могут представлять R4 и R5, могут содержать сульфоновую группу, такую как 1,1-диоксо-1-тиоморфолин-1-ил.
С3-С8циклоалкил относится к алифатическому карбоциклическому кольцу, содержащему типично от 3 до 8 кольцевых членов с необязательным разветвлением и содержащему от 3 до 8 атомов углерода в общей сложности. Примеры включают в себя циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, метилциклогексил, циклогептил и циклооктил.
4-8-членные алифатические гетероциклические кольца необязательно могут быть замещены. Согласно одному варианту осуществления кольца не являются замещенными. Согласно другому варианту осуществления кольцо несет один заместитель. Согласно другому варианту осуществления кольцо несет два заместителя. Заместитель может быть при атоме углерода или азота. Такие кольца, которые может представлять Het или которые попадают в пределы определения спиро-С, могут быть замещены метилом. Примеры включают в себя морфолинометил, пирролидин-1-илметил, 4-метил-1,4-диазепан-2-он и 4метилпиперазин-2-он.
Такие примеры замещенных гетероциклических колец, которые могут представлять R4 и R5, включают в себя 1-метилпиперазин, 1-метилпиперидин, 1-метил-1,4-диазепан, 4-диметиламинопиперидин, 4гидроксипиперидин, 1-(2-гидроксиэтил)пиперидин, 4-(гидроксиметил)пиперидин, 1-(2-метоксиэтил)пиперидин, 4,4-дифторпиперидин, 4-фторпиперидин, 1-ацетилпиперазин, 4-метил-1,4-диазепан-2он, 1-ацетил-1,4-диазепан, 4-(диметиламино)тетрагидро-2H-пиран, 4-(метилсульфонил)пиперазин и 3гидрокси-1-метилпирролидин.
Спиро-С относится к четвертичному атому углерода, соединяющему два алифатических гетероциклических кольца вместе в соответствии с определением выше с образованием спиробициклического кольца. Примеры спиробициклических колец включают в себя спиро[5.5]ундекан и спиро[5.6]додекан. Примеры замещенных спиробициклических колец включают в себя 1-метил-5-оксо-1,4,9-триазаспиро[5.5]ундекан и 7-метил-12-оксо-3,7,11-триазаспиро[5.6]додекан.
Согласно одному варианту осуществления представлена фармацевтически приемлемая соль соединения по настоящему изобретению.
Соединения настоящего раскрытия включают в себя такие соединения, в которых конкретный атом является изотопом природного происхождения или не природного происхождения. Согласно одному варианту осуществления изотопом является устойчивый изотоп. Таким образом, соединения по настоящему изобретению включают в себя, например, такие соединения, которые содержат один или несколько атомов дейтерия вместо атомов водорода и т.п.
Раскрытие также относится ко всем полиморфным формам определенных в настоящем описании соединений, включающих их соли.
Раскрытие также относится ко всем сольватам определенных в настоящем описании соединений. Примеры сольватов включают в себя гидраты.
Соответственно, R1 представляет собой Me.
- 5 038773
Согласно предпочтительному варианту осуществления R2 представляет собой группу, выбранную из Н, -C1-С6алкила, Ci-Сбалкокси-, С3-С8циклоалкил-, -CH2-(С3-С8циклоалкил), галогена и циано и R3 представляет собой группу -Z-Rx. Согласно альтернативному варианту осуществления R2 представляет собой группу -Z-Rx, и R3 представляет собой группу, выбранную из Н, -C1-С6алкила, C1-С6αлкокси-,
-С3-С8циклоалкила, -СН2-(С3-С8циклоалкил), галогена и циано.
Приемлемо, если R2 или R3 не представляют собой -Z-Rx, а представляют собой группу, выбранную из Н, C1-С6aлкила, C1-С6aлкокси-, С3-С6циклоалкила, галогена и циано, более приемлемо Н, С1-С4алкила или галогена, еще более приемлемо Н, Me или галогена, наиболее приемлемо Н, Me или F, в частности Н.
Согласно предпочтительному варианту осуществления Z представляет собой СО. Согласно альтернативному варианту осуществления Z представляет собой SO2.
Согласно одному предпочтительному варианту осуществления Rx представлен формулой (i).
Соответственно, R4 представляет собой NR16R17, m представляет собой 2, 3, 4 или 5 и R5 представляет собой Н или ОН, за исключением того, что если R5 представляет собой ОН, n представляет собой 2, 3, 4 или 5.
Альтернативно, соответствующий R4 представляет собой N-соединенный 4-8-членный алифатический гетероцикл, содержащий N и необязательно содержащий дополнительно один или несколько гетероатомов, выбранных из N, О и S, m представляет собой 2, 3, 4 или 5 и R5 представляет собой Н или ОН, за исключением того, что если R5 представляет собой ОН, n представляет собой 2, 3, 4 или 5.
Соответственно, R5 представляет собой NR18R19, n представляет собой 2, 3, 4 или 5 и R4 представляет собой Н или ОН, за исключением того, что если R4 представляет собой ОН, m представляет собой 2, 3, 4 или 5.
Альтернативно, соответствующий R5 представляет собой N-соединенный 4-8-членный алифатический гетероцикл, содержащий N и необязательно содержащий дополнительно один или несколько гетероатомов, выбранных из N, О и S, n представляет собой 2, 3, 4 или 5 и R4 представляет собой Н или ОН, за исключением того, что если R4 представляет собой ОН, m представляет собой 2, 3, 4 или 5.
Соответственно, X1 представляет собой (СН2)га.
Соответственно, X1 представляет собой (СН2)0, CH2 или (CH2)2, в частности (СН2)0 или СН2, предпочтительно (СН2)0.
Соответственно, R4 представляет собой Н или ОН, в частности Н.
Подходящий фрагмент -X1-R4 представляет собой Н, Me или 2-гидроксиэтил, в частности Н или Me, предпочтительно Н.
Соответственно, Y 1 представляет собой (СН2)п.
Соответственно, Yi представляет собой (СН2)0, СН2, (СН2)2 или (СН2)3, в частности (СН2)2 или (СН2)0, предпочтительно (СН2)2.
Соответственно, R5 представляет собой 1-метилпиперазинил, диметиламино, 1-метилпиперидинил, 1-метил-1,4-диазепанил, 4-диметиламинопиперидинил, пиперазинонил, 4-гидроксипиперидинил, 1-(2гидроксиэтил)пиперидинил, 1 -(2-метоксиэтил)пиперидинил, 4,4-дифторпиперидинил, 1 -ацетилпиперазинил, 4-фторпиперидинил, морфолинил, 1-ацетил-1,4-диазепанил, (2-метоксиэтил)(метил)амино, 4-(диметиламино)тетрагидро-2H-пиран, 1-(диметиламино)циклобутил, 4-(гидроксиметил)пиперидинил, 4-(метилсульфонил)пиперазинил, 4-(метилсульфонил)пиперазинил, 3-гидрокси-1-метилпирролидинил, (2гидроксиэтил)(метил)амино, 1,1-диоксидотиоморфолино, 5-оксо-1,4-диазепанил, метил(2-(метиламино)2-оксоэтил)амино или 3-оксо-1,4-диазепанил, в частности 4-гидроксипиперидинил, 1-метилпиперазинил, 5-оксо-1,4-диазепанил, 1-метилпиперидинил, 1-метил-1,4-диазепанил, 4-диметиламинопиперидинил, пиперазинонил или 1-(2-гидроксиэтил)пиперидинил, предпочтительно 1-метилпиперазинил, 1метилпиперидинил, 1-метил-1,4-диазепанил, 4-диметиламинопиперидинил, пиперазинонил или 1-(2гидроксиэтил)пиперидинил.
Соответствующий фрагмент -Y1-R5 представляет собой -(СН2)2-(4-метил)пиперазин-1-ил, -(СН2)2диметиламино, -(СН2)-(1-метил)-пиперидин-4-ил, -(СН2)2-(4-метил)пиперазин-1-ил, -(СН2)2-(4-метил-1,4диазепан-1 -ил), -(СН2)2-4-диметиламинопиперидин-1 -ил, -(СН2)2-3-оксопиперазин-1 -ил, -(СН2)2-(4-гидроксипиперидин-1-ил), -1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил, -(СН2)-1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил, -1-метилпиперидин-4-ил, -1-(2-метоксиэтил)пиперидин-4-ил, -(СН2)3-4-метилпиперазин-1-ил, -(СН2)3-диметиламино, -(СН2)2-4,4-дифторпиперидин-1 -ил), -(СН2)2-4-ацетилпиперазин-1 -ил, -1 -метилпиперидин-3 ил, -(СН2)2-4-фторпиперидин-1-ил, -(СН2)3-морфолин-4-ил, -(СН2)2-4-ацетил-1,4-диазепан-1-ил, -(СН2)2((2-метоксиэтил)(метил)амино), -СН2-(4-(диметиламино)тетрагидро-2Н-пиран-4-ил), -СН2-(1-(диметиламино)циклобутил), -1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил, -(СН2)2-(4-(гидроксиметил)пиперидин-1-ил), -(СН2)2-(4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил), 4-гидрокси-1-метилпирролидин-3-ил, -(СН2)2-(2-гидроксиэтил)(метил)амино, -(СН2)2-1,1 -диоксидотиоморфолино, -(СН2)2-(5-оксо- 1,4-диазепан-1 -ил),
-(CH2)2-(метил(2-(метиламино)-2-оксоэтил)амино), -(СН2)2-(3 -оксо-1,4-диазепан-1 -ил), в частности -(CH2)2-(4-гидроксипиперидин-1-ил), -1-(2-гидроксиэтил)пиперид ин-4-ил, -(СН2)-1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил, -(СН2)2-(5-оксо- 1,4-диазепан-1 -ил), -(CH2)2-(4-метил)пиперазин-1-ил, -(CH2)2-(4метил-1,4-диазепан-1 -ил), -(CH2)2-(4-диметиламинопиперидин-1 -ил), -(CH2)2-3-оксопиперазин-1 -ил, -1-метилпиперидин-4-ил, предпочтительно -(CH2)2-(4-метил)пиперазин-1-ил, -(CH2)2-(4-метил-1,4- 6 038773 диазепан-1 -ил), -(СН2)2-(4-диметиламинопиперидин-1 -ил), -(СН2)2-3-оксопиперазин-1 -ил, -1 -метилпиперидин-4-ил.
Соответствующая формула (i) представляет собой фрагмент, в котором: (a) -X1-R4 представляет собой Н и -Y1-R5 представляет собой -(CH2)2-(4-метил)пиперазин-1-ил, -(CH2)2-диметиламино, -(CH2)-(1метил)пиперидин-4-ил, -(CH2)2-(4-метил)пиперазин-1 -ил, -(CH2)2-(4-метил-1,4-диазепан-1 -ил), -(CH2)2-4диметиламинопиперидин-1 -ил, -(CH2)2-3 -оксопиперазин-1 -ил, -(CH2)2-(4-гидроксипиперидин-1 -ил), -1 -(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил, -(CH2)-1 -(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил, -1 -метилпиперидин-4-ил, -1 -(2-метоксиэтил)пиперидин-4-ил, -(CH2)3-4-метилпиперазин-1-ил, -(CH2)3-диметиламино, -(CH2)2-4,4дифторпиперидин-1-ил), -(CH2)2-4-ацетилпиперазин-1-ил, -1-метилпиперидин-3-ил, -(CH2)2-4фторпиперидин-1-ил, -(СН2)3-морФолин-4-ил, -(CH2)2-4-ацетил-1,4-диазеnан-1-ил, -(CH2)2-((2метоксиэтил)(метил)амино), -CH2-(4-(диметиламино)тетрагидро-2Н-пиран-4-ил), -CH2-( 1 -(диметиламино)циклобутил), -(CH2)2-(4-(гидроксиметил)пиперидин-1 -ил), -(CH2)2-(4-(метилсульфонил)пиперазин-1 ил), (CH2)2-(2-гидроксиэтил)(метил)амино, -(CH2)2-1,1 -диоксидотиоморфолино, -(СН2)2-(5-оксо-1 ,4диазепан- 1 -ил), -(CH2)2-(метил(2-(метиламино)-2-оксоэтил)амино) или -(CH2)2-(3 -оксо-1,4-диазепан-1 ил), в частности -X1-R4 представляет собой Н и -Y1-R5 представляет собой -(СН2)2-(4-гидроксипиперидин-1-ил), -1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил, -(СН2)-1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил, -(СН2)2-(5-оксо-1,4-диазепан-1 -ил), -(CH2)2-(4-метил)пиперазин-1 -ил, -(СН2)2-(4-метил-1,4-диазепан-1 ил), -(СН2)2-(4-диметиламинопиперидин-1 -ил), -(СН2)2-3-оксопиперазин-1 -ил, -1 -метилпиперидин-4-ил, предпочтительно -X1-R4 представляет собой Н и -Y1-R5 представляет собой -(СН2)2-(4-метил)пиперазин1-ил, -(СН2)2-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил), -(CH2)2-(4-диметиламинопиперидин-1-ил), -(СН2)2-3оксопиперазин-1-ил, -1-метилпиперидин-4-ил; или (b) -X1-R4 представляет собой Me и -Y1-R5 представляет собой -(СН2)2-диметиламино, -1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил или 4-гидрокси-1-метилпирролидин-3-ил, в частности -X1-R4 представляет собой Me и -Y1-R5 представляет собой -(СН2)2диметиламино; или (с) -X1-R4 представляет собой 2-гидроксиэтил и -Y1-R5 представляет собой -(CH2)2диметиламино. Фрагмент формулы (i) предпочтительно представлен при помощи (а).
Согласно одному варианту осуществления Rx представлен формулой (ii).
Соответственно, Y2 представляет собой (CH2)s.
Соответственно, s представляет собой 2, 3 или 4, более соответствующим образом 2 или 3, в частности 2.
Согласно варианту осуществления Y2 не замещен. Согласно варианту осуществления Y2 замещен одной группой. Согласно варианту осуществления Y2 замещен двумя группами, например, при том же атоме углерода.
Соответственно, Х2 представляет собой (CH2)v.
Соответственно, v представляет собой 2, 3 или 4, более соответственно 2 или 3, в частности 2.
Согласно варианту осуществления Х2 не замещен. Согласно варианту осуществления Х2 замещен одной группой. Согласно варианту осуществления Х2 замещен двумя группами, например, при том же атоме углерода.
Соответственно, Q представляет собой N, О или С, в частности N.
Соответственно, q представляет собой 0 или 1, в частности 1.
Соответственно, s представляет собой 2, v представляет собой 2 и q представляет собой 1, или s представляет собой 3, v представляет собой 2 и q представляет собой 0, или s представляет собой 2, v представляет собой 3 и q представляет собой 1, в частности s представляет собой 2, v представляет собой 2 и q представляет собой 1, или s представляет собой 3, v представляет собой 2, предпочтительно s представляет собой 2, v представляет собой 2 и q представляет собой 1.
Согласно одному варианту осуществления формула (ii) не содержит заместителей, т.е. ни один из Х2, Y2 и Q не замещены. Согласно одному варианту осуществления формула (ii) несет один заместитель, т.е. любой из Х2, Y2 или Q замещен один раз. Согласно другому варианту осуществления формула (ii) несет два заместителя, которые могут быть замещены в том же положении кольца или в разных положениях кольца т.е. Х2, Y2 и/или Q замещен/ы таким образом, что всего было два замещения. Заместитель может быть при атоме углерода или азота.
Подходящие заместители выбраны из Me, ОН, F, ацетила, диметиламино, 2-гидроксиэтила, гидроксиметила, 2-(метиламино)-2-оксоэтила, 2-метоксиэтила, 2-(диметиламино)этил)карбамоила, -СН2-диметиламино, пирролидин-1-илметила, 2-((2-метоксиэтил)амино)-2-оксоэтила, метилсульфонила, морфолинометила, пиперидинила, -CONH2 и 2-((2-гидроксиэтил)амино)-2-оксоэтила, в частности выбраны из Me, диметиламино и 2-гидроксиметила, предпочтительно Me.
Соответственно, Het замещен одной или двумя группами Me, такими как одна группа Me. Альтернативно, Het не замещен группами Me.
Соответствующая формула (ii) представляет собой 4-(2-(метиламино)-2-оксоэтил)пиперазин-1-ил, 4-метилпиперазин-1-ил, 4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил, 4-(1-метил-5-оксо-1,4,9-триазаспиро[5.5]ундекан-9-ил, 4-((2-(диметиламино)этил)карбамоил)пиперидин-1-ил, 4-((диметиламино)метил)-3-гидроксипиперидин-1-ил, 4-гидрокси-4-(пирролидин-1-илметил)пиперидин-1-ил, 4-((диметиламино)метил)-4(гидроксиметил)пиперидин-1 -ил, 4-(2-((2-метоксиэтил)амино)-2-оксоэтил)пиперазин-1 -ил, 7-метил-12- 7 038773 оксо-3,7,11-триазаспиро[5.6]додекан-3-ил, 4-гидрокси-4-(морфолинометил)пиперидин-1-ил, 4-(2гидроксиэтил)-1,4-диазепан-1-ил, 4'-карбамоил-[1,4'-бипиперидин-1'-ил], 4-(2-((2-гидроксиэтил)амино)-2оксоэтил)пиперазин-1-ил, в частности 4'-карбамоил-[1,4'-бипиперидин-1'-ил], 4-метилпиперазин-1-ил или
4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил, предпочтительно 4'-карбамоил-[1,4'-бипиперидин-1'-ил].
Согласно одному варианту осуществления Rx представлен формулой (iii).
Соответственно, Y3 представляет собой (СН2)t.
Соответственно, t представляет собой 1, 2, 3 или 4, в частности 1 или 2, более соответствующим образом 1.
Соответствующая формула (iii) представляет собой 2-(4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил)-2оксоэтил)амино, 2-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-оксоэтил)амино или 3-(4-метилпиперазин-1-ил)-3оксопропил)амино, в частности 2-(4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил)-2-оксоэтил)амино или 3-(4метилпиперазин-1-ил)-3-оксопропил)амино, предпочтительно 2-(4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил)-2оксоэтил)амино.
Соответственно, R6, R7, R10 и Rn независимо представляют собой Н, -С1-С4алкил или -С1-С4алкилN (С 1 -С4алкил)2.
Соответственно, R14 и R15 независимо представляют собой Н, -С1-С4алкил, -Cl-С4гидроксиалкил или С 1-С4алкокси(С 1 -С4)алкил-.
Соответственно, R6 представляет собой -Сl-С4алкилN(Сl-С4алкил)2, например -(CH2)2NMe2. Альтернативно, соответствующий R6 представляет собой Н или -С1-С4алкил, в частности Н.
Соответственно, R7, R10 и Rn независимо представляют собой Н или С1-С4алкил, в частности Н.
Соответственно, R14 представляет собой С1-С4алкокси(С1-С4)алкил-, например -(СН2)2ОМе или -С1-С4гидроксиалкил, например 2-гидроксиэтил.
Соответственно, R14 и R15 независимо представляют собой Н или -С1-С4алкил, в частности Н.
Соответственно, R16, R17, R18 и R19 независимо представляют собой -С1-С4алкил, необязательно замещенный одной или двумя группами, например одной группой, выбранной из ОН, оксо, NR24R25 и С1-С4алкокси-.
Соответственно, R16 представляет собой Me или 2-метоксиэтил, предпочтительно Me.
Соответственно, R17 представляет собой Me.
Соответственно, R18 представляет собой Me.
Соответственно, R19 представляет собой Me, 2-гидроксиэтил или 2-(метиламино)-2-оксоэтил, в частности Me.
Согласно варианту осуществления R16 представляет собой Н.
Согласно варианту осуществления R17 представляет собой Н.
Согласно варианту осуществления R18 представляет собой Н.
Согласно варианту осуществления R19 представляет собой Н.
Соответственно, R8, R9, R12, R13, R20, R21, R22, R23, R24 и R25 независимо выбраны из Н и Me. Согласно одному варианту осуществления R8, R9, R12, R13, R20, R21, R22, R23, R24 и R25 представляет собой Н. Согласно другому варианту осуществления R8, R9, R12, R13, R20, R21, R22, R23, R24 и R25 представляет собой Me.
Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения представлено соединение формулы (I), которое представляет собой соединение формулы (А)
где R1 представляет собой Me, Et, СН=СН2, С=С-Н или С=С-Ме;
один из R2 и R3 представляет собой группу, выбранную из Н, -C1-С6aлкила, C1-С6aлкокси, -С3-С8циклоалкила, -СН2-(С3-С8циклоалкил), галогена и циано, а другой представляет собой группу -Z-Rx;
Z представляет собой СО или SO2;
Rx представлен формулой (iv)
где V представляет собой СО;
где v представляет собой 0 или 1;
где n представляет собой 0, 1 или 2, за исключением того, что если v представляет собой 1, n представляет собой 1 или 2;
- 8 038773 m представляет собой 1 или 2;
X представляет собой СН или N, за исключением того, что если n представляет собой 0 или 1, X представляет собой СН;
Y представляет собой СН или N;
W представляет собой группу, выбранную из -С1-С4алкила, -С1-С4гидроксиалкила, СгС4алкокси(С1-С4)алкил-, -Сl-С4алкиленСОNR20R2l, -Cl-С4алкиленNR20СОR2l, -SO2(Cl-С4)алкила, -СО(С1-С4)алкила, галогена, CN, ОН и NR22R23, за исключением того, что если W представляет собой NR22R23, -СlалкиленNR20СОR2l или галоген, Y представляет собой СН;
R20, R2i, R22, R23, R24 и R25 независимо представляют собой Н или -С1-С4алкил;
или его фармацевтически приемлемая соль. Соответственно, R1 представляет собой Me. Соответственно, Z представляет собой СО. Соответственно, R3 представляет собой -Z-R,
-x·
Если v представляет собой 0, соответственно, n представляет собой 0 или 2, в частности 0.
Если v представляет собой 1, соответственно, n представляет собой 1.
Соответственно, v представляет собой 0.
Соответственно, m представляет собой 1.
Соответственно, X представляет собой СН.
Соответственно, Y представляет собой N.
Соответственно, W представляет собой -С1-С4алкил (в частности Me) или NR22R23 (в частности, NMe2).
Соединения формулы (I) в целях удобства могут быть получены способом, включающим в себя осуществление взаимодействия соединения формулы (II), в котором L представляет собой уходящую группу, такую как -ОС1-С4алкил, например Оэтил
или его защищенного производного с соединением формулы (III)
Как правило, соединения формул (II) и (III) могут взаимодействовать в присутствии растворителя, такого как DMF, и при нагревании до приблизительно 80°С в течение приблизительно 18 ч. После этой стадии проводили стадию снятия защитных групп с удалением защитной группы, ацетила. Для этого реакционная смесь может быть охлаждена до комнатной температуры и нуклеофил, такой как пиперидин, добавляли и перемешивали в течение 1-24 ч.
Соединения формулы (II), в которых L представляет собой -Оэтил, могут быть получены путем осуществления взаимодействия соединения формулы (IV)
или его защищенного производного с соединением формулы (V)
Как правило, соединения формул (IV) и (V) могут взаимодействовать в присутствии уксусного ангидрида при температуре приблизительно 110°С в течение приблизительно 4 ч. Другие соединения формулы (II) могут быть получены аналогичным способом.
Соединения формулы (IV) могут быть получены путем осуществления взаимодействия соединения формулы (VI)
- 9 038773 с уксусным ангидридом. Как правило, реакцию проводили при приблизительно 110°С. Альтернативно, соединения формулы (II), в которых L представляет собой -Оэтил, могут быть получены прямо из соединений формулы (VI) обработкой соединением формулы (V) в присутствии уксусного ангидрида
при температуре приблизительно 110°С в течение приблизительно 4 ч.
Соединения формулы (VI) могут быть получены путем восстановления группы -NO2 соединения формулы (VII)
до группы -NH2 с последующей амидобразующей циклизацией, что является хорошо известной процедурой в области техники. Условия восстановления и амидной циклизации, как правило, могут включать в себя применение Н2-Pd/C при комнатной температуре, и гидрирование при давлении 5 бар в течение приблизительно 36 ч в растворителе, таком как уксусная кислота, что является хорошо известной процедурой в области техники.
Соединения формулы (VII) могут быть получены путем осуществления взаимодействия соединения формулы (VIII)
с метилхлорацетатом. Как правило, реакцию проводили в присутствии полярного органического растворителя, такого как DMF, и основания, такого как KO'Bu, в атмосфере азота от приблизительно -20 до -10°С.
Альтернативно, соединения формулы (Ia), которые являются соединениями формулы (I), в которых Z представляет собой СО, могут быть получены путем осуществления взаимодействия соединения формулы (IXa) или (IXb)
или его защищенного производного с соединением формулы H-Rx или его защищенным производным реакцией конденсации между NH-аминогруппой, присутствующей в H-Rx, и СООН в соединениях формул (IXa) и (IXb). Соединения, как правило, могут реагировать в течение приблизительно 2-18 ч при комнатной температуре в присутствии связующего вещества, такого как HATU, и основания, такого как основание Хунига (DIPEA), в полярном органическом растворителе, таком как DMF, хотя также могут быть использованы другие полярные органические растворители. За этим способом, при необходимости, может следовать снятие защитных групп.
Соединения формул (IXa) и (IXb) могут быть получены путем снятия защитных групп с соединений формул (Ха) и (Xb), соответственно
- 10 038773
Снятие защитных групп может быть проведено с использованием стандартных реагентов области техники, таких как TFA, и соединения, как правило, перемешивали при комнатной температуре в течение приблизительно 16 ч в растворителе, таком как DCM.
Соединения формул (Ха) и (Xb) могут быть получены путем осуществления взаимодействия соединения формулы (II) с соединением формулы (XIa) и (XIb), соответственно
Соединения могут реагировать в присутствии DMF в течение приблизительно 18 ч при 100°С.
Соединения формулы (III) могут быть получены путем осуществления взаимодействия соединения формулы H-Rx с соединением формулы (XIIa) или (XIIb), соответственно
Соединения, как правило, могут реагировать в присутствии основания Хунига (DIPEA) и DMF в течение приблизительно 16 ч при комнатной температуре с последующей стадией снятия защитных групп с применением стандартных реагентов области техники, таких как TFA.
Альтернативно, соединения формулы (Ib), которые являются соединениями формулы (I), в которой Z представляет собой СО и Rx представлен формулой (ii)
могут быть получены путем осуществления взаимодействия соединения формулы (XIIIa) или (XIIIb)
с соединением NHR14R15. Как правило, соединения формул (XIIIa) или (XIIIb) и NHR14R15 могут взаимодействовать в присутствии связывающего средства, такого как HATU, и основания, такого как основание Хунига (DIPEA), в растворителе, таком как DMF, и это перемешивали при комнатной темпе- 11 038773 ратуре в течение приблизительно 4 ч. После этой стадии проводили стадию снятия защитных групп с удалением защитной группы, ацетила. Для этого добавляли нуклеофил, такой как пиперидин, и перемешивали в течение 1 -24 ч.
Соединения формулы (XIIIa) и (XIIIb) могут быть получены путем осуществления взаимодействия соединения формулы (IXa) и (IXb), соответственно, с соединением формулы (XIV)
Как правило, соединения формул (IX) и (XIV) могут взаимодействовать в присутствии связывающего средства, такого как HATU, и основания, такого как основание Хунига (DIPEA), в растворителе, таком как DMF, и это перемешивали при комнатной температуре приблизительно 3 ч. Снятие защитных групп с трет-бутильной группы может быть проведено с применением стандартных реагентов в области техники, таких как TFA, и соединения обычно перемешивали при комнатной температуре приблизительно 16 ч в растворителе, таком как DCM.
Новые промежуточные соединения, включая соединения формулы (II), (VII), (IXa), (IXb), (Ха), (Xb), (XIIIa) и (XIIIb), где R1 представляет собой Me, Et, CH=CH2, С С-II или С С-Ме, и формулы (VI), где R1 представляет собой Et, CH=CH2, С^С-Н или САС-Ме, и их соли заявлены как аспект настоящего изобретения.
Соединения формул (V), (VIII), (XIa), (XIb), (XIIa), (XIIb), (XIV), NHR14R15 и Н-Rx могут быть получены известными способами или способами, аналогичными описанным в настоящем изобретении.
Соединения формулы (I) могут быть получены или использованы в форме фармацевтически приемлемой соли, включая терапевтически активные нетоксичные кислотно-аддитивные соли, которые соединения формулы (I) способны образовывать. Такие фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли в целях удобства могут быть получены обработкой формы свободного основания соответствующими кислотами в подходящем растворителе или смеси растворителей. Соответствующие кислоты включают в себя, например, этансульфоновую, малеиновую, малоновую, L-виннокаменную, фумаровую, лимонную, янтарную, уксусную, трифенилуксусную, хлористоводородную, серную, фосфорную, 1гидрокси-2-нафтойную, бромистоводородную, метансульфоновую, виннокаменную, пальмитиновую, изэтиновую, памовую, муравьиную, коричную, бензойную, аскорбиновую, галактаровую, молочную, яблочную, щавелевую, пара-толуолсульфоновую, бензолсульфоновую, пропионовую, фуранкарбоновую, фосфорную и глутаровую. В свою очередь указанные солевые формы могут быть превращены обработкой соответствующим основанием в форму свободного основания.
Настоящее изобретение относится к соединению настоящего изобретения для применения в качестве фармацевтического препарата.
Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение по настоящему изобретению необязательно в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми разбавителями или носителями.
Разбавители и носители могут включать в себя такие, которые подходят для парентерального, перорального, местного, включая ингаляцию через рот в легкие или ингаляцию через нос, слизистого и ректального введения, и могут отличаться в зависимости от пути введения.
Согласно одному варианту осуществления композиции могут быть получены, например, для парентерального введения, например подкожного, внутримышечного, внутривенного, внутридермального, внутрисуставного или перисуставного введения, в частности в форме жидких растворов или суспензий; для перорального введения, в частности в форме таблеток, капсул, порошка, гранул, твердых дисперсий или в форме жидких растворов или суспензий, включая наносуспензии; для ингаляции в легкие или нос, например легочное или внутриносовое введение, в частности в форме сухих порошков, растворов, суспензий, включая наносуспензии для распыления, назальные спреи или капли, содержащие растворы или суспензии, или суспензии или растворы в виде герметизированных или не герметизированных аэрозолей; для местного или трансдермального введения, например в виде кремов, спреев, пен, гелей, мазей, жидкостей, пластырей; для введения через слизистую, например в щечную, подъязычную или влагалищную слизистую оболочку, и для ректального введения, например, в форме пены или суппозитория.
Композиции в целях удобства могут быть введены в стандартной лекарственной форме и могут быть получены любым из способов, хорошо известных в фармацевтической области, например, как описано в Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA., (1985). Композиции также в целях удобства могут быть введены в сложной стандартной лекарственной форме.
Составы для парентерального введения могут содержать в качестве наполнителей стерилизованную воду или солевой раствор, буферы, регулирующие тонус средства, консерванты, антиоксиданты, регулирующие вязкость средства, алкиленгликоли, такие как пропиленгликоль, полиалкиленгликоли, такие как полиэтиленгликоль, масла растительного происхождения, гидрированные нафталины и т.п.
Композиции, подходящие для перорального введения, могут включать в себя один или несколько физиологически совместимых носителей и/или наполнителей и могут быть в твердой или жидкой форме.
- 12 038773
Таблетки и капсулы могут быть получены со связующими средствами, такими как сироп, аравийская камедь, желатин, сорбит, трагакантовая камедь, целлюлоза или поливинилпирролидон; наполнителями, такими как лактоза, сахароза, кукурузный крахмал, фосфат кальция, сорбит или глицин; смазывающими веществами, такими как стеарат магния, тальк, полиэтиленгликоль или диоксид кремния; и поверхностно-активными веществами, такими как лаурилсульфат натрия. Жидкие композиции могут содержать традиционные добавки, такие как суспендирующие средства, например сорбитный сироп, метилцеллюлоза, сахарный сироп, желатин, карбоксиметилцеллюлоза или пищевые жиры; эмульгаторы и поверхностно-активные вещества, такие как лецитин или аравийская камедь; растительные масла, такие как миндальное масло, кокосовое масло, рыбий жир или арахисовое масло; консерванты, такие как бутилированный гидроксианизол (ВНА) и бутилированный гидрокситолуол (ВНТ). Жидкие композиции могут быть инкапсулированы, например, в желатине с получением стандартной лекарственной формы.
Твердые пероральные лекарственные формы включают в себя таблетки, твердые капсулы из двух частей и мягкие капсулы из гибкого желатина (SEG). Такие твердые капсулы из двух частей могут быть получены, например, из желатина или гидроксипропилметилцеллюлозы (НРМС).
Состав в сухой оболочке, как правило, содержит желатин по меньшей мере в концентрации 40%60%, пластификатор в приблизительной концентрации 20-30% (такой как глицерин, сорбит или пропиленгликоль) и воду в приблизительной концентрации 30-40%. Также могут присутствовать другие вещества, такие как консерванты, красители, замутнители и ароматизаторы. Жидкий наполнитель включает в себя твердое лекарственное вещество, которое было растворено, солюбилизировано или диспергировано (с суспендирующими средствами, такими как пчелиный воск, гидрированное касторовое масло или полиэтиленгликоль 4000), или жидкое лекарственное вещество в средах или комбинациях сред, таких как минеральное масло, растительные масла, триглицериды, гликоли, полиолы и поверхностно-активные вещества.
Составами для назального введения могут быть порошки, и они могут содержать наполнители, например лактозу или декстран, или могут быть водные или масляные растворы для применения в форме назальных капель или дозируемого спрея. Составы для назального введения также могут быть в форме водных суспензий или герметичных неводных растворов или суспензий. Для трансбуккального введения типичные наполнители включают в себя сахара, стеарат кальция, стеарат магния, прежелатинизированный крахмал и т.п.
Соответственно, соединение формулы (I) вводили местно в легкое. Таким образом, согласно одному варианту осуществления представлена фармацевтическая композиция, содержащая соединение по настоящему раскрытию, необязательно в комбинации с одним или несколькими местно приемлемыми разбавителями или носителями.
Местное введение в легкое может быть достигнуто путем применения не находящегося под давлением состава, такого как водные раствор или суспензия. Такие составы могут быть введены посредством небулайзера, который, например, может быть ручным и портативным или может служить для домашнего или больничного применения (т.е. непортативный). Состав может содержать вспомогательные средства, такие как вода, буферы, средства регулирования тоничности, средства регулирования рН, поверхностноактивные средства, консерванты, суспендирующие средства, объемообразующие средства и сорастворители. Суспензионные жидкие и аэрозольные составы (либо находящиеся под давлением, либо не находящиеся под давлением), как правило, будут содержать соединение в соответствии с настоящим изобретением в мелкоизмельченной форме, подходящей для отложения в легком, например с D50 0,5-10 мкм, например приблизительно 1-5 мкм. Порошки в мелкоизмельченной форме могут быть получены с помощью процесса микронизации или помола, с помощью сушки распылением, с помощью замораживания распылением или с помощью влажного помола с последующей сушкой распылением. Микронизация может быть выполнена с использованием струйной мельницы, такой как изготовляемые компанией Hosokawa Alpine. Полученное в результате распределение размеров частиц может быть измерено с использованием лазерной дифракции (например, с прибором Malvern Mastersizer 2000S или Mastersizer 3000). Распределения размеров частиц могут быть представлены с использованием значений D10, D50 и D90. Медианное значение D50 распределений размеров частиц определяют как размер частиц, при котором распределение делится пополам. Измерение, полученное с помощью лазерной дифракции, более точно описывают как объемное распределение, и, следовательно, значение D50, полученное с использованием этой процедуры, правильнее называть значением Dv50 (медианой для объемного распределения). Используемые в настоящем документе значения Dv относятся к распределениям размеров частиц, измеряемым с использованием лазерной дифракции. Подобным образом, значения D10 и D90, используемые в контексте лазерной дифракции, считаются значениями Dv10 и Dv90 и относятся к размеру частиц, при котором 10% распределения лежат ниже значения D10, a 90% распределения лежат ниже значения D90, соответственно. Согласно другому варианту осуществления комбинированные частицы соединения в соответствии с настоящим раскрытием и вспомогательные средства для применения в распылении суспензионного состава могут быть составлены с помощью совместного помола и/или совместной сушки распылением соединения и вспомогательных средств вместе, при этом комбинированные частицы, содержащие и активное и вспомогательные средства, имеют D50 1-10 мкм. Водные суспензионные составы для доставки в легкое
- 13 038773 также могут содержать наносуспензии или суспензии комбинированных частиц, содержащих наночастицы.
Местное введение в легкое также может быть достигнуто путем применения находящегося под давлением аэрозольного состава. Аэрозольные составы, как правило, содержат активный ингредиент, суспендированный или растворенный в подходящем аэрозольном газе-вытеснителе, таком как хлорфторуглерод (CFC) или гидрофторуглерод (HFC). Подходящие CFC газы-вытеснители включают в себя трихлормонофторметан (газ-вытеснитель 11), дихлортетрафторметан (газ-вытеснитель 114) и дихлордифторметан (газ-вытеснитель 12). Подходящие HFC газы-вытеснители включают в себя тетрафторэтан (HFC-134a) и гептафторапропан (HFC-227). Газ-вытеснитель, как правило, составляет 40-99,5 мас.%, например 40-90 мас.% всей ингаляционной композиции. Состав может содержать вспомогательные средства, в том числе сорастворители (например, этанол) и поверхностно-активные средства или стабилизаторы (например, лецитин, сорбит триолеат и т.п.). Другие возможные вспомогательные средства включают в себя полиэтиленгликоль, поливинилпирролидон, глицерин и т.п. Аэрозольные составы упаковывают в емкости и подходящую дозу доставляют посредством дозирующего клапана (например, поставляемые компаниями Bespak, Aptar или 3М или, в качестве альтернативы, компанией Coster или Vari). Находящиеся под давлением суспензионные составы для доставки в легкое также могут содержать наносуспензии или суспензии комбинированных частиц, включающих в себя наночастицы.
Местное введение в легкое также может быть достигнуто путем применения состава сухого порошка. Состав сухого порошка будет содержать соединение в соответствии с настоящим раскрытием в мелкоизмельченной форме, как правило, с D50 0,5-10 мкм, например приблизительно 1-5 мкм. Порошки в мелкоизмельченной форме могут быть получены с помощью процесса микронизации или помола, с помощью сушки распылением, с помощью замораживания распылением или с помощью влажного помола с последующей сушкой распылением. Микронизация может быть выполнена с использованием струйной мельницы, такой как изготовляемые компанией Hosokawa Alpine. Полученное в результате распределение размеров частиц может быть измерено с использованием лазерной дифракции (например, с прибором Malvern Mastersizer 2000S или Mastersizer 3000). Состав, как правило, будет содержать один или несколько приемлемых для местного введения разбавителей, таких как лактоза, глюкоза, трегалоза или маннит (предпочтительно лактоза), обычно со сравнительно большим размером частиц, например, D50 15-250 мкм. Согласно другому варианту осуществления комбинированные частицы соединения в соответствии с настоящим раскрытием и вспомогательные средства также могут быть составлены путем совместного помола и/или совместной сушки распылением соединения и вспомогательных средств вместе, при этом комбинированные частицы, содержащие как активные, так и вспомогательные средства, имеют D50 1-10 мкм. Используемый в настоящем документе термин лактоза относится к содержащему лактозу компоненту, в том числе к α-лактозы моногидрату, β-лактозы моногидрату, безводной α-лактозе, безводной β-лактозе и аморфной лактозе. Лактозные компоненты могут быть обработаны путем микронизации, просеивания, помола, сжатия, агломерирования или сушки распылением. Также предусматриваются коммерчески доступные формы лактозы в разных формах, например, продукты Lactohale® (DFE Pharma), InhaLac® (Meggle), Pharmatose® (DFE Pharma) и Respitose® (DFE Pharma). Согласно одному варианту осуществления лактозный компонент выбран из группы, состоящей из α-лактозы моногидрата, безводной α-лактозы и аморфной лактозы. Предпочтительно лактозой является α-лактозы моногидрат.
Составы сухого порошка также могут содержать другие вспомогательные средства, такие как лейцин, стеарат натрия, стеарат калия или стеарат магния. Частицы сухого порошка могут быть комбинированными частицами и могут состоять из наночастиц в комбинированной матрице.
Состав сухого порошка, как правило, доставляют с использованием ингаляторного устройства сухого порошка (DPI). Оно может представлять собой либо устройство с однократной дозой, в котором состав присутствует в отдельных единицах или в виде капсул или блистеров, либо устройство с несколькими дозами, в котором содержатся более чем одна доза состава, или резервуар с нерасфасованным продуктом, или несколько контейнеров (например, несколько блистеров или пакетов). Типичные ингаляторы сухого порошка включают в себя SPINHALER, DISKHALER, TURBOHALER, DISKUS, ELLIPTA, CLICKHALER, ECLIPSE, ROTAHALER, HANDIHALER, AEROLISER, CYCLOHALER, MONODOSE, BREEZHALER/NEOHALER, FLOWCAPS, TWINCAPS, X-CAPS, TWISTER, TURBOSPIN, ELPENHALER, TURBUHALER, MIATHALER, NEXTHaler, TWISTHALER, NOVOLIZER, GENUAIR, SKYEHALER, ингалятор сухого порошка ORIEL, MICRODOSE, ACCUHALER, PULVINAL, EASYHALER, ULTRAHALER, TAIFUN, PULMOJET, OMNIHALER, GYROHALER, TAPER, CONIX, XCELOVAIR и PROHALER.
Предполагают, что соединения в соответствии с настоящим изобретением являются применимыми в лечении фиброзных заболеваний, таких как легочный фиброз и заболевания легких с фиброзным компонентом, например, выбранные из IPF, гигантоклеточной интерстициальной пневмонии, саркоидоза, кистозного фиброза, респираторного дистресс-синдрома, индуцированного лекарственным средством легочного фиброза, гранулематоза, силикоза, асбестоза, системной склеродермии, вызванного вирусом цирроза печени, выбранного из вызванного вирусом гепатита С цирроза печени, или заболеваний кожи с
- 14 038773 фиброзным компонентом, например, выбранных из склеродермии, саркоидоза и системной красной волчанки, и особенно IPF. В более широком смысле предполагают, что соединения в соответствии с настоящим изобретением являются применимыми в лечении интерстициальных легочных заболеваний. Кроме того, предполагают, что соединения в соответствии с настоящим изобретением применимы в лечении заболеваний, характеризующихся гиперпролиферацией клеток, например злокачественная опухоль, и при этом соединения доставляют путем ингаляции, в частности, при злокачественной опухоли легкого. Более того, соединения в соответствии с настоящим изобретением также могут быть применимы в лечении респираторных нарушений, в том числе COPD (включая хронический бронхит и эмфизему), астмы, астмы у детей, аллергического ринита, ринита, синусита, особенно астмы, хронического бронхита и COPD.
Также предполагают, что соединения в соответствии с настоящим изобретением являются применимыми в лечении других фиброзных заболеваний, таких как легочный фиброз, ассоциированный с ревматоидным артритом, респираторным дистресс-синдромом, в том числе острым респираторным дистресс-синдромом, острым повреждением легкого, вызванным облучением легочным фиброзом или пневмонитом, хроническим пневмонитом гиперчувствительности, системным склерозом, синдромом Шегрена, интерстициальными легочными заболеваниями, легочной артериальной гипертензией (РАН), в том числе сосудистым компонентом РАН, или с заболеваниями кожи с фиброзным компонентом, например, выбранными из гипертрофированного рубцевания и келоидов, или с глазными заболеваниями, компонентом которых является фиброз, включающими в себя глаукому, возрастную дегенерацию желтого пятна, диабетический отек желтого пятна, заболевание сухости глаз и диабетическую ретинопатию, или с фиброзом в кишечнике, например, ассоциированным с воспалительным заболеванием кишечника.
Кроме того, предполагают, что соединения в соответствии с настоящим изобретением являются применимыми в предупреждении заболеваний, характеризующихся гиперпролиферацией клеток, например злокачественная опухоль, например, при которых соединения доставляют путем ингаляции, в частности, злокачественная опухоль легкого.
Настоящее изобретение относится к соединению в соответствии с настоящим изобретением для применения в лечении одного или нескольких из упомянутых выше заболеваний. Настоящее изобретение также относится к применению соединения в соответствии с настоящим изобретением в изготовлении медикамента для лечения одного или нескольких из упомянутых выше заболеваний.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения одного из упомянутых выше заболеваний, который предусматривает введение субъекту (особенно субъекту-человеку), нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения в соответствии с настоящим изобретением.
Термин лечение означает профилактику, а также терапевтическое лечение.
Соединения в соответствии с настоящим изобретением могут быть введены один раз, два раза или три раза в сутки, особенно один раз или два раза в сутки. Подходящая величина дозировки может быть определена с учетом тяжести заболевания и размера субъекта. Типичные величины дозировки находятся в диапазоне от 0,01 до 100 мг, например от 0,1 до 10 мг, например от 0,25 до 5 мг, на человеческую дозу, подлежащую доставке один раз, два раза или три раза в сутки, особенно один раз или два раза в сутки.
Соединение в соответствии с настоящим раскрытием также может быть введено в комбинации с одним или несколькими другими активными ингредиентами, например, активными ингредиентами, подходящими для лечения упомянутых выше состояний. Например, возможные активные ингредиенты включают в себя нинтеданиб или пирфенидон (они известны для лечения IPF). Другие активные ингредиенты, подлежащие использованию в комбинации, включают в себя вещества с секретолитической, бронхолитической и/или противовоспалительной активностью, такие как антихолинергические средства, β-2 миметики, стероиды, ингибиторы PDE-IV, ингибиторы р38 MAP киназы, ингибиторы MK2, ингибиторы галектина, антагонисты NK1, антагонисты LTD4, ингибиторы EGFR, ингибиторы VEGF, ингибиторы PDGF, ингибиторы FGF, ингибиторы TGFe, антагонисты LPA1, ингибиторы LOXL2, ингибиторы CTGF, пентоксифиллин, N-ацетилцистеин, средства против IL13, средства против IL4, ингибиторы интегрина Alphave6, ингибиторы IGF, ингибиторы PI3K, ингибиторы mTOR, ингибиторы JNK, пентаксин-2 и антагонисты эндотелина.
Другие активные ингредиенты, подлежащие использованию в комбинации, включают в себя вещества с противофиброзной активностью, такие как ингибиторы PDE-III, комбинированные средства против IL4/13, комбинированные ингибиторы PI3k/mTOR, ингибиторы аутотаксина, антагонисты Р2Х3, антагонисты CTGF, антагонисты 5-LO, антагонисты лейкотриена и ингибиторы ROCK.
Согласно одному варианту осуществления комбинацию активных ингредиентов составляют совместно.
Согласно одному варианту осуществления комбинацию активных ингредиентов совместно вводят последовательно или одновременно.
Согласно одному варианту осуществления соединения в соответствии с настоящим изобретением доставляют путем ингаляции, а другие возможные активные ингредиенты доставляют перорально или парентерально.
- 15 038773
Один вариант осуществления относится к комбинированному продукту, содержащему:
(A) соединение в соответствии с настоящим изобретением; и (B) дополнительный активный ингредиент (упомянутый выше), при этом каждый из компонентов (А) и (В) составляют в смеси с фармацевтически приемлемым разбавителем(ями) или носителем(ями). Комбинация необязательно может содержать дополнительные соответствующие вспомогательные средства.
Один вариант осуществления относится к соединению в соответствии с настоящим изобретением для применения в качестве медицинского препарата, подлежащего введению в комбинации с одним или несколькими дополнительными активными ингредиентами (упомянутыми выше).
Соединения в соответствии с настоящим изобретением, как предполагают, обладают одним или несколькими из следующих полезных свойств:
хорошая ингибиторная активность в отношении киназ, выбранных из VEGFR (например, VEGFR1 и VEGFR2), FGFR и PDGFR;
хорошая противофиброзная активность, например, как определено на in vivo моделях (например, на модели вызванного блеомицином фиброза) при доставке местным путем в легкое;
подходящие физические и химические свойства, а также низкая доза для медицинского продукта, в частности, предназначенного для доставки местным путем в легкое;
хорошее время нахождения в легком или продолжительность действия при введении местным путем в легкое;
низкая проницаемость при анализе проницаемости РАМРА;
хорошая продолжительность действия, например, как измерено с помощью ингибирования индуцированного PDGF-BB фосфорилирования BDGFRP в фибробластных клетках легкого человеческого плода;
хорошая безопасность и переносимость при введении местным путем в легкое;
низкая пероральная биодоступность.
Экспериментальный раздел.
Используемые в изобретении аббревиатуры определены ниже (табл. 1). Предусмотрено, что любые неопределенные аббревиатуры обладают своим общепринятым значением.
Таблица 1. Аббревиатуры
АсОН - ледяная уксусная кислота;
водн. - водный;
br - широкий;
ВЕН - этиленовый мостиковый гибрид;
Boc - трет-бутоксикарбонил;
CSH - гибрид с заряженной поверхностью;
конц. - концентрированный;
d - дублет;
δ - химический сдвиг;
DCM - дихлорметан;
DIAD - диизопропилазодикарбоксилат;
DMF - N,N-диметилформамид;
DMSO - диметилсульфоксид;
(ES+) - ионизация электрораспылением, режим определения положительных ионов;
(ES-) -ионизация электрораспылением, режим определения отрицательных ионов;
Et - этил;
EtOAc - этилацетат;
EtOH - этанол;
ч - час(ы);
HATU - 1-[бис(диметиламино)метилен]-1Н-1,2,3-триазоло[4,5-b]пиридиний 3-оксид гексафторфосфат;
основание Хунига - К,К-диизопропилэтиламин;
М - молярный;
м - мультиплет;
(М+Н)+ - протонированный молекулярный ион;
(М-Н)- - депротонированный молекулярный ион;
Me - метил;
MeCN - ацетонитрил;
МеОН - метанол;
МГц - мегагерц;
мин - минута(ы);
m/z - отношение массы к заряду;
ЯМР - ядерно-магнитный резонанс (спектроскопия);
р - пентуплет;
Ph - фенил;
- 16 038773
Ру - пиридин;
q - квартет;
к.т. - комнатная температура;
HPLC - высокоэффективная жидкостная хроматография;
s - синглет;
нас. - насыщенный;
SAX - анионнообменная (смола) с твердой основой;
SCX - катионнооменная (смола) с твердой основой;
t - триплет;
tBu - трет-бутил;
THF - тетрагндрофуран;
TFA - трифторуксусная кислота;
UV - УФ излучение;
мас. - масса.
Химические примеры.
Общие способы.
Все исходные вещества и растворители получали или из коммерческих источников, или получали согласно ссылкам из литературы. Если не отмечено иное, все реакционные смеси перемешивали. Органические растворы обычным способом сушили над безводным сульфатом магния. Гидрирование выполняли на проточном реакторе Thales H-cube при установленных условиях или под давлением в газовом автоклаве (сосуд высокого давления).
Колоночную хроматографию выполняли на картриджах с расфасованным диоксидом кремния (230400 меш, 40-63 мкм) с применением указанного количества. SCX закупали у Supelco и обрабатывали 1М хлористоводородной кислотой перед применением. Если не отмечено иное, очищаемую реакционную смесь сначала разбавляли МеОН и делали кислотной при помощи нескольких капель АсОН. Этот раствор загружали сразу в SCX и промывали МеОН. Требуемое вещество затем элюировали промыванием 1%NH3 в MeOH.
Препаративная высокоэффективная жидкостная хроматография с обращенной фазой.
Проводили с применением UV определения при 215 и 254 нм или с Waters X-Select Prep-C18, 5 мкм, 19x50 мм колонкой с элюированием градиентом H2O-MeCN с содержанием 0,1% об./об. муравьиной кислоты в течение 10 мин (способ А), или с Waters X-Bridge Prep-C18, 5 мкм, 19x50 мм с элюированием градиентом H2O-MeCN с содержанием 0,1% бикарбоната аммония в течение 10 мин (способ В).
Аналитические способы.
Высокоэффективная жидкостная хроматография с обращенной фазой.
Способ 1. Waters XSelect CSH C18 2,5 мкм (4,6x30 мм) при 40°С; скорость потока 2,5-4,5 мл мин-1 элюирование с градиентом Н2О-MeCN с содержанием 0,1% об./об. муравьиной кислоты в течение 4 мин с применением UV определения при 254 и 215 нм. Информация о градиенте: 0-3,00 мин, с уклоном от 95% Н2О-5% MeCN до 5% Н2О-95% MeCN; 3,00-3,01 мин, поддерживание при 5% Н2О-95% MeCN, скорость потока увеличивалась до 4,5 мл мин-1; 3,01-3,50 мин, поддерживание при 5% Н2О-95% MeCN; 3,503,60 мин, с возвратом до 95% Н2О-5% MeCN, скорость потока уменьшалась до 3,50 мл мин-1; 3,60-3,90 мин, поддерживание при 95% Н2О-5% MeCN; 3,90-4,00 мин, поддерживание при 95% Н2О-5% MeCN, скорость потока уменьшалась до 2,5 мл мин-1.
Способ 2. Waters XBridge ВЕН С18, 2,5 мкм (4,6x30 мм) при 40°С; скорость потока 2,5-4,5 мл мин-1, элюирование с градиентом Н2О-MeCN с содержанием 10 мМ бикарбоната аммония в течение 4 мин с применением UV определения при 254 нм. Информация о градиенте: 0-3,00 мин, с уклоном от 95% Н2О5% MeCN до 5% Н2О-95% MeCN; 3,00-3,01 мин, поддерживание при 5% Н2О-95% MeCN, скорость потока увеличивалась до 4,5 мл мин-1; 3,01-3,50 мин, поддерживание при 5% Н2О-95% MeCN; 3,50-3,60 мин, с возвратом до 95% Н2О-5% MeCN, скорость потока уменьшалась до 3,50 мл мин-1; 3,60-3,90 мин, поддерживание при 95% Н2О-5% MeCN; 3,90-4,00 мин, поддерживание при 95% Н2О-5% MeCN, скорость потока уменьшалась до 2,5 мл мин-1.
Спектроскопия 1Н ЯМР.
Спектры 1Н ЯМР получали на спектрометре Bruker Avance III при 400 МГц с применением остаточного недейтерированного растворителя в качестве эталона и, если не отмечено иное, проводили в DMSO-d6.
Все химические названия были образованы с применением CambridgeSoft ENotebook 12.0.
Путь 1А.
Пример 1. (Z)-Метил-5-метил-3-(((4-(N-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этил)сульфамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, 0,8 формиат.
Промежуточное соединение А. Метил-4-(2-метокси-2-оксоэтил)-2-метил-5-нитробензоат
- 17 038773
К перемешиваемому раствору трет-бутилата калия (35,9 г, 320 ммоль) в DMF (350 мл) в атмосфере азота при -20°С по каплям добавляли раствор метил-2-метил-5-нитробензоата (25,0 г, 128 ммоль) и метил-2-хлорацетата (16,9 мл, 192 ммоль) в DMF (300 мл) в течение 40 мин. Реакционную смесь нагревали до -10°С в течение 2 ч, а затем выливали во взвесь льда и HCl (900 г льда, 500 мл, 35 мас.% HCl). Смесь экстрагировали при помощи DCM (2 х 600 мл) и объединенные органические слои промывали солевым раствором (2 х 400 мл), а затем выпаривали при пониженном давлении. Полученный таким образом неочищенный продукт очищали методом колоночной флеш-хроматографии (SiO2, 330 г, 0-10% EtOAc в DCM, градиентное элюирование) с получением указанного соединения метил-4-(2-метокси-2-оксоэтил)2-метил-5-нитробензоата в виде оранжевого сиропа (31,0 г, 89%); Rt 2,06 мин (способ 1); m/z 266 (М-Н) (ES-); 1H ЯМР δ: 2.61 (3Н, s), 3.62 (3Н, s), 3.88 (3Н, s), 4.12 (2Н, s), 7.59 (1H, s), 8.51 (1H, s).
Промежуточное соединение В. Метил-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
К раствору метил-4-(2-метокси-2-оксоэтил)-2-метил-5-нитробензоата (промежуточное соединение В) (23,0 г, 86,0 ммоль) в уксусной кислоте (301 мл, 5,25 моль) добавляли палладиевый катализатор на углеродном носителе [5 мас.%, 58% воды, тип 87L] (3,30 г, 1,55 ммоль). Смесь гидрировали при к.т. в атмосфере H2 (5 бар) в течение 36 ч, а затем фильтровали через слой целита. Фильтрационный кек промывали EtOAc (500 мл) и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный остаток растворяли в горячем МеОН с нагреванием с обратным холодильником (200 мл) и смесь охлаждали до к.т. Полученное твердое вещество фильтровали, промывали МеОН (200 мл) и сушили в вакууме с получением указанного соединения метил-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде коричневого порошка (7,00 г, 39%); Rt 1,48 мин (способ 1); m/z 206 (М+Н)+ (ES+); 1Н ЯМР δ: 2.45 (3Н, s), 3.32 (2Н, s), 3.81 (3Н, s), 7.17 (1H, s), 7.22 (1H, s), 10.43 (1H, s).
Промежуточное соединение С. (Е)-Метил-1-ацетил-3-(этокси(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
К перемешиваемому раствору метил-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата (промежуточное соединение С) (5,00 г, 24,4 ммоль) в уксусном ангидриде (50,6 мл, 536 ммоль) добавляли (триэтоксиметил)бензол (22,1 мл, 97,0 ммоль) и смесь перемешивали при 110°С в течение 3 ч. Затем перемешивание продолжали при к.т. в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток перетирали в порошок с МеОН (50 мл). Полученное твердое вещество фильтровали, промывали МеОН (50 мл) и сушили в вакууме с получением указанного соединения (E)-метил-1-ацетил-3(этокси(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде желтого порошка (4,50 г, 48%); Rt 2,70 мин (способ 1); m/z 380 (М+Н)+ (ES+); 1Н ЯМР δ: 1.35 (3Н, t), 2.42 (3Н, s), 2.58 (3Н, s), 3.84 (3Н, s), 4.01 (2Н, q), 7.45-7.62 (5Н, перекрывающийся m), 7.90 (1H, s), 8.64 (1H, s).
(Z)-Метил-5-метил-3-(((4-(N-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этил)сульфамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, 0,8 формиат
- 18 038773
Смесь (Е)-метил-1-ацетил-3-(этокси(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата (промежуточное соединение С) (100 мг, 0,264 ммоль) и 4-амино-N-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этил)бензолсульфонамида, ди-трифторацетатной соли (387 мг, 0,316 ммоль) в DMF (3 мл) нагревали при 80°С в течение 16 ч. Добавляли пиперидин (261 мкл, 2,64 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. в течение 2 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток растворяли в 10% МеОН в растворе DCM (20 мл) и промывали водой (20 мл). Слои разделяли с применением картриджа фазового сепаратора и органический слой концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали методом препаративной HPLC (способ А, 20-50% MeCN в воде) с получением указанного соединения (Z)-метил5-метил-3-(((4-(N-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этил)сульфамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата, 0,8 формиат в виде светло-желтого твердого вещества (25 мг, 14%); Rt 1,58 мин (способ 1); m/z 590 (М+Н)+ (ES+); 1Н ЯМР δ: 2.14 (6Н, s), 2.17-2.35 (8Н, перекрывающийся m), 2.74-2.82 (2Н, m), 3.76 (3Н, s), 5.64 (1H, s), 6.96 (2Н, m), 7.37 (1H, s), 7.41 (1H, m), 7.50-7.59 (4Н, перекрывающийся m), 7.60-7.73 (3Н, перекрывающийся m), 8.19 (0.8Н, s), 10.92 (1H, s), 12.24 (1Н, s). (Отсутствие 2Нпредполагаемого затемнения растворителем).
Путь 1В.
Пример 2. (Z)-Метил-3-(((4-((2-(диметиламино)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, формиат.
Промежуточное соединение D. (Z)-Метил-1-ацетил-3-(((4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
Смесь (E)-метил-1-ацетил-3-(этокси(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата (промежуточное соединение С) (1,00 г, 2,64 ммоль) и трет-бутил-4-аминобензоата (509 мг, 2,64 ммоль) в
DMF (9 мл) нагревали при 100°С в течение 18 ч. После охлаждения до к.т. осадок собирали фильтрацией, промывали Et2O (10 мл) и сушили в вакууме с получением указанного соединения (Z)-метил-1-ацетил-3(((4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде желтого твердого вещества (1,20 г, 86%); Rt 3,23 мин (способ 1); m/z 527 (М+Н)+ (ES+); 1Н ЯМР δ: 1.50 (9Н, s), 2.13 (3Н, s), 2.73 (3Н, s), 3.78 (3Н, s), 5.54 (1H, s), 7.04 (2Н, m), 7.51 (2Н, m), 7.58-7.72 (5Н, перекрывающийся m), 8.68 (1H, s), 11.89 (1H, s).
Промежуточное соединение Е. (Z)-4-(((1-Ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3илиден)(фенил)метил)амино)бензойная кислота, трифторуксусный аддукт
- 19 038773
К раствору (Z)-метил-1-ацетил-3-(((4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата (промежуточное соединение О) (1,20 г, 2,28 ммоль) в DCM (14 мл) добавляли TFA (1,76 мл, 22,8 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. в течение 72 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного соединения (Z)-4-(((1-ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)бензойной кислоты, трифторуксусного аддукта, в виде желтого твердого вещества (1,00 г, 72%); Rt2,72 мин (способ 1); m/z 471 (М+Н)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 2.13 (3Н, s), 2.73 (3Н, s), 3.78 (3Н, s), 5.54 (1H, s), 7.04 (2Н, m), 7.50 (2Н, m), 7.57-7.76 (5Н, перекрывающийся m), 8.68 (1H, s), 11.89 (1H,s), 12.89 (1H, s).
(Z)-Метил-3-(((4-((2-(диметиламино)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, формиат
(Z)-4-(((1-Ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)бензойную кислоту, трифторуксусный аддукт (промежуточное соединение Е) (75 мг, 0,128 ммоль) и HATU (73,2 мг, 0,192 ммоль) в DMF (2 мл) перемешивали при к.т. в течение 10 мин. Затем добавляли основание Хунига (179 мкл, 1,027 ммоль) и N1,N1-диметилэтан-1,2-диамин (37,8 мкл, 0,346 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 16 ч. Добавляли пиперидин (127 мкл, 1,28 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 4 ч и реакционную смесь разделяли между DCM (25 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (10 мл). Органический слой промывали солевым раствором (10 мл) и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали методом препаративной HPLC (способ А, 20-50% MeCN в воде) с получением указанного соединения (Z)-метил-3-(((4-((2-(диметиламино)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата, формиата, в виде светло-желтого твердого вещества (3,7 мг, 5%); Rt 1,53 мин (способ 1); m/z 499 (М+Н)+ (ES+); 1Н ЯМР δ: 2.14 (3Н, s), 2.80 (6Н, s), 3.17-3.23 (2Н, перекрывающийся m), 3.50-3.56 (2Н, перекрывающийся m), 3.75 (3Н, s), 5.63 (1H, s), 6.90 (2Н, m), 7.37 (1H, s), 7.52 (2Н, m), 7.56-7.72 (5Н, перекрывающийся m), 8.56 (1H, m), 10.89 (1H, s), 12.22 (1H, s).
Пример 3. (Z)-Метил-5-метил-3-(((4-(((1-метилпиперидин-4-ил)метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, формиат
(Z)-4-(((1-Ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)бензойную кислоту, трифторуксусный аддукт (промежуточное соединение Е) (75 мг, 0,128 ммоль) и HATU (73,2 мг, 0,192 ммоль) в DMF (2 мл) перемешивали при к.т. в течение 10 мин. Затем добавляли основание Хунига (179 мкл, 1,02 ммоль) и (1-метилпиперидин-4-ил)метанамин (32,9 мг, 0,257 ммоль) в DMF (0,2 мл). Смесь перемешивали при к.т. в течение 16 ч. Добавляли пиперидин (127 мкл, 1,28 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 4 ч и реакционную смесь разделяли между DCM (25 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (10 мл). Органический слой промывали солевым раствором (10 мл) и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали методом препаративной HPLC (способ А, 20-50% MeCN в воде) с получением указанного соединения (Z)-метил-5-метил-3-(((4(((1-метилпиперидин-4-ил)метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата, формиата, в виде светло-желтого твердого вещества (19 мг, 25%); Rt 1,55 мин (способ 1); m/z 539 (М+Н)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 1.11-1.28 (2Н, перекрывающийся m), 1.53 (1H, m), 1.60-1.73 (2Н, перекрывающийся m), 2.13 (3Н, s), 2.15-2.24 (2Н, перекрывающийся m), 2.34 (3Н, s), 2.89-3.00 (2Н, перекрывающийся m), 3.09 (2Н, t), 3.75 (3Н, s), 5.61 (1H, s), 6.87 (2Н, m), 7.36 (1H, s), 7.52 (2Н, m), 7.58-7.69 (5Н, перекрывающийся m), 8.17 (1H, s), 8.36 (1H, t), 10.88 (1H, s), 12.23 (1H, s).
- 20 038773
Пример 4. (Z)-Метил-5-метил-3-(((4-((2-(4-метилпиперазин-1-ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
(Z)-4-(((1-Ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)бензойную кислоту, трифторуксусный аддукт (промежуточное соединение Е) (75 мг, 0,128 ммоль) и HATU (73 мг, 0.192 ммоль) в DMF (2 мл) перемешивали при к.т. в течение 10 мин, затем добавляли основание Хунига (179 мкл, 1,03 ммоль) и 2-(4-метилпиперазин-1-ил)этанамин (50 мг, 0,346 ммоль) в DMF (0,5 мл). Смесь перемешивали при к.т. в течение 3 ч и добавляли пиперидин (127 мкл, 1,28 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 18 ч. Реакционную смесь разделяли между DCM (25 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (10 мл). Органический слой промывали солевым раствором (10 мл) и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали методом препаративной HPLC (способ А, 20-50% MeCN в воде) с получением указанного соединения (Z)-метил-5-метил-3-(((4((2-(4-метилпиперазин-1-ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде светло-желтого твердого вещества (19 мг, 25%); Rt 1,46 мин (способ 1); m/z 554 (М+Н)+ (ES+); 1Н ЯМР δ: 2.13 (3Н, s), 2.21 (3Н, s), 2.32-2.46 (8Н, перекрывающийся m), 3.27-3.34 (4Н, перекрывающийся m), 3.75 (3Н, s), 5.62 (1H, s), 6.87 (2Н, m), 7.36 (1H, s), 7.52 (2Н, m), 7.56-7.69 (5Н, перекрывающийся m), 8.26 (1H, t), 10.87 (1H, s), 12.22 (1H, s).
Пример 5. (Z)-Метил-5 -метил-3 -(((4-((2-(4-метил-1,4-диазепан-1 -ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, формиат
(Z)-4-(((1-Ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)бензойную кислоту, трифторуксусный аддукт (промежуточное соединение Е) (75 мг, 0,128 ммоль) и HATU (73 мг, 0,192 ммоль) в DMF (2 мл) перемешивали при к.т. в течение 10 мин, затем добавляли основание Хунига (179 мкл, 1,03 ммоль) и 2-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)этанамин (54,5 мг, 0,346 ммоль) в DMF (0,5 мл). Смесь перемешивали при к.т. в течение 3 ч и добавляли пиперидин (127 мкл, 1,28 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 18 ч. Реакционную смесь разделяли между DCM (25 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (10 мл). Органический слой промывали солевым раствором (10 мл) и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали методом препаративной HPLC (способ А, 10-40% MeCN в воде) с получением указанного соединения (Z)-метил-5-метил-3-(((4((2-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата, формиата, в виде светло-желтого твердого вещества (27 мг, 34%); Rt 1,29 мин (способ 1); m/z 568 (М+Н)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 1.68-1.77 (2Н, перекрывающийся m), 2.13 (3Н, s), 2.34 (3Н, s), 2.58 (2Н, t), 2.612.74 (8Н, перекрывающийся m), 3.23-3.32 (2Н, перекрывающийся m), 3.75 (3Н, s), 5.62 (1H, s), 6.87 (2Н, m), 7.36 (1H, s), 7.52 (2Н, m), 7.56-7.71 (5Н, перекрывающийся m), 8.20 (1H, s), 8.24 (1H, t), 10.88 (1H, s), 12.22 (1H, s).
Пример 6. (Z)-Метил-3 -(((4-((2-(4-(диметиламино)пиперидин-1 -ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, формиат
- 21 038773
(Z)-4-((( 1 -Ацетил-6-(метоксикарбонил)-5 -метил-2-оксоиндолин-3 -илиден)(фенил)метил)амино)бензойную кислоту, трифторуксусный аддукт (промежуточное соединение Е) (75 мг, 0,128 ммоль) и HATU (73 мг, 0,192 ммоль) в DMF (2 мл) перемешивали при к.т. в течение 10 мин, затем добавляли основание Хунига (179 мкл, 1,03 ммоль) и 1-(2-аминоэтил)-N,N-диметилпиперидин-4-амин (59,3 мг, 0,346 ммоль) в DMF (0,2 мл). Смесь перемешивали при к.т. в течение 3 ч и добавляли пиперидин (127 мкл, 1,28 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 1 ч. Реакционную смесь разделяли между DCM (25 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (10 мл). Органический слой промывали солевым раствором (10 мл) и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали методом препаративной HPLC (способ А, 10-40% MeCN в воде) с получением указанного соединения (Z)-метил-3-(((4((2-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата, формиата, в виде светло-желтого твердого вещества (20 мг, 24%); Rt 1,26 мин (способ 1); m/z 582 (М+Н)+ (ES+); 1Н ЯМР δ: 1.29-1.44 (2Н, перекрывающийся m), 1.65-1.77 (2Н, перекрывающийся m), 1.86-1.98 (2Н, перекрывающийся m), 2.14 (3Н, s), 2.24 (6Н, s), 2.40 (2Н, t), 2.85-2.95 (2Н, перекрывающийся m), 3.76 (3Н, s), 5.62 (1H, s), 6.88 (2Н, m), 7.37 (1H, s), 7.53 (2Н, m), 7.57-7.70 (5Н, перекрывающийся m), 8.22 (1H, s), 8.28 (1H, t), 10.89 (1H, s), 12.23 (1H, s). (Отсутствие 3Нпредполагаемого затемнения растворителем).
Пример 7. (Z)-Метил-3-(((4-((2-(4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил)-2-оксоэтил)кαрбαмоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, формиат
О
(Z)-4-((( 1 -Ацетил-6-(метоксикарбонил)-5 -метил-2-оксоиндолин-3 -илиден)(фенил)метил)амино)бензойную кислоту, трифторуксусный аддукт (промежуточное соединение Е) (75 мг, 0,128 ммоль) и HATU (73 мг, 0,192 ммоль) в DMF (2 мл) перемешивали при к.т. в течение 10 мин, затем добавляли основание Хунига (179 мкл, 1,03 ммоль) и 2-амино-1-(4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил)этанон, 2 HCl (90 мг, 0,346 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 3 ч и добавляли пиперидин (127 мкл, 1,28 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 18 ч. Реакционную смесь разделяли между DCM (25 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (10 мл). Органический слой промывали солевым раствором (10 мл) и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали методом препаративной HPLC (способ А, 20-50% MeCN в воде) с получением указанного соединения (Z)-метил-3-(((4-((2-(4-(2гидроксиэтил)пиперазин-1-ил)-2-оксоэтил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата, формиата, в виде светло-желтого твердого вещества (24 мг, 27%); Rt 1,51 мин (способ 1); m/z 598 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.14 (3Н, s), 2.90-3.58 (8Н, перекрывающийся m), 3.68-3.79 (5Н, перекрывающийся m), 4.00-4.45 (4Н, перекрывающийся m), 5.40 (1H, br s), 5.63 (1H, s), 6.90 (2Н, m), 7.37 (1H, s), 7.53 (2Н, m), 7.57-7.70 (5Н, перекрывающийся m), 8.52 (1H, s), 9.63 (1H, br s), 10.89 (1H, s), 12.23 (1H, s).
Пример 8. (Z)-Метил-5-метил-3-(((4-((2-(4-метилпиперαзин-1-ил)-2-оксоэтил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, 0,5 формиат
- 22 038773
(Z)-4-(((1-Ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)бензойную кислоту, трифторуксусный аддукт (промежуточное соединение Е) (75 мг, 0,128 ммоль) и HATU (73 мг, 0,192 ммоль) в DMF (2 мл) перемешивали при к.т. в течение 10 мин, затем добавляли основание Хунига (179 мкл, 1,03 ммоль) и 2-амино-1-(4-метилпиперазин-1-ил)этанон, 2 HCl (80 мг, 0,346 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 3 ч и добавляли пиперидин (127 мкл, 1,28 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 18 ч. Реакционную смесь разделяли между DCM (25 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (10 мл). Органический слой промывали солевым раствором (10 мл) и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали методом препаративной HPLC (способ А, 20-50% MeCN в воде) с получением указанного соединения (Z)-метил-5-метил-3-(((4((2-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-оксоэтил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата, 0,5 формиата, в виде светло-желтого твердого вещества (28 мг, 36%); Rt 1,52 мин (способ 1); m/z 568 (М+Н)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 2.14 (3Н, s), 2.26 (3Н, s), 2.31-2.46 (4Н, перекрывающийся m), 3.41-3.54 (4Н, перекрывающийся m), 3.76 (3Н, s), 4.06 (2Н, d), 5.64 (1H, s), 6.89 (2Н, m), 7.37 (1H, s), 7.53 (2Н, m), 7.57-7.70 (5Н, перекрывающийся m), 8.13 (0.5Н, s), 8.46 (1H, t), 10.89 (1H, s), 12.23 (1H, s).
Пример 9. (Z)-Метил-5-метил-2-оксо-3-(((4-((2-(3-оксопиперазин-1-ил)этил)кαрбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)индолин-6-карбоксилат
(Z)-4-(((1-Ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)бензойную кислоту, трифторуксусный аддукт (промежуточное соединение Е) (75 мг, 0,128 ммоль) и HATU (73 мг, 0,192 ммоль) в DMF (2 мл) перемешивали при к.т. в течение 10 мин, затем добавляли основание Хунига (179 мкл, 1,03 ммоль) и 4-(2-аминоэтил)пиперазин-2-он (49,6 мг, 0,346 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 3 ч и добавляли пиперидин (127 мкл, 1,28 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 18 ч. Реакционную смесь разделяли между DCM (25 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (10 мл). Органический слой промывали солевым раствором (10 мл) и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали методом препаративной HPLC (способ А, 20-50% MeCN в воде) с получением указанного соединения (Z)-метил-5-метил-2-оксо-3-(((4-((2-(3оксопиперазин-1-ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)индолин-6-карбоксилата в виде светло-желтого твердого вещества (43 мг, 58%); Rt 1,59 мин (способ 1); m/z 554 (М+Н)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 2.14 (3Н, s), 2.40-2.63 (2Н, перекрывающийся m), 2.96 (1H, m), 3.13 (1H, m), 3.20-3.48 (4Н, перекрывающийся m), 3.58 (1H, m), 3.75 (3Н, s), 3.99 (1H, m), 5.62 (1H, s), 6.89 (2Н, m), 7.36 (1H, s), 7.53 (2Н, m), 7.57-7.69 (5Н, перекрывающийся m), 8.27-8.63 (2Н, перекрывающийся m), 10.89 (1Н, s), 12.23 (1Н, s).
Пример 10. (Z)-Метил-5-метил-3 -(((4-((3 -(4-метилпиперазин-1 -ил)-3 -оксопропил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
- 23 038773
(Z)-4-(((1-Ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)бензойную кислоту, трифторуксусный аддукт (промежуточное соединение Е) (800 мг, 1,37 ммоль) и HATU (781 мг, 2,05 ммоль) в DMF (6 мл) перемешивали при к.т. в течение 10 мин, затем добавляли основание Хунига (1,43 мл, 8,21 ммоль) и 3-амино-1-(4-метилпиперазин-1-ил)пропан-1-он (223 мг, 1,30 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 3 ч и добавляли пиперидин (1,35 мл, 13,7 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 18 ч. Реакционную смесь разделяли между 10% МеОН в DCM (25 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (10 мл). Органический слой промывали солевым раствором (10 мл) и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Вещество загружали в картридж SCX в МеОН (10 мл). Колонку промывали МеОН (30 мл) и фильтрат удаляли. Продукт элюировали 1% аммиаком в МеОН. Растворитель выпаривали и остаток очищали методом колоночной флеш-хроматографии (SiO2, 80 г, 0-30% 1% аммиака в МеОН в DCM, градиентное элюирование) с получением (Z)-метил-5-метил-3(((4-((3-(4-метилпиперазин-1-ил)-3-оксопропил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде светло-желтого твердого вещества (386 мг, 48%); Rt 1,60 мин (способ 1); m/z 582 (М+Н)+ (ES+); 1Н ЯМР δ: 2.13 (3Н, s), 2.15 (3Н, s), 2.21 (2Н, t), 2.24 (2Н, t), 2.53 (2Н, t), 3.35-3.45 (6Н, перекрывающийся m), 3.75 (3Н, s), 5.62 (1H, s), 6.87 (2Н, m), 7.36 (1H, s), 7.51 (2Н, m), 7.57-7.68 (5Н, перекрывающийся m), 8.37 (1H, t), 10.88 (1H, s), 12.21 (1H, s).
Пример 11. (Z)-Метил-5-метил-3-(((4-(4-(2-(метиламино)-2-оксоэтил)пиперазин-1-карбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
(Z)-4-(((1-Ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)бензойную кислоту, трифторуксусный аддукт (промежуточное соединение Е) (75 мг, 0,128 ммоль) и HATU (73 мг, 0,192 ммоль) в DMF (2 мл) перемешивали при к.т. в течение 10 мин, затем добавляли основание Хунига (179 мкл, 1,03 ммоль) и N-метил-2-(пиперазин-1-ил)ацетамид (54,5 мг, 0,346 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 3 ч и добавляли пиперидин (127 мкл, 1,28 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 18 ч. Реакционную смесь разделяли между DCM (25 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (10 мл). Органический слой промывали солевым раствором (10 мл) и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали методом препаративной HPLC (способ А, 20-50% MeCN в воде) с получением указанного соединения (Z)-метил-5-метил-3-(((4-(4-(2(метиламино)-2-оксоэтил)пиперазин-1-карбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде светло-желтого твердого вещества (8,8 мг, 12%); Rt 1,59 мин (способ 1); m/z 568 (М+Н)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 2.13 (3Н, s), 2.61-2.70 (4Н, перекрывающийся m), 3.75 (3Н, s), 5.60 (1H, s), 6.88 (2Н, m), 7.24 (2Н, m), 7.37 (1H, s), 7.53 (2Н, m), 7.57-7.71 (3Н, перекрывающийся m), 8.26 (1H, br s), 10.87 (1H, s), 12.23 (1H, s). (Отсутствие 9Н-предполагаемого затемнения растворителем).
Пример 12. (Z)-Метил-3-(((4-((2-(4-гидроксипиперидин-1-ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, 0,8 формиат
- 24 038773
(Z)-4-(((1-Ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)бензойную кислоту, трифторуксусный аддукт (промежуточное соединение Е) (75 мг, 0,128 ммоль) и HATU (73 мг, 0,192 ммоль) в DMF (2 мл) перемешивали при к.т. в течение 10 мин, затем добавляли основание Хунига (179 мкл, 1,03 ммоль) и 1-(2-аминоэтил)пиперидин-4-ол (50 мг, 0,346 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 3 ч и добавляли пиперидин (127 мкл, 1,28 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 18 ч. Реакционную смесь разделяли между DCM (25 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (10 мл). Органический слой промывали солевым раствором (10 мл) и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали методом препаративной HPLC (способ А, 20-50% MeCN в воде) с получением указанного соединения (Z)-метил-3-(((4-((2-(4-гидроксипиперидин1-ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата, 0,8 формиата, в виде светло-желтого твердого вещества (9 мг, 11%); Rt 1,54 мин (способ 1); m/z 555 (М+Н)+ (ES+); 1Н ЯМР δ: 1.28-1.42 (2Н, перекрывающийся m), 1.64-1.72 (2Н, перекрывающийся m), 2.02-2.11 (2Н, перекрывающийся m), 2.13 (3Н, s), 2.42 (2Н, t), 2.69-2.78 (2Н, перекрывающийся m), 3.75 (3Н, s), 4.56 (1H, br s), 5.62 (1H, s), 6.87 (2Н, m), 7.36 (1H, s), 7.52 (2Н, m), 7.57-7.69 (5Н, перекрывающийся m), 8.16 (0.8Н, s), 8.28 (1H, t), 10.88 (1H, s), 12.22 (1H, s). (Отсутствие 3Н-предполагаемого затемнения растворителем).
Пример 13. (Z)-Метил-3-(((4-(( 1 -(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
(Z)-4-(((1-Ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)бензойную кислоту, трифторуксусный аддукт (промежуточное соединение Е) (75 мг, 0,128 ммоль) и HATU (73 мг, 0,192 ммоль) в DMF (2 мл) перемешивали при к.т. в течение 10 мин, затем добавляли основание Хунига (179 мкл, 1,03 ммоль) и 2-(4-аминопиперидин-1-ил)этанол, 2 HCl (100 мг, 0,462 ммоль) в DMF (1 мл). Смесь перемешивали при к.т. в течение 2 ч и добавляли пиперидин (127 мкл, 1,28 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 18 ч. Реакционную смесь разделяли между DCM (25 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (10 мл). Органический слой промывали солевым раствором (10 мл) и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт загружали в колонку SCX (2 г) в 5% АсОН в МеОН (10 мл). Колонку промывали МеОН (10 мл) и фильтрат удаляли. Продукт элюировали 1% аммиаком в МеОН (25 мл). Растворитель выпаривали при пониженном давлении и продукт очищали методом колоночной флеш-хроматографии (SiO2, 12 г, 0-30% МеОН в DCM, градиентное элюирование) с получением (Z)-метил-3-(((4-((1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде светло-желтого твердого вещества (33 мг, 34%); Rt 1,56 мин (способ 1); m/z 555 (М+Н)+ (ES+); 1Н ЯМР δ: 1.43-1.56 (2Н, перекрывающийся m), 1.65-1.74 (2Н, перекрывающийся m), 2.00 (2Н, t), 2.13 (3Н, s), 2.36 (2Н, m), 2.85 (2Н, m), 3.47 (2Н, m), 3.66 (1H, m), 3.75 (3Н, s), 4.37 (1H, m), 5.61 (1H, s), 6.86 (2Н, m), 7.36 (1H, s), 7.52 (2Н, m), 7.56-7.76 (5Н, перекрывающийся m), 8.09 (1H, d), 10.88 (1H, s), 12.23 (1H, s).
Пример 14. (Z)-Метил-3-(((4-(((1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил)метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
- 25 038773
(Z)-4-(((1-Ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)бензойную кислоту, трифторуксусный аддукт (промежуточное соединение Е) (75 мг, 0,128 ммоль) и HATU (73 мг, 0,192 ммоль) в DMF (2 мл) перемешивали при к.т. в течение 10 мин, затем добавляли основание Хунига (179 мкл, 1,03 ммоль) и 2-(4-(аминометил)пиперидин-1-ил)этанол (73,1 мг, 0,462 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 3 ч и добавляли пиперидин (127 мкл, 1,28 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 18 ч. Реакционную смесь разделяли между DCM (25 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (10 мл). Органический слой промывали солевым раствором (10 мл) и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт загружали в колонку SCX (2 г) в 5% АсОН в МеОН (10 мл). Колонку промывали МеОН (10 мл) и фильтрат удаляли. Затем продукт элюировали 1% аммиаком в МеОН (25 мл). Растворитель выпаривали при пониженном давлении и продукт очищали методом колоночной флеш-хроматографии (SiO2, 12 г, 0-30% МеОН в DCM, градиентное элюирование) с получением (Z)-метил-3-(((4-(((1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил)метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде светло-желтого твердого вещества (63 мг, 63%); Rt 1,56 мин (способ 1); m/z 569 (М+Н)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 1.05-1.19 (2Н, перекрывающийся m), 1.47 (1H, m), 1.58 (2Н, m), 1.81-1.94 (2Н, перекрывающийся m), 2.13 (3Н, s), 2.28-2.40 (2Н, перекрывающийся m), 2.82 (2Н, m), 3.07 (2Н, t), 3.46 (2Н, m), 3.75 (3Н, s), 4.34 (1H, s), 5.61 (1H, s), 6.86 (2Н, m), 7.36 (1H, s), 7.52 (2Н, m), 7.57-7.70 (5Н, m), 8.32 (1H, t), 10.88 (1H, s), 12.23 (1H, s).
Путь 1С.
Пример 15. (Z)-Метил-3-(((4-(4-(2-((2-гидроксиэтил)амино)-2-оксоэтил)пиперазин-1 -карбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат.
Промежуточное соединение F. (Z)-Метил-1-ацетил-3-(((4-(4-(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)пиперазин-1-карбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
(Z)-4-(((1-Ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)бензойную кислоту, трифторуксусный аддукт (промежуточное соединение Е) (500 мг, 0,855 ммоль) и HATU (488 мг, 1,28 ммоль) в DMF (5 мл) перемешивали при к.т. в течение 10 мин, затем добавляли основание Хунига (448 мкл, 2,57 ммоль) и трет-бутил-2-(пиперазин-1-ил)ацетат (171 мг, 0,855 ммоль) в DMF (1 мл). Смесь перемешивали при к.т. в течение 3 ч. Реакционную смесь разделяли между DCM (100 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (40 мл). Органический слой промывали солевым раствором (40 мл) и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали методом колоночной флеш-хроматографии (SiO2, 12 г, 0-30% 1% аммиака в МеОН в DCM, градиентное элюирование) с получением указанного соединения (Z)-метил-1-ацетил-3-(((4-(4-(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)пиперазин-1-карбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде светложелтого твердого вещества (483 мг, 83%); Rt 2,31 мин (способ 1); m/z 653 (М+Н)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 1.40 (9Н, s), 2.13 (3Н, s), 2.73 (3Н, s), 3.13 (2Н, s), 3.17-3.30 (2Н, перекрывающийся m), 3.43-3.62 (2Н, перекрывающийся m), 3.77 (3Н, s), 5.49 (1H, s), 7.03 (2Н, m), 7.21 (2Н, m), 7.50 (2Н, m), 7.57-7.68 (3Н, перекрывающийся m), 8.68 (1H, s), 11.88 (1H, s). (Отсутствие 4Н-предполагаемого затемнения растворителем).
Промежуточное соединение G. (Z)-2-(4-(4-(((1-Ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)бензоил)пиперазин-1-ил)уксусная кислота
- 26 038773
К раствору (Z)-метил-1-ацетил-3-(((4-(4-(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)nиперазин-1-карбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата (промежуточное соединение F) (481 мг, 0,737 ммоль) в DCM (4,8 мл) добавляли TFA (568 мкл, 7,37 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. в течение 16 ч. Добавляли другую часть TFA (1 мл, 13,0 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при к.т. еще 3 ч, после чего добавляли еще одну часть TFA (0,5 мл, 7,50 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при к.т. еще один час. Реакционную смесь по каплям добавляли к насыщенному водному раствору NaHCO3 (50 мл). Слои разделяли и органические вещества концентрировали при пониженном давлении. Твердое вещество, образованное в водной среде, собирали фильтрацией и сушили при пониженном давлении. Оба твердых вещества объединяли с получением (Z)-2-(4-(4-(((1-ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)бензоил)пиперазин-1-ил)уксусной кислоты (410 мг, 89%) в виде светло-желтого твердого вещества; Rt 1,94 мин (способ 1); m/z 597 (М+Н)+ (ES+); 1Н ЯМР δ: 2.13 (3Н, s), 2.73 (3Н, s), 3.17 (2Н, s), 3.47-3.65 (2Н, перекрывающийся m), 3.77 (3Н, s), 5.50 (1H, s), 7.03 (2Н, m), 7.22 (2Н, m), 7.50 (2Н, m), 7.55-7.68 (4Н, перекрывающийся m), 8.68 (1H, s), 11.89 (1H, s). (Отсутствие 6Н-предполагаемого затемнения растворителем).
(Z)-Метил-3-(((4-(4-(2-((2-гидроксиэтил)амино)-2-оксоэтил)пиперазин-1-карбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
OH
(Z)-2-(4-(4-(((1-ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)бензоил)пиперазин-1-ил)уксусную кислоту (промежуточное соединение G) (200 мг, 0,335 ммоль) и HATU (191 мг, 0,503 ммоль) в DMF (2 мл) перемешивали при к.т. в течение 10 мин, затем добавляли основание Хунига (176 мкл, 1,00 ммоль) и 2-аминоэтанол (22,52 мг, 0,369 ммоль) в DMF (1 мл). Смесь перемешивали при к.т. в течение 4 ч и добавляли пиперидин (332 мкл, 3,35 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 18 ч. Реакционную смесь разделяли между DCM (25 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (10 мл). Органический слой промывали солевым раствором (10 мл) и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт загружали в картридж SCX в 5% АсОН в MeOH:MeOH:DCM (2:1:1, 20 мл). Колонку промывали МеОН (30 мл) и фильтрат удаляли. Продукт элюировали 1% аммиаком в МеОН (25 мл). Растворитель выпаривали при пониженном давлении и продукт очищали методом колоночной флеш-хроматографии (SiO2, 12 г, 0-30% 1% аммиака в МеОН в DCM, градиентное элюирование) с получением указанного соединения (Z)-метил-3-(((4-(4-(2-((2гидроксиэтил)амино)-2-оксоэтил)пиперазин-1-карбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата (81 мг, 39%) в виде светло-желтого твердого вещества; Rt 1,57 мин (способ 1); m/z 598 (М+Н)+ (ES+); 1Н ЯМР δ: 2.13 (3Н, s), 2.33-2.47 (4Н, перекрывающийся m), 2.93 (2Н, s), 3.16 (2Н, q), 3.39 (2Н, q), 3.75 (3Н, s), 4.68 (1H, t), 5.60 (1H, s), 6.87 (2Н, m), 7.19 (2Н, m), 7.36 (1H, s), 7.52 (2Н, m), 7.57-7.68 (3Н, перекрывающийся m), 7.72 (1H, s), 10.85 (1H, s), 12.21 (1H, s). (Отсутствие 4Нпредполагаемого затемнения растворителем).
Следующие соединения примеров (табл. 2) могут быть получены способами синтеза, подобными вышеупомянутым в примерах, или способами, описанными в другом месте настоящего описания.
- 27 038773
Таблица 2. Дополнительные соединения примеров изобретения
Пример 16:
О R1 1.59 мин (способ 1); m/z 513
о X-NH П Н О (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР (смесь ротамеров) δ: 1.89 (ЗН, s), 2.13 (ЗН, s), 2.15-2.26 (4Н, перекрывающийся т), 2.34-2.44 (1Н, т), 2.57 (1.5Н, s), 2.87 (1.5Н,
(7)-Метил-3-(((3-((2- (диметиламино)этил)(метил)карбамоил)фенил) амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6карбоксилат s), 2.88-2.96 (1Н, т), 3.39-3.49 (1Н, т), 3.75 (ЗН, s), 5.57 (1Н, s), 6.77 (0.5H, s), 6.85 (0.5H, s), 7.02 (2H, d), 7.26 (1H, t), 7.36 (1H, s), 7.49-7.51 (2H, перекрывающийся m), 7.54-7.66 (3H, перекрывающийся m), 10.83 (1H, s), 12.13 (1H, s).
Код пути*: 1В
Пример 17:
R1 1.56 мин (способ 1); m/z 511 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.13 (ЗН, s), 2.16 (ЗН, s), 2.19-2.31 (4Н, перекрывающийся т), 3.75 (ЗН, s), 5.60 (1Н, s), 6.87 (2Н, т), 7.18 (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.52 (2Н, т), 7.56-7.68 (ЗН, перекрывающийся (2)-Метил-5-метил-3-(((4-(4-метилпиперазин-1- ш), 10.85 (1Н, s), 12.21 (1Н, s).
карбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2- (Отсутствие 4Н-предполагаемого
- 28 038773
оксоиндолин-6-карбоксилат затемнения растворителем).
Код пути*: 1В
Пример 18:
О (2)-Метил-5-метил-3-(((4-((1-метилпиперидин-4ил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2оксоиндолин-6-карбоксилат, формиат
R1 1.54 мин (способ 1); m/z 525 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.601.75 (2Н, перекрывающийся т), 1.91-2.02 (2Н, перекрывающийся т), 2.13 (ЗН, s), 2.71-2.79 (ЗН, перекрывающийся т), 2.98-3.13 (2Н, перекрывающийся т), 3.403.47 (2Н, перекрывающийся т), 3.75 (ЗН, s), 3.94 (1Н, т), 5.62 (1Н, s), 6.86 (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.54 (2Н, т), 7.57-7.71 (5Н, перекрывающийся т), 8.30 (1Н, d), 9.16 (1Н, s), 10.89 (1Н, s), 12.24 (1Н, s).
Код пути*: 1В
Пример 19:
-DH
R1 1.49 мин (способ 1); m/z 541 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ:
(ЗН,
s), 2.28-2.45 перекрывающийся ш), 3.49 t), 3.76 (ЗН, s), 4.43 (1Н, s), (1Н,
s), 6.80-6.91
2.14 (6Н, (ЗН, 5.60 (2Н, (2)-Метил-3 -(((4-(4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1 карбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил2-оксоиндолин-6-карбоксилат, 0,5 формиат перекрывающийся ш), 7.13-7.23 (2Н, перекрывающийся ш), 7.37 (1Н,
s),
7.53 (2Н, перекрывающийся т), 7.57-7.70 (ЗН, перекрывающийся т), 8.16 (0.5Н, s), 10.86 (1Н, s), 12.22 (1Н,
s).
(Отсутствие
ЗНпредполагаемого затемнения растворителем)
- 29 038773
Код пути*: 1В
Пример 20:
О 11 О Ya / \^-ΝΗ . _ j о XjO=° Π h R1 1.58 мин (способ 1); m/z 569 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.661.83 (2Н, перекрывающийся ш), 1.89-2.03 (2Н, перекрывающийся т), 2.13 (ЗН, s), 2.99-3.14 (2Н, перекрывающийся т), 3.45-3.55
0 (2Н, перекрывающийся т), 3.65
(2)-Метил-3 -(((4-(( 1 -(2-метоксиэтил)пипер идин-4- (2Н, t), 3.75 (ЗН, s), 3.94 (1Н, т),
ил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5- 5.61 (1Н, s), 6.87 (2Н, т), 7.36
метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат (1Н, s), 7.53 (2Н, т), 7.57-7.72 (5Н, перекрывающийся т), 8.33 (1Н, d), 10.89 (1Н, s), 12.23 (1Н, s). (Отсутствие 5Н- предполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: 1В
Пример 21:
о н R1 1.40 мин (способ 1); m/z 568
/ Ν·- QP rNH (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.54-
1.68 (2Н, перекрывающийся т),
2.13 (ЗН, s), 2.14 (ЗН, s), 2.20-2.41
(8Н, перекрывающийся т), 3.16-
Г н 3.25 (2Н, перекрывающийся т),
0 3.75 (ЗН, s), 5.61 (1Н, s), 6.85 (2Н,
(2)-Метил-5 -метил-3 -(((4-((3 -(4-метилпиперазин-1 - т), 7.36 (1Н, s), 7.53 (2Н, т),
ил)пропил)карбамоил)фенил)амино)(фенил) 7.56-7.70 (5Н, перекрывающийся
метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, формиат т), 8.19 (1Н, s), 8.35 (1Н, t), 10.88 (1Н, s), 12.23 (1Н, s). (Отсутствие 2Н-предполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: 1В
- 30 038773
(2)-Метил-3 -(((4-((2-(4,4-дифтор пипер идин-1 ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
Пример 22:
Rl 1.53 мин (способ 1); m/z 513 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.65 (2Н, m), 2.13 (ЗН, s), 2.30 (6Н, s), 2.46 (2Н, t), 3.22 (2Н, m), 3.75 (ЗН, s), 5.61 (1Н, s), 6.87 (2H, m), 7.36 (1H, s), 7.53 (2H, m), 7.587.70 (5H, перекрывающийся m), 8.16 (0.5H, s), 8.39 (1H, t), 10.88 (диметиламино)пропил)карбамоил)фенил)амино) (1H, s), 12.23 (1H, s). (фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6карбоксилат, 0,5 формиат
Код пути*: 1В
Пример 23:
R1 1.65 мин (способ 1); m/z 575 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.932.32 (7Н, перекрывающийся т), 3.40-3.57 (2Н, т), 3.75 (ЗН, s), 5.62 (1Н, s), 6.89 (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.53 (2Н, т), 7.57-7.71 (5Н, перекрывающийся т), 8.47 (1Н, т), 10.88 (1Н, s), 12.23 (1Н, s). (Отсутствие 6Нпредполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: 1В
Пример 24:
R1 1.51 мин (способ 1); m/z 582 (М+Н)+ (ES+); 'Н ЯМР δ: 2.05 (ЗН, s), 2.14 (ЗН, s), 3.76 (ЗН, s), 3.87-4.52 (4Н, перекрывающийся т), 5.63 (1Н, s), 6.92 (2Н, т), 7.37 (1Н, s), 7.54 (2Н, перекрывающийся т), 7.58-7.72
- 31 038773
(2)-Метил-3-(((4-((2-(4-ацетилпиперазин-1- (5Н, перекрывающийся ш), 8.59 ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)- (1Н, t), 10.90 (1Н, s), 12.24 (1Н, 5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат s). (Отсутствие 8Н- предполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: 1В
Пример 25:
/ R’ 1.58 мин (способ 1); m/z 535 ΗΝ_Λ 4 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.13 °'S -0 (ЗН, s), 2.15 (6H, s), 2.35 (2H, t), 2.81 (2H, t), 3.76 (ЗН, s), 5.64 (1H, У-3' s), 6.97 (2H, m), 7.37 (1H, s), 7.50- У-NH ; 7.59 (4H, перекрывающийся m), ~ if '7.60-7.71 (ЗН, перекрывающийся υ Н ш), 8.15 (1Н, s), 10.92 (1Н, s), (Я)-Метил-3-(((4-(7/-(2- 12 24 (Ш’ (диметиламино)этил)сульфамоил)фенил)амино) (фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6- карбоксилат, формиат
Код пути*: 1А
Пример 26:
ОН Rt 1.65 мин (способ 1); m/z 577 (М+Н)+ (ES+); 'Н ЯМР δ: 2.14 ) (ЗН, s), 2.34 (2Н, t), 2.37-2.47 (4Н, 0. < перекрывающийся т), 2.73-2.82 г—< (4Н, перекрывающийся т), 3.41 (2Н, t), 3.76 (ЗН, s), 4.38 (1Н, s), y-NH 5.64 (1Н, s), 6.97 (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.48 (2Н, т), 7.56 (2Н, т), 7.60-7.72 (ЗН, перекрывающийся 0 т), 8.14 (1Н, s), 10.93 (1Н, s), (Я)-Метил-3-(((4-((4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1- 28 (1Н s) ил)сульфонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, формиат
- 32 038773
Код пути*: 1А
Пример 27:
0 н '^N R1 1.56 мин (способ 1); m/z 525
г4 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.27-
П О 1.64 (ЗН, перекрывающийся ш),
W г \-NH /Г 1.69-1.83 (2Н, перекрывающийся
..... / т), 2.13 (ЗН, s), 2.42 (ЗН, s), 2.82-
И н 3.09 (ЗН, перекрывающийся т),
0 3.75 (ЗН, s), 3.95 (1Н, s), 5.62 (1Н,
(S, 2)-Метил-5-метил-3-(((4-((1 -метилпипер ид ин-3- s), 6.87 (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.52
ил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2- (2Н, т), 7.58-7.69 (5Н,
оксоинд олин-6-карбоксилат, 0,5 формиат перекрывающийся т), 8.14 (0.5Н,
s), 8.17 (1Н, d), 10.89 (1Н, s),
12.23 (1Н, s).
Код пути*: 1В
Пример 28:
R1 1.60 мин (способ 1); m/z 557
(М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.70-
пр ° 2.35 (4Н, перекрывающийся т),
А-Д / 1 /Г 2.14 (ЗН, s), 3.00-3.35 (4Н,
ТТУо перекрывающийся т), 3.46-3.65
ί н (ЗН, перекрывающийся т), 3.76
0 (ЗН, s), 5.63 (1Н, s), 6.91 (2Н, т),
(2)-Метил-3 -(((4-((2-(4-фторпиперидин-1 - 7.37 (1Н, s), 7.53 (2Н, т), 7.58-
ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)- 7.73 (5Н, перекрывающийся т),
5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, формиат 8.57 (1Н, br s), 9.04 (1Н, br s),
10.89 (1H, s), 12.23 (1H, s).
(Отсутствие 2Н-предполагаемого
перекрытия растворителем).
Код пути*: 1В
Пример 29:
- 33 038773
(2)-Метил-5 -метил-3 -(((4-((3 морфолинопропил)карбамоил)фенил)амино) (фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
R1 1.55 мин (способ 1); m/z 555 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.62 (2Н, т), 2.13 (ЗН, s), 2.23-2.40 (6Н, перекрывающийся т), 3.22 (2Н, т), 3.50-3.58 (4Н, перекрывающийся т), 3.75 (ЗН, s), 5.62 (1Н, s), 6.87 (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.52 (2Н, т), 7.56-7.70 (5Н, перекрывающийся т), 8.34 (1Н, t), 10.88 (1Н, s), 12.23 (1Н, s).
Код пути*: 1В
Пример 30:
R1 1.57 мин (способ 1); m/z 594 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.622.00 (4Н, перекрывающийся т), 2.13 (ЗН, s), 2.33 (ЗН, s), 2.92-3.04 (2Н, перекрывающийся т), 3.053.27 (2Н, перекрывающийся т), 3.75 (ЗН, s), 4.06 (1Н, т), 5.59 (1Н, s), 6.87 (2Н, т), 7.19 (2Н, т), (Э-Метил-5-метил-3-(((4-(1-метил-5-оксо-1,4,9- 7.36 (1Н, s), 7.47 (1Н, s), 7.53 (2Н, триазаспиро[5.5]ундекан-9- т), 7.57-7.70 (ЗН, карбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2- перекрывающийся т), 10.85 (1Н, оксоиндолин-6-карбоксилат s), 12.22 (1Н, s). (Отсутствие ЗНпредполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: 1В
Пример 31:
- 34 038773
(2)-Метил-3 -(((4-(4-((2(диметиламино)этил)карбамоил)пиперидин-1 карбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил2-оксоиндолин-6-карбоксилат, 0,4 формиат
R1 1.53 мин (способ 1); m/z 610 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.361.52 (2Н, перекрывающийся т), 1.59-1.78 (2Н, перекрывающийся т), 2.13 (ЗН, s), 2.34 (1Н, т), 2.55 (6Н, s), 2.70-3.02 (4Н, перекрывающийся т), 3.75 (ЗН, s), 5.60 (1Н, s), 6.88 (2Н, т), 7.18 (2Н, т), 7.37 (1Н, s), 7.53 (2Н, т), 7.56-7.70 (ЗН, перекрывающийся т), 7.95 (1Н, d), 8.13 (0.4Н, s), 10.86 (1Н, s), 12.21 (1H, s). (Отсутствие 4Н-предполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: 1В
Пример 32:
(2)-Метил-3-(((4-((2-(диметиламино)этил)(2гидроксиэтил)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, 0,3 формиат
R1 1.49 мин (способ 1); m/z 543 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.13 (ЗН, s), 2.00-2.15 (2Н, перекрывающийся т), 2.65 (ЗН, br s), 3.04 (2Н, т), 3.21-3.46 (2Н, перекрывающийся т), 3.66 (2Н, т), 3.75 (ЗН, s), 5.61 (1Н, s), 6.88 (2Н, т), 7.23 (2Н, т), 7.37 (1Н, s), 7.47-7.67 (5Н, перекрывающийся т), 8.13 (0.3Н, s), 10.85 (1Н, s), 12.19 (1Н, s). (Отсутствие ЗНпредполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: 1В
Пример 33:
- 35 038773
он R1 1.54 мин (способ 1); m/z 569
0 V-N / Ν- А Гл ' vk г Wnh ..,W 0 (2)-Метил-3 -(((4-((35,45)-4- ((д иметиламино)метил)-3 -гидроксипиперидин-1 карбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил2-оксоиндолин-6-карбоксилат (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.14 (1Н, m), 1.74 (1H, m), 1.91 (1H, m), 2.13 (3H, s), 2.71-2.87 (6H, перекрывающийся m), 2.98 (2H, m), 3.19-3.29 (3H, перекрывающийся m), 3.75 (3H, s), 4.22-4.56 (2H, перекрывающийся m), 5.60 (1H, s), 6.88 (2H, m), 7.19 (2H, m), 7.37 (1H, s), 7.48-7.72 (5H, перекрывающийся m), 8.67 (1H, s), 10.86 (1H, s), 12.22 (1H, s).
Код пути*: 1В
Пример 34:
О н О Ά ΝΗ 0 П н 0 (2)-Метил-3 -(((4-((2-(4-ацетил-1,4-диазепан-1 - ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат Rl 1.55 мин (способ 1); m/z 596 (M+H)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.922.09 (5H, перекрывающийся m), 2.14 (ЗН, s), 3.52 (6Н, s), 3.76 (ЗН, s), 5.63 (1Н, s), 6.90 (2H, m), 7.37 (1H, s), 7.53 (2H, m), 7.58-7.69 (5H, перекрывающийся m), 8.56 (1H, s), 10.88 (1H, s), 12.23 (1H, s). (Отсутствие 6H- предполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: 1В
Пример 35:
- 36 038773
(2)-Метил-3 -(((4-((2-((2Rl 1.60 мин (способ 1); m/z 543 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.13 (ЗН, s), 2.38 (ЗН, s), 2.61-2.83 (4Н, перекрывающийся ш), 3.21 (ЗН, s), 3.45 (2Н, t), 3.75 (ЗН, s), 5.62 (1Н, s), 6.87 (2Н, ш), 7.36 (1Н, s), 7.52 (2Н, ш), 7.57-7.69 (5Н, перекрывающийся ш), 8.13 (0.5 метоксиэтил)(метил)амино)этил)карбамоил)фенил) Н, s), 8.30 (1Н, s), 10.88 (1Н, s), амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоинд олин-6- 12.22 (1Н, s). (Отсутствие 2Нкарбоксилат, 0,5 формиат предполагаемого затемнения
растворителем.)
Код пути*: 1В
Пример 36:
R1 1.59 мин (способ 1); m/z 569 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.641.90 (4Н, перекрывающийся т), 2.13 (ЗН, s), 2.62-2.86 (6Н, перекрывающийся т), 3.53-3.67 (2Н, перекрывающийся т), 3.763.89 (5Н, перекрывающийся т), (2)-Метил-3-(((4-(((4-(диметиламино)тетрагидро- 5.60 (1Н, s), 6.91 (2Н, т), 7.36
2Я-пиран-4- (Ш, s), 7.54 (2Н, т), 7.59-7.71 ил)метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен (5Н, перекрывающийся т), 8.43 )-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат (1Н, т), 10.90 (1Н, т), 12.25 (1Н,
s). (Отсутствие 2Н-
предполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: 1В
Пример 37:
- 37 038773
Rl 1.54 мин (способ 1); m/z 595 _ N (M+H)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.14- 1.69 (4Н, перекрывающийся ш), Л” 1.75-1.91 (4Н, перекрывающийся 4^ т), 2.13 (ЗН, s), 2.84-3.20 (8Н, ’V-NII у перекрывающийся т), 3.75 (ЗН, η Г Т /=° А 4.11 (1Н, br s), 5.60 (1Н, s), £ H 6.89 (2H, m), 7.18 (2H, m), 7.37 o ίίίΛ ίΛ Λί , (1H, s), 7.53 (2H, m), 7.56-7.68 (2)-Метил-3-(((4-(4-гидрокси-4-(пирролидин-1. , (ЗН, перекрывающийся m), 8.13 илметил)пиперидин-1- . X, X v, λ Α < (Ж 1086 (1Η> S), 1221 0Η’ кароонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил- _ , , s). (Отсутствие 2Η- 2-оксоиндолин-6-карбоксилат, формиат предполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: 1В
Пример 38:
л R1 1,52 мин (способ 1); m/z 583 J ν—7 (М+Н)+ (ES ); Ή ЯМР δ: 1.36- ί Ч 1.60 (4Н перекрывающийся т), Ч—f У 2.13 (ЗН, s), 2.82 (6Н, s), 3.12 (2Н, s), 3.19-3.38 (4Н, ζθ··^ζ 4-·^ перекрывающийся т), 3.56 (2Н, 0 Н s), 3.75 (ЗН, s), 5.44 (1Н, br s), (2)-Метил-3-(((4-(4-((диметиламино)метил)-4- 5.60 (1Н, s), 6.89 (2Н, т), 7.19 (гидроксиметил)пиперидин-1- (2Н, т), 7.37 (1Н, s), 7.53 (2Н, т), карбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил- 7.57-7.73 (ЗН, перекрывающийся 2-оксоиндолин-6-карбоксилат т), 10.85 (1Н, s), 12.21 (1Н, s).
Код пути*: 1В
Пример 39:
- 38 038773
ч v ° а>о S-nh I h R1 1.61 мин (способ 1); m/z 612 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.13 (ЗН, s), 2.36-2.44 (4Н, перекрывающийся т), 2.93 (2Н, s), 3.20-3.27 (5Н, перекрывающийся т), 3.75 (ЗН, s), 5.60 (1Н, s), 6.84 (2Н, т), 7.20
(2)-Метил-3-(((4-(4-(2-((2-метоксиэтил)амино)-2оксоэтил)пиперазин-1 - карбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил2-оксоиндолин-6-карбоксилат (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.50 (2Н, т), 7.57-7.69 (ЗН, перекрывающийся т), 7.76 (1Н, t), 10.85 (1Н, s), 12.21 (1Н, s). (Отсутствие 6Нпредполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: 1В
Пример 40:
(2)-Метил-3 -(((4-((( 1 (диметиламино)циклобутил)метил)карбамоил) фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2оксоиндолин-6-карбоксилат, 0,3 формиат
R1 1.66 мин (способ 1); m/z 539 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.621.75 (2Н, перекрывающийся т), 2.00-2.12 (4Н, перекрывающийся т), 2.13 (ЗН, s), 3.62 (2Н, d), 3.75 (ЗН, s), 5.60 (1Н, s), 6.90 (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.54 (2Н, т), 7.587.72 (5Н, перекрывающийся т), 8.14 (0.3Н, s), 8.47 (1Н, s), 10.89 (1Н, s), 12.25 (1Н, s). (Отсутствие бН-предполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: 1В
Пример 41:
- 39 038773
R1 1.58 мин (способ 1); m/z 569 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.591.84 (2Н, перекрывающийся т),
1.89-2.08 (2Н, перекрывающийся
т), 2.14 (ЗН, s), 2.68-2.81 (ЗН, Ьг
О
s).
2.83-3.08 (2H, (2)-Метил-3 -(((4-(( 1 -(2-гидроксиэтил)пиперидин-4ил)(метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метиле перекрывающийся ш), 3.55-3.71 (2Н, т), 3.75 (ЗН, s), 4.43 (1Н, Ьг s), 5.14 (1Н, br s), 5.62 (1Н, s),
н)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, формиат
0,2
6.89 (1Н, (ЗН, (2Н, т), 7.20 (2Н, т), 7.37 s), 7.51 (2Н, т), 7.57-7.69 перекрывающийся т), 8.13 (0.2Н, s), 10.85 (1Н, s), 12.19 (1H,
s).
(Отсутствие
4Hпредполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: IB
Пример 42:
О
R1 1.59 мин (способ 1); m/z 569 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.221.38 (2Н, перекрывающийся т), 1.53 (1Н, т), 1.74-1.78 (2Н, перекрывающийся т), 2.14 (ЗН,
s),
2.57-2.82 (2Н, (2)-Метил-3 -(((4-((2-(4(гидроксиметил)пиперид ин-1 ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)перекрывающийся т), 2.88-3.06 (2Н, перекрывающийся т), 3.26 (2Н, t), 3.49 (2Н, т), 3.75 (ЗН, s), 4.58 (1Н, t), 5.62 (1Н, s), 6.90 (2Н,
5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, формиат
0,2 т), 7.36
7.57-7.69
m), 8.13 (1Н, s), 7.52 (2Н, т), (5Н, перекрывающийся (0.2Н, s), 8.47 (1Н, t),
10.89 (1Н, s), 12.23 (1Н, s). (Отсутствие 2Н-предполагаемого затемнения растворителем).
- 40 038773
Код пути*: 1В
Пример 43:
R1 1.58 мин (способ 1); m/z 608
% ιΛΧ ) (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.46-
Д 7 1.66 (2Н, перекрывающийся т),
О О 1.67-1.81 (2ΕΙ, перекрывающийся
\^NH т), 2.13 (ЗН, s), 2.24 (ЗН, s), 2.96-
3.18 (4Н, перекрывающийся т),
3.19-3.29 (ЗН, перекрывающийся
О т), 3.75 (ЗН, s), 3.86 (1Н, br s),
(2)-Метил-5-метил-3 -(((4-(7-метил-12-оксо-3,7,11 - 5.59 (1Н, s), 6.87 (2H, m), 7.19
триазаспиро[5.6]додекан-3- (2H, m), 7.36 (1H, s), 7.47-7.57
карбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2- (ЗН, перекрывающийся m), 7.57-
оксоиндолин-6-карбоксилат 7.72 (ЗН, перекрывающийся m), 10.86 (1H, s), 12.22 (1H, s). (Отсутствие 2Н-предполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: 1В
Пример 44:
о н М R1 1.59 мин (способ 1); m/z 618
м V X-NH О' \ 1 н 0 (2)-Метил-5 -метил-3 -(((4-((2-(4- (метилсульфонил)пиперазин-1 - ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)2-оксоиндолин-6-карбоксилат (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.13 (ЗН, s), 2.85 (ЗН, s), 3.01-3.13 (4Н, перекрывающийся т), 3.75 (ЗН, s), 5.61 (1Н, s), 6.87 (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.52 (2Н, т), 7.57- 7.71 (5Н, перекрывающийся т), 8.29 (1Н, s), 10.88 (1Н, s), 12.23 (1Н, s). (Отсутствие 8Н- предполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: 1В
Пример 45:
- 41 038773
(2)-Метил-3 -(((4-(4-гидрокси-4(морфолинометил)пиперидин-1 карбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метилR1 1.53 мин (способ 1); m/z 611 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.321.61 (4Н, перекрывающийся т), 2.14 (ЗН, s), 2.24 (2Н, s), 3.00-3.30 (4Н, перекрывающийся т), 3.503.56 (4Н, перекрывающийся т), 3.76 (ЗН, s), 4.03 (1Н, br s), 4.29 (1Н, s), 5.60 (1H, s), 6.88 (2H, m), 7.18 (2H, m), 7.37 (1H, s), 7.53 (2H, m), 7.56-7.73 (3H, перекрывающийся m), 10.86 (1H, s), 12.21 (1H, s). (Отсутствие 3H-
2-оксоиндолин-6-карбоксилат предполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: IB
Пример 46:
R1 1.51 мин (способ 1); m/z 555 (М+Н)+ (ES+); 'Н ЯМР δ: 1.63
Д он V/ Λ \--NH П н О (1Н, т), 1.75 (1Н, т), 2.13 (ЗН, s), 2.53-2.92 (5Н, перекрывающийся т), 3.43-3.59 (7Н, перекрывающийся т), 3.75 (ЗН, s), 4.36 (1Н, br s), 5.60 (1Н, s), 6.87 (2H, m), 7.17 (2H, m), 7.36
(2)-Метил-3-(((4-(4-(2-гидроксиэтил)-1,4-диазепан1-карбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат (1H, s), 7.52 (2H, m), 7.57-7.68 (ЗН, перекрывающийся m), 10.85 (1H, s), 12.19 (1H, s).
Код пути*: 1В
Пример 47:
- 42 038773
Rl 1.58 мин (способ 1); m/z 622 (М+Н)+ (ES+); ХН ЯМР δ: 1.311.41 (2Н, перекрывающийся т),
1.41-1.51 (4Н, перекрывающийся
т), 1.56-1.90 (4Н, перекрывающийся т), 2.13 (ЗН, s), 2.35-2.45 (4Н, перекрывающийся т), 3.75 (ЗН, (2)-Метил-3-(((4-(4'-карбамоил-[1,4'-бипиперидин]- s), 5.59 (1Н, s), 6.87 (2Н, т), 7.00 Г-карбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5- (1Н, br s), 7.07 (1Н, br s), 7.20 метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат (2H, m), 7.36 (1H, s), 7.52 (2H, m),
7.58- 7.68 (ЗН, перекрывающийся
m), 10.85 (1Н, s), 12.21 (1H, s). (Отсутствие 4Н-предполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: IB
Пример 48:
О
Rl 1.52 мин (способ 1); m/z 541 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.13 (ЗН, s), 2.19 (ЗН, br s), 2.65 (1Н,
m),
2.77-2.93 (4H, (2)-Метил-3 -(((4-(((35,45)-4-гидрокси-1 метилпирролидин-3 ил)(метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, 0,4 формиат
Код пути*: 1В перекрывающийся m), 3.75 (ЗН, s), 4.22 (1Н, m), 5.18 (1H, m), 5.60 (1H, s), 6.87 (2H, m), 7.20 (2H, m), 7.37 (1H, s), 7.53 (2H, m), 7.587.68 (ЗН, перекрывающийся m), 8.14 (0.4H, s), 10.85 (1H, s), 12.22 (1H, s). (Отсутствие 3Hперекрытия растворителем).
Пример 49:
- 43 038773
Rl 1.60 мин (способ 1); m/z 555 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.441.57 (2Н, перекрывающийся т),
1.65-1.74 (2Н, перекрывающийся
т), 1.91-2.10 (2Н, перекрывающийся т), 2.13 (ЗН, s), 2.32-2.43(2Н, перекрывающийся т), 2.79-2.93 (2)-Метил-3-(((4-(( 1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4- z_„ v 7 м (2Н, перекрывающийся т), 3.44ил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5- „ „ z_„ ’ ' ' ' ’ ’ 3.51 (2Н, перекрывающийся т), метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат ч _ ζ_ ч _ к 3.68 (1Н, т), 3.75 (ЗН, s), 4.38 (1Н, s), 5.61 (1Н, s), 6.85 (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.51 (2Н, т), 7.567.70 (5Н, перекрывающийся т), 8.10 (1Н, d), 10.89 (1Н, s), 12.23 (1Н, s).
Код пути*: 1В
Пример 50:
О (2)-Метил-3 -(((4-((( 1 -(2-гидроксиэтил)пиперидин4-ил)метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
R1 1.54 мин (способ 1); m/z 569 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.051.19 (2Н, т), 1.46 (1Н, т), 1.541.63 (2Н, перекрывающийся т), 1.81-1.94 (2Н, перекрывающийся т), 2.13 (ЗН, s), 2.28-2.40 (2Н, перекрывающийся т), 2.77-2.90 (2Н, перекрывающийся т), 3.07 (2Н, t), 3.41-3.50 (2Н, перекрывающийся т), 3.75 (ЗН, s), 4.34 (1Н, br s), 5.61 (1Н, s), 6.86 (2H, m), 7.36 (1H, s), 7.52 (2H, m), 7.57-7.70 (5H, перекрывающийся m), 8.32 (1H, t), 10.88 (1H, s), 12.23 (1H, s).
Код пути*: IB
- 44 038773
Пример 51:
О (2)-Метил-3 -(((4-((2-((2гидроксиэтил)(метил)амино)этил)карбамоил) фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2оксоиндолин-6-карбоксилат
R1 1.51 мин (способ 1); m/z 529 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.13 (ЗН, s), 2.21 (ЗН, s), 2.40-2.48 (2Н, перекрывающийся т), 3.24-3.32 (2Н, перекрывающийся т), 3.403.48 (2Н, перекрывающийся т), 3.75 (ЗН, s), 4.37 (1Н, т), 5.61 (1Н, s), 6.86 (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.52 (2Н, т), 7.57-7.69 (5Н, перекрывающийся т), 8.25 (1Н, t), 10.88 (1Н, s), 12.23 (1Н, s). (Отсутствие 2Н-предполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: 1В
Пример 52:
R1 1.90 мин (способ 1); m/z 589 (М+Н)+ (ES+); 'Н ЯМР δ: 2.14 (ЗН, s), 2.61 (2Н, t), 2.89-2.96 (4Н, перекрывающийся т), 3.01-3.11 (4Н, перекрывающийся т), 3.283.34 (2Н, перекрывающийся т), 3.76 (ЗН, s), 5.62 (1Н, s), 6.88 (2Н, (7)-Метил-3-(((4-((2-( 1,1- т), 7.37 (1Н, s), 7.53 (2Н, т), диоксидотиоморфолино)этил)карбамоил)фенил) 7.58-7.70 (5Н, перекрывающийся амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6- ш), 8.29 (1Н, t), 10.89 (1Н, s), карбоксилат 12.24 (1Н, s).
Код пути*: 1В
Пример 53:
- 45 038773
°%-N О Д ГА WNH 11 Т н 0 R1 1.57 мин (способ 1); m/z 568 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.14 (ЗН, s), 2.36-2.42 (2Н, перекрывающийся т), 2.53-2.59 (6Н, перекрывающийся т), 3.063.12 (2Н, перекрывающийся т), 3.27-3.34 (2Н, перекрывающийся
(2)-Метил-5-метил-2-оксо-3-(((4-((2-(5-оксо-1,4- т), 3.76 (ЗН, s), 5.62 (1Н, s), 6.88
диазепан-1- (2Н, т), 7.37 (1Н, s), 7.50-7.56
ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен) индолин-6-карбоксилат (ЗН, перекрывающийся т), 7.587.71 (5Н, перекрывающийся т), 8.29 (1Н, t), 10.90 (1Н, s), 12.24 (1Н, s).
Код пути*: 1В
Пример 54:
О Н A-N J Н А A ν ° Χ,-ΝΗ О J Тк° П Н О R1 1.61 мин (способ 1); m/z 556 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.13 (ЗН, s), 2.21 (ЗН, s), 2.92 (2Н, s), 3.30 (2Н, т), 3.75 (ЗН, s), 5.61 (1Н, s), 6.87 (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.52 (2Н, т), 7.56-7.71 (6Н, перекрывающийся т), 8.35 (1Н,
(2)-Метил-5 -метил-3 -(((4-((2-(метил(2(метиламино)-2- t), 10.88 (1Н, s), 12.22 (1Н, s). (Отсутствие 5Н-предполагаемого
оксоэтил)амино)этил)карбамоил)фенил)амино) затемнения растворителем).
(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
Код пути*: 1В
Пример 55:
- 46 038773
Rl 1.64 мин (способ 1); m/z 572 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.13 (ЗН, s), 2.54-2.60 (2H, перекрывающийся m), 2.95 (2Н, br s), 3.06-3.15 (2H, перекрывающийся m), 3.76 (ЗН, s), 5.64 (1Н, s), 6.58 (1H, dd), 6.77 (2)-Метил-3-(((3-фтор-4-((2-(3-оксопиперазин-1- (1H, dd), 7.36 (1Н, s), 7.45 (1H, t), ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)- 7.55 (2H, m), 7.59-7.76 (4H, 5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат перекрывающийся m), 8.07 (1H,
s), 10.91 (1H, s), 12.16 (1H, s). (Отсутствие 4Н-предполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: 1В
Пример 56:
° JI Α ϊ R1 1.55 мин (способ 1); m/z 568 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.13
A i / । (ЗН, s), 2.35-2.41 (2Н,
// о И о 1ХХ0 Л н перекрывающийся т), 3.03-3.11 (2Н, перекрывающийся т), 3.17 (2Н, d), 3.26-3.33 (2Н,
о перекрывающийся т), 3.75 (ЗН,
(2)-Метил-5-метил-2-оксо-3 -(((4-((2-(3 -оксо-1,4- s), 5.61 (1Н, s), 6.87 (2Н, т), 7.36
диазепан-1- (1Н, s), 7.47-7.56 (ЗН,
ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен) перекрывающийся т), 7.55-7.70
индолин-6-карбоксилат (5Н, перекрывающийся т), 8.27 (1Н, t), 10.88 (1Н, s), 12.23 (1Н, s). (Отсутствие 4Н- предполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: 1В *Индекс кода пути: путь 1А: см. пример 1; путь 1В: см. примеры 2-14; путь 1С: см. пример 15.
Дополнительный способ синтеза для примера 18.
Пример 18. (2)-Метил-5-метил-3-(((4-((1-метилпиперидин-4-ил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
2)-4-(((1-Ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)бензойную кислоту (промежуточное соединение Е) (10 г, 17,54 ммоль) и HATU (10,01 г, 26,3 ммоль) перемешивали при к.т. в течение 10 мин в DMF (200 мл), затем добавляли основание Хунига (18,38 мл, 105
- 47 038773 ммоль) и 1-метилпиперидин-4-амин (2,204 г, 19,30 ммоль) в DMF (10 мл). Смесь перемешивали при к.т. в течение 3 ч. Затем добавляли пиперидин (17,37 мл, 175 ммоль) и полученную смесь перемешивали при к.т. в течение 3 ч. Реакционную смесь разделяли между 10% МеОН в DCM (750 мл) и насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (500 мл). Органический слой промывали солевым раствором (300 мл) и растворитель концентрировали. Полученное твердое вещество растирали в порошок с CH3CN, фильтровали и сушили с получением 7 г неочищенного продукта.
Реакцию повторяли в идентичном масштабе и неочищенные продукты объединяли и растворяли в 10% МеОН (1% аммиака) в DCM и загружали в колонку с диоксидом кремния (300 г). Продукт элюировали 30% МеОН (1% NH3) в растворе DCM и продукт, содержащий фракции, собирали и затем растворитель выпаривали. Вещество повторно растворяли в 30% МеОН (1% NH3) в растворе DCM (500 мл) и промывали водой (200 мл). Органический слой сушили над MgSO4, фильтровали и растворитель выпаривали.
Вещество сушили при пониженном давлении при 40°С всю ночь с получением (Z)-метил-5-метил3-(((4-((1-метилпиперидин-4-ил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата 1478-45-2 (12.8 г, 23,91 ммоль, 68,1% выход).
Продукт анализировали методом LCMS (Agilent, X-Select, Waters X-Select С18, 2,5 мкм, 4,6 χ 30 мм, кислотный способ (0,1% муравьиной кислоты) 4 мин, 5-95% MeCN/вода): 1478-45-2-Fin, m/z 525(M+H)+ (ES+); при 1,57 мин 98% чистоты при 254 нм.
1Н ЯМР δ: Rt 1,57 мин (способ 1); m/z 525 (М+Н)+ (ES+); 1Н ЯМР δ: 1.44-1.57 (2Н, перекрывающийся m), 1.65-1.72 (2Н, перекрывающийся m), 1.85-1.93 (2Н, перекрывающийся m), 2.13 (6Н, s), 2.70-2.76 (2Н, перекрывающийся m), 3.64 (1H, m), 3.75 (3Н, s), 5.61 (1H, s), 6.86 (2Н, m), 7.36 (1H, s), 7.52 (2Н, m), 7.57-7.68 (5Н, перекрывающийся m), 8.09 (1H, d), 10.88 (1H, s), 12.23 (1H, s).
Биологическое тестирование: экспериментальные способы.
Анализы ингибирования ферментов.
Ингибиторные активности в отношении ферментов соединений, раскрываемых в настоящем документе, определяли с использованием анализа ADP-Glo™ (Promega, UK). Анализы для FGFR1, PDGFRa, PDGFRe и VEGFR2 выполняли в буфере, содержащем 40 мМ Tris, рН 7,5, 20 мМ MgCl2, 0,1 мг/мл BSA и 1 мМ DTT; тогда как анализы для FGFR3 и VEGFR1 выполняли в вышеупомянутом буфере, дополненном 2 мМ MnCl2.
Ингибирование фермента FGFR1.
Ингибиторные активности соединений в соответствии с настоящим изобретением в отношении FGFR1 (FGFR1 Kinase Enzyme System: Promega) оценивали путем смешивания белка FGFR1 (3,12 нг/мл, 2 мкл), субстрата (Poly (4:1 Glu4, Tyr1), 100 нг/мл, 2 мкл) с тестируемым соединением (2 мкл либо при 3, 0,67, 0,15, 0,033, 0,0073, 0,0016, 0,0036, либо при 0,00008 мкМ) в течение 90 мин при 25°С. Затем инициировали киназную реакцию путем добавления АТФ (50 мкМ, 2 мкл) и смесь инкубировали в течение 1 ч при 25°С. Добавляли реагент ADP-Glo™ в течение 40 мин (8 мкл), затем добавляли проявляющий реагент (16 мкл) в течение 40 мин перед выявлением на устройстве для считывания микропланшетов (EnVision® Multilabel Reader, Perkin Elmer).
Ингибирование фермента FGFR3.
Ингибиторные активности соединений в соответствии с настоящим изобретением в отношении FGFR3 (FGFR3 Kinase Enzyme System: Promega) оценивали путем смешивания белка FGFR3 (12,5 нг/мл, 2 мкл), субстрата (Poly (Ala6, Glu2, Lys5, Tyr1), 100 нг/мл, 2 мкл) с тестируемым соединением (2 мкл либо при 3, 0,67, 0,15, 0,033, 0,0073, 0,0016, 0,0036, либо при 0,00008 мкМ) в течение 90 мин при 25°С. Затем инициировали киназную реакцию путем добавления АТФ (50 мкМ, 2 мкл) и смесь инкубировали в течение 90 мин при 25°С. Добавляли реагент ADP-Glo™ в течение 40 мин (8 мкл), затем добавляли проявляющий реагент (16 мкл) в течение 40 мин перед выявлением на устройстве для считывания микропланшетов (EnVision® Multilabel Reader, Perkin Elmer).
Ингибирование фермента PDGFRa.
Ингибиторные активности соединений в соответствии с настоящим изобретением в отношении PDGFRa (PDGFRa Kinase Enzyme System: Promega) оценивали путем смешивания белка PDGFRa (12,5 нг/мл, 2 мкл), субстрата (Poly (4:1 Glu4, Tyr1), 100 нг/мл, 2 мкл) с тестируемым соединением (2 мкл либо при 3, 0,67, 0,15, 0,033, 0,0073, 0,0016, 0,0036, либо при 0,00008 мкМ) в течение 90 мин при 25°С. Затем инициировали киназную реакцию путем добавления АТФ (25 мкМ, 2 мкл) и смесь инкубировали в течение 1 ч при 25°С. Добавляли реагент ADP-Glo™ в течение 40 мин (8 мкл), затем добавляли проявляющий реагент (16 мкл) в течение 40 мин перед выявлением на устройстве для считывания микропланшетов (EnVision® Multilabel Reader, Perkin Elmer).
Ингибирование фермента PDGFRe.
Ингибиторные активности соединений в соответствии с настоящим изобретением в отношении PDGFRe (PDGFRe Kinase Enzyme System: Promega) оценивали путем смешивания белка PDGFRe (6,25 нг/мл, 2 мкл), субстрата (Poly (4:1 Glu4, Tyr1), 100 нг/мл, 2 мкл) с тестируемым соединением (2 мкл либо при 3, 0,67, 0,15, 0,033, 0,0073, 0,0016, 0,0036, либо при 0,00008 мкМ) в течение 90 мин при 25°С. Затем
- 48 038773 инициировали киназную реакцию путем добавления АТФ (25 мкМ, 2 мкл) и смесь инкубировали в течение 1 ч при 25°С. Добавляли реагент ADP-Glo™ в течение 40 мин (8 мкл), затем добавляли проявляющий реагент (16 мкл) в течение 40 мин перед выявлением на устройстве для считывания микропланшетов (EnVision® Multilabel Reader, Perkin Elmer).
Ингибирование фермента VEGFR1.
Ингибиторные активности соединений в соответствии с настоящим изобретением в отношении VEGFR1 (VEGFR1 Kinase Enzyme System: Promega) оценивали путем смешивания белка VEGFR1 (12,5 нг/мл, 2 мкл), субстрата (IGFR1Rtide, 100 нг/мл, 2 мкл) с тестируемым соединением (2 мкл либо при 3, 0,67, 0,15, 0,033, 0,0073, 0,0016, 0,0036, либо при 0,00008 мкМ) в течение 90 мин при 25°С. Затем инициировали киназную реакцию путем добавления АТФ (50 мкМ, 2 мкл) и смесь инкубировали в течение 90 мин при 25°С. Добавляли реагент ADP-Glo™ в течение 40 мин (8 мкл), затем добавляли проявляющий реагент (16 мкл) в течение 40 мин перед выявлением на устройстве для считывания микропланшетов (EnVision® Multilabel Reader, Perkin Elmer).
Ингибирование фермента VEGFR2.
Ингибиторные активности соединений в соответствии с настоящим изобретением в отношении VEGFR2 (VEGFR2 Kinase Enzyme System: Promega) оценивали путем смешивания белка VEGFR2 (1,56 нг/мл, 2 мкл), субстрата (Poly (4:1 Glu4, Tyr1), 100 нг/мл, 2 мкл) с тестируемым соединением (2 мкл либо при 3, 0,67, 0,15, 0,033, 0,0073, 0,0016, 0,0036, либо при 0,00008 мкМ) в течение 90 мин при 25°С. Затем инициировали киназную реакцию путем добавления АТФ (50 мкМ, 2 мкл) и смесь инкубировали в течение 1 ч при 25°С. Добавляли реагент ADP-Glo™ в течение 40 мин (8 мкл), затем добавляли проявляющий реагент (16 мкл) в течение 40 мин перед выявлением на устройстве для считывания микропланшетов (EnVision® Multilabel Reader, Perkin Elmer).
Во всех случаях киназа превращает АТФ в АДФ, а затем реагент ADP-Glo™ истощает любую оставшуюся АТФ. Реагент для выявления превращает АДФ, которая была получена, обратно в АТФ и создает люциферазу, которая может быть выявлена по люминесценции. Поэтому люминесцентный сигнал прямо пропорционален количеству АДФ, полученной путем ферментативной реакции, и снижение этого сигнала после обработки соединением демонстрирует ингибирование. Процент ингибирования, полученного с помощью каждой концентрации соединения, вычисляли с использованием представленного ниже уравнения:
д . (Средиее„нн_ - СреднееНЕСГ.) % ингибирования = 1 — ------------------------ X 100.
(Средиее„ни,- Среднее^.)
Затем процент ингибирования наносили на график в зависимости от концентрации соединения и определяли относительную ингибиторную концентрацию на 50% (RIC5o) по полученной в результате кривой концентрация-ответ. После ее определения вычисляли Ki с использованием представленного ни же уравнения:
ЧыГ
Клеточные и другие in vitro анализы.
Индуцированная PDGF-BB пролиферация нормальных фибробластов легкого человека (NHLF).
NHLF (Lonza group Ltd) размножали до 90% конфлюентности в ростовой среде FGM-2, дополненной 2% FBS (плюс факторы роста SingleQuot™; Lonza). Фибробласты собирали (трипсин/EDTA), суспендировали при 25х103 на мл в ростовой среде и добавляли по 200 мкл на лунку (5х103 клеток/лунка) 96-луночного планшета для культуры тканей. После 24 ч инкубации (37°С/5% CO2/95% O2) клетки подвергали сывороточному голоданию (24 ч) путем снижения концентрации FBS до 0,1% в культуральной среде. Клетки предварительно инкубировали с тестируемым соединением в течение 1 ч, затем стимулировали с помощью rhuPDGF-BB (100 нг/мл, R&D Systems) в течение 48 ч. Пролиферацию клеток оценивали путем включения BrdU (Cell Proliferation colorimetric ELISA, Roche). Процентное ингибирование индуцированной rhuPDGF-BB пролиферации NHLF тестируемым соединением при каждой концентрации вычисляли как процентное отношение таковой, достигнутой с помощью rhuPDGF-BB, при каждой концентрации тестируемого соединения по сравнению с контролем - средой-носителем (базальная пролиферация). Относительную ингибиторную концентрацию на 50% (RIC50) определяли по полученной в результате кривой концентрация-ответ.
Индуцированная PDGF-BB/FGF-Basic пролиферация фибробластов легкого человеческого плода MRC-5.
Фибробласты MRC-5 (LGC Standards) размножали до 90% конфлюентности в среде DMEM, дополненной 10% FBS. Клетки собирали (трипсин/EDTA), суспендировали при 25х103 на мл в ростовой среде и добавляли по 200 мкл на лунку (5х103 клеток/лунка) 96-луночного планшета для культуры тканей. После 24 ч инкубации (37°С/5% CO2/95% O2) клетки подвергали сывороточному голоданию (3 ч) путем замещения ростовой среды средой, содержащей 0,1% FBS. Затем клетки предварительно инкубировали с тестируемым соединением в течение 1 ч с последующей стимуляцией с помощью rhuPDGF-BB (100
- 49 038773 нг/мл, R&D Systems) или rhuFGF-Basic (5 нг/мл; R&D Systems) в течение 48 ч. Пролиферацию клеток оценивали путем включения BrdU (Cell Proliferation Colorimetric ELISA, Roche). Процентное ингибирование индуцированной rhuPDGF-BB/rhuFGF пролиферации MRC-5 тестируемым соединением при каждой концентрации вычисляли как процентное отношение таковой, достигнутой с помощью rhuPDGFBB/FGF-Basic, при каждой концентрации тестируемого соединения по сравнению с контролем - средойносителем (базальная пролиферация). Относительную ингибиторную концентрацию на 50% (RIC50) определяли по полученной в результате кривой концентрация-ответ.
Индуцированная VEGF165/FGF-Basic пролиферация эндотелиальных клеток.
TeloHAEC (иммортализованные теломеразой эндотелиальные клетки аорты человека; АТСС) высевали в 96-луночные планшеты для культуры тканей при плотности клеток 4000 клеток на лунку (100 мкл) на минимальной среде для эндотелиальных клеток (0,5% FBS, без факторов роста FGF и VEGF) и культивировали в течение 3 ч (37°С/5% СО2/95% O2). Клетки предварительно инкубировали с тестируемым соединением в течение 1 ч, затем стимулировали с помощью rhuVEGF165 (10 нг/мл, R&D Systems) или rhuFGF-Basic (5 нг/мл, R&D Systems) в течение 48 ч. Пролиферацию клеток оценивали путем включения BrdU (Cell Proliferation colorimetric ELISA, Roche). Процентное ингибирование индуцированной rhuVEGF165/rhuFGF-Basic пролиферации TeloHAEC тестируемым соединением при каждой концентрации вычисляли как процентное отношение таковой, достигнутой с помощью rhuVEGF165/FGF-Basic, при каждой концентрации тестируемого соединения по сравнению с контролем - средой-носителем (базальная пролиферация). Относительную ингибиторную концентрацию на 50% (RIC50) определяли по полученной в результате кривой концентрация-ответ.
Индуцированное PDGF-BB фосфорилирование PDGFRe в фибробластах.
Использовали MRC-5/NHLF/NIH-3T3 (фибробласты эмбриона мыши, LGC Standards) для оценивания ингибиторного эффекта тестируемого соединения в отношении фосфорилирования PDGFRe с использованием набора для клеточного анализа (Cisbio) фосфо-PDGFRe (Tyr751) с использованием HTRF (гомогенной флуоресценции с временным разрешением). MRC-5/NHLF высевали в 96-луночные планшеты для культуры тканей при плотности клеток 10000 клеток на лунку в ростовую среду DMEM (10% FBS) или ростовую среду FGM-2 (2% FBS), соответственно, и культивировали в течение 48 ч (37°С/5% СО2/95% О2). NIH-3T3 высевали в 96-луночные планшеты для культуры тканей при плотности клеток 7000 клеток на лунку в ростовую среду DMEM (10% FBS) и культивировали в течение 48 ч (37°С/5% СО2/95% О2). Клеточную среду заменяли на соответствующую минимальную среду, содержащую 0,1% FBS, и планшеты далее инкубировали в течение 24 ч (37°С/5% СО2/95% О2) для MRC-5/NHLF и в течение 3 ч для NIH-3T3. Клетки предварительно инкубировали с тестируемым соединением в течение 1 ч, а затем стимулировали с помощью rhuPDGF-BB (25-50 нг/мл, R&D Systems) в течение 5 мин и с помощью rmPDGF-BB (25 нг/мл, Life Technologies) для NIH-3T3. Среду отсасывали и клетки сразу же лизировали путем добавления 50 мкл буфера для лизиса, представленного в наборе для анализа, с использованием HTRF. Переносили 16 мкл клеточного лизата из каждой лунки в белый мелкообъемный 384-луночный планшет, в который добавляли соответствующие реагенты из набора согласно инструкциям в наборе. Количественно определяли фосфорилирование PDGFRe путем вычисления отношения флуоресценции, считываемой при 665 и 620 нм. Процентное ингибирование индуцированного rPDGF-BB фосфорилирования PDGFRe тестируемым соединением вычисляли как процентное отношение такового, достигнутого с помощью rPDGF-BB, при каждой концентрации тестируемого соединения по сравнению с контролем средой-носителем. Относительную ингибиторную концентрацию на 50% (RIC50) определяли по полученной в результате кривой концентрация-ответ.
Индуцированное VEGF165 фосфорилирование VEGFR2 в эндотелиалъных клетках.
TeloHAEC (иммортализованные теломеразой эндотелиальные клетки аорты человека; АТСС) использовали для оценивания ингибиторного эффекта тестируемого соединения в отношении фосфорилирования VEGFR2 с использованием набора для клеточного анализа (Cisbio) фосфо-VEGFR2 (Tyr1175) с использованием HTRF (гомогенной флуоресценции с временным разрешением). TeloHAEC высевали в 96-луночные планшеты для культуры тканей при плотности клеток 12000 клеток на лунку в среду для роста эндотелия (АТСС; 2% FBS) и культивировали в течение 48 ч (37°С/5% СО2/95% O2). Клеточную среду заменяли на минимальную среду (без факторов роста VEGF и FGF), содержащую 0,5% FBS, и планшеты далее инкубировали в течение 24 ч (37°С/5% СО2/95% O2). Клетки предварительно инкубировали с тестируемым соединением в течение 1 ч с последующей стимуляцией с помощью rhuVEGF165 (50 нг/мл, R&D Systems) в течение 5 мин. Среду отсасывали и клетки сразу же лизировали путем добавления 50 мкл буфера для лизиса, представленного в наборе для анализа с использованием HTRF. Переносили 16 мкл клеточного лизата из каждой лунки в белый мелкообъемный 384-луночный планшет, в который добавляли соответствующие реагенты из набора согласно инструкциям в наборе. Количественно определяли фосфорилирование VEGFR2 путем вычисления отношения флуоресценции, считываемой при 665 и 620 нм. Процентное ингибирование индуцированного rhuVEGF165 фосфорилирования VEGFR2 тестируемым соединением вычисляли как процентное отношение такового, достигнутого с помощью rhuVEGF165, при каждой концентрации тестируемого соединения по сравнению с контролем - средой- 50 038773 носителем. Относительную ингибиторную концентрацию на 50% (RIC50) определяли по полученной в результате кривой концентрация-ответ.
Анализ по индуцированному фибробластами сокращению геля.
NHLF размножали до 90% конфлюентности в ростовой среде FGM-2 (Lonza), дополненной 2% FBS (плюс факторы роста SingleQuot™). Фибробласты собирали (трипсин/EDTA) и суспендировали при 1х106 на мл в бессывороточной среде. На основе набора для анализа по индуцированному клетками сокращению (Cell Biolabs) получали клеточный каркас путем смешивания 1 части клеточной суспензии с 4 частями раствора коллагенового геля согласно инструкциям в наборе. Добавляли 0,9-мл аликвоты в 1,5мл центрифужные пробирки и обрабатывали конечными аналитическими концентрациями тестируемого соединения. Затем обработанный 250 мкл соединения каркас пипеткой добавляли в каждую лунку 48луночного планшета для культуры тканей (три повторности на тестируемую концентрацию). Планшет инкубировали в течение 90 мин (37°С/5% СО2/95% O2) для обеспечения полимеризации геля. Затем добавляли 250 мкл бессывороточной среды, содержащей конечные аналитические концентрации тестируемого соединения, в каждый соответствующий гель. После дополнительных 30 мин инкубации гели стимулировали с помощью TGFe1 (10 нг/мл; R&D Systems). После 24-часового (37°С/5% СО2/95% O2) периода инкубации каждый отдельный гель извлекали и взвешивали на прецизионных весах. Эффект тестируемого соединения при каждой концентрации выражали в проценте обращения индуцированного TGFe1 сокращения относительно базального сокращения при обработке средой-носителем.
Анализ по опосредованному фибробластами высвобождению IL-6.
NHLF размножали до 90% конфлюентности в ростовой среде FGM-2 (Lonza), дополненной 2% FBS (плюс факторы роста SingleQuot™). Фибробласты собирали (трипсин/EDTA), суспендировали при 50x103 на мл в ростовой среде и добавляли по 200 мкл на лунку (10x103 клеток/лунка) 96-луночного планшета для культуры тканей. После 24 ч инкубации (37°С/5% СО2/95% O2) клетки подвергали сывороточному голоданию (24 часа) путем снижения концентрации FBS в среде до 0,1%. Клетки предварительно инкубировали с тестируемым соединением в течение 1 ч, затем стимулировали с помощью TGFe1 (5 нг/мл, R&D Systems) в течение 24 ч. Извлекали бесклеточные супернатанты для определения концентраций IL-6 с помощью сэндвич-анализа ELISA (Duo-set, R&D Systems). Ингибирование продуцирования IL-6 вычисляли как процент, который обеспечивали с помощью 5 нг/мл TGFe1, при каждой концентрации тестируемого соединения по сравнению с контролем - средой-носителем. Относительную ингибиторную концентрацию на 50% (RIC50) определяли по полученной в результате кривой концентрацияответ.
Апоптоз тучных клеток.
Тучные клетки дифференцировали из CD34+ клеток кордовой крови (Lonza) в течение 8 недель в ростовой среде, дополненной 100 нг/мл SCF и 10 нг/мл IL-6. Тучные клетки высевали в 384-луночные белые планшеты с прозрачным дном от 2500 до 10000 клеток/лунка в ростовой среде, содержащей SCF (100 нг/мл). В качестве положительного контроля для апоптоза инкубировали 8 лунок в ростовой среде без SCF. Клетки инкубировали с тестируемыми соединениями или средой-носителем в течение 24 ч (37°С/5% СО2/95% О2). В клетки добавляли люминогенный субстрат каспазы-3/7 (Caspase-Glo 3/7 Assay, Promega) и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин перед считыванием люминесцентного сигнала. Индуцирование апоптоза тестируемыми соединениями вычисляли как процентное отношение такового, достигнутого с помощью клеток, инкубированных при отсутствии SCF (максимальный апоптический ответ), для каждой концентрации тестируемого соединения по сравнению со средой-носителем (исходный апоптоз). Относительную ингибиторную концентрацию на 50% (RIC50) определяли по полученной в результате кривой концентрация-ответ.
Эффект тестируемых соединений в отношении жизнеспособности клеток.
Клетки MRC-5 высевали в 96-луночные планшеты для культуры тканей с белым прозрачным дном (для считываний флуоресценции/люминесценции) или прозрачные (для колориметрических считываний) при плотности клеток 12x103 клеток на лунку в ростовую среду DMEM (10% FBS). После 24 ч инкубации (37°С/5% СО2/95% О2) ростовую среду заменяли содержащей 0,1% FBS плюс тестируемое соединение средой/средой-носителем и инкубировали еще 48 ч. Для колориметрического анализа МТТ (по оцениванию клеточной метаболической активности) отсасывали супернатанты из каждой лунки, заменяли свежей средой по 100 мкл/лунка (0,1% FBS) и 10 мкл/лунка 5 мг/мл МТТ. После 1-часового периода инкубации (37°С/5% СО2/95% O2) среду отсасывали и добавляли 100% DMSO (100 мкл) в каждую лунку. Планшеты слегка встряхивали в течение 15 мин перед считыванием поглощения при 550 нм. Процент потери жизнеспособности клеток (представленный уменьшением значений поглощения) вычисляли для каждой концентрации соединения относительно обработанных средой-носителем (0,5% DMSO) клеток.
Использовали анализ MultiTox-Fluor Multiplex Cytotoxicity в сочетании с анализом Caspase-Glo 3/7 (Promega) для измерения клеточной цитотоксичности/жизнеспособности и апоптоза. Анализ MultiToxFluor Multiplex Cytotoxicity представляет собой анализ флуоресценции с добавлением единственного реагента, при котором одновременно измеряют относительное число живых и мертвых клеток в клеточных популяциях. Анализ дает логометрические, находящиеся в обратной зависимости величины клеточной
- 51 038773 жизнеспособности и цитотоксичности. Отношение жизнеспособных клеток к мертвым клеткам не зависит от числа клеток и, поэтому, может быть использовано для нормализации данных. Добавление единственного реагента Caspase-Glo® 3/7 в формате добавить-перемешать-измерить (add-mix-measure) приводит к лизису клеток с последующим расщеплением каспазой субстрата и генерацией люминесцентного сигнала типа свечения (glow-type). Для данного анализа Multiplex Cytotoxicity 100 мкл клеточных супернатантов из обрабатываемых соединением в течение 48 ч клеток осторожно удаляли из каждой лунки, затем добавляли 50 мкл реагента MultiTox (рабочий раствор реагентов MultiTox собственного изготовления получали путем разбавления 10 мкл GF-AFC и bis-AAF-R110 в 10 мл аналитического буфера согласно инструкциям в наборе). Клетки инкубировали в темноте в течение 30 мин перед выполнением двух отдельных считываний флуоресценции при 400Ex/505Em (считывание живых клеток) и 485Ex/520Em (считывание мертвых клеток). Затем по 100 мкл супернатанта осторожно удаляли из каждой лунки, добавляли 50 мкл реагента Caspase 3/7 Glo в планшет для клеточной культуры и инкубировали в течение 30 мин в темноте. Определяли количественно активность Caspase 3/7 путем считывания люминесцентного сигнала. Усиление сигнала по сравнению с обработанными средой-носителем контрольными клетками представляет усиление апоптоза клеток.
Анализ перехода фибробластов в миофибробласты.
Для оценивания противофиброзной активности тестируемых соединений использовали два альтернативных протокола. Согласно первому выделенные фибробласты легкого высевали в 96-луночные планшеты при 3000 клеток/лунка. Через 5 дней после высевания клеточную среду обновляли и в клетки добавляли тестируемые соединения или среду-носитель. Через 1 ч добавляли TGF-e1 (1,25 нг/мл) для индуцирования перехода фибробластов в миофибробласты. Экспрессию aSMA, маркера перехода в миофибробласты, измеряли через 72 ч с помощью иммуноокрашивания, оцениваемого по высокоинформационной визуализации на IN Cell Analyzer 2200 (GE Healthcare), и определяли количественно с использованием алгоритма собственной разработки (BioFocus) с программным обеспечением разработчика IN Cell (GE Healthcare). Данные алгоритма представляют интенсивность окрашивания, умноженную на окрашенную область (уровни D х А). Выполняли совместное окрашивание клеточных ядер 4',6диамидино-2-фенилиндолом (DAPI) для определения числа клеток, как меры потенциальной токсичности, и/или для нормализации aSMA по различиям в плотности клеток.
Согласно альтернативному протоколу выделенные фибробласты легкого высевали в 96-луночные планшеты при 5100 клеток/лунка. Через 24 ч клетки обновляли голодной средой еще на 24 ч. В клетки добавляли тестируемые соединения или среду-носитель. Через 1 ч добавляли TGF-e1 TGF-e1 (0,1 нг/мл) для индуцирования перехода фибробластов в миофибробласты. Экспрессию aSMA, маркера перехода в миофибробласты, измеряли через 48 ч с помощью иммуноокрашивания, оцениваемого по высокоинформационной визуализации на ImageXpres Micro (Molecular Devices) и определяли количественно с использованием программного обеспечения MetaXpress (Molecular Devices). Использовали процент положительных клеток для оценивания окрашивания aSMA и, таким образом, степени перехода фибробластов в миофибробласты. Выполняли совместное окрашивание клеточных ядер 4',6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI) для определения числа клеток, как меры потенциальной токсичности, и/или для нормализации aSMA по различиям в плотности клеток.
Оценивание продолжительности действия тестируемых соединений на индуцированное PDGF-BB фосфорилирование PDGFRe в человеческих феталъных фибробластных клетках легкого.
Для определения относительной персистенции эффектов воздействия лекарственного средства на индуцированное PDGF-BB фосфорилирование PDGFRe использовали эксперимент промывания с применением человеческих фетальных фибробластных клеток легкого MRC-5 и набор для клеточного анализа (Cisbio) Homogenous HTRF (гомогенная флуоресценция с временным разрешением) фосфо-PDGFRe (Tyr751), с помощью которого выявляли рецепторную модуляцию индуцированного PDGF-BB фосфорилирования PDGFRe.
Протокол промывания.
Сначала клетки MRC-5 отделяли трипсином и нейтрализовали полной средой (ростовой средой DMEM, 10% FBS). 1,2х106 клеток помещали в микроцентрифужные пробирки, центрифугировали при 10000 об/мин течение 30 с с использованием настольной центрифуги, супернатант удаляли, а клетки промывали в 1 мл предварительно нагретого (37°С) буфера для промывания (HBSS, рН 7,4, 0,1% BSA и 0,04% плюрониловой кислоты) для удаления какого-либо остаточного FBS. Затем клетки снова центрифугировали, супернатант удаляли и инкубировали с 500 мкл среды-носителя, тестируемого контрольного соединения и тестируемого соединения (при концентрации, обеспечивающей 70% ингибирование) в течение 1 ч с осторожным встряхиванием при 37°С. После инкубации клетки равномерно диспергировали и 100-мкл аликвоту извлекали из каждой пробирки для контроля без промывания. Затем остальные клетки подвергали 5 повторяющимся стадиям промывания, при которых клетки центрифугировали, супернатант удаляли и повторно суспендировали в 1 мл свежего предварительно нагретого (37°С) буфера для промывания. Чтобы избежать эффектов переноса соединения из-за прилипания к пластику, клетки переносили в свежие пробирки после каждой стадии промывания и помещали в шейкер (900 об/мин) при
- 52 038773
37°С для 10-минутной инкубации между промываниями для обеспечения восстановления равновесия между клетками и буфером. После финальной стадии промывания клетки повторно суспендировали в 360 мкл предварительно нагретого буфера для промывания. По 5 мкл как из пробирок без промывания, так и из пробирок с промыванием помещали в 384-луночный белый полипропиленовый микротитровальный планшет (Greiner) и инкубировали при 37°С в течение 15 мин. Затем клетки стимулировали 5 мкл rhuPDGF-ВВ (3 нг/мл, R&D Systems) в течение 5 мин, после чего клетки сразу же лизировали путем добавления 10 мкл буфера для лизиса, представленного в аналитическом наборе HTRF. Клетки помещали в шейкер для планшетов (1450 оборотов в минуту) на 1 ч, после чего планшет быстро центрифугировали в течение 30 с (3000 об/мин) и добавляли реагенты из набора HTRF собственного изготовления согласно инструкциям в наборе. Фосфорилирование PDGFRe определяли количественно путем вычисления отношения считывания флуоресценции при 665 и 620 нм. Процент ингибирования индуцированного rhuPDGF-BB фосфорилирования PDGFRe тестируемым соединением вычисляли как процент такового, достигаемого при 3 мкг/мл rhuPDGF-BB, по Анализу проницаемости РАМРА.
С помощью данного анализа измеряли проницаемость по всей искусственной мембране и выполняли его на Cyprotex с использованием параллельного анализа проницаемости искусственной мембраны. Он представляет собой in vitro модель пассивного, трансцеллюлярного проникновения через искусственную гексадекановую мембрану (Wohnsland F. et al., Med. Chem., 2001 44; 923-930). Соединения могут быть разделены по низкой и высокой проницаемости. Как правило, соединения, которые имеют Рарр < 10 х 10-6 см/с, классифицируют как соединения с низкой проницаемостью, а соединения с Рарр > 10 х 10-6 см/с, классифицируют как соединения с высокой проницаемостью. Считают, что соединения, имеющие низкую проницаемость, вероятно имеют длительное время нахождения в легком из-за их более медленной абсорбции (Tronde Ann et al., J. Pharm. Sci., 2003, 92(6), 1216-33).
Краткое описание протокола.
Тестируемое соединение добавляли на донорную сторону фильтра, покрытого искусственной мембраной РАМРА, и проницаемость измеряли с помощью мониторинга появления тестируемого соединения на акцепторной стороне клеточной мембраны с использованием LC-MS/MS.
Экспериментальная процедура.
Готовили раствор гексадекана в гексане (5% об./об.) и добавляли аликвоту на мембрану в каждой лунке фильтровального (донорного) планшета (фильтровального планшета Multiscreen для проницаемости, Millipore). Затем обеспечивали высыхание донорных планшетов для гарантии выпаривания гексана.
Добавляли буфер (рН 7), содержащий DMSO (5%), в каждую лунку акцепторных планшетов. Готовили растворы тестируемых соединений путем разбавления 10 мМ концентратов DMSO буфером с получением финальной концентрации тестируемого соединения 10 мкМ (финальной концентрации DMSO 5%). Также включали флуоресцентный маркер целостности люцифер желтый в раствор тестируемого соединения. Донорный планшет вставляли в акцепторный планшет и затем планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 5 ч. Из растворов тестируемых соединений готовили аналитические стандарты. Проницаемость тестируемого соединения оценивали в четырех повторностях. В каждом планшете в качестве контролей использовали соединения с известными характеристиками проницаемости.
В конце периода инкубации донорный планшет извлекали из акцепторного планшета. Определяли количество в донорных и акцепторных образцах тестируемых и контрольных соединений с помощью кассетного анализа LC-MS/MS с использованием 5-точечной калибровки с соответствующим разбавлением образцов. Экспериментальное восстановление вычисляли по концентрациям как донорного, так и акцепторного компартмента.
Если проникновение люцифера желтого превышало пределы QC для одной, двух или трех отдельных лунок тестируемого соединения, то сообщали результаты n = 3, 2 или 1.
Анализ данных.
Коэффициент эффективной проницаемости (Рарр) для каждого соединения вычисляли по следующему уравнению: [лекарственное средст во] др1.-, [лекарствен ное средство]^^^ при этом |с = Ур х , (Уд + ГЦ )Площадь X время в котором VD и VA представляют собой объемы донорного и акцепторного компартментов, соответственно, площадь представляет собой площадь поверхности мембраны, умноженную на пористость, а равновесная концентрация лекарственного средства представляет собой концентрацию тестируемого соединения в суммарном объеме донорного и акцепторного компартментов.
In vivo скрининг: фармакодинамические и фармакокинетические показатели.
Индуцированный блеомицином фиброз у мышей (мышиная модель легочного фиброза).
Мышам C57BL6/J внутритрахеальным путем вводили дозу либо среды-носителя, либо блеомицина сульфата (МР Biomedicals, 2 ед./кг) в день 0. Соединения вводили внутриназально (в виде водных растворов или суспензий, 25-50 мкл) один раз в сутки от дня 5 до дня 20. Еще через 24 ч животных анесте
Рарр = {С X — In(1 —
- 53 038773 зировали, канюлировали им трахеи и животных механически вентилировали с использованием управляемого компьютером поршневого вентилятора (FlexiVent, SCIREQ Inc., Montreal, Canada). После измерений функции легких мышей обескровливали и экстрагировали жидкость бронхоальвеолярного лаважа (BALF). Количества суммарных и отдельных видов лейкоцитов в образцах BALF измеряли с использованием гемоцитометра Neubaur. Получали цитоспиновые мазки образцов BALF с помощью центрифугирования и окрашивания с использованием системы окрашивания DiffQuik (Dade Behring). Подсчитывали клетки с использованием масляно-иммерсионной микроскопии. Оставшиеся супернатанты BALF сохраняли для анализа цитокина.
Целые легкие накачиваются под давлением 25 см H2O с 10% нейтральным забуференным формалином через трахеальную канюлю и погружали в формалин по меньшей мере на 24 ч. После запаивания в парафиновые блоки легкие нарезали на срезы (5 мкм) и окрашивали или гаматоксилином и эозином (Н&Е), пикросириусом красным (PSR) или трихромом по Массону. Постоянное количество изображений произвольно получали из 4 поперечных срезов. Изображения оценивались в баллах от 0 (отсутствие PF) до 8 (максимальный PF) 2 исследователями слепым методом для оценки фиброзных изменений в легких. Кроме того, выполняли окрашивание по актину α-гладких мышц (Thermo Scientific, Freemont, CA) с использованием стандартных методик. Растворимый коллаген в гомогенате цельного легкого оценивали с помощью анализа коллагена Sircol (Biocolor Ltd, Carrickfergus, UK).
Индуцированное PDGFBB фосфорилирование PDGFRe у мышей.
Мышей C57BL/6 (Charles River) возрастом 7-12 недель размещали при 12-часовом цикле свет/темнота и давали им корм и воду ad libitum. Водные растворы или суспензии соединений готовили для доставки указанных доз (мг/кг) на основе средней массы мышей в группах. Животных анестезировали и вводили соединения или среды-носители внутриназально (50 мкл). После восстановления в указанные моменты времени животных снова анестезировали и внутритрахеально вводили рекомбинантный мышиный PDGF-BB (50 мкг/животное, Cambridge Biosciences) или среду-носитель, а затем через 5-30 мин после вливания PDGF-BB забирали окончательные образцы крови и иссекали цельные легкие. Из крови выделяли плазму путем центрифугирования. Приблизительно половину левых долей гомогенизировали с использованием устройства FastPrep-24 5G в пробирках для лизиса Matrix D (МР Biomedicals). Измеряли уровни фосфорилирования PDGFRe с помощью вестерн-блоттинга с использованием антител против фосфо-PDGFRα(Y849)/β(Y857), против суммарного PDGFRe/α и против GAPDH (Cell Signaling). Уровни фосфорилирования PDGFRe описывали как отношения к суммарному содержанию PDGFRe или к GAPDH. Вычисляли процент ингибирования фосфорилирования PDGFRe для каждой обработки относительно обработки средой-носителем. Осуществляли измерения содержаний соединений в плазме или гомогенатах легких с помощью LC-MS/MS.
Фармакокинетические измерения у грызунов.
Для фармакокинетических исследований использовали самцов крыс CD или C57BL/6J, при этом дозы животным вводили внутритрахеально, перорально или внутривенно для крыс и внутриназально, перорально или внутривенно для мышей.
Животным вводили дозу внутривенно через боковую хвостовую вену. Животных, которым вводили дозу внутритрахеальным или внутриназальным путем, анестезировали перед введением дозы с использованием изофлурана, а также оксида одновалентного азота в исследования на крысах или кислорода в исследования на мышах.
Животных канюлировали в боковую хвостовую вену и помещали в камеру с подогревом (37-40°С) приблизительно на 5 мин перед каждым моментом времени забора образов для расширения хвостовых вен. Соединения составляли в виде растворов для внутривенного введения и в виде растворов или суспензий для всех других способов. Животных взвешивали в день введения дозы и осуществляли однократное введение состава с объемом, регулируемым согласно индивидуальной массе тела (табл. 3). Для серийных образцов брали 150-200-мкл образцы крови крысы или 20-мкл образцы крови мыши (с добавлением одинакового объема воды) из отверстия канюли в покрытые K2EDTA пробирки Microtainer в предварительно определенные моменты времени на протяжении 24 ч. Плазму выделяли путем центрифугирования (с относительным центробежным ускорением (rcf) 8200 в течение 5 мин), только в исследованиях на крысах.
При завершении образцы крови собирали через нисходящую полую вену в покрытые K2EDTA пробирки Microtainer и получали жидкость BAL путем промывания легких через трахею вливаниями 3x4 мл 4% BSA в PBS для крыс и вливаниями 3x0,4 мл 4% BSA в PBS для мышей. Легкие иссекали, взвешивали, регистрировали массы и быстро замораживали в жидком азоте.
Измерения содержания соединений в плазме или крови, гомогенатах легких и жидкости BAL осуществляли с помощью LC-MS/MS. Лекарственное средство экстрагировали путем осаждения белка с использованием избытка растворителя, содержащего соответствующий внутренний стандарт. Концентрации лекарственного средства определяли по кривой, построенной по внешнему стандарту, совместимому с матрицей.
Концентрации лекарственного средства наносили на график в полулогарифмическом масштабе в
- 54 038773 зависимости от времени (см. фиг. 1, 2 и 3). Стандартные фармакокинетические параметры вычисляли с использованием некомпартментного анализа. Концентрации в легком и жидкости BAL в каждый момент времени выражали как процент вводимой дозы.
Таблица 3. Объем введения
Путь введения Мышь Крыса
Внутриназальный (i.n.) 1,5 мл/кг Не использовали
Внутритрахеальный (i.t) Не использовали 0,5 мл/кг
Пероральный (р.о.) 10 мл/кг 10 мл/кг
Внутривенный (i.v.) 2 мл/кг 1 мл/кг
Результаты.
Результаты тестирования в анализах ингибирования фермента, а также в клеточных и других in vitro анализах представлены в приведенных ниже табл. 4-8 и на фиг. 1-3.
Таблица 4. Ингибиторные активности соединений в соответствии с настоящим изобретением и нинтеданиба в отношении FGFR1, FGFR3, PDGFRa, PDGFRe, VEGFR1 и VEGFR2
Анализы ферментов
Ki (пМ)
Номер примера FGFR1 FGFR3 PDGFRa PDGFRp VEGFR1 VEGFR2
Нинтеданиб* 32 5.9 8.4 8.0 ИЗ 3.8
1 35 13.8 12.3 9.93 97.6 22.9
2 44.9 14.8 18.2 11.1 123 28.8
3 34.1 12.9 10.7 6.86 73.1 27.7
4 29.3 8.07 11.3 11.6 74 16.7
5 43.7 10.4 12.2 12.9 72.6 36
6 28.4 7.35 9.41 10.3 80.8 21.2
7 35 15.7 7.82 5.76 146 23
8 41.8 17.1 10.9 8.12 150 18.8
9 38.7 9.42 8.36 7.89 133 17.3
- 55 038773
10 82.3 15.2 16.2 12.7 184 34.2
и 23.9 14.1 12.3 10.6 90.7 5.06
12 22.4 11.5 14.2 8.75 61.9 6.38
13 19.6 7.16 16.5 10.4 41.6 19.5
14 19.7 5.51 13.3 9.6 52.3 15.3
15 7.9 2.5 5.0 5.0 50 5.0
16 57.9 11.4 15.9 13 245 45.6
17 16.6 5.31 7.81 9.39 31.6 6.4
18 36.6 13.7 14.1 7.99 57.5 25.7
19 13.6 9.04 6.55 8.79 47.7 8.35
20 48.5 30 24.2 19.1 178 83.7
21 27.1 10.7 9.38 6.11 95.5 24.8
22 16.3 9.53 9.75 9.29 63.2 12.4
23 434 73.2 51.9 84.6 513 154
24 65.2 14.3 10.5 12.7 252 31.1
25 23.5 12.7 13 11.7 112 32.7
26 108 32.1 41 45 392 62.5
27 61 17.9 20.4 18 177 57.8
28 134 62.6 35.9 20 305 71.2
29 27.6 23.2 10.7 11.2 103 16.4
30 32.3 19.5 И 10 65.1 8
31 15.3 12.2 10.2 4.83 29.6 4.96
32 9.03 6.65 7.38 5.02 31.4 7.56
33 14.3 7.4 8.89 6.82 42.6 3.56
34 98.8 25.9 24.6 14.4 159 18.7
35 66.6 19.9 24.7 17 163 54.7
36 71.9 18.5 21.7 15.9 84.8 15
37 8.56 11.2 10.7 7.54 45.4 9.97
38 9.73 6.93 7.53 4.79 36.2 3.26
39 47.4 14.7 15.3 14.1 133 31.6
40 78.1 14.9 33.7 12.8 78.2 27
41 23.8 9.31 13.8 10.2 49.7 17.7
42 33.8 15.7 18.3 14.4 80.6 31.1
43 112 20.7 30.8 25.2 66.9 11.9
44 229 22 27.3 17.8 220 28.8
45 40.2 18.8 20 15.1 103 13
46 7.92 7.78 6.86 6.65 30.7 4.15
47 171 25.5 53.8 98.9 216 43.2
48 11.3 8.47 8.92 9.49 52.7 3.68
49 19.6 7.16 16.5 10.4 41.6 19.5
50 19.7 5.51 13.3 9.6 52.3 9.6
51 24.2 10.8 н. о. н. о. 79.3 20.8
52 50.8 19.2 н. о. н. о. 251 30.6
53 25.2 10.4 н. о. н. о. 71.5 20.8
54 100 39.8 25.1 15.8 316 50.1
55 79.4 15.8 25.1 25.1 316 39.8
56 39.8 12.6 12.6 12.6 126 15.8
н. о.: не определяли; η = 2, если не указано иное (среднее); *п = 34
- 56 038773
Таблица 5. Ингибиторные эффекты соединений в соответствии с изобретением и нинтеданиба в отношении индуцированного PDGFBB фосфорилирования PDGFRe в фибробластных клетках MRC5 и в отношении индуцированного VEGF165 фосфорилирования VEGFR2 в эндотелиальных клетках
Фосфорилирование рецептора (IC50, нМ)
Номер примера Индуцированное PDGFBB фосфорилирование PDGFR3 в клетках MRC5 Индуцированное VEGF 165 фосфорилирование VEGFR2 в клетках НАЕС
Нинтеданиб 7.07 (п=8) 0.594 (п=13)
1 25.6 (п=2) 2.47 (п=2)
2 36.7 17.7
3 12.7 (п=2) 10.6
4 14 (п=2) 4.38
5 15(п=2) 9.24 (п=2)
6 13.2 (п=2) 12.7 (п=2)
7 6.04 (п=2) 2.53 (п=2)
- 57 038773
8 12(n=2) 4.58
9 14.2 (n=2) 5.68 (n=2)
10 15.9 10.8 (n=2)
И 2.75 1.1
12 4.23 10.1
13 1.25 8.3
14 6.97 24.1
15 6.49 1.84
16 Η. 0. 8.89
17 4.48 3.11
18 16.8 (n=2) 8.15 (n=2)
19 5.04 0.765
20 38.9 17.1
21 35.1 23.6
22 12.3 31.9
23 22.6 942
24 12.3 4.96
25 24.2 10.8
26 18.1 4.08
27 43 16.7
28 51.3 14.9
29 3.65 3.46
30 6.02 0.204
31 5.52 2.99
32 4.53 3.88
33 2.32 H. 0.
34 4.71 6.88
35 17.3 11.6
36 9.96 7.61
37 5.28 4.63
38 1.7 8.78
39 5.95 2.11
40 13.4 72.2
41 7.4 5.82
- 58 038773
42 14.9 28.3
43 2.31 н. о.
44 3.33 6.99
45 2.42 3.16
46 2.49 1.5
47 3.67 3.17
48 2.29 н. о.
49 1.25 8.3
50 6.97 24.1
51 6.71 10.5
52 5.49 4.28
53 6.5 4.58
54 5.04 6.29
55 9.13 10.2
56 9.16 6.68
н. о.: не определяли; η = 1, если не указано иное
Таблица 6. Эффект соединений в соответствии с изобретением и нинтеданиба в отношении жизнеспособности клеток на клетках MRC5 (анализ МТТ)
Анализ жизнеспособности клеток на клетках MRC5 (МТТ)
Номер примера Жизнеспособность клеток при 1000 нМ (%) Жизнеспособность клеток при 300 нМ (%) Жизнеспособность клеток при 100 нМ (%)
Нинтеданиб (п=30) 92.7 105.6 104.6
1 (п=4) 68.7 89 103.6
2 68.5 91 94
3 (п=4) 79.5 86.1 88
4 (п=4) 70.9 83.2 80.6
5 (п=4) 84.8 81 91.5
6 (п=4) 91.2 98.9 102.3
7 (п=3) 67.5 97.2 102.9
8 (п=3) 77.7 108.2 110.4
- 59 038773
9 (n=3) 97.5 103.6 102
10 108.4 118.9 85
11 28.5 67.8 82
12 93.4 105.5 92.2
13 102.1 93.2 84.3
14 61 107.9 116.2
15 85.6 109.9 91.3
16 70.6 104.3 103.2
17 (n=3) 34.1 63.6 76.2
18 (n=4) 91.8 97.3 98.2
19 21.9 71.8 85.5
20 87.2 91.7 92.6
21 98.8 127.3 139.6
22 48.8 58.8 72.3
23 62.1 100.5 90.7
24 45.9 74.4 125.2
25 55.4 74.7 83.2
26 57.6 91.6 84.4
27 82.9 112.6 106.5
28 83.6 97.6 149.4
29 60.8 72.5 116.9
30 16.4 85.3 107.2
31 34.3 47.3 69.3
32 49.4 129.3 99.3
33 19.8 63.1 86.6
34 16.2 74.4 82.9
35 99.1 122.5 99.8
36 69.6 77.2 87.3
37 18.4 83.4 93.6
38 4.2 63 70.7
39 36.7 73.3 96.2
40 82.9 88 95.4
41 6.2 56.8 68.5
42 60.7 83.4 82.5
- 60 038773
43 6.4 58.8 72.2
44 60.4 78.4 98.4
45 62.8 71.7 80.1
46 18.2 80.2 87
47 58.5 123 143.1
48 14.1 74.4 84.4
49 102.1 93.2 84.3
50 61.0 107.9 116.2
51 83.8 95.5 ИЗ
52 85.9 81.2 81.3
53 95.3 92.9 89.1
54 92.4 105.5 110.2
55 101.7 101.5 79.4
56 102.0 104.9 100.0
η = 1, если не указано иное.
Таблица 7. Определение Рарр для соединений в соответствии с изобретением в анализе проницаемости РАМРА
Данные анализа РАМРА
№ примера* Среднее Рарр (10‘6 см с'1) SD РаРР N Рарр % восстановления
Нинтеданиб 0.277 0.151 4 83.5
Нинтеданиб (повтор) 0.129 0.0547 4 64.0
1 0.123 0.0586 4 92.0
2 н. о. н. о. н. о. и. о.
3 0.00775 0.00480 2 92.4
4 0.0216 0.00968 4 76.0
5 0.00254 0.000276 4 58.7
6 0.0120 0.00415 4 56.5
7 0.00653 0.00208 4 56.3
8 0.156 0.0925 4 87.8
9 0.0146 0.0144 3 72.7
- 61 038773
10 0.0428 0.0207 3 70.4
11 0.0479 0.0136 4 93.2
12 0.00638 0.000688 2 87.7
13 0.0439 Η. 0. 1 76.3
14 Η. 0. Η. 0. Η. 0. Η. 0.
15 Η. ο. Η. ο. Η. ο. Η. ο.
16 Η. 0. Η. 0. Η. 0. Η. 0.
17 24.6 6.76 4 59.8
18 0.00383 Η. 0. 1 84.5
19 0.589 0.189 4 61.8
20 0.0165 0.00927 4 104
21 0.0442 0.0182 4 76.0
22 0.0460 0.00625 4 101
23 Η. 0. Η. 0. Η. 0. Η. 0.
24 Η. 0. Η. 0. Η. 0. Η. 0.
25 11.0 4.21 4 105
26 10.3 1.09 4 96.2
27 16.8 5.25 4 54.3
28 Η. 0. Η. 0. Η. 0. Η. 0.
29 0.373 0.0168 4 72.1
30 0.0235 0.00544 4 87.2
31 0.00531 0.00133 4 66.2
32 0.0217 0.00799 4 59.6
33 0.0269 0.0117 4 69.1
34 0.00748 0.00338 3 41.1
35 10.7 4.14 4 79.2
36 8.96 3.22 4 77.4
37 0.0542 0.0147 4 68.2
38 0.0269 0.0154 4 70.3
39 0.633 0.124 4 85.7
40 26.5 11.6 4 56.0
41 Η. 0. Η. 0. Η. 0. Η. 0.
42 Η. 0. Η. 0. Η. 0. Η. 0.
43 0.865 0.211 2 72.2
- 62 038773
44 0.00879 0.00701 2 71.7
45 0.0893 0.0140 2 77.0
46 н. о. н. о. н. о. н. о.
47 н. о. н. о. н. о. н. о.
48 н. о. н. о. н. о. н. о.
49 н. о. н. о. н. о. н. о.
50 н. о. н. о. н. о. н. о.
51 н. о. н. о. н. о. н. о.
52 н. о. н. о. н. о. н. о.
53 н. о. н. о. н. о. н. о.
54 н. о. н. о. н. о. н. о.
55 н. о. н. о. н. о. н. о.
56 н. о. н. о. н. о. н. о.
н. о. = не определяли
Таблица 8. Фармакокинетические измерения за период в 24 ч у крыс, которым внутривенно (i.v.) и внутритрахеально (i.t.) вводили дозу соединений в соответствии с изобретением или нинтеданиба
Номер примера Нинтеданиб 3 4 5 6 7 9 18
исследования с i.v. введением дозы
i.v. доза 0.42 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
CL (мл/минута/ кг) 124 и. о. и. о. и. о. и. о. 75 90 и. о.
Vss (л/кг) 28 и. о. и. о. и. о. и. о. 3.4 7 и. о.
11/2 (часы) 3.9 и. о. и. о. и. о. и. о. 0.6 1.1 5.1
MRT (часы) 3.8 и. о. и. о. и. о. и. о. 0.7 1.1 и. о.
Концентрац ия в легком (нМ) на момент времени
- 63 038773
(часы)
0.1 2304 761 959 765 1002 99 494 638
1.5 1392 700 641 330 949 44 174 306
6 и. о. 321 156 499 939 BQL 235 201
24 66 135 88 247 837 BQL 502 41
Отношение концентраци и в легком/плаз ме на момент времени (часы)
0.1 92 38 86 127 77 2 17 39
1.5 226 154 137 >188 >558 12 55 69
6 и. о. 120 58 >284 >552 NC >326 71
24 >80 >72 >50 >140 >492 NC >697 >21.5
% введенной дозы в BAL на момент времени (часы)
0.1 0.06 0.1 0.07 BQL BQL 0.06 BQL 0.13
1.5 0.03 0.1 0.04 BQL BQL BQL BQL 0
6 и. о. 0.03 BQL BQL BQL BQL BQL BQL
24 BQL 0.02 BQL BQL BQL BQL BQL BQL
исследования с i.t. введением дозы
i.t. доза 0.42 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
i.t. В AV (%) 43 н. о. н. о. н. о. н. о. 35 <40 39
Концентрац ия в легком (нМ) на момент времени
- 64 038773
(часы)
0.1 12396 2605 3490 5506 9826 1532 5701 6533
1.5 7699 4986 1214 4022 7568 886 8813 5987
6 н. о. 4675 475 1067 7815 116 10466 2351
24 152 1863 370 1674 6438 27 10465 4523
Отношение концентраци и в легком/плаз ме на момент времени (часы)
0.1 1227 100 290 371 472 39 >7890 346
1.5 1607 1911 523 >2285 >4452 >265 >12197 2318
6 н. о. 2152 251 >606 >4597 >35 >14485 1197
24 >183 >10 04 >206 >951 >3787 >8 >14483 >2373
% введенной дозы в BAL на момент времени (часы)
0.1 2 14 3.4 13.6 14 3.5 13.7 6.7
1.5 1 1.2 0.4 0.9 0.9 0.6 5.2 2.2
6 н. о. 0.7 0.4 0.2 1.1 0.1 2.3 0.4
24 0.1 0.3 0.3 0.2 0.9 BQL 0.5 0.3
Отношение концентраци и в легком при i.t. введении/i.v. введении на момент
времени (часы)
0.1 5.4 3 3.6 7 9.8 15.5 12 10
1.5 5.5 7 1.9 12 8.0 20.1 51 20
6 н. о. 15 3.0 2 8.3 >42 45 12
24 2.3 14 4.2 7 7.7 >10 21 110
Исследования с пероральным введением дозы
Пероральная доза (мг/кг) - 3 3 3 3 3 3 3
BAV перорально (%) - н. о. н. о. н. о. н. о. <7 <2 н. о.
н. о.: не определяли.
NC: не вычисляли из-за одного параметра, находящегося BLQ. BLQ: ниже уровня количественного определения.
- 65 038773
CL: очищение.
Vss: объем распределения.
MRT: среднее время удержания.
BAV: биологическая доступность.
BAL: бронхоальвеолярное орошение, где значение > или < отмечено как значение, основанное на нижней границе количественного анализа из биоаналитического метода.
Краткое описание результатов.
Соединения в соответствии с настоящим изобретением, раскрываемые в настоящем документе, демонстрируют ингибиторную активность в отношении FGFR1, FGFR3, PDGFRa, PDGFRp, VEGFR1 и VEGFR2 (табл. 4 и 5) и наномолярную эффективность. Подавляющее большинство тестируемых соединений не оказывают неблагоприятных эффектов в анализах жизнеспособности клеток (табл. 6). Более того, соединения, как правило, обладают низкой проницаемостью сквозь мембраны (табл. 7 и фиг. 1). Фармакокинетические измерения показывают, что в целом соединения в соответствии с настоящим изобретением, как выяснилось, имеют более высокое относительное содержание, чем у нинтеданиба, сохраняющееся в легком через 24 ч после того, как субъекту была доставлена доза местным путем (табл. 8 и фиг. 2 и 3).
Фармакокинетические параметры также указывают на то, что соединения в соответствии с настоящим изобретением сохраняют более высокие уровни в легком при местной доставке по сравнению с эквивалентными дозами, доставляемыми i.v., и обычно такие более высокие относительные уровни выше соответствующих уровней нинтеданиба в особенности в момент времени 24 ч. Низкое содержание в BAL, отмеченное вместе с уменьшающимися количествами на протяжении 24-часового периода, указывают на то, что происходит быстрое растворение и всасывание в ткань легкого соединений в соответствии с настоящим изобретением.
Данный профиль указывает на то, что соединения в соответствии с настоящим изобретением, как предполагают, подходят в качестве медицинских препаратов inter alia для лечения фиброзных заболеваний или интерстициальных легочных заболеваний, таких как IPF, или респираторных нарушений, особенно при доставке в легкое местным путем.
Ссылки
Castriotta RJ, etal., Chest, 2010, 138(3):693-703
Du Bois RM., Nat Rev Drug Discov., 2010, 9(2):129-40
Fehrenbach. H., et al., Virchows Arch., 1999, 435(1):20-31
King ТЕ Jr, et al., Lancet, 2011, 3;378(9807): 1949-61
Lindroos. P., Am J Physio Lung Cell Mol Physiol., 2001, 280:L354-L362
Tronde Ann et al., JPharm. Sci., 2003, 92(6), 1216-33
Selman M, et al., Ann Intern Med., 2001, 16;134(2):136-51
Wohnsland F et al., Med Chem., 2001, 44;923-930
По всему описанию и следующей формуле изобретения, если контекст не требует иного, слово содержать и вариации, такие как содержит и содержащий, следует понимать как включение указанных целого числа, стадии, группы целых чисел или группы стадий, но не как исключение каких-либо других целого числа, стадии, группы целых чисел или группы стадий.
Все патенты и патентные заявки, упомянутые в настоящем документе, включены посредством ссылки во всей своей полноте.

Claims (20)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Соединение формулы (А)
    н о
    где R1 представляет собой Me, Et, CH=CH2, С=С-Н или С=С-Ме;
    один из R2 и R3 представляет собой группу, выбранную из Н, -С1-С6алкила, С1-С6алкокси, -С3-С8циклоалкила, -СН2-(С3-С8циклоалкил), галогена и циано, а другой представляет собой группу -Z-Rx;
    - 66 038773
    Z представляет собой СО или SO2; Rx представлен формулой (iv)
    где V представляет собой СО;
    где v представляет собой 0 или 1;
    где n представляет собой 0, 1 или 2 при условии, что если v представляет собой 1, n представляет собой 1 или 2;
    m представляет собой 1 или 2;
    X представляет собой СН или N при условии, что если n представляет собой 0 или 1, X представляет собой СН;
    Y представляет собой СН или N;
    W представляет собой группу, выбранную из -С1-С4алкила, -С1-С4гидроксиалкила, C1-С4алкокси(С1-С4)алкил-, -С1-С4алкиленСОNR20R21, -C1-С4алкиленNR20СОR21, -SO2(С1-С4)алкил, -СО(С1-С4)алкила, галогена, CN, ОН и NR22R23, при условии, что если W представляет собой NR22R23, -С1алкиленNR20СОR21 или галоген, Y представляет собой СН;
    R2o, R21, R22, R23, R24 и R25 независимо представляют собой Н или -С1-С4алкил; или соединение, выбранное из группы, состоящей из
    - 67 038773 или его фармацевтически приемлемая соль.
  2. 2. Соединение по п.1, где R1 представляет собой Me.
  3. 3. Соединение по п.1 или 2, где Z представляет собой СО.
  4. 4. Соединение по любому из пп.1-3, где R3 представляет собой -Z-Rx.
  5. 5. Соединение по любому из пп.1-4, где v представляет собой 1 и n представляет собой 1.
  6. 6. Соединение по любому из пп.1-5, где m представляет собой 1.
  7. 7. Соединение по любому из пп.1-6, где X представляет собой СН.
  8. 8. Соединение по любому из пп.1-7, где Y представляет собой N.
  9. 9. Соединение по любому из пп.1-8, где W представляет собой -С1-С4алкил или NR22R23.
  10. 10. Соединение по п.1, которое выбрано из (Z)-метил-5-метил-3-(((4-(N-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этил)сульфамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-3-(((4-(((1-метилпиперидин-4-ил)метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-3-(((4-((2-(4-метилпиперазин-1-ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-3-(((4-((2-(4-метил-1,4-диазепан-1 -ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил)-2-оксоэтил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-3-(((4-((2-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-оксоэтил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-2-оксо-3-(((4-((2-(3-оксопиперазин-1-ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)индолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-3-(((4-((3 -(4-метилпиперазин-1 -ил)-3-оксопропил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3 -(((4-((2-(4-гидроксипиперидин-1 -ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5 метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-(((1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил)метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-3-(((4-((1-метилпиперидин-4-ил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((1-(2-метоксиэтил)пиперидин-4-ил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-3-(((4-((3-(4-метилпиперазин-1-ил)пропил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(4,4-дифторпиперидин-1-ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(4-ацетилпиперазин-1-ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(4-фторпиперидин-1-ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-3-(((4-((3-морфолинопропил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3 -(((4-((2-(4-ацетил-1,4-диазепан-1 -ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5 метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3 -(((4-((2-(4-(гидроксиметил)пиперидин-1 -ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-3-(((4-((2-(4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-2-оксо-3-(((4-((2-(5-оксо-1,4-диазепан-1-ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)индолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3 -(((3-фтор-4-((2-(3-оксопиперазин-1 -ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-2-оксо-3-(((4-((2-(3-оксо-1,4-диазепан-1-ил)этил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)индолин-6-карбоксилата;
    - 68 038773 и фармацевтически приемлемых солей любого из этих соединений.
  11. 11. Фармацевтическая композиция для лечения фиброзных заболеваний или интерстициальных заболеваний легких, содержащая соединение по любому из пп.1-10 в комбинации с одним или более фармацевтически приемлемыми разбавителями или носителями.
  12. 12. Применение соединения по любому из пп.1-10 для изготовления лекарственного средства для лечения фиброзных заболеваний или интерстициальных заболеваний легких, выбранных из идиопатического легочного фиброза (IPF), гигантоклеточной интерстициальной пневмонии, саркоидоза, кистозного фиброза, респираторного дистресс-синдрома, индуцированного лекарственным средством легочного фиброза, гранулематоза, силикоза, асбестоза, вызванного вирусом цирроза печени; или заболеваний кожи с фиброзным компонентом, выбранных из склеродермии, саркоидоза и системной красной волчанки; или заболеваний, характеризующихся гиперпролиферацией клеток, выбранных из рака, или респираторных нарушений, выбранных из хронической обструктивной болезни лёгких (COPD), хронического бронхита и эмфиземы, астмы, ринита и синусита.
  13. 13. Применение соединения по любому из пп.1-10 для изготовления лекарственного средства для лечения фиброзных заболеваний, выбранных из легочного фиброза, ассоциированного с ревматоидным артритом, респираторного дистресс-синдрома, острого повреждения легкого, вызванного облучением легочного фиброза или пневмонита, хронического гиперчувствительного пневмонита, системного склероза, синдрома Шегрена, интерстициальных легочных заболеваний и легочной артериальной гипертензии (РАН); или с заболеваний кожи с фиброзным компонентом, выбранных из гипертрофированного рубцевания и келоидов; или глазных заболеваний, компонентом которых является фиброз, выбранных из глаукомы, возрастной дегенерации желтого пятна, диабетического отека желтого пятна, заболевания сухости глаз и диабетической ретинопатии; или фиброза в кишечнике, ассоциированного с воспалительным заболеванием кишечника.
  14. 14. Применение соединения по любому из пп.1-10 в комбинации с нинтеданибом или пирфенидоном для лечения фиброзных заболеваний или интерстициальных заболеваний легких, выбранных из идиопатического легочного фиброза (IPF), гигантоклеточной интерстициальной пневмонии, саркоидоза, кистозного фиброза, респираторного дистресс-синдрома, индуцированного лекарственным средством легочного фиброза, гранулематоза, силикоза, асбестоза, вызванного вирусом цирроза печени; или заболеваний кожи с фиброзным компонентом, выбранных из склеродермии, саркоидоза и системной красной волчанки; или заболеваний, характеризующихся гиперпролиферацией клеток, выбранных из рака; или респираторных нарушений, выбранных из хронической обструктивной болезни лёгких (COPD), хронического бронхита и эмфиземы, астмы, ринита и синусита.
  15. 15. Применение соединения по любому из пп.1-10 в комбинации с нинтеданибом или пирфенидоном для лечения фиброзных заболеваний, выбранных из легочного фиброза, ассоциированного с ревматоидным артритом, респираторного дистресс-синдрома, острого повреждения легкого, вызванного облучением легочного фиброза или пневмонита, хронического гиперчувствительного пневмонита, системного склероза, синдрома Шегрена, интерстициальных легочных заболеваний и легочной артериальной гипертензии (РАН); или заболеваний кожи с фиброзным компонентом, выбранных из гипертрофированного рубцевания и келоидов; или глазных заболеваний, компонентом которых является фиброз, выбранных из глаукомы, возрастной дегенерации желтого пятна, диабетического отека желтого пятна, заболевания сухости глаз и диабетической ретинопатии; или фиброза в кишечнике, ассоциированного с воспалительным заболеванием кишечника.
  16. 16. Применение по п.12 или 14, причем указанное заболевание выбрано из системной склеродермии, вызванной гепатитом С цирроза печени, рака легкого, астмы у детей, или аллергического ринита.
  17. 17. Применение по п.13 или 15, причем указанное заболевание представляет собой острый респираторный дистресс-синдром.
  18. 18. Соединение формулы (IXb)
    где R1 представляет собой Me, Et, CH=CH2, С=С-Н или С^С-Ме; и
    R3 независимо представляет собой Н, C1-С6αлкил, C1-С6алкокси, С3-С8циклоалкил, -СН2-(С3-С8циклоалкил), галоген или циано; или его соль.
  19. 19. Соединение формулы (Xb)
    - 69 038773 где R1 представляет собой Me, Et, CH=CH2, С=С-11 или С=С-Ме; и
    R3 независимо представляет собой Н, С1-С6алкил, С1-С6алкокси, С3-С8циклоалкил, -СН2-(С3-С8циклоалкил), галоген или циано; или его соль.
  20. 20. Способ получения соединения формулы (А) или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1-10, который включает в себя осуществление взаимодействия соединения формулы (II)
    где R1 определен в любом из пп.1-10; или его соли;
    L представляет собой уходящую группу; с соединением формулы (III)
    где R2 и R3 определены в любом из пп.1-10;
    или его солью, и удаление защитной ацетильной группы путем добавления нуклеофила.
EA201892020A 2016-03-08 2017-03-08 Индольные производные и их применение в качестве ингибиторов протеинкиназы EA038773B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP16159231 2016-03-08
PCT/GB2017/050619 WO2017153748A1 (en) 2016-03-08 2017-03-08 Indole derivatives and their use as protein kinase inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201892020A1 EA201892020A1 (ru) 2019-02-28
EA038773B1 true EA038773B1 (ru) 2021-10-18

Family

ID=55521584

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201892020A EA038773B1 (ru) 2016-03-08 2017-03-08 Индольные производные и их применение в качестве ингибиторов протеинкиназы

Country Status (10)

Country Link
US (2) US10669235B2 (ru)
EP (1) EP3426649B1 (ru)
JP (1) JP7039480B2 (ru)
CN (1) CN109153666B (ru)
AU (1) AU2017231860C1 (ru)
BR (1) BR112018068213A2 (ru)
CA (1) CA3017308A1 (ru)
EA (1) EA038773B1 (ru)
ES (1) ES2836255T3 (ru)
WO (1) WO2017153748A1 (ru)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3394048B1 (en) 2015-12-24 2020-03-11 Respivert Limited Indolinones compounds and their use in the treatment of fibrotic diseases
EP3426649B1 (en) 2016-03-08 2020-07-22 Respivert Limited Indole derivatives and their use as protein kinase inhibitors
CN112574094B (zh) * 2020-12-14 2022-07-01 成都大学 吲哚酮衍生物及其制药用途
WO2023043473A1 (en) * 2021-09-14 2023-03-23 R-Pharm Overseas, Inc. TGF-β INHIBITOR COMPOSITION AND USE THEREOF

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002081445A1 (de) * 2001-04-06 2002-10-17 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg In 6-stellung substituierte indoline und ihre verwendung als kinase-inhibitoren
WO2006067168A1 (en) * 2004-12-24 2006-06-29 Boehringer Ingelheim International Gmbh Medicaments for the treatment or prevention of fibrotic diseases

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA75054C2 (ru) 1999-10-13 2006-03-15 Бьорінгер Інгельхайм Фарма Гмбх & Ко. Кг Замещенные в положении 6 индолиноны, их получение и их применение как лекарственного средства
JP2004182726A (ja) 2002-11-22 2004-07-02 Yamanouchi Pharmaceut Co Ltd ２−オキソインドリン誘導体
JP2005145928A (ja) 2003-11-19 2005-06-09 Yamanouchi Pharmaceut Co Ltd ３−キノリン−２（１ｈ）−イリデンインドリン−２−オン誘導体を有効成分とする医薬組成物
PE20060777A1 (es) 2004-12-24 2006-10-06 Boehringer Ingelheim Int Derivados de indolinona para el tratamiento o la prevencion de enfermedades fibroticas
US7692005B2 (en) 2005-07-13 2010-04-06 Allergan, Inc. Kinase inhibitors
US8344018B2 (en) 2008-07-14 2013-01-01 Gilead Sciences, Inc. Oxindolyl inhibitor compounds
IN2014DN06869A (ru) 2012-01-26 2015-05-22 Angion Biomedica Corp
WO2015179436A1 (en) 2014-05-19 2015-11-26 Sanford-Burnham Medical Research Institute Inflammation therapy using mekk3 inhibitors or blocking peptides
EP3394048B1 (en) 2015-12-24 2020-03-11 Respivert Limited Indolinones compounds and their use in the treatment of fibrotic diseases
EP3426649B1 (en) 2016-03-08 2020-07-22 Respivert Limited Indole derivatives and their use as protein kinase inhibitors

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002081445A1 (de) * 2001-04-06 2002-10-17 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg In 6-stellung substituierte indoline und ihre verwendung als kinase-inhibitoren
WO2006067168A1 (en) * 2004-12-24 2006-06-29 Boehringer Ingelheim International Gmbh Medicaments for the treatment or prevention of fibrotic diseases

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ROTH GERALD J ET AL: "Design, Synthesis, and Evaluation of Indolinones as Triple Angiokinase Inhibitors and the Discovery of a Highly Specific 6-Methoxycarbonyl-Substituted Indolinone (BIBF 1120)", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, US, vol. 52, no. 14, 1 July 2009 (2009-07-01), US , pages 4466 - 4480, XP002582395, ISSN: 0022-2623, DOI: 10.1021/JM900431G *

Also Published As

Publication number Publication date
AU2017231860A1 (en) 2018-09-27
CN109153666A (zh) 2019-01-04
CN109153666B (zh) 2021-07-16
ES2836255T3 (es) 2021-06-24
US20210114982A1 (en) 2021-04-22
EP3426649A1 (en) 2019-01-16
WO2017153748A1 (en) 2017-09-14
US10669235B2 (en) 2020-06-02
US11208381B2 (en) 2021-12-28
EA201892020A1 (ru) 2019-02-28
EP3426649B1 (en) 2020-07-22
US20190071399A1 (en) 2019-03-07
AU2017231860B2 (en) 2021-06-10
JP7039480B2 (ja) 2022-03-22
BR112018068213A2 (pt) 2019-01-29
JP2019509294A (ja) 2019-04-04
CA3017308A1 (en) 2017-09-14
AU2017231860C1 (en) 2022-01-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11208381B2 (en) Indole derivatives and their use as protein kinase inhibitors
US7087614B2 (en) Pyrimidine inhibitors of phosphodiesterase (PDE) 7
ES2770026T3 (es) Derivados de imidazotiazol e imidazopirazina como inhibidores del receptor activado por proteasa 4 (PAR4) para tratar la agregación plaquetaria
EA038796B1 (ru) Индолиноновые соединения и их применение в лечении фиброзных заболеваний
EP2380891B1 (de) Substituierte Piperidino-Dihydrothienopyrimidine
BRPI0908417A2 (pt) composto, pró-droga, agente farmacêutico, método para inibir smo e para a profilacia ou tratamento de câncer em um mamídero, e, uso do composto
JP2013526484A (ja) キナーゼ阻害剤としてのアミノ‐キノリン
ES2905755T3 (es) Derivados de piperidina
MX2008013545A (es) Compuesto de piperazina novedoso y uso del mismo como inhibidor de polimerasa del virus de la hepatitis c.
TW201718587A (zh) 4H-吡唑並[1,5-α]苯並咪唑類化合物晶型及其製備方法和中間體
CN117043144A (zh) 作为lpa受体2抑制剂的8-环-取代的喹唑啉衍生物
EP4072670B1 (en) Quinazoline derivatives as lpa receptor 2 inhibitors
ES2371450T3 (es) Dihidropirimidinas heterocíclicas como inhibidores de los canales de potasio.
CA2722007A1 (en) Five-membered ring compound