CN109153666B - 吲哚衍生物及其作为蛋白激酶抑制剂的用途 - Google Patents

吲哚衍生物及其作为蛋白激酶抑制剂的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN109153666B
CN109153666B CN201780023315.XA CN201780023315A CN109153666B CN 109153666 B CN109153666 B CN 109153666B CN 201780023315 A CN201780023315 A CN 201780023315A CN 109153666 B CN109153666 B CN 109153666B
Authority
CN
China
Prior art keywords
phenyl
amino
methyl
methylene
carbamoyl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201780023315.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN109153666A (zh
Inventor
莱恩·瓦尔特斯
路易斯·比尔奇
史蒂芬·保罗·科林伍德
克里斯托弗·斯科特·斯特文松
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Respivert Ltd
Original Assignee
Respivert Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Respivert Ltd filed Critical Respivert Ltd
Publication of CN109153666A publication Critical patent/CN109153666A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109153666B publication Critical patent/CN109153666B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/30—Indoles; Hydrogenated indoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/32—Oxygen atoms
    • C07D209/34—Oxygen atoms in position 2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A61K31/4045—Indole-alkylamines; Amides thereof, e.g. serotonin, melatonin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4412—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/454—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pimozide, domperidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/527—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim spiro-condensed
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/54—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame
    • A61K31/541—Non-condensed thiazines containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/63—Compounds containing para-N-benzenesulfonyl-N-groups, e.g. sulfanilamide, p-nitrobenzenesulfonyl hydrazide
    • A61K31/635—Compounds containing para-N-benzenesulfonyl-N-groups, e.g. sulfanilamide, p-nitrobenzenesulfonyl hydrazide having a heterocyclic ring, e.g. sulfadiazine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C205/00—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton
    • C07C205/49—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups
    • C07C205/57—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups having nitro groups and carboxyl groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/04—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms
    • C07D295/14—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D295/145—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals with the ring nitrogen atoms and the carbon atoms with three bonds to hetero atoms attached to the same carbon chain, which is not interrupted by carbocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/10—Spiro-condensed systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

本发明特别涉及式(I)化合物，其中R1、R2和R3如说明书中所定义，并且涉及包含所述化合物的组合物，以及涉及所述化合物和所述化合物的组合物在治疗中、例如在治疗纤维化疾病或间质性肺病、特别是特发性肺纤维化中的用途。

Description

吲哚衍生物及其作为蛋白激酶抑制剂的用途
技术领域
本发明特别涉及抑制蛋白激酶的新化合物以及其在治疗中、特别 是用于治疗纤维化疾病或间质性肺病、特别是特发性肺纤维化和呼吸 疾病中的用途。本发明还涉及包含所述化合物的药物组合物。
背景技术
间质性肺病(ILD)的特征在于肺部瘢痕，所述肺部瘢痕会引起肺功 能障碍，从而最终可导致呼吸衰竭。有许多没有已知原因的ILD，其被 称为是特发性的。特发性肺纤维化(IPF)是最常见的ILD类型。IPF影 响了欧洲的约170,000人和美国的130,000人，仅在美国每年就诊断出 约48,000例新病例，并且美国每年有40,000人死亡。IPF死亡率非常 高，诊断后中值生存期为3-5年，并且报告的5年生存率低于30％，与 最致命的癌症相当。直到最近，除了肺移植之外，很少有治疗选择被 证明是有效的，并且用于大多数患者的治疗是症状控制和姑息护理。
IPF是一种慢性且致命的疾病，其主要特征在于由肺组织瘢痕引起 的肺功能进行性下降，从而导致呼吸困难恶化。血管内皮生长因子 (VEGF)、纤维母细胞生长因子(FGF)和血小板衍生生长因子(PDGF)是 纤维母细胞的已知有效有丝分裂原，其在纤维化发生时替代肺中的正 常组织。在ILD中，临床上已经展示了PDGF、VEGF和FGF的致病 作用的证据。受影响的主要部位是间质，即肺部气囊之间的组织，但 它还会影响气隙(airspace)、外周气道和血管。认为所述疾病病程通 过肺中肺泡上皮的一系列微损伤引发。损伤后，提高的血管渗透性导 致凝块形成，并且驻留的上皮细胞增殖以试图替代由于损伤而死亡的 那些细胞。这个过程触发了各种生长因子(例如PDGF、VEGF、FGF和 转化生长因子β(TGFβ))的释放，从而导致异常的上皮细胞活化、异常 的血管重塑以及最显著地，纤维母细胞的增殖和向肺的迁移。生长因 子还诱导驻留细胞转化为肌纤维母细胞，所述肌纤维母细胞与纤维母 细胞一起组织成病灶(King TE Jr等人,Lancet,2011, 3；378(9807):1949-61；Selman M等人,Ann Intern Med.,2001, 16；134(2):136-51)。这些细胞变化导致基底膜的破坏和间质空间中细胞 外基质蛋白的过度累积。结果是最终将肺泡毛细血管单元的正常结构 破坏和肺瘢痕。定义作为IPF的特征的纤维化的常见间质模式(UIP)的 病理是具有交替的正常肺、间质性炎症、致密纤维化、纤维母细胞灶 和蜂窝状区域的异质模式，特别是在肺的胸膜下区域中(Du Bois RM., Nat Rev Drug Discov.,2010,9(2):129-40；Selman M等人,AnnIntern Med.,2001,16；134(2):136-51；King TE Jr等人,Lancet,2011, 3；378(9807):1949-61)。正常结构的丧失和间质空间的瘢痕导致气体交 换能力的显著下降，从而导致所述疾病的典型症状的产生，所述典型 症状即呼吸困难、慢性咳嗽、听诊时吸气性爆裂音和异常呼吸量测定 结果(Castriotta RJ等人,Chest,2010,138(3):693-703)。虽然疾病病程是 异质性的，但中值生存期为约3-5年，并且最常见的死亡原因是呼吸衰 竭，所述呼吸衰竭由于破坏正常肺功能和气体交换的进行性病理。
为了在肺病的治疗中获得更好的耐受性和更好的功效，将药物直 接传递到肺中的作用位点可以是有利的。这使得能够在作用位点实现 较高浓度的药物，从而使总剂量较低，从而降低全身副作用。
尼达尼布(Nintedanib)是一种蛋白激酶抑制剂，其于2014年经FDA 批准用于通过口服施用治疗IPF。然而，其与显著的全身性不良事件有 关，包括腹痛，呕吐和腹泻。WO2006/067165教导了VEGFR、FGFR 和PDGFR的抑制剂如尼达尼布预期可用于治疗纤维化疾病，如IPF。 Fehrenbach.H.等人,Virchows Arch.,1999,435(1):20-31公开了VEGFR 与肺纤维化的病因有关。Lindroos.P.,Am J Physio Lung Cell Mol Physiol.,2001,280:L354-L362教导PDGF受体上调是肺纤维化期间肌 纤维母细胞增生的机制。WO01/27081显示对激酶包括VEGFR、PDGFR 和FGFR具有抑制作用的化合物适用于治疗纤维化疾病，并公开了一 系列6位取代的吲哚啉酮。类似地，WO2006/067165和WO2006/067168 也公开了用作治疗或预防纤维化疾病的药物的6位取代的吲哚啉酮。
本领域仍需要开发用于治疗纤维化疾病和间质性肺病如IPF的其 它化合物，特别是耐受性优于尼达尼布的化合物。理想地，这些化合 物应具有低剂量、适合于每天给与一次、两次或三次给药的长的作用 持续时间以及良好的功效和耐受性，特别是在局部地递送至肺时。本 文所述的式(I)化合物解决了这个问题。
发明内容
根据本发明，提供一种式(I)化合物：
Figure BDA0001826737760000031
其中
R1表示Me、Et、CH＝CH2、C≡C-H或C≡C-Me；
R2和R3中的一者表示选自以下的基团：H、-C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、-C3-C8环烷基、-CH2-(C3-C8环烷基)、卤素和氰基，并且另一 者表示基团-Z-Rx；
Rx表示式(i)
Figure BDA0001826737760000032
Figure BDA0001826737760000041
Z表示CO或SO2；
Y1表示(CH2)n，并且除了当n表示0时，Y1可以任选地被Me取 代；
X1表示(CH2)m，并且除了当m表示0时，X1可以任选地被Me 取代；
n和m独立地表示0、1、2、3、4或5；
Y2表示(CH2)s并且可以任选地在同一个或不同碳原子上被一个 或多个选自以下的基团取代：Me、OH、-C0-C4亚烷基CONR6R7、-C0-C4亚烷基NR6COR7、-C1-C4羟基烷基、-C1-C4烷基NR8R9和-C0-C4烷基-Het；
X2表示(CH2)v并且可以任选地在同一个或不同碳原子上被一个 或多个选自以下的基团取代：Me、OH、-C0-C4亚烷基CONR10R11、-C0-C4亚烷基NR10COR11、-C1-C4羟基烷基、-C1-C4烷基NR12R13和-C0-C4烷 基-Het；
Q表示螺C或选自N、O和S的杂原子，并且如果是N，则可 以任选地被一个或多个选自以下的基团取代：-C1-C4烷基、-C1-C4羟基 烷基、-C2-C4烷基NR12R13、-C0-C4烷基-Het、-C1-C4亚烷基CONR14R15和-C2-C4亚烷基NR14COR15；
Het表示含有一个或多个独立地选自N、O和S的杂原子的4-8元 脂族杂环，其任选地含有羰基并且任选地被一个或多个Me基团取代；
q表示0或1；
s和v独立地表示2或3，除了s+v+q＝3、4、5、6或7之外；
螺C是季碳原子，其将含有一个或多个独立地选自N、O和S 的杂原子、任选地含有羰基并且任选地被一个或多个Me基团取代的 4-8元脂族杂环与包含N、X2和Y2的杂环连接；
Y3表示(CH2)t；
t表示1、2、3或4；
R4表示H、OH、NR16R17、C3-C5环烷基或含有一个或多个独立 地选自N、O和S的杂原子的4-8元脂族杂环，除了当R4是OH或 NR16R17时，m是2、3、4或5；
R5表示H、OH、NR18R19、C3-C5环烷基或含有一个或多个独立 地选自N、O和S的杂原子的4-8元脂族杂环，除了当R5是OH或 NR18R19时，n是2、3、4或5；
其中R4和R5可以表示的脂族杂环基团可以任选地含有羰基或砜 基，并且R4和R5可以表示的C3-C5环烷基和脂族杂环基团可以任选地 被一个或多个选自以下的基团取代：-C1-C4烷基、-C1-C4羟基烷基、C1-C4烷氧基(C1-C4)烷基-、-C1-C4亚烷基CONR20R21、-C1-C4亚烷基 NR20COR21、-SO2(C1-C4)烷基、-CO(C1-C4)烷基、卤素、CN、OH和NR22R23；
R6、R7、R10、R11、R14和R15独立地表示H、-C1-C4烷基、-C1-C4羟基烷基、C1-C4烷氧基(C1-C4)烷基-或-C1-C4烷基N(C1-C4烷基)2；
R16、R17、R18、R19独立地表示H或任选地被一个或多个选自OH、 氧代基、NR24R25和C1-C4烷氧基-的基团取代的-C1-C4烷基；并且
R8、R9、R12、R13、R20、R21、R22、R23、R24和R25独立地表示H 或-C1-C4烷基；
或其药学上可接受的盐(下文称作“本发明的化合物”)。
附图说明
图1：显示了本发明的代表性实施例(3-12、17-22、25-27、29-40、 43-49)和尼达尼布的人造膜渗透性(参见PAMPA渗透性分析的结果和 表7：对于重复实验的化合物，使用平均值)
图2：显示了在大鼠中静脉内和气管内施用本发明的实施例或尼 达尼布后的总肺暴露(参见啮齿动物中药代动力学测量的结果)
图3：显示了在大鼠中静脉内和气管内施用本发明的实施例或尼 达尼布后的总肺暴露(参见啮齿动物中药代动力学测量的结果)
具体实施方式
烷基可以是支链或直链。C1-8烷基可以例如表示C1-6烷基、C1-4烷 基或C1-3烷基。示例性烷基包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁 基、叔丁基和CH2CHMe2。在一个实施方式中，烷基是指直链烷基。 亚烷基应以与烷基相同的方式解释，除了其是二价基团之外。
本文所用的烷氧基是指-O-烷基并且包括直链或支链烷氧基，例如 甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基。
羟基烷基是指在任何位置具有羟基取代基的烷基。实例包括羟基 甲基、2-羟基乙基、3-羟基-正丙基和4-羟基-正丁基。
卤素可以合适地为Br、Cl或F，特别是Cl或F，特别是F。
含有一个或多个独立地选自N、O和S的杂原子的4-8元脂族杂 环的实例包括氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、哌嗪、吗啉、二
Figure BDA0001826737760000061
烷、四 氢呋喃、硫代吗啉、四氢吡喃和二氮杂环庚烷。合适地，杂环包括1 或2个、特别是1个杂原子。这些环可以含有羰基，并且实例包括吡咯烷酮、哌嗪酮、二氮杂环庚烷酮和哌啶酮。R4和R5可以表示的这些 环可以含有砜基，如1,1-二氧代-1-硫代吗啉-1-基。
C3-C8环烷基是指通常含有3至8个环成员的脂族碳环，其具有任 选的支链并且总共含有3至8个碳原子。实例包括环丙基、环丁基、 环戊基、环己基、甲基环己基、环庚基和环辛基。在一个实施方式中， 环未被取代。在另一个实施方式中，环具有一个取代基，例如二甲基 氨基。取代的环烷基环的实例是1-(二甲基氨基)环丁基。
4-8元脂族杂环可以任选地被取代。在一个实施方式中，环未被取 代。在另一个实施方式中，环具有一个取代基。在另一个实施方式中， 环具有两个取代基。取代基可以在碳或氮原子上。Het可以表示或属于 螺C的定义内的这些环可以被甲基取代。实例包括吗啉基甲基、吡咯 烷-1-基甲基、4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-2-酮和4-甲基哌嗪-2-酮。
R4和R5可以表示的取代的杂环的这些实例包括1-甲基-哌嗪、1- 甲基-哌啶、1-甲基-1,4-二氮杂环庚烷、4-二甲基氨基-哌啶、4-羟基-哌 啶、1-(2-羟基乙基)哌啶、4-(羟基甲基)哌啶、1-(2-甲氧基乙基)哌啶、 4,4-二氟哌啶、4-氟哌啶、1-乙酰基哌嗪、4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-2- 酮、1-乙酰基-1,4-二氮杂环庚烷、4-(二甲基氨基)四氢-2H-吡喃、4-(甲 基磺酰基)哌嗪和3-羟基-1-甲基吡咯烷。
螺C是指将两个符合以上定义的脂族杂环连接在一起形成螺双环 的季碳原子。螺双环的实例包括螺[5.5]十一烷和螺[5.6]十二烷。取代的 螺双环的实例包括1-甲基-5-氧代-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷和7-甲基 -12-氧代-3,7,11-三氮杂螺[5.6]十二烷。
在一个实施方式中，提供本发明的化合物的药学上可接受的盐。
本公开的化合物包括其中指定的原子是天然存在的或非天然存在 的同位素的化合物。在一个实施方式中，所述同位素是稳定同位素。 因此，本公开的化合物包括例如含有一个或多个氘原子代替氢原子等 的化合物。
本公开还延伸至本文定义的化合物包括其盐的所有多晶型。
本公开还延伸至本文定义的化合物的所有溶剂化物。溶剂化物的 实例包括水合物。
合适地，R1表示Me。
在一个优选实施方式中，R2表示选自以下的基团：H、-C1-C6烷基、 C1-C6烷氧基-、C3-C8环烷基-、-CH2-(C3-C8环烷基)、卤素和氰基，并 且R3表示基团-Z-Rx。在一个替选性实施方式中，R2表示基团-Z-Rx， 并且R3表示选自以下的基团：H、-C1-C6烷基、C1-C6烷氧基-、-C3-C8环烷基、-CH2-(C3-C8环烷基)、卤素和氰基。
合适地，当R2或R3不表示-Z-Rx时，它们表示选自以下的基团： H、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基-、C3-C6环烷基、卤素和氰基，更合适地， H、C1-C4烷基或卤素，又更合适地，H、Me或卤素，最合适地，H、 Me或F，特别是H。
在一个优选实施方式中，Z表示CO。在一个替选性实施方式中， Z为SO2。
在一个优选实施方式中，Rx表示式(i)。
合适地，R4表示NR16R17，m是2、3、4或5，并且R5表示H或 OH，除了当R5是OH时，n是2、3、4或5。
或者合适地，R4表示含有N并且任选地含有另外一个或多个选自 N、O和S的杂原子的N连接的4-8元脂族杂环，m是2、3、4或5， 并且R5表示H或OH，除了当R5是OH时，n是2、3、4或5。
合适地，R5表示NR18R19，n是2、3、4或5，并且R4表示H或 OH，除了当R4是OH时，m是2、3、4或5。
或者合适地，R5表示含有N并且任选地含有另外一个或多个选自 N、O和S的杂原子的N连接的4-8元脂族杂环，n是2、3、4或5， 并且R4表示H或OH，除了当R4是OH时，m是2、3、4或5。
合适地，X1表示(CH2)m。
合适地，X1表示(CH2)0、CH2或(CH2)2，特别是(CH2)0或CH2，优 选(CH2)0。
合适地，R4表示H或OH，特别是H。
合适地，部分-X1-R4表示H、Me或2-羟基乙基，特别是H或Me， 优选H。
合适地，Y1表示(CH2)n。
合适地，Y1表示(CH2)0、CH2、(CH2)2或(CH2)3，特别是(CH2)2或 (CH2)0，优选(CH2)2。
合适地，R5表示1-甲基-哌嗪基、二甲基氨基、1-甲基-哌啶基、 1-甲基-1,4-二氮杂环庚烷基、4-二甲基氨基-哌啶基、哌嗪酮基、4-羟基 -哌啶基、1-(2-羟基乙基)哌啶基、1-(2-甲氧基乙基)哌啶基、4,4-二氟哌 啶基、1-乙酰基哌嗪基、4-氟哌啶基、吗啉基、1-乙酰基-1,4-二氮杂环 庚烷基、(2-甲氧基乙基)(甲基)氨基、4-(二甲基氨基)四氢-2H-吡喃、1-(二 甲基氨基)环丁基、4-(羟基甲基)哌啶基、4-(甲基磺酰基)哌嗪基、4-(甲 基磺酰基)哌嗪基、3-羟基-1-甲基吡咯烷基、(2-羟基乙基)(甲基)氨基、 1,1-二氧硫代吗啉基、5-氧代-1,4-二氮杂环庚烷基、甲基(2-(甲基氨基)-2- 氧代乙基)氨基或3-氧代-1,4-二氮杂环庚烷基，特别是4-羟基-哌啶基、 1-甲基-哌嗪基、5-氧代-1,4-二氮杂环庚烷基、1-甲基-哌啶基、1-甲基-1,4- 二氮杂环庚烷基、4-二甲基氨基-哌啶基、哌嗪酮基或1-(2-羟基乙基)哌啶基，优选1-甲基-哌嗪基、1-甲基-哌啶基、1-甲基-1,4-二氮杂环庚 烷基、4-二甲基氨基-哌啶基、哌嗪酮基或1-(2-羟基乙基)哌啶基。
合适地，部分-Y1-R5表示-(CH2)2-(4-甲基)-哌嗪-1-基、-(CH2)2-二 甲基氨基、-(CH2)-(1-甲基)-哌啶-4-基、-(CH2)2-(4-甲基)-哌嗪-1-基、 -(CH2)2-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)、-(CH2)2-4-二甲基氨基-哌啶-1- 基、-(CH2)2-3-氧代哌嗪-1-基、-(CH2)2-(4-羟基-哌啶-1-基)、-1-(2-羟基 乙基)哌啶-4-基、-(CH2)-1-(2-羟基乙基)哌啶-4-基、-1-甲基哌啶-4-基、 -1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基、-(CH2)3-4-甲基-哌嗪-1-基、-(CH2)3-二甲 基氨基、-(CH2)2-4,4-二氟-哌啶-1-基)、-(CH2)2-4-乙酰基哌嗪-1-基、-1- 甲基-哌啶-3-基、-(CH2)2-4-氟-哌啶-1-基、-(CH2)3-吗啉-4-基、-(CH2)2-4- 乙酰基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基、-(CH2)2-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)、 -CH2-(4-(二甲基氨基)四氢-2H-吡喃-4-基)、-CH2-(1-(二甲基氨基)环丁 基)、-1-(2-羟基乙基)哌啶-4-基、-(CH2)2-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)、 -(CH2)2-(4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)、4-羟基-1-甲基吡咯烷-3-基、-(CH2)2-(2-羟基乙基)(甲基)氨基、-(CH2)2-1,1-二氧硫代吗啉基、 -(CH2)2-(5-氧代-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)、-(CH2)2-(甲基(2-(甲基氨基)-2- 氧代乙基)氨基)、-(CH2)2-(3-氧代-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)，特别是 -(CH2)2-(4-羟基-哌啶-1-基)、-1-(2-羟基乙基)哌啶-4-基、-(CH2)-1-(2-羟 基乙基)哌啶-4-基、-(CH2)2-(5-氧代-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)、-(CH2)2-(4- 甲基)-哌嗪-1-基、-(CH2)2-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)、-(CH2)2-(4- 二甲基氨基-哌啶-1-基)、-(CH2)2-3-氧代哌嗪-1-基、-1-甲基哌啶-4-基， 优选-(CH2)2-(4-甲基)-哌嗪-1-基、-(CH2)2-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1- 基)、-(CH2)2-(4-二甲基氨基-哌啶-1-基)、-(CH2)2-3-氧代哌嗪-1-基、-1- 甲基哌啶-4-基。
合适地，式(i)表示如下部分，其中(a)-X1-R4表示H，并且-Y1-R5表示-(CH2)2-(4-甲基)-哌嗪-1-基、-(CH2)2-二甲基氨基、-(CH2)-(1-甲基)- 哌啶-4-基、-(CH2)2-(4-甲基)-哌嗪-1-基、-(CH2)2-(4-甲基-1,4-二氮杂环 庚烷-1-基)、-(CH2)2-4-二甲基氨基-哌啶-1-基、-(CH2)2-3-氧代哌嗪-1- 基、-(CH2)2-(4-羟基-哌啶-1-基)、-1-(2-羟基乙基)哌啶-4-基、-(CH2)-1-(2- 羟基乙基)哌啶-4-基、-1-甲基哌啶-4-基、-1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基、 -(CH2)3-4-甲基-哌嗪-1-基、-(CH2)3-二甲基氨基、-(CH2)2-4,4-二氟-哌啶 -1-基)、-(CH2)2-4-乙酰基哌嗪-1-基、-1-甲基-哌啶-3-基、-(CH2)2-4-氟- 哌啶-1-基、-(CH2)3-吗啉-4-基、-(CH2)2-4-乙酰基-1,4-二氮杂环庚烷-1- 基、-(CH2)2-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)、-CH2-(4-(二甲基氨基)四氢-2H- 吡喃-4-基)、-CH2-(1-(二甲基氨基)环丁基)、-(CH2)2-(4-(羟基甲基)哌啶 -1-基)、-(CH2)2-(4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)、-(CH2)2-(2-羟基乙基)(甲基) 氨基、-(CH2)2-1,1-二氧硫代吗啉基、-(CH2)2-(5-氧代-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)、-(CH2)2-(甲基(2-(甲基氨基)-2-氧代乙基)氨基)或-(CH2)2-(3-氧代 -1,4-二氮杂环庚烷-1-基)，特别是-X1-R4表示H并且-Y1-R5表示 -(CH2)2-(4-羟基-哌啶-1-基)、-1-(2-羟基乙基)哌啶-4-基、-(CH2)-1-(2-羟 基乙基)哌啶-4-基、-(CH2)2-(5-氧代-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)、-(CH2)2-(4- 甲基)-哌嗪-1-基、-(CH2)2-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)、-(CH2)2-(4- 二甲基氨基-哌啶-1-基)、-(CH2)2-3-氧代哌嗪-1-基、-1-甲基哌啶-4-基， 优选-X1-R4表示H，并且-Y1-R5表示-(CH2)2-(4-甲基)-哌嗪-1-基、 -(CH2)2-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)、-(CH2)2-(4-二甲基氨基-哌啶 -1-基)、-(CH2)2-3-氧代哌嗪-1-基、-1-甲基哌啶-4-基；或(b)-X1-R4表示 Me，并且-Y1-R5表示-(CH2)2-二甲基氨基、-1-(2-羟基乙基)哌啶-4-基或 4-羟基-1-甲基吡咯烷-3-基，特别是-X1-R4表示Me，并且-Y1-R5表示 -(CH2)2-二甲基氨基；或(c)-X1-R4表示2-羟基乙基，并且-Y1-R5表示 -(CH2)2-二甲基氨基。式(i)的部分优选由(a)表示。
在一个实施方式中，Rx表示式(ii)。
合适地，Y2表示(CH2)s。
合适地，s是2、3或4，更合适地是2或3，特别是2。
在一个实施方式中，Y2未被取代。在一个实施方式中，Y2被一个 基团取代。在一个实施方式中，Y2被两个基团取代，例如在同一个碳 原子上。
合适地，X2表示(CH2)v。
合适地，v是2、3或4，更合适地是2或3，特别是2。
在一个实施方式中，X2未被取代。在一个实施方式中，X2被一个 基团取代。在一个实施方式中，X2被两个基团取代，例如在同一个碳 原子上。
合适地，Q是N、O或C，特别是N。
合适地，q是0或1，特别是1。
合适地，s是2，v是2并且q是1，或s是3，v是2并且q是0， 或s是2，v是3并且q是1，特别是s是2，v是2并且q是1，或s 是3，v是2，优选地s是2，v是2并且q是1。
在一个实施方式中，式(ii)带有0个取代基，即X2、Y2和Q都未 被取代。在一个实施方式中，式(ii)带有一个取代基，即X2、Y2或Q 被取代一次。在另一个实施方式中，式(ii)带有两个取代基，其可以在 环上的同一个位置或在环上的不同位置被取代，即X2、Y2和/或Q被取代，使得总共存在两个取代。取代基可以在碳或氮原子上。
合适的取代基选自Me、OH、F、乙酰基、二甲基氨基、2-羟基乙 基、羟基甲基、2-(甲基氨基)-2-氧代乙基、2-甲氧基乙基、2-(二甲基氨 基)乙基)氨甲酰基、-CH2-二甲基氨基、吡咯烷-1-基甲基、2-((2-甲氧基 乙基)氨基)-2-氧代乙基、甲基磺酰基、吗啉基甲基、哌啶基、-CONH2和2-((2-羟基乙基)氨基)-2-氧代乙基，特别是选自Me、二甲基氨基和 2-羟基甲基，优选Me。
合适地，Het被一个或两个Me基团如一个Me基团取代。或者， Het未被Me基团取代。
合适地，式(ii)表示4-(2-(甲基氨基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基、4-甲 基哌嗪-1-基、4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基、4-(1-甲基-5-氧代-1,4,9-三氮杂 螺[5.5]十一烷-9-基、4-((2-(二甲基氨基)乙基)氨甲酰基)哌啶-1-基、 4-((二甲基氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-基、4-羟基-4-(吡咯烷-1-基甲基)哌 啶-1-基、4-((二甲基氨基)甲基)-4-(羟基甲基)哌啶-1-基、4-(2-((2-甲氧 基乙基)氨基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基、7-甲基-12-氧代-3,7,11-三氮杂螺 [5.6]十二烷-3-基、4-羟基-4-(吗啉基甲基)哌啶-1-基、4-(2-羟基乙基)-1,4- 二氮杂环庚烷-1-基、4'-氨甲酰基-[1,4'-联哌啶-1'-基]、4-(2-((2-羟基乙 基)氨基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基，特别是4'-氨甲酰基-[1,4'-联哌啶-1'-基]、 4-甲基哌嗪-1-基或4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基，优选4'-氨甲酰基-[1,4'-联 哌啶-1'-基]。
在一个实施方式中，Rx表示式(iii)。
合适地，Y3表示(CH2)t。
合适地，t表示1、2、3或4，特别是1或2，更合适地是1；
合适地，式(iii)表示2-(4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)氨基、 2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)氨基或3-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-氧代丙 基)氨基，特别是2-(4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)氨基或3-(4- 甲基哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基，优选2-(4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基)-2- 氧代乙基)氨基。
合适地，R6、R7、R10和R11独立地表示H、-C1-C4烷基或-C1-C4烷基N(C1-C4烷基)2。
合适地，R14和R15独立地表示H、-C1-C4烷基、-C1-C4羟基烷基 或C1-C4烷氧基(C1-C4)烷基-。
合适地，R6表示-C1-C4烷基N(C1-C4烷基)2，例如-(CH2)2NMe2。 或者合适地，R6表示H或-C1-C4烷基，特别是H。
合适地，R7、R10和R11独立地表示H或C1-C4烷基，特别是H。
合适地，R14表示C1-C4烷氧基(C1-C4)烷基-，例如-(CH2)2OMe或 -C1-C4羟基烷基，例如2-羟基乙基。
合适地，R14和R15独立地表示H或-C1-C4烷基，特别是H。
合适地，R16、R17、R18和R19独立地表示-C1-C4烷基，任选地被 一个或两个如一个选自OH、氧代基、NR24R25和C1-C4烷氧基-的基团 取代。
合适地，R16表示Me或2-甲氧基乙基，优选Me。
合适地，R17表示Me。
合适地，R18表示Me。
合适地，R19表示Me、2-羟基乙基或2-(甲基氨基)-2-氧代乙基， 特别是Me。
在一个实施方式中，R16表示H。
在一个实施方式中，R17表示H。
在一个实施方式中，R18表示H。
在一个实施方式中，R19表示H。
合适地，R8、R9、R12、R13、R20、R21、R22、R23、R24和R25独立 地选自H和Me。在一个实施方式中，R8、R9、R12、R13、R20、R21、 R22、R23、R24和R25表示H。在另一个实施方式中，R8、R9、R12、R13、R20、R21、R22、R23、R24和R25表示Me。
在本发明的一个实施方式中，提供一种式(I)化合物，其是式(A) 化合物：
Figure BDA0001826737760000151
其中
R1表示Me、Et、CH＝CH2、C≡C-H或C≡C-Me；
R2和R3中的一者表示选自以下的基团：H、-C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、-C3-C8环烷基、-CH2-(C3-C8环烷基)、卤素和氰基，并且另一 者表示基团-Z-Rx；
Z表示CO或SO2；
Rx表示式(iv)：
Figure BDA0001826737760000152
其中V表示CO；
其中v表示0或1；
其中n表示0、1或2，除了当v表示1时，n表示1或2；
m表示1或2；
X表示CH或N，除了当n表示0或1时，X表示CH；
Y表示CH或N；
W表示选自以下的基团：-C1-C4烷基、-C1-C4羟基烷基、C1-C4烷 氧基(C1-C4)烷基-、-C1-C4亚烷基CONR20R21、-C1-C4亚烷基NR20COR21、 -SO2(C1-C4)烷基、-CO(C1-C4)烷基、卤素、CN、OH和NR22R23，除了 当W表示NR22R23、-C1亚烷基NR20COR21或卤素时，Y表示CH；
R20、R21、R22、R23、R24和R25独立地表示H或-C1-C4烷基；
或其药学上可接受的盐。
合适地，R1表示Me。
合适地，Z表示CO。
合适地，R3表示-Z-Rx。
当v是0时，合适地，n表示0或2，特别是0。
当v是1时，合适地，n表示1。
合适地，v表示0。
合适地，m表示1。
合适地，X表示CH。
合适地，Y表示N。
合适地，W表示-C1-C4烷基(特别是Me)或NR22R23(特别是NMe2)。
式(Ⅰ)化合物可以方便地通过如下方法制备，该方法包含使式(Ⅱ) 化合物，其中L是离去基，如-OC1-C4烷基，例如-O乙基：
Figure BDA0001826737760000171
或其被保护的衍生物
与式(III)化合物反应：
(III)
Figure BDA0001826737760000172
通常，式(II)和(III)的化合物可以在溶剂如DMF存在下反应，并 且加热到约80℃后维持约18小时。在这个步骤之后，进行去保护步骤 来去除保护基——乙酰基。为实现这个目的，可将反应混合物冷却至 室温，添加亲核试剂如哌啶并搅拌1至24小时。
其中L表示-O乙基的式(II)化合物可以通过如下方法制备：使式 (IV)化合物：
(IV)
Figure BDA0001826737760000173
或其被保护的衍生物与式(V)化合物反应：
Figure BDA0001826737760000174
通常，式(IV)和(V)的化合物可以在乙酸酐存在下在约110℃的温 度下反应约4小时。其它式(II)化合物可以以类似方式制备。
式(IV)化合物可以通过如下方法制备：使式(VI)化合物：
Figure BDA0001826737760000181
与乙酸酐反应。通常在约110℃下进行该反应。或者，其中L表示-O 乙基的式(II)化合物可以直接从式(VI)化合物通过在乙酸酐存在下在约 110℃的温度下用式(V)化合物处理约4小时制备。
式(VI)化合物可以通过如下方法制备：将式(VII)化合物：
Figure BDA0001826737760000182
的-NO2基团还原为-NH2基团，接着进行作为本领域中公知程序的酰胺 形成环化。还原和酰胺环化条件通常可包括在室温下使用H2-Pd/C，并 在溶剂如乙酸中在5巴压力下氢化约36小时，这是本领域中公知的程 序。
式(VII)化合物可以通过如下方法制备：使式(VIII)化合物：
Figure BDA0001826737760000183
与氯乙酸甲酯反应。通常，反应在极性有机溶剂如DMF和碱如 KOtBu存在下，在约-20至-10℃的氮气氛围下进行。
或者，式(Ia)化合物——其中Z是CO的式(I)化合物，可以通过如 下方法制备：使式(IXa)或(IXb)的化合物：
Figure BDA0001826737760000191
或其被保护的衍生物与式H-Rx化合物或其被保护的衍生物通过 H-Rx中存在的NH-氨基与(IXa)和(IXb)中的COOH之间的缩合反应来 反应。所述化合物通常可以在室温下，在偶联剂如HATU和碱如休尼 格氏碱(Hünig's base)(DIPEA)存在下，在极性有机溶剂中反应约2至18 小时，所述极性有机溶剂如DMF，但也可以使用其它极性有机溶剂。 适当时，可以在这个过程之后进行去保护。
式(IXa)和(IXb)的化合物可以分别通过将式(Xa)和(Xb)的化合物 去保护来制备：
Figure BDA0001826737760000192
可以使用本领域的标准试剂如TFA实现去保护，并且通常在室温 下在溶剂如DCM中搅拌化合物约16小时。
式(Xa)和(Xb)的化合物可以分别通过使式(II)化合物与式(XIa)和 (XIb)的化合物反应来制备：
Figure BDA0001826737760000201
化合物可以在100℃下在DMF存在下反应约18小时。
式(III)化合物的合成可以分别通过使式H-Rx的化合物与式(XIIa) 或(XIIb)的化合物反应来进行：
Figure BDA0001826737760000202
所述化合物通常可在休尼格氏碱(DIPEA)和DMF存在下在室温下 反应约16小时，接着使用本领域的标准试剂如TFA进行去保护步骤。
或者，式(Ib)化合物——其中Z是CO并且Rx是式(II)的式(I)化合 物：
Figure BDA0001826737760000203
可以通过如下方法制备：使式(XIIIa)或(XIIIb)的化合物：
Figure BDA0001826737760000211
与化合物NHR14R15反应。通常，式(XIIIa)或(XIIIb)和NHR14R15的化 合物可以在偶联剂如HATU和碱如休尼格氏碱(DIPEA)存在下，在溶剂 如DMF中反应，并在室温下搅拌约4小时。在这个步骤之后，进行去 保护步骤来去除保护基——乙酰基。为实现这个目的，添加亲核试剂 如哌啶并搅拌1至24小时。
式(XIIIa)和(XIIIb)的化合物可以分别通过使式(IXa)和(IXb)的化 合物与式(XIV)化合物反应来制备：
(XIV)
Figure BDA0001826737760000212
通常，式(IX)和(XIV)的化合物可以在偶联剂如HATU和碱如休尼 格氏碱(DIPEA)存在下，在溶剂如DMF中反应，并在室温下搅拌约3 小时。可以使用本领域的标准试剂如TFA实现叔丁基的去保护，并且 通常在室温下在溶剂如DCM中搅拌化合物约16小时。
要求保护新的中间体及其盐作为本发明的一方面，所述中间体包 括式(II)、(VII)、(IXa)、(IXb)、(Xa)、(Xb)、(XIIIa)和(XIIIb)的化合 物，其中R1为Me、Et、CH＝CH2、C≡C-H或C≡C-Me，和式(VI)化合 物，其中R1为Et、CH＝CH2、C≡C-H或C≡C-Me。
式(V)、(VIII)、(XIa)、(XIb)、(XIIa)、(XIIb)、(XIV)、NHR14R15和H-Rx的化合物可以通过已知方法或类似于本文所述的方法制备。
式(I)化合物可以以药学上可接受的盐的形式制备或使用，包括式 (I)化合物能够形成的治疗活性无毒酸加成盐。这些药学上可接受的酸 加成盐可以通过在合适的溶剂或溶剂混合物中用这些适当的酸处理游 离碱形式而方便地获得。适当的酸包括例如乙磺酸、马来酸、丙二酸、 L-酒石酸、反丁烯二酸的、柠檬酸、丁二酸、乙酸、三苯基乙酸、盐 酸、硫酸、磷酸、1-羟基-2-萘甲酸、氢溴酸、甲磺酸、酒石酸、棕榈 酸、羟乙磺酸、双羟萘酸、甲酸、肉桂酸、苯甲酸、抗坏血酸、半乳 糖二酸、乳酸、苹果酸、草酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、丙酸、糠酸、 膦酸和戊二酸。相反地，可以通过用适当的碱处理将所述盐形式转化 成游离碱形式。
本发明提供一种用作药物的本发明的化合物。
此外，本发明提供一种药物组合物，其包含根据本发明的化合物 与任选地一种或多种药学上可接受的稀释剂或载体的组合。
稀释剂和载体可以包括适用于肠胃外、口服、局部(包括通过口吸 入肺中或通过鼻吸入)、经粘膜和经直肠施用的那些，并且可以根据施 用途径而不同。
在一个实施方式中，组合物可以制备成例如用于肠胃外施用，例 如皮下、肌肉内、静脉内、皮内、关节内或关节周围施用，特别是以 液体溶液或悬浮液的形式；用于口服施用，特别是以片剂、胶囊、粉 末、颗粒、固体分散体的形式或以液体溶液或悬浮液包括纳米悬浮液 的形式；用于吸入至肺或鼻，例如经肺或鼻内施用，特别是以干粉、 溶液、悬浮液(包括用于雾化的纳米悬浮液)、鼻喷雾剂或滴剂(包括溶 液或悬浮液，或悬浮液或溶液加压或非加压的气溶胶)的形式；用于局 部或透皮施用，例如乳膏、喷雾剂、泡沫、凝胶、软膏、液体、贴剂 的形式；用于经粘膜施用，例如经颊、舌下或经阴道粘膜，以及用于 经直肠施用，例如以泡沫或栓剂的形式。
组合物可以方便地以单位剂型施用，并且可以通过药物领域公知 的任何方法制备，例如如Remington's Pharmaceutical Sciences,第17 版,Mack Publishing Company,Easton,PA.,(1985)中所述。该组合物还 可以方便地以多单位剂型施用。
用于肠胃外施用的制剂可含有作为赋形剂的无菌水或盐水、缓冲 剂、张力调节剂、防腐剂、抗氧化剂、粘度调节剂、亚烷基二醇如丙 二醇、聚亚烷基二醇如聚乙二醇、植物来源的油、氢化萘等。
适用于口服施用的组合物可以包含一种或多种生理学相容的载体 和/或赋形剂，并且可以是固体或液体形式。片剂和胶囊可以用以下各 项制备：粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨糖醇、黄蓍胶、 纤维素或聚乙烯吡咯烷酮；填充剂，如乳糖、蔗糖、玉米淀粉、磷酸 钙、山梨糖醇或甘氨酸；润滑剂，如硬脂酸镁、滑石、聚乙二醇或二 氧化硅；和表面活性剂，如月桂基硫酸钠。液体组合物可以含有常规 添加剂，如悬浮剂，例如山梨糖醇糖浆、甲基纤维素、糖浆、明胶、 羧基甲基纤维素或食用脂肪；乳化剂和表面活性剂，如卵磷脂或阿拉 伯胶；植物油，如杏仁油、椰子油、鱼肝油或花生油；防腐剂，如丁 基化羟基苯甲醚(BHA)和丁基化羟基甲苯(BHT)。液体组合物可以被包 封在例如明胶中以提供单位剂型。
固体口服剂型包括片剂、两片式硬壳胶囊和软弹性明胶(SEG)胶囊。 这种两件式硬壳胶囊可以由例如明胶或羟基丙基甲基纤维素(HPMC) 制成。
干壳制剂通常包含约40％-60％浓度的明胶、约20％-30％浓度的增 塑剂(如甘油、山梨糖醇或丙二醇)和约30％-40％浓度的水。还可以存在 其它材料，如防腐剂、染料、遮光剂(opacifier)和调味剂。液体填充 材料包含已经(用悬浮剂，如蜂蜡、氢化蓖麻油或聚乙二醇4000)溶解或 分散的固体药物或在载体如矿物油、植物油、甘油三酯、二醇、多元醇和表面活性剂或载体组合中的液体药物。
用于经鼻施用的制剂可以是粉末，并且可以含有赋形剂，例如乳 糖或右旋糖酐，或可以是水性或油性溶液来以滴鼻剂或计量喷雾剂的 形式使用。用于经鼻施用的制剂也可以是水性悬浮液或加压非水性溶 液或悬浮液的形式。对于经颊施用，典型的赋形剂包括糖、硬脂酸钙、 硬脂酸镁、预胶化淀粉等。
合适地，将式(I)化合物局部施用至肺。因此，在一个实施方式中， 提供一种药物组合物，其包含任选地与一种或多种局部可接受的稀释 剂或载体组合的本公开的化合物。
可以通过使用非加压制剂如水溶液或悬浮液来实现局部施用至肺。 这些制剂可以借助于喷雾器施用，例如可以是手持式和便携式的或用 于家庭或医院使用的喷雾器(即非便携式)。制剂可以包含赋形剂如水、 缓冲剂、张力调节剂、pH调节剂、表面活性剂、防腐剂、悬浮剂、增 量剂和共溶剂。悬浮液和气溶胶制剂(无论是加压的还是非加压的)通常 含有适用于沉积到肺中的细粉形式的本发明化合物，例如D50为0.5-10 μm，例如约1-5μm。细粉形式的粉末可通过微粉化或研磨方法，通过 喷雾干燥，通过喷雾冷冻，或通过湿磨然后喷雾干燥来制备。微粉化 可以使用喷射式研磨机如Hosokawa Alpine制造的喷射式研磨机进行。 可以使用激光衍射(例如使用Malvern Mastersizer 2000S或Mastersizer 3000仪器)测量所得的粒度分布。粒度分布可以使用D10、D50和D90值 表示。粒度分布的D50中值被定义为将分布分成两半的粒度。来自激光 衍射的测量值更准确地被描述为体积分布，因此将使用这种程序获得 的D50值更有意义地称为Dv50值(体积分布的中值)。如本文所用，Dv 值是指使用激光衍射测量的粒度分布。类似地，在激光衍射的背景下 使用的D10和D90值被认为是指Dv10和Dv90值，并且指如下粒度，其 中分别地，分布的10％低于D10值，并且分布的90％低于D90值。在另 一个实施方式中，用于雾化悬浮液制剂的本公开化合物和赋形剂的复 合颗粒可以通过将化合物和赋形剂一起共研磨和/或共喷雾干燥来形成， 其中包含活性剂和赋形剂两者的复合颗粒的D50为1-10μm。用于递送 至肺的水性悬浮制剂还可以包含纳米悬浮液或含有纳米颗粒的复合颗 粒的悬浮液。
还可以通过使用加压气溶胶制剂来实现局部施用至肺。气溶胶制 剂通常包含悬浮或溶解在合适的气溶胶推进剂中的活性成分，所述合 适的气溶胶推进剂如氯氟烃(CFC)或氢氟烃(HFC)。合适的CFC推进剂 包括三氯单氟甲烷(推进剂11)、二氯四氟甲烷(推进剂114)和二氯二氟 甲烷(推进剂12)。合适的HFC推进剂包括四氟乙烷(HFC-134a)和七氟 丙烷(HFC-227)。推进剂通常占总吸入组合物的40重量％-99.5重量％ 如40重量％-90重量％)。制剂可以包含赋形剂，包括共溶剂(例如乙醇) 和表面活性剂或稳定剂(例如卵磷脂、脱水山梨糖醇三油酸酯等)。其它 可能的赋形剂包括聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、甘油等。将气溶胶制 剂包装在罐中，并借助于计量阀(例如由Bespak、Aptar或3M或由Coster 或Vari提供)递送合适的剂量。用于递送至肺的加压悬浮制剂还可以包 含纳米悬浮液或含有纳米颗粒的复合颗粒的悬浮液。
还可以通过使用干粉制剂来实现局部施用至肺。干粉制剂将含有 细粉形式的本发明化合物，通常D50为0.5-10μm，例如约1-5μm。细 粉形式的粉末可通过微粉化或研磨方法，通过喷雾干燥，通过喷雾冷 冻，或通过湿磨然后喷雾干燥来制备。微粉化可以使用喷射式研磨机 如Hosokawa Alpine制造的喷射式研磨机进行。可以使用激光衍射(例 如使用Malvern Mastersizer 2000S或Mastersizer 3000仪器)测量所得的 粒度分布。该制剂通常含有一种或多种局部可接受的稀释剂，如乳糖、 葡萄糖、海藻糖或甘露醇(优选乳糖)，所述稀释剂通常具有相对大的粒 度，例如D50为15-250μm。在另一个实施方式中，本公开的化合物和 赋形剂的复合颗粒也可以通过将化合物和赋形剂一起共研磨和/或共喷 雾干燥来形成，其中包含活性剂和赋形剂两者的复合颗粒的D50为1-10 微米。如本文所用，术语“乳糖”是指含乳糖的组分，包括α-乳糖单水 合物、β-乳糖单水合物、无水α-乳糖、无水β-乳糖和无定形乳糖。乳 糖组分可通过微粉化、筛分、研磨、压缩、团聚或喷雾干燥来加工。 还涵盖各种形式的市售乳糖形式，例如
Figure BDA0001826737760000261
(DFE Pharma)、
Figure BDA0001826737760000262
(Meggle)、
Figure BDA0001826737760000263
(DFE Pharma)和
Figure BDA0001826737760000264
(DFE Pharma)产品。在一个实施方式中，所述乳糖组分选自α-乳糖单水合物、 无水α-乳糖和无定形乳糖。优选地，所述乳糖是α-乳糖单水合物。
干粉制剂还可含有其它赋形剂，如亮氨酸、硬脂酸钠、硬脂酸钙 或硬脂酸镁。干粉颗粒可以是复合颗粒，并且可以由复合基质中的纳 米颗粒组成。
通常使用干粉吸入器(DPI)装置递送干粉制剂。这可以是单位剂量 装置，其中制剂存在于胶囊或泡罩形式的单个单元中，或存在于多剂 量装置中，其中装置中含有多于一剂的制剂，为大容量储库或装置内 的多个容器(例如多个泡罩或袋)。示例性干粉吸入器包括SPINHALER、 DISKHALER、TURBOHALER、DISKUS、ELLIPTA、CLICKHALER、 ECLIPSE、ROTAHALER、HANDIHALER、AEROLISER、 CYCLOHALER、MONODOSE、BREEZHALER/NEOHALER、FLOWCAPS、TWINCAPS、X-CAPS、TWISTER、TURBOSPIN、 ELPENHALER、TURBUHALER、MIATHALER、NEXTHaler、 TWISTHALER、NOVOLIZER、GENUAIR、SKYEHALER、ORIEL干 粉吸入器、MICRODOSE、ACCUHALER、PULVINAL、EASYHALER、 ULTRAHALER、TAIFUN、PULMOJET、OMNIHALER、GYROHALER、TAPER、CONIX、XCELOVAIR和PROHALER。
本发明的化合物预期适用于治疗纤维化疾病，如肺纤维化和具有 纤维化成分的肺部疾病，例如选自IPF、巨细胞间质性肺炎、结节病、 囊性纤维化、呼吸窘迫综合征、药物诱发的肺纤维化、肉芽肿病、硅 肺、石棉沉滞症、全身性硬皮病、选自丙型肝炎诱导性肝硬化的病毒 诱导性肝硬化，或具有纤维化成分的皮肤疾病，例如选自硬皮病、结 节病和全身性红斑狼疮，并且特别是IPF。更一般地，预期本发明的化 合物可用于治疗间质性肺病。另外，预期本发明的化合物可用于治疗 以细胞过度增殖为特征的疾病，例如癌症，并且其中化合物通过吸入 递送，特别是肺癌。此外，本发明的化合物还可用于治疗呼吸病症， 包括COPD(包括慢性支气管炎和肺气肿)、哮喘、小儿哮喘、过敏性鼻 炎、鼻炎、鼻窦炎，特别是哮喘、慢性支气管炎和COPD。
预期本发明的化合物还可用于治疗其它纤维化疾病，如与类风湿 性关节炎相关的肺纤维化；呼吸窘迫综合征，包括急性呼吸窘迫综合 征；急性肺损伤；放射诱发性肺纤维化或肺炎；慢性过敏性肺炎；全 身性硬化；休格林氏综合征(Sjogren's syndrome)；间质性肺病；肺动脉 高压(PAH)，包括PAH的血管成分；或具有纤维化成分的皮肤疾病， 例如选自肥厚性瘢痕和瘢痕疙瘩；或其中纤维化是一种成分的眼病， 包括青光眼、年龄相关的黄斑变性、糖尿病性黄斑水肿、干眼病和糖 尿病性视网膜病；或肠内纤维化，例如与炎症性肠病相关的肠内纤维 化。
另外，预期本发明化合物可用于预防以细胞过度增殖为特征的疾 病，例如癌症，例如其中化合物通过吸入递送，特别是肺癌。
本发明提供一种用于治疗一种或多种上述疾病的本发明的化合物。 本发明还提供本发明的化合物在制造用于治疗一种或多种上述疾病的 药物中的用途。
本发明还提供一种治疗上述疾病之一的方法，该方法包含向有需 要的受试者(特别是人类受试者)施用治疗有效量的本发明的化合物。
“治疗”一词旨在包括预防以及治疗性治疗。
本发明的化合物可以每天施用一次、两次或三次，特别是每天一 次或两次。可以通过参考疾病的严重程度和受试者的体型来确定合适 的剂量。典型的剂量范围为每人类剂量0.01mg至100mg，例如0.1mg 至10mg，例如0.25mg至5mg，每天递送一次、两次或三次，特别是 每天一次或两次。
本公开的化合物还可以与一种或多种其它活性成分如适用于治疗 上述病状的活性成分组合施用。例如，可能的活性成分包括尼达尼布 或吡非尼酮(pirfenidone)(这些活性成分已知用于治疗IPF)。组合使用的 其它活性成分包括具有分泌溶解(secretolytic)、支气管溶解 (broncholytic)和/或消炎活性的物质，如抗胆碱能剂、β-2模拟物、 类固醇、PDE-IV抑制剂、p38MAP激酶抑制剂、MK2抑制剂、半乳 糖凝集素抑制剂、NK1拮抗剂、LTD4拮抗剂、EGFR抑制剂、VEGF 抑制剂、PDGF抑制剂、FGF抑制剂、TGFβ抑制剂、LPA1拮抗剂、 LOXL2抑制剂、CTGF抑制剂、已酮可可豆碱(pentoxyfylline)、N-乙酰 基半胱氨酸、抗IL13剂、抗IL4剂、αvβ6整合素抑制剂、IGF抑制剂、 PI3K抑制剂、mTOR抑制剂、JNK抑制剂、五聚体蛋白2和内皮素拮 抗剂。
组合使用的其它活性成分包括具有抗纤维化活性的物质，如 PDE-III抑制剂、组合的抗IL4/13剂、组合的PI3k/mTOR抑制剂、自 分泌运动因子(autotaxin)抑制剂、P2X3拮抗剂、CTGF拮抗剂、5-LO 拮抗剂、白三烯拮抗剂和ROCK抑制剂。
在一个实施方式中，共配制活性成分的组合。
在一个实施方式中，依序或同时共施用活性成分的组合。
在一个实施方式中，本发明的化合物通过吸入递送并且其它可能 的活性成分口服或胃肠外递送。
在一个实施方式中，提供一种组合产品，其包含：
(A)本发明的化合物；和
(B)另一种活性成分(如上所述)
其中组分(A)和(B)各自与药学上可接受的稀释剂或载体混合配制。 所述组合可以任选地包含其它相关的赋形剂。
在一个实施方式中，提供本发明的化合物以用作与一种或多种其 它活性成分(如上所述)组合施用的药物。
预期本发明的化合物具有以下有利特性中的一种或多种：
-选自VEGFR(例如VEGFR1和VEGFR2)、FGFR和PDGFR的激 酶的良好抑制活性；
-良好的抗纤维化活性，例如如在局部递送至肺部时在体内模型(例 如博来霉素(bleomycin)纤维化模型)中测定的抗纤维化活性；
-适用于药品、特别是旨在局部递送至肺的药品的物理和化学特性 和低剂量；
-当局部施用至肺时，良好的肺中驻留时间或作用持续时间；
-PAMPA渗透性分析中的低渗透性；
-良好的作用持续时间，例如通过抑制PDGF-BB诱导的人胎肺纤 维母细胞中BDGFRβ的磷酸化来测量；
-当局部施用至肺时良好的安全性和耐受性；
-低的口服生物利用度。
实验部分
本文使用的缩写如下文所定义(表1)。未定义的任何缩写旨在表达 其公认的含义。
表1：缩写
AcOH 冰醋酸
aq 水溶液
br 宽峰
BEH 亚乙基桥接杂化颗粒
Boc 叔丁氧羰基
CSH 带电的表面杂化颗粒
conc 浓
d 双重峰
δ 化学位移
DCM 二氯甲烷
DIAD 偶氮二甲酸二异丙酯
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
(ES+) 电喷雾电离，正模式
(ES-) 电喷雾电离，负模式
Et 乙基
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
h 小时
HATU 1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡
啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐
休尼格氏碱 N,N-二异丙基乙基胺
M 摩尔浓度
m 多重峰
(M+H)+ 质子化的分子离子
(M-H)- 去质子化的分子离子
Me 甲基
MeCN 乙腈
MeOH 甲醇
MHz 兆赫
min 分钟
m/z 质荷比
NMR 核磁共振(光谱学)
p 五重峰
Ph 苯基
Py 吡啶
q 四重峰
rt 室温
HPLC 高效液相色谱
s 单峰
sat 饱和
SAX 固体负载的阴离子交换(树脂)
SCX 固体负载的阳离子交换(树脂)
t 三重峰
tBu 叔丁基
THF 四氢呋喃
TFA 三氟乙酸
UV 紫外线
wt 重量
化学实施例
一般程序
所有起始材料和溶剂都从商业来源获得或根据文献引用制备。除 非另外说明，否则搅拌所有反应。通常用无水硫酸镁干燥有机溶液。 在所述条件下或在压力下在气体高压釜(高压气体贮罐)中在Thales H-cube流动反应器上进行氢化。
使用指示量在预填充的二氧化硅(230-400目，40-63μm)柱上进行 柱色谱。SCX购自Supelco并在使用前用1M盐酸处理。除非另外说 明，否则首先用MeOH稀释待纯化的反应混合物，并用几滴AcOH使 其呈酸性。将这个溶液直接装载到SCX上并用MeOH洗涤。接着通过用1％NH3的MeOH溶液洗涤来洗脱所要物质。
制备型反相高效液相色谱法
使用Waters X-Select Prep-C18，5μm，19x50mm柱，用含有0.1％ v/v甲酸的H2O-MeCN梯度洗脱10min(方法A)，或使用Waters X-Bridge Prep-C18，5μm，19x50mm柱，用含有0.1％碳酸氢铵的 H2O-MeCN梯度洗脱10min(方法B)，使用在215和254nm下的UV 检测进行。
分析方法
反相高效液相色谱法
方法1：Waters XSelect CSH C18 2.5μm(4.6×30mm)，在40℃下； 流速2.5-4.5mLmin-1，用含有0.1％v/v甲酸的H2O-MeCN梯度洗脱4 min，使用在254和215nm下UV检测。梯度信息：0-3.00min，从95％ H2O-5％MeCN匀变成5％H2O-95％MeCN；3.00-3.01min，保持在5％H2O-95％MeCN下，流速增加至4.5mL min-1；3.01-3.50min，保持在 5％H2O-95％MeCN下；3.50-3.60min，恢复到95％H2O-5％MeCN， 流速降至3.50mL min-1；3.60-3.90min，保持在95％H2O-5％MeCN下； 3.90-4.00min，保持在95％H2O-5％MeCN下，流速降至2.5mL min-1。
方法2：Waters XBridge BEH C18，2.5μm(4.6×30mm)，在40℃ 下；流速2.5-4.5mLmin-1，用含有10mM碳酸氢铵的H2O-MeCN梯度 洗脱4min，使用在254nm下UV检测。梯度信息：0-3.00min，从95％ H2O-5％MeCN匀变成5％H2O-95％MeCN；3.00-3.01min，保持在5％ H2O-95％MeCN下，流速增加至4.5mL min-1；3.01-3.50min，保持在 5％H2O-95％MeCN下；3.50-3.60min，恢复到95％H2O-5％MeCN， 流速降至3.50mL min-1；3.60-3.90min，保持在95％H2O-5％MeCN下； 3.90-4.00min，保持在95％H2O-5％MeCN下，流速降至2.5mL min-1。
1HNMR光谱学
使用残余的未氘化溶剂作为参比，在Bruker Avance III光谱仪上 在400MHz下获得1H NMR光谱，并且除非另外指明，否则在DMSO-d6中进行。
所有化学名称均使用CambridgeSoft ENotebook 12.0生成。
途径1A
实施例1：(Z)-5-甲基-3-(((4-(N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)氨磺酰 基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯,0.8甲酸盐
中间体A：4-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-2-甲基-5-硝基苯甲酸甲酯
Figure BDA0001826737760000331
在氮气氛围下，在-20℃下，在40分钟内向叔丁醇钾(35.9g，320 mmol)在DMF(350mL)中的搅拌溶液中逐滴添加2-甲基-5-硝基苯甲酸 甲酯(25.0g，128mmol)和2-氯乙酸甲酯(16.9mL，192mmol)在DMF (300mL)中的溶液。将反应混合物在2h内温热至-10℃，接着倒在冰 -HCl浆液(900g冰，500mL 35wt％HCl水溶液)上。用DCM(2×600mL) 萃取混合物，并用盐水(2×400mL)洗涤合并的有机层，接着在减压下蒸 发。通过快速柱色谱法(SiO2，330g，0-10％EtOAc的DCM溶液，梯 度洗脱)纯化如此获得的粗产物，得到呈橙色糖浆状的子标题化合物 4-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-2-甲基-5-硝基苯甲酸甲酯(31.0g，89％)；Rt2.06min(方法1)；m/z 266(M-H)-(ES-)；1H NMRδ:2.61(3H,s),3.62(3H, s),3.88(3H,s),4.12(2H,s),7.59(1H,s),8.51(1H,s)。
中间体B：5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯
Figure BDA0001826737760000341
向4-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-2-甲基-5-硝基苯甲酸甲酯(中间体A) (23.0g，86.0mmol)在乙酸(301mL，5.25mol)中的溶液中添加钯/碳[5 wt％，58％水，87L型](3.30g，1.55mmol)。将混合物在室温下在H2(5 巴)氛围下氢化36h，接着过滤通过硅藻土垫。用EtOAc(500mL)洗涤 滤饼并在减压下浓缩滤液。将粗残余物溶解于热回流的MeOH(200mL)中并将混合物冷却至室温。将得到的固体过滤，用MeOH(200mL)冲 洗并在真空中干燥，得到呈棕色粉末状的子标题化合物5-甲基-2-氧代 吲哚啉-6-甲酸甲酯(7.00g，39％)；Rt1.48min(方法1)；m/z 206(M+H)+ (ES+)；1H NMRδ:2.45(3H,s),3.32(2H,s),3.81(3H,s),7.17(1H,s), 7.22(1H,s),10.43(1H,s)。
中间体C：(E)-1-乙酰基-3-(乙氧基(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲 哚啉-6-甲酸甲酯
Figure BDA0001826737760000342
向5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯(中间体B)(5.00g，24.4mmol) 在乙酸酐(50.6mL，536mmol)中的搅拌溶液中添加(三乙氧基甲基)苯 (22.1mL，97.0mmol)，并在110℃下搅拌混合物3h。之后，继续在室 温下搅拌18h。在减压下浓缩反应混合物并用MeOH(50mL)研磨残余 物。将得到的固体过滤，用MeOH(50mL)冲洗并在真空中干燥，得到 呈黄色粉末状的子标题化合物(E)-1-乙酰基-3-(乙氧基(苯基)亚甲基)-5- 甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯(4.50g，48％)；Rt 2.70min(方法1)； m/z 380(M+H)+(ES+)；1H NMRδ:1.35(3H,t),2.42(3H,s),2.58(3H,s), 3.84(3H,s),4.01(2H,q),7.45-7.62(5H,重叠的多重峰),7.90(1H,s), 8.64(1H,s)。
(Z)-5-甲基-3-(((4-(N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)氨磺酰基)苯基)氨 基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯,0.8甲酸盐
Figure BDA0001826737760000351
在80℃下加热(E)-1-乙酰基-3-(乙氧基(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧 代吲哚啉-6-甲酸甲酯(中间体C)(100mg，0.264mmol)和4-氨基 -N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)苯磺酰胺二-三氟乙酸盐(387mg，0.316 mmol)在DMF(3mL)中的混合物16h。添加哌啶(261μl，2.64mmol)并 在室温下搅拌混合物2h。在减压下去除溶剂，将残余物溶解于10％ MeOH的DCM溶液(20mL)中，并用水(20mL)洗涤。使用相分离柱分 离各层，并在减压下浓缩有机层。通过制备型HPLC(方法A，20-50％ MeCN的水溶液)纯化粗产物，得到呈淡黄色固体状的标题化合物(Z)-5- 甲基-3-(((4-(N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)氨磺酰基)苯基)氨基)(苯基)亚 甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯,0.8甲酸盐(25mg，14％)；Rt 1.58min (方法1)；m/z 590(M+H)+(ES+)；1H NMRδ:2.14(6H,s),2.17-2.35(8H, 重叠的多重峰),2.74-2.82(2H,m),3.76(3H,s),5.64(1H,s),6.96(2H, m),7.37(1H,s),7.41(1H,m),7.50-7.59(4H,重叠的多重峰),7.60-7.73 (3H,重叠的多重峰),8.19(0.8H,s),10.92(1H,s),12.24(1H,s)。(缺少 2H-推测被溶剂遮蔽)。
途径1B
实施例2：(Z)-3-(((4-((2-(二甲基氨基)乙基)氨甲酰基)苯基)氨 基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯,甲酸盐
中间体D：(Z)-1-乙酰基-3-(((4-(叔丁氧基羰基)苯基)氨基)(苯基) 亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯
Figure BDA0001826737760000361
在100℃下加热(E)-1-乙酰基-3-(乙氧基(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧 代吲哚啉-6-甲酸甲酯(中间体C)(1.00g，2.64mmol)和4-氨基苯甲酸叔 丁酯(509mg，2.64mmol)在DMF(9mL)中的混合物18h。冷却到室温 后，通过过滤收集沉淀物，用Et2O(10mL)洗涤并在真空中干燥，得到 呈黄色固体状的子标题化合物(Z)-1-乙酰基-3-(((4-(叔丁氧基羰基)苯基) 氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯(1.20g，86％)； Rt 3.23min(方法1)；m/z 527(M+H)+(ES+)；1H NMRδ:1.50(9H,s),2.13 (3H,s),2.73(3H,s),3.78(3H,s),5.54(1H,s),7.04(2H,m),7.51(2H,m), 7.58-7.72(5H,重叠的多重峰),8.68(1H,s),11.89(1H,s)。
中间体E：(Z)-4-(((1-乙酰基-6-(甲氧基羰基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉 -3-亚基)(苯基)甲基)氨基)苯甲酸,三氟乙酸盐加合物
Figure BDA0001826737760000371
向(Z)-1-乙酰基-3-(((4-(叔丁氧基羰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5- 甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯(中间体D)(1.20g，2.28mmol)在DCM (14mL)中的溶液中添加TFA(1.76mL，22.8mmol)，并在室温下搅拌 混合物72h。在减压下去除溶剂，得到呈黄色固体状的子标题化合物 (Z)-4-(((1-乙酰基-6-(甲氧基羰基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-3-亚基)(苯基) 甲基)氨基)苯甲酸,三氟乙酸盐加合物(1.00g，72％)；Rt 2.72min(方法 1)；m/z471(M+H)+(ES+)；1H NMRδ:2.13(3H,s),2.73(3H,s),3.78(3H, s),5.54(1H,s),7.04(2H,m),7.50(2H,m),7.57-7.76(5H,重叠的多重 峰),8.68(1H,s),11.89(1H,s),12.89(1H,s)。
(Z)-3-(((4-((2-(二甲基氨基)乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲 基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯,甲酸盐
Figure BDA0001826737760000372
在室温下搅拌(Z)-4-(((1-乙酰基-6-(甲氧基羰基)-5-甲基-2-氧代吲 哚啉-3-亚基)(苯基)甲基)氨基)苯甲酸三氟乙酸盐加合物(中间体E)(75 mg，0.128mmol)和HATU(73.2mg，0.192mmol)在DMF(2mL)中的 溶液10min。接着，添加休尼格氏碱(179μl，1.027mmol)和N1,N1-二 甲基乙烷-1,2-二胺(37.8μl，0.346mmol)。在室温下搅拌混合物16h。 添加哌啶(127μl，1.28mmol)。在室温下搅拌混合物4h，并使反应混 合物在DCM(25mL)和饱和NaHCO3水溶液(10mL)之间分配。用盐水 (10mL)洗涤有机层并在减压下蒸发溶剂。通过制备型HPLC(方法A， 20-50％MeCN的水溶液)纯化粗产物，得到呈淡黄色固体状的标题化合 物(Z)-3-(((4-((2-(二甲基氨基)乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲 基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯甲酸盐(3.7mg，5％)；Rt 1.53min (方法1)；m/z 499(M+H)+(ES+)；1H NMRδ:2.14(3H,s),2.80(6H,s), 3.17-3.23(2H,重叠的多重峰),3.50-3.56(2H,重叠的多重峰),3.75(3H, s),5.63(1H,s),6.90(2H,m),7.37(1H,s),7.52(2H,m),7.56-7.72(5H, 重叠的多重峰),8.56(1H,m),10.89(1H,s),12.22(1H,s)。
实施例3：(Z)-5-甲基-3-(((4-(((1-甲基哌啶-4-基)甲基)氨甲酰基)苯 基)氨基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯,甲酸盐
Figure BDA0001826737760000381
在室温下搅拌(Z)-4-(((1-乙酰基-6-(甲氧基羰基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉 -3-亚基)(苯基)甲基)氨基)苯甲酸三氟乙酸盐加合物(中间体E)(75mg， 0.128mmol)和HATU(73.2mg，0.192mmol)在DMF(2mL)中的溶液10 min。接着添加休尼格氏碱(179μl，1.02mmol)和(1-甲基哌啶-4-基)甲胺 (32.9mg，0.257mmol)在DMF(0.2mL)中的溶液。在室温下搅拌混合 物16h。添加哌啶(127μl，1.28mmol)。在室温下搅拌混合物4h，并 使反应混合物在DCM(25mL)和饱和NaHCO3水溶液(10mL)之间分配。 用盐水(10mL)洗涤有机层并在减压下蒸发溶剂。通过制备型HPLC(方 法A，20-50％MeCN的水溶液)纯化粗产物，得到呈淡黄色固体状的标 题化合物(Z)-5-甲基-3-(((4-(((1-甲基哌啶-4-基)甲基)氨甲酰基)苯基)氨 基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯甲酸盐(19mg，25％)；Rt 1.55min(方法1)；m/z539(M+H)+(ES+)；1H NMRδ:1.11-1.28(2H,重 叠的多重峰),1.53(1H,m),1.60-1.73(2H,重叠的多重峰),2.13(3H,s), 2.15-2.24(2H,重叠的多重峰),2.34(3H,s),2.89-3.00(2H,重叠的多重 峰),3.09(2H,t),3.75(3H,s),5.61(1H,s),6.87(2H,m),7.36(1H,s), 7.52(2H,m),7.58-7.69(5H,重叠的多重峰),8.17(1H,s),8.36(1H,t), 10.88(1H,s),12.23(1H,s)。
实施例4：(Z)-5-甲基-3-(((4-((2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)氨甲酰基) 苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯
Figure BDA0001826737760000391
在室温下搅拌(Z)-4-(((1-乙酰基-6-(甲氧基羰基)-5-甲基-2-氧代吲 哚啉-3-亚基)(苯基)甲基)氨基)苯甲酸三氟乙酸盐加合物(中间体E)(75 mg，0.128mmol)和HATU(73mg，0.192mmol)在DMF(2mL)中的溶 液10min，接着添加休尼格氏碱(179μl，1.03mmol)和2-(4-甲基哌嗪-1- 基)乙胺(50mg，0.346mmol)在DMF(0.5mL)中的溶液。在室温下搅拌 混合物3h并添加哌啶(127μl，1.28mmol)。在室温下搅拌混合物18h。 使反应混合物在DCM(25mL)和饱和NaHCO3水溶液(10mL)之间分配。 用盐水(10mL)洗涤有机层并在减压下蒸发溶剂。通过制备型HPLC(方 法A，20-50％MeCN的水溶液)纯化粗产物，得到呈淡黄色固体状的标 题化合物(Z)-5-甲基-3-(((4-((2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)氨甲酰基)苯基) 氨基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯(19mg，25％)；Rt 1.46min (方法1)；m/z 554(M+H)+(ES+)；1H NMRδ:2.13(3H,s),2.21(3H,s), 2.32-2.46(8H,重叠的多重峰),3.27-3.34(4H,重叠的多重峰),3.75(3H, s),5.62(1H,s),6.87(2H,m),7.36(1H,s),7.52(2H,m),7.56-7.69(5H, 重叠的多重峰),8.26(1H,t),10.87(1H,s),12.22(1H,s)。
实施例5：(Z)-5-甲基-3-(((4-((2-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基) 乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯甲 酸盐
Figure BDA0001826737760000401
在室温下搅拌(Z)-4-(((1-乙酰基-6-(甲氧基羰基)-5-甲基-2-氧代吲 哚啉-3-亚基)(苯基)甲基)氨基)苯甲酸三氟乙酸盐加合物(中间体E)(75 mg，0.128mmol)和HATU(73mg，0.192mmol)在DMF(2mL)中的溶 液10min，接着添加休尼格氏碱(179μl，1.03mmol)和2-(4-甲基-1,4- 二氮杂环庚烷-1-基)乙胺(54.5mg，0.346mmol)在DMF(0.5mL)中的溶 液。在室温下搅拌混合物3h并添加哌啶(127μl，1.28mmol)。在室温 下搅拌混合物18h。使反应混合物在DCM(25mL)和饱和NaHCO3水 溶液(10mL)之间分配。用盐水(10mL)洗涤有机层并在减压下蒸发溶剂。 通过制备型HPLC(方法A，10-40％MeCN的水溶液)纯化粗产物，得 到呈淡黄色固体状的标题化合物(Z)-5-甲基-3-(((4-((2-(4-甲基-1,4-二氮 杂环庚烷-1-基)乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉 -6-甲酸甲酯甲酸盐(27mg，34％)；Rt 1.29min(方法1)；m/z 568(M+H)+ (ES+)；1H NMRδ:1.68-1.77(2H,重叠的多重峰),2.13(3H,s),2.34(3H, s),2.58(2H,t),2.61-2.74(8H,重叠的多重峰),3.23-3.32(2H,重叠的多 重峰),3.75(3H,s),5.62(1H,s),6.87(2H,m),7.36(1H,s),7.52(2H,m),7.56-7.71(5H,重叠的多重峰),8.20(1H,s),8.24(1H,t),10.88(1H,s), 12.22(1H,s)。
实施例6：(Z)-3-(((4-((2-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)乙基)氨甲酰基) 苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯甲酸盐
Figure BDA0001826737760000411
在室温下搅拌(Z)-4-(((1-乙酰基-6-(甲氧基羰基)-5-甲基-2-氧代吲 哚啉-3-亚基)(苯基)甲基)氨基)苯甲酸三氟乙酸盐加合物(中间体E)(75 mg，0.128mmol)和HATU(73mg，0.192mmol)在DMF(2mL)中的溶 液10min，接着添加休尼格氏碱(179μl，1.03mmol)和1-(2-氨基乙 基)-N,N-二甲基哌啶-4-胺(59.3mg，0.346mmol)在DMF(0.2mL)中的溶 液。在室温下搅拌混合物3h，并添加哌啶(127μl，1.28mmol)。在室 温下搅拌混合物1h。使反应混合物在DCM(25mL)和饱和NaHCO3水 溶液(10mL)之间分配。用盐水(10mL)洗涤有机层并在减压下蒸发溶剂。 通过制备型HPLC(方法A，10-40％MeCN的水溶液)纯化粗产物，得 到呈淡黄色固体状的标题化合物(Z)-3-(((4-((2-(4-(二甲基氨基)哌啶-1- 基)乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲 酸甲酯甲酸盐(20mg，24％)；Rt1.26min(方法1)；m/z 582(M+H)+(ES+)； 1H NMRδ:1.29-1.44(2H,重叠的多重峰),1.65-1.77(2H,重叠的多重 峰),1.86-1.98(2H,重叠的多重峰),2.14(3H,s),2.24(6H,s),2.40(2H, t),2.85-2.95(2H,重叠的多重峰),3.76(3H,s),5.62(1H,s),6.88(2H,m), 7.37(1H,s),7.53(2H,m),7.57-7.70(5H,重叠的多重峰),8.22(1H,s), 8.28(1H,t),10.89(1H,s),12.23(1H,s)。(缺少3H-推测被溶剂遮蔽)。
实施例7：(Z)-3-(((4-((2-(4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)氨 甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯甲 酸盐
Figure BDA0001826737760000421
在室温下搅拌(Z)-4-(((1-乙酰基-6-(甲氧基羰基)-5-甲基-2-氧代吲 哚啉-3-亚基)(苯基)甲基)氨基)苯甲酸三氟乙酸盐加合物(中间体E)(75 mg，0.128mmol)和HATU(73mg，0.192mmol)在DMF(2mL)中的溶 液10min，接着添加休尼格氏碱(179μl，1.03mmol)和2-氨基-1-(4-(2- 羟基乙基)哌嗪-1-基)乙酮2HCl(90mg，0.346mmol)。在室温下搅拌混 合物3h，并添加哌啶(127μl，1.28mmol)。在室温下搅拌混合物18h。 使反应混合物在DCM(25mL)和饱和NaHCO3水溶液(10mL)之间分配。 用盐水(10mL)洗涤有机层并在减压下蒸发溶剂。通过制备型HPLC(方 法A，20-50％MeCN的水溶液)纯化粗产物，得到呈淡黄色固体状的标 题化合物(Z)-3-(((4-((2-(4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)氨甲酰 基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯甲酸盐 (24mg，27％)；Rt1.51min(方法1)；m/z 598(M+H)+(ES+)；1H NMRδ: 2.14(3H,s),2.90-3.58(8H,重叠的多重峰),3.68-3.79(5H,重叠的多重 峰),4.00-4.45(4H,重叠的多重峰),5.40(1H,br s),5.63(1H,s),6.90 (2H,m),7.37(1H,s),7.53(2H,m),7.57-7.70(5H,重叠的多重峰),8.52 (1H,s),9.63(1H,br s),10.89(1H,s),12.23(1H,s)。
实施例8：(Z)-5-甲基-3-(((4-((2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)氨 甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯,0.5甲酸盐
Figure BDA0001826737760000431
在室温下搅拌(Z)-4-(((1-乙酰基-6-(甲氧基羰基)-5-甲基-2-氧代吲 哚啉-3-亚基)(苯基)甲基)氨基)苯甲酸三氟乙酸盐加合物(中间体E)(75 mg，0.128mmol)和HATU(73mg，0.192mmol)在DMF(2mL)中的溶 液10min，接着添加休尼格氏碱(179μl，1.03mmol)和2-氨基-1-(4-甲 基哌嗪-1-基)乙酮2HCl(80mg，0.346mmol)。在室温下搅拌混合物3h， 并添加哌啶(127μl，1.28mmol)。在室温下搅拌混合物18h。使反应混 合物在DCM(25mL)和饱和NaHCO3水溶液(10mL)之间分配。用盐水 (10mL)洗涤有机层并在减压下蒸发溶剂。通过制备型HPLC(方法A， 20-50％MeCN的水溶液)纯化粗产物，得到呈淡黄色固体状的标题化合 物(Z)-5-甲基-3-(((4-((2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)氨甲酰基)苯基) 氨基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯,0.5甲酸盐(28mg，36％)； Rt 1.52min(方法1)；m/z568(M+H)+(ES+)；1H NMRδ:2.14(3H,s),2.26 (3H,s),2.31-2.46(4H,重叠的多重峰),3.41-3.54(4H,重叠的多重峰), 3.76(3H,s),4.06(2H,d),5.64(1H,s),6.89(2H,m),7.37(1H,s),7.53 (2H,m),7.57-7.70(5H,重叠的多重峰),8.13(0.5H,s),8.46(1H,t), 10.89(1H,s),12.23(1H,s)。
实施例9：(Z)-5-甲基-2-氧代-3-(((4-((2-(3-氧代哌嗪-1-基)乙基)氨 甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)吲哚啉-6-甲酸甲酯
Figure BDA0001826737760000441
在室温下搅拌(Z)-4-(((1-乙酰基-6-(甲氧基羰基)-5-甲基-2-氧代吲 哚啉-3-亚基)(苯基)甲基)氨基)苯甲酸三氟乙酸盐加合物(中间体E)(75 mg，0.128mmol)和HATU(73mg，0.192mmol)在DMF(2mL)中的溶 液10min，接着添加休尼格氏碱(179μl，1.03mmol)和4-(2-氨基乙基) 哌嗪-2-酮(49.6mg，0.346mmol)。在室温下搅拌混合物3h，并添加哌 啶(127μl，1.28mmol)。在室温下搅拌混合物18h。使反应混合物在 DCM(25mL)和饱和NaHCO3水溶液(10mL)之间分配。用盐水(10mL) 洗涤有机层并在减压下蒸发溶剂。通过制备型HPLC(方法A，20-50％ MeCN的水溶液)纯化粗产物，得到呈淡黄色固体状的标题化合物(Z)-5-甲基-2-氧代-3-(((4-((2-(3-氧代哌嗪-1-基)乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯 基)亚甲基)吲哚啉-6-甲酸甲酯(43mg，58％)；Rt 1.59min(方法1)；m/z 554(M+H)+(ES+)；1H NMRδ:2.14(3H,s),2.40-2.63(2H,重叠的多重 峰),2.96(1H,m),3.13(1H,m),3.20-3.48(4H,重叠的多重峰),3.58(1H, m),3.75(3H,s),3.99(1H,m),5.62(1H,s),6.89(2H,m),7.36(1H,s), 7.53(2H,m),7.57-7.69(5H,重叠的多重峰),8.27-8.63(2H,重叠的多重 峰),10.89(1H,s),12.23(1H,s)。
实施例10：(Z)-5-甲基-3-(((4-((3-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-氧代丙基) 氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯
Figure BDA0001826737760000451
在室温下搅拌(Z)-4-(((1-乙酰基-6-(甲氧基羰基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-3-亚基)(苯基)甲 基)氨基)苯甲酸三氟乙酸盐加合物(中间体E)(800mg，1.37mmol)和HATU(781mg，2.05 mmol)在DMF(6mL)中的溶液10min，接着添加休尼格氏碱(1.43ml，8.21mmol)和3-氨基- 1-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-酮(223mg，1.30mmol)。在室温下搅拌混合物3h，并添加哌啶 (1.35ml，13.7mmol)。在室温下搅拌混合物18h。使反应混合物在10％MeOH的DCM溶 液(25mL)和饱和NaHCO3水溶液(10mL)之间分配。用盐水(10mL)洗涤有机层并在减压下蒸 发溶剂。将该物质装载到MeOH(10mL)中的SCX柱上。用MeOH(30mL)洗涤柱并丢弃滤 液。用1％氨的MeOH溶液洗脱产物。蒸发溶剂并通过快速柱色谱法(SiO2，80g，0-30％含 1％氨的MeOH在DCM中的溶液，梯度洗脱)纯化残余物，得到呈淡黄色固体状的(Z)-5-甲 基-3-(((4-((3-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉 -6-甲酸甲酯(386mg，48％)；Rt 1.60min(方法1)；m/z 582(M+H)+(ES+)；1H NMRδ:2.13 (3H,s),2.15(3H,s),2.21(2H,t),2.24(2H,t),2.53(2H,t),3.35-3.45(6H,重叠的多重峰),3.75 (3H,s),5.62(1H,s),6.87(2H,m),7.36(1H,s),7.51(2H,m),7.57-7.68(5H,重叠的多重峰),8.37 (1H,t),10.88(1H,s),12.21(1H,s)。
实施例11：(Z)-5-甲基-3-(((4-(4-(2-(甲基氨基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-羰基)苯基)氨基)(苯 基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯
Figure RE-GDA0003073080460000011
在室温下搅拌(Z)-4-(((1-乙酰基-6-(甲氧基羰基)-5-甲基-2-氧代吲 哚啉-3-亚基)(苯基)甲基)氨基)苯甲酸三氟乙酸盐加合物(中间体E)(75 mg，0.128mmol)和HATU(73mg，0.192mmol)在DMF(2mL)中的溶 液10min，接着添加休尼格氏碱(179μl，1.03mmol)和N-甲基-2-(哌嗪 -1-基)乙酰胺(54.5mg，0.346mmol)。在室温下搅拌混合物3h，并添加 哌啶(127μl，1.28mmol)。在室温下搅拌混合物18h。使反应混合物在 DCM(25mL)和饱和NaHCO3水溶液(10mL)之间分配。用盐水(10mL) 洗涤有机层并在减压下蒸发溶剂。通过制备型HPLC(方法A，20-50％ MeCN的水溶液)纯化粗产物，得到呈淡黄色固体状的标题化合物(Z)-5-甲基-3-(((4-(4-(2-(甲基氨基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-羰基)苯基)氨基)(苯基) 亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯(8.8mg，12％)；Rt 1.59min(方法1)； m/z 568(M+H)+(ES+)；1HNMRδ:2.13(3H,s),2.61-2.70(4H,重叠的多 重峰),3.75(3H,s),5.60(1H,s),6.88(2H,m),7.24(2H,m),7.37(1H,s), 7.53(2H,m),7.57-7.71(3H,重叠的多重峰),8.26(1H,br s),10.87(1H, s),12.23(1H,s)。(缺少9H-推测被溶剂遮蔽)。
实施例12：(Z)-3-(((4-((2-(4-羟基哌啶-1-基)乙基)氨甲酰基)苯基) 氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯0.8甲酸盐
Figure BDA0001826737760000471
在室温下搅拌(Z)-4-(((1-乙酰基-6-(甲氧基羰基)-5-甲基-2-氧代吲 哚啉-3-亚基)(苯基)甲基)氨基)苯甲酸三氟乙酸盐加合物(中间体E)(75 mg，0.128mmol)和HATU(73mg，0.192mmol)在DMF(2mL)中的溶 液10min，接着添加休尼格氏碱(179μl，1.03mmol)和1-(2-氨基乙基) 哌啶-4-醇(50mg，0.346mmol)。在室温下搅拌混合物3h，并添加哌啶 (127μl，1.28mmol)。在室温下搅拌混合物18h。使反应混合物在DCM (25mL)和饱和NaHCO3水溶液(10mL)之间分配。用盐水(10mL)洗涤有 机层并在减压下蒸发溶剂。通过制备型HPLC(方法A，20-50％MeCN 的水溶液)纯化粗产物，得到呈淡黄色固体状的标题化合物 (Z)-3-(((4-((2-(4-羟基哌啶-1-基)乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲 基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯,0.8甲酸盐(9mg，11％)；Rt 1.54 min(方法1)；m/z 555(M+H)+(ES+)；1H NMRδ:1.28-1.42(2H,重叠的 多重峰),1.64-1.72(2H,重叠的多重峰),2.02-2.11(2H,重叠的多重峰), 2.13(3H,s),2.42(2H,t),2.69-2.78(2H,重叠的多重峰),3.75(3H,s), 4.56(1H,br s),5.62(1H,s),6.87(2H,m),7.36(1H,s),7.52(2H,m), 7.57-7.69(5H,重叠的多重峰),8.16(0.8H,s),8.28(1H,t),10.88(1H,s), 12.22(1H,s)。(缺少3H-推测被溶剂遮蔽)。
实施例13：(Z)-3-(((4-((1-(2-羟基乙基)哌啶-4-基)氨甲酰基)苯基) 氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯
Figure BDA0001826737760000481
在室温下搅拌(Z)-4-(((1-乙酰基-6-(甲氧基羰基)-5-甲基-2-氧代吲 哚啉-3-亚基)(苯基)甲基)氨基)苯甲酸三氟乙酸盐加合物(中间体E)(75 mg，0.128mmol)和HATU(73mg，0.192mmol)在DMF(2mL)中的溶 液10min，接着添加休尼格氏碱(179μl，1.03mmol)和2-(4-氨基哌啶-1- 基)乙醇,2HCl(100mg，0.462mmol)在DMF(1mL)中的溶液。在室温 下搅拌混合物2h，并添加哌啶(127μl，1.28mmol)。在室温下搅拌混 合物18h。使反应混合物在DCM(25mL)和饱和NaHCO3水溶液(10mL) 之间分配。用盐水(10mL)洗涤有机层并在减压下蒸发溶剂。将粗产物 装载在5％AcOH的MeOH溶液(10mL)中的SCX柱(2g)上。用MeOH (10mL)洗涤柱并丢弃滤液。用1％氨的MeOH溶液(25mL)洗脱产物。 在减压下蒸发溶剂并通过快速柱色谱法(SiO2，12g，0-30％MeOH的 DCM溶液，梯度洗脱)纯化产物，得到呈淡黄色固体状的(Z)-3-(((4-((1-(2-羟基乙基)哌啶-4-基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲 基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯(33mg，34％)；Rt 1.56min(方法 1)；m/z 555(M+H)+(ES+)；1HNMRδ:1.43-1.56(2H,重叠的多重峰), 1.65-1.74(2H,重叠的多重峰),2.00(2H,t),2.13(3H,s),2.36(2H,m), 2.85(2H,m),3.47(2H,m),3.66(1H,m),3.75(3H,s),4.37(1H,m),5.61 (1H,s),6.86(2H,m),7.36(1H,s),7.52(2H,m),7.56-7.76(5H,重叠的 多重峰),8.09(1H,d),10.88(1H,s),12.23(1H,s)。
实施例14：(Z)-3-(((4-(((1-(2-羟基乙基)哌啶-4-基)甲基)氨甲酰基) 苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯
Figure BDA0001826737760000491
在室温下搅拌(Z)-4-(((1-乙酰基-6-(甲氧基羰基)-5-甲基-2-氧代吲 哚啉-3-亚基)(苯基)甲基)氨基)苯甲酸三氟乙酸盐加合物(中间体E)(75 mg，0.128mmol)和HATU(73mg，0.192mmol)在DMF(2mL)中的溶 液10min，接着添加休尼格氏碱(179μl，1.03mmol)和2-(4-(氨基甲基) 哌啶-1-基)乙醇(73.1mg，0.462mmol)。在室温下搅拌混合物3h，并添 加哌啶(127μl，1.28mmol)。在室温下搅拌混合物18h。使反应混合物 在DCM(25mL)和饱和NaHCO3水溶液(10mL)之间分配。用盐水(10 mL)洗涤有机层并在减压下蒸发溶剂。将粗产物装载在5％AcOH的 MeOH溶液(10mL)中的SCX柱(2g)上。用MeOH(10mL)洗涤柱并丢 弃滤液。接着用1％氨的MeOH溶液(25mL)洗脱产物。在减压下蒸发 溶剂并通过快速柱色谱法(SiO2，12g，0-30％MeOH的DCM溶液，梯 度洗脱)纯化产物，得到呈淡黄色固体状的(Z)-3-(((4-(((1-(2-羟基乙基) 哌啶-4-基)甲基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚 啉-6-甲酸甲酯(63mg，63％)；Rt 1.56min(方法1)；m/z 569(M+H)+(ES+)； 1H NMRδ:1.05-1.19(2H,重叠的多重峰),1.47(1H,m),1.58(2H,m), 1.81-1.94(2H,重叠的多重峰),2.13(3H,s),2.28-2.40(2H,重叠的多重 峰),2.82(2H,m),3.07(2H,t),3.46(2H,m),3.75(3H,s),4.34(1H,s), 5.61(1H,s),6.86(2H,m),7.36(1H,s),7.52(2H,m),7.57-7.70(5H,m), 8.32(1H,t),10.88(1H,s),12.23(1H,s)。
途径1C：
实施例15：(Z)-3-(((4-(4-(2-((2-羟基乙基)氨基)-2-氧代乙基)哌嗪 -1-羰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯
中间体F：(Z)-1-乙酰基-3-(((4-(4-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌嗪 -1-羰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯
Figure BDA0001826737760000501
在室温下搅拌(Z)-4-(((1-乙酰基-6-(甲氧基羰基)-5-甲基-2-氧代吲 哚啉-3-亚基)(苯基)甲基)氨基)苯甲酸三氟乙酸盐加合物(中间体E) (500mg，0.855mmol)和HATU(488mg，1.28mmol)在DMF(5mL)中 的溶液10min，接着添加休尼格氏碱(448μl，2.57mmol)和2-(哌嗪-1- 基)乙酸叔丁酯(171mg，0.855mmol)在DMF(1mL)中的溶液。在室温 下搅拌混合物3h。使反应混合物在DCM(100mL)和饱和NaHCO3水 溶液(40mL)之间分配。用盐水(40mL)洗涤有机层并在减压下蒸发溶剂。 通过快速柱色谱法(SiO2，12g，0-30％含1％氨的MeOH在DCM中的 溶液，梯度洗脱)纯化粗产物，得到呈淡黄色固体状的子标题化合物 (Z)-1-乙酰基-3-(((4-(4-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-羰基)苯基)氨 基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯(483mg，83％)；Rt 2.31min(方法1)；m/z 653(M+H)+(ES+)；1H NMRδ:1.40(9H,s),2.13 (3H,s),2.73(3H,s),3.13(2H,s),3.17-3.30(2H,重叠的多重峰), 3.43-3.62(2H,重叠的多重峰),3.77(3H,s),5.49(1H,s),7.03(2H,m), 7.21(2H,m),7.50(2H,m),7.57-7.68(3H,重叠的多重峰),8.68(1H,s), 11.88(1H,s)。(缺少4H-推测被溶剂遮蔽)。
中间体G：(Z)-2-(4-(4-(((1-乙酰基-6-(甲氧基羰基)-5-甲基-2-氧代 吲哚啉-3-亚基)(苯基)甲基)氨基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)乙酸
Figure BDA0001826737760000511
向(Z)-1-乙酰基-3-(((4-(4-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-羰基) 苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯(中间体F) (481mg，0.737mmol)在DCM(4.8mL)中的溶液中添加TFA(568μl，7.37 mmol)，并在室温下搅拌混合物16h。再添加一份TFA(1mL，13.0mmol)， 并在室温下再搅拌反应物3h，之后再添加一份TFA(0.5mL，7.50mmol)，并在室温下再搅拌反应物1小时。将反应混合物逐滴添加到饱 和NaHCO3水溶液(50mL)中。分离各层，并在减压下浓缩有机层。通 过过滤收集水溶液中形成的固体并在减压下干燥。合并两批固体，得 到呈淡黄色固体状的(Z)-2-(4-(4-(((1-乙酰基-6-(甲氧基羰基)-5-甲基-2- 氧代吲哚啉-3-亚基)(苯基)甲基)氨基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)乙酸(410mg， 89％)；Rt 1.94min(方法1)；m/z 597(M+H)+(ES+)；1H NMRδ:2.13(3H, s),2.73(3H,s),3.17(2H,s),3.47-3.65(2H,重叠的多重峰),3.77(3H,s), 5.50(1H,s),7.03(2H,m),7.22(2H,m),7.50(2H,m),7.55-7.68(4H,重 叠的多重峰),8.68(1H,s),11.89(1H,s)。(缺少6H-推测被溶剂遮蔽)。
(Z)-3-(((4-(4-(2-((2-羟基乙基)氨基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-羰基)苯基) 氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯
Figure BDA0001826737760000521
在室温下搅拌(Z)-2-(4-(4-(((1-乙酰基-6-(甲氧基羰基)-5-甲基-2-氧 代吲哚啉-3-亚基)(苯基)甲基)氨基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)乙酸(中间体G) (200mg，0.335mmol)和HATU(191mg，0.503mmol)在DMF(2mL) 中的溶液10min，接着添加休尼格氏碱(176μl，1.00mmol)和2-氨基乙 醇(22.52mg，0.369mmol)在DMF(1mL)中的溶液。在室温下搅拌混合物4h，并添加哌啶(332μl，3.35mmol)。在室温下搅拌混合物18h。 使反应混合物在DCM(25mL)和饱和NaHCO3水溶液(10mL)之间分配。 用盐水(10mL)洗涤有机层并在减压下蒸发溶剂。将粗产物装载在5％ AcOH的MeOH:MeOH:DCM(2:1:1，20mL)溶液中的SCX柱上。用 MeOH(30mL)洗涤柱并丢弃滤液。用1％氨的MeOH溶液(25mL)洗脱 产物。在减压下蒸发溶剂并通过快速柱色谱法(SiO2，12g，0-30％含1％ 氨的MeOH在DCM中的溶液，梯度洗脱)纯化产物，得到呈淡黄色固 体状的子标题化合物(Z)-3-(((4-(4-(2-((2-羟基乙基)氨基)-2-氧代乙基)哌 嗪-1-羰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯 (81mg，39％)；Rt 1.57min(方法1)；m/z 598(M+H)+(ES+)；1H NMRδ: 2.13(3H,s),2.33-2.47(4H,重叠的多重峰),2.93(2H,s),3.16(2H,q), 3.39(2H,q),3.75(3H,s),4.68(1H,t),5.60(1H,s),6.87(2H,m),7.19 (2H,m),7.36(1H,s),7.52(2H,m),7.57-7.68(3H,重叠的多重峰),7.72 (1H,s),10.85(1H,s),12.21(1H,s)。(缺少4H-推测被溶剂遮蔽)。
以下化合物实施例(表2)可以通过与上述实施例类似的合成方法 或通过本文别处描述的方法制备：
表2：本发明的其它化合物实施例
*途径代码索引：
途径1A：参见实施例1
途径1B：参见实施例2至14
途径1C：参见实施例15
实施例编号、结构、名称、途径代码、LC-MS分析和1H NMR 波谱数据
Figure BDA0001826737760000531
Figure BDA0001826737760000541
Figure BDA0001826737760000551
Figure BDA0001826737760000561
Figure BDA0001826737760000571
Figure BDA0001826737760000581
Figure BDA0001826737760000591
Figure BDA0001826737760000601
Figure BDA0001826737760000611
Figure BDA0001826737760000621
Figure BDA0001826737760000631
Figure BDA0001826737760000641
Figure BDA0001826737760000651
Figure BDA0001826737760000661
Figure BDA0001826737760000671
Figure BDA0001826737760000681
Figure BDA0001826737760000691
Figure BDA0001826737760000701
Figure BDA0001826737760000711
Figure BDA0001826737760000721
Figure BDA0001826737760000731
Figure BDA0001826737760000741
Figure BDA0001826737760000751
Figure BDA0001826737760000761
Figure BDA0001826737760000771
实施例18的另一种合成方法：
实施例18(Z)-5-甲基-3-(((4-((1-甲基哌啶-4-基)氨甲酰基)苯基)氨 基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯
Figure BDA0001826737760000772
在室温下搅拌Z)-4-(((1-乙酰基-6-(甲氧基羰基)-5-甲基-2-氧代吲 哚啉-3-亚基)(苯基)甲基)氨基)苯甲酸(中间体E)(10g，17.54mmol)和 HATU(10.01g，26.3mmol)在DMF(200mL)中的溶液10min，接着添 加休尼格氏碱(18.38ml，105mmol)和1-甲基哌啶-4-胺(2.204g，19.30 mmol)在DMF(10mL)中的溶液。在室温下搅拌混合物3小时。接着添 加哌啶(17.37ml，175mmol)，并在室温下搅拌所得混合物3h。使反应 混合物在10％MeOH的DCM溶液(750mL)和饱和碳酸氢钠溶液(500 mL)之间分配。用盐水(300mL)洗涤有机层并浓缩溶剂。用CH3CN研 磨所得固体，过滤并干燥，得到7g粗产物。
以相同规模重复该反应，将粗产物合并，溶解于10％MeOH(1％ 氨)的DCM溶液中，并装载到二氧化硅柱(300g)上。用30％MeOH(1％ NH3)的DCM溶液洗脱产物，收集含有产物的洗脱级份，然后蒸发溶剂。 将该物质再溶解于30％MeOH(1％NH3)的DCM溶液(500mL)中，并用 水(200mL)洗涤。用MgSO4干燥有机层，过滤并蒸发溶剂。在40℃下 在减压下干燥该物质过夜，得到(Z)-5-甲基-3-(((4-((1-甲基哌啶-4-基)氨 甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯1478-45-2 (12.8g，23.91mmol，68.1％产率)。
通过LCMS(Agilent，X-Select，Waters X-Select C18，2.5μm，4.6×30 mm，酸性(0.1％甲酸)4min方法，5-95％MeCN/水)分析产物： 1478-45-2-Fin，m/z 525(M+H)+(ES+)；在1.57min时，在254nm下， 98％纯度。1H NMRδ:Rt 1.57min(方法1)；m/z 525(M+H)+(ES+)；1HNMRδ:1.44-1.57(2H,重叠的多重峰),1.65-1.72(2H,重叠的多重峰), 1.85-1.93(2H,重叠的多重峰),2.13(6H,s),2.70-2.76(2H,重叠的多重 峰),3.64(1H,m),3.75(3H,s),5.61(1H,s),6.86(2H,m),7.36(1H,s), 7.52(2H,m),7.57-7.68(5H,重叠的多重峰),8.09(1H,d),10.88(1H,s), 12.23(1H,s)。
生物学测试：实验方法
酶抑制分析
使用ADP-GloTM分析(Promega，UK)测定本文公开化合物的酶抑 制活性。在含有40mM Tris pH 7.5、20mM MgCl2、0.1mg/mL BSA和 1mM DTT的缓冲液中进行针对FGFR1、PDGFRα、PDGFRβ和VEGFR2 的分析；而在补充有2mM MnCl2的上述缓冲液中进行针对FGFR3和VEGFR1的分析。
FGFR1酶抑制
通过在25℃下将FGFR1蛋白(3.12ng/mL，2μL)、底物(聚(4:1Glu4, Tyr1)，100ng/mL，2μL)与测试化合物(2μL，3μM、0.67μM、0.15μM、 0.033μM、0.0073μM、0.0016μM、0.0036μM或0.00008μM)混合90 min来评估本发明的化合物对FGFR1(FGFR1激酶酶系统：Promega) 的抑制活性。接着通过添加ATP(50μM，2μL)引发激酶反应，并将混 合物在25℃下温育1hr。添加ADP-GloTM试剂(8μL)40min，接着添 加显色剂(16μL)40min，然后在微板读取器(
Figure BDA0001826737760000781
Multilabel Reader，Perkin Elmer)中检测。
FGFR3酶抑制
通过在25℃下将FGFR3蛋白(12.5ng/mL，2μL)、底物(聚(Ala6, Glu2,Lys5,Tyr1)，100ng/mL，2μL)与测试化合物(2μL，3μM、0.67μM、 0.15μM、0.033μM、0.0073μM、0.0016μM、0.0036μM或0.00008μM) 混合90min来评估本发明的化合物对FGFR3(FGFR3激酶酶系统：Promega)的抑制活性。通过添加ATP(50μM，2μL)引发激酶反应，并 将混合物在25℃下温育90min。添加ADP-GloTM试剂(8μL)40min，接 着添加显色剂(16μL)40min，然后在微板读取器(
Figure BDA0001826737760000795
Multilabel Reader，Perkin Elmer)中检测。
PDGFRα酶抑制
通过在25℃下将PDGFRα蛋白(12.5ng/mL，2μL)、底物(聚(4:1 Glu4,Tyr1)，100ng/mL，2μL)与测试化合物(2μL，3μM、0.67μM、 0.15μM、0.033μM、0.0073μM、0.0016μM、0.0036μM或0.00008μM) 混合90min来评估本发明的化合物对PDGFRα(PDGFRα激酶酶系统： Promega)的抑制活性。通过添加ATP(25μM，2μL)引发激酶反应，并 将混合物在25℃下温育1hr。添加ADP-GloTM试剂(8μL)40min，接 着添加显色剂(16μL)40min，然后在微板读取器(
Figure BDA0001826737760000794
Multilabel Reader，Perkin Elmer)中检测。
PDGFRβ酶抑制
通过在25℃下将PDGFRβ蛋白(6.25ng/mL，2μL)、底物(聚(4:1 Glu4,Tyr1)，100ng/mL，2μL)与测试化合物(2μL，3μM、0.67μM、 0.15μM、0.033μM、0.0073μM、0.0016μM、0.0036μM或0.00008μM) 混合90min来评估本发明的化合物对PDGFRβ(PDGFRβ激酶酶系统： Promega)的抑制活性。通过添加ATP(25μM，2μL)引发激酶反应，并 将混合物在25℃下温育1hr。添加ADP-GloTM试剂(8μL)40min，接 着添加显色剂(16μL)40min，然后在微板读取器(
Figure BDA0001826737760000796
Multilabel Reader，Perkin Elmer)中检测。
VEGFR1酶抑制
通过在25℃下将VEGFR1蛋白(12.5ng/mL，2μL)、底物 (IGFR1Rtide，100ng/mL，2μL)与测试化合物(2μL，3μM、0.67μM、 0.15μM、0.033μM、0.0073μM、0.0016μM、0.0036μM或0.00008μM) 混合90min来评估本发明的化合物对VEGFR1(VEGFR1激酶酶系统： Promega)的抑制活性。通过添加ATP(50μM，2μL)引发激酶反应，并 将混合物在25℃下温育90min。添加ADP-GloTM试剂(8μL)40min， 接着添加显色剂(16μL)40min，然后在微板读取器(
Figure BDA0001826737760000805
Multilabel Reader，Perkin Elmer)中检测。
VEGFR2酶抑制
通过在25℃下将VEGFR2蛋白(1.56ng/mL，2μL)、底物(聚(4:1 Glu4,Tyr1)，100ng/mL，2μL)与测试化合物(2μL，3μM、0.67μM、 0.15μM、0.033μM、0.0073μM、0.0016μM、0.0036μM或0.00008μM) 混合90min来评估本发明的化合物对VEGFR2(VEGFR2激酶酶系统： Promega)的抑制活性。通过添加ATP(50μM，2μL)引发激酶反应，并 将混合物在25℃下温育1hr。添加ADP-GloTM试剂(8μL)40min，接 着添加显色剂(16μL)40min，然后在微板读取器(
Figure BDA0001826737760000804
Multilabel Reader，Perkin Elmer)中检测。
在所有情况下，激酶将ATP转化为ADP，接着ADP-GloTM试剂 耗尽任何剩余的ATP。检测试剂将已经产生的ADP转化回ATP并产 生荧光素酶，其能够被检测为发光。因此，发光信号直接与酶反应产 生的ADP的量成正比，并且化合物处理后这个信号的减少展示抑制。 使用下示等式计算每种浓度的化合物产生的抑制百分比：
Figure BDA0001826737760000801
然后绘制抑制百分比相对于化合物浓度的图，并从所得浓度-反应 曲线确定相对50％抑制浓度(RIC50)。确定后，使用以下等式计算Ki：
Figure BDA0001826737760000802
细胞和其它体外分析
PDGF-BB诱导的正常人肺纤维母细胞(NHLF)增殖
使NHLF(Lonza group Ltd)在补充有2％FBS的FGM-2生长培养 基(加上SingleQuotTM生长因子；Lonza)中扩增至90％汇合。收获纤维 母细胞(胰蛋白酶/EDTA)，以25×103个/毫升悬浮在生长培养基中，并 在96孔组织培养板的各孔中添加200μl(5×103个细胞/孔)。温育24hr (37℃/5％CO2/95％O2)后，通过将培养基中的FBS浓度降低至0.1％使细胞血清饥饿(24hr)。将细胞与测试化合物一起预温育1hr，接着用 rhuPDGF-BB(100ng/ml，R&D Systems)刺激48hr。通过BrdU并入(细 胞增殖比色ELISA，Roche)评定细胞增殖。将每种浓度的测试化合物 对rhuPDGF-BB诱导的NHLF增殖的抑制百分比计算为通过与载体对照(基线增殖)比较获得的在每种浓度的测试化合物下由rhuPDGF-BB 达到的增殖的百分比。从得到的浓度-反应曲线确定相对50％抑制浓度 (RIC50)。
PDGF-BB/碱性FGF诱导的MRC-5胎人肺纤维母细胞增殖
使MRC-5纤维母细胞(LGC Standards)在补充有10％FBS的 DMEM培养基中扩增至90％汇合。收获细胞(胰蛋白酶/EDTA)，以 25×103个/毫升悬浮在生长培养基中，并在96孔组织培养板的各孔种添 加200μl(5×103个细胞/孔)。温育24hr(37℃/5％CO2/95％O2)后，通过 用含有0.1％FBS的培养基替代生长培养基使细胞血清饥饿(3hr)。然后 将细胞与测试化合物一起预温育1hr，接着用rhuPDGF-BB(100ng/ml， R&D Systems)或碱性rhuFGF(5ng/ml；R&D Systems)刺激48hr。通过 BrdU并入(细胞增殖比色ELISA，Roche)评定细胞增殖。将每种浓度的 测试化合物对rhuPDGF-BB/rhuFGF诱导的MRC-5增殖的抑制百分比 计算为通过与载体对照(基线增殖)比较获得的在每种浓度的测试化合 物下由rhuPDGF-BB/碱性FGF达到的增殖的百分比。从得到的浓度- 反应曲线确定相对50％抑制浓度(RIC50)。
VEGF165/碱性FGF诱导的内皮细胞增殖
将TeloHAEC(端粒酶永生化的人类主动脉内皮细胞；ATCC)以 4000个细胞/孔的细胞密度(100μl)接种到96孔组织培养板中的内皮细 胞饥饿培养基(0.5％FBS，无FGF和VEGF生长因子)中，并且培养3 hr(37℃/5％CO2/95％O2)。将细胞与测试化合物一起预温育1hr，接着 用rhuVEGF165(10ng/ml，R&D Systems)或碱性rhuFGF(5ng/ml，R&D Systems)刺激48hr。通过BrdU并入(细胞增殖比色ELISA，Roche)评 定细胞增殖。将每种浓度的测试化合物对rhuVEGF165/碱性rhuFGF诱 导的TeloHAEC增殖的抑制百分比计算为通过与载体对照(基线增殖) 比较获得的在每种浓度的测试化合物下由rhuVEGF165/碱性FGF达到的 增殖的百分比。从得到的浓度-反应曲线确定相对50％抑制浓度(RIC50)。
PDGF-BB诱导的纤维母细胞中的PDGFRβ磷酸化
使用MRC-5/NHLF/NIH-3T3(小鼠胚胎纤维母细胞，LGC Standards)，用HTRF(均相时间分辨荧光)磷酸PDGFRβ(Tyr751)细胞分 析试剂盒(Cisbio)评估测试化合物对PDGFRβ磷酸化的抑制作用。将 MRC-5/NHLF以10,000个细胞/孔的细胞密度分别接种于96孔组织培养板中的DMEM生长培养基(10％FBS)或FGM-2生长培养基(2％FBS) 中，并且培养48hr(37℃/5％CO2/95％O2)。将NIH-3T3以7000个细 胞/孔的细胞密度接种于96孔组织培养板中的DMEM生长培养基(10％ FBS)中，并且培养48hr(37℃/5％CO2/95％O2)。用含有0.1％FBS的相应饥饿培养基替代细胞培养基，并将MRC-5/NHLF的板进一步培养 24hr(37℃/5％CO2/95％O2)和将NIH-3T3的板进一步培养3hr。将细 胞与测试化合物一起预温育1hr，接着用rhuPDGF-BB(25-50ng/ml，R &D Systems)刺激5分钟和针对NIH-3T3用rmPDGF-BB(25ng/ml，Life Technologies)刺激。吸出培养基，并且立即通过添加50μl HTRF分析 试剂盒中提供的裂解缓冲液使细胞裂解。将来自每个孔的16μl细胞裂 解物转移至白色低体积384孔板中，根据试剂盒说明书向该板中添加 适当的试剂盒试剂。通过计算665nm和620nm下的荧光读数的比率 来定量PDGFRβ的磷酸化。将测试化合物对rPDGF-BB诱导的PDGFRβ 磷酸化的抑制百分比计算为通过与载体对照比较获得的在每种浓度的 测试化合物下由rPDGF-BB达到的磷酸化的百分比。从得到的浓度-反 应曲线确定相对50％抑制浓度(RIC50)。
VEGF165诱导的内皮细胞中的VEGFR2磷酸化
使用TeloHAEC(端粒酶永生化的人类主动脉内皮细胞；ATCC)用 HTRF(均相时间分辨荧光)磷酸VEGFR2(Tyr1175)细胞分析试剂盒 (Cisbio)评估测试化合物对VEGFR2磷酸化的抑制作用。将TeloHAEC 以12000个细胞/孔的细胞密度接种于96孔组织培养板中的内皮生长培 养基(ATCC；2％FBS)中，并且培养48hr(37℃/5％CO2/95％O2)。用含 有0.5％FBS的饥饿培养基(无VEGF和FGF生长因子)替代细胞培养基， 并将板进一步培养24hr(37℃/5％CO2/95％O2)。将细胞与测试化合物 一起预温育1hr，接着用rhuVEGF165(50ng/ml，R&DSystems)刺激5 min。吸出培养基，并且立即通过添加50μl HTRF分析试剂盒中提供的 裂解缓冲液使细胞裂解。将来自每个孔的16μl细胞裂解物转移至白色 低体积384孔板中，根据试剂盒说明书向该板中添加适当的试剂盒试 剂。通过计算665nm和620nm下的荧光读数的比率来定量VEGFR2 的磷酸化。将测试化合物对rhuVEGF165诱导的VEGFR2磷酸化的抑制 百分比计算为通过与载体对照比较获得的在每种浓度的测试化合物下 由rhuVEGF165达到的磷酸化的百分比。从得到的浓度-反应曲线确定相 对50％抑制浓度(RIC50)。
纤维母细胞凝胶收缩分析
使NHLF在补充有2％FBS的FGM-2生长培养基(Lonza)(加上 SingleQuotTM生长因子)中扩增至90％汇合。收获纤维母细胞(胰蛋白酶 /EDTA)并且以1×106个/毫升悬浮在无血清培养基中。基于细胞收缩分 析试剂盒(Cell Biolabs)，通过按照试剂盒说明书将1份细胞悬浮液+4 份胶原凝胶溶液混合来制备细胞晶格。将0.9ml等份的胶原晶格添加到1.5ml离心管中，并用最终分析浓度的测试化合物处理。然后将250μl 化合物处理的晶格移液到48孔组织培养板的每个孔中(每个测试浓度 一式三份)。将板温育90min(37℃/5％CO2/95％O2)以使凝胶聚合。接 着将250μl含有最终分析浓度的测试化合物的无血清培养基添加到每 个相应的凝胶中。再温育30min后，用TGFβ1(10ng/ml；R&D Systems) 刺激凝胶。在24hr(37℃/5％CO2/95％O2)温育期后，取出每个单独的 凝胶并在精密天平上称重。将每种浓度的测试化合物的作用表示为相 对于载体处理的基线收缩，TGFβ1诱导的收缩的逆转百分比。
纤维母细胞IL-6释放分析
使NHLF在补充有2％FBS的FGM-2生长培养基(Lonza)(加上 SingleQuotTM生长因子)中扩增至90％汇合。收获纤维母细胞(胰蛋白酶 /EDTA)，以50×103个/毫升悬浮在生长培养基中，并在96孔组织培养 板中每孔添加200μl(10×103个细胞/孔)。温育24hr(37℃/5％CO2/95％ O2)后，通过将培养基FBS浓度降低至0.1％使细胞血清饥饿(24hr)。将 细胞与测试化合物一起预温育1hr，接着用TGFβ1(5ng/ml，R&D Systems)刺激24hr。回收无细胞上清液来通过夹心ELISA(Duo-set，R &D systems)测定IL-6浓度。将IL-6产生的抑制计算为通过与载体对 照比较获得的在每种浓度的测试化合物下由5ng/ml TGFβ1达到的IL-6 产生的百分比。从得到的浓度-反应曲线确定相对50％抑制浓度(RIC50)。
肥大细胞凋亡
在补充有100ng/ml SCF和10ng/ml IL-6的生长培养基中，历时8 周从脐带血CD34+细胞(Lonza)分化出肥大细胞。将肥大细胞以2500 至10000个细胞/孔接种在384孔白色透明底板中含有SCF(100ng/ml) 的生长培养基中。作为细胞凋亡的阳性对照，将8个孔在不含SCF的 生长培养基中温育。将细胞与测试化合物或载体一起温育24hr(37℃/5％ CO2/95％O2)。将半胱天冬氨酸酶-3/7发光底物(半胱天冬氨酸酶-Glo 3/7 分析，Promega)添加到细胞中并在室温下温育30min，接着读取发光 信号。将测试化合物对细胞凋亡的诱导计算为与载体(基线细胞凋亡) 比较，每种浓度的测试化合物在不存在SCF下由温育的细胞达到的细 胞凋亡(最大凋亡反应)的百分比。从得到的浓度-反应曲线确定相对50％ 抑制浓度(RIC50)。
测试化合物对细胞活力的作用
将MRC-5细胞以12×103个细胞/孔的细胞密度接种到白色透明底 (用于荧光/发光读数)或透明(用于比色读数)的96孔组织培养板中的 DMEM生长培养基(10％FBS)中。温育24hr(37℃/5％CO2/95％O2)后， 用含有0.1％FBS加上测试化合物/载体的培养基替代生长培养基，并且 再温育48hr。对于比色MTT分析(细胞代谢活性的评定)，吸出每个孔 的上清液，用100微升/孔新鲜培养基(0.1％FBS)和10微升/孔5mg/ml MTT替代。温育1hr(37℃/5％CO2/95％O2)时段后，吸出培养基并向 每个孔中添加100％DMSO(100μl)。将板轻轻摇动15分钟，接着在 550nm下读取吸光度。相对于载体(0.5％DMSO)处理的细胞计算每种 化合物浓度下的细胞活力百分比损失(由吸光度值的降低表示)。
使用MultiTox-Fluor多重细胞毒性分析以及半胱天冬氨酸酶-Glo 3/7分析(Promega)来测量细胞的细胞毒性/活力和细胞凋亡。 MultiTox-Fluor多重细胞毒性分析是一种单试剂添加荧光分析，其同时 测量细胞群体中活细胞和死细胞的相对数量。该分析给出了细胞活力 和细胞毒性的比率测定反相关测量。活细胞与死细胞的比率与细胞数 量无关，因此可用于标准化数据。以“添加-混合-测量”形式添加单一半 胱天冬氨酸酶-
Figure BDA0001826737760000851
3/7试剂使细胞裂解，接着半胱天冬氨酸酶切割底 物并产生“发光型(glow-type)”发光信号。对于这种多重细胞毒性分 析，从每个孔中小心地取出100μl来自48hr化合物处理的细胞的细胞 上清液，然后添加50μl MultiTox试剂(通过按照试剂盒说明书将10μl GF-AFC和bis AAF-R110稀释到10ml分析缓冲液中来制备专有的 MultiTox试剂的工作溶液)。将细胞在黑暗中温育30分钟，接着在 400Ex/505Em(活细胞读数)和485Ex/520Em(死细胞读数)下获取两个单独 的荧光读数。接着，从每个孔中小心地取出100μl上清液，并将50μl 半胱天冬氨酸酶3/7Glo试剂添加到细胞板中并在黑暗中温育30分钟。 通过读取发光信号定量半胱天冬氨酸酶3/7活性。高于载体处理的对照 细胞的信号增加表示细胞凋亡增加。
纤维母细胞向肌纤维母细胞的转变分析
为了评定测试化合物的抗纤维化活性，使用了两种替代方案。首 先，将分离的肺纤维母细胞以3000个细胞/孔接种在96孔板上。接种 后五(5)天，更新细胞并将测试化合物或载体添加到细胞中。一(1)小时 后，添加TGF-β1(1.25ng/mL)来诱导纤维母细胞向肌纤维母细胞转变。 在72小时后通过免疫染色测量αSMA——肌纤维母细胞转变的标志物 的表达，通过在IN Cell分析仪2200(GE Healthcare)上高内涵成像评定， 并使用专有(BioFocus)算法用IN Cell显影软件(GE Healthcare)定量。算 法的输出表示染色强度乘以染色面积(DXA水平)。用4',6-二脒基-2-苯 基吲哚(DAPI)进行细胞核的共染色以定量细胞数量作为潜在毒性的量 度，和/或针对细胞密度的差异对αSMA进行标准化。
在另一方案中，将分离的肺纤维母细胞以5100个细胞/孔接种在 96孔板上。24小时后，再用饥饿培养基更新细胞24小时。将测试化 合物或载体添加到细胞中。一(1)小时后，添加TGF-β1(0.1ng/mL)来诱 导纤维母细胞向肌纤维母细胞转变。在48小时后通过免疫染色测量 αSMA——肌纤维母细胞转变的标志物的表达，通过在ImageXpres micro(Molecular Devices)上高内涵成像评定，并使用MetaXpress软件 (Molecular Devices)定量。使用阳性细胞百分比来评估αSMA染色，并 因此评估评估纤维母细胞向肌纤维母细胞转变的程度。用4',6-二脒基 -2-苯基吲哚(DAPI)进行细胞核的共染色以定量细胞数量作为潜在毒性 的量度，和/或针对细胞密度的差异对αSMA进行标准化。
评估测试化合物对PDGF-BB诱导的人胎肺纤维母细胞中的 PDGFRβ磷酸化的作用的持续时间
为了确定药物暴露对PDGF-BB诱导的PDGFRβ磷酸化的作用的 相对持久性，使用MRC-5人胎肺纤维母细胞和均相HTRF(均相时间分 辨荧光)磷酸PDGFRβ(Tyr751)细胞分析试剂盒(Cisbio)进行冲洗实验， 所述试剂盒检测PDGF-BB诱导的PDGFRβ磷酸化的受体调节。
冲洗方案
最初，用胰蛋白酶去除MRC-5细胞并用完全培养基(DMEM生长 培养基，10％FBS)中和。将1.2×106个细胞置于微量离心管中，使用台 式离心机以10,000rpm离心30秒，去除上清液，并用1ml预热(37℃) 的洗涤缓冲液(HBSS pH7.4、0.1％BSA和0.04％普卢兰尼克酸(Pluronic acid))洗涤细胞来去除任何残留的FBS。接着将细胞再次离心，去除上 清液，并在37℃下，在轻柔振荡下，与500μL载体、测试对照化合物 和测试化合物(在产生70％抑制的浓度下)一起温育1hr。温育后，将细 胞均匀分散，并从每个管中取出100μL等分试样来用于无洗涤对照。 接着将剩余的细胞进行5次重复洗涤步骤，其中将细胞离心，去除上 清液并再悬浮于1ml新鲜的预热(37℃)洗涤缓冲液中。为了避免由于 粘附到塑料上而导致化合物携带的影响，在每个洗涤步骤后将细胞转 移到新管中，并在洗涤之间置于37℃振荡器(900rpm)中温育10分钟以 使细胞和缓冲液之间再平衡。在最后的洗涤步骤之后，将细胞再悬浮 在360μl预热的洗涤缓冲液中。将来自未洗涤和洗涤的管的5μL置于 384白色聚丙烯微量滴定板(Greiner)中并在37℃下温育15分钟。接着 用5μL rhuPDGF-BB(3ng/ml，R&DSystems)刺激细胞5min，之后立 即通过添加10μl HTRF分析试剂盒中提供的裂解缓冲液来使细胞裂解。 将细胞置于板振荡器(rpm 1450)上1hr，之后将板短暂离心30秒(3000 rpm)，并按照试剂盒说明书添加专有的HTRF试剂盒试剂。通过计算 665nm和620nm下的荧光读数的比率来定量PDGFRβ的磷酸化。将 测试化合物对rPDGF-BB诱导的PDGFRβ磷酸化的抑制百分比计算为 相对于测试载体对照，3μg/ml rhuPDGF-BB下达到的磷酸化的百分比。
PAMPA渗透性分析
这个分析测量跨过人造膜的渗透性，并使用平行人造膜渗透性分 析通过Cyprotex进行。这是通过人造十六烷膜被动跨细胞渗透的体外 模型(Wohnsland F等人,Med.Chem.,2001 44；923-930)。所述化合物可 分为低渗透性和高渗透性。通常，Papp<10×10-6cm/s的化合物被分类为 低渗透性，Papp>10×10-6cm/s的化合物被分类为高渗透性。认为具有低 渗透性的化合物由于其较慢的吸收而可能在肺中具有长的驻留时间 (TrondeAnn等人,J Pharm.Sci.,2003,92(6),1216-33)。
方案概述
将测试化合物添加到过滤器包被的人造PAMPA膜的供体侧，并 通过使用LC-MS/MS监测测试化合物在细胞膜的受体侧的出现来测量 渗透性。
实验程序
制备十六烷在己烷中的溶液(5v/v％)，并将等分试样添加到过滤器 (供体)板(渗透性用多屏幕过滤板，Millipore)的每个孔的膜上。接着使 供体板干燥以确保己烷蒸发。
将含有DMSO(5％)的缓冲液(pH 7)添加到受体板的每个孔中。通 过用缓冲液稀释10mM DMSO浓缩物来制备测试化合物溶液，得到10 μM的最终测试化合物浓度(最终DMSO浓度为5％)。荧光完整性标记 物荧光黄也包括在测试化合物溶液中。将供体板插入受体板中，然后 将板在室温下温育5hr。从测试化合物溶液制备分析标准品。一式四份 地评定测试化合物渗透性。在每个板上，将具有已知渗透性特征的化 合物作为对照操作。
在温育期结束时，从受体板去除供体板。测试和对照化合物的供 体和受体样品通过LC-MS/MS盒分析使用5点校准通过对样品进行适 当稀释来定量。从供体和受体区室浓度两者计算实验回收率。
如果对于一个、两个或三个单独的测试化合物孔，荧光黄渗透率 高于QC限值，则报告n＝3、2或1个的结果。
数据分析
每种化合物的表观渗透系数(Papp)由以下等式计算：
Figure BDA0001826737760000891
其中
Figure BDA0001826737760000892
其中VD和VA分别是供体和受体区室的体积，面积是膜的表面积 乘以孔隙率，并且平衡药物浓度是供体和受体区室的总体积中测试化 合物的浓度。
体内筛选：药效学和药代动力学
博来霉素诱导的小鼠的纤维化(肺纤维化的小鼠模型)
在第0天，通过气管内途径给予C57BL6/J小鼠载体或硫酸博来霉 素(MPBiomedicals，2U/kg)。从第5天到第20天每天鼻内施用化合物 (水溶液或悬浮液形式，25-50μl)一次。再经过24hr后，将动物麻醉， 向它们的气管插入导管，并使用计算机控制的活塞呼吸机(flexiVent, SCIREQ Inc.,Montreal,Canada)使动物进行机械呼吸。在肺功能测量后， 对小鼠进行抽血并提取支气管肺泡灌洗液(BALF)。使用Neubaur血细 胞计数器测量BALF样品中的总白细胞计数和白细胞分类计数。通过 离心制备BALF样品的细胞离心涂片，并使用DiffQuik染色系统(Dade Behring)染色。使用油浸显微镜对细胞进行计数。保留剩余的BALF上 清液来用于细胞因子分析。
在25cm H2O压力下穿过气管插管用10％中性缓冲的福尔马林向 全肺充气，并浸在福尔马林中至少24h。在加工成石蜡块后，将肺切 片(5μm)并用苏木精和曙红(H&E)、苦天狼星红(picro-sirius red；PSR) 或Masson氏三色染色。从4个横截面中随机拍摄恒定数量的图片。由 2名不知情的研究者将图片按0(无PF)至8(最大PF)评分来评定肺中的 纤维化变化。另外，使用标准方法对α-平滑肌肌动蛋白(Thermo Scientific，Fremont，CA)进行染色。通过Sircol胶原分析(Biocolor Ltd, Carrickfergus,UK)评定全肺匀浆中的可溶性胶原。
PDGFBB诱导的小鼠的PDGFRβ磷酸化
将7至12周龄的C57BL/6小鼠(Charles River)饲养在12小时光照 /黑暗循环下并接受自由摄取的食物和水。制备化合物的水溶液或悬浮 液，以基于组中小鼠的平均重量递送指定剂量(mg/kg)。将动物麻醉并 鼻内施用化合物或载体(50μl)。在指示的时间点恢复后，再次麻醉动物 并气管内施用重组小鼠PDGF-BB(50微克/动物，CambridgeBiosciences) 或载体，然后在PDGF-BB滴注后5至30分钟，采集末梢血液样品并 切除全肺。通过离心从血液中分离血浆。使用FastPrep-24 5G仪器在 Matrix D裂解管(MPBiomedicals)中将约一半的左叶均质化。使用抗磷 酸PDGFRα(Y849)/β(Y857)、抗总PDGFRβ/α和抗GAPDH抗体(Cell Signaling)通过蛋白质印迹测量PDGFRβ的磷酸化水平。将PDGFRβ的 磷酸化水平报告为与总PDGFRβ水平或与GAPDH的比率。相对于载 体处理，针对每种处理计算对PDGFRβ磷酸化的抑制百分比。通过 LC-MS/MS进行血浆或肺匀浆中的化合物水平的测量。
啮齿动物中的药代动力学测量
将雄性CD大鼠或C57BL/6J小鼠用于药代动力学研究，其中向动 物气管内、口服或静脉内给药(大鼠)和鼻内、口服或静脉内给药(小鼠)。
通过侧尾静脉向动物静脉内给药。使用异氟烷和一氧化二氮(大鼠 研究中)或氧气(小鼠研究中)将通过气管内或鼻内途径给药的动物在给 药前麻醉。
在动物的侧尾静脉中插入导管并在每个取样时间点之前约5分钟 将动物置于热箱(37-40℃)中来扩张尾静脉。将化合物配制成用于静脉 内施用的溶液和用于所有其它方法的溶液或悬浮液。动物在给药当天 进行称重并接受制剂的单次施用，其中根据个体体重调节体积(表3)。 对于连续样品，在24小时内在预定的时间点将150-200μl大鼠血液样 品或20μl小鼠血液样品(添加相同体积的水)从插管端口取出到 K2EDTA包被的微容器(microtainer)中。仅在大鼠研究中，通过离心 (8200rcf，5分钟)分离血浆。
在终止时，通过下行腔静脉将血液样品收集到K2EDTA包被的微 容器中，并通过用3×4ml滴注4％BSA的PBS溶液(大鼠)和3×0.4ml 滴注4％BSA的PBS溶液(小鼠)经由气管冲洗肺来获得BAL液。切除 肺，称重并记录重量，并在液氮中快速冷冻。
通过LC-MS/MS进行血浆或血液、肺匀浆和BAL液中的化合物水 平的测量。使用含有适当内标的过量溶剂通过蛋白质沉淀提取药物。 根据外部基质匹配的标准曲线确定药物浓度。
在半对数图上绘制药物浓度相对于时间的曲线(参见图2和图3)。 使用非区室分析计算标准药代动力学参数。将每个时间点的肺和BAL 液中的浓度表示为施用的剂量的百分比。
Figure BDA0001826737760000911
结果
酶抑制分析中以及细胞和其它体外分析中的测试结果如下表4至 8和图1至3中所示。
表4本发明的化合物和尼达尼布对FGFR1、FGFR3、PDGFRα、 PDGFRβ、VEGFR1和VEGFR2的抑制活性
Figure BDA0001826737760000921
Figure BDA0001826737760000931
Figure BDA0001826737760000941
ND：未测定；除非另外指示，否则n＝2(平均值)；*n＝34
表5本发明的化合物和尼达尼布对MRC5细胞中由PDGFBB诱 导的纤维母细胞中PDGFRβ的磷酸化和VEGF165诱导的内皮细胞中 VEGFR2磷酸化的抑制作用。
Figure BDA0001826737760000942
Figure BDA0001826737760000951
Figure BDA0001826737760000961
ND：未测定；除非另外指示，否则n＝1
表6本发明的化合物和尼达尼布对MRC5细胞的细胞活力的作用 (MTT分析)
Figure BDA0001826737760000962
Figure BDA0001826737760000971
Figure BDA0001826737760000981
除非另外指示，否则n＝1
表7 PAMPA渗透性分析中本发明的化合物的Papp的测定
Figure BDA0001826737760000982
Figure BDA0001826737760000991
Figure BDA0001826737760001001
ND＝未测定
表8在静脉内(i.v.)和气管内(i.t.)给予本发明的化合物或尼达尼 布的大鼠中24小时周期内的药代动力学测量
Figure BDA0001826737760001002
Figure BDA0001826737760001011
Figure BDA0001826737760001021
ND：未测定
NC：由于一个参数为BLQ，因此无法计算
BLQ：低于定量水平
CL：清除率
Vss：分布体积
MRT：平均滞留时间
BAV：生物利用度
BAL：支气管肺泡灌洗
当报告>或<值时，该值基于生物分析方法的定量下限。
结果的概述
如本文所公开，本发明的化合物展示对FGFR1、FGFR3、PDGFRα、 PDGFRβ、VEGFR1和VEGFR2(表4和表5)的抑制活性和纳摩尔效力。 绝大多数测试化合物在细胞活力分析中没有显示副作用(表6)。此外， 化合物通常具有低的跨膜渗透性(表7和图1)。药代动力学测量显示， 在受试者接受该剂量后，发现通常本发明的化合物在局部递送后24小 时，在肺中剩余比尼达尼布更高的相对含量(表8和图2和图3)。药代 动力学参数还指示与静脉内递送的等效剂量相比，本发明的化合物在 局部递送时维持较高的肺水平，并且通常这些较高的相对水平高于尼 达尼布的相应水平，特别是在24h时间点时。注意到的低BAL水平以 及24h时段内减少的量指示本发明的化合物发生溶解和吸收进入肺组 织。
这个特征指示，本发明的化合物预期特别适用作用于治疗纤维化 疾病或间质性肺病如IPF或呼吸病症的药物，特别是当局部递送至肺 时。
参考文献
Castriotta RJ等人,Chest,2010,138(3):693-703
Du Bois RM.,Nat Rev Drug Discov.,2010,9(2):129-40
Fehrenbach.H.等人,Virchows Arch.,1999,435(1):20-31
King TE Jr等人,Lancet,2011,3；378(9807):1949-61
Lindroos.P.,Am J Physio Lung Cell Mol Physiol.,2001, 280:L354-L362
Tronde Ann等人,J Pharm.Sci.,2003,92(6),1216-33
Selman M等人,Ann Intern Med.,2001,16；134(2):136-51
Wohnsland F等人,Med Chem.,2001,44；923-930
在整个说明书和权利要求书中，除非上下文另外要求，否则词语 ‘包含’应被理解为暗示包括所述整数、步骤、整数组或步骤组，但不排 除任何其它整数、步骤、整数组或步骤组。
本文提及的所有专利和专利申请都通过全文引用的方式并入。

Claims (19)

1.一种式(I)的化合物：
(I)
Figure FDA0003033503270000011
其中
R1表示Me、Et、CH＝CH2、C≡C-H或C≡C-Me；
R2和R3中的一者表示选自以下的基团：H、-C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、-C3-C8环烷基、-CH2-(C3-C8环烷基)、卤素和氰基，并且另一者表示基团-Z-Rx；
其中Z表示CO或SO2；以及
Rx表示式(iv)：
Figure FDA0003033503270000012
其中V表示CO；
v表示0或1；
n表示0、1或2，除了当v表示1时，n表示1或2；
m表示1或2；
X表示CH或N，除了当n表示0或1时，X表示CH；
Y表示CH或N；
W表示选自以下的基团：-C1-C4烷基、-C1-C4羟基烷基、C1-C4烷氧基(C1-C4)烷基-、-C1-C4亚烷基CONR20R21、-C1-C4亚烷基NR20COR21、-SO2(C1-C4)烷基、-CO(C1-C4)烷基、卤素、CN、OH和NR22R23，除了当W表示NR22R23、-C1亚烷基NR20COR21或卤素时，Y表示CH；
其中R20、R21、R22、R23、R24和R25独立地表示H或-C1-C4烷基；
或选自以下的化合物：
Figure FDA0003033503270000021
Figure FDA0003033503270000031
或其药学上可接受的盐。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中R1表示Me。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中Z表示CO。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中R3表示-Z-Rx。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中v表示0。
6.根据权利要求5所述的化合物，其中n是0或2，或其中n是0。
7.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中v表示1，并且n表示1。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中m表示1。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中X表示CH。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中Y表示N。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中W表示-C1-C4烷基，或其中W表示Me或NR22R23，或其中W表示NMe2。
12.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物选自：
(Z)-5-甲基-3-(((4-(N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)氨磺酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-5-甲基-3-(((4-(((1-甲基哌啶-4-基)甲基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-5-甲基-3-(((4-((2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-5-甲基-3-(((4-((2-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-3-(((4-((2-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-3-(((4-((2-(4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-5-甲基-3-(((4-((2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-5-甲基-2-氧代-3-(((4-((2-(3-氧代哌嗪-1-基)乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-5-甲基-3-(((4-((3-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-3-(((4-((2-(4-羟基哌啶-1-基)乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-3-(((4-((1-(2-羟基乙基)哌啶-4-基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-3-(((4-(((1-(2-羟基乙基)哌啶-4-基)甲基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-5-甲基-3-(((4-((1-甲基哌啶-4-基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-3-(((4-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-5-甲基-3-(((4-((3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-3-(((4-((2-(4,4-二氟哌啶-1-基)乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-3-(((4-((2-(4-乙酰基哌嗪-1-基)乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-3-(((4-((2-(4-氟哌啶-1-基)乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-5-甲基-3-(((4-((3-吗啉基丙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-3-(((4-((2-(4-乙酰基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-3-(((4-((2-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-5-甲基-3-(((4-((2-(4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-3-(((4-((2-(1,1-二氧硫代吗啉基)乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-5-甲基-2-氧代-3-(((4-((2-(5-氧代-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-3-(((3-氟-4-((2-(3-氧代哌嗪-1-基)乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-6-甲酸甲酯；
(Z)-5-甲基-2-氧代-3-(((4-((2-(3-氧代-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)乙基)氨甲酰基)苯基)氨基)(苯基)亚甲基)吲哚啉-6-甲酸甲酯；
以及其任一种的药学上可接受的盐。
13.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至12中任一项所述的化合物与一种或多种药学上可接受的稀释剂或载体的组合。
14.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物或根据权利要求13所述的组合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗选自以下的纤维化疾病或间质性肺病：IPF，巨细胞间质性肺炎，结节病，囊性纤维化，呼吸窘迫综合征，药物诱发的肺纤维化，肉芽肿病，硅肺，石棉沉滞症，全身性硬皮病，选自丙型肝炎诱导性肝硬化的病毒诱导性肝硬化；或具有纤维化成分的皮肤疾病，其选自硬皮病、结节病和全身性红斑狼疮以及IPF；或用于治疗以细胞过度增殖为特征的疾病，其选自癌症或肺癌；或用于治疗呼吸病症，其选自COPD、慢性支气管炎、肺气肿、哮喘、小儿哮喘、过敏性鼻炎、鼻炎和鼻窦炎。
15.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物或根据权利要求13所述的组合物在制备用于治疗以下疾病的药物中的用途：纤维化疾病，其选自与类风湿性关节炎相关的肺纤维化、呼吸窘迫综合征、急性呼吸窘迫综合征、急性肺损伤、放射诱发性肺纤维化或肺炎、慢性过敏性肺炎、全身性硬化、休格林氏综合征、间质性肺病和肺动脉高压(PAH)；或具有纤维化成分的皮肤疾病，其选自肥厚性瘢痕和瘢痕疙瘩；或其中纤维化是一种成分的眼病，其选自青光眼、年龄相关的黄斑变性、糖尿病性黄斑水肿、干眼病和糖尿病性视网膜病；或与炎症性肠病相关的肠内纤维化。
16.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物或根据权利要求13所述的组合物与尼达尼布或吡非尼酮的组合，所述组合用于治疗选自以下的纤维化疾病或间质性肺病：IPF，巨细胞间质性肺炎，结节病，囊性纤维化，呼吸窘迫综合征，药物诱发的肺纤维化，肉芽肿病，硅肺，石棉沉滞症，全身性硬皮病，选自丙型肝炎诱导性肝硬化的病毒诱导性肝硬化；或具有纤维化成分的皮肤疾病，其选自硬皮病、结节病、全身性红斑狼疮和IPF；或用于治疗以细胞过度增殖为特征的疾病，其选自癌症和肺癌；或用于治疗呼吸病症，其选自COPD、慢性支气管炎、肺气肿、哮喘、小儿哮喘、过敏性鼻炎、鼻炎和鼻窦炎。
17.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物或根据权利要求13所述的组合物与尼达尼布或吡非尼酮的组合，所述组合用于治疗纤维化疾病，其选自与类风湿性关节炎相关的肺纤维化、呼吸窘迫综合征、急性呼吸窘迫综合征、急性肺损伤、放射诱发性肺纤维化或肺炎、慢性过敏性肺炎、全身性硬化、休格林氏综合征、间质性肺病和肺动脉高压(PAH)；或具有纤维化成分的皮肤疾病，其选自肥厚性瘢痕和瘢痕疙瘩；或其中纤维化是一种成分的眼病，其选自青光眼、年龄相关的黄斑变性、糖尿病性黄斑水肿、干眼病和糖尿病性视网膜病；或与炎症性肠病相关的肠内纤维化。
18.一种式(IXb)的化合物，
(IXb)
Figure FDA0003033503270000071
其中
R1表示Me、Et、CH＝CH2、C≡C-H或C≡C-Me，或R1表示Me；并且
R3表示H、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、-CH2-(C3-C8环烷基)、卤素或氰基；
或其盐。
19.一种用于制备根据权利要求1至12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐的方法，所述方法包含使式(II)化合物：
(II)
Figure FDA0003033503270000081
其中
R1如权利要求1至12中任一项所定义；以及
L表示离去基团；
或其盐；
与式(III)化合物：
(III)
Figure FDA0003033503270000082
其中
R2、R3和Z如权利要求1至12中任一项所定义；
或其盐反应。
CN201780023315.XA 2016-03-08 2017-03-08 吲哚衍生物及其作为蛋白激酶抑制剂的用途 Active CN109153666B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP16159231.6 2016-03-08
EP16159231 2016-03-08
PCT/GB2017/050619 WO2017153748A1 (en) 2016-03-08 2017-03-08 Indole derivatives and their use as protein kinase inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109153666A CN109153666A (zh) 2019-01-04
CN109153666B true CN109153666B (zh) 2021-07-16

Family

ID=55521584

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201780023315.XA Active CN109153666B (zh) 2016-03-08 2017-03-08 吲哚衍生物及其作为蛋白激酶抑制剂的用途

Country Status (10)

Country Link
US (2) US10669235B2 (zh)
EP (1) EP3426649B1 (zh)
JP (1) JP7039480B2 (zh)
CN (1) CN109153666B (zh)
AU (1) AU2017231860C1 (zh)
BR (1) BR112018068213A2 (zh)
CA (1) CA3017308A1 (zh)
EA (1) EA038773B1 (zh)
ES (1) ES2836255T3 (zh)
WO (1) WO2017153748A1 (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3394048B1 (en) 2015-12-24 2020-03-11 Respivert Limited Indolinones compounds and their use in the treatment of fibrotic diseases
EP3426649B1 (en) 2016-03-08 2020-07-22 Respivert Limited Indole derivatives and their use as protein kinase inhibitors
CN112574094B (zh) * 2020-12-14 2022-07-01 成都大学 吲哚酮衍生物及其制药用途
WO2023043473A1 (en) * 2021-09-14 2023-03-23 R-Pharm Overseas, Inc. TGF-β INHIBITOR COMPOSITION AND USE THEREOF

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1509270A (zh) * 2001-04-06 2004-06-30 ���ָ��Ӣ��ķ�������Ϲ�˾ 在6-位取代的吲哚满酮,其制法及其作为激酶抑制剂的用途
WO2006067168A1 (en) * 2004-12-24 2006-06-29 Boehringer Ingelheim International Gmbh Medicaments for the treatment or prevention of fibrotic diseases

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA75054C2 (uk) 1999-10-13 2006-03-15 Бьорінгер Інгельхайм Фарма Гмбх & Ко. Кг Заміщені в положенні 6 індолінони, їх одержання та їх застосування як лікарського засобу
JP2004182726A (ja) 2002-11-22 2004-07-02 Yamanouchi Pharmaceut Co Ltd ２−オキソインドリン誘導体
JP2005145928A (ja) 2003-11-19 2005-06-09 Yamanouchi Pharmaceut Co Ltd ３−キノリン−２（１ｈ）−イリデンインドリン−２−オン誘導体を有効成分とする医薬組成物
PE20060777A1 (es) 2004-12-24 2006-10-06 Boehringer Ingelheim Int Derivados de indolinona para el tratamiento o la prevencion de enfermedades fibroticas
US7692005B2 (en) 2005-07-13 2010-04-06 Allergan, Inc. Kinase inhibitors
US8344018B2 (en) 2008-07-14 2013-01-01 Gilead Sciences, Inc. Oxindolyl inhibitor compounds
IN2014DN06869A (zh) 2012-01-26 2015-05-22 Angion Biomedica Corp
WO2015179436A1 (en) 2014-05-19 2015-11-26 Sanford-Burnham Medical Research Institute Inflammation therapy using mekk3 inhibitors or blocking peptides
EP3394048B1 (en) 2015-12-24 2020-03-11 Respivert Limited Indolinones compounds and their use in the treatment of fibrotic diseases
EP3426649B1 (en) 2016-03-08 2020-07-22 Respivert Limited Indole derivatives and their use as protein kinase inhibitors

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1509270A (zh) * 2001-04-06 2004-06-30 ���ָ��Ӣ��ķ�������Ϲ�˾ 在6-位取代的吲哚满酮,其制法及其作为激酶抑制剂的用途
WO2006067168A1 (en) * 2004-12-24 2006-06-29 Boehringer Ingelheim International Gmbh Medicaments for the treatment or prevention of fibrotic diseases

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Design,Synthesis,and Evaluation of Indolinones as Triple Angiokinase Inhibitors and the Discovery of a Highly Specific 6-Methoxycarbonyl-Substituted Indolinone (BIBF 1120);Gerald J.Roth et.al;《J. Med. Chem.》;20090612;第52卷(第14期);4466-4480 *

Also Published As

Publication number Publication date
AU2017231860A1 (en) 2018-09-27
CN109153666A (zh) 2019-01-04
ES2836255T3 (es) 2021-06-24
US20210114982A1 (en) 2021-04-22
EP3426649A1 (en) 2019-01-16
WO2017153748A1 (en) 2017-09-14
US10669235B2 (en) 2020-06-02
EA038773B1 (ru) 2021-10-18
US11208381B2 (en) 2021-12-28
EA201892020A1 (ru) 2019-02-28
EP3426649B1 (en) 2020-07-22
US20190071399A1 (en) 2019-03-07
AU2017231860B2 (en) 2021-06-10
JP7039480B2 (ja) 2022-03-22
BR112018068213A2 (pt) 2019-01-29
JP2019509294A (ja) 2019-04-04
CA3017308A1 (en) 2017-09-14
AU2017231860C1 (en) 2022-01-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109302846B (zh) 吲哚啉酮化合物及其在纤维化疾病治疗中的用途
CN109153666B (zh) 吲哚衍生物及其作为蛋白激酶抑制剂的用途
CN109415367A (zh) 用于治疗和预防乙型肝炎病毒感染的新的二氢吡咯并嘧啶类化合物
EP3728253A1 (en) 6-azaindole compounds
KR20180088462A (ko) 수면-관련 호흡기 장애의 치료를 위한 TASK-1 및 TASK-2 채널의 차단제로서의 2-페닐-3-(피페라지노메틸)이미다조[1,2-a]피리딘 유도체
CN102264743A (zh) Mlk抑制剂及其使用方法
JP2019521170A (ja) 置換ジアザヘテロ−二環式化合物およびそれらの使用
CA3189873A1 (en) 1h-benzo[d]imidazole derivatives as tlr9 inhibitors for the treatment of fibrosis
CN113710672A (zh) 用于治疗自身免疫性疾病的六氢-1H-吡嗪并[1,2-a]吡嗪化合物
JP2023538393A (ja) 線維症の処置のためのｔｌｒ９の阻害剤としてのイミダゾ［１，２－ａ］ピリジンおよび［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリジン誘導体

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40002827

Country of ref document: HK

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant