EA038301B1 - Антитела, которые эффективно нейтрализуют вирус гепатита в, и их применение - Google Patents
Антитела, которые эффективно нейтрализуют вирус гепатита в, и их применение Download PDFInfo
- Publication number
- EA038301B1 EA038301B1 EA201890874A EA201890874A EA038301B1 EA 038301 B1 EA038301 B1 EA 038301B1 EA 201890874 A EA201890874 A EA 201890874A EA 201890874 A EA201890874 A EA 201890874A EA 038301 B1 EA038301 B1 EA 038301B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- antibody
- present
- hepatitis
- antigen
- seq
- Prior art date
Links
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 title claims abstract description 189
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 288
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 249
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 234
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 233
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 233
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 195
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 125
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 125
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims abstract description 99
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 95
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 77
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 66
- 208000005331 Hepatitis D Diseases 0.000 claims abstract description 47
- 241000724709 Hepatitis delta virus Species 0.000 claims abstract description 14
- 208000037262 Hepatitis delta Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 208000029570 hepatitis D virus infection Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 240
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 90
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 80
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 34
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 26
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 24
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 24
- 208000000419 Chronic Hepatitis B Diseases 0.000 claims description 23
- 229960001627 lamivudine Drugs 0.000 claims description 23
- JTEGQNOMFQHVDC-NKWVEPMBSA-N lamivudine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1O[C@@H](CO)SC1 JTEGQNOMFQHVDC-NKWVEPMBSA-N 0.000 claims description 23
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 23
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 19
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 17
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 17
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 17
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 claims description 15
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 claims description 15
- 229940123066 Polymerase inhibitor Drugs 0.000 claims description 14
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 claims description 13
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 claims description 13
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 11
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims description 11
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 claims description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 6
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 6
- 206010019663 Hepatic failure Diseases 0.000 claims description 5
- 231100000835 liver failure Toxicity 0.000 claims description 5
- 208000007903 liver failure Diseases 0.000 claims description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 4
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 208000010471 Chronic Hepatitis D Diseases 0.000 claims description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 238000001631 haemodialysis Methods 0.000 claims description 2
- 230000000322 hemodialysis Effects 0.000 claims description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 abstract description 28
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 abstract description 28
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 abstract description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 172
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 154
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 153
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 151
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 140
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 118
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 106
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 105
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 100
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 75
- 238000000034 method Methods 0.000 description 63
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 58
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 58
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 50
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 49
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 49
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 46
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 45
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 43
- MKGIILKDUGDRRO-FXQIFTODSA-N Pro-Ser-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 MKGIILKDUGDRRO-FXQIFTODSA-N 0.000 description 34
- 102100024952 Protein CBFA2T1 Human genes 0.000 description 33
- XNRJFXBORWMIPY-DCPHZVHLSA-N Trp-Ala-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O XNRJFXBORWMIPY-DCPHZVHLSA-N 0.000 description 33
- VLMIUSLQONKLDV-HEIBUPTGSA-N Ser-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VLMIUSLQONKLDV-HEIBUPTGSA-N 0.000 description 31
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- -1 serine and threonine Chemical class 0.000 description 30
- 108010071097 threonyl-lysyl-proline Proteins 0.000 description 29
- AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N Arg-Phe-Ser Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 28
- DJTXYXZNNDDEOU-WHFBIAKZSA-N Gly-Asn-Cys Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)CN)C(=O)N DJTXYXZNNDDEOU-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 28
- SNNSYBWPPVAXQW-ZLUOBGJFSA-N Ser-Cys-Cys Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O SNNSYBWPPVAXQW-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 28
- AVYVKJMBNLPWRX-WFBYXXMGSA-N Trp-Ala-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)=CNC2=C1 AVYVKJMBNLPWRX-WFBYXXMGSA-N 0.000 description 28
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 27
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 27
- WGAZVKFCPHXZLO-SZMVWBNQSA-N Leu-Trp-Glu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N WGAZVKFCPHXZLO-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 26
- DXTOOBDIIAJZBJ-BQBZGAKWSA-N Pro-Gly-Ser Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DXTOOBDIIAJZBJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 26
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 26
- IRKLTAKLAFUTLA-KATARQTJSA-N Cys-Thr-Lys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O IRKLTAKLAFUTLA-KATARQTJSA-N 0.000 description 25
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 25
- GMJDSFYVTAMIBF-FXQIFTODSA-N Pro-Ser-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O GMJDSFYVTAMIBF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 24
- UZJDBCHMIQXLOQ-HEIBUPTGSA-N Thr-Cys-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N)O UZJDBCHMIQXLOQ-HEIBUPTGSA-N 0.000 description 24
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 24
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 24
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 23
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 23
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 22
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 22
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 22
- WTMPKZWHRCMMMT-KZVJFYERSA-N Thr-Pro-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O WTMPKZWHRCMMMT-KZVJFYERSA-N 0.000 description 21
- MHZXESQPPXOING-KBPBESRZSA-N Gly-Lys-Phe Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O MHZXESQPPXOING-KBPBESRZSA-N 0.000 description 20
- AIZVVCMAFRREQS-GUBZILKMSA-N Pro-Cys-Arg Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O AIZVVCMAFRREQS-GUBZILKMSA-N 0.000 description 20
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 20
- VYXIKLFLGRTANT-HRCADAONSA-N Met-Tyr-Pro Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N VYXIKLFLGRTANT-HRCADAONSA-N 0.000 description 19
- JQFILXICXLDTRR-FBCQKBJTSA-N Gly-Thr-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCC(O)=O JQFILXICXLDTRR-FBCQKBJTSA-N 0.000 description 18
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 18
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 18
- YHYDTTUSJXGTQK-UWVGGRQHSA-N Gly-Met-Leu Chemical compound CSCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O YHYDTTUSJXGTQK-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 17
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 17
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 17
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 17
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 16
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 16
- QDGZDCVAUDNJFG-FXQIFTODSA-N entecavir (anhydrous) Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)C1=C QDGZDCVAUDNJFG-FXQIFTODSA-N 0.000 description 16
- 230000006870 function Effects 0.000 description 16
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 16
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 16
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 16
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 15
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 15
- DQUWSUWXPWGTQT-DCAQKATOSA-N Cys-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CS DQUWSUWXPWGTQT-DCAQKATOSA-N 0.000 description 15
- 108010060199 cysteinylproline Proteins 0.000 description 15
- 229960000980 entecavir Drugs 0.000 description 15
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 15
- QQAPDATZKKTBIY-YUMQZZPRSA-N Gln-Gly-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O QQAPDATZKKTBIY-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 14
- JDBQSGMJBMPNFT-AVGNSLFASA-N Leu-Pro-Val Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O JDBQSGMJBMPNFT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 14
- STGVYUTZKGPRCI-GUBZILKMSA-N Pro-Val-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 STGVYUTZKGPRCI-GUBZILKMSA-N 0.000 description 14
- 108010044940 alanylglutamine Proteins 0.000 description 14
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 14
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 14
- JXFLPKSDLDEOQK-JHEQGTHGSA-N Gln-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O JXFLPKSDLDEOQK-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 13
- FFALDIDGPLUDKV-ZDLURKLDSA-N Gly-Thr-Ser Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FFALDIDGPLUDKV-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 13
- PURRNJBBXDDWLX-ZDLURKLDSA-N Ser-Thr-Gly Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O PURRNJBBXDDWLX-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 13
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 13
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 13
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 13
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 13
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 12
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 12
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 12
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 12
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 12
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 12
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 12
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 11
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 11
- 101000872838 Hepatitis B virus genotype C subtype adr (isolate China/NC-1/1988) Small envelope protein Proteins 0.000 description 11
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 11
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 10
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 10
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 10
- 238000011161 development Methods 0.000 description 10
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 10
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 10
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 10
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 10
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 10
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 9
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 9
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 9
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 9
- 101710084021 Large envelope protein Proteins 0.000 description 9
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 9
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 9
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 9
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 9
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 9
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 8
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 8
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 8
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 7
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 7
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 7
- NTYQUVLERIHPMU-HRCADAONSA-N Met-Phe-Pro Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N NTYQUVLERIHPMU-HRCADAONSA-N 0.000 description 7
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 7
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 7
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 7
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 7
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 7
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 7
- 108010031719 prolyl-serine Proteins 0.000 description 7
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 7
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 7
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 7
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 7
- 108010011667 Ala-Phe-Ala Proteins 0.000 description 6
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 6
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- XVZCXCTYGHPNEM-UHFFFAOYSA-N Leu-Leu-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)N1CCCC1C(O)=O XVZCXCTYGHPNEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 6
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 6
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 6
- OLTFZQIYCNOBLI-DCAQKATOSA-N Pro-Cys-Lys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O OLTFZQIYCNOBLI-DCAQKATOSA-N 0.000 description 6
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 6
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 6
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 6
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 6
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 6
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 6
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 6
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 6
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 6
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 229960004556 tenofovir Drugs 0.000 description 6
- VCMJCVGFSROFHV-WZGZYPNHSA-N tenofovir disoproxil fumarate Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O.N1=CN=C2N(C[C@@H](C)OCP(=O)(OCOC(=O)OC(C)C)OCOC(=O)OC(C)C)C=NC2=C1N VCMJCVGFSROFHV-WZGZYPNHSA-N 0.000 description 6
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 5
- BYALSSDCQYHKMY-XGEHTFHBSA-N Cys-Arg-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CS)N)O BYALSSDCQYHKMY-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 5
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 5
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 5
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 5
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 5
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- MSIYNSBKKVMGFO-BHNWBGBOSA-N Thr-Gly-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O MSIYNSBKKVMGFO-BHNWBGBOSA-N 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 5
- 229960001997 adefovir Drugs 0.000 description 5
- WOZSCQDILHKSGG-UHFFFAOYSA-N adefovir depivoxil Chemical compound N1=CN=C2N(CCOCP(=O)(OCOC(=O)C(C)(C)C)OCOC(=O)C(C)(C)C)C=NC2=C1N WOZSCQDILHKSGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 5
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 5
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 5
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 5
- 108010004073 cysteinylcysteine Proteins 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Natural products NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 description 5
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 description 5
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 5
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 5
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 5
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 5
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 5
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 5
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 5
- 229960005311 telbivudine Drugs 0.000 description 5
- IQFYYKKMVGJFEH-CSMHCCOUSA-N telbivudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 5
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 5
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 5
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- KQESEZXHYOUIIM-CQDKDKBSSA-N Ala-Lys-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O KQESEZXHYOUIIM-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 4
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 4
- HRCIIMCTUIAKQB-XGEHTFHBSA-N Arg-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)O HRCIIMCTUIAKQB-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 4
- JUWZKMBALYLZCK-WHFBIAKZSA-N Asp-Gly-Asn Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O JUWZKMBALYLZCK-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- SBANPBVRHYIMRR-UHFFFAOYSA-N Leu-Ser-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CO)C(=O)N1CCCC1C(O)=O SBANPBVRHYIMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- YTJFXEDRUOQGSP-DCAQKATOSA-N Lys-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YTJFXEDRUOQGSP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 4
- XYSXOCIWCPFOCG-IHRRRGAJSA-N Pro-Leu-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O XYSXOCIWCPFOCG-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 4
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- LECUEEHKUFYOOV-ZJDVBMNYSA-N Thr-Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O LECUEEHKUFYOOV-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 4
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 4
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 4
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 4
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 4
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 4
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 4
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 4
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 4
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 4
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XVZCXCTYGHPNEM-IHRRRGAJSA-N (2s)-1-[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O XVZCXCTYGHPNEM-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- KQFRUSHJPKXBMB-BHDSKKPTSA-N Ala-Ala-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 KQFRUSHJPKXBMB-BHDSKKPTSA-N 0.000 description 3
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 3
- HPBNLFLSSQDFQW-WHFBIAKZSA-N Asn-Ser-Gly Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O HPBNLFLSSQDFQW-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- WLVLIYYBPPONRJ-GCJQMDKQSA-N Asn-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O WLVLIYYBPPONRJ-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 3
- VAWNQIGQPUOPQW-ACZMJKKPSA-N Asp-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VAWNQIGQPUOPQW-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 108020004638 Circular DNA Proteins 0.000 description 3
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 3
- 102100031673 Corneodesmosin Human genes 0.000 description 3
- 101710139375 Corneodesmosin Proteins 0.000 description 3
- SNHRIJBANHPWMO-XGEHTFHBSA-N Cys-Met-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)N)O SNHRIJBANHPWMO-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 3
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 3
- 241001533413 Deltavirus Species 0.000 description 3
- 101001065501 Escherichia phage MS2 Lysis protein Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 3
- ZQNCUVODKOBSSO-XEGUGMAKSA-N Glu-Trp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZQNCUVODKOBSSO-XEGUGMAKSA-N 0.000 description 3
- ZYRXTRTUCAVNBQ-GVXVVHGQSA-N Glu-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N ZYRXTRTUCAVNBQ-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 3
- QSQXZZCGPXQBPP-BQBZGAKWSA-N Gly-Pro-Cys Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O QSQXZZCGPXQBPP-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- 101000917824 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Proteins 0.000 description 3
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 3
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 3
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N L-prolylglycine Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- SBANPBVRHYIMRR-GARJFASQSA-N Leu-Ser-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N SBANPBVRHYIMRR-GARJFASQSA-N 0.000 description 3
- AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 3
- 102100029205 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Human genes 0.000 description 3
- 101710085938 Matrix protein Proteins 0.000 description 3
- 101710127721 Membrane protein Proteins 0.000 description 3
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 3
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 3
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 3
- NAXPHWZXEXNDIW-JTQLQIEISA-N Phe-Gly-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NAXPHWZXEXNDIW-JTQLQIEISA-N 0.000 description 3
- YTILBRIUASDGBL-BZSNNMDCSA-N Phe-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 YTILBRIUASDGBL-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 3
- HQPWNHXERZCIHP-PMVMPFDFSA-N Phe-Leu-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 HQPWNHXERZCIHP-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 3
- BPCLGWHVPVTTFM-QWRGUYRKSA-N Phe-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O BPCLGWHVPVTTFM-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 3
- MRWOVVNKSXXLRP-IHPCNDPISA-N Phe-Ser-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O MRWOVVNKSXXLRP-IHPCNDPISA-N 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 3
- PULPZRAHVFBVTO-DCAQKATOSA-N Pro-Glu-Arg Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O PULPZRAHVFBVTO-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004389 Ribonucleoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108010081734 Ribonucleoproteins Proteins 0.000 description 3
- FIXILCYTSAUERA-FXQIFTODSA-N Ser-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O FIXILCYTSAUERA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 3
- BPMRXBZYPGYPJN-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BPMRXBZYPGYPJN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N Ser-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 3
- AXOHAHIUJHCLQR-IHRRRGAJSA-N Ser-Met-Tyr Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N AXOHAHIUJHCLQR-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- FLONGDPORFIVQW-XGEHTFHBSA-N Ser-Pro-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CO FLONGDPORFIVQW-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 3
- CKDXFSPMIDSMGV-GUBZILKMSA-N Ser-Pro-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O CKDXFSPMIDSMGV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- QYBRQMLZDDJBSW-AVGNSLFASA-N Ser-Tyr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O QYBRQMLZDDJBSW-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- CUTPSEKWUPZFLV-WISUUJSJSA-N Thr-Cys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O CUTPSEKWUPZFLV-WISUUJSJSA-N 0.000 description 3
- ZESGVALRVJIVLZ-VFCFLDTKSA-N Thr-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O ZESGVALRVJIVLZ-VFCFLDTKSA-N 0.000 description 3
- MNYNCKZAEIAONY-XGEHTFHBSA-N Thr-Val-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MNYNCKZAEIAONY-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 3
- CRWOSTCODDFEKZ-HRCADAONSA-N Tyr-Arg-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N)C(=O)O CRWOSTCODDFEKZ-HRCADAONSA-N 0.000 description 3
- GBIUHAYJGWVNLN-UHFFFAOYSA-N Val-Ser-Pro Natural products CC(C)C(N)C(=O)NC(CO)C(=O)N1CCCC1C(O)=O GBIUHAYJGWVNLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 3
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 3
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 3
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 3
- 210000004900 c-terminal fragment Anatomy 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 3
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 230000006334 disulfide bridging Effects 0.000 description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 3
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 3
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 3
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 3
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 3
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 3
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 3
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 3
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010070409 phenylalanyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 3
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 2
- QHASENCZLDHBGX-ONGXEEELSA-N Ala-Gly-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QHASENCZLDHBGX-ONGXEEELSA-N 0.000 description 2
- JNJHNBXBGNJESC-KKXDTOCCSA-N Ala-Tyr-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O JNJHNBXBGNJESC-KKXDTOCCSA-N 0.000 description 2
- SNDBKTFJWVEVPO-WHFBIAKZSA-N Asp-Gly-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SNDBKTFJWVEVPO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 2
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 101100074836 Caenorhabditis elegans lin-22 gene Proteins 0.000 description 2
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 2
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 2
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 2
- KOHBWQDSVCARMI-BWBBJGPYSA-N Cys-Cys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KOHBWQDSVCARMI-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 2
- KSMSFCBQBQPFAD-GUBZILKMSA-N Cys-Pro-Pro Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 KSMSFCBQBQPFAD-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- NMPSRDYYNIYOSJ-IHPCNDPISA-N Cys-Trp-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)NC(=O)[C@H](CS)N NMPSRDYYNIYOSJ-IHPCNDPISA-N 0.000 description 2
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Polymers OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 2
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 2
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 2
- 102220532045 Gametogenetin_K66Y_mutation Human genes 0.000 description 2
- XKBASPWPBXNVLQ-WDSKDSINSA-N Gln-Gly-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XKBASPWPBXNVLQ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- JLXVRFDTDUGQEE-YFKPBYRVSA-N Gly-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N JLXVRFDTDUGQEE-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- MHHUEAIBJZWDBH-YUMQZZPRSA-N Gly-Asp-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)CN MHHUEAIBJZWDBH-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- QCTLGOYODITHPQ-WHFBIAKZSA-N Gly-Cys-Ser Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O QCTLGOYODITHPQ-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 108010009504 Gly-Phe-Leu-Gly Proteins 0.000 description 2
- HAOUOFNNJJLVNS-BQBZGAKWSA-N Gly-Pro-Ser Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O HAOUOFNNJJLVNS-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- YXTFLTJYLIAZQG-FJXKBIBVSA-N Gly-Thr-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N YXTFLTJYLIAZQG-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 2
- GWNIGUKSRJBIHX-STQMWFEESA-N Gly-Tyr-Arg Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)CN)O GWNIGUKSRJBIHX-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 2
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 description 2
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 2
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 2
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- LZDNBBYBDGBADK-UHFFFAOYSA-N L-valyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 LZDNBBYBDGBADK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- FMEICTQWUKNAGC-YUMQZZPRSA-N Leu-Gly-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O FMEICTQWUKNAGC-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- PDQDCFBVYXEFSD-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Asp Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PDQDCFBVYXEFSD-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- IFMPDNRWZZEZSL-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O IFMPDNRWZZEZSL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- XOWMDXHFSBCAKQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C XOWMDXHFSBCAKQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N Leu-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 2
- LCNASHSOFMRYFO-WDCWCFNPSA-N Leu-Thr-Gln Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O LCNASHSOFMRYFO-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 2
- HQBOMRTVKVKFMN-WDSOQIARSA-N Leu-Trp-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O HQBOMRTVKVKFMN-WDSOQIARSA-N 0.000 description 2
- VUBIPAHVHMZHCM-KKUMJFAQSA-N Leu-Tyr-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 VUBIPAHVHMZHCM-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- LZWNAOIMTLNMDW-NHCYSSNCSA-N Lys-Asn-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)N LZWNAOIMTLNMDW-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- GQZMPWBZQALKJO-UWVGGRQHSA-N Lys-Gly-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O GQZMPWBZQALKJO-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 2
- FVKRQMQQFGBXHV-QXEWZRGKSA-N Met-Asp-Val Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O FVKRQMQQFGBXHV-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 2
- QYIGOFGUOVTAHK-ZJDVBMNYSA-N Met-Thr-Thr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QYIGOFGUOVTAHK-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 108010066427 N-valyltryptophan Proteins 0.000 description 2
- BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N Nalpha-L-Leucyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 description 2
- JEGFCFLCRSJCMA-IHRRRGAJSA-N Phe-Arg-Ser Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N JEGFCFLCRSJCMA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- MSHZERMPZKCODG-ACRUOGEOSA-N Phe-Leu-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 MSHZERMPZKCODG-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 2
- OSBADCBXAMSPQD-YESZJQIVSA-N Phe-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N OSBADCBXAMSPQD-YESZJQIVSA-N 0.000 description 2
- PBWNICYZGJQKJV-BZSNNMDCSA-N Phe-Phe-Cys Chemical compound N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O PBWNICYZGJQKJV-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- 229920002594 Polyethylene Glycol 8000 Polymers 0.000 description 2
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 2
- HQVPQXMCQKXARZ-FXQIFTODSA-N Pro-Cys-Ser Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O HQVPQXMCQKXARZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- UIMCLYYSUCIUJM-UWVGGRQHSA-N Pro-Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 UIMCLYYSUCIUJM-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- AFXCXDQNRXTSBD-FJXKBIBVSA-N Pro-Gly-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O AFXCXDQNRXTSBD-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 2
- FDMKYQQYJKYCLV-GUBZILKMSA-N Pro-Pro-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 FDMKYQQYJKYCLV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- POQFNPILEQEODH-FXQIFTODSA-N Pro-Ser-Ala Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O POQFNPILEQEODH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- CZCCVJUUWBMISW-FXQIFTODSA-N Pro-Ser-Cys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O CZCCVJUUWBMISW-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N Ser-Gly-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- RHAPJNVNWDBFQI-BQBZGAKWSA-N Ser-Pro-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O RHAPJNVNWDBFQI-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- PYTKULIABVRXSC-BWBBJGPYSA-N Ser-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PYTKULIABVRXSC-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 2
- ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- JGUWRQWULDWNCM-FXQIFTODSA-N Ser-Val-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O JGUWRQWULDWNCM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- NRUPKQSXTJNQGD-XGEHTFHBSA-N Thr-Cys-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O NRUPKQSXTJNQGD-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 2
- NRBUKAHTWRCUEQ-XGEHTFHBSA-N Thr-Cys-Met Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O NRBUKAHTWRCUEQ-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 2
- KWQBJOUOSNJDRR-XAVMHZPKSA-N Thr-Cys-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O KWQBJOUOSNJDRR-XAVMHZPKSA-N 0.000 description 2
- KBBRNEDOYWMIJP-KYNKHSRBSA-N Thr-Gly-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N)O KBBRNEDOYWMIJP-KYNKHSRBSA-N 0.000 description 2
- BVOVIGCHYNFJBZ-JXUBOQSCSA-N Thr-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O BVOVIGCHYNFJBZ-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 2
- VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N Thr-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 2
- WYLAVUAWOUVUCA-XVSYOHENSA-N Thr-Phe-Asp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WYLAVUAWOUVUCA-XVSYOHENSA-N 0.000 description 2
- RVMNUBQWPVOUKH-HEIBUPTGSA-N Thr-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RVMNUBQWPVOUKH-HEIBUPTGSA-N 0.000 description 2
- NDZYTIMDOZMECO-SHGPDSBTSA-N Thr-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O NDZYTIMDOZMECO-SHGPDSBTSA-N 0.000 description 2
- ZMYCLHFLHRVOEA-HEIBUPTGSA-N Thr-Thr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ZMYCLHFLHRVOEA-HEIBUPTGSA-N 0.000 description 2
- COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N Thr-Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N 0.000 description 2
- KYWBVMKEYAEDIX-BPUTZDHNSA-N Trp-Met-Cys Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O)=CNC2=C1 KYWBVMKEYAEDIX-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 2
- ABEVJDLMFPTGPS-SZMVWBNQSA-N Trp-Met-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O ABEVJDLMFPTGPS-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 2
- VMXLNDRJXVAJFT-JYBASQMISA-N Trp-Thr-Ser Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N)O VMXLNDRJXVAJFT-JYBASQMISA-N 0.000 description 2
- JYLWCVVMDGNZGD-WIRXVTQYSA-N Trp-Tyr-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O JYLWCVVMDGNZGD-WIRXVTQYSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DLYOEFGPYTZVSP-AEJSXWLSSA-N Val-Cys-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N DLYOEFGPYTZVSP-AEJSXWLSSA-N 0.000 description 2
- QIVPZSWBBHRNBA-JYJNAYRXSA-N Val-Pro-Phe Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(O)=O QIVPZSWBBHRNBA-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- NZYNRRGJJVSSTJ-GUBZILKMSA-N Val-Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NZYNRRGJJVSSTJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N [CH2]CN(CC)CC Chemical group [CH2]CN(CC)CC MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 230000001919 adrenal effect Effects 0.000 description 2
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 238000002869 basic local alignment search tool Methods 0.000 description 2
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 2
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 2
- 150000002314 glycerols Polymers 0.000 description 2
- 108010010147 glycylglutamine Proteins 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 2
- 229940036107 hepatitis b immunoglobulin Drugs 0.000 description 2
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 2
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000010185 immunofluorescence analysis Methods 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 108010044311 leucyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 2
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 2
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 2
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 2
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 2
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 238000012758 nuclear staining Methods 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 235000019271 petrolatum Nutrition 0.000 description 2
- 108010073025 phenylalanylphenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 2
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 229920001583 poly(oxyethylated polyols) Polymers 0.000 description 2
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 230000002064 post-exposure prophylaxis Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 description 2
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 2
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 2
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 2
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 2
- 238000010798 ubiquitination Methods 0.000 description 2
- 230000034512 ubiquitination Effects 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- OXHOPZLBSSTTBU-UHFFFAOYSA-N 1,3-bis(bromomethyl)benzene Chemical compound BrCC1=CC=CC(CBr)=C1 OXHOPZLBSSTTBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 2'-(4-ethoxyphenyl)-5-(4-methylpiperazin-1-yl)-2,5'-bibenzimidazole Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1C1=NC2=CC=C(C=3NC4=CC(=CC=C4N=3)N3CCN(C)CC3)C=C2N1 PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IAHOUQOWMXVMEH-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trinitroaniline Chemical compound NC1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O IAHOUQOWMXVMEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[[5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-4-phosphonooxyhexanedioic acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COC1C(CO)OC(OC(C(O)C(OP(O)(O)=O)C(O)C(O)=O)C(O)=O)C(O)C1O OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WEZDRVHTDXTVLT-GJZGRUSLSA-N 2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 WEZDRVHTDXTVLT-GJZGRUSLSA-N 0.000 description 1
- LEACJMVNYZDSKR-UHFFFAOYSA-N 2-octyldodecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCC(CO)CCCCCCCC LEACJMVNYZDSKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 7-hydroxycoumarin Natural products O1C(=O)C=CC2=CC(O)=CC=C21 CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005730 ADP ribosylation Effects 0.000 description 1
- 108010066676 Abrin Proteins 0.000 description 1
- 208000032484 Accidental exposure to product Diseases 0.000 description 1
- 102000012440 Acetylcholinesterase Human genes 0.000 description 1
- 108010022752 Acetylcholinesterase Proteins 0.000 description 1
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 206010059193 Acute hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 108010000239 Aequorin Proteins 0.000 description 1
- YWWATNIVMOCSAV-UBHSHLNASA-N Ala-Arg-Phe Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 YWWATNIVMOCSAV-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- CCUAQNUWXLYFRA-IMJSIDKUSA-N Ala-Asn Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC(N)=O CCUAQNUWXLYFRA-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- IFTVANMRTIHKML-WDSKDSINSA-N Ala-Gln-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O IFTVANMRTIHKML-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N Ala-Leu-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- BLTRAARCJYVJKV-QEJZJMRPSA-N Ala-Lys-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(O)=O BLTRAARCJYVJKV-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- ZDILXFDENZVOTL-BPNCWPANSA-N Ala-Val-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZDILXFDENZVOTL-BPNCWPANSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- RWWPBOUMKFBHAL-FXQIFTODSA-N Arg-Asn-Cys Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O RWWPBOUMKFBHAL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- ULBHWNVWSCJLCO-NHCYSSNCSA-N Arg-Val-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ULBHWNVWSCJLCO-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- SLKLLQWZQHXYSV-CIUDSAMLSA-N Asn-Ala-Lys Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O SLKLLQWZQHXYSV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- DAPLJWATMAXPPZ-CIUDSAMLSA-N Asn-Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DAPLJWATMAXPPZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- QRHYAUYXBVVDSB-LKXGYXEUSA-N Asn-Cys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QRHYAUYXBVVDSB-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- HJRBIWRXULGMOA-ACZMJKKPSA-N Asn-Gln-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O HJRBIWRXULGMOA-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- KHCNTVRVAYCPQE-CIUDSAMLSA-N Asn-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KHCNTVRVAYCPQE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N Asn-Ser Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- JWQWPRCDYWNVNM-ACZMJKKPSA-N Asn-Ser-Gln Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N JWQWPRCDYWNVNM-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- MKJBPDLENBUHQU-CIUDSAMLSA-N Asn-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MKJBPDLENBUHQU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- YNQIDCRRTWGHJD-ZLUOBGJFSA-N Asp-Asn-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O YNQIDCRRTWGHJD-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N Asp-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- GKWFMNNNYZHJHV-SRVKXCTJSA-N Asp-Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O GKWFMNNNYZHJHV-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- YIDFBWRHIYOYAA-LKXGYXEUSA-N Asp-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O YIDFBWRHIYOYAA-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- OZBXOELNJBSJOA-UBHSHLNASA-N Asp-Ser-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N OZBXOELNJBSJOA-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- MNQMTYSEKZHIDF-GCJQMDKQSA-N Asp-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O MNQMTYSEKZHIDF-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- ALMIMUZAWTUNIO-BZSNNMDCSA-N Asp-Tyr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ALMIMUZAWTUNIO-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 101100505161 Caenorhabditis elegans mel-32 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100315624 Caenorhabditis elegans tyr-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 description 1
- OABOXRPGTFRBFZ-IMJSIDKUSA-N Cys-Cys Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O OABOXRPGTFRBFZ-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- ATPDEYTYWVMINF-ZLUOBGJFSA-N Cys-Cys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ATPDEYTYWVMINF-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- UCMIKRLLIOVDRJ-XKBZYTNZSA-N Cys-Gln-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CS)N)O UCMIKRLLIOVDRJ-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- BSFFNUBDVYTDMV-WHFBIAKZSA-N Cys-Gly-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BSFFNUBDVYTDMV-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- DZLQXIFVQFTFJY-BYPYZUCNSA-N Cys-Gly-Gly Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O DZLQXIFVQFTFJY-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- WZJLBUPPZRZNTO-CIUDSAMLSA-N Cys-Ser-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CS)N WZJLBUPPZRZNTO-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- FTTZLFIEUQHLHH-BWBBJGPYSA-N Cys-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)O FTTZLFIEUQHLHH-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 1
- JLZCAZJGWNRXCI-XKBZYTNZSA-N Cys-Thr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O JLZCAZJGWNRXCI-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- RIONIAPMMKVUCX-IHPCNDPISA-N Cys-Trp-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CS)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 RIONIAPMMKVUCX-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 101710112752 Cytotoxin Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IGNGBUVODQLMRJ-CIUDSAMLSA-N Gln-Ala-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O IGNGBUVODQLMRJ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- NNXIQPMZGZUFJJ-AVGNSLFASA-N Gln-His-Lys Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N NNXIQPMZGZUFJJ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- RONJIBWTGKVKFY-HTUGSXCWSA-N Gln-Thr-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O RONJIBWTGKVKFY-HTUGSXCWSA-N 0.000 description 1
- TUTIHHSZKFBMHM-WHFBIAKZSA-N Glu-Asn Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O TUTIHHSZKFBMHM-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- SBCYJMOOHUDWDA-NUMRIWBASA-N Glu-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SBCYJMOOHUDWDA-NUMRIWBASA-N 0.000 description 1
- ILWHFUZZCFYSKT-AVGNSLFASA-N Glu-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ILWHFUZZCFYSKT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- RFTVTKBHDXCEEX-WDSKDSINSA-N Glu-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O RFTVTKBHDXCEEX-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- MIWJDJAMMKHUAR-ZVZYQTTQSA-N Glu-Trp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N MIWJDJAMMKHUAR-ZVZYQTTQSA-N 0.000 description 1
- GQGAFTPXAPKSCF-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Cys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O GQGAFTPXAPKSCF-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- UXJHNZODTMHWRD-WHFBIAKZSA-N Gly-Asn-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O UXJHNZODTMHWRD-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- OCDLPQDYTJPWNG-YUMQZZPRSA-N Gly-Asn-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)CN OCDLPQDYTJPWNG-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- XCLCVBYNGXEVDU-WHFBIAKZSA-N Gly-Asn-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XCLCVBYNGXEVDU-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- XPJBQTCXPJNIFE-ZETCQYMHSA-N Gly-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN XPJBQTCXPJNIFE-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ULZCYBYDTUMHNF-IUCAKERBSA-N Gly-Leu-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ULZCYBYDTUMHNF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- NNCSJUBVFBDDLC-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NNCSJUBVFBDDLC-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- CVFOYJJOZYYEPE-KBPBESRZSA-N Gly-Lys-Tyr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O CVFOYJJOZYYEPE-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- OJNZVYSGVYLQIN-BQBZGAKWSA-N Gly-Met-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O OJNZVYSGVYLQIN-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- FGPLUIQCSKGLTI-WDSKDSINSA-N Gly-Ser-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O FGPLUIQCSKGLTI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- WCORRBXVISTKQL-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WCORRBXVISTKQL-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- LCRDMSSAKLTKBU-ZDLURKLDSA-N Gly-Ser-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN LCRDMSSAKLTKBU-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 1
- ZKJZBRHRWKLVSJ-ZDLURKLDSA-N Gly-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)CN)O ZKJZBRHRWKLVSJ-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N Gly-Thr-Lys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101150071666 HBA gene Proteins 0.000 description 1
- 108091005904 Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 208000037319 Hepatitis infectious Diseases 0.000 description 1
- BDFCIKANUNMFGB-PMVVWTBXSA-N His-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 BDFCIKANUNMFGB-PMVVWTBXSA-N 0.000 description 1
- TTYKEFZRLKQTHH-MELADBBJSA-N His-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)C(=O)O TTYKEFZRLKQTHH-MELADBBJSA-N 0.000 description 1
- ISQOVWDWRUONJH-YESZJQIVSA-N His-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CC3=CN=CN3)N)C(=O)O ISQOVWDWRUONJH-YESZJQIVSA-N 0.000 description 1
- 102000006947 Histones Human genes 0.000 description 1
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 1
- 101001066129 Homo sapiens Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 101000998020 Homo sapiens Keratin, type I cytoskeletal 18 Proteins 0.000 description 1
- 101000917826 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical class Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 1
- PWWVAXIEGOYWEE-UHFFFAOYSA-N Isophenergan Chemical compound C1=CC=C2N(CC(C)N(C)C)C3=CC=CC=C3SC2=C1 PWWVAXIEGOYWEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N L-leucine-L-tyrosine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MDVZJYGNAGLPGJ-KKUMJFAQSA-N Leu-Asn-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MDVZJYGNAGLPGJ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- AXZGZMGRBDQTEY-SRVKXCTJSA-N Leu-Gln-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O AXZGZMGRBDQTEY-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- FIYMBBHGYNQFOP-IUCAKERBSA-N Leu-Gly-Gln Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N FIYMBBHGYNQFOP-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- VWHGTYCRDRBSFI-ZETCQYMHSA-N Leu-Gly-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O VWHGTYCRDRBSFI-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- HYMLKESRWLZDBR-WEDXCCLWSA-N Leu-Gly-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O HYMLKESRWLZDBR-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- IEWBEPKLKUXQBU-VOAKCMCISA-N Leu-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IEWBEPKLKUXQBU-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N Leu-Pro-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- AXVIGSRGTMNSJU-YESZJQIVSA-N Leu-Tyr-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N AXVIGSRGTMNSJU-YESZJQIVSA-N 0.000 description 1
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGWXCIORNLWGGG-CIUDSAMLSA-N Lys-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DGWXCIORNLWGGG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- VMTYLUGCXIEDMV-QWRGUYRKSA-N Lys-Leu-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN VMTYLUGCXIEDMV-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N Lys-Pro-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- DIBZLYZXTSVGLN-CIUDSAMLSA-N Lys-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DIBZLYZXTSVGLN-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- TVOOGUNBIWAURO-KATARQTJSA-N Lys-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O TVOOGUNBIWAURO-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- ZVZRQKJOQQAFCF-ULQDDVLXSA-N Lys-Tyr-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O ZVZRQKJOQQAFCF-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- MIMXMVDLMDMOJD-BZSNNMDCSA-N Lys-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MIMXMVDLMDMOJD-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- AETNZPKUUYYYEK-CIUDSAMLSA-N Met-Glu-Asn Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O AETNZPKUUYYYEK-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- AWGBEIYZPAXXSX-RWMBFGLXSA-N Met-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)N AWGBEIYZPAXXSX-RWMBFGLXSA-N 0.000 description 1
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 239000004264 Petrolatum Substances 0.000 description 1
- SMFGCTXUBWEPKM-KBPBESRZSA-N Phe-Leu-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 SMFGCTXUBWEPKM-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- XALFIVXGQUEGKV-JSGCOSHPSA-N Phe-Val-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 XALFIVXGQUEGKV-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- HXNYBZQLBWIADP-WDSKDSINSA-N Pro-Cys Chemical compound OC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 HXNYBZQLBWIADP-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- QXNSKJLSLYCTMT-FXQIFTODSA-N Pro-Cys-Asp Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O QXNSKJLSLYCTMT-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- JMVQDLDPDBXAAX-YUMQZZPRSA-N Pro-Gly-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 JMVQDLDPDBXAAX-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- HAAQQNHQZBOWFO-LURJTMIESA-N Pro-Gly-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 HAAQQNHQZBOWFO-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- CLJLVCYFABNTHP-DCAQKATOSA-N Pro-Leu-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O CLJLVCYFABNTHP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- BRJGUPWVFXKBQI-XUXIUFHCSA-N Pro-Leu-Ile Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O BRJGUPWVFXKBQI-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- ZLXKLMHAMDENIO-DCAQKATOSA-N Pro-Lys-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ZLXKLMHAMDENIO-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- RWCOTTLHDJWHRS-YUMQZZPRSA-N Pro-Pro Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 RWCOTTLHDJWHRS-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- GOMUXSCOIWIJFP-GUBZILKMSA-N Pro-Ser-Arg Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O GOMUXSCOIWIJFP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- QUBVFEANYYWBTM-VEVYYDQMSA-N Pro-Thr-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O QUBVFEANYYWBTM-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 1
- RMJZWERKFFNNNS-XGEHTFHBSA-N Pro-Thr-Ser Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RMJZWERKFFNNNS-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- CXGLFEOYCJFKPR-RCWTZXSCSA-N Pro-Thr-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O CXGLFEOYCJFKPR-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N Propionic acid Chemical class CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 1
- 239000008156 Ringer's lactate solution Substances 0.000 description 1
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- JPIDMRXXNMIVKY-VZFHVOOUSA-N Ser-Ala-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JPIDMRXXNMIVKY-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- RZEQTVHJZCIUBT-WDSKDSINSA-N Ser-Arg Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N RZEQTVHJZCIUBT-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- QEDMOZUJTGEIBF-FXQIFTODSA-N Ser-Arg-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O QEDMOZUJTGEIBF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- WXWDPFVKQRVJBJ-CIUDSAMLSA-N Ser-Asn-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CO)N WXWDPFVKQRVJBJ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- KCFKKAQKRZBWJB-ZLUOBGJFSA-N Ser-Cys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KCFKKAQKRZBWJB-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- QKQDTEYDEIJPNK-GUBZILKMSA-N Ser-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO QKQDTEYDEIJPNK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- AEGUWTFAQQWVLC-BQBZGAKWSA-N Ser-Gly-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O AEGUWTFAQQWVLC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- JFWDJFULOLKQFY-QWRGUYRKSA-N Ser-Gly-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O JFWDJFULOLKQFY-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- NLOAIFSWUUFQFR-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O NLOAIFSWUUFQFR-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ZKBKUWQVDWWSRI-BZSNNMDCSA-N Ser-Phe-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZKBKUWQVDWWSRI-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- DKGRNFUXVTYRAS-UBHSHLNASA-N Ser-Ser-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O DKGRNFUXVTYRAS-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- 208000000223 Solitary Kidney Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-NQAPHZHOSA-N Sorbitol Polymers OCC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-NQAPHZHOSA-N 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 206010042566 Superinfection Diseases 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 102100036049 T-complex protein 1 subunit gamma Human genes 0.000 description 1
- VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N Thr-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- DWYAUVCQDTZIJI-VZFHVOOUSA-N Thr-Ala-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DWYAUVCQDTZIJI-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- MMTOHPRBJKEZHT-BWBBJGPYSA-N Thr-Cys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MMTOHPRBJKEZHT-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 1
- BBPCSGKKPJUYRB-UVOCVTCTSA-N Thr-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BBPCSGKKPJUYRB-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 1
- KHTIUAKJRUIEMA-HOUAVDHOSA-N Thr-Trp-Asp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 KHTIUAKJRUIEMA-HOUAVDHOSA-N 0.000 description 1
- DIHPMRTXPYMDJZ-KAOXEZKKSA-N Thr-Tyr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N)O DIHPMRTXPYMDJZ-KAOXEZKKSA-N 0.000 description 1
- AXEJRUGTOJPZKG-XGEHTFHBSA-N Thr-Val-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O AXEJRUGTOJPZKG-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- BTAJAOWZCWOHBU-HSHDSVGOSA-N Thr-Val-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O)C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 BTAJAOWZCWOHBU-HSHDSVGOSA-N 0.000 description 1
- VYVBSMCZNHOZGD-RCWTZXSCSA-N Thr-Val-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VYVBSMCZNHOZGD-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- LTLBNCDNXQCOLB-UBHSHLNASA-N Trp-Asp-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)=CNC2=C1 LTLBNCDNXQCOLB-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- SVGAWGVHFIYAEE-JSGCOSHPSA-N Trp-Gly-Gln Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 SVGAWGVHFIYAEE-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- UQHPXCFAHVTWFU-BVSLBCMMSA-N Trp-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O UQHPXCFAHVTWFU-BVSLBCMMSA-N 0.000 description 1
- LWFWZRANSFAJDR-JSGCOSHPSA-N Trp-Val Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 LWFWZRANSFAJDR-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- MBLJBGZWLHTJBH-SZMVWBNQSA-N Trp-Val-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)=CNC2=C1 MBLJBGZWLHTJBH-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 1
- RYSNTWVRSLCAJZ-RYUDHWBXSA-N Tyr-Gln-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 RYSNTWVRSLCAJZ-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- UNUZEBFXGWVAOP-DZKIICNBSA-N Tyr-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O UNUZEBFXGWVAOP-DZKIICNBSA-N 0.000 description 1
- SQUMHUZLJDUROQ-YDHLFZDLSA-N Tyr-Val-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O SQUMHUZLJDUROQ-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- YODDULVCGFQRFZ-ZKWXMUAHSA-N Val-Asp-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YODDULVCGFQRFZ-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- OXVPMZVGCAPFIG-BQFCYCMXSA-N Val-Gln-Trp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N OXVPMZVGCAPFIG-BQFCYCMXSA-N 0.000 description 1
- GBIUHAYJGWVNLN-AEJSXWLSSA-N Val-Ser-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N GBIUHAYJGWVNLN-AEJSXWLSSA-N 0.000 description 1
- OFTXTCGQJXTNQS-XGEHTFHBSA-N Val-Thr-Ser Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O OFTXTCGQJXTNQS-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- QHSSPPHOHJSTML-HOCLYGCPSA-N Val-Trp-Gly Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)NCC(=O)O)N QHSSPPHOHJSTML-HOCLYGCPSA-N 0.000 description 1
- OWFGFHQMSBTKLX-UFYCRDLUSA-N Val-Tyr-Tyr Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)N OWFGFHQMSBTKLX-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000818 accidental exposure Toxicity 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- FKNHDDTXBWMZIR-GEMLJDPKSA-N acetic acid;(2s)-1-[(2r)-2-amino-3-sulfanylpropanoyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound CC(O)=O.SC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O FKNHDDTXBWMZIR-GEMLJDPKSA-N 0.000 description 1
- 229940022698 acetylcholinesterase Drugs 0.000 description 1
- 231100000354 acute hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 208000037628 acute hepatitis B virus infection Diseases 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 108010041407 alanylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010070944 alanylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 1
- 230000006229 amino acid addition Effects 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 230000007503 antigenic stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000010516 arginylation Effects 0.000 description 1
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 description 1
- 239000013602 bacteriophage vector Substances 0.000 description 1
- 229940002637 baraclude Drugs 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 150000001558 benzoic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000013357 binding ELISA Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 108010064866 biozym Proteins 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- BMLSTPRTEKLIPM-UHFFFAOYSA-I calcium;potassium;disodium;hydrogen carbonate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].OC([O-])=O BMLSTPRTEKLIPM-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J calcium;potassium;sodium;2-hydroxypropanoic acid;sodium;tetrachloride Chemical compound [Na].[Na+].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].CC(O)C(O)=O ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 229920006317 cationic polymer Polymers 0.000 description 1
- 101150062912 cct3 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 108091092356 cellular DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 229940081733 cetearyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000000599 controlled substance Substances 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 150000002303 glucose derivatives Polymers 0.000 description 1
- 150000002304 glucoses Polymers 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Polymers C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000001279 glycosylating effect Effects 0.000 description 1
- 108010084264 glycyl-glycyl-cysteine Proteins 0.000 description 1
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010026364 glycyl-glycyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 210000002288 golgi apparatus Anatomy 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 1
- 108010050151 hepatitis B hyperimmune globulin Proteins 0.000 description 1
- 229940022353 herceptin Drugs 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 description 1
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 1
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 1
- 102000047486 human GAPDH Human genes 0.000 description 1
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003840 hydrochlorides Chemical class 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 1
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 239000005414 inactive ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 229910052738 indium Inorganic materials 0.000 description 1
- APFVFJFRJDLVQX-UHFFFAOYSA-N indium atom Chemical compound [In] APFVFJFRJDLVQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 108091008042 inhibitory receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000004020 intracellular membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 description 1
- 230000026045 iodination Effects 0.000 description 1
- 238000006192 iodination reaction Methods 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000001865 kupffer cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 108010012058 leucyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 150000002690 malonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000001806 memory b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 230000007498 myristoylation Effects 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010068617 neonatal Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N octadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCO GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 229940066842 petrolatum Drugs 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 108010084572 phenylalanyl-valine Proteins 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 108010052044 polyclonal B cell activator Proteins 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001818 polyoxyethylene sorbitan monostearate Substances 0.000 description 1
- 235000010989 polyoxyethylene sorbitan monostearate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229940113124 polysorbate 60 Drugs 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 229940071643 prefilled syringe Drugs 0.000 description 1
- 230000013823 prenylation Effects 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 108010020755 prolyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010077112 prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000013094 purity test Methods 0.000 description 1
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 239000012857 radioactive material Substances 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 229910052703 rhodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010948 rhodium Substances 0.000 description 1
- MHOVAHRLVXNVSD-UHFFFAOYSA-N rhodium atom Chemical compound [Rh] MHOVAHRLVXNVSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000037432 silent mutation Effects 0.000 description 1
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 1
- 239000008354 sodium chloride injection Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012289 standard assay Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 238000006277 sulfonation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 229940036185 synagis Drugs 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 108010045269 tryptophyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Chemical compound C1=CC(=O)OC2=CC(O)=CC=C21 ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Natural products Cc1cc2C=CC(=O)Oc2cc1OCC=CC(C)(C)O HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940120293 vaginal suppository Drugs 0.000 description 1
- 239000006216 vaginal suppository Substances 0.000 description 1
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 1
- 230000006648 viral gene expression Effects 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 230000009265 virologic response Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000003871 white petrolatum Substances 0.000 description 1
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 description 1
- VWQVUPCCIRVNHF-UHFFFAOYSA-N yttrium atom Chemical compound [Y] VWQVUPCCIRVNHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
- C07K16/082—Hepadnaviridae, e.g. hepatitis B virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/42—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum viral
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
В изобретении описаны антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые связываются с областью антигенной петли поверхностного антигена гепатита В (HBsAg) и эффективно нейтрализуют инфицирование как вирусом гепатита В (HBV), так и вирусом гепатита дельта (HDV). Описаны также эпитопы, с которыми связываются антитела и антигенсвязывающие фрагменты, а также нуклеиновые кислоты, которые их кодируют, и клетки, которые продуцируют указанные антитела и фрагменты антител. Кроме того, в изобретении описано применение антител и фрагментов антител по настоящему изобретению для диагностики, профилактики и лечения гепатита В и гепатита D.
Description
Настоящее изобретение относится к области антител против вируса гепатита В (HBV) и против вируса гепатита дельта (HDV), а также к их применению. В настоящем изобретении было установлено, что эффективные антитела против гепатита В по настоящему изобретению связываются с эпитопом, расположенным в антигенной петлевой области S домена поверхностных белков вируса гепатита B (ВГВ) (HBsAg). Настоящее изобретение также относится к нуклеиновым кислотам, которые кодируют указанные антитела, а также к иммортализованным В-клеткам и культивированным плазматическим клеткам, которые продуцируют указанные антитела и их фрагменты. Кроме того, настоящее изобретение относится к применению антител и фрагментов антител по настоящему изобретению в методах скрининга, а также при диагностике, профилактике и лечении заболеваний, прежде всего гепатита В и гепатита D.
Вирус гепатита В состоит из (i) поверхностной оболочки, содержащей три родственных поверхностных белка (поверхностный антиген гепатита В (HBsAg)) и липид, и (ii) икосаэдрического нуклеокапсида, включающего ДНК геном вируса и ДНК полимеразу. Капсид ВГВ образуется в цитозоле инфицированной клетки при упаковке репликационного комплекса РНК прегенома и приобретает способность развиваться в процессе синтеза ДНК генома вируса за счет обратной транскрипции прегенома в просвете частицы. Три белка поверхностной оболочки ВГВ: S-HBsAg, M-HBsAg и L-HBsAg, формируют комплексную трансмембранную складку, свернутую в области эндоплазматического ретикулума, и образуют связанные дисульфидными мостиками гомо- и гетеродимеры. В процессе развития у внутриклеточной мембраны короткий линейный домен в цитозольной пре-S области взаимодействует с участками связывания на поверхности капсида. Затем вирионы секретируются в кровь. Кроме того, поверхностные белки могут развиваться в отсутствие капсидов и образовывать субвирусные частицы (SVP), которые также секретируются в 3-4-кратном логарифмическом избытке по сравнению с вирионами. Высокий уровень HBsAg может ослаблять ответную реакцию HBsAg-специфичных Т-клеток и, как предполагают, является важным фактором для вирусной иммунологической толерантности у пациентов с хроническим гепатитом В (ХГВ) (Chisari F.V., Isogawa M., Wieland S.F., Pathologie Biologie, 58, p.. 258-266 (2010)).
Вирус гепатита В вызывает потенциально опасные для жизни острые и хронические инфекции печени. Для острого гепатита В характерно наличие вирусемии, которая сопровождается или не сопровождается симптомами с риском развития скоротечного гепатита (Liang T.J., Block T.M., McMahon B.J., Ghany M.G., Urban S., Guo J.T., Locarnini S., Zoulim F., Chang K.M., Lok A.S., Present and future therapies of hepatitis B: From discovery to cure, Hepatology (3 августа 2015), doi: 10.1002/hep.28025 (предварительная электронная публикация)). Несмотря на существование с 1982 г. эффективной вакцины против гепатита В, по данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) 240 миллионов человек страдают от хронического инфекционного гепатита В и более 780000 человек умирает каждый год из-за осложнений гепатита В. Приблизительно у одной трети пациентов с диагнозом хронический гепатит В (ХГВ) развивается цирроз печени, печеночная недостаточность и гепатоклеточная карцинома, что является причиной 600000 летальных исходов в год (Liang T.J., Block T.M., McMahon B.J., Ghany M.G., Urban S., Guo J.T., Locarnini S., Zoulim F., Chang K.M., Lok A.S., Present and future therapies of hepatitis B: From discovery to cure, Hepatology (3 августа 2015 г.), doi: 10.1002/hep.28025 (предварительная электронная публикация)).
Существующие в настоящее время способы лечения хронического гепатита В включают применение (пегилированного) интерферона-α (ИНФ-α или ПЭГ-ИНФ-α) и его нуклеозид(тид)ного аналога Direct Acting Antiviral (DAA), который ингибирует ДНК полимеразу вируса гепатита В (ВГВ) (ингибиторы полимеразы). Ингибиторы полимеразы включают ламивудин, адефовир, энтекавир, телбивудин и тенофовир. Ингибиторы полимеразы (ламивудин, адефовир, энтекавир, телбивудин, тенофовир) подавляют функцию обратной транскриптазы ДНК полимеразы ВГВ и таким образом препятствуют синтезу вирусной ДНК из прегеномной РНК. Указанное лечение не предотвращает распространение вируса, образование ковалентнонепрерывной кольцевой ДНК (кнкДНК) и не влияет на высвобождение HBsAg. Более того, ингибиторы полимеразы ограничивают прогрессирование заболевания, но редко элиминируют вирус. В связи с этим после прекращения лечения в большинстве случаев наблюдается рецидив вирусного заболевания, и в связи с этим ингибиторы полимеразы необходимо принимать на протяжении всей жизни. Кроме того, после продолжительного лечения появляются резистентные к лекарственным средствам мутантные формы вируса. ПЭГ-ИНФ-α ингибирует ВГВ косвенным образом за счет иммуномодулирующих эффектов, а также ингибирует напрямую за счет снижения стабильных уровней транскриптов ВГВ (повышенное ацетилирование гистонов, связанных с кнкДНК). Однако эффективность ПЭГ-ИНФ-α ограничена, и он вызывает серьезные побочные эффекты.
В то время как ПЭГ-ИНФ-α является эффективным приблизительно для одной трети пациентов, проходящих лечение, ингибиторы полимеразы значительно снижают вирусную нагрузку у подавляющего большинства пациентов, проходящих лечение (Block T.M., Gish R., Guo H., Mehta A., Cuconati A., London W. Th., Guo J.T., Chronic hepatitis B: What should be the goal for new therapies? Antiviral Research, 98, p. 27-34 (2013)). Интерферон-α ассоциируют со многими отрицательными реакциями, и его не рекомендуется применять пациентам с прогрессирующим циррозом печени или с медицинскими/психиатрическими противопоказаниями (Liang T.J., Block T.M., McMahon B.J., Ghany M.G., Urban S., Guo J.T., Locarnini S., Zoulim F., Chang K.M., Lok A.S., Present and future therapies of hepatitis B: From
- 1 038301 discovery to cure. Hepatology (3 августа 2015 г.), doi: 10.1002/hep.28025 (предварительная электронная публикация)). Хотя ингибиторы полимеразы, такие как энтекавир и тенофовир, по-видимому, характеризуются меньшим числом отрицательных побочных эффектов, эти лекарственные средства проявляют низкие скорости сероконверсии HBeAG и сниженный уровень HBsAg. Следовательно, большинству пациентов часто требуется лечение на протяжении всей жизни, что является дорогостоящим и связано с риском развития побочных реакций, резистентности к лекарственным средствам и нарушения назначенного курса лечения. В связи с этим существующее в настоящее время лечение хронического гепатита В все еще является недостаточно эффективным из-за различных ограничений, и его нельзя рассматривать в качестве средства для полного выздоровления. Следовательно, хотя лечение ВГВ в достаточной степени улучшено, пациентам с диагнозом ВГВ в большинстве случаев требуется лечение на протяжении всей жизни, а полное выздоровление все еще представляет собой сложную задачу (Liang T.J., Block T.M., McMahon B.J., Ghany M.G., Urban S., Guo J.T., Locarnini S., Zoulim F., Chang K.M., Lok A.S., Present and future therapies of hepatitis B: From discovery to cure, Hepatology (3 августа 2015 г.), doi: 10.1002/hep.28025 (предварительная электронная публикация)). Максимально возможным конечным результатом лечения хронического гепатита В (ХГВ) и идеальным конечным параметром лечения может являться обеспечение снижения уровня поверхностного антигена гепатита В (HBsAg), которое, однако, все еще не всегда эффективно обеспечивается существующими в настоящее время способами лечения хронического гепатита В (см. обзор Gish R.G. et al., Antiviral Research, 121, p. 47-58 (2015)).
Пациентам с диагнозом тяжелого декомпенсированного состояния ВГВ при наличии острого гепатита или гепатоклеточной карциномы показана ортотопическая трансплантация печени (ОТП). После ОТП при отсутствии профилактики частота рецидивов гепатита В составляет >80%, в то время как >90% реципиентов трансплантата можно клинически контролировать с использованием комбинированного лечения иммуноглобулином против гепатита В (HBIG) и его нуклозид(тид)ным аналогом. Иммуноглобулины против гепатита В (HBIG) представляют собой поликлональные очищенные иммуноглобулины, полученные у вакцинированных доноров. Однако продолжительное введение HBIG ассоциируют с некоторыми неразрешенными проблемами, включая ограниченную доступность и чрезвычайно высокую стоимость (Takaki A., Yasunaka Т., Yagi Т., Molecular mechanism to control post-transplantation hepatitis В recurrence, Int. J. Mol. Sci., 16, 8, p. 17494-17513 (30 июля 2015 г.)). Кроме того, реципиенту требуется введение чрезвычайно высоких доз, а именно 10 г (содержащих 10000 ME на основе анализов связывания), внутривенным вливанием в ходе трансплантации. Затем 2 г вводят внутривенно ежедневно в течение 8 дней и затем каждые 1-3 месяца проводят вливания, чтобы поддержать уровни анти-HBs в сыворотке выше 100 МЕ/мл. Как и в предыдущем случае, требуется лечение на протяжении всей жизни.
Еще более тяжелые осложнения наблюдаются, если происходит совместное инфицирование или супер инфицирование вирусом гепатита дельта (ВГ дельта). Согласно данным ВОЗ, во всем мире гепатитом D инфицировано приблизительно 15 миллионов человек. ВГ дельта рассматривается как субвирусный сателлит, так как он может распространяться только в присутствии ВГВ. ВГ дельта является одним из наиболее мелких вирусов животных (40 нм), при этом длина его гена составляет только 1,6 пар оснований, и он кодирует S и L HDAg. Все другие белки, необходимые для репликации генома ВГ дельта, включая РНК полимеразу, обеспечиваются клеткой хозяина, а поверхностная оболочка ВГ дельта обеспечивается ВГВ. Другими словами, ВГ дельта представляет собой дефектный вирус, для репликации которого требуется совместное инфицирование ВГВ, так как ВГ дельта использует белки поверхностной оболочки гепатита В (HBsAg) в качестве оболочки своего собственного вириона. При введении в пермиссивные клетки наблюдается репликация РНК генома ВГ дельта и ассоциация с множественными копиями белков, кодируемых ВГ дельта, и происходит сборка рибонуклеопротеидного (РНП) комплекса. РНП экспортируется из клетки белками поверхностной оболочки ВГВ, которые способны собирать липопротеиновые везикулы, которые разрастаются в просвете промежуточной полости Гольджи перед секрецией. Более того, белки поверхностной оболочки ВГВ также обеспечивают механизм направленного переноса ВГВ в неинфицированные клетки, таким образом, обеспечивая распространение ВГ дельта.
Осложнения, вызванные ВГ дельта, включают более высокую вероятность печеночной недостаточности при острых инфекциях и быстрое прогрессирование указанного состояния до цирроза печени с повышенным риском развития рака печени при хронических инфекциях. В сочетании с вирусом гепатита В гепатит D характеризуется наиболее высоким уровнем (около 20%) летальных исходов во всех случаях инфекций печени (Fattovich G., Giustina G., Christensen E., Pantalena M., Zagni E, Realdi G., Schalm S.W., Influence of hepatitis delta virus infection on morbidity and mortality in compensated cirrhosis type B, Gut., 46, 3, p. 420-426 (март 2000)). Единственным одобренным методом лечения хронической инфекции ВГ дельта является применение интерферона-α. Однако лечение ВГ дельта интерфероном-α является относительно неэффективным, а также характеризуется низкой переносимостью. Лечение интерфероном-α вызывает устойчивый вирусологический ответ через шесть месяцев после лечения у одной четверти пациентов. Для лечения гепатита D также широко исследовали нуклеозид(тид)ные аналоги (НА), но они оказались неэффективными. Комбинированное лечение с использованием НА наряду с интерфероном также оказалось неэффективным, и в связи с этим существует необходимость в разработке новых терапевтиче
- 2 038301 ских вариантов лечения (Abbas Z., Abbas M., Management of hepatitis delta: Need for novel therapeutic Options, World J. Gastroenterol., 21, 32, p. 9461-9465 (28 августа 2015 г.)).
В связи с вышеизложенным объектом настоящего изобретения является получение продукта на основе антител, который способен нейтрализовать оба вируса: вирус гепатита В (ВГВ) и вирус гепатита дельта. Это позволяет усовершенствовать профилактику и лечение гепатита В. Более того, в настоящее время не существует лечения гепатита D, и в связи с этим объектом настоящего изобретения также является получение продукта на основе антител для профилактики и лечения гепатита D. Кроме того, объектом настоящего изобретения является получение продукта на основе антител, который способен обеспечить более эффективное лечение хронического гепатита В. С этой точки зрения предпочтительно, если один продукт на основе антител действует различными способами: (i) эффективно нейтрализует ВГВ, (ii) способствует клиренсу HBsAg и ВГВ, а также (iii) индуцирует сероконверсию, т.е. иммунный ответ на вирус. Более того, антитела могут также предпочтительно способствовать улучшенной презентации антигена, тем самым облегчая возобновление ответной реакции T-клеток против ВГВ. Кроме того, объектом настоящего изобретения является получение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которое связывается с различными, предпочтительно со всеми известными генотипами поверхностного антигена вируса гепатита В, а также с различными, предпочтительно со всеми известными инфекционными мутантными формами поверхностного антигена вируса гепатита В. Подводя итог, объектом настоящего изобретения является получение усовершенствованных антител или их антигенсвязывающих фрагментов, а также молекул родственных нуклеиновых кислот, векторов и клеток, а также фармацевтических композиций, которые позволяют исключить описанные выше недостатки предшествующего уровня техники.
Объект, лежащий в основе настоящего изобретения, определен сущностью настоящего изобретения, изложенной ниже и в прилагаемых пунктах формулы настоящего изобретения.
Ниже описаны элементы настоящего изобретения. Указанные элементы перечислены со ссылкой на конкретные варианты осуществления, однако следует понимать, что их можно комбинировать любым способом и любое число раз, чтобы получить дополнительные варианты осуществления. Указанное описание предоставлено для понимания настоящего изобретения и его объема, которые объединяют явным образом описанные варианты с любым числом изложенных и/или предпочтительных элементов. Кроме того, любые преобразования и комбинации всех элементов, описанных в настоящем документе, следует рассматривать изложенными в описании, если в контексте явным образом не указано иное.
Если не указано иное, все технические и научные термины, использованные в данном контексте, имеют общеизвестное специалисту в данной области техники значение.
В настоящем описании и в последующих пунктах формулы изобретения, если в контексте не указано иное, термин включают и варианты, такие как включает и включающий, следует понимать как обозначающие включение указанного члена, целого числа или стадии, но без исключения любого другого не указанного члена, целого числа или стадии. Термин состоит из является отдельным вариантом термина включает, при этом любой другой не указанный член, целое число или стадия исключены. В контексте настоящего изобретения термин включает включает термин состоит из. Таким образом, термин включающий включает термин содержащий, а также термин состоящий, например, композиция, включающая X, может состоять исключительно из X или может включать дополнительный компонент, например X+Y.
Ссылку в единственном числе, использованную в контексте описания настоящего изобретения (прежде всего в контексте пунктов формулы изобретения), следует интерпретировать как включающую единственное и множественное число, если в контексте не указано иное или это явным образом не противоречит контексту. Перечисление в данном контексте диапазонов величин предназначено только для краткого обозначения ссылки на каждую отдельную величину, находящуюся в диапазоне. Если в контексте не указано иное, каждая индивидуальная величина включена в описание, как в случае ее индивидуального перечисления в данном контексте. Ни одну формулировку в описании не следует интерпретировать как указывающую на любой не заявленный элемент, существенный для практического осуществления настоящего изобретения.
Слово в основном не исключает полностью, например композиция, которая в основном не содержит Y, может полностью не содержать Y. При необходимости слово в основном можно исключить из определения настоящего изобретения.
Термин приблизительно в отношении численного значения х обозначает x±10%.
Использованный в данном контексте термин заболевание предназначен в основном для обозначения синонимов и используется взаимозаменяемо с терминами нарушение и состояние (в смысле состояния здоровья), поскольку все они отражают аномальное состояние организма человека или животного или одного из его отделов, при котором ухудшается нормальное функционирование, и которое, как правило, сопровождается отличительными признаками и симптомами, а также приводит к снижению продолжительности или качества жизни человека или животного.
Использованная в данном контексте ссылка на лечение субъекта или пациента включает предотвращение, профилактику, ослабление интенсивности симптомов, улучшение состояния и терапию. Тер
- 3 038301 мины субъект или пациент используются в данном контексте взаимозаменяемо для обозначения всех млекопитающих, включая человека. Примеры субъектов включают человека, крупный рогатый скот, собак, кошек, лошадей, коз, овец, свиней и кроликов. В одном варианте пациентом является человек.
Использованные в данном контексте термины пептид, полипептид и белок, а также варианты указанных терминов относятся к молекуле, прежде всего к пептиду, олигопептиду, полипептиду или белку, включая гибридный белок, соответственно включающему по меньшей мере две аминокислоты, связанные друг с другом простой пептидной связью или модифицированной пептидной связью, такой как, например, в случаях изостерических пептидов. Например, пептид, полипептид или белок предпочтительно состоит из аминокислот, выбранных из 20 аминокислот, определенных генетическим кодом, связанных друг с другом обычной пептидной связью (классический полипептид). Пептид, полипептид или белок может состоять из L-аминокислот и/или D-аминокислот. Прежде всего, термины пептид, полипептид, белок также включают пептидомиметики, которые определяют как пептидные аналоги, содержащие непептидные структурные элементы, пептиды в составе которых способны имитировать биологическую активность или проявлять антагонистическую биологическую функцию(и) исходного природного пептида. Пептидомиметик не обладает классическими пептидными характеристиками, такими как расщепляемые ферментами пептидные связи. Прежде всего, пептид, полипептид или белок может включать аминокислоты, в отличие от 20 аминокислот, определенных генетическим кодом, в дополнение к указанным аминокислотам, или он может состоять из аминокислот, в отличие от 20 аминокислот, определенных генетическим кодом. Прежде всего, в контексте настоящего изобретения пептид, полипептид или белок может в равной степени состоять из аминокислот, модифицированных в результате природных процессов, таких как процессы пост-трансплантационного созревания, или в результате химических процессов, которые известны специалисту в данной области техники. Указанные модификации исчерпывающим образом описаны в литературе. Указанные модификации могут происходить в любом участке полипептида: в основной пептидной цепи, в аминокислотной цепи или даже в С-или N-концевых участках. Прежде всего, после убиквитинирования может произойти разветвление или циклизация пептида или полипептида наряду или в отсутствии разветвления. Указанный тип модификации может происходить в результате природных или синтетических посттрансляционных процессов, которые известны специалисту в данной области. Термины пептид, полипептид, белок в контексте настоящего изобретения, прежде всего, также включают модифицированные пептиды, полипептиды и белки. Например, модификации пептидов, полипептидов или белков могут включать ацетилирование, ацилирование, АДФрибозилирование, амидирование, ковалентное присоединение нуклеотида или нуклеотидного производного, ковалентное присоединение липида или производного липида, ковалентное присоединение фосфатидилинозита, ковалентную или нековалентную сшивку, циклизацию, образование дисульфидных связей, деметилирование, гликозилирование, включая пегилирование, гидроксилирование, иодирование, метилирование, миристоилирование, окисление, протеолитические процессы, фосфорилирование, пренилирование, рацемизацию, сенелоилирование, сульфирование, аминокислотное присоединение, такое как аргинилирование или убиквитинирование. Такие модификации подробно описаны в литературе (Proteins Structure and Molecular Properties, Creighton Т.Е., 2-е изд., Нью-Йорк (1993), Post-translational Covalent Modifications of Proteins, Johnson B.C. (ред.), Academic Press, Нью-Йорк (1983), Seifter et al., Analysis for protein modifications and nonprotein cofactors, Meth. Enzymol., 182, p. 626-646 (1990) и Rattan et al., Protein Synthesis: Post-translational Modifications and Aging, Ann. NY Acad. Sci., 663, p. 48-62 (1992)). Соответственно, термины пептид, полипептид, белок предпочтительно включают, например, липопептиды, липопротеины, гликопептиды, гликопротеины и т.п.
Использованный в данном контексте термин полипептид включает единичную цепь мономеров аминокислот, связанных пептидными связями, как описано выше. Использованный в данном контексте термин белок включает один или более, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 (поли)пептидов, т.е. одну или более цепей мономеров аминокислот, связанных пептидными связями, как описано выше. Предпочтительно белок согласно настоящему изобретению включает 1, 2, 3 или 4 полипептида.
Использованный в данном контексте термин рекомбинантный (например, рекомбинантное антитело, рекомбинантный белок, рекомбинантная нуклеиновая кислота и т.п.) относится к любой молекуле (антитело, белок, нуклеиновая кислота и т.п.), которую получают, экспрессируют, создают или выделяют рекомбинантными способами, и которая не встречается в природе.
В данном контексте термины нуклеиновая кислота, молекула нуклеиновой кислоты и полинуклеотид используются взаимозаменяемо и включают молекулы ДНК и молекулы РНК. Молекула нуклеиновой кислоты может быть одноцепочечной или двухцепочечной, но предпочтительно является двухцепочечной ДНК.
В данном контексте термины клетка, клеточная линия и клеточная культура используются взаимозаменяемо, и все указанные обозначения включают потомство. Таким образом, слова трансформанты и трансформированные клетки включают первичные клетки субъекта и полученные из них культуры независимо от числа пересеиваний. Следует также понимать, что вследствие преднамеренных или спонтанных мутаций не все потомство может быть точно идентичным по содержанию ДНК. В объем настоящего изобретения включено вариантное потомство, которое характеризуется одинаковой функци
- 4 038301 ей или биологической активностью по данным скрининга исходно трансформированной клетки. Если подразумеваются другие определения, это явным образом следует из контекста.
В данном контексте термины антигенсвязывающий фрагмент, фрагмент и фрагмент антитела используются взаимозаменяемо и относятся к любому фрагменту антитела по настоящему изобретению, который сохраняет антигенсвязывающую активность антитела. Примеры фрагментов антител включают, но не ограничиваясь только ими, одноцепочечное антитело, Fab, Fab', F(ab')2, Fv или scFv. Кроме того, использованный в данном контексте термин антитело включает как антитела, так и их антигенсвязывающие фрагменты.
Использованный в данном контексте термин нейтрализующее антитело обозначает антитело, которое может нейтрализовать, т.е. предотвращать, ингибировать, уменьшать, затруднять или нарушать способность патогена инициировать инфекцию и/или способствовать ее распространению в организме хозяина. Термины нейтрализующее антитело и антитело, которое нейтрализует или антитела, которые нейтрализуют используются в данном контексте взаимозаменяемо. Указанные антитела можно использовать в отдельности или в комбинации, в качестве профилактических или терапевтических агентов, исходя из соответствующего состава, наряду с активной вакцинацией, в качестве диагностического средства или в качестве средства продуцирования, как описано в данном контексте.
Дозы в большинстве случаев выражают в расчете на массу тела. Так, например, доза, которую выражают в виде (г, мг или другая единица)/кг (или г, мг и т.п.), обычно относится к (г, мг или другой единице) на кг (или г, мг и т.п.) массы тела, даже если термин масса тела явным образом не упоминается.
Термины связывающий и специфично связывающий и аналогичная ссылка не включают неспецифическое прилипание.
Использованный в данном контексте термин вакцина, как правило, понимают как профилактический или терапевтический материал, обеспечивающий по крайней мере один антиген, предпочтительно иммуноген. Антиген или иммуноген можно получить из любого материала, который пригоден для вакцинации. Например, антиген или иммуноген можно получить из патогена, например, из бактериальных или вирусных частиц и т.п., или из опухолевой или раковой ткани. Антиген или иммуноген стимулирует приобретенную иммунную систему организма, чтобы обеспечить приобретенный иммунный ответ. Прежде всего, термин антиген или иммуноген, как правило, относится к соединению, которое может распознавать иммунная система, предпочтительно приобретенная иммунная система, и которое способно инициировать антигенспецифичный иммунный ответ, например, при формировании антител и/или антигенспецифических T-клеток в качестве части приобретенного иммунного ответа. Как правило, антиген может представлять собой или может включать пептид или белок, который может быть презентирован с помощью главного комплекса гистосовместимости (МНС) на T-клетках.
Использованный в данном контексте термин вариант последовательности относится к любой последовательности, содержащей одно или более изменений по сравнению с эталонной последовательностью, при этом эталонная последовательность представляет собой любую из последовательностей, перечисленных в таблице последовательностей и их идентификационных номеров SEQ ID (перечень последовательностей), т.е. последовательности от SEQ ID NO: 1 до SEQ ID NO: 88. Таким образом, термин вариант последовательности включает варианты нуклеотидных последовательностей и варианты аминокислотных последовательностей. Для варианта последовательности в контексте нуклеотидной последовательности эталонной последовательностью также является нуклеотидная последовательность, в то время как для варианта последовательности в контексте аминокислотной последовательности эталонной последовательностью также является аминокислотная последовательность. Использованный в данном контексте термин вариант последовательности обозначает последовательность, которая по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей мере на 98% или 99% идентична эталонной последовательностью. Идентичность последовательности обычно рассчитывают в отношении полной эталонной последовательности (т.е. последовательность, перечисленная в настоящем документе). Процент идентичности, как указано в данном контексте, можно определить, например, с использованием компьютерного обеспечения Basic Local Alignment Search Tool (BLAST), используя параметры по умолчанию, определенные в Национальном центре биотехнологической информации (NCBI, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/, матрица Blosum 62, штраф за открытие гэпа = 11, а штраф за продление гэпа = 1).
Термин вариант последовательности в контексте нуклеотидной последовательности (нуклеиновой кислоты) содержит измененную последовательность, в которой один или более нуклеотидов эталонной последовательности удален или заменен или один или более нуклеотидов вставлены в эталонную нуклеотидную последовательность. Нуклеотиды обозначены в данном контексте стандартным однобуквенным кодом (А, С, G или Т). Вследствие вырождения генетического кода вариант последовательности нуклеотидной последовательности может приводить в результате либо к изменению соответствующей эталонной аминокислотной последовательности, т.е. к образованию варианта последовательности аминокислоты, или не приводить к этому. Варианты последовательности нуклеотидов, которые не приводят к образованию вариантов аминокислотных последовательностей, являются предпочтительными (молча
- 5 038301 щие мутации). Однако варианты нуклеотидной последовательности, приводящие к не молчащим мутациям, также включены в объем настоящего изобретения, прежде всего такие варианты нуклеотидной последовательности, которые приводят к образованию аминокислотной последовательности, которая по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей на 98 или 99% идентична эталонной аминокислотной последовательности.
Термин вариант последовательности, использованный в контексте аминокислотной последовательности, относится к измененной последовательности, в которой одна или более аминокислот удалена, заменена или вставлена по сравнению с эталонной аминокислотной последовательностью. В результате изменений такой вариант последовательности содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей мере на 98 или 99% идентична эталонной аминокислотной последовательности. Например, вариант последовательности, который содержит не более 10 изменений на 100 аминокислот эталонной последовательности, т.е. содержит любую комбинацию делеций, вставок или замен, характеризуется идентичностью, которая составляет по мере 90% по отношению к эталонной последовательности.
Несмотря на возможность замен неконсервативных аминокислот, предпочтительными являются замены консервативных аминокислот, когда замененная аминокислота характеризуется аналогичной структурой или химическими свойствами по сравнению с соответствующей аминокислотной в эталонной последовательности. Например, замены консервативных аминокислот включают замену одной алифатической или гидрофобной аминокислоты, например аланина, валина, лейцина и изолейцина, на другую, замену одной гидроксилсодержащей аминокислоты, например, серина и треонина, на другую, замену одного кислотного остатка, например, глутаминовой кислоты или аспарагиновой кислоты, на другой, замену одного амидного остатка, например, аспарагина и глутамина, на другой, замену одного ароматического остатка, например фенилаланина и тирозина, на другой, замену одного основного остатка, например, лизина, аргинина и гистидина, на другой, а также замену одной аминокислоты с малой боковой цепью, например, аланина, серина, треонина, метионина и глицина, на другую.
Вставки аминокислотной последовательности включают N- и/или С-концевую гибридизации, при этом длина цепи изменяется на величину от одного пептидного остатка до полипептидов, содержащих 100 или более остатков, а также вставки в середине последовательности одного или множества аминокислотных остатков. Примеры концевых вставок включают гибридизацию по N- или С-концевым фрагментам аминокислотной последовательности с репортерной молекулой или ферментом.
Важно отметить, что изменения в вариантах последовательностей не нарушают функциональную способность соответствующей эталонной последовательности, например, в данном случае функциональную способность последовательности антитела или его антигенсвязывающего фрагмента связываться с одним и тем же эпитопом и/или в достаточной степени нейтрализовать инфекцию ВГВ и ВГ дельта. Инструкции по определению нуклеотидных и, соответственно, аминокислотных остатков, которые можно заменять, вставлять или удалять, не нарушая указанную функциональную способность, можно найти с помощью компьютерных программ, известных в данной области техники.
Использованный в данном контексте термин последовательность нуклеиновой кислоты или аминокислотная последовательность, полученная из указанной нуклеиновой кислоты, пептида, полипептида или белка, относится к источнику нуклеиновой кислоты, пептида, полипептида или белка. Предпочтительно последовательность нуклеиновой кислоты или аминокислотная последовательность, которая получена из конкретной последовательности, характеризуется аминокислотной последовательностью, которая в значительной степени идентична последовательности или ее части, из которой она получена, при этом выражение в значительной степени идентична включает варианты последовательности, как определено выше. Предпочтительно последовательность нуклеиновой кислоты или аминокислотная последовательность, которая получена из конкретного пептида или белка, получена из соответствующего домена в конкретном пептиде или белке. При этом термин соответствующий относится, прежде всего, к одинаковой функциональной способности. Например, внеклеточный домен соответствует другому внеклеточному домену (другого белка) или трансмембранный домен соответствует другому трансмембранному домену (другого белка). Таким образом, специалист в данной области техники может идентифицировать соответствующие части пептидов, белков и нуклеиновых кислот. Аналогичным образом специалист в данной области техники обычно может идентифицировать последовательности, полученные из другой последовательности, на основе ее источника.
Предпочтительно последовательность нуклеиновой кислоты или аминокислотная последовательность, полученная из другой нуклеиновой кислоты, пептида, полипептида или белка, может быть идентична исходной нуклеиновой кислоте, пептиду, полипептиду или белку (из которого она получена). Однако последовательность нуклеиновой кислоты или аминокислотная последовательность, полученная из другой нуклеиновой кислоты, пептида, полипептида или белка, может также содержать одну или более мутаций по сравнению с исходной нуклеиновой кислотой, пептидом, полипептидом или белком (из которого она получена), прежде всего последовательность нуклеиновой кислоты или аминокислотная по
- 6 038301 следовательность, полученная из другой нуклеиновой кислоты, пептида, полипептида или белка, может представлять собой описанный выше функциональный вариант последовательности исходной нуклеиновой кислоты, пептида, полипептида или белка (из которого она получена). Например, один или более аминокислотных остатков в пептиде/белке можно заменить на другие аминокислотные остатки или можно вставить или удалить один или более аминокислотных остатков.
Использованный в данном контексте термин мутация относится к изменению последовательности нуклеиновой кислоты и/или последовательности аминокислоты по сравнению с эталонной последовательностью, например, соответствующей геномной последовательностью. Мутация, например, по сравнению с геномной последовательностью может представлять собой, например, соматическую мутацию (природного происхождения), спонтанную мутацию, индуцированную мутацию, например, индуцированную ферментами, химическими веществами или радиацией, или мутацию, полученную сайтнаправленным мутагенезом (методы молекулярной биологии для получения специфических и преднамеренных изменений в последовательности нуклеиновой кислоты и/или в аминокислотной последовательности). В связи с этим термины мутация или мутирование следует понимать как включающие также физическое осуществление мутации, например, в последовательности нуклеиновой кислоты или в аминокислотной последовательности. Мутация включает замену, делецию и вставку одного или более нуклеотидных или аминокислотных остатков, а также перестановку нескольких последовательных нуклеотидов или аминокислот. Для включения мутации в последовательность аминокислоты, мутацию предпочтительно можно осуществлять в нуклеотидной последовательности, кодирующей указанную аминокислотную последовательность, чтобы экспрессировать мутантный (рекомбинантный) полипептид. Мутацию можно осуществлять, например, при изменении, например, путем сайт-направленного мутагенеза, кодона молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующего аминокислоту, при этом получают кодон, кодирующий другую аминокислоту, или при синтезе варианта последовательности, например, на основе известной нуклеотидной последовательности молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, и разрабатывая синтез молекулы нуклеиновой кислоты, включающей нуклеотидную последовательность, кодирующую вариант полипептида, без необходимости осуществления мутации одного или более нуклеотидов в молекуле нуклеиновой кислоты.
Настоящее изобретение, помимо других объектов, основано на открытии и выделении антител, которые являются высокоэффективными для нейтрализации вирусов гепатита В и гепатита D, а также на определении эпитопов, с которыми связываются антитела по настоящему изобретению. Указанные антитела являются предпочтительными, так как для нейтрализации вируса гепатита В требуются лишь незначительные количества антител. Более того, в настоящее время не существует методов лечения гепатита D. Антитела по настоящему изобретению являются высокоэффективными для профилактики, а также для лечения или ослабления интенсивности симптомов ВГВ и ВГ дельта. Кроме того, антитела по настоящему изобретению связываются с различными, предпочтительно со всеми известными, генотипами поверхностного антигена вируса гепатита В, а также с различными, предпочтительно со всеми известными, инфекционными мутантными формами поверхностного антигена вируса гепатита В.
Антитела и их антигенсвязывающие фрагменты.
В первом объекте настоящего изобретения предлагается выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывается с областью антигенной петли HBsAg и нейтрализует инфекцию вируса гепатита В и вируса гепатита D.
Использованный в данном контексте термин антитело включает различные формы антител, включая, но не ограничиваясь только ими, полные антитела, фрагменты антител, прежде всего антигенсвязывающие фрагменты, антитела человека, химерные антитела, гуманизированные антитела, рекомбинантные антитела и генетически сконструированные антитела (вариантные или мутантные антитела) при условии, что сохраняются характерные свойства согласно настоящему изобретению. Антитела человека и моноклональные антитела являются предпочтительными, при этом прежде всего предпочтительными являются моноклональные антитела человека, прежде всего в качестве рекомбинантных моноклональных антител человека.
Антитела человека широко известны в данной области техники (van Dijk М.А. и van de Winkel J.G., Curr. Opin. Chem. Biol., 5, p. 368-374 (2001)). Антитела человека можно также продуцировать в трансгенных животных (например, мыши), которые способны при иммунизации продуцировать весь набор или отдельную часть антител человека в отсутствие эндогенного продуцирования иммуноглобулина. Перенос генетического чипа иммуноглобулина зародышевой линии человека B-клетки зародышевой линии таких мутантных мышей вызывает при антигенной стимуляции продуцирование антител человека (см., например, Jakobovits А. et al., Proc. Natl. Acad. Sci., США, 90, p. 2551-2555 (1993), Jakobovits А. et al., Nature, 362, p. 255-258 (1993), Bruggemann M. et al., Year Immunol., 7, с 3340 (1993)). Антитела человека можно также продуцировать в библиотеках фагового дисплея (Hoogenboom H.R. и Winter G., J. Mol. Biol., 227, p. 381-388 (1992), Marks J.D. et al., J. Mol. Biol., 222, p. 581-597 (1991)). Для получения моноклональных антител человека пригодны также методики, описанные в статьях Cole и др. и Boerner и др. (статья Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985) и статья Boerner Р. et al., J. Immunol., 147, p. 86-95 (1991)). Предпочтительно моноклональные антитела человека
- 7 038301 получают с использованием усовершенствованной иммортализации B-клеток вируса Эпштейна-Барра (ВЭБ), как описано в статье Traggiai E., Becker S., Subbarao K., Kolesnikova L., Uematsu Y., Gismondo M.R., Murphy B.R., Rappuoli R., Lanzavecchia A., An efficient method to make human monoclonal antibodies from memory В cells: potent neutralization of SARS coronavirus, Nat. Med., 10, 8, p. 871-875 (2004). Использованный в данном контексте термин антитело человека также включает антитела, модифицированные, например, в вариабельной области для придания свойств согласно настоящему изобретению, как описано в данном контексте. Использованный в данном контексте термин вариабельная область (вариабельная область легкой цепи (VL), вариабельная область тяжелой цепи (VH)) обозначает каждую пару легкой и тяжелой цепей, которая напрямую принимает участие в связывании антитела с антигеном.
Настоящее изобретение включает антитела любого изотипа (например, IgA, IgG, IgM, т.е. α-, γ- или μ-тяжелая цепь), но предпочтительно антитело представляет собой IgG. В пределах изотипа IgG антитела могут представлять собой IgG подкласса IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4, причем предпочтительным является IgG1. Антитела по настоящему изобретению могут содержать к- или λ-легкую цепь. HBsAgспецифичные антитела типа IgG могут преимущественно также блокировать высвобождение ВГВ и HBsAg из инфицированных клеток, что основано на антиген-независимом захвате IgG через рецепторы FcRN-IgG в гепатоциты. В связи с этим HBsAg-специфичные антитела типа IgG могут связываться внутри клеток и тем самым блокировать высвобождение вирионов ВГВ и HBsAg.
Предпочтительно антителом по настоящему изобретению или его антигенсвязывающим фрагментом является очищенное антитело, одноцепочечное антитело, Fab, Fab', F(ab')2, Fv или scFv.
Таким образом, антитела по настоящему изобретению предпочтительно могут представлять собой антитела человека, моноклональные антитела, моноклональные антитела человека, рекомбинантные антитела или очищенные антитела. В настоящем изобретении также предлагаются фрагменты антител по настоящему изобретению, прежде всего фрагменты, которые сохраняют антигенсвязывающую активность антител. Указанные фрагменты включают, но не ограничиваясь только ими, одноцепочечные антитела, Fab, Fab', F(ab')2, Fv или scFv. Хотя настоящее описание, включая пункты формулы изобретения, может в некоторых случаях относиться явным образом к антигенсвязывающему фрагменту(ам), фрагменту(ам) антител, варианту(ам) и/или производному(ым) антител, следует понимать, что термин антитело или антитело по настоящему изобретению включает все категории антител, а именно, антигенсвязывающий фрагмент(ы), фрагмент(ы) антител, вариант(ы) и производное(ые) антител.
Фрагменты антител по настоящему изобретению можно получить из антител способами, которые включают расщепление ферментами, такими как пепсин или папаин, и/или расщепление дисульфидных связей при химическом восстановлении. В другом варианте, фрагменты антител можно получить клонированием и экспрессией части последовательностей тяжелой или легкой цепей. Фрагменты антител включают Fab, Fab', F(ab')2 и Fv фрагменты. Настоящее изобретение также включает одночепочечные Fv фрагменты (scFv), полученные из тяжелой и легкой цепей антитела по настоящему изобретению. Например, настоящее изобретение включает scFv фрагмент, содержащий определяющие комплементарность области (CDR) из антитела по настоящему изобретению. Включены также мономеры и димеры тяжелой или легкой цепей, однодоменные антитела, состоящие из тяжелых цепей, а также однодоменные антитела, состоящие из легких цепей, одноцепочечные антитела, например, одноцепочечное антитело Fv, в котором вариабельные области тяжелой и легкой цепей присоединены через пептидный линкер.
Фрагменты антител по настоящему изобретению могут придавать способность к моновалентным или мультивалентным взаимодействиям и содержаться в различных структурах, как описано выше. Например, для создания трехвалентного триатела или тетравалентного тетратела можно синтезировать молекулы scFv. Молекулы scFv могут включать домен Fc области, что приводит к получению двухвалентных мини-тел. Кроме того, последовательности по настоящему изобретению могут являться компонентом мультиспецифичных молекул, в которых последовательности по настоящему изобретению направленно связываются с эпитопами по настоящему изобретению, а другие области молекул связываются с другими мишенями.
Примеры молекул включают, но не ограничиваясь только ими, биспецифические Fab2, триспецифические Fab3, биспецифические scFv и диатела (Holliger и Hudson, Nature Biotechnology, 9, p. 1126-1136 (2005)).
Антитела по настоящему изобретению можно получить в очищенной форме. Как правило, антитело присутствует в композиции, которая в основном не содержит другие полипептиды, например другие полипептиды составляют менее 90 мас.%, как правило, менее 60 мас.% и более типично менее 50 мас.% композиции.
Антитела по настоящему изобретению могут проявлять иммуногенность в организме человека и/или в организме хозяина, не относящегося к человеку (или гетерологичного), например, в организме мышей. Например, антитела могут содержать идиотоп, который проявляет иммуногенность в организме хозяина, не относящегося к человеку, но не в организме человека. Антитела по настоящему изобретению, предназначенные для применения при лечении человека, включают такие антитела, которые нельзя вы
- 8 038301 делить простым способом из организмов хозяина, такого как мыши, козы, кролики, крысы, млекопитающие, не относящиеся к отряду приматов, и т.п., и которые обычно нельзя получить гуманизацией или из ксено-мыши.
Согласно настоящему изобретению антитело и его антигенсвязывающий фрагмент связывается с областью антигенной петли HBsAg. Поверхностная оболочка вируса гепатита В содержит три белка поверхностной оболочки ВГВ (также известные как HBsAg, поверхностный антиген гепатита В): S белок (малый, также известен как S-HBsAg), M белок (средний, также известен как M-HBsAg) и L белок (крупный, также известен как L-HBsAg). S-HBsAg, M-HBsAg и L-HBsAg характеризуются одинаковым С-концевым фрагментом (также известен как S домен, содержащий 226 аминокислоты), который соответствует S белку (S-HBsAg) и который играет основную роль для сборки и инфекционности вируса. S-HBsAg, M-HBsAg и L-HBsAg синтезируются в эндоплазматическом ретикулуме (ЭР), собираются и секретируются в виде частиц через комплекс Гольджи. S домен включает четыре предсказанных трансмембранных домена (ТМ), при этом оба N-концевых участка, а также С-концевой участок S домена экспонированы в просвет частицы. Оба трансмембранных домена ТМ1 и ТМ2 необходимы для котрансляционной интеграции белка в мембране ЭР, при этом трансмембранные домены ТМ3 и ТМ4 расположены в С-концевом фрагменте третьего S домена. Область антигенной петли HBsAg расположена между предсказанными трансмембранными доменами ТМ3 и ТМ4 в составе S домена HBsAg, при этом область антигенной петли содержит аминокислоты 101-172 S домена, который включает в целом 226 аминокислоты (Salisse J. и Sureau С., Journal of Virology, 83, p. 9321-9328 (2009)). Важно отметить, что детерминанта инфекционности остается в антигенной петлевой области белков поверхностной оболочки ВГВ. Прежде всего остатки, расположенные между положениями 119 и 125 в HBsAg, содержат СХХС, который, как установлено, является наиболее важной последовательностью, требуемой для инфекционности вирусов ВГВ и ВГ дельта (Jaoude G.A., Sureau С., Journal of Virology;79, p. 10460-10466 (2005)). При ссылке в данном контексте на положения в аминокислотной последовательности S домена HBsAg, ссылка указывает на аминокислотную последовательность, показанную на SEQ ID NO: 3 (см. ниже), или на ее природные или искусственные варианты.
MENIT S GFLGPLL VLQ AGFFLLTRILTIPQ SLD S W WT SLNFLGGTT VCLGQN
SOSPTSNHSPTSCPPTCPGYRWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCPL IPGSSTTSTGPCRTCMTTAQGTSMYPSCCCTKPSDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWE WASARFSWLSLLVPFVOWFVGLSPTVWLSVIWMMWYWGPSLYSILSPFLPLLPI FFCLWVYI (SEQ ID NO: 3, аминокислоты 101-172 подчеркнуты).
Например, выражение аминокислоты 101-172 S домена относится к аминокислотным остаткам, расположенным в положениях 101-172 полипептида согласно SEQ ID NO: 3. Однако специалисту в данной области техники представляется очевидным, что в аминокислотной последовательности S домена HBsAg естественным образом могут возникать мутации или варианты (включая, но не ограничиваясь только ими, замену, делецию и/или вставку, например различные генотипы HBsAg или различные мутантные формы HBsAg, как описано в данном контексте) или их можно включать искусственным способом в аминокислотную последовательность S домена HBsAg, не оказывая влияния на его биологические свойства. В связи с этим в настоящем изобретении термин S домен HBsAg включает все указанные полипептиды, например включая полипептид согласно SEQ ID NO: 3 и его природные или искусственные мутантные формы. Кроме того, если в данном контексте описаны фрагменты последовательности S домена HBsAg (например, аминокислоты 101-172 или аминокислоты 120-130 S домена HBsAg), они включают не только соответствующие фрагменты последовательности SEQ ID NO: 3, но также и соответствующие фрагменты ее природных или искусственных мутантных форм. Например, аминокислотные остатки, расположенные в положениях 101-172 S домена HBsAg включают аминокислотные остатки, расположенные в положениях 101-172 последовательности SEQ ID NO: 3, а также соответствующие фрагменты ее мутантных форм (природных или искусственных мутантных форм). Согласно настоящему изобретению выражение соответствующие фрагменты последовательности или соответствующие фрагменты относятся к фрагментам, которые расположены в эквивалентных положениях последовательностей, которые выравнивают оптимальным образом, а именно, для получения максимального процента идентичности.
М белок (M-HBsAg) соответствует S белку, удлиненному по N-концевому домену на 55 аминокислотных остатков, называемому пре-S2. L белок (L-HBsAg) соответствует М белку, удлиненному в N-концевом домене на 108 аминокислотных остатков, называемому пре-S1 (генотип D). Пре-S1 и преS2 домены L белка могут присутствовать либо на внутренней стороне вирусных частиц (на цитоплазматической стороне ЭР), играя основную роль в сборке вируса, либо на внешней стороне (на стороне просвета ЭР), доступные для взаимодействия с клетками-мишенями и необходимые для вирусной инфекционности. Более того, поверхностные белки ВГВ (HBsAg) не только включены в поверхностные оболочки вирионов, но также и спонтанно распространяются из мембран промежуточных отделов ЭР-Гольджи, образуя пустые субвирусные частицы (SVP), которые высвобождаются из клетки при секреции.
- 9 038301
Поскольку все три белка поверхностной оболочки ВГВ: S-HBsAg, M-HBsAg и L-HBsAg, содержат S домен, все три белка поверхностной оболочки ВГВ: S-HBsAg, M-HBsAg и L-HBsAg, содержат также антигенную петлевую область. Соответственно, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, которые нейтрализуют ВГВ и связываются с областью антигенной петли HBsAg, связываются со всеми тремя белками поверхностной оболочки ВГВ: S-HBsAg, M-HBsAg и L-HBsAg.
Кроме того, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению нейтрализует инфекцию вируса гепатита В и инфекцию вируса гепатита D. Другими словами, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению снижает инфекционность вируса гепатита В и вируса гепатита D.
Специалисту в данной области техники известны различные стандартные методы анализа на нейтрализацию для изучения и количественного определения инфекционности вируса (или нейтрализации) в лабораторных условиях. В ходе анализа на нейтрализацию вирусы животных, как правило, размножают B-клетках и/или клеточных линиях. В контексте настоящего изобретения анализ на нейтрализацию является предпочтительным, при этом культивированные клетки инкубируют в присутствии фиксированного количества ВГВ или ВГ дельта в присутствии (или в отсутствие) исследуемого антитела. В качестве считываемой информации можно использовать уровни поверхностного антигена гепатита В (HBsAg) или антигена е гепатита В (HBeAg), секретируемых в супернатант клеточной культуры, и/или можно использовать окрашивание HBcAg. Например, в случае ВГ дельта можно использовать иммунофлуоресцентное окрашивание дельта антигена.
В предпочтительном варианте анализа на нейтрализацию ВГВ культивированные клетки, например клетки HepaRG, прежде всего дифференцированные клетки HepaRG, инкубируют в присутствии фиксированного количества ВГВ в присутствии или в отсутствие исследуемого антитела, например, в течение 16 ч при 37°С. Указанную инкубацию предпочтительно проводят в среде (например, дополненной 4% ПЭГ 8000). После инкубации клетки можно промывать и затем культивировать. Для измерения инфекционности вируса можно определять уровни поверхностного антигена гепатита В (HBsAg) и антигена е гепатита В (HBeAg), секретированных в культуральный супернатант, например, в дни 7-11 после инфицирования методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА). Кроме того, можно использовать окрашивание HBeAg методом иммунофлуоресцентного анализа. В предпочтительном варианте анализа на нейтрализацию ВГ дельта можно использовать тот же метод анализа, как и для ВГВ, с тем различием, что сыворотки от носителей ВГ дельта можно использовать в качестве посевного материала инфекционного вируса ВГ дельта на дифференцированных клетках HepaRg (вместо ВГВ). Для детектирования в качестве считываемой информации можно использовать иммунофлуоресцентное окрашивание дельта антигена.
Антитело и антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению проявляют высокую нейтрализующую активность. Концентрация антитела по настоящему изобретению, требуемая для 50% нейтрализации вируса гепатита В (ВГВ) и вируса гепатита дельта (ВГ дельта), составляет, например, приблизительно 10 мкг/мл или менее. Предпочтительно концентрация антитела по настоящему изобретению, требуемая для 50% нейтрализации ВГВ и ВГ дельта, составляет приблизительно 5 мкг/мл, более предпочтительно концентрация антитела по настоящему изобретению, требуемая для 50% нейтрализации ВГВ и ВГ дельта, составляет приблизительно 1 мкг/мл, еще более предпочтительно концентрация антитела по настоящему изобретению, требуемая для 50% нейтрализации ВГВ и ВГ дельта, составляет приблизительно 750 нг/мл. Наиболее предпочтительно концентрация антитела по настоящему изобретению, требуемая для 50% нейтрализации ВГВ и ВГ дельта, составляет 500 нг/мл или менее, например 450, 400, 350, 300, 250, 200, 175, 150, 125, 100, 90, 80, 70, 60 нг/мл или приблизительно 50 нг/мл или менее. Указанное означает, что для 50% нейтрализации ВГВ и ВГ дельта необходимы лишь чрезвычайно низкие концентрации антитела. Специфичность и эффективность можно измерять с использованием стандартных методов анализа, известных специалисту в данной области техники.
Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, которое эффективно нейтрализует оба вируса - ВГВ и ВГ дельта, можно использовать для предотвращения и лечения гепатита В и гепатита D. В данном контексте следует отметить, что инфицирование ВГ дельта, как правило, происходит одновременно или после инфицирования ВГВ (инокуляция ВГ дельта в отсутствии ВГВ не приводит к развитию гепатита D, так как для репликации ВГ дельта необходимо наличие ВГВ), и гепатит D, как правило, наблюдается у носителей хронического ВГВ.
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению ускоряет клиренс HBsAg и ВГВ. Прежде всего антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению ускоряют клиренс как ВГВ, так и субвирусных частиц вируса гепатита В (SVP). Клиренс HBsAg или субвирусных частиц можно оценивать при измерении уровня HBsAg, например, в образце крови, например, взятой у пациента с диагнозом гепатит В. Аналогичным образом, клиренс ВГ дельта можно оценивать при измерении уровня ВГВ, например, в образце крови, например, взятой у пациента с диагнозом гепатит В.
В сыворотках пациентов, инфицированных ВГВ, кроме инфекционных частиц (ВГВ), как правило,
- 10 038301 присутствует избыток (как правило, от 1000- до 100000-кратного) пустых субвирусных частиц (SVP), состоящих только из белков поверхностной оболочки ВГВ (HBsAg) в форме относительно более мелких сфер и волокон различной длины. Установлено, что субвирусные частицы значительно повышают внутриклеточную репликацию вируса и генную экспрессию ВГВ (Bruns М. et al., J. Virol., 72, 2, p. 1462-1468 (1998)). Это также является важным в контексте инфекционности сывороток, содержащих ВГВ, так как инфекционность зависит не только от числа вирусов, но также и от числа субвирусных частиц SVP (Bruns М. et al., J. Virol., 72, 2, p. 1462-1468 (1998)). Более того, избыток субвирусных частиц может служить в качестве ловушки за счет абсорбции нейтрализующих антител и таким образом замедлять элиминацию инфекции. Таким образом, удаление поверхностного антигена гепатита В (HBsAg), как правило, рассматривают в качестве идеального конечного параметра лечения и ближайшего результата для лечения хронического гепатита В (ХГВ).
Соответственно, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, которое предпочтительно ускоряет клиренс HBsAg, прежде всего клиренс субвирусных частиц вируса гепатита В и ВГВ, обеспечивают усовершенствованное лечение гепатита В, прежде всего в контексте хронического гепатита В. Таким образом, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению может проявлять свои нейтрализующие свойства еще более эффективно, так как меньшее количество антител абсорбируется на субвирусных частицах SVP, действующих в качестве ловушки. Кроме того, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, которое предпочтительно ускоряет клиренс субвирусных частиц вируса гепатита В, снижает инфекционность сывороток, содержащих ВГВ.
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению содержит Fc фрагмент. Более предпочтительно используют Fc фрагмент человека, например, полученный из IgG1, IgG2, IgG3 и/или IgG4 человека, при этом прежде всего предпочтителен IgG1 человека.
Использованный в данном контексте термин Fc фрагмент относится к последовательности, полученной из части тяжелой цепи иммуноглобулина, начиная непосредственно с шарнирной области и далее до участка расщепления папаином (например, остаток 216 в нативном IgG и первый остаток консервативной области тяжелой цепи в положении 114) и затем до С-концевого участка тяжелой цепи иммуноглобулина. Соответственно, Fc фрагмент может представлять собой полноразмерный Fc фрагмент или его часть (например, домен). Полноразмерный Fc фрагмент включает по крайней мере шарнирный домен, СН2 домен и СН3 домен (например, положения аминокислот 216-446 согласно ЕС-нумерации). В некоторых случаях к С-концевому остатку Fc фрагмента присоединен дополнительный остаток лизина (K), но в большинстве случаев он отщепляется от зрелого антитела. Нумерацию каждого аминокислотного остатка в Fc фрагменте осуществляют согласно принятой в данной области системы ЕС-нумерации по Кабату, см., например, статью Kabat et al., в сборнике Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Dept. Health and Human Services, 1983 и 1987.
Предпочтительно в контексте настоящего изобретения Fc фрагмент включает по крайней мере один из следующих элементов: шарнирный домен (например, верхнюю, среднюю и/или нижнюю шарнирную область), СН2 домен, СН3 домен или их вариант, часть или фрагмент. В предпочтительных вариантах Fc фрагмент включает по крайней мере шарнирный домен, СН2 домен или СН3 домен. Более предпочтительно Fc фрагментом является полноразмерный Fc фрагмент. Fc фрагмент может также содержать одну или более аминокислотных вставок, делеций или замен по сравнению с нативным Fc фрагментом. Например, можно удалить по крайней мере один из следующих доменов: шарнирный домен, СН2 домен или СН3 домен (или их часть). Например, Fc фрагмент может включать следующие домены или состоять из них: (i) шарнирный домен (или его часть), присоединенный к СН2 домену (или к его части), (ii) шарнирный домен (или его часть), присоединенный к СН3 домену (или к его части), (iii) CH2 домен (или его часть), присоединенный к СН3 домену (или к его части), (iv) шарнирный домен (или его часть), (v) CH2 домен (или его часть) или (vi) СН3 домен или его часть.
Специалисту в данной области техники представляется очевидным, что Fc фрагмент можно модифицировать таким образом, чтобы его аминокислотная последовательность отличалась от аминокислотной последовательности полноразмерного Fc фрагмента молекулы нативного иммуноглобулина, и чтобы при этом сохранялась по крайней мере одна требуемая функция, характерная для нативного Fc фрагмента. Такие функции включают связывание с Fc рецептором (FcR), модуляцию периода полураспада антитела, функцию антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC), связывание с А белком, связывание с G белком и связывание с комплементом. Специалистам в данной области техники известны части нативных Fc фрагментов, которые ответственны за проявление указанных функций и/или играют важную роль при проявлении указанных функций.
Например, для активации каскада комплемента C1q связывается по крайней мере с двумя молекулами IgG1 или с одной молекулой IgM, присоединенной к антигенной мишени (Ward E.S. и Ghetie V., Ther. Immunol., 2, p. 77-94 (1995)). В статье Burton D.R. (Mol. Immunol., 22, p. 161-206 (1985)) описано, что область тяжелой цепи, включающая аминокислотные остатки 318 -337, принимает участие в фиксации комплемента. В статье Duncan A.R. и Winter G. (Nature, 332, p. 738-740 (1988)) с использованием сайт-направленного мутагенеза показано, что Glu318, Lys320 и Lys322 образуют участок связывания
- 11 038301
C1q. Роль остатков Glu318, Lys320 и Lys 322 в связывании C1q подтверждена способностью короткого синтетического пептида, содержащего указанные остатки, ингибировать опосредованный комплементом лизис.
Например, связывание FcR можно опосредовать при взаимодействии Fc фрагмента (антитела) с Fc рецепторами (FcR), которые представляют собой специфические поверхностные рецепторы, расположенные на гемопоэтических клетках. Fc рецепторы принадлежат к суперсемейству иммуноглобулинов, и было показано, что они опосредуют как удаление покрытых антигеном патогенов за счет фагоцитоза иммунных комплексов, так и лизис эритроцитов и различных других клеточных мишеней (например, опухолевых клеток), покрытых соответствующим антителом, за счет антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC, Van de Winkel J.G. и Andersonn C.L., J. Leukoc. Biol., 49, p. 511-524 (1991)). FcR рецепторы определяют по их специфичности в отношении классов иммуноглобулинов, при этом Fc рецепторы для антител IgG обозначают как FcyR, рецепторы для IgE обозначают как FcεR, рецепторы для IgA обозначают как FcaR и т.п., а неонатальные Fc рецепторы обозначают как FcRn. Связывание Fc рецепторов описано, например, в статье Ravetch J.V. и Kinet J.P., Annu. Rev. Immunol., 9, p. 457-492 (1991), в статье Capel P.J. et al., Immunomethods, 4, p. 25-34 (1994), в статье de Haas M. et al., J. Lab. Clin. Med., 126, p. 330-341 (1995), а также в статье Gessner J.E. et al., Ann. Hematol., 76, p. 231-248 (1998).
Сшивка рецепторов Fc доменом антител нативного IgG (FcyR) запускает широкий спектр эффекторных функций, включая фагоцитоз, антителозависимую клеточную цитотоксичность и высвобождение воспалительных медиаторов, а также клиренс иммунных комплексов и регуляцию продуцирования антител. В связи с этим Fc фрагменты, обеспечивающие сшивку рецепторов (FcyR), являются предпочтительными. Охарактеризованы три класса FcyR человека, а именно: (i) FcyRI (CD64), который связывается с мономерным IgG с высокой аффинностью и экспрессируется на макрофагах, моноцитах, нейтрофилах и эозинофилах, (ii) FcyRII (CD32), который связывается с комплексным IgG с аффинностью от средней до низкой, широко экспрессируется прежде всего на лейкоцитах и, как известно, играет ведущую роль в антитело-опосредованном иммунитете, и который можно разделить на три типа FcyRIIA, FcyRIIB и FcyRIIC, которые выполняют различные функции в иммунной системе, но связываются с Fc IgG с аналогичной низкой аффинностью, при этом эктодомены указанных рецепторов являются высоко гомологичными, и (iii) FcyRIII (CD16), который связывается с IgG с аффинностью от средней до низкой и существует в виде двух типов: FcyRIIIA, обнаруживаемый на NK клетках, макрофагах, эозинофилах и некоторых моноцитах и T-клетках, а также опосредующий ADCC, и FcyRIIIB, который интенсивно экспрессируется на нейтрофилах. FcyRIIA обнаружен на многих клетках, принимает участие в процессе гибели клеток (например, макрофаги, моноциты, нейтрофилы) и, по-видимому, способен активировать процесс гибели клеток. FcyRIIB, по-видимому, играет роль в процессах ингибирования, и обнаружен на Bклетках, макрофагах, а также на тучных клетках и эозинофилах. Важно, что 75% всего FcyRIIB обнаружено в печени (Ganesan L.P. et al., FcyRIIB on liver sinusoidal endothelium clears small immune complexes, Journal of Immunology, 189, p. 4981-4988 (2012)). FcyRIIB экспрессируется в избыточных количествах на синусоидальных эндотелиальных клетках печени (LSEC) и купферовских клетках в печени, при этом LSEC представляют собой главный участок клиренса малых иммунных комплексов (Ganesan L.P. et al., FcyRIIB on liver sinusoidal endothelium clears small immune complexes, Journal of Immunology, 189, p. 49814988 (2012)).
Соответственно, в настоящем изобретении предпочтительны такие антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые способны связываться с FcyRIIB, например антитела, включающие Fc фрагмент для связывания с FcyRIIB, прежде всего Fc область, такую как, например, антитела типа IgG. Более того, для повышения связывания с FcyRIIB можно сконструировать Fc фрагмент за счет включения мутаций S267E и L328F, как описано в статье Chu S.Y. et al., Inhibition of В cell receptor-mediated activation of primary human В cells by coengagement of CD19 and FcgammaRIIb with Fc-engineered antibodies, Molecular Immunology, 45, p. 3926-3933 (2008). Таким образом, можно ускорить клиренс иммунных комплексов (Chu S. et al., Accelerated Clearance of IgE In Chimpanzees Is Mediated By Xmab7195, An Fc-Engineered Antibody With Enhanced Affinity For Inhibitory Receptor FcyRIIB, Am. J. Respir. Crit., American. Thoracic. Society International Conference, Abstracts (2014)). Соответственно, в контексте настоящего изобретения предпочтительными являются такие антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, которые включают сконструированный Fc фрагмент с мутациями S267E и L328F, прежде всего, как описано в статье Chu S.Y. et al., Inhibition of В cell receptor-mediated activation of primary human В cells by coengagement of CD19 and FcgammaRIIb with Fc-engineered antibodies, Molecular Immunology, 45, p. 3926-3933 (2008).
На В-клетках функция такого фрагмента, по-видимому, заключается в подавлении дальнейшего продуцирования иммуноглобулинов и переключения изотипа, например, на класс IgE. На макрофагах действие FcyRIIB заключается в ингибировании фагоцитоза, которое опосредуется через FcyRIIA. На эозинофилах и тучных клетках b-форма может способствовать подавлению активации указанных клеток за счет связывания IgE с его отдельным рецептором.
В отношении связывания FcyRI, модификация нативного IgG по меньшей мере в одном из участков
- 12 038301
E233-G236, Р238, D265, N297, А327 и Р329 снижает связывание с FcyRI. Остатки IgG2 в положениях 233236, замененные в IgG1 и IgG4, снижают в 10 раз связывание с FcyRI и подавляют ответную реакцию моноцитов человека на антитело-сенсибилизированные эритроциты (Armour K.L. et al., Eur. J. Immunol., 29, p. 2613-2624 (1999)). В отношении связывания FcyRII, сниженное связывание в случае FcyRIIA обнаружено, например, для IgG, содержащего мутации по крайней мере в одном из участков E233-G236, Р238, D265, N297, А327, Р329, D270, Q295, А327, R292 и K414. В отношении связывания FcyRIII, сниженное связывание с FcyRIIIA обнаружено, например, для мутации по крайней мере в одном из участков E233-G236, Р238, D265, N297, А327, Р329, D270, Q295, А327, S239, Е269, Е293, Y296, V303, А327, K338 и D376. Картирование участков связывания Fc рецепторов на IgG1 человека, упомянутые выше участки мутаций, а также способы измерения связывания FcyRI и FcyRIIA описаны в статье Shields R.L. et al., J. Biol. Chem., 276, p. 6591 -6604 (2001).
В отношении связывания ключевого FcyRII, две Fc области нативного IgG, по-видимому, являются определяющими для взаимодействий фрагментов FcyRIIs с различными IgG, а именно (i) нижний шарнирный участок Fc IgG, прежде всего аминокислотные остатки L, L, G, G (234-237, ЕС-нумерация), и (ii) область, соседняя с СН2 доменом в составе Fc IgG, прежде всего петля и цепи в верхнем СН2 домене рядом с нижней шарнирной областью, например в области Р331 (Wines B.D. et al., J. Immunol., 164, p. 5313-5318 (2000)). Более того, FcyRI, по-видимому, связывается с тем же участком на Fc IgG, в то время как FcRn и А белок связываются с другим участком на Fc IgG, который, по-видимому, расположен на поверхности раздела доменов СН2-СН3 (Wines B.D. et al., J. Immunol., 164, p. 5313-5318 (2000)).
Например, Fc фрагмент может содержать по крайней мере часть Fc фрагмента или состоять по крайней мере из части Fc фрагмента, которая, как известно в данной области техники, необходима для связывания с FcRn или для увеличения периода полураспада. В другом варианте или дополнительно, Fc фрагмент антитела по настоящему изобретению включает по крайней мере часть известного в данной области техники фрагмента, который требуется для связывания А белка, и/или Fc фрагмент антитела по настоящему изобретению включает по крайней мере часть молекулы Fc, которая, как известно в данной области техники, требуется для связывания G белка. Предпочтительно сохраняемой функцией является клиренс HBsAg и ВГВ, который, как полагают, опосредуется при связывании с FcyR. Соответственно, предпочтительный Fc фрагмент включает по крайней мере часть известного в данной области техники фрагмента, который требуется для связывания с FcyR. Как указано выше, предпочтительный Fc фрагмент может также содержать по крайней мере (i) нижний шарнирный участок Fc нативного IgG, прежде всего аминокислотные остатки L, L, G, G (234-237, ЕС-нумерация), и (ii) соседнюю область СН2 домена Fc нативного IgG, прежде всего петлю и цепи в верхнем СН2 домене, рядом с нижней шарнирной областью, например, в области Р331, например, область, содержащая по крайней мере 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 последовательно расположенных аминокислотных остатков в верхнем СН2 домене Fc нативного IgG вблизи Р331, например, между аминокислотами 320 и 340 (ЕС-нумерация) Fc нативного IgG.
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению включает Fc область. Использованный в данном контексте термин Fc область относится к части иммуноглобулина, образованной двумя или более Fc фрагментами тяжелых цепей антитела. Например, Fc область может быть мономерной или одноцепочечной Fc областью (т.е. scFc область). Одноцепочечные Fc области включают Fc фрагменты, связанные в одну полипептидную цепь (например, кодируемые одной непрерывной нуклеотидной последовательностью). Примеры scFc областей описаны в заявке WO 2008/143954 А2. Предпочтительно Fc областью является димерная Fc область. Термин димерная Fc область или dcFc относится к димеру, образованному Fc фрагментами двух отдельных тяжелых цепей иммуноглобулина. Димерная Fc область может представлять собой гомодимер, состоящий из двух идентичных Fc фрагментов (например, Fc область нативного иммуноглобулина), или гетеродимер, состоящий из двух неидентичных Fc фрагментов.
Fc фрагменты в составе Fc области могут относиться к одному и тому же или к различным классам и/или подклассам. Например, Fc фрагменты можно получить из иммуноглобулина (например, иммуноглобулин человека) подклассов IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. Предпочтительно Fc фрагменты Fc области относятся к одному классу или подклассу. Однако Fc область (или один или более Fc фрагментов Fc области) также может представлять собой химерную область, при этом химерная Fc область включает Fc фрагменты, полученные из иммуноглобулинов различных классов и/или подклассов. Например, по крайней мере два Fc фрагмента димерной или одноцепочечной Fc области можно получить из иммуноглобулинов различных классов и/или подклассов. Кроме того, или в другом варианте, химерные Fc области могут содержать один или более химерных Fc фрагментов. Например, химерная Fc область или фрагмент может содержать одну или более частей, полученных из иммуноглобулина первого подкласса (например, подклассы IgG1, IgG2 или IgG3), в то время как остальную часть Fc области или фрагмента можно получить из другого подкласса. Например, Fc область или фрагмент полипептида Fc может содержать СН2 и/или СН3 домен, полученный из иммуноглобулина первого подкласса (например, подкласс IgG1, IgG2 или IgG4), и шарнирную область, полученную из иммуноглобулина второго подкласса (например, подкласс IgG3). Например, Fc область или Fc фрагмент может включать шарнирный домен и/или СН2 до
- 13 038301 мен, полученные из иммуноглобулина первого подкласса (например, подкласс IgG4), и СН3 домен, полученный из иммуноглобулина второго подкласса (например, подкласс IgG1, IgG2 или IgG3). Например, химерная Fc область может включать Fc фрагмент (например, полноразмерный Fc фрагмент), полученный из иммуноглобулина первого подкласса (например, подкласс IgG4) и Fc фрагмент, полученный из иммуноглобулина второго подкласса (например, подкласс IgG1, IgG2 или IgG3). Например, Fc область или Fc фрагмент может содержать СН2 домен, полученный из иммуноглобулина IgG4, и СН3 домен, полученный из иммуноглобулина IgG1. Например, Fc область или Fc фрагмент может содержать СН1 домен и СН2 домен, полученные из молекулы IgG4, и СН3 домен, полученный из молекулы IgG1. Например, Fc область или Fc фрагмент может содержать часть СН2 домена, полученную из конкретного подкласса антитела, например, положения 292-340 в СН2 домене (ЕС-нумерация). Например, Fc область или Fc фрагмент могут содержать аминокислоты в положениях 292-340 СН2 домена, полученные из фрагмента IgG4, и остальную часть СН2 домена, полученную из фрагмента IgG1 (в другом варианте положения 292-340 СН2 домена можно получить из фрагмента IgG1, a остальную часть СН2 домена можно получить из фрагмента IgG4).
Более того, Fc область или Fc фрагмент могут (дополнительно или в другом варианте), например, содержать химерную шарнирную область. Например, химерную шарнирную область можно получить, например, частично из молекулы IgG1, IgG2 или IgG4 (например, верхняя и нижняя средняя шарнирная последовательность) и частично из молекулы IgG3 (например, средняя шарнирная последовательность). В другом примере Fc область или Fc фрагмент могут содержать химерную шарнирную область, полученную частично из молекулы IgG1 и частично из молекулы IgG4. В еще одном примере химерная шарнирная область может содержать верхний и нижний шарнирные домены, полученные из молекулы IgG4, и средний шарнирный домен, полученный из молекулы IgG1. Такой шарнирный домен можно получить, например, при замене пролина (Ser228Pro) в положениях 228 (ЕС-нумерация) в среднем шарнирном домене шарнирной области IgG4. В другом варианте химерная шарнирная область может включать аминокислоты в положениях 233-236 (ЕС-нумерация), полученные из антитела IgG2, и/или мутацию Ser228Pro, при этом остальную часть аминокислот шарнирной области получают из антитела IgG4 (например, химерная шарнирная область ESKYGPPCPPCPAPPVAGP). Другие химерные шарнирные области, которые можно использовать в Fc фрагменте антитела по настоящему изобретению, описаны в патенте US 2005/0163783 А1.
В настоящем изобретении Fc фрагмент или Fc область предпочтительно включают аминокислотную последовательность, полученную из последовательности иммуноглобулина человека (например, из Fc области или Fc фрагмента молекулы IgG человека), или состоит из нее. Однако полипептиды могут содержать одну или более аминокислот из других видов млекопитающих. Например, в полипептиды по настоящему изобретению можно включить Fc фрагмент или его участок связывания из приматов. В другом варианте в Fc фрагменте или Fc области могут присутствовать одна или более аминокислот из мыши.
Предпочтительно антитело по настоящему изобретению включает, прежде всего дополнительно к Fc фрагменту, как описано выше, другие части, полученные из консервативной области, прежде всего, из консервативной области IgG, предпочтительно из консервативной области IgG1, более предпочтительно из консервативной области IgG1 человека. Более предпочтительно антитело по настоящему изобретению включает, прежде всего дополнительно к Fc фрагменту, как описано выше, все другие части консервативных областей, прежде всего все другие части консервативных областей IgG, предпочтительно все другие части консервативных областей IgG1, более предпочтительно все другие части консервативных областей IgG1 человека.
Как описано выше, наиболее предпочтительное антитело по настоящему изобретению включает Fc область (полноразмерную), полученную из IgG1 человека. Более предпочтительно антитело по настоящему изобретению включает, прежде всего дополнительно к Fc области (полноразмерной), полученной из IgG1 человека, также все другие части консервативных областей IgG, предпочтительно все другие части консервативных областей IgG1, более предпочтительно все другие части консервативных областей IgG1 человека.
Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению также предпочтительно связываются с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 генотипами HBsAg: А, В, С, D, E, F, G, Н, I и J. Примеры различных генотипов HBsAg включают следующие последовательности: код доступа базы данных GenBank J02203 (HBV-D, ayw3), код доступа базы данных GenBank J899792.1 (HBV-D, adw2), код доступа базы данных GenBank AM282986 (HBV-A), код доступа базы данных GenBank D23678 (HBV-B1 Japan), код доступа базы данных GenBank AB117758 (HBV-C1 Cambodia), код доступа базы данных GenBank АВ205192 (HBV-E Ghana), код доступа базы данных GenBank X69798 (HBV-F4 Brazil), код доступа базы данных GenBank AF160501 (HBV-G USA), код доступа базы данных GenBank AY090454 (HBV-H Nicaragua), код доступа базы данных GenBank AF241409 (HBV-I Vietnam) и код доступа базы данных GenBank АВ486012 (HBV-J Borneo). Аминокислотные последовательности антигенной петлевой области S домена различных генотипов HBsAg указаны в табл. 1 (SEQ ID NO: 5-15).
Более предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобрете
- 14 038301 нию связываются по крайней мере с 6, еще более предпочтительно по крайней мере с 8 и, прежде всего, предпочтительно по крайней мере со всеми 10 генотипами HBsAg: А, В, С, D, E, F, G, Н, I и J. Согласно геномной последовательности ВГВ дифференцирован на множество генотипов. В настоящее время определены восемь известных типов генома ВГВ (А-Н). Кроме того, идентифицированы также два новых генотипа I и J (Sunbul М., World J. Gastroenterol., 20, 18, p. 5427-5434 (2014)). Известно, что генотип влияет на прогрессирование заболевания, и были заявлены различные ответные реакции на противовирусное лечение в зависимости от генотипа. Например, генотип А характеризуется тенденцией к хроническому течению заболевания, в то время как при генотипе С часто встречаются вирусные мутации. Для генотипа D характерно как хроническое течение заболевания, так и вирусные мутации. Более того, генотипы ВГВ распространены во всем мире дифференцировано (Sunbul M., World J. Gastroenterol., 20, 18, p. 5427-5434 (2014)). Получение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению, которые предпочтительно связываются по крайней мере с 6, предпочтительно по крайней мере с 8, более предпочтительно со всеми 10 генотипами HBsAg - А, В, С, D, E, F, G, Н, I и J, позволяет получить антитело, которое связывается с различными генотипами в широком диапазоне.
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению связывается с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или с 18 мутантными формами HBsAg, содержащими мутации в антигенной петлевой области:
HBsAg Y100C/P120T, HBsAg Р120Т, HBsAg
P120T/S143L, HBsAg C121S, HBsAg R122D, HBsAg R122I, HBsAg T123N, HBsAg
Q129H, HBsAg Q129L, HBsAg M133H, HBsAg M133L, HBsAg M133T, HBsAg
K141E, HBsAg P142S, HBsAg S143K, HBsAg D144A, HBsAg G145R и HBsAg
N146A.
Указанные мутантные формы являются природными мутантными формами на основе S домена HBsAg генотипа D, код доступа базы данных Genbank FJ899792 (SEQ ID NO: 4), где указаны мутантный(ые) аминокислотный(ые) остаток(ки). SEQ ID NO: 4:
MENVTSGFLGPLLVLQAGFFLLTRILTIPQSLDSWWTSLNFLGGTTVCLGQ
NSOSPTSNHSPTSCPPTCPGYRWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCP LIPGSSTTGTGPCRTCTTPAQGTSMYPSCCCTKPSDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWE WASARFSWLSLLVPFVQWFVGLSPTVWLSVIWMMWYWGPSLYSTLSPFLPLLP IFFCLWVYI (область антигенной петли, т.е. аминокислоты 101-172, подчеркнута).
Аминокислотные последовательности антигенной петлевой области S домена различных мутантных форм HBsAg показаны в табл. 1 (SEQ ID NO: 16-33).
Более предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению связываются по крайней мере с 12, еще более предпочтительно по крайней мере с 15 и, прежде всего, предпочтительно со всеми 18 инфекционными мутантными формами HBsAg, содержащими мутации в антигенной петлевой области:
HBsAg Y100C/P120T, HBsAg Р120Т, HBsAg
P120T/S143L, HBsAg C121S, HBsAg R122D, HBsAg R122I, HBsAg T123N, HBsAg
Q129H, HBsAg Q129L, HBsAg M133H, HBsAg M133L, HBsAg M133T, HBsAg K141E, HBsAg P142S, HBsAg S143K, HBsAg D144A, HBsAg G145R и HBsAg N146A.
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению связываются с эпитопом, содержащим по крайней мере одну, предпочтительно по крайней мере две, более предпочтительно по крайней мере три аминокислоты, еще более предпочтительно по крайней мере четыре аминокислоты антигенной петлевой области HBsAg, при этом по крайней мере две, предпочтительно по крайней мере три, более предпочтительно по крайней мере четыре аминокислоты выбирают из аминокислот 115-133 S домена HBsAg, предпочтительно из аминокислот 120-133 S домена HBsAg, более предпочтительно из аминокислот 120-130 S домена HBsAg. Следует отметить, что положения аминокислот (например, 115-133, 120-133, 120-130) относятся к S домену HBsAg, как описано выше, который присутствует во всех трех белках поверхностной оболочки ВГВ: S-HBsAg, M-HBsAg и L-HBsAg, причем S-HBsAg, как правило, соответствует S домену HBsAg.
Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, прежде всего связывается с эпитопом в антигенной петлевой области HBsAg, при этом эпитоп, как правило, состоит из одной или более аминокислот, расположенных в положениях, выбранных из положений аминокислот 115-133, предпочтительно выбранных из положений аминокислот 120-133, более предпочтительно выбранных из положений 120-130 S домена HBsAg.
Использованный в данном контексте термин образованный в отношении эпитопа означает, что эпитоп, с которым связывается антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобре
- 15 038301 тению, может быть линейным (непрерывным) или конформационным (прерывистым). Линейный или непрерывный эпитоп представляет собой эпитоп, который антитела распознают по его линейной последовательности аминокислот, или первичной структуре. И наоборот, конформационный эпитоп характеризуется специфической трехмерной формой и структурой белка. Соответственно, если эпитоп является линейным эпитопом и включает более одной аминокислоты, расположенной в положениях, выбранных из положений аминокислот 115-133, предпочтительно выбранных из положений аминокислот 120-133 S домена HBsAg, то аминокислоты, входящие в состав эпитопа, как правило, занимают соседние положения первичной структуры (т.е. последовательно расположенные аминокислоты в аминокислотной последовательности). В случае конформационного эпитопа (3D-структура), наоборот, аминокислотная последовательность, как правило, образует 3D-структуру в виде эпитопа, и таким образом аминокислоты, образующие эпитоп (или аминокислоты включенные в эпитоп), могут располагаться или не располагаться в соседних положениях первичной структуры (т.е. могут представлять собой или не представлять собой последовательно расположенные аминокислоты в аминокислотной последовательности).
Предпочтительно эпитоп, с которым связывается антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, образован только аминокислотой(ами), выбранными из аминокислот, расположенных в положениях 115-133, предпочтительно выбранными из аминокислот, расположенных в положениях 120-133, более предпочтительно выбранными из аминокислот, расположенных в положениях 120-130 S домена HBsAg. Другими словами, для образования эпитопа, с которым связывается антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, предпочтительно не требуются аминокислоты (дополнительные), расположенные за пределами положений 115-133, предпочтительно за пределами положений 120-133, более предпочтительно за пределами положений 120-130.
Предпочтительно эпитоп в составе антигенной петлевой области HBsAg, с которым связывается антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, образован двумя или более аминокислотами, расположенными в положениях, выбранных из положений аминокислот 115-133, предпочтительно выбранных из положений аминокислот 120-133, более предпочтительно выбранных из положений аминокислот 120-130 S домена HBsAg. Более предпочтительно эпитоп в составе антигенной петлевой области HBsAg, с которым связывается антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, образован тремя или более аминокислотами, расположенными в положениях, выбранных из положений аминокислот 115-133, предпочтительно выбранных из положений аминокислот 120-133, более предпочтительно выбранных из положений аминокислот 120-130 S домена HBsAg. Еще более предпочтительно эпитоп в составе антигенной петлевой области HBsAg, с которым связывается антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, образован четырьмя или более аминокислотами, расположенными в положениях, выбранных из положений аминокислот 115133, предпочтительно выбранных из положений аминокислот 120-133, более предпочтительно выбранных из положений аминокислот 120-130 S домена HBsAg. Другими словами, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению связывается предпочтительно по крайней мере с одним, предпочтительно по крайней мере с двумя, более предпочтительно по крайней мере с тремя, еще более предпочтительно по крайней мере с четырьмя аминокислотами антигенной петлевой области HBsAg, выбранными из аминокислот 115-133 S домена HBsAg, предпочтительно из аминокислот 120133 S домена HBsAg, более предпочтительно выбранными из аминокислот 120-130 S домена HBsAg.
Более предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению связывается с эпитопом, включающим по крайней мере два, предпочтительно по крайней мере три, более предпочтительно по крайней мере четыре аминокислоты антигенной петлевой области HBsAg, при этом по крайней мере две, предпочтительно по крайней мере три, более предпочтительно по крайней мере четыре аминокислоты выбирают из аминокислот 120-133, предпочтительно из аминокислот 120-130 S домена HBsAg, и при этом по крайней мере две, предпочтительно по крайней мере три, более предпочтительно по крайней мере четыре аминокислоты расположены в соседних положениях (т.е. являются последовательно расположенными аминокислотами в аминокислотной последовательности/первичной структуре).
Эпитопом, с которым связывается антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, предпочтительно является конформационный эпитоп. Соответственно, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению предпочтительно связывается с эпитопом, включающим по крайней мере две, предпочтительно по крайней мере три, более предпочтительно по крайней мере четыре аминокислоты антигенной петлевой области HBsAg, при этом по крайней мере две, предпочтительно по крайней мере три, более предпочтительно по крайней мере четыре аминокислоты выбирают из аминокислот 120-133, предпочтительно из аминокислот 120-130 S домена HBsAg и при этом по крайней мере две, предпочтительно по крайней мере три, более предпочтительно по крайней мере четыре аминокислоты не расположены в соседних положениях (первичной структуры).
Другими словами, (i) либо ни одна из аминокислот, с которыми связывается антитело (т.е. аминокислоты, образующие эпитоп), не расположены в соседних положениях первичной структуры, либо (ii) некоторые, например две или три, аминокислоты, с которыми связывается антитело (т.е. аминокислоты, образующие эпитоп), расположены в соседних положениях (первичной структуры), в то время как
- 16 038301 другие аминокислоты, с которыми связывается антитело (т.е. аминокислоты, образующие эпитоп), не расположены в соседних положениях (первичной структуры).
Аминокислоты, с которым связывается антитело (т.е. аминокислоты, образующие эпитоп), которые не расположены в соседних положениях первичной структуры, как правило, разделены в пространстве одной или более аминокислотами, с которыми антитело не связывается. Предпочтительно по крайней мере одна, более предпочтительно по крайней мере две, еще более предпочтительно по крайней мере три, наиболее предпочтительно по крайней мере четыре, прежде всего предпочтительно по крайней мере пять аминокислот могут быть расположены между двумя, предпочтительно по крайней мере между тремя аминокислотами, которые входят в состав эпитопа и которые не расположены в соседних положениях.
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению связываются с эпитопом, включающим по крайней мере аминокислоты Р120, С121, R122 и С124 S домена HBsAg. Более предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению связываются с эпитопом, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 88:
PCRXC, где X обозначает любую аминокислоту или отсутствует, предпочтительно X обозначает любую аминокислоту, более предпочтительно X обозначает Т, Y, R, S или F, еще более предпочтительно X обозначает Т, Y или R, наиболее предпочтительно X обозначает Т или R.
Еще более предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с эпитопом, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 80:
TGPCRTC или аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 90%, более предпочтительно по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 80.
Наиболее предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с эпитопом, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 85:
STTSTGPCRTC или аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 90%, более предпочтительно по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 85.
Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент также предпочтительно связывается с эпитопом, включающим аминокислотную последовательность, содержащую по крайней мере аминокислоты 145151 S домена HBsAg:
GNCTCIP (SEQ ID NO: 81).
Более предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с эпитопом, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 80 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 81.
Более предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с эпитопом, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 85 и/или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 87.
Как описано выше, эпитоп, с которым связываются антитела по настоящему изобретению, может быть линейным (непрерывного типа) или конформационным (прерывистого типа). Предпочтительно антитело и фрагменты антител по настоящему изобретению связываются с конформационным эпитопом, более предпочтительно конформационный эпитоп присутствует только в не восстанавливающих условиях.
Однако антитело или его фрагмент по настоящему изобретению связывается также предпочтительно с линейным эпитопом, более предпочтительно линейный эпитоп присутствует как в не восстанавливающих условиях, так и в восстанавливающих условиях.
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению связывается с эпитопом, расположенным в антигенной петлевой области HBsAg, образованным аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 1:
x1x2x3tcx4x5x6ax7g, где X1, Х2, Х3, Х4, Х5, X6 и Х7 могут обозначать любую аминокислоту (SEQ ID NO: 1).
Предпочтительно X1, Х2, Х3, Х4, Х5, Х6 и Х7 обозначают аминокислоты, которые замещены консервативными аминокислотами по сравнению с аминокислотами 120-130 последовательности SEQ ID NO: 3. Предпочтительно X1, Х2, Х3, Х4, Х5, Х6 и Х7 обозначают также аминокислоты, которые замещены консервативными аминокислотами по сравнению с аминокислотами 20-30 любой из последовательностей SEQ ID NO: 5-33 (см. табл. 1 со ссылкой на последовательности антигенной петлевой области, т.е. на положения аминокислот 101-172 S домена различных вариантов HBsAG).
Предпочтительно в последовательности SEQ ID NO: 1 X1 обозначает аминокислоту с малой боковой цепью. Использованный в данном контексте термин аминокислота с малой боковой цепью отно
- 17 038301 сится к любой аминокислоте, выбранной из группы, состоящей из аланина, аспарагиновой кислоты, аспарагина, цистеина, глицина, пролина, серина, треонина и валина. Более предпочтительно X1 обозначает пролин, серии или треонин.
Предпочтительно в последовательности SEQ ID NO: 1 X2 обозначает аминокислоту с малой боковой цепью. Более предпочтительно Х2 обозначает цистеин или треонин.
Предпочтительно в последовательности SEQ ID NO: 1 X3 обозначает заряженную аминокислоту или алифатическую аминокислоту. Использованный в данном контексте термин заряженная аминокислота относится к любой аминокислоте, выбранной из группы, состоящей из аргинина, лизина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты и гистидина. Использованный в данном контексте термин алифатическая аминокислота относится к любой аминокислоте, выбранной из группы, состоящей из аланина, глицина, изолейцина, лейцина и валина. Более предпочтительно Х3 обозначает аргинин, лизин, аспарагиновую кислоту или изолейцин.
Предпочтительно в последовательности SEQ ID NO: 1 X4 обозначает аминокислоту с малой боковой цепью и/или гидрофобную аминокислоту. Использованный в данном контексте термин гидрофобная аминокислота относится к любой аминокислоте, выбранной из группы, состоящей из аланина, изолейцина, лейцина, фенилаланина, валина, триптофана, тирозина, метионина, пролина и глицина. Более предпочтительно Х4 обозначает метионин или треонин.
Предпочтительно в последовательности SEQ ID NO: 1 X5 обозначает аминокислоту с малой боковой цепью и/или гидрофобную аминокислоту. Более предпочтительно Х5 обозначает треонин, аланин или изолейцин.
Предпочтительно в последовательности SEQ ID NO: 1 Х6 обозначает аминокислоту с малой боковой цепью и/или гидрофобную аминокислоту. Более предпочтительно X6 обозначает треонин, пролин или лейцин.
Предпочтительно в последовательности SEQ ID NO: 1 X7 обозначает полярную аминокислоту или алифатическую аминокислоту. Использованный в данном контексте термин полярная аминокислота относится к любой аминокислоте, выбранной из группы, состоящей из аспарагиновой кислоты, аспарагина, аргинина, глутаминовой кислоты, гистидина, лизина, глутамина, триптофана, тирозина, серина и треонина. Более предпочтительно Х7 обозначает глутамин, гистидин или лейцин.
Соответственно, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению более предпочтительно связывается с эпитопом, расположенным в антигенной петле HBsAg, образованной аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2:
X1X2X3TCX4X5X6AX7G,, где X1 обозначает Р, Т или S,
Х2 обозначает С или S,
Х3 обозначает R, K, D или I,
Х4 обозначает М или Т,
Х5 обозначает Т, А или I,
X6 обозначает Т, Р или L,
Х7 обозначает Q, Н или L.
В отношении предпочтительных эпитопов, образованных аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 1 или 2, следует отметить, что использованный в данном контексте термин образованный, прежде всего не обозначает, что антитело обязательно связывается с каждой и любой аминокислотой в последовательности SEQ ID NO: 1 или 2. Прежде всего, в случае предпочтительных конформационных эпитопов антитело может связываться только с некоторыми аминокислотами в последовательности SEQ ID NO: 1 или 2, при этом другие аминокислотные остатки могут выполнять лишь функцию спейсеров, тем самым обеспечивая 3D-структуру эпитопа.
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению связываются с эпитопом, расположенным в антигенной петле HBsAg, образованным одной или более, предпочтительно двумя или более, более предпочтительно тремя или более и еще более предпочтительно четырьмя или более аминокислотами, входящими в состав аминокислотной последовательности, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 5-33, показанных в табл. 1.
Более предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению связываются с областью антигенной петли HBsAg, включающей аминокислотную последовательность из любой последовательности SEQ ID NO: 5-33, показанных в табл. 1, или вариант указанных последовательностей. Еще более предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению связываются со всеми вариантами антигенной петли HBsAg, включающими аминокислотную последовательность любой из последовательностей SEQ ID NO: 5-33, показанных в табл. 1. Другими словами, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, прежде всего, предпочтительно могут связываться со всеми различными антигенными петлевыми областями HBsAg, включающими аминокислотную последовательность из любой последовательности SEQ ID NO: 5-33.
- 18 038301
Таблица 1 Типичные аминокислотные последовательности антигенной петлевой области S домена HBsAg (остатки 101-172 S домена HBsAg, за исключением последовательности SEQ ID NO: 16, которая относится к остаткам 100-172 S домена HBsAg, чтобы исключить соответствующую мутацию) различных генотипов и мутантных форм, использованных в данном контексте
Название | SEQ ID NO. | Аминокислотная последовательность |
J02203 (D, ayw3) | 5 | QGMLPVCPLIPGSSTTSTGPCRTCMTTAQGTSMYPSCCCT KPSDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW |
FJ899792 (D, adw2) | 6 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPAQGTSMYPSCCCT KPSDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW |
АМ282986 (А) | 7 | QGMLPVCPLIPGTTTTSTGPCKTCTTPAQGNSMFPSCCCT KPSDGNCTCIPIPSSWAFAKYLWEWASVRFSW |
D23678 (Bl) | 8 | QGMLPVCPLIPGSSTTSTGPCKTCTTPAQGTSMFPSCCCTK PTDGNCTCIPIPSSWAFAKYLWEWASVRFSW |
АВ117758 (Cl) | 9 | QGMLPVCPLLPGTSTTSTGPCKTCTIPAQGTSMFPSCCCTK PSDGNCTCIPIPSSWAFARFLWEWASVRFSW |
АВ 20 5192 (Е) | 10 | QGMLPVCPLIPGSSTTSTGPCRTCTTLAQGTSMFPSCCCSK PSDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW |
Х69798(F4) | 11 | QGMLPVCPLLPGSTTTSTGPCKTCTTLAQGTSMFPSCCCS KPSDGNCTCIPIPSSWALGKYLWEWASARFSW |
AF160501 (G) | 12 | QGMLPVCPLIPGSSTTSTGPCKTCTTPAQGNSMYPSCCCT KPSDGNCTCIPIPSSWAFAKYLWEWASVRFSW |
AY090454 (Н) | 13 | QGMLPVCPLLPGSTTTSTGPCKTCTTLAQGTSMFPSCCCT KPSDGNCTCIPIPSSWAFGKYLWEWASARFSW |
AF241409 (I) | 14 | QGMLPVCPLIPGSSTTSTGPCKTCTTPAQGNSMYPSCCCT KPSDGNCTCIPIPSSWAFAKYLWEWASARFSW |
АВ486012 (J) | 15 | QGMLPVCPLLPGSTTTSTGPCRTCTITAQGTSMFPSCCCTK PSDGNCTCIPIPSSWAFAKFLWEWASVRFSW |
HBsAg Y100C/P120T | 16 | CQGMLPVCPLIPGSSTTGTGTCRTCTTPAQGTSMYPSCCC TKP SD GNCTCIPIP S S W AFGKFL WE W AS ARF S W |
HBsAg Р120Т | 17 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGTCRTCTTPAQGTSMYPSCCCT KPSDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW |
HBsAg P120T/S143L | 18 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGTCRTCTTPAQGTSMYPSCCCT KPLDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW |
HBsAg C121S | 19 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPSRTCTTPAQGTSMYPSCCCTK PSDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW |
HBsAg R122D | 20 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCDTCTTPAQGTSMYPSCCCT KPSDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW |
HBsAg R122I | 21 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCITCTTPAQGTSMYPSCCCTK PSDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW |
HBsAg T123N | 22 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRNCTTPAQGTSMYPSCCCT KPSDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW |
HBsAg Q129H | 23 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPAHGTSMYPSCCCT KPSDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW |
HBsAg Q129L | 24 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPALGTSMYPSCCCTK PSDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW |
HBsAg M133H | 25 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPAQGTSHYPSCCCTK PSDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW |
HBsAg M133L | 26 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPAQGTSLYPSCCCTK PSDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW |
HBsAg M133T | 27 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPAQGTSTYPSCCCTK PSDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW |
HBsAg K141E | 28 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPAQGTSMYPSCCCTE PSDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW |
HBsAg P142S | 29 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPAQGTSMYPSCCCT KSSDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW |
HBsAg S143K | 30 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPAQGTSMYPSCCCT KPKDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW |
HBsAg D144A | 31 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPAQGTSMYPSCCCT KPSAGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW |
HBsAg G145R | 32 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPAQGTSMYPSCCCT KPSDRNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW |
HBsAg N146A | 33 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPAQGTSMYPSCCCT KPSDGACTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW |
Обычно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению предпочтительно включают (по крайней мере) три определяющие комплементарность области (CDR) в тяжелой цепи и (по крайней мере) три CDR области в легкой цепи. Обычно определяющие комплементарность области (CDR) являются гипервариабельными областями, присутствующими в вариабельных областях тяжелой цепи и в вариабельных областях легкой цепи. Как правило, области CDR тяжелой цепи вместе с присоединенной легкой цепью антитела образуют рецептор антигена. Обычно три CDR (CDR1, CDR2 и CDR3) области располагаются в вариабельной области не в последовательном порядке. Так как рецепторы антигена, как правило, состоят из двух вариабельных областей (в составе двух различных полипептидных цепей, т.е. тяжелой и легкой цепей), существует шесть CDR областей для каждого рецептора антигена (тяжелая цепь: CDRH1, CDRH2 и CDRH3, легкая цепь: CDRL1, CDRL2 и CDRL3). Одна молекула антитела обычно содержит два рецептора антигена и, следовательно, содержит 12 CDR областей. CDR области тяжелой и/или легкой цепей могут быть разделены каркасными областями, при этом каркасная область (FR) обозначает участок вариабельной области, который является менее вариабельным по сравнению с CDR областью. Например, цепь (или каждая цепь, соответственно) может состоять из четы
- 19 038301 рех каркасных областей, разделенных тремя CDR областями.
Были определены последовательности тяжелых цепей и легких цепей типичного антитела по настоящему изобретению, содержащие три различные CDR области в тяжелой цепи и три различные CDR области в легкой цепи. Положение аминокислот CDR области определяют в соответствии с системой нумерации IMGT (IMGT: http://www.imgt.org/, см. статью Lefranc M.-P. et al., Nucleic Acids Res., 37, p. D1006-D1012 (2009)).
В табл. 2 приведены аминокислотные последовательности CDR областей, а также вариабельной области тяжелой цепи (VH) и вариабельной области легкой цепи (VL) типичного антитела по настоящему изобретению (НВС34).
Таблица 2
НВС34 | SEQ ID NO. | Аминокислотная последовательность |
CDRH1 | 34 | GRIFRSFY |
CDRH2 | 35 | NQDGSEK |
длинный вариант CDRH2 | 66 | INQDGSEK |
CDRH3 | 36 | AAWSGNSGGMDV |
CDRL1 | 37 | KLGNKN |
CDRL2 | 38 | EVK |
длинный вариант CDRL2 | 39 | VIYEVKYRP |
CDRL3 | 40 | QTWDSTTVV |
VH | 41 | ELQLVESGGGWVQPGGSQRLSCAASGRIFRS FYMSWVRQAPGKGLEWVATINQDGSEKLYV DSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNNLRVEDTA VYYCAAWSGNSGGMDVWGQGTTVSVSS |
VL | 42 | SYELTQPPSVSVSPGQTVSIPCSGDKLGNKNV С WFQHKPGQ SP VL VI YE VKYRP S GIPERF S GS NSGNTATLTISGTQAMDEAAYFCQTWDSTTV VFGGGTRLTVL |
Таким образом, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению предпочтительно включает аминокислотные последовательности, которые по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 88%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны по меньшей мере одной из последовательностей CDR, с последовательностью VH и/или с последовательностью VL, приведенными в табл. 2.
В табл. 3 приведены аминокислотные последовательности CDR областей, а также вариабельной области тяжелой цепи (VH) и вариабельной области легкой цепи (VL) еще одного типичного антитела по настоящему изобретению (HBC34v7).
Таблица 3
HBC34v7 | SEQ ID NO. | Аминокислотная последовательность |
CDRH1 | 34 | GRIFRSFY |
CDRH2 | 35 | NQDGSEK |
длинный вариант CDRH2 | 66 | INQDGSEK |
CDRH3 | 36 | AAWSGNSGGMDV |
CDRL1 | 37 | KLGNKN |
CDRL2 | 38 | EVK |
HBC34v7 | SEQ ID NO. | Аминокислотная последовательность |
длинный вариант CDRL2 | 39 | VIYEVKYRP |
CDRL3 | 58 | QTFDSTTVV |
VH | 41 | ELQLVESGGGWVQPGGSQRLSCAASGRIFRS FYMSWVRQAPGKGLEWVATINQDGSEKLYV DSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNNLRVEDTA VYYCAAWSGNSGGMDVWGQGTTVSVSS |
VL | 59 | SYELTQPPSVSVSPGQTVSIPCSGDKLGNKNV C WFQHKPGQ SPVL VI YE VKYRP S GIPERF S GS NSGNTATLTISGTQAMDEAAYFCQTFDSTTV VFGGGTRLTVL |
Таким образом, согласно настоящему изобретению, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент также предпочтительно включает аминокислотные последовательности, которые по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 88%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны по меньшей мере одной из последовательностей CDR, с последовательностью VH и/или с последовательностью VL, приведенными в табл. 3.
В табл. 4 приведены аминокислотные последовательности CDR областей, а также вариабельной области тяжелой цепи (VH) и вариабельной области легкой цепи (VL) другого типичного антитела по настоящему изобретению (HBC34v23).
- 20 038301
Таблица 4
HBC34v23 | SEQ ID NO. | Аминокислотная последовательность |
CDRH1 | 34 | GRIFRSFY |
CDRH2 | 35 | NQDGSEK |
длинный вариант CDRH2 | 66 | INQDGSEK |
CDRH3 | 36 | AAWSGNSGGMDV |
CDRL1 | 37 | KLGNKN |
CDRL2 | 38 | EVK |
длинный вариант CDRL2 | 39 | VIYEVKYRP |
CDRL3 | 58 | QTFDSTTVV |
VH | 41 | ELQLVESGGGWVQPGGSQRLSCAASGRIFR SFYMSWVRQAPGKGLEWVATINQDGSEKL Y VD S VKGRFTISRDN AKNSLFLQMNNLR VE DTAVYYCAAWSGNSGGMDVWGQGTTVSV SS |
VL | 65 | SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGNKN AC W YQQKP GQ SP VL VI YE VKYRP S GIPERF S GSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQTFDS TTVVFGGGTKLTVL |
Таким образом, согласно настоящему изобретению антитело или его антигенсвязывающий фрагмент также предпочтительно включает аминокислотные последовательности, которые по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 88%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны по меньшей мере одной из последовательностей CDR, с последовательностью VH и/или с последовательностью VL, приведенными в табл. 4.
В табл. 5 приведены аминокислотные последовательности CDR областей, а также вариабельной области тяжелой цепи (VH) и вариабельной области легкой цепи (VL) еще одного типичного антитела по настоящему изобретению (HBC34v31).
Таблица 5
HBC34v31 | SEQ ID NO. | Аминокислотная последовательность |
CDRH1 | 34 | GRIFRSFY |
CDRH2 | 35 | NQDGSEK |
длинный вариант CDRH2 | 66 | INQDGSEK |
CDRH3 | 36 | AAWSGNSGGMDV |
CDRL1 | 37 | KLGNKN |
CDRL2 | 38 | EVK |
длинный вариант CDRL2 | 39 | VIYEVKYRP |
CDRL3 | 40 | QTWDSTTVV |
VH | 67 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRIFRSF YMSWVRQAPGKGLEWVANINQDGSEKLYV DSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNNLRVEDTA VY Y C A AW S GNS GGMD V W GQGTT VT VS S |
VL | 42 | SYELTQPPSVSVSPGQTVSIPCSGDKLGNKNV C WFQHKPGQ SP VL VI YE VKYRP S GIPERF S GS NSGNTATLTISGTQAMDEAAYFCQTWDSTTV VFGGGTRLTVL |
Таким образом, согласно настоящему изобретению антитело или его антигенсвязывающий фрагмент предпочтительно включает аминокислотные последовательности, которые по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 88%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны по меньшей одной из последовательностей CDR, с последовательностью VH и/или с последовательностью VL, приведенными в табл. 5.
В табл. 6 приведены аминокислотные последовательности CDR областей, а также вариабельной области тяжелой цепи (VH) и вариабельной области легкой цепи (VL) другого типичного антитела по настоящему изобретению (HBC34v32).
Таблица 6
HBC34v32 | SEQ ID NO. | Аминокислотная последовательность |
CDRH1 | 34 | GRIFRSFY |
CDRH2 | 35 | NQDGSEK |
длинный вариант CDRH2 | 66 | INQDGSEK |
CDRH3 | 36 | AAWSGNSGGMDV |
CDRL1 | 37 | KLGNKN |
CDRL2 | 38 | EVK |
длинный вариант CDRL2 | 39 | VIYEVKYRP |
CDRL3 | 58 | QTFDSTTVV |
VH | 67 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRIFRSF YMSWVRQAPGKGLEWVANINQDGSEKLYV DSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNNLRVEDTA VYYCAAWSGNSGGMDVWGQGTTVTVSS |
VL | 59 | SYELTQPPSVSVSPGQTVSIPCSGDKLGNKNV C WFQHKPGQ SPVL VI YE VKYRP S GIPERF S GS NSGNTATLTISGTQAMDEAAYFCQTFDSTTV VFGGGTRLTVL |
Таким образом, согласно настоящему изобретению антитело или его антигенсвязывающий фраг- 21 038301 мент также предпочтительно включает аминокислотные последовательности, которые по меньшей на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 88%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере 99% идентичны по меньшей мере одной из последовательностей CDR, с последовательностью VH и/или с последовательностью VL, приведенными в табл. 6.
В табл. 7 приведены аминокислотные последовательности CDR областей, а также вариабельной области тяжелой цепи (VH) и вариабельной области легкой цепи (VL) еще одного типичного антитела по настоящему изобретению (HBC34v33).
Таблица 7
HBC34v33 | SEQ ID NO. | Аминокислотная последовательность |
CDRH1 | 34 | GRIFRSFY |
CDRH2 | 35 | NQDGSEK |
длинный вариант CDRH2 | 66 | INQDGSEK |
CDRH3 | 36 | AAWSGNSGGMDV |
CDRL1 | 37 | KLGNKN |
CDRL2 | 38 | EVK |
длинный вариант CDRL2 | 39 | VIYEVKYRP |
CDRL3 | 58 | QTFDSTTVV |
VH | 67 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRIFRSFY MSWVRQAPGKGLEWVANINQDGSEKLYVDSV KGRFTISRDNAKNSLFLQMNNLRVEDTAVYYC AAWSGNSGGMDVWGQGTTVTVSS |
VL | 65 | SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGNKNAC WYQQKPGQSPVLVIYEVKYRPSGIPERFSGSNSG NTATLTISGTQAMDEADYYCQTFDSTTVVFGGG TKLTVL |
Таким образом, согласно настоящему изобретению антитело или его антигенсвязывающий фрагмент также предпочтительно включает аминокислотные последовательности, которые по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 88%, по меньшей мере на 90%, по меньшей на 92%, по меньшей на 95%, по меньшей на 96%, по меньшей на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны по меньшей мере одной из последовательностей CDR, с последовательностью VH и/или с последовательностью VL, приведенными в табл. 7.
В табл. 8 представлен обзор модификаций VH и VL типичных вариантов антител HBC34v7, HBC34v23, HBC34v31, HBC34v32 и HBC34v33 антитела НВС34 дикого типа (WT) и соответствующих последовательностей SEQ ID NO: для аминокислотных последовательностей CDR и VH/VL.
Таблица 8
Название варианта | Модификация VH | Модификация VL | CDR | VL | VH | |||||
Н1 | Н2 | НЗ | L1 | L2 | L3 | |||||
НВС34 | WT | WT | 34 | 35/66 | 36 | 37 | 38/39 | 40 | 41 | 42 |
HBC34-V7 | WT | W107F | 34 | 35/66 | 36 | 37 | 38/39 | 58 | 41 | 59 |
HBC34-V23 | WT | W07F/FR1234GL/CD R2Y66 | 34 | 35/66 | 36 | 37 | 38/39 | 58 | 41 | 65 |
HBC34-V31 | FR124GL | WT | 34 | 35/66 | 36 | 37 | 38/39 | 40 | 67 | 42 |
HBC34-V32 | FR124GL | W107F | 34 | 35/66 | 36 | 37 | 38/39 | 58 | 67 | 59 |
HBC34-V33 | FR124GL | W07F/FR1234GL/CD R2Y66 | 34 | 35/66 | 36 | 37 | 38/39 | 58 | 67 | 65 |
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению включает тяжелую цепь, содержащую по крайней мере одну CDRH1, по крайней мере одну CDRH2 и по крайней мере одну CDRH3, а также легкую цепь, содержащую по крайней мере одну CDRL1, по крайней мере одну CDRL2 и по крайней мере одну CDRL3, причем по крайней мере одна CDR область, предпочтительно по крайней мере одна CDRH3 область тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36 или ее функциональный вариант или состоит из них, как описано в данном контексте. Соответственно, предпочтительно по крайней мере одна CDRH3 тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей на 90%, еще более предпочтительно по меньшей на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей мере на 98% или 99% идентична последовательности SEQ ID NO: 36. Более предпочтительно по крайней мере одна CDRH3 тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36.
Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент также предпочтительно включает тяжелую цепь, содержащую по крайней мере одну CDRH1, по крайней мере одну CDRH2 и по крайней мере одну CDRH3, а также легкую цепь, содержащую по крайней мере одну CDRL1, по крайней мере одну CDRL2 и по крайней мере одну CDRL3, причем по крайней мере одна CDRL3 легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40 или SEQ ID NO: 58 или функциональный вариант указанных последовательностей. Соответственно, по крайней мере одна CDRL3 легкой цепи предпочтительно содержит аминокислотную последовательность, которая составляет по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере меньшей на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей на 98% или 99%
- 22 038301 идентична последовательности SEQ ID NO: 40 или SEQ ID NO: 58. Более предпочтительно по крайней мере одна CDRL3 легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40 или SEQ ID NO: 58.
Более предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению включает тяжелую цепь, содержащую по крайней мере одну CDRH1, по крайней мере одну CDRH2 и по крайней мере одну CDRH3, а также легкую цепь, содержащую по крайней мере одну CDRL1, по крайней мере одну CDRL2 и по крайней мере одну CDRL3, причем по крайней мере одна CDRH1 тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34 или функциональный вариант указанной последовательности, и по крайней мере одна CDRH2 тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3 5 или функциональный вариант указанной последовательности, и/или по крайней мере одна CDRH3 тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36 или функциональный вариант указанной последовательности. Более предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению включают тяжелую цепь, содержащую по крайней мере одну CDRH1, по крайней мере одну CDRH2 и по крайней мере одну CDRH3, а также легкую цепь, содержащую по крайней мере одну CDRL1, по крайней мере одну CDRL2 и по крайней мере одну CDRL3, причем по крайней мере одна CDRH1 тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34 или функциональный вариант указанной последовательности, и по крайней мере одна CDRH2 содержит аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 35 или 66 или функциональный вариант указанной последовательности, и/или по крайней мере одна CDRH3 тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36 или функциональный вариант указанной последовательности. Соответственно, по крайней мере одна CDRH1 тяжелой цепи предпочтительно содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей мере на 98% или 99% идентична последовательности SEQ ID NO: 34, и по меньшей мере одна CDRH2 тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей мере на 98% или 99% идентична последовательности SEQ ID NO: 35 или 66, и/или по меньшей мере одна CDRH3 тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и, прежде всего, предпочтительно по меньшей мере на 98% или 99% идентична последовательности SEQ ID NO: 36. Более предпочтительно по меньшей мере одна CDRH1 тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34, и по меньшей мере одна CDRH2 тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35 или 66 и/или по крайней мере одна CDRH3 тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36.
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению включает тяжелую цепь, содержащую по крайней мере одну CDRH1, по крайней мере одну CDRH2 и по крайней мере одну CDRH3, а также легкую цепь, включающую по крайней мере одну CDRL1, по крайней мере одну CDRL2 и по крайней мере одну CDRL3, причем по крайней мере одна CDRL1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37 или функциональный вариант указанной последовательности, по крайней мере одна CDRL2 содержит аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 38 или 39 или функциональный вариант указанной последовательности, и/или по крайней мере одна CDRL3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40 или функциональный вариант указанной последовательности. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению также предпочтительно включают тяжелую цепь, содержащую по крайней мере одну CDRH1, по крайней мере одну CDRH2 и по крайней мере одну CDRH3, а также легкую цепь, включающую по крайней мере одну CDRL1, по крайней мере одну CDRL2 и по крайней мере одну CDRL3, причем по крайней мере одна CDRL1 легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37 или функциональный вариант указанной последовательности, по крайней мере одна CDRL2 легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38 или 39 или функциональный вариант указанной последовательности, и/или по крайней мере одна CDRL3 легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58 или функциональный вариант указанной последовательности. Соответственно, по крайней мере одна CDRL1 легкой цепи предпочтительно содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей мере на 98 или 99% идентична последовательности SEQ ID NO: 37, по меньшей мере одна CDRL2 легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей мере 98 или 99% идентична последовательности SEQ ID NO: 38 или 39 и/или по меньшей мере одна CDRL3 легкой цепи содержит аминокислотную по
- 23 038301 следовательность, которая по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей мере на 98 или 99% идентична последовательности SEQ ID NO: 40 или 58. Более предпочтительно по меньшей мере одна CDRL1 легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37, по меньшей мере одна CDRL2 легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38 или 39, и/или по крайней мере одна CDRL3 легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40 или 58.
Соответственно, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению также предпочтительно включают аминокислотные последовательности CDRH1, CDRH2 и CDRH3 и аминокислотные последовательности CDRL1, CDRL2 и CDRL3 SEQ ID NO: 34-38 и 40 или функциональные варианты указанных последовательностей, или SEQ ID NO: 34-37 и 39-40 или функциональные варианты указанных последовательностей, соответственно. или его антигенсвязывающий фрагмент также предпочтительно включают аминокислотные последовательности CDRH1, CDRH2 и CDRH3 и аминокислотные последовательности CDRL1, CDRL2 и CDRL3 SEQ ID NO: 34, 36-38, 40 и 66 или функциональные варианты указанных последовательностей, или SEQ ID NO: 34, 36-37, 39-40 и 66 или функциональные варианты указанных последовательностей, соответственно. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент также предпочтительно включает аминокислотные последовательности CDRH1, CDRH2 и CDRH3 и аминокислотные последовательности CDRL1, CDRL2 и CDRL3 SEQ ID NO: 34-38 и 58 или функциональные варианты указанных последовательностей или SEQ ID NO: 34-37, 39 и 58 или функциональные варианты указанных последовательностей соответственно. Кроме того, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент предпочтительно включают аминокислотные последовательности CDRH1, CDRH2 и CDRH3 и аминокислотные последовательности CDRL1, CDRL2 и CDRL3 SEQ ID NO: 34, 36-38, 58 и 66 или функциональные варианты указанных последовательностей или SEQ ID NO: 34, 36-37, 39, 58 и 66 или функциональные варианты указанных последовательностей соответственно.
Соответственно, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент предпочтительно включают аминокислотные последовательности CDRH1, CDRH2 и CDRH3 и аминокислотные последовательности CDRL1, CDRL2 и CDRL3, которые (i) по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей мере на 98 или 99% идентичны каждой из последовательностей SEQ ID NO: 34-38 и 40 соответственно, или (ii) по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей мере 98% или 99% идентична каждой из последовательностей SEQ ID NO: 34-37, 39 и 40 соответственно, или (iii) по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей мере на 98% или 99% идентична каждой из последовательностей SEQ ID NO: 34-38 и 58 соответственно? или (iv) по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей мере на 98 или 99% идентична каждой из последовательностей SEQ ID NO: 34-37, 39 и 58 соответственно, или (v) по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей мере на 98 или 99% идентична каждой из последовательностей SEQ ID NO: 34, 36-38, 40 и 66 соответственно, или (vi) по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей мере на 98 или 99% идентична каждой из последовательностей SEQ ID NO: 34, 36-37, 39, 40 и 66 соответственно, или (vii) по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей мере на 98 или 99% идентична каждой из последовательностей SEQ ID NO: 34, 36-38, 58 и 66 соответственно, или (viii) по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей мере на 98% или 99% идентична каждой из последовательностей SEQ ID NO: 34, 36-37, 39, 58 и 66 соответственно.
Более предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включает аминокислотные последовательности CDRH1, CDRH2 и CDRH3, а также аминокислотные последовательности CDRL1, CDRL2 и CDRL3 (i) с последовательностями SEQ ID NO: 34-38 и 40 соответственно, или (ii) SEQ ID NO: 34-37, 39 и 40 соответственно, или (iii) SEQ ID NO: 34-38 и 58 соответственно, или (iv) SEQ ID NO: 34-37, 39 и 58 соответственно, или (v) SEQ ID NO: 34, 36-38, 40 и 66 соответственно, или (vi) SEQ ID NO: 34, 36-37, 39, 40 и 66 соответственно, или (vii) SEQ ID NO: 34, 36-38, 58 и 66 соответственно, или (viii) SEQ ID NO: 34, 36-37, 39, 58 и 66 соответственно.
Кроме того, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент согласно настоящему изобретению
- 24 038301 также предпочтительно включает аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 41 или функциональный вариант указанной последовательности и/или аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 42 или функциональный вариант указанной последовательности.
Соответственно, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент предпочтительно включает аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH), которая по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей на 98% или 99% идентична последовательности SEQ ID NO: 41, и аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL), которая по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей мере на 98 или 99% идентична последовательности SEQ ID NO: 42. Более предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включают аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 41 и аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 42.
Кроме того, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент настоящему изобретению также предпочтительно включает аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 41 или 67 или функциональный вариант указанной последовательности и/или аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 42 или функциональный вариант указанной последовательности. Соответственно, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент предпочтительно включают аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH), которая по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей мере на 98 или 99% идентична последовательности SEQ ID NO: 41 или 67, и аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL), которая по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей мере на 98 или 99% идентична последовательности SEQ ID NO: 42. Более предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включает аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 41 или 67 и аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 42.
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению включает аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 41 или 67 или функциональный вариант указанной последовательности, а также аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 59 или 65 или функциональный вариант указанной последовательности. Соответственно, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент предпочтительно включают (i) аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH), которая по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей 98% или 99% идентична последовательности SEQ ID NO: 41 или 67, и (ii) аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL), которая по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей мере на 98% или 99% идентична последовательности SEQ ID NO: 59 или 65. Более предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включает аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 41 или 67 и аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 59 или 65.
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению включают аминокислотные последовательности по крайней мере одной CDRH1, CDRH2 и CDRH3 области тяжелой цепи и по крайней мере одной CDRL1, CDRL2 и CDRL3 области легкой цепи, которые по меньшей мере на 80%, например 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%, идентичны аминокислотным последовательностям SEQ ID NO: 34-38 и 40 или аминокислотным последовательностям SEQ ID NO: 34-37 и 39-40 соответственно.
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению включают аминокислотные последовательности по крайней мере одной CDRH1, CDRH2 и CDRH3 области тяжелой цепи и по крайней мере одной CDRL1, CDRL2 и CDRL3 области легкой цепи, которые по меньшей мере на 80%, например 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%, идентичны аминокислотным последовательностям SEQ ID NO: 34-38 и 58 соответственно или аминокислотным последовательностям SEQ ID NO: 34-37, 39 и 58 соответственно. Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению включают аминокислотные последовательности по крайней мере одной CDRH1, CDRH2 и CDRH3 области тяжелой цепи и по крайней мере одной CDRL1, CDRL2 и CDRL3 области легкой цепи, которые по меньшей мере на 80%, на
- 25 038301 пример 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%, идентичны аминокислотным последовательностям SEQ ID NO: 34, 36-38, 40 и 66 соответственно или аминокислотным последовательностям SEQ ID NO: 34, 36-37, 39-40 и 66 соответственно. Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению включает аминокислотные последовательности по крайней мере одной CDRH1, CDRH2 и CDRH3 области тяжелой цепи и по крайней мере одной CDRL1, CDRL2 и CDRL3 области легкой цепи, которые по меньшей мере на 80%, например 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%, идентичны аминокислотным последовательностями SEQ ID NO: 34, 36-38, 58 и 66 соответственно или аминокислотным последовательностям SEQ ID NO: 34, 36-37, 39, 58 и 66 соответственно.
Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению также предпочтительно включает аминокислотную последовательность по меньшей мере одной вариабельной области тяжелой цепи (VH) и аминокислотную последовательность по меньшей мере одной вариабельной области легкой цепи (VL), которая по меньшей мере на 80%, например, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%, идентична аминокислотным последовательностями SEQ ID NO: 41-42.
Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению также предпочтительно включает аминокислотную последовательность по крайней мере одной вариабельной области тяжелой цепи (VH) и аминокислотную последовательность по меньшей мере одной вариабельной области легкой цепи (VL), которая по меньше мере на 80%, например 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%, идентична аминокислотным последовательностям SEQ ID NO: 41-59.
Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению также предпочтительно включает аминокислотную последовательность по крайней мере одной вариабельной области тяжелой цепи (VH) и аминокислотную последовательность по меньшей мере одной вариабельной области легкой цепи (VL), которые по меньшей мере на 80%, например, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%, идентичны аминокислотным последовательностям SEQ ID NO: 41 и 65.
Прежде всего, антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению предпочтительно является gHBC34, прежде всего антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению является НВС34.
Авторы настоящего изобретения идентифицировали моноклональное антитело (mAb) по настоящему изобретению, которое в данном контексте названо НВС34 (см. пример 1). На основе указанного антитела НВС34, прежде всего для генов VH и VL HBC34, использованный в данном контексте термин gHBC34 относится к соответствующему характерному антителу или к его антигенсвязывающим фрагментам. А именно, gHBC34 относится к антителу или к его антигенсвязывающему фрагменту, включающему аминокислотную последовательность CDRH1 SEQ ID NO: 34, аминокислотную последовательность CDRH2 SEQ ID NO: 35, аминокислотную последовательность CDRH3 SEQ ID NO: 36, аминокислотную последовательность CDRL1 SEQ ID NO: 37, аминокислотную последовательность CDRL2 SEQ ID NO: 38 или 39 и аминокислотную последовательность CDRL3 SEQ ID NO: 40. Прежде всего, gHBC34 относится к антителу или к его антигенсвязывающему фрагменту, включающему аминокислотную последовательность CDRH1 SEQ ID NO: 34, аминокислотную последовательность CDRH2 SEQ ID NO: 35 или 66, аминокислотную последовательность CDRH3 SEQ ID NO: 36, аминокислотную последовательность CDRL1 SEQ ID NO: 37, аминокислотную последовательность CDRL2 SEQ ID NO: 38 или 39 и аминокислотную последовательность CDRL3 SEQ ID NO: 40. Вариабельная область тяжелой цепи (VH) gHBC34 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41, а вариабельная область легкой цепи (VL) gHBC34 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42.
Прежде всего, антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению предпочтительно является gHBC34v7, прежде всего антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению является HBC34v7.
Авторы настоящего изобретения идентифицировали еще одно моноклональное антитело (mAb) по настоящему изобретению, которое в данном контексте названо HBC34v7 (см. пример 11). На основе указанного антитела HBC34v7, прежде всего для генов VH и VL HBC34v7, использованный в данном контексте термин gHBC34v7 относится к соответствующему обобщенному антителу или к его антигенсвязывающим фрагментам. А именно, gHBC34v7 относится к антителу или к его антигенсвязывающему фрагменту, включающему аминокислотную последовательность CDRH1 SEQ ID NO: 34, аминокислотную последовательность CDRH2 SEQ ID NO: 35 или 66, аминокислотную последовательность CDRH3 SEQ ID NO: 36, аминокислотную последовательность CDRL1 SEQ ID NO: 37, аминокислотную последовательность CDRL2 SEQ ID NO: 38 или 39 и аминокислотную последовательность CDRL3 SEQ ID NO: 58. Вариабельная область тяжелой цепи (VH) gHBC34v7 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41, а вариабельная область легкой цепи (VL) gHBC34v7 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59.
- 26 038301
Прежде всего, антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению предпочтительно является gHBC34v23, прежде всего антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению является HBC34v23.
Авторы настоящего изобретения также идентифицировали моноклональное антитело (mAb) по настоящему изобретению, которое в данном контексте названо HBC34v23 (см. пример 12). На основе указанного антитела HBC34v23, прежде всего для генов VH и VL HBC34v23, использованный в данном контексте термин gHBC34v23 относится к соответствующему характерному антителу или к его антигенсвязывающим фрагментам. А именно, gHBC34v23 относится к антителу или к его антигенсвязывающему фрагменту, включающему аминокислотную последовательность CDRH1 SEQ ID NO: 34, аминокислотную последовательность CDRH2 SEQ ID NO: 35 или 66, аминокислотную последовательность CDRH3 SEQ ID NO: 36, аминокислотную последовательность CDRL1 SEQ ID NO: 37, аминокислотную последовательность CDRL2 SEQ ID NO: 38 или 39 и аминокислотную последовательность CDRL3 SEQ ID NO: 58. Вариабельная область тяжелой цепи (VH) gHBC34v23 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41, а вариабельная область легкой цепи (VL) gHBC34v23 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59.
Прежде всего, антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению предпочтительно является gHBC34v31, прежде всего антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению является HBC34v31.
Авторы настоящего изобретения дополнительно идентифицировали моноклональное антитело (mAb) по настоящему изобретению, которое в данном контексте названо HBC34v31 (см. пример 12). На основе указанного антитела HBC34v31, прежде всего для генов VH и VL HBC34v31, использованный в данном контексте термин gHBC34v31 относится к соответствующему обобщенному антителу или к его антигенсвязывающим фрагментам. А именно, gHBC34v31 относится к антителу или к его антигенсвязывающему фрагменту, включающему аминокислотную последовательность CDRH1 SEQ ID NO: 34, аминокислотную последовательность CDRH2 SEQ ID NO: 35 или 66, аминокислотную последовательность CDRH3 SEQ ID NO: 36, аминокислотную последовательность CDRL1 SEQ ID NO: 37, аминокислотную последовательность CDRL2 SEQ ID NO: 38 или 39 и аминокислотную последовательность CDRL3 SEQ ID NO: 40. Вариабельная область тяжелой цепи (VH) gHBC34v31 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 67, а вариабельная область легкой цепи (VL) gHBC34v31 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42.
Прежде всего, антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению предпочтительно является gHBC34v32, прежде всего антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению является HBC34v32.
Авторы настоящего изобретения дополнительно идентифицировали моноклональное антитело (mAb) по настоящему изобретению, которое в данном контексте названо HBC34v32 (см. пример 12). На основе указанного антитела HBC34v32, прежде всего для генов VH и VL HBC34v32, использованный в данном контексте термин gHBC34v32 относится к соответствующему характерному антителу или к его антигенсвязывающим фрагментам. А именно, gHBC34v32 относится к антителу или к его антигенсвязывающему фрагменту, включающему аминокислотную последовательность CDRH1 SEQ ID NO: 34, аминокислотную последовательность CDRH2 SEQ ID NO: 35 или 66, аминокислотную последовательность CDRH3 SEQ ID NO: 36, аминокислотную последовательность CDRL1 SEQ ID NO: 37, аминокислотную последовательность CDRL2 SEQ ID NO: 38 или 39 и аминокислотную последовательность CDRL3 SEQ ID NO: 40. Вариабельная область тяжелой цепи (VH) gHBC34v32 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 67, а вариабельная область легкой цепи (VL) gHBC34v32 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59.
Прежде всего, антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению предпочтительно является gHBC34v33, прежде всего антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению является HBC34v33.
Авторы настоящего изобретения дополнительно идентифицировали моноклональное антитело (mAb) по настоящему изобретению, которое в данном контексте названо HBC34v33 (см. пример 12). На основе указанного антитела HBC34v33, прежде всего для генов VH и VL HBC34v33, использованный в данном контексте термин gHBC34v33 относится к соответствующему характерному антителу или к его антигенсвязывающим фрагментам. А именно, gHBC34v33 относится к антителу или к его антигенсвязывающему фрагменту, включающему аминокислотную последовательность CDRH1 SEQ ID NO: 34, аминокислотную последовательность CDRH2 SEQ ID NO: 35 или 66, аминокислотную последовательность CDRH3 SEQ ID NO: 36, аминокислотную последовательность CDRL1 SEQ ID NO: 37, аминокислотную последовательность CDRL2 SEQ ID NO: 38 или 39 и аминокислотную последовательность CDRL3 SEQ ID NO: 40. Вариабельная область тяжелой цепи (VH) gHBC34v33 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 67, а вариабельная область легкой цепи (VL) gHBC34v33 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65.
Антителом по настоящему изобретению или его антигенсвязывающим фрагментом предпочтительно является антитело человека, моноклональное антитело, моноклональное антитело человека, очищен
- 27 038301 ное антитело, одноцепочечное антитело, Fab, Fab', F(ab')2, Fv или scFv.
В связи с этим антитела по настоящему изобретению могут представлять собой антитела человека, моноклональные антитела, моноклональные антитела человека, рекомбинантные антитела или очищенные антитела. В настоящем изобретении также предлагаются фрагменты антител по настоящему изобретению, прежде всего фрагменты, которые сохраняют антигенсвязывающую активность антител. Такие фрагменты включают, но не ограничиваясь только ими, одноцепочечные антитела, Fab, Fab', F(ab')2, Fv или scFv.
Фрагменты антител по настоящему изобретению можно получить из антител способами, которые включают расщепление ферментами, такими как пепсин или папаин, и/или расщепление дисульфидных связей в условиях химического восстановления. В другом варианте, фрагменты антител можно получить клонированием и экспрессией части последовательностей тяжелой или легкой цепей. Фрагменты антител включают Fab, Fab', F(ab')2 и Fv фрагменты. Настоящее изобретение также включает одноцепочечные Fv фрагменты (scFv), полученные из тяжелой и легкой цепей антитела по настоящему изобретению. Например, настоящее изобретение включает scFv, содержащий CDR области из антитела по настоящему изобретению. Включены также мономеры и димеры тяжелой или легкой цепи, однодоменные антитела, состоящие из тяжелых цепей, однодоменные антитела, состоящие из легких цепей, а также одноцепочечные антитела, например, одноцепочечный Fv, в котором вариабельные области тяжелой и легкой цепей соединены через пептидный линкер.
Фрагменты антител по настоящему изобретению могут придавать способность к моновалентным или мультивалентным взаимодействиям и содержаться в различных структурах, как описано выше. Например, чтобы сконструировать трехвалентное триатело или четырехвалентное тетратело, можно получить молекулы scFv. Молекулы scFv можно включать в домен Fc области, при этом получают двухвалентные минитела. Кроме того, последовательности по настоящему изобретению могут представлять собой компонент мультиспецифичных молекул, в которых последовательности по настоящему изобретению направленно связываются с эпитопами по настоящему изобретению, а другие области молекулы связываются с другими мишенями. Типичные молекулы включают, но не ограничиваясь только ими, биспецифический Fab2, триспецифический Fab3, биспецифический scFv и диатела (Holliger и Hudson, Nature Biotechnology, 9, p. 1126-1136 (2005)).
В другом объекте настоящего изобретения предлагается антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, как описано в данном контексте, предназначенное для применения в качестве лекарственного средства. Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, как описано в данном контексте, предназначено для применения при профилактике, лечении или ослаблении интенсивности симптомов гепатита В и/или гепатита D. Подробное описание указанного объекта приведено ниже в разделе Лечение и применение в медицинских целях, а также в контексте фармацевтической композиции по настоящему изобретению.
Молекула нуклеиновой кислоты.
В другом объекте настоящего изобретения предлагается молекула нуклеиновой кислоты, включающая полинуклеотид, кодирующий антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, как описано выше. Примеры молекул нуклеиновых кислот и/или полинуклеотидов включают, например, рекомбинантный полинуклеотид, вектор, олигонуклеотид, молекулу РНК, такую как рибосомальная РНК (рРНК), матричная РНК (мРНК), микроРНК, малая интерферирующая РНК (миРНК) или транспортная РНК (тРНК), или молекулу ДНК, такую как комплементарная ДНК (кДНК). Предпочтительными являются нуклеотидные последовательности, кодирующие или все легкие и тяжелые цепи или их часть, а также CDR области из антител по настоящему изобретению. В табл. 2-8 приведены номера (SEQ ID) аминокислотных последовательностей CDR областей, а также VH и VL типичных антител по настоящему изобретению, которые предпочтительно кодируются полинуклеотидами/последовательностями нуклеиновых кислот, как описано в данном контексте. Таким образом, в настоящем изобретении предпочтительно предлагаются нуклеотидные последовательности, кодирующие или все легкие и тяжелые цепи или их часть, прежде всего последовательности VH и VL областей, а также CDR типичных антител по настоящему изобретению. В табл. 9 представлены номера SEQ ID нуклеотидных последовательностей, кодирующих CDR области, а также VH и VL области типичных антител по настоящему изобретению. Благодаря вырожденности генетического кода настоящее изобретение включает также варианты последовательностей указанных нуклеотидных последовательностей и прежде всего такие варианты последовательностей, которые кодируют одинаковые аминокислотные последовательности.
Молекула нуклеиновой кислоты представляет собой молекулу, включающую и предпочтительно состоящую из компонентов нуклеиновой кислоты. Термин молекула нуклеиновой кислоты предпочтительно относится к молекулам ДНК или РНК. Прежде всего, он используется как синоним термину полинуклеотид. Предпочтительно молекула нуклеиновой кислоты представляет собой полимер, включающий нуклеотидные мономеры или состоящий из них, которые ковалентно связаны друг с другом фосфодиэфирными связями в основной сахариднофосфатной цепи. Термин молекула нуклеиновой кислоты также включает молекулы модифицированных нуклеиновых кислот, такие как молекулы ДНК
- 28 038301 или РНК с модифицированными основаниями, с модифицированными сахарами или с модифицированной основной цепью и т.п.
В табл. 9 представлены последовательности нуклеиновых кислот CDR областей, а также вариабельной области тяжелой цепи (VH) и вариабельной области легкой цепи (VL) типичных антител по настоящему изобретению (НВС34, HBC34v7, HBC34v23, HBC34v31, HBC34v32 и HBC34v33).
Таблица 9
Название | SEQ ID NO. | Последовательность нуклеиновой кислоты | |
HBC34 | ||
CDRH1 | 43 | GGACGCATCTTTAGAAGTTTTTAC |
CDRH2 | 44 | ATAAACCAAGATGGAAGTGAGAAA |
CDRH3 | 45 | GCGGCTTGGAGCGGCAATAGTGGGGGTATGGACG TC |
CDRL1 | 46 | AAATTGGGGAATAAAAAT |
CDRL2 | 47 | GAGGTTAAA |
длинный вариант CDRL2 | 48 | gtcatctatGAGGTTAAAtaccgcccc |
CDRL3 | 49 | CAGACGTGGGACAGCACCACTGTGGTG |
VH | 50 | GAACTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTGGG TCCAGCCGGGGGGGTCCCAGAGACTGTCCTGTGC AGCCTCTGGACGCATCTTTAGAAGTTTTTACATGA GCTGGGTCCGCCAGGCCCCAGGGAAGGGGCTGGA GTGGGTGGCCACTATAAACCAAGATGGAAGTGAG AAATTATATGTGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCA CCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTATT TCTGCAAATGAACAACCTGAGAGTCGAGGACACG GCCGTTTATTACTGCGCGGCTTGGAGCGGCAATA GTGGGGGTATGGACGTCTGGGGCCAGGGGACCAC GGTCTCCGTCTCCTCA |
VL | 51 | TCCTATGAGCTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCCGT GTCCCCAGGACAGACAGTCAGCATCCCCTGCTCT GGAGATAAATTGGGGAATAAAAATGTTTGCTGGT TTCAGCATAAGCCAGGCCAGTCCCCTGTGTTGGTC ATCTATGAGGTTAAATACCGCCCCTCGGGGATTC CTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACAC AGCCACTCTGACCATCAGCGGGACCCAGGCTATG GATGAGGCTGCCTATTTCTGTCAGACGTGGGACA GCACCACTGTGGTGTTCGGCGGAGGGACCAGGCT GACCGTCCTA |
КОДОН- оптимизированная VH | 70 | GAACTGCAGCTGGTCGAATCAGGAGGAGGGTGGG TCCAGCCCGGAGGGAGCCAGAGACTGTCTTGTGC CGCATCAGGGAGGATCTTCAGGAGCTTCTACATG TCCTGGGTGCGCCAGGCACCAGGCAAGGGACTGG AGTGGGTCGCCACCATCAACCAGGACGGATCTGA AAAGCTGTATGTGGATAGTGTCAAAGGCCGGTTC ACAATTAGCAGAGACAACGCTAAAAATTCTCTGT TTCTGCAGATGAACAATCTGCGAGTGGAGGATAC CGCCGTCTACTATTGCGCCGCTTGGTCTGGCAACA GCGGCGGGATGGATGTCTGGGGGCAGGGCACAAC AGTGAGCGTCTCTTCC |
HBC34 v31, HBC34 v32 и HBC34 v33 VH | 68 | GAGGTGCAGCTGGTGGAATCCGGCGGGGGACTGG TGCAGCCTGGCGGCTCACTGAGACTGAGCTGTGC AGCTTCTGGAAGAATCTTCAGATCTTTTTACATGA GTTGGGTGAGACAGGCTCCTGGGAAGGGACTGGA GTGGGTCGCAAACATCAATCAGGACGGATCAGAA AAGCTGTATGTGGATAGCGTCAAAGGCAGGTTCA CTATTTCCCGCGACAACGCCAAAAATTCTCTGTTT CTGCAGATGAACAATCTGCGGGTGGAGGATACCG CTGTCTACTATTGTGCAGCCTGGTCTGGCAACAGT GGAGGCATGGACGTGTGGGGACAGGGAACCACA GTGACAGTCAGCTCC |
VL v23 | 69 | TCTTACGAGCTGACACAGCCCCCTAGCGTGTCCGT CTCTCCAGGCCAGACAGCATCCATCACTTGCTCTG GCGACAAGCTGGGGAACAAAAATGCCTGTTGGTA TCAGCAGAAGCCAGGGCAGAGTCCCGTGCTGGTC ATCTACGAGGTGAAATATCGGCCTTCAGGAATTC CAGAAAGATTCAGTGGATCAAACAGCGGCAATAC TGCTACCCTGACAATTAGCGGGACCCAGGCCATG GACGAAGCTGATTACTATTGCCAGACATTCGATT CCACCACAGTGGTCTTTGGCGGGGGAACTAAGCT GACCGTGCTG |
- 29 038301
кодон- оптимизированная VL | 71 | TCATACGAACTGACTCAGCCTCCCTCCGTCTCCGT CTCACCTGGACAGACCGTCTCAATCCCCTGCTCCG GCGAT AAACTGGGCAACAAGAACGTGTGCTGGTTCCAGC ACAAACCCGGACAGAGTCCTGTGCTGGTCATCTA CGAGGTCAAGTATCGGCCAAGCGGCATTCCCGAA AGATTCAGCGGCTCCAACTCTGGGAATACCGCAA CACTGACTATCTCTGGAACCCAGGCAATGGACGA GGCAGCTTACTTTTGCCAGACTTGGGATTCAACTA CTGTCGTGTTCGGCGGCGGAACTAGACTGACTGT CCTG |
кодон- оптимизированная CRDH1 | 72 | GGGAGGATCTTCAGGAGCTTCTAC |
кодон- оптимизированная CDRH2 | 73 | ATCAACCAGGACGGATCTGAAAAG |
кодон- оптимизированная CDRH3 | 74 | GCCGCTTGGTCTGGCAACAGCGGCGGGATGGATG TC |
кодон- оптимизированная CDRL1 | 75 | AAACTGGGCAACAAGAAC |
кодон- оптимизированная CDRL2 | 76 | GAGGTCAAG |
длинный вариант кодоноптимизированной CDRL2 | 77 | GTCATCTACGAGGTCAAGTATCGGCCA |
кодон- оптимизированная CDRL3 | 78 | CAGACTTGGGATTCAACTACTGTCGTG |
HBC34v7, HBC34v23, НВС34 v31, НВС34 v32 и HBC34 v33 | ||
CDRL1 v7 и CDRL1 v23 | 60 | AAGCTGGGGAACAAAAAT |
CDRL2 v7 и CDRL2 v23 | 61 | GAGGTGAAA |
длинный вариант CDRL2 v7 и длинный вариант CDRL2 v23 | 62 | GTCATCTACGAGGTGAAATATCGGCCT |
CDRL3 v7 и CDRL3 v23 | 63 | CAGACATTCGATTCCACCACAGTGGTC |
VL v7 | 64 | TCTTACGAGCTGACACAGCCACCTAGCGTGTCCG TCTCTCCAGGACAGACCGTGTCCATCCCTTGCTCT GGCGACAAGCTGGGGAACAAAAATGTCTGTTGGT TCCAGCACAAGCCAGGGCAGAGTCCCGTGCTGGT CATCTACGAGGTGAAATATCGGCCTTCAGGAATT CCAGAACGGTTCAGCGGATCAAACAGCGGCAATA CTGCAACCCTGACAATTAGCGGGACCCAGGCCAT GGACGAAGCCGCTTATTTCTGCCAGACATTCGATT CCACCACAGTGGTCTTTGGCGGGGGAACTAGGCT GACCGTGCTG |
Предпочтительно последовательность молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению включает последовательности нуклеиновой кислоты согласно любой из последовательностей SEQ ID NO: 43-51 или состоит из нее или из функционального варианта указанной последовательности. Последовательность молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению также предпочтительно включает последовательности нуклеиновой кислоты согласно любой из последовательностей SEQ ID NO: 43-51, 60-64 и 68-78 или состоит из них.
Последовательности нуклеиновых кислот по настоящему изобретению также предпочтительно включают последовательности нуклеиновых кислот, которые по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 88%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны нуклеиновой кислоте, кодирующей CDR область, последовательность VH и/или последовательность VL, использованные в составе типичного антитела по настоящему изобретению, например, последовательности, приведенные в табл. 9.
В связи с этим молекула нуклеиновой кислоты является предпочтительной, если полинуклеотидная последовательность включает последовательности нуклеиновой кислоты согласно любой из последовательностей SEQ ID NO: 43-51 или состоит из нее или из функционального варианта указанной последовательности. Предпочтительна также молекула нуклеиновой кислоты, в которой полинуклеотидная последовательность включает последовательность нуклеиновой кислоты или состоит из последовательности нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей мере на 98 или 99% идентична любой из последовательностей SEQ ID NO: 43-51, 60-64 и 68-78. Более предпочтительно полинуклеотидная последовательность
- 30 038301 включает последовательность нуклеиновой кислоты согласно любой из последовательностей SEQ ID NO: 43-51, 60-64 и 68-78 или состоит из нее.
Более предпочтительно полинуклеотидная последовательность включает последовательность нуклеиновой кислоты или состоит из последовательности нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% и прежде всего предпочтительно по меньшей мере на 98 или 99% идентична любой из последовательностей SEQ ID NO: 70-78. Последовательности SEQ ID NO: 70-78 являются кодон-оптимизированными нуклеотидными последовательностями (см. табл. 9). Полинуклеотидная последовательность прежде всего предпочтительно включает последовательность нуклеиновой кислоты согласно любой из последовательностей SEQ ID NO: 70-78 или состоит из нее.
В основном молекулу нуклеиновой кислоты можно использовать, чтобы вставлять, удалять или изменять определенные нуклеотидные последовательности. Изменения в результате таких операций включают, но не ограничиваясь только ими, изменения для включения участков рестрикции, корректировки применения кодонов, добавления или оптимизации транскрипционных и/или трансляционных регуляторных последовательностей и т.п. Нуклеиновую кислоту также можно изменять, чтобы изменить кодируемые аминокислоты. Например, может быть полезным включение в аминокислотную последовательность антитела одной или более (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 и т.п.) аминокислотных замен, делеций и/или вставок. Такие точечные мутации позволяют модифицировать эффекторные функции, антигенсвязывающую аффинность, посттрансляционные модификации, иммуногенность и т.п., позволяют вставлять аминокислоты для присоединения ковалентных групп (например, метки) или позволяют включать маркеры (например, в целях очистки). Мутации можно включать в специфические участки или можно включать случайным образом с последующей селекцией (например, молекулярная эволюция). Например, в одной или более нуклеиновых кислот, кодирующих любую из CDR областей, последовательностей VH и/или VL типичного антитела по настоящему изобретению можно проводить случайную или направленную мутацию, чтобы придать различные свойства кодируемым аминокислотам. Такие изменения могут являться результатом итеративного (повторяющегося) процесса, в ходе которого сохраняются исходные изменения и при этом включают новые изменения в других положениях нуклеотидов. Кроме того, можно комбинировать изменения, достигнутые на независимых стадиях. Различные свойства, включенные в кодируемые аминокислоты, могут включать, но не ограничиваясь только ими, повышенную аффинность.
Вектор.
В объем настоящего изобретения включены, кроме того, векторы, например, векторы экспрессии, включающие молекулу нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению. Предпочтительно вектор включает описанную выше молекулу нуклеиновой кислоты.
Термин вектор относится к молекуле нуклеиновой кислоты, предпочтительно к рекомбинантной молекуле нуклеиновой кислоты, т.е. к молекуле нуклеиновой кислоты, которая не встречается в природе. В контексте настоящего изобретения вектор пригоден для включения или экспрессии требуемой последовательности нуклеиновой кислоты. Такие векторы могут представлять собой векторы хранения, векторы экспрессии, клонирующие векторы, векторы для переноса генов и т.п. Вектор хранения представляет собой вектор, который обеспечивает соответствующее хранение молекулы нуклеиновой кислоты. Таким образом, вектор может включать последовательность, соответствующую, например, требуемому антителу или его фрагменту по настоящему изобретению. Вектор экспрессии можно использовать для получения продуктов экспрессии, таких как РНК, например, мРНК, или пептиды, полипептиды или белки. Например, вектор экспрессии может включать последовательности, необходимые для транскрипции участка последовательности в составе вектора, такой как последовательность промотора. Клонирующий вектор, как правило, представляет собой вектор, содержащий участок клонирования, который можно использовать для включения последовательностей нуклеиновых кислот в вектор. Клонирующий вектор может представлять собой, например, плазмидный вектор или вектор бактериофага. Вектор для переноса генов может представлять собой вектор, который можно использовать для переноса молекул нуклеиновых кислот B-клетки или в организмы, например, векторы вирусов. В контексте настоящего изобретения вектор может представлять собой, например, вектор РНК или вектор ДНК. Предпочтительно вектором является молекула ДНК. Например, в контексте настоящего изобретения вектор включает участок клонирования, маркер селекции, такой как фактор устойчивости к антибиотику, и последовательность, пригодную для размножения вектора, такую как точка начала репликации. Предпочтительно, в контексте настоящей заявки вектором является плазмидный вектор.
Клетки.
В следующем объекте настоящего изобретения предлагается также клетка, экспрессирующая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению и/или включающая вектор по настоящему изобретению.
Примеры таких клеток включают, но не ограничиваясь только ими, эукариотические клетки, например дрожжевые клетки, клетки животных или клетки растений. Предпочтительно клетками являются
- 31 038301 клетки млекопитающих, более предпочтительно клеточная линия млекопитающих. Предпочтительные примеры включают клетки человека, клетки СНО, клетки HEK293T, клетки PER.C6, клетки NS0, клетки печени человека, например, клетки Нера RG, миеломные клетки или клетки гибридомы.
Прежде всего, клетку можно трансфектировать вектором по настоящему изобретению, предпочтительно вектором экспрессии. Термин трансфекция относится к введению молекул нуклеиновых кислот, таких как молекулы ДНК или РНК (например, мРНК) B-клетки, предпочтительно в эукариотические клетки. В контексте настоящего изобретения термин трансфекция включает любой известный специалисту в данной области техники способ введения молекул нуклеиновых кислот B-клетки, предпочтительно в эукариотические клетки, такие как клетки млекопитающих. Такие способы включают, например, электропорацию, липофекцию, например основанную на катионных липидах и/или липосомах, осаждение в присутствии фосфата кальция, трансфекцию на основе наночастиц, трансфекцию на основе вирусов или трансфекцию на основе катионных полимеров, таких как диэтиламиноэтил (ДЭАЭ) - декстран или полиэтиленимин и т.п. Предпочтительно введение является не вирусным.
Кроме того, клетки по настоящему изобретению можно стабильно или временно трансфектировать вектором по настоящему изобретению, например, для экспрессии антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению. Предпочтительно клетки стабильно трансфектируют вектором по настоящему изобретению, кодирующим антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению. В другом варианте клетки также предпочтительно временно трансфектируют вектором по настоящему изобретению, кодирующим антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению.
Необязательные дополнительные признаки антител.
Антитела по настоящему изобретению можно присоединять, например, к лекарственному средству для доставки в участок лечения или присоединять к детектируемой метке, чтобы способствовать визуализации участка, включающего исследуемые клетки. Способы присоединения антител к лекарственным средствам и детектируемым меткам известны в данной области техники, так как они представляют собой способы визуализации с использованием детектируемых меток. Меченые антитела можно использовать во множестве методов анализа, в которых применяют множество меток. Детектирование образования комплекса антитело-антиген между антителом по настоящему изобретению и исследуемым эпитопом в составе HBsAg, прежде всего в антигенной петлевой области HBsAg, можно ускорить за счет присоединения к антителу детектируемого вещества. Пригодные способы детектирования включают применение меток, таких как радионуклиды, ферменты, коферменты, флуорофоры, хемилюминесцентные реагенты, хромогены, субстраты ферментов или ко-факторы, ингибиторы ферментов, комплексы простетических групп, свободные радикалы, частицы, красители и т.п. Примеры пригодных ферментов включают пероксидазу хрена, щелочную фосфатазу, Р-галактозидазу или ацетилхолинэстеразу, примеры пригодных комплексов простетических групп включают стрептавидин/биотин и авидин/биотин, примеры пригодных флуоресцентных материалов включают умбеллиферон, флуоресцеин, флуоресцеин изотиоционат, родамин, дихлортриазиниламин флуоресцеин, дансилхлорид или фикоэритрин, примером люминесцентного материала является люминол, примеры биолюминесцентных материалов включают люциферазу, люциферин и экворин, а примеры пригодных радиоактивных материалов включают 125I, 131I, 35S, или 3Н. Такие реагенты-метки можно использовать при проведении различных известных анализов, таких как радиоиммуноанализ, иммуноферментный анализ, например, твердофазный иммуноферментный анализа (ИФА), флуоресцентный иммуноанализ и т.п. В связи с этим меченые антитела по настоящему изобретению можно использовать при проведении указанных анализов, например, как описано в патентах US 3766162, US 3791932, US 3817837 и US 4233402.
Антитело по настоящему изобретению можно конъюгировать с терапевтическим фрагментом, таким как цитотоксин, терапевтическим агентом или ионом радиоактивного металла или радиоизотопом. Примеры радиоизотопов включают, но не ограничиваясь только ими, I-131, I-123, I-125, Y-90, Re-188, Re-186, At-211, Cu-67, Bi-212, Bi-213, Pd-109, Tc-99, In-111 и т.п. Такие конъюгаты антител можно использовать для модификации данной биологической ответной реакции, при этом строение фрагмента лекарственного средства не ограничивается классическими химическими терапевтическими агентами. Например, фрагмент лекарственного средства может представлять собой белок или полипептид, характеризующийся требуемой биологической активностью. Такие белки могут включать, например, токсин, такой как абрин, рицин А, экзотоксин синегнойной палочки или дифтерийный токсин.
Методики конъюгации таких терапевтических фрагментов с антителами известны. См., например, Arnon et al., Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy в книге Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, ред. Reisfeld et al., Alan R. Liss, Inc., p. 243-256 (1985), Hellstrom et al., Antibodies for Drug Delivery в книге Controlled Drug Delivery, ред. Robinson et al., 2 изд., Marcel Dekker, Inc., p. 623-653 (1987), Thorpe, Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer Therapy: A Review в книге Monoclonal Antibodies '84: Biological and Clinical Applications, ред. Pinchera et al., Editrice Kurtis, Милан, Италия, p. 475-506 (1985), Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy в книге Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy, ред. Baldwin et al., Academic Press, Нью-Йорк, p. 303-316 (1985) и Thorpe et al., Immunol. Rev., 62, p. 119-158
- 32 038301 (1982).
В другом варианте антитело или его антигенсвязывающий фрагмент можно конъюгировать со вторым антителом или с фрагментом антитела, при этом получают гетероконъюгат антител, как описано в патенте US 4676980. Кроме того, между метками и антителами по настоящему изобретению можно включать линкеры, как описано в патенте US 4831175. К антителам или их антигенсвязывающим фрагментам можно напрямую присоединять радиоактивный йод, индий, иттрий или другую радиоактивную частицу, известную в данной области техники, например, как описано в патенте US 5595721. Лечение может включать комбинацию способов лечения, с использованием конъюгированных и неконъюгированных антител, которые вводят одновременно или последовательно, например, как описано в заявках WO 00/52031, WO 00/52473.
Антитела по настоящему изобретению также можно присоединять к твердой подложке. Кроме того, антитела по настоящему изобретению или их функциональные фрагменты можно модифицировать химическим методом ковалентной конъюгации с полимером, например, чтобы увеличить их период полураспада в кровотоке. Примеры полимеров и способов их присоединения к пептидам приведены в патентах US 4766106, US 4179337, US 4495285 и US 4609546. В некоторых вариантах полимеры можно выбрать из полиоксиэтилированных полиолов и полиэтиленгликоля (ПЭГ). ПЭГ растворим в воде при комнатной температуре и характеризуется общей формулой R(O-CH2-CH2)nO-R, где R может обозначать водород или защитную группу, такую как алкильная или алканольная группа. Предпочтительно защитная группа может содержать от 1 до 8 атомов углерода. Например, защитной группой является метил. Индекс п обозначает положительное целое число. В одном варианте п равен от 1 до 1000. В другом варианте п равен от 2 до 500. Предпочтительно ПЭГ характеризуется средней молекулярной массой от 1000 до 40000, более предпочтительно ПЭГ характеризуется средней молекулярной массой от 2000 до 20000, еще более предпочтительно ПЭГ характеризуется средней молекулярной массой от 3000 до 12000. Кроме того, ПЭГ может содержать по крайней мере одну гидроксильную группу, например ПЭГ может содержать концевую гидроксильную группу. Например, именно концевую гидроксильную группу активируют для взаимодействия со свободной аминогруппой в составе ингибитора. Однако следует понимать, что для получения ковалентно конъюгированного ПЭГ/антитела по настоящему изобретению тип и число реакционноспособных групп можно изменять.
Согласно настоящему изобретению можно также использовать водорастворимые полиоксиэтилированные полиолы. Указанные соединения включают полиоксиэтилированный сорбит, полиоксиэтилированную глюкозу, полиоксиэтилированный глицерин (ПОГ) и т.п. В одном варианте используют ПОГ. В связи с тем, что основная цепь глицерина в составе полиоксиэтилированного глицерина представляет собой цепь, аналогичную природному глицерину, например, в моно-, ди-, триглицеридах животных и человека, без ссылки на какую-либо теорию полагают, что такое разветвленное соединение не обязательно следует рассматривать как чужеродный агент в организме. ПОГ может характеризоваться молекулярной массой в том же диапазоне, как и ПЭГ. Другой системой для доставки лекарственных средств, которую можно использовать для увеличения периода полураспада в кровотоке, является липосома. Способы получения липосомальных систем доставки известны специалисту в данной области техники. В данной области техники известны другие системы для доставки лекарственных средств и описаны, например, в книгах Poznansky и др. (1980) и Poznansky (1984).
Антитела по настоящему изобретению можно получить в очищенной форме. Как правило, антитело присутствует в композиции, которая в основном не содержит другие полипептиды, при этом другие полипептиды составляют, например, менее 90 мас.%, обычно менее 60 мас.% и более типично менее 50 мас.% композиции.
Антитела по настоящему изобретению могут проявлять иммуногенность в организмах хозяина, не относящихся к человеку (или гетерологичных), например в организме мышей. Прежде всего, антитела могут содержать идиотоп, который является иммуногенным в организмах хозяина, не относящихся к человеку, но не в организме человека. Прежде всего, антитела по настоящему изобретению, предназначенные для применения при лечении человека, включают такие антитела, которые нельзя выделить простым способом из организмов хозяина, таких как мыши, козы, кролики, крысы, млекопитающие, не относящиеся к отряду приматов, и т.п., и, как правило, нельзя получить гуманизацией или из ксено-мышей.
Получение антител.
Антитела по настоящему изобретению можно получить любым способом, известным в данной области техники. Например, известна общая методология получения моноклональных антител с использованием гибридомной технологии (Kohler G. и Milstein С. (1975), Kozbar и др. (1983)). В одном варианте используют альтернативный способ иммортализации вируса Эпштейна-Барра (ВЭБ), описанный в заявке WO 2004/076677.
Предпочтительный способ описан в заявке WO 2004/076677. В указанном способе В-клетки, продуцирующие антитело по настоящему изобретению, трансформируют вирусом ВЭБ и поликлональным активатором В-клеток. На стадии трансформации необязательно можно добавлять дополнительные агенты, стимулирующие клеточный рост и дифференциацию, чтобы дополнительно повысить эффективность. Указанные стимулирующие агенты могут представлять собой цитокины, такие как IL-2 и IL-15. В
- 33 038301 одном объекте для дополнительного повышения эффективности на стадии иммортализации добавляют IL-2, однако его применение не играет значительной роли. Затем иммортализованные B-клетки, полученные указанными способами, можно культивировать с использованием способов, известных в данной области техники, и выделять.
Другой предпочтительный способ описан в заявке WO 2010/046775. В указанном способе плазматические клетки культивируют в ограниченных количествах или в качестве единичных плазматических клеток в микролуночных культуральных планшетах. Антитела можно выделять из культур плазматических клеток. Кроме того, из культур плазматических клеток можно экстрагировать РНК и проводить полимеразную цепную реакцию (ПЦР) с использованием известных в данной области техники способов. Области VH и VL в составе антител можно амплифицировать методом ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР), секвенировать и клонировать в векторе экспрессии, который затем трансфектируют B-клетки HEK293T или в другие клетки хозяина. Клонирование нуклеиновой кислоты в векторах экспрессии, трансфекцию клеток хозяина, культивирование трансфектированных клеток хозяина и выделение продуцируемого антитела можно проводить с использованием любых способов, известных специалисту в данной области техники.
Затем антитела можно при необходимости дополнительно очищать с использованием фильтрации, центрифугирования и различных хроматографических методов, таких как ВЭЖХ или аффинная хроматография. Методы очистки антител, например, моноклональных антител, включая методы получения антител фармацевтической степени чистоты известны в данной области техники.
Фрагменты антител по настоящему изобретению можно получить из антител способами, которые включают расщепление ферментами, такими как пепсин или папаин, и/или расщепление дисульфидных связей в условиях химического восстановления. В другом варианте, фрагменты антител можно получить клонированием и экспрессией части последовательности тяжелой или легкой цепей. Фрагменты антител включают Fab, Fab', F(ab')2 и Fv фрагменты. Настоящее изобретение также включает одноцепочечные Fv фрагменты (scFv), полученные из тяжелой и легкой цепей антитела по настоящему изобретению. Например, настоящее изобретение включает scFv, содержащий CDR области из антитела по настоящему изобретению. Включены также мономеры и димеры тяжелой или легкой цепей, однодоменные антитела, состоящие из тяжелых цепей, однодоменные антитела, состоящие из легких цепей, а также одноцепочечные антитела, например одноцепочечное Fv, в котором вариабельные области тяжелой и легкой цепей соединены через пептидный линкер.
Фрагменты антител по настоящему изобретению могут придавать способность к моновалентным или мультивалентным взаимодействиям и содержаться в различных структурах, как описано выше. Например, чтобы сконструировать трехвалентное триатело или четырехвалентное тетратело, можно синтезировать молекулы scFv. Молекулы scFv можно включать в домен Fc области, при этом получают двухвалентные мини-тела. Кроме того, последовательности по настоящему изобретению могут являться компонентом мультиспецифичных молекул, в которых последовательности по настоящему изобретению направленно связываются с эпитопами по настоящему изобретению, а другие области молекулы связываются с другими мишенями. Типичные молекулы включают, но не ограничиваясь только ими, биспецифический Fab2, триспецифический Fab3, биспецифический scFv и диатела (Holliger и Hudson, Nature Biotechnology, 9, p. 1126-1136 (2005)).
Для получения последовательностей ДНК, кодирующих антитела или фрагменты антител по настоящему изобретению, можно использовать стандартные методы молекулярной биологии. Требуемые последовательности ДНК можно синтезировать полностью или частично с использованием методов олигонуклеотидного синтеза. В зависимости от конкретного случая можно использовать сайт-направленный мутагенез и полимеразную цепную реакцию (ПЦР).
Для экспрессии последовательностей ДНК, кодирующих молекулы антител по настоящему изобретению или их фрагменты, можно использовать любую пригодную систему клетка хозяина/вектор. Для экспрессии фрагментов антител, таких как Fab и F(ab')2 фрагменты, и прежде всего Fv фрагменты и одноцепочечные фрагменты антител, например, одноцепочечный Fv можно частично использовать бактериальные системы, например Е. coli, и другие микробные системы. Для продуцирования более крупных молекул антител, включая полные молекулы антител, можно использовать экспрессионные системы на основе эукариотических клеток хозяина, например млекопитающих. Пригодные клетки хозяина млекопитающих включают, но не ограничиваясь только ими, клетки СНО, HEK293T, PER.C6, NS0, миеломные клетки или клетки гибридомы.
В настоящем изобретении предлагается также способ получения молекулы антитела по настоящему изобретению, включающий культивирование клетки хозяина, содержащей вектор, кодирующий нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению, в условиях, пригодных для экспрессии белка из ДНК, кодирующей молекулу антитела по настоящему изобретению, и выделение молекулы антитела.
Молекула антитела может включать только полипептид тяжелой или легкой цепи, в указанном случае для трансфекции клеток хозяина необходимо использовать только последовательность, кодирующую полипептид тяжелой или легкой цепи. Для получения продуктов, включающих обе тяжелую и легкую цепи, клеточную линию можно трансфектировать двумя векторами, при этом первый вектор кодирует
- 34 038301 полипептид легкой цепи, а второй вектор кодирует полипептид тяжелой цепи. В другом варианте можно использовать единичный вектор, включающий последовательности, кодирующие полипептиды легкой цепи и тяжелой цепи.
В другом варианте, антитела по настоящему изобретению можно получить с использованием следующих стадий: (i) экспрессия последовательности нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению B-клетке хозяина, например, с использованием вектора по настоящему изобретению и (ii) выделение экспрессированного антитела. Кроме того, способ может включать (iii) очистку выделенного антитела. В отношении требуемой специфичности или функции указанных полученных антител можно проводить скрининг трансформированных B-клеток и культивированных плазматических клеток.
Стадию скрининга можно проводить с использованием любого метода иммуноанализа, например, ИФА, окрашивание тканей или клеток (включая трансфектированные клетки), анализ на нейтрализацию, или любого метода анализа из ряда других методов анализа, известных в данной области техники для идентификации требуемой специфичности или функции. Анализ можно выбрать на основе простого распознавания одного или более антигенов или можно выбрать на дополнительной основе требуемой функции, например, чтобы выбрать нейтрализующие антитела, а не только антигенсвязывающие антитела, чтобы выбрать антитела, которые способны изменять характеристики клеток-мишеней, такие как их сигнальные каскады, их форма, скорость роста, способность оказывать влияние на другие клетки, ответная реакция на влияние других клеток или других реагентов или на изменение условий, статус дифференциации и т.п.
Затем из положительной культуры трансформированных В-клеток можно получить индивидуальные клоны трансформированных В-клеток. Стадию клонирования для выделения индивидуальных клонов из смеси положительных клеток можно проводить с использованием ограниченного разведения, микро-манипуляции, осаждения одиночных клеток при клеточной сортировке или другим способом, известным в данной области техники.
Нуклеиновую кислоту из культивированных плазматических клеток можно выделять, клонировать и экспрессировать B-клетках HEK293T или в других известных клетках хозяина с использованием способов, известных в данной области техники.
Клоны иммортализованных B-клеток или трансфектированных клеток хозяина по настоящему изобретению можно использовать различными способами, например, в качестве источника моноклональных антител, в качестве источника нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК), кодирующей требуемое моноклональное антитело, для исследований и т.п.
В настоящем изобретении предлагается также композиция, включающая иммортализованные B-клетки памяти или трансфектированные клетки хозяина, которые продуцируют антитела по настоящему изобретению.
Клон иммортализованных B-клеток или культивированные плазматические клетки по настоящему изобретению можно также использовать в качестве источника нуклеиновой кислоты для клонирования генов антитела для последующей рекомбинантной экспрессии. Экспрессия из рекомбинантных источников является наиболее распространенным методом, который используют в фармацевтических целях, чем экспрессия из B-клеток или гибридом, например, по причинам стабильности, воспроизводимости, простоты культивирования и т.п.
В связи с этим в настоящем изобретении также предлагается способ получения рекомбинантной клетки, включающий следующие стадии: (i) получение одной или более нуклеиновых кислот (например, мРНК тяжелой и/или легкой цепи) из клона B-клеток или из культивированных плазматических клеток, которые кодируют требуемое антитело, (ii) включение нуклеиновой кислоты в вектор экспрессии и (iii) трансфекция вектора B-клетку хозяина, при этом обеспечивают экспрессию требуемого антитела B-клетке хозяина.
Аналогичным образом, в настоящем изобретении предлагается способ получения рекомбинантной клетки, включающий следующие стадии: (i) секвенирование нуклеиновой(ых) кислоты(т) из клона B-клеток или из культивированных плазматических клеток, которые кодируют требуемое антитело, и (ii) использование информации о последовательности, полученной на стадии (i), для получения нуклеиновой(ых) кислоты(т) для включения B-клетку хозяина, при этом обеспечивают экспрессию требуемого антитела в указанной клетке хозяина. Нуклеиновую кислоту необязательно можно обрабатывать между стадиями (i) и (ii), чтобы включить участки рестрикции, корректировать использование кодонов и/или оптимизировать транскрипционные и/или трансляционные последовательности.
Кроме того, в настоящем изобретении также предлагается способ получения трансфектированной клетки хозяина, включающий стадию трансфекции клетки хозяина одной или более нуклеиновыми кислотами, которые кодируют требуемое антитело, при этом нуклеиновыми кислотами являются нуклеиновые кислоты, которые получают из клона иммортализованных B-клеток или из культивированных плазматических клеток по настоящему изобретению. В связи с этим методы, включающие, во-первых, получение нуклеиновой(ых) кислоты(т) и затем ее использование для трансфекции клетки хозяина, могут осуществлять различные люди в различные периоды времени в различных местах (например, в различных странах).
- 35 038301
Указанные рекомбинантные клетки по настоящему изобретению можно затем использовать для экспрессии и для культивирования. Такие клетки, прежде всего, пригодны для экспрессии антител при широкомасштабном фармацевтическом производстве. Их также можно использовать в качестве активного ингредиента фармацевтической композиции. Можно использовать любой пригодный метод культивирования, включая, но не ограничиваясь только ими, статическое культивирование, культивирование в роллерных флаконах, в асцитной жидкости, в биореакторе с системой половолоконных картриджей, в модульном мини-ферментере, в биореакторе с мешалкой, культивирование на микроносителях, в перфузионном биореакторе с керамическим заполнителем и т.п.
Способы получения и секвенирования генов иммуноглобулина из B-клеток или из плазматических клеток известны в данной области техники (см., например, главу 4 книги Kuby, Immunology, 4oe изд. (2000)).
Трансфектированная клетка хозяина может представлять собой эукариотическую клетку, включая дрожжевые клетки и клетки животных, прежде всего клетки млекопитающих (например, клетки СНО, клетки NS0, клетки человека, такие как клетки PER.C6 или НКВ-11, миеломные клетки или клетки печени человека, такие как Нера RG), а также клетки растений, при этом клетки млекопитающих является предпочтительными. Предпочтительные экспрессирующие организмы способны гликозилировать антитело по настоящему изобретению, прежде всего углеводородными структурами, которые сами по себе не являются иммуногенными в организме человека. В одном варианте трансфектированная клетка хозяина может расти в бессывороточной среде. В другом варианте трансфектированная клетка хозяина может расти в культуре в отсутствие продуктов животного происхождения. Трансфектированную клетку хозяина также можно культивировать, чтобы получить клеточную линию.
В настоящем изобретении предлагается также способ получения одной или более молекул нуклеиновых кислот (например, генов тяжелой и легкой цепей), которые кодируют требуемое антитело, включающий стадии: (i) получение клона иммортализованных B-клеток или культивирование плазматических клеток по настоящему изобретению, (ii) получение нуклеиновой кислоты, которая кодирует требуемое антитело, из клона B-клеток или из культивированных плазматических клеток. Кроме того, в настоящем изобретении предлагается способ получения последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует требуемое антитело, включающий стадии: (i) получение клона иммортализованных B-клеток или культивирование плазматических клеток по настоящему изобретению, (ii) секвенирование нуклеиновой кислоты, которая кодирует требуемое антитело, из клона B-клеток или из культивированных плазматических клеток.
В настоящем изобретении, кроме того, предлагается способ получения молекулы(л) нуклеиновой кислоты, которая кодирует требуемое антитело, включающий стадию получения нуклеиновой кислоты, полученной из клона трансформированных B-клеток или из культивированных плазматических клеток по настоящему изобретению. Таким образом, методы, включающие сначала получение клона B-клеток или культивированных плазматических клеток и затем получение нуклеиновой кислоты(т) из клона B-клеток или из культивированных плазматических клеток, могут осуществлять различные люди в различные периоды времени в различных местах (например, в различных странах).
Настоящее изобретение также включает способ получения антитела (например, для фармацевтического применения) по настоящему изобретению, включающий стадии: (i) получение и/или секвенирование одной или более молекулы нуклеиновой кислоты (например, генов тяжелой и легкой цепей) из выбранного клона B-клеток или из культивированных плазматических клеток, экспрессирующих требуемое антитело, (ii) вставка нуклеиновой(ых) кислоты(т) или использование последовательности(ей) нуклеиновой(ых) кислоты(т) для получения вектора экспрессии, (iii) трансфекция клетки хозяина, которая способна экспрессировать требуемое антитело, (iv) культивирование или субкультивирование трансфектированных клеток хозяина в условиях, в которых экспрессируется требуемое антитело, и, необязательно, (v) очистка требуемого антитела.
В настоящем изобретении также предлагается способ получения антитела, включающий следующие стадии: культивирование или субкультивирование популяции трансфектированных клеток хозяина, например, популяции стабильно трансфектированных клеток хозяина, в условиях, при которых экспрессируется требуемое антитело, и, необязательно, очистка требуемого антитела, причем указанную популяцию трансфектированных клеток хозяина получают в результате проведения следующих стадий: (i) получение нуклеиновой(ых) кислоты(т), кодирующей выбранное антитело, которое продуцируется клоном B-клеток или культивированными плазматическими клетками, полученными, как описано выше, (ii) вставка нуклеиновой(ых) кислоты(т) в вектор экспрессии, (iii) трансфекция вектора B-клетку хозяина, которая способна экспрессировать требуемое антитело, и (iv) культивирование или субкультивирование трансфектированной клетки хозяина, включающей вставленные нуклеиновые кислоты, для получения требуемого антитела. Таким образом, методы, включающие сначала получение рекомбинантной клетки хозяина и затем ее культивирование для экспрессии антитела, могут осуществлять различные люди в совершенно различные периоды времени в различных местах (например, в различных странах).
Фармацевтические композиции.
В настоящем изобретении также предлагается фармацевтическая композиция, включающая один
- 36 038301 или более из ниже перечисленных материалов:
(i) антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, (ii) нуклеиновая кислота, кодирующая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, (iii) вектор, включающий нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению, или (iv) клетка, экспрессирующая антитело по настоящему изобретению или включающая вектор по настоящему изобретению.
Другими словами, в настоящем изобретении также предлагается фармацевтическая композиция, содержащая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению, вектор по настоящему изобретению и/или клетку по настоящему изобретению.
Фармацевтическая композиция предпочтительно также может содержать фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель и/или эксципиент. Хотя носитель или эксципиент может облегчать введение, он сам по себе не должен индуцировать продуцирование антител, вредных для индивидуума, которому вводят композицию. Носитель также не должен оказывать токсическое действие. Пригодные носители могут представлять собой крупные, медленно метаболизируемые макромолекулы, такие как белки, полипептиды, липосомы, полисахариды, полимолочные кислоты, полигликолевые кислоты, полимерные аминокислоты, сополимеры аминокислот и инактивированные вирусные частицы. В основном фармацевтически приемлемые носители в фармацевтических композициях по настоящему изобретению могут представлять собой активные компоненты или неактивные компоненты. Предпочтительно фармацевтически приемлемый носитель в фармацевтической композиции по настоящему изобретению является неактивным компонентом в отношении гепатита В или D.
Можно использовать фармацевтически приемлемые соли, например соли неорганических кислот, такие как гидрохлориды, гидробромиды, фосфаты и сульфаты, или соли органических кислот, такие как ацетаты, пропионаты, малонаты и бензоаты.
Фармацевтически приемлемые носители в фармацевтической композиции могут дополнительно включать жидкости, такие как вода, физиологический раствор, глицерин и этанол. Кроме того, в таких композициях могут присутствовать вспомогательные вещества, такие как смачивающие или эмульгирующие агенты или агенты для регуляции pH (буферные вещества). Указанные носители позволяют перерабатывать фармацевтические композиции в таблетки, пилюли, драже, капсулы, жидкости, гели, сиропы, эмульсии и суспензии, предназначенные для приема внутрь субъектом.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно получить в различных формах. Например, композиции можно получить в виде препаратов для инъекций, или в виде жидких растворов, или суспензий. Можно также получить твердые формы, которые перед инъекцией можно растворить в жидких носителях для получения раствора или суспензии (например, лиофилизованная композиция, аналогичная продуктам Synagis™ и Herceptin™, предназначенная для разведения стерильной водой, содержащей консервант). Композицию можно получить для местного введения, например, в виде мази, крема или порошка. Композицию можно получить для перорального введения, например, в виде таблетки или капсулы, в виде спрея или сиропа (необязательно в смеси с ароматизатором). Композицию можно получить для пульмонального введения, например, в виде ингаляционного препарата, используя тонкодисперсный порошок, или в виде спрея. Композицию можно получить в виде суппозитория или вагинального суппозитория. Композицию можно получить для назального, ушного или глазного введения, например, в виде капель. Композицию можно представить в форме набора, созданного таким образом, что непосредственно перед введением субъекту комбинированную композицию растворяют повторно. Например, лиофилизованное антитело можно представлять в наборе со стерильной водой или стерильным буферным раствором.
Предпочтительно активным ингредиентом в композиции является молекула антитела, фрагмент антитела или его варианты и производные, прежде всего, активным ингредиентом в композиции является антитело, фрагмент антитела или его варианты и производные по настоящему изобретению. Сам по себе активный ингредиент может подвергаться деградации в желудочно-кишечном тракте. Таким образом, если композиция предназначена для введения способом с использованием желудочно-кишечного тракта, композиция может содержать агенты, которые защищают антитело от деградации, но которые высвобождают антитело после его абсорбции из желудочно-кишечного тракта.
Подробное описание фармацевтически приемлемых носителей приведено в справочнике Gennaro Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20 изд., ISBN: 0683306472 (2000).
Значением pH фармацевтических композиций по настоящему изобретению обычно составляет от 5,5 до 8,5, в некоторых вариантах pH может составлять от 6 до 8, а в других вариантах pH может составлять приблизительно 7. Значение pH можно поддерживать при использовании буферного вещества. Композиция может быть стерильной и/или апирогенной. Композиция может быть изотонической в отношении человека. В одном варианте фармацевтические композиции по настоящему изобретению поставляют в герметично закрытых контейнерах.
В объем настоящего изобретения включены композиции в нескольких формах введения, которые
- 37 038301 включают, но не ограничиваясь только ими, такие формы, которые пригодны для парентерального введения, например, инъекцией или вливанием, например, струйным вливанием или непрерывным вливанием. Если продукт предназначен для инъекции или вливания, его можно получить в форме суспензии, раствора или эмульсии в масляном или в водном носителе, и он может содержать вспомогательные вещества, такие как суспендирующие агенты, консерванты, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. В другом варианте молекулу антитела можно представить в сухой форме, предназначенной для растворения перед применением в пригодной стерильной жидкости. Носитель, как правило, означает материал, который пригоден для хранения, транспортировки и/или введения соединения, такого как фармацевтически активное соединение, прежде всего антитела по настоящему изобретению. Например, носитель может представлять собой физиологически приемлемую жидкость, которая пригодна для хранения, транспортировки и/или введения фармацевтически активного соединения, прежде всего антител по настоящему изобретению. После получения лекарственной формы композиции по настоящему изобретению можно вводить напрямую субъекту. В одном варианте состав композиции оптимизируют для введения млекопитающему, например, человеку.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно вводить рядом способов, включая, но не ограничиваясь только ими, пероральный, внутривенный, внутримышечный, внутриартериальный, костномозговой, внутрибрюшинный, внутриоболочечный, внутрижелудочковый, внутрикожный, чрескожный, местный, подкожный, интраназальный, энтеральный, подъязычный, внутривагинальный или ректальный способы введения. Для введения фармацевтических композиций по настоящему изобретению можно также использовать безыгольный шприц. Предпочтительно фармацевтическую композицию можно получить для перорального введения, например, в виде таблеток, капсул и т.п., для местного введения или в виде препарата для инъекций, например, в виде жидких растворов или суспензий, при этом фармацевтическую композицию, прежде всего предпочтительно можно использовать в виде препарата для инъекций. Предпочтительны также твердые формы, пригодные для растворения перед инъекцией в жидких носителях для получения раствора или суспензии, например, такую фармацевтическую композицию получают в лиофилизованной форме.
Для инъекции, например внутривенной, чрескожной или подкожной инъекции или инъекции в очаг поражения, активный ингредиент предпочтительно перерабатывают в форму парентерально приемлемого водного раствора, который является апирогенным и характеризуется пригодным pH, изотоничностью и стабильностью. Специалисты в данной области техники могут приготовить пригодные растворы с использованием, например, изотонических растворителей, таких как раствор хлорида натрия для инъекций, раствор Рингера для инъекций, раствор Рингера с лактатом для инъекций. При необходимости можно включать консерванты, стабилизаторы, буферные вещества, антиоксиданты и/или другие вспомогательные вещества. Если полипептид, пептид или нуклеиновую кислоту, другое фармацевтически полезное соединение настоящему изобретению предназначено для введения индивидууму, то введение предпочтительно проводят в профилактически эффективном количестве или терапевтически эффективном количестве (в зависимости от ситуации), которое является достаточным для проявления благоприятного действия на индивидуума. Действительное введенное количество, а также способ и период введения зависят от природы и степени тяжести состояния, подлежащего лечению. Для инъекции фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно получать, например, в виде предварительно заполненного шприца.
Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению, как определено выше, также можно вводить перорально в любой перорально приемлемой стандартной лекарственной форме, включая, но не ограничиваясь только ими, капсулы, таблетки, водные суспензии или растворы. В случае таблеток для перорального введения широко используемые носители включают лактозу и кукурузный крахмал. Как правило, также добавляют смазывающие вещества, такие как стеарат магния. Для перорального введения в форме капсулы пригодные растворители включают лактозу и высушенный кукурузный крахмал. Если для перорального введения необходимы водные суспензии, активный ингредиент, т.е. молекулу по настоящему изобретению, конъюгированную с карго-переносчиком, как определено выше, представляют в комбинации с эмульгирующими и суспендирующими агентами. При необходимости можно также добавлять определенные подсластители, ароматизаторы или красители.
Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно также вводить местным способом, прежде всего, если цель лечения включает участки или органы, легко доступные при местном применении, например, включая заболевания кожи или любой другой доступной эпителиальной ткани. Пригодные составы для местного введения получают для каждого из указанных участков или органов. Для местного применения фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно перерабатывают в пригодную мазь, содержащую фармацевтическую композицию по настоящему изобретению, прежде всего ее компоненты, как определено выше, суспендированные или растворенные в одном или более носителей. Носители для местного введения включают, но не ограничиваясь только ими, минеральное масло, вазелиновое масло, медицинский белый вазелин, пропиленгликоль, полиоксиэтилен, полиоксипропилен, эмульгированный воск и воду. В другом варианте применения фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно перерабатывать в пригодные лосьон или крем. В контексте
- 38 038301 настоящего изобретения пригодные носители включают, но не ограничиваясь только ими, минеральное масло, сорбит моностеарат, полисорбат 60, воск цетиловых эфиров, цетеариловый спирт, 2-октилдодеканол, бензиловый спирт и воду.
Схемы дозировок могут представлять собой схему однократных введений или схему многократных введений, при этом в контексте настоящего изобретения схема многократных введений является предпочтительным. К известным фармацевтическим препаратам на основе антител, прежде всего к фармацевтическим препаратам на основе антител против ВГВ, например продукт Hepatect® CP, прилагается инструкция, в которой указана частота введения, прежде всего для различных показаний, например указана предпочтительная частота введения фармацевтического препарата: ежедневно, еженедельно, ежемесячно и т.п. Частота введения и дозировка могут также зависеть от степени тяжести симптомов.
Например, фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить ежедневно, например, один или несколько раз в день, например, один, два, три раза или четыре раза в день, предпочтительно один или два раза в день, более предпочтительно один раз в день в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 21 или более дней, например, ежедневно в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6 месяцев. Предпочтительно фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить еженедельно, например, один или два раза в неделю в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 21 или более недель, например, еженедельно в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 месяцев, или еженедельно в течение 2, 3, 4 или 5 лет. Кроме того, фармацевтическую композицию по настоящему изобретению предпочтительно можно вводить ежемесячно, например, один раз в месяц, или, более предпочтительно каждый второй месяц в течение 1, 2, 3, 4 или 5 или более лет. Предпочтительным конечным параметром введения является достижение сероконверсии, предпочтительно конечным параметром лечения является устойчивое отсутствие HBsAg в сыворотке, сопровождающееся сероконверсией антител против ВГВ. Введение также предпочтительно продолжают на протяжении всей жизни. Кроме того, также предусмотрено только одно однократное введение, прежде всего для определенных показаний, например для профилактики гепатита В в случае случайного контакта неиммунизированных субъектов.
При введении однократной дозы, например ежедневной, еженедельной или ежемесячной дозы, для еженедельной дозы предпочтительно количество антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, прежде всего предпочтительно не превышает 1 г, предпочтительно не превышает 500 мг, более предпочтительно не превышает 250 мг, еще боле предпочтительно не превышает 100 мг и прежде всего предпочтительно не превышает 50 мг.
Фармацевтические композиции, как правило, включают эффективное количество одного или более антител по настоящему изобретению, т.е. количество, которое является достаточным для лечения, ослабления, снижения интенсивности симптомов или профилактики подлежащего лечению заболевания или состояния, или является достаточным для оказания детектируемого терапевтического действия. Терапевтические эффекты также включают снижение или ослабление патогенной активности или физических симптомов. Точное эффективное количество для любого конкретного субъекта зависит от размера субъекта, его массы и состояния здоровья, природы и степени тяжести состояния, а также от лекарственных средств или комбинации лекарственных средств, выбранных для введения. Эффективное количество для данной ситуации определяется при проведении стандартных экспериментов и оценивается лечащим врачом. Согласно настоящему изобретению эффективная доза обычно составляет от приблизительно 0,005 до приблизительно 100 мг/кг, предпочтительно от приблизительно 0,0075 до приблизительно 50 мг/кг, более предпочтительно от приблизительно 0,01 до приблизительно 10 мг/кг и еще более предпочтительно от приблизительно 0,02 до приблизительно 5 мг/кг антитела по настоящему изобретению (например, количество антитела в фармацевтической композиции) в расчете на массу тела (например, в кг) индивидуума, которому вводят указанную дозу.
Например, в случае трансплантации печени, например вследствие печеночной недостаточности, вызванной гепатитом В, количество антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в фармацевтической композиции по настоящему изобретению для однократной дозы, вводимой в день трансплантации, предпочтительно может составлять не более 50 мг, более предпочтительно не более 10 мг, затем в послеоперационный период указанное количество может составлять не более 10-50 мг, предпочтительно не более 2-10 мг в день, которое вводят в течение семи дней, и не более 10-50 мг, предпочтительно не более 2-10 мг в расчете на однократную дозу, вводимую каждые 1-3 месяца для поддержания уровней анти-HBs в сыворотке приблизительно 100 МЕ/л.
Для лечения хронического гепатита В антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению, например, предпочтительно вводят подкожно, при этом однократная доза составляет вплоть до 500 мг, предпочтительно вплоть до 250 мг, более предпочтительно вплоть до 100 мг антитела по настоящему изобретению. Указанную однократную дозу можно вводить ежедневно, еженедельно или ежемесячно, как описано выше.
Кроме того, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению также может содержать дополнительный активный компонент, который может представлять собой дополнительное антитело или компонент, который не является антителом. Дополнительный активный компонент предпочтительно вы
- 39 038301 бирают из группы, состоящей из ингибиторов полимеразы, интерферонов и/или ингибиторов контрольных точек. Предпочтительные ингибиторы полимеразы включают ламивудин, адефовир, энтекавир, телбивудин и тенофовир. Ингибиторы полимеразы подавляют обратную транскрипцию и синтез положительной цепи ДНК. Ингибиторы полимеразы не препятствуют распространению вирусов, образованию ковалентнонепрерывной кольцевой кнкДНК, а также не влияют на высвобождение HBsAg. Интерфероны (ИНФ) включают ИНФ-α и ИНФ-β, при этом ИНФ-β является предпочтительным. Предпочтительные ингибиторы контрольных точек направлены на блокирование PD-1/PD-L1 и/или CTLA4 и в связи с этим включают антитела против PD-1 и антитела против PD-L1, а также антитела против CTLA4. Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может содержать один или более дополнительных активных компонентов.
Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению могут присутствовать или в одной и той же фармацевтической композиции в качестве дополнительного активного компонента, или предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению присутствует в первой фармацевтической композиции, а дополнительный активный компонент присутствует во второй фармацевтической композиции, отличающейся от первой фармацевтической композиции. Соответственно, если предусмотрено более одного дополнительного активного компонента, каждый дополнительный активный компонент и антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению предпочтительно включают в разные фармацевтические композиции. Такие разные фармацевтические композиции можно вводить или совместно/одновременно или в различные моменты времени или в различных участках (например, различные отделы тела).
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению и дополнительный активный компонент обеспечивают аддитивное терапевтическое действие или предпочтительно синергетическое терапевтическое действие. Термин синергия используется в данном контексте для описания комбинированного действия двух или более активных агентов, которое превышает сумму индивидуальных действий каждого соответствующего активного агента. Таким образом, если объединенное действие двух или более агентов приводит к синергетическому ингибированию активности или процесса, подразумевается, что ингибирование активности или процесса является более значительным по сравнению с суммой ингибирующих действий каждого соответствующего активного агента. Термин синергетическое терапевтическое действие относится к терапевтическому действию, наблюдаемому при комбинировании двух или более курсов лечения, при этом терапевтическое действие (определяемое любым числом параметров) является более значительным по сравнению с суммой индивидуальных терапевтических эффектов, наблюдаемых при проведении соответствующих индивидуальных курсов лечения.
Предпочтительной является фармацевтическая композиция, содержащая антитело к gHCB34 или его антигенсвязывающему фрагменту, а также фармацевтически приемлемый носитель.
В одном варианте композиция по настоящему изобретению может включать антитела по настоящему изобретению, при этом содержание антител составляет по крайней мере 50 мас.% (например, 60, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 мас.% или более) в расчете на общее содержание белка в композиции. В такой композиции антитела предпочтительно присутствуют в очищенной форме.
В настоящем изобретении также предлагается способ получения фармацевтической композиции, включающий следующие стадии: (i) получение антитела по настоящему изобретению и (ii) смешивание очищенного антитела с одним или более фармацевтически приемлемых носителей.
В другом варианте способ получения фармацевтической композиции включает стадию смешивания антитела с одним или более фармацевтически приемлемых носителей, при этом антителом является моноклональное антитело, которое получают из трансформированных B-клеток или культивированных плазматических клеток по настоящему изобретению.
В качестве альтернативы доставке антител или B-клеток в терапевтических целях субъекту можно доставлять нуклеиновую кислоту (как правило, ДНК), которая кодирует требуемое моноклональное антитело (или его активный фрагмент), полученную из B-клеток или культивированных плазматических клеток, при этом нуклеиновая кислота может экспрессироваться in situ в организме субъекта и обеспечивать требуемое терапевтическое действие. Пригодная генная терапия и векторы для доставки нуклеиновых кислот известны в данной области техники.
Фармацевтические композиции могут включать противомикробный агент, прежде всего, если они упакованы в формате многократных доз. Такие композиции могут содержать ПАВ, например твин (полисорбат), например твин 80. Обычно ПАВ присутствуют при низких концентрациях, например менее 0,01%. Композиции могут также включать натриевые соли (например, хлорид натрия), для обеспечения тоничности. Например, концентрация NaCl, как правило, составляет 10±2 мг/мл.
Кроме того, фармацевтические композиции могут содержать альдит (например, маннит) или дисахарид (например, сахароза или трегалоза), например, при концентрации приблизительно 15-30 мг/мл (например, 25 мг/мл), прежде всего, если они подлежат лиофилизации или если они включают материал, который получен при растворении лиофилизованного материала. Значение pH композиции для лиофили
- 40 038301 зации можно регулировать перед лиофилизацией в интервале от 5 до 8 или 5,5-7 или значение pH может составлять приблизительно 6,1.
Композиции по настоящему изобретению могут также включать один или более иммунорегуляторных агентов. В одном варианте один или более иммунорегуляторных агентов включает(ют) адъювант.
Курсы лечения и области применения в медицине.
В следующем объекте настоящего изобретения предлагается применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению, нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, вектора по настоящему изобретению, клетки по настоящему изобретению или фармацевтической композиции по настоящему изобретению для (i) профилактики, лечения или ослабления симптомов гепатита В и/или гепатита D или для (ii) диагностики гепатита В и/или гепатита D.
В объем настоящего изобретения включены несколько форм и способов введения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора, клетки или фармацевтической композиции, как описано выше в отношении фармацевтической композиции. Указанное справедливо также в контексте применения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора и клетки, как описано в данном контексте, прежде всего в отношении предпочтительных форм и способов введения.
Способы диагностики могут включать контактирование антитела или фрагмента антитела с образцом. Такие образцы можно получить у субъекта, например, выделенный образец ткани, полученный, например, из носового прохода, синусовых пазух, слюнных желез, легких, печени, поджелудочной железы, печени, уха, глаза, плаценты, пищеварительного тракта, сердца, яичников, гипофиза, надпочечников, щитовидной железы, мозга, кожи или крови, предпочтительно из сыворотки. Способы диагностики могут также включать детектирование комплекса антиген/антитело, прежде всего после контактирования антитела или фрагмента антитела с образцом. Такую стадию детектирование, как правило, проводят в лабораторных условиях, т.е. без контактирования с организмом человека или животного. Примеры способов детектирования известны специалисту в данной области техники и включают, например, метод ИФА (твердофазный иммуноферментный анализ).
В настоящем изобретении также предлагается применение (i) антитела, его антигенсвязывающего фрагмента или его вариантов и производных по настоящему изобретению, (ii) клона иммортализованных B-клеток по настоящему изобретению, (iii) нуклеиновой кислоты или вектора по настоящему изобретению или (iv) фармацевтической композиции по настоящему изобретению для (а) получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики, лечения или ослабления симптомов гепатита В и/или гепатита D или для (б) диагностики гепатита В и/или гепатита D.
В настоящем изобретении также предлагается антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, нуклеиновая кислота по настоящему изобретению, вектор по настоящему изобретению, клетка по настоящему изобретению или фармацевтическая композиция по настоящему изобретению для применения в качестве лекарственного средства, предназначенного прежде всего для профилактики или лечения гепатита В и/или гепатита D. Предлагается также применение антитела по настоящему изобретению для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения субъекта и/или диагностики субъекта. Предлагается также способ лечения субъекта, включающий стадию введения субъекту композиции по настоящему изобретению. В некоторых вариантах субъектом может являться человек. Один способ проверки эффективности терапевтического лечения включает мониторинг симптомов заболевания после введения композиции по настоящему изобретению. Лечение можно проводить по схеме однократных введений или по схеме многократных введений.
В одном варианте антитело, фрагмент антитела, клон иммортализованных B-клеток или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению вводят субъекту, нуждающемуся в указанном лечении. Такой субъект включает, но не ограничиваясь только ими, прежде всего субъекта из группы риска или предрасположенного к развитию гепатита В и/или гепатита D.
Антитела или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению также можно использовать для диагностики гепатита В и/или гепатита D. Кроме того, эпитоп в антигенной петлевой области HBsAg, который способен связываться с антителом по настоящему изобретению, как описано в данном контексте, можно использовать в наборе для мониторинга эффективности лечения по присутствию защитных антител в отношении ВГВ или по их титру.
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению, вектор по настоящему изобретению, клетку по настоящему изобретению или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению используют для лечения или ослабления интенсивности симптомов хронического гепатита В.
Следует отметить, что антитело по настоящему изобретению (i) эффективно нейтрализует инфекцию ВГВ, (ii) связывается с L-HBsAg (крупный белок поверхностной оболочки ВГВ, который присутствует в инфекционных частицах ВГВ), тем самым предотвращая распространение ВГВ, (iii) связывается с S-HBsAg, тем самым ускоряя элиминацию субвирусных частиц (SVP), и (iv) может индуцировать сероконверсию, т.е. активную ответную иммунную реакцию на вирус.
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению,
- 41 038301 нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению, вектор по настоящему изобретению, клетку по настоящему изобретению или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению используют для предотвращения (повторного) инфицирования гепатитом В после трансплантации печени, прежде всего в случае печеночной недостаточности, вызванной гепатитом В.
С этой точки зрения пациенту, направленному на трансплантацию печени, предпочтительно можно вводить высокую дозу в день трансплантации и вводить суточные дозы в течение приблизительно недели после операции. Затем предпочтительно дополнительные дозы можно вводить каждые 1 -3 месяца для поддержания уровней антитела против ВГВ в сыворотке выше 100 МЕ/мл
В другом предпочтительном варианте антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению, вектор по настоящему изобретению, клетку по настоящему изобретению или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению используют для предотвращения/профилактики гепатита В у не иммунизированных субъектов. Данный подход применяют, например, в случае (предполагаемого) случайного контакта с ВГВ (пост контактная профилактика). Термин не иммунизированные субъекты включает субъектов, которых никогда не вакцинировали, и в связи с этим они являются не иммунизированными, а также субъектов, у которых отсутствует ответная иммунная реакция (не определяются антитела против гепатита В) после вакцинации. Прежде всего, в последней группе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению, вектор по настоящему изобретению, клетку по настоящему изобретению или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению используют для (непрерывного) предотвращения гепатита В, т.е. в отличие от пост контактной профилактики (непрерывное) предотвращение является предпочтительным для таких субъектов, у которых отсутствует ответная иммунная реакция (не определяются антитела против гепатита В) после вакцинации, и которым необходимо непрерывное предотвращение.
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению, вектор по настоящему изобретению, клетку по настоящему изобретению или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению используют для профилактики гепатита В у пациентов, проходящих курс гемодиализа.
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению, вектор по настоящему изобретению, клетку по настоящему изобретению или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению используют для предотвращения гепатита В у новорожденного. В связи с этим прежде всего предпочтительными являются новорожденные у матерей, являющихся носителями вируса гепатита В/не иммунизированных матерей. Кроме того, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению, вектор по настоящему изобретению, клетку по настоящему изобретению или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению вводят при рождении или по возможности в максимально короткий срок после рождения. Предпочтительно введение можно повторять до достижения сероконверсии после вакцинации.
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению, вектор по настоящему изобретению, клетку по настоящему изобретению или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению используют для лечения или ослабления интенсивности симптомов гепатита D, предпочтительно гепатита В и гепатита D, прежде всего сочетанного заболевания гепатитом В и гепатитом D. Интересно отметить, что антитело по настоящему изобретению не только эффективно нейтрализует вирус гепатита В, но также и вирус гепатита D. В связи с этим антитело по настоящему изобретению может обеспечить первоочередное лечение гепатита D.
Комбинированное лечение.
Введение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению, нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, вектора по настоящему изобретению, клетки по настоящему изобретению или фармацевтической композиции по настоящему изобретению при осуществлении способов и в ходе применения по настоящему изобретению можно проводить в отдельности или в комбинации с совместным агентом (названным в данном контексте дополнительным активным компонентом), пригодным для лечения и/или стабилизации заболевания или нарушения, которое необходимо вылечить или подавить.
Настоящее изобретение включает введение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению, нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, вектора по настоящему изобретению, клетки по настоящему изобретению или фармацевтической композиции по настоящему изобретению, при этом введение осуществляют субъекту до или после проведения других курсов лечения или одновременно с ними или до или после введения совместных агентов, пригодных для лечения и/или профилактики гепатита В, или одновременно с ними. Указанное антитело, нуклеиновую кислоту, вектор, клетку или фармацевтическую композицию, которые вводят одновременно с указанными совместными агентами, можно вводить в одной и той же или другой композиции(ях), а также одним и тем же или другим способом(ами) введения.
- 42 038301
Указанные другие курсы лечения или совместные агенты можно выбрать из группы, состоящей из ингибиторов полимеразы, интерферонов и/или ингибиторов контрольных точек.
Таким образом, в другом объекте настоящего изобретения для описанных выше областей применения в медицине антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению, вектор по настоящему изобретению, клетку по настоящему изобретению или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибитором полимеразы, интерфероном и/или ингибитором контрольной точки.
Предпочтительные ингибиторы полимеразы включают ламивудин, адефовир, энтекавир, телбивудин и тенофовир. Ламивудин является наиболее предпочтительным ингибитором полимеразы. Ингибиторы полимеразы подавляют обратную транскрипцию и синтез положительной цепи ДНК. Ингибиторы полимеразы не препятствуют распространению вирусов, образованию кнкДНК, а также не влияют на высвобождение HBsAg.
Интерфероны включают ИНФ-α и ИНФ-β, причем ИНФ-β является предпочтительным.
Действие предпочтительных ингибиторов контрольных точек направлено на блокирование PD-1/PD-L1 и/или CTLA4, и в связи с этим они включают антитела против PD-1 и антитела против PDL1, а также антитела против CTLA4. Таким образом, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может содержать один или более дополнительных активных компонентов.
Другой предпочтительный совместный агент (дополнительные активные компоненты), предназначенный для введения в комбинации с антителом или с его антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению, с нуклеиновой кислотой по настоящему изобретению, вектором по настоящему изобретению, клеткой по настоящему изобретению или с фармацевтической композицией по настоящему изобретению, включает агонисты LTeR.
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению, вектор по настоящему изобретению, клетку по настоящему изобретению или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибитором полимеразы. Данный подход прежде всего предназначен для применения указанной комбинации для профилактики, лечения или ослабления симптомов гепатита В и/или гепатита D. В данном случае предпочтительные ингибиторы полимеразы включают ламивудин, адефовир, энтекавир, телбивудин и тенофовир. Наиболее предпочтительным ингибитором полимеразы является ламивудин.
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, нуклеиновую кислоту, вектор, клетку или фармацевтическую композицию вводят тем же способом, как и ингибитор полимеразы, интерферон и/или ингибитор контрольной точки, или другим способом.
В связи с этим в еще одном объекте настоящего изобретения также предлагается комбинация, включающая:
(i) антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению, вектор по настоящему изобретению, клетку по настоящему изобретению или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению и (ii) ингибитор полимеразы, интерферон и/или ингибитор контрольной точки.
Такую комбинацию предпочтительно используют для профилактики, лечения или снижения интенсивности симптомов гепатита В и/или гепатита D, прежде всего для лечения или снижения интенсивности симптомов хронического гепатита В и/или хронического гепатита D. Более предпочтительно комбинацию используют для введения пациентам, инфицированным только ВГВ, или пациентам со смешанной инфекцией ВГВ/BГD.
Такая комбинация предпочтительно ускоряет элиминацию HBsAg.
В связи с этим в настоящем изобретении также предлагается набор, включающий:
(i) антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению, вектор по настоящему изобретению, клетку по настоящему изобретению или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению и (ii) ингибитор полимеразы, интерферон и/или ингибитор контрольной точки.
Кроме того, набор может содержать средства для введения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению, нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, вектора по настоящему изобретению, клетки по настоящему изобретению или фармацевтической композиции по настоящему изобретению, такие как, шприц или флакон, и/или листок-вкладыш, например, с инструкциям по применению антитела по или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению, нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, вектора по настоящему изобретению, клетки по настоящему изобретению или фармацевтической композиции по настоящему изобретению и/или ингибитора полимеразы, интерферона и/или ингибитора контрольной точки.
Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению могут присутствовать либо в той же самой фармацевтической композиции, что и дополнительный активный компонент (совместный агент), или предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению включают в первую фармацевтическую композицию, а дополнительный активный
- 43 038301 компонент (совместный агент) включают во вторую фармацевтическую композицию, отличающуюся от первой фармацевтической композиции. Соответственно, если предусмотрено более одного дополнительного активного компонента (совместного агента), каждый дополнительный активный компонент (совместный агент) и антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению предпочтительно содержатся в различных фармацевтических композициях. Указанные различные фармацевтические композиции можно вводить либо совместно/одновременно, либо в различные моменты времени или в различные участки (например, в различные отделы тела).
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению и дополнительный активный компонент (совместный агент) обеспечивают аддитивное терапевтическое действие или предпочтительно синергетическое терапевтическое действие. Как описано выше, термин синергия используется для описания комбинированного действия двух или более активных агентов, которое превышает сумму индивидуальных действий каждого соответствующего активного агента. Таким образом, если комбинированное действие двух или более агентов приводит к синергетическому ингибированию активности или процесса, то подразумевается, что ингибирование активности или процесса является более значительным по сравнению с суммой ингибирующих действий каждого соответствующего активного агента. Термин синергетическое терапевтическое действие относится к терапевтическому действию, наблюдаемому при использовании комбинации двух или более курсов лечения, при этом терапевтическое действие (определяемое любым числом параметров) является более значительным по сравнению с суммой индивидуальных терапевтических действий, наблюдаемых при проведении соответствующих индивидуальных курсов лечения.
Области и способы применения.
В другом объекте настоящего изобретения предлагается применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению, нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, вектора по настоящему изобретению, клетки по настоящему изобретению или фармацевтической композиции по настоящему изобретению для мониторинга качества вакцин против гепатита В или против гепатита D по наличию в антигене указанной вакцины специфического эпитопа в правильной конформации.
Более того, в настоящем изобретении предлагается также применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению, нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, вектора по настоящему изобретению, клетки по настоящему изобретению или фармацевтической композиции по настоящему изобретению для диагностики гепатита В и/или гепатита D.
Кроме того, в настоящем изобретении также предлагается применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению, нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, вектора по настоящему изобретению, клетки по настоящему изобретению или фармацевтической композиции по настоящему изобретению для определения инфицированности выделенного образца крови вирусом гепатита В и/или вирусом гепатита D.
Как описано выше, способы диагностики могут включать контактирование антитела или фрагмента антитела с образцом. Такие образцы можно получить у субъекта, например выделенный образец ткани, полученный, например, из носового прохода, синусовых пазух, слюнных желез, легких, печени, поджелудочной железы, печени, уха, глаза, плаценты, пищеварительного тракта, сердца, яичников, гипофиза, надпочечников, щитовидной железы, мозга, кожи или крови, предпочтительно, из сыворотки. Способы диагностики могут также включать детектирование комплекса антиген/антитело, прежде всего, после контактирования антитела или фрагмента антитела с образцом. Такую стадию детектирования, как правило, проводят в лабораторных условиях, т.е. без контактирования с организмом человека или животного. Примеры способов детектирования известны специалисту в данной области техники и включают, например, метод ИФА (твердофазный иммуноферментный анализ).
В настоящем изобретении также предлагается способ предотвращения и/или лечения гепатита В и/или гепатита D у субъекта, причем указанный способ включает введение субъекту, нуждающемуся в указанном лечении, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению, нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, вектора по настоящему изобретению, клетки по настоящему изобретению или фармацевтической композиции по настоящему изобретению.
В настоящем изобретении также предлагается способ лечения субъекта, перенесшего трансплантацию печени, включающий введение субъекту, который перенес трансплантацию печени, терапевтически эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению, нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, вектора по настоящему изобретению, клетки по настоящему изобретению или фармацевтической композиции по настоящему изобретению.
В описанных выше способах предпочтительным является субъект, страдающий от хронического гепатита В.
Кроме того, описанные выше детали, прежде всего в контексте фармацевтической композиции и применения в медицине, также применимы к способам, описанным в данном контексте. Например, в описанных выше способах антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению, вектор по настоящему изобретению, клетку по
- 44 038301 настоящему изобретению или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению предпочтительно вводят в комбинации с ингибитором полимеразы, интерфероном и/или ингибитором контрольной точки, как описано в данном контексте.
Краткое описание фигур
Ниже приведено краткое описание прилагаемых фигур. Фигуры предназначены для более подробной иллюстрации настоящего изобретения. Однако они никаким образом не ограничивают объект настоящего изобретения.
На фиг. 1 для примера 1 показано связывание моноклонального антитела НВС34 с тремя различными серотипами HBsAg (adw, ady и ayw) по данным ИФА.
На фиг. 2 для примера 2 показана способность различных антител против вируса гепатита (ВГ), а именно, иммуноглобулинов против ВГВ (HBIG), HBC34 и других моноклональных антител против PreS1 (18/7) или HBsAg нейтрализовать in vitro инфекцию ВГВ B-клетках HepaRG. Каждое антитело тестировали при трех различных концентрациях, а именно 5, 0,5 мкг/мли 0,05 мкг/мл, за исключением HBIG, который испытывали при концентрациях 5000, 500 и 50 мкг/мл.
На фиг. 3 для примера 2 показано окрашивание HBcAg B-клетках HepaRG, инфицированных в присутствии трех различных концентраций (5, 0,5 или 0,05 мкг/мл) моноклонального антитела НВС34, а также для сравнения показано окрашивание ядер.
На фиг. 4 для примера 2 показана нейтрализующая активность антитела НВС34 в отношении инфекции ВГ дельта при различных концентрациях. При концентрации НВС34, равной 0,12 мкг/мл, ВГ дельта-положительные клетки не детектируются, что указывает на эффективную нейтрализацию ВГ дельта. Напротив, HBIG не нейтрализует ВГ дельта (исследовали при разведении 1:1000, т.е. при концентрации 50 мкг/мл).
На фиг. 5 для примера 3 показана аминокислотная последовательность антигенной петли HBsAg 10 генотипов ВГВ: А, В, С, D, E, F, G, Н, I и J. Указанные последовательности включают эпитоп, распознаваемый антителом НВС34 (выделен серым цветом). Представленную сверху последовательность (HBV-D J02203) использовали для создания пептидной библиотеки, описанной в примере 5, фиг. 7.
На фиг. 6 для примера 3 приведены полученные цитофлуориметрическим методом данные анализа связывания моноклонального антитела человека НВС34 и контрольного антитела (концентрация обоих антител составляла 5 мкг/мл) с пермеабилизированными клетками Нер2, временно трансфектированными плазмидами, экспрессирующими различные генотипы HBsAg: А, В, С, D, E, F, G, Н, I и J, как показано на фигуре.
На фиг. 7 для примера 4 показаны аминокислотные последовательности антигенной петли 19 исследованных мутантных форм HBsAg. Кружками обведены остатки мутантных форм HBsAg, которые слабо связываются (пунктирный круг) или не связываются с антителом НВС34.
На фиг. 8 для примера 4 показано связывание моноклонального антитела человека НВС34 и двух других HBsAg-специфичных антител (Ab5 и Ab6), которые все исследованы при концентрации 5 мкг/мл, с клетками Нер2, трансфектированными плазмидами, экспрессирующими различные мутантные формы генотипа D HBsAg, которые указаны на фигуре (WT: генотип D HBsAg, код доступа Genbank FJ899792).
На фиг. 9 для примера 5 показано связывание НВС34 с библиотекой, состоящей из 650 линейных и петлевых пептидов, по данным измерений с использованием технологии Pepscan, а также последовательности четырех пептидов, связанных с НВС34. Остатки, обозначенные цифрой 1, представляют собой остатки цистеина, которые введены, чтобы обеспечить химическое присоединение к клеточному каркасу для перестройки конформационных эпитопов. Если помимо вновь введенных остатков цистеина присутствовали другие остатки цистеина, их заменяли на остатки аланина (остатки аланина подчеркнуты).
На фиг. 10 для примера 5 показано проведенное методом вестерн-блоттинга окрашивание Ab4 и НВС34 на вирусных частицах ВГВ в восстанавливающих условиях. Ab4 представляет собой антитело сравнения, которое также проявляет реактивность к антигенной петле.
На фиг. 11 для примера 6 показаны уровни вирусемии ВГВ у гуманизированных мышей uPA/SCID, инокулированных 5х107 копиями геномных эквивалентов ВГВ (генотип D), которых через три недели после инфицирования лечили в течение 6 недель либо антителом НВС34 (в дозе 1 мг/мг, вводимой внутрибрюшинно (в/б) два раза в неделю), контрольным антителом (контроль АВ), либо энтекавиром (ETV, вводимым перорально в дозе 1 мкг/мл). В фазе распространения инфекции ВГВ (неделя 3 - неделя 6 после инфицирования (п/и)) в группе мышей, которых лечили контрольным антителом, вирусемия возрастала на величину >2 log, в то время как у мышей, которых лечили антителом НВС34 или энтекавиром, титры ВГВ снижались.
На фиг. 12 для примера 6 показано окрашивание гепатоцитов мышей, описанных в примере 6, в присутствии HBsAg (внутрипеченочный анализ) при завершении эксперимента (неделя 9). Почти для всех гепатоцитов мышей, которых лечили контрольным антителом, наблюдалось HBsAg-положительное окрашивание, в то время как при лечении обоими препаратами - энтекавиром и НВС34, наблюдалась эффективная блокировка распространения вируса (приблизительно 1-5% HBsAg-положительных клеток).
- 45 038301
На фиг. 13 для примера 6 показаны результаты измерений кнкДНК, которые не отличаются значительно для мышей, которых умерщвляли через 3 недели после инфицирования ВГВ (3week hbv, т.е. без лечения), и для мышей, которых лечили антителом НВС34 или энтекавиром в течение периода неделя 3 неделя 9 после инфицирования. Напротив, в группе мышей, которых лечили контрольным антителом, при умерщвлении через 9 недель после инфицирования количество кнкДНК/клетка по данным оценки увеличивались на величину вплоть до 2 log.
На фиг. 14 для примера 6 показаны базовая линия (БЛ) уровней циркулирующего HBsAg, уровни через 3 недели лечения (неделя 6 после инфицирования) и через 6 недель лечения (неделя 9 после инфицирования). У мышей, которых лечили антителом НВС34, но не у мышей, которых лечили энтекавиром, уровни циркулирующего HBsAg снижались на величину >1 log (и ниже предела детектирования), в то время как в контрольной группе мышей уровни HBsAg увеличивались на величину >2 log (достигая уровней 5000-10000 МЕ/мл).
На фиг. 15 для примера 7 показан титр ВГВ (левая панель) и уровни циркулирующего HBsAg (правая панель) при развитии хронического гепатита В: базовая линия (БЛ), через 3 недели лечения (неделя 15 после инфицирования, неделя 3) и через 6 недель лечения (неделя 18 после инфицирования, неделя 6). У мышей, которых лечили антителом НВС34, титр ВГВ и уровни циркулирующего HBsAg снижались на неделе 3 и на неделе 6 лечения. Данные для отдельных животных представлены на отдельных кривых. Данные для контрольного антитела показаны пунктирными линиями, данные для НВС34 показаны непрерывными линиями.
На фиг. 16 для примера 8 показан титр ВГВ (левая панель) и титр ВГД (правая панель), определенные у мышей uPA/SCID, репопулированных первичными гепатоцитами человека и совместно инфицированных полученной от пациентов сывороткой, содержащей РНК ВГ дельта и ДНК ВГВ. Через пять недель после инфицирования начинали лечение НВС34 или контрольным антителом (контроль). Показана базовая линия (БЛ, неделя 3, неделя 5) титра ВГВ (левая панель) и титра ВГ дельта (правая панель), титры через 3 недели лечения (через 8 недель после инфицирования - неделя 8) и через 6 недель лечения (через 11 недель после инфицирования - неделя 11). Данные для отдельных животных представлены на отдельных кривых. Данные для контрольного антитела показаны пунктирными линиями, а данные для НВС34 показаны непрерывными линиями.
На фиг. 17 (часть 1) для примера 9 схематически показана антигенная петля поверхностного антигена ВГВ (HBV-s-антигена), эпитоп НВС34 выделен серым цветом. Для картирования эпитопа НВС34 исследовали библиотеку из 1520 различных пептидов с использованием технологии Pepscan. На фиг. 17 (часть 2-5) для примера 9 показана величина связывания (интенсивность по данным ИФА) НВС34 с 16 различными наборами пептидов. НВС34 связывается с конформационным эпитопом, о чем свидетельствует связывание с пептидами из наборов 13-16, состоящих из комбинаторных конструктов CLIPS, представляющих две части непрерывного эпитопа (часть 2), и с пептидами из наборов 9-12, состоящих из петлевых пептидов (часть 3). Связывание НВС34 с наборами линейных пептидов 1-4 (часть 4) и 5-8 (часть 5) не наблюдается, что дополнительно подтверждает вывод о том, что НВС34 связывается с непрерывным конформационным эпитопом.
На фиг. 18 для примера 9 показано связывание НВС34 с пептидной библиотекой, состоящей из 812 непрерывных или петлевых пептидов Т3 CLIPS. Для уточнения картирования эпитопа, показанного на фиг. 17, получали 3 набора пептидов (названные RN1, RN2 и RN3) на основе полученных ранее наборов (фиг. 17) при проведении анализа полной замены. На фиг. 18 показано связывание НВС34 с наборами 13, где остатки в положениях, выделенных рамками, заменены на одну из 13 аминокислот, выбранных из серий AEFGHKLPQRSVY_, где знак _ обозначает делецию остатка. Исходный остаток в положении перестановки показан слева от каждой панели, а также либо (i) в последовательности, выделенной горизонтальной рамкой (если исходная аминокислота является частью серий перестановок), либо (ii) ниже последовательности (если исходная аминокислота не является частью серий перестановок).
На фиг. 19 для примера 10 показан эффект комбинированного лечения НВС34 (1 мг/кг внутрибрюшинно (в/б) два раза в неделю) и ламивудином (добавляли в воду при концентрации 0,4 мг/мл) при снижении уровней вирусемии ВГВ (панель А) и циркулирующего поверхностного антигена ВГВ (HBV-sантигена (панель Б) у гуманизированных мышей uPA/SCID, инокулированных 2х109 копиями геномных эквивалентов ВГВ (генотип D), которых лечили в течение 4 недель, начиная с недели 8 после инфицирования, либо контрольным антителом (контроль), антителом НВС34 в отдельности (НВС34), ламивудином в отдельности (ламивудин) или комбинацией (НВС34 и ламивудин). Комбинированное лечение обеспечивало более значительное снижение вирусемии по сравнению с введением любого из лекарственных средств в отдельности.
На фиг. 20 для примеров 11 и 12 показано выравнивание двух наборов последовательностей VH (панель А) и VL (панель Б), сконструированных для получения вариантов антитела 1-32. CDR области (определенные методом IMGT) выделены серым цветом.
На фиг. 21 для примера 11 показано связывание 18 сконструированных вариантов НВС34 (полученных при комбинировании мутированных последовательностей VH и VL, как указано в столбцах 2 и 3) с HBsAg (субтип adw) по данным анализа методом ИФА. В столбце 4 символ - означает отсутствие
- 46 038301 связывания, символ +/- означает значительно снижение связывания, символ +/~ означает сниженное связывание, символ + означает связывание, аналогичное или равное связыванию исходного антитела.
На фиг. 22 для примера 11 показано связывание 8 различных сконструированных вариантов НВС34 с HBsAg (adw) по данным анализа ИФА на основе прямого связывания с антигенами. Указанные 8 вариантов выбирали среди 18 мутантных форм НВС34, показанных на фиг. 21, при этом для уточнения характеристики аффинности в отношении HBsAg, 8 антител титровали и сравнивали с последовательностью исходного антитела.
На фиг. 23 для примера 11 суммированы характеристики 8 антител, показанных на фиг. 22. Значения ЕС50 определяли аппроксимацией кривых, показанных на фиг. 22, с использованием программы Graphpad prism. Продуктивность определяли количественной оценкой (ИФА) IgG, секретированного в супернатант, полученный после трансфекции 300 мл клеток 293 Expi каждым из 8 вариантов, а также исходным антителом.
На фиг. 24 для примеров 11 и 12 представлена таблица, в которой суммированы характеристики 15 вариантов, в том числе 12 дополнительных сконструированных вариантов НВС34, разработанных с использованием полученного ранее набора при введении дополнительных мутаций в каркасные участки (панель А). Кривые связывания получали титрованием антител в ходе анализа методом ИФА на основе связывания антител с антигенами и рассчитывали значения ЕС50 экстраполяцией кривых с использованием программы Graphpad prism. Значения продуктивности рассчитывали на основе количественной оценки IgG, секретированного в супернатант, полученный после трансфекции 30 мл клеток 293 Expi каждым из 15 вариантов, а также исходным антителом. Графики кратных изменений показаны на панели Б.
На фиг. 25 для примеров 11 и 12 показано связывание НВС34, а также вариантов 6, 7, 19, 23 и 24 по данным цитофлуориметрического анализа. Все антитела титровали, начиная от концентрации 5 мкг/мл, и связывали с пермеабилизированными клетками Нер2, временно трансфектированными плазмидами, экспрессирующими различные генотипы HBsAg: А, В, С, D, E, F, G, Н, I и J.
Примеры
Ниже приведены конкретные примеры, иллюстрирующие различные варианты осуществления и объекты настоящего изобретения. Однако объем настоящего изобретения не ограничивается конкретными вариантами, описанными в данном контексте. Следующие препараты и примеры представлены для более четкого понимания настоящего изобретения и его осуществления специалистами в данной области техники на практике. Однако объем настоящего изобретения не ограничивается вариантами, приведенными в качестве примеров осуществления, которые предназначены только для иллюстрации отдельных объектов настоящего изобретения, и способами, которые являются функционально эквивалентными в объеме настоящего изобретения. Действительно, исходя из представленного выше описания, прилагаемых фигур и представленных ниже примеров, специалистам в данной области техники представляются очевидными различные модификации настоящего изобретения в дополнение к модификациям, описанным в данном контексте. Все такие модификации включены в объем настоящего изобретения и в прилагаемые пункты формулы настоящего изобретения.
Пример 1.
Идентификация и характеристика моноклонального антитела человека НВС34.
Моноклональное антитело человека выделяли аналогично тому, как описано в статье Traggiai Е. et al., Nat. Med., 10, 8, p. 871-875 (2004), из образца, полученного у человека. Антитело характеризовали при определении нуклеотидной и аминокислотной последовательностей его вариабельных областей (табл. 2 и 3) и расположенных в них определяющих комплементарность областей (CRD) и антитело обозначали НВС34. Соответственно, НВС34 представляет собой полноразмерное моноклональное антитело человека типа IgG1, включающее последовательности CDR, VH и VL, представленные выше в табл. 2 и 3.
Затем определяли, с каким серотипом из трех серотипов HBsAg: adw, ady и ayw, связывается моноклональное антитело человека НВС34. Интересно отметить, что НВС34 связывается с высокой аффинностью с тремя серотипами HBsAg (adw, ady и ayw), при этом методом ИФА регистрировали аналогичные и низкие значения ЕС50 (фиг. 1).
Защитные титры антител против ВГВ выражали в международных единицах (ME), что позволяет стандартизовать результаты различных анализов. Международный референсный препарат для иммуноглобулина против вирусов гепатита (ВГ) (International Reference Preparation for anti-HBs immunoglobulin, W1042) был установлен в 1977 г. Плазму, использованную для получения указанного стандарта, получали от индивидуумов, которые были инфицированы вирусом гепатита В естественным путем (Barker L.F., Lorenz D., Rastogi S.C., Finlayson J.S. и Seligmann E.B. Study of a proposed international reference preparation for antihepatitis В immunoglobulin. WHO Expert Committee on Biological Standardization technical report series. WHO Expert Committee on Biological Standardisation 29th Report BS 77.1 164, Женева, Швейцария, World Health Organization (1977), World Health Organization: Anti-hepatitis В immunoglobulin, WHO, Tech. Rep. Ser., 626, 18 (1978)). Согласно результатам диагностического иммуноанализа (Abbott Architect diagnostic immunoassay), активность НВС34 составляла 5000 МЕ/мг. В качестве сравнения активность HBIG составляет ~1 МЕ/мг.
Пример 2.
- 47 038301
Антитело НВС34 эффективно нейтрализует инфекцию ВГВ и ВГ дельта.
Первый объект, использованный в примере 2, заключается в определении способности НВС34 нейтрализовать инфекцию ВГВ и в сравнении нейтрализующей активности НВС34 с нейтрализующей активностью других антител против ВГ. Для этого дифференцированные клетки HepaRG инкубировали в присутствии фиксированного количества ВГВ в присутствии или в отсутствии антител (НВС34, 18/7, Ab2, Ab3 и HBIG) в среде, дополненной 4% ПЭГ 8000 (Sigma-Aldrich), при 37°С в течение 16 ч. При завершении инкубации клетки промывали и затем культивировали. Среду заменяли каждые 3 дня. Инфекцию детектировали, измеряя уровни поверхностного антигена гепатита В (HBsAg) и антигена е гепатита В (HBeAg), секретированных B-клеточный супернатант, в дни 7-11 после инфицирования методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА), а также детектируя окрашивание HBcAg методом иммунофлуоресцентного анализа.
Как указано на фиг. 2 и 3, НВС34 полностью нейтрализует инфекцию ВГВ при испытании в дозах от 5 до 0,5 мкг/мл, в то время как моноклональные антитела человека Ab2 и Ab3 против ВГ, которые также связываются с HBsAg, не обеспечивают полную нейтрализацию. Это указывает на то, что не все антитела, связывающиеся с HBsAg, способны нейтрализовать инфекцию ВГВ (например, Ab2 и Ab3). Следует отметить, что HBIG нейтрализует инфекцию ВГВ только при испытании в дозах от 5000 мкг/мл до 500 мкг/мл, т.е. проявляет в 1000-раз более низкую эффективность по сравнению с НВС34. Антитело 18/7 представляет собой моноклональное антитело мыши против пре-S1 области HBsAg.
Второй объект, описанный в примере 2, заключается в определении нейтрализующей активности НВС34 против ВГ дельта с использованием дифференцированных клеток HepaRg. В качестве инфекционного инокулята ВГ дельта использовали сыворотку, полученную у носителей ВГ дельта. Иммунофлуоресцентное окрашивание дельта антигена использовали в качестве параметра считывания. Как показано на фиг. 4, НВС34 полностью блокирует инфекцию ВГ дельта при испытании в дозе 0,12 мкг/мл. Для сравнения проводили также испытания HBIGd, который был неэффективен (испытывали при соотношении 1:1000, т.е. в дозе 50 мкг/мл).
Пример 3.
Антитело НВС34 распознает все 10 генотипов ВГВ: А, В, С, D, E, F, G, Н, I и J.
Исследовали способность НВС34 распознавать 10 генотипов ВГВ: А, В, С, D, E, F, G, Н, I и J (как указано на фиг. 5) методом анализа проточной цитометрии. Прежде всего эпителиальные клетки человека (клетки Нер2) трансфектировали плазмидами, экспрессирующими HBsAg каждого из 10 генотипов ВГВ: А, В, С, D, E, F, G, Н, I и J (как показано на фиг. 5). Моноклональное антитело человека НВС34 (5 мкг/мл) и контрольное антитело (5 мкг/мл) использовали для окрашивания временно трансфектированных пермеабилизированных клеток. Через два дня после трансфекции клетки Нер2 собирали, фиксировали и пермеабилизовали сапонином для иммуноокрашивания антителом НВС34 или контрольным антителом Ab. Связывание антител с трансфектированными клетками анализировали с использованием цитофлуориметра Becton Dickinson FACSCanto2 (фирмы BD Biosciences) и программного обеспечения FlowJo (фирмы TreeStar). Как показано на фиг. 6, антитело НВС34 распознает HBsAg всех 10 генотипов ВГВ, при этом наблюдаются аналогичные профили окрашивания.
Пример 4.
Антитело НВС34 распознает все функциональные мутантные формы HBsAg.
Методом проточной цитометрии исследовали способность НВС34 связываться с 19 различными мутантными формами HBsAg генотипа D (на основе HBsAg генотипа D, код доступа Genbank FJ899792, как показано на фиг. 7): HBsAg Y100C/P120T, HBsAg P120T, HBsAg P120T/S143L, HBsAg C121S, HBsAg R122D, HBsAg R122I, HBsAg T123N, HBsAg T123N/C124R, HBsAg Q129H, HBsAg Q129L, HBsAg M133H, HBsAg M133L, HBsAg M133T, HBsAg K141E, HBsAg P142S, HBsAg S143K, HBsAg D144A, HBsAg G145R и HBsAg N146A (см. SEQ ID NO: 16-33, соответствующие аминокислотным последовательностям антигенных петлевых областей указанных мутантных форм). Прежде всего эпителиальные клетки человека (клетки Нер2) трансфектировали плазмидами, экспрессирующими различные мутантные формы HBsAg, и анализировали, как описано в примере 3. Моноклональное антитело человека НВС34 (5 мкг/мл) и два других HBsAg-специфичных антитела (Ab5 и Ab6) использовали для исследования связывания НВС34 с трансфектированными клетками Нер2.
Как указано на фиг. 8, было установлено, что НВС34 связывается с 18 из 19 мутантных форм HBsAg. Связывание НВС34, но не связывание Ab5 и Ab6, полностью отсутствует только в случае мутантной формы HBsAg T123N/C124R, т.е., если мутированы оба остатка - 123 и 124. Следует отметить, что было установлено, что мутации указанных двух остатков (т.е. замена Т123 и С124) на аланин связаны с потерей инфекционности ВГВ, что наиболее вероятно происходит в результате разрушением дисульфидной мостиковой связи, образованной С124, что может вызывать конформационное изменение антигенной петли (Salisse J. и Sureau С., Journal of Virology, 83, p. 9321-9328 (2009)). Таким образом, моноклональное антитело человека НВС34 связывается с 18 мутантными формами HBsAg.
Пример 5.
Антитело НВС34 связывается с консервативным конформационным эпитопом в антигенной петле.
Эпитоп, распознаваемый НВС34, идентифицировали с использованием библиотеки, состоящей из
- 48 038301
650 линейных и петлевых пептидов (технология CLIPS Discontinuous Epitope Mapping фирмы Pepscan, Lelystad, Нидерланды), созданной для рассмотрения всей антигенной петлевой области HBsAg. Линейные и CLIPS пептиды синтезировали стандартным методом с использованием Fmoc-защитных групп. Петлевые пептиды синтезировали на основе химических каркасов для реконструкции конформационных эпитопов с использованием технологии химически присоединенных к каркасам пептидов (Chemically Linked Peptides on Scaffolds (CLIPS)), как описано в статье Timmerman et al., Journal of Molecular Recognition, 20, p. 283-299 (2007). Например, синтезировали однопетлевые пептиды, содержащие два остатка цистеина, при этом размер петли изменяли, вводя остатки цистеина на различном расстоянии. Если при сутствовали другие остатки цистеина, кроме вновь введенных остатков цистеина, то их заменяли на аланин. Боковые цепи нескольких остатков цистеина в пептидах присоединяли к матрицам CLIPS при взаимодействии в 0,5 мМ растворе матрицы CLIPS, таком как 1,3-бис-(бромметил)бензол в бикарбонате аммония на полипропиленовых планшетах PEPSCAN формата кредитной карты (455 пептидных форматов/карта). Связывание антитела с каждым пептидом исследовали методом ИФА в системе PEPSCAN. Полипропиленовые 455-луночные планшеты формата кредитной карты, содержащие ковалентно присоединенные пептиды, инкубировали в присутствии исследуемого антитела (при концентрации 1 мкг/мл) в блокирующем растворе. После промывки добавляли субстрат пероксидазы, 2,2'-азино-ди-3этилбензтиазолинсульфонат (ABTS) и 2 мкл 3% раствора H2O2. Через 1 ч развитие окрашивания оценивали с использованием камеры прибора с зарядовой связью (CCD) и системы обработки изображений. Необработанные данные представляли собой оптические значения, изменяющиеся в диапазоне от 0 до 3000 (логарифмическая шкала, аналогичная шкале от 1 до 3, которую используют в стандартном ридере ИФА для 96-луночного планшета). Как указано на фиг. 9, было установлено, что НВС34 распознает двухпетлевой пептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 52: XGSSTTSTGPCRTCMTXPSDGNATAIPIPSSWX , где остатки, обозначенные символом заменены на остатки цистеина, а в подчеркнутых остатках С заменен на A (SEQ ID NO: 52).
Три дополнительных пептида распознавались при более низком сигнале:
(а) линейный 15-членный пептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 53: TSTGPCRTCMTTAQG (seq id NO: 53), (б) другой линейный пептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 54: GMLPVCPLIPGSSTTSTGPCRTCMTT (SEQ ID NO: 54) и (в) двухпетлевой пептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 55: XSMYPSASATKPSDGNXTGPCRTCMTTAQGTSX где остатки, обозначенные символом У заменены на остатки цистеина, а в подчеркнутых остатках С заменен на A (SEQ ID NO: 55).
Результаты указанного анализа свидетельствуют о том, что коровый эпитоп НВС34 образован конформационным эпитопом, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56: PCRTCMTTAQG (SEQ ID NO: 56, аминокислоты 120-130 S домена HBsAg (HBV-D J02203).
Кроме того, как указано на фиг. 10, по данным вестерн-блоттинга моноклональное антитело человека НВС34 вообще не вступает в реакцию на вирусных частицах ВГВ в восстанавливающих условиях.
Эти результаты подтверждают, что эпитоп HBsAg, с которым связывается НВС34, представляет собой конформационный эпитоп.
Представленные результаты согласуются с данными, описанными в примере 4, где мутации T123N/C124R приводили к отсутствию связывания НВС34.
Область HBsAg, которая содержит конформационный эпитоп, с которым связывается НВС34, является полиморфной в отношении различных генотипов ВГВ. Следующая характерная последовательность области эпитопа HBsAg содержит остатки, мутированные в различных генотипах, которые обозначены символом X:
PCXiTCX2X3X4AQG, где X1 предпочтительно обозначает R или K,
Х2 предпочтительно обозначает М или Т,
Х3 предпочтительно обозначает Т или I, Х4 предпочтительно обозначает Т, Р или L (SEQ ID NO: 57).
Кроме того, дополнительное сравнение приведенной выше последовательности с 18 мутантными формами HBsAg, с которыми связывается моноклональное антитело человека НВС34, показало, что НВС34 связывается с эпитопом, образованным аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2:
X1 X2 Х3 Т С Х4 X5 XeA X7 G где X1 обозначает Р, Т или S,
X2 обозначает С или S,
X3 обозначает R, K, D или I,
Х4 обозначает М или Т,
Х5 обозначает Т, А или I,
X6 обозначает Т, Р или L,
- 49 038301
Х7 обозначает Q, Н или L.
Пример 6.
Введение НВС34 через 3 недели после инфицирования ВГВ предотвращает распространение вируса у гуманизированных мышей uPA.
Объект, описанный в примере 6, заключается в исследовании способности моноклонального антитела человека НВС34 предотвращать распространение ВГВ. Другими словами, цель заключается в исследовании способности антитела НВС34 в качестве ингибитора проникновения B-клетку подавлять in vivo инфекцию гепатоцитов человека при обработке мышей после исходного инфицирования. Для этого использовали наивных мышей uPA/SCID, репопулированных первичными гепатоцитами человека (см. статью Petersen et al., Nature Biotechnology, 26, p. 335-341 (2008)). Указанным мышам прививали криоконсервированные гепатоциты человека внутриселезеночной инъекцией. Через 8 недель успешность репопуляции гепатоцитов человека в печени хозяина определяли при измерении уровней сывороточного альбумина человека, который экспрессируется исключительно трансплантированными гепатоцитами человека. Мышей с соответствующими уровнями альбумина человека инокулировали 5x107 копиями геномных эквивалентов ВГВ (генотип D, HBeAg-положительный) внутрибрюшинно (в/б), чтобы обеспечить проникновение вируса. Через три недели после инфицирования начинали протокол лечения, при этом мышей лечили либо антителом НВС34 (в дозе 1 мг/кг, вводимой два раза в неделю внутрибрюшинно (в/б)), либо контрольным антителом или энтекавиром (ETV, который вводили перорально в дозе 1 мкг/мл в воде, Baraclude Solution, Bristol-Myers Squibb) в течение 6 недель. Образцы печени, извлеченные при умерщвлении животных, быстро замораживали в жидком азоте для иммунофлуоресцентного анализа.
ДНК ВГВ экстрагировали из образцов сыворотки с использованием набора QiAmp MinElute Virus spin kit (Qiagen, Hilden, Германия). ВГВ-специфичные праймеры и гибридизационные пробы использовали для количественного определения ДНК ВГВ при вирусемии и уровней кнкДНК, как описано ранее (Volz Т. et al., Gastroenterology, 133, p. 843-852 (2007)). ДНК и РНК экстрагировали из образцов печени с использованием набора для очистки ДНК Master Pure DNA (Epicentre, Biozym, Германия) и набора для очистки РНК RNeasy RNA (Qiagen, Hilden, Германия). Внутрипеченочные уровни ДНК ВГВ нормализовали на клеточные уровни ДНК с использованием набора для гена β-глобина (Roche DNA control Kit, Roche Diagnostics). Уровни релаксированной кольцевой ДНК (ркДНК) оценивали, вычитая количество кнкДНК из общего количества ДНК ВГВ. Проводили обратную транскрипцию вирусных РНК и геномных РНК с использованием праймеров oligo-dT и набора для транскрипции Transcriptor Kit (Roche Applied Science) и определяли количественно с использованием праймеров, специфичных для общих вирусных РНК. Уровни РНК ВГВ нормализовали относительно РНК, специфичной к GAPDH человека. Количественное определение HBsAg в образцах крови проводили с использованием платформы Abbott Architect (quant. HBsAg kit, Abbott, Ирландия, Diagnostic Division) согласно инструкциям фирмыпроизводителя. Проводили иммунное окрашивание криостатных срезов печени химерных мышей с использованием моноклонального антитела, специфичного к цитокератину-18 человека (Dako, Glostrup, Дания) для окрашивания гепатоцитов человека. Для детектирования корового антигена ВГВ (HBcAg) использовали поликлональное кроличье антитело против HBcAg. Специфичные сигналы визуализировали с применением вторичных антител, меченных красителем Alexa (Invitrogen, Darmstadt, Германия), или системы TSA-флуоресцеин (HBcAg) (Perkin Elmer, Jugesheim, Германия), в то время как окрашивание ядер проводили с использованием реагента Hoechst 33342 (фирмы Invitrogen). Окрашенные срезы анализировали с использованием флуоресцентного микроскопа.
Средний базовый уровень ДНК ВГВ в начале лечения составлял 2x106 копий ДНК/мл. В фазе распространения инфекции ВГВ (недели 3-6 после инфицирования (п/и)) в группе, которую лечили контрольным антителом, вирусемия возрастала на величину >2 log, в то время как у мышей, которых лечили антителом НВС34 или энтекавиром, титры ВГВ снижались (фиг. 11).
При завершении эксперимента (т.е. на неделе 9) проводили также внутрипеченочный анализ мышей, регистрируя количество гепатоцитов, окрашенных в присутствии HBcAg. У мышей, которых лечили контрольным антителом, наблюдалось HBcAg-положительное окрашивание почти всех гепатоцитов, в то время как в обеих группах лечения энтекавиром и антителом НВС34 наблюдалось эффективное блокирование распространения вируса (приблизительно 1-5% HBcAg-положительных клеток). Эти результаты указывают на способность НВС34 эффективно блокировать распространение вируса в фазе активного распространения инфекции ВГВ (фиг. 12).
В соответствии с гистологическими и серологическими данными измерения кнкДНК показали, что внутрипеченочные уровни кнкДНК не отличаются значительно у мышей, которых умерщвляли через 3 недели после инфицирования ВГВ, и у мышей, которых лечили в течение периода неделя 3 -неделя 9 после инфицирования. Для сравнения, оцененное количество кнкДНК/клетка увеличивалось вплоть до 2 log в контрольной группе мышей, умерщвленных через 9 недель после инфицирования, указывая на то, что у мышей, которых лечили, вновь образованные молекулы релаксированной кольцевой ДНК (ркДНК) не могут эффективно превращаться в кнкДНК (фиг. 13). Аналогичная тенденция также обнаружена при
- 50 038301 измерении других внутрипеченочных вирусных параметров, таких как уровни ркДНК и РНКтранскриптов ВГВ.
Кроме того, измеряли исходные уровни циркулирующего в крови HBsAg (базовая линия (БЛ)) на неделе 3 лечения (неделя 6 после инфицирования) и на неделе 6 лечения (неделя 9 после инфицирования). Следует отметить, что у мышей, которых лечили антителом НВС34, уровни циркулирующего HBsAg снижались на величину >1 log (а также ниже предела детектирования), но не у мышей, которых лечили энтекавиром, в то время как в контрольной группе уровни HBsAg увеличивались на величину >2 log (достигая уровней 5000-10000 МЕ/мл) (фиг. 14). Присутствие антитела НВС34 не оказывает влияние на измерение HBsAg, как следует из результатов эксперимента (spike-in experiment) по проверке чистоты исследования, в ходе которого было установлено, что добавление антитела НВС34 в HBsAgположительную сыворотку мыши не изменяет ожидаемый результат измерения с использованием набора Abbott Architect для проведения диагностического иммуноанализа.
Представленные результаты свидетельствуют о том, что антитело НВС34 способно блокировать распространение вируса ВГВ и ускорять клиренс HBsAg.
Пример 7.
Введение антитела НВС34 гуманизированным мышам uPA с хронической инфекцией ВГВ ускоряет клиренс ВГВ и HBsAg.
Для имитации развития хронического гепатита В наивных гуманизированных мышей uPA/SCID инфицировали ВГВ, при этом через 12 недель после инфицирования наблюдался средний уровень ДНК ВГВ, равный 2х109 копий/мл, и уровень HBsAg, равный 10000 МЕ/мл. Указанные уровни соответствуют высоким уровням, которые обычно наблюдаются у человека с хронической инфекцией ВГВ.
Затем начиная с 12 недели после инфицирования мышей лечили либо антителом НВС34, либо контрольным антителом (1 мг/кг внутрибрюшинно (в/б) два раза в неделю) в течение 6 недель. Как показано на фиг. 15, титр ВГВ и уровни циркулирующего в крови HBsAg снижались у мышей, которых лечили антителом НВС34 в течение 3 недель (неделя 15 после инфицирования) и 6 недель (неделя 18 после инфицирования). Таким образом, лечение антителом НВС34 в течение 6 недель ускоряло четкое снижение как вирусемии ВГВ, так и снижение уровней HBsAg. Уровни HBeAg и альбумина человека у мышей, которых лечили антителом НВС34, не изменялись, что указывало на отсутствие токсического действия на печень.
Пример 8.
Введение антитела НВС34 блокирует инфекцию ВГ дельта in vivo.
Наивных гуманизированных мышей uPA/SCID совместно инфицировали полученной от пациента сывороткой, содержавшей РНК ВГ дельта и ДНК ВГВ. Через пять недель после инфицирования (когда титры ВГВ достигли уровней от 107 до 109, а титры РНК ВГ дельта достигли уровней от 103 до 106 копий/мл) мышам вводили НВС34 или контрольное антитело в течение 6 недель (1 мг/кг два раза в неделю внутрибрюшинно (в/б)).
ДНК ВГВ при вирусемии определяли, как описано в примерах 6 и 7. Вирусемию ВГД определяли обратной транскрипцией вирусной РНК (экстрагированной из образцов сыворотки с использованием набора QiAmp MinElute Virus Spin Kit, Qiagen, Venlo, Нидерланды) и количественной ОТ-ПЦР с использованием набора ABI Fast 1-Step Virus Master (Applied Biosystems, Carlsbad, США), BFD-специфичных праймеров и зондов на приборе ABI Viia7 (Applied Biosystems, Carlsbad, США).
Как видно на фиг. 16, антитело НВС34 эффективно блокирует распространение ВГ дельта как на неделе 3, так и на неделе 6 после лечения (недели 8 и 11, соответственно). Аналогично наблюдениям для мышей с хроническим гепатитом ВГВ, антитело НВС34 обеспечивает снижение титров вирусной ДНК ВГВ на величину 2 log (фиг. 13).
Пример 9.
Уточнение картирования непрерывного эпитопа НВС34.
Для дополнительного уточнения распознавания эпитопа антителом НВС34, описанного в примере 5, получали новую библиотеку из 1520 пептидов, состоящих из 16 различных наборов.
Набор 1 (названный LIN15): линейные 15-членные пептиды, полученные из последовательностимишени (SEQ ID NO: 5:
QGMLPVCPLIPGSSTTSTGPCRTCMTTAQGTSMYPSCCCTKPSDGNCTCIPIPSS
WAFGKFLWEWASARFSW,
J02203 (D, ayw3)) при смещении одного остатка.
Нативные остатки Cys защищали ацетамидометильной группой (так называемой Acm, обозначены цифрой 2 в соответствующих аминокислотных последовательностях).
Набор 2 (названный LIN22): линейные 22-членные пептиды, полученные из последовательностимишени (SEQ ID NO: 5:
QGMLPVCPLIPGSSTTSTGPCRTCMTTAQGTSMYPSCCCTKPSDGNCTCIPIPSS
WAFGKFLWEWASARFSW,
J02203 (D, ayw3)) при смещении одного остатка.
- 51 038301
Нативные остатки Cys защищали группой Acm (обозначены цифрой 2).
Набор 3 (названный LIN30): линейные 30-членные пептиды, полученные из последовательностимишени (SEQ ID NO: 5:
QGMLPVCPLIPGSSTTSTGPCRTCMTTAQGTSMYPSCCCTKPSDGNCTCIPIPSS
WAFGKFLWEWASARFSW,
J02203 (D, ayw3)) при смещении одного остатка.
Нативные остатки Cys защищали группой Acm (обозначены цифрой 2). Набор 4 (названный LIN15.AA): пептиды из набора 1, но остатки в положениях 9 и 10 заменены на Ala. При наличии нативного Ala в любом положении его заменяли на Gly.
Набор 5 (названный LIN22.AA): пептиды из набора 2, но остатки в положениях 12 и 13 заменены на Ala. При наличии нативного Ala в любом положении его заменяли на Gly.
Набор 6 (названный LIN30.AA): пептиды из набора 3, но остатки в положениях 16 и 17 заменены на Ala. При наличии нативного Ala в любом положении его заменяли на Gly.
Набор 7 (названный CYS.A): комбинаторные пептиды длиной 27 остатков. В положениях 1-11 и 1727 присутствуют линейные последовательности, которые содержат спаренные остатки Cys. Указанные 11-членные последовательности соединены через линкер GGSGG (SEQ ID NO: 79). Остатки Cys, которые не участвуют в образовании дисульфидных мостиковых связей, защищены группой Acm (обозначены цифрой 2).
Набор 8 (названный CYS.B): линейные 22-членные последовательности, которые содержат два остатка Cys, образующие дисульфидную мостиковую связь. Остатки Cys, которые не участвуют в образовании дисульфидной мостиковой связи, защищены группой Acm (обозначены цифрой 2).
Набор 9 (названный LOOP12): пептиды со структурно ограниченной конформацией длиной 12 остатков. В положениях 2-11 присутствуют 10-членные последовательности, полученные из последовательности-мишени антигенной петли HBV-S-Ag. В положениях 1 и 12 присутствуют остатки Cys, которые соединены фрагментом mP2 CLIPS. Нативные остатки Cys защищены группой Acm (обозначены цифрой 2).
Набор 10 (названный LOOP15): пептиды со структурно ограниченной конформацией длиной 15 остатков. В положениях 2-14 присутствуют 13-членные последовательности, полученные из последовательности-мишени антигенной петли HBV-S-Ag. В положениях 1 и 15 присутствуют остатки Cys, которые соединены фрагментом mP2 CLIPS. Нативные остатки Cys защищены группой Acm (обозначены цифрой 2).
Набор 11 (названный LOOP21): пептиды со структурно ограниченной конформацией длиной 21 остаток. В положениях 2-20 присутствуют 19-членные последовательности, полученные из последовательности-мишени антигенной петли HBV-S-Ag. В положениях 1 и 21 присутствуют остатки Cys, которые соединены фрагментом mP2 CLIPS. Нативные остатки Cys защищены группой Acm (обозначены цифрой 2).
Набор 12 (названный LOOP31): пептиды со структурно ограниченной конформацией длиной 31 остаток. В положениях 2-30 присутствуют 29-членные последовательности, полученные из последовательности-мишени антигенной петли HBV-S-Ag. В положениях 1 и 31 присутствуют остатки Cys, которые соединены фрагментом mP2 CLIPS. Нативные остатки Cys защищены группой Acm (обозначены цифрой 2).
Набор 13 (названный МАТ.А): комбинаторные пептиды длиной 25 остатков. В положениях 2-12 и 14-24 присутствуют 11-членные пептиды, полученные из последовательности-мишени антигенной петли HBV-S-Ag. В положениях 1, 13 и 25 присутствуют остатки Cys, которые соединены фрагментом Т3 CLIPS. Нативные остатки Cys защищены группой Acm (обозначены цифрой 2).
Набор 14 (названный МАТ.В): комбинаторные пептиды длиной 28 остатков. В положениях 2-12 и 14-27 присутствуют 11-членные и 14-членные пептиды, соответственно. В положениях 1, 13 и 28 присутствуют остатки Cys, которые соединены фрагментом Т3 CLIPS. Нативные остатки Cys защищены группой Acm (обозначены цифрой 2).
Набор 15 (названный МАТ.С): комбинаторные пептиды длиной 28 остатков. В положениях 2-15 и 17-27 присутствуют 14-членные и 11-членные пептиды, соответственно. В положениях 1, 16 и 28 присутствуют остатки Cys, которые соединены фрагментом Т3 CLIPS. Нативные остатки Cys защищены группой Acm (обозначены цифрой 2).
Набор 16 (названный MAT.D): комбинаторные пептиды длиной 31 остаток. В положениях 2-15 и 17-30 присутствуют 14-членные пептиды, полученные из последовательности-мишени антигенной петли HBV-S-Ag. В положениях 1, 16 и 31 присутствуют остатки Cys, которые соединены фрагментом Т3 CLIPS. Нативные остатки Cys защищены группой Acm (обозначены цифрой 2).
При испытании в условиях повышенной жесткости антитело НВС34 не связывалось ни с одним пептидом на чипах. При испытании в условиях пониженной жесткости (5 мкг/мл в 0,1% буферном растворе Pepscan и растворе для предварительного кондиционирования, содержащем комбинацию лошадиной сыворотки и овальбумина) антитело связывалось с пептидами со структурно ограниченной конфор
- 52 038301 мацией и с комбинаторными пептидами, при этом наблюдали незначительно более низкую эффективность связывания с пептидами из набора 14 и набора 16 по сравнению с пептидами из набора 13 и набора 15. Связывание на миметиках линейных эпитопов не наблюдали. Данные показаны на фиг. 17. Указанные данные свидетельствуют о том, что антитело НВС34 распознает конформационный непрерывный эпитоп, состоящий из пептидных фрагментов 18TGPCRTC24 (SEQ ID NO: 80) и 45GNCTCIP51 (SEQ ID NO: 81), при этом пептидный фрагмент 18TGPCRTC24 (SEQ ID NO: 80) является доминантной частью эпитопа (фиг. 17).
Для уточнения картирования эпитопа антитела НВС34 при проведении анализа полной замены, основанного на описанных выше результатах, синтезировали 812 непрерывных или петлевых пептидов Т3 CLIPS, состоящих из трех различных наборов.
Набор 1 (названный RN1, непрерывный Т3 CLIPS): серии мутантных форм эпитопов получали из непрерывного миметика C2IPIPSSWAFGCSTTSTGP2RT2C (SEQ ID NO: 82). Анализ замены проводили для каждого положения в указанной последовательности. Другими словами, для каждого положения в пептидной последовательности получали варианты, в которых исходную аминокислоту в указанном положении заменяли на одну из 13 аминокислот, выбранных из группы, состоящей из аланина (А), глутаминовой кислоты (Е), фенилаланина (F), глицина (G), гистидина (Н), лизина (К), лейцина (L), пролина (Р), глутамина (Q), аргинина (R), серина (S), валина (V), тирозина (Y) и , где знак _ обозначает делецию остатка. Нативные остатки Cys защищены группой Acm (обозначены цифрой 2).
Набор 2 (названный RN2, непрерывный Т3 CLIPS): серии мутантных форм эпитопов получали из непрерывного миметика CGN2T2IPIPSSWAFCSTTSTGP2RT2^(SEQ ID NO: 83).
Анализ замены проводили для каждого положения в указанной последовательности аналогично тому, как описано для набора 1 (т.е. остатки GN2T не мутированы). Нативные остатки Cys защищены группой Acm (обозначены цифрой 2).
Набор 3 (названный RN3, петлевой Т3 CLIPS): серии мутантных форм эпитопов получали из петлевого миметика CGGGCSTTSTGP2RT2C_(SEQ ID NO: 84).
Анализ замены проводили для положений 6-16 в указанной последовательности аналогично тому, как описано для набора 1. Нативные остатки Cys защищены группой Acm (обозначены цифрой 2).
Антитело НВС34 испытывали метом ИФА на основе системы PEPSCAN при концентрации 20 мкг/мл на пептидном чипе, предварительно кондиционированном в 0,1% растворе SQ (буферный раствор Pepscan, содержащий 0,1% комбинации лошадиной сыворотки и овальбумина). Пептидные чипы инкубировали в растворе антитела НВС34 (в течение ночи при 4°С). После промывки пептидные чипы инкубировали соответствующим конъюгатом антитела с пероксидазой (SBA) (при разведении 1:1000) в течение 1 ч при 25°С. После промывки добавляли субстрат пероксидазы, 2,2'-азино-ди-3этилбензтиазолинсульфонат (ABTS), и 20 мкг/мл 3% раствора Н2О2. Через 1 ч измеряли развитие окрашивания. Развитие окрашивания определяли количественно с использованием камеры прибора с зарядовой связью (CCD) и системы обработки изображений.
Как ожидалось, при испытании в условиях повышенной жесткости антитело НВС34 связывалось с пептидами из всех наборов. В результате в эксперименте было установлено, что остатки 120PCR122 иС124 играют основную роль в связывании, в то время, как только некоторые замены остатков I150, I152, W156 и F158 заметно снижают связывание (фиг. 18). Кроме того, данные, зарегистрированные согласованно на всех трех чипах, свидетельствовали о том, что замена любого остатка в области h4STTSTGPCRTCi24 (SEQ ID NO: 85) на Е приводит к снижению связывания, в то время как обратные замены на R или Y усиливают связывание. Однако для области i45GNCTCIPIPSSWAFCi59 (SEQ ID no: 86) аналогичная тенденция не наблюдалась.
В совокупности представленные результаты свидетельствуют о том, что антитело НВС34 распознает непрерывный эпитоп, при этом присутствие остатков 120PCR122 и С124 играет основную роль в связывании. Установлено, что присутствие остатков i45GNCTCIPIPSSWAFi58 (SEQ ID NO: 87) обеспечивает структурное окружение для установления и стабилизации взаимодействий эпитоп - паратоп. Этот вывод основан на наблюдении о том, что миметики непрерывных эпитопов (если в одном миметике присутствуют последовательности i45GNCTCIPIPSSWAF158 (SEQ ID NO: 87) и 114STTSTGPCRTC124 (SEQ ID NO: 85)) являются более устойчивыми к заменам по сравнению с последовательностью ii4STTSTGPCRTCi24 (SEQ ID NO: 85} отдельности (набор 3, RN3). Кроме того, было установлено, что P151, который фиксирует торсионные углы, тем самым обеспечивая конформационную жесткость, влияет на связывание прежде всего, если он заменен на G, который, как известно, характеризуется обратными свойствами. Замена G145P аналогичным образом влияет на связывание НВС34. Многократно наблюдалось, что замены R/Y повышают эффективность связывания в любом положении в мотиве 114STTSTGPCRTC124 (SEQ ID NO: 85) но не в мотиве 145GNCTCIPIPSSWAF158 (SEQ ID NO: 87) в то время как замены Е снижают эффективность связывания. Указанное наблюдение может свидетельствовать о том, что остатки ii4STTSTGPCRTCi24 (SEQ ID NO: 85) связываются с отрицательно заряженным
- 53 038301 паратопом в антителе НВС34 (или вблизи кластера отрицательных зарядов), при этом повышение эффективности связывания, а также его снижение являются результатом электростатических сил и скорее характеризуют свойства паратопа, а не свойства эпитопа.
Пример 10.
Повышенное снижение HBsAg у гуманизированных мышей uPA с хронической инфекцией ВГВ, которых лечили комбинацией НВС34 и ламивудина.
В следующем испытании исследовали эффективность комбинированного лечения, включающего использование антитела НВС34. Для использования в комбинации с НВС34 был выбран ингибитор полимеразы, а именно ламивудин.
Для имитации развития хронического гепатита В наивных гуманизированных мышей uPA/SCID инфицировали ВГВ, и через 8 недель после инфицирования средний уровень ДНК ВГВ достигал 2х109 копий/мл, а уровень HBsAg достигал 9000 МЕ/мл. Указанные уровни соответствовали высоким уровням, которые обычно наблюдаются у пациентов с хронической инфекцией ВГВ.
Затем начиная с недели 8 после инфицирования мышей лечили либо антителом НВС34 в отдельности, ингибитором полимеразы, ламивудином, в отдельности или комбинацией НВС34 и ламивудина, или лечили контрольным антителом в течение 4 недель (НВС34 вводили в дозе 1 мг/кг внутрибрюшинно (в/б) два раза в неделю, ламивудин добавляли в питьевую воду в дозе 0,4 мг/мл).
Вирусемию ВГВ и уровни HBsAG в сыворотке оценивали на неделе 0 лечения (до начала лечения), на неделе 2 лечения, на неделе 4 лечения, на неделе 6 лечения или на неделе 0 лечения (до начала лечения), на неделе 3 лечения и на неделе 6 лечения. Результаты показаны на фиг. 19 А (вирусемия ВГВ) и Б (HBsAG).
Как показано на фиг. 19, лечение НВС34, ламивудином или обоими лекарственными средствами в комбинации вызывало снижение вирусемии (А) в среднем на величину 0,7 log, 1,3 log и 2,4 lg, соответственно. Следует отметить, что уровень HBsAg (Б) снижался на величину 1,3 log (средний уровень БЛ составлял 15600 МЕ/мл) у мышей, которых лечили антителом НВС34 в отдельности, и на величину 2,6 log (средний уровень БЛ составлял 2600 МЕ/мл) в группе мышей, которых лечили комбинацией, в то время как у мышей, которых лечили ламивудином в отдельности, значительного снижения уровня HBsAg не наблюдали (0,2 log, средний уровень БЛ составлял 9000 МЕ/мл).
Подводя итог, комбинированное лечение НВС34 и ламивудином явно обеспечивало наиболее сильный эффект. Интересно отметить, что такой сильный эффект комбинации НВС34 и ламивудина наблюдался, даже если лечение ламивудином в отдельности было неэффективным. В связи с этим наблюдаемый сильный эффект комбинации НВС34 и ламивудина явно указывает на неожиданное синергетическое действие.
Таким образом, неожиданно сильное снижение HBsAg, достигаемое при комбинированном лечении, доказывает, что антитело НВС34 можно использовать наряду с ингибиторами полимеразы, например, при развитии хронического заболевания, чтобы ускорить клиренс HBsAg как у пациентов с моноинфекцией ВГВ, так и у пациентов с совместной инфекцией ВГВ/ВГ дельта.
Пример 11.
Конструирование последовательностей антитела НВС34: CDR3 в VH и VL областях.
Первые серии мутантных форм НВС34 конструировали с использованием мутаций в CDR3 в VH и VL областях, т.е. при замене (i) остатка W107 в CDR3 в VH области либо на А, либо на F, (ii) остатка M115 в CDR3 в VH области на I или на L и/или (iii) остатка W107 в CDR3 в VL области либо на А, либо на F. Все 18 вариантов НВС34 получали при комбинировании немутированной VH или VL области НВС34 (здесь и далее называется дикий тип (WT) или исходное антитело) с различными комбинациями мутантных форм VH и VL, как показано на фиг. 20 и 21.
Продуцирование вариантов антитела НВС34 исследовали методом ИФА в отношении связывания с антигеном HBsAg adw аналогично тому, как описано в примере 1. Результаты показаны на фиг. 21.
Следует отметить, что мутация W107 в CDR3 в VH области на А (в вариантах HBC34-V5, HBC34V8, HBC34-V9, HBC34-V10, HBC34-V12 и HBC34-V17, фиг. 21) полностью отменяет связывание НВС34 с HBsAg. Это указывает на то, что W107 является важным остатком в паратопе НВС34 в отношении распознавания антигена. Мутация W107 в CDR3 в VH области на F (аминокислота с теми же ароматическими свойствами, как и W) частично влияет на связывание НВС34 (HBC34-V1), что указывает на то, что мутацию W нельзя провести без сопутствующего снижения связывающей аффинности НВС34 в отношении HBsAg.
Мутация M115 в CDR3 в VH области на L не влияет на связывание НВС34 (HBC34-V13), в то время как мутация на I (HBC34-V11) частично снижает связывание НВС34, указывая на то, что M115 нельзя заменить ни на L, ни на I без сопутствующего снижения связывания НВС34. В соответствии с результатами, полученными для единичной мутации W107A, двойная мутация W107A и М115А (HBC34-V10) полностью отменяет связывание НВС34.
Мутация W107 в CDR3 в VL области на F не влияет на связывание НВС34 (HBC34-V7), в то время как мутация на A (HBC34-V15) частично снижает связывание НВС34, указывая на то, что без сопутствующего снижения связывания НВС34, W107 в CDR3 в области VL можно заменить на F, но не на А.
- 54 038301
Как ожидалось, комбинация мутаций W107F в CDR3 в VH области и W107A в CDR3 в VL области полностью отменяет связывание (HBC34-v2). Комбинация мутаций M115L в CDR3 в VH области и W107F в CDR3 в VL области (HBC34-V6), мутаций M1151 в CDR3 в области VH с W107F в CDR3 в области VL (HBC34-V4) и мутаций W107F в CDR3 в VH области и W107F в CDR3 в VL области частично влияет на связывание НВС34 с HBsAg, указывая на то, комбинация этих двух мутаций, но не отдельные мутации, не совместима с сохранением связывающей аффинности исходного антитела НВС34.
На следующей стадии шесть из 18 описанных выше вариантов НВС34 выбирали для дополнительной характеристики (HBC34-V1, V3, V4, V6, V7, V11 и V13), чтобы (i) подтвердить исходные результаты, (ii) измерить связывающую аффинность методом ИФА (т.е. для определения ЕС50 связывания) и (iii) оценить продуцирование указанных вариантов НВС34 во временно трансфектированных клетках 293-Expi (фиг. 22 и 23).
Как наблюдали в первом эксперименте, вариант HBC34-V3 (несущий двойную мутацию W107F в CDR3 в VH области и W107F в CDR3 в VL области) связывался с HBsAg (серотип adw), при этом ЕС50 повышалось в 9 раз по сравнению с исходным антителом НВС34. Кроме того, вариант HBC34-V3 продуцировался при концентрации почти в 5 раз более низкой по сравнению с НВС34. Варианты HBC34-V11 и HBC34-V13, несущие единичную мутацию M1151 и M115L, соответственно, связывались с HBsAg, при этом наблюдалось ЕС50, равное или незначительно более высокое по сравнению с НВС34. Однако оба варианта продуцировались менее эффективно по сравнению с НВС34 (по сравнению с НВС34 продуктивность снижалась в 0,6- и 0,3-раза). Указанные результаты свидетельствуют о том, что вариант HBC34V11 и даже в большей степени вариант HBC34-V13 связываются с высокой аффинностью с HBsAg, но продуцируются B-клетках млекопитающих менее эффективно. Аналогичным образом, вариант HBC34V1, несущий единичную мутацию W107F в CDR3 в VH области, связывался с HBsAg с аффинностью, сравнимой с НВС34 (ЕС50 повышалось в 1,6-раза), но продуцировался в 4 раза менее эффективно (т.е. в 0,25 раз меньше) по сравнению с НВС34. Комбинация мутации W107 в CDR3 в VL области либо с W107, M1151 или M115L в CDR3 в VH области (HBC34-V3, HBC34-V4 и HBC34-V6) снижает как связывающую аффинность (ЕС50 повышалась в 1,6-9,0 раз), так и продуктивность (концентрация антитела в культуральных супернатантах снижалась в 0,20-0,35 раза). Неожиданно было установлено, что вариант с единичной мутацией W107F в CDR3 в VL области (HBC34-V7) связывается с HBsAg с аффинностью, аналогичной НВС34, и продуцируется даже более эффективно (вплоть до 1,7 раз) по сравнению с НВС34, обеспечивая чрезвычайно высокую концентрацию в культуральном супернатанте, равную 533 мкг/мл (фиг. 23).
Пример 12.
Конструирование последовательностей антитела НВС34: каркасные области.
Получали двенадцать дополнительных вариантов НВС34 (варианты НВС34-V19 - HBC34-V30, фиг. 24А), в которые включали несколько мутаций в каркасные области (FR) в обеих VH и VL областях, которые соответствовали остаткам, присутствующим в обычном не-мутированном предшественнике НВС34 (HBC34-UCA) (фиг. 20), и комбинировали с мутацией M115L в CDR3 в VH области и с мутацией W107F в CDR3 в VL области.
Результаты показаны на фиг. 24. Включение 9 мутаций в FR в VL области (НВС34-27, HBC34-V28, HBC34-V29 и HBC34-V30) в присутствии мутации W107 в CDR3 в VL области в комбинации с M115L WT значительно снижало эффективность связывания НВС34 с HBsAg, таким образом указывая на важную роль мутированных остатков в VL (фиг. 24А-Б). Варианты НВС34, в которых тот же описанный выше вариант VL (т.е. W107F/FR1234-GL) комбинировали с VH областью, несущей мутацию M115L и 9 дополнительных мутаций в FR областях, не связывались с HBsAg, указывая на существенный вклад мутаций в обеих VH и VL областях в связывании с HBsAg.
Важно отметить, что удаление только одной из 9 мутаций, введенных в FR в VL области (т.е. K66Y), в HBC34-V23 и HBC34-V24 значительно повышает связывание (ЕС50 снижалось в 100 раз) с HBsAg по сравнению с соответствующими вариантами, несущими мутацию Y66K (HBC34-V27 и HBC34-V28). Аналогичным образом, удаление мутации K66Y в HBC34-V25 и HBC34-V26 восстанавливает связывание с HBsAg по сравнению с соответствующими несвязывающими вариантами, несущими мутацию Y66K (HBC34-V27 и HBC34-V28).
Среди указанных вариантов, вариант HBC34-V23 сохраняет высокую связывающую аффинность (ЕС50 повышалось в 1,5 раза по сравнению с НВС34) и продуцируется аналогично исходному антителу НВС34. Следует отметить, что вариант HBC34-V24, отличающийся только одной аминокислотой от варианта HBC34-V23 (т.е. M115L в VH), связывается с HBsAg и характеризуется ЕС50, аналогичным ЕС50 для варианта HBC34-V23, но продуцируется неэффективно (продуктивность составляет только 0,14 продуктивности НВС34). Представленные результаты указывают на то, что присутствие L в положении 115 хотя и не влияет значительно на связывание вариантов НВС34 с HBsAg, оказывает негативное воздействие на продуцирование вариантов НВС34, несущих указанную мутацию. Действительно, в среднем все варианты НВС34, несущие мутацию M115L (HBC34-V6, HBC34-V13, HBC34-V19, HBC34-V20, HBC34V21, HBC34-V22, HBC34-V24, HBC34-V25, HBC34-V26, HBC34-V28, HBC34-V29 и HBC34-V30), характеризуются продуктивностью, которая составляет 0,3 продуктивности исходного антитела НВС34.
- 55 038301
Важно отметить, что введение 5 или 9 мутаций в FR в VH области при наличии мутации Ml 15L в CDR3 в VH области (варианты HBC34-V19 и HBC34-V2O соответственно) существенно не снижает связывание с HBsAg, указывая на то, что мутированные остатки не играют значительной роли в высоко аффинном распознавании антигена антителом НВС34. Введение мутации W107F в основную цепь вариантов HBC34V19 и HBC34-V20 в вариантах HBC34-V21 и HBC34-V22 снижает связывание с HBsAg в 2030 раз. Интересно отметить, что та же самая мутация (т.е. W107 в CDR3 в VL области) не влияет на связывание других вариантов, не содержащих 5 или 9 мутаций в FR в VH областях, и такой результат может указывать на кооперативную роль остатков в FR в VH областях (например, при стабилизации определенной конформации каркаса в вариабельной области) при связывании с HBsAg с остатком 107 VH.
Наконец, в соответствии с результатами, описанными в примере 11, показанными на фиг. 23, для антитела HMB34-V7, несущего единичную мутацию W107 в CDR3 в VL области, наблюдается сравнимое с НВС34 связывание с HBsAg (т.е. повышение 1,4 раза), и указанное антитело продуцируется более эффективно (повышение в 1,2 раза) по сравнению с НВС34 (в среднем при проведении двух экспериментов продуктивность HBC34-V7 повышалась в 1,5 раза, т.е. эффективность повышалась на 50% по сравнению с антителом НВС34). Этот результат позволяет предположить, что мутация W107F в CDR3 в VL области хотя и не влияет существенно на связывающую аффинность в отношении HBsAg, но оказывает положительное влияние на продуцирование антитела НВС34.
Наконец, методом анализа проточной цитометрии исследовали способность НВС34 и вариантов HBC34-V6, HBC34-V7, HBC34-V19, HBC34-V23 и HBC34-V24 распознавать 10 генотипов ВГВ: А, В, С, D, E, F, G, Н, I и J (как показано на фиг. 25). Прежде всего, эпителиальные клетки человека (клетки Нер2) трансфектировали плазмидами, экспрессирующими каждый из HBsAg 10 генотипов ВГВ: А, В, С, D, E, F, G, Н, I и J. Все антитела исследовали в различных концентрациях (8 серийных разведений от 5000 нг/мл до 7 нг/мл) при окрашивании временно трансфектированных пермеабилизированных клеток. Через два дня после трансфекции клетки Нер2 собирали, фиксировали и пермеабилизировали сапонином для иммуноокрашивания антителом НВС34 и пятью выбранными вариантами. Связывание антител с трансфектированными клетками анализировали на приборе Becton Dickinson FACSCanto2 (фирмы BD Biosciences) с использованием программного обеспечения FlowJo (фирмы TreeStar). Как показано на фиг. 25, НВС34 и все пять исследованных вариантов распознают HBsAg всех 10 генотипов ВГВ на одинаковом уровне.
Таблица последовательностей и номера последовательностей SEQ ID (перечень последовательностей)
SEQ ID NO | Последовательность | Примечания |
1 | Xi Х2 Х3 ТС Х4 Х5 Х6А X7G где Хь Х2, Хз, Х4, Xs, Хб и Х7 могут представлять собой аминокислоту. | ЭПИТОП |
2 | Xi Х2 Хз ТС Х4 Х5 Х6А X7G где Xi означает Р, Т или S, Х2 означает С или S, Хз означает R, К, D или I, Х4 означает М или Т, Х5 означает Т, А или I, Х6 означает Т, Р или L, и Х7 означает Q, Н или L. |
- 56 038301
3 | MENITSGFLGPLLVLQAGFFLLTRILTIPQSLDSWWTSLNFLGGTTVC LGQNSQSPTSNHSPTSCPPTCPGYRWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLVL LDYQGMLPVCPLIPGSSTTSTGPCRTCMTTAQGTSMYPSCCCTKPSD GNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSWLSLLVPFVQWFVGLSPTV WLSVIWMMWYWGPSLYSILSPFLPLLPIFFCLWVYI | S домен HBsAg (код доступа GenBank № J02203) |
4 | MENVTSGFLGPLLVLQAGFFLLTRILTIPQSLDSWWTSLNFLGGTTV CLGQNSQSPTSNHSPTSCPPTCPGYRWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLV LLDYQGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPAQGTSMYPSCCCTKPS DGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSWLSLLVPFVQWFVGLSPT VWLSVIWMMWYWGPSLYSTLSPFLPLLPIFFCLWVYI | S домен HBsAg (код доступа GenBank № FJ899792) |
5 | QGMLPVCPLIPGSSTTSTGPCRTCMTTAQGTSMYPSCCCTKPSDGNC TCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW | J02203 (D, ayw3) |
6 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPAQGTSMYPSCCCTKPSDGNC TCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW | FJ899792 (D, adw2) |
7 | QGMLPVCPLIPGTTTTSTGPCKTCTTPAQGNSMFPSCCCTKPSDGNC TCIPIP S S WAF AKYL WE W AS VRFS W | AM282986 (A) |
8 | QGMLPVCPLIPGSSTTSTGPCKTCTTPAQGTSMFPSCCCTKPTDGNC TCIPIP S S WAF AKYL WE WAS VRFS W | D23678 (Bl) |
9 | QGMLPVCPLLPGTSTTSTGPCKTCTIPAQGTSMFPSCCCTKPSDGNC TCIPIPSSWAF ARFLWEWASVRFSW | AB 117758 (Cl) |
10 | QGMLPVCPLIPGSSTTSTGPCRTCTTLAQGTSMFPSCCCSKPSDGNCT CIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW | AB205192 (E) |
11 | QGMLPVCPLLPGSTTTSTGPCKTCTTLAQGTSMFPSCCCSKPSDGNC TCIPIP SSWALGKYL WE WAS ARFSW | X69798 (F4) |
12 | QGMLPVCPLIPGSSTTSTGPCKTCTTPAQGNSMYPSCCCTKPSDGNC TCIPIP S S WAF AKYL WE WAS VRFS W | AF160501 (G) |
13 | QGMLPVCPLLPGSTTTSTGPCKTCTTLAQGTSMFPSCCCTKPSDGNC TCIPIP S S WAF GKYL WE WAS ARFSW | AY090454 (H) |
14 | QGMLPVCPLIPGSSTTSTGPCKTCTTPAQGNSMYPSCCCTKPSDGNC TCIPIPSSWAF AKYL WEWAS ARFSW | AF241409 (I) |
15 | QGMLPVCPLLPGSTTTSTGPCRTCTITAQGTSMFPSCCCTKPSDGNC TCIPIPSSWAF AKFLWEWASVRFSW | AB486012 (J) |
16 | CQGMLPVCPLIPGSSTTGTGTCRTCTTPAQGTSMYPSCCCTKPSDGN CTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW | HBsAg Y100C/P120T |
17 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGTCRTCTTPAQGTSMYPSCCCTKPSDGNC TCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW | HBsAg P120T |
18 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGTCRTCTTPAQGTSMYPSCCCTKPLDGNC TCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW | HBsAg P120T/S143L |
19 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPSRTCTTPAQGTSMYPSCCCTKPSDGNC TCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW | HBsAg C121S |
20 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCDTCTTPAQGTSMYPSCCCTKPSDGNC TCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW | HBsAg R122D |
21 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCITCTTPAQGTSMYPSCCCTKPSDGNCT CIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW | HBsAg R122I |
22 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRNCTTPAQGTSMYPSCCCTKPSDGNC TCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW | HBsAg T123N |
23 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPAHGTSMYPSCCCTKPSDGNC TCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW | HBsAg Q129H |
24 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPALGTSMYPSCCCTKPSDGNC TCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW | HBsAg Q129L |
25 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPAQGTSHYPSCCCTKPSDGNC TCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW | HBsAg M133H |
26 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPAQGTSLYPSCCCTKPSDGNC TCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW | HBsAg M133L |
- 57 038301
27 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPAQGTSTYPSCCCTKPSDGNC TCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW | HBsAg M133T |
28 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPAQGTSMYPSCCCTEPSDGNC TCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW | HBsAg K141E |
29 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPAQGTSMYPSCCCTKSSDGNC TCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW | HBsAg P142S |
30 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPAQGTSMYPSCCCTKPKDGNC TCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW | HBsAg S143K |
31 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPAQGTSMYPSCCCTKPSAGNC TCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW | HBsAg D144A |
32 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPAQGTSMYPSCCCTKPSDRNC TCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW | HBsAg G145R |
33 | QGMLPVCPLIPGSSTTGTGPCRTCTTPAQGTSMYPSCCCTKPSDGAC TCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSW | HBsAg N146A |
34 | GRIFRSFY | CDRH1 aa |
35 | NQDGSEK | CDRH2 aa |
36 | AAWSGNSGGMDV | CDRH3 aa |
37 | KLGNKN | CDRL1 aa |
38 | EVK | CDRL2 aa |
39 | VIYEVKYRP | длинный вариант CDRL2 aa |
40 | QTWDSTTVV | CDRL3 aa |
41 | ELQLVESGGGWVQPGGSQRLSCAASGRIFRSFYMSWVRQAPGKGL EWVATINQDGSEKLYVDSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNNLRVEDT AVYYCAAWSGNSGGMDVWGQGTTVSVSS | VH aa |
42 | SYELTQPPSVSVSPGQTVSIPCSGDKLGNKNVCWFQHKPGQSPVLVI YE VKYRP S GIPERF S GSNS GNT ATLTIS GTQ AMDE A AYF CQT WD STT VVFGGGTRLTVL | VL aa |
43 | GGACGCATCTTTAGAAGTTTTTAC | CDRH1 nuc |
44 | ATAAACCAAGATGGAAGTGAGAAA | CDRH2 nuc |
45 | GCGGCTTGGAGCGGCAATAGTGGGGGTATGGACGTC | CDRH3 nuc |
46 | AAATTGGGGAATAAAAAT | CDRL1 nuc |
47 | GAGGTTAAA | CDRL2 nuc |
48 | gtcatctatGAGGTTAAAtaccgcccc | длинный вариант CDRL2 nuc |
49 | CAGACGTGGGACAGCACCACTGTGGTG | CDRL3 nuc |
50 | GAACTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTGGGTCCAGCCGGG GGGGTCCCAGAGACTGTCCTGTGCAGCCTCTGGACGCATCTTTAG AAGTTTTTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCCCCAGGGAAGGGGC TGGAGTGGGTGGCCACTATAAACCAAGATGGAAGTGAGAAATTA TATGTGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAAC GCCAAGAACTCACTATTTCTGCAAATGAACAACCTGAGAGTCGA GGACACGGCCGTTTATTACTGCGCGGCTTGGAGCGGCAATAGTG GGGGTATGGACGTCTGGGGCCAGGGGACCACGGTCTCCGTCTCC TCA | VH nuc |
51 | TCCTATGAGCTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCCGTGTCCCCAGGA CAGACAGTCAGCATCCCCTGCTCTGGAGATAAATTGGGGAATAA AAATGTTTGCTGGTTTCAGCATAAGCCAGGCCAGTCCCCTGTGTT GGTCATCTATGAGGTTAAATACCGCCCCTCGGGGATTCCTGAGCG ATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACAGCCACTCTGACCATCAG CGGGACCCAGGCTATGGATGAGGCTGCCTATTTCTGTCAGACGTG GGACAGCACCACTGTGGTGTTCGGCGGAGGGACCAGGCTGACCG TCCTA | VL nuc |
- 58 038301
52 | XGSSTTSTGPCRTCMTXPSDGNATAIPIPSSWX где остатки, обозначенные символом X, заменены на остатки цистеина. | пептид |
53 | TSTGPCRTCMTTAQG | пептид |
54 | GMLPVCPLIPGSSTTSTGPCRTCMTT | пептид |
55 | XSMYP S AS АТКР SD GNXTGP CRTCMTT AQGT SX где остатки, обозначенные символом X, заменены на остатки цистеина. | пептид |
56 | PCRTCMTTAQG | аминокислоты 120-130 S домена HBsAg (HBV-D J02203) |
57 | PCXiTCX^XiAQG, где Xi предпочтительно означает R или К, Х2 предпочтительно означает М или Т, Х3 предпочтительно означает Т или I, и Х4 предпочтительно означает Т, Р или L. | ЭПИТОП |
58 | QTFDSTTVV | CDRL3 v7 и CDRL3 v23 (аа) |
59 | SYELTQPPSVSVSPGQTVSIPCSGDKLGNKNVCWFQHKPGQSPVLVI YE VKYRP S GIPERF S GSNS GNT ATLTIS GTQ AMDE A AYF CQTFD STT VVFGGGTRLTVL | VL v7 |
60 | AAGCTGGGGAACAAAAAT | CDRL1 v7 и CDRL1 v23 (nuc) |
61 | GAGGTGAAA | CDRL2 v7 и CDRL2 v23 nuc |
62 | GTCATCTACGAGGTGAAATATCGGCCT | длинный вариант CDRL2 v7 и длинный вариант CDRL2 v23 nuc |
63 | CAGACATTCGATTCCACCACAGTGGTC | CDRL3 v7 и CDRL3 v23 nuc |
64 | TCTTACGAGCTGACACAGCCACCTAGCGTGTCCGTCTCTCCAGGA CAGACCGTGTCCATCCCTTGCTCTGGCGACAAGCTGGGGAACAA AAATGTCTGTTGGTTCCAGCACAAGCCAGGGCAGAGTCCCGTGCT GGTCATCTACGAGGTGAAATATCGGCCTTCAGGAATTCCAGAAC GGTTCAGCGGATCAAACAGCGGCAATACTGCAACCCTGACAATT AGCGGGACCCAGGCCATGGACGAAGCCGCTTATTTCTGCCAGAC ATTCGATTCCACCACAGTGGTCTTTGGCGGGGGAACTAGGCTGAC CGTGCTG | VL v7 nuc |
65 | SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGNKNACWYQQKPGQSPVLVI YEVKYRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQTFDSTT VVFGGGTKLTVL | VL v23 aa |
66 | INQDGSEK | HBC34 WT CDRH2 aa |
67 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRIFRSFYMSWVRQAPGKGLE WVANINQDGSEKLYVDSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNNLRVEDT AVYYCAAWSGNSGGMDVWGQGTTVTVSS | HBC34 v31, HBC34 v32 и HBC34 v33 VH |
- 59 038301
68 | GAGGTGCAGCTGGTGGAATCCGGCGGGGGACTGGTGCAGCCTGG CGGCTCACTGAGACTGAGCTGTGCAGCTTCTGGAAGAATCTTCAG ATCTTTTTACATGAGTTGGGTGAGACAGGCTCCTGGGAAGGGACT GGAGTGGGTCGCAAACATCAATCAGGACGGATCAGAAAAGCTGT ATGTGGATAGCGTCAAAGGCAGGTTCACTATTTCCCGCGACAAC GCCAAAAATTCTCTGTTTCTGCAGATGAACAATCTGCGGGTGGAG GATACCGCTGTCTACTATTGTGCAGCCTGGTCTGGCAACAGTGGA GGCATGGACGTGTGGGGACAGGGAACCACAGTGACAGTCAGCTC C | HBC34 v31, HBC34 v32 и HBC34 v33 VH (nuc) |
69 | TCTTACGAGCTGACACAGCCCCCTAGCGTGTCCGTCTCTCCAGGC CAGACAGCATCCATCACTTGCTCTGGCGACAAGCTGGGGAACAA AAATGCCTGTTGGTATCAGCAGAAGCCAGGGCAGAGTCCCGTGC TGGTCATCTACGAGGTGAAATATCGGCCTTCAGGAATTCCAGAA AGATTCAGTGGATCAAACAGCGGCAATACTGCTACCCTGACAAT TAGCGGGACCCAGGCCATGGACGAAGCTGATTACTATTGCCAGA CATTCGATTCCACCACAGTGGTCTTTGGCGGGGGAACTAAGCTGA CCGTGCTG | VL v23 nuc |
70 | GAACTGCAGCTGGTCGAATCAGGAGGAGGGTGGGTCCAGCCCGG AGGGAGCCAGAGACTGTCTTGTGCCGCATCAGGGAGGATCTTCA GGAGCTTCTACATGTCCTGGGTGCGCCAGGCACCAGGCAAGGGA CTGGAGTGGGTCGCCACCATCAACCAGGACGGATCTGAAAAGCT GTATGTGGATAGTGTCAAAGGCCGGTTCACAATTAGCAGAGACA ACGCTAAAAATTCTCTGTTTCTGCAGATGAACAATCTGCGAGTGG AGGATACCGCCGTCTACTATTGCGCCGCTTGGTCTGGCAACAGCG GCGGGATGGATGTCTGGGGGCAGGGCACAACAGTGAGCGTCTCT TCC | HBC34 WT VH КОДОН-ОПТИМИЗИрованная |
71 | TCATACGAACTGACTCAGCCTCCCTCCGTCTCCGTCTCACCTGGA CAGACCGTCTCAATCCCCTGCTCCGGCGAT AAACTGGGCAACAAGAACGTGTGCTGGTTCCAGCACAAACCCGG ACAGAGTCCTGTGCTGGTCATCTACGAGGTCAAGTATCGGCCAA GCGGCATTCCCGAAAGATTCAGCGGCTCCAACTCTGGGAATACC GCAACACTGACTATCTCTGGAACCCAGGCAATGGACGAGGCAGC TTACTTTTGCCAGACTTGGGATTCAACTACTGTCGTGTTCGGCGG CGGAACTAGACTGACTGTCCTG | HBC34 WT VL КОДОН-ОПТИМИЗИрованная |
72 | GGGAGGATCTTCAGGAGCTTCTAC | HBC34 WT CDRH1 кодон- ОПТИМИЗИрованная |
73 | ATCAACCAGGACGGATCTGAAAAG | HBC34 WT CDRH2 кодонОПТИМИЗИрованная |
74 | GCCGCTTGGTCTGGCAACAGCGGCGGGATGGATGTC | HBC34 WT CDRH3 кодонОПТИМИЗИрованная |
75 | AAACTGGGCAACAAGAAC | HBC34 WT CDRL1 кодон- ОПТИМИЗИрованная |
76 | GAGGTCAAG | HBC34 WT CDRL2 кодонОПТИМИЗИрованная |
- 60 038301
77 | GTCATCTACGAGGTCAAGTATCGGCCA | НВС34 WT CDRL2 длинный кодон-оптимизированный вариант |
78 | CAGACTTGGGATTCAACTACTGTCGTG | НВС34 WT CDRL3 кодоноптимизированная |
79 | GGSGG | линкер |
80 | TGPCRTC | эпитоп |
81 | GNCTCIP | эпитоп |
82 | CCIPIPSSWAFGCSTTSTGPCRTCC где прежде всего остатки цистеина в положениях 2, 21, и 24 замещены ацетамидометильной группой. | миметик непрерывного эпитопа |
83 | CGNCTCIPIPSSWAFCSTTSTGPCRTCC где прежде всего остатки цистеина в положениях 4, 6, 24 и 27 замещены ацетамидометильной группой. | миметик непрерывного эпитопа |
84 | CGGGCSTTSTGPCRTCC где прежде всего остатки цистеина в положениях 13 и 16 замещены ацетамидометильной группой. | миметик петлевого эпитопа |
85 | STTSTGPCRTC | эпитоп |
86 | GNCTCIP IPSSWAFC | эпитоп |
87 | GNCTCIP IPSSWAF | эпитоп |
88 | PCRXC | эпитоп |
- 61 038301
Перечень последовательностей <220>
< 221> misc feature < 222> (2).7(2) < 223> Xaa is Cys or Ser <220>
< 221> misc feature < 222> (3).7(3) < 223> Xaa is Arg, Lys, Asp or lie <220>
< 221> misc feature < 222> (6).7(6) < 223> Xaa is Met or Thr <220>
< 221> misc feature < 222> (7).7(7) < 223> Xaa is Thr, Ala or lie <220>
< 221> misc feature < 222> (8).7(8) < 223> Xaa is Thr, Pro or Leu <220>
< 221> misc feature < 222> (10)7.(10) <223> Xaa is Gin, His or Leu <400> 2
Xaa Xaa Xaa Thr Cys Xaa Xaa Xaa Ala Xaa Gly 15 10 <210> 3 <211> 226 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> S домен HBsAg (GenBank acc. no. J02203) <400> 3
Met 1 | Glu | Asn | lie | Thr 5 | Ser | Gly | Phe | Leu | Gly 10 | Pro | Leu | Leu | Val | Leu 15 | Gin |
Ala | Gly | Phe | Phe 20 | Leu | Leu | Thr | Arg | lie 25 | Leu | Thr | lie | Pro | Gin 30 | Ser | Leu |
Asp | Ser | Trp 35 | Trp | Thr | Ser | Leu | Asn 40 | Phe | Leu | Gly | Gly | Thr 45 | Thr | Val | Cys |
Leu | Gly 50 | Gin | Asn | Ser | Gin | Ser 55 | Pro | Thr | Ser | Asn | His 60 | Ser | Pro | Thr | Ser |
- 62 038301
Cys Pro Pro Thr Cys Pro Gly Tyr Arg Trp Met Cys Leu Arg Arg Phe 65 70 7580 lie lie Phe Leu Phe lie Leu Leu Leu Cys Leu lie Phe Leu Leu Val 85 9095
Leu Leu Asp Tyr Gin Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly 100 105110
Ser Ser Thr Thr Ser Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Met Thr Thr Ala 115 120125
Gin Gly Thr Ser Met Tyr Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp
130 135140
Gly Asn Cys Thr Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Lys
145 150 155160
Phe Leu Trp Glu Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp Leu Ser Leu Leu
165 170175
Val Pro Phe Val Gin Trp Phe Val Gly Leu Ser Pro Thr Val Trp Leu 180 185190
Ser Val lie Trp Met Met Trp Tyr Trp Gly Pro Ser Leu Tyr Ser lie 195 200205
Leu Ser Pro Phe Leu Pro Leu Leu Pro lie Phe Phe Cys Leu Trp Val 210 215220
Tyr lie 225 <210> 4 <211> 226 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> S домен HBsAg (GenBank acc. no. FJ899792) <400> 4
Met Glu Asn Val Thr Ser Gly Phe Leu Gly Pro Leu Leu Val Leu Gin
10 15
Ala Gly Phe Phe Leu Leu Thr Arg lie Leu Thr lie Pro Gin Ser Leu 20 25 30
- 63 038301
Asp Ser Trp Trp Thr Ser Leu Asn Phe Leu Gly Gly Thr Thr Val Cys 35 4045
Leu Gly Gln Asn Ser Gln Ser Pro Thr Ser Asn His Ser Pro Thr Ser 50 5560
Cys Pro Pro Thr Cys Pro Gly Tyr Arg Trp Met Cys Leu Arg Arg Phe 65 70 7580 lie lie Phe Leu Phe lie Leu Leu Leu Cys Leu lie Phe Leu Leu Val 85 9095
Leu Leu Asp Tyr Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly 100 105110
Ser Ser Thr Thr Gly Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Thr Thr Pro Ala 115 120125
Gln Gly Thr Ser Met Tyr Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp 130 135140
Gly Asn Cys Thr Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Lys
145 150 155160
Phe Leu Trp Glu Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp Leu Ser Leu Leu
165 170175
Val Pro Phe Val Gln Trp Phe Val Gly Leu Ser Pro Thr Val Trp Leu 180 185190
Ser Val lie Trp Met Met Trp Tyr Trp Gly Pro Ser Leu Tyr Ser Thr 195 200205
Leu Ser Pro Phe Leu Pro Leu Leu Pro lie Phe Phe Cys Leu Trp Val
210 215220
Tyr lie 225 <210> 5 <211> 72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли J02203 (D, ayw3)
- 64 038301 <400> 5
Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr Thr
1015
Ser Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Met Thr Thr Ala Gln Gly Thr Ser 20 2530
Met Tyr Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp Gly Asn Cys Thr 35 4045
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Lys Phe Leu Trp Glu 50 5560
Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp 6570 <210>6 <211> 72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли FJ899792 (D, adw2) <400>6
Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr Thr
1015
Gly Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gln Gly Thr Ser 20 2530
Met Tyr Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp Gly Asn Cys Thr 35 4045
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Lys Phe Leu Trp Glu 50 5560
Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp 6570 <210> 7 <211> 72 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> область антигенной петли AM282986 (A)
- 65 038301 <400> 7
Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly Thr Thr Thr Thr
1015
Ser Thr Gly Pro Cys Lys Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gln Gly Asn Ser 20 2530
Met Phe Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp Gly Asn Cys Thr 35 4045
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Ala Lys Tyr Leu Trp Glu 50 5560
Trp Ala Ser Val Arg Phe Ser Trp 6570 <210>8 <211> 72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли D23678 (Bl) <400>8
Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr Thr
1015
Ser Thr Gly Pro Cys Lys Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gln Gly Thr Ser 20 2530
Met Phe Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Thr Asp Gly Asn Cys Thr 35 4045
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Ala Lys Tyr Leu Trp Glu 50 5560
Trp Ala Ser Val Arg Phe Ser Trp 6570 <210>9 <211> 72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли AB117758 (Cl) <400> 9
- 66 038301
Gin Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Thr 15 1015
Ser Thr Gly Pro Cys Lys Thr Cys Thr lie Pro Ala Gin Gly Thr Ser 20 2530
Met Phe Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp Gly Asn Cys Thr 35 4045
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Ala Arg Phe Leu Trp Glu 50 5560
Trp Ala Ser Val Arg Phe Ser Trp 6570 <210>10 <211>72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли AB205192 (E) <400>10
Gin Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr Thr
1015
Ser Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Thr Thr Leu Ala Gin Gly Thr Ser 20 2530
Met Phe Pro Ser Cys Cys Cys Ser Lys Pro Ser Asp Gly Asn Cys Thr 35 4045
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Lys Phe Leu Trp Glu 50 5560
Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp 6570 <210>11 <211>72 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> область антигенной петли X69798 (F4) <400> 11
- 67 038301
Gin Gly Met Leu Pro 1 5
Ser Thr Gly Pro Cys 20
Met Phe Pro Ser Cys 35
Cys lie Pro lie Pro 50
Val Cys Pro Leu Leu Pro 10
Lys Thr Cys Thr Thr Leu 25
Cys Cys Ser Lys Pro Ser 40
Ser Ser Trp Ala Leu Gly 55
Gly Ser Thr Thr Thr 15
Ala Gin Gly Thr Ser 30
Asp Gly Asn Cys Thr 45
Lys Tyr Leu Trp Glu 60
Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp 65 70 <210> 12 <211> 72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли AF160501 (G) <400>12
Gin Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr Thr
1015
Ser Thr Gly Pro Cys Lys Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gin Gly Asn Ser 20 2530
Met Tyr Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp Gly Asn Cys Thr 35 4045
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Ala Lys Tyr Leu Trp Glu 50 5560
Trp Ala Ser Val Arg Phe Ser Trp 6570 <210>13 <211> 72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли AY090454 (Η) <400> 13
Gin Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu Leu Pro Gly Ser Thr Thr Thr
- 68 038301
1015
Ser Thr Gly Pro Cys Lys Thr Cys Thr Thr Leu Ala Gln Gly Thr Ser 20 2530
Met Phe Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp Gly Asn Cys Thr 35 4045
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Lys Tyr Leu Trp Glu 50 5560
Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp 6570 <210>14 <211> 72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли AF241409 (I) <400>14
Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr Thr
1015
Ser Thr Gly Pro Cys Lys Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gln Gly Asn Ser 20 2530
Met Tyr Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp Gly Asn Cys Thr 35 4045
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Ala Lys Tyr Leu Trp Glu 50 5560
Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp 6570 <210>15 <211> 72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли AB486012 (J) <400> 15
Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu Leu Pro Gly Ser Thr Thr Thr
10 15
- 69 038301
Ser Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Thr lie Thr Ala Gin Gly Thr Ser 20 2530
Met Phe Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp Gly Asn Cys Thr 35 4045
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Ala Lys Phe Leu Trp Glu 50 5560
Trp Ala Ser Val Arg Phe Ser Trp 6570 <210>16 <211> 73 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли HBsAg Y100C/P120T <400>16
Cys Gin Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr
1015
Thr Gly Thr Gly Thr Cys Arg Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gin Gly Thr 20 2530
Ser Met Tyr Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp Gly Asn Cys 35 4045
Thr Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Lys Phe Leu Trp 50 5560
Glu Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp 6570 <210>17 <211> 72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли HBsAg P120T <400> 17
Gin Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr Thr
10 15
- 70 038301
Gly Thr Gly Thr Cys Arg Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gln Gly Thr Ser 20 2530
Met Tyr Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp Gly Asn Cys Thr 35 4045
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Lys Phe Leu Trp Glu 50 5560
Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp 6570 <210>18 <211> 72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли HBsAg P120T/S143L <400>18
Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr Thr
1015
Gly Thr Gly Thr Cys Arg Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gln Gly Thr Ser 20 2530
Met Tyr Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Leu Asp Gly Asn Cys Thr 35 4045
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Lys Phe Leu Trp Glu 50 5560
Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp 6570 <210>19 <211> 72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли HBsAg C121S <400> 19
Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr Thr
10 15
- 71 038301
Gly Thr Gly Pro Ser Arg Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gln Gly Thr Ser 20 2530
Met Tyr Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp Gly Asn Cys Thr 35 4045
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Lys Phe Leu Trp Glu 50 5560
Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp 6570 <210> 20 <211> 72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли HBsAg R122D <400> 20
Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr Thr
1015
Gly Thr Gly Pro Cys Asp Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gln Gly Thr Ser 20 2530
Met Tyr Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp Gly Asn Cys Thr 35 4045
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Lys Phe Leu Trp Glu 50 5560
Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp 6570 <210> 21 <211> 72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли HBsAg R122I <400> 21
Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr Thr
10 15
Gly Thr Gly Pro Cys lie Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gln Gly Thr Ser
- 72 038301
2530
Met Tyr Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp Gly Asn Cys Thr 35 4045
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Lys Phe Leu Trp Glu 50 5560
Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp 6570 <210> 22 <211>72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли HBsAg T123N <400> 22
Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr Thr
1015
Gly Thr Gly Pro Cys Arg Asn Cys Thr Thr Pro Ala Gln Gly Thr Ser 20 2530
Met Tyr Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp Gly Asn Cys Thr 35 4045
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Lys Phe Leu Trp Glu 50 5560
Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp 6570 <210> 23 <211>72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли HBsAg Q129H <400> 23
Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr Thr
10 15
Gly Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Thr Thr Pro Ala His Gly Thr Ser 20 25 30
- 73 038301
Met Tyr Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp Gly Asn Cys Thr 35 4045
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Lys Phe Leu Trp Glu 50 5560
Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp 6570 <210> 24 <211>72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли HBsAg Q129L <400> 24
Gin Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr Thr
1015
Gly Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Thr Thr Pro Ala Leu Gly Thr Ser 20 2530
Met Tyr Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp Gly Asn Cys Thr 35 4045
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Lys Phe Leu Trp Glu 50 5560
Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp 6570 <210> 25 <211>72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли HBsAg M133H <400> 25
Gin Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr Thr
10 15
Gly Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gin Gly Thr Ser 20 25 30
- 74 038301
His Tyr Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp Gly Asn Cys Thr 35 4045
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Lys Phe Leu Trp Glu 50 5560
Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp 6570 <210> 26 <211> 72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли HBsAg M133L <400> 26
Gin Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr Thr
1015
Gly Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gin Gly Thr Ser 20 2530
Leu Tyr Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp Gly Asn Cys Thr 35 4045
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Lys Phe Leu Trp Glu 50 5560
Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp 6570 <210> 27 <211> 72 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> область антигенной петли HBsAg M133T < 400> 27
Gin Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu Ile Pro Gly Ser Ser Thr Thr
10 15
Gly Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gin Gly Thr Ser 20 25 30
- 75 038301
Thr Tyr Pro Ser Cys Cys 35
Cys Thr Lys Pro Ser Asp Gly Asn Cys Thr
45
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Lys 50 55 60
Phe Leu Trp Glu
Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp 65 70 <210> 28 < 211> 72 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность < 220>
< 223> область антигенной петли HBsAg K141E < 400> 28
Gin Gly Met Leu Pro Vai Cys Pro Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr Thr
10 15
Gly Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gin Gly Thr Ser 20 25 30
Met Tyr Pro Ser Cys Cys Cys Thr Glu Pro Ser Asp Gly Asn Cys Thr 35 40 45
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Lys Phe Leu Trp Glu 50 55 60
Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp 65 70 <210> 29 <211> 72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли <400> 29
Gin Gly Met Leu Pro Vai Cys Pro 1 5
Gly Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys 20
Met Tyr Pro Ser Cys Cys Cys Thr
HBsAg P142S
Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr Thr 10 15
Thr Thr Pro Ala Gin Gly Thr Ser 25 30
Lys Ser Ser Asp Gly Asn Cys Thr
- 76 038301
4045
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Lys Phe Leu Trp Glu 50 5560
Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp 6570 <210> 30 <211> 72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли HBsAg S143K <400> 30
Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr Thr
1015
Gly Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gln Gly Thr Ser 20 2530
Met Tyr Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Lys Asp Gly Asn Cys Thr 35 4045
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Lys Phe Leu Trp Glu 50 5560
Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp 6570 <210> 31 <211> 72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли HBsAg D144A <400> 31
Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr Thr
1015
Gly Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gln Gly Thr Ser 20 2530
Met Tyr Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Ala Gly Asn Cys Thr 35 4045
- 77 038301
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Lys Phe Leu Trp Glu 50 55 60
Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp 65 70 <210> 32 <211> 72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли HBsAg G145R <400> 32
Gin Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr Thr
1015
Gly Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gin Gly Thr Ser 20 2530
Met Tyr Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp Arg Asn Cys Thr 35 4045
Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Lys Phe Leu Trp Glu 50 5560
Trp Ala Ser Ala Arg Phe Ser Trp 6570 <210> 33 <211> 72 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> область антигенной петли HBsAg N146A <400> 33
Gin Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr Thr
1015
Gly Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gin Gly Thr Ser 20 2530
Met Tyr Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp Gly Ala Cys Thr 35 4045
- 78 038301
Cys lie | Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala | Phe Gly Lys Phe Leu Trp Glu |
50 | 55 | 60 |
Trp Ala | Ser Ala Arg Phe Ser Trp |
65 | 70 |
<210> 34 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> антитело HBC34 CDRH1 aa <400> 34
Gly Arg lie Phe Arg Ser Phe Tyr 1 5 <210> 35 <211> 7 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> антитело HBC34 CDRH2 aa < 400> 35
Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys
5 <210> 36 <211> 12 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> антитело HBC34 CDRH3 aa <400> 36
Ala Ala Trp Ser Gly Asn Ser Gly Gly Met Asp Val
10 <210> 37 <211> 6 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> антитело HBC34 CDRL1 aa <400> 37
- 79 038301
Lys Leu Gly Asn Lys Asn 1 5 <210> 38 <400> 38 000 <210> 39 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> антитело HBC34 CDRL2 long aa <400> 39
Val lie Tyr Glu Val Lys Tyr Arg Pro 1 5 <210> 40 <211> 9 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> антитело HBC34 CDRL3 aa < 400> 40
Gin Thr Trp Asp Ser Thr Thr Val Val
5 <210> 41 <211> 119 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> антитело HBC34 VH aa < 400> 41
Glu 1 | Leu | Gin | Leu | Val 5 | Glu | Ser | Gly | Gly | Gly 10 | Trp | Val | Gin | Pro | Gly 15 | Gly |
Ser | Gin | Arg | Leu 20 | Ser | Cys | Ala | Ala | Ser 25 | Gly | Arg | lie | Phe | Arg 30 | Ser | Phe |
Tyr | Met | Ser 35 | Trp | Val | Arg | Gin | Ala 40 | Pro | Gly | Lys | Gly | Leu 45 | Glu | Trp | Val |
Ala | Thr 50 | lie | Asn | Gin | Asp | Gly 55 | Ser | Glu | Lys | Leu | Tyr 60 | Val | Asp | Ser | Val |
- 80 038301
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe 65 70 7580
Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 9095
Ala Ala Trp Ser Gly Asn Ser Gly Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105110
Thr Thr Val Ser Val Ser Ser
115 <210> 42 <211>106 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> антитело HBC34 VL aa < 400> 42
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1015
Thr Val Ser lie Pro Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asn Lys Asn Val 20 2530
Cys Trp Phe Gln His Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val lie Tyr 35 4045
Glu Val Lys Tyr Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 5560
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gln Ala Met 65 70 7580
Asp Glu Ala Ala Tyr Phe Cys Gln Thr Trp Asp Ser Thr Thr Val Val 85 9095
Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu
100105 <210> 43 <211> 24 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность
- 81 038301 <220>
<223> антитело HBC34 CDRH1 nuc <400> 43 ggacgcatct ttagaagttt ttac 24 <210> 44 <211> 24 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> антитело HBC34 CDRH2 nuc <400> 44 ataaaccaag atggaagtga gaaa 24 <210> 45 <211> 36 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> антитело HBC34 CDRH3 nuc <400> 45 gcggcttgga gcggcaatag tgggggtatg gacgtc 36 <210> 46 <211> 18 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> антитело HBC34 CDRL1 nuc <400> 46 aaattgggga ataaaaat 18 <210> 47 <400> 47 000 <210> 48 <211> 27 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> антитело HBC34 CDRL2 long nuc <400> 48 gtcatctatg aggttaaata ccgcccc 27 <210> 49
- 82 038301 <211> 27 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> антитело HBC34 CDRL3 nuc <400> 49 cagacgtggg acagcaccac tgtggtg 27 <210> 50 <211> 357 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> антитело HBC34 VH nuc <400> 50
gaactgcagc | tggtggagtc | tgggggaggc | tgggtccagc | cgggggggtc | ccagagactg | 60 |
tcctgtgcag | cctctggacg | catctttaga | agtttttaca | tgagctgggt | ccgccaggcc | 120 |
ccagggaagg | ggctggagtg | ggtggccact | ataaaccaag | atggaagtga | gaaattatat | 180 |
gtggactctg | tgaagggccg | attcaccatc | tccagagaca | acgccaagaa | ctcactattt | 240 |
ctgcaaatga | acaacctgag | agtcgaggac | acggccgttt | attactgcgc | ggcttggagc | 300 |
ggcaatagtg | ggggtatgga | cgtctggggc | caggggacca | cggtctccgt | ctcctca | 357 |
<210> 51 < 211> 318 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> антитело HBC34 VL nuc <400> 51
tcctatgagc | tgactcagcc | accctcagtg | tccgtgtccc | caggacagac | agtcagcatc | 60 |
ccctgctctg | gagataaatt | ggggaataaa | aatgtttgct | ggtttcagca | taagccaggc | 120 |
cagtcccctg | tgttggtcat | ctatgaggtt | aaataccgcc | cctcggggat | tcctgagcga | 180 |
ttctctggct | ccaactctgg | gaacacagcc | actctgacca | tcagcgggac | ccaggctatg | 240 |
gatgaggctg | cctatttctg | tcagacgtgg | gacagcacca | ctgtggtgtt | cggcggaggg | 300 |
accaggctga | ccgtccta | 318 |
<210> 52 < 211> 33 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
- 83 038301 <223> пептид <220>
< 221> misc feature < 222> (1).7(1) < 223> Xaa is substituted with Cys <220>
< 221> misc feature < 222> (17)7.(17) < 223> Xaa is substituted with Cys <220>
< 221> misc feature < 222> (33)7.(33) <223> Xaa is substituted with Cys <400> 52
Xaa Gly Ser Ser Thr Thr Ser Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Met Thr
1015
Xaa Pro Ser Asp Gly Asn Ala Thr Ala lie Pro lie Pro Ser Ser Trp 20 2530
Xaa <210> 53 <211>15 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> пептид <400> 53
Thr Ser Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Met Thr Thr Ala Gin Gly
10 15 <210> 54 <211> 26 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> пептид <400> 54
Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu lie Pro Gly Ser Ser Thr Thr Ser
10 15
Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Met Thr Thr
- 84 038301
25 <210> 55 <211> 33 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> пептид <220>
< 221> misc feature < 222> (1).7(1) < 223> Xaa замен Cys <220>
< 221> misc feature < 222> (17)7.(17) < 223> Xaa замен Cys <220>
< 221> misc feature < 222> (33)7.(33) < 223> Хаа замен Cys < 400> 55
Xaa Ser Met Tyr Pro Ser Ala Ser Ala Thr Lys Pro Ser Asp Gly Asn 15 1015
Xaa Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Met Thr Thr Ala Gin Gly Thr Ser 20 2530
Xaa < 210> 56 < 211>11 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> фрагмент региона антигенной петли (аминокислоты 120 - 130 S домена HBsAg HBV-D J02203) < 400> 56
Pro Cys Arg Thr Cys Met Thr Thr Ala Gin Gly
10 <210> 57 <211> 11 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность
- 85 038301 <220>
<223> эпитоп <220>
< 221> misc feature < 222> (3).7(3) < 223> Хаа может быть аминокислотой, предпочтительно Хаа является Arg или Lys <220>
< 221> misc feature < 222> (6).7(6) < 223> Хаа может быть аминокислотой, предпочтительно Хаа является Met или Thr <220>
< 221> misc feature < 222> (7).7(7) < 223> Хаа может быть аминокислотой, предпочтительно Хаа является Thr или Не <220>
< 221> misc feature < 222> (8).7(8) < 223> Хаа может быть аминокислотой, предпочтительно Хаа является Thr, Pro или Leu <400> 57
Pro Cys Хаа Thr Cys Хаа Хаа Хаа Ala Gln Gly
10 <210> 58 <211> 9 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> CDRL3 v7 и CDRL3 v23 (aa) < 400> 58
Gln Thr Phe Asp Ser Thr Thr Val Val
5 <210> 59 <211> 106 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> VL v7 <400> 59
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
10 15
- 86 038301
Thr Val Ser lie Pro Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asn Lys Asn Val 20 2530
Cys Trp Phe Gin His Lys Pro Gly Gin Ser Pro Val Leu Val lie Tyr 35 4045
Glu Val Lys Tyr Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 5560
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Met 65 70 7580
Asp Glu Ala Ala Tyr Phe Cys Gin Thr Phe Asp Ser Thr Thr Val Val 85 9095
Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu
100105 <210>60 <211>18 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> CDRL1 v7 и CDRL1 v23 (nuc) <400>60 aagctgggga acaaaaat <210>61 <400>61
000 <210>62 <211> 27 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> CDRL2 long v7 и CDRL2 long v23 nuc <400> 62 gtcatctacg aggtgaaata tcggcct <210> 63 <211> 27 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> CDRL3 v7 и CDRL3 v23 nuc
- 87 038301 <400>63 cagacattcg attccaccac agtggtc27 <210>64 <211> 318 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> VL v7 nuc <400> 64
tcttacgagc | tgacacagcc | acctagcgtg | tccgtctctc | caggacagac | cgtgtccatc | 60 |
ccttgctctg | gcgacaagct | ggggaacaaa | aatgtctgtt | ggttccagca | caagccaggg | 120 |
cagagtcccg | tgctggtcat | ctacgaggtg | aaatatcggc | cttcaggaat | tccagaacgg | 180 |
ttcagcggat | caaacagcgg | caatactgca | accctgacaa | ttagcgggac | ccaggccatg | 240 |
gacgaagccg | cttatttctg | ccagacattc | gattccacca | cagtggtctt | tggcggggga | 300 |
actaggctga | ccgtgctg | 318 |
<210> 65 <211> 106 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> VL v23 aa < 400> 65
Ser Tyr Glu Leu Thr Gin Pro Pro 1 5
Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 10 15
Thr Ala Ser lie Thr Cys Ser Gly 20
Asp Lys Leu Gly Asn Lys Asn Ala 25 30
Cys Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly 35 40
Gin Ser Pro Val Leu Val lie Tyr 45
Glu Val Lys Tyr Arg Pro Ser Gly
55 lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu 65 70
Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Met
80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin 85
Thr Phe Asp Ser Thr Thr Val Val
95
- 88 038301
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100105 <210>66 <211>8 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> HBC34wt CDRH2 aa < 4 0 0>66 lie Asn Gin Asp Gly Ser Glu Lys <210>67 <211>119 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> HBC34 v31, HBC34 v32 and <400>67
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly 15
HBC34 v33 VH
Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly
1015
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala 20
Ser Gly Arg lie Phe Arg Ser Phe 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gin Ala
40
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 45
Ala Asn lie Asn Gin Asp Gly Ser
55
Glu Lys Leu Tyr Val Asp Ser Val 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg 65 70
Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe
80
Leu Gin Met Asn Asn Leu Arg Val 85
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 90 95
Ala Ala Trp Ser Gly Asn Ser Gly 100
Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 <210> 68
- 89 038301 <211> 357 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> HBC34 v31, HBC34 v32 и HBC34 v33 VH (nuc) <400> 68
gaggtgcagc | tggtggaatc | cggcggggga | ctggtgcagc | ctggcggctc | actgagactg | 60 |
agctgtgcag | cttctggaag | aatcttcaga | tctttttaca | tgagttgggt | gagacaggct | 120 |
cctgggaagg | gactggagtg | ggtcgcaaac | atcaatcagg | acggatcaga | aaagctgtat | 180 |
gtggatagcg | tcaaaggcag | gttcactatt | tcccgcgaca | acgccaaaaa | ttctctgttt | 240 |
ctgcagatga | acaatctgcg | ggtggaggat | accgctgtct | actattgtgc | agcctggtct | 300 |
ggcaacagtg | gaggcatgga | cgtgtgggga | cagggaacca | cagtgacagt | cagctcc | 357 |
<210> 69 <211> 318 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
<223> VL v23 nuc | ||||||
<400> 69 tcttacgagc | tgacacagcc | ccctagcgtg | tccgtctctc | caggccagac | agcatccatc | 60 |
acttgctctg | gcgacaagct | ggggaacaaa | aatgcctgtt | ggtatcagca | gaagccaggg | 120 |
cagagtcccg | tgctggtcat | ctacgaggtg | aaatatcggc | cttcaggaat | tccagaaaga | 180 |
ttcagtggat | caaacagcgg | caatactgct | accctgacaa | ttagcgggac | ccaggccatg | 240 |
gacgaagctg | attactattg | ccagacattc | gattccacca | cagtggtctt | tggcggggga | 300 |
actaagctga | ccgtgctg | 318 |
<210> 70 <211> 357 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
<223> HBC34 wt VH кодоны оптимизированы <400> 70
gaactgcagc | tggtcgaatc | aggaggaggg tgggtccagc | ccggagggag | ccagagactg | 60 | |
tcttgtgccg | catcagggag | gatcttcagg | agcttctaca | tgtcctgggt | gcgccaggca | 120 |
ccaggcaagg | gactggagtg | ggtcgccacc | atcaaccagg | acggatctga | aaagctgtat | 180 |
gtggatagtg | tcaaaggccg | gttcacaatt | agcagagaca | acgctaaaaa | ttctctgttt | 240 |
ctgcagatga | acaatctgcg | agtggaggat | accgccgtct | actattgcgc | cgcttggtct | 300 |
- 90 038301 ggcaacagcg gcgggatgga tgtctggggg cagggcacaa cagtgagcgt ctcttcc
357 <210> 71 <211> 318 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> HBC34 wt VL кодоны оптимизированы <400> 71 tcatacgaac tgactcagcc tccctccgtc tccgtctcac ctggacagac cgtctcaatc60 ccctgctccg gcgataaact gggcaacaag aacgtgtgct ggttccagca caaacccgga120 cagagtcctg tgctggtcat ctacgaggtc aagtatcggc caagcggcat tcccgaaaga180 ttcagcggct ccaactctgg gaataccgca acactgacta tctctggaac ccaggcaatg240 gacgaggcag cttacttttg ccagacttgg gattcaacta ctgtcgtgtt cggcggcgga300 actagactga ctgtcctg318 <210> 72 <211> 24 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> HBC34 wt CDRH1 кодоны оптимизированы < 400> 72 gggaggatct tcaggagctt ctac < 210> 73 < 211> 24 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> HBC34 wt CDRH2 кодоны оптимизированы < 400> 73 atcaaccagg acggatctga aaag < 210> 74 < 211> 36 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> HBC34 wt CDRH3 кодоны оптимизированы < 400> 74 gccgcttggt ctggcaacag cggcgggatg gatgtc
- 91 038301 <210> 75 <211> 18 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
<223> HBC34 wt CDRL1 кодоны оптимизированы <400> 75 aaactgggca acaagaac 18 <210> 76 <400> 76 000 <210> 77 <211> 27 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> HBC34 wt CDRL2 long кодоны оптимизированы <400> 77 gtcatctacg aggtcaagta tcggcca 27 <210> 78 <211> 27 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> HBC34 wt CDRL3 кодоны оптимизированы <400> 78 cagacttggg attcaactac tgtcgtg 27 <210> 79 <211> 5 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> линкер < 400> 79
Gly Gly Ser Gly Gly 1 5 <210> 80 <211> 7 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность
- 92 038301 <220>
<223> эпитоп <400>80
Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys <210>81 <211> 7 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> эпитоп < 400>81
Gly Asn Cys Thr Cys lie Pro <210>82 <211> 25 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> непрерывный эпитоп mimic <220>
< 221> misc feature < 222> (2).7(2) < 223> цистеин, связанный с ацетамидометилом <220>
< 221> misc feature < 222> (21)7.(21) < 223> цистеин, связанный с ацетамидометилом <220>
< 221> misc feature < 222> (24)7.(24) <223> цистеин, связанный с ацетамидометилом <400>82
Cys Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Gly Cys Ser Thr Thr
1015
Ser Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Cys 2025 <210>83 <211> 28 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
- 93 038301 <220>
< 223> непрерывный эпитоп mimic <220>
< 221> misc feature < 222> (4).7(4) < 223> цистеин, связанный с ацетамидометилом <220>
< 221> misc feature < 222> (6).7(6) < 223> цистеин, связанный с ацетамидометилом <220>
< 221> misc feature < 222> (24)7.(24) < 223> цистеин, связанный с ацетамидометилом <220>
< 221> misc feature < 222> (27)7.(27) <223> цистеин, связанный с ацетамидометилом <400>83
Cys Gly Asn Cys Thr Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Cys
1015
Ser Thr Thr Ser Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Cys 2025 <210>84 <211>17 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> эпитоп mimic в виде петли <220>
< 221> misc feature < 222> (13)7.(13) < 223> цистеин, связанный с ацетамидометилом <220>
< 221> misc feature < 222> (16)7.(16) < 223> цистеин, связанный с ацетамидометилом < 400> 84
Cys Gly Gly Gly Cys Ser Thr Thr Ser Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys
10 15
Cys
- 94 038301 <210> 85 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> эпитоп <400>85
Ser Thr Thr Ser Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys
1510 <210>86 <211>15 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> эпитоп <400>86
Gly Asn Cys Thr Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe Cys 15 1015 <210>87 <211>14 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> эпитоп <400>87
Gly Asn Cys Thr Cys lie Pro lie Pro Ser Ser Trp Ala Phe 1510 <210>88 <211>5 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> эпитоп <220>
< 221> misc_feature < 222> (4)..(4) < 223> Xaa может быть любой встречающейся в природе аминокислотой < 400> 88
Pro Cys Arg Хаа Cys 1 5
Claims (35)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связываются с областью антигенной петли HBsAg и нейтрализуют инфекцию вируса гепатита B и вируса гепатита дельта (D), где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат CDRH1, CDRH2 и CDRH3; CDRL1, CDRL2 и CDRL3, которые имеют аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из:(i) последовательностей SEQ ID NO: 34, 35, 36, 37, 38 и 40 соответственно;(ii) последовательностей SEQ ID NO: 34, 35, 36, 37, 39 и 40 соответственно;(iii) последовательностей SEQ ID NO: 34, 35, 36, 37, 38 и 58 соответственно;(iv) последовательностей SEQ ID NO: 34, 35, 36, 37, 39 и 58 соответственно;(v) последовательностей SEQ ID NO: 34, 66, 36, 37, 38 и 40 соответственно;(vi) последовательностей SEQ ID NO: 34, 66, 36, 37, 39 и 40 соответственно;(vii) последовательностей SEQ ID NO: 34, 66, 36, 37, 38 и 58 соответственно и (viii) последовательностей SEQ ID NO: 34, 66, 36, 37, 39 и 58 соответственно.
- 2. Антитело по п.1, которое относится к типу IgG.
- 3. Антитело по п.2, которое относится к IgG1.
- 4. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-3, где антитело или его ан- 95 038301 тигенсвязывающий фрагмент представляют собой человеческое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, или моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, или человеческое моноклональное антитело человека или его антигенсвязывающий фрагмент.
- 5. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-4, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включают:(i) вариабельную область тяжелой цепи (VH) с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 41 или 67; и (ii) вариабельную область легкой цепи (VL) с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO: 42, 59 или 65.
- 6. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.5, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включают вариабельную область тяжелой цепи (VH) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 41 или 67 и вариабельную область легкой цепи (VL) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 42, 59 или 65.
- 7. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-6, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляют собой очищенное антитело или его фрагмент
- 8. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-6, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляют собой одноцепочечное антитело, Fab, Fab', F(ab')2, Fv или scFv.
- 9. Применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-8 в качестве лекарственного средства для профилактики, лечения или снижения интенсивности симптомов гепатита B и/или гепатита D.
- 10. Молекула нуклеиновой кислоты, включающая полинуклеотид, кодирующий антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-8.
- 11. Молекула нуклеиновой кислоты по п.10, где полинуклеотидная последовательность включает или состоит из последовательности нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 80% идентична любой из последовательностей SEQ ID NO: 43-51, 60-64 и 68-78.
- 12. Молекула нуклеиновой кислоты по п.10, где полинуклеотидная последовательность включает или состоит из последовательности нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 85% идентична любой из последовательностей SEQ ID NO: 43-51, 60-64 и 68-78.
- 13. Молекула нуклеиновой кислоты по п.10, где полинуклеотидная последовательность включает или состоит из последовательности нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 90% идентична любой из последовательностей SEQ ID NO: 43-51, 60-64 и 68-78.
- 14. Молекула нуклеиновой кислоты по п.10, где полинуклеотидная последовательность включает или состоит из последовательности нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 95% идентична любой из последовательностей SEQ ID NO: 43-51, 60-64 и 68-78.
- 15. Молекула нуклеиновой кислоты по п.10, где полинуклеотидная последовательность включает или состоит из последовательности нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 98% идентична любой из последовательностей SEQ ID NO: 43-51, 60-64 и 68-78.
- 16. Вектор экспрессии, включающий молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.10-15.
- 17. Клетка для продуцирования антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-8, включающая вектор по п. 16.
- 18. Клетка, экспрессирующая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.18, включающая молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.10-15.
- 19. Фармацевтическая композиция для профилактики, лечения или снижения интенсивности симптомов гепатита В и/или гепатита D, включающая эффективное количество антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-8, нуклеиновой кислоты по любому из пп.10-15, вектора по п.16 или клетки по п.17 или 18, и фармацевтически приемлемый эксципиент, разбавитель или носитель.
- 20. Применение нуклеиновой кислоты по любому из пп.10-15 для профилактики, лечения или ослабления интенсивности симптомов гепатита В и/или гепатита D.
- 21. Применение вектора по п.16 для профилактики, лечения или ослабления интенсивности симптомов гепатита B и/или гепатита D.
- 22. Применение клетки по п.17 или 18 для профилактики, лечения или ослабления интенсивности симптомов гепатита В и/или гепатита D.
- 23. Применение фармацевтической композиции по п.19 для профилактики, лечения или ослабления интенсивности симптомов гепатита В и/или гепатита D.
- 24. Применение по любому из пп.9 и 20-23 для лечения или ослабления интенсивности симптомов хронического гепатита В.
- 25. Применение по любому из пп.9 и 20-23 для предотвращения (повторного) инфицирования гепатитом В после трансплантации печени, особенно в случае печеночной недостаточности, вызванной гепатитом В.
- 26. Применение по любому из пп.9 и 20-23 для профилактики гепатита В у неиммунизированных субъектов или у новорожденных.- 96 038301
- 27. Применение по любому из пп.9 и 20-23 для профилактики гепатита В у неиммунизированных субъектов или у пациентов, проходящих курс гемодиализа.
- 28. Применение по любому из пп.9 и 20-23, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, нуклеиновая кислота, вектор, клетка или фармацевтическая композиция применяются в комбинации с ингибитором полимеразы, интерфероном и/или ингибитором контрольной точки, предпочтительно с ингибитором полимеразы, таким как ламивудин.
- 29. Применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-8 для in vitro диагностики гепатита В и/или гепатита D.
- 30. Применение нуклеиновой кислоты по любому из пп.10-15 для in vitro диагностики гепатита В и/или гепатита D.
- 31. Применение по п.29 или 30 для определения инфицированности выделенного образца крови вирусом гепатита B и/или вирусом гепатита D.
- 32. Комбинация для профилактики, лечения или ослабления интенсивности симптомов гепатита В и/или гепатита D, включающая:(i) антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-8, нуклеиновую кислоту по любому из пп.10-15, вектор по п.16, клетку по п.17 или 18 или фармацевтическую композицию по п.19;(ii) ингибитор полимеразы, интерферон и/или ингибитор контрольной точки.
- 33. Комбинация по п.32 для лечения или ослабления интенсивности симптомов хронического гепатита В и/или хронического гепатита D.
- 34. Набор для профилактики, лечения или ослабления интенсивности симптомов гепатита В и/или гепатита D, включающий:(i) антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-8, нуклеиновую кислоту по любому из пп.10-15, вектор по п.16, клетку по п.17 или 18 или фармацевтическую композицию по п.19;(ii) ингибитор полимеразы, интерферон и/или ингибитор контрольной точки; и содержит листок-вкладыш.
- 35. Применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-8 для мониторинга качества вакцин против гепатита В или против гепатита D с помощью проверки in vitro наличия в антигене указанной вакцины специфического эпитопа в правильной конформации.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PCT/EP2015/001970 WO2017059878A1 (en) | 2015-10-07 | 2015-10-07 | Antibodies that potently neutralize hepatitis b virus and uses thereof |
PCT/EP2016/074114 WO2017060504A1 (en) | 2015-10-07 | 2016-10-07 | Antibodies that potently neutralize hepatitis b virus and uses thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA201890874A1 EA201890874A1 (ru) | 2018-11-30 |
EA038301B1 true EA038301B1 (ru) | 2021-08-06 |
Family
ID=54330711
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA201890874A EA038301B1 (ru) | 2015-10-07 | 2016-10-07 | Антитела, которые эффективно нейтрализуют вирус гепатита в, и их применение |
Country Status (25)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US10683344B2 (ru) |
EP (2) | EP3359564B1 (ru) |
JP (3) | JP6869968B2 (ru) |
KR (1) | KR20180056777A (ru) |
CN (3) | CN114539391A (ru) |
AU (1) | AU2016334735B2 (ru) |
BR (1) | BR112018002406A2 (ru) |
CA (1) | CA2993745A1 (ru) |
CY (1) | CY1123462T1 (ru) |
DK (1) | DK3359564T3 (ru) |
EA (1) | EA038301B1 (ru) |
ES (1) | ES2813927T3 (ru) |
HK (1) | HK1256869A1 (ru) |
HR (1) | HRP20201345T1 (ru) |
HU (1) | HUE050231T2 (ru) |
IL (1) | IL258326B (ru) |
LT (1) | LT3359564T (ru) |
MX (1) | MX2018004127A (ru) |
MY (1) | MY187161A (ru) |
PH (1) | PH12018500199A1 (ru) |
PL (1) | PL3359564T3 (ru) |
PT (1) | PT3359564T (ru) |
SI (1) | SI3359564T1 (ru) |
WO (2) | WO2017059878A1 (ru) |
ZA (1) | ZA201800710B (ru) |
Families Citing this family (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017059878A1 (en) * | 2015-10-07 | 2017-04-13 | Humabs Biomed Sa | Antibodies that potently neutralize hepatitis b virus and uses thereof |
US11773141B2 (en) | 2018-05-10 | 2023-10-03 | Clearb Therapeutics Ltd. | Methods and compositions for the treatment of hepatitis B infection |
CN112770772A (zh) * | 2018-05-16 | 2021-05-07 | 长庚医疗财团法人林口长庚纪念医院 | 新型富亮氨酸重复神经元蛋白1(lrrn1)抗体和其用途 |
US11932681B2 (en) | 2018-05-31 | 2024-03-19 | Novartis Ag | Hepatitis B antibodies |
EP4292659A3 (en) * | 2018-12-19 | 2024-03-20 | Humabs Biomed SA | Antibodies that neutralize hepatitis b virus and uses thereof |
SG11202106489RA (en) * | 2018-12-20 | 2021-07-29 | Vir Biotechnology Inc | Combination hbv therapy |
KR102084912B1 (ko) * | 2019-01-17 | 2020-03-05 | 주식회사 녹십자 | B형 간염 바이러스 표면 항원의 입체 에피토프 및 이에 특이적으로 결합하는 항체 |
US20220259292A1 (en) * | 2019-07-20 | 2022-08-18 | Huahui Health Ltd. | A method of treating hbv infection by using anti-pre-s1 hbv antibodies |
BR112022003698A2 (pt) | 2019-08-29 | 2022-05-24 | Vir Biotechnology Inc | Método de tratamento de uma infecção pelo vírus da hepatite b e composição farmacêutica |
CN113717283B (zh) * | 2020-05-25 | 2023-05-26 | 厦门万泰凯瑞生物技术有限公司 | 一种抗乙型肝炎病毒e抗原的单克隆抗体及其应用 |
US20230242621A1 (en) | 2020-06-24 | 2023-08-03 | Vir Biotechnology, Inc. | Engineered hepatitis b virus neutralizing antibodies and uses thereof |
TW202406932A (zh) | 2020-10-22 | 2024-02-16 | 美商基利科學股份有限公司 | 介白素2-Fc融合蛋白及使用方法 |
TW202245838A (zh) | 2021-01-26 | 2022-12-01 | 美商維爾生物科技股份有限公司 | 用於治療b型肝炎病毒感染的組成物及方法 |
CN113234144B (zh) * | 2021-05-26 | 2022-02-25 | 武汉工程大学 | 一种人源性抗乙肝表面抗原的单链抗体、制剂、编码基因、载体质粒及宿主细胞 |
CN118076630A (zh) * | 2021-07-15 | 2024-05-24 | 新加坡国立大学 | 抗hbv抗体及其用途 |
CN113777312B (zh) * | 2021-09-03 | 2024-02-02 | 普十生物科技(北京)有限公司 | 乙肝抗体片段的制备方法、乙肝抗体片段、试剂盒及应用 |
WO2023039243A2 (en) * | 2021-09-13 | 2023-03-16 | Achelois Biopharma, Inc. | Hepatitis b virus antivirus (hbv-antivirus) compositions and methods of use |
WO2023122555A2 (en) * | 2021-12-21 | 2023-06-29 | Hbvtech, Llc. | Methods for eliminating hepatitis b virus cccdna and rcdna and the hepatitis b drugs used in the methods thereof |
WO2023230439A1 (en) | 2022-05-23 | 2023-11-30 | Vir Biotechnology, Inc. | Fc-engineered hepatitis b virus neutralizing antibodies and uses thereof |
CN116162153A (zh) * | 2022-09-01 | 2023-05-26 | 复旦大学附属中山医院 | 一种乙肝病毒表面抗原的单克隆抗体及其应用 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1997040164A1 (en) * | 1996-04-25 | 1997-10-30 | Murex Diagnostics Corporation | Hepatitis b monoclonal antibodies |
WO1998029442A1 (en) * | 1996-12-30 | 1998-07-09 | Innogenetics N.V. | ANNEXIN V-BINDING POLYPEPTIDES DERIVED FROM HBsAg AND THEIR USES |
WO2006076640A1 (en) * | 2005-01-14 | 2006-07-20 | The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Monoclonal antibodies that bind or neutralize hepatitis b virus |
WO2009069917A1 (en) * | 2007-11-30 | 2009-06-04 | Green Cross Corporation | Use of human antibody capable of neutralizing hepatitis b virus for the prevention or treatment of hepatitis b virus infection |
WO2014032176A1 (en) * | 2012-08-30 | 2014-03-06 | Replicor Inc. | Methods for the treatment of hepatitis b and hepatitis d infections |
WO2015107126A1 (en) * | 2014-01-16 | 2015-07-23 | Mondelli Mario Umberto Francesco | Neutralizing human monoclonal antibodies against hepatitis b virus surface antigen |
Family Cites Families (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NL154600B (nl) | 1971-02-10 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen. |
US3817837A (en) | 1971-05-14 | 1974-06-18 | Syva Corp | Enzyme amplification assay |
US3766162A (en) | 1971-08-24 | 1973-10-16 | Hoffmann La Roche | Barbituric acid antigens and antibodies specific therefor |
US4179337A (en) | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
US4233402A (en) | 1978-04-05 | 1980-11-11 | Syva Company | Reagents and method employing channeling |
JPS5896026A (ja) | 1981-10-30 | 1983-06-07 | Nippon Chemiphar Co Ltd | 新規ウロキナ−ゼ誘導体およびその製造法ならびにそれを含有する血栓溶解剤 |
DE3380726D1 (en) | 1982-06-24 | 1989-11-23 | Japan Chem Res | Long-acting composition |
US4766106A (en) | 1985-06-26 | 1988-08-23 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
US4676980A (en) | 1985-09-23 | 1987-06-30 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Target specific cross-linked heteroantibodies |
US4831175A (en) | 1986-09-05 | 1989-05-16 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Backbone polysubstituted chelates for forming a metal chelate-protein conjugate |
US5595721A (en) | 1993-09-16 | 1997-01-21 | Coulter Pharmaceutical, Inc. | Radioimmunotherapy of lymphoma using anti-CD20 |
CA2251904A1 (en) | 1996-04-18 | 1997-10-23 | Abbott Laboratories | An antigenic epitope of the a determinant of hepatitis b surface antigen and uses thereof |
MY133346A (en) | 1999-03-01 | 2007-11-30 | Biogen Inc | Kit for radiolabeling ligands with yttrium-90 |
US20020102208A1 (en) | 1999-03-01 | 2002-08-01 | Paul Chinn | Radiolabeling kit and binding assay |
EP1597280B2 (en) | 2003-02-26 | 2016-08-24 | Institute for Research in Biomedicine | Monoclonal antibody production by ebv transformation of b cells |
JP5091476B2 (ja) | 2003-06-27 | 2012-12-05 | バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド | 均質な抗体溶液の生成のための疎水性相互作用クロマトグラフィーまたはヒンジ領域改変の使用 |
US20090252729A1 (en) | 2007-05-14 | 2009-10-08 | Farrington Graham K | Single-chain Fc (scFc) regions, binding polypeptides comprising same, and methods related thereto |
BRPI0914092B1 (pt) | 2008-10-22 | 2021-08-31 | Institute For Research In Biomedicine | Método de produção de um anticorpo a partir de células plasmáticas, método de produção de um anticorpo monoclonal a partir de células plasmáticas e método de produção de um anticorpo ou de um fragmento de anticorpo |
US10618947B2 (en) | 2012-11-12 | 2020-04-14 | Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg | Development of HBV-and/or HDV-susceptible cells, cell lines and non-human animals |
WO2017059878A1 (en) * | 2015-10-07 | 2017-04-13 | Humabs Biomed Sa | Antibodies that potently neutralize hepatitis b virus and uses thereof |
-
2015
- 2015-10-07 WO PCT/EP2015/001970 patent/WO2017059878A1/en active Application Filing
-
2016
- 2016-10-07 CN CN202210185497.3A patent/CN114539391A/zh active Pending
- 2016-10-07 JP JP2018514962A patent/JP6869968B2/ja active Active
- 2016-10-07 CA CA2993745A patent/CA2993745A1/en active Pending
- 2016-10-07 ES ES16779075T patent/ES2813927T3/es active Active
- 2016-10-07 PT PT167790757T patent/PT3359564T/pt unknown
- 2016-10-07 CN CN201680055161.8A patent/CN108137675B/zh active Active
- 2016-10-07 EP EP16779075.7A patent/EP3359564B1/en active Active
- 2016-10-07 BR BR112018002406-6A patent/BR112018002406A2/pt active Search and Examination
- 2016-10-07 CN CN202210187026.6A patent/CN114539392B/zh active Active
- 2016-10-07 EA EA201890874A patent/EA038301B1/ru unknown
- 2016-10-07 KR KR1020187012979A patent/KR20180056777A/ko not_active Application Discontinuation
- 2016-10-07 US US15/766,703 patent/US10683344B2/en active Active
- 2016-10-07 AU AU2016334735A patent/AU2016334735B2/en active Active
- 2016-10-07 HU HUE16779075A patent/HUE050231T2/hu unknown
- 2016-10-07 DK DK16779075.7T patent/DK3359564T3/da active
- 2016-10-07 PL PL16779075T patent/PL3359564T3/pl unknown
- 2016-10-07 MY MYPI2018700678A patent/MY187161A/en unknown
- 2016-10-07 WO PCT/EP2016/074114 patent/WO2017060504A1/en active Application Filing
- 2016-10-07 EP EP20177206.8A patent/EP3753949A1/en active Pending
- 2016-10-07 LT LTEP16779075.7T patent/LT3359564T/lt unknown
- 2016-10-07 SI SI201630896T patent/SI3359564T1/sl unknown
- 2016-10-07 MX MX2018004127A patent/MX2018004127A/es unknown
-
2018
- 2018-01-25 PH PH12018500199A patent/PH12018500199A1/en unknown
- 2018-02-02 ZA ZA2018/00710A patent/ZA201800710B/en unknown
- 2018-03-25 IL IL258326A patent/IL258326B/en unknown
- 2018-12-12 HK HK18115967.7A patent/HK1256869A1/zh unknown
-
2020
- 2020-04-30 US US16/864,087 patent/US11390664B2/en active Active
- 2020-08-26 HR HRP20201345TT patent/HRP20201345T1/hr unknown
- 2020-08-26 CY CY20201100795T patent/CY1123462T1/el unknown
-
2021
- 2021-04-14 JP JP2021068062A patent/JP7171809B2/ja active Active
-
2022
- 2022-07-18 US US17/867,466 patent/US20230303663A1/en active Pending
- 2022-11-02 JP JP2022175909A patent/JP2023011809A/ja not_active Withdrawn
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1997040164A1 (en) * | 1996-04-25 | 1997-10-30 | Murex Diagnostics Corporation | Hepatitis b monoclonal antibodies |
WO1998029442A1 (en) * | 1996-12-30 | 1998-07-09 | Innogenetics N.V. | ANNEXIN V-BINDING POLYPEPTIDES DERIVED FROM HBsAg AND THEIR USES |
WO2006076640A1 (en) * | 2005-01-14 | 2006-07-20 | The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Monoclonal antibodies that bind or neutralize hepatitis b virus |
WO2009069917A1 (en) * | 2007-11-30 | 2009-06-04 | Green Cross Corporation | Use of human antibody capable of neutralizing hepatitis b virus for the prevention or treatment of hepatitis b virus infection |
WO2014032176A1 (en) * | 2012-08-30 | 2014-03-06 | Replicor Inc. | Methods for the treatment of hepatitis b and hepatitis d infections |
WO2015107126A1 (en) * | 2014-01-16 | 2015-07-23 | Mondelli Mario Umberto Francesco | Neutralizing human monoclonal antibodies against hepatitis b virus surface antigen |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
C. SUREAU ET AL.: "Production of infectious hepatitis delta virus in vitro and neutralization with antibodies directed against hepatitis B virus pre-S antigens", Journal of Virology, 1 February 1992 (1992-02-01), pages 1241-1245, XP055229681, UNITED STATES, Retrieved from the Internet: URL:http://jvi.asm.Org/content/66/2/1241.full.pdf#page=1&view=FitH [retrieved on 2015-11-19], abstract, page 1243, left-hand column, paragraph 2 - right-hand column, paragraph 2 * |
FOROUGH GOLSAZ SHIRAZI, HAMED MOHAMMADI, MOHAMMAD MEHDI AMIRI, KATRIN SINGETHAN, YUCHEN XIA, ALI AHMAD BAYAT, MOTAHAREH BAHADORI, : "Monoclonal antibodies to various epitopes of hepatitis B surface antigen inhibit hepatitis B virus infection", JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY AND HEPATOLOGY, 6TH INTERNATIONAL SYMPOSIUM ON ALCOHOLIC LIVER AND PANCREATIC DISEASES AND CIRRHOSIS, 20‐21 OCTOBER 2011, FUKUOKA, JAPAN, vol. 29, no. 5, 1 May 2014 (2014-05-01), pages 1083 - 1091, XP055231723, ISSN: 0815-9319, DOI: 10.1111/jgh.12483 * |
HEINER WEDEMEYER; SVENJA HARDTKE; MICHAEL P. MANNS: "Update on the Management of HBV-HDV Coinfection", CURRENT HEPATITIS REPORTS, CURRENT SCIENCE INC., NEW YORK, vol. 11, no. 2, 25 March 2012 (2012-03-25), New York, pages 95 - 101, XP035063834, ISSN: 1541-0706, DOI: 10.1007/s11901-012-0129-3 * |
QIU X., SCHROEDER P., BRIDON D.: "IDENTIFICATION AND CHARACTERIZATION OF A C(K/R)TC MOTIF AS A COMMON EPITOPE PRESENT IN ALL SUBTYPES OF HEPATITIS B SURFACE ANTIGEN.", THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY, WILLIAMS & WILKINS CO., US, vol. 156., no. 09., 1 May 1996 (1996-05-01), US, pages 3350 - 3356., XP002041204, ISSN: 0022-1767 * |
TRAGGIAI E, ET AL: "An efficient method to make human monoclonal antibodies from memory B cells: potent neutralization of SARS coronavirus", NATURE MEDICINE, NATURE PUB. CO, NEW YORK, vol. 10, no. 8, 11 July 2004 (2004-07-11), New York, pages 871 - 875, XP002385893, ISSN: 1078-8956 * |
ZUBKIN, M. ; BALAKIREV, E. ; CHERVINKO, V. ; BARANOVA, F. ; TARANOV, V. ; BAKULIN, I. ; STANKE, A. ; NOVOZHENOV, V.: "76 Strategy of vaccination against HBV-infection in hemodialysis patients with 'isolated' HBcAb", INTERNATIONAL JOURNAL OF INFECTIOUS DISEASES, INTERNATIONAL SOCIETY FOR INFECTIOUS DISEASES, HAMILTON, CA, vol. 10, 1 January 2006 (2006-01-01), CA, pages S42 - S43, XP028032646, ISSN: 1201-9712, DOI: 10.1016/S1201-9712(06)80073-1 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11390664B2 (en) | Antibodies that potently neutralize hepatitis B virus and uses thereof | |
KR101732056B1 (ko) | 중화 항-인플루엔자 a 바이러스 항체 및 이의 용도 | |
CN113544148B (zh) | 中和乙型肝炎病毒的抗体和其用途 | |
KR101407216B1 (ko) | 인간 사이토메갈바이러스 중화 항체 및 이의 용도 | |
KR20150070181A (ko) | B형 간염 바이러스에 결합하고 이를 중화시킬 수 있는 인간 결합 분자 및 그의 용도 | |
KR20220063188A (ko) | B형 간염 바이러스 감염을 치료하기 위한 항체 조성물 및 방법 | |
JP2024504167A (ja) | B型肝炎ウイルス感染を処置するための抗体組成物および方法 | |
JP7498714B2 (ja) | B型肝炎ウイルスを中和する抗体およびその使用 | |
CN118108836A (zh) | 中和乙型肝炎病毒的抗体和其用途 | |
CN117042797A (zh) | 用于治疗乙型肝炎病毒感染的组合物和方法 |