CN107531739A - 作为用于治疗丙型肝炎的hcv抑制剂的核苷酸衍生物 - Google Patents

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Abstract

式(1A)表示的化合物

Description

作为用于治疗丙型肝炎的HCV抑制剂的核苷酸衍生物
技术领域
本发明涉及特定的核苷酸衍生物，其为丙型肝炎病毒(HCV)的聚合酶的抑制剂，用于治疗或预防包括HCV基因型3病毒感染的丙型肝炎。本发明还涉及用于HCV GT3和所有其他基因型的与核苷酸衍生物和某些特定的抗病毒剂的组合治疗。
发明背景
HCV是单链正义RNA病毒，属于病毒的黄病毒(Flaviviridae)科、肝炎病毒属。RNA多基因的NS5B区域编码RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)，其对于病毒复制是至关重要的。在最初的急性感染后，由于HCV优先在肝细胞中复制而不直接引起细胞病变，大多数感染的个体发展为慢性肝炎。特别地，缺乏有力的T淋巴细胞响应和高病毒突变倾向看来促进了高比率的慢性感染。慢性肝炎可以进展为肝纤维化，导致肝硬化、晚期肝病和HCC(肝细胞癌)，使其成为肝移植的主要原因。
存在六种主要的HCV基因型和超过50种的亚型，其地理分布不同。HCV基因型1是欧洲和美国的主要基因型。HCV的广泛的遗传异质性有重要的诊断和临床含义，也许解释了在疫苗开发中的困难和对目前的治疗缺乏响应。
HCV的传播可通过与受污染的血液或血液制品接触，例如在输血或静脉使用药物后发生。用于血液筛选的诊断测试的引入导致输血后HCV发生率呈下降的趋势。然而，鉴于向晚期肝病的缓慢进展，现有的感染在数十年内将持续呈现严重的医学和经济负担。
第一代HCV治疗基于(聚乙二醇化的)干扰素-α(IFN-α)与利巴韦林的组合。该组合治疗在超过40％的基因型1病毒感染的患者和约80％的基因型2和3感染的患者中产生持续的病毒学响应。除对HCV基因型1有限的效力以外，该组合治疗有明显的副作用，在许多患者中耐受性差。主要副作用包括流感样症状、血液学异常和神经精神病症状。第二代HCV治疗增加了HCV蛋白酶抑制剂特立拉韦(telepravir)或波普瑞韦(boceprevir)，使得治疗时间缩短，但产生很多的严重副作用。通过引入蛋白酶抑制剂西米普韦(simeprevir)和HCV聚合酶抑制剂索非布韦(sofosbuvir)能够在治疗中取得重要改进。这些最初与干扰素和利巴韦林共同给予，但最近西米普韦(WO2007/014926)和索非布韦(WO2008/121634)的共同给予已经实现无干扰素和无利巴韦林的HCV治疗，其具有进一步减少的治疗时间和显著减少的副作用。
核苷/核苷酸HCV聚合酶抑制剂如索非布韦的优点是其倾向于针对几种HCV基因型都有活性。例如，索非布韦已经由FDA和EMA批准用于治疗HCV基因型1和4。然而，在Lawitz等人,N.Eng.J.Med.2013；368:1878-87报导的分裂生殖期III临床试验中，注意到“在索非布韦–利巴韦林组中的响应率在具有基因型3感染的患者中比在具有基因型2感染的患者中更低(56％相对于97％)”。因此，需要更有效、方便和更好耐受的治疗。
HIV药物，特别是HIV蛋白酶抑制剂的经验已教导次优的药代动力学和复合给药策略快速地导致意外的依从失败(compliance failure)。这进而意味着在HIV策略中的各种药物的24小时谷浓度(最低血浆浓度)在白天的大部分时间频繁地降至IC90或ED90阈值以下。认为至少IC50，和更实际的是IC90或ED90的24小时谷水平对减缓药物逃逸突变体(drugescape mutant)的发展是必要的。实现必需的药代动力学和药物代谢以得到这样的谷水平对药物设计提出了严峻的挑战。
NS5B RdRp对单链正义HCV RNA基因组的复制是绝对必要的，这使其成为抗病毒化合物开发的有吸引力的靶标。有两大类NS5B抑制剂：非核苷抑制剂(NNI)和核苷类似物。NNI结合到蛋白的变构区域，而核苷抑制剂合成代谢为(anabolize)相应的核苷酸并充当聚合酶的供选择的底物。随后形成的核苷酸掺入新生RNA聚合物链并且可以终止该聚合物链的生长。目前，NS5B的核苷和非核苷抑制剂均是已知的。
如上所述，核苷抑制剂的抑制机制涉及将核苷磷酸化为相应的三磷酸酯。磷酸化通常由宿主细胞激酶介导，并且是核苷活化为NS5B聚合酶的供选择的底物的绝对必要条件。通常，第一磷酸化步骤，即核苷转化为核苷5’-单磷酸酯是限速步骤。随后的单磷酸酯转化为二-和三-磷酸酯通常容易进行并且通常不限制速率。提高核苷三磷酸酯产生的策略是使用单磷酸酯的细胞可透过的核苷前药，即携带掩蔽的磷酸酯部分，“前药部分”的核苷，该前药易受细胞内的酶活化的影响，产生核苷单磷酸酯。随后如此形成的单磷酸酯通过细胞激酶转化为活性三磷酸酯。
提供潜在的前药的活性化合物的化学修饰产生全新的分子实体，其可能显示不希望的物理、化学和生物特性，因此，最佳前药的确定仍然是不确定的和挑战性的任务。
需要这样的HCV抑制剂，其可以克服目前HCV疗法的缺点，如副作用，例如毒性，有限的功效，缺少泛基因型覆盖，出现耐药性和依从失败，以及改善持续的病毒响应。
本发明提供新的HCV抑制化合物，其用于治疗丙型肝炎基因型3病毒感染，并且具有涉及以下参数中一个或多个的有用的特性：抗病毒功效；泛基因型覆盖；有利的抗性发展情况；无毒性和基因毒性；有利的药代动力学和药效学；和易于配制和给予。技术人员将理解本发明的用于治疗丙型肝炎基因型3病毒感染的HCV抑制化合物不需要证明在每方面比所有已知化合物都具有改进，而是可以提供特性的平衡，组合的特性意味着HCV抑制化合物是有价值的供选择的药物。
用于根据本发明的用途的化合物还可以由于其缺乏针对其他病毒，特别是针对HIV的活性，即是选择性的事实而具有吸引力。HIV感染的患者通常遭受如HCV的合并感染。使用也抑制HIV的HCV抑制剂治疗这样的患者可能导致出现耐药性HIV菌株。
发明描述
一方面，本发明提供了非对映异构化合物1A：
及其药学上可接受的盐。
本发明的另一方面提供了用于治疗或预防丙型肝炎基因型2a、3a、4a、5a或6a病毒感染的非对映异构化合物1A。
在具体实施方案中，本发明涉及用于治疗丙型肝炎基因型3a的式(1A)的非对映异构化合物。
式(1A)的化合物可以任选地以药学上可接受的盐和/或溶剂化物的形式提供。在一个实施方案中，用于根据本发明的用途的化合物以药学上可接受的盐的形式提供。在第二个实施方案中，用于根据本发明的用途的化合物以药学上可接受的溶剂化物的形式提供。在第三个实施方案中，用于根据本发明的用途的化合物以其游离形式提供。
认为式(1A)的非对映异构化合物的活性代谢物是具有以下结构的三磷酸酯：
其中U为O，R2为H并且碱基为尿嘧啶。
在优选的实施方案中，本发明提供了式(1A)的化合物，
其用于治疗丙型肝炎基因型2a、3a、4a、5a或6a感染。优选地，本发明涉及式(1A)的化合物，其用于治疗丙型肝炎基因型3a。
因此，提供了用于治疗或预防HCV基因型3感染的式(1A)的化合物。在优选的方面，本发明提供了用于治疗人的HCV基因型3感染的式(1A)的化合物。
在另外的方面，本发明提供了用于预防人的HCV基因型3感染的式(1A)的化合物。
在该方面的优选的实施方案中，提供了式(1A)的化合物。
此外，提供了式(1A)的化合物，其用作用于治疗或预防HCV基因型3感染，尤其是治疗HCV基因型3感染的药物。
还提供了式(1A)的化合物在制备用于治疗或预防HCV基因型3感染的药物，尤其是用于治疗HCV基因型3感染的药物中的用途。
在另外的方面，本发明提供了包含式(1A)的化合物连同药学上可接受的助剂、稀释剂、赋形剂或载体的药物组合物，其用于治疗丙型肝炎基因型3感染。药物组合物将通常包含抗病毒有效量(例如，对于人)的式(1A)的化合物，但当预期与其他药剂组合使用或以多剂量使用时，亚治疗量的式(1A)的化合物可以是有价值的。
本发明的一方面涉及药物组合物，其包含在药学上可接受的溶媒、载体或稀释剂中的：
具有下式的第一化合物，
或其药学上可接受的盐和选自以下的一至三种另外的HCV抗病毒剂：
a)阿那匹韦；
b)达卡他韦；和
c)贝卡布韦(beclubavir)。
因此，本发明提供了抗病毒组合物和HCV抗病毒治疗方案，其包含：
化合物1A和阿那匹韦；
化合物1A、阿那匹韦和达卡他韦；
化合物1A和达卡他韦；
化合物1A、阿那匹韦和贝卡布韦；
化合物1A，阿那匹韦、达卡他韦和贝卡布韦；
化合物1A、达卡他韦和贝卡布韦；
化合物1A和贝卡布韦；
其中化合物1A在每种情况下都包括其药学上可接受的盐。
阿那匹韦(INN)已显示有效抑制HCV复制。可以使用本领域技术人员已知的方法获得前述化合物，包括例如WO2003/099274和WO2009/085659中公开的那些方法，其全部内容通过引用特此并入。虽然本发明不受任何特定理论的限制，但是认为阿那匹韦抑制HCV蛋白酶，特别是NS3/4A蛋白酶。阿那匹韦的药学上可接受的盐可以用于本文描述的组合物中。
达卡他韦(INN)已证明有效抑制HCV复制。可以使用本领域技术人员已知的方法获得达卡他韦，如WO2008/021927、21928和WO2009/20828中描述的那些方法，其全部内容通过引用特此并入。虽然本发明不受任何特定理论的限制，但是认为达卡他韦是NS5A抑制剂，其中NS5A是参与丙型肝炎病毒复制的蛋白。
贝卡布韦(INN)已证明有效抑制HCV复制。可以使用本领域技术人员已知的方法获得贝卡布韦，如WO2014/014885和WO2007/136982中描述的那些方法，其全部内容通过引用特此并入。虽然本发明不受任何特定理论的限制，但是认为贝卡布韦是HCV NS5A聚合酶的非核苷抑制剂。
在一些实施方案中，组合物还可以包含药学上可接受的赋形剂、稀释剂和/或载体，如本文描述的那些。
通常考虑，在本发明的组合治疗中的化合物1A的抗病毒有效日剂量将为约0.01至约700mg/kg，或约0.5至约400mg/kg，或约1至约250mg/kg，或约2至约200mg/kg，或约10至约150mg/kg，或约0.1至约50mg/kg，或约1至约20mg/kg，或约2至约10mg/kg，或约5至约8mg/kg体重。适宜的是在全天以适宜的间隔以一个、两个、三个、四个或更多个亚剂量给予需要的剂量。所述亚剂量可以配制为单位剂型，例如，每单位剂型包含约1至约5000mg化合物1，或约50至约3000mg化合物1，或约100至约1000mg化合物1，或约200至约600mg化合物1，或约100至约400mg化合物1，或约7至约3500mg化合物1，或约70至约1400mg化合物1A，或约140至约700mg化合物1，或约340至约580mg化合物1A。优选地，配制单位剂型用于使用上述范围中的一种的QD给药。
类似地，不同量的阿那匹韦或药学上可接受的盐可以包含在组合物中。在一些实施方案中，组合物可以包含的阿那匹韦或其药学上可接受的盐的量在约50mg至约500mg QD或BID的范围内。在其他实施方案中，组合物可以包含的阿那匹韦或其药学上可接受的盐的量在约100mg至约300mg QD或BID的范围内。在再其他实施方案中，组合物可以包含的阿那匹韦或其药学上可接受的盐的量为约100mg 150或200mg BID或优选QD的剂量。
类似地，不同量的达卡他韦或其药学上可接受的盐可以包含在组合物中。在一些实施方案中，组合物可以包含的达卡他韦或其药学上可接受的盐的量在约10mg至约225mgBID或QD的范围内。在其他实施方案中，组合物可以包含的达卡他韦或其药学上可接受的盐的量在约15mg至约100mg BID或优选QD的范围内。在再其他实施方案中，组合物可以包含的达卡他韦或其药学上可接受的盐的量在约30-60mg QD的范围内。在又其他实施方案中，30-100mg，如30、50或60mg的负荷剂量的达卡他韦(declatasvir)或其药学上可接受的盐可以在治疗的最初1-3天给予。
类似地，不同量的贝卡布韦或其药学上可接受的盐可以包含在组合物中。在一些实施方案中，组合物可以包含的贝卡布韦或其药学上可接受的盐的量在约25mg至约225mgBID或QD的范围内。在其他实施方案中，组合物可以包含的贝卡布韦或其药学上可接受的盐的量在约50mg至约100mg QD或通常BID的范围内。在再其他实施方案中，组合物可以包含的贝卡布韦或其药学上可接受的盐的量在约75mg BID或QD的范围内。
制备化合物1A和阿那匹韦、达卡他韦和/或贝卡布韦或其药学上可接受的盐的组合的潜在优点可以是与使用当作为单药治疗给予时实现相同的病毒载量降低所需的任何一种单独的组分的在其他方面相当的患者群体的单药治疗相比，在治疗本文所公开的疾病病症(例如HCV)中有效的一种或多种化合物所需的量减少。
然而，一般而言，通常便利的是以反映各组分(多种组分)的单药治疗剂量方案的剂量给予化合物1A和阿那匹韦、达卡他韦和/或贝卡布韦，从而提供增强的抗病毒功效和/或起效。
使用化合物1A和阿那匹韦、达卡他韦和/或贝卡布韦或其药学上可接受的盐的组合的另外的优点可以包括：各组分之间几乎没有或没有交叉耐药性；用于消除各组分的途径不同；对细胞色素P 450几乎没有显著影响；和/或各组分之间几乎没有药代动力学相互作用。
在组合物中存在的化合物1A和阿那匹韦、达卡他韦和/或贝卡布韦或其药学上可接受的盐的百分比也可以不同。例如，在一些实施方案中，基于组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐的量和阿那匹韦、达卡他韦和/或贝卡布韦或其药学上可接受的盐的量的总和，组合物可以包含的化合物1A或其药学上可接受的盐的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案包括但不限于，基于组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐的量和阿那匹韦、达卡他韦和/或贝卡布韦或其药学上可接受的盐的量的总和，化合物1A或其药学上可接受的盐的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
对于阿那匹韦，在实施方案中，基于组合物中的阿那匹韦和其他组分的量的总和，组合物可以包含的阿那匹韦或其药学上可接受的盐或前药的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案的实例包括但不限于，基于组合物中的阿那匹韦和其他组分的量的总和，阿那匹韦或其药学上可接受的盐的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
对于达卡他韦，在实施方案中，基于组合物中的达卡他韦或其药学上可接受的盐或前药的量和其他组分的量的总和，组合物可以包含的达卡他韦或其药学上可接受的盐或前药的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案的实例包括但不限于，基于组合物中的达卡他韦或其药学上可接受的盐的量和其他组分的量的总和，达卡他韦或其药学上可接受的盐的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
对于贝卡布韦，在实施方案中，基于组合物中的贝卡布韦或其药学上可接受的盐或前药的量和其他组分的量的总和，组合物可以包含的贝卡布韦或其药学上可接受的盐或前药的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案的实例包括但不限于，基于组合物中的贝卡布韦或其药学上可接受的盐的量和其他组分的量的总和，贝卡布韦或其药学上可接受的盐的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
通常考虑，在本发明的组合治疗中的化合物1A的抗病毒有效日剂量将为约0.01至约700mg/kg，或约0.5至约400mg/kg，或约1至约250mg/kg，或约2至约200mg/kg，或约10至约150mg/kg，或约0.1至约50mg/kg，或约1至约20mg/kg，或约2至约10mg/kg，或约5至约8mg/kg体重。适宜的是在全天以适宜的间隔以一个、两个、三个、四个或更多个亚剂量给予需要的剂量。所述亚剂量可以配制为单位剂型，例如，每单位剂型包含约1至约5000mg化合物1A，或约50至约3000mg化合物1A，或约100至约1000mg化合物1A，或约200至约600mg化合物1A，或约100至约400mg化合物1A，或约7至约3500mg化合物1A，或约70至约1400mg化合物1A，或约140至约700mg化合物1A，或约340至约580mg化合物1A。优选地，配制单位剂型用于使用上述范围中的一种的QD给药。
类似地，不同量的阿那匹韦或药学上可接受的盐可以包含在组合物中。在一些实施方案中，组合物可以包含的阿那匹韦或其药学上可接受的盐的量在约50mg至约500mg QD或BID的范围内。在其他实施方案中，组合物可以包含的阿那匹韦或其药学上可接受的盐的量在约100mg至约300mgQD或BID的范围内。在再其他实施方案中，组合物可以包含的阿那匹韦或其药学上可接受的盐的量为约100mg 150或200mg BID或优选QD的剂量。
类似地，不同量的达卡他韦或其药学上可接受的盐可以包含在组合物中。在一些实施方案中，组合物可以包含的达卡他韦或其药学上可接受的盐的量在约10mg至约225mgBID或QD的范围内。在其他实施方案中，组合物可以包含的达卡他韦或其药学上可接受的盐的量在约15mg至约100mg BID或优选QD的范围内。在再其他实施方案中，组合物可以包含的达卡他韦或其药学上可接受的盐的量在约30-60mg QD的范围内。在又其他实施方案中，30-100mg，如30、50或60mg的负荷剂量的达卡他韦或其药学上可接受的盐可以在治疗的最初1-3天给予。
类似地，不同量的贝卡布韦或其药学上可接受的盐可以包含在组合物中。在一些实施方案中，组合物可以包含的贝卡布韦或其药学上可接受的盐的量在约25mg至约225mgBID或QD的范围内。在其他实施方案中，组合物可以包含的贝卡布韦或其药学上可接受的盐的量在约50mg至约100mg QD或通常BID的范围内。在再其他实施方案中，组合物可以包含的贝卡布韦或其药学上可接受的盐的量在约75mg BID或QD的范围内。
制备化合物1A和阿那匹韦、达卡他韦和/或贝卡布韦或其药学上可接受的盐的组合的潜在优点可以是与使用当作为单药治疗给予时实现相同的病毒载量降低所需的任何一种单独的组分的在其他方面相当的患者群体的单药治疗相比，在治疗本文所公开的疾病病症(例如HCV)中有效的一种或多种化合物所需的量减少。
然而，一般而言，通常便利的是以反映各组分(多种组分)的单药治疗剂量方案的剂量给予化合物1A和其他抗病毒剂，从而提供增强的抗病毒功效和/或起效。
在组合物中存在的化合物1A和阿那匹韦、达卡他韦和/或贝卡布韦或其药学上可接受的盐的百分比也可以不同。例如，在一些实施方案中，基于组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐的量和阿那匹韦、达卡他韦和/或贝卡布韦或其药学上可接受的盐的量的总和，组合物可以包含的化合物1A或其药学上可接受的盐的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案包括但不限于，基于组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐的量和阿那匹韦、达卡他韦和/或贝卡布韦或其药学上可接受的盐的量的总和，化合物1A或其药学上可接受的盐的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约6'0％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
对于阿那匹韦，在实施方案中，基于组合物中的阿那匹韦和其他组分的量的总和，组合物可以包含的阿那匹韦或其药学上可接受的盐或前药的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案的实例包括但不限于，基于组合物中的阿那匹韦和其他组分的量的总和，阿那匹韦或其药学上可接受的盐的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
对于达卡他韦，在实施方案中，基于组合物中的达卡他韦或其药学上可接受的盐或前药的量和其他组分的量的总和，组合物可以包含的达卡他韦或其药学上可接受的盐或前药的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案的实例包括但不限于，基于组合物中的达卡他韦或其药学上可接受的盐的量和其他组分的量的总和，达卡他韦或其药学上可接受的盐的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
对于贝卡布韦，在实施方案中，基于组合物中的贝卡布韦或其药学上可接受的盐或前药的量和其他组分的量的总和，组合物可以包含的贝卡布韦或其药学上可接受的盐或前药的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案的实例包括但不限于，基于组合物中的贝卡布韦或其药学上可接受的盐的量和其他组分的量的总和，贝卡布韦或其药学上可接受的盐的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
本文描述的一些实施方案涉及用于改善或治疗疾病病症的方法，所述方法可以包括给予一定量的化合物I或其药学上可接受的盐，以及一定量的阿那匹韦、达卡他韦和/或贝卡布韦或其药学上可接受的盐，其中所述疾病病症可以是丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和/或肝功能受损。
可以使用化合物1A或其药学上可接受的盐，阿那匹韦、达卡他韦和/或贝卡布韦或其药学上可接受的盐的各种剂型以改善和/或治疗疾病病症。在一些情况下，化合物1A和阿那匹韦、达卡他韦和/或贝卡布韦或其药学上可接受的盐可以存在于同一剂型中，例如本文所述的组合物。在其他情况下，化合物1A、阿那匹韦、达卡他韦和/或贝卡布韦或其药学上可接受的盐可作为分开的剂型给予。例如，化合物1A或其药学上可接受的盐可以以一个片剂给予，阿那匹韦(如果存在于该方案中)可以以第二片剂给予，达卡他韦(如果存在)可以以分开的片剂给予，以及贝卡布韦(如果存在)可以以又一片剂给予。当化合物1A和阿那匹韦、达卡他韦和/或贝卡布韦或其药学上可接受的盐包含在分开的剂型中时，剂型可以是相同的(例如，二者均作为丸剂)或不同的(例如，两种化合物可以配制成丸剂，且其它化合物可以配制为注射剂)。
化合物lA或其药学上可接受的盐和阿那匹韦、达卡他韦和/或贝卡布韦或其药学上可接受的盐的给予可以变化。当化合物1A和其他组分包含在分开的剂型中时，可以同时或顺序给予剂型。在一些实施方案中，包含化合物1A或其药学上可接受的盐的剂型可以在阿那匹韦(如果存在)、达卡他韦(delcatasvir)(如果存在)和贝卡布韦(beclubavir)(如果存在于该方案中)之前、之后、之间、与其同时或顺序给予。在一些实施方案中，化合物1A和阿那匹韦、达卡他韦和/或贝卡布韦或其药学上可接受的盐、或其药学上可接受的盐或前药可以同时给予。如本文所使用，术语“同时”是指所有二、三或四种化合物的有效浓度存在于受试者中。当同时给予时，化合物1A和阿那匹韦、达卡他韦和/或贝卡布韦或其药学上可接受的盐可以以同一剂型或分开的剂型给予。在其他实施方案中，化合物1A和阿那匹韦、达卡他韦和/或贝卡布韦或其药学上可接受的盐可以顺序给予。如本文所使用，术语“顺序”是指在第一时间段给予一种化合物，然后在第二时间段给予第二化合物，任选地接着在第三时间段给予第三化合物，其中第一、第二和(如果适用)第三时间段不重叠。
本发明的一方面涉及药物组合物，其包含在药学上可接受的溶媒、载体或稀释剂中的：
具有下式的第一化合物
或其药学上可接受的盐，和
a)第二化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中所述第二化合物是司美匹韦(simeprevir)(“化合物2”)；
和/或
b)第三化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中所述第三化合物为GSK2336805(也称为JNJ56914845)(“化合物3”)。
另一方面，本发明涉及组合物，其包含在药学上可接受的溶媒、载体或稀释剂中的化合物1和化合物2和/或化合物3或其药学上可接受的盐或前药，其中所述组合物还包含一种或多种治疗剂。在一个实施方案中，所述一种或多种治疗剂为利巴韦林和利托那韦。
司美匹韦(INN)(化合物2)已显示有效抑制HCV复制。可以使用本领域技术人员已知的方法获得前述化合物，包括例如WO2013/061285、WO2008/092955和WO2013/041655中公开的那些方法，其全部内容通过引用特此并入。虽然本发明不受任何特定理论的限制，但是认为化合物2抑制HCV蛋白酶，特别是NS3/4A蛋白酶。化合物2的药学上可接受的盐和前药可以用于本文描述的组合物。
JNJ56914845(也称为GSK2336805)(化合物3)已证明有效抑制HCV复制。认为化合物3具有以下结构：
并且可以使用本领域技术人员已知的方法获得，如WO2011/028596中描述的那些方法，其全部内容通过引用特此并入。虽然本发明不受任何特定理论的限制，但是认为化合物3是NS5A抑制剂，其中NS5A是参与丙型肝炎病毒复制的蛋白。
将理解的是，本发明的一方面提供药物组合物，其包含在药学上可接受的溶媒、载体或稀释剂中的化合物1A和司美匹韦。本发明的另一方面提供药物组合物，其包含在药学上可接受的溶媒、载体或稀释剂中的化合物1A和GSK2336805。本发明的另一方面提供药物组合物，其包含在药学上可接受的溶媒、载体或稀释剂中的化合物1A和司美匹韦和GSK2336805。
通常考虑，在本发明的组合治疗中的化合物1A的抗病毒有效日剂量将为约0.01至约700mg/kg，或约0.5至约400mg/kg，或约1至约250mg/kg，或约2至约200mg/kg，或约10至约150mg/kg，或约0.1至约50mg/kg，或约1至约20mg/kg，或约2至约10mg/kg，或约5至约8mg/kg体重。适宜的是在全天以适宜的间隔以一个、两个、三个、四个或更多个亚剂量给予需要剂量。所述亚剂量可以配制为单位剂型，例如，每单位剂型包含约1至约5000mg化合物1A，或约50至约3000mg化合物1A，或约100至约1000mg化合物1A，或约200至约600mg化合物1A，或约100至约400mg化合物1A，或约7至约3500mg化合物1A，或约70至约1400mg化合物1A，或约140至约700mg化合物1A，或约340至约580mg化合物1A。优选地，配制单位剂型用于使用上述范围中的一种的QD给药。
类似地，不同量的化合物2或其药学上可接受的盐或前药可以包含在组合物中。在一些实施方案中，组合物可以包含的化合物2或其药学上可接受的盐或前药的量在约50mg至约300mg的范围内。在其他实施方案中，组合物可以包含的化合物2或其药学上可接受的盐或前药的量在约100mg至约200mg的范围内。在再其他实施方案中，组合物可以包含的化合物2或其药学上可接受的盐或前药的量为100、125或150mg的量。
类似地，不同量的化合物3或其药学上可接受的盐或前药可以包含在组合物中。在一些实施方案中，组合物可以包含的化合物3或其药学上可接受的盐或前药的量在约10mg至约100mg的范围内。在其他实施方案中，组合物可以包含的化合物3或其药学上可接受的盐或前药的量在约20mg至约60mg的范围内。在再其他实施方案中，组合物可以包含的化合物3或其药学上可接受的盐或前药的量在约30-50mg的范围内。
制备化合物1A和化合物2和/或3或其药学上可接受的盐或前药的组合的潜在优点可以是与单独使用化合物1A、2或3的在其他方面相当的患者群体的单药治疗相比，在治疗本文所公开的疾病病症(例如HCV)中有效的一种或多种化合物所需的量减少。在一些实施方案中，组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐的量可以比当作为单药治疗给予时实现相同的病毒载量降低所需的化合物1或其药学上可接受的盐的量更低。在一些实施方案中，组合物中的化合物2或其药学上可接受的盐或前药的量可以比当作为单药治疗给予时实现相同的病毒载量降低所需的化合物2或其药学上可接受的盐或前药的量更低。在一些实施方案中，组合物中的化合物3或其药学上可接受的盐或前药的量可以比当作为单药治疗给予时实现相同的病毒载量降低所需的化合物3或其药学上可接受的盐或前药的量更低。
在实施方案中，化合物1A或药学上可接受的盐的量和化合物2或其药学上可接受的盐或前药的量和/或化合物3或其药学上可接受的盐或前药的量的总和低于基于用于治疗疾病病症如HCV的单独的化合物1A或药学上可接受的盐、单独的化合物2或其药学上可接受的盐或前药和/或单独的化合物3或其药学上可接受的盐或前药的累加组合所期望或预期的。
然而，一般而言，通常便利的是以反映各组分(多种组分)的单药治疗剂量方案的剂量给予化合物1A和化合物2和/或化合物3，从而提供增强的抗病毒功效和/或起效。
使用化合物1A和化合物2和/或3或其药学上可接受的盐或前药的组合的另外的优点可以包括：化合物1A和化合物2和/或3或其药学上可接受的盐或前药之间几乎没有或没有交叉耐药性；用于消除化合物1A和化合物2和/或3或其药学上可接受的盐或前药的途径不同；化合物1A和化合物2和/或3或其药学上可接受的盐或前药之间几乎没有或没有重叠的毒性；对细胞色素P 450几乎没有或没有显著影响；和/或化合物1A和化合物2和/或3或其药学上可接受的盐或前药之间几乎没有或没有药代动力学相互作用。
在组合物中存在的化合物1A和化合物2和/或3或其药学上可接受的盐或前药的百分比也可以不同。例如，在一些实施方案中，基于组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐的量和化合物2和/或3或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，组合物可以包含的化合物1A或其药学上可接受的盐的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案包括但不限于，基于组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐的量和化合物2和/或3或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，化合物1A或其药学上可接受的盐的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
对于化合物2，在实施方案中，基于组合物中的化合物2或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物1和/或3或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，组合物可以包含的化合物2或其药学上可接受的盐或前药的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案的实例包括但不限于，基于组合物中的化合物2或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物1和/或3或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，化合物2或其药学上可接受的盐或前药的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
对于化合物3，在实施方案中，基于组合物中的化合物3或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物1和/或2或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，组合物可以包含的化合物3或其药学上可接受的盐或前药的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案的实例包括但不限于，基于组合物中的化合物3或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物1和/或2或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，化合物3或其药学上可接受的盐或前药的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
在一些实施方案中，组合物还可以包含药学上可接受的赋形剂、稀释剂和/或载体，如本文描述的那些。
通常考虑，在本发明的组合治疗中化合物1A的抗病毒有效日剂量将为约0.01至约700mg/kg，或约0.5至约400mg/kg，或约1至约250mg/kg，或约2至约200mg/kg，或约10至约150mg/kg，或约0.1至约50mg/kg，或约1至约20mg/kg，或约2至约10mg/kg，或约5至约8mg/kg体重。适宜的是在全天以适宜的间隔以一个、两个、三个、四个或更多个亚剂量给予需要剂量。所述亚剂量可以配制为单位剂型，例如，每单位剂型包含约1至约5000mg化合物1A，或约50至约3000mg化合物1A，或约100至约1000mg化合物1A，或约200至约600mg化合物1A，或约100至约400mg化合物1A，或约7至约3500mg化合物1A，或约70至约1400mg化合物1A，或约140至约700mg化合物1A，或约340至约580mg化合物1A。优选地，配制单位剂型用于使用上述范围中的一种的QD给药。
类似地，不同量的化合物2或其药学上可接受的盐或前药可以包含在组合物中。在一些实施方案中，组合物可以包含的化合物2或其药学上可接受的盐或前药的量在约50mg至约300mg的范围内。在其他实施方案中，组合物可以包含的化合物2或其药学上可接受的盐或前药的量在约100mg至约200mg的范围内。在再其他实施方案中，组合物可以包含的化合物2或其药学上可接受的盐或前药的量为100、125或150mg的量。
类似地，不同量的化合物3或其药学上可接受的盐或前药可以包含在组合物中。在一些实施方案中，组合物可以包含的化合物3或其药学上可接受的盐或前药的量在约10mg至约100mg的范围内。在其他实施方案中，组合物可以包含的化合物3或其药学上可接受的盐或前药的量在约20mg至约60mg的范围内。在再其他实施方案中，组合物可以包含的化合物3或其药学上可接受的盐或前药的量在约30-50mg的范围内。
制备化合物1A和化合物2和/或3或其药学上可接受的盐或前药的组合的潜在优点可以是与单独使用化合物1A、2或3的在其他方面相当的患者群体的单药治疗相比，在治疗本文所公开的疾病病症(例如HCV)中有效的一种或多种化合物所需的量减少。在一些实施方案中，组合物中的化合物1或其药学上可接受的盐的量可以比当作为单药治疗给予时实现相同的病毒载量降低所需的化合物1A或其药学上可接受的盐的量更低。在一些实施方案中，组合物中的化合物2或其药学上可接受的盐或前药的量可以比当作为单药治疗给予时实现相同的病毒载量降低所需的化合物2或其药学上可接受的盐或前药的量更低。在一些实施方案中，组合物中的化合物3或其药学上可接受的盐或前药的量可以比当作为单药治疗给予时实现相同的病毒载量降低所需的化合物3或其药学上可接受的盐或前药的量更低。
在实施方案中，化合物1A或药学上可接受的盐的量和化合物2或其药学上可接受的盐或前药的量和/或化合物3或其药学上可接受的盐或前药的量的总和低于基于用于治疗疾病病症如HCV的单独的化合物1A或药学上可接受的盐、单独的化合物2或其药学上可接受的盐或前药和/或单独的化合物3或其药学上可接受的盐或前药的累加组合所期望或预期的。
然而，一般而言，通常便利的是以反映各组分(多种组分)的单药治疗剂量方案的剂量给予化合物1A和化合物2和/或化合物3，从而提供增强的抗病毒功效和/或起效。
在组合物中存在的化合物1A和化合物2和/或3或其药学上可接受的盐或前药的百分比也可以不同。例如，在一些实施方案中，基于组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐的量和化合物2和/或3或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，组合物可以包含的化合物1A或其药学上可接受的盐的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案包括但不限于，基于组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物2和/或3或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，化合物1A或其药学上可接受的盐的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
对于化合物2，在实施方案中，基于组合物中的化合物2或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物1A和/或3或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，组合物可以包含的化合物2或其药学上可接受的盐或前药的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案的实例包括但不限于，基于组合物中的化合物2或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物1A和/或3或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，化合物2或其药学上可接受的盐或前药的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
对于化合物3，在实施方案中，基于组合物中的化合物3或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物1A和/或2或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，组合物可以包含的化合物3或其药学上可接受的盐或前药的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案的实例包括但不限于，基于在合适的容器中并标记用于治疗指定病症的组合物中的化合物3或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物1A和/或2或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，化合物3或其药学上可接受的盐或前药的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
本文描述的一些实施方案涉及用于改善或治疗疾病病症的方法，所述方法可以包括给予一定量的化合物1A或其药学上可接受的盐，以及一定量的化合物2或其药学上可接受的盐或前药和/或一定量的化合物3或其药学上可接受的盐或前药，其中所述疾病病症可以是丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和/或肝功能受损。
可以使用化合物1A或其药学上可接受的盐和/或化合物2或其药学上可接受的盐或前药和/或化合物3或其药学上可接受的盐或前药的各种剂型以改善和/或治疗疾病病症。在一些情况下，化合物1A和2和/或3或其药学上可接受的盐或前药可以存在于同一剂型中，例如本文所述的组合物。在其他情况下，化合物1A和2和/或3或其药学上可接受的盐或前药可作为分开的剂型给予。例如，化合物1A或其药学上可接受的盐可以以一个片剂给予，化合物2或其药学上可接受的盐或前药可以以第二片剂给予，和/或化合物3或其药学上可接受的盐或前药可以以第三片剂给予。当化合物1A、2和3或其药学上可接受的盐或前药包含在分开的剂型中时，剂型可以是相同的(例如，二者均作为丸剂)或不同的(例如，两种化合物可以配制成丸剂，且其它化合物可以配制为注射剂)。
化合物lA或其药学上可接受的盐和化合物2或其药学上可接受的盐或前药和/或化合物3或其药学上可接受的盐或前药的给予可以变化。当化合物1A和2和/或3或其药学上可接受的盐或前药包含在分开的剂型中时，可以同时或顺序给予剂型。在相同的实施方案中，包含化合物1A或其药学上可接受的盐的剂型可以在化合物2和/或3或其药学上可接受的盐或前药之前、之后、之间、与其同时或顺序给予。在一些实施方案中，包含化合物2或其药学上可接受的盐或前药的剂型可以在化合物1A或化合物1A和3或其药学上可接受的盐或前药之前、之后、之间、与其同时或顺序给予。在一些实施方案中，包含化合物3或其药学上可接受的盐或前药的剂型可以在化合物1A和2或其药学上可接受的盐或前药之前、之后、之间、与其同时或顺序给予。
在一些实施方案中，化合物1A和化合物2和/或3或其药学上可接受的盐或前药可以同时给予。如本文所使用，术语“同时”是指所有三种化合物的有效浓度存在于受试者中。当同时给予时，化合物1A和化合物2和/或3或其药学上可接受的盐或前药可以以同一剂型或分开的剂型给予。在其他实施方案中，化合物1A和化合物2和/或3或其药学上可接受的盐或前药可以顺序给予。如本文所使用，术语“顺序”是指在第一时间段给予一种化合物，然后在第二时间段给予第二化合物，任选地接着在第三时间段给予第三化合物，其中第一、第二和(如果适用)第三时间段不重叠。
还可以给予患有疾病病症的受试者另外的治疗剂。另外的治疗剂的非限定性列表包括本文先前描述的那些。当使用一种或多种另外的治疗剂时，另外的药剂(多种药剂)可以以与化合物1A或药学上可接受的盐和/或化合物2或其药学上可接受的盐或前药和/或化合物3或其药学上可接受的盐或前药相同的剂型给予。例如，另外的治疗剂(多种治疗剂)可以包含在以下中：包含化合物1A或药学上可接受的盐，而没有化合物2和/或3或其药学上可接受的盐或前药的组合物；或包含化合物2或其药学上可接受的盐或前药，而没有化合物1A或没有化合物1A和3或其药学上可接受的盐或前药的组合物；或包含化合物3或其药学上可接受的盐或前药，而没有化合物1A或没有化合物1A和2或其药学上可接受的盐或前药的组合物。
本发明的一方面涉及药物组合物，其包含在药学上可接受的溶媒、载体或稀释剂中的：
具有下式的第一化合物
或其药学上可接受的盐，和选自以下的一种或两种另外的HCV抗病毒剂：
a)选自帕利瑞韦或ABT493的HCV蛋白酶抑制剂；各自为“化合物2a”
b)选自奥比他韦或ABT-530的NS5A抑制剂；各自为“化合物3a”
因此，本发明的不同方面提供了药物组合物或HCV治疗方案，其包含：
i)化合物1A，帕利瑞韦，奥比他韦
ii)化合物1A，帕利瑞韦，奥比他韦，
iii)化合物1A，帕利瑞韦，
iv)化合物1A，奥比他韦，
v)化合物1A，ABT-493，奥比他韦
vi)化合物1A，ABT-493
vii)化合物1A，ABT-493，ABT-530
viii)化合物1A，ABT-530
另一方面，本发明涉及这样的组合物用于改善或治疗患者群体的疾病病症，和/或用于制备用于改善或治疗这样的疾病病症的药物的用途。例如，所述疾病病症可以选自丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和肝功能受损。在一个实施方案中，本发明涉及包含化合物1A和化合物2a和/或化合物3a或其药学上可接受的盐或前药的组合物用于改善或治疗丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和肝功能受损的用途。
另一方面，本发明涉及用于改善或治疗患者群体的疾病病症的方法，其包括给予患有该疾病病症的受试者：治疗有效量的第一化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中所述第一化合物为化合物1A；和治疗有效量的第二化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中所述第二化合物为化合物2a；和/或治疗有效量的第三化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中所述第三化合物为化合物3a。在一个实施方案中，所述疾病病症可以选自丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和肝功能受损。
另一方面，本发明涉及化合物1A或其药学上可接受的盐或前药用于改善或治疗患者群体的疾病病症，和/或用于制备用于改善或治疗这样的疾病病症的药物的用途，其中制备化合物1A或其药学上可接受的盐用于与化合物2a或其药学上可接受的盐或前药组合使用；并且其中制备化合物1A和化合物2a或其药学上可接受的盐或前药用于与化合物3a或其药学上可接受的盐或前药组合使用，其中所述疾病病症选自丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和肝功能受损。
在本发明的一个实施方案中，用于改善或治疗患者群体的疾病病症的方法或用途包括给予一种或多种另外的治疗剂。在另一个实施方案中，一种或多种另外的治疗剂为利巴韦林和/或利托那韦。
帕利瑞韦(INN)，化合物2a的可能性之一，已显示有效抑制HCV复制。可以使用本领域技术人员已知的方法获得前述化合物，包括例如WO2011/112558和WO2013/106631中描述的那些方法，其全部内容通过引用特此并入。虽然本发明不受任何特定理论的限制，但是认为化合物2a抑制HCV蛋白酶，特别是NS3/4A蛋白酶。化合物2a的药学上可接受的盐和前药可以用于本文描述的组合物中。帕利瑞韦优选地与利托那韦的药代动力学加强剂(booster)共同给药，并且本文对化合物2a的每次提及应理解为包括任选的加强剂量，例如25-100mg，如50mg利托那韦。
奥比他韦(INN)，化合物3a的可能性之一，已被证明有效抑制HCV复制。可以使用本领域技术人员已知的方法获得化合物3a，如WO2012/051361中描述的那些方法，其全部内容通过引用特此并入。每种化合物3a均为NS5A抑制剂，其中NS5A是参与丙型肝炎病毒复制的蛋白。
通常考虑，在本发明的组合治疗中的化合物1A的抗病毒有效日剂量将为约0.01至约700mg/kg，或约0.5至约400mg/kg，或约1至约250mg/kg，或约2至约200mg/kg，或约10至约150mg/kg，或约0.1至约50mg/kg，或约1至约20mg/kg，或约2至约10mg/kg，或约5至约8mg/kg体重。适宜的是在全天以适宜的间隔以一个、两个、三个、四个或更多个亚剂量给予需要剂量。所述亚剂量可以配制为单位剂型，例如，每单位剂型包含约1至约5000mg化合物1A，或约50至约3000mg化合物1A，或约100至约1000mg化合物1A，或约200至约600mg化合物1A，或约100至约400mg化合物1A，或约7至约3500mg化合物1A，或约70至约1400mg化合物1A，或约140至约700mg化合物1A，或约340至约580mg化合物1A。优选地，配制单位剂型用于使用上述范围中的一种的QD给药。
类似地，不同量的化合物2a或其药学上可接受的盐或前药可以包含在组合物中。在一些实施方案中，组合物可以包含的化合物2a或其药学上可接受的盐或前药的量在约50mg至约300mg的范围内。在其他实施方案中，组合物可以包含的化合物2a或其药学上可接受的盐或前药的量在约75mg至约200mg的范围内。在再其他实施方案中，组合物可以包含的化合物2a或其药学上可接受的盐或前药的量在约100-150mg的范围内。尤其是当化合物2a为帕利瑞韦时，每个剂量单位可以含加强剂利托那韦，例如25-100mg，如50mg。
类似地，不同量的化合物3a或其药学上可接受的盐或前药可以包含在组合物中。在一些实施方案中，组合物可以包含的化合物3a或其药学上可接受的盐或前药的量在约5mg至约100mg的范围内。在其他实施方案中，组合物可以包含的化合物3a或其药学上可接受的盐或前药的量在约12.5mg至约75mg的范围内。在再其他实施方案中，组合物可以包含的化合物3a或其药学上可接受的盐或前药的量在约25mg的范围内。
制备化合物1A和化合物2a和/或3a或其药学上可接受的盐或前药的组合的潜在优点可以是与单独使用化合物1A、2a或3a的在其他方面相当的患者群体的单药治疗相比，在治疗本文所公开的疾病病症(例如HCV)中有效的一种或多种化合物所需的量减少。在一些实施方案中，组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐的量可以比当作为单药治疗给予时实现相同的病毒载量降低所需的化合物1A或其药学上可接受的盐的量更低。在一些实施方案中，组合物中的化合物2a或其药学上可接受的盐或前药的量可以比当作为单药治疗给予时实现相同的病毒载量降低所需的化合物2a或其药学上可接受的盐或前药的量更低。在一些实施方案中，组合物中的化合物3a或其药学上可接受的盐或前药的量可以比当作为单药治疗给予时实现相同的病毒载量降低所需的化合物3a或其药学上可接受的盐或前药的量更低。
在实施方案中，化合物1A或药学上可接受的盐的量和化合物2a或其药学上可接受的盐或前药的量和/或化合物3a或其药学上可接受的盐或前药的量的总和低于基于用于治疗疾病病症如HCV的单独的化合物1A或药学上可接受的盐或前药、单独的化合物2a或其药学上可接受的盐或前药和/或单独的化合物3a或其药学上可接受的盐或前药的累加组合所期望或预期的。
然而，一般而言，通常便利的是以反映各组分(多种组分)的单药治疗剂量方案的剂量给予化合物1A和化合物2a和/或化合物3a，从而提供增强的抗病毒功效和/或起效。
在组合物中存在的化合物1A和化合物2a和/或3a或其药学上可接受的盐或前药的百分比也可以不同。例如，在一些实施方案中，基于组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐的量和化合物2a和/或3a或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，组合物可以包含的化合物1A或其药学上可接受的盐的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案包括但不限于，基于组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物2a和/或3a或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，化合物1A或其药学上可接受的盐的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
对于化合物2a，在实施方案中，基于组合物中的化合物2a或其药学上可接受的盐或前药的量，和化合物1A和/或3a或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，组合物可以包含的化合物2a或其药学上可接受的盐或前药的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案的实例包括但不限于，基于组合物中的化合物2a或其药学上可接受的盐或前药的量，和化合物1A和/或3a或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，化合物2a或其药学上可接受的盐或前药的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
对于化合物3a，在实施方案中，基于组合物中的化合物3a或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物1A和/或2a或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，组合物可以包含的化合物3a或其药学上可接受的盐或前药的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案的实例包括但不限于，基于组合物中的化合物3a或其药学上可接受的盐或前药的量，和化合物1A和/或2a或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，化合物3a或其药学上可接受的盐或前药的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
可以使用化合物1A或其药学上可接受的盐和/或化合物2a或其药学上可接受的盐或前药和/或化合物3a或其药学上可接受的盐或前药的各种剂型以改善和/或治疗疾病病症。在一些情况下，化合物1A和2a和/或3a或其药学上可接受的盐或前药可以存在于同一剂型中，例如本文所述的组合物。在其他情况下，化合物1A和2a和/或3a或其药学上可接受的盐或前药可作为分开的剂型给予。例如，化合物1A或其药学上可接受的盐可以以一个片剂给予，化合物2a或其药学上可接受的盐或前药可以以第二片剂给予，和/或化合物3a或其药学上可接受的盐或前药可以以第三片剂给予。当化合物1A、2a和3a或其药学上可接受的盐或前药包含在分开的剂型中时，剂型可以是相同的(例如，二者均作为丸剂)或不同的(例如，两种化合物可以配制成丸剂，且其他化合物可以配制为注射剂)。
化合物1A或其药学上可接受的盐和化合物2a或其药学上可接受的盐或前药和/或化合物3a或其药学上可接受的盐或前药的给予可以变化。当化合物1A和2a和/或3a或其药学上可接受的盐或前药包含在分开的剂型中时，可以同时或顺序给予剂型。在一些实施方案中，包含化合物1A或其药学上可接受的盐的剂型可以在化合物2a和/或3a或其药学上可接受的盐或前药之前、之后、之间、与其同时或顺序给予。在一些实施方案中，包含化合物2a或其药学上可接受的盐或前药的剂型可以在化合物1A或化合物1A和3a或其药学上可接受的盐或前药之前、之后、之间、与其同时或顺序给予。在一些实施方案中，包含化合物3a或其药学上可接受的盐或前药的剂型可以在化合物1A或化合物1A和2a或其药学上可接受的盐或前药之前、之后、之间、与其同时或顺序给予。
在一些实施方案中，化合物1A和化合物2a和/或3a或其药学上可接受的盐或前药可以同时给予。如本文所使用，术语“同时”是指所有三种化合物的有效浓度存在于受试者中。当同时给予时，化合物1A和化合物2a和/或3a或其药学上可接受的盐或前药可以以同一剂型或分开的剂型给予。在其他实施方案中，化合物1A和化合物2a和/或3a或其药学上可接受的盐或前药可以顺序给予。如本文所使用，术语“顺序”是指在第一时间段给予一种化合物，然后在第二时间段给予第二化合物，任选地接着在第三时间段给予第三化合物，其中第一、第二和(如果适用)第三时间段不重叠。
本发明的一方面涉及药物组合物，其包含在药学上可接受的溶媒、载体或稀释剂中的：
具有下式的第一化合物
或其药学上可接受的盐，和
第二化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中所述第二化合物为阿拉泊韦(alisporavir)(“化合物2b”)；
另一方面，本发明涉及组合物，其包含在药学上可接受的溶媒、载体或稀释剂中的化合物1A和化合物2b或其药学上可接受的盐或前药，其中所述组合物还包含一种或多种治疗剂。在一个实施方案中，所述一种或多种治疗剂为利巴韦林和利托那韦。
另一方面，本发明涉及这样的组合物用于改善或治疗患者群体的疾病病症，和/或用于制备用于改善或治疗这样的疾病病症的药物的用途。例如，所述疾病病症可以选自丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和肝功能受损。在一个实施方案中，本发明涉及包含化合物1A和化合物2b或其药学上可接受的盐或前药的组合物用于改善或治疗丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和肝功能受损的用途。
另一方面，本发明涉及用于改善或治疗患者群体的疾病病症的方法，其包括给予患有该疾病病症的受试者：治疗有效量的第一化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中所述第一化合物为化合物1A；和治疗有效量的第二化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中所述第二化合物为化合物2b。在一个实施方案中，所述疾病病症可以选自丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和肝功能受损。
另一方面，本发明涉及化合物1A或其药学上可接受的盐或前药用于改善或治疗患者群体的疾病病症，和/或用于制备用于改善或治疗这样的疾病病症的药物的用途，其中制备化合物1A或其药学上可接受的盐用于与化合物2b或其药学上可接受的盐或前药组合使用；其中所述疾病病症选自丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和肝功能受损。
在本发明的一个实施方案中，用于改善或治疗患者群体的疾病病症的方法或用途包括给予一种或多种另外的治疗剂。在另一个实施方案中，一种或多种另外的治疗剂为利巴韦林和/或利托那韦。
阿拉泊韦(INN)(化合物2b)是宿主亲环蛋白A抑制剂(也称为肽基脯氨酰基顺反异构酶抑制剂)，其在II期临床试验中已经证明在HCV治疗中有效。阿拉泊韦属于环孢菌素类大分子。
可以使用本领域技术人员已知的方法获得化合物2b，如WO2013/167703和WO2006/038088中描述的那些方法，其全部内容通过引用特此并入。
通常考虑，在本发明的组合治疗中的化合物1A的抗病毒有效日剂量将为约0.01至约700mg/kg，或约0.5至约400mg/kg，或约1至约250mg/kg，或约2至约200mg/kg，或约10至约150mg/kg，或约0.1至约50mg/kg，或约1至约20mg/kg，或约2至约10mg/kg，或约5至约8mg/kg体重。适宜的是在全天以适宜的间隔以一个、两个、三个、四个或更多个亚剂量给予需要剂量。所述亚剂量可以配制为单位剂型，例如，每单位剂型包含约1至约5000mg化合物1，或约50至约3000mg化合物1，或约100至约1000mg化合物1A，或约200至约600mg化合物1A，或约100至约400mg化合物1A，或约7至约3500mg化合物1A，或约70至约1400mg化合物1A，或约140至约700mg化合物1A，或约340至约580mg化合物1A。优选地，配制单位剂型用于使用上述范围中的一种的QD给药。
不同量的化合物2b或其药学上可接受的盐或前药可以包含在组合物中。在一些实施方案中，组合物可以包含的化合物2b或其药学上可接受的盐或前药的量在约100-800mgBID或QD的范围内。在其他实施方案中，组合物可以包含的化合物2b或其药学上可接受的盐或前药的量在约200-400mg的范围内。在再其他实施方案中，组合物可以包含的化合物2b或其药学上可接受的盐或前药的量在约200、250、300、350或400mg的范围内。
制备化合物1A和化合物2b或其药学上可接受的盐或前药的组合的潜在优点可以是与单独使用化合物1A或2b的在其他方面相当的患者群体的单药治疗相比，在治疗本文所公开的疾病病症(例如HCV)中有效的一种或多种化合物所需的量减少。在一些实施方案中，组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐的量可以比当作为单药治疗给予时实现相同的病毒载量降低所需的化合物1A或其药学上可接受的盐的量更低。在一些实施方案中，组合物中的化合物2b或其药学上可接受的盐或前药的量可以比当作为单药治疗给予时实现相同的病毒载量降低所需的化合物2b或其药学上可接受的盐或前药的量更低。
在实施方案中，化合物1A或药学上可接受的盐的量和化合物2b或其药学上可接受的盐或前药的量的总和低于基于用于治疗疾病病症如HCV的单独的化合物1A或药学上可接受的盐或前药或单独的化合物2b或其药学上可接受的盐或前药的累加组合所期望或预期的。
然而，一般而言，通常便利的是以反映各组分(多种组分)的单药治疗剂量方案的剂量给予化合物1A和化合物2b，从而提供增强的抗病毒功效和/或起效。
使用化合物1A和化合物2b或其药学上可接受的盐或前药的组合的另外的优点可以包括：化合物1A和化合物2b或其药学上可接受的盐或前药之间几乎没有或没有交叉耐药性；用于消除化合物1和化合物2b或其药学上可接受的盐或前药的途径不同；化合物1A和化合物2b或其药学上可接受的盐或前药之间几乎没有或没有重叠的毒性；对细胞色素P 450几乎没有或没有显著影响；和/或化合物1A和化合物2b或其药学上可接受的盐或前药之间几乎没有或没有药代动力学相互作用。
在组合物中存在的化合物1A和化合物2b或其药学上可接受的盐或前药的百分比也可以不同。例如，在一些实施方案中，基于组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐的量和化合物2b或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，组合物可以包含的化合物1A或其药学上可接受的盐的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案包括但不限于，基于组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物2b或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，化合物1A或其药学上可接受的盐的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
对于化合物2b，在实施方案中，基于组合物中的化合物2b或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物1A或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，组合物可以包含的化合物2b或其药学上可接受的盐或前药的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案的实例包括但不限于，基于组合物中的化合物2b或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物1A或其药学上可接受的盐的量的总和，化合物2b或其药学上可接受的盐或前药的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
本文描述的一些实施方案涉及用于改善或治疗疾病病症的方法，所述方法可以包括给予一定量的化合物1A或其药学上可接受的盐，以及一定量的化合物2b或其药学上可接受的盐或前药，其中所述疾病病症可以是丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和/或肝功能受损。
可以使用化合物1A或其药学上可接受的盐和/或化合物2b或其药学上可接受的盐或前药的各种剂型以改善和/或治疗疾病病症。在一些情况下，化合物1A和2b或其药学上可接受的盐或前药可以存在于同一剂型中，例如本文所述的组合物。在其他情况下，化合物1A和2b或其药学上可接受的盐或前药可作为分开的剂型给予。例如，化合物1A或其药学上可接受的盐可以以一个片剂给予，化合物2b或其药学上可接受的盐或前药可以以第二片剂给予。当化合物1A和2b或其药学上可接受的盐或前药包含在分开的剂型中时，剂型可以是相同的(例如，二者均作为丸剂)或不同的(例如，一种可以配制成丸剂，且其他化合物可以配制为注射剂)。
化合物1A或其药学上可接受的盐和化合物2b或其药学上可接受的盐或前药的给予可以变化。当化合物1A和2b或其药学上可接受的盐或前药包含在分开的剂型中时，可以同时或顺序给予剂型。在相同的实施方案中，包含化合物1A或其药学上可接受的盐的剂型可以在化合物2b或其药学上可接受的盐或前药之前、之后、之间、与其同时或顺序给予。在一些实施方案中，包含化合物2b或其药学上可接受的盐或前药的剂型可以在化合物1A或其药学上可接受的盐或前药之前、之后、之间、与其同时或顺序给予。
在一些实施方案中，化合物1A和化合物2b或其药学上可接受的盐或前药可以同时给予。如本文所使用，术语“同时”是指两种化合物的有效浓度存在于受试者中。当同时给予时，化合物1A和化合物2b或其药学上可接受的盐或前药可以以同一剂型或分开的剂型给予。在其他实施方案中，化合物1A和化合物2b或其药学上可接受的盐或前药可以顺序给予。如本文所使用，术语“顺序”是指在第一时间段给予一种化合物，然后在第二时间段给予第二化合物，其中第一和第二时间段不重叠。
本发明的一方面涉及药物组合物，其包含在药学上可接受的溶媒、载体或稀释剂中的：
具有下式的第一化合物
或其药学上可接受的盐，和
第二化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中所述第二化合物为EDP-239(“化合物2c”)；
另一方面，本发明涉及组合物，其包含在药学上可接受的溶媒、载体或稀释剂中的化合物1A和化合物2c或其药学上可接受的盐或前药，其中所述组合物还包含一种或多种治疗剂。在一个实施方案中，所述一种或多种治疗剂是利巴韦林和利托那韦。
另一方面，本发明涉及这样的组合物用于改善或治疗患者群体的疾病病症，和/或用于制备用于改善或治疗这样的疾病病症的药物的用途。例如，所述疾病病症可以选自丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和肝功能受损。在一个实施方案中，本发明涉及包含化合物1A和化合物2c或其药学上可接受的盐或前药的组合物用于改善或治疗丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和肝功能受损的用途。
另一方面，本发明涉及用于改善或治疗患者群体的疾病病症的方法，其包括给予患有该疾病病症的受试者：治疗有效量的第一化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中所述第一化合物为化合物1A；和治疗有效量的第二化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中所述第二化合物为化合物2c。在一个实施方案中，所述疾病病症可以选自丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和肝功能受损。
另一方面，本发明涉及化合物1A或其药学上可接受的盐或前药用于改善或治疗患者群体的疾病病症，和/或用于制备用于改善或治疗这样的疾病病症的药物的用途，其中制备化合物1A或其药学上可接受的盐用于与化合物2c或其药学上可接受的盐或前药组合使用；其中所述疾病病症选自丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和肝功能受损。
在本发明的一个实施方案中，用于改善或治疗患者群体的疾病病症的方法或用途包括给予一种或多种另外的治疗剂。在另一个实施方案中，一种或多种另外的治疗剂为利巴韦林和/或利托那韦。
EDP-239(化合物2c)在II期临床试验中已证明有效抑制HCV复制。认为化合物2c的结构式为
可以使用本领域技术人员已知的方法获得化合物2c，如全部内容通过引用特此并入的WO2013/059281和WO2010/099527中描述的那些方法。虽然本发明不受特定理论的限制，但是认为化合物2c是NS5A抑制剂，其中NS5A是参与丙型肝炎病毒复制的蛋白。
在一些实施方案中，组合物还可以包含药学上可接受的赋形剂、稀释剂和/或载体，如本文描述的那些。
通常考虑，在本发明的组合治疗中的化合物1A的抗病毒有效日剂量将为约0.01至约700mg/kg，或约0.5至约400mg/kg，或约1至约250mg/kg，或约2至约200mg/kg，或约10至约150mg/kg，或约0.1至约50mg/kg，或约1至约20mg/kg，或约2至约10mg/kg，或约5至约8mg/kg体重。适宜的是在全天以适宜的间隔以一个、两个、三个、四个或更多个亚剂量给予需要剂量。所述亚剂量可以配制为单位剂型，例如，单位剂型包含约1至约5000mg化合物1A，或约50至约3000mg化合物1A，或约100至约1000mg化合物1A，或约200至约600mg化合物1A，或约100至约400mg化合物1A，或约7至约3500mg化合物1A，或约70至约1400mg化合物1A，或约140至约700mg化合物1A，或约340至约580mg化合物1A。优选地，配制单位剂型用于使用上述范围中的一种的QD给药。
不同量的化合物2c或其药学上可接受的盐或前药可以包含在组合物中。在一些实施方案中，组合物可以包含的化合物2c或其药学上可接受的盐或前药的量在约25mg至约225mg的范围内。在其他实施方案中，组合物可以包含的化合物2c或其药学上可接受的盐或前药的量在约50mg至约150mg的范围内。在再其他实施方案中，组合物可以包含的化合物2c或其药学上可接受的盐或前药的量在约50-100mg的范围内。在又其他实施方案中，100-200mg，如150mg的负荷剂量可以在治疗的最初1-3天给予。
制备化合物1A和化合物2c或其药学上可接受的盐或前药的组合的潜在优点可以是与单独使用化合物1A或2c的在其他方面相当的患者群体的单药治疗相比，在治疗本文所公开的疾病病症(例如HCV)中有效的一种或多种化合物所需的量减少。在一些实施方案中，组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐的量可以比当作为单药治疗给予时实现相同的病毒载量降低所需的化合物1A或其药学上可接受的盐的量更低。在一些实施方案中，组合物中的化合物2c或其药学上可接受的盐或前药的量可以比当作为单药治疗给予时实现相同的病毒载量降低所需的化合物2c或其药学上可接受的盐或前药的量更低。
在实施方案中，化合物1A或药学上可接受的盐的量和化合物2c或其药学上可接受的盐或前药的量的总和低于基于用于治疗疾病病症如HCV的单独的化合物1A或药学上可接受的盐或单独的化合物2c或其药学上可接受的盐或前药的累加组合所期望或预期的。
然而，一般而言，通常便利的是以反映各组分(多种组分)的单药治疗剂量方案的剂量给予化合物1A和化合物2c，从而提供增强的抗病毒功效和/或起效。
在组合物中存在的化合物1A和化合物2c或其药学上可接受的盐或前药的百分比也可以不同。例如，在一些实施方案中，基于组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐的量和化合物2c或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，组合物可以包含的化合物1A或其药学上可接受的盐的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案包括但不限于，基于组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物2c或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，化合物1A或其药学上可接受的盐的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
对于化合物2c，在实施方案中，基于组合物中的化合物2c或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物1A或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，组合物可以包含的化合物2c或其药学上可接受的盐或前药的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案的实例包括但不限于，基于组合物中的化合物2c或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物1或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，化合物2c或其药学上可接受的盐或前药的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
本文描述的一些实施方案涉及用于改善或治疗疾病病症的方法，所述方法可以包括给予一定量的化合物1A或其药学上可接受的盐，以及一定量的化合物2c或其药学上可接受的盐或前药，其中所述疾病病症可以是丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和/或肝功能受损。
可以使用化合物1A或其药学上可接受的盐和/或化合物2c或其药学上可接受的盐或前药的各种剂型以改善和/或治疗疾病病症。在一些情况下，化合物1A和2c或其药学上可接受的盐或前药可以存在于同一剂型中，例如本文所述的组合物。在其他情况下，化合物1A和2c或其药学上可接受的盐或前药可作为分开的剂型给予。例如，化合物1A或其药学上可接受的盐可以以一个片剂给予，化合物2c或其药学上可接受的盐或前药可以以第二片剂给予。当化合物1A和2c或其药学上可接受的盐或前药包含在分开的剂型中时，剂型可以是相同的(例如，二者均作为丸剂)或不同的(例如，一种可以配制成丸剂，且其他化合物可以配制为注射剂)。
化合物1AI或其药学上可接受的盐和化合物2c或其药学上可接受的盐或前药的给予可以变化。当化合物1A和2c或其药学上可接受的盐或前药包含在分开的剂型中时，可以同时或顺序给予剂型。在一些实施方案中，包含化合物1A或其药学上可接受的盐的剂型可以在化合物2c或其药学上可接受的盐或前药之前、之后、之间、与其同时或顺序给予。在一些实施方案中，包含化合物2c或其药学上可接受的盐或前药的剂型可以在化合物1A或其药学上可接受的盐或前药之前、之后、之间、与其同时或顺序给予。
在一些实施方案中，化合物1A和化合物2c或其药学上可接受的盐或前药可以同时给予。如本文所使用，术语“同时”是指两种化合物的有效浓度存在于受试者中。当同时给予时，化合物1A和化合物2c或其药学上可接受的盐或前药可以以同一剂型或分开的剂型给予。在其他实施方案中，化合物1A和化合物2c或其药学上可接受的盐或前药可以顺序给予。如本文所使用，术语“顺序”是指在第一时间段给予一种化合物，然后在第二时间段给予第二化合物，其中第一和第二时间段不重叠。
本发明的一方面涉及药物组合物，其包含在药学上可接受的溶媒、载体或稀释剂中的：
具有下式的第一化合物，
或其药学上可接受的盐，和
a)第二化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中所述第二化合物为索瓦普韦(sovaprevir)(“化合物2d”)；
和/或
b)第三化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中所述第三化合物为奥达拉韦(odalasvir)(也称为ACH-3102)(“化合物3d”)。
另一方面，本发明涉及组合物，其包含在药学上可接受的溶媒、载体或稀释剂中的化合物1A和化合物2d和/或化合物3d或其药学上可接受的盐或前药，其中所述组合物还包含一种或多种治疗剂。在一个实施方案中，所述一种或多种治疗剂是利巴韦林和利托那韦。
将理解的是，本发明的一方面提供药物组合物，其包含在药学上可接受的溶媒、载体或稀释剂中的化合物1A和索瓦普韦。本发明的另外的方面提供药物组合物，其包含在药学上可接受的溶媒、载体或稀释剂中的化合物1A和奥达拉韦。本发明的另外的方面提供药物组合物，其包含在药学上可接受的溶媒、载体或稀释剂中的化合物1A和索瓦普韦和奥达拉韦。
另一方面，本发明涉及这样的组合物用于改善或治疗患者群体的疾病病症，和/或用于制备用于改善或治疗这样的疾病病症的药物的用途。例如，所述疾病病症可以选自丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和肝功能受损。在一个实施方案中，本发明涉及包含化合物1A和化合物2d和/或化合物3d或其药学上可接受的盐或前药的组合物用于改善或治疗丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和肝功能受损的用途。
另一方面，本发明涉及用于改善或治疗患者群体的疾病病症的方法，其包括给予患有该疾病病症的受试者：治疗有效量的第一化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中所述第一化合物为化合物1A；和治疗有效量的第二化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中所述第二化合物为化合物2d；和/或治疗有效量的第三化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中所述第三化合物为化合物3d。在一个实施方案中，所述疾病病症可以选自丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和肝功能受损。
另一方面，本发明涉及化合物1A或其药学上可接受的盐或前药用于改善或治疗患者群体的疾病病症，和/或用于制备用于改善或治疗这样的疾病病症的药物的用途，其中制备化合物1A或其药学上可接受的盐用于与化合物2d或其药学上可接受的盐或前药组合使用；并且其中制备化合物1A和化合物2d或其药学上可接受的盐或前药用于与化合物3d或其药学上可接受的盐或前药组合使用，其中所述疾病病症选自丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和肝功能受损。
在本发明的一个实施方案中，用于改善或治疗患者群体的疾病病症的方法或用途包括给予一种或多种另外的治疗剂。在另一个实施方案中，一种或多种另外的治疗剂为利巴韦林和/或利托那韦。
索瓦普韦(INN)(化合物2d)已显示有效抑制HCV复制。可以使用本领域技术人员已知的方法获得前述化合物，包括例如WO2008/008502和WO2014/152928中公开的那些方法，其全部内容通过引用特此并入。虽然本发明不受任何特定理论的限制，但是认为化合物2d抑制HCV蛋白酶，特别是NS3/4A蛋白酶。化合物2d的药学上可接受的盐或前药可以用于本文描述的组合物中。
奥达拉韦(PINN，也称为ACH-3102)(化合物3d)已证明有效抑制HCV复制。可以使用本领域技术人员已知的方法获得化合物3d，例如WO2012/166716中描述的那些方法，其全部内容通过引用特此并入。虽然本发明不受任何特定理论的限制，但是认为化合物3d是NS5A抑制剂，其中NS5A是参与丙型肝炎病毒复制的蛋白。
在一些实施方案中，组合物还可以包含药学上可接受的赋形剂、稀释剂和/或载体，如本文所述的那些。
通常考虑，在本发明的组合治疗中的化合物1A的抗病毒有效日剂量将为约0.01至约700mg/kg，或约0.5至约400mg/kg，或约1至约250mg/kg，或约2至约200mg/kg，或约10至约150mg/kg，或约0.1至约50mg/kg，或约1至约20mg/kg，或约2至约10mg/kg，或约5至约8mg/kg体重。适宜的是在全天以适宜的间隔以一个、两个、三个、四个或更多个亚剂量给予需要剂量。所述亚剂量可以配制为单位剂型，例如，每单位剂型包含约1至约5000mg化合物1A，或约50至约3000mg化合物1A，或约100至约1000mg化合物1A，或约200至约600mg化合物1A，或约100至约400mg化合物1A，或约7至约3500mg化合物1A，或约70至约1400mg化合物1A，或约140至约700mg化合物1A，或约340至约580mg化合物1A。优选地，配制单位剂型用于使用上述范围中的一种的QD给药。
类似地，不同量的化合物2d或其药学上可接受的盐或前药可以包含在组合物中。在一些实施方案中，组合物可以包含的化合物2d或其药学上可接受的盐或前药的量在约50mg至约1000mg的范围内。在其他实施方案中，组合物可以包含的化合物2d或其药学上可接受的盐或前药的量在约100mg至约800mg的范围内。在再其他实施方案中，组合物可以包含的化合物2或其药学上可接受的盐或前药的量在约200mg至约400mg的范围内。在实施方案中，组合物可以包含的化合物2d或其药学上可接受的盐或前药的量在约250-350mg的范围内。
类似地，不同量的化合物3d或其药学上可接受的盐或前药可以包含在组合物中。在一些实施方案中，组合物可以包含的化合物3d或其药学上可接受的盐或前药的量在约25mg至约225mg的范围内。在其他实施方案中，组合物可以包含的化合物3或其药学上可接受的盐或前药的量在约50mg至约100mg的范围内。在再其他实施方案中，组合物可以包含的化合物3d或其药学上可接受的盐或前药的量在约50mg的范围内。在又其他实施方案中，100-200mg，如150mg的负荷剂量可以在治疗的最初1-3天给予。
制备化合物1A和化合物2d和/或3d或其药学上可接受的盐或前药的组合的潜在优点可以是与单独使用化合物1A、2d或3d的在其他方面相当的患者群体的单药治疗相比，在治疗本文所公开的疾病病症(例如HCV)中有效的一种或多种化合物所需的量减少。在一些实施方案中，组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐的量可以比当作为单药治疗给予时实现相同的病毒载量降低所需的化合物1A或其药学上可接受的盐的量更低。在一些实施方案中，组合物中的化合物2d或其药学上可接受的盐或前药的量可以比当作为单药治疗给予时实现相同的病毒载量降低所需的化合物2d或其药学上可接受的盐或前药的量更低。在一些实施方案中，组合物中的化合物3d或其药学上可接受的盐或前药的量可以比当作为单药治疗给予时实现相同的病毒载量降低所需的化合物3d或其药学上可接受的盐或前药的量更低。
在实施方案中，化合物1A或药学上可接受的盐的量和化合物2d或其药学上可接受的盐或前药的量和/或化合物3d或其药学上可接受的盐或前药的量的总和低于基于用于治疗疾病病症如HCV的单独的化合物1A或药学上可接受的盐、单独的化合物2d或其药学上可接受的盐或前药和/或单独的化合物3d或其药学上可接受的盐或前药的累加组合所期望或预期的。
然而，一般而言，通常便利的是以反映各组分(多种组分)的单药治疗剂量方案的剂量给予化合物1A和化合物2d和/或化合物3d，从而提供增强的抗病毒功效和/或起效。
在组合物中存在的化合物1A和化合物2d和/或3d或其药学上可接受的盐或前药的百分比也可以不同。例如，在一些实施方案中，基于组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐的量和化合物2d和/或3d或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，组合物可以包含的化合物1A或其药学上可接受的盐的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案包括但不限于，基于组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐的量和化合物2d和/或3d或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，化合物1A或其药学上可接受的盐的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
对于化合物2d，在实施方案中，基于组合物中的化合物2d或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物1A和/或3d或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，组合物可以包含的化合物2d或其药学上可接受的盐或前药的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案的实例包括但不限于，基于组合物中的化合物2d或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物1A和/或3d或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，化合物2d或其药学上可接受的盐或前药的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
对于化合物3d，在实施方案中，基于组合物中的化合物3d或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物1A和/或2d或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，组合物可以包含的化合物3d或其药学上可接受的盐或前药的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案的实例包括但不限于，基于组合物中的化合物3d或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物1A和/或2d或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，化合物3A或其药学上可接受的盐或前药的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
本文描述的一些实施方案涉及用于改善或治疗疾病病症的方法，所述方法可以包括给予一定量的化合物1A或其药学上可接受的盐，以及一定量的化合物2d或其药学上可接受的盐或前药和/或一定量的化合物3d或其药学上可接受的盐或前药，其中所述疾病病症可以是丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和/或肝功能受损。
可以使用化合物1A或其药学上可接受的盐和/或化合物2d或其药学上可接受的盐或前药和/或化合物3d或其药学上可接受的盐或前药的各种剂型以改善和/或治疗疾病病症。在一些情况下，化合物1A和2d和/或3d或其药学上可接受的盐或前药可以存在于同一剂型中，例如本文所述的组合物。在其他情况下，化合物1A和2d和/或3d或其药学上可接受的盐或前药可作为分开的剂型给予。例如，化合物1A或其药学上可接受的盐可以以一个片剂给予，化合物2d或其药学上可接受的盐或前药可以以第二片剂给予，和/或化合物3d或其药学上可接受的盐或前药可以以第三片剂给予。当化合物1A、2d和3d或其药学上可接受的盐或前药包含在分开的剂型中时，剂型可以是相同的(例如，二者均作为丸剂)或不同的(例如，两种化合物可以配制成丸剂，且其他化合物可以配制为注射剂)。
化合物1A或其药学上可接受的盐和化合物2d或其药学上可接受的盐或前药和/或化合物3d或其药学上可接受的盐或前药的给予可以变化。当化合物1A和2d和/或3d或其药学上可接受的盐或前药包含在分开的剂型中时，可以同时或顺序给予剂型。在一些实施方案中，包含化合物1A或其药学上可接受的盐的剂型可以在化合物2d和/或3d或其药学上可接受的盐或前药之前、之后、之间、与其同时或顺序给予。在一些实施方案中，包含化合物2d或其药学上可接受的盐或前药的剂型可以在化合物1A或化合物1A和3d或其药学上可接受的盐或前药之前、之后、之间、与其同时或顺序给予。在一些实施方案中，包含化合物3d或其药学上可接受的盐或前药的剂型可以在化合物1A或化合物1A和2d或其药学上可接受的盐或前药之前、之后、之间、与其同时或顺序给予。
在一些实施方案中，化合物1A和化合物2d和/或3d或其药学上可接受的盐或前药可以同时给予。如本文所使用，术语“同时”是指所有三种化合物的有效浓度存在于受试者中。当同时给予时，化合物1A和化合物2d和/或3d或其药学上可接受的盐或前药可以以同一剂型或分开的剂型给予。在其他实施方案中，化合物1A和化合物2d和/或3d或其药学上可接受的盐或前药可以顺序给予。如本文所使用，术语“顺序”是指在第一时间段给予一种化合物，然后在第二时间段给予第二化合物，任选地接着在第三时间段给予第三化合物，其中第一、第二和(如果适用)第三时间段不重叠。
本发明的一方面涉及药物组合物，其包含在药学上可接受的溶媒、载体或稀释剂中的：
具有下式的第一化合物，
或其药学上可接受的盐，和
a)第二化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中所述第二化合物为格佐普韦(grazoprevir)(“化合物2e”)；
和/或
b)第三化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中所述第三化合物为依巴司韦(elbasvir)(“化合物3e”)。
另一方面，本发明涉及组合物，其包含在药学上可接受的溶媒、载体或稀释剂中的化合物1A和化合物2e和/或化合物3e或其药学上可接受的盐或前药，其中所述组合物还包含一种或多种治疗剂。在一个实施方案中，所述一种或多种治疗剂为利巴韦林和利托那韦。
将理解的是，本发明的一方面提供药物组合物，其包含在药学上可接受的溶媒、载体或稀释剂中的化合物1A和格佐普韦。本发明的另外的方面提供药物组合物，其包含在药学上可接受的溶媒、载体或稀释剂中的化合物1A和依巴司韦。本发明的另外的方面提供药物组合物，其包含在药学上可接受的溶媒、载体或稀释剂中的化合物1A和格佐普韦和依巴司韦。
另一方面，本发明涉及这样的组合物用于改善或治疗患者群体的疾病病症，和/或用于制备用于改善或治疗这样的疾病病症的药物的用途。例如，所述疾病病症可以选自丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和肝功能受损。在一个实施方案中，本发明涉及包含化合物1A和化合物2e和/或化合物3e或其药学上可接受的盐或前药的组合物用于改善或治疗丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和肝功能受损的用途。
另一方面，本发明涉及用于改善或治疗患者群体的疾病病症的方法，其包括给予患有该疾病病症的受试者：治疗有效量的第一化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中所述第一化合物为化合物1A；和治疗有效量的第二化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中所述第二化合物为化合物2e；和/或治疗有效量的第三化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中所述第三化合物为化合物3e。在一个实施方案中，所述疾病病症可以选自丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和肝功能受损。
另一方面，本发明涉及化合物1A或其药学上可接受的盐或前药用于改善或治疗患者群体的疾病病症，和/或用于制备用于改善或治疗这样的疾病病症的药物的用途，其中制备化合物1A或其药学上可接受的盐用于与化合物2e或其药学上可接受的盐或前药组合使用；并且其中制备化合物1A和化合物2e或其药学上可接受的盐或前药用于与化合物3e或其药学上可接受的盐或前药组合使用，其中所述疾病病症选自丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和肝功能受损。
在本发明的一个实施方案中，用于改善或治疗患者群体的疾病病症的方法或用途包括给予一种或多种另外的治疗剂。在另一个实施方案中，一种或多种另外的治疗剂为利巴韦林和利托那韦。
格佐普韦(化合物2e)已显示有效抑制HCV复制。可以使用本领域技术人员已知的方法获得前述化合物，包括例如WO2010/011566和WO2013/024465中描述的那些方法，其全部内容通过引用特此并入。虽然本发明不受任何特定理论的限制，但是认为化合物2e抑制HCV蛋白酶，特别是NS3/4A蛋白酶。化合物2e的药学上可接受的盐可以用于本文描述的组合物中。
依巴司韦(化合物3e)已证明有效抑制HCV复制。可以使用本领域技术人员已知的方法获得化合物3e，如WO2012/040923中描述的那些方法，其全部内容通过引用特此并入。虽然本发明不受任何特定理论的限制，但是认为化合物3e是NS5A抑制剂，所述NS5A是参与丙型肝炎病毒复制的蛋白。
在一些实施方案中，组合物还可以包含药学上可接受的赋形剂、稀释剂和/或载体，如本文描述的那些。
通常考虑，在本发明的组合治疗中的化合物1A的抗病毒有效日剂量将为约0.01至约700mg/kg，或约0.5至约400mg/kg，或约1至约250mg/kg，或约2至约200mg/kg，或约10至约150mg/kg，或约0.1至约50mg/kg，或约1至约20mg/kg，或约2至约10mg/kg，或约5至约8mg/kg体重。适宜的是在全天以适宜的间隔以一个、两个、三个、四个或更多个亚剂量给予需要剂量。所述亚剂量可以配制为单位剂型，例如，每单位剂型包含约1至约5000mg化合物1A，或约50至约3000mg化合物1A，或约100至约1000mg化合物1A，或约200至约600mg化合物1A，或约100至约400mg化合物1A，或约7至约3500mg化合物1A，或约70至约1400mg化合物1A，或约140至约700mg化合物1A，或约340至约580mg化合物1A。优选地，配制单位剂型用于使用上述范围中的一种的QD给药。
类似地，不同量的化合物2e或其药学上可接受的盐或前药可以包含在组合物中。在一些实施方案中，组合物可以包含的化合物2e或其药学上可接受的盐或前药的量在约10mg至约250mg的范围内。在其他实施方案中，组合物可以包含的化合物2e或其药学上可接受的盐或前药的量在约25mg至约150mg的范围内。在再其他实施方案中，组合物可以包含的化合物2e或其药学上可接受的盐或前药的量在约50mg至约100mg的范围内。在实施方案中，组合物可以包含的化合物2e或其药学上可接受的盐或前药的量在约100mg的范围内。
类似地，不同量的化合物3e或其药学上可接受的盐或前药可以包含在组合物中。在一些实施方案中，组合物可以包含的化合物3e或其药学上可接受的盐或前药的量在约10mg至约250mg的范围内。在其他实施方案中，组合物可以包含的化合物3e或其药学上可接受的盐或前药的量在约25mg至约100mg的范围内。在再其他实施方案中，组合物可以包含的化合物3e或其药学上可接受的盐或前药的量在约40mg至约60mg的范围内。在又其他实施方案中，组合物可以包含的化合物3e或其药学上可接受的盐或前药的量为约50mg的量。
制备化合物1A和化合物2e和/或3e或其药学上可接受的盐或前药的组合的潜在优点可以是与单独使用化合物1A、2e或3e的在其他方面相当的患者群体的单药治疗相比，在治疗本文所公开的疾病病症(例如HCV)中有效的一种或多种化合物所需的量减少。在一些实施方案中，组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐的量可以比当作为单药治疗给予时实现相同的病毒载量降低所需的化合物1A或其药学上可接受的盐的量更低。在一些实施方案中，组合物中的化合物2e或其药学上可接受的盐或前药的量可以比当作为单药治疗给予时实现相同的病毒载量降低所需的化合物2e或其药学上可接受的盐或前药的量更低。在一些实施方案中，组合物中的化合物3e或其药学上可接受的盐或前药的量可以比当作为单药治疗给予时实现相同的病毒载量降低所需的化合物3e或其药学上可接受的盐或前药的量更低。
在实施方案中，化合物1A或药学上可接受的盐的量和化合物2e或其药学上可接受的盐或前药的量和/或化合物3e或其药学上可接受的盐或前药的量的总和低于基于用于治疗疾病病症如HCV的单独的化合物1A或药学上可接受的盐、单独的化合物2e或其药学上可接受的盐或前药和/或单独的化合物3e或其药学上可接受的盐或前药的累加组合所期望或预期的。
然而，一般而言，通常便利的是以反映各组分(多种组分)的单药治疗剂量方案的剂量给予化合物1A和化合物2e和/或化合物3e，从而提供增强的抗病毒功效和/或起效。
在组合物中存在的化合物1A和化合物2e和/或3e或其药学上可接受的盐或前药的百分比也可以不同。例如，在一些实施方案中，基于组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐的量和化合物2e和/或3e或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，组合物可以包含的化合物1A或其药学上可接受的盐的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案包括但不限于，基于组合物中的化合物1A或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物2e和/或3e或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，化合物1A或其药学上可接受的盐的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
对于化合物2e，在实施方案中，基于组合物中的化合物2e或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物1A和/或3e或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，组合物可以包含的化合物2e或其药学上可接受的盐或前药的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案的实例包括但不限于，基于组合物中的化合物2e或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物1A和/或3e或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，化合物2e或其药学上可接受的盐或前药的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
对于化合物3e，在实施方案中，基于组合物中的化合物3e或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物1A和/或2e或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，组合物可以包含的化合物3e或其药学上可接受的盐或前药的量在约1％至约98％(重量/重量)的范围内。另外的实施方案的实例包括但不限于，基于组合物中的化合物3e或其药学上可接受的盐或前药的量和化合物1A和/或2e或其药学上可接受的盐或前药的量的总和，化合物3e或其药学上可接受的盐或前药的量在约5％至约80％，约10％至约70％，约15％至约60％，约20％至约50％和约30％至约40％(重量/重量)的范围内。
本文描述的一些实施方案涉及用于改善或治疗疾病病症的方法，所述方法可以包括给予一定量的化合物1A或其药学上可接受的盐，和一定量的化合物2e或其药学上可接受的盐或前药和/或一定量的化合物3e或其药学上可接受的盐或前药，其中所述疾病病症可以是丙型肝炎病毒感染、肝纤维化和/或肝功能受损。
可以使用化合物1A或其药学上可接受的盐和/或化合物2e或其药学上可接受的盐或前药和/或化合物3e或其药学上可接受的盐或前药的各种剂型以改善和/或治疗疾病病症。在一些情况下，化合物1A和2e和/或3e或其药学上可接受的盐或前药可以存在于同一剂型中，例如本文所述的组合物。在其他情况下，化合物1A和2e和/或3e或其药学上可接受的盐或前药可作为分开的剂型给予。例如，化合物1A或其药学上可接受的盐可以以一个片剂给予，化合物2e或其药学上可接受的盐或前药可以以第二片剂给予，和/或化合物3e或其药学上可接受的盐或前药可以以第三片剂给予。当化合物1、2和3或其药学上可接受的盐或前药包含在分开的剂型中时，剂型可以是相同的(例如，二者均作为丸剂)或不同的(例如，两种化合物可以配制成丸剂，且其他化合物可以配制为注射剂)。
化合物1A或其药学上可接受的盐和化合物2e或其药学上可接受的盐或前药和/或化合物3e或其药学上可接受的盐或前药的给予可以变化。当化合物1A和2e和/或3e或其药学上可接受的盐或前药包含在分开的剂型中时，可以同时或顺序给予剂型。在相同实施方案中，包含化合物1A或其药学上可接受的盐的剂型可以在化合物2e和/或3e或其药学上可接受的盐或前药之前、之后、之间、与其同时或顺序给予。在一些实施方案中，包含化合物2e或其药学上可接受的盐或前药的剂型可以在化合物1A或化合物1A和3e或其药学上可接受的盐或前药之前、之后、之间、与其同时或顺序给予。在一些实施方案中，包含化合物3e或其药学上可接受的盐或前药的剂型可以在化合物1A或化合物1A和2e或其药学上可接受的盐或前药之前、之后、之间、与其同时或顺序给予。
在一些实施方案中，化合物1A和化合物2e和/或3e或其药学上可接受的盐或前药可以同时给予。如本文所使用，术语“同时”是指所有三种化合物的有效浓度存在于受试者中。当同时给予时，化合物1A和化合物2e和/或3e或其药学上可接受的盐或前药可以以同一剂型或分开的剂型给予。在其他实施方案中，化合物1A和化合物2e和/或3e或其药学上可接受的盐或前药可以顺序给予。如本文所使用，术语“顺序”是指在第一时间段给予一种化合物，然后在第二时间段给予第二化合物，任选地接着在第三时间段给予第三化合物，其中第一、第二和(如果适用)第三时间段不重叠。
本发明涉及用于治疗HCV基因型3a感染的化合物。在根据本发明的治疗或预防的上下文中，代表性的基因型包括基因型3a，如野生型基因型3a和基因型3a的突变株，例如S282T和L159/320F突变体。通常，本发明提供用于治疗HCV感染，特别是基因型3a，如野生型基因型3a和基因型3a的突变株，例如S282T和L159/320F突变体的方法。
在本发明的上下文中，另外的代表性的HCV基因型包括主要的HCV基因型，即基因型1a、1b、2a、4a、5a和6a。具体地，基因型1b(在欧洲常见)和1a(在北美常见)。
本发明还涉及治疗或预防由基因型2a、4a、5a、6a引起的HCV感染，尤其是治疗由基因型2a、4a、5a、6a引起的HCV感染。本发明还提供了用于治疗或预防基因型2a、4a、5a、6a的HCV感染的方法，尤其是治疗由基因型2a、4a、5a、6a引起的HCV感染的方法。
考虑到前几代核苷酸的性能较差，本发明的化合物针对基因型3a的良好活性是值得注意的。优选地，本发明的组合物具有针对6种基因型中的每种的泛基因型覆盖，也就是说本发明的化合物的EC50在基因型之间没有明显差异，从而简化了治疗。
如以上所公开的，本发明的组合治疗通常适用于所有的HCV基因型，尤其是基因型1a和基因型1b。
本发明的化合物具有几个手性中心，并且可以以光学活性和外消旋形式存在并被分离，并且可以显示多晶型。应理解本文提供的化合物的任何外消旋、光学活性、非对映异构、多晶型或立体异构形式或其混合物在本发明的范围内。这样的化合物的绝对构型可以使用本领域已知的方法确定，例如X射线衍射或NMR和/或来自已知立体化学的起始原料和/或立体选择性合成方法的提示。根据本发明的药物组合物将优选地包含指定的立体异构体的基本上立体异构纯的制剂。
如本文所提及的化合物和中间体的纯立体异构形式定义为基本上不含所述化合物或中间体的相同基本分子结构的其他对映异构或非对映异构形式的异构体。具体地，术语“立体异构纯”涉及具有至少80％的立体异构过量(即最少90％的一种异构体和最多10％的其他可能的异构体)至高达100％的立体异构过量(即100％的一种异构体且没有其他的)的化合物或中间体，更具体地，具有90％至高达100％的立体异构过量的化合物或中间体，甚至更具体地具有94％至高达100％的立体异构过量，最具体地具有97％至高达100％的立体异构过量的化合物或中间体。术语“对映异构纯”和“非对映异构纯”应以类似方式理解，但随后分别考虑到所关注的混合物的对映异构过量和非对映异构过量。
本发明的化合物和中间体的纯立体异构形式可以通过使用本领域熟知的过程获得。例如，对映异构体可以通过拆分外消旋混合物而彼此分离，即通过与光学活性酸或碱反应实现非对映异构盐的形成，随后对形成的非对映异构盐选择性结晶。这样的酸的实例为酒石酸、二苯甲酰酒石酸、二甲苯酰酒石酸和樟脑磺酸。供选择地，对映异构体可以通过使用手性固定相的色谱技术来分离。纯立体化学异构形式还可以通过由立体化学纯形式的适合的起始原料合成来获得，只要通过手性合成或通过使用手性助剂立体特异性地发生反应。如果希望具体的立体异构体，则该化合物的制备优选使用立体特异性方法进行。这些方法将有利地采用对映异构纯的起始原料。
本发明的化合物的非对映异构外消旋体可以通过常规方法分离。可以有利地被采用的适当的物理分离方法为例如，选择性结晶和色谱，例如柱色谱。
当本发明的化合物中存在磷原子时，该磷原子可以代表手性中心。在该中心的手性根据Cahn-Ingold-Prelog优先规则被指定为“R”或“S”。当未指出手性时，考虑其意味着已包括R-和S-异构体两者，以及两种异构体的混合物。
在本发明的优选的实施方案中，式(I)的化合物或式(I)的任何亚组是在磷原子处的纯立体异构体。优选的是在磷原子处具有S-构型的化合物。这些立体异构体指定为SP。
本发明还包括同位素标记的式(I)的化合物或式(I)的任何亚组，其中一个或多个原子被该原子的同位素替代，即与通常天然存在的原子(多种原子)具有相同的原子序数但具有不同的原子质量的原子。可以掺入式(I)的化合物或式(I)的任何亚组的同位素的实例包括但不限于氢的同位素，如2H和3H(分别地，氘还表示为D，氚还表示为T)，碳如11C、13C和14C，氮如13N和15N，氧如15O、17O和18O，磷如31P和32P，硫如35S，氟如18F，氯如36Cl，溴如75Br、76Br、77Br和82Br，以及碘如123I、124I、125I和131I。对同位素标记的化合物中包含的同位素的选择将取决于该化合物的具体应用。例如，对于药物或底物组织分布分析，其中掺入放射性同位素如3H或14C的化合物将通常是最有用的。对于放射性成像应用，例如，正电子发射断层摄影(PET)，正电子发射同位素如11C、18F、13N或15O将是有用的。更重的同位素，如氘(即2H)的掺入可以提供比式(I)的化合物或式(I)的任何亚组更高的代谢稳定性，这可以实现例如化合物的体内半衰期延长或剂量要求降低。
同位素标记的式(I)的化合物或式(I)的任何亚组可以通过使用合适的同位素标记的试剂或起始原料代替相应的非同位素标记的试剂或起始材料，通过与本文下文中的方案和/或实施例中描述的那些类似的方法制备，或通过本领域技术人员已知的常规技术制备。
药学上可接受的加成盐包括式(I)的化合物的有治疗活性的无毒酸和碱加成盐形式。关注的是式(I)的化合物的游离形式，即非盐形式。
药学上可接受的酸加成盐可以方便地通过使用这样的合适的酸处理碱形式获得。合适的酸包括例如，无机酸，如氢卤酸，例如盐酸或氢溴酸，硫酸、硝酸、磷酸和类似的酸；或有机酸，例如乙酸丙酸羟基乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸(即乙二酸)、丙二酸、琥珀酸(即丁二酸)、马来酸、富马酸、苹果酸(即羟基丁二酸)、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、环己基氨基磺酸、水杨酸、对氨基水杨酸、扑酸和类似的酸。相反地，所述盐形式可以通过使用合适的碱处理转化成游离碱形式。
包含酸质子的式(I)的化合物还可以通过使用合适的有机或无机碱处理转化成其无毒金属或胺加成盐形式。合适的碱盐形式包括，例如，铵盐，碱金属和碱土金属盐，例如，锂、钠、钾、镁、钙盐等，与有机碱的盐，例如苄星青霉素(benzathine)、N-甲基-D-葡胺、海巴明青霉素(hydrabamine)盐，和具有氨基酸，例如，精氨酸、赖氨酸等的盐。
除非另有说明，本文所使用的贯穿摘要、说明书和权利要求的术语和措辞将解释为如下文定义的。每个术语的含义在每次出现时是独立的。无论术语单独使用还是与其他术语组合使用，这些定义均适用，除非另有说明。未明确定义的本文使用的术语或措辞将解释为具有本领域使用的其普通含义。化学名、通用名和化学结构可以互换使用以描述相同的结构。如果使用化学结构和化学名两者提及化学化合物并且在结构和名称之间存在分歧时，以结构为准。
术语“单磷酸、二磷酸和三磷酸酯”是指基团：
无论何时在本文中使用时，术语“式(I)的化合物”或“本发明的化合物”或类似术语旨在包括式(I)的化合物和式(I)的化合物的亚组，包括可能的立体化学异构形式，及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
术语“溶剂化物”涵盖式(I)的化合物以及其盐能够形成的任何药学上可接受的溶剂化物。这样的溶剂化物例如为水合物，醇化物，例如乙醇化物、丙醇化物等，尤其是水合物。
一般地，用于本申请的化合物的名称使用ChemDraw Ultra 12.0生成。此外，如果结构或结构的部分的立体化学未使用例如粗体或虚线表示，则该结构或结构的部分应解释为包括其所有立体异构体。
通用合成方法
本发明的化合物可以通过各种方法制备，例如，如WO2015/034420中所公开以及如本文所例示的。
方案15说明了式(1A)的化合物的活性代谢物的路线，其中B’为尿嘧啶。
方案15
用于制备其中B为基团(a)或(b)的式(I)的化合物的三磷酸酯的适合的磷酰化剂为5-硝基环赛尔格烯基氯代亚磷酸酯(5-nitrocyclosalgenylchlorophosphite)(I-6)，其通过三氯化磷和2-羟基-5-硝基苄基醇的反应制备，如本文下文的实验部分中详述的。
本发明的核苷的适合的3’-O-保护的衍生物(15a)与硝基环赛尔格烯基氯代亚磷酸酯(I-1)在Et3N的存在下在惰性溶剂如DCM或MeCN中反应，接着使用例如氧化，提供了环状磷酸三酯(15b)。然后通过与焦磷酸酯例如三丁胺焦磷酸酯反应接着使用氨水处理获得三磷酸酯(15c)。为了得到希望的盐形式，使三磷酸酯经受合适的离子交换过程，例如，如果希望钾盐形式，则使残留物通过柱-K+。
对于本领域技术人员显而易见的是，待给予的有用的体内剂量和具体的给予方式将根据年龄、体重、病患的严重性、所治疗的哺乳动物物种、采用的具体化合物以及使用这些化合物所针对的具体用途而变化。(参见例如Fingl等人1975，“The PharmacologicalBasis of Therapeutics”，其全部内容通过引用并入本文，特别参考第一章第一部分)。有效剂量水平的确定，即实现期望结果所必需的剂量水平可以由本领域技术人员使用常规药理学方法来实现。通常，产品的人类临床应用以较低的剂量水平开始，增加剂量水平，直到达到期望的效果。供选择地，可以使用可接受的体外研究来确立给予组合物的有用剂量和给予途径，所述组合物使用确定的药理学方法通过本发明方法确定。
虽然确切的剂量将根据不同药物来确定，但在大多数情况下，可以进行关于剂量的一些概括。如受试者所需要的，剂量可以是一天或多天过程中给予的单次或一系列的两次或更多次。在一些实施方案中，化合物将在连续治疗期间给予，例如持续一周或更长时间，或数月或数年。
在针对至少一些条件已确立化合物的人用剂量的情况下，将使用与所确立的人用剂量相同的剂量或介于所确立的人用剂量的约10％至200％，更优选约50％至150％的剂量。如果没有确立人用剂量，如在新发现的药物组合物的情况下，适合的人用剂量可以从ED50或ID50值或其他由体外或体内研究得出的适当值推断出，如动物毒性研究和功效研究所限定的。通常是便利的是针对组合的各组分使用与单药治疗相同的剂量，目的是实现更显著的抗病毒作用、起效、副作用降低或耐药性降低。
在给予药学上可接受的盐的情况下，剂量可以根据可能的情况作为游离碱或游离酸进行计算。如本领域技术人员将理解的，在某些情况下，为了有效和侵袭性地治疗特别具有侵袭性的疾病或感染，可能必需以超过或甚至远超过上述优选剂量范围的量给予本文公开的化合物。
可以单独调整剂量和间隔以提供足以维持调节作用的活性部分的血浆水平，或最小有效浓度(MEC)。每种化合物的MEC将不同，但可以由体外数据估算。实现MEC所必需的剂量将取决于个体特征和给予途径。然而，常规的MS或HPLC分析或生物分析可用于测定血浆浓度。
也可以使用MEC值确定剂量间隔。组合物应该使用使血浆水平维持在MEC以上10-90％的时间，优选30-90％的时间，最优选50-90％的时间的方案。在局部给予或选择性摄取的情况下，药物的有效局部浓度可能与血浆浓度无关。
应该注意的是，主治医师将知道如何以及何时由于毒性或器官功能障碍而终止、中断或调整给予。相反，如果临床反应不足(排除毒性)，主治医师也将知道将治疗调整到更高水平。在管理所关注的障碍中，给予的剂量的程度将随待治疗病症的严重程度和给予途径而变化。例如，可以通过标准预后评估方法来部分评价病症的严重程度。此外，剂量和可能的剂量频率也将根据个体患者的年龄、体重和反应而变化。与以上讨论的相当的程序可用于兽医学中。
在非人动物研究中，潜在产品的应用以更高的剂量水平开始，降低剂量，直到不再达到期望的效果或不利的副作用消失。剂量范围可以很宽，这取决于期望的效果和治疗适应症。供选择地，如本领域技术人员所理解的，剂量可以基于患者的表面积并根据患者的表面积计算。
可以使用已知方法评价本文公开的化合物的功效和毒性。例如，可以通过确定对细胞系，如哺乳动物细胞系，优选人细胞系的体外毒性来确立特定化合物或共享某些化学部分的化合物子集的毒理学。这些研究的结果通常预测在动物，如哺乳动物，或更具体地人中的毒性。供选择地，可以使用已知方法确定动物模型如小鼠、大鼠、兔或猴中的特定化合物的毒性。可以使用几种公认的方法，例如体外方法、动物模型或人类临床试验来确定特定化合物的功效。类似地，可以使用可接受的动物模型来确立化学品治疗这些病症的功效。当选择模型以确定功效时，技术人员可以由现有技术指导以选择适当的模型、剂量和给予途径以及方案。当然，人类临床试验也可用于确定化合物或组合物在人体中的功效。
可以将本文所述的任何组合物和方法给予已被诊断患有HCV感染的个体。本文所述的任何组合物和方法可以给予以前HCV感染治疗失败的个体(治疗失败患者，包括无响应者和复发者)。
在许多实施方案中特别关注的是已被临床诊断为感染HCV的个体。被感染HCV的个体被确定为在其血液中具有HCV RNA，和/或在其血清中具有抗HCV抗体。这样的个体包括抗HCV ELISA阳性个体和具有阳性重组免疫印迹分析(RIBA)的个体。这些个体也可以但不必具有升高的血清ALT水平。
临床诊断为感染HCV的个体包括未经治疗的个体(例如，先前未治疗过HCV的个体，特别是先前未接受基于IFN-α和/或基于利巴韦林的治疗的那些)，和先前HCV感染治疗失败的个体(“治疗失败患者”)。治疗失败患者包括无响应者(即，先前的HCV治疗没有使HCV滴度显著或充分降低的个体，所述先前的HCV治疗例如，先前的IFN-α单药治疗、先前的IFN-α和利巴韦林联合治疗或先前的聚乙二醇的IFN-α和利巴韦林联合治疗)；和复发者(即，先前接受HCV治疗的个体，例如，接受了先前的IFN-α单药治疗、先前的IFN-α和利巴韦林联合治疗或先前的聚乙二醇化IFN-α和利巴韦林联合治疗的个体，其HCV滴度降低，随后升高)。
在实施方案中，HCV-阳性个体具有的HCV滴度为每毫升血清至少约105，至少约5×105或至少约106或至少约2×106个HCV基因组拷贝。患者可能感染任何HCV基因型(基因型1，包括1a和1b、2、3、4、6等，和亚型(例如2a、2b、3a等)，特别难治的基因型，如HCV基因型1，和特定的HCV亚型和准种。在一个实施方案中，患者感染HCV基因型1a。在另一个实施方案中，患者感染基因型1b。
在一些实施方案中，HCV阳性个体(如上所述)是由于慢性HCV感染而显示严重纤维化或早期肝硬化(非失代偿性Childs-Pugh A级或更低)，或更晚期的肝硬化(失代偿性，Childs-PughB或C级)的那些，以及尽管先前使用基于IFN-α的治疗进行抗病毒治疗但仍是病毒血症的那些或不能耐受基于IFN的治疗的那些，或具有对这样的疗法的禁忌症的那些。在实施方案中，具有根据METAVIR评分系统的3或4期肝纤维化的HCV阳性个体适合用本文所述的组合物和方法治疗。在其他实施方案中，适合用本文所述的组合物和方法治疗的个体是具有临床表现的失代偿性肝硬化的患者，包括极晚期肝硬化患者，包括等待肝移植的患者。在再其他实施方案中，适合用本文所述的组合物和方法治疗的个体包括具有较轻程度纤维化的患者，包括具有早期纤维化的患者(METAVIR、Ludwig和Schemer评分系统中的1和2期；或Ishak评分系统中的1、2期)。
一方面，本发明涉及包含治疗有效量的式(1A)的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。在该上下文中的治疗有效量是足以稳定或减少感染的受试者(例如，人)的病毒感染，特别是HCV感染的量。“治疗有效量”将根据在每种具体情况下的个体需要变化。影响剂量的特征为例如，待治疗的疾病的严重程度，待治疗的受试者的年龄、重量、一般健康状况等，给予途径和形式。
一方面，本发明涉及式(1A)的化合物用于治疗“未经治疗的”患者的用途，所述“未经治疗的”患者即感染HCV且先前未针对感染进行治疗的患者。
另一方面，本发明涉及式(1A)的化合物用于治疗“经过治疗的”患者的用途，所述“经过治疗的”患者即感染HCV且先前针对感染进行治疗并且随后复发的患者。
另一方面，本发明涉及式(1A)的化合物用于治疗“无响应者”的用途，所述“无响应者”即感染HCV且先前进行治疗但未响应治疗的患者。
另一方面，本发明涉及包含预防有效量的如本文限定的式(1A)的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。在该上下文中，预防有效量是在处于被感染的风险的受试者中针对HCV感染足以以预防方式起作用的量。
又一方面，本发明涉及制备本文限定的药物组合物的方法，其包括将药学上可接受的载体与治疗或预防有效量的如本文限定的式(1A)的化合物紧密混合。
因此，本发明的化合物可以配制成用于给予目的的各种药物形式。作为合适的组合物，可以引用通常用于全身给予药物的所有组合物。为了制备本发明的药物组合物，作为活性成分的有效量的具体化合物，任选地以加成盐形式或溶剂化物的形式，在紧密混合物中与药学上可接受的载体组合，所述载体可以根据希望用于给予的制剂形式而呈现多种形式。这些药物组合物在特别适用于口服、经直肠、经皮肤或通过胃肠外注射的单一剂型中是期望的。例如，在制备口服剂型的组合物时，在口服液体制剂，如混悬剂、糖浆、酏剂、乳剂和溶液的情况下，可以采用任何普通的药物介质，例如，水、二醇、油、醇等；或在粉末、丸剂、胶囊和片剂的情况下采用固体载体，如淀粉、糖、高岭土、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。由于片剂和胶囊易于给予，其代表最有利的口服剂量单位形式，在所述情况下显然采用固体药物载体。对于胃肠外组合物，载体将通常包括至少大部分的无菌水，但可以包括其他成分，例如以有助于溶解度。例如，可以制备可注射的溶液，其中载体包括盐溶液、葡萄糖溶液或盐溶液和葡萄糖溶液的混合物。还可以制备可注射的混悬剂，在该情况下可以采用合适的液体载体、助悬剂等。还包括的是预期在使用之前不久转化成液体形式制剂的固体形式制剂。在适用于经皮肤给予的组合物中，载体任选地包括渗透增强剂和/或适合的润湿剂，任选地以较小比例与任何性质的适合的添加剂组合，所述添加剂没有引入对皮肤显著有害的作用。还可以使用任何本领域已知的递送系统，以溶液、混悬剂或干粉的形式经由口服吸入或吹入给予本发明的化合物。
尤其有利的是以单位剂型配制前述药物组合物，以易于给予和剂量一致性。如本文所使用的单位剂型是指适合作为单一剂量的物理上离散的单位，每个单位包含经计算产生希望的治疗效果的预定量的活性成分连同需要的药物载体。这样的单位剂型的实例为片剂(包括刻痕片或包衣片)、胶囊、丸剂、栓剂、粉末包、板片、可注射的溶液或混悬剂等，及其分离的多剂型。
在一些实施方案中，组合治疗的化合物或其药学上可接受的盐或前药配制在水性缓冲液中。适合的水性缓冲液包括但不限于，乙酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐和磷酸盐缓冲液，强度从约5mM到约100mM不等。在一些实施方案中，水性缓冲液包括提供等渗溶液的试剂。这样的试剂包括但不限于，氯化钠和糖，例如，甘露醇、右旋糖、蔗糖等，在一些实施方案中，水性缓冲液还包括非离子表面活性剂，如聚山梨酯20或80。
供选择地，将组合治疗的化合物或其药学上可接受的盐或前药配置在常规SEDDS(自乳化药物递送系统)溶媒中，特别是Pouten IIIA、IIIB或IV型的那些。
任选地，制剂还可包含防腐剂。适合的防腐剂包括但不限于苯甲醇、苯酚、氯丁醇、苯扎氯铵等。在许多情况下，制剂储存在约4℃下。制剂也可以冻干，在这种情况下，它们通常包括冷冻保护剂，如蔗糖、海藻糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇等。冻干制剂即使在环境温度下仍可以长时间储存。
式(1A)的化合物显示针对HCV的活性，并且可以用于治疗和/或预防HCV感染或与HCV相关的疾病。通常，式(1A)的化合物可以用于治疗HCV感染或与HCV相关的疾病。与HCV相关的疾病包括进行性肝纤维化，炎症和导致肝硬化的坏死，晚期肝病和HCC。本发明的许多化合物可以具有针对HCV的突变株的活性。此外，许多本发明的化合物可以显示有利的药代动力学曲线并且就生物利用度而言具有吸引力的特性，包括可接受的半衰期、AUC(曲线下面积)和峰值，并且不存在不利的现象，如不充分的快速发作和组织保留。
式(I)的化合物针对HCV的体外抗病毒活性可以在基于Lohmann等人.(1999)Science 285:110-113的细胞HCV复制子系统中测试，该系统具有如Krieger等人.(2001)Journal of Virology 75:4614-4624(通过引用并入本文)描述的进一步修改，其进一步在实施例部分中示例。该模型，虽然不是HCV的完全感染模型，但广泛被接受为目前可用的最稳健和有效的自主HCVRNA复制的模型。将理解重要的是区分特异性干扰HCV功能的化合物与在HCV复制子模型中发挥细胞毒性或细胞抑制作用，因此导致HCV RNA或连接的报告基因酶浓度降低的那些。基于例如线粒体酶的活性，使用荧光氧化还原染料如刃天青，用于评价细胞的细胞毒性的分析是本领域已知的。此外，存在用于评价连接报告基因活性，如萤火虫荧光素酶的非选择性抑制的细胞计数屏。可以通过使用荧光素酶报告基因稳定转染来准备合适的细胞类型，所述荧光素酶报告基因的表达取决于构成性活性基因启动子，并且该细胞可以用作计数屏来去除非选择性抑制剂。
由于其抗病毒特性，特别是其抗HCV特性，式(1A)的化合物、其药学上可接受的加成盐或溶剂化物，在治疗感染HCV的温血动物，特别是人中是有用的。式(1A)的化合物进一步用于预防HCV感染。本发明还涉及治疗感染HCV或处于被HCV感染的风险中的温血动物，特别是人的方法，所述方法包括给予抗HCV有效量的式(I)的化合物。
因此，本发明的化合物可以用作药物，特别是抗HCV药物。所述作为药物的用途或治疗方法包括全身给予感染HCV的受试者或易受HCV感染的受试者有效对抗与HCV感染相关的病症的量。
本发明还涉及本发明的化合物在制备用于治疗或预防HCV感染的药物中的用途。
在优选的实施方案中，本发明涉及式(1A)的化合物在制备用于治疗HCV感染的药物中的用途。
通常考虑，抗病毒有效日剂量将为约0.01至约700mg/kg，或约0.5至约400mg/kg，或约1至约250mg/kg，或约2至约200mg/kg，或约10至约150mg/kg，或约0.1至约50mg/kg，或约1至约20mg/kg，或约2至约10mg/kg，或约5至约8mg/kg体重。适宜的是在全天以适宜的间隔以一个、两个、三个、四个或更多个亚剂量给予需要剂量。所述亚剂量可以配制为单位剂型，例如，每单位剂型包含约1至约5000mg，或约50至约3000mg，或约100至约1000mg，或约200至约600mg，或约100至约400mg，或约7至约3500mg，或约70至约1400mg，或约140至约700mg，或约340至约580mg的活性成分。
本发明还涉及式(1A)的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物和另一种抗病毒化合物，特别是另一种抗HCV化合物的组合。术语“组合”可以涉及包含以下的产品：(a)式(1A)的化合物和(b)任选的另一种抗HCV化合物，作为组合制剂用于在HCV感染的治疗中同时、单独或顺序使用。
可以用于该组合的抗HCV化合物包括HCV聚合酶抑制剂、HCV蛋白酶抑制剂、在HCV寿命周期中的其他靶标的抑制剂，和免疫调节剂及其组合。HCV聚合酶抑制剂包括NM283(瓦洛他滨)、R803、JTK-109、JTK-003、HCV-371、HCV-086、HCV-796和R-1479、R-7128、MK-0608、VCH-759、PF-868554、GS9190、XTL-2125、NM-107、GSK625433、R-1626、BILB-1941、ANA-598、IDX-184、IDX-375、INX-189、MK-3281、MK-1220、ABT-333、PSI-7851、PSI-6130、GS-7977(索非布韦)、VCH-916。HCV蛋白酶的抑制剂(NS2-NS3抑制剂和NS3-NS4A抑制剂)包括BILN-2061、VX-950(特拉匹韦)、GS-9132(ACH-806)、SCH-503034(波普瑞韦)、TMC435350(司美匹韦)、TMC493706、ITMN-191、MK-7009、BI-12202、BILN-2065、BI-201335、BMS-605339、R-7227、VX-500、BMS650032、VBY-376、VX-813、SCH-6、PHX-1766、ACH-1625、IDX-136、IDX-316。HCV NS5A抑制剂的实例是BMS790052、A-831、A-689、NIM-811并且DEBIO-025为NS5B亲环蛋白抑制剂的实例。
在HCV寿命周期中的其他靶标的抑制剂，包括NS3解旋酶；金属蛋白酶抑制剂；反义寡核苷酸抑制剂，如ISIS-14803和AVI-4065；siRNA如SIRPLEX-140-N；载体编码的短发夹RNA(shRNA)；DNA酶；HCV特异性核酶，如heptazyme、RPI.13919；侵入抑制剂如HepeX-C、HuMax-HepC；α-葡糖苷酶抑制剂，如西戈斯韦、UT-231B等；KPE-02003002；和BIVN 401。
免疫调节剂包括天然和重组干扰素同种型化合物，包括α-干扰素、β-干扰素、γ-干扰素和ω-干扰素，如 和聚乙二醇衍生的(聚乙二醇化的)干扰素化合物，如PEG干扰素-α-2aPEG干扰素-α-2b和聚乙二醇化的IFN-α-con1；干扰素化合物的长效制剂和衍生物如白蛋白融合的干扰素albuferonα；刺激细胞中干扰素的合成的化合物，如瑞喹莫德；白介素；提高1型辅助T细胞应答形成的化合物，如SCV-07；TOLL样受体激动剂如CpG-10101(actilon)，和艾沙托立宾；胸腺素α-1；ANA-245；ANA-246；组胺二盐酸盐；丙帕锗；四氯十氧化物；安普利近；IMP-321；KRN-7000；抗体，如civacir和XTL-6865；和预防和治疗疫苗如InnoVac C和HCV E1E2/MF59。
其他抗病毒剂包括利巴韦林、金刚烷胺、韦拉米定、硝唑尼特；替比夫定；NOV-205；塔利韦林；内部核糖体进入的抑制剂；广谱病毒抑制剂，如IMPDH抑制剂，和霉酚酸及其衍生物，并且包括但不限于VX-497(merimepodib)、VX-148和/或VX-944；或以上任意的组合。
用于所述组合中的具体试剂包括干扰素-α(IFN-α)，聚乙二醇化的干扰素-α或利巴韦林以及基于针对HCV表位靶向的抗体的治疗剂，小干扰RNA(Si RNA)，核糖酶，DNA酶，反义RNA，例如NS3蛋白酶、NS3解旋酶和NS5B聚合酶的小分子拮抗剂。
另一方面，提供了如本文限定的式(I)的化合物和抗HIV化合物的组合。后者优选为对药物代谢和/或药代动力学具有改善生物利用度的积极作用的那些HIV抑制剂。这样的HIV抑制剂的实例为利托那韦。因此，本发明还提供了包括以下的组合：(a)式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和(b)利托那韦或其药学上可接受的盐。化合物利托那韦、其药学上可接受的盐及其制备方法描述于WO 94/14436中。US 6,037,157和其中引用的参考文献：US 5,484,801、US 08/402,690、WO 95/07696和WO 95/09614公开了利托那韦的优选的剂型。
本发明还涉及用于制备如本文所述的组合的方法，所述方法包括将式(I)的化合物和另一药剂，如抗病毒剂，包括抗HCV或抗HIV剂，特别是以上提及的那些组合的步骤。
发现所述组合可以用于制备用于治疗感染HCV的哺乳动物的HCV感染的药物，所述组合特别包括如上限定的式(I)的化合物和干扰素-α(IFN-α)、聚乙二醇化的干扰素-α或利巴韦林。或本发明提供了治疗感染HCV的哺乳动物，特别是人的方法，其包括给予所述哺乳动物有效量的本文限定的组合。具体地，所述治疗包括所述组合物的全身给药，并且有效量为有效治疗与HCV感染相关的临床病症的量。
在一个实施方案中，将以上提及的组合配制成药物组合物的形式，所述药物组合物包括上述的活性成分和载体，如上所述。每种活性成分可以分开配制并且制剂可以共同给予，或可以提供包含两者且如果希望的话包含另外的活性成分的一种制剂。在前者情况下，组合还可以配制为组合制剂用于在HCV治疗中同时、单独或顺序使用。所述组合物可以呈上述的任何形式。在一个实施方案中，两种成分配制在一种剂型中，如固定剂量组合。在具体的实施方案中，本发明提供了包含以下的药物组合物：(a)治疗有效量的式(I)的化合物，包括其可能的立体异构形式或其药学上可接受的盐，或其药学上可接受的溶剂化物，和(b)治疗有效量的利托那韦或其药学上可接受的盐，和(c)载体。
本发明的组合的单一组分可以在治疗过程期间在不同的时间分开给予或以分开或单个的组合形式同时给予。本发明旨在包含所有这样的同时或交替治疗的方案，并且相应地解释术语“给予”。在优选的实施方案中，同时给予分开的剂型。
在一个实施方案中，本发明的组合包含一定量的利托那韦或其药学上可接受的盐，相对于单独给予所述式(I)的化合物时的生物利用度，其足以在临床上改善式(I)的化合物的生物利用度。或本发明的组合包含一定量的利托那韦或其药学上可接受的盐，相对于当单独给予所述式(I)的化合物时的所述至少一个药代动力学变量，所述量足以提高选自以下的式(I)的化合物的至少一个药代动力学变量：t1/2、Cmin、Cmax、Css、12小时的AUC或24小时的AUC。
本发明的组合可以以所述组合中包含的每种组分特定的剂量范围给予人，例如，如以上限定的式(I)的化合物，和利托那韦或药学上可接受的盐，可以具有0.02至5.0g/天的剂量水平。
式(I)的化合物与利托那韦的重量比可以在约30:1至约1:15，或约15:1至约1:10，或约15:1至约1:1，或约10:1至约1:1，或约8:1至约1:1，或约5:1至约1:1，或约3:1至约1:1，或约2:1至1:1的范围内。化合物式(I)和利托那韦可以每日共同给予一次或两次，优选经口服给予，其中每次给药的式(I)的化合物的量如上所述；并且每次给药的利托那韦的量为1至约2500mg，或约50至约1500mg，或约100至约800mg，或约100至约400mg，或40至约100mg的利托那韦。
实施方案详述
因此，现在将通过以下实施例说明本发明的各个实施方案和中间体。该实施例仅旨在进一步说明本发明，且决不限定本发明的范围。化合物名称由ChemDraw Ultra软件，Cambridgesoft,12.0.2版生成。
除了以上定义，以下缩写用于以下的实施例和合成方案中。如果本文使用的缩写未定义，则其具有其一般可接受的含义。
Bn 苄基
Bz 苯甲酰基
BOP-Cl 双(2-氧代-3-噁唑烷基)氯化膦
Bz 苯甲酰基
DCC 二环己基碳二亚胺
DCM 二氯甲烷
DIEA 二异丙基乙胺
DMAP 4-二甲基氨基吡啶
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMPU 1,3-二甲基-3,4,5,6-四氢-2-嘧啶酮
EDC 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
ES 电喷雾
Et3N 三乙胺
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
Et2O 二乙醚
LC 液相色谱
HOAc 乙酸
HPLC 高效液相色谱
MeCN 乙腈
MeOH 甲醇
MS 质谱
NT 3-硝基-1,2,4-三唑
NTP 核苷三磷酸
Pg 保护基团
Ph 苯基
SEM 平均值标准误差
TEST 双(三乙氧基甲硅烷基)丙基-四硫化物
THF 四氢呋喃
TFA 三氟乙酸
TFAA 三氟乙酸酐
TIPS 三异丙基甲硅烷基
中间体52
步骤a)L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(I-52a)
在-7至0℃下，在冷却下在30分钟的时间内将亚硫酰氯(80.2g，0.674mol，1.5当量)加至2-丙醇(400mL)，接着在0℃下加入L-丙氨酸(40.0g，0.449mol)。将流量指示器和具有27.65％氢氧化钠(228g)和水(225g)的混合物的洗涤器连接到出口。在67℃下搅拌反应混合物两小时，然后在70℃下搅拌一小时，并在20-25℃下搅拌过夜。在60℃浴中在减压(250-50毫巴)下在47-50℃下蒸馏反应混合物。当蒸馏变得非常缓慢的时候，将甲苯(100mL)加到残留油状物，并在60℃浴中在减压(150-50毫巴)下在48-51℃下继续蒸馏，直到其变得非常缓慢。将叔丁基甲基醚(tBME)(400mL)加到残留油状物，并在34-35℃下在有效搅拌下对两相体系引晶。当观察到结晶时，在一小时的时间内将混合物冷却到23℃，并通过过滤分离沉淀。使用tBME(100mL)洗涤滤饼，并在不加热的情况下减压干燥至恒重，得到标题化合物(67.7g，90％)，为白色固体。
步骤b)(S)-2-(((S)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯(I-52)
在0℃在氮气下将二氯磷酸苯酯(62.88g，0.298mol，1.0当量)加到L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(50.0g，0.298mol)的DCM(310mL)溶液-通过用DCM(39mL)洗涤完成加入。冷却混合物并在70分钟的时间内加入三乙胺(63.35g，0.626mol，2.1当量)，同时冷却保持温度不高于-14℃，通过用DCM(39mL)洗涤完成加入。在-15至-20℃下搅拌混合物一小时，然后加热至-8℃，并在42分钟的时间内加入五氟苯酚(60.38g，0.328mol，1.1当量)和三乙胺(33.19g，0.328mol，1.1当量)的DCM(78mL)溶液，同时冷却保持温度不高于0℃-通过用DCM(39mL)洗涤完成加入。在0℃下搅拌混合物一小时，然后在+5℃下搅拌过夜。通过过滤去除形成的沉淀，然后用DCM(95mL)洗涤滤饼。在5℃下用水(2x 190mL)洗涤合并的滤液。在减压(650-600毫巴)下在32-38℃下蒸馏有机相，并且继续蒸馏直到获得约170mL的残留体积的部分结晶的物质。加入乙酸乙酯(385mL)，并且在减压(300-250毫巴)下在43-45℃下蒸馏得到的澄清溶液。继续蒸馏，直到获得约345mL的残留体积。将澄清溶液冷却至36℃，并且通过加入如J.Org.Chem.,2011,76,8311-8319中所述制备的(S)-2-(((S)(全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯(20mg)的晶种诱导结晶。在一小时的时间内将混合物冷却至27℃，然后在47分钟的时间内加入正庚烷(770mL)，并且再搅拌混合物37分钟的时间。加入三乙胺(6.03g，0.2当量)，并且在23-25℃下搅拌混合物过夜。通过过滤分离沉淀。用乙酸乙酯:正庚烷(1:9，80mL)洗涤滤饼，并在不加热的情况下在减压(0.1毫巴以下)下干燥至恒重，得到标题化合物(75.64g，56％)，为白色结晶物质。
1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.38-7.32(m,2H),7.27-7.24(m,2H),7.23-7.19(m,1H),5.10-4.98(m,1H),4.20-4.08(m,1H),4.03-3.96(m,1H),1.46(dd,7.2,0.6Hz,3H),1.26-1.23(2xd,6H)；
13CNMR(CDCl3,100MHz)δ172.7(d,J＝8.8Hz),150.4(d,J＝7.1Hz),143.4-143.0(m),141.0-140.2(m),140.0-139.8(m),137.6-137.2(m),136.8-136.2(m),130.0(d,J＝0.82Hz),125.8(d,J＝1.4Hz),120.3(d,J＝5.0Hz),69.8,50.6,(d,J＝1.9Hz),21.8(d,J＝1.9Hz),21.2(d,J＝4.4Hz)；
标题化合物的结晶性质和NMR光谱数据与公开的数据(J.Org.Chem.,2011,76,8311-8319)一致，从而证实标题化合物的磷原子的S立体化学。
实施例1
步骤a)(4S,5R)-4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)-5-(((三异丙基甲硅烷基)氧基) 甲基)二氢呋喃-2(3H)-酮(1a)
将TIPS-氯化物(16.4g，85mmol)滴加到冰冷的搅拌的(4S,5R)-4-羟基-5-(羟甲基)二氢呋喃-2(3H)-酮(3.30g，25.0mmol)和咪唑(10.2g,150mmol)的DMF(35mL)溶液。在0℃下搅拌混合物1小时，然后在室温下搅拌40小时。使用水终止反应并使用EtOAc萃取混合物三次。干燥(Na2SO4)有机相，过滤并浓缩，通过硅胶柱色谱分离产物，使用异己烷和0至10％EtOAc的梯度洗脱。通过硅胶柱色谱再次纯化混合的级分，以甲苯洗脱，得到标题化合物(11.1g，94％)。
步骤b)(3S,4R,5R)-3-氟-4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)-5-(((三异丙基甲硅烷 基)氧基)甲基)-二氢呋喃-2(3H)-酮(1b)
在10min内将1M双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂的溶液(2.18g，13.0mmol)滴加到在-70℃下的1a(4.45g，10.0mmol)和NFSI(4.73g，15.0mmol)的干燥THF(50mL)溶液。在-70℃下搅拌混合物90min，然后添加到氯化铵和碎冰的饱和溶液。使用EtOAc萃取混合物三次，干燥(Na2SO4)有机相，过滤并浓缩，通过硅胶色谱分离产物，使用异己烷和0至5％EtOAc的梯度洗脱。产量4.63g，67％。
步骤c)(3S,4R,5R)-3-氯-3-氟-4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)-5-(((三异丙基甲 硅烷基)氧基)甲基)-二氢呋喃-2(3H)-酮(1c)
在10min内，将1M双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂的溶液滴加到在-70℃下的1b(3.08g，6.65mmol)和N-氯丁二酰亚胺(1.07g，7.99mmol)的干燥THF(25mL)溶液。在-70℃下搅拌混合物90min，然后添加到氯化铵和碎冰的饱和溶液。使用EtOAc萃取混合物三次，干燥(Na2SO4)有机相，过滤并浓缩，通过硅胶色谱分离产物，使用异己烷和0至5％EtOAc的梯度洗脱。产量2.40g，73％。
步骤d)(3S,4R,5R)-3-氯-3-氟-4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)-5-(((三异丙基甲 硅烷基)氧基)甲基)-四氢呋喃-2-醇(1d)
在氩气下，将1M的DIBAL(2.23g，15.7mmol)的DCM溶液滴加到在-70℃下的1c(5.20g，10.5mmol)的干燥甲苯(50mL)溶液。在-70℃下搅拌混合物2小时，然后将温度升至-30℃并使用2mL MeOH终止反应，然后添加到罗谢尔盐和碎冰的混合物。搅拌混合物30分钟然后使用EtOAc萃取三次。干燥(Na2SO4)有机相，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱分离产物，使用异己烷和0至10％EtOAc的梯度洗脱。产量5.22g，85％。
步骤e)甲磺酸-(2S,3S,4R,5R)-3-氯-3-氟-4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)-5- (((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基)四氢呋喃-2-酯(1e)
将甲磺酰氯(688mg，6.00mmol)缓慢添加到1d(2.00g，4.01mmol)和TEA(608mg，6.00mmol)的DCM(20mL)冷却的溶液。在室温下搅拌混合物三小时，然后使用EtOAc(80mL)稀释，用饱和NaHCO3(水溶液)、HCl、水和用盐水洗涤。干燥(Na2SO4)有机相，过滤并浓缩。在真空中干燥粗产物，然后不经纯化用于下一步。
步骤f)1-((2R,3S,4R,5R)-3-氯-3-氟-4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)-5-(((三异 丙基甲硅烷基)氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(1f)
将尿嘧啶(699mg，6.24mmol)和硫酸铵(25.8mg,0.195mmol)的六甲基二硅氮烷(HDMS)(40mL)悬浮液回流过夜。在真空中去除溶剂并将残留物溶于DCM(60mL)。在氩气下添加1e(2.25g，3.90mmol)，然后缓慢添加TMS三氟甲磺酸酯。在室温下搅拌混合物10分钟，然后回流4小时。将混合物添加到冷却的碳酸氢钠溶液中并使用EtOAc萃取三次。使用盐水洗涤有机相并用硫酸钠干燥。在减压下蒸发溶液并使用异己烷和20至50％乙酸乙酯，通过硅胶色谱纯化混合物，得到两种化合物二TIPS(1.29g，56％)和单TIPS(390mg，23％)。
步骤g)1-((2R,3S,4R,5R)-3-氯-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)嘧啶- 2,4(1H,3H)-二酮(1g)
在80℃下搅拌1f(1.27g，2.14mmol)的80％乙酸溶液18小时，然后浓缩并与甲苯一起共蒸发。将残留物溶于干燥THF(10mL)，添加三乙胺三氢氟酸盐(1.38g，8.56mmol)，并将混合物蒸发到硅胶上并通过硅胶柱色谱纯化，使用包括0至10％MeOH的DCM洗脱。通过HPLC在Hypercarb柱上纯化混合的级分，使用10至20％乙腈和10mmol乙酸铵洗脱，得到标题化合物(19mg，3.2％)。MS 281.2[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.39(s,1H),7.87(d,J＝8.1Hz,1H),6.74(s,1H),6.22(d,J＝16.1Hz,1H,7),5.73(d,J＝8.1Hz,1H),5.52(s,1H),4.21(dd,J＝19.6,9.2Hz,1H),3.87–3.77(m,2H),3.64(dd,J＝12.7,2.8Hz,1H)。
13C NMR(126MHz,DMSO)δ162.76,150.26,139.06,115.71,113.71,102.28,86.98,86.69,81.01,73.28,73.14,58.19。
实施例2
(2S)-2-(((((2R,3R,4S,5R)-4-氯-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4- 氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯(2)
在氩气下，将1M叔丁基氯化镁的溶液(0.22mL，0.22mmol)缓慢添加到糖1g(28mg，0.1mmol)的THF(1.5mL)溶液。在0℃下搅拌悬浮液1小时，然后添加DMPU(0.5mL)，接着在～5min内在0℃下添加(2S)-2-(((全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯(57mg，0.12mmol)(如WO2011/123672中所述制备)的THF(0.5mL)溶液。在0℃下搅拌混合物5h，然后使其达到室温并使用饱和氯化铵溶液终止。使用EtOAc萃取混合物三次。干燥(Na2SO4)有机相，在减压下浓缩并通过HPLC分离产物。(Gemini NX 30mm 20至60％乙腈10mmol乙酸铵梯度17分钟，流速每分钟40ml)。标题化合物被分离为磷原子处的单一立体异构体。产量22mg，40％。MS ES+550.4[M+H]+，ES-547.9[M-H]-。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ1.15(d,6H),1.23(d,3H),3.80(tq,1H),4.04(m,1H),4.31(m,3H),4.86(hept,1H),5.63(dd,1H),6.09(dd,1H),6.24(d,1H),6.66(d,1H),7.21(m,3H),7.38(m,2H),7.58(d,1H),11.63(m,1H)。
13C NMR(126MHz,DMSO)δ19.64(d),21.26,21.30,49.67,64.32,67.89,74.42(d),78.81,87.60(m),102.27,113.96(d),119.96(d),124.52,129.56,139.91,150.01,150.53(d),162.52,172.45(d)。
31P NMR(162MHz,DMSO)δ3.76。
19F NMR(376MHz,DMSO)δ-119.05。
实施例3
步骤a)乙酸-(2R3R4S5R)-4-氯-5-(24-二氧代-34-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-2- (羟甲基)四氢呋喃-3-酯(3a)
将4-甲氧基三苯甲基氯化物(133mg，0.43mmol)添加到化合物1f(81mg，0.29mmol)的吡啶(25mL)溶液。在室温下搅拌产生的混合物40小时，使用DCM稀释并使用NaHCO3洗涤。浓缩有机相并在硅胶上通过柱色谱纯化残留物，得到标题化合物(144mg，90％)。
将得到的化合物溶于干燥吡啶(1.4mL)，添加Ac2O(29μL，0.31mmol)并在室温下搅拌溶液。2h后，添加MeOH，浓缩混合物并使用DCM(×3)萃取，使用饱和NaHCO3水溶液洗涤合并的有机层，Na2SO4，浓缩并与THF共蒸发一次。
将残留物分散在80％的HOAc(35mL)中，并在45℃下搅拌3h，然后浓缩。在硅胶上通过柱色谱纯化残留物，得到标题化合物(69mg，33％)。
步骤b)((2R,3R,4S,5R)-4-氯-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟- 3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基三磷酸锂(3b)
在氮气下，将新鲜制备的2-氯-1,3,2-苯并二氧杂膦-4-酮(64mg，0.31mmol)的无水THF(280μL)溶液添加到搅拌的化合物3a(78mg，0.24mmol)在无水吡啶(560μL)和无水THF(560μL)的混合物中的溶液。在氮气下在室温下搅拌混合物15分钟，然后在氮气下添加先前制备的三丁基铵P2O7(146mg，0.27mmol)和三丁基胺(127μL，0.53mmol)的无水DMF(560μL)溶液。在室温下在氮气下再搅拌得到的溶液15分钟，然后添加作为在吡啶/水中的溶液(98/2，v/v)(1.1mL)的I2(123mg，0.48mmol)，并且搅拌反应混合物15分钟。通过添加～19滴5％的Na2SO3的水溶液破坏过量的碘，并浓缩反应溶液。将残留物分散在水/乙腈(95:5)(5mL)中并使之在室温下保持振摇30分钟。添加浓氨水(10mL)并在室温下搅拌反应混合物11/2h，然后浓缩并将残留物溶于水/乙腈(95:5，5mL)中并冻干。
将粗材料～430mg，溶于10％MeCN/水(3mL)中，过滤并通过HPLC在Gilson仪器上使用Phenomenex Luna 5μNH2(150×21.2mm)柱纯化，
溶剂A：95％水:5％乙腈:0.05M碳酸氢铵
溶剂B：95％水:5％乙腈:0.8M碳酸氢铵
梯度：在30min内从0％B到50％B
收集NTP级分并浓缩，将残留物溶于10％MeCN/水并冻干。将得到的固体分散在10％MeCN/水中，通过0.45μm烧结滤器滤除不溶物并将澄清滤液蒸发至干，溶于水/乙腈(95:5)，通过Dowex-Li+并冻干，得到标题化合物(39.3mg，28％)。
1H NMR(500MHz,D2O)δ7.87(d,J＝8.2Hz,1H),6.41(d,J＝15.9Hz,1H,1),5.98(d,J＝8.2Hz,1H),4.56(dd,J＝19.1,9.4Hz,1H,5),4.35(dddd,J＝42.1,12.3,5.1,2.2Hz,3H),4.19(d,J＝9.4Hz,1H,8)。
13C NMR(126MHz,D2O)δ165.94,151.67,140.78,114.54,112.55,103.12,87.95,87.62,79.45,79.38,73.16,73.02,62.60,62.56。
实施例19化合物1g的供选择的合成路线
步骤a)(3S,4R,5R)-乙酸-3-氯-3-氟-4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)-5-(((三异 丙基甲硅烷基)氧基)甲基)-四氢呋喃-2-酯(19a)
在-35℃下在氩气中，将1M Li(O-t-Bu)3AlH的THF(39mL，39mmol)溶液滴加到化合物1c(16.3g，32.8mmol)的THF(120mL)溶液。在-35℃下搅拌混合物1h，然后在室温下搅拌1h。将混合物冷却至-25℃，添加DMAP(4.00g，32.8mmol)并搅拌混合物15分钟，然后滴加乙酸酐(33.5g，328mmol)并搅拌混合物2h。使混合物达到0℃，并添加EtOAc(200mL)和水(200mL)。分离各相并使用EtOAc(×2)萃取水相。使用水(×2)和盐水(×1)洗涤合并的有机相。干燥(Na2SO4)有机相，过滤并在减压下浓缩。残留物与甲苯共蒸发两次，并且在硅胶上通过色谱纯化产物，使用异己烷和2至6％EtOAc洗脱，得到标题化合物(17.1g，96％)。
步骤b)(3S,4R,5R)-乙酸-3-氯-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-酯(19b)
将三乙胺三氢氟酸盐(20.5g，126mmol)添加到化合物19a(17.0g，31.4mmol)在乙腈(115mL)和THF(23mL)中的搅拌的溶液。在室温下搅拌混合物72小时，在50℃下搅拌20小时，然后在室温下搅拌过夜。在硅胶(60g)上浓缩溶液并通过硅胶色谱纯化，使用异己烷和EtOAc的梯度洗脱，得到标题化合物(68.0g，85％)。
步骤c)(2R,3R,4S)-苯甲酸-5-乙酰氧基-2-((苯甲酰基氧基)甲基)-4-氯-4-氟四 氢呋喃-3-酯(19c)
在冰冷却下将三乙胺(10.8g，107mmol)添加到化合物19b(6.80g，26.8mmol)的搅拌的溶液，接着滴加苯甲酰氯(9.41g，66.9mmol)。使混合物达到室温并搅拌过夜。添加EtOH(5mL)并搅拌混合物30分钟，然后在真空下浓缩。添加水并使用EtOAc(×3)萃取混合物。使用水和盐水洗涤有机相，干燥(Na2SO4)、过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱纯化产物，使用异己烷和EtOAc的梯度洗脱，得到标题化合物(10.1g，86％)。
步骤d)((2R,3R,4S)-3-(苯甲酰基氧基)-4-氯-4-氟-5-羟基四氢呋喃-2-基)甲基 苯甲酸酯(19d)
将乙醇胺(1.55g，25.4mmol)添加到化合物19c(10.1g，23.0mmol)在EtOAc(100mL)和DMSO(50mL)中的搅拌的溶液。在室温下搅拌混合物72小时，然后使用二乙醚(300mL)和EtOAc(300mL)稀释并用水(×4)洗涤。使用EtOAc萃取合并的水相，然后使用盐水(×2)洗涤EtOAc相。干燥(Na2SO4)合并的有机相、过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱纯化产物，使用DCM和EtOAc的梯度洗脱，得到标题化合物(7.50g，82％)。
步骤e)((2R,3R,4S)-苯甲酸-3-(苯甲酰基氧基)-4-氯-4-氟-5-((甲基磺酰基)氧 基)四氢呋喃-2-基)甲酯(19e)
在N2下在-15℃下，将Et3N(3.54mL，25.4mmol)添加到化合物19d(8.36g，21.2mmol)的干燥DCM(100mL)溶液，接着添加MsCl(1.97mL，25.4mmol)。在-15℃下搅拌反应混合物2小时，然后倒入HCl(80mL，1M，水溶液)中。分离相并使用DCM萃取水层。使用NH4Cl(饱和水溶液)洗涤合并的有机萃取液，干燥(MgSO4)并在减压下浓缩，以得到标题化合物(9.86g，98％)，为澄清油状物。
步骤f)((2R,3R,4S,5R)-苯甲酸-3-(苯甲酰基氧基)-4-氯-5-(2,4-二氧代-3,4- 二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟四氢呋喃-2-基)甲酯(19f)
在N2下在HMDS(49.3mL，236mmol)中将尿嘧啶(3.09g，27.5mmol)和硫酸铵(48.5mg，0.367mmol)加热至回流16小时。将反应混合物冷却至室温，在减压下浓缩并在真空中干燥。在N2下将在干燥DCE(50mL)中的残留物添加到化合物19e(8.68g，18.4mmol)的干燥DCE(75mL)溶液。在N2下将TMSOTf(6.12g，27.5mmol)缓慢添加到溶液。在添加后，将反应混合物加热至80℃达5小时，然后在65℃下加热16小时。将反应混合物冷却至室温，使用NaHCO3(饱和水溶液)终止，过滤并使用DCM萃取两次。干燥(MgSO4)合并的有机萃取液并在减压下浓缩。添加EtOAc和DCM并且通过过滤收集形成的沉淀，得到纯β-异构体(660mg，7.4％)。将滤液蒸发到硅胶上并通过快速色谱(hex:EtOAc 2:1-1:1)纯化，得到标题化合物，其为与α-异构体的混合物，α:β>5:95(942mg，11％)。
步骤e)1-((2R,3S,4R,5R)-3-氯-3-氟-4-羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)嘧啶- 2,4(1H,3H)-二酮(19g)
将化合物19f(670mg，1.37mmol)悬浮在NH3(7N，在MeOH中)中。30min后，添加EtOH(5mL)并在室温下搅拌悬浮液。又过了一个小时后，悬浮液变成溶液，并且在室温下搅拌反应混合物15小时。在减压下蒸发溶剂并通过快速色谱(DCM:MeOH 10:1)纯化得到的残留物，得到标题化合物(380mg，99％)，为白色固体。LC-MS ES-279.31[M-H]-。
实施例28，化合物2的供选择的合成路线
步骤a)(4S,5R)-4-羟基-5-(羟基甲基)二氢呋喃-2(3H)-酮(28a)
在氮气下将脱氧-D-核糖(400.0g，2.98mol)溶于水(1.6kg)，并将溶液冷却至3-7℃。在3-7℃下加入溴(800g，10.0mol，3.36当量)，同时搅拌约2小时的时间，并在3-7℃下继续搅拌约1小时。将反应混合物温和升温至20-25℃，然后搅拌约20小时。
将反应混合物冷却至-5至-7℃，并加入氢氧化钠溶液(27.65％，720g，1.67当量)，同时将反应温度保持在-3至-7℃。然后将温度调节至0-5℃并在0-5℃下加入氢氧化钠水溶液(9％，470g，1.06mol，0.35当量)，以获得最终pH＝1.40。
使用洗涤器(冷却的，14％氢氧化钠，0.9L)减压蒸除水，最后为p<5毫巴和50℃。为了从产物去除残留的水，将2-丙醇分批加到残留物，接着在减压下共沸蒸馏。最终含水量通过KF滴定确定为低于1％。将2-丙醇(400mL)加到残留物和混合物，然后过滤。使用2-丙醇(1L)洗涤滤饼。在减压下蒸除溶剂。加入甲苯(400mL)并继续蒸馏，以去除残留的2-丙醇和可能更多的水。获得474.6g的残留物(120％产率)。
步骤b)(4S,5R)-4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)-5-(((三异丙基甲硅烷基)氧基) 甲基)二氢呋喃-2(3H)-酮(28b)
将化合物28a(470.9g，2.97mol)溶于DMF(1.2L)并冷却至10-15℃。加入咪唑(707.0g，10.4mol，3.5当量)并将混合物的温度调节至3-7℃。加入TIPS-Cl(1145g，5.94mol，2.0当量)，同时在2小时期间内冷却至3-7℃。在3-7℃下再搅拌反应混合物1/2h，然后温和升温至20-25℃并搅拌20h。如下监测反应进程：将反应混合物样品用干燥DMF稀释十倍；将N,O-双(三甲基甲硅烷基)三氟乙酰胺(0.25mL)加到0.5mL的样品的DMF溶液并通过GC分析。如果反应未完成，则计算并加入所必需量的TIPS-Cl，再继续搅拌20小时。
当反应完成时，加入甲醇(50mL)并在20-25℃下搅拌混合物1/2-1小时。加入水(1.2kg)并将混合物的温度调节至15-25℃。通过小心加入36％盐酸(491g，4.7mol)将pH调节至pH 2.0-2.5。加入甲苯(0.9kg)并分离各相。使用5％氯化钠水溶液(1kg)洗涤有机相两次，使用甲苯(0.9kg)洗涤水相。合并有机相并使用硫酸钠(150g)干燥最少1小时。在由硅胶60(210g)和甲苯制备的柱上过滤悬浮液，并用甲苯(1.1kg)洗涤柱。在减压下在50℃下将合并的滤液浓缩至干，得到标题化合物(1338g，84.4％，来自粗2a)。纯度(GC)：93.9％。
步骤c)(3S,4R,5R)-3-氟-4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)-5-(((三异丙基甲硅烷 基)氧基)甲基)-二氢呋喃-2(3H)-酮(28c)
在氩气下将化合物28b(450.0g，1.01mol)和NFSI(348.0g，1.10mol)溶于Me-THF(2.2L)。将溶液冷却至-75℃以下并在3-4小时期间内加入双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂(20.2％的THF溶液，1.190kg，1.42当量)。通过GC监测反应进程，并且当认为完成时，加入甲基硫醚(6g，0.1mol)以淬灭残余的NFSI，并继续搅拌20-30分钟。
将反应混合物转移至12.5％氯化铵水溶液(1.7kg)中并将混合物升温至室温。分离水层(水溶液1)并使用纯净水(1L)洗涤有机相。分离水洗液(水溶液2)并得到有机相。使用庚烷(0.6kg)洗涤水溶液1。分离水相然后丢弃。将水溶液2加至有机相并搅拌所述混合物1分钟。分离水相然后丢弃。合并两份有机相并在50℃下减压浓缩。将庚烷(0.7kg)加至残留物，并过滤得到的悬浮液。使用庚烷(0.2kg)洗涤滤饼，在50℃下减压浓缩合并的滤液，得到506g粗产物。将粗产物溶于庚烷和甲苯的混合物(0.5L，3:1)中并通过硅胶柱色谱纯化(硅胶60，2.5kg和庚烷/甲苯3:1v/v)。使用庚烷/甲苯(3:1，5.0L)、庚烷/甲苯(2:1，2.5L)、庚烷/甲苯(3:1，2.5L)和甲苯(7.5L)洗脱柱。收集～1L的级分，合并包含纯化合物2c的级分并浓缩，合并包含化合物2c和二-氟化合物的混合物的级分并再纯化。
以450g和525g的化合物2b起始，重复以上过程两次。标题化合物的总产率为877.1g(59.2％)+来自再加工材料的104.1g(7.0％)。纯度(GC)：92.4％。
步骤d)(3S,4R,5R)-3-氯-3-氟-4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)-5-(((三异丙基甲 硅烷基)氧基)甲基)-二氢呋喃-2(3H)-酮(28d)
在氩气下在～20℃下在THF(2.0L)中搅拌化合物28c(400.0g，0.86mol)和NCS(138.0g，1.04mol，1.2当量)。将悬浮液冷却至-70℃以下，然后在1-1.5小时期间内加入双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂(20.2％的THF溶液，1.150kg，1.6当量)。通过GC监测反应，并且当认为完成时，将混合物转移到12.5％的氯化铵水溶液(1.5kg)中。将混合物升温至室温。停止搅拌并且分离水层，使用庚烷(0.8L)洗涤，然后丢弃。
将母有机相在55℃下减压浓缩至干，然后加到庚烷洗液。使用5％氯化钠水溶液洗涤如此合并的有机相。分离各相并使用庚烷(0.2L)洗涤水相，然后丢弃。减压浓缩有机相，得到440g粗产物。
以426.5g化合物2c开始重复该过程，得到473g粗产物。
将合并的粗产物溶于庚烷和甲苯的混合物(1.0L，2:1)中，并在由硅胶60(2.25kg)和庚烷/甲苯2:1v/v制备的硅胶柱上纯化。使用庚烷/甲苯(2:1，15L)洗脱柱。收集～1L级分，合并化合物2d的纯级分，并减压浓缩，得到标题化合物(667.3g，75.1％)。
步骤e)(3S,4R,5R)-3-氯-3-氟-4-羟基-5-(羟基甲基)二氢呋喃-2(3H)-酮(28e)
将化合物28d(613.0g，1.11mol)加到充有氮气和甲醇(1.2L)的3L玻璃反应器。向搅拌的乳液加入37％盐酸(368.0g，3.73mol，3.4当量)并将混合物加热至温和回流(73℃)。将混合物保持回流20小时，然后冷却至15-20℃，并使用庚烷(4×600ml)萃取。使用80-90℃的水浴，将残留的甲醇溶液减压浓缩至干，最后为p<35毫巴。加入二氧六环(600ml)并如上所述再次蒸馏，得到标题化合物(200.7g，98％)。
步骤f4-甲基苯甲酸(2R,3R,4S)-4-氯-4-氟-2-(((4-甲基苯甲酰基)氧基)甲基)- 5-氧代四氢呋喃-3-基酯(28f)
在水浴上将充有氮气并配备机械搅拌器、温度计和加料漏斗的3L玻璃反应器中的化合物28e(200.7g，1.11mol)的二氧六环(1.4L)溶液加热至40至45℃。加入对甲苯酰氯(360.5g，2.33mol，2.1当量)，然后在35分钟内加入三乙胺(258.3g，2.55mol，2.3当量)，以保持反应温度在70℃以下。然后在65℃下搅拌得到的悬浮液2小时，然后冷却至15℃并过滤。使用二氧六环(800ml，15℃)洗涤800ml滤饼，留下白色滤饼，将其丢弃。使用65℃的水浴，在减压下，最后在35毫巴下浓缩滤液。将2-丙醇(1.50L)加到残留的油状物(510g)，以使溶液的温度保持在40-45℃下。对溶液引晶并小心地使之冷却至室温。在冷却过程中，取0.25ml样品并与0.25ml水混合用于pH测量。加入三乙胺(15g)直到获得2.5-3.5的pH。一旦达到室温(1小时)，将晶体悬浮液冷却至10±1℃并保持在该温度下15小时。通过过滤分离标题产物，使用2-丙醇(600ml，5-10℃)洗涤，然后在通风烘箱中在30-50℃下干燥。产率：374.2g，80％。纯度(HPLC)：99.4％。熔点：88.0-89.5℃(1℃/min)晶型改变，然后在97-98℃熔化。
步骤g)4-甲基苯甲酸(2R,3R,4S)-4-氯-4-氟-5-羟基-2-(((4-甲基苯甲酰基)氧 基)甲基)-四氢呋喃-3-基酯(28g)
向配备有机械搅拌器、温度计和加料漏斗的3L反应烧瓶充入氮气。向烧瓶装入乙酸乙酯(1000g)并冷却至10℃。加入三叔丁氧基氢化铝锂(30％THF溶液，35g，0.05当量)。继续在10℃下搅拌5-10分钟，然后加入化合物28f(370.0g，0.88mol)。
在70分钟的期间内加入另外的三叔丁氧基氢化铝锂(30％THF溶液，933.8g，1.10mol，1.25当量)，同时使反应温度保持在10℃下。通过将反应混合物倒在淬灭混合物(1.45kg(10％NaCl-10％NH4Cl的3M HCl溶液))上来淬灭反应，使温度保持在10-15℃。将得到的悬浮液升温至20-25℃。分离水相并丢弃，使用酸水(1.0L+10mL的3M HCl)洗涤有机相，接着使用25％氯化钠(250mL)洗涤。最后在p<35毫巴和45℃下将有机相浓缩至干。将残留物再溶于甲苯(0.45kg)并再次在p<35毫巴和45℃下浓缩溶液，得到标题化合物，为包含少量固体氯化钠的油状物(412.6g，111％)。纯度(HPLC)97.5％。
步骤h)4-甲基苯甲酸(2R,3R,4S)-4,5-二氯-4-氟-2-(((4-甲基苯甲酰基)氧基) 甲基)四氢呋喃-3-基酯(28h)
向配备有机械搅拌、温度测量和冷凝器的2000mL反应烧瓶充入氮气并装入甲苯(740mL)、化合物28g(411.5g，0.88mol)和亚硫酰氯(174.0g，1.46mol，1.66当量)。将反应烧瓶置于水浴上，预热至50℃并加入DMF(0.50mL)。将冷凝器的顶端连接到冷却的洗涤器(700g的27.65％氢氧化钠)并施加稳定的氮气流。反应在加入DMF之后立即开始，接着进行HPLC。约三小时后，气体逸出减少，并将温度升高至60-65℃。在60-65℃下再继续加热4.5小时，之后亚硫酸酯消失。使用60-65℃的水浴减压蒸除溶剂和残留的亚硫酰氯(500mL)。将甲苯(650mL)加到残留的油状物并将混合物冷却至5℃。加入水(650mL)并在10℃以下的温度下通过加入3M氢氧化钠(40mL)将pH调节至2.0-3.0。将温度调节至20-22℃并分离水相。使用25％氯化钠(250mL)洗涤有机相。使用甲苯(250mL)反洗水相。使用硫酸镁(25g)干燥合并的有机相并过滤。蒸发溶剂(最后在p<35毫巴和60℃下)得到标题化合物，为浅棕色油状物(378.5g，97％产率)。将氯苯(200g)加到残留物，并使用以上条件浓缩混合物。再次将残留物溶于氯苯(200.0g)并浓缩所述混合物。
步骤i)4-甲基苯甲酸(2R,3R,4S,5R)-5-(4-苯甲酰胺基-2-氧代-3,4-二氢嘧啶-1 (2H)-基)-4-氯-4-氟-2-(((4-甲基苯甲酰基)氧基)甲基)四氢呋喃-3-基酯(28i)
向500mL圆底烧瓶装入N-苯甲酰基胞嘧啶(36.6g，170mmol，1.5当量)、氯苯(165g，150mL)和硫酸铵(0.45g，3.4mmol，0.03当量)，向该悬浮液加入HMDS(29.3g，181.3mmol，1.6当量)。将悬浮液加热至回流。当反应混合物变成澄清溶液时，再回流1h并随后通过在60℃下在真空中蒸馏浓缩(馏出物：150mL)。将氯苯(125mL)加入残留物。
通过真空蒸馏从氯苯除去化合物28h(50g，113.3mmol)中的残留甲苯。将来自该共蒸发的残留物溶于1,2-二氯乙烷(200mL)，并将该溶液装入甲硅烷基化的核苷的氯苯溶液。加入氯化锡(IV)(59.0g，226.6mmol，2当量)，并在氮气下将混合物加热至回流。在回流下搅拌反应混合物65h。将反应混合物冷却至5℃，并加入乙酸乙酯(99.8g，10当量)，同时将温度保持在10-12℃。混合物的总重量：601.7g。将该混合物的四分之一(150.4g，理论上为28.3mmol)装入250mL三颈圆底烧瓶，冷却至5℃，并将二氯甲烷(147.5g，EtOAc的4倍体积)与硅藻土(6.25g)一起加入。以使温度保持在5-12℃的速率，将温(约60℃)的50％NaOH溶液(17.6g，7.76当量)加入混合物。在10℃下搅拌混合物20min，然后将温度调节至25℃并在该温度下搅拌混合物30min。在硅藻土垫(12.5g)上过滤悬浮液，并使用二氯甲烷(190mL)洗涤滤饼。通过在60℃下真空蒸馏将合并的滤液和洗液浓缩至干。将二氯甲烷(86mL)加到残留物，然后加入甲苯(62mL)。通过在50℃下真空蒸馏去除包含的二氯甲烷。在室温下搅拌得到的悬浮液17h，然后通过过滤分离粗的标题化合物。使用甲苯(25mL)洗涤滤饼并在40℃下在通风干燥器中干燥湿产物，得到标题化合物，为固体(5.56g，31.7％)。
步骤j)4-甲基苯甲酸(2R,3R,4S,5R)-4-氯-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1 (2H)-基)-4-氟-2-(((4-甲基苯甲酰基)氧基)甲基)四氢呋喃-3-基酯(28j)
将化合物28i(15.2g，24.5mmol)悬浮在65％AcOH/水(152mL，v/v)中，并且将悬浮液加热回流20h。使反应混合物冷却至室温，然后加入水(53mL)，并在室温下搅拌混合物1.5h。过滤悬浮液并用水(2x 25mL)洗涤滤饼。在通风干燥器中在40℃下干燥湿滤饼20h，得到标题化合物，为固体(10.8g，85％)。
步骤k)1-((2R,3S,4R,5R)-3-氯-3-氟-4-羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)嘧 啶-2,4(1H,3H)-二酮(28k)
将化合物28j(8.0g，15.5mmol)悬浮于MeOH(80mL)中，加入正丙胺(9.1g，154.8mmol，10当量)，将混合物加热至30℃并在该温度下搅拌24h。通过在40℃下真空蒸馏去除溶剂。将残留物分散于水(20mL)中，使用DCM(3x 40mL)洗涤水相，并用水(5mL)洗涤合并的有机相。合并两份水相，并用3M HCl(约7mL)将pH调节至1.0。使用Me-THF(4x40mL)萃取酸性水相，并通过在40℃下真空蒸馏将合并的有机相浓缩至干。将乙酸异丙酯(80mL)加到残留物，并在60℃下在真空中浓缩浑浊的混合物。加入乙酸异丙酯(40mL)并继续真空蒸馏。将乙酸异丙酯(10mL)加到得到的粘稠悬浮液。将悬浮液冷却至室温并搅拌30min。通过过滤收集粗标题化合物，并使用乙酸异丙酯(2x4mL)洗涤滤饼。将得到的粗品溶于Me-THF(35mL)中，加入乙酸异丙酯(70mL)并通过在60℃下真空蒸馏浓缩混合物(馏出物：70mL)。加入另外的乙酸异丙酯(30mL)，并继续蒸馏(馏出物：30mL)。将悬浮液冷却至室温，搅拌45min然后过滤。使用乙酸异丙酯(2x4mL)洗涤滤饼，然后在室温下真空干燥。分离标题化合物，产率为70％(3.0g)。纯度(HPLC)98.5％。
步骤l)(S)-2-(((S)-(((2R,3R,4S,5R)-4-氯-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1 (2H)-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯(28)
将THF(0.07％水，12mL)加入化合物28k(500mg，1.78mmol)，并在氮气下将溶液冷却至-10℃。在-10℃下通过注射器在20min内加入在THF中的20％wt的叔丁基氯化镁(2.20g，3.74mmol，2.1当量)。用500μL THF冲洗注射器，并将冲洗液加至反应混合物。在-10℃下搅拌形成的悬浮液40min。在-10℃下在87min的时间内用注射器添加(S)-2(((S)(全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-氨基)丙酸异丙酯(1.01g，2.23mmol，1.25当量)在THF(10mL)和DMPU(2.0mL，16.9mmol，9.5当量)中的溶液，之后再在-10℃下搅拌反应混合物22h。通过加入1M HCl(4.6mL，2.6当量)淬灭反应，同时将温度保持在5℃以下。加入甲苯(20mL)，将混合物加热到25℃，并在该温度下搅拌5min。分离各相并用甲苯/THF(1:1，10mL)萃取水相。用1MHCl(2x 10mL)和5％Na2CO3(2x 10mL)洗涤有机相。用甲苯(1x 10mL)和甲苯/THF(1:1，2x10mL)萃取合并的碱性水相，并使用25％NaCl(15mL)洗涤合并的有机相。然后合并所有有机相，并在60℃下在真空中通过蒸馏去除溶剂。将2-丙醇(20mL)和正庚烷(30mL)加至残留物，并将悬浮液冷却至5℃过夜。过滤悬浮液并通过在50℃真空下蒸馏浓缩滤液。在泵上干燥残留物3h，得到题述化合物，为泡沫状物(874mg，89％)。粗品纯度(HPLC)为91.8％。
获得的在实施例28中制备的化合物28的NMR光谱与在实施例2中制备的化合物2的光谱数据一致。
生物学实施例
复制子分析
可以在细胞分析中检查式(I)的化合物对HCV RNA复制的抑制的活性，所述细胞分析目的在于确定抑制HCV功能性细胞复制细胞系，也被称为HCV复制子的化合物。适合的细胞分析基于双顺反子表达构建体，如Lohmann等人(1999),Science vol.285pp.110-113所述，具有如Krieger等人(2001),Journal of Virology 75:4614-4624所描述的修改，属于多靶点筛选策略。
该分析使用稳定转染的细胞系Huh-7luc/neo(下文称为Huh-Luc)。该细胞系包含(harbors)编码双顺反子表达构建体的RNA，所述构建体包括由来自脑心肌炎病毒(EMCV)的内部核糖体进入位点(IRES)翻译的HCV1b型的野生型NS3-NS5B区域，前面是报告基因部分(FfL-荧光素酶)和选择标记基因部分(neoR，新霉素磷酸转移酶)。构建体与来自HCV 1b型的5’和3’NTR(非翻译区域)邻接。在G418(neoR)存在下复制子细胞的连续培养取决于HCVRNA的复制。表达HCV RNA的稳定转染的复制子细胞自动复制并以高水平编码尤其是编码荧光素酶，被用于筛选抗病毒化合物。
在以不同浓度添加的测试和对照化合物的存在下，将复制子细胞铺板于384孔板中。在孵育三天后，通过分析荧光素酶活性(使用标准荧光素酶分析底物和试剂和PerkinElmer ViewLuxTM ultraHTS微板成像仪)测量HCV复制。在对照培养物中的复制子细胞在缺乏任何抑制剂的情况下具有高荧光素表达。在Huh-Luc细胞上监测化合物对荧光素酶活性的抑制活性，得到每种测试化合物的剂量-响应曲线。然后计算EC50值，该值表示使检测的荧光素酶活性的水平降低50％所需的化合物的量，或更具体地，复制遗传相关的HCV复制子RNA的能力。
酶分析
如复制子分析中可以证实的，本发明的化合物通过靶组织中的细胞激酶代谢成5'-三磷酸酯。该三磷酸酯被认为是抗病毒活性物质。此处描述的酶分析可以用于证实本发明的化合物与5'-三磷酸酯代谢物一样具有抗病毒活性。
酶分析测量三磷酸酯化合物在HCV NS5B-21(21-氨基酸C-末端截短版本)SPA分析(闪烁迫近分析)中的抑制作用。该分析通过评价放射性标记的ATP的量进行，所述放射性标记的ATP使用异源生物素化的RNA模板通过HCV NS5B-21掺入新合成的RNA中。
为了测定IC50值，在不同浓度下在终体积为100μl的反应混合物中测试化合物。通过添加0.5M EDTA溶液停止反应。
将样品转移到预涂覆链霉亲和素的闪板中。使用闪烁计数器(Wallac MicrobetaTrilux)定量掺入的放射性活度。
材料和供应商
涂覆链霉亲和素的闪板 PerkinElmer Life Sciences
96孔聚丙烯板 Corning
生物素化的RNA模板：具有序列 Medprobe
5′-UUU UUU UUU UAG UCA GUC
GGC CCG GUU UUC CGG GCC-3’并在
5′-引物末端生物素化，在10mM
Tris-HCl，100mM NaCl，pH＝8.0中配制
成83μM
酶：HCV NS5B-21，在水中配制成 Replizyme
500μg/ml
核苷酸：GTP、CTP、UTP Invitrogen
放射性标记的3H-ATP(目录号TRK747) GE Healthcare
0.5M EDTA，pH＝8.0 Life Technologies
Tris-HCl Sigma
MnCl2 Sigma
乙酸铵 Sigma
DTT(二硫苏糖醇) Sigma
CHAPS Sigma
RNase Out(目录号10777-019) Invitrogen
DMSO Carlo Erba Reactifs–SDS
设备
Wallac Microbeta Trilux Perkin Elmer Life Sciences
方法
分析条件
分析应包括酶对照(约四种，包含1μl DMSO代替抑制剂)和包含除模板以外的所有成分的背景对照。
在分开的稀释板上在DMSO中连续稀释化合物到100×最终希望的分析浓度。
根据下表针对孔的数量制备足够的反应混合物，并以90μl/孔添加到96孔聚丙烯板。除了在酶对照孔和背景对照孔中添加1μl DMSO，将来自稀释板的DMSO中的1μl化合物添加到每个孔。
反应混合物
组分 μl/孔
50mM tris-HCl pH＝7.5 40
1M乙酸铵 10
1M MnCl2 0.25
0.5M DTT 2
100mM CHAPS 2
RNase Out 0.2
1mM GTP 5
200μM CTP+UTP 2
NS5B-21 500μg/ml 0.4
模板：RNA-H3，83μM 0.1
模板缓冲液：10mM tris-HCl，100mM NaCl pH＝8.0 28.25
制备包含1.5μl/孔的3H-ATP(45Ci/mmol)、2.0μl/孔的100μM ATP和6.5μl/孔的H2O的ATP混合物，并通过添加10μl/孔的该混合物开始反应。
在22℃下孵育120min。
通过添加100μl/孔的0.5M EDTA，pH＝8.0停止反应。
以185μl/孔转移至链霉亲和素闪板。
孵育板过夜并使用闪板H3方案在Microbeta Trilux中读取闪板。
结果的处理
计算抑制：
背景＝没有模板的反应缓冲液
使用Graphpad Prism确定IC50。绘制化合物浓度的对数与百分比抑制曲线。使用非线性回归将曲线拟合成Log(抑制剂)相对于响应的公式。
其中Y为抑制％，X为log(抑制剂)，顶部和底部是抑制％的上限和下限。
生物学实施例1
在上述复制子分析中，测试本发明的化合物显示的对HCV复制的抑制。化合物显示亚微摩尔活性，在Huh-Luc细胞系中的细胞毒性超过50μM。EC50值显示在表1中。
表1
实施例 EC50(μM)
1 >50
2 0.055
生物学实施例2
在上述酶分析中测试实施例3的核苷酸，并且IC50值确定为0.72μM。
生物学实施例3
复制子分析
可以在细胞分析中检查本发明的组合物对HCV RNA复制的抑制的活性，所述细胞分析目的在于确定抑制HCV功能性细胞复制细胞系，也被称为HCV复制子的化合物。适合的细胞分析基于双顺反子表达构建体，如Lohmann等人(1999),Science vol.285pp.110-113所述，具有如Krieger等人(2001),Journal of Virology 75:4614-4624所描述的修改，属于多靶点筛选策略。
该分析使用稳定转染的细胞系Huh-7 luc/neo(下文称为Huh-Luc)。该细胞系包含(harbors)编码双顺反子表达构建体的RNA，所述构建体包括由来自脑心肌炎病毒(EMCV)的内部核糖体进入位点(IRES)翻译的HCV1b型的野生型NS3-NS5B区域，前面是报告基因部分(FfL-荧光素酶)和选择标记基因部分(neoR，新霉素磷酸转移酶)。构建体与来自HCV 1b型的5’和3’NTR(非翻译区域)邻接。在G418(neoR)存在下复制子细胞的连续培养取决于HCVRNA的复制。表达HCV RNA的稳定转染的复制子细胞自动复制并以高水平编码尤其是编码荧光素酶，被用于筛选抗病毒化合物。
在以不同浓度添加的测试和对照化合物的存在下，将复制子细胞铺板于384孔板中。在孵育三天后，通过分析荧光素酶活性(使用标准荧光素酶分析底物和试剂和PerkinElmer ViewLuxTM ultraHTS微板成像仪)测量HCV复制。在对照培养物中的复制子细胞在缺乏任何抑制剂的情况下具有高荧光素表达。在Huh-Luc细胞上监测化合物对荧光素酶活性的抑制活性，得到每种测试化合物的剂量-响应曲线。然后计算EC50值，该值表示使检测的荧光素酶活性的水平降低50％所需的化合物的量，或更具体地，复制遗传相关的HCV复制子RNA的能力。
化合物1A显示0.055μM的EC50值(n>10)，其中Huh-Luc细胞系中的细胞毒性超过50μM。
上述复制子分析可以进一步用于使用CI等效线法评估HCV抗病毒剂对彼此的协同、累加或拮抗作用，所述CI等效线法提供药物之间的协同作用的定量评估。CI由单一和组合药物治疗的剂量效应数据估算。小于1的CI值表示协同作用；CI＝1表示累加作用；以及CI>1表示拮抗作用。CI值距离1越远，药物相互作用(协同作用或拮抗作用)越明显。正式地，组合药物治疗的组合指数(CI)定义为：
CI＝D1/Dx1+D2/Dx2
此处D1和D2分别是组合中的药物1和药物2的剂量；Dx1和Dx2各自是仅采用药物1和药物2分别得到与组合的效果相同的效果的治疗剂量。剂量Dx1和Dx2需要从单一药物治疗的剂量-效应数据估算。在实践中，评估的两种药物在孔板的不同轴线上以连续稀释系列提供-参见附图1。使用市售的计算机软件如MacSynergy计算和Bonferroni调整协同体积。
从上表可以看出，化合物1A显示与各种机制类型的直接作用的和宿主作用的抗病毒剂的抗病毒协同作用。
比较例1
索非布韦在几个国家销售用于治疗HCV，主要针对基因型1和4。索非布韦的结构为：
如所见的，索非布韦与本实施例2的化合物不同之处在于其在2’-位具有β-甲基，而本发明的化合物在该位置具有β-氯取代基。在Lawitz等人,N.Eng.J.Med.,2013；368:1878-87报导的分裂增殖期III临床试验中，“索非布韦–利巴韦林组中的响应速率在具有基因型3感染的患者中比在具有基因型2感染的患者中更低(56％相对于97％)”。
在Kylefjord等人，J Virol.Methods 2014 195:156-63中描述的基因型3a瞬态复制子分析中，比较市售索非布韦和实施例2的化合物的抗病毒活性。
索非布韦针对基因型3a的EC50为0.230μM+/-0.067，n＝11，相比之下实施例2的化合物的EC50为0.072μM+/-0.024，n＝9。本发明的化合物相对于索非布韦好三倍的效力预期显著提高临床的病毒响应率。
本发明的化合物相对于索非布韦的效力的数倍提高在具有麻烦的S282T突变(赋予对HCV核苷美西他滨(mericitabine)的抗性)的基因型3a的瞬态复制子中保持，其中索非布韦具有0.48μM(n＝1)的EC50并且实施例2的化合物具有0.13μM(n＝1)的EC50。类似地，如以上在Kylefjord等人(出处同上)中描述的，在基因型3a瞬态复制子中制备通过暴露于核苷美西他滨并赋予对索非布韦的交叉耐药性生成的L159F/L320F双突变体(Tong等人2013J.Infect.Dis.,209(5),668-75)。在该双突变体中，索非布韦具有0.190(n＝1)的EC50，而实施例2的化合物显示0.062(n＝1)的EC50。
进一步评价实施例2的化合物以评估针对HCV基因型1-6，野生型和许多临床上相关的突变株两者的抗病毒活性。评价的结果以及基因型的平均EC50和针对索非布韦的相应的值在表2和3中总结。
表2
除了AVG，EC50数据(均以μM计)作为几何平均数提供，在AVG中，EC50作为算术平均数+/-SEM提供。
*在con1背景中包含所述GT NS5B基因的嵌合体复制子。
参考文献：Con1(Lohmann等人2003)；H77(Blight等人2003)；GT2a(Wakita等人2005)；GT3a(Kylefjord等人2013)；GT4-6(Wong等人2012)；L159F/L320F(Tong等人2013)。
表3
除了AVG，EC50数据(均以μM计)作为几何平均数提供，在AVG中，EC50作为算术平均数+/-SEM提供。
*在con1背景中包含所述GT NS5B基因的嵌合体复制子。
参考文献：Con1(Lohmann等人2003)；H77(Blight等人2003)；GT2a(Wakita等人2005)；GT3a(Kylefjord等人2013)；GT4-6(Wong等人2012)；L159F/L320F(Tong等人2013)。
从这两个表显而易见的是，本实施例2的化合物与索非布韦相比，具有针对在野生型菌株和两个临床相关突变株中的HCV GT3a的显著改进的效力，同时保持针对其他基因型的良好效力。
将本文提及的所有文献，包括专利和专利申请的全部内容通过引用并入。

Claims (7)

1.式(1A)表示的化合物
或其药学上可接受的盐在哺乳动物或人的HCV的治疗中的用途，其中所述式(1A)的化合物与选自以下的另外的HCV抗病毒剂组合给予：
a)阿那匹韦、达卡他韦和/或贝卡布韦；或
b)司美匹韦和/或JNJ56914845；或
c)选自帕利瑞韦或ABT493的HCV蛋白酶抑制剂，和选自奥比他韦或ABT-530的NS5A抑制剂；或
d)阿拉泊韦；或
e)EDP-239；或
f)奥达拉韦和/或索瓦普韦；或
g)格佐普韦和/或依巴司韦。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述HCV为基因型1a或1b。
3.式(1A)表示的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗或预防丙型肝炎基因型2a、3a、4a、5a或6a病毒感染
4.根据权利要求3所述的用途，其中所述丙型肝炎病毒感染为基因型3a。
5.式(1A)表示的非对映异构化合物
或其药学上可接受的盐。
6.一种药物组合物，其包含式(I)的化合物连同药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体，其用于治疗或预防丙型肝炎基因型2a、3a、4a、5a或6a病毒感染。
7.根据权利要求21所述的组合物，其中所述丙型肝炎病毒感染为基因型3a。
CN201680025360.4A 2015-03-02 2016-03-02 作为用于治疗丙型肝炎的hcv抑制剂的核苷酸衍生物 Pending CN107531739A (zh)

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