EA037915B1 - Клинические композиции - Google Patents
Клинические композиции Download PDFInfo
- Publication number
- EA037915B1 EA037915B1 EA201890516A EA201890516A EA037915B1 EA 037915 B1 EA037915 B1 EA 037915B1 EA 201890516 A EA201890516 A EA 201890516A EA 201890516 A EA201890516 A EA 201890516A EA 037915 B1 EA037915 B1 EA 037915B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- cells
- solution
- cell
- composition
- subject
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 312
- 238000009472 formulation Methods 0.000 title description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 122
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims abstract description 97
- 230000035899 viability Effects 0.000 claims abstract description 33
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 727
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 493
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 130
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 118
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 claims description 101
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L magnesium chloride Substances [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 73
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 73
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 60
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 57
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 57
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 claims description 51
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims description 50
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 44
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 40
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 40
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 40
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 claims description 40
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 40
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical group CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims description 39
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims description 39
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims description 39
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 37
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 37
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 36
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 claims description 33
- -1 MgCl2 hexahydrate Chemical class 0.000 claims description 24
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 23
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 23
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 22
- 239000012453 solvate Substances 0.000 claims description 19
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 18
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 claims description 17
- YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N sodium;(2s,3s,4s,5r,6r)-6-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2-[(2s,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2- Chemical group [Na+].CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N 0.000 claims description 17
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims description 14
- 208000027073 Stargardt disease Diseases 0.000 claims description 13
- 210000000608 photoreceptor cell Anatomy 0.000 claims description 11
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 claims description 10
- 201000007737 Retinal degeneration Diseases 0.000 claims description 10
- 208000007014 Retinitis pigmentosa Diseases 0.000 claims description 10
- 150000004683 dihydrates Chemical class 0.000 claims description 9
- 230000004258 retinal degeneration Effects 0.000 claims description 9
- 229960000999 sodium citrate dihydrate Drugs 0.000 claims description 8
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 8
- 201000003533 Leber congenital amaurosis Diseases 0.000 claims description 7
- 208000034461 Progressive cone dystrophy Diseases 0.000 claims description 7
- 201000008615 cone dystrophy Diseases 0.000 claims description 7
- 150000004687 hexahydrates Chemical class 0.000 claims description 7
- 229920002385 Sodium hyaluronate Polymers 0.000 claims description 6
- 210000003583 retinal pigment epithelium Anatomy 0.000 claims description 6
- 229940010747 sodium hyaluronate Drugs 0.000 claims description 6
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 abstract description 45
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 abstract description 45
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 14
- 238000011536 re-plating Methods 0.000 abstract 1
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 112
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 110
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 94
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 82
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical group [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 79
- 239000003855 balanced salt solution Substances 0.000 description 73
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 62
- 239000000047 product Substances 0.000 description 60
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 56
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 55
- 229960005069 calcium Drugs 0.000 description 55
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 55
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 55
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 42
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 40
- 229940091250 magnesium supplement Drugs 0.000 description 40
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 40
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 229960002713 calcium chloride Drugs 0.000 description 39
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 39
- 229960002337 magnesium chloride Drugs 0.000 description 36
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 33
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 32
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 31
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 31
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 31
- 108010014606 glutathione-bicarbonate-Ringer solution Proteins 0.000 description 30
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 28
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 27
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 26
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 25
- 239000006163 transport media Substances 0.000 description 25
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 24
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 24
- 229940113601 irrigation solution Drugs 0.000 description 23
- 229960002668 sodium chloride Drugs 0.000 description 20
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 19
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 18
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 108010053070 Glutathione Disulfide Proteins 0.000 description 15
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 15
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 15
- YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N glutathione disulfide Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CSSC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 15
- 239000002357 osmotic agent Substances 0.000 description 15
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 15
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 14
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 14
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 13
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 13
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 13
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 13
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 12
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 12
- 229940050906 magnesium chloride hexahydrate Drugs 0.000 description 12
- DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L magnesium dichloride hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[Cl-].[Cl-] DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 12
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 12
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 12
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 11
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 11
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 11
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 11
- LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L calcium chloride dihydrate Chemical compound O.O.[Cl-].[Cl-].[Ca+2] LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 11
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 11
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 11
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 11
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 11
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 11
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 10
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 10
- 229940052299 calcium chloride dihydrate Drugs 0.000 description 10
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 10
- 239000008155 medical solution Substances 0.000 description 10
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 10
- 206010064930 age-related macular degeneration Diseases 0.000 description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 9
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 9
- 230000004438 eyesight Effects 0.000 description 9
- 229940089982 healon Drugs 0.000 description 9
- 229960001790 sodium citrate Drugs 0.000 description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 8
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 8
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 8
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 8
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 8
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 7
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 7
- 230000006727 cell loss Effects 0.000 description 7
- 238000002571 electroretinography Methods 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 229940045883 glutathione disulfide Drugs 0.000 description 7
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 7
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 7
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 7
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 7
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 7
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 6
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 6
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 6
- 208000012641 Pigmentation disease Diseases 0.000 description 6
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 6
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 6
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 6
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 6
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 6
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 6
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 6
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 6
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 description 6
- 230000002629 repopulating effect Effects 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 6
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 6
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 5
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 5
- 101000670189 Homo sapiens Ribulose-phosphate 3-epimerase Proteins 0.000 description 5
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 5
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 5
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 5
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 5
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 5
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 5
- 229960004106 citric acid Drugs 0.000 description 5
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 5
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 5
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 5
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 5
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 5
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 5
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 4
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 4
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 4
- BGDKAVGWHJFAGW-UHFFFAOYSA-N Tropicamide Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(CO)C(=O)N(CC)CC1=CC=NC=C1 BGDKAVGWHJFAGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 4
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 4
- 238000011018 current good manufacturing practice Methods 0.000 description 4
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 4
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 4
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 4
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 4
- 239000013618 particulate matter Substances 0.000 description 4
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 229960004791 tropicamide Drugs 0.000 description 4
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 3
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 3
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 3
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 description 3
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 description 3
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010032788 PAX6 Transcription Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000007354 PAX6 Transcription Factor Human genes 0.000 description 3
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 3
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 3
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 3
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 3
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 3
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 3
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 3
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 description 3
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 3
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 3
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 3
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 3
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 3
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000036564 melanin content Effects 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 108091008695 photoreceptors Proteins 0.000 description 3
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 3
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 3
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 159000000000 sodium salts Chemical group 0.000 description 3
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 3
- 235000011044 succinic acid Nutrition 0.000 description 3
- 230000004304 visual acuity Effects 0.000 description 3
- 210000004127 vitreous body Anatomy 0.000 description 3
- WXTMDXOMEHJXQO-UHFFFAOYSA-N 2,5-dihydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=CC=C1O WXTMDXOMEHJXQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-N 2-Methylbenzenesulfonic acid Chemical compound CC1=CC=CC=C1S(O)(=O)=O LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 125000002353 D-glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- 208000010412 Glaucoma Diseases 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000013760 Microphthalmia-Associated Transcription Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010050345 Microphthalmia-Associated Transcription Factor Proteins 0.000 description 2
- 101100518992 Mus musculus Pax2 gene Proteins 0.000 description 2
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N N-benzoylglycine Chemical compound OC(=O)CNC(=O)C1=CC=CC=C1 QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 2
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 2
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 2
- 159000000021 acetate salts Chemical class 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 2
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N adipic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC(O)=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002870 angiogenesis inducing agent Substances 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 210000001742 aqueous humor Anatomy 0.000 description 2
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 2
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000003161 choroid Anatomy 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 210000000795 conjunctiva Anatomy 0.000 description 2
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 2
- 210000000695 crystalline len Anatomy 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- JXTHNDFMNIQAHM-UHFFFAOYSA-N dichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)Cl JXTHNDFMNIQAHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 229940059659 erythromycin ophthalmic ointment Drugs 0.000 description 2
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 2
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 2
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 210000000554 iris Anatomy 0.000 description 2
- SUMDYPCJJOFFON-UHFFFAOYSA-N isethionic acid Chemical compound OCCS(O)(=O)=O SUMDYPCJJOFFON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N isobutyric acid Chemical compound CC(C)C(O)=O KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- XTEGVFVZDVNBPF-UHFFFAOYSA-N naphthalene-1,5-disulfonic acid Chemical compound C1=CC=C2C(S(=O)(=O)O)=CC=CC2=C1S(O)(=O)=O XTEGVFVZDVNBPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 229940054534 ophthalmic solution Drugs 0.000 description 2
- 239000002997 ophthalmic solution Substances 0.000 description 2
- 210000001328 optic nerve Anatomy 0.000 description 2
- 238000012014 optical coherence tomography Methods 0.000 description 2
- YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N oxidized gamma-L-glutamyl-L-cysteinylglycine Natural products OC(=O)C(N)CCC(=O)NC(C(=O)NCC(O)=O)CSSCC(C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CCC(N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 2
- 229920003213 poly(N-isopropyl acrylamide) Polymers 0.000 description 2
- 229920002338 polyhydroxyethylmethacrylate Polymers 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000001023 pro-angiogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 210000001747 pupil Anatomy 0.000 description 2
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 2
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 2
- 210000003994 retinal ganglion cell Anatomy 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CXMXRPHRNRROMY-UHFFFAOYSA-N sebacic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCC(O)=O CXMXRPHRNRROMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N thiocyanic acid Chemical compound SC#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000428 triblock copolymer Polymers 0.000 description 2
- 239000012808 vapor phase Substances 0.000 description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- QBYIENPQHBMVBV-HFEGYEGKSA-N (2R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid Chemical compound O[C@@H](C(O)=O)c1ccccc1.O[C@@H](C(O)=O)c1ccccc1 QBYIENPQHBMVBV-HFEGYEGKSA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MIOPJNTWMNEORI-GMSGAONNSA-N (S)-camphorsulfonic acid Chemical compound C1C[C@@]2(CS(O)(=O)=O)C(=O)C[C@@H]1C2(C)C MIOPJNTWMNEORI-GMSGAONNSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M .beta-Phenylacrylic acid Natural products [O-]C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M 0.000 description 1
- CPKVUHPKYQGHMW-UHFFFAOYSA-N 1-ethenylpyrrolidin-2-one;molecular iodine Chemical compound II.C=CN1CCCC1=O CPKVUHPKYQGHMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RTBFRGCFXZNCOE-UHFFFAOYSA-N 1-methylsulfonylpiperidin-4-one Chemical compound CS(=O)(=O)N1CCC(=O)CC1 RTBFRGCFXZNCOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FRPZMMHWLSIFAZ-UHFFFAOYSA-N 10-undecenoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCC=C FRPZMMHWLSIFAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDKLKNJTMLIAFE-UHFFFAOYSA-N 2-(3-fluorophenyl)-1,3-oxazole-4-carbaldehyde Chemical compound FC1=CC=CC(C=2OC=C(C=O)N=2)=C1 BDKLKNJTMLIAFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AJTVSSFTXWNIRG-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(2-hydroxyethyl)amino]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+](CCO)CCS([O-])(=O)=O AJTVSSFTXWNIRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 2-oxoglutaric acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)C(O)=O KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UOQHWNPVNXSDDO-UHFFFAOYSA-N 3-bromoimidazo[1,2-a]pyridine-6-carbonitrile Chemical compound C1=CC(C#N)=CN2C(Br)=CN=C21 UOQHWNPVNXSDDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WUBBRNOQWQTFEX-UHFFFAOYSA-N 4-aminosalicylic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C(O)=C1 WUBBRNOQWQTFEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N Acrylic acid Chemical compound OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 208000005598 Angioid Streaks Diseases 0.000 description 1
- 239000007992 BES buffer Substances 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 102000012304 Bestrophin Human genes 0.000 description 1
- 108050002823 Bestrophin Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000019300 CLIPPERS Diseases 0.000 description 1
- LSPHULWDVZXLIL-UHFFFAOYSA-N Camphoric acid Natural products CC1(C)C(C(O)=O)CCC1(C)C(O)=O LSPHULWDVZXLIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000002177 Cataract Diseases 0.000 description 1
- 208000033825 Chorioretinal atrophy Diseases 0.000 description 1
- 208000024304 Choroidal Effusions Diseases 0.000 description 1
- 208000033810 Choroidal dystrophy Diseases 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N Cinnamic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N 0.000 description 1
- 244000007835 Cyamopsis tetragonoloba Species 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020001019 DNA Primers Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide/propylene oxide copolymer Chemical compound CCCOC(C)COCCO CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HKVAMNSJSFKALM-GKUWKFKPSA-N Everolimus Chemical compound C1C[C@@H](OCCO)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 HKVAMNSJSFKALM-GKUWKFKPSA-N 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 229940123457 Free radical scavenger Drugs 0.000 description 1
- DSLZVSRJTYRBFB-UHFFFAOYSA-N Galactaric acid Natural products OC(=O)C(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O DSLZVSRJTYRBFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000003098 Ganglion Cysts Diseases 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N Gluconic acid Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 1
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- OWXMKDGYPWMGEB-UHFFFAOYSA-N HEPPS Chemical compound OCCN1CCN(CCCS(O)(=O)=O)CC1 OWXMKDGYPWMGEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000958041 Homo sapiens Musculin Proteins 0.000 description 1
- 101001078886 Homo sapiens Retinaldehyde-binding protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000729271 Homo sapiens Retinoid isomerohydrolase Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 1
- NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N Lidocaine Chemical compound CCN(CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- 206010025421 Macule Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 208000024080 Myopic macular degeneration Diseases 0.000 description 1
- JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methyl-2-aminoethanesulfonic acid Chemical compound OCC(CO)(CO)NCCS(O)(=O)=O JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150092239 OTX2 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002944 PCR assay Methods 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 102100035846 Pigment epithelium-derived factor Human genes 0.000 description 1
- 206010035021 Pigmentation changes Diseases 0.000 description 1
- 229920002012 Pluronic® F 38 Polymers 0.000 description 1
- 229920002845 Poly(methacrylic acid) Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 206010060932 Postoperative adhesion Diseases 0.000 description 1
- 239000004792 Prolene Substances 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N Pyroglutamic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-N R-2-phenyl-2-hydroxyacetic acid Natural products OC(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004453 Retinal Dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 206010038848 Retinal detachment Diseases 0.000 description 1
- 102100028001 Retinaldehyde-binding protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100031176 Retinoid isomerohydrolase Human genes 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 102100038803 Somatotropin Human genes 0.000 description 1
- 208000005400 Synovial Cyst Diseases 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007994 TES buffer Substances 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031737 Tissue Adhesions Diseases 0.000 description 1
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 1
- 208000000208 Wet Macular Degeneration Diseases 0.000 description 1
- 206010048038 Wound infection Diseases 0.000 description 1
- CBTQXKYBMPNKEE-UHFFFAOYSA-M [O-]C(=O)C=C.C[N+](C)(CCO)C#P=O Chemical compound [O-]C(=O)C=C.C[N+](C)(CCO)C#P=O CBTQXKYBMPNKEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002679 ablation Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 235000011037 adipic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000001361 adipic acid Substances 0.000 description 1
- 229960000250 adipic acid Drugs 0.000 description 1
- 210000004504 adult stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000411 amacrine cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960004909 aminosalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940035674 anesthetics Drugs 0.000 description 1
- JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N anhydrous glutaric acid Natural products OC(=O)CCCC(O)=O JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002159 anterior chamber Anatomy 0.000 description 1
- 230000001772 anti-angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001494 anti-thymocyte effect Effects 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960002170 azathioprine Drugs 0.000 description 1
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000022 bacteriostatic agent Substances 0.000 description 1
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N benzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940092714 benzenesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940064804 betadine Drugs 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- WOBLPDAWNVAVAS-UHFFFAOYSA-N butyl carboxy carbonate Chemical compound CCCCOC(=O)OC(O)=O WOBLPDAWNVAVAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L calcium acetate Chemical compound [Ca+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001639 calcium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000011092 calcium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229960005147 calcium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000010376 calcium ascorbate Nutrition 0.000 description 1
- 229940047036 calcium ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 239000011692 calcium ascorbate Substances 0.000 description 1
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L calcium carbonate Substances [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- FNAQSUUGMSOBHW-UHFFFAOYSA-H calcium citrate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O FNAQSUUGMSOBHW-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000001354 calcium citrate Substances 0.000 description 1
- 229960004256 calcium citrate Drugs 0.000 description 1
- QXDMQSPYEZFLGF-UHFFFAOYSA-L calcium oxalate Chemical compound [Ca+2].[O-]C(=O)C([O-])=O QXDMQSPYEZFLGF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L calcium stearate Chemical compound [Ca+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000008116 calcium stearate Substances 0.000 description 1
- 235000013539 calcium stearate Nutrition 0.000 description 1
- BLORRZQTHNGFTI-ZZMNMWMASA-L calcium-L-ascorbate Chemical compound [Ca+2].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] BLORRZQTHNGFTI-ZZMNMWMASA-L 0.000 description 1
- HDRTWMBOUSPQON-ODZAUARKSA-L calcium;(z)-but-2-enedioate Chemical compound [Ca+2].[O-]C(=O)\C=C/C([O-])=O HDRTWMBOUSPQON-ODZAUARKSA-L 0.000 description 1
- PBUBJNYXWIDFMU-UHFFFAOYSA-L calcium;butanedioate Chemical compound [Ca+2].[O-]C(=O)CCC([O-])=O PBUBJNYXWIDFMU-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- LSPHULWDVZXLIL-QUBYGPBYSA-N camphoric acid Chemical compound CC1(C)[C@H](C(O)=O)CC[C@]1(C)C(O)=O LSPHULWDVZXLIL-QUBYGPBYSA-N 0.000 description 1
- KHAVLLBUVKBTBG-UHFFFAOYSA-N caproleic acid Natural products OC(=O)CCCCCCCC=C KHAVLLBUVKBTBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229960001631 carbomer Drugs 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical compound OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000002701 cell growth assay Methods 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 210000003986 cell retinal photoreceptor Anatomy 0.000 description 1
- 230000004656 cell transport Effects 0.000 description 1
- 238000013043 cell viability test Methods 0.000 description 1
- HGAZMNJKRQFZKS-UHFFFAOYSA-N chloroethene;ethenyl acetate Chemical compound ClC=C.CC(=O)OC=C HGAZMNJKRQFZKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000003571 choroideremia Diseases 0.000 description 1
- 208000021930 chronic lymphocytic inflammation with pontine perivascular enhancement responsive to steroids Diseases 0.000 description 1
- 210000004240 ciliary body Anatomy 0.000 description 1
- 229930016911 cinnamic acid Natural products 0.000 description 1
- 235000013985 cinnamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000011557 critical solution Substances 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000625 cyclamic acid and its Na and Ca salt Substances 0.000 description 1
- HCAJEUSONLESMK-UHFFFAOYSA-N cyclohexylsulfamic acid Chemical compound OS(=O)(=O)NC1CCCCC1 HCAJEUSONLESMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002806 daclizumab Drugs 0.000 description 1
- 230000004300 dark adaptation Effects 0.000 description 1
- HABLENUWIZGESP-UHFFFAOYSA-N decanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC(O)=O.CCCCCCCCCC(O)=O HABLENUWIZGESP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001309 degenerative myopia Diseases 0.000 description 1
- 230000004340 degenerative myopia Effects 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- HRLIOXLXPOHXTA-NSHDSACASA-N dexmedetomidine Chemical compound C1([C@@H](C)C=2C(=C(C)C=CC=2)C)=CN=C[N]1 HRLIOXLXPOHXTA-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- 229960004253 dexmedetomidine Drugs 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- SHPKCSFVQGSAJU-UAIGNFCESA-L dipotassium;(z)-but-2-enedioate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C(=O)\C=C/C([O-])=O SHPKCSFVQGSAJU-UAIGNFCESA-L 0.000 description 1
- MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N dodecyl hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 208000011325 dry age related macular degeneration Diseases 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 210000000871 endothelium corneal Anatomy 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- AFAXGSQYZLGZPG-UHFFFAOYSA-N ethanedisulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCS(O)(=O)=O AFAXGSQYZLGZPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-N ethanesulfonic acid Chemical compound CCS(O)(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005167 everolimus Drugs 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 210000000744 eyelid Anatomy 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 239000013020 final formulation Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012595 freezing medium Substances 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- DSLZVSRJTYRBFB-DUHBMQHGSA-N galactaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(O)=O DSLZVSRJTYRBFB-DUHBMQHGSA-N 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000003193 general anesthetic agent Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 229960005219 gentisic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 description 1
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 230000004886 head movement Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 102000046949 human MSC Human genes 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000819 hypertonic solution Substances 0.000 description 1
- 229940021223 hypertonic solution Drugs 0.000 description 1
- 239000000815 hypotonic solution Substances 0.000 description 1
- 229960003943 hypromellose Drugs 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 1
- 229940124589 immunosuppressive drug Drugs 0.000 description 1
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000000622 irritating effect Effects 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 229940099563 lactobionic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960004194 lidocaine Drugs 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical class [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 235000011160 magnesium carbonates Nutrition 0.000 description 1
- 239000004337 magnesium citrate Substances 0.000 description 1
- 229960005336 magnesium citrate Drugs 0.000 description 1
- 235000002538 magnesium citrate Nutrition 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960002510 mandelic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N methyl p-hydroxycinnamate Natural products OC(=O)C=CC1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N micophenolic acid Natural products OC1=C(CC=C(C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 229960000951 mycophenolic acid Drugs 0.000 description 1
- HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N mycophenolic acid Chemical compound OC1=C(C\C=C(/C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N 0.000 description 1
- 230000002911 mydriatic effect Effects 0.000 description 1
- UUORTJUPDJJXST-UHFFFAOYSA-N n-(2-hydroxyethyl)prop-2-enamide Chemical compound OCCNC(=O)C=C UUORTJUPDJJXST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KVBGVZZKJNLNJU-UHFFFAOYSA-N naphthalene-2-sulfonic acid Chemical compound C1=CC=CC2=CC(S(=O)(=O)O)=CC=C21 KVBGVZZKJNLNJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005155 neural progenitor cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001178 neural stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000004466 optokinetic reflex Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 238000009512 pharmaceutical packaging Methods 0.000 description 1
- 238000012503 pharmacopoeial method Methods 0.000 description 1
- 229960003733 phenylephrine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- OCYSGIYOVXAGKQ-FVGYRXGTSA-N phenylephrine hydrochloride Chemical compound [H+].[Cl-].CNC[C@H](O)C1=CC=CC(O)=C1 OCYSGIYOVXAGKQ-FVGYRXGTSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009013 pigment accumulation Effects 0.000 description 1
- 108090000102 pigment epithelium-derived factor Proteins 0.000 description 1
- 229940044519 poloxamer 188 Drugs 0.000 description 1
- 229920002946 poly[2-(methacryloxy)ethyl phosphorylcholine] polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920002503 polyoxyethylene-polyoxypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229960003975 potassium Drugs 0.000 description 1
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229960004109 potassium acetate Drugs 0.000 description 1
- 229960002816 potassium chloride Drugs 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- WSHYKIAQCMIPTB-UHFFFAOYSA-M potassium;2-oxo-3-(3-oxo-1-phenylbutyl)chromen-4-olate Chemical compound [K+].[O-]C=1C2=CC=CC=C2OC(=O)C=1C(CC(=O)C)C1=CC=CC=C1 WSHYKIAQCMIPTB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 229940117392 provisc Drugs 0.000 description 1
- 238000012372 quality testing Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000004264 retinal detachment Effects 0.000 description 1
- 230000004286 retinal pathology Effects 0.000 description 1
- 239000000790 retinal pigment Substances 0.000 description 1
- 210000001164 retinal progenitor cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 210000003786 sclera Anatomy 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 1
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 1
- 244000005714 skin microbiome Species 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N sn-glycerol 3-phosphate Chemical compound OC[C@@H](O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940087562 sodium acetate trihydrate Drugs 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008354 sodium chloride injection Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 239000012798 spherical particle Substances 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000003356 suture material Substances 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229940080150 systane Drugs 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 210000001912 transporting cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 235000013337 tricalcium citrate Nutrition 0.000 description 1
- PLSARIKBYIPYPF-UHFFFAOYSA-H trimagnesium dicitrate Chemical compound [Mg+2].[Mg+2].[Mg+2].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O PLSARIKBYIPYPF-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 229960002703 undecylenic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
- A01N1/0226—Physiologically active agents, i.e. substances affecting physiological processes of cells and tissue to be preserved, e.g. anti-oxidants or nutrients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7004—Monosaccharides having only carbon, hydrogen and oxygen atoms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
- A61K31/728—Hyaluronic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
- A61K33/06—Aluminium, calcium or magnesium; Compounds thereof, e.g. clay
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
- A61K33/14—Alkali metal chlorides; Alkaline earth metal chlorides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/30—Nerves; Brain; Eyes; Corneal cells; Cerebrospinal fluid; Neuronal stem cells; Neuronal precursor cells; Glial cells; Oligodendrocytes; Schwann cells; Astroglia; Astrocytes; Choroid plexus; Spinal cord tissue
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/02—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0048—Eye, e.g. artificial tears
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0618—Cells of the nervous system
- C12N5/0621—Eye cells, e.g. cornea, iris pigmented cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/60—Buffer, e.g. pH regulation, osmotic pressure
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Virology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Dentistry (AREA)
Abstract
В некоторых аспектах изобретение относится к медицинским средам, которые поддерживают жизнеспособность, эффективность повторного культивирования и репопуляционную способность клеток и тканей во время хранения в течение 48 ч или дольше. Медицинские среды, представленные в изобретении, также применяются для клинического орошения. Также рассмотрены клеточные или тканевые композиции, содержащие клеточную популяцию или ткань и медицинскую среду по изобретению, и способы получения таких композиций. Также раскрыты способы использования медицинских сред и клеточных и тканевых композиций по изобретению, например, для введения эффективного количества клеток или ткани субъекту, нуждающемуся в таком введении.
Description
Родственные заявки
Для настоящей заявки испрашивается приоритет согласно 35 U.S.C. 119(e) по предварительной заявке на патент США номер 62/206821, поданной 18 августа 2015 года под названием CLINICAL FORMULATIONS (Клинические композиции), полное содержание которой включено в данный документ в качестве ссылки.
Уровень изобретения
Существующие в настоящее время медицинские среды, используемые для хранения и транспортировки клеток и тканей для трансплантации, сохраняют жизнеспособность и функции клеток не более сравнительно короткого периода времени (например, максимум 4-6 ч), и даже в течение такого короткого срока хранения обычно наблюдаются значительные потери клеток и клеточных функций. Дополнительно современные медицинские среды, содержащие анионы бикарбоната, не выдерживают термическую стерилизацию, и часто при хранении даже при температуре окружающей среды в них образуется осадок углеродной соли, что является причиной короткого срока годности таких сред.
Сущность изобретения
Широкий спектр медицинских манипуляций основан на применении медицинских растворов, например, для орошения операционного поля, очищения раны, предотвращения послеоперационных спаек и удаления дебриса из области операционного поля. Медицинские растворы используются при имплантации или трансплантации клеток или тканей для создания композиции для клеток или тканей, хранения клеток или тканей после их помещения в композицию и до введения субъекту, и в качестве среды - носителя клеточных или тканевых элементов в ходе введения, например, при инъекции клеток или тканей. Растворы, которые контактируют с клетками или тканями в клинических условиях, например, во время орошения, очистки раны, инъекции и т.д., обычно являются стерильными, апирогенными, буферными при физиологическом уровне рН и имеют физиологическую осмолярность.
Конкретной проблемой, связанной с существующими хирургическими ирригационными растворами, предназначенными к применению во время операции для предотвращения повреждения чувствительных клеток или тканей, является использование анионов бикарбоната в качестве буферных веществ вместе с солями, склонными к преципитации с анионами бикарбоната, например, практически со всеми ионными солями кальция и магния, которые обычно используются в качестве фармацевтических наполнителей. Образование карбонатов и последующая преципитация может происходить быстро в случае термической стерилизации раствора, содержащего бикарбонат и кальций и/или магний, а также часто происходит с течением времени при хранении при условиях окружающей среды.
Одним из возможных решений проблемы преципитации является поставка хирургических ирригационных растворов в виде набора из двух частей, в котором одна часть содержит бикарбонатный буфер, и другая часть содержит соли кальция и/или магния. Обычно эти части смешивают друг с другом для получения единого раствора непосредственно перед использованием. Использование таких двухкомпонентных растворов имеет ряд недостатков, включающих необходимость производства двух отдельных растворов, неудобный этап смешивания, при котором существует риск ошибок при изготовлении смеси, и обычно короткий период полужизни смешанного раствора. Таким образом, однокомпонентный ирригационный раствор будет иметь преимущество и является весьма желательным.
Ранее предпринимались попытки получения однокомпонентного ирригационного раствора. См., например, Европейскую заявку на патент ЕР 1067907 B1 (Armitage). В этих попытках для предотвращения описанных выше проблем преципитации карбонатов обычно подразумевалось использование цвиттерионных органических буферов, таких как N-(2-гидроксиэтил)пипeразин-N'-(2-этансульфоновая кислота), общепринято называемая HEPES. Вместе с тем, используемые в таких однокомпонентных ирригационных растворах цвиттерионные органические буферы обычно не совместимы со средами для культивирования клеток или тканей, и, таким образом, в этом случае невозможно получить раствор широкого применения из-за нежелательной преципитации при хранении клеток.
В дополнение к проблеме образования осадка и несовместимости с общепринятыми компонентами среды для культивирования клеток, как отмечено выше, широко используемые хирургические ирригационные растворы также обычно включают комбинацию компонентов, которые не выдерживают стерилизацию паром, например, некоторые углеводы или дисульфид глутатиона (GSSG).
В отличие от ранее разработанных однокомпонентных ирригационных растворов, в настоящем изобретении рассмотрены однокомпонентные растворы, в которых не требуется наличия цвиттерионных органических буферов. В стабилизированных ирригационных растворах настоящего изобретения решена проблема преципитации и связанного с ней короткого срока годности существующих ирригационных растворов. Растворы по изобретению имеют значительно увеличенный срок годности при хранении по сравнению с имеющимися в настоящее время растворами.
Представленные в изобретении растворы применяются для орошения, разведения клеток (например, криоконсервированных или осажденных клеток), для хранения клеток (например, после их включения в состав композиций для перевозки или трансплантации), для транспортировки и/или введения клеток субъекту (например, при имплантации или трансплантации клеток). Представленные в изобретении растворы могут быть использованы для разных типов клеток и в разных местах введения. Предпочти- 1 037915 тельным является их применение в офтальмологии, но, вместе с тем, также рассмотрены другие применения, которые входят в объем настоящего изобретения.
В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к растворам для разведения клеток, хранения, транспортировки и/или введения субъекту. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит следующее: (а) буфер, поддерживающий физиологический уровень рН раствора; (b) по меньшей мере 2 мМ глюкозы и (с) осмотически активное вещество, поддерживающее физиологическую осмолярность раствора. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит от 2 до 150 мМ глюкозы, например от 5 до 150 мМ, от 10 до 150 мМ, от 15 до 150 мМ, от 2 до 100 мМ, от 2 до 50 мМ, от 5 до 30 мМ, от 10 до 100 мМ, от 10 до 50 мМ, от 10 до 30 мМ, от 10 до 20 мМ, от 12 до 18 мМ, от 14 до 17 мМ, от 15 до 17 или от 16 до 17 мМ. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит глюкозу в количестве по меньшей мере 2,5 мМ, по меньшей мере 3 мМ, по меньшей мере 5 мМ, по меньшей мере 7,5 мМ, по меньшей мере 10 мМ, по меньшей мере 15 мМ, по меньшей мере 20 мМ, по меньшей мере 25 мМ или по меньшей мере 30 мМ. В некоторых вариантах осуществления глюкоза состоит из декстрозы или включает декстрозу. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит глюкозу в количестве по меньшей мере 2,5 мМ, по меньшей мере 3 мМ, по меньшей мере 5 мМ, по меньшей мере б мМ, по меньшей мере 7,5 мМ, по меньшей мере 10 мМ, по меньшей мере 15 мМ, по меньшей мере 20 мМ, по меньшей мере 25 мМ или по меньшей мере 30 мМ декстрозы. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит по меньшей мере 0,03% (вес/объем), по меньшей мере 0,05% (вес/объем), по меньшей мере 0,1% (вес/объем), по меньшей мере 0,125% (вес/объем), по меньшей мере 0,15% (вес/объем), по меньшей мере 0,175% (вес/объем), по меньшей мере 0,2% (вес/объем), по меньшей мере 0,225% (вес/объем), по меньшей мере 0,25% (вес/объем), по меньшей мере 0,275% (вес/объем), по меньшей мере 0,28% (вес/объем), по меньшей мере 0,29% (вес/объем), по меньшей мере 0,3% (вес/объем), по меньшей мере, 0,35% (вес/объем), по меньшей мере 0,4% (вес/объем), по меньшей мере 0,45% (вес/объем), по меньшей мере 0,5% (вес/ объем), по меньшей мере 0,55% (вес/объем), по меньшей мере 0,6% (вес/объем), по меньшей мере 0,65% (вес/объем), по меньшей мере 0,7% (вес/объем), по меньшей мере 0,75% (вес/объем), по меньшей мере 0,8% (вес/объем), по меньшей мере 0,9% (вес/объем), по меньшей мере 1% (вес/объем), по меньшей мере, 1,25% (вес/объем), по меньшей мере 1,5% (вес/объем), по меньшей мере 1,75% (вес/объем), по меньшей мере 2% (вес/объем), по меньшей мере 2,125% (вес/объем), по меньшей мере 2,5% (вес/объем), по меньшей мере 2,75% (вес/объем) или по меньшей мере 3% (вес/объем). В некоторых вариантах осуществления раствор дополнительно включает источник двухвалентных катионов. В некоторых вариантах осуществления двухвалентные катионы включают катионы кальция и/или магния. В некоторых вариантах осуществления источник двухвалентных катионов включает источник кальция и/или источник магния. В некоторых вариантах осуществления раствор включает источник кальция. В некоторых вариантах осуществления раствор включает источник магния. В некоторых вариантах осуществления буфер включает ацетатный буфер и/или цитратный буфер.
В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к растворам для разведения клеток, хранения, транспортировки и/или введения клеток субъекту, при этом раствор содержит следующее: (а) буфер, поддерживающий физиологический уровень рН раствора; (b) глюкозу; (с) осмотически активное вещество, поддерживающее физиологическую осмолярность раствора; и (d) источник двухвалентных катионов. В некоторых вариантах осуществления источник двухвалентных катионов включает источник кальция и/или источник магния. В некоторых вариантах осуществления буфер включает ацетатный и/или цитратный буфер.
В некоторых вариантах осуществления представленных в изобретении растворов глюкоза представляет собой D-глюкозу (декстрозу). В некоторых вариантах осуществления концентрация глюкозы составляет от 5 до 50 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация глюкозы составляет от 10 до 25 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация глюкозы составляет от 10 до 20 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация глюкозы составляет приблизительно 10 мМ, приблизительно 11 мМ, приблизительно 12 мМ, приблизительно 13 мМ, приблизительно 14 мМ, приблизительно 15 мМ, приблизительно 16 мМ, приблизительно 17 мМ, приблизительно 18 мМ, приблизительно 19 мМ или приблизительно 20 мМ.
В некоторых вариантах осуществления представленных в изобретении растворов источник двухвалентных катионов включает фармацевтически приемлемую соль двухвалентного катиона. В некоторых вариантах осуществления источник двухвалентных катионов включает фармацевтически приемлемую соль кальция. В некоторых вариантах осуществления источник двухвалентных катионов включает фармацевтически приемлемую соль магния. В некоторых вариантах осуществления источник двухвалентных катионов включает фармацевтически приемлемую кальциевую и/или фармацевтически приемлемую магниевую соль, выбранную из группы, состоящей из солей кальция и/или магния, образованных с кислотой, выбранной из группы, включающей уксусную кислоту, аскорбиновую кислоту, лимонную кислоту, соляную кислоту, малеиновую кислоту, щавелевую кислоту, фосфорную кислоту, стеариновую кислоту, янтарную кислоту и серную кислоту. В некоторых вариантах осуществления источник двухвалентных катионов включает источник кальция. В некоторых вариантах осуществления источник кальция включает хлорид кальция. В некоторых вариантах осуществления источник кальция включает дигидрат
- 2 037915 хлорида кальция. В некоторых вариантах осуществления источник двухвалентных катионов включает источник магния. В некоторых вариантах осуществления источник магния включает хлорид магния. В некоторых вариантах осуществления источник магния включает гексагидрат хлорида магния. В некоторых вариантах осуществления представленных в изобретении растворов концентрация источника кальция составляет от 0,25 до 0,75 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация источника кальция составляет от 0,4 до 0,65 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация источника кальция составляет от 0,5 до 0,6 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация источника кальция составляет приблизительно 0,6 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация источника кальция составляет от 0,5 до 0,9 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация источника кальция составляет от 0,6 до 0,8 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация источника кальция составляет приблизительно 0,7 мМ.
В некоторых вариантах осуществления представленных в изобретении растворов концентрация источника магния составляет от 0,05 до 5 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация источника магния составляет от 0,1 до 0,3 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация источника магния составляет приблизительно 0,3 мМ.
В некоторых вариантах осуществления представленных в изобретении растворов цитратный или ацетатный буфер представляет собой соль цитрата или ацетата. В некоторых вариантах осуществления представленных в изобретении растворов цитратный буфер представляет собой цитрат натрия. В некоторых вариантах осуществления концентрация цитрата или ацетата составляет от 0,1 до 5 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация цитрата или ацетата составляет от 0,5 до 2 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация цитрата или ацетата составляет приблизительно 1 мМ.
В некоторых вариантах осуществления представленных в изобретении растворов уровень рН раствора составляет от 6,8 до 7,8. В некоторых вариантах осуществления представленных в изобретении растворов уровень рН раствора составляет от 7,2 до 7,6. В некоторых вариантах осуществления уровень рН раствора составляет 7,4-7,5. В некоторых вариантах осуществления уровень рН раствора составляет приблизительно 7,5.
В некоторых вариантах осуществления представленных в изобретении растворов осмотически активное вещество представляет собой соль. В некоторых вариантах осуществления осмотически активное вещество представляет собой натриевую соль. В некоторых вариантах осуществления осмотически активное вещество представляет собой хлорид натрия. В некоторых вариантах осуществления концентрация осмотически активного вещества составляет приблизительно от 100 до 250 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация осмотически активного вещества составляет приблизительно от 125 до 175 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация осмотически активного вещества составляет приблизительно 150 мМ.
В некоторых вариантах осуществления представленных в изобретении растворов такой раствор является изотоническим. В некоторых вариантах осуществления раствор является гипертоническим. В некоторых вариантах осуществления осмолярность раствора составляет приблизительно от 270 до 345 мОсм/л. В некоторых вариантах осуществления осмолярность раствора составляет приблизительно от 300 до 330 мОсм/л. В некоторых вариантах осуществления осмолярность раствора составляет приблизительно 315 мОсм/л.
В некоторых вариантах осуществления раствор дополнительно включает калиевую соль. В некоторых вариантах осуществления соль калия представляет собой хлорид калия. В некоторых вариантах осуществления концентрация KCl составляет от 0,2 до 5 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация KCl составляет от 1 до 2,5 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация KCl составляет приблизительно 2 мМ.
В некоторых вариантах осуществления раствор дополнительно включает вязкоупругий полимер. В некоторых вариантах осуществления полимер представляет собой синтетический полимер. В некоторых вариантах полимер присутствует в концентрации, эффективной для уменьшения воздействия напряжения сдвига на клетки в растворе. В некоторых вариантах осуществления концентрация полимера составляет от 0,001 до 5% вес/объем В некоторых вариантах осуществления концентрация полимера составляет приблизительно 0,05% вес/объем В некоторых вариантах осуществления полимер представляет собой гиалуроновую кислоту, или ее соль или сольват. В некоторых вариантах осуществления полимер представляет собой гиалуронат натрия. В некоторых вариантах осуществления гиалуроновая кислота, или ее соль или сольват представляет собой Healon Endocoat® (Abbott), Hyasis® (Novozymes) или Pro-Visc® (Alcon). В некоторых вариантах осуществления концентрация гиалуроновой кислоты, или ее соли или сольвата составляет приблизительно от 0,001 до 0,05% вес/объем, например, от 0,01 до 0,05% вес/объем, приблизительно от 0,02 до 0,05% вес/объем, приблизительно 0,01%, приблизительно 0,02%, приблизительно 0,03%, приблизительно 0,04% или приблизительно 0,05% вес/объем
В некоторых вариантах осуществления представленных в изобретении растворов раствор содержит или состоит по существу из хлорида кальция, хлорида магния, цитрата натрия, хлорида натрия, глюкозы и, например, D-глюкозы в водном растворе. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит или состоит по существу из хлорида кальция, хлорида магния, цитрата натрия, хлорида натрия, глюкозы,
- 3 037915 например, D-глюкозы и хлорида калия, в водном растворе. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит приблизительно 0,7 мМ CaCl (хлорид кальция), приблизительно 0,3 мМ MgCl (хлорид магния), приблизительно 1 мМ цитрата натрия, приблизительно 16 мМ декстрозы и приблизительно 145 мМ NaCl, в водном растворе, или по существу состоит из вышеперечисленного. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит CaCl (хлорид кальция) в количестве приблизительно от 0,5 до 0,9 мМ, MgCl (хлорид магния) в количестве приблизительно от 0,2 до 0,4 мМ, цитрат натрия в количестве приблизительно от 0,8 до 1,2 мМ, декстрозу в количестве приблизительно от 13 до 19 мМ и NaCl в количестве приблизительно от 116 до 174 мМ, в водном растворе, или по существу состоит из вышеперечисленного.
В некоторых вариантах осуществления раствор дополнительно содержит приблизительно 2 мМ KCl. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит приблизительно 0,7 мМ CaCl (хлорид кальция), приблизительно 0,3 мМ MgCl (хлорид магния), приблизительно 1 мМ цитрата натрия, приблизительно 16 мМ декстрозы, приблизительно 145 мМ NaCl и приблизительно 2 мМ KCl, в водном растворе, или по существу состоит из вышеперечисленного. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит СаС1 (хлорид кальция) в количестве приблизительно от 0,5 до 0,9 мМ, MgCl (хлорид магния) в количестве приблизительно от 0,2 до 0,4 мМ, цитрат натрия в количестве приблизительно от 0,8 до 1,2 мМ, декстрозу в количестве приблизительно от 13 до 19 мМ, NaCl в количестве приблизительно от 116 до 174 мМ, и KCl в количестве приблизительно от 1,6 до 2,4 мМ, в водном растворе, или по существу состоит из вышеперечисленного.
В некоторых вариантах осуществления представленных в изобретении растворов такой раствор содержит или состоит по существу из хлорида кальция, хлорида магния, цитрата натрия, хлорида натрия, глюкозы, например, D-глюкозы, и вязкоупругого полимера, например гиалуроновой кислоты, или ее соли или сольвата, в водном растворе. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит или состоит по существу из хлорида кальция, хлорида магния, цитрата натрия, хлорида натрия, глюкозы, например, D-глюкозы, хлорида калия, и вязкоупругого полимера, например, гиалуроновой кислоты, или ее соли или сольвата, в водном растворе. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит приблизительно 0,7 мМ CaCl (хлорид кальция), приблизительно 0,3 мМ MgCl (хлорид магния), приблизительно 1 мМ цитрата натрия, приблизительно 16 мМ декстрозы, приблизительно 145 мМ NaCl, и вязкоупругий полимер, такой как гиалуроновая кислота, или ее соль или сольват, в количестве приблизительно от 1 до 5% вес/объем, в водном растворе, или по существу состоит из вышеперечисленного. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит приблизительно 0,7 мМ CaCl (хлорид кальция), приблизительно 0,3 мМ MgCl (хлорид магния), приблизительно 1 мМ цитрата натрия, приблизительно 16 мМ декстрозы, приблизительно 145 мм NaCl, приблизительно 2 мМ KCl и вязкоупругий полимер в количестве приблизительно от 0,01 до 5% вес/объем, например, приблизительно от 0,01 до 0,05% вес/объем гиалуроновой кислоты, или ее соли или сольвата, в водном растворе, или по существу состоит из вышеперечисленного. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит приблизительно 0,7 мМ CaCl (хлорид кальция), приблизительно 0,3 мМ MgCl (хлорид магния), приблизительно 2 мМ KCl, приблизительно 1 мМ цитрата натрия, приблизительно 16 мМ декстрозы, приблизительно 145 мМ NaCl и приблизительно 0,05% гиалуроновой кислоты, или по существу состоит из вышеперечисленного. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит СаС1 (хлорид кальция) в количестве приблизительно от 0,5 до 0,8 мМ, MgCl (хлорид магния) в количестве приблизительно от 0,2 до 0,4 мМ, KCl в количестве приблизительно от 1,6 до 2,4 мМ, цитрат натрия в количестве приблизительно от 0,8 до 1,2 мМ, декстрозу в количестве приблизительно от 13 до 19 мМ, NaCl в количестве приблизительно от 116 до 174 мМ и гиалуроновую кислоту в количестве приблизительно от 0,04 до 0,06%, или по существу состоит из вышеперечисленного.
В некоторых вариантах осуществления раствор является стерильным. В некоторых вариантах осуществления раствор по существу является апирогенным.
В некоторых вариантах осуществления раствор не содержит карбонатный буфер. В некоторых вариантах осуществления раствор не содержит глутатион или дисульфид глутатиона (GSSG). В некоторых вариантах осуществления раствор не содержит органический цвиттерионный буфер.
В некоторых вариантах осуществления представленные в изобретении растворы могут храниться в течение по меньшей мере 4 ч, по меньшей мере 6 ч, по меньшей мере 8 ч, по меньшей мере 12 ч, по меньшей мере 18 ч, по меньшей мере 24 ч, по меньшей мере 36 ч, по меньшей мере 48 ч, по меньшей мере 72 ч, по меньшей мере 96 ч, по меньшей мере 120 ч, по меньшей мере 144 ч, по меньшей мере в течение одной недели, по меньшей мере двух недель, по меньшей мере трех недель или по меньшей мере в течение одного месяца при 25°С без измеримой преципитации растворенных веществ и/или измеримой потери способности раствора сохранять выживаемость и жизнеспособность клеток, находящихся в растворе. В некоторых вариантах осуществления представленные в изобретении растворы могут храниться в течение по меньшей мере 4 ч, по меньшей мере 6 ч, по меньшей мере 8 ч, по меньшей мере 12 ч, по меньшей мере 18 ч, по меньшей мере 24 ч, по меньшей мере 36 ч, по меньшей мере 48 ч, по меньшей мере 72 ч, по меньшей мере 96 ч, по меньшей мере 120 ч, по меньшей мере 144 ч, по меньшей мере в течение одной недели, по меньшей мере двух недель, по меньшей мере трех недель или по меньшей мере в течение одного месяца при температуре от 2 до 8°С без измеримой преципитации растворенных веществ
- 4 037915 и/или измеримой потери способности раствора сохранять выживаемость и жизнеспособность клеток, находящихся в растворе.
В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к композициям, содержащим популяции клеток в растворе согласно изобретению. В некоторых вариантах осуществления клеточная популяция подходит для трансплантации субъекту. В некоторых вариантах осуществления клеточная популяция подходит для трансплантации в глаз субъекта. В некоторых вариантах осуществления клеточная популяция включает клетки пигментного эпителия сетчатки (ПЭС). В некоторых вариантах осуществления клеточная популяция включает фоторецепторные клетки. В некоторых вариантах осуществления клеточная популяция включает мезенхимные клетки. В некоторых вариантах осуществления клеточная популяция включает ганглиозные клетки сетчатки. В некоторых вариантах осуществления клеточная популяция включает клетки-предшественники сетчатки. В некоторых вариантах осуществления клеточная популяция включает гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники, нервные стволовые клетки или клетки-предшественники, нервные клетки, астроциты или клетки-предшественники астроцитов, глиальные клетки или клетки-предшественники глиальных клеток и/или клетки поджелудочной железы. В некоторых вариантах осуществления композиция хранится в холодильнике. В некоторых вариантах осуществления композиция хранится в холодильнике при температуре приблизительно от 2 до 8°С. В некоторых вариантах осуществления композиция сохраняет выживаемость клеток в клеточной популяции при хранении композиции. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере 70% клеток в клеточной популяции остаются жизнеспособными после хранения композиции при температуре от 2 до 8°С в течение 24, 48, 72, 96, 120 или 144 ч. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере 80% клеток в клеточной популяции остаются жизнеспособными после хранения композиции при температуре от 2 до 8°С в течение 24, 48, 72, 96, 120 или 144 ч. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере 90% клеток в клеточной популяции остаются жизнеспособными после хранения композиции при температуре от 2 до 8°С в течение 24, 48, 72, 96, 120 или 144 ч. В некоторых вариантах осуществления композиция способствует сохранению эффективности культивирования клеточной популяции при хранении композиции. В некоторых вариантах осуществления после хранения композиции при температуре от 2 до 8°С в течение 24, 48, 72, 96, 120 или 144 ч в клеточной популяции выявляют эффективность культивирования на уровне по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, или по меньшей мере 99% от ее исходной эффективности культивирования, при этом исходная эффективность культивирования означает эффективность культивирования клеточной популяции в начале периода хранения. В некоторых вариантах осуществления композицию помещают внутри контейнера для хранения. В некоторых вариантах осуществления композицию помещают в шприц.
В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к способам получения описанных композиций, например, композиций, которые содержат популяцию клеток в растворе согласно изобретению, при этом способ включает контактирование популяции клеток с раствором. В некоторых вариантах осуществления способ включает контактирование популяции криоконсервированных клеток или осажденных клеток с раствором, при этом осуществляется разведение клеток.
В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, подходящим для введения субъекту, при этом фармацевтические композиции содержат описанный в изобретении раствор или композицию, содержащую популяцию клеток в растворе по изобретению.
Некоторые аспекты настоящего изобретения относятся к способам, включающим введение раствора или композиции по изобретению субъекту, нуждающемуся в таком введении. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение раствора или композиции в глаз пациента. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение композиции субъекту после хранения композиции в течение по меньшей мере 4, по меньшей мере 6, по меньшей мере 12, по меньшей мере 24, по меньшей мере 36, по меньшей мере 24, по меньшей мере 48, по меньшей мере 60, по меньшей мере 72, по меньшей мере 96, по меньшей мере 120, или по меньшей мере 144 ч. В некоторых вариантах осуществления субъект имеет заболевание сетчатки или у него диагностировано такое заболевание. В некоторых вариантах осуществления заболевание сетчатки представляет собой палочковую или колбочковую дистрофию, дегенерацию сетчатки, пигментный ретинит, диабетическую ретинопатию, макулярную дегенерацию, врожденный амавроз Лебера, заболевание, связанное с ганглиозными клетками сетчатки, глаукому или болезнь Штаргардта. В некоторых вариантах осуществления композиция включает популяцию клеток, размер которой эффективен для улучшения по меньшей мере одного симптома заболевания сетчатки у субъекта. В некоторых вариантах осуществления клеточная популяция содержит клетки ПЭС, фоторецепторные клетки или мезенхимальные стволовые клетки. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает контроль по меньшей мере одного симптома заболевания сетчатки у субъекта.
В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к способам, включающим: (а) контактирование клеточной популяции с раствором по изобретению, в результате чего создается клеточная композиция. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает (b) хранение клеточной композиции (а) приблизительно в течение по меньшей мере 4 ч, по меньшей мере 6, по меньшей мере 12, по меньшей мере 18, по меньшей мере 24, по меньшей мере 36, по меньшей мере 48, по меньшей мере
- 5 037915
60, по меньшей мере 72, по меньшей мере 96, по меньшей мере 120, или по меньшей мере 144 ч. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает (с) введение клеточной композиции (а) субъекту после периода хранения (b). В некоторых вариантах осуществления введение (с) включает инъекцию клеток в глаз субъекта. В некоторых вариантах осуществления указанный способ дополнительно содержит определение жизнеспособности клеток в клеточной композиции (а) после периода хранения (b). В некоторых вариантах осуществления способ включает помещение клеточной композиции (а) в холодильник в течение периода хранения на этапе (b). В некоторых вариантах осуществления хранение в холодильнике включает нахождение клеточной композиции при температуре от 2 до 8°С. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает транспортировку созданной на этапе (а) композиции в место, отличное от места создания композиции, в течение периода хранения (b). В некоторых вариантах осуществления транспортировка включает транспортировку композиции в клинику или операционную, где происходит введение (с).
В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к способам лечения заболевания сетчатки, и указанные способы включают введение эффективного количества клеточной композиции по изобретению в глаз пациента с заболеванием сетчатки. В некоторых вариантах осуществления у пациента имеется или диагностировано заболевание сетчатки. В некоторых вариантах осуществления заболевание сетчатки представляет собой палочковую или колбочковую дистрофию, дегенерацию сетчатки, пигментный ретинит, диабетическую ретинопатию, макулярную дегенерацию, патологическую миопию, врожденный амавроз Лебера, глаукому или болезнь Штаргардта. В некоторых вариантах осуществления композиция включает клеточную популяцию, размер которой эффективен для улучшения по меньшей мере одного симптома заболевания сетчатки у субъекта. В некоторых вариантах осуществления клеточная популяция содержит клетки ПЭС, фоторецепторные клетки сетчатки, ганглиозные или мезенхимальные стволовые клетки. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает контроль по меньшей мере одного симптома заболевания сетчатки у пациента.
В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к наборам, включающим: (а) раствор по изобретению; и (b) инструкцию для контактирования клеточной популяции с раствором (а) для создания клеточной композиции; и (с) контейнер для контактирования (b) и/или для хранения клеточной композиции (b). В некоторых вариантах осуществления раствор (а) и контейнер (с) подходят для использования для клеточной композиции (b), предназначенной для трансплантации субъекту.
Изложенная выше сущность изобретения неограничивающим образом иллюстрирует некоторые из вариантов осуществления, преимущества, признаки и применения технологий, раскрытых в настоящем изобретении. Другие варианты, преимущества, признаки и применения раскрытых в настоящем изобретении технологий будут очевидны из подробного описания, чертежей, примеров и формулы изобретения.
Краткое описание фигур
Фиг. 1. Клетки ПЭС могут сохраняться в среде HypoThermosol в течение 24 ч (но не 48 ч) без видимой потери с последующей способностью к культивированию и росту в культуре.
Фиг. 2. Стабильность клеток ПЭС в среде GS2 (от 2 до 8°С). Клетки ПЭС могут сохраняться в GS2 в течение по меньшей мере 48 ч без видимой потери в отношении количества жизнеспособных клеток или последующей способности к культивированию и росту в культуре.
Фиг. 3. Стабильность клеток ПЭС в среде GS2 (от 2 до 8°С). Клетки ПЭС могут сохраняться в GS2 в течение 4-5 дней, при этом происходит только номинальная потеря жизнеспособности клеток и нет значительного снижения плотности жизнеспособных клеток.
Фиг. 4. Стабильность клеток ПЭС в среде GS2 (от 2 до 8°С). Способность клеток ПЭС к культивированию и росту в культуре начинает уменьшаться после 5 дней хранения в GS2 с охлаждением.
Фиг. 5. Стабильность клеток ПЭС в среде GS2 (от 2 до 8°С). Среда GS2 совместима с современной инъекционной системой.
Фиг. 6. Показана средняя плотность жизнеспособных клеток из трижды исследованных пробирок+стандартные отклонения. Плотность человеческих клеток ПЭС определяли с помощью гемоцитометра. Жизнеспособность клеток оценивали в тесте на исключение с трипановым синим. Средние значения были рассчитаны по трижды проведенным для каждого условия анализам пробирок с клетками, при этом показатели концентрации жизнеспособных клеток для каждой пробирки рассчитывали в трех повторах. Процентное изменение (дельта) количества клеток, наблюдаемое после экструзии клеток через канюлю MedOne # 3233, показано над каждым набором значений для каждого условия.
Фиг. 7. Показаны среднее количество человеческих клеток ПЭС на лунку в шести лунках и стандартные отклонения (±SD) для каждого условия анализа. Для каждого условия приблизительно 20000 клеток на лунку высевали на 96-луночные планшеты с желатиновым покрытием и культивировали в среде для роста клеток ПЭС (RPE Growth Media EBM-2+EGM2 Single Quots, Stem Cell, Inc.) в течение 3 дней в условиях 5% СО2, 37°С, в инкубаторе с контролируемой влажностью. После роста клеток в течение трех дней эти клетки снимали с подложки с помощью 1:1 смеси трипсина (Sigma) и среды для диссоциации на основе HEPES (Gibco) для определения количества клеток. После снятия клеток трипсин нейтрализовали средой, содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки (FCS), и подсчитывали количество клеток с помощью гемоцитометра.
- 6 037915
Фиг. 8. Сравнение разных сред для хранения мезенхимальных стволовых клеток (MSC). Человеческие MSC, полученные из эмбриональных стволовых клеток, выращивали до 70% конфлюэнтности, собирали с добавлением 0,05% трипсина, ресуспендировали в среде аМЕМ+15% FCS (среда MSC) и центрифугировали при 200 g в течение 5 мин. Клеточный осадок ресуспендировали в небольшом объеме среды для MSC и подсчитывали на жизнеспособность в тесте на исключение с трипановым синим. Затем в каждую из 4 пробирок типа Эппендорф вводили 5 млн MSC, центрифугировали и ресуспендировали в 1 мл каждого из указанных буферов. Пробирки помещали в холодной комнате с температурой 4°С в течение указанного промежутка времени. CS=собачья сыворотка; FBS=фетальная бычья сыворотка.
Фиг. 9. Жизнеспособность MSC в GS2 повышается в условиях хранения при более высокой плотности, тогда как присутствие FBS имеет незначительный эффект для повышения жизнеспособности в GS2 в течение 24 ч.
Фиг. 10. Жизнеспособность MSC сохраняется при хранении и выдавливании через иглу/шприц 26G (в GS2 при 4°С).
Фиг. 11. Показаны электроретинограммы (ЭРГ) на 60 день после введения в глаза группе из 16 крыс, при введении или клеток ПЭС, суспендированных в BSS-Plus, или транспортной среды GS2, по сравнению с показателями от животных, в глаза которых вводили или BSS-Plus или транспортную среду GS2 в качестве единственных препаратов (без клеток), или подвергали мнимому лечению или оставляли без лечения.
Подробное описание Введение
Многие современные передовые хирургические манипуляции отличаются минимальным повреждением клеток и тканей по сравнению с более старыми методиками, но некоторые тонкие процедуры остаются очень чувствительными к технике и используемым материалам. Так, в глазной хирургии, например, при хирургическом лечении катаракты и операции витрэктомии, в манипуляции вовлечены легко ранимые клетки и ткани (например, эндотелиальный слой роговицы). В этой связи диапазон для ошибок является минимальным, и при этом существует большая вероятность повреждения тканей глаза и зрения пациента. Дополнительно, при трансплантации клеток, например, в методиках регенеративной медицины, часто требуется создание композиции, хранение, транспортировка и/или инъекция нежных или легко ранимых клеток, которые могут быть повреждены или потерять репопулирующую способность при неправильном обращении или воздействии нефизиологических условий.
Настоящее изобретение относится к раствору для орошения, разведения клеток, хранения клеток, транспортировки клеток и/или введения клеток субъекту. Представленные в изобретении растворы имеют ряд преимуществ по сравнению с имеющимися в настоящее время растворами для орошения, разведения клеток, создания композиций, хранения и/или трансплантации. Например, в отличии от существующих доступных сред, представленные в изобретении растворы способствуют выживанию клеток и тканей разных типов, в том числе легко повреждаемых клеток и тканей, и сохраняют высокую жизнеспособность клеток и тканей, эффективность повторного культивирования и репопулирующую способность даже при длительных сроках хранения. В других разделах настоящего изобретения описано более подробно, что имеющиеся в настоящее время среды для орошения или для получения клеточной композиции перед операцией имеют короткий период полужизни (например, по причине преципитации солей углерода), и/или не способствуют выживанию, эффективности повторного культивирования и репопулирующей способности сохраняемых клеток в течение длительного периода времени (например, в течение более 4-6 ч). По причине короткого периода полужизни и отсутствия поддержки жизнеспособности и функции клеток в течение относительно короткого периода времени использование имеющихся в настоящее время сред требует создания композиций среды и/или клеток и тканей в соответствующих средах в непосредственной близости от лечебного учреждения, в котором применяются эти среды или клеточные композиции (например, осуществляется трансплантация), или непосредственно в здании клиники или расположенной вблизи лаборатории. Таким образом, имеющееся в настоящее время растворы ограничивают клиническое применение композиций клеток или тканей только таким применением, когда введение можно осуществлять за короткий промежуток времени, в течение которого жизнеспособность клеток, эффективность повторного культивирования и/или репопулирующая способность являются приемлемыми. Требование к изготовлению композиции в непосредственной близости от лечебного учреждения приводит к дополнительным затратам, рискам и дополнительным ограничениям для обработки вне места изготовления.
В противоположность этому, представленные в изобретении растворы имеют длительный срок годности при хранении по сравнению с существующими растворами, и также способствуют сохранению функций и жизнеспособности клеток, эффективности повторного культивирования и репопулирующей способности у клеток разных типов, в том числе легко повреждаемых клеток, таких как клетки ПЭС, фоторецепторные клетки и мезенхимальные стволовые клетки, даже во время длительных периодов хранения (например, период хранения до 24, до 48 ч или дольше). Дополнительно, представленные в изобретении растворы являются биологически совместимыми и, таким образом, подходят для введения субъекту. Таким образом, клетки и ткани, представленные в виде композиции в растворе по изобретению, мож
- 7 037915 но непосредственно вводить субъекту без необходимости замены среды.
Улучшенные характеристики растворов по изобретению позволяют транспортировать полученные растворы, клетки и ткани в лечебные учреждения, находящиеся далеко от места создания композиции, что позволяет централизовать обработку и получение конечного продукта и устраняет необходимость изготовления композиции в непосредственной близости от лечебного учреждения. Расширение возможностей для хранения и транспортировки растворов по изобретению дополнительно позволяет задействовать лечебные учреждения, более удаленные от места изготовления конечного продукта, а также сделать более гибкими схемы клинического применения, например, при планировании операций по введению клеток или тканей в композиции с растворами по изобретению. Расширение окна времени в отношении хранения также дает дополнительные возможности для контроля качества полученного продукта, например, для тестирования на наличие патогенов в конечной рецептуре продукта, перед началом клинических манипуляций, например перед началом подготовки хирургической бригады к операции, или перед подготовкой пациента к операции.
Клинические растворы
В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к медицинским ирригационным растворам для орошения и для создания композиций, хранения, транспортировки и введения клеток и тканей.
В отличие от имеющихся в настоящее время сред для орошения и создания клеточных композиций, таких как сбалансированные солевые растворы или физиологический раствор, медицинские растворы по изобретению способствуют длительному выживанию и функционированию чувствительных клеток или тканей, отличаются простотой приготовления и стерилизации, и имеют длительный срок годности при хранении.
Для кратковременного хранения клеток можно использовать простые солевые растворы, такие как фосфатно-буферный раствор или 0,9% раствор хлорида натрия, но эти растворы не поддерживают в достаточной степени жизнеспособность клеток или клеточные функции в течение более длительного хранения, в результате чего происходит значительное и часто неприемлемое уменьшение жизнеспособности клеток, эффективности повторного культивирования и репопулирующей способности даже после короткого периода хранения.
Существуют более сложные сбалансированные солевые растворы для медицинского применения, например для орошения или хранения клеток и тканей, и такие растворы обычно включают вещество для поддержания осмолярности, источник кальция, источник магния и буферное вещество.
Для поддержания осмолярности раствора обычно используется хлорид натрия. Ионы кальция играют важную роль в поддержании межклеточных соединений, например, в эндотелии роговицы. Ионы магния, как и ионы кальция, присутствуют в водянистой влаге и необходимы для ряда клеточных функций.
Анионы бикарбоната обычно используются в качестве буферного вещества, поскольку являются физиологическим буфером для многих тканей и широко совместимы с другими растворенными веществами. Вместе с тем, некоторые формы кальция и магния могут вступать в реакцию с бикарбонатом с образованием карбонатов кальция или магния, которые при определенных обстоятельствах могут выпадать в осадок из раствора. Реакция и преципитация могут происходить быстро, если содержащий бикарбонаты и кальций и/или магний раствор подвергался термической стерилизации, и могут происходить в течение долгого времени при хранении в условиях окружающей среды. Предполагается, что реакция между кальцием или магнием и бикарбонатом происходит практически со всеми ионными солями кальция и магния, которые обычно используются в качестве фармацевтических наполнителей.
Чтобы избежать преципитации, применяется такой подход, как изготовление медицинского раствора с использованием бикарбонатного буфера в виде двух отдельных стоковых растворов, которые смешивают непосредственно перед применением. Например, одна из широко используемых медицинских сред представляет собой стерильный ирригационный раствор для внутриглазного применения BSS PLUS® (Alcon Laboratories, Inc.). Стерильный ирригационный раствор для внутриглазного применения BSS PLUS® представляет собой двухкомпонентный раствор. Две его части смешивают вместе для получения единого раствора непосредственно перед хирургическим вмешательством. Этот этап смешивания может быть неудобным и несет риск ошибок при изготовлении смеси в напряженной обстановке операционной. Дополнительно, производство двух отдельных растворов является более сложным и дорогостоящим, чем производство однокомпонентной лекарственной формы. Таким образом, однокомпонентный медицинский раствор будет иметь преимущество и является весьма желательным.
Часть I в стерильном ирригационном растворе для внутриглазного применения BSS PLUS® содержит хлорид натрия, хлорид калия, бикарбонат натрия и двухосновный фосфат натрия, растворенные в воде для инъекций. Уровень рН части I близок к нейтральному, и уровень ее осмолярности является почти изотоническим по отношению к физиологическим жидкостям. Часть II в стерильном ирригационном растворе для внутриглазного применения BSS PLUS® содержит хлорид кальция, хлорид магния, декстрозу и дисульфид глутатиона (GSSG), растворенные в воде для инъекций. Уровень рН части II доведен до диапазона от 3 до 5, и этот раствор имеет гипотоническую осмолярность.
- 8 037915
После разведения стерильный ирригационный раствор для внутриглазного применения BSS PLUS® имеет нейтральный уровень рН и изотоническую осмолярность. При объединении этих двух частей стерильного ирригационного раствора для внутриглазного применения BSS PLUS® двухвалентные катионы, такие как кальций и магний из части II, реагируют с бикарбонатом и фосфатом из части I с образованием осадка. Эта реакция протекает почти мгновенно, если объединенный раствор подвергается стерилизации паром, и более медленно при комнатной температуре, обычно в течение периода от нескольких часов до нескольких дней. Во избежание преципитации срок годности стерильного ирригационного раствора для внутриглазного применения BSS PLUS®, указанный в инструкции, составляет шесть часов, и в течение этого срока раствор должен быть использован.
Ранее осуществлялись попытки создания однокомпонентного медицинского раствора, сравнимого по эффекту с двухкомпонентным стерильным ирригационным раствором для внутриглазного применения BSS PLUS®. В Европейской заявке на патент ЕР 1067907 B1 (Armitage) описано применение цвиттерионных органических буферов, таких как N-(2-гидроксиэтил)пиперазин-N'-(2-этансульфоновая кислота), обычно называемая HEPES, с целью предотвращения преципитации, как указано выше. В раскрытых автором Armitage композициях отсутствуют такие компоненты, как декстроза и GSSG, которые отличаются нестабильностью в композиции растворов с физиологическим уровнем рН или при автоклавировании. В композициях согласно Armitage также отсутствует такой тип компонентов, как аминокислоты, обычно добавляемые в среды для культивирования тканей. Таким образом, изобретение Armitage не решает задачу получения раствора без недостатка преципитации.
В отличие от ранее разработанных однокомпонентных растворов, в некоторых аспектах настоящего изобретения рассмотрены однокомпонентные медицинские растворы, для которых не требуются цвиттерионные органические буферы, такие как HEPES, BES, MOPS, TES, EPPS и TRICINE (Трицин), чтобы поддерживать уровень рН раствора в физиологическом диапазоне. В медицинских растворах настоящего изобретения решена проблема короткого срока годности. Представленные в изобретении медицинские растворы имеют значительно увеличенный срок годности при хранении по сравнению с имеющимися в настоящее время клиническими средами, и сохраняют жизнеспособность клеток, эффективность повторного культивирования и репопуляционную способность клеток даже после длительного хранения в течение 24, 48, 60, 72, 96, 120, 144 или 168 ч или более.
Термин раствор, используемый в данном описании, относится к водной среде, содержащей воду в качестве основного растворителя, и одно или несколько растворенных веществ, присутствующих в растворе, например, буферное вещество, осмотически активное вещество, глюкозу, соль, полимер и т.д. В некоторых вариантах осуществления представленные в изобретении растворы предназначены для медицинского применения, и, следовательно, являются нетоксичными, апирогенными и стерильными.
В некоторых вариантах осуществления представленные в изобретении растворы имеют физиологический уровень рН и физиологическое осмотическое давление, также называемое физиологической осмолярностью. Физиологический уровень рН относится к показателю рН, который не является цитотоксическим и сходен с уровнем рН клетки или ткани, в которые вводится раствор, или условия для клетки или ткани в композиции с раствором сходны с естественной средой для этой клетки или ткани. Для большинства клеток и тканей физиологический уровень рН составляет приблизительно от 6,8 до 7,8, например, рН от 7 до 7,7, рН от 7,2 до 7,6, рН от 7,2 до 7,4 или рН от 7,4 до 7,5. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления представленные в изобретении растворы имеют уровень рН приблизительно 7,0, приблизительно 7,1, приблизительно 7,2, приблизительно 7,3, приблизительно 7,4, приблизительно 7,5, приблизительно 7,6, приблизительно 7,7 или приблизительно 7,8. Физиологическое осмотическое давление относится к осмотическому давлению, которое не является цитотоксическим и сходно с осмотическим давлением клетки или ткани, в которые вводится раствор, или условия для клетки или ткани в композиции с раствором сходны с естественной средой для этой клетки или ткани. Для большинства клеток и тканей физиологическое осмотическое давление составляет приблизительно от 270 до 345 мОсм/л, например, от 280 до 330 мОсм/л, от 290 до 325 мОсм/л, от 300 до 315 мОсм/л. В некоторых вариантах осуществления физиологическое осмотическое давление составляет приблизительно 300 мОсм/л, приблизительно 305, приблизительно 310, приблизительно 315, приблизительно 320 или приблизительно 325 мОсм/л.
Термин осмотическое давление или осмолярность раствора означает давление, необходимое для остановки потока растворителя в раствор через полупроницаемую мембрану, разделяющую чистый растворитель с одной стороны, и раствор с другой стороны, при этом полупроницаемая мембрана является проницаемой для молекул растворителя, но непроницаемой для молекул растворенного вещества. Осмотическое давление раствора пропорционально молярной концентрации растворенных частиц в растворе, и измеряется в мОсм/л или мОсм/кг. В некоторых вариантах осуществления раствор по изобретению имеет осмолярность приблизительно от 290 мОсм/л приблизительно до 320 мОсм/л, или приблизительно от 300 мОсм/л приблизительно до 310 мОсм/л или приблизительно 305 мОсм/л. В некоторых вариантах осуществления раствор имеет осмолярность приблизительно от 300 до 330 мОсм/л. В некоторых вариантах осуществления осмолярность раствора составляет приблизительно 300 мОсм/л, приблизительно 305,
- 9 037915 приблизительно 310, приблизительно 315, приблизительно 320 или приблизительно 325 мОсм/л.
В некоторых вариантах осуществления осмолярность раствора по изобретению относится к его тоничности, при этом гипертонический раствор вызывает сокращение клетки, гипотонический раствор вызывает набухание клетки и изотонический раствор не вызывает каких-либо изменений в объеме клетки. Термины гипертонический, гипотонический и изотонический обычно используются по отношению к клетке, клеточной популяции или ткани, которые контактируют с раствором. Например, в вариантах осуществления, относящихся к ирригационному раствору, термин изотонический относится к осмотическому давлению, которое не вызывает изменение объема клеток или тканей, контактирующих с раствором при орошении. Аналогичным образом, в вариантах осуществления, относящихся к использованию раствора для изготовления композиции с клеткой, клеточной популяцией или тканью для медицинского применения, например, для трансплантации субъекту, термин изотонический относится к осмотическому давлению, которое не вызывает изменение объема клетки, клеток в клеточной популяции, или клеток ткани, когда они находятся в этом растворе. В некоторых вариантах осуществления растворы по изобретению являются изотоническими. В некоторых вариантах осуществления раствор является гипертоническим.
В некоторых вариантах осуществления в растворах по изобретению осмотически активное вещество представляет собой соль. В некоторых вариантах осуществления соль представляет собой фармацевтически приемлемую соль. В некоторых вариантах осуществления осмотически активное вещество представляет собой натриевую соль. В некоторых вариантах осуществления осмотически активное вещество представляет собой хлорид натрия. В некоторых вариантах осуществления концентрация осмотически активного вещества составляет приблизительно от 100 до 200 мМ, от 125 до 175 мМ или от 140 до 160 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация осмотически активного вещества составляет приблизительно 100 мМ, приблизительно 105, приблизительно 110, приблизительно 115, приблизительно 120, приблизительно 125, приблизительно 130, приблизительно 135, приблизительно 140, приблизительно 145, приблизительно 150, приблизительно 155, приблизительно 160, приблизительно 165, приблизительно 170, приблизительно 175, приблизительно 180, приблизительно 185, приблизительно 190, приблизительно 195 или приблизительно 200 мМ.
Термин физиологическая осмолярность, используемый в изобретении, относится к осмотическому давлению, которое не является цитотоксическим (например, не разрушает данную клетку или тип клеток или не вызывает иного повреждения клетки), и сходно с осмотическим давлением ткани, в которую вводится раствор, или условия для клетки или ткани в композиции с раствором сходны с естественной средой для этой клетки или ткани. Диапазон физиологической осмолярности для большинства применений составляет приблизительно от 280 приблизительно до 325 мОсм/л, приблизительно от 290 приблизительно до 320 мОсм/л, или приблизительно от 300 до 310 мОсм/л, или приблизительно 305 мОсм/л.
В некоторых вариантах осуществления представленные в изобретении растворы для разведения клеток, их хранения, транспортировки и/или введения субъекту включают: (а) буфер, поддерживающий физиологический уровень рН раствора; (b) по меньшей мере 2 мМ глюкозы и (с) осмотически активное вещество, поддерживающее физиологическую осмолярность раствора. В некоторых вариантах осуществления раствор дополнительно включает источник двухвалентных катионов. В некоторых вариантах осуществления источник двухвалентных катионов включает источник кальция и/или источник магния. В некоторых вариантах осуществления раствор включает источник кальция. В некоторых вариантах осуществления раствор дополнительно включает источник магния. В некоторых вариантах осуществления буфер включает ацетатный буфер и/или цитратный буфер. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит глюкозу в количестве по меньшей мере 4 мМ, по меньшей мере 5 мМ, по меньшей мере 6 мМ, по меньшей мере 7 мМ, по меньшей мере 7,5 мМ, по меньшей мере 8 мМ, по меньшей мере 9 мМ, по меньшей мере 10 мМ, по меньшей мере 15 мМ, по меньшей мере 20 мМ, по меньшей мере 25 мМ, по меньшей мере 30 мМ, по меньшей мере 40 мМ, или по меньшей мере 50 мМ. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит декстрозу в количестве по меньшей мере 0,5 мМ, по меньшей мере 1 мМ, по меньшей мере 2 мМ, по меньшей мере 2,5 мМ, по меньшей мере 3 мМ, по меньшей мере 5 мМ, по меньшей мере 6 мМ, по меньшей мере 7 мМ, по меньшей мере 7,5 мМ, по меньшей мере 8 мМ, по меньшей мере 9 мМ, по меньшей мере 10 мМ, по меньшей мере 15 мМ, по меньшей мере 16 мМ, по меньшей мере 20 мМ, по меньшей мере 25 мМ, по меньшей мере 30 мМ, по меньшей мере 40 мМ или по меньшей мере 50 мМ. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит не более 3 мМ глюкозы, не более 4 мМ, не более 5 мМ, не более 6 мМ, не более 7 мМ, не более 7,5 мМ, не более 8 мМ, не более 9 мМ, не более 10 мМ, не более 15 мМ, не более 17 мМ, не более 20 мМ, не более 25 мМ, не более 30 мМ, не более 40 мМ или не более 50 мМ глюкозы. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит не более 0,5 мМ декстрозы, не более 1 мМ, не более 2 мМ, не более 2,5 мМ, не более 3 мМ, не более 4 мМ, не более 5 мМ, не более 6 мМ, не более 7 мМ, не более 7,5 мМ, не более 8 мМ, не более 9 мМ, не более 10 мМ, не более 15 мМ, не более 20 мМ, не более 25 мМ, не более 30 мМ, не более 40 мМ или не более 50 мМ декстрозы.
В некоторых вариантах осуществления представленные в изобретении растворы для разведения клеток, их хранения, транспортировки и/или введения субъекту включают: (а) буфер, поддерживающий
- 10 037915 физиологический уровень рН раствора; (b) глюкозу; (с) осмотически активное вещество, поддерживающее физиологическую осмолярность раствора; (d) источник кальция и (е) источник магния. В некоторых вариантах осуществления буфер включает ацетатный и/или цитратный буфер. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит глюкозу в количестве по меньшей мере 0,5 мМ, по меньшей мере 1 мМ, по меньшей мере 2 мМ, по меньшей мере 2,5 мМ, по меньшей мере 3 мМ, по меньшей мере 4 мМ, по меньшей мере 5 мМ, по меньшей мере 6 мМ, по меньшей мере 7 мМ, по меньшей мере 7,5 мМ, по меньшей мере 8 мМ, по меньшей мере 9 мМ, по меньшей мере 10 мМ, по меньшей мере 15 мМ, по меньшей мере 16 мМ, по меньшей мере 20 мМ, по меньшей мере 25 мМ, по меньшей мере 30 мМ, по меньшей мере 40 мМ или по меньшей мере 50 мМ. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит декстрозу в количестве по меньшей мере 0,5 мМ, по меньшей мере 1 мМ, по меньшей мере 2 мМ, по меньшей мере 2,5 мМ, по меньшей мере 3 мМ, по меньшей мере 5 мМ, по меньшей мере 6 мМ, по меньшей мере 7 мМ, по меньшей мере 7,5 мМ, по меньшей мере 8 мМ, по меньшей мере 9 мМ, по меньшей мере 10 мМ, по меньшей мере 15 мМ, по меньшей мере 16 мМ, по меньшей мере 20 мМ, по меньшей мере 25 мМ, по меньшей мере 30 мМ, по меньшей мере 40 мМ или по меньшей мере 50 мМ. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит не более 0,5 мМ глюкозы, не более 1 мМ, не более 2 мМ, не более 2,5 мМ, не более 3 мМ, не более 4 мМ, не более 5 мМ, не более 6 мМ, не более 7 мМ, не более 7,5 мМ, не более 8 мМ, не более 9 мМ, не более 10 мМ, не более 15 мМ, не более 17 мМ, не более 20 мМ, не более 25 мМ, не более 30 мМ, не более 40 мМ, или не более 50 мМ глюкозы. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит не более 0,5 мМ декстрозы, не более 1 мМ, не более 2 мМ, не более 2,5 мМ, не более 3 мМ, не более 4 мМ, не более 5 мМ, не более 6 мМ, не более 7 мМ, не более 7,5 мМ, не более 8 мМ, не более 9 мМ, не более 10 мМ, не более 15 мМ, не более 17 мМ, не более 20 мМ, не более 25 мМ, не более 30 мМ, не более 40 мМ или не более 50 мМ декстрозы.
В некоторых вариантах осуществления в растворах по изобретению концентрация глюкозы или декстрозы составляет от 0,5 до 150 мМ, от 0,5 до 50 мМ, от 2,5 до 50 мМ, от 5 до 50 мМ, от 10 до 50 мМ, от 0,5 до 25 мМ, от 2,5 до 25 мМ, от 5 до 25 мМ, от 10 до 25 мМ или от 10 до 20 мМ. В некоторых вариантах осуществления в растворах по изобретению концентрация глюкозы или декстрозы составляет приблизительно 0,5 мМ, приблизительно 1 мМ, приблизительно 2 мМ, приблизительно 2,5 мМ, приблизительно 3 мМ, приблизительно 4 мМ, приблизительно 5 мМ, приблизительно 6 мМ, приблизительно 7 мМ, 7,5 мМ, приблизительно 8 мМ, приблизительно 9 мМ, приблизительно 10 мМ, приблизительно 11 мМ, приблизительно 12 мМ, приблизительно 12,5 мМ, приблизительно 13 мМ, приблизительно 14 мМ, приблизительно 15 мМ, приблизительно 16 мМ, приблизительно 17 мМ, приблизительно 18 мМ, приблизительно 19 мМ, приблизительно 20 мМ, приблизительно 22,5 мМ, приблизительно 25 мМ, приблизительно 30 мМ, приблизительно 35 мМ, приблизительно 40 мМ, приблизительно 45 мМ или приблизительно 50 мМ.
В некоторых вариантах осуществления представленные в изобретении растворы включают источник двухвалентных катионов. Подходящие двухвалентные катионы включают без ограничения, например, катионы Са2+, Mg2+, Zn2+, Fe2+, Mn2+, Cr2+, Cu2+, Ba2+ и Sr2+. В некоторых вариантах осуществления источник двухвалентных катионов включает источник кальция. В некоторых вариантах осуществления источник двухвалентных катионов включает источник магния. В некоторых вариантах осуществления источник двухвалентных катионов включает источник двух или нескольких разных двухвалентных катионов, например, источник кальция и источник магния.
В некоторых вариантах осуществления растворы по изобретению представляют собой раствор, содержащий источник кальция, например, источник ионов кальция. В некоторых вариантах осуществления источник кальция включает фармацевтически приемлемую соль кальция. В некоторых вариантах осуществления растворы по изобретению представляют собой раствор, содержащий источник магния, например, источник ионов магния. В некоторых вариантах осуществления источник магния включает фармацевтически приемлемую соль магния.
Термин фармацевтически приемлемая соль, используемый в изобретении, относится к соли, которая считается подходящей для введения субъекту-человеку. В некоторых вариантах осуществления фармацевтически приемлемая соль представляет собой соль, образованную с кислотой, выбранной из группы, включающей уксусную кислоту, аскорбиновую кислоту, лимонную кислоту, соляную кислоту, малеиновую кислоту, щавелевую кислоту, фосфорную кислоту, стеариновую кислоту, янтарную кислоту и серную кислоту. В некоторых вариантах осуществления фармацевтически приемлемый источник двухвалентных катионов выбран из группы, состоящей из солей кальция и/или магния, образованных с кислотой, выбранной из группы, включающей уксусную кислоту, аскорбиновую кислоту, лимонную кислоту, соляную кислоту, малеиновую кислоту, щавелевую кислоту, фосфорную кислоту, стеариновую кислоту, янтарную кислоту и серную кислоту. Так, например, фармацевтически приемлемая соль кальция в этой группе вариантов осуществления будет включать ацетат кальция, аскорбат кальция, цитрат кальция, хлорид кальция, малеат кальция, оксалат кальция, фосфат кальция, стеарат кальция, сукцинат кальция и сульфат кальция. Специалистам в данной области будет очевидно, что в таких вариантах осуществления, где раствор включает две или несколько фармацевтически приемлемых солей (например, соли кальция, магния и калия), некоторые или все соли могут быть образованы с одной и той же кисло- 11 037915 той (например, хлорид кальция, хлорид магния и хлорид калия), или две или несколько солей могут быть образованы с разными кислотами (например, хлорид кальция, хлорид магния, ацетат калия и хлорид кальция, цитрат магния и малеат калия и т.д.).
В некоторых вариантах осуществления фармацевтически приемлемая соль, например фармацевтически приемлемая соль кальция или магния, представляет собой соль кислоты, выбранной из группы, состоящей из следующего: L-гидрокси-2-нафтойная кислота, 2,2-дихлоруксусная кислота, 2гидроксиэтансульфоновая кислота, 2-оксоглутаровая кислота, 4-ацетамидбензойная кислота, 4аминосалициловая кислота, уксусная кислота, адипиновая кислота, аскорбиновая кислота (L), аспарагиновая кислота (L), бензолсульфоновая кислота, бензойная кислота, камфорная кислота (+), камфор-10сульфоновый кислота (+), каприновая кислота (декановая кислота), капроновая кислота (капроновая кислота), каприловая кислота (октановая кислота), угольная кислота, коричная кислота, лимонная кислота, цикламовая кислота, додецилсерная кислота, этан-1,2-дисульфокислота кислоты, этансульфоновая кислота, муравьиная кислота, фумаровая кислота, галактаровая кислота, гентизиновая кислота, глюкогептоновая кислота (D), глюконовая кислота (D), глюкуроновая кислота (D), глутаминовая кислота, глутаровая кислота, glycerophosphoric кислоты, гликолевая кислота, гиппуровая кислота, бромистоводородная кислота, хлористоводородная кислота, изомасляная кислота, молочная кислота (DL), лактобионовая кислота, лауриновая кислота, малеиновая кислота, яблочная кислота (-L), малоновая кислота, миндальная кислота (DL), метансульфоновая кислота, нафталин-1,5-дисульфоновая кислота, нафталин-2сульфоновая кислота, никотиновая кислота, азотная кислота, олеиновая кислота, щавелевая кислота, пальмитиновая кислота, памовая кислота, фосфорная кислота, пропионовая кислота, пироглутаминовая кислота (-L), салициловая кислота, себациновая кислота, стеариновая кислота, янтарная кислота, серная кислота, винная кислота (+L), тиоциановая кислота, толуолсульфоновая кислота (р) и ундециленовая кислота. Дополнительные подходящие фармацевтически приемлемые соли будут очевидны специалистам в данной области, и следует понимать, что настоящее изобретение не ограничено в отношении этого перечня.
В некоторых вариантах осуществления общая концентрация двухвалентных катионов в источнике двухвалентных катионов составляет от 0,1 до 20 мМ, например, приблизительно от 0,5 до 10 мМ, от 0,5 до 5 мМ, от 1 до 10 мМ или от 2 до 10 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация источника двухвалентных катионов составляет приблизительно 0,2 мМ, приблизительно 0,3 мМ, приблизительно 0,4 мМ, приблизительно 0,5 мМ, приблизительно 0,6 мМ, приблизительно 0,7 мМ, приблизительно 0,8 мМ, приблизительно 0,9 мМ, приблизительно 1 мМ, приблизительно 2 мМ, приблизительно 3 мМ, приблизительно 4 мМ или приблизительно 5 мМ. В некоторых вариантах осуществления источник двухвалентных катионов включает источник кальция и/или магния.
В некоторых вариантах осуществления растворов по изобретению источник кальция включает хлорид кальция. В некоторых вариантах осуществления источник кальция включает дигидрат хлорида кальция. В некоторых вариантах осуществления источник магния включает хлорид магния. В некоторых вариантах осуществления источник магния включает гексагидрат хлорида магния. В некоторых вариантах осуществления растворов по изобретению концентрация источника кальция составляет от 0,1 до 1,2 мМ, от 0,25 до 0,75 мМ, от 0,4 до 0,65 мМ или от 0,5 до 0,7 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация источника кальция составляет приблизительно 0,2 мМ, приблизительно 0,3 мМ, приблизительно 0,4 мМ, приблизительно 0,5 мМ, приблизительно 0,6 мМ, приблизительно 0,7 мМ, приблизительно 0,8 мМ, приблизительно 0,9 мМ, приблизительно 1 мМ, приблизительно 1,1 мМ или приблизительно 1,2 мМ. В некоторых вариантах осуществления растворов по изобретению концентрация источника магния составляет от 0,05 до 5 мМ, от 0,1 до 0,5 мМ, от 0,25 до 2,5 мМ, от 0,1 до 1 мМ или от 0,1 до 0,3 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация источника магния составляет приблизительно 0,05 мМ, приблизительно 0,1 мМ, приблизительно 0,2 мМ, приблизительно 0,3 мМ, приблизительно 0,4 мМ, приблизительно 0,5 мМ, приблизительно 0,6 мМ, приблизительно 0,7 мМ, приблизительно 0,8 мМ, приблизительно 0,9 мМ, приблизительно 1 мМ, приблизительно 2 мМ, приблизительно 3 мМ, приблизительно 4 мМ или приблизительно 5 мМ.
В некоторых вариантах осуществления растворы по изобретению содержат буферное вещество. Термин буферный вещество используется в изобретении взаимозаменяемо с термином буфер и относится к веществу, которое может поддерживать относительно стабильный уровень рН раствора путем нейтрализации добавленной кислоты или основания. Обычно буфер включает пару сопряженных слабых кислот и щелочей, т.е. или слабую кислоту и ее сопряженное основание или слабое основание и его сопряженную кислоту.
В некоторых вариантах осуществления буфер в составе растворов по изобретению представляет собой цитратный или ацетатный буфер, например, представлен в виде соли цитрата или соли ацетата. В некоторых вариантах осуществления растворов по изобретению цитратный буфер представлен в виде цитрата натрия. В некоторых вариантах осуществления концентрация цитрата или ацетата составляет от 0,1 до 5 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация цитрата или ацетата составляет от 0,5 до 2 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация цитрата или ацетата составляет приблизительно 0,05, 0,06, 0,07, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 мМ.
- 12 037915
В некоторых вариантах осуществления раствор дополнительно содержит калиевую соль, предпочтительно фармацевтически приемлемую соль калия. В некоторых вариантах осуществления соль калия представляет собой хлорид калия. В некоторых вариантах осуществления концентрация KCl составляет от 0,2 до 5 мМ или от 1 до 2,5 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация KCl составляет приблизительно 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,9, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 4 или 5 мМ.
В некоторых вариантах осуществления раствор дополнительно содержит вязкоупругий полимер. Без связи с конкретной теорией, предполагается, что вязкоупругий полимер защищает клетки и ткани от усилия сдвига, и его добавление повышает жизнеспособность клетки и тканей, эффективность повторного культивирования и репопулирующую способность после хранения их в растворе по изобретению и/или после введения субъекту, например, способами введения, включающими катетеризацию. Вязкоэластичные полимеры хорошо известны специалистам в данной области, и примеры подходящих вязкоупругих полимеров включают без ограничения следующее: гиалуроновая кислота (например, Healon Endocoat® (Abbott), Hyasis® (Novozymes) и Pro-Vise® (Alcon)), альгинат (включая альгинат натрия), поли(этиленгликоль) (ПЭГ), также известный как поли(этиленоксид) (ПЭО), полиакриламид, поли(виниловый спирт) (ПВС), гидроксиэтилцеллюлоза (ГЭЦ), поли(N-гидроксиэтил-акриламид) (РНЕА), гидроксипропилметилцеллюлоза (ГПМЦ), гидроксиэтилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза, поли(2гидроксиэтилметакрилат) (рНЕМА), полиметакриловая кислота(карбомер), поли(винилпирролидон) (ПВП), поли(акриловая кислота) (ПАК), декстран, хондроитин сульфат, поли(2-метакрилоилоксиэтил фосфорилхолин) (РМРС) и триблок-сополимеры, например, полоксамер 188 (Pluronic® F68), полоксамер Р108 (Pluronic® F38), полоксамеры Р184 (Pluronic® L64), полоксамеры Р401, Р402 полоксамер, полоксамеры Р407 (Pluronic® F127) и полоксамеры Р408 (Pluronic® F108), гидроксипропил гуар поливинилпирролидон, сополимер полиоксиэтилен-полиоксипропилен (полоксамер), или их соли, или их смеси, включающие (без ограничения) смеси гиалуроновой кислоты и альгината, или их фармацевтически приемлемую соль. В некоторых вариантах осуществления полимер представляет собой неионогенный полимер. В некоторых вариантах осуществления полимер представляет собой полиэфир. В некоторых вариантах осуществления полимер представляет собой полиалкилэфир. В некоторых вариантах осуществления полимер представляет собой сополимер из полиалкилэфира и другого полимера (например, полиалкилэфир). В некоторых вариантах осуществления полимер представляет собой полоксамеры (также известные как полоксимеры). Полоксимеры представляют собой неионные триблок-сополимеры, состоящие из центральной гидрофобной цепи полиоксипропилена (ПОП) (также называемого полипропиленгликолем) в окружении двух гидрофильных цепей полиоксиэтилена (ПОЭ) (также называемого полиэтиленгликолем (ПЭГ)). Специалистам в данной области известны дополнительные подходящие вязкоупругие полимеры для использования в описанных здесь растворах, согласно настоящему изобретению, и следует понимать, что настоящее изобретение не ограничено в этом отношении. Специалистам в данной области следует понимать, что количество вязкоупругого полимера, подходящего для использования в растворах и композициях по изобретению, будет зависеть от свойств вязкоупругого полимера, например, среди прочего, от молекулярной массы полимера. В некоторых вариантах осуществления в растворах и композициях по изобретению используется вязкоупругий полимер в концентрации от 0,001 до 5% вес/объем В некоторых вариантах осуществления вязкоупругий полимер используется в концентрации, обеспечивающей вязкость растворов или композиций по изобретению, которая аналогична вязкости того же раствора или композиции, содержащей от 0,01 до 0,05% гиалуроновой кислоты, например, аналогична вязкости того же раствора или композиции, содержащей от 0,01 до 0,05% Healon Endocoat®.
В некоторых вариантах осуществления содержащая вязкоупругий полимер транспортная среда имеет вязкость при нулевом сдвиге, превышающую 1000, 10000, 50000 или даже 100000 Па-с, предпочтительно имеет вязкость при нулевом сдвиге в диапазоне от 1000 до 200000 Па-с, и более предпочтительно в диапазоне от 1000 до 20000 Па-с. В некоторых вариантах осуществления вязкоупругий полимер увеличивает вязкость при нулевом сдвиге в получаемой транспортной среде на 5, 10, 15, 25 или даже 40% по сравнению с транспортной средой без вязкоупругого полимера.
В таких вариантах осуществления, где раствор вводят субъекту, например, в виде композиции, содержащей клетки или ткань в растворе, используемый в настоящем изобретении полимер является биосовместимым и/или биологически разлагаемым.
В некоторых вариантах осуществления полимер представляет собой гиалуроновую кислоту, или ее соль или сольват. В некоторых вариантах осуществления полимер представляет собой гиалуронат натрия. В некоторых вариантах полимер присутствует в концентрации, эффективной для уменьшения воздействия усилия сдвига на клетки в растворе. В некоторых вариантах осуществления концентрация полимера составляет от 0,01 до 5% вес/объем В некоторых вариантах осуществления концентрация полимера составляет приблизительно от 0,01 до 0,05% вес/объем В некоторых вариантах осуществления полимер представляет собой Healon Endocoat®.
В некоторых вариантах осуществления раствор не содержит карбонатный буфер. В некоторых вариантах осуществления раствор не содержит глутатион или дисульфид глутатиона (GSSG). В некоторых вариантах осуществления раствор не содержит органический цвиттерионный буфер.
- 13 037915
В объем настоящего изобретения входят растворы, сочетающие два, или несколько или любое количество показателей (например, уровень рН, осмолярность, растворенные вещества (буфер, глюкоза, осмотически активное вещество, магний, кальций, калий, полимер), концентрация и т.д.). Например, в объем изобретения входят растворы, содержащие буферное вещество, глюкозу и осмотически активное вещество, с добавлением или без добавления полимера, содержащие калий растворы и растворы, не содержащие калий, а также растворы, содержащие любую комбинацию из растворенных веществ в любой концентрации, предусмотренной для соответствующего растворенного вещества. Также следует понимать, что к настоящему изобретению относятся растворы, содержащие перечисленные растворенные вещества, а также растворы, по существу содержащие или состоящих из перечисленных растворенных веществ и растворителя, например, воды. Эти варианты не указаны в изобретении в целях краткости.
Например, в некоторых вариантах осуществления растворов по изобретению такой раствор содержит или состоит по существу из хлорида кальция, хлорида магния, цитрата натрия, хлорида натрия и глюкозы, например, D-глюкозы, в воде. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит или состоит по существу из хлорида кальция, хлорида магния, цитрата натрия, хлорида натрия, глюкозы, например, D-глюкозы, и хлорида калия, в воде. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит или состоит по существу приблизительно из 0,7 мМ CaCl (хлорид кальция), приблизительно 0,03 мМ MgCl (хлорид магния), приблизительно 1 мМ цитрата натрия, приблизительно 16 мМ декстрозы и приблизительно 145 мМ NaCl, в воде. В некоторых вариантах осуществления раствор дополнительно содержит приблизительно 2 мМ KCl. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит или состоит по существу приблизительно из 0,7 мМ CaCl (хлорид кальция), приблизительно 0,03 мМ MgCl (хлорид магния), приблизительно 1 мМ цитрата натрия, приблизительно 16 мМ декстрозы, приблизительно 145 мМ NaCl и приблизительно 2 мМ KCl, в воде. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит или состоит по существу приблизительно из 0,7 мМ CaCl (хлорид кальция), приблизительно 0,3 мМ MgCl (хлорид магния), приблизительно 1 мМ цитрата натрия, приблизительно 16 мМ декстрозы, приблизительно 145 мМ NaCl и приблизительно 2 мМ KCl, в воде. В некоторых вариантах осуществления раствор дополнительно включает вязкоупругий полимер. В некоторых вариантах осуществления полимер представляет собой гиалуроновую кислоту, или ее соль или сольват. В некоторых вариантах осуществления полимер представляет собой гиалуронат натрия. В некоторых вариантах полимер присутствует в концентрации, эффективной для уменьшения воздействия напряжения сдвига на клетки в растворе. В некоторых вариантах осуществления концентрация полимера составляет от 0,01 до 5% вес/объем В некоторых вариантах осуществления концентрация полимера составляет приблизительно от 0,01 до 0,05% вес/объем В некоторых вариантах осуществления растворов по изобретению такой раствор содержит или состоит по существу из хлорида кальция, хлорида магния, цитрата натрия, хлорида натрия, глюкозы, например, D-глюкозы, и вязкоупругого полимера, например гиалуроновой кислоты, или ее соли или сольвата, в воде. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит или состоит по существу из хлорида кальция, хлорида магния, цитрата натрия, хлорида натрия, глюкозы, например, D-глюкозы, хлорида калия и вязкоупругого полимера, например, гиалуроновой кислоты, или ее соли или сольвата, в воде. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит или состоит по существу приблизительно из 0,7 мМ CaCl (хлорид кальция), приблизительно 0,03 мМ MgCl (хлорид магния), приблизительно 1 мМ цитрата натрия, приблизительно 16 мМ декстрозы, приблизительно 145 мм NaCl и вязкоупругого полимера, например, гиалуроновой кислоты, или ее соли или сольвата в количестве приблизительно от 0,005 до 5% вес/объем, в воде. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит или состоит по существу приблизительно из 0,7 мМ CaCl (хлорид кальция), приблизительно 0,03 мМ MgCl (хлорид магния), приблизительно 1 мМ цитрата натрия, приблизительно 16 мМ декстрозы, приблизительно 145 мм NaCl, приблизительно 2 мМ KCl и вязкоупругого полимера, например, из гиалуроновой кислоты, или ее соли или сольвата в количестве приблизительно от 0,005 до 5% вес/объем, в воде. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит или состоит по существу приблизительно из 0,85% NaCl, 0,015% KCl, приблизительно 0,01% дигидрата CaCl (дигидрат хлорида кальция), приблизительно 0,006% MgCl гексагидрата (гексагидрат хлорида магния), приблизительно 0,035% дигидрата цитрата натрия и приблизительно 0,29% декстрозы в воде, и необязательно содержит приблизительно от 0,01 до 5% вес/объем вязкоупругого полимера, например, гиалуроновой кислоты, или ее соли или сольвата, например, такого как Healon Endocoat® в количестве от 0,01 до 0,05%. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит или состоит по существу из NaCl в количестве приблизительно от 0,68 до 1,02%, приблизительно от 0,008 до 0,012% дигидрата СаС1 (дигидрат хлорида кальция), приблизительно от 0,0048 до 0,0072% MgCl гексагидрата (гексагидрат хлорида магния), приблизительно от 0,028 до 0,042% дигидрата цитрата натрия, и приблизительно от 0,23 до 0,35% декстрозы в воде, и необязательно содержит вязкоупругий полимер в количестве приблизительно от 0,01 до 5% вес/объем, например, гиалуроновую кислоту, или ее соль или сольват, такой как Healon Endocoat® в количестве от 0,01 до 0,05%. В некоторых вариантах осуществления раствор содержит или состоит по существу приблизительно из NaCl в количестве от 0,68 до 1,02%, приблизительно от 0,012 до 0,018% KCl, приблизительно от 0,008 до 0,012% дигидрата CaCl (дигидрата хлорида кальция), приблизительно от 0,0048 до 0,0072% гексагидрата MgCl (гексагидрат хлорида маг- 14 037915 ния), приблизительно от 0,028 до 0,042% дигидрата цитрата натрия и приблизительно от 0,23 до 0,35% декстрозы в воде, и необязательно содержит вязкоупругий полимер в количестве приблизительно от 0,01 до 5% вес/объем, например гиалуроновую кислоту, или ее соль или сольват, такой как Healon Endocoat® в количестве от 0,01 до 0,05%.
Клеточные и тканевые композиции
В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к композициям, содержащим популяции клеток или ткань в растворе по изобретению. В некоторых вариантах осуществления популяция клеток подходит для трансплантации субъекту. В некоторых вариантах осуществления композиции по изобретению изготовлены для введения субъекту, например, для введения посредством инъекции или орошения. Композиции по изобретению могут содержать популяцию клеток или ткань в растворе по изобретению, например, GS2, или по отдельности, или в комбинации с одним или несколькими дополнительными соединениями или веществами, например, с антиоксидантами, бактериостатическими веществами или с фармацевтически активным веществом. Описанные в качестве примера фармацевтические композиции содержат клетки или ткани в растворе GS2, как описано в примере 1 настоящего изобретения.
В качестве примера, клеточные или тканевые композиции в растворах по изобретению могут быть изготовлены таким образом, чтобы быть пригодными для применения в лечении пациента-человека, например, быть апирогенными или по существу апирогенными, стерильными, не содержать патогенов и иметь физиологический уровень рН и осмотического давления. В некоторых вариантах осуществления композиции по изобретению созданы для инъекций с определенной локализацией, например, в случае офтальмологических композиций для лечения заболеваний или нарушений сетчатки, для инъекций в стекловидное тело для доставки в область повреждения сетчатки или сосудистой оболочки глаза.
Композиции, представленные в настоящем изобретении, могут включать дополнительные терапевтические вещества, например иммунодепрессант, проангиогенное вещество, или питательные вещества или факторы роста, способствующие выживанию и/или имплантации клеток из композиции.
Объем композиции и количество клеток в композиции зависит от конкретного вида применения. Обычно для такого применения, как трансплантация клеток, желательно уменьшить вводимый объем в максимально возможной степени. Соответственно, может создавать композицию таким образом, чтобы достичь минимального доставляемого объема. Можно использовать любую концентрацию клеток для инъекции, которя является эффективной и нетоксичной. Например, в некоторых вариантах осуществления рассмотрены композиции клеток для трансплантации, которые содержат по меньшей мере приблизительно 104 клеток/мл в растворе по изобретению, например, в растворе GS2. В некоторых вариантах осуществления в клеточную композицию для трансплантации входит доза клеток по меньшей мере приблизительно 103 клеток/мл, по меньшей мере приблизительно 104, по меньшей мере приблизительно 105, по меньшей мере приблизительно 106, по меньшей мере приблизительно 107, по меньшей мере приблизительно 108, по меньшей мере приблизительно 109, по меньшей мере приблизительно 1010 клеток/мл.
В некоторых вариантах осуществления число клеток и/или концентрацию клеток в композиции по изобретению можно определять путем подсчета жизнеспособных клеток и исключения нежизнеспособных клеток. Например, нежизнеспособные клетки можно выявлять по неспособности к витальному окрашиванию (например, красителем трипановый синий) или с помощью функционального анализа (например, по способности к адгезии с культуральным субстратом, по способности фагоцитозу и т.д.). Дополнительно, число клеток или концентрацию клеток желательного типа можно определять путем подсчета клеток, которые экспрессируют один или несколько клеточных маркеров, характерных для этого клеточного типа, и/или путем исключения клеток, которые экспрессируют один или несколько маркеров, показательных для типа клеток, который не является желательным.
В некоторых вариантах осуществления рассмотрена клеточная композиция по изобретению, которая содержит по меньшей мере приблизительно 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000 или 9000 клеток. В некоторых вариантах осуществления клеточная композиция может содержать по меньшей мере приблизительно 1x104 клеток, 2x104, 3х104, 4x104, 5х104, 6х104, 7x104, 8х104, 9х104, 1x105, 2x105, 3x105, 4x105, 5x105, 6x105, 7x105, 8x105, 9x105, 1x106, 2x106, 3x106, 4x106, 5x106, 6x106, 7x106, 8x106, 9x106,
1x107, 2x107, 3x107, 4x107, 5x107, 6x107, 7x107, 8x107, 9x107, 1x108, 2x108, 3x108, 4x108, 5x108, 6x108,
7x108, 8x108, 9x108, 1x109, 2x109, 3x109, 4x109, 5x109, 6x109, 7x109, 8x109, 9x109, 1x1010, 2x1010, 3x1010, 4x1010, 5x1010, 6x1010, 7x1010, 8x1010 или 9x1010 клеток. В некоторых вариантах осуществленияклеточная композиция может содержать по меньшей мере приблизительно от 1x102 до 1x103, от 1x102 до 1x104, от 1x104 до 1x105 или от 1x103 до 1x106 клеток. В некоторых вариантах осуществления клеточная композиция может содержать по меньшей мере приблизительно 10000, 20000, 25000, 50000, 75000, 100000, 125000, 150000, 175000, 180000, 185000, 190000 или 200000 клеток, например, клеточная композиция может содержать по меньшей мере приблизительно от 20000 до 200000 клеток в объеме приблизительно от 50 до 200 мкл раствора по изобретению, например в растворе GS2.
В некоторых вариантах осуществления популяция клеток подходит для трансплантации в глаз субъекта. В некоторых вариантах осуществления популяция клеток, подходящих для трансплантации в глаз субъекта, включает клетки пигментного эпителия сетчатки (ПЭС), клетки-предшественники ПЭС,
- 15 037915 пигментированные эпителиальные клетки радужной оболочки (клетки IPE) и другие связанные со зрением нервные клетки, такие как связывающие нейроны (например, нейроны реле внутреннего ядерного слоя (INL)) и амакринные клетки, клетки сетчатки, палочки, колбочки и клетки роговицы, нервные клетки, фоторецепторные клетки и мезенхимальные клетки, например, мезенхимальные стволовые клетки (МСК).
В некоторых вариантах осуществления композиция по изобретению содержит популяцию клеток ПЭС в растворе по изобретению, например, в среде GS2, описанной в примере 1. Подходящие клетки ПЭС могут дифференцироваться из плюрипотентных стволовых клеток, таких как эмбриональные стволовые клетки человека, или из индуцированных плюрипотентных клеток (iPS), и могут иметь молекулярные отличия от эмбриональных стволовых клеток, клеток ПЭС, полученных от взрослых и клеток ПЭС фетального происхождения. В некоторых вариантах осуществления используются клетки ПЭС, полученные от взрослых и клетки ПЭС фетального происхождения.
В некоторых вариантах осуществления, в случае использования клеток ПЭС, полученных из эмбриональных стволовых клеток (ЭС клетки) композиция не содержит обнаруживаемое количество остаточных ЭС клеток, то есть, композиции по изобретению не несут неприемлемый риск загрязнения культур и композиций клеток ПЭС.
В некоторых вариантах осуществления композиция, содержащая популяцию подходящих для трансплантации в глаз субъекта клеток, подходит для инъекции в глаз субъекта. В некоторых вариантах осуществления такую композицию можно применять для лечения дегенеративных заболеваний или патологий сетчатки, включающих без ограничения отслойку сетчатки, дисплазию сетчатки, ангиоидные полосы, миопическую макулярную дегенерацию или атрофию сетчатки, или для лечения некоторых связанных с влиянием на зрение болезней, которые приводят к повреждению фоторецепторов и слепоте, таких как хороидеремия, диабетическая ретинопатия, макулярная дегенерация (например, связанная с возрастом макулярная дегенерация), пигментный ретинит и болезнь Штаргардта (fundus flavimaculatus).
Клетки ПЭС могут представлять собой стабильные, терминально дифференцированные клетки ПЭС, которые не де-дифференцируются в клетки, не относящиеся к типу клеток ПЭС. Описанные в изобретении клетки ПЭС могут представлять собой функциональные клетки ПЭС, отличающиеся возможностью интеграции в сетчатку при корнеальном, субретинальном или другом пути введения в организм человека или животного.
Клетки ПЭС могут экспрессировать маркеры клеток ПЭС. Например, уровень экспрессии таких маркеров, как RPE65, Рах2, РАХ6, тирозиназы, бестрофина, PEDF, CRALBP, Otx2 и/или MITF, может быть эквивалентен их уровням экспрессии в природных клетках ПЭС. Уровень зрелости клеток ПЭС можно оценивать путем измерения экспрессии по меньшей мере одного из маркеров Рах2, РАХ6 и тирозиназы, или их соответствующих уровней экспрессии.
В некоторых вариантах осуществления описанные в изобретении клетки ПЭС, содержащиеся в композиции по изобретению, можно идентифицировать и оценивать по степени пигментации клетки. Изменения пигментации можно контролировать по плотности, при которой клетки ПЭС культивируются и сохраняются, и продолжительности содержания клеток ПЭС в культуре. Дифференцированные клетки ПЭС, которые быстро делятся, имеют более светлую пигментацию. В противоположность этому, более медленно делящиеся или не делящиеся клетки ПЭС принимают свою характерную полигональную или шестиугольную форму и увеличивают уровень пигментации путем накопления меланина и липофусцина. Например, в культуре клеток ПЭС в состоянии покоя (например, из-за конфлуэнтности) обычно с течением времени увеличивается уровень пигментации. Таким образом, накопление пигмента служит индикатором дифференциации клеток ПЭС, и увеличенная пигментация, связанная с плотностью клеток, служит показателем зрелости ПЭС. Например, зрелые клетки ПЭС можно пересевать при более низкой плотности, таким образом пигментация уменьшается. В этом плане зрелые клетки ПЭС можно культивировать для получения менее зрелых клеток ПЭС. Такие как ПЭС с экспрессией маркеров дифференциации ПЭС.
Например, в некоторых вариантах осуществления рассмотрена композиция, которая содержит клетки ПЭС со средним содержание меланина, составляющим менее 8 пг/ на клетку, менее 7 пг/клетку, менее 6 пг/клетку или менее 5 пг/клетку, например, среднее содержание меланина находится в диапазоне от 0,1 до 8 пг/клетку, от 0,1 до 7 пг/клетку, от 0,1 до 6 пг/клетку, от 0,1 до 5 пг/клетку, от 0,1 до 4 пг/клетку, от 0,1 до 3 пг/клетку, от 0,1 до 2 пг/клетку, от 0,1 до 1 пг/клетку, от 1 до 8 пг/клетку, от 1 до 7 пг/клетку, от 1 до 6 пг/клетку, от 1 до 5 пг/клетку, от 1 до 4 пг/клетку, от 1 до 3 пг/клетку, от 1 до 2 пг/клетку, от 2 до 6 пг/клетку, от 3 до 5 пг/клетку или от 4 до 5 пг/клетку, например, от 4,2 до 4,8 пг/клетку или от 0,1 до 5 пг/клетку. В другом примере среднее содержание меланина может быть меньше, чем 5 пг/клетку, например, быть в диапазоне от 0,1 до 5 пг/клетку, от 0,2 до 5 пг/клетку, от 0,5 до 5 пг/клетку, от 1 до 5 пг/клетку, от 2 до 5 пг/клетку, от 3 до 5 пг/клетку, от 4 до 5 пг/клетку или от 4,5 до 5 пг/клетку.
В некоторых вариантах осуществления рассмотрена композиция, содержащая клетки ПЭС в растворе по изобретению, например GS2, и в указанной композиции клетки ПЭС сохраняют свой фенотип после трансплантации клеток ПЭС субъекту, например, после введения композиции в глаз субъекта.
- 16 037915
Клетки ПЭС могут сохранять свой фенотип на протяжении всей жизни реципиента после трансплантации. Так, например, клетки ПЭС могут сохранять свой фенотип на протяжении по меньшей мере приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 дней после трансплантации. Кроме того, клетки ПЭС может сохранять свой фенотип после трансплантации на протяжении по меньшей мере приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 недель. Клетки ПЭС могут сохранять свой фенотип после трансплантации в течение по меньшей мере приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 месяцев. Клетки ПЭС могут сохранять свой фенотип после трансплантации на протяжении по меньшей мере приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 лет или дольше.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к композиции клеток ПЭС в растворе по изобретению, и указанная композиция предназначена для инъекции в глаз субъекта. В таком варианте осуществления композиция представляет собой фармацевтически приемлемую офтальмологическую композицию для внутриглазной инъекции. Например, если композицию вводят путем инъекции в стекловидное тело, при создании этой композиции можно предусмотреть введение минимального объема. Можно осуществлять инъекцию при любой концентрации, которая является эффективной и нетоксичной. Композиция клеток ПЭС для лечения пациента может быть изготовлена с дозой клеток по меньшей мере приблизительно 104 клеток/мл раствора по изобретению. Доза клеток ПЭС в композиции для лечения пациента составляет по меньшей мере приблизительно 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109 или 1010 клеток ПЭС/мл.
Композиции клеток ПЭС, описанные в изобретении, могут содержать по меньшей мере приблизительно 1000 клеток ПЭС, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000 или 9000 клеток ПЭС в растворе по изобретению, например, в растворе GS2, как описано в примере 1. Фармацевтические композиции клеток ПЭС могут содержать по меньшей мере приблизительно 1x104, 2x104, 3x104, 4x104, 5x104, 6x104, 7x104, 8x104, 9x104, 1x105, 2x105, 3x105, 4x105, 5x105, 6x105, 7x105, 8x105, 9x105, 1x106, 2x106, 3x106, 4x106,
5x106, 6x106, 7x106, 8x106, 9x106, 1x107, 2x107, 3x107, 4x107, 5x107, 6x107, 7x107, 8x107, 9x107, 1x108,
2x108, 3x108, 4x108, 5x108, 6x108, 7x108, 8x108, 9x108, 1x109, 2x109, 3x109, 4x109, 5x109, 6x109, 7x109,
8x109, 9x109, 1x1010, 2x1010, 3x1010, 4x1010, 5x1010, 6x1010, 7x1010, 8x1010 или 9x1010 клеток ПЭС. Фармацевтические композиции клеток ПЭС могут содержать по меньшей мере приблизительно от 1x102 до 1x103, от 1x102 до 1x104, от 1x104до 1x105 или от 1x103 до 1x106 клеток. Фармацевтические композиции клеток ПЭС могут содержать по меньшей мере приблизительно 10000, 20000, 25000, 50000, 75000, 100000, 125000, 150000, 175000, 180000, 185000, 190000 или 200000 клеток ПЭС. Например, фармацевтическая композиция клеток ПЭС может содержать по меньшей мере приблизительно от 20000 до 200000 клеток ПЭС в объеме по меньшей мере, приблизительно от 50 до 200 мкл. Кроме того, фармацевтическая композиция клеток ПЭС может содержать приблизительно 50000 клеток ПЭС в объеме 150 мкл, приблизительно 200000 клеток ПЭС в объеме 150 мкл или по меньшей мере приблизительно 180000 клеток ПЭС в объеме по меньшей мере приблизительно 150 мкл.
Клетки ПЭС могут быть получены в виде композиции по изобретению для доставки в фармацевтически приемлемом офтальмологическом носителе таким образом, чтобы композиция сохраняла контакт с поверхностью глаза в течение достаточного периода времени, позволяющего клеткам проникнуть в пораженные участки глаза, такие как передняя камера, задняя камера, стекловидное тело, водянистая влага, стекловидная влага, роговица, радужная оболочка/цилиарное тело, хрусталик, сосудистая оболочка, сетчатка, склеры, супрахориоидальное пространство, конъюнктива, подконъюнктивальное пространство, эписклеральное пространство, интракорнеальное пространство, эпикорнеальное пространство, pars plana, послеоперационные аваскулярные области или макулы.
В некоторых вариантах осуществления представлена клеточная композиция по изобретению, в которой клетки ПЭС сгруппированы в клеточные пласты. Например, клеточный пласт, содержащий клетки ПЭС, может быть получен путем культивирования клеток ПЭС на субстрате, с которого можно, например, с помощью термочувствительного полимера, снять пласт интактных клеток. Например, на поверхности с нанесенным термочувствительным поли(N-изопропилакриламидом) (PNIPAAm) происходит адгезия и пролиферация клеток при температуре культивирования. Затем при температуре сдвига характеристики поверхности изменяются, что позволяет отделить пласт культивируемых клеток (например, путем охлаждения до температуры ниже нижней критической температуры раствора (НКТР) (см. публикации da Silva et al., Trends Biotechnol. 2007 Dec; 25 (12): 577-83; Hsiue et al., Transplantation. 2006 Feb 15;81(3): 473-6; Ide, T. et al. (2006); Biomaterials 27, 607-614, Sumide, Т. et al. (2005), FASEB J. 20, 392-394; Nishida, K. et al. (2004), Transplantation 77, 379-385 и Nishida, K. et al. (2004), N. Engl. J. Med. 351, 11871196, каждая из которых включена в настоящее изобретение путем ссылки в полном объеме). Клеточный пласт посредством адгезии может прикрепляться к субстрату, подходящему для трансплантации, например, к субстрату, который может растворяться in vivo при пересадке в организм хозяина этого клеточного пласта, например, подготовленного путем культивирования клеток на субстрате, подходящем для трансплантации, или клетки отделяют от другого субстрата (например, термочувствительного полимера) на субстрат, подходящий для трансплантации. В качестве примера, потенциально подходящий для трансплантации субстрат может содержать желатин (см. Hsiue et al, выше). Альтернативные субстраты,
- 17 037915 которые могут подходить для трансплантации, включают матрицы на фибриновой основе и другие. Клеточный пласт можно использовать при производстве лекарственного средства для профилактики или лечения дегенеративного заболевания сетчатки. Пласт клеток ПЭС можно сделать в виде клеточной или тканевой композиции для введения в глаз нуждающегося в этом субъекта, путем контактирования с раствором по изобретению, например, с раствором GS2. В некоторых вариантах осуществления клеточный пласт можно вводить в глаз нуждающегося в этом субъекта с помощью субфовеальной мембранэктомии с трансплантацией пласта клеток ПЭС, или клеточный пласт можно использовать для изготовления лекарственного средства для трансплантации после субфовеальной мембранэктомии.
Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, объем композиции зависит от таких факторов, как способ введения, количество вводимых клеток, возраст и вес пациента, и тип и степень тяжесть заболевания, подлежащего лечению. Так, например, при введении путем инъекций объем фармацевтических композиций клеток ПЭС по изобретению может составлять приблизительно 1 мл, 1,5, 2, 2,5, 3, 4 или 5 мл. Объем может составлять приблизительно 1-2 мл. Так, например, при введении путем инъекций объем фармацевтической композиции клеток ПЭС по изобретению может составлять приблизительно 1 мкл, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 100, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199 или 200 (мкл). Например, объем композиции по изобретению может составлять приблизительно от 10 до 50, от 20 до 50, от 25 до 50 или от 1 до 200 мкл. Объем композиции по изобретению может составлять приблизительно 10, 20, 30, 40, 50, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, или 200 мкл или больше.
В некоторых вариантах осуществления композиция по изобретению может содержать приблизительно 1х103, 2х103, 3х103, 4х103, 5х103, 6х103, 7х103, 8х103, 9х103, 1х104, 2х104, 3х104, 4x104, 5х104, 6х104, 7х104, 8х104 или 9х104 клеток на мкл. Например, в некоторых вариантах осуществления композиция может содержать 2000 клеток ПЭС на мкл, например, 100000 клеток ПЭС на 50 мкл или 18 0000 клеток ПЭС на 90 мкл.
В некоторых вариантах осуществления композицию помещают в холодильник. В некоторых вариантах осуществления композиция хранится в холодильнике при температуре приблизительно от 2 до 8°С.
В некоторых вариантах осуществления композиция способствует выживанию клеток в клеточной популяции при хранении композиции. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере 70% клеток в клеточной популяции сохраняют жизнеспособность после 48 ч хранения композиции при температуре от 2 до 8°С. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере 80% клеток в клеточной популяции клеток являются жизнеспособными после 48 ч хранения композиции при температуре от 2 до 8°С. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере 90% клеток в клеточной популяции являются жизнеспособными после 48 ч хранения композиции при 2-8°С. В некоторых вариантах осуществления композиция способствует сохранению эффективности культивирования клеточной популяции при хранении композиции. В некоторых вариантах осуществления через 48 ч хранения композиции при температуре от 2 до 8°С эффективность культивирования клеточной популяции составляет по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% от ее исходной эффективности культивирования, при этом исходная эффективность культивирования означает эффективность культивирования клеточной популяции в начале периода хранения. В некоторых вариантах осуществления композиция находится внутри контейнера для хранения. В некоторых вариантах осуществления композиция находится в шприце.
В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям клеток и тканей в растворе по изобретению. Такие композиции подходят для введения субъекту. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция состоит по существу из клеток, клеточной популяции или ткани, и раствора по изобретению. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит один или несколько фармацевтически активных ингредиентов, например, консервант, антиоксидант, поглотитель свободных радикалов, иммунодепрессант, проангиогенный фактор, антиангиогенный фактор, гормон роста, или питательное вещество для клетки или субстрат, способствующий росту клеток, их выживаемости и имплантации.
Также в объем настоящего изобретения входят фармацевтические упаковки и/или наборы. Фармацевтические упаковки и/или наборы по изобретению могут включать клеточную или тканевую композицию по изобретению, и контейнер (например, флакон, ампула, бутылка, шприц, и/или охлаждающий пакет или другой подходящий контейнер). В некоторых вариантах осуществления наборы по изобретению могут необязательно дополнительно включать второй контейнер, содержащий раствор, который исполь- 18 037915 зуется для получения композиции для разбавления, промывки и/или разведения клеток или тканей композиции. В некоторых вариантах осуществления содержимое предназначенного для композиции контейнера по изобретению объединяют с содержимым емкости для растворителя, чтобы получить по меньшей мере одну единичную лекарственную форму.
В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к способам получения композиции по изобретению, например, композиции, содержащей популяцию клеток в растворе по изобретению, и указанный способ включает контактирование популяции клеток с раствором. В некоторых вариантах осуществления способ включает контактирование популяции криоконсервированных клеток или осажденных центрифугированием клеток с раствором, и таким образом осуществляют разведение клеток.
Например, в некоторых аспектах настоящего изобретения рассмотрены способы, включающие (а) контактирование популяции клеток с раствором по изобретению, в результате чего создается клеточная композиция. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает (b) хранение клеточной композиции (а) по меньшей мере в течение 4, по меньшей мере 6, по меньшей мере 12, по меньшей мере 18, по меньшей мере 24, по меньшей мере 36, по меньшей мере 48, по меньшей мере 60, по меньшей мере 72 или по меньшей мере в течение 96 ч. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает (с) введение клеточной композиции (а) субъекту после периода хранения (b). В некоторых вариантах осуществления введение (с) включает инъекцию клеток в глаз субъекта. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение жизнеспособности клеток в клеточной композиции (а) после периода хранения (b). В некоторых вариантах осуществления способ включает охлаждение клеточной композиции (а) в течение периода хранения на этапе (b). В некоторых вариантах осуществления охлаждение включает хранение клеточной композиции при температуре от 2 до 8°С. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно содержит транспортировку полученной на этапе (а) композиции в место, отличное от места изготовления композиции, в течение периода хранения (b). В некоторых вариантах осуществления транспортировка включает транспортировку композиции в клинику или операционную, где осуществляется введение (с).
Примеры применений и способов
Описанные в настоящем изобретении растворы можно использовать для различных медицинских применений. Такие применения включают клиническую ирригацию, разведение или создание клеточной композиции, например, после осаждения или криоконсервации клеток, а также создание клеточной композиции, например, для клинического применения, включая без ограничения хранение и транспортировку клеток перед введением субъекту, и/или применение в качестве среды-носителя для введения субъекту клеток, клеточных монослоев или ткани.
Например, в некоторых вариантах осуществления описанный в настоящем изобретении раствор можно использовать в качестве раствора для разведения клеток. Используемое в изобретении понятие разведение клеток относится к механизму контактирования клеточной популяции с раствором, например, с раствором по изобретению, в целях получения раствора, содержащего популяцию клеток. В некоторых вариантах осуществления разведение популяции клеток включает создание раствора, содержащего популяцию клеток из клеточного осадка, например, из осадка клеток, полученных после этапа центрифугирования путем удаления супернатанта. В некоторых вариантах осуществления разведение популяции клеток раствором по изобретению включает разбавление или замену любой среды, в которой клетки были первоначально суспендированы, для получения популяции клеток в среде, которая состоит или по существу состоит из раствора по изобретению. В некоторых таких вариантах осуществления клеточную популяцию, суспендированную в отличной от раствора по изобретению среде, можно промывать один или несколько раз раствором по изобретению. В некоторых вариантах осуществления этап промывки может включать контактирование клетки с раствором по изобретению, осаждение клеток, например, путем центрифугирования, удаление супернатанта и разведение клеточного осадка с помощью раствора. В зависимости от объема используемого раствора и объема клеточного осадка, исходную среду, по существу, можно заменять раствором после однократного цикла промывки - разведения, или после 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 таких циклов.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения растворы по изобретению можно использовать для создания клеточных и тканевых композиций. Используемый в изобретении термин композиция применительно к клеткам и тканям относится к контактированию клетки, популяции клеток или ткани с объемом раствора по изобретению для получения клеточной или тканевой композиции, которая подходит для медицинского применения, например, для введения субъекту. Растворы по изобретению широко совместимы с разными типами клеток, клеточных популяций и тканей, включающих без ограничения взрослые стволовые клетки и клетки-предшественники, дифференцированные клетки, и содержащие такие клетки популяции и ткани. В некоторых вариантах осуществления клетка, клеточная популяция или ткань, находящаяся в композиции с раствором по изобретению, представляет собой терапевтическую клетку, клеточную популяцию или ткань, например, для применения в области регенеративной медицины. Так, например, в некоторых вариантах осуществления клетка, клеточная популяция или ткань, находящаяся в композиции с раствором по изобретению, может включать популяции клеток, которые могут заменять утраченные или дегенеративные клетки у субъекта, или восстанавливать или
- 19 037915 заменять у субъекта ткань с повреждением или дисфункцией. Например, в некоторых вариантах осуществления клетка, клеточная популяция или ткань, находящаяся в композиции с раствором по изобретению, может включать плюрипотентную стволовую или прогениторную клетку, или функционально дифференцированную клетку или популяцию или ткань, которые содержат такие клетки или комбинацию такие клеток. В некоторых вариантах осуществления растворы по изобретению используются для создания композиций таких клеток, как клетки ПЭС, фоторецепторные клетки, мезенхимальные стволовые клетки, гемопоэтические стволовые клетки, нервные или нейрональные стволовые или прогениторные клетки, глиальные стволовые или прогениторные клетки, панкреатические стволовые или прогениторные клетки, бета-клетки, кератиноциты, хондроциты, остеобласты, остеокласты, или для создания композиций с популяцией или тканью, содержащими или состоящими по существу из таких клеток, как например, монослой клеток ПЭС, панкреатический островок или кожный трансплантат. В некоторых вариантах осуществления клеточную композицию в растворе по изобретению можно хранить до момента медицинского применения (например, до введения субъекту), и/или ее можно транспортировать в лечебное учреждение и вводить субъекту, как в соответствии с изобретением, так и только с минимальной обработкой, такой как разбавление композиции до желаемого объема или до желаемой концентрации клеток.
В некоторых вариантах осуществления растворы по изобретению являются полезными для хранения клеток или тканей. Используемый в изобретении термин хранение применительно к клеткам и тканям относится к периоду времени между созданием композиции клетки (клеток) или ткани (тканей) в растворе по изобретению, и к дополнительному этапу обработки или к медицинскому применению клетки (клеток) или ткани (тканей). В отличие от существующих растворов предшествующего уровня, растворы по изобретению способствуют хранению клеток и тканей разных типов, в том числе легко повреждаемых клеток и тканей, таких как клетки ПЭС, фоторецепторные клетки и мезенхимальные стволовые клетки (МСК), в течение длительного периода времени, например по меньшей мере 4 ч по меньшей мере 6, по меньшей мере 8, по меньшей мере 12, по меньшей мере 18, по меньшей мере 24, по меньшей мере 30, по меньшей мере 36, по меньшей мере 48, по меньшей мере 60 ч или по меньшей мере в течение 72 ч при минимальном снижении жизнеспособности клеток, эффективности повторного культивирования или репопуляционной способности. Например, в некоторых вариантах осуществления хранение клетки, клеточной популяции или ткани, например клеток ПЭС, фоторецепторных клеток или МСК в растворе по изобретению в течение периода по меньшей мере 4, по меньшей мере 6, по меньшей мере 8, по меньшей мере 12, по меньшей мере 18, по меньшей мере 24, по меньшей мере 30, по меньшей мере 36, по меньшей мере 48, по меньшей мере 60 или по меньшей мере в течение 72 ч приводит к тому, что показатели жизнеспособности клеток, эффективности повторного культивирования или репопуляционной способности составляют по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% от исходных показателей жизнеспособности клеток, эффективности повторного культивирования или репопуляционной способности в начале периода хранения. В некоторых вариантах осуществления период времени хранения, например период времени между созданием клеточной или тканевой композиции и ее медицинским применением, не превышает 4, 6, 8, 12, 18, 24, 30, 36, 48, 60 или 72 ч. Обычно клеточную или тканевую композицию в растворе по изобретению помещают в холодильник для хранения, например, при температуре в диапазоне от 2 до 8°С. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления клетки и ткани сохраняются в растворе по изобретению при температурах ниже температуры окружающей среды, например, при температуре от 2 до 8°С. Вместе с тем, в некоторых вариантах осуществления рассматривается хранение при более высоких температурах, например при температуре от 8 до 16°С, от 16 до 22°С или при температуре окружающей среды (обычно приблизительно 25°С).
Растворы по изобретению также могут быть использованы для транспортировки клеток, клеточных популяций и тканей после изготовления композиций этих клеток, клеточных популяций и тканей в лечебном учреждении. Растворы по изобретению способствуют выживаемости клеток и во время транспортировки минимизируют метаболический и физический стресс, в том числе усилие сдвига. Транспортировка клеток или тканей обычно осуществляется в пределах срока хранения клеток или тканей, и также в подходящих условиях для хранения, как описано выше. В вариантах осуществления, в которых композиции клеток или тканей в растворе по изобретению перевозятся в условиях охлаждения, например, при температуре ниже температуры окружающей среды, использование мобильного холодильного оборудования является предпочтительным для транспортировки. Такое оборудование включает без ограничения изотермические транспортные или грузовые контейнеры, пакеты с жидким льдом, охлаждающие гели, охлаждающие контейнеры и мобильные устройства для охлаждения. Некоторые примеры подходящих способов транспортировки, контейнеров и устройств для транспортировки с охлаждением описаны более подробно в другом разделе настоящего изобретения, и специалистам в данной области известно о дополнительных подходящих способах, контейнерах и устройствах, относящихся к настоящему изобретению.
В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к способам лечения нуждающегося в этом субъекта путем введения субъекту эффективного количества медицинского раствора или клеточной или тканевой композиции по изобретению. В некоторых вариантах осуществления у субъекта имеется или
- 20 037915 диагностировано заболевание или расстройство, которое можно лечить путем введения клеток, клеточной популяции или ткани, например, в виде клеточной или тканевой композиции по изобретению. В некоторых вариантах осуществления вводимая субъекту композиция включает популяцию клеток, и размер этой популяции эффективен для улучшения по меньшей мере одного симптома заболевания или расстройства у субъекта. В некоторых вариантах осуществления субъект подвергается хирургической операции, и раствор или композиция по изобретению применяется для орошения операционного поля. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает контроль по меньшей мере одного симптома заболевания у субъекта.
Согласно настоящему изобретению понятия лечение, лечить и подвергаться лечению относятся к медицинскому вмешательству, направленному на возвращение в прежнее состояние, облегчение, задержку возникновения или прекращение заболевания или расстройства, или одного или нескольких симптомов этого заболевания или расстройства. В некоторых вариантах осуществления лечение можно проводить после развития одного или нескольких симптомов и/или после диагностики заболевания. В других вариантах осуществления лечение можно проводить при отсутствии симптомов, например, для предотвращения или задержки возникновения симптома, или торможения возникновения или прогрессирования заболевания. Например, можно подвергать восприимчивого человека лечению до появления симптомов (например, с учетом симптомов в анамнезе и/или с учетом генетических или других факторов восприимчивости). Лечение также можно продолжат после купирования симптомов, например, для профилактики или задержки их повторения.
Используемое в изобретении понятие субъект относится к отдельному организму, например к отдельному млекопитающему. В некоторых вариантах осуществления субъектом является человек. В некоторых вариантах осуществления субъект представляет собой млекопитающее, не являющееся человеком. В некоторых вариантах осуществления субъектом является примат нечеловеческого происхождения. В некоторых вариантах осуществления субъектом является грызун. В некоторых вариантах осуществления субъектом является овца, коза, крупный рогатый скот, кошка или собака. В некоторых вариантах осуществления субъектом является лабораторное животное. В некоторых вариантах осуществления субъектом является генноинженерный субъект, например, генноинженерный субъект нечеловеческого происхождения. Субъект может быть любого пола и на любой стадии развития.
Используемое в изобретении понятие эффективное количество относится к количеству биологически активного вещества, которое является достаточным для индукции желаемой биологической реакции. Например, в некоторых вариантах осуществления эффективное количество клеточной или тканевой композиции по изобретению может относиться к такому количеству композиции, которое включает определенное количество клеток или количество ткани, являющееся достаточным для улучшения связанных с заболеванием или расстройством симптомов, например, достаточным для улучшения зрения у субъекта с заболеванием или патологией сетчатки. Специалисту в данной области будет очевидно, что эффективное количество раствора или композиции по изобретению может варьироваться в зависимости от различных факторов, таких как желаемая биологическая реакция, подлежащее лечению конкретное заболевание, подлежащий облегчению конкретный симптом, тип целевой клетки или ткани и возраст, пол и общее состояние здоровья субъекта.
В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к способам, включающим введение нуждающемуся в этом субъекту раствора или композиции по изобретению. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение раствора или композиции в глаз пациента. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение композиции субъекту после хранения этой композиции в течение по меньшей мере 4 ч, по меньшей мере 6, по меньшей мере 12, по меньшей мере 24, по меньшей мере 36 или по меньшей мере 48 ч. В некоторых вариантах осуществления у субъекта имеется или диагностировано заболевание сетчатки. В некоторых вариантах осуществления заболевание сетчатки представляет собой палочковую или колбочковую дистрофию, дегенерацию сетчатки, пигментный ретинит, диабетическую ретинопатию, макулярную дегенерацию, амавроз Лебера или болезнь Штаргардта. В некоторых вариантах осуществления композиция включает популяцию клеток, и размер этой популяции эффективен для улучшения по меньшей мере одного симптома заболевания сетчатки у субъекта. В некоторых вариантах осуществления популяция клеток включает клетки ПЭС, фоторецепторные клетки или мезенхимальные стволовые клетки. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает контроль по меньшей мере одного симптома заболевания сетчатки у субъекта.
В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к способам лечения заболевания сетчатки, и указанные способы включают введение эффективного количества клеточной композиции по изобретению в глаз субъекта с заболеванием сетчатки. В некоторых вариантах осуществления у субъекта имеется или диагностировано заболевания сетчатки. В некоторых вариантах осуществления заболевание сетчатки представляет собой палочковую или колбочковую дистрофию, дегенерацию сетчатки, пигментный ретинит, диабетическую ретинопатию, макулярную дегенерацию, врожденный амавроз Лебера или болезнь Штаргардта. В некоторых вариантах осуществления композиция включает популяцию клеток, и размер этой популяции эффективен для улучшения по меньшей мере одного симптома заболевания сетчатки у субъекта. В некоторых вариантах осуществления клеточная популяция включает клетки ПЭС, фоторе- 21 037915 цепторные клетки или мезенхимальные стволовые клетки. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает мониторинг по меньшей мере одного симптома заболевания сетчатки у субъекта.
Используемое понятие мониторинг симптома заболевания относится к оценке степени тяжести симптома заболевания в нескольких точках времени в течение определенного периода. Например, степень тяжести симптома у субъекта можно оценивать до начала лечения субъекта, и затем повторно после лечения по истечении определенного периода времени. В некоторых вариантах осуществления мониторинг может включать оценку тяжести симптомов по истечении периода времени, которое является или предполагается достаточным для достижения результатов лечения в виде измеримого улучшения симптомов у аналогичного субъекта (например, у субъекта того же вида, пола, возраста, имеющего сходное общее состояние здоровья и т.д.). В некоторых вариантах осуществления мониторинг может включать оценку тяжести симптома через регулярные промежутки времени. Например, можно проводить оценку исходного состояния зрения у пациентов, проходящих лечение заболеваний сетчатки. Специалисту в данной области будет очевидно, что эта оценка является иллюстративной, и что можно проводить другие исследования вместо или в дополнение к оценке зрения субъекта. Такие оценки могут включать определение уровня дегенерации сетчатки, абляции сетчатки, дегенерации желтого пятна и так далее. После лечения субъекта путем введения клеточной композиции по изобретению, например, композиции, содержащей эффективное количество клеток ПЭС в среде GS2 по изобретению, зрение субъекта можно оценивать повторно, в идеале по истечении некоторого периода времени после операции, чтобы дать возможность введенным клеткам имплантироваться и начать функционировать, например, приблизительно через неделю, две недели, три недели, приблизительно через месяц, приблизительно два месяца, приблизительно три месяца, приблизительно четыре месяца, приблизительно пять месяцев, приблизительно шесть месяцев или приблизительно через год. Результат послеоперационной оценки можно регистрировать и сравнивать с предоперационной оценкой, чтобы установить наличие улучшения симптома, например, восстановление уровня зрения у субъекта. Оценку можно проводить однократно или повторять несколько раз, чтобы определить динамику облегчения симптомов или факт достижения конечного результата. В зависимости от результатов послеоперационного мониторинга, можно планировать дополнительные хирургические манипуляции для (дополнительного) улучшения оцениваемого симптома. Если улучшений после первоначальной операции не наблюдается, дозу клеточной или тканевой композиции можно увеличивать для более эффективного облегчения симптома.
Способ лечения заболевания сетчатки может включать введение единственной дозы эффективного количества композиции клеток ПЭС по изобретению, например, композиции, содержащей эффективное количество клеток ПЭС в среде GS2 по изобретению. Также способы лечения по изобретению могут включать курс лечения с многократным введением клеток ПЭС в течение определенного периода, при этом каждая доза клеток является эффективной для облегчения симптомов заболевания, или эффективное количество достигается с помощью кумулятивного эффекта от многократного введения дозы. Примерные курсы лечения могут включать введение один раз в неделю, один раз в две недели, один раз в месяц, один раз в три месяца, один раз в полгода или один раз в год. В качестве альтернативы, лечение может протекать по фазам, когда вначале применяют многократное введение дозы (например, ежедневное введение в течение первой недели), а затем требуются меньшие дозы и менее частое введение.
Если композицию клеток ПЭС по изобретению, например, композицию, содержащую клетки ПЭС в растворе GS2, вводят путем внутриглазной инъекции, композицию клеток ПЭС можно вводить один раз или несколько раз периодически в течение всей жизни пациента. Например, композицию клеток ПЭС можно вводить один раз в год, один раз каждые 6-12 месяцев, один раз каждые 3-6 месяцев, один раз каждые 1-3 месяца или один раз каждые 1-4 недели. В качестве альтернативы, при определенных состояниях или расстройствах может быть желательным более частое введение. Если введение осуществляют с помощью имплантата или устройства, клетки ПЭС можно вводить однократно, или один или несколько раз периодически в течение жизни пациента, когда это необходимо для конкретного пациента и при конкретном расстройстве или состоянии, подлежащем лечению. Аналогично предполагается, что режим лечения можно менять с течением времени. Например, более частое введение может потребоваться в начале лечения (например, ежедневное или еженедельное введение). Со временем, при улучшении состояния пациента может потребоваться более редкое введение или дальнейшее лечение может даже не требоваться.
Способы по изобретению могут дополнительно включать этап мониторинга эффективности лечения или профилактики путем измерения у субъекта показателей электроретинограммы, оптомоторной оценки порога остроты зрения или порога яркости. Способ может также включать контроль эффективности лечения или профилактики путем мониторинга иммуногенности клеток или клеточной миграции в глазе.
Клетки ПЭС или содержащие клетки ПЭС композиции, и медицинский раствор по изобретению, например, раствор GS2, можно использовать в производстве лекарственного средства для лечения дегенеративных заболеваний сетчатки. Изобретение также относится к применению содержащих клетки ПЭС композиций по изобретению для лечения слепоты. Например, содержащие человеческие клетки ПЭС
- 22 037915 композиции можно применять для лечения дегенеративных заболеваний сетчатки, обусловленных некоторыми влияющими на зрение заболеваниями, которые приводят к повреждению фоторецепторов и слепоте, такими, как диабетическая ретинопатия, макулярная дегенерация (в том числе возрастная макулярная дегенерация, например, влажная возрастная макулярная дегенерация и сухая возрастная макулярная дегенерация), пигментный ретинит и болезнь Штаргардта (fundus flavimaculatus). Композиция может содержать по меньшей мере приблизительно от 5000 до 500000 клеток ПЭС (например, 10000 клеток ПЭС), которые могут быть введены в сетчатку для лечения дегенеративных заболеваний сетчатки, обусловленных некоторыми влияющими на зрение заболеваниями, которые приводят к повреждению фоторецепторов и слепоте, такими как диабетическая ретинопатия, макулярная дегенерация (в том числе возрастная макулярная дегенерация), пигментный ретинит и болезнь Штаргардта (fundus flavimaculatus).
Используемые в композициях для лечения субъектов клетки, например, клетки ПЭС, которые используются в композициях клеток ПЭС по изобретению, могут быть человеческими клетками. Человеческие клетки могут быть использованы у больных людей, а также у больных животных или на животных моделях. Например, можно проводить испытания человеческих клеток на моделях дегенеративной патологии сетчатки у мышей, крыс, кошек, собак или приматов, отличных от человека. Дополнительно, человеческие клетки могут быть использованы с терапевтической целью для лечения нуждающихся в этом животных, например, в ветеринарной медицине.
В некоторых вариантах осуществления способ лечения заболевания сетчатки может дополнительно включать введение иммуносупрессивного препарата близко по времени к введению медицинской композиции по изобретению. Возможные для использования иммуносупрессивные препараты включают без ограничения поликлональные антитела против лимфоцитарного глобулина (ALG), поликлональные антитела против тимоцитарного глобулина (ATG), азатиоприн, Бализиксимаб® (антитело антагонист рецептора IL-2Ra), циклоспорин (циклоспорин А), Даклизумаб® (антитело - антагонист рецептора IL2RIL-2Ra), эверолимус, микофеноловую кислоту, Ритуксимаб® (антитело против CD20), сиролимус и циклоспорин. Эти иммуносупрессоры можно применять в дозе по меньшей мере приблизительно 1, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 мг/кг. В случае применения иммуносупрессоров их можно вводить системно или локально, и можно их вводить перед введением клеток ПЭС, одновременно или после введения клеток ПЭС. Иммуносупрессивная терапия может продолжаться в течение нескольких недель, месяцев, лет или в течение неопределенного срока времени после введения клеток ПЭС. Например, пациенту можно вводить циклоспорин в дозе 5 мг/кг в течение 6 недель после введения клеток ПЭС.
В некоторых аспектах растворы по изобретению можно использовать в качестве медицинских ирригационных растворов. Такие растворы подходят для клинического орошения, например, для орошения ран или операционного поля. Используемое в изобретение понятие медицинское орошение взаимозаменяемо с понятием орошение, которое обычно относится к введению раствора, обычно водного раствора, в рану или область хирургического вмешательства. Ирригационный раствор по изобретению можно вводить в различных целях, например, для гидратации тканей, очищения, удаления дебриса или поверхностных патогенных микроорганизмов, для смазки, предотвращения адгезии тканей или облегчения визуального осмотра. В некоторых вариантах осуществления орошение включает постоянное введение потока ирригационного раствора через открытую рану или область хирургического вмешательства. В некоторых вариантах осуществления ирригационный раствор вводят с перерывами. Способ введения, а также объем и скорость потока ирригационного раствора зависят от конкретных обстоятельств, например, от размера раны, типа орошаемой ткани и от состояния раны или области хирургического вмешательства (например, наличие дебриса, воздействие поверхностных патогенных микроорганизмов).
Специалисты в данной области смогут определить надлежащие способы и устройства, подходящие для введения, а также подходящие значения объема и скорости потока.
Вместе с тем, если при некоторых обстоятельствах простой ирригационный раствор может быть достаточным для достижения некоторых задач орошения, то в некоторых хирургических условиях общепринятые ирригационные растворы, такие как физиологический раствор, фосфатно-буферный солевой раствор (ФБР), антисептики или антибиотики, могут не способствовать выживанию или могут быть цитотоксичными в отношении чувствительных клеток или тканей, и тем самым отрицательно влиять на исход хирургического вмешательства.
Один из обычно используемых клинических ирригационных растворов, а именно нормальный физиологический раствор (0,9% NaCl в воде), является изотоническим и часто применяется для орошения ран благодаря своей низкой токсичности, физиологическим свойствам (уровень рН и осмолярность), простоте подготовки и стерилизации (в том числе стерилизации паром) и длительному сроку хранения при температуре окружающей среды. При этом нормальный физиологический раствор имеет ряд недостатков по сравнению с другими ирригационными растворами, таких как неспособность поддерживать длительное выживание чувствительных клеток или тканей, и наличие относительно высоких показателей раневой инфекции после орошения нормальным физиологическим раствором.
Был разработан ряд коммерчески доступных хирургических ирригационных растворов для орошения чувствительных областей операционного поля или раны, например, для областей или ран, на кото
- 23 037915 рые может оказать негативное действие орошение нормальным физиологическим раствором или другими простыми ирригационными растворами, например, во время хирургического вмешательства в офтальмологии. Имеющиеся в настоящее время хирургические ирригационные растворы для применения во время операции с целью предотвращения повреждения чувствительных клеток или тканей, например, во время хирургического вмешательства в офтальмологии, обычно включают четыре ключевых ингредиента: вещество для поддержания осмолярности, источник кальция, источник магния и буферное вещество.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам орошения операционного поля раствором по изобретению, например, раствором GS2. В некоторых вариантах осуществления областью хирургического вмешательства является глаз субъекта.
Способы и устройство для орошения операционного поля хорошо известны рядовым специалистам в данной области. Специалистам в данной области будет очевидно, что используемые способ доставки, объем и давление будут зависеть от характера и состояния операционного поля. Подходящие устройства для медицинского орошения включают без ограничения шприцы с баллончиком, поршневые шприцы, емкости под давлением, вихревые мешалки, вихревые шланговые распылители, ирригационные жидкости в пластиковых контейнерах с разливочной крышкой или наконечником, и устройства для иимпульсного лаважа (такого как струйное промывание, механическое промывание, пульсирующий лаваж, механическая ирригация, устройства для ирригации под высоким давлением).
В некоторых вариантах осуществления орошение проводят непрерывно, при этом постоянный поток ирригационного раствора направляют в область операционного поля. В других вариантах осуществления применяют импульсное или прерывистое орошение, при этом осуществляется периодическая или прерывистая доставка ирригационного раствора. Объем орошения зависит от характеристик области хирургического вмешательства и цели орошения (очищение раны, увлажнение и т.д.).
Наборы
В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к наборам, которые включают: (а) раствор по изобретению; (b) инструкцию для контактирования клеточной популяции с раствором (а) для получения клеточной композиции; и (с) контейнер для контактирования (b) и/или для хранения клеточной композиции (b). В некоторых вариантах осуществления раствор (а) и контейнер (с) подходят для использования клеточной композиции (b) для трансплантации субъекту.
Таким образом, настоящее изобретение, среди прочего, относится к следующему:
Пункт 1. Раствор, содержащий:
(a) буфер, поддерживающий физиологический уровень рН раствора;
(b) глюкозу в количестве по меньшей мере 2 мМ или по меньшей мере 0,05% (вес/объем) и (c) осмотически активное вещество, поддерживающее физиологическую осмолярность раствора.
Пункт 2. Раствор по п.1, при этом раствор содержит глюкозу в количестве по меньшей мере 5 мМ или по меньшей мере 0,1% (вес/объем).
Пункт 3. Раствор по п.1, при этом раствор содержит глюкозу в количестве по меньшей мере 7,5 мМ или по меньшей мере 0,14% (вес/объем).
Пункт 4. Раствор по п.1, при этом раствор содержит глюкозу в количестве по меньшей мере 10 мМ или по меньшей мере 0,2% (вес/объем).
Пункт 5. Раствор по п.1, при этом раствор содержит глюкозу в количестве по меньшей мере 15 мМ или по меньшей мере 0,25% (вес/объем).
Пункт 6. Раствор по п.1, при этом раствор содержит глюкозу в количестве по меньшей мере 20 мМ или по меньшей мере 0,4% (вес/объем).
Пункт 7. Раствор по п.1, при этом раствор содержит глюкозу в количестве по меньшей мере 25 мМ или по меньшей мере 0,5% (вес/объем).
Пункт 8. Раствор согласно любому из пп.1-7, при этом раствор дополнительно содержит источник двухвалентных катионов.
Пункт 9. Раствор по п.8, в котором источник двухвалентных катионов включает источник кальция и/или магния.
Пункт 10. Раствор согласно любому из пп.1-9, в котором буфер включает ацетатный буфер и/или цитратный буфер.
Пункт 11. Раствор, содержащий:
(a) буфер, поддерживающий физиологический уровень рН раствора, при этом буфер не является бутилдикарбонатным буфером;
(b) глюкозу;
(c) осмотически активное вещество, поддерживающее физиологическую осмолярность раствора; и (d) источник двухвалентных катионов.
Пункт 12. Раствор по п.11, в котором источник двухвалентных катионов (d) включает источник кальция и/или источник магния.
Пункт 13. Раствор согласно любому из пп.11-12, в котором буфер включает ацетатный буфер и/или цитратный буфер.
- 24 037915
Пункт 14. Раствор согласно любому из пп.9-10 или 12-13, в котором источник кальция содержит фармацевтически приемлемую соль кальция.
Пункт 15. Раствор согласно любому из пп.9-10 или 12-14, в котором источник магния содержит фармацевтически приемлемую соль магния.
Пункт 16. Раствор согласно любому из пп.14-15, в котором фармацевтически приемлемую соль кальция и/или фармацевтически приемлемую соль магния выбирают из группы, состоящей из солей кальция и/или солей магния, образованных с кислотой, выбранной из группы, включающей уксусную кислоту, аскорбиновую кислоту, лимонную кислоту, соляную кислоту, малеиновую кислоту, щавелевую кислоту, фосфорную кислоту, стеариновую кислоту, янтарную кислоту и серную кислоту.
Пункт 17. Раствор согласно любому из пп.9-10 или 12-16, в котором источник кальция содержит хлорид кальция.
Пункт 18. Раствор согласно любому из пп.9-10 или 12-17, в котором источник кальция включает дигидрат хлорида кальция.
Пункт 19. Раствор согласно любому из пп.9-10 или 12-18, в котором источник магния включает хлорид магния.
Пункт 20. Раствор согласно любому из пп.9-10 или 12-18, в котором источник магния включает гек сагидрат хлорида магния.
Пункт 21. Раствор согласно любому из пп.10 или 13-20, в котором цитратный буфер представлен в виде цитрата натрия.
Пункт 22. Раствор согласно любому из пп.1-21, в котором глюкоза представляет собой D-глюкозу (декстрозу).
Пункт 23. Раствор согласно любому из пп.1-22, в котором осмотически активное вещество представляет собой соль.
Пункт 24. Раствор согласно любому из пп.1-23, в котором осмотически активное вещество представляет собой натриевую соль.
Пункт 25. Раствор согласно любому из пп.1-24, в котором осмотически активное вещество представляет собой хлорид натрия.
Пункт 26. Раствор согласно любому из пп.1-25, в котором раствор содержит хлорид кальция, хло рид магния, цитрат натрия, хлорид натрия и глюкозу.
Пункт 27. Раствор согласно любому из пп.1-26, в котором уровень рН раствора составляет от 6,8 до 7,8.
Пункт 28. Раствор согласно любому из пп.1-27, в котором уровень рН раствора составляет 7,4-7,5.
Пункт 29. Раствор согласно любому из пп.1-28, в котором уровень рН раствора составляет приблизительно 7,5.
Пункт 30. Раствор согласно любому из пп.1-29, в котором раствор является изотоническим.
Пункт 31. Раствор согласно любому из пп.1-29, в котором раствор является гипертоническим.
Пункт 32. Раствор согласно любому из пп.1-31, в котором осмолярность раствора составляет приблизительно от 270 до 345 мОсм/л.
Пункт 33. Раствор согласно любому из п.1-32, в котором осмолярность раствора составляет приблизительно 315 мОсм/л.
Пункт 34. Раствор согласно любому из пп.9-10 или 12-33, в котором концентрация источника кальция составляет от 0,25 до 0,75 мМ.
Пункт 35. Раствор согласно любому из пп.9-10 или 12-34, в котором концентрация источника кальция составляет от 0,4 до 0,65 мМ.
Пункт 36. Раствор согласно любому из пп.9-10 или 12-35, в котором концентрация источника кальция составляет от 0,5 до 0,6 мМ, или раствор согласно любому из пп.9-10 или 12-35, в котором концентрация источника кальция составляет от 0,5 до 0,9 мМ, или в котором концентрация источника кальция составляет от 0,6 до 0,8 мМ.
Пункт 37. Раствор согласно любому из пп.9-10 или 12-36, в котором концентрация источника кальция составляет приблизительно 0,6 мМ, или раствор согласно любому из пп.9-10 или 12-36, в котором концентрация источника кальция составляет приблизительно 0,7 мМ.
Пункт 38. Раствор согласно любому из пп.9-10 или 12-37, в котором концентрация источника магния составляет от 0,05 до 5 мМ.
Пункт 39. Раствор согласно любому из пп.9-10 или 12-38, в котором концентрация источника магния составляет от 0,1 до 0,3 мМ.
Пункт 40. Раствор согласно любому из пп.9-10 или 12-39, в котором концентрация источника магния составляет приблизительно 0,3 мМ.
Пункт 41. Раствор согласно любому из пп.1-40, в котором концентрация глюкозы составляет от 5 до 50 мМ.
Пункт 42. Раствор согласно любому из пп.1-41, в котором концентрация глюкозы составляет от 10 до 25 мМ.
Пункт 43. Раствор согласно любому из пп.1-42, в котором концентрация глюкозы составляет от 10
- 25 037915 до 20 мМ.
Пункт 44. Раствор согласно любому из пп.1-43, в котором концентрация глюкозы составляет приблизительно 16 мМ.
Пункт 45. Раствор согласно любому из пп.1-44, в котором концентрация осмотически активного вещества составляет приблизительно от 100 до 200 мМ.
Пункт 46. Раствор согласно любому из пп.1-45, в котором концентрация осмотически активного вещества составляет приблизительно от 125 до 175 мМ.
Пункт 47. Раствор согласно любому из пп.1-46, в котором концентрация осмотически активного вещества составляет приблизительно 150 мМ.
Пункт 48. Раствор согласно любому из пп.10 или 13-47, в котором концентрация цитрата или ацетата составляет от 0,1 до 5 мМ.
Пункт 49. Раствор согласно любому из пп.10 или 13-48, в котором концентрация цитрата или ацетата составляет от 0,5 до 2 мМ.
Пункт 50. Раствор согласно любому из пп.10 или 13-39, в котором концентрация цитрата или ацетата составляет приблизительно 1 мМ.
Пункт 51. Раствор согласно любому из пп.1-51, в котором раствор дополнительно содержит калиевую соль.
Пункт 52. Раствор по п.51, в котором соль калия представляет собой хлорид калия.
Пункт 53. Раствор по п.51 или 52, в котором концентрация KCl составляет от 0,2 до 5 мМ.
Пункт 54. Раствор по п.53, в котором концентрация KCl составляет от 1 до 2,5 мМ.
Пункт 55. Раствор по п.54, в котором концентрация KCl составляет приблизительно 2 мМ.
Пункт 56. Раствор согласно любому из пп.1-55, при этом раствор содержит приблизительно 0,7 мМ CaCl (хлорид кальция), приблизительно 0,03 мМ MgCl (хлорид магния), приблизительно 1 мМ цитрата натрия, приблизительно 16 мМ декстрозы и приблизительно 145 мМ NaCl, или раствор согласно любому из пп.1-55, при этом раствор содержит приблизительно 0,7 мМ CaCl (хлорид кальция), приблизительно 0,3 мМ MgCl (хлорид магния), приблизительно 1 мМ цитрата натрия, приблизительно 16 мМ декстрозы и приблизительно 145 мМ NaCl, или раствор согласно любому из пп.1-55, при этом раствор содержит приблизительно от 0,5 до 0,9 мМ CaCl (хлорид кальция), приблизительно от 0,2 до 0,4 мМ MgCl (хлорид магния), приблизительно от 0,8 до 1,2 мМ цитрата натрия, приблизительно от 13 до 19 мМ декстрозы и приблизительно от 116 до 174 мМ NaCl.
Пункт 57. Раствор согласно любому из пп.1-55, при этом раствор содержит приблизительно 0,85% NaCl, приблизительно 0,01% дигидрата CaCl (дигидрат хлорида кальция), приблизительно 0,006% гексагидрата MgCl (гексагидрат хлорида магния), приблизительно 0,035% дигидрата цитрата натрия и приблизительно 0,29% декстрозы, или раствор согласно любому из пп.1-55, при этом раствор содержит приблизительно от 0,68 до 1,02% NaCl, приблизительно от 0,008 до 0,012% дигидрата CaCl (дигидрат хлорида кальция), приблизительно от 0,0048 до 0,0072% гексагидрата MgCl (гексагидрат хлорида магния), приблизительно от 0,028 до 0,042% дигидрата цитрата натрия и приблизительно от 0,23 до 0,35% декстрозы.
Пункт 58. Раствор согласно любому из пп.1-57, при этом раствор дополнительно содержит приблизительно 2 мМ KCl.
Пункт 59. Раствор согласно любому из пп.1-58, при этом раствор дополнительно содержит вязкоупругий полимер.
Пункт 60. Раствор по п.59, в котором полимер представляет собой гиалуроновую кислоту, или ее соль или сольват.
Пункт 61. Раствор по п.59 или 60, в котором полимер представляет собой гиалуронат натрия.
Пункт 62. Раствор согласно любому из пп.59-61, в котором полимер присутствует в концентрации, эффективной для уменьшения воздействия усилия сдвига на клетки в растворе.
Пункт 63. Раствор согласно любому из пп.59-62, в котором концентрация полимера составляет от 0,005 до 5% вес/объем
Пункт 64. Раствор по п.63, в котором концентрация полимера составляет приблизительно 0,05% вес/объем
Пункт 65. Раствор согласно любому из пп.1-64, при этом раствор содержит приблизительно 0,7 мМ CaCl (хлорид кальция), приблизительно 0,03 мМ MgCl (хлорид магния), приблизительно 2 мМ KCl, приблизительно 1 мМ цитрата натрия, приблизительно 16 мМ декстрозы, приблизительно 145 мМ NaCl и приблизительно 0,05% гиалуроновой кислоты, или раствор согласно любому из п.1-64, при этом раствор содержит приблизительно 0,7 мМ CaCl (хлорид кальция), приблизительно 0,3 мМ MgCl (хлорид магния), приблизительно 2 мМ KCl, приблизительно 1 мМ цитрата натрия, приблизительно 16 мМ декстрозы, приблизительно 145 мМ NaCl и приблизительно 0,05% гиалуроновой кислоты, или раствор согласно любому из пп.1-64, при этом раствор содержит приблизительно от 0,5 до 0,8 мМ CaCl (кальций хлорид), приблизительно от 0,2 до 0,4 мМ MgCl (хлорид магния), приблизительно от 1,6 до 2,4 мМ KCl, приблизительно от 0,8 до 1,2 мМ цитрата натрия, приблизительно от 13 до 19 мМ декстрозы, приблизительно от 116 до 174 мМ NaCl и приблизительно от 0,04 до 0,06% гиалуроновой кислоты.
- 26 037915
Пункт 66. Раствор согласно любому из пп.1-65, при этом раствор не содержит карбонатный буфер.
Пункт 67. Раствор согласно любому из пп.1-66, при этом раствор не содержит глутатион или дисульфид глутатиона (GSSG).
Пункт 68. Раствор согласно любому из пп.1-67, при этом раствор не содержит цвиттерионный органический буфер.
Пункт 69. Раствор согласно любому из пп.1-68, при этом раствор можно хранить в течение по меньшей мере 48, по меньшей мере 72, по меньшей мере 96, по меньшей мере 120, по меньшей мере 144 ч, по меньшей мере в течение одной недели, по меньшей мере двух недель, по меньшей мере трех недель или по меньшей мере в течение одного месяца при температуре 25°С без измеримой преципитации растворенных веществ и/или измеримой потери способности раствора поддерживать выживание и жизнеспособность хранящихся в растворе клеток.
Пункт 70. Раствор согласно любому из пп.1-69, при этом раствор можно хранить в течение по меньшей мере 48, по меньшей мере 72, по меньшей мере 96, по меньшей мере 120, по меньшей мере 144 ч, по меньшей мере в течение одной недели, по меньшей мере двух недель, по меньшей мере трех недель или по меньшей мере в течение одного месяца при температуре от 2 до 8°С без измеримой преципитации растворенных веществ и/или измеримой потери способности раствора поддерживать выживание и жизнеспособность хранящихся в растворе клеток.
Пункт 71. Раствор согласно любому из пп.1-70, при этом раствор подходит для введения субъекту, подходит для введения в глаз субъекта и/или подходит для трансплантации клеток в глаз субъекта.
Пункт 72. Раствор согласно любому из пп.1-71, при этом раствор по существу является апирогенным.
Пункт 73. Раствор согласно любому из пп.1-72, при этом раствор является стерильным.
Пункт 74. Раствор согласно любому из пп.1-73, при этом раствор предназначен для орошения, разведения клеток, хранения клеток, транспортировки клеток и/или введения субъекту.
Пункт 75. Композиция, содержащая популяцию клеток в растворе согласно любому из пп.1-74.
Пункт 76. Композиция по п.75, в которой популяция клеток подходит для трансплантации субъекту.
Пункт 77. Композиция по п.76, в которой популяция клеток подходит для трансплантации в глаз субъекта.
Пункт 78. Композиция согласно любому из пп.75-77, в которой популяция клеток содержит клетки ПЭС.
Пункт 79. Композиция согласно любому из пп.75-78, в которой популяция клеток содержит фоторецепторные клетки.
Пункт 80. Композиция согласно любому из пп.75-79, в которой популяция клеток содержит мезенхимные клетки.
Пункт 81. Композиция согласно любому из пп.75-80, при этом композицию охлаждают в холодильнике.
Пункт 82. Композиция по п.81, при этом композиция хранится в холодильнике при температуре приблизительно от 2 до 8°C.
Пункт 83. Композиция согласно любому из пп.75-82, при этом композиция способствует выживанию клеток в клеточной популяции во время хранения композиции и при этом по меньшей мере 70% клеток в клеточной популяции сохраняют жизнеспособность после хранения композиции при температуре от 2 до 8°С в течение 48 ч.
Пункт 84. Композиция по п.83, в которой по меньшей мере 80% клеток в клеточной популяции сохраняют жизнеспособность после хранения композиции при температуре от 2 до 8°С в течение 48 ч.
Пункт 85. Композиция по п.83, в которой по меньшей мере 90% клеток в клеточной популяции сохраняют жизнеспособность после хранения композиции при температуре от 2 до 8°С в течение 48 ч.
Пункт 86. Композиция согласно любому из пп.75-85, при этом композиция способствует сохранению эффективности культивирования клеточной популяции при хранении композиции и при этом эффективность культивирования клеточной популяции остается на уровне по меньшей мере 70% от ее исходной эффективности культивирования после хранения композиции при температуре от 2 до 8°С в течение 48 ч, при этом исходная эффективность культивирования означает эффективность культивирования клеточной популяции клеток в начале периода хранения.
Пункт 87. Композиция по п.86, в которой клеточная популяция проявляет эффективность культивирования на уровне по меньшей мере 80% от своей исходной эффективности культивирования после хранения композиции при температуре от 2 до 8°С в течение 48 ч.
Пункт 88. Композиция по п.86, в которой клеточная популяция имеет по меньшей мере 90% от своей исходной эффективности культивирования.
Пункт 89. Композиция согласно любому из пп.75-88, в которой композиция находится в контейнере для хранения.
Пункт 90. Композиция согласно любому из пп.75-89, в которой композиция находится внутри шприца.
Пункт 91. Способ получения композиции согласно любому из пп.75-90, при этом способ включает
- 27 037915 контактирование клеточной популяции с раствором согласно любому из пп.1-74.
Пункт 92. Способ по п.91, и указанный способ включает контактирование популяции криоконсервированных клеток или осажденных клеток с раствором согласно любому из пп.1-74, и таким образом осуществляют разведение клеток.
Пункт 93. Фармацевтическая композиция, содержащая раствор согласно любому из пп.1-74, или композицию согласно любому из пп.75-90, при этом фармацевтическая композиция подходит для введения субъекту.
Пункт 94. Способ, включающий введение раствора согласно любому из пп.1-74, или введение композиции согласно любому из пп.75-90, или фармацевтической композиции по п.88 нуждающемуся в этом субъекту.
Пункт 95. Способ по п.94, и указанный способ включает введение раствора или композиции в глаз пациента.
Пункт 96. Способ по п.94 или 95, и указанный способ включает введение композиции субъекту после хранения композиции в течение по меньшей мере 4, по меньшей мере 6, по меньшей мере 12, по меньшей мере 24, по меньшей мере 36 или по меньшей мере 48 ч.
Пункт 97. Способ по п.96, при этом у субъекта имеется или диагностировано заболевание сетчатки.
Пункт 98. Способ по п.97, в котором заболевание сетчатки представляет собой палочковую или колбочковую дистрофию, дегенерацию сетчатки, пигментный ретинит, диабетическую ретинопатию, макулярную дегенерацию, врожденный амавроз Лебера или болезнь Штаргардта.
Пункт 99. Способ по п.97 или 98, в котором композиция содержит клеточную популяцию и размер этой популяции эффективен для улучшения по меньшей мере одного симптома заболевания сетчатки у субъекта.
Пункт 100. Способ согласно любому из пп.97-99, и указанный способ дополнительно включает мониторинг по меньшей мере одного симптома заболевания сетчатки у субъекта.
Пункт 101. Способ, включающий:
(a) контактирование популяции клеток с раствором согласно любому из пп.1- 74 и создание клеточной композиции указанным путем.
Пункт 102. Способ по п.101, дополнительно включающий:
(b) хранение клеточной композиции (а) в течение по меньшей мере 4, по меньшей мере 6, по меньшей мере 12, по меньшей мере 18, по меньшей мере 24, по меньшей мере 36, по меньшей мере 48, по меньшей мере 60 или по меньшей мере 72 ч.
Пункт 103. Способ по п.102, при этом способ дополнительно включает:
(с) введение клеточной композиции (а) субъекту после периода хранения (b).
Пункт 104. Способ по п.103, при этом введение (с) включает инъекцию клеток в глаз субъекта.
Пункт 105. Способ согласно любому из пп.101-104, и указанный способ дополнительно включает определение жизнеспособности клеток в клеточной композиции (а) после периода хранения (b).
Пункт 106. Способ согласно любому одному из пп.101-105, и указанный способ включает охлаждение клеточной композиции (а) в течение периода хранения на этапе (b).
Пункт 107. Способ по п.106, в котором охлаждение включает сохранение клеточной композиции при температуре от 2 до 8°С.
Пункт 108. Способ лечения заболевания сетчатки, при этом указанный способ включает введение эффективного количества композиции согласно любому из пп.75-90 или фармацевтической композиции по п.93 в глаз субъекта с заболеванием сетчатки.
Пункт 109. Способ по п.108, при этом заболевание сетчатки представляет собой палочковую или колбочковую дистрофию, дегенерацию сетчатки, пигментный ретинит, диабетическую ретинопатию, макулярную дегенерацию, врожденный амавроз Лебера или болезнь Штаргардта.
Пункт 110. Набор, содержащий:
(a) раствор согласно любому из пп.1-74;
(b) инструкции по контактированию клеточной популяции с раствором (а) для получения клеточной композиции и (c) контейнер для контактирования (b) и/или для хранения клеточной композиции (b).
Пункт 111. Набор по п.110, в котором раствор (а) и контейнер (с) подходят для применения клеточной композиции (b) для трансплантации субъекту.
Примеры
Введение
Клинические испытания фазы 1 по введения клеток ПЭС в глаз субъектов с сенильной макулярной дегенерацией (SMD) и возрастной макулярной дегенерацией (AMD) были проведены с использованием среды Alcon BSS PLUS® в качестве среды для композиции клеток ПЭМ, их хранения и трансплантации. Среда BSS PLUS® представляет собой физиологически совместимый раствор (осмолярность приблизительно 310 мОс, уровень рН приблизительно 7,4), одобренный для применения в интраокулярной хирургии. Срок хранения для композиции клеток ПЭС в среде BSS PLUS® ограничен приблизительно че- 28 037915 тырьмя часами при хранении при температуре от 2 до 8°С до клинического применения (инъекции). В связи с таким ограниченным сроком годности продукта вспомогательные лаборатории для манипуляций с клетками должны находиться в непосредственной близости от каждого лечебного учреждения, участвующего в клинических испытаниях.
Создание среды со значительно увеличенным сроком годности конечного продукта при хранении (например, до 48 ч или больше) будет давать множество преимуществ. Увеличенный срок годности позволит объединять в одном месте продукцию в виде готовых композиций, которые можно отправлять во все лечебные учреждения США. Таким образом, можно расширить перечень лечебных учреждений, в настоящее время ограниченный только клиниками, расположенными в непосредственной близости к лабораториям, которые соответствуют текущей надлежащей производственной практике (cGMP). Увеличение срока годности продукта также устраняет логистические сложности, связанные с хранением многократного запаса продукта, обучением персонала и отслеживанием связей со множеством вспомогательных учреждений. Увеличение срока хранения позволит составлять более гибкий график при планировании трансплантаций, которые в настоящее время должны проводиться в строгих пределах окна времени, составляющего 4 ч.
Увеличение срока годности конечного продукта позволит иметь достаточно времени для уведомления о каких-либо задержках или отмене операции задолго до подготовки пациента к операции или входа в операционную (OR). Дополнительно, в случае, если испытания качества конечного продукта показали неудовлетворительный результат, можно приготовить дополнительную композицию конечного продукта в тот же день без задержки или отмены операции. Увеличение срока годности дает дополнительное время для дополнительного испытания качества конечного продукта, например анализа количественной ПЦР (кПЦР ДНК) с использованием пан-праймеров для выявления микробного загрязнения, что описано ниже.
Композицию ПЭС в виде конечного продукта в BSS PLUS® вводили через канюлю MedOne REF 3233 PolyTip®Cannula 23/38. При использовании композиции BSS PLUS® по изобретению было выявлено среднее снижение плотности жизнеспособных клеток приблизительно на 23%. Это снижение согласуется со всеми проанализированными значениями плотности клеток и не имеет какого-либо очевидного влияния на оставшиеся 77% клеток, экструдированных через канюлю, с точки зрения их жизнеспособности или последующей способности к высеванию, пролиферации и дифференцированию в культуре. Можно было предположить некоторые потерю клеток по причине адгезии, но вместе с тем, последующие эксперименты подтвердили, что клеточные потери и лизис клеток предположительно связаны с усилием сдвига, возникающим во время экструзии через канюлю. Для компенсации предполагаемых потерь плотность заполнения канюли соответственно увеличивают, чтобы гарантировать доставку необходимой дозы. В дополнение к увеличению срока хранения, конечная среда для композиции, обладающая подходящими вязкоупругими свойствами, минимизирует потерю клеток при доставке через канюлю. Сведение к минимуму клеточных потерь уменьшает объем вводимого клеточного дебриса, что смягчает возможные иммунные реакции на внутриклеточные компоненты.
Пример 1. Композиции среды
Среда GS2
Была получена среда для разведения, хранения, транспортировки клеток и/или введения субъекту. Эта среда под названием GS2 была получена следующим образом:
готовили смесь из 48,75 мл 0,9% NaCl в воде; 13,10 мл сбалансированного солевого раствора Alcon (BSS®), 300 мОсм, в воде и 3,75 мл 5% раствора декстрозы в 0,9% NaCl, 560 мОсм, в воде, для получения 65,6 мл среды с конечной концентрацией декстрозы 0,29% и осмолярностью 315 мОсм.
Таким образом, основная среда GS2 содержит приблизительно 145 мМ NaCl (приблизительно 0,85% NaCl), приблизительно 2 мМ KCl (приблизительно 0,015% KCl), приблизительно 0,7 мМ СаС1 (хлорид кальция), (приблизительно 0,01% дигидрата CaCl (дигидрат хлорида кальция)), приблизительно 0,3 мМ MgCl (хлорид магния) (приблизительно 0,006% MgCl гексагидрата (гексагидрат хлорида магния)), приблизительно 1 мМ цитрата натрия (приблизительно 0,035% дигидрата цитрата натрия) и приблизительно 16 мМ глюкозы (приблизительно 0,29% декстрозы), в воде.
Необязательно, среда GS2 может дополнительно содержать вязкоупругий полимер в количестве, эффективном для снижения воздействия усилия сдвига на клетки, например, в конечной концентрации приблизительно от 0,005 до 5% вес/объем В некоторых вариантах осуществления вязкоупругий полимер представляет собой гиалуроновую кислоту, или ее соль или сольват.
Сбалансированный солевой раствор Alcon (BSS®)
Сбалансированный солевой раствор Alcon (стерильный ирригационный раствор BSS®) представля- 29 037915 ет собой стерильный сбалансированный солевой раствор, содержащий
0,64% хлорида натрия (NaCl),
0,075% хлорида калия (KCl),
0,048% дигидрата хлорида кальция (CaCl2·2Н2О),
0,03% гексагидрата хлорида магния (MgCl2·6Н2О),
0,39% тригидрата ацетата натрия (C2H3NaO2-3H2O),
0,17% дигидрата цитрата натрия (C6H5Na3O7·2Н2О), соляную кислоту и/или гидроксид натрия (для регулирования уровня рН) и воду для инъекций.
Уровень рН BSS® составляет приблизительно 7,5, и осмоляльность составляет приблизительно 300 мОсм/кг.
Таким образом, раствор Alcon BSS содержит приблизительно 109 мМ NaCl, приблизительно 10 мМ KCl приблизительно 3 мМ CaCl (хлорид кальция) приблизительно 0,1 мМ MgCl (хлорид магния) приблизительно 5 мМ цитрата натрия
Сбалансированный солевой раствор Alcon PLUS (BSS® PLUS) Сбалансированный солевой раствор Alcon PLUS (BSS PLUS®) представляет собой стерильный интраокулярный ирригационный раствор для применения во время внутриглазных хирургических манипуляций. Его готовят перед применением путем объединения двух частей, называемых часть I и часть II.
Часть I представляет собой 480 мл стерильного раствора в бутылке однократной дозы объемом 500 мл, к которому добавляют часть II в виде концентрата. Часть I BSS PLUS® содержит
7,440 мг/мл хлорида натрия,
0,395 мг/мл хлорида калия,
0,433 мг/мл двухосновного фосфата натрия,
2,190 мг/мл бикарбоната натрия, соляную кислоту и/или гидроксид натрия (для регулирования уровня рН) и воду для инъекций.
Часть II представляет собой стерильный концентрат во флаконе однократной дозы объемом 20 мл, для добавления к части I.
Часть II BSS PLUS® содержит
3,85 мг/мл дигидрата хлорида кальция, мг/мл гексагидрата хлорида магния, мг/мл декстрозы,
4,6 мг/мл дисульфида глутатиона (окисленный глутатион) и воду для инъекций.
После добавления части II BSS PLUS® в бутылку с частью I и разведения полученный продукт содержит
7,14 мг/мл хлорида натрия,
0,38 мг/мл хлорида калия,
0,154 мг/мл дигидрата хлорида кальция,
0,2 мг/мл гексагидрата хлорида магния,
0,42 мг/мл двухосновного фосфата натрия,
2,1 мг/мл бикарбоната натрия,
0,92 мг/мл декстрозы,
0,184 мг/мл дисульфида глутатиона (окисленный глутатион), соляную кислоту и/или гидроксид натрия (для регулирования уровня рН) в воде для инъекций.
Уровень рН разведенного продукта составляет приблизительно 7,4 и осмоляльность составляет приблизительно 305 мОсм.
Пример 2. Срок годности конечного продукта из клеток ПЭС в композиции с BSS-Plus®.
Конечный продукт из клеток ПЭС в композиции с BSS Plus® сохраняет свою жизнеспособность в течение 4 ч при холодном хранении (от 2 до 8°С). Была проведена более полная оценка срока годности конечного продукта. В этом исследовании нерасфасованный продукт ПЭС оттаивали и подготавливали жизнеспособные клетки в двух значениях плотности, с предельной конечной плотностью хранения на уровне 2000 жизнеспособных клеток/мл. Эта плотность хранения была постоянной для всех приготовленных доз. Конечное разведение клеток с предварительно отмеренным объемом BSS Plus® выполнялось в операционной непосредственно перед наполнением шприца. На этом этапе разбавления определялась окончательная плотность клеток (постоянная для всех доз), вводимых путем инъекции в объеме 150 мкл.
- 30 037915
Жизнеспособность клеток, плотность жизнеспособных клеток, чистота и мощность конечного продукт из клеток ПЭС в композиции с BSS Plus®, который сохранялся на холоде, были оценены на момент изготовления композиции (0 часов) и через 4 и 6 ч при холодном хранении (от 2 до 8°С). Было показано, что плотность жизнеспособных клеток и жизнеспособность клеток остаются постоянными в течение 6 ч при холодном хранении. Дополнительно композицию из клеток ПЭС после хранения в течение 0, 4, и 6 ч высевали и культивировали для последующих анализов чистоты и активности. Для каждой точки времени культивирования (0, 4 и 6 ч) чистоту оценивали в анализе иммуноокрашивания MITF и РАХ6 и мощность оценивали путем сортировки клеток с активированной флуоресценцией (FACS анализ) по измерению фагоцитирующих частиц. Данные показывают, что все проанализированные свойства продукта оставались неизменными в течение 6-часового периода тестирования.
Жизнеспособность клеток ПЭС, сохраняемых в среде BSS Plus® в течение 12 ч, обычно составляет менее 70%, а после 24 ч содержания в среде BSS Plus® жизнеспособность клеток ПЭС обычно составляет менее 20%.
Пример 3. Создание улучшенной среды для разведения, хранения, транспортировки и/или трансплантации клеток
Была разработана улучшенная среда для разведения клеток, например, из криоконсервированного состояния, хранения клеток, например, для холодного хранения между разведением или сбором из клеточной культуры и транспортировкой до места проведения трансплантации или введения субъекту), для транспортировки клеток и клеточной трансплантации. Компоненты полученной среды (GS2) приведены в табл. 1 ниже. Фирмы-поставщики указаны в качестве примера. Специалистам в данной области будет очевидно, что существуют дополнительные источники перечисленных компонентов и можно определить подходящие источники указанных этих веществ:
Таблица 1
| Компоненты GS2 | |||
| Компонент | Поставщик | NDC# | Назначение/примечание |
| Дектроза 5%/ NaCl 0,9% или дектроза 5%/ NaCl 0,9% | Braun или Baxter | 00264-7610-00 или 0338-0089-04 | Физиологический уровень pH и изосмолярность для сохранения целостности клеток |
| Стерильный ирригационный раствор | Alcon 90086250113 | 0065-0795- 15viso | Физиологический уровень pH ~ 7,5 с буфером ацетат натрия/цитрат и изосмоляльность приблизительно 300 мОсм/кг для сохранения целостности клеток |
| 0,9% хлорид натрия | Baxter Healthcare | 0338-0049-11 | Изосмолярность для сохранения целостности клеток |
| 0,IN NaOH | J.T.Baker ® VWR #JT5636-2 | Подходящие no волюметрическ им и аналитическим свойствам для использования в фаромакопейны х методиках ACS, USP NF и общих лабораторных применений | Для доведения уровня pH среды GS2 до 7,4 |
| 3% гиалуронат натрия (например,Не а1on ® EndoCoat (Abbott), Hyasis® (Novozymes), Pro-Vise® (Alcon) (необязател ьный компонент) | Abbott, Novozymes, Alcon | 05047-4547-06 | Защитное действие против усилия сдвига во время экструзии через канюлю, для уменьшения потери клеток |
NDC=Национαльный лекарственный код
Конечная композиция GS2 является физиологической в отношении уровня рН (от 7,2 до 7,6) и осмолярности (рассчитанная осмолярность 315).
- 31 037915
Среда GS2 была изготовлена и расфасована в выделенном чистом помещении согласно ISO-7 для конечного продукта ПЭС в соответствии со стандартом ISO-5 BSC (бокс биологической безопасности). В стерильный резервуар добавляли стерильные компоненты, приведенные в табл. 1, и разервуар помещали на роторную качалку (30-40 оборотов в минуту). Минимум через три часа образцы удаляли из резервуара, затем измеряли уровень рН и доводили его до рН 7,4 +/- 0,2 с помощью добавления дополнительного количества 0,1N NaOH. Среда GS2 для заполнения не контактировала с образцом рН. Раствор стерилизовали с использованием мембранного фильтра и повторно определяли уровень рН.
Аликвотное количество GS23 мл разливали в обработанные гамма-облучением криопробирки, состоящие из первичного полипропиленового полимера, соответствующего требованиям USP класса VI. Образцы переносили из каждой заполненной пробирки, и пробирки закрывали крышками. Тестирование контроля качества (QC) проводили на объединенном образце, как описано ниже. Каждую пробирку подвергали визуальному осмотру при видимом и УФ-свете с целью подтверждения отсутствия твердых частиц. Затем пробирки возвращались в стерильные условия для маркировки и хранились при температуре от 2 до 8°С. После минимум одного дня холодного хранения несколько пробирок забирали и повторно определяли уровень рН с помощью рН-метра, калиброванного по стандартному рН при температуре от 2 до 8°С, чтобы подтвердить их пригодность при температуре использования (от 2 до 8°С).
Пример 4. Контроль качества и спецификация для выпуска конечного продукта клеток ПЭС в GS2
Было проведено 14-дневное исследование стерильности, уровня рН, осмотического давления и наличия эндотоксинов по стандарту USP, для которого брали аликвотное количество объединенной GS2, состоящее из образцов из всех заполненных ампул. Также оценивались показатели каждой партии GS2 по показателям сохранения жизнеспособности клеток ПЭС и их роста после изготовления композиции и экструзии через инъекционную канюлю. Примеры тестов по контролю качества и спецификация для выпуска готового продукта представлены в табл. 2 ниже.
Таблица 2
| Пример тестирования качества готового продукта GS2, критерий I | ||
| Тест | Способ | Спецификация |
| Стерильность | USP/21 C.F.R. 610.12 Способ погружения | Отрицательный |
| Эндотоксин | Эндотоксин специфический тур бидиме трич е ский метод | <0,50 EU/мл |
| pH при t от 2 до 8°С | рН-электрод | 7,2-7,6 |
| Осмолярность | Осмометр | 295-335 мОсм |
| Визуальный осмотр | Визуальный/УФсветовой осмотр | Отсутствие частиц в исследованных пробирках |
| Сохранение жизнеспособности и роста клеток ПЭС | Подтверждение приемлемой жизнеспособности и роста клеток ПЭС в композиции с GS2 | >/= 80% стандартных показателей GS2 по плотности и жизнеспособности клеток через 48 часов хранения после изготовления композиции, как перед, так и после экструзии через канюлю |
| Пример тестирования качества готового продукта GS2, критерий II | ||
| Стерильность | USP/21 C.F.R. 610.12 Способ погружения | Отрицательный |
| Эндотоксин | Эндотоксин специфический тур бидиме трич е ский метод | <0,20 EU/мл |
| pH при t от 2 до 8°С | рН-электрод | 6, 8-7,8 |
| Осмолярность | Осмометр | 270-345 мОсм |
- 32 037915
| Рост клеток ПЭС | Рост клеток после 2дневного хранения в среде GS2 | >/= 25% увеличение количества клеток после 2-3 дней культивирования (например, >/= 25000 клеток/лунку после 2-х дней культивирования, начиная с 20000 клеток/лунку) |
| Жизнеспособность клеток ПЭС | Тест на исключение окрашивания трипановым синим после 2-дневного хранения в среде GS2 | >/= 79% |
| Плотность жизнеспособных клеток | Подсчет жизнеспособных клеток после 2дневного хранения в GS2 | >/= 0,7 от плотности клеток в композиции |
Следует понимать, что критерии выпуска готового продукта, перечисленные в табл. 2, являются примерными и что любую комбинацию любых указанных в табл. 2 критериев можно объединять и использовать как по отдельности, так и в комбинации с дополнительными критериями, для тестирования выпуска готового продукта и контроля качества.
В соответствии с примерным вариантом осуществления анализа роста клеток ПЭС, после периода хранения в GS2 клетки высевали в покрытые желатином 96-луночные планшеты при начальной плотности, например 20000 клеток на лунку в среду RPE GM или EGM2/EBM2 (Lonza, например, Cat #: СС3156, СС-4176). Клетки выращивали в течение 2-3 дней при подходящих условиях, например, в 5% СО2 при 37°С и в термостате с контролируемой влажностью. Клетки поднимали из лунок, например, с помощью расщепления трипсином и затем подсчитывали. В этом тесте отмечали соответствие критериям качества готового продукта GS2, если в конце периода культивирования количество клеток на лунку составляло 125% или больше от начальной плотности клеток, например, >/= 25000 клеток/лунку при начальной плотности 20000 клеток/лунку).
Пример 5. Изготовление композиции конечного продукта ПЭС, упаковка и поставка
В описанном ниже способе использовали BSS Plus® на начальном этапе промывки для обработки средой GS2. Промывка в GS2 вместо BSS Plus® также рассматривается в вариантах осуществления настоящего изобретения и входит в его объем. Пробирки с криоконсервированными клетками MA09-hRPE, выпускаемыми для медицинского применения, извлекали из хранилища с жидким азотом. В зависимости от дозы требовалось от 2 до 4 пробирок клеток. Криопробирки переносили в чистое помещение и быстро оттаивали в водяной бане при 37°С. Размороженное содержимое каждой пробирки (1 мл криоконсервационной среды (90% фетальной телячьей сыворотки (FCS)+10% ДМСО), содержащей 2 млн клеток в момент криоконсервации) осторожно ресуспендировали в теплой DMEM, переносили в коническую пробирку объемом 50 мл и доводили до конечного объема 40 мл дополнительным количеством теплой среды DMEM. Каждую пробирку суспендированных клеток центрифугировали (160 g в течение 5 мин при комнатной температуре), и каждый осадок ресуспендировали в 40 мл раствора BSS Plus® комнатной температуры. Каждую клеточную суспензию повторно центрифугировали, осадки собирали и ресуспендировали в 10 мл раствора BSS Plus® комнатной температуры. Ресуспендированные объединенные клетки центрифугировали (160 g в течение 5 мин при комнатной температуре) в третий раз и удаляли супернатант аспирацией.
Ниже приведена схема этапов получения продукта, описанного выше (этапы с технологической средой GS2 обозначены подчеркиванием).
- 33 037915
Изготовление композиции ПЭС - I
После удаления максимально возможной части супернатанта осадок ресуспендировали в объеме холодного раствора BSS Plus® (обычный технологический раствор) или холодной среды GS2 (технологическая среда GS2) с доведением до конечного объема 50 мкл на каждый один миллион оттаянных клеток. С этого момента клетки находились в пробирках в охлаждающих штативах, чтобы поддерживать температуру клеток от 2 до 8°С в течение остальных этапов этого способа. Результатом обычного разведения от 15 до 25% целевого объема является получение клеточной суспензии приблизительно из 4 000 жизнеспособных клеток ПЭС на 1 мкл.
После отбора образцов проводили подсчет жизнеспособных клеток, определяли плотность жизнеспособных клеток и общее количество клеток в разведении. К суспензии клеток добавляли дополнительное количество холодного раствора BSS Plus® или холодной среды GS2, чтобы довести конечную концентрацию клеток до 2300 жизнеспособных клеток ПЭС/мкл (на 300 клеток больше, чем целевая конечная концентрация композиции из 2000 жизнеспособных клеток ПЭС/мкл). Затем проводили контрольный подсчет клеток и добавляли дополнительно холодный раствор BSS Plus® или холодную среду GS2, чтобы довести конечную концентрацию до 2000 жизнеспособных клеток ПЭС/мкл. Нужный объем клеток расфасовывали в укупорки с готовым продуктом (стерильные микроцентрифужные пробирки объемом 0,5 мл; Fisher, Cat. № 02-707-351). Этикетку продукта прикрепляли на каждую пробирку с технологическим раствором BSS Plus® или на вихрь-пакет, содержащий пробирку с продуктом с технологической средой GS2, с указанием 4-часового срока годности для клеток ПЭС в BSS Plus® или 48-часового срока годности для клеток ПЭС в GS2. Из каждой пробирки с продуктом извлекали образец и эти образцы объединяли для архива и тестирования контроля качества.
Дополнительно, был разработан протокол изготовления композиции культивируемых клеток. Согласно этому протоколу, криоконсервированные клетки ПЭС оттаивали и предварительно культивировали в течение 3-7 дней перед изготовлением композиции клеток в трансплантационной среде GS2. Культивируемые клетки снимали с культуральной чашки и промывали сначала в среде DMEM, а затем в растворе BSS-Plus, и в конце в растворе BSS-Plus в смеси 1:1 со средой GS2. После последнего этапа промывки клетки переносили в холодную среду GS2 (от 2 до 8°С). Извлечение, тестирование и доведение объема образцов до конечной плотности клеток выполняли, как описано выше.
Ниже приведена схема этапов получения продукта, описанного выше (этапы с технологической средой GS2 обозначены подчеркиванием):
Изготовление композиции ПЭС - II
Ресуспендированный осадок в холодном BSS-Plus или холодной GS2 Lc получением конечного объема 40 мкл или 40 мкл/на 1 миллион оттаянных клеток
Ф
- 34 037915
Упаковка и отгрузка ПЭС в BSS PLUS®
В клинических трансплантационных испытаниях (при SMD и AMD) каждая доза состояла из пары пробирок: одна из пробирок содержала предварительно отмеренный объем клеток ПЭС в виде композиции из 2000 жизнеспособных клеток ПЭС/мкл, и другая пробирка содержала предварительно отмеренный объем BSS Plus®. Каждую пару пробирок помещали в охлаждающий штатив Labtop при температуре от 2 до 8°С. Охлаждающие штативы помещали в пакеты, устанавливали в охлаждающий контейнер Coleman Cooler, содержащий приблизительно 16 фунтов предварительно охлажденного льда INSUL-Ice и доставлялись курьером в лечебное учреждение.
В операционной непосредственно перед трансплантацией к клеткам добавляли BSS Plus® с помощью тупоконечной иглы для инъекции наполнителей. Клетки смешивали и набирали в шприц для инъекций объемом 1 мл. Продукт (150 мкл для всех доз) выдавливали через канюлю для инъекции в субретинальное пространство. Плотность клеток в наполненном шприце была установлена с коэффициентом 1,33 х плотность вводимой дозы для компенсации предполагаемой потери 25% во время экструзии через канюлю.
Ниже приводится схема с описанием этапов упаковки и поставки в BSS Plus®
Упаковка и доставка ПЭС в GS2
Каждая доза состояла из одной микроцентрифужной пробирки, содержащей 250 мкл клеток ПЭС в виде композиции из 2300 жизнеспособных клеток ПЭС/мкл. Единственную пробирку, содержащую одну дозу готового продукта в виде композиции ПЭС помещали в стерильный вихрь-пакет объемом 2 унции, к которому прикрепляли этикетку готового продукта. Пробирки в пакетах помещали в чистый, предварительно охлажденный (от 2 до 8°С), индивидуально пронумерованный портативный охладитель для пробирок. В дополнении к маркированной пробирке (пробиркам) с продуктом, в каждый охладитель Chillette также помещали маркированную дополнительную пробирку (не в пакете), содержащую 30 мкл готовых клеток ПЭС, и отдельную пробирку, содержащую 100 мкл 0,4% красителя трипановый синий.
- 35 037915
Этикетку на готовое изделие также прикрепляли к каждому охладителю Chillette. Каждый охладитель с продуктом помещали в стерильный вихрь-пакет в стерильных условиях. Упакованный охладитель с продуктом, сопроводительная форма с медицинскими указаниями и двумя этикетками размещались в чистом помещении, со сквозным проходом в зону окончательной упаковки и отгрузки. Чтобы избежать путаницы, в каждый охладитель Chillette пробирки с продуктом загружали в стерильных условиях, и каждый охладитель по одному переносили в чистое помещение со сквозным проходом.
Выполняющие упаковку работники извлекали каждый охладитель Chillette, сопроводительные документы и этикетки готового продукта из чистого помещения со сквозным проходом и помещали охладитель Chillette в пакетах, воздушно-пузыпьковую пленку, тупоконечную иглу для наполнителя, шприц, инъекционную канюлю и гемоцитометр в транспортный контейнер предварительно охлажденной холодильной установки NanoCool. Крышку холодильной установки надежно закрывали, и внешнюю транспортную тару упаковывали вместе с документами для получения, инспекции, хранения и проверки жизнеспособности после транспортировки. До завершения всех испытаний выпуска готового продукта упакованный продукт помещался на карантин, после чего выдавался Сертификат выпуска готового продукта клеток ПЭС для трансплантологии (RPE Cell Final Product Certificate of Release for Transplantation). Транспортную тару NanoCool с продуктом и документами направляли в лечебное учреждение на следующий день. После получения транспортную тару можно хранить при комнатной температуре или при температуре от 2 до 8°С до использования продукта в течение 48 ч с момента окончательного заполнения. Этикетки готового продукта с датой и временем истечения срока действий прикрепляли на внешней транспортной таре, охладителе для пробирок Chillette и пакете с пробирками, содержащими готовый продукт.
Готовую композицию клеток ПЭС с 2300 жизнеспособных клеток/мкл в среде GS2 вмикроцентрифужной пробирке помещали в вихрь-пакет (Whirl-Pak) и переносили в охладитель пробирок Chillette (28°С)
Ϊ
Упакованный охладитель пробирок, содержащий пакет с готовым продуктом в пробирке, помещают в транспортную тару Nano Cool (при температуре от 2 до 8°С), и курьер транспортирует этот груз в лечебное учреждение на следующий день. Приоритетная доставка для трансплантации осуществляется в течение 48 часов после окончательного заполнения.
Ϊ
В операционной непосредственно перед инъекцией клетки ресуспендируют и смешивают. Продукт (250 мкл) загружают в 1 мл шприц для инъекции с помощью канюли. При введении 150 мкл доставляется доза 300 К с номинальной потерей клеток во время инъекции.
Анализ контроля качества при выпуске конечного продукта клеток ПЭС
Анализ контроля качества при выпуске имеющегося конечного продукта (в растворе BSS Plus®), выполняемый перед трансплантацией, включает проверку жизнеспособности клеток и окрашивание по Граму. Образцы направляли для USP испытаний в течение 14 дня на анализ стерильности, и результаты получали после трансплантации.
| Выпуск конечного продукта клеток ПЭС перед трансплантацией | ||
| Анализ | Способ | Спецификация |
| жизнеспособность | исключение по окрашиванию трипановым синим | >/= 70% |
| окрашивание по Граму | микроскопическое исследование | отрицательно |
| Выпуск конечного продукта клеток ПЭС после трансплантации | ||
| стерильность | USP/21 CFR 610.12 с иммерсией | отрицательно |
Анализ кПЦР для обнаружения контаминантов
Поскольку срок годности готового продукта клеток ПЭС увеличен с 4-х ч в BSS-Plus® по меньшей мере до 48 ч в среде GS2, можно выполнять анализы с более продолжительным циклом исследования перед выпуском продукта. Например, получена возможность проводить ПЦР-анализы конечного продукта клеток ПЭС и получать результаты для контроля качества и для выпуска перед выпуском и использованием продукта. Одним из подходящих для проведения анализов является кПЦР-анализ с пан
- 36 037915 праймерами ДНК. Такой анализ может быть завершен в течение 2 ч. Анализы кПЦР являются чрезвычайно чувствительными и могут быть использованы для обнаружения широкого спектра патогенных контаминантов, например, загрязнителей из окружающей среды, микробных и вирусных контаминантов, а также обычной кожной микрофлоры. Анализы кПЦР можно проводить в дополнение к анализам выпуска готового продукта для обнаружения микробной контаминации в дополнение к окрашиванию по Граму и тесту на стерильность USP. Результаты кПЦР будет известны до отгрузки продукции, таким образом предотвращается отправка потенциально загрязненного продукта из лаборатории. Следует понимать, что описанный в изобретении анализ кПЦР является иллюстративным и что можно выполнять другие подходящие анализы вместо или в дополнение, в том числе и без ограничения, к другим ПЦРанализам и другим типам анализов, которые могут быть выполнены в течение увеличенного срока хранения конечного продукта клеток ПЭС.
Осмотр и проверка жизнеспособности конечного продукта после транспортировки
При получении в лечебном учреждении обученный персонал должен принять продукт во внешней транспортировочной таре, подтвердить правильность информации в отношении серии и партии и проверить наличие повреждений внешней тары. Если в лечебном учреждении есть возможность выполнить проверку на жизнеспособность клеток, то на этом этапе из охладителя Chillette вынимают сопроводительную пробирку с клетками и пробирку с трипановым синим. Пробирки передают в испытательную лабораторию для пост-транспортировочной проверки жизнеспособности клеток. Если жизнеспособность клеток составляет менее 70%, продукт не подлежит к использованию.
Инструкция по заполнению инъекционной канюли
В операционной непосредственно перед трансплантацией клетки смешивают с помощью тупоконечной иглы для наполнителей и набирают их в шприц для инъекций объемом 1 мл. Продукт (150 мкл) выдавливают через инъекционную канюлю в субретинальное пространство. Поскольку при экструзии через канюлю в GS2 потеря клеток является номинальной, плотность клеток в заполненном шприце (2000 жизнеспособных клетки ПЭС/мкл) представляет собой плотность при доставке 150 мкл в виде инъекции дозы 300 К.
Пример 6. Стабильность клеток в среде GS2
На фиг. 1 показано, что клетки ПЭС могут сохраняться в растворе HypoThermosol (BioLife Solutions, Inc., Bothell, WA, USA) в течение 24 ч (но не в течение 48 ч) без видимого снижения последующей способности к культивированию и росту в культуре.
На фиг. 2-5 показана стабильность клеток ПЭС в среде GS2 при температуре от 2 до 8°С. На фиг. 2 показано, что клетки ПЭС могут сохраняться в GS2 в течение по меньшей мере 48 часов без видимого снижения количества жизнеспособных клеток или последующей способности к культивированию и росту в культуре. На фиг. 3 показано, что клетки ПЭС могут сохраняться в GS2 в течение 4-5 дней только с номинальной потерей жизнеспособности клеток и без значительного снижения плотности жизнеспособных клеток. Фиг. 4 показывает, что способность клеток ПЭС к культивированию и росту в культуре начинает снижаться после 5 дней в среде GS2 при холодном хранении. На фиг. 5 показано, что среда GS2 совместима с существующей инъекционной системой.
Пример 7. Трансплантационная среда GS2 - влияние вязкоупругого полимера
Выполняли оценку влияния разных знвчений концентрации вязкоупругого полимера на жизнеспособность клеток после их экструзии через канюлю. Человеческие клетки пигментного эпителия сетчатки (ПЭС) из нерасфасованной партии NRPE-313 5С Р2 были изготовлены в соответствии с методиками cGMP и подверглись криоконсервации. В день эксперимента флаконы оттаивали и готовили композицию. Клетки оттаивали в предварительно нагретой (37°С) среде DMEM (Gibco). Затем клетки центрифугировали (5 мин при 160 д). Каждый осадок ресуспендировали в 40 мл раствора BSS Plus® (Alcon) комнатной температуры и повторно центрифугировали. Полученный осадок объединяли в одной центрифужной пробирке, ресуспендировали в растворе BSS Plus® комнатной температуры и затем разделяли на несколько (4) пробирок перед этапом заключительного центрифугирования в объеме 10 мл на пробирку. Клеточные осадки вводили в отличающиеся композиции трансплантационной среды под названием GS2 ТМ.
Трансплантационную среду GS2 ТМ готовили путем объединения 5% декстрозы и солевого раствора (0,9% раствор NaOH), Braun NDC #00264-7610-00 или Baxter NDC #0338-0089-04; физиологического раствора (0,9% раствор NaOH), Baxter NDC #0338-0049-11; ирригационного раствора Alcon BSS, NDC #0065-0795-15; и гиалуроновой кислоты или гиалуроната натрия (НА), например, Abbott Healon EndoCoat, NDC #05047-4547-06; в стерильном резервуаре, и смешивали компоненты на орбитальном шейкере. Измеряли уровень рН и доводили его до рН 7,4 +/- 0,2 путем добавления дополнительного количества 0,1N NaOH перед стерильной фильтрацией. В этом эксперименте получали среду GS2 ТМ, содержащую гиалуроновую кислоту (НА) от Healon EndoCoat (Abbott) в конечной концентрации или 0,15, 0,1, 0,05 или 0%.
Клетки разбавляли по нарастающей, до получения конечной плотности сохраняющихся клеток приблизительно 2000 клеток на микролитр. После восстановления и разведения в разных трансплантаци
- 37 037915 онных средах были подготовлены по три экземпляра флаконов с клетками для каждого условия анализа. Флаконы с клетками хранили в течение 2-х дней в холодильнике при температуре от 2 до 8°С. Затем подсчитывали количество клеток с помощью гемоцитометра. Жизнеспособность клеток определяли по исключению окрашивания трипановым синим. Средние значения были рассчитаны по результатам в трех экземплярах подготовленных для каждого условия пробирок с клетками, и концентрацию жизнеспособных клеток в каждой пробирке определяли путем трехкратного подсчета. Была рассчитана разница (или дельта) в количестве клеток до и после экструзии через канюлю MedOne # 3233.
Результаты этого эксперимента приведены на фиг. 6. Показана средняя плотность жизнеспособных клеток из трех экземпляров пробирок±стандартные отклонения. Плотность человеческих клеток ПЭС определяли с помощью гемоцитометра. Жизнеспособность клеток определяли по исключению окрашивания трипановым синим. Средние значения были рассчитаны по результатам в трех экземплярах подготовленных для каждого условия пробирок с клетками, и концентрацию жизнеспособных клеток в каждой пробирке определяли путем трехкратного подсчета.
Процентное изменение (или дельта) в количестве клеток до и после экструзии через канюлю MedOne # 3233 указано над каждой группой значений, для каждого условия.
При всех протестированных значениях концентрации НА было показано улучшение жизнеспособности клеток после экструзии через канюлю. Вместе с тем, было установлено, что добавление 0,05% НА является предпочтительным для композиции трансплантационной среды. Меньшая потеря клеток после экструзии клеток ПЭС через канюлю MedOne # 3233 наблюдали при использовании среды GS2 ТМ, которая содержал 0,05% НА, чем в случае среды GS2 ТМ, которая бала изготовлена без НА или содержала 0,1 или 0,15% НА. В частности, на 10% меньше потерь выявлено при включением 0,05% НА по сравнению со средой GS2 ТМ без добавления НА.
Пример 8. Среда GS2 - влияние концентрации глюкозы на жизнеспособность клеток
Выполняли оценку влияния различных концентраций вязкоупругого полимера на жизнеспособность клеток после их экструзии через канюлю. Для этих целей человеческие клетки пигментного эпителия сетчатки (ПЭС) из нерасфасованной партии NRPE-313 5С Р2 были получены в соответствии с методиками cGMP и подверглись криоконсервации. В день эксперимента флаконы оттаивали и клетки разводили предварительно нагретой (37°С) средой DMEM (Gibco). Затем клетки центрифугировали (5 минут при 160 g). Каждый осадок ресуспендировали в 40 мл раствора BSS Plus® (Alcon) комнатной температуры и повторно центрифугировали. Полученный осадок объединяли в одной центрифужной пробирке, ресуспендировали в растворе BSS Plus® комнатной температуры, и затем разделяли на несколько (6) пробирок перед этапом заключительного центрифугирования в объеме 10 мл BSS Plus® на пробирку. Клеточные осадки вводили в отличающиеся композиции трансплантационной среды GS2 ТМ.
Трансплантационную среду GS2 ТМ готовили путем объединения 5% декстрозы и солевого раствора (0,9% раствор NaOH) солевого раствора (0,9% раствор NaOH); ирригационного раствора Alcon BSS, NDC # 0065-0795-15, в стерильном резервуаре и смешивали компоненты на орбитальном шейкере. Измеряли уровень рН и доводили его до рН 7,4 +/- 0,2 путем добавления дополнительного количества 0,1N NaOH перед стерильной фильтрацией. В этом эксперименте получали среду GS2 ТМ с разной концентрацией глюкозы, как показано в табл. 3 ниже. Объем указан в миллилитрах.
| Таблица 3 | |||||||
| без глюкозы | 1/3 х глюкозы | 1 х глюкозы | 2 х глюкозы | 3 х глюкозы | 4 х глюкозы | ||
| 0,9% натрия хлорид | 52,50 | 51,25 | 48,75 | 45, 00 | 41,25 | 37,50 | |
| 5% декстрозы и 0,9% натрия хлорид | 0, 00 | 1,25 | 3,75 | 7,50 | 11,25 | 15, 00 | |
| BSS (Alcon | 13, 13 | 13, 13 | 13, 13 | 13,13 | 13, 13 | 13, 13 | |
| рассчитанная осмолярность | 300, 0 | 305, 0 | 314,9 | 329, 7 | 344, 6 | 359, 4 |
После изготовления клеточной композиции с разными трансплантационными средами GS2 клетки по нарастающей разводили до конечной плотности сохраняющихся клеток приблизительно 2000 клеток на микролитр. Затем эти клетки хранили в стерильных флаконах (Fischer) в течение 3-х дней в холодильнике при температуре от 2 до 8°С. После этого определяли количество жизнеспособных клеток с помощью гемоцитометра, и приблизительно 20000 жизнеспособных клеток на лунку высевали в 96-луночные планшеты для культивирования ткани (Costar) с желатиновым покрытием (Stem Cells, Inc.). Клетки культивировали в ростовой среде для клеток ПЭС (ЕВМ-2 с EGM2 Single Quots, Stem Cells, Inc, например, Lonza Cat #: CC-3156, CC-4176) в течение 3-х дней в условиях 5% СО2, 37°С, в инкубаторе с контролируемой влажностью. После этого клетки снимали с планшета с помощью 40 Мг/лунку смеси 1: 1 трипсина (Sigma) и среды для диссоциации на основе HEPES (Gibco). Среду с содержанием сыворотки (40
- 38 037915 мкл/лунку) использовали для нейтрализации действия трипсина, пипеткой проводили титрование клеток для подъема, и подсчитывали количество с помощью гемоцитометра. На фиг. 7 показано среднее число человеческих клеток ПЭС на лунку из шести лунок для каждого условия испытания±SD. При каждой концентрации глюкозы выявлены улучшенные результаты по сравнению с контрольным образцом, не содержащим глюкозу.
Пример 9. Повышение жизнеспособности мезенхимальных стволовых клеток в среде GS2
На фиг. 8 показана жизнеспособность мезенхимальных стволовых клеток (МСК) в различных композициях среды. Полученные из человеческих эмбриональных стволовых клеток МСК выращивали до 70% конфлюэнтности, собирали с использованием 0,05% трипсина, ресуспендировали в среде аМЕМ+15% FCS (среда MSC) и центрифугировали при 200 g в течение 5 мин. Клеточный осадок ресуспендировали в небольшом объеме среды MSC и подсчитывали жизнеспособность клеток путем исключения по окрашиванию трипановым синим. Пять миллионов МСК были помещены в каждую из 4 пробирок типа Эппендорф, центрифугировали и ресуспендировали в 1 мл каждой из указанных сред. Пробирки хранили в холодном помещении при 4°С в течение указанного периода времени.
CS=собачья сыворотка; FBS=фетαльная бычья сыворотка. На фиг. 8 показано, что композиция в среде GS2, как с сывороткой, так и без сыворотки, повышает жизнеспособность МСК и увеличивает время хранения МСК.
На фиг. 9 показано, что более высокая плотность клеток (измеряемая в миллионах клеток на 1 мл) повышает жизнеспособность МСК при хранении в среде GS2. Было обнаружено, что наличие сыворотки (в данном случае FBS) имеет небольшое влияние на жизнеспособность клеток после их хранения в среде GS2 в течение 24 ч (указано стрелкой).
На фиг. 10 показано, что жизнеспособность МСК сохраняется после хранения в среде GS2 при 4°С и последующем выдавливании через иглу/шприц калибром 26G.
Пример 10. Пример сертификата анализа для транспортной среды GS2
В рамках контроля качества было проведено несколько тестов рассматриваемой транспортной среды, предназначенной для применения у больных людей и/или для ветеринарного применения. Это тестирование было предназначено для достижения максимальной полезности среды как компонента фармацевтических или хирургических манипуляций, и для максимального снижения риска неблагоприятных реакций или событий. Например, эндотоксины являются чрезвычайно мощными, термоустойчивыми и проходят через большинство стерилизующих мембранных фильтров, и присутствуют везде, где находятся или находились бактерии. Эндотоксины представляют собой наибольшую проблему в случае применения транспортной среды для местного введения, например, в субретинальном пространстве, и указанное введение предполагается осуществлять с применением композиции клеток ПЭС для инъекций. Таким образом, транспортные композиции GS2 были подвергнуты ряду анализов, и в результате было выявлено соответствие следующим критериям:
| Анализ | Способ | Спецификация |
| Стерильность | Иммерсионный способ USP/21 CFR 610.12 | отрицательно |
| Эндотоксин | Эндотоксинспецифичный тур бидиме трич е ский способ | <0,20 EU/мл |
| pH при 25 ± 2 ° С | pH - электрод | 6, 8-7,8 |
| Осмоляльность | осмометр | 270-345 мОм |
| Рост клеток ПЭС | рост клеток (после хранения в GS2) | > 25000 клеток/на лунку |
| Жизнеспособность клеток ПЭС | тест с исключением по окрашиванию трипановым синим (после хранения в GS2) | > 79% |
| Плотность Жизнеспособных клеток ПЭС | Подсчет жизнеспособных клеток (после хранения в GS2) | > 0,7 от заявленной плотности клеток |
Пример 11. Тестирование транспортной среды способом светоблокировки
Также в рамках контроля качества, в частности, для использования клеток в композиции для применения у больных людей, транспортная среда настоящего изобретения в общем не будет содержать неприемлемое количество твердых частиц. Твердые частицы состоят из подвижных нерастворенных частиц (то есть, которые не являются газовыми пузырьками), которые, как правило, нельзя определить количественно с помощью химического анализа по причине малого количества имеющегося материала и его гетерогенности. При испытании способом светоблокировки (USP, методика тестирования 788), то есть, при подсчете твердых частиц с использованием электронного счетчика частиц было показано, что композиции транспортных сред по настоящему изобретению имеют не более 25 частиц размером>10
- 39 037915 микрон на мл транспортной среды и не более 3 частиц размером>25 мкм на мл транспортной среды.
Методика USP 788 относится к технологии определения твердых частиц способом 1 (тест с подсчетом частиц со светоблокировкой) и способом 2 (тест с подсчетом частиц путем микроскопии). При исследовании транспортной среды на наличие невидимых невооруженным глазом частиц предпочтительно применяют способ 1. Вместе с тем, в некоторых случаях рассматриваемых композиций, для заключения о соответствии требованиям может потребоваться анализ композиций путем подсчета частиц со светоблокировкой с последующей микроскопией для подсчета частиц.
Не все парентеральные композиции могут быть проанализированы на наличие невидимых невооруженным глазом частиц с помощью одного или обоих указанных способов. Если способ 1 не применим, например, в случае композиций, имеющих пониженную прозрачность или повышенную вязкость, испытание следует проводить по способу 2, например, если транспортная среда включает в качестве компонентов коллоиды или липосомы. Аналогичным образом, для тех вариантов осуществления транспортной среды, в которых возможно образование воздушных или газовых пузырьков при засасывании в датчик, может также потребоваться микроскопия с подсчетом частиц. В рассматриваемых предпочтительных вариантах осуществления транспортная среда является не слишком вязкой. Но если вязкость тестируемой композиции является достаточно высокой, настолько, что исключается возможность проведения анализа каким-либо способом, можно применить количественный анализ с разведением подходящим разбавителем для уменьшения вязкости, при необходимости, что даст возможность провести необходимый анализ.
Способ 1 USP. Тест с подсчетом частиц со светоблокировкой
Образцы транспортной среды GS2, с компонентами в виде гиалуроновой кислоты и без таких компонентов, тестировали в подходящем аппарате, основанном на принципе блокировки света, что позволяет автоматически определять размер частиц и количество частиц по размеру. Аппарат был откалиброван с использованием дисперсий сферических частиц известных размеров в диапазоне от 10 до 25 мкм, согласно методике USP по подсчету количества частиц по стандартному образцу. Эти стандартные частицы диспергированы в воде, не содержащей частиц. Особое внимание уделено тому, чтобы избежать агрегации частиц во время диспергирования. Тесты на твердые частицы проводились в условиях ограничения твердых частиц, а именно, в ламинарном шкафу. Стеклянную посуду и фильтрационное оборудование очень тщательно промывали и ополаскивали. Непосредственно перед использованием оборудование ополаскивали сверху вниз, снаружи и внутри водой, не содержащей частиц. Количество используемых тестовых образцов было достаточным для обеспечения статистически обоснованной оценки тестируемой транспортной среды, и образцы анализировали на количество частиц, размер которых равен или превышал 10 и 25 мкм. Был проанализирован каждый из образцов транспортной среды GS2, и эти образцы включали <25 частиц размером >10 мкм на мл транспортной среды, и <3 частиц размером >25 мкм на мл транспортной среды.
Пример 12. Подтверждение жизнеспособности клеток ПЭС in vivo и эффективности в среде GS2
Целью этого исследования была оценка и сравнение безопасности, приживления и функциональности следующих клеток: 1) клетки пигментного эпителия сетчатки (человеческие клетки hRPE /чПЭС), полученные из эмбриональных стволовых клеток (ЭС) линии МА09, которые в композиции с BSS PLUS® были трансплантированы в пределах 4 ч; 2) клетки чПЭС, полученные из ЭС клеток линии J1, в композиции с BSS PLUS®; и 3) клетки чПЭС, полученные из клеточной линии J1, которые в композиции с транспортной средой GS2 были трансплантированы (а) в течение 22-28 ч и (b) в течение 44-52 ч. В этом исследовании подтверждено, что среда GS2 продлевает срок годности конечного продукта по сравнению с используемой в настоящее время композицией медицинской среды (BSS PLUS).
Для исследования были получены в общей сложности 32 детеныша крыс RCS (Royal College of Surgeon) (16 самцов и 16 самок). Возраст крыс составлял от 21 до 25 дней на момент начала введения.
Период акклиматизации: минимум 7 дней. День 1 соответствует дню субретинальной инъекции.
Схема эксперимента: Восемь крыс RCS (по 4 каждого пола) были рандомизированы на четыре группы введения: MA-09-hRPE (группа 1) и J1-hRPE (группы 2, 3, 4), каждая из которых состояла из трех подгрупп (табл. 1 ниже). Всем крысам провели субретинальную инъекцию клеток hRPE в правый глаз (OD) транссклеральным путем введения под анестезией. Группе 1 вводили клетки МА-09 hRPE в BSS PLUS® (в течение 4 ч), группе 2 вводили клетки J1-hRPE в BSS PLUS® (в течение 4 ч), группе 3 вводили клетки J1-hRPE в GS2 (в течение 22-28 ч) и группе 4 вводили клетки J1-hRPE в GS2 (в течение 44-52 ч). Подгруппы были распределены по введению в левый глаз; мнимая подгруппа (по 1 крысе каждого пола) получала только прокол иглой в субретинальное пространство левого глаза; подгруппа без введения (NI или интактная) (по 1 каждого пола) не получала инъекции в левый глаз; и две подгруппы с введением носителя (по 2 крысы каждого пола) получали субретинальную инъекцию или среды GS2 или BSS PLUS. Крысы были умерщвлены через 70-80 дней после инъекции.
- 40 037915
Таблица 1. Схема экспериментальных исследований
| Доза субретинальной инъекции | ||||
| Группа | Подгруппа | Число крыс | Левый глаз (OS) (контроль) | Правый глаз (OD) , клетки ПЭС |
| 1 (MA-09-hRPE в BSS PLUS® (в течение 4 часов) | а | 1M/1F | NI | ΜΆ-09-hRPE |
| Ь | 1M/1F | Мнимо е | ΜΆ-09-hRPE | |
| с | 2M/2F | Носитель (BSS PLUS) | ΜΆ-09-hRPE | |
| 2 Jl-hRPE в BSS PLUS® (в течение 4 часов) | d | 1M/1F | NI | Jl-hRPE |
| е | 1M/1F | Мнимое | Jl-hRPE | |
| f | 2M/2F | Носитель (BSS PLUS) | Jl-hRPE | |
| 3 (Jl-hRPE в GS2 (в течение 22-28 часов) | g | 1M/1F | NI | Jl-hRPE |
| h | 1M/1F | Мнимое | Jl-hRPE | |
| 1 | 2M/2F | Носитель (GS2) | Jl-hRPE | |
| 4 (Jl-hRPE в GS2 (в течение 44-52 часов) | j | 1M/1F | NI | Jl-hRPE |
| k | 1M/1F | Мнимо е | Jl-hRPE | |
| 1 | 2M/2F | Носитель (GS2) | Jl-hRPE |
NI=6e3 инъекции; мнимое=прокол субретинального пространства пустым шприцем.
BSS PLUS®=2 мкл носителя (без клеток);
GS2=2 мкл носителя (без клеток) hRPE=100000 клеток ПЭС в носителе BSS PLUS® или GS2.
Результаты прижизненных измерений, показателей аутопсии и гистопатологии для оценок проведенных исследований представлены в табл. 2 ниже.
Таблица 2. Параметры оценки и интервалы
| Показатели | Приблизительные интервалы (число дней после инъекции) |
| Клинический осмотр | по меньшей мере ежедневно |
| Масса тела/рацион | еженедельно |
| Осмотр глаз | перед введением и на день 40+3 и день 70+3 после операции (оба периода) |
| Оптомоторные данные (слежение за поворотом головы) | на день 40+3 и день 70+3 после операции |
| ЭРГ (электроретинография) | на день 40+3 и день 70+3 после операции |
| Оптическая когерентная томография | на день 70+4 после операции |
| Порог яркости | на день от 70 до 80 после операции |
| Полная аутопсия | в конце исследования, включая заметные грубые повреждения |
| Сбор образцов ткани | Мозг нижнечелюстных лимфатических узлов, сердце, печень, почки, селезенка и легкие. Сохранение тканей для архивных целей. |
| Вес органов | Мозг, сердце, печень, почки, селезенка и легкие |
| Гистопатология | Глаза и зрительные нервы, и любые макроскопические повреждения |
| Иммуноокрашивание | Глаза и зрительные нервы |
Среду BSS PLUS® разводили в день введения в соответствии с указаниями и хранили охлажденной (от 2 до 8°С) для использования в целях разбавления клеток ПЭС для получения композиции, а также для использования хирургом с целью заполнения устройства для инъекций и использования в качестве эталонного носителя. Коротко, содержимое BSS Plus® в качестве части II вносили в содержимое BSS PLUS® в качестве части I и использовали для ресуспендирования клеток ПЭС в течение 6 часов после разведения. Время разведения и инъекции регистрировали и сохраняли в записях исследований.
Порцию среды GS2, используемой в данном исследовании, готовили и хранили при температуре от
- 41 037915 до 8°С. GS2 использовали при комнатной температуре для промывки клетки в ходе изготовления композиции, и при температуре от 2 до 8°С для клеток ПЭС в конечной композиции, а также для использования хирургом с целью заполнения устройства для инъекций и использования в качестве эталонного носителя.
Подготовка BBS PLUS: Криоконсервированные клетки MA09-hRPE и клетки J1-hRPE хранили в жидком азоте (LN2), чтобы поддерживать клетки в паровой фазе при температуре < 135°С. Клетки сохранялись в условиях LN2 до дня обработки и трансплантации. В день трансплантации криоконсервированные клетки чПЭС оттаивали и готовили композицию с BSS PLUS® в концентрации приблизительно 50000 жизнеспособных клеток/мкл. Концентрированные клетки чПЭС приносили хирургу в пробирке, наполненной конечным продуктом, который помещали на мокрый лед в охладителе Labtop Cooler для использования в течение 4 ч от момента изготовления композиции (фиг. 11, см. MA-09-RPE <4 ч и J1RPE <4 ч). Время разведения и инъекции регистрировали и сохраняли в записях исследований.
Композиции GS2: Криоконсервированные клетки J1-hRPE хранили в жидком азоте (LN2) в химической паровой фазе при температуре<135°С. Клетки сохранялись в условиях LN2 до дня обработки. За один или два дня до трансплантации клетки J1-hRPE оттаивали и готовили композицию с GS2 в концентрации приблизительно 1500 жизнеспособных клеток /мкл. Затем клетки ПЭС в композиции сохраняли при температуре от 2 до 8°С и оценивали количество жизнеспособных клеток через 2-6 ч после изготовления композиции. Приблизительно через 20 или 42 ч после изготовления композиции клетки ПЭС концентрировали в среде GS2 до концентрации приблизительно 50000 жизнеспособных клеток/мкл. Концентрированные клетки чПЭС приносили хирургу в пробирке, наполненной конечным продуктом, который помещали на мокрый лед в охладителе Labtop Cooler. Затем выполняли трансплантацию клеток ПЭС приблизительно через 22 часа или 44 часа после изготовления композиции с GS2 (фиг. 11, см. J1-RPE < 22 ч и J1-RPE < 44 ч соответственно).
Доза введения: субретинальная инъекция
Животным проводили анестезию смесью кетамина (75 мг/кг) и дексмедетомидина (0,25 мг/кг), с последующим введением Карпрофена (5 мг/кг) путем подкожного (п/к) введения. Перед введением глаза промывали 0,9% натрия хлорида для инъекций (стерильный NaCl), USP. Затем глаза очищали 2 каплями 0,3% офтальмологического раствора Окуфлюкс (USP) и расширяли с помощью мидриатических капель (1% тропикамид), с последующим применением офтальмологического раствора 2,5% фенилэфрина гидрохлорида (USP). Тестируемые продукты, клетки чПЭС МА09 и J1 в BSS PLUS® вводили в течение от 0,25 до 4 ч после изготовления композиции (группы 1 и 2, табл. 1). Тестируемый продукт клетки J1-hRPE в GS2 вводили в течение 22 или 44 ч после изготовления композиции (группы 3 и 4, табл. 1). Тестируемые продукты для каждой группы (группы введения или клеток MA09-hRPE или клеток J1-hRPE) были введены путем субретинальной инъекции в правый глаз у 8 животных в каждой группе, как указано в описании эксперимента выше (и в таблице 1). В левый глаз у четырех животных в каждой из групп 1 и 2 вводили эталонный продукт BSS PLUS®. В левый глаз у четырех животных в каждой из групп 3 и 4 вводили эталонный продукт GS2. В левый глаз у двух животных в каждой из четырех групп была сделана процедура инъекции, но без введения какого-либо материала (мнимая инъекция). Левые глаза остальных двух животных в каждой из четырех групп оставались без инъекции (интактные).
Коротко, субретинальные инъекции выполняли с помощью операционного микроскопа. Глаза были стабилизированы с помощью шовного материала (Ethicon 4-0 Perma-Hand Silk®) позади экватора глазного яблока с помощью петли кисетного шва вокруг глазного яблока. Раствор гипромеллозы (или аналогичный раствор) наносили на глаз и фиксировали на месте с помощью кольца. Ножницами срезали небольшую часть конъюнктивы, и металлическую иглу 30 G х У/ использовали для выполнения склеротомии в верхней дорсальной височной области глазного яблока. Дозирующее устройство состоит из калиброванной стерильной стеклянной пипетки (World Precision Instruments, изделие #1В150-4), соединенной с пластиковой трубкой с каналом приблизительно 0,8 мм Tygon™ (Saint-Gobain Performance Plastics #P3603), соединенной с тупоконечной иглой 18G (Becton-Dickenson, Inc. Reference #305196), подсоединенной к 25 мкл шприцу Hamilton (модель # 702 LT, в каталоге #804010, предварительно наполненному подходящим носителем, как описано в схеме эксперимента (табл. 1). В систему вводили небольшое количество воздуха, чтобы в дозирующем устройстве отделить инъецируемый объем от носителя, после чего тестируемые или эталонные продукты набирали в стеклянную пипетку до объема 2 мкл. Для каждой инъекции/каждого глаза использовали новую стерильную стеклянную пипетку.
Склеротомию ушивали нерассасывающимся хирургическим швом (Ethicon Prolene 10-0). Удаляли шов (Ethicon 4-0 Perma-Hand Silk®) вокруг глазного яблока и веко в итоге возвращали в нормальное положение. После завершения процедуры инъекции на глаза наносили местные антибиотики (5 мг/г эритромициновой глазной мази).
Во время операции тщательно регистрировали интраоперационный рисунок глазного дна, чтобы сохранить размер и расположение фильтрационной подушки, а также любые другие офтальмологические изменения.
Животных содержали на теплой подстилке или под греющим одеялом (приблизительно при 37°С)
- 42 037915 до полного восстановления, после чего их возвращали в их клетку. Дополнительное нанесение 0,5% эритромициновой глазной мази на поверхность глаза применяли по мере необходимости, чтобы предотвратить высыхание, пока животное полностью не проснется и сможет мигать в нормальном режиме.
Все животные получали перорально циклоспорин А (CsA), вводимый в питьевой воде (210 г/л, с достижением целевой концентрации в крови приблизительно 300 г/л). Также применяли внутрибрюшинное введение дексаметазона один раз в день в течение 14 дней (1,6 мг/кг/день) после операции.
Наблюдения у клетки в отношении смертности/атонального состояния и медицинские наблюдения проводили по меньшей мере один раз в день. Не наблюдалось каких-либо клинических признаков болезни или реакции на лечение. Животных взвешивали по меньшей мере один раз во время акклиматизации, приблизительно один раз в неделю во время исследования и непосредственно перед аутопсией (терминальная масса тела). При исследовании животных не наблюдалось каких-либо исключительных изменений массы тела. Осмотр глаз проводили перед введением, приблизительно на 40-й день после введения дозы и повторно перед аутопсией. Глаза животных расширяли для обследования с помощью 1% тропикамида в дозе 1 капля на глаз. Не было выявлено каких-либо очевидных различий в результатах офтальмологических обследований между разными группами, которым вводили композиции клеток ПЭС. Аналогично, оптокинетические реакции (ОКР) проводили с использованием двигающихся полосок разной пространственной частоты, которые измеряли у всех животных в точках времени согласно табл. 2. Остроту зрения измеряли по ОКР для всех глаз, и исследуемых и контрольных. Используемое устройство для оптометрического тестирования (Prusky et al., 2000), состоит из вращающегося цилиндра, покрытого вертикальной синусоидальной дифракционной решеткой, представленной в виртуальном трехмерном (3D) пространстве на четырех компьютерных мониторах, расположенных квадратом. Крысы свободно размещались на платформе в центре площади, где они следили за решеткой с возвратными движениями головы. Пространственная частота решетки была зафиксирована в положении просмотра путем многократного повторного возвращения цилиндра к голове испытуемой крысы. Остроту зрения определяли количественно по увеличению пространственной частоты решетки с использованием психофизической ступенчатой прогрессии, до потери оптокинетического рефлекса, в результате чего достигался максимальный порог. Измерения проводились по количеству циклов (cycle/degree). He было каких-либо очевидных различий, выявленных в исследованиях ОКР, между разными группами, которым вводили композиции клеток ПЭС. Также была проведена спектральная оптическая когерентная томография (SDOCT), как описано выше, и не было выявлено никаких очевидных различий в результатах офтальмологических исследований между разными группами введения композиций клеток ПЭС. Крысам проводили анестезию путем интраперитонеальной (и/п) инъекции анестетиков. Тропикамид наносили на оба глаза для расширения зрачков, в целях улучшения визуализации сетчатки. Крысы были помещены в систему формирования изображения. Глазные капли Джентил и Систейн наносили на роговицу, чтобы поддерживать роговицу во влажном состоянии.
На фиг. 11 показаны результаты электроретинограмм (ЭРГ) на 60 дней после введения в группе из 16 крыс. Как указано выше, не было каких-либо очевидных различий, выявленных по результатам ЭРГ между разными группами введения композиций клеток ПЭС. Коротко, животных содержали в полной темноте в течение ночи (по меньшей мере 12 ч) для приведения сетчатки в состояние адаптации к темноте. Для регистрации ЭРГ животных анестезировали с помощью и/п инъекции анестезирующего вещества и помещали в стереотаксический держатель головы. При тусклом красном свете записывающий электрод (две коаксиальные проволочные петли, диаметр проволоки 50 мкм, прикрепленные к нейтральной контактной линзе) помещали на глаз животного, предварительно обработанного лидокаином. Одну из задних конечностей фиксировали для удаления шерсти электрической машинкой для стрижки, затем кожу обрабатывали бетадином перед установкой канюли (канюлю вставляли в мышцу задней конечности на все время манипуляции). Для расширения зрачка вводили Тропикамид. Перед началом регистрации проводили дополнительный 1-часовой период адаптации к темноте для восстановления адаптации после подготовки животных. Вся запись ЭРГ продолжалась приблизительно 20 мин для обоих глаз (глаза обследовали последовательно, слева направо, или справа налево). Для раздражения глаз применяли световые вспышки в полном поле. Корнеальные потенциалы регистрировали с усилителем, подключенным к электроду. Подачу вспышек контролировали с помощью компьютерной программы. Для результатов использовали средние значения реакций в течение 5-100 раздражающих вспышек, в зависимости от мощности электроретинографии, которая может быть очень низкой у животных с прогрессирующей дегенерацией сетчатки.
В целом, результаты этих исследований указывают на то, что транспортная среда GS2 обеспечивает приблизительно одинаково эффективное количество жизнеспособных и функциональных клеток ПЭС даже после пребывания в течение 44 ч в суспензии в транспортной среде GS2, по сравнению со средой BSS PLUS после суспендирования в течение менее чем 4 ч. При этом срок 4 ч является сроком годности, одобренным FDA (Управлением по контролю за пищевыми продуктами и лекарственными препаратами США) и ЕМА (Европейским агентством по лекарственным средствам) при использовании BSS PLUS для инъекций клеток ПЭС. В каждом случае, в контроле, при мнимом введении и в интактных глазах животных не было выявлено каких-либо улучшений по сравнению с группами животных, в глаза которых вво- 43 037915 дили клетки ПЭС в транспортных средах BSS-PLUS и GS2.
Эквиваленты и объем, включение путем ссылки
Специалистам в данной области будет понятно или они смогут определить с помощью не более чем рутинных экспериментов, что для описанных в настоящем изобретении вариантов осуществления существует множество эквивалентов. Объем настоящего изобретения не следует ограничивать приведенным выше описанием, скорее он изложен в прилагаемой формуле изобретения.
Формы единственного числа включают и единственное, и множественное число, если из контекста явно не следует иное. Так, например, ссылка на вещество включает одно вещество и множество таких веществ.
Пункты формулы изобретения или описания, которые содержат союз или между двумя или несколькими членами группы, считаются выполненными, если присутствует один, более одного или все члены группы, если не указано иное или иным образом очевидно из контекста. Раскрытие группы, которая включает союз или между двумя или несколькими членами группы, относится к вариантам осуществления, в которых точно присутствует один член группы, к вариантам осуществления, в которых присутствует более чем один член группы, и к вариантам осуществления, в которых присутствуют все члены группы. В целях краткости эти варианты не были по отдельности изложены в изобретении, но следует понимать, что каждый из этих вариантов осуществления рассмотрен в изобретении и может быть конкретно заявлен или отвергнут в формуле изобретения.
Следует понимать, что изобретение охватывает все варианты, комбинации и изменения, в которых одно или несколько ограничений, элементов, частей или описательных терминов, из одного или нескольких пунктов формулы изобретения или из одного или нескольких соответствующих разделов описания, введены в другой пункт формулы изобретения. Например, пункт формулы изобретения, который зависит от другого пункта формулы изобретения, может быть изменен, чтобы включать одно или несколько ограничений, выявленных в любом другом пункте формулы изобретения, который зависит от того же самого базового пункта формулы изобретения. Кроме того, если в пунктах формулы изобретения рассмотрена композиция, следует понимать, что включены способы изготовления или использования этой композиции в соответствии с любым из способов изготовления или использования, описанных в изобретении, или в соответствии с известными в данной области способами, если таковые имеются, если не указано иное, или если специалистам в данной области очевидно, что может возникнуть противоречие или несоответствие.
Если элементы представлены в виде списков, например, в формате группы Маркуша, следует понимать, что также раскрыты все возможные подгруппы элементов и что из группы можно удалить любой элемент или подгруппу элементов. Также следует отметить, что термин содержащий является открытым и допускает включение дополнительных элементов или этапов. Следует понимать, что, в общем, если вариант осуществления, продукт или способ упомянуты как включающие отдельные элементы, признаки или этапы, то изобретение также относится к вариантам осуществления, продуктам или способам, которые состоят или состоят по существу из таких элементов, признаков или этапов. В целях краткости эти варианты не были по отдельности изложены в изобретении, но следует понимать, что каждый из этих вариантов осуществления относится к изобретению, и может быть конкретно указан или отвергнут в формуле изобретения.
Если заданы диапазоны, то включены конечные точки. Кроме того, следует понимать, что если не иное указано или иным образом очевидно из контекста и/или известно рядовому специалисту в данной области, выраженные в виде диапазонов значения могут подразумевать любое конкретное значение в пределах указанных диапазонов в некоторых вариантах осуществления, до десятых долей единицы нижнего предела диапазона, если из контекста явно не следует иное. В целях краткости, значение в каждом диапазоне не было отдельно изложено в настоящем изобретении, но следует понимать, что каждое из этих значений представлено в изобретении и может быть конкретно указано или отвергнуто в формуле изобретения. Также следует понимать, что если иное не указано или иным образом очевидно из контекста и/или известно рядовому специалисту в данной области, выраженные в виде диапазонов значения могут подразумевать любой поддиапазон в пределах заданного диапазона, при этом конечные точки поддиапазона выражены со степенью точности до десятых долей единицы нижнего предела диапазона.
Дополнительно следует понимать, что любой конкретный вариант осуществления настоящего изобретения может быть явно исключен из любого одного или нескольких пунктов формулы изобретения. Если указаны диапазоны, любое значение в пределах диапазона явно может быть исключено из любого одного или нескольких пунктов формулы изобретения. Любой вариант осуществления, элемент, функция, применение или аспект композиций и/или способов по настоящему изобретению может быть исключен из любых одного или нескольких пунктов формулы изобретения. В целях краткости, все варианты осуществления, в которых исключены один или несколько элементов, признаков, целей или аспектов, в настоящем изобретении не указаны явно.
Все публикации, патенты, патентные заявки, публикации и записи в базах данных (например, значения в базе данных последовательностей), упомянутые в изобретении, например в разделах Уровень, Сущность, Подробное описание, Примеры и/или Ссылки, включены в настоящее изобретение в качестве
- 44 037915 ссылки в полном объеме, как если бы каждая отдельная публикация, патент, патентная заявка, публикация и запись в базе данных была конкретно и отдельно включена в настоящее изобретение путем ссылки.
В случае противоречий приоритет остается за настоящей заявкой, включая любые определения из данного документа.
Claims (26)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Раствор для хранения клеток и/или для инъекции пациенту, содержащий приблизительно 0,5-0,9 мМ CaCl2, приблизительно 0,2-0,4 мМ MgCl2, приблизительно 1,6-2,4 мМ KCl, приблизительно 0,8-1,2 мМ цитрата натрия, приблизительно 13-19 мМ декстрозы и приблизительно 116-174 мМ NaCl.
- 2. Раствор для хранения клеток и/или для инъекции пациенту, содержащий приблизительно 0,68-1,02% NaCl, приблизительно 0,008-0,012% дигидрата CaCl2, приблизительно 0,012-0,018% KCl, приблизительно 0,0048-0,0072% гексагидрата MgCl2, приблизительно 0,028-0,042% дигидрата цитрата натрия и приблизительно 0,23-0,35% декстрозы.
- 3. Раствор для хранения клеток и/или для инъекции пациенту, содержащий приблизительно 0,1-1,2 мМ CaCl2, приблизительно 0,05-5 мМ MgCl2, приблизительно 1-2,5 мМ KCl, приблизительно 0,5-2 мМ цитрата натрия, приблизительно от 15-17 мМ декстрозы и приблизительно 125-175 мМ NaCl.
- 4. Раствор согласно п.1, содержащий приблизительно 0,85% NaCl, приблизительно 0,01% CaCl2 дигидрата, приблизительно 0,015% KCl, приблизительно 0,006% MgCl2 гексагидрата, приблизительно 0,035% дигидрата цитрата натрия, по меньшей мере приблизительно 0,25% декстрозы.
- 5. Раствор согласно п.1, содержащий приблизительно 0,9 мМ CaCl2, приблизительно 0,3 мМ MgCl2, приблизительно 2 мМ KCl, приблизительно 1,2 мМ цитрата натрия, приблизительно 15 мМ декстрозы, приблизительно 145 мМ NaCl.
- 6. Раствор по любому из пп.1-3, где раствор дополнительно содержит ацетат натрия.
- 7. Раствор по любому из пп.1-6, где раствор дополнительно содержит вязкоупругий полимер.
- 8. Раствор по п.7, где концентрация полимера составляет 0,005-5% вес/объем, 0,01-0,05% вес/объем или приблизительно 0,05% вес/объем.
- 9. Раствор по п.7, где концентрация полимера составляет приблизительно 0,05% вес/объем.
- 10. Раствор по п.7 или 8, где полимер представляет собой гиалуроновую кислоту или ее соль или сольват.
- 11. Раствор по п. 10, где полимер представляет собой гиалуронат натрия.
- 12. Раствор согласно любому из пп.1-11, при этом указанный раствор можно:(a) хранить в течение по меньшей мере 48 ч при 25°С без измеримого осаждения растворенных веществ и/или измеримой потери способности раствора поддерживать выживание и жизнеспособность клеток, хранящихся в этом растворе, и/или (b) хранить в течение по меньшей мере 48 ч при температуре 2-8°С без измеримого осаждения растворенных веществ и/или измеримой потери способности раствора поддерживать выживание и жизнеспособность клеток, хранящихся в этом растворе.
- 13. Раствор по любому из пп.1-12, дополнительно содержащий популяцию клеток.
- 14. Раствор по п.13, где популяция клеток:(a) подходит для трансплантации субъекту, кроме того, необязательно подходит для трансплантации в глаз субъекта, (b) содержит клетки пигментного эпителия сетчатки (ПЭС), (c) содержит фоторецепторные клетки и/или (d) содержит мезенхимальные клетки.
- 15. Раствор по п.13 или 14, где раствор хранят в течение по меньшей мере 4, по меньшей мере 6, по меньшей мере 12, по меньшей мере 24, по меньшей мере 36 или по меньшей мере 48 ч.
- 16. Раствор по любому из пп.1-15, где раствор по существу является апирогеннным.
- 17. Раствор по любому из пп.1-16, где раствор является стерильным.
- 18. Способ получения клеточной композиции, содержащей популяцию клеток в растворе согласно любому из пп.1-12, где указанный способ включает контактирование популяции клеток с раствором.
- 19. Способ по п.18, где указанный способ включает контактирование популяции криоконсервированных или осажденных клеток с раствором и таким образом осуществляют разведение клеток.
- 20. Способ по п.18 или 19, где способ дополнительно включает хранение клеточной композиции в течение по меньшей мере 4, по меньшей мере 6, по меньшей мере 12, по меньшей мере 18, по меньшей мере 24, по меньшей мере 36, по меньшей мере 48, по меньшей мере 60 или по меньшей мере 72 ч.
- 21. Способ по любому из пп.18-20, где клеточная композиция подходит для введения субъекту.
- 22. Способ по п.21, где указанное введение включает инъекцию клеточной композиции в глаз субъекта.- 45 037915
- 23. Фармацевтическая композиция для лечения субъекта, имеющего заболевание сетчатки, содержащая популяцию клеток в растворе согласно любому из пп.1-12, при этом фармацевтическая композиция подходит для введения субъекту.
- 24. Фармацевтическая композиция по п.23, где фармацевтическую композицию хранят в течение по меньшей мере 4, по меньшей мере 6, по меньшей мере 12, по меньшей мере 24, по меньшей мере 36 или по меньшей мере 48 ч.
- 25. Фармацевтическая композиция по п.23 или 24, где заболевание сетчатки представляет собой палочковую или колбочковую дистрофию, дегенерацию сетчатки, пигментный ретинит, диабетическую ретинопатию, макулярную дегенерацию, врожденный амавроз Лебера или болезнь Штаргардта.
- 26. Набор для получения клеточной композиции для трансплантации, содержащий:(а) раствор согласно любому из пп.1-12;(b) инструкции по контактированию клеточной популяции с раствором (а) для получения клеточной композиции и (c) контейнер для контактирования (b) и/или для хранения клеточной композиции (b).
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201562206821P | 2015-08-18 | 2015-08-18 | |
| PCT/US2016/047545 WO2017031312A1 (en) | 2015-08-18 | 2016-08-18 | Clinical formulations |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201890516A1 EA201890516A1 (ru) | 2018-09-28 |
| EA037915B1 true EA037915B1 (ru) | 2021-06-07 |
Family
ID=56843032
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA202190722A EA202190722A1 (ru) | 2015-08-18 | 2016-08-18 | Клинические композиции |
| EA201890516A EA037915B1 (ru) | 2015-08-18 | 2016-08-18 | Клинические композиции |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA202190722A EA202190722A1 (ru) | 2015-08-18 | 2016-08-18 | Клинические композиции |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US11013808B2 (ru) |
| EP (1) | EP3334415A1 (ru) |
| JP (3) | JP7043392B2 (ru) |
| KR (3) | KR102411018B1 (ru) |
| CN (1) | CN108697641A (ru) |
| AU (2) | AU2016308818B2 (ru) |
| BR (1) | BR112018003031B1 (ru) |
| CA (1) | CA2995977A1 (ru) |
| EA (2) | EA202190722A1 (ru) |
| HK (1) | HK1256839A1 (ru) |
| IL (3) | IL299326A (ru) |
| MX (2) | MX2018002038A (ru) |
| PH (1) | PH12018500371A1 (ru) |
| SG (1) | SG10201913250SA (ru) |
| TW (2) | TWI833293B (ru) |
| WO (1) | WO2017031312A1 (ru) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9993427B2 (en) * | 2013-03-14 | 2018-06-12 | Biorest Ltd. | Liposome formulation and manufacture |
| ES2774456T3 (es) | 2014-12-30 | 2020-07-21 | Cell Cure Neurosciences Ltd | Poblaciones de células del RPE y métodos de generación de las mismas |
| IL303401A (en) | 2015-03-23 | 2023-08-01 | Astellas Inst For Regenerative Medicine | Improved assays for the potential of retinal pigment epithelium (RPE) cells and photoreceptor progenitors |
| JP7043392B2 (ja) | 2015-08-18 | 2022-03-29 | アステラス インスティテュート フォー リジェネレイティブ メディシン | 臨床製剤 |
| AU2017287997C1 (en) * | 2016-06-30 | 2023-02-02 | Healios K.K. | Transplantation medium |
| BR112020013238A2 (pt) * | 2017-12-29 | 2020-12-01 | Cell Cure Neurosciences Ltd. | composição e método para formular células do epitélio pigmentar da retina bem como uso da dita composição para tratar uma condição retiniana |
| AU2020337929A1 (en) | 2019-08-28 | 2022-03-24 | Astellas Institute For Regenerative Medicine | Methods of treating vascular diseases |
| CA3151636A1 (en) | 2019-08-28 | 2021-03-04 | Astellas Institute For Regenerative Medicine | Compositions and methods of treating vascular diseases |
| EP4051785A1 (en) | 2019-10-30 | 2022-09-07 | Astellas Institute for Regenerative Medicine | Methods for producing retinal pigment epithelium cells |
| JP7018527B1 (ja) | 2020-12-16 | 2022-02-10 | アニコム先進医療研究所株式会社 | 細胞の保存方法および細胞懸濁液 |
| JP2024525710A (ja) * | 2021-07-15 | 2024-07-12 | エスアイオーツー・メディカル・プロダクツ・インコーポレイテッド | 核酸および生体試料のための保存剤組成物ならびに使用方法 |
| WO2023176906A1 (ja) * | 2022-03-16 | 2023-09-21 | 住友ファーマ株式会社 | 移植用媒体 |
| WO2024019962A1 (en) | 2022-07-18 | 2024-01-25 | Astellas Institute For Regenerative Medicine | Methods of treating brain injury |
| WO2024044134A1 (en) | 2022-08-23 | 2024-02-29 | Astellas Institute For Regenerative Medicine | Photoreceptor rescue cell (prc) compositions and methods for treatment of ocular disorders |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0562188A1 (en) * | 1992-03-27 | 1993-09-29 | Chung-Ho Chen | Composition for tissues to sustain viability and biological functions in surgery and storage |
| EP0781547A1 (en) * | 1995-12-22 | 1997-07-02 | Chemedica S.A. | Sodium hyaluronate based ophthalmic formulation for use in eye surgery |
| WO2014095953A1 (en) * | 2012-12-18 | 2014-06-26 | Gambro Lundia Ab | Dialysis composition |
Family Cites Families (34)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5654266A (en) * | 1992-02-10 | 1997-08-05 | Chen; Chung-Ho | Composition for tissues to sustain viability and biological functions in surgery and storage |
| AU681675B2 (en) | 1993-06-04 | 1997-09-04 | Biotime, Inc. | Plasma-like solution |
| WO1999009953A1 (fr) | 1997-08-22 | 1999-03-04 | Shimizu Pharmaceutical Co., Ltd. | Preparation contenant du glucose |
| GB2336109A (en) | 1998-04-07 | 1999-10-13 | Univ Bristol | Ophthalmic Irrigating Solution |
| EP1247526B1 (en) * | 2000-01-11 | 2005-12-14 | Ophtecs Corporation | Perfusion liquid preparations for ophthalmic operations |
| US7084157B2 (en) * | 2002-05-17 | 2006-08-01 | Rajeev Raut | Ophthalmic pharmaceutical compositions and methods for treating ocular inflammation |
| KR20130025953A (ko) | 2004-01-23 | 2013-03-12 | 어드밴스드 셀 테크놀로지, 인코포레이티드 | 망막 변성 질환 치료를 위한 개선된 양식 |
| US7794704B2 (en) | 2004-01-23 | 2010-09-14 | Advanced Cell Technology, Inc. | Methods for producing enriched populations of human retinal pigment epithelium cells for treatment of retinal degeneration |
| US20190282622A1 (en) | 2004-01-23 | 2019-09-19 | Astellas Institute For Regenerative Medicine | Modalities for the treatment of degenerative diseases of the retina |
| EP3712258A1 (en) | 2006-04-14 | 2020-09-23 | Astellas Institute for Regenerative Medicine | Hemangio-colony forming cells |
| EP2617428A1 (en) * | 2006-08-15 | 2013-07-24 | Agency for Science, Technology and Research | Mesenchymal stem cell conditioned medium |
| IL292561A (en) * | 2007-10-12 | 2022-06-01 | Astellas Inst For Regenerative Medicine | Improved methods of rpe cell production and rpe cell preparations |
| MX2010012089A (es) | 2008-05-06 | 2011-07-28 | Advanced Cell Tech Inc | Metodos para producir celulas eritroides enucleadas derivadas de celulas troncales pluripotentes. |
| KR20110016913A (ko) | 2008-05-06 | 2011-02-18 | 어드밴스드 셀 테크놀로지, 인코포레이티드 | 혈관 콜로니 형성 세포 및 비-생착성 혈관 세포 |
| CA2781149A1 (en) | 2009-11-17 | 2011-05-26 | Advanced Cell Technology, Inc. | Methods of producing human rpe cells and pharmaceutical preparations of human rpe cells |
| BR112012014104A2 (pt) | 2009-12-04 | 2016-07-05 | Stem Cell & Regenerative Medicine International Inc | método de geração de células destrutoras naturais e células dendríticas de hemangioblastos embrionários humanos derivados de células-tronco |
| KR20210066020A (ko) | 2009-12-04 | 2021-06-04 | 아스텔라스 인스티튜트 포 리제너러티브 메디슨 | 기질 없는 조건 하에서 인간 배아줄기세포로부터 기능적 거핵구 및 혈소판의 대규모 생성 |
| EP3875599A1 (en) | 2010-07-23 | 2021-09-08 | Astellas Institute for Regenerative Medicine | Methods for detection of rare subpopulations of cells and highly purified compositions of cells |
| SI2780022T1 (sl) | 2011-11-14 | 2019-09-30 | Astellas Institute For Regenerative Medicine | Farmacevtski preparati humanih rpe celic in njihova uporaba |
| US8961956B2 (en) | 2011-11-30 | 2015-02-24 | Ocata Therapeutics, Inc. | Mesenchymal stromal cells and uses related thereto |
| EP3449929A1 (en) | 2011-11-30 | 2019-03-06 | Astellas Institute for Regenerative Medicine | Mesenchymal stromal cells and uses related thereto |
| CA2858173C (en) | 2011-12-06 | 2023-09-26 | Advanced Cell Technology, Inc. | Method of directed differentiation producing corneal endothelial cells, compositions thereof, and uses thereof |
| CN103783031B (zh) * | 2012-10-29 | 2015-11-18 | 四川新生命干细胞科技股份有限公司 | 一种细胞保存液 |
| EP2934555B1 (en) | 2012-12-21 | 2021-09-22 | Astellas Institute for Regenerative Medicine | Methods for production of platelets from pluripotent stem cells |
| US20160175362A1 (en) | 2014-03-14 | 2016-06-23 | Ocata Therapeutics, Inc. | Photoreceptors and photoreceptor progenitors produced from pluripotent stem cells |
| KR102263956B1 (ko) | 2013-03-15 | 2021-06-11 | 아스텔라스 인스티튜트 포 리제너러티브 메디슨 | 만능 줄기 세포로부터 제조된 광수용기 및 광수용기 전구체 |
| US20160175361A1 (en) | 2014-03-14 | 2016-06-23 | Advanced Cell Technology, Inc. | Photoreceptors and photoreceptor progenitors produced from pluripotent stem cells |
| US11241460B2 (en) | 2013-03-15 | 2022-02-08 | Astellas Institute For Regenerative Medicine | Photoreceptors and photoreceptor progenitors produced from pluripotent stem cells |
| PT3189135T (pt) | 2014-09-05 | 2021-08-19 | Astellas Inst For Regenerative Medicine | Células ganclionares retinianas e seus progenitores |
| IL303401A (en) | 2015-03-23 | 2023-08-01 | Astellas Inst For Regenerative Medicine | Improved assays for the potential of retinal pigment epithelium (RPE) cells and photoreceptor progenitors |
| JP7043392B2 (ja) | 2015-08-18 | 2022-03-29 | アステラス インスティテュート フォー リジェネレイティブ メディシン | 臨床製剤 |
| AU2020337929A1 (en) | 2019-08-28 | 2022-03-24 | Astellas Institute For Regenerative Medicine | Methods of treating vascular diseases |
| CA3151636A1 (en) | 2019-08-28 | 2021-03-04 | Astellas Institute For Regenerative Medicine | Compositions and methods of treating vascular diseases |
| EP4051785A1 (en) | 2019-10-30 | 2022-09-07 | Astellas Institute for Regenerative Medicine | Methods for producing retinal pigment epithelium cells |
-
2016
- 2016-08-18 JP JP2018508674A patent/JP7043392B2/ja active Active
- 2016-08-18 KR KR1020187007689A patent/KR102411018B1/ko active IP Right Grant
- 2016-08-18 TW TW111127548A patent/TWI833293B/zh active
- 2016-08-18 KR KR1020227020352A patent/KR102651291B1/ko active IP Right Grant
- 2016-08-18 TW TW105126446A patent/TWI772270B/zh active
- 2016-08-18 WO PCT/US2016/047545 patent/WO2017031312A1/en active Application Filing
- 2016-08-18 CN CN201680059201.6A patent/CN108697641A/zh active Pending
- 2016-08-18 CA CA2995977A patent/CA2995977A1/en active Pending
- 2016-08-18 AU AU2016308818A patent/AU2016308818B2/en active Active
- 2016-08-18 US US15/753,232 patent/US11013808B2/en active Active
- 2016-08-18 EA EA202190722A patent/EA202190722A1/ru unknown
- 2016-08-18 BR BR112018003031-7A patent/BR112018003031B1/pt active IP Right Grant
- 2016-08-18 IL IL299326A patent/IL299326A/en unknown
- 2016-08-18 KR KR1020237013564A patent/KR20230058544A/ko not_active Application Discontinuation
- 2016-08-18 EA EA201890516A patent/EA037915B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2016-08-18 MX MX2018002038A patent/MX2018002038A/es unknown
- 2016-08-18 SG SG10201913250SA patent/SG10201913250SA/en unknown
- 2016-08-18 EP EP16758025.7A patent/EP3334415A1/en active Pending
-
2018
- 2018-02-15 IL IL257551A patent/IL257551B/en unknown
- 2018-02-16 MX MX2022010363A patent/MX2022010363A/es unknown
- 2018-02-19 PH PH12018500371A patent/PH12018500371A1/en unknown
- 2018-12-12 HK HK18115924.9A patent/HK1256839A1/zh unknown
-
2021
- 2021-03-23 US US17/210,448 patent/US11957754B2/en active Active
- 2021-12-17 JP JP2021205350A patent/JP7449915B2/ja active Active
-
2022
- 2022-03-07 IL IL291163A patent/IL291163B2/en unknown
- 2022-07-20 AU AU2022206757A patent/AU2022206757A1/en active Pending
-
2024
- 2024-03-04 JP JP2024031906A patent/JP2024074803A/ja active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0562188A1 (en) * | 1992-03-27 | 1993-09-29 | Chung-Ho Chen | Composition for tissues to sustain viability and biological functions in surgery and storage |
| EP0781547A1 (en) * | 1995-12-22 | 1997-07-02 | Chemedica S.A. | Sodium hyaluronate based ophthalmic formulation for use in eye surgery |
| WO2014095953A1 (en) * | 2012-12-18 | 2014-06-26 | Gambro Lundia Ab | Dialysis composition |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11957754B2 (en) | Clinical formulations | |
| JP7081016B2 (ja) | ヒトｒｐｅ細胞医薬品およびその使用 | |
| Al-Nawaiseh et al. | A step by step protocol for subretinal surgery in rabbits | |
| Ben-Eliahu et al. | Protective effect of different ophthalmic viscosurgical devices on corneal endothelial cells during phacoemulsification: rabbit model | |
| EA047097B1 (ru) | Клинические композиции | |
| NZ740608B2 (en) | Clinical formulations | |
| TW202417023A (zh) | 臨床調配物 | |
| US20210220515A1 (en) | Viscoelastic agent material | |
| US20150051558A1 (en) | Composition and method for corneal proliferation | |
| TW202416830A (zh) | 細胞冷凍保存調配物及使用方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM |