TWI753252B - 含支鏈連接體的Tubulysin同系物偶聯物 - Google Patents
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本發明涉及含有支鏈連接體的Tubulysin同系物與細胞結合劑的偶聯和偶聯物,以便更好地遞送偶聯物和靶向殺滅異常細胞。本發明還涉及Tubulysin同系物與細胞結合劑的偶聯方法,以及使用該偶聯物靶向治療癌症、感染和自身免疫疾病的方法。
Description
本發明涉及以含支鏈(側鏈)連接體偶聯Tubulysin同系物與細胞結合分子,產生的偶聯物具有更好的藥代動力學性質、從而能更精確地靶向殺死異常細胞。本發明還涉及Tubulysin同系物與細胞結合劑的偶聯方法,以及使用該偶聯物靶向治療癌症、感染和自身免疫疾病的方法。
Adcetris治療複發或難治性霍奇金淋巴瘤的臨床成功(Okeley,N.等Hematol Oncol.Clin.North.Am,2014,28,13-25;Gopal,A.,等,Blood 2015,125,1236-43)和Kadcyla用於治療復發的HER2陽性乳腺癌的成功(Peddi,P.,Hurvitz,S.,Ther.Adv.Med.Oncol.2014,6(5),202-9;Lambert,J.和Chari,R.,J.Med.Chem.2014,57,6949-64)證明瞭抗體藥物偶聯物(ADC)是一種非常有前景的癌症靶向治療方法。ADC成功的重要因素包括其中的三個重要組成部分,即單克隆抗體、細胞毒性分子和連接體,以及連接體-細胞毒性分子的連接位點(L.Ducry和B Stump,Bioconjugate Chem.,2010,21,5-13;GS Hamilton,Biologicals 2015,43,318-32)。對於ADC各組分的研究已持續有三十年的歷史。連接體需要滿足可以和藥物上特定的反應性官能團反應,在人體血液循環系統具有穩定性,並且在與抗原結合和細胞內吞後要容易釋放藥物,尤其重要的是連接體-細胞毒性分子一旦在血液循環中脫靶後不能損害正常組織,現有的連接技術仍然有限(Ponte,J.等,Bioconj.Chem.,2016,27(7),1588-98;Dovgan,I.等Sci.Rep.2016,6,30835;Ross,P.L.和Wolfe,J.L.,J Pharm.Sci.105(2),391-7;Chen,T.等J.Pharm.Biomed.Anal.,2016,117,304-10)。
早期ADC主要用於靶向治療液體腫瘤,使用的連接體很不穩定,遊離藥物在血液循環中被釋放和進而出現脫靶毒性(B和er,N.H.等,Clin.Adv.Hematol.Oncol.,2012,10,1-16)。當前一代ADC上的連接體更穩定,細胞毒性劑地活性也更高(Behrens,C.R.和Liu,B.,mAbs,2014.6,46-53)。然而,脫靶
毒性目前仍然是ADC藥物開發中的主要挑戰之一(Roberts,S.A.等,Regul.Toxicol.Pharmacol.2013,67,382-91)。例如在臨床實踐中T-DM1(Kadcyla®)使用了穩定的(不可切割的)MCC連接體,它對HER2陽性患有轉移性乳腺癌(mBC)或已經接受了相應治療或在輔助治療的六個月內HER2腫瘤復發的患者有很大益處(Peddi,P.和Hurvitz,S.,Ther.Adv.Med.Oncol.2014,6(5),202-209;Piwko C.等,Clin Drug Investig.2015,35(8),487-93;Lambert,J.和Chari,R.,J.Med.Chem.2014,57,6949-64)。但是,在臨床試驗中T-DM1作為HER2陽性無法切除的局部晚期或轉移性乳腺癌患者的一線治療藥物已經失敗,作為HER2陽性晚期胃癌的二線治療藥物,與其產生的毒副作用相比,它對患者的益處不大(Ellis,PA,等,J.Clin.Oncol.2015,33(2015 ASCO會議摘要507);Shen,K.等,Sci Rep.2016,6,23262;de Goeij,B.E.和Lambert,J.M.Curr Opin Immunol 2016,40,14-23;Barrios,C.H.等,J Clin Oncol 2016,34,(2016 ASCO會議摘要593)。
為瞭解決脫靶毒性的問題,ADC化學研發的一個方向就是,將連接體-細胞毒性劑組分和偶聯化學擴展,而不僅僅應用單個的細胞毒性劑,同時還解決了ADC的連接體-細胞毒性劑對目標疾病的活性問題(Lambert,JM Ther Deliv 2016,7,279-82;Zhao,RY等,2011,J.Med.Chem.54,3606-23)。許多藥物的研發者和學術機構都集中力量來開發新型的可靠的特異偶聯連接體,定點ADC偶聯方法,似乎這些ADC的循環半衰期更長,療效更高,能降低脫靶毒性,ADC具有窄的體內藥代動力學(PK)特性,生產工藝的批間一致性更好(Hamblett,K.J.等Clin.Cancer Res.2004,10,7063-70;Adem,Y.T.等,Bioconjugate Chem.2014,25,656-664;Boylan,N.J.Bioconjugate Chem.2013,24,1008-1016;Strop,P.等,Chem.Biol.2013,20,161-67;Wakankar,A.mAbs,2011,3,161-172)。已見報導的這些定點偶聯方法包括:抗體中引入經改造的半胱氨酸(Junutula,J.R.等,Nat.Biotechnol.2008,26,925-32;Junutula,JR,等2010 Clin.Cancer Res.16,4769;US專利8,309,300;7,855,275;7,521,541;7,723,485,WO2008/141044),硒代半胱氨酸(Hofer,T.等,Biochemistry 2009,48,12047-57;Li,X.等,Methods 2014,65,133-8;US專利8,916,159),含全氟芳香族試劑標籤的半胱氨酸(Zhang,C.等,Nat.Chem.2015,8,1-9),硫代海藻糖(Okeley,N.M.等,Bioconjugate Chem.2013,24,1650),非天然氨基酸(Axup,J.Y.等,Proc.Nat.Acad.Sci.USA.2012,109,16101-6;Zimmerman,E.S.等,2014,Bioconjug.Chem.25,351-361;Wu,P.,等,2009 Proc.Natl.
Acad.Sci.106,3000-5;Rabuka,D.,等,Nat.Protoc.2012,7,1052-67;美國專利8,778,631和美國專利申請號.20100184135,WO2010/081110;WO2006/069246,2007/059312;美國專利7,332,571,7,696,312和7,638,299;WO2007/130453,美國專利7,632,492和7,829,659);分子間雙硫鍵被還原後通過下列基團再成橋:二溴馬來醯胺(Jones,MW等.J.Am.Chem.Soc.2012,134,1847-52),雙碸試劑(Badescu,G.等.Bioconjug.Chem.2014,25,1124-36;WO2013/190272,WO2014/064424)和雙溴噠嗪二酮(Maruani,A.等.Nat.Commun.2015,6,6645);半乳糖和唾液酸轉移酶(Zhou,Q.等.Bioconjug.Chem.2014,25,510-520;美國專利申請號20140294867 for Sanofi-Genzyme),甲醯甘氨酸生成酶(FGE)(Drake,PM等.Bioconj.Chem.2014,25,1331-41;Carrico,IS等美國專利7,985,783;8,097,701;8,349,910,和美國專利申請號20140141025,20100210543),磷酸泛醯巰基乙胺基轉移酶(PPTases)(Grünewald,J.等.Bioconjug.Chem.2015,26,2554-62),分選酶A(Beerli,RR,等.PLoS One 2015,10,e0131177),用茂原鏈輪絲菌轉穀氨醯胺酶引入的穀氨醯胺標籤(mTG)(Strop,P.,Bioconj.Chem.,2014,25,855-62;Strop,P.,等.,Chem.Biol.2013,20,161-7;美國專利8,871,908),或是用微生物轉穀氨醯胺酶(MTGase)引入的穀氨醯胺標籤(Dennler,P.,等,2014,Bioconjug.Chem.25,569-78;Siegmund,V.等.Angew.Chemie-Int.Ed.2015,54,13420-4;美國專利申請號20130189287;美國專利7,893,019),通過酶或細菌在蛋白質主鏈外形成異肽鍵-肽鍵(Kang,HJ,等.Science 2007,318,1625-8;Zakeri,B.等.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2012,109,E690-7;Zakeri,B.& Howarth,MJ Am.Chem.Soc.2010,132,4526-7)。
我們已經公開了幾種偶聯方法,重新橋接天然抗體鏈間二硫化物被還原產生的一對硫醇,例如使用溴馬來醯亞胺和二溴馬來醯亞胺連接體(WO2014/009774),2,3-二取代琥珀酸/2-單取代/2,3-二取代富馬酸或馬來酸連接體(WO2015/155753,WO20160596228),乙炔二羧基連接體(WO2015/151080,WO20160596228)或肼連接體(WO2015/151081)。相較於與抗體上的半胱氨酸或賴氨酸殘基偶聯的傳統非選擇性方法相比,用這些連接體和偶聯方法製備的ADC的治療視窗更大。在此我們公開一種含有長支鏈連接體的Tubulysin偶聯物。長支鏈連接體可以防止抗體藥物偶聯物被水解酶如蛋白酶或酯酶等水解,使偶聯物在循環系統中更加穩定。
Tubulysin是一類高效的細胞毒性劑,它在本領域廣為熟知,可以基於已知方法從天然產物中分離或通過有機合成的方法製備(如Balasubramanian,R.,等.J.Med.Chem.,2009,52,238-40;Wipf,P.,等.Org.Lett.,2004,6,4057-60;Pando,O.,等.J.Am.Chem.Soc.,2011,133,7692-5;Reddy,J.A.,等.Mol.Pharmaceutics,2009,6,1518-25;Raghavan,B.,等.J.Med.Chem.,2008,51,1530-33;Patterson,A.W.,等.J.Org.Chem.,2008,73,4362-9;Pando,O.,等.Org.Lett.,2009,11(24),5567-9;Wipf,P.,等.Org.Lett.,2007,9(8),1605-7;Friestad,G.K.,Org.Lett.,2004,6,3249-52;Peltier,H.M.,等.J.Am.Chem.Soc.,2006,128,16018-9;Chanrasekhar,S.,等J.Org.Chem.,2009,74,9531-4;Liu,Y.,等.Mol.Pharmaceutics,2012,9,168-75;Friestad,G.K.,等.Org.Lett.,2009,11,1095-8;Kubicek,K.,等.,Angew Chem Int Ed Engl,2010.49:4809-12;Chai,Y.,等.,Chem Biol,2010,17:296-309;Ullrich,A.,等.,Angew Chem Int Ed Engl,2009,48,4422-5;Sani,M.,等.Angew Chem Int Ed Engl,2007,46,3526-9;Domling,A.,等.,Angew Chem Int Ed Engl,2006,45,7235-9;Zanda,M.,等,Can.Pat.Appl.CA 2710693(2011);Chai,Y.,等.Eur.Pat.Appl.2174947(2010),WO 2010034724;Leamon,C.等,WO2010033733,WO 2009002993;Ellman,J.,等,PCT WO2009134279;WO 2009012958;美國專利申請20110263650,20110021568;Matschiner,G.,等,WO2009095447;Vlahov,I.,等,WO2009055562,WO 2008112873;Low,P.,等,WO2009026177;Richter,W.,WO2008138561;Kjems,J.,等,WO 2008125116;Davis,M.;等,WO2008076333;Diener,J.;等,美國專利申請20070041901,WO2006096754;Matschiner,G.,等,WO2006056464;Vaghefi,F.,等,WO2006033913;Doemling,A.,Ger.Offen.DE102004030227,WO2004005327,WO2004005326,WO2004005269;Stanton,M.,等,美國專利申請20040249130;Hoefle,G.,等,Ger.Offen.DE10254439,DE10241152,DE10008089;Leung,D.,等,WO2002077036;Reichenbach,H.,等,Ger.Offen.DE19638870;Wolfgang,R.,US20120129779;Chen,H.,美國專利申請20110027274。我們先前公開了用於靶向治療癌症,感染和自身免疫疾病的Tubulysin偶聯物(PCT/IB2012/053554)的構建。本發明中的含有長支鏈連接體的Tubulysin偶聯物在靶向傳送期間半衰期增加,在血液循環中對非靶細胞、組織或器官的暴露最小,導致脫靶毒性降低。
本發明描述了連接Tubulysin同系物與抗體的支鏈連接體,還描述了使用該連接體將Tubulysin同系物與抗體偶聯的方法。
其中“_”代表單鍵;n為1到30;T是細胞結合劑或分子,選自抗體、單鏈抗體、與靶細胞結合的抗體片段、單克隆抗體、單鏈單克隆抗體、結合靶細胞的單克隆抗體片段、嵌合抗體、結合靶細胞的嵌合抗體片段、結構域抗體、結合靶細胞的結構域抗體片段、adnectin類抗體、DARPin蛋白、淋巴因子、激素、維生素、生長因子、集落刺激因子、營養轉運分子(轉鐵蛋白)和/或连接在白蛋白、聚合物、樹狀大分子、脂質體、納米粒子、囊泡或(病毒)衣殼上的細胞結合肽、蛋白质或小分子;L1和L2是由C、N、O、S、Si和P等原子構成的鏈狀結構,優選具有0-500個原子的,共價連接到W和V1,V1和V2。構成L1和L2的原子可以以任何化學方式相組合,例如形成亞烷基、亞烯基和亞炔基、醚、聚氧化烯、酯、胺、亞胺、多胺、肼、腙、醯胺、脲、氨基脲、二氨基脲、烷氧基胺、氨基甲酸酯、氨基酸、肽、醯氧基胺、異羥肟酸或上述的組合。優選的L1和L2,相同或不同,獨立地選自於O、NH、N、S、P、NNH、NHNH、N(R3)、N(R3)N(R3’)、CH、CO、C(O)NH、C(O)O、NHC(O)NH、NHC(O)O;如下列結構式的聚乙烯氧基:(OCH2CH2)pOR3、或(OCH2CH(CH3))pOR3、或NH(CH2CH2O)pR3、或NH(CH2CH(CH3)O)pR3、或N[(CH2CH2O)pR3]-[(CH2CH2O)p’R3’]或(OCH2CH2)pCOOR3、或CH2CH2(OCH2CH2)pCOOR3,其中p和p’是獨立選自0到約1000的整數,或它們的組合;C1-C8烷基;C2-C8雜烷基、烷基環烷基、雜環烷基;C3-C8芳基、芳烷基、雜環、碳環、環烷基、雜烷基環烷基、烷基羰基、雜芳基;或(Aa)r,r=1-12(1至12個氨基酸單位),包括天然或非天然氨基酸,相同或不同序列的二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽、十肽、十一肽或十二肽單元;W是一個延展體單元,通常是自毀滅的間隔體、一個多肽單元、腙、
二硫化物、硫醚、酯或醯胺鍵;w是1或2或3;V1和V2是獨立的間隔體單元,選自O,NH,S,C1-C8烷基;C2-C8雜烷基、烯基或炔基;C3-C8芳基、雜環、碳環、環烷基、烷基環烷基、雜環烷基、雜芳烷基、雜烷基環烷基,或烷羰基;或(Aa)r、r=1-12(1-12個氨基酸單元),包括天然或非天然氨基酸,相同或不同序列的二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽、十肽、十一肽或十二肽單元;或(CH2CH2O)p、p為0-1000;v1和v2獨立為0、1或2,但v1和v2不同時為0,當v1或v2為0時,意味著側鏈Q1或Q2片段缺省。
Q1和Q2獨立地由式(I-q1)表示:
其中是連接至L1或L2的位置,G1和G2獨立地為OC(O),NHC(O),C(O),CH2,NH,OC(O)NH,NHC(O)NH,O,S,B,P(O)(OH),NHP(O)(OH),NHP(O)(OH)NH,CH2P(O)(OH)NH,OP(O)(OH)O,CH2P(O)(OH)O,NHS(O)2,NHS(O)2NH,CH2S(O)2NH,OS(O)2O,CH2S(O)2O,Ar,ArCH2,ArO,ArNH,ArS,ArNR1,(Aa)r,(r=1-12);X1和X2獨立地為O,CH2,S,NH,N(R1),+NH(R1),+N(R1)(R2),C(O),OC(O),OC(O)O,OC(O)NH,NHC(O)NH;Y2為O,NH,NR1,CH2,S;G3為OH,SH,OR1,SR1,OC(O)R1,NHC(O)R1,C(O)R1,CH3,NH2,NR1,+NH(R1),+N(R1)(R2),C(O)OH,C(O)NH2,NHC(O)NH2,BH2,BR1R2,P(O)(OH)2,NHP(O)(OH)2,NHP(O)(NH2)2,S(O)2(OH),(CH2)q1C(O)OH,(CH2)q1P(O)(OH)2,C(O)(CH2)q1C(O)OH,OC(O)(CH2)q1C(O)OH,NHC(O)(CH2)q1C(O)OH,CO(CH2)q1P(O)(OH)2,NHC(O)O(CH2)q1C(O)OH,OC(O)NH(CH2)q1C(O)OH,NHCO(CH2)q1P(O)(OH)2,NHC(O)(NH)(CH2)q1C(O)OH,CONH(CH2)q1P(O)(OH)2,NHS(O)2(CH2)q1C(O)OH,CO(CH2)q1S(O)2(OH),NHS(O)2NH(CH2)q1C(O)OH,OS(O)2NH(CH2)q1C(O)OH,NHCO(CH2)q1S(O)2(OH),NHP(O)(OH)(NH)(CH2)q1C(O)OH,CONH(CH2)q1S(O)(OH),OP(O)(OH)2,(CH2)q1P(O)(NH)2,NHS(O)2(OH),NHS(O)2NH2,CH2S(O)2NH2,OS(O)2OH,OS(O)2OR1,CH2S(O)2OR1,Ar,ArR1,ArOH,ArNH2,ArSH,ArNHR1或(Aa)q1,p1,p2和p3獨立地是0-100,但是不同時為0,q1和q2獨立地是0-24;優選的Q1和Q2獨立地是C2-C90聚羧酸或C-2-C90聚烷基胺,C6-C90寡糖或多糖,C6-C90含季銨陽離子和羧酸陰離子的兩性離子或含季銨陽離子和磺酸陰離子的兩性離子(PSB),可生物降解的聚合物,如聚乳酸/乙醇酸(PLGA)、聚(丙烯
酸酯)、脫乙醯殼多糖、N-(2-羥丙基)甲基丙烯醯胺的共聚物、聚[2-(甲基丙烯醯氧基)乙基磷酸膽鹼](PMPC)、聚-L-谷氨酸、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLG)、聚(乙二醇)(PEG)、聚(丙二醇)(PPG)、聚(乙二醇)改性肽、聚(乙二醇)改性脂質體、聚(乙二醇)改性烷基羧酸、聚(乙二醇)改性烷基胺、透明質酸(HA)(糖胺聚糖)、肝素或硫酸乙醯肝素(HSGAG)、硫酸軟骨素或硫酸皮素(CSGAG)、聚(乙二醇)改性的烷基硫酸鹽、聚(乙二醇)改性的烷基磷酸鹽或聚(乙二醇)改性的烷基季銨鹽;D是具有以下結構式(II)的Tubulysin同系物:
或是藥學上可接受的鹽、水合物或水合鹽;或多晶型結晶;或其光學異構體、外消旋物、非對映異構體或對映異構體,其中-----是獨立地連接至W的連接位點;R1,R2,R3和R4獨立地為H,C1-C8烷基;C2-C8雜烷基、烯基或炔基;C3-C8芳基、芳烷基、環烷基、烷基環烷基、雜環烷基、雜烷基環烷基,碳環或烷羰基;或R1R2、R1R3、R2 R3、R3 R4、R5 R6、R11 R12或R13 R14可形成3-7元的碳環、環烷、雜環、雜環烷、芳環或雜芳環結構;R1和R2獨立地連接至W,它們獨立地可以缺省;Y1是N或CH;R5、R6、R8、R10及R11獨立地是H或C1-C4烷基或雜烷基;R7選自H、R14、-R14C(=O)X1R15或-R14X1R15;X1是O、S、S-S、NH、CH2或NR14;R9選自H、OH、-O-、=O、-OR14、-OC(=O)R14、-OC(=O)NHR14-、-OC(=O)R14SSR15-、OP(=O)(OR14)-、-OC(=O)NR14R15、OP(=O)(OR14)或OR14OP(=O)(OR15);R11選自H、R14、-R14C(=O)R16、-R14X2R16、-R14C(=O)X2,X2指-O-,-S-,-NH-、-N(R14)-、-O-R14-、-S-R14-、-S(=O)-R14-、或-NHR14;R12是R15、-OH、-SH、-NH2、NH、NHNH2、-NH(R15)、-OR15、-R15COR16、-R15COOR16、-R15C(O)NH2、-R15C(O)NHR17、-SR16、R15S(=O)R16、-
R15P(=O)(OR17)2、-R15OP(=O)(OR17)2、-CH2OP(=O)(OR17)2、-R15SO2R17、-R15X2R16和-R15C(=O)X2,X2指-O-、OH、SH、-S-、NH2、-NH-、-N(R15)-、-OR15-、-SR15-、-S(=O)R15-、CH2或-NHR15-;R13和R14獨立地是H、O、S、NH、N(R15)、NHNH、-OH、-SH、-NH2、NH、-NHNH2、-NH(R15)、-OR15、CO、-COX2、-COX2R16、R17、F、Cl、Br、I、SR16、NR16R17、N=NR16、N=R16、NO2、SOR16R17、SO2R16、SO3R16、OSO3R16、PR16R17、POR16R17、PO2R16R17、OP(O)(OR17)2、OCH2OP(O)(OR17)2、OC(O)R17、OC(O)OP(O)(OR17)2、PO(OR16)(OR17)、OP(O)(OR17)OP(O)(OR17)2、OC(O)NHR17;-O-(C4-C12糖苷)、-N-(C4-C12糖苷);C1-C8烷基、雜烷基;C2-C8烯基、炔基、雜烷基、雜環烷基;C3-C8芳基、芳烷基、碳環、環烷基、雜烷基環烷基、烷基羰基、雜芳基、2-8個碳原子的酯、醚或醯胺;或含有1-8個氨基酸的肽(NH(Aa)1-8或CO(Aa)1-8);或結構式是(OCH2CH2)p或(OCH2CH(CH3))p的聚氧乙烯,其中p是0至約1000的整數;或上述基團的組合;X2是O、S、S-S、NH、CH2、OH、SH、NH2、CHR14或NR14;R15、R16及R17獨立地是H、C1-C8烷基、雜烷基;C2-C8烯基、炔基、雜烷基、雜環烷基;C3-C8芳基、芳烷基、碳環、環烷基、雜烷基環烷基、烷基羰基、雜芳基、烷基羰基或是它們的Na+,K+,Cs+,Li+,Ca2+,Mg+,Zn2+,N+(R1)(R2)(R3)(R4),HN+(C2H5OH)3鹽;Y1和Y2獨立地是N或CH;q是0或1;當q=0時,Y3缺省,Y4、Y5、Y6和Y7獨立地是CH、N、NH、O、S或N(R1),此時Y2、Y4、Y5、Y6和Y7形成雜芳環,如呋喃、吡咯、噻吩、噻唑、噁唑和咪唑、吡唑、三唑、四唑、噻二唑;當q=1時,Y3、Y4、Y5、Y6和Y7獨立地是CH或N,此時Y2、Y3、Y4、Y5、Y6和Y7形成芳香環,如苯、吡啶、噠嗪、嘧啶、吡嗪、三嗪、四嗪、噠嗪;本發明的另一方面,含有支鏈連接體的偶聯物的結構式表示如(III):
其中,D、W、w、L1、L2、Q1、Q2、V1、V2、v1、v2、n和T的定義同結構式(I)。
其中,D、W、w、L1、L2、Q1、Q2、V1、V2、v1、v2及n的定義同結構式(I);Lv1是下文所述的官能團。
其中,D、W、w、L1、L2、Q1、Q2、V1、V2、v1、v2及n的定義同結構式(I)。
Lv1和Lv2為相同或不同的反應官能團,這些官能團可以與細胞結合分子上的硫醇、胺、羧酸、硒醇、酚或羥基發生反應。Lv1和Lv2獨立地選自羥基(OH);氟(F);(Cl);溴(Br);碘(I);硝基酚基;N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)基;苯酚基;二硝基苯酚基;五氟苯酚基;四氟苯酚基;三氟苯酚基;二氟苯酚基;一氟苯酚基;五苯酚基;三氟甲磺醯基;咪唑基;二苯酚基;三苯酚基;四苯酚基;1-羥基苯並三唑基;甲苯磺醯基;甲磺醯基;2-乙基-5-苯基異噁唑-3’-磺醯基、酸酐或與其它酸酐作用形成的酸酐,例如乙酸酐、甲酸酐;或與多肽縮合試劑、Mitsunobu反應試劑作用生成的中間體。縮合劑的例子如下:1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺(EDC)、二環己基碳二亞胺(DCC)、N,N’-二異丙基碳二亞胺(DIC)、N-環己基-N’-(2-嗎啉代-乙基)碳二亞胺甲基對甲苯磺酸鹽(CMC或CME-CDI)、1,1’-羰基二咪唑(CDI)、氧-(苯並三唑-1-)基)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸鹽(TBTU)、N,N,N’,N’-四甲基-氧-(1H-苯並三唑-1-基)-六氟磷酸銨(HBTU)、(苯並三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)-六氟磷酸鹽(BOP)、(苯並三唑-1-基氧基)三吡咯烷基六氟磷酸鹽(PyBOP)、氰基膦酸二乙酯(DEPC)、-N,N,N’,N’-四甲基甲脒六氟磷酸鹽、1-[雙(二甲基氨基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑並[4,5-b]吡啶3-氧六氟磷酸鹽(HATU)、1-[(二甲氨基)(嗎啉代)亞甲基]-1H-[1,2,3]三唑並[4,5-b]吡啶-1-鎓3-氧六氟磷酸鹽(HDMA)、2--1,3-二甲基-咪唑六氟磷酸鹽(CIP)、六氟磷酸代吡咯烷酮鎓(PyCloP)、氟-
N,N,N’,N’-雙(四亞甲基)甲脒六氟磷酸鹽(BTFFH)、N,N,N’,N’-四甲基-S-(1-氧代-2-吡啶基)硫脲六氟磷酸鹽、氧-(2-氧代-1(2H)吡啶基)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸鹽(TPTU)、S-(1-氧代-2-吡啶基)N,N,N’,N’-四甲基硫脲四氟硼酸鹽、氧-[(乙氧基羰基)-氰基甲基氨基]-N,N,N’,N’-六氟磷酸四甲基脲(HOTU)、(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代乙基氨基氧基)二甲氨基-嗎啉代-六氟磷酸鹽(COMU)、氧-(苯並三唑-1-基)-N,N,N’,N’-雙(四亞甲基)六氟磷酸鹽(HBPyU)、N-芐基-N’-環己基-碳二亞胺(有或沒有聚合物結合)、二吡咯烷基(N-琥珀醯亞胺基氧基)碳鎓六氟磷酸鹽(HSPyU)、二吡咯烷基六氟磷酸鹽(PyClU)、2--1,3-二甲基咪唑四氟硼酸鹽(CIB)、(苯並三唑-1-基氧基)二呱啶碳六氟磷酸鹽(HBPipU)、氧-(6-苯並三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸鹽(TCTU)、溴代(二甲基氨基)-六氟磷酸鹽(BroP)、丙基膦酸酐(PPACA、T3P®)、2-嗎啉代乙基異氰化物(MEI)、N,N,N’,N’-四甲基-氧-(N-琥珀醯亞胺基)六氟磷酸鹽(HSTU)、2-溴-1-乙基-吡啶鎓四氟硼酸鹽(BEP)、氧-[(乙氧基羰基)氰基-亞甲基氨基]-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸鹽(TOTU)、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉化物(MMTM、DMTMM)、N,N,N’,N’-四甲基-氧-(N-琥珀醯亞胺基)脲四氟硼酸(TSTU)、氧-(3,4-二氫-4-氧代-1,2,3-苯並三嗪-3-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸鹽(TDBTU)、1,1’-(偶氮二羰基)-二呱啶(ADD)、二-(4-芐基)偶氮二羧酸酯(DCAD)、偶氮二羧酸二叔丁酯(DBAD)、偶氮二羧酸二異丙酯(DIAD)、偶氮二羧酸二乙酯(DEAD)。另外,Lv1和Lv2可以是酸酐,或與其它C1-C8酸酐作用形成的酸酐;本發明進一步涉及(I)和(III)中的細胞結合分子-藥物偶聯物的製備方法,以及(I)和(III)中的偶聯物的應用。
定義
“烷基”是指在烷烴上除去一個或兩個氫原子而產生的脂肪烴基團或單價基團。它可以是直鏈或是支鏈的,在鏈中具有C1-C8(1-8個碳原子)。“支鏈”是指直鏈烷基上連接有一個或多個低碳數的烷基,如甲基、乙基或丙基。示例性的烷基包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、正戊基、3-戊基、辛基、壬基、癸基、環戊基、環己基、2,2-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2,2-二甲基戊基、2,3-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2,3,4-三甲基戊基、3-甲基-己基、2,2-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、3,5-二甲基己基、2,4-二甲基戊基、2-甲基庚基、3-甲基庚基、正庚基、異庚基、正辛基和異辛基。C1-C8烷基可以是未被取
代的或被一個或多個基團取代,包括但不限於-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2,-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2、-NHC(O)R’、-SR’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2和-CN;其中每個R’獨立地選自於-C1-C8烷基和芳基。
“雜烷基”指其中1至4個碳原子獨立地被選自O、S和N的雜原子所取代的C2-C8烷基。
“碳環”指含有3到8個碳原子的飽和或不飽和單環,或含有7到13個碳原子的飽和或不飽和雙環。單環碳環有3到6個環原子,典型的有5或6個環原子。雙環碳環有7到12個環原子,構成[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]的雙環系統,或有9個或10個環原子,構成[5、6]或[6,6]的雙環系統。具有代表性的C3-C8的碳環包括但不限於:-環丙基、-環丁基、-環戊基、-環戊二烯基、-環己基、-環己烯基、-1,3-環己二烯基、-1,4-環己二烯基、-環庚基、-1,3-環庚二烯基、-1,3,5-環庚三烯基、-環辛基和-環辛二烯基。
C3-C8碳環可以是未被取代的或被一個或多個基團取代,包括但不限於-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2、-NHC(O)R’、-SR’、-S(O)R’、-S(O)2R’、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2及-CN;其中每個R’獨立地選自-C1-C8烷基和芳基。
“烯基”指含有碳-碳雙鍵的直鏈或支鏈脂肪烴基團,鏈內含有2-8個碳原子。示例性的烯基包括乙烯基、丙烯基、正丁烯基、異丁烯基、3-甲基丁-2-烯基、正戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基。
“炔基”指含有碳-碳三鍵的直鏈或支鏈脂肪烴基團,鏈內含有2-8個碳原子。示例性的炔基包括乙炔基、丙炔基、正丁炔基、2-丁炔基、3-甲基丁炔基、5-戊炔基、正戊炔基、己炔基、庚炔基和辛炔基。
“亞烷基”是指含1-18個碳原子的飽和的支鍊或直鏈或環狀烴基,並帶有兩個通過從母體烷烴的相同或兩個不同碳原子上除去兩個氫原子而產生的一價自由基。典型的亞烷基包括但不限於:亞甲基(-CH2-)、1,2-乙基(-CH2CH2-)、1,3-丙基(-CH2CH2CH2-)、1,4-丁基(-CH2CH2CH2CH2-)等。
“亞烯基”指含2-18個碳原子的不飽和的支鍊或直鏈或環狀烴基,並帶有兩個通過從母體烯烴的相同或兩個不同碳原子上除去兩個氫原子而產生的一價自由基。典型的亞烯基包括但不限於:1,2-亞乙基(-CH=CH-)。
“亞炔基”指含2-18個碳原子的不飽和的支鍊或直鏈或環狀烴基,並帶有兩個通過從母體炔的相同或兩個不同碳原子上除去兩個氫原子而產生的一價自由基。典型的亞炔基包括但不限於:乙炔、炔丙基和4-戊炔基。
“芳基”或“芳香基”指由一個或多個環組成的芳香或雜芳香基團,包含三至十四個碳原子,優選六至十個碳原子。術語“雜芳香基團”是指芳香基團上的一個或幾個碳,最優是一個、兩個、三個或四個碳原子,被氧(O)、氮(N)、矽(Si)、硒(Se)、磷(P)或(S)所取代,優選被氧、硫和氮所取代而產生的基團。術語“芳基”或“芳香基”也指其中一個或幾個氫原子獨立地被-R’、鹵素、-OR’,-SR’、-NR’R’’、-N=NR’、-N=R’、-NR’R’’、-NO2、-S(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)2OR’、-OS(O)2OR’、-PR’R’’、-P(O)R’R’’、-P(OR’)(OR’’)、-P(O)(OR’)(OR’’)或-OP(O)(OR’)(OR’’)所取代而產生的芳香基團。其中R’和R’’獨立地為氫、烷基、烯基、炔基、雜烷基、芳基、芳烷基、羰基或其藥用鹽。
“雜環”指其中一到四個環碳原子獨立地被O、N、S、Se、B、Si或P等雜原子所取代而產生的的環結構。優選的雜原子是O、N和S。在《化學與物理手冊》第78版的225-226頁(The Handbook of Chemistry and Physics,78th Edition,CRC Press,Inc.,1997-1998,p.225 to 226)上也有雜環化合物的相關描述,在此引作參考。優選的非芳基雜環包括環氧基、氮丙啶基、硫雜丙基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、環氧乙烷基、四氫呋喃基、二氧戊環基、四氫吡喃基、二噁烷基、二氧戊環基、呱啶基、呱嗪基、嗎啉基、吡喃基、咪唑啉基、吡咯啉基、吡唑啉基、噻唑烷基、四氫噻喃基、二噻烷基、硫代嗎啉基、二氫吡喃基、四氫吡喃基、二氫吡喃基、四氫吡啶基、二氫吡啶基、四氫嘧啶基、二氫噻喃基、氮雜環庚烷基,以及上述基團與苯基縮合得到的稠環體系。
術語“雜芳基”或“芳基雜環”是指含3到14,優選5至10個原子的芳香性雜環、包含單環、雙環或多環。示例包括吡咯基、吡啶基、吡唑基、噻吩基、嘧啶基、吡嗪基、四唑基、吲哚基、喹啉基、嘌呤基、咪唑基、噻吩基、噻唑基、苯並噻唑基、呋喃基、苯並呋喃基、1,2,4-噻二唑基、異噻唑基、三唑基、四唑基、異喹啉基、苯並噻吩基、異苯並呋喃基、吡唑基、哢唑基、苯並咪唑基、異噁唑基、吡啶基-N-氧化物,以及上述基團與苯基縮合得到的稠環體系。
“烷基”、“環烷基”、“烯基”、“炔基”、“芳基”、“雜芳基”、“雜環”等,也包含各自對應的“亞烷基”、“亞環烷基”、“亞烯基”、“亞炔基”、“亞芳基”、“亞雜芳基”、“亞雜環”等,為論述方便,本專利申請
對它們未做完全區分。
“芳烷基”指一類非環烷基,其中一個與碳原子(通常為末端或sp3碳原子)鍵合的氫原子被芳基取代。典型的芳烷基包括芐基、2-苯基乙-1-基、2-苯基乙烯-1-基、萘基甲基、2-萘基乙-1-基、2-萘基乙-1-基、萘並芐基、2-萘基苯基-1-基等。
“雜芳烷基”指一類非環烷基,其中一個與碳原子(通常為末端或sp3碳原子)鍵合的氫原子被雜芳基取代。雜芳烷基的實例有2-苯並咪唑基甲基、2-呋喃基乙基。
“羥基保護基”的實例包括甲氧基甲基醚、2-甲氧基乙氧基甲基醚、四氫吡喃基醚、芐基醚、對甲氧基芐基醚、三甲基甲矽醚、三乙基矽醚、三異丙基矽醚、叔丁基二甲基矽醚、三苯基甲基矽醚、乙酸酯、取代乙酸酯、特戊酸酯、苯甲酸酯、甲磺酸酯和對甲苯磺酸酯。
“離去基團”指可以被另一個官能團取代的官能團。這些離去基團是本領域公知的、實例包括鹵化物(如化物、溴化物和碘化物)、甲磺醯基、對甲苯磺醯基和三氟甲磺醯基。優選的離去基團選自硝基苯酚基;N-羥基琥珀醯亞胺基(NHS);苯酚基;二硝基苯酚基;五氟苯酚基;四氟苯酚基;二氟苯酚基;一氟苯酚基;五苯酚基;三氟甲磺醯基;咪唑基;酚基;四苯酚基;1-羥基苯並三唑基;甲苯磺醯基;甲磺醯基;2-乙基-5-苯基異噁唑-3’-磺醯基,酸酐或與其它酸酐作用形成的酸酐,例如乙酸酐、甲酸酐;或與多肽縮合試劑、Mitsunobu反應試劑作用生成的中間體。
以下縮寫為本發明所採用,其定義為:Boc,叔丁氧基羰基;BroP,溴代十四烷基鏻六氟磷酸鹽;CDI,1,1’-羰基二咪唑;DCC,二環己基碳二亞胺;DCE,二乙烷;DCM,二甲烷;DEAD,偶氮二甲酸二乙酯;DIAD,偶氮二甲酸二異丙基酯;DIBAL-H,二異丁基氫化鋁;DIPEA或DEA,二異丙基乙胺;DEPC,二乙基氰基磷酸酯;DMA,N,N-二甲基乙醯胺;DMAP,4-(N,N-二甲基氨基)吡啶;DMF,N,N-二甲基甲醯胺;DMSO,二甲基亞碸;DTPA,二亞乙基三胺五乙酸;DTT,二硫蘇糖醇;EDC,1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽;ESI-MS,電噴霧質譜;EtOAc,乙酸乙酯;Fmoc,N-(9-芴基甲氧基羰基);HATU,O-(7-氮雜苯並三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸鹽;HOBt,1-羥基苯並三唑;HPLC,高效液相色譜;NHS,N-羥基琥珀醯亞胺;MeCN,乙腈;MeOH,甲醇;MMP,4-甲基嗎啉;PAB,對氨基苯甲酸;PBS,磷酸鹽緩衝液(pH 7.0-7.5);Ph,苯基;Phe,L-苯丙氨酸;
PyBrop,溴-三-吡咯烷-鏻六氟磷酸鹽;PEG,聚乙二醇;SEC,尺寸排阻色譜;TCEP,三(2-羧乙基)膦;TFA,三氟乙酸;THF,四氫呋喃;Val,纈氨酸;TLC,薄層色譜;UV是紫外線。
“氨基酸”可以是天然或非天然的,優選α-氨基酸。天然氨基酸可以由遺傳密碼所編碼,它們是丙氨酸、精氨酸、天冬醯胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、穀氨醯胺、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、色氨酸和纈氨酸。非天然氨基酸是蛋白質氨基酸的衍生物,包括羥脯氨酸、羊毛硫氨酸、2-氨基異丁酸、脫氫丙氨酸、γ-氨基丁酸(神經遞質)、鳥氨酸、瓜氨酸、β-丙氨酸(3-氨基丙酸)、γ-羧基谷氨酸、硒代半胱氨酸(存在於許多非真核以及大多數真核細胞中、但不是由DNA直接進行編碼)、吡咯賴氨酸(僅在一些古細菌和一種細菌中發現)、N-甲醯基甲硫氨酸(通常是細菌、線粒體和葉綠體中蛋白質中最初的氨基酸)、5-羥色氨酸、L-二羥基苯丙氨酸、三碘甲腺原氨酸、L-3,4-二羥基苯丙氨酸(DOPA)和O-磷酸絲氨酸。術語“氨基酸”還包括氨基酸同系物和模擬物。同系物是具有與天然氨基酸相同結構通式H2N(R)CHCO2H的化合物,其中R在天然氨基酸裡。同系物的實例包括高絲氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸-亞碸和甲硫氨酸甲基鋶。更優的是氨基酸模擬物,它是具有與α-氨基酸的化學結構不同、但是作用方式類似的化合物。天然氨基酸多為“L”立體化學構型,“非天然氨基酸”也用於代表“D”構型的氨基酸。在本專利申請中使用1至8個氨基酸時、其序列優選為蛋白水解酶可識別的序列。許多水解酶識別序列是本領域已知的,可以參見:Matayoshi等.Science 247:954(1990);Dunn等.Meth.Enzymol.241:254(1994);Seidah等.Meth.Enzymol.244:175(1994);Thornberry,Meth.Enzymol.244:615(1994);Weber等.Meth.Enzymol.244:595(1994);Smith等.Meth.Enzymol.244:412(1994);及Bouvier等.Meth.Enzymol.248:614(1995);此處引作參考。特別是選自以下序列:Val-Cit、Ala-Val、Ala-Ala、Val-Val、Val-Ala-Val、Lys-Lys、Ala-Asn-Val、Val-Leu-Lys、Cit-Cit、Val-Lys、Ala-Ala-Asn、Asp-Lys、Asp-Glu、Glu-Lys、Lys、Cit、Ser及Glu。
“糖苷”是糖通過糖苷鍵在其異頭碳上與另一基團鍵合得到的分子。糖苷可以通過O-(產生O-糖苷)、N-(產生糖基胺)、S-(產生硫代糖苷)或C-(產生C-糖苷)糖苷鍵連接,其實驗式為C m (H2O) n (其中m可以不同於n、m、n<36),本發明中的糖苷包括葡萄糖(右旋糖)、果糖(左旋糖)、阿洛糖、阿卓糖、甘露糖、古洛糖、艾杜糖、半乳糖、塔羅糖、半乳糖胺、氨基葡萄糖、唾液酸、N-乙醯氨基葡
萄糖、磺基奎諾糖(6-脫氧-6-磺基-D-吡喃葡萄糖)、核糖、阿拉伯糖、木糖、來蘇糖、山梨糖醇、甘露醇、蔗糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、麥芽糖糊精、棉子糖、葡萄糖醛酸(葡糖苷酸)和水蘇糖。它可以是D或L的構型、5原子環狀呋喃糖的形式、6原子環狀吡喃糖的形式,或是非環形式、α-異構體(異頭碳的-OH在Haworth投影碳原子平面之下)、或β-異構體(異頭碳的-OH在Haworth投影碳原子平面之上)。本發明中亦稱為單糖、二糖、多元醇或含3-6個糖單元的低聚糖。
本發明中的“抗體”指全長免疫球蛋白分子或全長免疫球蛋白分子的免疫活性部分,如含有抗原結合位點的分子,該結合位點免疫特異性地與靶標抗原或部分靶標抗原結合,靶標包括但不限於,癌細胞或產生與自身免疫疾病相關的自免疫抗體的細胞。本發明中的免疫球蛋白可以是免疫球蛋白的任何類型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或子類。免疫球蛋白可以來自任何物種,但優選的免疫球蛋白來源於人、鼠或兔。本發明的抗體優選是單克隆抗體,包括但不限於多克隆、單克隆、雙特異性、人、人源化或嵌合抗體,單鏈抗體,Fv、Fab片段、F(ab’)片段、F(ab’)2片段、由Fab表達庫產生的片段,抗獨特型(抗Id)抗體,CDR和任何能免疫特異性地結合癌細胞抗原、病毒抗原或微生物抗原的上述結構的表位結合片段。
“對映異構體”,也稱為“光學異構體”,是兩個立體異構體中的一個,它們是彼此的鏡像,不可重疊(不等同),就像人的左右手,除非沿著某一平面被翻轉,它們是不可重疊的(僅通過改變方向不能讓雙手重疊)。化合物中的單個手性原子或類似的結構特徵使得該化合物具有兩種可能的結構,它們不可重疊,是彼此的鏡像。在某一化合物中存在的多個手性特徵增加了可能存在的構型的數目,其中可能會有一些互為鏡像。對映體純的化合物是指在檢測方法的能力範圍內,僅具有同一種手性的樣品。在對稱的環境中,兩個對映體可以使平面偏振光(+/-)在相反的方向上等量旋轉(偏振光可以被認為是不對稱的介質),除此之外,它們具有相同的化學性質和物理性質。由於這個原因,它們有時也被稱為光學異構體。光學活性異構體及其等量的對映體的混合物被稱為外消旋體,它對平面偏振光無淨旋轉,因為每個正旋轉(+)都被負旋轉(-)完全抵消。通常兩個對映異構體與其他的對映異構體物質發生不同的化學反應。由於許多生物分子是對映體,因此有時兩種對映體對生物有機體的影響存在顯著差異。例如,在藥物中,通常只有一種對映體可以發生想要的生理作用、而另一種對映體或是活性較低、或無活性,有時甚至產生不良反應。基於這樣的發現,可以開發僅由一種對映體(“對映體純”)組成的藥物以增強藥理學效力,有
時還可以消除一些副作用。
同位素是特定化學元素的質子數相同,中子數不同的不同核素。同一元素的所有同位素具有相同數量的質子。一個原子序數指定一個特定的元素,但非同位素;特定元素原子可以有不同的中子數。核子(質子和中子)的數量是原子的質量數,特定元素的每個同位素具有不同的質量數。例如、碳-12、碳-13和碳-14是碳元素的三種同位素,質量數分別為12,13和14。碳的原子序數為6,意味著每個碳原子都有6個質子,因此這些同位素的中子數分別為6、7和8。氫原子有三種同位素:氕(1H)、氘(2H)和氚(3H),氘的質量是氕的兩倍,氚的質量是氕的三倍。通過動力學同位素效應,同位素替代實驗可用於確定化學反應的機理。同位素替代實驗還可用於研究外源化合物通過吸收和分佈機制進入體內後,身體如何對它產生作用,體內物質的代謝變化(例如通過細胞色素P450或葡萄糖醛酸轉移酶等代謝酶的作用),以及藥物代謝產物的排泄途徑,是為藥代動力學(PK)研究。同位素替代實驗可用於研究藥物的生化和生理作用,包括在動物(包括人類)、微生物或生物組合(例如感染)上所顯現出來的作用,是為藥效學(PD)研究。兩者(PK和PD)一起決定藥物的劑量、益處及副作用。同位素可以採用一種穩定的(非放射性的)或非穩定的元素。藥物的同位素取代物還可能具有與原始藥物不同的治療功效。
“藥學上”或“藥學上可接受的”是指當分子實體和組合物酌情施用於動物或人時,不會產生不利、過敏或其他不良反應。
“藥學上可接受的溶劑化物”或“溶劑化物”是指一種或多種溶劑分子與本發明公開的化合物的結合物。形成藥學上可接受的溶劑合物,溶劑的實例包括但不限於水、異丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。
“藥學上可接受的賦形劑”包括任何載體、稀釋劑、佐劑或其它,例如防腐劑或抗氧化劑、填充劑、崩解劑、潤濕劑、乳化劑、懸浮劑、溶劑、分散介質、包衣劑、抗細菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等。這些介質和藥劑用於藥物活性物質在本領域內是熟知的。任何傳統介質或藥劑,除非與活性成分不相容,也可以考慮將其用於治療組合物中。補充活性成分也可以加入組合物中,成為合適的治療組合。
如本文所用,“藥用鹽”是指所公開化合物的衍生物,通過製備母體化合物的酸鹽或鹼鹽來獲得。藥學上可接受的鹽包括由無毒無機酸或有機酸與母體化合物形成的常規無毒鹽或季銨鹽。例如,所述常規無毒鹽包括衍生自無機酸(例如鹽酸、氫溴酸鹽、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等)的鹽;以及由有機酸(例如乙酸、
丙酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸、甲磺酸、苯磺酸、葡萄糖醛酸、谷氨酸、苯甲酸、水楊酸、甲苯磺酸、草酸、富馬酸、馬來酸及乳酸等製備的鹽。另外的加成鹽包括銨鹽,如三甲胺、葡甲胺、丙三醇等的鹽、金屬鹽、如鈉、鉀、鈣、鋅或鎂鹽。
本發明的藥用鹽可由含有鹼性或酸性部分的母體化合物,通過常規化學方法合成。通常而言,這些鹽可以通過在水或有機溶劑中或兩者的混合物中,向母體化合物裡,加入等當量的適當鹼或酸來製備。一般來說,乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈是非水介質的首選。適用鹽的列表見於1985年由麥克出版公司出版的《雷明頓藥物科學》(Remington’s Pharmaceutical Sciences),其公開內容納入本文作參考。
“施用”或“給藥”是指以任何方式向受試者轉移、遞送、引入或運輸藥物或其他藥劑。這些方式包括口服用藥、局部接觸、靜脈內、腹膜內、肌肉內、病灶內、鼻內、皮下或鞘內給藥。本發明還考慮使用裝置或器械來施用藥劑。這種裝置可以使用主動或被動型傳輸,而且可以是緩釋或快速釋放遞送裝置。
就癌症而言,術語“治療”包括以下任何一項或全部:阻止腫瘤細胞或癌細胞生長、複製,減輕整體腫瘤量,以及改善與該疾病相關的一個或多個症狀。
就自身免疫性疾病而言,術語“治療”包括以下任一項或全部:阻止與自身免疫性疾病相關的細胞的複制,包括但不限於能夠產生自身免疫性抗體的細胞,減輕自身免疫性抗體量和改善自身免疫性疾病的一個或多個症狀。
就傳染病而言、術語“治療”包括以下任何一項或全部:阻止引起傳染病的病原體的生長、增殖或複制、以及改善傳染病的一個或多個症狀。
“哺乳動物”或“動物”的實例包括但不限於人、鼠、家鼠、豚鼠、猴、豬、山羊、牛、馬、狗、貓、鳥和家禽。
本發明所公開的新型偶聯物使用了支鏈連接體。實施例1至34展示了一些適宜的連接體及其合成。
一種支鏈連接體連接的細胞結合劑-細胞毒素小分子的偶聯物
其中“_”代表單鍵;n為1到30;
T是細胞結合劑或分子,選自抗體、單鏈抗體、結合靶細胞的抗體片段、單克隆抗體、單鏈單克隆抗體、結合靶細胞的單克隆抗體片段、嵌合抗體、結合靶細胞的嵌合抗體片段、結構域抗體、結合靶細胞的結構域抗體片段、adnectin類抗體、DARPin蛋白、淋巴因子、激素、維生素、生長因子、集落刺激因子、營養轉運分子(轉鐵蛋白)和/或连接在白蛋白、聚合物、樹狀大分子、脂質體、納米粒子、囊泡或(病毒)衣殼上的細胞結合肽、蛋白质或小分子;L1和L2是由C、N、O、S、Si和P等原子構成的鏈狀結構,優選具有0-500個原子的,共價連接到W和V1,V1和V2。構成L1和L2的原子可以以任何化學方式相組合,例如形成亞烷基、亞烯基和亞炔基、醚、聚氧化烯、酯、胺、亞胺、多胺、肼、腙、醯胺、脲、氨基脲、二氨基脲、烷氧基胺、氨基甲酸酯、氨基酸、肽、醯氧基胺、異羥肟酸或上述的組合。優選的L1和L2,相同或不同,獨立地選自於O、NH、N、S、P、NNH、NHNH、N(R3)、N(R3)N(R3’)、CH、CO、C(O)NH、C(O)O、NHC(O)NH、NHC(O)O;如下列結構式的聚乙烯氧基:(OCH2CH2)pOR3、或(OCH2CH(CH3))pOR3、或NH(CH2CH2O)pR3、或NH(CH2CH(CH3)O)pR3、或N[(CH2CH2O)pR3]-[(CH2CH2O)p’R3’]或(OCH2CH2)pCOOR3、或CH2CH2(OCH2CH2)pCOOR3,其中p和p’是獨立選自0到約1000的整數,或它們的組合;C1-C8烷基;C2-C8雜烷基、烷基環烷基、雜環烷基;C3-C8芳基、芳烷基、雜環、碳環、環烷基、雜烷基環烷基、烷基羰基、雜芳基;或(Aa)r,r=1-12(1至12個氨基酸單位),(Aa)r為天然或非天然氨基酸,相同或不同序列的二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽、十肽、十一肽或十二肽單元;W是一個延展體單元,通常是自毀滅的間隔體、一個多肽單元、腙、二硫化物、硫醚、酯或醯胺鍵;w是1或2或3;V1和V2是獨立的間隔體單元,選自O,NH,S,C1-C8烷基;C2-C8雜烷基、烯基或炔基;C3-C8芳基、雜環、碳環、環烷基、烷基環烷基、雜環烷基、雜芳烷基、雜烷基環烷基,或烷羰基;或(Aa)r、r=1-12(1-12個氨基酸單元),(Aa)r為天然或非天然氨基酸,相同或不同序列的二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽、十肽、十一肽或十二肽單元;或(CH2CH2O)p、p為0-1000;v1和v2獨立為0、1或2,但v1和v2不同時為0,當v1或v2為0時,意味著側鏈Q1或Q2片段缺省。
Q1和Q2獨立地由式(I-q1)表示:
其中是連接至L1或L2的位置,G1和G2獨立地為OC(O),NHC(O),C(O),CH2,NH,OC(O)NH,NHC(O)NH,O,S,B,P(O)(OH),NHP(O)(OH),NHP(O)(OH)NH,CH2P(O)(OH)NH,OP(O)(OH)O,CH2P(O)(OH)O,NHS(O)2,NHS(O)2NH,CH2S(O)2NH,OS(O)2O,CH2S(O)2O,Ar,ArCH2,ArO,ArNH,ArS,ArNR1,(Aa)r,(r=1-12);X1和X2獨立地為O,CH2,S,NH,N(R1),+NH(R1),+N(R1)(R2),C(O),OC(O),OC(O)O,OC(O)NH,NHC(O)NH;Y2為O,NH,NR1,CH2,S;G3為OH,SH,OR1,SR1,OC(O)R1,NHC(O)R1,C(O)R1,CH3,NH2,NR1,+NH(R1),+N(R1)(R2),C(O)OH,C(O)NH2,NHC(O)NH2,BH2,BR1R2,P(O)(OH)2,NHP(O)(OH)2,NHP(O)(NH2)2,S(O)2(OH),(CH2)q1C(O)OH,(CH2)q1P(O)(OH)2,C(O)(CH2)q1C(O)OH,OC(O)(CH2)q1C(O)OH,NHC(O)(CH2)q1C(O)OH,CO(CH2)q1P(O)(OH)2,NHC(O)O(CH2)q1C(O)OH,OC(O)NH(CH2)q1C(O)OH,NHCO(CH2)q1P(O)(OH)2,NHC(O)(NH)(CH2)q1C(O)OH,CONH(CH2)q1P(O)(OH)2,NHS(O)2(CH2)q1C(O)OH,CO(CH2)q1S(O)2(OH),NHS(O)2NH(CH2)q1C(O)OH,OS(O)2NH(CH2)q1C(O)OH,NHCO(CH2)q1S(O)2(OH),NHP(O)(OH)(NH)(CH2)q1C(O)OH,CONH(CH2)q1S(O)(OH),OP(O)(OH)2,(CH2)q1P(O)(NH)2,NHS(O)2(OH),NHS(O)2NH2,CH2S(O)2NH2,OS(O)2OH,OS(O)2OR1,CH2S(O)2OR1,Ar,ArR1,ArOH,ArNH2,ArSH,ArNHR1或(Aa)q1,p1,p2和p3獨立地是0-100,但是不同時為0,q1和q2獨立地是0-24;優選的Q1和Q2獨立地是C2-C90聚羧酸或C-2-C90聚烷基胺,C6-C90寡糖或多糖,C6-C90含季銨陽離子和羧酸陰離子的兩性離子或含季銨陽離子和磺酸陰離子的兩性離子,可生物降解的聚合物,如聚乳酸/乙醇酸(PLGA)、聚(丙烯酸酯)、脫乙醯殼多糖、N-(2-羥丙基)甲基丙烯醯胺的共聚物、聚[2-(甲基丙烯醯氧基)乙基磷酸膽鹼](PMPC)、聚-L-谷氨酸、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLG)、聚(乙二醇)(PEG)、聚(丙二醇)(PPG)、聚(乙二醇)改性肽、聚(乙二醇)改性脂質體、聚(乙二醇)改性烷基羧酸、聚(乙二醇)改性烷基胺、透明質酸(HA)(糖胺聚糖)、肝素或硫酸乙醯肝素(HSGAG)、硫酸軟骨素或硫酸皮素(CSGAG)、聚(乙二醇)改性的烷基硫酸鹽、聚(乙二醇)改性的烷基磷酸鹽或聚(乙二醇)改性的烷基季銨鹽;Q1和Q2的結構示例如下:
O2,
O5,
Iq-07,
Iq-12,
Iq-22,
Iq-33,
其中,R25和R25’獨立地選自H、HC(O)、CH3C(O)、CH3C(NH)、C1-C18烷基、C1-C18烷基-Y1-SO3H、C1-C18烷基-Y1-PO3H2、C1-C18烷基-Y1-CO2H、C1-C18烷基-
Y1-N+R1’R2’R3’R4’、C1-C18烷基-Y1-CONH2、C2-C18烷基、C2-C18酯、C2-C18醚、C2-C18胺、C2-C18烷基羧醯胺、C3-C18芳基、C3-C18環烷基、C3-C18雜環、1-24個氨基酸、C2-C18脂質、C2-C18脂肪酸或C2-C18脂肪銨脂質;X1和X2獨立地選自NH、N(R1’)、O、CH2、S、C(O)、S(O)、S(O2)、P(O)(OH)、NHNH、CH=CH、Ar或(Aa)q1,q1=0-24(0-24個氨基酸、q1=0表示缺省);X1、X2、X3、X4、Y1、Y2和Y3獨立地選自NH、N(R1’)、O、C(O)、CH2、S、S(O)、NHNH、C(O)、OC(O)、OC(O)O、OC(O)NH、NHC(O)NH、Ar或(Aa)q1,X1、X2、X3、X4、Y1、Y2和Y3獨立地可以缺省;p1、p2和p3獨立地為0-100,但不能同時為0;q1、q2和q3獨立地為0-24;R1’、R2’、R3’和R4’獨立地選自H和C1-C6烷基;Aa是天然或非天然氨基酸;Ar或(Aa)q1是同或不同的肽序列;q1=0表示(Aa)q1缺省;D是具有下式(II)結構的Tubulysin同系物:
或其藥學上可接受的鹽、水合物或水合鹽;或多晶型結晶;或其光學異構體、外消旋物、非對映異構體或對映異構體,其中-----是獨立地連接至W的連接位點;R1,R2,R3和R4獨立地為H,C1-C8烷基;C2-C8雜烷基、烯基或炔基;C3-C8芳基、芳烷基、環烷基、烷基環烷基、雜環烷基、雜烷基環烷基,碳環或烷羰基;或R1R2、R1R3、R2 R3、R3 R4、R5 R6、R11 R12或R13 R14可形成3-7元的碳環、環烷、雜環、雜環烷、芳環或雜芳環結構;R1和R2獨立地連接至W,它們獨立地可以缺省;Y1是N或CH;R5、R6、R8、R10及R11獨立地是H或C1-C4烷基或雜烷基;R7選自H、R14、-R14C(=O)X1R15或-R14X1R15;X1是O、S、S-S、NH、CH2或NR14;R9選自H、OH、-O-、=O、-OR14、-OC(=O)R14、-OC(=O)NHR14-、-OC(=O)R14SSR15-、OP(=O)(OR14)-、-OC(=O)NR14R15、OP(=O)(OR14)或OR14OP(=O)(OR15);R11選自H、R14、-R14C(=O)R16、-R14X2R16、-R14C(=O)X2,X2指-O-,-S-,-NH-、-N(R14)-、-O-R14-、-S-R14-、-S(=O)-R14-、或-NHR14;
R12是R15、-OH、-SH、-NH2、NH、NHNH2、-NH(R15)、-OR15、-R15COR16、-R15COOR16、-R15C(O)NH2、-R15C(O)NHR17、-SR16、R15S(=O)R16、-R15P(=O)(OR17)2、-R15OP(=O)(OR17)2、-CH2OP(=O)(OR17)2、-R15SO2R17、-R15X2R16和-R15C(=O)X2,X2指-O-、OH、SH、-S-、NH2、-NH-、-N(R15)-、-OR15-、-SR15-、-S(=O)R15-、CH2或-NHR15-;R13和R14獨立地是H、O、S、NH、N(R15)、NHNH、-OH、-SH、-NH2、NH、-NHNH2、-NH(R15)、-OR15、CO、-COX2、-COX2R16、R17、F、Cl、Br、I、SR16、NR16R17、N=NR16、N=R16、NO2、SOR16R17、SO2R16、SO3R16、OSO3R16、PR16R17、POR16R17、PO2R16R17、OP(O)(OR17)2、OCH2OP(O)(OR17)2、OC(O)R17、OC(O)OP(O)(OR17)2、PO(OR16)(OR17)、OP(O)(OR17)OP(O)(OR17)2、OC(O)NHR17;-O-(C4-C12糖苷)、-N-(C4-C12糖苷);C1-C8烷基、雜烷基;C2-C8烯基、炔基、雜烷基、雜環烷基;C3-C8芳基、芳烷基、碳環、環烷基、雜烷基環烷基、烷基羰基、雜芳基、2-8個碳原子的酯、醚或醯胺;或含有1-8個氨基酸的肽(NH(Aa)18或CO(Aa)18);或結構式是(OCH2CH2)p或(OCH2CH(CH3))p的聚氧乙烯,其中p是0至約1000的整數;或上述基團的組合;X2是O、S、S-S、NH、CH2、OH、SH、NH2、CHR14或NR14;R15、R16及R17獨立地是H、C1-C8烷基、雜烷基;C2-C8烯基、炔基、雜烷基、雜環烷基;C3-C8芳基、芳烷基、碳環、環烷基、雜烷基環烷基、烷基羰基、雜芳基、烷基羰基或是它們的Na+,K+,Cs+,Li+,Ca2+,Mg+,Zn2+,N+(R1)(R2)(R3)(R4),HN+(C2H5OH)3鹽;Y1和Y2獨立地是N或CH;q是0或1;當q=0時,Y3缺省,Y4、Y5、Y6和Y7獨立地是CH、N、NH、O、S或N(R1),此時Y2、Y4、Y5、Y6和Y7形成雜芳環,如呋喃、吡咯、噻吩、噻唑、噁唑和咪唑、吡唑、三唑、四唑、噻二唑;當q=1時,Y3、Y4、Y5、Y6和Y7獨立地是CH或N,此時Y2、Y3、Y4、Y5、Y6和Y7形成芳香環,如苯、吡啶、噠嗪、嘧啶、吡嗪、三嗪、四嗪、噠嗪;Tubulysin的結構示例如下:
其中R20是H,C1-C8直鏈或支鏈烷基或雜烷基,C2-C8直鏈或支鏈烯基、炔基、烷基環烷基、雜環烷基,C3-C8直鏈或支鏈芳基、Ar-烷基、雜環、碳環、環烷基、雜烷基環烷基、烷基羰基、雜芳基,碳酸酯(-C(O)OR17)、氨基甲酸酯(-C(O)NR17R18)或1-8個碳原子的羧酸鹽、酯、醚或醯胺,1-8個氨基酸,如式(OCH2CH2)p或(OCH2CH(CH3))p中的聚氧乙烯單元,其中p是0至約1000的整數,R20或缺省而氧基形成酮,或以上的組合;Z2和Z3獨立地為H、OH、NH2、O、NH、COOH、COO、C(O)、C(O)NH、C(O)NH2、R18、OCH2OP(O)(OR18)2、OC(O)OP(O)(OR18)2、OPO(OR18)2、NHPO(OR18)2、OP(O)(OR18)OP(O)(OR18)2、OC(O)R18、OC(O)NHR18、OSO2(OR18)、O-(C4-C12-糖苷),C1-C8直鏈或支鏈烷基或雜烷基,C2-C8直鏈或支鏈烯基、炔基、烷基環烷基、雜環烷基;C3-C8直鏈或支鏈芳基、Ar-烷基、雜環、碳環、環烷基、雜烷基環烷基、烷基羰基、雜芳基,碳酸酯(-C(O)OR17)、氨基甲酸酯(-C(O)NR17R18);R17和R18獨立地為H、直鏈或支鏈烷基或雜烷基,C2-C8直鏈或支鏈烯基、炔基、烷基環烷基、雜環烷基,C3-C8直鏈或支鏈芳基、Ar-烷基、雜環、碳環、環烷基、雜烷基環烷基、烷基羰基、雜芳基,碳酸酯(-C(O)OR17)、氨基甲酸酯(-C(O)NR17R18);R7的定義與前文相同。
另外,W、L1、L2、V1和V2可獨立地由一個或多個下列連接體組分構成:6-馬來醯亞胺基己醯基(“MC”)、馬來醯亞胺丙醯基(“MP”)、纈氨酸-瓜氨酸(“val-cit”或“vc”)、丙氨酸-苯丙氨酸(“ala-phe”or“af”)、對氨基芐氧基-羰基(“PAB”)、4-硫代戊醯基(“SPP”)、4-(N-馬來醯亞胺甲基)環己烷-1醯基(“MCC”)、(4-乙醯基)氨基苯醯基(“SIAB”)、4-硫丁醯基(SPDB)、4-硫-2-羥基磺醯基-丁醯基(2-Sulfo-SPDB),結構如下所示,或含有1-12個天然或非天然氨基酸單元的天然或非天然肽。天然氨基酸最好選自天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、組氨酸、賴氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、天冬醯胺、穀氨醯胺、半胱氨酸、
硒代半胱氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、色氨酸、丙氨酸;
6-馬來醯亞胺己醯基(MC),
馬來醯亞胺丙醯基(MP),
纈氨酸-瓜氨酸(val-cit),
丙氨酸-苯丙氨酸(ala-phe),
賴氨酸-苯丙氨酸(lys-phe),
對氨基芐氧基-羰基(PAB),4-硫
戊醯基(SPP),4-硫丁醯基(SPDB),
4-(N-馬來醯亞胺甲基)環己烷-1-醯基(MCC),
馬來醯亞胺乙氨基(ME),4-硫-2-
羥基磺醯基-丁醯基(2-Sulfo-SPDB),芳基硫醚基(PySS),
(4-乙醯基)氨基苯醯基(SIAB),
,氧芐基硫醚基,氨基苄基硫醚基,
二氧基苄基硫醚基、二氨基苄
基硫醚基、氨基氧基苄基硫醚基,烷
氧基氨基(AOA),亞乙基氧基(EO),4-甲基-
4-硫代-戊醯基(MPDP),三唑,二硫、
烷基磺醯基,烷基磺胺,
碸基二磺胺,磷二醯胺,烷基膦醯胺,
膦酸,N-甲基烷基膦醯胺,N,
N’-二甲基磷二醯胺、烷基膦二醯胺,肼,
乙脒;肟,二乙醯肼,
氨基乙基胺,氨基乙基-氨基乙基胺和L-或D-,或含有1-20個氨基酸的天然或非天然肽;W、L1、L2、V1和V2獨立地也可以含有自我毀滅或非自我毀滅的組分、肽單元、腙鍵、二硫化物、酯、肟、醯胺或硫醚鍵。自我毀滅單元包括但不限於,與對氨基芐基氨甲醯基(PAB)的電子結構相似的芳香化合物,例如2-氨基咪唑-5-甲醇的衍生物、雜環PAB同系物、β-葡糖苷酸、以及鄰或對氨基芐基縮醛;優選的自我毀滅型連接體組分具有以下結構之一:
其中,*標記的是額外的間隔體或可釋放的連接體、或細胞毒性劑、和/或結合分子(CBA)的連接點;X1、Y1、Z2和Z3獨立地為NH、O或S;Z1為H、NHR1、OR1、SR1、COX1R1,其中X1和R1如前文所定義;v為0或1;U1為H、OH、C1-C6烷基、(OCH2CH2)n、F、Cl、Br、I、OR5、SR5、NR5R5’、N=NR5、N=R5、NO2、SOR5R5’、SO2R5、SO3R5、OSO3R5、PR5R5’、POR5R5’、PO2R5R5’、OPO(OR5)(OR5’)或OCH2PO(OR5(OR5’),其中R5和R5’獨立地選自H、C1-C8烷基;C2-C8烯基、炔基、雜烷基或氨基酸;C3-C8芳基、雜環、碳環、環烷基、雜環烷基、雜芳烷基、烷基羰基或糖苷;或藥學上的陽離子鹽;W、L1、L2、V1和V2獨立地也可以為包含以下結構之一的非自我毀滅
的連接體組分:*(CH 2 CH 2 O) r *;
其中,*標記的是額外的間隔體或可釋放的連接體、或細胞毒性劑、和/或結合分子(CBA)的連接點;X1、Y1、U1、R5、R5’如前文所定義;r為0-100;m和n獨立地為0-6;
更為優選的是,W、L1、L2、V1和V2獨立地是可釋放的連接體組分。術語“可釋放的”是指連接體上包含至少一個可在生理條件下被破壞的鍵,例如pH、酸、鹼、氧化作用、代謝、生化或酶不穩定的鍵。應當理解,導致鍵斷裂不一定是生物或代謝過程、而可能是一個標準化學反應、例如水解或取代反應,這種生理條件的例子有:pH值比細胞漿內pH低的內涵體,惡性細胞內存在的毫摩爾濃度的大量穀胱甘肽,它能夠與細胞內硫醇發生二硫鍵交換反應;W、L1、L2、V1和V2中可釋放組件的實例,包括但不限於:-(CR5R6)m(Aa)r(CR7R8)n(OCH2CH2)t-、-(CR5R6)m(CR7R8)n(Aa)r(OCH2CH2)t-、-(Aa)r-(CR5R6)m(CR7R8)n(OCH2CH2)t-、-(CR5R6)m(CR7R8)n(OCH2CH2)r(Aa)t-、-(CR5R6)m-(CR7=CR8)(CR9R10)n(Aa)t(OCH2CH2)r-、-(CR5R6)m(NR11CO)(Aa)t(CR9R10)n-(OCH2CH2)r-、-(CR5R6)m(Aa)t(NR11CO)(CR9R10)n(OCH2CH2)r-、-(CR5R6)m(OCO)(Aa)t(CR9R10)n-(OCH2CH2)r-、-(CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-、-(CR5R6)m(CO)(Aa)t-(CR9R10)n(OCH2CH2)r-、-(CR5R6)m(NR11CO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-、-(CR5R6)m(OCO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-、-(CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-、-(CR5R6)m(CO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-、-(CR5R6)m-phenyl-CO(Aa)t(CR7R8)n-、-(CR5R6)m-呋喃-CO(Aa)t(CR7R8)n-、-(CR5R6)m-惡唑-CO(Aa)t(CR7R8)n-、-(CR5R6)m-噻唑基-CO(Aa)t(CCR7R8)n-、-(CR5R6)t-噻吩-CO(CR7R8)n-、-(CR5R6)t-咪唑-CO-(CR7R8)n-、-(CR5R6)t-嗎啉-CO(Aa)t-(CR7R8)n-、-(CR5R6)t呱嗪-CO(Aa)t-(CR7R8)n-、-(CR5R6)t-N-甲基呱嗪-CO(Aa)t-(CR7R8)n-、-(CR5R)m-(Aa)t苯基-、-(CR5R6)m-(Aa)t呋喃-、-(CR5R6)m-惡唑(Aa)t-、-(CR5R6)m-噻唑基(Aa)t-、-(CR5R6)m-噻吩基-(Aa)t-、-(CR5R6)m-咪唑(Aa)t-、-(CR5R6)m-嗎啉-(Aa)t-、-(CR5R6)m-呱嗪-(Aa)t-、-(CR5R6)m-N-甲基呱嗪-(Aa)t-、-K(CR5R6)m(Aa)r(CR7R8)n(OCH2CH2)t-,-K(CR5R6)m(CR7R8)n(Aa)r(OCH2CH2)t-,-K(Aa)r-(CR5R6)m(CR7R8)n(OCH2CH2)t-,-K(CR5R6)m(CR7R8)n(OCH2CH2)r(Aa)t-,-K(CR5R6)m-(CR7=CR8)(CR9R10)n(Aa)t(OCH2CH2)r-,-K(CR5R6)m(NR11CO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-,-K(CR5R6)m(Aa)t(NR11CO)(CR9R10)n(OCH2CH2)r-,-K(CR5R6)m(OCO)(Aa)t(CR9R10)n-(OCH2CH2)r-,-K(CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-,-K(CR5R6)m(CO)(Aa)t-(CR9R10)n(OCH2CH2)r-,-K(CR5R6)m(NR11CO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-,-K(CR5R6)m-(OCO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-,-K(CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-,-K-(CR5R6)m(CO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-,-K(CR5R6)m-苯基-CO(Aa)t(CR7R8)n-,-K-(CR5R6)m-呋喃-CO(Aa)t-(CR7R8)n-,-K(CR5R6)m-惡唑-CO(Aa)t(CR7R8)n-,-K(CR5R6)m-噻唑基-CO(Aa)t-(CR7R8)n-,-K(CR5R6)t-噻吩-CO(CR7R8)n-,-K(CR5R6)t咪唑-CO-(CR7R8)n-
,-K(CR5R6)t嗎啉-CO(Aa)t(CR7R8)n-,-K(CR5R6)t呱嗪-CO(Aa)t-(CR7R8)n-,-K(CR5R6)t-N-甲基CO(Aa)t(CR7R8)n-,-K(CR5R)m(Aa)t苯基,-K-(CR5R6)m-(Aa)t呋喃-,-K(CR5R6)m-惡唑(Aa)t-,-K(CR5R6)m-噻唑基(Aa)t-,-K(CR5R6)m-噻吩-(Aa)t-,-K(CR5R6)m-咪唑(Aa)t-,-K(CR5R6)m-嗎啉(Aa)t-,-K(CR5R6)m呱嗪-(Aa)tG、-K(CR5R6)mN-甲基呱嗪基(Aa)t-;其中Aa、m、n、R3、R4和R5在前文已有定義;t和r獨立地為0-100;R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11獨立地選自H,鹵素,C1-C8烷基、芳基、烯基、炔基、醚、酯、胺或醯胺,這些基團均可以被以下成分所取代:一個或多個鹵素、CN、NR1R2、CF3、OR1、芳基、雜環、S(O)R1、SO2R1、-CO2H、-SO3H、-OR1、-CO2R1、-CONR1、-PO2R1R2、-PO3H或P(O)R1R2R3;K是NR1、-SS-、-C(=O)-、-C(=O)NH-、-C(=O)O-、-C=NH-O-、-C=N-NH-、-C(=O)NH-NH-、O、S、Se、B、Het(具有C3-C8的雜環或雜芳環),或含有1-20個氨基酸的肽;另外,W、L1、L2、V1和V2獨立地可以包含以下親水結構:
,其中是連接點;X2、X3、X4、X5和X6獨立地選自NH、NHNH、N(R3)、N(R3)N(R3 ’)、O、S,C1-C6烷基,C2-C6雜烷基、烷基環烷基、雜環烷基,C3-C8芳基、Ar-烷基、雜環、碳環、環烷基、雜烷基環烷基、烷基羰基、雜芳基,或1-8個氨基酸;其中R3和R3 ’獨立地為H,C1-C8烷基,C2-C8雜烷基、烷基環烷基、雜環烷基,C3-C8芳基、Ar-烷基、雜環、碳環、環烷基、雜烷基環烷基、烷基羰基、雜芳基,或1-8個碳原子的酯、醚或醯胺,如結構式(OCH2CH2)p或(OCH2CH(CH3))p的聚氧乙烯單元,其中p是0至約1000的整數,或上述的組合;更為優選地,W、L1、L2、V1和V2獨立地為具有1-6個碳原子的直鏈烷基,或結構如式(OCH2CH2)p的聚乙烯氧基單元,p=1-5000,或是含有1-4個氨基酸單元的肽(L或D形式),或以上的組合。
或者W、Q1、Q2、L1、L2、V1或V2中的任何一個或多個獨立地可以缺省、但Q1和Q2不能同時缺省。
在另一方面,一般而言,當細胞結合分子T與結構式(I)和(III)中V1和/或V2連接時、或與L1和/或L2直接連接時(V1和V2缺省),產生以下一個或多個結構:
其中R20和R21獨立地是C1-C8烷基,C2-C8雜烷基或雜環,C3-C8芳基、Ar-烷基、環烷基、烷基環烷基、雜環烷基、雜烷基環烷基、碳環或烷基羰基,或C2-C100具有式(CH2CH2O)p的聚亞烷基二醇,p如前文所定義。
在另一方面,Q1和Q2優選自含有C2-C18脂質、或C2-C18脂肪酸或C2-C18脂肪銨脂質的聚亞烷基二醇。聚亞烷基二醇不僅使偶聯物更具有親水,而且能防止偶聯物連接體被水解酶,如蛋白水解酶或酯酶水解。偶聯體上的脂質可以結合哺乳動物血液中的白蛋白,讓偶聯物在血液循環中從該複合物中緩慢釋放。因此,本專利申
請的支鏈連接體可以讓偶聯物在血液循環中更加穩定。這裡的聚亞烷基二醇包括但不限於聚乙二醇(PEG)、聚(丙二醇)及環氧乙烷與環氧丙烷的共聚物,優選的是PEG,更優選的是單官能團活化的羥基PEG(例如一個末端被活化的羥基PEG,包括羥基PEG-羧酸的反應活性酯、羥基PEG-單醛、羥基PEG-單胺、羥基PEG-單醯肼、羥基PEG-單肼基甲酸酯、羥基PEG-單碘乙醯胺、羥基PEG-單馬來醯亞胺、羥基PEG-單原甲醯基二硫化物、羥基PEG-單肟、羥基PEG-單苯基碳酸酯、羥基PEG-單苯基乙二醛、羥基PEG-單噻唑烷-2-硫酮、羥基PEG-單硫代酯、羥基PEG-單硫醇、羥基PEG-單三嗪和羥基PEG-單乙烯基碸)。聚亞烷基二醇的分子量約為10Da至約200kDa,優選範圍在約88Da至約40kDa之間,兩個支鏈,每個的分子量為約88Da至約40kDa;更優選為兩個支鏈,每個分子量為約88Da至約20kDa。在一個具體實例中,聚亞烷基二醇是聚乙二醇且具有約10kDa、20或40kDa的分子量。在其它具體的實例中,PEG是直鏈或支鏈10kDa的PEG、直鏈或支鏈20kDa PEG、直鏈或支鏈40kDa PEG。許多美國專利已經公開了直鏈或支鏈“非抗原性”PEG聚合物及其衍生物或偶聯物的製備,如美國專利5,428,128、5,621,039、5,622,986、5,643,575、5,728,560、5,730,990、5,738,846、5,811,076、5,824,701、5,840,900、5,880,131、5,900,402、5,902,588、5,919,455、5,951,974、5,965,119、5,965,566、5,969,040、5,981,709、6,011,042、6,042,822、6,113,906、6,127,355、6,132,713、6,177,087及6,180,095。
結構式(I)的示例如下:
a-O8,
a-14,
a-62,
或它們在藥學上可接受的鹽、水合物或水合鹽,或這些化合物的多晶型結構,或其光學異構體、外消旋體、非對映異構體或對映異構體;其中Z3和Z3獨立地為H、OH、NH2、O、NH、COOH、COO、C(O)、C(O)NH、C(O)NH2、R18、OCH2OP(O)(OR18)2、OC(O)OP(O)(OR18)2、OPO(OR18)2、NHPO(OR18)2、OP(O)(OR18)OP(O)(OR18)2、OC(O)R18、OC(O)NHR18、OSO2(OR18)、O-(C4-C12糖苷),C1-C8直鏈或支鏈烷基或雜烷基,C2-C8直鏈或支鏈烯基、炔基、烷基環烷基、雜環烷基,C3-C8直鏈或支鏈芳基、Ar-烷基、雜環、碳環、環烷基、雜烷基環烷基、烷基羰基、雜芳基,碳酸酯(-C(O)OR17)、氨基甲酸酯(-C(O)NR17R18);R19為H、OH、NH2、OSO2(OR18)、XCH2OP(O)(OR18)2、XPO(OR18)2、XC(O)OP(O)(OR18)2、XC(O)R18、XC(O)NHR18、C1-C8烷基或羧酸,C2-C8烯基、炔基、烷基環烷基、雜環烷基,C3-C8芳基或烷基羰基,或藥用鹽;X、X1、X2和X3獨立地為O、S、NH、NHNH或CH2;q1、q2和q3獨立地選自0-24;p、p1及p2獨立地為1-100;R1’、R2’、R3’及R4’獨立地選自H和C1-C6烷基;Aa是
天然或非天然氨基酸;r是0-12,當r>2時,(Aa)r是含有相同或不同氨基酸序列的肽,r=0表示(Aa)r缺省;m和n獨立地為1-30。
其中,D、W、w、L1、L2、Q1、Q2、V1、V2、v1、v2、n和T與式(I)中定義相同。
或其藥學上可接受的鹽、水合物或水合鹽;或這些化合物的多晶型結構;或其光學異構體、外消旋體、非對映異構體或對映異構體;其中X1、X2、X3、m、n、(Aa)r、p1、p2、p3、q1和q2定義如前文所述。
其中,D、W、w、L1、L2、Q1、Q2、V1、V2、v1、v2及n的定義同結構式(I);Lv1為一反應官能團,可以與細胞結合分子上的硫醇、胺、羧酸、硒醇、酚或羥基發生反應。它包括,但不限於鹵素(如氟、、溴、碘);甲磺醯基;甲苯磺醯基;三氟甲磺醯基;硝基酚基;N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)基;苯酚基;二硝基苯酚基;五氟苯酚基;四氟苯酚基;三氟苯酚基;二氟苯酚基;一氟苯酚基;五苯酚基;咪唑基;一酚基;二酚基;三酚基;四苯酚基;N-(苯並三唑基)氧基;2-乙基-5-苯基異惡唑基-3'-磺醯基;苯氧二唑基磺醯基;2-乙基-5-苯
基異惡唑基;苯氧二唑基;惡二唑基;不飽和碳(碳-碳、碳-氮、碳-硫、碳-磷、硫-氮、磷-氮、氧-氮或碳-氧之間的雙鍵或三鍵);或與Mitsunobu反應試劑作用生成的中間體。縮合劑的例子如下:1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺(EDC)、二環己基碳二亞胺(DCC)、N,N’-二異丙基碳二亞胺(DIC)、N-環己基-N’-(2-嗎啉代-乙基)碳二亞胺甲基對甲苯磺酸鹽(CMC或CME-CDI)、1,1’-羰基二咪唑(CDI)、氧-(苯並三唑-1-)基)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸鹽(TBTU)、N,N,N’,N’-四甲基-氧-(1H-苯並三唑-1-基)-六氟磷酸銨(HBTU)、(苯並三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)-六氟磷酸鹽(BOP)、(苯並三唑-1-基氧基)三吡咯烷基六氟磷酸鹽(PyBOP)、氰基膦酸二乙酯(DEPC)、-N,N,N’,N’-四甲基甲脒六氟磷酸鹽、1-[雙(二甲基氨基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑並[4,5-b]吡啶3-氧六氟磷酸鹽(HATU)、1-[(二甲氨基)(嗎啉代)亞甲基]-1H-[1,2,3]三唑並[4,5-b]吡啶-1-鎓3-氧六氟磷酸鹽(HDMA)、2--1,3-二甲基-咪唑六氟磷酸鹽(CIP)、六氟磷酸代吡咯烷酮鎓(PyCloP)、氟-N,N,N’,N’-雙(四亞甲基)甲脒六氟磷酸鹽(BTFFH)、N,N,N’,N’-四甲基-S-(1-氧代-2-吡啶基)硫脲六氟磷酸鹽、氧-(2-氧代-1(2H)吡啶基)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸鹽(TPTU)、S-(1-氧代-2-吡啶基)N,N,N’,N’-四甲基硫脲四氟硼酸鹽、氧-[(乙氧基羰基)-氰基甲基氨基]-N,N,N’,N’-六氟磷酸四甲基脲(HOTU)、(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代乙基氨基氧基)二甲氨基-嗎啉代-六氟磷酸鹽(COMU)、氧-(苯並三唑-1-基)-N,N,N’,N’-雙(四亞甲基)六氟磷酸鹽(HBPyU)、N-芐基-N’-環己基-碳二亞胺(有或沒有聚合物結合)、二吡咯烷基(N-琥珀醯亞胺基氧基)碳鎓六氟磷酸鹽(HSPyU)、二吡咯烷基六氟磷酸鹽(PyClU)、2--1,3-二甲基咪唑四氟硼酸鹽(CIB)、(苯並三唑-1-基氧基)二呱啶碳六氟磷酸鹽(HBPipU)、氧-(6-苯並三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸鹽(TCTU)、溴代(二甲基氨基)-六氟磷酸鹽(BroP)、丙基膦酸酐(PPACA、T3P®)、2-嗎啉代乙基異氰化物(MEI)、N,N,N’,N’-四甲基-氧-(N-琥珀醯亞胺基)六氟磷酸鹽(HSTU)、2-溴-1-乙基-吡啶鎓四氟硼酸鹽(BEP)、氧-[(乙氧基羰基)氰基-亞甲基氨基]-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸鹽(TOTU)、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉化物(MMTM、DMTMM)、N,N,N’,N’-四甲基-氧-(N-琥珀醯亞胺基)脲四氟硼酸(TSTU)、氧-(3,4-二氫-4-氧代-1,2,3-苯並三嗪-3-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸鹽(TDBTU)、1,1’-(偶氮二羰基)-二呱啶(ADD)、二-(4-芐基)偶氮二羧酸酯(DCAD)、偶氮二羧酸二叔丁酯(DBAD)、偶氮二羧酸二異丙酯(DIAD)、
偶氮二羧酸二乙酯(DEAD)。另外,Lv1可以是酸酐,或與其它C1-C8酸酐作用形成的酸酐;優選的Lv1包含以下物質:鹵化物(如氟化物、化物、溴化物和碘化物)、甲磺醯基(mesyl)、甲苯磺醯基(tosyl)、三氟甲基磺醯基(triflate)、三氟甲基磺酸鹽、硝基苯酚基、N-琥珀醯亞胺基(NHS)、苯酚基;二硝基苯酚基;五氟苯酚基、四氟苯酚基、三氟苯酚基、二氟苯酚基、一氟苯酚基、五苯酚基、1H-咪唑-1-基、一苯酚基、二苯酚基、三苯酚基、四苯酚基、N-(苯並三唑基)氧基、2-乙基-5-苯基異噁唑-3'-磺醯基、苯基惡二唑-磺醯基、2-乙基-5-苯基異噁唑基、苯基惡二唑基、惡二唑基、不飽和碳(碳-碳、碳-氮、碳-硫、碳-磷、硫-氮、磷-氮、氧-氮或碳-氧之間的雙鍵或三鍵),或以下結構之一:
二硫化物;鹵代乙醯基;醯鹵;
N-羥基琥珀醯亞胺酯;馬來醯亞胺;
單取代馬來醯亞胺;二取代馬來醯亞胺;
單取代的琥珀醯亞胺;二取代馬來醯亞胺;
取代馬來酸;-CHO醛;乙烯磺醯基;
丙烯醯基;2-(甲苯磺醯氧基)乙醯基;
2-(甲磺醯氧基)乙醯基;2-
(硝基苯酚基)乙醯基;2-(二硝基苯基)乙醯基;
2-(氟代苯酚基)-乙醯基;
2-(二氟苯酚基)-乙醯基;2-((三氟甲基磺醯基)氧基)乙
醯基;酮或醛,2-(五氟苯酚基)乙醯基;
,甲基碸苯基惡二唑(ODA); 酸酐,烷氧基氨;疊氮基,
炔基,或醯肼;其中,X1’是F、Cl、Br、I或Lv3;X2’是O、NH、N(R1)或CH2;R3是H、芳基或雜芳基,其中一個或多個H原子可獨立地被-R1、-鹵素、-OR1、-SR1、-NR1R2、-NO2、-S(O)R1、-S(O)2R1或-COOR1取代;Lv3是離去基團,選自F、Cl、Br、I;硝基苯基;N-羥基琥珀醯亞胺(NHS);苯酚基;二硝基苯酚基;五氟苯酚基;四氟苯酚基;二氟苯酚基;單氟苯酚基;五苯酚基;三氟甲磺醯基;咪唑基;二酚基;四苯酚基;1-羥基苯並三唑基;甲苯甲磺醯基;甲磺醯基;2-乙基-5-苯基異噁唑-3'-磺醯基,酸酐或與其它酸酐作用形成的酸酐,例如乙酸酐、甲酸酐;或與多肽縮合試劑、Mitsunobu反應試劑作用生成的中間體。結構式(IV)的示例如下:
或是其藥學上可接受的鹽、水合物或水合鹽;或這些化合物的多晶型結構;或其光學異構體、外消旋體、非對映異構體或對映異構體;其中X1、X2、X3、Z2、Z3、p1、p2、p3、q1、q2、Lv3、(Aa)r、R25、R25’及m定義如前文所述。
其中,D、W、w、L1、L2、Q1、Q2、V1、V2、v1、v2及n的定義同結構式(I);Lv1和Lv2定義同式(IV)中的Lv1,Lv1和Lv2可以相同,也可以不同。
本發明進一步涉及結構式(I)和(III)中細胞結合分子-Tubulysin同系物偶聯物的製備方法,以及這些偶聯物的應用。
細胞結合劑或細胞結合分子T,可以是目前已知的或即將公開的,具有治療意義或者可以被生物學方式修飾的,能夠與細胞的部分相結合、復合或反應的任何種類的分子。優選的細胞結合劑或細胞結合分子是免疫治療蛋白、抗體及單鏈抗體;結合靶細胞的抗體片段;單克隆抗體;單鏈單克隆抗體;或結合靶細胞的單克隆抗體片段;嵌合抗體;結合靶細胞的嵌合抗體片段;域抗體;結合靶細胞的域抗體片段;adnectin類抗體、DARPin蛋白、淋巴因子、激素、維生素、生長因子、集落刺激因子、營養轉運分子(轉鐵蛋白)和/或连接在白蛋白、聚合物、樹狀大分子、脂質體、納米粒子、囊泡或(病毒)衣殼上的含有四個以上氨基酸片段的細胞結合肽、蛋白质或小分子;優選的Lv1和Lv2可以與細胞結合劑或細胞結合分子上的巰基對反應。巰基最優是由細胞結合劑的鏈間二硫鍵被還原產生,還原劑選自二硫蘇糖醇(DTT)、二硫赤蘚糖醇(DTE)、L-穀胱甘肽(GSH)、二(2-碳氧乙基)膦(TCEP)、2-巰基乙胺(β-MEA)和/或β-巰基乙醇(β-ME,2-ME)。
以支鏈連接體連接的Tubulysin同系物與細胞結合分子偶聯物的製備
圖1-62說明瞭Tubulysin同系物與本發明中細胞結合分子偶聯物的製備和以支鏈連接體進行偶聯的合成線路。
式(I)和(III)中的偶聯物可分別由式(IV)和(V)的中間體化合物製備。通常,(IV)和(V)中的Tubulysin同系物具有Lv1和Lv2的官能團,可以很便利地與細胞結合分子或修飾的細胞結合分子發生反應。圖1-62中說明瞭(IV)和(V)中Tubulysin同系物的製備和部分(I)和(III)中偶聯物的製備。
通常情況下,為了合成式(I)中的偶聯物,式(IV)中的官能團Lv1與細胞結合分子上的一個、兩個或多個基團反應,反應在0-60℃,pH 5-9的水性介質中,可添加或不添加0-30%與水能混溶的有機溶劑,如DMA、DMF、乙醇、甲醇、丙酮、乙腈、THF、異丙醇、二噁烷、丙二醇或乙二醇,然後進行透析或色譜純化以得到式(I)中的偶聯物。細胞結合分子上的反應官能團(用於偶聯的基團)可以通過蛋白質工程的方法獲得。
式(III)中的偶聯物也可以通過式(V)中的官能團Lv1和Lv2,與
細胞結合分子上的兩個或多個基團的反應獲得,優選為細胞結合分子上通過還原雙硫鍵產生的一對遊離巰基,反應在0-60℃、pH5-9的水性介質中發生,可添加或不添加0-30%的水溶性(混溶)有機溶劑,形成偶聯物分子。成對的巰基,優選是,通過還原細胞結合劑上的鏈間二硫鍵而生成,還原劑可選自二硫蘇糖醇(DTT)、二硫赤蘚糖醇(DTE)、L-穀胱甘肽(GSH)、三(2-羧乙基)膦(TCEP)、2-巰基乙胺(β-MEA)、或是和β巰基乙醇(β-ME,2-ME),反應在pH4-9的水介質中進行,可加入或不加入0-30%的水溶性(混溶)有機溶劑。
式(IV)和(V)中的Lv1和Lv2的反應基團獨立地可以為以下基團:二硫化物、硫醇、硫酯、馬來醯亞胺、鹵素取代的馬來醯亞胺、鹵代乙醯基、疊氮化物、1-炔、酮、醛、烷氧基氨基、三氟甲磺醯基、羰基咪唑、甲苯磺醯基、甲磺醯基、2-乙基-5-苯基異噁唑-3'-磺醯基、硝基苯酚基、N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)、苯酚基;二硝基苯酚基、五氟苯酚基、四氟苯酚基、二氟苯酚基、單氟苯酚基、五苯酚基、二苯酚基、四苯酚基、1-羥基苯並三唑、酸酐或醯肼基團、酯或其他酸衍生物。可與細胞結合分子或細胞結合試劑上的一個、兩個或多個基團同時或依次反應,在0-60℃、pH為4-9.5的水性介質中進行,可添加或不添加0-30%水溶性(混溶)有機溶劑、經柱層析或透析後得到式(I)和(III)的偶聯物。式(IV)和(V)的Lv1和Lv2的反應性基團,與改性的細胞結合分子反應採用相應的不同的方式。例如,製備式(I)中含雙硫鍵連接體的細胞結合劑-Tubulysin同系物偶聯物,可以通過修飾的細胞結合劑中的二硫鍵與含遊離巰基的Lv1和Lv2之間進行二硫鍵交換,或通過修飾的細胞結合劑中的遊離巰基,與Lv1和/或Lv2上的二硫鍵進行交換。為了加速二硫化物交換反應,二硫化物基團通常選自二硫吡啶、二硫硝基吡啶、二硫硝基苯、二硫硝基苯甲酸或二硫基二硝基苯等基團。
式(I)和(III)的偶聯物中,含有硫醚鍵的連接通常是通過以下方式實現的:在(IV)和(V)中的修飾的細胞結合劑或Tubulysin同系物上的馬來醯亞胺基或鹵代乙醯基或乙基磺醯基,分別與Tubulysin同系物上的自由巰基或是修飾的細胞結合劑上的巰基反應;含有易被酸降解的腙鍵的連接可以通過藥物-連接體或細胞結合分子上的羰基,與細胞結合分子上的或藥物-連接體上的醯肼基反應而實現,這些方法是本領域熟知的(參見如P.Hamann等.,Cancer Res.53,3336-34,1993;B.Laguzza等.,J.Med.Chem.,32,548-55,1959;P.Trail等.,Cancer Res.,57,100-5,1997);含有三唑鍵的連接可以通過藥物-連接體或細胞結合分子上的炔基,與相應的疊氮,進行點擊化學(Huisgen環加成)反應(Lutz,JF.等,2008,
Adv.Drug Del.Rev.60,958-70;Sletten,EM等2011,AccChem.Research 44,666-76)而實現。含有肟鍵的連接可以通過藥物-連接體或細胞結合分子上的酮或醛,與相應的羥胺反應而實現。含巰基的細胞結合分子可以與式(IV)和(V)中的,含有馬來醯亞胺、鹵代乙醯基或乙基磺醯基取代基的藥物-連接體分子,在pH為5.5-9.0的緩衝液中反應,得到式(I)和(III)中以硫醚連接的偶聯物。含巰基的細胞結合分子,也可以與式(IV)和(V)中帶有吡啶基二硫基的藥物-連接體發生二硫鍵交換,得到以二硫鍵連接的偶聯物。帶有羥基或巰基的細胞結合分子可以與式(IV)和(V)中,帶有鹵素,特別是羧酸酯的α位鹵素的藥物-連接體,在溫和的鹼存在的情況下,比如pH為8.0-9.5,反應會得到帶有醚或硫醚鍵的偶聯藥物。細胞結合分子上的羥基或氨基,可與(IV)和(V)中帶有羧基的藥物-連接體,在縮合劑如EDC或DCC存在的情況下,縮合生成酯連接體。含有氨基的細胞結合分子可以與藥物-連接體分子上的下列基團的羧酸酯縮合,得到含醯胺鍵連接體的偶聯物:NHS、咪唑、硝基苯酚基、苯酚基、二硝基苯酚基、五氟苯酚基、四氟苯酚基、二氟苯酚基、單氟苯酚基、五苯酚基、三氟甲磺醯基、二苯酚基、四苯酚基、1-羥基苯基三唑、甲苯磺醯基、甲磺醯基、2-乙基-5-苯基異惡唑基-3'-磺醯基。
合成的偶聯物可以通過標準生物化學方法純化,例如在Sephadex G25或Sephacryl S300柱上進行凝膠過濾,吸附色譜,離子交換,或透析。在一些情況下,細胞結合劑為小分子化合物(例如葉酸、黑素細胞刺激激素、EGF等),與小分子藥物偶聯後,可以通過色譜法純化,例如HPLC、中壓柱層析法或離子交換色譜法。
為了使與優選抗體的,細胞結合分子上的一對遊離巰基的偶聯反應有更高產率,可能需要在反應混合物中加入少量水溶性有機溶劑或相轉移劑。可將式(IV)或(V)上的交聯劑(連接體),以高濃度如1-500mM溶解於可與水混溶的極性有機溶劑中,例如不同的醇(如甲醇、乙醇和丙醇)、丙酮、乙腈、四氫呋喃(THF)、1,4-二噁烷、二甲基甲醯胺(DMF)、二甲基乙醯胺(DMA)或二甲基亞碸(DMSO)。同時,將細胞結合分子,如抗體以1~50mg/ml濃度溶解在pH4~9.5,最優pH6~8.5的緩衝液中,再用0.5~20當量的TCEP或DTT處理20分鐘至48小時。還原後,DTT可通過SEC色譜純化去除。TCEP也可以通過SEC色譜法去除,或者留在反應混合物中,無需進一步純化,但最好用疊氮化物(如4-疊氮苯甲酸、4-(疊氮甲基)苯甲酸、疊氮聚乙二醇(如2-(2-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙醇)中和TCEP。此外,以TCEP還原抗體或其他細胞結合劑,可以在式(IV)或(V)的藥物共存時進行,此時藥物與細胞結合分子的偶聯,可以與TCEP還原同時實現。
進行修飾細胞結合劑反應的水溶液為pH4至9之間緩衝液,優選在6.0至7.5之間,並且可以含有適合用於這個pH範圍的任何非親核性緩衝鹽。典型的緩衝液包括磷酸鹽、乙酸鹽、三乙醇胺鹽酸鹽、HEPES和MOPS緩衝液,也可含有其它組分,例如環糊精、羥丙基-β-環糊精、聚乙二醇、蔗糖和其它鹽,如NaCl和KCl。
在將式(IV)或(V)中的藥物-連接體加入到含有還原的細胞結合分子的溶液中後,反應混合物在4℃至45℃,優選15℃的溫度下保溫。對反應進程的監測,可以測量在某一特定紫外線波長(例如252nm)吸光度的減少,或某一特定紫外線波長(例如280nm)吸光度的增加,或選擇其它適當波長。反應完成後,被修飾的細胞結合劑可以以常規方式被分離,例如使用凝膠過濾色譜、離子交換色譜、吸附色譜,矽膠或氧化鋁柱層析色譜,結晶、製備薄層色譜或HPLC方法。
可以通過測量反應生成的硝基吡啶硫酮、二硝基吡啶二硫酮、吡啶硫酮、羧基醯胺基吡啶二硫酮和二羧基醯氨基吡啶二硫酮基團的紫外吸光度,對修飾程度進行評估。對於沒有髪色基團分子的偶聯反應、修飾或偶聯反應可以通過LC-MS監測、優選HPLC-MS/MS、UPLC-QTOF質譜或毛細管電泳質譜法(CE-MS)監測。本發明所述的支鏈連接體含有多種官能團,可與細胞結合分子,尤其是具有合適取代基的修飾的細胞結合分子反應。例如,帶有氨基或羥基的修飾的細胞結合分子,可以與帶有N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)酯的藥物反應,帶有巰基的修飾的細胞結合分子,可以與帶有馬來醯亞胺基或鹵代乙醯基的藥物反應。另外,通過蛋白質工程、酶促反應或化學修飾得到的帶有羰基(酮或醛)的修飾的細胞結合分子,可以與帶有醯肼或烷氧基胺的藥物反應。基於修飾的細胞結合分子上官能團的反應活性,本領域技術人員可以很容易地確定使用哪種藥物-連接體分子。
細胞結合劑
本發明中的細胞結合劑,包括偶聯物內和被修飾的細胞結合劑,可以是目前已知的或即將公開的,能夠與細胞片段結合,複合或反應的,具有治療意義或者被生物學修飾的任何種類分子。
細胞結合劑包括,但不僅限於大分子量蛋白質,例如完整抗體(多克隆抗體,單克隆抗體,二聚體,多聚體,多特異性抗體,例如雙特異性抗體);單鏈抗體;抗體片段如Fab,Fab’,F(ab’)2,Fv(Parham,J.Immunol.1983,131,2895-2902);由Fab表達庫產生的片段,抗獨特型(抗-Id)抗體;CDR;雙價抗體;三價抗體;四價抗體;微型抗體;小免疫蛋白;上述任何抗體的表位結合片段,能免疫特異性結合癌細胞抗原,病毒抗原,微生物抗原;由免疫系統產生的蛋白質,能夠
識別、結合特定抗原或具有期望的生物學活性(Miller et al J.of Immunology 2003,170,4854-4861);幹擾素(如I,II,III型);多肽;淋巴因子如IL-2,IL-3,IL-4,IL-5,IL-6,IL-10,GM-CSF,幹擾素-γ(IFN-γ);激素例如胰島素,TRH(促甲狀腺激素釋放激素),MSH(促黑素細胞激素),類固醇激素如雄激素和雌激素;生長因子和集落刺激因子,如表皮生長因子(EGF),粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF),轉化生長因子(TGF)如TGF α,TGF β,胰島素和胰島素樣生長因子(IGF-I,IGF-II),G-CSF,M-CSF和GM-CSF(Burgess,Immunology Today 1984,5,155-158);牛痘生長因子(VGF);成纖維細胞生長因子(FGF);小分子量的蛋白質;多肽;肽和肽激素,如鈴蟾肽,胃泌素,胃泌素釋放肽;血小板衍生的生長因子;白細胞介素和細胞因子,例如,白細胞介素-2(IL-2),白細胞介素-6(IL-6),白血病抑制因子,粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF);維生素,如葉酸;脫輔基蛋白和糖蛋白,如轉鐵蛋白(O’Keefe et al,J.Biol.Chem.1985 260 932-937);糖結合蛋白或脂蛋白,如凝集素;細胞營養傳遞分子;小分子抑制劑,如前列腺特異性膜抗原(PSMA)抑制劑和小分子酪氨酸激酶抑制劑(TKI),非肽或任何其它細胞結合分子或物質,如生物活性聚合物(Dhar,et al,Proc.Natl.Acad.Sci.2008,105,17356-61),融合蛋白,激酶抑制劑,基因靶向劑,生物活性樹枝狀大分子(Lee,et al,Nat.Biotechnol.2005,23,1517-26;Almutairi,et al;Proc.Natl.Acad.Sci.2009,106,685-90),納米粒子(Liong,et al,ACS Nano,2008,19,1309-12;Medarova,et al,Nat.Med.2007,13,372-7;Javier,et al,Bioconjugate Chem.2008,19,1309-12),脂質體(Medinai,et al,Curr.Phar.Des.2004,10,2981-9)和病毒外殼(Flenniken,et al,Viruses Nanotechnol.2009,327,71-93)。
一般而言,如果適當的單克隆抗體是可用的,則優選單克隆抗體作為細胞表面結合劑。抗體可以是鼠源,人源,人源化,嵌合或源於其他物種。
用於本發明中的抗體的生產包括體內或體外方法或其組合。生產多克隆抗受體肽抗體的方法在本領域是公知的,例如美國專利4,493,795中所述。通常是通過將骨髓瘤細胞,與已經用所需抗原免疫的小鼠的脾細胞融合,來製備單克隆抗體(Köhler,G.;Milstein,C.Nature 1975,256:495-497)。詳細的過程在“Antibodies--A Laboratory Manual,Harlow and Lane,eds.,Cold Spring Harbor Laboratory Press,New York(1988)”中有描述,此處引作參考。具體地,可以用目標抗原,如從靶細胞、完整的病毒、滅活的全病毒和病毒蛋白質分離的抗原,來免疫小鼠,大鼠,倉鼠或任何其它哺乳動物而製備。通常使用聚乙二醇(PEG)6000將脾細
胞與骨髓瘤細胞融合。通過對HAT(次黃嘌呤-氨基蝶呤-胸腺嘧啶)的敏感性來篩選融合細胞。通過它們免疫反應特異性受體的能力或抑制靶細胞上的受體活性的能力,可以確定實施本發明的單克隆抗體的雜交瘤。
用於本發明中的單克隆抗體的生產在單克隆雜交瘤培養物裡進行,其中包含營養培養基和能分泌具有合適抗原特異性的抗體分子的雜交瘤。培養物在合適的條件下保持足夠長的一段時間,以使雜交瘤將抗體分子分泌到培養基。然後收集含有抗體的培養基。使用通過公知的技術進一步分離抗體分子,如蛋白質A親和層析,陰離子、陽離子、疏水或體積排阻色譜法(特別是通過蛋白質A親和層析和體積排阻色譜法),離心,差異溶解度或任何其他純化蛋白質的標準技術。
可用於製備這些組合物的培養基在本領域中是公知的,並且可商業獲得,也包括合成培養基。一個合成的培養基的例子是Dulbecco最少必需培養基(DMEM;Dulbecco et al.,Virol.1959,8,396)補充有4.5g/ml葡萄糖,0-20mM穀氨醯胺,0-20%胎牛血清,幾個ppm的Cu,Mn,Fe或Zn等重金屬或/和重金屬鹽,以及消泡劑如聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物。
另外,生產抗體的細胞系也可以通過融合以外的技術來獲得,例如將成瘤DNA移植至B淋巴細胞,或成瘤病毒轉染,如愛潑斯坦-巴爾病毒(EBV,也稱為人類皰疹病毒4(HHV-4))或卡波西肉瘤相關皰疹病毒(KSHV),見於美國專利4,341,761;4,399,121;4,427,783;4,444,887;4,451,570;4,466,917;4,472,500;4,491,632;4,493,890。單克隆抗體也可以通過含末端羧基的抗受體肽或肽製備,這些都為如本領域所公知,可參考文獻Niman et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1983,80:4949-4953;Geysen et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1985,82:178-182;Lei et al.Biochemistry 1995,34(20):6675-6688。通常,作為產生抗受體肽單克隆抗體免疫原,抗受體肽或肽同系物可以單獨使用或連接至免疫原性載體。
用作本發明中結合分子的單克隆抗體也可以通過其他本領域已知的技術獲得。特別有用的是製造完整人源抗體的方法。一種方法是噬菌體顯示技術,它使用親和富集的方式,可用於選擇能與抗原特異性結合的人源抗體。噬菌體展示技術在文獻中也有詳細描述,噬菌體展示庫的構建和篩選在本領域也是眾所周知的,可參考文獻Dente et al,Gene.1994,148(1):7-13;Little et al,Biotechnol Adv.1994,12(3):539-55;Clackson et al.,Nature 1991,352:264-628;Huse et al.,Science 1989,246:1275-1281。
通過與非人如小鼠細胞融合的雜交瘤產生的單克隆抗體,可以被人
源化以避免產生人類抗小鼠抗體。常見的抗體人源化方法是互補決定區移植技術,這些方法也已被詳細地描述,如美國專利5,859,205和6,797,492;Liu et al,Immunol Rev.2008,222:9-27;Almagro et al,Front Biosci.2008,13:1619-33;Lazar et al,MolImmunol.2007,44(8):1986-98;Li et al,Proc.Natl.Acad.Sci.U S A.2006,103(10):3557-62,此處引為參考。完整人抗體也可以通過用免疫原免疫攜帶大部分的人類球蛋白重輕鏈的轉基因小鼠、兔子、猴子或其他哺乳動物來製備。這些老鼠的例子有:Xenomouse(Abgenix/Amgen),HuMAb-Mouse(Medarex/BMS)和VelociMouse(Regeneron),參考美國專利6,596,541,6,207,418,6,150,584,6,111,166,6,075,181,5,922,545,5,661,016,5,545,806,5,436,149和5,569,825。用於人類治療時,小鼠的可變區域和人的恒定區域也可以被融合,成為“嵌合抗體”,它在人類身上的免疫原性顯著低於小鼠單抗(Kipriyanov et al,MolBiotechnol.2004,26:39-60;Houdebine,CurrOpinBiotechnol.2002,13:625-9)。另外,在抗體可變區域的定點誘變能導致抗體具有較高的親和性和特異性(Brannigan et al,Nat Rev Mol Cell Biol.2002,3:964-70;Adams et al,J Immunol Methods.1999,231:249-60),抗體恒定區域的改變可以提高其介導結合和細胞毒性的效應功能。
惡性腫瘤細胞抗原的免疫特異性抗體也可以從商業途徑獲得或通過任何已知方法生產,例如化學合成或重組表達技術。對惡性腫瘤細胞抗原具有免疫特異性的抗體的核苷酸序列編碼可以商業獲得,例如從GenBank資料庫或類似資料庫,文獻出版物獲得,或從常規克隆和測序得到。
除了抗體之外,與目標細胞上的表位或相應的受體相互作用(結合、阻斷、靶向或其他類型作用)的一種肽或蛋白質也可以作為結合分子。這些肽或蛋白質可能是任何隨機的肽或蛋白質,它們對表位或相應的受體有親和力,不一定非得是免疫球蛋白家族成員。這些肽可以通過類似噬菌體顯示抗體的技術分離出來(Szardenings,J Recept Signal Transduct Res.2003;23(4):307-49)。從隨機肽庫中獲得的肽可以同抗體和抗體片段類似地被使用。肽或蛋白質結合分子可以偶聯或連接至大分子或其他物質,包括但不限於白蛋白、聚合物、脂質體、納米粒子、樹形分子,只要這樣的連接能保留肽或蛋白質的抗原結合特異性。
在治療癌症、自身免疫性疾病和/或傳染性疾病的偶聯物上,和藥物分子通過本發明的連接體連接的抗體的例子包括,但不限於3F8(抗GD2),阿巴單抗(抗CA-125),阿昔單抗(抗CD41(整聯蛋白α-IIb),阿達木單抗(抗TNF-α),Adecatumumab(抗EpCAM,CD326),阿非莫單抗(抗TNF-α),Afutuzumab(抗
CD20),Alacizumab單抗(抗VEGFR2),ALD518(抗IL-6),Alemtuzumab(Campath,MabCampath,抗CD52),Altumomab(抗CEA),Anatumomab(抗TAG-72),Anrukinzumab(IMA-638,抗-IL-13),Apolizumab(抗-HLA-DR),阿奇單抗(抗-CEA),阿塞珠單抗(抗-L-選擇蛋白CD62L),Atlizumab(tocilizumab,Actemra,RoActemra,抗-IL-6受體),Atorolimumab(抗-Rhesus因子),Bapineuzumab(抗-β澱粉樣蛋白),Basiliximab(Simulect,抗CD25(IL-2受體的α鏈)),Bavituximab(抗磷脂醯絲氨酸),Bectumomab(LymphoScan,抗-CD22),貝利單抗(Benlysta,LymphoStat-B,抗BAFF),Benralizumab(抗CD125),Bertilimumab(抗CCL11(eotaxin-1)),Besilesomab(Scintimun,抗CEA相關抗原),貝伐單抗(Avastin,抗VEGF-A),Biciromab(FibriScint,抗纖維蛋白II β鏈),Bivatuzumab(抗-CD44v6),Blinatumomab(BiTE,抗CD19),Brentuximab(cAC10,抗-CD30 TNRSF8),Briakinumab(抗IL-12,IL-23),Canakinumab(Ilaris,抗IL-1),Cantuzumab(C242,抗CanAg),Capromab,Catumaxomab(Removab,抗EpCAM,抗CD3),CC49(抗TAG-72),Cedelizumab(抗CD4),Certolizumab單抗(Cimzia抗TNF-α),西妥昔單抗(愛必妥,IMC-C225,抗EGFR),Citatuzumab bogatox(抗EpCAM),Cixutumumab(抗IGF-1),Clenoliximab(抗CD4),Clivatuzu-mab(抗MUC1),Conatumumab(抗TRAIL-R2),CR6261(抗流感A血凝素),Dacetuzumab(抗CD40),Daclizumab(Zenapax,抗CD25(IL-2受體α鏈)),Daratumumab(抗CD38(環ADP核糖水解酶),Denosumab(Prolia,抗RANKL),Detumomab(抗B淋巴瘤細胞),Dorlimomab,Dorlixizumab,Ecromeximab(抗GD3神經節苷脂),Eculizumab(Soliris,抗-C5),Edobacomab(抗內毒素),Edrecolomab(Panorex,MAb17-1A,抗-EpCAM),Efalizumab(Raptiva,抗LFA-1(CD11a)),Efungumab(Mycograb,抗Hsp90),Elotuzumab(抗SLAMF7),Elsilimomab(抗IL-6),Enlimomab單抗(抗ICAM-1(CD54)),Epitumomab(抗episialin),依他珠單抗(抗-CD22),Erlizumab(抗-ITGB2(CD18)),Ertumaxomab(Rexomun,抗HER2/neu,CD3),依他拉單抗(Abegrin,抗整聯蛋白α v β 3),Exbivirumab(抗乙肝表面抗原),Fanolesomab(NeutroSpec,抗CD15),Faralimomab(抗幹擾素受體),Farletuzumab(抗葉酸受體1),Felvizumab(抗呼吸道合胞病毒),Fezakinumab(抗-IL-22),Figitumumab(抗-IGF-1受體),Fontolizumab(抗-IFN-γ),Foravirumab(抗狂犬病病毒糖蛋白),Fresolimumab(抗TGF-β),Galiximab(抗CD80),Gantenerumab(抗β澱粉樣蛋白),Gavilimomab(抗CD147(basigin)),Gemtuzumab(抗CD33),
Girentuximab(抗碳酸酐酶9),Glembatumumab(CR011,抗GPNMB),Golimumab(Simponi,抗-TNF-α),Gomiliximab(抗-CD23(IgE受體)),Ibalizumab(抗-CD4),Ibritumomab(抗CD20),Igovomab(Indimacis-125,抗CA-125),Imciromab(Myoscint,抗心肌肌凝蛋白),Infliximab(Remicade,抗TNF-α),Intetumumab(抗CD51),Inolimomab(抗CD25(IL-2受體α鏈),伊珠單抗(抗-CD22),Ipilimumab(抗CD152),Iratumumab(抗CD30(TNFRSF8)),Keliximab(抗-CD4),Labetuzumab(CEA-Cide,抗CEA),Lebrikizumab(抗IL-13),Lemalesomab(抗NCA-90(粒細胞抗原)),Lerdelimumab(抗TGF β 2),Lexatumumab(抗TRAIL-R2),Libivirumab(抗乙肝表面抗原),Lintuzumab(抗CD33),魯米木單抗(抗CD40),魯米單抗(抗CD23(IgE受體),Mapatumumab(抗TRAIL-R1),馬西莫單抗(抗T-細胞受體),馬妥珠單抗(抗EGFR),Mepolizumab(Bosatria,抗IL-5),Metelimumab(抗TGF β 1),Milatuzumab(抗CD74),Minretumomab(抗TAG-72),Mitumomab(BEC-2,抗GD3神經節苷脂),Morolimumab(抗恒河猴因子),Motavizumab(Numax,抗呼吸道合胞病毒),Muromonab-CD3(Orthoclone OKT3,抗CD3),Nacolomab(抗C242),Naptumomab(抗5T4),那他珠單抗(Tysabri,抗整聯蛋白α 4),奈巴單抗(抗內毒素),Necitumumab(抗EGFR),Nerelimomab(抗-TNF-α),Nimotuzumab(Theracim,Theraloc,抗-EGFR),Nofetumomab,Ocrelizumab(抗CD20),奧利木單抗(Afolimomab,抗LFA-1(CD11a)),Ofatumumab(Arzerra,抗CD20),Olaratumab(抗PDGF-Rα),Omalizumab(Xolair,抗IgE Fc區)Oportuzumab(抗EpCAM),Oregovomab(OvaRex,抗CA-125),Otelixizumab(抗CD3),Pagibaximab(抗脂磷壁酸),Palivizumab(Synagis,Abbosynagis,抗呼吸道合胞病毒),帕尼單抗(Vectibix,ABX-EGF,抗EGFR),Panobacumab(抗銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)),帕考珠單抗(抗IL-4),Pemtumomab(Theragyn,抗MUC1),Pertuzumab(Omnitarg,2C4,抗HER2/neu),Pexelizumab(抗C5),Pintumomab(抗腺癌抗原),Priliximab(抗-D4),Pritumumab(抗波形蛋白),PRO140(抗-CCR5)Racotumomab(1E10,抗-N-羥乙醯神經氨酸(NeuGc,NGNA)-神經節苷脂GM3)),Rafivirumab(抗狂犬病病毒糖蛋白),Ramucirumab(抗VEGFR2),Ranibizumab(Lucentis,抗VEGF-A),Raxibacumab(抗炭疽毒素,保護性抗原),Regavirumab(抗巨細胞病毒糖蛋白B),Reslizumab(抗-IL-5),Rilotumumab(抗-HGF),Rituximab(MabThera,Rituxanmab,抗-CD20),Robatumumab(抗-IGF-1受體),Rontalizumab(抗IFN-α),Rovelizumab(LeukAr-rest,抗CD11,CD18),
Ruplizumab(Antova,抗CD154(CD40L)),Satumomab(抗TAG-72),Sevirumab(抗巨細胞病毒),Sibrotuzumab(抗FAP),西法木單抗(抗IFN-α),Siltuximab(抗IL-6),Siplizumab(抗CD2),Smart MI95(抗CD33),Solanezumab(抗β澱粉狀蛋白),Sonepcizumab(抗鞘氨醇-1-磷酸),Sontuzumab(抗-episialin),Stamulumab(抗-myostatin),Sulesomab(LeukoScan,抗NCA-90(粒細胞抗原)),Tacatuzumab(抗α甲胎蛋白),Tadocizumab(抗整聯蛋白α IIb β 3),Talizumab(抗IgE),Tanezumab(anti-NGF),Taplitumomab(抗CD19),Tefibazumab(Aurexis,(抗凝聚因子A)),Telimomab,Tenatumomab(抗腱生蛋白C),Teneliximab(抗CD40),Teplizumab(抗CD3),TGN1412(抗CD28),Ticilimumab(Tremelimumab,抗-CTLA-4),Tigatuzumab(抗TRAIL-R2),TNX-650(抗IL-13),Tocilizumab(Atlizumab,Actemra,RoActemra,IL-6受體),Toralizumab(抗CD154(CD40L)),Tositumomab(抗CD20),曲妥珠單抗(赫賽汀,抗HER2/neu),Tremelimumab(抗CTLA-4),Tucotuzumab celmoleukin(抗EpCAM),Tuvirumab(抗乙型肝炎病毒),Urtoxazumab(抗大腸桿菌),Ustekinumab(Stelara,抗-IL-12,IL-23),Vapaliximab(抗-AOC3(VAP-1)),維多珠單抗(抗整聯蛋白α 4 β 7),維妥珠單抗(抗CD20),Vepalimomab(抗AOC3(VAP-1)),Visilizumab(Nuvion,抗CD3),Vitaxin(抗血管整合素avb3),Volociximab(抗整聯蛋白α 5 β 1),Votumumab(HumaSPECT,抗腫瘤抗原CTAA16.88),Zalutumumab(HuMax-EGFR,Zanolimumab(HuMax-CD4,抗-CD4),Ziralimumab(抗-CD147(basigin)),Zolimomab(抗-CD5),依那西普(Enbrel®),Alefacept(Amevive®),Abatacept(Orencia®),Rilonacept(Arcalyst),14F7(抗IRP-2(鐵調節蛋白2)),14G2a(抗GD2神經節苷脂,源於Nat.Cancer Inst.,治療黑素瘤和實體瘤),J591(抗-PSMA,源於Weill Cornell醫學院,治療前列腺癌),225.28S(抗HMW-MAA(高分子量黑素瘤相關抗原),Sorin Radiofarmaci SRL(源於義大利米蘭,治療黑色素瘤),COL-1(抗CEACAM3,CGM1,源於Nat Cancer Inst.治療結腸直腸癌和胃癌),CYT-356(oncoltad®,治療前列腺癌),HNK20(OraVax Inc.治療呼吸道合胞病毒感染),ImmuRAIT(源於Immunomedics,治療NHL),Lym-1(抗HLA-DR10,Peregrine Pharm),MAK-195F(抗TNF(腫瘤壞死因子,TNFA,TNF-α,TNFSF2,源於Abbott/Knoll,治療膿毒症中毒性休克),MEDI-500(T10B9,抗CD3,TR α β(T細胞受體α/β),源於MedImmune Inc,用於移植物抗宿主疾病病),RING SCAN(抗TAG 72(腫瘤相關糖蛋白72),源於Neoprobe Corp.,用於乳腺癌,結腸癌和直腸癌),Avicidin(抗EPCAM
(上皮細胞粘附分子)),抗-TACSTD1(腫瘤相關鈣信號轉導1),抗GA733-2(胃腸腫瘤相關蛋白2),抗EGP-2(上皮糖蛋白2),抗KSA,KS1/4抗原,M4S,腫瘤抗原17-1A,CD326(源於NeoRx公司,治療結腸癌,卵巢癌,前列腺癌和NHL),LymphoCide(源於Immunomedics),Smart ID10(源於Protein Design Labs),Oncolym(源於Techniclone Inc),Allomune(源於BioTransplant),抗VEGF(源於Genentech),CEAcide(源於Immunomedics),IMC-1C11(源於ImClone Systems)和Cetuximab(源於ImClone)。
其他可作為細胞結合分子/配體的抗體,包括但不限於,以下抗原的抗體:氨肽酶N(CD13),膜聯蛋白A1,B7-H3(CD276,各種癌症),CA125(卵巢癌),CA15-3(各種癌症),CA19-9(各種癌症),L6(各種癌症),路易士Y(各種癌症),路易士X(各種癌症),甲胎蛋白(各種癌症),CA242(結直腸癌),胎盤鹼性磷酸酶(各種癌症),前列腺特異抗原(前列腺癌),前列腺酸磷酸酶(前列腺癌),表皮生長因子(各種癌症),CD2(霍奇金症,NHL淋巴瘤,多發性骨髓瘤),CD3 ε(T細胞淋巴瘤,肺癌,乳腺癌,胃癌,卵巢癌,自身免疫性疾病,惡性腹水),CD19(B細胞惡性腫瘤),CD20(非霍奇金淋巴瘤),CD22(白血病,淋巴瘤,多發性骨髓瘤,SLE),CD30(霍奇金淋巴瘤),CD33(白血病,自身免疫性疾病),CD38(多發性骨髓瘤),CD40(淋巴瘤,多發性骨髓瘤,白血病(CLL)),CD51(轉移性黑色素瘤,肉瘤),CD52(白血病),CD56(小細胞肺癌,卵巢癌,梅克細胞癌,以及液體腫瘤,多發性骨髓瘤),CD66e(各種癌症),CD70(轉移性腎細胞癌和非霍奇金淋巴瘤),CD74(多發性骨髓瘤),CD80(淋巴瘤),CD98(各種癌症),粘液素(各種癌症),CD221(實體腫瘤)、CD227(乳腺癌、卵巢癌)、CD262(非小細胞肺癌及其他癌症)、CD309(卵巢癌)、CD326(實體腫瘤)、CEACAM3(結腸直腸癌、胃癌)、CEACAM5(癌胚抗原,CEA,CD66e)(乳腺,結直腸癌和肺癌),DLL4,EGFR(表皮生長因子受體,各種癌症),CTLA4(黑色素瘤),CXCR4(CD184,血液腫瘤,實體腫瘤),Endoglin(CD105,實體瘤),EPCAM(上皮細胞粘附分子,膀胱癌,頭頸癌,結腸癌,NHL前列腺癌,卵巢癌),ERBB2(表皮生長因子受體2,肺癌,乳腺癌,前列腺癌),FCGR1(自身免疫性疾病),FOLR(葉酸受體,卵巢癌),GD2神經節苷(各種癌症),G-28(細胞表面抗原糖脂質,黑色素瘤),GD3獨特型(各自癌症),熱休克蛋白(各種癌症),HER1(肺癌,胃癌),HER2(乳腺癌,肺癌和卵巢癌),HLA-DR10(NHL),HLA-DRB(NHL,B細胞白血病),人絨毛膜促性腺激素(各種癌症),IGF1R(類胰島素生長因子1受體,實體瘤,血癌),IL-2受體(白介素2受體,T細胞白血病和淋巴瘤),IL-6R(白介素6受體,多發性骨髓瘤,風濕性關節炎,Castleman病,白細胞介素6依賴腫瘤),整合
蛋白(α v β 3、α 5 β 1、α 6 β 4、α 11 β 3、α 5 β 5、α v β 5,各種癌症),MAGE-1(各種癌症),MAGE-2(各種癌症),MAGE-3(各種癌症),MAGE 4(各種癌症),抗轉鐵蛋白受體(各種癌症),p97(黑色素瘤),MS4A1(跨膜4結構域亞家族A成員1,非霍奇金B細胞淋巴瘤,白血病),MUC1或MUC1-KLH(乳腺癌、卵巢癌、子宮頸癌、支氣管癌和α胃腸道癌),MUC16(CA125)(卵巢癌),CEA(結直腸癌),gp100(黑色素瘤),MART1(黑色素瘤),MPG(黑素瘤),MS4A1(跨膜4結構域亞家族A成員1,小細胞肺癌,NHL),Nucleolin,Neu癌基因產物(各自癌症),P21(各種癌),抗(N-羥乙醯神經氨酸)抗體結合部位(乳腺癌,黑色素瘤),類PLAP睾丸鹼性磷酸酶(卵巢癌、睾丸癌),PSMA(前列腺瘤),PSA(前列腺癌),ROBO4,TAG 72(腫瘤相關糖蛋白72,AML,胃癌、結腸直腸癌、卵巢癌),T細胞跨膜蛋白(各種癌症),Tie(CD202b),TNFRSF10B(腫瘤壞死因子受體超家族成員10B,各種癌症),TNFRSF13B(腫瘤壞死因子受體超家族成員13B,多發性骨髓瘤,NHL,其他癌症,RA和SLE),TPBG(滋養細胞糖蛋白,腎細胞癌),TRAIL-R1(TNF相關壞死誘導配體受體1,淋巴瘤,NHL,結直腸癌,肺癌),VCAM-1(CD106,黑色素瘤),VEGF,VEGF-a,VEGF-2(CD309)(各種癌症)。其它可被抗體識別的,腫瘤相關抗原已被總結和評述(Gerber,et al,mAbs 2009,1:3,247-253;Novellino et al,Cancer ImmunolImmunother.2005,54(3),187-207;Franke,et al,Cancer BiotherRadiopharm.2000,15,459-76)。
細胞結合劑,優選為抗體,能夠抗以下細胞:腫瘤細胞,病毒感染細胞,微生物感染細胞,寄生蟲感染細胞,自身免疫細胞,活化的細胞,骨髓細胞,活化的T細胞,B細胞,或黑色素細胞。更具體地,細胞結合劑可以是任何能夠抗下列抗原或受體之一的試劑/分子:CD3,CD4,CD5,CD6,CD7,CD8,CD9,CD10,CD11a,CD11b,CD11c,CD12w,CD14,CD15,CD16,CDw17,CD18,CD19,CD20,CD21,CD22,CD23,CD24,CD25,CD26,CD27,CD28,CD29,CD30,CD31,CD32,CD33,CD34,CD35,CD36,CD37,CD38,CD39,CD40,CD41,CD42,CD43,CD44,CD45,CD46,CD47,CD48,CD49b,CD49c,CD51,CD52,CD53,CD54,CD55,CD56,CD58,CD59,CD61,CD62E,CD62L,CD62P,CD63,CD66,CD68,CD69,CD70,CD72,CD74,CD79,CD79a,CD79b,CD80,CD81,CD82,CD83,CD86,CD87,CD88,CD89,CD90,CD91,CD95,CD96,CD98,CD100,CD103,CD105,CD106,CD109,CD117,CD120,CD125,CD126,CD127,CD133,CD134,CD135,CD138,CD141,CD142,CD143,CD144,CD147,CD151,CD147,CD152,CD154,CD156,CD158,CD163,CD166,.CD168,CD174,CD180,CD184,CDw186,CD194,CD195,CD200,CD200a,CD200b,CD209,CD221,CD227,CD235a,CD240,
CD262,CD271,CD274,CD276(B7-H3),CD303,CD304,CD309,CD326,4-1BB,5AC,5T4(Trophoblast糖蛋白,TPBG,WNT-活化抑制因子1或WAIF1),腺癌抗原,AGS-5,AGS-22M6,啟動素受體激酶1,AFP,AKAP-4,ALK,α整合素,α v β 6,氨基肽酶N,澱粉樣蛋白β,雄激素受體,促血管新生蛋白因子2,促血管新生蛋白因子3,膜聯蛋白A1,炭疽毒素保護性抗原,抗轉移蛋白受體,AOC3(VAP-1),B7-H3,炭疽桿菌,BAFF(B細胞啟動因子),B淋巴瘤細胞,bcr-abl,蛙皮素,BORIS,C5,C242抗原,CA125(糖抗原125,MUC16),CA-IX(或CAIX,碳酸酐酶9),CALLA,CanAg,犬紅斑狼瘡IL31,碳酸酐酶IX,心肌肌凝蛋白,CCL11(C-C片段趨化因子11),CCR4(C-C趨化因子受體4,CD194),CCR5,CD3E(ε),CEA(癌胚抗原),CEACAM3,CEACAM5(癌胚抗原),CFD(因子D),Ch4D5,膽囊收縮素2(CCK2R),CLDN18(Claudin-18),叢生因子A,CRIPTO,FCSF1R(集落刺激因子1受體,CD115),CSF2(集落刺激因子2,粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)),CTLA4(細胞毒性T淋巴細胞相關蛋白4),CTAA16.88腫瘤抗原,CXCR4(CD184),C-X-C趨化因子受體4,環狀ADP核糖核酸酶,細胞週期蛋白B1,CYP1B1,巨細胞病毒,巨細胞病毒糖蛋白B,Dabigatran,DLL3(類△配體3),DLL4(類△配體4),DPP4(雙肽-肽酶4),DR5(死亡受體5),大腸桿菌shiga毒素類型-1,大腸桿菌shiga毒素類型-2,ED-B,EGFL7(類EGF結構域蛋白7),EGFR,EGFRII,EGFRvIII,內皮因子(CD105),內皮素B受體,內毒素,EpCAM(上皮細胞粘附分子),EphA2,Episialin,ERBB2(表皮生長因子受體2),ERBB3,ERG(TMPRSS2 ETS融合基因),大腸桿菌,ETV6-AML,FAP(成纖維細胞活化蛋白α),FCGR1,甲胎蛋白,纖維蛋白II β鏈,纖連蛋白額外結構域-B,FOLR(葉酸受體),葉酸受體α,葉酸水解酶,Fos相關抗原1,呼吸道合胞病毒的F蛋白,捲曲的受體,岩藻糖GM1,GD2神經節苷脂,G-28(細胞表面抗原糖脂),GD3獨特型,GloboH,Glypican 3,N-羥乙醯神經氨酸,GM3,GMCSF受體α鏈,生長分化因子8,GP100,GPNMB(跨膜糖蛋白NMB),GUCY2C(鳥苷酸環化酶2 C),鳥苷酸環化酶C(GC-C),腸鳥苷酸環化酶,鳥苷酸環化酶C受體,熱穩定腸毒素受體(hSTAR),熱休克蛋白,血凝素,乙肝表面抗原,乙型肝炎病毒,HER1(人類表皮生長因子受體1),HER2,HER2/neu,HER3(ERBB-3),IgG4,HGF/SF(肝細胞生長因子/分散因子),HHGFR,HIV-1,組蛋白複合物,HLA-DR(人類白細胞抗原),HLA-DR10,HLA-DRB,HMWMAA,人類絨毛膜促性腺激素,HNGF,人類分散因子受體激酶,HPV E6/E7,Hsp90,hTERT,ICAM-1(細胞間粘附分子1),獨特型,IGF1R(IGF-1,類胰島素生長因子1受體),IGHE,IFN-γ,流感血凝素,IgE,IgE Fc區,IGHE,IL-1,IL-2R(白介素2受體),IL-4,IL-5,IL-6,IL-6R(白介素6受體),IL-9,IL-10,
IL-12,IL-13,IL-17,IL-17A,IL-20,IL-22,IL-23,IL31RA,ILGF2(類胰島素生長因子2),整合蛋白(α 4、α IIb β 3、α v β 3、α 4 β 7、α 5 β 1、α 6 β 4、α 7 β 7、α 11 β 3、α 5 β 5、α v β 5),幹擾素γ誘導蛋白質,ITGA2,ITGB2,KIR2D,LCK,Le,Legumain,Lewis-Y抗原,LFA-1(淋巴細胞功能相關抗原1,CD11a),LHRH,LINGO-1,脂磷壁酸,LIV1A,LMP2,LTA,MAD-CT-1,MAD-CT-2,MAGE-1,MAGE-2,MAGE-3,MAGE A1,MAGE A3,MAGE 4,MART1,MCP-1,MIF(巨噬細胞遷移抑制因子,或糖基抑制因子(GIF)),MS4A1(跨膜4結構域亞家族A成員1),MSLN(間皮素),MUC1(粘蛋白1,細胞表面相關(MUC1)或多態性上皮粘蛋白(PEM)),MUC1-KLH,MUC16(CA125),MCP1(單核細胞趨化蛋白1),MelanA/MART1,ML-IAP,MPG,MS4A1,MYCN,髓磷脂相關糖蛋白,Myostatin,NA17,NARP-1,NCA-90(粒細胞抗原),Nectin-4(ASG-22ME),NGF,神經細胞凋亡調控蛋白酶1,NOGO-A,Notch受體,核仁素,Neu致癌基因產物,NY-BR-1,NY-ESO-1,OX-40,OxLDL(氧化低密度脂蛋白),OY-TES1,P21,p53非突變體,P97,PAP,抗(N-羥乙醯神經氨酸)抗體結合部位,PAX3,PAX5,PCSK9,PDCD1(PD-1、程式性細胞死亡蛋白1,CD279),PDGF-R α(α血小板源生長因子受體),PDGFR-β,PDL-1,PLAC1,類PLAP睾丸鹼性磷酸酶,血小板衍生生長因子受體β,磷酸鈉聯合轉運體,PMEL 17,聚唾液酸,蛋白酶3(PR1),前列腺癌,PS(磷脂醯絲氨酸),前列腺癌細胞,銅綠假單胞菌,PSMA,PSA,PSCA,狂犬病病毒糖蛋白,RHD(Rh多肽1(RhPI),CD240),Rhesus因子,RANKL,RhoC,Ras突變,RGS5,ROBO4,呼吸道合胞病毒,RON,肉瘤易位中斷點,SART3,Sclerostin,SLAMF7(SLAM成員7),Selectin P,SDC1(多配體蛋白聚糖1),系統性紅斑狼瘡(a),生長調節素C,SIP(1-磷酸鞘氨醇),生長激素抑制素,精子蛋白17,SSX2,STEAP1(6-跨膜上皮前列腺抗原1),STEAP2,STn,TAG-72(腫瘤相關糖蛋白),存活素,T細胞受體,T細胞跨膜蛋白,TEM1(腫瘤血管內皮標記1),TENB2,Tenascin C(TN-C),TGF-α,TGF-β(轉化生長因子β),TGF-β 1,TGF-β 2(轉化生長因子2),Tie(CD202b),Tie2,TIM-1(CDX-014),Tn,TNF,TNF-α,TNFRSF8,TNFRSF10B(腫瘤壞死因子受體超家族成員10 B),TNFRSF13B(腫瘤壞死因子受體超家族成員13B),TPBG(滋養細胞糖蛋白),TRAIL-R1(TNF相關壞死誘導配體受體1),TRAILR2(死亡受體5(DR5)),腫瘤相關的鈣信號傳感子2,腫瘤特異糖基化的MUC1,TWEAK受體,TYRP1(糖蛋白75),TRP-2,酪氨酸酶,VCAM-1(CD106),VEGF,VEGF-A,VEGF-2(CD309),VEGFR-1,VEGFR-2,vimentin,WT1,XAGE 1,表達胰島素生長因子受體的細胞,或表達表皮生長因子受體的細胞。
在另一個具體實施例中,細胞結合分子可以是選自以下的配體或受
體激動劑:葉酸衍生物(與葉酸受體結合、在卵巢癌和其他惡性腫瘤中超表達的蛋白質)(Low,PS等2008,Acc.Chem.Res.41,120-9);谷氨酸脲衍生物(與前列腺特異性膜抗原結合、前列腺癌細胞的表面標誌物)(Hillier,SM等,2009,Cancer Res.69,6932-40);生長抑制素(也稱為生長激素抑制激素(GHIH)或生長激素釋放抑制因子(SRIF)或生長激素釋放抑制激素)及其同系物,如奧曲肽(Sandostatin)和蘭瑞肽(Somatuline)(特別是用於神經內分泌腫瘤,產生GH的垂體腺瘤、副神經節瘤、非功能性垂體腺瘤、嗜鉻細胞瘤(Ginj,M.,等,2006,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 103,16436-41),以下瘤中生長激素抑制素受體亞型(sst1、sst2、sst3、sst4和sst5):分泌GH的垂體腺瘤(Reubi JC,L和olt,AM 1984 J.Clin.Endocrinol Metab 59:1148-51;Re ubi JC,L和olt AM 1987 J Clin Endocrinol Metab 65:65-73;Moyse E,等,J Clin Endocrinol Metab 61:98-103),胃腸胰腺腫瘤(Reubi JC,等,1987 J Clin Endocrinol Metab 65:1127-34;Reubi,J.C,等,1990 Cancer Res 50:5969-77),嗜鉻細胞瘤(Epel-baum J,等1995 J Clin Endocrinol Metab 80:1837-44;Reubi J C等,1992 J Clin Endocrinol Metab 74:1082-9),神經母細胞瘤(Prevost G,1996 Neuroendocrinology 63:188-197;Moertel,C.L,等1994 Am J Clin Path 102:752-756),甲狀腺髓樣癌(Reubi,J.C,等1991 Lab Invest 64:567-573),小細胞肺癌(Sagman U,等,1990 Cancer 66:2129-2133),腦膜瘤、成神經管細胞瘤或膠質瘤(Reubi JC,等1986 J Clin Endocrinol Metab 63:433-8;Reubi JC,等1987 Cancer Res 47:5758-64;Fruhwald,M.C,等1999 Pediatr Res 45:697-708),乳腺癌(Reubi JC,等1990 Int J Cancer 46:416-20;Srkalovic G,等1990 J Clin Endocrinol Metab 70:661-669),淋巴瘤(Reubi JC,等1992,Int J Cancer50:895-900),腎細胞癌(Reubi JC,等1992,Cancer Res 52:6074-6078),間充質腫瘤(Reubi JC,等1996 Cancer Res 56:1922-31),前列腺癌(Reubi J C,等1995,J.Clin.Endocrinol Metab 80:2806-14;等1989,Prostate 14:191-208;Halmos G,等J.Clin.Endo-crinol Metab 85:2564-71),卵巢癌(Halmos,G,等,2000 J Clin Endocrinol Metab 85:3509-12;Reubi JC,等1991 Am J Pathol 138:1267-72),胃癌(Reubi JC,等1999,Int J Cancer 81:376-86;Miller,G.V,1992 Br J Cancer 66:391-95),肝癌(Kouroumalis E,等1998 Gut 42:442-7;Reubi J C,等1999 Gut 45:66-774)及鼻咽癌(Loh K.S,等,2002 Virchows Arch 441:444-8);芳香磺醯胺(碳酸酐
酶IX特異性)(缺氧和腎細胞癌的標誌物)(Neri,D.,等,Nat.Rev.Drug Discov.2011,10,767-7);垂體腺苷酸環化酶啟動肽(PACAP)(PAC1)(用於嗜鉻細胞瘤和副神經節瘤);血管活腸肽(VIP)及其受體亞型(VPAC1,VPAC2);α-黑素細胞刺激素(α-MSH)受體;膽囊收縮素(CCK)或胃泌素受體及其受體亞型(CCK1(以前稱為CCK-A)和CCK2;血管活性腸肽(VIP)及其受體子類(VPAC1、VPAC2);α-黑素細胞刺激素(α-MSH)受體;膽囊收縮素(CCK)或胃泌素受體及其受體亞型(CCK);鈴蟾肽(Pyr-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2)或胃泌素釋放肽(GRP)及其受體子類(BB1,GRP受體子類(BB2)、BB3和BB4)(Ohlsson,B.,等,1999,Sc和.J.Gastroenterology 34(12):1224-9;Weber,HC,2009,Cur.Opin.Endocri.Diab.Obesity 16(1):66-71,Gonzalez N,等,2008,Cur.Opin.Endocri.Diab.Obesity 15(1),58-64);神經降壓素受體及其受體亞型(NTR1,NTR2,NTR3);物質P受體及其受體亞型(例如神經膠質腫瘤的NK1受體,Hennig I M,等1995 Int.J.Cancer 61,786-792);神經肽Y(NPY)受體及其受體亞型(Y1-Y6);歸巢肽包括RGD(Arg-Gly-Asp)、NGR(Asn-Gly-Arg)、二聚和多聚環狀RGD肽(如cRGDfV)(Laakkonen P,Vuorinen K.2010,Integr Biol(Camb).2(7-8):326-337;Chen K,Chen X.2011,Theranostics.1:189-200;Garanger E,等,Anti-Cancer Agents Med Chem.7(5):552-558;Kerr,JS等,Anticancer Research,19(2A),959-968;Thumshirn,G,等,2003 Chem.Eur.J.9,2717-2725),及TAASGVRSMH或LTLRWVGLMS(硫酸軟骨素蛋白多糖NG2受體)和F3肽(與細胞表面表達的核仁素受體結合的31個氨基酸肽)(Zitzmann,S.,2002 Cancer Res.,62,18,5139-5143;Temminga,K.,2005,Drug Resistance Updates,8,381-402;P.Laakkonen和K.Vuorinen,2010 Integrative Biol,2(7-8),326-337;M.A.Burg,1999 Cancer Res.,59(12),2869-2874;K.Porkka等2002,Proc.Nat.Acad.Sci.USA 99(11),7444-9);細胞穿透肽(CPPs)(Nakase I,等,2012,J.Control Release.159(2),181-188);肽激素,例如促黃體激素釋放激素(LHRH)的激動劑和拮抗劑,促性腺激素釋放激素(GnRH)激動劑,通過靶向卵泡刺激素(FSH)和促黃體激素(LH)以及睾酮產生而作用,如布舍瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt)、戈那瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)、戈舍瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-AzGly-NH2)、組氨瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(N-Bn)-Leu-Arg-Pro-NHEt)、亮丙瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt)、那法瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-
2Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)、曲普瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)、納法瑞林、地洛林、阿貝瑞林(Ac-D-2Nal-D-4-chloroPhe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-(N-Me)Tyr-D-Asn-Leu-isopropylLys-Pro-DAla-NH2)、西曲瑞克(Ac-D-2Nal-D-4-chloro-Phe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2)、地加瑞克(Ac-D-2Nal-D-4-chloroPhe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-4-aminoPhe(L-hydroorotyl)-D-4-aminoPhe(carba-moyl)-Leu-isopropylLys-Pro-D-Ala-NH2)和甘乃利(Ac-D-2Nal-D-4-chloroPhe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-Tyr-D-(N9,N10-diethyl)-homoArg-Leu-(N9,N10-diethyl)-homoArg-Pro-D-Ala-NH2)(Thundimadathil,J.,J.Amino Acids,2012,967347;Boccon-Gibod,L.;等,2011,Therapeutic Advances in Urology 3(3):127-140;Debruyne,F.,2006,Future Oncology,2(6),677-696;Schally A.V;Nagy,A.1999 Eur J Endocrinol 141:1-14;Koppan M,等1999 Prostate 38:151-158);模式識別受體(PRRs),如Toll樣受體(TLRs)、C型凝集素和結節狀的受體(NLRs)(Fukata,M.等,2009,Semin.Immunol.21,242-253;Maisonneuve,C.等,2014,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 111,1-6;Botos,I.等,2011,Structure 19,447-459;Means,T K等,2000,Life Sci.68,241-258),其分子量範圍從小分子(咪喹莫特、鳥嘌和腺苷同系物)到大型和復雜的生物大分子,如脂多糖(LPS)、核酸(CpG DNA,polyI:C)和脂肽(Pam3CSK4)(Kasturi,S P等,2011,Nature 470,543-547;Lane,T.,2001,JR Soc.Med.94,316;Hotz,C.,和Bourquin,C.,2012,Oncoimmunology 1,227-228;Dudek,A Z等,2007,Clin.Cancer Res.13,7119-25);降鈣素受體,它是一種32-氨基酸神經肽,主要通過其對破骨細胞和腎臟的作用參與鈣水準的調節(Zaidi M,等,1990 Crit Rev Clin Lab Sci 28,109-174;Gorn,A H,等1995 J Clin Invest 95:2680-91);整合素受體及其受體子類(如α V β 1,αV β 3,α V β 5,α V β 6,α 6β 4,α 7 β 1,α L β 2,α IIb β 3等),通常在血管生成中起重要作用,在多種細胞,特別是破骨細胞、內皮細胞和腫瘤細胞的表面表達(Ruoslahti,E.等,1994 Cell 77,477-8;Albelda,SM等,1990 Cancer Res.,50,6757-64)。短肽,GRGDSPK和環狀RGD五肽,如環(RGDfV)(L1)及其衍生物(環(-N(Me)R-GDfV)、環(R-Sar-DfV)、環-(RG-N(Me)D-fV)、環(RGD-N(Me)fV)、環(RGDf-N(Me)V-)(西崙吉肽))具有對整合素受體高親和力(Dechantsreiter,MA等,1999 J.Med.Chem.42,3033-40,Goodman,SL,等,2002 J.Med.Chem.45,1045-51)。
細胞結合分子或配體或細胞受體激動劑可以是基於Ig和非基於Ig的蛋白質支架分子。基於Ig的支架可以選自但不限於,納米抗體(VHH的衍生物(駱駝科動物Ig))(Muyldermans S.,2013 Annu Rev Biochem.82,775-97);結構域抗體(dAb,VH或VL結構域的衍生物)(Holt,L.J,等,2003,Trends Biotechnol.21,484-90);雙特異性T細胞接頭(BiTE、雙特異性雙抗體)(Baeuerle,P.A等,2009,Curr.Opin.Mol.Ther.11,22-30);雙重親和力重定向劑(DART,雙特異性雙抗體)(Moore PA P等.2011,Blood 117(17),4542-51);四價串聯抗體(T和Ab,、二聚雙特異性雙抗體)(Cochlovius,B等.2000,Cancer Res.60(16):4336-4341)。非Ig支架可以選自但不限於,Anticalin(Lipocalins的衍生物)(Skerra A.2008,FEBS J.,275(11):2677-83;Beste G等,1999 Proc.Nat.Acad.USA.96(5):1898-903;Skerra,A.2000 Biochim Biophys Acta,1482(1-2):337-50;Skerra,A.2007,Curr Opin Biotechnol.18(4):295-304;Skerra,A.2008,FEBS J.275(11):2677-83);Adnectin(第10個FN3(纖連蛋白))(Koide,A等,1998 J.Mol.Biol.,284(4):1141-51;Batori V,2002,Protein Eng.15(12):1015-20;Tolcher,A.W,2011,Clin.Cancer Res.17(2):363-71;Hackel,B.J,2010,Protein Eng.Des.Sel.23(4):211-19);設計的錨蛋白重複蛋白(DARPins)(錨蛋白重複(AR)蛋白的衍生物)(Boersma,Y L等,2011 Curr Opin Biotechnol.22(6):849-57),例如DARPin C9、DARPin Ec4及DARPin E69_LZ3_E01(Winkler J等,2009 Mol Cancer Ther.8(9),2674-83;Patricia MK.M.等,Clin Cancer Res.2011;17(1):100-10;Boersma Y.L等,2011 J.Biol.Chem.286(48),41273-85);高親和性多聚體(域A/低密度脂蛋白(LDL)受體)(Boersma Y.L,2011 J.Biol.Chem.286(48):41273-41285;Silverman J等,2005 Nat.Biotechnol.,23(12):1556-61)。
本專利申請的小分子細胞結合分子/配體或細胞受體激動劑的結構示例如下:LB01(葉酸)、LB02(PMSA配體)、LB03(PMSA配體)、LB04(PMSA配體)、LB05(生長抑制素)、LB06(生長抑制素)、LB07(奧曲肽、生長抑制素同系物)、LB08(蘭瑞肽、生長抑制素同系物)、LB09(伐普肽(Sanvar)、生長抑制素同系物)、LB10(CAIX配體)、LB11(CAIX配體)、LB12(胃泌素釋放肽受體(GRPr)、MBA)、LB13(促黃體激素釋放激素(LH-RH)和GnRH配體)、LB14(促黃體激素釋放激素(LH-RH)和GnRH配體)、LB15(GnRH拮抗劑、Abarelix)、LB16(鈷胺素、維生素B12同系物)、LB17(鈷胺素、維生素B12同系物)、LB18(用於
α v β 3整聯蛋白受體、環狀RGD五肽)、LB19(VEGF受體的異二價肽配體)、LB20(神經髓質素B)、LB21(蛙皮素,作用於G蛋白偶聯受體)、LB22(TLR2,作用於類Toll受體)、LB23(作用於雄性激素受體)、LB24(西崙吉肽或環(-RGDfV-)結合物,作用於α v整合素受體)LB25(利福布汀同系物)、LB26(利福布汀同系物)、LB27(利福布汀同系物)、LB28(氟氫可的松)、LB29(地塞米松)、LB30(丙酸氟替卡松)、LB31(丙酸倍米松)、LB32(醋酸曲安奈德)、LB33(潑尼松龍)、LB35(甲基強的松龍)、LB36(倍他米松)、LB37(伊立替康同系物)、LB38(克唑替尼同系物)、LB39(硼替佐米同系物)、LB40(卡菲佐米同系物)、LB41(卡非佐米同系物)、LB42(亮丙瑞林同系物)、LB43(曲普瑞林同系物)、LB44(克林黴素)、LB45(利拉魯肽同系物)、LB46(半長春新鹼同系物)、LB47(瑞他帕林同系物)、LB48(丁布林同系物)、LB49(長春鹼同系物)、LB50(利西森肽同系物)、LB51(奧西丁尼同系物)、LB52(核苷同系物)、LB53(厄洛替尼同系物)和LB54(拉帕替尼同系物),其結構如下所示:
偶聯物的應用
在一個具體實施例中,通過本專利的支鏈連接體連接的細胞結合劑-藥物偶聯物,可用作治療或預防癌症。目標癌症包括但不限於,腎上腺皮質癌、肛門癌、膀胱癌、大腦腫瘤(腦幹神經膠質瘤、小腦星形細胞瘤、腦星形細胞瘤、室管膜瘤、成神經管細胞瘤、幕上原始神經外胚層和松果體腫瘤、視覺通路和下丘腦膠質瘤)、乳腺癌、類癌腫瘤、胃腸道癌症、未知小細胞癌、宮頸癌、結腸癌、子宮內膜癌、食道癌、肝外膽管癌、尤因家族腫瘤(PNET)、顱內生殖細胞腫瘤、眼癌、眼內黑色素瘤、膽囊癌、胃癌(胃癌)、性腺外生殖細胞瘤、孕周滋養細胞瘤、頭頸癌、下嚥癌、胰島細胞癌、腎癌(腎細胞癌)、喉癌、白血病(急性淋巴細胞,急性髓系,慢性淋巴細胞,慢性粒細胞,毛細胞)、嘴唇和口腔癌症、肝癌、肺癌(非小細胞,小細胞)、淋巴瘤(愛滋病相關,中樞神經系統,皮膚T細胞,霍奇金病,非霍奇金病)、惡性間皮瘤、黑色素瘤、梅克爾細胞癌、轉移性鱗狀頸癌與隱匿性原發性癌、多發性骨髓瘤和其他漿細胞腫瘤、蕈樣肉芽腫、骨髓增生異常綜合征、骨髓增生異常、鼻咽
癌、神經母細胞瘤、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌(上皮、生殖細胞瘤、低惡性腫瘤)、胰腺癌(外分泌,胰島細胞癌)、副鼻竇和鼻腔癌、甲狀旁腺癌、陰莖癌、嗜鉻細胞瘤、垂體腫瘤、漿細胞腫瘤、前列腺癌橫紋肌肉瘤、直腸癌、腎細胞癌(腎癌)、腎盂和輸尿管(移行細胞)、唾腺癌、賽塞裡綜合症、皮膚癌(皮膚T細胞淋巴瘤,卡波西氏肉瘤,黑色素瘤)、小腸腫瘤、軟組織肉瘤、胃癌、睾丸癌、胸腺瘤(惡性)、甲狀腺癌、尿道癌症、子宮癌、不尋常的少年癌症、陰道腫瘤、外陰腫瘤和維爾姆斯瘤。
在另一個具體的實施例中,通過本專利的支鏈連接體連接的細胞結合劑-藥物偶聯物,可用作治療或預防自身免疫疾病的成分和方法。自身免疫性疾病包括但不限於,Achlorhydra自身免疫性活動性慢性肝炎,急性播散性腦脊髓炎,急性出血性腦白質炎,艾迪生病,無精症,斑禿,肌萎縮側索硬化症,強直性脊柱炎,抗GBM/TBM腎炎,抗磷脂綜合征,抗異常酶綜合征,關節炎,特應性過敏,特應性皮炎,自身免疫性再生障礙性貧血,自身免疫性心肌病,自身免疫性溶血性貧血,自身免疫性肝炎,自身免疫性內耳疾病,自身免疫性淋巴組織增生綜合征,自身免疫性周圍神經病,自身免疫性胰腺炎,自身免疫性多內分泌綜合征I,II和III型,自身免疫性黃體酮皮炎,自身免疫性血小板減少性紫癜,自身免疫性葡萄膜炎,Balo病/Balo同心硬化症,Bechets綜合征,Berger氏病,Bickerstaff腦炎,Blau綜合征,大皰性類天皰瘡,Castleman病,Chagas病,慢性疲勞免疫功能障礙綜合征,慢性炎性脫髓鞘性多發性神經病,慢性復發性多灶性骨髓炎,慢性萊姆病,慢性阻塞性肺病,Churg-Strauss綜合征,瘢痕性類天皰瘡,乳糜泄,Cogan綜合征,冷凝集素病,補體成分2缺乏症,顱骨動脈炎,CREST綜合征,Crohns病(特發性炎症性腸病),庫欣綜合征,皮膚白細胞增多性血管炎,德戈氏病,Dercum氏病,皰疹樣皮炎,皮肌炎,1型糖尿病,彌漫性皮膚系統性硬化症,Dressler綜合征,盤狀紅斑狼瘡,濕疹,子宮內膜異位症,附著點炎相關的關節炎,Eosinophilic筋膜炎,大皰性表皮松解症,結節性紅斑,特發性混合性冷球蛋白血症,伊文氏綜合征,纖維發育不良性骨化症,纖維肌痛,纖維化性肌炎,纖維性肺泡炎,胃炎,胃腸類天皰瘡,巨細胞動脈炎,腎小球腎炎,古德帕斯丘爾綜合征,格雷夫斯病,格林-巴厘綜合征,橋本氏腦炎,橋本氏甲狀腺炎,溶血性貧血,過敏性紫癜,妊娠性肝炎,化膿性汗腺炎,休斯綜合征(抗磷脂綜合征),低丙球蛋白血症,特發性炎性脫髓鞘疾病,特發性肺纖維化,特發性血小板減少性紫癜(自身免疫性血小板減少性紫癜),IgA腎病(伯傑氏病),包涵體肌炎,炎性脫髓鞘性多神經炎,間質性膀胱炎,過敏性腸綜合征,少年特發性
關節炎,青少年類風濕性關節炎,川崎氏病,朗伯-伊頓重症肌無力綜合征,白細胞碎屑性血管炎,扁平苔癬,硬化性硬化症,線狀IgA疾病(LAD),Lou Gehrig病(也稱肌萎縮側索硬化症),狼瘡性肝炎,紅斑狼瘡,Majeed綜合征,美尼爾氏病,顯微鏡下多動脈炎,米勒-費希爾綜合征,混合性結締組織病,硬斑病,穆罕默德-哈貝曼病,麥考利綜合征,多發性骨髓瘤,多發性硬化症,重症肌無力,肌炎,嗜睡症,視神經脊髓炎(Devic病),神經性肌強直,眼瞼瘢痕性類天皰瘡,Opsoclonus myoclonus綜合征,Ord甲狀腺炎,回文風濕病,PANDAS(與鏈球菌相關的小兒自身免疫性神經精神病),Paraneoplastic小腦變性,陣發性睡眠性血紅蛋白尿症,Parry Romberg綜合征,Parsonnage-Turner綜合征,睫狀體平部炎,天皰瘡,尋常型天皰瘡,貧血,周圍腦脊髓炎,POEMS綜合征,結節性多動脈炎,風濕性多肌痛,多發性肌炎,原發性膽汁性肝硬化,原發性硬化性膽管炎,進行性炎症性神經病變,牛皮癬,牛皮癬性關節炎,壞疽性皮膚炎,純紅細胞再生障礙,Rasmussen腦炎,雷諾現象,復發性多軟骨炎,賴特綜合征,不寧腿綜合症,後神經纖維化,類風濕性關節炎,類風濕熱,結節病,精神分裂症,施密特綜合征,Schnitzler綜合征,施尼茨勒綜合征,鞏膜炎,硬皮病,乾燥綜合征,脊椎關節病,粘稠血症,Still病,僵人綜合征,亞急性細菌性心內膜炎,蘇薩克綜合征,Sweet綜合征,小舞蹈病,交感神經性貧血,Takayasu動脈炎,顳動脈炎(巨細胞動脈炎),Tolosa-Hunt綜合征,橫貫性脊髓炎,潰瘍性結腸炎(特發性炎性腸病),未分化結締組織病,未分化脊柱關節病,血管炎,白癜風,韋格納肉芽腫病,威爾遜氏綜合征,威斯科特-奧爾德里奇綜合征。
在另一個具體的實施例中,在用於治療或預防自身免疫性疾病的偶聯物上,和藥物分子通過本專利的支鏈連接體連接的結合分子,包括但不限於,抗彈性蛋白抗體,Abys抗上皮細胞抗體,抗地下室膜IV型膠原蛋白抗體,抗核抗體,抗ds DNA,抗ss DNA,抗心磷脂抗體IgM,IgG,抗乳糜瀉抗體,抗磷脂抗體IgK,IgG,抗SM抗體,抗線粒體抗體,甲狀腺抗體,微粒體抗體,T細胞抗體,甲狀腺球蛋白抗體,抗SCL-70,抗Jo,抗U.sub.1RNP,抗La/SSB,抗SSA,抗SSB,抗壁細胞抗體,抗組蛋白,抗RNP,C-ANCA,P-ANCA,抗著絲粒,抗纖維蛋白原,抗GBM抗體,抗神經節苷脂抗體,抗Desmogein 3抗體,抗p62抗體,抗sp100抗體,抗線粒體(M2)抗體,類風濕因子抗體,抗MCV抗體,抗拓撲異構酶抗體,抗中性粒細胞胞質(cANCA)抗體。
在某些優選的實施例中,本專利中偶聯物上的結合分子,可以與自
身免疫性疾病相關的啟動淋巴細胞上表達的受體或受體複合物相結合。受體或受體複合物包含,免疫球蛋白基因超家族成員(例如CD2,CD3,CD4,CD8,CD19,CD20,CD22,CD28,CD30,CD33,CD37,CD38,CD56,CD70,CD79,CD79b,CD90,CD125,CD147,CD152/CTLA-4,PD-1或ICOS),TNF受體超家族成員(例如CD27,CD40,CD95/Fas,CD134/OX40,CD137/4-1BB,INF-R1,TNFR-2,RANK,TACI,BCMA,骨保護素,Apo2/TRAIL-R1,TRAIL-R2,TRAIL-R3,TRAIL-R4和APO-3),整合蛋白,細胞因子受體,趨化因子受體,主要組織相容性蛋白,凝集素(C型,S型或I型)或補體控制蛋白。
在另一個具體實施例中,可用的對病毒或微生物抗原具有免疫特異性的細胞結合配體是人源化或人單克隆抗體。“病毒抗原”包括但不限於,任何能夠引發免疫應答的病毒肽,多肽蛋白(例如HIV gp120,HIV nef,RSV F糖蛋白,流感病毒神經氨酸苷酶,流感病毒血凝素,HTLV Tax,皰疹單純皰疹病毒糖蛋白(例如gB,gC,gD和gE)和乙型肝炎表面抗原)。“微生物抗原”包括但不限於,任何能夠引發免疫應答的微生物肽,多肽,蛋白質,糖,多糖或脂質分子(例如細菌,真菌,致病原生動物或酵母多肽,包括如LPS和莢膜多糖)。可用於治療病毒或微生物感染的抗體的實例,包括但不限於:帕利珠單抗,它是用於治療RSV感染的,人源化抗呼吸道合胞病毒單克隆抗體;PRO542,是一種CD4融合抗體,用於治療HIV感染;奧斯他韋,是一種用於治療乙型肝炎病毒的人抗體;PROTVIR,是一種人源化IgG1抗體,用於治療巨細胞病毒,和抗LPS抗體。
通過本專利的支鏈連接體制得的細胞結合分子-藥物偶聯物可用於治療感染性疾病。這些感染性疾病包括但不限於,不動桿菌屬感染,放線菌病,非洲昏睡病(非洲錐蟲病),愛滋病(獲得性免疫缺陷綜合症),阿米巴病,無形體病,炭疽,溶血性耶爾森菌感染,阿根廷出血熱,蛔蟲病,麯黴病,星狀病毒感染,巴貝斯蟲病,蠟狀芽孢桿菌感染,細菌性肺炎,細菌性陰道炎,類桿菌感染,小袋蟲病,蛔蟲感染,BK病毒感染,黑色發結節病,人芽囊原蟲感染,芽生菌病,玻利維亞出血熱,疏螺旋體感染,肉毒中毒(和嬰兒肉毒中毒),巴西出血熱,布魯氏桿菌病,伯克霍爾德氏菌感染,布魯裡潰瘍,杯狀病毒感染(諾如病毒和沙波病毒),彎曲桿菌病,念珠菌病(念珠菌病,鵝口瘡),貓抓病,蜂窩組織炎,Chagas病(美洲錐蟲病),子囊,水痘,衣原體,肺炎衣原體感染,霍亂,色素母細胞瘤,華支睾吸蟲,艱難梭狀芽孢桿菌感染,球孢子菌病,科羅拉多蜱熱病,普通感冒(急性病毒性鼻咽炎,急性鼻炎),克雅氏病,克裡米亞-剛果出血熱,隱球菌病,隱孢子蟲病,皮膚
幼蟲遷徙,環孢子蟲病,腸桿菌感染,腸道病毒感染,流行性斑疹傷寒,傳染性紅斑(第五種疾病),急疹,薑片蟲病,肝片吸蟲病,致命性家族性失眠,絲蟲病,產氣莢膜梭菌食物中毒,自由活體阿米巴感染,梭桿菌感染,氣性壞疽(梭菌性肌壞死),地絲菌病,格斯特曼-斯特拉斯勒-謝克爾病綜合征,賈第鞭毛蟲病,馬鼻疽,淋病,肉芽腫性腹瀉(第五性病),A群鏈球菌感染,B群鏈球菌感染,流感嗜血桿菌感染,手足口病(HFMD),漢坦病毒肺綜合征,幽門螺桿菌感染,溶血性尿毒綜合征,腎綜合征出血熱,甲型肝炎,乙型肝炎,丙型肝炎,丁型肝炎,戊型肝炎,單純性皰疹,組織胞漿菌病,鉤蟲感染,人類博卡病毒感染,人類ewingii埃裡希體病,人類粒細胞無形體病,人類偏肺病毒感染,人類單核細胞埃裡希體病,人乳頭瘤病毒感染,人副流感病毒感染,膜殼絛蟲病,艾巴氏病毒傳染性單核細胞增多症(單),流行性感冒,等孢子蟲病,川崎病,角膜炎,金格桿菌感染,庫魯病,拉沙熱,軍團病(退伍軍人症),軍團病(皮蒂亞克熱),利什曼病,萊姆病,淋巴絲蟲病(象皮病),淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎,瘧疾,瑪律堡出血熱,麻疹,類鼻疽病(惠氏病),腦膜炎,腦膜炎球菌病,後殖吸蟲病,微孢子蟲病,傳染性軟疣,腮腺炎,小鼠斑疹傷寒(地方性斑疹傷寒),支原體肺炎,足菌腫,蠅蛆病,新生兒結膜炎(新生兒眼病),變異型克雅氏病(vCJD,nvCJD),諾卡氏菌病,盤尾絲蟲病(河盲症),副球孢子菌病(南美芽生菌病),肺吸蟲病,巴斯德氏菌病,頭蝨,體虱,陰虱,盆腔炎,百日咳,鼠疫,肺炎球菌感染,肺孢子蟲肺炎,肺炎,脊髓灰質炎,普氏菌感染,原發性阿米巴腦膜腦炎,進行性多灶性白質腦病,鸚鵡熱,Q熱,狂犬病,鼠咬熱,呼吸道合胞病毒感染,鼻孢子蟲病,鼻病毒感染,立克次體感染,立克次體痘,裂谷熱,洛磯山斑疹熱,輪狀病毒感染,風疹,沙門氏菌病,SARS(嚴重急性呼吸綜合征),疥瘡,血吸蟲病,敗血症,志賀氏菌病(Bacillary痢疾),帶狀皰疹(帶狀皰疹),天花(天花),孢子絲菌,葡萄球菌食物中毒,感染金黃色葡萄球菌,糞類圓線蟲病,梅毒,絛蟲病,破傷風,須癬(Barber癢),頭皮癬,體癬,股癬,手癬,掌黑癬,足癬(香港腳),甲癬(灰指甲),花斑癬,弓蛔蟲病(眼幼蟲移行症),弓蛔蟲病(內臟幼蟲移行症),弓形體病,旋毛蟲病,滴蟲病,鞭蟲病(鞭蟲感染),肺結核,兔熱病,解脲脲原體感染,委內瑞拉馬腦炎,委內瑞拉出血熱,病毒性肺炎,西尼羅河熱,白毛結節病(白癬),假結核耶爾森氏菌,耶爾森氏鼠疫桿菌腸道病,黃熱病,接合菌病。
本發明的細胞結合分子,更優選為抗體,對抗的病原菌株包括但不限於,鮑氏不動桿菌,以色列放線菌,放線菌和丙酸桿菌,布氏錐蟲,HIV(人免疫
缺陷病毒病毒),溶組織內阿米巴,無形體屬,炭疽芽孢桿菌,溶血弧菌,胡寧病毒,蛔蟲屬,麯黴屬,星狀病毒科,巴貝蟲屬,蠟狀芽孢桿菌,多種細菌,擬桿菌屬,大腸桿菌,蛔蟲屬,BK病毒,結節菌,人芽囊原蟲,皮炎芽生菌,馬丘波病毒,疏螺旋體屬,肉毒梭菌,清風藤屬,布魯氏菌屬,通常為洋蔥伯克霍爾德菌和其他伯克霍爾德氏菌種,潰瘍分枝桿菌,杯狀病毒科,彎曲桿菌屬,通常為白色假絲酵母和其他假絲酵母屬,漢賽巴爾通體,A群鏈球菌和葡萄球菌,克氏錐蟲,杜克雷嗜血桿菌,VZV,沙眼衣原體,科羅拉多蜱熱病毒,鼻病毒,冠狀病毒,CJD朊病毒,克裡米亞-剛果出血熱病毒,新型隱球菌,隱孢子蟲屬,巴西鉤蟲,多種寄生蟲,環孢子蟲,帶狀絛蟲,巨細胞病毒,登革熱病毒(DEN-1,DEN-2,DEN-3和DEN-4)-黃病毒,脆弱雙歧桿菌,白喉棒狀桿菌,裂頭絛蟲,麥迪那龍線蟲,埃博拉病毒,棘球絛蟲屬,埃立克體腸球菌屬,腸道病毒屬,普氏立克次體,細小病毒B19,人皰疹病毒6和人皰疹病毒7,布氏薑片蟲,肝片吸蟲和巨大片吸蟲,FFI朊病毒,絲蟲目超家族,產氣莢膜梭菌,梭桿菌屬,其他梭狀芽孢桿菌,白地黴,GSS朊病毒,腸道賈第蟲,伯克霍爾德氏菌,刺孢小芽孢桿菌和革蘭氏假絲酵母,淋球菌,肉芽腫克雷伯氏菌,化膿性鏈球菌,無乳鏈球菌,流感嗜血桿菌,腸道病毒,主要是柯薩奇A病毒和腸道病毒71,無名病毒,幽門螺旋桿菌,大腸桿菌O157:H7,布尼亞病毒科,甲型肝炎病毒,乙型肝炎病毒,丙型肝炎病毒,丁型肝炎病毒,戊型肝炎病毒,單純皰疹病毒1,單純皰疹病毒2,莢膜組織胞漿菌,十二指腸腺瘤和壺腹癌流感嗜血桿菌,人博卡病毒,埃裡希體,嗜吞噬細胞無嗜血桿菌,人偏肺病毒,查菲埃裡希體,人乳頭瘤病毒,人副流感病毒,微小膜殼絛蟲和縮小膜殼絛蟲,艾巴氏病毒,正粘病毒科家族,貝氏等孢球蟲,金格桿菌,肺炎克雷伯菌,克雷伯氏菌,嗜肺軍團菌,嗜肺軍團菌,嗜肺軍團菌,利什曼原蟲屬,麻風分枝桿菌和結核分枝桿菌,鉤端螺旋體屬,單核細胞增多性李斯特氏菌,伯氏疏螺旋體和其他疏螺旋體屬物種,班氏旋毛蟲和馬來絲蟲,淋巴細胞脈絡叢腦膜炎病毒(LCMV)瘧原蟲屬,瑪律堡病毒,麻疹病毒,類鼻疽伯克霍爾德氏菌,腦膜炎奈瑟氏球菌,橫川後殖吸蟲,小孢子蟲目門,傳染性軟疣病毒(MCV),腮腺炎病毒,傷寒立克次氏體,肺炎支原體,多種細菌和真菌寄生雙翅蠅幼蟲,沙眼衣原體和淋病奈瑟菌,vCJD朊病毒,諾卡氏菌和其他諾卡氏菌屬,盤尾絲蟲屬,盤鮑擬亞科,副龍屬西馬尼和其他副屬,巴斯德氏菌屬,頭蝨,人體虱,百日咳博多特氏菌鼠疫耶爾森氏菌,肺炎鏈球菌,肺炎球菌,脊髓灰質炎病毒,普雷沃氏菌屬,奈氏格氏桿菌,JC病毒,鸚鵡熱衣原體,伯氏考克斯體,狂犬病病毒,單鏈球菌和螺旋菌,呼吸道合胞病毒,鼻孢子菌,鼻病毒,立克次體屬,由小株立克次體,
裂谷熱病毒,立克次體立克次體,輪狀病毒,風疹,沙門氏菌屬,SARS冠狀病毒,人疥蟎,血吸蟲屬,體細胞屬,志賀菌屬,水痘帶狀皰疹病毒,天花少校或天花小,申克孢子絲菌,金黃色葡萄球菌屬,金黃色葡萄球菌,鏈球菌化膿,圓線蟲,梅毒螺旋體,絛蟲屬,破傷風,癬屬癬音鈾,癬屬,絮狀表皮癬菌,紅色毛癬菌,須毛癬菌,紅色毛癬菌,威尼克外瓶黴,毛癬菌屬屬,細胞死亡屬,弓箭毒或弓箭毒,剛地弓形蟲、旋毛蟲,陰道毛滴蟲,三丘裡三種,結核分枝桿菌,弗朗西拉圖拉菌,尿素和馬腦炎病毒,委內瑞拉馬腦炎病毒,霍亂弧菌,瓜納裡托病毒,西尼羅河病毒,beigelii絲孢,假結核耶爾森氏菌,小腸結腸炎耶爾森氏菌,黃熱病病毒,毛黴菌目階(毛黴菌病)和蟲黴目階(蟲黴屬真菌病),毛黴菌目綠膿桿菌,彎曲桿菌(弧菌),氣單胞菌,艾氏菌,耶爾森氏菌,志賀痢疾桿菌,志賀氏桿菌,志賀氏菌,沙門氏菌,傷寒沙門氏菌,雅司螺旋體,奮森氏螺旋體,伯氏疏螺旋體,細螺旋體,卡氏肺孢子蟲,流產布魯氏菌,布魯桿菌,布魯氏菌,支原體屬,普氏立克次體,恙蟲病立克次氏體,衣原體屬,致病性真菌(煙麯黴,白色念珠菌,莢膜組織胞漿菌),原生動物(溶組織內阿米巴,Tenas毛滴蟲,Hominis毛滴蟲,甘比亞錐蟲,羅得西亞錐蟲,羅氏利什曼原蟲,熱帶利什曼原蟲,巴西利什曼原蟲,肺孢子蟲肺炎,間日瘧原蟲,惡性瘧原蟲,瘧原蟲瘧疾)或Helminiths(日本血吸蟲,曼氏血吸蟲,埃及血吸蟲和鉤蟲)。
其他用作治療病毒性疾病的偶聯物上的抗體,包括但不限於,抗下列致病性病毒抗原的抗體:痘病毒;皰疹病毒;腺病毒;小黃病毒;腸病毒;小核糖核酸病毒;細小病毒;呼腸病毒;逆轉錄病毒;流感病毒;副流感病毒;腮腺炎;麻疹;呼吸道合胞病毒;風疹;蟲媒病毒;彈狀病毒;沙門氏菌;非a/非b型肝炎病毒;鼻病毒;冠狀病毒;羅托病毒;致癌病毒,如HBV(肝細胞癌),人乳頭狀瘤病毒(宮頸癌,肛門癌),卡波濟氏肉瘤相關的皰疹病毒(卡波濟氏肉瘤肉瘤)、人類皰疹病毒第四型(鼻咽癌、伯基特淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤)、瘤病毒(默克爾細胞癌)、SV40(猿猴病毒40)、HCV(肝細胞癌),HTLV-1(成人T細胞白血病/淋巴瘤);免疫紊亂導致病毒,如人類免疫缺陷病毒(愛滋病);中樞神經系統病毒,如JCV(進行性多灶性腦白質病),丙型肝炎病毒(亞急性硬化性全腦炎),LCV(淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎),亞博病毒腦炎,正粘病毒(腦炎性腦炎),RV(狂犬病),長鼻病毒,皰疹病毒腦膜炎,拉姆齊亨特綜合征II型,脊髓灰質炎病毒(脊髓灰質炎病毒,後脊髓灰質炎綜合征),HTLV-1(熱帶麻痹性麻痹));巨細胞病毒(巨細胞病毒視網膜炎,HSV(皰疹性角膜炎);心血管病毒,如CBV(心包炎,心肌炎);呼吸系統/急性病毒性鼻內炎/病毒性肺炎,
如愛潑斯坦-巴爾病毒(EBV感染/傳染性單核病),巨細胞病毒,非典冠狀病毒(嚴重急性呼吸綜合征)或正黏液病毒,流感病毒a/b/c(流感/禽流感),副粘病毒,人類副流感病毒,RSV(人類呼吸道合胞病毒),hMPV;消化系統病毒(腮腺炎病毒,巨細胞病毒(巨細胞病毒食管炎),腺病毒(腺病毒感染),輪狀病毒,諾瓦克病毒,星狀病毒,冠狀病毒,乙型肝炎病毒,CBV,甲型肝炎病毒,丙型肝炎病毒,丁型肝炎病毒,戊型肝炎病毒,HGV);泌尿生殖病毒,如BK病毒,MuV(腮腺炎)。
更進一步,本發明也包括用本發明中偶聯物和可接受的載體,稀釋劑或輔料構成的組合物,以治療癌症、感染或自身免疫性疾病。治療癌症、感染和自身免疫性疾病的方法可以在體外,體內或離體實施。體外用途的實例包括用它處理細胞培養物,以殺死除了不表達靶抗原的變體以外的所有細胞;或者殺死表達不需要的抗原的變體。離體使用的例子包括在進行移植(HSCT)之前對造血幹細胞(HSC)進行處理,以殺死患病或惡性腫瘤細胞。例如,在癌症治療中的自體移植之前或在自身免疫性疾病的治療中從骨髓中去除腫瘤細胞或淋巴細胞,或在移植之前為了防止移植物抗宿主疾病從同種異體骨髓或組織中除去T細胞和其他淋巴細胞。這樣的臨床離體治療可以按如下步驟進行:從患者或其他個體收穫骨髓,然後在含有血清的培養基中約37℃下孵育約30分鐘至約48小時,在該培養基中加入本發明的偶聯物,濃度範圍從約1pM至0.1mM。具體的藥物濃度和孵育時間應當由專業臨床醫師決定。孵育後,用含血清的培養基洗滌骨髓細胞,並按照已知的方法通過靜脈注射給患者。若患者在骨髓採集和再輸注治療細胞之間,還接受其它治療(例如消融化療或全身輻射療程)的情況下,應使用標準醫療設備將處理後的骨髓細胞在液氮中冷凍儲存。
用於協同作用的化學治療藥物或細胞毒性藥物
可以與本發明一起協同作用的化學治療藥物是包括細胞毒性劑在內的小分子藥物。本發明中的“小分子藥物”泛指分子量為100至2500,更優200至2000的有機、無機或金屬有機化合物。這些小分子藥物在本領域文獻中已被充分描述,如WO05058367A2和美國專利4,956,303等,此處引作參考。小分子藥物包括已知的藥物和即將被公開的藥物。
已知的藥物包括但不限於:
1)化療藥物:a)烷基化劑,如氮芥:苯那普,普那嗪,環磷醯胺,達卡巴嗪,雌二醇氮芥,異環磷醯胺,氮芥,鹽酸二甲氧胺,氧化二氮芥,鹽酸氨地平,麥考酚酸,衛矛醇,呱泊溴烷,新氮芥,苯芥膽甾醇,松龍苯芥,噻替呱,曲磷胺對,尿嘧啶;CC-1065(包括其阿多來新、卡折來新、比折來新及其合成同系
物);多卡黴素(包括KW-2189和CBI-TMI、及其合成同系物);苯並二氮卓二聚體(例如吡咯並苯二氮卓(PBD)或托美黴素,吲哚並苯並二氮卓,咪唑並苯並噻二氮卓或惡唑烷並苯並二氮卓的二聚體);亞硝基脲(卡莫司汀,洛莫司汀,化梭菌素,福莫司汀,尼莫司汀,拉莫司汀);烷基磺酸鹽(白蘇芬、樹蘇芬、磺胺異丙磺胺和皮蘇芬);三氮烯(達卡巴嗪);含鉑化合物(卡鉑,順鉑,奧沙利鉑);吖丙啶類,如苯並二氫吡喃酮,卡洛酮,美妥替派和烏雷多巴;乙烯亞胺和甲基三聚氰胺,包括六甲蜜胺,三亞乙基三胺,三乙基磷醯胺,三亞乙基硫代磷醯胺和三羥甲基甲基胺;b)植物生物鹼:如長春花生物鹼(長春新堿,長春堿,長春地辛,長春瑞濱,去甲長春堿);紫杉醇類(紫杉醇,多西紫杉醇及其同系物);美登素類(DM1、DM2、DM3、DM4、美登素、安沙黴素及其同系物);cryptophycin(特別是cryptophycin 1和cryptophycin 8);埃博黴素,軟瑚醇,迪莫利德,草苔蟲內酯,海兔毒素,奧瑞他汀,cephalostatin;pancratistatin;sarcodictyin;海綿抑制素;c)DNA拓撲異構酶抑制劑,例如依託泊苷替尼(9-氨基喜樹堿,喜樹堿,克立那托,多拉黴素,依託泊苷,磷酸依託泊苷,伊立替康,米托蒽醌,諾消靈,視黃酸(視黃醇),替尼泊苷,拓撲替康,9-硝基喜樹堿(RFS 2000));絲裂黴素(絲裂黴素C);d)抗代謝物,例如抗葉酸劑,DHFR抑制劑(甲氨蝶呤,曲麥克特,二甲葉酸,蝶羅呤,氨喋呤(4-氨基苯甲酸)或其他葉酸同系物);IMP脫氫酶抑制劑(麥考酚酸,噻唑呋林,利巴韋林,EICAR);核糖核苷酸還原酶抑制劑(羥基脲,去鐵胺);嘧啶同系物,尿嘧啶同系物(安西他濱,阿紮胞苷,6-氮尿嘧啶,卡培他濱(希羅達),卡莫氟,阿糖胞苷,雙去氧尿苷,去氧氟尿苷,依諾他濱,5-氟尿嘧啶,氟尿苷,ratitrexed(Tomudex);胞嘧啶同系物(阿糖胞苷,胞嘧啶阿拉伯糖苷,氟達拉濱);嘌呤同系物(硫唑嘌呤,氟達拉濱,巰嘌呤,硫胺素,硫鳥嘌呤);葉酸補充劑,如弗洛林酸;e)激素療法劑,如受體拮抗劑,抗雌激素(甲地孕酮,雷洛昔芬,他莫昔芬),LHRH興奮劑(戈斯他林,醋酸亮丙瑞林);抗雄激素藥(比卡魯胺,氟他胺,卡魯司酮,丙酸倍他雄酮,表雄甾醇,戈舍瑞林,亮丙瑞林,美替利定,尼魯米特,睾內酯,曲洛司坦及其他雄激素抑制劑);維甲類化合物,維生素D3同系物(CB1093,EB1089,KH1060,膽鈣化醇,麥角鈣化甾醇);光動力療法劑(維替泊芬,酞菁,光敏劑Pc4,去甲氧基-竹紅菌素A);細胞因子(幹擾素-α,幹擾素-γ,腫瘤壞死因子(TNF),含TNF的人蛋白);f)激酶抑制劑,如BIBW 2992(抗-EGFR/Erb2),伊馬替尼,吉非替尼,呱加他尼,索拉非尼,達沙替尼,舒尼替尼,厄洛替尼,尼洛替尼,拉帕替尼,阿西替尼,帕唑帕尼,凡德他尼,E7080(抗VEGFR2),
mubritinib,普納替尼(AP24534),bafetinib(INNO-406),bosutinib(SKI-606),卡博替尼,維莫德吉,iniparib,盧梭利替尼,CYT387,阿西替尼,tivozanib,索拉非尼,貝伐單抗,西妥昔單抗,曲妥珠單抗,雷珠單抗,帕尼單抗,伊斯平斯;g)聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制劑,如奧拉帕裡、尼拉帕裡、依尼帕裡、塔拉佐帕裡、維利帕裡、維利帕裡、CEP 9722(Cephalon)、E7016(Eisai)、BGB-290(Beigene)、3-氨基苯甲醯醯胺;h)抗生素,如烯二炔類抗生素(加利車黴素,特別是加利車黴素γ 1,δ 1,α 1和β 1(參考J.Med.Chem.1996,39(11),2103-2117;Angew Chem Intl.Ed.Engl.1994,33:183-186),達因黴素,包括達因黴素A和去氧米黴素,埃斯培拉黴素,卡達黴素,C-1027,maduropeptin,新卡嗪奧斯丁和相關色蛋白烯二炔抗生素),aclacinomysins,放線菌素,安麯黴素,重氮絲氨酸,博來黴素,卡諾黴素,卡拉黴素,洋紅黴素,嗜癌素,色黴素,達金黴素,柔紅黴素,去柔紅黴素,6-重氮-5-氧代-L-去甲亮氨酸,阿黴素,嗎啉-阿黴素,氰基嗎啉-阿黴素,2-吡咯啉阿黴素和去氧柔紅黴素,表柔比星,阿柔比星,伊達比星,馬可黴素,nitomycin,黴酚酸,諾加黴素,橄欖黴素,Peplomycin,potfiromycin,嘌呤黴素,奎拉黴素,羅道黴素,鏈黑黴素,鏈脲黴素,殺結核菌素,烏苯美司,淨司他丁,佐柔比星;i)其他,如聚酮化合物(番荔素),特別是bullatacin和bullatacinone;吉西他濱,環氧酶素(如卡菲偌米布),硼替佐米,沙利度胺,來那度胺,pomalidomide,tosedostat,zybrestat,PLX4032,STA-9090,Stimuvax,allovectin-7,Xegeva,Provenge,Yervoy,異戊二烯化抑制劑(如洛伐他汀),多巴胺能神經毒素(如星形孢菌素),放線菌素(如放線菌素D,更生黴素),博萊黴素(如博來黴素A2,博萊黴素B2,培洛黴素),蒽環類抗生素(如柔紅黴素),鵝膏毒素,阿黴素(亞德里亞黴素),伊達比星,表柔比星,吡柔比星,佐柔比星,米托蒽醌,MDR抑制劑(如維拉帕米),Ca2+ATP酶抑制劑(如毒胡蘿蔔素),組蛋白去乙醯酶抑制劑(伏立諾他,羅米地辛,帕比司他,丙戊酸,Mocetinostat(MGCD0103),Belinostat,PCI-24781,恩替諾特,SB939,Resminostat,Givinostat,AR-42,CUDC-101,蘿蔔硫素,曲古抑菌素A);塞來昔布,格列酮類,表沒食子兒茶素沒食子酸酯,雙硫侖,Salinosporamide A;抗腎上腺藥物,如氨魯米特,米托坦,曲洛司坦,醋葡醛內酯,醛磷醯胺,氨基乙醯丙酸,安吖啶,阿拉伯糖苷,bestrabucil,比生群,edatraxate,defofamine,美可辛,地吖醌,依氟鳥氨酸(DFMO),elfomithine,依利醋銨,依托格魯,硝酸鎵,胞嘧啶,羥基脲,伊班膦酸鹽,香菇多糖,尼達明,米托胍腙,米托蒽醌,莫呱達醇,
二胺硝吖啶,噴司他丁,蛋氨氮芥,吡柔比星,鬼臼酸,2-乙肼,甲基苄肼;PSK®;呱嗪二酮丙烷;根黴素;西佐;螺環鍺;細格孢氮雜酸;三亞胺醌;三三乙胺;單端孢黴烯(特別是T-2毒素,疣孢菌素A,杆孢菌素A和anguidine),聚氨酯,siRNA,反義藥物和核酸分解酶。
2)自身免疫疾病藥物,包括但不限於,環孢菌素,環孢菌素A,氨基己酸,硫唑嘌呤,溴隱亭,苯丁酸氮芥,喹,環磷醯胺,皮質類固醇(例如安西奈德,倍他米松,布地奈德,氫化可的松,氟尼縮松,丙酸氟替卡松,氟可龍達那唑,地塞米松,曲安奈德,二丙酸倍米松),DHEA,依那西普,羥基喹,英夫利昔單抗,美洛昔康,甲氨蝶呤,麥考酚酸酯,潑尼松,西羅莫司,他克莫司。
3)抗感染性疾病藥物,包括但不限於a)氨基糖苷類:阿米卡星,阿司米星,慶大黴素(奈替米星,西索米星,異帕米星),潮黴素B,卡那黴素(阿米卡星,阿貝卡星,氨基去氧卡那黴素,地貝卡星,妥布黴素),新黴素(framycetin,巴龍黴素,核糖黴素),奈替米星,壯觀黴素,鏈黴素,妥布黴素,甲基姿蘇黴素;b)醯胺醇類:疊氮黴素,黴素,氟苯尼考,甲碸黴素;c)安沙黴素:格爾德黴素,除莠黴素;d)碳青黴烯類:比阿培南,多利培南,厄他培南,亞胺培南/西司他丁,美羅培南,帕尼培南;e)頭孢烯:碳頭孢烯(洛拉卡比),頭孢乙腈,氨苄青黴素,頭孢拉定,頭孢羥氨,頭孢洛寧,頭孢噻啶,頭孢噻吩或頭孢金素,頭孢氨苄,頭孢來星,頭孢孟多,頭孢匹林,羥胺唑頭孢菌素,氟唑頭孢菌素,孢西酮,唑啉頭孢菌素,頭孢拉宗,頭孢卡品,頭孢達肟,頭孢吡,頭孢克肟,頭孢西丁,頭孢羅齊,頭孢甲氧環烯胺,頭孢替唑,頭孢呋辛,頭孢克肟,頭孢地尼,頭孢托侖,頭孢吡,頭孢他美,頭孢甲肟,頭孢地嗪,頭孢尼西,頭孢呱酮,頭孢雷特,頭孢噻肟,噻乙胺唑頭孢菌素,頭孢唑蘭,頭孢氨苄,頭孢咪唑,頭孢匹胺,頭孢匹羅,頭孢泊肟,頭孢羅齊,頭孢喹諾,頭孢磺啶,頭孢他啶,頭孢特侖,頭孢布騰,頭孢噻林,頭孢唑肟,頭孢吡普,頭孢曲松,頭孢呋辛,頭孢唑南,頭黴素(頭孢西丁,頭孢替坦,頭孢氰唑),氧(碳)頭孢烯(氟氧頭孢,拉氧頭孢);f)糖肽:博來黴素,萬古黴素(奧利萬星,特拉萬星),替考拉甯(達巴萬星),雷莫拉寧;g)甘氨醯環素:如替加環素;h)β-內醯胺酶抑制劑:青黴烷(舒巴坦,他唑巴坦),氧青黴烷(克拉維酸);i)林可醯胺:克林黴素,林可黴素;j)脂肽:達托黴素,A54145,鈣依賴性抗生素(CDA);k)大環內酯類:阿奇黴素,克黴素,克拉黴素,地紅黴素,紅黴素,氟雷黴素,交沙黴素,酮內酯(泰利黴素,塞紅黴素),麥迪黴素,米卡黴素,竹桃黴素,利福黴素(異煙肼、利福平,利福布丁,利福噴汀),羅匹黴素,羅
紅黴素,大觀黴素,螺旋黴素,他克莫司(FK506),醋竹桃黴素,泰利黴素;1)單環胺:氨曲南,替吉莫南;m)惡唑烷酮類:利奈唑胺;n)青黴素類:阿莫西林,氨苄青黴素(匹氨西林,海洛西林,巴氨西林,氨苄青黴素,阿黴素),阿替代西林,阿洛西林,苄青黴素,苄星青黴素苄青黴素,苄星青黴素苯氧甲基青黴素,克洛西林,普魯卡因青黴素(美替西林),美洛西林,甲氧西林,萘夫西林,苯唑西林,醋甲西林,青黴素,非奈西林,苯氧基甲基青黴素,呱拉西林,氨苄西林,磺苯西林,替莫西林,替凱西林;o)多肽:桿菌肽,粘菌素,多粘菌素B;p)喹諾酮類:阿拉曲沙星,巴羅沙星,環丙沙星,克林沙,達氟沙星,二氟沙星,依諾沙星,恩諾沙星,加雷沙星,加替沙星,吉米沙星,格帕沙星,卡諾曲伐沙星,左氧氟沙星,洛美沙星,麻保沙星,莫西沙星,那氟沙星,諾氟沙星,奧比沙星,氧氟沙星,培氟沙星,曲伐沙星,格帕沙星,西他沙星,司帕沙星,替馬沙星,托沙星,曲伐沙星;q)鏈陽性菌素:普那黴素,奎奴普丁/達福普汀;r)磺胺類:氨芐磺胺,偶氮磺胺,磺胺嘧啶,磺胺甲異唑、磺胺醯亞胺、磺胺吡啶、磺胺異惡唑、甲氧苄啶、磺胺甲惡唑(複方磺胺甲惡唑);s)類固醇抗菌藥物:如夫西地酸;t)四環素類:強力黴素,金黴素,米西環素,地美環素,雷莫昔林,美西環素,美他環素,米諾環素,土黴素,潘美環素,吡咯烷甲基四環素,四環素,甘氨醯環素(如替加環素);u)其他類型的抗生素:番荔枝素,胂凡納明,細菌萜醇抑制劑(桿菌肽),DANAL/AR抑制劑(環絲氨酸),dictyostatin,圓皮海綿內酯,軟瑚醇,埃博黴素,乙胺丁醇,依託泊苷,法羅培南,夫西地酸,呋喃唑酮,異煙肼,laulimalide,甲硝唑,莫匹羅星,NAM合成抑制劑(例如磷黴素),呋喃妥因,紫杉醇,普蘭西黴素,吡嗪醯胺,奎奴普丁/達福普汀,利福平,他唑巴坦替硝唑,烏菊花素。
4)抗病毒藥物:a)侵入/融合抑制劑:阿帕韋洛,馬拉韋羅,vicriviroc,gp41(恩夫韋肽),PRO 140,CD4(艾巴厘珠單抗);b)整合酶抑制劑:雷特格韋,elvite-gravir,globoidnan A;c)成熟抑制劑:bevirimat,vivecon;d)神經氨酸酶抑制劑:奧司他韋,紮那米韋,帕拉米韋;e)核苷和核苷酸:阿巴卡韋,阿昔單韋,阿德福韋,阿莫西韋,阿昔單抗,溴夫定,西多福韋,克拉夫定,地塞米松,去羥肌苷(ddI),elvucitabine,恩曲他濱(FTC),恩替卡韋,泛昔洛韋,氟拉西林(5-FU),3’-氟取代的2’,3’-去氧核苷同系物,如3’-氟-2’,3’-雙去氧胸苷(FLT)和3’-氟-2’,3’-雙去氧鳥苷(FLG),福米韋生,9-鳥嘌呤,碘苷,拉米夫定(3TC),1-核苷(例如β-1-胸苷和β-1-2’-去氧胞苷),噴昔洛韋,racivir,利巴韋林,迪替丁,司他夫定(d4T),塔利巴韋林
(viramidine),替比夫定,替諾福韋,三氟尿苷伐昔洛韋,纈更昔洛韋,紮西他濱(ddC),齊多夫定(AZT);f)非核苷類:金剛烷胺,阿替吡啶,卡普韋林,二芳基嘧啶(依曲韋林,rilpivirine),地拉夫定,二十二烷醇,乙米韋林,依法韋侖,膦甲酸(磷醯基甲酸),咪喹莫特,聚乙二醇幹擾素,洛韋胺,洛德腺苷,甲吲噻腙,奈韋拉平,NOV-205,長效幹擾素α,鬼臼毒素,利福平,金剛乙胺,瑞喹莫德(R-848),醋胺金剛烷;g)蛋白酶抑制劑:安普那韋,阿紮那韋,boceprevir,darunavir,福沙那韋,印地那韋,洛匹那韋,奈非那韋,普來可那立,利托那韋,沙奎那韋,telaprevir(VX-950),替拉那韋;h)其它類型的抗病毒藥物:抗體酶,阿比朵爾,calanolide a,ceragenin,氰維林-n,二芳基嘧啶,表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG),膦甲酸,格裡菲辛,taribavirin(viramidine),羥基脲,KP-1461,米替福新,普來可那立,混成抑制劑,利巴韋林,seliciclib。
5)放射治療使用的放射性同位素。放射性同位素(放射性核素)的實例有3H,11C,14C,18F,32P,35S,64Cu,68Ga,86Y,99Tc,111In,123I,124I,125I,131I,132Xe,177Lu,211At或213Bi。放射性同位素標記的抗體可用於受體靶向成像實驗,或者可用於如本發明的抗體-藥物偶聯物的靶向治療(Wu et al Nature Biotechnology 2005,23(9):1137-1146)。細胞結合分子,例如抗體可以通過本專利的連接體連結配體試劑,進行標記。配體可以用文獻(Current Protocols in Immunology,Volumes 1 and 2,Coligen et al,Ed.Wiley-Interscience,New York,N.Y.,Pubs.(1991))所述的方法與放射性金屬結合、螯合或生成複合物。可以絡合金屬離子的螯合配體包括DOTA,DOTP,DOTMA,DTPA和TETA(Macrocyclics,Dallas,TX)等。
6)另一種細胞結合分子-藥物偶聯物作為協同劑。優選的協同偶聯物上的細胞毒性分子為:Tubulysin同系物、美登木素生物鹼同系物、紫杉醇(紫杉烷)同系物、CC-1065同系物、柔紅黴素和多柔比星化合物、鵝膏毒素同系物、苯並二氮雜二聚體(如吡咯並苯並二氮雜的二聚體(PBD、托馬黴素、安麯黴素、indolinobenzodiazepines、咪唑苯並噻二氮卓類或噁唑烷二苯並二氮卓類)、加利西黴素和烯二炔類抗生素化合物、放線菌素、重氮絲氨酸、博萊黴素、表柔比星、他莫昔芬、伊達比星、海兔毒素、奧瑞他汀(如MMAE、MMAF、奧瑞他汀PYE、奧瑞他汀TP、奧瑞他汀2-AQ、6-AQ、EB(AEB)和EFP(AEFP))、多卡米星、格爾德黴素、氨甲喋呤、噻替派、長春鹼、長春新鹼、hemiasterlin、納沙醯胺、小金黴素、radiosumin、互花米草素、microsclerodermin、噻吩甲醯胺、埃斯呱黴素、PNU-
159682,以及它們的其同系物及以上所述物質的衍生物。
7)上述任何藥物的在藥學上可接受的鹽、酸或衍生物。
在另一個實施例中,免疫毒素可以作為協同藥物與細胞結合分子偶聯。本發明的免疫毒素是大分子藥物,通常是源自細菌或植物蛋白的細胞毒性蛋白,例如白喉毒素(DT)、霍亂毒素(CT)、天花粉蛋白(TCS)、香石竹毒蛋白、假單胞菌外毒素A(ETA)、紅細胞毒素,白喉毒素,AB毒素,III型外毒素等。它也可以是一種帶有劇毒的細菌成孔原毒素,經過蛋白酶水解啟動。原毒素的一個例子是前溶血素及其基因改造的形式topsalysin。Topsalysin是一種經過改性的重組蛋白,經過改造後被前列腺中的酶選擇性地啟動,致使局部細胞死亡和組織破壞,卻不會損傷鄰近的組織和神經。
在另一種協同免疫療法中,下列分子的抗體:檢查點抑製劑、TCR(T細胞受體)T細胞、CAR(嵌合抗原受體)T細胞、B細胞受體(BCR)、自然殺傷(NK)細胞,或CD3、CD4、CD8、CD16(Fc γ RIII)、CD27、CD40、CD40L、CD45RA、CD45RO、CD56、CD57、CD57bright、TNF β、脂肪酸合成酶配體、MHC I類分子(HLA-A,B,C)或NKR-P1的抗體,優選與本發明的偶聯物用於協同治療。
配方與應用
本專利申請的偶聯物被配製成液體,或者適於凍乾的形態,凍乾後被重新製成液體製劑。液體配方或配製的凍乾粉末中的偶聯物,為配方的主要成分,佔0.01%-99%的重量。一般而言,可在病人上施用,無高水準抗體聚集的液體製劑包含0.1克/升-300克/升的偶聯物活性成分、一種或多種多元醇(例如糖)、pH值為4.5至7.5的緩沖液、表面活性劑(如聚山梨酸20或80)、抗氧化劑(例如抗壞血酸和/或蛋氨酸)、強化劑(如甘露醇、山梨醇或化鈉)、螯合劑(如EDTA)、金屬絡合物(如鋅-蛋白絡合物)、可生物降解聚合物(如聚酯)、防腐劑(如苯甲醇)和/或遊離氨基酸。
用於製劑的合適緩沖液包括但不限於,有機酸鹽,例如檸檬酸、抗壞血酸、葡糖酸、碳酸、酒石酸、琥珀酸、乙酸或鄰苯二甲酸的鈉、鉀、銨或三羥乙基氨基鹽,氨基丁三醇鹽酸、硫酸或磷酸緩衝液。此外,氨基酸陽離子也可用作緩沖液。這些氨基酸包括但不限於,精氨酸、甘氨酸、甘氨醯甘氨酸和組氨酸。精氨酸緩衝液包括精氨酸乙酸鹽、精氨酸化物、精氨酸磷酸鹽、精氨酸硫酸鹽,精氨酸琥珀酸鹽等。在一個實施例中,精氨酸緩衝液是精氨酸乙酸鹽。組氨酸緩衝液的實例包括組氨酸化物-精氨酸化物、組氨酸乙酸鹽-精氨酸乙酸鹽、組氨酸磷酸鹽-精氨酸
磷酸鹽、組氨酸硫酸鹽-精氨酸硫酸鹽、組氨酸琥珀酸鹽-精氨酸琥珀酸鹽等。緩衝液的pH是4.5至pH7.5,優選約4.5至約6.5,更優選約5.0至約6.2。在一些實施例中,緩衝液中有機酸鹽的濃度為約10mM至約500mM。
在製劑中可選地含有的“多元醇”是具有多個羥基的物質。多元醇可用作液體和凍乾製劑中的穩定賦形劑和/或等滲劑。多元醇可以保護生物藥物免受物理和化學降解。最好能被排除的共溶劑增加了蛋白質介面處溶劑的有效表面張力,能量最有利的結構構像是表面積最小的那些溶劑。多元醇包括糖(還原和非還原糖)、糖醇和糖酸。“還原糖”是指含有半縮醛基團的糖,它能夠還原金屬離子,或與蛋白質中的賴氨酸和其他氨基發生反應,“非還原糖”是指不具有還原糖性質的糖。還原糖的例子有果糖、甘露糖、麥芽糖、乳糖、阿拉伯糖、木糖、核糖、鼠李糖、半乳糖和葡萄糖。非還原糖包括蔗糖、海藻糖、山梨糖、松解糖和棉子糖。糖醇選自甘露醇、木糖醇、赤蘚糖醇、麥芽糖醇、乳糖醇、赤蘚糖醇、蘇糖醇、山梨醇和甘油。糖酸包括L-葡萄糖酸鹽及其金屬鹽。液體配方或凍乾製劑中的多元醇含量,按重量計,為0.0%-20%。在配方中優選濃度約為0.1%到15%的非還原糖,蔗糖或海藻糖,其中由於海藻糖的溶液穩定性,海藻糖更優。
在製劑中可選的表面活性劑可選自聚山梨醇酯(聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯81、聚山梨醇酯85等);泊洛沙姆(如泊洛沙姆188、聚(環氧乙烷)-聚(環氧丙烷)、泊洛沙姆407或聚丙二醇-丙二醇等);Triton;十二烷基硫酸鈉(SDS);月桂基硫酸鈉;辛基糖苷鈉;十二烷基、肉荳蔻醯基、亞油基或硬脂基磺基甜菜鹼;十二烷基、肉荳蔻醯基、亞油基或硬脂基肌氨酸;亞油酸、肉荳蔻基或十六烷基甜菜鹼;月桂醯氨基丙基、椰油醯胺丙基、亞油醯胺基丙基、肉荳蔻醯基丙基、棕櫚醯基丙基或異硬脂醯氨基丙基-甜菜鹼(例如月桂醯胺丙基);肉荳蔻醯胺丙基、棕櫚醯丙基或異硬脂醯氨基丙基-二甲胺;甲基椰油醯基鈉或甲基油基牛磺酸二鈉;十二烷基甜菜鹼、十二烷基二甲基氧化胺、椰油醯胺丙基甜菜鹼和可哥兩性甘氨酸酯;MONAQUATTM系列(如異硬脂基乙基亞胺鎓乙基硫酸鹽);聚乙二醇,聚丙二醇,乙二醇和丙二醇的共聚物(如Pluronic、PF68等)。優選的表面活性劑是聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯,如聚山梨醇酯20、40、60或80(吐溫Tween20、40、60或80)。製劑中表面活性劑的濃度範圍,按照重量計,為0.0%至約2.0%。在某些特定實施例中,表面活性劑濃度為約0.01%至約0.2%。在一個實施例中,表面活性劑濃度為約0.02%。
在製劑中可選的“防腐劑”是從根本上可以減小其中細菌的化合物。
防腐劑的實例包括十八烷基二甲基芐基化銨、六甲基化銨、苯紮銨(烷基芐基二甲基化銨的混合物,其中烷基為長鏈烷基)和芐索銨。其他類型的防腐劑包括芳香醇如苯酚,丁基和芐基醇,對羥基苯甲酸烷基酯,如甲酯或丙酯,兒茶酚、間苯二酚、環己醇、3-戊醇和間甲酚。液體配方或凍乾粉末中的防腐劑含量,按照重量計,為0.0%-5.0%。在一個實施例中,所用防腐劑是苯甲醇。
在製劑中作為填充物質或張力劑或滲透壓調節劑的,合適的遊離氨基酸,選自但不限於精氨酸、胱氨酸、甘氨酸、賴氨酸、組氨酸、鳥氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸谷氨酸或天冬氨酸中的一種或多種。優選鹼性氨基酸為精氨酸、賴氨酸和/或組氨酸。如果組成中包含組氨酸,它可以充當緩衝劑和遊離氨基酸,但是當使用組氨酸緩衝液時,通常還要包含一個非組氨酸的遊離氨基酸,如賴氨酸。氨基酸可以以D-和/或L-型存在,但L-型比較常見。氨基酸可以任何合適的鹽的形式存在,如精氨酸鹽酸鹽。液體配方或凍乾粉末中的氨基酸含量,以重量計,為0.0%-30%。
可選地,製劑還包含甲硫氨酸,穀胱甘肽、半胱氨酸、胱氨酸或抗壞血酸作為抗氧化劑,在液體配方中濃度最多為約5毫克/毫升,在凍乾粉末中的含量,以重量計,為0.0%-5.0%;可選地,製劑包含金屬螯合劑,例如EDTA,EGTA等,在液體配方中濃度為約2mM,在凍乾粉末中的含量,以重量計,為0.0%-0.3%。
最終的製劑可以用緩沖調節劑(如一種酸,包括HCl、H2SO4、乙酸,H3PO4、檸檬酸等,或是鹼,如NaOH、KOH、NH4OH、乙醇胺、二乙醇胺或三乙醇胺、磷酸鈉、磷酸鉀、檸檬酸三鈉、氨基丁三醇等)調節至優選的pH值。製劑還應當被調節至“等滲”,即目標製劑具有與人血基本相同的滲透壓。等滲製劑滲透壓通常為250至350mOsm。可以使用蒸氣壓或冰凍型滲透壓計測量等滲性。等滲劑選自甘露醇、山梨糖醇、乙酸鈉、化鉀、磷酸鈉、磷酸鉀、檸檬酸三鈉或NaCl。通常,緩衝鹽和等滲劑在製劑中含量最多為30%(重量)。
用在本專利液體或凍乾製劑中賦形劑包括:例如,岩藻糖、纖維二糖、麥芽三糖、蜜二糖、辛酮糖、核糖、木糖醇、精氨酸、組氨酸、甘氨酸、丙氨酸、蛋氨酸、谷氨酸、賴氨酸、咪唑、甘氨醯甘氨酸、甘露糖基甘油酸酯、Triton X-100、Pluoronic F-127、纖維素、環糊精、(2-羥丙基)-β-環糊精、葡聚糖(10,40和/或70kD)、聚葡萄糖、麥芽糖糊精、聚蔗糖、明膠、羥丙基甲基纖維素、磷酸鈉、磷酸鉀、ZnCl2、鋅、氧化鋅、檸檬酸鈉、檸檬酸三鈉、氨基丁三醇、銅、纖連蛋白、肝素、人血清白蛋白、魚精蛋白、甘油、EDTA、甲酚、苯甲醇、苯酚、多元醇、羰基
被氫化還原成伯或仲羥基的糖。
其它可以在本專利申請的液體製劑中使用的賦形劑包括:調味劑、抗微生物劑、甜味劑、抗氧化劑、抗靜電劑、脂質如磷脂或脂肪酸脂、類固醇如膽固醇、蛋白質賦形劑如血清白蛋白(人血清白蛋白)、重組人白蛋白、明膠、酪蛋白、成鹽反離子如鈉等。這些和另外的適用於本發明製劑的,已知的藥物賦形劑和/或添加劑為本領域公知,如在由美國醫藥協會羅威(Rowe)等人編著的第四版《藥用輔料手冊》(The Handbook of Pharmaceutical Excipients)中所列;以及由威爾金斯出版公司出版,熱納羅(Gennaro)等人編著的第21版《雷明頓:藥學科學與實踐》(Remington:the Science and Practice of Pharmacy)中所列。
容納本專利申請中的偶聯物製劑的藥物容器或器具有:小瓶,瓶,預填充注射器,預填充或自動注射器。液體配方可以在硼矽酸鹽或鈉鈣玻璃小瓶中冷凍乾燥,或滾筒乾燥成餅或粉末形式。固體粉末也可以通過有效的噴霧乾燥製備,然後用小瓶或藥物容器包裝,用於儲存和配送。
在更進一步的實施例中,本發明提供了製劑的製備方法,包括以下步驟:(a)凍乾包含偶聯物,賦形劑和緩衝體系的配方;(b)在重構介質中重構步驟(a)中的凍乾混合物,以使得重構的製劑穩定。步驟(a)的製劑可進一步包含穩定劑和一種或多種賦形劑,選自前述填充劑、鹽、表面活性劑和防腐劑。重構介質可選用水,如無菌水,抑菌性注射用水(BWFI)、乙酸、丙酸、琥珀酸、化鈉、化鎂、化鈉的酸性溶液、化鎂的酸性溶液或精氨酸的酸性溶液,其含量為約10至約250mM。
本專利申請的偶聯物的液體製劑應具有各種預設的特徵。需要考慮的主要問題之一是其穩定性,因為蛋白質/抗體在製造和儲存期間,常會形成可溶及不溶的聚集體。此外,溶液中會發生各種化學反應(脫醯胺、氧化、剪切、異構化等),導致降解產物水準增加和/或生物活性喪失。液體或凍乾製劑中的偶聯物最好應在25℃下,具有超過6個月的貨架期。更優的液體或凍乾製劑中的偶聯物應在25℃下具有超過12個月的貨架期。最為優選的液體製劑應該在2-8℃下具有約24至36個月的貨架期,凍乾粉末在2-8℃下,應該具有長達約60個月的貨架期。液體製劑和凍乾製劑應該具有在-20℃或-70℃下至少兩年貨架期。
在某些實施例中,製劑在冷凍(例如-20℃或-70℃)和解凍後,如在冷凍和解凍1、2或3個循環後,還是穩定的。穩定性可以通過各種不同的方式進行定性和/或定量評估,包括評估藥物/抗體(蛋白質)比率和多聚體的生成(如使用紫外吸收光譜、尺寸排除色譜法、測量混濁度和/或通過目視檢查);評估電荷異質
性(使用陽離子交換色譜法、圖像毛細管等電聚焦(ICIEF)或毛細管電泳);氨基末端或羧基末端序列分析;質譜分析或MALDI/TOF MS或HPLC-MS/MS分析;SDS-PAGE分析,以比較還原及完整的抗體;肽圖(如胰蛋白酶或LYS--C)分析;評估抗體的生物活性或抗原結合能力等。製劑不穩定性可能涉及下列一種或多種內容:聚集、去醯胺(例如Asn脫醯胺)、氧化(例如Met氧化)、異構化(例如Asp異構化)、剪切或水解或裂解(例如鉸鏈區裂解)、琥珀醯亞胺生成、半胱氨酸不成對、N端延伸、C端加工及糖基化差異等。
如果在給定時間(例如12個月)內,所述偶聯物的生物活性能夠保持在製備時活性的約20%,優選約10%(測定的誤差範圍內),那麼該穩定的偶聯物在藥物製劑中應當可以“保持其生物活性”。生物活性可以通過如抗原結合和/或者體外細胞毒性分析測定。
用於臨床,本發明的支鏈連接體偶聯物將以溶液或凍乾固體的形式提供,所述凍乾固體可被重新溶解於無菌注射用水中。示例的施用偶聯物的方案如下:每天、每週、每兩週、每三週或每月一次,靜脈推注8-54周。在50至1000毫升的生理鹽水中加入藥物,可選地,加入人血清白蛋白(例如0.5至1毫升濃縮的人血清白蛋白溶液,100毫克/毫升)。每週給藥量為約50μg至20mg/kg體重,靜脈注射(每次注射10μg至200mg/kg體重)。治療結束後4-54週內,患者可接受第二療程治療。有關給藥途徑、賦形劑、稀釋劑、劑量、時間等的具體臨床方案可由熟練的臨床醫師確定。
用體內外殺死特定細胞的方法,可以治療的疾病的實例包括任何類型癌症的惡性腫瘤、自身免疫疾病、移植物排斥和感染(病毒、細菌或寄生蟲)。
達到所需治療效果需要的偶聯物的量取決於許多因素,包括偶聯物的化學特性、效力和生物利用度、疾病類型、患者所屬物種、患者患病狀態、給藥途徑,這些決定了所需藥物劑量、給藥方式和給藥方案。
一般而言,可將本發明的偶聯物配製成含有0.1至10%w/v偶聯物的生理緩衝溶液中,供注射使用。典型的劑量範圍是從1μg/kg至0.1g/kg(體重),每天、每週、每兩週、每三週或每月一次。優選的劑量範圍是每天0.01mg/kg至20mg/kg體重/每天,每週,每兩週、每三週或每月,或幼兒等效劑量。待施用的藥物的優選劑量可能取決於諸如疾病或病症的進展的類型和程度,特定患者的總體健康狀況,所選化合物的相對生物功效,藥物的配方,給藥途徑(靜脈內,肌肉內或其他),藥物指定運送途徑的藥代動力學性質,以及給藥速度(推注或連續輸注)和給
藥方案(給定時間內的重複次數)。
本發明的偶聯物還能夠以單位劑量形式給藥,其中術語“單位劑量”是指能夠給予患者的單次劑量,並且可以很容易地處置和包裝,同時活性偶聯物本身或如下文所述的藥學上可接受的組合物,保持物理和化學上穩定的單位劑量。典型的每天/每週/每兩周/每月總劑量範圍是從0.01至100mg/kg體重。作為一般指導原則,人類的單位劑量範圍為1mg到3000mg每天/每週/每兩周/每三週/每月。單位劑量優選1至500mg,一月一次至四次,更優選為1mg至100mg,每週/每兩周/每三週一次。本文提供的偶聯物可以通過與一種或多種藥學上可接受的賦形劑混合而配製成藥物組合物。這樣的單位劑量組合物可以通過口服給藥,如片劑,簡單膠囊或軟凝膠膠囊的形式的藥物;或鼻內給藥,如粉劑,滴鼻劑或氣霧劑的藥物;或皮膚給藥,如使用局部用軟膏,乳膏,乳液,凝膠或噴霧劑或通過透皮貼劑給藥。
在另一個實施方案中,包含治療有效劑量的結構式為(I)或(II)的偶聯物,或本發明中描述的其它任何偶聯物的藥物組合物,可以與其他治療劑,如化學治療劑,放射治療劑,免疫治療劑,自身免疫病症治療劑,抗感染劑或其他偶聯物協同給藥,以有效治療或預防癌症或自身免疫疾病或感染性疾病。協同劑優選自以下藥物中的一種或幾種:阿巴西普,醋酸阿比特龍,對乙醯氨基酚/氫可酮,阿達木單抗,阿法替尼馬來酸鹽,阿侖單抗,阿利維A酸,曲妥珠單抗,苯丙胺混合鹽(苯丙胺/右苯丙胺)阿那曲唑,阿立呱唑,阿紮那韋,Atezolizumab,阿托伐他汀,阿昔替尼,貝林,貝伐單抗,卡巴他賽,卡博替,貝沙羅汀,blinatumomab,硼替佐米,波舒替尼,brentuximab vedotin,布地奈德,布地奈德/福莫特羅,丁丙諾啡,卡培他濱,卡非佐米,塞來考昔,ceritinib,西妥昔單抗,環孢素,西那卡塞,克裡唑替尼,達比加群,達拉菲尼,阿法達貝汀,地瑞那韋,甲磺酸伊馬替尼,達沙替尼,地尼白介素,狄諾塞麥,雙丙戊酸鈉,右蘭索拉唑,右呱甲酯,Dinutuximab,多西環素,度洛西汀,恩曲他濱/利匹韋林/替諾福韋地索蒲賽富馬酸鹽,恩曲他濱/替諾福韋/依法韋侖,依諾肝素,恩雜魯胺,阿法依泊汀,厄洛替尼,埃索美拉唑,依折麥布,依折麥布/辛伐他汀,非諾貝特,非格司亭,芬戈莫德,丙酸氟替卡松,氟替卡松/沙美特羅,氟維司群,吉非替尼,格拉替雷,醋酸戈舍瑞林,伊馬替尼,替伊莫單抗,依魯替尼,胰島素門冬胰島素,地特胰島素,甘精胰島素,賴脯胰島素,幹擾素β 1a,幹擾素β 1b,拉帕替尼,Ipilimumab,異丙托溴銨/沙丁胺醇,醋酸蘭樂肽,來那度胺,聯合二甲苯磺酸鹽,來曲唑,左甲狀腺素,左旋甲狀腺素,利多卡因,利奈唑胺,利拉魯肽,MEDI4736,美金剛,呱醋甲酯,美托洛爾,莫達非尼,莫米
松,尼祿替尼,Nivolumab,奧法木單抗,奧立他珠單抗,帕唑帕尼,派姆單抗,培美曲塞,帕妥珠單抗,肺炎球菌結合疫苗,泊馬度胺,普瑞巴林,喹硫平,雷貝拉唑化鐳223,雷洛昔芬,拉替拉韋,雷莫瑞單抗,雷珠單抗,瑞格菲尼,利妥昔單抗,利伐沙班,羅米地辛,羅蘇伐他汀,盧梭替尼磷酸鹽,沙丁胺醇,司維拉明,西地那非,siltuximab,西他列汀,西他列汀/二甲雙胍,索非那新,索拉非尼,舒尼替尼,他達拉非,他莫昔芬,替拉普韋,替西羅莫司,替諾福韋/恩曲他濱,睾酮凝膠,沙利度胺(Talidex),噻托溴銨,托瑞米芬,曲美替尼,曲妥珠單抗,Tretinoin,尤特克單抗,纈沙坦,凡德他尼,維羅非尼,伏立諾他,阿柏西普,Zostavax及其同系物、衍生物、藥學上可接受的鹽、載體、稀釋劑或賦形劑,或其組合。
通過本發明中的支鏈連接體偶聯的藥物/細胞毒性劑,可以是本發明中描述的Tubulysin的任何同系物和/或衍生物。藥物/細胞毒劑領域的專業技術人員可以理解,本發明所述的Tubulysin均可以被修飾,只要獲得的化合物仍保留起始化合物的特異性和/或活性。本領域技術人員應理解,可以使用這些化合物來代替本發明所述的Tubulysin同系物。因此,本發明的Tubulysin同系物還包括這些衍生和被修飾的化合物。
本說明書和下文實施例中引用的所有文獻參考資料均全文引用作為參考。
〔圖1〕系說明Tubulysin同系物中Tuv片段的合成線路。
〔圖2〕系說明Tubulysin片段的合成。
〔圖3〕系說明Tubulysin片段的合成。
〔圖4〕系說明Tubulysin同系物片段的合成。
〔圖5〕系說明Tubulysin同系物片段的合成。
〔圖6〕系說明Tubulysin同系物片段的合成。
〔圖7〕系說明Tubulysin同系物片段的合成。
〔圖8〕系說明含有連接體的Tubulysin同系物片段的合成。
〔圖9〕系說明Tubulysin同系物片段的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖10〕系說明支鏈連接體片段的合成。
〔圖11〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖12〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖13〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖14〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物片段的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖15〕系說明支鏈連接體片段的合成及其與Tup片段的連接。
〔圖16〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖17〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖18〕系說明Tubulysin同系物片段的合成。
〔圖19〕系說明Tubulysin同系物片段的合成。
〔圖20〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖21〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖22〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖23〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。。
〔圖24〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖25〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖26〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin片段的合成。
〔圖27〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其通過抗體上的一對巰基與抗體偶聯。
〔圖28〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin片段的合成。
〔圖29〕系說明有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其通過抗體上的一對巰基與抗體偶聯。
〔圖30〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其通過抗體上的一對巰基與抗體偶聯。
〔圖31〕系說明Tubulysin片段的合成。
〔圖32〕系說明Tubulysin片段的合成。
〔圖33〕系說明Tubulysin片段的合成。
〔圖34〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin片段的合成。
〔圖35〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖36〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖37〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖38〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖39〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖40〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖41〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖42〕系說明Tubulysin同系物的合成。
〔圖43〕系說明Tubulysin同系物的合成。
〔圖44〕系說明Tubulysin同系物的合成。
〔圖45〕系說明Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖46〕系說明Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖47〕系說明Tubulysin同系物的合成。
〔圖48〕系說明Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖49〕系說明Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖50〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖51〕系說明Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖52〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖53〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其通過抗體上的一對巰基與抗體偶聯。
〔圖54〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其通過抗體上的一對巰基與抗體偶聯。
〔圖55〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖56〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖57〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成。
〔圖58〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其通過抗體上的一對巰基與抗體偶聯。
〔圖59〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其通過抗體上的一對巰基與抗體偶聯。
〔圖60〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖61〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖62〕系說明含有支鏈連接體的Tubulysin同系物的合成及其與抗體的偶聯。
〔圖63〕系說明使用人胃癌N87細胞模型,在6mg/kg劑量下靜脈一次注射,偶聯化合物474、486、493、601、626、637、641、669、673、680和692與T-DM1的抗腫瘤作用的比較。
〔圖64〕系說明在小鼠血清中與T-M1和有支鏈連接體的偶聯物
(680和692)以及常規單連接的偶聯物(化合物133)的穩定性相比。
本發明用下麵的實施例進一步地說明,這些實施例的內容並不旨在限制本發明的範圍。在實施例中細胞系,除了特殊說明之外,均是依據美國標準培養物保藏中心(ATCC)、德國菌種保藏中心(DSMZ)或中國科學院上海細胞培養中心規範的條件保存。除了特殊說明外,細胞培養試劑來自於Invitrogen公司。所有的無水試劑均由商業途徑獲得,並儲存於Sure-Seal密封瓶中。其他的試劑和溶劑均按照最高規格購買,使用時未經進一步的處理。用Varain PreStar HPLC進行製備HPLC分離。NMR譜在Bruker 500MHz儀器上獲得,化學位移以ppm為單位,四甲基矽烷為參考(0ppm),耦合常數(J)的單位是Hz。質譜數據在Waters Xevo Q Tof質譜儀(連接Waters Acquity UPLC高效液相色譜儀和TUV檢測器)上獲得。
向1,2-二甲酸肼二叔丁酯(8.01g,34.4mmol)的DMF(150ml)溶液中加入NaH(60%,礦物油中,2.76g,68.8mmol)。在室溫下攪拌30分鐘後,加入2-溴乙酸叔丁酯(14.01g,72.1mmol)。將混合物攪拌過夜,加入甲醇(3ml)淬滅、濃縮後用乙酸乙酯(100ml)和水(100ml)稀釋、分層,水層用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。將有機層合併,用硫酸鎂進行乾燥、過濾、濃縮,並通過矽膠柱層析法(乙酸乙酯/己烷1:5至1:3)純化,得到無色油狀的目標化合物(12.98g,82%產率)。MS ESI m/z C22H41N2O8[M+H]+:計算值461.28,實測值461.40。
向1,2-雙(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)肼-1,2-二甲酸二叔丁基酯(6.51g,14.14mmol)的1,4-二噁烷(40ml)溶液中加入鹽酸(12N,10ml)。將混合物攪拌30分鐘,用二噁烷(20ml)和甲苯(40ml)稀釋、濃縮,並依次與二噁烷(20ml)和甲苯(40ml)共同濃縮至乾,得目標產品(2.15g,產率為103%,純度約93%),不做進一步純化,用在下一步。MS ESI m/z C4H9N2O4[M+H]+:
計算值149.05,實測值149.40。
向2,2’-(1,2-肼基)二乙酸(1.10g,7.43mmol)的四氫呋喃(50ml)和磷酸二氫鈉(0.1M,80ml,pH 6.0)的混合物中加入(E)-3-溴丙烯醯溴(5.01g,23.60mmol)。將混合物攪拌6小時,濃縮並在矽膠柱上純化,用含有3%甲酸的水/乙腈(1:9)洗脫,得到目標化合物(2.35g,77%產率,-93%的純度)。MS ESI m/z C10H11Br2N2O6[M+H]+:計算值412.89,實測值413.50。
向2,2’-(1,2-雙((E)-3-溴丙烯醯基)-1,2-肼基)二乙酸(210mg,0.509mmol)的二乙烷(15ml)溶液中加入草醯(505mg,4.01mmol),然後加入0.040ml DMF。在室溫下攪拌2小時後,將混合物濃縮,依次與二乙烷(2×20ml)和甲苯(2×15ml)共濃縮至乾,得到目標產物(245mg,107%產率),無需進一步純化(不穩定)。MS ESI m/z C10H9Br2Cl2N2O4[M+H]+:計算值448.82,450.82,452.82,454.82,實測值448.60,450.60,452.60,445.60。
在4℃下,向3,3’-亞氨基二丙酸(10.00g,62.08mmol)的1.0N NaOH(300ml)溶液中,加入二碳酸二叔丁酯(22.10g,101.3mmol)的200ml THF溶液。添加1小時後,將混合物在4℃下攪拌2小時。用0.2M H3PO4將混合物小心酸化至pH-4,真空濃縮,用二甲烷萃取,用硫酸鈉乾燥,濃縮後用矽膠柱純化,用AcOH/MeOH/CH2Cl2(0.01:1:5)洗脫,得到3,3’-((叔丁氧基羰基)亞氨基)二丙酸(13.62g,產率84%)。ESI MS m/z C11H19NO6[M+H]+:計算值262.27,實測值262.40。
在0℃,向3,3’-((叔丁氧基羰基)亞氨基)二丙酸(8.0g,30.6mmol)的二甲烷(500ml)溶液中加入五氧化二磷(8.70g,61.30mmol)。將
混合物在0℃下攪拌2小時,然後在室溫下攪拌1小時,通過短矽膠柱過濾,並用乙酸乙酯/二甲烷(1:6)洗脫。濃縮濾液,用乙酸乙酯/正己烷打漿,得到目標化合物(5.64g,74%產率)。ESI MS m/z C11H17NO5[M+H]+:計算值244.11,實測值244.30。
在丙炔酸(5.00g,71.4mmol)的二甲烷(150ml)溶液中加入N,N’-二异丙基乙胺(5ml,28.7mmol)、NHS(9.01g,78.3mmol)和EDC(20.0g,104.1mmol),攪拌過夜,通過柱層析法(乙酸乙酯/正己烷1:4)純化,濃縮得到無色油狀的目標化合物(9.30g,產率79%)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 2.68(s,1H),2.61(s,4H)。MS ESI m/z C7H5NaNO4[M+Na]+:計算值190.02,實測值190.20。
向丙炔酸(5.00g,71.4mmol)、肼基羧酸叔丁酯(9.45g,71.5mmol)的二甲烷(150ml)溶液中加入N,N’-二异丙基乙胺(5ml,28.7mmol)和EDC(20.0g,104.1mmol),攪拌過夜,通過柱層析法(乙酸乙酯/正己烷1:5)純化,濃縮得到呈無色油狀的目標化合物(7.92g,產率84%)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.76(m,2H),2.68(s,1H),1.39(s,9H)。MS ESI m/z C5H12NaN2O2[M+Na]+:計算值155.09,實測值155.26。
將溶解在1,4-二噁烷(12mL)中的2-丙醇醯肼羧酸叔丁酯(4.01g,30.35mmol)與4ml濃鹽酸在4℃攪拌30分鐘,用二噁烷(30ml)和甲苯(30ml)稀釋,並減壓濃縮。將粗品用矽膠柱純化,使用甲醇/二甲烷(5%至10%,含1%的甲酸)的混合物作為洗脫劑洗脫,得到目標化合物(2.11g,產率83%),ESI MS m/z C3H5N2O[M+H]+:計算值85.03,實測值85.30。
在10-L反應釜中將二乙氧基乙腈(1.00kg,7.74mol)溶解於甲醇(6.0L),在室溫下加入(NH4)2S(48%水溶液,1.41kg,9.29mol)。釜內溫度升至33℃而後又降回室溫。攪拌過夜後,濃縮反應液。向殘留物中加入乙酸乙酯(5L),用飽和NaHCO3溶液(4×1.0L)洗,水相用乙酸乙酯(5×1.0L)反萃。合併有機相,用飽和食鹽水(3L)洗,之後用無水硫酸鈉乾燥,過濾後減壓濃縮。粗品用石油醚打漿,真空抽濾,收集固體並用石油醚洗滌。濾液濃縮後再用石油醚打漿,合併收集所得固體,總共得到1.1kg(87%產率)目標產物,為白色或亮黃色固體。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.81(d,J=71.1Hz,2H),5.03(s,1H),3.73(dq,J=9.4,7.1Hz,2H),3.64(dq,J=9.4,7.0Hz,2H),1.25(t,J=7.1Hz,6H)。
在5-L三頸圓底瓶上裝備一個回流冷凝管和一個恒壓滴液漏斗。在其中加入分子篩(3Å,500g)和硫醯胺2(350g,2.14mol)的乙醇溶液(3L),30分鐘內滴入3-溴丙酮酸乙酯(純度80%,404mL,2.57mol)。滴加過程中內溫稍有上升,隨後將反應液加熱至回流並攪拌30分鐘。將反應液冷卻至室溫後用矽藻土過濾除去不溶物,並用乙酸乙酯洗濾餅。濾液濃縮後的粗產物和矽膠(1.5kg)混合拌勻,通過矽膠柱(10kg)柱層析(10-20%乙酸乙酯/石油醚梯度洗脫)純化,得到棕色油狀物,為目標化合物(509g,92%產率)。
將縮醛(300g,1.16mol)的丙酮(3.0L)溶液加熱至回流,在1.0小時內滴加4N HCl溶液(250mL)。TLC顯示起始原料反應完全。反應液減壓濃縮後分離兩相。有機相加入乙酸乙酯稀釋(1.5L),並依次用飽和NaHCO3水溶液(1.0L)、水(1.0L)和食鹽水(1.0L)洗,然後用無水硫酸鈉乾燥。合併所有的水相並用乙酸乙酯反萃,並用無水硫酸鈉乾燥有機相。濾出乾燥劑後濃縮有機相,所得粗產品用石油醚/乙酸乙酯(5:1)溶液打漿,析出的固體經真空過濾收集,並用石油醚/乙酸乙酯(10:1)溶液洗。濾液濃縮用柱層析純化(0-15%乙酸乙酯/石油醚),所有固體合併,得目標產物40g(43%產率),為白色或亮黃色固體。1H NMR(500MHz,
CDCl3)δ 10.08-10.06(m,1H),8.53-8.50(m,1H),4.49(q,J=7.1Hz,2H),1.44(t,J=7.1Hz,3H)。MS ESI m/z C7H8NO3S[M+H]+:計算值186.01,實測值186.01。
將NaN3(740g,11.4mol)溶于水(2.0L)後加入二甲烷(2.0L)並冷卻至0℃,向該溶液中加入Tf2O(700mL,4.10mol),歷時1.5小時。加完後在0℃下繼續攪拌3小時。分離出有機相,水相用二甲烷萃取(2×500mL)。合併有機相,用飽和NaHCO3(3×1.0L)洗。室溫下將此二甲烷溶液加入到(L)-異亮氨酸(300g,2.28mol),碳酸鉀(472g,3.42mol),五水硫酸銅(5.7g,22.8mmol)的混合甲醇/水(1:1 v/v,6.0L)溶液中。加料過程中反應體系內溫度會稍微升高。混合液在室溫下攪拌16小時,減壓蒸去溶劑,水相用濃鹽酸(大約280mL)酸化至pH 6-6.5(約280mL),然後用磷酸鹽緩衝液稀釋(0.25M,pH 6.2,6.0L),用乙酸乙酯(6×2.0L)洗去磺酸胺副產物。水相用濃鹽酸(大約400mL)酸化至pH 3後用乙酸乙酯(4×2.0L)萃取。合併有機相,飽和食鹽水洗(2.0L),無水硫酸鈉乾燥,過濾濃縮得產物6(320g,89%產率),為亮黃色油狀物。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 12.01(s,1H),3.82(d,J=5.9Hz,1H),2.00(ddd,J=10.6,8.6,5.5Hz,1H),1.54(dqd,J=14.8,7.5,4.4Hz,1H),1.36-1.24(m,1H),1.08-0.99(m,3H),0.97-0.87(m,3H)。
在N2保護下室溫下向(S)-叔丁基亞磺酸胺(100g,0.825mol)的四氫呋喃(1L)溶液中加入Ti(OEt)4(345mL,1.82mol)和3-甲基-2-丁酮(81mL,0.825mol)。加熱反應液,回流16小時後冷卻至室溫,然後倒入冰水(1L)。過濾並且用乙酸乙酯洗濾餅。分離濾液中的有機相,無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮,其殘留物減壓蒸餾(15-20 torr,95℃)得目標產物10(141g,90%產率),為黃色油狀物。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 2.54-2.44(m,1H),2.25(s,3H),1.17(s,9H),1.06(dd,J=6.9,5.1Hz,6H)。MS ESI m/z C9H19NaNOS[M+Na]+:計算值212.12,實測值212.11。
在N2保護下,於-78℃下向二異丙胺(264mL,1.87mol)的四氫呋喃溶液中加入正丁基鋰溶液(2.5M,681mL,1.70mol)。反應在30分鐘內升溫至0℃然後重新冷卻至-78℃,向其中加入化合物10(258g,1.36mol)並用四氫呋喃(50mL)沖洗。攪拌1小時後滴加ClTi(OiPr)3(834g,3.17mol)的四氫呋喃(1.0L)溶液。滴加完成1小時後再緩慢滴入化合物4(210g,1.13mol)的四氫呋喃(500mL)溶液,耗時1小時。所得溶液在-78℃繼續攪拌3小時。TLC監測反應進行完全後,用乙酸和四氫呋喃(體積比1:1,300mL)的混合液淬滅反應,而後將反應液倒入鹽水(2L),用乙酸乙酯萃取(8×1L)。有機相用水和食鹽水洗,無水硫酸鈉乾燥,過濾並濃縮。殘留物經柱層析(二甲烷/乙酸乙酯/石油醚2:1:2)純化,得化合物11(298g,74%產率),為無色油狀物。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.13(s,1H),6.63(d,J=8.2Hz,1H),5.20-5.11(m,1H),4.43(q,J=7.0Hz,2H),3.42-3.28(m,2H),2.89(dt,J=13.1,6.5Hz,1H),1.42(t,J=7.1Hz,3H),1.33(s,9H),1.25-1.22(m,6H)。MS ESI m/z C16H26NaN2O4S2[M+Na]+:計算值397.13,實測值397.11。
將化合物11(509g,1.35mol)溶於四氫呋喃(200mL),冷卻至-78℃,向其中緩慢加入Ti(OEt)4(570mL,2.72mol),加完後攪拌1小時。然後在90分鐘內分批加入NaBH4(51.3g,1.36mol),反應在-78℃攪拌3小時。TLC監測發現起始原料仍有剩餘。緩慢加入EtOH(50mL),繼續攪拌1.5小時後將反應液倒入飽和食鹽水(2L,含250mL HOAc),升至室溫。經過矽藻土過濾,分離有機相。水洗、飽和食鹽水洗、無水硫酸鈉乾燥有機相、過濾並濃縮。殘留物經柱層析(乙酸乙酯/石油醚1:1)純化得化合物12(364g,71%產率),為白色固體。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.10(s,1H),5.51(d,J=5.8Hz,1H),5.23-5.15(m,1H),4.41(q,J=7.0Hz,2H),3.48-3.40(m,1H),3.37(d,J=8.3Hz,1H),2.29(t,J=13.0Hz,1H),1.95-1.87(m,1H),1.73-1.67(m,1H),
1.40(t,J=7.1Hz,3H),1.29(s,9H),0.93(d,J=7.3Hz,3H),0.90(d,J=7.2Hz,3H).MS ESI m/z計算值C16H28NaN2O4S2[M+Na]+:399.15,實測值399.14。
在0℃下於化合物12(600g,1.60mol)的乙醇(590mL)溶液中加入4N HCl的1,4-二氧六環(590mL)溶液。反應逐漸升至室溫後攪拌2.5小時。過濾收集析出的白色固體並用乙酸乙酯洗。濾液濃縮後用乙酸乙酯打漿。合併兩次獲得的白色固體,共446g(90%產率)。
將Azido-Ile-OH(6,153g,0.97mol)溶於四氫呋喃(1.5L)並冷卻至0℃,依次加入NMM(214mL,194mol)和甲酸異丁酯(95mL,0.73mol)。在0℃攪拌1小時後分批加入化合物13(150g,0.49mmol)。在0℃攪拌30分鐘後,逐漸升至室溫並繼續攪拌2小時。反應在0℃下加冰水淬滅並用乙酸乙酯萃取三遍。合併有機相用1N HCl洗,飽和NaHCO3洗和食鹽水洗,無水硫酸鈉乾燥。過濾濃縮,殘留物經柱層析(0-30%乙酸乙酯/石油醚)純化得到白色固體(140g,70%產率)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.14(s,1H),6.57(d,J=8.9Hz,1H),4.91(d,J=11.1Hz,1H),4.44(dd,J=13.2,6.3Hz,2H),4.08-3.95(m,2H),2.21(dd,J=24.4,11.5Hz,2H),1.90-1.79(m,3H),1.42(t,J=6.6Hz,3H),1.37-1.27(m,2H),1.11(d,J=6.4Hz,3H),1.01-0.94(m,9H)。MS ESI m/z計算值C18H30N5O4S[M+H]+:412.19,實測值412.19。
在0℃下依次向化合物14(436g,1.05mol)的二甲烷(50
mL)溶液中加入咪唑(94g,1.37mmol)和三乙基矽烷(222mL,1.32mol)。反應液歷時1小時升至室溫後,繼續攪拌1小時。加入飽和食鹽水淬滅,分出有機相,水相用乙酸乙酯萃取。合併後的有機相經乾燥、過濾、濃縮後用柱層析(15-35%乙酸乙酯/石油醚)純化得產物15(557.4g,95%產率),為無色油狀物。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.12(s,1H),6.75(d,J=8.0Hz,1H),5.20-5.12(m,1H),4.44(q,J=7.0Hz,2H),4.06-3.97(m,1H),3.87(d,J=3.8Hz,1H),2.14(d,J=3.8Hz,1H),2.01-1.91(m,3H),1.42(t,J=7.1Hz,3H),1.34-1.25(m,2H),1.06(d,J=6.8Hz,3H),1.00-0.93(m,18H),0.88(dd,J=19.1,6.8Hz,6H).MS ESI m/z C24H44N5O4SSi[M+H]+:計算值526.28,實測值526.28。
在0℃下向化合物15(408g,0.77mol)和碘甲烷(145mL,2.32mol)的四氫呋喃(4L)溶液中加入鈉氫(60%,62.2g,1.55mol)。將所得的反應液在0℃攪拌過夜,而後倒入激烈攪拌的冰水飽和化銨(5L)溶液中。用乙酸乙酯(3×500mL)萃取。合併後的有機相經乾燥、過濾、濃縮後用柱層析(15-35%乙酸乙酯/石油醚)純化得產物16(388g,93%產率),為亮黃色油狀物。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.09(s,1H),4.95(d,J=6.6Hz,1H),4.41(q,J=7.1Hz,2H),3.56(d,J=9.5Hz,1H),2.98(s,3H),2.27-2.06(m,4H),1.83-1.70(m,2H),1.41(t,J=7.2Hz,3H),1.29(ddd,J=8.9,6.8,1.6Hz,3H),1.01(d,J=6.6Hz,3H),0.96(dt,J=80,2.9Hz,15H),0.92(d,J=6.6Hz,3H),0.90(d,J=6.7Hz,3H).MS ESI m/z C25H46N5O4SSi[M+H]+:計算值540.30,實測值540.30。
向化合物16(1.01g,1.87mmol)的甲醇(15mL)溶液中滴入0.1N HCl直到pH為中性。加入Pd/C(10wt%,583mg)後將該混合溶液在H2(1atm)環境於
室溫攪拌16小時。濾去Pd/C,甲醇洗。濾液旋幹,殘留物複溶於乙酸乙酯(50mL)中,用無水硫酸鈉乾燥,過濾後濃縮得化合物17(900mg,94%產率),為淺黃色油狀物。
向D-呱啶酸(10.0g,77.4mmol)的甲醇(100mL)溶液中加入甲醛(37%水溶液,30.8mL,154.8mmol)和Pd/C(10wt%,1.0g)。將該反應液在H2(1atm)環境中攪拌過夜,而後用矽藻土過濾,甲醇洗。濾液濃縮得化合物22(10.0g,90%產率),為白色固體。
向D-N-甲基呱啶酸(2.65g,18.5mmol)的乙酸乙酯(50mL)溶液中加入五氟苯酚(3.75g,20.4mmol)和DCC(4.21g,20.4mmol)。反應在室溫下攪拌16小時,矽藻土過濾,用10mL乙酸乙酯洗。濾液不用進一步純化,直接使用。
將2-甲基丙氨酸(500g,4.85mol),甲醛(37%水溶液,1.0L,12.1mol)和甲酸(1.0L)的混合液加熱至回流(80℃)。攪拌3.0小時後冷卻至室溫,加入6N HCl(850mL),而後濃縮反應液。過濾收集所得的固體並用乙酸乙酯洗三遍(1.0L)。將固體溶于水(1.5L)並用4N NaOH(約1.0L)中和至pH 7。濃縮並用乙醇(2.0L)共沸以除水。殘留物用甲醇(2.0L)溶解,過濾除去NaCl固體,乙酸乙酯洗。濾液濃縮後得白色固體639.2g,包含有少量NaCl,可直接使用不用進一步純化。
向化合物28(97g,0.74mol)的乙酸乙酯(1L)溶液中加入五氟苯酚(163g,0.88mol)和DIC(126mL,0.81mol)。反應室溫攪拌24小時後用矽
藻土過濾,用10mL乙酸乙酯洗。濾液不經進一步純化直接使用。
向五氟苯基酯23的乙酸乙酯溶液中加入幹Pd/C(10wt%,300mg)和疊氮化合物16(3.33g,6.61mmol)。反應液在氫氣(1atm)環境中攪拌27小時,而後用矽藻土過濾,乙酸乙酯洗。濾液旋幹經柱層析(0-5%甲醇/乙酸乙酯)純化得化合30(3.90g,86%產率)。MS ESIm/z C32H59N4O5SSi[M+H]+計算值639.39,實測值639.39。
將化合物30(3.90g,6.1mmol)溶于乙酸/水/四氫呋喃(v/v/v 3:1:1,100mL)混合溶液中,室溫攪拌48小時。然後濃縮,殘留物經柱層析(2:98至15:85甲醇/乙酸乙酯)純化得化合物31(2.50g,兩步產率72%).MS ESI m/z C26H45N4O5S[M+H]+:計算值525.30,實測值525.33。
在0℃下將LiOH(0.4N,47.7mL,19.1mmol)水溶液加入化合物31(2.50g,4.76mmol)的1,4-二氧六環(47.7mL)溶液中。室溫攪拌2小時後濃縮。殘留物經柱層析(100%二甲烷至二甲烷/甲醇/氨水80:20:1)純化得化合物32(2.36g,99%產率),為無定形白色固體。MS ESI m/z C24H41N4O5S[M+H]+:計算值497.27,實測值497.28。
在0℃下向化合物32(2.36g,4.75mmol)的吡啶(50mL)溶液中滴入乙酸酐(2.25mL,24mmol)。反應經2小時逐漸升至室溫,並繼續攪拌24小時。濃縮後加入1,4-二氧六環/水(v/v 1:1,10mL)混合液攪拌1小時,以破壞可能生成的酸酐。濃縮後的殘留物經柱層析(100%二甲烷至二甲烷/甲醇/氨水50:50:1)純化,得化合物33(2.25g,88%產率)為無定形白色固體。MS ESI m/z C26H43N4O6S[M+H]+:計算值539.28,實測值539.28。
向上述五氟苯基酯29的乙酸乙酯溶液中加入化合物16(200g,0.37mol)和幹的Pd/C(10wt%,10g)。反應液在氫氣(1atm)環境中攪拌27小時。矽藻土過濾,乙酸乙酯洗。合併的有機相濃縮後經柱層析(0-5%甲醇/乙酸乙酯)純化得化合物38(184g,79%產率).MS ESI m/z C31H58N4O5SSi[M+H]+:計算值627.39,實測值627.39。
將化合物38(200g,0.32mmol)溶于乙酸/水/四氫呋喃(v/v/v 3:1:1,638mL)混合溶液中,室溫攪拌4天。反應液濃縮後用甲苯共沸帶幹,此步驟重複兩遍後得化合物39,直接用於下一步反應。MS ESI m/z C25H45N4O5S[M+H]+:計算值513.30,實測值513.30。
在0℃下將氫氧化鋰(0.4N,600mL,2.55mol)的水溶液加入化合物39(160g,0.319mol,1.0eq.)的甲醇(1.2L)溶液中。反應在室溫攪拌2小時後濃縮。經柱層析(100%二甲烷至80:20:1二甲烷/甲醇/氨水)得化合物40(140g,兩步產率91%)為無定形白色固體。MS ESI m/z C23H40N4O5S[M+H]+:計算值
485.27,實測值485.27。
將化合物40(143g,0.30mol)和DMAP(0.36g,2.95mmol)溶于無水四氫呋喃(1.4L)與無水DMF(75mL)的混合溶液中。冷卻至0℃,加入三乙胺(82.2mL,0.59mmol)和乙酸酐(56mL,0.59mmol)。反應逐漸升至室溫並攪拌24小時。濃縮後經柱層析(5-50%甲醇/二甲烷)純化得化合物41(147g,95%產率),為無定形白色固體。MS ESI m/z C25H44N4O6S[M+H]+:計算值527.28,實測值527.28。
在室溫下的氮氣環境中,向化合物41(5.0g,9.5mmol,1.0當量)的無水二甲烷(100mL)溶液中加入EDC(4.6g,23.8mmol,2.5當量)和五氟苯酚(4.4g,23.8mmol,2.5當量)。將混合物在室溫下攪拌2小時,然後在二甲烷(100mL)中稀釋,用水(2×200mL)和鹽水(200mL)洗滌,經無水硫酸鈉乾燥,過濾、濃縮,並通過矽膠柱層析法(50% EtOAc/PE)純化,得到白色固體狀的化合物41a(5.2g,產率79%)。MS ESI m/z C31H42F5N4O6S[M+H]+:計算值693.27,實測值693.27。
向配備有機械攪拌棒的500mL圓底瓶中加入三苯基膦(100g,381mmol)和2-溴丙酸乙酯(100mL,762mmol)。反應液在N2保護下加熱至50℃,攪拌過夜。當白色固體(PPh3)全部溶解後,大量的白色產物開始析出。經石油醚/乙酸乙酯打漿後抽濾收集白色固體,得化合物95(135g,80%產率)。MS ESI m/z C23H24O2P[M-Br]+:計算值363.15,實測值363.13.。
在劇烈的攪拌下將化合物95(135.42g,305.7mmol)的二甲烷(500mL)溶液加入到10% NaOH(450mL)水溶液中。有機相立即變黃,攪拌30分鐘後,TLC顯示反應完全。分離出有機相,水相用二甲烷(2×200mL)萃取。合併後的有機相經飽和食鹽水洗,無水硫酸鈉乾燥後濃縮得黃色固體96(104g,94%產率)。MS ESI m/z C23H24O2P[M+H]+:計算值362.14,實測值363.13。
向Boc-L-酪氨酸甲酯(670g,2.27mol),碳酸鉀(358g,2.5mol)和碘化鉀(38g,0.227mol)的丙酮(3L)溶液中緩慢加入苄基溴(283mL,2.38mol)。回流過夜,冷卻後加入水(6L),用乙酸乙酯(5×100L)萃取。合併後的有機相用飽和食鹽水(2L)洗,無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮後經矽膠柱層析(4:1石油醚/乙酸乙酯)得白色固體98(795g,91%產率).1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.43(d,J=7.0Hz,2H),7.38(t,J=7.4Hz,2H),7.32(t,J=7.2Hz,1H),7.04(d,J=8.5Hz,2H),6.91(d,J=8.6Hz,2H),5.04(s,2H),4.55(d,J=6.9Hz,1H),3.71(s,3H),3.03(qd,J=14.0,5.8Hz,2H),1.43(s,9H)。MS ESI m/z C22H28NO5[M+H]+:計算值386.19,實測值386.19。
在-78℃下向化合物98(380g,987mmol)的無水二甲烷(1L)溶液中緩慢滴加DIBAL(1.0M正己烷溶液,2.9L),歷時3小時。加完後用3L乙醇淬滅反應。滴加1N HCl至pH 4。所得混合液逐漸升至0℃,分出有機相,水相用乙酸乙酯(3×3L)萃取。合併後的有機相用飽和食鹽水洗,無水硫酸鈉乾燥,並濃縮。經石油醚/乙酸乙酯打漿得白色固體99(263g,75%產率).1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 9.65(s,1H),7.45(d,J=7.1Hz,2H),7.41(t,J=7.4Hz,2H),7.35(t,J=7.1Hz,1H),7.11(d,J=8.6Hz,2H),6.95(d,J=8.6Hz,2H),5.07(s,2H),4.42(dd,J=12.4,6.1Hz,1H),3.09(d,J=6.2
Hz,2H),1.46(s,9H).MS ESI m/z C21H26NO4[M+H]+:計算值356.18,實測值356.19。
室溫下向化合物99(81.4g,229mmol)的無水二甲烷(800mL)溶液中加入葉立德96(2.0eq.)的無水二甲烷(800mL)溶液,歷時30分鐘。反應在室溫攪拌過夜後濃縮,經矽膠柱層析(6:1石油醚/乙酸乙酯)純化後得白色固體100(63.4g,63%產率)1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.45-7.41(m,2H),7.40-735(m,2H),733(d,J=7.2Hz,1H),7.10-7.06(m,2H),6.92-6.88(m,2H),6.50(dd,J=8.8,1.3Hz,1H),5.04(s,2H),4.57(s,2H),4.18(q,J=7.1Hz,2H),2.86(d,J=8.5Hz,1H),2.72(dd,J=13.6,6.8Hz,1H),1.71(d,J=1.4Hz,3H),1.41(d,J=2.2Hz,9H),1.28(td,J=7.5,5.1Hz,4H).MS ESI m/z C26H33NaNO5[M+Na]+:計算值462.24,實測值462.22。
在氫化反應瓶中將Pd/C(1.83g,10wt%)加入到化合物100(30.2g,68.9mmol)的四氫呋喃(100mL)與甲醇(300mL)混合溶液中。混合物在1atm H2環境下振盪過夜。矽藻土過濾,濾液濃縮得化合物101(25.0g,約100%產率),為無色油狀物。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 6.99(d,J=7.0Hz,2H),6.72(d,J=7.6Hz,2H),4.39(s,1H),4.18-404(m,2H),382(s,1H),2.60(dd,J=37.2,20.9Hz,4H),1.95-1.81(m,1H),1.39(s,11H),1.24(dd,J=9.5,4.3Hz,3H),1.13(t,J=8.9Hz,3H).MS ESI m/z C19H31NO5[M+H]+:計算值352.20,實測值352.19。
在室溫下向化合物101(5.96g,35.9mmol)的無水二甲烷(200
mL)溶液中加入乙酸酐(3.2mL,33.9mmol)和硝酸(65%-68%水溶液,3.5mL,50.79mmol)。室溫攪拌30分鐘後,TLC顯示反應完全。反應液用水(3×200mL)洗,水相用二甲烷(3×100mL)反萃。合併的二甲烷相用飽和食鹽水洗,無水硫酸鈉乾燥,過濾並濃縮。經矽膠柱層析(5:1石油醚/乙酸乙酯)純化得化合物102(4.18g,72%產率),為一黃色固體。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 10.49(s,1H),7.89(s,1H),7.44(d,J=8.4Hz,1H),7.09(d,J=8.6Hz,1H),4.32(d,J=8.3Hz,1H),4.12(dd,J=14.0,7.0Hz,2H),3.80(s,1H),2.76(dd,J=13.0,6.8Hz,2H),2.59(s,1H),1.88(s,1H),1.37(t,J=8.7Hz,9H),1.25(dd,J=13.5,6.9Hz,4H),1.16(t,J=8.0Hz,3H).MS ESI m/z C19H28NaN2O7[M+Na]+:計算值419.19,實測值419.17。
向室溫下向化合物102(15.3g,38.6mmol)的四氫呋喃(100mL)與甲醇(100mL)混合溶液中加入LiOH˙H2O(16.3g,389mmol)的水溶液(190mL)。反應室溫攪拌40分鐘後,加水(400mL)稀釋並用1N KHSO4調至pH 3-4。用乙酸乙酯(3×300mL)萃取後,有機相用飽和食鹽水洗,無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮得103(14.4g,約100%產率),為一黃色固體。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 10.48(s,1H),7.98-7.88(m,1H),7.42(dd,J=18.4,8.2Hz,1H),7.14-703(m,1H),4.48(d,J=8.6Hz,1H),3.90(s,1H),2.82-2.53(m,3H),197-1.82(m,2H),1.42-1.27(m,10H),1.21(d,J=6.7Hz,4H).MS ESI m/z C17H23N2O7[M-H]-:計算值367.16,實測值367.14。
在氫化反應瓶中將Pd/C(2.60g,10wt%)加入到化合物103(26.0g,70.6mmol)的甲醇(260mL)溶液中。混合物在1atm H2環境下攪拌反應過夜。矽藻土過濾,濾液濃縮得化合物104(24.0g,約100%產率),為綠色油狀物。
將2-溴丙酸叔丁酯(255g,1.22mol)和三苯基膦(320g,1.22mol)的乾燥乙腈(1L)溶液在室溫攪拌18小時。減壓旋去乙腈後加入甲苯使白色固體析出。傾倒出甲苯後將白色固體溶於二甲烷(1L)並轉移至分液漏斗。加入10% NaOH水溶液(1L),搖晃後有機相很快變黃。分出有機相,水相用二甲烷(1L)反萃一次。合併二甲烷相,飽和食鹽水(400mL)洗,無水硫酸鈉乾燥,過濾後濃縮得葉立德106(280g,58%),為一黃色固體。
向化合物99(450g,1.27mol)的乾燥二甲烷(3L)溶液中加入葉立德106(546g,140mmol)。室溫攪拌過夜。TLC監測反應完全後,經柱層析(10-50%乙酸乙酯/石油醚)純化得化合物107(444g,75%產率),為一白色固體。ESI m/z C28H38NO5[M+H]+:計算值468.27,實測值468.22。
將化合物107(63g,0.13mol)溶於甲醇(315mL),加入Pd/C(10wt%,6.3g),在氫氣(1atm)環境下室溫攪拌過夜。過濾除去催化劑後濃縮濾液得化合物108(45.8g,93%產率)。
在室溫下向化合物108(390g,1.03mol)的四氫呋喃(4L)溶液中加入亞硝酸叔丁酯(1.06kg,10.3mol.)。攪拌過夜後旋去四氫呋喃,殘留物經柱層析(10-50%乙酸乙酯/石油醚)純化得化合物109(314g,72%產率),為一亮黃色固體。
在氮氣保護下向化合物109(166g,0.392mol)的乙酸乙酯(500mL)溶液中加入Pd/C(10wt%,16g)。通入氫氣,真空置換三次。反應液在氫氣(1atm)環境中於室溫攪拌16小時。矽藻土過濾,濃縮得化合物110(146g,97%產率),為一黃色泡沫狀固體。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 6.62(d,J=7.9Hz,1H),6.55(s,1H),6.43(d,J=7.3Hz,1H),4.39(dd,J=53.0,44.2Hz,1H),3.77(s,4H),2.72-2.29(m,3H),1.83-1.58(m,1H),1.40(d,J=7.6Hz,18H),1.24(s,1H),1.06(t,J=5.7Hz,3H).MS ESI m/z C21H35N2O5[M+H]+:計算值394.25,實測值395.25。
在在氮氣保護下,將(S)-4-異丙基惡唑烷-2-酮(5.00g,38.7mmol)溶于無水四氫呋喃(200mL)中,降溫至-78℃,30分鐘內將正丁基鋰(2.5M正己烷溶液,17.0mL)滴加進反應瓶中,在-78℃下反應1小時。然後滴加丙醯(4.0mL,42.58mmol),滴加完畢後,在-78℃下反應1小時,薄層色譜監測反應完畢,將反應液倒入飽和食鹽水溶液(250mL)中,乙酸乙酯萃取(3×100mL),合併有機相,用1N NaOH溶液(200mL)洗滌一次,飽和食鹽水溶液(300mL)洗滌一次,無水硫酸鈉乾燥,過濾,旋幹,用矽膠柱純化(7:1石油醚/乙酸乙酯)得到無色油狀物6.36g,產率89%。MS ESI m/z C9H16NO3[M+H]+計算值186.10,實測值186.10。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 4.48-4.39(m,1H),4.27(t,J=8.7Hz,1H),4.21(dd,J=9.1,3.1Hz,1H),3.06-2.82(m,2H),2.38(dtd,J=14.0,7.0,4.0Hz,1H),1.17(t,J=7.4Hz,3H),0.90(dd,J=17.0,7.0Hz,6H)。
在氮氣保護下,將化合物114(2.00g,11.9mmol)溶于無水二甲烷(200mL)中,降溫至0℃,將二異丙基乙基胺(2.3mL,12.9mmol)和n-Bu2BOTf(1.0M二甲烷溶液,12.0mL)滴加進反應瓶中,0℃下反應45分鐘,再降溫至-78℃,將化合物99(4.24mL,10.8mmol)的二甲烷溶液滴加進反應瓶中,-78℃下反應1小時,然後慢慢升溫至室溫並反應過夜。次日,將磷酸鹽緩衝液(0.1M,pH 7.0,100mL)加進反應瓶中,分液,水相用二甲烷萃取(3×50mL),合併有機相,用飽和食鹽水溶液(200mL)洗滌一次,無水硫酸鈉乾燥,旋幹得粗品。將粗品溶於甲醇(100mL)中,降溫至0℃,將H2O2(30%水溶液,26mL)滴入,0℃下反應3小時,旋蒸除去甲醇,加水(100mL),用乙酸乙酯萃取(3×100mL),合併有機相,飽和食鹽水溶液(300mL)洗滌一次,無水硫酸鈉乾燥,過濾,旋幹,矽膠柱純化(3:1石油醚/乙酸乙酯)得到白色泡沫狀固體2.7g,產率49%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.36(ddd,J=24.2,14.2,7.1Hz,5H),7.12(d,J=8.4Hz,2H),6.90(d,J=8.5Hz,2H),5.02(s,2H),4.69(d,J=9.0Hz,1H),4.45(d,J=4.1Hz,1H),4.33(t,J=8.4Hz,1H),4.15(d,J=8.6Hz,1H),3.90(dd,J=16.6,8.0Hz,1H),385-377(m,2H),2.81(d,J=7.6Hz,2H),2.27(dd,J=11.4,6.7Hz,1H),1.35(s,9H),0.89(dd,J=14.3,6.9Hz,6H)。MS ESI m/z C30H41N2O7[M+H]+計算值541.28,實測值541.30。
在氮氣保護下,將化合物115(2.50g,4.63mmol)溶于無水四氫呋喃(46mL)中,加入二硫羰基咪唑(2.48g,13.89mmol),回流反應過夜。次日,加水(100mL),乙酸乙酯萃取(3×50mL),合併有機相,用飽和食鹽水溶液(300mL)洗滌一次,無水硫酸鈉乾燥,過濾,旋幹,矽膠柱純化(3:1石油醚/乙酸乙酯)得到黃色泡沫狀固體2.33g,產率77%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.41(s,1H),7.67(s,1H),7.36(dt,J=16.0,6.9Hz,6H),7.09(s,1H),7.05(d,J=8.4Hz,2H),6.86(d,J=8.4Hz,2H),6.32(d,J=9.5Hz,1H),5.01(s,2H),4.56-4.43(m,2H),4.32(ddd,J=16.2,15.6,7.8Hz,3H),4.19(d,J=8.7Hz,1H),2.96(dd,J=14.6,4.4Hz,1H),2.49(dd,J=14.5,10.5
Hz,1H),2.29(td,J=13.4,6.7Hz,1H),1.73(s,1H),1.29(s,9H),0.91(dd,J=13.9,6.9Hz,6H)。MS ESI m/z C34H43N4O7S[M+H]+計算值651.27,實測值651.39。
在氮氣保護下,將化合物116(1.90g,2.92mmol)溶于無水甲苯(30mL)中,加入偶氮二異丁腈(0.05g,0.584mmol)和三丁基錫烷(1.6mL,5.84mmol),回流反應2.5小時,旋幹,矽膠柱純化(5:1石油醚/乙酸乙酯)得到白色泡沫狀固體1.21g,產率79%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.36(ddd,J=24.5,14.5,7.1Hz,5H),7.08(d,J=8.5Hz,2H),6.90(d,J=8.5Hz,2H),5.04(d,J=5.1Hz,2H),4.48(d,J=4.2Hz,1H),4.33(t,J=8.4Hz,1H),4.22(d,J=9.7Hz,1H),4.15(d,J=8.8Hz,1H),3.81(s,2H),2.73(dd,J=14.1,5.9Hz,1H),2.61(dd,J=14.0,7.2Hz,1H),2.29(dq,J=13.5,6.8Hz,1H),2.11-2.00(m,1H),1.60(dd,J=15.2,6.2Hz,2H),1.35(s,9H),1.20(d,J=6.9Hz,3H),0.89(dd,J=14.0,6.9Hz,6H)。MS ESI m/z C30H41N2O6[M+H]+:計算值525.28,實測值525.37。
將化合物117(1.20g,2.29mmol)溶於四氫呋喃(30mL)和水(6mL)中,冰浴下加入LiOH(0.192g,4.58mmol)和H2O2(30%水溶液,1.4mL),冰浴反應3小時,加入亞硫酸鈉(1.5M,30mL),冰浴下攪拌30分鐘後用1N KHSO4調節pH至4,乙酸乙酯萃取(3×50mL),合併有機相,飽和食鹽水溶液(200mL)洗滌一次,無水硫酸鈉乾燥,過濾,旋幹,矽膠柱純化(3:1石油醚/乙酸乙酯)得到白色固體0.78g,產率82%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.46-7.28(m,5H),7.07(d,J=7.7Hz,2H),6.91(d,J=7.8Hz,2H),5.04(s,2H),4.52(d,J=8.5Hz,1H),3.87(d,J=41.8Hz,1H),2.82-2.43(m,3H),1.85(t,
J=12.2Hz,1H),1.41(s,9H),1.17(d,J=6.9Hz,3H)。MS ESI m/z C24H32NO5[M+H]+計算值414.22,實測值414.21。
將化合物118(0.77g,1.86mmol)溶於甲醇(15mL)中,加入Pd/C(10wt%,0.25g),催化加氫(1atm H2)反應16小時,過濾,旋幹得到白色固體0.58g,產率96%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.00(d,J=7.5Hz,2H),6.80(s,2H),4.51(d,J=9.0Hz,1H),3.88(s,1H),2.66(dd,J=65.6,22.6Hz,4H),1.88(t,J=12.2Hz,1H),1.42(s,9H),1.14(d,J=6.6Hz,3H)。MS ESI m/z C17H26NO5[M+H]+:計算值324.17,實測值324.16。
將化合物119(0.57g,1.76mmol)溶于無水四氫呋喃(10mL)中,冰浴下滴加亞硝酸叔丁酯(0.63mL,5.28mmol),完畢升溫至室溫反應2h,加水(50mL),用乙酸乙酯萃取(3×30mL),合併有機相,用飽和食鹽水溶液(100mL)洗滌一次,無水硫酸鈉乾燥,過濾,旋幹,矽膠柱純化(2:1石油醚/乙酸乙酯,含0.1%乙酸)得到黃色固體0.50g,產率77%。1H NMR(400MHz,DMSO)δ 12.00(s,1H),10.68(s,1H),7.67(s,1H),7.34(d,J=8.4Hz,1H),7.03(d,J=8.4Hz,1H),6.69(d,J=8.9Hz,1H),3.56(d,J=3.8Hz,1H),2.67(dd,J=13.5,5.1Hz,1H),2.41(dd,J=13.8,6.6Hz,1H),1.78-1.65(m,1H),1.27(s,9H),1.18(s,1H),1.05(d,J=7.1Hz,3H)。MS ESI m/z C17H25N2O7[M+H]+:計算值369.15,實測值369.14。
將化合物120(0.77g,1.86mmol)溶於甲醇(10mL)中,加入Pd/C(10wt%,0.02g),催化加氫(1atm H2)反應1小時,過濾,旋幹得到白色固體
0.43g,產率93%。MS ESI m/z C17H27N2O5[M+H]+計算值339.18,實測值339.17。1H NMR(400MHz,MeOD)δ 6.60(d,J=7.9Hz,2H),6.44(d,J=7.3Hz,1H),3.71(d,J=6.3Hz,1H),2.62-2.37(m,3H),1.83(ddd,J=13.7,9.9,3.7Hz,1H),1.39(s,9H),1.13(d,J=7.1Hz,3H)。
將馬來酸酐(285g,2.76mol)溶於乙酸(1L)中,加入4-氨基丁酸(285g,2.76mol,1.0eq.),室溫反應30分鐘,升溫至回流後反應1.5小時,冷卻至室溫,旋蒸除去溶劑,用乙酸乙酯溶解,水洗,飽和食鹽水洗,無水硫酸鈉乾燥,過濾,旋幹,粗品用石油醚和乙酸乙酯重結晶得到白色固體400g,產率80%。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 6.71(s,2H),3.60(t,J=6.7Hz,2H),2.38(t,J=7.3Hz,2H),2.00-1.84(m,2H)。
將化合物124(400g,2.18mol)溶于無水二甲烷(1.5L)中,加入N-羥基馬來醯亞胺(276g,2.40mmol)和DIC(303g,2.40mol),室溫反應過夜,旋幹,矽膠柱純化(1:2石油醚/乙酸乙酯)得到白色固體382g,產率63%。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 6.74(s,2H),3.67(t,J=6.8Hz,2H),2.85(s,4H),2.68(t,J=7.5Hz,2H),2.13-2.03(m,2H)。
將化合物124(60g,328mmol)溶於THF(600mL)中,冰浴,滴加N-甲基嗎啉(85.3mL,984mmol)和甲酸異丁酯(44.6mL,426mmol),0℃下反應2小時後,滴加化合物104(102g,259mmol)的THF(400mL)溶液,完畢,0℃反應30分鐘,加水(300mL),用乙酸乙酯萃取(3×300mL),合併有機相,飽和食鹽水溶液(100mL)洗滌一次,無水硫酸鈉乾燥,過濾,旋幹,矽膠柱純化(9-35%乙
酸乙酯/石油醚)得到淺黃色固體104g,產率73%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.86(s,1H),8.40(d,J=17.3Hz,1H),6.87(s,3H),6.70(s,2H),4.53-4.16(m,0H),3.79(s,0H),3.62(t,J=6.1Hz,1H),2.63(s,1H),2.40(t,J=6.9Hz,1H),2.12-1.88(m,4H),1.84-1.64(m,0H),1.38(t,J=9.6Hz,6H),1.06(t,J=6.0Hz,3H)。
將溶解在二甲烷(20mL)中的化合物126(12.7g,22.7mmol),在0℃用三氟乙酸(40mL)處理,溫熱反應物至室溫,並攪拌3小時。濃縮混合物並與甲苯一起濃縮三次。將殘留物用乙醚研磨,收集淺黃色固體127(11.4g,理論產率)。
將化合物33(40mg,0.074mmol)溶於乙酸乙酯中,加入五氟苯酚(27mg,0.148mmol)和DCC(23mg,0.111mmol),室溫反應16小時,矽膠墊過濾,用乙酸乙酯洗脫,將濾液濃縮,再溶於DMA(6mL)中,加入化合物127(56.6mg,0.13mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(47.4μL,0.18mmol),室溫反應24小時,濃縮,製備HPLC(C18柱,10-100%乙腈/水)純化得到白色固體43mg,產率63%。MS ESI m/z C46H66N7O11S[M+H]+:計算值924.45,實測值924.45。
將化合物41a(11g,15.9mmol)和化合物127(12.3g,23.8mmol)溶於DMF(100mL)中,冰浴下加入N,N’-二异丙基乙胺(6.9mL,39.7mmol),升
溫至室溫反應1小時,濃縮,矽膠柱純化(0-10%甲醇/二甲烷)得到無定型固體10g,產率69%。MS ESI m/z C45H65N7O11S[M+H]+:計算值912.45,實測值912.45。
將(R)-4-異丙基-2-惡唑烷酮(25.0g,0.194mol)溶於1150mL無水THF中,在N2保護下,降溫至-70℃,滴加n-BuLi(85.0mL,0.213mol)(溫度控制在-70至-65℃之間),滴加過程中有大量白色固體析出,滴加完畢,-70℃下反應1h,再滴加丙醯(20.0mL,0.232mol),滴加完畢,-70℃下反應1h,薄層色譜跟蹤,反應完畢。將反應液倒入到1.2L飽和化銨溶液中,乙酸乙酯萃取(700mL×1,350mL×2),合併乙酸乙酯相,用1L 1mol/LNaOH溶液洗滌一次,1L水洗滌一次,1L飽和化鈉溶液洗滌一次,無水硫酸鈉乾燥,旋幹,得無色液體。乙酸乙酯/石油醚(6-10%)過柱,得產物32.6g,產率90.8%。ESI:m/z:C9H17NO3[M+H]+:計算值186.1,實測值186.1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 4.48-4.37(m,1H),4.27(t,J=8.7Hz,1H),4.21(dd,J=9.1,3.1Hz,1H),3.04-2.82(m,2H),2.45-2.30(m,1H),1.17(t,J=7.4Hz,3H),0.90(dd,J=17.1,7.0Hz,6H)。
將化合物(R)-4-異丙基-3-丙醯基噁唑烷-2-酮(18.4g,99.5mmol)溶於200mL無水二甲烷中,加入到乾燥的N2保護的1L三頸瓶,冰浴,滴加無水N,N’-二异丙基乙胺(19mL,108.6mmol),再慢慢滴加Bu2BOTf的二甲烷溶液(1.0M,100mL,100mmol),滴加完畢,冰浴下攪拌45分鐘,降溫至-78℃,滴加醛(32.2g,90.5mmol,1.0eq)的320mL無水二甲烷溶液,-78℃下反應1h,升溫至0℃,冰浴下反應,並慢慢升至室溫反應過夜,升溫過程中溶液由無色變成黃色。薄層色譜跟蹤,反應完畢。將反應液倒入700mL PBS(0.1M,PH7.0)溶液中,分液,用200mL二甲烷萃取水相,合併二甲烷相,等體積飽和化鈉溶液洗滌一次,無水硫酸鈉乾燥,旋幹得79.8g橘黃色油狀物,加入730mL甲醇溶解,冰浴,
慢慢滴加225mL的30% H2O2(23eq),冰浴下反應3h。加水750mL,旋蒸除去大部分甲醇,再加水100mL,乙酸乙酯萃取(500mL×1,150mL×2),合併乙酸乙酯相,飽和化鈉溶液洗滌一次,無水硫酸鈉乾燥,旋幹,乙酸乙酯/石油醚過柱,得產物28.3g白色泡沫狀固體,產率:58.7%。ESI:m/z:C30H41N2O7[M+H]+:計算值541.3,實測值541.3。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.49-7.26(m,3H),7.17(t,J=10.7Hz,1H),6.93(d,J=7.0Hz,2H),5.06(s,1H),4.28(dd,J=44.4,36.4Hz,2H),4.04-3.52(m,1H),3.11-2.73(m,1H),2.35(s,1H),1.41(t,J=16.3Hz,9H),0.91(dd,J=15.6,6.4Hz,5H)
稱化合物167(28.3g52.3mmol)和TCDI(35.1g,157.0mmol)於500mL N2保護的乾燥的兩頸瓶中,加入350mL無水THF溶解,回流反應過夜。薄層色譜跟蹤,反應完畢。飽和化鈉溶液(200mL)洗滌一次,乙酸乙酯(75mL×2)萃取,無水硫酸鈉乾燥,過濾,旋幹,乙酸乙酯/石油醚過柱得產物26.1g淡黃色泡沫狀固體,產率:76.8%。ESI:m/z:C34H43N4O7S[M+H]+:計算值651.3,實測值651.3。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.21(s,1H),7.43(d,J=11.8Hz,1H),7.42-7.28(m,5H),7.06(d,J=8.3Hz,2H),7.01(s,1H),6.80(d,J=8.3Hz,2H),6.17(dd,J=8.5,2.9Hz,1H),4.96(s,2H),4.42-4.04(m,5H),2.83(dd,J=14.2,6.2Hz,1H),2.69(dd,J=14.2,7.1Hz,1H),2.32(dd,J=6.8,4.2Hz,1H),1.37(s,9H),1.30(d,J=6.9Hz,3H),0.87(dd,J=9.9,7.0Hz,6H)。
稱化合物168(26.0g,40.0mmol)和AIBN(0.066g,0.01eq)於500mL乾燥的兩頸瓶中,N2保護下,加入350mL無水甲苯溶解,滴加n-Bu3SnH(21.5mL,80.0mmol),回流反應1h。薄層色譜跟蹤,反應完畢。旋幹,乙酸乙酯/石油醚
過柱得產物6.0g白色泡沫狀固體,產率:37.3%。ESI:m/z:C30H41N2O6[M+H]+:計算值525.3,實測值525.3。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.37(ddd,J=25.1,15.1,7.1Hz,5H),7.08(d,J=7.9Hz,2H),6.89(d,J=8.4Hz,2H),5.03(s,2H),4.61(d,J=8.4Hz,1H),4.40(s,1H),4.32-4.08(m,2H),3.91-3.66(m,2H),2.83(d,J=8.4Hz,1H),2.60(t,J=10.1Hz,1H),2.33(s,1H),1.71(s,1H),1.41(s,9H),1.15(d,J=6.5Hz,3H),0.87(dd,J=17.0,7.0Hz,6H)。
將化合物169(7.84g,15.0mmol)溶於90mL THF和30mL水中,冰浴。將LiOH˙H2O(1.57g,37.5mmol)溶於30% H2O2(11.4mL,112.5mmol)中,並將該溶液滴加到反應體系中,有淺黃色固體析出,冰浴下反應3h,薄層色譜跟蹤,反應完畢。滴加160mL 1.5M Na2SO3溶液,冰浴反應30min,用1N KHSO4溶液調節pH至4,乙酸乙酯萃取(200mL×1,750mL×2),合併乙酸乙酯相,飽和化鈉溶液洗滌一次,無水硫酸鈉乾燥,過濾,旋幹,乙酸乙酯/石油醚過柱,得6.18g白色固體,產率:100%。ESI m/z C24H32NO5[M+H]+:計算值414.2,實測值414.2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.39(ddd,J=24.5,15.0,7.2Hz,5H),7.11(d,J=7.8Hz,2H),6.93(d,J=8.3Hz,2H),5.06(s,2H),4.44(t,J=8.3Hz,1H),3.83(d,J=69.4Hz,1H),2.85-2.61(m,2H),2.61-2.40(m,1H),1.99-1.70(m,1H),1.39(d,J=26.1Hz,9H),1.19(s,3H)。
將化合物170(6.18g,15.0mmol)溶於50mL甲醇中,加入0.6g Pd/C,催化加氫,室溫過夜,薄層色譜跟蹤,反應完畢。加入50mL乙酸乙酯,過濾,乙酸乙酯洗滌,旋幹,真空抽幹,得到4.8g無色透明油狀物,產率:99.4%。ESI m/z C17H26NO5[M+H]+:計算值324.2,實測值324.2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 6.97(d,J=6.5Hz,2H),6.74(d,J=8.2Hz,2H),3.93-3.66(m,1H),2.58(tdd,J=19.5,12.9,7.4Hz,3H),1.75(ddd,J=20.1,16.3,7.7Hz,
1H),1.37(d,J=21.5Hz,9H),1.11(d,J=7.0Hz,3H)。
將化合物171(4.8g,15.0mmol)溶於75mL無水THF中,冰浴,N2保護下滴加t-BuONO(18.0mL,150mmol),升溫至室溫反應3h,薄層色譜跟蹤,反應完畢。冰浴條件下慢慢滴加100mL飽和NaHCO3溶液,有大量氣泡產生,再用1N KHSO4調節pH至4,乙酸乙酯萃取(150mL×1,75mL×2),飽和化鈉洗滌一次,無水硫酸鈉乾燥,過濾,旋幹,乙酸乙酯/石油醚過柱,得產物3.6g產率:65.4%。ESI m/z C17H25N2O7[M+H]+:計算值369.2,實測值369.2。1H NMR(400MHz,MeOD)δ 7.93(d,J=2.0Hz,1H),7.48(dd,J=8.6,2.1Hz,1H),7.06(d,J=8.5Hz,1H),3.83-3.71(m,1H),2.82(dd,J=13.6,5.0Hz,1H),2.66-2.41(m,2H),1.84(ddd,J=14.0,10.6,5.6Hz,1H),1.65-1.51(m,1H),1.28(d,J=24.9Hz,9H),1.15(d,J=7.0Hz,3H)。
將化合物172(3.2g,7.74mmol)溶於20mL甲醇中,加入0.2g Pd/C,催化加氫,室溫反應3h,薄層色譜跟蹤,反應完畢。加入20mL乙酸乙酯,過濾,乙酸乙酯洗滌,旋幹,真空抽幹,得到2.3g白色泡沫狀固體,產率:92.0%。ESI m/z C17H27N2O5[M+H]+:計算值339.2,實測值339.2。1H NMR(400MHz,MeOD)δ 6.61(d,J=8.0Hz,2H),6.45(d,J=6.3Hz,1H),3.72(d,J=7.3Hz,1H),2.68-2.34(m,3H),1.81-1.66(m,1H),1.56-1.45(m,1H),1.36(d,J=29.0Hz,9H),1.08(d,J=6.9Hz,3H)。
將化合物102(1.00g,2.52mmol)溶於乙腈(10mL)中,降溫至-
25℃,加入CCl4(2.2mL,22.7mmol),攪拌10分鐘,加入N,N’-二异丙基乙胺(0.88mL,5.04mmol)和DMAP(0.03g,0.252mmol),再滴加亞磷酸二苄酯(0.84mL,3.78mmol),滴加完畢,升溫至室溫反應1.5小時,用KH2PO4(0.5M,50mL)淬滅,乙酸乙酯萃取(3×50mL),無水硫酸鈉乾燥,過濾,旋幹,矽膠柱純化(10-50%乙酸乙酯/石油醚)得到無色油狀物1.60g,產率96%。MS ESI m/z C33H41N2O10P[M+H]+計算值657,實測值657。
將化合物187(1.60g,2.43mmol)溶於甲醇(20mL)中,加入Pd/C(10wt%,160mg),催化加氫(1atm H2)反應1小時,過濾,旋幹得到白色固體1.00g,產率91%。MS ESI m/z C19H31N2O8P[M-H]-計算值447,實測值447。
將化合物188(730mg,1.63mmol)溶於甲醇(10mL)中,加入1N NaOH(16mL,16.3mmol),室溫反應過夜,濃縮,加水(20mL)稀釋,用1N HCl酸化至pH 6,濃縮,將殘留物用甲醇/乙酸乙酯(80:20,5mL)打漿,過濾,收集得到白色固體0.68g,產率99%。MS ESI m/z C17H27N2O8P[M-H]-計算值417,實測值417。
將2-(2-氨基乙氧基)乙醇(21.0g,200mmol)和碳酸鉀(83.0g,600mmol)混合於乙腈(350mL)中,加入苄基溴(57.0mL,480mmol)。將混合物回流過夜後,加入水(1L),用乙酸乙酯(3×300mL)萃取。將合併的有機層用飽和食鹽水(1000mL)洗滌,用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮並通過矽膠柱色譜(4:1石油醚/乙酸乙酯)純化,得到無色油狀物(50.97g,產率89.2%)。MS ESI m/z C18H23NO2Na[M+Na]+:計算值309.17,實測值309.19。
向2-(2-(二苄基氨基)乙氧基)乙醇(47.17g,165.3mmol),丙烯酸叔丁酯(72.0mL,495.9mmol)和四丁基碘化銨(6.10g,16.53mmol)的二甲烷(560mL)溶液中加入50%氫氧化鈉水溶液(300mL)。將混合物攪拌過夜。分離有機層,水層用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合併有機層並用水(3×300mL)和飽和食鹽水(300mL)洗滌,用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮並通過矽膠柱色譜(7:1石油醚/乙酸乙酯)純化,得到無色油狀物(61.1g,89.4%產率)。MS ESI m/z C25H36NO4[M+H]+:計算值414.2566,實測值414.2384。
在氫化瓶中向3-(2-(2-(2-(二苄基氨基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯(20.00g,48.36mmol,1.0當量)的四氫呋喃(30mL)和甲醇(60mL)溶液中加入Pd/C(2.00g,10wt%)。將混合物在氫氣環境中(1atm)振盪過夜,通過矽藻土(助濾劑)過濾,濃縮濾液,得到無色油狀物(10.58g,93.8%產率)。MS ESI m/z C11H24NO4[M+H]+:計算值234.1627,實測值234.1810。
在0℃下,向(E)-3-溴丙烯酸(0.15g,1mmol),DMAP(0.15g,1.2mmol)和DCC(0.21g,1mmol)的二甲烷(10ml)溶液中加入化合物291(0.23g,1mmol)。將反應混合物升溫至室溫,攪拌過夜。將粗產物濃縮並通過矽膠柱色譜用乙酸乙酯/二甲烷梯度洗脫,得到化合物292(0.31g,85%產率)。ESI MS m/z C14H25BrNO5[M+H]+:計算值366.08,實測值366.08。
將化合物302(0.31g,0.84mmol)在0℃下溶解於甲酸(4mL)中,然後加入水(2mL)。將反應混合物升溫至室溫,並攪拌過夜。將粗產物濃縮後直接用於下一步。ESI MS m/z C10H17BrNO5[M+H]+:計算值310.02,實測值310.03。
將化合物303(0.12g,0.39mmol),N-羥基琥珀醯亞胺(0.067g,0.58mmol)和EDCI(0.11g,0.58mmol)溶於二甲烷(10mL)中,混合物在室溫下攪拌過夜,濃縮並通過矽膠柱色譜純化,得到化合物304(0.13g,82%產率)。ESI MS m/z C14H20BrN2O7[M+H]+:計算值407.04,實測值407.04。
將4-氨基丁酸(30g,300mmol)和NaOH(24g,600mmol)溶解于水(160mL),在0℃加入甲酸苄酯(64.4g,380mmol)的四氫呋喃(130mL)溶液。將反應在0℃攪拌1小時,室溫3小時。減壓蒸餾除去四氫呋喃,在0℃用濃鹽酸調節水溶液pH值至3。用乙酸乙酯萃取,飽和食鹽水洗,無水硫酸鈉乾燥,濃縮得到白色固體(70.8g,99%)。ESI m/z C12H16NO4[M+H]+:計算值238.10,實測值238.22。
將DMAP(0.8g,6.56mmol)和DCC(17.1g,83mmol)加入到4-((((苄氧基)羰基)氨基)丁酸(16.4g,69.2mmol)和叔丁醇(15.4g,208mmol)的二甲烷(100mL)溶液。室溫攪拌過夜,將反應物過濾並濃縮濾液。將殘留物溶於乙酸乙酯中,用1N HCl,飽和食鹽水洗滌,用硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮後通過柱色譜(10至50%乙酸乙酯/石油醚)純化,得到化合物327(7.5g,37%產率)。MS ESI m/z C16H23NO4Na[M+Na]+:計算值316.16,實測值316.13。
將4-(((苄氧基)羰基)氨基)丁酸叔丁酯(560mg,1.91mmol)溶於甲醇(50mL)中,與Pd/C催化劑(10wt%,100mg)混合,然後氫化(1atm)反應3小時。濾出催化劑,減壓蒸餾除去所有揮發物,得到化合物328(272mg,90%產率)。MS ESI m/z C8H18NO2[M+H]+:計算值160.13,實測值160.13。
將4-氨基丁酸叔丁酯(477mg,3mmol)和2,3-二溴代琥珀酸(414mg,1.5mmol)溶於二甲烷(35mL)中,向其中加入N,N’-二异丙基乙胺(1.16g,9mmol)和EDC(0.86g,4.5mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌過夜,然後用飽和食鹽水洗滌,用硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮後通過柱色譜法(純二甲烷至10%甲醇/二甲烷)純化,得到化合物330(160mg,22%產率)。MS ESI m/z C20H34BrN2O6[M+H]+:計算值477.15,實測值477.16。
將化合物330(80mg,0.168mmol)溶於二甲烷(5mL)中,並在38℃下與甲酸(8mL)攪拌過夜。減壓蒸餾除去所有揮發物,得到化合物331(61mg,99%產率)。MS ESI m/z C12H18BrN2O6[M+H]+:計算值365.03,實測值365.05。
將N-羥基琥珀醯亞胺(60mg,0.504mmol)和EDCI(97mg,0.504mmol)加入到化合物331(61mg,0.168mmol)的二甲烷(10mL)溶液中。在室溫攪拌過夜,將反應混合物濃縮並通過柱色譜(0至10%甲醇/二甲烷)純化,得到化合物332(72mg,77%產率)。MS ESI m/z C20H24BrN4O10[M+H]+:計算值559.06,實測值559.78。
將磷酸二氫鈉水溶液(0.1M,1mL)加入到化合物332(36mg,0.065mmol)和化合物110(25mg,0.063mmol)的乙醇(5mL)溶液中。將所得溶液在室溫下攪拌過夜,然後向其中加入HO-(PEG)24-NH2(95mg),室溫下攪拌過夜。減壓
蒸餾除去所有揮發物,並通過柱色譜(純二甲烷至10%甲醇/二甲烷)純化殘留物,得到化合物333(28mg,24%產率)。MS ESI m/z 1798.93([M+H]+)。
將化合物333(28mg,0.0156mmol)溶於二甲烷(2mL)中,加入三氟乙酸(2mL),在室溫下攪拌2小時。減壓蒸餾除去所有揮發物,得到化合物335(25mg,98%產率)。MS ESI m/z 1642.82([M+H]+)。
將化合物335(25mg,0.0152mmol)和五氟苯基酯33a(15mg,0.0213mmol)溶於DMA(5mL)中。向其中加入N,N’-二异丙基乙胺(10mg,0.077mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌過夜,濃縮後通過製備HPLC(C18柱,10-90%乙腈/水)純化,得到化合物337(13mg,40%產率)。MS ESI m/z 2163.82([M+H]+)。
向2,2’-(乙烷-1,2-二基雙(氧))二乙醇(55.0mL,410.75mmol)的無水四氫呋喃(200mL)溶液中加入鈉(0.1g)。將混合物攪拌直至鈉消失,然後滴加丙烯酸叔丁酯(20.0mL,137.79mmol),攪拌過夜,然後在0℃下用鹽酸溶液(20.0mL,1N)淬滅。通過旋轉蒸發除去四氫呋喃,加入飽和食鹽水(300mL),所得混合物用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。有機層用飽和食鹽水洗滌(3×300mL),用無水硫酸鈉乾燥,過濾並濃縮,得到無色油狀物(30.20g,收率79.0%),無需進一步純化即可使用。MS ESI m/zC13H27O6[M+H]+:計算值278.1729,實測值278.1730。
向3-(2-(2-(2-(2-羥基乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯(30.20g,108.5mmol)和對甲苯磺醯(41.37g,217.0mmol)的無水二甲烷(220mL)溶液中加入三乙胺(30.0mL,217.0mmol)。將反應在室溫下攪拌過夜,然後用水(3×300mL)和飽和食鹽水(300mL)洗滌,用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮並通過矽膠柱色譜(3:1石油醚/乙酸乙酯)純化至得到無色油狀物(39.4g,收率84.0%)。MS ESI m/zC20H33O8S[M+H]+:計算值433.1818,實測值433.2838。
向3-(2-(2-(2-(2-甲氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯(39.4g,91.1mmol)的無水DMF(100mL)溶液中加入NaN3(20.67g,316.6mmol),在室溫下攪拌過夜。加入水(500mL),用乙酸乙酯(3×300mL)萃取。將合併的有機層用水(3×900mL)和飽和食鹽水(900mL)洗滌,用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮並通過矽膠柱色譜(5:1石油醚/乙酸乙酯)純化,得到淺黃色油狀物(23.8g,85.5%產率)。MS ESI m/z C13H25O3N5Na[M+Na]+:計算值326.2,實測值326.2。
將雷尼鎳(7.5g,懸浮在水中)用水(三次)和異丙醇(三次)洗滌,並與化合物101(5.0g,16.5mmol)異丙醇溶液混合。將混合物在室溫氫氣球下攪拌16小時,然後用矽藻土墊過濾,用異丙醇洗滌。將濾液濃縮並通過柱色譜(5-25%甲醇/二甲烷)純化,得到淡黃色油狀物(2.60g,57%產率)。MS ESI m/z C13H28NO5[M+H]+:計算值279.19;實測值279.19。
將乙炔二羧酸(0.35g,3.09mmol)溶解在NMP(10mL)中並冷卻至0℃,向其中加入化合物344(2.06g,7.43mmol),隨後加入DMTMM(2.39g,8.65mmol)。將反應在0℃下攪拌6小時,然後用乙酸乙酯稀釋,用水和飽和食鹽水洗滌。將有機溶液濃縮並用乙酸乙酯和石油醚的混合溶劑打漿。濾出固體,濃縮濾液並通過柱色譜(80-90%乙酸乙酯/石油醚)純化,得到淡黃色油狀物(2.26g,>
100%產率),不經進一步純化直接使用。MS ESI m/z C30H53N2O12[M+H]+:計算值633.35;實測值633.30。
將化合物345(2.26g)溶於二甲烷(15mL)中並冷卻至0℃,然後加入三氟乙酸(15mL),將反應升溫至室溫,並攪拌45分鐘,然後在旋轉蒸發器上除去溶劑和殘留的TFA。將粗產物通過柱色譜(0-15%甲醇/二甲烷)純化,得到淡黃色油狀物(1.39g,兩步收率86%)。MS ESI m/zC22H37N2O12[M+H]+:計算值521.23,實測值521.24。
將化合物110(68mg,0.17mmol),化合物124(94.5mg,0.52mmol)和HATU(162mg,0.425mmol)溶於二甲烷(50mL)中。然後加入三乙胺(73μL,0.52mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜,然後減壓蒸餾除去溶劑,殘留物用SiO2柱純化,得到標題化合物392(98mg,80%產率)。ESI m/z C37H49N4O11[M+H]+:計算值725.33,實測值725.34。
將化合物380(98mg,0.135mmol)溶解在二甲烷(1.0mL)中,在室溫下加入TFA(1.0mL),攪拌2小時。然後濃縮,重新溶解在DMA(1mL)中,加入五氟苯基酯41a(44mg,0.06mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(45.8μL,0.27mmol)。將反應攪拌過夜,然後濃縮,殘留物通過製備HPLC(乙腈/H2O梯度洗脫)純化,得到標題化合物381(37mg,55%產率)。ESI m/z C53H73N8O14S[M+H]+:
計算值1077.49,實測值1077.50。
在0℃下,向含(S)-2-氨基-3-(4-硝基苯基)丙酸(13.2g,62.8mmol)的甲醇(120mL)溶液中加入化亞碸(9mL,125.6mmol)。將反應混合物加熱至回流並攪拌1小時,然後減壓濃縮並分散至乙酸乙酯(50mL)中。過濾混合物,收集得到白色固體目標化合物(14.5g,產率91%)。ESI m/z C10H13N2O4[M+H]+:計算值225.08,實測值225.08。
向化合物384(9.5g,36.4mmol)的THF(200mL)溶液中加入三乙胺(12.6mL,91.1mmol)。將混合物攪拌30分鐘後,加入二碳酸二叔丁酯(12.5mL,54.7mmol),將反應混合物攪拌1小時,然後用乙酸乙酯(200mL)稀釋,用1N HCl(30mL)、水(30mL)洗滌,經硫酸鈉乾燥,過濾並減壓濃縮,得到白色固體(11.4g,產率97%)。ESI m/z C15H21N2O6[M+H]+:計算值325.13,實測值325.13。
在-78℃下,向化合物385(14g,43.2mmol)的無水二甲烷(150mL)溶液中加入DIBAL-H(108mL,108mmol)。將反應混合物在-78℃下攪拌30分鐘,然後倒入冰水(200mL)中,用乙酸乙酯(3×80mL)萃取。將合併的有機相用1N HCl(2×50mL)、水(50mL)洗滌,經硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮,並通過矽膠柱層析法純化,得到目標化合物(8.6g,產率68%)。ESI m/z C14H19N2O5[M+H]+:計算值295.12,實測值295.12。
在0℃下,向化合物106(8.1g,20.8mmol)的二甲烷(100mL)溶液中加入化合物386(5.2g,17.8mmol)。將反應混合物升溫至室溫,並攪拌30分鐘。將反應物減壓濃縮,用矽膠柱純化,得到黃色固體(5.9g,產率82%)。ESI m/z C21H31N2O6[M+H]+:計算值406.21,實測值406.21。
在氫化瓶中,向化合物387(4g,9.85mmol)的甲醇(40mL)溶液中加入Pd/C(0.4g,10wt%)。將混合物在1atm氫氣下攪拌過夜,通過矽藻土過濾,濃縮濾液,得到化合物388(3.6g,產率-100%)。ESI m/z C21H35N2O4[M+H]+:計算值379.25,實測值379.25。
在0℃下,向化合物388(3.6g,9.52mmol)和三乙胺(1.3mL,9.52mmol)的二甲烷(50mL)溶液中加入4-硝基苯磺醯(2.1g,9.52mmol)。加熱至室溫並攪拌1小時,然後用二甲烷(50mL)稀釋,用1N鹽水(20mL)和水(20mL)洗滌,經硫酸鈉乾燥,過濾並減壓濃縮,然後通過矽膠柱層析法純化,得到黃色固體(4g,產率75%)。ESI m/z C27H38N3O8S[M+H]+:計算值564.23,實測值564.23。
室溫下,向化合物389(3.6g,6.39mmol)的乙腈(40mL)溶液中加入亞硝酸叔丁酯(2.29mL,19.1mmol)。將反應混合物加熱至45℃並攪拌6小時。然後將反應混合物減壓濃縮,並通過矽膠柱層析法純化,得到目標化合物(3g,
產率79%)。ESI m/z C27H37N4O10S[M+H]+:計算值609.22,實測值609.22。
向化合物390(3.0g,4.92mmol)的乙腈/DMSO(30mL/1mL)溶液中加入4-甲氧基苯硫酚(2.76g,19.7mmol)和碳酸鉀(2.7g,19.7mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜,然後用乙酸乙酯(100mL)稀釋,用水(20mL)和鹽水(20mL)洗滌,經硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮,並通過矽膠柱層析法純化,得到目標化合物(1.7g,產率85%)。ESI m/z C21H34N3O6[M+H]+:計算值424.24,實測值424.24。
在氫化瓶中,向含化合物391(100mg,0.236mmol)的甲醇(4mL)溶液中,加入Pd/C(10mg,10wt%)。將混合物在1atm氫氣下攪拌過夜,通過矽藻土過濾,濃縮濾液,得到目標化合物(92.9mg,-100%產率)。ESI m/z C21H36N3O4[M+H]+:計算值394.26,實測值394.26。
將化合物392(66mg,0.17mmol),化合物124(94.5mg,0.52mmol)和HATU(162mg,0.425mmol)溶解在二甲烷(50mL)中,然後加入三乙胺(73μL,0.52mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜,減壓蒸餾除去溶劑,殘留物用矽膠柱純化,得到目標產物393(98mg,產率80%)。ESI m/z C37H50N5O10[M+H]+:計算值724.35,實測值724.35。
向含化合物394(76.9mg,0.135mmol)的DMA(1mL)溶液中加入五氟苯酯41a(44mg,0.06mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(45.8μL,0.27mmol)。將反應物攪拌過夜,然後濃縮,濃縮液通過製備HPLC用MeCN/H2O梯度洗脫,得到目標產物395(37mg,產率55%)。ESI m/z C53H74N9O13S[M+H]+:計算值1076.50,實測值1076.50。
在0℃下,向馬來醯亞胺(6.35g,65.4mmol)的EtOAc(120mL)溶液中加入N-甲基嗎啉(8.6mL,78.5mmol)和甲酸甲酯(6.0mL,78.5mmol)。將反應在0℃下攪拌30分鐘,室溫攪拌1小時。濾出固體並濃縮濾液,將殘留物溶於二甲烷後通過矽膠柱過濾,並用二甲烷洗脫,以除去顏色。將產品收集濃縮,得到的固體用10%乙酸乙酯/石油醚打漿,得到白色固體9.00g(89%產率)。
將化合物301(8.16g,35.0mmol,1.0當量)和飽和NaHCO3(40mL)的混合物冷卻至0℃,向其中分批加入化合物409(5.43g,35.0mmol,1.0當量)。
在0℃下攪拌1小時後,將反應升溫至室溫,並攪拌1小時。用二甲烷(3×100mL)萃取反應物,用鹽水洗滌有機萃取物,用無水硫酸鈉乾燥,濃縮並通過矽膠柱層析法純化,得到白色固體(6.76g,產率62%)。MS ESI m/z C15H23NO6[M+H]+:計算值314.15,實測值314.15。
將化合物410(1.85g,5.9mmol)溶解在二甲烷(20mL)中並在室溫下與三氟乙酸(7mL)攪拌16小時,然後濃縮並通過矽膠柱層析法純化,得到白色泡沫(1.47g,97%產率)。MS ESI m/z C11H15NO6[M+H]+:計算值258.09,實測值258.09。
將化合物110(100mg,0.25mmol)、化合物411(65mg,0.25mmol)溶解在二甲烷(50ml)中。加入HATU(190mg,0.5mmol)和三乙胺(73μL,0.5mmol),並將反應混合物在室溫下攪拌過夜。減壓蒸餾除去溶劑,殘留物通過矽膠柱純化,得到目標產物412(164mg,75%產率)。ESI m/z C43H61N4O15[M+H]+:計算值873.41,實測值873.41。
將化合物412(52.4mg,0.06mmol)溶解在二甲烷(1.0mL)中,在室溫下與三氟乙酸(1.0mL)攪拌2小時,濃縮後重新溶解在DMA(1mL)中,加入五氟苯基酯41a(44mg,0.06mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(34μL,0.20mmol)。將反應混合物攪拌過夜,然後濃縮,濃縮液通過製備HPLC用MeCN/H2O梯度洗脫,
得到目標產物413(33mg,45%產率)。ESI m/z C59H85N8O18S[M+H]+:計算值1225.56,實測值1225。
將化合物392(98mg,0.25mmol)、化合物411(130mg,0.5mmol)溶解在二甲烷(50ml)中,加入HATU(190mg,0.5mmol)和三乙胺(73μL,0.5mmol),並將反應混合物在室溫下攪拌過夜。減壓除去反應溶劑,殘留物通過矽膠柱純化,得到目標產物415(163mg,75%產率)。ESI m/z C43H62N5O14[M+H]+:計算值872.42,實測值872.42。
將化合物415(54.3mg,0.06mmol)溶解在二甲烷(1.0mL)中,與三氟乙酸(1.0mL)在室溫下攪拌2小時,然後濃縮並重新溶解在DMA(1mL)中,向其中加入五氟苯基酯41a(44mg,0.06mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(34μL,0.20mmol)。將反應物攪拌過夜,然後濃縮,濃縮液通過製備HPLC用MeCN/H2O梯度洗脫,得到目標產物416(33mg,45%產率)。ESI m/z C59H86N9O17S[M+H]+:計算值1224.58,實測值1224.58。
將N-Boc-乙二胺(5.6mL,35.4mmol)和飽和NaHCO3(60mL)的混合物冷卻至0℃,分批加入化合物409(5.00g,32.2mmol)。在0℃下攪拌30分鐘後,將反應溫度升至室溫並攪拌1小時。過濾,收集沉澱並用冷水洗滌,然後溶於
乙酸乙酯中,用飽和食鹽水洗滌,無水Na2SO4乾燥並濃縮,得到白色固體(6.69g,87%產率)。
在高壓反應管中將化合物419(6.00g,25.0mmol),呋喃(18.0mL)的甲苯(120mL)溶液加熱至回流並攪拌16小時。無色溶液在反應過程中變黃。將反應物冷卻至室溫後濃縮,將所得白色固體用乙醚打漿,得到化合物420(6.5g,84%產率)。
將化合物420(9.93g,32.2mmol)溶於1,4-二氧六環(15mL)中,在室溫下加入濃HCl(15mL),攪拌3小時後將反應液濃縮,通過過濾收集所得固體,用乙酸乙酯洗滌濾餅。將固體在烘箱(50℃)中乾燥過夜,得到化合物421(6.94g,88%產率)。
在-10℃下,向化合物421(0.85g,3.47mmol)的THF(10mL)溶液中加入三氧磷(162μL,1.73mmol),然後加入三乙胺(966μL,6.95mmol)。將反應物在-10℃下攪拌3小時,然後用二甲烷(20mL)稀釋並通過矽藻土過濾,將濾液濃縮,得到化合物422,將其直接用於下一步驟。ESI m/z C20H23ClN4O7P[M+H]+:計算值497.09,實測值497.09。
在0℃下將化合物422(0.50g,1.0mmol)和N,N’-二异丙基乙
胺(0.4mL,2.4mmol)溶於二甲烷(5.0mL)中,然後加入化合物291(0.23g,1.0mmol)。將反應在0℃下攪拌2.5小時,濃縮並通過SiO2柱純化,得到標題化合物423(0.30g,43%)。ESI m/z C31H45N5O11P[M+H]+:計算值694.28,實測值694.28。
將化合物424(40mg,0.063mmol),化合物110(40mg,0.10mmol)溶於二甲烷(5mL)中,然後加入HATU(24mg,0.063mmol)和三乙胺(27.8μL,0.2mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜,然後減壓蒸餾除去溶劑,殘留物用矽膠柱純化,得到標題化合物425(53.4mg,收率84%)。ESI m/z C48H69N7O15P[M+H]+:計算值1014.45,實測值1014.45。
向化合物426(45.0mg,0.053mmol)的DMA(1mL)溶液中加入五氟苯基酯41a(37.0mg,0.053mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(17μL,0.1mmol)。將反應物攪拌過夜並濃縮,通過製備HPLC(乙腈/水梯度洗脫)純化殘留物,得到標題化合物427(26.2mg,36%產率)。ESI m/z C64H93N11O18PS[M+H]+:計算值1366.61,實測值1366.61。
將化合物427(8.0mg,0.0058mmol)溶於甲苯(5.0mL)中,加熱回流過夜,然後濃縮,用製備HPLC(乙腈/水梯度洗脫)純化,得到標題化合物428(6.4mg,90%產率)。ESI m/z C56H85N11O16PS[M+H]+:計算值1230.56,實測值1230.56。
在室溫下將鈉氫(60%,8g,200mmol)加入HO-PEG9-OMe(42.8g,100mmol)的四氫呋喃(1L)的溶液中。攪拌30分鐘後,將溴乙酸叔丁酯(48.8g,250mmol)加入,在室溫下攪拌1小時,然後倒入冰水中,用二甲烷萃取,有機層用飽和食鹽水洗,無水硫酸鈉乾燥。矽膠柱層析純化(0-5%甲醇/二甲烷)得到化合物432,為黃色油狀物狀物(32g,59%產率)。
將化合物432(40g,73.8mmol)溶解在二甲烷(400mL)中,然後加入甲酸(600mL),25℃攪拌過夜。減壓蒸餾除去所有的揮發物,得到黃色油狀物(36g,約100%產率)。ESI m/z C21H43O12[M+H]+:計算值487.27,實測值487.24。
將化合物433(36g,73.8mmol)溶解在二甲烷(640mL),依次加入草醯(100mL)、DMF(52g,0.74mmol)。將得到的溶液在室溫下攪拌4小時,減壓蒸餾除去所有的揮發物,得到黃色油狀物。
將Z-L-Lys-OH(41.4g,147.6mmol)、碳酸鈉(23.4g,221.4mmol)和NaOH(5.9g,147.6mmol)溶解于水(720ml)中,冷卻到0℃,然後加入化合物434(37.2g,73.8mmol)的四氫呋喃溶液(20mL)。得到的混合物在室溫下攪拌1小時,減壓蒸餾除去THF,在冰浴下用濃鹽酸調節至pH 3。溶液用二甲烷萃取,飽和食鹽水洗,無水硫酸鈉乾燥,得到黃色油狀物(55g,99%產率)。ESI m/z C35H60N2O15[M+H]+:計算值749.40,實測值749.39。
將HATU(39.9g,105mmol)加入到化合物4-(((芐氧基)羰基)氨基)丁酸(26.1g,110mmol)的DMF(300mL)溶液。在室溫下攪拌30分鐘後,將該反應混合物加入到化合物110(39.4g,100mmol)和三乙胺(20.2g,200mmol)的DMF(300mL)溶液。反應在室溫攪拌2小時,用水稀釋,經乙酸乙酯萃取,有機層用飽和食鹽水洗,硫酸鈉乾燥。濃縮後通過矽膠柱層析純化(20-70%乙酸乙酯/石油醚),得到白色固體(45g,產率73%)。ESI m/z C33H48N3O8[M+H]+:計算值614.34,實測值614.15。
將化合物437(100g,163mmol)溶解在甲醇(500mL)中,加入Pd/C催化劑(10wt%,10g),在室溫氫化反應(1atm H2)過夜。將催化劑過濾掉後,濾液減壓濃縮,得到棕色泡沫狀固體387(75.8g,產率97%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.11(s,1H),6.83(d,J=10.3Hz,2H),5.04-4.52(m,6H),3.90-3.56(m,1H),2.81(d,J=5.3Hz,2H),2.63(dd,J=12.5,6.1Hz,2H),2.54-2.26(dd,J=14.0,7.6Hz,4H),1.94-1.64(m,3H),1.44-1.36(m,18H),1.08(d,J=6.9Hz,3H)。ESI m/z C25H42N3O6[M+H]+:計算值480.30,實測值480.59。
在0℃,在化合物436(130g,174mmol)的DMF(500mL)溶液中在0℃依次加入三乙胺(66mL,474mmol)和HATU(72g,190mmol),然後將反應混合物升溫至室溫,攪拌2小時。將化合物438(75.8g,158mmol)的DMF(500mL)溶液在0℃下加入到上述溶液中,反應在室溫下攪拌1小時。將反應液倒入水(4L)中,用乙酸乙酯萃取(3×500ml),合併有機層,用飽和食鹽水洗(2L),硫酸鈉乾燥,過濾濃縮後粗品439(190g)直接用於下一步反應。ESI m/z C60H100N5O20[M+H]+:計算值1210.69,實測值1210.69。
將上一步反應得到的439粗品(190g)溶解在甲醇(900mL)中,加入Pd/C催化劑(10wt%,19g),和在室溫氫化(1atm H2)反應過夜。濾除催化劑,將濾液減壓濃縮,用矽膠柱純化(0-10%甲醇/二甲烷)得到一棕色油狀物(105g,兩步產率62%)。ESI m/z C52H95N5O18[M+H]+:計算值1077.65,實測值1077.65。
室溫下在化合物440(105g,97.1mmol)的EtOH(5.3L)溶液中,加入化合物125(54.4g,194.2mmol)和0.1N磷酸二氫鈉溶液(1.1L),反應在室溫下攪拌過夜。減壓蒸餾除去EtOH,殘留水溶液倒入水(3L)中,然後用乙酸乙酯萃取(4×500ml),合併有機相,用飽和食鹽水洗(2L),硫酸鈉乾燥、濃縮,粗產品用矽膠柱純化(0-10%甲醇/二甲烷)得到一黃色油狀物(100g,83%產率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.43(s,1H),7.35(s,1H),7.23(t,J=5.1Hz,1H),7.01(d,J=4.5Hz,2H),6.89(s,2H),6.70(s,2H),4.56-4.45(m,1H),4.30(t,J=9.7Hz,1H),3.97(s,2H),3.86-3.74(m,1H),3.66-3.63(m,36H),3.58-3.52(m,5H),3.38(s,3H),3.33-3.19(m,3H),2.47(d,J=6.2Hz,4H),2.23(dd,J=11.6,6.1Hz,2H),1.91(dtd,J=26.8,13.6,6.5Hz,7H),1.71(d,J=7.7Hz,2H),1.56-1.49(m,2H),1.42(s,9H),1.39(s,9H),1.10(d,J=6.5Hz,3H)。ESI m/z C60H101N6O21[M+H]+:計算值1241.69,實測值1241.69。
將化合物442(67mg,0.062mmol)和化合物41a(43mg,
0.062mmol)溶解在DMA(4mL)中,然後加入N,N’-二异丙基乙胺(43μL,0.248mmol)。在室溫下攪拌3小時後,減壓蒸餾除去溶劑,殘留物用製備HPLC(C18柱,乙腈/水10-90%)純化,得到化合物443(59mg,60%產率)。ESI m/z C76H125N10O24S[M+H]+:計算值1594.92,實測值1594.24。
將鈉氫(60%,0.64g,16mmol)分批加入HO-PEG6-OMe(2.37g,8mmol)的四氫呋喃(25mL)溶液。在室溫下攪拌15min後,加入溴乙酸叔丁酯(3.90g,20mmol),在室溫攪拌過夜。將反應混合物倒入冰水中,用二甲烷萃取,有機相用飽和食鹽水洗,硫酸鈉乾燥,經矽膠柱層析純化(20-50%乙酸乙酯/石油醚),得一無色油狀物(1.47g,45%)。ESI m/z C19H39O9[M+H]+:計算值411.25,實測值411.15。
將化合物457(1.47g,3.60mmol)溶解在二甲烷(30mL)中,與甲酸(50mL)在38℃攪拌過夜。減壓蒸餾除去所有揮發物,得標題化合物(1.20g,94%產率),為一黃色油狀物。ESI m/z C15H31O9[M+H]+:計算值355.19,實測值355.18。
將化合物458(1.10g,3.20mmol)溶解在二甲烷(20mL)中,依次加入草醯(4mL)和DMF(3滴)。將得到的溶液在室溫下攪拌4小時,減壓蒸餾除去所有揮發物,得黃色油狀物,直接用於下一步。
將Z-L-Lys-OH(1.80g,6.4mmol)、碳酸鈉(1g,9.6mmol)和NaOH(0.26g,6.4mmol)溶解于水(30mL),冷卻到0℃後,加入化合物459(1.20g,3.2mmol)的四氫呋喃(10mL)溶液。所得混合物在室溫下攪拌1小時,減壓蒸餾除去THF,水溶液在冰浴下用濃鹽酸條件pH至3。用二甲烷萃取,飽和食鹽
水洗,無水硫酸鈉乾燥,得標題化合物(1.77g,90%),為一棕色油狀物。ESI m/z C29H49N2O12[M+H]+:計算值617.32,實測值617.31。
將NHS(644mg,5.60mmol)和EDC(1.08g,5.60mmol)加入到化合物460(2.30g,3.70mmol)的二甲烷(100mL)溶液中。在室溫攪拌過夜後,將反應混合物直接在矽膠柱上樣,純化(0-10%甲醇/二甲烷),得到一棕色油狀物(2.10g,產率80%)。ESI m/z C33H52N3O14[M+H]+:計算值714.34,實測值714.32。
將磷酸二氫鈉(0.1M,3mL)加入到化合物461(357mg,0.50mmol)和化合物110(200mg,0.50mmol)的乙醇(15mL)溶液。將所得溶液在室溫下攪拌24小時,減壓蒸餾除去全部揮發物,殘留物經矽膠柱層析純化(5-10%甲醇/二甲烷)得到標題化合物(216mg,44%產率),為一棕色油狀物。ESI m/z C50H81N4O16[M+H]+:計算值993.56,實測值993.57。
將化合物462(108mg,0.109mmol)溶解在甲醇(5mL)中,加入鈀催化劑(10wt%、50mg)後,在氫氣氛下(1atm)室溫攪拌3小時,過濾掉催化劑,濾液減壓蒸餾,得標題化合物(94mg),為一黃色油狀物。ESI m/z C42H75N4O14[M+H]+:計算值859.52,實測值859.93。
將磷酸二氫鈉(0.1M,2mL)加入到化合物463(94mg,0.109mmol)和化合物125(61mg,0.218mmol)的乙醇(10mL)溶液。將得到的溶液在室溫下攪拌24小時,減壓蒸餾除去全部揮發物,殘留物通過柱色譜法純化(5-10%甲醇/二甲烷)得一黃色油狀物(40mg,36%產率)。ESI m/z C50H82N5O17[M+H]+:計算值1024.56,實測值1024.98。
將化合物464(20mg,0.0196mmol)溶解在二甲烷(3mL)中,和TFA(3mL)在室溫下攪拌2小時,減壓蒸餾除去所有揮發物,得標題化合物(17mg),為一黃色油狀物。ESI m/z C41H66N5O15[M+H]+:計算值868.45,實測值868.47。
將化合物465(17mg,0.0196mmol)和化合物41a(14mg,0.0196mmol)溶解在DMA(3mL)中。加入N,N’-二异丙基乙胺(10μl,0.0588mmol)後在室溫攪拌3小時,然後減壓蒸餾除去溶劑,殘留物通過製備HPLC(C18柱,乙腈/水10-90%)純化,得化合物466(15mg,產率64%),為一黃色油狀物。ESI m/z C66H106N9O20S[M+H]+:計算值1376.72,實測值1376.72。
將化合物110(0.30g,0.76mmol),Z-L-Ala-OH(0.17g,0.76mmol)和HATU(0.29g,0.76mmol)溶於二甲烷(20mL)中,向其中加入三乙胺(110μL,0.8mmol)。在室溫下攪拌過夜,然後減壓蒸餾除去溶劑,殘留物通過SiO2柱純化,得到標題化合物(0.43g,95%產率)。ESI m/z C32H46N3O8[M+H]+:計算值600.32,實測值600.32。
在氫化反應瓶中,向化合物378(0.3g,05mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入Pd/C(0.10g,33wt%)。將混合物在1atm H2下振盪過夜,然後通過矽藻土過濾,濃縮濾液然後與化合物461(357mg,0.5mmol)在乙醇(20mL)中混合,將磷酸二氫鈉(0.1M,4mL)加入,在室溫下攪拌24小時,減壓蒸餾除去全部揮發物,殘留物通過柱色譜(5-10%甲醇/二甲烷)純化,得到一黃色油狀物(176mg,33%)。ESI m/z C53H86N5O17[M+H]+:計算值1064.59,實測值1064.60。
將化合物488(176mg,0.166mmol)溶解在甲醇(15mL)中,加入鈀催化劑(10%,80mg),在室溫氫化(1atm)反應3小時,催化劑被過濾掉後,減壓蒸餾濃縮濾液,得標題化合物(154mg),為一黃色油狀物。ESI m/z C45H80N5O15[M+H]+:計算值930.56,實測值930.56。
將磷酸二氫鈉(0.1M,4mL)加入到化合物489(154mg,0.166mmol)和化合物125(93mg,0.332mmol)的乙醇(20mL)溶液。將得到的溶液在室溫下攪拌24小時,減壓蒸餾除去全部揮發物,殘留物通過矽膠柱層析純化(5-10%甲醇/二甲烷),得到一黃色油狀物(117mg,64%)。ESI m/z C53H87N6O18[M+H]+:計算值1095.60,實測值1095.61。
將化合物490(39mg,0.0356mmol)溶解在二甲烷(3mL)中,和TFA(3mL)在室溫下攪拌2小時,減壓蒸餾除去全部揮發物,得標題化合物(33mg),為一黃色油狀物。ESI m/z C44H71N6O16[M+H]+:計算值939.48,實測值939.49。
將化合物491(33mg,0.0356mmol)和化合物41a(25mg,0.0356mmol)溶解在DMA(3mL)中,向其中加入N,N’-二异丙基乙胺(15mg,0.116mmol),室溫攪拌3小時,減壓蒸餾除去反應溶劑,殘留物通過製備HPLC(C18柱,乙腈/水10-90%)純化,得化合物492(17mg,33%),為一黃色油狀物。ESI m/z C69H111N10O21S[M+H]+:計算值1447.76,實測值1448.78。
將化合物2-(二甲氨基)乙酸(0.60g,4.30mmol)和HATU(1.08g,2.86mmol)溶解在DMF(2mL),加入三乙胺(1mL,7.16mmol)後在室溫下攪拌1H,加入Z-L-LyS-OH(0.80g,2.86mmol)的DMF(2mL)溶液。反應液在室溫下攪拌2H,然後減壓濃縮。粗品用製備HPLC(C18柱,乙腈/水10-90%)純化,得到無色油狀物495(0.50g,50%)。MS ESI m/z C18H28N3O5[M+H]+:計算值366.20,實測值366.20。
將化合物495(0.50g,1.37mmol)溶於二甲烷(15mL),向其中加入五氟苯酚(0.38g,2.05mmol)和EDCI(0.52g,2.74mmol)。室溫攪拌過夜,反應液通過矽藻土過濾,用二甲烷洗滌濾餅。濾液濃縮得到的五氟苯酚的酯,將其溶於10mL二甲烷。將化合物438(0.44g,0.91mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(0.32mL,1.82mmol)加入上述溶液中,在室溫下攪拌2小時,然後濃縮。用矽膠柱純化粗品,甲醇/二甲烷梯度洗脫得化合物496(1.02g,約100%產率)。MS ESI m/z C43H67N6O10[M+H]+:計算值827.48,實測值827.48。
將化合物496(1.02g,1.23mmol)溶解在甲醇(10mL)中,加入鈀催化劑(10%,100mg),在H2氣氛下(1atm)室溫攪拌過夜。真空抽濾除去催化劑,濃縮反應液,得到黃色油狀物497(0.76g,89%)。MS ESI m/z C35H61N6O8[M+H]+計算值:693.45,實測值693.45。
將化合物497(0.25g,0.36mmol)和化合物125(0.15g,0.54mmol)溶於乙醇(5mL),加入磷酸二氫鈉(0.1M,1mL)後,在室溫下攪拌過夜。真空濃縮反應液,粗品通過柱色譜法純化(5%~10%甲醇/二甲烷)得到化合物498(0.15g,48%)。MS ESI m/z C43H68N7O11[M+H]+:計算值858.49,實測值858.49。
將化合物498(0.15g,0.175mmol)溶解在二甲烷(1mL)和三氟乙酸(2mL)中,在室溫下攪拌兩小時,真空濃縮,得到黃色油狀物,將其溶於DMA(2mL),向其中加入五氟苯基酯41a(121.1mg,0.175mmol),接著加入N,N’-二异丙基乙胺(91μL,0.525mmol)。反應在室溫攪拌過夜,然後低壓濃縮,粗品用製備HPLC(C18柱,乙腈/水10-90%)純化,得到化合物499(30.7mg,14%)。MS ESI m/z C59H92N11O14S[M+H]+:計算值1210.65,實測值1210.62。
將H-LyS-OH(0.31g,2.14mmol)溶於乙醇(20mL),向其中加入化合物125(1.80g,6.42mmol)和0.5M的磷酸氫二鈉(4mL),反應液在室溫下攪拌過夜。濃縮後,粗品用製備HPLC(C8柱,乙腈/水10-90%)純化,得到黃色油狀物501(0.26g,26%)。MS ESI m/z C22H29N4O8:計算值477.19,實測值477.19。
將化合物501(0.26g,0.55mmol)溶於二甲烷(10mL),加入NHS(0.095g,0.825mmol)和EDCI(0.16g,0.825mmol)。反應混合物在室溫條件下攪拌過夜,然後濃縮,用水(50mL)稀釋後,用乙酸乙酯萃取(2×20mL)。合併有機層,硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮得到粗產品502(0.34g),直接用於下一步反應。MS ESI m/z C26H32N5O10[M+H]+:計算值574.21,實測值574.21。
將化合物438(0.19g,0.4mmol)溶於乙醇(30mL),加入化合物502(0.34g,0.6mmol)和0.1M的磷酸二氫鈉(6mL)。反應混合物在室溫下攪拌過夜,然後真空濃縮。殘留物用水(100mL)稀釋,乙酸乙酯萃取(2×40mL)。合併有機層,硫酸鈉乾燥,矽膠柱純化(二甲烷/甲醇為洗脫劑梯度洗脫),得化合物503(0.115g,31%)。MS ESI m/z C47H68N7O13[M+H]+:計算值938.48,實測值938.49。
將化合物503(0.115g,0.12mmol)溶於二甲烷(1mL),加入2mL的TFA。反應混合物在室溫下攪拌2h後低壓濃縮,粗品用製備HPLC(C18柱,乙腈/水10-90%)純化,得到黃色油狀物504(0.0312g,33%)。MS ESI m/z C22H29N4O8[M+H]+:計算值477.19,實測值477.19。
將化合物504(31.2mg,0.04mmol)溶於DMA(2mL),向其中加入五氟苯基酯41a(27mg,0.04mmol),接著加入N,N’-二异丙基乙胺(16μL,0.08mmol)。反應液在室溫攪拌過夜,低壓濃縮,通過製備液相色譜(10-90%乙腈/水)純化,得到化合物505(11.9mg,24%)。MS ESI m/z C63H92N11O16S[M+H]+:計算值1290.64,實測值1290.64。
將3-(2-(2-(二苄基氨基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁基酯(5g,12.1mmol)溶於二甲烷(10mL)中,加入5mL的三氟乙酸。反應混合物在室溫下攪拌1小時,然後濃縮。粗產品溶於二甲烷(50ml),依次加入NHS(4.25g,37mmol)和EDCI(7.10g,37mmol)。反應混合物在室溫攪拌過夜,然後濃縮,矽膠柱純化(二甲烷/甲醇梯度洗脫),得到黃色油狀物508(5g,91%)。MS ESI m/z C25H31N2O6[M+H]+計算值:455.21,實測值455.21。
將化合物110(1g,2.5mmol)溶於乙醇(10ml),加入化合物508(1.80g,3.9mmol)和0.1M的磷酸二氫鈉(2mL),在室溫下反應過夜,然後濃縮。殘留物用水(100mL)稀釋,用乙酸乙酯萃取(3×50ml)。合併有機層用硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮,矽膠柱純化(二甲烷/甲醇體系梯度洗脫),得到黃色油狀物509(0.93g,50%)。MS ESI m/z C42H60N3O8[M+H]+計算值:734.43,實測值734.43。
將化合物509(0.93g,1.27mmol),乙酸乙酯(20mL)和Pd/C(0.093g,10wt%)加入到氫化瓶中,在氫氣(1atm)下攪拌過夜,然後通過矽藻土過濾固體。濾液濃縮得到化合物510(0.57g,81%),產物不用進一步純化。MS ESI m/z C28H48N3O8[M+H]+計算值:554.34,實測值554.34。
將化合物510(0.25g,0.45mmol)溶於乙醇(5mL)中,室溫下加入化合物502(0.39g,0.68mmol)和磷酸二氫鈉(0.1M,1mL),反應混合物在室溫攪拌過夜。反應液真空濃縮後用水(100mL)稀釋,用乙酸乙酯萃取(2×50mL)。合併有機層,硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮,矽膠柱純化(甲醇/二甲烷梯度洗脫),得到黃色油狀物511(0.076g,17%)。MS ESI m/z C50H74N7O15[M+H]+計算值:1012.52,實測值:1012.53。
將化合物511(0.076g,75mmol)溶於二甲烷(2mL),加入4mL的TFA後在室溫下攪拌1小時,濃縮,得到的粗品512直接用於下一步反應。MS ESI m/z C41H58N7O13[M+H]+計算值:856.40,實測值856.40。
將化合物512溶於DMA(2mL),加入化合物41a(33mg,0.048mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(25μL,0.144mmol)。反應在室溫下攪拌3小時,然後濃縮和製備HPLC純化(乙腈/水梯度洗脫),得到黃色油狀物513(21.3mg,32%)。MS ESI m/z C66H98N11O18S[M+H]+計算值:1364.67,實測值1364.67。
將化合物437(1g,1.63mmol)溶於二甲烷(1mL),向其中加入2mL TFA,反應混合物在室溫下攪拌1小時,然後濃縮,得到的粗品515直接用於下一步反應。MS ESI m/z C24H32N3O6[M+H]+計算值:458.22,實測值:458.22。
將化合物515溶於DMF(3mL),向其中加入五氟苯基酯41a(0.63g,0.91mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(0.46mL,2.73mmol)。反應在室溫下攪拌過夜,然後濃縮,矽膠柱純化(二甲烷/甲醇梯度洗脫),得到黃色油狀物516(1.75g)。MS ESI m/z C49H72N7O11S[M+H]+計算值:966.49,實測值966.49。
將化合物516(0.20g,0.20mmol),甲醇(15mL)和Pd/C(0.02g,10wt%)加入到氫化瓶中,然後用1N HCl調節pH值至4左右。在H2(1atm)下攪
拌過夜,墊矽藻土過濾,濾液濃縮得到化合物517,直接用於下一步反應。MS ESI m/z C41H66N7O9S[M+H]+計算值:832.46,實測值832.46。
將化合物H-Dap(Boc)-OH(1g,4.9mmol)與飽和NaHCO3溶液(20mL)混合,在0℃下加入化合物409(2.30g,14.7mmol)。反應在0℃攪拌1h,然後升溫到室溫攪拌1h。加入硫酸氫鉀(1M)調整pH至約6,產生的混合物用乙酸乙酯萃取(2×50ml)。合併有機層,硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮得化合物519(0.42g,30%)。MS ESI m/z C12H15N2O6[M-H]-計算值:283.10,實測值283.10。
將化合物519(0.21g,0.74mmol)溶於乙酸乙酯(10mL),然後加入五氟苯酚(0.27g,1.48mmol)和DCC(0.30g,1.48mmol)。反應混合物在室溫下攪拌過夜,然後過濾,用EtOAC洗滌濾餅。濃縮濾液得到活化酯(0.17g,0.37mmol),溶於1mL DMF,向其中加入化合物517(0.36g,0.43mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(0.13mL,0.74mmol),反應混合物在室溫下攪拌2小時,濃縮,製備HPLC純化(梯度的乙腈/水),得到化合物520(50mg,13%)。MS ESI m/z C53H80N9O14S[M+H]+計算值:1098.55,計算1098.55。
將化合物520(50mg,0.046mmol)溶於0.5mL的二甲烷中,加入1mL三氟乙酸後在室溫下反應1小時,濃縮並用製備HPLC(流動相乙腈/水)純化得到產物521(11mg,25%產率)。MS ESI m/z C48H72N9O12S[M+H]+:計算值998.49,實測值998.49。
將化合物509(1.00g,1.36mmol)溶於2mL二甲烷中,並向其中加入4mL三氟乙酸,加完後後室溫下反應1小時。濃縮得到化合物523。MS ESI m/z C33H44N3O6[M+H]+:計算值578.32,實測值578.32。
將化合物523溶於5mL DMF中,向其中加入化合物41a(0.78g,1.13mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(0.8mL,4.52mmol)。加完後後室溫攪拌過夜,濃縮後用矽膠柱純化(流動相甲醇/二甲烷)得到產物524(1.64g,100%產率)。MS MS ESI m/z C58H84N7O11S[M+H]+:計算值1086.59,實測值1086.58。
將化合物524(0.80g,0.20mmol)溶於10mL甲醇中,向其中加入Pd/C(0.08g,10wt%),並用1N HCl調pH到4。氫氣置換3次後,攪拌過夜。墊矽藻土過濾,濾液濃縮得到化合物525,其含有一些未反應的原料,無需進一步純化即可用於下一步驟。MS ESI m/z C41H66N7O9S[M+H]+:計算值832.46,實測值832.46。
將H-Lys(Boc)-OH(1.00g,3.8mmol)溶於16mL乙醇中,向其
中加入化合物125(1.00g,5.6mmol)和磷酸二氫鈉(0.1M,3mL),加完後後室溫攪拌過夜。反應液濃縮並用矽膠柱純化(流動相甲醇/二甲烷),得到產物527(1.62g,-100%產率)。MS ESI m/z C19H30N3O7[M+H]+:計算值412.20,實測值412.20。
將化合物527(0.24g,0.58mmol)溶於10mL乙酸乙酯中,加入五氟苯酚(0.21g,1.17mmol)和DCC(0.24g,1.17mmol)。加完後後室溫攪拌過夜,過濾並濃縮濾液得到產物(32mg,0.056mmol),將此化合物溶於DMF中,向其中加入化合物525(50mg,0.056mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(29μL,0.168mmol)。加完後後室溫反應2小時,濃縮後用製備HPLC純化(流動相:乙腈/水),得到產物528(3mg,4%產率)。MS ESI m/z C63H99N10O17S[M+H]+:計算值1299.68,實測值1299.68。
將化合物528(3mg,0.002mmol)溶於0.5mL二甲烷中,加入1mL三氟乙酸。加完後後室溫反應1小時,濃縮並用製備HPLC純化(流動相:乙腈/水),得到產物529(1.43mg,52%產率)。MS ESI m/z C58H91N10O15S[M+H]+:計算值1199.63,實測值1199.62。
將化合物527(0.11g,0.19mmol)的五氟苯酚酯溶於1mL DMF
中,加入化合物517(0.21g,0.25mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(86uL,0.5mmol)。加完後後室溫反應2小時並濃縮,用製備HPLC純化(流動相:乙腈/水)得到產物532(20mg,9%產率)。MS ESI m/z計算值C60H93N10O15S[M+H]+:1225.65,實測值1225.66。
將化合物532(20mg,0.016mmol)溶於1mL二甲烷中,加入2mL三氟乙酸,加完後後室溫反應1小時。反應液濃縮並用製備HPLC純化(流動相:乙腈/水)得到化合物533(8.9mg,18%產率)。MS ESI m/z C55H85N10O13S[M+H]+:計算值1125.59,實測值1125.59。
在室溫下,將化合物3-[[叔丁氧羰基]氨基]-L-丙氨酸(1.00g,7.3mmol)溶於30mL乙醇中,加入化合物125(2.00g,7.3mmol)和0.1M磷酸二氫鈉(6mL)。加完後室溫攪拌過夜,濃縮後用矽膠柱純化(流動相:甲醇/二甲烷),得到產物536(1.41g,78%產率)。MS ESI m/z C16H24N3O7[M+H]+:計算值370.15,實測值370.15。
將化合物536(1.41g,3.8mmol)溶於2mL的二甲烷中,加入5mL三氟乙酸後室溫反應1小時。反應液濃縮得到產物537,無需進一步純化即可用於下一步驟。MS ESI m/z C11H16N3O5[M+H]+:計算值270.10,實測值270.10。
將化合物537溶於20mL乙醇中,在室溫下,加入化合物125(1.90g,6.9mmol)和0.1M磷酸二氫鈉(4mL),加完後室溫攪拌過夜。反應液濃縮後用製備HPLC純化(流動相:乙腈/水)得到產物538(0.45g,22%產率)。MS ESI m/z C19H23N4O8[M+H]+:計算值435.14,實測值435.14。
將化合物538(0.15g,0.34mmol)和化合物438(0.17g,0.34mmol)溶於DMF(2mL)中,向其中加入HATU(0.16g,0.41mmol)和三乙胺(95μL,0.68mmol),加完後室溫反應1小時。反應液濃縮後用製備HPLC純化(流動相:乙腈/水)得到產物539(34mg,11%產率)。MS ESI m/z C44H62N7O13[M+H]+:計算值896.43,實測值896.42。
將化合物539(34mg,0.04mmol)溶於0.5mL二甲烷中,加入1mL三氟乙酸後,室溫反應2小時。反應液濃縮後得到化合物540。MS ESI m/z C35H46N7O11[M+H]+:計算值740.30,實測值740.32。
將化合物540溶於DMA(2mL)中,向其中加入化合物41a(28mg,0.04mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(21μL,0.12mmol)。加完後攪拌過夜,濃縮後用製備HPLC純化得到產物541(14.4mg,29%產率)。MS ESI m/z C60H86N11O16S[M+H]+:計算值1248.59,實測值1248.60。
將化合物132(0.300g,0.329mmol)和N-BOC-乙二胺鹽酸鹽(0.063g,0.395mmol)溶於二甲烷(30mL),在0℃下向其中加入EDCI(0.189g,0.988mmol),10分鐘後升至室溫,攪拌過夜。反應液用二甲烷稀釋後,水洗、鹽水洗、硫酸鈉乾燥,濃縮並用矽膠柱純化,得到黃色泡沫狀固體(0.132g,54%產率)。MS ESI m/z C52H80N9O12S[M+H]+:計算值1054.6,實測值1054.6。
將化合物544(0.132g,0.125mmol)溶於二甲烷(45mL),加入1.5mL三氟乙酸,室溫反應1小時。反應液濃縮後用製備HPLC純化得到產物545(111mg,93%產率)。MS ESI m/z C47H72N9O10S[M+H]+:計算值954.5,實測值954.5。
將化合物132(0.050g,0.0549mmol)和N-Boc-1,11-二氨基-3,6,9-三氧雜十一烷(0.024g,0.0549mmol)溶於二甲烷(10mL),在0℃下
向其中加入EDCI(0.032g,0.1647mmol),反應10分鐘後,升至室溫,攪拌過夜。反應液用二甲烷稀釋後水洗、鹽水洗、硫酸鈉乾燥、過濾濃縮,用矽膠柱純化得到產物548(0.030g,46%產率)。MS ESI m/z C58H92N9O15S[M+H]+:計算值1186.6,實測值1186.6。
將化合物548(0.030g,0.0253mmol)溶於3mL二甲烷中,加入1mL三氟乙酸,室溫反應1小時。濃縮後得到黃色油狀液體,用製備HPLC純化(C8柱,流動相A:水,流動相B:乙腈,60分鐘的時間,從B的10%到B的80%)得到產物549(11.7mg,43%產率)。MS ESI m/z C53H84N9O13S[M+H]+:計算值1086.6,實測值1086.6。
將化合物二乙基三胺(28.7g,275mmol)和DMAP(0.034g,0.000275mmol)溶於二甲烷(350mL),在0℃下加入Boc2O(6.0g,0.0275mmol)。加完後室溫攪拌過夜,濃縮反應液,並用矽膠柱純化得到黃色油狀物(45g,80%產率)。MS ESI m/z C9H22N3O2[M+H]+:計算值204.2,實測值204.2。
將化合物132(0.060g,0.0658mmol)和N-Boc-2,2’-亞氨基二乙胺(0.016g,0.0790mmol)溶於二甲烷(6mL),在0℃下加入EDCI(0.038g,0.1974mmol),加完後升至室溫,攪拌過夜。反應液濃縮後用製備HPLC純化得到產物553(48mg,66%產率)。MS ESI m/z C54H85N10O12S[M+H]+:計算值1097.6,實測值1097.6。
將化合物553(0.048g,0.0437mmol)溶於3mL二甲烷中,加入1mL三氟乙酸後,室溫反應1小時。反應液濃縮後用製備HPLC純化(C18柱,流動相A:水,流動相B:乙腈,60分鐘後從B的10%升到B的80%)得到產物554(111mg,93%產率)。MS ESI m/z C49H77N10O10S[M+H]+:計算值997.5,實測值997.5。
將化合物132(0.400g,0.439mmol)和H-Lys(Boc)-O t Bu˙HCl(0.135g,0.528mmol)溶於二甲烷(40mL)中,在0℃下加入EDCI(0.189g,1.317mmol),加完後升至室溫,攪拌過夜。反應液用二甲烷稀釋後,水洗、鹽水洗、硫酸鈉乾燥、過濾,濃縮並用矽膠柱純化得到產物558(0.43g,82%產率)。MS ESI m/z C60H94N9O14S[M+H]+:計算值1196.7,實測值1196.7。
將化合物558(0.230g,0.192mmol)溶於二甲烷(6mL)中,加入三氟乙酸(2mL),室溫反應3小時,濃縮後用製備HPLC純化(C18柱,流動相A:水,流動相B:乙腈;60分鐘從10%的B到80%的B)得到產物559(153mg,76%產率)。MS ESI m/z C51H78N9O12S[M+H]+:計算值1040.5,實測值1040.5。
將化合物558(0.200g,0.167mmol)和Boc-L-Lys(Boc)-OH(0.070g,0.200mmol)溶於二甲烷(10mL),在0℃下加入HATU(0.095g,0.250mmol)和三乙胺(46μL,0.334mmol)。反應液升至室溫,攪拌過夜,二甲烷稀釋後水洗、鹽水洗、硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮並用矽膠柱純化,得到產物562(0.270g,約100%收率)。MS ESI m/z C76H122N11O19S[M+H]+:計算值1524.9,實測值1524.9。
將化合物562(0.27g,0.177mmol)溶於二甲烷(6mL),加入三氟乙酸(2mL),室溫反應4小時。反應液濃縮後用製備HPLC純化(C18柱,流動相A:水,流動相B:乙腈;60分鐘從10%的B到80%的B)得到產物563(172mg,83%產率)。MS ESI m/z C57H90N11O13S[M+H]+:計算值1168.6,實測值1168.6。
將乙二胺(3.0g,0.5mmol)溶於二甲烷(500mL)中,降溫至0℃,然後加入CbzCl(8.53g,0.050mol),加完後升至室溫,攪拌過夜。反應液水洗、鹽水洗、硫酸鈉乾燥、過濾並濃縮得到N-苄氧羰基-1,2-二氨基乙烷(7.0g,94%產率).MS ESI m/z C10H14N2O2[M+H]+:計算值195.1,實測值195.2。
將化合物566(7g,35.8mmol)和37%甲醛(14mL,0.1772
mmol)溶於甲醇(120mL)中,在0℃下加入氰基硼氫化鈉(3.9g,0.062mol),用乙酸(3mL)調pH至7,加完後升至室溫,攪拌過夜。反應液用二甲烷(200mL)稀釋,水洗、鹽水洗、硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮並用矽膠柱純化得到產物黃色油狀物(6.4g,80%產率)。MS ESI m/z C12H18N2O2[M+H]+:計算值224.1,實測值224.1。
將化合物567(3.0g,13.4mmol)溶於甲醇(100mL)中,然後加入Pd/C(0.3g,10wt%)和HCl(3mL),加完後在100psi壓力的氫氣下反應5小時。反應液墊矽藻土過濾、濃縮得到產物568(2.1g,98%產率)。1H NMR(400MHz,D2O)δ 3.33(d,J=4.6Hz,2H),3.27(s,2H),2.79(s,6H)。
將化合物103(0.58g,1.58mmol)和化合物568(0.051g,3.15mmol)溶于無水DMF(10mL)中,在0℃下加入HATU(0.09g,2.37mmol)和三乙胺(0.656mL,4.74mmol)。加完後升至室溫,反應90分鐘。反應用水稀釋,並用乙酸乙酯萃取(3×100mL),合併有機相,水洗、鹽水洗、硫酸鈉乾燥、過濾並濃縮得到黃色固體(0.67g,97%產率)。MS ESI m/z C21H35N4O6[M+H]+:計算值439.2,實測值439.2。
將Pd/C(0.2g,10wt%)加入到化合物569(0.6g,13.7mmol)的乙酸乙酯(10mL)溶液中,在100psi的氫氣壓力下反應4小時。反應液墊矽藻土過濾、濃縮得到綠色油狀物(5.5g,98%產率)。MS ESI m/z C21H37N4O64[M+H]+:計算值409.3,實測值409.3。
將化合物570(0.5g,1.22mmol)溶於95%乙醇(10mL)中,加入0.1M NaH2PO4(2mL)和化合物125(0.683g,2.44mmol),加完後攪拌過夜。反應液濃縮並用矽膠柱純化(流動相:甲醇/二甲烷)得到產物黃色油狀物(0.624g,89%產率)。MS ESI m/z計算值C29H44N5O7[M+H]+:574.3,實測值574.3。
將化合物571(0.2g,0.349mmol)溶於6mL二甲烷中,加入2mL的三氟乙酸後,室溫反應2小時。然後用無水甲苯稀釋並濃縮,重複該操作三次,得到黃色油狀的目標化合物(165mg,-100%產率)。MS ESI m/z C24H36N5O5[M+H]+:計算值474.3,實測值474.3。
將化合物572(0.165g,0.349mmol)溶於2mL DMF中,在0℃下加入化合物41a(0.29g,1.047mmol)的DMF(3mL)溶液,加完後攪拌10分鐘,升至室溫,反應1小時。反應液濃縮並用製備HPLC純化(C18柱,流動相A:水,流動相B:乙腈;60分鐘從10%的B到80%的B)得到產物(58mg,17%產率)。MS ESI m/z C49H76N9O10S[M+H]+:計算值982.5,實測值982.5。
將2-溴代異丁酸(3g,17.9mmol)溶於四氫呋喃中(30mL),
向其中加入三甲胺(1M的THF溶液,17.9mL,35.9mmol)。加完後攪拌過夜,加入乙酸乙酯,過濾收集固體,得到產物576(4g,約100%)。MS ESI m/z C7H16NO2[M+H]+:計算值146,實測值146。
將化合物576(1.55g,6.9mmol)和五氟苯酚(2.5g,13.8mmol)溶於二甲烷(20mL)中,加入DCC(2.8g,13.8mmol),加完後攪拌過夜。反應液過濾並濃縮得到油狀產物577。MS ESI m/z C13H15F5NO2[M+H]+:計算值312,實測值312。
將化合物17(1.78g,3.4mmol)和化合物577(6.9mmol)溶於DMF(20mL),在0℃下加入N,N’-二异丙基乙胺(1.8mL,10.4mmol),加完後升溫至室溫反應1小時。反應液濃縮並用矽膠柱純化(1:100至1:5甲醇/二甲烷),得到產物578(1.2g,54%產率)。MS ESI m/z C32H61N4O5SSi[M+H]+:計算值642,實測值642。
將化合物578(1.20g,1.86mmol)溶於AcOH/THF/H2O(體積比3:1:1,20mL)中,室溫攪拌過夜。反應液濃縮得到泡沫狀固體,不經進一步純化即可用於下一步。MS ESI m/z C26H47N4O5S[M+H]+:計算值527,實測值527。
將化合物579(1.86mmol)溶於1,4-二噁烷(10mL),向其中加
入1N氫氧化鈉(9.3mL),室溫反應2小時。反應液濃縮後用1N鹽酸調pH至4,再次濃縮得到白色固體產物580。MS ESI m/z C24H43N4O5S[M+H]+:計算值499,實測值499。
將化合物580(1.86mmol)溶於吡啶(10mL)中,在0℃下加入乙酸酐(884μL,9.36mmol),反應升溫至室溫,攪拌過夜。反應液用水(20mL)稀釋後,用乙酸乙酯洗滌(3×10mL),水相濃縮得到黃色固體產物581。MS ESI m/z C26H45N4O6S[M+H]+:計算值541,實測值541。
將化合物581(150mg,0.277mmol)和五氟苯酚(76.5mg,0.415mmol)溶於二甲烷(2mL)中,加入EDCI(637mg,0.33mmol)後,室溫反應3小時。反應液濃縮得到黃色油狀物582。MS ESI m/z C32H44F5N4O6S[M+H]+:計算值707,實測值707。
將化合物127(50mg,0.10mmol)和化合物582(0.14mmol)溶於DMF(2mL)中,在0℃下加入N,N’-二异丙基乙胺(49μL,0.28mmol),加完後室溫反應1小時。反應液濃縮並用製備HPLC純化(10-90%MeCN/H2O),得到白色固體產物583(30mg,46%產率)。MS ESI m/z C46H68N7O11S[M+H]+:計算值926,實測值926。
將化合物17(1.90g,3.71mmol)溶於二甲烷(20mL)中,加入N,N’-二异丙基乙胺(2.58mL,14.8mmol),降溫至0℃,滴加化合物586的二甲烷(20mL)溶液,加完後升至室溫反應1小時。反應液濃縮並用矽膠柱純化(1:100至1:5甲醇/二甲烷),得到產物587(2.3g,約100%收率)。MS ESI m/z C30H57N4O5SSi[M+H]+:計算值613,實測值613。
將化合物587(2.3g,3.7mmol)溶於AcOH/THF/H2O(體積比3:1:1,40mL)中,攪拌過夜。反應液濃縮後,得到化合物588,無需任何純化即可用於下一步驟。MS ESI m/z C24H43N4O5S[M+H]+:計算值499,實測值499。
將化合物588(3.7mmol)溶於1,4-二噁烷(20mL)中,向其中加入1N氫氧化鈉(18.5mL),室溫反應2小時。反應液濃縮後,加入1N鹽酸調pH至4,再次濃縮得白色固體產物589(1.00g,57%產率)。MS ESI m/z C22H39N4O5S[M+H]+:計算值471,實測值471。
在0℃下,向化合物589(1.00g,2.12mmol)的吡啶(10mL)溶液中,加入乙酸酐(1mL,10.6mmol)。將反應混合物升溫至室溫並攪拌過夜,真空濃縮,然後用水(20mL)稀釋,並用EA(3×10mL)洗滌。將水相真空濃縮,得到化合物590,為黃色固體。ESI m/z C24H41N4O6S[M+H]+:計算值513,實測值513。
向化合物590(70mg,0.136mmol)和五氟苯酚(30mg,0.163mmol)的二甲烷(2mL)溶液中,加入DCC(33.7mg,0.163mmol)。將反應混合物攪拌3小時,減壓濃縮,得到化合物591,為黃色油狀物。ESI m/z C30H40F5N4O6S[M+H]+:計算值679,實測值679。
在0℃下,向化合物591(0.136mmol)和化合物127(0.11g,0.273mmol)的DMF(2mL)溶液中,加入N,N’-二异丙基乙胺(71μL,0.408mmol)。將反應混合物升溫至室溫。攪拌1小時後真空濃縮,用製備型HPLC純化,得到化合物592(30.9mg,25%產率),為黃色固體。ESI m/z C44H64N7O11S[M+H]+:計算值899,實測值899。
將(S)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-3-甲基丁酸(33mg,0.14mmol),DCC(32mg,0.154mmol)和五氟苯酚(39mg,0.21mmol)溶解於乙酸乙酯(20mL),在室溫下攪拌過夜。然後將反應混合物濃縮至乾,溶於2mL DMA中,並加入化合物603(52mg,0.14mmol)的DMA溶液(3mL)和N,N’-二异丙基乙胺(48.5μL,0.28mmol)。將反應在室溫下攪拌過夜,然後濃縮。殘留物用1mL乙腈
稀釋,並通過反相HPLC(MeCN/H2O梯度)純化,得到化合物604(40.2mg,49%產率。ESI m/z C28H49N4O7S[M+H]+:計算值585.32,實測值585.32。
在0℃下,向化合物604(40mg,0.069mmol)的吡啶(8mL)溶液中,加入乙酸酐(20.4mg,0.2mmol),將反應混合物升溫至室溫並攪拌過夜,然後濃縮。通過柱層析法(甲醇/二甲烷)純化殘留物,得到目標化合物605(48.1mg,約100%產率)。ESI m/z C30H51N4O8S[M+H]+:計算值627.33,實測值627.33。
將化合物605(48.1mg,0.077mmol)、DCC(17.4mg,0.085mmol)和五氟苯酚(21.2mg,0.115mmol)溶解在乙酸乙酯(10mL)中,在室溫下攪拌過夜,然後濃縮至乾,得到化合物606,將其溶於4mL DMA中,加入化合物607(20.7mg,0.1mmol)的DMA(3mL)溶液和N,N’-二异丙基乙胺(26.8μL,0.154mmol)。將反應在室溫下攪拌過夜,然後濃縮。用1mL乙腈稀釋殘留物,並通過反相HPLC(MeCN/H2O梯度)純化,得到化合物608。ESI m/z C42H66N5O9S[M+H]+:計算值816.45,實測值816.45。
將化合物608溶解在二甲烷(1mL)中,並在室溫下與三氟乙酸(1mL)反應2小時。濃縮反應物並將殘留物溶解在乙醇(20mL)中。加入化合物125(30.8mg,0.11mmol)和0.1M NaH2PO4(4mL),在室溫下攪拌過夜,然後濃縮,通過
柱層析法(甲醇/二甲烷)純化殘留物,得到目標化合物609(28.5mg,42%產率)。ESI m/z C45H65N6O10S[M+H]+:計算值881.44,實測值881.44。
在室溫下,將化合物608(63mg,0.077mmol)的二甲烷(1mL)溶液與三氟乙酸(1mL)攪拌2小時,然後濃縮,將殘留物溶於DMA(4mL)中。加入化合物611(65.8mg,0.11mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(27μL,0.154mmol),在室溫下攪拌過夜,然後濃縮,殘留物通過反相HPLC,用MeCN/H2O梯度洗脫純化,得到化合物612(14mg,16%產率)。ESI m/z C55H84N7O16S[M+H]+:計算值1130.56,實測值1130.57。
向化合物436(3.0g,4.00mmol)的DMF(50mL)溶液中,加入HATU(2.3g,6mmol)和三乙胺(1.7mL,12mmol)。將反應在0℃下攪拌20分鐘,升溫至室溫,並攪拌3小時。然後,加入(4-氨基苯基)甲醇(0.99g,8mmol)的DMF(10mL)溶液,在室溫下攪拌反應物1.5小時,然後倒入含有150mL水的分液漏斗中,用50mL乙酸乙酯萃取兩次。收集有機相,用無水硫酸鈉乾燥,過濾並濃縮。通過柱層析法(甲醇/二甲烷)純化殘留物,得到目標化合物614(3.9g,約100%產率)。ESI m/z C42H68N3O15[M+H]+:計算值854.46,實測值854.46。
在氫化瓶中,向化合物614(1.9g,2.22mmol)的甲醇(20mL)溶液中,加入Pd/C(0.19g,10wt%)。將混合物振蕩50分鐘,通過矽藻土過濾,濃縮濾液,然後溶解在乙醇(100mL)中。加入化合物125(0.61g,2.20mmol)和0.1M
NaH2PO4(20mL),將混合物在室溫下攪拌過夜,然後濃縮。殘留物用甲醇稀釋,並通過反相HPLC(MeCN/H2O梯度)純化,得到化合物615(0.30g,19%產率)。ESI m/z C42H69N4O16[M+H]+:計算值885.46,實測值885.44。
在0℃下,向化合物615(0.12g,0.14mmol)的DMF(50mL)溶液中,加入化亞砜(11μL,0.154mmol)。將反應在0℃下攪拌1小時,然後濃縮至乾,得到粗產物616(0.13g,0.14mmol)。ESI m/z C42H68ClN4O15[M+H]+:計算值903.43,實測值903.44。
向化合物616(0.13g,0.14mmol)和化合物617(0.06g,0.07mmol)的DMF(10mL)溶液中,加入TBAI(16mg,0.042mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(64μL,0.35mmol)。在室溫下攪拌1小時後濃縮。殘留物通過反相HPLC(MeCN/H2O)純化,得到化合物618(10mg,8.9%產率)。ESI m/z C79H125N9O23S[M+H]+:計算值1599.85,實測值1599.82。
將4-氨基丁酸叔丁酯(1.03g,6.12mmol)和化合物436(4.16g,5.56mmol)在DMF(18mL)中混合,冷卻至0℃,依次加入加入HATU(2.32g,6.12mmol)和三乙胺(1.2mL,8.34mmol)。將反應攪拌50分鐘,然後用水(300mL)稀釋,並用乙酸乙酯(3×250mL)萃取。將乙酸乙酯溶液用鹽水洗滌,經無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮並通過矽膠柱層析法(32:1二甲烷/甲醇)純化,得到化合物620(5.98g)。MS ESI m/z C43H75N3O16[M+H]+:計算值890.51,實測值891.09。
在氫化瓶中,向化合物620(1.0g,1.13mmol)的甲醇溶液中,加入Pd/C(10wt%,0.10g)。將混合物振盪2小時,通過矽藻土過濾,濃縮濾液,得到化合物621(1.0g,1.32mmol,約100%產率)。ESI m/z C35H70N3O14[M+H]+:計算值756.48,實測值756.47。
在室溫下,向化合物621(0.93g,1.23mmol,1.0當量)和化合物125(0.95g,1.84mmol,1.5當量)的95%乙酸乙酯中(50mL)溶液中,加入NaH2PO4溶液(0.1M,pH 5.0,10mL)。將混合物攪拌過夜,然後濃縮並用水(50mL)稀釋,用二甲烷(80mL×3)萃取,經無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮並通過矽膠柱色層析法(二甲烷:甲醇=25:1)純化,得到淺黃色油狀的目標化合物(0.90g,80%)。ESI m/z C43H77N4O17[M+H]+:計算值921.5,實測值921.5.
將化合物622(0.90g,0.98mmol)溶解在甲酸(50mL)中,並在室溫下攪拌1小時。減壓濃縮反應混合物,並與甲苯一起濃縮兩次,進一步將殘留物置於真空泵上濃縮,得到化合物623(0.85g,0.98mmol,粗產物)。ESI m/z C39H69N4O17[M+H]+:計算值865.46,實測值865.44。
在0℃,向化合物392(92.9mg,0.236mmol)和化合物623(510mg,0.59mmol)的DMF(3mL)溶液中,加入HATU(179mg,0.472mmol)和三乙胺(82μL,0.59mmol)。將混合物升溫至室溫並攪拌1小時,然後用二甲烷(50mL)稀釋,用1N鹽酸(5mL)、水(5mL)洗,經硫酸鈉乾燥,過濾並減壓濃縮,通過矽膠柱層析法純化,得到目標產物(295mg,60%產率)。ESI m/z計算值C99H168N11O36[M+H]+:2087.16,實測值2087.14。
向化合物624(100mg,0.047mmol)的二甲烷(3ml)溶液中加入三氟乙酸(3ml),在室溫下攪拌2小時,然後濃縮。將殘留物溶解於DMF(3ml),加入化合物41a(49.7mg,0.071mmo)的DMF(3ml)溶液和N,N’-二异丙基乙胺(12μL,0.071mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌1小時,然後減壓濃縮並通過製備HPLC純化,得到目標化合物(57mg,50%產率)。ESI m/z C115H192N11O39S[M+H]+:計算值2439.31,實測值2439.30。
向十二烷二酸(1.73g,8mmol)的DMF(30mL)溶液中,加入K2CO3(1.1g,8mmol)和芐溴(1.36g,8mmol)。將混合物在室溫下攪拌過夜,然後濃縮
並通過柱層析法(石油醚/乙酸乙酯)純化,得到目標化合物627(1.1g,45%產率)。ESI m/z C18H27O4[M+H]+:計算值307.18,實測值307.15。
將化合物300(2.00g,4.84mmol)的二甲烷(5mL)溶液,與甲酸(5mL)在室溫下攪拌過夜,然後減壓濃縮至乾,再與二甲烷共濃縮兩次,殘留物置於真空泵上進一步濃縮,得到化合物628(1.72g,約100%產率)。ESI m/z C21H27NO4[M+H]+:計算值358.19,實測值358.19。
在0℃下,向化合物301(1.12g,4.83mmol)和化合物628(1.72g,4.83mmol)的二甲烷(30mL)溶液中,加入HATU(1.83g,4.83mmol)和三乙胺(0.68mL,4.83mmol)。將反應升溫至室溫並攪拌1小時,然後用50mL二甲烷稀釋,倒入含有50mL水的分液漏斗中。分離有機相,用鹽水(50mL)洗滌,用無水硫酸鈉乾燥,過濾並濃縮。通過柱層析法(甲醇/二甲烷)純化殘留物,得到目標化合物629(2.21g,80%產率)。ESI m/z C32H48N2O7[M+H]+:計算值573.35,實測值573.35。
在氫化瓶中,向化合物629(2.21g,3.86mmol)的甲醇溶液中中加入Pd/C(10wt%,0.2g)。將混合物在1atm氫氣下攪拌過夜,通過矽藻土過濾,濃縮濾液,得到化合物630(1.5g,約100%產率)。ESI m/z C18H36N2O7[M+H]+:計算值393.25,實測值393.25。
在0℃下,向化合物630(1.50g,3.86mmol)和化合物627(1.10g,3.6mmol)的二甲烷(50mL)溶液中,加入HATU(1.48g,3.9mmol)和三
乙胺(0.55mL,3.9mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1小時,然後用50mL二甲烷稀釋並倒入含有50mL水的分液漏斗中。分離有機相,用鹽水(50mL)洗滌,用無水硫酸鈉,乾燥,過濾。殘留物通過柱層析法(甲醇/二甲烷)純化,得到目標化合物631(1.50g,61%產率)。ESI m/z C36H61N2O10[M+H]+:計算值681.42,實測值681.42。
向化合物631(1.50g,2.2mmol)的二甲烷(1mL)溶液中加入三氟乙酸(3mL),攪拌1小時,然後濃縮至乾,再與二甲烷共濃縮兩次,將殘留物在真空泵上進一步濃縮,得到化合物632(0.09g,2.2mmol,粗產物)。ESI m/z C32H53N2O10[M+H]+:計算值625.36,實測值625.35。
在0℃下,向化合物632(1.50g,2.20mmol)和Z-Lys-OH(0.62g,2.20mmol)的二甲烷(50mL)溶液中,加入HATU(0.84g,2.20mmol)和三乙胺(0.31mL,2.20mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌1小時,然後用50mL二甲烷稀釋,倒入含有100mL水的分液漏斗中。分離有機相,用鹽水(100mL)洗滌,用無水硫酸鈉,乾燥,過濾並濃縮。通過柱層析法(甲醇/二甲烷)純化殘留物,得到目標化合物633(1.00g,53%產率)。ESI m/z C46H71N4O13[M+H]+:計算值887.49,實測值887.50。
向化合物633(0.50g,0.56mmol)的DMF(5mL)溶液中,加入HATU(0.21g,0.56mmol),室溫下攪拌30分鐘。之後,在0℃下依次加入化合物
438(0.27g,0.56mmol)的DMF(5mL)溶液和三乙胺(85μL,0.6mmol),並將反應攪拌1小時。將反應混合物倒入含有100mL水的分液漏斗中,並用50mL乙酸乙酯萃取兩次。將有機相用100mL鹽水洗滌一次,經無水硫酸鈉乾燥,過濾並濃縮。殘留物通過柱層析法(甲醇/二甲烷)純化,得到目標化合物634(0.40g,55%產率)。ESI m/z C71H110N7O18[M+H]+:計算值1348.78,實測值1348.78。
在氫化瓶中,向化合物634(0.40g,0.30mmol)甲醇(20mL)溶液中,加入Pd/C(10wt%,0.2g)。將混合物在1atm氫氣下攪拌過夜,通過矽藻土過濾,濃縮濾液並重新溶解在甲醇(20mL)中。向其中加入化合物125(88.5mg,0.30mmol)和0.1M NaH2PO4(4mL)。將混合物在室溫下攪拌過夜,然後濃縮,殘留物通過柱層析法(甲醇/二甲烷)純化,得到目標化合物635(0.10g,26%產率)。ESI m/z C64H106N9O19[M+H]+:計算值1304.75,實測值1304.75。
將化合物635(0.10g,0.077mmol)的二甲烷(1mL)溶液與三氟乙酸(3mL)在室溫下攪拌30分鐘,然後濃縮至乾,再與二甲烷共濃縮兩次,將殘留物溶於DMA(4mL)中。向其中加入化合物41a(65.8mg,0.11mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(26μL,0.15mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌1小時,然後濃縮,殘留物用2mL乙腈稀釋,並通過反相HPLC(MeCN/H2O梯度)純化,得到化合物636(20mg,15%產率)。ESI m/z C80H130N13O22S[M+H]+:計算值1656.90,實測值1656.91。
向化合物633(0.50g,0.56mmol)的DMF(5mL)溶液中,加入HATU(0.21g,0.56mmol),在室溫下攪拌30分鐘。之後,在0℃下加入化合物110(0.22g,0.56mmol)的DMF(5mL)溶液和三乙胺(85μL,0.60mmol)。攪拌1小時後,將反應混合物倒入含有100mL水的分液漏斗中,並用50mL乙酸乙酯萃取兩次。分離有機相,用100mL鹽水洗滌,用無水硫酸鈉乾燥,過濾並濃縮。殘留物通過柱層析法(甲醇/二甲烷)純化,得到目標化合物638(0.20g,26%產率)。ESI m/z C67H103N6O17[M+H]+:計算值1263.73,實測值1263.73。
在氫化瓶中,向化合物638(0.20g,0.16mmol)的甲醇(20mL)溶液中加入Pd/C(10wt%,0.2g)。將混合物在1atm氫氣下攪拌過夜,通過矽藻土過濾,濃縮濾液,然後溶解在乙醇(20mL)中,隨後加入化合物125(47.2mg,0.30mmol)和0.1M NaH2PO4(4mL)。將混合物在室溫下攪拌過夜,然後濃縮,殘留物通過柱層析法(甲醇/二甲烷)純化,得到目標化合物639(75mg,40%產率)。ESI m/z C60H98N7O18[M+H]+:計算值1204.69,實測值1204.68。
向化合物639(75mg,0.06mmol)的二甲烷(1mL)溶液中加入三氟乙酸(3mL),在室溫下攪拌30分鐘,然後濃縮至乾,再與二甲烷一起濃縮兩次,
將殘留物溶於DMA(2mL)中。向其中加入化合物41a(41mg,0.06mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(26μL,0.15mmol),在室溫下攪拌1小時,然後濃縮。將殘留物用2mL乙腈稀釋,並通過反相HPLC(MeCN/H2O梯度)純化,得到化合物640(34mg,37%產率)。ESI m/z C76H122N11O21S[M+H]+:計算值1556.85,實測值1556.85。
向二乙二醇(20g,0.188mol)的THF(200mL)溶液中加入Na(0.43g,0.018mol)。在室溫下攪拌1小時後,加入丙烯酸叔丁酯(48g,0.376mol),在室溫下攪拌2天。將反應混合物真空濃縮,並通過柱層析法純化,得到目標化合物(34g,50%產率)。ESI m/z C18H35O7[M+H]+:計算值363.23,實測值363.23。
在室溫下將化合物642(34g,0.093mol)溶解在甲酸(100mL)中並攪拌過夜。真空濃縮反應物,得到目標化合物。ESI m/z C10H19O7[M+H]+:計算值251.11,實測值251.11。
在0℃下,向胺630(1.50g,3.82mmol)和二酸643(1.90g,7.64mmol)的DMF(10mL)溶液中,加入HATU(1.45g,3.82mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(0.66mL,3.82mmol)。將反應混合物升溫至室溫並攪拌1小時,然後用二甲烷(80mL)稀釋,用水(10mL)洗滌,經硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮並通過矽膠柱層析法純化,得到無色液體(1.75g,75%產率)。ESI m/z C28H53N2O13[M+H]+:計算值625.35,實測值625.35。
在0℃下,向化合物644(1.75g,2.8mmol)的二甲烷(20mL)溶液中,加入EDCI(1.07g,5.6mmol)和NHS(0.64g,5.6mmol)。將反應升溫至室溫並攪拌過夜,然後用二甲烷(80mL)稀釋,用水(10mL)洗滌,經硫酸鈉乾燥,過濾並減壓濃縮,得到目標化合物(2.00g,約100%產率)。ESI m/z C32H56N3O15[M+H]+:計算值722.36,實測值722.36。
向N-α-Cbz-L-賴氨酸(1.17g,4.2mmol)的水(10mL)溶液中加入碳酸氫鈉(0.47g,5.6mmol),冷卻至5℃,加入溶解在1,4-二噁烷(10mL)中的化合物645(2.00g,2.8mmol)。升溫至室溫並攪拌1小時,然後加入1N鹽酸,酸化至pH3,用二甲烷(50mL×3)萃取。用水(20mL)洗滌有機萃取物,經硫酸鈉乾燥,過濾並濃縮,得到目標產物(2.3g,92%產率)。ESI m/z C42H71N4O16[M+H]+:計算值887.48,實測值887.48。
在0℃下向胺438(1.87g,3.9mmol)和酸646(2.3g,2.59mmol)的二甲烷(30mL)溶液中,加入HATU(0.98g,2.59mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(450μL,2.59mmol)。將反應混合物升溫至室溫並攪拌1小時,然後真空濃縮,通過矽膠柱層析法純化,得到目標化合物(2.4g,70%產率)。ESI m/z C67H110N7O21[M+H]+:計算值1348.77,實測值1348.77。
在氫化瓶中,向化合物647(2.4g,1.78mmol)的甲醇(20mL)溶
液中,加入Pd/C(10wt%,0.2g)。將混合物在1atm氫氣下攪拌過夜,通過矽藻土過濾,濃縮濾液並重新溶解在甲醇(20mL)中。加入化合物125(0.79g,2.67mmol)和0.1M NaH2PO4(10mL),並將混合物在室溫下攪拌過夜,然後濃縮,殘留物通過柱層析法(甲醇/二甲烷)純化,得到目標化合物648(1.52g,62%產率)。ESI m/z C67H111N8O22[M+H]+:計算值1379.77,實測值1379.75。
向化合物648(51mg,0.037mmol)的二甲烷(2mL)溶液中,加入三氟乙酸(2mL),在室溫下攪拌2小時,然後濃縮並再次溶於DMF(1.0毫升)中。在0℃下,加入化合物41a(384mg,0.055mmol)的DMF(1.0mL)溶液,然後加入N,N’-二异丙基乙胺(13μL,0.074mmol)。將反應混合物升溫至室溫,並攪拌1小時,真空濃縮,用製備HPLC純化,得到目標化合物649(36.5mg,產率60%)。ESI m/z C79H127N12O25S[M+H]+:計算值1675.86,實測值1675.86。
在室溫下向N-鄰苯二甲醯基甘氨酸(10.0g,48.7mmol)的二甲烷(100mL)溶液中,加入草醯(6.3mL,73.1mmol),和幾滴DMF。將反應物攪拌2小時,然後濃縮,得到化合物651(10.8g),為黃色固體。
向肼基甲酸叔丁酯(7.08g,53.5mmol)的二甲烷(200mL)溶液中,加入Et3N(13.5mL,97.4mmol),然後在0℃加入化合物651(10.8g,48.7mmol)。將反應物在室溫下攪拌30分鐘後倒入冰水(100mL)中,用二甲烷(3×100mL)萃取。將合併的有機相用水(100mL)和鹽水(100mL)洗滌,經無水硫
酸鈉乾燥,過濾並濃縮,得到白色固體(15.5g,100%產率)。ESI m/z C15H18N3O5[M+H]+:計算值320.12,實測值320.12。
將化合物652(15.5g,48.7mmol)溶解在二甲烷(150mL)中,在室溫下與三氟乙酸(50mL)攪拌1小時,然後濃縮,得到白色固體(10.6g,約100%產率)。ESI m/z C10H10N3O3[M+H]+:計算值220.06,實測值220.06。
在0℃下,向化合物653(10.6g,48.7mmol)的二甲烷(200mL)溶液中,加入Et3N(13.5mL,97.4mmol)和化合物651(10.8g,48.7mmol)。將反應升溫至室溫並攪拌過夜。過濾收集沉澱物,分散在水(100mL)中,攪拌20分鐘。將混合物再次過濾,得到白色固體(15.7g,80%產率)。ESI m/z C20H15N4O6[M+H]+:計算值407.09,實測值407.09。
在0℃下將NaH(0.5g,12.3mmol)分批加入到化合物654(2.0g,4.92mmol)的DMF(40mL)溶液中。將混合物升溫至室溫,並攪拌3小時。然後加入溴乙酸叔丁酯(2.0g,10.3mmol),攪拌過夜後倒入冰水(100mL)中,用二甲烷(3×50mL)萃取。將合併的有機相用水(50mL)、鹽水(50mL)洗滌,經無水硫酸鈉乾燥,過濾並濃縮,通過矽膠層析法純化,得到白色固體(1.5g,50%產率)。ESI m/z C32H35N4O10[M+H]+:計算值635.23,實測值635.23。
將化合物655(1.5g,2.36mmol)和肼(442mg,7.08mmol)在乙醇(30mL)中的混合物回流1小時,然後冷卻至室溫並過濾。濃縮濾液后溶於乙酸乙酯(20mL)中,再次過濾。濃縮濾液,得到白色固體(750mg,85%產率)。ESI m/z C16H31N4O6[M+H]+:計算值375.22,實測值375.22。
將化合物656(750mg,2mmol)的THF(2mL)溶液,加入到飽和NaHCO3水溶液(30mL)中,冷卻至0℃後加入化合物409(622mg,4mmol)。將該反應在0℃下攪拌1小時,過濾收集白色固體(854mg,80%產率)。ESI m/z C24H31N4O10[M+H]+:計算值535.20,實測值535.20。
將化合物657(854mg,1.6mmol)溶解在二甲烷(3mL)中,並在室溫下與三氟乙酸(3mL)攪拌2小時,然後濃縮反應物,得到化合物658(675mg,約100%產率)。ESI m/z C16H15N4O10[M+H]+:計算值423.07,實測值423.07。
在0℃下,向化合物658(200mg,0.47mmol)的DMF(5mL)溶液中,加入4-氨基丁酸叔丁酯(158mg,0.99mmol)和EDC(189.7mg,0.99mmol)。將反應升溫至室溫並攪拌過夜,倒入冰水中,用二甲烷(3×10mL)萃取。將合併的有機相用1N鹽酸(5mL)、水(5mL)、鹽水(5mL)洗滌,經無水硫酸鈉乾燥,過
濾並濃縮,得到白色固體(330mg,約100%產率)。
將化合物659(330mg,0.47mmol)溶解於二甲烷(3mL)中,與三氟乙酸(3毫升)在室溫下攪拌2小時,濃縮,再溶解於DMF(5mL)中,冷卻至0℃,依次加入NHS(113mg,0.98mmol)和EDC(189mg,0.98mmol)。將反應升溫至室溫,攪拌過夜,倒入冰水中,用二甲烷(3×20ml)萃取。用水(5ml)、鹽水(5ml)洗滌合併的有機相,經無水硫酸鈉乾燥,過濾並濃縮,得到白色固體(369mg,產率約100%)。ESI m/z C32H35N8O16[M+H]+:計算值787.21,實測值787.21。
將化合物633(200mg,0.225mmol)溶解於DMF(5ml)中,冷卻至0℃,依次加入4-氨基丁酸叔丁酯(71.8mg,0.45mmol)和EDC(86.2mg,0.45mmol)。將反應物升溫至室溫,攪拌過夜,倒入冰水中,用二甲烷(3×10ml)萃取。用水(5ml)、鹽水(5ml)洗滌合併的有機相,經無水硫酸鈉乾燥,過濾並濃縮得到化合物663(231mg,產率約100%)。ESI m/z C54H86N5O14[M+H]+:計算值1028.61,實測值1028.61。
將化合物663(231mg,0.225mmol)溶解於二甲烷(3mL)中,與三氟乙酸(3mL)在室溫下攪拌1小時,將反應濃縮後再溶解於DMF(5mL)中,
冷卻至0℃,依次加入化合物110(44mg,0.112mmol)、HATU(85.5mg,0.225mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(39μL,0.225mmol)。升溫至室溫,攪拌過夜,將反應液倒入冰水中,用二甲烷(3×10ml)萃取。將有機相用1N鹽酸(5mL)、水(5mL)、鹽水(5mL)洗滌,在無水硫酸鈉上乾燥、過濾並濃縮,用矽膠柱層析法(0%-5%甲醇/二甲烷)純化,得到白色泡沫(206mg,產率80%)。ESI m/z C121H185N12O31[M+H]+:計算值2302.32,實測值2302.34。
將化合物664(206mg,0.089mmol)溶解於甲醇(5ml)中,加入Pd/C(10wt%,20mg),在1atm氫氣壓力下攪拌過夜。然後通過矽藻土過濾混合物,濃縮濾液得到化合物665(165mg,產率約100%)。ESI m/z C91H161N12O27[M+H]+:計算值1854.15,實測值1854.15。
在0℃下,向化合物665(165mg,0.089mmol)的乙醇(10mL)溶液中加入化合物660(140mg,0.178mmol)和磷酸鹽緩衝液(0.5M,pH 7.5,3mL)。在室溫下攪拌,然後濃縮,用矽膠柱層析法(0%-5%甲醇/二甲烷)純化,得到化合物666(128mg,產率61%)。ESI m/z C115H185N18O37[M+H]+:計算值2410.31,實測值2410.31。
將化合物666(128mg,0.053mmol)溶解於二甲烷(3mL)中,與三氟乙酸(3mL)在室溫下攪拌2小時,將反應濃縮,再與二甲烷共蒸3次,得到化合物667(120mg,產率約100%)。ESI m/z C106H169N18O35[M+H]+:計算值2254.19,實測值2254.19。
將化合物667(120mg,0.053mmol)和化合物41a(36.6mg,0.053mmol)溶解於DMA(5ml)中,冷卻至0℃。加入N,N’-二异丙基乙胺(18μL,0.106mmol),升溫至室溫,攪拌1小時。濃縮反應混合物後,殘留物用製備HPLC(10-90%乙腈/水)純化,得到化合物668(73mg,產率50%)。ESI m/z C131H209N22O40S[M+H]+:計算值2762.46,實測值2762.46。
向NaHCO3(20ml)飽和溶液中加入化合物621(1g,1.32mmol),然後在0℃加入化合物409(0.4g,2.64mmol)。攪拌30分鐘後倒入含有100ml乙酸乙酯的分液漏斗中,分離有機相,用50ml水和50ml鹽水洗滌,經
無水硫酸鈉乾燥,過濾濃縮得到化合物670(0.8g,產率72%)。ESI m/z C39H70N3O16[M+H]+:計算值836.47,實測值836.47。
將化合物670(0.9g,0.98mmol)溶解於甲酸(50ml)中,室溫下攪拌1小時。將反應混合物濃縮,與甲苯共蒸兩次,將殘留物置於真空泵上進一步濃縮,得到油狀物。將上述一半物料溶解於DMF(10ml)中,在0℃下加入化合物110(0.35g,0.48mmol)、HATU(0.36g,0.96mmol)和三乙胺(0.15ml,1.44mmol)。攪拌30分鐘後,將反應混合物倒入含有100ml水的分液漏斗中,用50ml乙酸乙酯萃取兩次。合併有機相,經無水硫酸鈉乾燥,過濾並濃縮。殘留物通過柱層析法(甲醇/二甲烷)純化,得到目標化合物671(21mg,2%產率)。ESI m/z C91H153N8O35[M+H]+:計算值1919.04,實測值1919.04。
將化合物671(21mg,0.01mmol)的二甲烷(0.5ml)溶液與三氟乙酸(1ml)在室溫下攪拌1小時,然後用二甲烷共同濃縮兩次,將殘留物置於真空泵上2小時后溶解在DMA(2ml)中。加入化合物41a(6.9mg,0.01mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(17μL,01mmol)。混合物在室溫下攪拌30分鐘,然後濃縮。殘留物通過反相HPLC(MeCN/H2O的梯度)純化,得到化合物672(10mg,產率44%)。ESI m/z C107H177N12O38S[M+H]+:計算值2271.20,實測值2271.20。
將化合物621(5.98g,6.73mmol)和Pd/C(10wt%,0.6g)在甲醇(30ml)中的混合物,在1atm氫氣壓力下攪拌過夜,然後通過矽藻土過濾。將濾液濃縮並重新溶解於THF(60ml),加入化合物674(1.01g,2.42mmol)和HOBT(817mg,6.05mmol),於0℃下添加DCC(1.25g,6.05mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(2.1ml,12.10mmol)。將反應物在室溫下攪拌過夜,然後用乙酸乙酯(400ml)稀釋,用1N鹽酸、飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌,經無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮,並用矽膠柱層析法(24:1二甲烷/甲醇)純化,得到化合物675(5.65g,產率49%)。MS ESI m/z C90H154N8O34[M+H]+:計算值1892.06,實測值1892.83。
將化合物675(3.71g,1.96mmol)和Pd/C(10wt%,0.40g)在甲醇(50ml)中的混合物,在1atm氫氣下攪拌過夜,然後通過矽藻土過濾。濃縮濾液得到化合物676(4.57g,產率51%)。MS ESI m/z C74H142N8O30[M+H]+:計算值1623.98,實測值1624.42。
向化合物676(315mg,0.194mmol)的乙醇(10ml)溶液中加入Na2HPO4水溶液(0.5m,2.5ml)和化合物125(136mg,0.485mmol)。將混合物在室溫下攪拌3天,濃縮,通過矽膠柱層析法(3:2 H2O/MeCN)純化,得到油狀物(50mg,13%產率),將其溶解於二甲烷(5ml)中,並在室溫下與三氟乙酸(5ml)攪拌過夜,然後濃縮,得到化合物677(47mg,產率98%)。MS ESI m/z C82H140N10O36[M+H]+:計算值1841.94,實測值1841.88。
將化合物677(154mg,0.0837mmol)與化合物110(33mg,0.0837mmol)溶於DMF(6ml)中,冷卻至0℃,依次加入HATU(64mg,0.167mmol)和三乙胺(46μL,0.335mmol)。將反應物攪拌1小時,然後用水(100ml)稀釋,並用乙酸乙酯(3×100ml)萃取。用鹽水洗滌乙酸乙酯溶液,經無水硫酸鈉乾燥,過濾、濃縮,用矽膠柱層析法(6:1二甲烷/甲醇)純化,得到化合物678(98mg,產率53%)。ESI m/z C103H170N12O39[M+H]+:計算值2200.17,實測值2200.15。
將化合物678(98mg,0.045mmol)的二甲烷(3ml)溶液與三氟乙酸(6ml)在室溫下攪拌1小時,然後濃縮並重新溶解於DMA(1ml),加入化合物41a(31mg,0.045mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(12μL,0.068mmol)。在室溫下攪拌90分鐘,濃縮後通過製備HPLC(10-100%乙腈/水)純化,得到化合物679(33.6mg,產率30%)。ESI m/z C119H194N16O42S[M+H]+:計算值1276.66,實測值1276.65。
向化合物301(1.0g,4.3mmol)和化合物643(1.6g,6.4mmol)的二甲烷(15ml)溶液中加入HATU(1.83g,4.83mmol)和三乙胺(0.68ml,4.83mmol),反應混合物在0℃攪拌90分鐘,濃縮,然後用柱層析法(甲醇/二甲烷)純化,得到目標化合物681(2.0g,產率>100%,含矽膠)。ESI m/z C21H40NO10[M+H]+:計算值466.26,實測值466.23。
向化合物681(2.0g,4.3mmol)的DMF(30ml)溶液中加入K2CO3(1.2g,8.6mmol)和芐溴(1.47g,8.6mmol)。將混合物在室溫下攪拌過夜,然後倒入含有100ml水的分液漏斗中,並用乙酸乙酯(3×50ml)萃取。有機相經無水硫酸鈉乾燥,過濾、濃縮並通過柱層析法(甲醇/二甲烷)純化,得到目標化合物682(1.0g,產率42%)。ESI m/z C28H46NO10[M+H]+:計算值556.30,實測值556.30。
向化合物682(1.0g,1.8mmol)的二甲烷(1ml)溶液中,加入三氟乙酸(3ml),在室溫下攪拌1小時,然後濃縮至乾,與二甲烷共蒸兩次后溶解於二甲烷(50ml)中。在0℃下添加Z-Lys-OH(0.5g,1.8mmol)、HATU(1.83g,4.83mmol)和三乙胺(0.68ml,4.83mmol)。將混合物在室溫下攪拌1小時,然後倒入含有100ml水的分液漏斗中,用50ml二甲烷萃取3次。將有機相合併,用100ml鹽水洗滌一次,然後經無水硫酸鈉乾燥,過濾並濃縮。殘留物通過柱層析法(甲醇/二甲烷)純化,得到目標化合物683(1.0g,產率71%)。ESI m/z C38H56N3O13[M+H]+:計算值762.37,實測值762.37。
向化合物683(1.0g,1.3mmol)的DMF(10ml)溶液中加入HATU(0.60g,1.56mmol),在室溫下攪拌30分鐘,然後在0℃下加入化合物438(0.51g,1.3mmol)的DMF(10ml)溶液和三乙胺(0.28ml,2mmol),在0℃下將反應攪拌1小時,然後倒入含有100毫升水的分液漏斗中,用乙酸乙酯(50毫升)萃取兩次。將有機相合併,用100ml鹽水洗滌,經無水硫酸鈉乾燥,過濾並濃縮。殘留物通過柱層析法(甲醇/二甲烷)純化,得到目標化合物684(1.20g,產率73%)。ESI m/z C63H95N6O18[M+H]+:計算值1223.66,實測值1223.66。
在氫化瓶中,將化合物684(1.20g,0.98mmol)的甲醇(20mL)溶
液和Pd/C(0.1g,10wt%,50%水分)振蕩過夜,通過矽藻土過濾,濃縮濾液,然後再溶解在乙醇(50mL)中。加入化合物125(0.32g,1.16mmol)和0.1M NaH2PO4(10mL),並將混合物在室溫下攪拌過夜。濃縮後,殘留物通過柱層析法(甲醇/二甲烷)純化,得到目標化合物685(0.57g,產率50%)。ESI m/z C56H90N7O19[M+H]+:計算值1164.62,實測值1164.62。
向化合物685(0.10g,0.086mmol)的二甲烷(1mL)溶液中,加入三氟乙酸(3mL),在室溫下攪拌30分鐘,然後濃縮至乾,並與二甲烷共濃縮兩次,然後溶於DMA(2mL),加入化合物41a(59mg,0.086mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(26μL,0.15mmol)。將混合物在室溫下攪拌1小時,然後濃縮,溶於2mL乙腈中,並通過反相HPLC(MeCN/H2O梯度)純化,得到化合物686(34mg,產率26%)。ESI m/z C72H114N11O22S[M+H]+:計算值1516.78,實測值1516.78。
向Boc-Glu(OtBu)-OH(0.50g,1.65mmol)的DMF(10mL)溶液中,加入HATU(0.69g,1.82mmol)和三乙胺(0.26mL,1.82mmol)。攪拌30分鐘後,加入11-氨基十一烷酸(0.33g,1.65mmol)的DMF(10mL)溶液,在室溫下攪拌1小時,然後倒入含有200毫升1N鹽酸的分液漏斗中,用二甲烷(3×50毫升)萃取。將有機相用100mL鹽水洗滌一次,然後經無水硫酸鈉乾燥,過濾並濃縮。殘留物通過柱層析法(甲醇/二甲烷)純化,得到目標化合物688(1.0g,產率>約100%)。ESI m/z C25H47N2O7[M+H]+:計算值487.33,實測值487.34。
將化合物688(1.0g)的二甲烷(1mL)溶液和三氟乙酸(3mL)在室溫下攪拌30分鐘,然後濃縮至乾,並用二甲烷共濃縮兩次。最後,再放在真空泵上濃縮,得到化合物689(0.68g,2.06mmol)。ESI m/z C16H31N2O5[M+H]+:計算值331.22,實測值331.22。
向化合物685(0.10g,0.086mmol)的乙酸乙酯(6mL)溶液中,加入五氟苯酚(18.4mg,0.1mmol)和EDC(19.1mg,0.1mmol)。將反應在室溫下攪拌1小時,然後倒入含有100mL水的分液漏斗中,並用50mL的乙酸乙酯萃取。收集有機相,用無水硫酸鈉乾燥,過濾並濃縮。將殘留物重新溶解在5mL DMF中,加入化合物125(43mg,0.13mmol)的DMF(5mL)溶液和N,N’-二异丙基乙胺(35μL,0.222mmol)。在室溫下攪拌90分鐘後倒入含有100mL 1N鹽酸的分液漏斗中,用二甲烷(2×50mL)萃取。將有機相用100mL鹽水洗滌一次,然後經無水硫酸鈉乾燥,過濾並濃縮。殘留物通過柱曾分析法(甲醇/二甲烷)純化,得到目標化合物690(0.11g,產率87%)。ESI m/z C72H118N9O23[M+H]+:計算值1476.83,實測值1476.84。
將化合物691(0.11g,0.074mmol)的二甲烷(1mL)溶液和三氟乙酸(3mL)在室溫下攪拌30分鐘,然後濃縮至乾,並與二甲烷共濃縮兩次,再溶解在DMA(6mL)中。加入化合物41a(100mg,0.148mmol)和N,N’-二异丙基乙胺(35μL,0.222mmol),在室溫下攪拌2小時並濃縮。將殘留物溶於2mL乙腈中,並通過反相HPLC(MeCN/H2O梯度)純化,得到化合物691(28.6mg,產率21%)。ESI
m/z C88H142N13O26S[M+H]+:計算值1828.98,實測值1828.98。
實施例292. 偶聯物133、339、382、396、414、444、455、467、474、480、486、493、500、522、530、534、546、550、556、560、564、574、584、593、601、613、619、626、637、641、650、669、673、680、687、692、E1、E2、E3、E4、E5、E6和E7製備的通用方法:向2.0mL、10mg/ml、pH 6.0-8.0的赫賽汀混合物中,加入0.70-2.0mL、100mM NaH2PO4緩衝液,pH為6.5-8.5的緩衝液,TCEP(14-35μL,20mM水溶液)以及化合物132、337、338、381、395、413、443、454、466、473、479、485、492、499、521、529、533、545、549、554、559、563、573、583、592、600、612、618、625、636、640、649、668、672、679、686、691或E1、E2、E3、E4、E5、E6或E7的馬來醯亞胺前體(獨立地是14-28μL,20mM DMA溶液),然後加入4-(疊氮基甲基)苯甲酸(14-50μL,20mM,pH 7.5 PBS緩衝液)。將混合物在室溫下孵育4-18小時,然後加入DHAA(135μL,50mM)。在室溫下孵育過夜後,將混合物在G-25柱上純化,用100mM NaH2PO4、50mM NaCl pH為6.0-7.5緩衝液洗脫,得到在13.4-15.8毫升的NaH2PO4緩衝液中的12.2-18.6mg不等的偶聯物133、339、382、396、414、444、455、467、474、480、486、493、500、522、530、534、546、550、556、560、564、574、584、593、601、613、619、626、637、641、650、669、673、680、687、692、E1、E2、E3、E4、E5、E6和E7(60%-93%產率)。偶聯物的藥物/抗體比(DAR)為3.4-4.1,其DAR是通過UPLC-QTOF質譜確定。SEC HPLC(Tosoh Bioscience,Tskgel G3000SW,7.8mm ID x 30cm,0.5ml/min,100min)測得單體含量94%至99%,SDS-PAGE凝膠顯示單一條帶。
實施例293. 與T-DM1對比,偶聯物133、339、382、396、414、444、455、467、474、480、486、493、500、522、530、534、546、550、556、560、564、574、584、593、601、613、619、626、637、641、650、669、673、680、687、692、E1、E2、E3、E4、E5、E6和E7的體外細胞毒性評價:用於體外細胞毒性評價的細胞係是一種人類胃癌細胞系NCI-N87,細胞在含有10%FBS的RPMI-1640中生長。為了進行測定,將細胞(180μL,6000個細胞)加入到96孔板的每個孔中,並在37℃、5% CO2下溫育24小時。接著,在合適的細胞培養基(總體積,0.2mL)中用各種濃度的測試化合物(20μL)處理細胞。對照
孔含有細胞和培養基但無測試化合物。將孔板在37℃、5%CO2下孵育120小時,然後將MTT(5mg/mL,20μL)加入孔中,將板在37℃下溫育1.5小時。小心地除去培養基,然後加入DMSO(180μL)。振搖15分鐘後,在490nm和570nm處測量吸光度(用620nm的參比濾光片)。根據下式計算抑制比:抑制%=[1-(測定值-空白)/(對照值-空白)]×100。結果列於表1中。
實施例294. 體內抗腫瘤活性(BALB/c裸鼠,攜帶NCI-N87異種移植腫瘤)
在人胃癌N-87細胞系腫瘤異種移植模型中,評估偶聯物474、486、493、601、626、637、641、669、673、680和692以及T-DM1在體內的功效。將5週齡的雌性BALB/c裸鼠(78只動物)在右肩下區域皮下接種N-87癌細胞(細胞數5×106,置於0.1mL無血清培養基中)。讓腫瘤生長8天至平均尺寸140mm3。然後將動物隨機分成13組(每組6只動物)。第一組小鼠作為對照組,注射磷酸鹽緩衝液(PBS)。另12組分別靜脈注射6mg/kg劑量的偶聯物474、486、493、601、626、637、641、669、673、680、692和T-DM1。每3天或4天(每週兩次)測量腫瘤的三個維度,並使用公式腫瘤體積=1/2(長×寬×高)計算腫瘤體積。同時測量動物的體重。當滿足以下任何
一個條件時,需要處死小鼠:(1)較治療前體重,體重減輕超過20%,(2)腫瘤體積大於1500mm3,(3)病得太重而無法進食和進水,或(4)皮膚壞死。如果沒有看感知的腫瘤,則認為小鼠無腫瘤。
結果繪製在圖63中。所有的12個偶聯物均未引起動物體重減輕。7個偶聯物(673、637、650、692、474、493和486)表現出優于比T-DM1的抗腫瘤活性。化合物474、493和486組中的所有動物的腫瘤在第16天至第28天幾乎測量不到。相比之下,相同劑量的T-DM1不能消除腫瘤,僅抑制腫瘤生長26天。6mg/kg劑量的偶聯物物601、669、680、673、637、650和692不能完全根除腫瘤,它們抑制腫瘤生長情況如下:
實施例295. 含支鏈連接體的偶聯物和T-DM1及常規偶聯物(化合物133)在小鼠血清中穩定性對比
將6-7週齡的60隻雌性ICR小鼠分成4組。每組包括15隻小鼠,用於一個ADC藥物的PK研究。將這15隻小鼠進一步隨機分成三組(n=5)。每隻小鼠分別靜脈注射偶聯物T-DM1、133、680和692,劑量為10mg/kg。血液採集遵循NCI的囓齒動物採血指南。原則上,每組中的小鼠依次採血,避免一隻在24小時內採血超過兩次。用70μL毛細血管,在給藥前(0時)以及用藥0.083、0.25、0.5、1、4、8、24、48、96、168、312和504小時后,從眼眶後竇中取血。通過特異性ELISA
技術分析血漿樣品的總抗體和偶聯藥物的抗體。簡而言之,以如下方法測量小鼠血清中偶聯的抗體或的總抗體濃度:將96孔ELISA板分別在4℃下用抗DM1抗體,抗Tubulysin抗體或抗Her2的Fab抗體包被過夜(在pH 7.2、10mM PBS中濃度為1μg/mL)。然後將孔板用洗滌緩衝液PBS-T(PBS/0.02%的吐溫20)洗滌三次,然後用1%(w/v)BSA/PBS-T稀釋緩衝液在37℃封閉1小時。移除封閉緩衝液後,將標準品或小鼠血清樣品用1%BSA/PBS-T的緩衝液中稀釋(每個重複三份),在37℃下孵育1小時,然後在將測定板洗滌後,加入AP-偶聯的驢抗人體抗體,37℃下放置30分鐘。再次洗滌測定板,接著加入用於顯色的pNPP底物,然後用1mol/L氫氧化鈉淬滅顯色反應,在405nm波長的酶標儀上讀數。從標準曲線的四參數曲線擬合獲得偶聯的抗體或總抗體的濃度。
結果如圖64所示,給藥ADC後,總抗體和偶聯藥物抗體的PK行為表現為典型的兩相清除曲線。用藥後8小時后血漿和外周組織之間等值。消除期出現在用藥後24小時后,並持續至最後的取樣時間點。總之,偶聯物T-DM1、133、680和692的Auclast分別為14981,14857,17012和17212hr˙ug/kg。所有偶聯物的分佈體積是總血液體積的兩倍。偶聯物的清除率(CL)為0.59,0.59,0.49和0.46mL/hr/kg,幾乎是總抗體的一半。偶聯物692和680的偶聯抗體和總抗體的清除率小於T-DM1和常規偶聯物133,這表明含支鏈偶聯物的抗體比常規偶聯物在小鼠血清中更穩定。
實施例296. 含支鏈的偶聯物和常規偶聯物(化合物133和T-DM1)的肝毒性對比。將6-7週齡的84隻雌性ICR小鼠分成14組。每組包括6隻小鼠用於肝臟毒性研究。第一組小鼠作為對照組,注射磷酸鹽緩衝液(PBS)。其它13組分別注射偶聯物133、474、486、493、601、626、637、641、669、673、680、692和T-DM1,靜脈注射,劑量200mg/kg。血液採集遵循NCI的囓齒動物採血指南。通常而言,給藥後第5天和第12天通過小鼠的眶後竇採血,離心以獲得血清。使用PUS-2018半自動生化分析儀,分析天冬氨酸氨基轉移酶(AST)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)和鹼性磷酸酶(ALP)的水平。根據製造商的建議,通過跟隨反應動力學建立參考值。平均結果如下表2所示:
肝臟毒性的結果表明,在150mg/kg的高劑量下,含有支鏈的偶聯物(474、486、493、601、626、637、641、669、673、680和692)要比更低劑量的T-DM1和常規偶聯物133的毒性低。由於偶聯物474、486、493、601、626、637、641、669、673、680和692具有比T-DM1更好的體內活性,因此整體上,偶聯物474、486、493、601、626、637、641、669、673、680和692的治療窗口將明顯大於T-DM1。
Claims (28)
- 一種含有支鏈連接體的偶聯物,其結構由式(I)表示:
- 一種含支鏈連接體的化合物,其結構如(IV)所示,可以便利地與細胞結合分子T反應,形成式(I)中的偶聯物:
- 如申請專利範圍第1或2項之含有支鏈連接體的偶聯物,其中該支鏈Q1和Q2,獨立地選自下列結構:
- 如申請專利範圍第3或4項之含支鏈連接體的化合物,其中該支鏈Q1和Q2,獨立地選自下列結構:
- 如申請專利範圍第1或2項之含有支鏈連接體的偶聯物,其中該D(Tubulysin)的結構選自:
- 如申請專利範圍第3或4項之含支鏈連接體的化合物,其中該D(Tubulysin)的結構選自:
- 如申請專利範圍第1或2項之含有支鏈連接體的偶聯物,其中該W、L1、L2、V1和V2可獨立地由一個或多個下列連接體組分構成:6-馬來醯亞胺己醯基(MC),馬來醯亞胺丙醯基(MP),纈氨酸-瓜氨酸(val-cit),丙氨酸-苯丙氨酸(ala-phe),賴氨酸-苯丙氨酸(lys-phe),對氨基芐氧基-羰基(PAB),4-硫戊醯基(SPP),4-硫丁醯基(SPDB), 4-(N-馬來醯亞胺甲基)環己烷-1-醯基(MCC),馬來醯亞胺乙氨基(ME),4-硫-2-羥基磺醯基-丁醯基(2-Sulfo-SPDB),芳基硫醚基(PySS),(4-乙醯基)氨基苯醯基(SIAB),,氧芐基硫醚基,氨基苄基硫醚基,二氧基苄基硫醚基,二氨基苄基硫醚基,氨基氧基苄基硫醚基,烷氧基氨基(AOA),亞乙基氧基(EO),4-甲基-4-硫代-戊醯基(MPDP),三唑,二硫、烷基磺醯基,烷基磺胺,碸基二磺胺,磷二醯胺,烷基膦醯胺,膦酸,N-甲基烷基膦醯胺,N,N’-二甲基磷二醯胺、烷基膦二醯胺,肼,乙脒;肟,二乙醯肼,氨基乙基胺, 氨基乙基-氨基乙基胺和L-或D-,或含有1-20個氨基酸的天然或非天然肽,
- 如申請專利範圍第3或4項之含支鏈連接體的化合物,其中該W、L1、L2、V1和V2可獨立地由一個或多個下列連接體組分構成:6-馬來醯亞胺己醯基(MC),馬來醯亞胺丙醯基(MP),纈氨酸-瓜氨酸(val-cit),丙氨酸-苯丙氨酸(ala-phe),賴氨酸-苯丙氨酸(lys-phe),對氨基芐氧基-羰基(PAB),4-硫戊醯基(SPP),4-硫丁醯基(SPDB),4-(N-馬來醯亞胺甲基)環己烷-1-醯基(MCC),馬來醯亞胺乙氨基(ME),4-硫-2-羥基磺醯基-丁醯基(2-Sulfo-SPDB),芳基硫醚基(PySS),(4-乙醯基)氨基苯醯基(SIAB),,氧芐基 硫醚基,氨基苄基硫醚基,二氧基苄基硫醚基,二氨基苄基硫醚基,氨基氧基苄基硫醚基,烷氧基氨基(AOA),亞乙基氧基(EO),4-甲基-4-硫代-戊醯基(MPDP),三唑,二硫、烷基磺醯基,烷基磺胺, 碸基二磺胺,磷二醯胺,烷基膦醯胺, 膦酸,N-甲基烷基膦醯胺,N,N’-二甲 基磷二醯胺、烷基膦二醯胺,肼,乙脒;肟,二乙醯肼,氨基乙基胺,氨基乙基-氨基乙基胺和L-或D-,或含有1-20個氨基酸的天然或非天然肽,
- 如申請專利範圍第1或2項之含有支鏈連接體的偶聯物,其中該W、L1、L2、V1和V2獨立地由下列組分構成: (A)自我毀滅組分、肽單元、腙鍵、二硫化物、酯、肟、醯胺或硫醚鍵。自我毀滅單元包括但不限於,與對氨基芐基氨甲醯基(PAB)的電子結構相似的芳香化合物,例如2-氨基咪唑-5-甲醇的衍生物、雜環PAB同系物、β-葡糖苷酸、以及鄰或對氨基芐基縮醛,或以下結構之一:
- 如申請專利範圍第3或4項之含支鏈連接體的化合物,其中該W、L1、L2、V1和V2獨立地由下列組分構成:(A)自我毀滅組分、肽單元、腙鍵、二硫化物、酯、肟、醯胺或硫醚鍵。自我毀滅單元包括但不限於,與對氨基芐基氨甲醯基(PAB)的電子結構相似的芳香化合物,例如2-氨基咪唑-5-甲醇的衍生物、雜環PAB同系物、β-葡糖苷酸、以及鄰或對氨基芐基縮醛,或以下結構之一:
- 如申請專利範圍第1項之含有支鏈連接體的偶聯物,其中該式(I)之偶聯物具有下列結構:
- 如申請專利範圍第1、2、13及14項中任一項之含有支鏈連接體的偶聯物,其具有選自下列結構的細胞結合劑或細胞結合分子:(A)由抗體、蛋白質、probody、納米抗體、維生素(包括葉酸)、肽、聚合物膠束、脂質體、脂蛋白藥物載體、納米顆粒藥物載體、樹枝狀大分子、和包覆或連接了細胞結合配體的上述分子或粒子,或以上的組合;(B)類抗體蛋白、完整抗體(多克隆抗體,單克隆抗體,二聚體,多聚體)、多特異性抗體(例如雙特異性、三特異性或四特異性抗體)、單鏈抗體、與靶細胞結合的抗體片段、單克隆抗體、單鏈單克隆抗體、結合靶細胞的單克隆抗體片段、嵌合抗體、結合靶細胞的嵌合抗體片段、結構域抗體、結合靶細胞的結構域抗體片段、表面修飾的抗體、單鏈表面修飾的抗體、結合靶細胞的表面修飾的抗體、人源化抗體、單鏈人源化抗體、結合靶細胞的單鏈人源化抗體、抗獨特型(抗-Id)抗體、CDR、雙價抗體、三價抗體、四價抗體、微型抗體、probody、probody片段、小免疫蛋白(SIP)、淋巴因子、激素、維生素、生長因子、集落刺激因子、營養轉運分子、大分子量蛋白、融合蛋白、激酶抑制劑、基因靶向劑、經抗體或大分子量蛋白修飾的納米微粒或聚合物;(C)選自以下的配體或受體激動劑:葉酸衍生物;谷氨酸脲衍生物;生長抑制素及其同系物,如奧曲肽(Sandostatin)和蘭瑞肽(Somatuline);芳香磺醯胺;垂體腺苷酸環化酶啟動肽(PACAP)(PAC1);血管活腸肽(VIP)(VPAC1,VPAC2);α-黑素細胞刺激素(α-MSH);膽囊收縮素(CCK)或胃泌素;鈴蟾肽(Pyr-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2)或胃泌素釋放肽(GRP);神經降壓素受體(NTR1,NTR2,NTR3);物質P;神經肽Y(Y1-Y6);歸巢肽包括RGD(Arg-Gly-Asp)、NGR(Asn-Gly-Arg)、二聚和多聚環狀RGD肽(如cRGDfV)、TAASGVRSMH或LTLRWVGLMS(硫酸軟骨素蛋白多糖NG2受體配體)和F3肽;細胞穿透肽(CPPs);肽激素,例如促黃體激素釋放激素(LHRH)的激動劑和拮抗劑,促性腺激素釋放激素(GnRH)激動劑,通過靶向卵泡刺激素(FSH)和促黃體激素(LH)以及睾酮產生而作用,如布舍瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt)、戈那瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)、戈舍瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-AzGly-NH2)、組氨瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(N-Bn)-Leu-Arg-Pro-NHEt)、亮丙瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt)、那法瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-2Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)、曲普瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)、納法瑞 林、地洛林、阿貝瑞林(Ac-D-2Nal-D-4-chloroPhe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-(N-Me)Tyr-D-Asn-Leu-isopropylLys-Pro-DAla-NH2)、西曲瑞克(Ac-D-2Nal-D-4-chloro-Phe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2)、地加瑞克(Ac-D-2Nal-D-4-chloroPhe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-4-aminoPhe(L-hydroorotyl)-D-4-aminoPhe(carba-moyl)-Leu-isopropylLys-Pro-D-Ala-NH2)和甘乃利(Ac-D-2Nal-D-4-chloroPhe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-Tyr-D-(N9,N10-diethyl)-homoArg-Leu-(N9,N10-diethyl)-homoArg-Pro-D-Ala-NH2);模式識別受體(PRRs),如Toll樣受體(TLRs)配體、C型凝集素和結節狀的受體(NLRs)配體;降鈣素受體;整合素受體及其受體子類(如αVβ1,αVβ3,αVβ5,αVβ6,α6β4,α7β1,αLβ2,αIIbβ3等)激動劑(選自GRGDSPK、環(RGDfV)(L1)及其衍生物(環(-N(Me)R-GDfV)、環(R-Sar-DfV)、環-(RG-N(Me)D-fV)、環(RGD-N(Me)fV)、環(RGDf-N(Me)V-)(西崙吉肽));納米抗體(VHH衍生物(駱駝科動物Ig));結構域抗體(dAb,VH或VL結構域的衍生物);雙特異性T細胞接頭(BiTE,雙特異性雙抗體);雙重親和力重定向抗體(DART,雙特異性二價抗體);四價串聯抗體(TandAb,二聚的雙特異性二價抗體);Anticalin(Lipocalins的衍生物);Adnectin(第10個FN3(纖連蛋白));設計的錨蛋白重複蛋白(DARPins);Avimer;EGF受體或VEGF受體的激動劑;(D)下列小分子細胞結合分子/配體或細胞受體激動劑:LB01(葉酸)、LB02(PMSA配體)、LB03(PMSA配體)、LB04(PMSA配體)、LB05(生長抑制素)、LB06(生長抑制素)、LB07(奧曲肽、生長抑制素同系物)、LB08(蘭瑞肽、生長抑制素同系物)、LB09(伐普肽(Sanvar)、生長抑制素同系物)、LB10(CAIX配體)、LB11(CAIX配體)、LB12(胃泌素釋放肽受體(GRPr)、MBA)、LB13(促黃體激素釋放激素(LH-RH)和GnRH配體)、LB14(促黃體激素釋放激素(LH-RH)和GnRH配體)、LB15(GnRH拮抗劑、Abarelix)、LB16(鈷胺素、維生素B12同系物)、LB17(鈷胺素、維生素B12同系物)、LB18(用於αvβ3整聯蛋白受體、環狀RGD五肽)、LB19(VEGF受體的異二價肽配體)、LB20(神經髓質素B)、LB21(蛙皮素,作用於G蛋白偶聯受體)、LB22(TLR2,作用於類Toll受體)、LB23(作用於雄性激素受體)、LB24(西崙吉肽或環(-RGDfV-)結合物,作用於αv整合素受體)LB25(利福布汀同系物)、LB26(利福布汀同系物)、LB27(利福布汀同系物)、LB28(氟氫可的松)、LB29(地塞米松)、LB30(丙酸氟替卡松)、LB31(丙酸倍米松)、LB32(醋酸曲安奈德)、LB33(潑尼松龍)、LB35(甲基強的松龍)、LB36(倍他米松)、LB37(伊立替康同系物)、LB38(克唑替尼同系物)、LB39(硼替佐米同系物)、LB40(卡菲佐米同系物)、LB41(卡 非佐米同系物)、LB42(亮丙瑞林同系物)、LB43(曲普瑞林同系物)、LB44(克林黴素)、LB45(利拉魯肽同系物)、LB46(半長春新鹼同系物)、LB47(瑞他帕林同系物)、LB48(丁布林同系物)、LB49(長春鹼同系物)、LB50(利西森肽同系物)、LB51(奧西丁尼同系物)、LB52(核苷同系物)、LB53(厄洛替尼同系物)和LB5 4(拉帕替尼同系物),其結構如下所示:
- 如申請專利範圍第1、2、13及14項中任一項之含有支鏈連接體的偶聯物,其中該細胞結合劑或細胞結合分子,能夠抗以下細胞:腫瘤細胞,病毒感染細胞,微生物感染細胞,寄生蟲感染細胞,自身免疫細胞,活化的細胞,骨髓細胞,活化的T細胞,B細胞,黑色素細胞,或任何表達下列抗原或受體的細胞:CD1,CD1a,CD1b,CD1c,CD1d,CD1e,CD2,CD3,CD3d,CD3e,CD3g,CD4,CD5,CD6,CD7,CD8,CD8a,CD8b,CD9,CD10,CD11a,CD11b,CD11c,CD11d,CD12w,CD14,CD15,CD16,CD16a,CD16b,CDw17,CD18,CD19,CD20,CD21,CD22,CD23,CD24,CD25,CD26,CD27,CD28,CD29,CD30,CD31,CD32,CD32a,CD32b,CD33,CD34,CD35,CD36,CD37,CD38,CD39,CD40,CD41,CD42,CD42a,CD42b,CD42c,CD42d,CD43,CD44,CD45,CD46,CD47,CD48,CD49b,CD49c,CD49d,CD49f,CD50,CD51,CD52,CD53,CD54,CD55,CD56,CD57,CD58,CD59,CD60,CD60a,CD60b,CD60c,CD61,CD62E,CD62L,CD62P,CD63,CD64,CD65,CD65s,CD66,CD66a,CD66b,CD66c,CD66d,CD66e,CD66f,CD67,CD68,CD69,CD70,CD71,CD72,CD73,CD74,CD75,CD75s,CD76,CD77,CD78,CD79,CD79a,CD79b,CD80,CD81,CD82,CD83,CD84,CD85,CD85a,CD85b,CD85c,CD85d,CD85e,CD85f,CD85g,CD85g,CD85i,CD85j,CD85k,CD85m,CD86,CD87,CD88,CD89,CD90,CD91,CD92,CD93,CD94,CD95,CD96,CD97,CD98,CD99,CD100,CD101,CD102,CD103,CD104,CD105,CD106,CD107,CD107a,CD107b,CD108,CD109,CD110,CD111,CD112,CD113,CD114,CD115,CD116,CD117,CD118,CD119,CD120,CD120a,CD120b,CD121,CD121a,CD121b,CD122,CD123,CD123a,CD124,CD125,CD126,CD127,CD128,CD129,CD130,CD131,CD132,CD133,CD134,CD135,CD136,CD137,CD138,CD139,CD140,CD140a,CD140b,CD141,CD142,CD143,CD144,CD145,CD145w,CD146,CD147,CD148,CD149,CD150,CD151,CD152,CD153,CD154,CD155,CD156,CD156a,CD156b,CD156c,CD156d,CD157,CD158,CD158a,CD158b1,CD158b2,CD158c,CD158d,CD158e1,CD158e2,CD158f2,CD158g,CD158h,CD158i,CD158j,CD158k,CD159,CD159a,CD159h,CD159c,CD160,CD161,CD162,CD163,CD164, CD165,CD166,CD167,CD167a,CD167b,CD168,CD169,CD170,CD171,CD172,CD172a,CD172b,CD172g,CD173,CD174,CD175,CD175s,CD176,CD177,CD178,CD179,CD179a,CD179b,CD180,CD181,CD182,CD183,CD184,CD185,CD186,CDw186,CD187,CD188,CD189,CD190,CD191,CD192,CD193,CD194,CD195,CD196,CD197,CD198,CD199,CDw198,CDw199,CD200,CD201,CD202,CD202(a,b),CD203,CD203c,CD204,CD205,CD206,CD207,CD208,CD209,CD210,CDw210a,CDw210b,CD211,CD212,CD213,CD213a1,CD213a2,CD214,CD215,CD216,CD217,CD218,CD218a,CD218,CD21b9,CD220,CD221,CD222,CD223,CD224,CD225,CD226,CD227,CD228,CD229,CD230,CD231,CD232,CD233,CD234,CD235,CD235a,CD235b,CD236,CD237,CD238,CD239,CD240,CD240ce,CD240d,CD241,CD242,CD243,CD244,CD245,CD246,CD247,CD248,CD249,CD250,CD251,CD252,CD253,CD254,CD255,CD256,CD257,CD258,CD259,CD260,CD261,CD262,CD263,CD264,CD265,CD266,CD267,CD268,CD269,CD270,CD271,CD272,CD273,CD274,CD275,CD276,CD277,CD278,CD279,CD281,CD282,CD283,CD284,CD285,CD286,CD287,CD288,CD289,CD290,CD291,CD292,CD293,CD294,CD295,CD296,CD297,CD298,CD299,CD300,CD300a,CD300b,CD300c,CD301,CD302,CD303,CD304,CD305,CD306,CD307,CD307a,CD307b,CD307c,CD307d,CD307e,CD307f,CD308,CD309,CD310,CD311,CD312,CD313,CD314,CD315,CD316,CD317,CD318,CD319,CD320,CD321,CD322,CD323,CD324,CD325,CD326,CD327,CD328,CD329,CD330,CD331,CD332,CD333,CD334,CD335,CD336,CD337,CD338,CD339,CD340,CD341,CD342,CD343,CD344,CD345,CD346,CD347,CD348,CD349,CD350,CD351,CD352,CD353,CD354,CD355,CD356,CD357,CD358,CD359,CD360,CD361,CD362,CD363,CD364,CD365,CD366,CD367,CD368,CD369,CD370,CD371,CD372,CD373,CD374,CD375,CD376,CD377,CD378,CD379,CD381,CD382,CD383,CD384,CD385,CD386,CD387,CD388,CD389,CRIPTO,CRIPTO,CR,CR1,CRGF,CRIPTO,CXCR5,LY64,TDGF1,4-1BB,APO2,ASLG659,BMPR1B,4-1BB,5AC,5T4(Trophoblast糖蛋白,TPBG,WNT-活化抑制因子1或WAIF1),腺癌抗原,AGS-5,AGS-22M6,啟動素受體激酶1,AFP,AKAP-4,ALK,α整合素,α v β6,氨基肽酶N,澱粉樣蛋白β,雄激素受體,促血管新生蛋白因子2,促血管新生蛋白因子3,膜聯蛋白A1,炭疽毒素保護性抗原,抗轉移蛋白受體,AOC3(VAP-1),B7-H3,炭疽桿菌,BAFF(B細胞啟動因子),B淋巴瘤細胞,bcr-abl,蛙皮素,BORIS,C5,C242抗原,CA125(糖抗原125,MUC16),CA-IX(或CAIX,碳酸酐酶9),CALLA,CanAg,犬紅斑狼 瘡IL31,碳酸酐酶IX,心肌肌凝蛋白,CCL11(C-C片段趨化因子11),CCR4(C-C趨化因子受體4,CD194),CCR5,CD3E(ε),CEA(癌胚抗原),CEACAM3,CEACAM5(癌胚抗原),CFD(因子D),Ch4D5,膽囊收縮素2(CCK2R),CLDN18(Claudin-18),叢生因子A,CRIPTO,FCSF1R(集落刺激因子1受體,CD115),CSF2(集落刺激因子2,粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)),CTLA4(細胞毒性T淋巴細胞相關蛋白4),CTAA16.88腫瘤抗原,CXCR4(CD184),C-X-C趨化因子受體4,環狀ADP核糖核酸酶,細胞週期蛋白B1,CYP1B1,巨細胞病毒,巨細胞病毒糖蛋白B,Dabigatran,DLL3(類△配體3),DLL4(類△配體4),DPP4(雙肽-肽酶4),DR5(死亡受體5),大腸桿菌shiga毒素類型-1,大腸桿菌shiga毒素類型-2,ED-B,EGFL7(類EGF結構域蛋白7),EGFR,EGFRII,EGFRvIII,內皮因子(CD105),內皮素B受體,內毒素,EpCAM(上皮細胞粘附分子),EphA2,Episialin,ERBB2(表皮生長因子受體2),ERBB3,ERG(TMPRSS2 ETS融合基因),大腸桿菌,ETV6-AML,FAP(成纖維細胞活化蛋白α),FCGR1,甲胎蛋白,纖維蛋白II β鏈,纖連蛋白額外結構域-B,FOLR(葉酸受體),葉酸受體α,葉酸水解酶,Fos相關抗原1,呼吸道合胞病毒的F蛋白,捲曲的受體,岩藻糖GM1,GD2神經節苷脂,G-28(細胞表面抗原糖脂),GD3獨特型,GloboH,Glypican 3,N-羥乙醯神經氨酸,GM3,GMCSF受體α鏈,生長分化因子8,GP100,GPNMB(跨膜糖蛋白NMB),GUCY2C(鳥苷酸環化酶2 C),鳥苷酸環化酶C(GC-C),腸鳥苷酸環化酶,鳥苷酸環化酶C受體,熱穩定腸毒素受體(hSTAR),熱休克蛋白,血凝素,乙肝表面抗原,乙型肝炎病毒,HER1(人類表皮生長因子受體1),HER2,HER2/neu,HER3(ERBB-3),IgG4,HGF/SF(肝細胞生長因子/分散因子),HHGFR,HIV-1,組蛋白複合物,HLA-DR(人類白細胞抗原),HLA-DR10,HLA-DRB,HMWMAA,人類絨毛膜促性腺激素,HNGF,人類分散因子受體激酶,HPV E6/E7,Hsp90,hTERT,ICAM-1(細胞間粘附分子1),獨特型,IGF1R(IGF-1,類胰島素生長因子1受體),IGHE,IFN-γ,流感血凝素,IgE,IgE Fc區,IGHE,白細胞介素(IL-1,IL-2,IL-3,IL-4,IL-5,IL-6,IL-6R,IL-7,IL-8,IL-9,IL-10,IL-11,IL-12,IL-13,IL-15,IL-17,IL-17A,IL-18,IL-19,IL-20,IL-21,IL-22,IL-23,IL-27,IL-28),IL31RA,ILGF2(類胰島素生長因子2),整合蛋白(α4、αIIbβ3、αvβ3、α4β7、α5β1、α6β4、α7β7、α11β3、α5β5、αvβ5),幹擾素γ誘導蛋白質,ITGA2,ITGB2,KIR2D,Kappa Ig,LCK,Le,Legumain,Lewis-Y抗原,LFA-1(淋巴細胞功能相關抗原1,CD11a),LHRH,LINGO-1,脂磷壁酸,LIV1A,LMP2,LTA,MAD-CT-1,MAD-CT-2,MAGE-1,MAGE-2,MAGE-3,MAGE A1,MAGE A3,MAGE 4,MART1,MCP-1,MIF(巨噬細胞遷移抑制因子,或糖基抑制因子(GIF)),MS4A1(跨膜4結構域亞家族A成員1),MSLN(間皮素),MUC1(粘蛋白1,細胞表面相關(MUC1)或多態性上皮粘蛋白(PEM)), MUC1-KLH,MUC16(CA125),MCP1(單核細胞趨化蛋白1),MelanA/MART1,ML-IAP,MPG,MS4A1,MYCN,髓磷脂相關糖蛋白,Myostatin,NA17,NARP-1,NCA-90(粒細胞抗原),Nectin-4(ASG-22ME),NGF,神經細胞凋亡調控蛋白酶1,NOGO-A,Notch受體,核仁素,Neu致癌基因產物,NY-BR-1,NY-ESO-1,OX-40,OxLDL(氧化低密度脂蛋白),OY-TES1,P21,p53非突變體,P97,PAP,抗(N-羥乙醯神經氨酸)抗體結合部位,PAX3,PAX5,PCSK9,PDCD1(PD-1、程式性細胞死亡蛋白1),PDGF-Rα(α血小板源生長因子受體),PDGFR-β,PDL-1,PLAC1,類PLAP睾丸鹼性磷酸酶,血小板衍生生長因子受體β,磷酸鈉聯合轉運體,PMEL 17,聚唾液酸,蛋白酶3(PR1),前列腺癌,PS(磷脂醯絲氨酸),前列腺癌細胞,銅綠假單胞菌,PSMA,PSA,PSCA,狂犬病病毒糖蛋白,RHD(Rh多肽1(RhPI),CD240),Rhesus因子,RANKL,RhoC,Ras突變,RGS5,ROBO4,呼吸道合胞病毒,RON,ROR1,肉瘤易位中斷點,SART3,Sclerostin,SLAMF7(SLAM成員7),Selectin P,SDC1(多配體蛋白聚糖1),系統性紅斑狼瘡(a),生長調節素C,SIP(1-磷酸鞘氨醇),生長激素抑制素,精子蛋白17,SSX2,STEAP1(6-跨膜上皮前列腺抗原1),STEAP2,STn,TAG-72(腫瘤相關糖蛋白),存活素,T細胞受體,T細胞跨膜蛋白,TEM1(腫瘤血管內皮標記1),TENB2,Tenascin C(TN-C),TGF-α,TGF-β(轉化生長因子β),TGF-β1,TGF-β2(轉化生長因子2),Tie(CD202b),Tie2,TIM-1(CDX-014),Tn,TNF,TNF-α,TNFRSF8,TNFRSF10B(腫瘤壞死因子受體超家族成員10 B),TNFRSF13B(腫瘤壞死因子受體超家族成員13B),TPBG(滋養細胞糖蛋白),TRAIL-R1(TNF相關壞死誘導配體受體1),TRAILR2(死亡受體5(DR5)),腫瘤相關的鈣信號傳感子2,腫瘤特異糖基化的MUC1,TWEAK受體,TYRP1(糖蛋白75),TROP1,TROP2,TROP3,TRP-2,酪氨酸酶,VCAM-1,VEGF,VEGF-A,VEGF-2,VEGFR-1,VEGFR-2,vimentin,WT1,XAGE 1,表達胰島素生長因子受體的細胞,或表達表皮生長因子受體的細胞。
- 如申請專利範圍第19項之含有支鏈連接體的偶聯物,其中該腫瘤細胞選自淋巴瘤細胞,骨髓瘤細胞,腎細胞,乳腺癌細胞,前列腺癌細胞,卵巢癌細胞,結直腸癌細胞,胃癌細胞,鱗狀細胞癌細胞,小細胞肺癌細胞,非小細胞肺癌細胞,睾丸癌細胞,惡性細胞或任何因不受控炔速生長和分裂導致癌症的細胞。
- 一種藥物組合物,其中包含治療有效量的申請專利範圍第1、2、13及14項中任一項之含有支鏈連接體的偶聯物及其藥學上可接受的鹽,載體,稀釋劑或賦形劑,或其組合,用於治療或預防癌症或自身免疫疾病或傳染病。
- 如申請專利範圍第21項之藥物組合物,其中該醫藥組合物為液體配方或凍幹固體,當被重新製成製劑施用于病人時,其組成(重量)為:0.01%-99%的一種或多種 申請專利範圍第1、2、13及14中任一項之含有支鏈連接體的偶聯物;0.0%-20.0%的一種或多種多元醇;0.0%-2.0%的一種或多種表面活性劑;0.0%-5.0%的一種或多種防腐劑;0.0%-30%的一種或多種氨基酸;0.0%-5.0%的一種或多種抗氧化劑;0.0%-0.3%的一種或多種金屬螯合劑;0.0%-30.0%的一種或多種緩衝鹽,用於將製劑的pH調節至pH 4.5至7.5;0.0%-30.0%一種或多種等滲劑,用於調節滲透壓至約250-350mOsm;其中,多元醇選自果糖,甘露糖,麥芽糖,乳糖,阿拉伯糖,木糖,核糖,鼠李糖,半乳糖,葡萄糖,蔗糖,海藻糖,山梨糖,松三糖,棉子糖,甘露醇,木糖醇,赤蘚糖醇,麥芽糖醇,乳糖醇,赤蘚糖醇,蘇糖醇,山梨糖醇,甘油或L-葡萄糖酸鹽及其金屬鹽;表面活性劑選自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯81或聚山梨醇酯85,泊洛沙姆,聚(環氧乙烷)-聚(環氧丙烷),聚乙烯-聚丙烯,Triton,十二烷基硫酸鈉(SDS),月桂基硫酸鈉,辛基糖苷鈉,十二烷基、肉荳蔻醯基、亞油基或硬脂基磺基甜菜鹼,十二烷基、肉荳蔻醯基、亞油基或硬脂基肌氨酸,亞油酸、肉荳蔻基或十六烷基甜菜鹼,月桂醯氨基丙基、椰油醯胺丙基、亞油醯胺基丙基、肉荳蔻醯基丙基、棕櫚醯基丙基或異硬脂醯氨-丙基-甜菜鹼(例如月桂醯胺丙基),肉荳蔻醯胺丙基、棕櫚醯丙基或異硬脂醯氨基丙基-二甲胺,甲基椰油醯基鈉或甲基油基牛磺酸二鈉,十二烷基甜菜鹼,十二烷基二甲基氧化胺,椰油醯胺丙基甜菜鹼和可哥兩性甘氨酸酯,異硬脂基乙基亞胺鎓乙基硫酸鹽,聚乙二醇,聚丙二醇,乙二醇和丙二醇的共聚物;防腐劑選自十八烷基二甲基芐基化銨、六甲基化銨、苯紮銨,芐索銨,苯酚,丁基和芐基醇,對羥基苯甲酸烷基酯,如甲酯或丙酯,兒茶酚、間苯二酚、環己醇、3-戊醇或間甲酚;氨基酸選自精氨酸、胱氨酸、甘氨酸、賴氨酸、組氨酸、鳥氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸谷氨酸或天冬氨酸;抗氧化劑選自抗壞血酸,谷胱甘肽,胱氨酸或蛋氨酸;金屬螯合劑選自EDTA或EGTA;緩衝鹽選自檸檬酸、抗壞血酸、葡萄糖酸、碳酸、酒石酸、琥珀酸、乙酸或鄰苯二甲酸的鈉、鉀、銨或三羥乙基氨基鹽,Tris或氨丁三醇的鹽酸、磷酸或硫酸鹽,精氨酸、甘氨酸、甘氨醯甘氨酸或組氨酸的乙酸鹽、化物、磷酸鹽、硫酸鹽或琥珀酸鹽;等滲劑選自甘露醇,山梨糖醇,乙酸鈉,化鉀,磷酸鈉,磷酸鉀,檸檬酸三鈉或化鈉。
- 如申請專利範圍第21或22項之藥物組合物,其中該醫藥組合物係以液體或凍幹固體的形式包裝在小瓶,瓶子,預填充注射器或預填充自動注射器中。
- 如申請專利範圍第1、2、13及14項中任一項之含有支鏈連接體的偶聯物,其具有體外,體內或離體細胞殺傷活性。
- 如申請專利範圍第21或22項之醫藥組合物,其中該醫藥組合物中之偶聯物具有體外,體內或離體細胞殺傷活性。
- 如申請專利範圍第21或22項之藥物組合物,其與化學治療藥物,放射療法,免疫治療藥物,自身免疫病藥物,抗感染藥物或其他偶聯物同時施用,用於協同治療或預防癌症、自身免疫性疾病或傳染病。
- 如申請專利範圍第26項之藥物組合物,其中該化學治療藥物選自:1)化療藥物:a)烷基化劑:氮芥類,苯那普,普那嗪,環磷醯胺,達卡巴嗪,雌二醇氮芥,異環磷醯胺,氮芥,鹽酸二甲氧胺,氧化二氮芥,鹽酸氨地平,麥考酚酸,衛矛醇,呱泊溴烷,新氮芥,苯芥膽甾醇,松龍苯芥,噻替呱,曲磷胺對,尿嘧啶;CC-1065,其阿多來新,卡折來新,比折來新及其合成同系物;多卡黴素及其合成同系物,KW-2189,CBI-TMI或CBI二聚體;苯並二氮卓二聚體或吡咯並苯二氮卓(PBD)二聚體,托美黴素二聚體,吲哚並苯並二氮卓二聚體,咪唑並苯並噻二氮卓二聚體或惡唑烷並苯並二氮卓的二聚體;亞硝基脲,包括卡莫司汀,洛莫司汀,化梭菌素,福莫司汀,尼莫司汀,拉莫司汀;烷基磺酸鹽,包括白蘇芬、樹蘇芬、磺胺異丙磺胺和皮蘇芬;三氮烯類,達卡巴嗪;含鉑化合物,包括卡鉑,順鉑,奧沙利鉑;吖丙啶類,苯並二氫吡喃酮,卡洛酮,美妥替派和烏雷多巴;乙烯亞胺和甲基三聚氰胺,包括六甲蜜胺,三亞乙基三胺,三乙基磷醯胺,三亞乙基硫代磷醯胺和三羥甲基甲基胺;b)植物生物鹼:長春花生物鹼,包括長春新堿,長春堿,長春地辛,長春瑞濱,去甲長春堿;紫杉醇類,包括紫杉醇,多西紫杉醇及其同系物;美登素類包括DM1,DM2,DM3,DM4,DM5,DM6,DM7,美登素和安沙黴素及其同系物;Cryptophycin(Cryptophycin 1和Cryptophycin 8);埃博黴素,軟瑚醇,迪莫利德,草苔蟲內酯,海兔毒素,奧瑞他汀,Cephalostatin;Pancratistatin;Sarcodictyin;海綿抑制素;c)DNA拓撲異構酶抑制劑:依託泊苷替尼,9-氨基喜樹堿,喜樹堿,克立那托,多拉黴素,依託泊苷,磷酸依託泊苷,伊立替康,米托蒽醌,諾消靈,視黃酸(視黃醇),替尼泊苷,拓撲替康,9-硝基喜樹堿(RFS 2000);絲裂黴素及其同系物; d)抗代謝物:抗葉酸劑,DHFR抑制劑(甲氨蝶呤,曲麥克特,二甲葉酸,蝶羅呤,氨喋呤(4-氨基苯甲酸)或其他葉酸同系物);IMP脫氫酶抑制劑(麥考酚酸,噻唑呋林,利巴韋林,EICAR);核糖核苷酸還原酶抑制劑(羥基脲,去鐵胺);嘧啶同系物,尿嘧啶同系物(安西他濱,阿紮胞苷,6-氮尿嘧啶,卡培他濱,卡莫氟,阿糖胞苷,雙去氧尿苷,去氧氟尿苷,依諾他濱,5-氟尿嘧啶,氟尿苷,Ratitrexed(Tomudex);胞嘧啶同系物(阿糖胞苷,胞嘧啶阿拉伯糖苷,氟達拉濱);嘌呤同系物(硫唑嘌呤,氟達拉濱,巰嘌呤,硫胺素,硫鳥嘌呤);葉酸補充劑,弗洛林酸;e)激素療法劑:受體拮抗劑,抗雌激素(甲地孕酮,雷洛昔芬,他莫昔芬),LHRH興奮劑(戈斯他林,醋酸亮丙瑞林);抗雄激素藥(比卡魯胺,氟他胺,卡魯司酮,丙酸倍他雄酮,表雄甾醇,戈舍瑞林,亮丙瑞林,美替利定,尼魯米特,睾內酯,曲洛司坦及其他雄激素抑制劑);維甲類化合物,維生素D3同系物(CB1093,EB1089,KH1060,膽鈣化醇,麥角鈣化甾醇);光動力療法劑(維替泊芬,酞菁,光敏劑Pc4,去甲氧基-竹紅菌素A);細胞因子(幹擾素-α,幹擾素-γ,腫瘤壞死因子(TNF),含TNF的人蛋白);f)激酶抑制劑:BIBW 2992(抗-EGFR/Erb2),伊馬替尼,吉非替尼,呱加他尼,索拉非尼,達沙替尼,舒尼替尼,厄洛替尼,尼洛替尼,拉帕替尼,阿西替尼,帕唑帕尼,凡德他尼,E7080(抗VEGFR2),Mubritinib,普納替尼,Bafetinib,Bosutinib,卡博替尼,維莫德吉,Iniparib,盧梭利替尼,CYT387,阿西替尼,Tivozanib,索拉非尼,貝伐單抗,西妥昔單抗,曲妥珠單抗,雷珠單抗,帕尼單抗,伊斯平斯;g)聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制劑:奧拉帕裡、尼拉帕裡、依尼帕裡、塔拉佐帕裡、維利帕裡、維利帕裡、CEP 9722(Cephalon)、E7016(Eisai)、BGB-290(Beigene)、3-氨基苯甲醯醯胺;h)抗生素:烯二炔類抗生素(加利車黴素,加利車黴素γ1,δ1,α1和β1,達因黴素,包括達因黴素A和去氧米黴素,埃斯培拉黴素,卡達黴素,C-1027,Maduropeptin,新卡嗪奧斯丁和相關色蛋白烯二炔抗生素),Aclacinomysins,放線菌素,安麯黴素,重氮絲氨酸,博來黴素,卡諾黴素,卡拉黴素,洋紅黴素,嗜癌素,色黴素類、達金黴素、柔紅黴素、去柔紅黴素、6-重氮-5-氧代-L-去甲亮氨酸、阿黴素、嗎啉-阿黴素、氰基嗎啉-阿黴素,2-吡咯啉阿黴素和去氧柔紅黴素,表柔比星,阿柔比星,伊達比星,馬可黴素,Nitomycin,黴酚酸,諾加黴素,橄欖黴素,Peplomycin,Potfiromycin,嘌呤黴素,奎拉黴素,羅道黴素,鏈黑黴素,鏈脲黴素,殺結核菌素,烏苯美司,淨司他丁,佐柔比星; i)聚酮化合物(番荔素),Bullatacin和Bullatacinone;吉西他濱,環氧酶素卡菲偌米布,硼替佐米,沙利度胺,來那度胺,Pomalidomide,Tosedostat,Zybrestat,PLX4032,STA-9090,Stimuvax,Allovectin-7,Xegeva,Provenge,Yervoy,異戊二烯化抑制劑,洛伐他汀,多巴胺能神經毒素,1-甲基-4-苯基吡啶離子,細胞週期抑制劑(包括葡萄球菌素),放線菌素(如放線菌素D,更生黴素),鵝膏毒素,博萊黴素(如博來黴素A2,博萊黴素B2,培洛黴素),蒽環類抗生素(如柔紅黴素),阿黴素(亞德里亞黴素),伊達比星,表柔比星,吡柔比星,佐柔比星,米托蒽醌,MDR抑制劑或維拉帕米,Ca2+ATP酶抑制劑或毒胡蘿蔔素,組蛋白去乙醯酶抑制劑(伏立諾他,羅米地辛,帕比司他,丙戊酸,Mocetinostat(MGCD0103),Belinostat,PCI-24781,恩替諾特,SB939,Resminostat,Givinostat,AR-42,CUDC-101,蘿蔔硫素,曲古抑菌素A);塞來昔布,格列酮類,表沒食子兒茶素,沒食子酸酯,雙硫侖,Salinosporamide A;抗腎上腺藥物,如氨魯米特,米托坦,曲洛司坦,醋葡醛內酯,醛磷醯胺,氨基乙醯丙酸,安吖啶,阿拉伯糖苷,Bestrabucil,比生群,Edatraxate,Defofamine,美可辛,地吖醌,依氟鳥氨酸(DFMO),Elfomithine,依利醋銨,依托格魯,硝酸鎵,胞嘧啶,羥基脲,伊班膦酸鹽,香菇多糖,尼達明,米托胍腙,米托蒽醌,莫呱達醇,二胺硝吖啶,噴司他丁,蛋氨氮芥,吡柔比星,鬼臼酸,2-乙肼,甲基苄肼;PSK®;呱嗪二酮丙烷;根黴素;西佐;螺環鍺;細格孢氮雜酸;三亞胺醌;三三乙胺;單端孢黴烯(包括T-2毒素,疣孢菌素A,杆孢菌素A和Anguidine),聚氨酯,siRNA,反義藥物和核酸分解酶;2)自身免疫疾病藥物:環孢菌素,環孢菌素A,氨基己酸,硫唑嘌呤,溴隱亭,苯丁酸氮芥,喹,環磷醯胺,皮質類固醇(例如安西奈德,倍他米松,布地奈德,氫化可的松,氟尼縮松,丙酸氟替卡松,氟可龍達那唑,地塞米松,曲安奈德,二丙酸倍米松),DHEA,依那西普,羥基喹,英夫利昔單抗,美洛昔康,甲氨蝶呤,麥考酚酸酯,潑尼松,西羅莫司,他克莫司;3)抗感染性疾病藥物:a)氨基糖苷類:阿米卡星,阿司米星,慶大黴素(奈替米星,西索米星,異帕米星),潮黴素B,卡那黴素(阿米卡星,阿貝卡星,氨基去氧卡那黴素,地貝卡星,妥布黴素),新黴素(Framycetin,巴龍黴素,核糖黴素),奈替米星,壯觀黴素,鏈黴素,妥布黴素,甲基姿蘇黴素;b)醯胺醇類:疊氮黴素,黴素,氟苯尼考,甲碸黴素;c)安沙黴素:格爾德黴素,除莠黴素; d)碳青黴烯類:比阿培南,多利培南,厄他培南,亞胺培南,西司他丁,美羅培南,帕尼培南;e)頭孢烯:碳頭孢烯(洛拉卡比),頭孢乙腈,氨苄青黴素,頭孢拉定,頭孢羥氨,頭孢洛寧,頭孢噻啶,頭孢噻吩或頭孢金素,頭孢氨苄,頭孢來星,頭孢孟多,頭孢匹林,羥胺唑頭孢菌素,氟唑頭孢菌素,孢西酮,唑啉頭孢菌素,頭孢拉宗,頭孢卡品,頭孢達肟,頭孢吡,頭孢克肟,頭孢西丁,頭孢羅齊,頭孢甲氧環烯胺,頭孢替唑,頭孢呋辛,頭孢克肟,頭孢地尼,頭孢托侖,頭孢吡,頭孢他美,頭孢甲肟,頭孢地嗪,頭孢尼西,頭孢呱酮,頭孢雷特,頭孢噻肟,噻乙胺唑頭孢菌素,頭孢唑蘭,頭孢氨苄,頭孢咪唑,頭孢匹胺,頭孢匹羅,頭孢泊肟,頭孢羅齊,頭孢喹諾,頭孢磺啶,頭孢他啶,頭孢特侖,頭孢布騰,頭孢噻林,頭孢唑肟,頭孢吡普,頭孢曲松,頭孢呋辛,頭孢唑南,頭黴素(頭孢西丁,頭孢替坦,頭孢氰唑),氧(碳)頭孢烯(氟氧頭孢,拉氧頭孢);f)糖肽:博來黴素,萬古黴素(奧利萬星,特拉萬星),替考拉甯(達巴萬星),雷莫拉寧;g)甘氨醯環素:替加環素;h)β-內醯胺酶抑制劑:青黴烷(舒巴坦,他唑巴坦),氧青黴烷(克拉維酸);i)林可醯胺:克林黴素,林可黴素;j)脂肽:達托黴素,A54145,鈣依賴性抗生素(CDA);k)大環內酯類:阿奇黴素,克黴素,克拉黴素,地紅黴素,紅黴素,氟雷黴素,交沙黴素,酮內酯(泰利黴素,塞紅黴素),麥迪黴素,米卡黴素,竹桃黴素,利福黴素(異煙肼、利福平,利福布丁,利福噴汀),羅匹黴素,羅紅黴素,大觀黴素,螺旋黴素,他克莫司(FK506),醋竹桃黴素,泰利黴素;l)單環胺:氨曲南,替吉莫南;m)惡唑烷酮類:利奈唑胺;n)青黴素類:阿莫西林,氨苄青黴素(匹氨西林,海洛西林,巴氨西林,氨苄青黴素,阿黴素),阿替代西林,阿洛西林,苄青黴素,苄星青黴素苄青黴素,苄星青黴素苯氧甲基青黴素,克洛西林,普魯卡因青黴素(美替西林),美洛西林,甲氧西林,萘夫西林,苯唑西林,醋甲西林,青黴素,非奈西林,苯氧基甲基青黴素,呱拉西林,氨苄西林,磺苯西林,替莫西林,替凱西林;o)多肽:桿菌肽,粘菌素,多粘菌素B; p)喹諾酮類:阿拉曲沙星,巴羅沙星,環丙沙星,克林沙,達氟沙星,二氟沙星,依諾沙星,恩諾沙星,加雷沙星,加替沙星,吉米沙星,格帕沙星,卡諾曲伐沙星,左氧氟沙星,洛美沙星,麻保沙星,莫西沙星,那氟沙星,諾氟沙星,奧比沙星,氧氟沙星,培氟沙星,曲伐沙星,格帕沙星,西他沙星,司帕沙星,替馬沙星,托沙星,曲伐沙星;q)鏈陽性菌素:普那黴素,奎奴普丁/達福普汀;r)磺胺類:氨芐磺胺,偶氮磺胺,磺胺嘧啶,磺胺甲異唑、磺胺醯亞胺、磺胺吡啶、磺胺異惡唑、甲氧苄啶、磺胺甲惡唑(複方磺胺甲惡唑);s)類固醇抗菌藥物:如夫西地酸;t)四環素類:強力黴素,金黴素,米西環素,地美環素,雷莫昔林,美西環素,美他環素,米諾環素,土黴素,潘美環素,吡咯烷甲基四環素,四環素,甘氨醯環素(如替加環素);u)其他類型的抗生素:番荔枝素,胂凡納明,細菌萜醇抑制劑(桿菌肽),DANAL/AR抑制劑(環絲氨酸),Dictyostatin,圓皮海綿內酯,軟瑚醇,埃博黴素,乙胺丁醇,依託泊苷,法羅培南,夫西地酸,呋喃唑酮,異煙肼,Laulimalide,甲硝唑,莫匹羅星,NAM合成抑制劑(磷黴素),呋喃妥因,紫杉醇,普蘭西黴素,吡嗪醯胺,奎奴普丁/達福普汀,利福平,他唑巴坦替硝唑,烏菊花素;4)抗病毒藥物:a)侵入/融合抑制劑:阿帕韋洛,馬拉韋羅,Vicriviroc,Gp41(恩夫韋肽),PRO 140,CD4(艾巴厘珠單抗);b)整合酶抑制劑:雷特格韋,Elvite-gravir,Globoidnan A;c)成熟抑制劑:Bevirimat,Vivecon;d)神經氨酸酶抑制劑:奧司他韋,紮那米韋,帕拉米韋;e)核苷和核苷酸:阿巴卡韋,阿昔單韋,阿德福韋,阿莫西韋,阿昔單抗,溴夫定,西多福韋,克拉夫定,地塞米松,去羥肌苷(ddI),Elvucitabine,恩曲他濱(FTC),恩替卡韋,泛昔洛韋,氟拉西林(5-FU),3’-氟取代的2’,3’-去氧核苷同系物,如3’-氟-2’,3’-雙去氧胸苷(FLT)和3’-氟-2’,3’-雙去氧鳥苷(FLG),福米韋生,9-鳥嘌呤,碘苷,拉米夫定(3TC),1-核苷(例如β-1-胸苷和β-1-2’-去氧胞苷),噴昔洛韋,racivir,利巴韋林,迪替丁,司他夫定(d4T),塔利巴韋林(Viramidine),替比夫定,替諾福韋,三氟尿苷伐昔洛韋,纈更昔洛韋,紮西他濱(ddC),齊多夫定(AZT); f)非核苷類:金剛烷胺,阿替吡啶,卡普韋林,二芳基嘧啶(依曲韋林,Rilpivirine),地拉夫定,二十二烷醇,乙米韋林,依法韋侖,膦甲酸(磷醯基甲酸),咪喹莫特,聚乙二醇幹擾素,洛韋胺,洛德腺苷,甲吲噻腙,奈韋拉平,NOV-205,長效幹擾素α,鬼臼毒素,利福平,金剛乙胺,瑞喹莫德(R-848),醋胺金剛烷;g)蛋白酶抑制劑:安普那韋,阿紮那韋,Boceprevir,Darunavir,福沙那韋,印地那韋,洛匹那韋,奈非那韋,普來可那立,利托那韋,沙奎那韋,Telaprevir(VX-950),替拉那韋;h)其它類型的抗病毒藥物:抗體酶,阿比朵爾,Aalanolide A,Ceragenin,氰維林-n,二芳基嘧啶,表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG),膦甲酸,格裡菲辛,Taribavirin(viramidine),羥基脲,KP-1461,米替福新,普來可那立,混成抑制劑,利巴韋林,Seliciclib;5)上述藥物的藥學上可接受的鹽、酸、衍生物、水合物或水合鹽;或多晶型結晶;或其光學異構體、外消旋物、非對映異構體或對映異構體。
- 如申請專利範圍第26項之藥物組合物,其中該協同治療藥物選自以下藥物中的一種或幾種:阿巴西普,阿巴黴素,醋酸阿比嗪,阿巴拉辛,對乙醯氨基酚/氫可酮,Acalabrutinib,阿杜卡單抗,阿達木單抗,ADXS31-142,ADXS-HER2,阿法替尼馬來酸,阿地白介素,Alectinib,阿侖單抗,阿利維A酸,ado-trastuzumab emtansine,安非他明/右旋安非他命,阿那曲唑,阿立呱唑,蒽環黴素,阿立呱唑,阿扎那韋,Atezolizumab,阿托伐他汀,阿維魯單抗,Axicabtagene ciloleucel,阿西替尼,貝利司他,BCG Live,貝伐單抗,貝沙羅汀,布列那圖單抗,硼替佐米,博蘇替尼,Brentuximab vedotin,布地奈德,布地奈德/福莫特羅,丁丙諾啡,卡巴他賽,卡博替尼,Capmatinib,卡培他濱,卡非佐米,嵌合抗原受體工程T細胞(CAR-T),塞來昔布,色瑞替尼,西妥昔單抗,西達本胺,環孢黴素,西那卡塞,克唑替尼,Cobimetinib,Cosentyx,克唑替尼,CTL019,達比加群酯,達拉非尼,達卡巴嗪,達利珠單抗,達克羅替尼,達托黴素,達拉圖單單抗,達比泊汀阿爾法,達魯那韋,達沙替尼,地尼白介素-白喉毒素,狄諾蘇單抗,丙戊酸鈉,地塞蘭索拉唑,右旋呱醋甲酯,地塞米松,地奈卡普,二努妥昔單抗,多西環素,度洛西汀,雙維利西布,杜瓦盧單抗,埃洛妥珠單抗,恩曲他濱/利匹韋林/替諾福韋酯,恩曲他濱/替諾福韋/埃法韋倫茨,依諾肝素,Ensartinib,恩雜魯胺,Epoetin α,厄洛替尼,埃索美拉唑,艾司佐匹克隆,依那西普,依維莫司,依西美坦,依維莫司,艾塞那肽,依澤替米貝,依澤替米貝/辛伐他汀,非諾貝特,非格司亭,芬戈莫德,丙酸氟替卡松,氟替卡松/沙美特羅,氟維司群,吉非 替尼,格拉替雷,醋酸戈舍瑞林,Icotinib,伊馬替尼,Ibritumomab tiuxetan,依魯替尼,Idelalisib,異環磷醯胺,英夫利昔單抗,咪喹莫特,ImmuCyst,Immuno BCG,Iniparib,門冬胰島素,地特胰島素,甘精胰島素,胰島素賴脯胰島素,幹擾素α,幹擾素α-1b,幹擾素α-2a,幹擾素α-2b,幹擾素β,幹擾素β1a,幹擾素β1b,幹擾素γ-1a,拉帕替尼,Ipilimumab,異丙托溴銨/沙丁胺醇,Ixazomib,Kanuma,醋酸蘭瑞肽,來那度胺,來那度胺,楽伐替尼甲磺酸鹽,來曲唑,左旋甲狀腺素,利多卡因,利奈唑胺,利拉魯肽,Lisdexamfetamine,LN-144,勞拉替尼,美金剛,呱甲酯,美托洛爾,曲美替尼,Mericitabine/利匹韋林/替諾福韋,莫達非尼,莫米他松,Mycidac-C,耐昔妥珠單抗,來那替尼,尼洛替尼,Niraparib,Nivolumab,奧法木單抗,奧濱尤妥珠單抗,奧拉帕尼,奧美沙坦酯,奧美沙坦/氫噻嗪,奧馬珠單抗,Omega-3脂肪酸乙酯,安珂瑞,奧司他韋,奧西替尼,羥可酮,帕博西尼,帕麗珠單抗,帕尼單抗,Panobinostat,帕唑帕尼,Pembrolizumab,PD-1抗體,PD-L1抗體,培美曲塞,帕妥珠單抗,肺炎球菌結合疫苗,泊馬度胺,普瑞巴林,ProscaVax,普萘洛爾,喹硫平,雷貝拉唑,鐳223化物,雷洛昔芬,雷特格韋,雷莫蘆單抗,雷珠單抗,瑞格列單,Ribociclib,利妥昔單抗,利伐沙班,羅米地辛,瑞舒伐他汀,魯素替尼磷酸鹽,沙丁胺醇,Savolitinib,素馬魯肽,司維拉姆,西地那非,司妥昔單抗,Sipuleucel-T,西他列汀,西他列汀/二甲雙胍,索非那新,Solanezumab,索尼吉布,索拉非尼,舒尼替尼,他克莫司,Tacrimus,他達拉非,他莫昔芬,達拉非尼,Talimogene laherparepvec,Talazoparib,特拉匹韋,Talazoparib,替莫唑胺,替西羅莫司,替諾福韋/恩曲他濱,替諾福韋酯,睾酮凝膠,沙利度胺,TICE BCG,噻托溴銨,Tisagenlecleucel,托瑞米芬,曲妥珠單抗,曲貝替定(Ecteinascidin 743),曲美替尼,Tremelimumab,三氟尿嘧啶/替吡嘧啶,維生素A酸,Uro-BCG,尤特克單抗,纈沙坦,維利帕尼,凡德他尼,維羅非尼,Venetoclax,伏立諾他,阿柏西普,Zostavax及其同系物、衍生物、藥學上可接受的鹽、載體、稀釋劑或其賦形劑,或上述組合。
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- 2019-05-03 TW TW108115437A patent/TWI753252B/zh active
Patent Citations (2)
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