EA027054B1

EA027054B1 - Связывающие молекулы человека, способные нейтрализовать вирусы гриппа a филогенетической группы 1 и филогенетической группы 2 и вирусы гриппа b

Info

Publication number: EA027054B1
Application number: EA201490288A
Authority: EA
Inventors: Теодорус Хендрикус Якобус Квакс; Давид А.Т.М. Зюэйдгест; Роналд Вогелс; Роберт Хайнц Эдвард Фризен
Original assignee: Круселл Холланд Б.В.
Priority date: 2011-07-14
Filing date: 2012-07-12
Publication date: 2017-06-30
Also published as: JP5683752B2; AU2012282504B2; NZ618530A; IL230222A; US20140120113A1; US8961978B2; AU2012282504A1; US9593159B2; JP2014527403A; KR20140095017A; CA2838999A1; KR101941724B1; DK2731967T3; CN103906763A; CA2838999C; EP2731967B1; MY166282A; HRP20161740T1; CN103906763B; MX2014000373A

Abstract

Настоящее изобретение относится к связывающим молекулам, таким как моноклональные антитела человека, которые связываются с эпитопом в стволовой области гемагглютинина вируса гриппа А филогенетической группы 1 и группы 2, а также вирусов гриппа В и обладают широкой нейтрализующей активностью, направленной против таких вирусов гриппа. В описании раскрыты молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие связывающие молекулы, их последовательности и композиции, содержащие связывающие молекулы. Связывающие молекулы можно применять для диагностики, профилактики и/или лечения в случае вирусов гриппа А филогенетической группы 1 и 2, а также вирусов гриппа В.

Description

Изобретение относится к области медицины. Изобретение, в частности, относится к связывающим молекулам человека, способным нейтрализовать вирусы гриппа А как филогенетической группы 1, так и филогенетической группы 2. В частности, изобретение относится к связывающим молекулам, способным нейтрализовать вирусы гриппа А как филогенетической группы 1, так и филогенетической группы 2, а также вирусы гриппа В. Изобретение, кроме того, относится к диагностике, профилактике и/или лечению инфекции, вызванной вирусами гриппа А филогенетических групп 1 и 2 и предпочтительно также вирусами гриппа В.

Уровень техники

Гриппозная инфекция (также называемая гриппом или инфлюэнцей) является одним из наиболее распространенных известных заболеваний человека, вызывающим от трех до пяти миллионов случаев тяжелых болезней и от 250000 до 500000 смертельных исходов каждый год во всем мире. Грипп быстро распространяется во время сезонных эпидемий, поражая 5-15% популяции и бремя, связанное с затратами на здравоохранение и снижение производительности труда огромно (Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ)).

Существуют 3 типа вируса гриппа (типы А, В и С), ответственные на инфекционные патологии у человека и животных. Вирусы типа А и типа В представляют собой агенты, являющиеся причиной сезонных эпидемий гриппа и пандемий у человека.

Вирусы гриппа А можно классифицировать по подтипам на основании изменений в антигенных областях двух генов, которые кодируют поверхностные гликопротеиды гемагглютинин (НА) и нейраминидазу (ΝΑ), которые необходимы для прикрепления вируса и высвобождения из клеток. В настоящее время известно шестнадцать подтипов НА (Н1-Н16) и девять антигенных вариантов ΝΑ (Ν1-Ν9) вируса гриппа А. Подтипы вируса гриппа могут быть дополнительно классифицированы с учетом их филогенетической группы. Филогенетический анализ (РоисНет с соавторами, 2005) показал подразделение двух основных групп, содержащих НА (Αίτ, 1981): наряду с прочими на подтипы Н1, Н2, Н5 и Н9 в филогенетической группе 1 (в настоящем описании также называемой группой 1) и наряду с прочими на подтипы НЗ, Н4 и Н7 в филогенетической группе 2 (или группе 2). Только некоторые подтипы гриппа А (т.е., Η1Ν1, Η1Ν2 и Η3Ν2) циркулируют среди людей, но все сочетания 16 НА- и 9 ΝΑ-подтипов были идентифицированы у животных, в частности, у видов птиц. Животные, инфицированные вирусом гриппа А, часто действуют в качестве носителей вирусов гриппа, и было показано, что некоторые подтипы пересекают видовой барьер, заражая людей, такие как высоко патогенный штамм гриппа Α Η5Ν1.

Штаммы вируса гриппа типа В являются строго человеческими. Антигенные варианты НА в штаммах вируса гриппа типа В слабее, чем варианты, наблюдаемые в пределах штаммов типов А. У людей циркулируют два генетически и антигенно отличающиеся линии вирусов гриппа В, которые представлены линиями В/Уатада!а/16/88 (также называемой В/Уатада1а) и В Ую1опа/2/87 (В УюЮпа) (Ретдизои с соавторами, 2003). Хотя в спектре заболеваний, вызываемых вирусами гриппа В, заболевания обычно слабее, чем заболевания, вызываемые вирусами гриппа А, все же при инфекции вирусом гриппа В часто наблюдается тяжелое заболевание, требующее госпитализации.

Современные способы борьбы с ежегодными эпидемиями гриппа включают ежегодную вакцинацию, предпочтительно создающую гетеротипический перекрестный иммунитет. Однако циркулирующие в популяциях человека вирусы гриппа подвергаются постоянным антигенным изменениям, что требует ежегодной адаптации препарата противогриппозной вакцины, чтобы обеспечить наиболее близко возможное совпадение между штаммами вакцины гриппа и циркулирующими штаммами гриппа. Хотя ежегодная вакцинация противогриппозными вакцинами является наилучшим способом профилактики гриппа, противовирусные лекарственные средства, такие как осельтамивир (Тамифлю®) могут быть эффективными для профилактики и лечения инфекции вирусами гриппа. Однако количество штаммов вирусов гриппа, проявляющих резистентность к противовирусным лекарственным средствам, таким как осельтамивир, увеличивается.

Альтернативным способом является разработка основанных на антителах профилактических или терапевтических средств лечения для нейтрализации различных сезонных и пандемических вирусов гриппа. Основной мишенью большинства нейтрализующих антител, которые защищают от инфекции вирусом гриппа, является глобулярная головка (часть НА1) вирусного белка НА, которая содержит сайт связывания с рецептором, но которая подвергается непрерывной генетической эволюции с аминокислотными заменами в участках связывания антителами (антигенный дрейф).

Недавно были идентифицированы антитела с широкой перекрестной нейтрализующей активностью, узнающие эпитоп в консервативной стволовой области гемагглютинина вирусов гриппа А филогенетической группы 1 (включая, например, подтипы вирусов гриппа Н1 и Н5) (см., например, АО 2008/028946), а также перекрестно нейтрализующие антитела, узнающие высоко консервативный эпитоп в стволовой области НА вирусов гриппа А филогенетической группы 2 (включая, например, подтипы Н3 и Н7) (АО 2010/130636). Нейтрализующая активность таких антител ограничена либо вирусами гриппа группы 1, либо вирусами гриппа группы 2. Кроме того, такие антитела не способны связываться и нейтрализовать вирусы гриппа В.

- 1 027054

Кроме того, в νθ 2010/010466 раскрыто антитело человека ΡΙ6, связывающееся с гемагглютинином и способное связываться и нейтрализовать подтипы вирусов гриппа А группы 1 (включая подтипы Н1 и Н5) и группы 2 (включая подтипы Н3 и Н7). Указанное антитело также не связывает НА из вирусов гриппа В.

Кроме того, в И8 2009/0092620 раскрыто мышиное антитело, узнающее антигенную структуру, присутствующую в гемагглютинине и подтипа Н1 и подтипа Н3 и в гемагглютинине вирусов гриппа В, относящихся к группам В/Ую1опа и В/Уатада1а. Антитела ингибируют активность в гемагглютинации нескольких штаммов Η3Ν2, что свидетельствует о том, что такое антитело связывает эпитоп в глобулярной головке НА.

В связи с тяжестью респираторного заболевания, вызываемого вирусами гриппа А и вирусами гриппа В, а также большим экономическим эффектом сезонных эпидемий и существующим риском пандемий сохраняется необходимость в эффективных средствах профилактики и лечения заболеваний, вызываемых подтипами гриппа А и В. Таким образом, существует потребность в связывающих молекулах, предпочтительно связывающих молекулах человека с широкой нейтрализующей активностью, способных перекрестно нейтрализовать вирусы гриппа А обеих филогенетических групп: филогенетической группы 1 и филогенетической группы 2, и предпочтительно также нейтрализовать вирусы гриппа В.

Сущность изобретения

Изобретение относится к связывающим молекулам, способным специфично связываться со штаммами вируса гриппа А из филогенетической группы 1 (включая, например, вирусы гриппа, содержащие НА подтипов Н1 и Н5) и штаммами вируса гриппа А из филогенетической группы 2 (включая, например, вирусы гриппа, содержащие НА подтипов Н3 и Н7). В одном варианте связывающие молекулы также обладают нейтрализующей активностью, направленной против штаммов вирусов гриппа А из филогенетической группы 1 и филогенетической группы 2. В одном варианте связывающие молекулы дополнительно способны специфично связывать штаммы вируса гриппа В, включая, например, штаммы вируса гриппа В линий В/Уатада1а и/или В/Ую1опа. В одном варианте связывающие молекулы дополнительно способны нейтрализовать штаммы вируса гриппа В, включая, например, штаммы вируса гриппа В линий В/Уатада1а и/или В/Ую1опа. В одном варианте связывающие молекулы способны нейтрализовать штаммы вирусов гриппа А и/или В ίη νίνο. В одном варианте связывающие молекулы связываются с консервативным эпитопом в стволовой области белка НА вирусов гриппа А и В. В одном варианте связывающие молекулы не обладают активностью в ингибировании гемагглютинации (ΗΙ).

Таким образом, изобретение относится к связывающим молекулам, которые связываются с эпитопом в стволовой области белка гемагглютинина, который является сходным у подтипов вирусов гриппа А в филогенетической группе 1 и подтипов вирусов гриппа в филогенетической группе 2, а также у подтипов вирусов гриппа В, и поэтому относится к связывающим молекулам, которые перекрестно взаимодействуют с подтипами вирусов гриппа А группы 1 и группы 2 и вирусами гриппа В. Изобретение также относится к молекулам нуклеиновых кислот, кодирующим, по меньшей мере, связывающую область связывающих молекул человека.

Связывающие молекулы и/или молекулы нуклеиновых кислот согласно изобретению подходят для применения в качестве универсального профилактического, диагностического и/или лечебного средства в случае вирусов гриппа А и вирусов гриппа В, независимо от подтипа гриппа, вызывающего заболевание.

Предполагается, что связывающие молекулы согласно настоящему изобретению связываются с неизвестными до настоящего времени и высоко консервативными эпитопами, которые не склонны или намного меньше склонны к антигенному дрейфу или сдвигу. В частности, такой эпитоп сходен у вирусов гриппа, относящихся к филогенетической группе 1 и филогенетической группе 2, и вирусов гриппа В. Также изобретение охватывает применение связывающих молекул согласно изобретению для идентификации и/или характеристики таких эпитопов.

Изобретение, кроме того, относится к применению связывающих молекул человека и/или молекул нуклеиновых кислот согласно изобретению для диагностики, профилактики и/или лечению субъекта, у которого имеется или для которого существует риск развития инфекции вирусом гриппа. Кроме того, изобретение относится к применению связывающих молекул человека и/или молекул нуклеиновых кислот согласно изобретению для диагностики/выявления таких инфекций гриппа.

Описание фигур

На фиг. 1 показано блокирование конформационного изменения НА Н1, Н5, Н9, Н3 и Н7 посредством СК9114. (А) Выявляемое с использованием РАС8 связывание СК9114 с разными конформациями нерасщепленный предшественник (НАО); нейтральный рН, расщепленный (НА); рН слияния, расщепленный (рН слияния) экспрессируемого на поверхности гНА в случае Λ/№\ν Са1ебоша/20/1999 (Н1) А/У1е1 №пп/1203/2004 (Н5), А/Нопд Копд/1073/1999 (Н9), А/Ж8сопяп/67/2005 (Н3) и

А/№1йег1апб8/219/2003 (Н7). Связывание выражено в виде процента от связывания с необработанным гНА (НАО). (В) Выявляемое с использованием РАС8 связывание СК9114 с экспрессируемым на поверхности НА, как указано выше, за исключением того, что мАт СК9114 добавляли до того, как расщепленные НА подвергали действию рН 4,9.

- 2 027054

На фиг. 2 показано, что мАт СК9114 конкурирует с СК6261 и СК8020 за связывание с Н1 и Н3, соответственно. Степень дополнительного связывания указанных мАт с иммобилизованным НА Α/Νθ№ Са1ейоша/20/1999 (Η1Ν1), насыщенным 100 нМ СК.6261 или СК9114 (панели А и В), или с иммобилизованным НА АЖ18сои81и/67/2005 (Η3Ν2), насыщенным 100 нМ СК8020 или СК9114 (панели С и И), измеренного с использованием интерферометрии бислоя.

Фиг. 3 демонстрирует профилактическую эффективность СК9114 в мышиной модели летального заражения вирусом гриппа В (В/Р1опба/04/2006). А. Кривые выживаемости Каплана-Мейера мышей, которых лечили внутривенным введением либо 15 мг/кг СК9114, либо контрольного наполнителя в день -1 перед заражением, с последующим заражением в день 0 с использованием 25 БЭ В/Р1опба/04/2006. В. Среднее изменение массы тела (%) по сравнению с днем 0. Планки погрешностей представляют 95% ДИ среднего значения. Если мышь погибала/подвергалась эвтаназии в ходе исследования, последнюю наблюдаемую массу тела переносили вперед. С. Медианные клинические оценки. Планки погрешностей представляют межквартильные размахи. Пояснение к клиническим оценкам: 0 = нет клинических признаков; 1 = неровная шерсть; 2 = неровная шерсть, менее реагирующие во время обработки; 3 = неровная шерсть, свернувшаяся, затрудненное дыхание, менее реагирующие во время обработки; 4 = неровная шерсть, свернувшаяся, затрудненное дыхание, нет активной реакции на манипуляции/обработку.

Описание изобретения

Определения терминов, которые использованы в настоящем изобретении, приведены ниже.

Подразумевают, что за термином включенный или включающий в используемом в настоящем описании смысле следуют слова без ограничения

В используемом в настоящем описании смысле термин связывающая молекула относится к интактному иммуноглобулину, включая моноклональные антитела, такие как химерные, гуманизированные или человеческие моноклональные антитела, или к антигенсвязывающему и/или вариабельному домену, содержащему фрагмент иммуноглобулина, который конкурирует с интактным иммуноглобулином за специфичное связывание с партнером иммуноглобулина в связывании, например, НА. Независимо от структуры антигенсвязывающий фрагмент связывается с тем же антигеном, который распознается интактным иммуноглобулином. Антигенсвязывающий фрагмент может содержать пептид или полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, состоящую по меньшей мере из 2, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 175, 200 или 250 следующих друг за другом аминокислотных остатков аминокислотной последовательности связывающей молекулы.

Термин связывающая молекула в используемом в настоящем описании смысле включает все классы и подклассы иммуноглобулинов, известные в данной области. В зависимости от аминокислотной последовательности константного домена их тяжелых цепей связывающие молекулы можно разделить на пять основных классов интактных антител: 1дА, 1§И, 1дЕ, 1§С и 1дМ, и некоторые из них могут быть дополнительно разделены на подклассы (изотипы), например 1дА1, 1дА2, 1§О1, 1дО2, 1§О3 и 1§О4.

Антигенсвязывающие фрагменты включают, наряду с другими, фрагменты РаЬ, Р(аЬ'), Р(аЬ')₂, Ρν, ЬАЬ. Ρά, определяющие комплементарность области (СИК), одноцепочечные антитела ОсР\'). бивалентные одноцепочечные антитела, одноцепочечные фаговые антитела, диантитела, триантитела, тетраантитела, (поли)пептиды, которые содержат, по меньшей мере, фрагмент иммуноглобулина, который достаточен для обеспечения специфичного связывания антигена с (поли)пептидом и т.д. Указанные выше фрагменты могут быть получены синтетически или ферментативным или химическим расщеплением интатных иммуноглобулинов, или они могут быть сконструированы генетически с использованием методики рекомбинантной ДНК. Способы получения хорошо известны в данной области и описаны, например, в публикации АийЬоФек: А ЬаЬога!огу Мапиа1, Еййей Ьу: Е. Наг1оте аиЬ И. Ьаие (1988), Со1Ь 8ргтд НагЬог ЬаЬога1огу, Со1Ь Бргтд НагЬог, №ν Уогк, которая включена в настоящее описание в виде ссылки. Связывающая молекула или ее антигенсвязывающий фрагмент могут иметь один или более участков связывания. Если имеется больше одного участка связывания, то участки связывания могут быть идентичными друг другу, или он могут быть разными.

Связывающая молекула может быть голой или неконъюгированной связывающей молекулой, но также может быть частью иммуноконъюгата. Подразумевается, что голая или неконъюгированная связывающая молекула относится к связывающей молекуле, которая не конъюгирована, оперативно не связана или физически или функционально не ассоциирована иным образом с эффекторным компонентом или меткой, такой как, наряду с прочими, токсическое вещество, радиоактивное вещество, липосома, фермент. Будет понятно, что голые или неконъюгированные связывающие молекулы не исключают связывающие молекулы, которые были стабилизированы, мультимеризованы, гуманизированы или обработаны любым другим образом, отличным от связывания эффекторного компонента или метки. Соответственно, при этом включены все посттранскрипционно модифицированные голые и неконъюгированные связывающие молекулы, включая случаи, когда модификации осуществлены в нейтральной среде клеток, продуцирующих связывающие молекулы, в рекомбинантной клетке, продуцирующей связывающие молекулы, и введены искусственно человеком после получения исходной связывающей молекулы.

Конечно, термин голая или неконъюгированная связывающая молекула не исключает способность

- 3 027054 связывающей молекулы образовывать функциональные ассоциации с эффекторными клетками и/или молекулами после введения в организм, так как некоторые из таких взаимодействий необходимы для проявления биологического эффекта. Таким образом, отсутствие ассоциированной эффекторной группы или метки применимо в случае определения голой или неконъюгированной связывающей молекулы ίη νίίτο, но не ίη νίνο.

В используемом в настоящем описании смысле термин биологический образец охватывает множество типов образцов, включая образцы крови и другие жидкие образцы биологического происхождения, образцы солидных тканей, такие как образцы биопсии или культуры тканей или полученные из них клетки и их потомство. Термин также включает образцы, которые были обработаны каким-либо образом после их получения, например, обработаны реагентами, подвергнуты солюбилизации или обогащены некоторыми компонентами, такими как белки или полинуклеотиды. Термин охватывает различные виды клинических образцов, полученных от любого вида, а также включает клетки в культуре, надосадки клеток и клеточные лизаты.

Термин определяющие комплементарность области (СИК) в используемом в настоящем описании смысле означает последовательности в вариабельных областях связывающих молекул, таких как иммуноглобулины, которые обычно в большой степени вносят вклад в образование антигенсвязывающего участка, который комплементарен по форме и распределению заряда эпитопу, узнаваемому на антигене. Области СИК могут быть специфичными по отношению к линейным эпитопам, непрерывным эпитопам или конформационным эпитопам белков или белковых фрагментов, которые либо присутствуют на белке в его нативной конформации, либо в некоторых случаях присутствуют на белках, которые денатурированы, например, в результате солюбилизации в §И§. Эпитопы также могут состоять из посттранскрипционных модификаций белков.

Термин делеция в используемом в настоящем описании смысле означает изменение либо в аминокислотной, либо в нуклеотидной последовательности, в которой один или более аминокислотных или нуклеотидных остатков, соответственно, отсутствуют по сравнению с эталонной молекулой, обычно встречающейся в природе.

Термин последовательность нуклеиновой кислоты, регулирующая экспрессию в используемом в настоящем описании смысле относится к полинуклеотидным последовательностям, необходимым для экспрессии и/или влияющим на экспрессию оперативно связанной кодирующей последовательности в конкретном организме-хозяине. Последовательности нуклеиновых кислот, регулирующие экспрессию, такие как наряду с прочими соответствующие последовательности инициации транскрипции, терминации, промоторные, энхансерные последовательности;

последовательности репрессора или активатора; эффективные сигналы процессинга РНК, такие как сигналы сплайсинга и полиаденилирования; последовательности, которые стабилизируют цитоплазматическую мРНК; последовательности, которые усиливают эффективность трансляции (например, сайты связывания рибосом); последовательности, которые повышают стабильность белка; и при необходимости последовательности, которые усиливают секрецию белка, могут представлять собой любую последовательность нуклеиновой кислоты, проявляющую активность в организме выбранного хозяина, и могут быть получены из генов, кодирующих белки, которые являются либо гомологичными, либо или гетерологичными для организма хозяина. Идентификация и использование регулирующих экспрессию последовательностей являются рутинными для специалиста в данной области.

Термин функциональный вариант в используемом в настоящем описании смысле относится к связывающей молекуле, которая содержит нуклеотидную и/или аминокислотную последовательность, которая изменена на один или более нуклеотидов и/или аминокислот по сравнению с нуклеотидными и/или аминокислотными последовательностями эталонной связывающей молекулы и которая способна конкурировать за связывание со связывающим партнером, т.е. вирусом гриппа, с эталонной связывающей молекулой. Другими словами, модификации аминокислотной и/или нуклеотидной последовательности эталонной связывающей молекулы существенно не влияют или не изменяют характеристики связывания связывающей молекулы, кодируемой нуклеотидной последовательностью или содержащей данную аминокислотную последовательность, т.е. связывающая молекула все еще способна узнавать и связывать свою мишень. Функциональный варианта может иметь консервативные модификации последовательности, включая нуклеотидные и аминокислотные замены, добавления и делеции. Такие модификации могут быть введены стандартными способами, известными в данной области, такими как сайт-направленный мутагенез и случайный ПЦР-опосредованный мутагенез, и могут содержать природные, а также неприродные нуклеотиды и аминокислоты.

Консервативные аминокислотные замены включают замены, при которых аминокислотный остаток заменяют аминокислотным остатком, имеющим сходные структурные и химические свойства. Семейства аминокислотных остатков, имеющих сходные боковые цепи, были определены в данной области. Такие семейства включают в себя аминокислоты с основными боковыми цепями (например, лизин, аргинин, гистидин), кислыми боковыми цепями (например, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота), незаряженными полярными боковыми цепями (например, аспарагин, глутамин, серин, треонин, тирозин, цистеин, триптофан), неполярными боковыми цепями (например, глицин, аланин, валин, лейцин, изолей- 4 027054 цин, пролин, фенилаланин, метионин), бета-разветвленными боковыми цепями (например, треонин, валин, изолейцин) и ароматическими боковыми цепями (например, тирозин, фенилаланин, триптофан). Специалисту в данной области будет понятно, что также может быть использована другая классификация семейств аминокислотных остатков, отличная от классификации, используемой выше. Кроме того, вариант может иметь неконсервативные аминокислотные замены, например замену аминокислоты аминокислотным остатком, обладающим другими структурными или химическими свойствами. Сходные минорные изменения также могут включать делеции или инсерции аминокислот или и то и другое. Руководство по определению того, какие аминокислотные остатки могут быть заменены, встроены или делетированы без утраты иммунологической активности, можно найти, используя компьютерные программы, хорошо известные в данной области.

Мутация в нуклеотидной последовательности может представлять собой одно изменение, осуществленное в локусе (точечную мутацию), такое как мак мутации транзиции или трансверсии, или альтернативно в одном локусе может быть встроено, делетировано или изменено множество нуклеотидов. Кроме того, одно или более изменений могут быть осуществлены в любом количестве локусов в нуклеотидной последовательности. Мутации могут быть осуществлены любым подходящим способом, известным в данной области.

Термин подтип вируса гриппа в используемом в настоящем описании смысле в связи с вирусами гриппа А относится к вариантам вируса гриппа А, которые характеризуются различными сочетаниями поверхностных вирусных белков гемагглютинина (Н) и нейраминидазы (Ν). Согласно настоящему изобретению подтипы вируса гриппа могут быть названы по номеру их Н, например вирус гриппа, содержащий НА подтипа Н1 или Н3 или вирус гриппа Н1, вирус гриппа Н3 или сочетанием номера Н и номера Ν, таким как, например, подтип вируса гриппа Η3Ν2 или Η3Ν2.

Термин подтип вируса гриппа специально включает все отдельные штаммы вируса гриппа в каждом подтипе, которые обычно возникают в результате мутаций и имеют разные патогенные профили. Такие штаммы также могут быть названы различными изолятами вирусного подтипа. Соответственно, в используемом в настоящем описании смысле, термины штаммы и изоляты можно использовать взаимозаменяемо. Современная номенклатура штаммов или изолятов вирусов гриппа включает географическое положение первого выделения, номер штамма и год выделения, обычно с описанием антигенов НА и ΝΑ, приведенным в скобках, например, А Мо8СО^/10/00 (Η3Ν2). В случае штаммов, не поражающих человека, в номенклатуру также включают хозяина, из которого он происходит.

Термин нейтрализующие в используемом в настоящем описании смысле в отношении связывающих молекул согласно изобретению относится к связывающим молекулам, которые ингибируют инфекцию клетки-мишени, осуществляемую вирусом гриппа в репликативном цикле, независимо от механизма, которым достигается нейтрализация. Таким образом, нейтрализация может быть достигнута, например, в результате ингибирования прикрепления или адгезии вируса на клеточной поверхности или в результате ингибирования слияния вирусной и клеточной мембран после прикрепления вируса к клеткемишени, и тому подобного.

Термины перекрестно нейтрализующие или перекрестная нейтрализация в используемом в настоящем описании смысле в отношении к связывающим молекулам согласно изобретению относятся к способности связывающих молекул согласно изобретению нейтрализовать разные подтипы вирусов гриппа А и/или В.

Подразумевается, что термин хозяин в используемом в настоящем описании смысле относится к организму или клетке, в которую был введен вектор, такой как клонирующий вектор или экспрессирующий вектор. Организм или клетка могут быть прокариотическими или эукариотическими. Предпочтительно хозяевами являются изолированные клетки-хозяева, например клетки-хозяева в культуре. Термин клетки-хозяева означает только то, что клетки модифицированы для (сверх)экспрессии связывающих молекул согласно изобретению и включают В-клетки, которые исходно экспрессируют такие связывающие молекулы, и такие клетки были модифицированы для сверхэкспрессии связывающей молекулы посредством иммортализации, амплификации, усиления экспрессии и т.д. Следует понимать, что термин хозяин предназначен для обозначения не только конкретного организма или клетки конкретного субъекта, но также потомства такого организма или клетки. В связи с тем, что в последующих поколениях могут происходить некоторые модификации либо вследствие мутации, либо вследствие влияния окружающей среды, в действительности, такое потомство может не быть идентичным исходному организму или клетке, но все еще включено в объем термина хозяин в используемом в настоящем описании смысле.

Термин человеческие в случае применения по отношению к связывающим молекулам, которые определены в настоящем описании, относится к молекулам, которые либо непосредственно получены от человека, либо основаны на последовательности зародышевой линии человека. Когда связывающая молекула получена или основана на последовательности человека и затем модифицирована, ее все еще считают человеческой в использованном в настоящем описании смысле. Другими словами, подразумевается, что термин человеческие в случае применения по отношению к связывающим молекулам охватывает связывающие молекулы, имеющие вариабельные и константные области, полученные из последова- 5 027054 тельностей иммуноглобулинов зародышевой линии человека или основанные на вариабельных или константных областях, встречающихся у человека или в лимфоцитах человека, и в определенной форме модифицированные. Таким образом, связывающие молекулы человека могут содержать аминокислотные остатки, не кодируемые последовательностями иммуноглобулинов зародышевой линии человека, содержать замены и/или делеции (например, мутации, введенные, например, в результате случайного или сайт-специфичного мутагенеза ίη νίίτο или в результате соматической мутации ίη νίνο). Термин основанные на в используемом в настоящем описании смысле относится к ситуации, когда последовательность нуклеиновой кислоты может быть точно скопирована с матрицы или с минорными мутациями, например, способами склонной к ошибкам ПЦР или получена синтетически так чтобы она точно совпадала с матрицей или с минорными модификациями.

Термин инсерция, также известный как термин добавление, означает изменение в аминокислотной или нуклеотидной последовательности, приводящее к добавлению одного или нескольких аминокислотных или нуклеотидных остатков, соответственно, по сравнению с исходной последовательностью.

Термин изолированные в случае применения по отношению к связывающим молекулам, которые определены в настоящем описании, относится к связывающим молекулам, которые по существу не содержат других белков или полипептидов, в частности, не содержат других связывающих молекул, обладающих другими антигенными специфичностями, а также по существу не содержат другого клеточного материала и/или химических веществ. Например, в том случае, когда связывающие молекулы получены рекомбинантно, предпочтительно они по существу не содержат компонентов культуральной среды, и в том случае, когда связывающие молекулы получены в результате химического синтеза, предпочтительно они по существу не содержат химических предшественников или других химических веществ, т.е., они отделены от химических предшественников или других химических веществ, которые вовлечены в синтез белка. Подразумевается, что термин изолированные в случае применения по отношению к молекулам нуклеиновых кислот, кодирующим связывающие молекулы, которые определены в настоящем описании, относится к молекулам нуклеиновых кислот, в которых нуклеотидные последовательности, кодирующие связывающие молекулы, не содержат других нуклеотидных последовательностей, в частности нуклеотидных последовательностей, кодирующих связывающие молекулы, которые связываются с другими связывающими партнерами. Кроме того, термин изолированные относится к молекулам нуклеиновых кислот, которые по существу отделены от других клеточных компонентов, которые в природе сопровождают нативную молекулу нуклеиновой кислоты в ее природном хозяине, например, от рибосом, полимераз или геномных последовательностей, с которыми она ассоциирована в природе. Кроме того, изолированные молекулы нуклеиновых кислот, такие как молекулы кДНК, по существу могут не содержать другого клеточного материала или культуральной среды в случае получения с использованием методики рекомбинации, или по существу могут не содержать химических предшественников или других химических веществ в случае химического синтеза.

Термин моноклональное антитело в используемом в настоящем описании смысле относится к препарату молекул антител с одной специфичностью. Моноклональное антитело проявляет одну специфичность и аффинность связывания по отношению к конкретному эпитопу. Соответственно, термин моноклональное антитело человека относится к антителу, проявляющему одной специфичность связывания, которое имеет вариабельную и константную области, полученные или основанные на последовательностях иммуноглобулинов зародышевой линии человека, или полученные из полностью синтетических последовательностей. Способ получения моноклонального антитела не важен для специфичности связывания.

Термин встречающийся в природе в используемом в настоящем описании смысле в применении к объекту относится к тому факту, что объект или соединение можно найти в природе. Например, полипептидная или полинуклеотидная последовательность, которая присутствует в организме, которая может быть выделена из природного источника и которая не была преднамеренно модифицирована человеком в лаборатории, является встречающейся в природе.

Термин молекула нуклеиновой кислоты в используемом в настоящем изобретении смысле относится к полимерной форме нуклеотидов и охватывает как смысловые, так и антисмысловые нити РНК, кДНК, геномной ДНК и синтетические формы и смешанные полимеры из указанных выше. Нуклеотид относится к рибонуклеотиду, дезоксирибонуклеотиду или модифицированной форме нуклеотида любого типа. Термин также включает однонитевые и двунитевые формы ДНК. Кроме того, полинуклеотид может включать либо встречающиеся в природе, либо модифицированные нуклеотиды, либо и те и другие, связанные вместе встречающимися в природе и/или не встречающимися в природе межнуклеотидными связями. Молекулы нуклеиновых кислот могут быть модифицированы химически или биохимически или могут содержать неприродные или дериватизованные основания нуклеотидов, которые хорошо известны специалистам в данной области. Такие модификации включают, например, метки, метилирование, замену одного или более встречающихся в природе нуклеотидов аналогом, межнуклеотидные модификации, такие как связи с незаряженными остатками (например, метилфосфонаты, сложные фосфотриэфиры, фосфорамидаты, карбаматы и т.д.), связи с заряженными остатками (например, фосфоротиоаты, фосфородитионаты и т.д.), боковые остатки (например, полипептиды), интеркаляторы (например, акридин,

- 6 027054 псорален и т.д.), хелаторы, алкилирующие агенты и модифицированные связи (например, альфааномерные нуклеиновые кислоты и т.д.). Также подразумевается, что указанный выше термин включает любую топологическую конформацию, включая однонитевую, двунитевую, частично дуплексную, триплексную, шпилечную, кольцевую и блокированную конформации. Также включены синтетические молекулы, которые имитируют полинуклеотиды по их способности связываться с определенной последовательностью посредством образования водородных связей и других химических взаимодействий. Такие молекулы известны в данной области и включают, например, молекулы, в которых пептидные связи заменяют фосфатные связи в остове молекулы. Ссылка на последовательность нуклеиновой кислоты охватывает ее комплемент, если не указано иное. Таком образом, следует понимать, что ссылка на молекулу нуклеиновой кислоты, имеющую конкретную последовательность, охватывает комплементарную ей нить с комплементарной ей последовательностью. Комплементарная нить также применима, например, для антисмысловой терапии, зондов для гибридизации и ПЦР-праймеров.

Термин оперативно связанный относится к двум или более элементам последовательности нуклеиновой кислоты, которые обычно физически связаны и находятся в функциональной взаимосвязи друг с другом. Например, промотор оперативно связан с кодирующей последовательностью, если промотор способен инициировать или регулировать транскрипцию или экспрессию кодирующей последовательности, и в данном случае следует понимать, что кодирующая последовательность находится под контролем промотора.

Под фармацевтически приемлемым эксципиентом подразумевают любое инертное вещество, которое сочетают с активной молекулой, такой как лекарство, средство или связывающая молекула, для получения отвечающей требованиям или подходящей формы дозирования. Фармацевтически приемлемый эксципиент означает эксципиент, который является нетоксичным для реципиентов в используемых дозах и концентрациях, и совместимым с другими ингредиентами препарат, содержащий лекарство, средство или связывающую молекулу. Фармацевтически приемлемые эксципиенты широко используются и известны в данной области.

Термин специфичное связывание в используемом в настоящем описании смысле в отношении взаимодействия связывающей молекулы, например антитела, и его партнера в связывании, например, антигена, означает, что взаимодействие зависит от наличия конкретной структуры, например, антигенной детерминанты или эпитопа, на партнере в связывании. Другими словами, антитело предпочтительно связывается или узнает партнера в связывании даже в том случае, когда такой связывающий партнер присутствует в смеси с другими молекулами или организмами. Связывание может быть опосредовано ковалентными или нековалентными взаимодействиями или их сочетанием. Другими словами, термин специфичное связывание означает иммуноспецифичное связывание с антигенной детерминантой или эпитопом и неиммуноспецифичное связывание с другими антигенными детерминантами или эпитопами. Связывающая молекула, которая иммуноспецифично связывается с антигеном, может связываться с другими пептидами или полипептидами с более низкой аффинностью, которую определяют, например, в радиоиммуноанализах (РИА), твердофазных иммуноферментных анализах (ЕЬ1§А), В1АСОКЕ или других анализах, известных в данной области. Связывающие молекулы или их фрагменты, которые иммуноспецифично связываются с антигеном, могут быть перекрестно реактивными с родственными антигенами, несущими такой же эпитоп. Предпочтительно связывающие молекулы или их фрагменты, которые иммуноспецифично связываются с антигеном, перекрестно не взаимодействуют с другими антигенами.

Замена в используемом в настоящем описании смысле означает замену одной или нескольких аминокислот или нуклеотидов другими аминокислотами или нуклеотидами соответственно.

Термин терапевтически эффективное количество относится к количеству связывающей молекулы, которая определена в настоящем описании, которое является эффективным для профилактики, ослабления и/или лечения состояния, возникающего в результате инфекции вирусом гриппа В. Ослабление в используемом в настоящем описании смысле может относиться к уменьшению видимых или ощущаемых симптомов заболевания, вирусемии или любого другого измеряемого проявления инфекции гриппа.

Термин лечение относится к терапевтическому лечению, а также профилактическим или превентивным мерам для излечения или прекращения или, по меньшей мере, замедления прогрессирования заболевания. К субъектам, нуждающимся в лечении, относятся субъекты, уже имеющие состояние, возникшее в результате инфекции вирусом гриппа, а также субъекты, у которых необходимо предотвратить инфекцию гриппа. Субъект, частично или полностью излеченный от инфекции вирусом гриппа, также может нуждаться в лечении. Профилактика охватывает подавление или уменьшение распространения вируса гриппа или ингибирование или снижение начала, развития или прогрессирования одного или нескольких симптомов, ассоциированных с инфекцией вирусом гриппа.

Термин вектор означает молекулу нуклеиновой кислоты, в которую может быть встроена вторая молекула нуклеиновой кислоты для введения в хозяина, где она может быть реплицирована и в некоторых случаях экспрессирована. Другими словами, вектор способен переносить молекулу нуклеиновой кислоты, с которой он был связан. Термин вектор в используемом в настоящем описании смысле охватывает клонирующие, а также экспрессирующие векторы. Векторы включают без ограничения плазмиды, космиды, бактериальные искусственные хромосомы (ВАС) и дрожжевые искусственные хромосомы

- 7 027054 (УАС) и векторы, полученные из бактериофагов или вирусов растений или животных (включая человека. Векторы содержат начало репликации, узнаваемое предполагаемым хозяином, и в случае экспрессирующих векторов содержат промотор и другие регуляторные области, узнаваемые хозяином. Вектор, содержащий вторую молекулу нуклеиновой кислоты, вводят в клетку в результате трансформации, трансфекции или используя вирусные механизмы проникновения. Некоторые векторы способны к автономной репликации в хозяине, в которого они введены (например, векторы, имеющие бактериальное начало репликации, могут реплицироваться в бактериях). Другие векторы могут быть интегрированы в геном хозяина после введения в хозяина, и поэтому они реплицируются вместе с геномом хозяина.

Подробное описание

В первом аспекте настоящее изобретение охватывает связывающие молекулы, способные специфично связываться с гемагглютинином (НА) подтипов вирусов гриппа А филогенетической группы 1 и подтипов вирусов гриппа А филогенетической группы 2. В одном варианте связывающие молекулы способны нейтрализовать подтипы вирусов гриппа А обеих групп: филогенетической группы 1 и филогенетической группы 2. Таким образом, связывающие молекулы согласно изобретению являются уникальными в том, что они способны перекрестно нейтрализовать штаммы вирусов гриппа А группы 1 и штаммы вирусов гриппа А группы 2. В одном варианте связывающие молекулы способны нейтрализовать по меньшей мере один или более, предпочтительно два или больше, предпочтительно три или больше, предпочтительно четыре или больше, еще более предпочтительно пять или больше подтипов вируса гриппа А группы 1, выбранных из группы, состоящей из подтипов Н1, Н2, Н5, Н6, Н8, Н9 и Н11 и по меньшей мере один или более, предпочтительно два или больше, предпочтительно три или больше подтипа вируса гриппа А группы 2, выбранных из группы, состоящей из подтипов Н3, Н4, Н7 и Н10. В одном варианте связывающие молекулы способны специфично связываться с гемагглютинином (НА) подтипов вирусов гриппа В. В другом варианте, связывающие молекулы способны нейтрализовать вирусы гриппа В. В одном варианте связывающие молекулы способны нейтрализовать вирусы гриппа А и/или В ίη νίνο. Штаммы вирусов гриппа А и В могут представлять собой штаммы вирусов гриппа как человека, так и животного, отличного от человека (т.е., могут быть получены из животных, отличных от человека, например, птиц).

Предпочтительно связывающие молекулы представляют собой связывающие молекулы человека. В предпочтительном варианте связывающие молекулы представляют собой антитела человека или их антигенсвязывающие фрагменты.

В одном варианте связывающие молекулы получают с гена зародышевой линии УН1-69. Таким образом, во всех связывающих молекулах использован один и тот же каркас, кодируемый УН 1-69 зародышевой линии.

В одном варианте обеспечивающее связывание взаимодействие связывающих молекул предпочтительно антитела и НА опосредовано исключительно вариабельными последовательностями тяжелой цепи.

В одном варианте связывающие молекулы содержат СЭК1 тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕО ГО N0: 133 или 8Е0 ГО N0: 139, СГОК2 тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 134, 8Е0 ГО N0: 140 или 8Е0 ГО N0: 151, и СГОК3 тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8ЕО ГО N0: 135, 8ЕО ГО N0: 141, 8ЕО ГО N0: 145, 8ЕО ГО N0: 152, 8ЕО ГО N0: 161 и 8ЕО ГО N0: 162. Области СОК связывающих молекул согласно изобретению показаны в табл. 7. Области СОК соответствуют областям, определенным Кабатом и соавт. (1991), которые описаны в публикации: 8сс|испсс5 οί Ρτοΐθίηκ οί 1шшипо1од1са1 БИсгсН.

Вирусы гриппа инфицируют клетки благодаря связыванию с остатками сиаловой кислоты на клеточной поверхности клеток-мишеней и затем перемещаются в эндосомы, происходит слияние их мембран с мембранами эндосом и высвобождение комплекса геном-транскриптаза в клетку. И связывание с рецептором, и процесс слияния мембран опосредованы гликопротеином НА. НА вируса гриппа А содержит две структурно отличающиеся области, т.е., область глобулярной головки, которая содержит участок связывания с рецептором, который отвечает за прикрепление вируса к клетке-мишени, и вовлечен в гемагглютинирующую активность НА, и область ствола, содержащую пептид слияния, который необходим для слияния мембран между оболочкой вируса и мембраной эндосомы клетки. Белок НА является тримером, в котором каждый мономер состоит из двух связанных дисульфидной связью гликополипептидов, НА1 и НА2, которые образуются во время инфекции в результате протеолитического расщепления предшественника (НАО). Расщепление необходимо для инфекционности вируса, так как оно необходимо для того, чтобы инициировать НА для слияния мембран, чтобы обеспечить возможность конформационного изменения. Активация инициируемой молекулы происходит при низком рН в эндосомах, в диапазоне от рН5 до рН6, и требует крупных изменений в структуре НА. Каждая из стадий в ходе инициации и активации НА, необходимых для его участия в процессе слияния мембран, представляет собой отдельную мишень для ингибирования, например, моноклональными антителами. В одном варианте связывающие молекулы способны блокировать рН-индуцированные конформационные изменения НА, ассоциированные со слиянием мембран.

- 8 027054

Связывающие молекулы согласно изобретению могут обладать способностью специфично связываться с НАО, НА1- и/или НА2-субъединицей белка НА. Они могут быть способны специфично связываться с линейными или структурными и/или конформационными эпитопами на НАО, НА1- и/или НА2субъединицу белка НА. Молекула НА может быть очищена из вирусов или получена рекомбинантно и необязательно выделена перед использованием. Альтернативно, НА может быть экспрессирован на поверхности клеток. В одном варианте связывающие молекулы согласно изобретению способны специфично связываться с эпитопом в стволовой области НА. В одном варианте связывающие молекулы связываются с эпитопом, который доступен в конформации НА перед слиянием.

Связывающие молекулы согласно изобретению могут быть способны специфично связываться с вирусами гриппа, которые являются жизнеспособными, живыми и/или инфекционными или которые находятся в инактивированной/аттенуированной форме. Способы инактивации/аттенуации вируса, например, вирусов гриппа, хорошо известны в данной области и включают без ограничения обработку формалином, β-пропиолактоном (ВРЬ), мертиолятом и/или ультрафиолетовым излучением.

Связывающие молекулы согласно изобретению также могут быть способны специфично связываться с одним или несколькими фрагментами вирусов гриппа, такими как, наряду с прочими, препарат одного или нескольких белков и/или (поли)пептидов, полученных из подтипов вирусов гриппа А и/или В, или один или более рекомбинантно полученных белков и/или полипептидов вирусов гриппа А и/или В. Нуклеотидную и/или аминокислотную последовательность белков различных штаммов гриппа А и В можно найти в базе данных ОеиВаик, базе данных последовательностей вирусов гриппа ΝΟΒΙ, базе данных последовательностей гриппа (ΙδΌ), базе данных ЕМВЬ и/или других базах данных. Специалист в данной области сможет найти такие последовательности в соответствующих базах данных.

В другом варианте связывающие молекулы согласно изобретению способны специфично связываться с фрагментом указанных выше белков и/или полипептидов, при этом фрагмент содержит, по меньшей мере, эпитоп, узнаваемый связывающими молекулами согласно изобретению. Эпитоп в используемом в настоящем описании смысле означает компонент, который способен связываться со связывающей молекулой согласно изобретению с достаточно высокой аффинностью с образованием регистрируемого антигенсвязывающего молекулярного комплекса.

Связывающие молекулы согласно изобретению могут быть способны или не способны специфично связываться с внеклеточной частью НА (также называемой в настоящем описании растворимым НА (δΗΑ)).

Связывающие молекулы согласно изобретению могут представлять собой интактные молекулы иммуноглобулинов, такие как поликлональные или моноклональные антитела, или связывающие молекулы могут представлять собой их антигенсвязывающие фрагменты, включая без ограничения фрагменты вариабельных областей тяжелых и легких цепей, РаЬ, Е(аЬ'), Е(аЬ')₂, Εν, 6ЛЬ. Еб, определяющих комплементарность областей (СОК), одноцепочечные антитела (δεΕν), бивалентные одноцепочечные антитела, одноцепочечные фаговые антитела, диантитела, триантитела, тетраантитела и (поли)пептиды, которые содержат, по меньшей мере, фрагмент иммуноглобулина, который достаточен для обеспечения антигенспецифичного связывания со штаммами вируса гриппа или его фрагментом. В предпочтительном варианте связывающие молекулы согласно изобретению являются моноклональными антителами человека и/или их антигенсвязывающих фрагментов. Связывающие молекулы также могут представлять собой наноантитела, альфа-антитела, молекулы АТйЬобу, ΕΝβ-доменные каркасы и другие каркасы, основанные на доменах повторяющихся белков (человека), подобные аднектинам, антикалинам, дарпинам и т.д., или другие каркасы, содержащие связывающие эпитоп последовательности.

Связывающие молекулы согласно изобретению можно использовать в неизолированной или изолированной форме. Кроме того, связывающие молекулы согласно изобретению можно использовать отдельно или в смеси, содержащей по меньшей мере одну связывающую молекулу (или ее вариант или фрагмент) согласно изобретению, и/или с другими связывающими молекулами, которые связываются с вирусом гриппа и оказывают ингибирующее действие на вирус гриппа. Другими словами, связывающие молекулы можно использовать в сочетании, например в виде фармацевтической композиции, содержащей две или больше связывающих молекул согласно изобретению, их вариантов или фрагментов. Например, связывающие молекулы, обладающие разными, но дополняющими друг друга активностями, можно сочетать в одной терапии, чтобы достичь требуемого профилактического, терапевтического или диагностического эффекта, но альтернативно, связывающие молекулы, обладающие идентичными активностями, также можно сочетать в одной терапии, чтобы достичь требуемого профилактического, терапевтического или диагностического эффекта. Необязательно смесь дополнительно содержит, по меньшей мере, одно другое терапевтическое средство. Предпочтительно терапевтическое средство, такое как, например, ингибиторы М2 (например, амантадин, римантадин) и/или ингибиторы нейраминидазы (например, занамивир, осельтамивир), применимо для профилактики и/или лечения инфекции вирусом гриппа.

Обычно связывающие молекулы согласно изобретению могут связываться со своими связывающими партнерами, т.е. вирусом гриппа А группы 1 (таким как Η1Ν1) и вирусом гриппа А группы 2 (таким как Η3Ν2) и/или вирусом гриппа В и/или их фрагментами с константой аффинности (значением Кб) ,

- 9 027054 которое ниже 0,2х10^-4 М, 1,0х10⁵ М, 1,0х10⁶ М, 1,0х10⁷ М, предпочтительно ниже 1,0х10⁸ М, более предпочтительно ниже 1,0х10^-9 М, более предпочтительно ниже 1,0х10^-10 М, еще более предпочтительно ниже 1,0х10^-11 М и, в частности, ниже 1,0х10^-12 М. Константы аффинности могут варьировать в зависимости от изотипа антитела. Например, аффинное связывание в случае изотипа 1дМ относится к аффинности связывания, составляющей по меньшей мере примерно 1,0х10^-7 М. Константы аффинности могут быть измерены, например, с использованием резонанса поверхностного плазмона, например, с использованием системы В1АС0РЕ (РИаттас1а Вюкеикот АВ, Ирр8а1а, 5>\\сйеп).

Связывающие молекулы согласно изобретению проявляют нейтрализующую активность. Нейтрализующая активность может быть измерена, например, как описано в настоящей публикации. Альтернативные анализы, в которых измеряют нейтрализующую активность, описаны, например, в \УН0 Мапиа1 оп Ашша1 1пПиеп/а Όίηβηοδίδ апй ЗитуеШапсе, Сепеуа: \Уог1й НеаЙЬ Отдашкайоп, 2005, уеглоп 2002.5.

Обычно связывающие молекулы согласно изобретению обладают нейтрализующей активностью 50 мкг/мл или меньше, предпочтительно 20 мкг/мл или меньше, более предпочтительно нейтрализующей активностью 10 мкг/мл или меньше, еще более предпочтительно 5 мкг/мл или меньше, которую определяют в анализе нейтрализации вируса (ΥΝΑ) ш уйго, который описан в примере 6. Связывающие молекулы согласно изобретению могут связываться с вирусом гриппа или его фрагментом в растворимой форме, такой как, например, в образце или в суспензии, или могут связываться с вирусами гриппа или их фрагментами, связанными или прикрепленными к носителю или подложке, например, планшетам для микротитрования, мембранам и шарикам и т.д. Носители или подложки могут быть изготовлены из стекла, пластика (например, полистирола), полисахаридов, нейлона, нитроцеллюлозы или тефлона и т.д. Поверхность таких подложек может быть твердой или пористой и иметь любую подходящую форму. Кроме того, связывающие молекулы могут связываться с вирусом гриппа в очищенной/изолированной или неочищенной/неизолированной форме.

Как обсуждалось выше, настоящее изобретение относится к изолированным связывающим молекулам человека, которые способны узнавать и связываться с эпитопом в белке гемагглютинине (НА) вируса гриппа, при этом указанные связывающие молекулы обладают нейтрализующей активностью, направленной против вирусов гриппа А филогенетической группы 1 и вирусов гриппа А филогенетической группы 2. Таким образом, согласно изобретению было показано, что связывающие молекулы, предлагаемые в настоящем изобретении, перекрестно нейтрализуют подтипы вирусов гриппа, относящиеся к обеим филогенетическим группам. Специалист на основе приведенного описания может определить, действительно ли антитело перекрестно взаимодействует с белками НА из разных подтипов, а также может определить, способны ли они нейтрализовать вирусы гриппа разных подтипов ш уйго и/или ш νί\Ό.

В одном варианте связывающая молекула согласно настоящему изобретению выбрана из группы, состоящей из:

a) связывающей молекулы, содержащей область СОРТ тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 133, область СГОР2 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 134 и область СГОР3 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 135,

b) связывающей молекулы, содержащей область СЭР1 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 139, область СГОР2 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 140 и область СЭР3 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 141,

c) связывающей молекулы, содержащей область СГОР1 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 139, область СГОР2 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 134 и область СГОР3 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 145,

й) связывающей молекулы, содержащей область СГОР1 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 139, область СГОР2 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 151 и область СГОР3 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 152,

е) связывающей молекулы, содержащей область СГОР1 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 139, область СГОР2 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 134 и область СГОР3 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 152,

ί) связывающей молекулы, содержащей область СГОР1 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 139, область СГОР2 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 151 и область СГОР3 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 161,

д) связывающей молекулы, содержащей область СГОР1 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 139, область СГОР2 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 151 и область СГОР3 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 162, и

И) связывающей молекулы, содержащей область СГОР1 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 139, область СГОР2 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 134 и область СГОР3 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 141.

В предпочтительном варианте связывающая молекула содержит область СГОР1 тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0: 139, область СГОР2 тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0: 134 и область СГОР3 тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0: 145 или ЗЕО ГО N0: 152.

В другом варианте связывающие молекулы человека согласно изобретению выбраны из группы, состоящей из:

а) связывающей молекулы, имеющей область СГОР1 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 133, область СГОР2 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 134 и область СГОР3 тяжелой цепи ЗЕО ГО N0: 135, область СГОР1 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0: 136, область СГОР2 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0: 137, и область СГОР3 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0: 138,

- 10 027054

b) связывающей молекулы, содержащей область СИК1 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 139, область СГОК2 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 140 и область СИКЗ тяжелой цепи §Еф ГО N0: 141, область СГОК1 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 142, область СГОК2 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 143, и область СИКЗ легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 144,

c) связывающей молекулы содержащей область СГОК1 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 139, область СГОК2 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 134 и область СИКЗ тяжелой цепи §Еф ГО N0: 145, область СГОК1 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 146, область СГОК2 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 174 и область СГОК3 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 147,

Б) связывающей молекулы, содержащей область СИК1 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 139, область СГОК2 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 134 и область СГОК3 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 145, область СГОК1 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 148, область СГОК2 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 149, и область СГОК3 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 150,

е) связывающей молекулы, содержащей область СГОК1 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 139, область СГОК2 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 151 и область СГОК3 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 152, область СГОК1 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 153, область СГОК2 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 154, и область СГОК3 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 155,

ί) связывающей молекулы, содержащей область СГОК1 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 139, область СГОК2 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 134 и область СГОК3 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 152, область СГОК1 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 148, область СГОК2 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 149, и область СГОК3 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 150,

д) связывающей молекулы, содержащей область СИК1 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 139, область СГОК2 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 134 и область СГОК3 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 152, область СГОК1 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 156, область СГОК2 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 157, и область СГОК3 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 158,

И) связывающей молекулы, содержащей область СИК1 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 139, область СГОК2 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 134 и область СГОК3 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 152, область СГОК1 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 148, область СИК2 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 159, и область СГОК3 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 160,

ί) связывающей молекулы, содержащей область СИК1 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 139, область СГОК2 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 151 и область СГОК3 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 161, область СИК1 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 142, область СИК2 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 143, и область СИК3 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 144,

_)) связывающей молекулы, содержащей область СИК1 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 139, область СГОК2 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 151 и область СГОК3 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 162, область СГОК1 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 163, область СГОК2 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 164, и область СГОК3 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 165,

k) связывающей молекулы, содержащей область СИК1 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 139, область СГОК2 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 134 и область СГОК3 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 152, область СГОК1 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 166, область СГОК2 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 167, и область СГОК3 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 168,

l) связывающей молекулы, содержащей область СИК1 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 139, область СГОК2 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 134 и область СГОК3 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 152, область СГОК1 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 169, область СГОК2 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 149, и область СГОК3 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 150,

т) связывающей молекулы, содержащей область СГОК1 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 139, область СГОК2 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 134 и область СГОК3 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 141, область СГОК1 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 163, область СГОК2 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 169, и область СГОК3 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность §Еф ГО N0: 170,

п) связывающей молекулы, содержащей область СИК1 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 139, область СГОК2 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 134 и область СГОК3 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 152, область СГОК1 лег- 11 027054 кой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 171, область СГОК2 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 164, и область СЭК3 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 172,

o) связывающей молекулы, содержащей область СГОК1 тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 139, область СГОК2 тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 134 и область СОКЗ тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 145, область СГОК1 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 142, область СГОК2 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 143, и область СОКЗ легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 173, и

p) связывающей молекулы, содержащей область СГОК1 тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 139, область СГОК2 тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 134 и область СГОК3 тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 152, область СГОК1 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 142, область СГОК2 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 143, и область СГОК3 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 144.

a) связывающей молекулы, содержащей область СГОК1 тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 139, область СГОК2 тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 134 и область СГОК3 тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 145, область СГОК1 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 14 6, область СГОК2 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 174, и область СГОК3 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 147,

b) связывающей молекулы, содержащей область СГОК1 тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 139, область СГОК2 тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 134 и область СГОК3 тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 152, область СГОК1 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 171, область СГОК2 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 164, и область СГОК3 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 172,

c) связывающей молекулы, содержащей область СГОК1 тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 139, область СГОК2 тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 134 и область СГОК3 тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 145, область СГОК1 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 142, область СГОК2 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 143, и область СГОК3 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 173, и

й) связывающей молекулы, содержащей область СГОК1 тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 139, область СГОК2 тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 134 и область СГОК3 тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 152, область СГОК1 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 142, область СГОК2 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 143, и область СГОК3 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 144.

В другом варианте связывающая молекула согласно изобретению выбрана из группы, состоящей из:

a) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 2,

b) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 6,

c) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 10, й) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 14, е) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 18, ί) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 22, д) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 26, й) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 30, ί) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 34,

_)) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 38,

k) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 42,

l) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 46, т) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 50,

п) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 54,

о) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 58, и

р) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 62.

В одном варианте связывающая молекула согласно изобретению выбрана из группы, состоящей из связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 10, связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 54, связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 58, и связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 62.

В следующем варианте связывающие молекулы согласно изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей 8ЕЦ ГО N0: 4, 8ЕЦ ГО N0: 8, 8ЕЦ ГО N0: 12, 8ЕЦ ГО N0: 16, 8ЕЦ ГО N0: 20, 8ЕЦ ГО N0: 24, 8ЕЦ ГО N0: 28, 8ЕЦ ГО N0: 32, 8ЕЦ ГО N0: 36, 8ЕЦ ГО N0: 40, 8ЕЦ ГО N0: 44, 8ЕЦ ГО N0: 48, 8ЕЦ ГО N0: 52, 8ЕЦ ГО N0: 56, 8ЕЦ ГО N0: 60 и 8ЕЦ ГО N0: 64.

- 12 027054

В еще одном варианте связывающая молекула выбрана из группы, состоящей из:

a) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи ЗЕЦ ГО N0: 2 и вариабельную область легкой цепи ЗЕЦ ГО N0: 4,

b) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи ЗЕЦ ГО N0: 6 и вариабельную область легкой цепи ЗЕЦ ГО N0: 8,

c) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи ЗЕЦ ГО N0: 10 и вариабельную область легкой цепи ЗЕЦ ГО N0: 12,

ά) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи ЗЕЦ ГО N0: 14 и вариабельную область легкой цепи ЗЕЦ ГО N0: 16,

е) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи ЗЕЦ ГО N0: 18 и вариабельную область легкой цепи ЗЕЦ ГО N0: 20,

1) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи ЗЕЦ ГО N0: 22 и вариабельную область легкой цепи ЗЕЦ ГО N0: 24,

д) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи ЗЕЦ ГО N0: 26 и вариабельную область легкой цепи ЗЕЦ ГО N0: 28,

И) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи ЗЕЦ ГО N0: 30 и вариабельную область легкой цепи ЗЕЦ ГО N0: 32,

ί) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи ЗЕЦ ГО N0: 34 и вариабельную область легкой цепи ЗЕЦ ГО N0: 36,

_)) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи ЗЕЦ ГО N0: 38 и вариабельную область легкой цепи ЗЕЦ ГО N0: 40,

k) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи ЗЕЦ ГО N0: 42 и вариабельную область легкой цепи ЗЕЦ ГО N0: 44,

l) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи ЗЕЦ ГО N0: 46 и вариабельную область легкой цепи ЗЕЦ ГО N0: 48,

т) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи ЗЕЦ ГО N0: 50 и вариабельную область легкой цепи ЗЕЦ ГО N0: 52,

п) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи ЗЕЦ ГО N0: 54 и вариабельную область легкой цепи ЗЕЦ ГО N0: 56,

о) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи ЗЕЦ ГО N0: 58 и вариабельную область легкой цепи ЗЕЦ ГО N0: 60, и

р) связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи ЗЕЦ ГО N0: 62 и вариабельную область легкой цепи ЗЕЦ ГО N0: 64.

В одном варианте связывающие молекулы человека согласно изобретению выбраны из группы, состоящей из связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи ЗЕЦ ГО N0: 10 и вариабельную область легкой цепи ЗЕЦ ГО N0: 12, связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи ЗЕЦ ГО N0: 54 и вариабельную область легкой цепи ЗЕЦ ГО N0: 56, связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи ЗЕЦ ГО N0: 58 и вариабельную область легкой цепи ЗЕЦ ГО N0: 60, и связывающей молекулы, содержащей вариабельную область тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 62 и вариабельную область легкой цепи ЗЕЦ ГО N0: 64.

В предпочтительном варианте связывающие молекулы согласно изобретению применимы в качестве лекарственного средства и предпочтительно применимы для диагностики, терапевтического и/или профилактического лечения инфекции гриппа, вызванной вирусами гриппа А и/или В. Предпочтительно вирус гриппа, который вызывает инфекцию гриппа, которую можно лечить, используя связывающие молекулы согласно настоящему изобретению, представляет собой вирус гриппа А филогенетической группы 1 и/или, 2 и/или вирус гриппа В. Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одну связывающую молекулу согласно изобретению и фармацевтически приемлемый эксципиент.

В еще одном варианте изобретение относится к применению связывающей молекулы согласно изобретению для получения лекарственного средства для диагностики, профилактики и/или лечения инфекции вирусом гриппа. Такие инфекции могут возникать в небольших популяциях, но также могут распространяться по миру в виде сезонных эпидемий или, еще хуже, в виде глобальных пандемий, когда риску подвергаются миллионы людей. Изобретение относится к связывающим молекулам, которые могут нейтрализовать инфекцию штаммами гриппа, которые вызывают сезонные эпидемии, а также возможные пандемии. Важно, что теперь могут быть предусмотрены профилактика и лечение с использованием связывающих молекул согласно настоящему изобретению, направленные на различные подтипы гриппа, так как было показано, что связывающие молекулы согласно настоящему изобретению способны перекрестно нейтрализовать различные подтипы вирусов гриппа как филогенетической группы 1, включающей в себя подтипы Н1, Н2, Н5, Н6, Н8, Н9 и Н1, так и филогенетической группы 2, включающей в себя подтипы Н3, Н4, Н7 и Н10, а также подтипы вирусов гриппа В.

Другой аспект изобретения относится к функциональным вариантам связывающих молекул, кото- 13 027054 рые определены в настоящем описании. Молекулы считают функциональными вариантами связывающей молекулы согласно изобретению, если такие варианты способны конкурировать за специфичное связывание с вирусом гриппа или его фрагментом с исходными или эталонными связывающими молекулами. Другими словами, молекулы считают функциональными вариантами связывающей молекулы согласно изобретению, когда функциональные варианты все еще способны связываться с тем же самым или перекрывающимся эпитопом вируса гриппа или его фрагмента. В случае указанного применения термины исходные и эталонные будут использованы как синонимы, означающие, что информация об эталонной или исходной молекуле или сама физическая молекула может быть основной для получения вариантов. Функциональные варианты включают без ограничения производные, которые по существу сходны по последовательности первичной структуры, включая варианты, которые имеют модификации в Рс-рецепторе или других областях, вовлеченных в эффекторные функции, и/или которые содержат, например, получаемые ίη νίίτο или ίη νίνο модификации, химические и/или биохимические, которые не встречаются в исходной связывающей молекуле. Такие модификации включают, наряду с прочим, ацетилирование, ацилирование, ковалентное связывание нуклеотида или производного нуклеотида, ковалентное связывание липида или производного липида, поперечные сшивки, образование дисульфидных связей, гликозилирование, гидроксилирование, метилирование, окисление, пегилирование, протеолитический процессинг, фосфорилирование и тому подобное. Альтернативно функциональные варианты могут представлять собой связывающие молекулы, которые определены в настоящем изобретении, содержащие аминокислотную последовательность, имеющую замены, инсерции, делеции одной или нескольких аминокислот или их сочетания, по сравнению с аминокислотными последовательностями исходных связывающих молекул. Кроме того, функциональные варианты могут содержать укорочения аминокислотной последовательности на любом из концов или на обоих амино- и карбоксильном концах. Функциональные варианты согласно изобретению могут обладать одинаковыми или разными, либо более высокими, либо более низкими аффинностями связывания по сравнению с исходной связывающей молекулой, но все еще быть способными связываться с вирусом гриппа или его фрагментом. Например, функциональные варианты согласно изобретению могут иметь повышенные или пониженные аффинности связывания вируса гриппа или его фрагмента по сравнению с исходными связывающими молекулами. Предпочтительно, аминокислотные последовательности вариабельных областей, включая без ограничения каркасные области, гипервариабельные области, в частности, области СИКЗ, модифицированы. В общем, вариабельные области легкой цепи и тяжелой цепи содержат три гипервариабельных области, содержащих три СЭК. и более консервативные области, так называемые каркасные области (РК). Гипервариабельные области содержат аминокислотные остатки из СИК и аминокислотные остатки из гипервариабельных петель. Подразумевается, что функциональные варианты, входящие в объем настоящего изобретения, имеют по меньшей мере примерно от 50 до примерно 99%, предпочтительно по меньшей мере примерно от 60 до примерно 99%, более предпочтительно по меньшей мере примерно от 70 до примерно 99%, еще более предпочтительно по меньшей мере примерно от 80 до примерно 99%, наиболее предпочтительно по меньшей мере примерно от 90 до примерно 99%, в частности, по меньшей мере примерно от 95 до примерно 99%, и в частности по меньшей мере примерно от 97 до примерно 99% идентичность и/или гомологию аминокислотных последовательностей с исходными связывающими молекулами, которые определены в настоящем описании. Можно использовать компьютерные алгоритмы, такие как, наряду с другими, Оар или Ββδίίϊί, известные специалисту в данной области, для оптимального выравнивания сравниваемых аминокислотных последовательностей, и определения сходных или идентичных аминокислотных остатков. Функциональные варианты могут быть получены в результате изменения исходных связывающих молекул или их частей обычными способами молекулярной биологии, известными в данной области, включая без ограничения склонную к ошибкам ПЦР, опосредованный олигонуклеотидами мутагенез, сайт-специфичный мутагенез и перетасовку тяжелых и/или легких цепей. В одном варианте функциональные варианты согласно изобретению обладают нейтрализующей активностью, направленной против вирусов гриппа А группы 1 и группы 2 и/или вирусы гриппа В. Нейтрализующая активность может быть либо идентичной, либо более высокой, либо более низкой по сравнению с активностью исходных связывающих молекул. Далее при использовании термина связывающая молекула (человека), такой термин также охватывает функциональные варианты связывающей молекулы (человека). Анализы для проверки того, обладает ли вариант связывающей молекулы нейтрализующей активностью, хорошо известны в данной области (см. АНО Мапиа1 οη Ашша1 1иПиси/а Όίαβηοδίδ апб §игνοίΠαΜβ, Οеηеνа: Αοτ16 НсабН От^ашка^^ 2005 νβτδίοη 2002.5).

В еще одном аспекте изобретение относится к иммуноконъюгатам, т.е., молекулам, содержащим по меньшей мере одну связывающую молекулу, которая определена в настоящем описании, и дополнительно содержащим по меньшей мере одну метку, такую как, наряду с другими, регистрируемый компонент/средство. Также в настоящем изобретении предусмотрены смеси иммуноконъюгатов согласно изобретению или смеси по меньшей мере одного иммуноконъюгата согласно изобретению и другой молекулы, такой как терапевтическое средство или другая связывающая молекула или иммуноконъюгат. В следующем варианте иммуноконъюгаты согласно изобретению могут содержать более одной метки. Такие метки могут быть одинаковыми или могут отличаться друг от друга и могут быть связа- 14 027054 ны/конъюгированы нековалентно со связывающими молекулами. Метка(метки) также может быть связана/конъюгирована непосредственно со связывающими молекулами человека в результате ковалентного связывания. Альтернативно метка (метки) могут быть связаны/конъюгированы со связывающими молекулами с помощью одного или нескольких связывающих соединений. Способы конъюгирования меток со связывающими молекулами хорошо известны специалисту в данной области.

Метками иммуноконъюгатов согласно настоящему изобретению могут быть терапевтические средства, но они также могут представлять собой регистрируемые компоненты/средства. Метки, подходящие для терапии и/или профилактики, могут представлять собой токсины или их функциональные части, антибиотики, ферменты, другие связывающие молекулы, которые усиливают фагоцитоз или иммунную стимуляцию. Иммуноконъюгаты, содержащие регистрируемое средство, могут быть использованы для диагностики, например, чтобы оценить, был ли субъект инфицирован вирусом гриппа, или проследить развитие или прогрессирование инфекции вирусом гриппа, в виде части способа клинического тестирования, например, чтобы определить эффективность данной схемы лечения. Однако их также можно использовать для других целей регистрации и/или аналитических и/или диагностических целей. Регистрируемые остатки/средства включают без ограничения ферменты, простетические группы, флуоресцирующие вещества, люминесцентные вещества, биолюминесцентные вещества, радиоактивные вещества, ионы позитронно-активные металлы и ионы нерадиоактивных парамагитных металлов. Метки, используемые для мечения связывающих молекул с целью детекции и/или с аналитической и/или диагностическими целями, зависят от конкретного способа специфичной детекции/анализа/диагностики и/или используемых способов, таких как, наряду с другими, иммуногистохимическое окрашивание образцов (тканей), проточно-цитометрическая регистрация, сканирующая лазерная цитометрическая регистрация, флуоресцентные иммуноанализы, твердофазные иммуноферментные анализы (ΕΟδΑ), радиоиммуоанализы (РИА), биоанализы (например, анализы фагоцитоза), Вестерн-блоттинг и т.д. Подходящие метки для способов детекции/анализа/диагностики и/или способов, известных в данной области, хорошо известны специалисту в данной области.

Кроме того, связывающие молекулы человека или иммуноконъюгаты согласно изобретению также могут быть связаны с твердыми подложками, которые, в частности, применимы для иммуноанализов ίη νίίΐΌ или очистки вирусов гриппа или их фрагментов. Такие твердые подложки могут быть пористыми или непористыми, плоскими или неплоскими. Связывающие молекулы согласно настоящему изобретению можно сливать с маркерными последовательностями, такими как пептид, для облегчения очистки. Примеры включают без ограничения гексагистидиновую метку, гемагглютининовую (НА) метку, тусметку или Лад-метку. Альтернативно антитело можно конъюгировать со вторым антителом с образованием гетероконъюгата антитела. В другом аспекте связывающие молекулы согласно изобретению могут быть конъюгированы/связаны с одним или несколькими антигенами. Предпочтительно такие антигены представляют собой антигены, которые распознаются иммунной системой субъекта, которому вводят конъюгат связывающая молекула-антиген. Антигены могут быть идентичными, но также могут отличаться друг от друга. Способы конъюгации для связывания антигенов и связывающих молекул хорошо известны в данной области и включают, без ограничения, использование поперечно-сшивающих агентов. Связывающие молекулы согласно изобретению будут связываться с вирусом гриппа НА, и антигены, связанные со связывающими молекулами, будут инициировать мощную Т-клеточную атаку на конъюгат, которая в конце концов приведет к разрушению вируса гриппа.

Наряду с получением иммуноконъюгатов химическим способом в результате конъюгации, прямо или опосредованно, например, через линкер, иммуноконъюгаты могут быть получены в виде слитых белков, содержащих связывающие молекулы согласно изобретению и подходящую метку. Слитые белки могут быть получены способами, известными в данной области, такими как, например, основанные на рекомбинации способы посредством конструирования молекул нуклеиновых кислот, содержащих нуклеотидные последовательности, кодирующие связывающие молекулы, в рамке с нуклеотидными последовательностями, кодирующими подходящую метку (метки), и затем экспрессии молекул нуклеиновых кислот.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей, по меньшей мере, связывающую молекулу, функциональный вариант или иммуноконъюгат согласно изобретению. Такие молекулы нуклеиновых кислот можно применять в качестве промежуточных соединений в целях клонирования, например, в процессе созревания аффинности, как описано выше. В предпочтительном варианте молекулы нуклеиновых кислот являются изолированными или очищенными.

Специалисту будет понятно, что также подразумевается, что функциональные варианты таких молекул нуклеиновых кислот составляют часть настоящего изобретения. Функциональные варианты представляют собой последовательности нуклеиновых кислот, которые могут быть непосредственно транслированы с использованием стандартного генетического кода с получением аминокислотной последовательности, идентичной аминокислотной последовательности, транслируемой с исходных молекул нуклеиновых кислот.

Предпочтительно молекулы нуклеиновых кислот кодируют связывающие молекулы, содержащие

- 15 027054

СИК-области, которые описаны выше. В следующем варианте молекулы нуклеиновых кислот кодируют связывающие молекулы, содержащие две, три, четыре, пять или даже все шесть СИК-областей связывающих молекул согласно изобретению.

В другом варианте молекулы нуклеиновых кислот кодируют связывающие молекулы, содержащие тяжелую цепь, содержащую вариабельные последовательности тяжелой цепи, которые описаны выше. В другом варианте молекулы нуклеиновых кислот кодируют связывающие молекулы, содержащие легкую цепь, содержащую вариабельные последовательности легкой цепи, которые описаны выше. Нуклеотидные последовательности и аминокислотные последовательности вариабельных последовательностей тяжелой и легкой цепей связывающих молекул согласно изобретению приведены ниже.

В другом аспекте изобретение относится к векторам, т.е., конструкциям нуклеиновых кислот, содержащим одну или более молекул нуклеиновых кислот согласно настоящему изобретению. Векторы являются производными плазмид, таких как, наряду с другими, плазмиды Р, К1, КР1, Со1, рВК322, ТОЬ, Τί и т.д.; космид; фагов, таких как фаг лямбда, лямбдовидный фаг, М13, Ми, Р1, Р22, Οβ. Т-сусп. Т-ойй, Т2, Т4, Т7 и т.д.; вирусов растений. Векторы можно использовать для клонирования и/или для экспрессии связывающих молекул согласно изобретению и также могут быть использованы в целях генной терапии. Векторы, содержащие одну или более молекул нуклеиновых кислот согласно изобретению, оперативно связанных с одной или несколькими регулирующими экспрессию молекулами нуклеиновых кислот, также входят в объем настоящего изобретения. Выбор вектора зависит от способов рекомбинации и используемого хозяина. Введение векторов в клетки-хозяева можно осуществлять, наряду с другими способами, используя трансфекцию с фосфатом кальция, вирусную инфекцию, опосредованную ΌΕΆΕдекстраном трансфекцию, опосредованную липофектамином трансфекцию или электропорацию. Векторы могут быть автономно реплицирующимися или могут реплицироваться вместе с хромосомой, в которую они были интегрированы. Предпочтительно векторы содержат один или более селектируемых маркеров. Выбор маркеров может зависеть от выбранной клетки-хозяина, хотя такой выбор не является критичным для изобретения, что хорошо известно для специалиста в данной области. Маркеры включают без ограничения гены устойчивости к канамицину, неомицину, пуромицину, гигромицину, зеоцину, ген тимидинкиназы вируса простого герпеса (Н8У-ТК), ген дигидрофолатредуктазы мыши (йЬГг). Векторы, содержащие одну или более молекул нуклеиновых кислот, кодирующих связывающие молекулы человека, которые описаны выше, оперативно связанные с одной или несколькими молекулами нуклеиновых кислот, кодирующими белки или пептиды, которые можно использовать для выделения связывающих молекул человека, также входят в объем изобретения. Такие белки или пептиды включают без ограничения глутатион-8-трансферазу, связывающий мальтозу белок, связывающий металлы полигистидин, зеленый флуоресцирующий белок, люциферазу и бета-галактозидазу.

Хозяева, содержащие одну или более копий векторов, указанных выше, являются дополнительным объектом настоящего изобретения. Предпочтительно хозяева представляют собой клетки-хозяева. Клетки-хозяева включают без ограничения клетки млекопитающих, растений, насекомых, грибов или клетки бактериального происхождения. Бактериальные клетки включают без ограничения клетки грамположительных бактерий или грамотрицательных бактерий, таких как несколько видов рода ЕзсНепсЫа, таких как Е.соП, и Рзеийотопаз. В группе клеток грибов предпочтительно используют дрожжевые клетки. Экспрессия в дрожжах может быть достигнута с использованием таких дрожжевых штаммов, как наряду с прочими, РюЫа разЮпз, §ассйаготусез сегеу131ае и Напзепи1а ро1утогрПа. Кроме того, в качестве клетокхозяев можно использовать клетки насекомых, такие как клетки ЭгозорНПа и 8Г9. Кроме того, клеткихозяева могут представлять собой растительные клетки, такие как, наряду с прочими, клетки растений, дающих определенную продукцию, таких как лесные растения, или клетки растений, дающих продукты и сырье, таких как злаковые растения или лекарственные растения, или клетки декоративных растений или клетки цветущих луковичных растений. Трансформированные (трансгенные) растения или растительные клетки получают известными способами, например, используя опосредованный ЛдгоЬасЮгшт перенос генов, трансформацию дисков листа, трансформацию протопластов посредством опосредованного полиэтиленгликолем переноса ДНК, электропорацию, обработку ультразвуком, микроинъекцию или перенос целых генов. Кроме того, подходящей системой экспрессии может быть бакуловирусная система. В настоящем изобретении предпочтительны системы экспрессии с использованием клеток млекопитающих, таких как клетки яичника китайского хомячка (СНО), клетки СО8, клетки ВНК, клетки N80 или клетки меланомы Боуэса. Клетки млекопитающих дают экспрессированные белки с посттрансляционными модификациями, которые больше всего похожи на природные молекулы, происходящие из организмов млекопитающих. Так как настоящее изобретение имеет отношение к молекулам, которые могут быть введены человеку, особенно предпочтительной может быть полностью человеческая система экспрессии. Таким образом, еще более предпочтительно клетки-хозяева представляют собой клетки человека. Примерами клеток человека, наряду с прочими, являются клетки НеЬа, 911, АТ1080, А549, 293 и НЕК293Т. В предпочтительных вариантах клетки-продуценты человека содержат, по меньшей мере, функциональную часть последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей область Е1 аденовируса, в экспрессируемой форме. В еще более предпочтительных вариантах указанные клетки-хозяева получены из сетчатки человека и иммортализованы нуклеиновыми кислотами, содержащими последовательно- 16 027054 сти Е1 аденовируса, такие как клетки 911 или клеточная линия, депонированная в европейской коллекции культур клеток (ЕСАСС), САМИ, ЗаЕкЬигу, АШкйге ЗР4 ОЮ, Сгеа! ВЖаит 29 февраля 1996 с номером 96022940 и продается под торговой маркой РЕИ.С6® (РЕИ.С6 является зарегистрированной торговой маркой СгисеЕ Но11апЕ В.У.). В целях настоящей заявки термин клетки РЕИ.С6 относится к клеткам, депонированным под номером 96022940 или предшественникам, пассажам до них или после, а также потомкам от предшественников депонированных клеток, а также производным любых указанных выше клеток. Продуцирование рекомбинантных белков в клетках-хозяевах может быть осуществлено согласно способам, хорошо известным в данной области. Применение клеток, продаваемых под торговой маркой РЕИ.С6®, в качестве платформы для получения представляющих интерес белков, описано в АО 00/63403, описание которой включено в настоящую публикацию в виде ссылки в полном объеме.

В еще одном варианте связывающие молекулы согласно настоящему изобретению также могут быть получены в трансгенных млекопитающих, отличных от человека, таких как, наряду с прочими, кролики, козы или коровы, и секретированы, например, в их молоко.

В еще одном альтернативном варианте связывающие молекулы согласно настоящему изобретению могут быть образованы в организме трансгенных млекопитающих, отличных от человека, таких как, например, трансгенные мыши или кролики, которые экспрессируют гены иммуноглобулинов человека. Предпочтительно трансгенные млекопитающие, отличные от человека, имеют геном, содержащий трансген тяжелой цепи человека и трансген легкой цепи человека, кодирующие полные или часть связывающих молекул человека, которые описаны выше. Трансгенные млекопитающие, отличные от человека, могут быть иммунизированы с использованием очищенного или обогащенного препарата вируса гриппа или его фрагмента. Протоколы иммунизации млекопитающих, отличных от человека, хорошо разработаны в данной области. См. публикации А ЬаЬога!огу Мапиа1, ЕЕЕеЕ Ьу: Е. Наг1оте, Ό. Ьапе (1998), Со1Е 8ргшд НагЬог ЬаЬога!огу, Со1Е §ргшд НагЬог, №ν Уогк апЕ Сиггей РгоЮсоП ίη 1ттипо1оду, ЕЕЕеЕ Ьу: !Е. СоЕдап, А.М. КгшкЬеек, И.Н. МагдиЕек, Е.М. ЗЕеуасЕ, А. 81гоЬег (2001), 1о1т АЕеу & Зопк 1пс., Уогк, описания которых включены в настоящую публикацию в виде ссылки. Протоколы иммунизации часто включают множественные иммунизации либо с адъювантами, либо без адъювантов, таких как полный адъювант Фрейнда и неполный адъювант Фрейнда, но также могут включать иммунизации голой ДНК. В другом варианте связывающие молекулы человека продуцируются В-клетками, плазматическими клетками и/или клетками памяти, полученными от трансгенных животных. В еще одном варианте связывающие молекулы человека продуцируются гибридомами, которые получают слиянием В-клеток, полученных от описанных выше трансгенных млекопитающих, отличных от человека, с иммортализованными клетками. В-клетки, плазматические клетки и гибридомы, которые могут быть получены из описанных выше трансгенных млекопитающих, отличных от человека, и связывающие молекулы человека, которые могут быть получены из описанных выше трансгенных млекопитающих, отличных от человека, В-клеток, плазматических клеток и/или клеток памяти и гибридом, также являются частью настоящего изобретения.

В еще одном аспекте изобретение относится к композициям, содержащим, по меньшей мере, связывающую молекулу, предпочтительно моноклональное антитело человека согласно изобретению, по меньшей мере, ее функциональный вариант, по меньшей мере, иммуноконъюгат согласно изобретению и/или их сочетание. Кроме того, композиции могут содержать, кроме всего прочего, стабилизирующие молекулы, такие как альбумин или полиэтиленгликоль, или соли. Предпочтительно используемыми солями являются соли, которые сохраняют требуемую биологическую активность связывающих молекул и не оказывают никаких нежелательных токсикологических эффектов. При необходимости связывающие молекулы человека согласно изобретению покрыты материалом или нанесены в виде покрытия на материал для их защиты от действия кислот или других природных или неприродных условий, который могут инактивировать связывающие молекулы.

В следующем аспекте изобретение относится к композициям, содержащим, по меньшей мере, молекулу нуклеиновой кислоты, которая определена в настоящем изобретении. Композиции могут содержать водные растворы, такие как водные растворы, содержащие соли (например, №С1 или соли, которые описаны выше), детергенты (например, 8Ό8) и/или другие подходящие компоненты.

Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим, по меньшей мере, связывающую молекулу, такую как моноклональное антитело человека согласно изобретению (или ее функциональный фрагмент или вариант), по меньшей мере, иммуноконъюгат согласно изобретению, по меньшей мере, композицию согласно изобретению или их сочетание. Фармацевтическая композиция согласно изобретению дополнительно содержит по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент. Фармацевтически приемлемые эксципиенты хорошо известны специалисту.

Фармацевтическая композиция согласно изобретению может дополнительно содержать по меньшей мере одно другое терапевтическое средство. Подходящие средства также хорошо известны специалисту в данной области.

В предпочтительном варианте фармацевтическая композиция согласно изобретению содержит по

- 17 027054 меньшей мере одну дополнительную связывающую молекулу, т.е. фармацевтическая композиция может представлять собой смесь связывающих молекул. Фармацевтическая композиция может содержать по меньшей мере две связывающих молекулы согласно изобретению или по меньшей мере одну связывающую молекулу согласно изобретению и по меньшей мере одну другую связывающую и/или нейтрализующую вирус гриппа молекулу, такую как другое антитело, направленное против белка НА или против других антигенных структур, присутствующих на вирусах гриппа, таких как М2. В другом варианте дополнительная связывающая молекула может быть приготовлена для одновременного, раздельного или последовательного введения.

В одном варианте фармацевтические композиции могут содержать две или больше связывающих молекул, которые обладают нейтрализующей активностью, направленной против вирусов гриппа А и/или вирусов гриппа В. В одном варианте связывающие молекулы проявляют синергетическую нейтрализующую активность в случае их применения в сочетании. В используемом в настоящем описании смысле термин синергетическая означает, что суммарное действие связывающих молекул при использовании в сочетании больше, чем их аддитивные эффекты при использовании по отдельности. Синергетические действующие связывающие молекулы могут связываться с разными структурами на одном и том же или разных фрагментах вируса гриппа. Способ расчета синергии основан на индексе аддитивности. Понятие индекса аддитивности (С1) описано Скои и Та1а1ау (1984). Композиции могут, например, содержать одну связывающую молекулу, обладающую нейтрализующей активностью, и одну не обладающую нейтрализующей активностью связывающую молекулу. Не нейтрализующие и нейтрализующие связывающие молекулы также могут действовать синергетически при нейтрализации вируса гриппа.

В одном варианте фармацевтическая композиция может содержать по меньшей мере одну связывающую молекулу согласно изобретению и по меньшей мере одну дополнительную нейтрализующую вирус гриппа связывающую молекулу. Связывающие молекулы в фармацевтической композиции предпочтительно способны взаимодействовать с вирусами гриппа разных подтипов. Связывающие молекулы должны обладать высокой аффинностью и должны иметь широкую специфичность. Предпочтительно обе связывающие молекулы являются перекрестно нейтрализующими молекулами, так как каждая из них нейтрализует вирусы гриппа разных подтипов. Кроме того, предпочтительно они нейтрализуют максимальное возможное количество штаммов каждого из разных подтипов вирусов гриппа.

Фармацевтическая композиция согласно изобретению может дополнительно содержать по меньшей мере одно другое терапевтическое, профилактическое и/или диагностическое средство. Предпочтительно фармацевтическая композиция содержит по меньшей мере одно другое профилактическое и/или терапевтическое средство. Предпочтительно указанные терапевтические и/или профилактические средства представляют собой средства, позволяющие осуществлять профилактику и/или лечение инфекции, вызванной вирусом гриппа, и/или состояния, возникающего в результате такой инфекции. Терапевтические и/или профилактические средства включают без ограничения противовирусные средства. Такими средствами могут быть связывающие молекулы, малые молекулы, органические или неорганические соединения, ферменты, полинуклеотидные последовательности, противовирусные пептиды и т.д. Другими средствами, которые в настоящее время используют для лечения пациентов, инфицированных вирусами гриппа, являются ингибиторы М2 (например, амантидин, римантадин) и/или ингибиторы нейраминидазы (например, занамивир, осельтамивир). Такие средства могут быть использованы в сочетании со связывающими молекулами согласно изобретению. Термин в сочетании в настоящем описании означает одновременно, в виде отдельных препаратов или в виде одного объединенного препарата, или в соответствии со схемой последовательного введения в виде отдельных препаратов в любом порядке. Средства, позволяющие осуществлять профилактику и/или лечение инфекции вирусом гриппа и/или состояния, возникающего в результате такой инфекции, которые в настоящее время проходят экспериментальную фазу, также могут быть использованы в качестве других терапевтических и/или профилактических средств, применимых в настоящем изобретении.

Связывающие молекулы или фармацевтические композиции согласно изобретению можно подвергать тестированию в подходящих системах на животных моделях перед применением на человеке. Такие системы на основе животных моделей включают без ограничения мышь, хорька и обезьяну.

Обычно фармацевтические композиции должны быть стерильными и стабильными в условиях производства и хранения. Связывающие молекулы, иммуноконъюгаты, молекулы нуклеиновых кислот или композиции согласно настоящему изобретению могут быть в форме порошка для перерастворения в подходящем фармацевтически приемлемом эксципиенте перед или во время доставки. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных инъекционных растворов предпочтительными способами приготовления являются вакуумная сушка и сушка вымораживанием (лиофилизация), которые дают порошок активного ингредиента плюс любой требуемый дополнительный ингредиент из его предварительно стерильно профильтрованного раствора.

Альтернативно, связывающие молекулы, иммуноконъюгаты, молекулы нуклеиновых кислот или композиции согласно настоящему изобретению могут быть в растворе, и подходящий фармацевтически приемлемый эксципиент может быть добавлен и/или смешан перед или во время доставки, чтобы получить инъекционную стандартную лекарственную форму. Предпочтительно фармацевтически приемле- 18 027054 мый эксципиент, используемый в настоящем изобретении, является подходящим для высокой концентрации лекарственного средства, может поддерживать правильную текучесть и при необходимости может замедлять всасывание.

На выбор оптимального пути введения фармацевтических композиций будут влиять несколько факторов, включая физико-химические свойства активных молекул, входящих в композиции, серьезность клинической ситуации и взаимосвязь концентраций активных молекул в плазме с требуемым терапевтическим эффектом. Например, при необходимости связывающие молекулы согласно изобретению могут быть приготовлены с носителями, которые могут защищать их от быстрого высвобождения, например, в виде препарата контролируемого высвобождения, включая имплантаты, трансдермальные пластыри и микроинкапсулированные системы доставки. Кроме того, могут быть использованы биологически разрушаемые, биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, сложные полиортоэфиры и полимолочная кислота. Кроме того, может быть необходимо покрывать связывающие молекулы или вводить связывающие молекулы совместно с материалом или соединением, которое предотвращает инактивацию связывающих молекул человека. Например, связывающие молекулы можно вводить субъекту в подходящем носителе, например липосомах или разбавителе.

Пути введения можно разделить на две основных категории, пероральное и парентеральное введение. Предпочтительным путем введения является внутривенное введение или ингаляция.

Пероральные дозированные формы могут быть приготовлены, наряду с прочим, в виде таблеток, лепешек, пастилок, водных или масляных суспензий, диспергируемых порошков или гранул, эмульсий, твердых капсул, мягких желатиновых капсул, сиропов или эликсиров, пилюль, драже, жидкостей, гелей или взвеси. Такие препараты могут содержать фармацевтические эксципиенты, включая без ограничения инертные разбавители, гранулирующие и дезинтегрирующие средства, связывающие средства, скользящие вещества, консерванты, красители, корригенты или подсластители, растительные или минеральные масла, увлажнители и загустители.

Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению также могут быть приготовлены для парентерального введения. Препараты для парентерального введения могут быть наряду с прочим в форме водных или неводных изотонических стерильных нетоксических инъекционных или инфузионных растворов или суспензий. Растворы или суспензии могут содержать средства, которые являются нетоксическими для реципиентов в используемых дозах и концентрациях, такие как 1,3-бутандиол, раствор Рингера, раствор Хенкса, изотонический раствор хлорида натрия, масла, жирные кислоты, местные анестетики, консерванты, буферы, средства, повышающие вязкость или растворимость, растворимые в воде антиоксиданты, растворимые в маслах антиоксиданты и средства, хелатирующие металлы.

В следующем аспекте связывающие молекулы, такие как моноклональные антитела человека (их функциональные фрагменты и варианты), иммуноконъюгаты, композиции или фармацевтические композиции согласно изобретению, можно применять в качестве лекарственного средства. Таким образом, способ диагностики, лечения и/или профилактики инфекции вирусом гриппа с применением связывающих молекул, иммуноконъюгатов, композиций или фармацевтических композиций согласно изобретению является другой частью настоящего изобретения. Указанные выше молекулы, наряду с прочим, можно применять для диагностики, профилактики, лечения или сочетания указанного в случае инфекции вирусом гриппа, вызванной вирусами гриппа, содержащими НА подтипов Н1, Н2, Н3, Н4, Н5, Н6, Н7, Н8, Н9, Н10 и/или Н11. В одном варианте указанные выше молекулы также можно применять для диагностики, профилактики, лечения или сочетания указанного в случае инфекции вирусом гриппа, вызванной вирусом гриппа В. Такие молекулы подходят для лечения еще не повергавшихся лечению пациентов, страдающих от инфекции вирусом гриппа, и пациентов, которые подвергались или подвергаются лечению инфекции вирусом гриппа.

Указанные выше молекулы или композиции можно применять вместе с другими молекулами, применимыми для диагностики, профилактики и/или лечения. Их можно применять ίη νίίτο, ех νίνο или ίη νίνο. Например, связывающие молекулы, такие как моноклональные антитела человека (или их функциональные варианты), иммуноконъюгаты, композиции или фармацевтические композиции согласно изобретению можно вводить совместно с вакциной против вируса гриппа (если таковая имеется). Альтернативно, вакцину также можно вводить до или после введения молекул согласно изобретению. Вместо вакцины также можно применять противовирусные средства вместе со связывающими молекулами согласно настоящему изобретению. Подходящие противовирусные средства указаны выше.

Молекулы обычно готовят в композициях и фармацевтических композициях согласно изобретению в терапевтически или диагностически эффективном количестве. Альтернативно их можно приготовить и ввести по отдельности. Например, другие молекулы, такие как противовирусные средства, можно применять системно, тогда как связывающие молекулы согласно изобретению можно применять внутривенно.

Лечение может быть направлено на группу пациентов, которые чувствительны к инфекции вирусом гриппа. Такие группы пациентов включают, например, но без ограничения, пожилых людей (например, в возрасте >50 лет, в возрасте >60 лет и предпочтительно в возрасте >65 лет), детей (например, в возрасте

- 19 027054 <5 лет, в возрасте <1 года), госпитализированных пациентов и уже инфицированных пациентов, которых лечили противовирусным соединением, но у которых наблюдали неадекватный ответ на противовирусную терапию.

Схемы дозирования можно корректировать, чтобы получить оптимальный требуемый ответ (например, терапевтический ответ). Подходящая схема дозирования может включать, например, 0,01-100 мг/кг массы тела, предпочтительно 0,1-50 мг/кг массы тела, предпочтительно 0,01-15 мг/кг массы тела. Кроме того, можно вводить, например, один болюс, можно вводить несколько дробных доз в течение определенного периода времени, или дозу можно пропорционально уменьшить или увеличить, как того требует терапевтическая ситуация. Молекулы и композиции согласно настоящему изобретению предпочтительно являются стерильными. Способы стерилизации таких молекул и композиций хорошо известны в данной области. Другие молекулы, применимые для диагностики, профилактики и/или лечения, можно вводить, используя схемы дозирования, сходные со схемами, предлагаемыми для связывающих молекул согласно изобретению. Если другие молекулы вводят отдельно, то их можно вводить пациенту до (например, за 2, 5, 10, 15, 30, 45, 60 мин, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 ч, 2 дня, 3 дня, 4, 5, 7 дней, 2, 4 или 6 недель), одновременно или после (например, спустя 2, 5, 10, 15, 30, 45, 60 мин, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 24 ч, 2, 3, 4, 5, 7 дней, 2, 4 или 6 недель) введения одной или нескольких связывающих молекул человека или фармацевтических композиций согласно изобретению. Точную схему дозирования обычно выбирают в ходе клинических испытаний на людях.

Связывающие молекулы человека и фармацевтические композиции, содержащие связывающие молекулы человека, особенно применимы и часто предпочтительны при введении людям в виде терапевтических средств ίη νίνο, так как иммунный ответ реципиента на вводимое антитело чаще всего будет значительно меньше, чем иммунный ответ, обусловленный введением моноклональной мышиной, химерной или гуманизированной связывающей молекулы.

В другом аспекте изобретение относится к применению связывающих молекул, таких как нейтрализующие моноклональные антитела человека (их функциональные фрагменты и варианты), иммуноконъюгаты, молекулы нуклеиновых кислот, композиции или фармацевтические композиции согласно изобретению, для получения лекарственного средства для диагностики, профилактики, лечения или сочетания указанного в случае инфекции вирусом гриппа, в частности, инфекции вирусом гриппа, вызванной вирусами гриппа, содержащими НА подтипов Н1, Н2, Н3, Н4, Н5, Н6, Н7, Н8, Н9, Н10, и/или Н11 и/или вирусами гриппа В.

Наряду с указанным наборы, содержащие, по меньшей мере, связывающую молекулу, такую как нейтрализующее моноклональное антитело человека (его функциональные фрагменты и варианты), по меньшей мере, иммуноконъюгат, по меньшей мере, молекулу нуклеиновой кислоты, по меньшей мере, композицию, по меньшей мере, фармацевтическую композицию, по меньшей мере, вектор, по меньшей мере, хозяина согласно изобретению или их сочетание, также составляют часть настоящего изобретения. Необязательно описанные выше компоненты наборов согласно изобретению упакованы в подходящие емкости и снабжены этикетками с указаниями для диагностики, профилактики и/или лечения указанных состояний. Указанные выше компоненты могут храниться в емкостях, содержащих однократную дозу или множество доз в виде водного, предпочтительно стерильного раствора или в виде лиофилизированного, предпочтительно стерильного препарата для перерастворения. Емкости могут быть сделаны из различных материалов, таких как стекло или пластик и иметь стерильный доступ (например, емкость может представлять собой мешок или флакон с внутривенным раствором, имеющий пробку, прокалываемую иглой для подкожных инъекций). Набор может еще включать в себя дополнительные емкости, содержащие фармацевтически приемлемый буфер. Набор может дополнительно включать в себя другие материалы, требуемые для коммерческой цели и с точки зрения пользователя, включая другие буферы, разбавители, фильтры, иглы, шприцы, культуральную среду для одного или нескольких подходящих хозяев и, возможно, по меньшей мере, еще одно другое терапевтическое, профилактическое или диагностическое средство. К набору могут прилагаться инструкции, обычно включаемые в коммерческие упаковки терапевтических, профилактических или диагностических продуктов, которые содержат информацию, например, о показаниях, применении, дозе, производстве, введении, противопоказаниях и/или предупреждениях, касающихся применения таких терапевтических, профилактических или диагностических продуктов.

Связывающие молекулы согласно настоящему изобретению также можно с успехом применять в качестве диагностического средства в способе ίη νίίτο для выявления вируса гриппа. Таким образом, изобретение дополнительно относится к способу выявления подтипов вируса гриппа филогенетической группы 1 или группы 2 или вируса гриппа В в образце, при этом способ включает в себя стадии (а) осуществления контакта образца с диагностически эффективным количеством связывающей молекулы (ее функциональных фрагментов и вариантов) или иммуноконъюгата согласно изобретению и (Ь) определения того, связывается ли связывающая молекула или иммуноконъюгат специфично с молекулой образца. Образец может представлять собой биологический образец, включая без ограничения образец крови, сыворотки, кала, слюны, аспиратов из носоглотки, бронхиального лаважа, мочи, ткани или другого биологического материала, полученного от (потенциально) инфицированных субъектов, или небиологиче- 20 027054 ский образец, такой как вода, напиток и т.д. (Потенциально) инфицированными субъектами могут быть люди, а также животные, которые, как подозревают, являются носителями вируса гриппа, которые могут быть подвергнуты тестированию в отношении присутствия вируса с применением связывающих молекул человека или иммуноконъюгатов согласно изобретению. Сначала образец может быть подвергнут обработке, чтобы сделать его более подходящим для способа выявления. Обработка означает, наряду с прочим, обработку образца, который предположительно содержит и/или содержит вирус, таким образом, чтобы разделить вирус на антигенные компоненты, такие как белки, (поли)пептиды или другие антигенные фрагменты. Предпочтительно связывающие молекулы человека или иммуноконъюгаты согласно изобретению подвергают контакту с образцом в условиях, которые обеспечивают возможность образования иммунного комплекса между связывающими молекулами человека и вирусом или его антигенными компонентами, которые могут присутствовать в образце. Образование иммунного комплекса, если таковое происходит, свидетельствующее о присутствии вируса в образце, затем выявляют и измеряют подходящими способами. Такие способы включают, наряду с другими, гомогенные и гетерогенные иммуноанализы связывания, такие как радиоиммуноанализы (РИА), ЕЫ§А, иммунофлуоресценция, иммуногистохимия, РАС8, В1АСОКЕ и Вестерн-блот-анализы.

Предпочтительными методиками анализа, особенно для крупномасштабного клинического скрининга сыворотки и крови пациентов и полученных из крови продуктов, являются методики ЕЫ§А и Вестерн-блот-анализа. Особенно предпочтительные тесты, основанные на ЕЬРЗА. Для применения в качестве реагентов в таких анализах связывающие молекулы или иммуноконъюгаты согласно изобретению обычно связывают с внутренней поверхностью лунок планшетов для микротитрования. Связывающие молекулы или иммуноконъюгаты согласно изобретению могут быть непосредственно связаны с лункой для микротитрования. Однако максимальное связывание связывающих молекул или иммуноконъюгатов согласно изобретению с лунками можно достичь предварительной обработкой лунок полилизином перед добавлением связывающих молекул или иммуноконъюгатов согласно изобретению. Кроме того, связывающие молекулы или иммуноконъюгаты согласно изобретению могут быть ковалентно связаны с лунками известными способами. Обычно связывающие молекулы или иммуноконъюгаты используют для покрывания в концентрации от 0,01 до 100 мкг/мл, хотя также можно использовать более высокие, а также более низкие количества. Затем образцы добавляют в лунки, покрытые связывающими молекулами или иммуноконъюгатами согласно изобретению.

Кроме того, связывающие молекулы согласно изобретению можно использовать для идентификации специфичных связывающих структур вируса гриппа. Связывающими структурами могут быть эпитопы на белках и/или полипептидах. Они могут быть линейными, а также структурными и/или конформационными. В одном варианте связывающие структуры можно анализировать с помощью анализа РЕР§СΑN (см. наряду с другими публикациями \УО 84/03564, \УО 93/09872, §1ооШга с соавторами, 1996). Альтернативно, можно осуществлять скрининг библиотеки случайных пептидов, содержащей пептиды белка вируса гриппа, в отношении пептидов, способных связываться со связывающими молекулами согласно изобретению.

Изобретение дополнительно проиллюстрировано следующими примерами и фигурами. Примеры никоим образом не предназначены для ограничения объема изобретения.

Примеры

Пример 1. Конструирование библиотек 8сΡν в фаговом дисплее с использованием РНК, экстрагированной из мононуклеарных клеток периферической крови

Периферическую кровь собирали от нормальных здоровых доноров посредством венопункции в пробирки для образцов с антикоагулянтом ЕИТА. Библиотеки 8сΡν в фаговом дисплее получали, как описано в публикации \УО 2008/028946, которая включена в настоящее описание в виде ссылки. Из мононуклеарных клеток периферической крови выделяли РНЕК и получали кДНК. Применяли способ ПЦР-амплификации в два раунда, используя наборы праймеров, показанные в табл. 1 и 2, чтобы выделить области УН и УЬ иммуноглобулина из соответствующего репертуара донора.

Первый раунд амплификации на соответствующей кДНК с использованием наборов праймеров, указанных в табл. 1, давал 7, 6 и 9 продуктов длиной примерно 650 пар оснований, соответственно, для областей УН, Укарра и У1атЬЬа. Для амплификации УН-области 1дМ использовали константный праймер ОСМ в сочетании с ОН1-ОН7. Программа термоциклирования для амплификации первого раунда: 2 мин при 96°С (стадия денатурации), 30 циклов 30 с при 96°С/30 с при 60°С/60 с при 72°С, конечная элонгация 10 мин при 72°С и охлаждение при 6°С. Продукты загружали на 1% агарозный гель и выделяли из него, используя колонки для гель-фильтрации (МасЬегеу №де1), и элюировали, используя 50 мкл 5 мМ трис-НС1, рН 8,0. Десять процентов продуктов первого раунда (от 3 до 5 мкл) подвергали второму раунду амплификации, используя праймеры, указанные в табл. 2. Такие праймеры удлиняли сайтами рестрикции, обеспечивающими возможность направленного клонирования соответствующих областей УЬ и УН в векторе для фагового дисплея РИУ-С06. Программа ПЦР для амплификации второго раунда: 2 мин при 96°С (стадия денатурации), 30 циклов 30 с при 96°С/30 с при 60°С/60 с при 72°С, конечная элонгация 10 мин при 72°С и охлаждение при 6°С. Продукты второго раунда (~350 пар оснований) сначала объединяли в соответствии с встречающимися в природе 1-участками, найденными в продуктах ге- 21 027054 нов иммуноглобулинов, получая в результате 7, 6 и 9 пулов для вариабельных областей УН, Укарра и У1атЬба, соответственно (см. табл. 3 и 4). Чтобы получить нормализованное распределение последовательностей иммуноглобулинов в иммунной библиотеке 6 пулов легких цепей Укарра и 9 пулов легких цепей У1атЬба смешивали в соответствии с процентами, указанными в таблице 3. Такой один конечный пул УЬ (3 мкг) расщепляли в течение ночи ферментами рестрикции §а11 и ΝοίΙ, наносили на 1% агарозный гель и выделяли из геля (~350 пар оснований), используя колонки для гель-фильтрации МасБетеу №де1, и лигировали в расщепленный 5>;·ι11-ΝοΙΙ вектор РЭУ-С06 (~5000 пар оснований) следующим образом: 10 мкл вектора РЭУ-С06 (50 нг/мкл), 7 мкл вставки УЪ (10 нг/мкл), 5 мкл 10Х буфер для лигирования (ΝΕΒ), 2,5 ДНК-лигазы Т4 (400 единиц/мкл) (ΝΕΒ), 25,5 мкл сверхчистой воды (отношение вектора к вставке составляло 1:2). Лигирование осуществляли в течение ночи на водяной бане при 16°С. Затем объем увеличивали в два раза, добавляя воду, экстрагировали равным объемом фенола-хлороформаизоамилового спирта (75:24:1) (Ιηνίίτο^η) с последующей экстракцией хлороформом (Мегск) и преципитировали, используя 1 мкл Ре11е1 РаиИ (№уодеп), 10 мкл ацетата натрия (3 М, рН 5,0) и 100 мкл изопропанола, в течение 2 ч при -20°С. Затем полученный образец центрифугировали при 20000 х д в течение 30 мин при 4°С. Полученный преципитат промывали 70% этанолом и центрифугировали в течение 10 мин при 20000хд при комнатной температуре. Этанол удаляли вакуумной аспирацией и осадок сушили на воздухе в течение нескольких минут и затем растворяли в 50 мкл буфера, содержащего 10 мМ трисНС1, рН 8,0. 2 мкл смеси для лигирования использовали для трансформации 40 мкл электрокомпетентных клеток ТО-1 (АдПеШ) в охлажденной кювете для электропорации размером 0,1 см (Вютаб), используя устройство ОепериНет II (Вютаб), установленное на 1,7 кВ, 200 ом, 25 мкФ (постоянная времени ~4,5 мс). Сразу после импульса бактерии вымывали из кюветы, используя 1000 мкл среды 8ОС (ЗпуНгодеп), содержащей 5% (мас./об.) глюкозы (§1дта), при 37°С и переносили в культуральные пробирки с круглым дном объемом 15 мл. Другие 500 мкл 8ОС/глюкозы использовали для вымывания оставшихся бактерий из кюветы и добавляли в культуральную пробирку. Бактерии восстанавливали культивированием точно в течение одного часа при 37°С в шейкере-инкубаторе при 220 об./мин.

Трансформированные бактерии высевали на большие квадратные чашки Петри размером 240 мм (ΝϋΝΟ, содержащие 150 мл агара 2ΤΥ (16 г/л бактотриптона, 10 г/л дрожжевого экстракта для бактерий, 5 г/л №С1, 15 г/л агара, рН 7,0) с добавлением 50 мкг/мл ампициллина и 5% (мас./об.) глюкозы (81дта). Разбавление 1 к 1000 высевали для подсчета на чашки Петри размером 15 см, содержащие такую же среду. Такой способ трансформации повторяли последовательно десять раз, и продукт каждой полной трансформации высевали на отдельную квадратную чашку Петри и выращивали в течение ночи в термостате при 37°С. Обычно при использовании описанного выше протокола получали около 1 х 10⁷КОЕ (1 х 10⁶ на чашку Петри). Промежуточную библиотеку УЪ легкой цепи собирали с чашек, слегка соскабливая бактерии с чашки в 10 мл среды 2ΤΥ. Клеточную массу определяли на основании измерения ΟΌ600 и две части бактерий по 500 ΟΌ использовали для получения плазмидной ДНК в масштабе макси, используя две колонки Р500 тах1ртер (МасБетеу №де1), согласно инструкциям производителя.

Аналогично вариабельным областям УЪ продукты УН-РН второго раунда смешивали вместе, чтобы получить нормальное распределение использования 1-сегмента (см. табл. 4), получая в результате 7 подпулов УН, названных РН1-РН7. Пулы смешивали, чтобы получить нормализованное распределение последовательностей с использованием процентов, указанных в табл. 4, получая одну фракцию УН, которую расщепляли ферментами рестрикции δίΐΙ и ΧΙιοΙ и лигировали в расщепленную δΓΗ-ΧΗοΙ промежуточную библиотеку РЭУ-УЕ полученную, как описано выше. Протокол лигирования, способ очистки, последующая трансформация ТО1 и сбор бактерий проводили, по существу, как описано для промежуточной библиотеки УЪ (см. выше), за исключением того, что использовали 20 трансформаций и 20 квадратных чашек Петри. Конечную библиотеку (примерно 1 х 10⁷ КОЕ) проверяли в отношении частоты вставок с помощью ПЦР на колониях, используя набор праймеров, фланкирующих встроенные области УН-УЪ. В случае 90% колоний наблюдали вставку правильной длины. Продукты ПЦР на колониях использовали для последующего анализа последовательностей ДНК, чтобы оценить изменение последовательностей и оценить процент колоний, в которых наблюдали полную ОКЕ. Такие колонии составляли 76%. Наконец библиотеку «спасали» и амплифицировали, используя хелперный фаг СТ (см. АО 02/103012), и использовали для селекции антител на фаге способами пэннинга, как описано ниже.

Пример 2. Селекция фагов, несущих одноцепочечные Εν-фрагменты против гемагглютинина вирусов гриппа А и вирусов гриппа В

Фрагменты антител отбирали, используя библиотеки антител в фаговом дисплее, сконструированные, по существу, как описано выше, и общую методику фагового дисплея и методику МАВ8ТКАСТ®, по существу, как описано в патенте США номер 6265150 и в АО 98/15833 (обе публикации включены в настоящее описание в виде ссылки). Кроме того, в настоящем изобретении применяли способы и хелперные фаги, которые описаны в АО 02/103012 (которая включена в настоящее описание в виде ссылки).

Селекцию осуществляли против рекомбинантного гемагглютинина (НА) подтипа Н1 (АДОст Са1ебоп1а/20/99), Н3 (А/А15СОП8ш/67/2005), Н4 (А/Оиск/Нопд Копд/24/1976), Н5 (А/СЫскеп/У1е1пат/28/2003), Н7 (А/Хе1йег1апб5/219/2003) и Н9 (А/НопдКопд/1073/99) вируса гриппа А. Антигены НА разбавляли в РВ§

- 22 027054 (5,0 мкг/мл), добавляли в пробирки Μ;·ιχίδοτρ™ Нипс-Пптигю (Яипс) и инкубировали в течение ночи при 4°С на вращающемся барабане. Содержимое иммунологических пробирок сливали и пробирки три раза промывали блокирующим буфером (2% обезжиренное сухое молоко (ЕЬК) в ΡΒδ). Затем иммунологические пробирки полностью заполняли блокирующим буфером и инкубировали в течение 1-2 ч при комнатной температуре. Аликвоты библиотеки в фаговом дисплее (500-1000 мкл, 0, 5х10¹³-1х10¹³ КОЕ, амплифицированной с использованием хелперного фага СТ (см. А0 02/103012)), блокировали в блокирующем буфере с добавлением 10% инактивированной без нагревания фетальной бычьей сыворотки и 2% мышиной сыворотки в течение 1-2 ч при комнатной температуре. Блокированную фаговую библиотеку добавляли в иммунологические пробирки, инкубировали в течение 2 ч при комнатной температуре и промывали буфером для промывки (0,05% (об./об.) твин-20 в ΡΒδ), чтобы удалить несвязанные фаги. Связанные фаги элюировали с соответствующего антигена, используя инкубацию с 1 мл 100 мМ триэтиламина (ТЕА) в течение 10 мин при комнатной температуре. Затем элюированные фаги смешивали с 0,5 мл 1 М трис-НС1, рН 7,5, для нейтрализации рН. Смесь использовали для того, чтобы инфицировать 5 мл культуры Е. тоП ХЬ1-В1ие, которая была выращена при 37°С до 0Ό 600 нм, примерно равной 0,3. Фагам давали возможность инфицировать бактерии ХЬ1-В1ие в течение 30 минут при 37°С. Затем смесь центрифугировали в течение 10 мин при 3000хд при комнатной температуре и осадок бактерий ресуспендировали 0,5 мл среды с дрожжевым экстрактом, 2-триптоном (2ΤΥ). Полученную суспензию бактерий делили на две чашки с 2ΤΥ-агаром с добавлением тетрациклина, ампициллина и глюкозы. После инкубации чашек в течение ночи при 37°С колонии соскребали с чашек и использовали для получения обогащенной фаговой библиотеки, по существу как описано Ое КгшГ с соавторами (1995) и А0 02/103012. Коротко, соскобленные бактерии использовали для посева в среду 2ΤΥ, содержащую ампициллин, тетрациклин и глюкозу, и выращивали при температуре 37°С до 0Ό 600 нм ~0,3. Добавляли хелперные фаги СТ и давали возможность инфицировать бактерии, после этого среду заменяли на 2ΤΥ, содержащую ампициллин, тетрациклин и канамицин. Инкубацию продолжали в течение ночи при 30°С. На следующий день бактерии удаляли из среды 2ΤΥ центрифугированием, затем фаги в среде преципитировали, используя полиэтиленгликоль (ПЭГ) 6000/ЫаС1. Наконец, фаги растворяли в 2 мл ΡΒδ с 1% бычьего сывороточного альбумина (БСА), стерилизовали фильтрованием и использовали для следующего раунда селекции. Второй раунд селекции осуществляли либо на таком же подтипе НА и/или на НА другого подтипа.

Осуществляли два последовательных раунда селекции перед выделением отдельных одноцепочечных фаговых антител. После второго раунда селекции отдельные колонии Е. отН использовали для получения моноклональных фаговых антител. По существу, отдельные колонии выращивали до кд-фазы в 96-луночном планшете и инфицировали хелперными фагами VСδ-Μ13 и после инфекции обеспечивали возможность для осуществления продуцирования фаговых антител в течение ночи. Фагмиды подвергали анализу последовательностей и все уникальные фагмиды использовали для дальнейшего анализа. Надосадки, содержащие фаговые антитела, использовали непосредственно в ЕМБА для связывания с антигенами НА. Альтернативно фаговые антитела преципитировали ПЭГ/ШО и стерилизовали фильтрованием, как для ЕЬ1БА, так и для проточно-цитометрического анализа.

Пример 3. Валидация НА-специфичных одноцепочечных фаговых антител

Специфичность отобранных надосадков, содержащих одноцепочечные фаговые антитела, которые были получены в результате скринингов, описанных выше, подтверждали в ЕЬ1БА, т.е., подтверждали связывание с разными НА-антигенами. С указанной целью экспрессированными бакуловирусами рекомбинантными НА Н1 (А/Ые^ Ε’;·ιΕύοηί;·ι/20/99). Н3 ^/^15^115111/67/2005), Н5 А/У1е1пат/1203/04). Н7 (А/№1Ьет1апЙ8/219/2003) и В (Β/0Ηίο/01/2005) (Рго1еш Бс1епсе8, СТ, ГОА) покрывали планшеты для ЕЫδΛ Μαχίδοτρ'™. После покрывания планшеты три раза промывали ΡΒδ, содержащим 0,1% об./об. твин-20 и блокировали в ΡΒδ, содержащем 3% БСА или 2% ЕЬК, в течение 1 ч при комнатной температуре. Отобранные одноцепочечные фаговые антитела инкубировали в течение 1 ч в равном объеме буфера ΡΒδ, содержащего 4% ЕЬК, получая блокированные фаговые антитела. Содержимое планшетов сливали, планшеты три раза промывали ΡΒδ/0,1% Твин-20 и в лунки добавляли блокированные одноцепочечные фаговые антитела. Инкубацию продолжали в течение одного часа, планшеты промывали ΡΒδ/0,1% Твин20 и выявляли связанные фаговые антитела (применяя измерение 0Ό при 492 нм), используя анти-М13антитело, конъюгированное с пероксидазой. В качестве контроля одновременно осуществляли способ без одноцепочечного фагового антитела и с неродственным одноцепочечным фаговым антителом в качестве негативного контроля. В результате селекции на разных антигенах НА с использованием фаговых библиотек получили 13 уникальных одноцепочечных фаговых антител, специфично связывающих рекомбинантный НА вируса гриппа А Н1, Н3, Н5, Н7 и вируса гриппа В (БС09-003, БС09-004, БС09-005, БС09-006, БС09-007, БС09-008, БС09-009, БС09-010, 8С09-011, БС09-030, 8С09-112, БС09-113 и БС09114). См. табл. 5.

Альтернативно ПЭГ/НаС1-преципитированные и стерилизованные фильтрованием фаговые антитела использовали для подтверждения связывания и специфичности в анализе РАСБ. С указанной целью полноразмерные рекомбинантные НА вирусов гриппа А подтипов Н1 (А/Ке^ Са1еάοη^а/20/1999), Н3 (А

- 23 027054

А18опз1п/67/2005) и Н7 (Л/№111ег1апЙ5/219/2003) экспрессировали на поверхности клеток РЕК.С6. Клетки инкубировали с одноцепочечными фаговыми антителами в течение 1 ч с последующими тремя стадиями промывки с использованием РВЗ+0,1% БСА. Связанные фаги выявляли, используя конъюгированное с ФИТЦ М13-антитело. В результате селекции на разных антигенах НА с использованием фаговых библиотек обнаружили 14 одноцепочечных фаговых антител, специфично связывающих НА вируса гриппа А подтипов Н1, Н3 и Н7 (ЗС09-003, ЗС09-004, ЗС09-005, ЗС09-006, ЗС09-007, ЗС09-008, ЗС09-009, ЗС09-010, ЗС09-011, ЗС09-012, ЗС09-030, ЗС09-112, ЗС09-113 и ЗС09-114). См. табл. 6.

Все 16 фаговых антител, ЗС09-003, ЗС09-004, ЗС09-005, ЗС09-006, ЗС09-007, ЗС09-008, ЗС09-009, ЗС09-010, ЗС09-011, ЗС09-012, ЗС09-029, ЗС09-030, ЗС09-031, ЗС09-112, ЗС09-113 и ЗС09-114, использовали для конструирования полностью человеческих иммуноглобулинов.

Пример 4. Конструирование полностью человеческих молекул иммуноглобулина (моноклональных антител человека) из отобранных одноцепочечных Ρν

Из отобранных клонов специфичных одноцепочечных фаговых антител (зсРу) получали плазмидную ДНК и определяли нуклеотидные и аминокислотные последовательности стандартными способами. Вариабельные области тяжелой и легкой цепей 8сΡν клонировали, непосредственно используя продукт расщепления, для экспрессии в экспрессирующих 1дС векторах р1д-С911-НСдатта1 (см. 8ЕО ГО ΝΟ: 175), рЮ-С909-Скарра (см. 8ЕО ГО ΝΟ: 176) или р1д-С910-С1атЬйа (см. 8ЕО ГО №: 177). Определяли идентичность генов УН и УЬ (см. ТотПпзоп ΙΜ с соавторами, У-ΒΑδΕ Зедиепсе ОпесЮгу. СатЬпйде Ипкей Кшдйот: МКС Сейте Гот Рто1еш Епдшеетшд (1997)) зсΡν (см. табл. 7).

Нуклеотидные последовательности для всех конструкций подтверждали согласно стандартным способам, известным специалисту в данной области. Полученные в результате экспрессирующие конструкции, кодирующие тяжелые и легкие цепи 1дС1 человека, временно экспрессировали в сочетании в клетках 293Т и получали надосадки, содержащие 1дС1-антитела человека, используя стандартные способы очистки.

Аминокислотные последовательности СОК тяжелых и легких цепей выбранных молекул иммуноглобулинов приведены в табл. 7.

Количество аминокислотных различий и идентичность в % всех вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей приведены в табл. 8.

Пример 5. Перекрестная реактивность в связывании 1дС

Панель их пяти 1дС-антител, описанных выше, СК9005, СК9030, СК9112, СК9113 и СК9114, проверяли в ΕΟ3Α в отношении специфичности связывания, т.е., связывания с разными антигенами НА. С указанной целью экспрессированными бакуловирусами рекомбинантными НА Н1 (Α/Ке^ Са1ейоп1а/20/1999). Н3 (Л/А^зсоηз^η/67/2005), Н5 (Л/У^еίηат/1203/04, Н7 (Л/NеIΠе^1аηΠз/219/2003) и Н9 (Л/ΗоηдΚоηд/1073/99) (Рго1е1п Зшепсез, СТ, υ3Α) покрывали планшеты для ΕΟ3Α Мах18отр™. После покрывания планшеты три раза промывали РВЗ, содержащим 0,1% об./об. Твин-20 и блокировали в РВЗ, содержащем 3% БСА или 2% ΕΗΚ, в течение 1 ч при комнатной температуре. Содержимое планшетов сливали, планшеты три раза промывали РВЗ/0,1% Твин-20 и в лунки добавляли 1дС-антитела. Инкубацию продолжали в течение одного часа, планшеты промывали РВЗ/0,1% твин-20 и выявляли связанные антитела (применяя измерение ΟΌ при 492 нм), используя антитело против 1дС человека, конъюгированное с пероксидазой. В качестве контроля использовали неродственный 1дС СК4098.

Показано, что СК9005, СК9030, СК9112, СК9113 и СК9114 обладают перекрестной активностью связывания разных тестированных подтипов рекомбинантных НА. См. табл. 9.

Кроме того, отобранные антитела использовали для тестирования связывания разных подтипов в анализе ΡΑС3. С указанной целью полноразмерные рекомбинантные НА вирусов гриппа А подтипов Н1 (Α/№№ Са1ейойа/20/1999), Н3 (Л/А^зоηз^η/67/2005) и Н7 (Л/NеΐЬе^1аηάз/219/2003) экспрессировали на поверхности клеток РΕК.С6. Клетки инкубировали с 1дС-антителами в течение 1 ч с тремя последующими стадиями промывки с использованием РВЗ + 0,1% БСА. Связанные антитела выявляли, используя конъюгированное с РЕ антитело против 1д человека. В качестве контроля использовали нетрансфицированные клетки РΕК.С6. СК9005, СК9030, СК9112, СК9113 и СК9114 проявляли перекрестную связывающую активность по отношению к НА вирусов гриппа А подтипов Н1, Н3 и Н7, но не по отношению к клеткам РΕК.С6 дикого типа. См. табл. 9.

Пример 6. Перекрестная нейтрализующая активность 1дС

Чтобы определить, способны ли отобранные 1дС блокировать множество штаммов гриппа А, осуществляли дополнительные анализы нейтрализации вирусов ш уйго (ΥΝΑ). νΝΑ осуществляли на клетках МЭСХ (АТСС ССЬ-34). Клетки МОСК культивировали в среде для культивирования клеток МОСК (среда ΜΕΜ с добавлением антибиотиков, 20 мМ Нерез и 0,15% (мас./об.) бикарбоната натрия (полная среда ΜΕΜ), с добавлением 10% (об./об.) фетальной сыворотки теленка). Все штаммы Н1 (Л/А3N/33, Α/Νο^ Са1ейоша/20/1999, Α/Зоктоп 1з1апНз/1УК-145 (высопродуктивный реассортант Α/Зоктоп 1з1апйз/3/2006), Л/В^^зЬаηе/59/2007, Α/ΝΥΜ^Χ-181 (высокопродуктивный реассортант

Л/Са1^ίо^η^а/07/2009), Н2 (Л/Εην/ΜРυ3156/05), Н3 (Α/Нопд Копд/1/68, Л/^оЬаηηезЬи^д/33/94, Л/Раηата/2000/1999, Л/Η^^озΠ^та/52/2005, Л/А^зсоηз^η/67/2005 и Л/В^^зЬаηе/10/2007), Н4 (Л/АΡ/ΗК/ΜРΑ892/06), Н5 (РК8-Н5М-НК97 (реассортант 6:2 Α/Нопд Копд/156/97 и ΑΦΚ/8/34) и

- 24 027054

Л/Еига81ап ^1§еоп/МРР461/07), Н6 (Л/Еига81ап ^1§еоп/МР041 1/07), Н7 (№ВКО-60 (реассортант 6:2 Л/Ма11ага/№Лег1апа5/12/2000) и РКЗ-ШЮ-ЫУ (реассортант 7:1 Л/\ем Уогк/107/2003 (Н7Ю) и А/РК/8/34)), Н8 (Л/Еига51ап ^1§еоп/МРН571/08), Н9 (А/Нопд Копд/1073/99 и А/СЫск/НК/δδΡ 176/09), Н10 (А/СЫск/Сегтапу/Ы/49) и Н14 (РК8-Н14№ (реассортант 6:2 А/та11агк/А81гакИап/263/1982 (Н14№) и А/РК/8/34)), которые использовали в анализе, разбавляли до титра 5,7 х 10³ ТЦИД50/мл (доза, инфицирующая 50% культуры ткани, в мл) , при этом титр вычисляли согласно способу 8реагтап и КагЬег. Препараты 1дО (200 мкг/мл) серийно 2-кратно разводили (1:2-1:512) в полной среде МЕМ в лунках в четырех повторах. 25 мкл соответствующего разведения 1дО смешивали с 25 мкл суспензии вирусов (100 ТЦИД50/2 5 мкл) и инкубировали в течение одного часа при 37°С. Затем суспензию переносили в четырех повторах в 96-луночные планшеты, содержащие слившийся слой культуры МОСК в 50 мкл полной среды МЕМ. Перед использованием клетки МОСК высевали по 3х10⁴ клеток на лунку в среду для культуры клеток МОСК, выращивали до слияния клеток в монослой, промывали 300-350 мкл РВЗ, рН 7,4, и наконец, в каждую лунку добавляли 50 мкл полной среды МЕМ. Инокулированные клетки культивировали в течение 3-4 суток при 37°С и ежедневно следили за развитием цитопатогенного эффекта (ЦПЭ). ЦПЭ сравнивали с позитивным контролем.

СК9005, СК9112, СК9113 и СК9114 проявляли перекрестную по отношению к разным подтипам нейтрализующую активность на типичных штаммах всех тестированных подтипов вируса гриппа А Н1, Н2, Н3, Н4, Н5, Н6, Н7, Н8, Н9 и Н10. См. табл. 10.

Пример 7. Антитела к вирусам пандемического гриппа связываются с конформацией НА до слияния.

Чтобы определить, способны ли отобранные 1дО связывать молекулу НА, имеющую конформацию до слияния или после слияния, осуществляли эксперимент со сдвигом рН ш \а1го. С указанной целью полноразмерный рекомбинантный НА вирусов гриппа А подтипов Н1 (А/Ые^ Са1ебойа/20/99), Н3 (АЖ18сои81и/67/2005), Н5 (А/У1е1иат/1203/04), Н7 (Л/\е1Пег1ап0з/219/03) и Н9 (А/Нопд Копд/1073/99) экспрессировали на поверхности клеток РЕК.С6. Чтобы измерить связывание мАт с разными структурными конформациями НА, клетки открепляли от пластиковой подложки, используя РВЗ-ЕОТА, и затем обрабатывали трипсином (ТгурЬЕ™§е1ес1, С1Ьсо) в течение 5 мин при комнатной температуре, промывали (1% БСА в РВЗ) и инкубировали в течение 15 мин в буфере, содержащем лимонную кислоту и фосфат натрия (рН 4,9). Образцы клеток отставляли после каждой стадии обработки (нетрипсинизированные/НА0; трипсинизированные/НА1-НА2; рН 4,9/НА слияния) и фракции после каждой обработки инкубировали с мАт СК9114 в течение 1 ч. Затем клети инкубировали в течение 30 мин с антителом против 1дО человека, конъюгированным с фикоэритрином (ЗойЪегп В|о1есИ), в 1% БСА. Окрашенные клетки анализировали, используя РАС8 Сайо и компьютерную программу РАС8 Эка (Вес1оп Оюкпъоп). РАСЗ-анализ связывания 1дО1 с экспрессированным на поверхности НА осуществляли после последовательной обработки трипсином и забуференной средой с рН 4,9 и выражали в процентах от связывания с необработанным НА (А). См. фиг. 1А.

В случае антитела СК9114 наблюдали заметное снижение связывания после сдвига рН, что свидетельствует о специфичности по отношению к эпитопу, присутствующему только до того, пока низкое значение рН не индуцировало конформационное изменение молекулы НА.

Альтернативно для того, чтобы проверить, могут ли 1дО блокировать индуцированное низким рН конформационное изменение НА, антитело СК9114 добавляли до стадии с низким значением рН. Образцы последовательных обработок разделяли и красили антителом против 1дО человека, конъюгированным с фикоэритрином (Зойкегп Вю1еск). Окрашенные клетки анализировали, используя РАС8 Сайо с помощью компьютерной программы РАС8 Эка (Вес1оп Окктзоп). См. фиг. 1В.

В случае антитела СК9114 наблюдали высокий уровень остаточного связывания с разными НА после сдвига рН, что свидетельствует о том, что в том случае, когда такие антитела связаны с молекулой НА, не происходит индуцированного низким значением рН конформационного изменения.

Пример 8. Измерения аффинности РаЬ на разных НА вирусов гриппа А и В.

Рекомбинантный растворимый НА Λ/№\ν Са1ебоша/20/1999 (Н1), А/Вг18Ьапе/59/2007 (Н1), ΛЖ^5СΟИδ^и/67/2005 (Н3), Λ/В^^5Ьаие/10/2007 (Н3), В/Р1огМа/4/2006 (В), В/Вг15Ьапе/60/2008 (В) и В/Ма1ау81а/2506/2004 (В), полученный с использованием бакуловирусных векторов в клетках насекомых, приобретали из Рго!еш Заепсез Согр (СТ, ИЗА) и биотинилировали при комнатной температуре (КТ) в течение 40 мин, используя сульфо-ХНЗ-РС-ЬС-биотин Е2-Ппк (Ртегсе). Стадию замены буфера на РВЗ осуществляли, используя центрифужные фильтры Атюоп ИРга 0,5 мл (МППроге). Биотинилированный НА связывали с сенсорами со стрептавидином при 37°С в течение 1200 с. Ассоциацию РаЬ-фрагмента СК9005, СК9112, СК9113 и СК9114 с НА измеряли на 0с1е1 ОК (РоПеВю) в течение 700 с при 37°С, экспонируя сенсоры с 100 нМ антитела в 1х буфере для кинетических измерений (РойеВю). Диссоциацию РаЬ-фрагментов оценивали, экспонируя сенсоры с 1х буфером для измерения кинетики в течение 9000 секунд при 37°С. Все РаЬ-фрагменты СК9005, СК9112, СК9113 и СК9114 связывались с НА Н1, Н3 и вируса гриппа В с аффинностью в диапазоне от микро- до пикомоль.

- 25 027054

Пример 9. Конкуренция за связывание с другими связывающими стволовую область антителами

Рекомбинантный растворимый НА Α/Νον Са1еάοта/20/1999 (Н11) и Α/Αί3^η3ίη/67/2005 (Η3Ν2), полученный с использованием бакуловирусных векторов в клетках насекомых, приобретали из Ρτοίβίη Заенсез Ροηι (СТ, И8Л) и биотинилировали при комнатной температуре (КТ) в течение 40 мин, используя сульфо^Н5>-ЬС-ЬС-биотин ΕΖ-1ίηΗ (Р1егсе). Стадию замены буфера на ΡΒδ осуществляли, используя центрифужные фильтры Αιηοη иНга 0,5 мл (ΜίΠίροΐΌ). Биотинилированный НА связывали с сенсорами со стрептавидином при 37°С в течение 1200 с. Ассоциацию антител СК9114 и СК6261 с НА Н1 измеряли на Ос1е1 ЦК (ΡοΡόΒιο) в течение 700 с при 37°С, экспонируя сенсоры с 100 нМ антитела в 1х буфере для кинетических измерений (ΡοΡόΒιο), затем оценивали степень дополнительного связывания, экспонируя сенсоры со вторым антителом (100 пМ в 1 х буфере для кинетических измерений) в присутствии первого антитела (100 нМ) в течение 700 с при 37°С. В качестве контроля брали мАт СК9020, связывающееся с глобулярной головкой Н1. Ассоциацию антител СК9114 и СК8020 с НА Н3 измеряли на Ос1е1 ЦК (ΡοΡόΒιο) в течение 900 секунд при 37°С, экспонируя сенсоры с 100 нМ антитела в 1х буфере для кинетических измерений (ΡοΡόΒιο), затем оценивали степень дополнительного связывания, экспонируя сенсоры со вторым антителом (100 пМ в 1 х буфере для кинетических измерений) в присутствии первого антитела (100 нМ) в течение 900 с при 37°С. В качестве контроля брали мАт СК8057, связывающееся с глобулярной головкой Н3.

СК9114 конкурирует за связывание с НА Н1 с СК6261 и за связывание с НА Н3 с СК8020. Поэтому СК9114 вероятно связывает эпитоп, перекрывающийся с обоими эпитопами СК6261 и СК8020 в стволовой области НА (см. фиг. 2).

Пример 10. Профилактические активность моноклонального 1дС-антитела человека СК9114 против летального заражения вирусом гриппа В ίη νίνο

Исследование проводили для того, чтобы тестировать профилактическое действие моноклонального антитела СК9114, направленное против летального заражения вирусом гриппа В ίη νίνο. мАт СК9114 тестировали в отношении профилактической эффективности в модели летального заражения мышей адаптированным для мышей вирусом гриппа Β/Ε1οπώ·ι/04/2006 (СеШга1 Vеίе^^ηа^у ТСзЙТСе (СУ1), Ие1у51аб, ТНе №1Нег1аг1бз). Вирус Β/Ε1οπώ·ι/04/2006 адаптировали для мышей после 5 пересевов из легких в легкие. Адаптированный к мышам вирус гриппа В 5-го пассажа размножали в куриных эмбрионах в лаборатории СУ1. Всех мышей (РаШ/с, самки, 6-8-недельного возраста, η=10 на группу) акклиматизировали и содержали до начала эксперимента в течение периода времени, составляющего по меньшей мере 4 дня. мАт СК9114 вводили в дозе 15 мг/кг внутривенно в хвостовую вену (Гена ^ссу^из) в день -1 перед заражением, исходя из средней массы мыши 18 г и фиксированного объема дозы 0,2 мл. Контрольной группе вводили контрольный наполнитель. Затем мышей заражали в 0 день, используя 25 ЬИ50 вируса гриппа В Β/Р1ο^^ба/Ο4/2006. посредством интраназальной инокуляции. Клинические признаки и массу тела определяли ежедневно с -1 дня до заражения вплоть до 8 дня. Клинические признаки оценивали, используя систему оценки (0 = нет клинических признаков; 1 = неровная шерсть; 2 = неровная шерсть, менее реагирующие во время обработки; 3 = неровная шерсть, свернувшаяся, затрудненное дыхание, менее реагирующие во время обработки; 4 = неровная шерсть, свернувшаяся, затрудненное дыхание, нет активной реакции на манипуляции/обработку). В случае оценки 4 животного подвергали эвтаназии.

Все мыши были активными и выглядели здоровыми без проявления признаков заболевания во время периода акклиматизации. На фиг. 3А показаны уровни выживаемости мышей после введения мАт. У мышей, которым вводили дозу 15 мг/кг мАт СК9114, наблюдали выживаемость 100%, тогда как в группе с контрольным мАт выживало 50% мышей.

На фиг. 3В показано изменение средней массы тела мышей в течение 8-дневного периода исследования после введения мАт. В группе мышей, которым вводили мАт СК9114, не было потери массы в течение 8-дневного периода исследования, тогда как в контрольной группе, в которой вводили наполнитель, наблюдали потерю массы. Медианные клинические оценки мышей изображены на фиг. 3С. Из тех мышей, которым вводили 15 мг/кг мАт СК9114 в -1 день перед заражением, все выживали и ни у одного из животных не наблюдали каких-либо клинических признаков в период обследования (с 0 дня до 8 дня после инфекции). Полученные результаты показывают, что антитело человека против вируса гриппа СК9114, идентифицированное и разработанное, как описано выше, способно обеспечивать защиту от летальной дозы вируса гриппа В ίη νίνο. При введении за день до инфекции в дозе 15 мг/кг или выше мАт СК9114 способно полностью предотвращать клиническое проявление инфекции гриппа В у мышей.

- 26 027054

Таблица 1. Первый раунд амплификации Укарра, У1атЬда и УН

Название праймера	Нуклеотидная последовательность праймера	5Ξ0 ΙΌ N0:
ОК1 (ΗιινΚΙΒ)	САС АТС САС ЮТС АСС САС ТСТ СС	65
0К2 (НцУК2)	САТ СТТ СТС АТС АСТ САС ТСТ СС	66
ОКЗ (НиУК2В2)	САТ АТТ СТС АТС АСС САС АСТ СС	67
0К4 (НцУКЗВ)	САА АТТ СТС ЮТС АСЕ САС ТСТ СС	68
ОК5 (НиУК5)	САА АСС АСА СТС АСС САС ТСТ СС	69
ОК6 (НиУКб)	САА АТТ СТС СТС АСТ САС ТСТ СС	70
ОСК (НиСК)	АСА СТС ТСС ССТ СТТ САА ССТ СТТ	71
ОЬ1 (ΗιΜΙΑ)*	САС ТСТ СТС СТС АСТ САС ССА СС	72
ОЬ1 (НиУЫВ)*	САС ТСТ СТС УТС АСС САС ССС СС	73
ОЬ1 (НиУЫС)*	САС ТСТ СТС СТС АСС САС ССС СС	74
ОЬ2 (НиУЬ2В)	САС ТСТ ССС СТС АСТ САС СС	75
ОЬЗ (НиУЬЗА)	ТСС ТАТ СИС СТС АСТ САС ССА СС	76
ОЬ4 (НиУЬЗВ)	ТСТ ТСТ САС СТС АСТ САС САС СС	77
ОЬ5 (НиУЬ4В)	САС СУТ СТС СТС АСТ САА ТС	78

ОЬб (НиУЬ5)	САС ССТ СТС СТС АСТ САС ССС ТС	79
ОЬ7 (НиУЬб}	ААТ ТТТ АТС СТС АСТ САС ССС СА	80
ОЬ8 (НиУЪ7/8)	САС ИСТ СТС СТС АСУ САС САС СС	81
ОЬЭ (НиУЬЭ)#	СИС ССТ СТС СТС АСТ САС ССМ СС	82
ОЬ9 (НиУЪЮН	САС ССА ССС СТС АСТ САС	83
ОСЬ (НиСЬ2}Х	ТСА АСА ТТС ТСТ АСС ССС САС ТС	84
ОСЬ (НиСЬ7)Х	АСА ССА ТТС ТСС АСС ССС САС ТС	85
ОН1(НиУН1В7й)+	САС КТС САС СТС СТС САК ТСТ СС	Θ6
ОН1 (НиУН1С)+	САС СТС САС СТС СТК САС ТСТ СС	87
ОН2 (НиУН2В>	САС КТС АСС ТТС ААС САС ТСТ СС	88
ОНЗ (НиУНЗА)	САС СТС САС СТС СТС САС	89
ОН4 (НиУНЗС}	САС СТС САС СТС СТС САС ЮСУ СС	90
ОН5 (НиУН4В)	САС СТС САС СТА САС САС ТСС СС	91
ОН6 (НиУН4С}	САС СТО САС СТС САС САС ТСС СС	92
ОН7 (НиУНбА)	САС СТА САС СТС САС САС ТСА СС	93
ОСМ (НиС1дМ>	ТСС ААС АСС САС СТТ СТТ ТТС ТТТ	94

*Смесь в соотношении 1:1:1; # Смесь в соотношении 1:1; X Смесь в соотношении 1:1; + Смесь в соотношении 1:1.

Таблица 2. Второй раунд амплификации Укарра, У1атЬда и УН

Название	Нуклеотидная последовательность праймера	5ЕС
праймера		Ιϋ ΝΟ
ОК15	ТСА ССА САС АСС ТСС АСС САС АТС САС ИТС	95
(НиУК1В-5АЬ)	АСС САС ТСТ СС
ОК23 (НЦУК2-	ТСА ССА САС АСС ТСС АСС САТ СТТ СТС АТС	96
ЗАЪ)	АСТ САС ТСТ СС
окзз	ТСА ССА САС АСС ТСС АСС САТ АТТ СТС АТС	97
(НиУК2В2-	АСС САС АСТ СС
ЗАЬ)
ОК43	ТСА ССА САС АСС ТСС АСС САА АТТ СТС ИТО	98
(НпУКЗВ-ЗАЬ)	АСЕ САС ТСТ СС

- 27 027054

ОК53 (Ηυ.νΚ5-	ТСА ССА САС АСС ТСС АСС САА АСС АСА СТС	99
ЗАЬ)	АСС САС ТСТ СС
ОКбЗ (НиУКб-	ТСА ССА САС АСС ТСС АСС САА АТТ СТС СТС	100
ЗАЪ)	АСТ САС ТСТ СС
0СК1 (НиСК1-	САС ТСА ТТС ТСС АСТ ТСС ССС ССС АСС ТТТ	101
ΝΟΤ)	САТ ТТС САС СТТ ССТ ССС
οσκ2 <Ηίΐσκ2-	САС ТСА ТТС ТСС АСТ ТСС ССС ССС АСС ТТТ	102
ΝΟΤ)	САТ СТС САС СТТ ССТ ССС
оэкз <Ηυσκ3-	САС ТСА ТТС ТСС АСТ ТСС ССС ССС АСС ТТТ	103
ΝΟΤ)	САТ АТС САС ТТТ ССТ ССС
οσκ4 <Ηΐυκ4-	САС ТСА ТТС ТСС АСТ ТСС ССС ССС АСС ТТТ	104
ΝΟΤ)	САТ СТС САС СТТ ССТ ССС
οσκδ <Ηΐυκ5-	САС ТСА ТТС ТСС АСТ ТСС ССС ССС АСС ТТТ	105
ΝΟΤ)	ААТ СТС САС ТСС ТСТ ССС
ОЫЗ	ТСА ССА САС АСС ТСС АСС САС ТСТ СТС СТС	106
(НиУЫА-	АСТ САС ССА СС
ЗАЬ) *
ОЫЗ	ТСА ССА САС АСС ТСС АСС САС ТСТ СТС ΥΤΟ	107
(НиУЫВ-	АСС САС ССС СС
ЗАЫ *
ОЫЗ	ТСА ССА САС АСС ТСС АСС САС ТСТ СТС СТС	108
(НиУЫС-	АСС САС ССС СС
ЗАЬ) *
ОЫЗ	ТСА ССА САС АСС ТСС АСС САС ТСТ ССС СТС	109
(НиУЬ2В-5АЬ)	АСТ САС СС
ОЬЗЗ	ТСА ССА САС АСС ТСС АСС ТСС ТАТ СМС СТС	110
(НиУЬЗА-ЗАЬ)	АСТ САС ССА СС
ОЬ43	ТСА ССА САС АСС ТСС АСС ТСТ ТСТ САС СТС	111
(НиУЬЗВ-ЗАЬ)	АСТ САС САС СС
0Ь53	ТСА ССА САС АСС ТСС АСС САС СУТ СТС СТО	112
(НиУЬ4В-ЗАЬ)	АСТ САА ТС
ОЫЗ <НЫЪ5-	ТСА ССА САС АСС ТСС АСС САС ССТ СТС СТО	113
ЗАЬ)	АСТ САС ССС ТС
ОЬ73 (НиУЬб-	ТСА ССА САС АСС ТСС АСС ААТ ТТТ АТС СТС	114
ЗАЬ)	АСТ САС ССС СА

- 28 027054

116

ОЬ85 (НиУЬ7/8ЗАЪ)

ΟΣ93 (НиУЪ9ЗАЪ) #

ОЁ95 (НиУЫОЗАЪ) #

ОДЫ (НиДЫΝΟΤ)

ОДЪ2 <НиДЬ2/3ΝΟΤ)

СДЪЗ (НиДЬ7ΝΟΤ)

ОН13 (Ни7Н1В3ΓΙ) +

ОН13 (ΗυνΗΙΟ3ΓΙ) +

ОН25 <Ни¥Н2В-ЗП)

ОН35 (НиУНЗА-ЗП)

СН45 (НиУНЗС-ЗП)

ОН55 <Ни¥Н4В-ЗП)

ОН65 <Ни¥Н4С-ЗП)

СН75 <Ни¥Н6А-ЗП)

ОДН1 <НиДН1/2ХНО)

ОДН2 (НиДНЗХНО) однз <НиДН4/5ХНО)

ОДН4 (НиДНбХНО)

ТСА ССА САС АСС ТСС АСС САС ЕСТ СТС СТС

АСУ САС САС СС

ТСА ССА САС АСС ТСС АСС СИС ССТ СТС СТС

АСТ САС ССМ СС

ТСА ССА САС АСС ТСС АСС САС ССА ССС СТС

АСТ САС

САС ТСА ТТС ТСС АСТ ТСС ССС ССС АСС ТАС

САС ССТ САС СТТ ССТ ССС

САС ТСА ТТС ТСС АСТ ТСС ССС ССС АСС ТАС

САС ССТ САС СТТ ССТ ССС

САС ТСА ТТС ТСС АСТ ТСС ССС ССС АСС САС

САС ССТ САС СТС ССТ ССС

СТС СТС ССА АСТ ССС ССС САС ССС ССС АТС

ССС САС ЕТС САС СТС СТС САЕ ТСТ СС

СТС СТС ССА АСТ ССС ССС САС ССС ССС АТС

ССС 5АС СТС САС СТС СТЕ САС ТСТ СС

СТС СТС ССА АСТ ССС ССС САС ССС ССС АТС

ССС САС ЕТС АСС ТТС ААС САС ТСТ СС

СТС СТС ССА АСТ ССС ССС САС ССС ССС АТС

ССС САС СТС САС СТС СТС САС

СТС СТС ССА АСТ ССС ССС САС ССС ССС АТС

ССС САС СТС САС СТС СТС САС ИСУ СС

СТС СТС ССА АСТ ССС ССС САС ССС ССС АТС

ССС САС СТС САС СТА САС САС ТСС СС

СТС СТС ССА АСТ ССС ССС САС ССС ССС АТС

ССС САС ЗТС САС СТС САС САС ТСЗ СС

СТС СТС ССА АСТ ССС ССС САС ССС ССС АТС

ССС САС СТА САС СТС САС САС ТСА СС

САС ТСА ТТС ТСС АСТ ССА САС ЕСТ САС САС

ССТ ССС

САС ТСА ТТС ТСС АСТ ССА САС ССТ САС САТ

ТСТ ССС

САС ТСА ТТС ТСС АСТ ССА САС ССТ САС САС

ССТ ТСС

САС ТСА ТТС ТСС АСТ ССА САС ССТ САС ССТ

ССТ ССС * Смесь в соотношении 1:1:1;

# Смесь в соотношении 1:1;

+ Смесь в соотношении 1:1.

115

117

118

119

120

121

122

123

124

125

126

127

128

129

130

131

132

- 29 027054

Таблица 3. Общие сведения о втором раунде амплификации областей УЬ

- 30 027054

ром раунде амплификации областей УН

Таблица 4. Общие сведения о вто

Матрица	5' праймер	3' праймер	Продукт	Доля в РК/РЬ (%)	Пул	Доля в УН (%)
Н1	ОН13	ОТН1	Н1 л	10	РН1	25
ОН13	ОТН2	Н1Т2	10
ОН13	ОТНЗ	низ	60
0Н13	ОДН4	НП4	20
Н2	ОН23	ОДН1	Н2Л	10	РН2	2
ОН23	ОДН2	Н2Д2	10
ОН23	однз	Н2 Л	60
ОН23	ООН 4	Н2Д4	20
на	ОНЗЗ	οτηι	НЗТ1	10	РНЗ	25
ОНЗЗ	ΟΟΉ2	НЗЛ	10
ОНЗЗ	отнз	нзтз	60
ОНЗЗ	ОТН 4	НЗТ4	20
Н4	ОН43	ОТН1	Н4Т1	10	РН4	25
ОН43	ОТН2	Н4 Л	10
ОН43	отнз	Н4ТЗ	60
ОН43	ОТН 4	Н4 Т4	20
Н5	ОН53	ОТН1	Н5Т1	10	РН5	2
ОН53	ОТН2	Н5Л	10
0Н53	однз	НбЛ	60
ОН53	ОТН 4	Н5Т4	20
Нб	ОН65	00Н1	Н6Л	10	РН6	20
ОН63	ОСГН2	НбЛ	10
	ОН 63	отнз	Н6Л	60
ОН 65	ОТН4	Н6Т4	20
т	ОН73	ОДН1	Н7Л	10	РН7	1
ОН73	О6Н2	Н7Л	10
ОН73	отнз	Н7ТЗ	60
ОН73	ОТН4	Н7 Т4	20
					УН 10 0 %

- 31 027054

Таблица 5. Перекрестная активность связывания ПЭГ/ИаСГиреципитированных и стерилизованных фильтрованием одноцепочечных фаговых антител по отношению к НА разных подтипов, которую измеряли в ЕЫ8А

	Μίάί-Ε1ί33 фагов
	Н1	нз	Н5	Н7	в	Бешенство
зсОЭ-ООЗ	+	+	+	+	+	-
зс09-004	+	+	+	+	+	-
ЗС09-005	+	+	+	+	+	-
асОЭ-ООб	+	+	+	+	+	-
зс09-007	+	+/-	+	+	+/-	-
ЗС09-008	+	+/-	+	+	+/-	-
зс09-009	+	+/-	+	+	+/-	-
зсОЭ-ОЮ	+	+	+	+	+/-	-
ЗС09-011	+	+	+	+	+	-
зсОЭ-012	+	+	+	+	-	-
зс09-029	+	+/-	+	+	-	-
зсОЭ-ОЗО	+	+	+	+	+	-
зсОЭ-031	+	+/-	+	+	-	-
зсОЭ-112	+	+	+	+	+	-
ЗС09-113	+	+	+	+	+	-
зсОЭ-114	+	+	+	+	+	-

+ = связывание (>4-кратное по сравнению с фоном);

+/- = низкое связывание (2-4-кратное по сравнению с фоном) - = нет регистрируемого связывания; Н1 = НА вируса гриппа А подтипа Н1; Н3 = НА вируса гриппа А подтипа Н3; Н5 = НА вируса гриппа А подтипа Н5; Н7 = НА вируса гриппа А подтипа Н7; В = НА вируса гриппа В; бешенство = гликопротеид вируса бешенства (негативный контроль).

Таблица 6. РАС8-анализ ПЭГ/НаСТпреципитированных и стерилизованных фильтрованием фаговых антител

	Μίάί-Гасз фагов (% пропускаемых иЬ)
	РегСб	тН1	гаНЗ	тН7
зсОЭ-ООЗ	-	+	+	+
ЗС09-004	-	+	+	+
ЗС09-005	-	+	+	+
зс09-00б	-	+	+	+
зсОЭ-007	-	+	+/-	+
зс09-008	-	+	+/-	+
зсОЭ-009	-	+	+/-	+
зсОЭ-ОЮ	-	+	+	+
зсОЭ-011	-	+	+	+
зсОЭ-012	-	+	+	+
зсОЭ-029	-	+	-	+/-
зс09-030	-	+	+	+
ЗС09-031	-	+	-	+/-
зсОЭ-112	-	+	+	+
зсОЭ-113	-	+	+	+
зсОЭ-114	-	+	+	+

+ = связывание (>4-кратное по сравнению с фоном); +/- = низкое связывание (2-4-кратное по сравнению с фоном) - = нет регистрируемого связывания; РЕИ.С6 = нетрансфицированные клетки РЕИ.С6 (контроль); тН1, тН3, тН7 = связанный с мембраной НА подтипов Н1, Н3 и Н7 соответственно.

- 32 027054

Таблица 7 Данные о СИК-областях НА-специфичных иммуноглобулинов

1дС	νΗ	НС ΟϋΕΙ	НС 0ΏΕ2	НС ΟΏΕ3	УЬ	НС ΟϋΚΙ	НС ΟϋΕ2	НС ΟϋΕ3
СЕ9	ΙΟΗνί-	ΟΟΤ5ΝΝΡΟ	Ι5ΡΙΡ05Τ	ΑΚΗΟΝΥΥΙΎ5ΟΜΙ)Η	ЮНУЗ-	Νν05Ν5	ϋΡΕ	<2УЖ)553РНЕУ
003	69*06	(133)	(134)	(135)	21*02	(136)	(137)	(138)
СК9	1ОНУ1-	ΟΟΤ3ΝΝΥΑ	УЗР1ГОЗТ	ΑΕΗΟΝΥΥΥΝ3ΟΜϋν	ΙΟΗνί-	Ώ5ΝΙ0ΕΕ5	3Νϋ	ΑΑΝϋϋ3ΗΚΟΑν
004	69*06	(139)	(140)	(141)	44*01	(142)	(143)	(144)
СЕ9	ΙΟΗνί-	ΟΟΤ3ΝΝΥΑ	Ι3ΡΙΓ03Τ	ΑΚΗΟΝΥΥΥΥ3ΟΜϋΗ	1СНУ2-	33υνοοΥΝΥ	ϋν3	03ΥΑ03ΑΚθν
005	69*06	(139)	(134)	(145)	14*01	(146)	(174)	(147)
СЕ9	ΙΟΗνί-	ΟΟΤ5ΝΝΥΑ	Ι5ΡΙΡ05Τ	ΑΚΗΟΝΥΥΥΥ5ΟΜΙ)Η	ЮНУЗ-	ΝΙΟ5ΚΤ	СРЗ	<2УЖ)553РНРСАУ
006	69*06	(139)	(134)	(145)	21*02	(148)	(149)	(150)
СЕ9	ΙΟΗνί-	ΟΟΤ3ΝΝΥΑ	Ι3ΡΙΓ03Α	ΑΕΗΟΝΥΥΥΥ3ΟΜϋν	ΙΟΗνί-	35ΝΙΟ3ΝΤ	ΟΏϋ	ΑΤΝϋϋ3ΗΝΟΗν
007	69*06	(139)	(151)	(152)	44*01	(153)	(154)	(155)
СЕ9	ΙΟΗνί-	ΟΟΤ5ΝΝΥΑ	Ι5ΡΙΓ05Τ	ΑΚΗΟΝΥΥΥΥ3ΟΜϋν	ιοπν3-	ΝΙΟ5ΚΤ	0Ώ5	0νΜ)555ϋΗΡΟΑν
008	69*06	(139)	(134)	(152)	21*02	(148)	(149)	(150)
СЕ9	ΙΟΗνί-	ΟΟΤ3ΝΝΥΑ	Ι5ΡΙΡ05Τ	ΑΚΗΟΝΥΥΥΥ3 ΟΜϋν	ιοκνι-	<2Н15зта	3Α3	<2<2ΑΝ5ΡΡΠΤ
009	69*06	(139)	(134)	(152)	12*01	(156)	(157)	(158)
СЕ9	ΙΟΗνί-	ΟΟΤ3ΝΝΥΑ	Ι3ΡΙΓ03Τ	ΑΚΗΟΝΥΥΥΥ3ΟΜϋν	ιοπν3-	ΝΙΟ3ΚΤ	νΏ3	0ννίϋ3Ν3ΏΗΡΟΑν
010	69*06	(139)	(134)	(152)	21*02	(148)	(159)	(160)
СЕ9	ΙΟΗνί-	ΟΟΤ5ΝΝΥΑ	Ι5ΡΙΡ03Α	ΑΕΗΟΝΥΥΥΥ3ΟΤϋν	ΙΟΗνί-	Ρ3ΝΙ0ΕΕ3	3ΝΡ	ΑΑίίϋϋδΗΚΟΑν
011	69*06	(139)	(151)	(161)	44*01	(142)	(143)	(144)
СЕ9	ΙΟΗνί-	ΟΟΤ3ΝΝΥΑ	Ι3ΡΙΡΟ3Α	ΑΕΗΟΤΥΥΥΥ3 ΟΜϋν	ιοπνι-	53ΝΙΟΑΟΥΏ	ΟΝΝ	<25ΥΡ<2ΝΠ5Ε0ν
012	69*06	(139)	(151)	(162)	40*02	(163)	(164)	(165)
СЕ9	ΙΟΗνί-	ΟΟΤ3ΝΝΥΑ	Ι3ΡΙΡΟ3Τ	ΑΕΗΟΝΥΥΥΥ5ΟΜΏν	ιοκν3-	<25ν55Υ	САЗ	<2<2ΥΟ35ΡΓΑ
029	69*06	(139)	(134)	(152)	20*01	(166)	(167)	(168)
СЕ9	ΙΟΗνί-	ΟΟΤ3ΝΝΥΑ	Ι3ΡΙΕΟ3Τ	ΑΕΗΟΝΥΥΥΥ3ΟΜϋν	ιοπν3-	ΝΙΟ5Κ5	ΟΏ3	ςννίΗ355ϋΗΡΟΑν
030	69*06	(139)	(134)	(152)	21*02	(169)	(149)	(150)
СЕ9	ΙΟΗνί-	ΟΟΤ3ΝΝΥΑ	Ι3ΡΙΓΟ3Τ	ΑΕΗΟΝΥΥΥΝ3ΟΜϋν	ιοπνι-	55ΝΙΟΑΟΥϋ	ϋΝΝ	03Υϋ5ΟΗ3Α3ΡΥν
031	69*06	(139)	(134)	(141)	40*01	(163)	(169)	(170)
СЕ9	ΙΟΗνί-	ΟΟΤ3ΝΝΥΑ	Ι5ΡΙΓΟ5Τ	ΑΕΗΟΝΥΥΥΥ3ΟΜϋν	ιοπνι-	5ΑΝΙ0Α0ΥΏ	ΟΝΝ	03Υϋ55Η50ΑΗ
112	69*06	(139)	(134)	(152)	40*01	(171)	(164)	(172)
СЕ9	ΙΟΗνί-	ΟΟΤ3ΝΝΥΑ	Ι5ΡΙΓΟ5Τ	ΑΕΗΟΝΥΥΥΥΒΟΜϋΣ	ιοπνι-	Ό3ΝΙΟΕΕ3	3Νϋ	ΑΑΜϋΑ3Η3ΟΡν
113	69*06	(139)	(134)	(145)	44*01	(142)	(143)	(173)
СЕ9	ΙΟΗνί-	ΟΟΤ3ΝΝΥΑ	Ι5ΡΙΓΟ5Τ	ΑΕΗΟΝΥΥΥΥ3ΟΜϋν	ιοπνι-	Ό3ΝΙΟΕΕ3	3Νϋ	ΑΑΜϋϋ3ΗΚΟΑν
114	69*06	(139)	(134)	(152)	44*01	(142)	(143)	(144)

Таблица 8. Кросс-таблицы идентичности аминокислотных последовательностей вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей

- 33 027054

в.

	0 6 0 0 <л	ЗСО9-1 14	0 0 0 0 и (Л	Различия аминокислот в легкой цепи	01 О О 0 О 0 й	0 N О 0 О 0 й
η 01 0 и Й	1*. о 0 Ф 0 0 <0	ЗСО9-О12	N σ 0 С й	й О 01 О 0 й	Ю 0 0 01 0 0 й	ф О О 0 О ϋ Й	И 0 О 01 О 0 й	0 ή 0 0 О й	О О 0) О и Й	Г» О О 01 0 0 й
	ЗС09-011		0	2	7	14	29	26	34	44	47	47	45	52	47	62	64
	8С0Э-114	100.0		2	7	14	29	26	34	44	47	47	45	52	47	62	64
	ЗС09-С04	98.2	96.2		ί	16	27	24	32	42	49	49	47	54	49	62	64
	8С09-113	93.6	93.6	95.5		17	25	22	29	41	46	46	44	51	47	62	64
X ПЗ	5СС9О07	87.3	67.3	855	84,6		26	25	32	42	41	41	41	47	43	61	61
I ф	5С09-012	73.9	73.9	75.7	77,5	76.6		9	13	39	48	48	47	52	46	61	62
о о. с	5С09-112	76.6	76.6	76.4	80.2	77.5	91,9		13	37	45	45	44	5,	45	60	60
аз X	5СМ	69.9	69.9	71,7	74.3	71.7	86,5	88.5		37	50	50	49	53	46	60	62
6 о	8С09-М5	60.4	60.4	62,2	63.1	62.2	64,9	66.7	67.3		55	55	54	56	46	64	63
7 5 и	5С09-006	58.0	68.0	56.3	589	63.4	57.5	60,2	55.8	51.3		0	3	7	17	«	61
I Ф	50008	58,0	580	56.3	589	63.4	57.5	602	55.8	51.3	100.0		3	7	17	64	61
	50030	59,8	55.8	58.0	60.7	63.4	58.4	61.1	56.6	622	97.3	97.3		И	14	62	59
	5Μ9-010	53.6	53.6	51.8	54,5	580	540	54.9	53.1	50.4	93.6	93.6	90,9		22	67	67
	5С09003	57.7	57,7	559	57,7	61.3	57.1	59.8	59.3	580	84.6	84.6	87.3	80.0		62	56
	5009009	45.1	45,1	45.1	45.1	460	46.5	47.4	47.4	43.4	42.9	429	440	402	44.1		34
	5С09-029	43.4	434	43.4	43.4	460	45,6	47.4	450	44.3	45.5	45.5	47.3	402	49.6	682

НА Н3 А ^18соп8ш/67/2005; Н5 = растворимый рекомбинантный НА Н5 А/У1е1пат/1203/04; Н7 = растворимый рекомбинантный НА Н7 А/Не1йег1апЙ5/219/2003; Н9 = растворимый рекомбинантный НА Н9 А/Нопд Копд/1073/99; В = растворимый рекомбинантный НА вируса гриппа В В/0Шо/01/05; бешенство = гликопротеид вируса бешенства; РЕР.С6 = нетрансфицированные клетки РЕР.С6 (контроль); тН1 = экспрессированный в РЕР.С6 НА Н1 А/№\у Са1ейота/20/1999; тН3 = экспрессированный в РЕР.С6 НА Н3 А/\У15соп5Й1/67/2005; тН7 = экспрессированный в РЕР.С6 НА Н7 А/Не1йег1апЙ5/219/2003; N0 = не делали; + = связывание (> 10кратное относительно фона); +/- = низкое связывание (2-10-кратное относительно фона); - = нет регистрируемого связывания.

- 34 027054

Таблица 10. Перекрестная нейтрализующая активность 1§С

	Под- тип	Штамм	СП9005	СР9112	СВ.9113	СР9114
Труп	Н1	Α/1Τ5Ν/33	1,1	0/ 9	1/1	1/ 1
па I		А/Ыем Са1едоп1а/20/99	2,6	1,9	4,4	3/7
		А/ 5о1отоп	1, 4	1/ з	2,2	1/ 8
		151апс1з/3/200б
		А/ В г ί зЬапе/59/2007	3, 4	2	3,1	2, б
		А/СаИ£огп1а/7/2009	0, 7	0, 5	0, 3	0, 3
	Н2	А/Епу/мри315б/05	8,8	6, 3	8,8	8, 8
	Н5	А/Нопд Копд/15б/97	0, 8	0/ 7	0/ 9	0/ 4
		А/ЕИ/МРЕ461/07	10,5	10,5	8,8	10,5
	Нб	Α/ΕΗ/ΜΡΏ411/07	29,7	10, 5	17,7	10, 5
	Η8	А/ЕИ/МРН571/08	8,8	8,8	8,8	8, 8
	Н9	А/Нопд Копд/1073/99	6, 3	3, 7	3, 7	4, 4
		А/Ск/НК/35Р176/09	4,4	4/4	6,3	6,3
Труп	нз	А/Нопд Копд/1/βδ	42	27,6	22, 3	19
па		А/ Цо]тагтезЬигд/33/94	17,7	13, 8	32, 4	21, 9
II		А/Рапата/2007/1999	28,2	47,5	47,5	39,9
		А/Н1гозк1та/52/2005	22,9	10,5	13, б	12,5
		А/ίίί εοοηείη/67/2005	35, 4	29, 7	35, 4	32,4
		А/Вг1зЬапе/10/2 007	11,2	5, 6	9, 4	5, б
Н4	А/НЕ/МРА 892/06	1,2	0,8	1/3	0, 8
Н7	А/Ма11аг<Я/НеЕЬег1ап<^з	9, 6	6, 3	6, 3	4, 8
	/12/2000
	А/Ыеи Уогк/107/2003	>100	>100	>100	>100
НЮ	А/СЫск/5егтапу/Ы/4 9	29, 6	26, 5	19,8	15, 7
Н14	А/Ма11агс1/А$1;гакЬап/	>100	>100	>100	>100
	263/1982

Титры (указанные в мкг/мл) являются средними геометрическими значениями 1С50, которые определяли согласно способу Спирмена-Кабера на основе по меньшей мере двух повторов экспериментов; >100 = нет нейтрализации при самой высокой тестированной концентрации (100 мкг/мл).

- 35 027054

Последовательности >5009-003 УН ДНЕ (БЕС ΙΟ N0: 1:

САССТССАССТССТССАСТСТСССССТОАССТСААСААСССТСОСТССТСССГСАЗкАСТСТССТССААСТСГТС

ТССАСССАССТССААСААСТТТССТАТСАеСТеССТАССАСАССССССТССССААДСССТТСАСТССАТСССССССАТСА

ОСССААТСТТТССТТССАСАСТСТАСССАСАСАААТТТСАОСССАСАСТСАСТАТТТССССССАСАТАТТТТСАСАСАСС <ЗССТАСАТССАЙА7<5ААСА<5ССТ6АСАТСТСАССАСАС66ССЗТСТАТТТСТ£ТСССАОССАСОСАААТТАТТАТТТСТА

СТССССТАТОСАССТССССОСССААЗСОАССАСССТСАСС >5009-003 УН БЕЛОК (5Е0 10 N0: 2)

ЕУ(ДЬ\/Е5СэАЕУККАСз55УКУ5СК55^|5еТЗЫМЕС15ИУйуАР(50СЬЕ^М(л(л1.$'РГК'5.5Т\'^гУА0КГ0СК-₁/ТТ5А0Т

Ρ5ΗΤΑΥΜΕΜΜΞίΤΞΕΟ72ΥνΥΡ0ΑΚΗ2ΜϊΥΡϊ5ΟΜΟίίΐ(30ΟΤΤνΤ >5009-003 VI, ДНК (ЗЕО 10 >Ю: 3;

ТССТАТСТССТСАСТСАСССАСССТСССТСТСАОТССССССАССАСАСАСССССАССАТТТССТСТСССССАСА

СААСОТТСОААСТААСАОТСТОСАСТССТАССАОСАОААСССАСОССАССССССТЗТССТСССССТСТАТСАТСАТСССС

АССОАСССТСАСССАТСССТСАСССАСТСТСТСССТССААСТСТСССААСАСССССАСССТОАССАТСАОСАССОТССАА

СССССССАТСАСССССАСТАГТАСТСТСАССГСТСССАТАСТ.АСТАСТСАГСАТССАСТСТТСССААСТгЗССАССААОСТ

САСССТССТА6 >5009-003 νί БЕЛОК 15Е£ 10 N0: 4)

5Υνί70ΡΡ5ν5νΑΡσθΤΑΤΙ5Ο0ΟΟΝν05Μ3νΗΗ?Υΰ0ΚΡ00ΑΡνίννΥ00ΚυΚΕΗσΐΡΕΗΕ5ΰ5Η50ΐπΑΤίΤΐ

5ΚνΕΑ0ΕΕΑ0ΎΥ0ςνΐωε5$0ΗΗνΕβΤ0ΤΚντνί >5009-004 νΗ ДНК ίίΕΟ ΙΟ N0; 5}

САССТССАССТССТАСАСТСТСССС-СТСАССТСААСААСССТСОСТССТСССТСАААСТСТССТССААСТСТТС

ТСССеСОАССТССААТААСТАТСССАТСАОСТОССТеССАСАССССССТССАСАА.СеССТТСАСТСеАТСССОССССТСА

6СССТАТСТТТС6Т7СОАСАСССТАСОСАСАСААСТТССА£СССАОАСТСАСТАТТТССОСССАСА7АТТТТССААСАСА

СССТАСАТССАОСТСААСАОТСГаАСАГСТСАССАСАССОССеТСТАТТАТТСТСССАСАСАОСССААТТАТТАТТАСАА

СТССССТАТСОАССБСТОС-ССССААСОСАССАСССТСАСО >5009-004 УН БЕЛОК 15Е0 ГО МО; 6!

0ν0ίν05ΟΑΕνΚΚΡΟ55νΚν5ΟΚ550ΟΤ5ΜΜΥΑΙ3ΚνΕ0ΑΡΐ300ίΟΗΜ0θν5?ΙΡΐ337Αϊ·Α0ΚΚζ_!ΟΚνΤΙ5Α0Τ ?5ΜΤΑΥΜΕίΝ5ίΤ3ΕΟΤΑνΥΥΟΑΕΗΟΜΥΥΥΝ50Μ0νΝΟ00ΤΤνΤ >5009-004 УЬ ДНК (5Е£ ГО МО: _}

САбТСТСТОСТОАСССАОССОСССОСАЗТСТСТОСОАСССССООССАСАССОТСАССАТСТССтТСТТСТССААС

ТСАТТССААСАТСООСА'ЗААСААСТСТАААСТССТАССАОСАСТТССОАСОААССОСССОСААА^ТОСТОАТСТАТАОТА

АССАТСАОССеСССТСАСТССТСССТСАСССАТТСТСТСССТССААСТСССССАССТСАасСТОССТССССАТОАСТССС

ΟΟΟΟΑΟΤΟΤΟΑΑΰΑΤΟΑΰΟΟΟ’ΰΑΑΤΑΊ'ΤΑΟ'Ι'ΟΤΟΟΑΟΟΑΤΟΟΟΑΤΟΑΟΑΟΟΟΤΟΑΑΟΟΟΟΟΟΤΰΤΟ'ΓΥΟΟΟΑΰΟΑΟΟΟΑΟ

ССАССТОАСССТССТСС

- 36 027054 >5009-004 УЪ БЕЛОК ΐ 5 □<> Ю N0: 0)

05УЬТСРРАУ50ТРеОКУТ13С5О505МЮАК5УНИ¥С0ЕРСТАРКЕЫ¥ЗМБ0ДРЗУУРС-АЕ£СЗКЗСТЗА5Е

АТЗОЪСЗЕОЕАЕУУСААИООЗЬЮЗАУГОЗСТОЬТУь >5009-005 УН ДНК [5ЕО ΙΡ НО: 9)

САССТССАССТСеТССААТСТСССССТСАСеТСААеАСеОСТСССТССТСССТСЛА/^ОТСТССТСС/АЛС'ГС'БТС

ТйСАОССАССТССААТААСТАТССТАТТ.АС'ТТС^СТСССхАСАСССОССТССАСАА'ЗСОСТУ'ЗАОТССЗАТССОСОеОАУСА

ССССТАТСТТТОСТТССАСАСТСТАСССАСАОАААТТССхАССССАОАСТСАСТАТТТССОСССАСАТАТТТТССААСАСА

ΟΟΟΤΑΟΑΤΟΟΑΟΟΤΟΑΑΟΑΟΟΟΤΟΑΟΑτθΤΟΑΟΟΑΟΑ003000ΤΑ·?ΑΤΤΤΟΤΟΤΟΟΟΑΟΟ€ΑΟΟΟΟΑΑΟΤΑΤΤΑΤΤΑ€τΑ

СТССООТАТОСАССТСТССССССАА.ОСЗАССАСССТСАСС >3009-005 УН БЕЛОК (5Ες 10 N0: 10)

0νθΒν03ΐΐΑΕνΚΚΡΟ35νκν5ϋΚ53ΰΰΓ5ΝΝΥΑΙ3νίνΗςιΑΡθς)ΟίΡΝΗΟΰΐ3ΡΙΞΌ3ΤνΥΑ0ΚΕ03ΕΥΤΐ5ΑΡΐ

РЗНТАУМЕЬМЗЕТЗЕОТАУУГСААНСЫУУУУгСИОЬМСОЗТТУТ >£С09-005 УД ДНК !ЗЕ£) 1_{0 :} п;

САбТСТССССТСЛСТСАСССТСССТСССТеГСТбССГетССГССАСАСТССАТСАССАТСГССТССАСТССААС

САССАСТОАСОТС<35ТООТТАТ_ААСТА?ОТСТССТОСТАССААСААСАСССАООСАААОСССССАААСТССТОАТТТТТО

АТЗТСАСГеАТСЗССССТСАСССбТТТСТСАТСССТТСТСТСОСТССААСТСТССЗЗАСАССОССТСССТОАССАТСТСТ

ССАСТССАСССТСАССАССйСССТ0;АТТАТТАСТЗСТССТСАТА7(ЗСАССТАСТСССААСС;СССТСТТСЗСААСТСССАС

СААЙОТСАССС-ТССТАС >3009-005 УД БЕЛОК ,5Е0 ТО N0: 12)

ОЗАЬТОРАЗУЗЗЗРСОЗГТ13С73ТЗЗОУСС1'К¥УЗ^,Л¹2'ООАРСК.АРКЬЫЕРУЗЕКРЗСУЗОКГЗОЗКЗАОТАЗ

КТ15еь0А00ЕАС¥¥ССЗУАС2АК'ЗУРО7ОТКУТУЕ >3009-006 УН ДНК (ΞΕΰ 2Р НО: 13)

САССТССАССТООТеЗАСТСТСеСССТСАССТСААСАССССГССС-ТССТСССТСАААСТСТССТЗСААСТОТТС

ТОСАСЗСАССТССДАТААСТАТССТАТТАСТТСССТеССАСАС-СССССТЗСАСАй.СОССТ^ЗАСТОЗАТООСССССАТСА &СССТАТСТТТССТТССАСАСТСТАСС-САСАСАААТТССАСЗеСАЗАСТСАСТАТТТС'ЗССССАСАТА7ТТТССААСАСА

СССТАСАТССАССТСААСАСССТСАСАТСТСАЙСАСАССОСССТАТАТТТСТСТСССАСССАССССААСТАТТАТТАСТА

СТССЗСТАТССАССТСТЗООСССААЗССАССАСССТСАСС >ЗС09-00б УН БЕДОК [ЗЕС 10 КО: 14)

ЕУ0ДУ£5САЕУККРС53УКУЗСК53СеТЗЫМУА15ИУК£А?С0,ЗЪОЮМСС15Р1ГСЗТУ¥АСКГ0С:КУТ13АЕ1

Ε5Ν?Αϊ·Μ£ΕΚ5ΣΤ3ΕΡΤΑνΥΓ0ΑΚΗι3ΝΥΥΥΥ3ΰΗΕΟ)0ςΰΤΤνΤ >3009-006 УД ДНК Ι3Ε0 Ю МО; 15)

ТССТАТОТОСТбАСТСАЗССАСССТСССТСТСАОТСОССССАССАСАСАССОССАССАТТАССТОТОССССААА

СААСАТТСЗААОТААААСТСТ&САТТССТАСОАЗСАОААСТСАОСССАЗЗССССТСТС-СОСЗТСОТСТАТСОТДАТАОСС

- 37 027054

АСС ООСССТСАССО А'ГС-ССЮАОСЗА'ГТС'Г СТООСТ СС ААС1 С ТЗОО АС САСООССАСССТОАоСАТСАЗСАСоС ТССАА ССССССС^АТСАСЙССЕАС'ТАТТАСП'СТСАС^ТСТСЦСАТАСТАСТАСТСАТСАТСССССТСС'ГСТСТТСЗеАСеАСССАС

ССАССТЙАССОТОСТСС5 >ЗСОЭ-ООб УЬ БЕЛОК ?5Е<2 10 N0: 161

Р.УУОТОРРРУРУАРОО'ТАПТСССММЮСКГУИНУООМОООАРУНУУУООЕОРРЗОТРЕРГЗООМНОТТАЕТОГ

ЗНУЕАЭОЕАПУУС07Ь'Э3550НРСА7РССБТСОТУЪ >3009-007 УН ДНК [БЕС 10 МС; 17)

САССТССАССТССТССААТСТСОАССТСАССТСААСААСССТСССТССТС5СТСАА5ОТСТССТОС.ААСТСТТС

ТССАСЗСАССГССААТААСТАТССТАТСАССТСССТСССАСАССССССТССАСААС'ЗССТТСАСТССАТСССАСССАТСА

ССССТАОСТТТССТТСАОСАСССТАСССЛСАСАЛСТТССАССОСАСАОТСАСТАТТАССССОСАСАТАТТТТССААСАСА

СТСТАСАТССАССТСААСАСССТСАСАТСТСАССАСАССССССТС7АТТ?ЮТСТСССАСАСАСССС-АГгТТАТТАТТАСТА

СТССССТАТОСАССТСТССССССААССОЛССАССеТСАСССТСТСОАСС >5009-007 УН БЕЛОК [5Е0 10 N0; 13;

ОУ0Ь7С5САЕУКЕ<РС55УКУ5СК38ССТ5ММУА15ИУВ.0АРС0СЬОИЦСС13р:ЕС5АА¥А0КК0ОВУТ1ТАО1

Г5КТ7УМЕЬМ5ЬТ5ЕОТАУУУСААНСМ¥У¥У5СМОУГСОООТТУТУ58 >5009-007 УЬ ДНК (ЗЕ£ 10 МО; 19)

ТССТАТОТОСТСАСТСАОССАСССТОАСССТСТССС-АСОССССССОАОАОООТСАССАТСТСТТ5ТТСТССААО

САССТССААСАТСЗСААСТ_ААТАСТЗТААЛСТССТАСС7^ССАССТССССССААСССССССС?.ААС^ССТСАТСТА'ГССТС

АТСАТСАСССССССТСАССССТСССТСАСССАТТСТСТСССТССААСТ'СТСОСАССТСАСССТСССТССССАТСАСТССС

СТСОАСТСТСАССАТОАСССТОАТТАТТАСТОТССААСАТСССАТЗАСАСССТОААТООТСАТСТСГТСССАССАОСОАС

СОАССТОАОООТООТСО >5009-007 УЬ БЕЛОК (БЕО 10 МО: 20)

ΞΥνΜΤ0ΡΡ3Α5ΟΤΡΟΟΗντΐ5Ο5Ο38ΰΜ1Ο5ΝΤνΝΜΥ00νΡΟΊ·ΑΡΚΕΜΙΥΟΟΟϋΗΡ3θνΡΟΚΚ3Ο5Κ8ΟΤ0Α5Μ

ΑΙ3ΰί03ΕΟΕΑΟΥΥΟΑΤΜ0Ο5ίΜΟ-Ρ;νΓΟΟΟ-ΤςίΤνί >5009-003 УН ДНК ί5Ε0 ΙΟ ΝΟ; 21)

БАССТССАООТСОТООАОТСТООООСТОАОС-ТСААОААСССЮООТСОТСОСТОАСАОТСТССТСТААОТСТТС

ТСОАСОСАССТССААТААСТАТОСТАТОАССТСССТСССАСАССССССТСОАСААСОССТТСАСТЗОАТССССООСАТСА сссстатстттссттссасаосстасссасасаасетссаосссасаотсастатттсссссоасататтттозаасаса

СССТАСАТССАОСТОААСАСССТСАСАТСТОАСОАСАСОСОСОТАТАТТТСТОТСССАСЗСАОСООААТТАТТАОТАОТА

СТССССТАТЗСАССТСТСОССССААСССАССАСЗООСАСССТСТССАСС >5009-003 УН БЕЛОК (5Е0 10 N0: 22)

Εν0Ε7Ο50ΑΕνΚΚΡΰ58νΚν5θΚ550ΰΤ5ΜΜΥΑΐ5ΜνρςιΑΡ000ίθνίΜ00ΐ3?ΙΡ35ΤΑ¥ΑθΚΓΟΟΡντΐε?.ΟΙ

Ε5ΝΤΑΥΜΕίΝ5ΕΤ3Ε9ΤΑνΥΕΟΑί<ΗβΝΥΥΥΥ5ΰΜθνΗ80θ:ΤΤνον53

- 38 027054 >5009-008 VI ЦНК 10 ΝΟ; 23)

ТССГАТСТЗСТСАСТСАССОАСССТС-ЗСТАТОАСТОеССССАССАСАСАССССОАССАТТАССТСТСОСССААА

ОААСАТТССААСТАДААСТСТССАТТС-ОТАССАССАСААГТСАССССАССССССТСТСОТССТСеТСТАТССТСАТАОСЗ

АСССЗСССТСАСССАТСССТбАСОСАТТСТСТСССТССААСТСТСССАСОАСОСССАСССТСАССАТСАССАСССТССАА сссссссатсасссссастаттастзтоасстзт-зссатаотастастсатоатсоссстсстстсттсосазсасссао

ССАССТСАССЗТССТСС >ЗС09-008 УЬ БЕЛОК {5Е£ БД N0; 24)

ЗУУЬТ^РРЗУЯУАРСОТАРТТСООМИТЗЗКТУНИУ'О^МЗСОАРУЬУУУСОЗОРРЗСТРЕРБЗСЗМЗЗТТАТЬТ!

ЗРУЕАСОЕАОУУСОУКЬЗеЗЬНРЗЛУЕЗОСТОЬТУЬ >3009-009 УН ДНК [5Е0 10 ИО; 25)

САСЗТССАССТССТОСААТОТООСССТСАССТСААСААОССТСССТССТСОСТС.АААСТСТССТССАА.СТСТТС

ТСОАЗССАССТССААТААСТАТЗСТАТСАОСТООСТССЗАСАССЗСССТЗСАСААЗОССТТСАСТЗСАТЗССЗССЗАТСА

ССССТАТСТТТССТТССАСАСССТАСССАСАСАААТТССАССССАСАСТСАСТАТТТССССССАСАТАТТТТССААСАСА

СССТАСА'2ССАССТСААСАСССТСССАТСТСАССАСАССС5СССТАТА^г-ГТСТОТСССАСССАСССаААТ ТАТТАТТАСТА

СТССССТАТССАССТСТОСССССААЗСОАССАСбСТС.АСССТСТСбАСС >5009-009 УН БЕЛОК (ЗЕО 10 КО: 26)

0УУЬУ^5САЕУККР055УКУ50К55ССТ51т¥А15МУК0АРО0СЬОМНСС15Р1ЕС5ТАУА0КЛ^СРУТ15А01 ΓΞΝΤΑΥΜΕΚΝ5ΕΑ8Ε0ΤΑνΥΚ0ΑΡΗ0ΝϊΎΥΥ5ΰΜ0ν№3$0Τντ7$5 >5С09-СС9 УЬ ДНК (5Б0 10 N0: 27)

ОАСАТССАОАТСАСССАСТСТССАТСТТССОТСТСТССАТСТСТАОСАОАСАСАСТСАССАТСАСТТСТСОССС

САСТСАССАТАТТАОСАСТТСЙТТАОССТС-СТАТСАССАСААОССАСОСАААЗССССТСАССТССТбАТСТАТТСТССАТ

ССеОТТТССАААСТССООТСССАТСААОСТТСАСССССАСТССАТСТССОАСАСАТТТОАСТСТСАССАТСАССАСССТС

САСССТСААСАТТТТССААСТТАСОАТТСТСААСАСС-СТААСАСТТТСССССТСАСТТТССЗССОТСССАССАААСТССА

ТАТСАААС >3009-009 УЬ БЕЛОК (5Е0 1Ь N0: 28)

С10МТО5Р55УЗА5УССРУТ1ТСРАЗОН135МЬАИУО0КРСКС?ОЬЫУ5Л5РЬО5СУРЗР.ЕЗС5СЗСТ0ЕТЬТ

125Ь0РЕ0ГАТУУС(22АМ5ГРЬТБ0РСТКУ01К >5009-010 УН ДНК (5Е0 ТЬ N0: 291

САССТССАСОТССТССАСТСССССССТеАСОТОААЗААОССТСССТССТОССТСАААеТСТССТССААеТСТТС

ТееАОССАССТССААТААТТАТОСТАТСАССТбССТСССАСАССССССТССАСААСеССТОеАСТОСАТбСеССЗ&АТСА

ССССТАТСТТТССТТССАОАОССТАСССАСАСААСТТССАССССАСАСТСАСТАТТТССССССАОАТАТТТТССААОАСА

СССТА0АТССАЗСТСААСАСССТЗАСАТСТСАССАСАССЗССЗТАТАТТАСТЗТССЗАЗССАССЗСААТТАТТАТТАСТА

СТССССТАТСОАСОТСТСООСССААСССАССАСССТСАСССТСТССАОС

- 39 027054 >3003-010 УН БЕЛОК ί 3 Ε<2 ΙΟ ΜΟ: 30,'

ЕУ0ЬУБ£Г1АЕУККРС55УКУ5СК55ОСТЗММУА‘5ИУКйА?Ст<2С1.0ИМОО15Р1БС5ТА¥АСКГ0СКУТ13АО1

Γ3ΝτΑΥΚίΠ·]3ΏΤ5ΕΟΤΑνΥΥ0ΑΚΗΰΙ·!ΥΥΥΥΞθΗΌνΜΰΰΟΤΤντνΞ5 >5009-010 ΥΣ ДНК (3Ε0 10 КО: 311

ТССТАТСТОСТСАСТСАСССАОССТССОТСТОАОТССОССОАОСАСАСАООООСАООАТТАОСТОТОССООААА

СААСАТУССААСТААААСТОТССАТТсгТАССАССАСААСТСАОСССА^ПССССТЗТСОТССТССТСТТТОТТСАТАССС

АСООТСССТОАСССАТССАТОАООСАТТСТСТОССТОС.ААСТСТСССТССАСС|ЗСОАСОСТОАСОАТСАЗОАССОТООАА ΰΟΟΟΟΟΟ-ΑΤΟΑΟΟΟΟΟΑΟΤΑΤΤΑΟΤΟΤΟΑΟΟΊΌΤΟΟΟ-,ΑΤΑΟΤΑΑΤΑΟΟΟΑΤΟΑΤΟϋΟΟΟΤΰΟ'ί’ΟΤΟΤΤΟΟΟΑΟΟΑΟΟΟΑΟ

ССАОСТОАОСОТССТСО >3009-010 УД БЕЛОК (5Е0 Ιϋ КО; 52)

5УУДТСРР5У5УАРС0ТАК1ТС0СНК1СЕКТУНЮ'ССК5ССАРУДУУГУЕ50РР5С1НЕРЕСС5К5С5ТАТЬТ1 ззуеасоеапуусоукюзкзенрсауезсстоьтуь >5009-011 УН ДНК (ЗЕО 10 КО: 331

САОСТОСАССТССТАСАСТСТОССЗСТОАОСТОААОААССОТОСОТОСТСаСТОААООТСТССТеСАА.О'ГОТТС

ТПСАСССАССТССААТААСТАТЗСТАТСАССТСССТйССССАеССССОТС'ЗАСААПесСТТОАСОеЗАТеССАС-ЗЗАТОА

ССССТАТСТТТССТТСАССАСССТАСССАСАСААСТТССАССеСАСАСТСАСТАТГАССССЗСАСАТАТТТТООЛАСЛОА

ΟΤΟΤΑΟΑΤΰΟΑΟΟΤΟΑΑΟΑΟΟΟΤΟΑΟΑΤΟΤΟΑΟΟΑΟΑΟσΟΟΟΟΤΟΤΑΤΤΑΟΤΟΤΟ-ΟΟΑΟΑΟΑΟΟΟΟΑΑΤΤΑΤΤΑΤΤΑΟΤΑ

СТССЗОТАСООАССТСТЗОССССААОСОАССАОССТОАСОС-ТСТССАОС >£009-011 УН ЕЕЛОК Ϊ5Ε3 IО КО: 34)

Е7ОЬ793САЕ7ККРЗ£37КУ5СК55ССТ5ММУА15НУЕОАРС'ЗСЬО™СС15Р:Г'5ЙЛАУЛОКГ2ОЕ7Т1ТАО;·

ЕБКТУУМЕЬМЗЬТЗЕЕТАУУУСАИНСЫУУУУЗСТЕУИеОСТТУТУЗЗ >3009-011 УД ДНК ·;ΞΕ£ ±0 КО: 35)

ТСОТАГЗТОСТСАСТСАСССАСССССАЗТОТСТССаАССССССОЙСАбАС.ОСТСАССАТСТССТОТТСТССААС

ТСАТТССААСАТСОССАЗААСАЛОТОТЛААСТСЗТАССАОСАОТТеССАССААСеоеССССЛААСТССТСАТСТАТАСТА

АССАТСАСССССССТОАЗТССТСССТСАСССАТТСТООСССТССААСТСССССАССТСАЗССТСССТеССОАТСАОТСОС

СТСОАСТСТОААЗАТОАОСССС-ААТАТТАСТОТССАОСАТСОСАТОАСАОССТСААООСЗССТСТСТТСООАСОАОССАС

ССАОСТОАССОТССТСС >5009-011 УД БЕЛОК (5Е£ 113 N0: 36)

5¥УЪТОРРАУ5СТРСОКУТ1$СЗС£О5Н1ОКК37№^0ОРРСТАРКЪЫУ5НО$К?5УУРОЗЕ$С5К5СТ5А5Ь

А15СДфЗЕЕ5АЕУУСАА1ТО51ЖСАУГС-ССТ0ДТУД >5009-012 УН ДНК [5Е0 10 N0: 37) бАеСТССАССОССТАСАСТСТССЗССТОАССТСААСА.АСССТСССТССТССОТСААССТСТССТООААСТСТТС

ТССАЗССАССТССААТААТТАТССТАТСАССТСССТСССАСАССССССТССАСААОСССТТОАСТССАТССЗАСЗеАТСА

ССССТАТТОТТССТТСАССАСТСТАСССАСАОААСТТССАОСОСАСАСТСЛСТАТОАССОСССЛСАТЛТТТТССААСАСЛ

- 40 027054 вТСТАСАТССАЗСГаААСАСССТОАСАТСТСАЗЗАСАССССССТОТАГТАСУ’ОТССОАСАОАСГРООАОТТАТТАТТАСТА

СТССССТАТСОАСеТСТССбСССААЗССАССАСССТСАСССТСТССАСС >3009-012 УН БЕЛОК (ЗЕ<2 IО N0: Ж

ЕУСЬУЭ5САЕУККРС53УКУ53К35ССТ5Ш4УА15И7?22АРС£СЪ№МСС15Р1 ЕЗЗАУ ΥΑΟΚΓΟΌΡΛ'ΤΙΤΑΌΙ ГЗЫТУУМЕЪН5ЪТЗЕОТЛУ¥¥ОЛКНСТ¥У¥УЗОМБУИС0СТТУТУ53 >3009-012 УЪ ДНК (ЗЕС 10 НО: ЗУ)

САСТСТСТСОТОАСССАОССООСОТСАОТСТСТСОССОЗССАОСЗСАбАЗООТСАССАТСТСОТССАСУООСАС

САСеТССААСАТСС-ССССАССТТАТСАТСТАСАСТССЛАССАССАССТТСОАСОЗАСАССССССАААСТССТСАТСТАТе

СТААСААСААТСОСССОТСАОООЗТСОСТСАСООАТТСТСТОСОТОСААСТСТООСАССТСАОССТСССТООССАТСАСТ

ЙОССТССАОеТТСАе&АТСАбаСТСАТТАТТАСТСССАеТССТАТСАССАЗААССТСАСТСАСССОСТСТТСЗОСССАЗе

САССААОСТСАССОТСОТАО >3009-012 УЪ БЕЛОК (3Е£ 10 N0: 40)

СЗУУТОРРЗУЗОАРОЙРУТТЗСТСЗЗЗНЮАОУБУНИУООЬРОТАРКЪЫУОК'НМКРЗСУРСКГЗСЗКЗСТЗАЗ

ЪА1Т0Ь£УЕРЕАП¥УС03У0С51]Ъ5ЕСУЕСССТКЪТУЬ >5009-029 УН ДНК (5Е£ 1С НО: 41) еАССТССАССТОСТССАСТСССССССТСАСОТСААСАЛСССТСООТССТСЗСТСАААСТСТССТОСААСТСТТС

ТССАСеСАССТОСААТ.ААСТАТЗСТАТСАбСТЗССТОСОАСАС-СССССТОСАСААССССТТСАСТССАТСССССССАТСА

ОССОТАТСТТТЗОТТСОАСАЗССР.АООСАСАОААОТТССАЗСОСАБАСТСАО'ГАТТТСССССОАСАТАТТТТСЗААСАСА

0ССТАСАТС-САЗСТ£ААСАСССТСАСАТСТСАЗЗАСАСС£СС0ТАТАТТАСТСТССЗАСССАССС0ААТТАТТАТ7АСТА

СТСССЗТАТСОАССТСТОССОССААОССАССАСЗСЕОАСССТСТСОАеС >5009-029 УН БЕЛОК (ΞΕΏ Ю МО: 42)

ЕУЗГ;Е53А£УККРС$ЗУКУЗСК55ССТ5МНУА13ИУР£АРССЗЬБИМСЙ15Р1ЕС$ТАУЛ'2КГСО-РУТ15АР1

ЕЗМТАУМБЬМНЪТЗЕОТАУУУСАКНСМУУУУЗСМОУЖдаТТУТУЗЗ >3009-029 УЬ ДНК (ЗЕ£ ΙΌ ИО: 43)

ЗАААТТЗТОАТОАСССАОТСТССАСССАСССТСТСТТГСТОТССТСООСАААСАСССАСССТСТССТОСАОЗСС

САСТСАЗАСТСТТАССАССТАСТТАСССТССТАССААСАСАААССТССССАСЗСТСССАСССТССТСАТСТАТССТССАТ

ССАССАОеОССАСТСССАТОССАОАСАСОТУОАСТОЗСАСТЗОСТОТСООАСАСАОТТСАСТСТСАООАТСАОСАОАСТО

ЗАСССТЗААСАТТТТССАЗТСТАТТАСТСТСАССАСЪАТСССАССТСАССАТТСССТГТССЗСССТСССАССААССТОСА

ЗАТСААА >5009-029 УЬ БЕЛОК !5Е0 10 N0: 44)

ЕТУМТОЗРСТЬЗЪЗРЗЕРЗТЬЗСВДЗОЗУЗЗУЪАИУООКРбЗАРПЬЬТУбАЗТКАТСТРОРРТЗЗСЗОТПГГЬТ

ТЗКЪЕРЕОГАУУУСЗОУСЗЗРЕАЕСРОТКУЕтк >3009-030 УН ДНК (ЗЕ£ 10 N0: 45)

- 41 027054

САСАТССАС-СТООТССАСТСТООСОСТЗАССТСААСААСССТСЗОТССТСССТСАААаТСТССТОСААСТСТТС тссасссасстссаатаастатсстатсасстссстоооасасссссстссасаассссттсасюоатососссоатса

СООСТАТОТТТССТТСОАСАОССТАСООАСАОААС'ГТССАОСССАСАОТСАСТАТТ7ССОСОЗАСАТАТТ7ТСОААСАСА

СССТАСАТССАООТСААСАСССТСАОАТСТОАСОАСАООЗССОТАТАТТ7СТОТОССАСООАСОСОААТТАТТ?ь7ТАСТА

СТССбОТАТеСАССТСТОвСбССААЗООАСОАСОСИСАССОТСТССАОС >5009-030 УН ВЕСОК [ЗЕО ΖΟ НС: 40) ΰΜςΐΣνς5δΑΕνΚΚΡ555νκν3€Κ55ΰ0Τ5ϊ1ΝΥΑΙ5ΜνΡ,2ΑΡσ05Σ0ΜΜ^Ι5ΡΙΓ'33ΤΑΥΑ0ΚΓΰδλνΤΙ5ΑϋΙ

Γ5ΚΤΑΥΚΕΕΝ$ΕΤ5ΕΟΤΑ7ΥΓΟΑΡ.ΗΟΜΥΥΥΥ5θΜΕν№3θΟΤΤντν55 >5009-030 VI, ДНК ;ЗЕ0 то НО: 47)

ТССТАТаТОСТСАСТОхАСССАССОТОООТОТОАСТЙССООСАОСЗАСАОАСССО'ОАОЗАТТАСОТ^ТООтбОСААА.

СААСАТТСОААСТААААСТСТССАСТОСТАССАССАСААеССАОСССАООССССТЗТССТССТССТСТАГССТСАТАОСО

АСССОСССГСАСОСАТОССТОАОСОАТТСТОТСОСТСОААОТСТОССАОСАССОСОАСОСТОАССАТСАССАСОСТСОАА

ОСССООС-АТеАООССОАСТАТТАСТОТСАОетОТССОАТАОТАОТАОТОАТСАТСССООТОСТОТОТТСЗОАООАОСОАС

ССАССТОАОССТССТСЗ >5009-030 VI БЕЛОК !5ЕО Ю НО: 43)

3ΥνΕΤ0ΡΡΞν3νΑΡθςΤΑΚΙΤΟΟΟΝΝΙ03Κ3νΗ^ςςΚΡθςΑΡνί7νΥΟϋ5Ώ3.Ρ5(ΠΡΕ?,Ε503Ν3ΰΤΤΑΤΈΤΙ

5КУЕпССЕАП¥У00УИ0555ОНРСА7КСССТСЕТ7Ъ >5009-031 УН ДНК Ϊ5Ε0 10 N0: 49)

САСС7ССАССТСС-ТАСАСТСТССООСТСАОСТСОЛОАСССОТСЗОТССТе.ЗСТСАААОТ€ТССТССАА'57СТТО

ТОЗССССАСОТССААТААСТАТСОСАТОАЗСТО-ОЗТОСЗАСАЗСОСССТЗСАОАА-ОЗООТТЗАОТССАТЗЗСОЗСС-АТСА

ЗСССТАТСТТТОЗТ7СОАСАОССТАОССАСАЗАА37ТССА5СЗСАЗАСТСАСТАТТТССЗСС-ОАСАТАТТТТСС-ААСАСА

СССТАСАТОСАССТЗААСАОТСТОАСАТСТеАССАСАС'ЗСССЗТСТАТТАТТСТЗСЗАСАСАСЗССААТТАТТАТТАСАА

СТССССТАТССАССТСТЗОСОССААСЗСАССАСС5ТСАСОЗТО7СЗАСС >5009-031 УН БЕЛОК (5ЕО ГО N0: 50)

0>УОЬУС5САЕУЕКРС55УКУ5СК£55СТ5ННУА15т^САР<;ОСЬСдазе:5Р1ГС5ТАУАСКЕОЗйУТ15А01

ΚΞΝΤΑΥΜΕΕΝ5ΕΤ3ΕΟΤΑνΥΥΟΑΚΗΟΝΥΥΥΝ5ΰΜΟ\™θβΟΤΤν?Υ55 >5009-031 УЬ ДНК (5Ε£ ΙΡ МО: 51)

САОТСТОТ5ТТ5АССЗАСССОСССТСА5ТЗТСТ50ССССССАС-ОЗСАСАС-СЗТСАССАТСТССТССАСТОСОАЗ

САССТССААСАТССОСЗОАСтЗТТАТОАТЗТАОпОТЗЗТАОСАЗОАЗО'ГТОСАЗААА.ОАЗСОООСАААОТССТСАТТТАТЗ

АТААСААСААТССТСССТСАЗОСаТТТСТСАССОАТТСТСТСОСТССААЗТСТООСАСТТСАОССТСССТОСССАТСАСТ

СССтСТССАСЙСТСАСеАТЗАбССТСАТТАТТАОТСССАСТОСТАТСАСАвССбССТСАбТООТТСбССТТАТеТСТТССО

АССТССЗАССААЗЗТСАСССТССТАЗ >5009-031 УЬ БЕЛОК <5Εζ) ГО N0: 52)

05У1ТОРР5У$ОАРС-ОКУТ15СТЙ555М1САОУЭУНИУОСЬРЕТАРКЕЫУЕМММБР5СУ50КЕ535К5СТ5А$

- 42 027054

ЬА1Т2Ь0АЕПЕАПУУСО5УО5'ЗЬ5А5РУ\Т<;АБТКУТУЬ >3009-112 УН ДНК Ι8ΕΏ 10 МО: 53)

САССТССАССГСБТОСАЗТСТСССОСТОАЗЗТСААСААСССТССЗТССТСЗОТСАЛАСТСТССТЗСААЗТСТТС

ТССАСССАССТССААТААОТАТССТАТСАССТСССТСССАСА^ДДСЗС’ТЗЭАДААССССТТСАСТССАТССССССЗАТСА

ОСССТАТОТТТОСТТеБАОАЗССТАеОСпСАЗААЗТТССАЗЛБСАЗБЗТОАСТАТТТССООССАСАТАТТТТСОААСАСА

СССТАСАТССАССТСААСАЗССТСАСАТСТСАССАСАССССССТАТАГТАСТОТСССАСССАССССААТТАТТАТТАСТА

СТССОСТАТООАСОТСТЗЗЗОССААСССАССАСССТСАСССТСТООАОО >5009-112 УН БЕЛОК [5Е0 10 КО: 54)

0У^ЬУ^ЗСАЕУКБ:Р355УКУ5СК55ССТ5КиУА15№/Е<-2АР5-25Ь0№]СС15Р1ГС5ТАУАСКГ2СЕУТ15АО1

ЕЗКТАУМЕЬМЗЬТЗЕОТАУУУСАКНСКУУУУЗЗМОУ^ЗОСТТУ'ГУЗЗ >5009-112 УЬ ДНК ίЗЕф 10 N0: 551

САйТСТСТОТТОАСССАСССССССТСАСТСТСТЗОЗСССССАСЗСОСАОАСЗСТСАССАТСТССТССАСТОССАС

САССЗССААСАТСЗеСЗСтСАСЙТТАТСАТСТССАСТЗЗТАССАССАСТТТССАСЙААСАЗСССССАААСТССТСАТСТАТС

СТААСААСААТСеССССТСАССССГСССТеАСССАТГСТС'ГееС'ГССААСТСТСССАСОТСАСССТССОТССССА'ГСАСТ

ЗЗССТССАСССТСАЗСАТСАСОСТСАТТАТТАСТСССАСТССТАТОЛСАССАСССТОАСТЗОТЗССТТАТТСОССССАОЗ

ОАССААССГСАСССТССТАС >5009-112 УЬ БЕЛОК (5Е0 10 N0; 5Б)

05УЬТ0РР5У5САРС0РУТ15СТС55АН1САСУОУНМУ00БР0ТАРКЕЫ УОЫПМНРЗОУРБЕБ5С5К2СТЗА5 ЬА1ТСЬ0АЕОЕА0УУСС£УО5£ЬЗДАЬГСССТКЬТУЬ >ЙС09-113 УН ДНК (ЗЕО 10 НО: 57)

САСАхТССАОСТОСТССАСТСТОСССС'ГСАио'ГСААСААСССТСССТССТС’Сб/ГСАААс] ТО Х'СО'ГОСААС'ТС Г'ГС

ТССАСССАССТССААТААСТАТОСТАТСАССТССОТСССАСАСООСССТСОАСЛАССССТТСАОТССАТООСОСОСАТСА

СТССААТСТТТССТТСЗАСАеТСТАСССАСАСАААТТССАССОСАБАСТСАСТАТТТССССОЗАСАТАТТТТСАСАСАСТ

СССТАСАТОСАССТС-ААСАС-ССТСАСАТСТОАССАСАСССССССАТАТТТСТОТСССАСЗСАСОЗАААСТАТТАТТАСТА

СТССССТАТССАССТСТС€СаССАА(ЗСОАССАСОСТСАССО!ТСТСС-АОС >5009-113 УН БЕЛОК (5Еф ТО N0: 59)

0МОЬУ05САЕУККАС55УКУ5СК55ССТЗКК1А15ИУК0АРСОеЬЕММСС15?1ГС5ТУУА0КУ9СКУТ15АО1

ЕЗНТАУМЕЬМЗЬТЗЕОТААУЕСАБНСКУУУУЗСМОЬКеОЗТТУТУЗЗ >5009-113 УЬ ДНК (5Е0 ΙΕ КО: 59)

САСТСТСТССТОАСТСАСССАСССССАС-ТСТСТСССАССССОССССАСАСССТСАССАТСТССТС-ТТСТССААС

ТОАТТССААСАТСССОАСААОААСТСТАААСТООТАССАССАЗТТСССАООААССССССССААА.СТССТСАТСТАТАОТА

АСеАТСАОССССССОСАСТССТСССТСАСССАТТСТСТСОСТССААОТСССССАССТСАСССТСССТОСССАТСАОТССС

СТССАСеСТСАСОАТЗАбССТСАТТАТТАСТСТССАССАТСССАТСССАССОТЗАСТССТССТСТСТТСССАОСАСССАС

ССАССЛСАСССТССТСС

- 43 027054 >5009-113 УЬ БЕЛОК [5Е0 Ю N0: 60)

ОЗУЬТОРРАУЗСТРООКУЫЗСЗСЗОЗМЮРКЗУМЮУООЕРСТАРКЬЫУЗМООКРЕУУРОРЕЗОЗКЗОТЗАЗЬ

А15ОЬ0АЕЬЁАОУУСААМОА5Ь5СРУГСООТ0ЬТУЬ >5509-114 УН ДНК (ЗЕО ГО N0: 61)

САС0Т05А0СТС0Т00.ААТ0Т00С0СТ0АС0Т0ААСАА0ССТС00ТСС5СС050ААА5ТСТССТ00АА55С5Т0

ТСОАСССАССТССААТААС^АТОСТАТСАССТОСЗТССЯАСАСОСССС^ССАСААСОССТГОАСТОСАТССОССОСАТСА

ССССТАТСТТТССТТССАСАСССТАСССАСАСАААТТССАССССАСАСОСАСТАТТТССССССАСАТАТТТТССААСАСА

СССТАСАТС0АСС50ААСА0ССТСА5АТСТСАС0АСАССССС05А5АТ55СТСТСССАСССАС0ССААТТАТ'ГАТТАСТА

СТССССТАТЙСАСОТСТСССЙССААСССАССАССеТСАССПТСТССАСС >3009-114 УН БЕЛОК 15Е0 10 N0: 62)

0У0ЬУОЗСАПУКГ<РС557КУ5СК25С5Т5иККАГ5ЮУР£АРСОЗЬОЮМСС15РТЕС5ТАУАСКГОСРУТ13АО1

РЗНТАУМЕЬКЗЬТЗЕОТАУ^РСАЕНСМУУУУЗСМОУИСОСТТУТУЗЗ >5009-114 УЬ ДНК I 5Е0 ГО МО: 63) ?ССТАТ0ТССТ6АСТСА0ССАССС0СА0ТСТСТСС0АССССС000СА0АС00ТСА5САТС5СС?57ТСТС0ААС

ТОАТТССААСАТСОСеАСААСААОТСТАААСОССТАССАССАОТТСССАСОААСОСССОССАААСТССТСАТСТАТАОТА

АСеАТСАСССССССТСАСТССТСССТСАСССАТТСТСТСССТССААСТССССОАССТСАСОСТСССТОСССАТСАОТССС

СТССАСТСТСААЗАТСАС0СССААТАТТАСТСТ6САССАТСССАТ0АСА2С0ТСААССССССТСТСТТСССАССАСССАС

ССАССТСАСССТССТСС >3509-114 УЬ БЕЛОК (ΞΕΟ 10 МО: 64)

ЙУУЬТОРРАУ5ОТРЗОКУТ15С5С£О5М1С№ЗУНЮУООГР0ГАРКЬЬ1У5М!Х)КР5УУРОНЕ5С$КЗЗТ5.А5Ь

А15СЬ05ЕОЕАЕУУСААЮОБ5ЬКСАУЕСССТОЬТУЬ

Вектор р1д-С911-НСдаггспа1 |5Е£ 10 N0:175)

ЬсдасддаОс	аддадаЕсЕс	осда^сссс):	а1.дд1доас1?.	сЕсадЕэсаа	ЕсЕдсЕсЕда	60
сдссдсагад	ЕЕаадссадЕ	зСеидс^ссс	ЬдоСύдСд£д	ЕЕддзддЕсд	сЕдадЕздЕд	120
сдсдадсааа	аЕСЕаадсЕа	саасаа-ддса	аддсР^дасс	дасааЕЕдса	ЕдаадааЕсЕ	1а 0
дсСΐадддСь	аддсдССЕЕд	сдсЕдеЕссд	сбэддеддбс	ааеаеЕддсс	эЕЕадссаЕа	240
та^ссаигд	сЕЕибаЕидс	аЕаааЕсаэЕ	еЛЬудсба ίϋ	ддссаЕЕдса	еасдеедеа1	300
сса^аЛсаСа	аЬаЕдЕасаЕ	ЕСзЕаЕЕддс	ЬсаЬдЬссаа	саЮассдсс	аЕдЕЕдасаЕ	360
£дагсассда	сЕадЕ ЕаЕЬа	аЕадЕааЕса	а!Лассдддг	са!1ад1±Сс	ЕадассаЕаЕ	420
а1ддадсДсс	дсдЕЕасаЕг	асе ЕасддЕа	□алддсссдс	с.дссЬдасс	дсссаасдас	400
сосодссса!	ОдасдЕсааЕ	ааЕдасдЕаЕ	д): 1: соса £ ад	саасдссаа5	адддасЕЕЕс	54 0
саыдасдЬс	ааЕдддЕдда	дЕаЕЕЕасдд	ЬааасСдссс	асысдсасЬ	асаЕсаадЕд	6С0
саЬоаЬаОдс	саад'.асдсс	сссЕаЕЕдас	дссаасдасд	д!ааа1ддсс	ссссЕсссаЕ	660
“этдсссадг.	асаддассЕЕ	аЕдддасЕЕЕ	сссасс:ддс	^дСасазсба	сдЕабЕадЕс	720
аЬсдсЬа!, 1а	ссаЕддсдаЕ	дсддаЕЕЕдд	садДасаДса	аЬдддсдДдд	аДадсддг Σ~	780

- 44 027054

дасбсасддд	да£6£ссаад	БсБсдасссс	аББдаедБеа	абдддадсББ	дббББддсес	•34 0
сааааъсаас	дддасБддсс	ааааедБедБ	аасаасбссд	ссссаББдас	дсааабдддс	900
ддбаддсдод	БаеддОддда	ддБеБаБаБа	аусауадсБе	дББ БауБдаа.	ссдБсздаОе	960
дссбддадас	дссабссасд	сБдББББдад	еБссасадаа	дасассддда	ссдаБссадс	ί 02 0
сессдсддсс	дддааеддбд	саББддаадс	БддсссддаБ	аБссБдаСБс	БСББаддоад	1060
ссСбдсадаэ	дсБддбедОд	аддсасгддд	саддБаадБа	БсааддББас	аадасаддсс	114 0
Бааддадабд	ааБадааас£	дддеББдБед	адасададаа	дасБсББдсд	БЕБсБдаБад	1200
дсассбаббд	д£с££ас£да	са Б ссасББ С	дсс-БББсссБ	ссасаддБдБ	ссасБсссад	1260
бБсааббаса	дсБсдссасс	аедддаБдда	дсБдБаБсаБ	ссБсББсББд	дБасБдсБдс	1320
гддсссадсс	ддссадБдас	сББдассддБ	дсассасБББ	БдаБдеБдББ	саадсБесБа	1380
а££асас£са	аса!ас£ Бса	БсБаБдаддд	дддБББасБа	БссБдаБдаа	аБББББадзБ	1440
сддасасБсб	сБаБББаасБ	саддаБББаБ	ББсББссаББ	ББаББсБааБ	дББасадддБ	..500
БОсаБасбаО	БааБсаБасд	БББддсаасс	сБдБсаБасс	ББББааддаБ	ддбаБББ.аББ	1.560
СЛдсБдссэс	ададаааБса	ааБдББдБсс	дьддгтддди	ББББ ддББсБ	ассабдаэса	1620
асаадБсаса	дБеддбдаББ	аББаББазса	аББсБассаа	БеББдББаБа	сдадсаБдБа	163 0
ассидааю	дБдБдасаас	СеБББеБББд	сБдБББсБаа	асссаБдддБ	асасадасас	1740
а£асЬа£да£	аББедаБааБ	дсаБББааББ	дсасСББсда	дБ асаБаБсб	дабдеегБББ	1300
сдсббдабдс	ББсадаааад	Бсад-дБааББ	ББааасаеББ	асдададБ.ББ	дБдБББаааа	1360
аБааада£дд	дСББсБсоаб	дБББаБаадд	дсБаБсаасс	БаБауаБдБа	дББедБдаБе	1920
£асСькскдд	ББББаасасБ	ББдазассБэ	БББСБаадББ	деебсБ ίддБ	аББааСУББа	1930
саааеЬББад	адссаББ еББ	асадссББББ	сассБдсБса	адасаББсдд	ддсасдБсад	2040
сБдсадссЕа	ББББдББддс	Б.аБББааадс	саасБасаББ	саБ деБеэад	БаБдаБдааа	2100
абддбасааб	дасадабдсБ	дББдаББдББ	сБсааааБ ас	аеББдеБдаа	сБеааабдсб	2160
сСдгдаадад	еБББдада ББ	дасаааддаа	БББассадэс	сЕсБааБББс	асддБбдББс	2220
ссксаддада	БдББдБдада	БбссесааБа	б СасаааеБС	дБдБсеББББ	ддададдБЕБ	2230
££аа£дс£ас	БаааББссеБ	БеБдБеБаБд	саБдддадэд	ааааааааББ	БсБааББдБд	2 34 0
Б£дс£да££а	сБсБдБдсБс	БасаасБсаа	саБББББ ББс	аассБББаад	БдеБэБддед	2 4 00
ГББ сгдссас	БаадгБдааБ	даίддсБдсс	БсБссааБдБ	сБаБдсадаБ	БеБс гБдеад	2 4 60
Бсаадддада	БдаБдБаада	саааБадсдс	саддасааас	БддБдББаББ	дсБдаББаБа	2520
а£Ба£ааа££	дссадэБдаБ	БбсаБдддБ Б	дБдБссББде	ББддааБасБ	адсаасаББд	2530
асдс^ас^гс	аасБддБааБ	БаБааББаБа	ааБасаддБа	БеБбадасаБ	ддсаадссса	2640
ддсссБББда	дададэсаБа	БеБааБдБде	сБББУБсссс	БдеБдусааа	ссББдсассс	2700
сассбдсХсб	БааББдББаБ	БддссаББаа	аБдаББаБдд	БББББасаОс	асБасБддса	27 50
Ыддсбасса	ассББасада	дББдеадБас	БББеББББда	аеББББаааБ	дсасссусса	2820
сддг.Г.кдг.дд	асеааазББа	ΐ ссасБдасс.	ББаББаадаа	ссадг.дБдБс	ааББББааББ	2830
Ь£аа6ддас£	сасБддБасБ	ддБдбдББаа	сБссббсБбс	ааададаББ Б	саассзБББс	2940
аасааБккдд	ссдбдаБдББ	БсБдаБББда	сБдаББссдБ	БсдадаБссБ	аааасаБсБд	ЗС'ОО
аааЪаЪЬада	саБББ сасс£	БдеБеББББд	ддодБдБаад	БдБааББаса	ссБддаасаа	30 60
абдсБИсаке	БдаадББдеБ	дББсБэБасс	аадаБдББаа	сБдсасБдаБ	дБ Б Б сБасад	3120
саа££са£де	адаБсаасБс	асассадсББ	ддедсаБаБа	ББсБасБдда	аасаабдбоБ	3130
гссадасСса	ддсаддсБдБ	еББаБаддад	сБдадеэбдБ	сдасасББсБ	БаБдадБдед	3240

- 45 027054

аса£ £сс£а£	£ддадс£ддс	а£££д£дс£а	д££асса£ас	ад£££с£££а	££асд£ад£а	3300
г£азссаааа	а£с£а££д£д	дс££а£ас£а	£д£с£££адд	£дс£да£ад£	£саа££дс££	3360
ас£с£аа£аа	сасса£~дс£	а£асс£ас£а	ас££££саа£	£адсэ££ас£	асадаад£аа	3420
£дсс£д£££с	£а£ддстааа	асс£ссд£ад	а££д£аа£а£	д£аса£с£дс	ддада££с£а	3480
с£даа£д£дс	£аа££Сдс££	с£ссаа£а£д	д£адс£££д	сасасаас£а	аа£сд£дсас	3540
Сс£садд£а£	£де£дс7даа	садда£сдса	асасаедъда	ад£д££сдс£	саадтсаззс	3600
ааа£д£асаа	аассссаасг	££дааа£а££	££дд£дд£7£	£аа£££££са	сааа£а££ас	3660
с£дассс£с£	ааадссаас£	аададд£ с££	££а££дадда	С£ £дс£с££ £	аа£аадд£да	3720
сас£сдс£да	£дс£ддс££с	а£даадсаа£	а£ддсдаэгд	сс£адд£да£	а££аа£дс£а	3780
дада£с£са£	££д£дсдсад	аад££саа£д	дас.££асад£	д££дссасс£	с£дс£сас£д	3840
а£да£а£да£	£дс£дсс£ас	ас£дс£дс£с	£ад££ад£дд	£ас£дссас£	дс£дда£дда	3500
са£££дд£дс	£сдсдсгдс£	с££сааа£ас	с££££дс£а£	дсааа£ддса	£а£адд££са	3560
а£ддса££дд	ад££агесаа	аа£д££с£<££	а£дадаасса	аааасаааТс	дссаассаа£	4020
Ь^аасааддс	да££ад£саа	а££саадааЪ	сас££асаас	ааса£саас£	дсаъ£дддса	4 080
адсЬдсаада	сд££д££ аас	садаа£дс£с	аадса££ааа	сэсас££д££	ааасаас££а	4140
дс£с£аа££ΐ	£дд£дсаа££	£саад£д£дс	£ааа£да£а£	сс£££сдсда	с£ £ да£эаад	4 200
Ьсдаддсдда	дд£асааа£ £	дасадд££аа	££асаддсад	ас££сааадс	с££саа&сс£	4260
а£д£аасаса	асаас£аа£с	адддс£дс£д	ааа£садддс	££с£дс£аа£	с££дс£сс£а	4320
с£аааа£д£с	£дад£д£д££	с££ддасаа£	сааааададТ	£дасс£££дг	ддааадддс£	4380
ассасс££а£	д£сс££ссса	саадсадссс	сдса£дд£д£	£д£с££сс£а	са£д£сасд£	4440
а£д£дсса£с	ссаддададс	аас££сасса	садсдссадс	эа£££д£са£	дааддсааад	4 500
са£ас££ссс	£сд£даадд£	д£££££с£д£	££аа£ддсас	1: £ с£ £ дд£ £ £	асиасасада	4560
ддаас££с££	££с£ссасаа	а£аа£ £ас£а	садасаз£ас	а£££д^с£са	ддааа££д£д	4 620
а£д£сд££а£	£ддса£са££	аасаасасад	£££а£да£сс	гсгдсаассп	дздс££дас£	4680
саССсааада	ададс£ддас	аад£ас££са	аааа£са£ас	а£сассзда£	д£ £ да £ £ £ 1; д	4740
дсдаса£££с	аддса££аас	дс££с£с£сд	ί сааса££са	аааадааа££	дассдсс£са	4800
а£дадд£сдс	£ааааа£££а	аа£даа£сас	£са££дасс£	£саадаас£д	ддааа«£а£д	4 8 60
адсаа£а£а£	£ааа£ддсс£	с£сдасдаас	ааааас£са£	с£садаадад	да£с£даа£д	4920
с£д£дддсса	ддасасдсад	дадд£са£сд	£дд£дссаса	с£сс££дссс	£££аадд£дд	4980
£дд£да£с£с	адсса£сс£д	дссс£дд£дд	£дс£сасса£	са£с£ссс£.£	а£са£сс£.са	5040
£са£дсДХ£д	дсадаадаад	ссасд££адд	сддссдсъсд	ад£дс£адса	ссаадддссс	5100
садсд£д££ с	сссс£ддссс	г.садсадсаа	дадсассадс	ддсддсасад	ссдссс£ддд	5160
с£дсс£дд£д	эаддас£ас£	£ссссдадсс	сд£дассд£д	адс£ддааса	дсддсдсс££	5220
дассадсддс	д£дсасасс£	£ссссдссд£	дс£асададс	адсддсс£д£	асадсс£дад	5280
садсд£дд£д	ассд£дссса	дсадсадсс£	дддсас^сад	асс£аса£с£	дсаасд£даа	5340
ссасаадссс	адсаасасса	аддСддасаа	асдсдСддад	сссаададсе	дедасаадас	5400
ссасассИдс	сссссс£дсс	с£дсссссда	дс£дс£дддс	ддасс<;£ссд	£д££СС£д££	5460
сссссссаад	сссааддаса	ссс£са£да£	садссддасс	сссдадд£да	сс£дсд£дд£	5520
дд£ддасд£д	адссасдадд	ассссоадд£	даад££саас	£дд£асд£дд	асддсд£дда	558 0
дд£дсасаас	дссзадасса	адссссддда	ддадсад£ас	аасадсасс£	ассддд£дд£	5640
дадсд£дс£с	зссд£дс£дс	ассадсасСд	дсЪдаасддс	ааддад£аса	ад£дсаадд£	5700

- 46 027054

дадсаасаад	дсссЕдесЕд	сссссаЕсдз	даадассаЕс	адсааддсса	адддссадсс	57 60
ссдддадссс	саддЕдЕаса	сссГдссссс	садссдддад	дадаЕдасса	адаассаддс	5820
дЕсссГ.сасс	гдЕсЕддЕда	адддс£Ес£а	ссесадсдас	аЕсдссдЕдд	адЕдддадад	5880
саасддссад	сссдадааса	ассасаздас	сасссссссЕ	дЕдсЕддаса	дсдасддсад	5 94 0
сЬЕсЬ^ссЬд	Еасадсаадс	ЕсассдЕдда	саададссдд	Еддсадсадд	дсаасдЕдЕЕ	6000
садс^дсадс	дЕдаЕдсасд	аддсссЕдса	саассассзс	асссадаада	дссЕсадссЕ	60 60
дадссссддс	аадЕдаЕааЕ	сЕададддсо	сдЕЕЕ ааасс	сдсЕдаЕсад	ссЕсдасЕдЕ	6120
дссЕЕсЕадЕ	ЕдссадссаЕ	сЕдкίдЕЕЕд	ссссЕссссс	дЕдссЕί ссЕ	ЕдаессЕдда	6180
аддЕдссасЪ	сесасЕдЕсс	ЕЕЕСсЕааЕа	аааЬдаддаа	аЕЕдеагсдс	асЕдссЕдад	6240
гаддтд^саЕ	ЕсЕаЕЕсЕдд	ддддЕддддЕ	ддддсаддас	адсааддддд	аддаЕЕддда	6300
адасаа£аде	аддсаЕдсЕд	дддаЕдеддЕ	дддсЕсЕаЕд	дсЕСсЕдадд	сддааадаас	6360
садс£ддддс	ЕсЕадддддЕ	аЕссссасдс	дсссЕдЕадс	ддедсаЕЕаа	дедеддеддд	6420
£д£ддЕдд1;1;	асдсдсадсд	ЕдассдсЕас	асЕЕдссадс	дсссЕадсдс	ссдсЕссЕЕЕ	6480
сдсЕЕСсЕ1с	ссЕЕссЕЕЕс	ЕсдссасдЕЕ	сдссддсЕЕЕ	ссссдЕ саад	сЕсЕаааЕсд	6540
ддддсЕсссЕ	аЕадддЕЕсс	даЕЕ.ЕадЕдс	ЕЕЕасддсас	сЕсдасссса	ааааасЕЕда	6600
гладддкдал	ддЕЕсасдЕа	дЕдддссаЕс	дсссЕдаЕад	аеддЕЕЕЕЕс	дсссЕЕЕдас	6660
д£Иддадк.сс	асдЕЕсЕ (Да	аЕадЕддасЕ	сЕЕдЕЕссаа	асг.ддаасаа	сасЕсаассс	6720
1;а1;с1;сддС.с	саЕЕсЕЕЕЕд	аЕЕЕаЕаадд	даЕЕЕЕдссд	аЕЕЕсддссЕ	эЕЕддЕЕааа	6780
ааа1дадс£д	аЕЕЕаасааа	ааЕЕЕаасдс	дааЕЕааЕЕс	ЕдСддаасдЕ	дЕдЕсадЕЕа	684 0
дддЕдЕддаа	адЕссссадд	сЕссссадса	ддсадаадЕа	ЕдсааадсаЕ	дсаЕсгсааЕ	6900
ЕадЕсадсаа	ссаддЕдЕдд	ааадЕссеса	ддс!ссссад	саддсадаад	ЕаЕдсааадс	6960'
аЕдсаЕсЕса	аЕЕадЕсадс	аассаЕадЕс	ссдссссЕаа	сЕссдсссаЕ	сссдссссЕа	7020
асЕссдссса	дЕЕссдссса	ίίсЕссдссс	саЕддсЕдас	ЕааЕЕЕЕЕ СЕ	ЕаЕЕЕаЕдса	⁷080
даддссдадд	ссдссЕсЕдс	сЕсЕдадсЕа	ЕЕссадаадЕ	адЕдаддадд	сЕЕЕЕЕЕдда	7140
ддссЕаддсЕ	ЕЕЕдсааааа	дсЕсссддда	дсЕЕдЕ аЕаЕ	ссаЕЕЕЕедд	аЕсЕдаЕсаа	7200
дадасаддаЕ	даддаЕсдЕЕ	ЕсдсаЕдаЕЕ	даасэадаЕд	даЕЕдсасдс	аддЕЕсЕссд	7260
дссдсЕЕддд	ЕддададдсЕ	аЕЕсддсЕаЕ	дасЕдддсас	засадасааЕ	сддсЕдсЕсЕ	7320
даЕдссдссд	ЕдЕЕссддсЕ	дЕсадсдсад	дддсдсссдд	ЕЕсЕЕЕЕЕдЕ	саадасссас	7300
сЕдЕссддЕд	ссссдааЕда	асГдсаддас	даддсадсдс	ддсЕаЕсдЕд	дсЕддссасд	74 40
асдддсдЕЕс	сЕЕдсдсадс	ЕдЕдсЕсдас	дЕЕдЕсасЕд	аадедддаад	ддасЕддсЕд	7500
сЕаЕЕдддсд	аадсдссддд	дсаддаЕсЕс	ссдЕсаЕсЕс	ассЕЕдсЕсс	Едссдадааа	7 5 60
дЕаЕссаЕса	ЕддсЕдаЕдс	ааЕдеддедд	ссдсаЕасдс	ЕЕдаЕссддс	ЕассЕдссса	7620
ЕЕсдассасс	аадсдаааса	ЕсдсаЕсдад	сдадсасдЕа	сЕсддаЕдда	адссддЕсЕЕ	7680
дЕсдаЕсадд	аЕдаЕсЕдда	сдаададсаЕ	саддддсЕсд	сдссадссда	асЕдЕЕ сдсс	7740
аддсЕсаадд	сдсдсаЕдсс	сдасддсдад	даЕсЕсдЕсд	ЕдасссаЕдд	сдаЕдссЕдс	7800
ЕЕдесдааЕа	ЕсаЕддЕдда	аааЕддседс	ЕЕЕЕсЕддаЕ	ЕсаЕсдасЕд	ЕддссддсЕд	7860
ддЕд^ддедд	ассдсЕаЕса	ддасаЕадсд	ЕЕддссассс	дЕдаЕаЕЕдс	ЕдаададсЕЕ	7920
ддсддсдаа£	дддсЕдассд	сЕЕссЕсдЕд	сЕЕЕасддЕа	ЕсдссдсЕсс	сдаЕЕсдсад	7980
сдса^сдссЕ	ЕсЕаЕсдссЕ	ЕсЕЕдасдад	ЕЕсЕЕсЕдад	сдддасЕсЕд	дддЕЕсдааа	8040
^дассдасса	адсдасдссс	аассЕдссаЕ	сасдадаЕЕЕ	сдаЕЕссасс	дссдссЕЕсЕ	8100
аЕдаааддЬЕ	дддсЕЕедда	аЕсдЕЕЕЕсс	дддасдссдд	сЕддаЕдаЕс	сЕссадсдсд	8160

- 47 027054

дддаЕсЕсаЕ	дсЕддадЕЕс	ЕЕсдсссасс	ссаасС^дС1:	ЕаЕЕдсадсЕ	ЕаЕааЕддЕЕ	8220
асаааЕ ааад	сааЕадсаЕ с	асаээЕгЕса	саааказадс	аЕЕЬ-ЕЕЕса	сЕдсаЕе сЕа	8280
дЕЕдЕддЕЕЕ	дЕссааасЕс	аЕсааЕдЕаС	стл аИсаСдг	сЕдЕаЕассд	ссдассьсса	8 3 4 0
дсЕададСЕЕ	ддсдЕааЕса	ЕддЕсаЕадс	ЁдСТЕссГдС	дЕдаааЕЕдЕ	саЕссдсЕса	8400
сааЕЕссаса	саасаЕасда	дееддзадса	ЕааадкдЬаа	адссЕддддЕ	дссЕааЕдад	8460
ЕдадсЕаасЕ	сасаЕЕааЕЕ	дсдЕЕдсдсЕ	саеСссссдс	ЕЕЕссадЕсд	ддаааесЕдс	8520
сдсдссадсс	дсасЕааЕда	ассддссаас	дедеддддзд	аддеддЕЕЕд	сдСаСьдддс	8580
дсЕсЕЕесдс	ЕЁссЕсдсЁс	асЕдасЕсдс	ЕдсдсЕсддЬ	сдЕЕсддсЕд	сддсдадсдд	9640
ЕаЕсадсЕса	сЕсаааддсд	дЕааСаеддЕ	ЕаЕссасада	аЕсаддддаЕ	аасдсаддаа	8700
адаасаЕдЕд	адсааааддс	садсаааадд	ссаддаассд	Еаааааддсс	дсдЕЕдсЕдд	8760
ед! ί ίί 1; сса	ЕаддсЕссдс	сссссЕдасд	адсаЕсасэа	аааЕсдасдс	ЕсаадЕсада	8820
ддЕддсдааа	сссдасадда	сЕаЕааадаЕ	ассаддсдЕЕ	ЕсссссЕдда	адсЕсссЕсд	8880
ЕдсдсЕсЕсс	ЕдЕЕссдасс	сЕдссдсЕЕа	ссддаЕассЕ	дЕссдссЕЕЕ	сЕсссЕЕсдд	8940
даадсдЕддс	дсЕЕЕсЕсаЕ	адсСсасдсЕ	дЕаддЕаЕсЕ	садЕЕсддЕд	ЕаддЕсдЕЕс	9000
дсЕссаадсЕ	дддсЕдЕдЕд	сасдаасссс	ссдЕЕсадсс	сдассдсЕдс	дссЕЕаЕссд	9060
дЕаасЕаЕсд	ЕсЕЕдачЁсс	аасссддЕаа	дасасдасЕЕ	аЕсдссасЕд	дсадсадсса	9120
сЕддЕаасад	даЕЕадсада	дсдаддЕаЕд	ЕаддсддЕдс	ЕасададЕЕс	ЕЕдаадЕддЕ	9180
ддссЕааСЕа	сддсЕасасЕ	адаадаасад	ЕаЕЕЕддЕаЕ	сЕдсдсЕсЕд	сЕдаадссад	9240
ЁЕассЕЕсдд	аазаададЕЕ	ддЕадсЕсЕЕ	даЕссддсаа	асааассасс	дсЕддЕадсд	9300
дЕЕЕЕЕЕЕдЕ	ЕЕдсаадсад	садаЕЕасдс	дсадаааааа	аддаЕсЕсаа	даадаЕссЕЕ	9360
ЕдаЕсЕЕЕЕс	ЕасддддЕсЕ	дасдСЕсадЕ	ддаасдаааа	сЕсасдЕСаа	дддаСЕЕЕдд	9420
ЕсаЕдадаЕЕ	аЕсааааадд	аЕсЕЕсассЕ	адаЕссЕЕЕЕ	аааЕЕааааа	ЕдаадЕЕЕЕа	94 80
ааЕсаэЕсЕа	аадЕаЕаЕаЕ	дадЕааасЕЕ	ддЕсЕдасад	ЕЕассдаЕдс	ЕЕааЕсадЕд	9540
аддсассЕаЕ	сЕсадсдаЕс	ЕдЕсЕаЕЕЕс	дЕЕсаЕссаЕ	адЕЕдссЕда	сЕссссдЕсд	9600
ЕдЕадаЕаас	ЕасдаЕасдд	дадддсЕЕаз	саЕсЕддссс	садЕдсЕдса	аЕдаЕассдс	9660
дадасссасд	сЕсассддсЕ	ссадаЕЕЕаЕ	садсааЕааа	ссадссадсс	ддаадддссд	9720
адсдсадаад	ЕддЕссЕдса	асЕЕЕаЕссд	ссЕссаЕсса	дЕсЕаЕ ЕааЕ	ЕдЕЕдссддд	9780
аадсЕададЕ	аадЕадЕЕсд	сеадЕЕааЕа	дЕЕЕдсдсаа	сдЕЕдЕЕдсс	аЕЕдсЕасад	9840
дсаЕсдЕддЕ	дЕсасдсЕсд	ЕсдЕЕЕддЕа	ЕддсЕЕсаЕЕ	садсЕссддС	СсссаасдаЕ	9900
сааддсдадЕ	ЕасаЕдаЕсс	сссаЕдЕЕдЕ	дсаааааадс	ддЕЕадсссс	ЕЕсддЕссЕс	9960
сдаЕсдЁЁдЕ	садаадЕаад	ЕЕддссдсад	ЕдЕЕаЕсасЕ	саЕддЕЕаЕд	дсадсасЕдс	10020
аЕааЕЕсЕсЕ	ЕасЕдЕсаЕд	ссаЕссдЕаа	даЕдсЕЕЕЕс	ЕдЕдасЕддЕ	дадЕасЕсаа	10080
ссаадЕсаЕЕ	сЕдадааЕад	ЕдЕаЕдсддс	дассдадЕЕд	сЕсЕЕдсссд	дсдЕсааЕас	10140
дддаЕааЕас	сдсдссасаЕ	адсадаасЕЕ	ЕаааадЕдсЕ	саЕсаЕЕдда	ааасдЕЕсЕЕ	10200
еддддсдааа	асЕсЕсаадд	аЕсЕЕассдс	ЕдЕЕдадаЕс	садЕЕсдаЕд	ЕаасссасЕс	102 60
дЕдсасссаа	сЕдаЁсЕЁса	дсаЕ СЕЕЕЕа	сЕЕЕсассад	сдЕЕЕсЕддд	Едадсааааа	10 320
саддааддса	аааЕдссдса	ааааадддаа	Еаадддсдас	аеддааа ЕдЕ	ЕдааЕасЕса	10380
ЕасЕсЕЕссЁ	ЕЕЕЕсааЕаЕ	ЕаЕЕдаадса	ЁЕЁаЕсаддд	ЕЕаЕЕдЕсЕс	аЕдадеддаЕ	10440
асаЕаЕЕЕда	аЕдЕаЕЕЕад	аааааЕааас	аааЕаддддЕ	Ессдсдсаса	ЕЕЕссссдаа	10500
аадЕдссасс	Едасд					10515

- 48 027054

Вектор р!д-С909-Скарра (НЕ<3 10 N0:176’

Седасддасс	дсдадаСсСс	ссдаСссссЪ	аСддЬдсасс	сЬсадбасаа	ссСдсСсСда	60
ЪдссдсаЬад	ССаадссадс	аСсСдссссс	СдсССдСдСд	ССддаддСсд	ссдадСадСд	120
сдсдадсааа	аСССаадсСа	саасааддса	аддсССдасс	дасааССдСС	ааССаасаСд	180
аадааЪсЛдс	ССадддССад	дсдСССС дсд	ССдсЬСсдсС	аддСддСсаа	СасСддссаС	240
Садссасасс	асссассддс	СаСаСадсаС	ааассаасас	Сддссаг.гдд	ссассдсаса	300
сд1; СдС ас сс	аеассасаас	аСдЪасассс	аСаССддссс	асдС ссааса	Ссассдссас	360
дССдасаС С д	аССаССдасС	адССаССааС	адСааСсааС.	С асддддС са	СсадССсаСа	420
дсссаСаСаС	дсадссссдс	дССасасаас	ССасддСааа	СддсссдссС	ддсСдассдс	480
ссаасдассс	ссдсссаССд	асдСсааСаа	СдасдСаСдС	СсссаСадСа	асдссаасад	54С
ддасссссса	ссдасдссаа	СдддСддадС	асссасддс а	аасс дсссас	ссддсадсас	600
аЪсаадСдЪа	СсаСаСдсса	ад^асдсссс	с1;а1;Сдасд£	сааСдасддС	аааСддсссд	660
сс^сдсаССа	СдсссадСас	аСдассССаС	дддасСССсс	сасС сддсад	СасаСсСасд	720
СаССадСсаС	сдсСаС Сасс	аСддСдаСдс	ддССССддса	дСасаСсаас	дддсдСддаС	780
адсддСССда	сСсасдддда	СССссаадСс	Сссассссас	СдасдСсаас	дддадСС1дС	840
СССддсасса	аааСсаасдд	дас£М:ссаа	ааСдЬсдСаа	саасСссдсс	ссаИСдасдс	900
аааСдддсдд	£аддсдСд^а	сддСдддадд	Ис^аСаСаад	сададсгсд^	СкадСдаасс	Э60
дСсадаСсдс	сСддадасдс	саСссасдсс	дССССдасес	ссаСадаада	сассдддасс	1020
даСссадссС	ссдсддссдд	даасддСдса	ССддэаСсда	сдасСсссСС	аддСадссСС	1080
дсэдаадмгд	д1;сдСдаддс	ассдддсадд	саад1;ассэз	ддССасаада	садд^ъаад	114 0
дадаЪсааСа	дааасСдддс	ССдСсдадас	ададаадасс	сССдсдСССс	СдаСаддсас	1200
есасъддссс	СасСдасаСс	сасСССдссс	сссссСссас	аддСдСссас	ссссадССса	1260
а^сасадссс	дссассаСдс	ддсСдсссдс	ссадсСдсСд	ддссССссса	СдсСдСдддС	1320
дсссдссС сд	адаСсСаСсд	аСдсаСдсса	СддСассаад	ссСдссасса	Сдадсадсад	1380
οί сССддсСд	сСдсСдадсс	СддСддссдС	дасадссдсс	сададсасса	Ссдаддадса	14 4 0
ддссаадасс	ССссСддаса	адССсаасса	сдаддссдад	дассСдССсС	эссададсад	1500
ссСддссадс	СддаасСаса	асаесаасас	сассдаддад	аасдСдсада	асаСдаасаа	15Й0
сдссддсдас	аадСддадсд	ссСГссСдаа	ддадсададс	асасСддссс	адзСдсассс	1620
сс!;дсэддад	асссадаасс	Сдассдсдаа	дсСдсадсСд	саддсссСдс	адс.адаасдд	1680
садсадсдС.д	сСдадсдадд	асаададсаа	дсддсСдаас	ассаСссСда	зсзссаСдСс	1740
сассаСсСас	адсассддса	аадСд^дсаа	ссссдасаас	ссссаддадС	дссСдсСдсС	1800
ддадсссддс	с^даасдада	Ссасддссаа	садсс1;ддас	£асаасдадс	ддсрдодддс	1860
сСдддададс	Оддсддадед	аадСдддсаа	дсадсЪдсдд	ссссСдСасд	адсадСасдк	1920
ддСдсСдаад	аасдадаСдд	ссадддссаа	ссассасдад	дасСасддсд	асСасСддад	1980
аддсдасСас	даадСдаасд	дсдсддасдд	сСасдассас	адсададдсс	адсСдаСсда	2040
ддасдСддад	сасассСИсд	аддадаСсаа	дссСсСдСас	дадсассСдс	асдссСасдЬ	2100
дсдддссаад	сСдаСдаасд	ссСассссад	сСасаСсадс	сссаСсддсс	дссСдсссдс	2160
ссассСдсСд	ддсдасаСдС.	ддддссддСС	сСддассаас	сЪдСасадсс	СдассдСдсс	2220
ссссддссад	аадсссааса	ссдасдсдас	сдасдссаСд	дс ддассасд	ссОдддесдс	2280
ссадсддакс	кСсааддадд	ссдадаадСС	сССсдкдадс	дСдддсс£дс	ссаасаЪдас	2340
ссадддсССС	ίдддадааса	дсаСдсСдас	сдассссддс	ааСдСдсада	аддссд£дСд	2400

- 49 027054

ссассссасс	дсстдддэсс	гдддсааддд	сдасъ^ссдд	аЕссЕдаЕдЕ	дсзсслаадп	2460
дасеа^ддас	дас££сссда	ссдсссасса	сдада£дддс	сасаЕссадЕ	асдасаБддс	2520
сИасдссдсс	садссс£Ссс	Сдс£дсддаа	сддсдссаас	дадддсЕЕЕс	асдаддссдг	2560
дддсдаааЬс	аБдадссСда	стсдссдссас	ссссаадсас	сЕдаададса	ΐ: сддссБдс^	2640
дадссссдас	^Гссаддадд	асаасдадас	сдадаГсаас	ЕЕссЕдсЕда	адсаддссс^	2700
дассаБсдБд	ддеасссёдс	ссБ'ЬсассЬа	саСдсЬддад	аадЕддсддЕ	дда^дд^дсΐ	27 60
Еаадддсдад	аБссссаадд	ассадБдда!	даадаэдСдд	ЕдддадаЕда	адсдддадаБ	2820
сдЕдддсдЕд	дБддадсссд	Сдссссасда	сдадассЬас	Едсдассссд	ссадссБдгс	2880
ссасдЕдадс	аасдасБасЪ	ссБ БсаБссд	дБас^асасс	сддасссЕдЕ	ассад^гсса	2940
дЕЕссаддад	дсссЕд1дес	аддсс^ссаа	дсасдаддсс	ссссС^саса	ад БдсдасаБ	3000
садсаасадс	ассдзддссд	дасадааасЕ	дсссааеа£д	сБдсддс+дд	дсаададсда	3060
дсссЕддасс	сСддссс^дд	адааЕдЕддЕ	дддсдссаад	ааса£.даа£.а	Пдсдсссссн	3120
дсЕдаасЕас	ί: Ссдадсссс	ЕдЕЕсассЕд	дсЬдаэддзс	садазсаада	асадсЪ £сдЪ	3180
дддсЕддздс	ассдас£дда	дссссЕасдс	сдассздадс	а£сааад£дс	дда+еадссЕ	3240
даададсдсс	скдддсдаса	аддссЕасда	д1ддаасдас	ааедада^дБ	ассЪдБЪссд	3300
дадсадсдЕд	дссГзГдсса	ЕдсддсадЕа	с££сс1;дааа	д1;даадаасс	ада£да£ссБ	3360
дЕЕсддсдад	даддасдГда	дадЕддссаа	ссГдаэдссс	сддаСсадсг	^саасдасда	3420
сдЕдассдсс	сссзадаасд	ЕдадсдасэЕ	саСсссссдд	ассдаад^дд	адааддсса£	3480
ссддаЕдадс	сддздссдда	Есаасдасдс	сЬБссддс^д	аасдасаасЕ	ссс£ддад77	354 0
ссЕдддсаЕс	садсссассс	ЕдддсссЕсс	саассадссс	сссдёдадса	СсБддсЁдаС	3600
одЕд^-. ЕЕддс	дЕддЕдаЕдд	дсдЕдаЕсдЕ	ддБдддааЬс	дНдаСссьда	СсГ+сассдд	3660
саЕссдддас	сддаадаада	адаасааддс	ссддадсддс	дадаассссс	асдссадсаС	3720
сдаЕаЕсадс	аадддсдада	асаассссдд	е+1: ссадаас	ассдасдасд	сдсадассад	3760
сЕЕсЕдаЕаа	ЕсЕадаасда	дсЕсдааЕЕс	даадс£1с1;д	садасдсдБ с	дзсдБса£аБ	3840
ддаЕссдаЕа	1сдссдЕддс	ддссдсассс	адсдЕдг с са	ГсЕГсссссс	сСссдасдад	3900
садсЕдаада	дсддсассдс	садсдЕддЕд	1:дсс£дс£да	асаасдасБа	сссссдддад	3960
дссааддЕдс	адЕддааддЕ	ддасаасдсс	ссдсададсд	дсаасадсса	ддададсдСд	4020
ассдадсадд	асадсаадда	сЕссассЕас	адссБдадса	дсасссЪсас	ссБдадсаад	4080
дссдасЕасд	адаадсасаа	ддЕдЕасдсс	£дсдадд£да	сссассаддд	сс£дадсадс	4140
сссдЕдасса	ададсЕЕсаа	ссддддсдад	БдГБааГада	с£ ЕаадБч; Г а	азссдсБдаБ	4200
садссЕсдас	ЕдЕдссЕЕсЕ	адЕЕдссадс	саБсБдБСд^	С^дсссеБсс	сссдЪдссИ!:	4260
ссЕСдасссЕ	ддааддСдсс	асСсссасЕд	Гсс+СиссСа	асаааа^дад	даааББссас	4320
сдсаЕЕдЕсЕ	дадЕаддЕдЕ	саЕЕеЕаЕЕс	ЕддддддСдд	ддЕддддсад	дасадсаадд	4 380
дддаддаЕЕд	ддаадасааЕ	адсаддсаЕд	сЕддддаЕдс	ддЕдддсЕсЕ	а£ддс£Лс£д	44 40
аддсддааад	аассадсЕдд	ддсЕсЕаддд	ддЕаЕсссса	сдсдсссЕдЕ	адсддсссаБ	4 500
Еаадсдсддс	дддЕдЕддЕд	дЕЕасдсдса	дсдЕдассдс	ЕасасЕЕдсс	адсдссс^ад	4560
сдсссдсЕсс	ЕЕЕсдсЕЕЕс	ЕЕсссЕЕссЕ	ЕЕсЕсдссас	дЕЕсдссддс	ШссссдБс	4 620
аадсЕсЕааа	гсдддддсЕс	ссЕЕЕадддЕ	ЕссдаЕЕЕад	ЕдсЕЕЕасдд	сасспсдасс	4680
ссаааааасЕ	ЕдаЕСадддЕ	даЕддЕЕсас	дЕадЕдддсс	аЕсдсссЕда	Гадасдд£££	4740
ЕЕсдсссЕЕЕ	дасдЕЕддад	ЕссасдСЕсЕ	ЕЕааЕадЕдд	асЕсЕЕдЕЕс	сааас^ддаа	4800
саасасЕсаа	сссЕаЕсЕсд	зесеэеессе	ЕЕдаЕЕЕаЕа	адддаЕЕЕЕд	дссаСБГсдд	4860

- 50 027054

ссЕаЕЕддЕЕ	аааааасдад	сЕдаЕЕЕаас	аааааЕЕЕаа	сдсдааЕЕаа	ЕЕсЕдЕддаа	4 920
ЕдЕдЕдЕсад	ЕЕадддЕдЕд	дааадЕсссс	аддсЕсссса	дсаддсадаа	дЕаСдсааад	4 98 0
саЕдсаЕсЕс	ааЕЕадЕсад	саассаддЕд	ЕддааадЕсс	ссаддсЕссс	садсаддсад	504 0
аадЕагдсаа	адсаЕдсаЕс	ЕсааЕЕадЕс	адсаассаЕа	дЕсссдсссс	ЕаасЕссдсс	5100
саЕсссдссс	сЕаасЕссдс	ссадЕЕ ссдс	ссаЕЕсЕссд	ссссаЕддсЕ	дасЕааЕЕЕЕ	5160
ЕЕЕЕаЕЕЕаЕ	дсададдссд	аддссдссЕс	ЕдссЕсЕдад	сЕаЕЕссада	адЕадЕдадд	5220
адддЕЕЕЕЕЕ	ддаддссЕад	дсЕЕЕЕдсаа	ааадсЕсссд	ддадсЕЕдЕа	ЕаЕссаЕЕЕ Е	5280
сддаЕсЕдаЕ	садсасдЕда	Едэаааадсс	ЕдаасЕсасс	дсдасдЕсЕд	ЕсдадаадЕЕ	5340
ЕсЕдаЕсдаа	аадЕЕсдаса	дсдЕсЕссда	ссЕдаЕдсад	сЕсЕсддадд	дсдаадааЕ с	5400
ЕсдЕдсЕЕЕс	адсЕЕсдаЕд	Еаддадддсд	ЕддаЕаЕдЕс	сЕдсдддЕаа	зЕадсЕдсдс	54 60
сдаЕддЕЕЕс	ЕасааадаЕс	дЕЕаЕдЕЕЕа	ЕсддсасЕЕЕ	дсаЕсддссд	сдсЕсссдаЕ	5520
ЕссддаадЕд	СЕЕдасаЕЕд	дддааЕЕсад	сдададссЕд	ассЕагЕдеа	ЕсЕсссдссд	5580
ЕдсасадддЕ	дЕсасдЕЕдс	аадассЕдсс	Едааассдаа	сЕдсссдсЕд	ЕЕсЕдсадсс	5640
ддЕсдсддад	дссаЕддаЕд	сдаЕсдсЕдс	ддссдаЕсЕЕ	адссадасда	дсдддЕЕсдд	5700
сссаЕЕсдда	ссасааддаа	ЕсддЕсааЕа	сасЕасаЕдд	СдЕдаЕЕЕса	ЕаЕдсдсдаЕ	5760
ЕдсЕдаЕссс	СаЕдЕдЕаЕс	асЕддсааас	ЕдЕдаЕддас	дасассдЕса	дЕдсдЕссдЕ	5320
сдсдсаддсЕ	сЕсдаЕдадс	ЕдаЕдсЕЕЕд	ддссдаддас	Едссссдаад	ЕссддсассЕ	5880
сдЕдсасдсд	даЕЕЕсддсЕ	ссаасааЕдЕ	ссЕдасддас	аэЕддссдса	ЕаасадсддЕ	5940
саЕЕдасЕдд	адсдаддсда	ЕдЕЕсдддда	ЕЕсссааЕас	даддЕсдсса	асаЕсЕЕсЕЕ	6000
сЕддаддссд	ЕддЕЕддсЕЕ	дЕаЕддадса	дсадасдсдс	ЕасЕЕсдадс	ддаддсаЕсс	6060
ддадсЕЕдса	ддаЕсдссдс	ддсЕссдддс	дЕаЕаЕдсЕс	сдсаЕЕддЕс	ЕьдассаасЕ	6120
сЕаЕсададс	ЕЕддЕЕдасд	дсааЕЕЕсда	ЕдаЕдсадсЕ	Едддсдсадд	дЕсдаЕдсда	6180
сдсааЕсдЕс	сдаЕссддад	ссдддасЕдЕ	сдддсдЕаса	сааассдссс	дсадаадсдс	6240
ддссдЕсЕдд	ассдаЕддсЕ	дЕдЕадаадЕ	асЕсдссдаЕ	адЕддааасс	дасдссссад	6300
сасЕсдЕссд	адддсааадд	ааЕадсасдЕ	дсЕасдадаЕ	ЕЕсдаЕЕсса	ссдссдссЕЕ	6360
сЕаЕдааадд	ЕЕдддсЕЕсд	дааСсдЕЕЕЕ	ссдддасдсс	ддсЕддаЕда	ЕссЕссадсд	6420
сддддаЕсЕс	аЕдсЕддадЕ	ЕсЕЕсдссса	ссссаасЕЕд	ЕЕЕаЕЕдсад	сЕЕаЕааЕдд	6480
ЕЕасаааЕаа	адсааЕадса	ЕсасаааЕЕЕ	сасаааЕааа	дсаЕЕЕЕЕЕЕ	сассдсаЕЕс	6540
ЕадЕЕдЕддЕ	ЕЕдЕссааас	ЕсаЕсааЕдЕ	аЕсЕЕаЕсаЕ	дЕсЕдЕаЕас.	сдЕсдассЕ с	6600
ЕадсЕададс	ЕЕддсдЕааЕ	саЕддЕсаЕа	дсЕдЕЕЕссЕ	дЕдЕдаааЕЕ	дЕЕаЕссдсЕ	6660
сасааЕЕсса	сасаасаЕас	дадссддаад	саЕааадЕдЕ	ааадссЕддд	дЕдссЕааЕд	6720
адЕдадсЕаа	сЕсасаЕЕаа	ЕЕдсдЕЕдсд	сЕсасЕдссс	дсЕЕЕссадЕ	сдддааассЕ	6780
дЕсдЕдссад	сЕдсаЕЕааЕ	дааЕсддсса	асдсдсдддд	ададдсддЕЕ	ЕдсдЕаЕЕдд	6840
дсдсЕсЕЕсс	дсЕЕссЕсдс	ίсасЕдасЕс	дсЕдсдсЕсд	дЕсдЕЕсддс	Едсддсдадс	6900
ддЕаЕсадсЕ	сасЕсааадд	сддЕааЕасд	дЕЕаЕссаса	дааЕсадддд	аЕаасдсадд	6960
ааадаасаЕд	Едздсаааад	дссадсаааа	ддссаддаас	сдЕааааадд	ссдсдЕЕдсЕ	7020
ддсдЕЕЕЕЕс	саЕаддсЕсс	дссссссЕда	сдадсаЕсас	аааааЕсдас	дсЕсаадЕса	7080
даддЕддсда	аасссдасад	дасЕаЕааад	аЕассаддсд	ЕЕЕсссссЕд	даадсЕсссЕ	7140
сдЕдсдсЕсЕ	ссЕдЕЕссда	сссЕдссдсЕ	ЕассддаЕас	сЕдЕссдссЕ	ЕЕсЕсссЕЕс	7200
дддаадсдЕд	дсдсЕЕЕсЕс	аЕадсЕсасд	сЕдЕаддЕаЕ	сЕсадЕЕсдд	ЕдЕаддЕсдЕ	7260
ЕсдсЕссаад	сЕдддсЕдЕд	Едсасдаасс	ссссдЕЕсад	сседассдсЕ	дсдссЕЕаЕс	7320

- 51 027054

сддХаасХаХ	сдХсХХдадХ	ссаасссддХ	аадасасдас	ЬДаСсдссас	Хддсадсадс	7 38 0
сасХддХаас	аддаХХадса	дадсдаддХа	ХдХаддсддХ	дсДасядадг	хсХХдаадХд	7440
дХддссХаас	ХасддсХаса	сХадаадаас	адХаХХХддХ	агсъдсдссс	ХдсХдаадсс	7500
адхХассХхс	ддааааадад	ХХддХадсХс	х Хуа хссддс	ааасааасса	ссдсХддХад	7 5 60
сддХХХХХХХ	дХХХдсаадс	адсадаХХас	дсдсадаааа	аааддаХсХс	аадаадаХсс	7620
ХХХдаХсХХХ	ίсхасддддх	сХдасдсХса	дХддаасдаа	аасхсасдхх	аауддаххсх	7680
ддХсаХдада	ХХаХсааааа	ддахсххсас	сХадаХссХХ	ХХаааХХааа	ааХдаадХХХ	7740
ХаааХсааХс	ХааадХаХаХ	аХдадХааас	ХХддЬсХдас	адХХассааХ	дсХХааХсад	7800
Хдаддсассх	аХсХсаусуа	ХсХуХсХаХХ	Хсд ХХсаХсс	аХадХХдссХ	дасХссссдХ	7860
сдХдХадаХа	эсХасдаХас	дддадддсХХ	зссаХсХддс	сссадХдсХд	сааХдаХасс	7920
дсдадассса	сдсХсассдд	сХссадаХХХ	аХсадсааХа	аассадссад	ссддаадддс	7930
сдадсдсада	адХддХссХд	саасхххахс	сдссХссаХс	садХсХаХХз	аХХдСХдссд	8040
ддаадсХада	дХаадХадХХ	сдссадХХаа	ХадХХХдсдс	аасдХХдХХд	ссаХХдсХас	8100
аддсаХсдХд	дХдХсасдсС	сдХсдХХСдд	ХаХддсХХса	ххсадсхссд	дХСсссаасд	8160
аХсааддсда	дХХасаХдаХ	сссссаХдХХ	дХдсаааааа	дсддХХадсХ	ссХХсддХсс	3220
ί ссдаХсдХХ	дХсадаадХа	адХХддссдс	адХдХХаХса	хХсаХддХХа	ХддсадсасХ	8280
дсаХааХХсХ	сХ ХасХдХса	ХдесаХссдХ	аадаЕдсХХХ	ХсХдХдасХд	дХдадХасХс	8340
аассаадХса	ХХсХдадааХ	адХдХаХдсд	дсдассдадХ	ХдсХсХХдсс	сддсдХсааХ	8400
асдддаХааХ	ассдсдссас	аХадсадаас	ХХХаааадХд	сХсаХсаХХд	дааааедХХс	8460
ХХсддддсда	ааэсХсХсаа	ддаХсХХасс	дсХдХХдада	ХссадХХсда	ХдХаасссас	8520
ХедХдсассс	аасХдаХсХ X	садсаХсХХХ	ХасХХХсасс	адсдХХ ХсХд	ддХдадсааа	8580
аасаддаадд	сааааХдссд	сааааааддд	ааХаадддсд	асасддаааХ	дХ ХдааХаеХ	8640
саХасХсХХс	сХХХХЬсааХ	аХХаХХдазд	саХХХаХсад	ддХХаХХдХс	ХсаХдадсдд	8700
аХасаХаХХХ	дааХдХаХХХ	адаааааХаа	асаааХаддд	дХХссдсдса	саХХХссссд	8760
аааадхдсса	ссХдасд					8777

Вектор р1д-С910-С1атЬс1а (ЗЕО Ю N0:177)

ХсдасддаХс	дддадаХсХс	ссдаХссссХ	аХддХдсасХ	сХсадХасаа	ХсХдсХсХда	60
ХдссдсаХад	ХХаадссадХ	аХсХдсХссс	ХдеХХдХдХд	хХддаддхсд	сХдадХадХд	120
сдсдадсааа	аХХХаадсХа	саасазддса	аддсХХдасс	дасааХХдХХ	ааХХаасаХд	130
аадааХсХдс	ххадддххад	дсдххххдсд	схдсххсдсх	аддХддХсаа	ХаХХддссаХ	240
ХадссаХаХЬ	аХХсаХХддХ	ЬахаХадсах	аааХсааХаХ	Хддсхаххдд	ссаХХдсаХа	300
сдХХдХаХсс	аХаХсаХааХ	аХдХасаХХХ	аХаХХддсХс	аХдХссааса	ХХассдссаХ	зео
дХХдасаХХд	аХХаХХдасХ	адХХаХХааХ	адХааХсааХ	ХасддддХса	ХХадХХсаХа	420
дсссахахах	ддадХХссдс	дХХасаХаас	ХХасддХааа	ХддсссдссХ	ддсХдассдс	480
ссаасдассс	ссдсссаХХд		ХдасдХаХдХ	ХсссаХадХа	асдссааХад	54 0
ддасхххсса	ХХдасдХсаа	ХдддХддадХ	аХХХасддХа	аасХдсссас	ХХддсадХас	600
аХсаадХдХа	ХсаХаХдсса	адХасдсссс	сХаХХдасдХ	сааХдасддХ	аааХддсссд	660
ссХддсаХХа	ХдсссадХас	аХдассХСзХ	дддасХХХсс	ХасХХддсад	ХасаХсХасд	720
ХаХХадХсаХ	сдсХаХХасс	аХддХдаХдс	ддХХХХддса	дХасаХсааХ	дддсдхддах	780
адсддХХХда	сХсасдддда	ХХХссаадХс	ХссассссаХ	ХдасдХсааХ	дддадХХХдХ	840

- 52 027054

ЕЕЕддсасса	аааЕсаасдд	дасЕ Е Ессаа	ааЕдЕсдЕаа	сааспссдсс	ссаЕЕдасдс	900
аааЕдддсдд	ЕаддсдЕдЕа	сддЕдддадд	ЕсЕаЕаЕаад	сададсЕсдЕ	ЕЕадЕдаасс	960
дЕсадаЕсдс	сЕддадасдс	саЕссасдсЕ	дЕЕЕЕдассЕ	ссаЕадаада	сассдддасс	1020
даЕссадссЕ	ссдсддссдд	даасддЕдса	ЕЕддаассда	ЕдасЕсЕсгЕ	асдЕадссЕЕ	1080
дсадаадЕЕд	дЕсдЕдаддс	асЕдддсадд	ЕаадЕаЕсаа	ддЕсасаада	саддЕЕ Еаад	1140
дадаЕсааЕа	дааасЕдддс	ЕЕдЕсдадас	ададаадасЕ	сЕЕдсдЕЕЕс	Есагаддсас	±200
сЕаЕЕддЕсЕ	ЕасЕдасаЕс	сасЕЕЕдссЕ	ЕЕсЕсЕссас	аддЕдЕссас	ЕсссадЕЕса	1260
аЕЕасадсЕс	дссассаЕдс	ддЕЕсЕссдс	ЕсадсЕдсЕд	ддссЕЕсЕдд	ЕдсЕдЕддаЕ	1320
ЕсссддсдЕс	ЕсдадаЕсЕа	ЕсдаЕдсаЕд	ссаЕддЕасс	аадсЕЕдсса	ссаЕдадсад	1380
садсЕсЕЕдд	сЕдсЕдсЕда	дссЕддЕддс	сдЕдасадсс	дсссададса	ссаЕсдадда	1440
дсаддссаад	ассЕЕссЕдд	асаадЕЕсаа	ссасдаддсс	даддассЕдЕ	ЕсЕассадад	1500
садссЕддсс	адсЕддаасЕ	асаасассаа	саЕсассдад	дадаасдЕдс	асаасаЕдаа	1560
саасдссддс	дасаадЕддэ	дсдссЕЕСсЕ	дааддадсад	адсасасЕдд	сссадаЕдЕа	1620
сссссЕдсад	дадаЕссада	ассЕдассдЕ	даадсЕдсад	сЕдсаддссс	Ессадсадаа	1680
сддсадсадс	дЕдсЕдадсд	аддасаадад	саадсддсЕд	аасассаЕсс	ЕсаасассаЬ	1740
дЕссассаЕс	Еасадсассд	дсааадЕдЕд	саассссдас	аасссссадд	асЕдссЕдсЕ	1800
дсЕддадссс	ддссЕдаасд	адаЕсаЕддс	саасадссЕд	дасЕасаасд	адсддсЕдЕд	18 60
ддссЕдддад	адсЕддсдда	дсдаадЕддд	саадсадсЕд	сддссссддЕ	асдаддадЕа	1920
сдЕддЕдсЕд	аадаасдада	Еддссадддс	саассасЕас	даддасЕасд	дсдасЕасЕд	1980
дададдсдас	ЕасдаадЕда	асддсдЕдда	сддсЕасдас	Еаеадсадад	десадсЕдаЕ	2040
сдаддасдЕд	дадсасассЕ	ЕсдаддадаЕ	саадссЕсЕд	Еасдадсасс	ЕдсасдссЕа	2100
сдЕдсдддсс	аадсЕдаЕда	асдссЕассс	садсЕасаЕс	адссссаЕсд	дсЕдссЕдсс	2160
сдсссассЕд	сЕдддсдаса	ЕдЕддддссд	дЕЕсЕддасс	аассЕдЕаса	дссЕдассдЕ	2220
дсссЕЕсддс	садаадссса	асаЕсдасдЕ	дассдасдсс	аЕддЕддасс	аддссЕддда	2280
сдсссадсдд	аЕсЕЕсаадд	аддссдадаа	дЕЕсЕЕсдЕд	адсдЕдддсс	ЕдсссаасаЕ	2340
дасссадддс	ЕЕЕЕдддада	асадсаЕдсЕ	дассдасссс	ддсааЕдЕдс	эдааддссдЕ	2400
дЕдссасссс	ассдссЕддд	ассЕдддсаа	дддсдасЕЕс	сддаЕссЕда	ЕдЕдсассаа	2460
адЕдассаЕд	дасдасЕЕсс	Едассдссса	ссасдадаЕд	ддссасаЕсс	адЕасдасаЕ	2520
ддссЕасдсс	дсссадсссЕ	ЕссЕдсЕдсд	даасддсдсс	аасдадддсЕ	ЕЕсасдаддс	2580
сдЕдддсдад	аЕсаЕдадсс	Едадсдссдс	сасссссаад	сассЕдаада	дсаЕсддссЕ	2640
дсЕдадсссс	дасЕЕссадд	аддасаасда	дассдадаЕс	аасЕ ЕссЕдс	Едаадсаддс	2700
ссЕдассаЕс	дЕдддсассс	ЕдсссЕЕсас	сЕасаЕдсЕд	дадаадЕддс	ддЕддаЕддг	2760
дЕЕЕаадддс	дадаЕсссса	аддассадЕд	даЕдаадаад	ЕддЕдддада	Едаадсддда	2820
даЕсдЕдддс	дЕддСддадс	ссдЕдсссса	сдасдадасс	Еас.Едсдасс	ссдссадссЕ	28 30
дЕЕесасдЕд	адсаасдасЕ	асЕссЕЕсаЕ	ссддЕасЕас	асссддассс	ЕдЕассадЕЕ	2940
ссадЕЕссад	даддсссЕдЕ	дссаддссдс	саадсасдад	ддсссссЕдс	асаадЕдсда	3000
саЕсадсаас	адсассдадд	ссддасадаа	аоЕдЕЕсаас	аЕдсЕдсддс	Едддсаадад	3060
сдадсссЕдд	асссЕддссс	ЕддадааЕдЕ	ддЕдддсдсс	аадаасаЕда	аЕдЕдсдссс	3120
ссЕдсЕдаас	ЕасЕЕсдадс	сссЕдЕЕсас	сЕддсЕдаад	дассадааса	адэасадсЕЕ	3180
сдЕдддсЕдд	адсассдасЕ	ддадссссЕа	сдссдассад	адсаЕсааад	ЕдсддаЕеад	3240
ссЕдаададс	дсссЕдддсд	асааддссЕа	сдадЕддаас	дасаасдада	ЕдЕассЕдЕЕ	3300

- 53 027054

ссддадсадс	дСддссСаСд	ссаСдсддса	дСасССссСд	ааадсдаада	ассадаСдаС	3360
ссСдССсддс	даддаддасд	СдададСддс	саассСдаад	ссссддаСса	дсССсаасСС	3420
сССсдСдасс	дсссссаада	асдСдадсда	саСсаСсссс	сддассдаад	С ддадааддс	3480
саСссддаСд	адссддадсс	ддаСсаасда	сдссССссдд	сСдаасдаса	асСсссСдда	35 4 0
дССссСдддс	аСссадссса	сссСдддссс	Ссссаассад	ссссссдеда	дсаСседдсС	3600
даСсдсдССС	ддсдеддСда	СдддсдСдаС	сдеддеддда	аСсдСдассс	едаесессас	3660
сддсаСссдд	дассддаада	адаадаасаа	ддсссддадс	ддсдадаасс	ссС асдссад	3720
саСсдасасс	адсаадддсд	адаасаассс	сддсССссад	аасассдасд	асдСдсадас	3780
садсссесда	саассеадаа	сдадсссдаа	ССсдаадсСС	сСдсадасдс	дСсдасдСса	3840
СаСддаСссд	аСаСсдссдС	ддсддссдса	ддссадссса	аддссдсСсс	садсдСдасс	3900
сСдССссссс	ссСссСссда	ддадсСдсад	дссаасаадд	ссасссСддС	дСдссСсаСс	3960
адсдасССсС	асссСддсдс	сдСдассдСд	дссСддаадд	ссдасадсад	ссссдСдаад	4020
дссддсдСдд	адассассас	ссссадсаад	сададсааса	асаадСасдс	сдссадсадс	4080
СассСдадсс	Ссасссссда	деадеддаад	адссассдда	дсСасадсСд	ссаддСдасс	4140
сасдадддса	дсассдСдда	даадассдСд	дсссссассд	адСдсадсСа	аСадасССаа	4200
дСССааассд	сСдаСсадсс	СсдасСдСдс	сССсСадССд	ссадссаСсС	дССдСССдсс	4 2 60
ссСсссссдС	дссССссССд	асссСддаад	дСдссасСсс	сасСдСсссС	С ссСааСааа	4320
аСдаддаааС	СдсаСсдсаС	СдСсСдадСа	ддСдСсаССс	СаССсСдддд	ддсддддсдд	4 380
ддсаддасад	саадддддад	даССдддаад	асааСадсад	дсаСдссддд	даСдсддСдд	4 4 4 0
дсСсСаСддс	ССсСдаддсд	дааадаасса	дсСддддсСс	СадддддСаС	ссссасдсдс	4500
ссСдСадсдд	сдсаССаадс	дсддсдддСд	СддСддССас	дсдсадсдСд	ассдсСасас	4560
ССдссадсдс	ссСадсдссс	дсСссСССсд	сСССсССссс	ССссСССсСс	дссасдССсд	4620
ссддсСССсс	ссдС саадсС	сеаааСсддд	ддсСсссССС	адддС Сссда	сссадсдссс	4 680
СасддсассС	сдассссааа	ааасССдаСС	адддсдаСдд	ССсасдСадС	дддссаСсдс	4 740
ссСдаСадас	ддСС ССС сдс	ссСССдасдС	СддадСссас	дССсСССааС	адСддасСсС	4800
СдССссааас	Сддаасааса	сСсаасссСа	СсСсддСсСа	ССсССССдаС	ССаСааддда	4860
ССССддссаС	ССсддссСаС	СддсСааааа	аСдадсСдаС	ССаасааааа	СССаасдсда	4920
аССааССсСд	СддааСдСдС	дСсадССадд	дСдСддааад	СссссаддсС	ссссадсадд	4 980
садаадСаСд	сааадсаСдс	аСсСсааССа	дСсадсаасс	аддСдСддаа	адСссссадд	5040
сСссссадса	ддсадаадСа	СдсааадсаС	дсаСсСсааС	СадС садсаа	ссаСадСссс	5100
дссссСаасс	ссдсссаСсс	сдссссСаас	СссдсссадС	СссдсссаСС	ссссдсссса	5160
СддсСдасСа	аССССССССа	ссСаСдсада	ддссдаддсс	дссСсС дссС	ссдадсСаСС	5220
ссадаадСад	СдаддаддсС	сссссддадд	ссСаддсССС	Сдсааааадс	С сссдддадс	5280
ССдСаСаСсс	аССССсддаС	сСдаСсадса	сдСдаСдааа	аадссСдаас	Ссассдсдас	5340
дСсСдСсдад	аадСССсСда	СсдаааадСС	сдасадсдСс	СссдассСда	СдсадсСсСс	5400
ддадддсдаа	дааСсСсдСд	сСССсадссс	сдаСдСадда	дддсдеддаС	аСдСссСдсд	54 60
ддСаааСадс	СдсдссдаСд	дСсссСасаа	адаСедС СаС	дСССаСсддс	асСССдсаСс	5520
ддссдсдсСс	ссдаССеедд	аадсдсссда	сас Сддддаа	С Ссадсдада	дссСдассСа	5580
ССдсаСсСсс	сдссдСдсас	адддСдСсас	дССдсаадас	сСдссСдааа	ссдаасСдсс	5640
сдсСдССсСд	садссддСсд	сддаддссаС	ддаСдсдаСс	дсСдсддссд	аСсССадсса	57 00
дасдадсддд	ССсддсссаС	Ссддассдса	аддааСеддС	сааСасасСа	са СддсдСда	5760

- 54 027054

ЕЕЕсаЕаСдс	дсдаЕЕдсЕд	аЕссссаЕдЕ	дЕаЕсасЕдд	сааасЕдЕдз	Е ддасдасас	5820
сдЕсадЕдсд	ЕссдЕсдсдс	аддсЕсЕсда	ЕдадсЕдаЕд	сЕЕЕдддссд	аддасЕдссс	5880
сдаадЕссдд	сассЕсдЕдс	асдсддаЕЕЕ	сддсЕссаас	ааЕдЕссЕда	сддасааЕдд	5940
ссдсаЕааса	дсддЕсаЕЕд	асЕддадсда	ддсдаЕдЕЕс	ддддаЕЕ ссс	ааЕасдаддЕ	6000
сдссаасаЕс	ίЕсЕЕсЕдда	ддссдЕддЕЕ	ддсЕЕдЕаЕд	дадсадсада	сдсдсЕасЕ Е	6060
сдадсддадд	саЕссддадс	ЕЕдсаддаЕс	дссдсддсЕс	сдддсдЕаЕа	ЕдсЕссдсаЕ	6120
ЕддЕсЕ Едас	саасЕсЕаЕс	ададсЕЕддЕ	ЕдасддсааЕ	ЕЕсдаЕдаЕд	садсЕЕдддс	6180
дсадддЕсда	ъдсдасдсаа	ЕсдЕссдасс	сддадссддд	ассдЕсдддс	дЕасасаааЕ	6240
сдсссдсада	адсдсддссд	ЕсЕддассда	ЕддсЕдЕдЕа	даадЕасЕсд	ссдаЕадЕдд	6300
ааассдасдс	сссадсасЕс	дЕссдадддс	аааддааЕад	сасдЕдсЕас	дадаЕЕЕсда	6360
ЕЕссассдсс	дссЕЕсЕаЕд	аааддЕЕддд	сЕЕсддааЕс	дЕЕЕЕссддд	асдссддсЕд	6420
даЕдаЕссЕс	садсдсдддд	аЕсЕсаЕдсЕ	ддадЕЕсЕЕс	дсссасссса	асЕЕдЕЕЕаЕ	6480
ЕдсадсЕЕаЕ	ааЕддЕЕаса	ааЕааадсаа	ЕадсаЕсаса	ааЕЕЕсасаа	аЕааадсаЕЕ	6540
ЕЕЕЕЕсасЕд	саЕЕсЕадЕЕ	дЕддЕЕЕдЕс	сааасЕсаЕс	ааЕдЕаЕ СЕЕ	аЕсаЬдЕсЕд	6600
ЕаЕассдЕсд	ассЕсЕадсЕ	ададсЕЕддс	дЕааЕсаСдд	ЕсаЕадсЕдЕ	ЕЕссЕдЕдЕа	6660
аааЕЕдЕЕаЕ	ссдсЕсасаа	ЕЕссасасаа	саЕасдадсс	ддаадсаЕаа	адЕдсааадс	6720
сЕддддЕдсс	ЕааЕдадЕда	дсЕаасЕсас	аЕЕааЕЕдсд	ЕЕдсдсЕсас	ЕдсссдсЕЕЕ	6780
ссадЕсддда	аассЕдЕсдЕ	дссадсЕдса	ЕЕааЕдааЕс	ддссаасдсд	еддддададд	6840
сддЕЕЕдсдЕ	аЕЕдддсдсЕ	сЕЕссдсЕЕс	сЕсдсЕсасЕ	дасЕсдсЕдс	дсЕсддЕсдЕ	6900
ЕсддсЕдсдд	сдадсддЕаЕ	садсЕсасЕс	аааддсддЕа	аЕасддЕЕаЕ	ссасадааЕс	6960
аддддаЕаас	дсаддааада	асаЕдЕдадс	ааааддссад	сааааддсса	ддаассдЕаа	7020
аааддссдсд	ЕЕдсЕддсдЕ	ЕЕЕЕссаЕад	дсЕссдсссс	ссЕдасдадс	аЕеасааааа	7080
ЕсдасдсЕса	адЕсададдЕ	ддсдааассс	дасаддасЕа	ЕааадаЕасс	аддсдЕЕЕсс	7140
сссЕддаадс	ЕсссЕсдЕдс	дсЕ сЕссЕдЕ	ЕссдасссЕд	ссдсЕЕассд	даЕассЕдЕс	7200
сдссЕЕЕсЕс	ссЕЕсдддаа	дсдЕддсдсЕ	СЕсЕсаЕадс	ЕсасдсЕдЕа	ддЕаЕсЕсад	7260
ЕЕсддЕдЕад	дЕсдЕЕсдсЕ	ссаадсЕддд	сЕдЕдЕдсас	даассссссд	ЕЕсадсссда	7320
ссдсЕдсдсс	ЕЕаЕссддЕа	асЕаЕсдЕсЕ	ЕдадЕссаас	ссддЕаадае	асдасЕЕаЕс	7380
дссасЕддса	дсадссасЕд	дЕаасаддаЕ	Еадсададсд	аддЕаЕдЕад	дсддЕдсЕас	74 40
ададЕЕсЕЕд	аадЕддЕддс	сЕаасЕасдд	сЕасасЕада	адаасадЕаЕ	ЕЕддЕаЕсЕд	7500
сдсЕсЕдсЕд	аадссадЕЕа	ссЕЕсддааа	аададЕЕддЕ	адсЕсЕЕдаЕ	ссддсаааса	7560
аассассдсЕ	ддЕадсддЕЕ	1; ΐ ί ЕЕ дТ; ΐ Е д	саадсадсад	аЕЕасдсдса	дааааааадд	7620
абсЕсаадаа	даЕссЕЕЕда	ЕсЕЕЕЕсЕас	ддддЕсЕдас	дсЕсадЕдда	асдаааасЕс	7680
асдЕЕааддд	аЕЕЕЕддЕса	ЕдадаЕЕаЕс	аааааддаЕс	ЕЕсассЕада	ЕссЕЕЕЕааа	7740
ЕЕаааааЕда	адΕϋЬЕаааЕ	сааЕсЕааад	ЕаЕаЕаЕдад	ЕааасЕЕддЕ	СЕдасадЕЕа	7800
ссааЕдсЕЕа	аЕсадЕдадд	сассЕаЕсЕс	адсдаЕсЕдЕ	сЕаЕЕЕсдЕЕ	саЕссаЕадЕ	7860
ЕдссЕдасЕс	сссдЕсдЕдЕ	адаЕаасЕзс	даЕасдддад	ддсЕЕассаЕ	сЕддссссад	7920
ЕдсЕдсааЕд	аЕассдсдад	асссасдсЕс	ассддсЕсса	даЕЕЕаЕсад	сааЕааасса	7980
дссадссдда	адддссдадс	дсадаадЕдд	ЕссЕдсаасЕ	ЕЕаЕссдссЕ	ссаЕссадЕс	8040
ЕаЕЕааЕЕдЕ	Едссдддаад	сЕададЕаад	ЕадЕЕсдсса	дЕЕааЕадЕЕ	ЕдсдсаасдЕ	8100
ЕдЕЕдссаЕЕ	дсЕасаддса	ЕсдЕддЕдЕс	асдсЕсдЕсд	ЕЕЕддЕаЕдд	сЕЕсаЕЕсад	8160
сЕссддЕЕсс	саасдаЕсаа	ддсдадЕЕас	аЕ даЕссссс	аЕдЕ ЕдЕдса	ааааадеддЕ	8220
ЕадсЕссЕЕс	ддЕссЕссда	ЕсдЕЕдЕсад	аадЕаадсЕд	дссдсадЕдЕ	ЕаесасЕсаЕ	8280
ддЕЕаЕддса	дсасЕдсаЕа	аЕЕсЕсЕЕас	ЕдЕсаЕдсса	ЕссдЕаадаЕ	дсЕЕЕЕСЕдЕ	8340
дасЕддЕдад	ЕасЕсаасса	адЕсаЕЕсед	адааЕадЕдЕ	эЕдсддсдас	сдадЕЕдеЕс	8400
ЕЕдсссддсд	ЕсааЕасддд	аЕааЕассдс	дссасаЕздс	адаасЕЕЕаа	аадЕдсЕсас	84 60
саЕЕддаааа	сдЕЕсЕЕсдд	ддсдаааасЕ	сЕсааддаЕс	ЕЕассдсЕдЕ	пдадаЕссад	8520
ЕЕсдаЕдЕаа	сссасЕсдЕд	сасссаасЕд	аЕсЕЕсадса	ЕсЕсЕЕасЕЕ	ЕсассадсдЕ	8580
ϋ ЕсЕдддЕда	дсааааасад	дааддсаааа	Едссдсаааа	аадддааЕаа	дддсдасасд	864 0
даааЕдЕЕда	аСасЕсаЕас	ЕсЕЕссЕЕЕЕ	ЕсааЕаЕЕаЕ	ЕдаассаЕЕ е	аЕсадддЕЕа	8700
ЕЕдЕсЕсаЕд	адсддаЕаса	ЕаЕЕЕдааЕд	ЕаЕЕЕадааа	ааЕааасааа	ЕаддддЕЕсс	8760
дсдсасаЕЕЕ	ссссдаааад	ЕдссассЕда	ед			8792

- 55 027054

Ссылки:

Άιγ МА (1981), Зециепсе ге1айоп5Ыр5 атопд 1Ие Иетадд1ийшп депе5 οί 12 зиЫурез οί тЛиеп/а Α νίги5. Ргос ИаИ АсаБ 5ά И8А 78 (12):7639-7643.

Ие Кгш£ I е1 а1. (1995), Кар1Б 5е1есйоп о£ се11 5иЬрори1айоп-5ресШс Иитап топос1опа1 апБЬоБ1е5 £гот а 5уп!ЪеБс рИаде апБЬоБу НЬгагу. Ргос №и1 АсаБ 8ш И8А 92:3938.

Регди5оп е1 а1., (2003), №Лиге 422: 428-443.

РоисЫег АМ е1 а1. (2005), СНагасЮп/аНоп о£ а пονе1 тЛиеп/а А νίπΐ5 Нетадд1иНшп 5иЫуре (Н16) оЬ1атеБ £гот Ь1аск-ИеаБеБ ди115. I Уно1 79 (5): 2814-2822 .

ТИе \УоЛБ НеаИЪ 0гдаш/аНоп С1оЬа1 1пЛиеп/а Ргодгат ЗипшИапсе №1\уогк (2005), Еνο1иΗοп о£ Н5Ш А\аап 1пЛиеп/а Уии5е5 ш А51а. Етегд 1пРес! Όΐ5 11: 1515-1521.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Изолированное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, способные специфично связываться с эпитопом в стволовой области белка гемагглютинина (НА) подтипов вирусов гриппа А филогенетической группы 1 и подтипов вирусов гриппа А филогенетической группы 2 и способные нейтрализовать по меньшей мере один или более подтипов вирусов гриппа А группы 1, выбранных из группы, состоящей из вирусов гриппа А, содержащих НА подтипов Н1, Н2, Н5, Н6, Н8, Н9 и Н11 и по меньшей мере один или более подтипов вирусов гриппа А группы 2, выбранных из группы, состоящей из вирусов гриппа А, содержащих НА подтипов Н3, Н4, Н7 и Н10, отличающиеся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент также способны специфично связываться с белком гемагглютинина (НА) подтипов вирусов гриппа В, где указанные антитело или его антигенсвязывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащих область СИК1 тяжелой цепи §Еф

ГО N0: 139, область СИК2 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 134 и область СИК3 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 145 и область СИК1 легкой цепи §Еф ГО N0: 146, область СИК2 легкой цепи §Еф ГО N0: 174 и область СИК3 легкой цепи §Еф ГО N0: 147, область СИК1 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 139, область СИК2 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 134 и область СИК3 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 145 и область СИК1 легкой цепи §Еф ГО N0: 148, область СИК2 легкой цепи §Еф ГО N0: 149 и область СИК3 легкой цепи §Еф ГО N0: 150, область СИК1 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 139, область СИК2 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 134 и область СИК3 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 145 и область СИК1 легкой цепи §Еф ГО N0: 142, область СИК2 легкой цепи §Еф ГО N0: 143 и область СИК3 легкой цепи §Еф ГО N0: 173;

антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащих область СИК1 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 139, область СИК2 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 134 и область СИК3 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 152 и область СИК1 легкой цепи §Еф ГО N0: 148, область СИК2 легкой цепи §Еф ГО N0: 149 и область СИК3 легкой цепи §Еф ГО N0: 150, область СИК1 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 139, область СИК2 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 134 и область СИК3 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 152 и область СИК1 легкой цепи §Еф ГО N0: 156, область СИК2 легкой цепи §Еф ГО N0: 157 и область СИК3 легкой цеп:л 5>Е0 ГО N0: 158, область СИК1 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 139, область СИК2 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 134 и область СИК3 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 152 и область СИК1 легкой цепи §Еф ГО N0: 171, область СИК2 легкой цепи §Еф ГО N0: 164 и область СИК3 легкой цепи §Еф ГО N0: 172 и область СИК1 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 139, область СИК2 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 134 и область СИК3 тяжелой цепи §Еф ГО N0: 152 и область СИК1 легкой цепи §Еф ГО N0: 142, область СИК2 легкой цепи §Еф ГО N0: 143 и область СИК3 легкой цепи §Еф ГО N0: 144.
2. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где указанные антитело или его антигенсвязывающий фрагмент не обладают ингибирующей гемагглютинин активностью.
3. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1 или 2.
4. Применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по п.1 или 2 в профилактическом и/или терапевтическом лечении инфекции гриппа.
5. Применение молекулы нуклеиновой кислоты по п.3 в профилактическом и/или терапевтическом лечении инфекции гриппа.
6. Применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по п.1 или 2 и молекулы нуклеиновой кислоты по п.3 в профилактическом и/или терапевтическом лечении инфекции гриппа.
7. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1 или 2 и фармацевтически приемлемый эксципиент.
8. Фармацевтическая композиция, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.3 и фармацевтически приемлемый эксципиент.
9. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 1 или 2 и молекулу нуклеиновой кислоты по п.3 и фармацевтически приемлемый эксципиент.