KR102050615B1 - 인플루엔자 b 바이러스들에 결합하고 중화할 수 있는 인간 결합 분자 및 그 용도 - Google Patents

인플루엔자 b 바이러스들에 결합하고 중화할 수 있는 인간 결합 분자 및 그 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 인플루엔자 B 바이러스들의 헤마글루티닌에 결합하고 그러한 인플루엔자 바이러스들에 대항하여 광범위한 중화 활성을 갖는, 인간 단일클론 항체들과 같은 결합 분자들에 관한 것이다. 결합 분자들은 인플루엔자 A 바이러스들의 헤마글루티닌에는 결합하지 않는다. 본 발명은 결합 분자들을 인코딩하는 핵산 분자들 및 결합 분자들을 포함하는 조성물들을 더 제공한다. 결합 분자들은 인플루엔자 B 바이러스들의 진단, 예방 및/또는 치료에 이용될 수 있다.

Description

인플루엔자 B 바이러스들에 결합하고 중화할 수 있는 인간 결합 분자 및 그 용도{HUMAN BINDING MOLECULES CAPABLE OF BINDING TO AND NEUTRALIZING INFLUENZA B VIRUSES AND USES THEREOF}
본 발명은 의약에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 인플루엔자 B 바이러스들에 결합하고 중화할 수 있는 인간 결합 분자들, 예컨대, 단일클론 항체들 또는 이들의 항원-결합 절편들, 특히, B/야마가타(Yamagata) 및/또는 B/빅토리아 계통(Victoria lineage) 양쪽 모두의 인플루엔자 B 바이러스들에 결합하고 중화하는 중화 결합 분자들에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 인플루엔자 B 바이러스에 의하여 유발된 감염들, 특히, B/야마가타 및 B/빅토리아 계통들의 인플루엔자 B 바이러스들에 의하여 유발된 감염들의 진단, 예방 및/또는 치료에 관한 것이다.
인플루엔자 감염("인플루엔자" 또는 "독감" 이라고도 함)은 전세계적으로 매년 3백만에서 5백만 건의 중병을 유발하고 250,000 내지 500,000 명을 사망에 이르게 하는 인간에게 알려진 가장 흔한 질병들 중 하나이다. 인플루엔자는 인구의 5 내지 15%에 영향을 미치는 계절성 유행병으로 빠르게 전염되고, 건강 관리 비용으로 갖는 부담 및 생산성 손실은 광범위하다(세계 보건 기구(WHO)). 인간 및 동물에 있어서 감염성 병변들의 원인이 되는 인플루엔자 독감 바이러스는 3 가지 유형(A, B 및 C 형)이 있다. 현재, A 형 및 B 형 바이러스들은 인간에게서 관찰되는 인플루엔자 유행병 및 전세계적인 유행병의 원인이 되는 매개체이다.
매년 발생하는 인플루엔자 유행병을 다루는 현재의 접근법들은 바람직하게는 이형 교차보호를 발생시키는 연간 백신접종을 포함한다. 그러나, 인간에 있어서 순환하는 인플루엔자 바이러스들은 인플루엔자 백신 균주들 및 순환하고 있는 인플루엔자 균주들 사이에서 가장 근접한 가능성이 있는 매치를 확보하기 위해 인플루엔자 백신 제형을 매년 개조할 것을 요하는 영구적인 항원 변화가 일어난다. 대안적으로, 오셀타미비어(Tamiflu
Figure 112014087542364-pct00001
)와 같은 항바이러스성 약물은 인플루엔자 감염의 예방 및 치료에 효과적일 수 있다. 그러나, 오셀타미비어와 같은 항바이러스성 약물에 대한 내성을 보이는 인플루엔자 바이러스 균주들의 수는 증가하고 있다.
대안적인 접근법은 다양한 계절성 인플루엔자 바이러스들을 중화시키는 항체-기반 예방 또는 치료 수단의 개발이다.
H3 및/또는 H7 아형들(예컨대, CR8020, CR8043; WO 2010/130636 참조)의 HA를 포함하는 인플루엔자 바이러스들과 같은 계통 발생(phylogenetic) 그룹 2의 인플루엔자 A 바이러스들의 HA의 줄기-영역(stem-region) 내에서 고도로 보존된 에피토프(epitope)를 인식하는 교차-중화 항체들뿐만 아니라 (H1 또는 H5 아형의 HA를 포함하는 인플루엔자 바이러스들과 같은) 계통 발생 그룹 1의 인플루엔자 A 바이러스들의 HA의 보존된 줄기-영역 내에서 에피토프들을 인식하는 광범위하게 교차-중화하는 항체들이 최근에 개시되었다(예컨대, CR6261, WO2008/028946 참조). 더 최근에는, 인플루엔자 B 바이러스뿐만 아니라 계통 발생 그룹 1 및 그룹 2 양쪽 모두의 인플루엔자 A 바이러스들과 결합하고 중화할 수 있는 항체들이 발견되었다(예컨대, CR9114, 출원 번호 EP11173953.8에 기재됨).
지금까지, 인플루엔자 B 바이러스들에는 관심을 덜 가졌었다. 이는 (숙주로서 인간에 주로 한정되는) 인플루엔자 B 바이러스들은 세계적 유행병 인플루엔자 A 균주들의 창궐에 핵심이 되는 대형 동물 원천들(reservoirs)이 부족하다는 사실에 기인할 수 있다. 그러나, 대유행기 사이의 기간 동안에 매년 유행병의 누적된 영향은 세계적 유행병의 누적된 영향을 초과하며, 인플루엔자 B에 원인을 돌릴 수 있는 이환율 및 사망률이 예컨대, H3N2 바이러스들보다 더 낮다고 하더라도, H1N1 바이러스들의 이환율 및 사망률보다 더 높다(Thompson(2003), Thompson(2004)).
인플루엔자 B 바이러스들의 진화는 항원적 및 유전적으로 상이한 계통들의 오랜 기간 동안의 공통-순환을 특징으로 한다. 원형 바이러스들인 B/빅토리아/2/87(빅토리아 계통) 및 B/야마가타/16/88(야마가타 계통)으로 표시되는 두 계통들은 현재 구별된다(카네가에(1990), 로타(1990)). B/야마가타는 B/빅토리아 계통 바이러스들이 창궐했을 때인 1980년대까지 순환하고 있는 주요 계통이었다. 그 이후로, 양쪽 인플루엔자 B 계통들의 이동 변이체들(drift variants)은 최근의 인플루엔자 계절들에 동시에 순환하고 있는 양쪽 계통들과 함께 전세계적으로 공통-순환하고 있다.
인플루엔자 B 바이러스들이 매 2 내지 4 년마다 계절성 인플루엔자 유행병들의 주요 원인이라는 사실을 감안하고, 계절성 유행병들이 큰 경제적 영향을 미칠 뿐만 아니라, 특정 인플루엔자 B 바이러스들에 의하여 유발된 호흡기 질환의 중증도를 고려하면, 인플루엔자 B 아형들의 방지 및 치료에 대한 대안적이고 효과적인 수단에 대한 계속적인 요구가 존재한다. 따라서, 인플루엔자 B 바이러스들을 교차-중화할 수 있는 결합 분자들, 바람직하게는 광범위하게 중화하는 인간 결합 분자들에 대한 요구가 존재한다.
본 발명은 B/야마가타 및 B/빅토리아 계통 모두로부터 나온 인플루엔자 B 바이러스 균주들에 특이적으로 결합하고 중화할 수 있는 결합 분자들, 특히 인간 결합 분자들을 제공한다. 결합 분자들은 인플루엔자 A 바이러스 아형들에 결합하지 않는다.
또한, 본 발명은 결합 분자들을 포함하는 면역 접합체들 및/또는 약학적 조성물들에 관한 것일 뿐만 아니라, 인간 결합 분자들의 적어도 결합 영역을 인코딩하는 핵산 분자들에 관한 것이다.
본 발명의 결합 분자들, 면역 접합체들 및/또는 핵산 분자들은 원인성(causative) 인플루엔자 B 바이러스 아형에 관계없이, 인플루엔자 B 바이러스들에 대한 보편적인 예방제, 진단제 및/또는 치료제로서의 용도에 적합하다.
도 1은 경쟁 실험들에 기초한 개략적인 에피토프 지도이다. 본 발명에서 확인된 항-인플루엔자 B 항체들은 인플루엔자 B HA에 대한 결합/경쟁에 기초하여 4개 그룹들로 구분된다.
도 2는 결합 분자들이 인플루엔자 바이러스의 수용체 결합 및 내재화(internalization)를 차단하는 능력을 분석하도록 설계된 면역형광 유입 분석법(immunofluorescence entry assay)의 결과들을 도시한다. A. 면역형광 판독에 의한 바이러스 유입의 억제; B. MDCK 세포들의 B/플로리다/04/2006 감염.
도 3은 본 발명의 결합 분자에 의한 바이러스 출현(egress)의 억제를 도시한다.
도 4는 인플루엔자 B 감염 세포들의 스캐닝 EM의 결과들을 도시한다.
도 5는 쥐들에서 치명적인 인플루엔자 B 감염(B/플로리다/04/2006 및 B/말레이시아/2506/2004)에 대항하는 CR8033에 의한 생체 내 보호를 도시한다.
본 발명에서 사용된 용어들의 정의는 아래에 주어져 있다.
본원에 사용된 "포함된" 또는 "포함하는"이라는 용어는 "제한 없이"라는 단어들이 앞에 오는 것으로 간주된다.
본원에 사용된 "결합 분자"라는 용어는 키메라, 인간화되거나 인간 단일클론 항체들과 같은 단일클론 항체들을 포함하는 완전 면역글로불린을 지칭하거나, 면역글로불린, 예컨대, HA의 결합 파트너에 대한 특이적인 결합을 위한 완전 면역글로불린과 경쟁하는 면역글로불린의 절편을 포함하는 항원-결합 및/또는 가변성 도메인을 지칭한다. 구조에 관계없이, 항원-결합 절편은 완전 면역글로불린에 의하여 인식된 동일한 항원과 결합한다. 항원-결합 절편은 결합 분자의 아미노산 서열의 적어도 2, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 175, 200, 또는 250 개의 인접한 아미노산 잔기들의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 폴리펩티드를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 "결합 분자"라는 용어는 업계에 알려진 모든 면역글로불린 클래스들 및 하부클래스들을 포함한다. 이의 중쇄들의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라, 결합 분자들은 완전 항체들의 5개 주요 클래스들: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM으로 분류될 수 있으며, 이들 중 일부는 하부클래스들(동형들), 예컨대, IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로 더 분류될 수 있다.
항원-결합 절편들은 특히, Fab, F(ab'), F(ab')2, Fv, dAb, Fd, 상보성 결정 영역(CDR) 절편들, 단일-쇄 항체들(scFv), 2가 단일-쇄 항체들, 단일-쇄 파지 항체들, 다이아바디들(diabodies), 트리아바디들(triabodies), 테트라바디들(tetrabodies), (폴리)펩티드 등에 결합하는 특이적인 항원을 부여하기에 충분한 면역글로불린의 적어도 하나의 절편을 함유하는 (폴리)펩티드들을 포함한다. 상기 절편들은 합성으로 또는 완전 면역글로불린들의 효소적 또는 화학적 분열에 의하여 생성될 수 있거나 이들은 재조합 DNA 기법들에 의하여 유전적으로 조작될 수 있다. 생성 방법들은 업계에 주지되어 있으며, 예를 들면, 본원에 참고로 포함된 Antibodies: A Laboratory Manual, Edited by: E. Harlow and D, Lane (1988), Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York에 기재되어 있다. 결합 분자 또는 이의 항원-결합 절편은 하나 이상의 결합 부위들을 가질 수 있다. 결합 부위가 하나를 초과하여 존재하면, 결합 부위들은 서로 동일하거나 상이할 수 있다.
결합 분자는 있는 그대로의(naked) 또는 미접합의(unconjugated) 결합 분자일 수 있지만, 면역접합체의 일부일 수도 있다. 있는 그대로의 또는 미접합의 결합 분자는 특히, 독성 물질, 방사성 물질, 리포좀, 효소와 같은 이펙터(effector) 모이어티 또는 태그와 접합, 작동적으로 연결, 그렇지 않으면, 물리적으로 또는 기능적으로 연관되지 않은 결합 분자를 지칭하는 의도이다. 있는 그대로의 또는 미접합의 결합 분자들은 안정화되고, 다량체화되고, 인간화되거나 이펙터 모이어티 또는 태그의 부착에 의한 것이 아닌 임의의 다른 방식으로 조작된 결합 분자들을 배제하지 않는 것으로 이해될 것이다. 따라서, 모든 번역 후 변형된 있는 그대로 및 미접합된 결합 분자들은 변형이 천연 결합 분자-생성 세포 환경에서 재조합 결합 분자-생성 세포에 의하여 이루어지고, 최초 결합 분자 제조 이후에 인간의 손에 의하여 도입되는 경우를 포함하여, 이와 함께 포함된다. 물론, 있는 그대로 또는 미접합의 결합 분자라는 용어는 결합 분자가 신체에 투여된 이후에 이펙터 세포들 및/또는 분자들과의 기능적 연관을 형성하는 능력을 배제하지 않는데, 이는 그러한 상호작용들의 일부가 생물학적 효과를 발휘하기 위하여 필요하기 때문이다. 그러므로, 연관된 이펙터 그룹 또는 태그의 부족은 생체 내가 아닌 시험관 내에서 있는 그대로 또는 미접합의 결합 분자에 대한 정의에 적용된다.
본원에서 사용된 "생물학적 표본"이라는 용어는 혈액 및 다른 생물학적 기원의 액체 표본들, 생검 시편 또는 조직 배양물들과 같은 고체 조직 표본들, 또는 이로부터 유래된 세포들 및 이들의 자손을 포함하는, 다양한 표본 유형들을 포함한다. 이 용어는 또한 시약으로 처리, 용해화, 또는 단백질들 또는 폴리뉴클레오티드들과 같은 특정 성분들에 대한 농축에 의한 것과 같이, 표본들을 획득한 이후에 임의의 방식으로 조작된 표본들을 포함한다. 이 용어는 임의의 종으로부터 획득된 다양한 종류의 임상 표본들을 포함하고, 또한, 배양물, 세포 상청액들 및 세포 용해물들에서의 세포들을 포함한다.
본원에 사용된 "상보성 결정 영역" (CDR)이라는 용어는 항원에 대하여 인식된 에피토프에 대하여 형상 및 전하 분포에 있어서 상보적인 항원 결합 부위에 통상적으로 크게 기여하는, 면역글로불린들과 같은 결합 분자들의 가변성 영역들 내에서의 서열들을 의미한다. CDR 영역들은 자연적인 배좌(conformation)로 단백질 상에 존재하거나, 일부 경우들에 있어서, 예컨대, SDS에서의 용해화에 의하여 변성된 단백질들 상에 존재하는, 단백질들 또는 단백질 절편들의 선형 에피토프들, 불연속 에피토프들 또는 배좌 에피토프들에 대하여 특이적일 수 있다. 에피토프들은 또한 단백질들의 번역후 변형들로 이루어져 있을 수 있다.
본원에 사용된 "삭제"라는 용어는 하나 이상의 아미노산 또는 뉴클레오티드 잔기들이 각각 기준 분자, 종종 자연적으로 발생하는 분자와 비교하여 부재한 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열의 변화를 나타낸다.
본원에 사용된 "발현-조절 핵산 서열"이라는 용어는 특별한 숙주 유기체 내에서 작동 가능하게 연결된 코딩 서열의 발현에 필요하고/하거나 영향을 미치는 폴리뉴클레오티드 서열들을 지칭한다. 특히, 적당한 전사 개시, 종결, 프로모터 및 인핸서 서열들; 리프레서 또는 액티베이터 서열들; 스플라이싱 및 폴리아데닐화 신호들과 같은 효율적인 RNA 가공 신호들; 세포질 mRNA를 안정화시키는 서열들; 번역 효율을 증강시키는 서열들(예컨대, 리보솜 결합 부위들); 단백질 안정성을 증강시키는 서열들; 및 필요한 경우, 단백질 분비를 증강시키는 서열들과 같은 발현-조절 핵산 서열들은 선택된 숙주 유기체 내에서 활성을 보이는 임의의 핵산 서열일 수 있으며, 숙주 유기체에 상동이거나 이종인 단백질들을 인코딩하는 유전자들로부터 유래될 수 있다. 발현-조절 핵산 서열들의 확인 및 이용은 당업자에게 일상적이다.
본원에 사용된 "기능적 변이체"라는 용어는 기준 핵산 분자 또는 결합 분자의 뉴클레오티드 및/또는 아미노산 서열들에 비하여 하나 이상의 뉴클레오티드들 및/또는 아미노산들에 의하여 변경된 뉴클레오티드 및/또는 아미노산 서열을 포함하는 핵산 분자 또는 결합 분자를 지칭한다. 본 발명에 따른 결합 분자의 기능적 변이체는 기준 결합 분자와 결합 파트너, 즉, 인플루엔자 바이러스에 결합을 위해 경쟁할 수 있다. 달리 말하면, 기준 결합 분자의 아미노산 및/또는 뉴클레오티드 서열의 변형들은 뉴클레오티드 서열에 의하여 인코딩되거나 아미노산 서열을 함유한 결합 분자의 결합 특징들에 현저히 영향을 주거나 변경하지 않는다, 즉, 결합 분자는 여전히 그 표적을 인식하고 결합할 수 있다. 기능적 변이체는 뉴클레오티드 및 아미노산 치환, 첨가 및 삭제를 포함하는 보존적 서열 변형이 있을 수 있다. 이러한 변형들은 부위 특이적 돌연변이 유발(site-directed mutagenesis) 및 무작위 PCR-매개 돌연변이 유발과 같은 업계에 알려진 표준 기법들에 의하여 도입될 수 있으며, 비-천연 뉴클레오티드들 및 아미노산들뿐만 아니라 천연 뉴클레오티드들 및 아미노산들을 포함할 수 있다.
보존성 아미노산 치환은 아미노산 잔기가 유사한 구조적 또는 화학적 특성을 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것들을 포함한다. 유사한 측쇄들을 갖는 아미노산 잔기들의 패밀리들은 업계에 정의되어 있다. 이러한 패밀리들은 염기 측쇄들(예컨대, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산 측쇄들(예컨대, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전 극성 측쇄들(예컨대, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄들(예컨대, 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타-분지 측쇄들(예컨대, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄들(예컨대, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판)을 갖는 아미노산들을 포함한다. 상기에 이용된 것과는 다른 아미노산 잔기 패밀리들의 분류들도 채용될 수 있다는 것은 당업자에게 명백할 것이다. 또한, 변이체는 비-보존성 아미노산 치환, 예컨대, 아미노산을 상이한 구조적 또는 화학적 특성을 갖는 아미노산 잔기로 대체할 수 있다. 유사한 중요하지 않은 변이들도 아미노산 삭제 또는 삽입 또는 양쪽 모두를 포함할 수 있다. 면역학적 활성을 제거하지 않으면서, 어느 아미노산 잔기들이 치환, 삽입 또는 삭제될 수 있는지 결정하는데 있어서 지침은 업계에 주지된 컴퓨터 프로그램들을 이용하여 찾을 수 있다.
뉴클레오티드 서열에 있어서 돌연변이는 전이 또는 염기전환 돌연변이와 같이 일 좌위에서 이루어진 단일 변경(점 돌연변이)일 수 있거나, 대안적으로는, 다수의 뉴클레오티드들이 단일 좌위에서 삽입, 삭제 또는 변경될 수 있다. 또한, 하나 이상의 변경들은 하나의 뉴클레오티드 서열 내에서 임의의 수의 좌위들에서 이루어질 수 있다. 돌연변이들은 업계에 알려진 임의의 적당한 방법에 의하여 수행될 수 있다.
인플루엔자 A 바이러스들과 연계하여 "인플루엔자 바이러스 아형" 이라는 용어는 헤마글루티닌(H) 및 뉴라미다아제(N) 바이러스성 표면 단백질들의 다양한 조합들을 특징으로 하는 인플루엔자 A 바이러스 변이체들을 지칭한다. 인플루엔자 A 바이러스 아형들은 예를 들면, "H1 또는 H3 아형의 HA를 포함하는 인플루엔자 바이러스" 또는 "H1 인플루엔자 바이러스" "H3 인플루엔자 바이러스"와 같이 이들의 H 수에 의하여, 또는 예를 들면, "인플루엔자 바이러스 아형 H3N2" 또는 "H3N2"와 같이, H 수 및 N 수의 조합에 의하여 지칭될 수 있다. 인플루엔자 바이러스 "아형"이라는 용어는 구체적으로는 주로 돌연변이들로부터 유래하고 상이한 병원성 프로파일들을 보이는, 각각의 아형 내에서 모든 개별 인플루엔자 바이러스 "균주들"을 포함한다. 이러한 균주들은 바이러스 아형의 다양한 "분리주들(isolates)"로도 지칭될 수 있다. 따라서, 본원에 사용된 "균주들" 및 "분리주들"이라는 용어들은 상호 교환 가능하게 사용될 수 있다.
본 발명의 결합 분자와 연계하여 본원에 사용된 "중화하는"이라는 용어는 중화를 달성시키는 메커니즘에 관계 없이 시험관 내 및/또는 피검자 내에서 인플루엔자 바이러스가 복제하는 것을 억제하는 결합 분자를 지칭한다. 따라서, 중화는 예컨대, 바이러스를 세포 표면에 부착 또는 접착하는 것을 억제함으로써, 또는 바이러스를 표적 세포에 부착한 이후에 바이러스막 및 세포막의 융합의 억제에 의하여, 또는 감염된 세포로부터 바이러스 출현을 억제하는 것 등으로써 달성될 수 있다.
본 발명의 결합 분자들과 연계하여 본원에 사용된 "교차-중화하는" 또는 "교차-중화"라는 용어는 본 발명의 결합 분자들이 B/야마가타 및 B/빅토리아 계통 모두의 인플루엔자 B 바이러스들 및/또는 이 계통들 내에서 상이한 인플루엔자 B 바이러스 균주들을 중화하는 능력을 지칭한다.
본원에 사용된 "숙주"라는 용어는 클로닝 벡터 또는 발현 벡터와 같은 벡터가 도입된 유기체 또는 세포를 지칭하는 것으로 의도된다. 유기체 또는 세포는 원핵 또는 진핵일 수 있다. 바람직하게는, 숙주들은 단리된 숙주세포들, 예컨대, 배양물 내에서 숙주 세포들이다. "숙주 세포들"이라는 용어는 단순히 세포들이 본 발명의 결합 분자의 (과다)-발현을 위해 변형되고, 이러한 결합 분자를 최초로 발현하는 B-세포들을 포함하는 것과 세포들이 불멸화, 증폭, 발현의 증강 등에 의하여 결합 분자를 과다 발현하도록 변형되는 것을 나타낸다. 숙주라는 용어는 특정한 피검자 유기체 또는 세포뿐만 아니라 그러한 유기체 또는 세포의 자손도 지칭하는 것으로 의도됨을 이해해야 한다. 특정한 변형들은 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인하여 다음 세대에서 발생할 수 있기 때문에, 그러한 자손은 사실상, 부모 유기체 또는 세포와 동일하지 않을 수 있지만, 본원에 사용된 "숙주"라는 용어의 범주 내에 여전히 포함된다.
"인간"이라는 용어는 본원에 정의된 바와 같이 결합 분자들에 적용되는 경우, 인간으로부터 직접 유래되거나 인간 생식계열 서열에 기초한 분자들을 지칭한다. 결합 분자가 인간 서열로부터 유래하거나 기초하고 이어서 변형되는 경우, 명세서 전반에 사용된 바와 같이 인간으로 여전히 간주된다. 달리 말하면, 인간이라는 용어는 결합 분자들에 적용되는 경우, 인간 생식계열 면역글로불린 서열들로부터 유래된 가변성 그리고 불변 영역들을 갖거나 인간 또는 인간 림프 세포에서 발생하는 가변성 또는 불변 영역들에 기초하고 일부 형태로 변형되는 결합 분자들을 포함하는 것으로 의도된다. 따라서, 인간 결합 분자들은 인간 생식계열 면역글로불린 서열들에 의하여 인코딩되지 않는 아미노산 잔기들을 포함하며, 치환 및/또는 삭제(예컨대, 시험관 내에서 예를 들면, 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이 유발에 의하거나 생체 내에서 체세포 돌연변이에 의하여 도입된 돌연변이들)를 포함할 수 있다. 본원에 사용된 "기초한"은 핵산 서열이 오류빈발(error-prone) PCR 방법들에 의하여 주형으로부터 정확히 복제되거나 사소한 돌연변이들이 있을 수 있거나, 정확히 또는 사소한 변형들이 있으면서 주형과 인위적으로 매칭되도록 하는 상황을 지칭한다.
"첨가"라는 용어로도 알려진 "삽입"이라는 용어는 부모 서열과 비교하여, 각각 하나 이상의 아미노산 또는 뉴클레오티드 잔기들의 첨가를 초래하는 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열의 변화를 뜻한다.
"단리된"이라는 용어는 본원에 정의된 바와 같이 결합 분자들에 적용되는 경우, 다른 단백질들 또는 폴리펩티드들이 실질적으로 없고, 특히 상이한 항원적 특이성들을 갖는 다른 결합 분자들이 없으며, 또한 다른 세포성 물질 및/또는 화학물질들이 실질적으로 없는 결합 분자들을 지칭한다. 예를 들면, 결합 분자들이 재조합으로 생성되는 경우, 이들은 바람직하게는 배양 배지 성분들이 실질적으로 없으며, 결합 분자들이 화학적 합성에 의하여 생성되는 경우, 이들은 바람직하게는 화학적 전구체들 또는 다른 화학물질들이 실질적으로 없다, 즉, 이들은 단백질의 합성에 관여하는 화학적 전구체들 또는 다른 화학물질들로부터 분리된다. "단리된"이라는 용어는 본원에 정의된 바와 같이 결합 분자들을 인코딩하는 핵산 분자들에 적용되는 경우, 결합 분자들을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열들에 다른 뉴클레오티드 서열들, 특히 다른 결합 파트너들을 결합하는 결합 분자들을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열들이 없는 핵산 분자들을 지칭하는 것으로 의도된다. 또한, "단리된"이라는 용어는 천연 핵산 분자의 자연적인 숙주 내에서 천연 핵산 분자를 자연적으로 동반하는 다른 세포 성분들, 예컨대, 리보솜들, 중합효소들 또는 천연 핵산 분자가 자연적으로 연관된 게놈 서열들로부터 실질적으로 분리된 핵산 분자들을 지칭한다. 또한, cDNA 분자들과 같은 "단리된" 핵산 분자들은 재조합 기법들에 의하여 생성되는 경우 다른 세포성 물질 또는 배양 배지가 실질적으로 없을 수 있거나, 화학적으로 합성되는 경우 화학적 전구체들 또는 다른 화학물질들이 실질적으로 없을 수 있다.
본원에 사용된 "단일클론 항체"라는 용어는 단일 특이성의 항체 분자들의 제제를 지칭한다. 단일클론 항체는 특정한 에피토프에 대하여 단일 결합 특이성 및 친화성을 보인다. 따라서, "인간 단일클론 항체"라는 용어는 인간 생식계열 면역글로불린 서열들로부터 유래되거나 기초한 또는 완전히 합성된 서열들로부터 유래된 가변성 및 불변 영역들을 갖는 단일 결합 특이성을 보이는 항체를 지칭한다. 단일클론 항체의 제조방법은 결합 특이성과 관련이 없다.
대상에 적용된 바와 같이, 본원에 사용된 "자연적으로 발생하는"이라는 용어는 대상 또는 화합물을 자연에서 찾을 수 있다는 사실을 지칭한다. 예를 들면, 자연 중의 원천으로부터 단리될 수 있으며, 실험실에서 인간에 의하여 의도적으로 변형되지 않은 유기체 내에 존재하는 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드 서열은 자연적으로 발생한다.
본 발명에서 사용된 "핵산 분자"라는 용어는 뉴클레오티드들의 중합체 형태를 지칭하며, RNA, cDNA, 게놈 DNA 및 상기의 합성 형태들 및 혼합된 중합체들의 센스 및 안티-센스 가닥들 양쪽 모두를 포함한다. 뉴클레오티드는 리보뉴클레오티드, 디옥시뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드의 어느 한 유형의 변형된 형태를 지칭한다. 이 용어는 DNA의 단일 및 이중 가닥 형태들도 포함한다. 또한, 폴리뉴클레오티드는 자연적으로 발생하고/하거나 비-자연적으로 발생하는 뉴클레오티드 연쇄들에 의하여 함께 연결된 자연적으로 발생한 뉴클레오티드들과 변형된 뉴클레오티드들 중 어느 하나 또는 양쪽 모두를 포함할 수 있다. 핵산 분자들은 당업자에 의하여 용이하게 이해될 수 있는 바와 같이, 화학적으로 또는 생화학적으로 변형될 수 있거나, 비-자연 또는 유도체화된 뉴클레오티드 염기들을 함유할 수 있다. 그러한 변형들은 예를 들면, 자연적으로 발생하는 뉴클레오티드들 중 하나 이상의 라벨들, 메틸화, 유사체로의 치환, 및 비하전 연쇄들(예컨대, 메틸 포스포네이트들, 포스포트리에스테르들, 포스포아미데이트들, 카르바메이트들 등), 하전 연쇄들(예컨대, 포스포로티오에이트들, 포스포로디티오에이트들 등), 펜덴트 모이어티들(예컨대, 폴리펩티드들), 인터칼레이터들(예컨대, 아크리딘, 소랄렌 등), 킬레이터들, 알킬레이터들 및 변형된 연쇄들(예컨대, 알파 아노머성 핵산들 등)과 같은 뉴클레오티드들 사이의 변형들을 포함한다. 상기 용어는 또한 단일 가닥 배좌, 이중 가닥 배좌, 부분적으로 듀플렉스된 배좌, 트리플렉스 배좌, 헤어핀 배좌, 원형 배좌 및 억제된(padlocked) 배좌를 포함하는 임의의 형태적 배좌를 포함하는 것으로 의도된다. 수소 결합 및 다른 화학적 상호작용들을 통해 지정된 서열과 결합하는 이들의 능력에서 폴리뉴클레오티드들을 모방하는 합성 분자도 포함된다. 그러한 분자들은 업계에 알려져 있으며, 예를 들면, 펩티드 연쇄들이 분자의 골격에서 포스페이트 연쇄들을 대신하는 것들을 포함한다. 핵산 서열에 대한 언급은 달리 특정되지 않으면 핵산 서열의 보체를 포함한다. 따라서, 특정 서열을 갖는 핵산 분자에 대한 언급은 이의 상보적 서열과 함께 이 상보적 가닥을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 상보적 가닥은 예컨대, 안티-센스 요법, 혼성화 탐침들 및 PCR 프라이머들에 대하여 유용하기도 하다.
"작동 가능하게 연결된"이라는 용어는 주로 물리적으로 연결되어 있으며, 서로 기능적 관계에 있는 둘 이상의 핵산 서열 구성요소들을 지칭한다. 예를 들면, 프로모터는 프로모터가 코딩 서열의 전사 또는 발현을 개시하거나 조절할 수 있으면, 코딩 서열에 작동 가능하게 연결되며, 이 경우에, 코딩 서열은 프로모터의 "조절 하"에 있는 것으로 이해되어야 한다.
"약학적으로 허용 가능한 부형제"는 적합하거나 간편한 제형을 제조하기 위하여 약물, 작용제 또는 결합 분자와 같은 활성 분자와 조합된 임의의 비활성 물질을 의미한다. "약학적으로 허용 가능한 부형제"는 사용된 복용량 및 농도들에서 수취자들에게 독성이 없으며, 약물, 작용제 또는 결합 분자를 포함하는 제형의 다른 성분들과 융화할 수 있는 부형제이다. 약학적으로 허용 가능한 부형제들은 광범위하게 적용되며 업계에 알려져 있다.
결합 분자, 예컨대, 항체 및 그 결합 파트너, 예컨대, 항원의 상호작용과 관련하여 본원에 사용된 "특이적으로 결합하는"이라는 용어는 상호작용이 결합 파트너 상에서 특정 구조, 예컨대, 항원성 결정인자 또는 에피토프의 존재에 의존하는 것을 의미한다. 달리 말해서, 항체는 결합 파트너가 다른 분자들 또는 유기체들의 혼합물에 존재하는 경우에도 결합 파트너와 우선적으로 결합하거나 인식한다. 결합은 공유 또는 비공유 상호작용들 또는 양쪽의 조합에 의하여 매개될 수 있다. 또 달리 말해서, "특이적으로 결합하는"이라는 용어는 항원성 결정인자 또는 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 것, 그리고 다른 항원성 결정인자들 또는 에피토프들에 면역특이적으로 결합하지 않는 것을 의미한다. 항원에 면역특이적으로 결합하는 결합 분자는 예컨대, 방사선면역분석법(RIA), 효소 연결 면역흡착 검정(enzyme-liked immunosorbent assay; ELISA), BIACORE, 또는 업계에 알려진 다른 검정법들에 의하여 결정된 바와 같이 더 낮은 친화성을 갖는 다른 펩티드들 또는 폴리펩티드들과 결합할 수 있다. 항원과 면역특이적으로 결합하는 결합 분자들 또는 이들의 절편들은 동일한 에피토프를 보유한, 관련된 항원들과 교차-반응할 수 있다. 바람직하게는, 항원과 면역특이적으로 결합하는 결합 분자들 또는 이들의 절편들은 다른 항원들과 교차-반응하지 않는다.
본원에 사용된 "치환"은 하나 이상의 아미노산들 또는 뉴클레오티드들을 각각 상이한 아미노산들 또는 뉴클레오티드들과 교체하는 것을 뜻한다.
"치료적으로 유효한 양"이라는 용어는 인플루엔자 B 바이러스 감염에 기인하는 병을 방지, 완화 및/또는 치료하는데 효과적인, 본원에 정의된 결합 분자의 양을 지칭한다. 본원에 사용된 완화는 가시적이거나 인지 가능한 질병 증상들, 바이러스혈증 또는 임의의 다른 측정 가능한 인플루엔자 감염 징후의 감소를 지칭할 수 있다.
"치료"라는 용어는 질병 진행을 치유 또는 정지시키거나 적어도 지연시키는 예방 또는 방지 조치들뿐만 아니라 치료적인 처치를 지칭한다. 치료가 필요한 이들은 인플루엔자 바이러스 감염에 기인한 병으로 이미 고통받는 이들뿐만 아니라, 인플루엔자 바이러스 감염이 방지되어야 하는 이들을 포함한다. 인플루엔자 바이러스 감염으로부터 부분적으로 또는 완전히 회복된 피검자들도 처치가 필요할 수 있다. 방지는 인플루엔자 바이러스의 퍼짐을 억제 또는 감소시키는 것 또는 인플루엔자 바이러스 감염과 연관된 증상들 중 하나 이상의 발병, 전개 또는 진행을 억제 또는 감소시키는 것을 포함한다.
"벡터"라는 용어는 제2 핵산 분자가 복제될 것이고, 일부 경우에 있어서 발현될 숙주로의 도입을 위해 제2 핵산 분자가 삽입될 수 있는 핵산 분자를 나타낸다. 달리 말해서, 벡터는 벡터가 연결되어 있는 핵산 분자를 수송할 수 있다. 발현 벡터뿐만 아니라 클로닝 벡터는 본원에 사용된 "벡터"라는 용어에 의하여 고려된다. 벡터들은 플라스미드들, 코스미드들, 박테리아성 인공 염색체들(BAC)와 효모 인공 염색체들(YAC) 및 박테리오파지들 또는 식물 또는 (인간을 포함하는) 동물 바이러스들로부터 유래된 벡터들을 포함하지만, 여기에 한정되지 않는다. 벡터들은 제안된 숙주에 의하여 인식되는 복제 원점을 포함하고, 발현 벡터들의 경우, 숙주에 의하여 인식되는 프로모터 및 다른 조절 영역들을 포함한다. 제2 핵산 분자를 함유하는 벡터는 형질전환, 형질감염에 의하여 또는 바이러스성 유입 메커니즘을 이용함으로써 세포에 도입된다. 특정 벡터들은 이들이 도입되는 숙주에서 자동 복제를 할 수 있다(예컨대, 박테리아성 복제 원점을 갖는 벡터들은 박테리아 내에서 복제할 수 있음). 다른 벡터들은 숙주로의 도입 시에 숙주의 게놈에 혼입될 수 있어서, 이에 의하여 숙주 게놈과 함께 복제된다.
상세한 설명
제1 양태에 있어서, 본 발명은 B/야마가타 및 B/빅토리아 계통의 인플루엔자 B 바이러스 균주들의 헤마글루티닌(HA)에 특이적으로 결합할 수 있고, B/야마가타 및/또는 B/빅토리아 계통의 상기 인플루엔자 B 바이러스 균주들을 중화할 수 있는 결합 분자들을 제공한다. 본 발명에 따르면, 결합 분자들은 인플루엔자 A 바이러스들의 HA와 결합하지 않는다. 결합 분자들은 시험관 내 및 생체 내의 양쪽에서 인플루엔자 B 바이러스들을 중화할 수 있다.
바람직하게는, 결합 분자들은 인간 결합 분자들이다. 바람직한 일 실시형태에 있어서, 결합 분자들은 인간 항체들 또는 이들의 항원-결합 절편들이다.
특정한 실시형태에 있어서, 결합 분자는 SEQ ID NO: 116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변성 영역 및 SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변성 영역을 포함하는, (공동-계류중인 유럽 특허 출원 제11173953.8호에 기재된 바와 같이) CR9114의 에피토프와 비교하여 상이한 에피토포와 결합한다. CR9114는 인플루엔자 B 바이러스들뿐만 아니라 계통 발생 그룹 1 및 2 양쪽의 인플루엔자 A 바이러스들과 결합하고 생체 내 중화할 수 있는 것으로 드러났다.
특정한 실시형태들에 있어서, 결합 분자들은 인플루엔자 B 바이러스들의 HA 단백질의 머리 영역, 특히 인플루엔자 B 바이러스들의 HA1의 머리 영역에 결합한다.
특정한 실시형태들에 있어서, 결합 분자들은 B/야마가타 계통 및/또는 B/빅토리아 계통의 인플루엔자 B 바이러스들의 세포 수용체 결합을 차단한다.
특정한 실시형태들에 있어서, 결합 분자들은 B/야마가타 계통 및/또는 B/빅토리아 계통의 인플루엔자 바이러스들의 세포 수용체 결합을 차단하지 않는다.
특정한 실시형태들에 있어서, 결합 분자들은 감염된 세포들로부터 인플루엔자 B 바이러스들, 특히, B/빅토리아 및 B/야마가타 계통 양쪽 모두의 인플루엔자 바이러스 균주들의 출현을 차단한다.
특정한 실시형태들에 있어서, 단리된 결합 분자들은 인플루엔자 B 바이러스의 헤마글루티닌 단백질(HA)에 특이적으로 결합할 수 있고, B/빅토리아/2/87 계통 및 B/야마가타/16/88 계통 양쪽 모두의 인플루엔자 B 바이러스 균주들을 중화할 수 있으며, 결합 분자들은 인플루엔자 A 바이러스 아형들의 HA 단백질과 결합하지 않고, SEQ ID NO: 71에 기록된 아미노산 서열 또는 여기에 적어도 서열 동일성 또는 적어도 약 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산들의 서열을 포함하는 중쇄 가변성 영역을 포함한다.
특정한 실시형태들에 있어서, 결합 분자들은 SEQ ID NO: 73에 기록된 아미노산 서열 또는 여기에 적어도 서열 동일성 또는 적어도 약 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산들의 서열을 포함하는 경쇄 가변성 영역을 포함한다.
일 실시형태에 있어서, 결합 분자는 SEQ ID NO: 71의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변성 영역 및 SEQ ID NO: 73의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변성 영역을 포함한다.
또한, 본 발명은 인플루엔자 B 바이러스의 헤마글루티닌 단백질(HA)과 특이적으로 결합할 수 있고, B/빅토리아/2/87 계통 및 B/야마가타/16/88 계통 양쪽 모두의 인플루엔자 B 바이러스 균주들을 중화할 수 있는 결합 분자들을 제공하며, 결합 분자들은 인플루엔자 A 바이러스 아형들의 HA 단백질에 결합하지 않고, 결합 분자들은 SEQ ID NO:1에 기록된 아미노산 잔기들의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1; SEQ ID NO:2에 기록된 아미노산 잔기들의 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 및 SEQ ID NO:3에 기록된 아미노산 잔기들의 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 본 발명에 따르면, CDR 영역들은 Kabat 등(1991)에 따라 Sequences of Proteins of Immunological Interest에 기재된 바와 같다.
특정한 실시형태들에 있어서, 결합 분자들은 SEQ ID NO: 4에 기록된 아미노산 잔기들의 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 5에 기록된 아미노산 잔기들의 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 6에 기록된 아미노산 잔기들의 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정한 실시형태들에 있어서, 결합 분자는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 및 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다.
본 발명은 SEQ ID NO: 71의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변성 서열 및 SEQ ID NO: 73의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 결합 분자로서 인플루엔자 B 바이러스 HA 단백질 상에 동일한 에피토프와 면역특이적으로 결합하는 결합 분자들을 더 제공한다.
특정한 실시형태들에 있어서, 결합 분자는 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 및 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정한 실시형태들에 있어서, 결합 분자는 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 및 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다.
본 발명은 또한 인플루엔자 B 바이러스, 특히 인플루엔자 B 바이러스 균주인 B/말레이시아/2506/2004의 HA의 168번 위치의 아미노산이 프롤린(P)인 경우, 헤마글루티닌 단백질(HA)에 특이적으로 결합할 수 있고, B/빅토리아 계통의 인플루엔자 B 바이러스 균주들, 특히 인플루엔자 B 바이러스 균주인 B/말레이시아/2506/2004를 중화할 수 있으며, 인플루엔자 B 바이러스, 특히 B/말레이시아/2506/2004의 HA의 168번 위치의 아미노산이 글루타민(Q)인 경우, B/빅토리아 계통의 인플루엔자 B 바이러스 균주들, 특히 B/말레이시아/2506/2004를 중화할 수 없는 결합 분자들을 제공한다.
특정한 실시형태들에 있어서, 본 발명은 인플루엔자 B 바이러스, 특히 인플루엔자 B 바이러스 균주인 B/플로리다/04/200의 HA의 38번 위치의 아미노산이 라이신(K)인 경우, 헤마글루티닌 단백질(HA)에 특이적으로 결합할 수 있고, B/야마가타 계통의 인플루엔자 B 바이러스 균주들, 특히 인플루엔자 B 바이러스 균주인 B/플로리다/04/2006을 중화할 수 있으며, 인플루엔자 B 바이러스, 특히 B/플로리다/04/2006의 HA의 38번 위치의 아미노산이 글루탐산(E)인 경우, B/야마가타 계통의 인플루엔자 B 바이러스 균주들, 특히 B/플로리다/04/2006도 중화할 수 있는 결합 분자들을 제공한다.
본 발명은 인플루엔자 B 바이러스의 헤마글루티닌 단백질(HA)에 특이적으로 결합할 수 있고, B/빅토리아/2/87 계통 및 B/야마가타/16/88 계통 양쪽 모두의 인플루엔자 B 바이러스 균주들을 중화할 수 있으며, 인플루엔자 A 바이러스 아형들의 HA 단백질과 결합하지 않고, SEQ ID NO: 75에 기록된 아미노산 서열 또는 여기에 적어도 서열 동일성 또는 적어도 약 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산들의 서열을 포함하는 중쇄 가변성 영역을 포함하는 결합 분자들을 더 제공한다.
특정한 실시형태들에 있어서, 결합 분자들은 SEQ ID NO: 77에 기록된 아미노산 서열 또는 여기에 적어도 서열 동일성 또는 적어도 약 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산들의 서열을 포함하는 경쇄 가변성 영역을 포함한다.
특정한 실시형태들에 있어서, 결합 분자들은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변성 영역 및 SEQ ID NO: 77의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변성 영역을 포함한다.
특정한 실시형태들에 있어서, 결합 분자는 SEQ ID NO: 78의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 가변성 영역 및 SEQ ID NO: 79의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄 가변성 영역을 포함한다.
특정한 실시형태들에 있어서, 본 발명은 인플루엔자 B 바이러스의 헤마글루티닌 단백질(HA)에 특이적으로 결합할 수 있고, B/빅토리아/2/87 계통 및 B/야마가타/16/88 계통 양쪽 모두의 인플루엔자 B 바이러스 균주들을 중화할 수 있는 결합 분자들을 제공하며, 결합 분자들은 인플루엔자 A 바이러스 아형들의 HA 단백질과 결합하지 않고, 결합 분자들은 SEQ ID NO: 7에 기록된 아미노산 잔기들의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1; SEQ ID NO: 8에 기록된 아미노산 잔기들의 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 9에 기록된 아미노산 잔기들의 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다.
특정한 실시형태들에 있어서, 결합 분자들은 SEQ ID NO: 10에 기록된 아미노산 잔기들의 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 11에 기록된 아미노산 잔기들의 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 12 또는 13에 기록된 아미노산 잔기들의 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정한 실시형태들에 있어서, 결합 분자는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 및 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정한 실시형태들에 있어서, 결합 분자는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 및 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다.
본 발명은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변성 서열 및 SEQ ID NO: 77의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 결합 분자로서 인플루엔자 B 바이러스 HA 단백질 상에 동일한 에피토프와 면역특이적으로 결합하는 결합 분자들을 더 제공한다.
특정한 실시형태들에 있어서, 결합 분자는 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 및 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정한 실시형태에 있어서, 결합 분자는 SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 및 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정한 실시형태들에 있어서, 본 발명은 인플루엔자 B 바이러스, 특히 인플루엔자 B 바이러스 균주인 B/말레이시아/2506/2004의 HA의 168번 위치의 아미노산이 프롤린(P)인 경우, 헤마글루티닌 단백질(HA)에 특이적으로 결합할 수 있고, B/빅토리아 계통의 인플루엔자 B 바이러스 균주들, 특히 인플루엔자 B 바이러스 균주인 B/말레이시아/2506/2004를 중화할 수 있으며, 또한 인플루엔자 B 바이러스, 특히 B/말레이시아/2506/2004의 HA의 168번 위치의 아미노산이 글루타민(Q)인 경우, B/빅토리아 계통의 인플루엔자 B 바이러스 균주들, 특히 B/말레이시아/2506/2004를 중화할 수 있는 결합 분자들을 제공한다.
특정한 실시형태들에 있어서, 본 발명은 인플루엔자 B 바이러스, 특히 인플루엔자 B 바이러스 균주인 B/플로리다/04/200의 HA의 38번 위치의 아미노산이 라이신(K)인 경우, 헤마글루티닌 단백질(HA)에 특이적으로 결합할 수 있고, B/야마가타 계통의 인플루엔자 B 바이러스 균주들, 특히 인플루엔자 B 바이러스 균주인 B/플로리다/04/2006을 중화할 수 있으며, 인플루엔자 B 바이러스, 특히 B/플로리다/04/2006의 HA의 38번 위치의 아미노산이 글루탐산(E)인 경우, B/야마가타 계통의 인플루엔자 B 바이러스 균주들, 특히 B/플로리다/04/2006을 중화할 수 없는 결합 분자들을 제공한다.
본 발명은 인플루엔자 B 바이러스의 헤마글루티닌 단백질(HA)에 특이적으로 결합할 수 있고, B/빅토리아/2/87 계통 및 B/야마가타/16/88 계통 양쪽 모두의 인플루엔자 B 바이러스 균주들을 중화할 수 있는 결합 분자들을 더 제공하며, 결합 분자들은 인플루엔자 A 바이러스 아형들의 HA 단백질과 결합하지 않고, 결합 분자들은 SEQ ID NO: 113에 기록된 아미노산 서열 또는 여기에 적어도 서열 동일성 또는 적어도 약 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산들의 서열을 포함하는 중쇄 가변성 영역을 포함한다.
특정한 실시형태들에 있어서, 결합 분자들은 SEQ ID NO: 115에 기록된 아미노산 서열 또는 여기에 적어도 서열 동일성 또는 적어도 약 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산들의 서열을 포함하는 경쇄 가변성 영역을 포함한다.
일 실시형태에 있어서, 결합 분자는 SEQ ID NO: 113의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변성 영역 및 SEQ ID NO: 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변성 영역을 포함한다.
특정한 실시형태들에 있어서, 본 발명은 인플루엔자 B 바이러스의 헤마글루티닌 단백질(HA)과 특이적으로 결합할 수 있고, B/빅토리아/2/87 계통 및 B/야마가타/16/88 계통 양쪽 모두의 인플루엔자 B 바이러스 균주들을 중화할 수 있는 결합 분자들을 제공하며, 결합 분자들은 인플루엔자 A 바이러스 아형들의 HA 단백질에 결합하지 않고, 결합 분자들은 SEQ ID NO: 54에 기록된 아미노산 잔기들의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 55에 기록된 아미노산 잔기들의 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 56에 기록된 아미노산 잔기들의 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다.
특정한 실시형태들에 있어서, 결합 분자들은 SEQ ID NO: 57에 기록된 아미노산 잔기들의 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 5에 기록된 아미노산 잔기들의 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 58에 기록된 아미노산 잔기들의 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정한 실시형태에 있어서, 결합 분자는 SEQ ID NO: 54의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 55의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 56의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 및 SEQ ID NO: 57의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 58의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다.
본 발명은 SEQ ID NO: 113의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변성 서열 및 SEQ ID NO: 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변성 영역을 포함하는, 결합 분자로서 인플루엔자 B 바이러스 HA 단백질 상에 동일한 에피토프와 면역특이적으로 결합하는 결합 분자들을 더 제공한다.
인플루엔자 A 바이러스들처럼, 인플루엔자 B 바이러스들은 표적 세포들의 세포 표면상에서 시알산 잔기들과 결합하고 이후 엔도솜들로 전이하며, 이들의 막들을 엔도솜 막들과 융합하고 게놈-전사효소 복합체를 세포로 방출함으로써 세포를 감염시킨다. 수용체 결합 및 막 융합 공정 양쪽 모두는 HA 글리코단백질에 의하여 매개된다. 인플루엔자 A 및 B 바이러스들 양쪽 모두의 HA는 2 개의 구조적으로 상이한 영역들, 즉, 표적 세포에 바이러스가 부착되는 원인이 되는 수용체 결합 부위를 포함하고 HA의 헤마글루틴화 활성과 관련된 구형의 헤드 영역 및 바이러스 외피(viral envelope)와 세포의 엔도솜막 사이에서 막 융합에 필요한 융합 펩티드들 함유하는 줄기 영역을 포함한다. HA 단백질은 각각의 단량체가 전구체(HA0)의 단백질 분해 절단에 의하여 감염 도중에 생성된 2 개의 이황화물-연결된 글리코폴리펩티드들인 HA1 및 HA2로 이루어진 삼량체이다. 배좌 변화(conformational change)를 허용하기 위하여 막 융합용 HA를 프라이밍하는 것이 요구되기 때문에, 절단은 바이러스 전염성(infectivity)에 필요하다. 프라이밍된 분자의 활성화는 엔도솜에서 pH5와 pH6 사이의 낮은 pH에서 일어나며, HA 구조 내에서 광범위한 변화들을 요한다.
특정한 실시형태들에 있어서, 결합 분자들은 HA 단백질의 HA1 서브유닛(subunit)에, 특히 HA1 서브유닛의 머리 영역에 특이적으로 결합할 수 있다. 결합 분자들은 HA 단백질의 HA1 서브유닛 상에 선형 또는 구조적 및/또는 배좌 에피토프들에 특이적으로 결합할 수 있다. HA 분자는 바이러스들로부터 정제되거나 재조합으로 생성될 수 있고, 선택적으로는 사용되기 전에 단리될 수 있다. 대안적으로, HA는 세포들의 표면상에 발현될 수 있다.
본 발명의 결합 분자들은 생존 가능하고, 생존하고/하거나 감염성이 있거나, 비활성/약독화된 형태인 인플루엔자 B 바이러스들에 특이적으로 결합할 수 있다. 바이러스, 예컨대, 인플루엔자 바이러스들을 비활성하고/약독화하는 방법들은 업계에 주지되어 있고, 포르말린, β-프로피오락톤(BPL), 메르티올레이트 및/또는 자외선으로의 처치를 포함하지만, 여기에 한정되지 않는다.
본 발명의 결합 분자들은 특히, 인플루엔자 B 바이러스들의 아형들로부터 유래된 하나 이상의 단백질들 및/또는 (폴리)펩티드들, 또는 인플루엔자 B 바이러스들의 하나 이상의 재조합으로 생성된 단백질들 및/또는 폴리펩티드들의 제제와 같이, 인플루엔자 B 바이러스들의 하나 이상의 절편들에 특이적으로 결합할 수도 있다. 다양한 인플루엔자 B 균주들의 단백질들의 뉴클레오티드 및/또는 아미노산 서열은 유전자 은행(GenBank)-데이터베이스, NCBI 인플루엔자 바이러스 서열 데이터베이스, 인플루엔자 서열 데이터베이스(ISD), EMBL-데이터베이스 및/또는 다른 데이터베이스들에서 찾을 수 있다. 각각의 데이터베이스들에서 그러한 서열들을 찾는 것은 당업자의 역량 내에 있다.
다른 실시형태에 있어서, 본 발명의 결합 분자들은 상기 단백질들 및/또는 폴리펩티드들의 절편에 특이적으로 결합할 수 있으며, 절편은 본 발명의 결합 분자들에 의하여 인식된 에피토프를 적어도 포함한다. 본원에 사용된 "에피토프"는 검출 가능한 항원-결합 분자 복합체를 형성할 만큼 충분히 높은 친화도를 가지고 본 발명의 결합 분자에 결합할 수 있는 모이어티이다.
본 발명의 결합 분자들은 단일클론 항체들과 같은 완전 면역글로불린 분자들일 수 있거나, 결합 분자들은 중쇄 및 경쇄 가변성 영역들, Fab, F(ab'), F(ab')2, Fv, dAb, Fd, 상보성 결정 영역(CDR) 절편들, 단일쇄 항체들(scFv), 2가의 단일쇄 항체들, 단일쇄 파지 항체들, 다이아바디들, 트라이아바디들, 테트라바디들, 및 인플루엔자 바이러스 균주들 또는 이들의 절편에 결합하는 특이적인 항원을 부여하기에 충분한 면역글로불린의 절편을 적어도 함유하는 (폴리)펩티드들을 포함하지만, 여기에 한정되지 않는, 결합 분자들의 항원-결합 절편들일 수 있다. 바람직한 일 실시형태에 있어서, 본 발명의 결합 분자들은 인간 단일클론 항체들 및/또는 이들의 항원-결합 절편들이다. 결합 분자들은 또한 아드넥틴들(Adnectins), 안티칼린들(Anticalins), 다르핀들(Darpins) 등과 같이, (인간) 중복 단백질들 내에서 도메인들에 기초한 나노바디들(nanobodies), 알파바디들(alphabodies), 어피바디들(affibodies), FN3-도메인 스캐폴드들(scaffolds) 및 다른 스캐폴드들 또는 에피토프 결합 서열들을 포함하는 다른 스캐폴드들일 수 있다.
특정한 실시형태들에 있어서, 결합 분자들은 완전한 중쇄 및 경쇄 불변 영역들뿐만 아니라 완전한 중쇄 및 경쇄 가변성 영역들을 포함하는 온전한 항체들이다.
특정한 실시형태들에 있어서, 결합 분자들은 보체-의존적 세포독성 활성(CDC) 및/또는 항체-의존적 세포-매개 세포독성(ADCC) 활성을 갖는다.
본 발명의 결합 분자들은 비단리되거나 단리된 형태로 이용될 수 있다. 또한, 본 발명의 결합 분자들은 단독으로 또는 본 발명의 적어도 하나의 결합 분자 (또는 이들의 변이체 또는 절편) 및 인플루엔자에 결합하고 인플루엔자 바이러스 억제 효과를 갖는 하나 이상의 다른 결합 분자들을 포함하는 혼합물로 이용될 수 있다. 달리 말해서, 결합 분자들은 조합으로, 예컨대, 둘 이상의 결합 분자들, 이들의 변이체들 또는 절편들을 포함하는 약학적 조성물로서 이용될 수 있다. 예를 들면, 상이하지만 상보적인 활성들을 갖는 결합 분자들은 원하는 예방, 치료 또는 진단 효과를 달성하는 단일 요법에서 조합될 수 있지만, 대안적으로는, 동일한 활성들을 갖는 결합 분자들은 원하는 예방, 치료 또는 진단 효과를 달성하는 단일 요법에서 조합될 수도 있다. 선택적으로는, 혼합물은 본 발명에 따른 적어도 하나의 결합 분자 및 적어도 하나의 다른 치료제를 포함할 수도 있다. 바람직하게는, 예컨대, M2 억제제들(예컨대, 아만티딘, 리만타딘) 및/또는 뉴라미니다아제 억제제들(예컨대, 자나미비르, 오셀타미비르)와 같은 치료제는 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 및/또는 치료에 유용하다.
통상적으로, 본 발명에 따른 결합 분자는 0.2 x 10-4M, 1.0x10-5 M, 1.0x10-6 M, 1.0x10-7 M보다 더 낮고, 바람직하게는, 1.0x10-8 M보다 낮고, 더 바람직하게는, 1.0x10-9 M보다 낮고, 더 바람직하게는 1.0x10-10 M보다 낮고, 더욱 더 바람직하게는 1.0x10-11 M보다 더 낮으며, 특히 1.0x10-12 M보다 더 낮은 친화도 상수(Kd-값)를 갖는 결합 분자의 결합 파트너들, 즉, B/야마가타 및/또는 B/빅토리아 계통의 인플루엔자 B 바이러스 및/또는 이들의 절편들에 결합할 수 있다. 친화도 상수들은 항체 동형들에 대하여 변할 수 있다. 예를 들면, IgM 동형에 대한 친화도 결합은 적어도 약 1.0x10-7 M의 결합 친화도를 지칭한다. 친화도 상수들은 예를 들면, BIACORE 시스템(Pharmacia Biosensor AB, 웁살라, 스웨덴)를 이용한 표면 플라스몬 공명을 이용하여 예를 들면, 측정될 수 있다.
본 발명의 결합 분자들은 중화 활성을 보인다. 중화 활성은 예를 들면, 본원에 기재된 바와 같이 측정될 수 있다. 중화 활성을 측정하는 대안적인 검정법들은 예를 들면, 동물 인플루엔자 진단 및 감시(Animal Influenza Diagnosis and Surveillance)에 관한 세계보건기구 매뉴얼, 제네바: 세계 보건 기구, 2005, 2002.5 판에 기재되어 있다.
통상적으로, 본 발명에 따른 결합 분자들은 실시예 6에 기재된 바와 같이, 시험관 내 바이러스 중화 검정(VNA)에서 측정되는 바와 같이, 50 ㎍/㎖ 이하, 바람직하게는 20 ㎍/㎖ 이하의 중화 활성, 더 바람직하게는 10 ㎍/㎖ 이하, 더욱 더 바람직하게는 5 ㎍/㎖ 이하의 중화 활성을 갖는다. 본 발명에 따른 결합 분자들은 예를 들면, 표본 내에서 또는 현탁액 내에서와 같이 가용성 형태로 인플루엔자 바이러스 또는 이들의 절편에 결합할 수 있거나, 담체 또는 기판, 예컨대, 마이크로타이터 플레이트들, 막들 및 비드들 등에 결합되거나 부착된 인플루엔자 바이러스들 또는 이들의 절편들에 결합할 수 있다. 담체들 또는 기판들은 유리, 플라스틱(예컨대, 폴리스티렌), 다당류, 나일론, 니트로셀룰로오스 또는 테프론 등으로 제작될 수 있다. 그러한 지지체들의 표면은 고체 또는 다공성일 수 있으며, 임의의 간편한 형상일 수 있다. 또한, 결합 분자들은 정제/단리된 형태 또는 비정제/비단리된 형태로 인플루엔자 바이러스에 결합할 수 있다.
상기에서 토의된 바와 같이, 특정한 실시형태들에 있어서 본 발명은 인플루엔자 B 바이러스들의 인플루엔자 헤마글루티닌 단백질(HA) 내에서 에피토프를 인식하고 이에 결합할 수 있는 단리된 인간 결합 분자들을 제공하며, 상기 결합 분자들은 시험관 내 및 생체 내에서 B/야마가타 및/또는 B/빅토리아 계통들 양쪽 모두의 인플루엔자 B 바이러스들에 대항하는 중화 활성을 갖는다. 본 발명에 따르면, 본 발명의 결합 분자들은 양쪽의 계통 발생 계통들에 속하는 인플루엔자 바이러스 아형들을 교차-중화시키는 것으로 드러났다. 본원에 개시된 바에 기초하여, 당업자는 항체가 상이한 아형들로부터 나온 HA 단백질들과 진정으로 교차-반응하는지의 여부를 결정할 수 있고, 또한, 이들이 시험관 내 및/또는 생체 내에서 상이한 아형들의 인플루엔자 바이러스들을 중화시킬 수 있는지의 여부를 결정할 수 있다.
본 발명의 다른 양태는 상기 정의된 바와 같이 결합 분자의 기능적 변이체들을 포함한다. 변이체 결합 분자들이 "부모" 또는 "기준" 결합 물질들과 함께 인플루엔자 바이러스 또는 이들의 절편과 면역특이적으로 결합하기 위해 경쟁할 수 있다면, 분자들은 본 발명에 따른 결합 분자의 기능적 변이체들이라고 간주된다. 달리 말해서, 기능적 변이체들이 인플루엔자 바이러스 또는 이들의 절편의 동일하거나 중첩하는 에피토프와 여전히 결합할 수 있는 경우, 분자들은 본 발명에 따른 결합 분자의 기능적 변이체들이라고 간주된다. 이 출원을 위해서, "부모" 또는 "기준"은 기준 또는 부모 분자의 정보 또는 물리적 분자 그 자체가 변이에 대한 근거를 형성할 수 있다는 의미의 동의어로서 사용될 것이다. 기능적 변이체들은 Fc 수용체에서 또는 이펙터 기능들과 관련된 다른 영역들에서 변형을 가지고/가지거나 예컨대, 부모 결합 분자에서는 발견되지 않는 화학적 및/또는 생화학적인 시험관 내 또는 생체 내 변형들을 함유하는 유도체들을 포함하여, 일차 구조적 서열에 실질적으로 유사한 유도체들을 포함하지만, 여기에 한정되지 않는다. 그러한 변형들은 특히, 아세틸화, 아실화, 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유도체의 공유적 부착, 지질 또는 지질 유도체의 공유적 부착, 교차-결합, 이황화물 결합 형성, 글리코실화, 히드록실화, 메틸화, 산화, 페질화, 단백질 분해 가공, 인산화 등을 포함한다. 대안적으로, 기능적 변이체들은 부모 결합 분자들의 아미노산 서열들과 비교하여 하나 이상의 아미노산들의 치환, 삽입, 삭제 또는 이들의 조합을 함유하는 아미노산 서열을 포함하는, 본 발명에서 정의된 결합 분자들일 수 있다. 또한, 기능적 변이체들은 아미노 말단 또는 카르복실 말단 중 어느 하나 또는 양쪽 모두에서의 아미노산 서열의 절단(truncations)을 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 기능적 변이체들은 부모 결합 분자와 비교하여 동일하거나 상이한, 더 높거나 더 낮은 결합 친화도들을 가질 수 있지만, 인플루엔자 바이러스 또는 이들의 절편과 여전히 결합할 수 있다. 예를 들면, 본 발명에 따른 기능적 변이체들은 부모 결합 분자들과 비교하여 인플루엔자 바이러스 또는 이들의 절편에 대한 결합 친화도가 증가하거나 감소할 수 있다. 특정한 실시형태들에 있어서, 골격 영역들, 초가변성 영역들, 특히 CDR3 영역들을 포함하지만, 여기에 한정되지 않는 가변성 영역들의 아미노산 서열들이 변형된다. 일반적으로, 경쇄 및 중쇄 가변성 영역들은 3 개의 CDR들 및 소위 골격 영역들(FRs)인 더 많은 보존된 영역들을 포함하는 3 개의 초가변성 영역들을 포함한다. 초가변성 영역들은 CDR들로부터 나온 아미노산 잔기들 및 초가변성 루프들로부터 나온 아미노산 잔기들을 포함한다. 본 발명의 범위에 속하는 것으로 의도된 기능적 변이체들은 본원에 정의된 바와 같은 부모 결합 분자들과 적어도 약 80% 내지 약 99%, 바람직하게는, 적어도 약 70% 내지 약 99%, 더 바람직하게는 적어도 약 80% 내지 약 99%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 약 90% 내지 약 99%, 가장 바람직하게는 적어도 약 95% 내지 약 99%, 특히 적어도 약 97% 내지 약 99%의 아미노산 서열 동일성 및/또는 상동성을 갖는다. 당업자에게 알려진 특히 Gap 또는 Bestfit과 같은 컴퓨터 알고리즘들은 비교 대상인 아미노산 서열들을 최적으로 정렬시키고 유사하거나 동일한 아미노산 잔기들을 정의하는데 이용될 수 있다. 기능적 변이체들은 오류 빈발 PCR, 올리고뉴클레오티드-지정 돌연변이 유도(oligonucleotide-directed mutagenesis), 부위-지정 돌연변이 유도 및 중쇄 및/또는 경쇄 셔플링(shuffling)을 포함하지만, 여기에 한정되지 않는 업계에 알려진 일반적인 분자 생물학 방법들에 의하여 부모 결합 분자들 또는 이들의 부분들을 변경함으로써 획득될 수 있다.
특정한 실시형태들에 있어서, 본 발명의 기능적 변이체들은 인플루엔자 B 바이러스들에 대항하는 중화 활성을 갖는다. 중화 활성은 부모 결합 분자들과 비교하여 동일하거나 더 높거나 더 낮을 수 있다. 이 출원에 사용된 바와 같이, (인간) 결합 분자라는 용어가 사용되는 경우, 이는 (인간) 결합 분자의 기능적 변이체들도 포함한다. 변이체 결합 분자가 중화 활성을 가지는지 여부를 검증하는 검증법들은 업계에 주지되어 있다(동물 인플루엔자 진단 및 감시에 관한 세계보건기구 매뉴얼, 제네바: 세계 보건 기구, 2005, 2002.5 판 참조).
특정한 실시형태들에 있어서, 기능적 변이체들은 SEQ ID NO: 71와 비교하여, 하나, 둘, 셋, 넷, 다섯, 여섯, 일곱, 여덟, 아홉, 열, 열하나, 열둘, 열셋, 열넷 또는 열다섯 개의 아미노산 돌연변이들과 같이 하나 이상의 아미노산 돌연변이들을 포함하는 중쇄 가변성 서열 및/또는 SEQ ID NO: 73과 비교하여, 하나, 둘, 셋, 넷, 다섯, 여섯, 일곱, 여덟, 아홉, 열, 열하나, 열둘, 열셋, 열넷 또는 열다섯 개의 아미노산 돌연변이들과 같이 하나 이상의 아미노산 돌연변이들을 포함하는 경쇄 가변성 영역을 포함하는 결합 분자들이다.
특정한 실시형태들에 있어서, 기능적 변이체들은 SEQ ID NO: 75와 비교하여, 하나, 둘, 셋, 넷, 다섯, 여섯, 일곱, 여덟, 아홉, 열, 열하나, 열둘, 열셋, 열넷 또는 열다섯 개의 아미노산 돌연변이들과 같이 하나 이상의 아미노산 돌연변이들을 포함하는 중쇄 가변성 서열 및/또는 SEQ ID NO: 77과 비교하여, 하나, 둘, 셋, 넷, 다섯, 여섯, 일곱, 여덟, 아홉, 열, 열하나, 열둘, 열셋, 열넷 또는 열다섯 개의 아미노산 돌연변이들과 같이 하나 이상의 아미노산 돌연변이들을 포함하는 경쇄 가변성 영역을 포함하는 결합 분자들이다.
특정한 실시형태들에 있어서, 기능적 변이체들은 SEQ ID NO: 113와 비교하여, 하나, 둘, 셋, 넷, 다섯, 여섯, 일곱, 여덟, 아홉, 열, 열하나, 열둘, 열셋, 열넷 또는 열다섯 개의 아미노산 돌연변이들과 같이 하나 이상의 아미노산 돌연변이들을 포함하는 중쇄 가변성 서열 및/또는 SEQ ID NO: 115와 비교하여, 하나, 둘, 셋, 넷, 다섯, 여섯, 일곱, 여덟, 아홉, 열, 열하나, 열둘, 열셋, 열넷 또는 열다섯 개의 아미노산 돌연변이들과 같이 하나 이상의 아미노산 돌연변이들을 포함하는 경쇄 가변성 영역을 포함하는 결합 분자들이다.
특정한 실시형태들에 있어서, 본 발명에 따른 결합 분자는 하기 사항들을 포함하는 결합 분자들로 이루어진 그룹으로부터 선택된다:
(a) SEQ ID NO: 59의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 및 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및SEQ ID NO: 60의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3;
(b) SEQ ID NO: 61의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 및 SEQ ID NO: 62의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및SEQ ID NO: 63의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3;
(c) SEQ ID NO: 59의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 및 SEQ ID NO: 64의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 65의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및SEQ ID NO: 66의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3; 및
(d) SEQ ID NO: 59의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 및 SEQ ID NO: 67의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 68의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및SEQ ID NO: 69의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3;
(e) SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 37의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 및 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3; 및
(f) SEQ ID NO: 40의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 41의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 42의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 및 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3;
(g) SEQ ID NO: 45의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 47의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 및 SEQ ID NO: 48의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3; 및
(h) SEQ ID NO: 45의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 47의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 및 SEQ ID NO: 51의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 52의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및SEQ ID NO: 53의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3.
특정한 실시형태들에 있어서, 결합 분자는 하기 사항들로 이루어진 그룹으로부터 선택된다:
a) SEQ ID NO: 119의 중쇄 가변성 영역 및 SEQ ID NO: 121의 경쇄 가변성 영역을 포함하는 결합 분자;
b) SEQ ID NO: 123의 중쇄 가변성 영역 및 SEQ ID NO: 125의 경쇄 가변성 영역을 포함하는 결합 분자;
c) SEQ ID NO: 127의 중쇄 가변성 영역 및 SEQ ID NO: 129의 경쇄 가변성 영역을 포함하는 결합 분자;
d) SEQ ID NO: 131의 중쇄 가변성 영역 및 SEQ ID NO: 133의 경쇄 가변성 영역을 포함하는 결합 분자;
e) SEQ ID NO: 77의 중쇄 가변성 영역 및 SEQ ID NO: 79의 경쇄 가변성 영역을 포함하는 결합 분자;
f) SEQ ID NO: 101의 중쇄 가변성 영역 및 SEQ ID NO: 103의 경쇄 가변성 영역을 포함하는 결합 분자;
g) SEQ ID NO: 105의 중쇄 가변성 영역 및 SEQ ID NO: 107의 경쇄 가변성 영역을 포함하는 결합 분자; 및
h) SEQ ID NO: 109의 중쇄 가변성 영역 및 SEQ ID NO: 111의 경쇄 가변성 영역을 포함하는 결합 분자.
특정한 실시형태들에 있어서, 본 발명에 따른 결합 분자들은 약제로서의 용도 및 바람직하게는, 인플루엔자 B 바이러스들에 의하여 유발된 인플루엔자 감염의 치료 및/또는 예방적 치료에서의 용도를 위한 것이다. 인플루엔자 감염을 유발하고, 본 발명의 결합 분자들을 이용하여 처치될 수 있는 인플루엔자 바이러스는 B/야마가타 및/또는 B/빅토리아 계통의 인플루엔자 B 바이러스일 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명에 따른 적어도 하나의 결합 분자 및 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학적 조성물들에 관한 것이다.
또 다른 실시형태에 있어서, 본 발명은 본 발명에 따른 결합 분자의 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 및/또는 치료용 약제의 제조에서의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 결합 분자들을 이용하여 방지 및/또는 치료될 수 있는 인플루엔자 바이러스 감염들은 적은 인구들에서 발생할 수 있지만, 계절성 유행병으로 또는 더 나쁘게는, 수백만의 개인들이 위험에 처하는 전세계적 유행병들로서 전세계에 걸쳐서 퍼질 수도 있다. 본 발명은 그러한 계절성 유행병뿐만 아니라 잠재적인 세계적 유행병을 유발하는 인플루엔자 균주들의 감염을 중화할 수 있는 결합 분자들을 제공한다.
또 다른 양태에 있어서, 본 발명은 면역접합체들, 즉, 본원에 정의된 바와 같이 적어도 하나의 결합 분자를 포함하고, 특히 검출 가능한 모이어티/작용제와 같은 적어도 하나의 태그를 더 포함하는 분자들을 제공한다. 본 발명에 따른 면역접합체들의 혼합물들 또는 본 발명에 따른 적어도 하나의 면역접합체들 및 치료제 또는 다른 결합 분자 또는 면역접합체와 같은 다른 분자의 혼합물들도 본 발명에서 고려된다. 다른 실시형태들에 있어서, 본 발명의 면역접합체들은 하나를 초과하는 태그를 포함할 수 있다. 이러한 태그들은 서로 동일하거나 상이할 수 있으며, 결합 분자들에 비공유적으로 결합/접합될 수 있다. 태그(들)은 공유 결합을 통해 인간 결합 분자들에 직접적으로 결합/접합될 수도 있다. 대안적으로, 태그(들)은 하나 이상의 연결 화합물들에 의하여 결합 분자들에 결합/접합될 수 있다. 결합 분자들에 태그들을 접합시키는 기법들은 당업자에게 주지되어 있다.
본 발명의 면역접합체들의 태그들은 치료제들일 수 있지만, 이들은 검출 가능한 모이어티들/작용제들일 수도 있다. 치료 및/또는 방지에서 적당한 태그들은 독소들 또는 이들의 기능적 부분들, 항생제들, 효소들, 식균작용 또는 면역 자극을 증강시키는 다른 결합 분자들일 수 있다. 검출 가능한 작용제를 포함하는 면역접합체들은 예를 들면, 피검자가 인플루엔자 바이러스에 감염되었는지 평가하거나 예컨대, 주어진 치료 계획의 효능을 결정하는 임상적 시험 절차의 일환으로 인플루엔자 바이러스 감염의 전개 또는 진행을 모니터링하기 위해 진단적으로 이용될 수 있다. 그러나, 이들은 다른 검출 및/또는 분석 및/또는 진단 목적들을 위해 이용될 수도 있다. 검출 가능한 모이어티들/작용제들은 효소들, 보결기들(prosthetic groups), 형광 물질들, 발광 물질들, 생물발광 물질들, 방사선 물질들, 양전자 방출 금속들 및 비-방사선 상자성 금속 이온들을 포함하지만, 여기에 한정되지 않는다. 결합 분자들을 검출 및/또는 분석 및/또는 진단 목적으로 라벨링하는데 이용되는 태그들은 특히, (조직) 표본들의 면역조직화학적 염색, 유동 세포 계측, 주사 레이저 세포계측 검출, 형광 면역검정, 효소 연결 면역흡착 검정(ELISA), 방사선면역분석법(RIA), 생물검정법(예컨대, 식균작용 검정법), 웨스턴 블롯팅 응용 등과 같이 이용된 특이적인 검출/분석/진단 기법들 및/또는 방법들에 의존한다. 업계에 알려진 검출/분석/진단 기법 및/또는 방법에 적당한 라벨들은 당업자의 역량 내에 있다.
또한, 본 발명의 인간 결합 분자들 또는 면역접합체들은 인플루엔자 바이러스들 또는 이들의 절편들의 시험관 내 면역검정 또는 정제에 특히 유용한 고체 지지체들에 부착될 수도 있다. 그러한 고체 지지체들은 다공성 또는 비다공성, 평면적 또는 비평면적일 수 있다. 본 발명의 결합 분자들은 정제를 용이하게 하는 펩티드와 같이 마커 서열들에 융합될 수 있다. 이의 예들은 헥사-히스티딘 태그, 헤마글루티닌(HA) 태그, myc 태그 또는 플래그 태그를 포함하지만, 여기에 한정되지 않는다. 대안적으로, 항체는 제2 항체에 접합되어 항체 헤테로접합체를 형성할 수 있다. 다른 양태에 있어서, 본 발명의 결합 분자들은 하나 이상의 항원들에 접합/부착될 수 있다. 바람직하게는, 이러한 항원들은 결합 분자-항원 접합체가 투여되는 피검자의 면역계에 의하여 인식된 항원들이다. 항원들은 동일할 수 있지만, 서로 상이할 수도 있다. 항원들 및 결합 분자들을 부착하는 접합법들은 업계에 주지되어 있으며, 교차-결합제들의 사용을 포함하지만, 여기에 한정되지 않는다. 본 발명의 결합 분자들은 인플루엔자 바이러스 HA에 결합할 것이며, 결합 분자들에 부착된 항원들은 궁극적으로 인플루엔자 바이러스의 파괴에 이르게 되는, 접합체에 대한 강력한 T-세포 공격을 개시할 것이다.
예를 들면, 링커를 통해 직접적으로 또는 간접적으로 접합함으로서 화학적으로 면역접합체들을 생성한 다음에, 면역접합체들은 본 발명의 결합 분자들 및 적당한 태그를 포함하는 융합 단백질들로서 생성될 수 있다. 융합 단백질들은 예컨대, 프레임 내에서 결합 분자들을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열들을 포함하는 핵산 분자들을 적당한 태그(들)을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열들로 축조한 이후에 핵산 분자들을 발현시킴으로써 재조합적으로, 업계에 알려진 방법들에 의하여 생성될 수 있다.
본 발명의 다른 양태에 의하면, 적어도 본 발명에 따른 결합 분자, 기능적 변이체 또는 면역접합체를 인코딩하는 핵산 분자들이 제공된다. 그러한 핵산 분자들은 예컨대, 상기에 기재된 바와 같이 친화도 성숙(affinity maturation) 공정에서, 클로닝 목적의 중간체들로서 이용될 수 있다. 바람직한 일 실시형태에 있어서, 핵산 분자들은 단리되거나 정제된다.
당업자는 이러한 핵산 분자들의 기능적 변이체들이 또한 본 발명의 일부가 되도록 의도된 것임을 알 것이다. 기능적 변이체들은 표준 유전 암호를 이용하여 직접 번역되어 부모 핵산 분자들로부터 번역된 것과 동일한 아미노산 서열을 제공할 수 있는 핵산 서열들이다.
바람직하게는, 핵산 분자들은 상기에 기재된 바와 같이 CDR 영역들을 포함하는 결합 분자들을 인코딩한다. 다른 일 실시형태에 있어서, 핵산 분자들은 본 발명의 결합 분자들의 둘, 셋, 넷, 다섯 또는 심지어 여섯 개의 모든 CDR 영역들을 포함하는 결합 분자들을 인코딩한다.
다른 실시형태에 있어서, 핵산 분자들은 상기에 기재된 바와 같이 가변성 중쇄 서열들을 포함하는 중쇄를 포함하는 결합 분자들을 인코딩한다. 다른 실시형태에 있어서, 핵산 분자들은 상기에 기재된 바와 같이 가변성 경쇄 서열들을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자들을 인코딩한다. 본 발명의 결합 분자들의 중쇄 및 경쇄 가변성 영역들의 뉴클레오티드 서열들 및 아미노산 서열들은 아래에 주어져 있다.
본 발명의 다른 양태에 의하면, 본 발명에 따른 하나 이상의 핵산 분자들을 포함하는 벡터들, 즉, 핵산 컨스트럭트들이 제공된다. 벡터들은 특히, F, R1, RP1, Col, pBR322, TOL, T 등과 같은 플라스미드들; 코스미드들; 람다(lambda), 람도이드(lambdoid), M13, Mu, P1, P22, Qβ, T-짝(even), T-홀(odd), T2, T4, T7 등과 같은 파지들; 식물 바이러스들로부터 유래될 수 있다. 벡터들은 본 발명의 결합 분자들의 클로닝 및/또는 발현을 위해 이용될 수 있으며, 유전자 요법 목적으로 이용될 수도 있다. 하나 이상의 발현-조절 핵산 분자들에 작동 가능하게 연결된 본 발명에 따른 하나 이상의 핵산 분자들을 포함하는 벡터들도 본 발명에 포함된다. 벡터의 선택은 수행되는 재조합 절차들 및 사용된 숙주에 의존한다. 숙주 세포들에 벡터들의 도입은 특히, 인산칼슘 형질감염, 바이러스 감염, DEAE-덱스트란 매개 형질감염, 리포펙타민 형질감염 또는 전기 천공법에 의하여 달성될 수 있다. 벡터들을 독립적으로 복제할 수 있거나 이들이 혼입되어 있는 염색체와 함께 복제할 수 있다. 바람직하게는, 벡터들은 하나 이상의 선택 마커들을 함유한다. 마커들의 선택은 당업자에게 주지된 바와 같이 본 발명에 중요하지 않다고 하더라도, 선택된 숙주 세포들에 의존할 수 있다. 마커들은 카나마이신, 네오마이신, 퓨로마이신, 하이그로마이신, 제오신, 단순 포진 바이러스로부터의 티미딘 키나아제 유전자(HSV-TK), 마우스로부터의 디히드로엽산 환원효소(dhfr) 유전자를 포함하지만, 여기에 한정되지 않는다. 인간 결합 분자들을 단리하는데 이용될 수 있는 단백질들 또는 펩티드들을 인코딩하는 하나 이상의 핵산 분자들에 작동 가능하게 연결된 상기에 기재된 인간 결합 분자들을 인코딩하는 하나 이상의 핵산 분자들을 포함하는 벡터들도 본 발명에 포함된다. 이러한 단백질들 또는 펩티드들은 글루타티온-S-전이효소, 말토오스 결합 단백질, 금속-결합 폴리히스티딘, 녹색 형광 단백질, 발광 효소 및 베타-갈락토시다아제를 포함하지만, 여기에 한정되지 않는다.
상기에 언급된 벡터들의 하나 이상의 복제본들을 함유하는 숙주들은 본 발명의 추가적인 양태이다. 바람직하게는, 숙주들은 숙주 세포들이다. 숙주 세포들은 포유류, 식물, 곤충, 진균 또는 박테리아 원점의 세포들을 포함하지만, 여기에 한정되지 않는다. 박테리아 세포들은 E. coli와 같은 대장균(Escherichia) 속 및 슈도모나스(Pseudomonas) 속의 일부 종들과 같은 그램(Gram)-양성 박테리아 또는 그램-음성 박테리아로부터 나온 세포들을 포함하지만, 여기에 한정되지 않는다. 진균 세포들의 군에서, 바람직하게는 효모 세포들이 이용된다. 효모에서의 발현은 특히, 피치아 파스토리스(Pichia pastoris), 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae) 및 한세눌라 폴리모르파(Hansenula polymorpha)와 같은 효모 균주들을 이용하여 달성될 수 있다. 또한, 드로소필라(Drosophila) 및 Sf9으로부터 나온 세포들과 같은 곤충 세포들이 숙주 세포들로 이용될 수 있다. 이에 더하여, 숙주 세포들은 특히, 삼림 식물들과 같은 작물 식물들로부터 나온 세포들 또는 곡물 식물들 또는 의약 식물들과 같이 식품 및 원료 물질들을 제공하는 식물들로부터 나온 세포들, 또는 관상식물들로부터 나온 세포들 또는 화훼 구근 작물들로부터 나온 세포들과 같은 식물 세포들일 수 있다. 형질전환된(유전형질전환) 식물들 또는 식물 세포들은 알려진 방법들, 예를 들면, 종양균(Agrobacterium)-매개 유전자 전이, 엽편들의 형질전환, 폴리에틸렌 글리콜-유도 DNA 전이에 의한 원형질체 형질전환, 전기 천공법, 초음파처리, 현미 주사 또는 볼리스틱(bolistic) 유전자 전이에 의하여 생성된다. 추가적으로, 적당한 발현 시스템은 배큘로바이러스 시스템일 수 있다. 중국 햄스터 난소(CHO) 세포들, COS 세포들, BHK 세포들, NSO 세포들 또는 보웨스(Bowes) 흑색종 세포들과 같은 포유류 세포들을 이용한 발현 시스템들은 본 발명에서 바람직하다. 포유류 세포들은 포유류 원점의 천연 분자들에 가장 유사한 번역후 변형을 갖는 발현된 단백질들을 제공한다. 본 발명은 인간에게 투여되어야 할 수도 있는 분자들을 다루기 때문에, 완전한 인간 발현 시스템은 특히 바람직할 것이다. 그러므로, 더욱 더 바람직하게는, 숙주 세포들은 인간 세포들이다. 인간 세포들의 예로는 특히 HeLa, 911, AT1080, A549, 293 및 HEK293T 세포들이다. 바람직한 실시형태들에 있어서, 인간 생산 세포들은 발현 가능한 형태로 아데노바이러스 E1 영역을 인코딩하는 핵산 서열의 기능적 부분을 적어도 포함한다. 더욱 더 바람직한 실시형태들에 있어서, 상기 숙주 세포들은 인간 망막으로부터 유래되며, 911 세포들 또는 번호 96022940 로 1996년 2월 29일에 영국 CAMR, 샐리스베리, 월트셔 SP4 OJG 소재 유러피안 컬렉션 오브 셀 컬쳐스(ECACC)에 기탁되고 상표 PER.C6
Figure 112014087542364-pct00002
(PER.C6는 Crucell Holland B.V.의 등록 상표이다) 로 판매되는 세포주와 같은 아데노바이러스 E1 서열들을 포함하는 핵산들로 불멸화된다. 이 출원을 위해, "PER.C6 세포들”은 번호 96022940으로 기탁된 세포들 또는 계대 상류 또는 하류의 조상들, 및 기탁된 세포들의 조상들로부터 나온 자손들뿐만 아니라 상기 중 어느 하나의 유도체들을 지칭한다. 숙주 세포들 내에서 재조합 단백질들의 생성은 업계에 주지된 방법들에 따라 수행될 수 있다. 관심의 대상이 되는 단백질용의 생성 플랫폼으로서 상표 PER.C6
Figure 112014087542364-pct00003
로 판매되는 세포들의 용도는 그 내용 전체가 본원에 참고로 포함되어 있는 WO 00/63403에 기재되어 있다.
본 발명에 따른 결합 분자의 생성 방법은 본 발명의 추가적인 양태이다. 이 방법은 a) 결합 분자의 발현에 도움이 되는 조건들 하에서 본 발명에 따른 숙주를 배양하는 단계, 및 b) 선택적으로는, 발현된 결합 분자를 회수하는 단계를 포함한다. 발현된 결합 분자들은 무세포 추출물로부터 회수될 수 있지만, 바람직하게는, 이들은 배양 배지로부터 수거된다. 상기 생성 방법은 본 발명의 결합 분자들 및/또는 면역접합체들의 기능적 변이체들을 제작하는데 이용될 수도 있다. 무세포 추출물들 또는 배양 배지로부터 결합 분자들과 같은 단백질들을 회수하는 방법들은 당업자에게 주지되어 있다. 상기 기재된 방법에 의해 획득 가능한 결합 분자들, 기능적 변이체들 및/또는 면역접합체들도 본 발명의 일부이다.
대안적으로, 숙주 세포와 같은 숙주들 내에서 발현된 다음, 본 발명의 결합 분자들 및 면역접합체들은 종래 펩티드 합성자들에 의하여 또는 본 발명에 따른 DNA 분자들로부터 유래된 RNA 핵산을 이용한 무세포 번역 시스템들 내에서 합성적으로 생성될 수 있다. 상기 기재된 합성 생성 방법들 또는 무세포 번역 시스템들에 의하여 획득할 수 있는 바와 같은 결합 분자들 및 면역접합체들도 본 발명의 일부이다.
또 다른 실시형태에 있어서, 본 발명의 결합 분자들은 특히, 토끼들, 염소들 또는 암소들과 같은 유전형질전환된 인간이 아닌 포유류들에서 생성되고, 예를 들면, 이들의 유젖으로 분비될 수도 있다.
또 다른 대안적인 실시형태에 있어서, 본 발명에 따른 결합 분자들은 예를 들면, 인간 면역글로불린 유전자들을 발현하는 유전형질전환된 쥐들 또는 토끼들과 같은 유전형질전환된 인간이 아닌 포유류들에 의하여 발생될 수 있다. 바람직하게는, 유전형질전환된 인간이 아닌 포유류들은 상기에 기재된 바와 같이 인간 결합 분자들의 전부 또는 일부를 인코딩하는 인간 중쇄 이식 유전자 및 인간 경쇄 이식 유전자를 포함하는 게놈을 갖는다. 유전형질전환된 인간이 아닌 포유류들은 인플루엔자 바이러스 또는 이들의 절편의 정제되거나 농축된 제제로 면역화될 수 있다. 인간이 아닌 포유류들을 면역화하는 프로토콜들은 업계에 잘 확립되어 있다. 그 내용이 본원에 참고로 포함되어 있는 Using Antibodies: A Laboratory Manual, Edited by: E. Harlow, D. Lane (1998), Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York and Current Protocols in Immunology, Edited by: J.E. Coligan, A.M. Kruisbeek, D.H. Margulies, E.M. Shevach, W. Strober (2001), John Wiley & Sons Inc., New York를 참조하도록 한다. 면역화 프로토콜들은 프로이드 완전 보조제 및 프로이드 불완전 보조제와 같은 보조제들의 사용 유무로 다중 면역화들을 종종 포함하지만, 있는 그대로의 DNA 면역화들도 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 인간 결합 분자들은 유전형질전환된 동물들로부터 유래된 B-세포들, 혈장 및/또는 메모리 세포들에 의하여 생성된다. 또 다른 실시형태에 있어서, 인간 결합 분자들은 상기 기재된 유전형질전환된 인간이 아닌 포유류들로부터 획득된 B-세포들의 불멸화된 세포들로의 융합에 의하여 제조된 융합 세포종들(hybridomas)에 의하여 생성된다. 상기 기재된 유전형질전환된 인간이 아닌 포유류들로부터 획득 가능한 B-세포들, 혈장 세포들과 융합 세포종들 및 상기 기재된 유전형질전환된 인간이 아닌 포유류들, B-세포들, 혈장 및/또는 메모리 세포들 및 융합 세포종들로부터 획득 가능한 인간 결합 분자들도 본 발명의 일부이다.
또 다른 양태에 있어서, 본 발명은 적어도 하나의 결합 분자, 바람직하게는, 본 발명에 따른 인간 단일클론 항체, 이들의 적어도 하나의 기능적 변이체, 본 발명에 따른 적어도 하나의 면역접합체 및/또는 이들의 조합을 포함하는 조성물들을 제공한다. 이에 더하여, 조성물들은 특히 알부민 또는 폴리에틸렌 글리콜 또는 염들과 같은 안정화 분자들을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 이용된 염들은 결합 분자들의 원하는 생물학적 활성을 유지하고 임의의 원하지 않는 독성학적 효과들은 부여하지 않는 염들이다. 필요하다면, 본 발명의 인간 결합 분자들은 결합분자들을 비활성화시킬 수 있는 산들 또는 다른 천연 또는 비천연 조건들의 작용으로부터 이들을 보호하는 물질로 코팅되거나 이 물질 상에 코팅될 수 있다.
또 다른 양태에 있어서, 본 발명은 본 발명에서 정의된 바와 같이 적어도 하나의 핵산 분자를 포함하는 조성물들을 제공한다. 조성물들은 염들(예컨대, NaCl 또는 상기에 기재된 바와 같은 염들), 세제들(예컨대, SDS) 및/또는 다른 적당한 성분들을 함유하는 수용액들과 같은 수용액들을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 인간 단일클론 항체와 같은 본 발명의 적어도 하나의 결합 분자 (또는 이들의 기능적 절편 또는 변이체), 본 발명에 따른 적어도 하나의 면역접합체, 본 발명에 따른 적어도 하나의 조성물 또는 이들의 조합들을 포함하는 약학적 조성물들에 관한 것이다. 본 발명의 약학적 조성물은 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 더 포함한다. 약학적으로 허용 가능한 부형제들은 당업자에게 주지되어 있다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 적어도 하나의 다른 치료제를 더 포함할 수 있다. 적당한 작용제들도 당업자에게 주지되어 있다.
특정한 실시형태들에 있어서, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 적어도 하나의 추가적인 결합 분자를 포함한다, 즉, 약학적 조성물은 결합 분자들의 칵테일 또는 혼합물일 수 있다. 약학적 조성물은 본 발명에 따른 적어도 두 개의 결합 분자들, 또는 HA 단백질에 대항하여 또는 M2와 같은 인플루엔자 바이러스들 상에 존재하는 다른 항원성 구조들에 대항하여 지시된 다른 항체와 같이, 본 발명에 따른 적어도 하나의 결합 분자 및 적어도 하나의 추가적인 인플루엔자 바이러스 결합 및/또는 중화 분자, 및/또는 하나 이상의 다른 병원체들을 중화하는 결합 분자를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 추가적인 결합 분자는 동시적인 분리 또는 순차 투여용으로 제형화될 수 있다.
특정한 실시형태들에 있어서, 결합 분자들은 조합되어 사용되는 경우, 상승적인 중화 활성을 보인다. 본원에 사용된 "상승적인"이라는 용어는 결합 분자들이 조합되어 사용되는 경우 조합된 효과들은 이들이 개별적으로 사용되는 경우 이들의 가산적인 효과들을 상회하는 것을 의미한다. 상승적으로 작용하는 결합 분자들은 인플루엔자 바이러스의 동일하거나 상이한 절편들 상에서 상이한 구조들과 결합할 수 있다. 상승을 계산하는 방식은 조합 지수에 의한다. 조합 지수(CI)의 개념은 Chou 및 Talalay에 의하여 기재되어 있다(1984). 조성물들은 예컨대, 중화 활성을 갖는 하나의 결합 분자 및 하나의 비-중화 결합 분자를 포함할 수 있다. 비-중화 및 중화 결합 분자들도 인플루엔자 바이러스를 중화하는데 있어 상승적으로 작용할 수도 있다.
특정한 실시형태들에 있어서, 약학적 조성물은 본 발명에 따른 적어도 하나의 결합 분자 및 적어도 하나의 다른 결합 분자, 바람직하게는 결합 분자를 중화하는 다른 인플루엔자 바이러스를 포함할 수 있다. 약학적 조성물에 있어서 결합 분자들은 바람직하게는 상이한 아형들의 인플루엔자 바이러스들과 반응할 수 있다. 결합 분자들은 높은 친화도를 가질 수 있으며 광범위한 특이성을 갖는다. 바람직하게는, 양 결합 분자들은 각각 상이한 아형들의 인플루엔자 바이러스들을 중화한다는 점에서 교차-중화하는 분자들이다. 또한, 바람직하게는, 이들은 상이한 인플루엔자 바이러스 아형들의 각각의 가능한 한 많은 균주들을 중화한다.
특정한 실시형태들에 있어서, 약학적 조성물은 적어도 하나의 다른 예방제 및/또는 치료제를 포함한다. 바람직하게는, 상기 다른 치료제 및 예방제는 인플루엔자 바이러스 감염 및/또는 그러한 감염에 의한 병을 방지하고/하거나 치료할 수 있는 작용제들이다. 치료제 및/또는 예방제는 항-바이러스제들을 포함하지만, 여기에 한정되지 않는다. 그러한 작용제들은 결합 분자들, 소형 분자들, 유기 또는 무기 화합물들, 효소들, 폴리뉴클레오티드 서열들, 항-바이러스성 펩티드들 등일 수 있다. 인플루엔자 바이러스들에 감염된 환자들을 치료하는데 현재 사용되는 다른 작용제들은 M2 억제제들(예컨대, 아만티딘, 리만타딘) 및/또는 뉴라미니다아제 억제제들(예컨대, 자나미비르, 오셀타미비르)이다. 이들은 본 발명의 결합 분자들과 조합하여 이용될 수 있다. 본원에서 "조합된"은 동시에, 분리된 제형들로서, 또는 임의의 순서로 하나의 조합된 제형으로서, 또는 분리된 제형들로서 순차적인 투여법에 따르는 것을 의미한다. 실험적인 단계에 있는, 인플루엔자 바이러스 감염 및/또는 그러한 감염으로부터 기인한 병을 방지 및/또는 치료할 수 있는 작용제들은 본 발명에서 유용한 다른 치료제 및/또는 예방제로서 이용될 수도 있다.
본 발명의 결합 분자들 또는 약학적 조성물들은 인간에게서 사용되기 이전에 적당한 동물 모델 시스템들에서 시험될 수 있다. 그러한 동물 모델 시스템들은 쥐, 흰담비 및 원숭이를 포함하지만, 여기에 한정되지 않는다.
통상적으로, 약학적 조성물들은 제조 및 저장 조건들 하에서 멸균 상태이며 안정적이어야 한다. 본 발명의 결합 분자들, 면역접합체들 또는 조성물들은 약물 전달 전 또는 전달 시에 적절한 약학적으로 허용 가능한 부형제 내에서 재구성을 위한 분말 형태일 수 있다. 멸균 주입 가능한 용액들의 제조용 멸균 분말들인 경우, 바람직한 제제의 방법들은 활성 성분의 분말에 더하여 이의 미리 멸균한-여과된 용액으로부터 임의의 원하는 추가 성분을 산출하게 하는 진공 건조 및 동결-건조(동결 건조)이다.
대안적으로, 본 발명의 결합 분자들, 면역접합체들 또는 조성물들은 용액으로 있을 수 있으며, 적절한 약학적으로 허용 가능한 부형제는 약물 전달 전 또는 전달 시에 첨가 및/또는 혼합되어 단위 용량의 주입 가능한 형태를 제공할 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에서 이용된 약학적으로 허용 가능한 부형제는 높은 약물 농도에 적합하고, 적당한 유동성을 유지할 수 있으며, 필요한 경우, 흡수를 지연시킬 수 있다.
약학적 조성물들의 최적 투여 경로의 선택은 조성물들 내에서 활성 분자들의 물리화학적 특성, 임상적 상황의 응급성 및 활성 분자들의 혈장 농도들의 원하는 치료 효과와의 관계를 포함하는 몇 개의 인자들에 의하여 영향받을 수 있다. 예를 들면, 필요하다면, 본 발명의 결합 분자들은 이식 조직편들, 경피 패치들 및 마이크로캡슐화된 전달 시스템들을 포함하는, 방출 제어 제형과 같이, 속방성에 대하여 결합 분자들을 보호할 담체들을 이용하여 제조될 수 있다. 특히, 에틸렌 초산 비닐, 폴리무수화물들, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르들 및 폴리락트산과 같은 생분해성, 생적합성 중합체들이 이용될 수 있다. 또한, 인간 결합 분자들의 비활성화를 방지하는 물질 또는 화합물로 결합 분자들을 코팅하거나 이와 함께 결합 분자들을 공통 투여하는 것이 필요할 수 있다. 예를 들면, 결합 분자들은 적절한 담체, 예를 들면, 리포솜 또는 희석제 내에서 피검자에게 투여될 수 있다.
투여 경로들은 두 개의 주요 범주들, 경구 및 비경구 투여로 분류될 수 있다. 바람직한 투여 경로는 정맥 내 또는 흡입에 의한 것이다.
경구 제형들은 특히, 정제, 트로키, 로젠지(lozenges), 수용성 또는 유성 현탁액, 분산 가능한 분말 또는 과립, 유화액, 경질 캡슐, 연질 젤라틴 캡슐, 시럽 또는 엘릭서, 알약, 당의정, 액체, 젤 또는 슬러리로서 제형화될 수 있다. 이러한 제형들은 비활성 희석제들, 과립화제 및 붕해제, 결합제들, 윤활제들, 보존제들, 착색제, 향미제 또는 감미제, 식물성유 또는 미네랄유, 습윤제들 및 증점제들을 포함하지만, 여기에 한정되지 않는 약학적으로 허용 가능한 부형제들을 함유할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물들은 비경구 투여용으로 제형화될 수도 있다. 비경구 투여용 제형들은 특히, 수용성 또는 비수용성 등장 멸균 비독성 주사 또는 주입 용액들 또는 현탁액들의 형태일 수 있다. 용액 또는 현탁액은 1,3-부탄디올, 링거 용액, 행크 용액, 등장성 염화 나트륨 용액, 오일들, 지방산들, 국소 마취제들, 보존제들, 완충액들, 점도 또는 용해도 향상제들, 수용성 항산화제들, 유용성 항산화제들 및 금속 킬레이트제들과 같이, 사용된 투여량 및 농도에서 수취인들에게 비독성인 작용제들을 포함할 수 있다.
다른 양태에 있어서, 본 발명의 인간 단일클론 항체들(이들의 기능적 절편들 및 변이체들), 면역접합체들, 조성물들 또는 약학적 조성물들과 같은 결합 분자들은 약제 또는 진단제로서 이용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 결합 분자들, 면역접합체들, 조성물들 또는 약학적 조성물들을 이용하여 인플루엔자 바이러스 감염을 진단, 치료 및/또는 방지하는 방법들은 본 발명의 다른 양태이다. 상기 언급된 분자들은 특히, 인플루엔자 B 바이러스에 의하여 유발된 인플루엔자 바이러스 감염의 진단, 예방, 치료 또는 이의 조합에 이용될 수 있다. 이들은 인플루엔자 바이러스 감염을 앓고 있는 아직 치료되지 않은 환자들 및 인플루엔자 바이러스 감염에 대해 치료 받았거나 치료받는 환자들의 치료에 적합하다.
상기 언급된 분자들 또는 조성물들은 진단, 예방 및/또는 치료에 유용한 다른 분자들과 연계해서 사용될 수 있다. 이들은 시험관 내, 생체 외 또는 생체 내에서 이용될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 인간 단일클론 항체들 (또는 이들의 기능적 변이체들), 면역접합체들, 조성물들 또는 약학적 조성물들과 같은 결합 분자들은 (이용할 수 있다면) 인플루엔자 바이러스에 대항하는 백신과 함께 공동으로 투여될 수 있다. 대안적으로, 백신은 본 발명의 분자들의 투여 전 또는 후에 투여될 수도 있다. 백신 대신에, 항-바이러스제들도 본 발명의 결합 분자들과 연계하여 사용될 수도 있다. 적당한 항-바이러스제들은 상기에 언급되어 있다.
분자들은 통상적으로는 본 발명의 조성물들 및 약학적 조성물들 내에서 치료적 또는 진단적으로 유효한 양으로 제형화된다. 대안적으로, 이들은 따로 제형화되고 투여될 수 있다. 예를 들면, 항-바이러스제들과 같은 다른 분자들은 전신으로 적용될 수 있는 반면에, 본 발명의 결합 분자들은 정맥 내로 적용될 수 있다.
치료는 인플루엔자 감염에 감수성인 환자 그룹들을 표적으로 할 수 있다. 그러한 환자 그룹들은 예를 들면, 노인들(예컨대, 50세 이상, 60세 이상 및 바람직하게는 65세 이상), 유아들(예컨대, 5세 이하, 1세 이하), 입원한 환자들 및 항바이러스성 화합물로 치료 받았지만 부적절한 항바이러스성 반응을 보인 이미 감염된 환자들을 포함하지만, 여기에 한정되지 않는다.
투여 계획들을 조절하여 최적의 원하는 반응(예컨대, 치료 반응)을 제공할 수 있다. 적당한 투여 범위는 예를 들면, 0.01 내지 100 ㎎/㎏ 체중, 바람직하게는 0.1 내지 50 ㎎/㎏ 체중, 바람직하게는 0.01 내지 15 ㎎/㎏ 체중일 수 있다. 또한, 예를 들면, 단일 용량(single bolus)이 투여될 수 있고, 수회 구분된 용량들이 시간에 따라 투여될 수 있거나, 용량은 치료 상황의 긴급함에 의하여 지시된 바와 같이 이에 비례하여 감소되거나 증가될 수 있다. 본 발명에 따른 분자들 및 조성물들은 바람직하게는 멸균 상태이다. 이들 분자들 및 조성물들을 멸균 상태가 되도록 하는 방법들은 업계에 주지되어 있다. 진단, 예방 및/또는 치료에 유용한 다른 분자들은 본 발명의 결합 분자들에 대하여 제안된 바와 유사한 투여 계획으로 투여될 수 있다. 다른 분자들이 따로 투여된다면, 이들은 본 발명의 인간 결합 분자들 또는 약학적 조성물들 중 하나 이상을 투여하기 전(예컨대, 2분, 5분, 10분, 15분, 30분, 45분, 60분, 2시간, 4시간, 6시간, 8시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 7일, 2주, 4주 또는 6주 전), 투여에 수반하여 또는 투여에 이어서(예컨대, 2분, 5분, 10분, 15분, 30분, 45분, 60분, 2시간, 4시간, 6시간, 8시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 7일, 2주, 4주 또는 6주 후) 환자에게 투여될 수 있다. 정확한 투여 계획은 인간 환자들에게서 임상적 시도를 수행하는 동안에 통상적으로 정리된다.
인간 결합 분자들 및 인간 결합 분자들을 포함하는 약학적 조성물들은 특히 유용하며, 투여된 항체에 대해 수취인의 면역 반응이 종종 단일클론 생쥐, 키메라 또는 인간화된 결합 분자의 투여에 의하여 야기되는 면역 반응보다 실질적으로 미치지 못할 것이기 때문에, 생체 내 치료제들로서 인간에게 투여되는 경우 종종 바람직하다.
다른 양태에 있어서, 본 발명은 인플루엔자 바이러스 감염, 특히, 인플루엔자 B 바이러스들에 의하여 유발된 인플루엔자 바이러스 감염의 진단, 예방, 치료 또는 이들의 조합용 약제의 제제에 있어서 본 발명에 따른 인간 단일클론 항체들(이들의 기능적 절편들 및 변이체들), 면역접합체들, 핵산 분자들, 조성물들 또는 약학적 조성물들의 중화와 같은, 결합 분자들의 용도에 관한 것이다.
이 다음에, 본 발명에 따른 중화 인간 단일클론 항체(이들의 기능적 절편들 및 변이체들)과 같은 적어도 하나의 결합 분자, 적어도 하나의 면역접합체, 적어도 하나의 핵산 분자, 적어도 하나의 조성물, 적어도 하나의 약학적 조성물, 적어도 하나의 벡터, 적어도 하나의 숙주 또는 이들의 조합을 포함하는 키트들도 본 발명의 일 양태이다. 선택적으로는, 본 발명의 키트들의 상기-기재된 성분들은 적당한 용기들에 포장되고, 지시된 병들의 진단, 예방 및/또는 치료용으로 라벨링된다. 상기-기재된 성분들은 수용성, 바람직하게는 멸균된 용액으로 또는 동결건조된, 바람직하게는, 멸균된 재구성용 제형으로 단위 또는 복수 용량 용기들 내에 저장될 수 있다. 용기들은 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 물질들로부터 형성될 수 있으며, 멸균된 접근 포트를 가질 수 있다(예를 들면, 용기는 정맥 내 용액 백(bag) 또는 피하 주사 바늘에 의하여 관통될 수 있는 마개를 갖는 바이알일 수 있다). 키트는 약학적으로 허용 가능한 완충액을 포함하는 다른 용기들을 더 포함할 수 있다. 이는 다른 완충액들, 희석제들, 필터들, 바늘들, 주사기들, 하나 이상의 적당한 숙주용의 배양 배지 및 가능하게는, 심지어 적어도 하나의 다른 치료제, 예방제 또는 진단제를 포함하는, 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질들을 더 포함할 수 있다. 예를 들면, 치료, 예방 또는 진단 제품들의 용도에 관하여 표시, 취급, 용량, 제작, 투여, 금기 및/또는 경고에 관한 정보를 함유하는 치료, 예방 또는 진단 제품들의 상업적 포장들에 관습적으로 포함된 지시사항들은 키트들과 연관될 수 있다.
본 발명에 따른 결합 분자들은 인플루엔자 바이러스 검출용의 시험관 내 방법에서 진단제로서 유리하게 이용될 수도 있다. 따라서, 본 발명은 하기 단계들을 포함하는, 표본 내에서 인플루엔자 B 아형 인플루엔자 바이러스의 검출 방법에 관한 것이기도 하다
(a) 본 발명에 따른 결합 분자 및/또는 본 발명에 따른 면역접합체를 이용하는 생물학적 표본 내에서 인플루엔자 B 바이러스 항원의 수준을 검정하는 단계; 및
(b) 인플루엔자 B 바이러스 항원의 검정된 수준을 대조군 수준과 비교함으로써, 인플루엔자 B 바이러스 항원의 대조군 수준과 비교하여 인플루엔자 B 바이러스 항원의 검증된 수준의 증가는 인플루엔자 B 바이러스 감염을 나타내는 것인 단계.
생물학적 표본은 (잠재적으로) 감염된 피검자들로부터의 혈액, 혈청, 변, 객담, 비인강액(nasopharyngal aspirates), 기관지 세척액(bronchial lavages), 소변, 조직 또는 다른 생물학적 물질을 포함하지만 여기에 한정되지 않는 생물학적 표본, 또는 물, 드링크 등과 같은 비-생물학적 표본일 수 있다. (잠재적으로) 감염된 피검자들은 인간 피검자들일 수 있지만, 본 발명의 인간 결합 분자들 또는 면역접합체들을 이용하여 바이러스의 존재에 대해 인플루엔자 바이러스의 보균자들로서 의심되는 동물들을 시험할 수도 있다. 표본은 우선 조작되어 검출 방법에 더욱 적합해질 수 있다. 조작은 특히, 바이러스가 단백질들, (폴리)펩티드들 또는 다른 항원성 절편들과 같은 항원성 성분들로 붕해하도록 바이러스를 함유하고 있다고 의심되고/되거나 바이러스를 함유하는 표본을 처리하는 것을 의미한다. 바람직하게는, 본 발명의 인간 결합 분자들 또는 면역접합체들은 인간 결합 분자들 및 표본 내에서 존재할 수 있는 바이러스 또는 이들의 항원성 성분들 사이의 면역학적 복합체가 형성되도록 하는 조건에서 표본과 접촉된다. 만약 존재한다면 표본 내에서 바이러스의 존재를 나타내는 면역학적 복합체의 형성은 적당한 수단에 의하여 이후 검출되고 측정된다. 그러한 방법들은 특히, 방사선-면역검정(RIA), ELISA, 면역형광법, 면역조직화학, FACS, BIACORE 및 웨스턴 블롯 분석들과 같은 동종 및 이종 결합 면역검정법들을 포함한다.
특히, 환자 혈청 및 혈액 및 혈액-유래 생성물들의 대규모 임상 선별을 위한 바람직한 검정 기법들은 ELISA 및 웨스턴 블롯 기법들이다. ELISA 시험들은 특히 바람직하다. 이 검정법들에서 시약들로서의 용도를 위해, 본 발명의 결합 분자들 또는 면역접합체들은 마이크로타이터 웰들의 내부 표면에 간편하게 결합된다. 본 발명의 결합 분자들 또는 면역접합체들은 마이크로타이터 웰에 직접 결합될 수 있다. 그러나, 본 발명의 결합 분자들 또는 면역접합체들의 웰들에의 최대 결합은 본 발명의 결합 분자들 또는 면역접합체들의 첨가 이전에 웰들을 폴리라이신으로 사전 처리함으로써 달성될 수 있다. 또한, 본 발명의 결합 분자들 또는 면역접합체들은 알려진 수단에 의하여 웰들에 공유적으로 부착될 수 있다. 일반적으로, 결합 분자들 또는 면역접합체들은 비록 더 적은 양뿐만 아니라 더 많은 양도 이용될 수 있다고 하더라도, 코팅용으로 0.01 내지 100 ㎍/㎖ 사이의 농도로 이용된다. 표본들은 이후 본 발명의 결합 분자들 또는 면역접합체들로 코팅된 웰들에 첨가된다.
본 발명은 본 발명의 결합 분자들, 면역접합체들 및/또는 약학적 조성물들의 치료적 또는 예방적 유효량을 피검자에게 투여하는 단계를 포함하는, 피검자에게서 인플루엔자 B 바이러스 감염을 치료하거나 방지하는 방법들을 더 제공한다. 특정한 실시형태들에 있어서, 피검자는 포유류, 바람직하게는 인간이다.
또한, 본 발명의 결합 분자들은 인플루엔자 바이러스의 특이적인 결합 구조들을 확인하기 위해 이용될 수 있다. 결합 구조들은 단백질들 및/또는 폴리펩티드들 상의 에피토프들일 수 있다. 이들은 선형일 수 있지만, 구조 및/또는 배좌일 수 있다. 일 실시형태에 있어서, 결합 구조들은 PEPSCAN 분석에 의하여 분석될 수 있다(특히, WO 84/03564, WO 93/09872, Slootstra 등, 1996 참조). 대안적으로, 인플루엔자 바이러스의 단백질로부터의 펩티드들을 포함하는 무작위 펩티드 라이브러리는 본 발명의 결합 분자들에 결합할 수 있는 펩티드들의 존재 여부에 대해 선별될 수 있다.
본 발명은 하기 실시예들 및 도면들에서 더 예시된다. 실시예들은 결코 본 발명의 범위를 제한하고자 하는 것은 아니다.
실시예
실시예 1
메모리 B 세포들로부터 추출된 RNA를 이용한 scFv 파지 디스플레이 라이브러리들의 구축
말초 혈액은 EDTA 항-응집 표본 튜브들에서 정맥 천자에 의하여 정상적인 건강한 공여자들로부터 수집되었다. 단쇄 Fv(scFv) 파지 디스플레이 라이브러리들은 본원에 참고로 포함되어 있는 WO 2008/028946에 기재된 바와 같이 얻었다. 최종 라이브러리는 삽입된 VH-VL 영역들(100 내지 150 개의 단일 콜로니들)을 플랭킹하는 프라이머 세트를 이용하는 콜로니 PCR로 삽입 횟수에 대해 점검하였다. 통상적으로, 콜로니들 중 95%를 초과하는 것들이 정확한 길이 삽입을 보였다(표 1 참조). 서열 변화를 확인하고 완전한 ORF를 보이는 콜로니들의 백분율을 평가하는 이후의 DNA 서열 분석을 위해 콜로니 PCR 제품들이 이용되었다. 이는 통상적으로 70%를 초과하였다(표 1 참조). V 유전자들에서 돌연변이의 횟수도 분석되었다. 서열들 중 약 95%는 성숙 과정을 나타내고 라이브러리에 대한 RNA 원천으로 이용된 B 세포들의 메모리 표현형과 일치하는 생식 계통 구조에 있지 않았다.
WO 2008/028946에 나타난 프라이머 세트들을 이용한 2-라운드 PCR 증폭 접근법을 적용하여 각각의 공여자 레퍼토리로부터 면역글로불린 VH 및 VL 영역들을 단리하였다.
각각의 cDNA 상에서의 제1 라운드 증폭으로 인하여 VH, V카파 및 V람다 영역들 각각에 대한 약 650 개의 염기쌍들의 일곱, 여섯 및 아홉 개의 생성물들이 산출되었다. IgM 메모리 B 세포 VH 영역 증폭을 위해, OCM 불변 프라이머(IgM 불변 중쇄 특이적)가 OH1 내지 OH7과 조합되어 이용되었다. 제1 라운드 증폭들을 위한 열적 사이클링 프로그램은 다음과 같다: 2분 96℃(변성 단계), 30초 96℃/30초 60℃/50초 72℃의 35 사이클, 10분 72℃ 최종 신장 및 6℃ 냉장. 생성물들은 젤-추출 칼럼들(Macherey-Nagel, 미네소타)을 이용한 1% 아가로스 젤 상에 적재되고 이로부터 단리되었으며, 50 ㎕ 5 mM Tris-HCl pH 8.0에서 용출되었다. 제1 라운드 생성물들(5 ㎕)의 10 퍼센트는 제2 라운드 증폭을 거쳤다. 이 프라이머들은 각각의 VL 및 VH 영역들의 방향성 클로닝을 가능하게 하는 제한 부위들로 파지 디스플레이 벡터 PDV-C06까지 연장되었다. 제2 라운드 증폭들에 대한 PCR 프로그램은 다음과 같다: 2분 96℃(변성 단계), 30초 96℃/30초 60℃/50초 72℃의 30 사이클, 10분 72℃ 최종 신장 및 6℃ 냉장. 제2 라운드 생성물들(약 350 염기쌍들)은 우선 젤 상에 적재되었으며, 상기와 같이 아가로스로부터 추출되었다. 이후, 절편들은 면역글로불린 유전자 생성물들에서 발견되는 J 세그먼트들의 자연적 발생에 따라 혼주되어, 표 1 및 2에 나타난 바와 같이 VH, V카파 및 V람다 가변성 영역들 각각에 대해 일곱, 여섯 및 아홉 개의 혼주들을 생성하였다.
면역 라이브리에서 면역글로불린 서열들의 정규화된 분포를 얻기 위하여, 여섯 개 V카파 및 아홉 개 V람다 경쇄 혼주들이 표 1에 언급된 백분율들에 따라 혼합되었다. 이 단일 최종 VL 혼주(5 ㎍)는 Sa1I 및 NotI 제한 효소들로 소화되었고, MN-추출 칼럼들을 이용한 1.5% 아가로스 젤 상에 적재되고 이로부터 단리었으며(약 350 염기쌍들), SalI-NotI 절단 PDV-C06 벡터(약 5000 염기쌍들)에서 다음과 같이 결찰되었다: 500 ng PDV-C06 벡터, 70 ng VL 삽입물, 5 ㎕ 10X 결찰 완충액(NEB), 2.5 T4 DNA 라이게이즈(400 U/㎕) (NEB), 및 초순수 물이 최대 50 ㎕의 총부피로 첨가되었다(벡터 대 삽입물 비는 1:2였다). 결찰은 16℃의 수조에서 하룻밤 동안 수행되었다. 다음으로, 부피는 물로 두 배가 되었고, 동일 부피의 페놀-클로로포름-이소아밀알코올(75:24:1)(Invitrogen)로 추출되었고, 이후 클로로포름(Merck) 추출하고 -20℃에서 2 시간 동안 1 ㎕ 펠릿 페인트(Novogen), 10 ㎕ 초산 나트륨(3 M pH 5.0) 및 100 ㎕ 이소프로판올로 침전시켰다. 얻어진 표본은 이어서 4℃에서 30분 동안 20.000xg로 원심분리되었다. 얻어진 침전물은 70% 에탄올로 세척되고 실온에서 10분 동안 20.000xg로 원심분리되었다. 에탄올이 제거되고 펠릿은 수 분 동안 공기 건조되었으며, 이후 10 mM Tris-HCl, pH 8.0을 함유하는 50 ㎕ 완충액에 용해되었다. 1.7 kV, 200 Ohm, 25 μF로 설정된 Genepulser II 장치(Biorad)를 이용한 냉각된 0.1 ㎝ 전기 천공 큐벳(Biorad)에서 40 ㎕ TG-1 전기천공적격(electrocompetent) 세포들(Agilent)의 형질전환을 위해 2 ㎕ 결찰 혼합물이 이용되었다(시간 상수 약 4.5 msec). 펄스 이후 곧바로, 박테리아는 37℃에서 5%(w/v) 글루코오스(Sigma)를 함유하는 750 ㎕ SOC 배지(Invitrogen)로 큐벳으로부터 씻어 내렸으며, 15 ㎖ 둥근 바닥 배양 튜브로 옮겼다. 다른 750 ㎕ SOC/글루코오스가 이용되어 잔류 박테리아를 큐벳으로부터 씻어 내렸으며, 배양 튜브에 첨가되었다. 박테리아는 220 rpm의 진탕 배양기 내에서 37℃에서 정확히 1 시간 동안 배양함으로써 회수되었다. 형질전환된 박테리아는 50 ㎍/㎖ 암피실린 및 5%(w/v) 글루코오스(Sigma)로 보충된 200 ㎖ 2TY 한천(16 g/l 박토-트립톤, 10 g/l 박토-효모 추출물, 5 g/l NaCl, 15 g/l 한천, pH 7.0)을 함유하는 대형 240 ㎜ 정사각형 페트리디쉬들(NUNC) 상에 도말되었다. 1 대 1000 및 1 대 10.000 희석물은 동일한 배지를 함유하는 15 ㎝ 페트리디쉬들 상에 계수 목적으로 도말되었다. 이 형질전환 절차는 순차적으로 20회 반복되었으며, 완전한 라이브러리는 총 10 개의 대형 정사각형 페트리디쉬들 상에 도말되었으며, 37℃ 배양 스토브 내에서 하룻 밤 동안 성장되었다. 통상적으로, 상기 프로토콜을 이용하여 대략 1x107 cfu가 획득되었다. 중간체 VL 경쇄 라이브러리는 박테리아를 플레이트 당 12 ㎖ 2TY 배지로 살짝 긁어내어 플레이트들로부터 수거되었다. 세포 질량은 OD600 측정에 의하여 측정되었으며, 제작자 지시사항에 따라 2 개의 맥시프렙(maxiprep) 칼럼들(MN)을 이용하는 맥시 플라스미드 DNA 제제용으로 박테리아의 500 OD가 2 회 이용되었다.
VL 가변성 영역들에 유사하게, 제2 라운드 VH-JH 생성물들이 우선 함께 혼합되어 정규 J 세그먼트 활용 분포(표 2 참조)를 얻게 되었으며, PH1 내지 PH7이라고 하는 7 개 VH 서브혼주들이 생성되었다. 혼주들은 혼합되어 표 2에 나타낸 백분율들을 이용한 정규화된 서열 분포를 획득하여, SfiI 및 XhoI 제한 효소들로 소화되고, 상기 기재된 바와 같이 얻어진 SfiI-XhoI 절단 PDV-VL 중간체 라이브러리 내에서 결찰된 하나의 VH 분획을 얻게 되었다. 결찰 셋업, 정제 방법, 이후 TG1의 형질전환 및 박테리아의 수거는 이용된 240 ㎜ 플레이트들의 수를 제외하고는 VL 중간체 라이브러리에 대하여 기재된 바와 정확히 같다(상기 참조). 최종 라이브러리를 위해, 20 개의 플레이트들이 이용되었으며, 대략 2x107 cfu가 생성되었다. 최종 라이브러리는 삽입된 VH-VL 영역들(100 내지 150 개의 단일 콜로니들)을 플랭킹하는 프라이머 세트를 이용하는 콜로니 PCR로 삽입 횟수를 확인하였다. 통상적으로, 콜로니들 중 95%를 초과하는 것들이 정확한 길이 삽입을 보였다(표 3 참조). 서열 변화를 확인하고 완전한 ORF를 보이는 콜로니들의 백분율을 평가하는 이후의 DNA 서열 분석을 위해 콜로니 PCR 제품들이 이용되었다. 이는 통상적으로 70%를 초과하였다(표 3 참조). V 유전자들의 돌연변이의 횟수도 분석되었다. 서열들 중 약 95%는 성숙 과정을 나타내고 라이브러리에 대한 RNA 원천으로 이용된 B 세포들의 메모리 표현형과 일치하는 생식 계통 구조에 있지 않았다. 최종적으로, 라이브러리는 검색되었고, CT 헬퍼 파지들을 이용함으로써 증폭되었으며(WO 02/103012 참조), 하기에 기재된 바와 같이 패닝 방법들에 의하여 파지 항체 선택을 위해 이용되었다.
실시예 2
인플루엔자 B에 대항하는 단쇄 Fv 절편들을 보유하는 파지들의 선택
인플루엔자 B(B/오하이오/01/2005, B/플로리다/04/2006 및 B/브리스베인/60/2008)의 재조합 헤마글루티닌(HA)에 대항하는 항체 파지 디스플레이 라이브러리들을 이용하여 선택이 수행되었다. HA 항원들은 PBS(5.0 ㎍/㎖)에서 희석되었고, MaxiSorpTM Nunc-Immuno 튜브들(Nunc)에 튜브당 2 ㎖ 첨가되었으며, 회전하는 휠 상에서 4℃에서 하룻밤 배양되었다. 면역튜브들이 비워졌으며, 블록 완충액(PBS에서의 2% 무지방 건조 우유(ELK))로 3 회 세척되었다. 이어서, 면역튜브들은 블록 완충액으로 완전히 충진되었고, 실온에서 1 내지 2 시간 동안 배양되었다. 파지 디스플레이 라이브러리(350 내지 500 ㎕, CT 헬퍼 파지를 이용하여 증폭됨(WO 02/103012 참조))의 분취량들은 실온에서 1 내지 2 시간 동안 차단 완충액(선택적으로는: 10% 비-열 비활성화된 우태 혈청 및 2% 마우스 혈청으로 보충됨)에서 차단되었다. 차단된 파지 라이브러리는 면역튜브들에 첨가되고, 실온에서 2 시간 동안 배양되었으며, 세척 완충액(PBS에서 0.05%(v/v) Tween-20)으로 세척되어 미결합 파지들을 제거하였다. 결합된 파지들은 실온에서 10 분 동안 100 mM 트리에틸아민(TEA) 1 ㎖로 배양함으로써 각각의 항원으로부터 용출되었다. 이어서, 용출된 파지들은 1 M Tris-HCl pH 7.5의 0.5 ㎖와 혼합되어 pH를 중화하였다. 이 혼합물은 37℃에서 성장된 XL1-청색 대장균 배양물 5 ㎖를 대략 0.3의 OD 600 ㎚로 감염시키는데 이용되었다. 파지들은 37℃에서 30분 동안 XL1-청색 박테리아를 감염시키도록 하였다. 이후, 혼합물은 실온에서 10분 동안 3000xg로 원심분리되었으며, 박테리아 펠릿은 0.5 ㎖ 2-트립톤 효모 추출물(2TY) 배지에서 재현탁되었다. 얻어진 박테리아 현탁액은 테트라시클린, 암피실린 및 글루코오스로 보충된 2개의 2TY 한천 플레이트들 상에 나눠졌다. 37℃에서 하룻밤 플레이트들을 배양한 이후에, 플레이트들로부터 콜로니들이 긁어졌고, 본질적으로는 De Kruif 등(1995a)에 의해서 그리고 WO 02/103012에 기재된 바와 같이, 농축된 파지 라이브러리를 제조하는데 이용되었다. 요약하면, 긁혀진 박테리아는 암피실린, 테트라시클린 및 글루코오스를 함유하며 37℃에서 성장된 2TY 배지를 약 0.3의 OD 600 ㎚으로 접종하는데 이용되었다. CT 헬퍼 파지들이 첨가되고 박테리아를 감염시키도록 한 이후에 배지는 암피실린, 테트라시클린 및 카나마이신을 함유하는 2TY로 변화되었다. 배양은 30℃에서 하룻밤 동안 계속되었다. 다음날, 박테리아는 원심분리에 의하여 2TY 배지로부터 제거된 이후에 배지 내에서 파지들이 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 6000/NaCl을 이용하여 침전되었다. 최종적으로, 파지들은 1% 우 혈청 알부민(BSA)로 보충된 PBS 2 ㎖에 용해되었고, 필터-멸균되었으며, 다음 라운드의 선택을 위해 이용되었다. 제2 선택 라운드는 동일한 HA 아형 또는 상이한 아형의 HA 상 중 어느 하나에 대하여 수행되었다.
개별 단쇄 파지 항체들의 단리 이전에 2 번의 연속적인 선택 라운드들이 수행되었다. 제2 선택 라운드 이후에, 개별 대장균 콜로니들은 단일클론 파지 항체들을 제조하는데 이용되었다. 본질적으로, 개별 콜로니들은 96-웰 플레이트 포맷에서 로그-페이즈로 성장되었고, VCS-M13 헬퍼 파지들로 감염되었으며, 이후 파지 항체 생성은 하룻밤 동안 진행하도록 하였다. 파지 항체들을 함유하는 상청액들은 HA 항원들로의 결합 여부를 위해 ELISA에서 직접 이용되었다. 대안적으로, 파지 항체들은 PEG/NaCl-침전되었고, ELISA 및 유동 세포계측 분석(ELISA에서 양성인 클론들에서 통상적으로 수행됨)을 위해 필터-멸균되었다.
실시예 3
HA 특이적 단쇄 파지 항체들의 실증
상기 기재된 선별들에서 얻은 단쇄 파지 항체들을 함유하는 선택된 상층액들은 ELISA에서 특이성, 즉, 상이한 HA 항원들에의 결합 여부에 대해 실증되었다. 이 목적을 위하여, 바큘로바이러스-발현된 재조합 인플루엔자 B HA(B/오하이오/01/2005, B/말레이시아/2506/2004, B/질린/20/2003, B/브리스베인/60/2008 및 B/플로리다/04/2006)(Protein Sciences, CT, 미국)는 (0.5 ㎍/㎖)로 MaxisorpTM ELISA 플레이트들에 코팅되었다. 코팅한 이후에, 플레이트들은 0.1% v/v Tween-20을 함유하는 PBS로 3회 세척되고, 실온에서 1 시간 동안 2% ELK를 함유하는 PBS 내에서 차단되었다. 선택된 단쇄 파지 항체들은 4% ELK를 함유하는 동일 부피의 PBS 내에서 1 시간 배양되어 차단된 파지 항체들을 얻었다. 플레이트들은 비워졌고, PBS/0.1% Tween-20으로 3 회 세척되었으며, 차단된 단쇄 파지 항체들은 웰들에 첨가되었다. 1 시간 동안 배양이 진행되도록 하였고; 플레이트들은 PBS/0.1% Tween-20으로 5 회 세척되었다. 퍼옥시다아제에 접합된 항-M13 항체를 이용하여 (OD 492 ㎚ 측정을 이용하여) 결합된 파지 항체들이 검출되었다. 대조군으로서, 단쇄 파지 항체를 사용하지 않고, 무관한(unrelated) 음성 대조 단쇄 파지 항체를 사용하는 절차가 동시에 수행되었다.
면역 라이브러리들이 있는 상이한 HA 항원들에 대한 선택으로부터, 야마가타-유사 및 빅토리아-유사 인플루엔자 B HA 양쪽 모두에 대하여 특이적인 14 개의 독특한 단쇄 파지 항체들이 획득되었다(sc08-031, sc08-032, sc08-033, sc08-034, sc08-035, sc08-059, sc10-023, sc10-032, sc10-049, sc10-051, sc11-035, sc11-036, sc11-038 및 sc11-039). 표 4 참조.
이 14 개의 파지 항체들은 추가로 특성화를 위해 완전한 인간 면역글로불린들의 구축을 위해 이용되었다(실시예 4 참조).
실시예 4
선택된 단쇄 Fv들로부터 완전한 인간 면역글로불린 분자들(인간 단일클론 항체들)의 구축
선택된 특이적인 단쇄 파지 항체(scFv) 클론들로부터, 플라스미드 DNA가 획득되었고 표준 서열분석 기법들을 이용하여 뉴클레오티드 서열들이 결정되었다. scFv들의 VH 및 VL 유전자 동일성은 IMGT/V-QUEST 검색 페이지(Brochet 등(2008))를 이용하여 결정되었다(표 5 참조).
scFv들의 중쇄 가변성 영역(VH)은 동일한 효소들로 소화된, IgG 발현 벡터 pIg-C911-HC감마1 내에서 발현을 위한 제한 소화(SfiI/XhoI)에 의하여 클로닝되었다. 경쇄 가변성 영역(VL)도 WO 2008/028946에서 이전에 기재된 바와 같이, 삽입 절편용으로 SalI/NotI 및 표적 벡터용으로 XhoI/NotI을 이용하여 IgG 지정된 발현 벡터 pIG-C909-C카파 또는 pIg-C910-C람다로 클로닝되었다.
항체들 중 하나(CR8059)에서 잠재적인 탈-아미드화 부위를 제거하기 위하여, 단일 아미노산 돌연변이 항체(CR8071)는 결합체 PCR에 의하여 발생되었다. 원하는 돌연변이를 각각 함유한 2 개의 중첩하는 PCR 절편들이 생성되었다. 이러한 절편들은 동일몰 비율들로 혼합되었고, 제2 라운드 PCR에서 주형으로 작용하여 전장 LC 서열을 획득하였다. 모든 구조체들에 대한 뉴클레오티드 서열들은 표준 서열분석 기법들을 이용하여 실증되었다. 인간 IgG1 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 얻어진 발현 구조체들은 HEK293T 세포들에서 일시적으로 함께 발현되었다. 일 주일 뒤에, 인간 IgG1 항체들을 함유하는 상층액들이 획득되고 표준 정제 절차들을 이용하여 가공되었다. 인간 IgG1 항체들은 인플루엔자 B HA 항원에 대하여 10 내지 0.003 ㎍/㎖의 농도 범위에서 적정되었다(데이터 미도시). 무관한 항체는 대조군 항체로 포함되었다.
선택된 면역글로불린 분자들의 중쇄 및 경쇄 양쪽 모두의 CDR들의 아미노산 서열은 표 5에 주어져 있다. 중쇄 및 경쇄 가변성 영역들의 뉴클레오티드 서열 및 아미노산 서열은 아래에 주어져 있다.
실시예 5
항-인플루엔자 B IgG들의 교차-결합 반응성
선택된 항-인플루엔자 B 항체들은 FACS 분석에 의하여 결합의 폭을 시험하는데 이용되었다. 이 목적을 위하여, HA를 코딩하는 전장 재조합 인플루엔자 B 발현 벡터들(B/미시시피/04/2008, B/휴스톤/B60/1997, B/내쉬빌/45/1991, B/플로리다/01/2009, B/미시시피/07/2008 및 B/오하이오/01/2005)은 1 대 5의 비율로 리포펙타민(Invitrogen)을 이용하여 PER.C6
Figure 112014087542364-pct00004
세포들로 형질감염되었다. 형질감염한 지 48시간 후에, 표면 상에 인플루엔자 B HA를 발현하는 PER.C6
Figure 112014087542364-pct00005
세포들은 FACS(CantoII, BD bioscience)에 의하여 분석되었다. 이에 세포들은 IgG 항체들로 1 시간 동안 배양되었고, 이후 0.1% BSA를 함유하는 PBS로 3 회 순차로 세척하였다. 결합된 항체들은 또한 1 시간 동안 배양된 PE-접합된 2차 항-인간 항체를 이용하여 검출되었다. 음성 대조군으로서, 형질감염되지 않은 PER.C6
Figure 112014087542364-pct00006
세포들이 이용되었고 제2 항체로 배양되었다. FACS 결과들은 인플루엔자 B 결합 항체들 CR8033, CR8059, CR8071, CR10032 및 CR10051이 6 개의 모든 시험된 인플루엔자 B HA들에 결합하는 것으로 나타난 것을 보여주었다(표 6).
실시예 6
교차-반응성 항-인플루엔자 B IgG들의 HA에의 결합을 위한 경쟁
상기 기재된 항-인플루엔자 B IgG 항체들은 인플루엔자 B HA 상의 에피토프들에 대한 경쟁에 대하여 입증되었다. 이에, B/브리스베인/60/2008, B/플로리다/04/2006 및 B/질린/20/2003은 EZ-링크 술포(link Sulpho)-NHS-LC-LC-비오틴 키트(Pierce)를 이용하여 비오틴으로 라벨링되었다. 10 mM 비오틴 용액 1 ㎕은 비오틴의 6 배 몰 과량인 재조합 HA의 110 ㎍에 첨가되었고, 실온에서 30 내지 40 분 동안 배양되었다. Amicon Ultra 원심분리 필터(0.5 ㎖, 10 K 울트라셀-10K 막; 밀리포어(Millipore), cat#: UFC501096)를 이용하여 자유로운 비병합된 비오틴(free unincorporated biotin) 비오틴이 제거되었다. 이에 표본(300 ㎕)은 칼럼 상에 적재되고, 에펜도르프(Eppendorf) 탁상용 원심분리기(20800 rcf) 내에서 14000 RPM으로 10 분 동안 회전되었다. 유동 트러프(trough)는 폐기되었고, 0.4 ㎖ DPBS 완충액은 칼럼 상에 적재되고 다시 회전되었다. 이 단계는 2 회 반복되었다. 라벨링된 표본은 칼럼을 새 수집기(collector) 튜브로 거꾸로 돌려 놓음으로써 수거되고; 이후 200 ㎕ DPBS는 탁상용 원심분리기에 적재되고 1000 rpm으로 1 분 동안 회전되었다. HA 농도는 나노드랍(Nanodrop) ND-1000 장치(Thermo Scientific)을 이용하여 측정되었다.
실제 경쟁 실험은 실온에서 동적 완충액에 30 분 동안 사전에 습윤된 스트렙타비딘-코팅된 바이오센서들(ForteBio, cat# 18-5019)를 이용하여, 표 7에 있는 셋팅들에 따라 Octet-QK 바이오-층 간섭법 장치(ForteBio)에 대하여 수행되었다. 제2 항체가 제1 항체의 존재 하에 인플루엔자 B HA와 결합할 수 있는 경우, 이는 비-경쟁적인 것으로 간주되었다(표 8 참조). (공동-계류중인 출원 EP11173953.8에 기재된 바와 같은) 줄기-결합 항체 CR9114 및 (WO2010/130636에 기재된 바와 같은) 비-결합 항체 CR8057이 대조군들로서 이용되었다.
CR10023 및 CR10049 항체들은 CR8033와 결합하기 위해 경쟁한다. CR10032 및 CR10051 항체들은 CR8059와의 결합을 위해 경쟁한다. CR10049 항체는 CR10032와의 결합을 위해 경쟁한다. 시험된 항체들 중 어느 것도 줄기-결합 항체 CR9114와 경쟁하지 않는다. 이 결과들은 인플루엔자 B HA 상에 적어도 3 내지 4 개의 상이한 에피토프들의 존재를 시사한다(도 1).
실시예 7
IgG들의 교차-중화 활성
선택된 IgG들이 다중 인플루엔자 B 균주들을 차단할 수 있었는지 여부를 결정하기 위하여, 시험관 내 바이러스 중화 검정법(VNA)이 수행되었다. MDCK 세포 배양 배지(10%(v/v) 우태 혈청으로 보충된 20 mM Hepes 및 0.15%(w/v) 중탄산나트륨(완전한 MEM 배지)로 보충된 MEM 배지)에서 배양된 MDCK 세포들(ATCC CCL-34)에 대하여 VNA가 수행되었다. 검정법에 이용된 인플루엔자 B 야마가타-유사(B/하얼빈/7/1994 및 B/플로리다/04/2006) 및 빅토리아-유사(B/말레이시아/2506/2004 및 B/브리스베인/60/2008) 균주들은 Spearman 및 Karber의 방법에 따라 계산된 역가를 이용하여, 5.7 x 103 TCID50/㎖(㎖ 당 50% 조직 배양 감염성 용량)의 역가로 모두 희석되었다. IgG 제제들(100 ㎍/㎖)은 4 배의 웰들에서 완전한 MEM 배지 내에서 연속적으로 2-배 희석되었다(1:2 내지 1:512). 각각의 IgG 희석물 50 ㎕는 바이러스 현탁액(100 TCID50/35 ㎕) 50 ㎕와 혼합되었고, 37℃에서 1 시간 동안 배양되었다. 이후 현탁액은 100 ㎕ 완전 MEM 배지에서 컨플루언트(confluent) MDCK 배양물들을 함유한 96-엘 플레이트들에 4 배수씩 옮겨졌다. 사용하기 전에, MDCK 세포들은 MDCK 세포 배양 배지 내에서 웰당 2x104 세포들로 종자 살포되었고, 세포들이 컨플루언스에 도달할 때까지 성장되었고, 300 내지 350 ㎕ PBS, pH 7.4로 세척되었으며, 최종적으로 100 ㎕ 완전 MEM 배지는 각각의 웰에 첨가되었다. 접종된 세포들은 37℃에서 3 내지 4일 동안 배양되었으며, 세포병원성 효과(CPE)의 전개를 위해 매일 관찰되었다. CPE는 양성 대조군과 비교되었다.
CR8032, CR8033, CR8034, CR8035, CR8059, CR8071, CR10023, CR10032, CR10049, CR10051, CR11035, CR11036, CR11038 및 CR11039는 모두 야마가타 및 빅토리아-유사 인플루엔자 B 바이러스 균주들 양쪽 모두의 대표적인 균주들에 교차-중화 활성을 보였다. 표 9 참조.
실시예 8
IgG들의 수용체 결합 차단 활성
선택된 IgG들이 숙주 세포들에 인플루엔자 B 균주들의 수용체 매개 결합을 차단할 수 있는지의 여부를 결정하기 위하여, 헤마글루틴화 억제(HI) 검정법이 수행되었다. 인플루엔자 B 야마가타-유사(B/하얼빈/7/1994 및 B/플로리다/04/2006) 및 빅토리아-유사(B/말레이시아/2506/2004 및 B/브리스베인/60/2008) 바이러스 균주들은 HAU 검정법에서 측정된 바와 같이, 8 HA 유닛들로 희석되었으며, 연속적으로 희석된 동일 부피의 IgG로 조합되었으며 실온에서 1 시간 동안 배양되었다. 동일한 부피의 0.5% 터키 적혈 세포들(TRBC)이 웰들에 첨가되었고 배양은 30분 동안 지속되었다. 단추(button) 형성은 헤마글루틴화의 증거로서 채점되었다.
CR8059, CR8071, CR10032, CR10051 및 CR11036은 시험된 인플루엔자 B 바이러스 균주들 중 어느 것에도 HI 활성을 보이지 않았는데(CR11036에 대해 10 ㎍/㎖ 초과, 다른 항체들에 대해 50 ㎍/㎖ 초과), 이들은 수용체 결합을 차단하지 않는다는 것을 나타내는 것이다. CR8033 및 CR10023 항체들은 빅토리아-유사 인플루엔자 B 바이러스 균주들이 아닌, 야마가타-유사 인플루엔자 B 바이러스 균주의 대표적인 균주들에만 HI 활성을 보인다. CR11035 항체는 야마가타-유사 인플루엔자 B 바이러스 균주들이 아닌, 빅토리아-유사 인플루엔자 B 바이러스 균주의 대표적인 균주에만 HI 활성을 보인다. CR10049, CR11038 및 CR11039 항체들은 야마가타 및 빅토리아-유사 인플루엔자 B 바이러스 균주들 양쪽 모두의 대표적인 균주들에 HI 활성을 보인다. 표 10 참조.
대안적으로, 면역형광 유입 검정법은 주어진 항체가 바이러스의 수용체 결합 및 내재화를 차단하는 능력을 분석하도록 설계되었다. 그러므로, 바이러스는 감염 배지(DMEM+200 mM 글루타민)에서 96-웰 접시에 2 내지 3 시간 동안 플레이트된 MDCK 세포들의 컨플루언트 단일층에 첨가되기 이전에 연속적인 2-배 희석 단계들로 항체와 사전 배양되었다. 이어서, 접종물은 제거되고 37℃, 5% CO2에서 16 내지 18 시간 동안 지시된 농도에서 항체로 교체되었다. 이 시간 이후에, 상청액들은 제거되었고, 마우스 단일클론 항-NP 일차 항체(산타 크루즈, sc-52027) 및 Alexa488-커플링된 항-마우스 이차 항체(Invitrogen A11017)를 이용하여 감염된 세포들을 라벨링하고 이후 세포 핵들을 DAPI 라벨링함으로써 이후의 면역형광 검출용으로 80% 아세톤에 플레이트들이 고정되었다(도 2a 참조). HI 검정법에서 보게되는 바와 같이, CR8033 항체는 빅토리아-유사 바이러스 B/말레이시아/2506/2004가 아닌 야마가타-유사 바이러스 B/플로리다/04/2006의 바이러스성 유입을 특이적으로 차단하였다. CR8059 항체는 시험된 인플루엔자 B 바이러스들의 유입을 차단하지 않았다. 이어서, 플레이트들의 일부가 BD Pathway 855 바이오이미저(bioimager)를 이용하여 분석되었다. 유입 억제의 수준을 평가하기 위해, (세포를 정의하는데 DAPI 균주를 이용하여) 감염된 세포들의 정의된 배경 및 양을 초과하는 주어진 웰 당 형광 세기들은 BD Pathway 이미징 분석 도구들을 이용하여 분석되었다. 비-결합 대조군 항체로 처리된 감염 세포들과 비교하여 항체의 지시된 희석물들로 처리된 감염 세포들의 백분율은 도 2b에 나타나 있다.
실시예 9
항-HA IgG들의 출현 억제
항체의 작용 메커니즘을 조사하기 위하여, 항체 처리 조건들 하에서 감염 18시간 후에 상청액에 방출된 바이러스 입자들의 양을 분석하기 위하여 출현 검정법이 설계되었다. 젤 전기영동 후 항-HA 신호의 검출(또는 부재) 이후 상청액들을 웨스턴 블롯하는 것은 방출된 바이러스 입자들의 존재(또는 부재)를 위한 지시로서 취해진 것이다.
실험 4시간 전에, 웰당 40,000 MDCK 세포들이 DMEM/글루타민에 살포되어 96-웰 플레이트들로 퍼졌다. 90 내지 100% 감염을 달성하는데 필요한 바이러스의 양은 개별 실험에서 적정되었다. 필요한 양의 바이러스가 세포들에 첨가되고 37℃, 5% CO2에서 배양되었다. 3 시간 후에, 상청액들은 제거되었으며, 세포들은 PBS로 3회 세척되어 비-내재화된 바이러스 입자들을 제거하였다. 세포들은 mAbs(20 ㎍/㎖에서 시작하는 연속 희석)를 함유하는 감염 배지로 보충되었다. 37℃, 5% CO2에서 16 내지 18 시간 후에, 상청액들은 수거되었고 잔류 세포들은 용해되었다(Tris HCl pH 7.5, 150 mM NaCl, 5 mM EDTA, 1% (v/v) Triton-X). 표본들은 토끼 폴리클론 항-HA 염색(Protein Sciences)를 이용하고, 이후 HRP-커플링된 항-토끼 F(ab')2-절편(Jackson Immuno Research Laboratories, 111-036-047)으로 웨스턴 블롯(WB)을 전개시킴으로써 측정된, 상청액으로 방출된 비리온들의 양을 분석하는 SDS-PAGE/웨스턴 블롯을 거쳤다. 도 3에 도시된 바와 같이, CR8033 및 CR8059 항체 양쪽 모두는 농도 의존적인 방식으로 바이러스성 입자들의 방출을 억제한다. 다른 실험들에 의하면 적어도 CR8071 및 CR10051도 바이러스 입자들의 방출을 억제하는 것을 보였다.
세포들의 적정한 감염은 동일하게-처리된 웰들을 80% 아세톤으로 고정함으로써 확인되었다. 감염의 양은 마우스 단일클론 항-NP 일차 항체(산타 크루즈, sc-52027) 및 Alexa488-커플링된 항-마우스 이차 항체(Invitrogen A11017)를 이용하여 면역형광 라벨링을 이용하여 평가되었다. 이어서, 플레이트들은 BD Pathway 855 바이오이미저를 이용하여 분석되었다(결과 미도시).
실시예 10
인플루엔자 B 감염 세포들의 주사 전자 현미경
MDCK 세포들은 실험 하루 전에 유리 커버슬립들 상에 살포되었다. 그 다음 날, 세포들은 감염 후 18 시간 후에 90 내지 100% 감염된 세포들을 산출하는 양을 결정하기 위해 상이한 양들의 바이러스로 감염되었다. 최초 감염 후 3 시간 후에, 상청액들은 제거되고; 지시된 농도의 항체들을 함유하는 배지들이 첨가되기 전에 세포들은 PBS로 3회 세척되었다. 추가로 15 내지 18 시간 이후에, 세포 배양 배지는 제거되었고, 세포들은 2.5% 글루타르알데히드 완충액에 고정되었으며, 더 분석할 때까지 4℃에서 저장되었다. 표본들은 글루타르알데히드(GA) 및/또는 오스뮴 테트록시드(OsO4)를 이용하여 추가로 화학적 고정화를 거쳤다. SEM 이미징 하기 이전에, 시편들은 아세톤 탈수 및 임계점-건조를 거쳤다. 최종적으로, 세포들은 알루미나 스터브들 상에 장착되었고, 탄소 박층으로 코팅되었으며, Zeiss Ultra 55 SEM 현미경에서 검사되었다.
인플루엔자 B 감염된 MDCK 세포들의 표면은 비감염 대조군들(도 4a)와 대조하여, 전자 밀집 구형 입자들(도 4b)로 덮인다. CR8059 항체로의 배양은 이러한 구형 입자들(도 4c)의 형성을 막지 않는 반면에, CR8033 항체로의 배양은 입자들(도 4d)의 형성을 대단히 감소시킨다. CR8059 배양된 세포들과 대조하여, 싹이 튼 비리온들은 CR8033 배양된 세포들 상에서 용이하게 검출될 수 없다(도 4e 및 4f).
실시예 11
생체 내 치명적 인플루엔자 B 공격에 대항한 인간 IgG 단일클론 항체들의 예방적 활성
생체 내 2 개의 인플루엔자 B 바이러스들의 치명적인 공격에 대항하여 단일클론 항체들인 CR8033 및 CR8071의 예방적 효과를 시험하기 위하여 연구가 수행되었다. 단일클론 항체들인 CR8033 및CR8071은 마우스 적응된 인플루엔자 B/플로리다/04/2006 바이러스를 이용한 마우스 치명적 공격 모델에서 예방적 효능에 대해 시험되었다. B/플로리다/04/2006 바이러스는 5 개 허파-대-허파 계대들 이후에 마우스들에 적응되었다. 마우스 적응된 인플루엔자 B 계대 5 바이러스는 부화된 달걀들 내에서 증식되었다. 모든 마우스들(Balb/c, 암컷, 연령 6 내지 8 주, 그룹당 n=8)은 실험 시작 전 적어도 4 일의 기간 동안 적응되고 유지되었다. 단일클론 항체들인 CR8033 및CR8071은 마우스 당 18 g의 평균 중량 및 0.2 ㎖의 고정 용량 부피를 가정하고, 공격 전 하루 전에 꼬리 정맥(미골 정맥)으로 0.06, 0.2, 0.6, 1.7 및 5 ㎎/㎏이 정맥 내 투여되었다. 대조군은 운반체 대조군이 투여된 것을 취하였다. 이후 마우스들은 비강내 접종에 의하여 0 일째에 25 LD50 마우스 적응된 B/플로리다/04/2006 인플루엔자 B 바이러스의 공격을 받았다. 도 5는 단일클론 항체 투여 이후에 마우스들의 생존률을 보여준다. CR8033에 대하여 0.2 ㎎/㎏ 및 CR8071에 대하여 0.6 ㎎/㎏만큼 낮은 투여량이 투여된 마우스들은 운반체 처리된 대조군 동물들에 비하여 현저히 더 높은 생존률을 보였다.
단일클론 항체들인 CR8033 및CR8071은 마우스 적응된 인플루엔자 B/말레이시아/2506/2504 바이러스를 이용한 마우스 치명적 공격 모델에서 예방적 효능에 대해 시험되었다. B/말레이시아/2506/2004 바이러스는 4 개 허파-대-허파 계대들 이후에 마우스들에 적응되었다. 마우스 적응된 인플루엔자 B 계대 4 바이러스는 부화된 달걀들 내에서 증식되었다. 모든 마우스들(Balb/c, 암컷, 연령 6 내지 8 주, 그룹당 n=8)은 실험 시작 전 적어도 4 일의 기간 동안 적응되고 유지되었다. 단일클론 항체들인 CR8033 및CR8071은 마우스 당 18 g의 평균 중량 및 0.2 ㎖의 고정 용량 부피를 가정하고, 공격 전 하루 전에 꼬리 정맥(미골 정맥)에 0.06, 0.2, 0.6, 1.7 및 5 ㎎/㎏이 정맥 내 투여되었다. 대조군은 운반체 대조군이 투여된 것을 취하였다. 이후, 마우스들은 경비 접종에 의하여 0 일째에 25 LD50 마우스 적응된 B/말레이시아/2506/2004 인플루엔자 B 바이러스의 공격을 받았다. 도 5는 단일클론 항체 투여 이후에 마우스들의 생존률을 보여준다. CR8033에 대하여 0.2 ㎎/㎏ 및 CR8071에 대하여 0.6 ㎎/㎏만큼 낮은 투여량이 투여된 마우스들은 운반체 처리된 대조군 동물들에 비하여 현저히 더 높은 생존률을 보였다.
이러한 결과들은 본원에 개시된 바와 같이 확인되고 전개된 인간 항-인플루엔자 항체들인 CR8033 및 CR8071은 각각 0.2 또는 0.6 ㎎/㎏ 이상의 투여량으로 감염되기 하루 전에 투여되는 경우, B/야마가타 및 B/빅토리아 계통들 양쪽 모두의 인플루엔자 B 바이러스들의 치사량에 대항하여 생체 내 보호를 제공할 수 있다는 것을 보여주고 있다.
제2 라운드 VL 영역들의 증폭 개요
주형 5'프라이머 3'프라이머 생성물 PK/PL 점유율(%)
혼주 VL 점유율(%)
OK1S OJK1 K1J1 25
OK1S OJK2 K1J2 25
K1 OK1S OJK3 K1J3 10 PK1 30
OK1S OJK4 K1J4 25
OK1S OJK5 K1J5 15
OK2S OJK1 K2J1 25
OK2S OJK2 K2J2 25
K2 OK2S OJK3 K2J3 10 PK2 4
OK2S OJK4 K2J4 25
OK2S OJK5 K2J5 15
OK3S OJK1 K3J1 25
OK3S OJK2 K3J2 25
K3 OK3S OJK3 K3J3 10 PK3 1
OK3S OJK4 K3J4 25
OK3S OJK5 K3J5 15
OK4S OJK1 K4J1 25
OK4S OJK2 K4J2 25
K4 OK4S OJK3 K4J3 10 PK4 19
OK4S OJK4 K4J4 25
OK4S OJK5 K4J5 15
OK5S OJK1 K5J1 25
OK5S OJK2 K5J2 25
K5 OK5S OJK3 K5J3 10 PK5 1
OK5S OJK4 K5J4 25
OK5S OJK5 K5J5 15
OK6S OJK1 K6J1 25
OK6S OJK2 K6J2 25
K6 OK6S OJK3 K6J3 10 PK6 5
OK6S OJK4 K6J4 25
OK6S OJK5 K6J5 15
OL1S OJL1 L1J1 30
L1 OL1S OJL2 L1J2 60 PL1 14
OL1S OJL3 L1J3 10
OL2S OJL1 L2J1 30
L2 OL2S OJL2 L2J2 60 PL2 10
OL2S OJL3 L2J3 10
OL3S OJL1 L3J1 30
L3 OL3S OJL2 L3J2 60 PL3 10
OL3S OJL3 L3J3 10
OL4S OJL1 L4J1 30
L4 OL4S OJL2 L4J2 60 PL4 1
OL4S OJL3 L4J3 10
OL5S OJL1 L5J1 30
L5 OL5S OJL2 L5J2 60 PL5 1
OL5S OJL3 L5J3 10
OL6S OJL1 L6J1 30
L6 OL6S OJL2 L6J2 60 PL6 1
OL6S OJL3 L6J3 10
OL7S OJL1 L7J1 30
L7 OL7S OJL2 L7J2 60 PL7 1
OL7S OJL3 L7J3 10
OL8S OJL1 L8J1 30
L8 OL8S OJL2 L8J2 60 PL8 1
OL8S OJL3 L8J3 10
OL9S OJL1 L9J1 30
L9 OL9S OJL2 L9J2 60 PL9 1
OL9S OJL3 L9J3 10
VL 100%
제2 라운드 VH 영역들의 증폭 개요
주형 5'프라이머 3'프라이머 생성물 PK/PL 점유율(%) 혼주 VH 점유율(%)
OH1S OJH1 H1J1 10
OH1S OJH2 H1J2 10
H1 OH1S OJH3 H1J3 60 PH1 25
OH1S OJH4 H1J4 20
OH2S OJH1 H2J1 10
OH2S OJH2 H2J2 10
H2 OH2S OJH3 H2J3 60 PH2 2
OH2S OJH4 H2J4 20
OH3S OJH1 H3J1 10
OH3S OJH2 H3J2 10
H3 OH3S OJH3 H3J3 60 PH3 25
OH3S OJH4 H3J4 20
OH4S OJH1 H4J1 10
OH4S OJH2 H4J2 10
H4 OH4S OJH3 H4J3 60 PH4 25
OH4S OJH4 H4J4 20
OH5S OJH1 H5J1 10
OH5S OJH2 H5J2 10
H5 OH5S OJH3 H5J3 60 PH5 2
OH5S OJH4 H5J4 20
OH6S OJH1 H6J1 10
OH6S OJH2 H6J2 10
H6 OH6S OJH3 H6J3 60 PH6 20
OH6S OJH4 H6J4 20
OH7S OJH1 H7J1 10
OH7S OJH2 H7J2 10
H7 OH7S OJH3 H7J3 60 PH7 1
OH7S OJH4 H7J4 20
VH 100%
개별 IgM 메모리 B 세포 라이브러리들의 특징
라이브러리 사용된 세포들 라이브러리 크기 완전 개방형 해독률
MEM-05-M08 1 공여자로부터 분류된 540.000 IgM 메모리 세포들 Fac들 5.9E+07
MEM-05-M09 1 공여자로부터 분류된 775.000 IgM 메모리 세포들 Fac들 2.35E+07
MEM-05-M10 1 공여자로부터 분류된 700,000 IgM 메모리 세포들 Fac들 1.7E+07
Flu-PBMC-09-M02 1 공여자로부터의 1E+07 총 PBMC＇들 1.0E+07 75%
Flu-Bcell-09-M03 1 공여자로부터의 280,000 Mac 분류된 B 세포들 2.0E+07 76%
Flu-MEM-09-M08 1 공여자로부터 분류된 800,000 IgM 메모리 세포들 Fac들 2.4E+07 85%
Flu-PBMC-10-M03 3 공여자들로부터 3E+07 총 PBMC＇들(공여자 당 1E+07 PBMC들) 2.8E+07 82%
Flu-PBMC-10-M04 3 공여자들로부터 3E+07 총 PBMC＇들(공여자 당 1E+07 PBMC들) 3.1E+07 87%
Flu-PBMC-10-M05 3 공여자들로부터 3E+07 총 PBMC＇들(공여자 당 1E+07 PBMC들) 3.3E+07 89%
Flu-PBMC-11-G01 4 공여자들로부터 4E+07 총 PBMC＇들(공여자 당 1E+07 PBMC들) >1E+07 82%
scFv-파지들의 재조합 인플루엔자 B HA와의 결합
야마가타 빅토리아
B/지린/20/03 B/플로리다/04/06 B/말레이시아/2506/04 B/오하이오/01/05 B/브리스베인/60/08
sc08-031 ++ nt ++ ++ nt
sc08-032 ++ nt ++ ++ nt
sc08-033 ++ ++ ++ +++ ++
sc08-034 ++ nt ++ ++ nt
sc08-035 ++ nt ++ ++ nt
sc08-059 ++ ++ ++ ++ ++
sc10-023 ++ ++ + ++ +
sc10-032 +++ +++ ++ +++ +++
sc10-049 +++ +++ +++ +++ +++
sc10-051 +++ +++ +++ +++ +++
sc11-035 nt +++ nt ++ ++
sc11-036 nt +++ nt +++ +++
sc11-038 nt ++ nt ++ +++
sc11-039 nt +++ nt ++ +++
+++ 강한 결합
++ 결합
+ 약한 결합
- 비결합
nt 미시험
표 5A : 선택된 항체들의 HC CDR들의 아미노산 서열들
CR # VH 좌위 CDR1-HC (SEQ ID NO) CDR2-HC(SEQ ID NO) CDR3-HC (SEQ ID NO)
CR8033 IGHV3-9*01 GFSFDEYT (1) INWKGNFM (2) AKDRLESSAMDILEGGTFDI (3)
CR8059 IGHV1-18*01 GYIFTESG (7) ISGYSGDT (8) ARDVQYSGSYLGAYYFDY (9)
CR8071 IGHV1-18*01 GYIFTESG (7) ISGYSGDT (8) ARDVQYSGSYLGAYYFDY (9)
CR10023 IGHV3-9*01 GFTFDDYA (14) INWVSTTM (15) AKDRLESAAIDILEGGTFDI (16)
CR10032 IGHV4-39*02 GGSINSSPYK (20) FYYDGST (21) AAYCSSISCHAYYDYMNV (22)
CR10049 IGHV3-23*04 GFTFSSYA (26) LSDESTT (27) AEDLGTVMDSYYYGMNV (28)
CR10051 IGHV1-46*01 GDTFTNYH (31) INPSGGDT (32) ATDESPGLLTGLRDYWYYYGMDV (33)
CR11024 IGHV1-2*02 GYSFTGYY (35) INPISGDT (36) ARVAGEDWFGDLDY (37)
CR11035 IGHV1-18*01 GYAFNGYG (40) INTYKVNT (41) ARDWGGPFGNAFDF (42)
CR11036 IGHV1-46*01 GYAFTSYY (45) MNLHGGST (46) ARESPDSSGYPGYYGMDV (47)
CR11038 IGHV1-46*01 GYAFTSYY (45) MNPHGGST (50) ARESPDSSGYPGYYGMDV (47)
CR11039 GHV1-18*01 GYAFTGYG (54) INTYKFNT (55) ARDWAGPFGNAFDV (56)
CR08031 IGHV3-9*01 GFTFDEYI (59) INWKGNFM (2) AKDRLESSAMDILEGGTFDI (3)
CR08032 IGHV3-9*01 GFSFDEYI (61) INWKGNFM (2) AKDRLESSAMDILEGGTFDI (3)
CR08034 IGHV3-9*01 GFTFDEYI (59) INWKGNFM (2) AKDRLESSAMDILEGGTFDI (3)
CR08035 IGHV3-9*01 GFTFDEYI (59) INWKGNFM (2) AKDRLESSAMDILEGGTFDI (3)
+++ 강한 결합
++ 결합
+ 약한 결합
- 비결합
nt 미시험
표 5B : 선택된 항체들의 LC CDR들의 아미노산 서열들
Figure 112014087542364-pct00007

정제된 IgG의 세포 발현된 인플루엔자 B HA와의 결합
야마가타 빅토리아
내쉬빌/45/91 미시시피/04/08 휴스턴/B0/97 미시시피/07/08 플로리다/01/09 오하이오/01/05
CR8031 ++ NT NT NT - NT
CR8032 +++ + NT ++ - NT
CR8033 ++ ++ ++ ++ ++ ++
CR8034 ++ NT NT NT - NT
CR8035 +++ + +++ + - ++
CR8059 +++ +++ +++ +++ +++ +++
CR8071 +++ +++ +++ +++ +++ +++
CR10023 +++ - +++ - - -
CR10032 +++ +++ +++ +++ +++ +++
CR10049 + - + - - +
CR10051 ++ ++ ++ ++ ++ ++
+++ 강한 결합
++ 결합
+ 약한 결합
- 비결합
플레이트 레이아웃 옥텟 경쟁 실험
단계
기준선 1 HA 적재 기준선 2 연관 제1 IgG(15 ug/ml) 연관/경쟁 제2 IgG(15 ug/ml)
지속시간
(초)		 60 1200 60 700 700
A 행 동적 완충액 비오틴 라벨링된 인플루엔자 B HA
10 ug/ml		 동적 완충액 CR8033 CR8033
2차 측정 CR8059 등
Row B CR8059
Row C CR10023
Row D CR10032
Row E CR10049
Row F CR10051
Row G CR9114*
Row I CR8057*
* 대조군 항체들(CR9114: 결합, CR8057 비결합)
인플루엔자 B HA에 대한 경쟁 실험
CR8033 CR8059 CR10023 CR10032 CR10049 CR10051 CR9114 CR8057
CR8033 X N Y N Y N N N
CR8059 N X N Y N Y N N
CR10023 Y N X Y Y N N N
CR10032 N Y Y X Y Y N N
CR10049 Y N Y N X N N N
CR10051 N Y N Y N X N N
CR9114 N N N N N N X N
CR8057 - - - - - - - -
Y: 경쟁; N: 비경쟁; X: 자기 경쟁; -: 비결합
인플루엔자 B 바이러스 균주들에 대한 바이러스 중화 검정법
VNA 야마가타 빅토리아
역가 ㎍/㎖ B/하얼빈/7/1994 B/플로리다/04/2006 B/말레이시아/2506/2004 B/브리스베인/60/2008
CR8031 1.24 0.88 >50* NT
CR8032 0.69 0.69 3.88* NT
CR8033 0.03 0.02 0.88* 5.95
CR8034 0.29 0.12 2.31* NT
CR8035 0.66 0.66 4.46* NT
CR8059 2.39 3.23 17.68* 4.55
CR8071 2.34 2.12 14.87* 3.72
CR10023 0.26 =0.55 12.5* 7.07
CR10032 12.5 21.02 53.03* 35.36
CR10049 4.42 1.3 25* 35.36
CR10051 0.28 0.63 1.77* 1.51
CR11035 0.16 =0.06 0.53* 0.93
CR11036 0.02 =0.06 0.22* =0.14
CR11038 0.05 =0.06 2.1* 0.55
CR11039 0.02 =0.06 0.06* =0.14
NT: 미시험
* 검정은 25TCID들로 수행되었다
인플루엔자 B 바이러스 균주들에 대한 헤마글루틴화 억제 검정
HI 야마가타 빅토리아
역가 ㎍/㎖ B/하얼빈/7/1994 B/플로리다/04/2006 B/말레이시아/2506/2004 B/브리스베인/60/2008
CR8033 0.39 0.22 >50 >50
CR8059 >50 >50 >50 >50
CR8071 >50 >50 >50 >50
CR10023 1.1 1.56 >50 >50
CR10032 >50 >50 >50 >50
CR10049 >50 1.1 4.42 35.36
CR10051 >50 >50 >50 >50
CR11035 NT >10 NT 0.26
CR11036 NT >10 NT >10
CR11038 NT 1.25 NT 0.31
CR11039 NT 0.63 NT 0.44
NT: 미시험
서열
>sc08-033 VH DNA(SEQ ID NO: 70)
gaggtgcagctggtggagactgggggaggcctggtacagcctggcaggtccctgagactgtcctgtgcagcctctggattcagctttgatgagtacaccatgcattgggtccggcaagctccagggaagggcctggagtgggtcgcaggtattaattggaaaggtaatttcatgggttatgcggactctgtccagggccgattcaccatctccagagacaacggcaagaactccctctatctgcaaatgaacagtctgagagctgaggacacggccttgtattactgtgcaaaagaccggctggagagttcagctatggacattctagaagggggtacttttgatatctggggccaagggacaatggtcacc
>sc08-033 VH 단백질(SEQ ID NO: 71)
EVQLVETGGGLVQPGRSLRLSCAASGFSFDEYTMHWVRQAPGKGLEWVAGINWKGNFMGYADSVQGRFTISRDNGKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDRLESSAMDILEGGTFDIWGQGTMVT
>sc08-033 VL DNA(SEQ ID NO: 72)
gaaattgtgttgacgcagtctccaggcaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctctcctgcagggccagtcagagtgttagcagcagctacttagcctggtaccagcagaaacctggccaggctcccaggctcctcatctatggtgcatccaccagggccactggtatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcactctcaccatcagcagactggagcctgaagatcttgcagtgtattactgtcagcagtatggtagctcaccgtggacgttcggccaagggaccaaggtggaaatcaaac
>sc08-033 VL PROTEIN (SEQ ID NO: 73)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDLAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK
>sc08-059 VH DNA(SEQ ID NO: 74)
gaggtccagctggtacagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgagggtctcctgcagggcctctggttacatctttaccgaatctggtatcacctgggtgcgccaggcccctggacaagggcttgagtggatgggatggatcagcggttacagtggtgacacaaaatatgcacagaaactccagggcagagtcaccatgaccaaagacacatccacgaccacagcctacatggaattgaggagcctgagatatgacgacacggccgtatattactgtgcgagagacgtccagtacagtgggagttatttgggcgcctactactttgactattggagcccgggaaccctggtcaccgtctcgagc
>sc08-059 VH 단백질(SEQ ID NO: 75)
EVQLVQSGAEVKKPGASVRVSCRASGYIFTESGITWVRQAPGQGLEWMGWISGYSGDTKYAQKLQGRVTMTKDTSTTTAYMELRSLRYDDTAVYYCARDVQYSGSYLGAYYFDYWSPGTLVTVSS
>sc08-059 VL DNA(SEQ ID NO: 76)
tcctatgtgctgactcagccaccctcagcgtctgggacccccgggcagagggtcaccatctcttgttctggaagcagctccaacatcggaactaattatgtatactggtaccagcagttcccaggaacggcccccaaactcctcatctataggagttatcagcggccctcaggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggctcctcagcctccctggccatcagtgggctccagtctgaggatgaggctgattattactgtgcaacatgggatgacagcctgaatggttgggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctag
>sc08-059 VL 단백질(SEQ ID NO: 77 SYVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGTNYVYWYQQFPGTAPKLLIYRSYQRPSGVPDRFSGSKSGSSASLAISGLQSEDEADYYCATWDDSLNGWVFGGGTKLTVL
>cr08071 vh 단백질(seq id no: 78
QVQLVQSGAEVKKPGASVRVSCRASGYIFTESGITWVRQAPGQGLEWMGWISGYSGDTKYAQKLQGRVTMTKDTSTTTAYMELRSLRYDDTAVYYCARDVQYSGSYLGAYYFDYWSPGTLVTVSS
>cr08071 vL 단백질(seq id no: 79)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGTNYVYWYQQFPGTAPKLLIYRSYQRPSGVPDRFSGSKSGSSASLAISGLQSEDEADYYCATWDDSL D GWVFGGGTKLTVLRK
>SC10-051 VH DNA(SEQ ID NO: 80)
gaggtccagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtagaactttcctgcaaggcatctggagacaccttcaccaactaccatatacactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggaataatcaatcctagtggtggtgacacagactactcacagaagttccagggcagagtcaccctgaccagggacaggtccacaaacacattctatatgaagttggccagcctgagatctgaggacacggccgtgtattactgtgcgacagatgagagtcccggacttttgactggccttcgggattactggtactactacggtatggacgtctggggccaggggaccacggtcaccgtctcgag
>SC10-051 VH 단백질(SEQ ID NO: 81)
EVQLVQSGAEVKKPGASVELSCKASGDTFTNYHIHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGDTDYSQKFQGRVTLTRDRSTNTFYMKLASLRSEDTAVYYCATDESPGLLTGLRDYWYYYGMDVWGQGTTVTVS
>SC10-051 Vl DNA(SEQ ID NO: 82)
gaaattgtgttgacgcagtctccaggcaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctctcctgcagggccagtcagagtgttagcagcagctacttagcctggtaccagcagaaacctggccaggctcccaggctcctcatctatggtgcatccagcagggccactggcatcccagacaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcactctcaccatcagcagactggagcctgaagattttgcagtgtattactgtcagcagtatggtagctcacctctgtgcagttttggccaggggaccaagctggagatcaaac
>SC10-051 VL 단백질(SEQ ID NO: 83)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLCSFGQGTKLEIK
>SC10-049 VH DNA(SEQ ID NO: 84)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtacagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcacctttagcagctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcacgtcttagtgatgaaagtaccacatactatgcagactccgtgaagggccgattcactatctccagagacaattccaagaacacactgtatctgcagatgaacagcctgaaagccgacgacacggccatatattactgtgcggaggatctggggacggtgatggactcctactactacggtatgaacgtctggggcccagggaccacggtcaccgtctcgag
> SC10-049 VH 단백질(SEQ ID NO: 85)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSRLSDESTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLKADDTAIYYCAEDLGTVMDSYYYGMNVWGPGTTVTVS
>SC10-049 Vl dna (SEQ ID NO: 86)
gatgttgtgatgactcagtctccactctccctgcccgtcacccctggagagccggcctccatctcctgcaggtctagtcagagcctcctgcatagtaatggactcaattatttggattggtacctgcagaagccagggcagtctccacagctcctgatctatttgggttctaatcgggcctccggggtccctgacaggttcagtggcagtggatcaggcacagattttacactgaaaatcagcagagtggaggctgaggatgttggggtttattactgcatgcaagctctacaaactcctttcactttcggcggagggaccaaggtggagatcaaac
>SC10-049 VH 단백질(SEQ ID NO: 87)
DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGLNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPFTFGGGTKVEIK
>SC10-023 VH DNA(SEQ ID NO: 88)
gaggtgcagctggtggagactgggggaggcttggtacagcctggcaggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcacctttgatgattatgccatgcattgggtccggcaagctccagggaagggcctggagtgggtctcaggtattaattgggttagtactaccatgggctatgcggactctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactccctgtatctgcaaatgaacagtctgagagctgaggacacggccttgtattactgtgcaaaagataggctggagagtgcagctatagacattctagaagggggtacttttgatatcaggggccaagggacaatggtcaccgtctcgagcg
>SC10-023 VH 단백질(SEQ ID NO: 89)
EVQLVETGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWVSTTMGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDRLESAAIDILEGGTFDIRGQGTMVTVSS
>SC10-023 Vl DNA(SEQ ID NO: 90)
cagtctgccctgactcagcctccctccgcgtccggctctcctggacagtcagtcaccatctcctgcactggaaccagcagtgatgttggtggttataactatgtctcctggtaccaacagcacccaggcaaagcccccaaactcatgatttatgatgtcagtaagcggccctcaggggtccctgatcgcttctctgggtccaagtctggcaacacggcctccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgaatattactgcagctcatatgcaagcggcagcacttatgtcttcggaactgggaccaaggtcaccgtcctag
>SC10-023 Vl 단백질(SEQ ID NO: 91)
QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEAEYYCSSYASGSTYVFGTGTKVTVL
>SC10-032 VH DNA (SEQ ID NO: 92)
caggtgcagctgcaggagtcgggcccaggactggtgaagccttcgggcaccctgtccctcacctgcaatgtctctggtggctccatcaacagtagtccctataagtgggcctggatccgccagtccccagggaaggggctggagtggattgggactttctattatgatgggagcaccgactacaacccgtccctccagagtcgactcaccatttccggagacatgtccagtaaccacttctccttgaggctgaggtctgtgaccgccgcagacacggctgtgtattactgtgcggcctattgtagtagtataagctgccatgcctattacgactacatgaacgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcgagc
>SC10-032 VH 단백질(SEQ ID NO: 93)
QVQLQESGPGLVKPSGTLSLTCNVSGGSINSSPYKWAWIRQSPGKGLEWIGTFYYDGSTDYNPSLQSRLTISGDMSSNHFSLRLRSVTAADTAVYYCAAYCSSISCHAYYDYMNVWGKGTTVTVSS
>SC10-032 Vl DNA(SEQ ID NO: 94)
gaaattgtgctgactcagtctccactctccctgcccgtcacccctggagagccggcctccatctcctgcaggtctagtcagagcctccgacatgagaatggatacaactatttggattggtacctgcagaagccagggcagtctccacagctcctgatgtatttgggttctgttcgggcctccggggtccctgacaggttcagtggcagtggatcaggcacagattttacactgaaaatcagcagagtggaggctgaggatgttggggtttattactgcatgcaagctctacaaacgctcactttcggcggagggaccaagctggagatcaaac
>SC10-032 Vl 단백질(SEQ ID NO: 95)
EIVLTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLRHENGYNYLDWYLQKPGQSPQLLMYLGSVRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTLTFGGGTKLEIK
>SC11-024 VH DNA(SEQ ID NO: 96)
gaggtgcagctggtgcagtctggggctgaaattaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggatacagcttcaccggctactatatgcactgggtgcgacaggcccctggacaaggacctgagtggatggggcggatcaaccctatcagtggtgacacaaactatgcacagaggtttcagggcagggtcaccttgaccagggacaggtccaccagcacagcctacatggagctgagcgggctgaaatctgacgacacggccgtatatttctgtgcgagagtcgcgggtgaagattggttcggggatcttgactattggggccagggaaccctggtcaccgtctcgagcg
>SC11-24 VH 단백질(SEQ ID NO: 97)
EVQLVQSGAEIKKPGASVKVSCKASGYSFTGYYMHWVRQAPGQGPEWMGRINPISGDTNYAQRFQGRVTLTRDRSTSTAYMELSGLKSDDTAVYFCARVAGEDWFGDLDYWGQGTLVTVSS
>SC11-024 VL DNA(SEQ ID NO: 98)
gaaattgtgttgacgcagtctccagccaccctgtctgtgtctccaggggaaagagccaccctctcctgcagggccagtcagagtgttagcagcagctacttagcctggtaccagcagaaacctggccaggctcccaggctcctcatctttggaacatccagcagggccactggcatcccagacaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcactctcaccatcagcaggctggagcctgaagattttgcagtgtattactgtcagcagtatggtagctcacctcggacgttcggccaagggaccaaggtggagatcaaac
>SC11-024 VL 단백질(SEQ ID NO: 99)
EIVLTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGTSSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPRTFGQGTKVEIK
>SC11-035 VH DNA(SEQ ID NO: 100)
caggtgcagctggtacagtctggagctgaggtgaagaagcctgggtcctcggtgaaggtctcctgcaagacctctggttacgcctttaacggctacggtatcagctgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtgggtggcatggatcaacacttacaaagttaacacacattatgcacagaatctccggggcagggtcaccgtgagcatagacacatccacgaccacagcctatatggaactgaggagcctgagatctgacgacacggccgtctattactgtgcgagagactggggtgggccgtttgggaacgcttttgatttctggggccaagggacaatggtcaccgtctcgagcg
>SC11-035 VH 단백질(SEQ ID NO: 101)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKTSGYAFNGYGISWVRQAPGQGLEWVAWINTYKVNTHYAQNLRGRVTVSIDTSTTTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDWGGPFGNAFDFWGQGTMVTVSS
>SC11-035 VL DNA(SEQ ID NO: 102)
Gacatccagatgacccagtctccatcctccctggctgcatctataggagacagtgtcaccatcacttgccgggcaagtcagagcgttggctcttacttaaattggtatcagcaaaaaccagggaaagcccctaagttgttgatctatggtgcatccaatgtgcaaagtggggtcccatcaaggtttagtggcagtgagtctgggacagagtccacactcaccatcaacaatctgcagcctgaagattctgcaacttactactgtcaacagagttacagtacccctagaacgttcggccaagggaccaaggtggaaatcaaac
>SC11-035 VL 단백질(SEQ ID NO: 103)
DIQMTQSPSSLAASIGDSVTITCRASQSVGSYLNWYQQKPGKAPKLLIYGASNVQSGVPSRFSGSESGTESTLTINNLQPEDSATYYCQQSYSTPRTFGQGTKVEIK
>SC11-036 VH DNA(SEQ ID NO: 104)
gaggtgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgacggtttcctgcaaggcatctggatacgccttcaccagctactatttacactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatggggataatgaatcttcatggtggtagcacaacctacgcacagaagttccagggcagagtcaccatgaccagggacacgtccacgaggacagtttacatggagctgagcggcctgagatctgaggactcggccgtatattactgtgcccgagagagtcccgatagcagtggttatcctggctactacggtatggacgtctggggccaggggaccacggtcaccgtctcgagc
>SC11-036 VH 단백질(SEQ ID NO: 105)
EVQLVQSGAEVKKPGASVTVSCKASGYAFTSYYLHWVRQAPGQGLEWMGIMNLHGGSTTYAQKFQGRVTMTRDTSTRTVYMELSGLRSEDSAVYYCARESPDSSGYPGYYGMDVWGQGTTVTVSS
>SC11-036 VL DNA(SEQ ID NO: 106)
Gaaattgtgttgacgcagtctccaggcaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctctcctgcagggccagtcagagtgttagcagcgacttcttcgcctggtaccagcagaaacgtggccagactcccaccctcctcatctatggtacatccaccagggccactggcatcccagacaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcacactcagcgtcgccagactggagcctgaagattttgcagtgtattactgtcagcagtatggtagctcgacgtggacgttcggccaagggaccaaggtggaaatcaaac
>SC11-036 VL 단백질(SEQ ID NO: 107)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSDFFAWYQQKRGQTPTLLIYGTSTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLSVARLEPEDFAVYYCQQYGSSTWTFGQGTKVEIK
>SC11-038 VH DNA(SEQ ID NO: 108)
gaggtgcagctggtggagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtttcctgcaaggcatctggatacgccttcaccagctactatttgcactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatggggataatgaaccctcatggtggtagcacaacctacgcacagaagttccagggcagagtcaccatgaccagggacacgtccacgagcacagtctacatggagctgagcagcctgagatctgaggacacggccgtgtattactgtgcccgagagagtcccgatagtagtggttatcctggctactacggtatggacgtctggggccaagggaccacggtcaccgtctcgagc
>SC11-038 VH 단백질(SEQ ID NO: 109)
EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYLHWVRQAPGQGLEWMGIMNPHGGSTTYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARESPDSSGYPGYYGMDVWGQGTTVTVSS
>SC11-038 VL DNA(SEQ ID NO: 110)
tcctatgagctgactcagccaccctcagcgtctgggacccccgggcagagggtcaccatgtcttgttctggaagcagatccaacatcggatctaatcctgtaagctggttccagcaactcccgggaatggtccccaaactcctcatctatactaatgatcagcggccctcaggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggcccctcagcctccctggccatcagtgggctccagtctgaggatgaggctgattattactgtgcagcatgggatgacagcctgaaaggttgggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctag
>SC11-038 VL 단백질(SEQ ID NO: 111)
SYELTQPPSASGTPGQRVTMSCSGSRSNIGSNPVSWFQQLPGMVPKLLIYTNDQRPSGVPDRFSGSKSGPSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLKGWVFGGGTKLTVL
>SC11-039 VH DNA (SEQ ID NO: 112)
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tcttctgagctgactcaggaccctgctgtgtctgtggccttgggacagacagtcaggatcacatgccaaggagacagcctcagaagctattatgcaagctggtaccagcagaagccaggacaggcccctgtacttgtcatctatggtaaaaacaaccggccctcagggatcccagaccgattctctggctccagctcaagaaacacagcttccttgaccatcactggggctcaggcggaagatgaggctgactattattgtgactcccgggacagcagtggaacccattatgtcttcggaggtgggaccaaggtcaccgtcctag
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참고문헌
Brochet 등, Nucl. Acids Res. 36, W503-508 (2008).
De Kruif J 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:3938 (1995).
Kanegae 등, J. Virol. 64: 2860-2865 (1990).
Kubota-Koketsu 등, Biochem. Biophys. Res. Comm. 387: 180-185 (2009).
Rota 등, J. Gen. Virol. 73: 2737-2742 (1992).
Thompson 등 JAMA 289(2): 179-186 (2003).
Thompson 등, JAMA 292(11): 1333-1340 (2004).
Wrammert 등, Nature 453: 667-672 (2008).
SEQUENCE LISTING <110> Crucell Holland B.V. <120> Human binding molecules capable of binding to and neutralizing influenza B viruses and uses thereof <130> 0194EP00P00PRI <140> EP12158525.1 <141> 2012-03-08 <160> 133 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> CR8033 HC CDR1 <400> 1 Gly Phe Ser Phe Asp Glu Tyr Thr 1 5 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> CR8033 HC CDR2 <400> 2 Ile Asn Trp Lys Gly Asn Phe Met 1 5 <210> 3 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> CR8033 HC CDR3 <400> 3 Ala Lys Asp Arg Leu Glu Ser Ser Ala Met Asp Ile Leu Glu Gly Gly 1 5 10 15 Thr Phe Asp Ile 20 <210> 4 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> CR8033 LC CDR1 <400> 4 Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr 1 5 <210> 5 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> CR8033 LC CDR2 <400> 5 Gly Ala Ser 1 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> CR8033 LC CDR3 <400> 6 Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr 1 5 <210> 7 <211> 8 <212> PRT <213> 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Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Arg Leu Glu Ser Ser Ala Met Asp Ile Leu Glu Gly Gly 100 105 110 Thr Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 128 <211> 322 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> SC08-034 VL DNA <400> 128 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacactt atccactcac tttcggcgga 300 gggaccaagc tggagatcaa ac 322 <210> 129 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> SC08-034 VL PROTEIN <400> 129 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp 20 25 30 Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Thr Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 130 <211> 381 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> SC08-035 VH DNA <400> 130 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gagtatatca tgcattgggt ccggcaagct 120 cccgggaagg gcccggaatg ggtcgcaggt attaattgga aaggtaattt catgggttat 180 gcggactctg tccagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctctat 240 ctgcaaatga acagtctgag agctgacgac acggccttat attactgtgc aaaagaccgg 300 ctggagagtt cagctatgga cattctagaa gggggtactt ttgatatctg gggccaaggg 360 acaatggtca ccgtctcgag c 381 <210> 131 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> SC08-035 VH PROTEIN <400> 131 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Glu Tyr 20 25 30 Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val 35 40 45 Ala Gly Ile Asn Trp Lys Gly Asn Phe Met Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Arg Leu Glu Ser Ser Ala Met Asp Ile Leu Glu Gly Gly 100 105 110 Thr Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 132 <211> 325 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> SC08-035 VL DNA <400> 132 tcttctgagc tgactcagga ccctgctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcaggatc 60 acatgccaag gagacagcct cagaagctat tatgcaagct ggtaccagca gaagccagga 120 caggcccctg tacttgtcat ctatggtaaa aacaaccggc cctcagggat cccagaccga 180 ttctctggct ccagctcaag aaacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240 gatgaggctg actattattg tgactcccgg gacagcagtg gaacccatta tgtcttcgga 300 ggtgggacca aggtcaccgt cctag 325 <210> 133 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> SC08-035 VL PROTEIN <400> 133 Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Arg Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asp Ser Arg Asp Ser Ser Gly Thr His 85 90 95 Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105

Claims (21)

  1. B/야마가타 계통의 인플루엔자 B 바이러스 균주들의 헤마글루티닌(HA) 및 B/빅토리아 계통의 인플루엔자 B 바이러스 균주들의 HA 모두에 특이적으로 결합할 수 있고, B/야마가타 및/또는 B/빅토리아 계통의 상기 인플루엔자 B 바이러스 균주들을 중화할 수 있는 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 절편에 있어서, 상기 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 절편은 인플루엔자 A 바이러스들의 HA에 결합하지 않고, SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 및 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 절편.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 제1항에 있어서,
    상기 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 절편은 SEQ ID NO: 75에 기록된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변성 영역을 포함하는 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 절편.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 절편은 SEQ ID NO: 77에 기록된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변성 영역을 포함하는 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 절편.
  8. 삭제
  9. 제1항에 있어서,
    상기 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 절편은 SEQ ID NO: 78의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 가변성 영역 및 SEQ ID NO: 79의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄 가변성 영역을 포함하는 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 절편.
  10. 삭제
  11. 삭제
  12. 삭제
  13. 제1항의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 절편과 인플루엔자 B 바이러스 HA 단백질 상의 에피토프의 결합을 위해 면역특이적으로 경쟁하는 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 절편으로서,
    상기 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 절편은
    SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 및 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하거나, 또는
    SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 및 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 및 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는,
    단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 절편.
  14. 제1항에 있어서,
    상기 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 절편은 감염된 세포들로부터 인플루엔자 B 바이러스의 출현(egress)을 억제하는 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 절편.
  15. 제1항에 있어서,
    상기 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 절편은 인간 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 절편인 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 절편.
  16. 제1항, 제6항, 제7항, 제9항, 제13항, 제14항, 및 제15항 중 어느 한 항에 따른 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 절편을 적어도 하나 포함하고, 적어도 하나의 태그를 더 포함하는 면역접합체.
  17. 제1항, 제6항, 제7항, 제9항, 제13항, 제14항, 및 제15항 중 어느 한 항에 따른 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 절편을 인코딩하는 핵산 분자.
  18. 인플루엔자 B 바이러스에 의하여 유발된 인플루엔자 감염의 진단, 예방 및/또는 치료에의 용도를 위한 제1항, 제6항, 제7항, 제9항, 제13항, 제14항, 및 제15항 중 어느 한 항에 따른 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 절편.
  19. 삭제
  20. 인플루엔자 B 바이러스에 의하여 유발된 인플루엔자 감염의 진단, 예방 및/또는 치료에의 용도를 위한, 제1항, 제6항, 제7항, 제9항, 제13항, 제14항, 및 제15항 중 어느 한 항에 따른 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 절편 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약학적 조성물.
  21. (a) 제1항, 제6항, 제7항, 제9항, 제13항, 제14항, 및 제15항 중 어느 한 항에 따른 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 절편을 이용하는 생물학적 표본 내에서 인플루엔자 B 바이러스 항원의 수준을 검정하는 단계; 및
    (b) 인플루엔자 B 바이러스 항원의 검정된 수준을 대조군 수준과 비교하여, 이에 의하여 인플루엔자 B 바이러스 항원의 대조군 수준에 비해 인플루엔자 B 바이러스 항원의 검증된 수준의 증가는 인플루엔자 B 바이러스 감염을 나타내는 것인 단계를 포함하는 인플루엔자 B 바이러스 감염의 검출 방법.
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Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA033386B1 (ru) 2011-11-28 2019-10-31 Janssen Vaccines & Prevention Bv Рекомбинантные иммуногенные полипептиды стеблевого домена гемагглютинина вируса гриппа а и их применение
US10654915B2 (en) 2011-12-05 2020-05-19 Trellis Bioscience, Llc Antibodies useful in passive influenza immunization
CA2865594C (en) 2012-03-08 2021-07-27 Crucell Holland B.V. Human binding molecules capable of binding to and neutralizing influenza b viruses and uses thereof
US9969794B2 (en) 2012-05-10 2018-05-15 Visterra, Inc. HA binding agents
AU2014236508A1 (en) 2013-03-14 2015-09-17 Contrafect Corporation Composition and methods based on neutralizing antibodies delivered intranasally for enhanced therapeutic efficacy
WO2014152946A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Polypeptides for treating and/or limiting influenza infection
AU2014329609B2 (en) 2013-10-02 2019-09-12 Humabs Biomed Sa Neutralizing anti-influenza A antibodies and uses thereof
WO2015082600A1 (en) * 2013-12-05 2015-06-11 Crucell Holland B.V. Process for preparing influenza vaccines
CA2938726A1 (en) * 2014-02-04 2015-08-13 Contrafect Corporation Antibodies useful in passive influenza immunization, and compositions, combinations and methods for use thereof
US10639370B2 (en) 2014-02-04 2020-05-05 Contrafect Corporation Antibodies useful in passive influenza immunization, and compositions, combinations and methods for use thereof
US9745365B2 (en) * 2014-03-27 2017-08-29 Genentech, Inc. Anti-influenza B virus hemagglutinin antibodies and methods of use
AU2015289805B2 (en) * 2014-07-15 2020-06-25 Humabs Biomed Sa Neutralizing anti-influenza B antibodies and uses thereof
TWI702229B (zh) 2014-12-19 2020-08-21 美商再生元醫藥公司 流行性感冒病毒血球凝集素之人類抗體
JP6772157B2 (ja) 2015-02-05 2020-10-21 ヤンセン ファッシンズ アンド プリベンション ベーフェーＪａｎｓｓｅｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ＆ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ Ｂ．Ｖ． インフルエンザヘマグルチニンに対する結合分子及びその使用
BR112017024206A2 (pt) * 2015-05-11 2018-07-17 Janssen Vaccines & Prevention Bv compostos peptidomiméticos neutralizadores do vírus da gripe
EA201792500A1 (ru) 2015-05-13 2018-04-30 Дзе Трастиз Оф Дзе Юниверсити Оф Пенсильвания Aav-опосредованная экспрессия антител против гриппа и способы их использования
CN107667114B (zh) 2015-06-01 2021-07-02 免疫医疗有限责任公司 中和抗流感结合分子及其用途
EP3305811B1 (en) * 2015-06-03 2020-04-01 Xiamen University Broad-spectrum monoclonal anti-flu b antibody and uses thereof
JP2017062300A (ja) * 2015-09-24 2017-03-30 セイコーエプソン株式会社 半導体装置、システム、電子機器、及び、音声認識方法
EP3374390A1 (en) 2015-11-13 2018-09-19 Visterra, Inc. Compositions and methods for treating and preventing influenza
IL304940A (en) 2016-01-13 2023-10-01 Medimmune Llc A method for treating type A influenza
US10703803B2 (en) 2016-03-01 2020-07-07 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Human neutralizing antibodies binding to influenza B neuraminidase
AU2017306709A1 (en) 2016-08-05 2019-03-14 Humabs, BioMed SA Anti-o2 antibodies and uses thereof
EA201990895A1 (ru) 2016-10-19 2019-10-31 Антитела к о1 и варианты их применения
JOP20190200A1 (ar) 2017-02-28 2019-08-27 Univ Pennsylvania تركيبات نافعة في معالجة ضمور العضل النخاعي
SG10201912976WA (en) 2017-02-28 2020-02-27 Univ Pennsylvania Adeno-associated virus (aav) clade f vector and uses therefor
SG10201913833PA (en) 2017-02-28 2020-03-30 Univ Pennsylvania Influenza vaccines based on aav vectors
MX2019012083A (es) 2017-04-13 2019-11-21 Cadila Healthcare Ltd Nueva vacuna de peptidos contra la pcsk9.
MA51681A (fr) 2018-01-26 2021-05-05 Regeneron Pharma Anticorps humains contre l'hémagglutinine de la grippe
CN112996910A (zh) * 2018-07-11 2021-06-18 动量制药公司 与靶向PD-L1的工程化Fc-抗原结合结构域构建体有关的组合物和方法
WO2020198329A1 (en) 2019-03-25 2020-10-01 Visterra, Inc. Compositions and methods for treating and preventing influenza
WO2021195326A1 (en) * 2020-03-26 2021-09-30 Vanderbilt University Human monoclonal antibodies to severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (sars-cov-2)
WO2021201677A1 (en) 2020-04-01 2021-10-07 Kiadis Pharma Intellectual Property B.V. Compositions and methods targeting influenza

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110319600A1 (en) * 2008-12-25 2011-12-29 Kazuyoshi Ikuta Human Anti-Human Influenza Virus Antibody

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ207394A (en) 1983-03-08 1987-03-06 Commw Serum Lab Commission Detecting or determining sequence of amino acids
NL9101953A (nl) 1991-11-21 1993-06-16 Seed Capital Investments Testinrichting omvattende een plaat met een veelvoud van putjes met een bijbehorende doseerinrichting, alsmede een kit die deze inrichtingen omvat en toepassing van de inrichtingen.
US6248780B1 (en) 1998-10-01 2001-06-19 Duquesne University Of The Holy Ghost Compounds for the treatment of estrogen-dependent illnesses and methods for making and using the same
DE60043273D1 (de) 1999-04-15 2009-12-17 Crucell Holland Bv Verwendung von Rekombinanten Proteinen in Menschlichen Zellen
AU2002345421B2 (en) 2001-06-15 2006-11-16 Crucell Holland B.V. Chimaeric phages
US7135174B2 (en) 2002-01-07 2006-11-14 Amgen Fremont, Inc. Antibodies directed to PDGFD and uses thereof
ES2527503T3 (es) * 2005-03-08 2015-01-26 Medimmune, Llc Virus influenza reordenantes
WO2006124269A2 (en) * 2005-05-16 2006-11-23 Amgen Fremont Inc. Human monoclonal antibodies that bind to very late antigen-1 for the treatment of inflammation and other disorders
CA2658612C (en) * 2006-08-03 2015-11-17 Astrazeneca Ab Antibodies directed to .alpha.v.beta.6 and uses thereof
PL2059532T3 (pl) 2006-09-07 2013-05-31 Crucell Holland Bv Ludzkie cząsteczki wiążące zdolne do neutralizowania wirusa grypy H5N1 i ich zastosowania
WO2009002380A2 (en) * 2007-06-26 2008-12-31 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Isolation of anti-desmoglein 1 antibodies by phage display of pemphigus foliaceus autoantibodies
FR2921928B1 (fr) * 2007-10-08 2011-03-04 Sanofi Pasteur Anticorps monoclonaux specifiques de l'hemagglutinine du virus grippal
JP5607620B2 (ja) * 2008-07-25 2014-10-15 インスティテュート・フォー・リサーチ・イン・バイオメディシン 抗ａ型インフルエンザウイルス中和抗体およびその使用
EP2179811B1 (en) 2008-10-21 2018-10-03 Agie Charmilles SA Method and apparatus for controlling an electric discharge machining process
ES2770134T3 (es) 2008-11-07 2020-06-30 Galaxy Biotech Llc Anticuerpos monoclonales para el receptor del factor de crecimiento de fibrolastos 2
NZ596032A (en) 2009-05-11 2013-09-27 Crucell Holland Bv Human binding molecules capable of neutralizing influenza virus h3n2 and uses thereof
AU2010254136B2 (en) * 2009-05-26 2016-09-29 Mount Sinai School Of Medicine Monoclonal antibodies against influenza virus generated by cyclical administration and uses thereof
US8926976B2 (en) * 2009-09-25 2015-01-06 Xoma Technology Ltd. Modulators
WO2013114885A1 (en) * 2012-01-31 2013-08-08 Osaka University Human monoclonal antibodies broadly protective against influenza b virus and methods of using the same
CA2865594C (en) 2012-03-08 2021-07-27 Crucell Holland B.V. Human binding molecules capable of binding to and neutralizing influenza b viruses and uses thereof

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110319600A1 (en) * 2008-12-25 2011-12-29 Kazuyoshi Ikuta Human Anti-Human Influenza Virus Antibody

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