EA026914B1 - Состав, содержащий соединение бензотиазолона - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к фармацевтической композиции в твердой пероральной лекарственной форме, содержащей ацетатную соль (R)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[d]тиазол-2(3Н)-она.

Description

Настоящее изобретение относится к новым фармацевтическим композициям, содержащим (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол2(3Н)-он, к способам получения таких композиций и к их использованию при лечении и профилактике заболеваний, таких как мышечная дистрофия, атрофия, связанная с бездействием, кахексия или саркопения.

Предпосылки создания изобретения

Соединения бензотиазолона, которые представляют собой агонисты бета-2-адреноцептора, описаны в \νϋ 2004/16601 и \νϋ 2006/056471. В \УО 2005/110990 также описаны бензоконденсированные гетероциклы, такие как бета-2 агонисты.

В то время как бета-2 агонисты давно известны своими бронхолитическими свойствами, они также известны своей способностью продуцировать гипертрофию скелетных мышц.

Многочисленные исследования были сосредоточены на терапевтических применениях анаболических свойств бета-2 агонистов для облегчения мышечной атрофии и улучшения функции мышц. Тем не менее, этот класс соединений был также связан с нежелательными побочными эффектами, в том числе повышенным риском неблагоприятных сердечно-сосудистых осложнений. Таким образом, использование бета-2 агонистов при мышечной атрофии до сих пор было ограничено гипертрофией сердца и потенциально вредных эффектов на функцию сердечно-сосудистой системы.

Существует необходимость в новых бета-2 агонистах, а именно, в эффективном лекарственном средстве. В частности, новый бета-2 агонист должен эффективно связываться с бета-2-адренорецептором, в то же время, проявляя небольшую аффинность к другим рецепторам, таким как, например, бета-1-адренорецептор, альфа-1А адренорецептор или 5НТ_2С рецептор, и показывает функциональную активность в качестве агониста. Он должен быть метаболически стабильным и обладать благоприятными фармакокинетическими свойствами. Он должен быть нетоксичным и проявлять мало побочных эффектов, в частности, меньше кардиальных побочных эффектов, чем известные на рынке бета-2 агонисты, такие как, например, формотерол. Кроме того, потенциальное лекарственное средство должно находиться в физической форме, которая является стабильной, не гигроскопичной и легко формулируется.

Сущность изобретения

Существует, следовательно, потребность в создании соединения, имеющего, по меньшей мере, некоторые из свойств, описанных выше, где соединение находится в физической форме, которая может улучшить эффективность, биодоступность, стабильность и/или прием пациентом.

Эти цели направлены на разработку композиции, как описано в настоящем документе, предоставление композиции для применения при заболеваниях, особенно для лечения мышечной дистрофия, атрофии, связанной с бездействием, кахексии или саркопении, как описано в настоящем документе, и обеспечение способа получения композиции, как описано в настоящем документе.

Различные варианты осуществления изобретения описаны в настоящем документе.

Определенные аспекты, предусмотренные в настоящем документе, относятся к фармацевтической композиции в твердой лекарственной форме для перорального применения, содержащей от 0,01 до 15% (мас./мас.) (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она и один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов, в которой (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол2(3Н)-он находится в форме ацетатной соли.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу производства указанной фармацевтической композиции.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения или профилактики мышечной дистрофии, атрофии, связанной с бездействием, кахексии или саркопении, включающему введение указанной фармацевтической композиции.

Изложение сущности изобретения

Соединение по настоящему изобретению представляет собой селективный бета-2 агонист. В частности, он показывает повышенную аффинность к бета-2-адренорецептору, которая больше, чем его аффинность по отношению к бета-1 адренорецептору или альфа-1А адренорецептору, по сравнению с известными бета-2 агонистами, такими как формотерол. Неожиданным образом, но также показывает более низкую аффинность к рецептору серотонина (5НТ_2С) и нижнюю функциональную активность в 5НТ2С экспрессирующих клетках, чем его рацемат или его соответствующий энантиомер, указывая, что он не влияет на двигательную активность и потребление пищи, которая может вызвать снижение массы тела, потенциально противодействуя бета-2 агонист-индуцированной гипертрофии скелетных мышц.

Отрицательное влияние агонистов рецептора 5НТ2С на потребляемую калорийность и массу тела описано 1. НаНогй апй 1. НаггоМ ίη НапйЪ Ехр. РЪагшасо1. 2012; (209):349-56.

Композиция по настоящему изобретению, содержащая соединение по настоящему изобретению, следовательно, потенциально полезна при лечении широкого спектра заболеваний, в частности, при лечении или профилактике заболеваний, связанных с мышечной атрофией, таких как мышечная дистро- 1 026914 фия, атрофия, связанная с бездействием, кахексия или саркопения.

Также предполагается использование в лечении кахексии. Все формы кахексии потенциально излечимы композицией по настоящему изобретению, в том числе рак, например, раковая кахексия.

Краткое описание фигур

На фиг. 1 показано увеличение массы скелетных мышц и массы сердца у крыс, которым инъецировали формотерола против соединения А (соединение по настоящему изобретению) - (значения выражены в виде среднего ± 8ЕМ (п=5-6); пул скелетных мышц (икроножной-камбаловидной-большеберцовой), нормализованный по начальной массе тела, масса сердца, нормализованная по массе мозга.

На фиг. 2а показаны увеличения скорости ритмического сокращения в синоатриальных узлах кролика при использовании формотерола против соединения А (соединение по настоящему изобретению).

На фиг. 2Ь показано увеличение пейсмекерной активности в сердцах кроликов при использовании формотерола против соединения А (соединение по настоящему изобретению).

На фиг. 3 а и 3Ь показано изменение частоты сердечных сокращений у крыс в результате подкожной болюсной инъекции соединения А (соединение по настоящему изобретению) или формотерола, соответственно.

На фиг. 3 с показано среднее изменение частоты сердечных сокращений у крыс при введении формотерола против соединения А (соединение по настоящему изобретению).

На фиг. 4а и 4Ь показано изменение частоты сердечных сокращений у макак-резусов в результате подкожной болюсной инъекции соединения А (соединение по настоящему изобретению) или формотерола, соответственно.

На фиг. 5 показана картина дифракции рентгеновских лучей на порошке кристаллической ацетатной соли Соединения А (соединение по настоящему изобретению).

Подробное описание

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей (К)-7-(2-(1-(4бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-он и один или несколько фармацевтически приемлемых наполнителей.

В дальнейшем, если не указано иное, термины имеют следующее значение.

Фармацевтическая композиция, как используется в настоящем описании, представляет собой смесь, содержащую активный ингредиент, для введения млекопитающему, например, человеку, для профилактики, лечения и контроля конкретного заболевания или состояния, влияющих на млекопитающих.

Термин фармацевтически приемлемый, как используется в настоящем описании, относится к соединениям, материалам, композициям и/или лекарственным формам, которые являются, в рамках тщательного медицинского заключения, подходящими для применения в контакте с тканями млекопитающих, особенно человека, без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции и других проблемных осложнений, соразмерных с разумным соотношением выгода/риск.

Как правило, термин активный ингредиент относится к любому соединению, веществу, лекарственному средству или активному ингредиенту, имеющему терапевтическое или фармакологическое действие, и который подходит для введения млекопитающему, например, человеку, в композиции, особенно подходящей для перорального введения.

В фармацевтической композиции по настоящему изобретению активный ингредиент представляет собой (К)-7 -(2-( 1 -(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1 -гидроксиэтил)-5гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-он.

Как используется в настоящем описании, термин соединение А, соединение по изобретению или соединение по настоящему изобретению относится к (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-ону.

В фармацевтической композиции по настоящему изобретению активный ингредиент (К)-7-(2-(1-(4бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-он представлен в виде ацетатной соли (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)5-гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-она.

Как используется в настоящем описании, абсолютная стереохимия выражается в соответствии с системой Кана-Ингольда-Прелога (СаЬп-1пдо1б-Рге1од). Когда соединение представляет собой чистый энантиомер, то стереохимия каждого хирального атома углерода может быть указана как К- или 8-. Разделенные соединения, абсолютная конфигурация которых неизвестна, обозначаются (+) или (-), в зависимости от направления (право- или левовращающий), в котором они вращают плоскость поляризации света при длине волны натрия Ό. Любой асимметричный атом (например, углерод и т.п.) соединения может присутствовать в рацемической или энантиомерно обогащенной, например, (К)-, (8)-или (К,8)конфигурации. Рацемическая смесь 50:50 стереоизомеров обозначена как (К,8) и энантиомерно обогащенные формы энантиомерного избытка (К) и (8), соответственно, или (8) или (К) формы. Энантиомерный избыток обычно представлен уравнением Е=((т1-т2)/(т1+т2))х100%, где т1 и т2 представляют собой массу соответствующих энантиомерных форм К и 8.

- 2 026914

Соединение по настоящему изобретению содержит один асимметричный центр, который определен в терминах абсолютной стереохимии как (К). Его соответствующий энантиомер определяется как (8), который является менее активной формой.

В некоторых вариантах осуществления изобретения асимметричный атом имеет по меньшей мере 95, 98 или 99% энантиомерного избытка в (К)-конфигурации.

В одном из вариантов осуществления изобретения предложена фармацевтическая композиция в твердой пероральной лекарственной форме, содержащая ацетатную соль (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она, и один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов, в которой ацетатная соль (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она присутствует в энантиомерном избытке, составляющем по меньшей мере 95%. В указанном варианте осуществления композиция, предпочтительно содержит 0,01-15% (мас./мас.), более предпочтительно 0,01-10% (мас./мас.), наиболее предпочтительно 0,01-5% (мас./мас.), еще более предпочтительно 0,01-2% (мас./мас.), еще более предпочтительно 0,1-1% (мас./мас.) (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она.

В одном из вариантов осуществления изобретения предложена фармацевтическая композиция в твердой пероральной лекарственной форме, содержащая ацетатную соль (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она, и один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов, в которой ацетатная соль (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она присутствует в энантиомерном избытке, составляющем по меньшей мере 98%. В указанном варианте осуществления композиция, предпочтительно содержит 0,01-15% (мас./мас.), более предпочтительно 0,01-10% (мас./мас.), наиболее предпочтительно 0,01-5% (мас./мас.), наиболее предпочтительно 0,01-2% (мас./мас.), еще более предпочтительно 0,1-1% (мас./мас.) (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она.

В одном из вариантов осуществления изобретения предложена фармацевтическая композиция в твердой пероральной лекарственной форме, содержащая ацетатную соль (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она, и один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов, в которой ацетатная соль (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она присутствует в энантиомерном избытке, составляющем по меньшей мере 99%. В указанном варианте осуществления композиция, предпочтительно содержит 0,01-15% (мас./мас.), более предпочтительно 0,01-10% (мас./мас.), еще более предпочтительно 0,01-5% (мас./мас.), еще более предпочтительно 0,01-2% (мас./мас.), наиболее предпочтительно 0,1-1% (мас./мас.) (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она.

В зависимости от выбора исходных материалов и способов химического синтеза, соединения могут присутствовать в форме одного из возможных изомеров или в виде их смесей, например, в виде чистых оптических изомеров, или в виде смеси изомеров, например, рацематов. Оптически активные (К)- и (8)-изомеры могут быть получены с использованием хиральных синтонов или хиральных реагентов, или разделены с использованием традиционных способов. Все таутомерные формы заявленного соединения включены в настоящее изобретение.

Соответственно, используемое в настоящем описании соединение по настоящему изобретению может быть в виде таутомеров или их смесей.

Любые образующиеся рацематы конечных продуктов или промежуточных соединений синтеза могут быть разделены на оптические антиподы известными способами, например, разделением диастереомерных солей, полученных с оптически активной кислотой или основанием, и отделения оптически активного кислотного или основного соединения. В частности, основной фрагмент, таким образом, может быть использован, для разделения соединения по настоящему изобретению в его оптические антиподы, например, фракционной кристаллизацией соли, образованной с оптически активной кислотой, например, винной кислотой, дибензоилвинной кислотой, диацетилвинной кислотой, ди-О,О'-п-толуоилвинной кислотой, миндальной кислотой, яблочной кислотой или камфор-10-сульфоновой кислоты. Рацемические или энантиомерно обогащенные продукты также могут быть отделены с помощью хиральной хроматографии, например, жидкостной хроматографии высокого давления (ВЭЖХ) с использованием хирального адсорбента.

В настоящем изобретении фармацевтическая композиция содержит (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-он в форме ацетатной соли.

Фармацевтически приемлемые соли соединения, используемого в настоящем изобретении, могут быть синтезированы из основного фрагмента, обычными химическими способами. Как правило, такие соли могут быть получены взаимодействием форм свободного основания соединения со стехиометрическим количеством соответствующей кислоты. Такие реакции обычно проводят в воде или в органическом растворителе или в смеси двух. Как правило, использование неводных сред, таких как эфир, этилацетат, этанол, изопропанол или ацетонитрил, желательно, если это практически возможно. Списки до- 3 026914 полнительных подходящих солей можно найти, например, РепипфопЕ РЬагтасеийса1 8с1спсс5. 20'¹' ей., Маск РиЪНкЫпд Сотрапу, ЕаЯоп. Ра., (1985); апй ίη НапйЬоок оГ РЬагтасеийса1 8аЙ8: Ргорегйек, 8е1есНоп, апй Ике Ьу 81аЬ1 апй ХУегтШН (^йеу-уСн, ^ешйеш, Сегтапу, 2^пй гесЕей ейШоп, 2011).

В одном из аспектов настоящего изобретения ацетатная соль (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2метилпропан-2-иламино)-1 -гидроксиэтил)-5 -гидроксибензо [й]тиазол-2(3Н)-она образована взаимодействием (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо_- [й]тиазол-2(3Н)-она с уксусной кислотой в подходящем растворителе.

В определенном аспекте настоящего изобретения ацетатная соль (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она образована в соответствии с процедурой, описанной в примере 3.

В определенном аспекте настоящего изобретения ацетатная соль (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она образована в соответствии со способом, описанным в примере 3а.

Если не указано иное, концентрация активного ингредиента в фармацевтической композиции по настоящему изобретению приведена в % (мас./мас.) свободного основания указанного активного ингредиента.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению содержит от 0,01 до 15% (мас./мас.) активного ингредиента.

В одном из вариантов осуществления композиция содержит от 0,01 до 10% (мас./мас.) активного ингредиента.

В одном из вариантов осуществления композиция содержит от 0,01 до 5% (мас./мас.) активного ингредиента.

В одном из вариантов осуществления композиция содержит от 0,01 до 2% (мас./мас.) активного ингредиента.

В одном из вариантов осуществления композиция содержит от 0,1 до 1% (мас./мас.) активного ингредиента.

Композиции по изобретению подходят для перорального введения.

Кроме того, соединение, используемое в настоящем изобретении, в том числе его ацетатная соль, также могут быть получены в форме их гидратов или могут включать другие растворители, используемые для его кристаллизации. Соединение по настоящему изобретению может по существу или по конструкции образовывать сольваты с фармацевтически приемлемыми растворителями (включая воду); таким образом, предполагают, что настоящее изобретение охватывает как сольватированные формы, так и несольватированные формы. Термин сольват относится к молекулярному комплексу соединения по настоящему изобретению (включая их фармацевтически приемлемые соли) с одной или несколькими молекулами растворителя. Такие молекулы растворителя обычно используют в фармацевтической области, которые, как известно безвредны для реципиента, например, вода, этанол и тому подобное. Термин гидрат относится к комплексу, где молекулой растворителя является вода.

Фармацевтически приемлемые сольваты в соответствии с изобретением включают те, в которых растворитель для кристаллизации может быть изотопно замещенным, например Ό₂Θ, й₆-ацетон, й₆-ДМСО.

Соединение по настоящему изобретению, включая его ацетатную соль, гидраты и сольваты, может быть по своей природе или сконструировано в виде полиморфных форм.

Термин аморфный описывает физическое состояние, которое не является кристаллическим и может быть подтверждено с помощью дифракции рентгеновских лучей и другими средствами, включающими, но ими не ограничиваясь, наблюдение через поляризационный микроскоп и дифференциальную сканирующую калориметрию.

Термин кристалл описывает одну форму твердого состояния вещества, которая отличается от второй формы - аморфного твердого состояния, которое существует в основном как разнородное, гетерогенное твердое вещество. Кристаллы имеют постоянную трехмерную матрицу атомов, ионов, молекул или молекулярных ансамблей. Кристаллы представляют собой решетки матриц строительных блоков, называемых асимметричные единицы (которые состоят из вещества способного кристаллизоваться), которые расположены в соответствии с четко определенными симметриями в блоке ячеек, которые повторяются в трех измерениях.

Термин полиморф, как используется в настоящем описании, относится к кристаллическим формам, имеющим одинаковую химическую композицию, но разное пространственное размещение молекул, атомов и/или ионов, образующих кристалл.

В настоящем изобретении активный ингредиент может быть в виде полиморфов, таких как, полиморф, описанный в примере 4.

(К)-7-(2-(1-(4-Бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-он в форме ацетатной соли, используемый в настоящем изобретении, может образовывать сокристаллы с подходящими формами сокристаллов. Такие сокристаллы могут быть получены из ацетатной соли (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5- 4 026914 гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-она известными способами образования сокристаллов. Такие способы включают размельчение, нагревание, совместное сублимирование, совместное плавление или контактирование в растворе ацетатной соли (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-она с сокристаллом, образованным в условиях кристаллизации, и выделение образованных посредством этого сокристаллов. Подходящие сокристаллические формы включают те, которые описаны в \УО 2004/078163. Сокристалл относится к кристаллическому материалу, состоящему из двух или более уникальных твердых веществ при комнатной температуре, каждый из которых содержит отличительные физические характеристики, такие как структура, температура плавления и удельная теплота плавления.

Как используется в настоящем описании, наполнитель или носитель представляет собой фармацевтически приемлемую композицию, которая транспортирует лекарственное средство через биологическую мембрану или внутри биологической жидкости.

В одном из вариантов осуществления изобретения предложена фармацевтическая композиция в твердой пероральной лекарственной форме, содержащая ацетатную соль (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-она в кристаллической форме. В указанном варианте осуществления композиция предпочтительно содержит 0,01-15% (мас./мас.), более предпочтительно 0,01-10% (мас./мас.), еще более предпочтительно 0,01-5% (мас./мас.), еще более предпочтительно 0,01-2% (мас./мас.), наиболее предпочтительно 0,1-1% (мас./мас.) (К)-7-(2-(1-(4бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-она.

В другом варианте осуществления изобретения предложена фармацевтическая композиция в твердой пероральной лекарственной форме, содержащая кристаллическую ацетатную соль (К)-7-(2-(1-(4бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-она по существу в чистом виде. В указанном варианте осуществления композиция предпочтительно содержит 0,01-15% (мас./мас.), более предпочтительно 0,01-10% (мас./мас.), еще более предпочтительно 0,01-5% (мас./мас.), еще более предпочтительно 0,01-2% (мас./мас.), наиболее предпочтительно 0,1-1% (мас./мас.) (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[б]тиазол2(3Н)-она.

Как используется в настоящем описании, по существу чистый, при использовании в отношении кристаллической ацетатной соли (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-она, означает имеющей чистоту более чем 90 мас.%, включая больше чем 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 и 99 мас.%, и в том числе примерно равна 100 мас.% ацетатной соли (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-она в расчете на массу соединения. Наличие примесей при реакции и/или примесей при обработке может быть определено аналитическими способами, известными в данной области, такими как, например, хроматография, спектроскопия ядерного магнитного резонанса, массспектрометрия или инфракрасная спектроскопия.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции в твердой пероральной лекарственной форме, содержащей кристаллическую форму ацетатной соли (К)-7-(2-(1-(4бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-она, которая имеет картину порошковой рентгеновской дифрактограммы по меньшей мере с одним, двумя или тремя пиками, имеющими значения угла преломления 2 тета (Θ), выбранные из 8,8, 11,5, 16,4, 17,6, 18,2, 19,6, 20,1, 20,8 и 21,1°, при измерении с использованием излучения СиКа, в частности, где указанные значения составляют плюс или минус 0,2° 2Θ.

В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции в твердой пероральной лекарственной форме, содержащей кристаллическую форму ацетатной соли (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-она, которая имеет картину порошковой рентгеновской дифрактограммы (картину дифракции рентгеновских лучей на порошке) с пиком при значении угла преломления 2θ 8,8°, при измерении с использованием излучения СиКа, в частности, где указанное значение составляет плюс или минус 0,2° 2θ.

В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции в твердой пероральной лекарственной форме, содержащей кристаллическую форму ацетатной соли (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-она, которая имеет картину порошковой рентгеновской дифрактограммы с пиком при значении угла преломления 2Θ 16,4°, при измерении с использованием излучения СиКа, в частности, где указанное значение составляет плюс или минус 0,2° 2θ.

В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции в твердой пероральной лекарственной форме, содержащей кристаллическую форму ацетатной соли (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-она, которая имеет картину порошковой рентгеновской дифрактограммы с пиком при значении угла преломления 2Θ 20,8°, при измерении с использованием излучения СиКа, в частности, где

- 5 026914 указанное значение составляет плюс или минус 0,2° 2θ.

В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции в твердой пероральной лекарственной форме, содержащей кристаллическую форму ацетатной соли (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-она, которая имеет картину порошковой рентгеновской дифрактограммы, по существу, такую же, как картина порошковой рентгеновской дифрактограммы, показанная на фиг. 5, при измерении с помощью излучения СиКа. Подробнее см. пример 4.

Термин по существу, тот же со ссылкой на положения рентгенодифракционного пика означает, что типичное положение пика и изменение интенсивности учитываются. Например, специалисту в данной области будет понятно, что позиции пика (2θ) будут показывать некоторую межаппаратурную вариабельность, типично 0,2°. Кроме того, специалисту в данной области будет понятно, что относительные интенсивности пиков будут показывать межаппаратурную вариабельность, а также вариабельность, обусловленную степенью кристалличности, предпочтительной ориентацией, поверхностью полученного образца и другими факторами, известными специалистам в данной области, и их следует воспринимать только как качественные показатели.

Специалисту в данной области также будет понятно, что дифракционную рентгеновскую картину можно получить с ошибкой измерения, которая зависит от условий измерения. В частности, общеизвестно, что интенсивности в дифракционных рентгеновских изображениях могут колебаться в зависимости от условий измерения. Следует также понимать, что относительные интенсивности могут также изменяться в зависимости от экспериментальных условий и, соответственно, точный порядок интенсивности не должен быть принят во внимание. Кроме того, погрешность измерения угла дифракции для обычной дифракционной рентгеновской картины, как правило, около 5% или менее, и такая степень ошибки измерения должна быть принята во внимание как относящаяся к упомянутым выше дифракционным углам.

Следовательно, следует понимать, что кристаллические формы ацетатной соли (К)-7-(2-(1-(4бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-она не ограничиваются кристаллической формой, которая обеспечивает дифракционную рентгеновскую картину, полностью идентичную дифракционной рентгеновской картине, изображенной на прилагаемой фиг. 5, описанной в настоящем описании. Любые кристаллические формы, которые обеспечивают дифракционную рентгеновскую картину, по существу, идентичны тем, которые описаны в прилагаемой фиг. 5, входят в объем настоящего изобретения. Возможность установления существенного тождества рентгеновских дифракционных картин находится в пределах компетенции обычного специалиста в данной области техники.

Как используется в настоящем описании, термин фармацевтически приемлемый эксципиент относится к фармацевтически приемлемому ингредиенту, который обычно используется в фармацевтических способах получения гранул и/или твердых пероральных дозированных составов. Примеры групп эксципиентов включают, но ими не ограничиваются, связующие вещества, разрыхлители, смазывающие вещества, лубриканты, вещества, способствующие скольжению частиц порошка, наполнители и разбавители. Специалист в данной области может выбрать один или несколько из вышеуказанных эсципиентов по отношению к конкретным требуемым свойствам гранул и/или твердой пероральной лекарственной формы с помощью обычных экспериментов и без чрезмерных затрат. Количество каждого используемого эксципиента может изменяться в обычных диапазонах в данной области. Следующие ссылки, которые все включены в данное описание в качестве ссылки, описывают способы и эксципиенты, используемые для составления пероральных лекарственных форм. См. ТЬе НапбЪоок οί РЬагтасеибса1 ΕχοίρίοηΚ 4'¹' ебйюп, Ро\уе е1 а1., Ебк., Атепсап РЬагтасеибсак Аккошабоп (2003); апб КетшдЮп: 1Ье 8аепсе апб Ргасбсе оГРЬагтасу, 20¹¹' ебйюп, Оеппаго, Еб., Прршсой ХУППапъ & ХУПкпъ (2000).

Типичные эксципиенты включают антиоксиданты. Антиоксиданты могут быть использованы для защиты ингредиентов композиции из п окислителей, которые включены в или вступать в контакт с композицией. Примеры антиоксидантов включают водорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, сульфит натрия, метабисульфит, миосульфит натрия, формальдегид натрия, сульфоксилат, изоаскорбиновая кислота, изоаскорбиновая кислота, цистеина-гидрохлорид, 1,4-диазобицикло-(2,2,2)-октан и их смеси. Примеры растворимых в масле антиоксидантов включают аскорбилпальмитат, бутилгидроксианизол, бутилгидрокситолуол, пропилгаллат калия, октилгаллат, додецилгаллат, фенил-а-нафтиламин и токоферолы, такие как а-токоферол.

Примеры фармацевтически приемлемых связующих веществ включают, но ими не ограничиваются, крахмалы; целлюлозы и их производные; сополимер 1-винил-2-пирролидона и винилацетата; сахарозу; декстрозу; кукурузный сироп; полисахариды и желатин. Примеры целлюлоз и их производных включают, например, микрокристаллическую целлюлозу, например, Ауюе1 РН от РМС (РЫ1абе1рЫа, РА), гидроксипропилцеллюлозу гидроксиэтилцеллюлозу и гидроксипропилметилцеллюлозу МЕТНОСЕЬ от Эо\у СЬетюа1 Согр. (М1б1апб, М1); НР-целлюлозу 100 (К1исе1 ЬР). Сополимер 1-винил-2-пирролидона и винилацетата может быть приобретен как КоШбоп УА64 от ВАЗЕ.

- 6 026914

В настоящем изобретении связующее вещество может присутствовать в количестве от примерно 1 до примерно 20 мас.% композиции.

Предпочтительные связующие вещества для фармацевтической композиции по настоящему изобретению включают НР-целлюлозу 100 (К1исе1 ЬР) и сополимер 1-винил-2-пирролидона и винилацетата.

Буферные агенты могут быть использованы для поддержания установленного рН композиции. Примеры буферных агентов включают цитрат натрия, ацетат кальция, метафосфат калия, калия фосфат однозамещенный и винную кислоту.

Наполнители представляют собой ингредиенты, которые могут обеспечить основную массу фармацевтической композиции. Примеры наполнителей включают, без ограничения, ПЭГ, маннит, трегалозу, лактозу, сахарозу, поливинилпирролидон, сахарозу, глицин, циклодекстрины, декстран и их производные и смеси.

Поверхностно-активные вещества представляют собой средства, используемые для стабилизации многофазовых композиций, например используемые в качестве смачивающих средств, пеногасителей, эмульгаторов, диспергирующих средств, и смачивающих средств. Поверхностно-активные вещества также могут быть дополнительно использованы в фармацевтической композиции по настоящему изобретению. Поверхностно-активные вещества включают, но ими не ограничиваются, жирные кислоты и алкилсульфонаты; бензетония хлорид, например ΗΥΑΜΙΝΕ 1622 от Боп/а. 1пс. (Ра1г1а^п. N1); полиоксиэтиленовые эфиры сорбита и жирной кислоты, например, серии ΤνΕΕΝ из ишдета (^ПтшДои, ΌΕ) и природные поверхностно-активные вещества, такие как натрий таурохолевая кислота, 1-пальмитоил-28и-глицеро-3-фосфохолин, лецитин и другие фосфолипиды. Такие поверхностно-активные вещества, например, минимизируют агрегацию лиофилизированных частиц во время восстановления продукта. Поверхностно-активные вещества, если они присутствуют, как правило, используют в количестве примерно от 0,01 до примерно 5% (мас./об.).

Вторичное поверхностно-активное вещество представляет собой поверхностно-активное вещество, которое действует в дополнение к поверхностно-активному веществу для дальнейшего снижения энергии поверхности раздела фаз, но которые не могут образовывать мицеллярные агрегаты сами. Вторичное поверхностно-активное вещество может быть, например, гидрофильным или липофильным. Примеры вторичного поверхностно-активного вещества включают, но ими не ограничиваются, цетиловый спирт и стеариловый спирт.

Примеры фармацевтически приемлемых разрыхлителей включают, но ими не ограничиваются, крахмалы, например карбоксиметилкрахмал натрия; глины; целлюлозы, например низкозамещенная гидроксипропилцеллюлоза; альгинаты; смолы; поперечно сшитые полимеры, например поперечно сшитый поливинилпирролидон или кросповидон, например Полипласдон ХЬ от 1и1егиайопа1 БрешаИу Ргобисй ^ауие, N1); поперечно сшитая карбоксиметилцеллюлоза натрия или кроскармеллоза натрия, например АС-О1-8ОЬ от РМС; и поперечно сшитая карбоксиметилцеллюлозы кальция; полисахариды сои и гуаровая камедь. В настоящем изобретении разрыхлитель может присутствовать в количестве от примерно 1 до примерно 20 мас.% композиции.

Предпочтительные разрыхлители для фармацевтической композиции по настоящему изобретению включают карбоксиметилкрахмал натрия, низкозамещенную гидроксипропилцеллюлозу, поперечно сшитую карбоксиметилцеллюлозу натрия или кроскармеллозу натрия (например, АС-О1-8ОЬ).

Примеры фармацевтически приемлемых наполнителей и фармацевтически приемлемых разбавителей включают, но ими не ограничиваются, кондитерский сахар, прессованный сахар, декстраты, декстрин, декстрозу, лактозу, маннит, микрокристаллическую целлюлозу, порошкообразную целлюлозу, сорбит, сахарозу и тальк. В настоящем изобретении наполнитель и/или разбавитель может присутствовать в количестве от примерно 15 до примерно 90 мас.% композиции.

Предпочтительные наполнители и/или разбавители для фармацевтической композиции настоящего изобретения включают микрокристаллическую целлюлозу (например, Ауюе1 ΡΗ101), высушенную распылением лактозу, СА-^Э-фосфат (например, Етсотргезз), маннит ИС (например, Сотрге88о1), прежелатинизированный крахмал (например, 8ТА-КХ 1500).

Примеры фармацевтически приемлемых лубрикантов и фармацевтически приемлемых веществ, способствующих скольжению частиц порошка, включают, но ими не ограничиваются, коллоидный диоксид кремния, трисиликат магния, крахмалы, тальк, трикальцийфосфат, стеарат магния, стеарат алюминия, стеарат кальция, карбонат магния, оксид магния, полиэтиленгликоль, порошкообразную целлюлозу и микрокристаллическую целлюлозу. Как правило, лубрикант может присутствовать в количестве от примерно 0,1 до примерно 5 мас.% композиции; тогда как вещество, способствующее скольжению частиц порошка, например, может присутствовать в количестве от примерно 0,1 до примерно 10 мас.%. В настоящем изобретении лубрикант предпочтительно присутствует в композиции в количестве от 0,1 до 1% (мас./мас.). В настоящем изобретении вещество, способствующее скольжению частиц порошка предпочтительно присутствует в композиции в количестве от 0,1 до 1% (мас./мас.).

Предпочтительные вещества, способствующие скольжению частиц порошка, фармацевтической композиции по настоящему изобретению включают Аэросил 200 и тальк.

- 7 026914

Предпочтительные лубриканты фармацевтической композиции по настоящему изобретению включают стеарат магния.

Кроме того, изобретение относится к фармацевтическим композициям, которые могут содержать одно или несколько средств, которые снижают скорость с которой соединение по настоящему изобретению в качестве активного ингредиента будет разлагаться. Такие средства, которые упоминаются в настоящем документе как стабилизаторы, включают, но ими не ограничиваются, антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, буферы рН или буферные соли и т.д.

Консерванты также могут быть использованы для защиты композиции от деградации и/или микробной контаминации. Примеры консервантов включают масло Нцшраг, феноксиэтанол, метилпарабен, пропилпарабен, бутилпарабен, изопропиловый парабен, изобутиловый парабен, диазолидинил-мочевину, имидазолидинил-мочевину, диазолиндил-мочевину, хлорид бензалкония, хлорид бензетония, фенол и их смеси (например, масло Ндшраг).

В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции в твердой пероральной лекарственной форме, содержащей от 0,01 до 10% (мас./мас.) (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[Д]тиазол-2(3Н)-она;

от 15 до 90% (мас./мас.) по меньшей мере одного наполнителя; от 1 до 20% (мас./мас.) разрыхлителя;

от 0,1 до 1% (мас./мас.) вещества, способствующего скольжению частиц порошка; и от 0,1 до 1% (мас./мас.) лубриканта.

В указанном варианте осуществления (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[Д]тиазол-2(3Н)-он обеспечивается в форме ацетатной соли.

В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, подходящей для перорального введения, содержащей от 0,01 до 10% (мас./мас.) (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[Д]тиазол-2(3Н)-она;

от 15 до 90% (мас./мас.) по меньшей мере одного наполнителя; от 1 до 20% (мас./мас.) связующего вещества; от 1 до 20% (мас./мас.) разрыхлителя;

от 0,1 до 1% (мас./мас.) вещества, способствующего скольжению частиц порошка; и от 0,1 до 1% (мас./мас.) лубриканта.

В указанном варианте осуществления (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[Д]тиазол-2(3Н)-он обеспечивается в форме ацетатной соли.

Как используется в настоящем описании, термин терапевтически эффективное количество соединения по настоящему изобретению относится к количеству соединения по настоящему изобретению, которое будет вызывать биологический или медицинский ответ у индивида, например, уменьшение или ингибирование активности фермента или белка, или облегчение симптомов, облегчение состояний, медленное или замедление прогрессирования заболевания или профилактику заболевания и т.п. В одном неограничивающем варианте осуществления изобретения термин терапевтически эффективное количество относится к количеству соединения по настоящему изобретению, которое при введении индивиду, является эффективным (1) по меньшей мере, для частичного облегчения, ингибирования, профилактики и/или облегчения состояния, или расстройства, или заболевания, связанного с активностью бета-2адренорецептора; или (2) увеличения или стимулирования активности бета-2-адренорецептора.

В другом неограничивающем варианте осуществления изобретения термин терапевтически эффективное количество относится к количеству соединения по настоящему изобретению, которое при введении в клетку, или ткань, или неклеточный биологический материал или среду, является эффективным, по меньшей мере, для частичного увеличения или стимулирования активности бета-2-адренорецепторов. Значение термина терапевтически эффективное количество, как описано в приведенном выше варианте осуществления для бета-2-адренорецептора, также относится к тем же средствами любых других соответствующих белков/пептидов/ферментов, таких как миметики ЮР-1 или блокаторы АеЖПВ/миостатина и т.п.

Как используется в настоящем описании, термин индивид относится к животному. Обычно животное представляет собой млекопитающее. Индивид также относится, например, к приматам (например, человек, мужчина или женщина), коровам, овцам, козам, лошадям, собакам, кошкам, кроликам, крысам, мыши, рыбе, птицам и т.п. В некоторых вариантах осуществления индивид представляет собой примата. В других вариантах осуществления индивид представляет собой человека.

Как используется в настоящем описании, термин ингибирование, подавление или замедление означает уменьшение или подавление данного состояние, симптома или нарушения или заболевания или значительное снижение базовой активности биологической активности или процесса.

Как используется в настоящем описании, термин лечить, лечение или терапия любого заболевания или нарушения относится в одном варианте осуществления, к облегчению заболевания или нарушения (т.е. замедление, или остановка, или ослабление развития заболевания или по меньшей мере одно- 8 026914 го из его клинических симптомов). В другом варианте осуществления лечить, лечение или терапия относится к облегчению или уменьшению по меньшей мере одного физического параметра, включая те, которые не могут быть воспринимаемы пациентом. В еще одном варианте осуществления лечить, лечение или терапия относится к модуляции заболевания или расстройства, либо физически (например, стабилизация заметного симптома), физиологически (например, стабилизация физического параметра), или обеих. В еще одном варианте осуществления лечить, лечение или терапия относится к профилактике или задержке начала или развития или прогрессирования заболевания или нарушения.

Как используется в настоящем описании, индивид нуждающийся в лечении, если такой индивид выиграет биологически, с медицинской точки зрения или в качестве жизни от такого лечения.

Как используется в настоящем описании, термин в единственном числе и аналогичные термины, используемые в контексте настоящего изобретения охватывают как единственное, так и множественное число, если иное не указано иное или явно опровергается контекстом.

Все описанные в настоящем описании способы могут быть выполнены в любом подходящем порядке, если не указано иное или иное явно противоречит контексту. Использование любого и всех примеров или примерного выражения (например, такой как), предусмотренных в настоящем документе, предназначено только для лучшей иллюстрации изобретения и не накладывает ограничения на объем изобретения или формулу изобретения.

(К)-7-(2-(1-(4-Бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-он может быть получен согласно схеме, представленной ниже.

Стадии процесса описаны более подробно ниже.

Стадия 1. Соединение формулы (У1а), где На1 представляет галоген и К_а представляет собой защитную группу, взаимодействующую с соединением формулы К_ьОН, где Кь представляет собой защитную группу в присутствии подходящего основания, например триэтиламина, с получением соединения формулы (Уа), где На1 представляет галоген и К_а и К_ь представляет собой защитные группы.

Стадия 2. Соединение формулы (Уа) взаимодействует с подходящим сильным основанием, например трет-бутиллитием, в подходящем растворителе, например тетрагидрофуране (ТНР) в присутствие подходящего карбонилирующего агента, например подходящего амида, с получением соединения формулы (1Уа), где К_а и К_ь представляет собой защитные группы и Кс представляет водород или любой фрагмент, полученный из карбонилирующего агента.

Стадия 3. Соединение формулы (1Уа) необязательно функционализировать перед стереоселективным превращением с получением соединения формулы (Ша), где К_а и К_ь представляют собой защитные группы и ЬО представляет собой уходящую группу.

Стадия 4. Соединение формулы (111а) обрабатывают подходящим основанием, например бикарбонатом натрия, с получением соединения формулы (11а), где К_а и К_ь представляют собой защитные группы.

Стадия 5. Соединение формулы (11а) или (111а) взаимодействует с 2-(4-бутокси-фенил)-1,1-диметилэтиламином в подходящем растворителе, например толуоле, необязательно в присутствии подходящего

- 9 026914 основания, например карбоната калия, с последующим удалением защитной группы в присутствии подходящей кислоты, например соляной кислоты, с получением соединения формулы (I).

Реакции можно проводить в соответствии с известными способами, например, как описано в разделе Примеры. Обработка реакционных смесей и очистка соединений, получаемых таким образом, могут быть выполнены в соответствии с известными процедурами. Кислотно-аддитивные соли могут быть получены из свободных оснований известным образом, и наоборот. В частности, ацетатная соль (К)-7-(2-(1(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1 -гидроксиэтил)-5 -гидроксибензо [й]тиазол-2(3Н)-она может быть получена, как описано в примерах 3 и 3 а.

(К)-7-(2-(1-(4-Бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-он также может быть получен дополнительными обычными способами, например, как описано в примерах.

Используемые исходные вещества известны или могут быть получены в соответствии с обычными процедурами, исходя из известных соединений, например, как описано в примерах.

Настоящие способы могут быть модифицированы, при этом промежуточный продукт получают на любой его стадии, используя в качестве исходного материала, и выполняют остальные стадии, или в которых исходные материалы образованы ίη зйи в условиях реакции, или в которых компоненты реакции используются в форме их солей или оптически чистого материала.

Соединение по настоящему изобретению и промежуточные соединения могут быть также конвертированы друг в друга в соответствии со способами, известными специалистам в данной области техники.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению находятся в твердой пероральной лекарственной форме. Твердые пероральные лекарственные формы включают, но ими не ограничиваются, таблетки, твердые или мягкие капсулы, каплеты, таблетки для рассасывания, пилюли, мини-таблетки, пеллеты, шарики, гранулы (например, упакованные в пакетики) или порошки. Фармацевтические композиции могут быть подвергнуты обычным фармацевтическим операциям, таким как стерилизация, и/или могут содержать обычные инертные разбавители, смазывающие агенты или буферные агенты, а также адъюванты, такие как консерванты, стабилизаторы, смачивающие агенты, эмульгаторы и буферы, и т.д.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению предпочтительно изготавливают для перорального введения.

Подходящие композиции для перорального введения включают эффективное количество соединения по настоящему изобретению в форме ацетатной соли в виде таблеток, твердых или мягких капсул, каплет, таблеток для рассасывания, пилюль, мини-таблеток, пеллет, шариков, гранул (например, упакованы в пакетики) или порошков. Композиции, предназначенные для перорального применения, получают любым способом, известным в данной области для производства фармацевтических композиций, и такие композиции могут содержать один или несколько агентов, выбранных из группы, состоящей из подслащивающих агентов, ароматизаторов, красителей и консервантов с целью обеспечения фармацевтически простых и приятных на вкус препаратов. Таблетки могут содержать активный ингредиент в смеси с нетоксичными фармацевтически приемлемыми эксципиентами, которые подходят для получения таблеток. Эти эксципиенты представляют собой, например, инертные разбавители, такие как карбонат кальция, карбонат натрия, лактоза, фосфат кальция или фосфат натрия; гранулирующие и дезинтегрирующие агенты, например, кукурузный крахмал или альгиновая кислота; связывающие агенты, например крахмал, желатин или гуммиарабик; и смазывающие агенты, например стеарат магния, стеариновая кислота или тальк. Таблетки могут быть без покрытия или покрыты известными способами с целью замедления дезинтеграции и абсорбции в желудочно-кишечном тракте и тем самым обеспечения пролонгированного действия в течение более длительного периода. Например, могут быть использованы вещества с задержкой времени, такие как моностеарат глицерина или дистеарат глицерина. Составы для перорального применения могут быть представлены в виде твердых желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешан с инертным твердым разбавителем, например карбонатом кальция, фосфатом кальция или каолином, или в виде мягких желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешан с водой или средним маслом, например арахисовым маслом, жидким парафином или оливковым маслом.

В одном из вариантов осуществления фармацевтическая композиция по настоящему изобретению находится в виде таблетки или капсулы.

В одном из вариантов осуществления фармацевтические композиции представляют собой таблетки или желатиновые капсулы, содержащие активный ингредиент в форме ацетатной соли:

a) вместе с разбавителями, например лактозой, декстрозой, сахарозой, маннитом, сорбитом, целлюлозой и/или глицином;

b) вместе с лубрикантами, например кремнеземом, тальком, стеариновой кислотой, ее магниевой или кальциевой солью и/или полиэтиленгликолем; для таблеток также

c) связующие вещества, например алюмосиликат магния, крахмальная паста, желатин, трагакант, метилцеллюлоза, сополимеры 1-винил-2-пирролидона и винилацетата, натрий карбоксиметилцеллюлозы и/или поливинилпирролидон; при желании

й) разрыхлители, например крахмалы, агар, альгиновая кислота или ее натриевая соль или шипучие

- 10 026914 смеси; целлюлозы; поперечно сшитые полимеры; и/или

е) абсорбенты, красители, ароматизаторы и подсластители.

Таблетки могут быть покрыты пленкой или покрыты энтеросолюбильной оболочкой в соответствии со способами, известными в данной области.

Таблетки могут быть необязательно покрыты функциональным или нефункциональным покрытием, как известно в данной области. Примеры способов нанесения покрытия, включают, но ими не ограничиваются, сахарное покрытие, пленочное покрытие, микроинкапсуляцию и покрытие оболочкой путем прессования. Виды покрытий, включают, но ими не ограничиваются, энтеросолюбильное покрытие, покрытие, обеспечивающее устойчивое высвобождение, покрытие, обеспечивающее контролируемое высвобождение.

Безводные фармацевтические композиции и дозированные формы могут быть также получены с использованием безводного или с низким содержанием влаги компонента и в состоянии низкой увлажненности или низкой влажности. Безводные фармацевтические композиции могут быть получены и сохранены, так что их безводный характер сохраняется. Соответственно, безводные композиции упакованы с использованием материалов, известных для предотвращения воздействия воды, так что они могут быть включены в подходящий формуляр наборов. Примеры подходящей упаковки включают, но ими не ограничиваются, герметично запаянная фольга, пластики, контейнеры стандартных доз (например, флаконы), блистерные упаковки и контурная безъячейная упаковка.

Как используется в настоящем описании, стандартная лекарственная форма представляет собой единичную дозированную форму, которая эффективна для введения индивиду, и которая может быть легко обработана и упакована, оставаясь физически и химически стабильной единичной дозой, содержащей активный ингредиент.

Таблетки могут быть получены путем непосредственного прессования или гранулирования.

В процессе прямого прессования порошкообразные материалы, заключенные в твердую лекарственную форму, как правило, прессуют непосредственно, не изменяя их физическую природу. Обычно активный ингредиент, эксципиенты, такие как вещества, способствующие скольжению частиц порошка, для улучшения скорости потока таблетируемого гранулята и лубрикант для предотвращения адгезии таблетируемого материала к поверхности штампов и пуансонов таблеточного пресса смешивают в У-образном миксере или аналогичных смесителях с малыми сдвиговыми усилиями перед прессованием в таблетки.

Гранулирование представляет собой процесс, при котором образуются гранулы. Эти гранулы затем подвергают прямому прессованию с целью получения таблетки или инкапсулирования для капсулы. Гранулы могут быть получены путем влажной грануляции, которая включает:

a) формирование порошковой смеси активного ингредиента и по меньшей мере одного фармацевтически приемлемого эксципиента;

b) добавление грануляционной жидкости к порошковой смеси при перемешивании с получением влажной массы;

c) гранулирование влажной массы с образованием влажных гранул; б) сушку влажных гранул с образованием гранул;

е) просеивание гранул.

Альтернативно, гранулы могут быть получены путем грануляции в псевдоожиженном слое, который включает:

a) суспендирование частиц материала (например, инертного материала или активного ингредиента), например, с ростом воздушного потока в вертикальной колонке;

b) распыление гранулирующегося материала в колонну;

c) выдерживание частиц для покрытыя гранулирующим материалом с получением гранул.

Другая альтернатива для получения гранул включает гранулирование из расплава. Этот способ включает:

a) получение смеси активного ингредиента по меньшей мере с одним ингибитором высвобождения, например, задерживающим высвобождение полимером и необязательно пластификатором;

b) гранулирование смеси с использованием экструдера или другого подходящего оборудования, например, мешалки с большими сдвиговыми усилиями, снабженной рубашкой, при нагревании смеси до температуры, превышающей температуру размягчения ингибитора высвобождения; используемый в настоящем описании термин температура размягчения относится к температуре, при которой ингибитор высвобождения испытывает изменение в скорости уменьшения вязкости в зависимости от температуры; и

c) охлаждение гранул до комнатной температуры, например, с регулируемой скоростью.

Другой альтернативный способ получения гранул включает сухое гранулирование, которое может включать вальцовое прессование (вальцевание) или брикетирование. Вальцевание представляет собой процесс, при котором равномерно смешанные порошки сжимаются между двумя парами валков, вращающихся в противоположных направлениях, чтобы сформировать сжатый лист или ленту, которые затем измельчают (гранулируют).

- 11 026914

Брикетирование представляет собой процесс, при котором равномерно смешанные порошки прессуют в большие таблетки, которые затем измельчают до желаемого размера.

В предпочтительном варианте осуществления способа по настоящему изобретению гранулы получают путем вальцового прессования.

Капсулы, как используются в настоящем описании, относятся к составу, в котором активный ингредиент в форме ацетатной соли может быть заключен в любую твердую или мягкую, растворимую емкость или оболочку, часто образованную из желатина.

Твердая желатиновая капсула, также известная как сухая заполненная капсула, состоит из двух секций, одна насаживается на другую, таким образом полностью окружая (инкапсулируя) состав лекарственного средства.

Мягкая эластичная капсула имеет мягкую, шаровидную, например, желатиновую оболочку.

В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к способу получения фармацевтической композиции, пригодной для перорального введения, включающему стадии:

a) смешивание ацетатной соли (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-она с наполнителем и веществом, способствующим скольжению частиц порошка, для образования премикса;

b) смешивание премикса, полученного на стадии а), с дополнительным наполнителем и разрыхлителем с получением порошка;

c) добавление лубриканта к порошку, полученному на стадии Ь), для получения конечной смеси, и б) обработка окончательной смеси, полученной на стадии с), в фармацевтическую композицию, подходящую для перорального введения.

В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к способу получения фармацевтической композиции, подходящей для перорального введения в форме капсулы, включающему стадии:

a) смешивание ацетатной соли (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-она с наполнителем и веществом, способствующим скольжению частиц порошка, для образования премикса;

b) смешивание премикса, полученного на стадии а), с дополнительным наполнителем и разрыхлителем с получением порошка;

c) добавление лубриканта к порошку, полученному на стадии Ь), с получением конечной смеси;

б) инкапсуляция конечной смеси в капсулу для обеспечения указанной фармацевтической композиции.

В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к способу получения фармацевтической композиции, подходящей для перорального введения в форме таблетки, включающему стадии:

a) смешивание ацетатной соли (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-она с наполнителем и веществом, способствующим скольжению частиц порошка, с образованием премикса;

b) смешивание премикса, полученного на стадии а), с дополнительным наполнителем и разрыхлителем для получения порошка;

c) добавление лубриканта к порошку, полученному на стадии Ь), чтобы получить конечную смесь; и б) прессование конечной смеси, полученной на стадии с), в таблетки.

В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к способу получения фармацевтической композиции, подходящей для перорального введения в форме таблетки, включающему стадии:

a) смешивание ацетатной соли (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[б]тиазол-2 (3Н)-она с наполнителем и веществом, способствующим скольжению частиц порошка, с образованием премикса;

b) смешивание премикса, полученного на стадии а), с дополнительным наполнителем, связывающим средством и разрыхлителем с получением порошка;

c) добавление лубриканта к порошку, полученному на стадии Ь), с получением промежуточной смеси;

б) уплотнение смеси промежуточной смеси и измельчение уплотненного материала; е) смешивание размолотого материала, полученного на стадии б), с дополнительным количеством вещества, способствующего скольжению частиц порошка, и разрыхлителя и добавление дополнительного количества лубриканта, чтобы получить конечную смесь; и

ί) прессование конечной смеси, полученной на стадии е), в таблетки.

В предпочтительном варианте осуществления указанного процесса уплотнение осуществляется вальцеванием.

В способах по настоящему изобретению всем стадиям смешивания могут предшествовать стадии просеивания.

В способах по настоящему изобретению количество ацетатной соли (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2- 12 026914 метилпропан-2-иламино)-1 -гидроксиэтил)-5 -гидроксибензо [4]тиазол-2(3Н)-она составляет предпочтительно 0,01-15% (мас./мас.), более предпочтительно 0,01-10% (мас./мас.), еще более предпочтительно 0,01-5% (мас./мас.), еще более предпочтительно 0,01-2% (мас./мас.), наиболее предпочтительно 0,1-1% (мас./мас.) (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5гидроксибензо[4]тиазол-2(3Н)-она, присутствующего в фармацевтической композиции.

Активный ингредиент в фармацевтической композиции по настоящему изобретению может быть освобожден при введении индивиду разными путями.

Ингибиторы высвобождения представляют собой материалы, которые замедляют высвобождение активного ингредиента из фармацевтической композиции при пероральном приеме. Различные системы с замедленным высвобождением, как известно в данной области, могут быть получены путем использования задерживающего высвобождение компонента, например, в системе диффузии, системе растворения и/или осмотической системе.

Например, фармацевтическая композиция может быть предназначена для немедленного высвобождения, которое относится к быстрому высвобождению большинства активного ингредиента, например более чем приблизительно 50%, приблизительно 60%, приблизительно 70%, приблизительно 80% или приблизительно 90% в течение сравнительно короткого времени, например в течение 1 ч, 40, 30 или 20 мин после перорального приема. Особенно полезными условиями для немедленного высвобождения является освобождение по меньшей мере или равного приблизительно 80%, например до 99%, активного ингредиента в течение 30 мин после перорального приема. Конкретные непосредственные условия высвобождения для конкретного активного ингредиента будут определены или известны любому специалисту в данной области.

Кроме того, модифицированное высвобождение такое, когда может быть желательным контролируемое высвобождение или замедленное высвобождение активного ингредиента. Контролируемое высвобождение относится к постепенному, но замедленному высвобождению в течение относительно длительного периода содержания активного ингредиента после перорального приема. Высвобождение будет продолжаться в течение определенного периода времени и не может продолжаться до и после достижения фармацевтической композиции кишечника.

Замедленное высвобождение может относиться к высвобождению активного ингредиента, которое не начинается сразу же, когда фармацевтическая композиция достигает желудка, но задерживается в течение периода времени, например, до тех пор, пока фармацевтическая композиция достигнет кишечника, когда используется повышение рН, чтобы вызвать высвобождение активного ингредиента из фармацевтической композиции.

Другая альтернатива включает хроматографическое высвобождение, которое относится к высвобождению активного ингредиента периодически или во временной точке, что соответствует биологической потребности терапии данного заболевания.

(К)-7-(2-(1-(4-Бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5гидроксибензо[4]тиазол-2(3Н)-он в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли обладает ценными фармакологическими свойствами, например модулирующими свойствами бета-2адренорецептора, например, как показано в тестах ίη νίΐτο и ίη νίνο, предусмотренных в следующих разделах, и, следовательно, показаны для терапии или для использования в качестве вещества для исследования, например, в качестве тестового соединения.

(К)-7-(2-(1-(4-Бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5гидроксибензо[4]тиазол-2(3Н)-он может быть полезен для лечения указанных заболеваний, выбранных из: мышечной дистрофии, атрофии, связанной с бездействием, кахексии или саркопении.

Таким образом, в дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, как определено в настоящем описании, в качестве лекарственного средства. В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, как определено в настоящем описании, для применения в качестве лекарственного средства. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, как определено в настоящем описании, для применения в лечении или профилактике мышечной дистрофии, атрофии, связанной с бездействием, кахексии или саркопении.

Таким образом, в дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению фармацевтической композиции, как определено в настоящем описании, в терапии. В другом варианте осуществления терапия выбрана из заболевания, которое можно лечить путем активации бета2-адренорецептора. В другом варианте осуществления заболевание выбрано из мышечной дистрофии, атрофии, связанной с бездействием, кахексии или саркопении.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания, которое лечат активацией бета-2-адренорецептора, включающему введение фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе. В дополнительном варианте осуществления заболевание выбрано из мышечной дистрофии, атрофии, связанной с бездействием, кахексии или саркопении

Таким образом, еще один аспект настоящего изобретения относится к способу лечения или профилактики мышечной дистрофии, атрофии, связанной с бездействием, кахексии или саркопении, вклю- 13 026914 чающему введение фармацевтической композиции, как определено в настоящем описании, индивиду, нуждающемуся в этом.

Пользу фармацевтической композиции по настоящему изобретению можно наблюдать в стандартных клинических испытаниях, в том числе тестах для определения биологической доступности, например, при известных показаниях дозировок лекарственных средств, дающих терапевтически эффективные уровни в крови активного ингредиента; например, с использованием доз в интервале 0,01-15 мг активного ингредиента в день для млекопитающего весом 75 кг, например взрослого человека и в стандартных моделях животных.

Фармацевтическая композиция, например, в виде таблетки или капсулы или в виде порошка, пригодного состава для таблетки или капсулы может соответственно и надлежащим образом содержать по меньшей мере 0,01-15 мг активного ингредиента, предпочтительно 0,5-1,5 мг активного ингредиента. В одном из вариантов осуществления твердая пероральная лекарственная форма содержит примерно 1 мг активного ингредиента соединения. Такие стандартные лекарственные формы пригодны для введения один-два раза в день в зависимости от конкретной цели лечения, фазы терапии и т.п.

Терапевтически эффективная доза соединения или фармацевтической композиции, зависит от вида индивида, массы тела, возраста и индивидуального состояния, нарушения или заболевания или тяжести, которые лечат. Врач, клиницист или ветеринар обычной квалификации может легко определить эффективное количество каждого из активных ингредиентов, необходимых для профилактики, лечения или ингибирования развития расстройства или заболевания.

Вышеуказанные свойства дозы могут быть продемонстрированы в тестах ίη νίίτο и ίη νίνο с использованием преимущественно млекопитающих, например мыши, крыс, собак, обезьян или выделенных органов, тканей и их препаратов. Соединение по настоящему изобретению можно использовать ίη νίίτο в виде растворов, например водных растворов, и ίη νίνο либо энтерально, парентерально, предпочтительно подкожно, например, в виде суспензии или в виде водного раствора. Дозировка ίη νίίτο может варьироваться между приблизительно 10^-3 и 10^-9 М. Терапевтически эффективное количество ίη νίνο может варьироваться в зависимости от пути введения, между приблизительно 0,01-500 мг/кг, или между приблизительно 0,01-100 мг/кг, или между приблизительно 0,01-1 мг/кг, или между приблизительно 0,01-0,1 мг/кг.

Активность соединения по настоящему изобретению может быть оценена с помощью следующих способов ίη νίίτο. Кроме того, способы ίη νίνο описаны далее в разделе Примеры.

Тест 1. Клеточный функциональный анализ ίη νίίτο с использованием клеток СНО и клеток скелетных мышц.

цАМФ: Клетки скелетных мышц человека (ккМС) получали от СашЪгех (номер по каталогу СС-2561) и культивировали в скелетной основной среде (8КВМ), полученной от СашЪгех (номер по каталогу СС-3161). Ответы цАМФ измеряли с помощью набора для динамического анализа цАМФ НТКР-А88ау с 2 объемами, полученными от СпЪю или Сл5 СотреиОуе 1п1еШденсе (номер по каталогу 62АМ4РЕС). Клетки 8кМС культивировали в течение 1 дня в клеточной культуральной среде 8КВМ, дополненной 20% РС8 в 384-луночном планшете при 37°С, 5% СО₂. На следующий день клетки промывали дважды 50 мкл РВ8 и дифференцировали в течение 3 дней в бессывороточной среде 8КВМ в присутствии 1 мкМ 8В431542, ингибитора АЬК 4/5, полученного от §1§та (номер по каталогу 84317) при 37°С, 7,5% СО₂. На 4 день бессывороточную среду 8КВМ, дополненную 1 мкМ 8В431542, удаляли, клетки дважды промывали 50 мкл РВ8 и далее дифференцировали в течение 1 дня в бессывороточной среде 8КВМ без 8В431542 (50 мкл на лунку) при 37°С, 7,5% СО₂. Клетки 8кМС крысы и кардиомиоциты выделяли из новорожденных крыс стандартным способом и обрабатывали, как описано выше. Клетки яичника китайского хомячка (СНО), стабильно трансфицированные адренорецепторами человека β (β 1 или β2), были продуцированы в ΝονηΠίδ ΙηδΙίΙιιΚδ ίοτ ВюМеФса1 КекеагсЪ ;·ιηύ сиЪигеф как описано выше (I. РЬагтасс1. Ехр. ТЪег. 2006 Мау; 317(2):762-70).

Соединения были составлены в стимулирующем буфере при 2х требуемой концентрации и были приготовлены в серийных разведениях 1:10 в стимулирующем буфере, в 96-луночном планшете (И-формы). Контроль ДМСО приводил к нормализации содержания ДМСО наибольшего разведения, например 0,1% ДМСО (х2) для 10^-5 М (х2) концентрации первого разбавления соединения. Анализ проводили в 384-луночных планшетах, объем стимуляции 20 мкл и конечный объем анализа 40 мкл/лунку. В день эксперимента культуральную среду удаляли из клеточной культуры 384-луночных планшетов путем инвертирования и вибрирования планшета на стопке бумаги 2-3 раза. Сначала добавляли 10 мкл/лунку свежей культуральной среды в 384-луночный планшет. После 10 мин инкубации при комнатной температуре 10 мкл/лунку разведений функциональных соединений добавляли к клеткам и инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре в темноте. В течение этого времени рабочие растворы реагентов были подготовлены путем разбавления исходных растворов анти цАМФ криптата и цАМФ Ό2 1:20 в буфере для лизиса, поставляемых с набором. Через 30 мин инкубации соединения 10 мкл ЦАМФ-И2 и 10 мкл анти-цАМФ криптата последовательно добавляли в планшеты для анализа. После 1 ч времени инкубации при комнатной температуре в темноте измерение проводили с помощью РНега81аг (длина волны возбуждения: 337 нм, длина волны эмиссии: 620 и 665 нм).

- 14 026914

Са²': Адренергический Л1рЪа1Л человека линии клеток СНО-К1 был приобретен у Регкш Е1тег (УаН8сгееи™ §1аЪ1е гесотЫпай ОРСК Се11 Ппе. номер по каталогу Е8-036-С, партия номер Μ1\ν-ί'Ί. Βοδΐοη, Ма55асЪи5ей5, И8Л). 3а один день до эксперимента замороженные клетки Л1рЪа1Л (10 млн/мл и на каждый флакон) оттаивали в водяной бане при 37°С. Суспензию клеток центрифугировали в течение 5 мин при 1000 об/мин и клеточный осадок ресуспендировали в среде для культивирования клеток. Клетки высевали в черные 384-луночные планшеты с прозрачным дном с плотностью 8000 клеток/лунку в 50 мкл клеточной культуральной среды. Планшеты инкубировали в течение приблизительно 24 ч при 37°С, 5% СО₂. В день эксперимента среду удаляли с помощью устройства для промывки лунок (ТЕСАЛ Ρν3). После последней промывки осталось 10 мкл в лунках. Добавляли 40 мкл загрузочного буфера и клетки загружали в течение 60 мин при 37°С, 5% СО₂. Планшеты промывали ТЕСАЛ Ρ\ν3 с 20 мкл буфера для анализа и инкубировали в течение по меньшей мере 20 мин при комнатной температуре перед проведением эксперимента РЫРК (спектрофотометр для чтения планшетов для визуализации флуоресценции). Соединения затем оценивали на тип агониста и/или антагониста. Для проверки данных анализа использовали тот же протокол со свежими клетками. В этом случае клетки отделяли из 150 см² колбы, используя 3 мл трипсина-ЭДТА, центрифугировали и ресуспендировали в среде клеточной культуры.

Клетки стимулировали добавлением 5 мкл соединений (5х), используя РЫРК. Соединения, действующие в качестве агонистов, вызывали кратковременное повышение внутриклеточного кальция. Это было записано в системе РЫРК. Измерение сигнала базовой линии впервые было отмечено каждые 2 мин до инъекции соединений. Измерения кальция проводили при возбуждении клеток аргоновым ионным лазером при длине волны 488 нм при мощности лазера 0,6 Вт и записи сигнала флуоресценции камерой ССИ (открытие 0,4 с) в течение 2 мин. Нижние пределы (нестимулированные клетки) были определены с добавлением 5 мкл буфера для анализа. Верхние пределы были определены с добавлением 5 мкл известного агониста при высокой концентрации ЕС₄₀₀ (А-61603 при концентрации 1 мкМ) и эталонное соединение агониста также добавляли в каждый планшет.

Соединение по настоящему изобретению в тестовом анализе 1 обладает эффективностью ЕС₅₀, равной менее 10 нМ. Удельная активность показана в примере 6.

Дополнительные специфические активности соединения по настоящему изобретению описаны в примерах 7-11.

Следующие примеры предназначены для иллюстрации настоящего изобретения и не должны истолковываться как ограничение изобретения. Температуры даны в градусах Цельсия. Если не указано иное, все испарения выполняются при пониженном давлении, обычно между приблизительно 15 до 100 мм рт.ст. (= 20-133 мбар). Структура конечных продуктов, промежуточных соединений и исходных материалов подтверждается стандартными аналитическими методами, например микроанализами и спектральными характеристиками, например М§, ИК, ЯМР. Используются сокращения, обычные в данной области.

Все исходные материалы, составляющие, реагенты, кислоты, основания, дегидратирующие средства, растворители и катализаторы, используемые для синтеза соединения по настоящему изобретению, являются коммерчески доступными или могут быть получены с помощью способов органического синтеза, известных специалисту в данной области, (НоиЪеи-^еу1 4* Ей. 1952, Мейюйз о£ Огдашс 8уйЪе515, ТИете, Уо1ите 21). Кроме того, соединение по настоящему изобретению может быть получено с помощью способов органического синтеза, известных специалисту в данной области, как показано в следующих примерах.

Примеры

Список сокращений:

М: один моль,

АРС1: химическая ионизация при атмосферном давлении, вод.: водный,

АК: адренорецептор, атм: атмосферный ушир.: уширенный, см: сантиметры, д: дуплет, дд: двойной дуплет, ддд: двойной дуплет дуплетов, (ПНОЦ)₂РНАР: гидрохинидин 1,4-фталазиндииловый диэфир,

ИМАС: диметилацетамид,

ДМСО: диметилсульфоксид,

И8С: дифференциальная сканирующая калориметрия эи: энантиомерный избыток, экв.: эквивалент,

Е§: электронное распыление, г: граммы,

- 15 026914 ч: часы,

ВЭЖХ: высокоэффективная жидкостная хроматография,

НКМ8: масс-спектроскопия с высоким разрешением, м: мультиплет,

МС: метилцеллюлоза, мбар: миллибар,

МеОН: метанол, мин: минуты, мл: миллилитр,

М8: масс-спектроскопия,

МТВЕ: метил трет-бутиловый эфир, нм: нанометр,

ЯМР: ядерный магнитный резонанс,

ВУ: время удержания, к.т.: комнатная температура, с: синглет, нас.: насыщенный, сеп: септет, т: триплет,

ТРА: трифторуксусная кислота, мкм: микрометр, мас./об.: масса/объем,

ΧΚΡΌ: рентгеновская порошковая дифрактометрия.

Если не указано иное, ВЭЖХ/МС-спектры регистрировали на АдПсШ 1100 серии ЬС/Адбей М8 6210 Циабгиро1е. Использовали колонку \Уа1ег5 8уттеРу С8 (2,1x50 мм 3,5 мкм) (^АТ200624). Затем был применен градиентный способ (% = процент по объему): А = вода + 0,1% ТРА / В = ацетонитрил + 0,1% ТРА; 0,0-2,0 мин 90А:10В - 5А:95В; 2,0-3,0 мин 5А:95В; 3,0-3,3 мин 5А:95В -90А:10В; поток 1,0 мл/мин; температура колонки 50°С. Все соединения ионизировали в режиме АРС1.

Спектр ¹ Н-ЯМР фиксировали на аппарате УапапМегсигу (400 МГц) или Вгикег Абуаисе (600 МГц).

Угол вращения измеряли на Регкт Е1тег Ро1апте1ег 341.

Условия ЬСМ8 для примера 2Ь, 2с, 2б, 2е, 2д:

Аппарат масс-спектрометр: ЛдПеШ 6130 Циабгиро1е ЬС/М8 с Адбей 1200 НРЬС; Колонка: Адбей 2огЬах 8В-С18 (быстрое разделение), 2,1x30 мм, 3,5 мкм; Подвижные фазы: В: 0,1% муравьиная кислота в воде; С: 0,1% муравьиная кислота в МеСЫ; от 1,0 до 6,0 мин, от 95 до 5% В и от 5 до 95% С; от 6,0 до 9,0 мин, 5% В и 95% С; время между скачками: 2,0 мин; скорость потока: 0,8 мл/мин; температура колонки: 30°С; УФ-детектирование: 210 и 254 нм; М8 сканирование в режиме позитива и негатива: 801000; ионизирующий способ: АР1-Е8.

Условия НКМ8 для примера 2Р.

Аппарат: \Уа1ег5 Асдийу ИРЬС вместе с 8упар1 Ц-ТОР М8; колонка: \Уа1ег5 Асдийу ИРЬС ВЕН С18, 2,1x50 мм, 1,7 мкм подвижная фаза: А: 0,1% муравьиная кислота в воде, В: 0,1% муравьиная кислота в ацетонитриле; температура колонки: при комнатной температуре; УФ-детектирование: сканирование от 190 до 400 нм; скорость потока: 0,5 мл/мин; Градиент состояния:

Время [мин.] Фаза В [%]

0	5
1	5	Начало сбора данных
9	95
11	95	Конец сбора данных
11, 10	5
14	5	Следующая инъекция

Ионизирующий способ: Е81+; М8 диапазон сканирования: 100-1000 т/ζ.

Промежуточное соединение А. 2-(4-Бутоксифенил)-1,1-диметилэтиламин.

а) 4-(2-Метил-2-нитропропил)фенол.

Смесь 4-(гидроксиметил)фенола (20 г), ΚΟίΒιι (27,1 г) и ЭМАС (2 00 мл) перемешивали магнитной мешалкой. 2-Нитропропан (21,5 г) медленно добавляли в течение 20 мин. Смесь нагревали до 140°С в течение 5 ч перед охлаждением до комнатной температуры. Смесь медленно добавляли к охлажденному водному раствору НС1 (3,0%, 600 мл), затем экстрагировали МТВЕ (1x300 мл, 1x200 мл). Органические слои объединяли, промывали водой (2x300 мл) и насыщенным ЫаС1 водным раствором (1x50 мл), затем сушили над безводным Ыа₂8О₄. Смесь фильтровали и концентрировали в вакууме с получением светложелтого твердого вещества (28,5 г), который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

- 16 026914 [М-1]+ = 194,2; ВУ = 5,3 мин.

Ή ЯМР (400 МГц, ΟΌΟ1₃) ррт 6,96 (д, 1=8,5 Гц, 2Н), 6,75 (д, 1=8,5 Гц, 2Н), 3,11 (с, 2Н), 1,56 (с, 6Н).

b) 1 -Бутокси-4-(2-метил-2-нитропропил)бензол.

Смесь 4-(2-метил-2-нитропропил)фенола (20,4 г), 1-бромбутана (28,7 г), ОМАС (200 мл), К₂СО₃ (21,6 г), йодид тетрабутиламмония (38,7 г) перемешивали магнитной мешалкой и нагревали до 85°С в течение 17 ч. Смесь охлаждали до 0-10°С и добавляли воду (700 мл). Смесь экстрагировали МТВЕ (1x300 мл, 1x200 мл). Объединенные органические фазы промывали водой (2x250 мл), затем концентрировали в вакууме с получением красно-коричневого масла (27,8 г), которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

Ή ЯМР (400 МГц, ССС1_;) ррт 7,0 (д, 1=8,8 Гц, 2Н), 6,81 (д, 1=8,8 Гц, 2Н), 3,93 (т, 1=6,6 Гц, 2Н), 3,12 (с, 2Н), 1,74 (м, 2Н), 1,56 (с, 6Н), 1,48 (м, 2Н), 0,97 (т, 3Н).

c) 2-(4-Бутоксифенил)-1,1-диметилэтиламин.

В реактор гидрирования (1 л) добавляли раствор 1-бутокси-4-(2-метил-2-нитропропил)бензола (27,8 г) в АсОН (270 мл) с последующим добавлением влажного никеля Ренея (7,0 г). Смесь продували Н2 3 раза, а затем нагревали до 60°С и выдерживали при перемешивании при 5,0 атм в течение 16 ч. Смесь фильтровали, общий фильтрат концентрировали под вакуумом. Полученный остаток разбавляли водой (150 мл)/н-гептаном (80 мл), водный слой промывали снова н-гептаном (80 мл). Водный слой доводили с помощью ΝαΟΗ (~20%) до рН~11, а затем экстрагировали МТВЕ (100 млх1) и ЕЮАс (2x150 мл). Средний слой отбрасывали. Все верхние слои объединяли и промывали насыщенным раствором №НС'О₄ (100 мл) и насыщенным раствором №С1 (100 мл), а затем сушили над безводным №-ь8О₄. После фильтрации смесь концентрировали. Полученный остаток перемешивали и добавляли раствор НС1 в изопропиловом спирте (2 М, 40 мл). Суспензию нагревали до 60°С и добавляли н-гептан (120 мл). Смесь охлаждали до 20°С, затем фильтровали, осадок на фильтре промывают небольшим количеством нгептана. Белое твердое вещество сушили на воздухе в течение 2 дней с получением 10 г чистой НС1 соли продукта.

Выход: 35,2%. [МН]+ = 222,2; ВУ = 5,0 мин.

Ή ЯМР (400 МГц, ά-ДМСО) ррт 8,13 (с, 3Н), 7,12 (д, 1=8,6 Гц, 2Н), 6,88 (д, 1=8,5 Гц, 2Н), 3,93 (т, 1=6,4 Гц, 2Н), 2,80 (с, 2Н), 1,67 (м, 2Н), 1,42 (м, 2Н), 1,18 (с, 6Н), 0,92 (т, 3Н).

Пример 1. (К)-7-(2-( 1 -(4-Бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1 -гидроксиэтил)-5 гидроксибензо[0]тиазол-2(3Н)-он

a) 1-трет-Бутокси-3-фтор-5-изотиоцианатбензол.

Тиофосген (33,6 г) в СНС1₃ (250 мл) и К₂СО₃ (64,7 г) в Н₂О (450 мл) добавляли, отдельно и одновременно, по каплям к раствору 3-трет-бутокси-5-фторфениламина (42,9 г) в СНС1₃ (350 мл) при 0°С. Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры в течение ночи. Органические вещества отделяли и промывали водой (3х), солевым раствором (1х), сушили над М§8О₄, фильтровали и растворитель удаляли в вакууме. Указанное в заголовке соединение получали с помощью колоночной флэшхроматографии (силикагель, элюент дихлорметан/изогексан 1:3).

Ή ЯМР (ΟϋΟ1₃, 400 МГц): 6,70 (м, 3Н), 1,40 (с, 9Н).

b) О-Изопропиловый эфир (3-трет-бутокси-5-фторфенил)тиокарбаминовой кислоты.

1-трет-Бутокси-3-фтор-5-изотиоцианатбензол (24,0 г) и триэтиламин (10,9 г) растворяли в изопропаноле (150 мл). Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 18 ч и растворитель удаляли под вакуумом. Сырой продукт растворяли в гексан:диэтиловый эфир (19:1). Диэтиловый эфир удаляли в вакууме и полученный раствор охлаждали до 0°С в течение 3 ч. Раствор фильтровали с получением указанного в заголовке соединения.

Ή ЯМР (ΟϋΟ1₃, 400 МГц): 8,10 (ушир.с, 1Н), 6,65 (ушир.с, 2Н), 6,45 (ддд, 1Н) 5,60 (септ, 1Н), 1,35 (д, 6Н), 1,30 (с, 9Н).

c) 5-трет-Бутокси-2-изопропокси-бензотиазол-7-карбальдегид.

О-Изопропиловый эфир (3-трет-бутокси-5-фторфенил)тиокарбаминовой кислоты (2,2 г) растворяли в сухом тетрагидрофуране (20 мл). Реакционную смесь охлаждали до -78°С и трет-бутиллитий (15,2 мл, раствора 1,5 М) добавляли в течение 20 мин. Реакционную смесь затем нагревали до -10°С в течение 75 мин. Затем реакционную смесь повторно охлаждали до -78°С, добавляли Ν,Ν-диметилформамид (1,5

г) и реакционную смесь медленно нагревали до комнатной температуры, затем перемешивали при -10°С в течение 1 ч. Реакционную смесь гасили НС1 (водный раствор) (5 мл, раствора 2 М), органические вещества разделяли между этилацетатом/водой и удаляли в вакууме. Указанное в заголовке соединение получали с помощью колоночной флэш-хроматографии (силикагель, элюент этилацетат/изогексан 1:9).

- 17 026914

М8 (Е8+) т/е 294 (МН+).

ά) 5 -трет-Бутокси-2 -изопропокси-7-винилбензотиазол.

РЬ₃РМе-Вг (5,0 г) растворяли в сухом тетрагидрофуране (100 мл) в атмосфере аргона. Ν-Бутиллитий (8,8 мл, 1,6 М раствора) добавляли при комнатной температуре в течение 10 мин и реакционную смесь перемешивали в течение еще 30 мин. Раствор 5-трет-бутокси-2-изопропоксибензотиазол-7карбальдегида (1,25 г) в дихлорметане (40 мл) добавляли по каплям к реакционной смеси и реакционную смесь перемешивали в течение 4,5 ч при комнатной температуре. Растворитель удаляли в вакууме, вновь растворяли в этилацетате, промывали водой (3х), солевым раствором (1х), сушили над Мд80₄, фильтровали и растворитель удаляли в вакууме. Указанное в заголовке соединение получали с помощью колоночной флэш-хроматографии (силикагель, элюент этилацетат/изогексан 1:9).

М8 (Е8+) т/е 292 (МН+).

е) (К)-1-(5-трет-Бутокси-2-изопропоксибензотиазол-7-ил)этан-1,2-диол.

К₃Ре(С№)₆ (1,2 г), К₂С0₃ (0,5 г), (ΌΗρΌ)₂ΡΗΑ1 (19 мг) растворяли в трет-бутанол/вода (15 мл, 1:1 смеси) в атмосфере аргона и перемешивали в течение 15 мин. Реакционную смесь охлаждали до 0°С и 0к0₄ (3,1 мг) с последующим добавлением 5-трет-бутокси-2-изопропокси-7-винилбензотиазола (0,35 г). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили натрий-мета-бисульфатом (1 г) и перемешивали в течение 1,5 ч. Добавляли этилацетат, органические вещества отделяли, промывали водой (2х), (1 х) солевым раствором, сушили над Мд80₄, фильтровали и растворитель удаляли в вакууме. Указанное в заголовке соединение получали с помощью колоночной флэш-хроматографии (силикагель, элюент этилацетат/изогексан 2:5).

М8 (Е8+) т/е 326 (МН+).

ί) (К)-2-(5-трет-Бутокси-2-изопропоксибензо[б]тиазол-7-ил)-2-гидроксиэтил-4метилбензолсульфонат.

500-мл 3-горлую круглодонную колбу продували и поддерживали инертную атмосферу азота, помещали раствор (К)-1-(5-трет-бутокси-2-изопропокси-бензо[б]тиазол-7-ил)этан-1, 2-диола (20 г, 59,05 ммоль) в пиридине (240 мл) и молекулярные сита 4 А (5 г). Это было с последующим добавлением раствора хлорида толуолсульфоновой кислоты (тозил хлорида) (15,3 г, 79,73 ммоль) в пиридине (60 мл) по каплям при перемешивании при температуре 0°С. Полученный раствор перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Затем реакционную смесь гасили добавлением 1000 мл 1 М хлористого водорода. Полученный раствор экстрагировали 2х300 мл этилацетата и органические слои объединяли. Органическую фазу промывали 1х500 мл 1 М хлористого водорода, 1х500 мл 10% раствором бикарбоната натрия и 300 мл солевого раствора. Смесь сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток наносили на колонку с силикагелем с этилацетат/петролейный эфир (1:10). Это привело к 26 г (87%) (К)-2-(5-трет-бутокси-2-изопропоксибензо[б]тиазол-7-ил)-2-гидроксиэтил 4-метилбензолсульфонату в виде желтого масла.

БС/М8 ВУ = 2,47 мин; (т/ζ): 480 [М+Н]+.

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-Д₆): δ (ррт) 7,57 (д, 2Н), 7,36 (д, 2Н), 7,17 (д, 1Н), 6,79 (д, 1Н), 6,32 (д, 1Н), 5,37-5,26 (м, 1Н), 4,97-4,90 (м, 1Н), 4,12-4,00 (м, 2Н), 2,40 (с, 3Н), 1,45-1, 38 (м, 6Н), 1, 32 (с, 9Н).

д) (К)-1-(5-трет-Бутокси-2-изопропоксибензо[б]тиазол-7-ил)-2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан2-иламино)этанол.

В 1000-мл 4-горлую круглодонную колбу помещали раствор (К)-2-(5-трет-бутокси-2изопропоксибензо[б]тиазол-7-ил)-2-гидроксиэтил-4-метилбензолсульфоната (26 г, 51,55 ммоль, 1,00 экв) в толуоле (320 мл) и 2-(4-бутоксифенил)-1,1-диметилэтиламин (промежуточное соединение А) (22 г, 99,47 ммоль, 1,93 экв). Раствор перемешивали в течение 24 ч при температуре 90°С на масляной бане. Полученную смесь концентрировали в вакууме. Остаток наносили на колонку с силикагелем с этилацетат/петролейный эфир (1:8). Это привело к 16 г (58%) (К)-1-(5-трет-бутокси-2изопропоксибензо[б]тиазол-7-ил)-2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)этанолу в виде светло-желтого масла.

БС/М8: ВУ = 2,24 мин; (т/ζ): 529 [М+Н]+.

Ή ЯМР (600 МГц, ДМСО-ά..): δ (ррт) 7,12 (с, 1Н), 6,83 (д, 2Н), 6,77 (с, 1Н), 6,63 (д, 2Н), 5,80 (ушир.с, 1Н), 5,38-5,30 (м, 1Н), 4,70-4,66 (м, 1Н), 3,90 (т, 2Н), 2,81-2,61 (м, 2Н), 2,50-2,39 (м, 2Н), 1,711,62 (м, 2Н), 1,47-1,41 (м, 2Н), 1,41 (д, 6Н), 1,22 (с, 9Н), 0,91 (кв, 3Н), 0,88 (с, 3Н), 0,83 (с, 3Н).

1ι) (К)-7-(2-( 1 -(4-Бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1 -гидроксиэтил)-5 гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-он.

Раствор (К)-1 -(5-трет-бутокси-2-изопропоксибензо [б]тиазол-7 -ил)-2-( 1 -(4-бутоксифенил)-2метилпропан-2-иламино)этанола (3,5 г) в муравьиной кислоте (40 мл) перемешивали в течение 68 ч при температуре окружающей среды. Добавляли 50 мл воды и полученную смесь выпаривали досуха (роторный испаритель, 15 мбар, 40°С), получая 3,8 г сырого продукта. Этот материал подвергали распределению между насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (50 мл) и этилацетатом (50 мл), чтобы удалить муравьиную кислоту. Водный слой экстрагировали 3 раза этилацетатом (30 мл каждого). Объединенные органические экстракты сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали с

- 18 026914 получением 3 г сырого свободного основания. Этот материал был подвергнут флэш-хроматографии (силикагель; градиент 0-60% метанола в дихлорметане). Чистые фракции собирали и упаривали досуха с получением 1,7 4 г аморфного полутвердого вещества.

Это вещество подвергали хиральной препаративной хроматографии [колонка: СЫга1рак 1С (20 мкм) 7,65x37,5 см; элюент: н-гептан/дихлорметан/этанол/диэтиламин 50:30:20 (+0,05 диэтиламин); скорость потока = 70 мл/мин; концентрация: 2,5 г/50 мл элюента; обнаружение: УФ, 220 нм] с получением чистого энантиомера (100% э.и.).

Это вещество растворяли в 45 мл ацетонитрила при 60°С. Раствор оставляли охлаждаться до температуры окружающей среды в течение 18 ч, после чего выпал осадок. Смесь разбавляли 5 мл холодного (4°С) ацетонитрила и фильтровали через воронку Бюхнера. Осадок на фильтре дважды промывали холодным ацетонитрилом. Затем влажное твердое вещество собирали и сушили в вакууме (0,2 мбар) при температуре окружающей среды в течение ночи, получая 1,42 г (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она в виде бесцветного порошка.

ЬС/М8: ВУ = 1,81 мин; (т/ζ): 431 [М+Н]+.

¹Н ЯМР (600 МГц, ДМСО-й₆): δ (ррт) 11,5 (ушир.с, 1Н), 9,57 (ушир.с, 1Н), 6,99 (д, 2Н), 6,76 (д, 2Н), 6,52 (с, 1Н), 6,47 (с, 1Н), 5,63 (ушир.с, 1Н), 4,53-4,48 (м, 1Н), 3,90 (т, 2Н), 2,74-2,63 (м, 2Н), 2,54-2,45 (м, 2Н), 1,71-1,62 (м, 2Н), 1,49-1,40 (м, 2Н), 0,93 (кв, 3Н), 0,89 (с, 6Н).

Угол вращения: [а]_с ²²=-43° (с = 1,0 г/100 мл МеОН).

Пример 2. Альтернативный способ (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она

a) 1-трет-Бутокси-3-фтор-5-изотиоцианат-бензол.

1,1'-Тиокарбонилдиимидазол (423 г, 2,37 моль) растворяли в дихлорметане (3200 мл). Смесь перемешивали в атмосфере Ν₂, в то время как раствор 3-трет-бутокси-5-фторанилина (435 г, 2,37 моль) в дихлорметане (800 мл) медленно добавляли в течение 2 ч. Затем смесь выдерживали при перемешивании при 20°С в течение 16 ч. Смесь разбавляли водой (3000 мл). Отделенную фазу дихлорметана снова промывали водой (3000 мл), прежде чем сушили над безводным №₂8О₄ в течение 2 ч. Смесь фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме для удаления растворителя, получая 1-трет-бутокси-3-фтор-5изотиоцианат-бензол (499 г).

¹Н ЯМР (400 МГц, СЭС1₃): 6,63-6,68 (м, 3 Н), 1,37 (м, 9Н).

b) О-Изопропиловый эфир (3-трет-бутокси-5-фторфенил)тиокарбаминовой кислоты.

К раствору 1-трет-бутокси-3-фтор-5-изотиоцианатбензола (460 г, 2,04 моль) в безводном изопропиловом спирте (3250 мл) добавляли триэтиламин (315 г, 3,06 моль). Смесь нагревали с обратным холодильником в атмосфере Ν₂ в течение 16 ч и температуру охлаждали до 40-50°С. После концентрирования полученный темный остаток разбавляли н-гептаном (1000 мл) и нагревали до 60°С. Смесь медленно охлаждали до 25°С, в то же время был добавлен затравляющий раствор. Суспензию наблюдали и перемешивали при 25°С в течение 16 ч, затем охлаждали медленно до 0-10°С в течение 2 ч. После фильтрации и промывки н-гептаном (200 мл) собранное твердое вещество сушили в печи под вакуумом при 40-45°С в течение 18 ч, получая 0-изопропиловый эфир (3-трет-бутокси-5-фторфенил)тиокарбаминовой кислоты (453,1 г).

ЬСМ8: [М+Н]+ = 286,1; ВУ = 7,2 мин.

¹Н ЯМР (400 МГц, СЭС1₃): 8,18 (с, 1Н), 6,81 (м, 2Н), 6,51 (дт, 1=10,2 Гц, 1Н), 5,66 (гептет, 1=6,3 Гц, 1Н), 1,42 (д, 1=6,2 Гц, 6Н), 1,37 (с, 9Н).

c) 1-(5-трет-Бутокси-2-изопропоксибензотиазол-7-ил)-2-хлорэтанон.

В атмосфере азота раствор трет-бутиллития (481 мл, 737,6 ммоль, 1,6 М) добавляли по каплям к раствору О-изопропилового эфира (3-трет-бутокси-5-фторфенил)тиокарбаминовой кислоты (200 г, 700,83 ммоль) в 2-МеТНР (1600 мл) при температуре ниже -65°С. Температуру реакции смеси нагревали до -35°С и добавляли вторую порцию трет-бутиллития (388 мл, 737,6 ммоль, 1,9 М), медленно при поддержании температуры ниже -35°С. Реакционную смесь затем перемешивали при этой температуре в течение 3 ч и охлаждали до -70°С. Раствор ^метил-^метокси хлорацетамида (96,4 г, 700,83 ммоль) в 2-МеТНР (300 мл) добавляли к реакционной смеси, поддерживая температуру ниже -70°С. Затем смесь нагревали до -30°С и перемешивали в течение 45 мин. Охлажденную реакционную смесь гасили добавлением по каплям 30% НС1 в изопропаноле (240 г) с последующим добавлением 1500 мл воды. Органический слой последовательно промывали 1000 мл воды, 1500 мл насыщенного водного раствора NаНСОз и 1500 мл солевого раствора. После концентрирования полученный светло-коричневый остаток добавля- 19 026914 ли в изопропанол (135 мл). Смесь нагревали до 50°С и охлаждали медленно до 25°С. н-Гептан (135 мл) добавляли по каплям к раствору и смесь перемешивали в течение ночи. Суспензию фильтровали и осадок на фильтре промывали н-гептаном 40 мл) с последующей другой частью н-гептана (20 мл). Осадок сушили в вакууме, получая 1-(5-трет-бутокси-2-изопропоксибензотиазол-7-ил)-2-хлорэтанон в виде не совсем белого порошка (42,8 г, выход 17,9%).

Ή ЯМР (400 МГц, СОС1₃): 7,60 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 7,45 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 5,40 (гептет, 1=6,3 Гц, 1Н), 4,77 (с, 2Н), 1,47 (д, 1=6,3 Гц, 6Н), 1,40 (с, 9Н).

ЬСМ8: [М+Н]+ = 342,1, ВУ = 7,29 мин.

б) (К)-1-(5-трет-Бутокси-2-изопропоксибензотиазол-7-ил)-2-хлорэтанол.

Суспензию 1-(5-трет-бутокси-2-изопропоксибензо[б]тиазол-7-ил)-2-хлорэтанон (70 г, 204,8 ммоль) и КиС1(р-сутепе)[(8,8)-Т5-ОРЕМ] (1,954 г, 3,07 ммоль) в метаноле/ΌΜΡ (1330 мл/70 мл) дегазировали и снова заполняли Ν₂ трижды. Добавляли предварительно дегазированную смесь муравьиной кислоты (28,3 г) в Εΐ₃Ν (124,3 г) медленно при сохранении внутренней температуры от 15 до 20°С. Полученную желтую суспензию нагревали до 30°С. Через 2 ч реакционную смесь охлаждали до 25°С, затем добавляли к реакционной смеси воду (750 мл) с последующим добавлением уксусной кислоты (56 мл) в виде одной порции. Смесь концентрировали и затем разбавляли ТВМЕ (1000 мл). Водную фазу отделяли и экстрагировали ТВМЕ (1000 мл). Объединенную органическую фазу промывали последовательно водой и солевым раствором, а затем сушили над Ν;·ι₂8Ο₂ и концентрировали в вакууме с получением (К)-1 -(5 -трет-бутокси-2-изопропоксибензотиазол-7-ил) -2-хлорэтанола (72 г).

ЬСМ8 (способ А): [М+Н]+ = 343,1, ВУ = 5,67 мин.

Ή ЯМР (400 МГц, СОС1₃): 7,29 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 6,83 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 5,37 (гептет, 1=6,3 Гц, 1Н), 4,96 (м, 1Н), 3,74 (м, 2Н), 3,01 (с, 1Н), 1,46 (д, 1=6,2 Гц, 6Н), 1,36 (с, 9Н).

е) (К)-5-трет-Бутокси-2-изопропокси-7-оксиранилбензотиазол.

К раствору (К)-1-(5-трет-бутокси-2-изопропоксибензо[б]тиазол-7-ил)-2-хлор-этанола (140 г, 407,1 ммоль) в ТВМЕ (420 мл) добавляли по каплям водный раствор ΝαΟΗ (2 М, 420 мл) с последующим добавлением иодида тетрабутиламмония (7,52 г, 2 0,36 ммоль) одной порцией. После 4 ч при 26°С добавляли 400 мл ТВМЕ и органический слой отделяли. Водный слой экстрагировали ТВМЕ (400 мл). Объединенные органические слои промывали водой (400 мл) и солевым раствором (400 мл), получая (К)-5-трет-бутокси-2-изопропокси-7-оксиранилбензотиазол (122 г).

ЬСМ8: [М+Н]+ = 308,0, ВУ = 6,80 мин.

Ή ЯМР (400 МГц, СОСЬ) ррт 7,28 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 6,85 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 5,38 (м, 1Н), 3,96 (м, 1Н), 3,15 (дд, 1=4,3, 5,5 Гц, 1Н), 2,94 (дд, 1=4,3, 5,5 Гц, 1Н), 1,45 (д, 1=Гц, 6Н), 1,37 (с, 9Н).

ί) (К)-1-(5-трет-Бутокси-2-изопропоксибензо[б]тиазол-7-ил)-2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан2-иламино)этанол.

(К)-5-трет-Бутокси-2-изопропокси-7-оксиранилбензотиазол.

(145 г, 471,7 ммоль) и 2-(4-бутокси-фенил)-1,1-диметилэтиламин (114,8 г, 518,9 ммоль) растворяли в ДМСО (850 мл). Реакционную смесь нагревали до 80°С и перемешивали в течение 27 ч. Затем смесь охлаждали до 25°С и добавляли к перемешиваемой смеси воду (1500 мл) и ТВМЕ (1500 мл). Водный слой отделяли и экстрагировали ТВМЕ (1000 мл). Объединенные органические слои последовательно промывали водой (1500 мл) и солевым раствором (1000 мл), сушили над безводным Ν;·ι₂8Ο₂. После концентрирования остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (элюент: 10% ЕЮАс в нгептане до 33% ЕЮАс в н-гептане). Твердое вещество (К)-1-(5-трет-бутокси-2изопропоксибензо[б]тиазол-7-ил)-2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)этанол получали (140 г) в виде не совсем белого твердого вещества.

НРМ8: [М+1] 529,2996.

Ή ЯМР (400 МГц, СОС1₃): 7,26 (м, 1Н), 7,01 (м, 1Н), 6,99 (м, 1Н), 6,78-6,80 (м, 3Н), 5,39 (м, 1Н), 4,65 (дд, 1=3,8, 8,8 Гц, 1Н), 3,83 (т, 1=6,4 Гц, 2Н), 2,96 (дд, 1=3,8, 12 Гц, 1Н), 2,74 (дд, 1=8,8, 12 Гц, 1Н), 2,60 (дд, 1=13,6, 17,6 Гц, 2Н), 1,72-1,79 (м, 2Н), 1,50 (м, 2Н), 1,46 (д, 1=2,0 Гц, 3Н), 1,45 (д, 1=2,0 Гц, 3Н), 1,35 (с, 9Н), 1,06 (с, 3Н), 1,04 (с, 3Н), 0,98 (т, 1=7,2 Гц, 3Н).

д) (К.)-7-(2-( 1 -(4-Бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1 -гидроксиэтил)-5 гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-он.

К (К)-1-(5-трет-бутокси-2-изопропоксибензо[б]тиазол-7-ил)-2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан2-иламино)этанолу (7,5 г) в изопропаноле (30 мл) и воде (25 мл) добавляли 1 М водный раствор НС1 (43 мл). Затем реакционную смесь нагревали до 60°С и перемешивали в течение 2,5 ч. Смесь охлаждали до 50°С и затем медленно добавляли 2 М водный раствор ΝαΟΗ (18 мл), чтобы довести рН между 8,2-8,4. Реакционную смесь затем охлаждали до 30°С с последующей экстракцией ТВМЕ (сначала 40 мл, во второй раз 25 мл). Два органических слоя объединяли и промывали водой (38 мл за два раза), затем сушили над безводным Ν;·ι₂8Ο₂. После фильтрации фильтрат концентрировали и затем растворяли в ΜеСN (145 мл). Раствор обрабатывали активированным углем (0,6 г) и нагревали до 60°С. После второй фильтрации осадок на фильтре промывали ΜеСN (10 мл за два раза), фильтрат кристаллизовали при 60°С, получая (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-он (3, 8 г). э.и. = 97,6%.

- 20 026914

ЬСМ8 (способ А): [М+Н]+=431,2.

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆): 9,5 (ушир. с, 1Н), 6,81 (дд 1=8,5 Гц, 2Н), 6,57 (д, 1=8,6 Гц, 2Н), 6,33 (д, 1=2,2 Гц, 1Н), 6,30 (д, 1=2,2 Гц, 1Н), 4,43 (ушир.с, 1Н), 3,69 (т, 1=6,4 Гц, 2Н), 2,58-2,59 (м, 2Н), 2,242,31 (м, 2Н), 1,41-1,48 (м, 2Н), 1,15-1,25 (м, 2Н), 0,78 (с, 6Н), 0,70 (т, 1=7,4 Гц, 3Н).

Пример 3. Ацетатная соль (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она.

500 мг (1,161 ммоль) свободного основания (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она суспендировали в 10,0 мл ацетонитрила и 0,25 мл воды в 50 мл четырехгорлой колбе и лопастной мешалкой перемешивали при комнатной температуре. Суспензию нагревали при внутренней температуре 50°С (температура рубашки 75°С) и добавляли 72 мг уксусной кислоты (1,161 ммоль) (прозрачный желтый раствор был сформирован). Раствор охлаждали в течение 30 мин при комнатной температуре и добавляли 0,15 мл воды.

Затем в раствор внесли затравку с (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-он ацетатом и перемешивали в течение ночи (16 ч) при комнатной температуре. Затем суспензию фильтровали при комнатной температуре через стеклянный фильтр и промывали три раза 1 мл ацетонитрила. 510 мг влажной фильтровальной лепешки сушили в сушильном шкафу в течение ночи (16 ч) при комнатной температуре досуха.

Выход: 508 мг белого порошка (89,1%).

Получение затравочных кристаллов ацетата (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2иламино)-1 -гидроксиэтил)-5-гидроксибензо [й]тиазол-2(3Н)-она.

57,0 мг (0,132 ммоль) свободного основания (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она и 8,03 мг (0,132 ммоль) уксусной кислоты растворяли в 1,0 мл ацетонитрила и 0,05 мл воды. Раствор перемешивали при комнатной температуре, перемешивали с помощью магнитной мешалки. Осадок выпадал в течение ночи. Затем раствор фильтровали при комнатной температуре через стеклянный фильтр и промывали три раза 0,5 мл ацетонитрила. Влажный осадок на фильтре сушили в сушильном шкафу в течение ночи (16 ч) при комнатной температуре досуха.

Выход: 57 мг белого порошка.

Пример 3а. Альтернативный способ формирования ацетатной соли (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2метилпропан-2-иламино)-1 -гидроксиэтил)-5 -гидроксибензо [й]тиазол-2(3Н)-она.

(К)-1 -(5-трет-Бутокси-2-изопропоксибензо [й]тиазол-7-ил)-2-( 1 -(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2иламино)этанол (1 экв.) суспендировали в изопропаноле. При 50-60°С 1 М водный раствор соляной кислоты (3 экв.) добавляли в течение примерно 30-60 мин. После завершения реакции (приблизительно 2,5 ч при 60°С) раствор охлаждали до 20°С и 2 М раствор гидроксида натрия (3 экв.) постепенно добавляли при этой температуре. После завершения добавления эмульгированное свободное основание (К)-7-(2-(1(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1 -гидроксиэтил)-5 -гидроксибензо [й]тиазол-2(3Н)-она экстрагировали в этилацетат и органический слой промывали водой. Органический слой обрабатывали активированным углем и фильтровали с использованием микрокристаллической целлюлозы в качестве вспомогательного фильтрующего материала. Осадок на фильтре промывали этилацетатом. Фильтрат, содержащий свободное основание (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она, тщательно концентрировали до остаточного объема, определенного путем перегонки при температуре рубашки 55°С при пониженном давлении. Затем добавляли изопропилацетат и частично удаляли перегонкой до определенного остаточного объема при температуре рубашки 55°С при пониженном давлении. Затем изопропилацетат и раствор уксусной кислоты в изопропилацетате добавляли к теплому остатку при 50-55°С. Во время добавления порции уксусной кислоты вводили затравку с ацетатной солью (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она для иницииации контролируемой кристаллизации соли ацетата при 50-55°С. После постепенного охлаждения до 0°С продукт суспензии отфильтровывали и дважды промывали холодным изопропилацетатом. Осадок на фильтре высушивали при 50-90°С при пониженном давлении до постоянной массы, получая кристаллическую ацетатную соль (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[а]тиазол2(3Н)-она при типичном выходе приблизительно 80%.

Пример 4. Анализ ΧΚΡΌ и Э8С кристаллической формы ацетатной соли (К)-7-(2-(1-(4бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она.

Анализ ΧΚΡΌ кристаллической формы ацетатной соли (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она проводили при следующих условиях эксперимента:

- 21 026914

Способ ΧΚΡϋ

Аппарат Вгикег Э8 Αάνβηοβ (отражение) облучение СиКа (40 кВ, 30 мА)

Шаг 0,017

Тип сканирования непрерывное сканирование

Время сканирования 107,1 сек диапазон 2°-40° (значение 2 тета) сканирования

Анализ ЭЗС проводили при следующих условиях эксперимента:

Способ ЭЗС

Аппарат Регкгп Е1тег йсатопб.

Диапазон температур 30°- 300С

Масса образца 2-3 мг

Кювета для образца алюминий

Поток азота 20-50 К/мин

Анализы ХКРР кристаллической ацетатной соли (А)-7-(2-(1(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5гидроксибензо[сП тиазол-2(ЗН)-она

Кристаллическую ацетатную соль (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-она анализировали ΧΡΡΌ и характеристические пики показаны в приведенной ниже таблице (см. также фиг. 6). Из них пики при 8,8, 11,5, 16,4, 17,6, 18,2, 19,6, 20,1, 20,8, и 21,1° 2-тета являются наиболее характерными.

Угол (2-тета°)	интенсивность %	Угол (2- тета°)	интенсивность
8, 8	высокая	19,1	низкая
10,0	низкая	19, 6	средняя
11,5	высокая	20,1	высокая
14,2	низкая	20, 8	высокая
14,6	низкая	21, 1	средняя
15, 7	низкая	23, 3	средняя
16, 4	высокая	26,2	низкая
17,6	средняя	26, 6	средняя
18,2	высокая	27,1	средняя

Кристаллическую ацетатную соль (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-она анализировали с помощью И8С и обнаружили широкую эндотермичность при около 170°С.

Пример 5. Сравнительные растворимости свободного основания, соли ацетата и гликолятных солевых форм соединения А.

Относительные растворимости формы свободного основания и солевых форм ацетата и гликолята соединения А были проанализированы и результаты показаны в таблице ниже. Растворы титровали добавлением НС1 или ИаОН для доведения рН. Улучшенные растворимости в воде солевых форм ацетата и гликолята по отношению к форме свободного основания соединения А делают соли ацетата и гликолята соединения А больше подходящими для подкожной инъекции или инфузии.

Растворимость в НгО свободного основания Соединения А	Растворимость в ЩО ацетатной соли Соединения А	Растворимость в Н2О гликолятной соли Соединения А
рН	Конц, в мг/мл	рН	Конц. в мг/мл	рН	Конц, в мг/мл
6, 2	0,27	5, 9	1,33	5,1	13, 1
7, 0	0, 05	6, 0	1, 11	5, 3	6, 39
7,3	<0, 01	6, 1	1, 10	5, 4	4, 47
7, 8	<0, 01	6, 2	0, 55

- 22 026914

Пример 6. Ιη νίίΓΟ клеточные структуры соединения по настоящему изобретению (соединение А), его энантиомера (соединение В), его рацемата (соединение А/В) и формотерола.

Соединение по настоящему изобретению (соединение А) показывает следующие значения ЕС₅₀ в тесте 1, как описано выше.

Соединения	Клетки СНО ” ЕС50 (Е^ %)	Первичные клетки; цАМФ ответ ЕС50 (Е^ %)
р2 АК	р1 АК	αΙΑ АЕ	зкМС человека	зкМС крысы	кардиомио циты крысы
Формотерол	0,7 нМ (99%'*)	85 нМ (86%**)	190 нМ	0,2 нМ	0,9 нМ	2,9 нМ
Соединение А (Гр	5,6 нМ (88%'*)	5 60 нМ (32%**)	> 10 мкМ	0,7 нМ (96%*)	3,4 нМ (98%*)	5, 7 нМ (71%**)
Соединение В (3)	950 нМ (33%'*)	> 10 мкМ	> 30 мкМ	280 нМ (100%*)	н.о.	н.о.
Соединение А/В	11 нм (87%'*)	684 нМ (38%**)	н.о.	0,63 нм (100%*)	н.о.	н.о.
Соединение А (Е) ацетатная соль	2,5 нМ (91%+*)	н. о.	н.о.	1,7 нМ (93%**)	н.о.	н.о.

зкМС: дифференцированные скелетные мышечные трубочки;

*: по сравнению с формотеролом;

**: по сравнению с изопреналином;

#: цАМФ для β1 и β2, Са²⁺ для α1Α; н.о. не определено.

Соединение по настоящему изобретению (соединение А) является мощным и селективным агонистом β2 ΑΚ с очень низкой характеристической эффективностью в отношении β 1 ΑΚ и нет активности в отношении ΑΚ α1Α. Его энантиомер соединения В очень слаб в отношении β2 ΑΚ с ЕС₅₀ 950 нМ.

Пример 7. Влияние формотерола и соединения А на скелетную мышцу и массу сердца ίη νίνο.

Самцы крыс ХУГйг Нап ΙΟ8 <(1п1сгпа11опа1 СепеЕс 81апйагй)) (Ст1:^1(Нап)) весом 350-400 г были приобретены у СНаНсз Κίνβτ ЬаЬогаЮпек. Крысы акклиматизировались в помещении в течение 7 дней. Животных содержали в группах по 3 животных при 25°С с 12:12-часовым циклом свет-темнота. Крыс кормили стандартной лабораторной пищей, содержащей 18,2% белка и 3,0% жира с содержанием энергии 15,8 МДж/кг (ΝΑΡΑΟ 3890, КПЬа. Базель, Швейцария). Пища и вода были предоставлены без ограничений. Формотерол или соединение А растворяли в транспортном средстве, указанном ниже, чтобы достичь диапазон доз от 0,003 до 0,03 мг/кг/день для формотерола и от 0,01 до 0,1 мг/кг/день для соединения А для модели ΑΙ/е! 2МЬ4 в течение 28 дней. Насосы заполняли раствором и выдерживали в течение нескольких часов при 37°С в РВ8 до хирургической имплантации. Крыс обрабатывали подкожно Тстдсзк в дозе 0,02 мг/кг при объеме 1 мл/кг по меньшей мере за 30 мин до операции, а затем насосы, наполненные указанным выше раствором, имплантировали подкожно в спину крыс под анестезией с изофлураном в концентрации 3%. Тстдсзк вводили подкожно крысам через 24 и 48 ч после операции. Массу тела измеряли два раза в неделю. Зажимы были удалены через 10 дней после хирургического вмешательства под анестезией. Через 4 недели после обработки крыс умерщвляли с помощью СО₂, иссекали и взвешивали переднюю большеберцовую мышцу, икроножную мышцу и камбаловидную мышцу, сердце и мозг. Масса мозга была использована для нормализации масс органов. Результаты выражены в виде среднего ± 8ЕМ. Статистический анализ проводили с использованием множественного сравнительного теста Даннетта, с последующим односторонним дисперсионным анализом для сравнения групп, получавших лечение с контрольной группой с носителем. Различия считались значимыми при значении вероятности, равном <0,05: *: Статистический анализ проводили с помощью СтарЬРай Рпзт версия 5,0 (СтарЬРай 8ойтеаге, 1пс., Ьа 1о11а, СΑ). Масса мышц нормализовалось к массе тела в день 0 (исходная массы тела) и масса сердца была нормализована массой мозга.

Исследование 1. Формотерол.

Группа	Обработка	Доза (мг/кг)	Путь введения	Схема
1	наполнитель’	0		Мининасос
2	Формотерол	0, 003	подкожно	А1геб 2МЬ4
3	Формотерол	0, 01	в течение 4
4	Формотерол	0, 03		недель

Наполнитель: 20% 1:2 кремофор:этанол в физиологическом растворе (0,9% ЖС1).

- 23 026914

Исследование 2. Соединение А.

Группа	Обработка	Доза (мг/кг)	Путь введения	Схема
1	наполнитель ’	0		Мининасос
2	Соединение А	0, 01	подкожно	А1ге(: 2МЬ4 в
3	Соединение А	0, 03	течение 4
4	Соединение А	0, 1		недель

Наполнитель: 20% 1:2 кремофор:этанол в физиологическом растворе (0,9% ЫаС1).

На фиг. 1 показано, что формотерол индуцирует и гипертрофию скелетных мышц и прирост сердечной массы в одинаковой степени, в то время как соединение А индуцирует гипертрофию скелетных мышц с минимальным воздействием на сердечную массу, это свидетельствует, что соединение А обладает селективным действием на скелетные мышцы относительно сердечной мышцы. Соединение А значительно индуцирует гипертрофию скелетных мышц на 11% при 0,01 мг/кг/день с равновесной концентрацией в плазме ~0,2 нМ, в то время как не было вывода о сердечной гистопатологии даже при 0,1 мг/кг/день с равновесной концентрацией ~2 нМ.

Пример 8. Влияние формотерола и соединения А на функцию отдельных органов (сокращение левого предсердия, скорость ритмического сокращения синоатриального узла и автоматию всего сердца).

Способ.

Сокращение левого предсердия: Анализ сокращения левого предсердия проводили на Юсегса Вюкиепсек, ЬЬС (номер по каталогу 407500 Абгепегдк Ъе1а1), используя левое предсердие морской свинки Эипкт Нагйеу массой тела 600±80 г (АгсЬ. 1пк РЬагтасобуп. 1971, 191:133-141.).

Скорость ритмического сокращения синоатриального узла: Новозеландские белые кролики женского пола были убиты путем обескровливания после глубокой анестезии с использованием смеси кетамина/ксилазина, внутривенно. Сердце быстро удаляли и помещали в раствор Тирода. Этот раствор непрерывно насыщали газом 95% О₂, 5% СО₂ и предварительно нагревали до приблизительно 36±0,5°С. Правое предсердие был отделено от остальной части сердца. Препараты помещали в инкубатор тканевых культур и выдерживали при 37±0,5°С в течение не менее 1 ч для стабилизации. Потенциалы действия (АР) были записаны внутри клетки с помощью стандартного стеклянного микроэлектрода, заполненного 3 М КС1, подключенного к усилителю с нейтрализацией обратной связи с высоким входным сопротивлением (микроэлектродный усилитель УЕ-180, Вю-Ьощс). АР выводили на цифровой осциллограф (осциллограф НМ-4 07, НАМЕО), анализировали с помощью высокого разрешения системы сбора данных (программное обеспечение ЫоЮсогб Ьет 4.2, ЫоЮсогб ЗА, Сгонку, Егапсе). После 1 ч стабилизации соединения добавляли к раствору Тироде при возрастающих концентрациях, каждую концентрацию поддерживали в течение 30 мин. Там не было вымывания между двух концентраций. Электрофизиологические измерения были сделаны на основе анализа потенциалов действия в ходе экспериментального протокола в конце 30-минутного периода перфузии. Спонтанную частоту ЗА оценивали путем подсчета количества ударов каждые 10 с, чтобы выразить результаты в числе ударов в минуту (Ърт). Данные выражали в виде среднего ± ЗЕМ.

Автоматия.

Автоматия была исследована в сердцах кроликов, перфузируемых по Лангендорфу, проводится НопбедЬет РЬагтасеийса1к СопкиШпд Ν.ν., В-8400 Оок1епбе, Ве1дшт. Тесты проводили на сердцах кроликов-альбиносов женского пола весом приблизительно 2,5 кг и имеющих возраст около 3 месяцев. Эффекты соединения были измерены в полностью автоматизированной модели с использованием сердца, перфузируемого по Лангендорфу. Спонтанно сокращающееся сердце перфузировали ретроградно с возрастающими концентрациями испытуемого соединения. Один электрод осторожно помещали на левом предсердии для того, чтобы записать длину цикла синусового узла автоматизма.

На фиг. 2а и 2Ъ показаны результаты, полученные при сравнении формотерола с соединением по настоящему изобретению (соединение А).

Соединение А не показывает эффекты на сокращение левого предсердия до 10 мкМ и менее прямого воздействия на пейсмейкерную активность, по сравнению с формотеролом.

- 24 026914

	Формотерол	Соединение А
Сокращение левого предсердия ЕС5о (п—2)	17 нМ	> 10 мкМ
Скорость ритмического сокращения синоатриального узла, максимальное увеличение (п=б)	+ 45%	+ 6, 2%
Автоматия, максимальное увеличение (п=3)	+ 46¾	+ 17%

Значения на фиг. 2а и 2Ь выражены как среднее ± §ЕМ; синоатриальный узел (п=6), сердце (п=3).

Пример 9. Влияние формотерола и соединения А на частоту сокращений средца ίη νίνο.

Крысы линии \УМаг Нап (^-Н) Ю8 (1п1егпаДопа1 ОепеЬс 81апДагД) (Сг1:^1(Нап)) были приобретены у СЬаг1е8 КАег ЬаЬогаФпек. Катетеры бедренной артерии и венозные катетеры были хронически имплантированы и выводились через систему трос-поворотной пружины, которые были помещены в специализированные кейджи. Артериальный катетер соединяли с датчиком давления для непрерывного измерения пульсового артериального давления, среднего артериального давления и частоты сердечных сокращений, который был получен из сигнала артериального давления, с помощью цифровой системы сбора данных. Соединения вводили с помощью подкожно имплантированного катетера. Величины выражены в виде среднего ± 8ЕМ (п=3).

Соединение А показывает меньшее увеличение частоты сердечных сокращений по сравнению с формотеролом при введении с болюсом подкожно, до 0,3 мг/кг, как показано на фиг. 3а-3с.

Пример 10. Влияние формотерола и соединения А на частоту сокращений сердца ш νίνο.

Макак-резусов, 24 самки массой тела около 4-8 кг, были разделены на 4 группы по п=6. Животных обездвиживали на стуле до 4 ч после однократного подкожного введения соединений, а затем возвращали в свое помещение. Частоту сердечных сокращений измеряли с помощью устройства 8игдАе1 У3304. Величины выражены в виде среднего ± 8ЕМ (п=6).

Соединение А показало меньшее увеличение частоты сердечных сокращений по сравнению с формотеролом при введении болюсов подкожно, до 0,03 мг/кг, как показано на фиг. 4а и 4Ь.

Пример 11. Эффект соединения А, его энантиомера (соединение В) и его рацемата (соединение А/В) на серотониновый 5-НТ_2с рецептор.

Рекомбинантные клеточные мембраны СНО Ьг5-НТ_2С человека (Вю81дпа1 РаскагД, И8А) и ³Н-месулергин (ΝΕΝ Ы1с §с1епсе РгоДиДз, США, 1 нМ) используют для измерения аффинности связывания соединений с рецептором человека 5-НТ_2С. Неспецифическое связывание оценивается в присутствии 1 мкМ месулергин. 50 мкл каждого из мембраны, лиганда и соединения в общем объеме 250 мкл инкубировали в 96-луночных планшетах в течение 60 мин при 22°С в буфере, содержащем 50 мМ Трис, 0,1% аскорбиновой кислоты, 10 мкМ паргилина, рН 7,7. Планшеты фильтровали, промывали 3 раза в ледяном 50 мМ Трис, сушили и измеряли в ТорсоипР

Клетки СНО-К1 совместной экспрессии митохондриального апоэкворина, рекомбинантного серотонинового 5-НТ_2Спе и беспорядочного О белка О_а16, выращивали до середины логарифмического роста в культуральной среде без антибиотиков, отделяли с РВ§-ЕЭТА, центрифугировали и ресуспендировали в буфере для анализа (Р12 ЭМЕМ/КАМ с НЕРЕ8, без фенол красный + 0,1% В8А свободной протеазы) в концентрации 1 χ 10⁶ клеток/мл. Клетки инкубировали при комнатной температуре в течение по меньшей мере 4 ч с коэлентеразином. Эталонный агонист представлял собой а-метил-5-НТ. Для тестирования агониста 50 мкл клеточной суспензии смешивали с 50 мкл испытуемого или эталонного агониста в 96луночном планшете. Результаты излучения света были записаны с помощью люминометра Натата18и РипсЬопа1 Эгид §сгеешпд §у81ет 6000 (ΡΌδδ 6000). Активность агониста тестируемого соединения выражали в процентах от активности эталонного агониста при его концентрации ЕС₁₀₀.

Серотонин 5-НТ2с	Связывание	СНО ЕС,. (Е %) 50 тах
5-НТ	Н.О .	0,24 нМ
Соединение А (К)	11 мкМ	280 нМ (83%)
Соединение В (5)	0,8 мкМ	19,7 нМ (99%)
Соединение А/В	1,7 ыкМ	25 нМ (113%)

Соединение А в 50 раз менее активно на 5-НТ_2с по сравнению с активностью агониста β2 АК (5,6 нМ), в то время как его энантиомер соединение В очень слабый на β2 АК с ЕС₅₀ 950 нМ, но гораздо более мощный на 5-НТ_2с с ЕС₅₀ 19,7 нМ, показывая обратную селективность на мишень.

Соединение А также более 10 раз менее активно на 5-НТ_2С по сравнению с рацематом или (8)-энантиомером, предполагая, что профиль побочного действия этого соединения является предпочти- 25 026914 тельным.

Пример 12. Твердые капсулы.

Таблица 1

Композиция (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-

гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она в <	юрме твердых капсул
Компонент для заполнения капсул	% (масс./ масс.) для капсул 0,5 мг	% (масс./ масс.) для капсул 5 мг	% (масс./ масс.) для капсул 10 мг
Ацетатная соль (К)-7- (2-(1-(4-0утоксифенил)- 2-метилпропан-2- иламино)— 1 — гидроксиэтил)-5- гидроксибензо[Л]тиазол- 2(ЗН)-она	0, 60	5, 95	11,90
Авицел РН101	71,90	66, 55	60, 60
Высушенная распылением лактоза	20,00	20,00	20, 00
Ас-с11-3о1	6, 00	6, 00	6, 00
Аэросил 200	0, 50	0, 50	0,50
стеарат магния	1, 00	1, 00	1,00

Твердые желатиновые капсулы, каждая из которых содержит в качестве активного ингредиента 0,5, 5 или 10 мг (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она (эквивалент 0,60, 5,95 и 11,90 мг соответственно ацетатной соли (К)7-(2-( 1 -(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1 -гидроксиэтил)-5 -гидроксибензо [й]тиазол-2(3Н)она) с композицией приведены в табл. 1, могут быть получены следующим образом.

Получение премикса.

Ацетатную соль (К)-7-(2-( 1 -(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1 -гидроксиэтил)-5 гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она с частью авицела РН101 и аэросила 200 пропускали через подходящее сито и смешивали в барабанном смесителе (приблизительно 100-300 оборотов).

Получение конечной смеси.

Полученный выше премикс и оставшееся количество авицела РН101, высушенную распылением лактозу и Αο-Ωί-8ο1 пропускали через подходящее сито и смешивали в барабанном смесителе (приблизительно 100-300 оборотов).

Затем эту смесь пропускали через сито с размером ячейки приблизительно 0,5-1,0 мм и снова перемешивали (приблизительно 100-300 оборотов).

Аналогичным образом, требуемое количество просеянного стеарата магния добавляли к порошковой массе, а затем смешивали в том же контейнере для смешивания приблизительно при 30-150 оборотах.

Заполнение.

Эту конечную смесь инкапсулировали в капсулы с использованием автоматизированного оборудования. Массовое отношение заполнения капсулы к пустой оболочке капсул составляет 2:1.

- 26 026914

Пример 13. Твердые капсулы.

Таблица 2

Композиция (К)-7-(2-( 1 -(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1 -гидроксиэтил)-5-

гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-он в с	юрме твердых капсул
Компонент для заполнения капсул	% (масс./ масс.) для 0,5 мг капсул	% (масс./ масс.) для 5 мг капсул	% (масс./ масс.) для 10 мг капсул
Ацетатная соль (К)-7- (2-(1-(4-бутоксифенил)- 2-ме тилпро пан-2 - иламино)— 1 — гидроксиэтил)-5- гидроксибензо[ά]тиазол- 2(ЗН)-она	0, 60	5, 95	11, 90
СА-НУЦ-фосфат	71,90	66, 55	60, 60
Авицел РН101	20, 00	20, 00	20, 00
Карбоксиметилкрахмал	6, 00	6, 00	6, 00

натрия
Аэросил 200	0, 50	0, 50	0, 50
Стеарат магния	1, 00	1, 00	1, 00

Капсулы с композицией, приведенной в табл.2, могут быть получены следующим способом, описанным в примере 12.

Пример 14. Твердые капсулы.

Таблица 3

Композиция (К)-7-(2-( 1 -(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1 -гидроксиэтил)-5гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-она в форме твердых желатиновых капсул

Компонент для заполнения капсул	% (масс./ масс.) для 0,5 мг капсул	с. о (масс./ масс.) для 5 мг капсул	% (масс./ масс.) для 10 мг капсул
Ацетатная соль (К)-7-(2-(1- (4-бутоксифенил)-2- метилпропан-2-иламино)-1- гидроксиэтил)-5- гидроксибензо[ά]тиазол- 2(ЗН)-она	0, 60	5, 95	11,90
Маннит ЦС	64,40	59, 05	53, 10
ЗТА-РХ 1500	23,00	23, 00	23, 00
Низкозамещенная гидроксипропилцеллюлоза	10,00	10, 00	10, 00
Тальк	1, 00	1,00	1, 00
стеарат магния	1, 00	1, 00	1, 00

Капсулы с композицией, приведенной в табл.3, могут быть получены следующим способом, описанным в примере 12.

Пример 15. Таблетки.

Составы, перечисленные в примере 14 (табл.3), также могут быть превращены в таблетки с дозировками 0,5, 5 и 10 мг, следуя способу, описанному ниже.

Получение премикса.

Ацетатная соль (К)-7-(2-( 1 -(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1 -гидроксиэтил)-5 гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-она с частью маннита ОС и талька пропускали через подходящее сито и

- 27 026914 смешивали в барабанном смесителе (приблизительно 100-300 оборотов).

Получение конечной смеси.

Полученный выше премикс и оставшееся количество маннита ОС. 8ТЛ-КХ 1500 и низкозамещенную гидроксипропилцеллюлозу пропускают через подходящее сито и смешивают в барабанном смесителе (приблизительно 100-300 оборотов). Эту смесь затем просеивали через сито с размером отверстий приблизительно 0,5-1,0 мм и снова перемешивали (приблизительно 100-300 оборотов). Наконец, стеарат магния, просеянный через ручное сито с размером отверстий приблизительно 0,5-1,0 мм, смешивали с предыдущей смесью в барабанном смесителе (примерно 30-150 оборотов).

Прессование.

Полученную выше конечную смесь прессовали в таблетки-ядра приблизительно 100 мг с использованием специального дозировочного инструмента (например, приблизительно 6 мм, изогнутые валки).

Пример 16. Таблетки.

Таблица 4

Композиция (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5гидроксибензо[4]тиазол-2(3Н)-она в форме таблеток

Ингредиент для сердцевин таблетки	% (масс./ масс.) для 0,5 мг таблеток	О, Ό (масс./ масс.) для 5 мг таблеток	% (масс,/ масс.) для 10 мг таблеток
Ацетатная соль (К)-7-(2- (1- (4-бутоксифенил)-2- метилпропан-2-иламино)-1- гидроксиэтил)-5- гидроксибензо[б]тиазол-2(ЗН)- она	0, 60	5, 95	11,90

Авицел РН101	65, 40	60, 05	54,10
Высушенная распылением лактоза	20,00	20, 00	20,00
НР-Целлюлоза 100	4, 00	4,00	4, 00
Ас-сП-Зо1	8, 00	8,00	8, 00
Аэросил 200	1, 00	1,00	1, 00
Стеарат магния	1, 00	1,00	1, 00

Таблетки, каждая из которых содержит в качестве активного ингредиента 0,5, 5 или 10 мг (К)-7-(2(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[4]тиазол-2(3Н)-она (эквивалент 0,60, 5,95 и 11,90 мг соответственно, ацетатной соли (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[4]тиазол-2(3Н)-она) с композицией, приведенной в табл. 4, могут быть получены следующим образом.

Получение премикса.

Ацетатную соль (К)-7-(2-( 1 -(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1 -гидроксиэтил)-5 гидроксибензо[4]тиазол-2(3Н)-она с частью высушенной распылением лактозы и аэросила 200 (например, приблизительно 0,5%) пропускали через подходящее сито и смешивали в барабанном смесителе (примерно 100-300 оборотов).

Полученный выше премикс и оставшееся количество лактозы, высушенной распылением, авицел РН101, НР-целлюлозу 100 и Лс-Όί-δοΙ (например, приблизительно 4,0%) пропускали через подходящее сито и смешивали в барабанном смесителе (приблизительно 100-300 оборотов).

Пропускали эту смесь через сито с размером отверстий приблизительно 0,5-1,0 мм и снова перемешивали (приблизительно 100-300 оборотов).

Аналогичным образом, требуемое количество просеянного стеарата магния (например, приблизительно 0,5%) добавляли к порошковой массе, а затем смешивали в том же смесительном барабане (приблизительно 30-150 оборотов).

Вальцевание.

Полученную выше смесь уплотняли валками с помощью оборудования для прессования. Уплотненный материал размалывали и пропускали через сито с размером отверстий примерно 0,5-1,0 мм с помощью помольного оборудования.

- 28 026914

Получение конечной смеси.

Полученный выше премикс и количество Ас-Э1-8о1 (например, приблизительно 4,0%) и аэросила 200 (например, приблизительно 0,5%) пропускали через соответствующее сито со смешиванием в барабанном смесителе (приблизительно 100-300 оборотов).

Оставшийся стеарат магния просеивали через ручное сито с размером отверстий приблизительно 0,5-1,0 мм, смешивали с конечной смесью в барабанном смесителе (приблизительно 30-150 оборотов).

Прессование.

Полученную выше конечную смесь прессовали на роторном прессе в ядра приблизительно массой, например, 100 мг с использованием специальных дозировочных инструментов (например, приблизительно 6-мм изогнутые валки).

Пример 17. Таблетки.

Таблица 5

Композиция (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-она в форме таблеток

Компонент для заполнения капсул	% (масс./ масс.) для 0,5 мг таблеток	% (масс./ масс.) для 5 мг таблеток	% (масс./ масс.) для 10 мг таблеток
Ацетатная соль (К)-7-(2- (1-(4-бутоксифенил)-2- метилпропан-2-иламино)-1- гидроксиэтил)-5- гидроксибензо[ά]тиазол- 2(ЗН)-она	0, 60	5, 95	11,90
Маннит ЬС	58, 40	53, 05	47,10
ЗТА-КХ 1500	23, 00	23, 00	23,00
Низкозамещенная НР- целлюлоза	10, 00	10, 00	10,00
Коллидон УА64	6, 00	6, 00	6, 00
Тальк	1,00	1,00	1, 00
Стеарат магния	1, 00	1, 00	1, 00

Способ получения.

Получение премикса.

Ацетатную соль (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5гидроксибензо[б]тиазол-2(3Н)-она с частью маннита ОС и талька (например, приблизительно 0,5%) пропускали через подходящее сито и смешивали в барабанном смесителе (приблизительно 100-300 оборотов).

Полученный выше премикс и оставшееся количество маннита ОС, 8ТА-КХ 1500, коллидон УА64 и часть низкозамещенной НР-целлюлозы (например, приблизительно 5,0%) пропускали через подходящее сито и смешивали в барабанном смесителе (приблизительно 100-300 оборотов).

Пропускали эту смесь через сито с размером отверстий приблизительно 0,5-1,0 мм и снова перемешивали (приблизительно 100-300 оборотов).

Аналогичным образом, требуемое количество просеянного стеарата магния (например, приблизительно 0,5%) добавляли к порошковой массе, а затем смешивали в том же смесительном барабане (приблизительно 30-150 оборотов).

Вальцевание.

Полученную выше смесь уплотняли валками с помощью оборудования для прессования. Уплотненный материал размалывали и пропускали через сито с размером отверстий примерно 0,5-1,0 мм с помощью помольного оборудования.

Получение конечной смеси.

Полученный выше премикс и оставшееся количество низкозамещенной гидроксипропилцеллюлозы (например, приблизительно 5,0%) и тальк (например, приблизительно 0,5%) пропускали через соответствующее сито со смешиванием в барабанном смесителе (приблизительно 100-300 оборотов).

Оставшийся стеарат магния просеивали через ручное сито с размером отверстий приблизительно 0,5-1,0 мм, смешивали с конечной смесью в барабанном смесителе (приблизительно 30-150 оборотов).

- 29 026914

Прессование.

Полученную выше конечную смесь прессовали на роторном прессе в ядра приблизительно массой (например, 100 мг) с использованием специального дозировочного инструмента (например, приблизительно 6-мм изогнутые валки).

Claims (12)

1. Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики мышечной дистрофии, атрофии, связанной с бездействием, кахексии или саркопении в твердой пероральной лекарственной форме, содержащая от 0,01 до 15% (мас./мас.) (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она и один или более фармацевтически приемлемых эксципиентов, в которой (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-он представлен в форме ацетатной соли.

2. Фармацевтическая композиция по п.1, содержащая от 0,01 до 5% (мас./мас.) (К)-7-(2-(1-(4бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она.

3. Фармацевтическая композиция по п.1 или 2, содержащая от 0,1 до 1% (мас./мас.) (К)-7-(2-(1-(4бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она.

4. Фармацевтическая композиция по любому из предыдущих пунктов, которая представлена в форме таблетки или капсулы.

5. Фармацевтическая композиция по любому из предыдущих пунктов, где один или несколько эксципиентов выбраны из наполнителя, лубриканта, вещества, способствующего скольжению частиц порошка, разрыхлителя и связующего вещества.

6. Фармацевтическая композиция по п.5, где наполнитель присутствует в количестве, составляющем 15-90% (мас./мас.).

7. Фармацевтическая композиция по п.5 или 6, где лубрикант присутствует в количестве, составляющем 0,1-1% (мас./мас.).

8. Фармацевтическая композиция по любому из пп.5-7, где вещество, способствующее скольжению частиц порошка, присутствует в количестве, составляющем 0,1-1% (мас./мас.).

9. Фармацевтическая композиция по любому из пп.5-8, где связующее средство присутствует в количестве, составляющем 1-20% (мас./мас.).

10. Фармацевтическая композиция по любому из пп.5-9, где разрыхлитель присутствует в количестве, составляющем 1-20% (мас./мас.).

11. Применение фармацевтической композиции в твердой пероральной лекарственной форме, содержащей от 0,01 до 15% (мас./мас.) (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1гидроксиэтил-5-гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-она и один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов, где (К)-7-(2-(1-(4-бутоксифенил)-2-метилпропан-2-иламино)-1-гидроксиэтил)-5гидроксибензо[й]тиазол-2(3Н)-он находится в форме ацетатной соли для лечения или профилактики мышечной дистрофии, атрофии, связанной с бездействием, кахексии или саркопении.

12. Способ лечения или профилактики мышечной дистрофии, атрофии, связанной с бездействием, кахексии или саркопении, включающий пероральное введение фармацевтической композиции по любому из пп.1-10 индивиду, нуждающемуся в этом.

- 31 026914

- 32 026914

Картина дифракции рентгеновских лучей на порошке кристаллической ацетатной соли Соединения А ип (Соип($)

80004

70004

60004

5000^

4000

3000

2000

1000 о

3 10 20 30

2-тета - Шкала (градусы)

Фиг. 5