KR20170004013A - 옥시토신 작용제인 펩티드 - Google Patents
옥시토신 작용제인 펩티드 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20170004013A KR20170004013A KR1020167036060A KR20167036060A KR20170004013A KR 20170004013 A KR20170004013 A KR 20170004013A KR 1020167036060 A KR1020167036060 A KR 1020167036060A KR 20167036060 A KR20167036060 A KR 20167036060A KR 20170004013 A KR20170004013 A KR 20170004013A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- fmoc
- tbu
- lower alkyl
- hydrogen
- anxiety
- Prior art date
Links
- JPGYBVPIXLOBBD-FRXJWSSMSA-N CCC(C)C(C(N[C@@H](CCC(N)=O)C(N[C@@H](CC(N)=O)C(N[C@@H](CNC(CCC(N[C@@H](Cc(cc1)ccc1O)C1=O)=O)=O)C(N(CCC2)C2C(N[C@@H](Cc2ccc[s]2)C(NCC(N)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)[NH+]1[NH-] Chemical compound CCC(C)C(C(N[C@@H](CCC(N)=O)C(N[C@@H](CC(N)=O)C(N[C@@H](CNC(CCC(N[C@@H](Cc(cc1)ccc1O)C1=O)=O)=O)C(N(CCC2)C2C(N[C@@H](Cc2ccc[s]2)C(NCC(N)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)[NH+]1[NH-] JPGYBVPIXLOBBD-FRXJWSSMSA-N 0.000 description 1
- 0 CCC(C)C(C(N[C@@](CCC(N)=O)C(N[C@@](CC(N)=O)C(*[C@@](CNC(CCC(N[C@]1Cc(cc2)ccc2O)=O)=O)C(N(CC(N[C@](C(C)C)C(NCC(N)=O)=O)=O)C2CC2)=O)=O)=O)=O)NC1=O Chemical compound CCC(C)C(C(N[C@@](CCC(N)=O)C(N[C@@](CC(N)=O)C(*[C@@](CNC(CCC(N[C@]1Cc(cc2)ccc2O)=O)=O)C(N(CC(N[C@](C(C)C)C(NCC(N)=O)=O)=O)C2CC2)=O)=O)=O)=O)NC1=O 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/16—Oxytocins; Vasopressins; Related peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/50—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link
- C07K7/54—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring
- C07K7/56—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring the cyclisation not occurring through 2,4-diamino-butanoic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/22—Anxiolytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/24—Antidepressants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
- A61P25/32—Alcohol-abuse
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
- A61P25/36—Opioid-abuse
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Abstract
본 발명은 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 산 부가 염, 라세미 혼합물 또는 이의 상응하는 거울상 이성질체 및/또는 광학 이성질체에 관한 것이다:
화학식 I
상기 식에서,
R1은 수소, 저급 알킬 또는 사이클로알킬이고,
R2는 수소이거나,
R1 및 R2는 이들이 부착된 N 및 C 원자와 함께 1 또는 2개의 F 원자 또는 하이드록시로 선택적으로 치환된 피롤리딘 고리를 형성하거나, 아제티딘 또는 피페라진 고리를 형성하고;
R3은 수소, 저급 알킬, 하이드록시로 치환된 저급 알킬, -(CH2)2C(O)NH2, 벤질, 페닐, -CH2-5원 방향족 헤테로환형 기, CH2-인돌일, -CH2-사이클로알킬, 사이클로알킬 또는 -(CH2)2-S-저급 알킬이고;
R3'는 수소 또는 저급 알킬이고;
X는 -C(O)-CHR4-CHR4'-C(O)-NH-CH2-이고;
R4 및 R4'는 수소이거나, R4 및 R4' 중 하나는 아미노이고;
o는 0 또는 1이다.
본 발명의 화합물이 자폐증, 외상후 스트레스 장애를 비롯한 스트레스, 불안 장애 또는 우울증을 비롯한 불안, 정신분열증, 정신 질환, 기억 상실, 알코올 금단 증상, 약물 중독 또는 프라더-윌리 증후군의 치료를 위한 옥시토신 수용체 작용제임이 밝혀졌다.
화학식 I
상기 식에서,
R1은 수소, 저급 알킬 또는 사이클로알킬이고,
R2는 수소이거나,
R1 및 R2는 이들이 부착된 N 및 C 원자와 함께 1 또는 2개의 F 원자 또는 하이드록시로 선택적으로 치환된 피롤리딘 고리를 형성하거나, 아제티딘 또는 피페라진 고리를 형성하고;
R3은 수소, 저급 알킬, 하이드록시로 치환된 저급 알킬, -(CH2)2C(O)NH2, 벤질, 페닐, -CH2-5원 방향족 헤테로환형 기, CH2-인돌일, -CH2-사이클로알킬, 사이클로알킬 또는 -(CH2)2-S-저급 알킬이고;
R3'는 수소 또는 저급 알킬이고;
X는 -C(O)-CHR4-CHR4'-C(O)-NH-CH2-이고;
R4 및 R4'는 수소이거나, R4 및 R4' 중 하나는 아미노이고;
o는 0 또는 1이다.
본 발명의 화합물이 자폐증, 외상후 스트레스 장애를 비롯한 스트레스, 불안 장애 또는 우울증을 비롯한 불안, 정신분열증, 정신 질환, 기억 상실, 알코올 금단 증상, 약물 중독 또는 프라더-윌리 증후군의 치료를 위한 옥시토신 수용체 작용제임이 밝혀졌다.
Description
본 발명은 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 산 부가 염, 라세미 혼합물 또는 이의 상응하는 거울상 이성질체 및/또는 광학 이성질체에 관한 것이다:
[화학식 I]
상기 식에서,
R1은 수소, 저급 알킬 또는 사이클로알킬이고,
R2는 수소이거나,
R1 및 R2는 이들이 부착된 N 및 C 원자와 함께 1 또는 2개의 F 원자 또는 하이드록시로 선택적으로 치환된 피롤리딘 고리를 형성할 수 있거나, 아제티딘 또는 피페라진 고리를 형성할 수 있고;
R3은 수소, 저급 알킬, 하이드록시로 치환된 저급 알킬, -(CH2)2C(O)NH2, 벤질, 페닐, -CH2-5원 방향족 헤테로환형 기, CH2-인돌일, -CH2-사이클로알킬, 사이클로알킬 또는 -(CH2)2-S-저급 알킬이고;
R3'는 수소 또는 저급 알킬이고;
X는 -C(O)-CHR4-CHR4'-C(O)-NH-CH2-이고;
R4 및 R4'는 수소이거나, R4 및 R4' 중 하나는 아미노이고;
o는 0 또는 1이다.
본 발명 화합물이 옥시토신 수용체 작용제(agonist)로서 이는 옥시토신 생-활성을 나타내는 옥시토신 유사체임이 밝혀졌다. 이러한 유사체 분자는, 옥시토신 수용체와 결함함을 비롯한, 내생(endogenous) 옥시토신과 유사한 방식으로 작용할 수 있다. 옥시토신의 유사체는 완전히 신규한 분자 구조를 가진다.
옥시토신은 1 및 6 위치에서 다이설파이드 가교를 형성하는 2개의 시스테인 잔기를 가지는 9개의 아미노산 환형 펩티드 호르몬이다. 인간 옥시토신은 Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly의 서열을 포함한다.
전형적인 소분자 약제보다 더 우수한 특이성, 잠재성 및 더 낮은 독성 프로파일의 이점을 제공하는 상업적인 관련 부류의 약으로서 펩티드가 나와있다. 이는 의사 및 펩티드계 약물을 더 잘 수용할 수 있는 환자에게 다양한 질병, 예컨대 당뇨병, HIV, 간염, 암 등에 대한 유망한 치료 옵션을 제공한다. 본 발명은, 천연 호르몬 옥시토신 및 카베토신을 또한 포함하는, 펩티드계 옥시토신 수용체 작용제에 관한 것이다.
옥시토신은, 출산을 유도하기 위해 임상적으로 사용되는, 자궁이완증 및 과출혈의 조절을 위한 강력한 자궁수축제이고, 모유 수유의 시작 및 유지를 강화한다고 보고되어 있다(문헌[Gimpl et al., Physiol. Rev., 81, (2001), 629-683, Ruis et al., BMJ, 283, (1981), 340-342)] 참조). 카베토신(1-데아미노-1-카바-2-티로신(O-메틸)-옥시토신) 또한 자궁이완증 및 과출혈의 조절을 위해 임상적으로 사용되는 강력한 자궁수축제이다.
펩티드계 옥시토신 작용제는, 25,000명 당 1명의 어린이가 걸리는 희귀 유전 질병인 프라더-윌리(Prader-Willi) 증후군의 치료에 사용될 수 있다.
추가적인 연구는 옥시토신 작용제가, 복통 및 요통을 비롯한 염증 및 통증(문헌[Yang, Spine, 19, 1994, 867-71]), 남성 성기능 장애(문헌[Lidberg et al., Phannakopsychiat, 10, 1977, 21-25]) 및 여성 성기능 장애(문헌[Anderson-Hunt, et al., BMJ, 309, 1994, 929]), 과민성 대장 증후군(IBS, 문헌[Louvel et al., Gut, 39, 1996, 741-47]), 변비 및 위장관 폐쇄(문헌[Ohlsson et al., Neurogastroenterol. Motil., 17, 2005, 697-704]), 자폐증(문헌[Hollander et al., Neuropsychopham., 28, 2008, 193-98]), 외상후 스트레스 장애(PTSD)를 비롯한 스트레스(문헌[Pitman et al., Psychiatry Research, 48, 107 -117]), 불안 장애 또는 우울증을 비롯한 불안(문헌[Kirsch et al., J. Neurosci., 25, 49, 11489-93, Waldherr et al., PNAS, 104, 2007, 16681-84)]), 수술후 혈액 손실 또는 분만후 출혈 조절(문헌[Fujimoto et al., Acta Obstet. Gynecol., 85, 2006, 1310-14]), 출산 유도 및 유지(문헌[Flamm et al., Obstet. Gynecol., 70, 1987, 70-12]), 상처 치료 및 감염, 유방염 및 태반 만출, 및 골다공증의 치료에 유용하다는 것을 나타낸다. 추가적으로, 옥시토신 작용제는 암 및 태반 기능부전의 진단에 유용할 수 있다.
또한, 논문["Intranasal Oxytocin blocks alcohol withdrawal in human subjects", Alcohol Clin Exp Res, Vol, No. 2012] 및 논문["Breaking the loop: Oxytocin as a potential treatment for drug addiction", Hormones and Behavior, 61, 2012 , 331-339]은 옥시토신 작용제로 알코올 금단 증상 및 약물 중독을 치료할 것을 제안한다.
옥시토신 및 이의 수용체는 뇌의 정신분열증의 증상에 관련된 부분, 예컨대 측위 신경핵 및 해마에 존재한다. 옥시토신 수용체 작용제는 자폐증, 외상후 스트레스 장애를 비롯한 스트레스, 불안 장애 또는 우울증을 비롯한 불안, 정신분열증, 알츠하이머병, 정신질환, 기억상실 및 대사성 질병의 치료를 위해 사용될 수 있다(국제특허출원공개 제2012/016229호).
본 발명의 목적은 화학식 I의 신규한 화합물, 화학식 I의 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염의 옥시토신 수용체와 관련된 CNS 질병의 치료를 위한 용도이고, 이때 상기 질병은 자폐증, 외상후 스트레스 장애를 비롯한 스트레스, 불안 장애 또는 우울증을 비롯한 불안, 정신분열증, 정신 질환, 기억 상실, 알코올 금단 증상, 약물 중독 또는 프라더-윌리 증후군이다.
추가적인 목적은 화학식 I의 신규한 화합물 및 이를 함유하는 약제의 제조이다.
본 발명은 특정 CNS 질병, 예컨대 자폐증, 외상후 스트레스 장애를 비롯한 스트레스, 불안 장애 또는 우울증을 비롯한 불안, 정신분열증, 정신 질환, 기억 상실, 알코올 금단 증상, 약물 중독 또는 프라더-윌리 증후군의 치료에 대안 및/또는 개선을 제공하는 선택적이고 효과적인 화합물을 제공할 수 있다.
본 펩티드가 표에 제시된 바와 같이 바소프레신 수용체 V1a 및 V2에 대해 매우 우수한 선택성을 가짐이 입증되었다. 이는 약제로서 사용시 부작용을 피할 수 있는 주요 이점을 가질 수 있다. 이러한 생리학적 효과는, 중추신경계 질병의 치료를 위한 약물의 경우, 바람직하지 않은 부작용인 것으로 간주될 수 있다. 따라서, 옥시토신 수용체 대 바소프레신 수용체에 대한 선택성을 가지는 약물을 수득하는 것이 바람직하다.
본원에서 사용된 용어 "저급 알킬"은 1 내지 7개의 탄소 원자를 함유하는 포화 직쇄 또는 분지쇄 기, 예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, n-부틸, i-부틸, 2-부틸 및 t-부틸 등을 나타낸다.
용어 "하이드록시로 치환된 저급 알킬"은 하나 이상의 수소 원자가 하이드록시 기로 대체된 상기 정의된 저급 알킬을 나타낸다.
용어 "사이클로알킬"은 3 내지 6개의 탄소 원자를 함유하는 환형 알킬 쇄를 나타낸다.
본원에서 사용된 용어 "5원 방향족 헤테로환형 기"는 이미다졸일, 티오페닐, 퓨라닐, 피롤일, 피라졸일, 옥사졸일, 옥사다이아졸일 또는 이소옥사졸일 기를 나타낸다.
용어 "약학적으로 허용되는 산 부가 염"은 무기 및 유기 산, 예컨대 염산, 질산, 황산, 인산, 시트르산, 폼산, 퓨마르산, 말레산, 아세트산, 석신산, 타르타르산, 메탄설폰산 및 p-톨루엔설폰산 등과의 염을 포함한다.
바람직한 5원 헤테로환형 고리는 이미다졸 고리이다.
o가 0인 화학식 I의 화합물이 바람직하다.
추가 양태는 R1이 메틸 또는 사이클로프로필인 화학식 I의 화합물이다.
추가 양태는 R1 및 R2가 이들이 부착된 N 및 C 원자와 함께 피롤리딘 고리를 형성할 수 있는 화학식 I의 화합물이다.
하기 특정 화합물이 제조되었고, 옥시토신 수용체에 대한 이들의 작용제 활성에 대해 시험되었다:
본원의 화합물은 Fmoc 및 Boc 방법 둘 다를 활용한 고상(solid phase) 펩티드 화학에서의 표준 방법으로 합성되었다. 수동으로 수행된 반응은 실온에서 수행되었고, 마이크로파-보조된 펩티드 합성은 더 고온에서 수행되었다.
일반적인 합성 기술:
환형 펩티드는 온-비드(on-bead) 환화(알릴/Aloc 전략 방법 A)를 통해 생성될 수 있거나, 용액상(solution phase) 환화(방법 B)를 통해 완전히 탈보호된 선형 펩티드로서 생성될 수 있다.
선형 펩티드를 수동으로 또는 종래 기술의 고상 합성 프로토콜(Fmoc-화학)을 통한 마이크로파 기술을 사용하여 합성하였다(문헌[Kates and Albericio, Eds., “Solid Phase Synthesis: A practical guide”, Marcel Decker, New York, Basel, 2000] 참조). 고체 지지체로서, 텐타젤(TentaGel)-S-RAM 수지(0.24 meq/g)를 사용하였다. HOBT/HBTU 1:1(DMF 중 0.5 mol/L) 및 4당량의 DIPEA(NMP 중 2 mol/L)로 활성화한 후에 모든 Fmoc-아미노산을 4배 과량으로 첨가하였다. Fmoc-절단(cleavage)은 DMF 중 20%의 피페리딘으로 달성하였다.
알릴/Aloc-절단 및 락탐-환화:
방법 A: 상기 수지-연결된 펩티드를, 실온에서 30분 동안 DCM 중 페닐실란(20당량) 및 테트라키스 트라이페닐포스핀 팔라듐(0.05당량)의 용액으로 처리하였다. 이 절차를 반복하였다. 상기 수지를 DMF 중 0.5% 나트륨 다이티오카바메이트의 용액으로 세척하였다. 온-비드 락탐의 형성을 위해, 활성화 시약을 다시 수지에 첨가하고, 실온에서 추가로 8시간 동안 진탕하였다. 환화의 완료는 닌하이드린(Ninhydrin)-시험을 통해 확인하였다.
방법 B: 펩티드를 탈보호 및 수지로부터의 절단 및 표준 후처리 후 용액 중에서 환화시켰다. 조질 펩티드를 DMF 중 표준 펩티드 활성화 시약으로 처리하였다. 환화를 HPLC를 통해 모니터링하였다.
절단 및 후처리:
트라이플루오로아세트산, 트라이이소프로필실란 및 물(95/2.5/2.5)로 이루어진 절단-칵테일을 수지에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 진탕하였다. 절단된 펩티드를 차가운 에터(-18℃)에서 침전시켰다. 상기 펩티드를 원심분리하고, 잔사를 차가운 에터로 2회 세척하였다. 상기 잔사를 다시 물/아세토니트릴에 용해시키고, 동결건조시켰다.
정제:
펩티드를, 정지상으로서 레프로스퍼(Reprospher) 100 C18-T 컬럼(100 x 4.6 mm, 입자 크기 5 μ) 및 용리액으로서 물/아세토니트릴(30분에 걸쳐 구배 1 내지 50%의 MeCN)을 사용하는 역상 고성능 액체 크로마토그래피(RP-HPLC)를 사용하여 정제하였다. 분획을 수집하고, LC/MS로 분석하였다. 순수한 생성물 샘플을 합하고, 동결건조시켰다. 모든 펩티드를 85% 초과의 순도를 가진 백색 분말로서 수득하였다. 생성물의 확인을 질량 분석기로 수행하였다.
모든 표준 아미노산을 CEM으로부터 구입하였다. Fmoc-SAR-OH 및 Fmoc-N-사이클로프로필-글리신을 바켐(Bachem) 및 에나민(Enamine)으로부터 각각 구입하였다. 모노-tBu-석시네이트를 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)로부터 구입하였다.
모노-알릴 석시네이트의 합성:
70 mL THF 및 92 mmol DIPEA 중 46 mmol의 4-tert-부톡시-4-옥소부탄산(시그마-알드리치)의 용액을 0℃까지 냉각하였다. 이어서, 6 mL의 THF 중 55 mmol의 3-요오도프로프-1-엔(플루카(Fluka))의 용액을 적가하고, 실온까지 가온하고, 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 바이카보네이트로 추출하고, 나트륨 설페이트 상에서 건조시키고, 용매를 증발시켰다. 3.7 g의 갈색 오일을 수득하였다. 조질 물질을 키셀겔(Kieselgel) 크로마토그래피를 통해 정제하여 3.4 g의 다이-에스터를 수득하였다. 중간체를 10 mL DCM에 용해시키고, 5 mL의 TFA를 실온에서 첨가하고, 밤새 교반하였다. 용매 및 TFA를 증발시켜 1.6 g의 최종 생성물을 수득하였다.
실시예 1의 합성을 위한 구체적인 기술이 합성 조건을 추가로 설명하기 위하여 제공된다:
펩티드 합성:
고온(78℃) 및 0.25 mmol 크기로 아미노산 당 5분의 커플링 시간 동안 CEM 마이크로파 기술을 사용하여 펩티드를 합성하였다. 상기 합성은 고체 지지체로서 텐탈겔(TentalGel)-S RAM 수지(0.24 meq/g)를 사용하여 수행되었다. 사용된 모든 아미노산을 DMF에 0.2몰 농도로 용해시켰다. HOBT/HBTU 1:1(4당량, 0.5 mol/L) 및 DIPEA(4당량)의 혼합물을 아미노산을 활성화시키는 데 사용하였다. Fmoc-절단을 3분 동안 DMF 중 피페리딘(20%)으로 달성하였다. Fmoc-절단을 반복하였다.
Aloc- 및 알릴-절단:
상기 수지를 실온에서 30분 동안 DCM(5 mL) 중 페닐실란(20당량) 및 테트라키스트라이페닐포스핀 팔라듐(0.05당량)의 용액으로 수동으로 처리하였다. 이러한 절차를 반복하였다. 상기 수지를 DMF 중 나트륨 다이티오카바메이트(0.5%)의 용액으로 세척하였다. 상기 세척 단계를 DCM으로 반복하였다.
온-비드 환화(방법 A):
DMF 중 커플링제(4 mL의 HOBT/HBTU(1:1, 0.5 mol/L 용액) 및 1 mL의 DIPEA(4당량))를 다시 상기 수지에 첨가하였다. 슬러리를 실온에서 약 8시간 동안 진탕하였다. 수지를 DMF 및 DCM으로 2회 세척하였다. 환화의 완결을 닌하이드린 시험으로 확인하였다.
수지로부터의 절단:
절단-칵테일(TFA; TIS; 물 (95/2.5/2.5), 10 mL)을 상기 수지에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 진탕하였다. 절단된 펩티드를 차가운 에터(-18℃)에서 침전시켰다. 상기 펩티드를 원심분리하고, 침전물을 차가운 에터로 2회 세척하였다. 침전물을 H2O/아세토니트릴에 용해시키고, 동결건조시켜 백색 분말(210 mg)을 수득하였다.
오프-비드(off-bead) 환화 전략을 사용하는 방법 B의 경우 모든 다른 유사체가 생성되었다.
오프-비드 환화(방법 B):
조질 펩티드를 DMF(15 mL)에 용해시켰다. DMF 중 1당량의 커플링 시약 PyaOP(0.5 mol/L) 및 NMP 중 DIPEA(2 mol/L)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후(LCMS 조절), DMF 함량을 약 2 mL까지 농축시켰다. 잔사를 차가운(-18℃) 다이에틸 에터(40 mL)에서 침전시켰다. 펩티드를 원심분리하고, 침전물을 차가운 에터로 세척하였다.
정제:
조질 펩티드를 레프로스퍼 l00 C18-T 컬럼(100 x 4.6 mm, 5 ㎛의 입자 크기) 상의 제조용 HPLC로 정제하였다. 용리액 시스템으로서 0 내지 30분 내에 0 내지 50%의 아세토니트릴의 구배를 가지는 TFA/물/아세토니트릴(0.1%)의 혼합물을 사용하였다. 분획을 수집하고, 분석용 HPLC로 분석하였다. 순수한 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 동결건조시켰다. 백색 분말(7.2 mg)을 수득하였다.
하기 열거된 모든 다른 펩티드를 이와 마찬가지로 합성하였다.
약어:
Fmoc: 9-플루오렌일메톡시카보닐
tBu: tert-부틸
Gly: 글리신
Phe: 페닐알라닌
Cha: 사이클로헥실알라닌
Chg: 사이클로헥실글리신
CyclopropGly: N-사이클로프로필글리신
Sar: 사르코신
Ile: 이소류신
Leu: 류신
Nle: 노르류신
Nva: 노르발린
Aib: 아미노이소부티르산
Pro: 프롤린
Ala: 알라닌
Val: 발린
homoVal: 호모발린
MeVal: L-α-메틸-발린
His(Trt): 측쇄-보호된(트리틸) 히스티딘
Asn(Trt): 측쇄-보호된(트리틸) 아스파라긴
Gln(Trt): 측쇄-보호된(트리틸) 글루타민
Ser(tBu): 측쇄-보호된(tert-부틸) 세린
Tyr(tBu): 측쇄-보호된(tBu) 티로신
Thr(tBu): 측쇄-보호된(tBu) 트레오닌
HOBT: N-하이드록시벤조트라이아졸
COMU: 1-[(1-(시아노-2-에톡시-2-옥소에틸리덴아미노옥시) 다이메틸아미노모폴리노)] 우로늄 헥사플루오로포스페이트
PyoAP: (7-아자벤조트라이아졸-1-일옥시) 트라이피롤리디노-포스포늄 헥사플루오로포스페이트
HBTU: O-벤조트라이아졸-N,N,N',N'-테트라메틸-우로늄-헥사플루오로포스페이트
DMF: N,N-다이메틸폼아미드
NMP: N-메틸피롤리돈
DIPEA: N,N-다이이소프로필아민
DCM: 다이클로르메탄
MeCN: 아세토니트릴
실시예 1
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 971.1; 관측치 971.2.
실시예 2
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Dap(Aloc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 Fmoc-Asp(알릴)-OH. MS (M+H+): 예측치 960.0; 관측치 960.8.
실시예 3
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 945.0; 관측치 945.5.
실시예 4
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-SAR-OH, Fmoc-Dap(Aloc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-D-AspO알릴. MS (M+H+): 예측치 960.0; 관측치 960.8.
실시예 5
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 931.0; 관측치 931.1.
실시예 6
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Nva-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 945.0; 관측치 945.2.
실시예 7
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-MeVal-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 985.0; 관측치 985.2.
실시예 8
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 989.1; 관측치 989.5.
실시예 9
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 971.0; 관측치 971.5.
실시예 10
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 959.0; 관측치 959.5.
실시예 11
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 945.0; 관측치 945.5.
실시예 12
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 957.0; 관측치 957.6.
실시예 13
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 986.0; 관측치 986.5.
실시예 14
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-PheOH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 1005.0; 관측치 1006.8.
실시예 15
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 995.0; 관측치 996.7.
실시예 16
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 1044.10; 관측치 1045.4.
실시예 17
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Nva-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 957.0; 관측치 957.5.
실시예 18
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Cha-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 1011.1; 관측치 1011.5.
실시예 19
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Phg-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 991.0; 관측치 991.5.
실시예 20
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Chg-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 997.0; 관측치 997.5.
실시예 21
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Thi-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 1011.1; 관측치 1011.4.
실시예 22
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-homoLeu-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 985.1; 관측치 985.5.
실시예 23
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-MeLeu-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 959.0; 관측치 959.5.
실시예 24
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Chg-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 971.0; 관측치 971.2.
실시예 25
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-homoLeu-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 959.0; 관측치 959.1.
실시예 26
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 963.1; 관측치 963.6.
실시예 27
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Nva-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 931.0; 관측치 931.5.
실시예 28
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 945.0; 관측치 945.5.
실시예 29
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 933.0; 관측치 933.6.
실시예 30
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 919.0; 관측치 919.4.
실시예 31
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Cha-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 985.1; 관측치 985.6.
실시예 32
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 960.0; 관측치 960.8.
실시예 33
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 979.0; 관측치 979.3.
실시예 34
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Thi-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 985.1; 관측치 985.6,
실시예 35
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 969.0; 관측치 969.9.
실시예 36
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 1018.0; 관측치 1018.6.
실시예 37
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Phg-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 965.0; 관측치 965.2.
실시예 38
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-CyclopropGly-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 971.1; 관측치 971.8.
실시예 39
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-MeVal-OH, Fmoc-CyclopropGly-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 985.1; 관측치 985.6.
실시예 40
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-CyclopropGly-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 957.0; 관측치 957.5.
실시예 41
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Aib-OH, Fmoc-CyclopropGly-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 943.0; 관측치 943.5.
실시예 42
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-CyclopropGly-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 971.1; 관측치 971.6.
실시예 43
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Chg-OH, Fmoc-CyclopropGly-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 997.1; 관측치 997.6.
실시예 44
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-CyclopropGly-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 959.0; 관측치 959.5.
실시예 45
하기 아미노산을 사용하였다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-CyclopropGly-OH, Fmoc-Dap(Boc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH 및 모노-tBu 석시네이트. MS (M+H+): 예측치 945.0; 관측치 945.5.
재료 및 방법
세포 배양 및 안정한 클론 생성
중국 햄스터 난소(Chinese Hamster Ovary, CHO) 세포를, 인간 V1a, 인간 옥시토신(OTR) 또는 인간 V2 수용체를 코딩하는 발현 플라스미드로 형질감염시키고, 이어서, 칼슘 플럭스(flux)에 대한 신호를 재전송하도록 키메라 Gqs5 G 단백질과 조합으로 형질감염시켰다. 안정한 세포를 제한적으로 희석함으로써 클로닝하여 인간 V1a, 인간 V2+Gqs5 또는 인간 OTR 수용체를 발현시키는 모노클론 세포주를 수득하고, 수용체 활성화 이후에 세포에서 칼슘 플럭스를 검출하는 형광 이미지화 판 판독기(FLIPR)에서 검출된 작용성 반응에 기초하여 선택하였다. 안정한 세포주를 95% 습도 하에 10% CO2 항온처리기에서, 37℃에서 소태아혈청(FBS, 10%), 페니실린-스트렙토마이신(1%), L-글루타메이트(1%), 제네티신(200 μg/mL)을 함유하는 F-12 K 뉴트리언트 믹스쳐(Nutrient Mixture)(카인즈 모디피케이션(Kaighns Modification))에서 성장시켰다.
형광 이미지화(형광 이미지화 판 판독기,
FLIPR
)를 사용하는 칼슘 플럭스 분석
분석 전날 오후에, 깨끗한 바닥을 가진 흑색 96 웰 플레이트에 세포를 50,000 세포/웰의 밀도로 평판배양하여 세포 검사 및 각각의 웰의 바닥으로부터의 형광 측정을 가능하게 하였다. 세포의 밀도는 다음날 융합성(confluent) 단층을 얻기에 충분하였다. 페놀 레드(Red) 없이, 20 mM의 HEPES(pH 7.3) 및 2.5 mM 프로베네시드(분석 완충제)를 포함하는 행크스(Hanks) 균형 염 용액을 각각의 실험을 위해 깨끗하게 준비하였다. 1% DMSO를 포함하는 분석 완충제에서 베크만 바이오멕(Beckman Biomek) 2000 실험실용 자동 워크스테이션을 이용하여 화합물 희석액을 제조하였다. 염료-담지용 완충제는 분석 완충제 중 최종 농도 2 μM의 Fluo-4-AM(DMSO 및 플루론산에 용해됨)으로 구성되었다. 존재하는 배양 매질을 웰에서 제거하고, 100 μL의 염료-담지용 완충체를 각각의 웰에 첨가하고, 95% 습도 하에 5% CO2 항온처리기에서, 37℃에서 약 60분 동안 항온처리하였다. 염료-담지된 다음, 세포를 엠블라(Embla) 세포 세척기에서 분석 완충제로 철저히 세척하여 임의의 혼입되지 않은 염료를 제거하였다. 정확히 100 μL의 분석 완충제가 각각의 웰에 남았다.
염료-담지된 세포를 함유하는 각각의 96 웰 플레이트를 FLIPR 기기에 위치시키고, 레이저 강도를 낮은 기저 형광을 검출하기에 적절한 수준으로 설정하였다. 작용제로서의 화합물을 시험하기 위해, 25 μL의 희석된 화합물을 형광 측정기에서 10초 동안 플레이트에 첨가하고, 형광 반응을 5분 동안 기록하였다. 형광 데이터를 내생 완전 작용제 용량-반응 세트로 정규화시켰다(최대 반응의 경우 100%, 최소 반응의 경우 0%). 각각의 작용제 농도-반응 곡선을, 하기와 같이 마이크로소프트 엑셀 XLFit로 4개의 변수의 로지스틱 방정식을 사용하여 설계하였다: Y = 최소값 + ((최대값 - 최소값)/(1 + 10(LogEC50-X)nH)), 이때 y는 정규화된 형광%이고, 최소값은 최소값 y이고, 최대값은 최대값 y이고, logEC50은 최대 유도된 형광의 50%를 생성하는 log10 농도이고, x는 작용제 화합물의 log10 농도이고, H는 곡선의 기울기(힐(Hill) 계수)이다. 최대값은 작용제 시험 화합물의 효능(%)을 나타낸다. 절반-최대 반응은 EC50 값으로 나타내어지고, 그의 로그값은 pEC50 값을 제공한다.
특정 펩티드에 대한 하기 EC50(nM) 및 효능(%)이, hV1a 및 hV2에 대한 비교 데이터와 함께 제공될 수 있다.
화학식 I의 화합물 및 화학식 I의 화합물의 약학적으로 허용되는 염은 약제, 예컨대 약학 제제의 형태로 사용될 수 있다. 약학 제제는 바람직하게는 경피, 비강, 피하 또는 정맥 주사(iv)로 투여될 수 있다.
경피는 활성 성분을 전신 분포를 위해 피부를 통해 전달시키는 투여 경로이다. 예는 약물 전달에 사용되는 경피 패치, 및 의학 또는 마취 목적으로 사용되는 경피 이식물을 포함한다.
비강 투여는 국부 또는 전신 효과를 위한 약물을 전달하기 위해 사용될 수 있고, 국부 효과를 위한 비강 스프레이가 매우 일반적이다. 펩티드 약물은, 경구 투여 후 약물 분해를 피하기 위해 비강 스프레이로서 투여될 수 있다.
피하 주사 또한 펩티드 약물의 투여에 일반적이다. 근육내 주사는 근육 내로의 물질의 직접적인 주사이다. 이는 약제의 투여를 위한 여러가지 다른 방법 중 하나이다. 이는 적은 양으로 투여되는 특정 형태의 약제에 종종 사용된다. 상기 주사는 피부 아래에 제공되어야 한다.
정맥내 경로는 정맥 내로의 액체 물질의 직접적인 주입이다. 다른 투여 경로와 비교할 때, 정맥 내 경로는 신체 전반에 걸쳐 유체 및 약제를 전달하는 가장 빠른 방식이다.
약학 제제는 또한, 보존제, 가용화제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 감미제, 착색제, 향미제, 삼투압을 변경하기 위한 염, 완충제, 마스킹제 또는 산화방지제를 함유할 수 있다. 이들은 또한 또 다른 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있다.
화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 및 치료적 불활성 담체를 함유하는 약제가 또한 본 발명의 목적이고, 하나 이상의 화학식 I의 화합물 및/또는 약학적으로 허용되는 산 부가 염, 및 필요에 따라 하나 이상의 다른 치료적으로 유용한 물질을 하나 이상의 치료적 불활성 담체와 함께 생약 투여 형태로 만드는 것을 포함하는 이들의 제조 방법도 본 발명의 목적이다.
본 발명에 따른 가장 바람직한 적응증은 중추신경계 질병, 예를 들어 자폐증, 외상후 스트레스 장애를 비롯한 스트레스, 불안 장애 또는 우울증을 비롯한 불안, 정신분열증, 정신 질환, 기억 상실, 알코올 금단 증상, 약물 중독 또는 프라더-윌리 증후군을 포함한다.
투여량은 여러가지 제한 및 목적 내에서 변할 수 있고, 당연히 각각의 구체적인 경우에 개별적인 요건에 따라 조정되어야 한다. 성인을 위한 투여량은, 1일 당 약 0.01 mg 내지 약 1,000 mg의 화학식 I의 화합물 또는 상응하는 양의 이의 약학적으로 허용되는 염으로 변할 수 있다. 상기 일일 투여량은 단일 투여로 또는 분할 투여로 투여될 수 있고, 또한 처방된 경우 상한치를 초과할 수도 있다.
Claims (11)
- 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 산 부가 염, 라세미 혼합물 또는 이의 상응하는 거울상 이성질체 및/또는 광학 이성질체:
화학식 I
상기 식에서,
R1은 수소, 저급 알킬 또는 사이클로알킬이고,
R2는 수소이거나,
R1 및 R2는 이들이 부착된 N 및 C 원자와 함께 1 또는 2개의 F 원자 또는 하이드록시로 선택적으로 치환된 피롤리딘 고리를 형성하거나, 아제티딘 또는 피페라진 고리를 형성하고;
R3은 수소, 저급 알킬, 하이드록시로 치환된 저급 알킬, -(CH2)2C(O)NH2, 벤질, 페닐, -CH2-5원 방향족 헤테로환형 기, CH2-인돌일, -CH2-사이클로알킬, 사이클로알킬 또는 -(CH2)2-S-저급 알킬이고;
R3'는 수소 또는 저급 알킬이고;
X는 -C(O)-CHR4-CHR4'-C(O)-NH-CH2-이고;
R4 및 R4'는 수소이거나, R4 및 R4' 중 하나는 아미노이고;
o는 0 또는 1이다. - 제1항에 있어서,
R1이 메틸 또는 사이클로프로필인, 화학식 I의 화합물. - 제1항에 있어서,
R1 및 R2가 이들이 부착된 N 및 C 원자와 함께 피롤리딘 고리를 형성하는, 화학식 I의 화합물. - 제1항에 있어서,
o가 0인, 화학식 I의 화합물. - 제1항에 있어서,
하기 화합물로 구성된 군에서 선택된 화학식 I의 화합물:
.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 화합물 및 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 보조제를 포함하는 약학 조성물.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 화합물 및 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 보조제를 포함하는, 자폐증, 외상후 스트레스 장애를 비롯한 스트레스, 불안 장애 또는 우울증을 비롯한 불안, 정신분열증, 정신 질환, 기억 상실, 알코올 금단 증상, 약물 중독 또는 프라더-윌리(Prader-Willi) 증후군의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
치료적 활성 물질로서 사용하기 위한 화합물. - 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
자폐증, 외상후 스트레스 장애를 비롯한 스트레스, 불안 장애 또는 우울증을 비롯한 불안, 정신분열증, 정신 질환, 기억 상실, 알코올 금단 증상, 약물 중독 또는 프라더-윌리 증후군의 치료에서 치료적 활성 물질로서 사용하기 위한 화합물. - 자폐증, 외상후 스트레스 장애를 비롯한 스트레스, 불안 장애 또는 우울증을 비롯한 불안, 정신분열증, 정신 질환, 기억 상실, 알코올 금단 증상 또는 약물 중독의 치료적 및/또는 예방적 처치용 약제, 또는 프라더-윌리 증후군의 치료용 약제의 제조를 위한, 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
- 본원에 전술된 발명.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP14170992.3 | 2014-06-03 | ||
| EP14170992 | 2014-06-03 | ||
| PCT/EP2015/062054 WO2015185467A1 (en) | 2014-06-03 | 2015-06-01 | Peptides as oxytocin agonists |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20170004013A true KR20170004013A (ko) | 2017-01-10 |
Family
ID=50842169
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020167036060A KR20170004013A (ko) | 2014-06-03 | 2015-06-01 | 옥시토신 작용제인 펩티드 |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9957298B2 (ko) |
| EP (1) | EP3151849B1 (ko) |
| JP (1) | JP6412170B2 (ko) |
| KR (1) | KR20170004013A (ko) |
| CN (1) | CN106414479B (ko) |
| AU (1) | AU2015270723A1 (ko) |
| CA (1) | CA2949173A1 (ko) |
| CL (1) | CL2016003095A1 (ko) |
| CR (1) | CR20160563A (ko) |
| EA (1) | EA030091B1 (ko) |
| IL (1) | IL248553A0 (ko) |
| MX (1) | MX2016015873A (ko) |
| PE (1) | PE20161559A1 (ko) |
| PH (1) | PH12016502232A1 (ko) |
| SG (1) | SG11201610073PA (ko) |
| WO (1) | WO2015185467A1 (ko) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10441627B2 (en) | 2014-09-19 | 2019-10-15 | Ferring B.V. | Method of treating prader-willi syndrome |
| WO2019060962A1 (en) * | 2017-09-28 | 2019-04-04 | The University Of Sydney | SELECTIVE AGONISTS OF THE OCYTOCIN RECEPTOR, INSPIRED BY METABOLITES |
| WO2020061414A1 (en) * | 2018-09-20 | 2020-03-26 | Levo Therapeutics, Inc. | Stable intranasal formulations of carbetocin |
| TW202034899A (zh) | 2018-09-20 | 2020-10-01 | 克里斯托弗 Ｓ 布萊恩特 | 卡貝縮宮素藥品及其製備方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20070022753A (ko) * | 2004-05-26 | 2007-02-27 | 화이자 인코포레이티드 | 인다졸 및 인돌론 유도체 및 이의 약제로서의 용도 |
| KR20090101504A (ko) * | 2007-01-22 | 2009-09-28 | 지티엑스, 인코포레이티드 | 핵 수용체에 결합하는 물질 |
| KR20110076944A (ko) * | 2008-09-23 | 2011-07-06 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 도파민 ｄ3 수용체의 조절제로서 유용한 이속사졸로〔4,5〕피리딘-3-일-피페라진 유도체 |
| KR20120027204A (ko) * | 2009-05-05 | 2012-03-21 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 아이속사졸-피리다진 유도체 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE9701162D0 (sv) * | 1997-03-27 | 1997-03-27 | Karolinska Innovations Ab | New use II |
| US8673841B2 (en) * | 2008-03-31 | 2014-03-18 | Ferring B.V. | Oxytocin analogues |
| TWI463990B (zh) * | 2009-09-21 | 2014-12-11 | Ferring Bv | 催產素受體促進劑 |
| ES2509270T3 (es) * | 2009-10-01 | 2014-10-17 | The University Of Sydney | Terapia y prevención del alcoholismo |
| KR101819804B1 (ko) | 2012-12-21 | 2018-01-17 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 옥시토신 작용제로서의 펩타이드 |
-
2015
- 2015-06-01 PE PE2016002397A patent/PE20161559A1/es unknown
- 2015-06-01 CA CA2949173A patent/CA2949173A1/en not_active Abandoned
- 2015-06-01 EA EA201692404A patent/EA030091B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2015-06-01 MX MX2016015873A patent/MX2016015873A/es unknown
- 2015-06-01 CN CN201580027370.7A patent/CN106414479B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2015-06-01 CR CR20160563A patent/CR20160563A/es unknown
- 2015-06-01 KR KR1020167036060A patent/KR20170004013A/ko not_active Application Discontinuation
- 2015-06-01 EP EP15725359.2A patent/EP3151849B1/en not_active Not-in-force
- 2015-06-01 JP JP2016571027A patent/JP6412170B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2015-06-01 WO PCT/EP2015/062054 patent/WO2015185467A1/en active Application Filing
- 2015-06-01 SG SG11201610073PA patent/SG11201610073PA/en unknown
- 2015-06-01 AU AU2015270723A patent/AU2015270723A1/en not_active Abandoned
-
2016
- 2016-10-27 IL IL248553A patent/IL248553A0/en unknown
- 2016-11-09 PH PH12016502232A patent/PH12016502232A1/en unknown
- 2016-12-01 CL CL2016003095A patent/CL2016003095A1/es unknown
- 2016-12-02 US US15/368,080 patent/US9957298B2/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20070022753A (ko) * | 2004-05-26 | 2007-02-27 | 화이자 인코포레이티드 | 인다졸 및 인돌론 유도체 및 이의 약제로서의 용도 |
| KR20090101504A (ko) * | 2007-01-22 | 2009-09-28 | 지티엑스, 인코포레이티드 | 핵 수용체에 결합하는 물질 |
| KR20110076944A (ko) * | 2008-09-23 | 2011-07-06 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 도파민 ｄ3 수용체의 조절제로서 유용한 이속사졸로〔4,5〕피리딘-3-일-피페라진 유도체 |
| KR20120027204A (ko) * | 2009-05-05 | 2012-03-21 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 아이속사졸-피리다진 유도체 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Journal of Medical Chemistry, Vol. 21, No. 1, pp. 117-120 (1978.01.01.) * |
| Journal of Medical Chemistry, Vol. 57, No. 12, pp. 5306-5317 (2014.05.29.) * |
| Journal of Organic Chemistry, Vol. 70, No. 20, pp. 7799-7809 (2005.09.30.) * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IL248553A0 (en) | 2016-12-29 |
| PH12016502232A1 (en) | 2017-01-09 |
| EA201692404A1 (ru) | 2017-05-31 |
| AU2015270723A1 (en) | 2016-11-17 |
| SG11201610073PA (en) | 2016-12-29 |
| WO2015185467A1 (en) | 2015-12-10 |
| CA2949173A1 (en) | 2015-12-10 |
| CR20160563A (es) | 2017-01-06 |
| JP6412170B2 (ja) | 2018-10-24 |
| JP2017518311A (ja) | 2017-07-06 |
| CN106414479A (zh) | 2017-02-15 |
| EP3151849B1 (en) | 2018-10-10 |
| US9957298B2 (en) | 2018-05-01 |
| US20170081369A1 (en) | 2017-03-23 |
| CN106414479B (zh) | 2021-08-03 |
| MX2016015873A (es) | 2017-03-27 |
| CL2016003095A1 (es) | 2017-06-16 |
| EA030091B1 (ru) | 2018-06-29 |
| EP3151849A1 (en) | 2017-04-12 |
| PE20161559A1 (es) | 2017-01-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101819804B1 (ko) | 옥시토신 작용제로서의 펩타이드 | |
| EP3152225B1 (en) | Peptides as oxytocin agonists | |
| KR101558404B1 (ko) | 옥시토신 유사체 | |
| RU2539692C2 (ru) | Агонисты окситоциновых рецепторов | |
| US9957298B2 (en) | Peptides as oxytocin agonists | |
| Williams et al. | Recent advances in the development of oxytocin receptor antagonists |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E601 | Decision to refuse application |