EA037206B1 - Комбинация для лечения и ослабления rsv инфекции и фармацевтическая композиция на её основе - Google Patents

Комбинация для лечения и ослабления rsv инфекции и фармацевтическая композиция на её основе Download PDF

Info

Publication number
EA037206B1
EA037206B1 EA201891655A EA201891655A EA037206B1 EA 037206 B1 EA037206 B1 EA 037206B1 EA 201891655 A EA201891655 A EA 201891655A EA 201891655 A EA201891655 A EA 201891655A EA 037206 B1 EA037206 B1 EA 037206B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
compound
combination
rsv
pharmaceutically acceptable
synergy
Prior art date
Application number
EA201891655A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201891655A1 (ru
Inventor
Нина Исебарт
Неле Иса Э. Гуйвартс
Дирк Андре Э. Ройманс
Анил Коул
Original Assignee
Янссен Сайенсиз Айрлэнд Юси
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Янссен Сайенсиз Айрлэнд Юси filed Critical Янссен Сайенсиз Айрлэнд Юси
Publication of EA201891655A1 publication Critical patent/EA201891655A1/ru
Publication of EA037206B1 publication Critical patent/EA037206B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/437—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. indolizine, beta-carboline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4184—1,3-Diazoles condensed with carbocyclic rings, e.g. benzimidazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4745—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/52—Purines, e.g. adenine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/53—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with three nitrogens as the only ring hetero atoms, e.g. chlorazanil, melamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A61K31/5513—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/7056—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing five-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/42—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum viral
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1027—Paramyxoviridae, e.g. respiratory syncytial virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Изобретение направлено на комбинацию, предназначенную для лечения или ослабления RSV инфекции, содержащую 3-({5-хлор-1-[3-(метилсульфонил)пропил]-1H-индол-2-ил}метил)-1-(2,2,2-трифторэтил)-1,3-дигидро-2Н-имидазо[4,5-с]пиридин-2-он или его фармацевтически приемлемую соль в качестве соединения А и рибавирин или его фармацевтически приемлемую соль в качестве соединения В, где количество соединения А соответствует значению концентрации от 0,19 до 139 нМ и количество соединения В соответствует значению концентрации от 206 до 50000 нМ. Кроме того, изобретение относится к фармацевтической композиции, обладающей активностью против RSV, содержащей терапевтически эффективное количество указанной выше комбинации и фармацевтически приемлемый носитель.

Description

(54) КОМБИНАЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ОСЛАБЛЕНИЯ RSV ИНФЕКЦИИ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ЕЁ ОСНОВЕ
037206 Bl
(31) 16154035.6 (32) 2016.02.03 (33) ЕР (43) 2018.12.28 (86) РСТ/ЕР2017/052201 (87) WO 2017/134133 2017.08.10 (71 )(73) Заявитель и патентовладелец: MICHEL PERRON ET AL.: GS-5806 Inhibits a Broad Range of Respiratory Syncytial Virus Clinical Isolates by Blocking the Virus-Cell Fusion Process, ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY, vol. 60, no. 3, 14 December 2015 (2015-12-14), pages 1264-1273, XP055384299, ISSN: 0066-4804, DOI: 10.1128/AAC.01497-15, figure 1, table 1, page 1267, column 2 JOHN P. DE VINCENZO ET AL.: Oral GS-5806
ЯНССЕН САЙЕНСИЗ АЙРЛЭНД ЮСи (IE) Activity in a Respiratory Syncytial Virus Challenge Study, NEW ENGLAND JOURNAL OF MEDICINE, THE NEJM -, vol. 371, no. 8, 21 August 2014 (2014-08-21),
(72) Изобретатель: pages 711-722, XP055384254, ISSN: 0028-4793, DOI: 10.1056/NEJMoal401184, abstract, tables 1, 2, figure 1,
Исебарт Нина, Гуйвартс Неле Иса Э., Ройманс Дирк Андре Э., Коул Анил (BE) page 721 MEJIAS ASUNCION ET AL.: New options in the treatment of respiratory syncytial virus disease, JOURNAL OF INFECTION, vol. 71, 25 April 2015
(74) Представитель: (2015-04-25), XP029231667, ISSN: 0163-4453, DOI: 10.1016/J.JINF.2015.04.025, page 582, column 2, table 1
Медведев В.Н. (RU) (56) WO-A1-2012080447 WYDE PR. ET AL.: Comparison of the inhibition of human metapneumovirus and respiratory syncytial virus by ribavirin and immune serum globulin in vitro, ANTIVIRAL RESEARCH, ELSEVIER BV, NL, vol. 60, no. 1, 1 September 2003 (2003-09-01), pages 51-59, XP002291798, ISSN: 0166-3542, DOI: 10.1016/ S0166-3542(03)00153-0, abstract, figure 1, table 1 WHIMBEY E. ET AL.: COMBINATION THERAPY WITH AEROSOLIZED RIBAVIRIN AND INTRAVENOUS IMMUNOGLOBULIN FOR RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS DISEASE IN ADULT BONE MARROW TRANSPLANT RECIPIENTS, BONE MARROW TRANSPLANTATION, STOCKTON PRESS, GB, vol. 16, no. 3, 1 September 1995 (1995-09-01), pages 393-399, XP009035052, the whole document S. GHOSH: IDWeek 2015. San Diego, California, USA - October 7-11, 2015, DRUGS OF THE FUTURE, vol. 40, no. 11, 1 January 2015 (2015-01-01), page 765, XP055384274, ES ISSN: 0377-8282, DOI: 10.1358/dof.2015.040.11.2409822, page 765, column 2, paragraph 3 - page 766, column 1, paragraph 1 LEONARD R. KRILOV: Palivizumab in the prevention of respiratory syncytial virus disease, EXPERT OPINION ON BIOLOGICAL THERAPY, vol. 2, no. 7, 1 October 2002 (2002-10-01), pages 763-769, XP055384374, ASHLEY, LONDON; GB ISSN: 1471-2598, DOI: 10.1517/14712598.2.7.763, abstract, table 1, page 765-766 JIA HU ET AL.: Treatment of respiratory syncytial virus with palivizumab: a systematic review, WORLD JOURNAL OF PEDIATRICS, vol. 6, no. 4, 1 November 2010 (2010-11-01), pages 296-300, XP055384380, CN, ISSN: 1708-8569, DOI: 10.1007/ sl2519-010-0230-z, abstract, table 1 WO-A1-2016055791 WO-A1-2014174018
(57) Изобретение направлено на комбинацию, предназначенную для лечения или ослабления RSV инфекции, содержащую 3-({5-хлор-1-[3-(метилсульфонил)пропил]-1Н-индол-2-ил}метил)-1(2,2,2-трифторэтил)-1,3-дигидро-2Н-имидазо[4,5-с]пиридин-2-он или его фармацевтически приемлемую соль в качестве соединения А и рибавирин или его фармацевтически приемлемую
037206 В1 соль в качестве соединения В, где количество соединения А соответствует значению концентрации от 0,19 до 139 нМ и количество соединения В соответствует значению концентрации от 206 до 50000 нМ. Кроме того, изобретение относится к фармацевтической композиции, обладающей активностью против RSV, содержащей терапевтически эффективное количество указанной выше комбинации и фармацевтически приемлемый носитель.
Настоящее изобретение направлено на комбинацию, предназначенную для лечения или ослабления RSV инфекции, содержащую 3-({5 -хлор-1-[3 -(метилсульфонил)пропил] - 1H-индол-2-ил}метил)-1 -(2,2,2трифторэтил)-1,3-дигидро-2Н-имидазо[4,5-с]пиридин-2-он или его фармацевтически приемлемую соль в качестве соединения А и рибавирин или его фармацевтически приемлемую соль в качестве соединения В, где количество соединения А соответствует значению концентрации от 0,19 до 139 нМ и количество соединения В соответствует значению концентрации от 206 до 50000 нМ.
Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, обладающей активностью против RSV, содержащей терапевтически эффективное количество указанной выше комбинации и фармацевтически приемлемый носитель.
RSV, или респираторно-синцитиальный вирус человека, представляет собой крупный РНК-вирус, входящий в семейство Pneumoviridae рода Orthopneumovirus вместе с RSV-вирусом крупного рогатого скота. RSV человека вызывает ряд заболеваний дыхательных путей у людей всех возрастов во всем мире. Он является основной причиной заболеваний нижних дыхательных путей в младенчестве и детстве. Более половины всех младенцев сталкиваются с RSV в свой первый год жизни и почти все - в течение их первых двух лет. Инфекция у маленьких детей может приводить к повреждению легких, которое сохраняется годами и может способствовать развитию хронического заболевания легких в дальнейшей жизни (хроническая бронхолегочная обструкция, астма). Подростки и взрослые часто страдают от (сильной) простуды при RSV-инфекции. В старости восприимчивость вновь возрастает, и RSV был вовлечен во множество вспышек пневмонии у пожилых людей, что приводило в результате к значительной смертности.
На данный момент было одобрено только три лекарственных средства для применения против RSV-инфекции. Первым таковым является рибавирин, нуклеозидный аналог, который обеспечивает аэрозольное средство для лечения тяжелой RSV-инфекции у госпитализированных детей. Другие два лекарственных средства, RespiGam® (RSV-IG) и Synagis® (паливизумаб), иммуностимуляторы на основе поликлональных и моноклональных антител, предназначены для профилактического применения. Оба являются очень дорогостоящими и требуют парентерального введения. Ряд соединений, предназначенных для лечения RSV-инфекции, находится на стадии клинических испытаний. Одно из таких соединений представляет собой 3-({5-хлор-1-[3-(метилсульфонил)-пропил]-1Н-индол-2-ил}метил)-1-(2,2,2трифторэтил)-1,3-дигидро-2Н-имидазо[4,5-с]пиридин-2-он, раскрытый в WO-2012/080447 как соединение Р55.
В настоящее время было обнаружено, что комбинация 3-({5-хлор-1-[3-(метилсульфонил)пропил]1H-индол-2-ил}метил)-1-(2,2,2-трифторэтил)-1,3-дигидро-2Н-имидазо[4,5-с]пиридин-2-она (далее в настоящем документе называемого соединением А) и соединения В, которое обладает свойствами ингибирования репликации RSV, обеспечивает улучшенную терапию при лечении RSV-инфекции.
Некоторые варианты осуществления, раскрытые в настоящем документе, относятся к комбинации соединения А и соединения В и к применению данной комбинации для лечения или уменьшения интенсивности RSV-инфекции у субъекта, нуждающегося в этом.
Другие варианты осуществления относятся к фармацевтической композиции, содержащей комбинацию соединения А и соединения В, и к применению данной фармацевтической композиции для лечения или уменьшения интенсивности RSV-инфекции.
Соединение А представляет собой 3-({5-хлор-1-[3-(метилсульфонил)пропил]-1H-индол-2ил}метил)-1-(2,2,2-трифторэтил)-1,3-дигидро-2Н-имидазо[4,5-с]пиридин-2-он, раскрытый в WO2012/080447 как соединение Р55, имеющее следующую структуру:
Соединение В представляет собой рибавирин.
- 1 037206
Структура или регистрационный номер согласно CAS соединений В Альтернатив ное название Научное название
/=N\ ΛνΝΗ2 НС> \ \___/ О H(f %н Рибавирин Ι-β-ϋ-рибофуранозил1Н-1,2,4-триазол-Зкарбоксамид
При использовании далее в настоящем документе выражения соединение А, соединение В, предназначены для включения как соединения А и/или соединения В в своей форме свободного основания, так и их форм фармацевтически приемлемых солей.
Соединение А или соединение В можно применять в формах фармацевтически приемлемых солей или в свободной (т.е. несолевой) форме. Формы солей могут быть получены путем обработки свободной формы кислотой или основанием. Интерес представляют фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты и основания, которые подразумеваются как включающие формы терапевтически активных нетоксичных солей присоединения кислоты и основания, которые данные соединения способны образовывать. Фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты соединения А или соединений В можно легко получать посредством обработки свободной формы такой соответствующей кислотой. Соответствующие кислоты предусматривают, например, неорганические кислоты, такие как галогенводородные кислоты, такие как бромистоводородная кислота или, в частности, хлористоводородная кислота; или серная, азотная, фосфорная и подобные кислоты; или органические кислоты, такие как, например, уксусная, пропановая, гидроксиуксусная, молочная, пировиноградная, щавелевая, малоновая, янтарная, малеиновая, фумаровая, яблочная (т.е. гидроксибутандиовая кислота), винная, лимонная, метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфоновая, п-толуолсульфоновая, цикламовая, салициловая, паминосалициловая, памовая и подобные кислоты. Соединение А или соединения В также можно превращать в формы фармацевтически приемлемых солей присоединения металлов или аминов посредством обработки соответствующими органическими или неорганическими основаниями. Соответствующие формы основных солей включают, например, соли аммония, соли щелочных и щелочноземельных металлов, например соли лития, натрия или калия; или соли магния или кальция; соли органических оснований, например соли бензатина, N-метил-D-глюкамина, гидрабамина, и соли аминокислот, таких как, например, аргинин, лизин и подобные. Выражение форма соли присоединения также подразумевает включение любых сольватов, которые соединение А или соединения В могут образовывать, а также их соли. Такими сольватами являются, например, гидраты, алкоголяты, например этаноляты, и подобные.
В варианте осуществления количество соединения А и количество соединения В в комбинациях по настоящему изобретению являются таковыми, что в отношении RSV обеспечивается синергический противовирусный эффект.
Количества соединения А в комбинациях по настоящему изобретению, которые вводят ежесуточно, могут варьироваться от приблизительно 10 до приблизительно 2500 мг, от приблизительно 50 до приблизительно 1000 мг или от приблизительно 50 до приблизительно 500 мг.
- 2 037206
Количества соединения В в комбинациях по настоящему изобретению, которые вводят ежесуточно, могут варьироваться от приблизительно 10 до приблизительно 2500 мг, от приблизительно 50 до приблизительно 1000 мг или от приблизительно 50 до приблизительно 500 мг.
Все количества, которые упоминаются в данном и следующих абзацах, относятся к свободной форме (т.е. несолевой форме). Приведенные выше значения представляют эквиваленты свободной формы, т.е. величины, соответствующие предполагаемому введению свободной формы. При введении солей количества должны быть рассчитаны в зависимости от соотношения молекулярных масс солевой формы и свободной формы.
Указанные выше суточные дозы рассчитаны для средней массы тела, составляющей приблизительно 70 кг, и должны быть пересчитаны в случае применения в педиатрии или в случае применения у пациентов со значительным отклонением массы тела.
Дозировки могут быть представлены в виде одной, двух, трех или четырех или более частей дозы, вводимых через определенные интервалы в течение суток. Применяемая дозировка предпочтительно соответствует суточному количеству соединения А и соединения В, указанному выше, или его части дозы, такой как его 1/2, 1/3 или 1/4. Лекарственная форма может содержать соединение А и соединение В в количестве, эквивалентном диапазонам или величинам, указанным в предыдущих абзацах, либо в отдельных составах, либо в комбинированном составе. Такой комбинированный состав является предпочтительным.
В случае, если соединение А и соединение В подлежат введению один раз в сутки, оно может быть выполнено посредством введения объединенной комбинации с фиксированной дозой, содержащей соединение А и соединение В. Лекарственные формы, которые можно вводить, описаны далее в настоящем документе, при этом лекарственные формы для перорального применения, в частности, растворы для перорального приема, являются предпочтительными.
Активные ингредиенты могут быть составлены в фармацевтических композициях либо по отдельности, либо в виде объединенной фармацевтической композиции. В последнем случае предусмотрена фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения А или его фармацевтически приемлемой соли и соединения В или его фармацевтически приемлемой соли и фармацевтически приемлемый носитель. Терапевтически эффективное количество в данном контексте представляет собой количество, достаточное для стабилизации или снижения интенсивности RSVинфекции у инфицированных субъектов. Терапевтически эффективные количества могут, в частности, соответствовать количествам, указанным выше, для введения ежесуточно или их частям дозы для удобства нескольких ежесуточных введений.
Комбинации, представленные в настоящем документе, также можно составлять в виде комбинированного препарата для одновременного или последовательного применения в терапии против RSV. В таком случае соединение А составлено в фармацевтической композиции, содержащей другие фармацевтически приемлемые наполнители, и соединение В составлено отдельно в фармацевтической композиции, содержащей другие фармацевтически приемлемые наполнители. Условно говоря, данные отдельные фармацевтические композиции могут представлять собой часть набора для одновременного или последовательного применения.
Отдельные компоненты комбинации по настоящему изобретению можно вводить одновременно или раздельно в разные моменты времени в ходе терапии или параллельно в разделенных или единых комбинированных формах.
Следовательно, соединение А и соединение В отдельно или в комбинации можно составлять в различные фармацевтические композиции, которые подходят для целей введения. В таких композициях терапевтически эффективное количество каждого из конкретных соединений А и В объединено с фармацевтически приемлемым носителем, причем носитель может принимать широкое разнообразие форм в зависимости от необходимой для введения формы препарата. Фармацевтические композиции можно получать в виде лекарственных препаратов, предназначенных для перорального, парентерального (в том числе подкожного, внутримышечного и внутривенного), ректального, трансбуккального или интраназального введения. Подходящие композиции для перорального введения включают порошки, грануляты, агрегаты, таблетки, прессованные или покрытые пилюли, драже, саше, твердые или желатиновые капсулы, сиропы и суспензии. Подходящие композиции для парентерального введения включают водные или неводные растворы или эмульсии, при этом подходящие композиции для ректального введения включают суппозитории с гидрофильной или гидрофобной средой-носителем. Для интраназальной доставки можно применять подходящие системы аэрозольной доставки.
Например, при получении композиций для перорального введения можно использовать любую обычную фармацевтическую среду, такую как, например, вода, гликоли, масла, спирты и им подобные, в случае жидких композиций для перорального введения, таких как суспензии, сиропы, эликсиры, эмульсии и растворы; или твердые носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, смазывающие вещества, связующие, разрыхлители и им подобные, в случае твердых композиций. В случае композиций для парентерального введения носитель будет, как правило, содержать стерильную воду, по меньшей мере, в значительной степени, хотя в носитель могут добавляться другие ингредиенты, такие как солюбилизаторы,
- 3 037206 эмульгаторы или дополнительные вспомогательные средства. Могут быть получены инъекционные растворы, в которых носитель содержит физиологический раствор, раствор глюкозы или смесь и первого, и второго. Также можно получать суспензии для инъекций, в случае которых можно использовать соответствующие жидкие носители, суспендирующие средства и т.п. Также включены препараты в твердой форме, которые предназначены для превращения непосредственно перед применением в препараты в жидкой форме, такие как порошки для растворения.
Фармацевтические композиции для удобства могут быть представлены в стандартной лекарственной форме для простоты введения и однородности дозы. Примеры включают таблетки (в том числе делимые или покрытые оболочкой таблетки), капсулы, пилюли, суппозитории, пакеты с порошком, пластинки, растворы или суспензии для инъекций и им подобные, а также их отдельные множества.
Комбинация соединения А и соединения В, указанных в настоящем документе, подходит для лечения теплокровных животных, в частности людей, инфицированных RSV.
Используемые в настоящем документе выражения лечить, лечащий, лечение, терапевтический и терапия необязательно означают полное излечение или устранение заболевания или состояния. Любое снижение значения вирусной нагрузки или облегчение любых нежелательных признаков или симптомов заболевания или состояния до некоторой степени можно рассматривать как лечение и/или терапию.
Выражения терапевтически эффективное количество и эффективное количество применяют для обозначения количества активного соединения или фармацевтического средства, которое вызывает отмечаемый биологический или медицинский ответ. Например, терапевтически эффективное количество соединения может представлять собой количество, необходимое для предупреждения, облегчения или уменьшения интенсивности симптомов заболевания, снижения значения вирусной нагрузки или продления продолжительности жизни субъекта, подвергаемого лечению. Данный ответ может возникать в ткани, системе, животном или человеке и включает снижение значения вирусной нагрузки, облегчение признаков или симптомов заболевания, которое лечат. Определение эффективного количества вполне соответствует квалификации специалистов в данной области техники с учетом раскрытия, представленного в настоящем документе. Терапевтически эффективное количество соединений, раскрытых в настоящем документе, требуемое в качестве дозы, будет зависеть от пути введения, вида животного, в том числе человека, подвергаемого лечению, и физических характеристик конкретного рассматриваемого животного. Доза может быть изменена для достижения необходимого эффекта, но будет зависеть от факторов, таких как вес, рацион, параллельное применение лекарственных препаратов и другие факторы, которые будут понятны специалистам в области медицины.
Различные показатели, предназначенные для определения эффективности способа лечения инфекции, вызываемой респираторно-синцитиальным вирусом (RSV), известны специалистам в данной области техники. Пример подходящих показателей включает без ограничения снижение значения вирусной нагрузки, снижение репликации вируса, сокращение времени до сероконверсии (вирус, который невозможно обнаружить в сыворотке пациента), снижение заболеваемости или смертности в клинических исходах и/или другой показатель ответа заболевания.
В некоторых вариантах осуществления комбинация соединения А и соединения В или фармацевтически приемлемых солей вышеуказанных соединений может обеспечивать снижение значений титра вируса до необнаруживаемых уровней, например менее 1,7 log10 эквивалента бляшкообразующих единиц (PFUe)/мл или менее 0,3 log10 эквивалента бляшкообразующих единиц (PFUe)/мл. В некоторых вариантах осуществления комбинация соединений, описанная в настоящем документе, может обеспечивать снижение значения вирусной нагрузки по сравнению со значением вирусной нагрузки до введения комбинации (например, через 60 ч после получения начальной дозы комбинации). В некоторых вариантах осуществления комбинация соединений, описанная в настоящем документе, может обеспечивать снижение значения вирусной нагрузки до значения менее 1,7 log10 (PFUe)/мл или менее 0,3 log10 (PFUe)/мл. В некоторых вариантах осуществления комбинация соединений, описанная в настоящем документе, может обеспечивать снижение титра вируса в сыворотке субъекта в диапазоне от приблизительно 1,5-кратного логарифмического до приблизительно 2,5-кратного логарифмического снижения, от приблизительно 3-кратного логарифмического до приблизительно 4-кратного логарифмического снижения или более чем приблизительно 5-кратного логарифмического снижения по сравнению со значением вирусной нагрузки до введения комбинации. Например, значение вирусной нагрузки измеряют перед введением комбинации и через несколько часов после получения начальной дозы комбинации (например, через 60 ч после получения начальной дозы комбинации).
В некоторых вариантах осуществления комбинация соединения А и соединения В или фармацевтически приемлемых солей вышеуказанных соединений может обеспечивать по меньшей мере 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 10-, 15-, 20-, 25-, 50-, 75-, 100-кратное или большее снижение репликации RSV относительно уровней перед осуществлением лечения у субъекта, определенное через несколько часов после получения начальной дозы комбинации (например, через 60 ч после получения начальной дозы комбинации). В некоторых вариантах осуществления комбинация, описанная в настоящем документе, может обеспечивать снижение репликации RSV относительно уровней перед осуществлением лечения в диапазоне от при
- 4 037206 близительно 2- до приблизительно 5-кратного, от приблизительно 10- до приблизительно 20-кратного, от приблизительно 15- до приблизительно 40-кратного или от приблизительно 50- до приблизительно 100кратного снижения. В некоторых вариантах осуществления комбинация, описанная в настоящем документе, может обеспечивать снижение репликации RSV в диапазоне от 1- до 1,5-кратного логарифмического, от 1,5- логарифмического до 2-кратного логарифмического, от 2- логарифмического до 2,5кратного логарифмического, от 2,5- до 3-кратного логарифмического, от 3- логарифмического до 3,5кратного логарифмического или от 3,5- до 4-кратного логарифмического или большего снижения репликации RSV по сравнению со снижением RSV, достигаемым благодаря применению одного средства против RSV, вводимого в виде монотерапии, или может достигаться такое же снижение за более короткий период времени.
Через некоторое время возбудители инфекции могут проявлять устойчивость к одному или нескольким терапевтическим средствам. Выражение устойчивость, используемое в настоящем документе, относится к вирусному штамму, демонстрирующему отложенный, уменьшенный и/или нулевой ответ на терапевтическое(терапевтические) средство(средства). Например, после лечения противовирусным средством значение вирусной нагрузки субъекта, инфицированного устойчивым вирусом, может быть снижено в меньшей степени по сравнению с величиной, проявляемой при снижении значения вирусной нагрузки субъектом, инфицированным неустойчивым штаммом. В некоторых вариантах осуществления комбинацию соединения А и соединения В или фармацевтически приемлемых солей вышеуказанных соединений можно вводить субъекту, инфицированному RSV, который является устойчивым к одному или нескольким различным средствам против RSV (например, рибавирину). В некоторых вариантах осуществления развитие устойчивых штаммов RSV может быть отложено при лечении субъектов с помощью комбинации соединений, описанной в настоящем документе, по сравнению с развитием штаммов RSV, устойчивых к другим средствам против RSV, вводимым в виде монотерапии.
В некоторых вариантах осуществления комбинация соединения А и соединения В или фармацевтически приемлемых солей вышеуказанных соединений может снижать процент субъектов, которые испытывают осложнения от вирусной инфекции, вызванной RSV, по сравнению с процентом субъектов, которые испытывают осложнение при лечении одним средством против RSV. Например, процент субъектов, подвергаемых лечению комбинацией соединений, описанной в настоящем документе, которые испытывают осложнения, может составлять на 5, 10, 25, 40, 50, 60, 70, 80 и 90% меньше по сравнению со значением для субъектов, подвергаемых лечению лишь одним средством против RSV, вводимым в виде монотерапии.
Потенциальное преимущество использования комбинации соединения А и соединения В или фармацевтически приемлемых солей вышеуказанных соединений может представлять собой снижение требуемого(требуемых) количества(количеств) соединения А или его фармацевтически приемлемой соли и/или соединения В или его фармацевтически приемлемых солей, которое(которые) является(являются) эффективным(эффективными) в лечении RSV-инфекции по сравнению с количеством, требуемым для достижения такого же терапевтического результата при применении одного соединения (В) или его фармацевтически приемлемых солей и/или соединения А или его фармацевтически приемлемой соли. Например, количество соединения А или его фармацевтически приемлемой соли и/или соединения В или его фармацевтически приемлемых солей может быть меньшим по сравнению с количеством вышеуказанных соединений, необходимым для достижения такого же значения снижения вирусной нагрузки при введении в виде монотерапии. Другое потенциальное преимущество использования комбинации, описанной в настоящем документе, заключается в том, что применение двух или более соединений, имеющих различный механизм действия, может создать более высокий барьер для развития устойчивых вирусных штаммов по сравнению с барьером при введении соединения в виде монотерапии. Дополнительные преимущества использования комбинации, описанной в настоящем документе, могут включать перекрестную устойчивость к соединениям комбинации - от незначительной до ее отсутствия; различные пути выведения соединений комбинации; перекрывание профилей токсичности соединений комбинации - от небольшой степени до его отсутствия; эффекты на цитохром Р450 - от небольших до незначительных; и/или фармакокинетические взаимодействия соединений комбинации - от небольших до их отсутствия.
Примеры
Следующие примеры предназначены для иллюстрации настоящего изобретения, а не для его ограничения.
Пример 1. Анализ в отношении RSV.
Черные 384-луночные титрационные микропланшеты с прозрачным дном (Corning, Амстердам, Нидерланды) заполняли путем звукового выталкивания капли с использованием устройства для манипуляций с жидкостями Echo (Labcyte, Саннивейл, Калифорния). 200 нл исходных растворов соединений (100% DMSO) переносили в планшеты для исследования. Соединение (А) или его фармацевтически приемлемую соль серийно разводили (1:3) с получением 12 различных концентраций в горизонтальном направлении в 384-луночном планшете и соединение (В) или его фармацевтически приемлемую соль серийно разводили (1:3) с получением 12 различных концентраций в вертикальном направлении в 384
- 5 037206 луночном планшете. Также было выделено пространство для титрования каждого из соединений по отдельности для применения в качестве эталонных контролей. Анализ инициировали путем добавления 10 мкл среды для культивирования в каждую лунку (среда RPMI без фенолового красного, 10% FBS, инактивированной нагреванием, 0,04% гентамицина (50 мг/мл). Все дополнительные стадии выполняли с использованием многоканального дозатора (Thermo Scientific, Эрембодегем, Бельгия). Затем вирус rgRSV224 (MOI=1), разведенный в среде для культивирования, вносили в планшеты. Вирус rgRSV224 представляет собой сконструированный вирус, который включает в себя дополнительный ген GFP (Hallak L.K., Spillmann D., Collins P.L., Peeples M.E. Glycosaminoglycan sulfation requirements for respiratory syncytial virus infection; Journal of virology (2000), 74(22), 10508-13), и лицензия на который была приобретена у NIH (Бетесда, Мэриленд, США). В конечном итоге вносили 20 мкл суспензии клеток HeLa (3000 клеток/лунка). Среду, инфицированные вирусом контрольные образцы и контрольные образцы с имитацией инфицирования включали в каждый тест. Лунки содержали 0,05% DMSO на объем. Клетки инкубировали при 37°С в атмосфере 5% СО2. Через три дня после воздействия вируса количественно оценивали вирусную репликацию путем измерения экспрессии GFP в клетках с помощью собственной разработки лазерного микроскопа MSM (Tibotec, Берсе, Бельгия). EC50 определяли как 50% ингибирующую концентрацию для экспрессии GFP.
Анализ жизнеспособности клеток.
Параллельно инкубировали соединения в течение трех суток в наборе белых 384-луночных титрационных микропланшетов (Corning) и определяли цитотоксичность соединений в клетках HeLa путем измерения содержания ATP в клетках с применением набора ATPLite (Perkin Elmer, Завентем, Бельгия) в соответствии с инструкциями изготовителя. CC50 определяли как 50% концентрацию для цитотоксичности.
Анализ данных.
Каждый эксперимент осуществляли при N=3 как в отношении активности против RSV, так и в отношении жизнеспособности клеток. Получали среднее процентное ингибирование величин содержания репликонов из 3 экспериментов и в отношении активности против RSV рассчитывали показатель аддитивности (CI) с помощью программы из пакета программного обеспечения CalCuSyn от Biosoft (Biosoft, Великобритания): CI=[(D)1/(Dx)1]+[(D)2/(Dx)2]. Комбинацию определяли как: CI<1: синергия; CI>1: антагонизм; CI=1: аддитивность. Более подробный диапазон CI представлен в таблице ниже.
Диапазон С1 Описание Символы
<0,1 Очень сильный синергизм ++++++
0, 1-0,3 Сильный синергизм ++++
0,3-0,7 Синергизм +++
0,7-0,85 Умеренный синергизм + +
0,85-0,90 Легкий синергизм +
0,90-1,10 Практически аддитивность +/-
1,10-1,20 Легкий антагонизм -
1,20-1,45 Умеренный антагонизм —
1,45-3,3 Антагонизм —
3,3-10 Сильный антагонизм —
>10 Очень сильный антагонизм
Пример 2. Исследования комбинации - RSV с репортерным геном Renilla.
RSV, экспрессирующий люциферазу Renilla (A2-RL-line19F), был получен доктором Мартином Муром из Университета Эмори, Атланта, Джорджия, США. In vitro вирусная кинетика A2-RL-linel9F подобна таковой RSV дикого типа. Линию HEp-2 клеток-хозяев приобретали у АТСС (№ по кат. CCL-23) и клетки культивировали в Ix 50/50 DMEM/среда Хэма F-12, содержащей L-глутамин и 15 мМ HEPES (Mediatech, № по кат. 10-092-СМ). В среду дополнительно добавляли 5% (об./об.) FBS (Mediatech, № по кат. 35-010-CV) и 1% (об./об.) пенициллина/стрептомицина (Mediatech, № по кат. 30-002-CI). Клетки HEp-2 выдерживали при 37°С в увлажненной атмосфере с 5% CO2.
Обработка лекарственным средством и введение доз вируса.
Для определения эффекта комбинации соединений следовали следующей процедуре. В первые сутки высевали 20000 клеток HEp-2/лунка в 96-луночном планшете. На следующие сутки тестируемые образцы солюбилизировали в 100% DMSO до необходимой конечной тестовой концентрации, составляющей 200x. Затем соединение (А) или его фармацевтически приемлемую соль серийно разводили (1:3) с
- 6 037206 получением 9 различных концентраций в горизонтальном направлении в 96-луночном планшете и соединение (В) или его фармацевтически приемлемую соль серийно разводили (1:3) с получением 7 различных концентраций в вертикальном направлении в 96-луночном планшете. Серийно разведенные тестируемые образцы 200х затем разводили 1:10 в питательной среде для клеток с получением тестируемых образцов 20 х. Аликвоту, составляющую 5 мкл, тестируемых образцов 20 х добавляли в шахматном порядке к клеткам с 90 мкл существующей среды. Также было выделено пространство для титрования каждого из соединений по отдельности для применения в качестве эталонных контролей. После 12часовой предварительной инкубации тестируемых образцов в планшет добавляли A2-RL-line19F при MOI, составляющей 0,5, и дополнительно инкубировали в течение 2 суток при 37°С в 5% СО2.
Определение активности против RSV.
Систему анализа с использованием люциферазы Renilla (Promega, № по кат. Е2820) применяли для измерения активности против RSV. Анализируемые планшеты подготавливали, как указано выше. Люминесценцию регистрировали с использованием многометочного счетчика Victor3V от Perkin Elmer.
Анализ жизнеспособности клеток.
Люминесцентный анализ жизнеспособности клеток CellTiter-Glo (Promega, № по кат. G7572) применяли для измерения жизнеспособности клеток. Люминесцентный анализ жизнеспособности клеток CellTiter-Glo® представляет собой однофазный способ определения числа жизнеспособных клеток в культуре на основе определения количества присутствующего аденозинтрифосфата (ATP), который сигнализирует о наличии метаболически активных клеток. Анализируемые планшеты подготавливали при таких же условиях, что и для анализа в отношении RSV, за исключением того, что вирус не добавляли при анализе жизнеспособности клеток. Аликвоту 100 мкл реагента CellTiter-Glo добавляли в каждую лунку и инкубировали при комнатной температуре в течение 8 мин. Люминесценцию регистрировали с использованием многометочного счетчика Victor3V от Perkin Elmer.
Анализ данных.
Каждый эксперимент осуществляли при N=5 как в отношении активности против RSV, так и в отношении жизнеспособности клеток. Получали среднее процентное ингибирование величин содержания репликонов из 5 экспериментов и активность против RSV анализировали с применением двух моделей анализа взаимодействия лекарственных средств, анализа изоболограммы и/или модели Причарда.
Анализ изоболограммы.
Эффекты комбинаций лекарственное средство-лекарственное средство оценивали с помощью модели аддитивности Леве, в которой экспериментальные данные анализировали с применением CalcuSyn (Biosoft, Фергюсон, Миссури), компьютерной программы на основе метода Чжоу-Талалэя. Для каждой экспериментальной комбинации рассчитывали величину показателя аддитивности (CI) и изоболограмму. Величины CI, составляющие соответственно <1, 1 и >1, указывают на синергию, аддитивный эффект и антагонизм. В рамках категории синергии: CI<0,1 предусматривает очень сильный синергизм; CI 0,1-0,3 - сильный синергизм; CI 0,3-0,7 - синергизм и CI 0,7- 0,85 - умеренный синергизм. Анализ изоболограммы, который графически представляет аддитивный, синергический и антагонистический эффекты лекарственных средств, также применяли для моделирования взаимодействия противовирусных активностей. В данном представлении величина эффективной концентрации (EC) одного лекарственного средства нанесена на одну ось, а соответствующая величина EC второго лекарственного средства нанесена на вторую ось; при этом линия, соединяющая данные две точки, представляет собой количество каждого лекарственного средства в комбинации, которое может потребоваться для достижения эквивалентной величины EC, при условии, что их эффекты являются аддитивными.
Модель Причарда (Mac Synergy II).
Программное обеспечение MacSynergy II было любезно предоставлено доктором М. Причардом (Мичиганский университет). Данная программа позволяет проводить трехмерное исследование взаимодействия лекарственных средств во всех точках данных, полученных от комбинации в шахматном порядке двух ингибиторов с помощью модели независимого анализа межлекарственных взаимодействий по Блиссу. Доверительные пределы определяли из дублированных данных. Если 95% доверительных пределов (CL) не перекрывают теоретическую аддитивную поверхность, то взаимодействие между двумя лекарственными средствами существенно отличается от аддитивного. Размеры синергии или антагонизма можно определять и графически изображать в трех измерениях и представлять относительную величину синергизма или антагонизма на одно изменение концентраций двух лекарственных средств. Размеры синергии и антагонизма основаны на модели независимого анализа межлекарственных взаимодействий по Блиссу, которая предполагает, что оба соединения действуют независимо друг от друга на разные цели. Набор расчетных фракционных ответов faAB в соответствии с моделью независимого анализа межлекарственных взаимодействий по Блиссу рассчитывают как faAB=faA+faB-faAxfaB, при этом faA и faB представляют собой фракцию возможных ответов, например % ингибирования соединений А и В соответственно при количествах dA и dB, и он описывает % ингибирования комбинации соединений А и В при количестве (dA+dB). Если faAB>faA+faB-faAxfaB, то получается синергия по Блиссу; если faAB<faA+faB-faAxfaB, то получается антагонизм по Блиссу. 95% размеров синергии/антагонизма пред- 7 037206 ставляет собой суммирование значений разности между наблюдаемым ингибированием и 95% доверительным пределом при прогнозировании faAB в соответствии с моделью независимого анализа межлекарственных взаимодействий по Блиссу. В табл. 1 показаны размеры и соответствующие описания размеров для результатов независимого анализа межлекарственных взаимодействий по Блиссу. Для анализа данных применяли MacSynergy II.
Таблица 1
Описание размеров с помощью MacSynergy II
Размер (мкМ2%) Описание размера
< 25 аддитивность
25-50 незначительный синергизм
50-100 значительный синергизм
> 100 сильный синергизм
Пример 3. Эксперименты в отношении анализируемой комбинации для RSV.
Для оценивания их объединенного противовирусного эффекта в отношении RSV проводили исследования комбинации in vitro с JNJ-53718678 (соединение А) и различными соединениями с различными механизмами действия (соединение В). Вкратце, 9 концентраций соединения А объединяли с 6 или 7 концентрациями определенного соединения В. Клетки HeLa инфицировали с помощью rgRSV224, разработанного штамма RSV, который кодирует eGFP (Hallak LK, Spillmann D, Collins PL, Peeples ME. Glycosaminoglycan sulfation requirements for respiratory syncytial virus infection; Journal of Virology (2000), 74(22), 10508-13), в присутствии различных концентраций соединения А и соединения В по отдельности или в комбинации.
Исходные растворы соединений представляли собой 5 мМ в 100% DMSO со следующими исключениями: рибавирин, 20 мМ; А 60444, 10 мМ; CR9501, 141 мкМ в PBS; паливизумаб, 156 мкМ в PBS; MDT 637, 100 мкМ в метаноле. Во-первых, соединения серийно разводили в 3-кратных сериях разведения в DMSO; CR9501 и паливизумаб серийно разводили в клеточной культуральной среде и MDT 637 - в метаноле. Серию концентраций разводили 100-кратно в клеточной культуральной среде с достижением комбинированной матрицы. 10 мкл данных растворов соединения переносили в черные 384-луночные обработанные культурой тканей планшеты с прозрачным дном. Затем добавляли 10 мкл суспензии клеток HeLa с концентрацией 150000 клеток на 1 мл для достижения концентрации 3000 клеток в лунке. Наконец, добавляли 10 мкл разведенного исходного раствора, содержащего вирус, для достижения MOI, составляющей 1. Конечная концентрация DMSO во всех лунках составляла 0,5% DMSO за исключением случая эксперимента с MDT 637, где она составляла 0,25% DMSO+0,25% метанола. Каждую комбинацию концентраций соединений тестировали в 4 повторностях на 3 отдельных планшетах с получением в общей сложности 12 повторностей. Планшеты инкубировали в течение 3 суток при 37°С в увлажненной атмосфере при 5% CO2. Сигнал GFP измеряли с помощью устройства EnVision от PerkinElmer с применением фильтра 405 нм.
Для статистического анализа наблюдаемый сигнал GFP нормализовали с применением вирусных контролей (VC) и клеточных контролей (СС) на соответствующем планшете: ответ=(GFP-СС)/(VC-CC), где CC вычисляли как медианное значение GFP для всех холостых лунок (без вируса) и VC вычисляли как медианное значение GFP для всех контрольных лунок (без соединения).
Для оценивания синергии применяли метод Харброна (Statistics in Medicine, 2010, DOI:10.1002/sim3916). Применяя определение Леве, два соединения определяют как являющиеся аддитивными, синергическими или антагонистическими с помощью выражения:
Г = 1, аддитивность di <h I —--h —— < < 1, синергия и у л 1
I > 1. антагонизм, где d1 и d2 представляют собой дозы двух соединений, которые в комбинации обеспечивают эффект y, и Dy.1 и Dy.2 представляют собой дозы двух соединений, которые обеспечивают такой же эффект у при введении в виде монотерапии. 3PL-модель (3-параметрическую логарифмически-логистическую модель) применяли для данных о зависимости доза-эффект при монотерапии, где исходный уровень ответа устанавливали на уровне единицы.
В соответствии с подходом Харброна следующие модели приспосабливали к данным: аддитивная: исходя из отсутствия взаимодействия между двумя соединениями;
однородная: исходя из постоянного показателя взаимодействия τ во всех комбинациях доз;
линейная А: исходя из того, что показатель взаимодействия линейно зависит от log10 дозы соединения А: τ=τ1+τ2 log10(dA);
отдельная А: исходя из того, что показатель взаимодействия τ принимает отдельное значение для каждой дозы соединения А.
- 8 037206
Последние две модели также рассматривали для соединения В:
линейная В: исходя из того, что показатель взаимодействия τ линейно зависит от log10 дозы соединения В: τ=τ1+τ2 log10(dB);
отдельная В: исходя из того, что показатель взаимодействия τ принимает отдельное значение для каждой дозы соединения В.
Отдельная А модель была выбрана из всех тестируемых комбинаций на основании информационного критерия Акаике (AIC). Результаты тестов для комбинаций соединения А с различными соединениями В представлены ниже.
Комбинация: соединение А и пульмоцидное соединение (N-(2-фтор-6-метилфенил)-6-(4-(5-метил-2(7-окса-2-αзаспиро[3.5]нонан-2-ил)никотинамидо)бензоил)-5,6-дигидро-4Н-бензо[b]тиено[2,3-d]αзепин2-карбоксамид) в качестве соединения В.
Таблица 2
Нормализованные данные для соединения А в комбинации с пульмоцидным соединением (среднее из 12 повторностей)
А=0 А=0,19 А=0,5 7 А=1,7 А=5,1 А=15 А=4 6 А=139 А=417 А=1250
в=о 0, 94 0,96 0,92 0,78 0,56 0, 43 0,36 0,20 0,11 0, 06
В=0,058 0, 99 0,99 0,93 0, 81 0,56 0,39 0,28 0, 17 0,08 0, 04
В=0,17 0, 99 0,99 0,91 0,74 0,51 0,37 0,23 0, 16 0,08 0, 04
В=0,52 1, 04 0,96 0,87 0,70 0,45 0,31 0,23 0, 14 0,07 0, 04
В=1,6 0, 91 0,87 0,75 0, 46 0,27 0, 18 0, 11 0, 06 0,04 0, 02
В=4,7 0,20 0,14 0,12 0, 06 0,03 0, 01 0, 01 -0,00 -0, 00 -0,00
В=14 0, 02 0,01 -0, 00 -0,01 -0, 01 -0,01 -0,02 -0,01 -0, 01 -0,01
В=42 0, 02 0,01 0,01 0, 00 -0, 00 -0,01 -0,01 -0,00 -0, 00 -0,00
В табл. 3 показано, что показатель взаимодействия (τ) оценивается с 95% доверительными интервалами (CI) для отдельной А модели. При условии, что степень синергии варьируется в зависимости от доз соединения А, обнаруживается значительная степень синергии при дозах, составляющих 0,57 нМ и выше. В целом степень синергии увеличивается с повышением уровней дозы при плато примерно от 5,1 до 139 нМ.
Таблица 3
Оценочные значения показателей взаимодействия при 95% CI для отдельной А модели. Показатель взаимодействия при значении EC50 аппроксимировали посредством линейной интерполяции оценок тау
Доза (нМ) Оценка 95% CI
Τι 0, 19 1,013 (0,955, 1,075)
τ2 0, 57 0,93 (0,875, 0,989)
т3 1,7 0, 636 (0,601, 0,674)
τ4 5, 1 0, 479 (0,449, 0,51)
τ5 15 0, 484 (0,443, 0,528)
τ6 46 0, 544 (0,479, 0,618)
τ7 139 0,51 (0,412, 0,632)
τ8 417 0,234 (0,198, 0,277)
τ9 1250 0, 073 (0,06, 0,088)
τ ЕС 50 9, 79 0, 481 (н. д., Η. д.)
Комбинация: соединение А и паливизумаб в качестве соединения В.
Таблица 4
Нормализованные данные для соединения А в комбинации с паливизумабом в качестве соединения В (среднее из 12 повторностей)
Α=0 Α=0,19 Α=0,57 Α=1,7 Α=5, 1 Α=15 Α=4 6 Α=13 9 Α=417 Α=1250
Β=0 Β= 1, 11 1, 04 0,98 0,86 0,57 0,38 0,28 0, 17 0,09 0,05
0,0061 1, 05 0, 99 0,93 0,77 0,51 0,34 0,26 0, 15 0,08 0,04
Β=0,018 1, 01 0, 94 0,88 0,74 0,44 0,30 0, 19 0, 12 0,06 0,03
Β=0,055 0, 97 0, 90 0,84 0,69 0,42 0,26 0,20 0, 12 0,06 0,03
Β=0,165 1, 01 0, 93 0,82 0,64 0,32 0, 16 0, 11 0, 06 0,03 0,02
Β=0,494 0, 89 0,78 0,61 0,25 0, 08 0, 04 0, 02 0, 00 0,00 0,00
Β=1,482 0,33 0, 13 0,08 0,02 0, 01 0, 00 0, 00 0, 00 0,00 0,00
Β=4,447 0, 06 0, 03 0,02 0,01 0, 01 0, 00 0, 00 0, 00 0,00 0,00
В табл. 5 показано, что показатель взаимодействия (τ) оценивается с 95% доверительными интервалами (CI) для отдельной А модели. Следует заметить, что модель была подобрана посредством установления наклона в 3PL-модели для соединения В с оценкой, полученной в результате подбора моноте- 9 037206 рапии. При условии, что степень синергии варьируется в зависимости от доз соединения А, обнаруживается значительная степень синергии для всех рассматриваемых уровней дозы. В целом степень синергии увеличивается с повышением уровней дозы при плато примерно от 5,1 до 139 нМ.
Таблица 5
Оценочные значения показателей взаимодействия при 95% CI для отдельной А модели. Показатель взаимодействия при значении ЕС50 аппроксимировали посредством линейной интерполяции оценок тау
Доза (нМ) Оценка 95% CI
Т1 0, 19 0,788 (0,726, 0,855)
τ2 0,57 0, 626 (0,579, 0,678)
τ3 1,7 0,386 (0,357, 0,418)
τ4 5, 1 0,248 (0,224, 0,273)
τ5 15 0,237 (0,206, 0,273)
τ6 46 0,31 (0,253, 0,38)
τ7 139 0,274 (0,185, 0,407)
τ8 417 0, 101 (0,044, 0,232)
τ9 1250 0, 036 (0,018, 0, 076)
τ ЕС 50 7 , 6 0,245 (н. д., н. д . )
Комбинация: соединение А и AZ-27 в качестве соединения В.
Таблица 6
Нормализованные данные для соединения А в комбинации с AZ-27 в качестве соединения В (среднее из 12 повторностей)
А=0 А=0,19 А=0,57 А=1,7 А=5,1 А=15 А=4 6 А=139 А=417 А=1250
в=о 0,99 0,98 0,96 0,89 0,71 0,45 0,25 0,17 0,07 0,04
В=17 1,03 0,98 0,97 0,86 0,60 0,34 0,20 0,12 0,05 0,03
В=51 1,00 0,93 0,90 0,72 0,45 0,23 0,13 0,07 0,03 0,02
В=154 0,53 0,43 0,38 0,22 0,10 0,05 0,03 0,02 0,01 0,01
В=463 0,07 0,05 0,04 0,03 0,00 -0,01 -0,00 -0,01 -0,01 -0,00
В=1389 0,01 0,00 0,00 -0,01 -0,01 -0,01 -0,00 -0,00 -0,00 -0,00
В=4167 0,00 0,00 0,00 -0,00 -0,01 -0,01 -0,00 0,00 -0,00 0,00
В табл. 7 показано, что показатель взаимодействия (τ) оценивается с 95% CI для отдельной А модели. При условии, что степень синергии варьируется в зависимости от доз соединения А, обнаруживается значительная степень синергии для всех рассматриваемых уровней дозы. В целом степень синергии увеличивается с повышением уровней дозы при плато примерно от 5,1 до 139 нМ.
Таблица 7
Оценочные значения показателей взаимодействия при 95% CI для отдельной А модели. Показатель взаимодействия при значении ЕС50 аппроксимировали посредством линейной интерполяции оценок тау
Доза (нМ) Оценка 95% CI
Τι 0, 19 0, 922 (0, 896, 0,949)
τ2 0,57 0, 894 (0,867, 0,923)
τ3 1,7 0,755 (0,724, 0,788)
τ4 5, 1 0, 609 (0,579, 0,642)
τ5 15 0,537 (0,499, 0,578)
Тб 46 0,582 (0,515, 0,658)
τ7 139 0,57 (0,43, 0,755)
τ8 417 0,312 (0,171, 0, 57)
τ9 1250 0, 126 (0,093, 0, 17)
τ ЕС 50 11,99 0,559 (н. д., н. Д . )
Комбинация: соединение А и GS-5806 в качестве соединения В.
Таблица 8
Нормализованные данные для соединения А в комбинации с GS-5806 в качестве соединения В (среднее из 12 повторностей)
А=0 А=0,19 А=0,57 А=1,7 А=5,1 А=15 А=4 6 А=139 А=417 А=1250
в=о 1,06 0,99 0, 93 0,83 0,47 0,30 0,21 0,11 0, 06 0,03
В=0,051 0,99 0,96 0, 91 0,71 0,44 0,23 0,17 0,09 0, 05 0,03
В=0,15 0,98 0,91 0, 87 0,68 0,39 0,22 0,17 0,08 0, 05 0,02
В=0,46 0,83 0,82 0,74 0,50 0,32 0,21 0,13 0,08 0, 04 0,01
В=1,4 0,36 0,39 0,27 0,21 0, 18 0,17 0,13 0,08 0, 04 0,01
В=4,2 0,19 0,13 0, 09 0,07 0, 06 0,08 0,12 0,08 0, 04 0,02
В=12,5 0,06 0,05 0, 06 0,03 0, 03 0,04 0,04 0,04 0, 04 0,03
В=37,5 0,05 0,03 0, 03 0,03 0, 03 0,02 0,02 0,03 0, 04 0,03
- 10 037206
В табл. 9 показано, что показатель взаимодействия (τ) оценивается с 95% доверительными интервалами (CI) для отдельной А модели. При условии, что степень синергии варьируется в зависимости от доз соединения А, обнаруживается значительная степень синергии при дозах, составляющих от 0,57 до нМ. Следует заметить, что показатель взаимодействия при самой высокой концентрации не поддавался оцениванию.
Таблица9
Оценочные значения показателей взаимодействия при 95% CI для отдельной А модели. Показатель взаимодействия при значении ЕС50 аппроксимировали посредством линейной интерполяции оценок тау
Доза (нМ) Оценка 95% CI
Т1 0, 19 1,063 (0,985, 1,148)
τ2 0,57 0, 895 (0,832, 0,963)
τ3 1,7 0,728 (0,678, 0,78)
τ4 5, 1 0, 678 (0,621, 0,74)
τ5 15 0,783 (0,684, 0,897)
τ6 46 1,321 (1,091, 1,598)
τ7 139 0, 938 (0,469, 1,878)
τ8 417 0, 037 (0,007, 0,204)
τ9 1250 0 (н. д., н. д . )
τ ЕС 50 5, 17 0, 679 (н. д., н. д . )
Комбинация: соединение А и MDT-637 в качестве соединения В.
Таблица 10
Нормализованные данные для соединения А в комбинации с MDT-637 в качестве соединения В (среднее из 12 повторностей)
А=0 А=0,19 А=0,57 А=1,7 А=5, 1 А=15 А=4 6 А=139 А=417 А=1250
в=о 1, 01 0,98 0, 97 0, 85 0,43 0,26 0, 16 0,06 0,02 -0, 00
В=0,038 1, 01 0,98 0, 90 0,76 0,41 0,22 0, 11 0,04 0,01 -0, 01
В=0,12 0, 99 0,95 0, 89 0,72 0,39 0, 17 0, 09 0,03 -0, 00 -0, 02
В=0,35 0, 95 0,93 0, 86 0, 65 0,36 0, 15 0, 09 0,04 -0, 01 -0, 01
В=1 0, 93 0,89 0, 80 0,58 0,30 0, 16 0, 07 0,03 -0, 00 -0, 02
В=3,1 0,75 0,69 0,59 0,38 0,23 0, 12 0, 07 0,03 0,00 -0, 01
В=9,3 0, 14 0,11 0, 10 0, 10 0, 11 0, 11 0, 08 0,04 0,00 -0, 01
В=2 8 0, 01 0,00 -0,00 -0, 01 0, 04 0, 08 0, 08 0,05 0,02 0,00
Следует заметить, что для отдельной А модели показатели взаимодействия при двух самых высоких концентрациях не поддавались оцениванию (τ8 и τ9), и результаты основаны на значении локального оптимума. В табл. 11 показано, что показатель взаимодействия (τ) оценивается с 95% доверительными интервалами (CI) для отдельной А модели. При условии, что степень синергии варьируется в зависимости от доз соединения А, обнаруживается значительная степень синергии при дозах, составляющих от 0,19 до 15 нМ.
Таблица 11
Оценочные значения показателей взаимодействия при 95% CI для отдельной А модели. Показатель взаимодействия при значении ЕС50 аппроксимировали посредством линейной интерполяции оценок тау
Доза (нМ) Оценка 95% CI
Т1 0,19 0, 93 (0,87, 0,995)
τ2 0,57 0, 865 (0,811, 0,924)
τ3 1,7 0,756 (0,709, 0,806)
τ4 5, 1 0, 668 (0, 615, 0,726)
τ5 15 0,756 (0,665, 0,859)
τ6 46 1,081 (0,875, 1,334)
τ7 139 1,111 (0,542, 2,278)
τ8 417 0,225 (н. д., Η. д.)
τ9 1250 0 (н. Д., Η. д.)
τ ЕС 50 4,85 0, 674 (Η. Д., Η. д.)
Комбинация: соединение А и 4-амино-8-[3-[[2-(3,4-диметоксифенил)этил]амино]пропил]-6,6- 11 037206 диметил-2-(4-метил-3-нитрофенил)-3Н-имидазо[4,5-Ь]изохинолин-7,9(6Н,8Н)-дион в качестве соединения В.
Таблица 12
Нормализованные данные для соединения А в комбинации с 4-амино-8-[3-[[2-(3,4-диметоксифенил)этил]амино]пропил]-6,6-диметил-2-(4-метил-3-нитрофенил)-3Н-имидαзо[4,5-h]изохинолин7,9(6Н,8Н)-дионом в качестве соединения В (среднее из 12 повторностей)
А=0 А=0, 19 А=0, 57 А=1,7 А=5,1 А=15 А=4 6 А=139 А=417 А=1250
в=о 1,02 0, 99 0, 96 0,83 0,50 0,31 0,19 0, 10 0, 06 0, 04
В=1, 9 0, 99 0, 96 0, 89 0,74 0,47 0,24 0,16 0, 09 0, 05 0, 01
В=5, 7 0, 97 0, 94 0, 85 0,73 0,43 0,24 0, 13 0, 08 0, 04 0, 02
В=17 0, 89 0, 84 0,79 0, 64 0,35 0,20 0, 15 0, 05 0, 04 0, 01
В=51 0,74 0, 65 0, 60 0,47 0,22 0,18 0, 09 0, 05 0, 02 0, 01
В=154 0,38 0,38 0,34 0,22 0,11 0,05 0, 03 0, 02 0, 01 0, 01
В=463 0, 05 0, 03 0, 04 0,03 0,01 0,01 0, 01 -0, 00 -0, 00 -0, 00
В=1389 0,01 0, 01 0, 00 0, 00 -0, 00 0, 00 0, 00 0, 00 0, 00 0, 00
Следует заметить, что в столбце 1 в планшете 3 был обнаружен дефект изготовления, соответствующий данным о монотерапии для соединения В, и что такие данные не учитывались в анализе (этим обусловлено наличие 10 вместо 12 повторностей). В табл. 13 показано, что показатель взаимодействия (τ) оценивается с 95% доверительными интервалами (CI) для отдельной А модели. При условии, что степень синергии варьируется в зависимости от доз соединения А, обнаруживается значительная степень синергии при концентрациях, составляющих от 0,57 до 46 нМ.
Таблица 13
Оценочные значения показателей взаимодействия при 95% CI для отдельной А модели. Показатель взаимодействия при значении ЕС50 аппроксимировали посредством линейной интерполяции оценок тау
Доза (нМ) Оценка 95% CI
Xi 0, 19 0, 954 (0,878, 1,037)
т2 0, 57 0, 89 (0,821, 0,964)
Т3 1,7 0, 72 (0,668, 0,776)
т4 5, 1 0,49 (0,449, 0,534)
т5 15 0, 512 (0,453, 0,579)
т6 46 0, 682 (0,57, 0,816)
139 0, 762 (0,548, 1,061)
Т8 417 0, 847 (0,454, 1,583)
т9 1250 0, 85 (0,34, 2,129)
τ ЕС 50 5, 39 0,49 (н. д., н. д.)
Комбинация: соединение А и моноклональное антитело CR9501 в качестве соединения В.
Таблица 14
Нормализованные данные для соединения А в комбинации с CR9501 в качестве соединения В (среднее из 12 повторностей)
А=0 А=0,19 А=0,57 А=1,7 А=5,1 А=15 А=4 6 А=139 А=417 А=1250
в=о 1,06 1,05 1,01 0,89 0,64 0,41 0,28 0,21 0,10 0,06
В=0,002 1,06 0,98 0,94 0,80 0,51 0,37 0,26 0,17 0,06 0,04
В=0,0061 0,99 0,94 0,89 0,73 0,43 0,30 0,21 0,13 0,05 0,04
В=0,018 0,93 0,88 0,79 0,67 0,39 0,26 0, 18 0,10 0,04 0,02
В=0,055 0,99 0,92 0,80 0,52 0,24 0,15 0, 07 0,04 0,02 0,01
В=0,164 0,77 0,66 0,49 0,26 0,07 0,03 0, 01 0,00 0,00 0,00
В=0,493 0,28 0,18 0,09 0,03 0,01 -0,00 0, 00 0,00 0,00 0,00
В=1,48 0,04 0,02 0,01 0,01 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
В табл. 15 показано, что показатель взаимодействия (τ) оценивается с 95% доверительными интервалами (CI) для отдельной А модели. При условии, что степень синергии варьируется в зависимости от доз соединения А, обнаруживается значительная степень синергии для всех значений концентрации.
- 12 037206
Таблица 15
Оценочные значения показателей взаимодействия при 95% CI для отдельной А модели. Показатель
взаимодействия при значении ЕС50 аппроксимировали посредством линейной интерполяции оценок тау
Доза (нМ) Оценка 95% CI
τι 0, 19 0, 844 (0,772, 0,921)
τ2 0,57 0,599 (0,55, 0,652)
τ3 1,7 0,375 (0,343, 0,41)
τ4 5, 1 0,21 (0,187, 0,235)
τ5 15 0,217 (0,186, 0,253)
τ6 46 0,245 (0,195, 0,308)
τ7 139 0,243 (0,161, 0,367)
τ8 417 0, 059 (0,009, 0,407)
τ9 1250 0, 023 (0,003, 0,176)
τ ЕС 50 8,93 0,212 (н. д., н. д.)
Комбинация: соединение А и рибавирин в качестве соединения В.
Таблица 16
Нормализованные данные для соединения А в комбинации с рибавирином в качестве соединения В (среднее из 12 повторностей)
А=0 А=0,19 А=0,57 А=1,7 А=5,1 А=15 А=4 6 А=139 А=417 А=1250
в=о 1,01 0,97 0,95 0,87 0,63 0,39 0,25 0,15 0,08 0,04
В=69 1,00 0,99 0,93 0,81 0,54 0,33 0,23 0,15 0,07 0,05
В=2 0 6 0,98 0,95 0,85 0,77 0,51 0,34 0,23 0,14 0,07 0,04
В=617 0,98 0,88 0,86 0,72 0,49 0,29 0,20 0,13 0,06 0,04
В=1852 0,97 0,91 0,83 0,69 0,46 0,22 0,16 0,11 0,05 0,03
В=5556 0,94 0,91 0,83 0,63 0,34 0,16 0,13 0,07 0,04 0,03
В=16667 0,83 0,72 0,62 0,39 0,17 0,08 0,06 0,04 0,03 0,02
В=50000 0,13 0,12 0,09 0,05 0,02 0,01 0,02 0,02 0,01 0,01
В табл. 17 показано, что показатель взаимодействия (τ) оценивается с 95% доверительными интервалами (CI) для отдельной А модели. Следует заметить, что 2PL-модель с нижней границей, установленной на нуле, была подобрана для данных о монотерапии для соединения В. При условии, что степень синергии варьируется в зависимости от доз соединения А, обнаруживается значительная степень синергии для значений концентрации от 0,19 до 139 нМ.
Таблица 17
Оценочные значения показателей взаимодействия при 95% CI для отдельной А модели. Показатель взаимодействия при значении ЕС50 аппроксимировали посредством линейной интерполяции оценок тау
Доза (нМ) Оценка 95% CI
Т1 0,19 0, 911 (0, 852, 0, 974)
Т2 0,57 0, 812 (0,761, 0, 867)
τ3 1,7 0, 61 (0,572, 0, 651)
τ4 5, 1 0,407 (0,377, 0,44)
τ5 15 0,338 (0,303, 0,376)
τ6 46 0,486 (0,419, 0,563)
τ7 139 0, 648 (0,511, 0,822)
τ8 417 0, 652 (0,378, 1,126)
τ9 1250 0, 934 (0,347, 2,52)
τ ЕС 50 9, 04 0,379 (н. д., Η. д.)
- 13 037206
Комбинация: соединение А и А-60444 в качестве соединения В.
Таблица 18
Нормализованные данные для соединения А в комбинации с А-60444 в качестве соединения В (среднее из 12 повторностей)
А=0 А=0,19 А=0,57 А=1,7 А=5,1 А=15 А=4 6 А=139 А=417 А=1250
в=о 0,97 0,96 0,95 0,83 0,55 0,38 0,28 0,14 0,07 0,04
В=34 1,00 0,97 0,92 0,82 0,59 0,36 0,23 0,15 0,09 0,04
В=103 1,00 0,96 0,87 0,82 0,58 0,34 0,23 0,14 0,07 0,04
В=309 0,96 0,93 0,88 0,75 0,52 0,30 0,22 0,16 0,07 0,04
В=926 0,93 0,92 0,86 0,73 0,55 0,30 0,22 0,16 0,08 0,03
В=2778 0,93 0,92 0,83 0,71 0,52 0,27 0,17 0,12 0,07 0,03
В=8333 0,75 0,72 0,62 0,45 0,16 0,08 0,05 0,03 0,02 0,01
В=25000 0,39 0,31 0,24 0,12 0,04 0,01 0,01 0,01 0,00 0,00
В табл. 19 показано, что показатель взаимодействия (τ) оценивается с 95% доверительными интервалами (CI) для отдельной А модели. Следует заметить, что 2PL-модель с нижней границей, установленной на нуле, была подобрана для данных о монотерапии для соединения В. При условии, что степень синергии варьируется в зависимости от доз соединения А, обнаруживается значительная степень синергии для значений концентрации от 0,57 до 139 нМ.
Таблица 19
Оценочные значения показателей взаимодействия при 95% CI для отдельной А модели. Показатель взаимодействия при значении ЕС50 аппроксимировали посредством линейной интерполяции оценок тау
Доза (нМ) Оценка 95% CI
Τι τ2 τ3 τ4 τ5 τ6 τ7 τ8 τ9 0, 19 0,57 1,7 5, 1 15 46 139 417 1250 1,072 0, 844 0, 635 0,407 0,308 0,409 0, 631 0, 858 1,403 (0,976, 1,177) (0,769, 0,926) (0,579, 0,696) (0,368, 0,45) (0,27, 0,351) (0,346, 0,484) (0,502, 0,792) (0,585, 1,257) (0,768, 2,562)
τ ЕС 50 7, 89 0,379 (н. д., Η. д.)
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Claims (2)

1. Комбинация, предназначенная для лечения или ослабления инфекции, вызванной респираторносинцитиальным вирусом (RSV), содержащая 3-({5-хлор-1-[3-(метилсульфонил)пропил]-1H-индол-2ил}метил)-1-(2,2,2-трифторэтил)-1,3-дигидро-2Н-имидазо[4,5-с]пиридин-2-он или его фармацевтически приемлемую соль в качестве соединения А и рибавирин или его фармацевтически приемлемую соль в качестве соединения В, где количество соединения А соответствует значению концентрации от 0,19 до 139 нМ и количество соединения В соответствует значению концентрации от 206 до 50000 нМ.
2. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью против RSV, содержащая терапевтически эффективное количество комбинации по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ
Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
EA201891655A 2016-02-03 2017-02-02 Комбинация для лечения и ослабления rsv инфекции и фармацевтическая композиция на её основе EA037206B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP16154035 2016-02-03
PCT/EP2017/052201 WO2017134133A1 (en) 2016-02-03 2017-02-02 Combination products for the treatment of rsv

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201891655A1 EA201891655A1 (ru) 2018-12-28
EA037206B1 true EA037206B1 (ru) 2021-02-19

Family

ID=55304886

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201891655A EA037206B1 (ru) 2016-02-03 2017-02-02 Комбинация для лечения и ослабления rsv инфекции и фармацевтическая композиция на её основе
EA202092251A EA202092251A1 (ru) 2016-02-03 2017-02-02 Комбинированные продукты для лечения rsv
EA202092250A EA202092250A1 (ru) 2016-02-03 2017-02-02 Комбинированные продукты для лечения rsv

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA202092251A EA202092251A1 (ru) 2016-02-03 2017-02-02 Комбинированные продукты для лечения rsv
EA202092250A EA202092250A1 (ru) 2016-02-03 2017-02-02 Комбинированные продукты для лечения rsv

Country Status (19)

Country Link
US (1) US10363253B2 (ru)
EP (2) EP3411028B1 (ru)
JP (1) JP7065030B2 (ru)
KR (1) KR20180108598A (ru)
CN (2) CN108601774B (ru)
AU (2) AU2017214246B2 (ru)
BR (1) BR112018014958A2 (ru)
CA (1) CA3006488A1 (ru)
CL (3) CL2018001808A1 (ru)
EA (3) EA037206B1 (ru)
ES (1) ES2877808T3 (ru)
IL (2) IL259669B (ru)
MX (2) MX2020012592A (ru)
MY (1) MY197217A (ru)
PH (2) PH12018501649B1 (ru)
SG (1) SG11201806581TA (ru)
UA (1) UA124099C2 (ru)
WO (1) WO2017134133A1 (ru)
ZA (1) ZA201805205B (ru)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3204389B1 (en) 2014-10-10 2019-06-26 Pulmocide Limited Novel 5,6-dihydro-4h-benzo[b]thieno-[2,3-d]azepine derivative
EP3233867B1 (en) 2014-12-18 2018-10-17 Pulmocide Limited 4,5-dihydro-6h-thieno[3,2-d]benzazepine derivatives and their use to treat respiratory syncytial virus (rsv) infections
WO2017175000A1 (en) 2016-04-08 2017-10-12 Pulmocide Limited Compounds
TW201936193A (zh) * 2017-12-05 2019-09-16 愛爾蘭商健生科學愛爾蘭無限公司 使用組合產品治療ｒｓｖ
JP2023500214A (ja) * 2019-10-30 2023-01-05 ヤンセン・サイエンシズ・アイルランド・アンリミテッド・カンパニー ３－（｛５－クロロ－１－［３－（メチルスルホニル）プロピル］－１Ｈ－インドール－２イル｝メチル）－１－（２，２，２－トリフルオロエチル）－１，３－ジヒドロ－２Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－オンの合成
CN114014856B (zh) * 2021-11-26 2023-12-22 嘉兴安谛康生物科技有限公司 作为呼吸道合胞病毒抗病毒剂的咪唑并吡啶类衍生物
CN116077494A (zh) * 2023-01-11 2023-05-09 黑龙江中医药大学 一种治疗呼吸道合胞病毒的药物组合物及其制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012080447A1 (en) * 2010-12-16 2012-06-21 Janssen R&D Ireland Indoles as respiratory syncytial virus antiviral agents
WO2014174018A1 (en) * 2013-04-25 2014-10-30 Crucell Holland B.V. Stabilized soluble prefusion rsv f polypeptides
WO2016055791A1 (en) * 2014-10-10 2016-04-14 Pulmocide Limited Novel 5,6-dihydro-4H-benzo[b]thieno-[2,3-d]azepine derivative

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA123854C2 (uk) 2013-08-21 2021-06-16 Аліос Біофарма, Інк. Противірусні сполуки

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012080447A1 (en) * 2010-12-16 2012-06-21 Janssen R&D Ireland Indoles as respiratory syncytial virus antiviral agents
WO2014174018A1 (en) * 2013-04-25 2014-10-30 Crucell Holland B.V. Stabilized soluble prefusion rsv f polypeptides
WO2016055791A1 (en) * 2014-10-10 2016-04-14 Pulmocide Limited Novel 5,6-dihydro-4H-benzo[b]thieno-[2,3-d]azepine derivative

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JIA HU, JOAN L. ROBINSON: "Treatment of respiratory syncytial virus with palivizumab: a systematic review", WORLD JOURNAL OF PEDIATRICS, HANGZHOU INSITUTE OF PEDIATRICS : SPRINGER, CN, vol. 6, no. 4, 1 November 2010 (2010-11-01), CN, pages 296 - 300, XP055384380, ISSN: 1708-8569, DOI: 10.1007/s12519-010-0230-z *
JOHN P. DEVINCENZO, RICHARD J. WHITLEY, RICHARD L. MACKMAN, CECILIA SCAGLIONI-WEINLICH, LISA HARRISON, ERIC FARRELL, STEPHEN MCBRI: "Oral GS-5806 Activity in a Respiratory Syncytial Virus Challenge Study", THE NEW ENGLAND JOURNAL OF MEDICINE, MASSACHUSETTS MEDICAL SOCIETY, US, vol. 371, no. 8, 21 August 2014 (2014-08-21), US, pages 711 - 722, XP055384254, ISSN: 0028-4793, DOI: 10.1056/NEJMoa1401184 *
LEONARD R KRILOV: "Palivizumab in the prevention of respiratory syncytial virus disease", EXPERT OPINION ON BIOLOGICAL THERAPY, INFORMA HEALTHCARE, vol. 2, no. 7, 1 October 2002 (2002-10-01), pages 763 - 769, XP055384374, ISSN: 1471-2598, DOI: 10.1517/14712598.2.7.763 *
MEJIAS ASUNCION; RAMILO OCTAVIO: "New options in the treatment of respiratory syncytial virus disease", JOURNAL OF INFECTION., ACADEMIC PRESS, LONDON., GB, vol. 71, 25 April 2015 (2015-04-25), GB, XP029231667, ISSN: 0163-4453, DOI: 10.1016/j.jinf.2015.04.025 *
MICHEL PERRON, STRAY KIRSTEN, KINKADE APRIL, THEODORE DOROTHY, LEE GARY, EISENBERG EUGENE, SANGI MICHAEL, GILBERT BRIAN E., JORDAN: "GS-5806 Inhibits a Broad Range of Respiratory Syncytial Virus Clinical Isolates by Blocking the Virus-Cell Fusion Process", ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY, AMERICAN SOCIETY FOR MICROBIOLOGY, US, vol. 60, no. 3, 26 March 2016 (2016-03-26), US, pages 1264 - 1273, XP055384299, ISSN: 0066-4804, DOI: 10.1128/AAC.01497-15 *
S. GHOSH: "IDWeek 2015. San Diego, California, USA - October 7-11, 2015", DRUGS OF THE FUTURE, PROUS SCIENCE, ES, vol. 40, no. 11, 1 January 2015 (2015-01-01), ES, pages 765, XP055384274, ISSN: 0377-8282, DOI: 10.1358/dof.2015.040.11.2409822 *
WHIMBEY E, ET AL.: "COMBINATION THERAPY WITH AEROSOLIZED RIBAVIRIN AND INTRAVENOUS IMMUNOGLOBULIN FOR RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS DISEASE IN ADULT BONE MARROW TRANSPLANT RECIPIENTS", BONE MARROW TRANSPLANTATION., STOCKTON PRESS., GB, vol. 16, no. 03, 1 September 1995 (1995-09-01), GB, pages 393 - 399, XP009035052 *
WYDE P R,ET AL: "Comparison of the inhibition of human metapneumovirus and respiratory syncytial virus by ribavirin and immune serum globulin in vitro", ANTIVIRAL RESEARCH, ELSEVIER BV, NL, vol. 60, no. 1, 1 September 2003 (2003-09-01), NL, pages 51 - 59, XP002291798, ISSN: 0166-3542, DOI: 10.1016/S0166-3542(03)00153-0 *

Also Published As

Publication number Publication date
SG11201806581TA (en) 2018-09-27
CN108601774A (zh) 2018-09-28
WO2017134133A1 (en) 2017-08-10
ZA201805205B (en) 2020-10-28
EP3892273A2 (en) 2021-10-13
MX2018009422A (es) 2018-12-19
BR112018014958A2 (pt) 2019-01-08
CA3006488A1 (en) 2017-08-10
US20190054084A1 (en) 2019-02-21
UA124099C2 (uk) 2021-07-21
CL2019001454A1 (es) 2019-08-16
CL2019001455A1 (es) 2019-08-16
JP2019504102A (ja) 2019-02-14
JP7065030B2 (ja) 2022-05-11
EP3892273A3 (en) 2021-12-22
EA201891655A1 (ru) 2018-12-28
CN112245429A (zh) 2021-01-22
AU2017214246B2 (en) 2022-03-31
EA202092250A1 (ru) 2020-12-11
EA202092251A1 (ru) 2020-12-11
EP3411028B1 (en) 2021-05-05
AU2022202070A1 (en) 2022-04-14
EP3411028A1 (en) 2018-12-12
AU2017214246A1 (en) 2018-06-21
ES2877808T3 (es) 2021-11-17
PH12020551598A1 (en) 2021-05-10
MX2020012592A (es) 2022-10-27
PH12018501649A1 (en) 2019-06-03
MY197217A (en) 2023-06-01
KR20180108598A (ko) 2018-10-04
CN108601774B (zh) 2021-09-21
IL259669B (en) 2021-03-25
IL277281B (en) 2021-04-29
IL259669A (en) 2018-07-31
US10363253B2 (en) 2019-07-30
CL2018001808A1 (es) 2018-08-31
IL277281A (en) 2020-10-29
PH12018501649B1 (en) 2019-06-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA037206B1 (ru) Комбинация для лечения и ослабления rsv инфекции и фармацевтическая композиция на её основе
AU2022202686B2 (en) Methods of treating and preventing graft versus host disease
TW201609100A (zh) 醫藥組合
JP6479812B2 (ja) 細胞増殖性疾患を治療するためのａｌｋ阻害剤とｃｄｋ阻害剤との組合せ
EA037601B1 (ru) Комбинация для лечения вич-инфекции
US9173884B2 (en) Inhibitors of phosphodiesterase 11 (PDE11)
US20210268103A1 (en) Therapeutic mitigation of epithelial infection
WO2018069463A1 (en) Fgfr regulation for the treatment of viral infections
US11963959B2 (en) Inhibitors for coronavirus
JP2020529423A (ja) 第三世代ｅｇｆｒチロシンキナーゼ阻害剤とサイクリンｄキナーゼ阻害剤の治療用組合せ
US20210353614A1 (en) Compounds and uses thereof to treat tumors in a subject
US20240016775A1 (en) Anti-coronavirus application of poly adp ribose polymerase inhibitor
JP7293225B2 (ja) 組合せ製品を用いるｒｓｖの処置
EA040090B1 (ru) Комбинация для лечения и ослабления rsv инфекции и фармацевтическая композиция на ее основе
EA040061B1 (ru) Комбинация для лечения и ослабления rsv инфекции и фармацевтическая композиция на ее основе
CA2978640A1 (en) Combination treatment protocol