EA032203B1 - Производные тубулизина - Google Patents

Производные тубулизина Download PDF

Info

Publication number
EA032203B1
EA032203B1 EA201691963A EA201691963A EA032203B1 EA 032203 B1 EA032203 B1 EA 032203B1 EA 201691963 A EA201691963 A EA 201691963A EA 201691963 A EA201691963 A EA 201691963A EA 032203 B1 EA032203 B1 EA 032203B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
cancer
mmol
resin
antibody
mixture
Prior art date
Application number
EA201691963A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201691963A1 (ru
Inventor
Лакшмаях Гинджипалли
Дорин Тоадер
Фэнцзян Ван
Original Assignee
МЕДИММЬЮН ЭлЭлСи
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by МЕДИММЬЮН ЭлЭлСи filed Critical МЕДИММЬЮН ЭлЭлСи
Publication of EA201691963A1 publication Critical patent/EA201691963A1/ru
Publication of EA032203B1 publication Critical patent/EA032203B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/05—Dipeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/07—Tetrapeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A61K47/6829—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxins or Pseudomonas exotoxin A
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/021—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)n-C(=0)-, n being 5 or 6; for n > 6, classification in C07K5/06 - C07K5/10, according to the moiety having normal peptide bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0212—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -N-C-N-C(=0)-, e.g. retro-inverso peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Abstract

Предложены новые производные тубулизина, которые могут быть полезны в качестве цитотоксических агентов для обеспечения терапевтических эффектов в лечении различных видов рака отдельно или в виде конъюгатов лекарственных средств с антителами. Производные тубулизина состоят из тетрапептидного каркаса, содержащего метил- и этилзамещенные пиперидины. Конъюгаты тубулизина дополнительно содержат моноклональное антитело, присоединенное посредством сукцинимидного линкера.

Description

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ (45) Дата публикации и выдачи патента
2019.04.30 (21) Номер заявки
201691963 (22) Дата подачи заявки
2015.04.10 (51) 1п1. С1. С071) 277/30 (2006.01)
А61К31/426 (2006.01)
А61К31/427 (2006.01) (54) ПРОИЗВОДНЫЕ ТУБУЛИЗИНА (31) 61/978,460 (32) 2014.04.11 (33) и§ (43) 2017.06.30 (86) РСТ/и82015/025235 (87) \У() 2015/157594 2015.10.15 (71) (73) Заявитель и патентовладелец:
МЕДИММЬЮН ЭлЭлСи (ϋδ) (72) Изобретатель:
Гинджипалли Лакшмаях, Тоадер
Дорин, Ван Фэнцзян (118) (74) Представитель:
Поликарпов А.В. (Κϋ) (56) υδ-ΑΙ-20130197259 υδ-ΑΙ-20080108820 υδ-ΑΙ-20130129753 υδ-ΑΙ-20060148014
032203 В1 (57) Предложены новые производные тубулизина, которые могут быть полезны в качестве цитотоксических агентов для обеспечения терапевтических эффектов в лечении различных видов рака отдельно или в виде конъюгатов лекарственных средств с антителами. Производные тубулизина состоят из тетрапептидного каркаса, содержащего метил- и этилзамещенные пиперидины. Конъюгаты тубулизина дополнительно содержат моноклональное антитело, присоединенное посредством сукцинимидного линкера.
032203 Β1
Предшествующий уровень техники
Тубулизины представляют собой класс цитостатических тетрапептидов, которые были выделены из миксобактерий (Баззе Г е! а1 I. Ап!1Ью!1сз, 2000, 879). Общим признаком тубулизинов является их тетрапептидная структура, в которой только 11е (изолейцин) является природной аминокислотой, а три других представляют собой сложные неприродные аминокислоты: Мер (Κ-Ν-метилпипеколиновую кислоту), Тиу (тубувалин) и Ти! (тубутирозин) или Тир (тубуфенилаланин). В дальнейшем были описаны дополнительные члены этого семейства (Б!етте!!/ е! а1, Апде^. СБет. Ιη!. Бб.2004, 4888). Большинство природных тубулизинов демонстрировало рМ цитотоксическую активность в отношении клеточных линий рака, которая коррелировала с ингибированием полимеризации тубулина. Механизм действия тубулизинов описан у Баззе (КБаШ М^ е! а1 СБетВюСБет, 2006, 678), который показал, что тубулизин А является более эффективным в ингибировании полимеризации тубулина, чем другие вещества, связывающиеся с доменом бета-тубулина, предназначенным для связывания соединений барвинка (фомопсин, доластатин и гемиастерлин). Природные тубулизины демонстрировали стабильно более высокую токсичность по сравнению с доластатином. Кроме того, сообщалось (Каиг О е! а1, ВюсБет. I, 2006, 235), что тубулизин А вызывает апоптоз в клеточных линиях рака и помимо сильной противоопухолевой активности демонстрирует антиангиогенную активность в животных моделях. На основании этих данных были приложены значительные усилия для поиска синтетических аналогов, сопоставимых по эффективности с природными тубулизинами. Присутствие Ν,Ο-ацеталь-содержащего Тиу создает проблему для синтеза тубулизинов и вызывает опасения относительно их стабильности. Некоторые группы идентифицировали синтетические аналоги, в которых Ν,Ο-ацеталь заменен простой метильной группой без значительной потери цитотоксической активности (Ра!!егзоп, А е! а1, СБет. Еиг. I. 2007, 9534; ^ΐρί* Р е! а1 Огд. Бе!!. 2007, 1605).
В некоторых сообщениях раскрыты конъюгаты тубулизинов с фолатом (Беатоп СР е! а1, Сапсег Кез. 2008, 9839), наноконъюгаты с циклодекстрином (БсБ1иер ТБ е! а1 С11п. Сапсег Кез. 2009, 15:181), а также дендримерные конъюгаты (Г1оуб ^С, СБетМебСБет 2011, 49). В одном сообщении раскрыта конъюгация тубулизинов с моноклональными антителами (иБ2011/0027274).
Новые производные тубулизина могут быть полезны в качестве цитотоксических агентов для обеспечения терапевтических эффектов в лечении различных видов рака в монотерапии, в виде лекарственных конъюгатов или в комбинации с другими видами химиотерапии.
Краткое изложение сущности изобретения
Согласно настоящему изобретению предложены соединения, имеющие структуру формулы I
где К1 представляет собой СН3 или СН2-СН3;
К2 представляет собой Н или СН3;
К3 представляет собой Н или ΝΠ2; и п равен 1 или 2;
или их фармацевтически приемлемые соли.
В некоторых аспектах п равен 1 и К1 представляет собой метил.
В некоторых аспектах К2 представляет собой метил.
В некоторых аспектах К3 представляет собой ΝΠ2.
В некоторых аспектах п равен 1, К1 представляет собой метил, К2 представляет собой метил и К3 представляет собой ΝΠ2.
Соединения формулы I являются цитотоксичными и могут быть полезными для лечения рака.
Согласно настоящему изобретению также предложены соединения, имеющие структуру формулы II
где К1 представляет собой СН3 или СН2-СН3;
К2 представляет собой Н или СН3;
К4 представляет собой СН3, (СН2)^Н2 или (СН2)3КНС(=О)КН2;
- 1 032203
К5 представляет собой Н; С(СИз)(СИ3);
К6 представляет собой НИС(=О) или СН2;
η равен 1 или 2; и т равен 0, 1, 2 или 3.
В некоторых аспектах η равен 1 и К1 представляет собой метил.
В некоторых аспектах К2 представляет собой метил.
В некоторых аспектах К3 представляет собой ΝΗ2.
В некоторых аспектах η равен 1, К1 представляет собой метил, К2 представляет собой метил и К3 представляет собой ΝΗ2.
В некоторых аспектах К4 представляет собой ^Η2)4ΝΗ2.
В некоторых аспектах К5 представляет собой Н.
В некоторых аспектах К6 представляет собой СН2.
В некоторых аспектах т равен 1.
В некоторых аспектах η равен 1, т равен 1, К1 представляет собой метил, К2 представляет собой метил, и К3 представляет собой ΝΗ2, К4 представляет собой (С112)4\Η2. К5 представляет собой Н и К6 представляет собой С112.
Соединения формулы I и соединения формулы II могут быть конъюгированы с антителом традиционными способами получения конъюгата антитело-лекарственное средство (АЭС). В некоторых аспектах изобретения соединения формулы I и II конъюгированы с антителом посредством лизинов и цистеинов антитела с получением конъюгата антитело-лекарственное средство (АЭС). Предложены некоторые конъюгаты антитело-лекарственное средство согласно данному изобретению, где антитело представляет собой моноклональное антитело. Предложены другие конъюгаты антитело-лекарственное средство согласно данному изобретению, где антитело является специфическим к раковому антигену. Предложены другие конъюгаты антитело-лекарственное средство согласно изобретению, где антитело представляет собой алемтузумаб, бевацизумаб, брентуксимаб, цетуксимаб, гемтузумаб, ипилимумаб, офатумумаб, панитумумаб, ритуксимаб, тозитумомаб или трастузумаб.
Согласно настоящему изобретению также предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель. Предложены фармацевтические композиции, содержащие АЭС по настоящему изобретению и фармацевтически приемлемый носитель.
Также согласно данному изобретению предложены способы лечения рака, включающие введение субъекту, страдающему от рака, эффективного количества соединения формулы I или соединения формулы II. Также согласно данному изобретению предложены способы лечения рака, включающие введение субъекту, страдающему от рака, эффективного количества конъюгата антитело-лекарственное средство, представляющего собой соединение формулы I или соединение формулы II, конъюгированное с антителом. В некоторых аспектах изобретения субъект страдает от плоскоклеточного рака, мелкоклеточного рака легкого, немелкоклеточного рака легкого, рака желудочно-кишечного тракта, лимфомы Ходжкина, неходжкинской лимфомы, рака поджелудочной железы, глиобластомы, глиомы, рака шейки матки, рака яичников, рака печени, рака мочевого пузыря, рака молочной железы, рака толстой кишки, колоректального рака, карциномы эндометрия, миеломы, карциномы слюнной железы, рака почки, базальноклеточной карциномы, меланомы, рака предстательной железы, рака вульвы, рака щитовидной железы, рака яичка, рака пищевода, видов рака головы и шеи, слизеобразующего рака яичников, холангиокарциномы или папиллярного рака почки.
Также предложены способы лечения рака, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I. Согласно данному изобретению также предложен способ лечения рака, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, фармацевтической композиции, содержащей АЭС по настоящему изобретению.
В некоторых аспектах способ дополнительно включает введение по меньшей мере одного дополнительного терапевтического агента. В некоторых аспектах по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент представляет собой радионуклид или химиотерапевтический агент.
Подробное описание изобретения
Согласно настоящему изобретению предложены соединения, имеющие структуру формулы I
где К1 представляет собой СИ3 или С^-С^;
К2 представляет собой Η или С113;
К3 представляет собой Η или ΝΗ2; и
- 2 032203 η равен 1 или 2;
или их фармацевтически приемлемые соли.
В некоторых аспектах η равен 1 и К1 представляет собой метил.
В некоторых аспектах К2 представляет собой метил.
В некоторых аспектах К3 представляет собой ΝΗ2.
В некоторых аспектах η равен 1, К1 представляет собой метил, К2 представляет собой метил, и К3 представляет собой ΝΗ2.
Конкретные примеры соединений по изобретению формулы I включают соединения от (11) до (Ινι).
Согласно настоящему изобретению предложены соединения, имеющие структуру формулы II
где
К1 представляет собой СН3 или СН2-СН3;
К2 представляет собой Н или СН3;
К4 представляет собой СН3, (СН2^Н2 или (СН2)^НС(=О)№2;
К5 представляет собой Н; С(СН3)(СН3);
К6 представляет собой N№(=0) или СН2;
η равен 1 или 2; и т равен 0, 1, 2 или 3.
В некоторых аспектах η равен 1 и К1 представляет собой метил. В некоторых аспектах К2 представляет собой метил.
В некоторых аспектах К3 представляет собой ΝΙΚ
- 3 032203
В некоторых аспектах η равен 1, К1 представляет собой метил, К2 представляет собой метил, и К3 представляет собой ΝΗ2.
В некоторых аспектах К4 представляет собой (ΟΗ2)4ΝΗ2.
В некоторых аспектах К5 представляет собой Н.
В некоторых аспектах К6 представляет собой СН2.
В некоторых аспектах т равен 1.
Конкретные примеры соединений по изобретению формулы II включают соединения от (Ш) до (ΙΙνί)
В некоторых аспектах изобретения η равен 1. В других аспектах изобретения η равен 2. В тех случаях, когда η равен 2, К1 заместители по пиперидиновому кольцу могут находиться на одном атоме углерода в кольце или могут находиться на разных атомах углерода в кольце. В некоторых аспектах изобретения, когда η равен 1, К1 заместитель кольца находится в пара-положении относительно атома азота. В других аспектах изобретения, когда η равен 1, К1 заместитель находится в мета-положении относительно атома азота в пиперидиновом кольце.
Соединения формулы I и II могут быть конъюгированы с антителами с образованием конъюгатов антитело-лекарственное средство (АЭС). В АЭС комплексе соединения формулы I и соединения формулы II выступают в качестве терапевтических группировок, которые доставляются к интересующей терапевтической мишени с помощью антитела, с которым они конъюгированы. Фармацевтические композиции, содержащие АЭС, образованные посредством конъюгации соединений формулы I и формулы II и антитела, также предложены. Также предложены способы получения АЭС с использованием соединений формулы I и соединений формулы II. Также предложены способы лечения рака у субъекта, нуждающегося в этом, включающие введение АЭС по настоящему изобретению. Способы лечения рака дополнительно включают введение АЭС по настоящему изобретению в комбинации с химиотерапевтическим агентом.
Чтобы настоящее изобретение было понято лучше, предварительно будут определены некоторые термины. Дополнительные определения даны в ходе подробного описания.
Предшествующее письменное описание, как считают, является достаточным, для того чтобы специалист в данной области техники смог осуществить на практике воплощения изобретения. В предшествующем описании и примерах подробно изложены некоторые воплощения и описан лучший вариант осуществления, предполагаемый авторами изобретения. Следует принимать во внимание, однако, что независимо от того, насколько подробно вышеизложенное может быть представлено в тексте, воплощения можно осуществить на практике множеством способов, а формула изобретения включает любые их эквиваленты.
Перед подробным описанием настоящего изобретения следует понимать, что это изобретение не
- 4 032203 ограничивается конкретными композициями или стадиями способа и по существу может варьировать. Использованные в данном описании и прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа один, какой-либо и этот включают множественные значения, если в контексте четко не оговорено иное. Термины один (или какой-либо), а также термины один или более чем один и по меньшей мере один могут быть здесь использованы взаимозаменяемо.
Кроме того, термин и/или, в тех случаях, когда он использован здесь, следует понимать как конкретное раскрытие каждого из двух конкретных признаков или компонентов вместе с другим или без него. Таким образом, термин и/или, использованный здесь в выражении, таком как А и/или В, подразумевает включение А и В, А или В, А (отдельно) и В (отдельно). Подобным образом, термин и/или, использованный здесь в выражении, таком как А, В и/или С подразумевает включение каждого из следующих аспектов: А, В и С; А, В или С; А или С; А или В; В или С; А и С; А и В; В и С; А (отдельно); В (отдельно) и С (отдельно).
Если не оговорено особо, все технические и научные термины, использованные здесь, имеют такое же значение, которое обычно подразумевается специалистом в той области техники, к которой относится данное изобретение. Например, Ше Сопаке Окбопату оГ Вютебюше апб Мо1еси1аг Βίοίοβν. Лю. Ре18йоте, 2пб еб., 2002, СЯС Ргекк; ТНе Июбопату оГ Се11 апб Мо1еси1аг Вю1оду, 3гб еб., 1999, Асабетю Ргекк; и (Не ОхГогб Окбопату ОГ Вюсйетщбу Апб Мо1еси1аг Вю1оду, Яеу1кеб, 2000, ОхГогб ИшуеткИу Ргекк, обеспечивают специалисту общий словарь многих терминов, используемых в данном изобретении.
Единицы измерения, префиксы и символы обозначаются в форме, в которой они приняты в Международной системе единиц (СИ). Диапазоны числовых значений включают числа, определяющие диапазон. Если не оговорено особо, аминокислотные последовательности написаны слева направо в направлении от аминокислотного остатка к остатку, содержащему карбоксигруппу. Разделы, представленные здесь, не ограничивают различные аспекты, которые могут иметься посредством ссылки на описание в целом. Соответственно, термины, определенные непосредственно ниже, более полно определены посредством ссылки на описание во всей его полноте.
Понятно, что во всех случаях, когда аспекты описаны здесь с помощью формулировки содержащий, другие аналогичные аспекты, описанные с помощью терминов состоящий из и/или состоящий по существу из также предусмотрены.
Аминокислоты обозначены здесь либо с помощью общеизвестных трехбуквенных кодов, либо с помощью однобуквенных кодов, рекомендованных Объединенной Комиссией ИЮПАК-ИЮБ (ГОРАС1ИВ) по биохимической номенклатуре.
Термины ингибировать, блокировать и подавлять использованы здесь взаимозаменяемо и относятся к любому статистически значимому снижению биологической активности, включая полную блокаду активности. Например, ингибирование может относиться к снижению биологической активности на примерно 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100%.
Оценить пролиферацию клеток можно при использовании методов, известных в данной области техники, с помощью которых измеряют скорость деления клеток, и/или фракцию клеток в клеточной популяции, подвергнутую клеточному делению, и/или скорость потери клеток клеточной популяцией вследствие терминальной дифференцировки или клеточной гибели (например, введения тимидина).
Термины антитело или иммуноглобулин, использованные здесь взаимозаменяемо, включают целые антитела и любой их антигенсвязывающий фрагмент или отдельные цепи и их комбинации (например, биспецифические антитела).
Типичное антитело содержит по меньшей мере две тяжелые (Н) цепи и две легкие (Ь) цепи, соединенные дисульфидными связями. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельной области тяжелой цепи (здесь сокращенно УН) и константной области тяжелой цепи (здесь сокращенно СН). Константная область тяжелой цепи состоит из трех доменов СН1, СН2 и СН3. Каждая легкая цепь состоит из вариабельной области легкой цепи (здесь сокращенно УЬ) и константной области легкой цепи. Константная область легкой цепи состоит из одного домена СЬ. УН и УЬ области могут быть дополнительно разделены на гипервариабельные участки, называемые участками, определяющими комплементарность (СИЯ), чередующиеся с более консервативными участками, называемыми каркасными областями (БА). Каждый УН и УЬ состоит из трех СИЯ и четырех БА, расположенных в следующем порядке от Ν-конца к Сконцу: БА1, СИЯ1, БА2, СИЯ2, БАЗ, СИЯ3, БА4. Вариабельные области тяжелых и легких цепей содержат связывающий домен, который взаимодействует с антигеном. Константные области антител могут опосредовать связывание иммуноглобулина с тканями или факторами хозяина, включающими различные клетки иммунной системы (например, эффекторные клетки) и первый компонент (С1с.|) классической системы комплемента. Приводимые в качестве примера антитела по настоящему изобретению включают типичные антитела, ксБу (одноцепочечные вариабельные фрагменты антител) и их комбинации, где, например, ксБу ковалентно связано (например посредством пептидных связей или посредством химического линкера) с Ν-концом или тяжелой цепи и/или легкой цепи типичного антитела, либо интеркалировано в тяжелую цепь и/или легкую цепь типичного антитела.
Термин антитело означает молекулу иммуноглобулина, которая распознает и специфически связывает мишень, такую как белок, полипептид, пептид, углевод, полинуклеотид, липид или комбинации
- 5 032203 вышеуказанного, с помощью по меньшей мере одной антигенраспознающей области в вариабельном участке молекулы иммуноглобулина. Использованный здесь термин антитело включает интактные поликлональные антитела, интактные моноклональные антитела, фрагменты антител (такие как ЕаЬ, ЕаЬ', Е(аЬ')2 и Εν-фрагменты), одноцепочечный вариабельный фрагмент антитела (5сЕу). стабилизированные дисульфидными связями 5сЕу. полиспецифические антитела, такие как биспецифические антитела, образованные по меньшей мере из двух интактных антител и/или их антигенсвязывающих фрагментов, химерные антитела, гуманизированные антитела, человеческие антитела, слитые белки, содержащие распознающую антиген часть антитела, и любую другую модифицированную молекулу иммуноглобулина, содержащую распознающую антиген область, при условии, что такие антитела проявляют требуемую биологическую активность.
Антитело может относиться к любому из пяти главных классов иммуноглобулинов: 1дА, 1дО, 1дЕ, 1дС и 1дМ или их подклассов (изотипов) (например 1§С1, 1§С2, 1§С3, 1§С4, 1§А1 и 1§А2), основанных на идентичности константных доменов их тяжелых цепей, обозначаемых альфа, дельта, эпсилон, гамма и мю, соответственно. Различные классы иммуноглобулинов обладают различными и хорошо известными субъединичными структурами и трехмерными конфигурациями. Антитела могут быть свободными или конъюгированными с другими молекулами, такими как токсины, радиоактивные изотопы и так далее, с образованием АЭС.
Термин антигенсвязывающий фрагмент относится к части интактного антитела и относится к распознающим антиген вариабельным участкам интактного антитела. В данной области техники известно, что антигенсвязывающая функция антитела может быть осуществлена с помощью фрагментов полноразмерного антитела. Примеры фрагментов антител включают фрагменты ЕаЬ, ЕаЬ', Е(аЬ')2 и Εν, линейные антитела, одноцепочечные антитела и полиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител, но не ограничиваются ими.
Моноклональное антитело относится к гомогенной популяции антител, вовлеченных в высокоспецифичное распознавание и связывание отдельной антигенной детерминанты или эпитопа. В этом их отличие от поликлональных антител, которые, как правило, включают разные антитела, направленные против разных антигенных детерминант.
Термин моноклональное антитело включает как интактные, так и полноразмерные моноклональные антитела, а также фрагменты антител (такие как ЕаЬ, ЕаЬ', Е(аЬ')2, Εν), одноцепочечные вариабельные фрагменты антител (5сЕу). слитые белки, содержащие часть антитела, и любую другую модифицированную молекулу иммуноглобулина, содержащую участок распознавания антигена. Кроме того, моноклональное антитело относится к таким антителам, полученным любым числом способов, включая гибридому, фаговую селекцию, экспрессию рекомбинантных антител и с помощью трансгенных животных (например экспрессию человеческого антитела в трансгенной мыши), но не ограничиваясь ими.
Термин гуманизированное антитело относится к антителу, имеющему происхождение из не являющегося челевеческим иммуноглобулина (например мышиного), которое было сконструировано так, чтобы содержать минимальные не являющиеся человеческими последовательности. Как правило, гуманизированные антитела представляют собой иммуноглобулины человека, в которых остатки из СИЯ заменены остатками из СИЯ не являющихся человеческими видов (например, мыши, крысы, кролика или хомяка), обладающими требуемой специфичностью, сродством и емкостью Попс5 с1 а1., 1986, №1Шгс. 321:522-525; Я1есЬтапи е1 а1., 1988, ЫаШге, 332:323-327; УегЬоеуеи е1 а1., 1988, 8с1еисе, 239:1534-1536). В некоторых случаях ЕУ остатки человеческого иммуноглобулина заменены соответствующими остатками антитела из не являющихся человеческими видов, обладающего требуемой специфичностью, и/или сродством, и/или емкостью.
Термин конъюгат антитело-лекарственное средство (АЭС) относится к конъюгату, содержащему по меньшей мере одно антитело, связывающееся с соответствующим эпитопом, конъюгированное по меньшей мере с одним соединением формулы I или соединением формулы II. Соединения формулы I и соединения формулы II могут быть конъюгированы с антителами с образованием конъюгатов антителолекарственное средство (АЭС), тем самым соединения формулы I и соединения формулы II могут выступать в качестве терапевтических группировок, которые доставляются к интересующей терапевтической мишени с помощью антитела, с которым они конъюгированы.
В некоторых аспектах АЭС содержит две, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять или десять терапевтических группировок. В некоторых конкретных аспектах АЭС содержит две, три или четыре терапевтические группировки. В некоторых аспектах все терапевтические группировки являются одинаковыми. В некоторых аспектах по меньшей мере одна терапевтическая группировка отличается от остальных.
Терапевтическая группировка относится к отдельной молекуле соединения формулы I или отдельной молекуле соединения формулы II.
Термин субъект относится к любому животному (например млекопитающему), включая людей, приматов, грызунов и тому подобных, но не ограничиваясь ими, которое предназначено быть реципиентом конкретного лечения. Как правило, термины субъект и пациент используют здесь взаимозаменяемо по отношению к субъекту-человеку.
- 6 032203
Термин фармацевтическая композиция относится к препарату, который находится в такой форме, которая обеспечивает биологическую активность активного ингредиента, и который не содержит дополнительных недопустимых компонентов, токсичных для субъекта, которому будет вводиться данная композиция. Такая композиция может быть стерильной.
Термины, такие как лечение, или излечение, или лечить, или облегчение, или облегчать, относятся как к (1) терапевтическим мерам, которые излечивают, замедляют, облегчают симптомы и/или останавливают прогрессирование диагностированного патологического состояния или расстройства, так и к (2) профилактическим или предупреждающим мерам, которые предупреждают и/или замедляют развитие целевого патологического состояния или расстройства. Таким образом, те, кто нуждается в лечении, включают тех, у кого уже имеется расстройство; тех, кто имеет предрасположенность к приобретению расстройства; и тех, у кого расстройство должно быть предупреждено. В некоторых аспектах, субъекта успешно лечат от рака согласно способам по настоящему изобретению, если пациент демонстрирует, например, полную, частичную или временную ремиссию определенного вида рака.
Термины рак, опухоль, раковый и злокачественный обозначают или описывают физиологическое состояние у млекопитающих, которое, как правило, характеризуется нерегулируемым ростом клеток. Примеры раковых заболеваний включают карциному, включая аденокарциномы, лимфомы, бластомы, меланомы, саркомы и лейкозы, но не ограничиваются ими. Более конкретные примеры таких раковых заболеваний включают плоскоклеточный рак, мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, рак желудочно-кишечного тракта, ходжкинскую и неходжкинскую лимфому, рак поджелудочной железы, глиобластому, глиому, рак шейки матки, рак яичника, рак печени, такой как гепатокарцинома и гепатома, рак мочевого пузыря, рак молочной железы (включая гормонально опосредованный рак молочной железы, см., например, 1пие8 с1 а1. (2006) Вг. 1. Сапсег 94:1057-1065), рак толстой кишки, рак толстой и прямой кишки, карциному эндометрия, миелому (такую как множественная миелома), карциному слюнной железы, рак почки, такой как почечно-клеточная карцинома и опухоли Вильмса, базально-клеточную карциному, меланому, рак предстательной железы, рак вульвы, рак щитовидной железы, рак яичка, рак пищевода, различные типы рака головы и шеи и раковые заболевания муцинозного происхождения, такие как муцинозный рак яичника, холангиокарцинома (печени) и папиллярная карцинома почки.
Использованный здесь термин цитотоксический агент определен широко и относится к веществу, которое ингибирует или препятствует функционированию клеток, и/или вызывает разрушение клеток (клеточную смерть), и/или оказывает антинеопластические/антипролиферативные воздействия. Например, цитотоксический агент прямо или опосредованно предотвращает развитие, созревание и распространение злокачественных опухолевых клеток. Термин включает также такие агенты, которые вызывают только цитостатический эффект и ни в коей мере не вызывают цитотоксический эффект. Термин включает химиотерапевтические агенты, которые указаны далее, а также другие антагонисты НЕК.2 (рецептора человеческого эпидермального фактора роста 2 типа), антиангиогенные агенты, ингибиторы тирозинкиназ, ингибиторы протеинкиназы А, члены семейства цитокинов, радиоактивные изотопы и токсины, такие как ферментативно активные токсины бактериального, грибного, растительного или животного происхождения.
Термин химиотерапевтический агент является частным случаем термина цитотоксический агент, включающим природные или синтетические химические соединения. Примеры химиотерапевтических агентов включают алкилирующие агенты, например мустаргены, этилениминовые соединения, алкилсульфонаты и другие соединения с алкилирующим действием, такие как нитрозомочевины, цисплатин и дакарбазин; антиметаболиты, например антагонисты фолиевой кислоты, пурина и пиримидина; ингибиторы митоза, например алкалоиды барвинка и производные подофиллотоксина; цитотоксические антибиотики и производные камптотецина. Другими химиотерапевтическими агентами являются амифостин (е11гуо1®), цисплатин, дакарбазин (ИТ1С), дактиномицин, мехлорэтамин (мустарген), стрептозоцин, циклофосфамид, карнустин (ВСИИ), ломустин (ССИИ), доксорубицин (Абпатуст®), доксорубицин липосомальный (άοχίΐ®), гемцитабин (дет/аг®), даунорубицин, даунорубицин липосомальный (баипоХоте®), прокарбазин, митомицин, цитарабин, этопозид, метотрексат, 5-фторурацил (5-ЕИ), винбластин, винкристин, блеомицин, паклитаксел (1ахо1®), доцетаксел (1ахо1ете®), альдеслейкин, аспарагиназа, бусульфан, карбоплатин, кладрибин, камптотецин, СРТ-11, 10-гидрокси-7-этил-камптотецин (8Ν38), гефитиниб (1те88а®), дакарбазин, флоксуридин, флударабин, гидроксимочевина, ифосфамид, идарубицин, месна, интерферон альфа, интерферон бета, иринотекан, митоксантрон, топотекан, лейпролид, мегестрол, мелфалан, меркапропурин, пликамицин, митотан, пэгаспаргаза, пентостатин, пипоброман, пликамицин, стрептозоцин, тамоксифен, тенипозид, тестолактон, тиогуанин, тиотепа, урамустин, винорелбин, хлорамбуцил, ингибиторы ароматазы и их комбинации.
В соответствии со способами по настоящему изобретению соединения и ЛИС по настоящему изобретению могут быть введены пациенту для стимулирования положительного терапевтического ответа в отношении рака. Термин положительный терапевтический ответ применительно к лечению рака относится к облегчению симптомов, связанных с заболеванием.
- 7 032203
Например, положительная динамика заболевания может быть охарактеризована как полный ответ. Термин полный ответ относится к отсутствию клинически диагностируемого заболевания с нормализацией любых результатов ранее проведенных исследований. Альтернативно, положительная динамика заболевания может быть классифицирована как частичный ответ. Положительный терапевтический ответ включает уменьшение или подавление прогрессирования и/или длительности течения рака, уменьшение или ослабление степени тяжести рака, и/или ослабление одного или более чем одного его симптома вследствие введения соединений по настоящему изобретению.
В конкретных аспектах такие термины относятся к одному, двум или трем результатам, полученным после введения соединений по настоящему изобретению:
1) стабилизация, уменьшение или элиминация популяции раковых клеток;
2) стабилизация или уменьшение роста опухоли;
3) ослабление канцерогенеза;
4) уничтожение, удаление или контроль первичного, местно-распространенного и/или метастатического рака;
5) снижение смертности;
6) увеличение длительности или частоты выживаемости без признаков заболевания, безрецидивной выживаемости, выживаемости без прогрессирования и/или общей выживаемости;
7) увеличение степени ответа, длительности ответа или числа пациентов, поддающихся лечению или находящихся в состоянии ремиссии;
8) снижение частоты госпитализации;
9) уменьшение срока госпитализации;
10) опухоль сохраняет свой размер и не увеличивается или увеличивается менее чем на 10%, предпочтительно менее чем на 5%, предпочтительно менее чем на 4%, предпочтительно менее чем на 2%; и
11) увеличение числа пациентов, находящихся в состоянии ремиссии;
12) уменьшение числа видов адъювантной терапии (например химиотерапии или гормональной терапии), которые в ином случае потребовались бы для лечения рака.
Клинический ответ можно оценить при использовании скрининговых методов, таких как ПЭТ (позитронно-эмиссионная томография), сканирование с помощью магнитной резонансной томографии (МРТ), рентгенография, компьютерное томографическое сканирование (КТ), проточная цитометрия или анализ с помощью клеточного сортера с активацией флуоресценции (КСАФ), гистология, макропатология и биохимический анализ крови, включая изменения, выявляемые с помощью ИФА (иммуноферментного анализа), РИА (радиоиммунного анализа), хроматографии и тому подобного, но не ограничиваясь ими. Помимо этих положительных терапевтических ответов субъект, проходящий лечение, может испытывать благоприятное воздействие от облегчения симптомов, связанных с заболеванием.
Соединения по настоящему изобретению могут быть использованы в комбинации с любыми известными видами терапии рака, включая любой агент или комбинацию агентов, которые, как известно, являются полезными, или которые использовались или используются в настоящее время для лечения рака, например рака толстой кишки, рака легкого, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи и рака молочной железы. Противораковые агенты включают лекарственные средства, используемые для лечения злокачественных новообразований, например раковых опухолей. Медикаментозная терапия может быть использована отдельно или в комбинации с другими видами лечения, такими как хирургия или лучевая терапия. Некоторые классы лекарственных средств могут быть использованы при лечении рака в зависимости от природы пораженного органа. Например, виды рака молочной железы в большинстве случаев индуцированы эстрогенами и могут подвергаться лечению лекарственными средствами, которые инактивируют половые гормоны. Аналогично, рак предстательной железы может быть подвергнут лечению лекарственными средствами, которые инактивируют андрогены, мужские половые гормоны.
Противораковые агенты для применения в некоторых способах по настоящему изобретению включают, среди прочего, антитела, антиметаболиты, алкилирующие агенты, ингибиторы топоизомеразы, агенты, воздействующие на микротрубочки, ингибиторы киназ, ингибиторы синтеза белка, иммунотерапевтические агенты, гормональные препараты, глюкокортикоиды, ингибиторы ароматазы, ингибиторы тТОК (мишени рапамицина млекопитающих), химиотерапевтические агенты, ингибиторы протеинкиназы В, ингибиторы фосфатидилинозитол-3-киназы (ΡΙ3Κ), ингибиторы циклинзависимых киназ (СЭК), КЕт9, СЭ289. ингибиторы ферментов, анти-ТКЛГЙ (антитела к зависимому от фактора некроза опухоли лиганду, индуцирующему апоптоз), ингибиторы МЕК (киназы митоген-активируемой протеинкиназы) и тому подобное.
В случаях, когда комбинированные виды терапии включают введение соединений по настоящему изобретению в комбинации с введением другого терапевтического агента, способы по настоящему изобретению включают совместное введение при использовании отдельных препаратов или одного фармацевтического препарата и последовательное введение в любом порядке. В некоторых аспектах соединения формулы I, соединения формулы II и/или ЛИС, описанные здесь, вводят в комбинации с другими лекарственными средствами, в которой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, вариант или производное и терапевтический агент (терапевтические агенты) могут быть введены последовательно в
- 8 032203 любом порядке или совместно (то есть одновременно или в пределах одного и того же временного интервала).
Комбинированное лечение может обеспечить синергизм и подтвердить синергетический эффект, то есть эффект, достигаемый при совместном использовании активных ингредиентов больше, чем сумма эффектов, которые возникают в результате использования соединений по отдельности. Синергетический эффект может быть достигнут, когда активные ингредиенты: (1) приготовлены в виде одного препарата и вводятся или доставляются совместно в объединенной стандартной лекарственной форме; (2) доставляются по очереди или одновременно в виде отдельных препаратов; или (3) по какой-либо другой схеме. При доставке по схеме лечения с поочередным введением синергетический эффект может быть достигнут, когда соединения вводят или доставляют последовательно, например путем разных инъекций в отдельных шприцах. В основном, при лечении с поочередным введением эффективную дозу каждого активного ингредиента вводят последовательно, то есть периодически, тогда как при комбинированном лечении эффективные дозы двух или более активных ингредиентов вводят совместно.
Соединения и АЭС по настоящему изобретению (терапевтические агенты) могут быть введены пациенту посредством перорального, парентерального, ингаляционного или местного пути введения. Использованный здесь термин парентеральный включает, например, внутривенное, внутриартериальное, внутрибрюшинное, внутримышечное, подкожное, ректальное или вагинальное введение. Однако в других способах, соответствующих описываемым здесь принципам, АЭС могут быть использованы для избирательно направленных соединений по настоящему изобретению для доставки терапевтических агентов непосредственно к месту нежелательной клеточной популяции, тем самым усиливая воздействие терапевтического агента на пораженную ткань.
Как здесь отмечено, терапевтические агенты по настоящему изобретению могут быть введены в виде фармацевтически приемлемой композиции для лечения раковых заболеваний ίη νίνο. Как правило, соединения по настоящему изобретению будут приготовлены в виде растворов для внутривенного введения или в виде лиофилизированных концентратов для разведения с целью приготовления внутривенных растворов (например с физиологическим раствором, 5%-ной декстрозой или сходными изотоническими растворами). Фармацевтические композиции могут содержать фармацевтически приемлемые носители, включая, например, воду, иониты, белки, буферные вещества и соли. Также могут присутствовать консерванты и другие вспомогательные вещества. Носитель может являться растворителем или дисперсионной средой. Подходящие препараты для применения в способах лечения, раскрытых здесь, описаны в Кетшд1оп'8 Рйагтасеи11са1 8с1снсс8 (Маск ΡηΠΙίδΠίη^ Со.) 16(П еб. (1980).
В любом случае стерильные инъекционные растворы могут быть приготовлены посредством включения терапевтических агентов по настоящему изобретению в требуемом количестве в соответствующий растворитель с последующей стерилизующей фильтрацией. Далее препараты можно упаковывать и продавать в форме набора. Такие изделия могут иметь этикетки или листки-вкладыши, указывающие, что соответствующие композиции применимы для лечения субъекта, страдающего от заболевания или расстройства или предрасположенного к нему.
Препараты для парентерального введения могут находиться в виде однократной болюсной дозы, инфузии или ударной болюсной дозы, за которой следует поддерживающая доза. Эти композиции можно вводить через конкретные фиксированные или изменяющиеся интервалы времени, например один раз в сутки или по мере необходимости.
Композиция может быть введена в виде однократной дозы, многократных доз или в течение установленного периода времени в виде инфузии. Режимы дозирования также можно корректировать для обеспечения оптимального желаемого ответа (например терапевтического или профилактического ответа).
Терапевтически эффективные дозы композиций по настоящему изобретению для лечения раковых заболеваний, включая, например рак толстой кишки, рак легкого, рак желудка, плоскоклеточный рак головы и шеи, меланому, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы и рак молочной железы, варьируют в зависимости от многих различных факторов, включая способы введения, сайт-мишень, физиологическое состояние пациента, то, является ли пациент человеком или животным, другие вводимые лекарственные препараты и то, является ли лечение профилактическим или терапевтическим. Обычно пациент является человеком, но не являющиеся человеком млекопитающие, включая трансгенных млекопитающих, также могут быть подвергнуты лечению. Лечебные дозы могут быть оттитрованы при использовании традиционных способов, известных специалистам в данной области техники, для достижения оптимальной безопасности и эффективности.
Количество терапевтического агента по настоящему изобретению, которое необходимо ввести, может быть легко определено специалистом в данной области техники без излишних экспериментов. Факторы, влияющие на способ введения и соответствующее количество агента, включают тяжесть заболевания, историю болезни и возраст, рост, вес, здоровье и физическое состояние индивидуума, подвергающегося лечению, но не ограничиваются ими. Аналогично, количество анти-НЕК2-связывающей молекулы. например антитела или его фрагмента, варианта или производного, которое необходимо ввести, будет зависеть от способа введения и того, будет ли субъект подвергаться воздействию однократной дозы или
- 9 032203 многократных доз этого агента.
Согласно настоящему изобретению также предложено применение терапевтического агента по изобретению в изготовлении лекарственного средства для лечения вида рака, включающего, например, рак молочной железы, рак толстой кишки, рак легкого, рак желудка, плоскоклеточный рак головы и шеи, меланому, рак поджелудочной железы и рак предстательной железы.
Согласно изобретению также предложено применение терапевтического агента по изобретению в изготовлении лекарственного средства для лечения рака у субъекта. В некоторых аспектах лекарственное средство применяют у субъекта, ранее проходившего лечение с применением по меньшей мере одной другой терапии.
Под термином ранее проходивший лечение или предварительное лечение имеется в виду то, что субъект получал один или более чем один вид терапии (например был подвергнут лечению с применением по меньшей мере одной другой противораковой терапии) перед приемом лекарственного средства, содержащего соединения по настоящему изобретению. Необязательно, чтобы субъект реагировал на предварительное лечение с применением предшествующей терапии или нескольких видов терапии. Таким образом, субъект, который принимает лекарственное средство, мог реагировать или мог не реагировать на предварительное лечение с применением предшествующей терапии или на одну или более чем одну предшествующую терапию в случаях, когда предварительное лечение включало виды множественной терапии.
Согласно настоящему изобретению также предложено совместное применение терапевтического агента и по меньшей мере одного другого вида терапии совместно в одной композиции или совместно вводимых в одно и то же время или в частично перекрывающиеся интервалы времени в отдельных композициях.
Согласно настоящему изобретению также предложено применение терапевтического агента в изготовлении лекарственного средства для лечения рака у субъекта, где агент вводят перед тем, как подвергнуть субъекта лечению с применением по меньшей мере одной другой терапии.
Примеры
Аспекты настоящего изобретения могут быть дополнительно определены со ссылкой на следующие неограничивающие примеры, которые подробно описывают получение некоторых соединений и промежуточных соединений по настоящему изобретению и способы применения соединений по настоящему изобретению. Специалистам в данной области техники будет понятно, что многие модификации, как материалов, так и способов, могут быть применены в пределах объема настоящего изобретения. Если не оговорено особо:
I) температуры даны в градусах Цельсия (°С); когда процессы проводят при комнатной температуре или температуре окружающей среды, это означает диапазон 18-25°С, если не оговорено особо;
II) растворы сушили над безводным сульфатом натрия или сульфатом магния; выпаривание органического растворителя проводили при использовании роторного испарителя при пониженном давлении (4,5-30 мм рт.ст.(0,6-4 кПа)) с температурой бани до 30°С;
III) хроматография означает флэш-хроматографию на силикагеле; тонкослойную хроматографию (ТСХ) проводили на силикагелевых пластинах;
IV) обычно ход взаимодействий контролируют посредством ТСХ или жидкостной хроматографии/масс-спектроскопиии (ЖХ/МС), а величины времени взаимодействия даны только с иллюстрационной целью;
V) конечные продукты имеют удовлетворительные спектры протонного ядерного магнитного резонанса (ЯМР) и/или масс-спектральные данные;
VI) выходы даны только с иллюстрационной целью и необязательно являются такими, какие можно получить при тщательном проведении процесса; получения повторяли, если требовалось больше материала;
VII) в случае наличия, данные ядерного магнитного резонанса (ЯМР) представлены в виде значений дельта (δ) для основных диагностических протонов, приведенных в миллионных долях (м.д.) относительно тетраметилсилана (ТМ8) в качестве внутреннего стандарта, определяемых при 300 или 400 МГц в ά6-ΌΜ8Ο (диметилсульфоксиде), если не оговорено особо;
VIII) химические символы имеют свои обычные значения;
IX) доля растворителя указана в соотношении объем:объем (об./об.);
X) очистку соединений проводили при использовании одного или более чем одного из следующих способов:
a) флэш-хроматография на стандартном силикагеле;
b) флэш-хроматография на силикагеле при использовании системы разделения Нсо СотЬШакй®: флэш-колонка Яеб18ер с нормальной фазой, скорость потока 30-40 мл/мин Ц8С0 МРЬС);
c) полупрепаративная ВЭЖХ-система разделения СИкои: колонка УМС раск 0Э8-ЛО. 100x20 мм, 8 5 мкм 12 нм, вода (0,1% трифторуксусная кислота) и ацетонитрил (0,1% трифторуксусная кислота) в качестве растворителя, 20 мин; и
- 10 032203
XI) использовали следующие аббревиатуры:
Вос трет-бутоксикарбонил;
ОСМ дихлорметан;
ϋΙΑϋ диизопропилазодикарбоксилат;
ϋΙΟ Ν,Ν'-диизопропилкарбодиимид;
ОСС Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид;
ϋΙΕΑ диэтилизопропиламин;
ϋΜΑ Л/,Л/-диметилацетамид;
ϋΜΕ Л/,Л/-диметилформамид;
ΕϋΟΙ 1 -этил-3-(3- диметиламинопропил)карбодиимид
ЕЮАс этилацетат;
ει2ο Етос-О8и диэтиловый эфир; 9-флуоренилметил-М-сукцинимидилкарбонат
МеОН метанол;
1\1а2СОз карбонат натрия;
1\1аНСО3 гидрокарбонат натрия;
КТ комнатная температура;
ТЕА триэтиламин;
ТЕА трифторуксусная кислота;
ТНЕ тетрагидрофуран;
идти гексафторфосфат 1 - [бис(диметиламино)метилен]-1 Н-1,2,3триазоло[4,5-Ь]пиридиний-3-оксида
ϋΑ8Τ трифторид диэтиламиносеры
ΑΟΝ ацетонитрил
Вос2О ди-трет-бутилдикарбонат
Мельдрума
2,2-диметил-1,3-диоксан-4,6-дион кислота
Общая схема синтеза соединений 1-5
2.
Соединения 4,5
I) отщепление кислоты
II) очистка
Промежуточное соединение 1
Тритильная смола
1.снятие защиты восста новление
- 11 032203
К раствору (2К,4К)-4-метилпиперидин-2-карбоновой кислоты (2 г; 13,97 ммоль) в МеОН (40 мл) и воде (40,0 мл) добавляли параформальдегид (2,52 г; 27,94 ммоль) и Рб/С (10%) (0,8 г; 7,52 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение ночи. Посредством ТСХ установили, что взаимодействие не завершено. Добавляли еще один эквивалент параформальдегида (2,52 г; 27,94 ммоль) и реакционную смесь перемешивали еще в течение 24 ч. ТСХ показала, что взаимодействие завершено, и реакционную смесь фильтровали, катализатор промывали МеОН (2x30 мл). Фильтрат концентрировали под вакуумом с получением неочищенного продукта в виде белого твердого вещества, которое промывали эфиром (3x30 мл), сушили под глубоким вакуумом в течение ночи с получением (2К,4К)-1,4-диметилпиперидин-2-карбоновой кислоты (1) (1,870 г; 85%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС: 158 (М+ 1); 4Н ЯМР (400 МГц, ϋ2Ο) δ м.д. 0.97 (б, 1=5,52 Гц, 3Н), 1.54 (ушир. з, 1Н), 1.71-1.87 (т, 3Н), 1.91-2.07 (т, 1Н), 2.84 (з, 3Н), 3.13 (!б, 1=8,41, 3,76 Гц, 1Н), 3.35 (т, 1Н), 3.65 (т, 1Н).
Промежуточное соединение 2 соон
Вос2О (243,0 г; 1,1 моль) по каплям добавляли к суспензии (К)-3-амино-4-метилпентановой кисло ты (имеющейся в продаже) (133,0 г; 1,0 моль) и №2СО3 (212 г; 2,0 моль) в ацетоне (1 л) и воде (1 л) при перемешивании при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи и органический растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток разбавляли водой (1 л) и промывали Е!ОАс (500 млх3). Водную фазу подкисляли 2н. раствором НС1 до значения рН 3 и полученную смесь экстрагировали Е!ОАс (800 млх3). Объединенные экстракты промывали рассолом (800 млх1), сушили (№2БО.|) и концентрировали с получением соединения (2) (224,0 г; выход 97%) в виде масла, которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Промежуточное соединение 3
ΒοοΗΝ ‘Ν
ОМе
Триэтиламин (67 г; 0,61 моль) добавляли к суспензии промежуточного соединения (2) (140,0 г; 0,61 моль) и гидрохлорида АО-диметилгидроксиламина (74,1 г; 0,76 моль) в СН2С12 (1,4 л) при перемешивании при 0°С. Суспензию перемешивали в течение 0,5 часа и порциями добавляли ЕЭС1 (74 г; 0,61 моль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при 0°С и добавляли воду (800 мл). Органиче скую фазу отделяли, промывали 5%-ным раствором КНБО4 (800 млх3), насыщенным раствором №11СО3 (800 млх3) и рассолом (800 млх1), сушили (№2БО2) и концентрировали досуха. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (Е!ОАс/гексан, 1:5) с получением соединения (3) (141,0 г; выход 84%) в виде масла. 4Н ЯМР (300 МГц, СПС13): δ 5.26 (т, 1Н), 3.75 (т, 1Н), 3.70 (з, 3Н), 3.15 (з, 3Н), 2.60~2.80 (т, 2Н), 1.85 (т, 1Н), 1.41 (з, 9Н), 0.90 (б, 1=6,6 Гц, 3Н), 0.88 (б, 1=6,6 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 4
Йодэтан (250,0 г; 1,6 моль) добавляли к раствору промежуточного соединения (3) (55,0 г; 0,2 моль) в ЭМЕ (1,1 л) при перемешивании при 0°С. Затем порциями добавляли \аП (60%-ная суспензия; 24,0 г; 0,60 моль) при 0°С и реакционную смесь оставляли для нагревания до комнатной температуры и перемешивали в течение 12 ч. Реакционную смесь осторожно гасили водой (2 л) и добавляли Е!ОАс (2 л). Органическую фазу отделяли, промывали 5%-ным раствором КНБО4 (800 млх3), насыщенным раствором №НСО3 (800 млх3) и рассолом (800 млх1), сушили (№2БО2) и концентрировали досуха. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (Е!ОАс/гексан, 1:10) с получением трет-бутил-(К)-этил-(1-(метокси(метил)амино)-4-метил-1-оксопентан-3-ил)карбамата (35,1 г; выход
58%) в виде масла. 4Н ЯМР (300 МГц, СПС13): δ 3.70 (з, 3Н), 3.65 (т, 1Н), 3.10-3.30 (т, 5Н), 2.50~2.95 (т,
2Н), 1.90~2.20 (т, 1Н), 1.40~1.55 (т, 9Н), 1.10 (!, 1=7,2 Гц, 3Н), 0.90 (б, 1=6,6 Гц, 3Н), 0.88 (б, 1=6,6 Гц,
3Н).
Промежуточное соединение 5
ОТВ8
Раствор п-ВиЬ1 (106 мл; 2,5 н. в гексане; 0,17 моль) по каплям добавляли к раствору промежуточного соединения (50) (74 г; 0,24 моль) в безводном ТНЕ (500 мл) при -78°С в атмосфере Ν2 при перемешивании в течение 1 ч. Суспензию перемешивали в течение еще 30 мин и затем по каплям добавляли раствор промежуточного соединения (4) (51,0 г; 0,17 моль) в безводном ТНЕ (300 мл) в течение 30 мин при -78°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при -78°С и затем оставляли для нагревания до
- 12 032203 комнатной температуры и перемешивали в течение 12 ч. Реакцию останавливали посредством добавления 20%-ного водного раствора хлорида аммония (1 л) и органический растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученную смесь экстрагировали ЕЮАс (800 млх3). Объединенные органические фазы промывали 5%-ным раствором КН8О4 (800 млх3), насыщенным раствором ЫаНСО3 (800 млх3) и рассолом (800 млх1), сушили (Ыа28О4) и концентрировали досуха. Неочищенное вещество очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (ЕЮАс/гексан, 1:10) с получением третбутил-(К)-(1 -(4-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)-метил)тиазол-2-ил)-4-метил-1 -оксопентан-3 -ил)(этил) карбамата (58,1 г; выход 73%) в виде масла. 1Н ЯМР (300 МГц, СОС13): δ 7.53 (т, 1Н), 4.90 (δ, 2Н), 4.04 (т, 1Н), 3.35 (т, 2Н), 3.15 (т, 2Н), 2.00 (т, 1Н), 1.40 (δ, 9Н), 0.80~1.20 (т, 18Н), 0.14 (δ, 6Н).
Промежуточное соединение 6
Е1БН4 (4,8 г; 0,22 моль) порциями добавляли к раствору промежуточного соединения (5) (47,1 г; 0,1 моль) в метаноле (500 мл) при комнатной температуре в течение 0,5 часа при перемешивании. Суспензию перемешивали в течение 2 ч и растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток растворяли в ЕЮАс (800 мл) и полученный раствор промывали насыщенным раствором ΝαΙ 1СО3 (500 млх3) и рассолом (500 млх1), сушили (Ыа28О4) и концентрировали досуха. Неочищенное вещество очищали посредством колоночной флэш-хроматографии (ЕЮАс/гексан, 1:6) с получением трет-бутил-((1К,3К)-1-(4(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)тиазол-2-ил)- 1 -гидрокси-4-метилпентан-3 -ил)(этил)карбамата (13,5 г; выход 28%) и его изомера (6') (21,0 г; выход 45%). 1Н ЯМР (300 МГц, СОС13) δ м.д. 0.06-0.05 (т, 6Н) 0.76-0.89 (т, 15Н) 1.12 (ΐ, 1=6,97 Гц, 3Н) 1.39 (δ, 9Н) 1.55-2.05 (т, 3Н) 2.86-3.21 (т, 2Н) 3.76-3.96 (т, 1Н) 4.73 (ά, 1=1,13 Гц, 4Н) 7.01 (δ, 1Н).
Промежуточное соединение 7
Ацетилхлорид (45,2 г; 0,58 моль) по каплям добавляли к раствору промежуточного соединения (6) (34,0 г; 72 ммоль) в пиридине (500 мл) при 0°С при перемешивании в течение 10 мин. Реакционную смесь оставляли для нагревания до комнатной температуры и перемешивали в течение 12 ч. Реакционную смесь гасили водой (200 мл) и растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток обрабатывали СН2С12 (800 мл) и полученную смесь промывали 5%-ным раствором КН8О4 (800 млх3), насыщенным раствором ΝαΙ 1СО3 (800 млх3) и рассолом (800 млх1), сушили (Ыа28О4) и концентрировали досуха. Неочищенное вещество очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (ЕЮАс/гексан, 1:10) с получением (1К,3К)-3-((трет-бутоксикарбонил)(этил)амино)-1-(4-(((третбутилдиметилсилил)окси)метил)тиазол-2-ил)-4-метилпентилацетата (25,7 г; выход 69%) в виде масла. 1Н
ЯМР (300 МГц, СОС13): δ 7.15 (т, 1Н), 5.95 (т, 1Н), 4.84 (δ, 2Н), 4.04 (т, 1Н), 3.10 (т, 2Н), 2.35 (т, 1Н),
2.15 (δ, 3Н), 2.00 (т, 1Н), 1.70 (т, 1Н), 1.45 (δ, 9Н), 1.25 (ΐ, 1=7,2 Гц, 3Н), 0.80~1.10 (т, 15Н), 0.08 (δ, 6Н).
Промежуточное соединение 8
Раствор фторида тетрабутиламмония (65,3 г; 0,25 моль) в ТНЕ (200 мл) по каплям добавляли к раствору промежуточного соединения (7) (25,7 г; 50 ммоль) в ТНЕ (300 мл) при 0°С при перемешивании. Реакционную смесь оставляли для нагревания до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 ч. Добавляли воду (800 мл) и органический растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток обрабатывали СН2С12 (800 мл) и полученную смесь промывали 5%-ным раствором КН8О4 (800 млх3), насыщенным раствором ΝαΙ 1СО3 (800 млх3) и рассолом (800 млх1), сушили (Ыа28О4) и концентрировали досуха. Неочищенное вещество очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (ЕЮАс/гексан, 1:4) с получением (1К,3К)-3-((трет-бутоксикарбонил)(этил)амино)-1-(4-(гидроксиметил) тиазол-2-ил)-4-метилпентилацетата (19,5 г; выход 98%) в виде масла. 1Н ЯМР (300 МГц, СОС13): δ 8.26 (т, 1Н), 5.95 (т, 1Н), 4.83 (т, 2Н), 4.10 (т, 1Н), 3.17 (т, 2Н), 2.40 (т, 1Н), 2.20 (δ, 3Н), 2.18 (т, 1Н), 1.75 (т, 1Н), 1.56 (δ, 9Н), 1.10~1.30 (т, 3Н), 0.80~1.05 (т, 6Н).
Промежуточное соединение 9
Реактив Десса-Мартина (32,7 г; 75 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения (8) (20,0 г; 50 ммоль) в дихлорметане (300 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч. Смесь промывали раствором гидроксида натрия (1 н; 300 млх3), раствором тиосуль
- 13 032203 фата натрия (1 н.; 300 млх3), насыщенным раствором \а11СО3 (300 млх3) и рассолом (300 млх1), соответственно. Органический слой сушили (\а28О4) и концентрировали досуха с получением соответствующего альдегида. Этот неочищенный альдегид растворяли в трет-бутиловом спирте (500 мл) и по каплям добавляли раствор хлорита натрия (80%; 36,4 г; 320 ммоль) и моногидрата дигидрофосфата натрия (105 г; 0,77 моль) в воде (300 мл) в течение 1 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч и разбавляли раствором соляной кислоты (0,1 н; 500 мл). Полученную смесь экст рагировали ЕЮАс (500 млх1) и объединенные органические слои промывали 5%-ным раствором ΚΗ8Ο4 (500 млх3) и рассолом (500 млх1), сушили над \а28О4 и концентрировали досуха. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле ^Η202/ΜΰΟΗ, 100:5) с получением 2((1К,3К)-1-ацетокси-3-((трет-бутоксикарбонил)(этил)амино)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоновой кислоты (15,4 г; выход 58%). 1Η ЯМР (300 МГц, СОС13): δ 9.90 (ушир. 8, 1Η), 8.27 (δ, 1Η), 5.96 (т, 1Η), 4.07 (т, 1Η), 3.15 (т, 1Η), 2.35 (т, 1Η), 2.20 (8, 3Η), 2.18 (т, 1Η), 1.75 (т, 1Η), 1.45 (8, 9Η), 1.20 (I, 1=7,2 Гц, 3Η), 0.98 (ά, 1=6,6 Гц, 3Η), 0.88 (ά, 1=6,6 Гц, 3Η).
Промежуточное соединение 10
К раствору промежуточного соединения (9) (6,5 г; 15,68 ммоль) в ЭСМ (60 мл) по каплям добавляли ТЕА (30 мл) при 0°С. Смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч. Растворитель выпаривали под вакуумом с получением неочищенной 2-((1К,3К)-1-ацетокси-3-(этиламино)-4-метилпентил)тиазол-4карбоновой кислоты. Неочищенный продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки (7,2 грамм). ЖХ-МС: 315 (М+1).
Промежуточное соединение 11
К раствору промежуточного соединения (10) (5 г; 11,67 ммоль) и бикарбоната натрия (9,80 г; 116,71 ммоль) в смеси ацетона (300 мл) и воды (150 мл) добавляли (9Η-флуорен-9-ил)метил-(2,5диоксопирролидин-1-ил)карбонат (3,94 г; 11,67 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. ЖХМС показала, что взаимодействие завершено. Смесь подкисляли до значения ρΗ 2 соляной кислотой и ацетон выпаривали под вакуумом. Продукт экстрагировали ЭСМ (3х300 мл). Объединенные органические экстракты промывали 0,1%-ным раствором ΗΟ (200 мл), рассолом (200 мл), сушили над \а28О4 и упаривали под вакуумом. Остаток очищали посредством флэш-хроматографии (силикагель, МсО11/ЭСМ, ΜеΟΗ от 0 до 5%) с получением 2-((1К,3К)-3-((((9Η-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)(этил)амино)- 1 -ацетокси-4-метилпентил)тиазол-4-карбоновой кислоты (3,53 г; 54,6%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС: 537.2 (М+1); 1Η ЯМР (400 МГц, хлороформ-ά) δ м.д. 0.84 (ά, 1=6,78 Гц, 3Η), 0.92-1.05 (т, 5Η), 1.14 (ά, 1=3,01 Гц, 1Η), 1.73 « 1=10,23, 6,43 Гц, 1Η), 1.92-2.05 (т, 1Η), 2.12-2.27 (т, 4Η), 2.28-2.44 (т, 1Η), 2.90-3.33 (т, 2Η), 3.98 (I, 1=9,29 Гц, 1Η), 4.12-4.32 (т, 1Η), 4.47-4.82 (т, 2Η), 5.95 (άά, 1=10,92, 2,89 Гц, 1Η), 7.29-7.45 (т, 4Η), 7.55-7.69 (т, 2Η), 7.72-7.81 (т, 2Η), 8.22-8.29 (т, 1Η).
Промежуточное соединение 12
□МАР (106 г; 0,86 моль) добавляли к раствору Вос-Е-4-нитро-фенилаланина (1800 г; 0,58 моль) и кислоты Мельдрума (92 г; 0,64 моль) в дихлорметане (1,5 л). Полученный раствор охлаждали при -5°С в атмосфере Ν2 с последующим добавлением ЭСС (240 г; 1,16 моль) в дихлорметане (1 л) в течение 1 ч. Смесь перемешивали в течение ночи при 0~5°С. Затем осажденную Ν,Ν'-дициклогексилмочевину удаля ли посредством фильтрации и фильтрат промывали 5%-ной водной ΗΟ (1 лх3) и рассолом (1 лх1) и сушили над Мд8О4. После удаления Мд8О4 посредством фильтрации органическую фазу концентрировали досуха. Остаток растирали со смесью ЕЮАс/гексан (1:1; 500 мл) и сушили с получением трет-бутил-(8)(1 -(2,2-диметил-4,6-диоксо- 1,3-диоксан-5-ил)-3-(4-нитрофенил)-1 -оксопропан-2-ил)карбамата (130,0 г;
выход 51 %) в виде желтого твердого вещества.
Промежуточное соединение 13
о
АсОН (400 мл) добавляли к раствору промежуточного соединения (12) (130,0 г; 0,298 моль) в ди- 14 032203 хлорметане (1,5 л) при -5°С в атмосфере Ν2. Небольшими порциями добавляли твердый ЫаВН4 (22,7 г; 0,597 моль) в течение 2 ч (выделение газа и экзотермическая реакция). После перемешивания в течение дополнительных 3 ч при -5°С ТСХ показала, что взаимодействие завершено. Смесь гасили рассолом (1
л). Органический слой отделяли и последовательно промывали водой (1 лх2), насыщенным водным №НСО3 (1 лх3) и рассолом (1 лх3) и сушили над М§8О4. Фильтрат концентрировали досуха с получением трет-бутил-(К)-(1-(2,2-диметил-4,6-диоксо-1,3-диоксан-5-ил)-3-(4-нитрофенил)пропан-2-ил)карбамата (70,3 г; выход 55%) в виде желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, СБС13): δ 8.18 (ά, 1=8,7 Гц, 2Н), 7.41 (ά, 1=8,7 Гц, 2Н), 4.58 (т, 1Н), 4.29 (т, 1Н), 3.85 (т, 1Н), 2.97 (ά, 1=6,6 Гц, 2Н), 2.27 (т ,2Н),
1.80 (8, 3Н), 1.76 (8, 3Н), 1.35 (δ, 9Н).
Промежуточное соединение 14
К2СО3 (35 г; 0,25 моль) и Ме1 (36 г; 0,25 моль) добавляли к раствору промежуточного соединения (13) (70,3 г; 0,167 моль) в ацетоне (400 мл) и ΌΜΤ (400 мл). Смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. ТСХ показала, что исходное вещество полностью израсходовано. Добавляли воду (2 л) и смесь перемешивали в течение дополнительного часа. Осажденное твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали водой, сушили с получением трет-бутил-(8)-(1-(4нитрофенил)-3-(2,2,5-триметил-4,6-диоксо-1,3-диоксан-5-ил)пропан-2-ил)карбамата (34,5 г; выход 47%) в виде бледно-желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, СБС13): δ 8.17 (ά, 1=8,7 Гц, 2Н), 7.34 (ά, 1=8,7 Гц, 2Н), 4.22 (т, 1Н), 3.85 (т, 1Н), 2.85 (т, 2Н), 2.22 (т, 2Н), 1.73 (δ, 3Н), 1.73 (δ, 3Н), 1.52 (δ, 3Н), 1.31 (δ, 9Н).
Промежуточное соединение 15
Промежуточное соединение (14) (34,5 г; 79,1 ммоль) растворяли в толуоле (500 мл). Раствор нагревали с обратным холодильником в течение 40 ч. ТСХ показала, что взаимодействие завершено. Растворигель удаляли с получением трет-бутил-(5К)-3-метил-5-(4-нитробензил)-2-оксопирролидин-1-карбоксилата (30 г), который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Промежуточное соединение 16 о
К2СО3 (22 г; 0,16 моль) добавляли к раствору промежуточного соединения (15) (30 г; 79 ммоль) в МеОН (300 мл). Смесь перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре. ТСХ показала полное превращение. Растворитель удаляли, остаток растворяли в дихлорметане (500 мл), промывали рассолом (500 млх3) и сушили над М§8О4. После удаления М§8О4 посредством фильтрации органическую фазу концентрировали досуха. Остаток далее очищали посредством хроматографии на силикагеле (ЕЮЛе/гексан, 1:10) и получали метил-(4К)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)-2-метил-5-(4-нитрофенил) пентаноат (23,5 г; выход за две стадии 81%) в виде диастереомерной смеси, 1:1. 1Н ЯМР (300 МГц, СБС13): δ 8.13 (ά, 1=8,7 Гц, 2Н), 7.34 (ά, 1=8,7 Гц, 2Н), 4.43 (т, 1Н), 3.85 (т, 1Н), 3.65 (δ, 3Н), 2.85 (т, 2Н), 2.65 (т, 1Н), 1.85 (т, 1Н), 1.50 (т, 1Н), 1.30 (δ, 9Н), 1.15 (ΐ, 1=6,6 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 17 о
г соединения (16) подвергали хиральной хроматографии с использованием СФХ (сверхкритической флюидной хроматографии) на колонке СЫга1рак с внутренним размером 21x250 мм, 5 мкм при использовании подвижной фазы А 90% диоксида углерода и фазы В 10% изопропанола при скорости потока 60 мл/мин. Разделение проводили при 40°С и детектирование при 270 нм. Достигали полного разделения пиков и выделяли две фракции. Пик В представлял собой целевой метил-(28,4К)-4-((третбутоксикарбонил)-амино)-2-метил-5-(4-нитрофенил)пентаноат, и его получали в виде твердого вещества (27,4 г; 55%). Диастереомерный избыток более 99:1 на колонке СЫга1рак ΙΑ 4,6x250 мм, 5 мкм, 10% смесь метанол:изопропанол, 1:1, в гексане с 0,1% диэтиламиновым модификатором. ЖХ/МС (2 мин, способ Αοΐά _СУ10.о1р 367 (М+1), 1,16 мин. 1Н ЯМР (400 МГц, метанол^) δ м.д. 8.16 (ά, 1=8,53 Гц, 2Н), 7.46 (ά, 1=8,53 Гц, 2Н), 3.79-3.93 (т, 1Н), 3.68 (δ, 3Н), 2.90-2.99 (т, 1Н), 2.71-2.81 (т, 1Н), 2.47-2.59 (т, 1Н), 1.81-1.95 (т, 1Н), 1.55-1.66 (т, 1Н), 1.32 (δ, 9Н), 1.21-1.25 (т, 2Н), 1.16 (ά, 1=7,03 Гц, 3Н).
- 15 032203
Промежуточное соединение 18
Раствор промежуточного соединения (17) в 6н. водном растворе НС1 (8,0 мл; 263,30 ммоль) нагревали при 130°С в микроволновой печи в течение 30 мин. Реакционную смесь лиофилизировали с получением (28,4К)-4-амино-2-метил-5-(4-нитрофенил)пентановой кислоты в виде твердого вещества. Продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки (3,2 г). ЖХ-МС: 253 (М+1); 1Н ЯМР (400 МГц, Ό2Θ) δ м.д. 1.12 (б, 1=7,28 Гц, 3Н), 1.62-1.76 (т, 1Н), 1.90-2.02 (т, 1Н), 2.56-2.68 (т, 1Н), 3.023.11 (т, 2Н), 3.58-3.69 (т, 1Н), 7.47 (б, 1=8,53 Гц, 2Н), 8.18 (б, 1=8,78 Гц, 2Н).
Промежуточное соединение 19
К раствору промежуточного соединения 18 (0,43 г; 1,49 ммоль) и №НСО3 (1,251 г; 14,89 ммоль) в смеси ацетона (30 мл) и воды (15 мл) добавляли (9Н-флуорен-9-ил)метил-2,5-диоксопирролидин-1илкарбонат (0,502 г; 1,49 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. ЖХ/МС показала, что взаимодействие завершено. Смесь подкисляли до значения рН 2 соляной кислотой и ацетон выпаривали под вакуумом. Продукт экстрагировали ЭСМ (3x60 мл). Объединенные органические экстракты промывали 1 н. раствором НС1 (40 мл), рассолом (40 мл), сушили над Να28Ο4 и упаривали под вакуумом. Остаток очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (ЕЮАс от 0% до 100% в ЭСМ) с получением (28,4К)-4-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-2-метил-5-(4-нитрофенил) пентановой кислоты (0,630 г; 89%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС: 475,5 (М+Н); 1Н ЯМР (400
МГц, хлороформ-б) δ м.д. 0.81-1.06 (т, 1Н), 1.08-1.28 (т, 2Н), 1.33-1.75 (т, 1Н), 1.77-2.11 (т, 1Н), 2.362.69 (т, 2Н), 2.76-3.18 (т, 1Н), 3.43-4.08 (т, 1Н), 4.09-4.19 (т, 1Н), 4.21-4.53 (т, 2Н), 4.54-4.80 (т, 1Н), 7.18-7.58 (т, 8Н), 7.66-7.82 (т, 2Н), 7.95-8.17 (т, 2Н), 8.67 (ушир. з, 1Н).
Промежуточное соединение 20
ΌΙΕΑ (0,419 мл; 2,40 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения (19) (0,380 г; 0,80 ммоль) в ЭСМ (4,5 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 минут, затем в смесь добавляли 2-хлортритилхлоридную смолу (нагрузка 0,4 ммоль/г; 0,5 г; 0,80 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, полученную смолу промывали ЭМЕ (3x6 мл), МеОН (3x6 мл) и ОСМ (3x6 мл), затем обрабатывали ΌΙΕΑ (0,419 мл; 2,40 ммоль) и смесью МеОНЮСМ (1:1; 5 мл) при комнатной температуре в течение 30 минут. Полученную смолу отфильтровывали, промывали ОМЕ (3x6 мл), МеОН (3x6 мл) и ОСМ (3x6 мл), сушили под глубоким вакуумом в течение ночи. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы и анализировали посредством ЖХ/МС. Полученную смолу использовали на следующей стадии. ЖХ/МС: 475 (М+1).
Промежуточное соединение 21
К промежуточному соединению на смоле (20) (0,5 г; 0,80 ммоль) добавляли 20%-ный пиперидин в ОМЕ (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 минут, полученную смолу фильтровали, промывали ОМЕ (3x6 мл), МеОН (3x6 мл), ОСМ (3x6 мл) и сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХ/МС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученную смолу использовали на следующей стадии. ЖХ/МС: 253 (М+Н).
Промежуточное соединение 22
К промежуточному соединению на смоле (21) (0,5 г; 1,88 ммоль) добавляли раствор промежуточного соединения (11) (1,108 г; 2,07 ммоль), НАТи (1,428 г; 3,76 ммоль), 2,4,6-триметилпиридин (0,500 мл; 3,76 ммоль) и ΌΙΕΑ (0,656 мл; 3,76 ммоль) в ОМЕ (5 мл) при комнатной температуре. Смесь перемеши
- 16 032203 вали при комнатной температуре в течение двух часов и полученную смолу фильтровали, промывали ΌΜΡ (3x6 мл), МеОН (3x6 мл) и ЭСМ (3x6 мл) и сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХ/МС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученную смолу использовали на следующей стадии. ЖХ/МС: 771 (М+Н).
Промежуточное соединение 23
К промежуточному соединению на смоле (22) (0,5 г; 0,80 ммоль) добавляли 20%-ный пиперидин в ΌΜΡ (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 мин, полученную смолу фильтровали, промывали ΌΜΡ (3x6 мл), МеОН (3x6 мл), ЭСМ (3x6 мл) и сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХ/МС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученную смолу использовали на следующей стадии. ЖХ-МС: 549 (М+1).
Промежуточное соединение 24
К раствору (28,38)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-метилпентановой кислоты (Ртос-изолейцин) (7 г; 19,81 ммоль) и пиридина (1,602 мл; 19,81 ммоль) в ЭСМ (120 мл) добавляли через канюлю раствор ΌΆ8Τ (3,11 мл; 23,77 ммоль) в ЭСМ (20 мл) в течение 10 минут. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, разбавляли ЭСМ (80 мл), промывали ледяной водой (2x200 мл), органический слой сушили над Мд8О4, фильтровали и упаривали под вакуумом с получением (9Н-флуорен-9-ил)метил-(28,38)-1-фтор-3-метил-1-оксопентан-2-илкарбамата (6,65 г; 94%) в виде белого твердого вещества. Проводили тест на этерификацию, чтобы подтвердить количественное образование фторангидрида, растворив Ртос-11е-Р (5 мг) в безводном МеОН (0,3 мл) и ΌΙΕΆ (0,030 мл) и оставив для взаимодействия при комнатной температуре в течение 15 мин. Смесь затем упаривали под вакуумом и анализировали посредством ЖХМС, которая показала присутствие менее 1% Ртос-11е-ОН. 1Н ЯМР (400 МГц, СИС13) δ м.д. 0.83-1.12 (т, 6Н) 1.18-1.37 (т, 1Н) 1.42-1.59 (т, 1Н) 2.01 (ушир. 8, 1Н) 4.26 (1, 1=6,78 Гц, 1Н) 4.44-4.63 (т, 3Н) 5.20 (б, 1=8,53 Гц, 1Н) 7.31-7.39 (т, 2Н) 7.40-7.47 (т, 2Н) 7.61 (б, 1=7,28 Гц, 2Н) 7.80 (б, 1=7,53 Гц, 2Н).
Промежуточное соединение 25
К промежуточному соединению на смоле (23) (0,5 г; 0,80 ммоль) добавляли раствор промежуточного соединения (24) (0,569 г; 1,60 ммоль), ΌΜΆΡ (4,89 мг; 0,04 ммоль) и ΌΙΕΆ (0,419 мл; 2,40 ммоль) в ЭСМ (5 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, полученную смолу фильтровали, промывали ΌΜΡ (3x6 мл), МеОН (3x6 мл), ЭСМ (3x6 мл), сушили под глубоким вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы и анализировали посредством ЖХ/МС. ЖХ/МС показала, что взаимодействие завершено. Полученную смолу использовали на следующей стадии. ЖХ-МС: 884 (М+Н).
Промежуточное соединение 26
К промежуточному соединению на смоле (25) (0,5 г; 0,80 ммоль) добавляли 20%-ный пиперидин в ΌΜΡ (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 мин, полученную смолу фильтровали, промывали ΌΜΡ (3x6 мл), МеОН (3x6 мл), ЭСМ (3x6 мл) и сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХ/МС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученную смолу использовали на следующей стадии. ЖХ/МС: 662 (М+1).
- 17 032203
К промежуточному соединению на смоле (26) (0,5 г; 0,80 ммоль) добавляли раствор промежуточного соединения (1) (0,252 г; 1,60 ммоль), НАТи (0,608 г; 1,60 ммоль), 2,4,6-триметилпиридин (0,320 мл; 2,40 ммоль) и Э1ЕА (0,419 мл; 2,40 ммоль) в ΌΜΓ (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, полученную смолу фильтровали, промывали ΌΜΓ (3x6 мл), МеОН (3x6 мл) и ЭСМ (3x6 мл) и сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХ/МС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученную смолу использовали на следующей стадии. ЖХ-МС: 801 (М+1).
Промежуточное соединение 28
К промежуточному соединению на смоле (27) добавляли раствор дигидрата хлорида олова (II) (1,805 г; 8,00 ммоль) и ацетат натрия (0,197 г; 2,40 ммоль) в ЭМГ (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Полученную смолу фильтровали, промывали ЭМГ (3x6 мл), МеОН (3x6 мл) и ЭСМ (3x6 мл) и сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы и анализировали посредством ЖХМС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученную смолу использовали на следующей стадии. ЖХ-МС: 771 (М+Н).
Соединение 1
К промежуточному соединению на смоле (28) (0,1 г; 0,16 ммоль) добавляли ЭСМ (1 мл), воду (0,200 мл) и ТГА (1 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 мин, затем фильтровали и смолу промывали смесью вода/ТГА (1:1, 3x2 мл) и фильтрат упаривали под вакуумом. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой ВЭЖХ (высокоэффективной жидкостной хроматографии) (АСЖН2О 0,1% ТГА, АСN от 5 до 50% за 14 мин). Чистые фракции лиофилизировали с получением (28,4К)-4-(2-((1К,3К)-1-ацетокси-3-((28,38)-2-((2К,4К)-1,4-диметилпиперидин2-карбоксамидо)-№этил-3-метилпентанамидо)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-5-(4-аминофенил)-2-метилпентановой кислоты (0,050 г; 35,3%) в виде твердого вещества. ЖХ/МС: 771,8 [М+1]; 1Н ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ м.д. 7.8 (δ, 1Н), 7.30 (6, 1=8,53 Гц, 2Н), 7.08-7.18 (т, 2Н), 5.66 (6, 1=13,05 Гц, 1Н), 4.57 (6, 1=8,53 Гц, 1Н), 4.29 (666, 1=9,98, 6,71, 2,89 Гц, 1Н), 3.90 (ушир. δ, 1Н), 3.73 (6, 1=6,27 Гц, 1Н), 3.24-3.33 (т, 1Н), 2.84 (6, 1=7,28 Гц, 2Н), 2.68 (ушир. δ, 3Н), 2.40-2.53 (т, 2Н), 2.20-2.36 (т, 1Н), 2.03-2.12 (т, 4Н), 1.75-2.00 (т, 7Н), 1.64 (666, 1=14,12, 10,23, 4,02 Гц, 2Н), 1.42-1.57 (т, 2Н), 1.30 (!, 1=7,15 Гц, 3Н), 1.01-1.17 (т, 7Н), 0.88-0.98 (т, 7Н), 0.84 (!, 1=7,40 Гц, 3Н), 0.77 (6, 1=6,53 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 29
К раствору 2-этилпиперидин-2-карбоновой кислоты (320 мг; 1,65 ммоль) в МеОН (4,0 мл) и воде (4,0 мл) добавляли параформальдегид (372 мг; 4,13 ммоль) и Р6/С (10%) (88 мг; 0,83 ммоль). Добавляли один эквивалент карбоната натрия (175 мг; 1,65 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение ночи. ЖХ/МС показывала полное превращение исходного вещества. Реакционную смесь фильтровали через диатомит. Осадок на фильтре промывали МеОН (2x30 мл). Фильтрат концентрировали под вакуумом с получением неочищенного продукта. Неочищенное твердое вещество суспендировали в метаноле (50 мл), и полученную суспензию фильтровали и фильтрат концентрировали с получением 2-этил- 1 -метилпиперидин-2-карбоновой кислоты (202 мг; 71,4%) в виде твердого вещества. ЖХ/МС: 172 (М+1); ’Н ЯМР (400 МГц, С1):О1)) δ м.д. 3.58 (16, 1=12,80, 3,51 Гц, 1Н), 3.09-3.20 (т, 1Н), 2.81 (δ, 3Н), 2.17-2.29 (т, 1Н), 1.54-1.84 (т, 7Н), 0.98 (I, 1=7,40 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 30
К промежуточному соединению на смоле (26) (0,2 г; 0,32 ммоль) добавляли раствор промежуточного соединения (29) (0,082 г; 0,48 ммоль), НАТи (0,243 г; 0,64 ммоль), 2,4,6-триметилпиридин (0,127 мл;
- 18 032203
0,96 ммоль) и Э^РЕА (0,168 мл; 0,96 ммоль) в ЭМЕ (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов, полученную смолу фильтровали, промывали ЭМЕ (3х4 мл), МеОН (3х4 мл) и ЭСМ (3х4 мл) и сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХМС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученную смолу использовали на следующей стадии. ЖХ/МС: 815 (М+Н).
К промежуточному соединению на смоле (30) добавляли раствор дигидрата хлорида олова(П) (0,544 г; 2,41 ммоль) и ацетата натрия (0,059 г; 0,72 ммоль) в ЭМЕ (5 мл). Смесь встряхивали при комнатной температуре в течение 4 ч, полученную смолу фильтровали, промывали ЭМЕ (3х6 мл), МеОН (3х6 мл) и ЭСМ (3х6 мл) и сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХМС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученную смолу использовали на следующей стадии. ЖХ-МС: 785 (М+Н).
Соединение 2
К промежуточному соединению на смоле (31) добавляли ЭСМ (2 мл) и ТЕА (0,493 мл; 6,40 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 мин. Смолу промывали смесью ЭСМ/ТЕА (1:1; 3х2 мл) и фильтраты упаривали под вакуумом. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой ВЭЖХ (ЛСМЗАО 0,1% муравьиная кислота, АСN от 10% до 50% за 14 минут). Чистые фракции лиофилизировали с получением (2Б,4К)-4-(2-((1К,3К)-1-ацетокси-3-((2Б,3Б)-№ этил-2-(2-этил-1метилпиперидин-2-карбоксамидо)-3-метилпентанамидо)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-5(4-аминофенил)-2-метилпентановой кислоты (0,057 г; 20,31%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС: 785 (М+Н); 1Н ЯМР (400 МГц, С1')3О[')) δ м.д. 7.98 (з, 1Н), 6.87 (т, 1=8,28 Гц, 2Н), 6.54 (т, 1=8,03 Гц, 2Н), 5.63-5.73 (т, 1Н), 4.60-4.71 (т, 3Н), 4.17 (ушир. з, 2Н), 3.76 (бб, 1=14,93, 7,15 Гц, 1Н), 2.69 (б, 1=6,53 Гц, 2Н), 2.42 (ушир. з, 1Н), 2.36 (з, 3Н), 2.29 (ушир. з, 2Н), 2.03-2.12 (т, 3Н), 1.88 (б, 1=9,79 Гц, 3Н), 1.79 (ушир. з, 2Н), 1.49-1.64 (т, 5Н), 1.43 (ушир. з, 2Н), 1.23-1.35 (т, 4Н), 1.11 (б, 1=7,78 Гц, 1Н), 1.06 (б, 1=7,03 Гц, 4Н), 0.93 (б, 1=15,81 Гц, 3Н), 0.94 (б, 1=15,56 Гц, 3Н), 0.70-0.87 (т, 9Н).
Промежуточное соединение 32
К суспензии 1-(трет-бутоксикарбонил)-2-метилпиперидин-2-карбоновой кислоты (1 г; 4,11 ммоль) и карбоната калия (0,852 г; 6,17 ммоль) в АСN (20 мл) по каплям добавляли бензилбромид (0,733 мл; 6,17 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. ЖХ/МС показала образование требуемого продукта. Реакционную смесь разбавляли водой (2 мл) и экстрагировали этилацетатом (2х30 мл). Объединенные экстракты сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии (силикагель, элюент гексан/этилацетат, 80/20) с получением 2-бензил-1-(трет-бутил)-2-метилпиперидин-1,2дикарбоксилата (1,27 г; 92%) в виде масла. ЖХ-МС: 356 (М+№); 1Н ЯМР (400 МГц, СП2С12) δ м.д. 7.337.45 (т, 5Н), 5.13-5.27 (т, 2Н), 3.91-4.09 (т, 1Н) ,2.83-3.09 (т, 1Н), 2.10-2.32 (т, 1Н), 1.56-1.72 (т, 1Н), 1.30-1.51 (т, 12Н), 1.09 (цб, 6=12,42, 4,64 Гц, 1Н), 0.90-0.98 (т, 3Н).
Промежуточное соединение 33
К раствору промежуточного соединения (32) (1,2 г; 3,60 ммоль) в ЭСМ (10 мл) по каплям добавляли ТЕА (4,16 мл; 53,99 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. ЖХ/МС показала полное снятие защитной группы Вос. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенное вещество подщелачивали насыщенным водным бикарбонатом натрия и водный слой экстрагировали этилацетатом (2х50 мл). Объединенные экстракты сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением бензил-2-метилпиперидин-2-карбоксилата
- 19 032203 (810 мг) в виде масла. Неочищенный продукт использовали на следующей стадии без очистки. ЖХ/МС: 234 (М+1).
Промежуточное соединение 34
К раствору промежуточного соединения (33) (1,45 г; 6,22 ммоль) и ОША (2,388 мл; 13,67 ммоль) в ОСМ (25 мл) по каплям добавляли бензилхлорформиат (0,875 мл; 6,22 ммоль) при 0°С. Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли 30 мл ОСМ и 4 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия, перемешивали в течение 5 мин. Органический слой отделяли и водный слой экстрагировали (2x30 мл) ОСМ. Объединенные органические экстракты сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии (силикагель, гексан/этилацетат, 90/10) с получением дибензил2-метилпиперидин-1,2-дикарбоксилата (1,32 г; 58%) в виде масла. ЖХ-МС: 268 (М+1); ‘Н ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ м.д. 7.21-7.42 (т, 10Н), 5.04-5.18 (т, 2Н), 5.00 (ушир. 8, 2Н), 4.91 (ушир. 8, 1Н), 3.88 (6, 1=12,80 Гц, 1Н), 3.17 (1, 1=9,54 Гц, 1Н), 1.83-1.97 (т, 1Н), 1.55-1.78 (т, 4Н), 1.51 (8, 3Н).
Промежуточное соединение 35
Промежуточное соединение (34) подвергали СФХ разделению на хиральной колонке (СЫга1рак АО, диоксид углерода/метанол, 90-10%) на два энантиомера для выделения требуемого продукта дибензил(Я)-2-метилпиперидин-1,2-дикарбоксилата. ЖХ-МС: 368 (М+1); ‘Н ЯМР (400 МГц, СП3ОП) δ м.д. 7.197.44 (т, 10Н), 5.04-5.15 (т, 2Н), 5.00 (ушир. 8, 2Н), 3.88 (6, 1=13,05 Гц, 1Н), 3.17 (1, 1=9,54 Гц, 1Н), 1.841.97 (т, 1Н), 1.55-1.78 (т, 5Н), 1.51 (8, 3Н); %ее (энантиомерный избыток): более 98; Оптическое вращение: [α]ο: +2° (метанол).
Промежуточное соединение 36
К раствору промежуточного соединения (35) (600 мг; 1,63 ммоль) в метаноле (10 мл) добавляли параформальдегид (49,0 мг; 1,63 ммоль) и палладий на угле (174 мг; 1,63 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение ночи. ЖХ/МС показала исчерпание исходного вещества. Реакционную смесь фильтровали, катализатор промывали МеОН (2x30 мл). Фильтрат концентрировали под вакуумом с получением неочищенного продукта в виде белого твердого вещества, которое промывали эфиром (3x30 мл), сушили под глубоким вакуумом в течение ночи с получением 1,2-диметилпиперидин-2-карбоновой кислоты (230 мг; 90%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС: 158 (М+1); ‘Н ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ м.д. 3.03-3.18 (т, 1Н), 2.76 (ушир. 8, 3Н), 2.01 (ушир. 8, 1Н), 1.83 (ушир. 8, 2Н), 1.72-1.81 (т, 1Н), 1.62-1.71 (т, 2Н), 1.48 (8, 3Н). Оптическое вращение: αο +24° (метанол).
К промежуточному соединению на смоле (26) (0,5 г; 0,80 ммоль) добавляли раствор промежуточного соединения (36) (0,189 г; 1,20 ммоль), НАТИ (0,608 г; 1,60 ммоль), 2,4,6-триметилпиридина (0,318 мл; 2,40 ммоль) и ЭША (0,419 мл; 2,40 ммоль) в ЭМЕ (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, полученную смолу фильтровали, промывали ЭМЕ (3x6 мл), МеОН (3x6 мл) и ОСМ (3x6 мл) и сушили. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХ/МС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученную смолу использовали на следующей стадии. ЖХ-МС: 801 (М+1).
- 20 032203
К промежуточному соединению на смоле (37) (0,5 г; 0,80 ммоль) добавляли раствор дигидрата хлорида олова(П) (1,384 г; 6,13 ммоль) и ацетата натрия (0,151 г; 1,84 ммоль) в ΌΜΤ (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч и полученную смолу фильтровали, промывали ΌΜΓ (3x6 мл), МеОН (3x6 мл) и ЭСМ (3x6 мл) и сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХ/МС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученную смолу использовали на следующей стадии. ЖХ-МС: 771 (М+Н).
Соединение 3 о
о
К промежуточному соединению на смоле (38) (0,15 г; 0,24 ммоль) добавляли ЭСМ (5 мл) и ТЕА (0,370 мл; 4,80 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин, затем фильтровали и промывали ОСМ (2x50 мл). Фильтраты упаривали под вакуумом. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой ВЭЖХ (АС\Л ЕО 0,1% муравьиная кислота, АС\ от 10% до 50% за 14 минут). Чистые фракции лиофилизировали с получением (28,4К)-4-(2-((1К,3К)-1ацетокси-3-((28,38)-2-((К)-1,2-диметилпиперидин-2-карбоксамидо)-\-этил-3-метилпентанамидо)-4метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-5-(4-аминофенил)-2-метилпентановой кислоты (0,037 г; 17,86%) в виде твердого вещества. ЖХ/МС: 771 (М+1); !Н ЯМР (400 МГц, СО3ОО) δ м.д. 7.97 (δ, 1Н), 6.87 (ά, 6=8,03 Гц, 2Н), 6.53 (ά 1=8,03 Гц, 2Н), 5.67 (ά, 1=12,80 Гц, 1Н), 4.59 (ά, 1=8,28 Гц, 1Н), 4.17 (ушир. 8, 2Н), 3.72 (ά, 1=7,28 Гц, 1Н), 2.69 (ά, 1=6,27 Гц, 3Н), 2.42 (ушир. δ, 2Н), 2.28 (ушир. δ, 2Н), 2.17 (δ, 3Н), 2.07 (δ, 3Н),1.74-1.94 (т, 3Н), 1.45-1.62 (т, 4Н), 1.36 (ушир. δ, 3Н), 1.27 (ΐ, 1=7,03 Гц, 3Н), 1.10 (δ, 3Н), 1.06 (ά, 1=7,03 Гц, 4Н), 0.95 (ά, 1=6,53 Гц, 3Н), 0.90 (ά, 1=6,78 Гц, 4Н), 0.83 (ΐ, 1=7,40 Гц, 4Н), 0.74 (ά, 1=6,27 Гц, 3Н).
Η
СООЕ1
СН2ОН
1. Дефлегмация
2. ΚΟΒιΕ
2. №ΒΗ4
3. Разделение
ΡΙΊ
Промежуточное соединение 39
Триэтиламин (40 г; 0,4 моль) добавляли к суспензии Бос-Ь-фенилаланина (90 г; 0,34 моль) и гидрохлорида \,О-диметилгидроксиламина (36,5 г; 0,37 моль) в ОСМ (500 мл) при 0°С при перемешивании. Суспензию перемешивали в течение 10 мин и добавляли ЕОС1 (соль НС1; 72 г; 0,37 моль). Суспензию перемешивали в течение еще 3 ч при 0°С. Смесь гасили насыщенным водным \аНСО3 (1 л). Слои разделяли и водную фазу реэкстрагировали ЭСМ (500 млx3). Объединенные органические фазы промывали водой (1 лx3), 5%-ным водным КН8О4 (1 лx3), насыщенным водным \аНСО3 (1 лx3) и рассолом (1 лx1), сушили (\а28О4) и концентрировали досуха. Неочищенное вещество далее очищали посредством флэшхроматографии (силикагель, ЕЮАс/гексан, 1:1) с получением (8)-трет-бутил-1-(метокси(метил)амино)-1оксо-3-фенилпропан-2-илкарбамата (85,1 г; выход 81%) в виде белого твердого вещества. !Н ЯМР (300 МГц, СЭС13): δ 7.15-7.26 (т, 5Н), 5.25 (Ьк, 1Н), 4.95 (т, 1Н), 3.63 (δ, 3Н), 3.14 (δ, 3Н), 2.83~3.07 (т, 2Н), 1.37 (δ, 9Н).
Промежуточное соединение 40
- 21 032203
Раствор промежуточного соединения (39) (97,1 г; 0,315 моль) в безводном ТНБ (500 мл) по каплям добавляли к суспензии Ь1А1Н4 (12,0 г; 0,316 моль) в безводном ТНБ (200 мл) при -10°С при перемешивании в течение 1 часа. Суспензию перемешивали в течение еще 3 ч при 0°С, затем гасили водой (12 мл), 15%-ным водным N41011 (12 мл) и водой (12 млх3) при -10°С. После перемешивания в течение 0,5 ч смесь фильтровали, фильтрат концентрировали досуха с получением (8)-трет-бутил-1-оксо-3-фенилпропан-2-илкарбамата (45,2 г; неочищенный), который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. 1Н ЯМР (300 МГц, СОСЬ): δ 9.65 (к, 1Н), 7.17~7.33 (т, 5Н), 4.80 (т, 1Н), 2.80~3.15 (т, 2Н), 1.45 (к, 9Н).
Промежуточное соединение 41
Раствор трифенилфосфина (173,7 г; 0,66 моль) и этил-2-бром-пропионата (100 г; 0,55 моль) в этилацетате (400 мл) нагревали с обратным холодильником в течение ночи. После охлаждения смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали этилацетатом и сушили с получением соли фосфония. Соль фос-
ем по каплям триэтиламина (111 г; 1,1 моль) при комнатной температуре при перемешивании. Смесь перемешивали в течение еще 1 ч, затем фильтровали. Фильтрат промывали водой (300 млх3), 5%-ным
щенное вещество далее очищали посредством флэш-хроматографии (силикагель, ЕЮАс/гексан, 1:10) с получением этил-(трифенилфосфоранилиден)пропионата (105 г; выход 52%) в виде твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, СОС13): δ 7.34~8.10 (т, 15Н), 4.02 (ц, 1=7,2 Гц, 2Н), 1.68 (т, 3Н), 1.01 ((, 1=7,2 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 42
Раствор промежуточного соединения (40) (52 г; 0,21 моль) и промежуточного соединения (41) (76 г; 0,21 моль) в ЭСМ (500 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 14 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток далее очищали посредством флэш-хроматографии (силикагель, ЕЮАс/гексан, 1:10) с получением (8)-этил-4-(трет-бутоксикарбониламино)-2-метил-5-фенилпент-2еноата (45,3 г; выход 64%) в виде масла. 1Н ЯМР (300 МГц, СЭС13): δ 7.17~7.32 (т, 5Н), 6.53 (бб, 1=1,2 и
Гц, 1Н), 4.63 (т, 2Н), 4.18 (д, 1=7,2 Гц, 2Н), 2.76~2.95 (т, 2Н), 1.72 (к, 3Н), 1.42 (к, 9Н), 1.28 ((, 1=7,2 Гц,
3Н).
Промежуточное соединение 43
О;
ОН
Промежуточное соединение (42) (45 г; 0,135 моль) растворяли в МеОН (600 мл), содержащем 10% Рб/С (10 г). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере водорода в течение 16 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтровали через диатомит и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в ацетоне (200 мл) и добавляли водный №ОН (2 М; 135 мл) при 0°С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 ч. Реакционную смесь выливали в водный НС1 (2 М; 135 мл) и экстрагировали ЭСМ (300 млх3). Объединенные органические экстракты сушили (М§8О4), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением (Я)-4-(третбутоксикарбониламино)-2-метил-5-фенилпентановой кислоты (41,0 г; приблизительно 100% выход), которую использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХ-МС подтвердила ее структуру.
Промежуточное соединение 44 он
Промежуточное соединение (43) (28 г; 0,091 моль) растворяли в безводном ТНБ (200 мл) и охлаждали до -40°С. К этому раствору добавляли триэтиламин (10,1 г; 0,099 моль) с последующим добавлением по каплям этилхлорформиата (11 г; 0,10 моль) в течение 15 мин. Реакционную смесь перемешивали в течение еще 1 ч при -40°С и затем фильтровали для удаления осажденного вещества. Фильтрат охлажда- 22 032203 ли до 0°С и обрабатывали водной суспензией, содержащей борогидрид натрия (7,5 г; 0,197 моль) в воде (20 мл), в течение 30 мин. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 30 мин и при комнатной температуре в течение еще 30 мин. Смесь разбавляли ЕЮАс (500 мл) и промывали рассолом (500 мл). Водный слой экстрагировали ЕЮАс (200 млх3). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным водным ЫаНСО3 (500 млх2) и рассолом (500 мл), сушили (М§8О4), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением маслянистого остатка. Остаток очищали посредством флэш-хроматографии (силикагель, ЕЮАс/гексан, 10:1) с получением трет-бутил-(2К,48)-5-гидрокси4-метил-1-фенилпентан-2-илкарбамата (17,5 г; выход 65%) в виде масла. 1Н ЯМР (300 МГц, СОС13): δ 7.15~7.29 (т, 5Н), 4.60 (т, 1Н), 4.00 (т, 1Н), 3.45 (ά, 1=5,7 Гц, 2Н), 2.71~2.11 (т, 4Н), 1.78 (т, 1Н), 1.55 (т, 1Н), 1.38 (δ, 9Н), 1.25 (т, 1Н).
Промежуточное соединение 45
Перйодинан Десса-Мартина (39 г; 89,4 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения (44) (17,5 г; 59,7 ммоль) в ОСМ (300 мл) и суспензию перемешивали в течение 15 часов при комнатной температуре. Смесь промывали водным ЫаОН (1 н.; 300 млх3) и рассолом (300 млх3), сушили (М§8О4), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством флэшхроматографии (силикагель, ЕЮАс/гексан, 1:6) с получением трет-бутил-(38,5К)-5-бензил-3-метил-2оксопирролидин-1-карбоксилата (9,1 г; выход 53%) в виде масла. 1Н ЯМР (300 МГц, СОС13): δ 7.16~7.35 (т, 5Н), 4.30 (т, 1Н), 3.15 (άά, 1=3,3 и 13,2 Гц, 1Н), 2.73 (άά, 1=9,6 и 13,2 Гц), 2.42 (т, 1Н), 2.00~2.10 (т, 2Н), 1.58 (δ, 9Н), 1.15 (ά, 1=6,9 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 46
Промежуточное соединение (45) (9,0 г; 31,1 ммоль) и водный НС1 (4 н.; 150 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 4 ч. После охлаждения растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток растворяли в ацетоне (100 мл) и воде (100 мл). рН раствора доводили до значения 8,5 с помощью 2 М водного ЫаОН и по каплям добавляли раствор Етос-О8и (12 г; 35 ммоль) в ацетоне (20 мл), во время данного процесса рН этого раствора поддерживали на уровне 8~9 с помощью 2 М водного ЫаОН. Суспензию перемешивали в течение 4 ч, затем подкисляли 2 М водным НС1 до рН 3, экстрагировали ЕЮАс (200 млх3). Объединенные органические фазы промывали водой (100 млх3), 5%-ным водным КН8О4 (100 млх3) и рассолом (100 млх1), сушили (Ыа28О4) и концентрировали досуха. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии (силикагель, ЕЮАс/гексан, 1:1) с получением (28,4К)-4((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-2-метил-5-фенилпентановой кислоты (5,3 г; выход 40%). ЖХ-МС: 430 [М+1]; 1Н ЯМР (400 МГц, метанол-ά^ δ м.д. 7.78-7.83 (т, 2Н), 7.59-7.65 (т, 2Н), 7.37-7.43 (т, 2Н), 7.28-7.35 (т, 2Н), 7.14-7.26 (т, 5Н), 6.94-7.01 (т, 1Н), 4.28-4.36 (т, 1Н), 4.21-4.27 (т, 1Н), 4.104.16 (т, 1Н), 3.84-3.93 (т, 1Н), 2.68-2.82 (т, 2Н), 2.48-2.60 (т, 1Н), 1.86-1.95 (т, 1Н), 1.42-1.51 (т, 1Н), 1.17 (ά, 1=7,03 Гц, 3Н), 1.09-1.14 (т, 1Н).
Схема ν/οη
Вос 4
1. СЮООВи-ί
2. СН21Ч2
3. Ад(ОАс) / /СООН
Вос
НЫМе(ОМе), ЕОС
1. №N02
2. №Вг
1. Ν3ΒΗ4
2. ΤΒδ-С!
1. №ВН4
2. Разделение
1. Реактив
Десса-Мартина
2. ЫаСЮ2
1. ТРА
2. Етос-ОЗи
- 23 032203
Промежуточное соединение 47
Этилхлорформиат (12,6 мл; 0,13 моль) по каплям добавляли к раствору I-Μе-Вос-^-Vа1-ΟΗ (27,3 г; 0,12 моль) и триэтиламина (14,7 мл; 0,13 моль) в безводном ΤΗΕ (200 мл) при -20°С в течение 15 мин и полученную белую суспензию дополнительно перемешивали в течение 30 мин. Раствор диазометана (0,36 моль; приготовленный из 60 г ^нитрозо-^метилмочевины и высушенный над гидроксидом калия) в эфире (500 мл) затем вводили в реакционную смесь через канюлю. Смесь оставляли для нагревания до комнатной температуры и перемешивали в течение еще 5 ч, затем осторожно гасили водной уксусной кислотой (10%; 250 мл). Слои разделяли и органический слой промывали насыщенным бикарбонатом натрия (300 млх3) и рассолом (300 млх3), сушили (№28О4), концентрировали до примерно 200 мл. Остаток растворяли в ΤΗΕ (900 мл) и воде (100 мл). Раствор нагревали до 40°С и добавляли ацетат серебра (500 мг). Суспензию перемешивали в течение 5 ч, затем концентрировали до примерно 300 мл. Остаток экстрагировали ЕЮАс (500 млх3). Органический слой промывали насыщенным бикарбонатом натрия (300 млх3) и рассолом (300 мл), сушили (№28О4) концентрировали с получением (К)-3-(третбутоксикарбонил(метил)амино)-4-метилпентановой кислоты (23,8 г; выход 81%), которую использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. 1Η ЯМР (300 МГц, СБС13): δ 10.08 (Ь8, 1Η), 4.00 (т, 1Η), 2.75 (т, 3Η), 2.55 (т, 2Η), 1.43 (8, 9Ь), 0.85~0.84 (т, 6Η).
Промежуточное соединение 48
Триэтиламин (34,3 мл; 0,244 моль) добавляли к суспензии промежуточного соединения (47) (60 г;
0,244 моль) и гидрохлорида НО-диметилгидроксиламина (23,9 г; 0,244 моль) в С^С^ (300 мл) при перемешивании при 0°С. Суспензию перемешивали в течение 0,5 часа при этой температуре, затем порциями добавляли ΕΌΟ (46,9 г; 0,244 моль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение еще 2 ч при 0°С, затем гасили водой (300 мл). Органическую фазу отделяли и промывали 5%-ным водным К118О4 (300 млх3), насыщенным водным £1+(% (300 млх3) и рассолом (300 млх1), сушили (№28О4) и концентрировали досуха. Остаток далее очищали посредством хроматографии на силикагеле (ЕЮАс/гексан, 1:3) с получением трет-бутил-(К)-(1-(метокси(метил)амино)-4-метил-1-оксопентан-3ил)(метил)карбамата (52 г; выход 74%) в виде масла.
Промежуточное соединение 49 трет-Бутилнитрит (приготовленный из 0,61 моль NаNΟ2 и 110 мл трет-бутилового спирта) по каплям добавляли к суспензии СиВг2 (260 г; 1,16 моль) и этил-2-аминотиазол-4-карбоксилата (100 г; 0,58 моль) в АСN (500 мл) при 0°С в течение 1 ч. Смесь перемешивали в течение 12 ч при комнатной температуре, затем гасили ЕЮАс (800 мл) и водой (800 мл). Смесь фильтровали и фильтрат разделяли на водную и органическую фазу. Водную фазу экстрагировали ЕЮАс (800 млх2). Объединенные органические экстракты промывали 5%-ным водным К118О4 (300 млх3), насыщенным водным NаΗСΟ3 (300 млх3) и рассолом (300 млх1), сушили (№28О4) и концентрировали досуха с получением этил-2-бромтиазол-4карбоксилата (79,4 г; выход 58%), который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. 1Η ЯМР (300 МГц, 1>М81 4К.): δ 7.45 (8, 1Η), 4.20 (ς, >7,2 Гц, 2Η), 1.25 (I, .1 7.2 Гц, 3Η).
Промежуточное соединение 50
ШВ114 (16,5 г; 0,43 моль) порциями добавляли к раствору промежуточного соединения (49) (68 г; 0,288 моль) в этаноле (500 мл) при 50°С в течение 0,5 ч при перемешивании. Суспензию нагревали с обратным холодильником в течение 5 ч и порциями добавляли другую часть ШВ114 (8,25 г; 0,22 моль). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение еще 12 ч. После ее охлаждения до комнатной температуры растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток растворяли в ОСМ (500 мл) и промывали насыщенным водным NаΗСΟ3 (300 млх3) и рассолом (300 млх1), сушили (№28О4) и концентрировали досуха с получением спирта. Спирт растворяли в БМВ (300 мл) и добавляли имидазол (28,3 г; 0,416 моль). Раствор ТВ8-С1 (62, г; 0,16 моль) в ΤΗΕ (100 мл) по каплям добавляли к этому раствору при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 12 ч, затем гасили водой (800 мл) и экстрагировали ЕЮАс (800 млх2). Объединенные органические экстракты промывали 5%-ным водным К118О4 (300 млх3), насыщенным водным NаΗСΟ3 (300 млх3) и рассолом (300 млх1), сушили (№28О4) и концентрировали досуха. Остаток очищали посредством флэш-хроматографии (силикагель, ЕЮАс/гексан, 1:30) с
- 24 032203 получением 2-бром-4-((трет-бутилдиметилсилилокси)метил)тиазола (42,0 г; выход за две стадии 47%) в виде масла. 1Н ЯМР (300 МГц, СПС13): δ 7.15 (ΐ, 1=1,5 Гц, 1Н), 4.84 (ά, 1=1,5 Гц, 2Н), 0.94 (δ, 9Н), 0.12 (δ, 6Н).
Промежуточное соединение 51
Раствор п-ВиГ1 (77 мл; 2,5 н. в гексане; 0,19 моль) по каплям добавляли к раствору промежуточного соединения (50) (53,9 г; 0,175 моль) в безводном ТНЕ (500 мл) при -78°С в атмосфере Ν2 при перемешивании в течение 1 ч. Суспензию перемешивали в течение 30 мин при этой температуре. Затем по каплям добавляли раствор промежуточного соединения (48) (50,4 г; 0,175 моль) в безводном ТНЕ (200 мл) в течение 30 мин при -78°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при этой температуре, затем оставляли для нагревания до комнатной температуры и перемешивали в течение 12 ч. Смесь гасили 20%ным водным хлоридом аммония (1 л) и удаляли органический растворитель при пониженном давлении. Полученную смесь экстрагировали ЕЮАс (500 млх3). Объединенные органические фазы промывали 5%ным водным КНЗО4 (500 млх3), насыщенным водным ΝαΙ 1С(.)3 (500 млх3) и рассолом (500 млх1), сушили (Να2^(.)4) и концентрировали досуха. Неочищенное вещество далее очищали посредством флэшхроматографии (силикагель, ЕЮАс/гексан, 1:10) с получением (К)-трет-бутил-1-(4-((трет-бутилдиметилсилилокси)метил)тиазол-2-ил)-4-метил-1-оксо-пентан-3-ил(метил)карбамата (38,1 г; выход 48%) в виде масла. 1Н ЯМР (300 МГц, С1)СГ>: δ 7.55 (т, 1Н), 4.91 (δ, 2Н), 4.27 (т, 1Н), 3.20-3.60 (т, 2Н), 1.90 (т, 1Н), 1.03 (ά, 1=6,6 Гц, 3Н), 0.97 (δ, 9Н), 0.88 (ά, 1=6,6 Гц, 3Н), 0.15 (δ, 6Н).
ΝαΒΙ Ι4 (4,7 г; 125 ммоль) порциями добавляли к раствору промежуточного соединения (51) (38,0 г; 83,3 ммоль) в метаноле (200 мл) при комнатной температуре в течение 0,5 ч при перемешивании. Суспензию перемешивали в течение 2 ч и добавляли другую порцию ΝαΒΙ 14 (1,5 г; 40 ммоль) и смесь перемешивали в течение еще 2 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток растворяли в ЕЮАс (200 мл), промывали насыщенным водным ШНС()3 (200 млх3) и рассолом (200 млх1), сушили (№28О4) и концентрировали досуха. Неочищенное вещество далее очищали посредством хроматографии на силикагеле (ЕЮАс/гексан, 1:6) ис получением трет-бутил-(1К,3К)-1-(4-((трет-бутилдиметилсилилокси)метил)-тиазол-2-ил)-1-гидрокси-4-метилпентан-3-ил(метил)карбамата (16,2 г; выход 42%) и трет-бутил-(( 18,3К)-1 -(4-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)-тиазол-2-ил)-1 -гидрокси-4-метилпентан-3-ил)(метил)карбамата (изомер; 17,3 г; выход 45%).
трет-Бутил-(1К,3К)-1 -(4-((трет-бутилдиметилсилилокси)метил)тиазол-2-ил)-1 -гидрокси-4-метилпентан-3-ил(метил)карбамат (1К,3К-изомер): 1Н ЯМР (300 МГц, СОСЦ): δ 7.11 (δ, 1Н), 4.98 φδ, 1Н), 4.80 (δ, 2Н), 4.68 (άΐ, 1=11,7 Гц, 1Н), 3.95 (άΐ, 1=3,3 и 12 Гц, 1Н), 2.75 (δ, 3Н), 1.70~1.95 (т, 2Н), 1.49 (δ, 9Н), 0.95 (δ, 9Н), 0.85~0.95 (т, 6Н), 0.15 (δ, 6Н).
трет-Бутил-(( 18,3К)-1 -(4-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)тиазол-2-ил)-1 -гидрокси-4метилпентан-3-ил)(метил)карбамат (18,3К-изомер): 1Н ЯМР (300 МГц, СОС13): δ 7.07 (δ, 1Н), 5.01 (т, 1Н), 4.81 (δ, 2Н), 4.81 φδ, 1Н), 3.86 (άΐ, 1=3,3 и 10,5 Гц, 1Н), 2.35 (δ, 3Н), 2.25 (т, 1Н), 1.74 (т, 1Н), 1.43 (δ, 9Н), 1.00 (ά, 1=6,6 Гц, 3Н), 0.96 (δ, 9Н), 0.84 (ά, 1=6,6 Гц, 3Н), 0.15 (δ, 6Н).
Промежуточное соединение 53
Ацетилхлорид (22,5 мл; 0,316 моль) по каплям добавляли к раствору промежуточного соединения (52) (19,7 г; 43 ммоль) в пиридине (140 мл) при 0°С при перемешивании в течение 1 ч. Реакционную смесь оставляли для нагревания до комнатной температуры и перемешивали в течение 12 ч. Смесь гасили водой (200 мл) и органический растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток растворяли в ОСМ (500 мл) и промывали 5%-ным водным КНЗО4 (200 млх3), насыщенным водным ΝαΙ 1С(.)3 (200 млх3) и рассолом (200 млх1), сушили (№28О4) и концентрировали досуха. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии (силикагель, ЕЮАс/гексан, 1:10) с получением (1К,3К)-3-(третбутоксикарбонил(метил)амино)-1-(4-((трет-бутилдиметилсилилокси)метил)-тиазол-2-ил)-4-метилпентилацетата (18,5 г; выход 86%) в виде масла. ЖХ-МС подтвердила ее структуру.
- 25 032203
Промежуточное соединение 54
Раствор фторида геграбугиламмония (45,7 г; 175 ммоль) в ТНР (100 мл) по каплям добавляли к раствору промежуточного соединения (53) (17,5 г; 35 ммоль) в ТНР (100 мл) при 0°С при перемешивании. Реакционную смесь оставляли для нагревания до комнатной температуры и перемешивали в течение 12 ч. Смесь гасили водой (100 мл) и органический растворитель удаляли при пониженном давлении. Оста ток растворяли в СН2С12 (500 мл) и промывали 5%-ным водным КН8О4 (200 млх3), насыщенным водным №НСО3 (200 млх3) и рассолом (200 млх1), сушили (№28О4) и концентрировали досуха. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии (силикагель, ЕЮАс/гексан, 1:4) с получением (1К,3К)-3-(трет-бутоксикарбонил(метил)амино)-1-(4-(гидроксиметил)тиазол-2-ил)-4-метилпентилацетата (9,3 г; выход 69%) в виде масла. 1Н ЯМР (300 МГц, СОС13): δ 7.15 (ά, >3 Гц, 1Н), 5.81~5.86 (т, 1Н), 4.74 (ά, 1=3 Гц, 2Н), 4.11 (т, 1Н), 2.70 и 2.63 (δ, 3Н), 2.31 (т, 1Н), 2.15 (δ, 3Н), 2.05 (т, 1Н), 1.70 (т, 1Н), 1.47 (δ, 9Н), 0.98 (ά, 1=6,6 Гц, 3Н), 0.86 (ά, 1=6,6 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 55
Перйодинан Десса-Мартина (14,9 г; 34,2 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения (54) (8,8 г; 22,8 ммоль) в дихлорметане (250 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч, затем промывали водным гидроксидом натрия (1 н.; 200 млх3), водным тиосульфатом натрия (1 н.; 200 млх3), насыщенным водным №НСО3 (200 млх3) и рассолом (200 млх1), сушили (№28О4) и концентрировали досуха с получением альдегида.
Этот неочищенный альдегид растворяли в трет-бутиловом спирте (250 мл) и по каплям добавляли раствор хлорита натрия (80%; 11,6 г; 102 ммоль) и моногидрата дигидрофосфата натрия (33,6 г; 244 ммоль) в воде (150 мл) в течение 1 часа при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали еще в течение 16 часов, затем разбавляли соляной кислотой (0,1 н.; 100 мл) и экстрагировали ЕЮАс (200 млх3). Объединенные органические слои промывали 5%-ным водным КН8О4 (200 млх3) и рассолом (200 млх1), сушили (№28О4) и концентрировали досуха с получением 2-((1К,3К)-1-ацетокси-3-(третбутоксикарбонил(метил)амино)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоновой кислоты (7,5 г; выход 82%), которую использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ЯМР (300 МГц, СЭС13): δ 8.26 (δ, 1Н), 5.87-6.01 (т, 1Н), 4.15 (т, 1Н), 2.72 и 2.65 (δ, 3Н), 2.35 (т, 1Н), 2.20 (δ, 3Н), 2.18 (т, 1Н), 1.75 (т, 1Н), 1.49 (δ, 9Н), 1.00 (ά, 1=6,6 Гц, 3Н), 0.88 (ά, 1=6,6 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 56
ТРА (30 мл) добавляли к раствору промежуточного соединения (55) (7,4 г; 18,5 ммоль) в дихлорметане (80 мл). Смесь перемешивали в течение 12 часов, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток растворяли в ацетоне (100 мл) и воде (100 мл). рН раствора доводили до значения 8,5 с помощью 2 М водного №ОН и по каплям добавляли раствор Ртос-О8и (6,2 г; 18,5 ммоль) в ацетоне (50 мл), во время данного процесса рН этого раствора поддерживали на уровне 8~9 с помощью 2 М водного №ОН. Суспензию перемешивали в течение 4 ч, подкисляли 2 М водным НС1 до рН 3, экстрагировали ЕЮАс (200 млх3). Объединенные органические фазы промывали водой (100 млх3), 5%-ным водным КН8О4 (100 млх3) и рассолом (100 млх1), сушили (№28О4) и концентрировали досуха. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии (силикагель, МеОН/СН2С12, 1:40) с получением 2((1К,3К)-3-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)(метил)амино)-1-ацетокси-4-метилпентил)тиазол-4карбоновой кислоты (5,1 г; выход 53%). ЖХ-МС: 523 [М+1]; :Н ЯМР (400 МГц, СОС13) δ м.д. 0.56 (ушир. δ, 1Н) 0.67-0.82 (т, 2Н) 0.83-0.96 (т, 2Н) 1.64 (άΐ, 1=10,36, 6,57 Гц, 1Н) 1.88 (δ, 1Н) 2.07 (δ, 2Н) 2.09-2.17 (т, 1Н) 2.19-2.33 (т, 1Н) 2.52-2.67 (т, 3Н) 3.86-4.01 (т, 1Н) 4.08 (δ, 1Н) 4.12-4.21 (т, 1Н) 4.29-4.40 (т, 1Н) 4.68 (άά, 1=10,61, 5,56 Гц, 1Н) 5.85 (άά, 1=10,86, 3,28 Гц, 1Н) 7.19-7.27 (т, 2Н) 7.27-7.35 (т, 2Н) 7.427.58 (т, 2Н) 7.61-7.71 (т, 2Н) 8.11-8.19 (т, 1Н).
Промежуточное соединение 57
- 26 032203
ΌΙΕΑ (0,419 мл; 2,40 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения (46) (0,344 г; 0,80 ммоль) в ЭСМ (1,5 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 минут, затем в смесь добавляли 2-хлортритилхлоридную смолу (0,5 г; 0,80 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч, полученную смолу промывали ОМЕ (3x6 мл), МеОН (3x6 мл) и ЭСМ (3x6 мл), затем обрабатывали ΌΙΕΑ (0,419 мл; 2,40 ммоль) и смесью МеОН/ОСМ (1:1; 5 мл) при комнатной температуре в течение 30 минут. Полученную смолу отфильтровывали, промывали ОМЕ (3x6 мл), МеОН (3x6 мл) и ЭСМ (3x6 мл), сушили под глубоким вакуумом в течение ночи. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы и анализировали посредством ЖХМС. Высушенную смолу использовали на следующей стадии. ЖХ-МС: 430 (М+1).
Промежуточное соединение 58
К промежуточному соединению на смоле (57) (0,5 г; 0,80 ммоль) добавляли 20%-ный пиперидин в ЭМЕ (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 мин, полученную смолу фильтровали, промывали ЭМЕ (3x6 мл), МеОН (3x6 мл), ЭСМ (3x6 мл), сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХ/МС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученную смолу использовали на следующей стадии. ЖХ-МС: 208 (М+1).
К промежуточному соединению на смоле (58) (0,4 г; 0,64 ммоль) добавляли раствор промежуточного соединения (56) (0,351 г; 0,67 ммоль), ΉΑΤυ (0,487 г; 1,28 ммоль), 2,4,6-триметилпиридина (0,256 мл; 1,92 ммоль) и ΌΙΕΑ (0,335 мл; 1,92 ммоль) в ЭМЕ (4 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Полученную смолу фильтровали, промывали ЭМЕ (3x6 мл), МеОН (3x6 мл), ЭСМ (3x6 мл), сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы и анализировали посредством ЖХМС. Взаимодействие было завершено. Полученную смолу использовали на следующей стадии. ЖХ-МС: 712 (М+1).
Промежуточное соединение 60
К промежуточному соединению на смоле (59) (0,4 г; 0,64 ммоль) добавляли 20%-ный пиперидин в ЭМЕ (4 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 мин, полученную смолу фильтровали, промывали ЭМЕ (3x6 мл), МеОН (3x6 мл), ЭСМ (3x6 мл), сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХМС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученную смолу использовали на следующей стадии. ЖХ/МС: 491 (М+Н).
Промежуточное соединение 61
К промежуточному соединению на смоле (60) (0,4 г; 0,64 ммоль) добавляли раствор промежуточного соединения (24) (0,341 г; 0,96 ммоль), ^МΑΡ (3,91 мг; 0,03 ммоль) и ΌΙΕΑ (0,335 мл; 1,92 ммоль) в ЭСМ (4 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, полученную смолу фильтровали, промывали ЭМЕ (3x6 мл), МеОН (3x6 мл), ЭСМ (3x6 мл), сушили под глубоким вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы и анализировали посредством ЖХМС. Полученную смолу использовали на следующей стадии. ЖХ-МС: 825 (М+1).
К промежуточному соединению на смоле (61) (0,4 г; 0,64 ммоль) добавляли 20%-ный пиперидин в ЭМЕ (4 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 мин, полученную смолу филь- 27 032203 тровали, промывали ΌΜΡ (3x6 мл), МеОН (3x6 мл), 1)СМ (3x6 мл), сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХМС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученную смолу использовали на следующей стадии. ЖХ-МС: 603 (М+1).
Промежуточное соединение 63
Раствор 4,4-диметилциклогексанона (30 г; 0,238 моль), гидрохлорида гидроксиламина (32,8 г; 0,476 моль) и ацетата натрия (39,0 г; 0,476 моль) в смеси Н2О/Е1ОН (720 мл; 5/1) нагревали с обратным холодильником. Взаимодействие контролировали с помощью ТСХ и после завершения смесь охлаждали до комнатной температуры. Разбавляли дихлорметаном (500 мл). Органический слой отделяли, промывали рассолом (100 мл) и сушили над Ш2§О4. Растворитель удаляли при пониженном давлении и получали оксим 4,4-диметилциклогексанона в виде бесцветного твердого вещества, которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Промежуточное соединение 64
К перемешиваемой суспензии пентахлорида фосфора (120 г; 0,576 моль) в ксилоле (1000 мл) добавляли в течение 20 мин раствор промежуточного соединения (63) (27,2 г; 0,192 моль) в ксилоле (400 мл). Во время добавления температуру реакционной смеси поддерживали при 30-36°С с использованием водяной бани. Затем нагревали до 80°С и перемешивали в течение 1,5 ч. Гомогенную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и вливали в насыщенный водный карбонат натрия (2000 мл). Смесь оставляли выстаиваться в течение ночи и собирали осадок. Получили 3,3-дихлор-5,5диметилазепан-2-он (28,4 г) в виде коричневого твердого вещества, и его использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. 1Н ЯМР (300 МГц, СЭС13): δ 6.51 (Ь8, 1Н), 3.39-3.44 (т, 1Н), 3.163.21 (т, 1Н), 1.41-1.51 (т, 2Н), 1.17 (8, 2Н), 0.99 (8, 6Н).
Промежуточное соединение 65
Промежуточное соединение (64) (25,8; 0,123 моль) растворяли в ледяной уксусной кислоте (1300 мл) и перемешивали при 40 атм (4 МПа) в атмосфере водорода над Рб/С (13 г; 10%) в течение 2 ч при комнатной температуре. Катализатор отфильтровывали и фильтрат концентрировали под вакуумом. ЭСМ (200 мл) и насыщенный водный №НСО3 (200 мл) добавляли к остатку и смесь перемешивали в течение 10 мин. Органический слой отделяли, сушили над Ш2§О4 и концентрировали под вакуумом с получением 3-хлор-5,5-диметилазепан-2-она (19,1 г), который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. 1Н ЯМР (300 МГц, СЭС13): δ 6.19 (Ьг8, 1Н), 4.75 (б, 1=11 Гц, 1Н), 3.30-3.36 (т, 1Н), 3.11-3.17 (т, 1Н), 1.91-2.09 (т, 2Н), 1.39-1.59 (т, 2Н), 1.14 (8, 3Н), 1.04 (8, 3Н).
Промежуточное соединение 66
В колбу, в которую загружали промежуточное соединение (65) (16,1 г; 0,092 моль) и Ва(ОН)2 (35,1 г; 0,11 моль), добавляли воду (400 мл). Эту смесь перемешивали в течение 2 ч при 110°С. Затем ее охла- 28 032203 ждали до комнатной температуры и добавляли раствор СВ2-хлорида (20,6 г; 0,121 моль) в ТНЕ (400 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, затем значение рН доводили до 3 при использовании 1 н. НС1. Неочищенный продукт экстрагировали этилацетатом (2х200 мл). Объединенный экстракт промывали рассолом (100 мл), сушили над №2БО4 и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле с получением 1-((бензилокси)карбонил)-4,4-диметилпиперидин-2-карбоновой кислоты в виде вязкого масла (7 г). 1Н ЯМР (300 МГц, СОС13): δ 7.33-7.38 (т, 5Н), 5.16-5.19 (т, 2Н), 4.78-4.88 (т, 1Н), 3.95-3.99 (т, 1Н), 3.23-3.27 (т, 1Н), 2.07 (з, 2Н), 1.64-1.71 (т, 1Н), 1.37-1.40 (т, 2Н), 0.97 (з, 3Н), 0.93 (з, 3Н).
Промежуточное соединение 67
Два энантиомера разделяли с помощью колонки СЫга1рак А при использовании подвижной фазы А 90% диоксида углерода/подвижной фазы В 10% этанола (детектирование при 210 нм). (К)-1((бензилокси)карбонил)-4,4-диметилпиперидин-2-карбоновая кислота: ЖХ-МС: 292 [М+1]; 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-б) δ м.д. 0.93 (з, 3Н) 0.98 (з, 3Н) 1.40 (б, 1=11,80 Гц, 2Н) 1.68 (бб, 1=14,05, 7,28 Гц, 1Н) 1.99-2.18 (т, 1Н) 3.27 (т, 1=12,30 Гц, 1Н) 3.97 (т, 1=12,80 Гц, 1Н) 4.69-4.95 (т, 1Н), 5.11-5.25 (т, 2Н), 7.28-7.44 (т, 5Н), 9.63 (ушир. з, 1Н).
Промежуточное соединение 68
К раствору промежуточного соединения (67) (1,14 г; 3,91 ммоль) в МеОН (20 мл) и воде (20,00 мл) добавляли параформальдегид (0,705 г; 7,83 ммоль) и Рб/С (10%) (0,4 г; 3,76 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение ночи. Посредством ТСХ установили, что взаимодействие не завершено. Добавляли дополнительное количество параформальдегида (0,705 г; 7,83 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение ночи. ТСХ показала, что взаимодействие завершено. Реакционную смесь фильтровали, катализатор промывали МеОН (2х20 мл). Фильтрат концентрировали под вакуумом с получением неочищенного продукта в виде белого твердого вещества, которое промывали эфиром (3х20 мл), сушили под глубоким вакуумом в течение ночи с получением (К)-1,4,4-триметилпиперидин-2-карбоновой кислоты (0,671 г; 100%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС: 172 [М+1]; 1Н ЯМР (400 МГц, Э2О) δ м.д. 0.96 (з, 3Н) 1.01 (з, 3Н) 1.49-1.63 (т, 3Н) 1.83 (б!, 1=14,56, 2,64 Гц, 1Н) 2.79 (з, 3Н) 3.08-3.18 (т, 1Н) 3.273.34 (т, 1Н) 3.54 (бб, 1=12,80, 3,26 Гц, 1Н).
К промежуточному соединению на смоле (62) (0,1 г; 0,16 ммоль) добавляли раствор промежуточного соединения (68) (0,055 г; 0,32 ммоль), НАТи (0,122 г; 0,32 ммоль), 2,4,6-триметилпиридина (0,064 мл; 0,48 ммоль), и ЭГЕА (0,056 мл; 0,32 ммоль) в ЭМЕ (1 мл). Смесь перемешивали при комнатной темпера туре в течение 2 ч, полученную смолу фильтровали, промывали ЭМЕ (3х2 мл), МеОН (3х2 мл) и ЭСМ (3х2 мл), сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХМС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученную смолу использовали на следующей стадии. ЖХ-МС: 756 (М+1).
Соединение 4
К промежуточному соединению на смоле (69) (0,1 г; 0,13 ммоль) добавляли ЭСМ (1 мл) и ТЕА (1 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 мин, затем фильтровали, смолу промывали смесью ЭСМ/ТЕА (1:1; 3х2 мл), фильтраты упаривали под вакуумом. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой ВЭЖХ (АСМН2О 0,1% ТЕА, ЛСN от 5% до 75% за 14 минут). Чистые фракции лиофилизировали с получением (2Б,4К)-4-(2-((1К,3К)-1-ацетокси-3-((2Б,3Б)-^3-диметил-2-((К)1,4,4-триметилпиперидин-2-карбоксамидо)пентанамидо)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2
- 29 032203 метил-5-фенилпентановой кислоты (30 мг; выход 30%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС: 756,5 [М+1]; ‘Н ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ м.д. 0.75 (66, 1=6,53, 2,01 Гц, 3Н), 0.85 (16, 1=7,34, 3,64 Гц, 4Н), 0.90-0.99 (т, 11Н), 1.01-1.16 (т, 9Н), 1.45-1.66 (т, 6Н), 1.67-1.85 (т, 4Н), 1.86-1.97 (т, 1Н), 2.03-2.06 (т, 3Н), 2.16-2.34 (т, 2Н), 2.39-2.51 (т, 1Н), 2.66 (6, 1=1,25 Гц, 3Н), 2.75-2.85 (т, 2Н), 3.02 (6, 1=1,25 Гц, 3Н), 3.16 (ушир. 8, 1Н), 3.79-3.93 (т, 1Н), 4.29 (ушир. 8, 2Н), 4.57-4.66 (т, 1Н), 5.55-5.70 (т, 1Н), 7.01-7.18 (т, 5Н), 7.98 (6, 1=1,25 Гц, 1Н).
Промежуточное соединение 70
К промежуточному соединению на смоле (62) (0,1 г; 0,16 ммоль) добавляли раствор промежуточного соединения (1) (0,050 г; 0,32 ммоль), НАТи (0,122 г; 0,32 ммоль), 2,4,6-триметилпиридина (0,064 мл; 0,48 ммоль) и БЕА (0,056 мл; 0,32 ммоль) в ОМЕ (1 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, полученную смолу фильтровали, промывали 1)МЕ (3x2 мл), МеОН (3x2 мл) и БСМ (3x2 мл), сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХМС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученную смолу использовали на следующей стадии. ЖХ-МС: 742 (М+1).
Соединение 5
К промежуточному соединению на смоле (70) (0,1 г; 0,16 ммоль) добавляли БСМ (1 мл) и ТЕА (1 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 мин, затем фильтровали, смолу промывали смесью БСМ/ТЕА (1:1; 3x2 мл), фильтраты упаривали под вакуумом. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой ВЭЖХ (АСЫ/Н2О 0,1% ТЕА, АСЫ от 5% до 50% за 14 мин). Чистые фракции лиофилизировали с получением (2Б,4Я)-4-(2-((1Я,3Я)-1 -ацетокси-3 -((28,3Б)-2-((2Я,4Я)-1,4-диметилпиперидин-2-карбоксамидо)-Ы,3-диметилпентанамидо)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5фенилпентановой кислоты (0,040 г; 29,2%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС: 742 (М+1); ‘Н ЯМР (400 МГц, СВ3ОВ) δ м.д. 0.71-0.78 (т, 3Н), 0.80-0.87 (т, 3Н), 0.93 (66, 1=9,91, 6,65 Гц, 6Н), 1.07 (6, 1=7,03 Гц, 6Н) ,1.42-1.65 (т, 3Н), 1.74-1.85 (т, 3Н), 1.86-1.98 (т, 3Н), 2.05 (8, 4Н), 2.16-2.35 (т, 2Н), 2.382.51 (т, 1Н), 2.59-2.72 (т, 3Н), 2.77-2.83 (т, 2Н), 3.02 (8, 3Н), 3.84-3.94 (т, 1Н), 4.20-4.35 (т, 2Н), 4.564.65 (т, 1Н), 5.57-5.67 (т, 1Н), 7.03-7.09 (т, 1Н), 7.13 (8, 4Н), 7.91-8.02 (т, 2Н).
Промежуточное соединение 71
К раствору этил-2-((1Я,3Я)-3-((28,3Б)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-Ы,3-диметилпентанамидо)-1гидрокси-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксилата (полученному, как описано в РаЦегаоп А. е1 а1 I. Огд. СНет. 2008, 73, 4362) (1,2 г; 2,40 ммоль) в БСМ (24 мл) добавляли равный объем ТЕА (24,00 мл) при перемешивании в течение 1 ч. Раствор затем концентрировали, разбавляли ЕЮАс и однократно промывали насыщенным ЫаНСО3 (водн.). Водную фракцию дважды обратно экстрагировали ЕЮАс и объединенные органические фракции сушили Ыа2БО4, фильтровали и концентрировали с получением Воснезащищенного свободного амина, который передавали на следующую стадию без дополнительной очистки. К этому амину в СН2С12 (24 мл) добавляли НОВТ (0,368 г; 2,40 ммоль) и промежуточное соединение (1) (0,3969 г; 2,52 ммоль). Смесь затем охлаждали на бане с подсоленной водой и льдом при перемешивании и добавляли РБ-карбодиимид (1,23 ммоль/г) (2,598 г; 2,88 ммоль). Баню нагревали до комнатной температуры и перемешивание продолжали в течение 14 ч. Смесь затем фильтровали, смолу промывали БСМ и фильтрат концентрировали. Неочищенную смесь затем разбавляли ЕЮАс и однократно промывали насыщенным водным ЫаНСО3. Водную фракцию дважды подвергали обратной экстракции с ЕЮАс и объединенные органические фракции сушили Ыа2БО4, фильтровали и концентрировали с получением 4-МетилМер-связанного промежуточного соединения, которое использовали без дополнительной очистки. К неочищенному промежуточному соединению, разбавленному диоксаном (24 мл), добавляли раствор БЮН (0,230 г; 9,60 ммоль) в дегазированной воде (24 мл). После перемешивания в течение 5 часов раствор концентрировали. Остаток очищали с помощью колонки с силикагелем, элюировали смесью ВСМ/ЭСМ:МеОН:ЫН4ОН (от 90:10:1 до 70:30:1) (БСМ:МеОН:ЫН4ОН в виде градиента от 0 до 100%) при использовании нормально-фазовой флэш-хроматографии. Чистые фракции концентрировали
- 30 032203 и в конце сушили под глубоким вакуумом с получением 2-((1К,3К)-3-((28,38)-2-((2К,4К)-1,4диметилпиперидин-2-карбоксамидо)-^3-диметилпентанамидо)-1-гидрокси-4-метилпентил)тиазол-4карбоновой кислоты (1,003 г; 82%) в виде аморфного твердого вещества. ЖХ-МС: 509 [М+1].
Промежуточное соединение 72
К раствору промежуточного соединения (71) (1,0026 г; 1,96 ммоль) в пиридине (19,47 мл) охлаждали на водяной бане со льдом и при перемешивании добавляли ангидрид уксусной кислоты (0,927 мл; 9,82 ммоль). Баню нагревали до комнатной температуры и перемешивание продолжали в течение 24 ч. Раствор затем охлаждали на водяной бане со льдом и добавляли раствор диоксана в дегазированной воде, 1:1 (об./об.) (40 мл). Баню нагревали до комнатной температуры и перемешивание продолжали в течение 22 ч. Остаток концентрировали посредством упаривания и остаток очищали посредством обращеннофазовой хроматографии при использовании смеси АСЖН2О (0,1% ТГА), АСN от 5% до 50% за 14 мин, чистые фракции лиофилизировали с получением 2-((1К,3К)-1-ацетокси-3-((28,38)-2-((2К,4К)-1,4-диметилпиперидин-2-карбоксамидо)-^3-диметилпентанамидо)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоновой кислоты (0,945 г; 72,2%) в виде бесцветного твердого вещества. ЖХ-МС: 551 [М+1]; ’Н ЯМР (400 МГц, метанол64) δ м.д. 0.85 (6, 1=6,53 Гц, 3Н), 0.88-0.98 (т, 4Н), 0.98-1.08 (т, 6Н), 1.10-1.28 (т, 4Н), 1.59 (666, 1=13,49, 7,47, 2,89 Гц, 1Н), 1.70 (6, 1=14,05 Гц, 1Н), 1.81-2.12 (т, 5Н), 2.12-2.25 (т, 3Н), 2.32 (6, 1=7,78 Гц, 2Н), 2.72-2.93 (т, 4Н), 3.07-3.18 (т, 4Н), 4.02 (6, 1=10,54 Гц, 1Н), 4.10-4.39 (т, 1Н), 4.65-4.76 (т, 1Н), 5.64-5.80 (т, 1Н), 8.30-8.39 (т, 1Н), 8.66 (6, 1=7,28 Гц, 1Н).
Промежуточное соединение 73
Промежуточное соединение (72) (100 мг; 0,18 ммоль) добавляли к раствору 2,3,4,5,6-пентафторфенола (49,32 мг; 0,27 ммоль) и 1ИС (41,34 мкм; 0,27 ммоль) в ЭСМ (5 мл) при 0°С. Раствор оставляли для достижения комнатной температуры, перемешивали в течение 4 ч, затем растворитель удаляли под вакуумом. В смесь добавляли ЕЮАс (4 мл) и полученную суспензию фильтровали через вакуум-фильтр с получением требуемой активированной кислоты в фильтрате. ЕЮАс удаляли под вакуумом, затем добавляли безводный 1)МГ (1,3 мл) с последующим добавлением промежуточного соединения (18) (52,2 мг; 0,18 ммоль) и ЭГЕА (0,213 мл). Смесь перемешивали в течение ночи и затем под глубоким вакуумом удаляли ЭМГ. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой хроматографии (АСЖН2О с 10 мМ ацетата аммония, АСN от 10 до 80% за 20 мин) и чистые фракции лиофилизировали с получением (28,4К)-4-(2-((1К,3К)-1-ацетокси-3-((28,38)-2-((2К,4К)-1,4-диметилпиперидин-2-карбоксамидо)-Н3диметилпентанамидо)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-2-метил-5-(4-нитрофенил)пентановой кислоты (85 мг; 59,3%) в виде бесцветного твердого вещества. ЖХ-МС: 787 [М+1].
Соединение 6
В круглодонную колбу на 25 мл помещали магнитную мешалку и промежуточное соединение (73) (84,5 мг; 0,11 ммоль) и МеОН (5 мл), в атмосфере азота добавляли 10% Р6-С (50 мг; 0,47 ммоль). Смесь гидрировали при использовании баллона, заполненного водородом, в течение 1 ч при комнатной температуре. Предварительная ЖХ/МС показала полное превращение исходного вещества в продукт. Реакционную смесь фильтровали через набивку из диатомита и промывали МеОН на фильтре. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и в конце сушили под глубоким вакуумом с получением (28,4К)-4-(2-((1К,3К)-1-ацетокси-3-((28,38)-2-((2К,4К)-1,4-диметилпиперидин-2-карбоксамидо)-Н3диметилпентанамидо)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-5-(4-аминофенил)-2-метилпентановой кислоты (79 мг; 97%) в виде твердого вещества. ЖХ-МС: 757 [М+1]; ’Н ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ м.д. 8.10 (δ, 1Н) 6.99 (6, 1=8,28 Гц, 2Н) 6.65 (6, 1=8,28 Гц, 2Н) 5.66-5.78 (т, 1Н) 4.71-4.80 (т, 1Н) 4.24-4.43 (т, 2Н) 3.13 (δ, 3Н) 2.77-2.83 (т, 2Н) 2.61-2.71 (т, 1Н) 2.49-2.56 (т, 1Н) 2.44 (δ, 3Н) 2.27-2.40 (т, 2Н) 2.17 (δ, 3Н) 1.86-2.04 (т, 4Н) 1.74-1.83 (т, 1Н) 1.53-1.69 (т, 3Н) 1.31 (ушир. δ, 3Н) 1.17 (6, 1=7,03 Гц, 4Н) 0.981.07 (т, 8Н) 0.93 (6, 1=7,53 Гц, 6Н) 0.83-0.87 (т, 3Н).
- 31 032203
Общая схема синтеза соединений 7-10
Промежуточное соединение 74
К промежуточному соединению на смоле (28) (0,2 г; 0,32 ммоль) добавляли раствор (8)-2-(((9Нфлуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-6-(трет-бутоксикарбониламино)гексановой кислоты (0,300 г; 0,64 ммоль), НАТИ (0,243 г; 0,64 ммоль), 2,4,6-триметилпиридина (0,128 мл; 0,96 ммоль) и Э1ЕА (0,168 мл; 0,96 ммоль) в ЭМБ (4 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, полученную смолу фильтровали, промывали ЭМБ (3х2 мл), МеОН (3х2 мл) и ЭСМ (3х2 мл) и сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХМС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученное промежуточное соединение на смоле (74) использовали на следующей стадии. ЖХ-МС: 1221 (М+1).
К промежуточному соединению на смоле (74) (0,2 г; 0,32 ммоль) добавляли 20%-ный пиперидин в ЭМБ (2 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 мин, полученную смолу фильтровали, промывали ЭМБ (3х3 мл), МеОН (3х3 мл), ЭСМ (3х3 мл), сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХМС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученное промежуточное соединение на смоле (75) использовали на следующей стадии. ЖХ/МС: 999 (М+Н).
Промежуточное соединение 76
- 32 032203
К промежуточному соединению на смоле (75) (0,2 г; 0,32 ммоль) добавляли раствор 2,5диоксопирролидин-1-ил-6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексаноата (0,148 г; 0,48 ммоль) в ΌΜΡ (2 мл) с последующим добавлением Ν-метилморфолина (0,106 мл; 0,96 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, полученную смолу фильтровали, промывали ΌΜΡ (3x3 мл), ЭСМ (3x3 мл), сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХМС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученное промежуточное соединение на смоле (76) использовали на следующей стадии. ЖХ-МС: 1192 (М+1).
Соединение 7
К промежуточному соединению на смоле (76) (0,2 г; 0,32 ммоль) добавляли ЭСМ (1 мл) и ТРА (1 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 мин и фильтровали. Смолу промывали смесью ЭСМ/ТРА (1:1; 3x2 мл), объединенные фильтраты упаривали под вакуумом. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой ВЭЖХ (АСШюда. 0,1% ТРА, АСN от 5 до 75% за 14 мин). Чистые фракции лиофилизировали с получением (28,4К)-4-(2-((1К,3К)-1-ацетокси3-((28,38)-2-((2К,4К)-1,4-диметилпиперидин-2-карбоксамидо)-^этил-3-метилпентанамидо)-4метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-5-(4-((8)-6-амино-2-(6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1ил)гексанамидо)гексанамидо)фенил)-2-метилпентановой кислоты (0,095 г; 22,48%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС: 1092 [М+1]; 1Н ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ м.д. 7.99 (8, 1Н), 7.34 (б, 1 =8,53 Гц, 2Н), 7.10 (б, 1=8,53 Гц, 2Н), 6.66 (8, 2Н), 5.64 (б, 1=10,79 Гц, 1Н), 4.50-4.61 (т, 1Н), 4.21-4.35 (т, 2Н), 3.92 (б, 1=9,29 Гц, 1Н), 3.69 (ушир. 8, 1Н), 3.37 (1, 1=7,15 Гц, 2Н), 3.15-3.35 (т, 4Н), 3.04 (б1, 1=3,58, 1.85 Гц, 1Н), 2.84 (1, 1=7,65 Гц, 2Н), 2.76 (б, 1=7,03 Гц, 2Н), 2.62 (ушир. 8, 2Н), 2.38-2.52 (т, 2Н), 2.25 (1, 1=11,54 Гц, 1Н), 2.16 (1, 1=7,40 Гц, 2Н), 2.04-2.11 (т, 4Н), 1.70-2.00 (т, 7Н) 1.42-1.69 (т, 11Н), 1.34-1.40 (т, 1Н), 1.27 (1, 1=6,78 Гц, 3Н), 1.16-1.24 (т, 2Н), 1.01-1.14 (т, 7Н), 0.90 (б, 1=6,78 Гц, 3Н), 0.94 (б, 1=6,53 Гц, 3Н), 0.84 (1, 1=7,40 Гц, 3Н), 0.79 (б, 1=6,53 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 77
К промежуточному соединению на смоле (28) добавляли раствор (8)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-5-уреидопентановой кислоты (3,88 г; 9,76 ммоль), НАТи (3,71 г; 9,76 ммоль), 2,4,6триметилпиридина (2,59 мл; 19,52 ммоль) и Э1ЕА (3,41 мл; 19,52 ммоль) в ΌΜΡ (38 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, полученную смолу фильтровали, промывали ΌΜΡ (3x100 мл), МеОН (3x100 мл) и ЭСМ (3x100 мл) и сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХМС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученное промежуточное соединение на смоле (77) использовали на следующей стадии. ЖХ-МС: 1150 (М+1).
Промежуточное соединение 78
К промежуточному соединению на смоле (77) добавляли 20%-ный раствор пиперидина в ΌΜΡ (35 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение шести минут. Полученную смолу фильтровали, промывали ΌΜΡ (3x100 мл), МеОН (3x100 мл) и ЭСМ (3x100 мл) и сушили под вакуумом. Не
- 33 032203 большое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХМС, которая показала слабый сигнал. Полученное промежуточное соединение на смоле (78) использовали на следующей стадии. ЖХ-МС: 928 (М+1).
Промежуточное соединение 79
К промежуточному соединению на смоле (78) добавляли раствор (8)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-метилбутановой кислоты (1,529 г; 4,50 ммоль), 4ΑΤυ (1,713 г; 4,50 ммоль), 2,4,6триметилпиридина (1,294 мл; 9,76 ммоль) и ΌΙΡΕΑ (1,705 мл; 9,76 ммоль) в ЭМЕ (20 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, полученную смолу фильтровали, промывали ЭМЕ (3x75 мл), МеОН (3x75 мл) и ЭСМ (3x75 мл) и сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХ/МС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученное промежуточное соединение на смоле (79) использовали на следующей стадии. ЖХ-МС: 1250 (М+1).
Промежуточное соединение 80
К промежуточному соединению на смоле (79) добавляли 20%-ный раствор пиперидина в ЭМЕ (20 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение шести минут и полученную смолу фильтровали, промывали ЭМЕ (3x75 мл), МеОН (3x75 мл) и ЭСМ (3x75 мл) и сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХМС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученное промежуточное соединение на смоле (80) использовали на следующей стадии. ЖХ/МС: 1028 (М+1).
Промежуточное соединение 81
К промежуточному соединению на смоле (80) добавляли раствор 2,5-диоксопирролидин-1-ил-6(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексаноата (1,157 г; 3,75 ммоль) в ЭМЕ (18 мл) с последующим добавлением 4-метилморфолина (1,032 мл; 9,38 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч и полученную смолу фильтровали, промывали ЭМЕ (3x75 мл), МеОН (3x75 мл) и ЭСМ (3x75 мл) и сушили под вакуумом. Небольшое количество смолы отщепляли посредством добавления ΤЕΑ и анализировали посредством ЖХ/МС, которая показала образование требуемого продукта. Промежуточное соединение на смоле (81) использовали на следующей стадии. ЖХ-МС: 1220 (М+1).
Соединение 8
К смоле с промежуточным соединением (81) добавляли раствор ΤЕΑ (2,9 мл; 37,4 ммоль) в ЭСМ (40 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин, полученную смолу фильтровали, промывали дополнительными 50 мл ЭСМ. Объединенные экстракты концентрировали. Неочищенное вещество очищали посредством обращенно-фазовой ВЭЖХ (способ: колонка С18, 0,1%
ΤЕΑ/вода/0,1% ТЕД/ацетонитрил, 0-40%, 30 мин). Чистые фракции лиофилизировали с получением
- 34 032203 (28,4К)-4-(2-(( 1 К,3К)-1 -ацетокси-3-((28,3 8)-2-((2К,4К)-1,4-диметилпиперидин-2-карбоксамидо)-\-этил3-метилпентанамидо)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-5-(4-((8)-2-((8)-2-(6-(2,5-диоксо-2,5дигидро-1 Н-пиррол-1 -ил)гексанамидо)-3 -метилбутанамидо)-5 -уреидопентанамидо)фенил)-2метилпентановой кислоты (0,620 г; 12,38%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС: 1220 (М+1); !Н ЯМР (400 МГц, СП3ОП) δ м.д. 8.03 (δ, 1Н), 7.30-7.44 (т, 2Н), 7.07 (ά, 1=8,53 Гц, 2Н), 6.69 (δ, 2Н), 5.535.68 (т, 1Н), 4.52 -4.63 (т, 1Н), 4.19-4.40 (т, 3Н), 4.01-4.12 (т, 2Н), 3.89-3.99 (т, 1Н), 3.56-3.74 (т, 1Н), 3.33-3.43 (т, 2Н), 3.23-3.32 (т, 1Н), 2.96-3.13(т, 4Н), 2.83-2.95 (т, 1Н), 2.66-2.83 (т, 3Н), 2.57 (ушир. δ, 3Н), 2.40-2.52 (т, 2Н), 2.14-2.24 (т, 3Н), 2.02-2.11 (т, 4Н), 1.87-2.00 (т, 5Н), 1.72-1.87 (т, 4Н), 1.42-1.68 (т, 10Н), 1.16-1.28 (т, 5Н), 1.09 (ά, 1=7,03 Гц, 6Н,) 0.76-0.96 (т, 16Н).
Промежуточное соединение 82
К промежуточному соединению на смоле (38) (0,35 г; 0,56 ммоль) добавляли раствор (8)-2-((((9Нфлуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-6-((трет-бутоксикарбонил)амино)гексановой кислоты (0,525 г; 1,12 ммоль), НАТи (0,426 г; 1,12 ммоль), 2,4,6-триметилпиридина (0,223 мл; 1,68 ммоль) и ЭГРЕА (0,293 мл; 1,68 ммоль) в ЭМЕ (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, получен ную смолу фильтровали, промывали ОМЕ (3x5 мл), МеОН (3x5 мл) и ОСМ (3x5 мл) и сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХМС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученное промежуточное соединение на смоле (82) использовали на следующей стадии. ЖХ/МС: 1221 (М+1).
Промежуточное соединение 83
К промежуточному соединению на смоле (82) добавляли 20%-ный пиперидин в ОМЕ (4 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 минут и полученную смолу отфильтровывали, промывали ОМЕ (3x5 мл), МеОН (3x5 мл), ОСМ (3x5 мл) и сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХ/МС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученное промежуточное соединение на смоле (83) использовали на следующей стадии. ЖХ/МС: 999 (М+1).
Промежуточное соединение 84
К промежуточному соединению на смоле (83) добавляли раствор 2,5-диоксопирролидин-1-ил-6(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексаноата (0,259 г; 0,84 ммоль) в ОСМ (4 мл) с последующим добавлением 4-метилморфолина (0,185 мл; 1,68 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешива ли при комнатной температуре в течение 6 ч, полученную смолу фильтровали, промывали ОМЕ (3x5 мл), МеОН (3x5 мл), ОСМ (3x5 мл), сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы, анализировали посредством ЖХ/МС, которая показала, что взаимодействие завершено. Полученное промежуточное соединение на смоле (84) использовали на следующей стадии. ЖХ-МС: 1192 (М+1).
Промежуточное соединение 85
- 35 032203
К промежуточному соединению на смоле (84) (0,35 г; 0,56 ммоль) добавляли ТБА (0,216 мл; 2,80 ммоль) в БСМ (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток растворяли в БМ8О и очищали посредством обращеннофазовой ВЭЖХ (0,1 ТБА/вода/ацетонитрил, 20-80%, 14 минут). Фракции, содержащие чистый продукт, лиофилизировали с получением (28,4Я)-4-(2-(( 1 Я,3Я)-1 -ацетокси-3 -((28,3 8)-2-( 1,2-диметилпиперидин-2карбоксамидо)^-этил-3-метилпентанамидо)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-5-(4-((8)-6-((третбутоксикарбонил)амино)-2-(6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексанамидо)гексанамидо)фенил)-2-метилпентановой кислоты (0,123 г; 18,42%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: 1192 (М+1).
Соединение 9
К промежуточному соединению (85) (95 мг; 0,08 ммоль) добавляли раствор ТБА (0,123 мл; 1,59 ммоль) в БСМ (1 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток растворяли в БМ8О и очищали посредством обращеннофазовой ВЭЖХ (0,1 ТБА/вода/ацетонитрил, 10-70%, 10 минут). Фракции, содержащие чистый продукт, лиофилизировали с получением (28,4Я)-4-(2-(( 1Я,3Я)-1 -ацетокси-3-((28,3 8)-2-((Я)-1,2-диметилпиперидин-2-карбоксамидо)-№этил-3-метилпентанамидо)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-5-(4-((8)-6амино-2-(6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексанамидо)гексанамидо)фенил)-2-метилпентановой кислоты (53,0 мг; 50,4%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС: 1092 (М+1); 1Н ЯМР (400 МГц, СП3ОП) δ м.д. 7.97 (к, 1Н), 7.36 (б, 1=8,28 Гц, 2Н), 7.11 (б, 1=8,28 Гц, 2Н), 6.65 (к, 2Н), 5.63 (б, 1=11,29 Гц, 1Н), 4.34 (бб, 1=8,28, 5,77 Гц, 1Н), 4.26 (ушир. к, 1Н),3.75-3.60 (т, 1Н), 3.32-3.46 (т, 4Н), 3.30-3.25 (т, 1Н), 2.71-2.90 (т, 5Н), 2.49-2.62 (т, 3Н), 2.27 ((, 1=12,05 Гц, 1Н), 2.17 ((, 1=7,40 Гц, 3Н) 2.00-2.12 (т, 5Н), 1.84-1.96 (т, 3Н), 1.72-1.84 (т, 4Н), 1.58-1.69 (т, 5Н), 1.47-1.56 (т, 4Н), 1.36-1.44 (т, 5Н), 1.14-1.30 (т, 6Н), 1.01-1.10 (т, 4Н), 0.93 (бб, 1=13,93, 6,65 Гц, 7Н), 0.74-0.86 (т, 7Н).
Промежуточное соединение 86
К промежуточному соединению на смоле (75) (0,20 г; 0,16 ммоль) добавляли раствор 2,5диоксопирролидин-1-ил-3-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)пропаноата (85 мг; 0,32 ммоль) в БСМ с последующим добавлением Б1ЕА (0,056 мл; 0,32 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч, полученную смолу промывали БМБ (3х3 мл), БСМ (3х3 мл) и МеОН (3х3 мл) и сушили под вакуумом. Небольшое количество соединения отщепляли от смолы с помощью смеси ТБА/БСМ (1:2). После выпаривания растворителя неочищенный продукт анализировали посредством ЖХ/МС. ЖХ/МС показала, что реакция сочетания завершена. ЖХ/МС: 1050,37 (М+1).
Соединение 10
К промежуточному соединению на смоле (86) (0,20 г; 0,16 ммоль) добавляли смесь ТБА/БСМ (1:2; 3 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин и фильтровали. Смолу промывали БСМ (3х3 мл), все фильтраты объединяли и упаривали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали посредством обращенно-фазовой ВЭЖХ (Н2О и СН3СN с 0,1% ТБА, СН3СN от 5 до 40% в размере 12 СУ (объемов колонки)). Собранные фракции объединяли и лиофилизировали с получением (28,4Я)-4-(2-((1Я,3Я)-1-ацетокси-3
- 36 032203 ((28,38)-2-((2К,4К.)-1,4-диметилпиперидин-2-карбоксамидо)-Ы-этил-3-метилпентанамидо)-4-метилпентил)тиазол-4-карбоксамидо)-5-(4-((8)-6-амино-2-(3-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)пропанамидо)гексанамидо)фенил)-2-метилпентановой кислоты в виде белого порошка (70 мг; 35%). ЖХ/МС: 1050,37 (М+1); '11 ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 7.99 (δ, 1Н), 7.35 (ά, 1=8,5 Гц, 2Н), 7.10 (ά, 1=8,5 Гц, 2Н), 6.65 (δ, 2Н), 5.64 (ά, 1=10,9 Гц, 1Н), 4.56 (ά, 1=8,9 Гц, 1Н), 4.28 (ΐά, 1=11,3, 10,0, 6,1 Гц, 2Н), 3.92 (ά, 1=11,5 Гц, 1Н), 3.69 (д, 1=6,8 Гц, 3Н), 3.31-3.23 (т, 1Н), 3.18 (δ, 1Н), 2.83 (ΐ, 1=7,7 Гц, 3Н), 2.76 (ά, 1=7,1 Гц, 3Н), 2.63 (δ, 3Н), 2.50-2.40 (т, 4Н), 2.25 (ΐ, 1=12,8 Гц, 1Н), 2.06 (δ, 4Н), 2.00-1.69 (т, 8Н), 1.69-1.52 (т, 6Н), 1.53-1.31 (т, 4Н), 1.28 (ά, 1=6,4 Гц, 3Н), 1.08 (ά, 1=7,1 Гц, 7Н), 0.92 (άά, 1=13,7, 6,7 Гц, 7Н), 0.83 (ΐ, 1=7,4 Гц, 4Н), 0.78 (ά, 1=6,6 Гц, 3Н).
Общее описание конъюгации
АЭС, содержащие антитела, могут быть получены стандартными способами, такими как, без ограничения, связывание с помощью альдегида/основания Шиффа, связывание с помощью сульфгидрильного линкера, связывание с помощью кислотолабильных связей, цис-аконитильного линкера, гидразонового линкера, способами, аналогичными описываемым НашЫей, С1ш. Сапсег Кс8. 2004, 10, 7063-7070; Эогошпа еΐ а1., №11. В^есйпо1. 2003, 21(7), 778-784 и ЕгапШсо еΐ а1., Β1οοά, 2003, 102, 1458-1465, и соответствующих модификаций следующего неограничивающего примера.
Антитело обрабатывают в присутствии восстановителя при использовании 40 эквивалентов ТСЕР (трис-2-карбоксиэтиленфосфин) в ΡΒ8 (фосфатно-солевом буфере) при рН 7,2 и 1 мМ ЕЭТА (этилендиаминтетрауксусная кислота) в течение 3 ч при 37°С для удаления молекул, содержащих реакционноспособные тиольные группы, таких как цистеин, глутатион, металлы, и восстановления межцепочечных дисульфидных связей в антителе. За этой стадией следует два цикла диализа в ΡΒ8 при рН 7,2, 1 мМ ЕЭТА при 4°С при использовании диализных кассет с М\УСО (номинальное отсечение по молекулярной массе) 10000 Да (Тйегто 8с1епбйс). Проводят преобразование дисульфидных связей в антителе посредством окисления дегидроаскорбиновой кислотой в течение 4 ч при 25°С в ΡΒ8 при рН 7,2, 1 мМ ЕЭТА. После этого 20 молярных эквивалентов соединения формулы II конъюгируют через реакционноспособные тиольные группы антитела путем инкубирования в течение 1 ч при 25°С в ΡΒ8 при рН 7,2, 1 мМ ЕЭТА, 10% об./об. ЭМ8О (диметилсульфоксид) (Тйегто 8с1епбйс). Конъюгаты очищают посредством фильтрации. Реакцию конъюгации останавливают посредством добавления 4 молярных эквивалентов Νацетилцистеина (8щта-АИпсй). Проводят диализ конъюгатов антитело-лекарственное средство при 4°С в течение ночи при использовании 20К М\УСО кассеты в 5 мМ NаΡ04 при рН 6 и затем очищают при использовании картриджа объемом 5 мл с керамическим гидроксиапатитом (СНТ) типа I (Βω^ιά). Конъюгаты элюируют с картриджа при использовании 10 мМ NаΡО4 при рН 6 и линейного ингредиента от 0 до 2 М №С1, и их можно концентрировать и изготавливать в виде препарата посредством замены буфера при использовании диализа в 20 мМ гистидин-НС1 при рН 6,0.
Анализ пролиферации ΐη νϊίΐ'ο
Для определения относительной цитотоксичности соединений тубулизина по изобретению использовали панель линий раковых клеток человека (Όυ 145, ΝΠ-Ν87, и Μ^Α-ΜΒ-361), полученную из Американской коллекции тканевых культур (АТСС) (Ρ.Θ. Βοx 1549, Μаηаδδа, УА 20108 (и8А)). Клетки высевали в планшеты с культуральными средами с плотностью от 2000 до 5000 на лунку обработанных тканевой культурой 96-луночных планшетов в объеме 80 мкл и оставляли для адгезии в течение ночи. Готовили 5х концентрацию каждого тестируемого соединения посредством разбавления тестируемых образцов в культуральной среде. Двадцать микролитров каждого тестируемого образца добавляли к клеткам в двух или трех повторностях, так чтобы конечная кривая зависимости дозы находилась в пределах от 4 мкг/мл до 61 пг/мл с шагом серийного разведения 1:4. Обработанные клетки культивировали при 37°С/5% СО2 в течение периода времени от 72 до 144 ч. Для определения относительной цитотоксичности использовали анализ жизнеспособности люминесцирующих клеток (Тйе Се11Т1(ег-С1о Ειιιηίικδсеп! У1аЫ1йу Αδδау) от Гготеда. Вкратце, 100 мкл реагента Се11Т1(ег-С1о добавляли в каждую лунку, оставляли для инкубирования в течение 10 минут при комнатной температуре при слабом перемешивании и затем считывали оптическую плотность каждого образца при 560 нм при использовании люминометра ЕпУШоп от Ρе^к^п Е1тег. Процент жизнеспособности клеток подсчитывали с помощью следующей формулы: (средняя люминесценция обработанных образцов/средняя люминесценция контрольных (необработанных) образцов)х 100. Значения КА, определяли при использовании нелинейного регрессионного анализа методом логистической регрессии с помощью программы Сгарй^М Ρπδΐη. Не все соединения были проанализированы в отношении всех клеточных линий. В табл. I представлены данные анализа.
- 37 032203
Соединение 011145 1С50 (нМ)
Соединение 1 0,2
Соединение 2 0,5
Соединение 3 0,2
Соединение 4 1,3
Соединение 5 0,9
Соединение 6 4
Таблица I
НСТ1161С50 (нМ) МВ231 1С50 (нМ)
,6 2,5
Νϋ Νϋ
Νϋ Νϋ
1,8 3,9
0,5 3,4
1,9 6,6
ΝΏ - не определяли.
Все ссылки, процитированные здесь, включая патенты, заявки на патенты, документы, учебные пособия и тому подобное, и ссылки, процитированные в них, если только они уже не раскрыты, таким образом включены здесь посредством ссылки во всей своей полноте во всех отношениях.

Claims (13)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Соединение, имеющее структуру формулы I или его фармацевтически приемлемая соль, где К1 представляет собой С113 или С^-С^, К2 представляет собой Η или СИ3, К3 представляет собой Η или ΝΗ2 и η равен 1 или 2.
  2. 2. Соединение по п.1, где η равен 1, К1 представляет собой метил, К2 представляет собой метил и К3 представляет собой ΝΗ2.
    формулы (Ей) формулы (Пу) формулы (IV)
    - 38 032203 или формулы (Ινι)
  3. 4. Соединение, имеющее структуру формулы II или его фармацевтически приемлемая соль, где К1 представляет собой СН3 или СН2-СН3, К2 представляет собой Н или СН3,
    К4 представляет собой СН3, (СНД^г или (СН2)3ННС(=О)НН2, К5 представляет собой Н, С(СН3)(СН3),
    К6 представляет собой ХНС(=О) или СН2;
    η равен 1 или 2 и т равен 0, 1, 2 или 3.
  4. 5. Соединение по п.4, где η равен 1, К1 представляет собой метил, К2 представляет собой метил и К3 представляет собой N112.
  5. 6. Соединение по п.4, где η равен 1, т равен 1, К1 представляет собой метил, К2 представляет собой метил, К3 представляет собой ХН2, К4 представляет собой (СН2)4ХН2, К5 представляет собой Н и К6 представляет собой СН2.
  6. 7. Соединение формулы (Ш)
    - 39 032203 или формулы (Μίν)
  7. 8. Конъюгат антитело-лекарственное средство, представляющий собой конъюгат соединения по любому из пп.4-7, где антитело является специфическим к раковому антигену.
  8. 9. Конъюгат антитело-лекарственное средство по п.8, где антитело представляет собой моноклональное антитело.
  9. 10. Конъюгат антитело-лекарственное средство по п.8 или 9, где антитело представляет собой алемтузумаб, бевацизумаб, брентуксимаб, цетуксимаб, гемтузумаб, ипилимумаб, офатумумаб, панитумумаб, ритуксимаб, тозитумомаб или трастузумаб.
  10. 11. Фармацевтическая композиция для лечения рака, содержащая (1) соединение по любому из пп.1-7 или (2) конъюгат антитело-лекарственное средство по любому из пп.8-10.
  11. 12. Применение соединения по любому из пп.1-7 для лечения рака.
  12. 13. Применение конъюгата антитело-лекарственное средство по любому из пп.8-10 для лечения рака.
  13. 14. Применение по п.12 или 13, где субъект страдает от плоскоклеточного рака, мелкоклеточного рака легкого, немелкоклеточного рака легкого, рака желудочно-кишечного тракта, лимфомы Ходжкина, неходжкинской лимфомы, рака поджелудочной железы, глиобластомы, глиомы, рака шейки матки, рака яичника, рака печени, рака мочевого пузыря, рака молочной железы, рака толстой кишки, колоректального рака, карциномы эндометрия, миеломы, карциномы слюнной железы, рака почки, базальноклеточной карциномы, меланомы, рака предстательной железы, рака вульвы, рака щитовидной железы, рака яичка, рака пищевода, видов рака головы и шеи, слизеобразующего рака яичников, холангиокарциномы или папиллярного рака почки.
EA201691963A 2014-04-11 2015-04-10 Производные тубулизина EA032203B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461978460P 2014-04-11 2014-04-11
PCT/US2015/025235 WO2015157594A1 (en) 2014-04-11 2015-04-10 Tubulysin derivatives

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201691963A1 EA201691963A1 (ru) 2017-06-30
EA032203B1 true EA032203B1 (ru) 2019-04-30

Family

ID=54264545

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201691963A EA032203B1 (ru) 2014-04-11 2015-04-10 Производные тубулизина

Country Status (19)

Country Link
US (2) US9427479B2 (ru)
EP (1) EP3129362A4 (ru)
JP (1) JP2017510661A (ru)
KR (1) KR20160142392A (ru)
CN (1) CN106458942A (ru)
AR (1) AR100006A1 (ru)
AU (1) AU2015243379B2 (ru)
CA (1) CA2945318A1 (ru)
CL (1) CL2016002548A1 (ru)
EA (1) EA032203B1 (ru)
IL (1) IL247822A0 (ru)
MA (1) MA39862A (ru)
MX (1) MX2016013373A (ru)
NZ (1) NZ725131A (ru)
PH (1) PH12016501995A1 (ru)
SG (1) SG11201608203RA (ru)
TW (1) TW201625662A (ru)
UY (1) UY36075A (ru)
WO (1) WO2015157594A1 (ru)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9427479B2 (en) 2014-04-11 2016-08-30 Medimmune Llc Tubulysin derivatives
JP2017512765A (ja) 2014-04-11 2017-05-25 メディミューン，エルエルシー 二重特異性ｈｅｒ２抗体
CA2977589A1 (en) * 2015-02-25 2016-09-01 William Marsh Rice University Desacetoxytubulysin h and analogs thereof
SI3374398T1 (sl) 2015-11-10 2020-07-31 Medimmune, Llc Vezavne molekule, specifične za ASCT2 in njihove uporabe
MX2018006218A (es) 2015-12-04 2018-09-05 Seattle Genetics Inc Conjugados de compuestos de tubulisina cuaternizada.
US11793880B2 (en) 2015-12-04 2023-10-24 Seagen Inc. Conjugates of quaternized tubulysin compounds
WO2017134547A1 (en) * 2016-02-01 2017-08-10 Pfizer Inc. Tubulysin analogs and methods for their preparation
PE20190353A1 (es) 2016-04-15 2019-03-07 Macrogenics Inc Moleculas de union b7-h3 novedosas, conjugados anticuerpo-farmaco de los mismos y metodos de uso de los mismos
CN109862919A (zh) 2016-10-11 2019-06-07 免疫医疗有限公司 抗体-药物缀合物联合免疫介导的治疗剂
AU2018311503C1 (en) 2017-08-01 2023-11-30 Medimmune, Llc BCMA monoclonal antibody-drug conjugate
EP3621652A4 (en) * 2017-12-31 2021-01-13 Hangzhou DAC Biotech Co, Ltd CONJUGATE OF ANALOGUE OF TUBULYSIN WITH BRANCHED LINKS
CN109456212A (zh) * 2018-12-03 2019-03-12 康化（上海）新药研发有限公司 一种沙库比曲中间体的合成方法
TWI753252B (zh) * 2019-05-03 2022-01-21 中國大陸商杭州多禧生物科技有限公司 含支鏈連接體的Ｔｕｂｕｌｙｓｉｎ同系物偶聯物
JP2022539076A (ja) * 2019-06-24 2022-09-07 ハンジョウ ディーエーシー バイオテック シーオー．，エルティディ． 分岐連結体を有する細胞結合分子と細胞毒性剤との共役体
WO2021262910A2 (en) * 2020-06-24 2021-12-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Tubulysins and protein-tubulysin conjugates
US11795225B2 (en) 2020-09-11 2023-10-24 Medimmune Limited Therapeutic binding molecules
KR20240099430A (ko) 2021-11-10 2024-06-28 아스트라제네카 아베 항체 분자 및 접합체
GB202117928D0 (en) 2021-12-11 2022-01-26 Cancer Research Tech Ltd Immunotherapy for cancer
WO2024002938A1 (en) 2022-06-27 2024-01-04 Astrazeneca Ab Combinations involving epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors for the treatment of cancer

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060148014A1 (en) * 2004-12-09 2006-07-06 Sergei Agoulnik Tubulin isotype screening in cancer therapy using hemiasterlin analogs
US20080108820A1 (en) * 2002-03-22 2008-05-08 Campagna Silvio A Hemiasterlin Derivatives and Uses Thereof
US20130129753A1 (en) * 2011-11-17 2013-05-23 Pfizer Inc. Cytotoxic peptides and antibody drug conjugates thereof
US20130197259A1 (en) * 2009-08-03 2013-08-01 Medarex, Inc. Antiproliferative compounds, conjugates thereof, methods therefor, and uses thereof

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1394860B1 (it) * 2009-07-22 2012-07-20 Kemotech S R L Composti farmaceutici
AU2012348017A1 (en) * 2011-12-05 2014-07-03 Igenica Biotherapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and related compounds, compositions, and methods
SG11201506243XA (en) * 2013-02-14 2015-09-29 Bristol Myers Squibb Co Tubulysin compounds, methods of making and use
WO2015155345A1 (en) * 2014-04-11 2015-10-15 Medimmune Limited Antibodies and antibody-drug conjugates
US9427479B2 (en) * 2014-04-11 2016-08-30 Medimmune Llc Tubulysin derivatives
JP2017512765A (ja) * 2014-04-11 2017-05-25 メディミューン，エルエルシー 二重特異性ｈｅｒ２抗体

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080108820A1 (en) * 2002-03-22 2008-05-08 Campagna Silvio A Hemiasterlin Derivatives and Uses Thereof
US20060148014A1 (en) * 2004-12-09 2006-07-06 Sergei Agoulnik Tubulin isotype screening in cancer therapy using hemiasterlin analogs
US20130197259A1 (en) * 2009-08-03 2013-08-01 Medarex, Inc. Antiproliferative compounds, conjugates thereof, methods therefor, and uses thereof
US20130129753A1 (en) * 2011-11-17 2013-05-23 Pfizer Inc. Cytotoxic peptides and antibody drug conjugates thereof

Also Published As

Publication number Publication date
US20160339114A1 (en) 2016-11-24
US9427479B2 (en) 2016-08-30
NZ725131A (en) 2018-03-23
IL247822A0 (en) 2016-11-30
EP3129362A1 (en) 2017-02-15
WO2015157594A1 (en) 2015-10-15
PH12016501995A1 (en) 2017-01-09
JP2017510661A (ja) 2017-04-13
UY36075A (es) 2015-10-30
US10159745B2 (en) 2018-12-25
CL2016002548A1 (es) 2017-02-24
AU2015243379B2 (en) 2018-02-01
CA2945318A1 (en) 2015-10-15
AR100006A1 (es) 2016-08-31
EP3129362A4 (en) 2017-08-23
EA201691963A1 (ru) 2017-06-30
TW201625662A (zh) 2016-07-16
MX2016013373A (es) 2017-05-02
KR20160142392A (ko) 2016-12-12
CN106458942A (zh) 2017-02-22
AU2015243379A1 (en) 2016-11-03
MA39862A (fr) 2017-02-15
SG11201608203RA (en) 2016-10-28
US20150291657A1 (en) 2015-10-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA032203B1 (ru) Производные тубулизина
AU2021202467B2 (en) Bridge Linkers for Conjugation of Cell-Binding Molecules
JP7138350B2 (ja) 共役連結体、該連結体を含有する細胞結合分子－薬物共役体、並びに該共役体及び連結体の使用及び製造方法
CN109912683B (zh) 一种细胞毒素分子、偶联物及其制备方法和应用
JP6700321B2 (ja) 細胞結合分子の特異的共役体
CA3013412C (en) Specific conjugation linkers, specific immunoconjugates thereof, methods of making and uses such conjugates thereof
CA2991975C (en) Novel linkers and their uses in specific conjugation of drugs to a biological molecule
JP2023530128A (ja) 細胞結合分子とカンプトテシン類縁体との共役体
NZ764814A (en) A conjugate of a tubulysin analog with branched linkers
JP2024028815A (ja) チューブリシン類縁体と細胞結合分子との共役体の製剤
EP3862023A1 (en) Conjugates of cell-binding molecules with cytotoxic agents
EP3991752A1 (en) Cell-binding molecule-tubulysin derivative conjugate and preparation method therefor
JP2022172122A (ja) 細胞結合分子の共役のための架橋連結体
CA3062977A1 (en) Peptidic linkers and cryptophycin conjugates, useful in therapy, and their preparation
JP2020063254A (ja) 細胞結合分子の特異的共役体
JP2023159139A (ja) 新規な連結体及び生体分子と薬物との特異的共役におけるその使用
NZ795845A (en) A conjugate of a tubulysin analog with branched linkers
EA045708B1 (ru) Новые пептидные линкеры и конъюгаты на основе криптофицина, их получение и их терапевтическое применение

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM RU