EA027459B1 - Липаза в короткоцепочечной этерификации жирных кислот - Google Patents
Липаза в короткоцепочечной этерификации жирных кислот Download PDFInfo
- Publication number
- EA027459B1 EA027459B1 EA201491987A EA201491987A EA027459B1 EA 027459 B1 EA027459 B1 EA 027459B1 EA 201491987 A EA201491987 A EA 201491987A EA 201491987 A EA201491987 A EA 201491987A EA 027459 B1 EA027459 B1 EA 027459B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- fatty acids
- patatin
- fatty acid
- alcohols
- reaction
- Prior art date
Links
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 title claims abstract description 115
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 title claims abstract description 114
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 title claims abstract description 114
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 96
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 title abstract description 27
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 title abstract description 27
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 title abstract description 23
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 title abstract description 23
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 title abstract description 18
- 230000032050 esterification Effects 0.000 title description 11
- 101710091688 Patatin Proteins 0.000 claims abstract description 67
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 33
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 93
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 80
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 claims description 32
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 27
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 15
- 239000003225 biodiesel Substances 0.000 claims description 11
- 150000004666 short chain fatty acids Chemical class 0.000 claims description 9
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 claims description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 7
- 150000004667 medium chain fatty acids Chemical class 0.000 claims description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 6
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 5
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 abstract description 26
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 abstract description 26
- 235000019626 lipase activity Nutrition 0.000 abstract description 3
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 abstract description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 17
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 16
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 15
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 14
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 11
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 7
- -1 fatty acid esters Chemical class 0.000 description 7
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 6
- OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N alpha-ethylcaproic acid Natural products CCCCC(CC)C(O)=O OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000019387 fatty acid methyl ester Nutrition 0.000 description 6
- 235000015203 fruit juice Nutrition 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 5
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 5
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 5
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- NHTMVDHEPJAVLT-UHFFFAOYSA-N Isooctane Chemical compound CC(C)CC(C)(C)C NHTMVDHEPJAVLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JVSWJIKNEAIKJW-UHFFFAOYSA-N dimethyl-hexane Natural products CCCCCC(C)C JVSWJIKNEAIKJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 4
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 4
- 235000021391 short chain fatty acids Nutrition 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical group O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 3
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 3
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000005189 flocculation Methods 0.000 description 3
- 230000016615 flocculation Effects 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical compound CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229930008677 glyco alkaloid Natural products 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 150000004668 long chain fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- JGHZJRVDZXSNKQ-UHFFFAOYSA-N methyl octanoate Chemical compound CCCCCCCC(=O)OC JGHZJRVDZXSNKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N octane Chemical compound CCCCCCCC TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091075678 patatin family Proteins 0.000 description 2
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 2
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 2
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 2
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 2
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940125673 3C-like protease inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 208000016444 Benign adult familial myoclonic epilepsy Diseases 0.000 description 1
- 244000060011 Cocos nucifera Species 0.000 description 1
- 235000013162 Cocos nucifera Nutrition 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 239000005641 Methyl octanoate Substances 0.000 description 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 241000519995 Stachys sylvatica Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000007824 aliphatic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 150000001491 aromatic compounds Chemical class 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- SUHOQUVVVLNYQR-MRVPVSSYSA-N choline alfoscerate Chemical compound C[N+](C)(C)CCOP([O-])(=O)OC[C@H](O)CO SUHOQUVVVLNYQR-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 208000016427 familial adult myoclonic epilepsy Diseases 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 229960004956 glycerylphosphorylcholine Drugs 0.000 description 1
- 238000006912 hydrolase reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002366 lipolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000622 liquid--liquid extraction Methods 0.000 description 1
- 150000002646 long chain fatty acid esters Chemical class 0.000 description 1
- 150000002711 medium chain fatty acid esters Chemical class 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000002417 nutraceutical Substances 0.000 description 1
- 235000021436 nutraceutical agent Nutrition 0.000 description 1
- MYSFLUCHHGIXIT-UHFFFAOYSA-N octanoic acid;hydrate Chemical compound O.CCCCCCCC(O)=O MYSFLUCHHGIXIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- DVDUMIQZEUTAGK-UHFFFAOYSA-N p-nitrophenyl butyrate Chemical compound CCCC(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 DVDUMIQZEUTAGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003784 tall oil Substances 0.000 description 1
- 150000004669 very long chain fatty acids Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
- C11B3/00—Refining fats or fatty oils
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
- A23C19/06—Treating cheese curd after whey separation; Products obtained thereby
- A23C19/09—Other cheese preparations; Mixtures of cheese with other foodstuffs
- A23C19/0921—Addition, to cheese or curd, of minerals, including organic salts thereof, trace elements, amino acids, peptides, protein hydrolysates, nucleic acids, yeast extracts or autolysate, vitamins or derivatives of these compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
- A23C19/02—Making cheese curd
- A23C19/04—Making cheese curd characterised by the use of specific enzymes of vegetable or animal origin
- A23C19/043—Enzymes other than proteolytic enzymes or milk clotting enzymes, e.g. lipase, lysosyme
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
- A23C19/02—Making cheese curd
- A23C19/05—Treating milk before coagulation; Separating whey from curd
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
- A23C19/06—Treating cheese curd after whey separation; Products obtained thereby
- A23C19/063—Addition of, or treatment with, enzymes or cell-free extracts of microorganisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11C—FATTY ACIDS FROM FATS, OILS OR WAXES; CANDLES; FATS, OILS OR FATTY ACIDS BY CHEMICAL MODIFICATION OF FATS, OILS, OR FATTY ACIDS OBTAINED THEREFROM
- C11C3/00—Fats, oils, or fatty acids by chemical modification of fats, oils, or fatty acids obtained therefrom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11C—FATTY ACIDS FROM FATS, OILS OR WAXES; CANDLES; FATS, OILS OR FATTY ACIDS BY CHEMICAL MODIFICATION OF FATS, OILS, OR FATTY ACIDS OBTAINED THEREFROM
- C11C3/00—Fats, oils, or fatty acids by chemical modification of fats, oils, or fatty acids obtained therefrom
- C11C3/02—Fats, oils, or fatty acids by chemical modification of fats, oils, or fatty acids obtained therefrom by esterification of fatty acids with glycerol
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/62—Carboxylic acid esters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6436—Fatty acid esters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6436—Fatty acid esters
- C12P7/649—Biodiesel, i.e. fatty acid alkyl esters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/01—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12Y301/01003—Triacylglycerol lipase (3.1.1.3)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Dairy Products (AREA)
- Seasonings (AREA)
- Fats And Perfumes (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Liquid Carbonaceous Fuels (AREA)
- Preparation Of Fruits And Vegetables (AREA)
Abstract
Было обнаружено, что пататин, представляющий собой липазу, получаемую из картофеля, обладает преимуществами в реакции этерификации жирных кислот с получением алкильных эфиров жирных кислот. Описаны способы применения этой липазной активности, а также применение пататина в различных промышленных процессах.
Description
Хорошо известно, что липазы способны катализировать образование сложных эфиров в органических средах. Таким образом, с помощью липазы карбоновые кислоты можно превращать в сложные эфиры в присутствии достаточного количества свободных гидроксизамещенных соединений.
Липазы часто применяют в промышленности. Примеры включают разделение рацемических лекарственных средств, модификацию жиров и липидов, синтез вкусоароматических веществ и производство фармацевтической продукции и нутрицевтиков. Подавляющее большинство липаз, применяемых в настоящее время, получают с помощью грибковых или бактериальных ферментных систем, хотя иногда также применяют и липазы животного происхождения. Липазы растительного происхождения сравнительно редко применяют в промышленности.
Большинство промышленно применимых липаз получают из смесей, образующихся при бактериальной ферментации. Впоследствии липазы необходимо выделить с применением трудоемкой дальнейшей обработки. Это сложный и дорогостоящий процесс, ограничивающий доступность таких липаз. Следовательно, такие липазы обычно имеют низкую чистоту, как общую, так и в отношении белка, а также содержат большое количество углеводов и солей и обладают возможными нежелательными побочными действиями. Кроме того, коммерческие препараты липаз обычно содержат широкий спектр небелковых веществ, солей и ферментов, не являющихся липазами (ВщгПп с1 а1., 2001, 1АОС8 78-2, р. 153-160).
Обычно реакции этерификации, для проведения которых требуются жирные кислоты, основаны на применении ферментационных осадков, содержащих большое количество свободных жирных кислот. Это приводит к высокой изменчивости составов смесей, в которых свободные жирные кислоты присутствуют в качестве одного из компонентов наряду со множеством примесей. Фосфолипиды, присутствующие в клеточных мембранах, представляют собой важную составляющую этих примесей. Например, для получения сложного эфира из масла с применением широко используемого фермента липазы - Νονο/утс 435 - требуются очищенные от смол масла; присутствие фосфолипидов ингибирует реакцию этерификации. Липазам обычно трудно справляться с высоким содержанием примесей, что приводит к неэффективному синтезу сложных эфиров жирных кислот.
Фермент липазу растительного происхождения можно получать из картофеля. Белки картофеля можно разделить на три категории: (ί) семейство пататина, высокогомологичные кислые гликопротеины с молекулярной массой 43 кДа (40-50 мас.% картофельных белков), (ίί) основные ингибиторы протеазы, 5-25 кДа (30-40 мас.% картофельных белков) и (ίίί) другие белки, в основном белки с высокой молекулярной массой (10-20 мас.% картофельных белков). Известно, что семейство пататина обладает некоторой липазной активностью и что данные белки можно получить при помощи одностадийного хроматографического процесса с последующим концентрированием и сушкой. Очень удобный способ выделения, среди прочих, пататина с высокой чистотой описан в заявке \УО 2008/069650.
Однако на практике картофельные белки, в том числе картофельную белковую липазу, называемую пататином, в основном применяют в качестве корма для животных из-за отсутствия практического коммерческого применения.
Краткое описание изобретения
В настоящем изобретении предложены средства применения пататина для синтеза конкретных сложных эфиров. Таким образом, пататин можно применять для получения сложных эфиров из С4-С26 жирных кислот, предпочтительно С4-С12 жирных кислот и более предпочтительно С6-С10 жирных кислот, наиболее предпочтительно С8-С10 жирных кислот. Сложные эфиры, полученные по способу согласно настоящему изобретению, получают из С1-С3 спиртов, предпочтительно из одноатомных спиртов, более предпочтительно из этанола или метанола и наиболее предпочтительно из метанола.
Краткое описание графических материалов
Фиг. 1: остаточная активность липазы при различных концентрациях метанола.
Фиг. 2: тонкослойная хроматограмма алкильных эфиров жирных кислот (АЭЖК), синтезированных с помощью пататина. Дорожка 1 содержит свободные жирные кислоты (СЖК, в частности, лауриновую кислоту, С12), дорожка 2 содержит метиловый эфир жирной кислоты (МЭЖК) на основе кокосового масла, дорожки с 3 по 7 содержат продукты реакции лауриновой кислоты с метанолом, этанолом, нпропанолом, изопропанолом и н-бутанолом, соответственно.
Фиг. 3: осаждение жирных кислот в присутствии повышенной концентрации соли. Слева: неосажденная октановая кислота в двухфазной системе октановая кислота-деминерализованная вода. Справа: осаждение жирной кислоты, представляющей собой октановую кислоту, в двухфазной системе октановая кислота-насыщенный водный раствор КС1.
Подробное описание изобретения
Для целей настоящего изобретения под пататином понимают фракцию с высокой молекулярной массой (ВММ) нативных картофельных белковых изолятов, высокогомологичное семейство гликопротеинов, имеющих молекулярную массу 30 кДа или более, предпочтительно 35 кДа или более и более предпочтительно примерно 43 кДа, и изоэлектрическую точку менее 5,8, предпочтительно от 4,8 до 5,5, которая составляет примерно 40-50 мас.% картофельных белков. Пататин представляет собой семейство
- 1 027459 гликопротеинов, которые демонстрируют ацилгидролазную активность и составляют до 40 мас.% от общей массы растворимого белка в клубнях картофеля. В заявке АО 2008/069650, содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки, подробно описано выделение пататина из картофельного плодового сока (КПС) или картофельной плодовой воды (КПВ).
В этом способе картофельный плодовый сок подвергают флокуляции катионом двухвалентного металла при рН 7-9, и проводят центрифугирование флокулированного картофельного плодового сока с получением таким образом супернатанта. Затем супернатант подвергают адсорбционной хроматографии с расширенным слоем адсорбента, проводимой при рН менее 11 и температуре 5-35°С с использованием адсорбента, способного связывать картофельный белок, с обеспечением таким образом адсорбции нативного картофельного белка адсорбентом. Затем по меньшей мере один изолят нативного картофельного белка элюируют из адсорбента элюентом. Этот способ позволяет, в частности, выделить нативный пататин высокой чистоты, содержащий минимум денатурированного белка и характеризуемый стабильной растворимостью.
Картофельный плодовый сок предварительно обрабатывают катионом двухвалентного металла при рН 7-9, предпочтительно 7,0-7,5, с обеспечением флокуляции нежелательных веществ, и далее отделяют хлопья центрифугированием. Особенно подходящим катионом двухвалентного металла является Са2'. Эта предварительная обработка позволяет удалить из картофельного плодового сока нежелательные вещества, такие как отрицательно заряженные полимеры, пектины, гликоалкалоиды и микроорганизмы. В частности, является предпочтительным удаление пектинов и гликоалкалоидов, так как эти соединения присоединяются к картофельным белкам и могут вызвать флокуляцию, что приводит к получению белкового изолята, нестабильного в отношении растворимости и других физических свойств.
На второй стадии способа супернатант подвергают адсорбционной хроматографии с расширенным слоем адсорбента. Предпочтительно поддерживать температуру исходного материала ниже 35°С для лучшей стабильности пататина. Кроме того, предпочтительно использовать умеренно высокую скорость потока, обычно в диапазоне от 600-1200 см/ч. Адсорбционную хроматографию с расширенным слоем адсорбента проводят при рН менее 11, предпочтительно при рН менее 10.
Нативные картофельные белки в предварительно обработанном картофельном плодовом соке выделяют из супернатанта путем связывания их на подходящем адсорбенте в адсорбционной колонке с расширенным слоем адсорбента. Материалы колонки, которые связывают некоторое количество нативных картофельных белков, включают смешанные адсорбенты, такие как АтетзЬат §1теат1ше™ Эпес! С8Т I (ОБ НеаНйсате), адсорбенты РазШие (ИрГтои! СЬтота1одтарйу А/δ), макропористые адсорбенты, такие как АтЬетШе™ ΧΑΌ7ΗΡ (компании Койт &) и ионообменные адсорбенты. Адсорбент с адсорбированными нативными картофельными белками затем элюируют подходящим элюентом для извлечения изолята нативного картофельного белка, такого как пататин. Элюент предпочтительно имеет рН в диапазоне 412, более предпочтительно в диапазоне 5,5-11,0.
В предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения с применением смешанных адсорбентов белки можно фракционировать как по изоэлектрической точке, так и по молекулярной массе. Это позволяет разделять, например, фракции пататина и ингибиторов протеазы. Изоляты пататина элюируют при рН 5,7-8,7, предпочтительно при рН 5,8-6,5.
Под ацилгидролазной активностью обычно понимают способность фермента (класса ферментов) катализировать гидролиз сложноэфирной связи с помощью молекулы воды с образованием отдельных компонентов: карбоновой кислоты и спирта. Эта реакция может быть обращена путем подходящей адаптации условий реакции, в результате чего происходит этерификация карбоновой кислоты и спирта. Условия реакции, которые могут влиять на направление реакции, включают, например, температуру, идентичность реагента и/или количество воды, присутствующие карбоновую кислоту и спирта.
В соответствии с настоящим изобретением было обнаружено, что пататин имеет относительно сильную устойчивость к органической среде. Кроме того, поскольку пататин выделяют из обычного растительного материала, его легко получить в больших количествах, намного легче, чем выделить липазы, получаемые из ферментационной среды и провести трудоемкую последующую обработку.
По этой причине пататин особенно подходит для получения сложных эфиров из С4-С26 жирных кислот, предпочтительно С4-С12 жирных кислот и более предпочтительно С6-С10 жирных кислот, наиболее предпочтительно С8-Сю жирных кислот. Сложные эфиры получают путем реакции со спиртами, предпочтительно низкомолекулярными спиртами, т.е. С1-С3 спиртами. Низкомолекулярные спирты могут поставляться в чистом виде или в виде смеси нескольких низкомолекулярных спиртов. Предпочтительно используют одноатомные спирты, еще более предпочтительно этанол или метанол и наиболее предпочтительно метанол.
В предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения получают метиловый и этиловый сложные эфиры С4-С26 жирных кислот, предпочтительно С,|-С]2 жирных кислот и более предпочтительно Сб-С10 жирных кислот, наиболее предпочтительно С8-С|0 жирных кислот, с применением С1 или С2 одноатомных спиртов, т.е. метанола или этанола или их смеси.
В соответствии с настоящим изобретением было обнаружено, что ацилгидролазная реакционная
- 2 027459 способность пататина в соответствии с настоящим изобретением может привести к этерификации жирных кислот с низкомолекулярными спиртами. Следовательно, ацилгидролазную активность пататина можно применять для синтеза сложных эфиров. Таким образом, пататин можно применять в способе для получения алкильных эфиров короцепочечных жирных кислот, даже если эта смесь содержит большое количество примесей.
Таким образом, настоящее изобретение относится к способу получения, предпочтительно селективно, алкилового эфира жирной кислоты, включающему обеспечение жидкой среды, содержащей одну или более С4-С26 жирных кислот, один или более Οι -С3 спиртов и нативный пататин и обеспечение реакции одной или более жирных кислот с одним или более спиртами с получением алкилового эфира жирной кислоты.
В способе в соответствии с настоящим изобретением жирные кислоты представляют собой С4-С26 жирные кислоты, предпочтительно С4-С12 жирные кислоты, более предпочтительно С6-С10 жирные кислоты, наиболее предпочтительно С8-С10 жирные кислоты.
Один или более С1-С3 спиртов содержат предпочтительно один или более одноатомных спиртов, среди которых применяют н-пропанол, изопропанол, этанол и/или метанол и более предпочтительно метанол и/или этанол.
В гораздо более предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения спирт представляет собой метанол и/или этанол, жирная кислота представляет собой С4-С12 жирную кислоту и алкиловый эфир жирной кислоты представляет собой метиловый или этиловый эфир С4-С12 жирной кислоты.
Цепи жирных кислот классифицируют по длине цепи, от коротких до очень длинных: короткоцепочечные жирные кислоты (КЦЖК) представляют собой жирные кислоты с цепями короче чем С6;
среднецепочечные жирные кислоты (СЦЖК) представляют собой С6-С12 жирные кислоты; длинноцепочечные жирные кислоты(ЖЦЖК) представляют собой С13-С21 жирные кислоты; жирные кислоты с очень длинной цепью (ЖКОДЦ) представляют собой жирные кислоты с цепями длиннее, чем С22.
Как правило, липазы чувствительны к примесям, присутствующим в этерификационной смеси. С другой стороны, пататин значительно менее чувствителен к примесям, в частности к фосфолипидам. Таким образом, преимуществом способа согласно настоящему изобретению является то, что исходное сырье, содержащее жирные кислоты, может содержать более высокое количество примесей, в частности фосфолипидов, чем в случае применения других липаз.
В других ферментативных реакциях этерификации присутствие фосфолипидов часто ингибирует реакцию этерификации. По этой причине фосфолипиды необходимо удалять из исходного сырья, содержащего жирные кислоты. Это приводит к удорожанию сырья, а, следовательно, и к удорожанию продукта. Таким образом, сложноэфирные продукты с применением пататина можно получать значительно дешевле по сравнению с другими способами этерификации на основе липаз.
Жирные кислоты в способе согласно настоящему изобретению можно обеспечить в виде исходного сырья, содержащего жирные кислоты. Такое исходное сырье представляет собой твердую или жидкую среду, содержащую, помимо прочего, жирные кислоты для применения в настоящем изобретении. Предпочтительно, исходное сырье представляет собой жидкую среду. Жидкая среда может содержать растворитель, но также возможно осуществить способ согласно изобретению без применения растворителя, например в условиях, когда среда находится в расплавленном состоянии.
Исходное сырье, содержащее жирные кислоты, содержит по меньшей мере одну из С4-С26 жирных кислот или любую смесь С4-С26 жирных кислот для получения сложных эфиров С4-С26 жирных кислот. В частности, исходное сырье для реакции со спиртом в соответствии с настоящим изобретением содержит по меньшей мере одну коротко- или среднецепочечную жирную кислоту или любую их смесь, т.е. С4-С12 жирные кислоты. Более предпочтительно исходное сырье содержит по меньшей мере одну С6-С10 жирную кислоту или любую смесь С6-С10 жирных кислот, наиболее предпочтительно С8-С10 жирные кислоты. Это приводит к получению сложных эфиров С4-С12 жирных кислот, предпочтительно С6-С10 жирных кислот, наиболее предпочтительно С8-С10 жирных кислот.
Жирные кислоты в исходном сырье могут быть представлены в любой форме, такой как связанные с глицерином в виде моно-, ди- и/или триглицеридов, но исходное сырье также может содержать фосфолипиды или частично гидролизованные фосфолипиды. Кроме того, жирные кислоты могут присутствовать в исходном сырье в виде свободных жирных кислот. Кроме того, может присутствовать смесь любых или всех этих компонентов, а также другие компоненты, не связанные с жирными кислотами. Однако предпочтительно жирные кислоты присутствуют в исходном сырье, по крайней мере, в значительном количестве, в качестве свободных жирных кислот. Значительное количество в контексте настоящего изобретения представляет собой 6 г/л, предпочтительно выше 90 г/л.
Преимуществом способа согласно настоящему изобретению является то, что свободные жирные кислоты могут присутствовать в относительно больших количествах. Наиболее предпочтительно количество свободных жирных кислот, выраженное в процентах от общего количества жирных кислот, присутствующих в исходном сырье, содержащем жирные кислоты, составляет по меньшей мере 25 мас.%,
- 3 027459 предпочтительно более чем 40 мас.% в расчете на массу исходного сырья.
Примерами подходящего исходного сырья, содержащего жирные кислоты, являются животные жиры или масла, растительные масла, среди которых гидролизованные и/или окисленные растительные масла, такие как, например, масло для жарки, испорченный жир сливочного масла и талловый жир низкого качества.
Однако в альтернативном варианте реализации настоящего изобретения исходное сырье, содержащее жирные кислоты, представляет собой ферментационный осадок. Поскольку применение пататина в соответствии с настоящим способом увеличивает толерантность к примесям, исходное сырье ферментационного осадка хорошо подходит для этерификации жирных кислот, которые он содержит, спиртами. Явным преимуществом настоящего изобретения является то, что примеси, среди которых, что важно, присутствуют фосфолипиды, могут присутствовать в реакционной среде в больших количествах, не препятствуя реакции этерификации.
Спирты для применения согласно настоящему изобретению представляют собой по меньшей мере один С1-С3 спирт, предпочтительно одноатомный спирт и более предпочтительно метанол и/или этанол. Сложные эфиры этих спиртов с короткоцепочечными жирными кислотами обычно обладают весьма сильным запахом, в то время как сложные эфиры со средне- или длинноцепочечными жирными кислотами могут выгодно функционировать в качестве биодизельного топлива. Предпочтительно С1-С3 одноатомные спирты представляют собой концевые спирты, например метанол, этанол и 1-пропанол. Однако более предпочтительно спирт представляет собой С1-С2 спирт, например метанол или этанол. Однако наиболее предпочтительным является применение метанола в качестве акцептора жирных кислот. Спирты с более короткой цепью являются предпочтительными из-за их более высокой реакционной способности по отношению к жирным кислотам в присутствии пататина.
В способе в соответствии с настоящим изобретением пататин может в иммобилизованном виде присутствовать на носителе, но предпочтительно его используют без носителя. Носители для иммобилизации липаз хорошо известны в данной области техники. В качестве примера можно привести целит. Таким образом, он может присутствовать в растворенной или молекулярно диспергированной форме, в зависимости от природы реакционной среды. Предпочтительно пататин свободно взвешен в реакционной среде.
Недостатком липаз является то, что они обычно требуют большого количества солей, такого как до 50% солей калия, для стабилизации их в свободном растворе.
Соли, однако, служат препятствием по отношению к реакции этерификации жирных кислот, так как она вызывает кристаллизацию. По этой причине в известном уровне техники липазы обычно применяют на носителе в иммобилизованной форме. Пататин не требует стабилизации солью, когда его применяют без носителя, т.е. в свободно взвешенном состоянии в среде, и по этой причине он особенно подходит для этерификации жирных кислот с низкомолекулярными спиртами в соответствии с настоящим изобретением.
Как уже упоминалось, реакционная среда, в которой выполняют способ согласно изобретению, предпочтительно жидкая и содержит, по меньшей мере, исходное сырье, содержащее жирные кислоты, и один или более спиртов согласно изобретению. Кроме того, среда может содержать растворитель, такой как вода и/или органическое соединение, такое как растворитель, например алифатическое соединение, простой эфир, сложный эфир или ароматическое соединение.
Преимуществом применения пататина является то, что в реакции этерификации может присутствовать значительное количество воды. Таким образом, изобретение может работать при содержании воды в реакционной среде до 91 об.% в расчете на объем реакционной среды. Однако предпочтительно содержание воды составляет менее чем 73 об.%, еще более предпочтительно менее чем 40 об.%, более предпочтительно менее 19 об.% в расчете на объем реакционной среды. В случае, если содержание воды в реакционной среде превышает 50 об.% в расчете на объем реакционной среды, ее называют водной.
Однако способ согласно изобретению также можно выполнять, по существу, в органической среде, при содержании воды менее 50 об.% в расчете на объем реакционной среды. В этом случае, содержание воды в реакционном сосуде может достигать 5 об.% или достигать 2 об.% в расчете на объем реакционной среды. Предпочтительно, чтобы присутствовало, по меньшей мере, некоторое количество воды, например, по меньшей мере 2 об.% в расчете на объем реакционной среды, даже если способ применяют, по существу, в органической среде.
В случае если среда представляет собой, по существу, органическую среду, исходное сырье, содержащее жирные кислоты, разбавляют, по крайней мере, спиртом согласно настоящему изобретению, который может функционировать в качестве растворителя, а также в качестве реагента в этом варианте реализации настоящего изобретения. Кроме того, можно применять другой растворитель, который можно соответствующим образом выбрать для достижения финального растворения всех компонентов реакции. Подходящие примеры включают октан, изооктан, пентан, гексан, гептан, петролейный эфир и бутанол. Предпочтительные растворители представляют собой октан и изооктан. Следует иметь в виду, что также можно применять комбинацию растворителей, в том числе комбинацию с одним или более растворителями и спиртом, действующим в качестве растворителя.
- 4 027459
Концентрация жирных кислот в реакционной среде предпочтительно составляет от 12 до 84 мас.% в расчете на массу реакционной среды. Предпочтительно эти жирные кислоты присутствуют в виде свободных жирных кислот.
Концентрация спирта в реакционной среде предпочтительно в небольшом мольном избытке по отношению к свободным жирным кислотам. В расплавленной среде свободная жирная кислота предпочтительно присутствует в концентрации выше 80 мас.%, более предпочтительно выше 84 мас.% в расчете на массу реакционной среды. В органическом растворителе свободная жирная кислота присутствует в концентрации выше 10 мас.%, более предпочтительно 12 мас.% в расчете на массу реакционной среды.
Как правило, пататин присутствует в концентрации 1 мас.%, более предпочтительно 10 мас.% в расчете на количество жирной кислоты.
Таким образом, изобретение также раскрывает способ получения, предпочтительно избирательного, алкилового эфира жирной кислоты, включающий смешение в любом порядке нативного пататина с жирными кислотами, одним или более спиртами и необязательными другими компонентами, при этом смесь содержит значительное количество фосфолипидов, и проведение этерификации, при этом жирные кислоты предпочтительно представляют собой коротко- или среднецепочечные жирные кислоты, спирты представляют собой С1-С3 одноатомные спирты, предпочтительно метанол и/или этанол, а алкильный сложный эфир жирной кислоты представляет собой С1-С3 сложный эфир С4-С12 жирной кислоты, предпочтительно метиловый или этиловый эфир. Если пататин применяют без иммобилизации на носителе, что является предпочтительным, смешивание предпочтительно проводят таким образом, что пататин будет свободно взвешен в реакционной среде. В альтернативном варианте реализации настоящего изобретения спирт можно предпочтительно добавлять в аликвоты с различными интервалами или непрерывно в течение всей реакции для того, чтобы контролировать скорость реакции и избежать денатурации фермента. Конечно, для достижения хорошего выхода реакции общее количество спирта должны быть достаточными для достижения желаемого превращения.
В предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения способ согласно изобретению применяют в отсутствие дополнительного растворителя. В этом случае реакционная смесь содержит исходное сырье, содержащее жирные кислоты, которое содержит коротко- или среднецепочечные жирные кислоты, и спирт, предпочтительно метанол или этанол. В соответствии с этим вариантом реализации настоящего изобретения способ предпочтительно осуществляют в условиях, когда среда является расплавленной.
Условия реакции могут быть оптимизированы специалистом в данной области техники на основании его общих знаний. Например, температура реакции не является критической, пока она не влияет на стабильность и активность пататина. Предпочтительно реакцию проводят в условиях окружающей среды или при температуре выше точки плавления исходного сырья, содержащего жирные кислоты. Подходящие температуры реакции обычно находятся в диапазоне от 10 до 75°С, предпочтительно от 15 до 60°С, более предпочтительно от 20 до 45°С.
Предпочтительно полученные алкильные эфиры жирных кислот выделяют из реакционной смеси и необязательно дополнительно очищают, например, путем перегонки, жидкость-жидкостной экстракции или сверхкритической СО2-экстракции.
Способ согласно настоящему изобретению можно удобно применять для получения биодизельного топлива. Таким образом, настоящее изобретение раскрывает способ получения биодизельного топлива, включающий смешивание пататина с исходным сырьем, содержащим жирные кислоты, и с одним или более С4-С3 спиртами, где исходное сырье, содержащее жирные кислоты, содержит одну или более С4С26 жирных кислот, и проведение реакции одной или более жирных кислот с одним или более спиртом. В этом способе предпочтительно пататин свободно взвешен в исходном сырье.
Особенно выгодно применять в этом способе пататин, поскольку пататин легко доступен из обычных растений, и может быть выделен в больших количествах. Кроме того, с пататином можно производить биодизельное топливо из исходного сырья, содержащего относительно большие количества примесей, таких как фосфолипиды. И, наконец, присутствие соли повышает температуру плавления жирных кислот, подлежащих преобразованию в биодизельное топливо. Поскольку, в отличие от других липаз, свободно суспендированному пататину не требуется солевая стабилизация, при использовании пататина можно избежать негативного эффекта, обусловленного присутствием соли, при производстве биодизельного топлива. В результате получают алкильные эфиры жирных кислот в соответствии с настоящим изобретением, которые можно применять в качестве биодизельного топлива.
Ниже изобретение будет проиллюстрировано следующими неограничивающими примерами.
Пример 1. Активность липазы в органическом растворителе.
Множество липолитических процессов проводят в органических растворителях или в водных смесях таких растворителей. Ярким примером является производство биодизельного топлива из триглицеридов или свободных жирных кислот. В этих случаях НММ спирты применяют в качестве ацильных акцепторов для получения алкильных эфиров жирных кислот (АЭЖК). Спирты представляют собой и реагент, и растворитель. Метанол представляет собой предпочтительный спирт из-за цены и качества полу- 5 027459 чаемого биодизельного топлива.
Такой подход может допускать наличие воды в реакционной смеси, но требует ферментов, которые выдерживают высокие концентрации спирта, чтобы обеспечить движущую силу для протекания реакции.
Пататин (§о1ашс 206Р) приводили в контакт с 1 мМ хромогенного паранитрофенил бутирата в 10 мМ буфере, рН 6,5, при различных концентрациях метанола. Активности пататина в этих системах определяли с помощью измерения увеличения поглощающей способности при 405 нм на планшет-ридере ВюРаб Мобе1 680 и выражали в тОЦ/мин. Результаты показывают, что пататин без потери активности толерантен к содержанию метанола до 20% метанола, а также то, что может присутствовать более 40% метанола, прежде чем теряется вся активность.
Пример 2. Синтез алкильных эфиров жирных кислот с пататином в расплавленном субстрате.
мг пататина (8о1ашс 206Р) в 100 мкл деминерализованной воды приводили в контакт с 5 ммоль (1,0 г) лауриновой кислоты (Мегск 8.05333) и эквимолярным количеством метанола (Мегск 1,06007), этанола (Рто1аЬо 83804.360), н-пропанола (А1£а Аекат А19902), изопропанола (Рто1аЬо 437423Р) или нбутанола (Мегск 1.01990). Добавляли деминерализованную воду с получением 20% (об./об.) спиртового раствора в воде. Смеси инкубировали в течение ночи при 45°С при интенсивном перемешивании.
Сравнительный метиловый эфир жирной кислоты (МЭЖК) получали с помощью растворения 1 г кокосового жира (8щтаЛ1бпс11 С1758) в 100 мл метанола, содержащем 1,85% концентрированной соляной кислоты (Мегск 1.00317), смесь нагревали с обратным холодильником в течение 4 часов. Продукт реакции выпаривали с получением прозрачного желтого масла.
Продукты реакции анализировали с помощью тонкослойной хроматографии на пластинах силикагеля (Ишр1а1е Ζ26529-2), которые были предварительно обработаны 2,4% борной кислотой (Р1ика 15663) в 50% водным этаноле.
Все образцы разводили в 20 раз в элюентах ТСХ, состоящих из н-гексана (Мегск 1.04367), эфира (Мегск 1.00921) и уксусной кислоты (Рго1аЬо 20104.334) в соотношении 80:20:2, и один капиллярный объем наносили на пластину. Пластину погружали в элюент и сушили на воздухе. Пластину опрыскивали концентрированной серной кислотой (Мегск 1.00371). В результате такой обработки лауриновая кислота и ее эфиры выглядели как белые пятна на синем фоне (фиг. 10).
Проявленные пластины ТСХ показывает свободную лауриновую кислоту на дорожке 1 примерно на середине высоты и МЭЖК, находящиеся близко к верху на дорожке 2.
Лауриновая кислота, инкубированная с пататином и спиртами, показывает остаточные количества свободных жирных кислот на полпути со дна и алкильных эфиров жирных кислот сверху, в верхней части пластины. Пататин катализирует образование АЭЖК из свободных жирных кислот и небольших спиртов, при этом наибольшая степень превращения происходит в случае метанола, этанола и нпропанола, в указанном порядке.
Пример 3. Синтез алкильных эфиров жирных кислот с пататином в органическом растворителе.
Октановую кислоту (Мегск 8.00192.1000) и 20% метанол (Мегск ПСНгоюР 1.06007.1000) смешивали в изооктане (8щтаЛ1бпс11 360597) таким образом, что октановая кислота и метанол находились в примерно эквимолярных количествах (11,0 мл октановой кислоты и 16,8 мл 20% метанола в изооктане). Добавляли 500 мг пататина (8о1ашс 206Р) и 40 мг воды. Пустой образец подготовливали таким же образом, но без пататина. Реакцию проводили в закрытых пробирках, которые нагревали на водяной бане с закрытой крышкой. Растворы инкубировали в течение четырех часов при температуре 50°С. Аликвоты брали из реакционных сосудов и разводили в 10 раз в чистом ацетонитриле (Мегск ЫСЬтокоК 1.00030.25007) и анализировали с помощью ВЭЖХ. ВЭЖХ оборудовали колонкой с силикагелем с обращенной фазой (С18-сефароза), УФ-детектором, работающим на 202 нм (Кпаиег §таШше ИУ ЭеЮсЮг 2600) и градиентным смесителем (§таШше Мападег 5000 е1иеп! тгхет). Градиент ацетонитрила применяли для экспериментов ВЭЖХ.
Элюенты 50% ацетонитрила готовили с помощью смешивания с водой МгШф и 0,5 мкм фильтрации. Колонку предварительно обрабатывали элюентами. Образцы инъецировали непосредственно в ацетонитрил и элюировали градиентом ацетонитрила от 50 до 100% на протяжении 20 мин. Количественное определение метилового эфира жирной кислоты проводили по калибровочной кривой, полученной при помощи чистого метилового октаноата (ЫдтаЛИпсН 260673-230).
Образец пататина показал 12% конверсию октановой кислоты в соответствующий метиловый эфир, что указывало на успешную этерификацию.
Пример 4. Фосфолипазная активность пататина.
Фосфолипиды с ациловыми цепями различной длины диспергировали в водных растворах, содержащих 0,5% гуммиарабика и 100 мм ТгПоп Х100 с помощью обработки ультразвуком в течение 30 мин. Пататин добавляли в количестве до 100 мг и потребление гидроксида натрия контролировали с помощью установки рН-стат, работающей при рН 7,5.
Диацилглицерофосфохолины с длиной цепи до 9 восприимчивы к гидролизу пататином.
- 6 027459
Активность пататина по отношению к различным субстратам в ммоль/мин/г пататина при комнатной температуре
Длина 1,2-диацил-5п-3цепи глицерофосфохолин
ОБ
5,6
20,7
40,7
0,6
Этот эксперимент показал, что пататин способен гидролизовать фосфолипиды, и ожидается, что по этой причине он не будет деактивирован в присутствии фосфолипидов в среде этерификации.
Пример 5. Влияние соли на свободные жирные кислоты.
мл аликвоты октановой кислоты (Мегск 8.00192.1000) смешивали с деминерализованной водой или с насыщенным раствором хлорида калия (§1§таА1бт1сЬ Р9311) и кратковременно нагревали до 50°С. При охлаждении смесь раствора октановой кислоты-соли демонстрировала мутность в органической фазе и мыльный осадок на границе раздела, в то время как смесь октановая кислота - вода осталась прозрачной и не содержала мыла. Мутность указывает на частичное осаждение. Результаты показывали, что присутствие соли делает операции со свободными жирными кислотами более затруднительными.
Claims (10)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Способ селективного получения алкилового эфира жирной кислоты, включающий обеспечение жидкой среды, содержащей одну или более С4-С26 жирных кислот, один или более спиртов и нативный пататин, и обеспечение реакции указанной одной или более жирных кислот с указанным одним или более спиртами с получением алкилового эфира жирной кислоты, при этом указанный пататин присутствует в иммобилизованной форме, а спирт представляет собой метанол и/или этанол.
- 2. Способ селективного получения алкилового эфира жирной кислоты, включающий обеспечение жидкой среды, содержащей одну или более С4-С26 жирных кислот, один или более спиртов и нативный пататин, и обеспечение реакции указанной одной или более жирных кислот с указанным одним или более спиртами с получением алкилового эфира жирной кислоты, при этом указанный пататин присутствует в растворенной или молекулярно диспергированной форме, а спирт представляет собой по меньшей мере один С) -С3 одноатомный спирт.
- 3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что жирная кислота представляет собой С4-СР2 жирную кислоту, при этом алкиловый эфир жирной кислоты представляет собой метиловый или этиловый эфир С-1-С.у жирной кислоты.
- 4. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что указанная среда содержит, по существу, только содержащее жирные кислоты исходное сырье, содержащее коротко- или среднецепочечные жирные кислоты, и метанол или этанол.
- 5. Способ по п.4, отличающийся тем, что указанная среда не содержит растворитель.
- 6. Способ получения биодизельного топлива, включающий смешивание пататина с исходным сырьем, содержащим жирные кислоты, и с одним или более спиртами, при этом исходное сырье, содержащее жирные кислоты, содержит одну или более С4-С26 жирных кислот, и обеспечение реакции указанных одной или более жирных кислот с указанными одним или более спиртами, при этом указанный пататин присутствует в иммобилизованной форме, а спирт представляет собой метанол и/или этанол.
- 7. Способ получения биодизельного топлива, включающий смешивание пататина с исходным сырьем, содержащим жирные кислоты, и с одним или более спиртами, при этом исходное сырье, содержащее жирные кислоты, содержит одну или более С4-С26 жирных кислот, и обеспечение реакции указанных одной или более жирных кислот с указанными одним или более спиртами, при этом указанный пататин присутствует в растворенной или молекулярно диспергированной форме, а спирт представляет собой по меньшей мере один С -С3 одноатомный спирт.
- 8. Способ по п.6 или 7, отличающийся тем, что жирная кислота представляет собой С4-СР2 жирную кислоту, при этом алкиловый эфир жирной кислоты представляет собой метиловый или этиловый эфир С4-СР2 жирной кислоты.
- 9. Способ по любому из пп.6-8, отличающийся тем, что исходное сырье содержит, по существу, только содержащее жирные кислоты исходное сырье, содержащее коротко- или среднецепочечные жирные кислоты, и метанол или этанол.
- 10. Способ по п.9, отличающийся тем, что исходное сырье не содержит растворителя.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP12174894 | 2012-07-04 | ||
| PCT/NL2013/050489 WO2014007622A1 (en) | 2012-07-04 | 2013-07-03 | Lipase in short-chain esterification of fatty acids |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201491987A1 EA201491987A1 (ru) | 2015-06-30 |
| EA027459B1 true EA027459B1 (ru) | 2017-07-31 |
Family
ID=48833028
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201491986A EA025269B9 (ru) | 2012-07-04 | 2013-07-03 | Способы гидролиза триглицеридов с применением пататина |
| EA201491987A EA027459B1 (ru) | 2012-07-04 | 2013-07-03 | Липаза в короткоцепочечной этерификации жирных кислот |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201491986A EA025269B9 (ru) | 2012-07-04 | 2013-07-03 | Способы гидролиза триглицеридов с применением пататина |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20150189896A1 (ru) |
| EP (2) | EP2870252B1 (ru) |
| JP (2) | JP6231091B2 (ru) |
| CN (2) | CN104428420B (ru) |
| BR (2) | BR112014032741B1 (ru) |
| CA (2) | CA2873378C (ru) |
| DK (1) | DK2870252T3 (ru) |
| EA (2) | EA025269B9 (ru) |
| MX (2) | MX357703B (ru) |
| PL (1) | PL2870252T3 (ru) |
| WO (2) | WO2014007621A1 (ru) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3213640B1 (en) * | 2014-10-30 | 2021-07-21 | Fuji Oil Holdings Inc. | Long-chain polyunsaturated fatty-acid-containing fat and food containing same |
| US10640740B2 (en) | 2015-11-06 | 2020-05-05 | Cooperative AVEBE U.A. | Fermentation |
| EP3213638A1 (en) * | 2016-03-01 | 2017-09-06 | Coöperatie Avebe U.A. | Vegan cheese analogue |
| EP3599881A4 (en) * | 2017-03-31 | 2021-02-17 | J.R. Simplot Company | POTATO PROTEIN POWDERS |
| EP3578630B1 (en) | 2018-06-04 | 2020-12-02 | The Procter & Gamble Company | Liquid detergent composition |
| IL300231A (en) | 2020-07-30 | 2023-03-01 | Co?Peratie Koninklijke Avebe U A | Patatin as a binder in meat substitutes |
| EP3944769A1 (en) | 2020-07-30 | 2022-02-02 | Coöperatie Koninklijke Avebe U.A. | Patatin as binder in meat substitutes |
| IL305521A (en) * | 2021-03-02 | 2023-10-01 | Co?Peratie Koninklijke Avebe U A | Binder emulsified in patatin |
| MX2024001391A (es) | 2021-07-29 | 2024-02-27 | Cooeperatie Koninklijke Avebe U A | Patatina como aglutinante en productos alimenticios distintos de los sustitutos de la carne. |
| WO2023080785A1 (en) | 2021-11-03 | 2023-05-11 | Coöperatie Koninklijke Avebe U.A. | Patatin inhibition |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6398707B1 (en) * | 2001-05-31 | 2002-06-04 | Wen-Teng Wu | Method of preparing lower alkyl fatty acids esters and in particular biodiesel |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7226771B2 (en) * | 2002-04-19 | 2007-06-05 | Diversa Corporation | Phospholipases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them |
| US7943360B2 (en) * | 2002-04-19 | 2011-05-17 | Verenium Corporation | Phospholipases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them |
| EP3299465A1 (en) * | 2003-03-07 | 2018-03-28 | DSM IP Assets B.V. | Hydrolases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them |
| EP1920662A1 (en) * | 2006-11-10 | 2008-05-14 | Coöperatie Avebe U.A. | Native potato protein isolates |
| WO2008056977A1 (en) * | 2006-11-10 | 2008-05-15 | Coöperatie Avebe U.A. | Glycoalkaloid removal |
| JP2011512809A (ja) * | 2008-02-29 | 2011-04-28 | ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． | 短鎖脂肪に対して特異性の高いリパーゼおよびその使用 |
| US8703463B2 (en) * | 2009-03-10 | 2014-04-22 | Dsm Ip Assets B.V. | Pregastric esterase and derivatives thereof |
| JP2011148874A (ja) * | 2010-01-20 | 2011-08-04 | Daiki Axis:Kk | 脂肪酸アルキルエステルの製造方法とその製造装置 |
| JP5756972B2 (ja) | 2010-02-24 | 2015-07-29 | 国立研究開発法人産業技術総合研究所 | バイオディーゼル燃料の製造方法及びバイオディーゼル燃料組成物 |
| US20110211679A1 (en) * | 2010-02-26 | 2011-09-01 | Vladimir Mezhibovsky | Voice Response Processing |
| CN103119172B (zh) * | 2010-06-18 | 2016-05-11 | 布特马斯先进生物燃料有限责任公司 | 在提取发酵中用于醇移除的来源于油的提取溶剂 |
| WO2011159998A2 (en) | 2010-06-18 | 2011-12-22 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Production of alcohol esters and in situ product removal during alcohol fermentation |
| JP5793288B2 (ja) * | 2010-09-30 | 2015-10-14 | 綱 秀 典 金 | バイオ石油燃料製造方法と、それに使用する触媒および製造システム |
-
2013
- 2013-07-03 MX MX2014014876A patent/MX357703B/es active IP Right Grant
- 2013-07-03 EP EP13739848.3A patent/EP2870252B1/en active Active
- 2013-07-03 WO PCT/NL2013/050488 patent/WO2014007621A1/en active Application Filing
- 2013-07-03 BR BR112014032741-6A patent/BR112014032741B1/pt active IP Right Grant
- 2013-07-03 US US14/411,536 patent/US20150189896A1/en not_active Abandoned
- 2013-07-03 CN CN201380035725.8A patent/CN104428420B/zh active Active
- 2013-07-03 MX MX2014014866A patent/MX362234B/es active IP Right Grant
- 2013-07-03 EP EP13739849.1A patent/EP2870253A1/en active Pending
- 2013-07-03 JP JP2015520091A patent/JP6231091B2/ja active Active
- 2013-07-03 WO PCT/NL2013/050489 patent/WO2014007622A1/en active Application Filing
- 2013-07-03 EA EA201491986A patent/EA025269B9/ru not_active IP Right Cessation
- 2013-07-03 DK DK13739848.3T patent/DK2870252T3/da active
- 2013-07-03 JP JP2015520092A patent/JP6230601B2/ja active Active
- 2013-07-03 EA EA201491987A patent/EA027459B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2013-07-03 CN CN201380035673.4A patent/CN104428419A/zh active Pending
- 2013-07-03 PL PL13739848T patent/PL2870252T3/pl unknown
- 2013-07-03 CA CA2873378A patent/CA2873378C/en active Active
- 2013-07-03 US US14/411,954 patent/US10034485B2/en active Active
- 2013-07-03 BR BR112014032171A patent/BR112014032171A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2013-07-03 CA CA2873366A patent/CA2873366C/en active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6398707B1 (en) * | 2001-05-31 | 2002-06-04 | Wen-Teng Wu | Method of preparing lower alkyl fatty acids esters and in particular biodiesel |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| ALASDAIR R. MACRAE, JEAN E. VISICCHIO, ALEXANDRA LANOT: "Application of potato lipid acyl hydrolase for the synthesis of monoacylglycerols", JOURNAL OF THE AMERICAN OIL CHEMISTS’ SOCIETY, SPRINGER BERLIN / HEIDELBERG, vol. 75, no. 11, 1 November 1998 (1998-11-01), pages 1489 - 1494, XP055044737, ISSN: 0003021X, DOI: 10.1007/s11746-998-0083-y * |
| ISO MAMORU ET AL: "Production of biodiesel fuel from triglycerides and alcohol using immobilized lipase", JOURNAL OF MOLECULAR CATALYSIS. B, ENZYMATIC, ELSEVIER, AMSTERDAM,, NL, vol. 16, no. 1, 20 November 2001 (2001-11-20), NL, pages 53 - 58, XP002417337, ISSN: 1381-1177, DOI: 10.1016/S1381-1177(01)00045-5 * |
| PINSIRODOM P, PARKIN K L: "SELECTIVITY OF CELITE-IMMOBILIZED PATATIN (LIPID ACYL HYDROLASE) FROM POTATO (SOLANUM TUBEROSUM L.) TUBERS IN ESTERIFICATION REACTIONS AS INFLUENCED BY WATER ACTIVITY AND GLYCEROL ANALOGUES AS ALCOHOL ACCEPTORS", JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, BOOKS AND JOURNALS DIVISION, vol. 48, no. 02, 1 February 2000 (2000-02-01), pages 155 - 160, XP001147929, ISSN: 0021-8561, DOI: 10.1021/jf990338g * |
| PRAPHAN PINSIRODOM, KIRK L. PARKIN: "Fatty acid and product selectivities of potato tuber lipid acyl hydrolase in esterification reactions with glycerol in organic media", JOURNAL OF THE AMERICAN OIL CHEMISTS’ SOCIETY, SPRINGER BERLIN / HEIDELBERG, vol. 76, no. 10, 1 October 1999 (1999-10-01), pages 1119 - 1125, XP055044701, ISSN: 0003021X, DOI: 10.1007/s11746-999-0083-6 * |
| PRAPHAN PINSIRODOM, KIRK L. PARKIN: "Selectivity of potato tuber lipid acyl hydrolase toward long-chain unsaturated FA in esterification reactions with glycerol analogs in organic media", JOURNAL OF THE AMERICAN OIL CHEMISTS’ SOCIETY, SPRINGER BERLIN / HEIDELBERG, vol. 80, no. 4, 1 April 2003 (2003-04-01), pages 335 - 340, XP055044641, ISSN: 0003021X, DOI: 10.1007/s11746-003-0699-8 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2014007622A1 (en) | 2014-01-09 |
| EA025269B9 (ru) | 2017-03-31 |
| JP6231091B2 (ja) | 2017-11-15 |
| CA2873366A1 (en) | 2014-01-09 |
| CA2873366C (en) | 2021-06-15 |
| JP2015521845A (ja) | 2015-08-03 |
| EP2870253A1 (en) | 2015-05-13 |
| EA025269B1 (ru) | 2016-12-30 |
| MX2014014866A (es) | 2015-04-08 |
| EA201491986A1 (ru) | 2015-05-29 |
| EA201491987A1 (ru) | 2015-06-30 |
| WO2014007621A1 (en) | 2014-01-09 |
| CN104428419A (zh) | 2015-03-18 |
| CA2873378C (en) | 2020-01-14 |
| CN104428420A (zh) | 2015-03-18 |
| BR112014032741B1 (pt) | 2022-01-25 |
| CA2873378A1 (en) | 2014-01-09 |
| CN104428420B (zh) | 2018-06-01 |
| MX362234B (es) | 2019-01-09 |
| US10034485B2 (en) | 2018-07-31 |
| BR112014032171A2 (pt) | 2017-06-27 |
| US20150189896A1 (en) | 2015-07-09 |
| BR112014032741A2 (pt) | 2017-06-27 |
| JP2015527060A (ja) | 2015-09-17 |
| MX2014014876A (es) | 2015-03-09 |
| EP2870252B1 (en) | 2020-01-22 |
| EP2870252A1 (en) | 2015-05-13 |
| MX357703B (es) | 2018-07-20 |
| US20150140618A1 (en) | 2015-05-21 |
| DK2870252T3 (da) | 2020-03-16 |
| PL2870252T3 (pl) | 2020-07-13 |
| JP6230601B2 (ja) | 2017-11-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA027459B1 (ru) | Липаза в короткоцепочечной этерификации жирных кислот | |
| KR101502191B1 (ko) | Ｅｐａ 농축유 및 ｄｈａ 농축유의 제조 방법 | |
| Lozano et al. | A clean enzymatic process for producing flavour esters by direct esterification in switchable ionic liquid/solid phases | |
| US8227010B2 (en) | Process for producing oil and fat rich in diacylglycerol | |
| Garcia et al. | A comparative study of biocatalysis in non-conventional solvents: Ionic liquids, supercritical fluids and organic media | |
| Quilles et al. | Modulation of the activity and selectivity of the immobilized lipases by surfactants and solvents | |
| NO166877B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av et immobilisert lipasepreparat for omestring av fett. | |
| JP2003500082A (ja) | 蒸留−酵素的エステル交換の組合せによるポリ不飽和脂肪酸エステルの濃縮及び精製 | |
| AU2011376066B2 (en) | Enzymatic transesterification with lipases immobilized on hydrophobic resins in water solutions | |
| WO1990013656A1 (en) | Enzymatic production of glycerides containing omega-3 fatty acids | |
| Liu et al. | Purification and characterization of a lipase with high thermostability and polar organic solvent-tolerance from Aspergillus niger AN0512 | |
| US5316927A (en) | Production of monoglycerides by enzymatic transesterification | |
| MX2014009145A (es) | Proceso enzimatico para la hidrolisis de grasa y aceite. | |
| Li et al. | Synthesis of DHA/EPA-rich phosphatidylcholine by immobilized phospholipase A 1: effect of water addition and vacuum condition | |
| Garcia-Galan et al. | Biotechnological prospects of the lipase from Mucor javanicus | |
| JPH01137988A (ja) | エステル交換脂の製造法 | |
| WO1990004033A1 (en) | Production of monoglycerides by enzymatic transesterification | |
| Li et al. | Preparation of highly pure n-3 PUFA-enriched triacylglycerols by two-step enzymatic reactions combined with molecular Distillation | |
| Compton et al. | Influence of solid supports on acyl migration in 2-monoacylglycerols: purification of 2-MAG via flash chromatography | |
| EP2403955B1 (fr) | Procédé de production d'ester d'acide ricinoléique par transestérification enzymatique sélective | |
| Jonzo et al. | Concentrates of DHA from fish oil by selective esterification of cholesterol by immobilized isoforms of lipase from Candida rugosa | |
| JPH08294394A (ja) | ジグリセリドの製造法 | |
| Natadiputri et al. | One-step transesterification reaction using methanol-stable lipase for omega-3 fatty acid ethyl ester production | |
| Vikbjerg et al. | Strategies for lipase‐catalyzed production and the purification of structured phospholipids | |
| Turner et al. | Selected uses of enzymes with critical fluids in analytical chemistry |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM |