EA028433B1 - Антитело, связывающееся с вирусами гриппа b и его применение - Google Patents

Антитело, связывающееся с вирусами гриппа b и его применение Download PDF

Info

Publication number
EA028433B1
EA028433B1 EA201491656A EA201491656A EA028433B1 EA 028433 B1 EA028433 B1 EA 028433B1 EA 201491656 A EA201491656 A EA 201491656A EA 201491656 A EA201491656 A EA 201491656A EA 028433 B1 EA028433 B1 EA 028433B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
influenza
amino acid
acid sequence
binding
virus
Prior art date
Application number
EA201491656A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201491656A1 (ru
Inventor
Теодорус Хендрикус Якобус Квакс
Роналд Вогелс
Original Assignee
Янссен Вэксинс Энд Превеншн Б.В.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Янссен Вэксинс Энд Превеншн Б.В. filed Critical Янссен Вэксинс Энд Превеншн Б.В.
Publication of EA201491656A1 publication Critical patent/EA201491656A1/ru
Publication of EA028433B1 publication Critical patent/EA028433B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1018—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/42—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum viral
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6839—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting material from viruses
    • A61K47/6841—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting material from viruses the antibody targeting a RNA virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/11—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)

Abstract

Изобретение относится к антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, таким как моноклональные антитела человека, которые связываются с гемагглютинином вирусов гриппа B и обладают широкой нейтрализующей активностью в отношении таких вирусов гриппа. Эти антитела или их антигенсвязывающие фрагменты не связываются с гемагглютинином вирусов гриппа A. Изобретение также относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, и композициям, содержащим антитела или их антигенсвязывающие фрагменты. Эти антитела или их антигенсвязывающие фрагменты можно использовать в диагностике, профилактике и/или лечении заболевания, вызванного вирусами гриппа B.

Description

Настоящее изобретение относится к медицине. В частности, настоящее изобретение относится к связывающим молекулам человека, например моноклональным антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, способным связываться с вирусами гриппа В и нейтрализовать их, в частности нейтрализующим связывающим молекулам, которые связывают и нейтрализуют вирусы гриппа В как из линии В/Уатада1а, так и/или из линии В/Ую1опа. Кроме того, настоящее изобретение относится к диагностике, профилактике и/или лечению инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа В, в частности инфекционных заболеваний, вызванных вирусами гриппа В из линий В/Уатада1а и В/УюЮпа.
Предпосылки изобретения
Инфекционное заболевание грипп (также называемое грипп или инфлюэнца) является одним из наиболее распространенных заболеваний у людей, которое обуславливает по всему миру от трех до пяти миллионов случаев тяжелого заболевания и от 250000 до 500000 смертельных случаев в год. Грипп быстро распространяется во время сезонных эпидемий, поражая 5-15% населения, с очень существенной нагрузкой по затратам на здравоохранение и снижением производительности труда (Всемирная организация здравоохранения (АНО)). Существует 3 типа вируса гриппа (типы А, В и С), ответственных за развитие инфекционных патологий у людей и животных. В настоящее время вирусы типа А и типа В являются агентами, ответственными за эпидемии и пандемии гриппа, наблюдаемые у людей.
Существующие в настоящее время подходы для решения проблем, связанных с ежегодными эпидемиями гриппа, включают ежегодную вакцинацию, которая предпочтительно дает перекрестную гетеротипичную защиту. Тем не менее, у циркулирующих вирусов гриппа у людей происходят постоянные изменения антигенов, в результате чего необходима ежегодная адаптация состава вакцины против гриппа для обеспечения наибольшего возможного соответствия между штаммами вакцины против гриппа и циркулирующими штаммами гриппа. Альтернативно, для предупреждения или лечения инфекционного заболевания грипп могут быть эффективны противовирусные лекарственные средства, такие как озельтамивир (ТатШи®). Тем не менее, количество штаммов вируса гриппа, демонстрирующих устойчивость к противовирусным лекарственным средствам, таким как озельтамивир, возрастает.
Альтернативным подходом является разработка профилактических или терапевтических средств на основе антител для нейтрализации различных сезонных вирусов гриппа.
Недавно были раскрыты антитела с широкой перекрестной нейтрализацией, распознающие эпитопы в консервативном участке-стебле НА вирусов гриппа А 1-й филогенетической группы (таких как вирусы гриппа, содержащие НА подтипа Н1 или Н5) (например, СК.6261, см. АО 2008/028946), а также антитела с перекрестной нейтрализацией, распознающие высококонсервативный эпитоп в участкестебле НА вирусов гриппа А 2-й филогенетической группы, таких как вирусы гриппа, содержащие НА подтипов Н3 и/или Н7 (например, СК8020, СК8043; см. АО 2010/130636). Совсем недавно были обнаружены антитела, которые могут связывать и нейтрализовать вирусы гриппа А как 1-й, так и 2-й филогенетической группы, а также вирусы гриппа В (например, СК9114, описанное в заявке № ЕР11173953.8).
На сегодняшний день меньше всего уделяют внимания вирусам гриппа В. Это может быть связано с тем фактом, что, поскольку они ограничены людьми в качестве хозяев, у вирусов гриппа В отсутствуют большие животные резервуары, которые важны для возникновения пандемических штаммов вируса гриппа А. Тем не менее, совокупное влияние ежегодных эпидемий во время периодов между пандемиями превышает влияние пандемий, и хотя показатели заболеваемости и смертности, связанные с гриппом В, ниже показателей, например, вирусов Η3Ν2, они выше, чем показатели у вирусов Η1Ν1 (ТЬотркоп (2003), ТПотрзои (2004)).
Эволюция вирусов гриппа В характеризуется совместной циркуляцией в течение продолжительных периодов времени различающихся по антигенам и в генетическом плане линий. В настоящее время различают две линии, представляемые вирусами-прототипами В/У1с1от1а/2/87 (линия У1с1от1а) и В/Уатада1а/16/88 (линия Уатада1а) (Капедае (1990), Ко1а (1990)). В/Уатада1а была основной линией, циркулирующей до 198 0-х, когда появились вирусы линии В/Ую1опа. С тех пор в мировом масштабе совместно циркулируют дрейфующие варианты обеих линий гриппа В, причем в последних сезонах гриппа совместно циркулируют обе линии.
С учетом того факта, что вирусы гриппа В являются основной причиной сезонных эпидемий гриппа каждые 2-4 года, и принимая во внимание тяжесть респираторных заболеваний, вызванных некоторыми вирусами гриппа В, а также сильное экономическое влияние сезонных эпидемий, существует постоянная потребность в альтернативных и эффективных средствах предупреждения и лечения подтипов гриппа В. Таким образом, существует потребность в связывающих молекулах, предпочтительно связывающих молекулах человека с широкой нейтрализующей способностью, способных к перекрестной нейтрализации вирусов гриппа В.
- 1 028433
Краткое описание изобретения
Настоящее изобретение относится к антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, в частности к человеческому антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, способным специфично связываться со штаммами линий как В/УашадаЮ. так и Β/νίοΙοΓία вируса гриппа В и нейтрализовать их. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент не связываются с подтипами вируса гриппа А.
Настоящее изобретение относится к иммуноконъюгатам и/или фармацевтическим композициям. содержащим антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. а также к молекулам нуклеиновой кислоты. кодирующим. по меньшей мере. связывающий участок антитела человека или его антигенсвязывающего фрагмента.
Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. иммуноконъюгаты и/или молекулы нуклеиновых кислот по настоящему изобретению подходят для применения в качестве универсального профилактического. диагностического и/или лечебного средства от вирусов гриппа В. независимо от вызывающего заболевания подтипа вируса гриппа В.
Описание фигур
Фиг. 1 представляет собой схематическую карту эпитопа на основе экспериментов по конкуренции. Антитела к гриппу В. представленные согласно настоящему изобретению. распределяют на 4 группы по связыванию/конкуренции с НА гриппа В.
На фиг. 2 показаны результаты иммунофлуоресцентного анализа входа. предназначенного для анализа способности связывающих молекул блокировать связывание с рецептором и интернализацию вируса гриппа. А. Ингибирование входа вируса по результатам считывания иммунофлуоресценции; В. Инфицирование МИСК-клеток В/Р1опба/04/2006.
На фиг. 3 показано ингибирование выхода вируса при помощи связывающей молекулы по настоящему изобретению.
На фиг. 4 показаны результаты сканирующей ЕМ клеток. инфицированных гриппом В.
На фиг. 5 показана ίη νίνο защита с помощью СК8033 от летального инфицирования гриппом В (В/Р1опба/04/2006 и В/Ма1ауз1а/2506/2004) мышей.
Описание изобретения
Ниже даны определения выражений. используемых в настоящем изобретении.
Предусматривается. что после используемого в настоящем описании выражения включенный или включающий следуют слова без ограничения.
Используемое в настоящем описании выражение связывающая молекула относится к интактному иммуноглобулину. в том числе моноклональным антителам. таким как химерные. гуманизированные или человеческие моноклональные антитела. или к антигенсвязывающему и/или вариабельному домену. включая фрагмент иммуноглобулина. который конкурирует с интактным иммуноглобулином за специфичное связывание с партнером по связыванию иммуноглобулина. например. НА. Независимо от структуры антигенсвязывающий фрагмент связывается с тем же антигеном. который распознается интактным иммуноглобулином. Антигенсвязывающий фрагмент может включать пептид или полипептид. содержащий аминокислотную последовательность по меньшей мере из 2. 5. 10. 15. 20. 25. 30. 35. 40. 50. 60. 70. 80. 90. 100. 125. 150. 175. 200 или 250 смежных аминокислотных остатков аминокислотной последовательности связывающей молекулы.
Применяемое в настоящем документе выражение связывающая молекула включает все известные из уровня техники классы и подклассы иммуноглобулина. В зависимости от аминокислотной последовательности константного домена их тяжелых цепей. связывающие молекулы можно разделить на пять основных классов интактных антител: 1дА. ί§Ό. 1дЕ. 1дС и 1дМ. и некоторые из них можно дополнительно разделить на подклассы (изотипы). например 1§А1. 1§А2. ί§Ο1. 1дС2. 1дС3 и 1дС4.
Антигенсвязывающие фрагменты включают. помимо прочего. РаЬ. Р(аЬ'). Р(аЬ')2. Ρν. бАЬ. Рб. фрагменты определяющих комплементарность участков (СИК). одноцепочечные антитела (5θΡν). двухвалентные одноцепочечные антитела. одноцепочечные фаговые антитела. диатела. триатела. тетратела. (поли)пептиды. которые содержат. по меньшей мере. фрагмент иммуноглобулина. который достаточен для придания (поли)пептиду специфичного связывания с антигеном. и т.д. Вышеописанные фрагменты можно получить посредством синтеза или с помощью ферментативного или химического расщепления интактных иммуноглобулинов или же их можно генетически сконструировать с помощью методик с применением рекомбинантных ДНК. Способы получения хорошо известны из уровня техники и описаны. например. в АпйЬоб1ез: А ЬаЬогаФгу Мапиа1. Ебйеб Ьу Е. Наг1оте апб И.. Ьапе (1988). Со1б 8ргтд НагЬог ЬаЬогаФгу. Со1б 8ргш§ НагЬог. №те Уогк. которая включена в настоящий документ с помощью ссылки. Связывающая молекула или ее антигенсвязывающий фрагмент могут иметь один или несколько сайтов связывания. При наличии более одного сайта связывания сайты связывания могут быть идентичны друг другу или они могут различаться.
Связывающая молекула может представлять собой голую или неконъюгированную связывающую молекулу. но также может быть частью иммуноконъюгата. Подразумевают. что голая или неконъюгированная связывающая молекула относится к связывающей молекуле. которая не конъюгирована. функционально не связана или иным образом физически или функционально ассоциирована с эффекторным
- 2 028433 фрагментом или меткой, таким как, помимо прочих, токсичное вещество, радиоактивное вещество, липосома, фермент. Понятно, что голые или неконъюгированные связывающие молекулы не исключают связывающие молекулы, которые были подвергнуты стабилизации, мультимеризации, гуманизации или иной манипуляции, за исключением присоединения эффекторного фрагмента или метки. Соответственно, таким образом включены все модифицированные на посттрансляционном этапе голые и неконъюгированные связывающие молекулы, в том числе если модификации выполнены в окружении природных, продуцирующих связывающие молекулы клеток, с помощью рекомбинантной продуцирующей связывающую молекулу клетки, и введены вручную человеком после получения изначальной связывающей молекулы. Разумеется, выражение голая или неконъюгированная связывающая молекула не исключает возможности связывающей молекулы образовывать функциональные ассоциации с эффекторными клетками и/или молекулами после введения в организм, поскольку некоторые такие взаимосвязи необходимы для проявления биологического эффекта. Отсутствие ассоциированной эффекторной группы или метки, таким образом, применимо к определению голая или неконъюгированная связывающая молекула ίη νίίτο, но не ίη νίνο.
Применяемое в настоящем документе выражение биологический образец охватывает ряд типов образцов, в том числе образцы крови и других жидкостей биологического происхождения, образцы твердых тканей, такие как биоптат или культуры ткани, или полученные от них клетки и их потомство. Выражение также включает образцы, над которыми были каким-либо образом произведены манипуляции после их забора, такие как обработка реагентами, солюбилизация или обогащение определенными компонентами, такими как белки или полинуклеотиды. Выражение охватывает различные типы клинических образцов, полученных от любых видов, а также включает клетки в культуре, клеточные супернатанты или клеточные лизаты.
Применяемое в настоящем документе выражение определяющие комплементарность участки (СОК) означает последовательности в вариабельных участках связывающих молекул, таких как иммуноглобулины, которые обычно вносят большой вклад в сайт связывания с антигеном, который комплементарен по форме и распределению зарядов эпитопу, распознаваемому на антигене. СЭК-участки могут быть специфичны по отношению к линейным эпитопам, эпитопам прерывистого типа или конформационным эпитопам белков или фрагментов белков, либо как присутствующих на белке в их нативной конформации, либо, в некоторых случаях, как присутствующих на белках, которые денатурированы, например, в результате солюбилизации в δΌδ. Эпитопы также могут состоять из посттрансляционных модификаций белков.
Применяемое в настоящем документе выражение делеция обозначает изменение либо аминокислотной, либо нуклеотидной последовательности, в которой один или несколько аминокислотных или нуклеотидных остатков, соответственно, отсутствуют по сравнению с эталонной, зачастую встречающейся в природе, молекулой.
Применяемое в настоящем документе выражение регулирующая экспрессию последовательность нуклеиновой кислоты относится к полинуклеотидным последовательностям, необходимым для экспрессии функционально связанной кодирующей последовательности, и/или затрагивающим такую экспрессию, у конкретного организма-хозяина. Регулирующие экспрессию последовательности нуклеиновой кислоты, такие как, помимо прочих, подходящие последовательности для инициации, окончания транскрипции, промоторные, энхансерные последовательности; репрессорные или активаторные последовательности; эффективные сигналы процессинга РНК, такие как сигналы сплайсинга и полиаденилирования; последовательности, которые стабилизируют цитоплазматическую мРНК; последовательности, которые повышают эффективность трансляции (например, сайты связывания с рибосомами); последовательности, которые повышают стабильность белка; и, при необходимости, последовательности, которые повышают секрецию белка, могут представлять собой любую последовательность нуклеиновой кислоты, проявляющую активность у предпочтительного организма-хозяина, и могут быть получены из генов, кодирующих белки, которые либо гомологичны, либо гетерологичны по отношению к организмухозяину. Выявление и использование регулирующих экспрессию последовательностей не составят труда для специалиста в данной области.
Применяемое в настоящем документе выражение функциональный вариант относится к молекуле нуклеиновой кислоты или связывающей молекуле, которая содержит нуклеотидную и/или аминокислотную последовательность, которая изменена с помощью одного или нескольких нуклеотидов и/или аминокислот при сравнении с нуклеотидной и/или аминокислотной последовательностями эталонной молекулы нуклеиновой кислоты или связывающей молекулы. Функциональный вариант связывающей молекулы по настоящему изобретению может конкурировать за связывание с партнером по связыванию, т. е. вирусом гриппа, с эталонной связывающей молекулой. Другими словами, модификации аминокислотной и/или нуклеотидной последовательности связывающей молекулы существенно не влияет на характеристики связывания и не изменяет их у связывающей молекулы, кодируемой нуклеотидной последовательностью или содержащей аминокислотную последовательность, т.е. связывающая молекула все еще может распознавать и связывать свою мишень. Функциональный вариант может содержать модификации в консервативной последовательности, в том числе нуклеотидные и аминокислотные замены, присоедине- 3 028433 ния и делеции. Эти модификации модно вводить с помощью стандартных методик, известных в данной области, таких как сайт-направленный мутагенез и опосредованный ПЦР мутагенез, и они могут включать естественные, а также неестественные нуклеотиды и аминокислоты.
Консервативные аминокислотные замены включают замены, при которых аминокислотный остаток заменяется аминокислотным остатком с похожими структурными или химическими свойствами. В данной области были обозначены семейства аминокислотных остатков с похожими боковыми цепями. Эти семейства включают аминокислоты с основными боковыми цепями (например, лизин, аргинин, гистидин), кислыми боковыми цепями (например, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота), незаряженными полярными боковыми цепями (например, аспарагин, глутамин, серин, треонин, тирозин, цистеин, триптофан), неполярными боковыми цепями (например, глицин, аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин), бета-разветвленными боковыми цепями (например, треонин, валин, изолейцин) и ароматическими боковыми цепями (например, тирозин, фенилаланин, триптофан). Специалисту в данной области будет понятно, что помимо приведенной выше также можно использовать другие классификации семейств аминокислотных остатков. Кроме того, вариант может содержать неконсервативные аминокислотные замены, например замещение аминокислоты аминокислотным остатком с отличными структурными или химическими свойствами. Похожие незначительные изменения также могут включать аминокислотные делеции или вставки или и те и другие. Руководство по определению того, какие аминокислотные остатки могут быть заменены, вставлены или удалены без утраты иммунологической активности, можно найти с помощью компьютерных программ, хорошо известных в данной области техники.
Мутация нуклеотидной последовательности может представлять собой отдельное изменение, произведенное в локусе (точечная мутация), такое как мутации по типу транзиции или трансверии, или, альтернативно, в отдельном локусе может быть вставлено, удалено или изменено множество нуклеотидов. Кроме того, одно или несколько изменений могут быть произведены в любом количестве локусов в пределах нуклеотидной последовательности. Мутации можно осуществить с помощью любой подходящей методики, известной из уровня техники.
Выражение подтип вируса гриппа в отношении вирусов гриппа А относится к вариантам вируса гриппа А, которые характеризуются различными комбинациями вирусных поверхностных белков гемагглютинин (Н) и нейрамидаза (Ν). Подтипы вируса гриппа А можно называть по их числу Н, как, к примеру, вирус гриппа, содержащий НА подтипа Н1 или Н3 или вирус гриппа Н1, вирус гриппа Н3, или по комбинации числа Н и числа Ν, как, к примеру, подтип 43Ν2 вируса гриппа или Ή3Ν2. Выражение подтип вируса гриппа, в частности, включает все отдельные штаммы вируса гриппа в каждом подтипе, которые обычно получаются в результате мутаций и характеризуются различными патогенетическими профилями. Такие штаммы также можно называть различными изолятами вирусного подтипа. Соответственно, применяемые в настоящем документе выражения штаммы и изоляты можно применять взаимозаменяемо.
Применяемое в настоящем документе в отношении связывающей молекулы по настоящему изобретению выражение нейтрализующая относится к связывающей молекуле, которая подавляет репликацию вируса гриппа ίη νίίτο и/или у субъекта, независимо от механизма, с помощью которого достигается нейтрализация. Таким образом, нейтрализации можно, например, достигнуть путем подавления прикрепления вируса к клеточной поверхности или сцепления с ней, или путем подавления слияния вирусной и клеточной мембран после прикрепления вируса к целевой клетке, или путем подавления выхода вируса из инфицированных клеток и т. п.
Применяемое в настоящем документе в отношении связывающих молекул по настоящему изобретению выражение осуществление перекрестной нейтрализации или перекрестная нейтрализация относится к способности связывающих молекул по настоящему изобретению нейтрализовать вирусы гриппа В как от линии В/Уашада4а, так и от линии В/УюЮпа и/или других штаммов вируса гриппа В в пределах этих линий.
Подразумевают, что применяемое в настоящем документе выражение хозяин относится к организму или клетке, в которую был введен вектор, такой как вектор для клонирования или вектор экспрессии. Организм или клетка могут быть прокариотическими или эукариотическими. Предпочтительно хозяева представляют собой выделенные клетки-хозяева, например клетки-хозяева в культуре. Выражение клетки-хозяева попросту обозначает, что клетки модифицированы в отношении (сверх)экспрессии связывающей молекулы по настоящему изобретению и включают В-клетки, которые изначально экспрессируют такие связывающие молекулы, и при этом эти клетки были модифицированы для сверхэкспрессии связывающей молекулы путем иммортализации, амплификации, усиления экспрессии и т.д. Следует понимать, что выражение хозяин предназначено для обозначения не только конкретного организма- или клетки-субъекта, но также и потомства такого организма или клетки. Поскольку вследствие либо мутации, либо влияний окружающей среды в последующих поколениях могут происходить определенные модификации, фактически такое потомство может не быть идентичным родительскому организму или клетке, но его все еще включают в объем выражения хозяин, применяемого в настоящем документе.
Выражение человеческий применительно к обозначенным в настоящем документе связывающим
- 4 028433 молекулам относится к молекулам, которые либо непосредственно получены от человека, либо в своей основе имеют последовательность зародышевой линии человека. Если связывающая молекула получена или в своей основе имеет человеческую последовательность, а затем модифицирована, согласно настоящему описанию ее все еще следует рассматривать как человеческую. Другими словами, подразумевают, что выражение человеческие применительно к связывающим молекулам включает связывающие молекулы с вариабельными и константными участками, полученными от последовательностей иммуноглобулина зародышевой линии человека или основанными на вариабельных или константных участках, встречающихся у человека или лимфоците человека, и в некоторой форме модифицированными. Таким образом, связывающие молекулы человека могут включать аминокислотные остатки, которые не кодируются последовательностями генов иммуноглобулина зародышевой линии человека, могут содержать замены и/или делеции (например, мутации, введенные при помощи, к примеру, неспецифического или сайтспецифического мутагенеза ίη νίίτο или при помощи соматической мутации ίη νίνο). Применяемое в настоящем документе выражение основанные на относится к ситуации, в которой последовательность нуклеиновой кислоты может быть точно скопирована с матрицы или с незначительными мутациями, как, к примеру, в случае способов ПЦР сниженной точности, или получена искусственно с точным совпадением с матрицей или с незначительными модификациями.
Выражение вставка, также известное как выражение присоединение, обозначает изменение аминокислотной или нуклеотидной последовательности, приводящее к присоединению одного или нескольких соответственно аминокислотных или нуклеотидных остатков по сравнению с исходной последовательностью.
Выражение выделенный применительно к обозначенным в настоящем документе связывающим молекулам относится к связывающим молекулам, среди которых практически отсутствуют другие белки или полипептиды, в частности отсутствуют другие связывающие молекулы с иными антигенными специфичностями, а также практически отсутствуют другой клеточный материал и/или химические вещества. Например, если связывающие молекулы получены рекомбинантно, то среди них предпочтительно практически отсутствуют компоненты культуральной среды, а если связывающие молекулы получены с помощью химического синтеза, то среди них практически отсутствуют химические предшественники или другие химические вещества, т. е. они отделены от химических предшественников или других химических веществ, которые вовлечены в синтез белка. Подразумевают, что выражение выделенные применительно к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим обозначенные в настоящем документе связывающие молекулы, относится к молекулам нуклеиновой кислоты, у которых среди нуклеотидных последовательностей, кодирующих связывающие молекулы, отсутствуют другие нуклеотидные последовательности, в частности нуклеотидные последовательности, кодирующие связывающие молекулы, которые связываются с другими партнерами по связыванию. Кроме того, выражение выделенный относится к молекулам нуклеиновой кислоты, которые практически отделены от других клеточных компонентов, которые в норме сопутствуют нативной молекуле нуклеиновой кислоты в ее природном хозяине, например рибозимы, полимеразы или геномные последовательности, с которыми они в норме связаны. Более того, среди выделенных молекул нуклеиновых кислот, таких как молекулы кДНК, может практически отсутствовать другой клеточный материал или культуральная среда при получении с помощью рекомбинантных методик или могут практически отсутствовать химические предшественники или другие химические вещества при получении с помощью химического синтеза.
Применяемое в настоящем документе выражение моноклональное антитело относится к получению молекул антител с одной специфичностью. Моноклональное антитело характеризуется одной специфичностью и аффинностью связывания в отношении конкретного эпитопа. Соответственно, выражение моноклональное антитело человека относится к антителу, характеризующемуся одной специфичностью связывания, которое имеет вариабельные и константные участки, полученные от последовательностей иммуноглобулина зародышевой линии человека или основанные на них или полученные от полностью искусственных последовательностей. Способ получения моноклонального антитела не относится к вопросу специфичности связывания.
Применяемое в настоящем документе выражение встречающийся в природе применительно к объекту относится к тому факту, что объект или соединение можно обнаружить в природе. Например, встречающейся в природе является полипептидная или полинуклеотидная последовательность, которая присутствует в организме, который может быть выделен из источника в природе и который не был преднамеренно модифицирован человеком в лаборатории.
Применяемое в настоящем изобретении выражение молекула нуклеиновой кислоты относится к полимерной форме нуклеотидов и включает как смысловые, так и антисмысловые цепи РНК, кДНК, геномной ДНК и искусственных форм и смешанных полимеров, указанных выше. Нуклеотид относится к рибонуклеотиду, дезоксинуклеотиду или модифицированной форме любого типа нуклеотида. Выражение также включает одно- и двухцепочечные формы ДНК. Кроме того, полинуклеотид может включать любой из двух типов или оба типа вместе: встречающиеся в природе и модифицированные нуклеотиды, которые связаны друг с другом при помощи встречающихся в природе и/или не встречающихся в природе связей между нуклеотидами. Молекулы нуклеиновых кислот могут быть модифицированы химически
- 5 028433 или биохимически или могут содержать неприродные или дериватизированные нуклеотидные основания, что будет совершенно понятно специалистам в данной области техники. Такие модификации включают, например, метки, метилирование, замену одного или нескольких встречающихся в природе нуклеотидов аналогом, межнуклеотидные модификации, такие как незаряженные связи (например, метилфосфонаты, сложные фосфотриэфиры, фосфорамидаты, карбаматы и т.д.), заряженные связи (например, фосфоротиоаты, фосфородитиоаты и т.д.), выступающие фрагменты (например, полипептиды), интеркаляторы (например, акридин, псорален и т.д.), хелатирующие вещества, алкилирующие вещества и модифицированные связи (например, альфа-аномерные нуклеиновые кислоты и т.д.). Подразумевают, что вышеупомянутое выражение также включает любую топологическую конформацию, в том числе одноцепочечную, двухцепочечную, частично дуплексную, триплексную, шпильковую, кольцевую конформацию и конформацию по типу висячего замка. Также включены искусственные молекулы, которые имитируют полинуклеотиды по их способности связываться с обозначенной последовательностью посредством образования водородных связей и с помощью других химических взаимодействий. Такие молекулы известны из уровня техники и включают, например, молекулы, в которых пептидные связи в остове молекулы заменяют фосфатные связи. Упоминание последовательности нуклеиновой кислоты охватывает комплементарную ей цепь, если не указано иное. Таким образом, упоминание молекулы нуклеиновой кислоты с конкретной последовательностью следует понимать как охватывающее комплементарную ей цепь с ее комплементарной последовательностью. Комплементарная цепь также пригодна, например, для антисмысловой терапии, зондов для гибридизации и ПЦР-праймеров.
Выражение функционально связанный относится к двум или более элементам последовательности нуклеиновой кислоты, которые обычно физически связаны и находятся в функциональном взаимоотношении друг с другом. Например, промотор функционально связан с кодирующей последовательностью, если промотор может инициировать или регулировать транскрипцию или экспрессию кодирующей последовательности, в случае чего кодирующую последовательность следует понимать как находящуюся под контролем указанного промотора.
Под фармацевтически приемлемым наполнителем понимают любое инертное вещество, которое скомбинировано с активной молекулой, такой как лекарственное средство, средство или связывающая молекула, для получения соответствующей или подходящей лекарственной формы. Фармацевтически приемлемый наполнитель представляет собой наполнитель, который не является токсичным для реципиентов в применяемых дозировках и концентрациях и является совместимым с другими ингредиентами состава, содержащего лекарственное средство, средство или связывающую молекулу. Фармацевтически приемлемые наполнители широко применяются и известны из уровня техники.
Применяемое в настоящем документе выражение специфичное связывание в отношении взаимодействия связывающей молекулы, например антитела, и ее партнера по связыванию, например антигена, означает, что взаимодействие зависит от наличия конкретной структуры, например антигенной детерминанты или эпитопа, на партнере по связыванию. Другими словами, антитело предпочтительно связывается или распознает партнера по связыванию, даже если партнер по связыванию присутствует в смеси из других молекул или организмов. Связывание может быть опосредовано ковалентными или нековалентными взаимодействиями или комбинацией тех и других. Другими словами, выражение специфичное связывание означает иммуноспецифичное связывание антигенной детерминанты или эпитопа, но не иммуноспецифичное связывание с другими антигенными детерминантами или эпитопами. Связывающая молекула, которая иммуноспецифично связывается с антигеном, может связываться с другими пептидами или полипептидами с более низкой аффинностью, которая определена с помощью, например, радиоиммунологических анализов (МЛ), твердофазных иммуноферментных анализов (ЕЫ§Л), В1ЛСОКЕ или других известных из уровня техники анализов. Связывающие молекулы или их фрагменты, которые иммуноспецифично связываются с антигеном могут характеризоваться перекрестной реактивностью с родственными антигенами, несущими тот же эпитоп. Предпочтительно связывающие молекулы или их фрагменты, которые иммуноспецифично связываются с антигеном, не характеризуются перекрестной реактивностью с другими антигенами.
Применяемое в настоящем документе выражение замена обозначает замещение одной или нескольких аминокислот или нуклеотидов, соответственно, иными аминокислотами или нуклеотидами.
Выражение терапевтически эффективное количество относится к количеству обозначаемой в настоящем документе связывающей молекулы, которая эффективна для предупреждения, ослабления и/или лечения состояния, являющегося результатом инфицирования вирусом гриппа В. Применяемое в настоящем документе ослабление может относиться к уменьшению видимых или ощутимых симптомов заболевания, вирусомии или других поддающихся измерению проявлений инфекционного заболевания гриппа.
Выражение лечение относится к терапевтическому лечению, а также профилактическим или превентивным мерам для излечения заболевания, или остановки, или, по меньшей мере, замедления прогрессирования заболевания. Нуждающиеся в лечении включают тех, которые уже имеют состояние, являющееся результатом инфицирования вирусом гриппа, а также тех, у которых необходимо предупредить инфицирование вирусом гриппа. Также в лечении могут нуждаться субъекты, которые частично или
- 6 028433 полностью выздоровели после инфицирования вирусом гриппа. Предупреждение охватывает подавление или уменьшение распространения вируса гриппа или подавления или уменьшения начала, развития и прогрессирования одного или нескольких симптомов, связанных с инфицированием вирусом гриппа.
Выражение вектор обозначает молекулу нуклеиновой кислоты, в которую может быть вставлена вторая молекула нуклеиновой кислоты для введения в хозяина, где она будет замещена и в некоторых случаях экспрессироваться. Другими словами, вектор может транспортировать молекулу нуклеиновой кислоты, к которой он был присоединен. Под применяемым в данном документе термином вектор предусмотрены векторы для клонирования, а также векторы экспрессии. Векторы включают, но без ограничений, плазмиды, космиды, бактериальные искусственные хромосомы (ВАС), и дрожжевые искусственные хромосомы (УАС), и векторы, полученные из бактериофагов или вирусов растений или животных (в том числе человека). Векторы включают точку начала репликации, распознаваемую предполагаемым хозяином и в случае векторов экспрессии хозяином могут распознаваться промоторные и другие регуляторные участки. Вектор, содержащий вторую молекулу нуклеиновой кислоты, вводят в клетку с помощью трансформации, трансфекции или с использованием механизмов проникновения вируса. Некоторые векторы могут автономно реплицироваться у хозяина, в которого они введены (например, векторы с бактериальной точкой начала репликации могут реплицироваться у бактерий). Другие векторы можно встроить в геном хозяина после введения в хозяина, и, таким образом, они могут реплицироваться наряду с геномом хозяина.
Подробное описание
В первом аспекте настоящее изобретение предлагает связывающие молекулы, которые могут специфично связываться с гемагглютинином (НА) штаммов вируса гриппа В линии В/Уатада1а и В/Ую1опа и могут нейтрализовать указанные штаммы вируса гриппа В линий В/Уатада1а и/или В/Ую1опа. В соответствии с настоящим изобретением связывающие молекулы не связываются с НА вирусов гриппа А. Связывающие молекулы могут нейтрализовать вирусы гриппа В как ίη νίίτο, так и ίη νίνο.
Предпочтительно связывающие молекулы представляют собой связывающие молекулы человека. В предпочтительном варианте осуществления связывающие молекулы представляют собой антитела человека или их антигенсвязывающие фрагменты.
В некоторых вариантах осуществления связывающие молекулы связываются с эпитопом, отличным по сравнению с эпитопом СК9114 (который описан в заявке ЕР11173953.8, находящейся на одновременном рассмотрении с заявкой на данное изобретение), содержащим вариабельный участок тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 116, и вариабельный участок легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 117. Было показано, что СК9114 может связываться с вирусами гриппа А обеих филогенетических групп 1 и 2, а также вирусами гриппа В и нейтрализовать их ίη νίνο.
В некоторых вариантах осуществления связывающие молекулы связываются с участком-головкой белка НА вирусов гриппа В, в частности участком-головкой НА1 вирусов гриппа В.
В некоторых вариантах осуществления связывающие молекулы блокируют связывание с клеточным рецепторов вирусов гриппа В линии В/Уашада1а и/или линии В/УюЮпа.
В некоторых вариантах осуществления связывающие молекулы не блокируют связывание с клеточным рецепторов вирусов гриппа линии В/Уатада1а и/или линии В/УюЮпа.
В некоторых вариантах осуществления связывающие молекулы блокируют выход вирусов гриппа В, в частности штаммов вируса гриппа линий как В/УюЮпа, так и В/Уатада1а. из инфицированных клеток.
В некоторых вариантах осуществления выделенные связывающие молекулы могут специфично связываться с гемагглютинином (НА) вируса гриппа В и могут нейтрализовать штаммы вируса гриппа В как линии В/У1с1опа/2/87, так и линии В/Уатада1а/16/88, причем связывающие молекулы не связываются с белком НА подтипов вируса гриппа А и содержат вариабельный участок тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность, изложенную в 8ЕС ГО N0: 71, или последовательность аминокислот, которая идентична ей по меньшей мере или по меньшей мере приблизительно на 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более.
В некоторых вариантах осуществления связывающие молекулы содержат вариабельный участок легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность, изложенную в 8ЕС ГО N0: 73, или последовательность аминокислот, которая идентична ей по меньшей мере или по меньшей мере приблизительно на 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более.
В варианте осуществления связывающая молекула содержит вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 71, и вариабельный участок легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 73.
Настоящее изобретение также предлагает связывающие молекулы, которые могут специфично связываться с гемагглютинином (НА) вируса гриппа В и могут нейтрализовать штаммы вируса гриппа В как линии В/У1с1опа/2/87, так и линии В/Уатада1а/16/88, причем связывающие молекулы не связываются с белком НА подтипов вируса гриппа А, и при этом связывающие молекулы содержат СЭК1 тяжелой цепи, содержащий последовательность аминокислотных остатков, изложенную в 8ЕС ГО N0: 1; СЭК2 тя- 7 028433 желой цепи, содержащий последовательность аминокислотных остатков, изложенную в 8ЕС ГО N0: 2, и СГОЕ3 тяжелой цепи, содержащий последовательность аминокислотных остатков, изложенную в 8ЕС ГО N0: 3. Согласно настоящему изобретению участки СЭЕ обозначены согласно КаЬа! с1 а1. (1991), как описано в 8сциспсс5 οί Ρτοΐθίηδ οί 1ттипо1одюа1 ЕИсгсД.
В некоторых вариантах осуществления связывающие молекулы содержат СГОЕ1 легкой цепи, который содержит последовательность аминокислотных остатков, изложенную в 8ЕС ГО N0: 4, СГОЕ2 легкой цепи, который содержит последовательность аминокислотных остатков, изложенную в 8ЕС ГО N0: 5, и СГОЕ3 легкой цепи, который содержит последовательность аминокислотных остатков, изложенную в 8ЕЦ ГО N0: 6.
В некоторых вариантах осуществления связывающая молекула содержит СГОЕ 1 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 1, СГОЕ2 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 2, и СГОЕ3 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 3, и СГОЕ1 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 4, С1ЭЕ2 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8 ЕС ГО N0: 5, и СГОЕ3 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 6.
Настоящее изобретение дополнительно предлагает связывающие молекулы, которые иммуноспецифично связываются с тем же эпитопом на том же белке НА вируса гриппа В, что и связывающая молекула, содержащая вариабельную последовательность тяжелой цепи, которая содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 71, и вариабельный участок легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 73.
В некоторых вариантах осуществления связывающая молекула содержит СГОЕ 1 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 14, СГОЕ2 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 15, и СГОЕ3 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 16, и СГОЕ1 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 17, СГОЕ2 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 18, и СГОЕ3 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 19.
В некоторых вариантах осуществления связывающая молекула содержит СГОЕ 1 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 26, СГОЕ2 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 27, и СГОЕ3 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 28, и СГОЕ1 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 29, СГОЕ2 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 24, и СГОЕ3 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 30.
Настоящее изобретение также предлагает связывающие молекулы, которые могут специфично связываться с гемагглютинином (НА) и могут нейтрализовать штаммы линии В/Ую1опа вируса гриппа В, в частности штамм В/Ма1ау81а/2506/2004 вируса гриппа В, если аминокислотой в положении 168 у НА вируса гриппа В, в частности штамма В/Ма1ау81а/2506/2004 вируса гриппа В, является пролин (Р), и не могут нейтрализовать штаммы вируса гриппа В линии В/Ую1опа, в частности В/Ма1ау81а/2506/2004, если аминокислотой в положении 168 у НА вируса гриппа В, в частности В/Ма1ау81а/2506/2004, является глутамин (О.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предлагает связывающие молекулы, которые могут специфично связываться с гемагглютинином (НА) и могут нейтрализовать штаммы вируса гриппа В линии В/УатадаЕг в частности штамм В/Е1опйа/04/2006 вируса гриппа В, если аминокислота в положении 38 у НА вируса гриппа В, в частности штамма В/Е1опйа/04/200 вируса гриппа В, представляет собой лизин (К), а также могут нейтрализовать штаммы вируса гриппа В линии В/Уатада1а, в частности В/Р1ог1йа/04/2006, если аминокислота в положении 38 у НА вируса гриппа В, в частности В/Р1ог1йа/04/2006, представляет собой глутаминовую кислоту (Е).
Настоящее изобретение дополнительно предлагает связывающие молекулы, которые могут специфично связываться с гемагглютинином (НА) вируса гриппа В и могут нейтрализовать штаммы вируса гриппа В как линии В/У1с1опа/2/87, так и линии В/Уатада1а/16/88, и не связываются с белком НА подтипов вируса гриппа А и содержат вариабельный участок тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность, изложенную в 8ЕС ГО N0: 75, или последовательность аминокислот, которая идентична ей по меньшей мере или по меньшей мере приблизительно на 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более.
В некоторых вариантах осуществления связывающие молекулы содержат вариабельный участок легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность, изложенную в 8ЕС ГО N0: 77, или последовательность аминокислот, которая идентична ей по меньшей мере или по меньшей мере приблизительно на 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более.
В некоторых вариантах осуществления связывающие молекулы содержат вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 75, и вариабельный уча- 8 028433 сток легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕО ГО N0: 77.
В некоторых вариантах осуществления связывающая молекула содержит вариабельный участок тяжелой цепи, состоящий из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0: 78, и вариабельный участок легкой цепи, состоящий из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0: 79.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предлагает связывающие молекулы, которые могут специфично связываться с гемагглютинином (НА) вируса гриппа В и могут нейтрализовать штаммы вируса гриппа В как линии В/У1с1ог1а/2/87, так и линии В/Уашада1а/16/88, причем связывающие молекулы не связываются с белком НА подтипов вируса А, и при этом связывающие молекулы содержат С0В1 тяжелой цепи, который содержит последовательность аминокислотных остатков, изложенную в 8Е0 ГО N0: 7, СГОВ2 тяжелой цепи, который содержит последовательность аминокислотных остатков, изложенную в 8Е0 ГО N0: 8, и СГОВ3 тяжелой цепи, который содержит последовательность аминокислотных остатков, изложенную в 8Е0 ГО N0: 9.
В некоторых вариантах осуществления связывающие молекулы содержат СЭВ.1 легкой цепи, который содержит последовательность аминокислотных остатков, изложенную в 8Е0 ГО N0: 10, СГОВ2 легкой цепи, который содержит последовательность аминокислотных остатков, изложенную в 8Е0 ГО N0: 11, и СГОВ3 легкой цепи, который содержит последовательность аминокислотных остатков, изложенную в 8Е0 ГО N0: 12 или 13.
В некоторых вариантах осуществления связывающая молекула содержит СГОВ 1 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 7, СГОВ2 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 8, и СГОВ3 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 9, и СГОВ1 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 10, СГОВ2 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 11, и СГОВ3 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 12.
В некоторых вариантах осуществления связывающая молекула содержит СГОВ 1 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 7, СГОВ2 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 8, и СГОВ3 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 9, и СЭВ 1 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 10, СГОВ2 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 11, и СГОВ3 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕО ГО N0: 13.
Настоящее изобретение дополнительно предлагает связывающие молекулы, которые иммуноспецифично связываются с тем же эпитопом на том же белке НА вируса гриппа В, что и связывающая молекула, содержащая вариабельную последовательность тяжелой цепи, которая содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 75, и вариабельный участок легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 77.
В некоторых вариантах осуществления связывающая молекула содержит СГОВ 1 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 20, СГОВ2 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 21, и СГОВ3 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 22, и СГОВ1 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 23, СГОВ2 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 24, и СГОВ3 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 25.
В определенном варианте осуществления связывающая молекула содержит С0В1 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 31, СГОВ2 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 32, и СГОВ3 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 33, и СГОВ1 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 4, СГОВ2 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 5, и СГОВ3 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 34.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предлагает связывающие молекулы, которые могут специфично связываться с гемагглютинином (НА) и могут нейтрализовать штаммы линии В/Ую1опа вируса гриппа В, в частности штамм В/Ма1ау81а/2506/2004 вируса гриппа В, если аминокислотой в положении 168 у НА вируса гриппа В, в частности штамма В/Ма1ау81а/2506/2004 вируса гриппа В, является пролин (Р), а также могут нейтрализовать штаммы вируса гриппа В линии В/Ую1опа, в частности В/Ма1ау81а/2506/2004, если аминокислотой в положении 168 у НА вируса гриппа В, в частности В/Ма1ау81а/2506/2004, является глутамин (О).
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предлагает связывающие молекулы, которые могут специфично связываться с гемагглютинином (НА) и могут нейтрализовать штаммы линии В/Уашада1а вируса гриппа В, в частности штамм В/Е1опба/04/2006 вируса гриппа В, если аминокислота в положении 38 у НА вируса гриппа В, в частности штамма В/Е1опба/04/200 вируса гриппа В, представля- 9 028433 ет собой лизин (К), и не могут нейтрализовать штаммы линии В/Уашада1а вируса гриппа В, в частности В/Е1опба/()4/2006. если аминокислота в положении 38 у НА вируса гриппа В, в частности В/Нопба/04/2006. представляет собой глутаминовую кислоту (Е).
Настоящее изобретение дополнительно предлагает связывающие молекулы, которые могут специфично связываться с гемагглютинином (НА) вируса гриппа В и могут нейтрализовать штаммы вируса гриппа В как линии В/У1е1о1та/2/87, так и линии В/Уашада1а/16/88, причем связывающие молекулы не связываются с белком НА подтипов вируса А, и при этом связывающие молекулы содержат вариабельный участок тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность, изложенную в 8ЕС ГО N0: 113, или последовательность аминокислот, которая идентична ей по меньшей мере или по меньшей мере приблизительно на 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более.
В некоторых вариантах осуществления связывающие молекулы содержат вариабельный участок легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность, изложенную в 8ЕС ГО N0: 115, или последовательность аминокислот, которая идентична ей по меньшей мере или по меньшей мере приблизительно на 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 9%, 99% или более.
В варианте осуществления связывающая молекула содержит вариабельный участок тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 113, и вариабельный участок легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 115.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предлагает связывающие молекулы, которые могут специфично связываться с гемагглютинином (НА) вируса гриппа В и могут нейтрализовать штаммы вируса гриппа В как линии В/У1е1о1та/2/87, так и линии В/Уашада1а/16/88, причем связывающие молекулы не связываются с белком НА подтипов вируса гриппа А, и при этом связывающие молекулы содержат СГОР1 тяжелой цепи, содержащий последовательность аминокислотных остатков, изложенную в 8ЕС ГО N0: 54; СГОР2 тяжелой цепи, содержащий последовательность аминокислотных остатков, изложенную в 8ЕС ГО N0: 55, и СГОР3 тяжелой цепи, содержащий последовательность аминокислотных остатков, изложенную в 8ЕС ГО N0: 56.
В некоторых вариантах осуществления связывающие молекулы содержат СГОР1 легкой цепи, который содержит последовательность аминокислотных остатков, изложенную в 8ЕС ГО N0: 57, СГОР2 легкой цепи, который содержит последовательность аминокислотных остатков, изложенную в 8Е0 ГО N0: 5, и СГОР3 легкой цепи, который содержит последовательность аминокислотных остатков, изложенную в 8ЕС ГО N0: 58.
В определенном варианте осуществления связывающая молекула содержит СГОР1 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 54, СГОР2 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 55, и СГОР3 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 56, и СГОР1 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 57, СГОР2 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 5, и СГОР3 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 58.
Настоящее изобретение дополнительно предлагает связывающие молекулы, которые иммуноспецифично связываются с тем же эпитопом на том же белке НА вируса гриппа В, что и связывающая молекула, содержащая вариабельную последовательность тяжелой цепи, которая содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 113, и вариабельный участок легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 115.
Вирусы гриппа В, как и вирусы гриппа А, инфицируют клетки путем связывания с остатками сиаловой кислоты на клеточной поверхности целевых клеток и последующего перехода в эндосомы путем слияния их мембран с эндосомальными мембранами и высвобождения геном-транкриптазного комплекса в клетку. Как связывание с рецептором, так и процесс слияния с мембраной опосредованы гликопротеином НА. НА как у вируса гриппа А, так и у вируса гриппа В содержит два структурно разделенных участка, т.е. участок-глобулярную головку, который содержит сайт связывания рецептора, ответственный за прикрепление вируса к целевой клетке, и который вовлечен в гемагглютинирующую активность НА, и участок-стебель, содержащий пептид слияния, необходимый для слияния мембраны вирусной оболочки и эндосомальной мембраны клетки. Белок НА является тримером, каждый мономер которого состоит из двух связанных дисульфидной связью гликополипептидов НА1 и НА2, которые получаются при инфицировании в результате протеолитического расщепления предшественника (НА0). Расщепление необходимо для инфективности вируса, поскольку для нее необходима инициация НА в отношении слиянии мембран и осуществление конформационного изменения Активация инициированной молекулы происходит при низком рН в эндосомах в диапазоне от рН5 до рН6 и нуждается в обширных изменениях в структуре НА.
В некоторых вариантах осуществления связывающие молекулы могут специфично связываться с субъединицей НА1 белка НА, в частности с участком-головкой субъединицы НА1. Связывающие молекулы могут быть способны к специфичному связыванию с линейными или структурными и/или конформационными эпитопами на субъединице НА1 белка НА. Молекулу НА можно очистить от вирусов или получить рекомбинантными способами и необязательно выделить до применения. Альтернативно,
- 10 028433
НА может экспрессироваться на поверхности клеток.
Связывающие молекулы по настоящему изобретению могут быть способны к специфическому связыванию с вирусами гриппа В, которые являются жизнеспособными, живыми и/или инфекционными или которые находятся в инактивированной/аттенуированной форме. Способы инактивации/аттенуирования вируса, например вирусов гриппа, хорошо известны из уровня техники и включают, но без ограничения, обработку формалином, β-пропиолактоном (ВРЬ), мертиолятом и/или ультрафиолетовым светом.
Связывающие молекулы по настоящему изобретению также могут быть способны к специфичному связыванию с одним или несколькими фрагментами вирусов гриппа В, к примеру, помимо прочего, препаратом из одного или нескольких белков и/или (поли)пептидов, полученных от подтипов вирусов гриппа В, или одного или нескольких полученных рекомбинантными способами белков и/или полипептидов вирусов гриппа В. Нуклеотидную и/или аминокислотную последовательность белков различных штаммов гриппа В можно найти в базе данных СепВапк, базе данных последовательностей вирусов гриппа ΝΟΒΙ, базе данных последовательностей гриппа (ΙδΌ), базе данных ЕМВЬ и/или других базах данных. Специалист в данной области легко поймет, как найти такие последовательности в соответствующих базах данных.
В другом варианте осуществления связывающие молекулы по настоящему изобретению могут специфично связываться с фрагментом вышеупомянутых белков и/или полипептидов, причем данный фрагмент, по меньше мере, содержит эпитоп, распознаваемый связывающими молекулами по настоящему изобретению. Применяемый в настоящем документе эпитоп представляет собой фрагмент, который может связываться со связывающей молекулой по настоящему изобретению с достаточно высокой аффинностью с образованием выявляемого комплекса антигенсвязывающая молекула.
Связывающие молекулы по настоящему изобретению могут представлять собой интактные молекулы иммуноглобулина, такие как моноклональные антитела, или связывающие молекулы могут представлять собой их антигенсвязывающие фрагменты, включая, но без ограничения, вариабельные участки тяжелых и легких цепей, РаЬ, Р(аЬ'), Р(аЬ')2, Ρν, 6АЬ, Р6 фрагменты, фрагменты, представляющие собой определяющие комплементарности участки (СЭВ), одноцепочечные антитела (δοΡν), двухвалентные одноцепочечные антитела, одноцепочечные фаговые антитела, диатела, триатела, тетратела и (поли)пептиды, которые содержат, по меньшей мере, фрагмент иммуноглобулина, который достаточен для придания специфичного связывания с антигеном штаммов вируса гриппа или его фрагментом. В предпочтительном варианте осуществления связывающие молекулы по настоящему изобретению представляют собой моноклональные антитела человека и/или их антигенсвязывающие фрагменты. Связывающие молекулы также могут представлять собой нанотела, альфа-тела, антитела по типу аРйЬобу, остовы доменов ΡΝ3 и другие остовы на основе доменов в содержащих повторы белках (человека), по типу А6пеейп,
Апйеайп, Оагрш и т.д. или другие остовы, содержащие связывающиеся с эпитопом последовательности.
В некоторых вариантах осуществления связывающие молекулы представляют собой интактные антитела, содержащие комплект вариабельных участков тяжелых и легких цепей, а также комплект константных участков тяжелых и легких цепей.
В некоторых вариантах осуществления связывающие молекулы обладают комплементзависимой цитотоксической активностью (СОС) и/или антителозависимой клеточной цитотоксической (ЛЭСС) активностью.
Связывающие молекулы по настоящему изобретению можно применять в невыделенной или выделенной форме. Кроме того, связывающие молекулы по настоящему изобретению можно применять отдельно или в смеси, содержащей по меньшей мере одну связывающую молекулу (или ее вариант или фрагмент) по настоящему изобретению и одну или несколько других связывающих молекул, которые связываются с гриппом и оказывают ингибирующий эффект на вирус гриппа. Другими словами, связывающие молекулы можно применять в комбинации, например, в виде фармацевтической композиции, содержащей две или более связывающие молекулы, их вариантов или фрагментов. Например, связывающие молекулы с иными, но дополняющими активностями можно скомбинировать в отдельное средство для терапии для достижения необходимого профилактического, терапевтического или диагностического эффекта, но альтернативно, связывающие молекулы с идентичными активностями можно скомбинировать в отдельном средстве для терапии для достижения необходимого профилактического, терапевтического или диагностического эффекта. Необязательно, смесь может также содержать по меньшей мере одну связывающую молекулу согласно настоящему изобретению и по меньшей мере одно другое терапевтическое средство. При профилактике и/или лечении инфекции, вызванной вирусом гриппа, предпочтительно пригодно такое терапевтическое средство, как, например, ингибиторы М2 (например, амантидин, римантадин) и/или ингибиторы нейраминидазы (например, занамивир, озельтамивир).
Как правило, связывающая молекула согласно настоящему изобретению может связываться со своими партнерами по связыванию, т.е. вирусом гриппа В линии В/Уатада1а и/или В/УюЮпа, и/или его фрагментами, с константой аффинности (К6-величиной), которая ниже 0,2х10-4 М, 1,0х10-5 М, 1,0х10-6 М, 1,0х10-7 М, предпочтительно ниже 1,0х10-8 М, более предпочтительно ниже 1,0х10-9 М, более
- 11 028433 предпочтительно ниже 1,0х1010 М, еще более предпочтительно ниже 1,0х10-11 М и, в частности, ниже 1,0х1012 М. Константы аффинности могут варьировать для изотипов антител. Например, аффинное связывание для изотипа 1дМ обозначает аффинность связывания, составляющую по меньшей мере 1,0х10-7 М. Константы аффинности, например, можно измерить с помощью поверхностного плазмонного резонанса, например, с помощью системы В1АСОКЕ (РЬаттас1а Вюкеикот АВ, Уппсала, Швеция).
Связывающие молекулы по настоящему изобретению характеризуются нейтрализующей активностью. Нейтрализующую активность, например, можно измерить, как описано в настоящем документе. Альтернативные анализы, с помощью которых измеряют нейтрализующую активность, описаны, например в \УНО Мапиа1 оп Ашта1 1пГ1иеп/а Ωίαβοοδίδ апб ЗитуеШапсе, Сеиеуа: \νοι1ύ НеаНЬ Отдашкайоп, 2005, уеткюп 2002.5.
Как правило, связывающие молекулы согласно настоящему изобретению обладают нейтрализующей активностью 50 мкг/мл или менее, предпочтительно 20 мкг/мл или менее, более предпочтительно нейтрализующей активностью 10 мкг/мл или менее, еще более предпочтительно 5 мкг/мл или менее, согласно результатам определения в анализе нейтрализации вируса ш νίίτο (νΝΑ), который описан в примере 6. Связывающие молекулы согласно настоящему изобретению могут связываться с вирусом гриппа или его фрагментом в растворимой форме, такой как, например, в образце или в суспензии, или могут связываться с вирусами гриппа или их фрагментами, связанными с носителем или подложкой или прикрепленными к ним, например, титрационным микропланшетам, мембранам и гранулам и т.д. Носители или подложки могут быть выполнены из стекла, пластика (например, полистирола), полисахаридов, найлона, нитроцеллюлозы или тефлона и т.д. Поверхность таких подложек может быть твердой или пористой и иметь любую подходящую форму. Кроме того, связывающие молекулы могут связываться с вирусом гриппа в очищенной/выделенной или неочищенной/невыделенной форме.
Как обсуждалось выше, настоящее изобретение в некоторых вариантах осуществления предлагает выделенные связывающие молекулы человека, которые могут распознавать и связывать эпитоп гемагглютинина гриппа (НА) вирусов гриппа В, при этом указанные связывающие молекулы обладают нейтрализующей активностью в отношении вирусов гриппа В линий как В/Уатада1а, так и/или В/^йопа, как щ νίίτο, так и щ νίνο. Согласно настоящему изобретению было показано, что связывающие молекулы по настоящему изобретению перекрестно нейтрализуют подтипы вируса гриппа, принадлежащие к обеим филогенетическим линиям. Специалист в данной области, основываясь на том, что раскрыто в настоящем документе, может определить, действительно ли антитело перекрестно реагирует с белками НА из различных подтипов, а также может определить, могут ли они нейтрализовать вирусы гриппа различных подтипов щ νίίτο и/или ш νίνο.
Другой аспект настоящего изобретения включает функциональные варианты определенной выше связывающей молекулы.
Молекулы рассматривают как функциональные варианты связывающей молекулы по настоящему изобретению, если вариантные связывающие молекулы могут конкурировать за иммуноспецифичное связывание вируса гриппа или его фрагмента с исходными или эталонными связывающими молекулами. Другими словами, молекулы рассматривают как функциональные варианты связывающей молекулы по настоящему изобретению, если функциональные варианты все еще могут связывать тот же или перекрывающий эпитоп вируса гриппа или его фрагмент. В контексте настоящего описания исходная и эталонная будут применять в качестве синонимов, означающих, что информация эталонной или исходной молекулы или сама физическая молекула может давать основу для вариации. Функциональные варианты включают, но без ограничений, производные, которые, по сути, схожи по основной структурной последовательности, включая производные, которые имеют модификации в Рс рецепторе или других участках, связанных с эффекторными функциями, и/или которые содержат, например, ш νίίτο или ш νίνο модификации, химические и/или биохимические, не встречающиеся у исходной связывающей молекулы. Такие модификации включают, помимо прочих, ацетилирование, ацилирование, ковалентное присоединение нуклеотида или производного нуклеотида, ковалентное присоединение липида или производного липида, образование поперечных межмолекулярных связей, образование дисульфидных связей, гликозилирование, гидроксилирование, метилирование, окисление, пегилирование, протеолитический процессинг, фосфорилирование и т. п. Альтернативно, функциональные варианты могут представлять собой связывающие молекулы, которые определены в настоящем изобретении, содержащие аминокислотную последовательность, которая содержит замены, вставки, делеции или их комбинации по одной или нескольким аминокислотам по сравнению с аминокислотными последовательностями исходных связывающих молекул. Кроме того, функциональные варианты могут характеризоваться укорочениями аминокислотной последовательности либо на амино-, либо на карбоксильном конце, либо на обоих концах. Функциональные варианты по настоящему изобретению могут иметь одинаковую или различные, либо более высокую, либо более низкую аффинности связывания по сравнению с исходной связывающей молекулой, но все еще могут связываться с вирусом гриппа или его фрагментом. Например, функциональные варианты по настоящему изобретению могут характеризоваться повышенной или пониженной аффинностью связывания в отношении вируса гриппа или его фрагмента по сравнению с исходными свя- 12 028433 зывающими молекулами. В некоторых вариантах осуществления модифицированы аминокислотные последовательности вариабельных участков, включая, но без ограничений, каркасные участки, гипервариабельные участки, в частности СЭК3 участки. Обычно вариабельные участки легкой цепи и тяжелой цепи содержат три гипервариабельных участка, включающих три СОК, и более консервативные участки, так называемые каркасные участки (РК). Гипервариабельные участки содержат аминокислотные остатки из СОК и аминокислотные остатки из гипервариабельных петель. Функциональные варианты, подразумеваемые как подпадающие в объем настоящего изобретения, характеризуются по меньшей мере от 80 до приблизительно 99%, предпочтительно по меньшей мере от приблизительно 70 до приблизительно 99%, более предпочтительно по меньшей мере от приблизительно 80 до приблизительно 99%, еще более предпочтительно по меньшей мере от приблизительно 90 до приблизительно 99%, наиболее предпочтительно по меньшей мере от приблизительно 95 до приблизительно 99%, в частности, по меньшей мере от приблизительно 97 до приблизительно 99% идентичностью и/или гомологией аминокислотной последовательности с обозначенными в настоящем документе исходными связывающими молекулами. Для оптимального выравнивания подлежащих сравнению аминокислотных последовательностей и для определения похожих или идентичных аминокислотных остатков можно применять компьютерные алгоритмы, такие как, помимо прочих, Оар или ΒοδίΠΐ. которые известны специалистам в данной области. Функциональные варианты можно получить путем изменения исходных связывающих молекул или их частей с помощью общих способов молекулярной биологии, известных из уровня техники, включая, но без ограничений, ПЦР сниженной точности, олигонуклеотид-направленный мутагенез, сайт-направленный мутагенез или шаффлинг тяжелой и/или легкой цепи.
В некоторых вариантах осуществления функциональные варианты по настоящему изобретению обладают нейтрализующей активностью в отношении вирусов гриппа В. Нейтрализующая активность либо может быть идентичной, либо выше или ниже по сравнению с исходными связывающими молекулами. В контексте настоящего описания при использовании выражения связывающая молекула (человека) данное выражение также охватывает функциональные варианты связывающей молекулы (человека). Анализы проверки того, обладает ли вариантная связывающая молекула нейтрализующей активностью, хорошо известны из уровня техники (см. \УН0 Мапиа1 οη Лтта1 1пГ1исп/а Ωίαβηοδίδ аий ЗигусШапсс. Сспсуа: \νοι1ύ НеаНЬ Ог^атка^^ 2005 νβΓδίοη 2002.5).
В некоторых вариантах осуществления функциональные варианты представляют собой связывающие молекулы, содержащие вариабельную последовательность тяжелой цепи, которая содержит одну или несколько аминокислотных мутаций, к примеру одну, две, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать или пятнадцать аминокислотных мутаций по сравнению с 8ЕО ГО N0: 71, и/или вариабельный участок легкой цепи, который содержит одну или несколько аминокислотных мутаций, к примеру одну, две, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать или пятнадцать аминокислотных мутаций по сравнению с 8Е0 ГО N0: 73.
В некоторых вариантах осуществления функциональные варианты представляют собой связывающие молекулы, содержащие вариабельную последовательность тяжелой цепи, которая содержит одну или несколько аминокислотных мутаций, к примеру одну, две, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать или пятнадцать аминокислотных мутаций по сравнению с 8Е0 ГО N0: 75, и/или вариабельный участок легкой цепи, который содержит одну или несколько аминокислотных мутаций, к примеру одну, две, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать или пятнадцать аминокислотных мутаций по сравнению с 8Е0 ГО N0: 77.
В некоторых вариантах осуществления функциональные варианты представляют собой связывающие молекулы, содержащие вариабельную последовательность тяжелой цепи, которая содержит одну или несколько аминокислотных мутаций, к примеру одну, две, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать или пятнадцать аминокислотных мутаций по сравнению с 8Е0 ГО N0: 113, и/или вариабельный участок легкой цепи, который содержит одну или несколько аминокислотных мутаций, к примеру одну, две, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать или пятнадцать аминокислотных мутаций по сравнению с 5>Е0 ГО N0: 115.
В некоторых вариантах осуществления связывающая молекула согласно настоящему изобретению выбрана из группы, состоящей из связывающих молекул, содержащих:
(a) СГОК1 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 59, СГОК2 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 2, и СГОК3 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 3, и СГОК1 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 17, СГОК2 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 18, и СГОК3 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 60;
(b) СГОК1 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 61, СГОК2 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 2, и
- 13 028433
СГОК3 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 3, и СГОК1 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 62, СГОК2 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 18, и СГОК3 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 63;
(с) СГОК1 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 59, СГОК2 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 2, и СГОК3 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 3, и СГОК1 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 64, СГОК2 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 65, и СГОК3 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 66; и (ά) СГОК1 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 59, СГОК2 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 2, и СГОК3 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 3, и СГОК1 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 67, СГОК2 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 68, и СГОК3 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 69;
(е) СГОК1 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 35, СГОК2 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 36, и СГОК3 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 37, и СГОК1 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 4, СГОК2 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 38, и СГОК3 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 39;
(ί) СГОК1 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 40, СГОК2 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 41, и СГОК3 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 42, и СГОК1 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 43, СГОК2 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 5, и СГОК3 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 44;
(д) СГОК1 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 45, СГОК2 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 46, и СГОК3 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 47, и СГОК1 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 48, СГОК2 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 38, и СГОК3 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 49; и (Ь) СГОК1 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 45, СГОК2 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 50, и СГОК3 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 47, и СГОК1 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 51, СГОК2 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 52, и СГОК3 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 53.
В некоторых вариантах осуществления связывающая молекула выбрана из группы, состоящей из:
a) связывающей молекулы, содержащей вариабельный участок тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 119 и вариабельный участок легкой цепи 8Е0 ГО N0: 121;
b) связывающей молекулы, содержащей вариабельный участок тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 123 и вариабельный участок легкой цепи 8Е0 ГО N0: 125;
c) связывающей молекулы, содержащей вариабельный участок тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 127 и вариабельный участок легкой цепи 8Е0 ГО N0: 129;
ά) связывающей молекулы, содержащей вариабельный участок тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 131 и вариабельный участок легкой цепи 8Е0 ГО N0: 133;
е) связывающей молекулы, содержащей вариабельный участок тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 77 и вариабельный участок легкой цепи 8Е0 ГО N0: 79;
ί) связывающей молекулы, содержащей вариабельный участок тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 101 и вариабельный участок легкой цепи 8Е0 ГО N0: 103;
д) связывающей молекулы, содержащей вариабельный участок тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 105 и вариабельный участок легкой цепи 8Е0 ГО N0: 107; и
Ь) связывающей молекулы, содержащей вариабельный участок тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 109 и вариабельный участок легкой цепи 8Е0 ГО N0: 111.
В некоторых вариантах осуществления связывающие молекулы по настоящему изобретению предназначены для применения в качестве лекарственного препарата и, предпочтительно, для применения при терапевтическом и/или профилактическом лечении инфекционного заболевания гриппа, вызванного вирусами гриппа В. Вирус гриппа, который вызывает инфекционное заболевание грипп и который можно лечить с помощью связывающих молекул по настоящему изобретению, может представлять собой
- 14 028433 вирус гриппа В линии В/Уатада1а и/или Β/ΥίοΙΟΓία.
Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим по меньшей мере одну связывающую молекулу по настоящему изобретению и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый наполнитель.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению связывающей молекулы по настоящему изобретению при получении лекарственного препарата для профилактики и/или лечения инфекции, вызванной вирусом гриппа.
Инфекция, вызванная вирусом гриппа, которую можно предупредить и/или лечить с помощью связывающих молекул по настоящему изобретению, может появляться в небольших популяциях, но также может распространяться по всему миру во время сезонных эпидемий или, что хуже, во время глобальных пандемий, при которых риску подвергаются миллионы людей. Настоящее изобретение предлагает связывающие молекулы, которые могут нейтрализовать инфекцию, вызванную штаммами гриппа, которые вызывают такие сезонные эпидемии, а также потенциальные пандемии.
В еще одном дополнительном аспекте настоящее изобретение предлагает иммуноконъюгаты, т. е. молекулы, содержащие по меньшей мере одну, обозначенную в настоящем документе связывающую молекулу и дополнительно содержащие по меньшей мере одну метку, такую как, среди прочих, выявляемый фрагмент/выявляемое средство. Также в настоящем изобретении предусмотрены смеси с иммуноконъюгатами по настоящему изобретению или смеси по меньшей мере с одним иммуноконъюгатом по настоящему изобретению и другой молекулой, такой как терапевтическое средство или другая связывающая молекула или иммуноконъюгат. В дополнительных вариантах осуществления иммуноконъюгаты по настоящему изобретению могут содержать более одной метки. Эти метки могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга, и они могут быть нековалентно присоединены к связывающим молекулам/нековалентно конъюгированы с ними. Метка(метки) может быть непосредственно присоединена к связывающим молекулам/конъюгирована с ними посредством ковалентного связывания. Альтернативно, метка(метки) может быть присоединена к связывающим молекулам/конъюгирована с ними посредством одного или нескольких сшивающих соединений. Методики конъюгирования меток со связывающими молекулами хорошо известны специалистам в данной области.
Метки иммуноконъюгатов по настоящему изобретению могут представлять собой терапевтические средства, но также они могут представлять собой выявляемые фрагменты/средства. Метками, подходящими при терапии и/или предупреждении, могут быть токсины или их функциональные части, антибиотики, ферменты, другие связывающие молекулы, которые повышают фагоцитоз и иммуностимуляцию. Иммуноконъюгаты, содержащие выявляемое средство, можно применять в диагностических целях, например для оценки того, был ли субъект инфицирован вирусом гриппа, или для отслеживания развития или прогресса инфекции вируса гриппа как части процедуры клинического тестирования, например, для определения эффективности данной схемы лечения. Тем не менее, их также можно применять для других связанных с выявлением и/или аналитических, и/или диагностических целей. Выявляемые фрагменты/средства включают, но без ограничений, ферменты, простетические группы, флуоресцентные материалы, люминесцентные материалы, биолюминесцентные материалы, радиоактивные материалы, позитрон-активные металлы и нерадиоактивные ионы парамагнитных металлов. Метки, применяемые для мечения связывающих молекул для связанных с выявлением и/или аналитических, и/или диагностических целей, зависят от конкретных применяемых связанных с выявлением/аналитических/диагностических методик и/или способов, таких как, помимо прочих, иммуногистохимическое окрашивание образцов (ткани), выявление с помощью проточной цитометрии, выявление с помощью сканирующей лазерной цитометрии, флуоресцентные иммуноанализы, твердофазные иммуноферментные анализы (ЕЫ8А), радиоиммунологические анализы (ΚΙΑ), биоанализы (например, анализы фагоцитоза), применения вестерн-блоттинга и т. д. Подходящие метки для связанных с выявлением/аналитических/диагностических методик и/или способов хорошо известны из уровня техники и доступны специалистам в данной области.
Кроме того, связывающие молекулы человека или иммуноконъюгаты по настоящему изобретению также могут быть прикреплены к твердым подложкам, которые особенно пригодны для иммуноанализов ίη νίίτο или очистки вирусов гриппа или их фрагментов. Такие твердые подложки могут быть пористыми или не пористыми, плоскими или не плоскими. Для облегчения очистки связывающие молекулы по настоящему изобретению можно слить с маркерными последовательностями, такими как пептид. Примеры включают, но без ограничений, гексагистидиновую метку, гемагглютининовую (НА) метку, метку туе или метку Лад. Альтернативно, антитело можно сконъюгировать со вторым антителом с получением гетероконъюгата антител. В другом аспекте связывающие молекулы по настоящему изобретению могут быть сконъюгированы с одним или несколькими антигенами/присоединены к ним. Предпочтительно эти антигены представляют собой антигены, которые распознаются иммунной системой субъекта, которому вводят конъюгат связывающая молекула-антиген. Антигены могут быть одинаковыми, но также могут отличаться друг от друга. Способы конъюгации для присоединения антигенов к связывающим молекулам хорошо известны из уровня техники и включают, но без ограничений, применение сшивающих средств. Связывающие молекулы по настоящему изобретению будут связываться с НА вируса гриппа, а
- 15 028433 антигены, присоединенные к связывающим молекулам, будут инициировать мощную атаку Т-клеток на конъюгат, что в итоге приведет к разрушению вируса гриппа.
После получения иммуноконъюгатов химическим способом путем конъюгирования, непосредственно или опосредовано, посредством, например, линкера, иммуноконъюгаты можно получить в виде гибридных белков, содержащих связывающие молекулы по настоящему изобретению и подходящую метку. Гибридные белки можно получить с помощью способов, известных из уровня техники, таких как, например, рекомбинантные способы путем построения молекул нуклеиновых кислот, содержащих нуклеотидные последовательности, кодирующие связывающие молекулы, в рамке с нуклеотидными последовательностями, кодирующими подходящую метку(метки), а затем экспрессии молекул нуклеиновых кислот.
Другой аспект настоящего изобретения заключается в получении молекул нуклеиновых кислот, кодирующих, по меньшей мере, связывающую молекулу, функциональный вариант или иммуноконъюгат согласно настоящему изобретению. Такие молекулы нуклеиновых кислот можно применять в качестве промежуточных продуктов с целью клонирования, например, в описанном выше процессе созревания аффинности. В предпочтительном варианте осуществления молекулы нуклеиновой кислоты являются выделенными или очищенными.
Специалист в данной области поймет, что также предусмотрено, что частью настоящего изобретения являются функциональные варианты таких молекул нуклеиновых кислот. Функциональные варианты представляют собой последовательности нуклеиновой кислоты, которые можно непосредственно транслировать с помощью стандартного генетического кода с получением аминокислотной последовательности, идентичной транслированной с исходных молекул нуклеиновой кислоты.
Предпочтительно молекулы нуклеиновой кислоты кодируют связывающие молекулы, содержащие описанные выше СЭР участки. В следующем варианте осуществления молекулы нуклеиновой кислоты кодируют связывающие молекулы, содержащие два, три, четыре, пять или даже все шесть СЭР участков связывающих молекул по настоящему изобретению.
В другом варианте осуществления молекулы нуклеиновой кислоты кодируют связывающие молекулы, содержащие тяжелую цепь, которая содержит описанные выше вариабельные последовательности тяжелой цепи. В другом варианте осуществления молекулы нуклеиновой кислоты кодируют связывающие молекулы, содержащие легкую цепь, которая содержит описанные выше вариабельные последовательности легкой цепи. Ниже приведены нуклеотидные последовательности и аминокислотные последовательности вариабельных участков тяжелых и легких цепей связывающих молекул по настоящему изобретению.
Другим аспектом настоящего изобретение является обеспечение векторов, т. е. конструктов на основе нуклеиновой кислоты, содержащих одну или несколько молекул нуклеиновых кислот по настоящему изобретению. Векторы могут быть получены из плазмид, таких как, помимо прочих, Р, Р1, РР1, Со1, рВР322, ТОЬ, Τι и т.д.; космид, фагов, таких как лямбда, лямбдоидный, М13, Ми, Р1, Р22, 0(г Т-еуеп, Т-обб, Т2, Т4, Т7 и т.д.; растительных вирусов. Векторы можно применять для клонирования и/или для экспрессии связывающих молекул по настоящему изобретению и даже можно применять для генной терапии. Также настоящим изобретением охватываются векторы, содержащие одну или несколько молекул нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, функционально связанные с одной или несколькими регулирующими экспрессию молекулами нуклеиновой кислоты. Выбор вектора зависит от соблюдаемых процедур рекомбинации и используемого хозяина. Введение векторов в клетки-хозяева может быть произведено с помощью, помимо прочего, трансфекции с использованием фосфата кальция, вирусной инфекции, трансфекции, опосредованной ΌΕΑΕ-декстраном, трансфекции с использованием липофектамина или электропорации. Векторы могут автономно реплицироваться или могут реплицироваться вместе с хромосомой, в которую они были интегрированы. Предпочтительно векторы содержат один или несколько маркеров для отбора. Выбор маркеров может зависеть от выбранных клеток хозяев, хотя это не является решающим для настоящего изобретения, что хорошо известно специалистам в данной области техники. Они включают, без ограничения, канамицин, неомицин, пуромицин, гигромицин, зеоцин, ген тимидин-киназы из вируса простого герпеса (Н8У-ТК), ген дигидрофолат-редуктазы из мыши (бЫг). Векторы, содержащие одну или несколько молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих связывающие молекулы человека, которые описаны выше, функционально связанные с одной или несколькими молекулами нуклеиновой кислоты, кодирующими белки или пептиды, которые можно использовать для выделения связывающих молекул человека, также охватываются настоящим изобретением. Эти белки или пептиды включают, без ограничения, глутатион-§-трансферазу, мальтоза-связывающий белок, металлсвязывающий полигистидин, зеленый флуоресцентный белок, люциферазу и бета-галатозидазу.
Хозяева, содержащие одну или несколько копий вышеупомянутых векторов, представляют собой дополнительный аспект настоящего изобретения. Предпочтительно хозяева представляют собой клеткихозяева. Клетки-хозяева включают, но без ограничения, клетки, происходящие из млекопитающего, растения, насекомого, клетки грибного или бактериального происхождения. Бактериальные клетки включают, но без ограничения, клетки из грамположительных бактерий или грамотрицательных бактерий, таких как некоторые виды из родов ЕксБепсЫа, как, например, Е.соБ, и Ркеиботопак. В группе грибных клеток
- 16 028433 предпочтительно используют клетки дрожжей. Экспрессии в дрожжах можно достичь при использовании штаммов дрожжей, таких как, помимо прочего, Псйа раЛогй 8ассйаготусе8 ссгебЫас и Нап8епи1а ро1утогрйа. Более того, в качестве клеток хозяев можно использовать клетки насекомых, такие как клетки из Ого5ор1и1а и 8£9. Кроме того, клетки хозяева могут представлять собой растительные клетки, такие как, помимо прочего, клетки из сельскохозяйственных растений, таких как лесные растения, или клетки из растений, обеспечивающих пищевые и сырьевые материалы, таких как зерновые растения, или лекарственных растений, или клеток из декоративных растений, или клеток из цветочных луковичных культур. Трансформированные (трансгенные) растения или растительные клетки получают с помощью известных способов, например, опосредованного АдгоЪайегшт переноса генов, трансформации листовых дисков, трансформации протопластов с помощью вызванного полиэтиленгликолем переноса ДНК, электропорации, обработки ультразвуком, микроинъекции или биолистического переноса генов. Кроме того, подходящая система экспрессии может представлять собой бакуловирусную систему. Системы экспрессии, использующие клетки млекопитающих, такие как клетки яичника китайского хомячка (СНО), клетки СО8, клетки ВНК, клетки N80 или клетки меланомы Боуэса, являются предпочтительными в настоящем изобретении. Клетки млекопитающих обеспечивают экспрессируемые белки с посттрансляционными модификациями, которые являются наиболее подобными природным молекулам, происходящим из млекопитающих. Поскольку настоящее изобретение касается молекул, которые можно вводить людям, особенно предпочтительной будет человеческая система экспрессии. Таким образом, даже более предпочтительно клетки-хозяева представляют собой клетки человека. Примерами клеток человека являются, помимо прочего, клетки НеЬа, 911, АТ1080, А549, 293 и НЕК293Т. В предпочтительных вариантах осуществления человеческие клетки-продуценты содержат, по меньшей мере, функциональную часть последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей аденовирусный участок Е1 в экспрессируемом формате. В еще более предпочтительных вариантах осуществления указанные клетки-хозяева являются полученными из сетчатки человека и иммортализированными нуклеиновыми кислотами, содержащими аденовирусные последовательности Е1, такими как клетки 911 или клеточная линия, депонированная в Европейской коллекции клеточных культур (ЕСАСС), САМИ, Солсбери, Уилтшир 8Р4 0ί0, Великобритания, 29 февраля 1996 г. № 96022940 и представленная на рынке под торговым названием РЕИ.С6® (РЕИ.С6 является зарегистрированным торговым названием Сгисе11 Но11апб В.У.). В контексте данного описания клетки РЕИ.С6 относятся к клеткам, депонированным № 96022940, или к их предкам, более ранним или более поздним пассажам, а также к потомкам предков депонированных клеток, а также производных любого из следующего. Получение рекомбинантных белков в клетках-хозяевах можно осуществлять согласно способам, известным в уровне техники. Применение клеток, представленных на рынке под торговым названием РЕИ.С6®, в качестве платформы для получения белков, представляющих интерес, было описано в документе \УО 00/63403, раскрытие которого включено в данный документ с помощью ссылки в полном объеме.
Способ получения связывающей молекулы согласно настоящему изобретению представляет собой дополнительный аспект настоящего изобретения. Способ включает этапы а) культивирования хозяина согласно настоящему изобретению в условиях, приспособленных для экспрессии связывающей молекулы и Ъ) необязательно, извлечения экспрессированной связывающей молекулы. Экспрессированные связывающие молекулы можно извлекать из бесклеточных экстрактов, но предпочтительно их извлекают из среды культивирования. Вышеописанный способ получения также можно использовать для создания функциональных вариантов связывающих молекул и/или иммуноконъюгатов согласно настоящему изобретению. Способы извлечения белков, таких как связывающие молекулы, из бесклеточных экстрактов или среды культивирования хорошо известны специалисту в данной области техники. Связывающие молекулы, функциональные варианты и/или иммуноконъюгаты, получаемые с помощью вышеописанного способа, также являются частью настоящего изобретения.
В качестве альтернативы после экспрессии в хозяевах, таких как клетки-хозяева, связывающие молекулы и иммуноконъюгаты согласно настоящему изобретению можно получать путем синтеза с использованием общепринятых синтезаторов пептидов или в бесклеточных трансляционных системах с использованием нуклеиновой кислоты РНК, полученной из молекул ДНК согласно настоящему изобретению. Связывающие молекулы и иммуноконъюгаты, которые можно получать с помощью вышеописанных способов получения с помощью синтеза или бесклеточных трансляционных систем, также являются частью настоящего изобретения.
В еще одном варианте осуществления связывающие молекулы согласно настоящему изобретению также могут продуцироваться в трансгенных млекопитающих, отличных от человека, таких как, помимо прочего, кролики, козы или коровы, и секретироваться, например, в их молоко.
В еще одном альтернативном варианте осуществления связывающие молекулы согласно настоящему изобретению можно получать с помощью трансгенных млекопитающих, отличных от человека, таких как, например, трансгенные мыши или кролики, которые экспрессируют гены иммуноглобулина человека. Предпочтительно трансгенные млекопитающие, отличные от человека, имеют геном, содержащий трансген тяжелой цепи человека и трансген легкой цепи человека, кодирующий все или часть связы- 17 028433 вающих молекул человека, которые описаны выше. Трансгенных млекопитающих, отличных от человека, можно иммунизировать очищенным или обогащенным препаратом вируса гриппа или его фрагментом. Протоколы иммунизации млекопитающих, отличных от человека, хорошо известны в уровне техники. См., Икшд ЛийЪоФек: А. ЬаЪогаФгу Мапиа1, Ебйеб Ьу: Е. Наг1оте, Ό. Ьаие (1998), Со1б Зргшд НагЪог ЬаЬога1огу, Со1б Зргшд НагЬог, Ыете Уогк и Сиггеп! Рго1осо1§ ίη 1ттипо1оду. Ебйеб Ъу: ТЕ. Сойдап, А.М. КгшкЪеек, Ό.Η. Магдийек, Е.М. ЗНеуасй ^. 81гоЪег (2001), 1оЬп \УПеу & Зоп5 1пс., Иете Уогк, раскрытия которых включены в данный документ с помощью ссылки. Протоколы иммунизации часто включают несколько иммунизации либо с, либо без адъювантов, таких как полный адъювант Фрейнда и неполный адъювант Фрейнда, но могут также включать иммунизации голой ДНК. В другом варианте осуществления связывающие молекулы человека продуцируются В-клетками, плазматическими клетками и/или клетками памяти, полученными из трансгенных животных. В еще одном варианте осуществления связывающие молекулы человека продуцируются гибридомами, которые получают путем слияния В-клеток, полученных из вышеописанных трансгенных млекопитающих, отличных от человека, с иммортализированными клетками. В-клетки, плазматические клетки и гибридомы, которые можно получать из вышеописанных трансгенных млекопитающих, отличных от человека, и связывающие молекулы человека, которые можно получать из вышеописанных трансгенных млекопитающих, отличных от человека, В-клеток, плазматических клеток и/или клеток памяти и гибридом, также являются частью настоящего изобретения.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение предусматривает композиции, содержащие, по меньшей мере, связывающую молекулу, предпочтительно моноклональное антитело человека согласно настоящему изобретению, по меньшей мере, ее функциональный вариант, по меньшей мере, иммуноконъюгат согласно настоящему изобретению и/или их комбинацию. В дополнение к этому композиции могут содержать, помимо прочего, стабилизирующие молекулы, такие как альбумин или полиэтиленгликоль, или соли. Предпочтительно применяемые соли представляют собой соли, которые сохраняют желаемую биологическую активность связывающих молекул и не придают каких-либо нежелательных токсикологических эффектов. Если необходимо, связывающие молекулы человека согласно настоящему изобретению могут быть заключены в материал или нанесены в виде покрытия на материал для защиты их от действия кислот или других естественных условий или условий, не относящихся к естественным, которые могут инактивировать связывающие молекулы.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение предусматривает композиции, содержащие, по меньшей мере, молекулу нуклеиновой кислоты, которая определена в настоящем изобретении. Композиции могут содержать водные растворы, такие как водные растворы, содержащие соли (например, ИаС1 или соли, которые описаны выше), детергенты (например, 8И8) и/или другие подходящие компоненты.
Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим, по меньшей мере, связывающую молекулу, такую как моноклональное антитело человека, согласно настоящему изобретению (или его функциональный фрагмент или вариант), по меньшей мере, иммуноконъюгат согласно настоящему изобретению, по меньшей мере, композицию согласно настоящему изобретению или их комбинации. Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению дополнительно содержит по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. Фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества хорошо известны специалисту в данной области техники. Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может дополнительно содержать по меньшей мере одно отличное терапевтическое средство. Подходящие средства также хорошо известны специалисту в данной области техники.
В определенных вариантах осуществления фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению содержит по меньшей мере одну дополнительную связывающую молекулу, например фармацевтическая композиция может представлять собой коктейль или смесь связывающих молекул. Фармацевтическая композиция может содержать по меньшей мере две связывающие молекулы согласно настоящему изобретению или по меньшей мере одну связывающую молекулу согласно настоящему изобретению и по меньшей мере одну дополнительную молекулу, связывающую и/или нейтрализующую вирус гриппа, такую как другое антитело, направленное против белка НА или против других антигенных структур, присутствующих на вирусах гриппа, таких как М2, и/или связывающие молекулы, нейтрализующие один или несколько других патогенов. В другом варианте осуществления дополнительную связывающую молекулу можно составить для одновременного раздельного или последовательного введения.
В некоторых вариантах осуществления связывающие молекулы проявляют синергичную нейтрализующую активность, когда применяются в комбинации. Используемое в данном документе выражение синергичный означает, что объединенные эффекты связывающих молекул, когда их применяют в комбинации, будут больше, чем их совокупные эффекты, когда их применяют отдельно. Синергически действующие связывающие молекулы могут связываться с различными структурами на том же или на разделенных фрагментах вируса гриппа. Способ расчета синергии осуществляют с помощью показателя аддитивности. Понятие показателя аддитивности (С1) было описано у Сйои апб Та1а1ау (1984). Композиции, например, могут содержать одну связывающую молекулу с нейтрализующей активностью и одну
- 18 028433 не-нейтрализующую связывающую молекулу. Не-нейтрализующие и нейтрализующие связывающие молекулы могут также действовать синергично при нейтрализации вируса гриппа.
В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция может содержать по меньшей мере одну связывающую молекулу согласно настоящему изобретению и по меньшей мере одну дополнительную связывающую молекулу. предпочтительно дополнительную связывающую молекулу. нейтрализующую вирус гриппа. Связывающие молекулы в фармацевтической композиции предпочтительно способны к реакции с вирусами гриппа различных подтипов. Связывающие молекулы могут иметь высокую аффинность и широкую специфичность. Предпочтительно обе связывающие молекулы являются перекрестно нейтрализующими молекулами в том отношении. что каждая из них нейтрализует вирусы гриппа разных подтипов. Кроме того. предпочтительно они нейтрализуют столько штаммов каждого из различных подтипов вируса гриппа. сколько возможно.
В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит по меньшей мере одно другое профилактическое и/или терапевтическое средство.
Предпочтительно указанные дополнительные терапевтические и/или профилактические средства представляют собой средства. способные к предупреждению и/или лечению инфекции. вызванной вирусом гриппа. и/или состояния. являющегося результатом такой инфекции. Терапевтические и/или профилактические средства включают. но без ограничения. противовирусные средства. Такие средства могут представлять собой связывающие молекулы. малые молекулы. органические или неорганические соединения. ферменты. последовательности полинуклеотидов. противовирусные пептиды и т. д. Другие средства. которые используются в настоящее время для лечения пациентов. инфицированных вирусами гриппа. представляют собой ингибиторы М2 (например. амантидин. римантадин) и/или ингибиторы нейраминидазы (например. занамивир. озельтамивир). Их можно применять в комбинации со связывающими молекулами согласно настоящему изобретению. В комбинации в данном документе означает одновременно. в виде отдельных составов или в виде одного комбинированного состава или в соответствии со схемой последовательного введения в виде отдельных составов. в любом порядке. Средства. способные к предупреждению и/или лечению инфекции. вызванной вирусом гриппа. и/или состояния. являющегося результатом такой инфекции. которые находятся в фазе испытаний. можно также применять в качестве других терапевтических и/или профилактических средств. пригодных для настоящего изобретения. Связывающие молекулы или фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению можно исследовать в подходящих животных модельных системах перед применением у людей. Такие животные модельные системы включают. без ограничения. мышь. хорька и обезьяну.
Как правило. фармацевтические композиции должны быть стерильными и стабильными при условиях производства и хранения. Связывающие молекулы. иммуноконъюгаты или композиции согласно настоящему изобретению могут присутствовать в форме порошка для восстановления в соответствующем фармацевтически приемлемом вспомогательном веществе до или во время доставки. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных инъекционных растворов предпочтительными способами получения являются вакуумная сушка и сушка сублимацией (лиофилизация). которые дают в результате порошок активного ингредиента плюс любого дополнительного желаемого ингредиента из их раствора. ранее стерилизованного фильтрованием.
В качестве альтернативы связывающие молекулы. иммуноконъюгаты или композиции согласно настоящему изобретению могут присутствовать в растворе. и соответствующее фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество можно добавлять и/или смешивать до или во время доставки для обеспечения единичной инъекционной лекарственной формы. Предпочтительно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. используемое в настоящем изобретении. является подходящим для высокой концентрации лекарственного средства. может поддерживать надлежащую текучесть и. при необходимости. может задерживать абсорбцию.
На выбор оптимального пути введения фармацевтической композиции будут влиять несколько факторов. в том числе физико-химические свойства активных молекул в композициях. неотложность клинической ситуации и взаимосвязь концентраций активных молекул в плазме с желаемым терапевтическим эффектом. Например. при необходимости. связывающие молекулы согласно настоящему изобретению можно приготовить с носителями. которые защищают их от быстрого высвобождения. как. например. состав с контролируемым высвобождением. в том числе имплантаты. трансдермальные пластыри и микроинкапсулированные системы доставки. Можно использовать. помимо прочего. биоразлагаемые биосовместимые полимеры. такие как этилен-винилацетат. полиангидриды. полигликолевая кислота. коллаген. сложные полиортоэфиры и полимолочная кислота. Кроме того. может быть необходимо покрыть связывающие молекулы или совместно вводить связывающие молекулы с материалом или соединением. которые предотвращают инактивацию связывающих молекул человека. Например. связывающие молекулы можно вводить субъекту в соответствующем носителе. например липосомах. или разбавителе.
Пути введения можно разделить на две главных категории. пероральное и парентеральное введение. Предпочтительным путем введения является внутривенное или введение с помощью ингаляции.
Пероральные лекарственные формы можно составлять. помимо прочего. в виде таблеток. лепешек. пастилок. водных или масляных суспензий. диспергируемых порошков или гранул. эмульсий. твердых
- 19 028433 капсул, мягких желатиновых капсул, сиропов или эликсиров, пилюль, драже, жидкостей, гелей или взвесей. Эти составы могут содержать фармацевтические вспомогательные вещества, в том числе, но без ограничения, инертные разбавители, гранулирующие средства и средства, улучшающие распадаемость, связующие, смазывающие средства, консерванты, красители, ароматизаторы или подсластители, растительные или минеральные масла, смачивающие средства и загустители.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению можно также составлять для парентерального введения. Составы для парентерального введения могут присутствовать, помимо прочего, в форме водных или неводных изотоничных стерильных нетоксичных инъекционных или инфузионных растворов или суспензий. Растворы или суспензии могут содержать средства, которые не являются токсичными для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях, такие как 1,3-бутандиол, раствор Рингера, раствор Хенкса, изотоничный раствор хлорида натрия, масла, жирные кислоты, анестезирующие средства местного действия, консерванты, буферы, средства, повышающие вязкость или растворимость, водорастворимые антиоксиданты, маслорастворимые антиоксиданты и средства-хелаторы металлов.
В дополнительном аспекте связывающие молекулы, такие как моноклональные антитела человека (их функциональные фрагменты и варианты), иммуноконъюгаты, композиции или фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению можно применять в качестве лекарственного препарата или диагностического средства. Таким образом, способы диагностики, лечения и/или предупреждения инфекции, вызванной вирусом гриппа, с использованием связывающих молекул, иммуноконъюгатов, композиций или фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению представляют собой другой аспект настоящего изобретения. Вышеупомянутые молекулы можно, помимо прочего, применять при диагностике, профилактике, лечении инфекционного вирусного заболевания грипп, вызванного вирусом гриппа В, или их комбинации. Они являются подходящими для лечения пациентов, еще не получавших лечение, страдающих от инфекции, вызванной вирусом гриппа, и пациентов, которые получили или получали лечение от инфекции, вызванной вирусом гриппа.
Вышеупомянутые молекулы или композиции можно использовать в сочетании с другими молекулами, полезными при диагностике, профилактике и/или лечении. Их можно использовать ίη νίΐτο, ех νίνο или ίη νίνο. Например, связывающие молекулы, такие как моноклональные антитела человека (или их функциональные варианты), иммуноконъюгаты, композиции или фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению, можно вводить совместно с вакциной против вируса гриппа (если она доступна). В качестве альтернативы вакцину можно вводить до или после введения молекул согласно настоящему изобретению. Вместо вакцины также можно использовать противовирусные средства в сочетании со связывающими молекулами согласно настоящему изобретению. Подходящие противовирусные средства упоминаются выше.
Молекулы, как правило, составляют в композиции и фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению в терапевтически или диагностически эффективном количестве. В качестве альтернативы их можно составлять и вводить отдельно. Например, другие молекулы, такие как противовирусные средства, можно применять системно, хотя связывающие молекулы согласно настоящему изобретению можно применять внутривенно.
Лечение может быть нацелено на группы пациентов, которые являются чувствительными к инфекционному заболеванию грипп. Такие группы пациентов включают, но без ограничения, например, пожилых людей (например, возрастом >50 лет, возрастом >60 лет и предпочтительно возрастом >65 лет), молодых людей (например, возрастом <5 лет, возрастом <1 года), госпитализированных пациентов и уже инфицированных пациентов, которые получили лечение противовирусным соединением, но проявили недостаточный противовирусный ответ.
Схемы дозирования можно корректировать для обеспечения оптимального желаемого ответа (например, терапевтического ответа). Подходящий диапазон дозировок может, например, составлять 0,01100 мг/кг массы тела, предпочтительно 0,1-50 мг/кг массы тела, предпочтительно 0,01-15 мг/кг массы тела.
Кроме того, например, можно вводить одной болюсной дозой, несколько разделенных доз можно вводить в течение периода времени или дозу можно пропорционально снижать или повышать, на что указывают потребности терапевтической ситуации. Молекулы и композиции согласно настоящему изобретению предпочтительно являются стерильными. Способы обеспечения стерильности этих молекул и композиций являются хорошо известными в данной области техники. Другие молекулы, полезные при диагностике, профилактике и/или лечении, можно вводить при подобной схеме дозирования, которая предлагается для связывающих молекул согласно настоящему изобретению. Если другие молекулы вводят раздельно, их можно вводить пациенту перед (например, за 2, 5, 10, 15, 30, 45, 60 мин, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 ч, 2, 3, 4, 5, 7 дней, 2, 4 или 6 недель), одновременно с или после (например, через 2, 5, 10, 15, 30, 45, 60 мин, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 ч, 2, 3, 4, 5, 7 дней, 2, 4 или 6 недель) введения одной или нескольких связывающих молекул человека или фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению. Точную схему дозирования обычно подбирают в ходе клинических
- 20 028433 испытаний у пациентов-людей.
Связывающие молекулы человека и фармацевтические композиции, содержащие связывающие молекулы человека, являются особенно полезными и часто предпочтительными, когда их нужно вводить в человеческий организм в качестве ίη νίνο терапевтических средств, поскольку иммунный ответ реципиента на вводимые антитела часто будет значительно слабее, чем вызванный введением моноклональной мышиной химерной или гуманизированной связывающей молекулой.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к применению связывающих молекул, таких как нейтрализующие моноклональные антитела человека (их функциональные фрагменты и варианты), иммуноконъюгаты, молекулы нуклеиновых кислот, композиции или фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению, при получении лекарственного препарата для диагностики, профилактики, лечения инфекции, вызванной вирусом гриппа, в частности инфекционного вирусного заболевания грипп, вызванного вирусами гриппа В, или их комбинации.
После этого наборы, содержащие, по меньшей мере, связывающую молекулу, такую как нейтрализующее моноклональное антитело человека (его функциональные фрагменты и варианты), по меньшей мере, иммуноконъюгаты, по меньшей мере, молекулу нуклеиновой кислоты, по меньшей мере, композицию, по меньшей мере, фармацевтическую композицию, по меньшей мере, вектор, по меньшей мере, хозяина согласно настоящему изобретению или их комбинацию, также представляют собой аспект настоящего изобретения. Необязательно, вышеописанные компоненты наборов согласно настоящему изобретению являются запакованными в подходящие контейнеры и маркированными для диагноза, профилактики и/или лечения указанных состояний. Вышеупомянутые компоненты можно хранить в контейнерах с однократной или несколькими дозами в виде водного, предпочтительно стерильного, раствора или в виде лиофилизированного, предпочтительно стерильного, состава для восстановления. Контейнеры можно сформировать из ряда материалов, таких как стекло или пластик, и могут иметь стерильное отверстие для доступа (например, контейнер может представлять собой мешок для раствора внутривенной инъекции или флакон, которые имеют пробку, прокалываемую иглой для подкожной инъекции). Набор может дополнительно содержать больше контейнеров, содержащих фармацевтически приемлемый буфер. Кроме того, он может включать другие материалы, желаемые с коммерческой или пользовательской точки зрения, в том числе другие буферы, разбавители, фильтры, иглы, шприцы, среду культивирования для одного или нескольких из подходящих хозяев и, возможно, даже по меньшей мере одно другое терапевтическое, профилактическое или диагностическое средство. К набору могут прилагаться инструкции, обычно включенные в коммерческие упаковки терапевтических, профилактических или диагностических продуктов, которые содержат информацию, например, о показаниях, по применению, дозировке, производстве, введению, противопоказаниям и/или предупреждения, относящиеся к применению таких терапевтических, профилактических или диагностических продуктов.
Связывающие молекулы согласно настоящему изобретению можно также преимущественно применять в качестве диагностического средства в ίη νίίτο способе обнаружения вируса гриппа. Настоящее изобретение, следовательно, также относится к способу обнаружения подтипа вируса гриппа В в образце, где способ включает следующие этапы:
(a) оценка уровня антигена вируса гриппа В в биологическом образце с применением связывающей молекулы согласно настоящему изобретению и/или иммуноконъюгата согласно настоящему изобретению;
(b) сравнение оцененного уровня антигена вируса гриппа В с контрольным уровнем, при этом повышение оцененного уровня антигена вируса гриппа В по сравнению с контрольным уровнем антигена вируса гриппа В указывает на инфекцию вирусом гриппа В.
Биологический образец может представлять собой биологический образец, в том числе, без ограничения, кровь, сыворотку, экскременты, мокроту, носоглоточные аспираты, бронхиальный лаваж, мочу, ткань или другой биологический материал от (потенциально) инфицированных субъектов или небиологический образец, такой как вода, напиток и т. д. (Потенциально) инфицированные субъекты могут быть субъектами-людьми, но животных, которые по подозрению являются носителями вируса гриппа, также можно исследовать на предмет присутствия вируса с применением связывающих молекул человека или иммуноконъюгатов согласно настоящему изобретению. Образец можно вначале подвергнуть манипуляции с тем, чтобы сделать его более подходящим для способа обнаружения. Манипуляция означает, помимо прочего, обработку образца, который по подозрению содержит вирус, и/или образца, содержащего вирус, таким образом, что вирус будет распадаться на антигенные компоненты, такие как белки, (поли)пептиды или другие антигенные фрагменты. Предпочтительно связывающие молекулы человека или иммуноконъюгаты согласно настоящему изобретению приводят в контакт с образцом в условиях, которые обеспечивают возможность образования иммунологического комплекса между связывающими молекулами человека и вирусом или его антигенными компонентами, которые могут присутствовать в образце. Образование иммунологического комплекса, если он образуется, указывающее на присутствие вируса в образце, затем обнаруживают и измеряют с помощью подходящих средств. Такие способы включают, помимо прочего, гомогенный и гетерогенный иммунологические анализы связывания, такие как радиоиммунологические анализы (К1А), ЕЫ8А, иммунофлуоресцентный анализ, иммуногистохими- 21 028433 ческий анализ, РАС8, В1АСОКЕ и Вестерн-блоттинг.
Предпочтительными методиками анализа, особенно для широкомасштабного клинического скрининга сыворотки, и крови пациента, и продуктов, получаемых из крови пациента, являются методики ЕЫ8А и Вестерн-блоттинга. Исследования ЕЫ8А являются особенно предпочтительными. Для применения в качестве реактивов в этих анализах связывающие молекулы или иммуноконъюгаты согласно настоящему изобретению подходящим образом связывают с внутренней поверхностью микротитровальных планшетов.
Связывающие молекулы или иммуноконъюгаты согласно настоящему изобретению можно непосредственно связывать с лункой микротитровального планшета. Тем не менее, максимальное связывание связывающих молекул или иммуноконъюгатов согласно настоящему изобретению с лунками можно получить путем предварительной обработки лунок полилизином перед добавлением связывающих молекул или иммуноконъюгатов согласно настоящему изобретению. Кроме того, связывающие молекулы или иммуноконъюгаты согласно настоящему изобретению можно ковалентно прикрепить к лункам с помощью известных средств. В целом, связывающие молекулы или иммуноконъюгаты используют в концентрации от 0,01 до 100 мкг/мл для нанесения в виде покрытия, хотя также можно использовать как большие, так и меньшие количества. Образцы затем добавляют в лунки, покрытые связывающими молекулами или иммуноконъюгатами согласно настоящему изобретению.
Настоящее изобретение дополнительно предусматривает способы лечения или предупреждения инфекции, вызванной вирусом гриппа В, у субъекта, включающие введение субъекту терапевтически или профилактически эффективного количества связывающих молекул, иммуноконъюгатов и/или фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления субъект является млекопитающим, предпочтительно человеком.
Кроме того, связывающие молекулы согласно настоящему изобретению можно применять для идентификации специфических структур для связывания вируса гриппа. Структуры для связывания могут представлять собой эпитопы на белках и/или полипептидах. Они могут быть линейными, а также структурными и/или конформационными. В одном варианте осуществления структуры для связывания можно анализировать посредством РЕРЗСАЫ анализа (см., помимо прочего, \УО 84/03564, \УО 93/09872, δΙοοΙδίΓΗ с1 а1., 1996). В качестве альтернативы библиотеку случайных пептидов, содержащую пептиды из белка вируса гриппа, можно подвергнуть скринингу в отношении пептидов, способных к связыванию со связывающими молекулами согласно настоящему изобретению.
Настоящее изобретение дополнительно проиллюстрировано следующими примерами и фигурами. Примеры не предусмотрены для ограничения объема настоящего изобретения каким-либо образом.
Примеры
Пример 1.
Конструирование библиотек для фагового дисплея δοΡν с использованием РНК, экстрагированной из В-клеток памяти.
Периферическую кровь собирали у доноров с нормальным состоянием здоровья путем венопункции в пробирки для образцов с антикоагулянтом ЕЭТА. Библиотеки для фагового дисплея одноцепочечных Ρν (δϋΡν) получали, как описано в документе \УО 2008/028946, который включен в данный документ с помощью ссылки. Окончательную библиотеку проверяли на частоту вставок с помощью ПЦР колоний с использованием набора праймеров, фланкирующих вставленные УН-УЪ участки (100-150 отдельных колоний). Как правило, более 95% колоний показывали правильную длину вставки (см. табл. 1). Продукты ПЦР колоний использовали для последующего анализа с помощью секвенирования ДНК для проверки изменений в последовательности и для оценки процента колоний, показывающих законченную ОКБ. Он составлял, как правило, выше 70% (см. табл. 1). Также анализировали частоту мутаций в У генах. Приблизительно 95% последовательностей не находились в зародышевой конфигурации, что указывало на процесс созревания и соответствовало фенотипу клеток памяти у В-клеток, используемых в качестве источника РНК для библиотеки.
Применяли подход двухраундной ПЦР амплификации с использованием наборов праймеров, показанных в документе \УО 2008/028946, для выделения УН и Уъ участков иммуноглобулина из соответствующего репертуара у доноров.
Первый раунд амплификации на соответствующей кДНК давал семь, шесть и девять продуктов длиной приблизительно 650 пар оснований для УН, У-каппа и У-лямбда участков соответственно. Для амплификации УН участка 1дМ В-клеток памяти ОСМ праймер константного домена (специфичный к константному домену тяжелой цепи 1дМ) использовали в комбинации с ОН1-ОН7. Программа термоциклирования для амплификации первого раунда была следующей: 2 мин при 96°С (этап денатурации), 35 циклов по 30 с при 96°С/30 с при 60°С/50 с при 72°С, 10 мин заключительной элонгации при 72°С и охлаждение до 6°С. Продукты загружали на 1% агарозный гель и выделяли с использованием колонок для экстракции из геля (МасЬегеу-Ыаде1, ΜΝ) и элюировали в 50 мкл 5 мМ ТП5-НС1 с рН 8,0. 10% продуктов первого раунда (5 мкл) подвергали второму раунду амплификации. Эти праймеры удлиняли сайтами рестрикции, обеспечивающими возможность направленного клонирования соответствующих Уъ и УН участков в векторе для фагового дисплея РЭУ-С06. Программа ПЦР для амплификации второго ра- 22 028433 унда была следующей: 2 мин при 96°С (этап денатурации), 30 циклов по 30 с при 96°С/30 с при 60°С/50 с при 72°С, 10 мин заключительной элонгации при 72°С и охлаждение до 6°С. Продукты второго раунда (~350 пар оснований) вначале загружали на гель и экстрагировали из агарозы, как указано выше. Затем фрагменты собирали в пулы согласно распространению в природе I сегментов, обнаруживаемых в продуктах гена иммуноглобулина, с получением в результате семи, шести и девяти пулов соответственно для вариабельных участков УН, ν-каппа и ν-лямбда, которые показаны в табл. 1 и 2.
Для получения нормализованного распределения последовательностей иммуноглобулина в иммунной библиотеке шесть пулов ν-каппа и девять пулов ν-лямбда легких цепей смешивали в соответствии с процентными соотношениями, упомянутыми в табл. 1. Этот единственный окончательный пул У (5 мкг) расщепляли рестрикционными ферментами ЗаП и ΝοίΙ, загружали на 1,5% агарозный гель (~350 пар оснований) и выделяли из него с использованием ΜΝ-экстракционных колонок и лигировали в разрезанный ЗаП-ΝοίΙ вектор РЭУ-С06 (~5000 пар оснований) следующим образом: 500 нг вектора РОУ-С’06. 70 нг вставки УЬ. 5 мкл 10Х буфера для лигирования (ΝΕΕ). 2,5 Т4 ДНК лигазу (400 ед./мкл) (ΝΕΕ) и сверхчистую воду добавляли до общего объема 50 мкл (соотношение вектора к вставке составляло 1:2). Лигирование осуществляли в течение ночи в водяной бане температурой 16°С. Затем объем удваивали водой, экстрагировали равным объемом смеси фенол-хлороформ-изоамиловый спирт (75:24:1) (ЧпуПгодеп) с последующей экстракцией хлороформом (Мегск) и осаждали с 1 мкл Ре11е1 РаиИ (Νονο^π), 10 мкл ацетата натрия (3 М, рН 5,0) и 100 мкл изопропанола в течение 2 ч при -20°С. Полученный образец в дальнейшем центрифугировали при 20000хд в течение 30 мин при 4°С. Полученный осадок отмывали 70% этанолом и центрифугировали в течение 10 мин при 20000хд при комнатной температуре. Этанол удаляли и осадок сушили на воздухе в течение нескольких минут и затем растворяли в 50 мкл буфера, содержащего 10 мМ 1п8-НС1, рН 8,0. 2 мкл смеси для лигирования использовали для трансформации 40 мкл электрокомпетентных клеток ТО-1 (АдПепГ) в охлажденной 0,1 см кювете для электропорации (Вюгаб) с использованием аппарата Оеперийег II (Вюгаб), установленного на 1,7 кВ, 200 Ом, 25 мкФ (временная постоянная ~4,5 мс). Непосредственно после импульса бактерии смывали из кюветы 750 мкл среды ЗОС Ц^йгодеп), содержащей 5% (вес./об.) глюкозы (З1дта) при 37°С и переносили в 15 мл круглодонную пробирку для культивирования. Еще 750 мкл ЗОС/глюкозы использовали для смыва оставшихся бактерий из кюветы и добавляли в пробирку для культивирования. Бактерии выделяли путем культивирования в течение ровно 1 ч при 37°С в инкубаторе со встряхиванием при 220 об/мин. Трансформированных бактерий высаживали на большие 240 мм квадратные чашки Петри (ΝΟΝΟ), содержащие 200 мл 2ΤΥ агара (16 г/л бактотриптона, 10 г/л бактодрожжевого экстракта, 5 г/л №С1, 15 г/л агара, рН 7,0), дополненного 50 мкг/мл ампициллина и 5% (вес./об.) глюкозы (Зщта). Разведения 1:1000 и 1:10000 высаживали с целью подсчета на 15 см чашки Петри, содержащие ту же среду. Эту процедуру трансформации повторяли последовательно 20 раз и полную библиотеку высаживали суммарно на десять больших квадратных чашек Петри и выращивали в течение ночи в 37°С нагреваемой камере для культивирования. Как правило, с использованием вышеуказанного протокола получали около 1х107 КОЕ. Промежуточную библиотеку У легкой цепи собирали с плашек путем осторожного соскребания бактерий в 12 мл среды 2ΤΥ на плашку. Клеточную массу определяли с помощью измерения ОЭ600 и два раза 500 ОЭ бактерии использовали для получения плазмидной ДНК для больших объемов культур с использованием двух колонок тах1ргер (МК) в соответствии с инструкциями производителя.
Аналогично вариабельным участкам Уъ продукты второго раунда с УН-1Н вначале смешивали с получением нормального распределения использования I сегмента (см. табл. 2), что приводило в результате к 7 субпулам УН, называемым РН1-РН7. Пулы смешивали с получением нормализованного распределения последовательностей с использованием процентных соотношений, описанных в табл. 2, получая одну фракцию Ун, которую расщепляли рестрикционными ферментами Зй1 и ΧΙιοΙ и лигировали в разрезанную ЗГП-ΧΙιοΙ промежуточную библиотеку в РЭУ-У^ полученную, как описано выше. Порядок лигирования, способ очистки, последующая трансформация ТО1 и сбор бактерий были точно такими же, как описано для промежуточной библиотеки Уь (см. выше), за исключением количества использованных 240 мм плашек. Для окончательной библиотеки использовали 20 плашек, что давало в результате примерно 2х107 КОЕ. Окончательную библиотеку проверяли на частоту вставок с помощью ПЦР колоний с использованием набора праймеров, фланкирующих вставленные УН-Уь участки (100-150 отдельных колоний). Как правило, более 95% колоний показывали правильную длину вставки (см. табл. 3). Продукты ПЦР колоний использовали для последующего анализа с помощью секвенирования ДНК для проверки изменений в последовательности и для оценки процента колоний, показывающих законченную ОКР. Он составлял, как правило, выше 70% (см. табл. 3). Также анализировали частоту мутаций в У генах. Приблизительно 95% последовательностей не находились в зародышевой конфигурации, что указывало на процесс созревания и соответствовало фенотипу клеток памяти у В-клеток, используемых в качестве источника РНК для библиотеки. Наконец, библиотеку выделяли и амплифицировали при использовании СТ фагов-помощников (см. \УО 02/103012) и использовали для отбора фаговых антител с помощью способов пэннинга, как описано ниже.
- 23 028433
Пример 2.
Отбор фагов. несущих одноцепочечные Ρν фрагменты против гриппа В.
Отбор проводили с использованием библиотек для фагового дисплея антител против рекомбинантного гемагглютинина (НА) гриппа В (В/ОЫо/01/2005. В/Р1опба/04/2006 и В/ВпзЬапе/60/2008). Антигены НА разводили в РВ§ (5.0 мкг/мл). добавляли в пробирки для иммуноанализа Мах18огр™ ЫипсЧттипо (Ыипс). 2 мл на пробирку. и инкубировали в течение ночи при 4°С на вращающемся столе. Пробирки для иммуноанализа опорожняли и промывали три раза блокирующим буфером (2% обезжиренное сухое молоко (ЕЬК) в РВ§). Затем пробирки для иммуноанализа целиком заполняли блокирующим буфером и инкубировали в течение 1-2 ч при комнатной температуре. Аликвоты библиотеки для фагового дисплея (350-500 мкл. амплифицированой с использованием СТ фага-помощника (см. АО 02/103012)) блокировали в блокирующем буфере (необязательно: дополненном 10% неинактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки и 2% мышиной сыворотки) в течение 1-2 ч при комнатной температуре. Заблокированную фаговую библиотеку добавляли в пробирки для иммуноанализа. инкубировали в течение 2 ч при комнатной температуре и промывали отмывочным буфером (0.05% (об./об.) Ттеееп-20 в РВ§) для удаления несвязанных фагов. Связанные фаги элюировали из соответствующего антигена путем инкубирования с 1 мл 100 мМ триэтиламина (ТЕА) в течение 10 мин при комнатной температуре. Затем элюированные фаги смешивали с 0.5 мл 1 М Т65-НС1 с рН 7.5 для нейтрализации рН. Эту смесь использовали для инфицирования 5 мл культуры ХЬ1-В1ие Е.соП. которая была выращена при 37°С до ОЭ примерно 0.3 при 600 нм. Фагам предоставляли возможность для инфицирования бактерий ХЬ1-В1ие в течение 30 мин при 37°С. Затем смесь центрифугировали в течение 10 мин при 3000хд при комнатной температуре и осадок бактерий ресуспендировали в 0.5 мл среды 2 с триптоном и дрожжевым экстрактом (2ΤΥ). Полученную суспензию бактерий делили на две плашки 2ΤΥ агара. дополненные тетрациклином. ампициллин и глюкозой. После инкубирования плашек в течение ночи при 37°С колонии соскребали с плашек и использовали для получения обогащенной фаговой библиотеки. как. по существу. описано Эе КгшГ е1 а1. (1995а) и в АО 02/103012. Вкратце. бактерии. которые соскребли. использовали для инокуляции среды 2ΤΥ. содержащей ампициллин. тетрациклин и глюкозу. и выращивали при температуре 37°С до ΟΌ ~0.3 при 600 нм. СТ фаги-помощники добавляли и предоставляли им возможность для инфицирования бактерий. после чего среду меняли на 2ΤΥ. содержащую ампициллин. тетрациклин и канамицин. Инкубирование продолжали в течение ночи при 30°С. На следующий день бактерии удаляли из среды 2ΤΥ с помощью центрифугирования. после чего фаги в среде осаждали с использованием полиэтиленгликоля (РЕО) 6000/№С1. Наконец. фаги растворяли в 2 мл РВ§ с 1% бычьего сывороточного альбумина (В8А). стерилизовали фильтрованием и использовали для следующего цикла отбора. Второй цикл отбора осуществляли либо на тот же подтип НА. либо на НА отличающегося фенотипа.
Перед выделением отдельных одноцепочечных фаговых антител проводили два последовательных цикла отбора. После второго цикла отбора отдельные колонии Е.соН использовали для получения моноклональных фаговых антител. По существу. отдельные колонии выращивали до лог-фазы в формате 96луночного планшета и инфицировали VСδ-М13 фагами-помощниками. после чего обеспечивали возможность продуцирования фаговых антител. Супернатанты. содержащие фаговые антитела. использовали непосредственно в ЕЫ8А для связывания с антигенами НА. В качестве альтернативы фаговые антитела осаждали с помощью РЕО/ЫаС1 и стерилизовали фильтрованием как для ЕЫ8А. так и для проточного цитометрического анализа (обычно выполняемого с клонами. которые являются положительными по результатам ЕЫ8А).
Пример 3.
Подтверждение специфических к НА одноцепочечных фаговых антител.
Выбранные супернатанты. содержащие одноцепочечные фаговые антитела. которые получали при вышеописанных скринингах. подтверждали по результатам ЕЫ8А в отношении специфичности. т.е. связывания с различными антигенами НА. Для этой цели экспрессируемый в составе бакуловируса рекомбинантный НА гриппа В (В/ОЫо/01/2005. В/Ма1ауз1а/2506/2004. В/НПп/20/2003. В/ВпзЬапе/60/2008 и В/Р1опба/04/2006) (Рго1е1п §с1епсез. Коннектикут. США) наносили в виде покрытия на (0.5 мкг/мл) планшеты для ЕЫ8А Мах15огр™. После покрытия планшеты промывали три раза РВ§. содержащим 0.1% (об./об.) Ттеееп-20. и блокировали в РВ§. содержащем 2% ЕЬК в течение 1 ч при комнатной температуре. Выбранные одноцепочечные фаговые антитела инкубировали в течение 1 ч в равном объеме РВ§. содержащего 4% ЕЬК. с получением блокированных фаговых антител.
Планшеты опорожняли. промывали три раза РВ§/0.1% Ттеееп-20 и блокированные одноцепочечные антитела добавляли в лунки. Обеспечивали возможность протекания инкубирования в течение одного часа; планшеты промывали пять раз РВ§/0.1% Ттеееп-20. Связанные фаговые антитела обнаруживали (с использованием измерения ОЭ при 492 нм) с помощью антитела к М13. конъюгированного с пероксидазой. В качестве контроля процедуру проводили одновременно без одноцепочечного фагового антитела и с неродственным одноцепочечным фаговым антителом отрицательного контроля.
Из отборов по различным антигенам НА с иммунными библиотеками получали 14 отдельных одноцепочечных фаговых антител. специфичных в отношении НА как УатадаЮ-подобного гриппа В. так и
- 24 028433
УюЮпа-подобного гриппа В (вс08-031, §с08-032, §с08-033, §с08-034, §с08-035, §с08-059, 8С10-023, 5С10-032, 8с10-049, зс10-051, зс11-035, 5с11-036, вс11-038 и 5с11-039). См. табл. 4.
Эти 14 фаговых антител использовали для конструирования полностью человеческих иммуноглобулинов для дальнейшей характеристики (см. пример 4).
Пример 4.
Конструирование молекул полностью человеческого иммуноглобулина (моноклональные антитела человека) из отобранных одноцепочечных Ρν.
Из отобранных клонов специфичных одноцепочечных фаговых антител (всРх') получали плазмидную ДНК и нуклеотидные последовательности определяли с использованием стандартных методик секвенирования. Особенности генов УН и У[, в 8сΡν определяли (см. табл. 5) с использованием страницы поиска 1МСТ/У-РИЕ8Т (ВгосНеГ е1 а1. (2008)).
Вариабельный участок тяжелой цепи (УН) 8сΡν клонировали путем расщепления рестриктазами (δίΐΙ/ΧΜ) для экспрессии в векторе экспрессии 1дС р1д-С911-НСдатта1, который расщепляли теми же ферментами. Вариабельный участок легкой цепи (УЬ) также клонировали в предусмотренный для него вектор экспрессии 1дС р1С-С909-Скарра или р1д-С910-С1атЬ6а с использованием 8аИ/№Н для вставки фрагмента и ΧΙιοΙ/ΝοΙΙ для целевого вектор, как описано ранее в \УО 2008/028946.
Для удаления возможного сайта дезамидирования в одном из антител (СВ8059) можно создать антитело, мутантное по аминокислоте (СВ8071), с помощью ПЦР-сборки (полимеразной циклической сборки). Создавали два перекрывающихся ПЦР фрагмента, каждый из которых содержал желаемую мутацию. Эти фрагменты смешивали в эквимолярных соотношениях, и они служили в качестве матрицы во втором раунде ПЦР с получением последовательности ЬС полной длины. Нуклеотидные последовательности для всех конструктов подтверждали с использованием стандартных методик секвенирования. Полученные в результате конструкты экспрессии, кодирующие тяжелые и легкие цепи 1дС1 человека временно экспрессировали вместе в клетках НЕК293Т. Через одну неделю получали супернатанты, содержащие антитела 1дС1 человека, и их подвергали обработке с использованием стандартных процедур очистки. Антитела 1дС1 человека титровали в диапазоне концентраций от 10 до 0,003 мкг/мл против антигена НА гриппа В (данные не показаны). Неродственное антитело включали в качестве контрольного антитела.
Аминокислотная последовательность СЭВ обеих, тяжелой и легкой цепей, выбранных молекул иммуноглобулина приведена в табл. 5. Ниже приведены нуклеотидная последовательность и аминокислотная последовательность вариабельных участков тяжелых и легких цепей
Пример 5.
Перекрестно-связывающая реактивность 1дС к гриппу В.
Выбранные антитела к гриппу В применяли для тестирования широту связывания с помощью РАС8-анализа. С этой целью рекомбинантные векторы экспрессии полноразмерного антигена гриппа В, кодирующие НА (В/М1881881рр1/04/2008, В/Нои81оп/В60/1997, В/№15Н\а11е/45/199 Р В/Р1оп6а/01/2009, В/М1881881рр1/07/2008 и В/ОЫо/01/2005) трансфицировали в клетки РЕВ.С6® с помощью липофектамина (1п\Цгодеп) в соотношении 1:5. Спустя 48 ч после трансфекции клетки РЕВ.С6®, экспрессирующие НА гриппа В на поверхности, анализировали с помощью РАС8 (СайоП, ВЭ Ьюкаепсе). Для этого клетки инкубировали с антителами 1дС в течение 1 ч с последующими тремя последовательными этапами отмывки с помощью РВ8, содержащего 0,1% В8А. Связавшиеся антитела выявляли с помощью конъюгированного с РЕ вторичного антитела к антителу человека, которое также инкубировали в течение 1 ч. В качестве отрицательного контроля использовали нетрансфицированные клетки РЕВ.С6® и инкубировали со вторичным антителом. Результаты РАС8 показывали, что связывающиеся с гриппом В антитела СВ8033, СВ8059, СВ8071, СВ10032 и СВ10051 демонстрировали связывание со всеми шестью тестируемыми НА гриппа В (табл. 6).
Пример 6.
Конкуренция за связывание НА у перекрестно-реактивных 1дС к гриппу В.
Описанные выше антитела 1дС к гриппу В проверяли на конкуренцию за эпитопы на НА гриппа В. Для этого В/Вт18Ьапе/60/2008, В/Р1оп6а/04/2006 и В/ЛШп/20/2003 метили биотином с применением набора Е2-1шк δи1рЬο-NНδ-^С-^С-Ь^οί^η (Р1етсе). 1 мкл 10 мМ раствора биотина добавляли к 110 мкг рекомбинантного НА, в котором был шестикратный избыток биотина, и инкубировали в течение 30-40 мин при комнатной температуре. Свободный невключенный биотин удаляли с помощью центрифужного фильтра Атюоп ИИта (0,5 мл, 10К мембрана иИтасе1-10К; МПНроте, кат. № ИРС501096). Для этого образец (300 мкл) загружали на колонку и крутили в течение 10 мин со скоростью 14000 ВРМ в настольной центрифуге ЕррепбогГ (20800 гсГ). Удаляли фильтрат и на колонку загружали 0,4 мл ЭРВ8-буфера и снова крутили. Данный этап повторяли два раза. Меченый образец извлекали путем вращения колонки сверху вниз в новой пробирке для сбора; затем загружали 200 мкл ЭРВ8 и крутили в настольной центрифуге в течение 1 мин со скоростью 1000 грт. Концентрацию НА измеряли с помощью прибора №то6гор ΝΌ-1000 (ТНегто 8с1епЛйс).
- 25 028433
Собственно эксперимент по конкурентному связыванию проводили на интерферометре Ос1е1-ОК для биослоев (РойеВю) согласно установкам из табл. 7 с применением покрытых стрептавидином биодатчиков (РойеВю, кат. № 18-5019), которые предварительно смачивали в течение 30 мин в буфере для режима измерения кинетики реакции при комнатной температуре. Если второе антитело могло связываться с НА гриппа В в присутствии первого, то этот случай считали неконкурентным (см. табл. 8). В качестве контролей применяли связывающееся со стеблем антитело СР9114 (которое описано в находящейся на одновременном рассмотрении заявке ЕР11173953.8) и несвязывающееся антитело СР8057 (которое описано в АО2010/130636).
Антитела СР10023 и СР10049 конкурировали за связывание СР8033. Антитела СР10032 и СР10051 конкурировали за связывание с СР8059. Антитело СР10049 конкурировало за связывание с СР10032. Ни одно из протестированных антител не конкурировало со связывающимся со стеблем антителом СР9114. Эти результаты указывают на наличие по меньшей мере 3-4 различных эпитопов на НА гриппа В (фиг. 1).
Пример 7.
Перекрестно-нейтрализующая активность 1дО.
Чтобы определить, способны ли выбранные 1дО блокировать несколько штаммов гриппа В, проводили ίη уйго анализы нейтрализации вируса (VNΑ). УNΑ проводили на клетках МОСК (АТСС ССЬ-34), которые культивировали в культуральной среде для клеток МЭСК (среде МЕМ, дополненной 20 мМ Нерек и 0,15% (мас./об.) бикарбоната натрия (полная среда МЕМ), дополненной 10% (об./об.) фетальной бычьей сыворотки). Уатада!а-подобные (В/НагЫп/7/1994 и В/Р1ойба/04/2006) и УюЮпа-подобные (В/Ма1аук1а/2506/2004 и В/ВйкЪапе/60/2008) штаммы гриппа В, использованные в анализе, разводили до титра 5,7х103 ТСГО50/мл (50% инфицирующей культуру ткани дозы на мл), при этом титр рассчитан по способу Спирмена-Карбера. Препараты 1дО (100 мкг/мл) серийно разводили в 2 раза (1:2-1:512) в полной среде МЕМ в лунках в четырех повторностях. 50 мкл соответствующего разбавления 1дО смешивали с 50 мкл вирусной суспензии (100 ТСГО50/25 мкл) и инкубировали в течение 1 ч при 37°С. Затем суспензию переносили в четырех повторностях в 96-луночные планшеты, содержащие конфлюэнтные культуры МОСК в 100 мкл полной среды МЕМ. Предварительно клетки МОСК высеивали с плотностью 2х104 клеток/лунку в культуральную среду для клеток МЭСК, выращивали до достижения клетками конфлюэнтности, отмывали с помощью 300-350 мкл РВ§, рН 7,4, и, наконец, в каждую лунку добавляли 100 мкл полной среды МЕМ. Инокулированные клетки культивировали в течение 3-4 дней при 37°С и каждый день проводили наблюдение за развитием цитопатогенного эффекта (СРЕ). СРЕ сравнивали с положительным контролем.
Все из СР8032, СР8033, СР8034, СР8035, СР8059, СР8071, СР10023, СР10032, СР10049, СР10051, СР11035, СР11036, СР11038 и СР11039 демонстрировали перекрестно-нейтрализующую активность в отношении репрезентативных штаммов как Уатада!а, так и УюЮпа-подобных штаммов вируса гриппа В. См. табл. 9.
Пример 8.
Блокирующая связывание с рецептором активность 1дО.
Для определения того, могут ли выбранные 1дО блокировать опосредованное рецептором связывание штаммов гриппа В с клетками-хозяевами, осуществляли оценки подавления гемагглютинации (Н1). Уатада1а-подобные (В/НагЫп/7/1994 и В/Р1ойба/04/2006) и УюЮпа-подобные (В/Ма1аук1а/2506/2004 и В/ВйкЪапе/60/2008) штаммы вируса гриппа В разводили до 8 единиц НА, согласно результатам определения при оценке НАИ, и объединяли с равным объемом серийно разведенного 1дО, и инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре. В лунки добавляли равный объем 0,5% эритроцитов индюшки (ТРВС) и продолжали инкубацию в течение 30 мин. Образование сгустков оценивали как доказательство гемагглютинации.
СР8059, СР8071, СР10032, СР10051 и СР11036 не демонстрировали Н1-активность по отношению к какому-либо из протестированных штаммов вируса гриппа В (>10 мкг/мл для СР11036, > 50 мкг/мл для других антител), что указывало на то, что они не блокируют связывание с рецептором. Антитела СР8033 и СР10023 проявляли Н1-активность по отношению к репрезентативным штаммам только у Уатада!а-, но не у УюЮпа-подобных штаммов вируса гриппа В. Антитело СР11035 проявляло Н1-активность по отношению к репрезентативному штамму только у УюЮпа-, но не у Уатада1а-подобных штаммов вируса гриппа В. Антитела СР10049, СР11038 и СР11039 проявляли Н1-активность по отношению к репрезентативным штаммам как у Уатада!а, так и у УюЮпа-подобных штаммов вируса гриппа В. См. табл. 10.
Альтернативно, иммунофлуоресцентный анализ входа разработали для анализа способности заданного антитела блокировать связывание с рецептором и интернализацию вируса. Поэтому вирус предварительно инкубировали с антителом в последовательных этапах с двукратным разведением перед добавлением к конфлюэнтному монослою МОСК-клеток, посеянных в 96-луночный планшет в инфекционной среде (ЭМЕМ+200 мМ глутамина), в течение 2-3 ч. Затем инокулят удаляли и заменяли антителом в указанных концентрациях на 16-18 ч при 37°С, 5% СО2. Спустя указанное время супернатанты удаляли и
- 26 028433 планшеты фиксировали в 80% ацетоне для последующего иммунофлуоресцентного определения путем мечения инфицированных клеток с помощью первичного моноклонального антитела мыши к NР (8айа Сш/, вс-52027) и сшитого с А1еха488 вторичного антитела к антителу мыши (1п\'Пгодеп А11017) с последующим ИАР1-мечением клеточных ядер (см. фиг. 2а). Как было показано с помощью Н1-анализа, антитело СИ8033 специфично блокировало вирусный вход Уатада1а-подобного вируса В/Р1огМа/04/2006, но не УюЮпа-подобного вируса В/Ма1аув1а/2506/2004. Антитело СИ8059 не блокировало вход тестируемых вирусов гриппа В. Некоторые планшеты анализировали с помощью устройства для биовизуализации ВО РаПцуау 855. Для оценки уровня подавления входа, с помощью инструментария для анализа изображений ВО РаПцуау анализировали интенсивности флуоресценции на заданную лунку, превышающие установленный фон, и количество клеток (с помощью красителя ЭЛР1 для определения клетки). Процент инфицированных клеток, обработанных указанными разведениями антител, в сравнении с инфицированными клетками, обработанными несвязывающимся контрольным антителом, показан на фиг. 2Ъ.
Пример 9.
Подавление выхода при помощи 1дО к НА.
Для исследования механизма действия антитела разработали анализ выхода для анализа количества вирусных частиц, высвободившихся в супернатант спустя 18 ч после инфицирования в условиях лечения антителом. Обнаружение (или отсутствие) сигнала от антител к НА после гель-электрофореза с последующим вестерн-блоттингом таких супернатантов принимали за указание на наличие (или отсутствие) высвободившихся вирусных частиц.
За 4 ч до эксперимента высеивали 40000 МИСК клеток/лунку в ЭМЕМ/глутамине в 96-луночные планшеты. Количество вируса, необходимое для достижения 90-100% инфицирования, титровали в ходе отдельного эксперимента. Необходимое количество вируса добавляли к клеткам и инкубировали при 37°С, 5% СО2. Спустя 3 ч удаляли супернатанты, а клетки трижды промывали РВ8 для удаления ненейтрализованных вирусных частиц. Клетки повторно заполняли инфекционной средой, содержащей тАЪ (серийное разведение, начиная от 20 мкг/мл). Спустя 16-18 ч при 37°С, 5% СО2, собирали супернатанты и лизировали оставшиеся клетки (Тпв НС1 рН 7,5, 150 мМ №С1, 5 мМ ЕИТА, 1% (об./об.) ТгПоп-Х). Образцы подвергали 8И8-РАОЕ/вестерн-блоттингу для анализа количества вирионов, высвободившихся в супернатант, измеренных путем проявления \УВ с применением окрашивания поликлональными антителами кролика к НА (Рго1е1п 8с1епсев) с последующим добавлением сшитого с НИР Р(аЪ')2-фрагмента к антителу кролика Иасквоп 1ттипо Иевеагсй ЬаЪогаФпев, 111-036-047). Как показано на фиг. 3, оба антитела СИ8033 и СИ8059 подавляют высвобождение вирусных частиц в зависимости от концентрации. Дополнительные эксперименты показали, что, по меньшей мере, СИ8071 и СИ10051 также подавляют высвобождение вирусных частиц.
Надлежащее инфицирование клеток проверяли путем фиксации одинаково обработанных лунок 80% ацетоном. Величину инфицирования оценивали с помощью иммунофлуоресцентного мечения с применением первичного моноклонального тела мыши к NР (8ап1а Сги/, вс-52027) и сшитого с А1еха488 вторичного антитела к антителу мыши (1п\а1годеп А11017). Затем планшеты анализировали с помощью устройства для биовизуализации ВО РаПцуау 855 (результаты не показаны).
Пример 10.
Сканирующая электронная микроскопия клеток, инфицированных гриппом В.
Клетки МИСК высеивали на стеклянные покровные стекла за день до эксперимента. На следующий день клетки инфицировали различными количествами вируса для определения количества, которое давало 90-100% инфицированных клеток спустя 18 ч после инфицирования. Спустя 3 ч после начального инфицирования удаляли супернатанты; клетки трижды промывали РВ8 перед добавлением сред, содержащих указанные концентрации антител. Спустя дополнительные 15-18 ч среду для культивирования клеток удаляли, а клетки фиксировали в 2,5% глутаральдегидном буфере и хранили при 4°С до последующего анализа. Образцы подвергали дополнительной химической фиксации с применением глутаральдегида (ОА) и/или тетроксида осмия (ОвО4). Перед получением 8ЕМ-изображения образцы обезвоживали при помощи ацетона и сушили до критической точки. Наконец, клетки помещали на столбики из оксида алюминия и покрывали тонким слоем углерода и исследовали на 8ЕМ-микроскопе 2е1вв ИЙта 55.
Поверхность МИСК-клеток, инфицированных гриппом В, покрывали электронноплотными сферическими частицами (фиг. 4В), в отличие от неинфицированных контролей (фиг. 4А). Инкубация с антителом СИ8059 не предотвращала образование таких сферических частиц (фиг. 4С), в то время как инкубация с антителом СИ8033 значительно уменьшала образование частиц (фиг. 4И). В отличие от инкубированных с СИ8059 клеток, отпочковавшиеся вирионы нельзя было легко выявить на инкубированных с СИ8033 клетках (фиг. 4Е и Р).
Пример 11.
Профилактическая активность человеческих моноклональных антител 1дО против летального контрольного заражения гриппом В ш νί\Ό.
Исследование проводили для тестирования профилактического эффекта моноклональных антител СИ8033 и СИ8071 против летального контрольного заражения двумя вирусами гриппа В ш νί\Ό. тАЪ СИ8033 и СИ8071 тестировали на профилактическую эффективность в мышиной модели летального кон- 27 028433 трольного заражения адаптированным к мышам вирусом гриппа В/Р1огПа/04/2006. Вирус В/Р1огМа/04/2006 адаптировали к мышам после 5 пассажей из легких в легкие. Адаптированный к мышам вирус гриппа В 5-го пассажа размножали в куриных яйцах с зародышем. Перед началом эксперимента всех мышей (Ва1Ь/с, самок, возрастом 6-8 недель, п=8 на группу) акклиматизировали и поддерживали в течение по меньше мере четырехдневного периода. тАЬ СЕ8033 и СЕ8071 внутривенно вводили дозами 0,06, 0,2, 0,6, 1,7 и 5 мг/кг в хвостовую вену (уепа соссудеик) в день -1 до контрольного заражения из расчета среднего веса 18 г на мышь и фиксированного объема дозы 0,2 мл. Контрольную группу держали отдельно и давали дозу контроля, представляющего собой среду для лекарства. Затем мышей в день 0 контрольно заражали 25 ΕΌ50 адаптированным к мышам вирусом гриппа В В/Р1огПа/04/2006 путем интраназальной вакцинации. На фиг. 5 показаны частоты выживаемости у мышей после введения тАЬ. Мыши, дозировки у которых составляли до 0,2 мг/кг для СЕ8033 и 0,6 мг/кг для СЕ8071, демонстрировали значимо более высокие частоты выживаемости, чем обработанные средой для лекарства контрольные животные.
Альтернативно, тАЬ СЕ8033 и СЕ8071 тестировали на профилактическую эффективность в мышиной модели с летальным контрольным заражением адаптированным к мышам вирусом гриппа В/Ма1ау81а/2506/2004. Вирус В/Ма1ау81а/2506/2004 адаптировали к мышам после 4 пассажей из легких в легкие. Адаптированный к мышам вирус гриппа В 4-го пассажа размножали в куриных яйцах с зародышем. Перед началом эксперимента всех мышей (Ва1Ь/с, самок, возрастом 6-8 недель, п=8 на группу) акклиматизировали и поддерживали в течение по меньше мере четырехдневного периода. тАЬ СЕ8033 и СЕ8071 внутривенно вводили дозами 0,06, 0,2, 0,6, 1,7 и 5 мг/кг в хвостовую вену (уепа соссудеик) в день -1 до контрольного заражения из расчета среднего веса 18 г на мышь и фиксированного объема дозы 0,2 мл. Контрольную группу держали отдельно и давали дозу контроля, представляющего собой среду для лекарства. Затем мышей в день 0 контрольно заражали 25 ЬП50 адаптированным к мышам вирусом гриппа В В/Ма1ау81а/2506/2004 путем интраназальной вакцинации. На фиг. 5 показаны частоты выживаемости у мышей после введения тАЬ. Мыши, дозировки у которых составляли до 0,2 мг/кг для СЕ8033 и 0,6 мг/кг для СЕ8071, демонстрировали значимо более высокие частоты выживаемости, чем обработанные средой для лекарства контрольные животные.
Из этих результатов видно, что человеческие антитела к гриппу СЕ8033 и СЕ8071, выявленные и разработанные как раскрыто в настоящем документе, могут обеспечивать защиту ш У1уо от летальной дозы вирусов гриппа В как линии В/Уатада1а, так и линии В/УЮопа при введении за один день до инфицирования дозой, равной или превышающей 0,2 или 0,6 мг/кг соответственно.
- 28 028433
Таблица 1
Обзор второго цикла амплификации УЬ-участков
Матрица 5' праймер 3' праймер Продукт Доля в РК/РЬ(%) Пул Доля в УЬ (%)
К1 0К13 ола К1Л 25 РК1 30
0К13 О1К2 КП2 25
0К13 олз КПЗ 10
0К13 ОЛ4 КП4 25
0К13 ОЛ5 КП5 15
К2 ОК23 ола К2Л 25 РК2 4
ОК23 ола К2 Л 25
ОК23 ола К2Л 10
ОК23 ола К2Х 25
ОК23 ола К2Х 15
КЗ ОКЗЗ О1К1 кзл 25 РКЗ 1
ОКЗЗ О1К2 кзл 25
ОКЗЗ О1КЗ кзлз 10
ОКЗЗ О1К4 КЗХ 25
ОКЗЗ О1К5 кзл 15
К4 ОК43 ола К4Л 2 5 РК4 19
ОК43 О1К2 К4 Л 25
ОК43 О1КЗ К4 Л 10
ОК43 О1К4 К4 X 25
ОК43 О1К5 К4Л 15
К5 ОК53 ола К5Л 25 РК5 1
ОК53 ола К5 Л 25
ОК53 ола К5Л 10
ОК53 ола Κ5Χ 25
ОК53 ола К5Л 15
Кб ОК63 ола КбЛ 25 РКб 5
ОКбЗ ола К6Л 25
ОКбЗ ола К6Л 10
ОКбЗ ола Κ6Χ 25
ОКбЗ ола К6Л 15
Ь1 ОЪ13 ОЛ1 Ъ1 л 30 РЪ1 14
ОЪ13 ОЛ2 ЪП2 60
ОЪ13 олз ъиз 10
Ъ2 ОЪ23 ОЛ1 Ъ2 Л 30 РЪ2 10
ОЪ23 ОЛ2 Ъ2Л 60
ОЪ23 олз Ъ2Л 10
ЪЗ ОЪЗЗ ОЛ1 ЪЗЛ 30 РЪЗ 10
ОЪЗЗ ОЛ2 ъзл 60
ОЪЗЗ олз ЪЗЛ 10
Ъ4 ОЪ43 ОЛ1 Ъ4 Л 30 РЪ4 1
ОЪ43 ОЛ2 Ъ4 Л 60
ОЪ43 олз Ъ4 Л 10
Ъ5 ОЪ53 ОЛ1 Ъ5Л 30 РЪ5 1
ОЪ53 ОЛ2 Ъ5Л 60
- 29 028433
Таблица 2
Обзор второго цикла амплификации УН-участков
- 30 028433
Характеристики отдельных библиотек В-клеток памяти 1дМ.
Таблица 3
Библиотека Использованные клетки Размер библиотеки Интактная Ог£
МЕМ-05-М08 540000 клеток памяти 1дМ, отсортированные при помощи Еасз от 1 донора 5,9Е+07
МЕМ-05-М09 775000 клеток памяти 1дМ, отсортированные при помощи Еасз от 1 донора 2,35Е+07
МЕМ-05-М10 700000 клеток памяти 1дМ, отсортированные при помощи Еасз от 1 донора 1,7Е+07
Е1и-РВМС-09- М02 1Е+07 всего РВМС от 1 донора 1,0Е+07 75%
Е1и-Все11- 09-М03 280000 отсортированных при помощи Масз В-клеток от 1 донора 2,0Е+07 76%
Е1и-МЕМ-09- М08 800,000 клеток памяти 1дМ, отсортированные при 2,4Е+07 85%
помощи Еасз от 1 донора
Е1и-РВМС-10- МОЗ ЗЕ+07 всего РВМС от 3 доноров (1Е+07 РВМС на донора) 2,8Е+07 82%
Е1и-РВМС-10- М04 ЗЕ+07 всего РВМС от 3 доноров (1Е+07 РВМС на донора) 3,1Е+07 87%
Е1и-РВМС-10- М05 ЗЕ+07 всего РВМС от 3 доноров (1Е+07 РВМС на донора) 3,ЗЕ+07 89%
Е1и-РВМС-11- С01 4Е+07 всего РВМС от 4 доноров (1Е+07 РВМС на донора) >1Е+07 82%
- 31 028433
Связывание §сЕу-фагов с рекомбинантным НА гриппа В
Таблица 4
Уата§а1а У1с1опа
В/ЛНп/ 20/03 В/Р1опда/ 04/06 В/Ма1ау81а/ 2506/04 В/оЫо/ 001/05 В/ВпзЪапе/ 60/08
зсО8-О31 ++ ηΐ ++ ++ ηΐ
зс08-032 ++ ηΐ ++ ++ ηΐ
зсО8-ОЗЗ ++ ++ ++ +++ ++
ЗС08-034 ++ ηΐ ++ ++ ηΐ
зсО8-О35 ++ ηΐ ++ ++ ηΐ
зс08-059 ++ ++ ++ ++ ++
8С10-023 ++ ++ + ++ +
зсЮ-032 +++ +++ ++ +++ +++
зсЮ-049 +++ +++ +++ +++ +++
зсЮ-051 +++ +++ +++ +++ +++
8с11-035 ηΐ +++ ηΐ ++ ++
зс11-036 ηΐ +++ ηΐ +++ +++
зс11-038 ηΐ ++ ηΐ ++ +++
8с11-039 ηΐ +++ ηΐ ++ +++
+++: сильное связывание;
++: слабое связывание;
+: связывание;
-: связывание отсутствует;
ηΐ: не тестировали.
Таблица 5 А
Аминокислотные последовательности СЭВ НС избранных антител
СН № локус νΗ ΟΌΗΙ-НС (5Ε<2 Ю ΝΟ) ΟΌΗ2-ΗΟ(3Ε0 ΙΌ ΝΟ) ΟΌΗ3-ΗΟ (3Ε0 ΙΌ ΝΟ)
СН8033 Ι6Ην3-9*01 6Ε3ΕΏΕΥΤ (1) ΙΝΝΚΟΝΕΜ (2) ΑΚΌΗΌΕ33ΑΜΌΙΌΕΟΟΤΕΌΙ (3)
СН8059 Ι6Ηνΐ-18*01 ΟΥΙΕΤΕ3Ο (7) Ι3ΟΥ3ΟΌΤ (8) ΑΗΌν0Υ3Ο3ΥΌΟΑΥΥΕΌΥ (9)
СН8071 Ι6Ηνΐ-18*01 ΟΥΙΕΤΕ3Ο (7) Ι3ΟΥ3ΟΌΤ (8) ΑΗΌν0Υ3Ο3ΥΌΟΑΥΥΕΌΥ (9)
СН10023 Ι6Ην3-9*01 ΟΕΤΕϋϋΥΑ (14) ΙΝ«ν3ΤΤΜ (15) ΑΚΌΚΌΕ3ΑΑΙΌΙΌΕΟΟΤΕΌΙ (16)
СК10032 Ι6Ην4-39*02 ΟΟ3ΙΝ33ΡΥΚ (20) ΕΥΥΌΟ3Τ (21) ΑΑΥΟ33Ι3ΟΗΑΥΥΌΥΜΝν (22)
СН10049 Ι6Ην3-23*04 ΟΕΤΕ33ΥΑ (26) Ό3ΌΕ3ΤΤ (27) ΑΕΌΌΟΤνΜΌ3ΥΥΥΟΜΝν (28)
СН10051 Ι6Ηνΐ-46*01 ΟΌΤΕΤΝΥΗ (31) ΙΝΡ3ΟΟΌΤ (32) ΑΤΌΕ3ΡΟΌΌΤΟΌΗΌΥΝΥΥΥΟΜΌν (33)
СН11024 Ι6Ηνΐ-2*02 ΟΥ3ΕΤΟΥΥ (35) ΙΝΡΙ3ΟΌΤ (36) ΑΚνΑΟΕΌΝΕΟΌΌΌΥ (37)
СН11035 Ι6Ηνΐ-18*01 ΟΥΑΕΝΟΥΟ (40) ΙΝΤΥΚνΝΤ (41) ΑΚΌΝΟΟΡΕΟΝΑΕΌΕ (42)
СК11036 Ι6Ηνΐ-46*01 ΟΥΑΕΤ3ΥΥ (45) ΜΝΌΗΟΟ3Τ (4 6) ΑΚΕ3ΡΌ33ΟΥΡΟΥΥΟΜΌν (47)
СН11038 Ι6Ηνΐ-46*01 ΟΥΑΕΤ3ΥΥ (45) ΜΝΡΗΟΟ3Τ (50) ΑΚΕ3ΡΌ33ΟΥΡΟΥΥΟΜΌν (47)
СН11039 6Ηνΐ-18*01 ΟΥΑΕΤΟΥΟ (54) ΙΝΤΥΚΕΝΤ (55) ΑΚΌΝΑΟΡΕΟΝΑΕΌν (56)
СН08031 Ι6Ην3-9*01 ΟΕΤΕΌΕΥΙ (59) ΙΝΝΚΟΝΕΜ (2) ΑΚΌΗΌΕ33ΑΜΌΙΌΕΟΟΤΕΌΙ (3)
СН08032 Ι6Ην3-9*01 ΟΕ3ΕΌΕΥΙ (61) ΙΝΝΚΟΝΕΜ (2) ΑΚΌΗΌΕ33ΑΜΌΙΌΕΟΟΤΕΌΙ (3)
СН08034 Ι6Ην3-9*01 ΟΕΤΕΌΕΥΙ (59) ΙΝΝΚΟΝΕΜ (2) ΑΚΌΗΌΕ33ΑΜΌΙΌΕΟΟΤΕΌΙ (3)
СК08035 ΙΟΗΥ3-9*01 ΟΕΤΕΌΕΥΙ (59) ΙΝΝΚΟΝΕΜ (2) ΑΚΌΗΌΕ33ΑΜΌΙΌΕΟΟΤΕΌΙ (3)
- 32 028433
Аминокислотные последовательности СТ Ж ЬС избранных антител
Таблица 5В
СК № локус УЬ 6ΏΚ1-Ώ6 (3Εζ) Ю ΝΟ) 6ЕН2-ЪС(ЗЕ0 Ю ΝΟ) ООКЗ-ЪС (ЗЕО Ιϋ ΝΟ)
СК8033 161073-20*01 ζ)5ν555Υ (4) 6Α3 ( 5) 00Υ633ΡΝΤ (6)
СК8059 161/71-47*01 33ΝΙ6ΤΝΥ (10) Κ3Υ (11) АТТОРЗЬИбИУ (12)
СК8071 161/71-47*01 33ΝΙ6ΤΝΥ (10) Κ3Υ (11) АТТОРЗЬРбИУ (13)
СК10023 1617/2-8*01 55ϋν66ΥΝΥ (17) ϋν3 (18) 33ΥΑ363ΤΥν (19)
СК10032 1СРС72-28*01 05ΗΚΗΕΝ6ΥΝΥ (23) ЬСЗ (24) МОАЪТОТЪТ (25)
СК10049 16X72-28*01 <25ЬЬН5И6ЬИУ (29) Ъ63 (24) МОАЬОТРЕТ (30)
СК10051 16X73-20*01 <25ν555Υ (4) 6Α3 ( 5) ооубззрьез (34)
СК11024 16X73-20*01 ζ)5ν555Υ (4) 6Τ3 (38) 00Υ633ΡΗΤ (39)
СК11035 16X71-39*01 <25ν65Υ (43) 6Α3 ( 5) 003Υ3ΤΡΡΤ (44)
СК11036 16X73-20*01 □37Τ33ΡΕ (48) 6Τ3 (38) 00Υ633ΤΝΤ (49)
СК11038 161/71-44*01 Κ3ΝΙ63ΝΡ (51) ΤΝϋ (52) ААИРРЗЬКбЖ/ (53)
СК11039 6НУ1-18*01 <2ϋΙ3ΌΥ (57) 6Α3 ( 5) ООУбЫЬРРТ (58)
СК08031 1617/2-14*01 33ϋν66ΥΝΥ (17) ϋν3 (18) 33ΥΤ333ΤΗν (60)
СК08032 161/72-14*01 ΕΕϋνΟΟΥΚΥ (62) Όν3 (18) 33ΥΤΤ3ΝΤΗν (63)
СК08034 16КУ1-17*01 <26ΙΚΝϋ (64) ΑΑ3 (65) ΟΟΑΝΤΥΡΙΑ (66)
СК08035 161/73-19*01 ЗЬКЗУУ (67) 6ΚΝ (68) РЗНРЗЗбТНУУ (69)
Таблица 6
Связывание очищенных Ι§Θ с клетками, экспрессирующими НА гриппа В
УатадаЕа А/ФсЕогФа
ИазчФ1е/45/91 Μί55155ίρρί/04/08 НоизЕоп/В0/97 МФззФззФррФ/07/08 Е1огФба/01/09 ΟΗίο/01/05
СК8031 + + ΝΤ ΝΤ ΝΤ - ΝΤ
СК8032 + + + + ΝΤ + + - ΝΤ
СК8033 + + + + + + + + + + + +
СК8034 + + ΝΤ ΝΤ ΝΤ - ΝΤ
СК8035 + + + + + + + + - + +
СК8059 + + + + + + + + + + + + + + + + + +
СК8071 + + + + + + + + + + + + + + + + + +
СК10023 + + + - + + + - - -
СК10032 + + + + + + + + + + + + + + + + + +
СК10049 + - + - - +
СК10051 + + + + + + + + + + + +
+++: сильное связывание;
++: связывание;
+: слабое связывание;
-: связывание отсутствует.
Таблица 7
Эксперимент по конкурентному связыванию с помощью прибора οκΉ в формате планшета
Этап
Нулевая линия 1 Загрузка НА Нулевая линия 2 бвязывание 1го 1д6 (15 мкг/мл) бвязывание/ конкуренция 2го 1дб (15 мкг/мл)
Длительность (секунд) 60 1200 60 700 700
Ряд А 6Р8033
Ряд В Буфер для режима измерения кинетики СК8059
Ряд 6 Меченный Буфер для режима измерения кинетики реакции СК10023 СК8033
Ряд ϋ биотином НА СК10032 При 2ОМ измерении СК8059 и т.д.
Ряд Е гриппа В СК10049
Ряд Е реакции 10 мкг/мл СК10051
Ряд 6 СК9114*
Ряд I СК8057*
^Контрольные антитела (СК9114: связывающиеся, СК8057: не связывающиеся).
- 33 028433
Таблица 8
Эксперимент по конкурентному связыванию на НА гриппа В
СН8033 СН8059 СН10023 СН10032 СН10049 СН10051 СН9114 СН8057
СН8033 V N Υ N N N
СН8059 N Υ N Υ N N
СН10023 Υ Υ N N N
СН10032 N Υ Υ Υ N N
СН10049 Υ N Υ N N N
СН10051 N Υ N Υ N
СН9114 N N N N N N
СН8057 - - - - - - -
Υ: конкурентное связывание;
Ν: конкурентное связывание отсутствует;
X: самоконкуренция;
-: связывание отсутствует.
Таблица 9
Анализы по нейтрализации вирусов на штаммах вируса гриппа В
νΝΑ Уатадайа УТсйогга
титры в мкг/мл В/НагЫп/7/1994 В/Г1ог10а/04/2006 В/Ма1ауз1а/2506/2004 В/Вг1зЬапе/60/2008
СК8031 1,24 0, 88 >50* ΝΤ
СК8032 0, 69 0, 69 3, 88* ΝΤ
СК8033 0, 03 0, 02 0, 88* 5, 95
СК8034 0,29 0, 12 2,31* ΝΤ
СК8035 0, 66 0, 66 4,46* ΝΤ
СК8059 2,39 3,23 17,68* 4,55
СК8071 2,34 2, 12 14,87* 3, 72
СК10023 0,26 <0,55 12,5* 7, 07
СК10032 12,5 21,02 53,03* 35, 36
СК10049 4,42 1,3 25* 35, 36
СК10051 0,28 0, 63 1,77* 1,51
СК11035 0,16 <0,06 0,53* 0, 93
СК11036 0, 02 <0,06 0,22* <0, 14
СК11038 0, 05 <0,06 2,1* 0, 55
СК11039 0, 02 <0,06 0, 06* <0, 14
ΝΤ: не тестировали;
* анализ проводили с 25ТСГО.
Таблица 10
Анализ ингибирования гемагглютинации на штаммах вируса гриппа В
ΗΙ Уатадайа УТсйогга
титры в мкг/мл В/НагЫп/7/1994 В/Е1ог1с1а/04/2006 В/Ма1ауз1а/2506/2004 В/Вг1зЬапе/60/2008
СК8033 0,39 0,22 >50 >50
СК8059 >50 >50 >50 >50
СК8071 >50 >50 >50 >50
СН10023 1,1 1,56 >50 >50
СК10032 >50 >50 >50 >50
СН10049 >50 1, 1 4,42 35, 36
СК10051 >50 >50 >50 >50
СН11035 ΝΤ >10 ΝΤ 0,26
СК11036 ΝΤ >10 ΝΤ >10
СК11038 ΝΤ 1,25 ΝΤ 0, 31
СК11039 ΝΤ 0, 63 ΝΤ 0,44
ΝΤ: не тестировали.
- 34 028433
Последовательности >3008-033 УН, ДНК (ЗЕО Ю N0: 70)
САССТССАССТССТССАСАСТСССССАССССТССТАСАСССТСССАССТСССТСАСАС
ТСТССТСТССАСССТСТССАТТСАССТТТСАТСАСТАСАССАТССАТТСССТСССССААССТС
САСССААСССССТССАСТСССТСССАССТАТТААТТССАААССТААТТТСАТСССТТАТСССС
АСТСТСТССАССССССАТТСАССАТСТССАСАСАСААССССААСААСТСССТСТАТСТССААА
ТСААСАСТСТСАСАССТСАССАСАСССССТТСТАТТАСТСТССААААСАСССССТССАСАСТТ
САССТАТССАСАТТСТАСААСССССТАСТТТТСАТАТСТССССССААСССАСААТССТСАСС >3008-033 УН, БЕЛОК (ЗЕО Ю N0: 71)
Εν0ΗνΕΤΟΟΟΗν0ΡΟΗ3ΗΗΗ3ΟΑΑ3ΟΕ3ΕΟΕΥΤΜΗΜνΗ0ΑΡΟΚΟΗΕ«νΑΟΙΝΜΚΟΝΕΜ
ΟΥΑϋ3ν0ΟΡΕΤΙ3ΡϋΝΟΚΝ3ΕΥΗ0ΜΝ3ΗΡΑΕϋΤΑΗΥΥΟΑΚϋΡΗΕ33ΑΜϋΙΕΕΟΟΤΕϋΙΐΛίΟ0ΟΤ
Μντ >3008-033 УЬ, ДНК (ЗЕО Ю N0: 72)
САААТТСТСТТСАСССАСТСТССАСССАСССТСТСТТТСТСТССАССССАААСАСССА
СССТСТССТССАСССССАСТСАСАСТСТТАССАССАССТАСТТАСССТССТАССАССАСАААС
СТССССАСССТСССАСССТССТСАТСТАТССТССАТССАССАСССССАСТССТАТСССАСССА
ССТТСАСТСССАСТСССТСТСССАСАСАСТТСАСТСТСАССАТСАССАСАСТССАСССТСААС
АТСТТССАСТСТАТТАСТСТСАССАСТАТССТАССТСАСССТССАССТТСССССААСССАССА
АССТССАААТСАААС >3008-033 УЬ, БЕЛОК (ЗЕО Ю N0: 73)
ЕТУЬТОЗРСТНЗНЗРСЕНАТНЗСНАЗОЗУЗЗЗУНАИУООКРСОАРКЬЫУСАЗТНАТС
1РАНЕЗСЗСЗСТЕЕТЬТ13НЬЕРЕЕЬАДУУС00УСЗЗРИТЕС0СТКДЕ1К >3008-059 УН, ДНК (ЗЕО Ю N0: 74)
САССТССАССТССТАСАСТСТССАССТСАССТСААСААСССТССССССТСАСТСАССС
ТСТССТССАСССССТСТССТТАСАТСТТТАСССААТСТССТАТСАССТСССТСССССАССССС
СТССАСААССССТТСАСТССАТСССАТССАТСАССССТТАСАСТССТСАСАСААААТАТССАС
АСАААСТССАССССАСАСТСАССАТСАССАААСАСАСАТССАССАССАСАСССТАСАТССААТ
ТСАССАСССТСАСАТАТСАССАСАССССССТАТАТТАСТСТСССАСАСАССТССАСТАСАСТС
ССАСТТАТТТСССССССТАСТАСТТТСАСТАТТССАСССССССААСССТССТСАСССТСТССА
СС >3008-059 ΥΗ, БЕЛОК (ЗЕО Ю N0: 75)
- 35 028433
ЕУ<2ЬУ<25САЕУККРСА5УКУ5СКА5С¥1ЕТЕ5С1ТИУК<2АРС<2СЬЕИМСИ15С¥5СЬТ
КУАОКЬОСКУТМТКОТбТТТАУМЕЬКбЬКУООТАУУУСАКОУОУбСбУЬСАУУЕЬУКбРСТЬУ
ТУ55 >5С08-059 УЬ, ДНК (5Е<2 Ю N0: 76)
ТССТАТСТССТСАСТСАСССАСССТСАСССТСТСССАСССССССССАСАСССТСАССА
ТСТСТТСТТСТССААССАССТССААСАТСССААСТААТТАТСТАТАСТССТАССАССАСТТСС
САССААССССССССАААСТССТСАТСТАТАССАСТТАТСАСССССССТСАССССТСССТСАСС
САТТСТСТСССТССААСТСТСССТССТСАСССТСССТССССАТСАСТССССТССАСТСТСАСС
АТСАСССТСАТТАТТАСТСТССААСАТСССАТ6АСАСССТСААТССТТСССТСТТССССССАС
ССАССААССТСАСССТССТАС >5008-059 УЬ, БЕЛОК (5Е<2 Ю N0: 77
5ΥνΕΤ<2ΡΡ5Α50ΤΡ0<2ΚνΤΙ5050555ΝΙ0ΤΝΥνΥΜΥ<2<2ΕΡ0ΤΑΡΚΕΕΙΥΚ5Υ<2ΚΡ50νΡ0ΚΕ 5С5К5С55А5ЬА15СЬ<25ЕОЕАЬ¥¥САТИОЬ5ЬиСИУЕСССТКЬТУЬ >СН08071 УН, БЕЛОК (5Е0 Ю N0: 78
0У0ЬУ05САЕУККРСА5УКУ5СКА5С¥1ЕТЕ5С1ТИУК<2АРС<2СЬЕИМСИ15С¥5СЬТ
КУАОКЬОСНУТМТКЬТбТТТАУМЕЬНбЬНУООТАУУУСАНОУОУбСбУЬСАУУЕЬУИбРСТЬУ
ТУ55 >СН08071 УЬ, БЕЛОК (5Е<2 Ю N0: 79) <25νΕΤ<2ΡΡ5Α5ΟΤΡΟ<2ΚνΤΙ5Ο5Ο555ΝΙΟΤΝΥνΥΜΥ<2<2ΕΡΟΤΑΡΚΕΕΙΥΚ5Υ<2ΚΡ5Ο
УРОКЕ5С5К5С55А5ЬА15СЬ<25ЕОЕАО¥¥САТИОЬ5ЬВСИУЕСССТКЬТУЬКК >5010-051 УН, ДНК (5Е<2 Ю N0: 80)
САССТССАССТССТССАСТСТССАССТСАССТСААСААСССТССССССТСАСТАСААС
ТТТССТССААСССАТСТССАСАСАССТТСАССААСТАССАТАТАСАСТСССТСССАСАССССС
СТССАСААССССТТСАСТССАТСССААТААТСААТССТАСТССТССТСАСАСАСАСТАСТСАС
АСААСТТССАССССАСАСТСАСССТСАССАСССАСАССТССАСАААСАСАТТСТАТАТСААСТ
ТССССАСССТСАСАТСТСАССАСАССССССТСТАТТАСТСТСССАСАСАТСАСАСТСССССАС
ТТТТСАСТССССТТССССАТТАСТССТАСТАСТАСССТАТССАССТСТССССССАССССАССА
СССТСАСССТСТССАС >5010-051 УН, БЕЛОК (5Е<2 Ю N0: 81)
ЕУ<2ЬУ<25САЕУККРСА5УЕЬ5СКА5СЬТЕТН¥Н1НИУК<2АРС<2СЬЕИМС1 1ЫР5ССЬТ
- 36 028433
ОУЗОКГОСНУТЪТНОНЗТЫТГУМКЪАЗЪНЗЕОТАУУУСАТОЕЗРСЪЪТСЪНОУИУУУСМОУИС
Осттутуз >5010-051 УЬ, ДНК (5Е<2 Ю N0: 82)
САААТТСТСТТСАСССАСТСТССАСССАСССТСТСТТТСТСТССАССССАААСАСССА
СССТСТССТССАСССССАСТСАСАСТСТТАССАССАССТАСТТАСССТССТАССАССАСАААС
СТССССАСССТСССАСССТССТСАТСТАТССТССАТССАССАСССССАСТСССАТСССАСАСА
ССТТСАСТСССАСТСССТСТСССАСАСАСТТСАСТСТСАССАТСАССАСАСТССАСССТСААС
АТТТТССАСТСТАТТАСТСТСАССАСТАТССТАССТСАССТСТСТССАСТТТТССССАССССА
ССААССТССАСАТСАААС >5010-051 УЬ, БЕЛОК (5Е0 Ю N0: 83)
ЕТУЬТОЗРСТЬЗЬЗРСЕНАТЬЗСНАЗОЗУЗЗЗУЬАИУООКРСОАРНЬЫУСАЗЗНАТС
1РОНЕ5С5С5СТОЕТЬТ15НЬЕРЕОЕАУ¥¥С00¥С55РЬС5ЕС0СТКЬЕ1К >5010-049 УН, ДНК (5Е0 Ю N0: 84)
САССТССАССТССТССАСТСТСССССАСССТТССТАСАСССТССССССТСССТСАСАС
ТСТССТСТССАСССТСТССАТТСАССТТТАССАССТАТСССАТСАССТСССТСССССАСССТС
САСССААСССССТССАСТСССТСТСАССТСТТАСТСАТСАААСТАССАСАТАСТАТССАСАСТ
ОСОТ 6АА6ССС С САТ Т САС ТАТ С Т С СА6А6АСААТТ ССААСААСАСАС ТСТАТСТССАСАТ СА
АСАСССТСАААССССАССАСАСССССАТАТАТТАСТСТССССАССАТСТССССАСССТСАТСС
АСТССТАСТАСТАСССТАТСААССТСТСССССССАСССАССАСССТСАСССТСТССАС > 5С10-049 УН, БЕЛОК (5Е0 Ю N0: 85)
ЕУСНУЕЗСССНУСРССЗНКНЗСААЗСЕТЕЗЗУАМЗИУКСАРСКСНЕИУЗКНЗБЕЗТТУ
ΥΑΟ5νΚΟΗΕΤΙ5ΗΟΝ5ΚΝΤΗΥΗ0ΜΝ5ΗΚΑΟΟΤΑΙΥΥΟΑΕΟΗΟΤνΜΟ5ΥΥΥΟΜΝνΐΛΓΟΡΟΤΤντν >5010-049 УЬ, ДНК (5Е0 Ю N0: 86)
САТСТТСТСАТСАСТСАСТСТССАСТСТСССТСССССТСАССССТССАСАСССССССТ
ССАТСТССТССАССТСТАСТСАСАСССТССТССАТАСТААТССАСТСААТТАТТТССАТТССТ
АССТССАСААСССАССССАСТСТССАСАССТССТСАТСТАТТТСССТТСТААТССССССТССС
СССТСССТСАСАССТТСАСТСССАСТССАТСАСССАСАСАТТТТАСАСТСААААТСАССАСАС
ТССАСССТСАССАТСТТССССТТТАТТАСТССАТССААССТСТАСАААСТССТТТСАСТТТСС
ССССАСССАССААССТССАСАТСАААС
- 37 028433 >5010-049 УН, БЕЛОК (5Е<2 Ю N0: 87)
ОАЛЖТОЗРЪЗЪРУТРСЕРАЗТЗСНЗЗОЗЪЪНЗЫСЪЫУЪОИУЪОКРСОЗРОЪЫУЪСЗЫ
КА5СУРОКЕ5С5С5СТОЕТЪК15КУЕАЕОУСУУУСМ<2АИ2ТРЕТЕСССТКУЕ1К >5010-023 УН, ДНК (5Е<2 Ю N0: 88)
САССТССАССТССТССАСАСТСССССАСССТТССТАСАСССТСССАССТСССТСАСАС
ТСТССТСТССАСССТСТССАТТСАССТТТСАТСАТТАТСССАТССАТТСССТСССССААССТС
САСССААСССССТССАСТСССТСТСАССТАТТААТТСССТТАСТАСТАССАТССССТАТСССС
АСТСТСТСААССССССАТТСАССАТСТССАСАСАСААССССААСААСТСССТСТАТСТССААА
ТСААСАСТСТСАСАССТСАССАСАСССССТТСТАТТАСТСТССААААСАТАСССТССАСАСТС
САССТАТАСАСАТТСТАСААСССССТАСТТТТСАТАТСАССССССААСССАСААТССТСАССС
ТСТС6А6С6 >5010-023 УН, БЕЛОК (5Е<2 Ю N0: 89)
ЕУ<2ЪУЕ ТСССЪУОРСКЗ ЪКЪ 5 СААЗ СЕТ ΕϋϋУАМНИУК<2АРСКСЪЕИУ5 61ЛИУЗ Т ТМ ΟΥΑΟ5νΚΟΚΕΤΙ5ΚΟΝΑΚΝ5ΗΥΗ<2ΜΝ5ΗΚΑΕΟΤΑΗΥΥΟΑΚΟΚΗΕ5ΑΑΙΟΙΗΕΟΟΤΕΟΙΚΟ<2ΟΤ
МУТУ55 >5010-023 УЛ, ДНК (5Е<2 Ю N0: 90)
САСТСТССССТСАСТСАСССТСССТСССССТСССССТСТССТССАСАСТСАСТСАССА
ТСТССТССАСТССААССАССАСТСАТСТТССТССТТАТААСТАТСТСТССТССТАССААСАСС
АСССАСССАААССССССАААСТСАТСАТТТАТСАТСТСАСТААСССССССТСАССССТСССТС
АТСССТТСТСТСССТССААСТСТСССААСАСССССТСССТСАССАТСТСТССССТССАСССТС
АССАССАСССТСААТАТТАСТССАССТСАТАТССААСССССАССАСТТАТСТСТТСССААСТС
ССАССААССТСАСССТССТАС >5010-023 УД, БЕЛОК (5Е<2 Ю N0: 91) <25АНТ<2РР5А5С5РС<25УТ15СТСТ55ОУССУЛУУ5ИУ<2<2НРСКАРКНМ1УОУ5ККР5 θνΡΟΚΕ5Ο5Κ5ΟΝΤΑ5ΗΤΙ5ΟΗ<2ΑΕϋΕΑΕΥΥΟ55ΥΑ5Ο5ΤΥνΕ(0ΤΟΤΚντνΗ >5010-032 УН, ДНК (5Е<2 Ю N0: 92)
САССТССАССТССАССАСТСССССССАССАСТССТСААСССТТСССССАСССТСТССС
ТСАССТССААТСТСТСТССТСССТССАТСААСАСТАСТСССТАТААСТСССССТССАТССССС
АСТССССАСССААСССССТССАСТССАТТСССАСТТТСТАТТАТСАТСССАССАСССАСТАСА
АССССТСССТССАСАСТССАСТСАССАТТТССССАСАСАТСТССАСТААССАСТТСТССТТСА
СССТСАССТСТСТСАСССССССАСАСАССССТСТСТАТТАСТСТССССССТАТТСТАСТАСТА
- 38 028433
ТААССТСССАТСССТАТТАССАСТАСАТСААССТСТСССССАААСССАССАСССТСАСССТСТ
ССАСС >3010-032 ДН, БЕЛОК (5Е0 Ю N0: 93)
ОУОЬОЕЗСРСНУКРЗСТЬЗЬТСКУЗССЗ ΙΝ33ΡΥΚΜΑΜΙΚ03ΡΟΚΟΗΕ1λΓΙΟΤΕΥΥΟΟ3 ΤΟΥΝΡ3Η03ΚΗΤΙ3ΟΟΜ33ΝΗΕ3ΗΚΗΚ3νΤΑΑΟΤΑνΥΥΟΑΑΥΟ33Ι3ΟΗΑΥΥΟΥΜΝνΐΛΓΟΚΟΤΤ ντν33 >3010-032 ЛЬ, ДНК (ЗЕО Ю N0: 94)
САААТТСТССТСАСТСАСТСТССАСТСТСССТСССССТСАССССТССАСАСССССССТ
ССАТСТССТССАССТСТАСТСАСАСССТСССАСАТСАСААТССАТАСААСТАТТТССАТТССТ
АССТССАСААСССАССССАСТСТССАСАССТССТСАТСТАТТТСССТТСТСТТССССССТССС
СССТСССТСАСАССТТСАСТСССАСТССАТСАСССАСАСАТТТТАСАСТСААААТСАССАСАС
ТССАСССТСАССАТСТТССССТТТАТТАСТССАТССААССТСТАСАААСССТСАСТТТССССС
САСССАССААССТССАСАТСАААС >3010-032 ЛЬ, БЕЛОК (ЗЕО Ю N0: 95)
Е1УЬТ03РЬЗЬРУТРСЕРА313СК3303ЬКНЕЖДЖЛЬОИЛЬ0КРС03Р0ЬЬМЛЬСЗУ
НАЗСУРОНЕЗСЗСЗСТОЕТЬК13НУЕАЕОУСУЛЛСМ0АЬ0ТЬТЕСССТКЬЕ1К >3011-024 ДН, ДНК (ЗЕО Ю N0: 96)
САССТССАССТССТССАСТСТСССССТСАААТТААСААСССТССССССТСАСТСААСС
ТСТССТССААСССТТСТССАТАСАССТТСАСССССТАСТАТАТССАСТСССТСССАСАССССС
СТССАСААССАССТСАСТССАТСССССССАТСААСССТАТСАСТССТСАСАСАААСТАТССАС
АСАССТТТСАССССАСССТСАССТТСАССАСССАСАССТССАССАССАСАСССТАСАТССАСС
ТСАССССССТСАААТСТСАССАСАССССССТАТАТТТСТСТСССАСАСТССССССТСААСАТТ
ССТТСССССАТСТТСАСТАТТССССССАСССААСССТССТСАСССТСТССАССС >3011-24 УН, БЕЛОК (ЗЕО Ю N0: 97)
Εν0Ην03ΟΑΕΙΚΚΡΟΑ3νκν3ΟΚΑ3ΟΥ3ΕΤΟΥΥΜΗΜνΗ0ΑΡΟ0ΟΡΕΜΜΟΚΙΝΡΙ3ΟΟΤ
КЛАОКЕОСКУТНТКОКЗТЗТАЛМЕНЗСНКЗООТАУЛЕСАКУАСЕОИЕСОНОЛИСОСТНУТУЗЗ >3011-024 ЛЬ, ДНК (ЗЕО Ю N0: 98)
САААТТСТСТТСАСССАСТСТССАСССАСССТСТСТСТСТСТССАССССАААСАСССА
СССТСТССТССАСССССАСТСАСАСТСТТАССАССАССТАСТТАСССТССТАССАССАСАААС
СТССССАСССТСССАСССТССТСАТСТТТССААСАТССАССАСССССАСТСССАТСССАСАСА
- 39 028433
ССТТСАСТС6САСТСССТСТСССАСАСАСТТСАСТСТСАССАТСАССАСССТССАСССТСААС
АТТТТССАСТСТАТТАСТСТСАССАСТАТССТАССТСАССТСССАССТТСССССААСССАССА
АССТССАСАТСАААС >5011-024 УЬ, БЕЛОК (5Е<2 Ю N0: 99)
Е1УЬТ05РАТЬ5У5РСЕКАТЕ5СКА5<25У555¥ЬАИ¥<2<2КРС<2АРКЬЬ1ЕСТ55КАТС
1РОКЕ5С5С5СТОЕТЬТ15КЬЕРЕОЕАУ¥¥С<2<2¥С55РКТЕС<2СТКУЕ1К >5С11-035 УН, ДНК (5Е<2 Ю N0: 100)
САССТССАССТССТАСАСТСТССАССТСАССТСААСААСССТСССТССТСССТСААСС
ТСТССТССААСАССТСТССТТАССССТТТААССССТАСССТАТСАССТСССТСССАСАССССС
СТССАСААССССТТСАСТСССТСССАТССАТСААСАСТТАСАААСТТААСАСАСАТТАТССАС
АСААТСТСССССССАСССТСАСССТСАССАТАСАСАСАТССАССАССАСАСССТАТАТССААС
ТСАССАСССТСАСАТСТСАССАСАССССССТСТАТТАСТСТСССАСАСАСТССССТССССССТ
ТТСССААСССТТТТСАТТТСТССССССААСССАСААТССТСАСССТСТССАССС >5011-035 УН, БЕЛОК (5Е<2 Ю N0: 101)
0ν0Ην05ΟΑΕνΚΚΡΟ55νκν5ΟΚΤ5ΟΥΑΕΝΟΥΟΙ5ΜνΚ<2ΑΡΟ<2ΟΗΕΐΛΓνΑΐΛΓΙΝΤΥΚνΝΤ Н УАОЛЬНСНУТ У51ΏΤ 5 Т Т ΤΑΥΜΕ ЬР.5 ЬН5 ϋϋΤΑνΥ УСАНОИССР ΕΟΝΑΕϋ ЕИС<2СТМУТ У5 5 >5011-035 УЬ, ДНК (5Е<2 Ю N0: 102)
САСАТССАСАТСАСССАСТСТССАТССТСССТСССТССАТСТАТАССАСАСАСТСТСА
ССАТСАСТТСССССССААСТСАСАСССТТСССТСТТАСТТАААТТССТАТСАССАААААССАС
ССАААСССССТААСТТСТТСАТСТАТССТССАТССААТСТССАААСТССССТСССАТСААССТ
ТТАСТСССАСТСАСТСТСССАСАСАСТССАСАСТСАССАТСААСААТСТССАСССТСААСАТТ
СТССААСТТАСТАСТСТСААСАСАСТТАСАСТАССССТАСААССТТСССССААСССАССААСС
Т66АААТСАААС >5011-035 УЬ, БЕЛОК (5Е<2 Ю N0: 103)
ΟΙ0ΜΤ05Ρ55ΗΑΑ5ΙΟΟ5νΤΙΤΟΚΑ5<25νθ5ΥΗΝΐΛΓΥ<2<2ΚΡ(3ΚΑΡΚΗΗΙΥΟΑ5Νν<25θν
Ρ5ΚΕ5Ο5Ε56ΤΕ5ΤΗΤΙΝΝΗ<2ΡΕΟ5ΑΤΥΥΟ<2<25Υ5ΤΡΚΤΕΟ<2(3ΤΚνΕΙΚ >5011-036 УН, ДНК (5Е<2 Ю N0: 104)
САССТССАССТССТССАСТСТСССССТСАССТСААСААСССТССССССТСАСТСАССС
ТТТССТССААСССАТСТССАТАССССТТСАССАССТАСТАТТТАСАСТСССТСССАСАССССС
СТССАСААССССТТСАСТССАТССССАТААТСААТСТТСАТССТССТАССАСААССТАСССАС
- 40 028433
АСААСТТССАССССАСАСТСАССАТСАССАСССАСАССТССАССАССАСАСТТТАСАТССАСС
ТСАССССССТСАСАТСТСАССАСТССССССТАТАТТАСТСТСССССАСАСАСТССССАТАССА
СТССТТАТССТСССТАСТАСССТАТССАССТСТССССССАССССАССАСССТСАСССТСТССА
СС >3011-036 УН, БЕЛОК (ЗЕО Ю N0: 105)
ЕУОЬУОЗСАЕУККРСАЗУТУЗСКАЗСУАЕТЗУУЬНИУНОАРСОСЬЕИМС1МКЬНССЗТ
ТУАОКЕОСНУТМТНОТЗТНТУУМЕЬЗСЬНЗЕОЗАУУУСАНЕЗРОЗЗСУРСУУСМОУИСОСТТУ
ТУЗЗ >3011-036 УЬ, ДНК (ЗЕО Ю N0: 106)
САААТТСТСТТСАСССАСТСТССАСССАСССТСТСТТТСТСТССАССССАААСАСССА
СССТСТССТССАСССССАСТСАСАСТСТТАССАСССАСТТСТТССССТССТАССАССАСАААС
СТССССАСАСТСССАСССТССТСАТСТАТССТАСАТССАССАСССССАСТСССАТСССАСАСА
66ТТСА6Т66СА6Т666ТСТ666АСА6АСТТСАСАСТСА6С6ТС6ССА6АСТ66А6ССТ6АА6
АТТТТССАСТСТАТТАСТСТСАССАСТАТССТАССТССАССТССАССТТСССССААСССАССА
А66Т66АААТСАААС >3011-036 УЬ, БЕЛОК (ЗЕО Ю N0: 107)
Е1УЬТОЗР6ТЬЗЬЗР6ЕНАТЬЗСРАЗОЗУЗЗОЕЕАИУООКН60ТРТЬЫУ6ТЗТНАТ6
1РОКЕ5СЗСЗСТОЕТЬЗУАКЬЕРЕОЕАУУУС00УСЗЗТИТЕС0СТКУЕ1К >3011-038 УН, ДНК (ЗЕО Ю N0: 108)
6А66Т6СА6СТ66Т66А6ТСТ6666СТ6А66Т6АА6АА6ССТ6666ССТСА6Т6АА66
ТТТССТССААСССАТСТССАТАССССТТСАССАССТАСТАТТТССАСТСССТСССАСАССССС
СТССАСААССССТТСАСТССАТССССАТААТСААСССТСАТССТССТАССАСААССТАСССАС
АСААСТТССАССССАСАСТСАССАТСАССАСССАСАССТССАССАССАСАСТСТАСАТССАСС
ТСАССАСССТСАСАТСТСАССАСАССССССТСТАТТАСТСТСССССАСАСАСТССССАТАСТА
6Т66ТТАТССТ66СТАСТАС66ТАТ66АС6ТСТ6666ССАА666АССАС66ТСАСС6ТСТС6А
СС >3011-038 УН, БЕЛОК (ЗЕО Ю N0: 109)
ЕУОЬУЕ 3 САЕУККРСАЗУКУЗ СКАЗ СΥΑΕΤ 3 ΥУЬНКУКОАРСОСЬЕИМСΙΜΝΡΗΟΟ3 Т ТУАОКЕОСНУТМТНОТЗТЗТУУМЕЬЗЗЬНЗЕОТАУУУСАНЕЗРОЗЗСУРСУУСМОУИСОСТТУ
ТУЗЗ
- 41 028433 >5011-038 УЬ, ДНК (ЗЕО Ю N0: 110)
ТССТАТСАССТСАСТСАСССАСССТСАСССТСТСССАСССССССССАСАСССТСАССА
ТСТСТТСТТСТССААССАСАТССААСАТСССАТСТААТССТСТААССТССТТССАССААСТСС
ССССААТССТССССАААСТССТСАТСТАТАСТААТСАТСАСССССССТСАССССТСССТСАСС
САТТСТСТСССТССААСТСТССССССТСАСССТСССТССССАТСАСТССССТССАСТСТСАСС
АТСАСССТСАТТАТТАСТСТССАССАТСССАТСАСАСССТСАААССТТСССТСТТССССССАС
ССАССААССТСАСССТССТАС >5011-038 УЬ, БЕЛОК (ЗЕО Ю N0: 111) зуеьторрзазстрсокутмзсзсзкзшсзкрузиеооьрсмуркьыуткоокрзс
УРОНЕЗСЗК36РЗАЗЬА13СЬОЗЕОЕАО¥¥СААИООЗЬКСИУЕСССТКЬТУЬ >3011-039 УН, ДНК (ЗЕО Ю N0: 112)
САССТССАССТССТАСАСТСТССАССАСАССТСАААААССССССССАСТСТСТСААСА
ТСТССТСТАА6АСТТСТССТТАССССТТТАСССССТАСССТАТСАССТСССТСССАСАССССС
СТССАСААССССТТСАСТССАТСССАТССАТСААСАСТТАСАААТТТААСАСАААТТАТССАС
АСААССТССА6СССАСАСТСАССАТСАССАТАСАСАСАТССАССАССССАСССТАСАТССАСС
ТСАССАСССТ6АСАТАТСАССАСАССССССТАТАТТТСТСТСССАСАСАСТССССТССССССТ
ТТСССААТССТТТТСАТСТСТССССССАССССАСААТССТСАСССТСТССАССС >3011-039 УН, БЕЛОК (ЗЕО Ю N0: 113)
Εν0Ην03ΟΑΕνΚΚΡΟΕ3νΚΙ3ΟΚΤ3ΟΥΑΕΤΟΥΟΙ3«νΗ0ΑΡΟ0ΟΗΕΐΛΓΜΟΐΛΓΙΝΤΥΚΕΝΤ
ΝΥΑ0ΝΗ0ΟΚνΤΜΤΙΟΤ3Τ3ΑΑΥΜΕΗΚ3ΗΚΥΕΟΤΑνΥΕΟΑΚΟΐΛΓΑΟΡΕΟΝΑΕθνΐΛΓΟ0ΟΤΜντν33 >3011-039 УЬ, ДНК (ЗЕО Ю N0: 114)
АСАТССАСАТСАСССАСТСТССАТСТТСССТСТСТССАТСТАТАССАСАСАСАСТССС
САТСАСТТСССАССССАСТСАССАСАТТАСССАСТАТТТАААТТССТАТСАССААСААССАСС
САААСССССТААССТССТССТСТАСССТССАТССААТТТССАААСАССССТСССАТСААССТТ
САСТССААСТ6САТСТСССАСАСАТТТТАСТТТСАССАТСАССАСССТССАСССТСААСАСАТ тесААСАТАттАттетсААСАетАтеетААтстссстссеАстттсессееееееАссААест
66А6АТСАААС >3011-039 УЬ, БЕЛОК (ЗЕО Ю N0: 115)
10МТ08Р55Ь5А51СОКУА1ТС0А50О15О¥Ь№лГ¥000РСКАРКЬЬЬ¥СА5ЖЕТСУР
5ΗΕ5Ο5Ο5ΟΤΏΕΤΕΤΙ55Η0ΡΕΟΙΑΤΥΥΟ00ΥΟΝΗΡΡΤΕΟΟΟΤΚΗΕΙΚ
- 42 028433 >5009-114 УН, БЕЛОК (5Е<2 Ю N0: 116)
0У0ЪУ05САЕУККРС55УКУ5СК55ССТ5Ш¥А15КУК(2АРС(2СЪОКМСС15Р1ЕС5Т
ΑΥΑ0ΚΕ0ΟΚνΤΙ5ΑΟΙΕ5ΝΤΑΥΜΕΕΝ5ΕΤ5ΕΟΤΑνΥΕΟΑΚΗΟΝΥΥΥΥ5ΟΜθνΐΛίΟ<2ΟΤΤντν55 >5009-114 ЛЬ, БЕЛОК (5Е<2 Ю N0: 117)
5ΥνΕΤ<2ΡΡΑν5ΟΤΡΟ<2ΚνΤΙ5Ο5Ο5Ο5ΝΙΟΚΚ5νΝΐΛίΥ<2<2ΕΡΟΤΑΡΚΕΕΙΥ5ΝΟ<2ΚΡ5ν
УРОКЕ5С5К5СТ5А5ЬА15СЬ<25ЕОЕАЕ¥¥СААИОО5ЬКСАУЕСССТ<2ЬТУЬ >5008-031 УН, ДНК (5Е<2 Ю N0: 118)
САССТССАССТССТССАСТСТСССССАССССТССТАСАСССТСССАССТСССТСАСАС
ТСТССТСТССАСССТСТССАТТСАССТТТСАТСАСТАТАТСАТССАТТСССТСССССААССТС
СССССААССССССССААТСССТСССАССТАТТААТТССАААССТААТТТСАТСССТТАТСССС
АСТСТСТССАССССССАТТСАССАТСТССАСАСАСААССССААСААСТСССТСТАТСТССААА
ТСААСАСТСТСАСАССТСАССАСАСССССТТАТАТТАСТСТССААААСАСССССТССАСАСТТ
САССТАТССАСАТТСТАСААСССССТАСТТТТСАТАТСТССССССААСССАСААТССТСАСС >5008-031 УН, БЕЛОК (5Е<2 Ю N0:119)
Εν0ΗνΕ5ΟΟΟΗν0ΡΟΗ5ΗΗΗ5ΟΑΑ5ΟΕΤΕΟΕΥΙΜΗ«νΗ0ΑΡΟΚΟΡΕΜνΑΟΙΝΜΚΟΝΕΜ
ΟΥΑΟ5ν0ΟΚΕΤΙ5ΚΟΝΑΚΝ5ΗΥΗ<2ΜΝ5ΗΚΑΟΟΤΑΗΥΥΟΑΚΟΚΕΕ55ΑΜΟΙΗΕΟΟΤΕΟΙΐΛίΟ<2ΟΤ
МУТ >5008-031 ЛЬ, ДНК (5Е<2 Ю N0: 120)
САСТСТССССТСАСТСАСССТСССТСССТСТСТСССТСТССТССАСАСТССАТСАССА
ТСТССТССАСТССААССАССАСТСАССТТССТССТТАТААСТАТСТСТССТССТАССААСАСС
АСССАСССАААССССССАААСТСАТСАТТТАТСАТСТСАСТАСТССССССТСАССССТТТСТА
АТСССТТСТСТСССТССААСТСТССССАСАСССССТСССТСАССАТСТСТССССТССАСССТС
АССАССАСССТСАТТАТТАСТССАССТСАТАТАСААССАССАССАСТСАТСТСТТСССААСТС
ССАССААССТСАСССТССТАС >5008-031 ЛЬ, БЕЛОК (5Е<2 Ю N0:121) <25ΑΗΤ<2ΡΑ5ν505Ρ0<25ΙΤΙ50Τ0Τ550ν00ΥΝΥν5ΝΥ<2<2ΗΡ0ΚΑΡΚΗΜΙΥ0ν55ΚΡ5
0ν5ΝΚΕ505Κ500ΤΑ5Η5Ι50Η<2ΑΕ0ΕΑ0ΥΥ055ΥΤ555ΊΉνΕ0Τ0ΤΚντνΗ >5008-032 УН, ДНК (5Е<2 Ю N0: 122)
САССТССАССТССТССАСТСТСССССАССССТССТАСАСССТСССАССТСССТСАСАС
ТСТССТСТССАСССТСТССАТТСАССТТТСАТСАСТАСАТСАТССАТТСССТСССССААССТС
- 43 028433
САСССААСССССТССАСТСССТСССАССТАТТААТТССАААССТААТТТСАТСССТТАТСССС
АСТСТСТССАССССССАТТСАССАТСТССАСАСАСААССССААСААСТСССТСТАТСТССААА
ТСААСАСТСТСАСАССТСАССАСАСССССТТСТАТТАСТСТССААААСАСССССТССАСАСТТ
САССТАТССАСАТТСТАСААСССССТАСТТТТСАТАТСТССССССААСССАСААТССТСАССС
ТСТС6А6С >3008-032 УН, БЕЛОК (ЗЕ<2 Ю N0:123)
ЕУ0ЬУЕ5СССЬУ0РСК5ЬКЬ5САА5СЕ5ЕОЕ¥1МНИУК<2АРСКСЬЕИУАС1ЫИКСЫЕМ
СУАОЗУОСНЕТТЗНОЫСКЫЗЬУЬОМЫЗЬНАЕОТАЬУУСАКОНЬЕЗЗЛЛЮТЬЕССТЕОПлГСОСТ
МУТУЗЗ >3008-032 УЬ, ДНК (ЗЕ<2 Ю N0: 124)
САСТСТССССТСАСТСАСССТСССТСССТСТСТСССТСТССТССАСАСТССАТСАССА
ТСТССТССАСТССААСССССАСССАССТТССТСАТТАТААСТАТСТСТССТССТАССААСААС
АСССАСССАААССССССАААСТСАТСАТТТАТСАТСТСАСТААТССССССТСАССССТСТСТА
АТСССТТСТСТСССТССААСТСТСССАССАСССССТСССТСАССАТСТСТССССТССАСССТС
АССАССАСССТСАТТАТТАТТССАСТТСАТАСАСААССАССААСАСТССССТСТТССССССАС
ССАССААССТСАСССТССТАС >3008-032 УЬ, БЕЛОК (ЗЕ<2 Ю N0:125)
03ΑΗΤ<2ΡΑ3ν3Ο3ΡΟ<23ΙΤΙ3ΟΤΟΤΚΚθνθΟΥΚΥν3ΝΥ<2<2ΗΡΟΚΑΡΚΗΜΙΥθν3ΝΚΡ3
0ν3ΝΚΕ303Κ30ΤΤΑ3ΗΤΙ30Η<2ΑΕ0ΕΑ0ΥΥ033ΥΤΤ3ΝΤΚνΕ000ΤΚΗΤνΗ >3008-034 УН, ДНК (ЗЕ<2 Ю N0: 126)
САССТССАССТССТССАСАСТСССССАССССТССТАСАСССТСССАССТСССТСАСАС
ТСТССТСТССАСССТСТССАТТСАССТТТСАТСАСТАТАТСАТССАТТСССТСССССААССТС
СССССААССССССССААТСССТСССАССТАТТААТТССАААССТААТТТСАТСССТТАТСССС
АСТСТСТССАССССССАТТСАССАТСТССАСАСАСААССССААСААСТСССТСТАТСТССААА
ТСААСАСТСТСАСАССТСАССАСАСССССТТАТАТТАСТСТССААААСАСССССТССАСАСТТ
САССТАТССАСАТТСТАСААСССССТАСТТТТСАТАТСТССССССААСССАСААТССТСАССС
ТСТССАСС >3008-034 УН, БЕЛОК (ЗЕ<2 Ю N0: 127)
Εν0ΗνΕΤΟΟΟΗν0ΡΟΚ3ΗΚΗ3ΟΑΑ3ΟΕΤΕϋΕΥΙΜΗΝνΚ<2ΑΡΟΚΟΡΕΝνΑΟΙΝΝΚΟΝΕΜ
ΟΥΑΟ3ν0ΟΚΕΤΙ3ΚΟΝΑΚΝ3ΗΥΗ<2ΜΝ3ΗΚΑΟΟΤΑΗΥΥΟΑΚΟΚΗΕ33ΑΜΟΙΗΕΟΟΤΕΟΙΝΟ<2ΟΤ
МУТУЗЗ
- 44 028433 >3008-034 УЬ, ДНК (ЗЕО Ю N0: 128)
САСАТССАСАТСАСССАСТСТССАТССТСССТСТСТССАТСТСТСССАСАСАСАСТСА
ССАТСАСТТСССССССААСТСАССССАТТАСАААТСАТТТАСССТССТАТСАССАСАААССАС
ССАААСССССТААСССССТСАТСТАТССТССАТССАСТТТССАААСТССССТСССАТСААССТ
ТСАСТСССАСТССАТСТСССАСАСАТТТСАСТСТСАССАТСАССАСТСТССААССТСААСАТТ
ТТССААСТТАСТАТТСТСААСАСССТААСАСТТАТССАСТСАСТТТССССССАСССАССААСС
Т66А6АТСАААС >3008-034 УЬ, БЕЛОК (ЗЕО Ю N0:129)
ЫОМТОЗРЗЗЬЗАЗУСОКУЫТСКАЗОСПШЬЬСИУООКРСКАРККЫУААЗЗЬОЗСУ
РЗКЕЗСЗСЗСТОЕТЬЫЗЗЬОРЕЬЕАТУУСООАНТУРЬТЕСССТКЬЕШ >3008-035 УН, ДНК (ЗЕО Ю N0: 130)
САССТССАССТССТССАСТСТСССССАССССТССТАСАСССТСССАССТСССТСАСАС
ТСТССТСТССАСССТСТССАТТСАССТТТСАТСАСТАТАТСАТССАТТСССТСССССААССТС
СССССААССССССССААТСССТСССАССТАТТААТТССАААССТААТТТСАТСССТТАТСССС
АСТСТСТССАССССССАТТСАССАТСТССАСАСАСААССССААСААСТСССТСТАТСТССААА
ТСААСАСТСТСАСАССТСАССАСАСССССТТАТАТТАСТСТССААААСАСССССТССАСАСТТ
САССТАТССАСАТТСТАСААСССССТАСТТТТСАТАТСТССССССААСССАСААТССТСАССС тстсоАос :
>3008-035 УН, БЕЛОК (ЗЕО Ю N0: 131)
ЕУ0ЬУЕЗСССЬУ0РСНЗЬНЬЗСААЗСЕТЕОЕ¥1МНИУН0АРСКСРЕИУАС1НИКСЫЕМ Г бУАОЗУОбКЕЫЗКОНАКНЗЬУЬОМНЗЬКАООТАЬУУСАКОКЬЕЗЗАМЫЬЕббТЕЫИбООТ
МУТУЗЗ >3008-035 УЬ, ДНК (ЗЕО Ю N0: 132)
ТСТТСТСАССТСАСТСАССАСССТССТСТСТСТСТССССТТСССАСАСАСАСТСАССА
ТСАСАТСССААССАСАСАСССТСАСААССТАТТАТССААССТССТАССАССАСААСССАССАС.
АССССССТСТАСТТСТСАТСТАТССТАААААСААСССССССТСАСССАТСССАСАСССАТТСТ.
СТСССТССАССТСААСАААСАСАССТТССТТСАССАТСАСТСССССТСАСССССААСАТСАСС.
СТСАСТАТТАТТСТСАСТССССССАСАССАСТССААСССАТТАТСТСТТСССАССТСССАССА
А66ТСАСС6ТССТА6 >3008-035 УЬ, БЕЛОК (ЗЕО Ю N0: 133)
ЗЗЕЬТ0ОРАУЗУАЬС0ТУК1ТС0СОЗЬКЗ¥¥АЗИ¥00КРС0АРУЬУ1¥СКННКРЗС1Р
ОНЕЗСЗЗЗНЫТАЗЬЫТСАОАЕОЕАОУУСОЗНОЗЗСТНУУЕСССТКУТУЬ
- 45 028433
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> Круцелл Холланд Б.В.
<120> Антитело, связывающееся с вирусами гриппа В, и его применение <130> 0194ΕΡ00Ρ00ΡΚΙ <140> ΕΡ12158525.1 <141> 2012-03-08 <160> 133 <170> Ραϋθηϋΐη версия 3.3 <210> 1 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> СК8033 НС СБК1 <400> 1
О1у ΡΗ.Θ Бег ΡΗ.Θ Азр О1и Туг ТНг <210> 2 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> СК8033 НС СБК2 <400> 2
11е Азп Тгр Ьуз О1у Азп Ρ^ МеЬ <210> 3 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> СК8033 НС СБК3 <400> 3
А1а Ьуз Азр Агд Ьеи О1и Бег Бег А1а МеЬ Азр 11е Ьеи О1и О1у О1у
5 10 15
ТНг ΡΗ^ Азр 11е 20 <210> 4
- 46 028433
<211> <212> <213> 7 БЕЛОК Искусственный
<220> <223> СК8033 ЬС СБК1
<400> 4
Θ1η Бег Уа1 Бег Бег Бег Туг
1 5
<210> <211> <212> <213> 5 3 БЕЛОК Искусственный
<220> <223> СК8033 ЬС СБК2
<400> 5
О1у А1а Бег
<210> <211> <212> <213> 6 9 БЕЛОК Искусственный
<220> <223> СК8033 ЬС СБК3
<400> 6
О1п О1п Туг О1у Бег Бег Ργο Тгр ТИг
1 5
<210> <211> <212> <213> 7 8 БЕЛОК Искусственный
<220> <223> НС СБК1
<400> 7
О1у Туг 11е ΡΗ.Θ ТИг О1и Бег О1у 1 5
<210> <211> <212> <213> 8 8 БЕЛОК Искусственный
<220> <223> НС СБК2
- 47 028433 <400> 8
11е Зег О1у Туг Зег О1у Азр ТЪг
1 5
<210> 9
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220> <223> НС 0-3
<400> 9
А1а Агд Азр Уа1 О1п Туг Зег О1у Зег Туг Ьеи О1у А1а Туг Туг РЪе
1 5 10 15
Азр Туг
<210> 10
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220> <223> ЬС 3331
<400> 10
Зег Зег Азп 11е О1у ТЪг Азп Туг
1 5
<210> 11
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220> <223> ЬС 3332
<400> 11
Агд Зег 1 Туг
<210> 12
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220> <223> ЬС 3333
<400> 12
А1а ТЪг • Тгр Азр Азр Зег Ьеи Азп О1у Тгр Уа1
- 48 028433
1 5
<210> 13
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЬС СЬК3
<400> 13
А1а ТИг Тгр Азр Азр
1 5
<210> 14
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> НС СЬК1
<400> 14
О1у ΡΗθ > ТИг ΡΗθ Азр
1 5
<210> 15
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> НС СЬК2
<400> 15
11е Азп Тгр Уа1 Бег '
1 5
<210> 16
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> НС СЬК3
<400> 16
А1а Ьуз : Азр Агд Ьеи ι
1 5
Ьеи Азр
Туг А1а
ТИг МеЬ
Бег А1а
О1у Тгр Уа1
А1а 11е Азр 11е Ьеи О1и О1у О1у 10 15
ТИг ΡΗθ Азр 11е
- 49 028433 <210> 17 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> ЬС СЬК1 <400> 17
Зег Зег Азр Уа1 О1у О1у Туг Азп Туг
1 5
<210> 18
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЬС 0-2
<400> 18
Азр Уа1 . Зег
1
<210> 19
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЬС 3223
<400> 19
Зег Зег Туг А1а Зег О1у Зег ТЪг Туг
1 5
<210> 20
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> НС 3331
<400> 20
О1у О1у Зег 11е Азп Зег Зег Рго Туг
1 5
<210> 21
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> НС 3332
Уа1
Ьуз
- 50 028433 <400> 21
ΡΗθ Туг Туг Азр О1у Бег ТИг 1 5
<210> 22
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> НС СБК3
<400> 22
А1а А1а Туг Суз Бег Бег 11е Бег Суз Н1з А1а Туг Туг Азр Туг МеЕ
1 5 10 15
Азп Уа1
<210> 23
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЬС СЬК1
<400> 23
О1п Бег Ьеи Агд Нгз О1и Азп О1у Туг Азп Туг
1 5 10
<210> <211> <212> <213> 24 3 БЕЛОК Искусственный
<220> <223> ЬС СЬК2
<400> 24
Ьеи О1у Бег
<210> 25
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220> <223> ЬС СЬК3
<400> 25
- 51 028433
МеЬ О1п А1а Ьеи ТЪг О1п ТЪг Ьеи ТЪг
1 5
<210> 26
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220> <223> ЬС СЬК1
<400> 26
О1у РЪе > ТЪг РЪе Зег Зег Туг А1а
1 5
<210> 27
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220> <223> ЬС СЬК2
<400> 27
Ьеи Зег Азр О1и Зег ТЪг ТЪг
1 5
<210> 28
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220> <223> ЬС СЬК3
<400> 28
А1а О1и Азр Ьеи О1у ТЪг Уа1 МеЬ Азр Зег Туг Туг Туг О1у МеЬ Азп
1 5 10 15
Уа1
<210> 29
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЬС СЬК1
<400> 29
О1п Зег Ьеи Ьеи Нтз Зег Азп О1у Ьеи Азп Туг
1 5 10
- 52 028433 <210> 30 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> ЬС СЬК3 <400> 30
МеЕ О1п А1а Ьеи О1п ТИг Ργο ΡΗθ ТИг 1 5
<210> 31
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> НС СЬК1
<400> 31
О1у Азр > ТИг ΡΗθ ТИг Азп Туг Н1з
1 5
<210> 32
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> НС СЬК2
<400> 32
11е Азп Ργο Бег О1у О1у Азр ТИг
1 5
<210> 33
<211> 23
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> НС СЬК3
<400> 33
А1а ТИг Азр О1и Бег Ργο О1у Ьеи
1 5
Туг Туг Туг О1у МеЕ Азр Уа1
Ьеи ТИг О1у Ьеи Агд Азр Туг Тгр 10 15 <210> 34 <211> 10
- 53 028433 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> ЬС ΟΌΚ3 <400> 34
О1п О1п Туг О1у Бег Бег Рго Ьеи Суз
1 5
<210> 35
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> НС СБК1
<400> 35
О1у Туг Бег РЬе ТЬг О1у Туг Туг
1 5
<210> 36
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> НС СБК2
<400> 36
11е Азп Рго 11е Бег О1у Азр ТЬг
1 5
<210> 37
<211> 14
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> НС СБК3
<400> 37
А1а Агд Уа1 А1а О1у О1и Азр Тгр РЬе
1 5
<210> 38
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЬС СБК2
<400> 38
Бег
О1у Азр Ьеи Азр Туг 10
- 54 028433
О1у ТЪг Зег 1 <210> 39 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> ЬС СЬК3 <400> 39
О1п О1п Туг О1у Зег Зег Рго Агд ТЪг 1 5 <210> 40 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> НС СЬК1 <400> 40
О1у Туг А1а РЪе Азп О1у Туг О1у 1 5 <210> 41 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> НС СЬК2 <400> 41
11е Азп ТЪг Туг Ьуз Уа1 Азп ТЪг 1 5 <210> 42 <211> 14 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> НС СЬК3 <400> 42
А1а Агд Азр Тгр О1у О1у Рго РЪе О1у Азп А1а РЪе Азр РЪе 1 5 10 <210> 43 <211> 6
- 55 028433
<212> <213> <220> <223> <400> О1п Зег 1 БЕЛОК Искусственный
ЬС СБК1 43 - Уа1 О1у Зег ' 5
<210> 44
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЬС СБК3
<400> 44
О1п О1п Зег Туг Зег '
1 5
<210> 45
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> НС СБК1
<400> 45
О1у Туг А1а РЬе ТЬг
1 5
<210> 46
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> НС СБК2
<400> 46
МеЬ Азп Ьеи Нтз О1у ΐ
1 5
<210> 47
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> НС СБК3
<400> 47
Рго Агд
Туг Туг
Зег ТЬг
ТЬг
- 56 028433
А1а Агд О1и Бег Ργο Азр Бег Бег
1 5
Азр Уа1
О1у Туг Ργο О1у Туг Туг О1у МеЕ 10 15
<210> 48
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЬС СЬК1
<400> 48
О1п Бег Уа1 Бег Бег Азр ΡΗθ
1 5
<210> 49
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЬС СЬК3
<400> 49
О1п О1п Туг О1у Бег Бег ТИг Тгр
1 5
<210> 50
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЬС СЬК2
<400> 50
МеЕ Азп Ργο Нгз О1у О1у Бег ТИг
1 5
<210> 51
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЬС СЬК1
<400> 51
Агд Бег Азп 11е О1у Бег Азп Ργο
1 5
ТИг
- 57 028433
<210> <211> <212> <213> 52 3 БЕЛОК Искусственный
<220> <223> ЬС СБК2
<400> 52
ТЪг Азп Азр
<210> 53 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> ЬС СБК3 <400> 53
А1а А1а Тгр Азр Азр Бег Ьеи Ьуз О1у Тгр Уа1 10
1 5
<210> 54
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЬС СБК1
<400> 54
О1у Туг А1а РИе ТЪг О1у Туг О1у
1 5
<210> 55
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> НС СБК2
<400> 55
11е Азп ТЪг Туг Ьуз РЪе Азп ТЪг
1 5
<210> 56
<211> 14
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
- 58 028433 <220>
<223> НС СЬК3 <400> 56
А1а Агд Азр Тгр А1а О1у Рго РЪе О1у Азп А1а РЪе Азр Уа1
1 5 10
<210> 57
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЬС СЬК1
<400> 57
О1п Азр ι 11е Зег Азр Туг
1 5
<210> 58
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЬС СЬК3
<400> 58
О1п О1п Туг О1у Азп Ьеи Рго Рго ТЪг
1 5
<210> 59
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> НС СЬК1
<400> 59
О1у РЪе ! ТЪг РЪе Азр О1и Туг 11е
1 5
<210> 60
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЬС СЬК3
<400> 60
Зег Зег Туг ТЪг Зег Зег Зег ТЪг Н1з Уа1
1 5 10
- 59 028433 <210> 61 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> НС СЬК1 <400> 61
О1у РЬе Бег РЬе Азр О1и Туг 11е
1 5
<210> 62
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЬС СЬК1
<400> 62
Агд Агд Азр Уа1 О1у Азр Туг Ьуз Туг
1 5
<210> 63
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЬС СЬК3
<400> 63
Бег Бег • Туг ТЬг ТЬг Бег Азп ТЬг Агд Уа1
5 10 <210> 64 <211> 6 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> ЬС СЬК1 <400> 64
О1п О1у 11е Агд Азп Азр 1 5 <210> 65 <211> 3 <212> БЕЛОК <213> Искусственный
- 60 028433
<220> <223> ЬС СЬК2
<400> 65
А1а А1а Бег
<210> <211> <212> <213> 66 9 БЕЛОК Искусственный
<220> <223> ЬС СЬК3
<400> 66
О1п О1п А1а Азп ТИг Туг Ργο Ьеи ТИг
1 5
<210> <211> <212> <213> 67 6 БЕЛОК Искусственный
<220> <223> ЬС СЬК1
<400> 67
Бег Ьеи Агд Бег Туг Туг
1 5
<210> <211> <212> <213> 68 3 БЕЛОК Искусственный
<220> <223> ЬС СЬК2
<400> 68
О1у Ьуз Азп
<210> <211> <212> <213> 69 11 БЕЛОК Искусственный
<220> <223> ЬС СЬК3
<400> 69
Азр Бег Агд Азр Бег Бег О1у ТИг Н1з Туг Уа1
5 10
- 61 028433 <210> 70 <211> 372 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> 5С08-033 УН, ДНК <400> 70
даддЕдсадс ЕддЕддадас Едддддаддс сЕддЕасадс сЕддсаддЕс ссЕдадасЕд 60
ЕссЕдЕдсад ссЕсЕддаЕЕ садсЕЕЕдаЕ дадЕасасса ЕдсаЕЕдддЕ ссддсаадсЕ 120
ссадддаадд дссЕддадЕд ддЕсдсаддЕ аЕЕааЕЕдда ааддЕааЕЕЕ саЕдддЕЕаЕ 180
дсддасЕсЕд Ессадддссд аЕЕсассаЕс Ессададаса асддсаадаа сЕсссЕсЕаЕ 240
сЕдсаааЕда асадЕсЕдад адсЕдаддас асддссЕЕдЕ аЕЕасЕдЕдс аааадассдд 300
сЕддададЕЕ садсЕаЕдда саЕЕсЕадаа дддддЕасЕЕ ЕЕдаЕаЕсЕд дддссааддд 360
асааЕддЕса сс 372
<210> 71 <211> 124 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> 5008-033 УН, БЕЛОК <400> 71
О1и 1 Уа1 О1п Ьеи Уа1 5 О1и ТЬг О1у О1у О1у Ьеи 10 Уа1 О1п Рго О1у 15 Агд
5ег Ьеи Агд Ьеи 5ег Суз А1а А1а 5ег О1у РЬе 5ег РЬе Азр О1и Туг
20 25 30
ТЬг МеЕ Н1з Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
А1а О1у 11е Азп Тгр Ьуз О1у Азп РЬе МеЕ О1у Туг А1а Азр 5ег Уа1
50 55 60
О1п О1у Агд РЬе ТЬг 11е 5ег Агд Азр Азп О1у Ьуз Азп 5ег Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи О1п МеЕ Азп 5ег Ьеи Агд А1а О1и Азр ТЬг А1а Ьеи Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Ьуз Азр Агд Ьеи О1и 5ег 5ег А1а МеЕ Азр 11е Ьеи О1и О1у О1у
100 105 110
- 62 028433
ТЬг РЬе Азр 11е Тгр О1у О1п О1у ТЬг МеТ Уа1 ТЬг 115 120 <210> 72 <211> 325 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> ЗС08-033 УЬ, ДНК <400> 72 даааТТдТдТ ТдасдсадТс Тссаддсасс сТдТсТТТдТ сТссадддда аададссасс сТсТссТдса дддссадТса дадТдТТадс адсадсТасТ ТадссТддТа ссадсадааа ссТддссадд сТсссаддсТ ссТсаТсТаТ ддТдсаТсса ссадддссас ТддТаТссса дссаддТТса дТддсадТдд дТсТдддаса дасТТсасТс ТсассаТсад садасТддад ссТдаадаТс ТТдсадТдТа ТТасТдТсад садТаТддТа дсТсассдТд дасдТТсддс саадддасса аддТддаааТ сааас
120
180
240
300
325 <210> 73 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> 3008-033 УЬ, БЕЛОК <400> 73
О1и 1 11е Уа1 Ьеи ТЬг 5 О1п Зег Рго
О1и Агд А1а ТЬг 20 Ьеи Зег Суз Агд
Туг Ьеи А1а 35 Тгр Туг О1п О1п Ьуз 40
11е Туг 50 О1у А1а Зег ТЬг Агд 55 А1а
О1у 65 Зег О1у Зег О1у ТЬг 70 Азр РЬе
Рго О1и Азр Ьеи А1а 85 Уа1 Туг Туг
Тгр ТЬг Рпе О1у 100 О1п О1у ТЬг Ьуз
О1у ТЬг 10 Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 15 О1у
А1а 25 Зег О1п Зег Уа1 Зег 30 Зег Зег
Рго О1у О1п А1а Рго 45 Агд Ьеи Ьеи
ТЬг О1у 11е Рго 60 А1а Агд РЬе Зег
ТЬг Ьеи ТЬг 75 11е Зег Агд Ьеи О1и 80
Суз О1п 90 О1п Туг О1у Зег Зег 95 Рго
Уа1 О1и 11е Ьуз
105
- 63 028433 <210> 74 <211> 375 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> ЗС08-059 УН, ДНК <400> 74
даддЬссадс ЬддЬасадЬс ЬддадсЬдад дЬдаадаадс сЬддддссЬс адЬдадддЬс 60
ЬссЬдсаддд ссЬсЬддЬЬа саЬсЬЬЬасс дааЬсЬддЬа ЬсассЬдддЬ дсдссаддсс 120
ссЬддасаад ддсЬЬдадЬд даЬдддаЬдд аЬсадсддЬЬ асадЬддЬда сасааааЬаЬ 180
дсасадааас Ьссадддсад адЬсассаЬд ассааадаса саЬссасдас сасадссЬас 240
аЬддааЬЬда ддадссЬдад аЬаЬдасдас асддссдЬаЬ аЬЬасЬдЬдс дададасдЬс 300
садЬасадЬд ддадЬЬаЬЬЬ дддсдссЬас ЬасЬЬЬдасЬ аЬЬддадссс дддаасссЬд 360
дЬсассдЬсЬ сдадс 375
<210> 75 <211> 125 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> ЗС08-059 УН, БЕЛОК <400> 75
О1и Уа1 1 О1п Ьеи Уа1 5 О1п Зег О1у А1а О1и Уа1 10 Ьуз Ьуз Рго О1у 15 А1а
Зег Уа1 Агд Уа1 Зег Суз Агд А1а Зег О1у Туг 11е РЬе ТЬг О1и Зег
20 25 30
О1у 11е ТЬг Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр МеЬ
35 40 45
О1у Тгр 11е Зег О1у Туг Зег О1у Азр ТЬг Ьуз Туг А1а О1п Ьуз Ьеи
50 55 60
О1п О1у Агд Уа1 ТЬг МеЬ ТЬг Ьуз Азр ТЬг Зег ТЬг ТЬг ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЬ О1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Туг Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азр Уа1 О1п Туг Зег О1у Зег Туг Ьеи О1у А1а Туг Туг РЬе
100 105 110
- 64 028433
Азр Туг Тгр Зег Рго О1у ТЪг Ьеи Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115 120 125 <210> 76 <211> 331 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> ЗС08-059 УЬ, ДНК <400> 76
ЬссЬаЬдЬдс ЬдасЬсадсс асссЬсадсд ЬсЬдддассс ссдддсадад ддЬсассаЬс
ЬсЬЬдЬЬсЬд даадсадсЬс саасаЬсдда асЬааЬЬаЬд ЬаЬасЬддЬа ссадсадЬЬс ссаддаасдд сссссааасЬ ссЬсаЬсЬаЬ аддадЬЬаЬс адсддсссЬс аддддЬсссЬ дассдаЬЬсЬ сЬддсЬссаа дЬсЬддсЬсс ЬсадссЬссс ЬддссаЬсад ЬдддсЬссад
ЬсЬдаддаЬд аддсЬдаЬЬа ЬЬасЬдЬдса асаЬдддаЬд асадссЬдаа ЬддЬЬдддЬд
ЬЬсддсддад ддассаадсЬ дассдЬссЬа д
120
180
240
300
331 <210> 77 <211> 110 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> ЗС08-059 УЬ, БЕЛОК <400> 77
Зег 1 Туг Уа1 Ьеи ТЪг 5 О1п Рго Рго Зег А1а 10 Зег О1у ТЪг Рго О1у 15 О1п
Агд Уа1 ТЪг 11е Зег Суз Зег О1у Зег Зег Зег Азп 11е О1у ТЪг Азп
20 25 30
Туг Уа1 Туг Тгр Туг О1п О1п РЪе Рго О1у ТЪг А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи
35 40 45
11е Туг Агд Зег Туг О1п Агд Рго Зег О1у Уа1 Рго Азр Агд РЪе Зег
50 55 60
О1у Зег Ьуз Зег О1у Зег Зег А1а Зег Ьеи А1а 11е Зег О1у Ьеи О1п
65 70 75 80
Зег О1и Азр О1и А1а Азр Туг Туг Суз А1а ТЪг Тгр Азр Азр Зег Ьеи
85 90 95
Азп О1у Тгр Уа1 РЪе О1у О1у О1у ТЪг Ьуз Ьеи ТЪг Уа1 Ьеи
100 105 110
- 65 028433 <210> 78 <211> 125 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> СК08071 УН, БЕЛОК <400> 78
О1п 1 Уа1 О1п Ьеи Уа1 5 О1п Бег О1у А1а О1и 10 Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у 15 А1а
Бег Уа1 Агд Уа1 Бег Суз Агд А1а Бег О1у Туг 11е РЬе ТЬг О1и Бег
20 25 30
О1у 11е ТЬг Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр МеЕ
35 40 45
О1у Тгр 11е Бег О1у Туг Бег О1у Азр ТЬг Ьуз Туг А1а О1п Ьуз Ьеи
50 55 60
О1п О1у Агд Уа1 ТЬг МеЕ ТЬг Ьуз Азр ТЬг Бег ТЬг ТЬг ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЕ О1и Ьеи Агд Бег Ьеи Агд Туг Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азр Уа1 О1п Туг Бег О1у Бег Туг Ьеи О1у А1а Туг Туг РЬе
100 105 110
Азр Туг Тгр Бег Рго О1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег
115 120 125
<210> 79
<211> 112
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> СК08071 УЬ, БЕЛОК
<400> 79
О1п Бег Уа1 Ьеи ТЬг О1п Рго Рго Бег А1а Бег О1у ТЬг Рго О1у О1п
1 5 10 15
Агд Уа1 ТЬг 11е Бег Суз Бег О1у Бег Бег Бег Азп 11е О1у ТЬг Азп
20 25 30
Туг Уа1 Туг Тгр Туг О1п О1п РЬе Рго О1у ТЬг А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи
- 66 028433
40 45
11е Туг 50 Агд Бег Туг О1п Агд 55 Рго Бег О1у Уа1 Рго 60 Азр Агд РИе Бег
О1у 65 Бег Ьуз Бег О1у Бег 70 Бег А1а Бег Ьеи А1а 75 11е Бег О1у Ьеи О1п 80
Бег О1и Азр О1и А1а 85 Азр Туг Туг Суз А1а 90 ТИг Тгр Азр Азр Бег 95 Ьеи
Азр О1у Тгр Уа1 100 РИе О1у О1у О1у ТИг 105 Ьуз Ьеи ТИг Уа1 Ьеи 110 Агд Ьуз
<210> 80 <211> 389 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> БС10-051 УН, ДНК <400> 80
даддЬссадс ЬддЬдсадЬс ЬддадсЬдад дЬдаадаадс сЬддддссЬс адЬадаасЬЬ 60
ЬссЬдсаадд саЬсЬддада сассЬЬсасс аасЬассаЬа ЬасасЬдддЬ дсдасаддсс 120
ссЬддасаад ддсЬЬдадЬд даЬдддааЬа аЬсааЬссЬа дЬддЬддЬда сасадасЬас 180
ЬсасадаадЬ Ьссадддсад адЬсасссЬд ассадддаса ддЬссасааа сасаЬЬсЬаЬ 240
аЬдаадЬЬдд ссадссЬдад аЬсЬдаддас асддссдЬдЬ аЬЬасЬдЬдс дасадаЬдад 300
адЬсссддас ЬЬЬЬдасЬдд ссЬЬсдддаЬ ЬасЬддЬасЬ асЬасддЬаЬ ддасдЬсЬдд 360
ддссадддда ссасддЬсас сдЬсЬсдад 389
<210> 81 <211> 129 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> БС10-051 УН, БЕЛОК <400> 81
О1и 1 Уа1 О1п Ьеи Уа1 5 О1п Бег О1у А1а О1и 10 Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у 15 А1а
Бег Уа1 О1и Ьеи Бег Суз Ьуз А1а Бег О1у Азр ТИг РИе ТИг Азп Туг
20 25 30
Няз 11е Няз Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр МеЬ
35 40 45
- 67 028433
О1у Ι1θ 50 Ι1θ Азп Ργο Бег О1у О1у Азр 55 ТИг Азр Туг 60 Бег О1п Ьуз ΡΗθ
О1п О1у Агд Уа1 ТИг Ьеи ТИг Агд Азр Агд Бег ТИг Азп ТИг ΡΗθ Туг
65 70 75 80
МеЕ Ьуз Ьеи А1а Бег Ьеи Агд Бег О1и Азр ТИг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а ТИг Азр О1и Бег Ργο О1у Ьеи Ьеи ТИг О1у Ьеи Агд Азр Туг Тгр
100 105 110
Туг Туг Туг О1у МеЕ Азр Уа1 Тгр О1у О1п О1у ТИг ТИг Уа1 ТИг Уа1
115 120 125
Бег <210> 82 <211> 328 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> БС10-051 УЬ, ДНК <400> 82
даааЕЕдЕдЕ ЕдасдсадЕс Ессаддсасс сЕдЕсЕЕЕдЕ сЕссадддда аададссасс 60
сЕсЕссЕдса дддссадЕса дадЕдЕЕадс адсадсЕасЕ ЕадссЕддЕа ссадсадааа 120
ссЕддссадд сЕсссаддсЕ ссЕсаЕсЕаЕ ддЕдсаЕсса дсадддссас ЕддсаЕссса 180
дасаддЕЕса дЕддсадЕдд дЕсЕдддаса дасЕЕсасЕс ЕсассаЕсад садасЕддад 240
ссЕдаадаЕЕ ЕЕдсадЕдЕа ЕЕасЕдЕсад садЕаЕддЕа дсЕсассЕсЕ дЕдсадЕЕЕЕ 300
ддссадддда ссаадсЕдда даЕсааас 328
<210> 83
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> БС10-051 УЬ, БЕЛОК
<400> 83
О1и 11е Уа1 Ьеи ТИг О1п Бег Ργο О1у ТИг Ьеи Бег Ьеи Бег Ργο О1у
1 5 10 15
О1и Агд А1а ТИг Ьеи Бег Суз Агд А1а Бег О1п Бег Уа1 Бег Бег Бег
- 68 028433
20 25 30
Туг ^еυ А1а Тгр Туг О1п О1п ^уз Рго О1у О1п А1а Рго Агд ^еυ ^еυ
35 40 45
11е Туг О1у А1а Зег Зег Агд А1а ТЬг О1у 11е Рго Азр Агд РЬе Зег
50 55 60
О1у Зег О1у Зег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг ^еυ ТЬг 11е Зег Агд ^еυ О1и
65 70 75 80
Рго О1и Азр РНе А1а Уа1 Туг Туг Суз О1п О1п Туг О1у Зег Зег Рго
85 90 95
^еυ Суз Зег РНе О1у О1п О1у ТЬг ^уз ^еυ О1и 11е ^уз
100 105
<210> 84 <211> 368 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> ЗС10-049 УН, ДНК <400> 84
даддЕдсадс ЕддЕддадЕс Едддддаддс ЕЕддЕасадс сЕддддддЕс ссЕдадасЕс 60
ЕссЕдЕдсад ссЕсЕддаЕЕ сассЕЕЕадс адсЕаЕдсса ЕдадсЕдддЕ ссдссаддсЕ 120
ссадддаадд ддсЕддадЕд ддЕсЕсасдЕ сЕЕадЕдаЕд ааадЕассас аЕасЕаЕдса 180
дасЕссдЕда адддссдаЕЕ сасЕаЕсЕсс ададасааЕЕ ссаадаасас асЕдЕаЕсЕд 240
садаЕдааса дссЕдааадс сдасдасасд дссаЕаЕаЕЕ асЕдЕдсдда ддаЕсЕдддд 300
асддЕдаЕдд асЕссЕасЕа сЕасддЕаЕд аасдЕсЕддд дсссадддас сасддЕсасс 360
дЕсЕсдад 368
<210> 85
<211> 122
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЗС10-049 УН, БЕЛОК
<400> 85
О1и Уа1 О1п ^еυ Уа1 О1и Зег О1у О1у О1у ^еυ Уа1 О1п Рго О1у О1у
1 5 10 15
Зег ^еυ Агд ^еυ Зег Суз А1а А1а Зег О1у РЬе ТЬг РЬе Зег Зег Туг
20 25 30
- 69 028433
А1а МеЕ Бег Тгр Уа1 35 Агд О1п А1а 40 Рго О1у Ьуз О1у Ьеи 45 О1и Тгр Уа1
Бег Агд Ьеи Бег Азр О1и Бег ТЬг ТЬг Туг Туг А1а Азр Бег Уа1 Ьуз
50 55 60
О1у Агд РЬе ТЬг 11е Бег Агд Азр Азп Бег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг Ьеи
65 70 75 80
О1п МеЕ Азп Бег Ьеи Ьуз А1а Азр Азр ТЬг А1а 11е Туг Туг Суз А1а
85 90 95
О1и Азр Ьеи О1у ТЬг Уа1 МеЕ Азр Бег Туг Туг Туг О1у МеЕ Азп Уа1
100 105 110
Тгр О1у Рго О1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Бег
115 120
<210> 86 <211> 337 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> БС10-049 УЬ, ДНК <400> 86 даЕдЕЕдЕда ЕдасЕсадЕс ЕссасЕсЕсс сЕдсссдЕса ссссЕддада дссддссЕсс аЕсЕссЕдса ддЕсЕадЕса дадссЕссЕд саЕадЕааЕд дасЕсааЕЕа ЕЕЕддаЕЕдд
ЕассЕдсада адссадддса дЕсЕссасад сЕссЕдаЕсЕ аЕЕЕдддЕЕс ЕааЕсдддсс
ЕссддддЕсс сЕдасаддЕЕ садЕддсадЕ ддаЕсаддса садаЕЕЕЕас асЕдааааЕс адсададЕдд аддсЕдадда ЕдЕЕддддЕЕ ЕаЕЕасЕдса ЕдсаадсЕсЕ асааасЕссЕ
ЕЕсасЕЕЕсд дсддадддас сааддЕддад аЕсааас
120
180
240
300
337 <210> 87 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> БС10- 049 УН, БЕЛОК
<400> 87
Азр Уа1 1 Уа1 МеЕ ТЬг 5 О1п Бег Рго Ьеи Бег 10 Ьеи Рго Уа1 ТЬг Рго 15 О1у
О1и Рго А1а Бег 11е Бег Суз Агд Бег Бег О1п Бег Ьеи Ьеи Нтз Бег
- 70 028433
25 30
Азп О1у Ьеи 35 Азп Туг Ьеи Азр Тгр 40 Туг Ьеи О1п Ьуз Рго 45 О1у О1п 5ег
Рго О1п Ьеи Ьеи 11е Туг Ьеи О1у 5ег Азп Агд А1а 5ег О1у Уа1 Рго
50 55 60
Азр Агд РЬе 5ег О1у 5ег О1у 5ег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи Ьуз 11е
65 70 75 80
5ег Агд Уа1 О1и А1а О1и Азр Уа1 О1у Уа1 Туг Туг Суз МеЕ О1п А1а
85 90 95
Ьеи О1п ТЬг Рго РЬе ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз
100 105 110
<210> 88 <211> 382 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> 5С10-023 УН, ДНК <400> 88
даддЕдсадс ЕддЕддадас Едддддаддс ЕЕддЕасадс сЕддсаддЕс ссЕдадасЕс 60
ЕссЕдЕдсад ссЕсЕддаЕЕ сассЕЕЕдаЕ даЕЕаЕдсса ЕдсаЕЕдддЕ ссддсаадсЕ 120
ссадддаадд дссЕддадЕд ддЕсЕсаддЕ аЕЕааЕЕддд ЕЕадЕасЕас саЕдддсЕаЕ 180
дсддасЕсЕд Едаадддссд аЕЕсассаЕс Ессададаса асдссаадаа сЕсссЕдЕаЕ 240
сЕдсаааЕда асадЕсЕдад адсЕдаддас асддссЕЕдЕ аЕЕасЕдЕдс аааадаЕадд 300
сЕддададЕд садсЕаЕада саЕЕсЕадаа дддддЕасЕЕ ЕЕдаЕаЕсад дддссааддд 360
асааЕддЕса ссдЕсЕсдад сд 382
<210> 89
<211> 127
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> 5С10-023 УН, БЕЛОК
<400> 89
О1и Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1и ТЬг О1у О1у О1у Ьеи Уа1 О1п Рго О1у Агд
1 5 10 15
5ег Ьеи Агд Ьеи 5ег Суз А1а А1а 5ег О1у РЬе ТЬг РЬе Азр Азр Туг
20 25 30
- 71 028433
А1а МеЕ Ηΐ3 35 Тгр Уа1 Агд О1п А1а 40 Рго О1у Ьуз О1у Ьеи 45 О1и Тгр Уа1
Зег О1у 50 11е Азп Тгр Уа1 Зег 55 ТЬг ТЬг МеЕ О1у Туг 60 А1а Азр Зег Уа1
Ьуз 65 О1у Агд РЬе ТЬг 11е 70 Зег Агд Азр Азп А1а 75 Ьуз Азп Зег Ьеи Туг 80
Ьеи О1п МеЕ Азп Зег 85 Ьеи Агд А1а О1и Азр 90 ТЬг А1а Ьеи Туг Туг 95 Суз
А1а Ьуз Азр Агд 100 Ьеи О1и Зег А1а А1а 105 11е Азр 11е Ьеи О1и 110 О1у О1у
ТЬг РЬе Азр 115 11е Агд О1у О1п О1у 120 ТЬг МеЕ Уа1 ТЬг Уа1 125 Зег Зег
<210> 90 <211> 331 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> ЗС10-023 УЬ, ДНК <400> 90 садЕсЕдссс ЕдасЕсадсс ЕсссЕссдсд ЕссддсЕсЕс сЕддасадЕс адЕсассаЕс
ЕссЕдсасЕд даассадсад ЕдаЕдЕЕддЕ ддЕЕаЕаасЕ аЕдЕсЕссЕд дЕассаасад
120
180
240
300
331
сасссаддса аадсссссаа асЕсаЕдаЕЕ ЕаЕдаЕдЕса дЕаадсддсс сЕсаддддЕс
ссЕдаЕсдсЕ ЕсЕсЕдддЕс саадЕсЕддс аасасддссЕ сссЕдассаЕ сЕсЕдддсЕс
саддсЕдадд асдаддсЕда аЕаЕЕасЕдс адсЕсаЕаЕд саадсддсад сасЕЕаЕдЕс
ЕЕсддаасЕд ддассааддЕ сассдЕссЕа д
<210> 91
<211> 110
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЗС10-023 УЬ, БЕЛОК
<400> 91
О1п Зег А1а Ьеи ТЬг О1п Рго Рго Зег А1а Зег О1у Зег Рго О1у О1п
1 5 10 15
Зег Уа1 ТЬг 11е Зег Суз ТЬг О1у ТЬг Зег Зег Азр Уа1 О1у О1у Туг
- 72 028433
20 25 30
Азп Туг Уа1 Зег Тгр Туг О1п О1п Н1з Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи
35 40 45
МеТ 11е Туг Азр Уа1 Зег Ьуз Агд Рго Зег О1у Уа1 Рго Азр Агд РЬе
50 55 60
Зег О1у Зег Ьуз Зег О1у Азп ТЬг А1а Зег Ьеи ТЬг 11е Зег О1у Ьеи
65 70 75 80
О1п А1а О1и Азр О1и А1а О1и Туг Туг Суз Зег Зег Туг А1а Зег О1у
85 90 95
Зег ТЬг Туг Уа1 РЬе О1у ТЬг О1у ТЬг Ьуз Уа1 ТЬг Уа1 Ьеи
100 105 110
<210> 92 <211> 378 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> ЗС10-032 УН, ДНК <400> 92
саддТдсадс ТдсаддадТс дддсссадда сТддТдаадс сТТсдддсас ссТдТсссТс 60
ассТдсааТд ТсТсТддТдд сТссаТсаас адТадТсссТ аТаадТдддс сТддаТссдс 120
садТссссад ддааддддсТ ддадТддаТТ дддасТТТсТ аТТаТдаТдд дадсассдас 180
ТасаасссдТ сссТссадад ТсдасТсасс аТТТссддад асаТдТссад ТаассасТТс 240
ТссТТдаддс ТдаддТсТдТ дассдссдса дасасддсТд ТдТаТТасТд ТдсддссТаТ 300
ТдТадТадТа ТаадсТдсса ТдссТаТТас дасТасаТда асдТсТдддд сааадддасс 360
асддТсассд ТсТсдадс 378
<210> 93
<211> 126
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЗС10-032 УН, БЕЛОК
<400> 93
О1п Уа1 О1п Ьеи О1п О1и Зег О1у Рго О1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег О1у
1 5 10 15
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз Азп Уа1 Зег О1у О1у Зег 11е Азп Зег Зег
20 25 30
- 73 028433
Ργο Туг Ьуз 35 Тгр А1а Тгр Ι1θ Агд 40 О1п Бег Ργο О1у Ьуз 45 О1у Ьеи О1и
Тгр Ι1θ О1у ТИг ΡΗθ Туг Туг Азр О1у Бег ТИг Азр Туг Азп Ργο Бег
50 55 60
Ьеи О1п Бег Агд Ьеи ТИг Ι1θ Бег О1у Азр МеЕ Бег Бег Азп Н1з ΡΗθ
65 70 75 80
Бег Ьеи Агд Ьеи Агд Бег Уа1 ТИг А1а А1а Азр ТИг А1а Уа1 Туг Туг
85 90 95
Суз А1а А1а Туг Суз Бег Бег Ι1θ Бег Суз Н1з А1а Туг Туг Азр Туг
100 105 110
МеЕ Азп Уа1 Тгр О1у Ьуз О1у ТИг ТИг Уа1 ТИг Уа1 Бег Бег
115 120 125
<210> 94 <211> 334 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> БС10-032 УЬ, ДНК <400> 94 даааЕЕдЕдс ЕдасЕсадЕс ЕссасЕсЕсс сЕдсссдЕса ссссЕддада дссддссЕсс аЕсЕссЕдса ддЕсЕадЕса дадссЕссда саЕдадааЕд даЕасаасЕа ЕЕЕддаЕЕдд
ЕассЕдсада адссадддса дЕсЕссасад сЕссЕдаЕдЕ аЕЕЕдддЕЕс ЕдЕЕсдддсс
ЕссддддЕсс сЕдасаддЕЕ садЕддсадЕ ддаЕсаддса садаЕЕЕЕас асЕдааааЕс адсададЕдд аддсЕдадда ЕдЕЕддддЕЕ ЕаЕЕасЕдса ЕдсаадсЕсЕ асааасдсЕс асЕЕЕсддсд дадддассаа дсЕддадаЕс ааас
120
180
240
300
334
<210> 95
<211> 111
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> БС10-032 УЬ, БЕЛОК
<400> 95
О1и Не Уа1 Ьеи ТИг О1п Бег Ργο Ьеи Бег Ьеи Ργο Уа1 ТИг Ργο О1у
1 5 10 15
О1и Ργο А1а Бег Ι1θ Бег Суз Агд Бег Бег О1п Бег Ьеи Агд Нгз О1и
- 74 028433
25 30
Азп О1у Туг 35 Азп Туг Ьеи Азр Тгр 40 Туг Ьеи О1п Ьуз Рго 45 О1у О1п Бег
Рго О1п Ьеи Ьеи МеЕ Туг Ьеи О1у Бег Уа1 Агд А1а Бег О1у Уа1 Рго
50 55 60
Азр Агд РЬе Бег О1у Бег О1у Бег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи Ьуз 11е
65 70 75 80
Бег Агд Уа1 О1и А1а О1и Азр Уа1 О1у Уа1 Туг Туг Суз МеЕ О1п А1а
85 90 95
Ьеи О1п ТЬг Ьеи ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Ьеи О1и 11е Ьуз
100 105 110
<210> 96 <211> 364 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> БС11-024 УН, ДНК <400> 96 даддЕдсадс
ЕссЕдсаадд ссЕддасаад дсасададдЕ аЕддадсЕда ддЕдаадаЕЕ
ЕддЕдсадЕс сЕЕсЕддаЕа дассЕдадЕд
ЕЕсадддсад дсдддсЕдаа ддЕЕсдддда
ЕддддсЕдаа садсЕЕсасс даЕддддсдд ддЕсассЕЕд аЕсЕдасдас
ЕсЕЕдасЕаЕ аЕЕаадаадс ддсЕасЕаЕа аЕсаасссЕа ассадддаса асддссдЕаЕ
Еддддссадд сЕддддссЕс
ЕдсасЕдддЕ
ЕсадЕддЕда ддЕссассад аЕЕЕсЕдЕдс даасссЕддЕ адЕдааддЕс дсдасаддсс сасааасЕаЕ сасадссЕас дададЕсдсд сассдЕсЕсд адсд
120
180
240
300
360
364
<210> 97
<211> 121
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> БС11-24 УН, БЕЛОК
<400> 97
О1и Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Бег О1у А1а О1и 11е
1 5 10
Ьуз Ьуз Рго О1у А1а 15
Бег Уа1 Ьуз Уа1 Бег Суз Ьуз А1а Бег О1у Туг Бег РЬе ТЬг О1у Туг
20 25 30
- 75 028433
Туг МеЬ Н1з 35 Тгр Уа1 Агд О1п А1а 40 Рго О1у О1п О1у Рго О1и Тгр 45 МеЬ
О1у Агд 11е Азп Рго 11е Зег О1у Азр ТЬг Азп Туг А1а О1п Агд РЬе
50 55 60
О1п О1у Агд Уа1 ТЬг Ьеи ТЬг Агд Азр Агд Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЬ О1и Ьеи Зег О1у Ьеи Ьуз Зег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг РЬе Суз
85 90 95
А1а Агд Уа1 А1а О1у О1и Азр Тгр РЬе О1у Азр Ьеи Азр Туг Тгр О1у
100 105 110
О1п О1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120
<210> 98 <211> 325 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> ЗС11-024 УЬ, ДНК <400> 98 даааЬЬдЬдЬ ЬдасдсадЬс Ьссадссасс сЬдЬсЬдЬдЬ сЬссадддда аададссасс сЬсЬссЬдса дддссадЬса дадЬдЬЬадс адсадсЬасЬ ЬадссЬддЬа ссадсадааа ссЬддссадд сЬсссаддсЬ ссЬсаЬсЬЬЬ ддаасаЬсса дсадддссас ЬддсаЬссса дасаддЬЬса дЬддсадЬдд дЬсЬдддаса дасЬЬсасЬс ЬсассаЬсад саддсЬддад ссЬдаадаЬЬ ЬЬдсадЬдЬа ЬЬасЬдЬсад садЬаЬддЬа дсЬсассЬсд дасдЬЬсддс саадддасса аддЬддадаЬ сааас
120
180
240
300
325
<210> 99
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЗС11-024 УЬ, БЕЛОК
<400> 99
О1и 11е Уа1 Ьеи ТЬг О1п Зег Рго А1а ТЬг Ьеи Зег Уа1 Зег Рго О1у
1 5 10 15
О1и Агд А1а ТЬг Ьеи Зег Суз Агд А1а Зег О1п Зег Уа1 Зег Зег Зег
- 76 028433
20 25 30
Туг Ьеи А1а Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у О1п А1а Рго Агд Ьеи Ьеи
35 40 45
11е РЪе О1у ТЪг Зег Зег Агд А1а ТЪг О1у 11е Рго Азр Агд РЪе Зег
50 55 60
О1у Зег О1у Зег О1у ТЪг Азр РЪе ТЪг Ьеи ТЪг 11е Зег Агд Ьеи О1и
65 70 75 80
Рго О1и Азр РЪе А1а Уа1 Туг Туг Суз О1п О1п Туг О1у Зег Зег Рго
85 90 95
Агд ТЪг РЪе О1у О1п О1у ТЪг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 100 <211> 364 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> ЗС11-035 УН, ДНК <400> 100
саддЬдсадс ЬддЬасадЬс ЬддадсЬдад дЬдаадаадс сЬдддЬссЬс ддЬдааддЬс 60
ЬссЬдсаада ссЬсЬддЬЬа сдссЬЬЬаас ддсЬасддЬа ЬсадсЬдддЬ дсдасаддсс 120
ссЬддасаад ддсЬЬдадЬд ддЬддсаЬдд аЬсаасасЬЬ асааадЬЬаа сасасаЬЬаЬ 180
дсасадааЬс Ьссддддсад ддЬсассдЬд адсаЬадаса саЬссасдас сасадссЬаЬ 240
аЬддаасЬда ддадссЬдад аЬсЬдасдас асддссдЬсЬ аЬЬасЬдЬдс дададасЬдд 300
ддЬдддссдЬ ЬЬдддаасдс ЬЬЬЬдаЬЬЬс Ьддддссаад ддасааЬддЬ сассдЬсЬсд 360
адсд 364
<210> 101
<211> 121
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЗС11-035 УН, БЕЛОК
<400> 101
О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Зег О1у А1а О1и Уа1
1 5 10
Ьуз Ьуз Рго О1у Зег 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз ТЪг Зег О1у Туг А1а РЪе Азп О1у Туг
20 25 30
- 77 028433
О1у Ι1θ Бег Тгр 35 Уа1 Агд О1п А1а 40 Ργο О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр Уа1 45
А1а Тгр Ι1θ Азп ТИг Туг Ьуз Уа1 Азп ТИг Н1з Туг А1а О1п Азп Ьеи
50 55 60
Агд О1у Агд Уа1 ТИг Уа1 Бег Ι1θ Азр ТИг Бег ТИг ТИг ТИг А1а Туг
65 70 75 80
МеЕ О1и Ьеи Агд Бег Ьеи Агд Бег Азр Азр ТИг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азр Тгр О1у О1у Ργο ΡΗθ О1у Азп А1а ΡΗθ Азр ΡΗθ Тгр О1у
100 105 110
О1п О1у ТИг МеЕ Уа1 ТИг Уа1 Бег Бег
115 120
<210> 102 <211> 322 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> БС11-035 УЬ, ДНК <400> 102
дасаЕссада ЕдасссадЕс ЕссаЕссЕсс сЕддсЕдсаЕ сЕаЕаддада садЕдЕсасс 60
аЕсасЕЕдсс дддсаадЕса дадсдЕЕддс ЕсЕЕасЕЕаа аЕЕддЕаЕса дсааааасса 120
дддааадссс сЕаадЕЕдЕЕ даЕсЕаЕддЕ дсаЕссааЕд ЕдсааадЕдд ддЕсссаЕса 180
аддЕЕЕадЕд дсадЕдадЕс Едддасадад ЕссасасЕса ссаЕсаасаа ЕсЕдсадссЕ 240
даадаЕЕсЕд саасЕЕасЕа сЕдЕсаасад адЕЕасадЕа ссссЕадаас дЕЕсддссаа 300
дддассаадд ЕддаааЕсаа ас 322
<210> 103 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> БС11- 035 УЬ, БЕЛОК
<400> 103
Азр Ι1θ О1п 1 МеЕ ТИг 5 О1п Бег Ργο
Азр Бег Уа1 ТИг Ι1θ ТИг Суз Агд
Бег Бег 10 Ьеи А1а А1а Бег Ι1θ 15 О1у
А1а Бег О1п Бег Уа1 О1у Бег Туг
- 78 028433
20 25 30
Ьеи Азп Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг О1у А1а Зег Азп Уа1 О1п Зег О1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег О1у
50 55 60
Зег О1и Зег О1у ТЬг О1и Зег ТЬг Ьеи ТЬг 11е Азп Азп Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр Зег А1а ТЬг Туг Туг Суз О1п О1п Зег Туг Зег ТЬг Рго Агд
85 90 95
ТЬг РЬе О1у О1п О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 104 <211> 375 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> ЗС11-036 УН, ДНК <400> 104
даддЬдсадс ЬддЬдсадЬс ЬддддсЬдад дЬдаадаадс сЬддддссЬс адЬдасддЬЬ 60
ЬссЬдсаадд саЬсЬддаЬа сдссЬЬсасс адсЬасЬаЬЬ ЬасасЬдддЬ дсдасаддсс 120
ссЬддасаад ддсЬЬдадЬд даЬддддаЬа аЬдааЬсЬЬс аЬддЬддЬад сасаассЬас 180
дсасадаадЬ Ьссадддсад адЬсассаЬд ассадддаса сдЬссасдад дасадЬЬЬас 240
аЬддадсЬда дсддссЬдад аЬсЬдаддас ЬсддссдЬаЬ аЬЬасЬдЬдс ссдадададЬ 300
сссдаЬадса дЬддЬЬаЬсс ЬддсЬасЬас ддЬаЬддасд ЬсЬддддсса ддддассасд 360
дЬсассдЬсЬ сдадс 375
<210> 105
<211> 125
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЗС11-036 УН, БЕЛОК
<400> 105
О1и Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Зег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у А1а
1 5 10 15
Зег Уа1 ТЪг Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег О1у Туг А1а РЪе ТЪг Зег Туг
20 25 30
- 79 028433
Туг Ьеи Нтз Тгр Уа1 Агд О1п А1а 40 Рго О1у О1п О1у Ьеи 45 О1и Тгр МеЬ
35
О1у 11е МеЬ Азп Ьеи Н1з О1у О1у Бег ТЬг ТЬг Туг А1а О1п Ьуз РЬе
50 55 60
О1п О1у Агд Уа1 ТЬг МеЬ ТЬг Агд Азр ТЬг Бег ТЬг Агд ТЬг Уа1 Туг
65 70 75 80
МеЬ О1и Ьеи Бег О1у Ьеи Агд Бег О1и Азр Бег А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд О1и Бег Рго Азр Бег Бег О1у Туг Рго О1у Туг Туг О1у МеЬ
100 105 110
Азр Уа1 Тгр О1у О1п О1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег
115 120 125
<210> 106 <211> 325 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> БС11-036 УЬ, ДНК <400> 106 даааЬЬдЬдЬ ЬдасдсадЬс Ьссаддсасс сЬдЬсЬЬЬдЬ сЬссадддда аададссасс сЬсЬссЬдса дддссадЬса дадЬдЬЬадс адсдасЬЬсЬ ЬсдссЬддЬа ссадсадааа сдЬддссада сЬсссасссЬ ссЬсаЬсЬаЬ ддЬасаЬсса ссадддссас ЬддсаЬссса дасаддЬЬса дЬддсадЬдд дЬсЬдддаса дасЬЬсасас ЬсадсдЬсдс садасЬддад ссЬдаадаЬЬ ЬЬдсадЬдЬа ЬЬасЬдЬсад садЬаЬддЬа дсЬсдасдЬд дасдЬЬсддс саадддасса аддЬддаааЬ сааас
120
180
240
300
325 <210> 107 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> БС11 -036 УЬ, БЕЛОК
<400> 107
О1и 11е Уа1 Ьеи ТЬг О1п Бег Рго О1у ТЬг Ьеи Бег Ьеи Бег Рго О1у
1 5 10 15
О1и Агд А1а ТЬг Ьеи Бег Суз Агд А1а Бег О1п Бег Уа1 Бег Бег Азр
- 80 028433
20 25 30
РЬе РЬе А1а Тгр Туг О1п О1п Ьуз Агд О1у О1п ТЬг Рго ТЬг Ьеи Ьеи
35 40 45
11е Туг О1у ТЬг Зег ТЬг Агд А1а ТЬг О1у 11е Рго Азр Агд РЬе Зег
50 55 60
О1у Зег О1у Зег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи Зег Уа1 А1а Агд Ьеи О1и
65 70 75 80
Рго О1и Азр РЬе А1а Уа1 Туг Туг Суз О1п О1п Туг О1у Зег Зег ТЬг
85 90 95
Тгр ТЬг РЬе О1у О1п О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 108 <211> 375 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> ЗС11-038 УН, ДНК <400> 108
даддТдсадс ТддТддадТс ТддддсТдад дТдаадаадс сТддддссТс адТдааддТТ 60
ТссТдсаадд саТсТддаТа сдссТТсасс адсТасТаТТ ТдсасТдддТ дсдасаддсс 120
ссТддасаад ддсТТдадТд даТддддаТа аТдаасссТс аТддТддТад сасаассТас 180
дсасадаадТ Тссадддсад адТсассаТд ассадддаса сдТссасдад сасадТсТас 240
аТддадсТда дсадссТдад аТсТдаддас асддссдТдТ аТТасТдТдс ссдадададТ 300
сссдаТадТа дТддТТаТсс ТддсТасТас ддТаТддасд ТсТддддсса адддассасд 360
дТсассдТсТ сдадс 375
<210> 109
<211> 125
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> ЗС11-038 УН, БЕЛОК
<400> 109
О1и Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1и Зег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у А1а
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег О1у Туг А1а РЬе ТЬг Зег Туг
20 25 30
- 81 028433
Туг Ьеи Нтз Тгр Уа1 Агд О1п А1а 40 Рго О1у О1п О1у Ьеи 45 О1и Тгр МеЬ
35
О1у 11е МеЬ Азп Рго Н1з О1у О1у Бег ТИг ТИг Туг А1а О1п Ьуз РИе
50 55 60
О1п О1у Агд Уа1 ТИг МеЬ ТИг Агд Азр ТИг Бег ТИг Бег ТИг Уа1 Туг
65 70 75 80
МеЬ О1и Ьеи Бег Бег Ьеи Агд Бег О1и Азр ТИг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд О1и Бег Рго Азр Бег Бег О1у Туг Рго О1у Туг Туг О1у МеЬ
100 105 110
Азр Уа1 Тгр О1у О1п О1у ТИг ТИг Уа1 ТИг Уа1 Бег Бег
115 120 125
<210> 110 <211> 331 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> БС11-038 УЬ, ДНК <400> 110
ЬссЬаЬдадс ЬдасЬсадсс асссЬсадсд ЬсЬдддассс ссдддсадад ддЬсассаЬд
ЬсЬЬдЬЬсЬд даадсадаЬс саасаЬсдда ЬсЬааЬссЬд ЬаадсЬддЬЬ ссадсаасЬс ссдддааЬдд ЬссссааасЬ ссЬсаЬсЬаЬ асЬааЬдаЬс адсддсссЬс аддддЬсссЬ дассдаЬЬсЬ сЬддсЬссаа дЬсЬддсссс ЬсадссЬссс ЬддссаЬсад ЬдддсЬссад
ЬсЬдаддаЬд аддсЬдаЬЬа ЬЬасЬдЬдса дсаЬдддаЬд асадссЬдаа аддЬЬдддЬд
ЬЬсддсддад ддассаадсЬ дассдЬссЬа д
120
180
240
300
331
<210> 111
<211> 110
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> БС11-038 УЬ, БЕЛОК
<400> 111
Бег Туг О1и Ьеи ТИг О1п Рго Рго Бег А1а Бег О1у ТИг Рго О1у О1п
1 5 10 15
Агд Уа1 ТИг МеЬ Бег Суз Бег О1у Бег Агд Бег Азп 11е О1у Бег Азп
- 82 028433
20 25 30
Рго Уа1 Бег Тгр РЬе О1п О1п Ьеи Рго О1у МеЕ Уа1 Рго Ьуз Ьеи Ьеи
35 40 45
11е Туг ТЬг Азп Азр О1п Агд Рго Бег О1у Уа1 Рго Азр Агд РЬе Бег
50 55 60
О1у Бег Ьуз Бег О1у Рго Бег А1а Бег Ьеи А1а 11е Бег О1у Ьеи О1п
65 70 75 80
Бег О1и Азр О1и А1а Азр Туг Туг Суз А1а А1а Тгр Азр Азр Бег Ьеи
85 90 95
Ьуз О1у Тгр Уа1 РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи
100 105 110
<210> 112 <211> 364 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> БС11-039 УН, ДНК <400> 112
даддЕссадс ЕддЕасадЕс Еддадсадад дЕдааааадс ссддддадЕс ЕдЕдаадаЕс 60
ЕссЕдЕаада сЕЕсЕддЕЕа сдссЕЕЕасс ддсЕасддЕа ЕсадсЕдддЕ дсдасаддсс 120
ссЕддасаад дссЕЕдадЕд даЕдддаЕдд аЕсаасасЕЕ асаааЕЕЕаа сасаааЕЕаЕ 180
дсасадаасс Едсадддсад адЕсассаЕд ассаЕадаса саЕссасдад сдсадссЕас 240
аЕддадсЕда ддадссЕдад аЕаЕдаддас асддссдЕаЕ аЕЕЕсЕдЕдс дададасЕдд 300
дсЕдддссдЕ ЕЕдддааЕдс ЕЕЕЕдаЕдЕс Еддддссадд ддасааЕддЕ сассдЕсЕсд 360
адсд 364
<210> 113
<211> 121
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> БС11-039 УН, БЕЛОК
<400> 113
О1и Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Бег О1у А1а О1и Уа1
1 5 10
Ьуз Ьуз Рго О1у О1и 15
Бег Уа1 Ьуз 11е Бег Суз Ьуз ТЬг Бег О1у Туг А1а РЬе ТЬг О1у Туг
20 25 30
- 83 028433
О1у 11е 5ег Тгр 35 Уа1 Агд О1п А1а 40 Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр МеЕ 45
О1у Тгр 11е Азп ТЬг Туг Ьуз РЬе Азп ТЬг Азп Туг А1а О1п Азп Ьеи
50 55 60
О1п О1у Агд Уа1 ТЬг МеЕ ТЬг 11е Азр ТЬг 5ег ТЬг 5ег А1а А1а Туг
65 70 75 80
МеЕ О1и Ьеи Агд 5ег Ьеи Агд Туг О1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг РЬе Суз
85 90 95
А1а Агд Азр Тгр А1а О1у Рго РЬе О1у Азп А1а РЬе Азр Уа1 Тгр О1у
100 105 110
О1п О1у ТЬг МеЕ Уа1 ТЬг Уа1 5ег 5ег
115 120
<210> 114 <211> 321 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> 5С11-039 УЬ, ДНК <400> 114
асаЕссадаЕ дасссадЕсЕ ссаЕсЕЕссс ЕдЕсЕдсаЕс ЕаЕаддадас ададЕсдсса 60
ЕсасЕЕдсса ддсдадЕсад дасаЕЕадсд асЕаЕЕЕааа ЕЕддЕаЕсад саасаассад 120
ддааадсссс ЕаадсЕссЕд сЕсЕасддЕд саЕссааЕЕЕ ддааасаддд дЕсссаЕсаа 180
ддЕЕсадЕдд аадЕддаЕсЕ дддасадаЕЕ ЕЕасЕЕЕсас саЕсадсадс сЕдсадссЕд 240
аадасаЕЕдс аасаЕаЕЕаЕ ЕдЕсаасадЕ аЕддЕааЕсЕ сссЕссдасЕ ЕЕсддсдддд 300
ддассаадсЕ ддадаЕсааа с 321
<210> 115
<211> 106
<212> БЕЛОК
<213> Искусственный
<220>
<223> 5С11-039 УЬ, БЕЛОК
<400> 115
11е О1п МеЕ ТЬг О1п 5ег Рго 5ег 5ег Ьеи 5ег
1 5 10
А1а 5ег 11е О1у Азр 15
Агд Уа1 А1а 11е ТЬг Суз О1п А1а 5ег О1п Азр 11е 5ег Азр Туг Ьеи
- 84 028433
20 25 30
Азп Тгр Туг О1п О1п О1п Рго О1у ^уз А1а Рго ^уз ^еυ ^еυ ^еυ Туг
35 40 45
О1у А1а Зег Азп ^еυ О1и ТЬг О1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег О1у Зег
50 55 60
О1у Зег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг РЬе ТЬг 11е Зег Зег ^еυ О1п Рго О1и
65 70 75 80
Азр 11е А1а ТЬг Туг Туг Суз О1п О1п Туг О1у Азп ^еυ Рго Рго ТЬг
85 90 95
РЬе О1у О1у О1у ТЬг ^уз ^еυ О1и 11е ^уз
100 105
<210> 116
<211> 121
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> ЗС09- 114 УН, БЕЛОК
<400> 116
О1п Уа1 О1п ^еυ Уа1 О1п Зег О1у А1а О1и Уа1 ^уз ^уз Рго О1у Зег
1 5 10 15
Зег Уа1 ^уз Уа1 Зег Суз ^уз Зег Зег О1у О1у ТЬг Зег Азп Азп Туг
20 25 30
А1а 11е Зег Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у О1п О1у ^еυ Азр Тгр МеЕ
35 40 45
О1у О1у 11е Зег Рго 11е РЬе О1у Зег ТЬг А1а Туг А1а О1п ^уз РЬе
50 55 60
О1п О1у Агд Уа1 ТЬг 11е Зег А1а Азр 11е РЬе Зег Азп ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЕ О1и ^еυ Азп Зег ^еυ ТЬг Зег О1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг РЬе Суз
85 90 95
А1а Агд Н1з О1у Азп Туг Туг Туг Туг Зег О1у МеЕ Азр Уа1 Тгр О1у
100 105 110
О1п О1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120
- 85 028433 <210> 117 <211> 110 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> ЗС09-114 УЬ, БЕЛОК <400> 117
Зег 1 Туг Уа1 Ьеи ТЬг 5 О1п Рго Рго А1а Уа1 10 Зег О1у ТЬг Рго О1у 15 О1п
Агд Уа1 ТЬг 11е Зег Суз Зег О1у Зег Азр Зег Азп 11е О1у Агд Агд
20 25 30
Зег Уа1 Азп Тгр Туг О1п О1п РЬе Рго О1у ТЬг А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи
35 40 45
11е Туг Зег Азп Азр О1п Агд Рго Зег Уа1 Уа1 Рго Азр Агд РЬе Зег
50 55 60
О1у Зег Ьуз Зег О1у ТЬг Зег А1а Зег Ьеи А1а 11е Зег О1у Ьеи О1п
65 70 75 80
Зег О1и Азр О1и А1а О1и Туг Туг Суз А1а А1а Тгр Азр Азр Зег Ьеи
85 90 95
Ьуз О1у А1а Уа1 РЬе О1у О1у О1у ТЬг О1п Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи
100 105 110
<210> 118 <211> 372 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> ЗС08-031 УН, ДНК <400> 118
даддЕдсадс ЕддЕддадЕс Едддддаддс сЕддЕасадс сЕддсаддЕс ссЕдадасЕс 60
ЕссЕдЕдсад ссЕсЕддаЕЕ сассЕЕЕдаЕ дадЕаЕаЕса ЕдсаЕЕдддЕ ссддсаадсЕ 120
сссдддаадд дсссддааЕд ддЕсдсаддЕ аЕЕааЕЕдда ааддЕааЕЕЕ саЕдддЕЕаЕ 180
дсддасЕсЕд Ессадддссд аЕЕсассаЕс Ессададаса асдссаадаа сЕсссЕсЕаЕ 240
сЕдсаааЕда асадЕсЕдад адсЕдасдас асддссЕЕаЕ аЕЕасЕдЕдс аааадассдд 300
сЕддададЕЕ садсЕаЕдда саЕЕсЕадаа дддддЕасЕЕ ЕЕдаЕаЕсЕд дддссааддд 360
асааЕддЕса сс 372
- 86 028433 <210> 119 <211> 124 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> БС08-031 УН, БЕЛОК <400> 119
О1и Уа1 1 О1п Ьеи Уа1 5 О1и Бег О1у О1у О1у Ьеи 10 Уа1 О1п Рго О1у 15 Агд
Бег Ьеи Агд Ьеи Бег Суз А1а А1а Бег О1у РЬе ТЬг РЬе Азр О1и Туг
20 25 30
11е МеЕ Нгз Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Рго О1и Тгр Уа1
35 40 45
А1а О1у 11е Азп Тгр Ьуз О1у Азп РЬе МеЕ О1у Туг А1а Азр Бег Уа1
50 55 60
О1п О1у Агд РЬе ТЬг 11е Бег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп Бег Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи О1п МеЕ Азп Бег Ьеи Агд А1а Азр Азр ТЬг А1а Ьеи Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Ьуз Азр Агд Ьеи О1и Бег Бег А1а МеЕ Азр 11е Ьеи О1и О1у О1у
100 105 110
ТЬг РЬе Азр 11е Тгр О1у О1п О1у ТЬг МеЕ Уа1 ТЬг
115 120
<210> 120 <211> 331 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> БС08-031 УЬ, ДНК <400> 120
садЕсЕдссс ЕдасЕсадсс ЕдссЕссдЕд ЕсЕдддЕсЕс сЕддасадЕс даЕсассаЕс 60
ЕссЕдсасЕд даассадсад ЕдасдЕЕддЕ ддЕЕаЕаасЕ аЕдЕсЕссЕд дЕассаасад 120
сасссаддса аадсссссаа асЕсаЕдаЕЕ ЕаЕдаЕдЕса дЕадЕсддсс сЕсаддддЕЕ 180
ЕсЕааЕсдсЕ ЕсЕсЕддсЕс саадЕсЕддс дасасддссЕ сссЕдадсаЕ сЕсЕдддсЕс 240
саддсЕдадд асдаддсЕда ЕЕаЕЕасЕдс адсЕсаЕаЕа саадсадсад сасЕсаЕдЕс 300
ЕЕсддаасЕд ддассааддЕ сассдЕссЕа д 331
- 87 028433 <210> 121 <211> 110 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> БС08-031 УЬ, БЕЛОК <400> 121
О1п 1 Зег А1а Ьеи ТЬг 5 О1п Рго А1а Зег Уа1 10 Зег О1у Зег Рго О1у 15 О1п
Зег 11е ТЬг 11е Зег Суз ТЬг О1у ТЬг Зег Зег Азр Уа1 О1у О1у Туг
20 25 30
Азп Туг Уа1 Зег Тгр Туг О1п О1п Няз Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи
35 40 45
МеЕ 11е Туг Азр Уа1 Зег Зег Агд Рго Зег О1у Уа1 Зег Азп Агд РЬе
50 55 60
Зег О1у Зег Ьуз Зег О1у Азр ТЬг А1а Зег Ьеи Зег 11е Зег О1у Ьеи
65 70 75 80
О1п А1а О1и Азр О1и А1а Азр Туг Туг Суз Зег Зег Туг ТЬг Зег Зег
85 90 95
Зег ТЬг Нтз Уа1 РЬе О1у ТЬг О1у ТЬг Ьуз Уа1 ТЬг Уа1 Ьеи
100 105 110
<210> 122 <211> 381 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> 3008-032 УН, ДНК <400> 122
даддЕдсадс ЕддЕддадЕс Едддддаддс сЕддЕасадс сЕддсаддЕс ссЕдадасЕд 60
ЕссЕдЕдсад ссЕсЕддаЕЕ садсЕЕЕдаЕ дадЕасаЕса ЕдсаЕЕдддЕ ссддсаадсЕ 120
ссадддаадд дссЕддадЕд ддЕсдсаддЕ аЕЕааЕЕдда ааддЕааЕЕЕ саЕдддЕЕаЕ 180
дсддасЕсЕд Ессадддссд аЕЕсассаЕс Ессададаса асддсаадаа сЕсссЕсЕаЕ 240
сЕдсаааЕда асадЕсЕдад адсЕдаддас асддссЕЕдЕ аЕЕасЕдЕдс аааадассдд 300
сЕддададЕЕ садсЕаЕдда саЕЕсЕадаа дддддЕасЕЕ ЕЕдаЕаЕсЕд дддссааддд 360
асааЕддЕса ссдЕсЕсдад с 381
- 88 028433 <210> 123 <211> 127 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> БС08-032 УН, БЕЛОК <400> 123
О1и Уа1 1 О1п Ьеи Уа1 5 О1и Бег О1у О1у О1у Ьеи 10 Уа1 О1п Ργο О1у 15 Агд
Бег Ьеи Агд Ьеи Бег Суз А1а А1а Бег О1у ΡΗθ Бег ΡΗθ Азр О1и Туг
20 25 30
Ι1θ МеЕ Н1з Тгр Уа1 Агд О1п А1а Ργο О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
А1а О1у Ι1θ Азп Тгр Ьуз О1у Азп ΡΗθ МеЕ О1у Туг А1а Азр Бег Уа1
50 55 60
О1п О1у Агд ΡΗθ ТИг Ι1θ Бег Агд Азр Азп О1у Ьуз Азп Бег Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи О1п МеЕ Азп Бег Ьеи Агд А1а О1и Азр ТИг А1а Ьеи Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Ьуз Азр Агд Ьеи О1и Бег Бег А1а МеЕ Азр Ι1θ Ьеи О1и О1у О1у
100 105 110
ТИг ΡΗθ Азр Ι1θ Тгр О1у О1п О1у ТИг МеЕ Уа1 ТИг Уа1 Бег Бег
115 120 125
<210> 124 <211> 331 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> БС08-032 УЬ, ДНК <400> 124
садЕсЕдссс ЕдасЕсадсс ЕдссЕссдЕд ЕсЕдддЕсЕс сЕддасадЕс даЕсассаЕс 60
ЕссЕдсасЕд даасссдсад ддасдЕЕддЕ даЕЕаЕаадЕ аЕдЕсЕссЕд дЕассаасаа 120
сасссаддса аадсссссаа асЕсаЕдаЕЕ ЕаЕдаЕдЕса дЕааЕсддсс сЕсаддддЕс 180
ЕсЕааЕсдсЕ ЕсЕсЕддсЕс саадЕсЕддс ассасддссЕ сссЕдассаЕ сЕсЕдддсЕс 240
саддсЕдадд асдаддсЕда ЕЕаЕЕаЕЕдс адЕЕсаЕаса саассадсаа сасЕсдддЕд 300
ЕЕсддсддад ддассаадсЕ дассдЕссЕа д 331
- 89 028433 <210> 125 <211> 110 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> ЗС08-032 УЬ, БЕЛОК <400> 125
О1п 1 Зег А1а Ьеи ТЬг О1п Рго А1а 5 Зег Уа1 10 Зег О1у Зег Рго О1у 15 О1п
Зег 11е ТЬг 11е Зег Суз ТЬг О1у ТЬг Агд Агд Азр Уа1 О1у Азр Туг
20 25 30
Ьуз Туг Уа1 Зег Тгр Туг О1п О1п Н1з Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи
35 40 45
МеЬ 11е Туг Азр Уа1 Зег Азп Агд Рго Зег О1у Уа1 Зег Азп Агд РЬе
50 55 60
Зег О1у Зег Ьуз Зег О1у ТЬг ТЬг А1а Зег Ьеи ТЬг 11е Зег О1у Ьеи
65 70 75 80
О1п А1а О1и Азр О1и А1а Азр Туг Туг Суз Зег Зег Туг ТЬг ТЬг Зег
85 90 95
Азп ТЬг Агд Уа1 РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи
100 105 110
<210> 126 <211> 381 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> ЗС08-034 УН, ДНК <400> 126
даддЬдсадс ЬддЬддадас Ьдддддаддс сЬддЬасадс сЬддсаддЬс ссЬдадасЬс 60
ЬссЬдЬдсад ссЬсЬддаЬЬ сассЬЬЬдаЬ дадЬаЬаЬса ЬдсаЬЬдддЬ ссддсаадсЬ 120
сссдддаадд дсссддааЬд ддЬсдсаддЬ аЬЬааЬЬдда ааддЬааЬЬЬ саЬдддЬЬаЬ 180
дсддасЬсЬд Ьссадддссд аЬЬсассаЬс Ьссададаса асдссаадаа сЬсссЬсЬаЬ 240
сЬдсаааЬда асадЬсЬдад адсЬдасдас асддссЬЬаЬ аЬЬасЬдЬдс аааадассдд 300
сЬддададЬЬ садсЬаЬдда саЬЬсЬадаа дддддЬасЬЬ ЬЬдаЬаЬсЬд дддссааддд 360
асааЬддЬса ссдЬсЬсдад с 381
- 90 028433 <210> 127 <211> 127 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> ЗС08-034 УН, БЕЛОК <400> 127
О1и Уа1 1 О1п Ьеи Уа1 5 О1и ТЬг О1у О1у О1у Ьеи Уа1 10 О1п Рго О1у 15 Агд
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег О1у РЬе ТЬг РЬе Азр О1и Туг
20 25 30
11е МеТ Н1з Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Рго О1и Тгр Уа1
35 40 45
А1а О1у 11е Азп Тгр Ьуз О1у Азп РЬе МеТ О1у Туг А1а Азр Зег Уа1
50 55 60
О1п О1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп Зег Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи О1п МеТ Азп Зег Ьеи Агд А1а Азр Азр ТЬг А1а Ьеи Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Ьуз Азр Агд Ьеи О1и Зег Зег А1а МеТ Азр 11е Ьеи О1и О1у О1у
100 105 110
ТЬг РЬе Азр 11е Тгр О1у О1п О1у ТЬг МеТ Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120 125
<210> 128 <211> 322 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> ЗС08-034 УЬ, ДНК <400> 128
дасаТссада ТдасссадТс ТссаТссТсс сТдТсТдсаТ сТдТдддада сададТсасс 60
аТсасТТдсс дддсаадТса дддсаТТада ааТдаТТТад дсТддТаТса дсадааасса 120
дддааадссс сТаадсдссТ даТсТаТдсТ дсаТссадТТ ТдсааадТдд ддТсссаТса 180
аддТТсадТд дсадТддаТс ТдддасадаТ ТТсасТсТса ссаТсадсад ТсТдсаассТ 240
даадаТТТТд саасТТасТа ТТдТсаасад дсТаасасТТ аТссасТсас ТТТсддсдда 300
дддассаадс ТддадаТсаа ас 322
- 91 028433 <210> 129 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> БС08-034 УЬ, БЕЛОК <400> 129
Азр 1 11е О1п МеЕ ТЬг 5 О1п Бег Рго Бег Бег 10 Ьеи Бег А1а Бег Уа1 15 О1у
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Бег О1п О1у 11е Агд Азп Азр
20 25 30
Ьеи О1у Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз Агд Ьеи 11е
35 40 45
Туг А1а А1а Бег Бег Ьеи О1п Бег О1у Уа1 Рго Бег Агд РЬе Бег О1у
50 55 60
Бег О1у Бег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Бег Бег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз О1п О1п А1а Азп ТЬг Туг Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Ьеи О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 130 <211> 381 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> БС08-035 УН, ДНК <400> 130
даддЕдсадс ЕддЕддадЕс Едддддаддс сЕддЕасадс сЕддсаддЕс ссЕдадасЕс 60
ЕссЕдЕдсад ссЕсЕддаЕЕ сассЕЕЕдаЕ дадЕаЕаЕса ЕдсаЕЕдддЕ ссддсаадсЕ 120
сссдддаадд дсссддааЕд ддЕсдсаддЕ аЕЕааЕЕдда ааддЕааЕЕЕ саЕдддЕЕаЕ 180
дсддасЕсЕд Ессадддссд аЕЕсассаЕс Ессададаса асдссаадаа сЕсссЕсЕаЕ 240
сЕдсаааЕда асадЕсЕдад адсЕдасдас асддссЕЕаЕ аЕЕасЕдЕдс аааадассдд 300
сЕддададЕЕ садсЕаЕдда саЕЕсЕадаа дддддЕасЕЕ ЕЕдаЕаЕсЕд дддссааддд 360
асааЕддЕса ссдЕсЕсдад с 381
- 92 028433 <210> 131 <211> 127 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> БС08-035 νΗ, БЕЛОК <400> 131
О1и Уа1 1 О1п Ьеи Уа1 5 О1и Зег О1у О1у О1у Ьеи 10 Уа1 О1п Рго О1у 15 Агд
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег О1у РЬе ТЬг РЬе Азр О1и Туг
20 25 30
11е МеЬ Ηΐ3 Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Рго О1и Тгр Уа1
35 40 45
А1а О1у 11е Азп Тгр Ьуз О1у Азп РЬе МеЬ О1у Туг А1а Азр Зег Уа1
50 55 60
О1п О1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп Зег Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи О1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а Азр Азр ТЬг А1а Ьеи Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Ьуз Азр Агд Ьеи О1и Зег Зег А1а МеЬ Азр 11е Ьеи О1и О1у О1у
100 105 110
ТЬг РЬе Азр 11е Тгр О1у О1п О1у ТЬг МеЬ Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120 125
<210> 132 <211> 325 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> 3008-035 νΣ, ДНК <400> 132
ЬсЬЬсЬдадс ЬдасЬсадда сссЬдсЬдЬд ЬсЬдЬддссЬ Ьдддасадас адЬсаддаЬс 60
асаЬдссаад дадасадссЬ садаадсЬаЬ ЬаЬдсаадсЬ ддЬассадса даадссадда 120
саддссссЬд ЬасЬЬдЬсаЬ сЬаЬддЬааа аасаассддс ссЬсадддаЬ сссадассда 180
ЬЬсЬсЬддсЬ ссадсЬсаад ааасасадсЬ ЬссЬЬдасса ЬсасЬддддс Ьсаддсддаа 240
даЬдаддсЬд асЬаЬЬаЬЬд ЬдасЬсссдд дасадсадЬд даасссаЬЬа ЬдЬсЬЬсдда 300
ддЬдддасса аддЬсассдЬ ссЬад 325
- 93 028433 <210> 133 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственный <220>
<223> 5С08-035 УЬ, БЕЛОК <400> 133
5ег 1 5ег О1и Ьеи ТЬг 5 О1п Азр Рго А1а Уа1 10 5ег Уа1 А1а Ьеи О1у 15 О1п
ТЬг Уа1 Агд 11е ТЬг Суз О1п О1у Азр 5ег Ьеи Агд 5ег Туг Туг А1а
20 25 30
5ег Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у О1п А1а Рго Уа1 Ьеи Уа1 11е Туг
35 40 45
О1у Ьуз Азп Азп Агд Рго 5ег О1у 11е Рго Азр Агд РЬе 5ег О1у 5ег
50 55 60
5ег 5ег Агд Азп ТЬг А1а 5ег Ьеи ТЬг 11е ТЬг О1у А1а О1п А1а О1и
65 70 75 80
Азр О1и А1а Азр Туг Туг Суз Азр 5ег Агд Азр 5ег 5ег О1у ТЬг Ндз
85 90 95
Туг Уа1 РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Уа1 ТЬг Уа1 Ьеи
100 105
Ссылки
ВгосЬек ек а1. , Ыис1. Αοίά3 Нез. 36, И503-508 (2008). ϋθ Кги1£ Д ек а1. , Ргос. Ыак1. АсасЬ 5οί. 1Д5А 92:3938 (1995).
Капедае ек а1., Д. νίτοί. 64: 2860-2865 (1990). КиЬока-Кокекзи ек а1. , Влоскет. Влоркуз. Нез. Сотт. 387:
180-185 (2009).
Пока ек а!., Д. Сеп. νίτοί. 73: 2737-2742 (1992).
ТЬотрзоп ек а1. ДАМА 289(2): 179-186 (2003) .
ТЬотрзоп ек а1. , ДАМА 292 (11) : 1333- 1340 (2004
Игаттегк ек а!. , Ыакиге 453: 667-672 (2008) .
- 94 028433

Claims (14)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с гемагглютинином (НА) штаммов линии В/Уашада1а и линии В/УюЮпа вируса гриппа В и нейтрализует указанные штаммы линии В/Уашада1а и линии В/УюЮпа вируса гриппа В, но не связывается с НА вирусов гриппа А, причем антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит ΟΌΚ1 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 7, 0ΌΚ2 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 8, и 0ΌΚ3 тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 9, и 0ΌΚ1 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 10, 0ΌΚ2 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 11, и 0ΌΚ3 легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность 8ЕО ГО N0: 12 или 13.
  2. 2. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, в котором вариабельный участок тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 75 или последовательность аминокислот, которая идентична ей по меньшей мере на 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более.
  3. 3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, в котором вариабельный участок легкой цепи содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 77 или последовательность аминокислот, которая идентична ей по меньшей мере на 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более.
  4. 4. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, в котором вариабельный участок тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 75 и вариабельный участок легкой цепи содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 77.
  5. 5. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, в котором вариабельный участок тяжелой цепи состоит из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0: 78 и вариабельный участок легкой цепи состоит из аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0: 79.
  6. 6. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-5, которые подавляют выход вируса гриппа В из инфицированных клеток.
  7. 7. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-6, которые представляют собой моноклональное антитело человека или его антигенсвязывающий фрагмент.
  8. 8. Иммуноконъюгат, содержащий по меньшей мере одно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-7 и по меньшей мере одну метку.
  9. 9. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-7.
  10. 10. Применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-7 для получения лекарственного препарата для диагностики, профилактики и/или лечения инфекции гриппа, вызванного вирусом гриппа В.
  11. 11. Применение нуклеиновой кислоты по п.9 для получения лекарственного препарата для диагностики, профилактики и/или лечения инфекции гриппа, вызванного вирусом гриппа В.
  12. 12. Применение иммуноконъюгата по п.8 для получения лекарственного препарата для диагностики, профилактики и/или лечения инфекции гриппа, вызванного вирусом гриппа В.
  13. 13. Фармацевтическая композиция для диагностики, профилактики и/или лечения инфекции гриппа, вызванной вирусом гриппа В, содержащая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-7 и/или иммуноконъюгат по п.8 и фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель.
  14. 14. Способ обнаружения инфекции, вызванной вирусом гриппа В, включающий:
    (a) оценку уровня антигена вируса гриппа В в биологическом образце с применением антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по пп.1-7 и/или иммуноконъюгата по п.8;
    (b) сравнение оцененного уровня антигена вируса гриппа В с контрольным уровнем, при этом повышение оцененного уровня антигена вируса гриппа В по сравнению с контрольным уровнем антигена вируса гриппа В указывает на инфекцию вирусом гриппа В.
EA201491656A 2012-03-08 2013-03-07 Антитело, связывающееся с вирусами гриппа b и его применение EA028433B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261608414P 2012-03-08 2012-03-08
EP12158525 2012-03-08
PCT/EP2013/054606 WO2013132007A1 (en) 2012-03-08 2013-03-07 Human binding molecules capable of binding to and neutralizing influenza b viruses and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201491656A1 EA201491656A1 (ru) 2014-12-30
EA028433B1 true EA028433B1 (ru) 2017-11-30

Family

ID=49115966

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201491656A EA028433B1 (ru) 2012-03-08 2013-03-07 Антитело, связывающееся с вирусами гриппа b и его применение

Country Status (19)

Country Link
US (5) US8834881B2 (ru)
EP (1) EP2822968B1 (ru)
JP (1) JP6328061B2 (ru)
KR (1) KR102050615B1 (ru)
CN (2) CN104169298B (ru)
AR (1) AR091316A1 (ru)
AU (2) AU2013229488B2 (ru)
CA (1) CA2865594C (ru)
DK (1) DK2822968T3 (ru)
EA (1) EA028433B1 (ru)
ES (1) ES2664625T3 (ru)
HK (1) HK1200176A1 (ru)
MX (1) MX360056B (ru)
MY (1) MY170407A (ru)
NZ (1) NZ628382A (ru)
PH (2) PH12014501776B1 (ru)
SG (1) SG11201405226TA (ru)
TW (1) TWI628190B (ru)
WO (1) WO2013132007A1 (ru)

Families Citing this family (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MY170927A (en) 2011-11-28 2019-09-19 Janssen Vaccines & Prevention Bv Influenza virus vaccines and uses thereof
JP6371222B2 (ja) 2011-12-05 2018-08-08 トレリス バイオサイエンス リミテッド ライアビリティー カンパニー インフルエンザの受動免疫用抗体
NZ628382A (en) 2012-03-08 2017-03-31 Janssen Vaccines & Prevention Bv Human binding molecules capable of binding to and neutralizing influenza b viruses and uses thereof
US9969794B2 (en) 2012-05-10 2018-05-15 Visterra, Inc. HA binding agents
CA2906676A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Contrafect Corporation Composition and methods based on neutralizing antibodies delivered intranasally for enhanced therapeutic efficacy
EP2970397A2 (en) 2013-03-14 2016-01-20 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Polypeptides for treating and/or limiting influenza infection
ES2837392T3 (es) 2013-10-02 2021-06-30 Medimmune Llc Anticuerpos anti-influenza A neutralizantes y usos de los mismos
US20160304586A1 (en) * 2013-12-05 2016-10-20 Crucell Holland B.V. Process for preparing influenza vaccines
US10639370B2 (en) 2014-02-04 2020-05-05 Contrafect Corporation Antibodies useful in passive influenza immunization, and compositions, combinations and methods for use thereof
MX2016010059A (es) * 2014-02-04 2017-04-27 Contrafect Corp Anticuerpos útiles en la inmunización pasiva contra la gripe y composiciones, combinaciones y métodos para utilizarlos.
US9745365B2 (en) * 2014-03-27 2017-08-29 Genentech, Inc. Anti-influenza B virus hemagglutinin antibodies and methods of use
CA2954780A1 (en) * 2014-07-15 2016-01-21 Medimmune, Llc Neutralizing anti-influenza b antibodies and uses thereof
TWI701258B (zh) 2014-12-19 2020-08-11 美商再生元醫藥公司 流行性感冒病毒血球凝集素之人類抗體
SG11201705614QA (en) 2015-02-05 2017-08-30 Janssen Vaccines & Prevention Bv Binding molecules directed against influenza hemagglutinin and uses thereof
KR20180002713A (ko) * 2015-05-11 2018-01-08 얀센 백신스 앤드 프리벤션 비.브이. 인플루엔자 바이러스 중화 펩티드 모방 화합물
WO2016200543A2 (en) * 2015-05-13 2016-12-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Aav-mediated expression of anti-inluenza antibodies and methods of use thereof
AU2016271323B2 (en) * 2015-06-01 2022-08-25 Medimmune, Llc Neutralizing anti-influenza binding molecules and uses thereof
US10696736B2 (en) 2015-06-03 2020-06-30 Xiamen University Broad-spectrum monoclonal anti-flu B antibody and uses thereof
JP2017062300A (ja) * 2015-09-24 2017-03-30 セイコーエプソン株式会社 半導体装置、システム、電子機器、及び、音声認識方法
WO2017083627A1 (en) 2015-11-13 2017-05-18 Visterra, Inc. Compositions and methods for treating and preventing influenza
CN116271017A (zh) 2016-01-13 2023-06-23 免疫医疗有限责任公司 治疗甲型流感的方法
WO2017148889A1 (en) 2016-03-01 2017-09-08 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Human neutralizing antibodies binding to influenza b neuraminidase
EA201990222A1 (ru) 2016-08-05 2019-07-31 МЕДИММЬЮН, ЭлЭлСи Антитела к o2 и пути их применения
CN109843917B (zh) 2016-10-19 2023-10-03 免疫医疗有限责任公司 抗o1抗体及其用途
AU2018229293A1 (en) 2017-02-28 2019-08-29 Janssen Biotech, Inc. Influenza vaccines based on AAV vectors
LT3589730T (lt) 2017-02-28 2024-03-12 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adenoasocijuoto viruso (aav) monofiletinės grupės f vektorius, ir jo panaudojimo būdai
JOP20190200A1 (ar) 2017-02-28 2019-08-27 Univ Pennsylvania تركيبات نافعة في معالجة ضمور العضل النخاعي
CA3058567A1 (en) 2017-04-13 2018-10-18 Cadila Healthcare Limited Novel peptide based pcsk9 vaccine
CA3088194A1 (en) 2018-01-26 2019-08-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human antibodies to influenza hemagglutinin
US20210147549A1 (en) * 2018-07-11 2021-05-20 Momenta Pharmaceuticals, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS RELATED TO ENGINEERED Fc-ANTIGEN BINDING DOMAIN CONSTRUCTS TARGETED TO PD-L1
EP3946613A1 (en) 2019-03-25 2022-02-09 Visterra, Inc. Compositions and methods for treating and preventing influenza
WO2021195326A1 (en) * 2020-03-26 2021-09-30 Vanderbilt University Human monoclonal antibodies to severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (sars-cov-2)
WO2021201677A1 (en) 2020-04-01 2021-10-07 Kiadis Pharma Intellectual Property B.V. Compositions and methods targeting influenza
JP2023523336A (ja) 2020-04-27 2023-06-02 ツイスト バイオサイエンス コーポレーション コロナウイルス用の変異体核酸ライブラリー

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003057857A2 (en) * 2002-01-07 2003-07-17 Abgenix, Inc. Antibodies directed to pdgfd and uses thereof
WO2006124269A2 (en) * 2005-05-16 2006-11-23 Amgen Fremont Inc. Human monoclonal antibodies that bind to very late antigen-1 for the treatment of inflammation and other disorders
WO2009002380A2 (en) * 2007-06-26 2008-12-31 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Isolation of anti-desmoglein 1 antibodies by phage display of pemphigus foliaceus autoantibodies
WO2010054265A2 (en) * 2008-11-07 2010-05-14 Galaxy Biotech, Llc. Monoclonal antibodies to fibroblast growth factor receptor 2
WO2010130636A1 (en) * 2009-05-11 2010-11-18 Crucell Holland B.V. Human binding molecules capable of neutralizing influenza virus h3n2 and uses thereof
US20100330103A1 (en) * 2006-08-03 2010-12-30 Astrazeneca Ab Antibodies Directed to Alpha V Beta 6 And Uses Thereof
US20110076284A1 (en) * 2009-09-25 2011-03-31 Xoma Technology Ltd. Novel Modulators

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ207394A (en) 1983-03-08 1987-03-06 Commw Serum Lab Commission Detecting or determining sequence of amino acids
NL9101953A (nl) 1991-11-21 1993-06-16 Seed Capital Investments Testinrichting omvattende een plaat met een veelvoud van putjes met een bijbehorende doseerinrichting, alsmede een kit die deze inrichtingen omvat en toepassing van de inrichtingen.
US6248780B1 (en) 1998-10-01 2001-06-19 Duquesne University Of The Holy Ghost Compounds for the treatment of estrogen-dependent illnesses and methods for making and using the same
PT1161548E (pt) 1999-04-15 2005-06-30 Crucell Holland Bv Producao de proteinas recombinantes numa celula humana utilizando sequencias codificando a proteina e1 de adenovirus
EP1402025B1 (en) 2001-06-15 2006-02-01 Crucell Holland B.V. Chimaeric phages
EP2441471B1 (en) * 2005-03-08 2014-10-08 MedImmune, LLC Reassortant influenza viruses
EP2450377A1 (en) 2006-09-07 2012-05-09 Crucell Holland B.V. Human binding molecules capable of neutralizing influenza virus H5N1 and uses thereof
FR2921928B1 (fr) * 2007-10-08 2011-03-04 Sanofi Pasteur Anticorps monoclonaux specifiques de l'hemagglutinine du virus grippal
MX2011000768A (es) * 2008-07-25 2011-10-05 Inst Research In Biomedicine Anticuerpos neutralizantes del virus anti-influenza a y usos de los mismos.
EP2179811B1 (en) 2008-10-21 2018-10-03 Agie Charmilles SA Method and apparatus for controlling an electric discharge machining process
JP5780762B2 (ja) * 2008-12-25 2015-09-16 国立大学法人大阪大学 抗ヒトインフルエンザウイルス・ヒト型抗体
WO2010138564A1 (en) * 2009-05-26 2010-12-02 Mount Sinai School Of Medicine Of New York University Monoclonal antibodies against influenza virus generated by cyclical administration and uses thereof
US9181328B2 (en) * 2012-01-31 2015-11-10 Osaka University Human monoclonal antibodies broadly protective against influenza B virus and methods of using the same
NZ628382A (en) 2012-03-08 2017-03-31 Janssen Vaccines & Prevention Bv Human binding molecules capable of binding to and neutralizing influenza b viruses and uses thereof

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003057857A2 (en) * 2002-01-07 2003-07-17 Abgenix, Inc. Antibodies directed to pdgfd and uses thereof
WO2006124269A2 (en) * 2005-05-16 2006-11-23 Amgen Fremont Inc. Human monoclonal antibodies that bind to very late antigen-1 for the treatment of inflammation and other disorders
US20100330103A1 (en) * 2006-08-03 2010-12-30 Astrazeneca Ab Antibodies Directed to Alpha V Beta 6 And Uses Thereof
WO2009002380A2 (en) * 2007-06-26 2008-12-31 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Isolation of anti-desmoglein 1 antibodies by phage display of pemphigus foliaceus autoantibodies
WO2010054265A2 (en) * 2008-11-07 2010-05-14 Galaxy Biotech, Llc. Monoclonal antibodies to fibroblast growth factor receptor 2
WO2010130636A1 (en) * 2009-05-11 2010-11-18 Crucell Holland B.V. Human binding molecules capable of neutralizing influenza virus h3n2 and uses thereof
US20110076284A1 (en) * 2009-09-25 2011-03-31 Xoma Technology Ltd. Novel Modulators
WO2011038302A2 (en) * 2009-09-25 2011-03-31 Xoma Technology Ltd. Novel modulators

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CYRILLE DREYFUS, NICK S. LAURSEN, TED KWAKS, DAVID ZUIJDGEEST, REZA KHAYAT, DAMIAN C. EKIERT, JEONG HYUN LEE, ZOLTAN METLAGEL, MIR: "Highly conserved protective epitopes on influenza B viruses.", SCIENCE, AMERICAN ASSOCIATION FOR THE ADVANCEMENT OF SCIENCE, US, vol. 337, no. 6100, 14 September 2012 (2012-09-14), US, pages 1343 - 1348, XP002693350, ISSN: 1095-9203, DOI: 10.1126/science.1222908 *
DAMIAN C. EKIERT, ROBERT H. E. FRIESEN, GIRA BHABHA, TED KWAKS, MANDY JONGENEELEN, WENLI YU, CARLA OPHORST, FREEK COX, HANS J.W.M.: "A highly conserved neutralizing epitope on group 2 influenza A viruses.", SCIENCE, AMERICAN ASSOCIATION FOR THE ADVANCEMENT OF SCIENCE, US, vol. 333, no. 6044, 12 August 2011 (2011-08-12), US, pages 843 - 850, XP002693349, ISSN: 1095-9203, DOI: 10.1126/science.1204839 *
EKIERT DAMIAN C; BHABHA GIRA; ELSLIGER MARC-ANDRE; FRIESEN ROBERT H E; JONGENEELEN MANDY; THROSBY MARK; GOUDSMIT JAAP; WILSON IAN : "Antibody Recognition of a Highly Conserved Influenza Virus Epitope", SCIENCE, AMERICAN ASSOCIATION FOR THE ADVANCEMENT OF SCIENCE, vol. 324, no. 5924, 1 April 2009 (2009-04-01), pages 246 - 251, XP009144786, ISSN: 0036-8075 *
J. C. KRAUSE, T. TSIBANE, T. M. TUMPEY, C. J. HUFFMAN, C. F. BASLER, J. E. CROWE: "A Broadly Neutralizing Human Monoclonal Antibody That Recognizes a Conserved, Novel Epitope on the Globular Head of the Influenza H1N1 Virus Hemagglutinin", JOURNAL OF VIROLOGY, AMERICAN SOCIETY FOR MICROBIOLOGY., vol. 85, no. 20, 15 October 2011 (2011-10-15), pages 10905 - 10908, XP055044176, ISSN: 0022538X, DOI: 10.1128/JVI.00700-11 *
JAMES R. R. WHITTLE, RUIJUN ZHANG, SURENDER KHURANA, LISA R. KING, JODY MANISCHEWITZ, HANA GOLDING, PHILIP R. DORMITZER, BARTON F.: "Broadly neutralizing human antibody that recognizes the receptor-binding pocket of influenza virus hemagglutinin.", PNAS, PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES, vol. 108, no. 34, 23 August 2011 (2011-08-23), pages 14216 - 14221, XP002693351, ISSN: 1091-6490, DOI: 10.1073/pnas.1111497108 *
THROSBY M, VAN DEN BRINK E, JONGENEELEN M, POON LLM, ALARD P, ET AL: "Heterosubtypic neutralizing monoclonal antibodies cross-protective against H5N1 and H1N1 recovered from human IgM+ memory B cells.", PLOS ONE, PUBLIC LIBRARY OF SCIENCE, US, vol. 3, no. 12, 16 December 2008 (2008-12-16), US, pages 1 - 15, XP002672518, ISSN: 1932-6203, DOI: 10.1371/journal.pone.0003942 *

Also Published As

Publication number Publication date
US20140341929A1 (en) 2014-11-20
AU2013229488B2 (en) 2017-12-07
TWI628190B (zh) 2018-07-01
US20160002318A1 (en) 2016-01-07
CA2865594C (en) 2021-07-27
PH12015502553A1 (en) 2017-04-10
US9200064B2 (en) 2015-12-01
NZ628382A (en) 2017-03-31
HK1200176A1 (en) 2015-07-31
MX2014010755A (es) 2014-12-05
PH12015502553B1 (en) 2017-04-10
US20140065165A1 (en) 2014-03-06
US20130243792A1 (en) 2013-09-19
TW201339173A (zh) 2013-10-01
CN108640989B (zh) 2021-12-14
CN104169298A (zh) 2014-11-26
DK2822968T3 (en) 2018-04-16
KR20140135753A (ko) 2014-11-26
CN104169298B (zh) 2018-04-20
PH12014501776A1 (en) 2014-11-10
AU2013229488A1 (en) 2014-09-18
PH12014501776B1 (en) 2014-11-10
US8852595B2 (en) 2014-10-07
AU2018201647B2 (en) 2020-01-30
EP2822968A1 (en) 2015-01-14
WO2013132007A1 (en) 2013-09-12
AU2018201647A1 (en) 2018-03-29
AR091316A1 (es) 2015-01-28
NZ729856A (en) 2021-12-24
MX360056B (es) 2018-10-19
JP2015518369A (ja) 2015-07-02
US20150037345A1 (en) 2015-02-05
US8834881B2 (en) 2014-09-16
EP2822968B1 (en) 2018-01-10
EA201491656A1 (ru) 2014-12-30
JP6328061B2 (ja) 2018-05-23
CN108640989A (zh) 2018-10-12
MY170407A (en) 2019-07-27
SG11201405226TA (en) 2014-11-27
CA2865594A1 (en) 2013-09-12
US9005621B2 (en) 2015-04-14
ES2664625T3 (es) 2018-04-20
KR102050615B1 (ko) 2019-11-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA028433B1 (ru) Антитело, связывающееся с вирусами гриппа b и его применение
JP6022515B2 (ja) 抗ａ型インフルエンザウイルス中和抗体およびその使用
US20190194299A1 (en) Middle east respiratory syndrome coronavirus neutralizing antibodies and methods of use thereof
KR101659306B1 (ko) 인간 사이토메갈로바이러스 중화 항체 및 이의 용도
EA027054B1 (ru) Связывающие молекулы человека, способные нейтрализовать вирусы гриппа a филогенетической группы 1 и филогенетической группы 2 и вирусы гриппа b
KR20220158053A (ko) 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2(SARS-CoV-2)에 대한 인간 단클론 항체
CN108610416A (zh) 登革热病毒中和抗体及其用途
BRPI1012749B1 (pt) Anticorpo monoclonal humano, seu uso e seu método de produção, imunoconjugado, e composição farmacêutica
SA96170384B1 (ar) وطرق تحضيرها واستخداماتها العلاجية (rsv) الاجسام المضادة المعادلة البشرية احادية النسيلة ذات الالفة العالية المختصة ببروتين - ف للفيروس المخلوي التنفسي
WO2021218947A1 (zh) 一种抗新型冠状病毒的单克隆抗体及其应用
CN114685652B (zh) 针对SARS-CoV-2和SARS-CoV的全人广谱交叉中和抗体及其应用
CN114685653B (zh) 抗新冠病毒受体结合区域表位中和抗体及其应用
CN117836322A (zh) 针对SARS-CoV-2的人中和单克隆抗体及其用途
NZ729856B2 (en) Human binding molecules capable of binding to and neutralizing influenza b viruses and uses thereof

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ KZ KG TJ TM