EA030091B1 - Пептиды, выполняющие роль агонистов окситоцина - Google Patents

Пептиды, выполняющие роль агонистов окситоцина Download PDF

Info

Publication number
EA030091B1
EA030091B1 EA201692404A EA201692404A EA030091B1 EA 030091 B1 EA030091 B1 EA 030091B1 EA 201692404 A EA201692404 A EA 201692404A EA 201692404 A EA201692404 A EA 201692404A EA 030091 B1 EA030091 B1 EA 030091B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
ртос
rtos
alkyl
hydrogen
rotos
Prior art date
Application number
EA201692404A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201692404A1 (ru
Inventor
Катерина Биссанц
Конрад Блайгер
Кристоф Грундшобер
Original Assignee
Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=50842169&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA030091(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг filed Critical Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг
Publication of EA201692404A1 publication Critical patent/EA201692404A1/ru
Publication of EA030091B1 publication Critical patent/EA030091B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/50—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link
    • C07K7/54—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring
    • C07K7/56—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring the cyclisation not occurring through 2,4-diamino-butanoic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/16—Oxytocins; Vasopressins; Related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/22—Anxiolytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/32—Alcohol-abuse
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/36—Opioid-abuse
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Addiction (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к соединениям формулыгде Rявляется водородом, Cалкилом или Cциклоалкилом; Rявляется водородом; Rявляется водородом, Cалкилом, Cалкилом, замещенным гидроксильной группой, -(CH)C(O)NH, бензилом, фенилом, -CH-пятичленной ароматической гетероциклической группой, выбранной из имидазолильной и тиофенильной групп, CH-индолилом, -CH-Cциклоалкилом, Cциклоалкилом или -(CH)-S-Cалкилом; Rявляется водородом или Cалкилом; X представляет собой -C(O)-CHR-CHR-C(O)-NH-CH-; R/Rявляются водородом, или один из Rили Rпредставляет собой аминогруппу; о означает 0 или 1; или к их фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты, рацемической смеси или соответствующему энантиомеру и/или их оптическим изомерам. Было установлено, что настоящие соединения являются агонистами рецепторов окситоцина и могут применяться для лечения аутизма, стресса, тревоги, депрессии, шизофрении, психических расстройств, потери памяти, алкогольной абстиненции, лекарственной зависимости и синдрома Прадера-Вилли.

Description

Изобретение относится к соединениям формулы
где К1 является водородом, Сф-алкилом или Сз.бДиклоалкилом;
К2 является водородом;
К3 является водородом, С1--алкилом, С1--алкилом, замещенным гидроксильной группой, -(СН2)2С(О)ИН2, бензилом, фенилом, -СН2-пятичленной ароматической гетероциклической группой, выбранной из имидазолильной и тиофенильной групп, СН2-индолилом, -СН2-С3-6циклоалкилом, С3-6циклоалкилом или -(СН2)2-8-С1-7алкилом;
К3 является водородом или С1-7алкилом;
X представляет собой -С(О)-СНК4-СНК4'-С(О)-ИН-СН2-;
К4/К4 являются водородом, или один из К4 или К4 представляет собой аминогруппу; о означает 0 или 1;
или к их фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты, рацемической смеси или соответствующему энантиомеру и/или их оптическим изомерам.
Было обнаружено, что настоящие соединения являются агонистами рецепторов окситоцина, причем эти соединения представляют собой аналоги окситоцина, сохраняющие биологическую активность окситоцина. Такие молекулы-аналоги способны оказывать воздействие, аналогичное эндогенному окситоцину, включая связывание с рецептором окситоцина. Аналоги окситоцина имеют абсолютно новые молекулярные структуры.
Окситоцин представляет собой циклический пептидный гормон, содержащий девять аминокислот, с двумя цистеиновыми остатками, образующими дисульфидную связь между положениями 1 и 6. Человеческий окситоцин содержит последовательность Су8-Туг-11е-О1п-А8п-Су8-Рго-Реи-О1у.
Пептиды становятся коммерчески значимым классом лекарственных средств, обеспечивающим преимущество, состоящее в большей специфичности и эффективности при более низких профилях токсичности по сравнению с традиционными низкомолекулярными фармацевтическими продуктами. Они представляют интерес в плане возможностей терапии различных заболеваний, таких как сахарный диабет, ВИЧ (англ. Н1У, йишап ппшипобеПаепсу У1ги8 - вирус иммунодефицита человека), гепатит, онкологические заболевания и другие, при этом врачи и пациенты начинают все лучше относиться к лекарственным препаратам на основе пептидов. Настоящее изобретение относится к пептидным агонистам рецептора окситоцина, которые также включают естественный гормон окситоцин и карбетоцин.
Окситоцин представляет собой эффективное утеротоническое средство для регуляции атонии матки и избыточного кровотечения, применяемое в клинической практике для вызывания родов и, как показано, для улучшения стимуляции и поддержания лактации (О1тр1 е! а1., Рйу8ю1. Кеу., 81, (2001), 629-683, Кш8 е! а1., ВМ1, 283, (1981), 340-342). Карбетоцин (1-деамино-1-монокарба-[2-О-метилтирозин]окситоцин) также является сильным утеротоническим средством, применяемым в клинической практике для регуляции атонии матки и избыточного кровотечения.
Пептидные агонисты окситоцина могут применяться для лечения синдрома Прадера-Вилли, представляющего собой редкую генетическую аномалию, встречающуюся у одного ребенка из 25000.
Дальнейшие исследования показывают, что агонисты окситоцина находят применение для лечения воспаления и боли, включая боль в области живота и боль в спине (Уапд. 8рше, 19, 1994, 867-71), нарушения половой функции как у мужчин (ЫбЬетд е! а1., РПагтакор8усЫа!., 10, 1977, 21-25), так и у женщин (Апбет8оп-Нцп1, е! а1., ВМ1, 309, 1994, 929), синдрома раздраженного кишечника (1В8, Ьоиуе1 е! а1., Ои1, 39, 1996, 741-47), запора и желудочно-кишечной непроходимости (ОП188оп е! а1., №игода81тоеп!его1. МоБ1., 17, 2005, 697-704), аутизма (Но11апбет е! а1., №игор8усйорЬагт., 28, 2008, 193-98), стресса, включая посттравматическое стрессовое расстройство (ПТСР, англ. РТ8И) (Рйтап е! а1., Р8усЫа1ту Ке8еатсй, 48, 107-117), тревоги, включая тревожные расстройства, и депрессии (К1т8сй е! а1., 1. №ито8с1., 25, 49, 11489-93, ХУаИПегг е! а1., РИА§, 104, 2007, 16681-84), потери крови при хирургическом вмешательстве или регуляции послеродового кровотечения (Рирто!о е! а1., Ас!а ОЬ8!е!. Оупесо1., 85, 2006, 1310-14), стимуляции и поддержания родов (Р1атт е! а1., ОЬ8!е!. Оупесо1., 70, 1987, 70-12), заживления ран и ране- 1 030091
вых инфекций, мастита и рождения плаценты, а также остеопороза. Наряду с этим, агонисты окситоцина могут применяться для диагностики онкологических заболеваний и плацентарной недостаточности.
Кроме того, в статьях "БИгапакб ОхуЮст Ыоскк а1соНо1 \νί11ιάπι\γ;·ι1 ίη Нитап киЬ|ес1к (Интраназальный окситоцин блокирует алкогольную абстиненцию у человека" (А1соНо1 С1ш Ехр Кек, Уо1., Νο. 2012) и "Вгеакшд Не 1оор: ОхуЮсю ак а ро1епйа1 1геаПпеп1 Гог бгид аббюОоп (Разрыв замкнутой цепи: окситоцин в качестве потенциального лечения лекарственной зависимости" (Ногтопек апб Векауюг, 61, 2012 , 331339) предложено лечение алкогольной абстиненции и лекарственной зависимости с помощью агониста окситоцина.
Окситоцин и его рецепторы находятся в зонах головного мозга, вовлеченных в симптомы шизофрении, таких как прилежащее ядро и гиппокамп. Агонисты окситоциновых рецепторов могут применяться для лечения аутизма, стресса, включая посттравматическое стрессовое расстройство, тревоги, включая тревожные расстройства, депрессии, шизофрении, болезни Альцгеймера, психических расстройств, потери памяти и метаболических расстройств (АО 2012/016229).
Объектами настоящего изобретения являются новые соединения формулы I и применение соединений формулы I и их фармацевтически приемлемых солей для лечения заболеваний ЦНС (англ. ΟΝδ, сеп1га1 пегуоик кук1ет - центральная нервная система), связанных с окситоциновым рецептором, к которым относятся аутизм, стресс, включая посттравматическое стрессовое расстройство, тревога, включая тревожные расстройства, депрессия, шизофрения, психические расстройства, потеря памяти, алкогольная абстиненция, лекарственная зависимость, а также для лечения синдрома Прадера-Вилли.
Другим объектом изобретения является получение новых соединений формулы I и содержащих их лекарственных средств.
Настоящее изобретение может предложить селективные эффективные соединения, обеспечивающие альтернативные варианты и/или улучшения при лечении некоторых заболеваний ЦНС, включающих аутизм, стресс, в том числе посттравматическое стрессовое расстройство, тревогу, в том числе тревожные расстройства, депрессию, шизофрению, психические расстройства, потерю памяти, алкогольную абстиненцию, лекарственную зависимость, а также при лечении синдрома Прадера-Вилли.
Было обнаружено, что настоящие пептиды обладают очень высокой селективностью в отношении рецепторов вазопрессина У1а и У2, как показано в таблице. Это может иметь значительное преимущество при применении в качестве лекарственного средства для предотвращения побочных эффектов. Такие физиологические эффекты можно считать нежелательными побочными эффектами в случае лекарственных средств, нацеленных на лечение заболеваний центральной нервной системы. Таким образом, желательно получить лекарственные средства, обладающие селективностью в отношении рецептора окситоцина по сравнению с рецептором вазопрессина.
При использовании в данном контексте термин "низший алкил" означает группу с насыщенной прямой или разветвленной цепью, содержащую от 1 до 7 атомов углерода, например метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, 2-бутил, трет-бутил и тому подобное.
Термин "низший алкил, замещенный гидроксильной группой" означает низшую алкильную группу, такую как определена выше, где по меньшей мере один атом водорода замещен гидроксильной группой.
Термин "циклоалкил" означает циклическую алкильную цепь, содержащую от 3 до 6 атомов углерода.
При использовании в данном контексте термин "пятичленная ароматическая гетероциклическая группа" означает имидазолильную, тиофенильную, фуранильную, пирролильную, пиразолильную, оксазолильную, оксадиазолильную или изоксазолильную группу.
Термин "фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты" включают в себя соли с неорганическими и органическими кислотами, такими как соляная кислота, азотная кислота, серная кислота, фосфорная кислота, лимонная кислота, муравьиная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, уксусная кислота, янтарная кислота, винная кислота, метансульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота и т.п.
Предпочтительным пятичленным гетероциклическим кольцом является имидазольное кольцо.
Предпочтительными являются соединения формулы I, где о соответствует 0.
Еще одним вариантом осуществления являются соединения формулы I, где К1 означает метил или циклопропил.
Были получены и испытаны на агонистическую активность в отношении окситоцинового рецептора следующие конкретные соединения:
- 2 030091
- 3 030091
- 4 030091
- 5 030091
- 6 030091
Соединения в данной работе синтезировали при помощи стандартных методов химии твердофазного синтеза пептидов, используя методики с защитными группами Ртос (англ. 9-йиогепу1те1ЬохусагЬоиу1 9-флуоренилметоксикарбонил) и Вос (англ. 1ег1-Ьи1охусагЬоиу1 - трет-бутоксикарбонил). Реакции, осуществляемые вручную, проводили при комнатной температуре, тогда как пептидный синтез с помощью микроволнового излучения выполняли при повышенной температуре.
Описание примеров осуществления изобретения.
Общее описание синтеза
Циклические пептиды могут быть получены либо с помощью циклизации на гранулах (стратегия с использованием А11у1/А1ос (англ. А11у1 - аллил; А1ос, а11у1охусагЬоиу1 - аллилоксикарбонил), методика А), либо в виде полностью незащищенных линейных пептидов путем циклизации в жидкой фазе (методика В).
Линейные пептиды синтезировали вручную или при помощи технологии с использованием микроволнового излучения посредством современных протоколов твердофазного синтеза (Ртос-химия), как указано, например, в работе: Какез апб А1Ьейсю, Ебз., "8ойб Рказе 5уп1Пе818: А ртасйса1 дшбе (Твердофазный синтез: Практическое руководство)", Магсе1 Эескег. №\ν Уогк, Вазе! 2000. В качестве твердого носителя использовали смолу Теи1аОе1-8-КАМ (0,24 мг-экв/г). Все Ртос-аминокислоты добавляли в 4кратном избытке после активации при помощи активационных реагентов НОВ1/НВТИ (англ. НОВк, ΝНубгохуЬеп/о1па/о1е - Ν-гидроксибензотриазол; НВТИ, О-Ьеп/о1па/о1е- ^^№,№-1е1гате1Ьу1игошит ЬехаЯиогоркозрЬаке - гексафторфосфат О-бензотриазол-Н^№,№-тетраметилурония), 1:1 (0,5 моль/л в ДМФА (англ. ΌΜΡ, άίιικίΐινί Гогтапибе -диметилформамид)), и 4 экв. Э1РЕА (англ. Ν,Νбн8оргору1е1ку1атте - Ν,Ν-диизопропилэтиламин) (2 моль/л в ΝΜΡ (англ. У-Ме111у1-2-руггоПбопе - Νметилпирролидон)). Отщепление Ртос-защитной группы осуществляли с помощью 20% раствора пиперидина в ДМФА.
Отщепление аллила (А11у1)/аллилоксикарбонила (А1ос) и циклизация лактама
Методика А.
Связанные со смолой пептиды обрабатывали вручную раствором 20 экв. фенилсилана в ДХМ (англ. Ό0Μ, бюЫототеШаие - дихлорметан) и 0,05 экв. тетракис-(трифенилфосфин)палладия в течение 30 мин при комнатной температуре (англ. КТ, гоот 1етрега1ига - комнатная температура). Данную процедуру
- 7 030091
повторяли. Смолу промывали 0,5% раствором дитиокарбамата натрия в ДМФА. Для образования лактама на гранулах в смолу снова добавляли активационный реагент и встряхивали в течение еще 8 ч при комнатной температуре. Завершение циклизации подтверждали при помощи нингидриновой реакции.
Методика В.
Пептиды циклизовали в растворе после снятия защиты, отщепления смолы и стандартной обработки. Неочищенные пептиды обрабатывали стандартными реагентами активации пептидов в ДМФА. Циклизацию контролировали методом ВЭЖХ (англ. НРЬС, ЬфЬ регГогтапсе Ьсццб сЬгота!одгарЬу - высокоэффективная жидкостная хроматография).
Отщепление и обработка
К смоле добавляли смесь для отщепления, содержащую трифторуксусную кислоту, триизопропилсилан и воду (95/2,5/2,5), и встряхивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Отщепленные пептиды осаждали в холодном диэтиловом эфире (-18°С). Пептиды центрифугировали, остаток дважды промывали холодным диэтиловым эфиром. Остатки повторно растворяли в смеси вода/ацетонитрил и лиофилизировали.
Очистка
Пептиды очищали при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенными фазами (ОФ-ВЭЖХ (англ. КР-НРЬС)), используя колонку КергокрЬег 100 С18-Т (100x4,6 мм, размер частиц 5 мкм) в качестве неподвижной фазы и смесь вода/ацетонитрил в качестве элюента (градиент 1-50% МеСЫ в течение 30 мин). Фракции собирали и анализировали при помощи ЖХ/МС (англ. ЬС/Μδ, Ыцшй СЬготаЮщарЬ Ма88 8рес!готе1ег- жидкостная хроматография с масс-спектрометрией). Образцы чистого продукта объединяли и лиофилизировали. Все пептиды были получены в виде порошкообразных веществ белого цвета, имеющих чистоту более 85%. Продукт идентифицировали при помощи массспектрометрии.
Все стандартные аминокислоты приобретали в компании СЕМ. Ртос-8АК-ОН и Ртос-Νциклопропилглицин приобретали в компаниях ВасЬет и Епапипе. соответственно. моно-1Ви-сукцинат приобретали в компании 8щта-А1бпсЬ
Синтез моноаллилсукцината
Раствор 46 ммоль 4-трет-бутокси-4-оксобутановой кислоты (Ъщта-АИпсЬ) в 70 мл ТГФ (англ. ТНР, 1е1гаЬубгоГигаи - тетрагидрофуран) и 92 ммоль ΌΙΡΕΑ охлаждали до 0°С. После чего по каплям прибавляли раствор 55 ммоль 3-йодпроп-1-ена (Р1ика) в 6 мл ТГФ, нагревали до КТ и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь экстрагировали водным раствором бикарбоната, сушили над сульфатом натрия и отгоняли растворитель. Получали 3,7 г масла коричневого цвета. Технический продукт очищали при помощи хроматографии на кизельгеле и получали 3,4 г сложного диэфира. Промежуточный продукт растворяли в 10 мл ДХМ, при комнатной температуре добавляли 5 мл ТФУК (ТРА, ТпЯиогоасеЬс АсМ - трифторуксусная кислота) и перемешивали в течение ночи. Растворитель и ТФУК отгоняли и получали 1,6 г конечного продукта.
Подробное описание синтеза примера 1 приведено для дополнительной иллюстрации условий синтеза.
Синтез пептида
Пептид синтезировали, используя микроволновую технологию СЕМ с периодами связывания 5 мин на аминокислоту при повышенной температуре (78°С) и в масштабе 0,25 ммоль. Синтез осуществляют, используя в качестве твердого носителя смолу Теп1а1Се1-8 КАМ (0,24 мг-экв/г). Все используемые аминокислоты растворяли в ДМФА до концентрации 0,2 моль. Для активации аминокислот использовали смесь активационных реагентов НОВ1/НВТИ, 1:1 (0,5 моль/л), 4 экв., и Э1РЕА, 4 экв. Отщепление защитной группы Ртос осуществляли с помощью пиперидина в ДМФА (20%) в течение 3 мин. Отщепление Ртос повторяли.
Отщепление А1ос- и А11у1Смолу обрабатывали вручную раствором 20 экв. фенилсилана и 0,05 экв. тетракис(трифенилфосфин)палладия в ДХМ (5 мл) в течение 30 мин при комнатной температуре. Данную процедуру повторяли. Смолу дважды промывали 0,5% раствором дитиокарбамата натрия в ДМФА. Стадию промывки повторяли с ДХМ.
Циклизация на гранулах (методика А)
Как и в предыдущем случае, в смолу добавляли связывающий реагент (4 мл 0,5 моль/л раствора НОВ1/НВТИ (1:1) и 1 мл Э1РЕА (4 экв.) в ДМФА). Суспензию встряхивали в течение приблизительно 8 ч при комнатной температуре. Смолу дважды промывали ДМФА и ДХМ. Завершение циклизации подтверждали при помощи нингидриновой реакции.
Отщепление со смолы
К смоле добавляли 10 мл смеси для отщепления (ТФУК; ТИС; вода (95/2,5/2,5)) и встряхивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Отщепленный пептид осаждали в холодном диэтиловом эфире (-18°С). Пептид центрифугировали и осадки дважды промывали холодным диэтиловым эфиром. Осадок растворяли в смеси Н2О/ацетонитрил и лиофилизировали с получением 210 мг порошка белого цвета.
- 8 030091
Все прочие аналоги получали в соответствии с методикой В, используя циклизацию вне гранул. Циклизация вне гранул (методика В)
Неочищенный пептид растворяли в ДМФА (15 мл). Добавляли 1 экв. конденсирующих реагентов РуаОР (0,5 моль/л) в ДМФА и ΌΙΡΕΑ в ΝΜΡ (2 моль/л). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. После завершения реакции (контроль ЖХ-МС) содержание ДМФА концентрировали приблизительно до 2 мл. Остаток осаждали в холодном (-18°С) диэтиловом эфире (40 мл). Пептид центрифугировали и осадок промывали холодным диэтиловым эфиром.
Очистка
Неочищенный пептид очищали методом препаративной ВЭЖХ на колонке КертокрЬет 100 С18-Т (100x4,6 мм, размер частиц 5 мкм). В качестве системы для элюирования использовали смесь 0,1% ТФУК/вода/ацетонитрил с градиентом 0-50% ацетонитрила в течение от 0 до 30 мин. Фракции собирали и проверяли при помощи аналитической ВЭЖХ. Фракции, содержащие чистый продукт, объединяли и лиофилизировали. Получали 7,2 мг порошкообразного вещества белого цвета.
Все прочие пептиды, указанные ниже, синтезировали соответственно этому.
Сокращения.
Ршос: 9-флуоренилметоксикарбонил.
(Ви: трет-бутил.
О1у: глицин.
РЬе: фенилаланин.
СЬа: циклогексилаланин.
СЬд: циклогексилглицин.
Сус1орторО1у: Ν-циклопропилглицин.
8ат: саркозин.
11е: изолейцин.
Ьеи: лейцин.
Ме: норлейцин.
Ννα: норвалин.
ЛФ: аминоизомасляная кислота.
Рго: пролин.
А1а: аланин.
Уа1: валин.
ЬотоУа1: гомовалин.
МеУа1: Ь-а-метилвалин.
Ηίδ(ΤτΙ): гистидин с тритил-защищенными боковыми цепями (англ. ТгПук ЬтрЬепу1те1Ьу1 - трифенилметил).
Αδη(Ττί): аспарагин стритил-защищенными боковыми цепями.
Ο1η(Ττί): глутамин стритил-защищенными боковыми цепями.
8ет(1Ви): серин с трет-бутил-защищенными боковыми цепями.
ТутДВи): тирозин с трет-бутил-защищенными боковыми цепями.
ТЬт(1Ви): треонин с трет-бутил-защищенными боковыми цепями.
НОВТ: Ν-гидроксибензотриазол.
СОМИ: гексафторфосфат 1-[(1-(циано-2-этокси-2-оксоэтилиденаминоокси)диметиламиноморфолино)]урония.
РуаОР: гексафторфосфат (7-азабензотриазол-1-илокси)трипирролидинофосфония.
НВТИ: гексафторфосфат О-бензотриазол-КХМИ-тетраметилурония.
ДМФА (англ. ΌΜΡ): Ν,Ν-диметилформамид.
ΝΜΡ: Ν-метилпирролидон.
ΌΙΡΕΑ: Ν,Ν-диизопропилэтиламин.
ДХМ (англ. ЭСМ): дихлорметан.
МеСМ ацетонитрил.
Пример 1 (сравнительный).
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-О1у-ОН, Ртос-Ьеи-ОН, Ртос-Ρ^о-ОΗ, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-А§п(Тг1)-ОН, Ртос-О1п(Тт1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Тут(1Ви)-ОН и моноЧВисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 971,1; наблюдаемая 971,2.
- 9 030091
Пример 2.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-Ьеи-ОН, Ртос-8аг-ОН, РтосОар(Л1ос)-ОН. Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-О1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и РтосЛ8р(Л11у1)-ОН. МС (М+Н'): ожидаемая 960,0; наблюдаемая 960,8.
Пример 3.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-Ьеи-ОН, Ртос-8аг-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моноЧВисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 945,0; наблюдаемая 945,5.
Пример 4.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-Ьеи-ОН, Ртос-8ЛК-ОН, РтосИар(А1ос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН, Ртос-ΌА8рОА11у1. МС (М+Н+): ожидаемая 960,0; наблюдаемая 960,8.
Пример 5.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-Уа1-ОН, Ртос-8аг-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-А8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моноЧВисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 931,0; наблюдаемая 931,1.
Пример 6.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-Ыуа-ОН, Ртос-8аг-ОН, Ртос- 10 030091
Иар(Вос)-ОН, Ртос-Л8п(Тг1)-ОН, Ртос-О1п(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-1Висукцинат. МС (М+Н'): ожидаемая 945,0; наблюдаемая 945,2.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-МеУа1-ОН, Ртос-Рго-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8п(Тг1)-ОН, Ртос-О1п(Тй)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моноНВисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 985,0; наблюдаемая 985,2.
Пример 8 (сравнительный).
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-Ме1-ОН, Ртос-Рго-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8п(Тг1)-ОН, Ртос-О1п(Тй)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моноНВисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 989,1; наблюдаемая 989,5.
Пример 9 (сравнительный).
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Рго-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8п(Тг1)-ОН, Ртос-О1п(Тй)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моноНВисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 971,0; наблюдаемая 971,5.
Пример 10 (сравнительный).
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-Тйг(1Ви)-ОН, Ртос-Рго-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8п(Тг1)-ОН, Ртос-О1п(Тй)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моноНВисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 959,0; наблюдаемая 959,5.
- 11 030091
Пример 11 (сравнительный).
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-8ет(1Ви)-ОН, Ртое-Рто-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тт1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Тут(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 945,0; наблюдаемая 945,5.
Пример 12 (сравнительный).
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-Уа1-ОН, Ртос-Рго-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тт1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Тут(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 957,0; наблюдаемая 957,6.
Пример 13 (сравнительный).
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-С1и(Тт1)-ОН, Ртос-Рго-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 986,0; наблюдаемая 986,5.
Пример 14 (сравнительный).
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-РЬеОН, Ртос-Рго-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 1005,0; наблюдаемая 1006,8.
Пример 15 (сравнительный).
- 12 030091
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-Н18(Тг1)ОН, Ртое-Рго-ОН, РтосОар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н'): ожидаемая 995,0; наблюдаемая 996,7.
Пример 16 (сравнительный).
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-Тгр(Вос)-ОН, Ртос-Рго-ОН, РтосОар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 1044,10; наблюдаемая 1045,4.
Пример 17 (сравнительный).
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-Ыуа-ОН, Ртос-Рго-ОН, РтосОар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 957,0; наблюдаемая 957,5.
Пример 18 (сравнительный).
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-СНа-ОН, Ртос-Рго-ОН, РтосОар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 1011,1; наблюдаемая 1011,5.
Пример 19 (сравнительный).
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-РЬд-ОН, Ртос-Рго-ОН, РтосОар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 991,0; наблюдаемая 991,5.
- 13 030091
Пример 20 (сравнительный).
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-СНд-ОН, Ртос-Рго-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тт1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Тут(1Ви)-ОН и моно-ΐΒιιсукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 997,0; наблюдаемая 997,5.
Пример 21 (сравнительный).
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-ТП-ОН, Ртос-Рго-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 1011,1; наблюдаемая 1011,4.
Пример 22 (сравнительный).
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-Ьото1_еи-ОН, Ртос-Рго-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 985,1; наблюдаемая 985,5.
Пример 23.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-МеЬеи-ОН, Ртос-8аг-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 959,0; наблюдаемая 959,5.
Пример 24.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-СНд-ОН, Ртос-8аг-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 971,0; наблюдаемая 971,2.
- 14 030091
Пример 25.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-Ьото1_еи-ОН, Ртос-8аг-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н'): ожидаемая 959,0; наблюдаемая 959,1.
Пример 26.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-Ме1-ОН. Ртос-8аг-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 963,1; наблюдаемая 963,6.
Пример 27.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-Ыуа-ОН, Ртос-8аг-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 931,0; наблюдаемая 931,5.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-8аг-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 945,0; наблюдаемая 945,5.
Пример 29.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-ТЬг(1Ви)-ОН, Ртос-8аг-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-1Висукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 933,0; наблюдаемая 933,6.
- 15 030091
Пример 30.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-8ег(1Ви)-ОН, Ртос-8аг-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н'): ожидаемая 919,0; наблюдаемая 919,4.
Пример 31.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-СНа-ОН, Ртос-8аг-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 985,1; наблюдаемая 985,6.
Пример 32.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-8аг-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 960,0; наблюдаемая 960,8.
Пример 33.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-РЬе-ОН, Ртос-8аг-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 979,0; наблюдаемая 979,3.
Пример 34.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-ТЫ-ОН, Ртос-8аг-ОН, РтосИар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 985,1; наблюдаемая 985,6.
- 16 030091
Пример 35.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-Н18(Тт1)-ОН, Ртос-8ат-ОН, РтосОар(Вос)-ОН, Ртос-Л$п(Тг1)-ОН. Ртос-С1и(Тт1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Тут(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 969,0; наблюдаемая 969,9.
Пример 36.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-Тгр(Вос)-ОН, Ртос-8аг-ОН, РтосЭар(Вос)-ОН. Ртос-Л$п(Тг1)-ОН. Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 1018,0; наблюдаемая 1018,6.
Пример 37.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-РЬд-ОН, Ртос-8аг-ОН, РтосОар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 965,0; наблюдаемая 965,2.
Пример 38.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-Ьеи-ОН, Ртос-Сус1оргорС1у-ОН, Ртос-Оар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 971,1; наблюдаемая 971,8.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-С1у-ОН, Ртос-МеУа1-ОН, Ртос-Сус1оргорС1у-ОН,
Ртос-Оар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-С1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 985,1; наблюдаемая 985,6.
- 17 030091
Пример 40.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-О1у-ОН, Ртос-Уа1-ОН, Ртос-Сус1оргорО1у-ОН, Ртос-Иар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-О1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 957,0; наблюдаемая 957,5.
Пример 41.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-О1у-ОН, Ртос-Л1Ь-ОН, Ртос-Сус1оргорО1у-ОН, Ртос-Иар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-О1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 943,0; наблюдаемая 943,5.
Пример 42.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-О1у-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Сус1оргорО1у-ОН, Ртос-Иар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-О1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и монс-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 971,1; наблюдаемая 971,6.
Пример 43.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-О1у-ОН, Ртос-СНд-ОН, Ртос-Сус1оргорО1у-ОН, Ртос-Иар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-О1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно-Шисукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 997,1; наблюдаемая 997,6.
Пример 44.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-О1у-ОН, Ртос-ТЬг(1Ви)-ОН, Ртос-Сус1оргорО1уОН, Ртос-Иар(Вос)-ОН, Ртос-Л8и(Тг1)-ОН, Ртос-О1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моноШи-сукцинат. МС (М+Н+): ожидаемая 959,0; наблюдаемая 959,5.
- 18 030091
Пример 45.
Использовали следующие аминокислоты: Ртос-О1у-ОН, Ртос-8ег(1Ви)-ОН, Ртос-Сус1оргорО1уОН, Ртос-Эар(Вос)-ОН, Ртос-Акп(Тг1)-ОН, Ртос-О1и(Тг1)-ОН, Ртос-11е-ОН, Ртос-Туг(1Ви)-ОН и моно(Ви-сукцинат. МС (М+Н'): ожидаемая 945,0; наблюдаемая 945,5.
Материалы и методы
Клеточные культуры и получение стабильного клона.
Клетки ЯКХ (англ. СНО, СЫпек Натк1ег Оуагу - яичника китайского хомячка) трансфицировали экспрессирующими плазмидами, кодирующими либо человеческий рецептор У1а, либо человеческий рецептор окситоцина (ОТК), либо человеческий рецептор У2, последний в сочетании с химерным Ос.|55 О-белком, для переориентации сигнала на кальциевый поток. Стабильные клетки клонировали с помощью предельного разведения, получая моноклональные клеточные линии, экспрессирующие либо человеческие рецепторы У1а, либо человеческие рецепторы У2+Ос.|55. либо человеческие рецепторы ОТК, и отбирали на основании функциональных откликов, выявляемых на спектрофотометре для чтения планшетов для визуализации флуоресценции (анг. РЬ1РК, йиоготейю ипащпд р1а!е геайег), определяя кальциевый поток в клетке после активации рецептора. Стабильные клеточные линии выращивали в питательной смеси Р-12 К (модификация КащИп), содержащей 10% эмбриональную бычью сыворотку (англ. РВ§, Гое1а1 Ъоуше кегит), 1% пенициллин-стрептомицин, 1% Ь-глутамат, 200 мкг/мл генетицина, при 37°С в 10% СО2-инкубаторе при влажности 95%.
Анализ потоков кальция с использованием флуоресцентной визуализации (на спектрофотометре для чтения планшетов для визуализации флуоресценции, англ. РЫРК).
В день, предшествующий анализу, клетки высевали при плотности 50000 клеток/лунку в черные 96луночные планшеты с прозрачным дном, позволяющим осуществлять осмотр клеток и измерение флуоресценции с дна каждой лунки. Плотность клеток была достаточной для получения конфлюентного монослоя на следующий день. Для каждого эксперимента готовили свежий сбалансированный солевой раствор Хэнкса без фенолового красного, содержащий 20 мМ НЕРЕ8 (англ. К-2-Иуйгохуе1ку1-р|рега/1пе-К-2еШапекийошс аай - И-2-гидроксиэтилпиперазин-Х-2-этансульфоновая кислота) (рН 7,3) и 2,5 мМ пробенецида (аналитический буфер). Разведения соединений в аналитическом буфере, содержащем 1% ДМСО (англ. ИМ§О, Й1те(Иу1 8и1Гох1Йе - диметилсульфоксид), осуществляли при помощи лабораторной автоматизированной станции Весктап Вютек 2000. Буфер для введения красителя содержал Р1ио-4-АМ (растворенный в ДМСО и плюроновой кислоте) с конечной концентрацией 2 мкМ в аналитическом буфере. Из лунок удаляли имевшуюся в них культурную среду, в каждую лунку добавляли по 100 мкл буфера с красителем и инкубировали в течение приблизительно 60 мин при температуре 37°С в 5% СО2инкубаторе при влажности 95%. После однократного введения красителя клетки тщательно промывали аналитическим буфером на устройстве для промывания клеток ЕтЪ1а с целью удаления всего несвязанного красителя. В каждой лунке оставляли ровно 100 мкл аналитического буфера.
Каждый из 96-луночных планшетов, содержащих клетки с красителем, помещали в прибор РЫРК и устанавливали интенсивность лазерного излучения на уровень, подходящий для обнаружения низких значений базового уровня флуоресценции. Для изучения соединений в качестве агонистов 25 мкл разведенного соединения добавляли в планшет через 10 секунд после начала измерений флуоресценции и регистрировали флуоресцентный отклик в течение 5 мин. Данные флуоресценции нормализовали по результатам доза-ответ эндогенного полного агониста, принимая за 100% максимальный отклик и за 0% минимальный. Каждую кривую зависимости "концентрация агониста-отклик" строили следующим образом, используя логистическое уравнение с четырьмя параметрами из Мюгокой Ехсе1 ХЫП:
¥=Минимум+((Максимум-Минимум)/(1+10(ЬодЕС50-Х)пН)), где у означает нормализованную флуоресценцию в %, минимум соответствует минимальному значению у, максимум - максимальному значению у, 1одЕС50 представляет собой 1о§10 концентрации, дающей 50% максимальной индуцированной флуоресценции, х представляет собой 1од10 концентрации соединения-агониста, а Н означает наклон кривой (коэффициент Хилла). Максимальное значение дает эффективность соединения, испытываемого в качестве агониста, в %. Концентрация агониста, обеспечивающая половину максимального отклика, соответствует величине ЕС50, логарифм которой дает значение рЕС50.
- 19 030091
Для конкретных пептидов могут быть представлены следующие значения ЕС50 (нМ) и эффективность (%) вместе со сравнительными данными в отношении НУ1а и НУ2.
пр им ер РОТ ЕС5„(нМ)/э ффективно сгь (%) ЬУ1а ЕС6„ (нМ) ЕС50 (нМ)/эфф ективност ь (%) Пр им ер МОТ ЕС50(нМ)/э ффективно сть (%) 1Ш1а ес50 (нМ)/эфф екгивност Ь (%) Ιτν2 ЕС50 (нМ)/эфф ективност ь (%)
1 1/105 512 5 216/130 24 0,5/104 >27000 152/120
2 4/144 >27 000 25 0,8/103 >27000 213/118
3 0,9/113 >27 000 612/130 26 0,5/107 >27000 281/119
4 5/126 - - 27 0,8/107 >27000 282/114
5 0,7/111 >27 000 1126/123 28 0,5/109 >27000 1385/119
6 1/119 >27 000 364/104 29 0,6/109 >27000 2068/113
7 3/101 - - 30 2/109 - -
8 1/134 31 0,5/107 >27000 199/126
9 1/132 - - 32 5/112 - -
10 1/130 - - 33 3/111 - -
11 3/128 - - 34 3/106 - -
12 1,6/130 - - 35 4/111 - -
13 8/128 - - 36 2/111 - -
14 6/122 - - 37 0,2/112 >27000 53/121
15 8/123 - - 38 0,38/126 >27000 626/146
16 4/100 - - 39 1,3/108 - -
17 0,6/114 351 116/116 40 0,6/106 - -
18 2/130 - - 41 2,5/108 - -
19 0,4/114 470 59/114 42 0,37/115 - -
20 0,9/117 562 174/112 43 0,26/110 - -
21 4/126 - - 44 0,9/115 - -
22 0,8/109 391 176/106 45 0,8/117 - -
23 3/123 - -
Соединения формулы I и фармацевтически приемлемые соли соединений формулы I можно применять в качестве лекарственных средств, например, в форме фармацевтических препаратов. Фармацевтические препараты предпочтительно можно вводить трансдермальным, интраназальным, подкожным или внутривенным (в/в) путем.
Трансдермальное введение представляет собой способ введения, при котором активные ингредиенты доставляются через кожу для системного распределения. Примеры включают в себя трансдермальные пластыри, применяемые для доставки лекарственного средства, и трансдермальные имплантаты, применяемые для медицинских или эстетических целей.
Назальное введение можно применять для доставки лекарственных средств для оказания местного или системного действия, при этом достаточно широко распространены назальные спреи для местного применения. Пептидные лекарственные средства можно вводить в виде назальных спреев во избежание разложения лекарственного средства после перорального введения.
Для введения пептидных лекарственных средств также широко распространены подкожные инъекции. Внутримышечная инъекция представляет собой инъекцию вещества непосредственно в мышцу. Этот способ является одним из нескольких альтернативных способов введения лекарственных средств. Такой способ часто применяют для конкретных форм лекарственного средства, вводимых в небольших количествах. Инъекции следует вводить под кожу.
Внутривенный путь представляет собой инфузию жидких веществ непосредственно в вену. По сравнению с другими способами введения внутривенное введение является самым быстрым способом доставки жидкостей и лекарственных средств по всему организму.
Фармацевтические препараты также могут содержать консерванты, растворители, стабилизаторы, увлажняющие агенты, эмульгаторы, подсластители, красители, ароматизаторы, соли для регулирования осмотического давления, буферные агенты, маскирующие агенты или антиокислители. Они могут также содержать и другие терапевтически ценные вещества.
Лекарственные средства, содержащие соединение формулы I или его фармацевтически приемле- 20 030091
мую соль и терапевтически инертный носитель, также являются объектом настоящего изобретения, как и способ их получения, включающий в себя объединение одного или более соединений формулы I и/или их фармацевтически приемлемых солей присоединения кислоты и, при необходимости, одного или более других терапевтически ценных веществ в галеновую лекарственную форму вместе с одним или более терапевтически инертным носителем.
Наиболее предпочтительными показаниями в соответствии с настоящим изобретением являются показания, включающие в себя расстройства центральной нервной системы, например, лечение или предупреждение аутизма, стресса, включая посттравматическое стрессовое расстройство, тревоги, включая тревожные расстройства, депрессии, шизофрении, психических расстройств, потери памяти, алкогольной абстиненции, лекарственной зависимости, а также лечение синдрома Прадера-Вилли.
Дозировка может варьироваться в широких пределах и, разумеется, ее следует регулировать в зависимости от индивидуальных потребностей в каждом конкретном случае. Доза для взрослых может меняться приблизительно от 0,01 до 1000 мг в сутки соединения общей формулы I или соответствующее количество фармацевтически приемлемой соли. Суточную дозу можно вводить в виде однократной дозы либо разделенными дозами, при этом верхний предел также может быть превышен, когда для этого появляются показания.
1. Соединение формулы

Claims (9)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    где К1 является водородом, С^алкилом или С3-6циклоалкилом;
    К2 является водородом;
    К3 является водородом, С1-7алкилом, С1-7алкилом, замещенным гидроксильной группой, -(СН2)2С(О)МН2, бензилом, фенилом, -СН2-пятичленной ароматической гетероциклической группой, выбранной из имидазолильной и тиофенильной групп, СН2-индолилом, -СН2-С3-6циклоалкилом, С3-6циклоалкилом или -(СН2)2-§-С1-7алкилом;
    К3 является водородом или С1-7алкилом;
    X представляет собой -С(О)-СНК4-СНК4'-С(О)-МН-СН2-;
    К4, К4 являются водородом, или один из К4 или К4 представляет собой аминогруппу; о означает 0 или 1;
    или его фармацевтически приемлемая соль присоединения кислоты, рацемическая смесь или соответствующий энантиомер и/или его оптические изомеры.
  2. 2. Соединение формулы I по п.1, где К1 представляет собой метил или циклопропил.
  3. 3. Соединение формулы I по п.1, где о означает 0.
  4. 4. Соединение формулы I, выбранное из
    - 21 030091
    - 22 030091
    - 23 030091
    - 24 030091
    - 25 030091
    - 26 030091
  5. 5. Фармацевтическая композиция, обладающая агонистической активностью в отношении рецептора окситоцина, содержащая соединение по любому из пп.1-4 и фармацевтически приемлемый носитель и/или адъювант.
  6. 6. Применение фармацевтической композиции по п.5 для лечения аутизма, стресса, тревоги, депрессии, шизофрении, психических расстройств, потери памяти, алкогольной абстиненции, лекарственной зависимости и синдрома Прадера-Вилли.
  7. 7. Применение соединения по любому из пп.1-4 в качестве агониста рецептора окситоцина.
  8. 8. Применение соединения по любому из пп.1-4 в качестве терапевтически активного вещества для лечения аутизма, стресса, тревоги, депрессии, шизофрении, психических расстройств, потери памяти, алкогольной абстиненции, лекарственной зависимости и синдрома Прадера-Вилли.
  9. 9. Применение соединения по любому из пп.1-4 для получения лекарственного средства для терапевтического и/или профилактического лечения аутизма, стресса, тревоги, депрессии, шизофрении, психических расстройств, потери памяти, алкогольной абстиненции, лекарственной зависимости и синдрома Прадера-Вилли.
EA201692404A 2014-06-03 2015-06-01 Пептиды, выполняющие роль агонистов окситоцина EA030091B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP14170992 2014-06-03
PCT/EP2015/062054 WO2015185467A1 (en) 2014-06-03 2015-06-01 Peptides as oxytocin agonists

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201692404A1 EA201692404A1 (ru) 2017-05-31
EA030091B1 true EA030091B1 (ru) 2018-06-29

Family

ID=50842169

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201692404A EA030091B1 (ru) 2014-06-03 2015-06-01 Пептиды, выполняющие роль агонистов окситоцина

Country Status (16)

Country Link
US (1) US9957298B2 (ru)
EP (1) EP3151849B1 (ru)
JP (1) JP6412170B2 (ru)
KR (1) KR20170004013A (ru)
CN (1) CN106414479B (ru)
AU (1) AU2015270723A1 (ru)
CA (1) CA2949173A1 (ru)
CL (1) CL2016003095A1 (ru)
CR (1) CR20160563A (ru)
EA (1) EA030091B1 (ru)
IL (1) IL248553A0 (ru)
MX (1) MX2016015873A (ru)
PE (1) PE20161559A1 (ru)
PH (1) PH12016502232A1 (ru)
SG (1) SG11201610073PA (ru)
WO (1) WO2015185467A1 (ru)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HRP20240166T1 (hr) 2014-09-19 2024-04-26 Ferring B.V. Postupak liječenja prader-willijevog sindroma
AU2018340867B2 (en) * 2017-09-28 2021-05-27 Kinoxis Therapeutics Pty Ltd Metabolite inspired selective oxytocin receptor agonists
TW202031283A (zh) * 2018-09-20 2020-09-01 馬克 Ｃ 曼寧 穩定卡貝縮宮素鼻內製劑
EP3852724A4 (en) 2018-09-20 2022-07-06 Levo Therapeutics, Inc. CARBETOCIN DRUG PRODUCT AND PROCESS FOR ITS MANUFACTURE

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009122285A1 (en) * 2008-03-31 2009-10-08 Ferring B.V. Oxitocin analogues
WO2011035330A2 (en) * 2009-09-21 2011-03-24 Ferring International Center S.A. Oxytocin receptor agonists

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE9701162D0 (sv) * 1997-03-27 1997-03-27 Karolinska Innovations Ab New use II
KR20070022753A (ko) * 2004-05-26 2007-02-27 화이자 인코포레이티드 인다졸 및 인돌론 유도체 및 이의 약제로서의 용도
EA019833B1 (ru) * 2007-01-22 2014-06-30 ДЖиТиЭкс, ИНК. Вещества, связывающие ядерные рецепторы
EP2337783A1 (en) * 2008-09-23 2011-06-29 F. Hoffmann-La Roche AG Isoxazolo[4,5]pyridin-3-yl-piperazin derivatives useful as modulatorsof dopamine d3 receptors
WO2010127968A1 (en) * 2009-05-05 2010-11-11 F. Hoffmann-La Roche Ag Isoxazole-pyridazine derivatives
EP2482835B1 (en) * 2009-10-01 2014-07-02 The University Of Sydney Therapy and prevention of problem drinking
JP6067878B2 (ja) 2012-12-21 2017-01-25 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ オキシトシンアゴニストとしてのペプチド

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009122285A1 (en) * 2008-03-31 2009-10-08 Ferring B.V. Oxitocin analogues
WO2011035330A2 (en) * 2009-09-21 2011-03-24 Ferring International Center S.A. Oxytocin receptor agonists

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CLARK W. SMITH, RODERICH WALTER, STANLEY MOORE, RAYMOND C. MAKOFSKE, JOHANNES MEIENHOFER: "Replacement of the disulfide bond in oxytocin by an amide group. Synthesis and some biological properties of [cyclo-(1-L-aspartic acid, 6-L-.alpha.,.beta.-diaminopropionic acid)]oxytocin", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, vol. 21, no. 1, 1 January 1978 (1978-01-01), pages 117 - 120, XP055103882, ISSN: 00222623, DOI: 10.1021/jm00199a023 *
JAKE L. STYMIEST, BRYAN F. MITCHELL, SUSAN WONG, JOHN C. VEDERAS: "Synthesis of Oxytocin Analogues with Replacement of Sulfur by Carbon Gives Potent Antagonists with Increased Stability", JOURNAL OF ORGANIC CHEMISTRY, WILLIAMS & WILKINS, US, vol. 70, no. 20, 30 September 2005 (2005-09-30), US, pages 7799 - 7809, XP002669141, ISSN: 0022-3263, DOI: 10.1021/jo050539l - *
Roderich Walter ET AL.: "A Neurohypophyseal Hormone Analog with Selective Oxytocin-Like Activities and Resistance-to Enzymatic Inactivation: An Approach to the Design of Peptide Drugs* (conformation/hormone action/smooth muscle contractility/induction of labor)", 1 May 1974 (1974-05-01), pages 1901-1905, XP055203170, Retrieved from the Internet: URL:http://www.pnas.org/content/71/5/1901.full.pdf [retrieved on 2015-07-17], figures 1, 3 *
WIŚNIEWSKI K, ALAGARSAMY S, GALYEAN R, TARIGA H, THOMPSON D, LY B, WIŚNIEWSKA H, QI S, CROSTON G, LAPORTE R, RIVIÈRE P J, SCHTEING: "New, potent, and selective peptidic oxytocin receptor agonists.", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, vol. 57, no. 12, 26 June 2014 (2014-06-26), pages 5306 - 5317, XP002742425, ISSN: 0022-2623, DOI: 10.1021/jm500365s *

Also Published As

Publication number Publication date
EP3151849B1 (en) 2018-10-10
CL2016003095A1 (es) 2017-06-16
CN106414479B (zh) 2021-08-03
IL248553A0 (en) 2016-12-29
CR20160563A (es) 2017-01-06
KR20170004013A (ko) 2017-01-10
CN106414479A (zh) 2017-02-15
JP2017518311A (ja) 2017-07-06
US20170081369A1 (en) 2017-03-23
MX2016015873A (es) 2017-03-27
EA201692404A1 (ru) 2017-05-31
AU2015270723A1 (en) 2016-11-17
PH12016502232A1 (en) 2017-01-09
EP3151849A1 (en) 2017-04-12
CA2949173A1 (en) 2015-12-10
JP6412170B2 (ja) 2018-10-24
WO2015185467A1 (en) 2015-12-10
PE20161559A1 (es) 2017-01-12
SG11201610073PA (en) 2016-12-29
US9957298B2 (en) 2018-05-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA026687B1 (ru) Пептиды в качестве агонистов окситоцина
JP3042887B2 (ja) 血栓塞栓症疾患を診断するための像形成剤としての放射線標識された血小板ＧＰ▲ＩＩ▼ｂ／▲ＩＩＩ▼ａ受容体アンタゴニスト
EP3152225B1 (en) Peptides as oxytocin agonists
EA030091B1 (ru) Пептиды, выполняющие роль агонистов окситоцина
WO2009131191A1 (ja) メタスチン誘導体およびその用途
KR20190117541A (ko) 신규 화합물 (이뮤노렐린)
US20230203096A1 (en) Epha4 targeting compounds and methods of use thereof
TW202404643A (zh) 化合物及用途

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM RU