EA027306B1

EA027306B1 - Соединения феноксиэтил дигидро-1h-изохинолина в качестве селективных антагонистов ер4

Info

Publication number: EA027306B1
Application number: EA201591915A
Authority: EA
Inventors: Джереми Шуленбург Йорк
Original assignee: Эли Лилли Энд Компани
Priority date: 2013-05-17
Filing date: 2014-05-09
Publication date: 2017-07-31
Also published as: CA2908400C; BR112015026967A8; CN105209438A; SA515370035B1; WO2014186218A1; JP2016519140A; JP6148400B2; PT2997015T; TWI636046B; AU2014265762A1; HUE033574T2; EP2997015B1; KR20150140831A; US9371289B2; EA201591915A1; US20160052889A1; CN105209438B; KR101798315B1; TW201534588A; BR112015026967A2

Abstract

В изобретении предложено соединение формулы Iгде R представляет собой H или F; или его фармацевтически приемлемая соль.

Description

(57) В изобретении предложено соединение формулы I

027306 Β1

где К представляет собой Н или Р; или его фармацевтически приемлемая соль.

Настоящее изобретение относится к новым соединениям феноксиэтил дигидро-1Н-изохинолина, к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения, к способам применения указанных соединений для лечения физиологических нарушений и к промежуточным веществам и процессам, полезным при синтезе указанных соединений.

Настоящее изобретение относится к области лечения воспалительных заболеваний, таких как артрит, включая остеоартрит и ревматоидный артрит, и дополнительно включает боль, связанную с указанными состояниями. Артрит поражает миллионы людей только в США, и он является главной причиной нарушения здоровья. Кроме того, было признано, что артрит является значимой причиной нарушения здоровья у домашних животных. Методы лечения часто включают НПВС (нестероидные противовоспалительные лекарственные средства) или ингибиторы ЦОГ-2, которые могут вызвать у пациентов нежелательные побочные эффекты со стороны сердечно-сосудистой системы и/или желудочно-кишечного тракта. В связи с этим, некоторым пациентам может быть противопоказано применение НПВС или ингибиторов ЦОГ-2. Таким образом, существует потребность в альтернативном лечении остеоартрита и ревматоидного артрита предпочтительно без побочных эффектов существующих методов лечения.

Четыре подтипа рецепторов простагландина Е₂ (ПГЕ₂) были обозначены следующим образом: ЕР1, ЕР2, ЕР3 и ЕР4. Было обнаружено, что ЕР4 является главным рецептором, задействованным в возникновении боли воспалительного характера в суставах в моделях ревматоидного артрита и остеоартрита у грызунов. Следовательно, для лечения артрита, включая боль при артрите, может быть полезен селективный антагонист ЕР4. Кроме того, было высказано предположение, что, поскольку антагонизм ЕР4 не влияет на биосинтез простаноидов, таких как РС1₂ и ТхА₂, для селективного антагониста ЕР4 могут быть не характерны возможные побочные эффекты со стороны сердечно-сосудистой системы, наблюдаемые при применении НПВС и ингибиторов ЦОГ-2.

В АО 2013/004290 раскрыты производные циклических аминов в качестве антагонистов рецепторов ЕР4. В ϋδ 2005/0250818 описаны определенные орто-замещенные арил- и гетероариламидные соединения, которые являются селективными антагонистами рецепторов ЕР4, обладающие анальгетическим действием. Кроме того, в АО 2011/102149 описаны определенные соединения, являющиеся селективными антагонистами ЕР4, которые пригодны для лечения заболеваний, опосредованных Ш-23.

В настоящем изобретении предложены определенные новые соединения, которые являются селективными ингибиторами ЕР4 относительно ЕР1, ЕР2 и ЕР3. Кроме того, в настоящем изобретении предложены определенные новые соединения, которые могут снизить интенсивность побочных эффектов со стороны желудочно-кишечного тракта в сравнении с традиционными НПВС.

Соответственно в настоящем изобретении предложено соединение формулы I

где К представляет собой Н или Е;

или его фармацевтически приемлемая соль.

В настоящем изобретении также предложен способ лечения артрита у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли. В настоящем изобретении дополнительно предложен способ лечения остеоартрита у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли. Кроме того, в настоящем изобретении предложен способ лечения ревматоидного артрита у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли. В настоящем изобретении также предложен способ лечения боли, связанной с артритом, у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли. В настоящем изобретении дополнительно предложен способ лечения боли, связанной с остеоартритом или ревматоидным артритом, у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.

Кроме того, в настоящем изобретении предложено соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии, в частности для лечения остеоартрита. Кроме того, в настоящем изобретении предложено соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль для применения для лечения ревматоидного артрита. В настоящем изобретении также предложено соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль для применения для лечения боли, связанной с остеоартритом или ревматоидным артритом. Кроме того, в настоящем изобретении предложено приме- 1 027306 нение соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для производства медикамента для лечения остеоартрита. В настоящем изобретении предложено применение соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для производства медикамента для лечения ревматоидного артрита. В настоящем изобретении также предложено применение соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для производства медикамента для лечения боли, связанной с остеоартритом или ревматоидным артритом.

В настоящем изобретении дополнительно предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями, разбавителями или вспомогательными веществами. Согласно конкретному варианту реализации композиция дополнительно содержит один или более терапевтических агентов. В настоящем изобретении также предложена фармацевтическая композиция для лечения артрита, содержащая соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль. Настоящее изобретение также охватывает новые промежуточные вещества и способы синтеза соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.

В тексте настоящего документа термины лечение и лечить включают ограничение, замедление, остановку или прекращение прогрессирования или уменьшение тяжести существующего симптома или нарушения.

В тексте настоящего документа термин пациент обозначает млекопитающее, включая человека, домашнее животное, такое как кошка или собака, или домашний скот, такой как лошадь, корова или свинья. Человек и домашние животные являются предпочтительными пациентами.

В тексте настоящего документа термин эффективное количество обозначает количество или дозу соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, которое при однократном или многократном введении пациенту дает желаемый эффект у пациента, проходящего диагностику или получающего лечение.

Эффективное количество может легко быть определено лечащим диагностом в качестве специалиста в данной области техники с применением известных методов и путем учета результатов, полученных в аналогичных обстоятельствах. При определении эффективного количества для пациента лечащий диагност принимает во внимание ряд факторов, включая в качестве неограничивающих примеров: вид млекопитающего, его размер, возраст и общее состояние здоровья; наблюдаемое конкретное заболевание или нарушение; степень или распространенность или тяжесть заболевания или нарушения; реакцию отдельного пациента; конкретное вводимое соединение; способ введения; показатели биодоступности вводимого препарата; избранную схему лечения; одновременное применение других препаратов и другие актуальные обстоятельства.

Соединения согласно настоящему изобретению обычно эффективны в широком диапазоне доз. Например, диапазон ежедневных доз обычно составляет от примерно 0,01 до примерно 50 мг/кг массы тела. В некоторых случаях дозы ниже нижней границы вышеназванного диапазона могут быть более чем адекватными, тогда как в других случаях могут применяться еще большие дозы, что будет сопровождаться приемлемыми побочными эффектами, и, таким образом, не предполагается, что представленный выше диапазон доз ограничивает каким-либо образом объем настоящего изобретения.

Соединения согласно настоящему изобретению предпочтительно представляют собой фармацевтические композиции для введения любым способом, при котором соединение будет обладать биодоступностью. Наиболее предпочтительно, чтобы такие композиции предназначались для приема внутрь. Такие фармацевтические композиции и способы их получения хорошо известны в данной области техники (см., например, Кешт§1оп: Тйе Зшепсе апй Ргасйсе о£ Рйагшасу (Ώ.Β. Тгоу, Еййог, 21δί Εάΐίΐοη, Ырртсой, №ιίΙιαηΐδ & ι'ΙΕι'ηδ, 2006).

Соединения согласно настоящему изобретению особенно полезны в способах лечения согласно настоящему изобретению, но определенные группы, заместители и конфигурации являются предпочтительными. В нижеследующих абзацах описаны такие предпочтительные группы, заместители и конфигурации. Следует понимать, что данные предпочтения применимы как к способам лечения, так и к новым соединениям согласно настоящему изобретению.

Предпочтительным является соединение формулы !а

или его фармацевтически приемлемая соль.

- 2 027306

Кроме того, предпочтительным является соединение формулы 1Ь

или его фармацевтически приемлемая соль.

Особенно предпочтительным соединением является 4-[(18)-1-[[(3К)-2-(2-феноксиэтил)-3,4-дигидро1Н-изохинолин-3-карбонил]амино]этил]бензойная кислота со структурной формулой

или ее фармацевтически приемлемая соль.

4-[(18)-1-[[(3К)-2-(2-Феноксиэтил)-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-3-карбонил]амино]этил]бензойная кислота наиболее предпочтительна.

На следующих схемах не были указаны некоторые стереохимические центры и были опущены некоторые заместители для повышения ясности изложения, однако не предполагается, что этот факт будет ограничивать информацию, передаваемую данными схемами, каким-либо образом. Кроме того, отдельные изомеры, энантиомеры или диастереомеры могут быть отделены или разделены специалистом в данной области техники в любой удобный момент в ходе синтеза соединений формулы I такими способами, как метод селективной кристаллизации или хиральная хроматография (см., например, I. 1асциеь, е1 а1., Епапйошегь, Каееша1еь, апб Кеьо1ийопь, 1оЬп ШПеу апб 8опь, 1пс., 1981, и ЕЕ Ейе1 и 8.Н. ^йеп, 81;егеосйеш1ьйу о£ Огдашс Сошроипбь, ШПеу-1п1егьс1епсе, 1994). В качестве альтернативы могут также применяться обладающие хиральными свойствами исходные материалы, что понятно специалисту в данной области техники. Кроме того, промежуточные вещества, приведенные в нижеследующих схемах, содержат азотзащитные группы. Условия защиты и снятия защиты хорошо известны специалисту в данной области техники и описаны в литературе (см., например, Огеепе'ь Рго1есйуе Огоирь ΐη Огдашс 8уп1йеь1ь, РоигФ Ебйюп, Ьу Ре1ег О.М. Ши1ь апб Тйеобога Огеепе, .1оИп ШПеу апб 8опь, 1пс. 2007).

В тексте настоящего документа кПа изб. обозначает килопаскаль избыточного давления; ЗГ обозначает подходящую защитную группу; СИМД называет среду Игла, модифицированную по способу Дульбекко; Вос обозначает терт-бутокси карбонильную защитную группу; ДМСО обозначает диметилсульфоксид; ТГФ обозначает тетрагидрофуран; Е1Ас обозначает этилацетат; Εΐ₂Ο обозначает диэтиловый эфир; ТБМЭ называет терт-бутилметиловый эфир; БОФ обозначает бензотриазол-1илокситрис(диметиламино)фосфония гексафторфосфат; ПГЕ₂ обозначает простагландин Е₂; ФБС обозначает фетальную бычью сыворотку; ИБМК обозначает (3-изобутил-1-метилксантин); МЭС обозначает (2-(И-морфолино)этансульфоновую кислоту; ГЭПЭС обозначает (2-[4-(2гидроксиэтил)пиперазин-1-ил-этансульфоновую кислоту); ГФВР обозначает гомогенную флуоресценцию с временным разрешением; ЭПЧ обозначает эмбриональную почку человека; ССРХ обозначает сбалансированный солевой раствор Хэнкса; ЕС₈₀ обозначает концентрацию агента, которая дает 80% максимально возможной эффективности для данного агента; и 1С₅₀ обозначает концентрацию агента, которая дает 50% максимально возможного ингибирующего ответа для данного агента.

Соединения согласно настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемые соли могут быть получены различными способами, известными специалисту в данной области техники, некоторые из которых проиллюстрированы нижеследующими схемами, приготовлениями и примерами. Конкретные этапы синтеза для каждого из описанных путей могут комбинироваться различными способами или сочетаться с этапами из других схем для получения соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли. Продукты каждого из этапов в нижеприведенных схемах могут быть восстановлены традиционными способами, включая экстрагирование, выпаривание, осаждение, хроматографию, фильтрацию, измельчение и кристаллизацию. Реагенты и исходные материалы легко доступны специалисту в данной области техники. Все заместители, если не указано иное, определены заранее. Следует понимать,

- 3 027306 что не предполагается как-либо ограничить область настоящего изобретения с помощью данных схем, приготовлений и примеров.

Схема 1

На схеме 1, на этапе А, защищенная 3,4-дигидро-1Н-изохинолин-3-карбоксильная кислота, в которой ЗГ представляет собой подходящую азотзащитную группу, такую как трет-бутокси карбонильная защитная группа (Вос), соединяется с метил 4-(1-аминоэтил)бензоатом в стандартных условиях с получением защищенного изохинолин амида со структурой (1). Например, защищенную 3,4-дигидро-1Низохинолин-3-карбоксильную кислоту растворяли в подходящем органическом растворителе, таком как дихлорметан, охлаждали до температуры примерно 0°С и обрабатывали примерно 1,1 экв. подходящего органического основания, такого как триэтиламин. Затем добавляли по капле, перемешивая, примерно 1,1 экв. изобутила хлорформиата. Смеси давали перемешаться примерно 20 мин при температуре 0°С, затем добавляли примерно 1,1 экв. метил 4-(1-аминоэтил)бензоат. Затем реакционную смесь перемешивали в течение примерно 1 ч при комнатной температуре. Защищенный изохинолин амид (1) изолируют, используя методы, хорошо известные специалисту в данной области техники, такие как методы экстрагирования. Например, в смесь добавляют воду, разделяют слои, и происходит мытье органической фазы водным бисульфатом калия, а затем - бикарбонатом натрия. Органическую фазу затем высушивают над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при сниженном давлении с получением защищенного изохинолин амида (1).

На схеме 2, на этапе А, снимается защита с защищенного изохинолин амида (1) в условиях, хорошо известных специалисту в данной области техники, с получением изохинолин амида со снятой защитой (2). Например, примерно 10 экв. ацетилхлорида добавляли по капле к примерно 11 экв. этанола, растворенного в подходящем органическом растворителе, таком как этилацетат, при температуре примерно 0°С. Смесь перемешивали в течение примерно 30 мин, нагревали до комнатной температуры, а затем раствор примерно 1 экв. защищенного изохинолин амида (1) в этилацетате добавляли, перемешивая, к реакционной смеси. Затем реакционную смесь перемешивали при температуре примерно 40°С в течение 12 ч. Затем ее охлаждали до комнатной температуры и изолировали изохинолин со снятой защитой с помощью методов, хорошо известных специалисту в данной области техники. Например, собирали твердое вещество путем фильтрации и высушивали его при сниженном давлении. К твердому веществу добавляли воду, а затем добавляли 32% водного аммиака до тех пор, пока рН смеси не достиг примерно 10. Твердые вещества вновь собирали с помощью фильтрации и высушивали при сниженном давлении при температуре примерно 45°С с получением изохинолин амида со снятой защитой (2).

В качестве альтернативы, на схеме 2, на этапе А, защита защищенного изохинолин амида (1) может быть снята в условиях, хорошо известных специалисту в данной области техники с получением соли НС1 изохинолин амида со снятой защитой (2). Например, защищенный изохинолин амид (1) растворяли в 4 М раствора хлороводорода в 1,4-диоксане. Реакционную смесь перемешивали в течение примерно 12 ч при

- 4 027306 комнатной температуре. Затем изолировали соль НС1 изохинолин амида со снятой защитой (2) путем концентрирования реакционной смеси при сниженном давлении.

На схеме 2, на этапе В, изохинолин амид со снятой защитой (2) комбинировали с феноксильным соединением с подходящим заместителем с получением феноксиэтил изохинолина (3). Например, силикагель комбинировали с подходящим органическим растворителем, таким как дихлорметан, при температуре примерно 22°С, и раствор примерно 2 экв. периодата натрия в воде добавляли по капле в смесь силикагеля, перемешивая последнюю. Смесь перемешивали в течение примерно 30 мин и добавляли примерно 1,5 экв. 3-фенокси-1,2-пропандиола. Смесь перемешивали в течение еще примерно 30 мин, затем фильтровали для удаления твердых веществ, отделяли слои и сушили органический слой над сульфатом магния. Органический слой вновь фильтровали и добавляли примерно 1 экв. изохинолин амида со снятой защитой (2), а затем примерно 2 экв. частями подходящего восстановителя, такого как триацетоксиборогидрид. Реакционную смесь затем оставляли для перемешивания в течение примерно 1 ч, после чего добавляли избыточную воду. Водный раствор 32% аммиака добавляли в смесь до тех пор, пока рН водного слоя не достиг примерно 10.

Феноксиэтил изохинолин (3) затем изолировали и очищали способами, хорошо известными специалисту в данной области техники. Например, слои реакционной смеси разделяли, органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при сниженном давлении. Неочищенную нефть растворяли в подходящем органическом растворителе, таком как ТБМЭ, добавляли воду, а затем 1 М водного НС1. Полученную суспензию перемешивали в течение 30 мин, а затем концентрировали при сниженном давлении для удаления органического растворителя. Осадок затем собирали путем фильтрации и добавляли в смесь воды и ТБМЭ. Смесь обрабатывали 32% водным аммиаком до тех пор, пока рН водного слоя не достигал примерно 10, слои разделяли, и органический слой мыли насыщенным водным хлоридом натрия, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при сниженном давлении. Полученное сырье очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с подходящим элюентом, таким как этилацетат/гексаны, с получением очищенного феноксиэтил изохинолина (3).

В качестве альтернативы, на схеме 2, на этапе В, соль НС1 изохинолин амида со снятой зашитой (2) комбинировали с феноксильным соединением с подходящим замещением с получением феноксиэтил изохинолина (3). Например, примерно 1,5 экв. 2-феноксиацетальдегида, такого как 2(4фторфенокси)ацетальдегид, комбинировали с примерно 1 экв. соли НС1 изохинолин амида со снятой защитой (2) в подходящем органическом растворителе, таком как 1,2-дихлорэтан. К этой смеси добавляли примерно 1,4 экв. подходящего восстановителя, такого как триацетоксиборогидрид натрия, и перемешивали реакционную смесь в течение примерно 12 ч при комнатной температуре. Затем к реакционной смеси добавляли насыщенный водный бикарбонат натрия и изолировали и очищали феноксиэтил изохинолин (3) с помощью методов, известных специалисту в данной области техники. Например, реакционную смесь экстрагировали с помощью подходящего органического растворителя, такого как этилацетат, комбинировали органические экстракты, мыли их насыщенным водным хлоридом натрия, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при сниженном давлении. Данное сырье затем очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с подходящим элюентом, таким как этилацетат/гексаны, с получением очищенного феноксиэтил изохинолина (3).

Схема 3

На схеме 3, этап А, феноксиэтил изохинолин (3) гидролизовали в условиях, хорошо известных специалисту в данной области техники, с получением соединения формулы I. Например, феноксиэтил изохинолин (3) растворяли в подходящем органическом растворителе, таком как ТГФ, или смеси метанол/ТГФ, а затем обрабатывали, используя от примерно 2 до 4 экв. подходящего водного основания, такого как водный гидроксид натрия. Реакционную смесь затем перемешивали при температуре от примерно 20°С до примерно 40°С в течение примерно 12 ч. Затем соединение формулы I изолировали и очищали в условиях, хорошо известных в данной области техники. Например, реакционную смесь концентрировали при сниженном давлении для удаления органического растворителя. Добавляли воду, и мыли водный слой подходящим органическим растворителем, таким как ТБМЭ. Водный слой затем охлаждали до температуры примерно 5°С и обрабатывали подходящей водной кислотой, такой как соляная кислота, перемешивая, до тех пор, пока рН не достигал примерно 2. Затем реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и собирали твердые вещества методом фильтрации. Затем твердые вещества добавляли в воду, нагревали до примерно 80°С в течение примерно 1 ч, охлаждали до комнатной темпе- 5 027306 ратуры, собирали методом фильтрации и сушили при сниженном давлении при температуре примерно

45°С в течение примерно 12 ч. Высушенное твердое вещество затем добавляли к подходящему органическому растворителю, такому как изопропилацетат, и перемешивали в течение примерно 5 ч. Твердые вещества собирали методом фильтрации и сушили при сниженном давлении с получением очищенного соединения формулы I.

Фармацевтически приемлемые соли и традиционные методы их получения хорошо известны специалисту в данной области техники; см., например, ОоиМ, Р.Ь., За1! §е1ес!юп Гог Ьа§1с бгидз, 1п1егпа1юпа1 1оигпа1 оГ Рйагшасеийсз, 33: 201-217 (1986); Вазйп, К.Т, е! а1. ЗаИ 8е1ес1юп апб ОрПпп/аПоп Ргосебигез Гог Рйагшасеийса1 \е\у Сйеш1са1 Епййез, Огдашс Ргосезз Кезеагсй апб Оеуе1ортеп1, 4: 427-435 (2000); и Вегде, З.М., е! а1., РйагтасеиБса1 За11§, 1оигпа1 оГ Рйагшасеийса1 Зшепсез, 66: 1-19, (1977). Специалисту в области синтеза известно, что соединения согласно настоящему изобретению можно преобразовать в фармацевтически приемлемую соль и можно изолировать в виде такой соли с помощью методов и условий, известных специалисту в данной области техники. Приготовления и примеры Нижеследующие приготовления и примеры дополнительно иллюстрируют настоящее изобретение. Если не указано иное, соединения, проиллюстрированные в тексте данного документа, названы и пронумерованы с использованием программы Лссе1гу§ Огам (названия ИЮПАК).

Пример получения 1. Синтез терт-бутил(3К)-3-[[(1З)-1-(4-метоксикарбонилфенил)этил]карбамоил]3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоксилата.

СО₂СН₃

Τ Ί н ιί Ύ

I Α Д/ % о СНз (НзС)зСО О

Схема 1, этап А.

К смеси (3К)-2-терт-бутоксикарбонил-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-3-карбоксильной кислоты (40,0 г, 141,4 ммоль) и дихлорметана (784 мл) с температурой 0°С добавляли триэтиламин (21,7 мл, 155,5 ммоль). Затем добавляли по капле изобутила хлороформиат (20,3 мл, 155,5 ммоль). По окончании добавления перемешивали смесь при температуре 0°С в течение 20 мин. Затем добавляли метил(З)-4-(1аминоэтил)бензоат (27,9 г, 155,5 ммоль) и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли воду (400 мл), разделяли слои и мыли органический слой с помощью 1 М водного КНЗО₄(500 мл), затем насыщенным водным ЫаНСО₃ (500 мкл). Органическую фазу сушили над МдЗО₄, фильтровали для удаления твердых веществ и концентрировали фильтрат при сниженном давлении с получением титульного соединения в виде твердого вещества белого цвета (60 г, выход 97%). Масс-спектр (т/ζ): 339 ([М + Н - Вос]+), 383 ([М + Н - т-Бу]⁺), 439 ([М + Н]+).

Пример получения 2. Синтез метил 4-[(1З)-1-[[(3К)-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3карбонил]амино]этил]бензоата.

% /СО₂СНз

Схема 2, этап А.

Охлаждали смесь этилацетата (214 мл) и этанола (87,6 мл, 1,51 моль) до температуры 0°С, а затем добавляли по капле ацетилхлорид (97,4 мл, 1,37 моль). Смесь перемешивали в течение 30 мин, при этом давая ей нагреться до комнатной температуры. Добавляли раствор трет-бутил(3К)-3-[[(1З)-1-(4метоксикарбонилфенил)этил]карбамоил]-3,4-дигидро-1Н-изохи нолин-2-карбоксилата (60 г, 137 ммоль) в этилацетате (480 мл), а затем перемешивали полученную смесь при температуре 40°С в течение ночи. Смесь охлаждали до комнатной температуры, затем изолировали полученный осадок методом фильтрации и сушили его при сниженном давлении. К твердому веществу добавляли воду (300 мл), а затем добавляли 32% водный раствор аммиака до тех пор, пока рН смеси не достиг 10. Изолировали суспендированные твердые вещества методом фильтрации, затем сушили их в вакуумном сушильном шкафу при температуре 45°С в течение ночи для получения титульного соединения в виде белого твердого вещества (44 г, выход 95%). Масс-спектр (т/ζ): 339 ([М + Н]+), 677 ([2М + Н]+), 699 ([2М + Ыа]+).

- 6 027306

Пример получения 3. Синтез метило 4-[(18)-1-[[(3К)-2-(2-феноксиэтил)-3,4-дигидро-1Низохинолин-3-карбонил]амино]этил]бензоата.

Схема 2, этап В.

К перемешиваемой смеси силикагеля (200 г, 3,33 моль) и дихлорметана (1100 мл) при температуре 22°С добавляли по капле раствор периодата натрия (56,2 г, 260 ммоль) в воде (352 мл). По окончании добавления смесь перемешивали в течение дополнительных 30 мин, затем добавляли 3-феноксил-1,2пропандиол (34,5 г, 195 ммоль) с получением слабого экзотермического эффекта. Смесь перемешивали в течение дополнительных 30 мин, затем фильтровали для удаления твердых веществ, отбрасывали водный слой и сушили органический слой над Мд80₄, фильтровали для удаления твердых веществ и обрабатывали фильтрат метил 4-[(18)-1-[[(3К)-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3-карбонил]амино]этил]бензоатом (44 г, 130 ммоль). Затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (57,4 г, 260 ммоль) малыми частями. По завершении добавления перемешивали смесь в течение одного дополнительного часа, затем добавляли воду (200 мл). Добавляли 32% водный раствор аммиака до тех пор, пока рН водного слоя не достиг 10. Слои разделяли, сушили органический слой над Мд80₄, фильтровали для удаления твердых веществ и концентрировали фильтрат при сниженном давлении. Растворяли полученную неочищенную нефть в ТБМЭ (300 мл), затем добавляли воду (250 мл) и 1 М водной хлористоводородной кислоты (200 мл). Полученную суспензию перемешивали в течение 30 мин, концентрировали при сниженном давлении для удаления ТБМЭ и изолировали полученный белый осадок методом фильтрации. Данный осадок наливали в перемешиваемую смесь воды (400 мл) и ТБМЭ (400 мл) и добавляли 32% водный раствор аммиака до тех пор, пока рН водного слоя не достигал 10. Удаляли водный слой и мыли органический слой насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл). Изолировали органический слой, сушили его над полученным в результате сырьем, выполняли флэш-хроматографию на силикагеле с использованием от 30 до 70% Мд80₄, фильтровали для удаления твердых веществ и концентрировали при сниженном давлении. Полученное сырье подвергали флэш-хроматографии на силикагеле, применяя 30-70% градиента Е1Ас/гексана. Объединяли фракции, содержавшие продукт, и концентрировали их при сниженном давлении с получением титульного соединения в виде белого твердого вещества (44 г, выход 74%). Масс-спектр (т/ζ): 459 ([М + Н]+).

Пример получения 4. Синтез метил 4-[(18)-1-[[(3К)-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3карбонил] амино] этил] бензоат гидрохлорида.

Схема 2, этап А.

Растворяли трет-бутил (3К)-3-[[(18)-1-(4-метоксикарбонилфенил)этил]карбамоил]-3,4-дигидро-1Низохинолин-2-карбоксилат (5,5 г в 12,5 ммоль) в 4 М раствора хлористого водорода в 1,4-диоксане (30 мл 120 ммоль). Смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре, а затем концентрировали смесь при сниженном давлении с получением титульного соединения в виде белого твердого вещества (4,70 г, выход 100%). Масс-спектр (т/ζ): 339 ([М + Н]+), 677 ([2М + Н]+), 699 ([2М + Ыа]+).

Пример получения 5. Синтез метил 4-[(18)-1-[[(3К)-2-(2-(4-фторфенокси)этил)-3,4-дигидро-1Низохинолин-3-карбонил]амино]этил]бензоата.

- 7 027306

Схема 2. Этап В.

К смеси метил 4-[(18)-1-[[(3К)-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3-карбонил]амино]этил]бензоат гидрохлорида (800 мг, 2,13 ммоль) и 2-(4-фторфенокси)ацетальдегида (493 мг, 3,2 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (10,7 мл) добавляли триацетоксиборогидрид натрия (633 мг, 2,99 ммоль) и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли насыщенный водный ΝαΙ 1СО₃ (25 мл) и экстрагировали водный слой этилацетатом (2x25 мл). Комбинированные органические слои мыли насыщенным водным ΝαίΊ (25 мл), сушили органическую фазу Μ§δΟ₄, фильтровали и концентрировали фильтрат при сниженном давлении. Полученное сырье подвергали флэш-хроматографии на силикагеле с использованием от 0 до 60% градиента Е1Ас/гексан. Объединяли фракции, содержавшие продукт, и концентрировали их при сниженном давлении с получением титульного соединения в виде бесцветной пены (550 мг, выход 54%). Масс-спектр (т/ζ): 477 ([М + Н]+).

Пример 1. Синтез 4-[(18)-1-[[(3К)-2-(2-феноксиэтил)-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-3карбонил]амино]этил]бензо иной кислоты.

Схема 3. Этап А.

Смесь метил 4-[(18)-1-[[(3К)-2-(2-феноксиэтил)-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-3-карбонил]амино]этил]бензоата (41,5 г, 90,5 ммоль), ТГФ (291 мл) и 2 М водного гидроксида натрия (181 мл, 360 ммоль) перемешивали при температуре 40°С в течение ночи. Концентрировали при сниженном давлении для удаления ТГФ. Добавляли воду (200 мл), затем мыли водный слой ТБМЭ (2x200 мл). Охлаждали водный слой до температуры 5°С и добавляли концентрированную соляную кислоту, перемешивая, до тех пор, пока рН не достиг 2 (согласно анализу с помощью индикаторной бумаги для определения рН). Перемешивая, давали смеси нагреться до комнатной температуры в течение 30 мин, затем изолировали твердые вещества методом фильтрации. Добавляли твердые вещества в воду (500 мл) и нагревали до 80°С в течение 1 ч. Охлаждали смесь до комнатной температуры, изолировали твердые вещества методом фильтрации и сушили твердые вещества в вакуумном сушильном шкафу при температуре 45°С в течение ночи. Добавляли твердые вещества к изопропилацетату (300 мл) и перемешивали интенсивно в течение 5 ч. Изолировали твердые вещества методом фильтрации при сниженном давлении с получением титульного соединения в виде белого твердого вещества (26 г, выход 60%). Масс-спектр (т/ζ): 445 ([М + Н]+).

Пример 2. Синтез 4-[(18)-1-[[(3К)-2-(2-(4-фторфенокси)этил)-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-3карбонил]амино]эт ил] бензойной кислоты гидрохлорида.

Схема 3. Этап А.

Растворяли метил 4-[(18)-1-[[(3К)-2-(2-(4-фторфенокси)этил)-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-3карбонил]амино]этил]бензоат (550 мг, 1,15 ммоль) в смеси метанола (10 мл) и тетрагидрофурана (10 мл). Добавляли 5н. водный раствор гидроксида натрия (0,462 мл, 2,31 ммоль), затем перемешивали смесь при комнатной температуре в течение ночи. Концентрировали указанную смесь при сниженном давлении с получением белого твердого вещества. Добавляли 4 М раствора хлороводорода в 1,4-диоксане (10 мл, 40 ммоль) и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 10 мин. Удаляли суспендированные твердые вещества методом фильтрации, ополаскивая указанные твердые вещества ТГФ (5 мл). Концентрировали объединенный фильтрат при сниженном давлении с получением белого твердого вещества. Материал растирали в порошок в горячем диэтиловом эфире (10 мл) и фильтровали с получением титульного соединения в виде белого твердого вещества (535 мг, выход 93%). Масс-спектр (т/ζ): 463 ([М + Н]+), 485 ([М + Να]+).

Связывание ΐη νΐΐΓΟ с ЕР1, ЕР2, ЕР3 и ЕР4 человека.

Мембраны НЕР1 и НЕР4 получают из рекомбинантных клеток НЕК293, стабильно экспрессирующих рецепторы ЕР1 человека (учетный номер в ГенБанке ΑΥ275470), или ЕР4 (учетный номер в ГенБан- 8 027306 ке ΑΥ429109). Мембраны ЙЕР2 и ЙЕР3 получают из клеток НЕК293, транзиторно трансфицированных плазмидами рецептора ЕР2 (учетный номер в ГенБанке ΑΥ275471), или ЕР3 (изоформа VI: учетный номер в ГенБанке ΑΥ429108). Замороженную клеточную массу гомогенизировали в гомогенизирующем буфере, используя тефлоновый/ стеклянный гомогенизатор. Готовили аликвоты мембранных белков и быстро замораживали, поместив на сухой лед, перед хранением при температуре -80°С. Гомогенизирующий буфер (см., например, МаиЬаск, К.А., Впйзй 1оигпа1 о£ Рйагтасо1оду, 156: 316-327 (2009)), содержал 10 мМ Тпз-НС1, рН 7,4, 250 мМ сахарозы, 1 мМ ЭДТА, 0,3 мМ индометацина, плюс Сотр1е!е™, содержащий ЭДТА, полученный от компании Косйе Мо1еси1аг ВюсйетюаВ (номер в каталоге 1697498).

Значения К_а для связывания [3Н]-ПГЕ₂ с каждым рецептором определяли путем исследования насыщения связывания или гомологического соревнования. Соединения испытывали в формате 96 лунок, с применением серий трехкратного разбавления для создания 10-точечной кривой. Разбавленное соединение инкубировали с мембраной ЕР1 в количестве 20 мкг/лунка, ЕР2 в количестве 10 мкг/лунка, ЕР3 в количестве 1 мкг/лунка или ЕР4 в количестве от 10 до 20 мкг/лунка в течение 90 мин при температуре 25°С в присутствии [³Н]-ПГЕ2 (компания РегктЕ1тег, от 118 до 180 Ки/ммоль) в количестве от 0,3 до 0,5 нМ. Реакцию связывания проводили в буферном растворе МЕЗ в количестве 200 мкл (10 мМ МЕЗ, рН 6,0, с КОН, 10 мМ МдС12 и 1 мМ ЭДТА), используя 96-луночные планшеты из полистирола с глубокими лунками объемом 0,5 мл. Неспецифическое связывание рассчитывали путем сравнения связывания в присутствии и в отсутствие ПГЕ2 в количестве 2 мкм. Мембраны собирали методом фильтрации (коллектор ТотТек), мыли 4 раза холодным буферным раствором (10 мМ МЕЗ, рН 6,0, с КОН, 10 мМ МдС12 и 1 мМ ЭДТА), сушили в печи при температуре 60°С и рассчитывали радиоактивность, выражая ее как число импульсов в минуту (ЧИМ), используя детектор ТорСоип!®. Процент-специфическое связывание рассчитывали как процентную долю связывания в отсутствие какого-либо ингибитора, скорректированную по неспецифическому связыванию в присутствии ПГЕ2 в количестве 2 мкМ. При анализе данных использовали нелинейное логистическое уравнение с 4 параметрами (уравнение АВазе 205) следующего вида: у=(А+((В-А)/(1+((С/х)^ЛЭ)))), причем у=% специфического ингибирования, А=низшая точка кривой; В=высшая точка кривой; С=относительная 1С50=концентрация, вызывающая ингибирование на 50% на основании диапазона данных от верхней точки до нижней точки; I) наклон Хилла=наклон кривой. Конверсия К_; по значениям 1С₅₀ (К_;=1С₅₀/(1+[Ь]/Ка), где [Ь] обозначает концентрацию лиганда).

Таблица 1

Связывание ΐπ уйго в примерах 1 и 2 с ЕР1, ЕР2, ЕР3 и ЕР4 человека

Исследуемое НЕР1, К, (нМ) НЕР2, К, (нМ) НЕРЗ, К, (нМ) НЕР4, К, (нМ) соединение

Прим. 1

7920±5810(п=3) 1320±1780(п=4) >14800 (п=3) 0,403±0,247(п=9)

Прим. 2 4650 (п=1) 331±72(п=2) >14600 (п=1) 0,380±0,142(п=4)

Соединения испытывали в соответствии с процедурами, по существу описанными выше. Данные в табл. 1 показывают, что соединения по примеру 1 и примеру 2 связываются с ЙЕР4 в субнаномолярных концентрациях. Данные в табл. 1 также показывают, что соединения по примеру 1 и примеру 2 связываются с БЕР4 крепче, чем с ЙЕР1, ЙЕР2 и ЙЕР3, что свидетельствует о селективности в отношении рецептора БЕР4.

Функционально-антагонистическая активность ΐπ уйго ЕР4 у человека.

Анализ проводили на рекомбинантных клетках НЕК293 со стабильной экспрессией рецептора ЕР4 человека. Культуры клеток поддерживали путем культивирования в СИМД с высоким содержанием глюкозы и пиридоксина гидрохлорида (1пуйгодеп) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (ФБС), 1 мМ пирувата натрия, 10 мМ ГЭПЭС, 500 мкг/мл генетицина и 2 мМ Ь-глютамина. Конфлюэнтные культуры выращивали при температуре 37°С при содержании в атмосфере 5% СО₂. Клетки собирали, используя 0,25% Трипсина-ЭДТА, суспендированного в замороженной среде (ФБС с 6% ДМСО), при 10 клеток/мл, и аликвоты хранили в жидком азоте. Непосредственно перед анализом клеткам давали оттаять в ДМСО, центрифугировали их и ресуспендировали в буферном растворе цАМФ.

Ингибирование выработки цАМФ, стимулированной ПГЕ₂, антагонистами ЕР4 измеряли с помощью ГФВР (в каталоге ОзЬю № 62АМ4РЕВ). Аликвотный эквивалент 4000 клеток инкубировали с аналитическим буферным раствором цАМФ в количестве 50 мкл, содержащим ПГЕ2 в такой концентрации, чтобы получить концентрацию ЕС₈₀ (0,188 нМ ПГЕ₂, получено от компании Зщта, номер в каталоге Р5640-10мг), и антагонисты ЕР4, при комнатной температуре в течение 20 мин. Аналитический буферный раствор цАМФ содержал 500 мл ССРХ, 0,1% БСА, 20 мМ ГЭПЭС и 200 мкМ ИБМК (Зщта 15879). В качестве положительного контроля использовали СЕ042794 (см. АО 2005/021508, пример 68, 4-{(1З)1-[({5-хлор-2-[(4-фторфенил)окси]фенил}карбонил)амино]этил}бензойная кислота; см. также Мигазе, А., е! а1., Ьйе Заенсез, 82:226-232 (2008)). Для измерения уровней цАМФ конъюгат цАМФ-62 и конъюгат анти-цАМФ-криптата в лизирующем буфере инкубировали с обработанными клетками при комнатной температуре в течение 1 ч. Сигнал ГФВР детектировали с помощью планшет-ридера ЕηV^з^оη® (компания Регкт-Е1тег) для расчета отношения флуоресценции при 665 нм к флуоресценции при 620 нм. Пер- 9 027306 воначальные данные конвертировали в количество цАМФ (пмоль/лунка) с помощью стандартной кривой цАМФ, создаваемой для каждого эксперимента. Данные анализировали с помощью нелинейного логистического уравнения с 4 параметрами (уравнение АВаке 205), имевшего следующий вид: у=(А+((ВА)/(1+((С/х)^лБ)))), причем у=% специфического ингибирования, А=низшая точка кривой, В=высшая точка кривой , С=относительная 1С₅₀=относительная 1С₅₀=концентрация, вызывающая ингибирование на 50% на основании диапазона данных от верхней точки до нижней точки; Б=наклон Хилла=наклон кривой.

Соединения были испытаны в соответствии с процедурами, по существу описанными выше. Для соединения по примеру 1 1С₅₀ составляла 0,752±0,538 нМ (п=12), а для соединения по примеру 2 1С₅₀ составляла 0,450±0,256 нМ (п=4) при измерении для ЕР4 человека. Это свидетельствует о том, что соединения по примеру 1 и примеру 2 являются антагонистами ЕР4 у человека ίη νίίτο.

Функционально-антагонистическая активность ίη νίίτο ЕР4 у крысы ЕР4 кДНК крысы (учетный номер в ГенБанке ΝΜ03276) клонировали в вектор 3.1 пкДНК, а затем трансфицировали в клетки НЕК293 для экспрессии рецептора. Стабильный клон ЕР4 крысы масштабировали, а затем замораживали в качестве клеточного банка для последующего скрининга соединений. Для испытания соединений - антагонистов ЕР4 в клетках гЕР4 давали оттаять замороженным клеткам, а затем ресуспендировали клетки в аналитическом буферном растворе цАМФ. Буферный раствор цАМФ готовили из ССРХ без фенолового красного (Нус1опе, 8Н30268) с добавлением 20 мМ ГЭПЭС (Нус1опе, 8Н30237), 0,1% БСА (ОФсо, 15260) и 125 мкМ ИБМК (§1§ша, 15879) (см., например, Мигаке, А., е1 а1., ЫГе 8с1епсек, 82:226-232 (2008)). Клетки помещали в 96-луночные плоскодонные планшеты с половинным объемом лунок из полистирола черного цвета (Сок1ат 3694). Проводили серию разбавлений соединений ДМСО для получения 10-точечных кривых концентрация-ответ. Затем разбавленные соединения добавляли в аналитический буферный раствор цАМФ, содержавший ПГЕ₂ (Саутап 14010, в такой концентрации, чтобы получить ЕС₈₀), при этом отношение ДМСО/буфер составляло 1/100. Клетки обрабатывали соединениями в присутствии ПГЕ₂(концентрация ЕС₈₀) в течение 30 мин при комнатной температуре. Количественное выражение уровней цАМФ, выработанного в клетках, находили с помощью набора реактивов ГФВР для цАМФ (С1кЪю 62АМ4РЕС). Планшеты читали на планшет-ридере ЕпУщюп, используя оптимизированный протокол ГФВР (РегкшЕ1тег). 1С₅₀ рассчитывали с помощью программы Огаркрай Рпкт (ν. 4) с нелинейной регрессией, сигмоидальное проведение кривой доза-ответ.

Соединения были испытаны в соответствии с процедурами, по существу описанными выше. Для соединения по примеру 1 1С₅₀ составила 2,0 нМ (п=1), а для соединения по примеру 2 1С₅₀ составила 6,7 нМ (п=1), согласно измерениям для ЕР4 у крысы. Это свидетельствует о том, что соединения по примеру 1 и примеру 2 являются антагонистами ЕР4 щ νίίτο у крысы.

Антагонистическая активность ш νίίτο в цельной крови человека.

Считается, что ингибирующее воздействие ПГЕ₂ на ЛПС-индуцированный синтез ФНОа из макрофагов/моноцитов опосредовано рецепторами ЕР4 (см. Мигаке, А., еί а1., ЬгГе 8аепсек, 82:226-232 (2008)). Способность соединения по примеру 1 нейтрализовывать ингибирующее воздействие ПГЕ2 на ЛПСиндуцированный синтез ФНОа в цельной крови человека является свидетельством функциональной активности.

Кровь собирали у здоровых добровольцев в вакуумные пробирки с гепарином натрия. Доноры не принимали НПВС или целекоксиб за 48 ч или глюкокортикоиды за две недели до сдачи крови. Кровь из всех пробирок/от всех доноров сливали в конические центрифужные пробирки типа Ρа1сοη емкостью 50 мл, а 98 мкл/лунка распределяли в 96-луночный планшет с культурами тканей (ΤηΚοΗ 3072). Соединения разбавляли в ДМСО до 100Х окончательный результат, а 1 мкл/лунка в трех параллельных испытаниях добавляли в кровь для получения 7-точечных кривых концентрация-ответ. Кровь предварительно обрабатывали соединениями при температуре 37°С, в увлажненной атмосфере с содержанием СО₂ 5%, в течение 30 мин, после чего добавляли 1 мкл/лунка раствора 1 мг/мл липополисахарида (ЛПС) (81дта 0111:В4) в 0,2 мг/мл бычьего сывороточного альбумина (БСА)/ФСБ, как с 1 мМ ПГЕ₂ (Саутап 14010), так и без него, для получения окончательной концентрации ЛПС 10 мкг/мл как при наличии 10 нМ ПГЕ₂, так и при его отсутствии. Планшеты были инкубированы в течение 20-24 ч при температуре 37°С в увлажненной атмосфере с содержанием СО₂ 5%. Планшеты центрифугировали при 1800х г в течение 10 мин при температуре 22°С в центрифуге Ерреп^гГ 5810К. Плазму крови извлекали и клеточного слоя и переносили на полипропиленовые планшеты с ν-образным дном. Уровни ФНОа в 2 мкл плазмы крови определяли с помощью коммерчески доступного иммуноферментного анализа (Κ&Ό 8ук1етк ΌΥ210), используя планшеты Iтти1οη 4 НВХ (Ткегию 3855) и 3,3',5,5' тетраметилбифенил-4,4'-диамин субстрат (КРЬ 50-76-03). Планшеты читали при Ад₅₀-А₆₅₀ на планшет-ридере (ΜοΚαιΡιτ Бе\зсек Уегкатах) с помощью программного обеспечения 8ОРТтахРКО (ν. 4.3.1). 1С₅₀ рассчитывали с помощью программы Огаркраб Рпкт (ν. 4) с нелинейной регрессией, сигмоидальное проведение кривой доза-ответ. Результаты выражали как геометрическое среднее ± стандартное отклонение; п=количество независимых определений.

- 10 027306

Соединения были испытаны в соответствии с процедурами, по существу описанными выше. Для соединения согласно примеру 1 1С₅₀ составила 39±21 нМ (п=8), а для соединения по примеру 2 1С₅₀ составила 61 ±55 нМ (п=5) при измерении для ЕР4 человека. Это свидетельствует о том, что соединения согласно примеру 1 и примеру 2 являются антагонистами ЕР4 в анализе индукции ФНОа в крови человека.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ где К представляет собой Н или Р;

или его фармацевтически приемлемая соль.
2. Соединение или соль по п.1, представляющее собой
3. Соединение или соль по любому из пп.1 или 2, представляющее собой
4. Соединение по п.3, представляющее собой 4-[(18)-1-[[(3К)-2-(2-феноксиэтил)-3,4-дигидро-1Низохинолин-3-карбонил]амино]этил]бензойную кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль.
5. Соединение по п.4, представляющее собой 4-[(18)-1-[[(3К)-2-(2-феноксиэтил)-3,4-дигидро-1Низохинолин-3-карбонил]амино]этил]бензойную кислоту

- 11 027306
6. Соединение по п.3, представляющее собой 4-[(18)-1-[[(3К)-2-(2-(4-фторфенокси)этил)-3,4дигидро-1Н-изохинолин-3-карбонил]амино]этил]бензойную кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль.
7. Способ лечения остеоартрита у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п.1.
8. Способ лечения ревматоидного артрита у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п.1.
9. Способ лечения боли, связанной с остеоартритом или ревматоидным артритом, у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п.1.
10. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по пп.1-6 в терапии воспалительных заболеваний.
11. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по пп.1-6 для лечения остеоартрита.
12. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по пп.1-6 для лечения ревматоидного артрита.
13. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по пп.1-6 для лечения боли, связанной с остеоартритом или ревматоидным артритом.
14. Фармацевтическая композиция, имеющая активность селективного антагониста ЕР4, содержащая соединение или его фармацевтически приемлемую соль по пп.1-6 с одним или более фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или вспомогательным веществом.