EA028974B1 - Ингибиторы полимеразы hcv - Google Patents

Ингибиторы полимеразы hcv Download PDF

Info

Publication number
EA028974B1
EA028974B1 EA201690452A EA201690452A EA028974B1 EA 028974 B1 EA028974 B1 EA 028974B1 EA 201690452 A EA201690452 A EA 201690452A EA 201690452 A EA201690452 A EA 201690452A EA 028974 B1 EA028974 B1 EA 028974B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
mmol
alkyl
mixture
group
compounds
Prior art date
Application number
EA201690452A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201690452A1 (ru
Inventor
Генадий Калаянов
Стеффан Торсселл
Хорст Вяхлинг
Original Assignee
Медивир Аб
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=52628746&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA028974(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Медивир Аб filed Critical Медивир Аб
Publication of EA201690452A1 publication Critical patent/EA201690452A1/ru
Publication of EA028974B1 publication Critical patent/EA028974B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A61K31/7072—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid having two oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. uridine, uridylic acid, thymidine, zidovudine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/073—Pyrimidine radicals with 2-deoxyribosyl as the saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C07H19/11—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids containing cyclic phosphate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/173—Purine radicals with 2-deoxyribosyl as the saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C07H19/213—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids containing cyclic phosphate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H23/00—Compounds containing boron, silicon, or a metal, e.g. chelates, vitamin B12

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

В изобретении представлены соединения, характеризующиеся формулойгде B представляет собой нуклеотидное основание, выбранное из групп (a) и (b)а другие переменные указаны в формуле изобретения, которые пригодны при лечении или профилактике вируса гепатита C, а также связанных с этим аспектов.

Description

изобретение относится к производным нуклеозидов, которые являются ингибиторами полимеразы вируса гепатита С (НСУ). Кроме того, настоящее изобретение относится к пролекарствам производных нуклеозидов, содержащим их композициям и способам их применения при лечении или профилактике инфекции НСУ.
Предпосылки изобретения
НСУ представляет собой одноцепочечный, положительно-полярный РНК-вирус, принадлежащий к роду Ьерас1У1ги8 семейства вирусов Р1ау1ушйае. Область Ν85Β полигена РНК кодирует РНК-зависимую РНК-полимеразу (КДКр), которая имеет существенное значение для репликации вируса. После первичной острой инфекции у большинства инфицированных людей развивается хронический гепатит, так как НСУ реплицируется преимущественно в гепатоцитах, но он не является непосредственно цитопатическим. В частности, отсутствие сильной ответной реакции Т-лимфоцитов и высокая склонность вируса к мутации отражается в способствовании высокого уровня хронической инфекции. Хронический гепатит может прогрессировать до фиброза печени, приводящего к циррозу, конечной стадии заболевания печени и НСС (гепатоцеллюлярной карциноме), делая это заболевание основной причиной трансплантации печени.
Существует шесть основных генотипов НСУ и более 50 подтипов, которые различным образом распределены в географическом отношении. Генотип 1 НСУ является преобладающим генотипом в Европе и в США. Широкая генетическая гетерогенность НСУ имеет важные диагностические и клинические значения, возможно, объясняющие трудности в разработке вакцины и отсутствие ответной реакции на современные методы терапии.
Передача НСУ может происходить путем контакта с зараженной кровью или препаратами крови, например, после переливания крови или внутривенного приема лекарственных средств. Введение диагностических тестов, применяемых при скрининге крови, привело к снижению тенденции посттрансфузионной заболеваемости НСУ. Однако, учитывая медленное прогрессирование заболевания печени к его конечной стадии, существующие инфекции будут продолжать представлять серьезную медицинскую и экономическую нагрузку на протяжении десятилетий.
Способы лечения НСУ первого поколения были основаны на применении (пегилированного) интерферона-альфа (ΙΡΝ-α) в сочетании с рибавирином. Эта комбинированная терапия дает устойчивый вирусологический ответ более чем у 40% пациентов, инфицированных вирусами генотипа 1 и около 80% от общего числа инфицированных генотипами 2 и 3. Наряду с ограниченной эффективностью лечения в отношении генотипа 1, эта комбинированная терапия имеет значительные побочные эффекты и плохо переносится многими пациентами. Основные побочные эффекты включают симптомы, подобные симптомам при заболевании гриппом, гематологические нарушения и психоневрологические симптомы. Методы лечения НСУ второго поколения добавили ингибиторы протеазы НСУ телапревир или боцепревир, что позволяет укоротить время лечения, однако порождает значительное количество серьезных побочных эффектов. Основное улучшение лечения стало возможным с введением ингибитора протеазы симепревира и ингибитора полимеразы НСУ софосбувира. Их первоначально вводили совместно с интерфероном и рибавирином, однако на сегодняшний день совместное введение симепревира (Υ02007/014926) и софосбувира (Υ02008/121634) позволило отказаться от интерферона и рибавирина при лечении гепатита С, а также уменьшить время лечения и резко уменьшить побочные эффекты.
Преимущество нуклеозидных/нуклеотидных ингибиторов полимеразы НСУ, такого как софосбувир, заключается в том, что они, как правило, активны против нескольких генотипов НСУ. Например, софосбувир был одобрен ΡΌΑ и ЕМА для лечения генотипами 1 и 4 НСУ. Однако в клинических исследованиях фазы ΙΙΙ Ρίδδίοη, о которых сообщается в Ра\\й/ е1 а1., Ν. Еид. ί. Мей. 2013; 368:1878-87, было отмечено: "Частота ответных реакций в группе софосбувир-рибавирин была ниже у пациентов инфицированных генотипом 3, чем среди тех, которые были инфицированы генотипом 2 (56% по сравнению с 97%)". Следовательно, существует потребность в более эффективных, удобных и лучше переносимых методах лечения.
Опыт работы с лекарственными средствами против ВИЧ, в частности с ингибиторами протеазы ВИЧ, показал, что недостаточно оптимальная фармакокинетика и сложные режимы дозирования быстро приводят к непреднамеренному несоблюдению режима лечения. Это, в свою очередь, означает, что концентрация за 24 ч (минимальная концентрация в плазме) соответствующих лекарственных средств, при режиме лечения против ВИЧ, часто опускается ниже порога 1С90 или ΕΌ90 на протяжении большей части дня. Считается, что уровень лекарства на протяжении 24 ч, по меньшей мере, 1С50, а более реально 1С90 или ΕΌ90 имеет важное значение для замедления развития "ускользающих" мутантов к лекарственному средству. Достижение необходимой фармакокинетики и метаболизма лекарственного средства для обеспечения таких уровней на протяжении суток предполагает строгие требования к разработке лекарственных средств.
Ν85Β РйРр является абсолютно необходимой для репликации одноцепочечного, положительнополярного генома РНК НСУ, что делает его привлекательной мишенью для разработки противовирусных соединений. Есть два основных класса ингибиторов Ν85Β: ингибиторы, не являющиеся нуклеозидами
- 1 028974
(NN1) и аналоги нуклеозидов. NN1 связываются с аллостерическими областями белков, в то время как нуклеозидные ингибиторы превращаются в ходе анаболизма в соответствующие нуклеотиды и выступают в качестве альтернативного субстрата для полимеразы. Образовавшийся нуклеотид затем вводится в зарождающуюся полимерную цепь РНК и может остановить рост полимерной цепи. На сегодняшний день известны нуклеозидные и не являющиеся нуклеозидными ингибиторы N8513.
Как было указано выше, механизм ингибирования нуклеозидных ингибиторов включает фосфорилирование нуклеозида соответствующим трифосфатом. Фосфорилирование обычно опосредовано киназами клетки-хозяина, и является абсолютным требованием для активирования нуклеозида, чтобы он стал активным в качестве альтернативного субстрата для полимеразы N8513. Как правило, первая стадия фосфорилирования, т.е. превращение нуклеозида в нуклеозид-5'-монофосфат, является ограничивающей скорость стадией. Последующее превращение монофосфата в ди- и трифосфат обычно протекает свободно и, как правило, оно не является ограничивающим скорость. Стратегией повышения производства нуклеозид трифосфата является применение проникающих в клетку нуклеозидных пролекарств монофосфата, т.е. нуклеозидов, несущих замаскированный фосфатный фрагмент, "фрагмент пролекарства", которые являются чувствительным к внутриклеточной ферментативной активации, приводящей к получению нуклеозид монофосфата. Образованный таким образом монофосфат затем киназами клетки превращается в активный трифосфат.
Химические модификации активного соединения с получением потенциального пролекарства, производит совершенно новую молекулярную единицу, которая может проявлять нежелательные физические, химические и биологические свойства, таким образом, идентификация оптимальных пролекарств остается неопределенной и сложной задачей.
Существует потребность в ингибиторах НСУ, которые могут исключить недостатки современной терапии НСУ, такие как побочные эффекты, например токсичность, ограниченная эффективность, отсутствие пан-генотипического влияния, возникающая резистентность и нарушение режима лечения, а также улучшить устойчивый вирусологический ответ.
Настоящее изобретение относится к новым ингибирующим соединениям НСУ, которые обладают полезными свойствами в отношении одного или нескольких последующих параметров: противовирусная эффективность; пан-генотипическое влияние; благоприятный профиль развития резистентности; отсутствие токсичности и генотоксичности; благоприятные фармакокинетика и фармакодинамика; и легкость приготовления и введения. Специалисту будет понятно, что ингибирующее соединение НСУ по настоящему изобретению не обязательно должно демонстрировать улучшенные качества во всех отношениях относительно всех известных соединений, однако вместо этого, оно может обеспечить баланс свойств, что означает, что в комбинации соединений, ингибирующих НСУ, оно является ценным альтернативным фармацевтическим средством.
Соединения по настоящему изобретению также могут быть привлекательными из-за того, что они не обладают активностью против других вирусов, т.е. являются избирательными, в частности, против ВИЧ. Пациенты, инфицированные ВИЧ, часто страдают от сопутствующих инфекций, таких как НСУ. Лечение таких больных ингибитором НСУ, который также ингибирует ВИЧ, может привести к появлению штаммов, устойчивых к ВИЧ.
Описание изобретения
В одном аспекте настоящее изобретение относится к соединениям, представленным формулой (I)
Ах,
К2О Р
(О
где В представляет собой нуклеиновое основание, выбранное из групп (а)-(б)
где Υ представляет собой N или -С(К)-;
К.1 представляет собой Н, С(=О)К30, С(=О)СНК31МН2, СК32К32'ОС(=О)СНК33ЫН2 или К1 выбран из групп (ΐ)-(νΐ)
К2 представляет собой Н, С(=О)К30, С(=О)СНК31ЫН2, СК32К32ОС(=О)СНК33ЫН2 или
- 2 028974
θ'} θ'} Ο/Λ 1 'У
СК К ОС(=О)К или К и К вместе образуют двухвалентное связующее звено с формулой
и к3 ν /
К3 представляет собой ОН, С1-С6-алкокси, С3-С7-циклоалкокси, С3-С7-циклоалкил-С1-С3-алкокси, бензилокси, О-(С1-С6-алкилен)-Т-К21 или ЫНС(К15)(К15')С(=О)К16;
каждый из К4, К5, К7 и К8 независимо представляет собой Н, С1-С6-алкил, С1-С6-галогеналкил, С1С6-гидроксиалкил, галогено, -ОК18, -8К18 или -Ы(К18)2;
каждый из К6, К9, К10, К11 независимо выбран из Н, С1-С6-алкила, С2-С6-алкенила, С2-С6-алкинила, С3-С7-циклоалкила, С1-С6-галогеналкила, С1-С6-гидроксиалкила, галогена, ОК18, 8К18, Ы(К18)2, -\НС(О)ОК\ -\НС(О)\(К8), -СЫ, -ΝΌ, -С(О)К18, -С(О)ОК18, -С(О)Ы(К18)2 и -ЫНС(О)К18, где указанные С2-С6-алкенильная и С2-С6-алкинильная группы необязательно могут быть замещены галогена или С3-С5-циклоалкилом;
К12 представляет собой Н или-(С1-С6-алкилен)-Т-К21, фенил, индолил или нафтил, при этом фенильная, индолильная или нафтильная группа необязательно замещена 1, 2 или 3 заместителями, каждый из которых независимо выбран из галогена, С1-С6-алкила, С2-С6-алкенила, С1-С6-галогеналкила, гидроксиС1-С6-алкила, С3-С6-циклоалкила, С1-С6-алкилкарбонила, С3-С6-циклоалкилкарбонил-С1-С6-алкокси, С1С6-галогеноалкокси, гидрокси и амино;
К13 представляет собой Н или-(С1-С6-алкилен)-Т-К21 или
К12 и К13 могут связываться с образованием С2-С4-алкиленовой группы между атомами кислорода, к которым они присоединены, где указанная С2-С4-алкиленовая группа необязательно замещена одной С6С10-арильной группой;
К14 представляет собой Н или С1-С6-алкил, фенил, нафтил или 5-12-членный моно- или бициклический гетероарил, содержащий 1, 2 или 3 гетероатома независимо выбранных из Ν, О и 8, при этом фенил, нафтил или гетероарил необязательно замещен 1, 2 или 3 К22;
каждый из К15 и К15 независимо выбран из Н, С1-С6-алкила, С3-С7-циклоалкила, С3-С7циклоалкилС1-С3-алкила, фенила и бензила, или К15 и К15 вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют С3-С7-циклоалкиленовую группу, где каждый С1-С6-алкил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, ОК18 и 8К18, а каждый С3-С7-циклоалкил, С3-С7-циклоалкилен, фенил и бензил необязательно замещен одной или двумя группами, независимо выбранными из С1-С3-алкила, галогена и ОК18; или К15 представляет собой Н, а К15 и К24 вместе с атомами, к которым они присоединены, образуют 5-членное кольцо;
К16 представляет собой Н, С1-С10-алкил, С2-С10-алкенил, С3-С7-циклоалкил, С3-С7-циклоалкил-С1-С3алкил, бензил, фенил или адамантил, любой из которых необязательно замещен 1, 2 или 3 группами, каждая из которых независимо выбрана из галогена, ОК18 и Ы(К18)2;
каждый К17 независимо выбран из Н, С1-С6-алкила, С2-С6-алкенила, С2-С6-алкинила, С1-С6галогеналкила, С3-С7-циклоалкила, С3-С7-циклоалкенила, фенила и бензила; или оба К17 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 3-7-членное гетероциклическое или 5-6-членное гетероарильное кольцо, при этом кольца необязательно замещены одной или двумя группами, независимо выбранными из С1-С3-алкила, галогена, С1-С3-галогеналкила, амино, С1-С3-алкиламино, С1-С3-алкил)2амино; каждый К18 независимо представляет собой Н, С1-С6-алкил, С1-С6-галогеналкил или С3-С7циклоалкил;
К19 представляет собой Н, С1-С6-алкил, С2-С6-алкенил, С2-С6-алкинил, С3-С7-циклоалкил, С1-С618 18 20
галогеналкил, С1-С6-гидроксиалкил, галоген, -ОК или Ы(К )2; каждый К независимо представляет собой Н, С1-С6-алкил, С1-С6-галогеналкил, С3-С7-циклоалкил, С1-С6-гидроксиалкил или С3-С7циклоалкил-С1-С3-алкил; каждый К21 независимо представляет собой Н, С1-С24-алкил, С1-С6галогеналкил, С1-С6-гидроксиалкил, С2-С6-алкенил, С2-С6-алкинил, С3-С7-циклоалкил или С3-С7циклоалкенил; каждый К22 независимо выбран из галогено, С1-С6-алкила, С2-С6-алкенила, С1-С6галогеналкила, фенила, гидрокси-С1-С6-алкила, С3-С6-циклоалкила, С1-С6-алкилкарбонила, С3-С6циклоалкилкарбонила, карбокси-С1-С6-алкила, оксо (требуется для получения флавона), ОК20, 8К20, Ы(К20)2, СЫ, ЫО2, С(О)ОК20, С(О)Ы(К20)2 и ЫНС(О)К20, или любые две К22 группы, присоединенные к соседним атомам углерода кольца, могут объединятся с образованием -О-К23-О-; К23 представляет собой -[С(К33)2]П-;
24 24 15
К24 представляет собой Н или К24 и К15 вместе с атомами, к которым они присоединены, образуют 5-членное кольцо;
каждый К30 независимо выбран из С1-С6-алкила и С1-С6-алкокси;
каждый К31 независимо выбран из Н, С1-С6-алкила, С3-С7-циклоалкила и бензила;
каждый К32 и К32 независимо выбран из Н и С1-С3-алкила;
каждый К33 независимо выбран из Н и С1-С6-алкила; и представляет собой О или 8;
каждый Т независимо представляет собой -8-, -О-, -8С(О)-, -С(О)8-, -8С(8)-, -С(8)8-, -ОС(О)-, -С(О)О- и -ОС(О)О-,
или их фармацевтически приемлемой соли и/или сольвату.
- 3 028974
Соединения по формуле (I) могут быть представлены в форме фармацевтически приемлемой соли и/или сольвата. В одном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению представлено в форме фармацевтически приемлемой соли. Во втором варианте осуществления соединение по настоящему изобретению предусматривается в форме фармацевтически приемлемого сольвата. В третьем варианте осуществления соединение по настоящему изобретению представлено в его свободной форме.
В одном аспекте настоящее изобретение включает пролекарства. В типичной конфигурации группа пролекарства расположена в 3'- и/или 5'-положении фрагмента, представляющего собой сахар. Подходящие для этих целей группы включают сложные эфиры, т.е. группы, характеризующиеся формулой ОС(=О)К30, где К30, как правило, представляет собой С^Сд-алкил, и сложные эфиры аминокислот, т.е. группы, характеризующиеся формулой ОС(=О)СНК31ПН2, где К31, как правило, представляет собой С1-Сб-алкил. Кроме того, пригодными в качестве пролекарства являются фосфатные пролекарства, т.е. группа пролекарств, которая в условиях ίη νίνο превращается в фосфат.
Группа(группы) пролекарств также может присутствовать на нуклеиновом основании В.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения В представляет собой группу (а). Как правило, в данном варианте осуществления группа В характеризуется формулой (а')
где К5 представляет собой Н или Р, а К6 представляет собой Ν(Κ18)2 или ПНСОС1-С6-алкил. Как правило, К6 представляет собой ΝΗ2.
В другом типичном варианте осуществления настоящего изобретения В представляет собой группу (а")
где К6 представляет собой Ν(Π)2 или NНСОС1-С6-алкил. Как правило, К6 представляет собой ΝΗ2. Во втором варианте осуществления настоящего изобретения В представляет собой группу (Ь). Как
правило, в данном варианте осуществления группа В характеризуется формулой (Ь')
где К8 представляет собой Н или Р. Как правило, К8 представляет собой Н.
В третьем варианте осуществления настоящего изобретения В представляет собой группу (с')
где К9 представляет собой ОН или С^С6-алкокси, а К10 представляет собой ΝΉ2 или :ХНСОС^С6алкил.
В четвертом варианте осуществления настоящего изобретения В представляет собой группу (ά).
В одном варианте осуществления настоящего изобретения К2 представляет собой Н.
В альтернативных вариантах осуществления настоящего изобретения К2 представляет собой С(=О)К30, С(=О)СНК31:ХН2 или ОСК32К32ОС(=О)СНК33К1Н2.
2 30 30
В вариантах осуществления настоящего изобретения, где К представляет собой С(=О)К , К представляет собой, как правило, метил, изопропил, изобутил или втор-бутил, в частности изопропил. В вариантах осуществления настоящего изобретения, где К2 представляет собой С(=О)СНК31NН2, К31 надлежащим образом соответствует боковой цепи природной аминокислоты, или аминокислоты не природного происхождения, такой как боковая цепь глицина (О1у), аланина (А1а), валина (Уа1), изолейцина (11е) или фенилаланина (РБе), т.е. К31 представляет собой Н, метил, изопропил, изобутил или бензил соответственно, в частности изопропил. Особый интерес представляют собой эфиры аминокислотных остатков, где конфигурация на асимметричном атоме углерода, к которому присоединен К31, соответствует таковой, которая наблюдается у Ь-аминокислоты, в частности Ь-А1а, Ь-Уа1, Ь-11е и Ь-РБе, в частности Ьвалина, т. е. К31 представляет собой изопропил. В вариантах осуществления настоящего изобретения, где К2 представляет собой ОСК32К32'ОС(=О)СНК33NН2, К32 и К32' могут быть одинаковыми или различными, и, как правило, выбраны из Н и метила, где К33, как правило, представляет собой С1-С3-алкил.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения К1 представляет собой Н.
В альтернативных вариантах осуществления настоящего изобретения К1 представляет собой пролекарственный фрагмент. В соответствии с данными способами осуществления подходящий К1 представляет собой С(=О)К30, С(=О)СНК31К1Н2 или ОСК32К32ОС(=О)СНК33МН2.
В вариантах осуществления настоящего изобретения, где К1 представляет собой С(=О)К30, К30
- 4 028974
представляет собой, как правило, метил, изопропил, изобутил или втор-бутил, в частности изопропил. В вариантах осуществления настоящего изобретения, где К1 представляет собой С(=О)СНК31ЫН2, К31 надлежащим образом соответствует боковой цепи природной аминокислоты или аминокислоты не природного происхождения, такой как боковые цепи глицина (О1у), аланина (А1а), валина (Уа1), изолейцина (11е) или фенилаланина (РЬе), т.е. К31 представляет собой Н, метил, изопропил, изобутил или бензил, соответственно, в частности изопропил. Особый интерес представляют собой эфиры аминокислотных остатков, где конфигурация на асимметричном атоме углерода, к которому присоединен К31, соответствует таковой, которая наблюдается у Ь-аминокислоты, в частности Ь-А1а, Ь-Уа1, Ь-11е и Ь-Рйе, в частности I.валина, т.е. К31 представляет собой изопропил. К31 также может представлять собой втор-бутил. В вариантах осуществления настоящего изобретения, где К1 представляет собой ОСК32К32ОС(=О)СНК33ЫН2, К32 и К32 могут быть одинаковыми или различными, и, как правило, выбраны из Н и метила, где К33, как правило, представляет собой Н или С1-С3-алкил.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения К1 и К2 вместе образуют двухвалентное связующее звено, характеризующееся формулой
рЛ
где К3 соответствует таковому, который определен выше, таким образом обеспечивает соединения, характеризующиеся формулой
Как правило, в соответствии с данным вариантом осуществления и представляет собой О. Иллюстративные конфигурации К3 включают С1-С6-алкокси и ЫНС(К15)(К15)С(=О)К16. Как правило, К3 представляет собой С1-С3-алкокси, такую как изопропокси или метокси.
Еще одна типичная конфигурация К3 представляет собой ЫНС(К15)(К15)С(=О)К16. Как правило, в данной конфигурации каждый из К15 и К15 независимо выбран из Н, С1-С6-алкила и бензила. Как правило, один из К15 и К15
15 и К15'
представляет собой Н, а другой представляет собой боковую цепь аминокислоты,
такую как боковая цепь аланина, валина, лейцина или изолейцина, т.е. метил, изопропил, изобутил или 1метилпроп-1-ил соответственно. В предпочтительной конфигурации один из К15 и К15 представляет собой Н, а другой представляет собой метил.
К16 представляет собой, как правило, линейный или разветвленный С1-С6-алкил или С3-С7циклоалкил. Как правило, К16 представляет собой изопропил.
Иллюстративное значение К3 представляет собой ЫНСН(С1-С6-алкил)С(=О)С1-С3-алкил.
Согласно альтернативной конфигурации К3 представляет собой О-(С1-С6-алкилен)-Т-К21, где С1-С6алкиленовый фрагмент является линейным или разветвленным.
В одном варианте осуществления соединений, характеризующихся формулой (I), К1 представляет
собой группу (ι)
В соответствии с данным вариантом осуществления предпочтительно в соединениях и представляет собой О.
В одной конфигурации группы (ΐ) К13 представляет собой Н, а К12 представляет собой (С1-С6алкилен)-Т-К21, как правило, в данной конфигурации К12 представляет собой этилен, Т представляет собой О, а К21 представляет собой С12-С19, таким образом образуя структуру (ι-а)
и
11 I
^о-р-!- (1-а)
ОН
где η представляет собой целое число от 11 до 23, например от 11 до 18.
Предпочтительно η представляет собой целое число от 15 до 16.
Как правило, в группе (ι-а) и представляет собой О.
Как правило, в соединениях с формулой (I), где К1 представляет собой группу (ι-а), К2 представляет собой Н.
В альтернативной конфигурации группы (ΐ) К12 и К13 связываются с образованием необязательно замещенной С2-С4-алкиленовой группы между атомами кислорода, к которым они присоединены, при этом образуя циклический фосфат. Как правило, алкиленовая группа представляет собой С3-алкилен, таким образом обеспечивая структуру (ί-Ь)
Как правило, и представляет собой О, а Аг представляет собой фенил, который необязательно за- 5 028974
мещен одним или двумя заместителями, независимо выбранными из галогена, С1-С6-алкила, СгС6галогеналкила, С1-С6-алкокси и циано, как правило из галогена. Иллюстративные примеры Аг включают фенил и фенил, который заменен хлором в мета-положении.
Как правило, в соединениях с формулой (I), где К1 представляет собой группу (ι-Ь), К2 представляет собой Н.
В дополнительной конфигурации группы (ι), К13 представляет собой (С1-С6-алкилен)-Т-К21, таким образом обеспечивая группу (ΐ-е)
где С1-С6-алкиленовый фрагмент является линейным или разветвленным.
Неограничивающие примеры С1-С6-алкиленового фрагмента в группе (ΐ-е) включают метилен, этилен, изопропилен и диметилметилен.
Как правило, в группе (ΐ-е) и представляет собой О.
В типичной подгруппе группы (ΐ-е) и представляет собой О, С1-С6-алкилен представляет собой метилен, а Т представляет собой -С(О)О-, или С1-С6-алкилен представляет собой этилен, а Т представляет собой -С(О)8-, таким образом обеспечивая соединения, характеризующиеся формулой (I), обладающие какой-либо одной из подструктур (ΐ-ο1) или (1-с2) соответственно
где К21 представляет собой С1-С6-алкил, такой как трет-бутил. В данных структурах К12, как правило, представляет собой такую же группу, что и К13, или в качестве альтернативы К12 представляет собой группу, определенную выше.
Как правило, в соединениях с формулой (I), где К1 представляет собой группу (ι-с), К2 представляет собой Н.
В еще одном варианте осуществления соединений, характеризующихся формулой (I), К1 представляет собой группу (ΐΐΐ), т.е. К1 вместе с атомом кислорода, к которому он присоединен, образует трифосфат или тритиофосфат, таким образом обеспечивая соединения, имеющие структуру
но-р-о-р-о-р-о
он он
I
он
ΛΧ,
Р2О
или их фармацевтически приемлемую соль, такую как соль калия или соль натрия. В предпочтительных конфигурациях в соответствии с данными вариантами осуществления и представляет собой О.
Как правило, в соответствии с данным вариантом осуществления К2 представляет собой Н.
В дополнительном варианте осуществления соединений по формуле (I) К1 представляет собой
группу (ιν)
К15 р15·
А*
ν—р— к24 он14
(IV)
В типичных соединениях, характеризующихся формулой (I), где К1 представляет собой группу (ιν), а один из К15 и К15 представляет собой Н, стереохимия является такой, какая указана в частичной формуле
К15
К16
К и :
γ>-?—
К24 ОР1
и, как правило, представляет собой О. К24, как правило, представляет собой Н.
Иллюстративные примеры К14 включают фенил, который необязательно замещен одним или двумя К , где каждый К независимо выбран из галогенов, С1-С6-алкила, С2-С6-алкенила, а ОК и К представляют собой С1-С6-алкил; или К14 представляет собой нафтил.
Как правило, в соответствии с данным вариантом осуществления и представляет собой О, К24 представляет собой Н, а К14 представляет собой фенил, который необязательно замещен 1, 2 или 3 К22, таким образом обеспечивая группу (ιν-а)
В типичной конфигурации группы (ιν-а) фенил заменен одним или двумя галогено, такими как хлор
- 6 028974
или фтор.
В еще одной иллюстративной конфигурации группы (ΐν-а) фенил заменен одним К22, который выбран из С3-С6-циклоалкила, С1-С6-алкилкарбонила или С3-С6-циклоалкилкарбонила, циклоалкильный фрагмент необязательно замещен С1-С3-алкилом.
В еще одной иллюстративной конфигурации группы (ΐν-а) фенил замещен двумя К22, где один К22 выбран из С3-С6-циклоалкила, С1-С6-алкилкарбонила или С3-С6-циклоалкилкарбонила, циклоалкильный фрагмент необязательно замещен С1-С3-алкилом, а другой К22 представляет собой метил, циклопропил, фтор или хлор.
Еще одно иллюстративное значение К14 представляет собой фенил, который замещен двумя К22, расположенными на смежных атомах углерода и двумя К22, которые совместно образуют -О-СН2-О-, таким образом обеспечивая подструктуру
Согласно еще одной иллюстративной конфигурации К14 представляет собой фенил, который замещен К22, а К22 представляет собой карбокси-С1-С6-алкил и К24 представляет собой Н. Иллюстративный пример данной конфигурации продемонстрирован в формуле (ΐν-Ь)
Как правило, в группе (ΐν-Ь) и представляет собой О.
В одной конфигурации группы (ΐν) К14 представляет собой фенил, который конденсирован с 4членным гетероциклическим кольцом, которое замещено кетоновой группой и фенилом. Такие типичные
Дополнительные иллюстративные значения К14 включают индолил, как правило 5-индолил.
В одном варианте осуществления К14 представляет собой гетероарил, в котором гетероарил представляет собой 5-12-членное моно- или бициклическое ароматическое кольцо, содержащее 1, 2 или 3 гетероатома, независимо выбранных из Ν, О и δ, и в которых гетероарил необязательно замещен 1, 2 или 3 К22. Как правило, в данном варианте осуществления каждый К22 независимо выбран из С1-С6-алкила, С2-С6-алкенила, С1-С6-галогеналкила, С1-С6-алкокси, гидрокси и амино.
В соответствии с данным вариантом осуществления иллюстративное значение К14 представляет собой необязательно замещенный пиридил.
Типичные соединения в соответствии с данным вариантом осуществления представляют собой таковые, в которых и представляет собой О, К14 представляет собой пиридил, который необязательно замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из галогено, С1-С6галогеналкила, С1-С6-алкила, С2-С6-алкенила, С1-С6-алкокси, гидрокси, амино.
Как правило, в соединениях с формулой (I), где К1 представляет собой группу (ΐν) или какую-либо ее подгруппу, фрагмент ^К24)С(К15)(К15)-С(=О)ОК16 образует остаток сложного эфира аминокислоты, включая аминокислотные остатки природного и не природного происхождения. Как правило, один из К15 и К15 представляет собой водород, а другой представляет собой водород или С1-С6-алкил, такой как изопропил или изобутил. Особый интерес представляют собой аминокислотные радикалы, где К15 представляет собой водород, примерами являются радикалы глицина (С1у), аланина (А1а), валина (Уа1), изолейцина (11е) и фенилаланина (Рйе), т.е. К15 представляет собой Н, а К15 представляет собой метил, изопропил, изобутил или бензил соответственно. В соединениях, где К15 представляет собой водород, а К15 не является водородом, конфигурация асимметрического атома углерода является, как правило, таковой, который встречается у Е-аминокислоты, а частности Е-А1а, Е-Уа1, Е-11е, и Е-Рйе.
В типичной конфигурации группы (ΐν) один из К15 и К15 представляет собой Н, а другой представляет собой метил.
В еще одной конфигурации группы (ΐν) К15 и К15 вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют С3-С7-циклоалкил, например циклопропил или циклобутил.
В типичной конфигурации группы (ΐν) К16 представляет собой С1-С10-алкил.
В одной конфигурации группы (ΐν) К16 представляет собой С1-С3-алкил, такой как метил, этил, пропил, изопропил, предпочтительно изопропил.
В еще одной конфигурации группы (ΐν) К16 представляет собой С1-С8-алкил, такой как 2-этилбутил,
- 7 028974
2-пентил, 2-бутил, изобутил, трет-пентил, предпочтительно 2-этилбутил.
В еще одной конфигурации группы (ΐν) К16 представляет собой С3-С7-циклоалкил, такой как циклогексил.
В одном варианте осуществления соединений, характеризующихся формулой (I), где К1 представляет собой группу (ΐν), где и представляет собой О, К24 представляет собой Н, К14 представляет собой фенил, который замещен С3-С6-циклоалкилом, С1-С6-алкилкарбонилом или 5- 6-членным гетероарилом, К15 представляет собой Н, К15 представляет собой С1-С3-алкил, такой как метил, этил или изопропил, и К16 представляет собой С1-С6-алкил или С3-С7-циклоалкил, такой как циклопропил, циклобутил или циклопентил.
В одном варианте осуществления соединений, характеризующихся формулой (I), где К1 представляет собой группу (ΐν), где К24 представляет собой Н, К14 представляет собой необязательно замещенный фенил или нафтил, каждый из К15 и К15 независимо представляет собой Н или С1-С6-алкил, и К16 представляет собой С1-С8-алкил или С3-С7-циклоалкил.
В типичной конфигурации К1 в соответствии с данным вариантом осуществления К24 представляет собой Н, К14 представляет собой необязательно замещенный фенил, один из К15 и К15 представляет собой Н, а другой представляет собой С1-С3-алкил, и К16 представляет собой С1-С8-алкил.
В альтернативной конфигурации группы (ΐν) К15 представляет собой Н, а К15 и К24 вместе с атомами, к которым они присоединены, образуют пирролидиновое кольцо, таким образом образуя группу (ΐνс)
Как правило, в данной конфигурации и представляет собой О, К14 представляет собой необязательно замещенный фенил, а К16 представляет собой С1-С6-алкил или С3-С6-циклоалкил.
Как правило, в соединениях, характеризующихся формулой (I), где К1 представляет собой группу (ΐν) или любую ее подгруппу, К2 представляет собой Н.
В дополнительном варианте осуществления соединений, характеризующихся формулой (I), К1 представляет собой группу (ν)
Как правило, в группе (ν) и представляет собой О.
В соответствии с этим вариантом осуществления два Ν-связанных заместителя Р-атома идентичны, т.е. оба фрагмента К15 являются одинаковыми, оба фрагмента К15 являются одинаковыми и оба фрагмента К16 являются одинаковыми.
В типичной конфигурации группы (ν) оба К15 представляют собой Н или С1-С6-алкил (такой как этил, н-пропил, изопропил, н-бутил или изобутил), оба К15 представляют собой Н, а оба К16 представляют собой С1-С6-алкил (такой как метил, этил или изопропил) или С3-С7-циклоалкил (такой как циклопропил, циклобутил или циклопентил).
В одной конфигурации группы (ν) К16 представляет собой С1-С3-алкил, такой как метил, этил, пропил, изопропил, предпочтительно изопропил.
В еще одной конфигурации группы (ν) К16 представляет собой С1-С8-алкил, такой как 2-этилбутил, 2-пентил, 2-бутил, изобутил, трет-пентил, предпочтительно 2-этилбутил.
В еще одной конфигурации группы (ν) К16 представляет собой С3-С7-циклоалкил, такой как циклогексил.
В дополнительном варианте осуществления соединений по формуле (I) К1 представляет собой группу (νΐ)
Как правило, в группе (νΐ) и представляет собой О.
В одной конфигурации группы (νΐ) К13 представляет собой (С1-С6-алкилен)-Т-К21, таким образом обеспечивая структуру (νΐ-а)
Ц21-Т-С1-С6алкилен—О—Р—(νί-а)
где С1-С6-алкиленовый фрагмент является линейным или разветвленным. Не ограничивающие примеры С1-С6-алкиленовых фрагментов в группе (νΐ-а) включают метилен, этилен, изопропилен и диме- 8 028974
тилметилен.
В одной конфигурации подгруппы (νΐ-а) К21 представляет собой 1-гидрокси-2-метилпропан-2-ил, т.е. группу, характеризующуюся формулой
Как правило, в группе (νΐ-а) и представляет собой О.
В типичной подгруппе группы (νΐ-а) С1-С6-алкилен представляет собой метилен, который необязательно замещен одним или двумя С1-С3-алкилами, а Т представляет собой -ОС(О)О-, таким образом обеспечивая соединения, характеризующиеся формулой (I), имеющей подструктуру (νΐ-Ь)
О к32 к32'
!- (νϊ-Ь)
I 1 N
К17 'К17'
где К32 и К32 независимо представляют собой Н или С1-С3-алкил. Как правило, один из К32 и К32 представляет собой Н, а другой представляет собой Н, метил или изопропил. В качестве альтернативы К32 и К32 представляют собой метил.
Как правило, в группе (νΐ-Ь) и представляет собой О.
Типичные примеры К21 включают необязательно замещенный С1-С6-алкил, такой как метил, этил, пропил и изопропил.
Как правило, один из К17 и К17 представляет собой Н, а другой представляет собой фенил или бензил, предпочтительно бензил.
Как правило, в соединениях, характеризующихся формулой (I), где К1 представляет собой группу (νΐ) или любую их подгруппу, К2 представляет собой Н.
В еще одной подгруппе группы (νΐ-а) и представляет собой О, С1-С6-алкилен представляет собой этилен, а Т представляет собой -С(О)3-, таким образом обеспечивая соединения, характеризующиеся формулой (I), имеющей подструктуру
о
о
11 !
О-Р— I 1
Η1?Ν^17'
Типичные примеры К21 включают необязательно замещенный С1-С6-алкил, в особенности разветвленный С1-С6-алкил и С1-С6-гидроксиалкил.
Как правило, один из К17 и К17 представляет собой Н, а другой представляет собой фенил или бензил, предпочтительно бензил.
Как правило, в соединениях, характеризующихся формулой (I), где К1 представляет собой группу (νΐ) или любую их подгруппу, К2 представляет собой Н.
Следовательно, представлено соединение, характеризующееся формулой (I), для применения в качестве лекарственного препарата, в частности, для применения при лечении или профилактике инфекции НСУ, особенно при лечении инфекции НСУ.
Дополнительно представлено применение соединения, характеризующегося формулой (I), в производстве лекарственного препарата, в частности лекарственного препарата для лечения или профилактики инфекции НСУ, особенно лекарственного препарата для лечения инфекции НСУ.
Дополнительно представлен способ лечения или профилактики инфекции НСУ, включающий введение соединения, характеризующегося формулой (I), в частности способ лечения инфекции НСУ, включающий введение соединения, характеризующегося формулой (I).
В другом аспекте настоящее изобретение относится к применению соединений по настоящему изобретению для ингибирования НСУ.
Дополнительно представлено применение соединений, характеризующихся формулой (I), для лечения или профилактики инфекции НСУ, например лечения или профилактики инфекции НСУ у людей. В предпочтительном аспекте в настоящем изобретении относится представлено применение соединений, характеризующихся формулой (I), для лечения инфекции НСУ, например лечения инфекции НСУ у человека.
Кроме того, настоящее изобретение относится к способу получения соединений, характеризующихся формулой (I), к новым промежуточным соединениям для применения в производстве соединений, характеризующихся формулой (I), и к производству таких промежуточных соединений.
В другом аспекте в настоящем изобретении представлены фармацевтические композиции, содержащие соединение, характеризующееся формулой (I), в сочетании с фармацевтически приемлемым вспомогательным средством, разбавителем, наполнителем или носителем. Фармацевтическая композиция, как правило, будет содержать противовирусное эффективное количество (например, для человека) соединения, характеризующегося формулой (I), хотя субтерапевтические количества соединения, характеризующегося формулой (I) может, тем не менее, иметь значение, когда оно предназначено для применения в сочетании с другими средствами или в виде нескольких доз.
- 9 028974
Специалисту будет понятно, что ссылки на соединения, характеризующиеся формулой (I) будут включать в себя любую подгруппу соединений, характеризующихся формулой (I), описанной в настоящем документе.
Генотипы НСУ в контексте лечения или профилактики в соответствии с настоящим изобретением включают в себя основные генотипы НСУ, т.е. генотипы 1а, 1Ь, 2а, За, 4а, 5а и 6а. В настоящем изобретении также представлен способ лечения или профилактики инфекции НСУ. Как правило, в настоящем изобретении представлен способ лечения инфекции НСУ.
Иллюстративные генотипы НСУ в контексте лечения или профилактики в соответствии с настоящим изобретением включают генотип 1Ь (распространен в Европе) и 1а (распространен в Северной Америке). В настоящем изобретении также представлен способ лечения или профилактики инфекции НСУ, в частности генотипа 1а или 1Ь. Как правило, в настоящем изобретении представлен способ лечения инфекции НСУ, в частности генотипа 1а или 1Ь.
Дополнительные иллюстративные генотипы в контексте лечения или профилактики в соответствии с настоящим изобретением включают в себя генотип За, такой как генотип За дикого типа и мутантные штаммы генотипа За, например мутанты 8282Т и Ы59/320Р. Как правило, в настоящем изобретении представлен способ лечения инфекции НСУ, в частности генотипа 3 а, такого как генотип 3 а дикого типа и мутантных штаммов генотипа За, например мутантов 8282Т и Ы59/320Р.
Настоящее изобретение дополнительно относится к лечению или профилактике инфекции НСУ, вызванной генотипами 2а, 4а, 5а, 6а. В настоящем изобретении также представлен способ лечения или профилактики инфекции НСУ, вызванной генотипами 2а, 4а, 5а, 6а.
Следует отметить хорошую активность соединений по настоящему изобретению в отношении генотипа 3, принимая во внимание низкие показатели нуклеотидов предыдущих поколений. Предпочтительные композиции настоящего изобретения имеют пан-генотипическое влияние против каждого из 6 генотипов, то есть ЕС50 соединения по настоящему изобретению заметно не отличается между генотипами, что упрощает обработку.
Соединения по настоящему изобретению имеют несколько хиральных центров, могут существовать и быть выделены в оптически активной и рацемической формах. Некоторые соединения могут проявлять полиморфизм. Следует понимать, что любые рацемические, оптически активные, диастереомерные, полиморфные или стереоизомерные формы, или их смеси, соединения, представленного в настоящем документе, находятся в пределах объема настоящего изобретения. Абсолютная конфигурация таких соединений может быть определена с использованием способов, известных в данной области, таких как, например, рентгеновская дифракция или ЯМР и/или выведение из исходных материалов с известной стереохимией и/или стереоселективные методы синтеза. Фармацевтические композиции в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно будут содержать в основном стереизомерно чистые препараты указанных стереоизомеров.
Большинство аминокислот являются хиральными и могут существовать в виде отдельных энантиомеров. Они обозначаются Ь- или Ό-аминокислоты, где Ь-энантиомер является встречающимся в природе энантиомером. Соответственно чистые энантиомеры аминокислот легкодоступны, и если аминокислоту применяют в синтезе соединения по настоящему изобретению, применение хиральной аминокислоты обеспечит получение хирального продукта.
Чистые стереоизомерные формы соединений и промежуточных соединений, указанных в настоящем изобретении, определяются как изомеры, по сути не содержащие других энантиомерных или диастереомерных форм той же основной молекулярной структуры указанных соединений или промежуточных соединений. В частности, термин "стереоизомерно чистый" относится к соединениям или промежуточным соединениям, характеризующимся стереоизомерным избытком по меньшей мере от 80% (т.е. минимум 90% одного изомера и максимум 10% других возможных изомеров) до стереоизомерного избытка 100% (т. е. 100% одного изомера и ни каких других), более конкретно, к соединениям или промежуточным соединениям, характеризующимся стереоизомерным избытком от 90 до 100%, еще более конкретно, характеризующимся стереоизомерным избытком от 94 до 100% и наиболее конкретно, характеризующимся стереоизомерным остатком от 97 до 100%. Термины "энантиомерно чистый" и "диастереомерно чистый" следует понимать подобным образом, но относительно энантиомерного избытка и диастереомерного избытка соответственно рассматриваемой смеси.
Чистые стереоизомерные формы соединений и промежуточных соединений по настоящему изобретению могут быть получены с применением процедур, хорошо известных в данной области. Например, энантиомеры могут быть отделены друг от друга с помощью рацемической смеси, т.е. образование диастереомерной соли осуществляется путем осуществления реакции с оптически активной кислотой или основанием с последующей селективной кристаллизацией образовавшейся диастереомерной соли. Примерами таких кислот являются винная кислота, дибензоилвинная кислота, диацетилвинная кислота и камфорсульфокислота. В качестве альтернативы энантиомеры могут быть разделены с помощью хроматографических методик с применением хиральных стационарных фаз. Чистые стереохимически изомерные формы также могут быть получены путем их синтеза из стереохимически чистых форм соответствующих исходных материалов, при условии, что реакция протекает стереоспецифически путем хираль- 10 028974
ного синтеза или путем использования хирального вспомогательного соединения. Если желателен конкретный стереоизомер, получение этого соединения предпочтительно осуществляют с использованием стереоспецифических способов. В данных способах преимущественно применяют энантиомерно чистые исходные материалы.
Диастереомерные рацематы соединений по настоящему изобретению могут быть разделены с помощью обычных способов. Соответствующие способы физического разделения, которые могут быть успешно использованы, включают, например, селективную кристаллизацию и хроматографию, например колоночную хроматографию.
Если атом фосфора присутствует в соединениях по настоящему изобретению, атом фосфора может представлять собой хиральный центр. Хиральность в этом центре обозначена как "К" или "δ" в соответствии с правилами приоритета по номенклатуре Кана-Ингольда-Прелога. Если хиральность не указана, предполагается, что как К-, так и δ-изомеры предназначены для включения, а также их смесь, т.е. смесь диастереомеров.
В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения включены стереоизомеры, имеющие δ-конфигурацию у атома фосфора. Данные стереоизомеры обозначены как δΡ.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения включены стереоизомеры, имеющие Кконфигурацию у атома фосфора. Эти стереоизомеры обозначены как КР.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения включены диастереомерные смеси, т.е. смеси соединений, имеющих К- или δ-конфигурацию у атома фосфора.
Настоящее изобретение также включает меченные изотопами соединения, характеризующиеся формулой (I), или любую подгруппу с формулой (I), где один или несколько атомов замещен изотопом этого же атома, т.е. атомом, имеющим такой же атомный номер, но отличающийся по атомной массе, что и атом(ы), как правило, встречающийся в природе. Примеры изотопов, которые могут быть включены в соединения, характеризующиеся формулой (I), или любую подгруппу с формулой (I), включают без ограничения изотопы водорода, такие как 2Н и 3Н (также обозначается как Ό - дейтерий и Т - тритий соответственно), углерода, такие как ПС, 13С и 14С, азота, такие как 13Ν и 15Ν, кислорода, такие как 15О, 17О и 18О, фосфора, такие как 31Ρ и 32Ρ, серы, такие как 35δ, фтора, такие как 18Р, хлора, такие как 36С1, брома, такие как Вг, 6Вг, Вг и Вг, и йода, такие как I, I, I и I. Выбор изотопа, включенного в меченые им соединения, будет зависеть от конкретного применения этого соединения. Например, для анализов распределения лекарственного средства или субстрата в тканях, как правило, наиболее пригодными будут соединения, в которые включен радиоактивный изотоп, такой как 3Н или 14С. Для применения в получении радиоизображений, например, с помощью позитронно-эмиссионной томографии (РЕТ), будет пригоден излучающий позитрон изотопов, таких как С, Ρ, N или О. Включение более тяжелого изотопа, такого как дейтерий, т. е. 2Н, может обеспечить большую метаболическую стабильность для соединения, характеризующегося формулой (I), или любой подгруппы, характеризующейся формулой (I), что может привести, например, к увеличению в условиях ίη νίνο полураспада соединения или снижению требуемой дозировки.
Меченные изотопом соединения, характеризующиеся формулой (I), или любые подгруппы, характеризующиеся формулой (I), могут быть получены с помощью аналогичных процедур, описанных в схемах и/или примерах настоящего документа ниже с использованием соответствующих меченных изотопами реагентов или исходных материалов вместо соответствующего не меченного изотопами реагента или исходного материала, или с помощью обычных способов, известных специалистам в данной области.
Фармацевтически приемлемые соли присоединения включают терапевтически активные нетоксичные кислые и основные формы солей присоединения соединений, характеризующихся формулой (I). Интерес представляют свободные формы, т.е. формы соединений, характеризующихся формулой (I), не являющиеся солью.
Фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты могут быть легко получены путем обработки основной формы соответствующей кислотой. Соответствующие кислоты включают, например, неорганические кислоты, такие как галогенводородные кислоты, например хлористо-водородная или бромисто-водородная кислота, серная, азотная, фосфорная и подобные кислоты; или органические кислоты, такие как, например, уксусная, пропионовая, гликолевая, молочная, пировиноградная, щавелевая (т.е. этандиовая кислота), малоновая, янтарная (т.е. бутандиовая кислота), малеиновая, фумаровая, яблочная (т.е. гидроксибутандиовая кислота), винная, лимонная, метансульфоновая , этансульфоновая, бензолсульфоновая, р-толуолсульфоновая, цикламовая, салициловая, п-аминосалициловая, памоиновая и подобные кислоты. И наоборот, указанные формы солей могут быть превращены в форму свободного основания путем ее обработки соответствующим основанием.
Соединения, характеризующиеся формулой (I), содержащие кислотный протон, также можно превратить в их нетоксичные формы солей присоединения металла или амина путем их обработки соответствующими органическими и неорганическими основаниями. Соответствующие основные формы солей включают, например, соли аммония, соли щелочных и щелочно-земельных металлов, например соли лития, натрия, калия, магния, кальция и подобные, соли с органическими основаниями, например соли бензатина, Ν-метил-О-глюкамина, гидрабамина, а также соли с аминокислотами, такими как, например, ар- 11 028974
гинин, лизин и тому подобные.
Некоторые из соединений, характеризующихся формулой (I), также могут существовать в их таутомерной форме. Например, таутомерные формы амидных групп (-Ο(=Θ)-ΝΗ-) представляют собой иминоспирты (-Ο(ΘΗ)=Ν-), которые могут стать стабилизированными в кольцах, имеющих ароматические свойства. Такие формы, хотя они явно не указаны в структурных формулах, представленных в настоящем документе, предназначены для включения в объем настоящего изобретения.
Термины и выражения, применяемые во введении, описании и формуле настоящего документа, должны быть истолкованы, как это определено ниже, если не указано иное. Значение каждого термина является независимым в каждом конкретном случае. Данные определения применяются независимо от того, используется ли термин сам по себе или в сочетании с другими терминами, если не указано иное. Термин или выражение, применяемое в настоящем документе, которое явным образом не определено, должно быть истолковано как имеющее свое обычное значение, используемое в данной области. Химические названия, общие названия и химические структуры могут применяться взаимозаменяемо для описания одной и той же структуры. Если химическое соединение обозначают с использованием как химической структуры, так и химического названия, существует возможность возникновения неоднозначности между структурой и названием, в таких случаях преобладает структурное обозначение.
"Ст-Сп-Алкил" сам по себе или в составных выражениях, таких как Ст-См-галогеналкил. Ст-Спалкилкарбонил, Ст-Сп-алкиламин и т.п., представляет собой линейный или разветвленный алифатический углеводородный радикал, имеющий установленное количество атомов углерода, например С1-С4алкил означает алкильный радикал, имеющий от 1 до 4 атомов углеводорода. С1-С6-алкил имеет соответствующее значение, также включая все линейные и разветвленные цепи изомеров пентила и гексила. Предпочтительными алкильными радикалами для применения в настоящем изобретении являются С1-С6алкил, включая метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил и н-гексил, в основном С1-С4-алкил, такой как метил, этил, н-пропил, изопропил, т-бутил, н-бутил и изобутил. Как правило, предпочтительными являются метил и изопропил. Алкильная группа может быть незамещенной или замещенной одним или несколькими заместителями, которые могут быть одинаковыми или различными, при этом каждый заместитель независимо выбран из группы, состоящей из галогено, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, циано, гидрокси, -О-алкила, -О-арила, -алкилен-О-алкила, алкилтио, -ΝΗ2, -NΗ(алкил), -^алкил)2, ^Н(циклоалкил), -О-С(=О)-алкила, -О-С(=О)-арила, -О-С(=О)циклоалкила, -С(=О)ОН и -С(=О)О-алкила. В общем предпочтительно, чтобы алкильная группа не была замещена, если не указано иное.
"С2-Сп-Алкенил" означает линейный или разветвленный алифатический углеводородный радикал, содержащий по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь и имеющий установленное количество атомов углерода, т. е. С2-С4-алкенил означает алкенильный радикал, имеющий от 2 до 4 атомов углерода; С2-С6-алкенил означает алкенильный радикал, имеющий от 2 до 6 атомов углерода. Неограничивающие алкенильные группы включают этенил, пропенил, н-бутинил, 3-метилбут-2-инил, н-пентенил и гексенил. Алкенильная группа может быть незамещенной или замещенной одним или несколькими заместителями, которые могут быть одинаковыми или различными, при этом каждый заместитель независимо выбран из группы, состоящей из галогено, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, циано, гидрокси, -О-алкила, -О-арила, -алкилен-О-алкила, алкилтио, -ΝΗ2, -Ж(алкил), -^алкил)2,
-ЫЩциклоалкил), -О-С(=О)-алкила, -О-С(=О)-арила, -О-С(=О)-циклоалкила, -Ο^Θ^Η и -С(=О)Оалкила. В общем предпочтительно, чтобы алкенильная группа не была замещена, если не указано иное.
"С2-Сп-Алкинил" означает линейный или разветвленный алифатический углеводородный радикал, содержащий по меньшей мере одну углерод-углеродную тройную связь и имеющий установленное количество атомов углерода, т. е. С2-С4-алкинил означает алкинильный радикал, имеющий от 2 до 4 атомов углерода; С2-С6-алкинил означает алкинильный радикал, имеющий от 2 до 6 атомов углерода. Неограничивающие алкенильные группы включают этинил, пропинил, 2-бутинил, 3-метилбутинил пентинил и гексинил. Алкинильная группа может быть незамещенной или замещенной одним или несколькими заместителями, которые могут быть одинаковыми или различными, при этом каждый заместитель независимо выбран из группы, состоящей из галогено, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, циано, гидрокси, -О-алкила, -О-арила, -алкилен-О-алкила, алкилтио, -ΝΗ2, -МЩалкил), -^алкил)2, -МЩциклоалкил), -О-С(О)-алкила, -О-С(О)-арила, -О-С(О)-циклоалкила, ^^^Η и -С(О)О-алкила. В общем предпочтительно, чтобы алкинильная группа не была замещена, если не указано иное.
Применяемый в настоящем документе термин "Ст-Сп-галогеналкил" обозначает Ст-Сп-алкил, где по меньшей мере один атом С заменен галогеном (например, Ст-Сп-галогеналкильная группа может содержать от одного до трех атомов галогенов), предпочтительно хлором или фтором. Как правило, галогеналкильные группы представляют собой С1 -С2-галогеналкил, в котором подходящим галогеном является фтор. Типичные галогеналкильные группы включают фторметил, дифторметил и трифторметил.
Применяемый в настоящем документе термин "Ст-Сп-гидроксиалкил" представляет собой Ст-Спалкил, где по меньшей мере один атом С замещен одной гидроксильной группой. Типичные Ст-Спгидроксиалкильные группы представляют собой Ст-Сп-алкил, где один атом С замещен одной гидроксильной группой. Типичные гидроксиалкильные группы включают гидроксиметил и гидроксиэтил.
- 12 028974
Применяемый в настоящем документе термин "Сщ-Сп-аминоалкил" представляет собой Ст-Спалкил, где по меньшей мере один атом С замещен одной аминогруппой. Типичные Ст-Спаминоалкильные группы представляют собой Ст-Сп-алкил, где один атом С замещен одной аминогруппой. Типичные аминоалкильные группы включают аминометил и аминоэтил.
Применяемый в настоящем документе термин "Ст-Сп-алкилен" представляет собой линейный или разветвленный двухвалентный алкильный радикал, имеющий указанное количество атомов углерода. Предпочтительными Ст-Сп-алкиленовыми радикалами для применения в настоящем изобретении являются С1-Сз-алкиленовые радикалы. Неограничивающие примеры алкиленовых групп включают -СН2-, -СН2сн2-, -СН2СН2СН2-, -СН(СНз)СН2СН2-, -СН(СНз)- и -СН(СН(СЩ)2)-.
Термин "Ме" означает метил, а "МеО" означает метокси.
Термин "Ст-Сп-алкилкарбонил" представляет собой радикал, характеризующийся формулой Ст-Спалкил-С(=О)-, где фрагмент Ст-Сп-алкил определен выше. Как правило, "Ст-Сп-алкилкарбонил" представляет собой С1-С6-алкил-С(=О)-.
"Ст-Сп-Алкокси" представляет собой радикал Ст-Сп-алкил-О-, где Ст-Сп-алкил определен выше. Особый интерес представляет С^Сд-алкокси, который включает метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, т-бутокси, н-бутил и изобутокси. Как правило, предпочтительными являются метокси и изопропокси. С1-С6-алкокси имеет соответствующее значение, расширенное за счет включения всех линейных и разветвленных цепей изомеров пентокси и гексокси.
Термин "Ст-Сп-алкоксикарбонил" представляет собой радикал, характеризующийся формулой Ст-Сп-алкокси-С(=О)-, где фрагмент Ст-Сп-алкокси определен выше. Как правило, "Ст-Спалкоксикарбонил" представляет собой С1-С6-алкокси-С(=О)-.
Термин "амино" обозначает радикал -ΝΗ2.
Термин "галоген" обозначает галогенный радикал, такой как фтор, хлор, бром или йод. Как правило, галогенными группами являются фтор или хлор.
Термин "арил" означает фенильную, бифенильную или нафтильную группу.
Термин "гетероциклоалкил" обозначает стабильное насыщенное моноциклическое 3-7-членное кольцо, содержащее 1-3 гетероатома, независимо выбранных из О, δ и Ν. В одном варианте осуществления стабильное насыщенное моноциклическое 3-7-членное кольцо содержит 1 гетероатом, выбранный из О, δ и Ν. Во втором варианте осуществления стабильное насыщенное моноциклическое 3-7-членное кольцо содержит 2 гетероатома, независимо выбранных из О, δ и Ν. В третьем варианте осуществления стабильное насыщенное моноциклическое 3-7-членное кольцо содержит 3 гетероатома, независимо выбранных из О, δ и Ν. Стабильное насыщенное моноциклическое 3-7-членное кольцо, содержащее 1-3 гетероатома, независимо выбранных из О, δ и Ν, может, как правило, быть 5-7-членным кольцом, например 5- или 6-членным кольцом. Гетероциклоалкильная группа может быть незамещенной или замещенной одним или несколькими заместителями, которые могут быть одинаковыми или различными, при этом каждый заместитель независимо выбран из группы, состоящей из галогена, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, циано, гидрокси, -О-алкила, -О-арила, -алкилен-О-алкила, алкилтио, -ΝΗ2, -ЫН(алкил), -Л(алкил)2, -ПН(циклоалкил), -О-С(О)-алкила, -О-С(О)-арила, -О-С(О)-циклоалкила, -С(О)ОН и -С(О)О-алкила. В общем предпочтительно, чтобы гетероциклоалкильная группа не была замещена, если не указано иное.
Термин "гетероарил" означает стабильную моно- или бициклическую ароматическую кольцевую систему, содержащую 1-4 гетероатома, независимо выбранных из О, δ и Ν, при этом каждое кольцо имеет 5 или 6 атомов кольца. В одном варианте осуществления настоящего изобретения стабильная моноили бициклическая ароматическая кольцевая система содержит один гетероатом, выбранный из О, δ и Ν, при этом каждое кольцо имеет 5 или 6 атомов кольца. Во втором варианте осуществления настоящего изобретения стабильная моно- или бициклическая ароматическая кольцевая система содержит два гетероатома, независимо выбранных из О, δ и Ν, при этом каждое кольцо имеет 5 или 6 атомов кольца. В третьем варианте осуществления стабильная моно- или бициклическая ароматическая кольцевая система содержит три гетероатома, независимо выбранных из О, δ и Ν, при этом каждое кольцо имеет 5 или 6 атомов кольца. В четвертом варианте осуществления стабильная моно- или бициклическая ароматическая кольцевая система содержит четыре гетероатома, независимо выбранных из О, δ и Ν, при этом каждое кольцо имеет 5 или 6 атомов кольца. В одном варианте осуществления гетероарила включен флавон.
Термин "С3-Сп-циклоалкил" обозначает циклический одновалентный алкильный радикал, имеющий указанное количество атомов углерода, например С3-С7-циклоалкил означает циклический одновалентный алкильный радикал, имеющий от 3 до 7 атомов углерода. Предпочтительными циклоалкильными радикалами для применения в настоящем изобретении являются С3-С4-алкилы, т.е. циклопропил и циклобутил. Циклоалкильная группа может быть незамещенной или замещенной одним или несколькими заместителями, которые могут быть одинаковыми или различными, при этом каждый заместитель независимо выбран из группы, состоящей из галогена, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, циано, гидрокси, -О-алкила, -О-арила, -алкилен-О-алкила, алкилтио, -ΝΗ2, -ПН(алкил), -Л(алкил)2,
-ЫН(циклоалкил), -О-С(О)-алкила, -О-С(О)-арила, -О-С(О)-циклоалкила, -С(О)ОН и -С(О)О-алкила. В общем предпочтительно, чтобы циклоалкильная группа не была замещена, если не указано иное.
- 13 028974
Термин "амино-Ст-Сп-алкил" обозначает Ст-Сп-алкильный радикал, как это определено выше, который замещен аминогруппой, т.е. один атом водорода алкильного фрагмента замещен NΗ2-группой. Как правило, "амино-Ст-Сп-алкил" представляет собой амино-С1-С6-алкил.
Термин "амино-Ст-Сп-алкилкарбонил" обозначает Ст-Сп-алкилкарбонильный радикал, как это определено выше, где один атом водорода алкильного фрагмента замещен NΗ2-группой. Как правило, "амино-Ст-Сп-алкилкарбонил" представляет собой амино-С1-С6-алкилкарбонил. Примеры амино-Ст-Спалкилкарбонила включают без ограничения глицил С(С))СН2\Н2, аланил С(О)СН(\Н2)СН2, валинил С=ОСН(ПИ2)СИ(СИз)2, лейцинил С(=О)СН(\Н2)(СН2)зСНз, изолейцинил
С(=О)СН(\Н2)СН(СНз)(СН2СНз) и норлейцинил 0(=0)^(^2)(0¾^¾ и т.п. Это определение не ограничивается встречающимися в природе аминокислотами.
Родственные термины должны истолковываться в соответствии с определениями, приведенными выше, а также их общим применением в технической области.
Используемый в настоящем документе термин "(=О)" образует карбонильную группу, в том случае, когда она присоединена к атому углерода. Следует отметить, что атом может нести оксогруппу только тогда, когда валентность этого атома допускает это.
Термин "монофосфатный, дифосфатный и трифосфатный сложный эфир" относится к группам
о о о ООО
II < ни, и и и ι
но-р-1- но-р-о-р-;- и но-р-о-р-о-р-:I 1 1 11' III'·
он он он он он он .
Термин "тиомонофосфатный, тиодифосфатный и тио-трифосфатный сложный эфир" относится к группам
5 0 5 0 0 5
II , ИИ, II II II I
но-р-1- но—р—о—р-р « но-р-о-р-о-р-:I ' ’ 11' I I I 1
он он он он он он .
Используемые в настоящем документе положения радикалов на любом фрагменте молекулы, применяемом в определениях, могут быть в любом месте на таком фрагменте, пока он является химически стабильным. Если присутствующая любая переменная встречается более чем один раз в каком-либо фрагменте, каждое определение является независимым.
Всякий раз, когда в настоящем документе применяется термин "соединения, характеризующиеся формулой (I)" или "соединения по настоящему изобретению" или аналогичный термин, это означает включение соединений, характеризующихся формулой (I), и подгрупп соединений, характеризующихся формулой (I), включая возможные стереохимически изомерные формы, их фармацевтически приемлемые соли и сольваты. Термин "сольваты" охватывает любые фармацевтически приемлемые сольваты соединений, характеризующихся формулой (I), а также их соли, которые они могут образовывать. Такими сольватами являются, например, гидраты, алкоголяты, например этаноляты, пропаноляты и тому подобное, особенно гидраты.
В общем, названия соединений, применяемых в настоящей заявке получены с применением программного обеспечения СИетЭнж ИКга 12.0. В дополнение к этому, если стереохимия структуры или части структуры не обозначена, например, жирными или пунктирными линиями, структуру или часть этой структуры следует истолковывать как охватывающую все ее стереоизомеры.
Общие способы синтеза
Соединения по настоящему изобретению могут быть получены различными способами, например, как показано на иллюстративных схемах синтеза и описано ниже. Применяемые исходные материалы и реагенты доступны от коммерческих поставщиков или могут быть получены в соответствии с процедурами, описанными в литературе, которые изложены в ссылках использующихся способов, хорошо известных специалистам в данной области.
На схеме 1 проиллюстрирован путь получения соединений, характеризующихся формулой (I), где К1 и К2 представляют собой Н, и основание В представляет собой урацил или образующий производное урацил, т.е. В представляет собой группу, характеризующуюся формулой (Ь).
- 14 028974
Схема 1
Защиту гидроксильных групп (48,5К)-4-гидрокси-5-(гидроксиметил)дигидрофуран-2(3Н)-она с использованием, например, триизопропилсилильных (ΤΙΡδ) групп осуществляют путем обработки ΤΙΡδхлоридом в присутствии основания, такого как имидазол или ему подобного, или можно применять любые другие подходящие защитные группы, такие как ацильные группы, как, например, ацетильные, бензоильные или р-хлорбензоильные группы или тритильные группы. В качестве альтернативы применение стратегии ортогональных защитных групп может применяться с целью осуществления более позднего селективного снятия защиты одной из гидроксильных групп, не затрагивая другой. Как правило, после этого 5'-гидроксильная группа защищена тритильной, метокситритильной или силильной группой с последующей защитой З'-гидроксильной группы с использованием, например, ацильной группы. Защищенное таким образом производное затем подвергают электрофильному α-фторированию путем обработки Ν-фторбензолсульфонимидом (ΝΕδΙ) в присутствии основания, такого как бис-(триметилсилил)амид, что обеспечивает получение фторлактона (1Ь). Обычно после этого вводят заместитель α-хлор путем проведения реакции с Ν-хлорсукцинимидом в присутствии основания, такого как бис-(триметилсилил)амид лития или аналогичного таковому. Дальнейшее восстановление кетоновой функции с использованием любого подходящего восстанавливающего средства, такого как ΌΙΒΑΕ или подобного, с последующим превращением полученной гидроксильной группы в уходящую группу, например производное сульфокислоты, галогенида или сложного эфира фосфорной кислоты, обеспечивает получение гликозильного донора (1е). Производное сульфокислоты, такое как метилсульфон, как правило, получают путем обработки мезилхлоридом или его эквивалентом в присутствии основания, такого как Εί3Ν; гликозилбромид, как правило, получают с помощью аномерного ацетата путем ацетилирования гидроксильной группы с использованием уксусного ангидрида или аналогичных таковому, с последующей обработкой бромистым водородом в уксусной кислоте. Нуклеозид (1ί) затем формируется путем конденсации с необходимым основанием или его защищенным производным с использованием стандартных условий, хорошо известных в области химии нуклеозидов, например, в присутствии гексаметилдисилазана (ΗΌΜδ) и кислоты Льюиса, такой как ΤΜδ трифлат или тетрахлорид олова или подобных. В случае, если гликозилбромид применяют в качестве гликозильного донора, подходящими для применения активаторами реакции гликозилирования являются тетрахлорид олова или соль серебра, такая как трифлат серебра или подобные. Удаление гидроксильных защитных групп и, если они присутствуют, защитных групп на их основе, с использованием соответствующих способов в соответствии с группами стандартных способов, хорошо известных в данной области, обеспечивает получение нуклеозида (1д). Если необходимо, полученный нуклеозид (1д) затем можно преобразовать в 5'-моно-, ди- или трифосфат, 5'-тио-моно-, тио-диили тио-трифосфат, или в пролекарство с использованием любого из способов, описанных в настоящем документе ниже, или в соответствии с приведенными в литературе процедурами.
Соединения по настоящему изобретению, несущие связывающий фрагмент пролекарства в виде циклического сложного эфира фосфорной кислоты как в З'-положении, так и в 5'-положении, т.е. К1 и К2 вместе с атомами кислорода, к которым они присоединены, образуют циклический сложный эфир фосфорной кислоты, могут быть получены, например, в соответствии со способами, описанными в патентном документе ΑΘ2010/075554. Путь получения таких соединений, где К3 представляет собой ОК3, К3 представляет собой Н, СцСб-алкил, С3-С7-циклоалкил, С3-С7-циклоалкил-СгС3-алкил или бензил, а реагент с фосфором(Ш) применяют для введения фосфорного фрагмента, представлен на схеме 2А.
- 15 028974
Реакция диола (2а), полученного как описано выше, с реагентом с фосфором(Ш), таким как алкилΝ,Ν,Ν',Ν'-тетраизопропилфосфорамидат, несущий необходимую группу К3 в присутствии активатора, такого как тетразол или дицианоимидазол, или подобного, обеспечивает эфир циклического фосфата (2Ь). Затем выполняют последовательное окисление сложного эфира фосфористой кислоты до сложного эфира фосфорной кислоты (2с) с использованием любого удобного способа окисления, известного в данной области, например окисления с применением реагента, такого как м-хлорпербензойная кислота, трет-бутилгидропероксид, пероксид водорода или подобного. В качестве альтернативы можно применять ТЕМРО-окисление или окисление на основе смеси йод-ТНР-пиридин-вода, или любой другой подходящий способ окисления. Подобным образом, соответствующее пролекарство в виде циклического тиофосфата, т.е. и представляет собой 8 в соединениях по настоящему изобретению, несущих 3', 5'циклический фрагмент пролекарства (26), будет получено путем сульфирования фосфористокислого производного (2Ь). Подходящие средства для сульфирования включают без ограничения элементарную серу, реагент Лоуессона, циклооктасеру, бис-(триэтоксисилил)пропилтетрасульфид (ТЕ8Т).
Циклический сложный эфир фосфорной кислоты (2с) может в качестве альтернативы быть получен непосредственно посредством одной стадии посредством реакции диола с Р(У) -реагентом, таким как алкилфосфородихлоридат, что позволяет избежать необходимости в проведении отдельной стадии окисления.
Реагенты с фосфором (III) и фосфором (V), применяемые для получения циклических фосфористокислых сложных эфиров и сложных эфиров фосфорной кислоты соответственно могут быть получены, как описано в патентном документе Ψ02010/075554. Вкратце, за счет проведения реакции коммерчески доступного хлор-ММЖН-тетраизопропилфосфорамидита с необходимым спиртом, К3-ОН в присутствии третичного амина, такого как ΕΙ3Ν, обеспечивает реагент с фосфором (III), в то время как проведение реакции фосфорилтрихлорида (РОС13) с необходимым спиртом К3 -ОН в присутствии ΕΙ3Ν или подобного, обеспечивает реагент с фосфором (V).
Пролекарства по настоящему изобретению в виде циклического сложного эфира фосфорной кислоты, где ϋ представляет собой О, К3 представляет собой ΝΗ^Κ15)(Κ15)^=Ο)Κ16, могут быть получены, как это описано на схеме 2В.
НО Р
2а
Схема 2В
□ 15 о15 у О
Р1е ’у "Ν-Ρ-Ο-ρΝΟ?ΡΙι
О Н л
2Аа ρΝ02Ρΐι
Получение циклического сложного эфира фосфорной кислоты (2АЬ) осуществляют, например, путем проведения реакции диола (2а) с фосфорилирующим средством, несущим необходимый эфир аминокислоты и две уходящие группы (2Аа), например две р-нитрофенольные группы, в присутствии основания, такого как ΌΒϋ или эквивалентного таковому, с применением растворителя, такого как ацетонитрил или подобного. Аналогичным образом, соответствующее пролекарство в виде циклического тиофосфата, т.е. ϋ представляет собой 8 в соединениях по настоящему изобретению, несущих 3', 5'-циклический фрагмент пролекарства, будет получено с использованием соответствующего тиофосфорамида в качестве фосфорилирующего средства.
Для получения соединений по настоящему изобретению, где К2 представляет собой Н, а К1 представляет собой фосфорамидат, т.е. фрагмент пролекарства с формулой (ίν), может быть использовано преимущество более высокой реакционной способности первичной 5'-гидроксильной группы по сравнению со вторичной 3'-гидроксильной группой, а фосфорамидат может быть введен непосредственно на 3', 5-диол без необходимости применения какой-либо специальной стратегии для защиты группы. Данный способ описан на схеме 3.
Схема 3
Конденсация производного нуклеозида (3 а), полученного, как описано выше, с необходимым фос- 16 028974
фородихлоратом в инертном растворителе, таком как эфир, например диэтиловый эфир или ТИБ, или галогенированным углеводородом, например дихлорметаном, в присутствии основания, такого как Νметилимидазол (ΝΜΙ) или подобного, обеспечивает получение производного фосфорной кислоты (3Ь).
Аналогичным образом, соединения по настоящему изобретению, где К2 представляет собой Н, а К1 представляет собой тиофосфорамидат, т.е. фрагмент пролекарства с формулой (ΐν), где и представляет собой δ, получают в результате реакции сахара (3а) с тиофосфорамидохлоридатом.
Используемый в приведенной выше схеме тиофосфорамидохлоридат может быть получен путем проведения реакции в два этапа, начиная с добавления оксихлорид фосфора (РОС13). На схеме 4 проиллюстрировано получение тиофосфорамидохлоридатов, пригодных для получения соединений, характеризующихся формулой (I), где К1 представляет собой группу с формулой (ΐν), где и представляет собой О, К24 представляет собой Н, и тиофосфорамидохлоридатов, пригодных для получения соединений, характеризующихся формулой (I), где К1 представляет собой группу с формулой (ΐν-е), где и представляет собой О, а К24 и К15 вместе с атомами, к которым они присоединены, образуют пирролидоновое кольцо.
Конденсация РОС13 с необходимым спиртом К14ОН в инертном растворителе, таком как Εΐ2Ο, обеспечивает получение алкокси или арилоксифосфородихлоридата (4а). Последующая реакция с производным аминокислоты (4Ь) или (4Ь') обеспечивает получение хлорофосфорамидата (4с) или (4с') соответственно. При необходимости, полученные хлорофосфорамидаты (4с) и (4с') можно преобразовать в соответствующие фосфорилирующие средства, имеющие активированный фенол в качестве уходящей группы, например пентафторфенол или п-М)2-фенол, как в общем проиллюстрировано на фиг. 4ά и 4е соответственно. Это превращение удобно выполнять при помощи проведения реакции производного хлора (4с) или (4с') с необходимым активированным фенолом в присутствии основания, такого как триэтиламин или подобного.
Тиофосфорамидохлоридаты, т.е. фосфорилирующие средства, пригодные для получения соединений, характеризующихся формулой (I), где К1 обозначает группу с формулой (ΐν), а и представляет δ, могут быть получены с использованием аналогичных стратегий, как в общем описано выше, как это проиллюстрировано на схеме 5.
Реакция тиофосфорилхлорида с нужным спиртом К14ОН в присутствии основания, такого как Εΐ3Ν или подобного, обеспечивает получение алкокси или арилокситиофосфорамидохлоридата (5а). Последующая реакция с производным аминокислоты (4Ь) или (4Ь') обеспечивает получение тиофосфорамидохлоридататов (5Ь) или (5Ь') соответственно.
Путь получения фосфорилирующего средства, пригодного для получения соединений, характеризующихся формулой (I), где К1 представляет собой группу (ν), а и представляет собой О, описан на схеме 6.
- 17 028974
Схема 6
Реакция фосфорилирующего средства, такого как 4-нитрофенилдихлорфосфат, фосфорилтрихлорид или подобного, с подходящим амином в присутствии Εί3Ν или подобного, в растворителе, таком как ΌΟΜ, обеспечивает получение требуемого хлорфосфордиамидата.
Соединения, характеризующиеся формулой (I), где К1 представляет собой фрагмент пролекарства группы (ΐ), оба К12 и К13 представляют собой К21(=О)8-(С1-С6-алкилен), а и представляет собой О, могут быть получены в соответствии с описанными в литературе процедурами. Например, способ описанный в ΒΐοοΓ§. Меб. Сйеш. Ье1., Уо1. 3, Νο 12, 1993, р. 2521-2526, как это в общем описано на схеме 7А.
Схема 7А
н°ух
Рдб р
о
н3ро3
Ρϊν-С! Η
пиридин
νμ,
рдб ρ
гЛ
ί) К21 5—С1-С&алкилен
Ρίν-ΟΙ, пиридин
ϋ) 12/пиридин/Н2О ϋί) снятие защитной
группы
О
I ° В
Р21'' 3 - СгС6алкилен - О - Ρ-О "Χ/θχΛ
2-С!
К2/ '5 — С-1-Сеалкилен / ϊ
Ύ но
О 7с
Преобразование 5'-гидроксильного соединения (7а) в соответствующий водородофосфонат (7Ь), полученный путем обработки фосфоновой кислотой в пиридине в присутствии активатора, такого как пивалоилхлорид, с последующей реакцией с 8-(2-гидроксиалкил)алканэтиолятом и пивалоилхлоридом в пиридине и последующим окислением с применением конкретных условий, таких как применение йода в смеси пиридин/вода, обеспечивает получение сложного фосфотриэфира. В конечном итоге, удаление защитных групп с использованием стандартных способов обеспечивает получение нуклеотидного пролекарства (7 с).
В качестве альтернативы нуклеотидное пролекарство (7 с) может быть получено путем фосфорилирования нуклеозида (7а) фосфорилирующим средством, уже несущим соответствующие заместители. Данный способ описан в патентном документе ШО2013/096679 и описан на схеме 7В.
Схема 7В
Реакция нуклеозида (7 а) с фосфорилирующим средством в присутствии 5-этилтиотетразола (ЕТТ) с последующим окислением, с использованием, например, мСРВА, обеспечивает получение необходимого пролекарства (7 с). Фосфорилирующее средство соответствующим образом получают в соответствии с описанными в литературе процедурами, как это в общем схематически изображено на схеме 8.
Схема 8
Реакция необходимого ацилхлорида КС(=О)С1 с меркаптоэтанолом необходимой конфигурации в присутствии третичного амина, такого как триэтиламин или его эквивалента, с последующей обработкой полученным производным ацилтиоалканом (8а) с 1,1-дихлор-Н^диизопропилфосфорамином, обеспечивает получение фосфорилирующего средства (8Ь).
Соединения, характеризующиеся формулой (I), где К1 представляет собой фрагмент пролекарства группы (ΐ), а К и К представляют собой формулу К С(=О)О-С1-С6-алкилен или К ОС(=О)О-С1-С6алкилен, могут быть получены в соответствии со способами, описанными, например, в патентном документе ШО2013/096679 и приведенных в настоящем документе ссылках. Способ кратко описан на схеме
- 18 028974
9А.
Связывание необязательно защищенного нуклеозида 9а с подходящим бифосфатом 9Ь или 9Ь', предпочтительно в форме аммонийной соли, такой как соль триэтиламмония или подобной, в присутствии ΌΙΕΑ или подобного, с использованием подходящих условий связывания, таких как ВОР-С1 и 3нитро-1,2,4-триазол в растворителе, таком как ТНР, обеспечивает получение пролекарств 9с и 9С' соответственно.
В альтернативном подходе получения соединений, характеризующихся формулой (I), где К1 представляет собой фрагмент пролекарства группы (I), а К12 и К13 представляют собой формулу К21С(=О)ОС1-С6-алкен или К21ОС(=О)О-С1-С6-алкилен, нуклеозид 9а подвергают реакции с оксихлоридом фосфора на первой стадии, а затем дополнительно подвергают реакции с необходимым уже замещенным фосфорилирующим средством, как это описано на схеме 9В.
Фосфаты 9с и 9с' получают путем проведения реакции нуклеозида 9а с оксихлоридом фосфора в растворителе, таком как триэтилфосфат, с последующим проведением реакции при повышенной температуре с необходимым хлоралкилкарбонатом (9Ь") или сложным эфиром (9Ь'") в присутствии ΌΙΕΑ.
Соединений с формулой (I), где К1 представляет собой фрагмент пролекарства группы (ΐ), где и представляет собой О, К12 представляет собой Н, К13 представляет собой формулу Р21-О-С1-С6-алкилен и К21 представляет собой С1-С24-алкил, могут быть получены в соответствии со способами, описанными, например, в I. Мей. СЬет., 2006, 49, 6, р. 2010-2013, патентном документе Ж)2009/085267 и приведенных в настоящем документе ссылках. Общий способ описан на схеме 10А.
Схема 10А
Образование фосфорилирующего средства (10Ь), которое осуществляют путем проведения реакции соответствующего алкоксиспирта (10а) с хлоридом фосфора в присутствии триэтиламина с применением, например, диэтилового эфира или подобного, в качестве растворителя с последующим фосфорилированием необязательно защищенного нуклеозида, и, наконец, удалением защитной группы обеспечивает получение пептида (10с).
В альтернативном подходе получения соединений, характеризующихся формулой (Ι), где К1 представляет собой фрагмент пролекарства группы (ΐ), где и представляет собой О, К12 представляет собой Н, а К13 характризуется формулой К21-О-С1-С6-алкилен и К21 представляет собой С1-С24-алкил, реагент с фосфором(Ш) можно применять в качестве фосфорилирующего средства, как это описано на схеме 10В.
- 19 028974
Реагент с фосфором(Ш) получают путем проведения реакции алкоксиспирта (10а) с фосфинамином (10ά) в присутствии третичного амина, такого как ΌΙΕΆ или подобного. Последующее фосфорилирование нуклеозида полученным фосфорамидатным производным (10е) с последующим окислением с использованием, например, пероксида, такого как трет-бутоксипероксид или подобного, обеспечивает получение нуклеотида (10ί). Гидролиз цианоэтилового фрагмента и удаление защитных групп, если они присутствуют, обеспечивает получение необходимого нуклеотида (10с).
Соединения, характеризующиеся формулой (I), где К1 представляет собой фрагмент пролекарства группы (νί), а К13 представляет собой К21С(=О)О-СН2- или К21ОС(=О)О-СН2-, могут быть получены в соответствии со способами, описанными, например, в патентном документе ШО2013/039920 и приведенных в настоящем документе ссылках. Способ кратко описан на схеме 11 А.
Схема 11А
Фосфорамидаты 11с и 11с' получают путем проведения реакции нуклеозида 11а с оксихлоридом фосфора в триэтилфосфате, с последующим проведением реакции с необходимым амином ХНК17К17 в присутствии ΌΙΕΆ и, в конечном итоге, проведением реакции при повышенной температуре с хлоралкилкарбонатом (11Ь) или сложным эфиром (11Ь') в присутствии ΌΙΕΆ.
Соединения, характеризующиеся формулой (I), где К1 представляет собой фрагмент пролекарства группы (νί), а К13 представляет собой К21С(=О)8-СН2СН2-, могут быть получены в соответствии со способами, описанными в патентном документе ШО2008/082601 и приведенных в настоящем документе ссылках. Способ кратко описан на схеме 12А.
Схема 12А
группы 12с
Фосфорилирование 5'-гидроксильного соединения (12а) подходящей солью тетраалкиламония, например солью тетрабутиламония, для получения необходимого водородфосфоната, осуществляемого путем активации пивалоилхлоридом в пиридине, обеспечивает получение водородфосфоната (12Ь). Затем вводят аминогруппу ХК17К17 путем проведения реакции с необходимым амином в четыреххлористом углероде в безводных условиях, с последующим удалением защитных групп, получая таким образом фосфорамидат (12с).
В качестве альтернативы фосфорамидат (12с) может быть получен из Н-фосфоната (7Ь), описанного на схеме 7А, путем проведения реакции с необходимым 8-(2-гидроксиэтил )алканэтиоатом К21С(С=О)8СН2СН2ОН в присутствии связывающего средства, такого как РуВОР или подобного, с по- 20 028974
следующим аминированием и удалением защитной группы, как это описано выше. Этот путь описан на схеме 12В.
Схема 12В
эн κ17κ17'νη СС14 .
РА
-р-0-^,ογ N. \ Д.С!
НО р
12с
РдО Р руВОР 7Ь
снятие
защитной
группы
Специалисту в данной области будет понятно, что процедуры, описанные в схемах 12А и 12В, будут применяться не только для получения δ-ацилтиоэтанольных производных, но и производных, имеющих другие конфигурации алкилена между атомами серы и кислорода.
Соединения по настоящему изобретению, имеющие ацильный фрагмент пролекарства в 5'положении и необязательно также в З'-положении, то есть К1 и, возможно, также К2 представляют собой С(О=)К30 или Ε(=())Κ31ΝΙ 12, могут быть получены путем обработки соответствующего 3'-защищенного соединения в подходящих условиях ацилирования, которые описаны на схеме 13.
Схема 13
13с К30 13е
Нуклеозид (13Ь), где группа пролекарства в 5'-положении представляет собой сложный эфир, т.е. группу с формулой ОС(=О)К10, получают путем проведения реакции 5'-гидроксильного соединением (9а) с соответствующим ацилирующим средством, с использованием стандартных способов, таких как применение ангидрида алкильной кислоты, К30С(=О)ОС(=О)К30, в присутствии пиридина, или хлорида алкильной кислоты, К30С(=О)С1 или подобного, в то время как нуклеозиды (13й), несущие сложный эфир аминокислоты в 5'-положении будут получены с помощью проведения реакции 5'-гидроксильного соединения (13а) с Ν-защищенной алифатической аминокислотой в присутствии подходящего конденсирующего реагента для образования пептидной связи, такого как ЕЭЛС или подобного. Затем удаление 3'гидроксильной защитной группы обеспечивает получение соединений по настоящему изобретению, где К2 представляет собой Н. С другой стороны, обработка З'-гидроксильных соединений (13Ь) и (13 с) в условиях ацилирования, описанных непосредственно выше, обеспечивает получение диацильных производных (130) и (13 е) соответственно.
Соединения настоящего изобретения, несущие эфир или фрагмент пролекарства в виде эфира аминокислоты в 5'- и/или З'-положении, могут быть получены, как это описано на схеме 14.
- 21 028974
В связи с более высокой реакционной способностью первичного диола в 5'-положении (14а) это положение может быть селективно подвержено реакции с подходящим ацилирующим средством с получением 5'-ацильных производных (14Ь) и (14с), или он может быть защищен подходящей защитной группой, чтобы обеспечить последующее ацилирование в 3'-положении. Нуклеозиды (14Ь), где группа пролекарства в 5'-положении представляет собой эфир, т.е. группу с формулой ОС(=О)К30, обычно получают путем проведения реакции с ацилирующим средством, таким как алкильный ангидрид в присутствии пиридина, или хлорангидридной кислоты или подобной, в то время как нуклеозиды (14с), несущие эфир аминокислоты в 5'-положении будут получены в результате проведения реакции диола (14а) с Νзащищенной алифатической аминокислотой в присутствии подходящего конденсирующего реагента для образования пептидной связи, такого как БОАС или подобный таковому. Если группа ацильного пролекарства необходима в 3'-положении, последовательность реакций защита-ацилирование-снятие защиты будет соответствующей с целью обеспечения проведения чистых реакций со снижением выхода продукта. Как правило, защитная группа подобно силильной, тритильной или монометокситритильной (ММТ) группе будет пригодна для защиты 5'-гидроксильной группы. Использование этих групп широко описано в литературе, и как правило, условия таких реакции с соответствующим галогенидом, таким как хлорид в растворителе, таком как пиридин, применяют для их введения. Последующее ацилирование выполняют, как описано выше, с последующим удалением 5'-О-защитной группы, а в случае сложного эфира аминокислот вводят Ν-защитную группу в виде Ν-защищенной аминокислоты с использованием соответствующих условий в соответствии с применяемой защитной группой, например кислотной обработки в случае тритильной или метокситритильной защитной группы, затем обеспечивает получение 3'ацилированных производных (14ά) и (14е). При необходимости, фосфорамидат можно вводить в 5'положение полученных 5'-гидроксильных производных (14ά) и (14е), например, с использованием процедуры, описанной в настоящем документе выше, или моно-, ди- или трифосфат можно вводить с использованием стандартной процедуры фосфорилирования, описанной в литературе, или 5'-положении можно ацилировать с использованием способа, описанного выше, для ацилирования в 3'-положении.
Соединения по настоящему изобретению, имеющие фрагмент пролекарства в виде ацетила в 5'положении или в 5'- и 3'-положениях, т.е. соединения, характеризующиеся формулой (I), где К1 или К1 и К2 представляет собой СК32К32 ОС(=О)СНК3^Н2, могут быть получены из 5'-гидроксильного соединение, с использованием, например, способа, описанного в Вюог§. Мед. СБет. 112003:2453-2461.
Соединения по настоящему изобретению, несущие фрагмент пролекарства "НерОнес!" в 5'положении, т.е. соединение, характеризующееся формулой (I), где К1 представляет собой группу (ΐ), а К12 и К13 связаны с образованием пропиленовой группы между атомами кислорода, к которым они присоединены, могут быть получены в соответствии со способом, описанным в I. Ат. СБет. Зос, Уо1. 126, Νο. 16, 2004, р. 5154-5163.
Путь получения соединения, характеризующегося формулой (I), где В представляет собой группу (а) или (Ь), К2 представляет собой Н, а К1 представляет собой трифосфат, т.е. группу с формулой (III), где и представляет собой О, как это проиллюстрировано на схеме 15.
Подходящее фосфорилирующее средство для получения трифосфата соединений, характеризующихся формулой (I), где В представляет собой группу (а) или (Ь), представляет собой 5нитроциклосальгенилхлорфосфит ^-6), который получают путем проведения реакции треххлористого фосфора с 2-гидрокси-5-нитробензиловым спиртом, как это подробно описано в экспериментальной части настоящего документа ниже. Реакция подходящего 3'-О-защищенного производного нуклеозида по настоящему изобретению (15а) с нитроциклосальгенилхлорфосфитом 0>1) в присутствии Ε!3Ν в инертном растворителе, таком как ОСМ или МеС^ с последующим окислением с использованием, например, Охопе®, обеспечивает получение циклического сложного триэфира фосфорной кислоты (15Ь). Затем получение трифосфата (15с) достигается за счет проведения реакции пирофосфата, например с пирофосфатом трибутиламина, с последующей обработкой аммиаком. С целью получения требуемой соли трифосфат подвергают соответствующей процедуре ионного обмена, например, если необходима форма калиевой соли, остаток пропускают через колонку 1)о\уех®-К'.
Путь получения соединения, характеризующегося формулой (I), где В представляет собой урацил, К2 представляет собой Н, а К1 представляет собой тио-трифосфат, т.е. группу, характеризующуюся фор- 22 028974
мулой (III), где и представляет собой δ, описан на схеме 16.
Схема 16
Подходящим средством для введения первой фосфатной группы при получении тио-трифосфата ϋнуклеозида соединения, характеризующегося формулой (I), является 2-хлор-4Н-1,3,2бензодиоксафосфорин-4-он, который получают в соответствии с описанными в литературе процедурами.
Таким образом, соответствующий 3'-О-защищенный нуклеозид подвергают реакции с 2-хлор-4Н1,3,2-бензодиоксафосфорин-4-оном в таком растворителе, как смесь пиридин/ТНР или ее эквивалент, с последующей обработкой трибутиламмонийпирофосфатом в присутствии трибутиламина в таком растворителе, как ΌΜΡ. Полученное промежуточное соединение затем преобразуют в тио-трифосфат путем его обработки раствором серы в ΌΜΡ. С целью получения требуемой соли трифосфат подвергают соответствующей процедуре ионного обмена, например, если необходима форма литиевой соли, остаток пропускают через колонку Помех®-®'.
Альтернативный путь получения тио-трифосфата описан на схеме 17.
Схема 17
В данном способе трифосфатный реагент применяют на этапе фосфорилирования. Реагент получают путем проведения реакции РЗС13 с триазолом в растворителе, например ΜеСN или подобном. Затем полученное таким образом средство связывают с 3'-О-защищенным нуклеозидом 13а, после чего проводят реакцию с пирофосфатом, таким как трис-(тетрабутиламмоний)водород пирофосфат, таким образом обеспечивая получение тио-трифосфата (17Ь).
Применение различных защитных групп (РО), примененных в вышеописанных схемах, известно специалисту в данной области, а также известны их преимущества и их дополнительные альтернативные варианты, которые широко описаны в литературе, см., например, Огеепе Т.А., АнЕ Р.О.М. Рго1ес1Ае дгоирз ΐη огдашс §уп1йе§18, 2пб еб. ®\ν Уогк: Ж1еу; 1995.
Используемый в настоящем документе термин "Ν-защитная группа" или "Ν-защищенный" относится к тем группам, которые предназначены для защиты Ν-концевой аминокислоты или пептида, или для защиты аминогруппы от вступления в нежелательные реакции в процессе синтеза. Широко используемые Ν-защитные группы раскрыты в Огеепе. Ν-защитные группы включают ацильные группы, такие как формил, ацетил, пропионил, пивалоил, т-бутилацетил, 2-хлорацетил, 2-бромацетил, трифторацетил, трихлорацетил, фталил, о-нитрофеноксиацетил, α-хлорбутирил, бензоил, 4-хлорбензоил, 4-бромбензоил, 4нитробензоил и подобные; сульфониловые группы, такие как бензолсульфонил, р-толуолсульфонил и подобные; группы, образующие карбомат, такие как бензилоксикарбонил, р-хлорбензилоксикарбонил, рметоксибензилоксикарбонил, р-нитробензилоксикарбонил, 2-нитробензилоксикарбонил, рбромбензилоксикарбонил, 3,4-диметоксибензилоксикарбонил, 4-метоксибензилоксикарбонил, 2-нитро4,5-диметоксибензилоксикарбонил, 3,4,5 -триметоксибензилоксикарбонил, 1 -(п-бифенил)-1 метилэтоксикарбонил, а,а-диметил-3,5-диметоксибензилоксикарбонил, бензидрилоксикарбонил, тбутоксикарбонил, диизопропилметоксикарбонил, изопропилоксикарбонил, этоксикарбонил, метоксикарбонил, алкилоксикарбонил, 2,2,2-трихлорэтоксикарбонил, феноксикарбонил, 4-нитрофеноксикарбонил, флуоренил-9-метоксикарбонил, циклопентилоксикарбонил, адамантилоксикарбонил, циклогексилоксикарбонил, фенилтиокарбонил и подобные; алкильные группы, такие как бензил, трифенилметил, бензилоксиметил и подобные; и силильные группы, такие как триметилсилил и подобные. Предпочтительные Ν-защитные группы включают формил, ацетил, бензоил, пивалоил, т-бутилацетил, фенилсульфонил, бензил (Βζ), т-бутоксикарбонил (ВОС) и бензилоксикарбонил (СЬ/).
Также в Огеепе Пж! широко описаны гидроксильные и/или карбоксильные защитные группы и включают эфиры, такие как метил, замещенные метиловые эфиры, такие как метоксиметил, метилтиометил, бензилоксиметил, т-бутоксиметил, 2-метоксиэтоксиметил и т.п., силиловые эфиры, такие как триметилсилил (ΤΜδ), т-бутилдиметилсилил (ΤΒΌΜδ), трибензилсилил, трифенилсилил, т-бутил- 23 028974
дифенилсилил, триизопропилсилил и т.п., замещенные этиловые эфиры, такие как 1-этоксиметил, 1метил-1-метоксиэтил, т-бутил, алил, бензил, р-метоксибензил, дифенилметил, трифенилметил и т.п., аралкильные группы, такие как тритил и пиксил (производные 9-гидрокси-9-фенилксантена, в частности хлорид). Сложноэфирные гидроксизащитные группы включают эфиры, такие как формиат, бензилформиат, хлорацетат, метоксиацетат, феноксиацетат, пивалоат, адамантоат, мезитоат, бензоат и т.п. Карбонатные гидроксизащитные группы включают метилвинил, аллил, циннамил, бензил и т.п.
В одном из аспектов настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения, характеризующиеся формулой (I), и фармацевтически приемлемый носитель. Терапевтически эффективное количество в данном контексте является количеством, достаточным для стабилизации или уменьшения вирусной инфекции, в частности инфекции НСУ, у инфицированных субъектов (например, людей). "Терапевтически эффективное количество" будет изменятся в зависимости от отдельных требований в каждом конкретном случае. Характеристики, которые влияют на дозу, представляют собой, например, тяжесть заболевания, которое подлежит лечению, возраст, вес, общее состояние здоровья и т.п. субъекта, который подлежит лечению, способ и форма введения.
В одном из аспектов настоящее изобретение относится к применению соединения, характеризующегося формулой (I), для лечения пациентов, ранее не получавших лекарственной терапии, то есть пациентов, инфицированных НСУ, которые ранее не проходили лечения против данной инфекции.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к применению соединения, характеризующегося формулой (I), для лечения пациентов, ранее получавших лекарственную терапию, то есть пациентов, инфицированных НСУ, которые ранее проходили лечение против данной инфекции, и у которых впоследствии наблюдается рецидив.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к применению соединения, характеризующегося формулой (I), для лечения пациентов, не отвечающих на лечение, т.е. пациентов, инфицированных НСУ, которые ранее проходили лечение, но которые на него не отвечали.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей профилактически эффективное количество соединения, характеризующиеся формулой (I), как это определено в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель. Профилактически эффективное количество в данном контексте представляет собой количество, достаточное для оказания влияния в качестве профилактического средства против инфекции НСУ у субъектов, подвергающихся риску инфицирования.
В еще одном дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к способу получения фармацевтической композиции, как это определено в настоящем документе, который включает непосредственное смешивание фармацевтически приемлемого носителя с терапевтически или профилактически эффективным количеством соединения, характеризующегося формулой (I), как это определено в настоящем документе.
Таким образом, для введения соединения по настоящему изобретению могут быть получены в виде различных фармацевтических форм. В качестве соответствующих композиций могут быть указаны все композиции, обычно используемые для системного введения лекарственных препаратов. Для получения фармацевтических композиций по настоящему изобретению эффективное количество конкретного соединения необязательно в форме соли присоединения или сольвата комбинируют в качестве активного ингредиента в однородную смесь с фармацевтически приемлемым носителем, причем этот носитель может принимать широкое разнообразие форм в зависимости от формы препарата, предназначенного для введения. Эти фармацевтические композиции являются необходимыми в виде единичной лекарственной формы, пригодной, в частности, для введения перорально, ректально, чрескожно или путем парентеральной инъекции. Например, при получении композиций в виде лекарственной формы для перорального введения, могут применяться любые обычные фармацевтические среды, такие как, например, вода, гликоли, масла, спирты и т. п. в случае пероральных жидких препаратов, таких как суспензии, сиропы, эликсиры, эмульсии и растворы; или твердые носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, смазывающие вещества, связующие вещества, разрыхлители и т.п. в случае применения порошков, пилюль, капсул и таблеток. Таблетки и капсулы представляют собой наиболее предпочтительные пероральные стандартные лекарственные формы из-за простоты их введения, в которых, очевидно, используют твердые фармацевтические носители. В случае композиций для парентерального введения носитель обычно включает стерильную воду, по крайней мере, в большей части, хотя могут быть включены и другие ингредиенты, например, способствующие растворимости. Например, могут быть получены инъекционные растворы, в которых носитель включает физиологический раствор, раствор глюкозы или смесь солевого раствора и раствора глюкозы. Также могут быть получены суспензии для инъекций, при этом применяют подходящие жидкие носители, суспендирующие средства и т. п. Также включены твердые формы препаратов, предназначенные для превращения непосредственно перед применением в препараты жидкой формы. В композициях, подходящих для подкожного введения, носитель необязательно включает средство, усиливающее проникновение и/или подходящее смачивающее средство, необязательно объединенное с подходящими добавками любой природы, присутствующими в незначительных количествах, причем эти до- 24 028974
бавки не оказывают существенного вредного воздействия на кожу. Соединения по настоящему изобретению также можно вводить с помощью пероральной ингаляции или инсуффляции в виде раствора, суспензии или сухого порошка с использованием любой известной в данной области системы доставки.
Для простоты введения и однородности дозы особенно предпочтительно получать вышеуказанные фармацевтические композиции в виде единичной лекарственной формы. Используемая в настоящем документе единичная лекарственная форма относится к физически дискретным единицам, пригодным в качестве единичных доз, причем каждая единица содержит заданное количество активного ингредиента, рассчитанного на получение необходимого терапевтического эффекта в сочетании с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами таких единичных лекарственных форм являются таблетки (включая таблетки с насечками или таблетки с покрытием), капсулы, пилюли, суппозитории, пакетики с порошком, пластинки, инъекционные растворы или суспензии и т.п., а также множество их отдельных форм.
Соединения, характеризующиеся формулой (I), демонстрируют активность против НСУ и могут быть использованы при лечении и/или профилактике инфекции НСУ или заболеваний, связанных с НСУ. Как правило, соединения, характеризующиеся формулой (I), могут быть использованы при лечении инфекции НСУ или заболеваний, связанных с НСУ. Заболевания, связанные с НСУ, включают прогрессирующий фиброз, воспаление и некроз печени, ведущие к циррозу печени, конечной стадии заболевания печени и НСС. Ряд соединений по настоящему изобретению могут быть активными против мутировавших штаммов НСУ. Кроме того, многие из соединений по настоящему изобретению могут демонстрировать благоприятный фармакокинетический профиль и обладать привлекательными свойствами с точки зрения биодоступности, включая приемлемый период полувыведения, ЛИС (площадь под кривой) и пиковые значения, и отсутствие неблагоприятных явлений, таких как недостаточно быстрое начало действия и удержания в тканях.
Противовирусная активность соединений, характеризующихся формулой (I) против НСУ в условиях ίη νίίΓΟ, может быть протестирована на клеточной системе репликона НСУ, основанной на работе ЬоЬтаии с1 а1. (1999) δοίοηοο 285:110-113, с дополнительными модификациями, описанными Кпедег с1 а1. (2001) 1оита1 о£ У1го1о§у 75: 4614-4624 (включен в настоящий документ в качестве ссылки), которая далее описана в разделе примеров. Эта модель, хотя она и не является полной моделью инфекции НСУ, в настоящее время она получила широкое признание в качестве наиболее надежной и эффективной модели автономной репликации РНК НСУ. Следует принять во внимание, что является важным установить различие между соединениями, которые специфически подавляют функционирование НСУ и теми, которые оказывают цитотоксические или цитостатические эффекты в модели репликона НСУ, и, как следствие, приводят к снижению РНК НСУ или связанной с ней указанной концентрации фермента. В данной области известны анализы для оценки клеточной цитотоксичности, основанные, например, на активности митохондриальных ферментов с применением флуорогенных окислительно-восстановительных красителей, таких как резазурин. Кроме того, существуют методы клеточных обратных скринингов, предназначенные для оценки неселективного ингибирования активности связанного гена-репортера, такого как ген люциферазы светлячка. Подходящие типы клеток могут быть стабильно трансформированы вирусной РНК с включением гена-репортера люциферазы, экспрессия которого зависит от его конститутивно активного промотора, и такие клетки могут быть использованы в качестве обратного скрининга для устранения неселективных ингибиторов.
Благодаря своим антивирусным свойствам, в частности их свойствам против НСУ, соединения, характеризующиеся формулой (I), в том числе любые их возможные стереоизомеры, фармацевтически приемлемые соли присоединения или их сольваты, могут быть использованы при лечении теплокровных животных, в частности людей, инфицированных НСУ. Соединения, характеризующиеся формулой (I), также пригодны для профилактики инфекции НСУ. Кроме того, настоящее изобретение относится к способу лечения теплокровных животных, в частности человека, инфицированного НСУ или подвергающихся риску заражения НСУ, причем указанный способ включает в себя введение эффективного против НСУ количества соединения, характеризующегося формулой (I).
Таким образом, соединения по настоящему изобретению могут быть использованы в качестве лекарственного средства, в частности в качестве лекарственного препарата против НСУ. Указанное применение в качестве лекарственного препарата или способа лечения включает системное введение субъектам, инфицированным НСУ, или субъектам, восприимчивым к инфекции НСУ, эффективного количества препарата для борьбы с состояниями, связанными с инфекцией НСУ.
Настоящее изобретение также относится к применению данных соединений в производстве лекарственного препарата для лечения или профилактики инфекции НСУ.
В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению соединений, характеризующихся формулой (I), в производстве лекарственного препарата для лечения инфекции НСУ.
В целом, предполагается, что противовирусное эффективное суточное количество должно составлять от приблизительно 0,01 до приблизительно 700 мг/кг, или от приблизительно 0,5 до приблизительно 400 мг/кг, или от приблизительно 1 до приблизительно 250 мг/кг, или от приблизительно 2 до приблизительно 200 мг/кг, или от приблизительно 10 до приблизительно 150 мг/кг массы тела. Может быть целе- 25 028974
сообразным введение требуемой дозы в виде двух, трех, четырех или большего количества раздельных доз через соответствующие промежутки времени в течение дня. Указанные раздельные дозы могут быть получены в виде единичных лекарственных форм, например, содержащих от приблизительно 1 до приблизительно 5000 мг, или от приблизительно 50 до приблизительно 3000 мг, или от приблизительно 100 до приблизительно 1000 мг, или от приблизительно 200 до приблизительно 600 мг, или от приблизительно 100 до приблизительно 400 мг активного ингредиента на стандартную лекарственную форму.
Настоящее изобретение также относится к комбинации соединения, характеризующегося формулой (I), его фармацевтически приемлемой соли или его сольвату и другому противовирусному соединению, в частности еще одному соединению против НСУ. Термин "комбинация" может относиться к продукту, содержащему (а) соединение, характеризующееся формулой (I), и (Ь) необязательно другому соединению против НСУ, в качестве комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения при лечении инфекций НСУ.
Соединения против НСУ, которые могут быть использованы в таких комбинациях включают ингибиторы полимеразы НСУ, ингибиторы протеазы НСУ, ингибиторы других мишеней в жизненном цикле НСУ, а также иммуномодулирующие средства и их комбинации. Ингибиторы полимеразы НСУ включают ΝΜ283 (валопицитабин), К803, ЛК-109, ЛК-003, НСУ-371, НСУ-086, НСУ-796 и К-1479, К-7128, МК-0608, УСН-759, ΡΡ-868554, Οδ9190, ХТЬ-2125, ММ-107, ΟδΚ625433, К-1626, ВШВ-1941, ΑΝΑ-598, ГОХ-184, ГОХ-375, П\ТХ-189, МК-3281, МК-1220, АВТ-333, ΡδΣ-7851, ΡδΣ-6130, Οδ-7977 (софосбувир), УСН-916. Ингибиторы протеаз НСУ (ингибиторы Νδ2-Νδ3 и Νδ3-Νδ4Α) включают ВI^N-2061, УХ-950 (телапревир), Οδ-9132 (АСН-806), δί'.Ή-503034 (боцепревир), ТМС435350 (симепревир), ТМС493706, ΓΣΜΝ-191, МК-7009, ВВ12202, В!ЬЛ2065, ВК201335, ВΜδ-605339, К-7227, УХ-500, ВΜδ650032, УВУ376, УХ-813, 8СН-6, РНХ-1766, АСН-1625, ГОХ-136, ГОХ-316. Примерами ингибитора Νδ5Α НСУ являются ВΜδ790052, А-831, А-689, ММ-811 и ОЕВЮ-025, которые представляют собой примеры циклофилиновых ингибиторов А5В.
Ингибиторы других мишеней в жизненном цикле НСУ, включают Νδ3 геликазы; ингибиторы металлопротеазы; ингибиторы антисмысловых олигонуклеотидов, такие как ШШ-14803 и ΑΥ^-4065; ингибиторы миРНК, такие как δIКΡ^ЕX-140-N; ингибиторы коротких шпилек РНК, закодированных в векторе (δΟΡΝΑ); ингибиторы ДНК-ферментов; ингибиторы специфических рибозимов НСУ, такие как гепатозим, КР!13919; ингибиторы проникновения в клетку, такие как НереХ-С, НиМах-НерС; ингибиторы альфа-глюкозидазы, такие как целгозивир, ИТ-231В и т.п.; КРЕ-02003002 и ВIУN 401.
Иммуномодулирующие средства включают природные и рекомбинантный изоформы интерферона, включая а-интерферон, β-интерферон, γ-интерферон, и ω-интерферон, такие как ОЦгоп Α®, РоГсгоп-Α®. Сап£егоп-А300®, ΑάναΓβΓοη®, [пГсгдсп®, НитоГегоп®, διιιηίΡΐΌη МР®, ΑΙΓαΓβΓοηβ®, ШМЬйа® и Регоп®; интерфероны связанные с дериватизированным полиэтиленгликолем (пэгилированным), такие как ПЭГ-интерферон-а-2а (Реда8у8®), ПЭГ-интерферон-а-2Ь (РЕСЧйгоп®) и пегилированный-ШМасоп1; препараты длительного действия и дериватизированные интерфероны, такие как альбумин, слитый с интерфероном - альбуферон а; соединения, которые стимулируют синтез интерферона в клетках, таких как резиквимод; соединения, которые усиливают развитие Т-клеточного ответа 1-го типа, такие как δСУ07; интерлейкины; агонисты ТОЬЬ-подобных рецепторов, такие как СрС-10101 (актилон) и исаторибин; тимозин а-1; ΑΝΑ-245; ΑΝΑ-246; гистамина дигидрохлорид; пропагерманиум; тетрахлордекаоксид; амплиген; IΜΡ-321; Ι<ΡΝ-7000; антитела, такие как цивацир и ХТЬ-6865; и профилактические и терапевтические вакцины, такие как IηηοУас С и НСУ Е1Е2/МР59.
Другие противовирусные средства включают рибавирин, амантадин, вирамидин, нитазоксанид; тельбивудин; NОУ-205; тарибавирин; ингибиторы внутреннего сайта первичного связывания рибосомы; вирусные ингибиторы широкого спектра, такие как ингибиторы ИМРОН, микофенольные кислоты и их производные, включая, но не ограничиваясь ими, УХ-497 (тептероФЬ), УХ-148, и/или УХ-944); или комбинации любых из вышеперечисленных.
Конкретные средства для использования в указанной комбинации включают интерферон-а (ΣΡΝ-α), пегилированный интерферон-а или рибавирин, а также в качестве терапевтических средств на основе антител, направленных против эпитопов НСУ, малых интерферирующих РНК (δί КNΑ), рибозимов, ДНК-ферментов, антисмысловой РНК, малых молекул антагонистов, например протеазы Νδ3, геликазы Νδ3 и полимеразы Νδ5Ρ.
В другом аспекте предусмотрены комбинации соединения, характеризующиеся формулой (I), как указано в настоящем документе, и соединения против ВИЧ. Наиболее предпочтительными являются те ингибиторы ВИЧ, которые оказывают положительное воздействие на метаболизм лекарственного препарата и/или его фармакокинетику, которые улучшают биодоступность. Примером такого ингибитора ВИЧ является ритонавир. Таким образом, настоящее изобретение дополнительно относится к комбинации, содержащей (а) соединение, характеризующееся формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль или сольват; и (Ь) ритонавир или его фармацевтически приемлемую соль. Соединение ритонавир, его фармацевтически приемлемые соли, а также способы его получения описаны в патентном документе АО 94/14436. В патентном документе υδ 6037157 и приведенных в настоящем документе ссылках υδ
- 26 028974
5484801, υδ 08/402690, АО 95/07696 и АО 95/09614 раскрывают предпочтительные лекарственные формы ритонавира.
Настоящее изобретение также относится к способу получения комбинации, как это описано в настоящем документе, включающему стадию объединения соединения, характеризующегося формулой (I), с другим средством, таким как противовирусное средство против НСУ или ВИЧ, в частности, с теми, которые упомянуты выше.
Указанные комбинации могут найти применение при изготовлении лекарственного препарата для лечения инфекции НСУ у млекопитающего, инфицированного ей, причем указанная комбинация, в частности, содержащая соединение, характеризующееся формулой (I), как указано выше, и интерферон-а (ΓΡΝ-α), пегилированный интерферон-а или рибавирин. В противном случае настоящее изобретение относится к способу лечения млекопитающего, в частности человека, инфицированного НСУ, включающий введение указанному млекопитающему эффективного количества комбинации, как указано в настоящем документе. В частности, указанное лечение включает системное введение указанной комбинации, а эффективным количеством является такое количество, которое является эффективным при лечении клинических состояний, связанных с инфекцией НСУ.
В одном варианте осуществления вышеупомянутые комбинации получены в виде фармацевтической композиции, содержащей активные ингредиенты, описанные выше, и носитель, как это описано выше. Каждый из активных ингредиентов может быть получен отдельно и составы могут быть введены совместно, или в виде отдельного препарата, содержащего оба соединения, и, при необходимости, могут быть включены дополнительные активные ингредиенты. В первом случае, комбинации могут быть также получены в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения в терапии НСУ. Указанная композиция может иметь любую из форм, описанных выше. В одном варианте осуществления оба ингредиента получены в одной лекарственной форме, такой как комбинация с фиксированными дозами. В конкретном варианте осуществления в настоящем изобретении представлена фармацевтическая композиция, содержащая (а) терапевтически эффективное количество соединения, характеризующиеся формулой (I), в том числе его возможные стереоизомерные формы или его фармацевтически приемлемую соль или его фармацевтически приемлемый сольват, и (б) терапевтически эффективное количество ритонавира или его фармацевтически приемлемую соль, и (с) носитель.
Отдельные компоненты комбинации по настоящему изобретению могут быть введены раздельно в разное время в течение курса терапии или одновременно в виде разделенных или единых комбинированных форм. Настоящее изобретение предназначено для включения всех таких режимов одновременного или альтернативного лечения, и термин "введение" следует интерпретировать соответствующим образом. В предпочтительном варианте осуществления изобретения отдельные лекарственные формы вводят одновременно.
В одном варианте осуществления комбинации по настоящему изобретению содержат количество ритонавира или его фармацевтически приемлемой соли, которое является достаточным, чтобы клинически улучшить биодоступность соединения, характеризующегося формулой (I), по сравнению с биодоступностью, когда указанное соединение, характеризующееся формулой (I), вводят отдельно. В противном случае, комбинации по настоящему изобретению содержат количество ритонавира или его фармацевтически приемлемой соли, которое является достаточным для увеличения по меньшей мере одного из переменных фармакокинетических соединений, характеризующихся формулой (I), выбранных из 11/2, Стт, Стах, С,,, АиС в течение 12 ч, или АиС в течение 24 ч, по сравнению с указанной по меньшей мере одной фармакокинетической переменной, когда соединение, характеризующееся формулой (I), вводят отдельно.
Комбинации по настоящему изобретению можно вводить человеку в виде диапазона конкретных доз для каждого компонента, содержащегося в упомянутых комбинациях, например соединение, характеризующееся формулой (I), как указано выше, и ритонавир или его фармацевтически приемлемая соль, может иметь уровни дозирования в диапазоне от 0,02 до 5,0 г/день.
Весовое отношение соединения, характеризующегося формулой (I), по отношению к ритонавиру может находиться в интервале от приблизительно 30:1 до приблизительно 1:15, или от приблизительно 15: 1 до приблизительно 1:10, или от приблизительно 15: 1 до приблизительно 1:1, или от приблизительно 10: 1 до приблизительно 1:1, или от приблизительно 8: 1 до приблизительно 1:1, или от приблизительно 5: 1 до приблизительно 1:1, или от приблизительно 3: 1 до приблизительно 1:1, или от приблизительно 2:1 до 1:1. Соединение, характеризующееся формулой (I), и ритонавир можно вводить совместно один раз или два раза в день, предпочтительно перорально, при этом количество соединения, характеризующегося формулой (I), на дозу является таким, как описано выше; а количество ритонавира на дозу составляет от 1 до приблизительно 2500 мг, от приблизительно 50 до приблизительно 1500 мг, от приблизительно 100 до приблизительно 800 мг, от приблизительно 100 до приблизительно 400 мг или от 40 до приблизительно 100 мг ритонавира.
- 27 028974
Подробное описание изобретения
Различные варианты осуществления настоящего изобретения и его промежуточные соединения таким образом будут проиллюстрированы следующими примерами. Примеры приведены только с целью дополнительной иллюстрации настоящего изобретения и никоим образом не ограничивают объем настоящего изобретения. Названия соединений получали при помощи программного обеспечения СЬетГ)га\у ЦИга, СашЬгЫдезой, версия 12.0.2.
В дополнение к приведенным выше определениям, ниже приведены следующие сокращения, которые используются в примерах и схемах синтеза. Если используемое в настоящем документе сокращение не определено, оно имеет общепринятое значение.
Вп - Бензил,
Βζ - бензоил,
ВОР-С1 - бис-(2-оксо-3-оксазолидинил)фосфинхлорид,
Βζ - бензоил,
ИСС - дициклогексилкарбодиимид,
ИСМ - дихлорметан,
ΌΣΕΛ - диизопропилэтиламин,
ΌΜΆΡ - 4-диметиламинопиридин,
ΌΜΕ - Ν,Ν-диметилформамид,
ΌΜΡυ - 1,3-диметил-3,4,5,6-тетрагидро-2-пиримидинон,
ЕГ)С - 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимидгидрохлорид,
Е3 - электрораспыление,
Εί3Ν - триэтиламин,
ЕЮЛс - этилацетат,
ЕЮН - этанол,
ЕьО - диэтиловый эфир,
БС - жидкостная хроматография,
НОАс - уксусная кислота,
ПРЕС - высокоэффективная жидкостная хроматография,
ΜеСN - ацетонитрил,
МеОН - метанол,
М3 - масс-спектрометрия,
ΝΤ - 3-нитро-1,2,4-триазол,
ΝΤΡ - нуклеозид трифосфат,
Рд - защитная группа,
РЬ - фенил,
3ЕМ - стандартная ошибка среднего,
ТЕ3Т - бис-(триэтоксисилил)пропилтетрасульфид,
ТНЕ - тетрагидрофуран,
ТЕА - трифторукусная кислота,
ТЕАА - трифторуксусный ангидрид,
ТХР3 - триизопропилсилил.
Следующие фенолы получали и применяли для получения промежуточных соединений для соединений по настоящему изобретению.
Фенол 1
Стадия а). 1-(3-((трет-Бутилдиметилсилил)окси)фенил)этанон (РЬ1-а).
Имидазол (4,46 г, 65,5 ммоль) добавляли к раствору 3-гидроксиацетофенона (4,46 г, 32,8 ммоль) в ΌΜΕ (6 мл). Через 5 мин добавляли раствор ТВИМ3-С1 (4,69 г, 31,1 ммоль) в ΌΜΕ (4 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 90 мин, затем выливали в гексан, содержащий 5% ЕЮАс, (200 мл) и промывали 1 М НС1 (60 мл), водой (60 мл), насыщенным раствором бикарбонатом натрия (2x60 мл), водой (60 мл) и солевым раствором (60 мл). Органический слой высушивали над Ж23О4, фильтровали и концентрировали, полученный остаток очищали с помощью флэшхроматографии на силикагеле с последующим элюированием гексаном/ЕЮАс с получением титульного соединения (5,7 г, 69%).
Стадия Ь). трет-Бутилдиметил(3-(проп-1-ен-2-ил)фенокси)силан (РЬ1-Ь).
Метил(трифенилфосфоний)бромид (10,2 г, 28,4 ммоль) суспендировали в сухом ТНЕ (30 мл) в атмосфере азота и суспензию охлаждали до 0°С. К смеси по каплям добавляли н-бутиллитий (17,8 мл, 28,4 ммоль) и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. К смеси до- 28 028974
бавляли РБ1-а (5,7 г, 22,8 ммоль) и обеспечивали возможность протекания реакции при комнатной температуре в течение 60 мин. Реакцию гасили водным раствором бикарбоната натрия и экстрагировали диэтиловым эфиром (50 мл). Органический слой промывали раствором бикарбоната натрия, сушили (Ыа25О4), фильтровали и концентрировали. Полученный остаток очищали посредством пропускания через силикагель с использованием элюирования гексаном с получением титульного соединения (3,9 г, 69%).
Стадия с). трет-Бутилдиметил(3-(1-метилциклопропил)фенокси)силан (РЫ-с).
В охлажденный (0°С) раствор олефина РБ1-Ь (3,9 г, 15,7 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (60 мл) по каплям добавляли диэтилцинк в гексане (439,2 ммоль) в атмосфере азота в течение 10 мин. По каплям добавляли дийодометан (6,32 мл, 78,5 ммоль) и полученную смесь перемешивали при 0°С в течение 30 мин, а затем позволяли раствору достичь комнатной температуры в течение ночи. Смесь выливали в ледяной раствор хлорида аммония и экстрагировали диэтиловым эфиром. Органический слой промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия, сушили (Ыа25О4), фильтровали и концентрировали. Неочищенное соединение растворяли в гексане, а остающийся дийодметан удаляли.
Слой гексана концентрировали до получения неочищенного соединения, которое растворяли на последующем этапе без какой либо дополнительной очистки.
Стадия ά). 3-(1-Метилциклопропил)фенол (фенол 1).
РБ1-с (3,45 г, 13,1 ммоль) растворяли в 1 М растворе тетрабутиламмонийфторида в ТНР (20 мл, 20 ммоль) и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакцию гасили 1 М НС1 (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (100 мл). Органический слой промывали солевым раствором (2x50 мл), сушили (Ыа25О4), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с последующим элюированием смесью 2-пропанол, ЕЮАс и гексан с получением титульного соединения (0,56 г, 29%). Μδ 147,1 [М-Н]-.
Фенол 2
Фенол 2
Титульное соединение получали из 4-гидроксиацетофенона (6,0 г, 44,1 ммоль) с использованием способа, описанного для получения фенола 1. Выход 53%.
Фенол 3
Стадия а). 1-(3-(Бензилокси)фенил)циклопентанол (РБ3-а).
Йод, подогретый с магнием, добавляли к суспензии магниевой стружки (1,29 г, 52,8 ммоль) в сухом ТНР (50 мл). Смесь нагревали с обратным холодильником и добавляли приблизительно 5% раствора 3бромофенола (13,9 г, 52,8 ммоль). Когда реакция начиналась, по каплям добавляли раствор брома и смесь нагревали в колбе с обратным холодильником в течение еще 1 ч. Смесь охлаждали до приблизительно 5°С и по каплям добавляли раствор циклопентанона (4,44 г, 52,8 ммоль) в ТНР (50 мл). Смесь перемешивали при КТ в течение 72 ч, затем реакцию гасили охлажденным насыщенным раствором хлорида аммония и экстрагировали диэтиловым эфиром (х3). Органическую фазу промывали солевым раствором, сушили (Ыа28О4), фильтровали и концентрировали. Продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле (изогексан/ЕЮАс) с получением титульного соединения (8,5 г, 54%).
Стадия Ь). 1-(Бензилокси)-3-(циклопент-1-ен-1-ил)бензол (РБ3-Ь).
п-Толуолсульфоновую кислоту добавляли к раствору РБ3-а (8,4 г, 28,2 ммоль) в бензоле (100 мл). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 3 ч с заградителем ΏΜΡ, затем охлаждали до КТ, разбавляли диэтиловым эфиром и промывали насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и солевым раствором. Органическую фазу сушили (Ыа28О4), фильтровали и концентрировали. Продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле (изогексан/ЕЮАс) с получением титульного соединения (6,45 г, 91%). Μδ 249,4 [М-Н]-.
Стадия с). 3-Циклопентилфенол (фенол 3).
Раствор РБ3-Ь (6,4 г, 26 ммоль) в ЕЮАс (75 мл) и ЕЮН (75 мл) гидрогенизовали при 22°С и 40 фунт/кв.дюйм в присутствии 10% Рд на углероде (1,5 г) в Рагг в течение ночи. Катализатор отфильтровывали и промывали ЕЮАс и ЕЮН. Растворитель выпаривали при пониженном давлении и выделяли продукт с помощью хроматографии на силикагеле (изогексан/ЕЮАс) с получением титульного соединения (3,6 г, 82%). Μδ 161,2 [М-Н]-.
- 29 028974
Фенол 4
РМ-а Фенол 4
Стадия а). трет-Бутил(3-циклопропилфенокси)диметилсилан (РЬ4-а).
Суспензию (3-бромфенокси)(трет-бутил)диметилсилана (5,46 г, 19 ммоль), циклопропилборной кислоты (2,12 г, 24,7 ммоль), трехосновного фосфат калия (14,1 г, 66,5 ммоль), трициклогексилфосфина (0,53 г, 1,9 ммоль) и Рй(ОАс)2 (0,21 г, 0,95 ммоль) в толуоле (80 мл) и воде (4 мл) перемешивали при 110°С в течение ночи. Суспензию разбавляли диэтиловым эфиром и промывали водой и солевым раствором. Органическую фазу сушили (Мд8О4), фильтровали и концентрировали. Неочищенное соединение очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (ЕЮАс/гексан), с получением титульного соединение (1,94 г, 41%).
Стадия Ь). 3-Циклопропилфенол (фенол 4).
1 М тетрабутиламмонийфторид (10,1 мл, 10,1 ммоль) добавляли к раствору РЬ4-а (1,94 г, 7,81 ммоль) в ТНР (25 мл). Раствор перемешивали в течение 2 ч, затем растворитель выпаривали и остаток растворяли в ЕЮАс и промывали дважды концентрированным Ν^Ο (водн.) и один раз солевым раствором. Органическую фазу сушили (Мд8О4), фильтровали и концентрировали. Неочищенное соединение очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (гексан/этилацетат 9:1 с 1% изопропилового спирта) с получением незначительно загрязненного титульного соединения (1,24 г, 119%).
Фенол 5
Вг РН5-а РН5-Ь Фенол 5
Стадия а). 2-(4-Бромфенокси)тетрагидро-2Н-пиран (РЬ5-а).
4-Бромфенол (3,75 г, 21,7 ммоль) растворяли в 3,4-дигидро-2Н-пиране (16 мл, 175 ммоль), добавляли каталитическое количество п-толуолсульфоновой кислоты (15 мг, 0,09 ммоль) и смесь перемешивали при 22°С в течение 45 мин. Смесь разбавляли диэтиловым эфиром и промывали 1 М №О11 (водн.) х2, водой, сушили (№28О4) и концентрировали, с получением титульного соединения (5,57 г, 99%).
Стадия Ь). 2-(4-Циклопропилфенокси)тетрагидро-2Н-пиран (РЬ5-Ь).
Раствор 0,5М циклопропилбромида магния в ТНР (6,5 мл, 3,25 ммоль) добавляли в течение 15 мин к раствору РЬ5-а (552,5 мг, 2,15 ммоль), ΖηΒτ (144 мг, 0,64 ммоль), три-трет-бутилфосфин тетрафторбората (35,6 мг, 0,12 ммоль) и Рй(ОАс)2 (29,5 мг, 0,13 ммоль) в ТНР (4 мл). Смесь перемешивали при 22°С в течение 90 мин, затем охлаждали на ледяной бане и добавляли ледяную воду (10 мл). Смесь экстрагировали ЕЮАс х3 и экстракты промывали солевым раствором, а затем сушили (№28О4), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/ЕЮАс) с получением титульного соединения (292 мг, 62%).
Стадия с). 4-Циклопропилфенол (фенол 5).
Моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты (18,9 мг, 0,1 ммоль) добавляли к раствору РЬ5-Ь (2,28 г, 10,45 ммоль) в МеОН (15 мл). Смесь нагревали при 120°С в течение 5 мин в микроволновом реакторе, затем концентрировали и очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/ЕЮАс). Полученные твердые частицы выкристаллизовывали из петролейного эфира с получением титульного соединения (1,08 г, 77%).
Фенол 6
РК6-а Стадия с ( РН6-Ь’ Г - Ме
Л Фенол 6, К - Н
Стадия а). 1-(3-Метоксифенил)циклобутанол (РЬ6-а).
1 М раствор 3-метоксифенил магнийбромида в ТНР (2,11 г, 99,8 ммоль) добавляли по каплям при температуре от 0 до 10°С к перемешанному раствору циклобутанона (6,66 г, 95 ммоль) в диэтиловом эфире (65 мл). Смесь перемешивали в течение 3 ч при температуре 0-10°С, затем смесь добавляли к ледяному насыщенному раствору Ν^Ο (300 мл) и воде (300 мл). Смесь перемешивали в течение 10 мин, затем три раза экстрагировали диэтиловым эфиром. Органическую фазу сушили, (№28О4), фильтровали и концентрировали. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле (изогексан/ЕЮАс), с получением титульного соединения (16,9 г, 86%).
Стадия Ь). 1-Циклобутил-3-метоксибензол (РЬ6-Ь).
10% Рй на углероде (2,5 г) добавляли к раствору РЬ6-а (15,4 г, 86,1 ммоль) в этаноле (200 мл) и смесь гидрогенизовали в Рагг при 60 фунт/кв.дюйм. Через 18 ч добавляли дополнительные 10% Рй на углероде (1,5 г) и смесь гидрогенизировали в течение дополнительных 18 ч при 60 фунт/кв.дюйм. Ката- 30 028974
лизатор отфильтровывали и промывали ЕЮН и ЕЮАс. Раствор концентрировали при пониженном давлении и выделяли неочищенный продукт с помощью хроматографии на силикагеле (изогексан/ЕЮАс) с получением титульного соединения (14,0 г, 77%).
Стадия с). 3-Циклобутилфенол (фенол 6).
Раствор 1 М трибромид бора (18,1 г, 72,2 ммоль) в ЭСМ добавляли по каплям при 0°С к раствору РБ6-Ь (10,6 г, 65,6 ммоль) в сухом ЭСМ (65 мл). Смесь перемешивали в течение 2,5 ч при -5°С, затем реакцию гасили охлажденным насыщенным раствором ЫН4С1 и три раза экстрагировали ЭСМ. Органическую фазу сушили (Ыа28О4), фильтровали и концентрировали. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле (изогексан/ЕЮАс) с получением титульного соединения (9,73 г, 88%).
Фенол 7
РИ7-а Фенол 7
Стадия а). 1-(4-(Бензилокси)фенил)циклобутанол (РБ7-а).
Раствор 1-(бензилокси)-4-бромбензола (2,63 г, 100 ммоль) в диэтиловом эфире:ТНР 1:1 (100 мл) добавляли по каплям при нагревании с обратным холодильником в течение ~1 ч к суспензии магниевой стружки (2,43 г) и остаточному количеству йода в диэтиловом эфире (50 мл). После завершения добавления, смесь нагревали с обратным холодильником в течение 4 ч, затем охлаждали до ~0°С. Добавляли сухой ТНР (50 мл) с последующим медленным добавлением раствора циклобутанона (7,01 г, 100 ммоль) в диэтиловом эфире (50 мл) и смесь оставляли для достижения КТ. После перемешивания в течение 2 ч добавляли охлажденный насыщенный раствор ЫН4С1 (500 мл) и смесь перемешивали в течение 15 мин, затем дважды экстрагировали ЕЮАс. Органическую фазу промывали солевым раствором, сушили с сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Продукт очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением титульного соединения (12,5 г, 42%).
Стадия Ь). 4-Циклобутилфенол (фенол 7).
Ρά 10% на углероде (2,55 г, 21,5 ммоль) добавляли в атмосфере аргона к раствору РБ7-а (12,4 г, 41,4 ммоль) в абсолютном ЕЮН (110 мл) и смесь гидрогенизовали при 45 фунт/кв.дюйм при КТ в течение 18 ч. Катализатор отфильтровывали, промывали этанолом и раствор концентрировали. Продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле (изогексан-ЕЮАс). Соответствующие фракции объединяли и концентрировали и остаток выкристаллизовывали из петролейного эфира с получением титульного соединения (3,15 г, 51%).
Фенол 8
РН-8
4-(1-Метилциклопентил)фенол (РБ-8).
Раствор 1-метилциклопентанола (2,00 г, 20,0 ммоль) и фенола (2,07 г, 22,0 ммоль) в пентане (50 мл) добавляли по каплям в течение 30 мин к свежеприготовленной суспензии А1С13 (1,33 г, 10 ммоль) в пентане (100 мл). Полученную смесь перемешивали в атмосфере Ы2 при КТ в течение 72 ч, затем реакционную смесь выливали в воду/лед и НС1 (12 М, 20 ммоль, 1,66 мл). Органическую фазу промывали водой (50 мл) и солевым раствором (50 мл), сушили (Ыа28О4), фильтровали и концентрировали. Неочищенное соединение очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (МеОН-ЭСМ) с получением титульного соединения (426 мг, 12%).
Фенол 9
Стадия а). 2-(4-Бром-3-метилфенокси)тетрагидро-2Н-пиран (РБ9-а).
рТь (16 мг, 0,086 ммоль) добавляли к раствору 4-бром-3-метилфенола (4,0 г, 21,4 ммоль) в 3,4дигидро-2-Н-пиране (16 мл, 175 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, затем разбавляли диэтиловым эфиром и промывали 1 М ЫаОН (водн.) и водой. Органическую фазу сушили (Ыа28О4), фильтровали и концентрировали. Неочищенное соединение очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (ЕЮАс/гептан) с получением титульного соединения (3,32 г, 57%).
Стадия Ь). 2-(4-Циклопропил-3-метилфенокси)тетрагидро-2Н-пиран (РБ9-Ь) РБ9-а (3,12 г, 11,5 ммоль), ΖπΒγ2 (2,59 г, 11,5 ммоль), три-трет-бутилфосфин тетрафторборат (0,2 г, 0,69 ммоль) и РР(ОАс)2 (258 мг, 1,15 ммоль) помещали в колбу и продували через нее Ы2 несколько раз. ТНР (10 мл) добавляли
- 31 028974
при перемешивании с последующим добавлением по каплям 0,5 М циклопропилмагнийбромида в ТНР (35 мл, 17,4 ммоль) в течение 5 мин. Смесь перемешивают при комнатной температуре, затем фильтровали путем пропускания через слой целита и элюировали МеОН. Раствор концентрировали и неочищенное соединение очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (ЕЮАс/гептан) с получением титульного соединения (1,69 г, 57%).
Стадия с). 4-Циклопропил-3-метилфенол (фенол 9).
Рй9-Ь (1,70 г, 7,30 ммоль) растворяли в МеОН (20 мл) и добавляли рТьхН2О (318 мг, 1,67 ммоль). Смесь перемешивали при 22°С в течение 30 мин, затем концентрировали. Неочищенное соединение очищали с помощью колоночной хроматографии (ЕЮАс/гептан) с получением титульного соединения (704 мг, 65%).
Фенол 10
Стадия а). 4-Циклопропил-1-метокси-2-метилбензол (Рй10-а).
4-Бром-1-метокси-2-метилбензол (4,39 г, 21,9 ммоль) вступал в реакцию с циклопропилмагний бромидом в соответствии с процедурой, описанной в этапе Ь при получении РН9 с получением титульного соединения (1,54 г, 43%).
Стадия Ь). 4-Циклопропил-2-метилфенол (фенол 10).
ВВг3 (5 мл, 5 ммоль) добавляли в атмосфере Ν2 при 0°С к раствору Рй10-а (1,54 г, 9,49 ммоль) в ОСМ (7,5 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч, затем гасили МеОН (3 мл) и концентрировали. Неочищенное соединение растворяли в ЕЮАс и промывали солевым раствором. Органическую фазу сушили (№23О4), фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением титульного соединения (826 мг, 59%). М3 147,11 [М-Н]-.
Фенол 11
Фенол 11
4-Циклопропил-3-метоксифенол (фенол 11).
Титульное соединение получали из 4-бром-3-метоксифенола (1,11 г, 5,49 ммоль) в соответствии с процедурой, описанной для получения фенола 9. Выход 40%.
Фенол 12
Стадия а). 3-(Диметиламино)-1-(3-гидроксифенил)пропан-1-он (Рй12-а).
Несколько капель НС1 добавляли к раствору 3-гидрокси-ацетофенона (4,08 г, 30 ммоль), параформальдегида (4,05 г, 45 ммоль) и гидрохлорида диметиламина (2,69 г, 33 ммоль) в абсолютном этаноле (100 мл) и реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 18 ч. Добавляли дополнительное количество диметиламина гидрохлорида (0,55 экв., 1,22 г), параформальдегида (0,5 экв., 1,35 г) и НС1 (0,5 мл) и реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение дополнительных 4 ч, затем охлажденный до КТ. Осажденные белые твердые частицы собирали и промывали охлажденным ЕЮН (50 мл) и охлажденным ацетоном (10 мл), а затем лиофилизировали с получением титульного соединения (2,59 г, 38%), которое применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия Ь). Циклопропил(3-гидроксифенил)метанон (фенол 12).
К перемешанной суспензии йодида триметилсульфоксония (6,20 г, 28,2 ммоль) в ΏΜ3Ο (100 мл) при КТ частями добавляли ΝαΙΙ (60% дисперсия минерального масла) (1,13 г, 28,2 ммоль). Через 1 ч частями добавляли твердый Рй12-а (2,59 г, 11,3 ммоль) при перемешивании и охлаждении. Реакционную смесь перемешивали при КТ в течение 40 ч, затем выливали в охлажденную воду (200 мл) и экстрагировали ОСМ (3х100 мл). Органическую фазу промывали насыщенным водным раствором N11X4 (2х100 мл), сушили (№23О4), фильтровали и концентрировали. Полученное неочищенное соединение очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (МеОН/ОСМ) с получением титульного соединения (883 мг, 48%).
- 32 028974
Фенол 13
о о
Фенол 13
Стадия а). Циклопропил(4-гидроксифенил)метанон (РН13).
п-Гидрокси-у-хлорбутирофенон (4,95 г) добавляли частями в течение приблизительно 30 мин к раствору ΝαΟΙ I (8 мл, водн., 50% вес./вес.), добавляли затем ΝαΟΙ I (35 мл, водн., 25% вес./вес.) с последующим добавлением п-гидрокси-у-хлорбутирофенона (4,95 г) в виде одной части. Температуру понижали до 140°С и добавляли ΝαΟΙ I (8 г). Через 90 мин добавляли Н2О (10 мл), и после дополнительных 60 мин реакционную смесь охлаждали, разбавляли Н2О и нейтрализовали НО Ас (-27-30 мл) путем доведения рН до -7. Образованный осадок фильтровали, промывали Н2О и сушили в вакууме. Твердые частицы растирали в порошок в СНС13 (200 мл) при 40°С в течение 10 мин, затем при КТ в течение ночи. Суспензию нагревали до 40°С в течение 30 мин, затем фильтровали. Фильтрат сушили (М§8О4), фильтровали и концентрировали до достижения -70 мл. Добавляли гексан и образовывалось масло, которое в конечном счете превращалось в кристаллы. Суспензию фильтровали, твердые частицы промывали СНС13/гексаном и сушили с получением титульного соединения (4,15 г, 51%).
Фенол 14
РН14-а Фенол 14
Стадия а). 3-(1-Гидрокси-2,2-диметилпропил) фенол (РН14-а).
1.Ви-М§Вг (1,5 водн.) добавляли по каплям в течение 30 мин к охлажденной (-10°С) смеси 3гидроксибензальдегида (2,00 г, 16,4 ммоль) в диэтиловом эфире (20 мл). Одновременно добавляли ТНР (20 мл). Смеси позволяли достичь температуры 23°С и перемешивали в течение 6 ч. Добавляли большее количество ТВи-МдВг (0,7 водн.) и смесь оставляли перемешиваться в течение ночи, затем ее охлаждали и реакцию гасили водным насыщенным раствором ПН4С1 с получением. К смеси добавляли ЕЮАс с последующим добавлением 1 М водной НС1 до получения гомогенной смеси. Фазы разделяли и органическую фазу промывали солевым раствором, сушили (Να2δ(.)4), фильтровали и концентрировали. Неочищенное соединение очищали с помощью колоночной хроматографии с получением титульного соединения (1,1 г, 37%).
Стадия Ь). 1-(3-Гидроксифенил)-2,2-диметилпропан-1-он (РЫ4).
В высушенную в печи круглодонную колбу добавляли 3 Α Μδ и пиридинийхлорхромат (РСС) (1,97 г, 9,15 ммоль) с последующим добавлением сухого 1)СМ (5 мл). Смесь перемешивали при 20°С в течение 5 мин, после чего медленно добавляли смесь АА8019 (1,10 г, 6,10 ммоль) в 1)СМ (5 мл). После полного окисления смесь фильтровали путем пропускания через слой целита при промывании слоя диэтиловым эфиром. Фильтрат концентрировали. Неочищенное соединение очищали с помощью колоночной хроматографии с получением титульного соединения (402 мг, 37%). Μδ 179,25 [М+Н]+.
Фенол 15
Фенол 15
1-(4-Гидроксифенил)-2,2-диметилпропан-1 -он (РЫ5).
Обеспечивали реакцию 4-гидроксибензальдегида (3 г, 24,6 ммоль) в соответствии с процедурой, описанной при получении фенола 14 с получением титульного соединения (538 мг, 17%)
Аминокислота 1
Стадия а). ^)-^)-втор-Бутил-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)пропаноат (АА1-а).
Ь-Вос-аланин (2,18 г, 11,5 ммоль) растворяли в сухом ОСМ (40 мл) и добавляли спирт (К)-бутан-2ол (938 мг, 12,6 ммоль). Смесь охлаждали до приблизительно 5°С и добавляли Е1)С (3,31 г, 17,2 ммоль) в виде одной части с последующим добавлением частями ОМАР (140 мг, 1,15 ммоль). Смеси позволяли достичь комнатной температуры и ее перемешивали в течение ночи, затем разбавляли этилацетатом (~300 мл) и органическую фазу промывали три раза насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и один раз солевым раствором. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Продукт выделяли с помощью хроматографии на силикагеле с последующим элюированием изогексаном и 10% этилацетатом с получением титульного соединения (2,78 г, 98%).
- 33 028974
Стадия Ь). (8)-(8)-втор-Бутил 2-аминопропаноат (ЛЛ1-Ь).
Смесь АА1-А (2,77 г, 11,3 ммоль) и моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты (2,15 г, 11,3 ммоль) в ЕЮАс (45 мл) перемешивали в течение 16 ч при температуре 65°С, а затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток выкристаллизовывали из диэтилового эфира с получением титульного соединения (3,20 г, 89%).
Аминокислота 2
ζ о
АА2
(8)-(К)-Пентан-2-ил 2-аминопропаноат (АА2).
Проводили процедуру, описанную для получения АА1, однако применяли (К)-пентан-2-ол вместо (К)-бутан-2-ола с получением титульного соединения (4,6 г).
Аминокислота 3
(8)-(8)-Пентан-2-ил 2-аминопропаноат (АА3).
Проводили процедуру, описанную для получения АА1, однако применяли (8)-пентан-2-ол вместо (К)-бутан-2-ола с получением титульного соединения (8,3 г).
Получали следующие промежуточные соединения, которые можно применять для получения соединений по настоящему изобретению.
Промежуточное соединение 1
Стадия а). (К)-4-Фторбензил 2-((трет-бутоксикарбонил)амино)пропаноат (1-1а).
Вос-^-А1аОΗ (19,92 ммоль), ОМАР (1,99 ммоль) и (4-фторфенил )метанол (23,9 ммоль) растворяли в С^СЦ (100 мл). К этому раствору добавляли триэтиламин (23,9 ммоль) с последующим добавлением ЕЭС (23,9 ммоль) и полученную реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре в атмосфере Ν2. Реакционную смесь разбавляли С^СЦ (100 мл), промывали насыщенным водным раствором NаΗСОз (2x50 мл), насыщенным водным раствором ΝαίΊ (2x50 мл), сушили (№28О4) и концентрировали, полученный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с последующим элюированием н-гексан-ЕЮАс (от 95:5 до 60:40) с получением титульного соединения (4,44 г) в виде белого воскообразного твердого вещества. М8: 296 [М-Н]-.
Стадия Ь). (К)-4-Фторбензил 2-аминопропаноат (1-1Ь).
Соединение 1-1 а (14,93 ммоль) растворяли в 4 М Ηί1/диоксане (40 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, и выпаривали до сухого состояния с получением гидрохлоридной соли титульного соединения (3,4 г) в виде белого порошка. М8: 198[Μ+Η]+.
Стадия с). (2К)-4-Фторбензил 2-((хлор(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (1-1).
РйОРОС12 (4,28 ммоль) добавляли по каплям при -78°С к раствору соединения 1-5Ь (4,28 ммоль) в С^С^ с последующим добавлением по каплям триэтиламина (8,56 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при -78°С в атмосфере Аг и позволяли ей достичь комнатной температуры в течение ночи. Реакционную смесь выпаривали на силикагеле и очищали с помощью хроматографии (нгексан/ЕЮАс (88:12)-(0:100)) с получением титульного соединения (769 мг). 31Р-ЯМР (СВС13) δ: 7,85 (δ) и 7,54 (δ) (КР и 8Р диастереомеры).
Промежуточное соединение 2
1) фенилфосфородихлоридат, Εί3Ν
2) 4-ЫО2-фенол,
Ε13Ν
Стадия с 1-2
Стадия а). (8)-(К)-втор-Бутил-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)пропаноат (1-2а).
Б-Вос-аланин (2,18 г, 11,5 ммоль) растворяли в сухом ОСМ (40 мл) и добавляли спиртовой (К)бутан-2-ол (938 мг, 12,6 ммоль). Смесь охлаждали до приблизительно 5°С и добавляли ЕЭС (3,31 г, 17,2 ммоль) в виде одной части с последующим добавлением частями ОМАР (140 мг, 1,15 ммоль). Смеси позволяли достичь комнатной температуры и ее перемешивали в течение ночи, затем разбавляли этилаце- 34 028974
татом (~300 мл) и органическую фазу промывали три раза насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и один раз солевым раствором. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Продукт выделяли с помощью хроматографии на силикагеле с последующим элюированием изогексаном и 10% этилацетатом с получением титульного соединения (2,78 г, 98%).
Стадия Ь). ^)-(К)-втор-Бутил 2-аминопропаноат (1-2Ь).
Смесь 1-10а (2,77 г, 11,3 ммоль) и моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты (2,15 г, 11,3 ммоль) в ЕЮЛс (45 мл) перемешивали в течение 16 ч при температуре 65°С, а затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток выкристаллизовывали из диэтилового эфира с получением титульного соединения (3,20 г, 89%).
Стадия с). ^)-(К)-втор-Бутил-2-(((4-нитрофенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (1-2).
Фенилдихлорфосфат (1 экв) добавляли в атмосфере азота при -30°С к раствору соединения 1-10Ь (3,15 г, 9,92 ммоль) в ОСМ (75 мл) с последующим добавлением по каплям триэтиламина (2 экв.). Смеси позволяли достичь комнатной температуры и ее перемешивали в течение ночи, затем охлаждали до приблизительно 5°С и добавляли 4-нитрофенол (1 экв., 15 ммоль) в виде твердого вещества с последующим добавлением по каплям триэтиламина (1 экв.-г, 15 ммоль). Смесь перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре, затем концентрировали при пониженном давлении, разбавляли этилацетатом (40 мл) и эфиром (40 мл) и оставляли при комнатной температуре в течение ночи. Соль триэтиламин-НС1 отфильтровывали и концентрировали фильтрат при пониженном давлении. Полученный осадок очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с последующим элюированием изогексанэтилацетатом с получением титульного соединения (4,19 г, 79%).
Следующие соединения получали в соответствии с процедурой, описанной для получения 1-2 с применением соответствующего спирта.
ь# Структура Спирт
1-3 циклопропилметанол
1-4 υ'Ρή циклопентилметанол
1-5 _ I о /=х О" ΌΤθΑΥ м°2 пентан-3-ол
1-6 % „ = о ϊΕ-θΕΗ ° %н 2-пропилпентан-1-ол
Промежуточное соединение 7
Стадия а). ^)-Циклооктил 2-аминопропаноат (1-7а).
Моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты (3,6 г, 19,1 ммоль) добавляли к суспензии Б-аланина (1,7 г, 19,1 ммоль) и циклооктанола (25 мл, 191 ммоль) в толуоле (100 мл). Реакционную смесь нагревали при температуре перегонки в течение 25 ч и удаляли воду из реакционной смеси с использованием насадки Дина-Старка. Смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток выдерживали в вакууме в течение ночи. К остатку (27 г) добавляли диэтиловый эфир (100 мл). Белый осадок собирали путем фильтрации, промывали диэтиловым эфиром (3x50 мл) и сушили в вакууме с получением титульного соединения (4,84 г, 68%).
Стадия Ь). (2δ)-Ι рпкюоктил 2-(((4-нитрофенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (1-7).
Соединение 1-7а вступало в реакцию в соответствии со способом, описанным в этапе с при получении 1-2, с получением титульного соединения (4,7 г, 76%).
- 35 028974
Промежуточное соединение 8
1-8
(25)-Циклогептил 2-(((4-нитрофенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (Σ-22).
Проводили процедуру, описанную для получения соединения Σ-7, однако применяли циклогептан
(27 мл, 224 ммоль) вместо циклооктанола с получением титульного соединения (5,72 г, 55%). Промежуточное соединение 9
1) фенилфосфородихлоридат,
Ε13Ν
2) 4-ЫО2-фенол,
Ε13Ν |-9
(25)-Циклогексил 2-(((4-нитрофенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (3-2з).
Проводили процедуру, описанную в этапе с для получения соединения Σ-2, однако применяли (5)циклогексил 2-аминопропаноат вместо (5)-з,з-диметилбутил 2-аминопропаноата с получением титульного соединения (10,6 г, 82%).
Промежуточное соединение 10
(5)-2-Этилбутил 2-((бис-(4-нитрофенокси)фосфорил)амино)пропаноат (Σ-10).
(5)-2-Этилбутил 2-аминопропаноат (5 г, 14,49 ммоль) добавляли к раствору бис-(4-нитрофенил) фосфорохлоридата (6,14 г, 17,1 ммоль) в Г)СМ (50 мл), смесь охлаждали на ледяной бане и добавляли по каплям 1%\ (4,77 мл, з4,2 ммоль). Через 15 мин охлаждение убирали и реакционную смесь перемешивали при 2з°С до полного завершения реакции в соответствии с ТБС. Затем добавляли диэтиловый эфир, смесь фильтровали и фильтрат концентрировали и очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением титульного соединения (2,05 г, 82%).
Промежуточное соединение 11
Стадия а). (5)-Изопропил 2-аминопропаноат (Σ-Па).
5ОС12 (29 мл, 400 ммоль) добавляли по каплям при 0°С к суспензии НС1 соли Б-аланина (17,8 г, 200 ммоль) в изопропиловом спирте (700 мл). Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, затем концентрировали с получением титульного соединения (29,2 г, 87%).
Стадия Ь). (25)-Изопропил 2-(((((5)-1-изопропокси-1-оксопропан-2-ил)амино)(4-нитрофенокси)фосфорил)амино)пропаноат (Ί-11).
Раствор 4-нитрофенил дихлорфосфат (1,8 г, 7 ммоль) в ОСМ добавляли по каплям при -60°С к раствору амина Σ-Па (2,з5 г, 14 ммоль) и триэтиламина (7,7 мл, 56 ммоль) в ОСМ. Реакционную смесь оставляли до достижения комнатной температуры, перемешивали в течение ночи, концентрировали и затем разбавляли этилацетатом и эфиром, и оставляли при комнатной температуре в течение ночи. Соль триэтиламин-НС1 отфильтровывали, фильтрат концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с последующим элюированием изогексанэтилацетатом с получением титульного соединения (1,6 г, 50%).
Промежуточное соединение 12
Стадия а). (5)-Неопентил 2-((трет-бутоксикарбонил)амино)пропаноат ^-12а).
1Ч)АС и ΏΜΆΡ добавляли частями при -5°С к раствору Вос-аланина (18,9 г, 100 ммоль) и неопентилового спирта (1з,0 мл, 120 ммоль) в ОСМ (200 мл). Реакционную смесь оставляли до достижения комнатной температуры и перемешивали в течение 72 ч. Добавляли ЕЮАс (700 мл) и органическую фазу промывали три раза насыщенным раствором \аНСОз и один раз солевым раствором, затем концентри- з6 028974
ровали. Полученный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии с последующим элюированием гексан-ЕЮАс 90/10-80/20 с получением титульного соединения (21 г, 81%).
Стадия Ь). (8)-Неопентил 2-аминопропаноат (1-12Ь).
п-Толуолсульфоновую кислоту (15,6 г, 82,0 ммоль) добавляли при -65°С к раствору амина, защищенного Вос, 1-12а (21,1 г, 82,0 ммоль) в ЕЮАс (330 мл). Реакционную смесь перемешивали при -65°С в течение 8 ч, затем ее оставляли до достижения комнатной температуры в течение ночи. Затем смесь фильтровали и концентрировали с получением титульного соединения (21 г, 78%).
(28)-Неопентил 2-(((((8)-1-(неопентилокси)-1-аминопропан-2-ил)амино)(4-нитрофенокси)фосфорил)амино)пропаноат (1-12).
4-Нитрофенол дихлорфосфат добавляли по каплям в течение 1 ч при -50°С к раствору амина 1-12Ь (3,90 г, 24,5 ммоль) в ЭСМ (100 мл). Реакционную смесь оставляли до достижения комнатной температуры, перемешивали в течение ночи, концентрировали и затем разбавляли диэтиловым эфиром и оставляли при комнатной температуре в течение ночи. Смесь фильтровали, фильтрат концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с последующим элюированием изогексан-этилацетатом с получением титульного соединения (4,8 г, 77%).
Промежуточное соединение 13
1-13
(28)-Этил 2-((хлор(фенокси)фосфоротиоил)амино)пропаноат (1-13).
Тиофосфорил хлорид (0,27 мл, 2,62 ммоль) добавляли при -35°С в атмосфере Ν2 к раствору фенола (247 мг, 2,62 ммоль) в смеси сухого ОСМ (8,8 мл) и сухого ТНР (4,4 мл). После 5 мин по каплям добавляли триэтиламин (365 мкл, 2,62 ммоль) и перемешивали реакционная смесь при -35°С в течение 3 ч. Добавляли аланин этиловый эфир НС1 (403 мг, 2,62 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 5 мин при -35°С, после чего по каплям добавляли триэтиламин (731 мкл, 5,24 ммоль). Смесь оставляли для медленного достижения КТ в течение ночи (17 ч). Реакционную смесь разбавляли Е12О, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. После флэш-хроматографии (гексан:ЕЮАс 8:1) полученный неочищенный продукт давал указанное в заголовке соединение (659 мг, 82%) в виде чистого масла. М8 306,18 [М-Н]-.
Промежуточное соединение 14
(28)-Неопентил 2-((хлор(4-хлорфенокси)фосфоротиоил)амино)пропаноат (1-14).
4-Хлорфенол (381 мкл, 3,87 ммоль) добавляли в атмосфере азота при -30°С к раствору тиофосфорил
хлорида (400 мкл, 3,87 ммоль) в ОСМ с последующим добавлением по каплям триэтиламина (1,62 мл, 11,6 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч, для достижения температуры 5°С. Добавляли ρΤδ соль (8)-неопентил-2-аминопропаноат (1,28 г, 3,87 ммоль) и смесь охлаждали до -30°С. По каплям добавляли триэтиламин (1,62 л, 11,6 ммоль) и реакционную смесь оставляли для достижения комнатной температуры и ее перемешивали на протяжении выходных. Смесь концентрировали на силикагеле и очищали остаток с помощью флэш-хроматографии, с использованием смеси гексан/этилацетат 7/1 с получением титульного соединения (807 мг, 54%). М8 368,34 [М+Н]+.
Промежуточное соединение 15
(28)-Метил 2-((хлор(нафталин-1-илокси)фосфоротиоил)амино)пропаноат (1-15). Тиофосфорилхлорид (1 экв.) добавляли при -35°С в атмосфере Ν2 к раствору нафтола (1 экв.) в смеси сухого ОСМ (10 мл) и сухого ТНР (5 мл). После 5 мин по каплям добавляли триэтиламин (1 экв.) и перемешивали реакционная смесь при -35°С в течение 3 ч. Добавляли (8)-метил-2-аминопропаноат (1 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 5 мин при -35°С, после чего по каплям добавляли триэтиламин (2 экв.). Смесь оставляли для медленного достижения КТ в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли Е12О, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. В ходе флэшхроматографии (гексан :ЕЮАс 8:1) полученного неочищенного продукта получали титульное соединение в 8,0% М8 564,24 [М+Н]+.
Следующие промежуточные продукты получали в соответствии со способом, описанным для получения промежуточного соединения 13 с применением соответствующего фенола и эфира аминокислоты.
- 37 028974
Ζ 5 θ Н θχ^/^^х^мета ^пара
к# Емета Епаиа
16 (28)-2-этилбутил циклопропил н
17 этил циклопропил н
18 (5)-2-пентил циклопропил н
19 изопропил н циклопропил
20 этил н циклопропил
21 метил н циклопропил
22 изобутил н циклопропил
23 изопропил н н
24 метил метилциклопропил н
25 изопропил циклопропил н
26 изобутил циклопропил н
27 н-бутил циклопропил н
28 метил циклопропил н
29 изопропил циклобутил н
30 метил н н
31 изопропил н н
Промежуточное соединение 32
(28)-(К)-втор-Бутил 2-(((перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (Р32).
Εΐ3Ν (10,9 мл, 78,1 ммоль) добавляли по каплям при -70°С в атмосфере азота в течение 15 мин к перемешанному раствору ρΤδ соли (8)-(К)-втор-бутил-2-аминопропаноату (12,0 г, 37,7 ммоль) в ОСМ (50 мл). К этой смеси добавляли раствор фенилдихлорфосфата (5,61 мл, 37,7 ммоль) в ОСМ (50 мл) в течение 1 ч. Реакционную смесь перемешивали при -70°С в течение дополнительных 30 мин, затем позволяли нагреться до 0°С в течение 2 ч и перемешивали в течение 1 ч. К смеси в течение 20 мин добавляли раствор пентафторфенола (6,94 г, 37,7 ммоль) и Εΐ3Ν (5,73 мл, 41,1 ммоль) в ОСМ (30 мл). Неочищенную смесь оставляли перемешиваться при 0°С в течение 18 ч, а затем концентрировали. Остаток растворяли в ТНР (100 мл), нерастворенные частицы отфильтровывали и несколько раз промывали ТНР. Растворитель выпаривали и остаток растирали в порошок с трет-бутилметиловым эфиром. Нерастворенные частицы отфильтровывали и промывали трет-бутилметиловым эфиром. Объединенный фильтрат концентрировали и неочищенное твердое соединение обрабатывали ультразвуком с н-гексаном/ЕЮЛс (80:20; 100 мл). Твердое соединение фильтровали, промывали н-гексаном/ ЕЮЛс (80:20) с получением чистого Рстериоизомера титульного соединения в виде белого твердого вещества (2,3 г, 13%).
Промежуточное соединение 33
(28)-Этил 2-(((перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (I-33).
Титульное соединение получали в соответствии со способом, описанным для получения ^32, однако процесс получения начинали с добавления НС1 соли (8)-этил 2-аминопропаноата (11,0 г, 71,1 ммоль). Выход 8,56 г, 27%.
- 38 028974
Промежуточное соединение 34
(28)-2-Этилбутил 2-(((перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (П34).
Титульное соединение получали в соответствии со способом, описанным для получения П32, однако процесс получения начинали с добавления рТ§ соли (8)-2-этилбутил 2-аминопропаноата (18,8 г, 54,4
(28)-Бутил 2-(((перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (П35).
Фенилдихлорфосфат (12,4 мл, 83,1 ммоль) добавляли к охлажденной (-20°С) суспензии (8)-бутил 2аминопропаноата (26,4 г, 83,1 ммоль) в Г)СМ (200 мл). Смесь перемешивали в течение 10 мин, затем по каплям добавляли Εΐ3Ν (25,5 мл, 183 ммоль) в течение 15 мин. Смесь перемешивали при -20°С в течение 1 ч, а затем при 0°С в течение 30 мин. Для охлаждения смесь выдерживали на ледяной бане и добавляли пентафторфенол (15,3 г, 0,08 моль) с последующим добавлением по каплям Εΐ3Ν (11,6 мл, 0,08 моль). Смесь перемешивали в течение ночи до медленного достижения 20°С. Добавляли диэтиловый эфир и смесь фильтровали путем пропускания через слой целита, концентрировали и очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с последующим элюированием петролейным эфиром/ ЕЮАс (9:1 8:2). Соответствующие фракции объединяли, концентрировали и выкристаллизовывали из петролейного эфира/ЕЮАс с получением чистого Р-стериоизомера титульного соединения в виде белого твердого
вещества (2,23 г, 5,8%).
Промежуточное соединение 36
1-36
(28)-Циклогексил 2-(((перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (П36). Фенилдихлорфосфат (11,1 мл, 74,4 ммоль) добавляли в виде одной части при -15°С к раствору Ьаланинциклогексил эфира (25,5 г, 74,4 ммоль) в ОСМ (250 мл). Полученную смесь перемешивали в течение 10 мин, затем добавляли триэтиламин (2,2 экв.) в течение периода 10 мин и оставляли для протекания реакции на холоде в течение 30 мин при -15°С, а затем при комнатной температуре в течение 72 ч. Реакционную смесь охлаждали на льду и добавляли пентафторфенол (13,7 г, 74,4 ммоль) с последующим добавлением триэтиламина (1 экв.) в течение 10 мин. Реакционную смесь оставляли до достижения комнатной температуры и перемешивали в течение 30 мин. Нерастворимый материал отфильтровывали путем пропускания через слой целита и промывали осадок на фильтре ОСМ (100 мл). Растворитель выпаривали и остаток сушили в вакууме, затем растворяли в ЕЮАс (200 мл) и перемешивали в течение 20 мин. Нерастворимый материал отфильтровывали путем пропускания через слой целита и промывали осадок на фильтре ЕЮАс (75 мл) и оставляли раствор при 5°С в течение ночи. Образованные кристаллы растворяли в ЕЮАс и промывали раствор 2 М ΝαΟΙ I (х 1), 2 М НС1 (х 1) сушили (Να28Ο4) и концентрировали с получением (2,37 г, 6%) почти чистого диастероизомера титульного соединения (6е=~90%).
Промежуточное соединение 37
(28)-Изопропил 2-(((бензо[6][1,3]диоксол-5-илокси)(перфторфенокси)фосфорил)амино)пропаноат (Б37).
РОС13 (1,79 мл, 19,2 ммоль) добавляли в атмосфере Ν2 при -78°С к раствору сезамола (2,65 г, 19,2 ммоль) в Г)СМ (60 мл) с последующим добавлением по каплям Еда (2,67 мл, 19,2 ммоль). Смесь перемешивали в течение 4 ч при температуре от -20 до -30°С. Смесь охлаждали до -78°С и по каплям добавляли раствор (8)-изопропил-2-аминопропаноата (3,22 г, 19,2 ммоль) в Г)СМ (10 мл) с последующим добавлением Еда (5,62 мл, 40,3 ммоль) в течение 15 мин. Реакционную смесь оставляли до достижения КТ и перемешивали в течение ночи. Затем снижали температуру реакционной смеси до 0°С и добавляли одну часть пентафторфенола (3,53 г, 19,2 ммоль) с последующим добавлением по каплям Еда (2,67 мл,
- 39 028974
19,2 ммоль). Полученную суспензию перемешивали при 0°С. После завершения реакции, о чем судили с помощью ЬС-МЗ, смесь фильтровали и твердое соединение промывали охлажденным ОСМ. Фильтрат концентрировали и повторно растворяли в трет-бутиловом эфире, снова фильтровали, а затем концентрировали. Добавляли Е!ОА:гексан 20:80 и полученную суспензию осторожно нагревали до получения прозрачного раствора. Раствор оставляли до достижения КТ, а затем помещали на -20°С. Через 1 ч образовывались кристаллы, их отфильтровывали, несколько раз промывали гексаном, а затем сушили в вакууме, Выход 1,8 г. Маточный раствор концентрировали и образовавшиеся кристаллы отфильтровывали и сушили в вакууме, выход 5,5 г. Общий выход 7,3 г, 69%. МЗ ЕЗ+ 498,06 [М+Н]+.
Следующие промежуточные продукты получали в соответствии со способом, описанным для получения промежуточного соединения 37 с применением соответствующего фенола и эфира аминокислоты.
_ р\ р 'Г°'Л:4МУ' АХ? Г Кмета -*
Б# Бррто Кмета Клара Выход М5
38 метокси н Н 62% Нет данных
39 Н н метокси 63% Нет данных
401 Н циклопропил Н 27% 494,2 [М+Н]+
43 Н циклобутил Н 20% 508,0 [М+Н]+
441 Н 1метилциклопропил Н 11% 508,0 [М+Н]+
451 Н Н 1метилциклопропил 41% 506,5 [М-Н]’
1 Пентафторфенол добавляли при -78°С, а не при 0°С, как в случае с Т-37.
Промежуточное соединение 41
(2З)-(З)-втор-Бутил 2-(((перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (^41).
Титульное соединение получали в соответствии со способом, описанным для получения ^32, однако вместо (З)-(К)-втор-бутил 2-аминопропаноата начинали добавлять (З)-(З)-втор-бутил 2аминопропаноат (12,0 г, 37,8 ммоль). Выход: 3,33 г, 19%.
Промежуточное соединение 42
(2З)-Пропил 2-(((перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (^42).
Титульное соединение получали в соответствии со способом, описанным для получения ^35, однако вместо рТ§ соли (З)-(К)-втор-бутил-2-аминопропаноата начинали добавлять НС1 соль (З)-пропил 2аминопропаноата (5,62 г, 33,53 ммоль). Продукт перекристаллизовывали из простого изопропилового эфира. Выход: 5,8 г (38%). ЬС-МЗ ЕЗ+ 454,1 [М+Н]+.
Промежуточное соединение 46
Стадия а). (З)-(К)-1-Метоксипропан-2-ил 2-((трет-бутоксикарбонил)амино)пропаноат (Ь46а).
ЕГ)С (6,08 г, 0,03 моль) и 4-(диметиламино)пиридин (0,48 г, 0,004 моль) добавляли к раствору ВосЬ-аланина (5 г, 0,03 моль) и (К)-(-)-1-метокси-2-пропанола (2,59 мл, 0,03 моль) при 0°С. Реакционную смесь оставляли перемешиваться на тающей ледяной бане, а затем перемешивали при комнатной температуре в течение 72 ч. Реакционную смесь концентрировали до ~1/2 объема, разбавляли этилацетатом (400 мл) и промывали насыщенным водным раствором Ν^Ο (200 мл), 10% водным раствором лимонной кислоты (50 мл) и насыщенным раствором водного №11СО3 (200 мл). Органический слой сушили (№2ЗО4), фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (Вю1аде ЗNАР иНга 100 г, 5-30% градиент этилацетата в гептане) с получением титульного соединения в виде прозрачного масла (5,90 г, 85%).
- 40 028974
Стадия Ь). (8)-(К)-1-Метоксипропан-2-ил 2-аминопропаноат (1-46Ь).
Раствор 1-46а (5,88 г) в 4 М НС1 в диоксане (50 мл) перемешивали в течение 90 мин, затем концентрировали и остаток лиофилизировали из диоксана (25 мл) с получением титульного соединения в виде гидрохлорида (5,19 г, 99%).
Стадия с). (28)-(К)-1-Метоксипропан-2-ил 2-(((перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (1-46).
Триэтиламин (9,25 мл, 66,4 ммоль) добавляли по каплям к охлажденному (0°С) раствору (8)-(К)-1метоксипропан-2-ил 2-аминопропаноатгидрохлорида (5,18 г, 22,1 ммоль) в ЭСМ (35 мл). Смесь охлаждали до -78 °С и добавляли раствор фенилдихлорфосфата (3,29 мл, 22,1 ммоль) в ЭСМ (20 мл). Смесь перемешивали в течение 10 мин, а затем по каплям добавляли Ε13Ν (25,5 мл, 183 ммоль) в течение 15 мин. Смесь перемешивали при -78°С в течение 5 мин, затем при 0°С в течение 2 ч. Пентафторфенол (4,07 г, 22,1 ммоль) и Ε13Ν (3,39 мл, 23,3 ммоль) в ЭСМ (20 мл) добавляли по каплям, а затем реакционную смесь оставляли для постепенного достижения комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Смесь концентрировали и добавляли ТНР (50 мл). Твердые частицы отфильтровывали и промывали ТНР (3x25 мл). Фильтрат концентрировали и остаток растворяли в трет-бутилметиловом эфире (50 мл) при помощи обработки ультразвуком. Добавляли гептан (50 мл) и продукт осаждали из раствора путем его отстаивания при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли больше гептана (50 мл) и твердые частицы удаляли путем фильтрации. Осадок промывали трет-бутилметиловым эфиром/гептаном 1:2 (50 мл) и гептаном (50 мл). Осадок сушили в вакууме с получением титульного соединения в виде чистого изомера в соответствии с ЯМР (4,32 г, 40%). РС-М8 Е8+ 484,34 [М+Н]+.
Промежуточное соединение 47
Стадия а). (8)-1,3-Диметоксипропан-2-ил 2-((трет-бутоксикарбонил)амино)пропаноат (Ι-47-а).
ЕРС (2,79 г, 14,5 ммоль), кристаллический 4-(диметиламино)пиридин (229 мг, 1,88 ммоль) и Ε13Ν (5,27 мл, 37,8 ммоль) добавляли к раствору Вос-Р-аланин (2,42 г, 12,8 ммоль) и 1,3-диметоксипропан-2ол (1,52 г, 12,6 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 72 ч, затем разбавляли ЕЮАс и промывали №11С(О (водн., х2), 0,1 М НС1 (водн., х2), сушили (№28О.|) и концентрировали. Полученный неочищенный продукт использовали на следующей стадии.
Стадия Ь). (28)-1,3-Диметоксипропан-2-ил 2-(((перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (Ι-47).
1-47а (3 г, 10,8 ммоль) перемешивали в 4 М НС1 в ТНР (15 мл, 60 ммоль) при 22°С в течение 2 ч, затем концентрировали и два раза выпаривали совместно с толуолом. Полученное масло растворяли в РСМ (40 мл) и добавляли фенилдихлорфосфат (1,62 мл, 10,8 ммоль). Смесь охлаждали на ледяной бане и через 15 мин медленно добавляли ΙΆΝ (3,32 мл, 23,8 ммоль). Смесь перемешивали при 4°С в течение 18 ч, затем температуру медленно доводили до 22°С. Смесь снова охлаждали до 0°С, добавляли пентафторфенол (2,01 г, 10,9 ммоль) с последующим добавлением по каплям ΗρΝ (1,51 мл, 10,8 ммоль). Смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч, а затем при 22°С в течение 5 ч. Смесь фильтровали и промывали твердые соединения ЕЮАс хЗ (в сумме 150 мл). Объединенные органические фазы промывали КаНСО3 (водн., х2) и солевым раствором, а затем сушили (Ка28О4). Раствор пропускали через короткую колонку с диоксидом кремния с последующим элюированием петролейным эфиром/ЕЮАс (8:2). Соответствующие фракции собирали и концентрировали, а полученное масло растворяли в диизопропиловом эфире и обрабатывали гептаном с получением слегка мутного раствора, который затвердевает при отстаивании. Смесь оставляли при 4°С в течение 72 ч, затем твердое соединение собирали фильтрованием с получением титульного соединения (333 мг, 6%). РС Е8+ 514,0 [М+Н]+.
Промежуточное соединение 48
(28)-Пентан-3-ил-2-(((перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (Ι-48).
Титульное соединение получали в соответствии со способом, описанным для получения Ι-32, однако вместо рТз соли (8)-(К)-втор-бутил 2-аминопропаноата начинали добавлять НС1 соль (8)-пентан-3-ил
2-аминопропаноата (3,25 г, 16,6 ммоль). Выход: 8,0 г (18%). РС-М8 Е8+ 482,4 [М+Н]+.
- 41 028974
Промежуточное соединение 49
Титульное соединение получали в соответствии с процедурой, описанной в патентном документе АО 2014078427.
Промежуточное соединение 50
(28)-Изопропил 2-(((перфторфенокси)(хинолин-6-илокси)фосфорил)амино)пропаноат (^50).
Фосфор оксихлорид (1,5 мл, 16,4 ммоль) добавляли к ЭСМ (40 мл) и смесь охлаждали на бане с сухим льдом/ЕЮН. Добавляли 6-гидроксихинолин (2,38 г, 16,4 ммоль) с последующим добавлением по каплям Εΐ3Ν (2,28 мл, 16,4 ммоль) в ОСМ (5 мл). Смесь перемешивали с охлаждением в течение 3 ч, затем добавляли изопропилаланин (2,75 г, 16,4 ммоль) с последующим добавлением по каплям Εΐ3Ν (4,57 мл, 32,8 ммоль). Смесь перемешивали с охлаждением в течение 5 ч. Добавляли пентафторфенол (3,02 г, 16,4 ммоль) с последующим добавлением Εΐ3Ν (2,28 мл, 16,4 ммоль) и смесь перемешивали в течение 72 ч. Смесь разбавляли ЕЮАс (200 мл) и промывали с 0,1 М НС1 (ад) х2, сушили (№28О4) и концентрировали. Остаток очищали на силикагеле с использованием смеси петролейный эфир/ЕЮАс (1:1) с получением раствора бежевого цвета, который затвердевает в ЕЮАс/п-эфире. Твердое соединение собирали фильтрацией с получением титульного соединения (787 мг, 9,5%).
Промежуточное соединение 51
(28)-(8)-1-Метоксипропан-2-ил 2-(((перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат ^-51). Титульное соединение получали в соответствии со способом, описанным для получения ^46, однако вместо (К)-(-)-1-метокси-2-пропанола начинали добавлять (8)-(+)-1-метокси-2-пропанол (0,87 мл, 8,89 ммоль). Выход: 604 мг, 14%. ЬС-М8 Е8 481,5 [М-Н]-.
Пример 1
' и
ΤΙΡ30 Стадия ь
1а
Т1Р8° οιβαι Т|Р5° νο.,,ΟΗ
ΤΙΡ3Ο Р 1с
ΤΙΡ3Ο Р
1ά
О. ,м. ,о
Стадия ί
° !—Д-С1 Стадия д
ΤΙΡ3Ο ΐ
1ί
ΤΙΡ3Ο 'р Стадия с 1Ь
_ -30 о-у
щия е _·
ΤΙΡ3Ο Р
И.
Η°Ύ£,*·
НО Р
1д
Стадия а). (48,5К)-4-((Триизопропилсилил)окси)-5-(((триизопропилсилил)окси)метил)дигидрофуран-2(3Н)-он 1а.
ΤIР8-хлорид (16,4 г, 85 ммоль) добавляли по каплям к ледяному перемешанному раствору (48,5К)4-гидрокси-5-(гидроксиметил)дигидрофуран-2(3Н)-она (3,30 г, 25,0 ммоль) и имидазола (10,2 г, 150 ммоль) в ΏΜΕ (35 мл). Смесь перемешивали в течение 1 ч при 0°С, а затем при КТ в течение 40 ч. Реакцию гасили водой и смесь три раза экстрагировали ЕЮАс. Органическую фазу сушили (№28О4), фильтровали и концентрировали, продукт выделяли с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с последующим элюированием изогексаном и ЕЮАс с градиентом концентраций от 0 до 10%. Смешанные фракции снова очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с последующим элюированием толуолом с получением титульного соединения (11,1 г, 94%).
Стадия Ь). (38,4К,5К)-3-Фтор-4-((триизопропилсилил)окси)-5-(((триизопропилсилил)окси)метил)дигидрофуран-2(3Н)-он (1Ь).
1 М раствор бис-(триметилсилил)амид лития (2,18 г, 13,0 ммоль) добавляли по каплям в течение 10 мин при -70°С к раствору 1а (4,45 г, 10,0 ммоль) и NΡ8I (4,73 г, 15,0 ммоль) в сухом ТНР (50 мл). Смесь
- 42 028974
перемешивали в течение 90 мин при -70°С, затем ее добавляли к насыщенному раствору хлорида аммония и помещали на дробленый лед. Смесь экстрагировали три раза ЕЮАс, органическую фазу сушили (№^О4), фильтровали и концентрировали, продукт выделяли с помощью хроматографии на силикагеле с последующим элюированием изогексаном и ЕЮАс с градиентом концентраций от 0 до 5%. Выход 4,63 г, 67%.
Стадия с). ^,4К,5К)-3-Хлор-3-фтор-4-((триизопропилсилил)окси)-5-(((триизопропилсилил)окси)метил)дигидрофуран-2(3Н)-он (1с).
1 М раствор бис-(триметилсилил)амид лития добавляли по каплям в течение 10 мин при -70°С к раствору 1Ь (3,08 г, 6,65 ммоль) и Ν-хлорсукцинимида (1,07 г, 7,99 ммоль) в сухом ТНБ (25 мл). Смесь перемешивали в течение 90 мин при -70°С, затем ее добавляли к насыщенному раствору хлорида аммония и помещали на дробленый лед. Смесь экстрагировали три раза ЕЮАс, органическую фазу сушили (№^О4), фильтровали и концентрировали, продукт выделяли с помощью хроматографии на силикагеле с последующим элюированием изогексаном и ЕЮАс с градиентом концентраций от 0 до 5%. Выход 2,40 г, 73%.
Стадия ά). ^,4К,5К)-3-Хлор-3-фтор-4-((триизопропилсилил)окси)-5-(((триизопропилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ол (1ά).
1 М раствор ОЮАЬ (2,23 г, 15,7 ммоль) в ΌϋΜ добавляли по каплям в атмосфере аргона при -70°С к раствору 1с (5,20 г, 10,5 ммоль) в сухом толуоле (50 мл). Смесь перемешивали в течение 2 ч при -70°С дробленого льда. Смесь перемешивали в течение 30 мин и затем три раза экстрагировали ЕЮАс. Органическую фазу сушили (№^О4), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Продукт выделяли с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с последующим элюированием ЕЮАс с градиентом концентраций от 0 до 10%. Выход 5,22 г, 85%.
Стадия е). (2δ,3δ,4К,5К)-3-Хлор-3-фтор-4-((триизопропилсилил)окси)-5-(((триизопропилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил метансульфонат (1 е).
Мезилхлорид (688 мг, 6,00 ммоль) медленно добавляли к охлажденному раствору 1ά (2,00 г, 4,01 ммоль) и ТЕА (608 мг, 6,00 ммоль) в ΌϋΜ (20 мл). Смесь перемешивали в течение 3 ч при КТ, затем разводили ЕЮАс (80 мл), промывали насыщенным раствором №НСО3 (водн.), НС1, водой и солевым раствором. Органическую фазу сушили (№^О4), фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт сушили в вакууме, а затем применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия ί). 1-((2К^,4К,5К)-3-Хлор-3-фтор-4-((триизопропилсилил)окси)-5-(((триизопропилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)пиримидин-2,4(1Н,3Н)-дион(11).
Суспензию урацила (699 мг, 6,24 ммоль) и сульфата аммония (25,8 мг, 0,195 ммоль) в гексаметилдисилазане ^ΌΜδ) (40 мл) нагревали с обратным холодильником в течение ночи. Растворитель удаляли в вакууме и остаток растворяли в ^СΜ (60 мл), добавляли 1е (2,25 г, 3,90 ммоль) в атмосфере аргона, а затем медленно добавляли ΤΜδ трифлат. Смесь перемешивали в течение 10 мин при КТ и затем нагревали с обратным холодильником в течение 4 ч. Смесь добавляли к охлажденному раствору гидрокарбоната натрия и три раза экстрагировали ЕЮАс. Органическую фазу промывали солевым раствором и сушили над сульфатом натрия. Раствор выпаривали при пониженном давлении и смесь очищали с помощью хроматографии на силикагеле изогексаном и 20-50% этилацетатом с получением двух соединений - άιΉΡδ (1,29 г, 56%) и моно-ΉΡδ (390 мг, 23%).
Стадия д). 1-((2К^,4К,5К))-3-Хлор-3-фтор-4-гидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2ил)пиримидин-2,4 (1Н,3Н)-дион (1д).
Раствор 1ί (1,27 г, 2,14 ммоль) в 80% уксусной кислоте перемешивали при 80°С в течение 18 ч, затем концентрировали и выпаривали совместно с толуолом. Остаток растворяли в сухом ТНБ (10 мл), добавляли триэтиламин тригидрофторид (1,38 г, 8,56 ммоль) и смесь выпаривали на силикагеле и очищали с помощью хроматографии на силикагеле с последующим элюированием ^СΜ, содержащим от 0 до 10% МеОН. Смешанные фракции очищали с помощью НРЬС на колонке НурегсагЬ с последующим элюированием 10-20% ацетонитрилом и 10 ммоль ацетата аммония с получением титульного соединения (19 мг, 3,2%). Μδ 281,2 [М+Н]+.
1Н ЯМР (500 МГц, ^ΜδΟ) δ 10,39 (5, 1Н), 7,87 (ά, 1=8,1 Гц, 1Н), 6,74 (8, 1Н), 6,22 (ά, 1=16,1 Гц, 1Н, 7), 5,73 (ά, 1=8,1 Гц, 1Н), 5,52 (5, 1Н), 4,21 (άά, 1=19,6, 9,2 Гц, 1Н), 3,87-3,77 (т, 2Н), 3,64 (άά, 1=12,7, 2,8 Гц, 1Н).
13С ЯМР (126 МГц, ^ΜδΟ) δ 162,76, 150,26, 139,06, 115,71, 113,71, 102,28, 86,98, 86,69, 81,01, 73,28, 73,14,58,19.
Пример 2
Н0 Р Н0 Р
- 43 028974
^)-Изопропил 2-(((((2К,3К^,5К)-4-хлор-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)-ил)-4-фтор3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (2).
1 М раствор трет-бутилхлорида магния (0,22 мл, 0,22 ммоль) медленно добавляли в атмосфере аргона к 1 г раствора сахара (28 мг, 0,1 ммоль) в ТНР (1,5 мл). Суспензию перемешивали в течение одного часа при 0°С, затем добавляли ΟΜΗΡ (0,5 мл) с последующим добавлением раствора (^)-пропил 2(((перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноата (57 мг, 0,12 ммоль) (полученного, как описано в патентном документе ^О2011/123672) в ТНР (0,5 мл) при 0°С в течение ~5 мин. Смесь перемешивали в течение 5 ч при 0°С, затем смеси оставляли до достижения КТ и реакцию гасили насыщенным раствором хлорида аммония. Смесь экстрагировали три раза ЕЮАс. Органическую фазу сушили (Ка^О4), концентрировали при пониженном давлении и продукт выделяли с помощью НРЬС (Сепит ΝΧ 30 мм). Градиент от 20 до 60% ацетонитрила, 10 ммоль ацетата аммония в течение 17 мин и поток 40 мл в 1 мин. Выход 22 мг, 40%.
Пример 3
Стадия а). (2К,3К^,5К)-4-Хлор-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)-ил)-4-фтор-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ил ацетат (3а).
4-Метокситритил хлорид (133 мг, 0,43 ммоль) добавляли к раствору соединения 1£ (81 мг, 0,29 ммоль) в пиридине (25 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 40 ч, разбавляли ^СΜ и промывали №НСО3. Органическую фазу концентрировали и остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением титульного соединения (144 мг, 90%).
Полученный соединение растворяли в сухом пиридине (1,4 мл), добавляли Ас2О (29 мкл, 0,31 ммоль) и раствор перемешивали при КТ. Через 2 ч добавляли ΜеОН, смесь концентрировали и экстрагировали 1)С1Ч (х3) и объединенные органические слои промывали насыщенным водными растворами ΝοНСО3, №^О4, смесь концентрировали и один раз выпаривали совместно с ТНР.
Остаток растворяли в 80% НОАс (35 мл) и перемешивали при 45°С в течение 3 ч, затем концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением титульного соединения (69 мг, 33%).
Стадия Ь). Литий ((2К,3К^,5К)-4-хлор-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)-ил)-4-фтор-3гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил трифосфат (3Ь).
Свежеприготовленный раствор 2-хлор-1,3,2-бензодиоксафосфин-4-он (64 мг, 0,31 ммоль) в безводном ТНР (280 мкл) добавляли в атмосфере азота к перемешанному раствору соединения 3а (78 мг, 0,24 ммоль) в смеси безводного пиридина (560 мкл) и безводного ТНР (560 мкл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 15 мин, затем ранее полученный раствор трибутиламмония Р2О7 (146 мг, 0,27 ммоль) и трибутиламина (127 мкл, 0,53 ммоль) в безводном Ι)ΜΓ' (560 мкл) добавляли в атмосфере азота. Полученный раствор перемешивали в течение дополнительных 15 мин при комнатной температуре в атмосфере азота, затем добавляли Ц (123 мг, 0,48 ммоль) в виде раствора в пиридине/воде (98/2, об./об.) (1,1 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 15 мин. Избыток йода нейтрализовали путем добавления ~ 19 капель 5% водного раствора №^О3 и реакционный раствор концентрировали. Остаток растворяли в воде/ацетонитриле (95:5) (5 мл) и оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 30 мин. Добавляли концентрированный раствор аммиака (10 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 11/2 ч при комнатной температуре, затем концентрировали и остаток растворяли в воде/ацетонитриле (95:5, 5 мл) и лиофилизировали.
Неочищенный материал ~430 мг растворяли в 10% ΜеСN/воде (3 мл), фильтровали и очищали с помощью НРЬС на приборе Θΐίδοη, используя колонку Рйепотеиех Йипа 5 мкм N112 (150x21,2 мм).
Растворитель А: 95%вода:5%ацетонитрил: 0,05М бикарбонат аммония.
Растворитель В: 95%вода:5%ацетонитрил: 0,8М бикарбонат аммония.
Градиент: от 0 до 50% В в течение 30 мин.
Фракции NТР объединяли и концентрировали, остаток растворяли в 10% ΜеСN/воде и лиофилизировали. Полученные твердые соединения растворяли в 10% ΜеСN/воде, нерастворенные частицы отфильтровывали путем пропускания через фильтры с фритой 0,45 мкм и прозрачный фильтрат выпаривали до сухого состояния, растворяли в воде/ацетонитриле (95:5), пропускали через 1)о\уех-йГ и лиофили- 44 028974
зировали с получением титульного соединения (39,3 мг, 28%).
1Н ЯМР (500 МГц, Б2О) δ 7,87 (ά, 1=8,2 Гц, 1Н), 6,41 (ά, 1=15,9 Гц, 1Н, 1), 5,98 (ά, 1=8,2 Гц, 1Н), 4,56
(άά, 1=19,1, 9,4 Гц, 1Н, 5), 4,35 (άάάά, 1=42,1, 12,3, 5,1, 2,2 Гц, 3Н), 4,19 (б, 1=9,4 Гц, 1Н,8).
13С ЯМР (126 МГц, И.· О) δ 165,94, 151,67, 140,78, 114,54, 112,55, 103,12, 87,95, 87,62, 79,45, 79,38,
73,16, 73,02, 62,60, 62,56.
Пример 4
^)-Циклогексил-2-(((((2К,3К^,5К)-4-хлор-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)-ил)-4фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (4).
ΐ.ΒπΜ§Ο (13,7 мг, 0,12 ммоль) добавляли в атмосфере Ν2 при 0°С к раствору нуклеозида 1д (15 мг, 0,053 ммоль) в сухом ТНР (2 мл). Полученную суспензию перемешивали в течение 1 ч при 0°С, затем добавляли ΟΜΕΡ (0,5 мл) с последующим добавлением по каплям раствора (2δ)-циклогексил 2(((перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноата (33 мг, 0,067 ммоль) в ТНР (0,5 мл), поддерживая температуру 0°С. Через 4 ч добавляли ΝΙ14С1 (насыщенный водный раствор) и смесь экстрагировали три раза Е1ОАс. Объединенные органические экстракты промывали водой и солевым раствором, затем сушили (№^О4) и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с использованием Вю1аде (δNАР 25 г) с последующим элюированием в градиенте ^СΜ/ΜеОН с последующей дополнительной очисткой, с использованием колонки Аа1ег§ Оеш1ш пх С18, рН 7. Соответствующие фракции объединяли, концентрировали и совместно выпаривали из воды, затем лиофилизировали из ΜеСN и воды с получением титульного соединения в виде белого порошка (9,9 мг, 31,4%). ЬС-Μδ 590,09 [М+Н]+.
Следующие соединения синтезировали путем фосфорилирования нуклеозида 1д с указанным фосфорилирующим средством, с использованием процедуры примера 4.
-0^=0" "-‘УМ-®- ,уд.Л1Й" о «· м ϊ »ί,ΛА?» но Р но Р 1д #
Прим. Структура Р-средство Выход М5 (Е5)
5 η 0 ΊΗ № г ό "V 1-32 4,6 мг, 15% 564,1 [М+Н]+
6 ! о ΊΗ 0 Ηό 1-33 11 мг, 38% 536,08 [М+Н]+
- 45 028974
7 3 ; О ЧН Т \_£.С1 0 Нб 1 Ι-34 5,3 мг, 23%. 589,93 [М-Н]’
8 \ о чн / гула О " Ι-35 12 мг, 39% 564,32 [М+Н]+
9 ! О -У'1,14 Ύ Ή Фл°учо °(У но / \—о Ι-37 4,5 мг, 19% 594,0 [М+Н]+
10 5 О ΜΗ Ύ Г мт-°ю°уЧ Н° № но г 10 Ι-38 9,0 мг, 34% 580,0 [М+Н]+
11 ? о чн Ύ ГЙ'°Л°7Ч° ПГ И-С| 11 Ι-39 12 мг, 43% 580,1 [М+Н]+
12 ? О ЧИ ГГН°пНН _/ \_Д.С1 0-0 Н0 Ι-40 5 мг, 7,7% 590,0 [М+Н]+
13 5 о У''ΊΗ ПГ ГН°Л°уч° Гт Ис| ЧД нб Р 13 1-41 6,5 мг, 14% 564,0 [М+Н]+
14 ? 0 У'ЧИ ПНолоуН> %γ° \_1с| ЕД нб Р 14 Ι-42 2,1 мг, 4,5% 549,9 [М+Н]+
15 = и л - 0 </ ΝΗ ύΤ;.Ού£« <Х> "У* Ι-43 17 мг, 32% 604,0 [М+Н]+
16 , и - 0 (/ ΝΗ Ύ ГфууЧ По нб ν '—' 16 Ι-44 16 мг, 29% 604,0 [М+Н]+
- 46 028974
Стадия а). 1 -((2К,3 3,4К,5К)-3 -Хлор-3 -фтор-4-гидрокси-5-(((6-нитро-2-оксидо-4Н-бензо[Р][1,3,2]диоксафосфинин-2-ил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)пиримидин-2,4(1Н,3Н)-дион (18а).
Нуклеозид 3а (69 мг, 0,21 ммоль) растворяли в смеси ацетонитрил/дихлорметан: 2,7/1,3 (~4 мл) и раствор охлаждали до -20°С в атмосфере азота. К раствору добавляли Е13Х (77 мкл, 0,56 ммоль) с последующим добавлением 2-хлор-6-нитро-4Н-бензо[Р][1,3,2]диоксафосфинина (125 мг, 0,54 ммоль), полученного в виде раствора в ЭСМ (1,34 мл; 2 ммоль разводили до 5 мл с получением маточного раствора). Охлаждающую баню убирали и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. После 11/2 ч реакционную смесь охлаждали до -5°С и добавляли раствор Охопе®, (0,855 ммоль) в воде (4,0 мл) и двухфазную систему интенсивно перемешивали в течение 15 мин. Затем смесь экстрагировали ЕЮАс, фазы разделяли и органическую фазу промывали охлажденной водой (2х), сушили (№23О4), концентрировали и совместно выпаривали из гептана/ЭСМ, РСМ3 536 [М+Н]. Этот неочищенный материал использовали на следующей стадии.
Стадия Ь). ((2К,3К,43,5К)-4-Хлор-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1 (2Н)-ил)-4-фтор-3гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метилтриводороддифосфат (18Ь).
Соединение 18а совместно выпаривали один раз с сухим ЭМР, а затем растворяли в сухом ЭМР (2,2 мл) и добавляли бис-трибутиламин фосфат (0,25 ммоль, 0,5 мл, 0,5 М в ЭМР) в атмосфере азота. Раствор перемешивали ~17 ч при комнатной температуре, затем концентрировали в вакууме и добавляли несколько мл воды с последующим добавлением концентрированного раствора аммиака (25-30 мл) и ТНР (1-2 мл) и перемешивали эту смесь при комнатной температуре. Через 2 ч большую часть N1Р удаляли путем выпаривания и остаток экстрагировали ЭСМ (4х40 мл). Слой воды концентрировали и остаток растворяли в 10% МеСХ/МРР р воде. Нерастворенные частицы отфильтровывали и фильтрат концентрировали до сухого состояния. Полученный остаток растворяли в 10% МеСХ/воде (1,5 мл), загружали на колонку с активированным углем (0,85х3,00 см) и элюировали 10% МеСХ/МйР р водой. Соответствующие фракции объединяли, концентрировали, совместно выпаривали МеСХ (х2) и в конце сушили в лиофилизаторе.
Неочищенный остаток (76 мг) растворяли в 10% МеСХ/МРР р воде (1 мл) и очищали с помощью полупрепаративной НРРС на колонке Рипа ХН2 на приборе Ойзоп, с использованием градиента (30 мл/мин) от 0 до 30% В в течение 20 мин (растворитель А: 0,05 М бикарбоната аммония, 5% ацетонитрила; Растворитель В: 0,8 М бикарбоната аммония, 5% ацетонитрила). Соответствующие фракции собирали и концентрировали до сухого состояния, остаток растворяли в воде МНР р с некоторыми количеством МеСХ и лиофилизировали. Рыхлые остатки растворяли в 10% МеСХ в МНР р вод, суспензию фильтровали путем пропускания через 0,2 мкм фильтры и прозрачные фильтраты объединяли и лиофилизировали с получением титульного соединения (28,6 мг, 36%). РСМ3 Е3- 438,8 [М-Н]-.
- 47 028974
Пример 19. Альтернативный путь получения соединения 1
Стадия а). (38,4К,5К)-3-Хлор-3-фтор-4-((триизопропилсилил)окси)-5-(((триизопропилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил ацетат (19а).
1 М раствор ^^(О-ί-Βи)зΑ1Н в ТНР (39 мл, 39 ммоль) добавляли по каплям в атмосфере аргона при -35°С к раствору соединения 1с (16,3 г, 32,8 ммоль) в ТНР (120 мл). Смесь перемешивали в течение 1 ч при -35°С, затем при КТ в течение 1 ч. Смесь охлаждали до -25°С, добавляли ОМАР (4,00 г, 32,8 ммоль) и смесь перемешивали в течение 15 мин, затем по каплям добавляли уксусный ангидрид (33,5 г, 328 ммоль) и смесь перемешивали в течение 2 ч. Смесь оставляли до достижения 0°С и добавляли ЕЮАс (200 мл) и воду (200 мл). Фазы разделяли и экстрагировали водную фазу ЕЮАс (х2). Объединенные органические фазы промывали водой (х2) и солевым раствором (х1). Органическую фазу сушили (№28О4), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток совместно выпаривали два раза с толуолом и продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле с последующим элюированием изогексаном и ЕЮАс в градиенте от 2 до 6% с получением титульного соединения (17,1 г, 96%).
Стадия Ь). (38,4К,5К)-3-Хлор-3-фтор-4-гидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил ацетат
(19Ь).
Триэтиламинтригидрофторид (20,5 г, 126 ммоль) добавляли к перемешанному раствору соединения 19а (17,0 г, 31,4 ммоль) в ацетонитриле (115 мл) и ТНР (23 мл). Смесь перемешивали в течение 72 ч при КТ, 20 ч при 50°С и затем при КТ в течение ночи. Раствор концентрировали на силикагеле (60 г) и очищали с помощью хроматографии на силикагеле с последующим элюированием в градиенте изогексана и ЕЮАс с получением титульного соединения (68,0 г, 85%).
Стадия с). (2К,3К,48)-5-Ацетокси-2-((бензоилокси)метил)-4-хлор-4-фтортетрагидрофуран-3-ил бензоат (19с).
Триэтиламин (10,8 г, 107 ммоль) добавляли к перемешанному раствору соединения 19Ь (6,80 г, 26,8 ммоль) при охлаждении льдом с последующим добавлением по каплям бензилхлорида (9,41 г, 66,9 ммоль).
Смесь оставляли до достижения КТ и перемешивали в течение ночи. Добавляли ЕЮН (5 мл) и смесь перемешивали в течение 30 мин, затем концентрировали в вакууме. Добавляли воду и смесь экстрагировали ЕЮАс (х3). Органическую фазу промывали водой и солевым раствором, сушили (№28О4), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле с последующим элюированием в градиенте изогексана и ЕЮАс с получением титульного соединения (10,1 г, 86%).
Стадия й). ((2К,3К,48)-3-(Бензоилокси)-4-хлор-4-фтор-5-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метилбензоат (19й).
Этаноламин (1,55 г, 25,4 ммоль) добавляли к перемешанному раствору соединения 19с (10,1 г, 23,0 ммоль) в ЕЮАс (100 мл) и БМ8О (50 мл). Смесь перемешивали при КТ в течение 72 ч, затем разбавляли диэтиловым эфиром (300 мл) и ЕЮАс (300 мл) и промывали водой (х4). Объединенные водные фазы экстрагировали ЕЮАс, затем ЕЮАс фазу промывали солевым раствором (х2). Объединенные органические фазы сушили (№28О4), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле с последующим элюированием в градиенте БСМ и ЕЮАс с получением титульного соединения (7,5 г, 82%).
Стадия е). ((2К,3К,48)-3-(Бензоилокси)-4-хлор-4-фтор-5-((метилсульфонил)окси)тетрагидрофуран2-ил)метилбензоат (19е).
Е1^ (3,54 мл, 25,4 ммоль) добавляли при -15°С в атмосфере Ν2 к раствору соединения 19й (8,36 г, 21,2 ммоль) в сухом БСМ (100 мл) с последующим добавлением М§С1 (1,97 мл, 25,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при -15°С в течение 2 ч, затем выливали в НС1 (80 мл, 1 М, водн.). Фазы разделяли и водную фазу экстрагировали БСМ. Объединенные органические экстракты промывали Ν^Ο (насыщ. водн.), сушили (Мд8О4) и концентрировали при пониженном давлении, с получением титульного соединение (9,86 г, 98%) в виде прозрачного масла.
- 48 028974
Стадия ί). ((2К,3К,48,5К)-3-(Бензоилокси)-4-хлор-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)-ил)4-фтортетрагидрофуран-2-ил)метил бензоат (19ί).
Урацил (3,09 г, 27,5 ммоль) и сульфат аммония (48,5 мг, 0,367 ммоль) нагревали с обратным холодильником в атмосфере N в НМЭ8 (49,3 мл, 236 ммоль) в течение 16 ч. Реакционную смесь охлаждали до КТ, концентрировали при пониженном давлении в вакууме. Остаток в сухом ЭСЕ (50 мл) добавляли в атмосфере N к раствору соединения 19е (8,68 г, 18,4 ммоль) в сухом ЭСЕ (75 мл). К раствору медленно добавляли в атмосфере N ТМ8ОТР (6,12 г, 27,5 ммоль). После добавления, реакционную смесь нагревали до 80°С в течение 5 ч, а затем при 65°С в течение 16 ч. Реакционную смесь охлаждали до КТ, гасили №НСО3 (насыщ. водн.), фильтровали и дважды экстрагировали ЭСМ. Объединенные органические экстракты сушили (Мд8О4) и фильтровали при пониженном давлении. Добавляли ЕЮАс и ЭСМ и образовавшийся осадок собирали путем фильтрации с получением чистый β-изомер (660 мг, 7,4%). Фильтрат выпаривали на силикагеле и очищали с помощью флэш-хроматографии (гексан:ЕЮАс 2:1-1:1) с получением титульного соединения в виде смеси с α-изомером, α:β>5:95 (942 мг, 11%).
Стадия е). 1-((2К,38,4К,5К)-3-Хлор-3-фтор-4-гидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2ил)пиримидин-2,4(1Н,3Н)-дион (19е).
Соединение 19ί (670 мг, 1,37 ммоль) суспендировали в NН3 (7Я в МеОН). После 30 мин добавляли ЕЮН (5 мл) и суспензию перемешивали при КТ. Через дополнительный час суспензию переводили в раствор и затем реакционную смесь перемешивали при КТ в течение 15 ч. Растворители выпаривали при пониженном давлении и полученный остаток очищали с помощью флэш-хроматографии (ОСМ:МеОН 10:1) с получением титульного соединения (380 мг, 99%) в виде белого твердого вещества. БС-М8 Е8 279,31 [М-Н]-.
Следующие соединения синтезировали путем фосфорилирования нуклеозида 1д с указанным фосфорилирующим средством, с использованием процедуры примера 4.
хХ А А А аъХ" но ¥ НО р 1д #
Прим. Структура Р-средство Выход МВ (Е8)
20 5 о чн АДАН 0 Ηό р АА 20 1-46 67 мг, 32% 580,26 [М+Н]+
- 49 028974
2Ϊ 0 О? 1-47 12 мг, 14% 609,9 [М+Н]+
22 - и Л - О (/ ΝΗ О 1-48 54 мг, 24% 578,0 [М+Н]+
232 , О /0ЧН Т \_Ζ-ΟΙ 0 н6? 1-49 7,1 мг, 12% 549,94 [М+Н]+
24 ? о мн Ύ Г Фл°уч° Т \_Д-С1 00 Н<О 1-50 31 мг, 28% 601,2 [М+Н]+
25 - и Л - О (/ ΝΗ Т \_Ζ-а άнб? 1-51 37 мг, 18% 580,1 [М+Н]+
1 ΏΜΡϋ не присутствует в реакционной смеси.
2 Через 18 ч добавляли дополнительно 0,8 экв. фосфорилирующего средства.
Пример 26
Стадия а). (2К,3К,48,5К)-4-Хлор-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)-ил)-4-фтор-2-(((4хлорбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3-ил 4-метилбензоат (26а).
1 г нуклеозида (253 мг, 0,9 ммоль) растворяли в пиридине (5 мл) и ЭСМ (5 мл). Добавляли триэтиламин (630 мкл, 4,52 ммоль) и смесь охлаждали в ванне со льдом. Через 15 мин добавляли 4хлорбензоилхлорид (300 мкл, 2,27 ммоль) и смесь перемешивали с охлаждением в течение 10 мин, затем при 22°С в течение 90 мин. Добавляли №НСО3 (водн.) и смесь разбавляли ЭСМ и промывали 1 М НС1 (водн.) х3, сушили (№28О4) и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с последующим элюированием петролейным эфиром/ЕЮЛс (3:1) с получением титульного соединения (279,2 мг, 60%). ЬС-М8
Стадия Ь). 4-Амино-1-((2К,38,4К,5К)-3-хлор-3-фтор-4-гидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)пиримидин-2(1 Н)-он (26Ь).
Соединение 26а (279 мг, 0,54 ммоль) растворяли в пиридине (5 мл), добавляли молекулярное сито (4 А, половина ложки) и смесь перемешивали на ледяной бане в течение 15 мин. Добавляли оксихлорид фосфора (200 мкл, 2,18 ммоль) и через 5 мин добавляли 1,2,4-1Н-триазол (373 мг, 5,4 ммоль). Смесь перемешивали с охлаждением в течение 15 мин, затем при 22°С в течение 5 ч.
Добавляли аммиак (32%, 10 мл, 82,2 ммоль) и смесь перемешивали в течение ночи при 22°С. Смесь концентрировали, растворяли в воде и промывали ЕЮЛс х2. Объединенные органические слои экстрагировали водой, объединенные водные экстракты концентрировали и остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с последующим элюированием ОСМ/МеОН (8:2) с получением титульного соединения (139 мг, 83%). М8 Е8+ 279,9 [М+Н]+.
- 50 028974
Стадия с). (28)-Изопропил 2-(((((2К,3К,48,5К)-5-(4-амино-2-оксопиримидин-1(2Н)-ил)-4-хлор-4фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (26с).
Соединение 26Ь (27,4 мг, 0,1 ммоль) растворяли в сухом ТНР (6 мл), содержащем молекулярное сито, и смесь перемешивали при 22°С в течение 30 мин, затем добавляли 2 М трет-бутилмагнийхлорид в ТНР (0,11 мл) и смесь дополнительно перемешивали в течение 30 мин. Добавляли (28)-изопропил 2(((перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (51,4 мг, 0,11 ммоль) и смесь перемешивали в течение 15 ч, затем разбавляли ЕЮАс, промывали ЫаНСО3 (водн.), сушили (Ыа28О4), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью УМС на силикагеле с последующим элюированием в градиенте БСМ:МеОН (95:5 90:10). Соответствующие фракции объединяли и концентрировали. Остаток очищали с помощью препаративной НРРС с использованием колонки Оеш1ш С18 с последующим элюированием в градиенте ацетонитрил/вода (рН 7, 0,01 М ЫН4ОАс, 20-40%). Продукт концентрировали, затем очищали на фторфениловой колонке с последующим элюированием в градиенте МеОН/воды (рН 7, 0,01 М ЫН4ОАс, 33-50%). Продукт собирали, растворяли в ацетонитриле/воде (1:4) и лиофилизировали, с получением титульного соединение (13 мг, 24%) РС-М8 548,9 [М+Н]+.
Пример 27
Стадия а). Ы-(1-((2К,38,4К,5К)-3-Хлор-3-фтор-4-гидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2ил)-2-оксо-1,2-дигидропиримидин-4-ил)метилизобутирамид (27а).
Изомасляный ангидрид (118 мг, 0,746 ммоль) добавляли при 58°С к раствору нуклеозида 26Ь (139 мг, 0,497 ммоль) в диоксане (1,7 мл) и воде (0,19 мл). Раствор перемешивали в течение 3 ч при 58°С, затем его концентрировали. Остаток растворяли в 20% ЕЮН в ОСМ и промывали (х4) насыщенным водным раствором. ЫаНСО3/соляной раствор в соотношении 30:70 об./об. сушили (Ыа28О4), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с последующим элюированием ЕЮНЮСМ с градиентом концентраций (2^8%) с получением титульного соединения в виде твердого вещества (62 мг).
Стадия Ь). (2К,3К,48,5К)-4-Хлор-4-фтор-5-(4-метилизобутирамидо-2-оксопиримидин-1(2Н)-ил)-2(((4-метоксифенил)дифенилметокси)метил)тетрагидрофуран-3-ил изобутират (27Ь).
4-Метокситритил хлорид (65,7 мг, 0,177 ммоль) добавляли к раствору соединения 27 а (62 мг, 0,177 ммоль) в пиридине (1,1 мл) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение приблизительно 6 ч, затем добавляли дополнительное количество 4-метокситретилхлорида (16 мг, 0,3 экв.) и смесь перемешивали в течение дополнительных 18 ч. Добавляли изомасляный ангидрид (33,6 мг, 0,212 ммоль) и раствор перемешивали при КТ в течение 4 ч. Реакцию гасили МеОН, затем концентрировали и экстрагировали ОСМ(х3)/насыщ. водн. ЫаНСО3. Органическую фазу сушили (Ыа28О4), фильтровали и концентрировали и остаток совместно выпаривали два раза с толуолом и два раза с ТНР. Полученный твердый остаток использовали непосредственно на следующей стадии.
Стадия с). (2К,3К,48,5К)-4-Хлор-4-фтор-2-(гидроксиметил)-5-(4-изобутирамидо-2-оксопиримидин1(2Н)-ил)тетрагидрофуран-3-ил изобутират (27 с).
Соединение 27Ь (123 мг, 0,177 ммоль) растворяли в 80% АсОН (25 мл) и ТНР (5 мл) и раствор перемешивали при 45°С в течение 2 ч, затем концентрировали и совместно выпаривали ТНР (х3) и толуолом (х1). Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с последующим элюированием в градиенте 0^4% ЕЮН в ОСМ с получением титульного соединения (36 мг, 48,5% в течение 3 стадий). РС-М8 420,0 [М+Н]+.
Стадия ά). (((2К,3К,48,5К)-5-(4-Амино-2-охопиримидин-1(2Н)-ил)-4-хлор-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил)трифосфорная кислота (27ά).
Соединение 27с (36,0 мг, 0,086 ммоль) растворяли в смеси МеСЫ/БСМ: 1,06/0,54 (~1,6 мл) и раствор охлаждали до -20°С в атмосфере азота. Ρΐ3Ν (31,1 мкл, 0,223 ммоль) добавляли к раствору с последующим добавлением раствора 2-хлор-6-нитро-4Н-бензо[б][1,3,2]диоксафосфинин (50,1 мг, 0,214 ммоль) в БСМ (0,71 мл). Охлаждающую баню убирали и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение Р/2 ч. Реакционную смесь охлаждали до -5°С и добавляли раствор Охопе® (0,343 ммоль) в воде (1,73 мл) и двухфазную систему интенсивно перемешивали в течение 15 мин. Смесь экст- 51 028974
рагировали этилацетатом, органическую фазу промывали охлажденной водой (2х), сушили Ща28О4) и концентрировали. Остаток один раз выпаривали совместно с толуолом и один раз с сухим ЭМР, затем растворяли в сухом ОМЕ (1 мл). Триэтиламинпирофосфат (0,1 ммоль, 54,6 мг) добавляли в атмосфере азота и раствор перемешивали в течение ~18 ч при комнатной температуре, затем концентрировали. К остатку добавляли 30% МеС№ЩО (~20 мл) и раствор перемешивали в течение 20-25 мин при КТ. Летучие соединения выпаривали и остаточную смесь масло-твердое соединение растворяли в концентрированном аммиаке (10-15 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение приблизительно 5 ч.
Большую часть ΝΗ3 удаляли путем выпаривания, затем остаток экстрагировали ОСМ (4x40 мл). Органические экстракты удаляли, а слой воды концентрировали. Остаток растворяли в 5% МеСЫ в воде (1,5-2,0 мл) и наносили на колонку с активированным углем (0,85x2,5). Колонку промывали 5% МеСХ в воде и собирали 6-7 мл элюента, концентрировали и лиофилизировали. Остаток растворяли в 5% МеСХ/воде (1,6 мл) и очищали с помощью полупрепаративной ΗР^С с использованием колонки Ьипа 5 мкм ΝΗ2 на приборе Οίίδοπ, с последующим элюированием в градиенте (30 мл/мин) от 0 до 40% В в течение 30 мин (растворитель А: 0,05 М бикарбоната аммония, 5% ацетонитрила; растворитель В: 0,8 М бикарбоната аммония, 5% ацетонитрила). Соответствующие ЭТР фракции собирали и концентрировали до сухого состояния, остаток растворяли в воде МИН О с 5% МеСХ и лиофилизировали. Остаток растворяли в 5% МеСХ в МО воде (4-5 мл) и суспензию фильтровали путем пропускания через 0,45 мкм фильтр и фильтрат концентрировали. Остаток растворяли в 5% МеСХ в воде (0,5 мл) и наносили на короткую колонку Эо\уе\ с Ы+ (6x1 см) и промывали 5% МеСХ в воде. Первые ~10 мл объединяли, концентрировали и лиофилизировали с получением титульного соединения (11,7 мг, 30%) с 89% чистоты, содержащее 6,6% НОР в соответствии с анализом Р1. М8 Е8+ 519,9 [М+Н]+.
Данные ЯМР для выбора иллюстративных соединений.
Соединение 9.
1Н ЯМР (500 МГц, ПМ8О-с16) δ 7,55 (ά, 1=7,8 Гц, 1Η), 6,87 (ά, 1=8,4 Гц, 1Η), 6,84 (ά, 1=1,7 Гц, 1Η), 6,76-6,60 (тДИ), 6,32-6,19 (т, 1Η), 6,10-6,01 (т, 1Η), 6,02 (δ, 2Η), 5,62 (ά, 1=8,1 Гц, 1Η), 4,86 (р, 1=6,3Гц, 1Η), 4,37-4,15 (т,4Щ, 4,07-3,97 (т, 1Η), 3,79 (1ц, 1=10,1, 7,1 Гц, 2Η), 1,23 (ά, 1=7,1 Гц, 3Η), 1,16 (ά, 1=6,3 Гц, 5Н).
13С ЯМР (126 МГц, ЭМ8ОЛ6) δ 172,50, 147,46, 144,86, 144,81, 143,91, 115,06, 115,05, 113,05, 113,05, 112,41, 112,40, 112,37, 112,37, 107,88, 102,36, 102,34, 101,52, 78,74, 74,44, 74,30, 67,90, 64,28, 49,65, 40,63, 40,40, 40,34, 40,27, 39,99, 39,90, 39,83, 39,73, 39,66, 39,57, 39,40, 39,23, 39,07, 38,90, 21,28, 21,26, 19,72, 19,67, -0,00.
Соединение 10.
1Н ЯМР (500МГц, ЭМ8ОЛ6) δ 7,58 (ά, 1=8,1 Гц, 1Η), 7,28 (ά, 1=8,0 Гц, 1Η), 7,20-7,05 (т, 2Η), 6,90 (1ά, 1=7,9, 1,6 Гц, 1Η), 5,60 (ά, 1=8,1 Гц, 1Η), 4,87 (άφ 1=12,5, 6,2 Гц, 1Η), 4,41-4,20 (т, 5Η), 4,09-3,99 (т, 1Η), 4,00-3,77 (т, 2Η), 3,79 (δ, 3Η), 1,79 (δ, 1Η), 1,22 (ά, 1=7,1 Гц, 3Η), 1,16 (ά, 1=6,3 Гц, 5Н).
13С ЯМР (126 МГц, ЭМ8ОЛ6) δ 172,59, 172,55, 162,64, 150,28, 150,24, 150,09, 139,37, 139,32, 125,29, 120,90, 120,88, 120,25, 115,03, 113,02, 112,85, 102,25, 78,82, 74,38, 74,24, 67,85, 64,26, 55,59, 49,57, 40,26, 40,20, 40,17, 39,99, 39,90, 39,82, 39,73, 39,66, 39,57, 39,40, 39,23, 39,07, 38,90, 21,30, 21,26, 19,63, 19,58.
Соединение 11.
1Н ЯМР (500 МГц, ЭМ8ОЛ6) δ 7,57 (ά, 1=8,1 Гц, 1Η), 7,13 (ά, 1=8,3 Гц, 2Н), 6,98-6,86 (т, 3Η), 6,25 (1, 1=16,6 Гц, 1Η), 5,62 (ά, 1=8,1 Гц, 1Η), 4,86 (Ьер1, 1=6,2 Гц, 1Η), 4,37-4,15 (т,4Щ, 4,07-3,97 (т, 1Η), 3,78 (1ц, 1=10,2, 7,1 Гц, 1Η), 3,72 (δ, 2Η), 1,23 (ά, 1=7,1 Гц, 3Η), 1,22-1,11 (т, 8Η).
13С ЯМР (126 МГц, ЭМ8ОЛ6) δ 172,52, 172,48, 162,65, 155,91, 150,08, 143,96, 143,91, 120,95, 120,92, 114,99, 114,42, 112,98, 102,27, 78,77, 74,44, 74,30, 67,86, 64,21, 55,29, 49,65, 40,25, 40,15, 39,99, 39,90, 39,83, 39,74, 39,66, 39,57, 39,40, 39,24, 39,07, 38,90, 21,30, 21,27, 19,69, 19,64.
Соединение 13.
1Н ЯМР (500 МГц, ЭМ8ОЛ6) δ 0,82 (1, 3Η), 1,12 (ά, 3Η), 1,25 (ά, 3Η), 1,49 (т, 2Η), 3,83 (ά1ά, 1Η), 4,02 (т, 1Η), 4,26 (ά1, 2Η), 4,34 (т, 1Η), 4,72 (Ь, 1Η), 5,58 (ά, 1Η), 6,12 (άά, 1Η), 6,26 (т, 1Η), 7,20 (т, 3Η), 7,37 (1, 2Η), 7,53 (ά, 1Η).
13С ЯМР (126 МГц, ЭМ8ОЛ6) δ 9,35, 19,05, 19,77 (ά), 28,00, 40,08, 49,72, 64,32, 72,27, 74,35 (ά), 78,72 (т), 102,36, 114,08 (ά), 119,95 (ά), 124,49, 129,54, 150,53 (ά), 163,41 (т), 172,62 (ά).
Соединение 15.
1Η ЯМР (500 МГц, ЭМ8ОЛ6) δ 1,16 (ά, 6Η), 1,24 (ά, 3Η), 1,80 (т, 1Η), 1,96 (т, 1Η), 2,05 (ράά, 2Η), 2,26 (т, 2Η), 3,49 (ρ, 1Η), 3,81 (1ц, 1Η), 4,04 (т, 1Η), 4,30 (т, 3Η), 4,86 (Ьер1, 1Η), 5,60 (ά, 1Η), 6,07 (άά, 1Η), 6,24 (ά, 1Η), 6,68 (ά, 1Η), 7,03 (т, 3Η), 7,28 (1, 1Η), 7,58 (ά, 1Η).
13С ЯМР (126 МГц, ОМ8О-а6) δ 17,58, 19,65 (ά), 21,26, 21,29, 29,13, 49,65, 64,33, 67,87, 74,37 (ά), 78,78,102,28, 113,98 (ά), 117,35 (ά), 117,76 (ά), 122,45, 129,25, 139,49, 147,50, 150,05, 150,56, 162,56, 172,48 (ά).
Соединение 16.
1Н ЯМР (500 МГц, ЭМ8ОЛ6) δ 0,78 (т, 8Η), 1,15 (ά, 12Η), 1,23 (ά, 7Η), 1,35 (δ, 6Η), 3,80 (1ц, 2Н), 4,03 (т, 2Н), 4,25 (т, 4Н), 4,34 (т, 2Н), 4,86 (р, 2Н), 5,59 (ά, 2Η), 6,07 (άά, 2Η), 6,24 (ά, 2Н), 6,72 (δ, 1Η),
- 52 028974
7,01 (т, 6Н), 7,26 (ί, 2Н), 7,57 (й, 2Н).
13С ЯМР (126 МГц, ИМ8О-й6) δ 16,03, 18,82, 19,65 (й), 21,26, 21,30, 24,42, 49,63, 64,29, 67,87, 74,35 (й), 78,78, 87,51, 102,30, 114,00 (й), 116,92 (й), 117,60 (й), 122,06, 129,18, 139,60 (т), 148,45, 150,13, 150,50 (й), 162,69, 172,47 (й).
Соединение 17.
13С ЯМР (126 МГц, ИМ8О-й6) δ 15,52, 18,66, 19,65 (й), 21,25, 21,30, 24,98, 49,67, 64,23, 67,87, 74,35 (й), 78,76, 87,49, 102,25, 113,97 (й), 119,69 (й), 127,19, 139,65 (й), 142,69, 148,17 (й), 150,02, 162,52, 172,46 (й).
Соединение 21.
'II ЯМР (500 МГц, ИМ8О) δ 1,25 (й, 3Н), 3,23 (т, 6Н), 3,41 (т, 4Н), 3,87 (йй1, 1Н), 4,04 (т, 1Н), 4,31 (т, 3Н), 5,02 (ρ, 1Н), 5,61 (й, 1Н), 6,20 (т, 2Н), 7,21 (т, 3Н), 7,38 (ί, 2Н), 7,57 (й, 1Н).
13С ЯМР (126 МГц, ИМ8О) δ 19,72 (й), 49,60, 58,36, 64,28, 70,33, 70,46, 71,53, 74,38 (й), 78,81 (й), 102,26, 114,00 (й), 119,99 (й), 124,53, 129,55, 150,03, 150,51 (й), 162,54, 172,59 (й).
Соединение 24.
Ή ЯМР (500 МГц, ИМ8О) δ 1,15 (йй, 6Н), 1,22 (й, 3Н), 3,52 (т, 1Н), 3,78 (1ц, 1Н), 4,05 (т, 1Н), 4,16 (т, 1Н), 4,26 (й1, 1Н), 4,34 (т, 1Н), 4,86 (йерр 1Н), 5,65 (й, 1Н), 6,14 (йй, 1Н), 6,23 (5, 1Н), 6,27 (5, 1Н), 7,21 (т, 3Н), 7,37 (ί, 2Н), 7,50 (й, 1Н).
13С ЯМР (126 МГц, ИМ8О) δ 19,62 (й), 21,25 (й), 49,61, 63,83, 67,92, 74,16 (й), 78,53, 102,42, 114,03 (й), 119,85 (й), 124,49, 129,58, 139,35 (йй), 150,26, 150,56 (й), 162,87, 172,51 (й).
Соединение 26Ь.
Ή ЯМР (500 МГц, ИМ8О) δ 3,62 (й, 1Н), 3,80 (т, 2Н), 4,15 (йй, 1Н), 5,26 (5, 1Н), 5,77 (й, 1Н), 6,31 (й, 1Н), 6,41 (5, 1Н), 7,33 (5, 1Н), 7,36 (5, 1Н), 7,73 (й, 1Н).
13С ЯМР (126 МГц, ИМ8О) δ 58,50, 58,62, 73,62 (й), 80,48, 87,01 (т), 94,50, 94,56, 114,92 (й), 140,04, 154,57, 165,42.
Соединение 27й.
Ή ЯМР (500 МГц, 1ГО) δ 4,12 (й, 1Н), 4,24 (ййй, 1Н), 4,33 (т, 1Н), 4,46 (йй, 1Н), 6,09 (й, 1Н), 6,39 (й,1Н), 7,80 (й,1Н).
13С ЯМР (126 МГц, 1ГО) δ 62,48 (й), 73,03 (й), 78,99 (й), 88,15 (й), 97,04, 113,71 (й), 140,63, 157,39, 166,21.
Биологические примеры.
Анализ репликона.
Соединения по формуле (I) могут быть исследованы на активность в отношении ингибирования репликации РНК НСУ в клеточном анализе, направленном на идентификацию соединений, которые ингибируют активную клеточную линию, в клетках которой происходила репликация НСУ, также известную как репликоны НСУ. Подходящий анализ клеток основан на бицистронной экспрессиионной конструкции, как описано Ьойтапп еί а1. (1999), 8с1еисе νοί. 285, р. 110-113 с модификациями, описанными Кйедег еί а1. (2001), 1оита1 о£ Уйо1оду 75: 4614-4624, в стратегии скрининга нескольких мишеней.
В анализе применяют стабильно трансфицированную клеточную линию Ний-7 1ис/пео (далее обозначается как Ний-Ьис). Данная клеточная линия содержит РНК, кодирующую бицистронную экспрессирующую конструкцию, содержащую Ν83-Ν85Β области дикого типа НСУ типа 1Ь, транслирующиеся с внутреннего сайта связывания рибосомы (ГКЕ8) из вируса энцефаломиокардита (ЕМСУ), которым предшествует репортерную часть (ИЪ-люцифераза) и селективную маркерную часть (пеоК, неомицинфосфотрансфераза). Конструкция граничит с 5' и 3'-ΝΤΡ (нетранслируемые области) из НСУ типа 1Ь. Длительное культивирование репликона клеток в присутствии 0418 (пеоК) зависит от репликации РНК НСУ. Стабильно трансфицированные репликоны клеток, которые экспрессируют РНК НСУ, который реплицируется автономно и до высоких уровней, кодирует, среди прочего, люциферазу, применяют для скрининга противовирусных соединений.
Репликоны клеток высевают в 384-луночные планшеты в присутствии тестируемых и контрольных соединений, которые добавляют в различных концентрациях. После инкубации в течение трех дней, репликация НСУ измеряется путем анализа активности люциферазы (с использованием стандартных субстратов и реагентов люциферазного анализа и микропланшетного аппарата для визуализации Регкт Е1тег У1е\\ТихТ™ иЙгаНТ8). Клетки репликона в контрольных культурах обладают высокой экспрессией люциферазы в отсутствие какого-либо ингибитора. Ингибирующая активность соединения в отношении активности люциферазы отслеживается на клетках Ний-Ьис, что делает возможной кривую доза-реакция для каждого тестируемого соединения. Затем вычисляют значения ЕС50, которое бы представляло значение количества соединения, необходимого для снижения уровня обнаруженной активности люциферазы на 50%, или, более конкретно, способности генетически связанного репликона РНК НСУ к репликации.
Анализ ферментов.
Как может быть продемонстрировано на примере анализа репликона, соединения по настоящему изобретению метаболизируются киназами клеток в тканях-мишенях в 5'-трифосфат. Предполагают, что именно этот трифосфат, является видом соединения, обладающим противовирусной активностью. Опи- 53 028974
санный в данном документе анализ ферментов может использоваться для подтверждения того, что соединения по настоящему изобретению в виде 5'-трифосфатного метаболита являются активными противовирусными средствами.
При анализе ферментов измеряют ингибирующее действие соединений трифосфата в Νδ5Ι1-21 НСУ (21-аминокислотный С-терминально усеченный вариант) анализе δΡΑ (сцинтилляционный анализ сближения). Анализ проводят путем оценки количества радиоактивно меченного АТР, включенного посредством Νδ5Ι1-21 НСУ во вновь синтезированную РНК с применением гетерогенной биотинилированной РНК-матрицы.
Для определения значения 1С50 соединения тестируют в различных концентрациях в конечном объеме реакционной смеси 100 мкл. Реакцию останавливают путем добавления 0,5 М раствора ΕΌΤΑ.
Образцы переносят в Р1а§йр1а1е, предварительно покрытые стрептавидином. Введенную радиоактивность количественно определяют с помощью сцинтилляционного счетчика (Аа11ас М1сгоЬе1а Τπ1υχ).
Материалы и поставщик.
Р1азпр1а1е, покрытый стрептавидином Регк1пЕ1тег 1_Не 8с1епсез
96-луночный полипропиленовый планшет Согтнпд
Биотинилированная РНК-матрица: с последовательностью
5'-иии иии иии идс исл сис ссс ссс
Сии 1Л1С ССС ССС-З’ и биотинилированный на 5'-конец праймера доводили до 83 мкМ в 10 мМ Трис-НС1,
100 мМ ЫаС1, рН= 8,0 МебргоЬе
Фермент: НС\/ Ν35Β-21, доливают до 500 мкг/мл в воде.ВерНгуте
Нуклеотиды: СТР, СТР, иТР
1пу|1годеп
СЕ
Меченный радиоактивным изотопом 3Н-АТР (кат. №ТРК747)
НеаИИсаге
0,5 Μ ΕϋΤΑ, рН=8,0 121е ТесИпо1од1ез
Трис-НС1 8|дта
МпС12 8|дта
Ацетат аммония 81дта
ϋΤΤ (дитиотреитол) 81дта
СНАРЗ 8|дта
РЫазе Ои! (кат. № 10777-019) 1пуИгодеп
ϋΜ8Ο Саг1о ЕИэа ВеасМз - 8ϋ8
Оборудование.
Способ.
\Л/аИас МюгоЬе1а Тл1их
Регк1п Е1шег 1_Не Зс1епсез
Условия анализа
Буфер: 20 мМ Трис-НС1, 100 мМ ацетат аммония, 20 мМ ЫаС1, 2,5 мМ МпС12, 10 мМ ϋΤΤ, 2 мМ СНАРЗ, РЫазе Ои! рН 7,5
СТР 50 мкМ
СТР 2 мкМ
итр 2 мкМ
АТР 2 мкМ
3Н-АТР (47 Ки/ммоль) 0,5 мкМ
Матрица: РНК-НЗ 83 нМ
Фермент: Ν35Β-21 (500 мкг/мл) 2 мкг/мл
Объем анализа 100 мкл
Анализ должен включать контрольные ферменты (приблизительно четыре, содержащие 1 мкл ЭМ8О вместо ингибитора) и фоновый контроль, содержащий все ингредиенты, кроме матрицы.
Соединения серийно разводят в ЭМ8О на отдельном планшете для разбавления до 100х конечных требуемых концентраций для анализа.
Составляют достаточное количество реакционной смеси на количество лунок, которые будут использоваться в соответствии с нижеописанной таблицей и добавляют 90 мкл/лунка в 96-луночный полипропиленовый планшет. В каждую лунку добавляют по 1 мкл соединения в ЭМ8О из планшета для разбавления, за исключением контрольных лунок с ферментом и фоновых контрольных лунок, к которым добавляют 1 мкл ЭМ8О.
- 54 028974
Реакционная смесь.
Компонент мкл/лунка
50 мМ Трис-НС1 рН=7,5 40
1 М ацетата аммония 10
1 М МпС12 0,25
0,5 Μ БТТ 2
100 мМ СНАР5 2
РЫазе Οιιΐ 0,2
1 мМ СТР 5
200 мкМ стр+итр 2
Ν55Β-21 500 мкг/мл 0,4
Матрица: РНК-НЗ, 83 мкМ 0,1
Буфер матрицы: 10 мМ Трис-НС1, 100 мМ ЫаС! рН=8,0 28,25
Приготовить смесь АТР, содержащую 1,5 мкл/лунка 3Н-АТР (45 Ки/ммоль), 2,0 мкл/лунка 100 мкМ АТР и 6,5 мкл/лунка Н2О, и запустить реакцию путем добавления 10 мкл/лунка этой смеси.
Инкубировать при 22°С в течение 120 мин.
Остановить реакцию путем добавления 100 мкл/лунка 0,5 М РОТА, рН 8,0. Перенести 185 мкл/лунка в Р1а§Рр1а1е, содержащий стрептавидин. Инкубировать планшет в течение ночи и считать Р1а§Рр1а1е на МюгоЬе1а Тп1их с использованием протокола Р1а§Нр1а1е§ Н3.
Обработка результатов.
Расчет для ингибирования:
СРМСоединения — Фоновый СРМ
% Ингибирования =Среднее значение СРМ— Фоновый СРМ
контрольного фермента
Фон=буфер для проведения реакции без матрицы.
КА, определяют с использованием ОгарРрад Рпбш. Построить кривую концентрации соединения в Ьо§ относительно процента ингибирования. Апроксимировать кривую с нелинейной регрессии к Ьо§ (Ингибитор) относительно равенства ответной реакции.
«Верх» — «Низ»
У = «Низ» -|------—
1 +
Если Υ представляет собой% ингибирования, X представляет собой 1од (ингибитор), а "верх" и "низ" представляют собой нижний и верхний пределы % ингибирования.
Биологический пример 1.
Ингибирование репликации ΗСV, которое проявляется за счет соединений по настоящему изобретению, тестировали в описанном выше анализе репликона. Соединения показали субмикромолярную активность с клеточной токсичностью в отношении клеточной линии НиИ-Рис при превышении 50 мкМ. Значения ЕС50 представлены в табл. 1.
- 55 028974
Таблица 1
Биологический пример 2.
Нуклеотиды примеров з и 27 тестировали в описанном выше анализе ферментов и определенные значения !С50 составляли 0,72 и 0,089 мкМ соответственно.
Сравнительный пример 1.
Софосбувир доступен в нескольких странах для лечения НСУ, преимущественно против генотипов 1 и 4. Структура софосбувира
но Т
Как можно было видеть, софосбувир отличается от соединения по настоящему примеру 2 тем, что он обладает бета-метильной группой в 2'-положении, в то время как соединения по настоящему изобретению в том же положении имеют заместитель бета-хлор. В клинических исследованиях фазы III Ρΐδδΐοπ, о которых сообщается в Ра\уН/ е! а1., Ν. Епд. I. Мед., 201з; з68:1878-87, "Частота ответных реакций в группе софосбувир-рибавирин была ниже у пациентов, инфицированных генотипом з, чем среди тех, которые были инфицированы генотипом 2 (56% по сравнению с 97%)" Противовирусную активность коммерчески доступного софосбувира и соединения примера 2 сравнивали с использованием анализа временной экспрессии репликонов генотипа за, описанного в Ку1е!|огд е! а1., I. νΐΓθ1. ΜеίΗοάδ 2014 195:156-6з. ЕС50 софосбувира в отношении НСУ генотипа за составляет 0,2з0 мкМ +/- 0,067, п=11, по сравнению с ЕС50 0,072 мкМ +/- 0,024, п=9 для соединения примера 2. Соединение по настоящему изобретению в три раза активнее софосбувира, и как ожидается, значительно улучшает скорости вирусологического ответа при применении в клинике. Относительно софосбувира активность соединений по настоящему изобретению была в несколько раз улучшена, и поддерживала временную экспрессию репликонов генотипа за нестабильного мутанта 5282Т (придающий устойчивость нуклеозиду ИСV шепсйаЬте), где софосбувир имел значение ЕС50 0,48 мкМ (п=1), а соединение примера 2 имело значение ЕС50 0,1з мкМ (п=1).Подобным образом, двойных мутантов Б159Р/Бз20Р, полученных путем воздействия нуклеозида тепсдаЬте, придающего перекрестную резистентность в отношении софосбувира (Топд е! а1. 201з I. Мес!. Όΐδ., 209 (5), 668-75) получали с временной экспрессией репликонов генотипа за, как описано выше в Ку1е!|огд е! а1. Λίά. У этих двойных мутантов софосбувир имел значение ЕС50 0,190 (п=1), в то время как соединение примера 2 показывало значение ЕС50 0,062 (п=1).
- 56 028974
Соединение примера 2 дополнительно оценивали для анализа противовирусной активности в отношении генотипов 1-6 НСУ как дикого типа, так и большого количества клинически значимых мутантных штаммов. Результат оценки, совместно со средними значениями ЕС50 для всех генотипов и соответствующие значения для софосбувира приведены в табл. 2 и 3.
Таблица 2
Дикий тип
Анализ на НСУ софосбувир Соединение примера 2
НСУ СТ1Ь (стабильная экспрессия) 0,098 (п=126) 0,045 (п=63)
НСУ СТ1Ь (временная экспрессия) 0,081 (п=31) 0,044 (п=22)
НСУ СТ1а* 0,131 (п=16) 0,050 (п=16)
НСУ СТ2а репликон 0,048 (п=2) 0,023 (п=2)
НСУ СТ2а вирус 0,054 (п=4) 0,017 (п=3)
НСУ СТЗа* 0,129 (п=8) 0,046 (п=8)
НСУ СТ4а* 0,218 (п=8) 0,059 (п=8)
НСУ СТба* 0,114 (п=5) 0,044 (п=8)
НСУ СТба* 0,179 (п=4) 0,058 (п=6)
АУС£С50: (повышение активности по сравнению с софосбувиром) 0,117+/-0,019 1,0 0,043 +/- 0,005 2,7
Данные по ЕС50 (все в мкМ) представлены в виде геометрических средних значений, за исключением ЛУО, где ЕС50 представлена в виде арифметического среднего значения +/δЕΜ.
*Химерные репликоны, содержащие указанные гены СТ Νδ5Η в фоне соп1.
Ссылки: Соп1 (^οйтаηη е! а1. 2003); Н77 (ВНдй! е! а1. 2003); СТ2а (Аакпа е! а1 2005); СТ3а (Ку1еГ|огс1 е! а1. 2013); СТ4-6 (Аону е! а1. 2012); Ы59Р/Б320Р (Топ§ е! а1. 2013).
Таблица 3
Мутанты
Анализ на НСУ софосбувир Соединение примера 2
НСУ СТ16 5282Т 0,741 (п=18) 0,298 (п=9)
РС по сравнению с \А/Т 8,8 6,8
НСУСТ1Ь 1_159Р/1_320Р 0,199 (п=5) 0,070 (п=5)
РС по сравнению с \А/Т 2,5 1,6
НСУ СТ1а* 5282Т 1,01 (п=5) 0,301 (п=5)
РС по сравнению с \А/Т 7,7 6,0
НСУ СТЗа* 5282Т 0,521 (п=6) 0,122 (п=6)
РС по сравнению с \А/Т 4,0 2,7
НСУ СТЗа* 1_159Р/1_320Р 0,190 (п=1) 0,062 (п=1)
РС по сравнению с \А/Т 7,5 1,3
аусес50 0,532 +/- 0,158 0,171 +/-0,054
(повышение активности по сравнению с софосбувиром) 1,0 3,1
Данные по ЕС50 (все в мкМ) представлены в виде геометрических средних значений, за исключением ЛУСк где ЕС50 представлена в виде арифметического среднего значения +/δЕΜ.
*Химерные репликоны, содержащие указанные гены СТ Νδ5Η в фоне соп1.
Ссылки: Соп1 (^οйтаηη е! а1. 2003); Н77 (ВНдй! е! а1. 2003); СТ2а (Аакйа е! а1. 2005);
СТ3а (Ку1еГ|огс1 е! а1. 2013); СТ4-6 (\Уоиу е! а1 2012); Ы59Р/Б320Р (Топ§ е! а1. 2013).
Из этих двух таблиц видно, что соединение данного примера 2 имеет значительно повышенную активность по сравнению с софосбувиром в отношении СТ3а НСУ как в штамме дикого типа, так и в двух клинически значимых мутантных штаммах, при этом сохраняя хорошую активность против других генотипов.
Анализ на образование трифосфата.
Для оценки способности соединений по настоящему изобретению образовывать различные виды трифосфатов, обладающих противовирусной активностью, проводили анализ на способность образовывать трифосфат. В данном анализе каждое соединение испытывали в трех повторах.
Для анализа применяли свежую культуру адгезированных гепатоцитов человека (ВюргеЛс, Франция), находящихся в 12-луночном планшете. В каждую лунку высевали 0,76х106 клеток и инкубировали с 10 мкМ раствором ^ΜδО соединения (0,1% ^ΜδО) в 1 мл инкубационной среды в СО2 инкубаторе при 37°С в течение 6-8 ч. Инкубирование завершали путем промывания каждой лунки 1 мл охлажденного на льду сбалансированного раствора Хэнкса, рН 7,2 (х2), с последующим добавлением 0,5 мл охлаж- 57 028974
денного на льду 70% метанола. Непосредственно после добавления метанола слой клеток снимали со дна лунки с использованием клеточного скребка и с использованием автоматической пипетки выполняли 5-6 всасывающих движений вверх и вниз. Суспензию клеток переносили в стеклянные пробирки и хранили их в течение ночи при -20°С. Затем образцы, каждый из которых содержит различное количество белка, свободных нуклеозидов, и моно-, ди- и трифосфатов, встряхивали и центрифугировали при 10°С в течение 10 мин, при 14000 грт в центрифуге ЕррепдогГ 5417К. Надосадочные жидкости переносили в 2 мл стеклянные пробирки со вставкой и подвергали биоанализу.
Биоанализ.
Внутренний стандарт (ΊηάίιηινίΓ) добавляли к каждому образцу и образцы (объема инъекции 10 мкл) анализировали на двухколоночной системе, связанной с масс-спектрометром С)ТКАР 5000. Двухколоночная система состояла из двух двойных насосов, X и Υ, двух переключающих клапанов и автодозатора. Применяли две НРЬС колонки - Зупегду РОЬАК-КР 50x4,6 мм, с размером частиц 4 мкм и ВюВазю АХ 50x2,1 мм, с размером частиц 5 мкм. Скорости потока ЬС была 0,4-0,6 мл/мин (на этапе восстановления была использована более высокая скорость потока). Подвижные фазы НРЬС для колонки РОЬАК-КР состояли из 10 ммоль/л ацетата аммония в 2% ацетонитриле (подвижная фаза А) и 10 ммоль/л ацетата аммония в 90% ацетонитриле (подвижная фаза В), а для колонки ВюВазю АХ состояли из 10 ммоль/л ацетата аммония в 2% ацетонитриле (подвижная фаза С) и 1% раствора гидроксида аммония в 2% ацетонитриле (подвижная фаза Ό). Градиент НРЬС для насоса Υ начинался при 0% подвижной фазы В и выдерживался в течение 2 мин. Во время фазы загрузки, подвижная фаза проходила через колонки РОЬАККР и ВюВазю АХ и пролекарство, нуклеозид и внутренний стандарт, захватывались в колонке РОЬАККР; в то время как нуклеотиды (моно-, ди- и трифосфаты) элюировались в колонку ВюВазю АХ и там оказывались в ловушке.
На следующей стадии поток переключали из колонки РОЬАК-КР в МЗ, а подвижную фазу С переключали из насоса X в колонну ВюВазю АХ. Соединения на колонке РОЬАК-КР элюировали с градиентом от 0 до 100% В в течение приблизительно 2 мин и анализировали в положительном или отрицательном режиме с использованием режима мониторинга множественных реакций (МКМ).
На последнем этапе поток из колонны ВюВазю АХ переключали на МЗ и фосфаты элюировали в течение приблизительно 7 мин с градиентом до 50% Ό и анализировали в положительном или отрицательном режиме с использованием МКМ. В течение последней стадии обе колонки были восстановлены.
Затем определяли концентрацию трифосфата для каждого соединения путем сравнения со стандартными кривыми. Калибровочные кривые были сделаны на основе анализа стандартных образцов с известными концентрациями трифосфата. Стандарты проходили в таких же матрицах, как и испытуемые образцы. Из-за различий в уровнях фосфорилирования, зависящее от донора гепатоцитов, при каждом прохождении необходимо внутреннее контрольное соединение для того, чтобы сделать возможным ранговое распределение результатов различных прохождений друг к другу.
В описании и формуле изобретения, которые следуют ниже, если контекст не требует иного, слово "включать" и его вариации, такие как "включает" и "включающий", следует понимать в качестве обозначения включения установленного целого числа, степени, группы целых чисел или группы степеней, но не в качестве исключения любого другого целого числа, степени, группы целых чисел или группы степеней.
Все приведенные здесь документы, включая патенты и патентные заявки, включены в настоящий документ во всей их полноте посредством ссылки.

Claims (18)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Соединение, представленное формулой (I)
    к1 о
    ΎΖ
    К2б т
    (')
    где В представляет собой нуклеиновое основание, выбранное из групп (а) и (Ь)
    К1 представляет собой Н или К1 выбран из групп (ΐΐ)-(ΐν)
    К2 представляет собой Н;
    - 58 028974
    каждый из К4, К5, К7 и К8 представляет собой Н;
    К6 представляет собой К(К18)2;
    К14 представляет собой фенил, который необязательно замещен 1 или 2 К22; каждый из К15 и К15 независимо выбран из Н и С1-С6-алкила;
    К16 представляет собой С1-С10-алкил или С3-С7-циклоалкил, любой из которых необязательно замещен 1 или 2 ОК18;
    каждый К18 независимо представляет собой Н или С1-С6-алкил;
    К20 представляет собой С1-С6-алкил;
    каждый К22 независимо выбран из С3-С6-циклоалкила, ОК20, или любые две К22 группы, присоединенные к соседним атомам углерода кольца, могут объединяться с образованием -О-К23-О-;
    К23 представляет собой -[С(К33)2]П-;
    К24 представляет собой Н;
    К33 представляет собой Н; и представляет собой О,
    или его фармацевтически приемлемая соль и/или фармацевтически приемлемый сольват.
  2. 2. Соединение по п.1, где К6 представляет собой КН2.
  3. 3. Соединение по п.1, где К1 представляет собой трифосфат, характеризующийся формулой
    о о и
    но-β-ο-β-ο-β-:он он он
    или его фармацевтически приемлемая соль.
  4. 4. Соединение по любому из пп.1, 2, где К1 представляет собой группу (ίν)
    р15 рГ
    Р16
    Ι-β-ΐ(ίν)
    р24ОР14
  5. 5. Соединение по п.4, где один из К15 и К15 представляет собой Н, а другой представляет собой С1С3-алкил; К16 представляет собой С1-С8-алкил.
  6. 6. Соединение по п.4, где один из К15 и К15 представляет собой Н, а другой представляет собой С1С3-алкил; и стереохимия является такой, как указано в частичной формуле
    и
    ΗΟ-β-Ο-β-Ο-β-Ο
    0Н 0Н 0Н
  7. 7. Соединение по любому из пп.1, 2, где К1 представляет собой Н.
  8. 8. Соединение по п.1, представленное формулой
    где В представляет собой группу (Ь')
    Ύϊ
    Ρ20 Ρ
    или его фармацевтически приемлемая соль и/или фармацевтически приемлемый сольват.
  9. 9. Соединение по п.1, которое представляет собой
    о
    но Р
    или его фармацевтически приемлемая соль и/или фармацевтически приемлемый сольват.
  10. 10. Соединение по п.1, которое представляет собой
    о
    - 59 028974
    или его фармацевтически приемлемая соль и/или фармацевтически приемлемый сольват.
  11. 11. Соединение по п.1, которое представляет собой
    о
    или его фармацевтически приемлемая соль и/или фармацевтически приемлемый сольват.
  12. 12. Соединение по п.1, которое представляет собой
    о
    или его фармацевтически приемлемая соль и/или фармацевтически приемлемый сольват.
  13. 13. Применение соединения по любому из пп.1-12 в качестве лекарственного препарата.
  14. 14. Применение соединения по любому из пп.1-12 в лечении или профилактике инфекции, вызванной вирусом гепатита С.
  15. 15. Фармацевтическая композиция, ингибирующая полимеразу вируса гепатита С (НСУ), содержащая соединение по любому из пп.1-12, в сочетании с фармацевтически приемлемым вспомогательным средством, разбавителем или носителем.
  16. 16. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп.1-12, дополнительно содержащая одно или несколько других дополнительных противовирусных средств.
  17. 17. Способ лечения или профилактики инфекции, вызванной вирусом гепатита С, включающий введение соединения по любому из пп.1-12.
  18. 18. Применение соединения по любому из пп.1-12 в производстве лекарственного препарата для лечения или профилактики инфекции, вызванной вирусом гепатита С.
EA201690452A 2013-09-04 2014-09-02 Ингибиторы полимеразы hcv EA028974B1 (ru)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE1351026 2013-09-04
SE1351169 2013-10-03
SE1450152 2014-02-12
PCT/SE2014/051005 WO2015034420A1 (en) 2013-09-04 2014-09-02 Hcv polymerase inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201690452A1 EA201690452A1 (ru) 2016-08-31
EA028974B1 true EA028974B1 (ru) 2018-01-31

Family

ID=52628746

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201690452A EA028974B1 (ru) 2013-09-04 2014-09-02 Ингибиторы полимеразы hcv

Country Status (29)

Country Link
US (5) US9481703B2 (ru)
EP (2) EP3252066B1 (ru)
JP (2) JP6456958B2 (ru)
KR (1) KR20160078337A (ru)
CN (3) CN105705510B (ru)
AU (2) AU2014315715B2 (ru)
BR (1) BR112016004919A2 (ru)
CA (1) CA2921899A1 (ru)
CL (2) CL2016000493A1 (ru)
CR (1) CR20160123A (ru)
CY (1) CY1119587T1 (ru)
DK (1) DK3041855T3 (ru)
EA (1) EA028974B1 (ru)
HK (2) HK1221228A1 (ru)
HR (1) HRP20171435T1 (ru)
HU (1) HUE036365T2 (ru)
IL (2) IL244389B (ru)
ME (1) ME02875B (ru)
MX (1) MX2016002849A (ru)
MY (1) MY177804A (ru)
PH (2) PH12016500402B1 (ru)
PL (1) PL3041855T3 (ru)
PT (1) PT3041855T (ru)
RS (1) RS56383B1 (ru)
SA (1) SA516370684B1 (ru)
SG (2) SG11201601474UA (ru)
SI (1) SI3041855T1 (ru)
UA (1) UA117375C2 (ru)
WO (1) WO2015034420A1 (ru)

Families Citing this family (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9676797B2 (en) 2015-09-02 2017-06-13 Abbvie Inc. Anti-viral compounds
US10023600B2 (en) 2009-09-21 2018-07-17 Gilead Sciences, Inc. Processes and intermediates for the preparation of 1′-substituted carba-nucleoside analogs
SG186830A1 (en) 2010-07-22 2013-02-28 Gilead Sciences Inc Methods and compounds for treating paramyxoviridae virus infections
CN110156838A (zh) * 2013-05-14 2019-08-23 北京美倍他药物研究有限公司 磷酸/膦酸衍生物及其医药用途
UA117375C2 (uk) * 2013-09-04 2018-07-25 Медівір Аб Інгібітори полімерази hcv
EP3074399A1 (en) * 2013-11-27 2016-10-05 Idenix Pharmaceuticals LLC 2'-dichloro and 2'-fluoro-2'-chloro nucleoside analogues for hcv infection
WO2015081133A2 (en) * 2013-11-27 2015-06-04 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Nucleotides for the treatment of liver cancer
CN106536538A (zh) * 2014-04-24 2017-03-22 共晶制药股份有限公司 用于治疗黄病毒家族病毒和癌症的2’‑双取代核苷类似物
CN105315319B (zh) * 2014-07-30 2020-11-20 南京圣和药业股份有限公司 丙型肝炎病毒抑制剂及其应用
TWI698444B (zh) 2014-10-29 2020-07-11 美商基利科學股份有限公司 製備核糖苷的方法
AU2015380298B2 (en) 2014-12-30 2019-02-21 Corteva Agriscience Llc Picolinamide compounds with fungicidal activity
CA2972034A1 (en) 2014-12-30 2016-07-07 Dow Agrosciences Llc Picolinamides with fungicidal activity
JP2018500362A (ja) * 2014-12-30 2018-01-11 ダウ アグロサイエンシィズ エルエルシー 殺真菌活性を有するピコリンアミド化合物の使用
US20180000084A1 (en) 2014-12-30 2018-01-04 Dow Agrosciences Llc Use of picolinamide compounds with fungicidal activity
WO2016134057A1 (en) * 2015-02-18 2016-08-25 Abbvie Inc. Anti-viral compounds
JP2018507233A (ja) * 2015-03-02 2018-03-15 メディヴィル・アクチエボラーグ ヌクレオチドホスホルアミデート配合物
CN107531739A (zh) * 2015-03-02 2018-01-02 美迪维尔公司 作为用于治疗丙型肝炎的hcv抑制剂的核苷酸衍生物
WO2016160646A1 (en) * 2015-04-02 2016-10-06 Merck Sharp & Dohme Corp. Process for making phosphoramidate protected nucleoside compounds
MX2017013956A (es) * 2015-05-01 2018-09-05 Cocrystal Pharma Inc Analogos de nucleosidos para el tratamiento de la familia de virus flaviviridae y cancer.
WO2017040895A1 (en) * 2015-09-02 2017-03-09 Abbvie Inc. Anti-viral compounds
WO2017040896A1 (en) * 2015-09-02 2017-03-09 Abbvie Inc. Anti-viral compounds
WO2017040898A1 (en) * 2015-09-02 2017-03-09 Abbvie Inc. Anti-viral compounds
WO2017040889A1 (en) * 2015-09-02 2017-03-09 Abbvie Inc. Anti-viral compounds
WO2017040892A1 (en) * 2015-09-02 2017-03-09 Abbvie Inc. Anti-viral compounds
PT3785717T (pt) 2015-09-16 2022-04-14 Gilead Sciences Inc Métodos para o tratamento de infeções por coronaviridae
CN105367505A (zh) * 2015-12-01 2016-03-02 苏利制药科技江阴有限公司 一种新型合成3,6-二甲基-2,5-哌嗪二酮的方法
EP3500584A1 (en) * 2016-08-19 2019-06-26 Sandoz AG Sofosbuvir derivatives for the treatment of hepatitis c
CN116036112A (zh) 2017-03-14 2023-05-02 吉利德科学公司 治疗猫冠状病毒感染的方法
JP2020518578A (ja) 2017-05-01 2020-06-25 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド （Ｓ）−２−エチルブチル２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（４−アミノピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル）−５−シアノ−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパノエートの結晶形態
US20200085047A1 (en) 2017-05-02 2020-03-19 Dow Agrosciences Llc Use of an Acyclic Picolinamide Compound as a Fungicide for Control of Phytopathogenic Fungi in Vegetables
TW201842851A (zh) 2017-05-02 2018-12-16 美商陶氏農業科學公司 用於穀類中的真菌防治之協同性混合物
TWI774761B (zh) 2017-05-02 2022-08-21 美商科迪華農業科技有限責任公司 用於穀物中的真菌防治之協同性混合物
TW201919648A (zh) 2017-07-11 2019-06-01 美商基利科學股份有限公司 用於治療病毒感染之含rna聚合酶抑制劑與環糊精的組合物
WO2019018185A1 (en) 2017-07-15 2019-01-24 Arisan Therapeutics Inc. ENANTIOMERICALLY PURE ADAMATANE DERIVATIVES FOR THE TREATMENT OF FILOVIRUS INFECTIONS
BR102019004480B1 (pt) 2018-03-08 2023-03-28 Dow Agrosciences Llc Picolinamidas como fungicidas
CA3094958A1 (en) 2018-03-09 2019-09-12 Medivir Aktiebolag Cancer treatment with (2,2-bishydroxymethyl) methylenecyclopropane nucleotides
WO2020081382A1 (en) 2018-10-15 2020-04-23 Dow Agrosciences Llc Methods for sythesis of oxypicolinamides
CN109762040A (zh) * 2019-01-14 2019-05-17 歌礼生物制药(杭州)有限公司 一种核苷类ns5b聚合酶抑制剂的制备方法
US11660307B2 (en) 2020-01-27 2023-05-30 Gilead Sciences, Inc. Methods for treating SARS CoV-2 infections
US10874687B1 (en) 2020-02-27 2020-12-29 Atea Pharmaceuticals, Inc. Highly active compounds against COVID-19
CN111269263A (zh) * 2020-03-09 2020-06-12 上海龙翔生物医药开发有限公司 一种瑞德西韦侧链中间体及其制备方法
AU2021234308C1 (en) 2020-03-12 2024-02-22 Gilead Sciences, Inc. Methods of preparing 1'-cyano nucleosides
JP7482250B2 (ja) 2020-04-06 2024-05-13 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド １’－シアノ置換カルバヌクレオシド類似体の吸入製剤
CN111848679A (zh) * 2020-04-17 2020-10-30 山东科巢生物制药有限公司 一种利用微通道反应技术合成瑞德西韦的方法
CN115666570A (zh) 2020-05-29 2023-01-31 吉利德科学公司 瑞德西韦治疗方法
EP4172160A2 (en) 2020-06-24 2023-05-03 Gilead Sciences, Inc. 1'-cyano nucleoside analogs and uses thereof
PT4204421T (pt) 2020-08-27 2024-06-25 Gilead Sciences Inc Compostos e métodos para o tratamento de infeções virais
EP4320128A1 (en) 2022-03-02 2024-02-14 Gilead Sciences, Inc. Compounds and methods for treatment of viral infections
CN116199679A (zh) * 2022-12-23 2023-06-02 吉斯凯(苏州)制药有限公司 一种拉米夫定的工业化制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002032920A2 (en) * 2000-10-18 2002-04-25 Pharmasset Limited Modified nucleosides for treatment of viral infections and abnormal cellular proliferation
CN101591371A (zh) * 2009-06-30 2009-12-02 连云港金康医药科技有限公司 一种通过卤交换氟化制备吉西他滨或其类似物的方法
WO2012040126A1 (en) * 2010-09-22 2012-03-29 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleotide analogs

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT727419E (pt) 1992-12-29 2002-08-30 Abbott Lab Compostos intermediarios para a preparacao de inibidores da protease retroviral
IL110752A (en) 1993-09-13 2000-07-26 Abbott Lab Liquid semi-solid or solid pharmaceutical composition for an HIV protease inhibitor
US5559158A (en) 1993-10-01 1996-09-24 Abbott Laboratories Pharmaceutical composition
IL111991A (en) 1994-01-28 2000-07-26 Abbott Lab Liquid pharmaceutical composition of HIV protease inhibitors in organic solvent
US6037157A (en) 1995-06-29 2000-03-14 Abbott Laboratories Method for improving pharmacokinetics
PE20070211A1 (es) 2005-07-29 2007-05-12 Medivir Ab Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
WO2008022469A1 (en) * 2006-08-23 2008-02-28 Mcgill University 2'-DEOXY-2'-FLUORO-β-D-ARABINONUCLEOSIDE 5'-TRIPHOSPHATES AND THEIR USE IN ENZYMATIC NUCLEIC ACID SYNTHESIS
ES2358853T3 (es) * 2006-10-10 2011-05-16 Medivir Ab Inhibidor nucleosídico de vhc.
US7951789B2 (en) 2006-12-28 2011-05-31 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
US7964580B2 (en) * 2007-03-30 2011-06-21 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidate prodrugs
CA2710832A1 (en) 2007-12-27 2009-07-09 Epiphany Biosciences, Inc. Antiviral compounds
US8173621B2 (en) * 2008-06-11 2012-05-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside cyclicphosphates
KR20110104074A (ko) 2008-12-23 2011-09-21 파마셋 인코포레이티드 퓨린 뉴클레오시드의 합성
EA201190178A1 (ru) * 2009-03-20 2012-06-29 Алиос Биофарма, Инк. Замещённые нуклеозидные и нуклеотидные аналоги
SI2609923T1 (sl) 2010-03-31 2017-10-30 Gilead Pharmasset Llc Postopek za kristalizacijo (s)-izopropil 2-(((s)-(perfluorofenoksi) (fenoksi)fosforil)amino)propanoata
US8402690B2 (en) 2010-09-09 2013-03-26 Sterling International Inc. Bedbug trap
US8871737B2 (en) * 2010-09-22 2014-10-28 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleotide analogs
US9061041B2 (en) 2011-04-13 2015-06-23 Merck Sharp & Dohme Corp. 2′-substituted nucleoside derivatives and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
US9403863B2 (en) 2011-09-12 2016-08-02 Idenix Pharmaceuticals Llc Substituted carbonyloxymethylphosphoramidate compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
DK2794627T3 (en) 2011-12-22 2019-01-14 Alios Biopharma Inc SUBSTITUTED NUCLEOSIDES, NUCLEOTIDES AND ANALOGUES THEREOF
EP2920195A1 (en) 2012-11-14 2015-09-23 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. D-alanine ester of rp-nucleoside analog
UA117375C2 (uk) * 2013-09-04 2018-07-25 Медівір Аб Інгібітори полімерази hcv
WO2015081133A2 (en) * 2013-11-27 2015-06-04 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Nucleotides for the treatment of liver cancer
EP3074399A1 (en) * 2013-11-27 2016-10-05 Idenix Pharmaceuticals LLC 2'-dichloro and 2'-fluoro-2'-chloro nucleoside analogues for hcv infection
CN106536538A (zh) 2014-04-24 2017-03-22 共晶制药股份有限公司 用于治疗黄病毒家族病毒和癌症的2’‑双取代核苷类似物

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002032920A2 (en) * 2000-10-18 2002-04-25 Pharmasset Limited Modified nucleosides for treatment of viral infections and abnormal cellular proliferation
CN101591371A (zh) * 2009-06-30 2009-12-02 连云港金康医药科技有限公司 一种通过卤交换氟化制备吉西他滨或其类似物的方法
WO2012040126A1 (en) * 2010-09-22 2012-03-29 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleotide analogs

Also Published As

Publication number Publication date
UA117375C2 (uk) 2018-07-25
PL3041855T3 (pl) 2018-03-30
AU2017203954B2 (en) 2019-05-09
SA516370684B1 (ar) 2017-05-10
IL244389A0 (en) 2016-04-21
US20180105549A1 (en) 2018-04-19
EP3252066B1 (en) 2019-05-22
BR112016004919A2 (pt) 2017-09-05
US20170107244A1 (en) 2017-04-20
US9540411B2 (en) 2017-01-10
JP6456958B2 (ja) 2019-01-23
PH12018500931A1 (en) 2019-02-04
SG10201700647PA (en) 2017-02-27
CL2016000493A1 (es) 2016-12-23
CN108558973A (zh) 2018-09-21
HK1221228A1 (zh) 2017-05-26
PT3041855T (pt) 2017-11-08
CN105705510A (zh) 2016-06-22
US10106571B2 (en) 2018-10-23
MY177804A (en) 2020-09-23
AU2014315715B2 (en) 2017-04-06
PH12016500402A1 (en) 2016-05-16
IL261702B (en) 2019-05-30
SI3041855T1 (sl) 2017-11-30
US9481703B2 (en) 2016-11-01
US20160340380A1 (en) 2016-11-24
US9828408B2 (en) 2017-11-28
US20150175648A1 (en) 2015-06-25
EP3041855B1 (en) 2017-07-26
CN108676047B (zh) 2021-04-02
CN108676047A (zh) 2018-10-19
IL261702A (en) 2018-10-31
MX2016002849A (es) 2016-10-26
AU2017203954A1 (en) 2017-07-06
EP3252066A1 (en) 2017-12-06
DK3041855T3 (en) 2017-10-23
HUE036365T2 (hu) 2018-07-30
CN105705510B (zh) 2018-11-30
AU2014315715A1 (en) 2016-03-10
HRP20171435T1 (hr) 2017-11-03
KR20160078337A (ko) 2016-07-04
EA201690452A1 (ru) 2016-08-31
JP2019065011A (ja) 2019-04-25
JP2016529324A (ja) 2016-09-23
PH12016500402B1 (en) 2016-05-16
HK1255872A1 (zh) 2019-08-30
WO2015034420A1 (en) 2015-03-12
RS56383B1 (sr) 2017-12-29
EP3041855A1 (en) 2016-07-13
IL244389B (en) 2018-10-31
CA2921899A1 (en) 2015-03-12
CR20160123A (es) 2016-07-20
US20190085010A1 (en) 2019-03-21
CY1119587T1 (el) 2018-03-07
SG11201601474UA (en) 2016-03-30
CL2019000271A1 (es) 2019-06-07
ME02875B (me) 2018-04-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA028974B1 (ru) Ингибиторы полимеразы hcv
JP7532440B2 (ja) ＨＣＶ治療に対するβ－Ｄ－２’－デオキシ－２’－α－フルオロ－２’－β－Ｃ－置換－２－修飾－Ｎ６－置換プリンヌクレオチド
AU2018203337A1 (en) Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
US10144750B2 (en) Dioxolane analogues of cytidine for the treatment of cancer
EA020244B1 (ru) Урацильные циклопропилнуклеотиды
EA022754B1 (ru) Циклопропильные ингибиторы полимеразы
WO2015056213A1 (en) Hcv polymerase inhibitors
TWI675664B (zh) Hcv聚合酶抑制劑

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): RU