EA024627B1 - Производные криптофицина и его конъюгаты, их получение и применение в терапии - Google Patents
Производные криптофицина и его конъюгаты, их получение и применение в терапии Download PDFInfo
- Publication number
- EA024627B1 EA024627B1 EA201270096A EA201270096A EA024627B1 EA 024627 B1 EA024627 B1 EA 024627B1 EA 201270096 A EA201270096 A EA 201270096A EA 201270096 A EA201270096 A EA 201270096A EA 024627 B1 EA024627 B1 EA 024627B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- compound
- mixture
- group
- μmol
- cryptophycin
- Prior art date
Links
- PSNOPSMXOBPNNV-VVCTWANISA-N cryptophycin 1 Chemical class C1=C(Cl)C(OC)=CC=C1C[C@@H]1C(=O)NC[C@@H](C)C(=O)O[C@@H](CC(C)C)C(=O)O[C@H]([C@H](C)[C@@H]2[C@H](O2)C=2C=CC=CC=2)C/C=C/C(=O)N1 PSNOPSMXOBPNNV-VVCTWANISA-N 0.000 title claims abstract description 109
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 19
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title 1
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 52
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims abstract description 11
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 claims abstract description 7
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 176
- -1 maleimidomethyl Chemical group 0.000 claims description 136
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 125
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims description 47
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 37
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 31
- 125000004169 (C1-C6) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 29
- 229930188224 Cryptophycin Natural products 0.000 claims description 16
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 14
- 102100021942 C-C motif chemokine 28 Human genes 0.000 claims description 12
- 101000897477 Homo sapiens C-C motif chemokine 28 Proteins 0.000 claims description 12
- PSNOPSMXOBPNNV-UHFFFAOYSA-N cryptophycin-327 Natural products C1=C(Cl)C(OC)=CC=C1CC1C(=O)NCC(C)C(=O)OC(CC(C)C)C(=O)OC(C(C)C2C(O2)C=2C=CC=CC=2)CC=CC(=O)N1 PSNOPSMXOBPNNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 101100242312 Oryza sativa subsp. japonica OSK1 gene Proteins 0.000 claims description 11
- 101100533605 Oryza sativa subsp. japonica SKP1 gene Proteins 0.000 claims description 11
- 108010006226 cryptophycin Proteins 0.000 claims description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 10
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 claims description 4
- NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-N cyclohexanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCCC1 NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 125000000229 (C1-C4)alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000003161 (C1-C6) alkylene group Chemical group 0.000 claims description 3
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 125000006528 (C2-C6) alkyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 101150108928 CCC1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 abstract description 22
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 abstract description 12
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 abstract description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 4
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 abstract description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 273
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 250
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 168
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 96
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 85
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 80
- CCNWZGXOWHXIJE-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;oxane Chemical compound CCOCC.C1CCOCC1 CCNWZGXOWHXIJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 75
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 74
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 70
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 68
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 65
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 64
- 239000003880 polar aprotic solvent Substances 0.000 description 58
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 56
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 50
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 49
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 48
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 48
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 46
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 46
- 125000001301 ethoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])O* 0.000 description 45
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 45
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 43
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 40
- 125000000466 oxiranyl group Chemical group 0.000 description 40
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 40
- 150000002009 diols Chemical group 0.000 description 37
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 36
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 32
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 31
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 31
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 31
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 150000001793 charged compounds Chemical class 0.000 description 29
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 29
- 239000000047 product Substances 0.000 description 29
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 239000012230 colorless oil Substances 0.000 description 26
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 26
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 21
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 21
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 20
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 19
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 19
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 19
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 18
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 18
- 238000010534 nucleophilic substitution reaction Methods 0.000 description 18
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 17
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 17
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- XXROGKLTLUQVRX-UHFFFAOYSA-N allyl alcohol Chemical compound OCC=C XXROGKLTLUQVRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 16
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 16
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 16
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M Lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 15
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 14
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 14
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 14
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 13
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 13
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 13
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N TCEP Chemical compound OC(=O)CCP(CCC(O)=O)CCC(O)=O PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 12
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 12
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 12
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 12
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 12
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 11
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 11
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 11
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 11
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 10
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 10
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 10
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 10
- ONDSBJMLAHVLMI-UHFFFAOYSA-N trimethylsilyldiazomethane Chemical compound C[Si](C)(C)[CH-][N+]#N ONDSBJMLAHVLMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 9
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 9
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 9
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 9
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 9
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 9
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 9
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 9
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 9
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 9
- ISXSCDLOGDJUNJ-UHFFFAOYSA-N tert-butyl prop-2-enoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)C=C ISXSCDLOGDJUNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical compound NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- YYROPELSRYBVMQ-UHFFFAOYSA-N 4-toluenesulfonyl chloride Chemical compound CC1=CC=C(S(Cl)(=O)=O)C=C1 YYROPELSRYBVMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 8
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 8
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 8
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 8
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 8
- 239000012359 Methanesulfonyl chloride Substances 0.000 description 7
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 7
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- QARBMVPHQWIHKH-UHFFFAOYSA-N methanesulfonyl chloride Chemical compound CS(Cl)(=O)=O QARBMVPHQWIHKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000003586 protic polar solvent Substances 0.000 description 7
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 7
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 description 7
- KSXVEOLRERRELV-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 3-[2-[2-(2-hydroxyethoxy)ethoxy]ethoxy]propanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)CCOCCOCCOCCO KSXVEOLRERRELV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- WZZBNLYBHUDSHF-DHLKQENFSA-N 1-[(3s,4s)-4-[8-(2-chloro-4-pyrimidin-2-yloxyphenyl)-7-fluoro-2-methylimidazo[4,5-c]quinolin-1-yl]-3-fluoropiperidin-1-yl]-2-hydroxyethanone Chemical compound CC1=NC2=CN=C3C=C(F)C(C=4C(=CC(OC=5N=CC=CN=5)=CC=4)Cl)=CC3=C2N1[C@H]1CCN(C(=O)CO)C[C@@H]1F WZZBNLYBHUDSHF-DHLKQENFSA-N 0.000 description 6
- YSUIQYOGTINQIN-UZFYAQMZSA-N 2-amino-9-[(1S,6R,8R,9S,10R,15R,17R,18R)-8-(6-aminopurin-9-yl)-9,18-difluoro-3,12-dihydroxy-3,12-bis(sulfanylidene)-2,4,7,11,13,16-hexaoxa-3lambda5,12lambda5-diphosphatricyclo[13.2.1.06,10]octadecan-17-yl]-1H-purin-6-one Chemical compound NC1=NC2=C(N=CN2[C@@H]2O[C@@H]3COP(S)(=O)O[C@@H]4[C@@H](COP(S)(=O)O[C@@H]2[C@@H]3F)O[C@H]([C@H]4F)N2C=NC3=C2N=CN=C3N)C(=O)N1 YSUIQYOGTINQIN-UZFYAQMZSA-N 0.000 description 6
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N aldrithiol Chemical group C=1C=CC=NC=1SSC1=CC=CC=N1 HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 6
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 6
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 6
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 6
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 6
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 6
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 6
- NDVLTYZPCACLMA-UHFFFAOYSA-N silver oxide Chemical compound [O-2].[Ag+].[Ag+] NDVLTYZPCACLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 description 6
- FPGGTKZVZWFYPV-UHFFFAOYSA-M tetrabutylammonium fluoride Chemical compound [F-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC FPGGTKZVZWFYPV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- VXUYXOFXAQZZMF-UHFFFAOYSA-N titanium(IV) isopropoxide Chemical compound CC(C)O[Ti](OC(C)C)(OC(C)C)OC(C)C VXUYXOFXAQZZMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- AOSZTAHDEDLTLQ-AZKQZHLXSA-N (1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-6-[(3-chlorophenyl)methyl]-12,19-difluoro-11-hydroxy-8-(2-hydroxyacetyl)-9,13-dimethyl-6-azapentacyclo[10.8.0.02,9.04,8.013,18]icosa-14,17-dien-16-one Chemical compound C([C@@H]1C[C@H]2[C@H]3[C@]([C@]4(C=CC(=O)C=C4[C@@H](F)C3)C)(F)[C@@H](O)C[C@@]2([C@@]1(C1)C(=O)CO)C)N1CC1=CC=CC(Cl)=C1 AOSZTAHDEDLTLQ-AZKQZHLXSA-N 0.000 description 5
- ARLKVQYMFRECLV-JSGCOSHPSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-amino-3-(1h-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanamide Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)=CNC2=C1 ARLKVQYMFRECLV-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 5
- DJMOXMNDXFFONV-UHFFFAOYSA-N 1,3-dimethyl-7-[2-(n-methylanilino)ethyl]purine-2,6-dione Chemical compound C1=NC=2N(C)C(=O)N(C)C(=O)C=2N1CCN(C)C1=CC=CC=C1 DJMOXMNDXFFONV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- JYWKEVKEKOTYEX-UHFFFAOYSA-N 2,6-dibromo-4-chloroiminocyclohexa-2,5-dien-1-one Chemical compound ClN=C1C=C(Br)C(=O)C(Br)=C1 JYWKEVKEKOTYEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- FQMZXMVHHKXGTM-UHFFFAOYSA-N 2-(1-adamantyl)-n-[2-[2-(2-hydroxyethylamino)ethylamino]quinolin-5-yl]acetamide Chemical compound C1C(C2)CC(C3)CC2CC13CC(=O)NC1=CC=CC2=NC(NCCNCCO)=CC=C21 FQMZXMVHHKXGTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VLBWEJJOETYCSE-UHFFFAOYSA-N 2-Methyl-2-(methyldithio)propanal Chemical compound CSSC(C)(C)C=O VLBWEJJOETYCSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QBWKPGNFQQJGFY-QLFBSQMISA-N 3-[(1r)-1-[(2r,6s)-2,6-dimethylmorpholin-4-yl]ethyl]-n-[6-methyl-3-(1h-pyrazol-4-yl)imidazo[1,2-a]pyrazin-8-yl]-1,2-thiazol-5-amine Chemical compound N1([C@H](C)C2=NSC(NC=3C4=NC=C(N4C=C(C)N=3)C3=CNN=C3)=C2)C[C@H](C)O[C@H](C)C1 QBWKPGNFQQJGFY-QLFBSQMISA-N 0.000 description 5
- 108091005932 CCKBR Proteins 0.000 description 5
- 229940126657 Compound 17 Drugs 0.000 description 5
- 108010002156 Depsipeptides Proteins 0.000 description 5
- LVDRREOUMKACNJ-BKMJKUGQSA-N N-[(2R,3S)-2-(4-chlorophenyl)-1-(1,4-dimethyl-2-oxoquinolin-7-yl)-6-oxopiperidin-3-yl]-2-methylpropane-1-sulfonamide Chemical compound CC(C)CS(=O)(=O)N[C@H]1CCC(=O)N([C@@H]1c1ccc(Cl)cc1)c1ccc2c(C)cc(=O)n(C)c2c1 LVDRREOUMKACNJ-BKMJKUGQSA-N 0.000 description 5
- LNUFLCYMSVYYNW-ZPJMAFJPSA-N [(2r,3r,4s,5r,6r)-2-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[[(3s,5s,8r,9s,10s,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl]oxy]-4,5-disulfo Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1C[C@@H]2CC[C@H]3[C@@H]4CC[C@@H]([C@]4(CC[C@@H]3[C@@]2(C)CC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H]1O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]1OS(O)(=O)=O LNUFLCYMSVYYNW-ZPJMAFJPSA-N 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- 150000001350 alkyl halides Chemical class 0.000 description 5
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 5
- XRWSZZJLZRKHHD-WVWIJVSJSA-N asunaprevir Chemical compound O=C([C@@H]1C[C@H](CN1C(=O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(C)(C)C)OC1=NC=C(C2=CC=C(Cl)C=C21)OC)N[C@]1(C(=O)NS(=O)(=O)C2CC2)C[C@H]1C=C XRWSZZJLZRKHHD-WVWIJVSJSA-N 0.000 description 5
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 5
- 125000000440 benzylamino group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 5
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 5
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 5
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 5
- 229940125961 compound 24 Drugs 0.000 description 5
- 229940125846 compound 25 Drugs 0.000 description 5
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 description 5
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- FHBSGPWHCCIQPG-UHFFFAOYSA-N hydroxy-methyl-oxo-sulfanylidene-$l^{6}-sulfane Chemical compound CS(S)(=O)=O FHBSGPWHCCIQPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- DUWWHGPELOTTOE-UHFFFAOYSA-N n-(5-chloro-2,4-dimethoxyphenyl)-3-oxobutanamide Chemical compound COC1=CC(OC)=C(NC(=O)CC(C)=O)C=C1Cl DUWWHGPELOTTOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 5
- 238000006268 reductive amination reaction Methods 0.000 description 5
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 5
- 239000012321 sodium triacetoxyborohydride Substances 0.000 description 5
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 5
- CWXPZXBSDSIRCS-UHFFFAOYSA-N tert-butyl piperazine-1-carboxylate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N1CCNCC1 CWXPZXBSDSIRCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 5
- ASGMFNBUXDJWJJ-JLCFBVMHSA-N (1R,3R)-3-[[3-bromo-1-[4-(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl)phenyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-6-yl]amino]-N,1-dimethylcyclopentane-1-carboxamide Chemical compound BrC1=NN(C2=NC(=NC=C21)N[C@H]1C[C@@](CC1)(C(=O)NC)C)C1=CC=C(C=C1)C=1SC(=NN=1)C ASGMFNBUXDJWJJ-JLCFBVMHSA-N 0.000 description 4
- GHYOCDFICYLMRF-UTIIJYGPSA-N (2S,3R)-N-[(2S)-3-(cyclopenten-1-yl)-1-[(2R)-2-methyloxiran-2-yl]-1-oxopropan-2-yl]-3-hydroxy-3-(4-methoxyphenyl)-2-[[(2S)-2-[(2-morpholin-4-ylacetyl)amino]propanoyl]amino]propanamide Chemical compound C1(=CCCC1)C[C@@H](C(=O)[C@@]1(OC1)C)NC([C@H]([C@@H](C1=CC=C(C=C1)OC)O)NC([C@H](C)NC(CN1CCOCC1)=O)=O)=O GHYOCDFICYLMRF-UTIIJYGPSA-N 0.000 description 4
- VIJSPAIQWVPKQZ-BLECARSGSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-acetamido-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4,4-dimethylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]propanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(C)=O VIJSPAIQWVPKQZ-BLECARSGSA-N 0.000 description 4
- UDQTXCHQKHIQMH-KYGLGHNPSA-N (3ar,5s,6s,7r,7ar)-5-(difluoromethyl)-2-(ethylamino)-5,6,7,7a-tetrahydro-3ah-pyrano[3,2-d][1,3]thiazole-6,7-diol Chemical compound S1C(NCC)=N[C@H]2[C@@H]1O[C@H](C(F)F)[C@@H](O)[C@@H]2O UDQTXCHQKHIQMH-KYGLGHNPSA-N 0.000 description 4
- MPDDTAJMJCESGV-CTUHWIOQSA-M (3r,5r)-7-[2-(4-fluorophenyl)-5-[methyl-[(1r)-1-phenylethyl]carbamoyl]-4-propan-2-ylpyrazol-3-yl]-3,5-dihydroxyheptanoate Chemical compound C1([C@@H](C)N(C)C(=O)C2=NN(C(CC[C@@H](O)C[C@@H](O)CC([O-])=O)=C2C(C)C)C=2C=CC(F)=CC=2)=CC=CC=C1 MPDDTAJMJCESGV-CTUHWIOQSA-M 0.000 description 4
- YQOLEILXOBUDMU-KRWDZBQOSA-N (4R)-5-[(6-bromo-3-methyl-2-pyrrolidin-1-ylquinoline-4-carbonyl)amino]-4-(2-chlorophenyl)pentanoic acid Chemical compound CC1=C(C2=C(C=CC(=C2)Br)N=C1N3CCCC3)C(=O)NC[C@H](CCC(=O)O)C4=CC=CC=C4Cl YQOLEILXOBUDMU-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-OYDXRQHMSA-N 1-[(2r,4s,5s)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H]([14CH2]O)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-OYDXRQHMSA-N 0.000 description 4
- TVTJUIAKQFIXCE-HUKYDQBMSA-N 2-amino-9-[(2R,3S,4S,5R)-4-fluoro-3-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-7-prop-2-ynyl-1H-purine-6,8-dione Chemical compound NC=1NC(C=2N(C(N(C=2N=1)[C@@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H]1O)F)CO)=O)CC#C)=O TVTJUIAKQFIXCE-HUKYDQBMSA-N 0.000 description 4
- AQYNZOSCOWGGTP-UHFFFAOYSA-N 2-pyridin-2-ylsulfanylpyridine Chemical group C=1C=CC=NC=1SC1=CC=CC=N1 AQYNZOSCOWGGTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 4
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JQUCWIWWWKZNCS-LESHARBVSA-N C(C1=CC=CC=C1)(=O)NC=1SC[C@H]2[C@@](N1)(CO[C@H](C2)C)C=2SC=C(N2)NC(=O)C2=NC=C(C=C2)OC(F)F Chemical compound C(C1=CC=CC=C1)(=O)NC=1SC[C@H]2[C@@](N1)(CO[C@H](C2)C)C=2SC=C(N2)NC(=O)C2=NC=C(C=C2)OC(F)F JQUCWIWWWKZNCS-LESHARBVSA-N 0.000 description 4
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 229940127007 Compound 39 Drugs 0.000 description 4
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101150040795 EIS1 gene Proteins 0.000 description 4
- QOVYHDHLFPKQQG-NDEPHWFRSA-N N[C@@H](CCC(=O)N1CCC(CC1)NC1=C2C=CC=CC2=NC(NCC2=CN(CCCNCCCNC3CCCCC3)N=N2)=N1)C(O)=O Chemical compound N[C@@H](CCC(=O)N1CCC(CC1)NC1=C2C=CC=CC2=NC(NCC2=CN(CCCNCCCNC3CCCCC3)N=N2)=N1)C(O)=O QOVYHDHLFPKQQG-NDEPHWFRSA-N 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-N Phosphine Chemical compound P XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LJOOWESTVASNOG-UFJKPHDISA-N [(1s,3r,4ar,7s,8s,8as)-3-hydroxy-8-[2-[(4r)-4-hydroxy-6-oxooxan-2-yl]ethyl]-7-methyl-1,2,3,4,4a,7,8,8a-octahydronaphthalen-1-yl] (2s)-2-methylbutanoate Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=C[C@H]2C[C@@H](O)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)[C@@H](C)CC)CC1C[C@@H](O)CC(=O)O1 LJOOWESTVASNOG-UFJKPHDISA-N 0.000 description 4
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 4
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 4
- KGNDCEVUMONOKF-UGPLYTSKSA-N benzyl n-[(2r)-1-[(2s,4r)-2-[[(2s)-6-amino-1-(1,3-benzoxazol-2-yl)-1,1-dihydroxyhexan-2-yl]carbamoyl]-4-[(4-methylphenyl)methoxy]pyrrolidin-1-yl]-1-oxo-4-phenylbutan-2-yl]carbamate Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CO[C@H]1CN(C(=O)[C@@H](CCC=2C=CC=CC=2)NC(=O)OCC=2C=CC=CC=2)[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)(O)C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C1 KGNDCEVUMONOKF-UGPLYTSKSA-N 0.000 description 4
- GTCAXTIRRLKXRU-UHFFFAOYSA-N carbamic acid methyl ester Natural products COC(N)=O GTCAXTIRRLKXRU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 4
- 229940125797 compound 12 Drugs 0.000 description 4
- 229940125810 compound 20 Drugs 0.000 description 4
- 229940125833 compound 23 Drugs 0.000 description 4
- 229940125851 compound 27 Drugs 0.000 description 4
- 229940127204 compound 29 Drugs 0.000 description 4
- 229940126540 compound 41 Drugs 0.000 description 4
- 229940125936 compound 42 Drugs 0.000 description 4
- 229940125844 compound 46 Drugs 0.000 description 4
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 4
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JAXFJECJQZDFJS-XHEPKHHKSA-N gtpl8555 Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)N[C@H](B1O[C@@]2(C)[C@H]3C[C@H](C3(C)C)C[C@H]2O1)CCC1=CC=C(F)C=C1 JAXFJECJQZDFJS-XHEPKHHKSA-N 0.000 description 4
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 4
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 4
- RENRQMCACQEWFC-UGKGYDQZSA-N lnp023 Chemical compound C1([C@H]2N(CC=3C=4C=CNC=4C(C)=CC=3OC)CC[C@@H](C2)OCC)=CC=C(C(O)=O)C=C1 RENRQMCACQEWFC-UGKGYDQZSA-N 0.000 description 4
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 4
- 125000000250 methylamino group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N tert-butoxycarbonyl anhydride Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)OC(=O)OC(C)(C)C DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 4
- QAEDZJGFFMLHHQ-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic anhydride Chemical compound FC(F)(F)C(=O)OC(=O)C(F)(F)F QAEDZJGFFMLHHQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UAOUIVVJBYDFKD-XKCDOFEDSA-N (1R,9R,10S,11R,12R,15S,18S,21R)-10,11,21-trihydroxy-8,8-dimethyl-14-methylidene-4-(prop-2-enylamino)-20-oxa-5-thia-3-azahexacyclo[9.7.2.112,15.01,9.02,6.012,18]henicosa-2(6),3-dien-13-one Chemical compound C([C@@H]1[C@@H](O)[C@@]23C(C1=C)=O)C[C@H]2[C@]12C(N=C(NCC=C)S4)=C4CC(C)(C)[C@H]1[C@H](O)[C@]3(O)OC2 UAOUIVVJBYDFKD-XKCDOFEDSA-N 0.000 description 3
- SZUVGFMDDVSKSI-WIFOCOSTSA-N (1s,2s,3s,5r)-1-(carboxymethyl)-3,5-bis[(4-phenoxyphenyl)methyl-propylcarbamoyl]cyclopentane-1,2-dicarboxylic acid Chemical compound O=C([C@@H]1[C@@H]([C@](CC(O)=O)([C@H](C(=O)N(CCC)CC=2C=CC(OC=3C=CC=CC=3)=CC=2)C1)C(O)=O)C(O)=O)N(CCC)CC(C=C1)=CC=C1OC1=CC=CC=C1 SZUVGFMDDVSKSI-WIFOCOSTSA-N 0.000 description 3
- YJLIKUSWRSEPSM-WGQQHEPDSA-N (2r,3r,4s,5r)-2-[6-amino-8-[(4-phenylphenyl)methylamino]purin-9-yl]-5-(hydroxymethyl)oxolane-3,4-diol Chemical compound C=1C=C(C=2C=CC=CC=2)C=CC=1CNC1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O YJLIKUSWRSEPSM-WGQQHEPDSA-N 0.000 description 3
- WWTBZEKOSBFBEM-SPWPXUSOSA-N (2s)-2-[[2-benzyl-3-[hydroxy-[(1r)-2-phenyl-1-(phenylmethoxycarbonylamino)ethyl]phosphoryl]propanoyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)O)C(=O)C(CP(O)(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)CC1=CC=CC=C1 WWTBZEKOSBFBEM-SPWPXUSOSA-N 0.000 description 3
- QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[5-[(3aS,6aR)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-[1-bis(4-chlorophenoxy)phosphorylbutylamino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CCCC(NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](Cc1ccc(O)cc1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCC1SC[C@@H]2NC(=O)N[C@H]12)C(C)C)P(=O)(Oc1ccc(Cl)cc1)Oc1ccc(Cl)cc1 QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N 0.000 description 3
- IWZSHWBGHQBIML-ZGGLMWTQSA-N (3S,8S,10R,13S,14S,17S)-17-isoquinolin-7-yl-N,N,10,13-tetramethyl-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-amine Chemical compound CN(C)[C@H]1CC[C@]2(C)C3CC[C@@]4(C)[C@@H](CC[C@@H]4c4ccc5ccncc5c4)[C@@H]3CC=C2C1 IWZSHWBGHQBIML-ZGGLMWTQSA-N 0.000 description 3
- OOKAZRDERJMRCJ-KOUAFAAESA-N (3r)-7-[(1s,2s,4ar,6s,8s)-2,6-dimethyl-8-[(2s)-2-methylbutanoyl]oxy-1,2,4a,5,6,7,8,8a-octahydronaphthalen-1-yl]-3-hydroxy-5-oxoheptanoic acid Chemical compound C1=C[C@H](C)[C@H](CCC(=O)C[C@@H](O)CC(O)=O)C2[C@@H](OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@@H](C)C[C@@H]21 OOKAZRDERJMRCJ-KOUAFAAESA-N 0.000 description 3
- HUWSZNZAROKDRZ-RRLWZMAJSA-N (3r,4r)-3-azaniumyl-5-[[(2s,3r)-1-[(2s)-2,3-dicarboxypyrrolidin-1-yl]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-oxo-4-sulfanylpentane-1-sulfonate Chemical compound OS(=O)(=O)CC[C@@H](N)[C@@H](S)C(=O)N[C@@H]([C@H](C)CC)C(=O)N1CCC(C(O)=O)[C@H]1C(O)=O HUWSZNZAROKDRZ-RRLWZMAJSA-N 0.000 description 3
- STPKWKPURVSAJF-LJEWAXOPSA-N (4r,5r)-5-[4-[[4-(1-aza-4-azoniabicyclo[2.2.2]octan-4-ylmethyl)phenyl]methoxy]phenyl]-3,3-dibutyl-7-(dimethylamino)-1,1-dioxo-4,5-dihydro-2h-1$l^{6}-benzothiepin-4-ol Chemical compound O[C@H]1C(CCCC)(CCCC)CS(=O)(=O)C2=CC=C(N(C)C)C=C2[C@H]1C(C=C1)=CC=C1OCC(C=C1)=CC=C1C[N+]1(CC2)CCN2CC1 STPKWKPURVSAJF-LJEWAXOPSA-N 0.000 description 3
- KQZLRWGGWXJPOS-NLFPWZOASA-N 1-[(1R)-1-(2,4-dichlorophenyl)ethyl]-6-[(4S,5R)-4-[(2S)-2-(hydroxymethyl)pyrrolidin-1-yl]-5-methylcyclohexen-1-yl]pyrazolo[3,4-b]pyrazine-3-carbonitrile Chemical compound ClC1=C(C=CC(=C1)Cl)[C@@H](C)N1N=C(C=2C1=NC(=CN=2)C1=CC[C@@H]([C@@H](C1)C)N1[C@@H](CCC1)CO)C#N KQZLRWGGWXJPOS-NLFPWZOASA-N 0.000 description 3
- ONBQEOIKXPHGMB-VBSBHUPXSA-N 1-[2-[(2s,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-4,6-dihydroxyphenyl]-3-(4-hydroxyphenyl)propan-1-one Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC(O)=CC(O)=C1C(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 ONBQEOIKXPHGMB-VBSBHUPXSA-N 0.000 description 3
- WGFNXGPBPIJYLI-UHFFFAOYSA-N 2,6-difluoro-3-[(3-fluorophenyl)sulfonylamino]-n-(3-methoxy-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridin-5-yl)benzamide Chemical compound C1=C2C(OC)=NNC2=NC=C1NC(=O)C(C=1F)=C(F)C=CC=1NS(=O)(=O)C1=CC=CC(F)=C1 WGFNXGPBPIJYLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VCUXVXLUOHDHKK-UHFFFAOYSA-N 2-(2-aminopyrimidin-4-yl)-4-(2-chloro-4-methoxyphenyl)-1,3-thiazole-5-carboxamide Chemical compound ClC1=CC(OC)=CC=C1C1=C(C(N)=O)SC(C=2N=C(N)N=CC=2)=N1 VCUXVXLUOHDHKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ANOJXMUSDYSKET-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-(2-aminoethoxy)ethoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound NCCOCCOCCOCCO ANOJXMUSDYSKET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PYRKKGOKRMZEIT-UHFFFAOYSA-N 2-[6-(2-cyclopropylethoxy)-9-(2-hydroxy-2-methylpropyl)-1h-phenanthro[9,10-d]imidazol-2-yl]-5-fluorobenzene-1,3-dicarbonitrile Chemical compound C1=C2C3=CC(CC(C)(O)C)=CC=C3C=3NC(C=4C(=CC(F)=CC=4C#N)C#N)=NC=3C2=CC=C1OCCC1CC1 PYRKKGOKRMZEIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VVCMGAUPZIKYTH-VGHSCWAPSA-N 2-acetyloxybenzoic acid;[(2s,3r)-4-(dimethylamino)-3-methyl-1,2-diphenylbutan-2-yl] propanoate;1,3,7-trimethylpurine-2,6-dione Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O.CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C.C([C@](OC(=O)CC)([C@H](C)CN(C)C)C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 VVCMGAUPZIKYTH-VGHSCWAPSA-N 0.000 description 3
- DQAZPZIYEOGZAF-UHFFFAOYSA-N 4-ethyl-n-[4-(3-ethynylanilino)-7-methoxyquinazolin-6-yl]piperazine-1-carboxamide Chemical compound C1CN(CC)CCN1C(=O)NC(C(=CC1=NC=N2)OC)=CC1=C2NC1=CC=CC(C#C)=C1 DQAZPZIYEOGZAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XFJBGINZIMNZBW-CRAIPNDOSA-N 5-chloro-2-[4-[(1r,2s)-2-[2-(5-methylsulfonylpyridin-2-yl)oxyethyl]cyclopropyl]piperidin-1-yl]pyrimidine Chemical compound N1=CC(S(=O)(=O)C)=CC=C1OCC[C@H]1[C@@H](C2CCN(CC2)C=2N=CC(Cl)=CN=2)C1 XFJBGINZIMNZBW-CRAIPNDOSA-N 0.000 description 3
- RSIWALKZYXPAGW-NSHDSACASA-N 6-(3-fluorophenyl)-3-methyl-7-[(1s)-1-(7h-purin-6-ylamino)ethyl]-[1,3]thiazolo[3,2-a]pyrimidin-5-one Chemical compound C=1([C@@H](NC=2C=3N=CNC=3N=CN=2)C)N=C2SC=C(C)N2C(=O)C=1C1=CC=CC(F)=C1 RSIWALKZYXPAGW-NSHDSACASA-N 0.000 description 3
- BQXUPNKLZNSUMC-YUQWMIPFSA-N CCN(CCCCCOCC(=O)N[C@H](C(=O)N1C[C@H](O)C[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)c1ccc(cc1)-c1scnc1C)C(C)(C)C)CCOc1ccc(cc1)C(=O)c1c(sc2cc(O)ccc12)-c1ccc(O)cc1 Chemical compound CCN(CCCCCOCC(=O)N[C@H](C(=O)N1C[C@H](O)C[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)c1ccc(cc1)-c1scnc1C)C(C)(C)C)CCOc1ccc(cc1)C(=O)c1c(sc2cc(O)ccc12)-c1ccc(O)cc1 BQXUPNKLZNSUMC-YUQWMIPFSA-N 0.000 description 3
- 229940126639 Compound 33 Drugs 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XTHFKEDIFFGKHM-UHFFFAOYSA-N Dimethoxyethane Chemical compound COCCOC XTHFKEDIFFGKHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 229910017976 MgO 4 Inorganic materials 0.000 description 3
- OPFJDXRVMFKJJO-ZHHKINOHSA-N N-{[3-(2-benzamido-4-methyl-1,3-thiazol-5-yl)-pyrazol-5-yl]carbonyl}-G-dR-G-dD-dD-dD-NH2 Chemical compound S1C(C=2NN=C(C=2)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(N)=O)=C(C)N=C1NC(=O)C1=CC=CC=C1 OPFJDXRVMFKJJO-ZHHKINOHSA-N 0.000 description 3
- PNUZDKCDAWUEGK-CYZMBNFOSA-N Sitafloxacin Chemical compound C([C@H]1N)N(C=2C(=C3C(C(C(C(O)=O)=CN3[C@H]3[C@H](C3)F)=O)=CC=2F)Cl)CC11CC1 PNUZDKCDAWUEGK-CYZMBNFOSA-N 0.000 description 3
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Natural products NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IOSLINNLJFQMFF-XMMPIXPASA-N [(2R)-1-[[4-[[3-[(4-fluorophenyl)methylsulfanyl]phenoxy]methyl]phenyl]methyl]pyrrolidin-2-yl]methanol Chemical compound FC1=CC=C(CSC=2C=C(OCC3=CC=C(CN4[C@H](CCC4)CO)C=C3)C=CC=2)C=C1 IOSLINNLJFQMFF-XMMPIXPASA-N 0.000 description 3
- PSLUFJFHTBIXMW-WYEYVKMPSA-N [(3r,4ar,5s,6s,6as,10s,10ar,10bs)-3-ethenyl-10,10b-dihydroxy-3,4a,7,7,10a-pentamethyl-1-oxo-6-(2-pyridin-2-ylethylcarbamoyloxy)-5,6,6a,8,9,10-hexahydro-2h-benzo[f]chromen-5-yl] acetate Chemical compound O([C@@H]1[C@@H]([C@]2(O[C@](C)(CC(=O)[C@]2(O)[C@@]2(C)[C@@H](O)CCC(C)(C)[C@@H]21)C=C)C)OC(=O)C)C(=O)NCCC1=CC=CC=N1 PSLUFJFHTBIXMW-WYEYVKMPSA-N 0.000 description 3
- BWVAOONFBYYRHY-UHFFFAOYSA-N [4-(hydroxymethyl)phenyl]methanol Chemical compound OCC1=CC=C(CO)C=C1 BWVAOONFBYYRHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SORGEQQSQGNZFI-UHFFFAOYSA-N [azido(phenoxy)phosphoryl]oxybenzene Chemical compound C=1C=CC=CC=1OP(=O)(N=[N+]=[N-])OC1=CC=CC=C1 SORGEQQSQGNZFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 3
- 125000003158 alcohol group Chemical group 0.000 description 3
- BHELZAPQIKSEDF-UHFFFAOYSA-N allyl bromide Chemical compound BrCC=C BHELZAPQIKSEDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 239000012300 argon atmosphere Substances 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- KQIADDMXRMTWHZ-UHFFFAOYSA-N chloro-tri(propan-2-yl)silane Chemical compound CC(C)[Si](Cl)(C(C)C)C(C)C KQIADDMXRMTWHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 229940126543 compound 14 Drugs 0.000 description 3
- 229940126142 compound 16 Drugs 0.000 description 3
- 229940126086 compound 21 Drugs 0.000 description 3
- 229940126208 compound 22 Drugs 0.000 description 3
- 229940125877 compound 31 Drugs 0.000 description 3
- 229940127573 compound 38 Drugs 0.000 description 3
- 229940125900 compound 59 Drugs 0.000 description 3
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 3
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 3
- GWNFQAKCJYEJEW-UHFFFAOYSA-N ethyl 3-[8-[[4-methyl-5-[(3-methyl-4-oxophthalazin-1-yl)methyl]-1,2,4-triazol-3-yl]sulfanyl]octanoylamino]benzoate Chemical compound CCOC(=O)C1=CC(NC(=O)CCCCCCCSC2=NN=C(CC3=NN(C)C(=O)C4=CC=CC=C34)N2C)=CC=C1 GWNFQAKCJYEJEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 125000000592 heterocycloalkyl group Chemical group 0.000 description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000003588 lysine group Chemical class [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 3
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 3
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IOMMMLWIABWRKL-WUTDNEBXSA-N nazartinib Chemical compound C1N(C(=O)/C=C/CN(C)C)CCCC[C@H]1N1C2=C(Cl)C=CC=C2N=C1NC(=O)C1=CC=NC(C)=C1 IOMMMLWIABWRKL-WUTDNEBXSA-N 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- PIDFDZJZLOTZTM-KHVQSSSXSA-N ombitasvir Chemical compound COC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NC1=CC=C([C@H]2N([C@@H](CC2)C=2C=CC(NC(=O)[C@H]3N(CCC3)C(=O)[C@@H](NC(=O)OC)C(C)C)=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)C(C)(C)C)C=C1 PIDFDZJZLOTZTM-KHVQSSSXSA-N 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 150000002923 oximes Chemical class 0.000 description 3
- NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N palladium;triphenylphosphane Chemical compound [Pd].C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- MUWVIMJPXKIXJK-UHFFFAOYSA-N prop-2-enyl 2-bromoacetate Chemical compound BrCC(=O)OCC=C MUWVIMJPXKIXJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 229910001923 silver oxide Inorganic materials 0.000 description 3
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M sodium iodide Chemical compound [Na+].[I-] FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000012536 storage buffer Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 125000005490 tosylate group Chemical group 0.000 description 3
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 3
- ABJSOROVZZKJGI-OCYUSGCXSA-N (1r,2r,4r)-2-(4-bromophenyl)-n-[(4-chlorophenyl)-(2-fluoropyridin-4-yl)methyl]-4-morpholin-4-ylcyclohexane-1-carboxamide Chemical compound C1=NC(F)=CC(C(NC(=O)[C@H]2[C@@H](C[C@@H](CC2)N2CCOCC2)C=2C=CC(Br)=CC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)=C1 ABJSOROVZZKJGI-OCYUSGCXSA-N 0.000 description 2
- VRDGQQTWSGDXCU-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 2-iodoacetate Chemical compound ICC(=O)ON1C(=O)CCC1=O VRDGQQTWSGDXCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- STBLNCCBQMHSRC-BATDWUPUSA-N (2s)-n-[(3s,4s)-5-acetyl-7-cyano-4-methyl-1-[(2-methylnaphthalen-1-yl)methyl]-2-oxo-3,4-dihydro-1,5-benzodiazepin-3-yl]-2-(methylamino)propanamide Chemical compound O=C1[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC)[C@H](C)N(C(C)=O)C2=CC(C#N)=CC=C2N1CC1=C(C)C=CC2=CC=CC=C12 STBLNCCBQMHSRC-BATDWUPUSA-N 0.000 description 2
- AXKGIPZJYUNAIW-UHFFFAOYSA-N (4-aminophenyl)methanol Chemical compound NC1=CC=C(CO)C=C1 AXKGIPZJYUNAIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FQJYKXVQABPCRA-UHFFFAOYSA-M (4-bromophenyl)methyl-triphenylphosphanium;bromide Chemical compound [Br-].C1=CC(Br)=CC=C1C[P+](C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FQJYKXVQABPCRA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- CLECMSNCZUMKLM-UHFFFAOYSA-N (4-ethenylphenyl)methanol Chemical compound OCC1=CC=C(C=C)C=C1 CLECMSNCZUMKLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NXLNNXIXOYSCMB-UHFFFAOYSA-N (4-nitrophenyl) carbonochloridate Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(OC(Cl)=O)C=C1 NXLNNXIXOYSCMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VUEGYUOUAAVYAS-JGGQBBKZSA-N (6ar,9s,10ar)-9-(dimethylsulfamoylamino)-7-methyl-6,6a,8,9,10,10a-hexahydro-4h-indolo[4,3-fg]quinoline Chemical compound C1=CC([C@H]2C[C@@H](CN(C)[C@@H]2C2)NS(=O)(=O)N(C)C)=C3C2=CNC3=C1 VUEGYUOUAAVYAS-JGGQBBKZSA-N 0.000 description 2
- DEVSOMFAQLZNKR-RJRFIUFISA-N (z)-3-[3-[3,5-bis(trifluoromethyl)phenyl]-1,2,4-triazol-1-yl]-n'-pyrazin-2-ylprop-2-enehydrazide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC(C(F)(F)F)=CC(C2=NN(\C=C/C(=O)NNC=3N=CC=NC=3)C=N2)=C1 DEVSOMFAQLZNKR-RJRFIUFISA-N 0.000 description 2
- KKHFRAFPESRGGD-UHFFFAOYSA-N 1,3-dimethyl-7-[3-(n-methylanilino)propyl]purine-2,6-dione Chemical compound C1=NC=2N(C)C(=O)N(C)C(=O)C=2N1CCCN(C)C1=CC=CC=C1 KKHFRAFPESRGGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UNILWMWFPHPYOR-KXEYIPSPSA-M 1-[6-[2-[3-[3-[3-[2-[2-[3-[[2-[2-[[(2r)-1-[[2-[[(2r)-1-[3-[2-[2-[3-[[2-(2-amino-2-oxoethoxy)acetyl]amino]propoxy]ethoxy]ethoxy]propylamino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-[(2r)-2,3-di(hexadecanoyloxy)propyl]sulfanyl-1-oxopropan-2-yl Chemical compound O=C1C(SCCC(=O)NCCCOCCOCCOCCCNC(=O)COCC(=O)N[C@@H](CSC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CO)C(=O)NCCCOCCOCCOCCCNC(=O)COCC(N)=O)CC(=O)N1CCNC(=O)CCCCCN\1C2=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2CC/1=C/C=C/C=C/C1=[N+](CC)C2=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C1 UNILWMWFPHPYOR-KXEYIPSPSA-M 0.000 description 2
- GQHTUMJGOHRCHB-UHFFFAOYSA-N 2,3,4,6,7,8,9,10-octahydropyrimido[1,2-a]azepine Chemical compound C1CCCCN2CCCN=C21 GQHTUMJGOHRCHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LSTRKXWIZZZYAS-UHFFFAOYSA-N 2-bromoacetyl bromide Chemical compound BrCC(Br)=O LSTRKXWIZZZYAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFOIDLOIBZFWDO-UHFFFAOYSA-N 2-methoxy-6-[6-methoxy-4-[(3-phenylmethoxyphenyl)methoxy]-1-benzofuran-2-yl]imidazo[2,1-b][1,3,4]thiadiazole Chemical compound N1=C2SC(OC)=NN2C=C1C(OC1=CC(OC)=C2)=CC1=C2OCC(C=1)=CC=CC=1OCC1=CC=CC=C1 LFOIDLOIBZFWDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DIPLXSBTYRDLGV-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-2-methylsulfanylpropanal Chemical compound CSC(C)(C)C=O DIPLXSBTYRDLGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BKOOMYPCSUNDGP-UHFFFAOYSA-N 2-methylbut-2-ene Chemical compound CC=C(C)C BKOOMYPCSUNDGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RQFUZUMFPRMVDX-UHFFFAOYSA-N 3-Bromo-1-propanol Chemical compound OCCCBr RQFUZUMFPRMVDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DKUZHSDZSMQOGQ-UHFFFAOYSA-N 3-[2-[2-[2-(2-aminoethoxy)ethoxy]ethoxy]ethoxy]propanoic acid Chemical compound NCCOCCOCCOCCOCCC(O)=O DKUZHSDZSMQOGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YEIYIPDFZMLJQH-UHFFFAOYSA-N 3-[2-[2-[2-[2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCCOCCOCCOCCOCCC(O)=O YEIYIPDFZMLJQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WYFCZWSWFGJODV-MIANJLSGSA-N 4-[[(1s)-2-[(e)-3-[3-chloro-2-fluoro-6-(tetrazol-1-yl)phenyl]prop-2-enoyl]-5-(4-methyl-2-oxopiperazin-1-yl)-3,4-dihydro-1h-isoquinoline-1-carbonyl]amino]benzoic acid Chemical compound O=C1CN(C)CCN1C1=CC=CC2=C1CCN(C(=O)\C=C\C=1C(=CC=C(Cl)C=1F)N1N=NN=C1)[C@@H]2C(=O)NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 WYFCZWSWFGJODV-MIANJLSGSA-N 0.000 description 2
- GYFCEVXCVFNSCL-UHFFFAOYSA-N 4-methyl-4-(methyldisulfanyl)pentanoic acid Chemical compound CSSC(C)(C)CCC(O)=O GYFCEVXCVFNSCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PKMUHQIDVVOXHQ-HXUWFJFHSA-N C[C@H](C1=CC(C2=CC=C(CNC3CCCC3)S2)=CC=C1)NC(C1=C(C)C=CC(NC2CNC2)=C1)=O Chemical compound C[C@H](C1=CC(C2=CC=C(CNC3CCCC3)S2)=CC=C1)NC(C1=C(C)C=CC(NC2CNC2)=C1)=O PKMUHQIDVVOXHQ-HXUWFJFHSA-N 0.000 description 2
- CYIPYUAFGIHFLZ-UHFFFAOYSA-N C[S+](C)SCCCN Chemical compound C[S+](C)SCCCN CYIPYUAFGIHFLZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005046 Chlorosilane Substances 0.000 description 2
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 2
- 238000005727 Friedel-Crafts reaction Methods 0.000 description 2
- 229930190887 Leptomycin Natural products 0.000 description 2
- 239000002841 Lewis acid Substances 0.000 description 2
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006751 Mitsunobu reaction Methods 0.000 description 2
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical compound C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical compound CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XYONNSVDNIRXKZ-UHFFFAOYSA-N S-methyl methanethiosulfonate Chemical compound CSS(C)(=O)=O XYONNSVDNIRXKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 description 2
- 238000007239 Wittig reaction Methods 0.000 description 2
- SPXSEZMVRJLHQG-XMMPIXPASA-N [(2R)-1-[[4-[(3-phenylmethoxyphenoxy)methyl]phenyl]methyl]pyrrolidin-2-yl]methanol Chemical compound C(C1=CC=CC=C1)OC=1C=C(OCC2=CC=C(CN3[C@H](CCC3)CO)C=C2)C=CC=1 SPXSEZMVRJLHQG-XMMPIXPASA-N 0.000 description 2
- XFDKWHAYGYSXOX-UHFFFAOYSA-N [4-(bromomethyl)phenyl]methoxy-tri(propan-2-yl)silane Chemical compound CC(C)[Si](C(C)C)(C(C)C)OCC1=CC=C(CBr)C=C1 XFDKWHAYGYSXOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WREOTYWODABZMH-DTZQCDIJSA-N [[(2r,3s,4r,5r)-3,4-dihydroxy-5-[2-oxo-4-(2-phenylethoxyamino)pyrimidin-1-yl]oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] phosphono hydrogen phosphate Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O[C@H]1N(C=C\1)C(=O)NC/1=N\OCCC1=CC=CC=C1 WREOTYWODABZMH-DTZQCDIJSA-N 0.000 description 2
- 125000000738 acetamido group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)N([H])[*] 0.000 description 2
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 2
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 2
- 125000000852 azido group Chemical group *N=[N+]=[N-] 0.000 description 2
- RWCCWEUUXYIKHB-UHFFFAOYSA-N benzophenone Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)C1=CC=CC=C1 RWCCWEUUXYIKHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012965 benzophenone Substances 0.000 description 2
- KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N benzyl chloride Chemical compound ClCC1=CC=CC=C1 KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940073608 benzyl chloride Drugs 0.000 description 2
- 150000001649 bromium compounds Chemical class 0.000 description 2
- PVEOYINWKBTPIZ-UHFFFAOYSA-N but-3-enoic acid Chemical compound OC(=O)CC=C PVEOYINWKBTPIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N calicheamicin Chemical compound C1[C@H](OC)[C@@H](NCC)CO[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@@H]2C\3=C(NC(=O)OC)C(=O)C[C@](C/3=C/CSSSC)(O)C#C\C=C/C#C2)O[C@H](C)[C@@H](NO[C@@H]2O[C@H](C)[C@@H](SC(=O)C=3C(=C(OC)C(O[C@H]4[C@@H]([C@H](OC)[C@@H](O)[C@H](C)O4)O)=C(I)C=3C)OC)[C@@H](O)C2)[C@@H]1O HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N 0.000 description 2
- 229930195731 calicheamicin Natural products 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- KOPOQZFJUQMUML-UHFFFAOYSA-N chlorosilane Chemical compound Cl[SiH3] KOPOQZFJUQMUML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 description 2
- 229940125773 compound 10 Drugs 0.000 description 2
- 229940125758 compound 15 Drugs 0.000 description 2
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 2
- 229940125878 compound 36 Drugs 0.000 description 2
- 229940127271 compound 49 Drugs 0.000 description 2
- 229940126545 compound 53 Drugs 0.000 description 2
- 229940126179 compound 72 Drugs 0.000 description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 2
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000006352 cycloaddition reaction Methods 0.000 description 2
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 2
- JRBPAEWTRLWTQC-UHFFFAOYSA-N dodecylamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCN JRBPAEWTRLWTQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BJXYHBKEQFQVES-NWDGAFQWSA-N enpatoran Chemical compound N[C@H]1CN(C[C@H](C1)C(F)(F)F)C1=C2C=CC=NC2=C(C=C1)C#N BJXYHBKEQFQVES-NWDGAFQWSA-N 0.000 description 2
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 2
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 2
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 2
- 150000002466 imines Chemical class 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 description 2
- ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N jdtic Chemical compound C1([C@]2(C)CCN(C[C@@H]2C)C[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]2NCC3=CC(O)=CC=C3C2)=CC=CC(O)=C1 ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N 0.000 description 2
- 229910052745 lead Inorganic materials 0.000 description 2
- YACHGFWEQXFSBS-RJXCBBHPSA-N leptomycin Chemical compound OC(=O)/C=C(C)/C[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)/C=C(\C)/C=C/C[C@@H](C)\C=C(/CC)\C=C\[C@@H]1OC(=O)C=C[C@@H]1C YACHGFWEQXFSBS-RJXCBBHPSA-N 0.000 description 2
- 150000007517 lewis acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000005649 metathesis reaction Methods 0.000 description 2
- YDCHPLOFQATIDS-UHFFFAOYSA-N methyl 2-bromoacetate Chemical compound COC(=O)CBr YDCHPLOFQATIDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- YCJZWBZJSYLMPB-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloropyrimidin-4-yl)-2,5-dimethyl-1-phenylimidazole-4-carboxamide Chemical compound CC=1N(C=2C=CC=CC=2)C(C)=NC=1C(=O)NC1=CC=NC(Cl)=N1 YCJZWBZJSYLMPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035407 negative regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N nickel Substances [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NXJCBFBQEVOTOW-UHFFFAOYSA-L palladium(2+);dihydroxide Chemical compound O[Pd]O NXJCBFBQEVOTOW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 2
- 229910000073 phosphorus hydride Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- ZBJSHDVMDCJOEZ-UHFFFAOYSA-N potassium;1h-naphthalen-1-ide Chemical compound [K+].[C-]1=CC=CC2=CC=CC=C21 ZBJSHDVMDCJOEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YORCIIVHUBAYBQ-UHFFFAOYSA-N propargyl bromide Chemical compound BrCC#C YORCIIVHUBAYBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHMDPDGBKYUEMW-UHFFFAOYSA-N pyridine-2-thiol Chemical compound SC1=CC=CC=N1 WHMDPDGBKYUEMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 2
- 150000003385 sodium Chemical class 0.000 description 2
- PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M sodium ascorbate Substances [Na+].OC[C@@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M 0.000 description 2
- 235000010378 sodium ascorbate Nutrition 0.000 description 2
- 229960005055 sodium ascorbate Drugs 0.000 description 2
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M sodium-L-ascorbate Chemical compound [Na+].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M 0.000 description 2
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 2
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- BCNZYOJHNLTNEZ-UHFFFAOYSA-N tert-butyldimethylsilyl chloride Chemical compound CC(C)(C)[Si](C)(C)Cl BCNZYOJHNLTNEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UWHCKJMYHZGTIT-UHFFFAOYSA-N tetraethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCOCCO UWHCKJMYHZGTIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-imine Chemical compound N=C1CCCS1 CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- IUSARDYWEPUTPN-OZBXUNDUSA-N (2r)-n-[(2s,3r)-4-[[(4s)-6-(2,2-dimethylpropyl)spiro[3,4-dihydropyrano[2,3-b]pyridine-2,1'-cyclobutane]-4-yl]amino]-3-hydroxy-1-[3-(1,3-thiazol-2-yl)phenyl]butan-2-yl]-2-methoxypropanamide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](C)OC)[C@H](O)CN[C@@H]1C2=CC(CC(C)(C)C)=CN=C2OC2(CCC2)C1)C(C=1)=CC=CC=1C1=NC=CS1 IUSARDYWEPUTPN-OZBXUNDUSA-N 0.000 description 1
- XBLWUZUTFMEGOR-UHFFFAOYSA-M (4-ethenylphenyl)methyl-triphenylphosphanium;bromide Chemical compound [Br-].C1=CC(C=C)=CC=C1C[P+](C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 XBLWUZUTFMEGOR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- ABEDCEQXQBVFCP-UHFFFAOYSA-N 1,3-diazacyclohexadec-13-ene-2,5,9,12-tetrone Chemical compound O=C1CCCC(=O)CNC(=O)NCCC=CC(=O)CC1 ABEDCEQXQBVFCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ABVYSFJBOMPCKK-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxa-8,11-diazacyclohexadec-13-ene-2,5,9,12-tetrone Chemical compound O=C1CNC(=O)C=CCCOC(=O)COC(=O)CCN1 ABVYSFJBOMPCKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WEGOLYBUWCMMMY-UHFFFAOYSA-N 1-bromo-2-propanol Chemical compound CC(O)CBr WEGOLYBUWCMMMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NRKYWOKHZRQRJR-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-trifluoroacetamide Chemical compound NC(=O)C(F)(F)F NRKYWOKHZRQRJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MBQYGQMGPFNSAP-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-(2-azidoethoxy)ethoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound OCCOCCOCCOCCN=[N+]=[N-] MBQYGQMGPFNSAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQMJFCWQBPUZCK-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-(2-prop-2-ynoxyethoxy)ethoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound OCCOCCOCCOCCOCC#C WQMJFCWQBPUZCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FMKGJQHNYMWDFJ-CVEARBPZSA-N 2-[[4-(2,2-difluoropropoxy)pyrimidin-5-yl]methylamino]-4-[[(1R,4S)-4-hydroxy-3,3-dimethylcyclohexyl]amino]pyrimidine-5-carbonitrile Chemical compound FC(COC1=NC=NC=C1CNC1=NC=C(C(=N1)N[C@H]1CC([C@H](CC1)O)(C)C)C#N)(C)F FMKGJQHNYMWDFJ-CVEARBPZSA-N 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NJUMHPXJVKDMAW-UHFFFAOYSA-N 3-[2-[2-(2-hydroxyethoxy)ethoxy]ethoxy]propanoic acid Chemical compound OCCOCCOCCOCCC(O)=O NJUMHPXJVKDMAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PBVAJRFEEOIAGW-UHFFFAOYSA-N 3-[bis(2-carboxyethyl)phosphanyl]propanoic acid;hydrochloride Chemical compound Cl.OC(=O)CCP(CCC(O)=O)CCC(O)=O PBVAJRFEEOIAGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHQDETIJWKXCTC-UHFFFAOYSA-N 3-chloroperbenzoic acid Chemical compound OOC(=O)C1=CC=CC(Cl)=C1 NHQDETIJWKXCTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WAGMYTXJRVPMGW-UHFFFAOYSA-N 4-azidobutanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCN=[N+]=[N-] WAGMYTXJRVPMGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DMAYBPBPEUFIHJ-UHFFFAOYSA-N 4-bromobut-1-ene Chemical compound BrCCC=C DMAYBPBPEUFIHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PZSDWEKDTOXAEG-UHFFFAOYSA-N 4-methyl-4-(methyldisulfanyl)-1-piperazin-1-ylpentan-1-one Chemical compound CSSC(C)(C)CCC(=O)N1CCNCC1 PZSDWEKDTOXAEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BYMCKHOSPXAEDG-UHFFFAOYSA-N 4-methyl-4-(methyldisulfanyl)-1-piperazin-1-ylpentan-1-one;hydrochloride Chemical compound Cl.CSSC(C)(C)CCC(=O)N1CCNCC1 BYMCKHOSPXAEDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HLYQBBSYKLLKAF-UHFFFAOYSA-N 4-o-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 1-o-[2-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)ethyl] butanedioate Chemical compound O=C1C=CC(=O)N1CCOC(=O)CCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O HLYQBBSYKLLKAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004939 6-pyridyl group Chemical group N1=CC=CC=C1* 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100058739 Arabidopsis thaliana BZR2 gene Proteins 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical class [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UUEYQNQWWSJGIV-UHFFFAOYSA-N CC(C=O)S[S+](C)C Chemical compound CC(C=O)S[S+](C)C UUEYQNQWWSJGIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150050425 CCC2 gene Proteins 0.000 description 1
- HGPPRNRUNRGONC-UHFFFAOYSA-N C[S+](C)SCCCN1CCNCC1.Cl Chemical compound C[S+](C)SCCCN1CCNCC1.Cl HGPPRNRUNRGONC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- CKDWPUIZGOQOOM-UHFFFAOYSA-N Carbamyl chloride Chemical compound NC(Cl)=O CKDWPUIZGOQOOM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 241000722731 Carex Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101100339482 Colletotrichum orbiculare (strain 104-T / ATCC 96160 / CBS 514.97 / LARS 414 / MAFF 240422) HOG1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001492658 Cyanea koolauensis Species 0.000 description 1
- 241000192700 Cyanobacteria Species 0.000 description 1
- 241001464430 Cyanobacterium Species 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical class S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 1
- 101100289989 Drosophila melanogaster alpha-Man-Ia gene Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GKQLYSROISKDLL-UHFFFAOYSA-N EEDQ Chemical compound C1=CC=C2N(C(=O)OCC)C(OCC)C=CC2=C1 GKQLYSROISKDLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 241001572175 Gaza Species 0.000 description 1
- 239000007818 Grignard reagent Substances 0.000 description 1
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 101000794228 Homo sapiens Mitotic checkpoint serine/threonine-protein kinase BUB1 beta Proteins 0.000 description 1
- 238000006736 Huisgen cycloaddition reaction Methods 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 101150021286 MAS1 gene Proteins 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GMPKIPWJBDOURN-UHFFFAOYSA-N Methoxyamine Chemical compound CON GMPKIPWJBDOURN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100030144 Mitotic checkpoint serine/threonine-protein kinase BUB1 beta Human genes 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-diisopropylethylamine Substances CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N Sulphide Chemical compound [S-2] UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150057833 THEG gene Proteins 0.000 description 1
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 1
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- SMNRFWMNPDABKZ-WVALLCKVSA-N [[(2R,3S,4R,5S)-5-(2,6-dioxo-3H-pyridin-3-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [[[(2R,3S,4S,5R,6R)-4-fluoro-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxy-hydroxyphosphoryl] hydrogen phosphate Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@H]2O[C@H]([C@H](O)[C@@H]2O)C2C=CC(=O)NC2=O)[C@H](O)[C@@H](F)[C@@H]1O SMNRFWMNPDABKZ-WVALLCKVSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 125000004423 acyloxy group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010640 amide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940064734 aminobenzoate Drugs 0.000 description 1
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N azide group Chemical group [N-]=[N+]=[N-] IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UGUUDTWORXNLAK-UHFFFAOYSA-N azidoalcohol Chemical compound ON=[N+]=[N-] UGUUDTWORXNLAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PFYXSUNOLOJMDX-UHFFFAOYSA-N bis(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) carbonate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)ON1C(=O)CCC1=O PFYXSUNOLOJMDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RLECCBFNWDXKPK-UHFFFAOYSA-N bis(trimethylsilyl)sulfide Chemical compound C[Si](C)(C)S[Si](C)(C)C RLECCBFNWDXKPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- MCQRPQCQMGVWIQ-UHFFFAOYSA-N boron;methylsulfanylmethane Chemical compound [B].CSC MCQRPQCQMGVWIQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- DVECBJCOGJRVPX-UHFFFAOYSA-N butyryl chloride Chemical compound CCCC(Cl)=O DVECBJCOGJRVPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- MOIPGXQKZSZOQX-UHFFFAOYSA-N carbonyl bromide Chemical class BrC(Br)=O MOIPGXQKZSZOQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical group 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003518 caustics Substances 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- XENVCRGQTABGKY-ZHACJKMWSA-N chlorohydrin Chemical group CC#CC#CC#CC#C\C=C\C(Cl)CO XENVCRGQTABGKY-ZHACJKMWSA-N 0.000 description 1
- 229940125807 compound 37 Drugs 0.000 description 1
- 229940127113 compound 57 Drugs 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- MQFIBLPYJVBNLZ-UHFFFAOYSA-N cryptocin Natural products CC(O)C1N(C)C(=O)C(C(=O)C2(C)C(C)C=CC3CC(C)CCC23)C1=O MQFIBLPYJVBNLZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010089438 cryptophycin 1 Proteins 0.000 description 1
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 1
- 125000006165 cyclic alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001995 cyclobutyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 230000022811 deglycosylation Effects 0.000 description 1
- NKLCNNUWBJBICK-UHFFFAOYSA-N dess–martin periodinane Chemical compound C1=CC=C2I(OC(=O)C)(OC(C)=O)(OC(C)=O)OC(=O)C2=C1 NKLCNNUWBJBICK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- PIZLBWGMERQCOC-UHFFFAOYSA-N dibenzyl carbonate Chemical compound C=1C=CC=CC=1COC(=O)OCC1=CC=CC=C1 PIZLBWGMERQCOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAMRKDQNMBBFBR-BQYQJAHWSA-N diethyl azodicarboxylate Substances CCOC(=O)\N=N\C(=O)OCC FAMRKDQNMBBFBR-BQYQJAHWSA-N 0.000 description 1
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HCUYBXPSSCRKRF-UHFFFAOYSA-N diphosgene Chemical compound ClC(=O)OC(Cl)(Cl)Cl HCUYBXPSSCRKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 125000005414 dithiopyridyl group Chemical group 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000006735 epoxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- ZPQNOPCJUCMNTL-UHFFFAOYSA-N ethyl 4-azidobutanoate Chemical compound CCOC(=O)CCCN=[N+]=[N-] ZPQNOPCJUCMNTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XBPOBCXHALHJFP-UHFFFAOYSA-N ethyl 4-bromobutanoate Chemical compound CCOC(=O)CCCBr XBPOBCXHALHJFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAMRKDQNMBBFBR-UHFFFAOYSA-N ethyl n-ethoxycarbonyliminocarbamate Chemical compound CCOC(=O)N=NC(=O)OCC FAMRKDQNMBBFBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000004222 ferrous gluconate Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N formamide Substances NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 1
- 229960000587 glutaral Drugs 0.000 description 1
- VANNPISTIUFMLH-UHFFFAOYSA-N glutaric anhydride Chemical compound O=C1CCCC(=O)O1 VANNPISTIUFMLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004795 grignard reagents Chemical class 0.000 description 1
- 125000001188 haloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 125000004836 hexamethylene group Chemical group [H]C([H])([*:2])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[*:1] 0.000 description 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- XNXVOSBNFZWHBV-UHFFFAOYSA-N hydron;o-methylhydroxylamine;chloride Chemical compound Cl.CON XNXVOSBNFZWHBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSQACBWWAIBWIC-UHFFFAOYSA-N hydron;piperazine;chloride Chemical compound Cl.C1CNCCN1 MSQACBWWAIBWIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940087305 limonene Drugs 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 1
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- UHHVABRWHRKEPJ-UHFFFAOYSA-N methyl 2-piperazin-1-ylacetate Chemical compound COC(=O)CN1CCNCC1 UHHVABRWHRKEPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UOBSVARXACCLLH-UHFFFAOYSA-N monomethyl adipate Chemical compound COC(=O)CCCCC(O)=O UOBSVARXACCLLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- SQDFHQJTAWCFIB-UHFFFAOYSA-N n-methylidenehydroxylamine Chemical compound ON=C SQDFHQJTAWCFIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HQFYIDOMCULPIW-UHFFFAOYSA-N n-methylprop-2-yn-1-amine Chemical compound CNCC#C HQFYIDOMCULPIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001971 neopentyl group Chemical group [H]C([*])([H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012038 nucleophile Substances 0.000 description 1
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002901 organomagnesium compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229940127084 other anti-cancer agent Drugs 0.000 description 1
- 238000007248 oxidative elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- YJVFFLUZDVXJQI-UHFFFAOYSA-L palladium(ii) acetate Chemical compound [Pd+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O YJVFFLUZDVXJQI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- PMOIAJVKYNVHQE-UHFFFAOYSA-N phosphanium;bromide Chemical compound [PH4+].[Br-] PMOIAJVKYNVHQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RFIOZSIHFNEKFF-UHFFFAOYSA-M piperazine-1-carboxylate Chemical compound [O-]C(=O)N1CCNCC1 RFIOZSIHFNEKFF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- JKANAVGODYYCQF-UHFFFAOYSA-N prop-2-yn-1-amine Chemical compound NCC#C JKANAVGODYYCQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- WBHQBSYUUJJSRZ-UHFFFAOYSA-M sodium bisulfate Chemical compound [Na+].OS([O-])(=O)=O WBHQBSYUUJJSRZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000342 sodium bisulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000009518 sodium iodide Nutrition 0.000 description 1
- 239000012265 solid product Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000000020 sulfo group Chemical group O=S(=O)([*])O[H] 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- QTZDUJVZYGUSQJ-UHFFFAOYSA-N tert-Butyl (2-(2-(2-(2-azidoethoxy)ethoxy)ethoxy)ethyl)carbamate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCCOCCOCCOCCN=[N+]=[N-] QTZDUJVZYGUSQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NZVUWEZJFULOOK-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 4-(2-methoxy-2-oxoethyl)piperazine-1-carboxylate Chemical compound COC(=O)CN1CCN(C(=O)OC(C)(C)C)CC1 NZVUWEZJFULOOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MFPWEWYKQYMWRO-UHFFFAOYSA-N tert-butyl carboxy carbonate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)OC(O)=O MFPWEWYKQYMWRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001981 tert-butyldimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([H])(C([H])([H])[H])[*]C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000383 tetramethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- DUYAAUVXQSMXQP-UHFFFAOYSA-M thioacetate Chemical compound CC([S-])=O DUYAAUVXQSMXQP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000006177 thiolation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 1
- 238000005809 transesterification reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-M triflate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000000025 triisopropylsilyl group Chemical group C(C)(C)[Si](C(C)C)(C(C)C)* 0.000 description 1
- WNOKPZUDLDIWHX-UHFFFAOYSA-M triphenyl-[[4-[tri(propan-2-yl)silyloxymethyl]phenyl]methyl]phosphanium;bromide Chemical compound [Br-].C1=CC(CO[Si](C(C)C)(C(C)C)C(C)C)=CC=C1C[P+](C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 WNOKPZUDLDIWHX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D273/00—Heterocyclic compounds containing rings having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D261/00 - C07D271/00
- C07D273/08—Heterocyclic compounds containing rings having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D261/00 - C07D271/00 having two nitrogen atoms and more than one oxygen atom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D245/00—Heterocyclic compounds containing rings of more than seven members having two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D245/04—Heterocyclic compounds containing rings of more than seven members having two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D245/06—Heterocyclic compounds containing rings of more than seven members having two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к производному криптофицина формулы (II), в которой Rозначает (C-C)алкильную группу; Rи Rозначают, независимо один от другого, Н или (C-C)алкильную группу; Rи Rозначают, независимо один от другого, Н или (C-С)алкильную группу; Rозначает Н или по меньшей мере один заместитель фенильного кольца, выбранный из группы (C-С)алкокси, атома хлора; Rозначает Н или по меньшей мере один заместитель, выбранный из (C-C)алкильной группы; L означает линкер в положении орто(о)-, мета(м)- или пара(п)-, выбранный изRозначает Н или (С-С)алкильную группу, Zозначает Н или группу -SR, где Rозначает группу (С-С)алкил; Zозначает простую связь, -О- или -NH-, причем Rозначает Н или группу (C-C)алкил. Кроме того, изобретение относится к применению указанного производного криптофицина для образования конъюгата с моноклональным антителом, способу получения коньюгата, представляющего собой моноклональное антитело, с которым ковалентно связано по меньшей мере одно производное криптофицина формулы (II), а также конъюгату для применения в качестве противоракового агента, получаемого описанным способом.
Description
Настоящее изобретение относится к конъюгированным криптофицинам, к содержащим их фармацевтическим композициям и применению их в терапии, в частности, в качестве противораковых агентов. Изобретение относится также к способу получения этих соединений, а также к самим производным криптофицинов.
Область техники
Криптофицины являются вторичными метаболитами, относящимися к классу депсипептидных макроциклов, продуцируемых цианобактериями вида Νοδΐοο. Их название связано с тем, что эти соединения являются высоко цитотоксичными соединениями по отношению к дрожжам вида Сгур!ососси8. Первый представитель этого класса молекул, криптофицин-1 (С-1), был выделен в 1990 г. из цианобактерии Νοδ1ос δρ (АТСС 53789) (ΕίβΙβΓ δ., е! а1., 8уп1йе818 2006, 22, 3747-3789). Структура, общая формула и нумерация атомов углерода в этих соединениях, такие как описано в заявке \УО 98/08505, и представлены ниже
Криптофицины С-1 и С-52, характеризующиеся наличием эпоксидной функциональной группы, показанной ниже, обладают противораковыми свойствами. Клинические испытания были проведены на раке легких, фаза II, с С-52 (ЬУ 355073): см. Ейе1тап М.1. е! а1., Ьипд Сапсег 2003, 39, 197-199; δеδδа С. е! а1., Еиг. 1. Сапсег 2002, 38, 2388-96. Сам криптофицин С-55, являющийся пролекарством С-52, характеризуется наличием хлоргидриновой функциональной группы вместо и на месте эпоксидной функциональной группы (Вюпра11у Р.Р.. е! а1., Сапсег Сйешо1йег Рйагшасо1. 2003, 52, 25-33). С-55 проявил себя очень активным продуктом, но нестабильным в растворе. Описаны также производные типа хлоргидринглицинатных производных, такие как соединение С-55 О1у, для увеличения стабильности (Ыап§ 1., е! а1., Iпνеδί^да!^οпа1 Νον Ωπίβδ 2005, 23, 213-224).
С52
Техническая задача
Химия конъюгатов известна в течение несколько лет и была применена для изучения нескольких семейств цитотоксических соединений, таких как, например, майтансиноиды (\УО 04103272), таксаны (\УО 06061258), томаймицины (\УО 09016516), лептомицины (\УО 07144709), СС-1065 и его аналоги (\УО 2007102069); см. также о конъюгированных соединениях: Моппеге! С., е! а1., Ви11ейп йи Сапсег, 2000, 87(11), 829-38; Исай А.Э. е! а1., №!иге Сйшса1 Ргасйсе Опсо1оду 2007, 4, 245-255. Однако эта химия не занималась производными криптофицина, конъюгированными с антителами или другими агентами клеточного связывания.
Техническая задача, которую предлагает решить настоящее изобретение, заключается в предоставлении новых конъюгатов на основе производных криптофицина, а также новых производных криптофицина, способных к конъюгированию.
Уровень техники
Документы ЕР 0830136 и \УО 98/08505 описывают производные криптофицинов, но не описывают конъюгированные криптофицины. Заявка \УО 98/08505 описывает производные криптофицинов формулы (А)
в которой Аг может означать группу Аг' формулы в которой К54 означает Н, группу
- 1 024627 (С1-С6)алкил, (С1-Сб)алкил(К57, К57·, К57»), арил, фенил, гетероциклоалкил, атом галогена, СООК57, РО3Н, 8О3Н, δΟ7Ρ78. N^59^60, ΝΗΟΚβι, ΝΗΟΚβΐ', СЫ, ΝΟ7. ОР72· СН7ОРб7'· ΟΒ^ΝΚ^Ρ^', (С1-Сб)алкил-ОКюо,
Ν Ν-Κ,,,
- δΚ63; К55 и К56 означают Н, группу (С1-С6)алкил, С(К57, К57, К57), арил, фенил, гетероциклоалкил, атом галогена, СООК57, РО3Н, §О3Н, §О2К58, ΝΚ59Κ60, ЦНОКбь ННСНК6Г, ΟΝ, NΟ2, ОК62, СН2ОК623 СН2ОСОК95, СН2НК96К96', (С1-С6)алкил-ОК100, (С1-С6)алкил-НК59, К60. Заявка \УО 98/08505 описывает, в частности, следующие соединения:
соединение 24, схема 4
соединение 33,схема 5
которые характеризуются конечной группой -ЯНС(=О)О1-Ви. Однако заявка \УО 98/08505 не конкретизирует, что эти соединения могут быть конъюгированы или используются для конъюгирования.
И8 2007/0213511 описывает иммуноконъюгаты калихеамицина. Среди них упоминается МУЪОТАКО® (или СМА-676), который является иммуноконьюгатом калихеамицина, используемым для лечения АМЬ (анти-СО33-калихеамицин). О конъюгатах см. также \УО 2006/042240.
А1-а^аг Κ.δ., е! а1., 1. Меб. СЬет. 2003, 46(14), 2985-3007 и А1-а^аг Κ.δ., е! а1., Мо1. Сапсег ТЬег. 2004, 3(9), 1061-1067 описывают производные криптофицина, а также оценивают их активность ίη νίνο.
\УО 08010101 описывает моноклональное антитело против ЕрЬА2, а также соответствующие конъюгаты, включающие одну или несколько молекул цитотоксического соединения, связанного(ых) с моноклональным антителом. \УО 08047242 описывает моноклональное антитело против СЭ38. а также соответствующие конъюгаты, включающие одну или несколько молекул цитотоксического соединения, свя- 2 024627 занного(ых) с моноклональным антителом. Цитотоксическое соединение может быть выбрано из майтансиноидов, таксанов, томаймицинов, лептомицинов, СС-1065 и его аналогов.
\νϋ 2009/126934 описывает антитела против СЭ70 и их конъюгаты с цитотоксическими соединениями; среди цитотоксических соединений назван криптофицин. νθ 2009/134976 описывает конъюгаты с оптимальной степенью замещения для подачи необходимого количества цитотоксических соединений в клетку; среди цитотоксических соединений назван криптофицин.
νθ 2005/116255 описывает конъюгаты аптамеров с цитотоксическим соединением, которым может быть криптофицин (см. [0037] и табл. 2), причем линкер может включать ПЭГ-цепочку ([0038]). В частности, описан криптофицин Сгур-ΝΗ формулы
а также его конъюгаты на основе аптамеров со следующими линкерами: ΝΗδ-ПЭГ-эритритол, ρΝΡПЭГ-эритритол, ΝΗδ-ПЭГ-октаПЭГ, ρΝΡ-ПЭГ-октаПЭГ и ПЭГ-еотЬ (табл. 3 и 4). Природа цепи на фенильном кольце (-СН2О-С(=О)-СМе2-СН2МН-...) отличается от того, что предложено в настоящем изобретении. νθ 2006/096754 также описывает конъюгаты аптамеров с цитотоксическим соединением, которым тоже может быть криптофицин.
νθ 2009/002993 описывает конъюгаты цитотоксического соединения формулы В-Ь-Л, включающие гидрофильные линкеры, например линкер формулы о со£н
Цитотоксическим соединением может быть криптофицин (с.46), при этом не уточнено место присоединения линкера. Примером конъюгированного соединения является ЕС0262
у которого линкер и место его присоединения отличаются от тех, которые предложены в настоящем изобретении.
Определения
Подразумевают под конъюгатом: агент клеточного связывания, с которым ковалентно соединена по меньшей мере одна молекула цитотоксического соединения;
агентом клеточного связывания (или по-английски се11 ЫпФпд адеи!): молекулу, имеющую сродство к биологической мишени: в настоящей заявке это моноклональное антитело. Функция агента клеточного связывания заключается в том, чтобы направлять биологически активное соединение, такое как цитотоксическое соединение, к биологической мишени. Предпочтительно, чтобы агент клеточного связывания не был аптамером;
биологической мишенью: антиген (или группу антигенов), локализованный предпочтительно на поверхности раковых или стромальных клеток, ассоциированных с этой опухолью; этими антигенами могут быть, например, рецептор фактора роста, онкогенный продукт или мутированный ген-супрессор опухоли, молекула, связанная с ангиогенезом, адгезивная молекула;
линкером: совокупность атомов, позволяющая ковалентно соединить цитотоксическое соединение с моноклональным антителом;
алкильной группой: углеводородную алифатическую насыщенную группу, получаемую удалением атома водорода из алкана. Алкильная группа может быть линейной или разветвленной. В качестве примера можно назвать группы: метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, трет-бутил, пентил, 2,2диметилпропил, гексил;
циклоалкильной группой: циклическую алкильную группу, содержащую 3-8 атомов углерода, встроенных в циклическую структуру. В качестве примера можно назвать группы: циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил;
гетероциклоалкильной группой: циклоалкильную группу, содержащую по меньшей мере один гетероатом (О, 8, Ν), встроенный в цикл и связанный с атомами углерода, образующими цикл;
алкоксигруппой: О-алкильную группу, в которой алкильная группа такая, как определена выше; алканоилоксигруппой: О-СО-алкильную группу, в которой алкильная группа такая, как определена выше;
алкиленовой группой: двухвалентную насыщенную группу брутто-формулы -СмН2м-. получаемую
- 3 024627 удалением двух атомов водорода из алкана. В качестве примера можно назвать метиленовую (-СН2-), этиленовую (-СН2СН2-), пропиленовую (-СН2СН2СН2-), бутиленовую (-СН2СН2СН2СН2-), гексиленовую
.....у о?
(-СН2СН2СН2СН2СН2СН2-) группу или следующие разветвленные группы : предпочтительно алкиленовая группа отвечает формуле -(СН2)П-, где η означает целое число; в диапазон величин включены граничные значения (например, диапазон типа η от 1 до 6 или между 1 и 6 включены граничные значения 1 и 6).
Используемая аббревиатура.
ΛοΘΕί: этилацетат; ЛЬК: группа (С1-С12)алкилен, более конкретно (С1-С6)алкилен, более конкретно в виде -(СН2)п-, где η означает целое число от 1 до 12, предпочтительно от 1 до 6; ад.: водный; ССМ: хроматография в тонком слое (по-английски ТЬС); СМ8: метансульфонилхлорид; крипто означает звено формулы '·!>· в частности крипто означает одно из производных криптофицина Ό1-Όδ, описанных ниже, или производное криптофицина согласно какому-либо примеру; Κί: коэффициент удерживания; ΌΑΚ: степень замещения (йтид-апйЬойу тайо); ИВИ: 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен; ИСС: Ν,Ν'дициклогексилкарбодиимид; ИСМ: дихлорметан; ΌΕΆΌ: диэтилазодикарбоксилат; И1С: Ν,Ν'диизопропилкарбодиимид; ΌΙΡΕΑ: Ν,Ν-диизопропилэтиламин; ΌΜΑ: диметилацетамид; ΌΜΑΡ: 4диметиламинопиридин; ΌΜΕ: диметоксиэтан; ΌΜΡ: диметилформамид; ДМСО: диметилсульфоксид; ΕΕΌΟ: 2-этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин; ЕИС1: ^(3-диметиламинопропил)-№этилкарбодиимид; ΕΌΤΑ: этилендиаминтетрауксусная кислота; экв.: эквивалент; Ртос: флуоренилметоксикарбонил; НОВ!: 1-гидроксибензотриазол; ΗΕΡΕ8: 4-(2-гидроксиэтил)-1пиперазинэтансульфоновая кислота; тСРВА: м-хлорпербензойная кислота; ΝΗ8: Ν-гидроксисукцинимид; ΝΜΡ: Ν-метилпирролидинон; АД: атмосферное давление; РАВАС: карбонат парааминобензилового спирта; ПД: пониженное давление; 8Ε& эксклюзионная стерическая хроматография; 8ΡΕ: твердофазная экстракция; КТ: комнатная температура; ΤΒΌΜ8: трет-бутилдиметилсилил; ТСЕР: гидрохлорид трис-(2-карбоксиэтил)фосфина; ΤΕΑ: триэтиламин; ТРА: трифторуксусная кислота; ΤΙΡ8: триизопропилсилил; ТНР: тетрагидрофуран; !К: время удерживания.
Подробное описание изобретения
Изобретение относится к моноклональному антителу, с которым соединено по меньшей мере одно производное криптофицина формулы (I)
в которой К3 означает (С1-С6)алкильную группу;
Кб и К7 означают, независимо один от другого, Н или (С1-С6)алкильную группу;
К8 и К9 означают, независимо один от другого, Н или (С1-С6)алкильную группу;
К10 означает Н или по меньшей мере один заместитель фенильного кольца, выбранный из: группы (С1-С4)алкокси, атома хлора;
Кп означает Н или по меньшей мере один заместитель фенильного кольца, выбранный из (С1-С4)алкильной группы;
при этом моноклональное антитело и производное криптофицина ковалентно соединены и место их соединения находится в орто(о)-, мета(м)- или пара(п)-положении на фенильном кольце, несущем звено СК1.
орто(о)-, мета(м)- или пара(п)-Положения.
где К3 означает (С1-С6)алкильную группу, более конкретно Μβ;
К6 и К7 означают, независимо один от другого, Н или (С1-С6)алкильную группу; более конкретно они означают, независимо один от другого, Н или группу Μβ;
К8 и К9 означают, независимо один от другого, Н или (С1-С6)алкильную группу; более конкретно К8 означает Н и К9 означает изобутил;
Κι0 представляет собой Н или по меньшей мере один заместитель фенильного кольца, выбранный из группы -ОН, (С1-С4)алкоксигруппы, атома хлора. Более конкретно на фенильном кольце имеется два заместителя в положении 3 и 4. Предпочтительно ими являются 3-С1 и 4-метокси. Кп представляет собой Н или по меньшей мере один заместитель фенильного кольца, выбранный из (С1-С4)алкильной группы; более конкретно Н.
- 4 024627
В более конкретном случае можно выбрать один из заместителей К3 и Кб-Кц среди тех, которые описаны в примерах. Каждый заместитель К3 и Κβ-Κπ может также принять одну из пространственных конфигураций (например, К или δ или же Ζ или Е), как описано в примерах.
Связывание производного криптофицина с моноклональным антителом осуществляется через линкер Ь, занимающий орто(о)-, мета(м)- или пара(п)-положение на фенильном кольце, несущем звено СК/ так, производное криптофицина, способное к конъюгированию, имеет формулу (II)
Место соединения с моноклональным антителом находится на другом конце линкера Ь на уровне реакционноспособной группы, имеющейся на моноклональном антителе. Так, Ь содержит по меньшей мере одну химическую реакционноспособную группу (ССК1) напротив химической реакционноспособной группы (ССК2), имеющейся на моноклональном антителе. Взаимодействие между ССК1 и ССК2 обеспечивает связывание соединения формулы (II) с моноклональным антителом посредством образования ковалентной связи. Таким путем производное криптофицина формулы (II) способно конъюгироваться с моноклональным антителом.
Производные криптофицина согласно настоящему изобретению, в том числе производные криптофицина согласно примерам, могут существовать в форме оснований или кислотно-аддитивных солей с кислотами, в частности с фармацевтически приемлемыми кислотами.
В качестве примеров группы ССК1 можно назвать:
(ί) реакционноспособную группу -δΖα, в которой Ζ,, означает Н или группу -δΚ,,. где Ка означает группу (С1-С6)алкил;
(ίί) реакционноспособную группу -ί’(=ϋ)-Ζ|:ιΚ|, в которой Ζ|:, означает простую связь, -О- или -ΝΗ-, более конкретно -0-, и К| означает Н или группу (С1-С6)алкил.
Более конкретно -δΖα может означать -δΗ или -δδ(С1-С6)алкил, в частности -δδΜе. Более конкретно -Ζ|:Κ|:, может означать -ОН, -ОСН3. Более конкретно группа ССК1 может быть выбрана из тех групп, которые описаны в примерах.
В качестве примера ССК2 можно назвать ε-аминогруппы лизинов, находящиеся на боковых цепях лизиновых остатков, которые имеются на поверхности антитела, сахаридные группы соединительной цепи или тиольные группы цистеинов, образующиеся восстановлением дисульфидных межцепочечных связей (Сагпс!! М.С., с! а1., Абтапссб Эгид ЭсПусгу Кс\ас\У5 2001, 53, 171-216). В последнее время появились другие технические решения, такие как введение цистеинов путем мутации (1ипи!и1а ЕК. с! а1., ΝαШгс В|о1ссНпо1оду 2008, 26, 925-932; АО09026274) или введение аминокислот не природного происхождения другими химическими методами (СгааГ А.Е с! а1., Вюсопщда!с СНст. 2009, РиЬПсаНоп Оа1с (Ас|): февраль, 3, 2009 (КсуюА); Ό0Ε 10.1021/|с800294а; АО 2006/069246 и согласно СЫп ЕА., с! а1., 1АС8 2002, 124, 9026-9027 (технология КсСобс®)). Все эти используемые варианты связывания с антителами можно применять ко всем известным моноклональным антителам в зависимости от их структуры.
Можно также химически модифицировать моноклональное антитело так, чтобы можно было ввести новые химические реакционноспособные группы ССК2. Так, специалисту известно, каким путем можно модифицировать антитело с помощью модифицирующего агента (см., в частности, АО 2005/077090, с.14). Модификация позволяет улучшить реакцию конъюгирования и использовать более разнообразные виды групп ССК1.
Модифицирующие агенты, позволяющие вводить дисульфидные группы.
Модифицирующим агентом может быть активированный сложный эфир ΝΗδ формулы о о !—'·.
Р ,8--А1К-И. N.. /
О ό
Г в которой К означает группу (С1-С6)алкил и АЬК означает (С1-С6)алкиленовую группу; например, можно ввести реакционноспособные дитиопиридильные группы ССК2 (см. Воигбоп М.А., с! а1., ВюсНст. I. 1978, 173, 723-737; υδ 5208020), которые затем можно ввести во взаимодействие с химической реакционноспособной группой ССК1 типа -δΗ, находящейся на линкере производного криптофицина, с образованием новой связи -δ-δ- (см. пример 9 конъюгата, имеющего дисульфидную связь). Ν-гидроксисукцинимидная группа взаимодействует предпочтительно с аминогруппами, имеющимися на антителе, с образованием амидных связей.
Модифицирующие агенты, позволяющие вводить малеимидные группы.
Другим примером модифицирующего агента является сукцинимидил-4-^малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат ^МСС), аналогичное ему соединение описано в ЕР 0306943, или сульфо^МСС (сульфосукцинимидил-4-^-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат). В
- 5 024627 качестве других примеров можно назвать г „ ϊ такое как Ν-сукцинимидил-З-малеимидопропаноат;
« ’Ά такое как М-сукцинимидил-6-(3-малеимидопропионамидо)гексаноат; ''·% где Ь означает целое число между 0 и 2000, предпочтительно между 1 и 200 (Ь может принимать любые значения между 0 и 2000), такое как М-сукцинимидил-3-(2-{2-[3малеимидопропиониламино]этокси}этокси)пропаноат или 5М(ПЭГ)2; Э ! Уу такое как Νсукцинимидилмалеимидоэтилсукцинат;
такое как
М-сукцинимидил-4-(4малеимидофенил)бутаноат или 6 . такое как Ν-сукцинимидил-З-малеимидобензоат.
Модифицирующие агенты, позволяющие вводить галогенацетамидные группы.
Другим примером модифицирующего агента является сукцинимидил-4-(И-иодацетил)аминобензоат (δΙΑΒ) - ” . или аналогичные соединения, среди которых сукцинимидил-И-иодацетат (δΙΑ) ° ° % сукцинимидил-И-бромацетат (δΒΑ), или сукцинимидил-3-(М-бромацетамидо)пропионат (δΒΑΡ), или (Д, X аналогичное пэгилированное соединение, описанное в \¥О 2009/134976 а ° где Ь имеет указанные выше значения. На фиг. 1 и 2 иллюстрирован способ модификации аминогруппы моноклонального антитела с помощью δΡΌΡ или предпочтительного вышеупомянутого иминотиолана.
Таким путем можно вводить в моноклональные антителодисульфидные (-δδΚ) группы ОСК2, в случае, когда ОСК1 означает -δΗ. Аналогично этому, можно ввести в моноклональное антителотиольные (-δΗ) группы ОСК2, в случае, когда ОСК1 означает дисульфид. В обоих случаях ковалентная связь, образующаяся в результате реакции между ОСК1 и ОСК2, представляет собой расщепляемую дисульфидную связь.
Возможно также, в случае, когда ОСК1 означает -δΗ, ввести на поверхность моноклонального антителагруппы ОСК2 типа малеимидо < > или иодацетамидо • И, наоборот, можно ввести в моноклональное антитело тиольные (-δΗ) группы ОСК2, например, с помощью иминотиолана, в случае, когда
ОСК1 означает ° или °
В этом случае ковалентная связь, образующаяся в результате реакции между ОСК1 и ОСК2, представляет собой нерасщепляемую сульфидную связь.
Таблица Ι
Примеры модификаций агента клеточного связывания в случае, когда ΟΤ’Β1=-δΖα
д - Число функциональных групп ОСК2 на модифицированном моноклональном антителе; ά - число производных криптофицина, связанных с моноклональным антителом МАЬ;
I,* - такой фрагмент линкера I,. содержащего ОСК1 -δΖ,,. чтобы I, -Ι+δΖ,,.
-Ь
В случае, когда ОСК1 означает реакционноспособную группу малеимидо > или гелогенацетамидо ° > где К12 означает Н или (С1-С6)алкил, более конкретно Ме, производное криптофицина может быть представлено нижеописанной формулой (11а) или (11Ь)
где Ь* означает такой фрагмент линкера, чтобы Ь—Щ-малеимидо или Ь-Щ-иодацетамидо.
- 6 024627
Производным криптофицина из серии С-52 и С-1 может быть одно из следующих производных:
или эквивалентное звено, описанное в одном из примеров.
Более конкретно Ь находится в пара-положении к звену СК1. Способ получения производных криптофицина
Соединения формулы (II) получают согласно схеме 1 из производного криптофицина формулы (III) и предшественника линкера (РП).
где С означает группу -СН=СН2, -(СН2)ПУ или -(С1-С6)алкилен-У, где η является целым числом от 1 до 6, и Υ означает -ОН, -8Н, -С1, -ОСР, где СР означает уходящую группу, такую как, например, мезилатная (ΟΜδ) или тозилатная группа, или Υ означает -Ν3, ΝΗ2, -СООН, -ЛК.12-СН2-С=СН, в которой К12 означает Н или (С1-С6)алкильную группу, более конкретно метильную группу. Предшественник линкера РЬ выполняет роль, заключающуюся во введении линкера Ь в производное криптофицина после взаимодействия группы С с химической функциональной группой, находящейся на РЬ.
С может также означать группу выбираемую из 9 сле(т.е. Υ означает группу *' дующих групп (К12 и К'12 означают Н или (С1-С6)алкильную группу)
или -(СН2)П-8Н.
Согласно схеме 1 для получения производного криптофицина (II) из производного криптофицина (III) могут быть необходимы несколько стадий и/или реакций. Так, например, в случае, когда Ζα=4, предпочитают вводить линкер Ь, в котором 2а=-§(С1-С6)алкил, используя соответствующий предшественник линкера, затем восстанавливают дисульфидную функциональную группу 88(С1-С6)алкил до тиольной функциональной группы -8Н. Для этого можно использовать, например, ТСЕР: в этой связи см. Вигп5 ТА., е! а1., I. Огд. СЬет. 1991, 56(8), 2648-2650. Это превращение -88 (Ц-СДалкил -8Н может применяться, например, к линкерам Ь1-4 и Ь21-23 табл. II.
Схемы 1' и 1 иллюстрируют также получение производного криптофицина, включающего линкер, содержащий соответственно группу малеимидо или иодацетамидо (Ь* означает такой фрагмент линкера Ь, чтобы Е=-Ь*-малеимидо или Е=-Ь*-иодацетамидо).
Схема 1'
Эти производные получают взаимодействием производного криптофицина, включающего линкер Ь', содержащий амино- или тиольную группу, с модифицирующим агентом, позволяющим ввести соответственно малеимидо- или иодацетамидогруппу.
- 7 024627
Примеры реакций между группой С и химической функциональной группой, находящейся на РЬ.
Реакция нуклеофильного замещения между предшественником линкера РЬ, несущим аминогруппу -ΝΗ- (может быть использована также соль амина) и С=-(СН2)ПС1 или -(СН2)пОМк (см., например, табл. II, РЬ1-4, РЬ7а, РЬ8-1о, РЬ21-2з): эту реакцию можно проводить в полярном апротонном растворителе в присутствии основания, такого как, например, ТЕА или ОГРЕА; см. пример 1, соединение 7 или пример 15, соединение 48.
Реакция ацилирования между предшественником линкера РЬ, несущим функциональную карбамоилгалогенидную группу, и С=-(СН2)пОН (см., например, табл. II, РЬ5): эту реакцию можно вести в полярном апротонном растворителе в присутствии аминного основания, такого как, например, ТЕА.
В соответствии с вариантом можно также осуществить реакцию между предшественником линкера РЬ, несущим функциональную аминогруппу -ΝΗ-, и С=-(СН2)пО-С(=О)-О-(4-нитрофенил), полученным из С=-(СН2)пОН и п-нитрофенилхлорформиата (активация спирта в форме карбоната) согласно схеме, представленной ниже: (К12=Н или (С1-С6)алкил):
-ΝΗΚ12 + крипто-(СН2)пО-С(=О)-О-(4-нитрофенил) крипто-(СН2)пО-С(=О)^К12-активация спирта в форме карбоната может быть также использована для осуществления реакции между предшественником линкера, несущим функциональную группу -ОН, и С=-(СН2)пМН2 или -(СН2)пОН для получения соответственно карбаматной (-О-С(=О)-МН-) или карбонатной (-О-С(=О)-О-) функциональной группы согласно соответственно следующим схемам:
-О-С(=О)-О-(4-нитрофенил) + крипто-(СН2)пМН2 крипто-(СН2)пМН-С(=О)-О-,
-ОН + крипто-(СН2)пО-С(=О)-О-(4-нитрофенил) крипто-(СН2)пО-С(=О)-О- (см., например, табл.
П, ΡΡ·6,ι-6Η· РР'2-1-25) реакция этерификации между предшественником линкера РЬ, несущим функциональную кислотную группу -СООН, и С=-(СН2)пОН (см., например, табл. II, РЬ14Ь): эту реакцию можно вести в полярном апротонном растворителе в присутствии аминного основания, такого как, например, ОМАР, и сочетающего агента, например ЭСС;
реакция амидирования между предшественником линкера РЬ, несущим функциональную кислотную группу -СООН, и С=-(СН2)пМН2 (см., например, табл. II, РЬ14а): эту реакцию можно вести в полярном апротонном растворителе в присутствии сочетающего агента, например ЕЭС1 или НОВ!;
реакция амидирования между предшественником линкера РЬ, несущим функциональную группу -ΝΠ2, и С=-(СН2)пСООН (см., например, табл. II, РЬ7с): эту реакцию можно вести в полярном апротонном растворителе в присутствии сочетающего агента, например ЕЭС1 или НОВ!;
1,3-диполярное циклоприсоединение (в химии называемое также сйск реакцией), реакция между предшественником линкера РЬ, несущим терминальную алкиновую функциональную группу, и С=-(СН2)^3, или между предшественником линкера РЬ, несущим азидную функциональную группу, и С=-(СН2)пМК12-СН2С^СН (см., например, табл. II, РЬ15-18): эту реакцию можно вести в полярном растворителе в присутствии СиД) в качестве катализатора (см. циклоприсоединение по Хьюзгену: РокЮуйсу У.У., е! а1., Апдем.СйетТпкЕб. 2002, 41, 2596-2599; Тогпое С.^., е! а1., Ютд.СЬет. 2002, 61, 3057-3064);
метатезис, реакция между предшественником линкера РЬ, несущим терминальную этиленненасыщенную функциональную группу, и С=-СН=СН2 (см., например, табл. II, РЬ19, РЬ20): эту реакцию можно вести в полярном апротонном растворителе в присутствии катализатора Груббса 2-го поколения (САЗ №246047-72-3, см. об этой реакции Роеу1аи!-Ра1епа А.А. е! а1., ЕОтд.Сйет. 2008, 13, 2024-2027).
О линкере Ь.
Линкер Ь может быть выбран из следующих соединений:
К12 означает Н или (С1-С6)алкильную группу;
2а означает Н или группу -ЗКа, где Ка означает группу (С1-С6)алкил;
Ζ|. означает простую связь, -О- или -Ν4-, причем КЬ означает Н или группу (С1 -С6)алкил;
где группу -3Ζ3 или -С(=О)^ЬКЬ обозначают как химическую реакционноспособную группу (ССК.1).
Получение соединений формулы (III), когда С=-(СН2)пОН или -СН=СН2.
- 8 024627
Схема 2
Ρ1 получают согласно сведениям, содержащимся в заявках \νϋ 98/08505, \νϋ 00/23429 и \νϋ 00/34252, а также в следующих публикациях: Ке.) К., е! а1., 1. Огд. СЬет. 1996, 61, 6289-6295; 8а1атопс/ук С.М., е! а1., 1. Огд. СЬет. 1996, 61, 6893-6900 или 1. Меб. СЬет. 1999, 42(14), 2588-2603 (включены в описание в качестве ссылок). На с. 158-159 публикации ТЬе 1во1аЬои, сНагас!еп/а!юп апб беуе1ортей о£ а поуе1 с1ав5 о£ ро!еп! апйтйойс тасгосусЬс берв1рерЬбев: !Ье стурФрЬутпв, глава 9, в ЛпЬсапсет адейв £тот па!ига1 ртобийв, Тау1от&Ртапсе, СКС ртевв Ьоок, 1вЬп=0-8493-1863-7. даны схемы синтеза, позволяющего получить различные фрагменты (А, В, С и И) криптофицина и получить в результате Ρ1. Авторами Ке.) К., е! а1., 1. Огд. СЬет. 1996, 61, 6289-6295 изображен на схемах 1-6 путь получения одного из производных криптомифицина согласно фиг. 1, однако эти схемы могут быть применимы в случае получения Ρ1 с использованием иодиновых исходных реагентов.
Ρ1 позволяет получить другие производные криптофицина с помощью стадий, подробно описанных ниже.
Стадия (ί): раскрытие эпоксидного цикла Ρ1 в кислой среде с получением диольной функциональной группы. Можно использовать, например, концентрированную перхлорную кислоту.
Стадия (и): окислительное расщепление диола с помощью, например, периодата натрия.
Стадия (ίίί): реакция Виттига, использующая соответствующий галогенид фосфония, например бромид, и сильное основание, такое как, например, ВиЫ.
Стадия (ίν): реакция эпоксидирования Кори-Чайковского с использованием хиральной соли сульфония, например трифлата, в присутствии основания, такого как, например, КОН.
Стадия (ν): снятие защиты с силилированного простого эфира, используя, например, раствор тетрабутиламмонийфторида.
Бромид 4-(триизопропилсилоксиметил)бензилтрифенилфосфония получают из 1-(бромметил)-4(триизопропилсилоксиметил)бензола (СА8№ 934667-38-6), получение которого из 1,4-бензолдиметанола (СА8№ 589-29-7, рыночный продукт) описано Ьо!!ег К.О., е! а1., Огдашс Ьейетв 2007, 9(7), 1187-1190. Соединения, в которых К11 означает (С1-С4)алкильную группу, получают аналогичным способом, исходя из соответствующего диола, который либо является рыночным продуктом, либо получают С-алкилированием по Фриделю-Крафтсу из 1,4-бензолдиметанола.
Исходя из 1-(бромметил)-4-(триизопропилсилоксиметил)бензола (СА8№ 135408-73-0), получение которого описано на схеме 4а патента ЕР 0496548, или на странице 83 статьи №νίίί С.К. Ьу е! а1., Вюогдатс & Меб. СЬет. Ьей. 1991, 1(1), 83-86, можно получить соответствующий бромид фосфония. Соединения, в которых К11 означает (С1-С4)алкильную группу, получают аналогичным способом, исходя из соединения, эквивалентного соединению 1, описанному на странице 83 статьи №νίίί С.К. ίτ., е! а1., Вюогдатс & Меб. СЬет. Ьей. 1991, 1(1), 83-86, которое либо является рыночным продуктом, либо получают С-алкилированием по Фриделю-Крафтсу из п-толуолуксусной кислоты.
Трифторметансульфонат (1К,4К,5К,6К)-4,7,7-триметил-6-(4-винилбензил)-6-тиониабицикло[3.2.1]октана, используемый на стадии (ίν), получают из (1К,4К,5К)-изотиоцинеола (см. Аддаг\уа1 V. е! а1., 1АС8 2010, 132, 1828-1830), получение которого из (К)-лимонена (СА8 № 95327-98-3), рыночный продукт) описано в этой же самой ссылке.
Бромид трифенил(п-винилбензил)фосфония (СА8 № 118766-51-1) получают из соответствующего бромпроизводного (см. Ите£аЬ1 О., е! а1., СЬет.Вег. 1961, 94(8), 2002-2010), получение которого из 4винилбензилового спирта (СА8 № 1074-61-9, рыночный продукт) описано в статье 81йтотига О., е! а1., ТейаЬебгоп 2005, 61, 12160-12167.
Исходя из Р7 или Р8, которые являются соединениями формулы (III), в которых О=-(СН2)п ОН, можно получить другие соединения формулы (III), имеющие другие группы О.
- 9 024627
Случай, когда О=-(СН2)ПС1 или -(ΟΗ2)ηΝ3.
Схема 3
Исходя из группы О=-СН2ОН можно получить группы О=-СН2С1 или -ί'Ή2Ν3: введение -С1 может быть осуществлено в присутствии СМ8: см. пример 1, соединение 2; азидирование может быть осуществлено в присутствии дифенилфосфоразида (ΡΠΟ)2Ρ(=Ο)Ν3 и основания, например ИВИ. Схема 3 описывает эти реакции для случая, когда п=1, но способ может быть также применен для случая, когда η>1.
Случай, когда О=-(СН2)ПСООН.
Схема 4
Исходя из группы О=-СН2ОН можно получить группу О=-СН2СООН путем окисления. Схема 4 описывает двойное окисление: 1-е окисление с помощью реагента Десс-Мартина (см. Епсус1ореФа οί КеадепЩ ίοτ Отдашс 8уп!Ье515; Расщепе Ь.Л., Εά.; \УПеу: СЬ1сЬе8!ег, ИК, 1995, т. 7, 4982-4987 или Воесктап К.К. ίτ., е! а1., ТТ ТЬе Ие88-Магйп РетюДшапе Огд. 8уп!Ь. 2004, 10, 696-702), и последующее 2-е окисление по типу Ршшск в присутствии 2-метил-2-бутена (Р1пп1ск Н.\У.. ТейаЬеДтоп 1981, 37, 20912096). Схема 4 описывает эти реакции в случае использования исходного соединения, когда п=2, но этот способ применим также для п>2.
Случай, когда Ο=-(СΗ2)ηNΗ2.
Схема 5
ΥΧ ул н» а, кен ,СЁР т
Исходя из группы О=-СН^3, получение которой описано на схеме 3, можно получить группу Ο-Ο^Ν^ с помощью реакции восстановления, используя фосфин, такой как ТСЕР; см. об этой реакции РаисЬет А.-М. е! а1., 8уп!Ье!ю Сотт 2003, 33, 3503-3511.
Схема 5'
Согласно варианту исходя из группы О=-СН2ОН можно получить группу Ο=-СΗ2NΗ2 с помощью реакции Мицунобу, используя трифенилфосфин и ΌΕΑΌ. Об этой реакции см. МЬъипоЪи О., 8уп!Ье818 1981, 1-28; НидЬек Ό.Ό., Огд. КеасЬопк 1992, 42, 335-656; НидЬек Ό.Ό., Огд. Ргер. 1996, 28, 127-164. Схемы 5 и 5' описывают случай, когда п=1, но они могут быть применены также для п>1.
Случай, когда О=-(СН2)1пЖ12-СН2С=СН.
Исходя из группы О=-(СН2)пС1 можно получить группу О=-(СН2)п-ИК12-СН2-С^СН с помощью нуклеофильного замещения, используя соединение формулы NΗΚ12-СΗ2-СΞСΗ (К12=Н:пропаргиламин; Рз2=(С1-С6)алкил: получено согласно Моск \У.Е, е! X, ί. Огд. СЬет. 1989, 54, (22), 5302-8).
Случай, когда О=-(СН2)п-8Н.
Схема 6
Исходя из группы О=-(СН2)пС1 можно получить группу О=-(СН2)п8Н прямой функционализацией с помощью триметилсилилтиолата тетрабутиламмония, получаемого ш 5Пи из тетрабутиламмонийфторида
- 10 024627 и гексаметилдисилатиана согласно Ни 1. е! а1., 1. Огд. СЬет. 1999, 64, 4959-4961 (см. пример 8). Схема 6 описывает эту реакцию для случая, когда п=1, но способ может быть применен также для п>1. В процессе этой реакции может образоваться промежуточный димер формулы
Случай, когда С=-АЬК-8Н.
Схема 7
Р3 позволяет получить другие производные криптофицина согласно схеме 7.
Стадия (ί): реакция Виттига с использованием подходящего галогенида фосфония, например бромида, и сильного основания, например ВиЫ.
Стадия (ίί): сочетание Кумады с использованием подходящего реактива Гриньяра, например бромида алкоксимагния, защищенного в форме силилированного простого эфира, в присутствии палладиевого или никелевого катализатора (см., например, Огдатс ЬеИегз 2009, 11, 5686-5689 или §уп1Ьез1з 2009, 141, 2408-2412).
Стадии (ίίί)-(ν) описаны на схеме 2, а стадия (νί) описана на схеме 6.
Бромид (4-бромбензил)трифенилфосфония является рыночным продуктом (СА8 № 51044-13-4). Бромиды алкоксимагния, защищенные в форме силилированного простого эфира, могут быть получены из соответствующих бромспиртов путем защиты спиртовой группы соответствующим хлорсиланом с последующим получением магнийорганического соединения в присутствии магния, в апротонном полярном безводном растворителе, таком как ТГФ (см., например, Огдатс ЬеИегз 2005, 7, 183-186). Бромспирты, линейные или разветвленные, содержащие 1-6 атомов углерода, являются коммерчески доступными, такие как 3-бром-1-пропанол (СА8 №627-18-9) или 1-бром-2-пропанол (СА8 № 19686-73-8), или могут быть получены из соответствующих сложных бромэфиров или бромкетонов согласно способам, описанным в литературе. Хлорсиланом может быть, например, трет-бутилдиметилхлорсилан (СА8 № 18162-48-6) или триизопропилхлорсилан (СА8 № 13154-24-0).
Случай, когда С=-(СН2)п-малеимидо.
Схема 8
В дополнение к схеме 1', которая описывает способ получения производных криптофицина, содержащего малеимидное звено, и исходя из группы С=-СН2ОН можно получить группу
осуществляя реакцию Мицунобу в присутствии трифенилфосфина и ПЕАН согласно МаШз/ак N. е! а1., 1. Меб. СЬет. 2009, 52, 7410-7420. Схема 8 описывает эту реакцию для случая, когда п=1, но она применима и к случаю, когда п>1.
На схемах 1-8, представленных выше, линкер находится в пара-положении, однако эти схемы одинаково действительны для линкеров в орто- или мета-положениях. Аналогично этому, хотя эти схемы приведены для производного криптофицина, они применимы для получения других производных формулы (II), в частности Όι-Ό8.
В частности, в случае С-52 можно использовать следующие соединения, получение которых описано в А1-а^аг К8., е! а1., 1. Меб. СЬет. 2003, 46, 2985-3007 или в АО 9808505
- 11 024627
С1
ОМе
О=-СН2ОН: соединение 31Ь схемы 5 С=-СН2СН2ОН: соединение 49 схемы 9 соединение 51 схемы 9 в НО 9808505
С=-СН2СООН: или пример <3=-С(=О)Н: пример 80 в НО 9808505
С другой стороны, исходя из соединения 31Ь, у которого С=-СН2ОН, можно получить соединения, у которых С=-СН2С1 или -СН2Ы3:
С=-СН2С1: см. пример 1, соединение 2;
О=-СН2Ы3: конверсия -СН2ОН в -СН2Ы3 может быть осуществлена в полярном апротонном растворителе в присутствии дифенилфосфоразида и основания, такого как ΌΒυ, см. пример 19, соединение 60.
С=-СН2малеимидо: конверсия -СН2ОН в -СН2малеимидо может быть осуществлена в полярном апротонном растворителе в присутствии малеимида, трифенилфосфина и ΌΕΛΌ.
Сведения, изложенные в I. Меб. Сйет. 2003, 46, 2985-3007, могут быть применены для получения других производных криптофицина, содержащих другие заместители К6-К9.
Получение предшественников линкера РЬ.
РЬ может быть одним из следующих предшественников:
О
-·...
2аЫЧ.К N >
Г,, I ΝΜ
РЬ1 ' получаемый согласно нижеописанной схеме
νη а
Стадия (ί): активация кислоты с помощью ΝΉδ; активацию проводят при КТ в присутствии сочетающего агента, такого как, например, гидрохлорид 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида, растворенного в безводном апротонном растворителе, таком как ΌίΜ. Можно использовать условия примера 1 получения соединения 4.
Стадия (ίί): амидирование Ν-Вос-пиперидином; пептидное сочетание осуществляют в полярном апротонном растворителе при КТ в присутствии основания, которым может быть третичный амин, такой как ΤΕΑ или ΌΙΡΕΆ. Растворителем может быть ΌΜΡ. Можно использовать условия примера 1 для получения соединения 5.
Стадия (ίίί): реакция снятия защиты с амина при помощи раствора кислоты, например соляной кислоты (например, растворенной в диоксане). Можно использовать условия примера 1 получения соединения 6.
Исходная кислота, например 4-метил-4-(метилдитио)пентановая кислота, может быть коммерчески доступна или получена из галогенсодержащей карбоновой кислоты путем последовательных обработок тиоацетатом калия и производным типа метантиосульфоната; см. также υδ 2719170.
РЬ2 получаемый согласно нижеописанной схеме
Стадия (ί): восстановительное аминирование с помощью альдегида; реакцию осуществляют при КТ в безводном полярном апротонном растворителе, таком как ТНР, в две стадии: образование промежуточного комплекса в присутствии изопропоксида титана, затем восстановление ίη δίΐιι восстановительным агентом, таким как, например, цианборгицрид натрия. Можно использовать условия примера 5 получения соединения 17.
Стадия (ίί): реакиия снятия защиты с амина при помощи раствора кислоты, например соляной кислоты (например, растворенной в диоксане). Можно использовать условия примера 5 получения соединения 18.
Исходный альдегид, например 2-метил-2-(метилдитио)пропаналь, может быть коммерчески доступен или получен окислением спирта, несущего дисульфидное звено, получаемого из галогенсодержащего спирта, защищенного должным образом (например, в форме силилированного простого эфира), в результате последовательных обработок тиоацетатом калия и производным типа метантиосульфоната.
РЬ3 2а§-АЬК-МНК.12, получаемый согласно нижеописанной схеме.
В случае, когда К.12=Н.
Стадия (ί): образование оксима; описанный выше альдегид растворяют в полярном протонном растворителе, таком как этанол, затем обрабатывают гидрохлоридом О-метилгидроксиамина при нагревании с обратным холодильником в присутствии основания, такого как гидроксид натрия. Можно исполь- 12 024627 зовать условия примера 3 получения соединения 11.
Стадия (ίί): восстановление оксима; оксим восстанавливают обработкой при нагревании с обратным холодильником раствором диметилсульфидборана в безводном полярном апротонном растворителе, таком как ТНР. Можно использовать условия примера 3 получения соединения 12.
В случае, когда К12^Н о инн,,
Л и м газ АГК- Н ♦ μ Ν --- гаЗ-АЬК
Стадия (ί): восстановительное аминирование с помощью альдегида; реакцию осуществляют при КТ в безводном полярном апротонном растворителе, таком как ТНР, в присутствии восстановительного агента, такого как, например, триацетоксиборгидрид натрия.
Λ3ΑΙ.Κ ' ψ '(
РЬ4 ’' получаемый согласно нижеописанной схеме
Этот линкер получают аналогично способу, описанному для РЬ2.
Стадия (ί): восстановительное аминирование с помощью альдегида; реакцию осуществляют при КТ в безводном полярном апротонном растворителе, таком как ТНР, в две стадии: образование промежуточного комплекса в присутствии изопропоксида титана, затем восстановление ίη вЬи восстановительным агентом, таким как, например, цианборгидрид натрия. Можно использовать условия примера 5 получения соединения 17.
Стадия (ίί): реакция снятия защиты с амина с помощью раствора кислоты, например соляной кислоты (например, растворенной в диоксане). Можно использовать условия примера 5 получения соединения
18.
РЬ5 иаах»А1.к ω«.«-«»!„ а, получаемый согласно нижеописанной схеме
ΒΓ-ΑίΚ-Ν(ΒθΟΡ12 (О
ΗΟ-ΑίΚ-ΝΗΚ,2 --► ΗΟ-ΑΙΚ Ν(Βοο)Κ12
ΜδΟ-ΑΙ,Κ“Ν(Βοο)Κ12
Стадия (ί): снятие защиты с амина; реакцию осуществляют при КТ в полярном апротонном растворителе, таком как ЭСМ. обработкой амина ди-трет-бутилдикарбонатом в присутствии основания, такого как, например, ТЕА.
Стадия (ίί): превращение спирта в бромид; реакцию осуществляют при КТ в полярном апротонном растворителе, таком как ТНР, обработкой спиртовой функциональной группы при помощи СВг4 в присутствии фосфина, например трифенилфосфина; см. об этом Арре1 К. Апдете. СЬет. ίηΐ. Ей. Епд1. 1975, 14, 801-811 или Эевтапв Ν., е! а1., ТеЦаЬейгоп Ьейегв 2003, 44(41), 7589-7591.
Стадия (ίίί): замещение бромида тиоацетатом; реакцию осуществляют при КТ в безводном полярном апротонном растворителе, таком как ЭМР, используя в качестве нуклеофила тиоацетат калия.
Стадия (ίν): образование дисульфидной связи; реакцию осуществляют в полярном протонном безводном растворителе, таком как метанол, в присутствии основания, такого как, например, метанолят натрия, и реагента, содержащего пиридилдисульфидное звено.
Согласно варианту стадия (ν): активация спирта в форме мезилата; реакцию осуществляют в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ЭСМ, обработкой мезилхлоридом в присутствии основания, такого как, например, ТЕА;
стадия (νί): образование свободного тиола; реакцию осуществляют при нагревании с обратным холодильником в полярном протонном растворителе, таком как смесь этанола/воды, в две стадии, осуществляемые последовательно: замещение мезилата на тиомочевину, затем гидролиз ίη βίΐπ соли изотиоурония путем добавления основания, такого как ΝαΟΗ;
стадия (νίί): активация тиола в форме пиридилдисульфида; реакцию осуществляют при КТ в полярном протонном растворителе, таком как этанол, при обработке реагентом, содержащим пиридилдисульфидное звено, в присутствии кислоты, такой как уксусная кислота;
стадия (νίίί): снятие защиты с амина при помощи раствора кислоты, например соляной кислоты (например, растворенной в диоксане);
стадия (ΐχ): активация амина в форме карбамоилхлорида; реакцию осуществляют в безводном полярном апротонном растворителе, таком как ЭСМ, путем обработки дифосгеном в присутствии основания, такого как ТЕА.
РЬ6 КЬ2Ь-ОС-АЕК-(ОСН2СН2)1-ОН, получаемый согласно нижеописанной схеме.
В случае, когда АЬК=СН2СН2
- 13 024627 путь А путь В
Стадия (ί): снятие защиты с помощью раствора соляной кислоты (например, раствора в диоксане) или трифторуксусной кислоты.
Стадия (и): защита карбоновой кислоты в форме сложного аллилового эфира; реакцию осуществляют при КТ в полярном апротонном растворителе, таком как, ΌΜΡ, в присутствии аллилбромида и основания, такого как карбонат калия.
Стадия (ίίί): элонгация ПЭГ цепи; реакцию осуществляют в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ТНР, путем обработки ненасыщенной кислоты, защищенной в форме сложного эфира, алкоголятом, генерируемым под действием натрия в каталитическом количестве.
В случае, когда АЬК^СН2СН2
I ΐ Г Λ Ί -ί1»' I П о дьк-на* нр Цогнр Ά о'ди< г
Ц-ОТНР о
. д 0 Μ.Κ {о- 4е
Стадия (ίν): элонгация ПЭГ цепи; реакцию осуществляют в безводном полярном апротонном растворителе, таком как ТНР или ИМР, путем обработки галогенированного сложного эфира алкоголятом ПЭГ диола, монозащищенного в форме простого эфира тетрагидропирана (ТНР). Получение этого типа монозащищенного ПЭГ диола описано в литературе, см., например, КюЬатб А. е! а1., Сйет. Еиг. ί. 2005, 11, 7315-7321 или 8аке11атюи Е.С., е! а1., Те1гайеагоп 2003, 59, 9083-9090.
ПЭГ спирты, содержащие кислотную функциональную группу, защищенную в форме сложного трет-бутилового эфира, коммерчески доступны (такой как трет-бутил-12-гидрокси-4,7,10триоксадодеканоат) или их получают из трет-бутилакрилата и ПЭГ диола. Исходные ПЭГ диолы коммерчески доступны для 1=3-12.
РЬ7 Β6ΖΒ-Οί.’-ΑΡ1<-(ΟίΉ2ίΉ2)ι-ΝΗΒι2. получаемый согласно нижеописанным схемам.
В случае, когда АЬК=СН2СН2
Случай, когда К12=Н.
Случай, когда К ^Н
В случае, когда АЕК^СН2СН2. Случай, когда К12=Н
Случай, когда К ^Н
Стадия (ί): защита карбоновой кислоты в форме сложного аллилового эфира; реакцию осуществляют при КТ в полярном апротонном растворителе, таком как, ИСМ, в присутствии аллилового спирта, сочетающего агента, такого как ЕИС1, и основания, такого как ИМАР. Можно использовать условия примера 14 получения соединения 42.
Стадия (ίί): снятие защиты с помощью раствора соляной кислоты (например, раствора в диоксане) или трифторуксусной кислоты. Можно использовать условия примера 14 получения соединения 43.
- 14 024627
Стадия (ίίί): алкилирование атома азота; реакцию осуществляют в безводном полярном апротонном растворителе, таком как ТНР, путем обработки основанием, таким как NаΗ, в присутствии реагента, несущего уходящую группу (нуклеофуг), такого как алкилгалогенид. Можно использовать условия примера 15 получения соединения 46.
Стадия (ίν): элонгация ПЭГ цепи; реакцию осуществляют в безводном полярном апротонном растворителе, таком как ТНР или ЭМР, путем обработки галогенированного сложного эфира алкоголятом бензофенонимин-ПЭГ-спирта, генерируемого под действием NаН или нафталенида калия, как описано в АО 2007/127440;
Стадия (ν): омыление сложного эфира; реакцию осуществляют путем взаимодействия сложного эфира с гидроксидом лития в присутствии воды.
Стадия (νί): защита амина; реакцию осуществляют при КТ в полярном апротонном растворителе, таком как ЭСМ, путем обработки амина ди-трет-бутилдикарбонатом в присутствии основания, такого как, например, ТЕА.
Амин-ПЭГ-кислоты являются коммерчески доступными при 1=3, 5, 6, 10 или могут быть получены из трет-бутилакрилата и соответствующего амин-ПЭГ-спирта.
Амин-ПЭГ-спирты являются коммерчески доступными, например, при 1=3, 4, 7, 8 или могут быть получены из ПЭГ диолов, коммерчески доступных при 1=3-12, согласно процедуре, описанной в υδ 7230101. Защита аминофункции бензофеноном может быть осуществлена в процессе азеотропной дегидратации в присутствии кислоты Льюиса, такой как эфират ВР3.
РЬ2ЬОС-А1К (ОСН.СНЛ к .ΝΗ
РЬ8 ” ' получаемый согласно схемам, описанным ниже.
В случае, когда АЬК=СН2СН2.
Стадия (ί): снятие защиты с исходного соединения с помощью раствора соляной кислоты (например, раствора в диоксане) или трифторуксусной кислоты. Можно использовать условия примера 16 получения соединения 50.
Стадия (ίί): защита карбоксильной функциональной группы кислоты в форме сложного аллилового эфира; реакцию осуществляют при КТ в полярном апротонном растворителе, таком как ЭМР. в присутствии аллилбромида и основания, такого как карбонат калия. Можно использовать условия примера 16 получения соединения 51.
Стадия (ίίί): активация спирта в форме мезилата; реакцию осуществляют в безводном полярном апротонном растворителе, таком как ЭСМ, обработкой мезилхлоридом в присутствии основания, такого как ТЕА.
Вое N 5
Стадия (ίν): реакция между мезилатной и аминной функиональной группой соединения т (алкилирование); реакцию осуществляют при КТ в безводном полярном апротонном растворителе, таком как ЭСМ, в присутствии основания, такого как ТЕА. Можно использовать условия примера 16 получения соединения 52.
В случае, когда АЬК+СН2СН2.
Стадия (ν): элонгация ПЭГ цепи; реакцию осуществляют в безводном полярном апротонном растворителе, таком как ТНР или ЭМР, путем обработки галогенированного сложного эфира алкоголятом ПЭГ диола, монозащищенного в форме простого эфира тетрагидропирана (ТНР). Получение этого типа монозащищенного ПЭГ диола описано в литературе, см., например, МсЬагй А. е! а1., СЬет. Еиг. ί. 2005, 11, 7315-7321 или 5аке11апои Е.С., е! а1., Те!гаЬейгоп 2003, 59, 9083-9090.
ПЭГ спирты, содержащие кислотную функциональную группу, защищенную в форме сложного трет-бутилового эфира, коммерчески доступны (такой как трет-бутил-12-гидрокси-4,7,10триоксадодеканоат) или их получают из трет-бутилакрилата и ПЭГ диола. Исходные ПЭГ диолы коммерчески доступны при 1=3-12.
- 15 024627
РЬ9
' получаемый согласно нижеописанной схеме.
Стадия (ί): алкилирование амина; реакцию осуществляют в безводном полярном апротонном растворителе, таком как ацетонитрил, с использованием аллилгалогеналкилкарбоксилата, такого как аллилбромацетат, в присутствии основания, такого как, например, ТЕА. Можно использовать условия примера 13 получения соединения 38.
Стадия (ίί): снятие защиты с амина с помощью раствора кислоты, например соляной кислоты (например, растворенной в диоксане). Можно использовать условия примера 13 получения соединения 39.
Аллилгалогеналкилкарбоксилат может быть получен из аллилового спирта и соответствующего галогенацилгалогенида и может быть коммерчески доступным, когда АЬК=-(СН2)1-6- (такой как бромацетилбромид или 4-бутаноилхлорид).
О
Л гьдь-со-Αΐκ м ριτ к. .МН _
РЬю * получаемый согласно нижеописанным схемам.
В случае, когда АЬК=Сн2СН2.
В случае, когда АЬК^СН2СН2.
Стадия (ί): раскрытие циклического ангидрида; реакцию осуществляют при КТ в безводном полярном апротонном растворителе, таком как ЭСМ, в присутствии основания, такого как ТЕА.
Стадия (ίί): защита карбоновой кислоты в форме сложного аллилового эфира; реакцию осуществляют при КТ в полярном апротонном растворителе, таком как ЭСМ, в присутствии аллилового спирта, сочетающего агента, такого как ΕΌΟ, и основания, такого как ОМАР.
Стадия (ίίί): снятие защиты с помощью раствора соляной кислоты (например, раствора в диоксане).
Стадия (ίν): пептидное сочетание; реакцию между карбоновой кислотой и амином осуществляют при КТ в полярном апротонном растворителе, таком как ЭСМ, в присутствии сочетающего агента, такого как система ОКУНОВ!
Стадия (ν): омыление сложного метилового эфира; реакцию осуществляют при КТ в смеси полярных растворителей, такой как смесь ТНР/вода, в присутствии гидроксида лития.
Двухосновные кислоты, монозащищенные в форме сложного метилового эфира, являются коммерчески доступными при АЬК=-(СН2)1-6- (такого как сложный монометиловый эфир 1,6-гександиовой кислоты).
РЬП
В случае, когда АЬК=СН2СН2. Случай, когда К.12=Н.
получаемый согласно нижеописанным схемам.
Стадия (ί): образование амида и активация кислоты; осуществляют последовательно две стадии в полярном апротонном растворителе, таком как ΌΕΜ: реакцию между аминофункцией и Ν-гидроксисукцинимидил-галогенацетатом, затем введение ίη Юн сочетающего агента, такого как ΌΚ''. Можно использовать условия примера 17 получения соединения 56.
- 16 024627
Случай, когда К12+Н.
Стадия (ίί): защита карбоновой кислоты в форме сложного метилового эфира и амина в форме трифторацетамида; реакцию осуществляют в две последовательные стадии в полярном апротонном растворителе, таком как, ЭСМ: защита кислоты путем обработки триметилсилилдиазометаном в присутствии метанола, затем защита амина добавлением трифторуксусного ангидрида и основания, такого как ТЕА.
Стадия (ίίί): алкилирование амина и омыление сложного эфира; реакцию осуществляют в две последовательные стадии в среде полярного апротонного безводного растворителя, такого как ТНР: алкилирование амина обработкой основанием, таким как ΝαΗ, в присутствии реагента, несущего нуклеофуг, такого как алкилгалогенид К12На1, затем введение гидроксида лития и воды.
Стадия (ί): продолжение стадии (ίίί), повторяют реакции стадии (ί), описанные для случая К.12=Н.
В случае, когда АЬК+СН2СН2.
Случай, когда Κι2=Η.
Случай, когда К +Н
Стадия (ίν): элонгация ПЭГ цепи; реакцию осуществляют в безводном полярном апротонном растворителе, таком как ТНР или ΌΜΡ, путем обработки галогенированного сложного эфира алкоголятом бензофенонимин-ПЭГ-спирта, генерируемым под действием ΝαΗ или нафталенида калия (см. νθ 2007/127440).
Стадия (ν): селективное расщепление имина путем гидрирования в присутствии палладия на угле (см. Vе55^оЬаηη, Ь. е! а1., 8уйБе515 1989, 5, 359-63).
Стадия (νί): защита амина введением трифторуксусного ангидрида и основания, такого как ТЕА.
Амин-ПЭГ-кислоты являются коммерчески доступными при ί=3, 5, 6, 10, или могут быть получены из трет-бутилакрилата и соответствующего амин-ПЭГ-спирта.
Амин-ПЭГ-спирты являются коммерчески доступными, например, при ί=3, 4, 7, 8, или могут быть получены из ПЭГ диолов, коммерчески доступных при 1=3-12, согласно процедуре, описанной в И8 7230101. Защита аминофункции бензофеноном может быть осуществлена в процессе азеотропной дегидратации в присутствии кислоты Льюиса, такой как эфират ВР3.
РЬ2Ъ-СО-А1_К-(ОСН2СН-,)| ''ζ
РЬ12 ' где Ζ=Βτ или I, получаемый согласно нижеописанным схемам.
В случае, когда АЬК=СН2СН2 путь А путь В
- 17 024627
В случае, когда АЬК^СН2СН2.
4Хк|о -г — 4οΑ-4ο-4°)уы [θ'’ '·· |'Σ
О
Стадия (ί): активация спирта в форме мезилата; реакцию осуществляют в безводном полярном апротонном растворителе, таком как ЭСМ, путем обработки мезилхлоридом в присутствии основания, такого как ТЕА.
Стадия (ίί): обмен мезилат/галоген; реакцию осуществляют при нагревании с обратным холодильником в полярном апротонном растворителе, таком как ацетон, с использованием галогенида натрия, такого как иодид натрия.
Стадия (ίίί): снятие защиты с помощью раствора соляной кислоты (например, раствора в диоксане) или трифторуксусной кислоты.
Стадия (ίν): активация кислоты; реакцию осуществляют при КТ в полярном апротонном растворителе, таком как ЭСМ, путем обработки с помощью ΝΉ8 в присутствии сочетающего агента, такого как ИСС.
Стадия (ν): элонгация ПЭГ цепи; реакцию осуществляют в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ТНР, путем обработки ненасыщенной кислоты, защищенной в форме сложного эфира, алкоголятом, генерируемым под действием натрия в каталитическом количестве.
Стадия (νί): элонгация ПЭГ цепи; реакцию осуществляют в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ТНР или ЭМР, путем обработки галогенированного сложного эфира алкоголятом ПЭГ диола, монозащищенного в форме простого эфира тетрагидропирана (ТНР). Получение этого типа монозащищенного ПЭГ диола описано в литературе, см., например, КгсЬагб А. е! а1., СЬет. Еиг. ί. 2005, 11, 7315-7321 или 8аке11апои Е.С., е! а1., ТеКаЬебгоп 2003, 59, 9083-9090.
Образующееся промежуточное соединение селективно гидролизуют при рН 5 до сложного гидроксиэфира.
ПЭГ спирты, содержащие кислотную функциональную группу, защищенную в форме сложного трет-бутилового эфира, коммерчески доступны (такие как трет-бутил-12-гидрокси-4,7,10триоксадодеканоат) или их получают из трет-бутилакрилата и ПЭГ диола. Исходные ПЭГ диолы коммерчески доступны, когда 1=3-12.
РЬ13 КЬ2Ь-СО-АЬК-(ОСН2СН2)1-§Н, получаемый согласно нижеописанным схемам.
В случае, когда АЬК=СН2СН2 путь А но+ --4 -А-М. μοί, оР'-. он -М- НО К % у, 0 ° О 0 (Μ ύ н4-,°4ун о
путь В
В случае, когда АЬК^СН2СН2
Стадия (ί): снятие защиты с помощью раствора соляной кислоты (например, раствора в диоксане) или трифторуксусной кислоты. В последнем случае может образоваться трифторацетат гидрокси функциональной группы. Эта соль расщепляется на следующей стадии (ίί).
Стадия (ίί): защита карбоновой кислоты в форме сложного метилового эфира; реакцию осуществляют при КТ в полярном апротонном растворителе, таком как метанол, путем обработки триметилсилилдиазометаном.
Стадия (ίίί): активация спирта в форме мезилата; реакцию осуществляют в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ИСМ, путем обработки мезилхлоридом в присутствии основания, такого как ТЕА.
Стадия (ίν): образование свободного тиола и омыление метилового сложного эфира; реакцию осуществляют при нагревании с обратным холодильником в полярном протонном растворителе, таком как смесь этанол/вода, в две последовательные стадии: замещение мезилата тиомочевиной, затем гидролиз щ зЬи соли изотиоурония введением основания, такого как гидроксид натрия.
- 18 024627
Стадия (ν): элонгация ПЭГ цепи; реакцию осуществляют в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ТНР, путем обработки ненасыщенной кислоты, защищенной в форме сложного эфира, алкоголятом, генерируемым под действием натрия в каталитическом количестве.
Стадия (νί): элонгация ПЭГ цепи; реакцию осуществляют в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ТНР или ИМР, путем обработки галогенировакного сложного эфира алкоголятом ПЭГ диола, монозащищенного в форме простого эфира тетрагидропирана (ТНР). Получение этого типа монозащищенного ПЭГ диола описано в литературе, см., например, КюЬагб А. е! а1., СЬет. Еиг. ί. 2005, 11, 7315-7321 или δ;ιΚνΊ1;ιποιι Е.О., е! а1., ТебаЬебгоп 2003, 59, 9083-9090.
Линкер, у которого п=8 (3-[2-меркаптоэтоксигепта-(этиленокси)]пропионовая кислота), коммерчески доступен. ПЭГ спирты, содержащие кислотную функциональную группу, защищенную в форме сложного трет-бутилового эфира, коммерчески доступны, (такие как трет-бутил-12-гидрокси-4,7,10триоксадодеканоат), или их получают из трет-бутилакрилата и ПЭГ диола. Исходные ПЭГ диолы коммерчески доступны в случае 1=3-12.
О
л.
Κ2Ζ3ΙΧ-ΑΙ-К-1ОСН.СНЛ, ОН „ „
РЬ14 ' получаемый согласно нижеописанной схеме.
В случае, когда АЬК=СН2СН2.
В случае, когда АЬК^СН2СН2.
Стадия (ί): элонгация ПЭГ цепи; реакцию осуществляют в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ТНР, путем обработки ненасыщенной кислоты, защищенной в форме сложного эфира, алкоголятом, образующимся под действием натрия в каталитическом количестве.
Стадия (ίί): снятие защиты с помощью раствора соляной кислоты (например, раствора в диоксане) или трифторуксусной кислоты. В последнем случае, может образоваться трифторацетат гидроксильной функциональной группы, необязательно находящейся в структуре соединения. Этот трифторацетат расщепляется на следующей стадии (ίίί).
Стадия (ίίί): защита карбоновой кислоты в форме сложного метилового эфира; реакцию осуществляют при КТ в полярном апротонном растворителе, таком как метанол, путем обработки триметилсилилдиазометаном.
Стадия (ίν): омыление метилового сложного эфира; реакцию осуществляют при КТ в смеси полярных растворителей, такой как смесь ТНР/вода, в присутствии гидроксида лития.
Стадия (ν): защита карбоновой кислоты в форме сложного аллилового эфира; реакцию осуществляют при КТ в полярном апротонном растворителе, таком как ИСМ, в присутствии аллилового спирта, сочетающего агента, такого как ЕИС1, и основания, такого как ИМАР.
Стадия (νί): элонгация ПЭГ цепи; реакцию осуществляют в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ТНР или ИМР, путем обработки галогенированного сложного эфира алкоголятом ПЭГ диола, монозащищенного в форме простого тетрагидропиранового эфира (ТНР). Получение этого типа монозащищенного ПЭГ-диола описано в литературе, см., например, КюЬагб А. е! а1., СЬет. Еиг. ί. 2005, 11, 7315-7321 или δ;ιΚνΊ1;ιποιι Е.О., е! а1., ТебаЬебгоп 2003, 59, 9083-9090.
Исходные ПЭГ диолы коммерчески доступны, когда 1=3-12.
пьгь<о-Аик-;осн.сн2||О,.
РЬ15 ' получаемый согласно нижеописанным схемам.
В случае, когда АЬК=СН2СН2 путь А
- 19 024627 путь В
В случае, когда АЬК^СН .
Стадия (ί): нуклеофильное замещение; реакцию осуществляют в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ТНР, в присутствии основания, такого как ΝαΗ, и алкинилгалогенида, такого как пропаргилбромид или 4-бром-1-бутин. Можно использовать условия примера 20 получения соединения 63.
Стадия (ίί): снятие защиты с помощью раствора соляной кислоты (например, раствора в диоксане) или трифторуксусной кислоты. Можно использовать условия примера 20 получения соединения 65.
Стадия (ίίί): активация карбоновой кислоты в форме сложного АН8-эфира; реакцию осуществляют при КТ в полярном апротонном растворителе, таком как Όί'Μ. путем обработки с помощью АН8 в присутствии сочетающего агента, такого как ЭСС на носителе.
Стадия (ίν): элонгация ПЭГ цепи; реакцию осуществляют в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ТНР, путем обработки ненасыщенной кислоты, защищенной в форме сложного эфира, алкоголятом, генерируемым под действием натрия в каталитическом количестве. Можно использовать условия примера 20 получения соединения 64.
Стадия (ν): элонгация ПЭГ цепи; реакцию осуществляют в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ТНР или ΌΜΡ, путем обработки галогенированного сложного эфира алкоголятом ПЭГ диола, монозащищенного в форме простого эфира тетрагидропирана (ТНР). Получение этого типа монозащищенного ПЭГ диола описано в литературе, см., например, КюЬагб А. е! а1., СЬет. Ειιγ. ί. 2005, 11, 7315-7321 или 8аке11апои Ε.Ο., е! а1., Те1гаЬейгоп 2003, 59, 9083-9090.
ПЭГ спирты, содержащие кислотную функциональную группу, защищенную в форме сложного трет-бутилового эфира, коммерчески доступны, (такой как трет-бутил-12-гидрокси-4,7,10триоксадодеканоат), или их получают из трет-бутилакрилата и ПЭГ диола. Исходные ПЭГ диолы коммерчески доступны, когда 1=3-12.
N
КЬгЬОС-АСКЧОСНгСН^' ’
ΡΕι6 ' получаемый согласно нижеописанным схемам.
В случае, когда АЬК=СН2СН2.
, о
Ао-Мс
Л. Л.
\ О ' н+о А'·
----А ,о
ГУ ?
Ум'о-У-Эо·'' о
у.
В случае, когда АЬК^СН2СН2.
Стадия (ί): элонгация ПЭГ цепи; реакцию осуществляют в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ТНР, путем обработки ненасыщенной кислоты, защищенной в форме сложного эфира, алкоголятом, генерируемым под действием натрия в каталитическом количестве.
Стадия (ίί): снятие защиты с помощью раствора соляной кислоты (например, раствора в диоксане) или трифторуксусной кислоты.
Стадия (ίίί): активация карбоновой кислоты в форме сложного АН8-эфира; реакцию осуществляют при КТ в полярном апротонном растворителе, таком как ΌΓΜ, путем обработки с помощью АН8 в присутствии сочетающего агента, такого как ЭСС на носителе.
Стадия (ίν): элонгация цепи ПЭГ-гидроксиазида; реакцию осуществляют в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ТНР или ΌΜΕ, путем обработки галогенированного сложного эфира алкоголятом ПЭГ-гидроксиазида.
Азид-ПЭГ-спирты являются коммерчески доступными или могут быть получены из соответствующих ПЭГ диолов, коммерчески доступных, когда 1=3-12.
ΡΚ получаемый согласно нижеописанной схеме.
.0
У Ό Άικ— о
Стадия (ί): активация карбоновой кислоты в форме сложного АН8-эфира; реакцию осуществляют
- 20 024627 при КТ в полярном апротонном растворителе, таком как ЭСМ. путем обработки с помощью ΝΉδ в присутствии сочетающего агента, такого как ЭСС на носителе.
Кислоты, имеющие ацетиленненасыщенную группу, являются коммерчески доступными при
АЬК=-(СН2)т, где т=1-10 (такие как 3-бутиновая кислота).
г’ьгь-со-лк'''’ „ „
РБ]8 ' получаемый согласно нижеописанной схеме.
Стадия (ί): нуклеофильное замещение галогенида азидом; реакцию осуществляют в полярном апротонном растворителе, таком как ацетон, в присутствии азида натрия.
Стадия (ίί): омыление метилового сложного эфира; реакцию осуществляют при КТ в смеси полярных растворителей, такой как смесь ТНР/вода в присутствии гидроксида лития.
Стадия (ίίί): активация карбоновой кислоты в форме сложного ΝΉδ-эфира; реакцию осуществляют при КТ в полярном апротонном растворителе, таком как ЭСМ, путем обработки с помощью Ν4δ в присутствии сочетающего агента, такого как ЭСС на носителе.
Сложные метиловые эфиры, несущие галогеналкильное звено, являются коммерчески доступными, когда АЬК=-(СН2)т, где т=1-6 (такие как метилбромацетат).
ЗЬ’Ь-СО-ЛЬК-ЮСН-СН ,«О
РЦу 12 - получаемый согласно нижеописанным схемам.
В случае, когда АЬК=СН2СН2 путь А
путь В
В случае, когда АЬК^СН2СН
Стадия (ί): нуклеофильное замещение; реакцию осуществляют в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ТНР, в присутствии основания, такого как ΝαΚ и алкенилгалогенида, такого как аллилбромид или 4-бром-1-бутен.
Стадия (ίί): снятие защиты с помощью раствора соляной кислоты (например, раствора в диоксане) или трифторуксусной кислоты.
Стадия (ίίί): активация карбоновой кислоты в форме сложного ΝΠδ-эфира; реакцию осуществляют при КТ в полярном апротонном растворителе, таком как НСМ, путем обработки с помощью Ν4δ в присутствии сочетающего агента, такого как НСС на носителе.
Стадия (ίν): элонгация ПЭГ цепи; реакцию осуществляют в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ТНР, путем обработки ненасыщенной кислоты, защищенной в форме сложного эфира, алкоголятом, генерируемым под действием натрия в каталитическом количестве.
Стадия (ν): элонгация ПЭГ цепи; реакцию осуществляют в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ТНР или НМР, путем обработки галогенированного сложного эфира алкоголятом ПЭГ диола, монозащищенного в форме простого эфира тетрагидропирана (ТНР). Получение этого типа монозащищенного ПЭГ диола описано в литературе, см., например, Юсйагб А. е1 а1., Сйет. Еиг. ί. 2005, 11, 7315-7321 или δаке11а^^ои Е.С., е! а1., Тейайебгоп 2003, 59, 9083-9090.
ПЭГ спирты, содержащие кислотную функциональную группу, защищенную в форме сложного трет-бутилового эфира, коммерчески доступны (такие как трет-бутил-12-гидрокси-4,7,10триоксадодеканоат), или их получают из трет-бутилакрилата и ПЭГ диола. Исходные ПЭГ диолы коммерчески доступны, когда 1=3-12.
РЬ2, получаемый согласно нижеописанной схеме.
Υ с
НО А1_К—'--О (I) //
Стадия (ΐ): активация карбоновой кислоты в форме сложного NΉδ-эфира; реакцию осуществляют при КТ в полярном апротонном растворителе, таком как ОСМ, путем обработки с помощью Ν4δ в при- 21 024627 сутствии сочетающего агента, такого как ЭСС на носителе.
Кислоты, несущие этиленненасыщенную группу, являются коммерчески доступными при
АЬК=-(СН2)т, где т=1-10 (такие как 3-бутеновая кислота).
РЬ21 Ζаδ-А^К-СН2-NΚ12-(СН2СН2О)1-СН2СН2-NΚ'12, получаемый согласно нижеописанным схемам. В случае, когда К12 и К'12=Н но _( МНВос ». I 1^0 ^.,^,ΝΗΒΟΟ + -^ЦНВос .Μ- [.КНВоо °О ’ I о м Л „
I Н АЬК 52$
2а$ ΑίΚ N ч ΐΝΗ, , Γνι 2β5ΑΙ-Κ4^Ν. Ν ъЦНЭос
- го -1, г * '' |о --Й ι
В случае, когда К,2+Н и К.'12=Н.
В случае, когда К.12=Н и К'12+Н.
В случае, когда К12 и К'12+Н.
|(ν) ) на
2а5М_К .КК].
Стадия (ί): активация спирта в форме тозилата; реакцию осуществляют в полярном апротонном растворителе, таком как ЭСМ, обработкой тозилхлоридом в присутствии оксида серебра и иодида калия. Можно использовать условия примера 6 получения соединения 23.
Стадия (ίί): нуклеофильное замещение тозилата; реакцию осуществляют в полярном апротонном растворителе, таком как ацетонитрил, обработкой азидом натрия. Можно использовать условия примера 6 получения соединения 24.
Стадия (ίίί): реакция азидирования; реакцию осуществляют в полярном растворителе, таком как смесь ТНР/воды, в присутствии трифенилфосфина. Можно использовать условия примера 6 получения соединения 26.
Стадия (ίν): восстановительное аминирование с использованием альдегида; реакцию осуществляют при КТ в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ЭСМ, в присутствии восстановительного агента, такого как триацетоксиборгидрид натрия, и, если необходимо, уксусной кислоты в качестве катализатора. Можно использовать условия примера 6 получения соединения 27.
Стадия (V): снятие защиты с помощью раствора соляной кислоты (например, раствора в диоксане) или трифторуксусной кислоты. Можно использовать условия примера 6 получения соединения 29.
Стадия (νί): защита функциональной группы в форме N4^^ реакцию осуществляют в полярном апротонном растворителе, таком как ТНР или ЭМР, обработкой 1 эквивалентом основания, такого как гидрид натрия, с последующей обработкой бензилгалогенидом, таким как бензилхлорид.
Стадия (νίί): отщепление бензильной группы и восстановление функциональной азидогруппы; реакцию осуществляют в протонном растворителе, таком как метанол, водородом в присутствии катализатора, такого как гидроксид палладия.
Стадия (νίίί): алкилирование амина; реакцию осуществляют в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ТНР, обработкой основанием, таким как гидрид натрия, в присутствии реагента, несущего нуклеофуг, такого как алкилгалогенид. Можно использовать условия примера 6 получения соединения 25.
Амин-ПЭГ-спирты, незащищенные или защищенные группой Вос на аминофункции, являются коммерчески доступными, (такие как Ν-Вос-аминоэтоксиэтоксиэтанол или 1-амино-3,6,9триоксаундеканил-11-ол), или могут быть получены из ПЭГ диолов, коммерчески доступных, когда 1=312, согласно процедуре, описанной в АО 7230101. Альдегид Ζаδδ-А^К-СНО, например 2-метил-2(метилтио)пропаналь, является рыночным продуктом, или может быть получен окислением спирта, несущего дисульфидное звено, полученного из галогенированного спирта, защищенного соответствующим
- 22 024627 образом (например, в форме силилированного простого эфира), путем последовательных обработок сначала тиоацетатом калия, затем производным типа метантиосульфоната.
о гаЗ-АЬК ΝΡ.,,-ιΌΗ.ΟΗ,Ο) -СН..СН,-Г; НК',.
РЙ21
В случае, когда К12 и К'12=Н.
' получаемый согласно нижеописанным схемам.
В случае, когда К =Н.
В случае, когда К +Н.
В случае, когда К +Н.
Стадия (ί): активация спирта в форме тозилата; реакцию осуществляют в полярном апротонном растворителе, таком как ЭСМ, обработкой тозилхлоридом в присутствии оксида серебра и иодида калия. Можно использовать условия примера 6 получения соединения 23.
Стадия (ίί): нуклеофильное замещение тозилата; реакцию осуществляют в полярном апротонном растворителе, таком как ацетонитрил, обработкой азидом натрия. Можно использовать условия примера 6 получения соединения 24.
Стадия (ίίί): восстановление азида; реакцию осуществляют в полярном растворителе, таком как смесь ТНР/воды, в присутствии трифенилфосфина. Можно использовать условия примера 6 получения соединения 26.
Стадия (ίν): пептидное сочетание; реакцию осуществляют в полярном апротонном растворителе, таком как диметилформамид, в присутствии сочетающих агентов, таких как система И,№-диизопропилкарбодиимид/1-гидроксибензотриазол, и основания, такого как ТЕА.
Стадия (ν): снятие защиты с помощью раствора соляной кислоты (например, раствора в диоксане) или трифторуксусной кислоты. Можно использовать условия примера 7 получения соединения 32.
Стадия (νί): защита функциональной группы в форме ИНВос; реакцию осуществляют в полярном апротонном растворителе, таком как ТНР или ΌΜΡ, обработкой 1 экв. основания, такого как гидрид натрия, с последующей обработкой бензилгалогенидом, таким как бензилхлорид.
Стадия (νίί): отщепление бензильной группы и восстановление функциональной азидогруппы; реакцию осуществляют в протонном растворителе, таком как метанол, водородом в присутствии катализатора, такого как гидроксид палладия.
Стадия (νίίί): алкилирование амина путем восстановительного аминирования с использованием альдегида; реакцию осуществляют при КТ в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ЭСМ, в присутствии восстановительного агента, такого как триацетоксиборгидриц натрия, и, если необходимо, уксусной кислоты в качестве катализатора.
Стадия (ίχ): алкилирование группы ИНВос; реакцию осуществляют в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ТНР, обработкой основанием, таким как гидрид натрия, в присутствии
- 23 024627 реагента, несущего нуклеофуг, такого как алкилгалогенид. Можно использовать условия примера 6 получения соединения 25.
Амин-ПЭГ-спирты, незащищенные или защищенные группой Вос на аминофункции, являются коммерчески доступными (такие как Ν-Вос-аминоэтоксиэтоксиэтанол или 1-амино-3,6,9триоксаундеканил-11-ол) или могут быть получены из ПЭГ диолов, коммерчески доступных, когда 1=312, согласно процедуре, описанной в ^О 7230101. Карбоновая кислота 2а8-АЬК-СО2Н, например 4метил-4-(метилдитио)пентановая кислота, может быть рыночным продуктом, или может быть получена из галогенсодержащей карбоновой кислоты последовательными обработками сначала тиоацетатом калия, затем производным типа метантиосульфоната.
Ρ^3 Ζа8-(СН2СН2О)1-СН2СН2-NНК12, получаемый согласно нижеописанным схемам.
В случае, когда К12=Н.
НО . ' о Ί ΝΗΗκ о | ,.ΝΙ-Ιιχ-, |м> . Н5 { ' о ЫНВос - 7дЗ-^.· ''□--'к МННнг.
|<М гай 4.---0α ..ΝΗ, ‘ НС1
В случае, когда К12^Н
НО Ц 0--| .. ΝΗΒΚ (|>. , ΜΐΟ.ρ- 0
,.ΝΗβΟΟ .№1}вос
Стадия (ί): активация спирта в форме мезилата; реакцию осуществляют в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ИСМ, обработкой мезилхлоридом в присутствии основания, такого как ТЕА.
Стадия (ίί): образование свободного тиола; реакцию осуществляют при нагревании с обратным холодильником в полярном протонном растворителе, таком как смесь этанола/воды в две последовательные стадии: замещение мезилата на тиомочевину, затем гидролиз ш ы!и соли изотиоурония введением основания, такого как гидроксид натрия.
Стадия (ίίί): защита тиола; реакцию осуществляют в смеси полярных растворителей, такой как смесь этанола/воды, с использованием реагента, содержащего метантиосульфонатную функциональную группу, такого как метилметантиосульфонат, в присутствии основания, такого как карбонат натрия.
Стадия (ίν): снятие защиты с помощью раствора соляной кислоты (например, раствора в диоксане) или трифторуксусной кислоты.
Стадия (ν): алкилирование амина; реакцию осуществляют в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ТНР, путем обработки основанием, таким как гидрид натрия, в присутствии реагента, несущего нуклеофуг, такого как алкилгалогенид.
Амин-ПЭГ-спирты, незащищенные или защищенные группой Вос на аминофункции, являются коммерчески доступными (такие как Ν-Вос-аминоэтоксиэтоксиэтанол или 1-амино-3,6,9триоксаундеканил-11-ол) или могут быть получены из ПЭГ диолов, коммерчески доступных, когда 1=312, согласно процедуре, описанной в ^О 7230101.
ΡΡ2
получаемый согласно нижеописанной схеме.
Стадия (ί): активация Ртос-Ь-валина в форме сложного NН8-эфира; реакцию осуществляют в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ТНР, обработкой с помощью ΝΉ8 в присутствии сочетающего агента, такого как ЭСС.
Стадия (ίί): пептидное сочетание между Ртос-Ь-валин^Н8 и Ь-цитруллином; реакцию осуществляют в полярном растворителе, таком как смесь диметоксиэтана/ТНР/воды, в присутствии основания, такого как бикарбонат натрия.
Стадия (ίίί): пептидное сочетание с 4-аминобензиловым спиртом; реакцию осуществляют в полярном растворителе, таком как смесь ИСМ/метанола, в присутствии сочетающего агента, такого как ЕЕИЦ.
Стадия (ίν): снятие защиты с Ртос-амина; реакцию осуществляют в полярном растворителе, таком как смесь ИСМ/метанола, в присутствии основания, такого как диэтиламин.
Стадия (ν): активация карбоновой кислоты в форме сложного NН8-эфира; реакцию осуществляют в полярном апротонном растворителе, таком как ИСМ, обработкой с помощью ΝΉ8 в присутствии соче- 24 024627 тающего агента, такого как гидрохлорид ЕЭС1.
Стадия (νί): пептидное сочетание между дипептидом и сложным ΝΗδ-эфиром; реакцию осуществляют при КТ в полярном апротонном растворителе, таком как смесь ЭСМ/ацетонитрила.
Дикислоты, монозащищенные в форме сложного аллилового эфира, являются коммерчески доступными, когда п=2 (моноаллилсукцинат) или могут быть получены переэтерификацией метиловых или трет-бутиловых сложных моноэфиров, которые являются коммерчески доступными, когда п=2-6.
Ϊ й А ,'-он π„ζκκ.λικ<οοη;™λ N - Й(1 (
РЬ25 г получаемый согласно нижеописанной схеме.
Стадия (ί): активация Ртос-Ь-валина в форме сложного ΝΗδ-эфира; реакцию осуществляют в полярном апротонном безводном растворителе, таком как ΤΗΡ, обработкой с помощью ΝΗδ в присутствии сочетающего агента, такого как ЭСС.
Стадия (ίί): пептидное сочетание между Ртос-Ь-валин-ΝΗδ и Ь-цитруллином; реакцию осуществляют в полярном растворителе, таком как смесь диметоксиэтана/ТНР/воды, в присутствии основания, такого как бикарбонат натрия.
Стадия (ίίί): пептидное сочетание с 4-аминобензиловым спиртом; реакцию осуществляют в полярном растворителе, таком как смесь ЭСМ/метанола, в присутствии сочетающего агента, такого как ЕЕЭЦ.
Стадия (ίν): снятие защиты с Ртос-амина; реакцию осуществляют в полярном растворителе, таком как смесь ЭСМ/метанола, в присутствии основания, такого как диэтиламин.
Стадия (ν): активация карбоновой кислоты в форме сложного ΝΗδ-эфира; реакцию осуществляют при КТ в полярном апротонном растворителе, таком как ЭСМ, обработкой с помощью ΝΗδ в присутствии сочетающего агента, такого как ЭСС на носителе.
Стадия (νί): пептидное сочетание между дипептидом и сложным ΝΗδ-эфиром; реакцию осуществляют при КТ в полярном апротонном растворителе, таком как смесь ЭСМ/ацетонитрила.
Двухосновные ПЭГ кислоты, монозащищенные в аллиловой форме, получают согласно описанию получения линкера Ь14.
ΡΟΖΟ... , -Г 1 о
РЬ26 '; йодацетат 2,5-диоксопирролидин-1-ила является рыночным продуктом и имеет номер
САδ 39028-27-8.
Таблица II
Предшественники линкеров | С | Реакциями)’ | Прои но пн те кртнофицииа форму ιι.ι ГП) 2 5 | |||
РЬ | Примеры РЬ | Ь | Семейство линкеров происходящих от предшественника РЬ | г , ?’ ,.о , А О о о НМ С1 ) ». .* ] < О у' Н О ОМе при Ь = | ||
рь, | о | -(СНг)пС1 | д 1 а. 5 = = 1 § ? ! § 1 = | ь, | О Я га$ди<· N М (СНг)л — | κε λ ίί Ν λ 1 к |
РЬг | 5 5 Ϋ Ί | -(СНг)пС1 | Ьг | гаЗАЬК Ν (СНД — | 143 < ν'4 | |
РЬз | 3 ынр1г К,5 НкпиЯ,г Ме | .(СН2)ПС1 | Ьз | Р,г 2а8 АТК Ν ,сНг)п -- | Ρ. НЗ -- Р,г-Н 1трЗют((?„=Ме ТР4 | |
ΡΙ-4 | Κι7-Η·“<Κ ,=Ме | -(СНг)тС1 | и | % N газ аьк | - N (СНгК,— | ν * Г 7 | |
рц | О Т * , м Л ь \ к а о О | -(СНг)пОН | ацилирование | Ь5 | К,г РЬ7о СО А1К 33 ΑΙ.Κ М-ц ° (СИД-О | 8 5 |
РЦ | ч -о У-ь 4™ | -(СН2)пОН | ацилирование сочетание [необязательно преьраше ниеоддою/ЬНЪ в 1р>юе ΖΚΚΗ например котла -4 2ОКЬ= о снятие защиты «ыивгит посредством N145) | 1-6а | ΡΟΖΟ СО-А1К (ОСНгСНр ° || ° (СИД— о | о, о „ ι т ° г Т '-‘О о о |
(СНгСНг. | 1-6Ь | РЬ2Ь-С0 АЬК (ОСНгСН?)| ° ή Ν (СН^-ао | 0 и “1 οΐ 1 ' - о о о | |||
(СНЛ СОгН | ттерифюэдко, (необязательно кгреьрашение одного /ЬР.0 | ί-ве | О ΡΟΖΟ СО АЬК (0СН2СНг)| 0 - (С||) . | -I О 0 |
- 25 024627
4 2=«ь= 0 сняше защиты, активация посредством ΝΗ5) | ||||||
Рк | о° · К|; = НоиМе | -(СН2)пС1 | нуклеофильное замещение [необязательно, превраще ние одного ΖΒΡ6 в другое ?,ЪКЬ, например, когда -0-^ 2ьРь= 0 снятие защиты, активация посредством ΝΉ5) | ка | Кц РЬгЬ-С0-А1К-(ОСНгСН2)| ' АсНД— | о % —Ч- 0 0 К,=Н Пр14н»К„=Ме Пр15 |
-(СН2)п он | активация, сочетание, [необязательно, превраще' ине одного Ζ6Κ6 в другое 2ЬКЪ, например, когда -У ДКь= ° снятие защиты, активация посредством ΝΗ5] | кь | % ΡΟΖΟ СО-АЬК-(ОСН2СНг)| Νγ 0 (СНг)„-А0 “ | о ; λ№-Α'·'θΑ'ΟΑ-ΝγοΑ ''—1 0 0 0 К,г=Н пр 1вн»К„=Ме | ||
-(СН2)П СО2Н | амидирование, [необязательно, превращение одного гькь в другое гькь, например, когда ч Ζ0ΡΒ= 0 снятие защити, активация посредством ΝΗ5) | кс | о Къ2Ь-СО-А1.К-(ОСН,СНг)|, А „ ·> у *снл~Р,г | 0 /—> О 0 у” οΛ--/ο^4°'^'νΛΑ 6 ‘ Й В12=Нн».Ме ,г | ||
Рк | 0 к-,Ν* | -(СН2)пС1 | нуклеофильное замещение [необязательно, превращение одного гЬКЬ в другое ΖΒΚΒ, например, когда | к | «Ь2Г>СО-А1-К-(ОСНгСНг)|.. \ N ' (СНгХ, - | .0 ,—χ 0 УаМ^аа-аа |
Рк | ^У'У, | -(СН2)пС1 | к | кьге-со-А1.к ν η N > - (Снг>п-<- | 0 С Ϊ. 0 1 Пр 13 |
ч гьРь= 0 снятие защиты, активация посредством ΝΗ5) | ||||||
Рк | (Ч ίο 44 ΝΗβ” К12 = Ним Ме | -<СН2)пС1 | нуклеофильное замещение [необязательно превращение одного Ζ6Κ6 в другое Ζ№6, например, когда -4 гьКь= ° снятие защити, активация посредством ΝΗ5] | ка | н,2 кьгь СО АЬК |ОСНгСНг)| Ν (СН,)„ А | Λ,^Α'-θΑ о-А·’'' •-Л о |
-<сн2)п он | активация сочетание [необязательно, превраще·1 ние одного Ζ6Κ6 в другое ΖΒΚΗ, например, когда ч гькв= ° снятие защиты, аыивацня посредством ΝΗ5] | кь | К,2 ΡΟΖΟ СО АЬК (ОСНгСН2)| Ν <| ° о | о в„ Л»0»-'-0! Ю ,°- •—-У о о 0 К,?«Н пр 18КП» К г8Ме | ||
-(СН2)п СО2Н | амидирование. (иеобязате> явно, превращение οληοι о Ζ6ΚΒ в другое ΖΒΚΗ, например, когда -ч ΖβΚβ= 0 снятие защиты, активация посредством ΝΗ5) | кс | 0 рьгьсоАьк(ОСн,сн,)|-. А -, 2 1 N (СНД-А- н1г | 0 /—С о о ΑΝ ОД-^0^Аз°^ N У< ° %=Н„,Ме | ||
Рк | о Α^ΝΗ | -(СНг)„С1 | нуклеофильное замещение (необязательно, превращение одного ΖόΚΒ в другое 2,ЪКЬ, например, когда | к | ΗΡΖυ-ΟΟ-ΑΙΚ (ОСЬ^СН, к N (οη,κ,Α | пр 16 |
Рк | ^У'лу | -(СН2)пС! | к | кьгосо-дьк ,--, к ,Ν > «Αχ,Α | 0 У о у ι ч ι 5:гыа |
Рко | о с ΝΚ Л ,- N ) - 0 ' 'ί 0 | -(СН2)„С1 | °У 2ьКь= 0 снятие защиты, активация посредству | ко | 0 Ньгр-СОАСК ~ N ( Ν (СН2>„-— | 0 ' N А' —0 0 | 0 У Ί , |
0 | о | ___ 0 | |||||
Рк1 | , Ί А? ° 0 ^νΛ''Βγ | И8<>,си νΑ | нуклеофильное замещение | к) | кьгь-со-А1.к-(осн,сн,>1.. А 5-< к - 1 ’ А (СНД,— к,г | «у ° А-.......!° '4,°—» | А ° А Αν „г |
н | Пр17 | ||||||
0 | 0 | ||||||
Ркг | /—( 0 ΥΝ ОЛ-Ао^ЗУ -~вг 0 | нуклеофильное замещение | кг | КЬгЬ-СО-АЬК-(ОСНгСН2>А А | 0 | Юу^А-'.-, | |
Ркз | о Ηθ'^Ύ'Ο'Ά,°''''~'δΗ | -(СНг)„С1 | нуклеофильное замещение | кз | рьгь-со-А1К-(оснгсн2)1 '8' (снг)„ А | <> Уа-Л о | |
амидирование. снятие | А КЬ2Ь-СО-АЬК-(ОСН,СН,)| , , N г !Г <сн2)Г^ | о .—I' О | |||||
0 | (СН2)ПЫН2 | зашиты, активация | к 4а | Αν Α,-τ ο 'Άθ | Αθ-ΥΝΑ· | ||
Ркд | ^•оЛ-^о^Ч°-А'°Н | о | о | ||||
0 | этерификация, снятие | Кьгь-СОАЬКЧОСН.СНЛ, .0, , | /А О | ||||
-(сн2)пок | защиты, активация | 1~14Ъ | А (Снг)„А о | γ·Ν </ -Ао' | У°-А'0^ | ||
ό | О | ||||||
0 | Ν-Ν | ||||||
0 /А' 9 | У°А°^ | 04г-Л~ы-! | |||||
•Νο1 ;с А - | ци клоп рисоед и некие | 0 0 | |||||
Ркб | ό | -(ΟΗ2)πΝ3 | кб | регь.со-А1.к-(ОСн2снг)1°'(-кУ-'м'(Сн2)пА | Л-° Α | 0 | |
о | пр 20 | —0 Ν=Ν | |||||
4ΝΜ. |
РЦб | м Ц , О 7 о ]О |2 Ν, | (сн2)цмр12 СНгСиСН | циклоприсоединение | Цб | Ν Ν К12 Ρ6ΖΙ>ΟΟ.ΑΙ.Κ-(ΟΟΗ2ΟΗ2> Ν Ν (Сн2у— | О N О ° 1 ΐ |
РЦ7 | 0 4 5 0 ° или 5 текенковая кислота | (СН2)„Щ | 1-17 | Ν-Ν КЬ2ЬСО-А1.К Ν (СН^Ц- | 0 /~4 О Ν-Ν Да α ν ι 0 пр 19 | |
РЦв | (СНг^МЯ.г- СН2С=СН | Ϊ-1Β | Ν-Ν Ρ., Ν Λ Η ηβζοοο-αικ (сн2>„— | 0 Г~< 0 Ν-Ν Р , | ||
РЦв | РоМо-Ч? | -СН=СН2 | метатезис | 1-19 | Рс2Ь СО ΑΙΚ (ОСНгСНг)| | /+4 V оД-4- |
Ρί-го | /‘Ύ° Ч νΝ о - о | -сн=сн2 | — | 1-20 | рьгь со-ацк | ^0А..^ 0 |
ΡΙ-2, | Ме55-А ΝΜβ г „ , МНР 'У К ,2= Н или Ме | -(СН2)„С1 | нуклеофильное замещение (при Ζβ Н дополнительно стадия восстановления | I—21 | р,2 Р12 ΖόώΑίΚ-ΟΗ? Ίο р (СНД,— | У λ -.Да Н5 ' |
ΡΙ-22 | / Н ΝΗΚ Ме$5 '''Ι0''/ о В12=Н«ли Ме | -(СНг),С1 | ^22 | «,г А1_К _ N о | 1 и я« 4,404“-· Ц,гНилнК,2’у« пр 7 | |
ΡΙ-23 | Ме55-(СН2СН?О)3 СНгСНг ΝΗΚι: К12=Нили Ме | -(СН2)пС1 | Ьгз | в,г га$-(СНгсн2о).-сн2сц2 Ν (СН2)„— | НЗ До 44Р12-Н илтМе | |
Р1-24 | о 0 ,~У~ ‘'о | (ΟΗ2)„ΝΗ2 | ί I ε ί ί * 1 1 В ! | Ι-24 | о н у-о (СК-.Ю -Г- <Α Κν о ( Η,Ν-< | ΑΛ- АА 4 о » - НА'П ΝΗ |
ΡΙ-2! | (СНгСНг | снязие защиты активация | Ι-25 | О N.. 1 (Сну^ о Γί 'А О. ΝΗ АА '-—к «Ро В02Ь СО-АКК (ОСН2СН2)| | 4 - χ ” 5_ - 0 1 ^~ζ о 0 0 Ао | |
ΡΙ-26 | о /~~ 0 \ N Д г д о 0 Ζ-, | Ор,) ц | нуклеофильное | Ι-26 | О кьгь | О 0 4 чо к ; |
1 Более подробно см. раздел Примеры реакций, изложенный выше.
2 Примеры даны на конкретное производное криптофицина, но может быть использовано любое производное криптофицина формулы (II), в частности Ό1-Ό8.
3 , -'(сн,:,, соответствует расщепляемой дисульфидной структуре линкера, выбираемой из линкеров Ь1-Ь4 или Ь21-Ь23.
4 К12 или К'12: Н или (С1-С6)алкильная группа, например метил; п: целое число от 1 до 6; ί: целое число от 1 до 20, более конкретно от 1 до 10, более конкретно от 1 до 8 или от 1 до 6, еще более конкретно от 2 до 5. ί может принимать любое значение из указанных диапазонов, в частности 2, 3, 4 или 5.
5 В табл. II Ь находится в пара-положении, однако можно получить аналогичным способом соединения с Ь в орто- и мета-положениях.
Способ получения конъюгата.
Конъюгат получают способом, заключающимся в том, что:
(ί) вводят в контактирование и осуществляют взаимодействие между водным раствором моноклонального антитела, необязательно забуференного, и раствором производного криптофицина формулы(П);
(ίί) необязательно, отделяют конъюгат, образовавшийся на стадии (ί), от непрореагировавших производного криптофицина и/или моноклонального антитела, и/или от агрегатов, которые могут сформироваться.
Более конкретно на стадии (ίί) отделяют конъюгат, полученный на стадии (ί), только от непрореагировавшего производного криптофицина и возможно образовавшихся агрегатов, и оставляют в растворе моноклональное антитело, который возможно не был прореагирован.
Введение в контакт необходимо для реализации взаимодействия химических групп ССК1 и ОСК2, чтобы связать таким путем производное криптофицина с моноклональным антителом и образовать ковалентную связь; предпочтительно когда ССК1 означает -δΖα: модифицируют моноклональное антитело с помощью модифицирующего агента таким образом, чтобы ввести на поверхность моноклонального антитела подходящие группы ОСК2, в частности группы, описанные во 2-й колонке табл. I:
химические дисульфидные группы, в случае, когда ССК1 означает -δΗ; химические тиольные группы, в случае, когда ССК1 означает -δΖα, где Ζ4Η; химические малеимидо- или иодацетамидогруппы, в случае, когда ССК1 означает -δΗ.
В случае антител (МАЬ) в 4-й колонке табл. I приведены формулы конъюгатов:
когда ССК1 означает -С(=О)^ЬКЬ: реакция протекает по аминофункциям агента клеточного связывания, в частности, по группам ε-амино, которые несут боковые цепи остатков лизина (Ьук) антитела. В случае антитела (МАЬ) получают конъюгат формулы: МАГОСМИ-САОЦА-СгурШ],!, где Ь*=такой фраг- 27 024627 мент линкера Ь, содержащего ОСК1=-С(=О)^ЬКЬ, чтобы Ь=-Ь*С(=О)^ьКь;
в присутствии производного криптофицина формулы (III), где С=-(СН2)пУ, моноклональное антитело содержит -§Н-группы, если У=-С1, группы -С^СН, если Υ=-Ν3 или карбоксильные кислотные группы, если Υ—ОН или -ΝΉ2;
в присутствии производного криптофицина, содержащего химическую реакционноспособную группу ОСК1 типа малеимидо или йодацетамидо, агент клеточного связывания включает химические тиольные группы.
Под термином агрегаты понимают ассоциации, которые могут формироваться между двумя или более агентами клеточного связывания, при этом агенты клеточного связывания могут быть модифицированы или нет методом конъюгирования. Агрегаты способны формироваться под действием большого числа параметров, таких как высокая концентрация агента клеточного связывания в растворе, рН раствора, высокие усилия сдвига, число привитых димеров и их гидрофобный характер, температура (см. ссылки, цитированные в предисловии в I. МетЬгапе §сЕ 2008, 318, 311-316), однако влияние некоторых из них точно не выяснено до сих пор. В случае работы с белками или антителами, можно сослаться на ААР§ 1оигпа1, Рго!еш АддгедаНоп апб Вюргосе55шд 2006, 8(3), Е572-Е579. Содержание агрегатов может быть определено при помощи известных методов, таких как §ЕС (см. в этой связи Апа1уБса1 ВюсйептПл 1993, 212(2), 469-480).
Водный раствор моноклонального антитела может быть забуферирован посредством, например, таких буферов, как, например, калий-фосфатный буфер или буфер, содержащий Ν-2гидроксиэтилпиперазин-№-2-этансульфоновую кислоту (буфер НЕРЕ§), или смесь буферов, такая, как буфер А, описанный ниже. Буфер зависит от природы моноклонального антитела. Производное криптофицина растворяют в полярном органическом растворителе, например в ПМ§О или ОМА.
Реакция протекает при температуре главным образом в интервале от 20 до 40°С. Продолжительность реакции варьируется от 1 до 24 ч. За реакцией между антителом и производным криптофицина можно следить при помощи §ЕС-хроматографии с рефрактометрическим и/или ультрафиолетовым детектором для того, чтобы определять ход реакции. Если степень замещения недостаточна, то можно продлить время реакции и/или добавить производное криптофицина. Можно сослаться на общий метод, раскрытый в части описания примеров осуществления, чтобы узнать подробности относительно конкретных условий реакции. Частные варианты осуществления описаны в примерах 9, 10, 11, 25, 26 или 27.
Специалист располагает различными хроматографическими методами для осуществления разделения на стадии (ίί): конъюгат может быть очищен, например, методом эксклюзионной стерической хроматографии (§ЕС), адсорбционной хроматографии (такой как ионообменная хроматография, 1ЕС), хроматографии гидрофобного взаимодействия (Н1С), аффинной хроматографии, хроматографии на смешанных носителях, таких как керамический гидроксиапатит, или ВЭЖХ. Может быть также использована очистка методом диализа или диафильтрации.
После стадии (ί) или (ίί) раствор конъюгата можно направить на стадию (ίίί) ультрафильтрации и/или диафильтрации. После выхода из этих стадий получают таким путем конъюгат в виде водного раствора.
Антитела.
Антитела (см. о них 1апе^ау е! а1., 1тгаипоЬю1о§у, 5-е изд., 2001, Оаг1апб РиЬ15Ыпд, Нью-Йорк) могут быть выбраны из тех, которые описаны, в частности, в \УО 04043344, \УО 08010101, \УО 08047242, \УО 05009369 (против СА6) или \УО 2010014812. Антитело необязательно может быть модифицировано посредством модифицирующего агента для того, чтобы способствовать связыванию с производным криптофицина (см. выше). Антитела могут быть, в частности, моноклональными, поликлональными или мультиспецифичными, предпочтительно моноклональными. Это могут быть также фрагменты антител. Это могут быть также муриновые, человеческие, гуманизированные или химерные антитела.
Конъюгат.
Конъюгат обычно включает около 1-10 производных криптофицина, связанных ковалентно с моноклональным антителом (речь идет о степени сшивки или, по-английски, о бгадЧо-апБЬобу гаБо или ПАК). Это число меняется в зависимости от природы моноклонального антитела и производного криптофицина, а также от рабочих условий, используемых в способе конъюгирования (например, количество эквивалентов производного криптофицина по отношению к моноклональному антителу, время реакции, природа растворителя и, возможно, сорастворителя). Контактирование моноклонального антитела с производным криптофицина приводит к смеси, содержащей несколько конъюгатов, отличающихся индивидуально друг от друга по различным показателям ПАК; при этом возможно, что моноклональное антителоне полностью прореагировало; возможно наличие агрегатов. Следовательно, величина ИАК, определяемая в конечном растворе, соответствует средней величине ПАК
В случае, когда агентом клеточного связывания является антитело, может быть использован метод УФ-спектроскопии для определения ПАК Этот метод основан на методе, изложенном в АЩопу §. ΠίιηίίϊΌν (еб), ЬЬС, 2009, ТБегареиБс АпБЬоФе5 апб РгоФсок, т. 525, 445, §рБпдег §щепсе. Он заключается в измерении поглощения раствора конъюгата, полученного после стадии разделения (ίί), на двух длинах
- 28 024627 волн, обозначемых λ1 и λ2. Используют следующие коэффициенты молярной экстинкции голого антитела и производного криптофицина, измеренные перед конъюгированием.
Поглощение раствора конъюгата при λ1 и λ2 (Ам) и (Αλ2) измеряют либо при соответствующем пике спектра ЗЕС (это позволяет расчитать ИАК(ЗЕС)) или с использованием классического УФспектрофотометра (это позволит расчитать ИАК(иУ)). Значения поглощения могут быть выражены в форме уравнений
Αχι. ( εΕχι) + (СдХЕдхх)
А\2= (сЕх εΕ\2) + (Сдх ) в которых с, и сА обозначают соответственно концентрации в растворе части конъюгата, относящейся к производному криптофицина, и части конъюгата, относящейся к антителу;
εϋλ1 и εϋλ2 обозначают коэффициенты молярного поглощения производного криптофицина перед конъюгированием на двух длинах волн λ1 и λ2 соответственно, причем коэффициенты измерены с соединениями формулы (II) типа 8Ζ3, где Ζ^-ЗМе или типа -С^О)^^, где ΖЬКЬ=ОМе;
εΑλ1 и εΑλ2 обозначают коэффициенты молярного поглощения голых антител на двух длинах волн λ1 и λ2 соответственно.
Под голым антителом понимают антитело, к которому не присоединено ни одно производное криптофицина, т.е. антитело перед конъюгированием.
Решение указанных двух уравнений приводит к
Сп= [ ( Га? ι ) - ( ГддгхАы ) ] / [ ( Год2х ε Αλί) - х £с?.1) ] сд=[Αχι-] /САМ
Тогда среднее значение ИАК соответствует с2/сЛ. В случае производных криптофицина можно установить длину волны λ1=280 нм, и, в зависимости от природы криптофицина, λ2 выбирают из интервала специфических длин волны 246-252 нм. Значение ИАК(иУ)предпочтительно выше 0,5, более конкретно между 1 и 10, еще более конкретно между 2 и 7.
Конъюгат может быть использован в качестве противораковых агентов. Благодаря присутствию моноклонального антитела, конъюгат становится значительно более избирательным к опухолевым клеткам, чем к здоровым клеткам. Это позволяет направлять производное криптофицина в пространство, близкое к опухолевым клеткам, или непосредственно внутрь этих клеток (см. об этом следующие публикации, которые описывают использование конъюгатов с моноклональными антителами при лечении раковых опухолей: АпбЬобу-бгид соп)ида!е8 Гог сапсег Легару Сайег Р.1, е! а1., Сапсег Т 2008, 14, 154-169; Тагде!еб сапсег Легару: сопГегппд вресШсИу !о су!о!охю бгидк СЬап К., Асе. СЬет. Ке8. 2008, 41, 98107). Это также дает возможность лечить солидные и жидкие опухоли. Конъюгат может быть использован индивидуально или в комбинации по меньшей мере с одним другим противораковым агентом.
Конъюгат входит в рецептуры, выпускаемые в форме забуференного водного раствора, в концентрации, как правило, между 1 и 10 мг/мл. Этот раствор может быть инъецирован в форме перфузии как таковой или разбавлен с получением перфузионного раствора.
Примеры
Используемые методы анализа.
Жидкостная хроматография высокого давления - масс-спектрометрия (ЖХМС).
Метод А1.
Анализ проводят в аппарате ^а!егк ΖΟ на колонке ХВйбде С18 2,5 мкм (3x50 мм) при 70°С со скоростью потока 0,9 мл/мин, градиент элюирования (7 мин)(А)вода/0,1% муравьиная кислота и (В) ацетонитрил/0,1% муравьиная кислота (градиент: от 5 до 100% В за 5,3 мин; 5,5 мин: 100% В; 6,3 мин: 5% В) и ионизация электрораспылением в положительном и/или отрицательном режиме.
Метод А2.
Анализ проводят в аппарате ^а!егк иРЬС-ЗОЭ на колонке Асцийу ВЕН С18 1,7 мкм (2,1x50 мм) при 50°С со скоростью потока 1 мл/мин, градиент элюирования (2 мин) (А)вода/0,1% муравьиная кислота и (В) ацетонитрил/0,1% муравьиная кислота (градиент: от 5 до 50% В за 0,8 мин; 1,2 мин: 100% В; 1,85 мин: 100% В; 1,95 мин: 5% В) и ионизация электрораспылением в положительном и/или отрицательном режиме.
Метод А3.
Анализ проводят в аппарате ^а!егк иРЬС-ЗОЭ на колонке Асцийу ВЕН Οι8 1,7 мкм (2,1x50 мм) при 70°С со скоростью потока 1 мл/мин, градиент элюирования (2 мин) (А)вода/0,1% муравьиная кислота и (В) ацетонитрил/0,1% муравьиная кислота (градиент: от 5 до 50% В за 1 мин; 1,3 мин: 100% В; 1,45 мин: 100% В; 1,75 мин: 5% В) и ионизация электрораспылением в положительном и/или отрицательном режиме.
Метод А4.
Анализ проводят в аппарате ^а!егк ΖΟ на колонке РЬепотепех Кше!ех С!8 100А 2,6 мкм (3x50 мм) при 45°С со скоростью потока 1 мл/мин, градиент элюирования (6 мин) (А)вода/0,1% муравьиная кислота и (В) ацетонитрил/0,1% муравьиная кислота (градиент: 6% В: 0,8 мин; от 6 до 100% В за 4,1 мин; 4,8
- 29 024627 мин: 100% В; 5,0-6,0 мин: 6% В) и ионизация электрораспылением в положительном и/или отрицательном режиме.
Метод А5.
Анализ проводят в аппарате \Уа1ег5 ΖΟ на колонке РЬепотепех Кше1ех С18 2,6 мкм (3x1000 мм) при 50°С со скоростью потока 0,8 мл/мин, градиент элюирования (8 мин) (А)вода/0,1% муравьиная кислота и (В) ацетонитрил/0,1% муравьиная кислота (градиент: 4% В: 0,15 мин; от 4 до 100% В за 6,85 мин; 7,1 мин: 100% В; 7,4-8,2 мин: 4% В) и ионизация электрораспылением в положительном и/или отрицательном режиме.
Масс-спектрометрия (МС).
Спектры получают путем прямого введения в аппарат ХУАТЕКЗ ОСТоГ (прямое введение без ЖХ).
Эксклюзионная стерическая хроматография. Масс-спектрометрия высокого разрешения (§ЕСНКМ8).
Анализ может потребовать проведения предварительной стадии дегликозилирования конъюгата. Эту стадию осуществляют добавлением к 2%-му (об.) раствору конъюгата раствора фермента РNΟа5е Р (полученного добавлением воды милли-Ц к 100 единицам лиофилизата фермента Ν-гликаназы, доводя объем во флаконе до 100 мл). Раствор гомогенизируют с помощью прибора вортекс и инкубируют при 37°С в течение 19 ч. Дегликозилированный образец готов к анализу 8ЕС-НКМ§. Хроматографический анализ осуществляют на аппарате АдПеп1 НР 1100 и на колонке \Уа1ег5 ВювиЪе 250 НК §ЕС 4 мкм (4,6x300 мм) при 30°С, при скорости потока 0,4 мл/мин и изократическом элюировании смесью (А) формиат аммония 25 мМ рН 7/(В) ацетонитрил 70/30 за 15 мин. Масс-спектрометрию осуществляют на аппарате \Уа1ег5 РТОЕ ίί с ионизацией электрораспылением в положительном режиме. Масс-спектры подвергают деконволюции с использованием программного обеспечения \Уа1ег5 МахЕпЙ.
Эксклюзионная стерическая хроматография (§ЕС НРЬС).
Анализ проводят на аппарате Мегск ЬасЬтот Е1Ье НРЬС со спектрофотометрическим детектором Ь2455 ОАЭ и колонкой ТовоЬ Вювшепсе Т§Кде1 03000 ЗХУХБ 5 мкм (7,8x300 мм) при скорости потока 0,5 мл/мин и изократическом элюировании в течение 30 мин буфером рН 7, содержащим 0,2 М КС1, 0,052 М КН2РО4, 0,107 М К2НРО4 и 20% об. изопропанола.
Ядерный магнитный резонанс 1Н (ЯМР).
Спектры 1Н ЯМР снимали на спектрометре Вгикег Ауапсе, модель ΌΚΧ-300, ΌΚΧ-400, ΌΚΧ-500 или ОМХ-600. Химические сдвиги даны в м.д.
Общий способ, используемый для получения конъюгатов, в которых производные криптофицина содержат линкер Ь с концевой группой -δΖ3.
Способ осуществления в две последовательные стадии.
Стадия 1.
Антитело сначала модифицируют активированным сложным ΝΉδ-эфиром для введения на поверхность антитела пиридилсульфидных групп. Раствор антитела Ьи2Н11 в водном буфере с рН 6,5, содержащем 0,05 М фосфата калия и 0,05 М №С1, (обозначаемого как буфер А), обрабатывают с помощью 510 экв. активированного сложного ΝΉδ-эфира, растворенного в ОМА таким образом, чтобы конечная концентрация антитела составляла от 5 до 10 мг/мл и процентное содержание ОМА в водном буфере составляло 5%. Реакцию продолжают в течение 2 ч при КТ. Смесь наносят на гель-фильтрующую колонку (матрица δерЬайеx™ 025, ОЕ НеаЪЬсате), предварительно уравновешенную водным буфером рН 8, содержащим 0,05 М НЕРЕδ, 0,05 М Ν;·ιΟ и 2 мМ БЭТА. Модифицированные антитела элюируют буфером НЕРЕδ рН 8, собирают и количественно анализируют методом УФ-спектрометрии для определения концентрации антител в образце и числа пиридилсульфидных групп. Пробу модифицированного антитела обрабатывают дитиотреитолом для восстановления дисульфидной связи, высвободившийся пиридин-2тион подвергают количественному анализу методом спектрометрии (коэффициенты экстинкции: ε343 нм: 8080 М-1см-1, ε280 нм: 5100 М-1см-1 для пиридин-2-тиона и ε280 нм: 208380 М-1см-1 для антитела). В среднем от 3 до 6 пиридилдисульфидных групп прививаются к молекуле антитела.
Стадия 2.
Раствор модифицированного антитела, полученного на 1-й стадии, разбавляют водным буфером рН 8, описанным выше, затем обрабатывают раствором производного криптофицина (5 экв.) таким образом, чтобы конечная концентрация антитела была 3 мг/мл, а процентное содержание ОМА в водном буфере составило 20%; количество эквивалентов производного криптофицина выражено по отношению к количеству молекул пиридилсульфида, введенных на первой стадии. Реакция продолжается в течение ночи при 30°С или при перемешивании со скоростью около 2000 об/мин. Смесь анализируют методом δЕС НРЬС, чтобы определить степень прививки производного криптофицина к антителу. Если степень замещения недостаточна, смесь обрабатывают дополнительно 1-5 экв. производного криптофицина в ОМА в течение 3 ч при 30°С или при перемешивании со скоростью около 2000 об/мин. Смесь фильтруют через фильтр МШехФ-δν 5 мкм (мембрана РУЭЕ, Эигароге, МПЬроте), затем очищают гель-фильтрацией с использованием матрицы δире^йеx 200 рд (колонка НПоай 16/60 обессоливающая, ОЕ НеаЪЬсате), предварительно уравновешенной водным буфером рН 6,5, содержащим 0,01 М фосфата, 0,14 М ΝηΟ и 10%- 30 024627
20% NМΡ. Фракции, содержащие конъюгированное антитело в мономерной форме, собирают, объединяют и концентрируют на приборе Атюоп иЬга-15 (мембрана И11гасе1 10к или 50к, МПНроге) до концентрации от 2 до 15 мг/мл. Замену буфера окончательно производят для того, чтобы удалить органический растворитель из буфера для хранения конъюгата. Конъюгат наносят на гель-фильтрационную колонку, состоящую из матрицы 8ирегДех™ Ο25 (колонки Мар-5,-10, ΡΌ-10, Нргер 26/10 обессоливающая, ΟΕ Неа1!Ьсаге), предварительно уравновешенной водным буфером, имеющим состав и рН, подобранные для каждого конъюгата. Конечный конъюгат количественно анализируется методом УФ-спектрометрии с использованием коэффициентов экстинкции, установленных для антитела и соответствующего производного криптофицина, с целью определения концентрации антитела и среднего значения индекса токсичности, вносимого антителом. Степень замещения может быть рассчитана путем деконволюции 8ЕСНКМ8-спектра конъюгата.
Двухстадийный способ опе-ро!.
Антитело сначала модифицируют активированным сложным МН8-эфиром для введения на поверхность антитела пиридилдисульфидных групп. Раствор антитела Ьи2Н11 в водном буфере рН 6,5, содержащем 0,05 М фосфата калия и 0,05 М №С1, разбавляют фосфатным буфером с рН 6,5 и 1н. водным раствором НЕРЕ8 таким образом, чтобы конечное соотношение между первоначальным фосфатным буфером с рН 6,5 и НЕРЕ8 составляло 96/4 для достижения рН«7,5-8. Этот раствор антитела обрабатывают 510 экв. активированного сложного NΗ8-эфира, растворенного в ЭМА таким образом, чтобы конечная концентрация антитела составляла от 5 до 10 мг/мл и процентное содержание ЭМА в водном буфере составляло 5%. Реакцию продолжают 2 ч при КТ. Раствор модифицированного таким путем антитела разбавляют непосредственно в смеси 96/4 фосфатного буфера рН 6,5 и НЕРЕ8, затем обрабатывают раствором производного криптофицина (4 экв.) в ЭМА таким образом, чтобы конечная концентрация антитела составляла 3 мг/мл и процентное содержание ЭМА в водном буфере составило 20%; число эквивалентов производного криптофицина выражают по отношению к числу эквивалентов активированного сложного NΗ8-эфира, введенных на первой стадии. Реакцию продолжают в течение ночи при 30°С или при перемешивании со скоростью около 2000 об/мин. Смесь анализируют методом 8ЕС НРЬС для определения степени прививки производного криптофицина к антителу. Если степень замещения недостаточна, смесь обрабатывают дополнительно 1-5 экв. производного криптофицина в ЭМА в течение 3 ч при 30°С или при перемешивании со скоростью около 2000 об/мин. Смесь фильтруют через фильтр МП1ех®-8У 5 мкм (мембрана РУЭР, Эитароте, МПНроге), затем очищают гель-фильтрацией с использованием матрицы 8ирегДех 200 рд (колонка НПоаД 16/60 обессоливающая, ОЕ Неа1!Ьсаге), предварительно уравновешенной водным буфером рН 6,5, содержащим 0,01 М фосфата, 0,14 М Ν;·ιΟ и 10%-20% ММР. Фракции, содержащие конъюгированное антитело в мономерной форме, собирают, объединяют и концентрируют на приборе Атюоп И1!та-15 (мембрана иНтасе1 10к или 50к, МПНроге) до концентрации от 2 до 15 мг/мл. Замену буфера окончательно производят для того, чтобы удалить органический растворитель из буфера для хранения конъюгата. Конъюгат наносят на гель-фильтрационную колонку, состоящую из матрицы 8ирегДех™ О25 (колонки Мар-5, -10, РЭ-10, Шргер 26/10 обессоливающая, ОЕ Неа1!Ьсаге), предварительно уравновешенной водным буфером, имеющим состав и рН, подобранные для каждого конъюгата. Количественный анализ конечного конъюгата осуществляется методом УФ-спектрометрии с использованием коэффициентов экстинкции, установленных для антитела и соответствующего производного криптофицина, с целью определения концентрации антитела и среднего значения индекса токсичности, вносимого антителом. Степень замещения может быть расчитана путем деконволюции 8ЕС-НРМ8-спектра конъюгата.
Общий способ, используемый для получения конъюгатов, в которых производные криптофицина содержат линкер Ь с концевой группой -С(=О)2ЪКЪ.
Раствор антитела Ьи2Н11 в водном буфере рН 8, содержащем 0,05 М НЕРЕ8, 0,05 М МаС1 и 2 мМ ЕЭТА или состоящем из смеси 96/4 водного буфера рН 6,5, содержащего 0,05 М фосфата калия и 0,05 М МаС1/1н. НЕРЕ8, обрабатывают избытком раствора в ЭМА производного криптофицина таким образом, чтобы конечная концентрация антитела была 3 мг/мл, а процентное содержание ЭМА в водном буфере составило 20%. Реакцию продолжают 3 ч при 30°С или при перемешивании со скоростью около 2000 об/мин. Смесь анализируют методом 8ЕС НРЬС для определения степени прививки цитотоксического соединения к мономерной популяции антитела. Если степень замещения недостаточна, смесь обрабатывают дополнительными 1-5 экв. производного криптофицина в ЭМА в течение 3 ч при 30°С или при перемешивании со скоростью около 2000 об/мин. Смесь фильтруют через фильтр МШех®-8У 5 мкм (мембрана РУЭР, Эигароге, МПНроге), затем очищают гель-фильтрацией с использованием матрицы 8ирегДех 200 рд (колонка НДоаД 16/60 обессоливающая, ОЕ НеаНЬсате), предварительно уравновешенной водным буфером рН 6,5, содержащим 0,01 М фосфата, 0,14 М МаС1 и 10-20% ММР. Фракции, содержащие конъюгированное антитело в мономерной форме, собирают, объединяют и концентрируют на приборе Атюоп ИНта-15 (мембрана И1!тасе1 10к или 50к, МПНроге) до концентрации от 2 до 5 мг/мл. Замену буфера окончательно производят длч того, чтобы удалить органический растворитель из буфера для хранения конъюгата. Конъюгат наносят на гель-фильтрационную колонку, состоящую из матрицы 8е- 31 024627 рЬабех™ О25 (колонки Яар-5,-10, ΡΌ-10, Шргер 26/10 обессоливающая, ОЕ НеаИЬсаге), предварительно уравновешенной водным буфером, имеющим состав и рН, подобранные для каждого конъюгата. Конечный конъюгат количественно анализируется методом УФ-спектрометрии с использованием коэффициентов экстинкции, установленных для антитела и соответствующего производного криптофицина, для определения концентрации антитела и степени прививки. Степень замещения может быть также рассчитана путем деконволюции δЕС-НΚМδ-спектра конъюгата.
Способы, описанные с участием антитела Ьи2Н11, применимы аналогичным образом и к другим антителам, а также к другим моноклональным антителам.
Пример 1. (Е)-(3δ,10Κ,16δ)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-16-[(δ)-1-((2Κ,3Κ)-3-{4-[4-(4меркапто-4-метилпентаноил)пиперазин-1 -илметил] фенил}оксиранил)этил] -6,6-диметил-1,4-диокса-8,11диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраон
Соединение 2. (Е)-(3δ,10Κ,16δ)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-16-{(δ)-1-[(Κ)-3-(4-хлорметилфенил)оксиранил]этил}-3-изобутил-6,6-диметил-1,4-диокса-8,11-циазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраон
Соединение 1 (30 мг; 42,9 мкмол, получено согласно А1-а\\аг Κ.δ., е! а1., ί. Меб. СЬет. 2003, 46, 2985-3007) растворяют в безводном ИМР (2 мл) и смесь охлаждают до 0°С, после этого добавляют ТЕА (107 мкмоль), затем СМδ (64,6 мкмоль). Спустя 15 мин баню удаляют и реакцию продолжают при перемешивании в течение 12 ч при КТ. Смесь разбавляют добавлением АсОЕ! (2 мл) и органический слой промывают водой (2x1 мл), насыщенным водным раствором ЯаНСО3 (1 мл) и насыщенным водным раствором ЯаС1 (1 мл). Органический слой сушат над М^О4 и после фильтрования и выпаривания растворителей при ПД получают продукт 2 в форме бесцветного кристаллизующегося масла (25 мг; 81%). 'Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6): 0,77-0,83 (м, 6Н); 1,02 (с, 3Н); 1,04-1,07 (м, 3Н); 1,14 (с, 3Н); 1,29-1,36 (м, 1Н); 1,54-1,63 (м, 2Н); 1,80-1,87 (м, 1Н); 2,24-2,33 (м, 1Н); 2,63-2,73 (м, 2Н); 2,96-3,06 (м, 3Н); 3,28-3,32 (м, 1Н); 3,83 (с, 3Н); 3,93 (д, >1,6 Гц, 1Н); 4,27 (ддд, 1=11,3, 8,0, 3,6 Гц, 1Н); 4,78 (с, 2Н); 4,93 (дд, 1=9,6, 3,6 Гц, 1Н); 5,13 (дд, 1=10,8, 5,1 Гц, 1Н); 5,81 (д, 1=14,8 Гц, 1Н); 6,49 (ддд, 1=15,0, 11,2, 3,7 Гц, 1Н); 7,07 (д, 6=8,5 Гц, 1Н); 7,18 (цд, 1=8,5, 1,9 Гц, 1Н); 7.23 (д, 1=9,6 Гц, 1Н); 7,29 (д, 1=1,9 Гц, 1Н); 7,34 (д, 1=8,2 Гц, 2Н); 7,47 (д, 1=8,2 Гц, 2Н); 8,35 (д, 1=8,2 Гц, 1Н). ЖХМС (А1): Еδ т^=713 [М+Н]+; т//=715 [М-Н]-; !К=5,17 мин.
Соединение 4. 2,5 -Диоксопирролидин-1 -ил-4-метил-4 -метилдисульфанилпентаноат
К раствору, продуваемому аргоном, соединения 3 (3,05 г, 15,7 ммоль, получено согласно УО 2007085930) в ИСМ (30 мл), последовательно добавляют ΝΉδ (17,3 ммоль) и хлорид ЕЭС! (17,3 ммоль). Смесь перемешивают 3 ч при КТ, после чего промывают фосфатным буфером рН 6 (2x30 мл), затем насыщенным раствором Ν;·ιΟ (30 мл), сушат над М^О4 и концентрируют досуха. Полученное кристаллизирующееся масло с запахом промывают смесью гептана/АсОЕ! 75/25 и фильтруют через фриттированное стекло с получением соединения 4 в форме твердого белого вещества (2,08 г, 45%). Фильтрат концентрируют досуха, и полученный неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью гептана/АсОЕ! 50/50-0/100. Фракции, содержащие целевой продукт, концентрируют досуха и обрабатывают изопропиловым эфиром (5 мл); осадок отфильтровывают через фриттированное стекло и получают целевое соединение 4 (1 г, 22%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): 1,29 (с, 6Н); 1,92-1,98 (м, 2Н); 2,41 (с, 3Н); 2,72-2,78 (м, 2Н); 2,81 (с, 4Н); ЖХМС (А4): Е1, т//=291 [М+Н]+.
Соединение 5. трет-Бутил-4-(4-метил-4-метилдисульфанилпентаноил)пиперазин-1 -карбоксилат
В колбу УЬеа!!оп помещают соединение 4 (200 мг, 686 мкмоль), 1-Вос-пиперазин (686 мкмоль), ТЕА (755 мкмоль) и ИМР (1,6 мл). Смесь перемешивают при КТ в течение ночи, затем рабавляют с помощью АсОЕ! (5 мл), промывают водой (2x5 мл), сушат над М^О4 и концентрируют досуха. Неочищенный продукт обрабатывают изопропиловым эфиром (3 мл); осадок отфильтровывают через фритти- 32 024627 рованное стекло и получают соединение 5 (213 г, 86%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-Б6): 1,27 (с, 6Н); 1,41 (с, 9Н); 1,73-1,87 (м, 2Н); 2,34-2,41 (м, 2Н); 2,40 (с, 3Н); 3,23-3,36 (м частично экранирован, 4Н); 3,39-3,45 (м, 4Н). ЖХМС (А2): Е8 т//=363 [М+Н]+; т^=307 [М+Н-С4Н8]-; Ц=1,08 мин.
Соединение 6. Гидрохлорид 4-метил-4-метилдисульфанил-1-пиперазин-1-илпентан-1-она
К раствору соединения 5 (213 мг, 588 мкмоль) в диоксане (4,4 мл) прибавляют 4 М раствор НС1 в диоксане (4,4 мл). Перемешивание ведут 4 ч при КТ. Смесь отфильтровывают через фриттированное стекло, полученный твердый продукт промывают диоксаном (2 мл), затем изопропиловым эфиром (2 мл) и получают соединение 6 (132 мг, 75%) в форме твердого вещества кремового цвета. 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-ф): 1,27 (с, 6Н); 1,73-1,85 (м, 2Н); 2,37-2,45 (м, 2Н); 2,40 (с, 3Н); 2,98-3,15 (м, 4Н); 3,62-3,73 (м, 4Н); 9,39 (м уш., 2Н). ЖХМС (А1): Е8 т/ζ 263 [М+Н]+; Ц=2, 40 мин.
Соединение 7. (Е)-(38,10К,168)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-16-[(8)-1((2К,3К)-3-{4-[4-(4-метил-4-метилдисульфанилпентаноил)пиперазин-1 -илметил] фенил}оксиранил)этил] 1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраон
Соединение 1 (20,3 мг; 29,0 мкмоль) растворяют в безводном ΌΜΡ (0,77 мл) и ТЕА (72,6 мкмоль), затем добавляют СМ8 (43,6 мкмоль). Спустя 12 ч при КТ образовавшийся продукт 2 не выделяют, а добавляют ТЕА (58,0 мкмоль), затем гидрохлорид 4-метил-4-метилдисульфанил-1-пиперазин-1-илпентан1-она 6 (34,8 мкмоль). Смесь перемешивают дополнительно 72 ч при КТ, затем разбавляют посредством АсОЕ1 (10 мл). Органический слой промывают водой (2x2 мл), насыщенным водным раствором ИаНСО3 (2 мл) и насыщенным водным раствором ИаС1 (2 мл). После сушки над М§8О4 и фильтрации растворители выпаривают при ПД. Неочищенный продукт реакции очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ЭСМ/метанол 99/1-98/2. Получают твердый белый продукт 7 (5,7 мг; 21%). ТСХ (ЭСМ 90/МеОН 10): К=0,6; !Н ЯМР (400 МГц, Д\1СО-сЕ): 0,75-0,81 (м, 6Н); 1,01 (с, 3Н); 1,05 (д, 1=6,8 Гц, 3Н); 1,12 (с, 3Н); 1,26 (с, 6Н); 1,28-1,33 (м, 1Н); 1,52-1,61 (м, 2Н); 1,76-1,83 (м, 2Н); 2,27-2,38 (м, 4Н); 2,39 (с, 3Н); 2,64-2,74 (м, 2Н); 2,95-3,05 (м, 2Н); 3,24-3,34 (м, 6Н); 3,44 (шир. с, 4Н); 3,49 (с, 2Н); 3,81 (с, 3Н); 3,88 (д, 1=1,7 Гц, 1Н); 4,22-4,29 (м, 1Н); 4,92 (дд, 1=9,9, 3,5 Гц, 1Н); 5,08-5,15 (м, 1Н); 5,81 (д, 1=14,2 Гц, 1Н);
6,48 (ддд, 1=15,2, 11,3, 3,5 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,6 Гц, 1Н); 7,17 (дд, 1=8,4, 2,3 Гц, 1Н); 7,22 (д, 1=9,3 Гц, 1Н); 7,25-7,34 (м, 5Н); 8,34 (д, 1=8,1 Гц, 1Н). ЖХМС (А1): Е8 т/ζ 943 [М+Н]+; т//=941 [М-Н]-; Ц=4,03 мин.
Пример 1. (Е)-(38,10К,168)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-16-[(8)-1((2К,3К)-3-{4-[4-(4-меркапто-4-метилпентаноил)пиперазин-1-илметил]фенил}оксиранил)этил]-1,4диокса-8,11-диазациклогекса,цец-13-ен-2,5,9,12-тетраон
Продукт 7 (9,6 мг; 10,2 мкмоль) растворяют в смеси этанола (1,2 мл)/воды (1 мл) и смесь встряхивают. Затем добавляют ТСЕР (25,4 мкмоль) и смесь перемешивают 5 ч при КТ. Смесь разбавляют добавлением АсОЕ1 и органический слой промывают смесью 1/1 воды и насыщенного водного раствора ИН4С1 (1 мл). После сушки органического слоя над М§8О4, фильтрации и выпаривания растворителей при ПД конечный продукт, пр.1, получают в форме белого твердого вещества (6,5 мг; 71%). ТСХ (ЭСМ 90/МеОН 10): К=0,56; !Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-ф): 0,76-0,81 (м, 6Н); 1,01 (с, 3Н); 1,06 (д, 1=6,8 Гц, 3Н); 1,13 (с, 3Н); 1,24 (с, 6Н); 1,27-1,31 (м, 1Н); 1,56-1,64 (м, 2Н); 1,73-1,85 (м, 3Н); 2,26-2,33 (м, 3Н); 2,36-2,45 (м, 4Н); 2,63-2,75 (м, 2Н); 2,95-3,06 (м, 3Н); 3,34-3,36 (м, 1Н); 3,42-3,51 (м, 6Н); 3,82 (с, 3Н); 3,89 (с, 1Н); 4,22-4,29 (м, 1Н); 4,92 (дд, 1=9,8, 3,4 Гц, 1Н); 5,12 (дд, 1=10,8, 4,9 Гц, 1Н); 5,81 (д, 1=15,2 Гц, 1Н);
6,48 (ддд, 1=15,0, 11,4, 3,4 Гц, 1Н); 7,06 (д, 1=8,3 Гц, 1Н); 7,18 (дд, 1=8,3, 1,5 Гц, 1Н); 7,24 (д, 1=9,8 Гц, 1Н); 7,26-7,36 (м, 5Н); 8,37 (д, 1=7,8 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): Е8 т/ζ 897 [М+Н]+; т/ζ 895 [М-Н]; Ц=0,97 мин.
- 33 024627
Пример 2. (Е)-(3§,6К,10К,16§)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-16-[(§)-1-((2К,3К)-3-{4-[4(4-меркапто-4-метилпентаноил)пиперазин-1-илметил]фенил}оксиранил)этил]-6-метил-1,4-диокса-8,11диазациклоге ксадец- 13-ен-2,5,9,12-тетраон
Соединение 9. (Е)-(3§,6К,10К,16§)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-16-{(§)-1-[(К)-3-(4-хлорметилфенил)оксиранил]этил}-3-изобутил-6-метил-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраон
Соединение 8 (49 мг; 71,4 мкмол, которое может быть получено согласно А1-а\\аг К.8., с1 а1., ί. Меб. Сйет. 2003, 46, 2985-3007) растворяют в безводном ЭСМ (5 мл) и смесь охлаждают до 0°С, после этого добавляют ΌΙΡΕΆ (428 мкмоль), затем СМ§ (214 мкмоль). Дают смеси вернуться к КТ и ведут перемешивание 40 ч при КТ. Смесь гидропизуют посредством 5 мл воды, водный слой экстрагируют посредством ΌΟΜ (3x5 мл). Органические слои объединяют, промывают насыщенным водным раствором ΝαНСО3 (10 мл) и насыщенным водным раствором ΝαΤΊ (10 мл) и сушат над Мд§О4. После фильтрации и выпаривания растворителей при ПД неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ЭСМ/МеОН 100/0-90/10. Соединение 9 получают в виде твердого белого вещества (37 мг; 79%). ΊI ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6): 0,78 (д, 1=6,6 Гц, 3Н); 0,80 (д, 1=6,6 Гц, 3Н); 1,01 (д, 1=6,9 Гц, 3Н); 1,05 (д, 1=6,9 Гц, 3Н); 1,30 (м, 1Н); 1,54 (м, 1Н); 1,60 (м, 1Н); 1,82 (м, 1Н); 2,27 (м, 1Н); 2,60-2,78 (м, 3Н); 2,97-3,05 (м, 2Н); 3,15 (м, 1Н); 3,41 (м, 1Н); 3,81 (с, 3Н); 3,92 (д, 1=1,6 Гц, 1Н); 4,26 (ддд, 1=3,8 и 8,2 и 11,5 Гц, 1Н); 4,77 (с, 2Н); 4,88 (дд, 1=3, 8 и 9,6 Гц, 1Н); 5,12 (ддд, 1=1,5 и 5,3 и 11,2 Гц, 1Н); 5,80 (дд, 1=1,5 и 15,0 Гц, 1Н); 6,47 (ддд, 1=3,7 и 11,2 и 15,0 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,5 Гц, 1Н); 7,17 (дд, 1=2,2 и 8,5 Гц, 1Н); 7,23 (дд, 1=2,7 и 9,1 Гц, 1Н); 7,29 (д, 1=2,2 Гц, 1Н); 7,32 (д, 1=8,2 Гц, 2Н); 7,45 (д, 1=8,2 Гц, 2Н); 8,34 (д, 1=8, 2 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): Е8 т/ζ 703 [М+Н]+; т/ζ 701 [М-Н]-; т/ζ 747 [М-Н+НСО2Н]- пик молекулярного иона; 0=1,17 мин.
Соединение 10. (Е)-(38,6К,10К,16§)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6-метил-16-[(§)-1((2К,3К)-3-{4-[4-(4-метил-4-метилдисульфанилпентаноил)пиперазин-1 -илметил] фенил}оксиранил)этил] 1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраон
Соединение 9 (36,6 мг; 52 мкмоль) растворяют в безводном ацетонитриле (3 мл), затем последовательно добавляют ΌΙΡΕΑ (260 мкмоль) и соединение 6 (156 мкмоль). Реакционную среду перемешивают 20 ч при КТ, затем гидролизуют добавлением 4 мл воды. Водный слой экстрагируют посредством АсОЕ1 (3x4 мл), органические слои объединяют, промывают насыщенным водным раствором NаНСО3 (5 мл) и насыщенным водным раствором №С1 (5 мл). После сушки над Мд§О4 и фильтрации растворители выпаривают при ПД. Неочищенный продукт реакции очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ЭСМ/метанол 100/0-95/5. Соединение 10 получают в виде твердого белого вещества (39 мг; 80%). 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6): 0,78 (д, 1=6, 6 Гц, 3Н); 0,80 (д, 1=6,6 Гц, 3Н); 1,01 (д, 1=6,9 Гц, 3Н); 1,05 (д, 1=6,9 Гц, 3Н); 1,26 (с, 6Н); 1,30 (м, 1Н); 1,53 (м, 1Н); 1,60 (м, 1Н); 1,75-1,84 (м, 3Н); 2,26-2,37 (м, 7Н); 2,39 (с, 3Н); 2,61-2,77 (м, 3Н); 2,96-3,05 (м, 2Н); 3,15 (м, 1Н); 3,38 (м частично экранирован, 1Н); 3,44 (м, 4Н);
3,48 (с, 2Н); 3,81 (с, 3Н); 3,88 (д, 1=1,6 Гц, 1Н); 4,27 (ддд, 1=4,0 и 8,1 и 11,5 Гц, 1Н); 4,88 (дд, 1=3,8 и 9,6 Гц, 1Н); 5,12 (ддд, 1=1,6 и 5,3 и 11,5 Гц, 1Н); 5,80 (дд, 1=1,6 и 15,1 Гц, 1Н); 6,47 (ддд, 1=3,6 и 11,5 и 15,1 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,5 Гц, 1Н); 7,17 (дд, 1=2, 2 и 8,5 Гц, 1Н); 7,23 (дд, 1-2,6 и 9,2 Гц, 1Н); 7,27 (д, 1=8,4 Гц, 2Н); 7,29 (д, 1=2,2 Гц, 1Н); 7,32 (д, 1=8,4 Гц, 2Н); 8,35 (д, 1=8,1 Гц, 1Н); ЖХМС (А2): Е8 тЦ=929 [М+Н]+; ιη/ζ=927 [М-Н]-; тЦ=973 [М-Н+НСО2Н]- пик молекулярного иона; 0=0,99 мин.
Пример 2. (Е)-(38,6К,10К,16§)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6-метил-16-[(§)-1((2К,3К)-3-{4-[4-(4-меркапто-4-метилпентаноил)пиперазин-1-илметил]фенил}оксиранил)этил]-1,4диокса-8,11 -диазациклогексадец-13 -ен-2,5,9,12-тетраон
Продукт 10 (34 мг; 36,6 мкмоль) растворяют в смеси этанола (4,3 мл)/воды (3,6 мл) и полученную смесь встряхивают. Затем добавляют ТСЕР (146 мкмоль), при этом смесь становится бесцветной, перемешивают смесь 2 ч при КТ. Смесь разбавляют добавлением АсОЕ1(20 мл) и органический слой промы- 34 024627 вают смесью 1/1 воды и насыщенного водного раствора ΝΚ·|Ο (20 мл). Водный слой экстрагируют 2x20 мл АсОЕ1, органические слои объединяют и промывают насыщенным раствором №С1 (20 мл). После сушки над М^О4, фильтрации и выпаривания растворителей при ПД неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ЭСМ/МеОН 98/2-90/10. Соединение пр.2 получают в виде твердого белого вещества (28,2 мг; 87%). 'Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6): 0,77 (д, 1=6, 6 Гц, 3Н); 0,79 (д, 1=6, 6 Гц, 3Н); 1,01 (д, 1=6,9 Гц, 3Н); 1,04 (д, 1=6,9 Гц, 3Н); 1,27 (м, 1Н); 1,31 (с, 6Н); 1,53 (м, 1Н); 1,59 (м, 1Н); 1,77 (м, 2Н); 1,82 (м, 1Н); 2,24-2,32 (м, 3Н); 2,34-2,44 (м, 4Н); 2,62-2,76 (м, 4Н); 2,98-3,04 (м, 2Н); 3,15 (м, 1Н); 3,41 (м, 1Н); 3,46 (м, 4Н); 3,48 (с, 2Н); 3,81 (с, 3Н); 3,88 (д, 1=2,0 Гц, 1Н); 4,26 (ддд, 1=3,4 и 8,3 и 11,5 Гц, 1Н); 4,88 (дд, 1=3,7 и 10,0 Гц, 1Н); 5,12 (ддд, 1=2,0 и 5,3 и 11,1 Гц, 1Н); 5,80 (дд, 1=2,0 и 15,0 Гц, 1Н); 6,47 (ддд, 1=3,7 и 11,1 и 15,0 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,3 Гц, 1Н); 7,17 (дд, 1=2,0 и 8,3 Гц, 1Н); 7,23 (дд, 1=2,9 и 9,3 Гц, 1Н); 7,27 (д, 1=8,5 Гц, 2Н); 7,29 (д, 1=2,0 Гц, 1Н); 7,32 (д, 1=8,5 Гц, 2Н); 8,35 (д, 1=8,3 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): Εδ тА=883 [М+Н]+; тА=881 [М-Н]-; ΐκ=-0,92 мин.
Пример 3. (Е)-(3δ,10Κ,16δ)-10-(3-Хлор-4-меτоксибензил)-3-изобуτил-16-[(δ)-1-((2Κ,3Κ)-3-{4-[(2меркапто-2-метилпропиламино)метил] фенил}оксиранил)этил] -6,6-диметил-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраон
Η,Ν
Соединение 11. О-Метилоксим 2-метил-2-метилдисульфанилпропиоальдегида
О N ° 11 г (33,3 ммоль) 2-(метилдитио)изобутиральдегида растворяют в 50 мл этанола в инертной атмосфере. Последовательно добавляют 5,56 г (66,54 ммоль) О-метилгидроксиламина в 50 мл этанола, затем 6,65 мл (66,54 ммоль) №ОН. Смесь мутно-белого цвета нагревают с обратным холодильником в течение ночи. После возвращения к КТ смесь выливают в 500 мл воды. Водный слой экстрагируют посредством АсОЕ! (3x175 мл), органические слои объединяют, промывают насыщенным раствором №С1 (200 мл) и сушат над М^О4. После фильтрации и концентрирования при ПД соединение 11 получают в форме бесцветного масла (5,89 г, 32,9 ммоль).
Соединение 12. 2-Метил-2-метилдисульфанилпропиламин
В колбу, продуваемую азотом, последовательно вводят при КТ 1,18 г (9,9 ммоль) простого эфира оксима 11, 19 мл безводного ТНР и 99,5 мл 2 М раствора боранметилсульфида в ТНР. Смесь нагревают 16 ч с обратным холодильником. Затем реакцию останавливают, дают смеси вернуться к КТ, и осторожно добавляют по каплям 100 мл МеОН при 0°С пока происходит пенообразование, затем при КТ. Смесь выпаривают при ПД с образованием около 2,8 г желтого масла, которое обрабатывают 30 мл 5-6н. раствора НС1 в изопропаноле. Смесь нагревают 1 ч с обратным холодильником, затем доводят до КТ в течение ночи. После выпаривания при ПД полученный остаток обрабатывают 80 мл 1н. НС1, затем экстрагируют диэтиловым эфиром (3x20 мл). Водный слой обрабатывают 30% водным раствором аммиака до достижения рН 12,5-13, и 12 мл (водный слой светло-фиолетового цвета) снова экстрагируют 3x20 мл простым эфиром. Органические слои объединяют, сушат над М^О4, фильтруют и выпаривают досуха при ПД с получением 760 мг неочищенного продукта. Этот остаток окончательно очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ОСМ/МеОН 100/0-90/10. Соединение 12 получают в виде бледножелтого масла (301 мг, 20%). ЖХМС (А2): Εδ тА=152 [М+Н]+; ΐκ=0,27 мин.
Соединение 13. (Ε)-(3δ,10Κ,16δ)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-16-[(δ)-1-((2Κ,3Κ)-3-{4[(2-метил-2-метилдисульфанилпропиламино)метил] фенил}оксиранил)этил] -6,6-диметил-1,4-диокса-8,11диазациклоге ксадец- 13-ен-2,5,9,12-тетраон
К раствору, продуваемому аргоном, 25 мг (35 мкмоль) соединения 2 в 3,1 мл безводного НМР, прибавляют последовательно при КТ 9,8 мкл (70 мкмоль) ΤΕΑ и 6,3 мг (42 мкмоль) соединения 12. Перемешивание осуществляют при 40°С. После проведения реакции в течение 72 ч остается исходное соединение 2, тогда добавляют 9,8 мкл (70 мкмоль) ΤΕΑ и 6,3 мг (42 мкмоль) амина 12. После проведения реакции в течение дополнительных 72 ч при 40°С соединение 2 все еще остается: добавляют 6,3 мг (42 мкмоль) амина 12 и перемешивание продолжают при 40°С. Спустя одни сутки реакция полностью завершается.
Смесь разбавляют 10 мл ΑсОΕΐ, промывают 2x10 мл водой, 10 мл насыщенного раствора NаНСОз и
- 35 024627 мл насыщенного раствора №С1. После сушки органического слоя над Мд§О4 его фильтруют, затем выпаривают при ПД с получением 30 мг неочищенного продукта. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ИСМ/метанол 98/2-93/7. Соединение 13 получают в виде белого порошка (23,3 мг; 81%). ТСХ (ИСМ 90/МеОН 10): КР=0,55; !Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6): 0,76-0,81 (м, 6Н); 1,02 (с, 3Н); 1,07 (д, 1=6,9 Гц, 3Н); 1,13 (с, 3Н); 1,27-1,33 (м, 7Н); 1,52-1,63 (м, 2Н); 1,82 (схт, >6,8 Гц, 1Н); 2,06 (с шир., 1Н); 2,25-2,34 (м, 1Н); 2,37 (с, 3Н); 2,57 (с, 2Н); 2,66-2,76 (м, 2Н); 2,97-3,06 (м, 3Н); 3,33-3,38 (м, 1Н); 3,75 (с, 2Н); 3,83 (с, 3Н); 3,88 (д, >1,6 Гц, 1Н); 4,27 (ддд, >3,7 и 8,0 и 11,4 Гц, 1Н); 4,93 (дд, 1=3,7 и 9,7 Гц, 1Н); 5,12 (дд, >5,8 и 11,3 Гц, 1Н); 5,82 (дд, >1,5 и 15,2 Гц, 1Н); 6,49 (ддд, >3,8 и 11,3 и 15,2 Гц, 1Н); 7,07 (д, >8,5 Гц, 1Н); 7,18 (дд, >1,9 и 8,5 Гц, 1Н); 7,23 (дд, >2,6 и 9,5 Гц, 1Н); 7,26 (д, >8,2 Гц, 2Н); 7,30 (д, >1,9 Гц, 1Н); 7,35 (д, >8,2 Гц, 2Н); 8,35 (д, >8,0 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): Е8 т//=832 [М+Н]+; т/ζ 830 [М-Н]-; Ιι<=0,96 мин.
Пример 3. (Е)-(3§,10К,16§)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-16-[(§)-1-((2К,3К)-3-{4-[(2меркапто-2-метилпропиламино)метил] фенил}оксиранил)этил] -6,6-диметил-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраон
Продукт 13 (10,6 мг; 12,8 мкмоль) растворяют в смеси этанола (1,5 мл)/воды (1,26 мл). Затем добавляют ТСЕР (9,1 мг, 31,9 мкмоль) и смесь перемешивают 2 ч 30 мин при КТ. Смесь разбавляют добавлением 15 мл АсОЕ! и органический слой промывают смесью 1/1 воды и насыщенного водного раствора ΝΉ4Ο (5 мл). После сушки органического слоя над Мд§О4, фильтрации и выпаривания растворителей при ПД неочищенный продукт окончательно очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ИСМ/метанол 98/2-92/8. Соединение пр.3 получают в виде твердого белого вещества (6,4 мг; 63%). ТСХ (ИСМ 90/МеОН 10): К>0,47; Ή ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6): 0,80-0,86 (м, 6Н); 1,06 (с, 3Н); 1,11 (д, ί-6,9 Гц, 3Н); 1,18 (с, 3Н); 1,31-1,38 (м, 7Н); 1,57-1,67 (м, 2Н); 1,87 (схт, >6,8 Гц, 1Н); 2,29-2,38 (м, 1Н); 2,56 (с, 2Н); 2,70-2,80 (м, 2Н); 3,00-3,11 (м, 3Н); 3,39-3,43 (м, 1Н); 3,82 (с, 2Н); 3,87 (с, 3Н); 3,92 (д, >1,9 Гц, 1Н);
4,31 (ддд, 1=3,6 и 8,0 и 11,5 Гц, 1Н); 4,97 (дд, >3,7 и 9,7 Гц, 1Н); 5,17 (дд, >5,8 и 11,3 Гц, 1Н); 5,86 (дд, >1,4 и 15,1 Гц, 1Н); 6,54 (ддд, >3,8 и 11,3 и 15,1 Гц, 1Н); 7,11 (д, >8,7 Гц, 1Н); 7,23 (дд, >1,9 и 8,7 Гц, 1Н); 7,27 (дд, >2,7 и 9,6 Гц, 1Н); 7,31 (д, >8,0 Гц, 2Н); 7,34 (д, >1,9 Гц, 1Н); 7,42 (д, >8,0 Гц, 2Н); 8,40 (д, >8,0 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): Е8 т4=786 [М+Н]+; т4=784 [М-Н]-; Ц=0,92 мин.
Пример 4. (Е)-(3§,10К,16§)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-16-[(§)-1-((2К,3К)-3-{4-[({2меркапто-2-метилпропил}метиламино)метил] фенил}оксиранил)этил] -6,6-диметил-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраон
Соединение 14. Метил-[2-метил-2-метилдисульфанилпроп-(Е)-илиден]амин
г (6,66 ммоль) 2-(метилдитио)изобутиральдегида растворяют в 10 мл безводного ТНР в инертной атмосфере. Прибавляют 2 М раствор метиламина в ТНР (33,3 мл, 66,6 ммоль), затем смесь перемешивают 5 ч при КТ. Разбавляют посредством 50 мл АсОЕ!, промывают водой (30 мл), насыщенным раствором Νηί'Ί (30 мл) и сушат над Мд§О4. После фильтрации и концентрирования при ПД получают соединение 14 в виде масла бледно-желтого цвета (1,01 г, 93%). 'Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-б): 1,46 (с, 6Н); 2,36 (с, 3Н); 3,32 (с, 3Н); 7,52 (с, 1Н).
Соединение 15. 2-Метил-2-метилдисульфанилпропиламин
Раствор соединения 14 (1,01 г, 6,185 ммоль) в 30 мл ТНР продувают аргоном и охлаждают до 0°С, затем прибавляют при 0°С 1,4 4 г (6,80 ммоль) триацетоксиборгидрида натрия. Перемешивание ведут 15 ч при КТ: исходный имин остается; добавляют при 0°С 1,44 г (6,80 ммоль) триацетоксиборгидрида натрия и 354 мкл (6,185 ммоль) уксусной кислоты, затем перемешивание продолжают при КТ в течение 3 ч. Смесь разбавляют посредством 50 мл АсОЕ! и промывают водой (50 мл). Значение рН водной фазы доводят примерно до 12 добавлением 14 мл 1н. водного раствора гидроксида натрия, затем водный слой экстрагируют диэтиловым эфиром (3x50 мл). Органические слои объединяют, промывают насыщенным раствором №-1С1 (50 мл), сушат над Мд§О4. После фильтрации и концентрирования при ПД получают соединение 15 в виде бесцветного масла (695 мг, 68%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): 1,25 (с, 6Н); 1,47
- 36 024627 (м уш., 1Н; 2,31 (с, 3Н); 2,38 (с, 3Н); 2,53 (м, 2Н). ЖХМС (А2): Ε8 тА=166 [Μ+Н]? ΐΚ=0,28 мин.
Соединение 16. (Ε)-(3§,10Κ,16§)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-16-{(§)-1-[(2Κ,3Κ)-3-(4{[(2-метил-2-метилдисульфанилпропил)метиламино]метил}фенил)оксиранил)этил]-6,6-диметил-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраон
Соединение 16 может быть получено нуклеофильным замещением хлоргруппы производного 2 на амин 15, применяя способ, описанный для получения соединения 30.
Пример 4. (Е)-(38,10К,168)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-16-{(§)-1-[(2К,3К)-3-(4-{[(2меркапто-2-метилпропил)метиламино]метил}фенил)оксиранил]этил}-6,6-диметил-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраон
Соединение пр.4 может быть получено, применяя способ, описанный для получения примера 6, но исходя из соединения 16.
Пример 5. (Е)-(38,10К,168)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-16-[(§)-1-((2К,3К)-3-{4-[4-(2меркапто-2-метилпропил)пиперазин-1-илметил] фенил}оксиранил)этил] -6,6-диметил-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраон
Соединение 17. трет-Бутил-4-(2-метил-2-метилдисульфанилпропил)пиперазин-1-карбоксилат
К раствору, продуваемому аргоном, 1-Вос-пиперазина (1,0 г, 5,37 ммоль) в безводном ТНР (20 мл) прибавляют 2-(метилдитио)изобутиральдегид (5,37 ммоль) и изопропоксид титана (IV) (6,71 ммоль). Смесь перемешивают 20 мин при КТ, затем снова прибавляют 2-(метилдитио)изобутиральдегид (5,37 ммоль) и изопропоксид титана (IV) (6,71 ммоль). Перемешивание ведут 2 ч, затем прибавляют 12 мл этанола и перемешивание продолжают 5 мин. После прибавления цианборгидрида натрия (5,37 ммоль) смесь перемешивают 1 час, а затем добавляют дополнительно 5,37 ммоль цианборгидрида натрия. Перемешивание продолжают 1 час. Смесь концентрируют досуха и затем обрабатывают Α^Εΐ. Добавляют воду, и образовавшийся осадок отфильтровывают через фриттированное стекло, промывают с помощью Α^Εΐ и водой. Полученный твердый продукт солюбилизируют в 1н. водном растворе НС1 (50 мл), среду нейтрилизуют 5н. водным раствором №ОН, затем экстрагируют посредством ΌΟΜ. Органические слои объединяют, промывают насыщенным раствором №С1 (50 мл), сушат над Μ§δΟ4, фильтруют и концентрируют при ПД. Неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, элюируч смесью ^СΜ/метанол 100/0-97/3. Соединение 17 получают в виде бледно-желтого масла (650 мг, 40%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-й6): 1,26 (с, 6Н); 1,39 (с, 9Н); 2,39 (с, 3Н); 2,42 (с, 2Н); 2,44-2,48 (м, 4Н); 3,27 (м частично экранирован, 4Н). ЖХМС (А1): Ε8 т//=321 [М+Н]+; т//=265 пик молекулярного иона; ΐΚ=3,02 мин.
Соединение 18. Гидрохлорид 1-(2-метил-2-метилдисульфанилпропил)пиперазин
К раствору соединения 17 (322 мг, 1,01 ммоль) в диоксане (13 мл) прибавляют 4 М раствор НС1 в диоксане (5 мл). Перемешивание ведут в течение 16 ч при КТ. Смесь фильтруют через фриттированное стекло, полученный твердый продукт промывают диоксаном и получают соединение 18 (231 мг, 90%) в виде белого порошка. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-й6): 1,31 (с шир., 6Н); 2,42 (с, 3Н); 2,59-3,38 (м очень уш., 10Н); 8,78 (м уш., 2Н). ЖХМС (А2): Ε8 тА=221 [Μ+НЦ ΐΚ=0,46 мин.
Соединение 19. (Ε)-(3§,10Κ,16§)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-16-[(§)-1((2К,3К)-3-{4-[4-(2-метил-2-метилдисульфанилпропил)пиперазин-1 -илметил] фенил}оксиранил)этил] 1,4диокса-8,11 -диазациклогексадец-13 -ен-2,5,9,12-тетраон
К раствору, продуваемому аргоном, соединения 2 (15,02 мг, 20,93 мкмоль) в безводном ΌΜΤ (0,9 мл), прибавляют раствор соединения 18 (25,12 мкмоль) и ΤΕΑ (52,3 мкмоль) в ΌΜΤ (1 мл).
- 37 024627
Смесь перемешивают при 40°С в атмосфере аргона. После проведения реакции в течение 24 ч добавляют 25,12 мкмоль соединения 18 и 31,4 мкмоль ТЕА. После проведения реакции в течение дополнительных 24 ч при 40°С реакция завершается. Смесь разбавляют АсОЕ! (6 мл) и промывают водой (2x6 мл), насыщенным раствором NаНСΟз (6 мл) и насыщенным раствором Ναί'Ί (6 мл). После сушки над Мд§О4 органический слой фильтруют, затем выпаривают при ПД с получением 46 мг неочищенного продукта. Остаток очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ЭСМ/метанол 100/0-95/5. Соединение 19 получают в виде белого порошка (5,2 мг, 28%). %). 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6): 0,76 (д, 1=6,4 Гц, 3Н); 0,78 (д, 1=6,4 Гц, 3Н); 1,01 (с, 3Н); 1,06 (д, 1=6,8 Гц, 3Н); 1,13 (с, 3Н); 1,25 (с, 6Н); 1,27-1,33 (м, 1Н); 1,51-1,63 (м, 2Н); 1,76-1,85 (м, 1Н); 2,23-2,32 (м, 1Н); 2,37 (м, 4Н); 2,39 (с, 3Н); 2,41 (с, 2Н); 2,532,56 (м, 4Н); 2,63-2,76 (м, 2Н); 2,94-3,06 (м, 3Н); 3,34 (м частично экранирован, 1Н); 3,40-3,48 (м, 2Н); 3,82 (с, 3Н); 3,87 (д, 1=2,0 Гц, 1Н); 4,26 (ддд, 1=3,8 и 7,8 и 11,3 Гц, 1Н); 4,92 (дд, 1=3,8 и 9,8 Гц, 1Н); 5,075,14 (м, 1Н); 5,81 (д, 1=15,2 Гц, 1Н); 6,48 (ддд, 1=3,8 и 11,3 и 15,2 Гц, 1Н); 7,06 (д, 1=8,5 Гц, 1Н); 7,18 (дд, ί=2,2 и 8,5 Гц, 1Н); 7,21-7,32 (м, 6Н); 8,35 (д, 1=8,3 Гц, 1Н). ЖХМС (А1): Е§ тЦ=901 [М+Н]+; тЦ=451 пик молекулярного иона; !К=4,33 мин.
Пример 5. (Е)-(3§,10К,16§)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-16-[(§)-1-((2К,3К)-3-{4-[4-(2меркапто-2-метилпропил)пиперазин-1-илметил] фенил}оксиранил)этил] -6,6-диметил-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраон
Продукт 19 (5,7 мг; 6,3 мкмоль) растворяют в смеси этанола (0,8 мл)/воды (0,5 мл). Затем добавляют ТСЕР (4,54 мг, 15,83 мкмоль) и смесь перемешивают 1 ч при КТ. Смесь разбавляют добавлением 7 мл АсОЕ! и органический слой промывают смесью 1/1 воды и насыщенного водного раствора ΝΉ4Ο (7 мл). После сушки органического слоя над Мд§О4, фильтрации и выпаривания растворителей при ПД, неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ЭСМ/метанол 99/1-95/5. Соединение пр.5 получают в виде твердого белого вещества (2,95 мг; 55%). 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6): 0,77 (д, 1=6,3 Гц, 3Н; 0,78 (д, 1=6,3 Гц, 3Н); 1,02 (с, 3Н); 1,06 (д, 1=6,9 Гц, 3Н); 1,13 (с, 3Н); 1,27 (с, 6Н); 1,29-1,34 (м, 1Н); 1,52-1,63 (м, 2Н); 1,82 (м, 1Н); 2,29 (м, 1Н); 2,37 (с, 2Н); 2,39-2,41 (м, 4Н); 2,57-2,62 (м, 4Н); 2,65-2,76 (м, 2Н); 2,96-3,06 (м, 3Н); 3,34 (м, частично экранирован, 1Н); 3,46 (с, 2Н); 3,83 (с, 3Н); 3,88 (д, ί=2,2 Гц, 1Н); 4,27 (ддд, 1=3,7 и 8,0 и 11,5 Гц, 1Н); 4,93 (дд, 1=3,7 и 9,7 Гц, 1Н); 5,12 (м, 1Н); 5,82 (д, 1=15,2 Гц, 1Н); 6,49 (ддд, 1=3,7 и 11,5 и 15,2 Гц, 1Н); 7,07 (д, 1=8,5 Гц, 1Н); 7,18 (дд, 1=2,2 и 8,5 Гц, 1Н); 7,21-7,33 (м, 6Н); 8,36 (д, 1=8,0 Гц, 1Н). ЖХМС (А1): Е§ тЦ=855 [М+Н]+; тЦ-428 [М+2Н]2+ пик молекулярного иона; !К=4,13 мин.
Пример 6. (Е)-(3§,10К,16§)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-16-[(§)-1-((2К,3К)-3-{4-[4-({2[2-(2-{2-метил-[2-меркапто-2-метилпропил]аминоэтокси}этокси)этокси]этил}метиламино)метил]фенил}оксиранил)этил] -6,6-диметил-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13 -ен-2,5,9,12-тетраон
Соединение 20. Толуол-4-сульфонат 2-{2-[2-(2-гидроксиэтокси)этокси]этокси}этил
К раствору, продуваемому аргоном и охлажденному до 0°С, 5 г (25,74 ммоль) тетраэтиленгликоля в 68,7 мл ЭСМ последовательно прибавляют порциями для поддержания заданного перемешивания 8,95 г (38,61 ммоль) оксида серебра и 5,40 г (28,31 ммоль) тозилхлорида. Прибавляют маленькими порциями 855 мг (5,15 ммоль) К1 для подержания температуры смеси ниже 5°С. Перемешивание продолжают 1 ч при поддержании температуры ниже 5°С. После возвращения в комнатной температуре смесь фильтруют на С1агсе1, остаток промывают посредством ЭСМ, затем фильтрат концентрируют досуха при ПД. Неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, используя в качестве олюента смесь ОСМ/метанол 99/1-95/5. Соединение 20 получают в виде бесцветного масла (5,4 г, 60%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): 2,43 (с, 3Н); 3,40 (м, 2Н); 3,44-3,52 (м, 10Н); 3,58 (м, 2Н); 4,11 (м, 2Н); 4,53 (т, 1=5,4 Гц, 1Н); 7,48 (д, 1=8,3 Гц, 2Н); 7,78 (д, 1=8,3 Гц, 2Н). ЖХМС (А2): ЕС тЦ=349 [М+Н]+; тЦ=371 [М+№]+;
!К=0,69 мин.
Соединение 21. 1-Азидо-3,6,9-триоксаундекан-11-ол
К раствору 5,4 г (15,51 ммоль) соединения 20 в 40,6 мл безводного ацетонитрила прибавляют 1,34 г
- 38 024627 (20,63 ммоль) NаNз, затем смесь нагревают 6 ч 30 мин с обратным холодильником. После возвращения в КТ смесь фильтруют на С1агсе1 и концентрируют при ПД. Остается исходное соединение 20: неочищенный продукт обрабатывают 25 мл безводного ацетонитрила и прибавляют 230 мг (3,5 ммоль) NаNз. Смесь нагревают 5 ч с обратным холодильником. После возвращения в КТ смесь фильтруют на С1агсе1 и концентрируют досуха при ПД с получением соединения 21 в виде масла бледно-желтого цвета (3,37 г, 99%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): 3,37-3,43 (м, 4Н); 3,45-3,58 (м, 10Н); 3,60 (м, 2Н); 4,54 (т, ί=5,1 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): Е8 т//=220 [М+Н]+; т//=242 |М+№|' пик молекулярного иона; !К=0,39 мин.
Соединение 22. Ν-Вос-Аминоэтоксиэтоксиэтоксиэтанол
К раствору, находящемуся в инертной атмосфере аргона, 320 мг 10%-ного палладия на угле в 5 мл АсОЕ! прибавляют раствор 3,25 мг (14,8 ммоль) соединения 21, 6,46 г (29,6 ммоль) третбутилдикарбоната и 4,13 мл (29,6 ммоль) ТЕА в 45 мл АсОЕ!. Рекция протекает в течение 17 ч при 30°С при давлении водорода 2 бар. После возвращения к КТ и ПД смесь фильтруют на С1агсе1 и концентрируют при ПД. Неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, используя в качестве элюента смесь ИСМ/метанол 98/2-90/10. Соединение 22 получают в виде бесцветного масла (2,92 г, 67%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): 1,37 (с, 9Н); 3,06 (к, 1=6,1 Гц, 2Н); 3,37 (т, 1=6,1 Гц, 2Н); 3,42 (м, 2Н); 3,46-3,53 (м, 10Н); 4,54 (т шир., 1=5,1 Гц, 1Н); 6,71 (т шир., 1=6,1 Гц, 1Н). ЖХМС (А1): Е8 т//=316 |М+№|'; т//=194 пик молекулярного иона; !К=2,81 мин.
Соединение сульфонат
23.
2-{2-[2-(2-трет-Бутоксикарбониламиноэтокси)этокси]этокси}этилтолуол-4-
К раствору, продуваемому аргоном, 3,06 г (10,42 мкмоль) соединения 22 в 20 мл ИСМ прибавляют 2,53 мл (31,2 6 ммоль) пиридина. Смесь охлаждают до 0°С, затем прибавляют по каплям раствор 2,98 г (15,63 ммоль) тозилхлорида в 10 мл ИСМ. Перемешивание продолжают 15 ч при КТ. Смесь разбавляют 20 мл ИСМ, промывают насыщенным раствором NаНСОз (30 мл), водой (2x30 мл), насыщенным раствором №аС1 (30 мл) и сушат над Мд8О4. После фильтрации и концентрирования при ПД неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, используя в качестве элюента смесь ИСМ/метанол 100/0-90/10. Соединение 23 получают в виде бледно-желтого масла (4,38 г, 94%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): 1,37 (с, 9Н); 2,42 (с, 3Н); 3,05 (к, 1=6,1 Гц, 2Н); 3,36 (т, 1=6,1 Гц, 2Н); 3,46 (м, 8Н); 3,58 (м, 2Н); 4,10 (м, 2Н); 6,71 (т шир., 1=6,1 Гц, 1Н); 7,48 (д, 1=7,8 Гц, 2Н); 7,78 (д, 1=7,8 Гц, 2Н). ЖХМС (А2): Е8 т//=448 [М+Н]+; т//=470 [М+№а]+; т//=348 пик молекулярного иона; т//=492 [М-Н+НСО2Н]-; !К=1,00 мин.
Соединение 24. трет-Бутил-(2-{2-[2-(2-азидоэтокси)этокси]этокси}этил)карбамат
К раствору 4,38 г (9,79 ммоль) соединения 23 в 25 мл ацетонитрила прибавляют 846 мг (13,02 ммоль) азида натрия, затем смесь нагревают 6 ч с обратным холодильником. Содержание исходного соединения остается значительным: после возвращения к КТ добавляют к смеси 1,7 г (26,13 ммоль). Перемешивание поддерживают 24 ч при нагревании с обратным холодильником. После возвращения к КТ смесь фильтруют на С1агсе1 и концентрируют при ПД. Неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, используя в качестве элюента смесь ИСМ/метанол 98/2-90/10. Соединение 24 получают в виде бледно-желтого масла (2,16 г, 69%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): 1,37 (с, 9Н); 3,06 (к, Л=6,1 Гц, 2Н); 3,34-3,43 (м, 4Н); 3,46-3,58 (м, 8Н); 3,60 (м, 2Н); 6,70 (т шир., 1=6,1 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): Е8 т//=341 [М+№а]+; !К=0,81 мин.
Соединение 25. трет-Бутил-(2-{2-[2-(2-азидоэтокси)этокси]этокси}этил)метилкарбамат
К раствору, продуваемому аргоном и охлажденному до 0°С, 2,06 г (6,47 ммоль) соединения 24 в 25 мл ТНР последовательно прибавляют при 0°С (порцией) 854 мг (21,35 ммоль) 60%-ного №аН в виде дисперсии в минеральном масле, и 886 мкл (14,23 ммоль)метилиодида. Перемешивание продолжают 1 ч при 0°С, затем 16 ч при КТ. Смесь фильтруют на С1агсе1, промывают ТНР и концентрируют при ПД. Неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, используя в качестве элюента смесь ИСМ/метанол 99/1-90/10. Соединение 25 получают в виде бесцветного масла (1,67 г, 78%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): 1,39 (с, 9Н); 2,80 (с шир., 3Н); 3,29 (т частично экранирован, Д=5,6 Гц, 2Н); 3,38 (м, 2Н); 3,46-3,56 (м, 10Н); 3,60 (т, 1=5,4 Гц, 2Н).
- 39 024627
Соединение 26. трет-Бутил-(2-{2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]этокси}этил)метилкарбамат
К раствору, продуваемому аргоном, 1,66 г (4,99 ммоль) соединения 25 в 20 мл ТНР последовательно прибавляют 1,31 г (4,994 ммоль) трифенилфосфина и 108 мкл (5,99 ммоль) воды. Перемешивание продолжают 25 ч 30 мин, затем смесь концентрируют досуха и очищают фильтрацией δРЕ на кондиционированном картридже δСX (Уапап) и промывают метанолом, затем элюируют 0,5н. раствором аммиака в метаноле. Соединение 26 получают в виде бесцветного масла (1,23 г, 80%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСОб6): 1,39 (с, 9Н); 2,65 (т, 1=5,9 Гц, 2Н); 2,80 (с шир., 3Н); 3,29 (т, 1=5,9 Гц, 2Н); 3,36 (т, 1=5,7 Гц, 2Н); 3,453,56 (м, 10Н). ЖХМС (А2): Еδ т/г=307 [М+Н]+; !К=0,49 мин.
Соединение 27. трет-Бутилметил-[2-(2-{2-[2-(2-метил-2-метилдисульфанилпропиламино)этокси]этокси}этокси)этил]карбамат ι
О. Ν4,-4Λ.^Χ..Ο .>··,_ -‘.. .N1-1
Ί т 0 ' ' 0
О 16
К раствору, продуваемому аргоном, 131 мг (426 мкмоль) соединения 26 в 3 мл ИСМ последовательно прибавляют 64 мг (426 мкмоль) 2-метилдитиоизобутиральдегида, 126 мг (596 мкмоль) триацетоксиборгидрида натрия и 24,4 мкл (426 мкмоль) уксусной кислоты. Перемешивание продолжают 6 ч при КТ в атмосфере аргона, реакцию гасят добавлением 1 мл 1н. водного раствора гидроксида натрия, затем смесь экстрагируют 10 мл диэтилового эфира. После концентрирования при ПД неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, используя в качестве элюента смесь ИСМ/изопропанол 90/10, что не позволяет отделить целевой продукт от остаточного исходного амина. Полученный продукт снова очищают хроматографией на колонке с обращенной фазой КР18, используя в качестве элюента смесь воды/ацетонитрила 95/5-5/95. Соединение 27 получают в виде бесцветного масла (67 мг, 36%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): 1,25 (с, 6Н); 1,39 (с, 9Н); 1,58 (м уш., 1Н); 2,38 (с, 3Н); 2,59 (с, 2Н); 2,68 (т, 1=5,6 Гц, 2Н); 2,80 (с шир., 3Н); 3,46 (т, 1=5,6 Гц, 2Н); 3,48-3,54 (м, 12Н). ЖХМС (А1): Еδ т//=441 [М+Н]+; !К=3, 2 9 мин.
Соединение 28. трет-Бутилметил-{2-[2-(2-{2-[метил-(2-метил-2-метилдисульфанилпропил)амино]этокси}этокси)этокси]этил}карбамат
К раствору, продуваемому аргоном и охлажденному до 0°С, 65 мг (148 мкмоль) соединения 27 в 1 мл ИСМ последовательно прибавляют 19,5 мг (487 мкмоль) 60%-ного ЯаН в виде дисперсии в минеральном масле, и 20 мкл (325 мкмоль)метилиодида. Перемешивание продолжают 45 мин при 0°С, затем 72 ч при КТ. Смесь фильтруют на С1агсе1, затем концентрируют при ПД. Неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, используя в качестве элюента смесь ИСМ/метанол 99/1-90/10. Соединение 28 получают в виде бесцветного масла (43 мг, 64%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): 1,25 (с, 6Н); 1,39 (с, 9Н); 2,32 (с, 3Н); 2,39 (с, 3Н); 2,54 (с, 2Н); 2,61 (т, 1=6,1 Гц, 2Н); 2,80 (с шир., 3Н); 3,42-3,54 (м, 14Н). ЖХМС (А2): Еδ т//=455 [М+Н]+; !К=0,77 мин.
Соединение 29. Метил-(2-{2-[2-(2-метиламиноэтокси)этокси]этокси}этил)-(2-метил-2метилдисульфанилпропил)амин
К раствору 43 мг (95 мкмоль) соединения 28 в 1,5 мл ИСМ прибавляют 351 мкл ТРА. Перемешивание продолжают 5 ч при КТ, затем концентрируют досуха. Неочищенный продукт очищают фильтрацией δРЕ на кондиционированном картридже δСX (Уапап) и промывают метанолом, затем элюируют 0,5н. раствором аммиака в метаноле. Соединение 29 получают в виде бесцветного масла (25 мг, 75%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): 1,25 (с, 6Н); 1,75 (м уш., 1Н); 2,27 (с, 3Н); 2,32 (с, 3Н); 2,39 (с, 3Н); 2,53 (м, 2Н); 2,57-2,64 (м, 4Н); 3,44 (т, 1=5,7 Гц, 2Н); 3,46-3,55 (м, 10Н). ЖХМС (А2): Еδ т//=355 [М+Н]+; !К=0,30 мин.
Соединение 30. (Е)-(3δ,10Κ,16δ)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-16-[(δ)-1-((2Κ,3Κ)-3-{4[4-({2-[2-(2-{2-метил-[2-метил-2-метилдисульфанилпропил]аминоэтокси}этокси)этокси]этил}метиламино)метил] фенил}оксиранил)этил] -6,6-диметил-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13 -ен-2,5,9,12тетраон
К раствору, продуваемому аргоном, 15,3 мг (21,3 мкмоль) соединения 2 в 1 мл безводного ацетонитрила последовательно прибавляют 18,6 мкл (106,6 мкмоль) ИГРЕА и раствор 22,7 мг (64 мкмоль) соединения 29 в 1 мл безводного ацетонитрила. Перемешивание продолжают 24 ч в атмосфере аргона при
- 40 024627
40°С. После возвращения к КТ смесь разбавляют 7 мл АсОЕ!, промывают водой (2x3 мл), насыщенным раствором NаНСОз (3 мл), насыщенным раствором №аС1 (3 мл) и сушат над Мд§О4. После фильтрации и концентрирования при ПД неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, используя в качестве элюента смесь ЭСМ/метанол 90/10. Соединение 30 получают в виде твердого бесцветного вещества (14,6 мг, 68%). 'ΐ I ЯМР (500 МГц, ДМСО-й6): 0,76 (д, 1=6,1 Гц, 3Н); 0,76 (д, 1=6,1 Гц, 3Н); 1,00 (с, 3Н); 1,04 (д, 1=6,8 Гц, 3Н); 1,12 (с, 3Н); 1,24 (с, 6Н); 1,29 (м, 1Н); 1,50-1,62 (м, 2Н); 1,81 (м, 1Н); 2,15 (с, 3Н); 2,27 (м, 1Н); 2,31 (с, 3Н); 2,38 (с, 3Н); 2,45-2,54 (м частично экранирован, 4Н); 2,60 (т, 1=6,1 Гц, 2Н); 2,63-2,75 (м, 2Н); 2,92-3,06 (м, 3Н); 3,25-3,35 (м частично экранирован, 1Н); 3,44-3,54 (м, 14Н); 3,81 (с, 3Н); 3,87 (д, 1=2,0 Гц, 1Н); 4,25 (ддд, 1=3,9 и 8,3 и 11,7 Гц, 1Н); 4,91 (дд, 1=3,4 и 9,8 Гц, 1Н); 5,11 (ддд, 1=1,5 и 5,7 и 11,5 Гц, 1Н); 5,80 (дд, 1=1,5 и 15,5 Гц, 1Н); 6,47 (ддд, 1=3,5 и 11,5 и 15,5 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,8 Гц, 1Н); 7,17 (дд, 1=2,0 и 8,8 Гц, 1Н); 7,20-7,26 (м, 3Н); 7,27-7,33 (м, 3Н); 8,35 (д, 1=8,3 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): Е§ т//=1035 [М+Н]+; пик молекулярного иона т//=518 [М+2Н]2+; !к=0,86 мин.
Пример 6. (Е)-(3§,10К,16§)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-16-[(§)-1-((2К,3К)-3-{4-[4-({2[2-(2-{2-метил-[2-меркапто-2-метилпропил]аминоэтокси}этокси)этокси]этил}метиламино)метил]фенил}оксиранил)этил] -6,6-диметил-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13 -ен-2,5,9,12-тетраон
К раствору 10,9 мг (10,5 мкмоль) соединения 30 в 1,24 мл этанола прибавляют раствор 12,06 мг (42,1 мкмоль) ТСЕР в 1,04 мл воды. Перемешивание ведут 4 ч при КТ. Смесь разбавляют 6 мл АсОЕ!, промывают смесью 1/1 воды/NН4С1нас. (6 мл), насыщенным раствором №аС1 (6 мл) и сушат над М§§О4. После фильтрации и концентрирования при ПД неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, используя смесь ЭСМ/метанол 99/1-90/10. Соединение пр.6 получают в виде твердого белого вещества (7,36 мг, 71%). 'II ЯМР (500 МГц, ДМСО-й6): 0,76 (д, 1=5,9 Гц, 3Н); 0,78 (д, 1=5,9 Гц, 3Н); 1,00 (с, 3Н); 1,04 (д, 1=6,8 Гц, 3Н); 1,12 (с, 3Н); 1,25 (с, 6Н); 1,28 (м, 1Н); 1,51-1,62 (м, 2Н); 1,80 (м, 1Н); 2,15 (с, 3Н); 2,27 (м, 1Н); 2,34 (с, 3Н); 2,44 (с, 2Н); 2,51 (т, 1=6,4 Гц, 2Н); 2,60 (с, 1Н); 2,63 (т, 1=6,4 Гц, 2Н); 2,662,74 (м, 2Н); 2,93-3,04 (м, 3Н); 3,25-3,37 (м частично экранирован, 1Н); 3,45-3,55 (м, 14Н); 3,81 (с, 3Н); 3,87 (д, 1=1,5 Гц, 1Н); 4,25 (ддд, 1=3,7 и 8,0 и 11,5 Гц, 1Н); 4,91 (дд, 1=3,4 и 9,8 Гц, 1Н); 5,11 (ддд, 1=1,5 и 5,6 и 11,5 Гц, 1Н); 5,80 (дд, 1=1,5 и 15,2 Гц, 1Н); 6,47 (ддд, 1=3,9 и 11,5 и 15,2 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,8 Гц, 1Н); 7,17 (дд, 1=2,2 и 8,8 Гц, 1Н); 7,20-7,26 (м, 3Н); 7,27-7,32 (м, 3Н); 8,35 (д, 1=8,0 Гц, 1Н). ЖХМС (А1): Е§ т//=989 [М+Н]+; пик молекулярного иона т//=495 [М+2Н]2+; !к=3,24 мин.
Пример 7. (Е)-(3§,10К,16§)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-16-[(§)-1-((2К,3К)-3-{4-[4-({2[2-(2-{4-метил-4-метилдисульфанилпентаноиламиноэтокси}этокси)этокси]этил}метиламино)метил]фенил}оксиранил)этил] -6,6-диметил-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13 -ен-2,5,9,12-тетраон
О
С1 о
Соединение 31. трет-Бутилметил-[2-(2-{2-[2-(4-метил-4-метилдисульфанилпентаноиламино)этокси]этокси}этокси)этил]карбамат
270 мг (649 мкмоль) соединения 4, 199 мг (649 мкмоль) соединения 26 растворяют в 1,5 мл ЭМР, затем к смеси прибавляют 100 мкл (714 мкмоль) ТЕА. Перемешивание проводят 16 ч при КТ. Смесь разбавляют 10 мл АсОЕ!, промывают водой (2x5 мл), насыщенным раствором №аС1 (5 мл) и сушат над М§§О4. После фильтрации и концентрирования при ПД неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, используя в качестве элюента смесь ЭСМ/метанол 98/2-90/10. Соединение 31 получают в виде бесцветного масла (251 мг, 80%). 'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-й6): 1,24 (с, 6Н); 1,39 (с, 9Н); 1,79 (м, 2Н); 2,16 (м, 2Н); 2,40 (с, 3Н); 2,80 (с шир., 3Н); 3,18 (кв., 1=5,9 Гц, 2Н); 3,39 (т, 1=5,9 Гц, 2Н); 3,453,54 (м, 12Н); 7,88 (т шир., 1=5,9 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): Е8 т/ζ 483 [М+Н]+; т//=505 [М+№а]+; т^=527 [М-Н+НСО2Н]-; !к=1,0 4 мин.
Соединение 32. №-(2-{2-[2-(2-Метиламиноэтокси)этокси]этокси}этил)-4-метил-4-метилдисульфанилпентамид
К раствору 251 мг (520 мкмоль) соединения 31 в 8 мл ЭСМ прибавляют 1,93 мл (26 ммоль) ТРА. Перемешивание продолжают 3 ч при КТ, затем смесь концентрируют досуха. Неочищенный продукт растворяют в минимальном количестве ЭСМ, затем проводят несколько раз перегонку с толуолом. Неочищенный продукт очищают фильтрацией §РЕ на кондиционированном картридже §СХ Аапап) и промывают метанолом, затем элюируют 0,5н. раствором аммиака в метаноле. Соединение 32 получают в
- 41 024627 виде бесцветного масла (159 мг, 80%). !Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): 1,24 (с, 6Н); 1,79 (м, 2Н); 2,15 (м, 2Н); 2,27 (с, 3Н); 2,40 (с, 3Н); 2,58 (т, 1=5,7 Гц, 2Н); 3,18 (к, 1=5,7 Гц, 2Н); 3,39 (т, 1=5,7 Гц, 2Н); 3,44 (т, 1=5,7 Гц, 2Н); 3,47-3,54 (м, 8Н); 7,89 (т шир., 1=5,7 Гц, 1Н). ЖХМС (А1): ЕЗ т//=383 [М+Н]+; !К=2,68 мин.
Пример 7. (Е)-(3З,10К,16З)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-16-[(З)-1-((2К,3К)-3-{4-[4-({2[2-(2-{4-метил-4-метилдисульфанилпентаноиламиноэтокси}этокси)этокси]этил}метиламино)метил]фенил}оксиранил)этил]-6,6-диметил-1,4-диокса-8,11-циазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраон
Соединение примера 7 может быть получено путем нуклеофильного замещения хлоргруппы производного 2 на амин 32, применяя способ, описанный для получения соединения 30, с последующим восстановлением дисульфида с помощью способа, описанного для получения примера 6.
Пример 8. (Е)-(3З,10К,16З)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-16-{(З)-1-[(2К,3К)-3-(4меркаптометилфенил)оксиранил]этил}-6,6-диметил-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12тетраон /V о ,- I 4 ·· γН$ Л О О ΗΝ С1 > т , ι ιί ;ι г о / и ° - V
Соединение 33. Димер примера 8
О
Соединение 2 (24,5 мг; 34,1 мкмоль) растворяют в безводном ТНР (2,5 мл) и смесь охлаждают до -10°С и затем добавляют гексаметилдисилатиан (44,3 мкмоль), затем 1М раствор тетрабутиламмонийфторида в ТНР (40,9 мкмоль). Смесь возвращают к КТ и продолжают перемешивание 1 ч 30 мин. Смесь разбавляют добавлением АсОЕ! (5 мл) и органический слой промывают насыщенным водным раствором ИН4С1 (5 мл). Водный слой экстрагируют АсОЕ! (2x5 мл). Органические слои объединяют, промывают насыщенным водным раствором №С1 (5 мл). После сушки над М§ЗО4 и фильтрации растворители выпаривают при ПД. Неочищенный продукт реакции очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ИСМ/метанол 100/0-97/3. Получают соединение 33 в виде белого твердого вещества (19 мг, 78%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): 0,78 (м, 12Н); 1,00 (с, 6Н); 1,04 (д, 1=6,8 Гц, 6Н); 1,11 (с, 6Н); 1,30 (м, 2Н); 1,49-1,63 (м, 4Н); 1,82 (м, 2Н); 2,26 (м, 2Н); 2,63-2,72 (м, 4Н); 2,93-3,05 (м, 6Н); 3,25-3,37 (м частично экранирован, 2Н); 3,81 (с, 6Н); 3,82 (с, 4Н); 3,89 (д, 1=2,0 Гц, 2Н); 4,25 (ддд, 1=3,7, 8,0 и 11,5 Гц, 2Н); 4,91 (дд, 1=3,7, 9,6 Гц, 2Н); 5,10 (ддд, 1=1,3, 5,3 и 10,8 Гц, 2Н); 5,79 (дд, 1=1,3, 15,3 Гц, 2Н); 6,47 (ддд, 1=3,7, 10,8 и 15,3 Гц, 2Н); 7,05 (д, 1=8,6 Гц, 2Н); 7,17 (дд, 1=2,0, 8,6 Гц, 2Н); 7,22 (дд, 1=2,5, 9,3 Гц, 2Н); 7,26-7,32 (м, 10Н); 8,34 (д, 1=8,0 Гц, 2Н). ЖХМС (А2): ЕЗ т//=1427 [М+Н]+; !К=1,31 мин.
Пример 8. (Е)-(3З,10К,16З)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-16-{(З)-1-[(2К,3К)-3-(4меркаптометилфенил)оксиранил]этил}-6,6-диметил-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12тетраон
Соединение 33 (11 мг; 7,7 мкмоль) растворяют в метаноле (8,8 мл). Затем прибавляют ТСЕР (76,7 мкмоль), растворенный в 2,2 мл воды, и смесь перемешивают 2 ч при КТ. Смесь разбавляют 20 мл АсОЕ! и органический слой промывают смесью 1/1 воды и насыщенного водного раствора ИН4С1 (20 мл). Водный слой экстрагируют АсОЕ! (2x15 мл). Органические слои объединяют, промывают насыщенным водным раствором №С1 (15 мл). После сушки над М§ЗО4 и фильтрации растворители выпаривают при ПД.
Неочищенный продукт реакции очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ИСМ/метанол 100/0-95/5. Получают соединение пр.8 в виде белого твердого вещества (4,7 мг, 31%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): 0,79 (д, 1=6,4 Гц, 6Н); 1,00 (с, 3Н); 1,05 (д, 1=6,9 Гц, 3Н); 1,12 (с, 3Н); 1,30 (м, 1Н); 1,50-1,63 (м, 2Н); 1,80 (м, 1Н); 2,27 (м, 1Н); 2,62-2,75 (м, 2Н); 2,84 (т шир., 1=6,5 Гц, 1Н); 2,93-3,06 (м, 3Н); 3,34 (м частично экранирован, 1Н); 3,73 (д шир., 1=6,5 Гц, 2Н); 3,81 (с, 3Н); 3,87 (д, 1=1,6 Гц, 1Н); 4,25 (ддд, 1=3,7, 8,0 и 11,4 Гц, 1Н); 4,91 (дд, 1=3,6, 9,6 Гц, 1Н); 5,11 (ддд, 1=1,3, 5,3 и 11,4 Гц, 1Н); 5,79 (дд, 1=1,3, 15,2 Гц, 1Н); 6,47 (ддд, 1=3,4, 11,3 и 15,2 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,5 Гц, 1Н); 7,17 (дд, 1=1,9, 8,5 Гц, 1Н); 7,22 (дд, 1=2,3, 9,5 Гц, 1Н); 7,25 (д, 1=8,3 Гц, 2Н); 7,28 (д, 1=1,9 Гц, 2Н); 7,35 (д, 1=8,3 Гц, 2Н); 8,34 (д, 1=8,0 Гц, 2Н). ЖХМС (А2): ЕЗ т^=715 [М+Н]+; т//=713 [М-Н]-; !К=1,18 мин.
- 42 024627
Пример 9. 1ш2Н11-8РОВ-пр.1.
Согласно общему описанию двухстадийного способа 10,4 мг (0,071 мкмол, 1,174 мл) голого антитела 1ш2Н11 с первоначальной концентрацией 8,8 6 мг/мл обрабатывают 7 экв. Νгидроксисукцинимидилового сложного эфира 4-(2-пиридилдитио)бутановой кислоты (0,16 мг, 0,496 мкмоль), растворенного в 34,2 мкл ОМА таким образом, чтобы в смеси конечная концентрация антител была 8 мг/мл. После очистки получают 2,2 мл антител 1ш2Н11 в концентрации 4,28 мг/мл (9,42 мг, 91%), модифицированных в среднем 4,68 молекулами пиридилсульфида на антитело. Обрабатывают 1,68 мл (7,2 мг, 0,04 9 мкмоль) модифицированных антител 1ш2Н11 с помощью 1,0 3 мг (Е)-(38,10К,168)-10-(3хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-16-[(8)-1-((2К,3К)-3-{4-[4-(4-меркапто-4-метилпентаноил)пиперазин1-илметил]фенил}оксиранил)этил]-6,6-диметил-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраона (соединение пр.1, 1,148 мкмоль), растворенного в 101,2 мкл ОМА. После очистки на 8иретБех в присутствии 10% ИМР и концентрирования на аппарате Аписон иИта-15, окончательную замену буфера производят в водном буфере рН 6,5, содержащем 0,01 М фосфата и 0,14 М ИаС1. Получают 1,5 мл конъюгата пр. 9 в концентрации 1,1 мг/мл, содержащего в среднем 3 производных криптофицина на антитело (НКМ8) и с мономерной чистотой 99,9%.
Пример 10. 1ш2Н11-8РЭВ-пр.2
Согласно описанию общего способа в одну стадию 13,5 мг (0,092 мкмол, 1,318 мл) голого антитела 1ш2Н11 с первоначальной концентрацией 10,24 мг/мл обрабатывают 6 экв. Νгидроксисукцинимидилового сложного эфира 4-(2-пиридилдитио)бутановой кислоты (0,18 мг, 0,551 мкмоль), растворенного в 38,4 мкл ОМА так, чтобы в смеси конечная концентрация антител была 9 мг/мл. После перемешивания в течение 2 ч со скоростью примерно 2000 об/мин при КТ к 1,333 мл (12,0 мг, 0,081 мкмоль) смеси с модифицированым антителом 1ш2Н11 последовательно прибавляют 1,760 мл буфера рН«7,5-8, 543 мкл ОМА, затем 1,73 мг (Е)-(38,6К,10К,168)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3изобутил-16-[(8)-1-((2К,3К)-3-{4-[4-(4-меркапто-4-метилпентаноил)пиперазин-1-илметил]фенил}оксиранил)этил]-6-метил-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраона (соединение пр. 2, 1,958 мкмоль), растворенного в 18 2 мкл ОМА. После очистки на 8иретБех в присутствии 20% ИМР и концентрирования на приборе Атюоп иИта-15, окончательную замену буфера производят в водном буфере рН 6,5, содержащем 0,01 М гистидина, 10% сахарозы (м/об) и 5% ИМР (об./об.). Получают 1,5 мл конъюгата пр.10 в концентрации 2,83 мг/мл, содержащего в среднем 3,7 производных криптофицина на антитело (НКМ8) и с мономерной чистотой 98,8%.
Пример 11. 1ш2Н11-8РЭВ-пр.5
Согласно описанию общего способа в одну стадию 9,45 мг (0,064 мкмол, 0,923 мл) голого антитела 1ш2Н11 с первоначальной концентрацией 10,24 мг/мл обрабатывают 6 экв. Игидроксисукцинимидилового сложного эфира 4-(2-пиридилдитио)бутановой кислоты (0,13 мг, 0,398 мкмоль), растворенного в 26,88 мкл ОМА так, чтобы в смеси конечная концентрация антитела была 9 мг/мл. После перемешивания в течение 2 ч со скоростью примерно 2000 об/мин при КТ к 1,0 мл (9,0 мг, 0,061 мкмоль) реакционной среды с модифицированым антителом 1ш2Н11 последовательно прибавляют 1,45 мл буфера рН«7,5-8, 265 мкл ОМА, затем 1,26 мг (Е)-(38,10К,168)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3изобутил-16-[(8)-1-((2К,3К)-3-{4-[4-(2-меркапто-2-метилпропил)пиперазин-1-илметил]фенил}оксиранил) этил]-6,6-диметил-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраона (соединение пр.5, 1,472 мкмоль), растворенного в 285 мкл ОМА. После очистки на 8иретБех в присутствии 20% ИМР и концентрирования на приборе Атюоп иИта-15, окончательную замену буфера производят в водном буфере рН 6,5, содержащем 0,01 М гистидина, 10% сахарозы (м/об) и 5% ИМР (об./об.). Получают 2,5 мл конъюгата пр. 12 в концентрации 1,7 0 мг/мл, содержащего в среднем 3,7/3,1 производных криптофицина на антитело (ИУ/НКМ8) и с мономерной чистотой 98,0%.
- 43 024627
Пример 12. 1ш2Н11^РЭВ-пр.6
Согласно описанию общего способа в одну стадию 10,31 мг (0,070 мкмол, 1,006 мл) голого антитела 1ш2Н 11 с первоначальной концентрацией 10,24 мг/мл обрабатывают 6 экв. Νгидроксисукцинимидилового сложного эфира 4-(2-пиридилдитио)бутановой кислоты (0,14 мг, 0,429 мкмоль), растворенного в 29,32 мкл ОМА так, чтобы в смеси конечная концентрация антитела была 9 мг/мл. После перемешивания в течение 2 ч со скоростью примерно 2000 об/мин при КТ к 1,1 мл (9,9 мг, 0,067 мкмоль) смеси с модифицированным антителом Ьи2Н11 последовательно прибавляют 1,595 мл буфера рН«7,5-8, 291 мкл ОМА, затем 1,60 мг (Е)-(3δ,10К,16δ)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил16-[^)-1-((2К,3К)-3-{4-[4-({2-[2-(2-{2-метил-[2-меркапто-2-метилпропил]аминоэтокси}этокси)этокси]этил}метиламино)метил] фенил}оксиранил)этил] -6,6-диметил-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13 ен-2,5,9,12-тетраона (соединение пр.6, 1,617 мкмоль), растворенного в 314 мкл ОМА. После очистки на δире^йеx в присутствии 20% NМР и концентрирования на приборе Атюоп иИга-15, окончательную замену буфера производят в водном буфере рН 6,5, содержащем 0,01 М гистидина, 10% сахарозы (м/об.) и 5% NМР (об./об.). Получают 3 мл конъюгата пр.12 в концентрации 1,97 мг/мл, содержащего в среднем 3,4 производных криптофицина на антитело (НКМБ) и с мономерной чистотой 99,8%.
Пример 13. 2,5-Диоксопирролидин-1-ил-(4-{4-[(2К,3К)-3-((δ)-1-{(Е)-(3δ,10К,16δ)-10-[3-хлор-4метоксибензил]-3-изобутил-6,б-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен16-ил}этил)оксиранил] бензил} пиперазин-1 -ил)ацетат
Соединение 3 4. трет-Бутил-4-метоксикарбонилметилпиперазин-1 -карбоксилат
Растворяют 200 мг (1,07 ммоль) трет-бутилпиперазин-1-карбоксилата в безводном ацетонитриле (10 мл). Прибавляют ТЕА (1,07 ммоль), затем метилбромацетат (1,61 ммоль). Белую суспензию перемешивают 48 ч при КТ, после чего вводят насыщенный водный раствор NаНСΟз (10 мл). Водный слой экстрагируют ЭСМ (3x10 мл), органические слои объединяют, промывают насыщенным водным раствором Ν;·ιΟ и сушат над М^О4. После фильтрации и выпаривания растворителей при ПД получают неочищенный продукт реакции. Этот неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ОСМ/метанол 98/2. Получают целевой продукт 34 в виде бесцветного масла (174,8 мг; 63%). ТСХ (ЭСМ 90/МеОН 10): КГ=0,66; Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-й6): 1,39 (с, 9Н); 2,40-2,48 (м, 4Н); 3,25 (с, 2Н); 3,28-3,33 (м частично экранирован, 4Н); 3,61 (с, 3Н).
Соединение 35. Гидрохлорид метилпиперазин-1-илацетата
Соединение 34 (174 мг; 0,67 ммоль) растворяют в безводном диоксане (5 мл) и прибавляют 4 М раствор НС1 в диоксане (0,02 ммоль). Смесь перемешивают 5 ч при КТ, затем суспензию фильтруют через фриттированное стекло. Полученный твердый продукт промывают диоксаном (2 мл), затем изопропиловым эфиром (2 мл), и после этого сушат в вакууме. Получают соединение 35 в виде твердого вещества бежевого цвета (131 мг; 100%). Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-й6): 2,88-2,97 (м, 4Н); 3,09-3,19 (м, 4Н); 3,53-3,59 (м, 2Н); 3,65 (с, 3Н); 8,65-9,22 (м уш., 2Н).
Соединение 36. Метил-(4-{4-[(2К,3К)-3-((δ)-1-{(Е)-(3δ,10К,16δ)-10-[3-хлор-4-метоксибензил]-3изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил}этил)оксиранил]бензил}пиперазин-1-ил)ацетат
Производное 1 (20 мг; 28,6 мкмоль) растворяют в безводном ЭСМ (1 мл) и ТЕА (71,5 мкмоль), затем прибавляют СМБ (45,8 мкмоль). После проведения реакции в течение 12 ч при КТ образовавшийся продукт 2 не выделяют. Добавляют ТЕА (85,7 мкмоль), затем вводят гидрохлорид метилпиперазин-1илацетата 35 (42,8 мкмоль). Смесь перемешивают дополнительно 72 ч при КТ, затем добавляют безводный ОМЕ (1 мл) и №П (30 мкмоль). Смесь перемешивают 48 ч при 45°С, затем разбавляют посредством АсОЕ! (5 мл). Органический слой промывают водой (2x2 мл), насыщенным водным раствором NаНСΟз
- 44 024627 (2 мл) и насыщенным водным раствором МаС1 (2 мл). После сушки над Мд8О4 и фильтрации растворители выпаривают при ПД. Неочищенный продукт реакции очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ИСМ/метанол 100/0-98/2. Получают соединение 36 в виде твердого белого вещества (8,2 мг; 34%). ТСХ (ИСМ 90/МеОН 10): Κί=0,45; !Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-Д6): 0,77 (д, 1=6,1 Гц, 3Н); 0,78 (д, 1=6,1 Гц, 3Н); 1,00 (с, 3Н); 1,05 (д, 1=7,1 Гц, 3Н); 1,12 (с, 3Н); 1,27-1,32 (м, 1Н); 1,50-1,60 (м, 2Н); 1,74-1,84 (м, 1Н); 2,21-2,30 (м, 1Н); 2,37 (с шир., 4Н); 2,64-2,74 (м, 2Н); 2,94-3,06 (м, 3Н); 3,18-3,52 (м, частично экранирован, 9Н); 3,60 (с, 3Н); 3,81 (с, 3Н); 3,87 (д, 1=2,0 Гц, 1Н); 4,20-4,31 (м, 1Н); 4,91 (дд, 1=3,8 и 9,9 Гц, 1Н); 5,11 (м, 1Н); 5,80 (д, 1=15,2 Гц, 1Н); 6,48 (ддд, 1=3,8 и 11,2 и 15,2 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,3 Гц, 1Н); 7,17 (дд, 1=2,2 и 8,3 Гц, 1Н); 7,20-7,33 (м, 6Н); 8,34 (д, 1=8,1 Гц, 1Н). ЖХМС (А1): Е8 т//=839 [М+Н]+; т//=420 [М+2Н]2+ (пик молекулярного иона); т//=837 [М-Н]-; т//=883 [М+НСО2Н-Н] (пик молекулярного иона); 0=3,57 мин.
Соединение 37. Аллилбромацетат
Растворяют 288 мг (4,95 ммоль) аллилового спирта в 25 мл ИСМ. Раствор охлаждают до 0°С, затем прибавляют 760 мкл (5,45 ммоль) ТЕА и 3,03 мг (24,8 мкмоль) ИМАР. Смесь перемешивают при 0°С, затем прибавляют 1,0 г (4,95 ммоль) бромацетилбромида. Реакцию продолжают в течение ночи при КТ. К смеси добавляют воду; водный слой промывают посредством ИСМ. Органические слои объединяют, промывают водой и насыщенным раствором МаС1 и сушат над Мд8О4. После фильтрации и выпаривания растворителей при ПД получают продукт 37 (747 мг, 84%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-Д6): 4,18 (с, 2Н); 4,64 (тд, 1=1,5 и 5,4 Гц, 2Н); 5,25 (кв.д, 1=1,5 и 10,5 Гц, 1Н); 5,35 (кв.д, 1=1,5 и 17,2 Гц, 1Н); 5,92 (тдд, 1=5,4 и 10,5 и 17,2 Гц, 1Н).
Соединение 38. трет-Бутил-4-аллилоксикарбонилметилпиперазин-1 -карбоксилат
К раствору 200 мг (1,07 ммоль) 1-Вос-пиперазина в 8 мл ацетонитрила прибавляют 150 мкл (1,07 ммоль) ТЕА и 250 мг (1,40 ммоль) аллилбромацетата 37. Смесь перемешивают в течение ночи при КТ. Реакцию останавливают добавлением насыщенного раствора МаНСО3. Смесь экстрагируют посредством АсОЕ! (3 раза); органические слои объединяют, промывают насыщенным раствором МаС1 и сушат над Мд8О4. После фильтрации и выпаривания растворителей при ПД неочищенный продукт реакции очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ИСМ/метанол 100/0-95/5. Получают целевой продукт 38 в виде желтого масла (314 мг; 100%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-Д6): 1,39 (с, 9Н); 2,45-2,48 (м, 4Н); 3,25-3,34 (м частично экранирован, 6Н); 4,57 (тд, 1=1,5 и 5,6 Гц, 2Н); 5,22 (кд, 1=1,5 и 10,3 Гц, 1Н); 5,30 (кд, 1=1,5 и 17,1 Гц, 1Н); 5,83-5,98 (м, 1Н). ЖХМС (А2): Е8 тО=285 [М+Н]+; тО=229 пик молекулярного иона; 0=0,51 мин.
Соединение 39. Гидрохлорид аллилпиперазин-1-илацетата
О
О г'· Ν- О 9 Г ΝΗ НС!
л -----а м
Растворяют 314 мг (1,10 ммоль) соединения 38 в 12,6 мл диоксана, затем добавляют 5,5 мл (22,0 ммоль) 4 М раствора НС1 в диоксане. Перемешивание осуществляют в течение ночи при КТ. Смесь концентрируют досуха с получением целевого соединения 39 в виде желтого масла (260 мг, 100%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-Д6): 2,79-2,88 (м, 4Н); 3,07-3,15 (м, 4Н); 3,48-3,51 (м, 2Н); 4,60 (тд, 1=1,5 и 5,6 Гц, 2Н); 5,23 (кд, 1=1,5 и 10,3 Гц, 1Н); 5,32 (кд, 1=1,5 и 7,4 Гц, 1Н); 5,86-5,98 (м, 1Н); 8,74 (с шир., 2Н). ЖХМС (А2): Е8 т//=185 [М+Н]+; 0=0,19 мин.
Соединение 40. Аллил-(4-{4-[(2К,3К)-3-((8)-1-{(Е)-(38,10К,168)-10-[3-хлор-4-метоксибензил]-3изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил}этил)оксиранил]бензил}пиперазин-1-ил)ацетат
К раствору, продуваемому аргоном, соединения 2 (28,3 мг, 39,5 мкмоль) в безводном ацетонитриле (2,5 мл) прибавляют раствор соединения 39 (118,5 мкмоль) и ТЕА (198 мкмоль) в безводном ацетонитриле (1 мл). Перемешивание ведут 24 ч при 40°С. Смесь разбавляют АсОЕ! (10 мл). Органический слой промывают водой (10 мл), насыщенным водным раствором МаНСО3 (10 мл), насыщенным водным раствором МаС1 (10 мл). После сушки над Мд8О4 и фильтрации растворители выпаривают при ПД. Неочищенный продукт реакции очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ИСМ/метанол 98/2. Соединение 40 получают в виде твердого белого вещества (19,2 мг, 56%). 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-Д6): 0,75 (д, 1=6,3 Гц, 3Н); 0,77 (д, 1=6,3 Гц, 3Н); 1,00 (с, 3Н); 1,05 (д, 1=6,9 Гц, 3Н); 1,12 (с, 3Н); 1,25-1,33 (м,
- 45 024627
1Н); 1,50-1,61 (м, 2Н); 1,74-1,84 (м, 1Н); 2,27 (дт, 1=11,3 и 14,2 Гц, 1Н); 2,32-2,42 (м, 4Н); 2,52 (м частично экранирован, 4Н); 2,64-2,74 (м, 2Н); 2,94-3,05 (м, 3Н); 3,25 (с, 2Н); 3,32-3,35 (м частично экранирован, 1Н); 3,40-3,48 (м, 2Н); 3,81 (с, 3Н); 3,87 (д, 1=1,6 Гц, 1Н); 4,25 (ддд, 1=3,7 и 8,0 и 11,6 Гц, 1Н); 4,56 (тд, 1=1,5 и 5,5 Гц, 2Н); 4,91 (дд, 1=3,7 и 9,7 Гц, 1Н); 5,11 (м, 1Н); 5,21 (кв.д, 1=1,5 и 10,5 Гц, 1Н); 5,30 (кв.д, 1=1,5 и 17,3 Гц, 1Н); 5,80 (д, 1=16,2 Гц, 1Н); 5,86-5,95 (м, 1Н); 6,47 (ддд, 1=3,8 и 11,2 и 15,2 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,5 Гц, 1Н); 7,17 (дд, 1=2,2 и 8,5 Гц, 1Н); 7,19-7,32 (м, 6Н); 8,34 (д, 1=8,0 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): Εδ т//=865 [М+Н]+; т//=433,5 [М+2Н]2+ (пик молекулярного иона); т//=863 [М-Н]-; т//=909 [М+НСО2НН]-; ΐκ=0,92 мин.
Соединение 41. (4-{4-[(2Κ,3Κ)-3-((δ)-1-{(Ε)-(3δ,10Κ,16δ)-10-[3-Хлор-4-меτоксибензил]-3-изобуτил6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-дчазациклогекоадец-13-ен-16-ил}этил)оксиранил]бензил}пиперазин-1-ил)уксусная кислота
К раствору, находящемуся в атмосере аргона, соединения 40 (12,8 мг, 14,8 мкмоль) в безводной ТНР прибавляют тетракис(трифенилфосфин)палладий (1,48 мкмоль) и морфолин (148 мкмоль). После 3 ч реакции смесь концентрируют досуха и обрабатывают 5 мл ЭСМ. Органический слой промывают 1 мл 0,1н. раствора НС1 в 3 мл воды (рН«5), сушат над М^О4, фильтруют и выпаривают с получением соединения 41 (6,7 мг, 55%). !Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6): 0,76 (д, 1=6,0 Гц, 3Н); 0,78 (д, 1=6,0 Гц, 3Н); 1,00 (с, 3Н); 1,05 (д, 1=6,9 Гц, 3Н); 1,12 (с, 3Н); 1,28 (м, 1Н); 1,52-1,59 (м, 2Н); 1,76-1,84 (м, 1Н); 2,21-2,32 (м, 1Н); 2,42 (д, 1=6,6 Гц, 4Н); 2,58-2,76 (м, 6Н); 2,97-3,09 (м, 3Н); 3,14 (с шир., 2Н); 3,33 (м экранирован, 1Н); 3,46 (с шир., 2Н); 3,81 (с, 3Н); 3,87 (д, 1=1,8 Гц, 1Н); 4,20-4,29 (м, 1Н); 4,89-4,93 (м, 1Н); 5,06-5,14 (м, 1Н); 5,80 (д, 1=15,2 Гц, 1Н); 6,43-6,50 (м, 1Н); 7,05 (д, 1=8,5 Гц, 1Н); 7,17 (дд, 1=2,2 и 8,5 Гц, 1Н); 7,20-7,32 (м, 6Н); 8,34 (д, 1=8,0 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): Εδ т//=825 [М+Н]+; т//=413 [М+2Н]2+ (пик молекулярного иона); т//=823 [М-Н]; 1К=0,86 мин.
Пример 13. 2,5-Диоксопирролидин-1-ил-(4-{4-[(2Κ,3Κ)-3-((δ)-1-{(Е)-(3δ,10Κ,16δ)-10-[3-хлор-4метоксибензил] -3 -изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13 -ен16-ил}этил)оксиранил] бензил} пиперазин-1 -ил)ацетат
Соединение примера 13 может быть получено активированием кислоты 41 согласно способу, описанному для примера 18.
Пример 14. 2,5-Диоксопирролидин-1-ил-(2-{2-[2-(2-{4-[(2Κ,3Κ)-3-((δ)-1-{(Ε)-(3δ,10Κ,16δ)-10-[3хлор-4-метоксибензил]-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец13 -ен-16-ил}этил)оксиранил] бензиламино}этокси)этокси]этокси}этокси)пропаноат
Соединение 42. Аллил-3-(2-{2-[2-(2-трет-бутоксикарбониламиноэтокси)этокси]этокси}-этокси)пропаноат
К раствору Вос-15-амино-4,7,10,13-тетраоксапентадекановой кислоты (50 мг, 137 мкмоль) в 1,25 мл ЭСМ последовательно прибавляют гидрохлорид БЭС1 (164,2 мкмоль), ОМАР (13,7 мкмоль) и аллиловый спирт (164,2 мкмоль). Смесь перемешивают при КТ в течение 16 ч, затем выпаривают досуха. Неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ЭСМ/метанол 100/0-95/5. Соединение 42 получают в виде бесцветного масла (37,5 мг, 67%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): 1,37 (с, 9Н); 2,57 (т, 1=6,1 Гц, 2Н); 3,06 (кв., 1=6,1 Гц, 2Н); 3,37 (т, 1=6,1 Гц, 2Н); 3,44-3,53 (м, 12Н); 3,64 (т, 1=6,1 Гц, 2Н); 4,55 (тд, 1=1,6 и 5,4 Гц, 2Н); 5,20 (кв.д, 1=1,6 и 10,5 Гц, 1Н); 5,30 (кв.д, 1=1,6 и 17,3 Гц, 1Н); 5,90 (тдд, 1=5,4 и 10,5 и 17,3 Гц, 1Н); 6,70 (т шир., 1=6,1 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): Εδ тА=406 [М+Н]+; тА=428 |М+№|'; т//=306 пик молекулярного иона; ίκ=0,91 мин.
Соединение 43. Гидрохлорид аллил-3-(2-{2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]этокси}этокси)пропаноата
К раствору соединения 42 (37,5 мг, 92,5 мкмоль) в 2 мл диоксана прибавляют 460 мкл (1,85 ммоль) 4 М раствора соляной кислоты в диоксане. Перемешивание ведут в течение ночи при КТ, затем реакционную среду выпаривают досуха с получением соединения 43 в виде бесцветного масла (31 мг, количе- 46 024627 ственный выход). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-ά..): 2,58 (т, 1=6,1 Гц, 2Н); 2,96 (т, 1=5,4 Гц, 2Н); 3,48-3,53 (м, 8Н); 3,55-3,58 (м, 4Н); 3,60 (т, 1=5,4 Гц, 2Н); 3,65 (т, 1=6,1 Гц, 2Н); 4,56 (тд, 1=1,6 и 5,4 Гц, 2Н); 5,21 (кв.д, 1=1,6 и 10,5 Гц, 1Н); 5,30 (кв.д, 1=1,6 и 17,3 Гц, 1Н); 5,91 (тдд, 1=5,4 и 10,5 и 17,3 Гц, 1Н); 7,91 (м ушир., 3Н). ЖХМС (А2): Ε8 тА=306 [Μ+НЦ !к=0,42 мин.
Соединение 44. (2-{2-[2-(2-{4-[(2Κ,3Κ)-3-((8)-1-{(Ε)-(38,10Κ,168)-10-[3-Хлор-4-метоксибензил]-3изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил}этил)оксиранил]бензиламино}этокси)этокси]этокси}этокси)пропаноат
К раствору, продуваемому аргоном, соединения 2 (12,7 мг, 17,7 мкмоль) в 1,48 мл безводного ацетонитрила прибавляют последовательно 22,2 мкл 'ΓΕΑ (159 мкмоль) и 30,2 мг соединения 43 (88,4 мкмоль). Перемешивание ведут в течение 24 ч при 40°С: остается исходное соединение 2; снова к смеси прибавляют 22,2 мкл ΤΕΑ (159 мкмоль) и 30,2 мг соединения 43 и (88,4 мкмоль) и перемешивание продолжают дополнительно в течение 48 ч при 40°С. К смеси прибавляют 2 мл воды, затем смесь экстрагируют 2x2 мл Α^Εΐ. Органические слои объединяют, промывают насыщенным водным раствором ΝηНСО3 (2 мл), насыщенным раствором хлорида натрия (2 мл) и сушат над Μ§δΟ4. После фильтрации и концентрирования при ПД неочищенный продукт реакции очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ^СΜ/метанол 100/0-95/5. Соединение 44 получают в виде твердого белого вещества (4,8 мг, 27%). Ή ЯМР (500 МГц, ДМСО-А): 0,77 (м, 6Н); 1,00 (с, 3Н); 1,05 (д, 1=6,9 Гц, 3Н); 1,12 (с, 3Н); 1,29 (м, 1Н); 1,49-1,60 (м, 2Н); 1,81 (м, 1Н); 2,26 (м, 1Н); 2,56 (т, 1=6,1 Гц, 2Н); 2,61-2,73 (м, 4Н); 2,93-3,04 (м, 3Н); 3,28-3,38 (м частично экранирован, 1Н); 3,45-3,53 (м, 14Н); 3,63 (т, 1=6,1 Гц, 2Н);3,72 (с, 2Н); 3,81 (с, 3Н); 3,86 (с шир., 1Н); 4,25 (ддд, 1=3,4 и 8,2 и 11,4 Гц, 1Н); 4,55 (дм, 1=5,4 Гц, 2Н); 4,90 (дд, 1=3,9 и 9,8 Гц, 14); 5,11 (ддд, 1=1,4 и 5,4 и 11,2 Гц, 1Н); 5,19 (дм, 1=10,8 Гц, 1Н); 5,29 (дм, 1=17,2 Гц, 1Н); 5,79 (дд, 1=1,4 и 15,2 Гц, 1Н); 5,90 (м, 1Н); 6,47 (ддд, 1=3,9 и 11,2 и 15,2 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,8 Гц, 1Н); 7,17 (дд, 1=2,0 и 8,8 Гц, 1Н); 7,21 (м, 1Н); 7,24 (д, 1=8,3 Гц, 2Н); 7,28 (д, 1=2,0 Гц, 1Н); 7,33 (д, 1=8,3 Гц, 2Н); 8,35 (д, 1=8,2 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): Ε8 т//=986 [Μ+НЦ т//=493,5 [Μ+2Π|2+ пик молекулярного иона; т//=984 [Μ-Н]-; т//=1030 [Μ-Н+НСОД - пик молекулярного иона; !К=0,95 мин.
Пример 14. 2,5-Диоксопирролидин-1-ил-(2-{2-[2-(2-{4-[(2Κ,3Κ)-3-((8)-1-{(Ε)-(38,10Κ,168)-10-[3хлор-4-метоксибензил]-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец13 -ен-16-ил}этил)оксиранил] бензиламино}этокси)этокси]этокси}этокси)пропаноат
Соединение примера 14 может быть получено путем удаления защиты с соединения 44 согласно способу, описанному для соединения 41 и активацией полученной кислоты согласно способу, описанному для примера 18.
Пример 15. 2,5-Диоксопирролидин-1-ил-(2-{2-[2-(2-{4-[(2К,3К)-3-((8)-1-{(Е)-(38,10К,168)-10-[Зхлор-4-метоксибензил]-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец13-ен-16-ил}этил)оксиранил]бензилметиламино}этокси)этокси]этокси}этокси)пропаноат
Соединение 45 си]пропановая кислота но,.
Г о
3-[2-(2-{2-[2-(трет-Бутоксикарбонилметиламино)этокси]этокси}этокси)эток-
Растворяют 520 мг (1,423 ммоль) Вос-15-амино-4,7,10,13-тетраоксапентадекановой кислоты в 14 мл безводного ТНР, затем смесь охлаждают до 0°С, после этого прибавляют порциями с помощью шпателя 85,4 мг (2,135 ммоль) гидрида натрия. Перемешивание ведут в течение 10 мин при 0°С, затем прибавляют 150,6 мкл (2,419 ммоль)метилиодида при 0°С. Дают температуре вернуться в КТ и продолжают перемешивание 2 ч. Добавляют к смеси 8 мл воды и затем подкисляют смесь добавлением уксусной кислоты для получения рН«4. Экстрагируют 3x10 мл Α^Εΐ. Органические слои объединяют, промывают 10 мл насыщенным раствором №С1 и сушат над Μ^^ψ После фильтрации и концентрирования досуха при ПД получают соединение 45 в виде бесцветного масла (414 мг, 77%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-й6): 1,38 (с, 9Н); 2,43 (т, 1=6,4 Гц, 2Н); 2,80 (с шир., 3Н); 3,29 (т, 1=5,9 Гц, 2Н); 3,45-3,52 (м, 14Н); 3,60 (т, 1=6,4 Гц, 2Н); 12,01 (м уш., 1Н); ЖХМС (А2): Ε8 ιη/ζ=402 [Μ+№]+; тА=378 [Μ-Н]-; т//=280 пик молекулярного иона; !К=0,95 мин.
- 47 024627
Соединение 46. си)этокси] пропаноат
НО Х-. ^о. [,
О
Алил-3-[2-(2-{2-[2-(трет-бутоксикарбонилметиламино)этокси]этокси}эток-
К раствору 540 мг (1,423 ммоль) соединения 45 в 15 мл безводного ЭСМ последовательно прибавляют 327 мг (1,71 ммоль) ЕЭС1, 17,4 мг (142 мкмоль) ОМАР и 116 мкл (1,71 ммоль) аллилового спирта. Перемешивание ведут 15 ч при КТ, затем смесь концентрируют досуха. Полученный неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ЭСМ/метанол 100/0-90/10. Получают соединение 46 в виде бесцветного масла (337 мг; 56%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): 1,38 (с, 9Н); 2,57 (т, Л=6,1 Гц, 2Н); 2,80 (с шир., 3Н); 3,22-3,33 (м частично экранирован, 2Н); 3,44-3,54 (м, 14Н); 3,64 (т, 1=6,1 Гц, 2Н); 4,55 (д шир., 1=4,9 Гц, 2Н); 5,20 (д шир., 1=10,3 Гц, 1Н); 5,30 (д шир., 1=17,1 Гц, 1Н); 5,90 (м, 1Н); ЖХМС (А2): ЕЗ ιη/ζ=442 |М+№|'; тЦ=320 пик молекулярного иона; 0=0,98 мин.
Соединение 47. Алил-3-(2-{2-[2-(2-метиламиноэтокси)этокси]этокси}этокси)пропаноат
К раствору 337 мг (0,802 ммоль) соединения 46 в 20 мл ЭСМ прибавляют 1,19 мл (16,04 ммоль) ТРА. Перемешивание ведут в течение 3 ч при КТ, затем смесь концентрируют досуха при ПД. Полученный неочищенный продукт очищают путем ЗРЕ фильтрации на кондиционированном картридже ЗСХ (Уапап) и промывают метанолом, затем элюируют 0,5н. раствором аммиака в метаноле. Соединение 47 получают в виде бесцветного масла (208 мг, 81%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): 2,27 (с, 3Н); 2,54-2,61 (м, 4Н); 3,44 (т, 1=5,6 Гц, 2Н); 3,47-3,52 (м, 12Н); 3,65 (т, 1=6,2 Гц, 2Н); 4,56 (д шир., Д=5,4 Гц, 2Н); 5,20 (д шир., 1=10,5 Гц, 1Н); 5,30 (д шир., 1=17,2 Гц, 1Н); 5,90 (м, 1Н); ЖХМС (А2): ЕЗ тЦ=320 [М+Н]+; 0=0, 4 2 мин.
Соединение 48. Аллил-(2-{2-[2-(2-{4-[(2К,3К)-3-((З)-1-{(Е)-(3З,10К,16З)-10-[3-хлор-4-метоксибензил]-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16ил}этил)оксиранил]бензиламино}этокси)этокси]этокси}этокси)пропаноат
К раствору, продуваемому аргоном, соединения 2 (40 мг, 55,7 мкмоль) в 5 мл безводного ацетонитрила последовательно прибавляют 48,5 мкл Э1РЕА (279 мкмоль) и 53 мг соединения 47 (167 мкмоль). Перемешивание ведут в течение 15 ч при 40°С; к смеси прибавляют 5 мл воды, затем смесь экстрагируют 4x5 мл АсОЕР Органические слои объединяют, промывают насыщенным раствором NаНСОз (5 мл), насыщенным раствором №С1 (5 мл) и сушат над М§ЗО4. После фильтрации и концентрирования при ПД неочищенный продукт реакции очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ЭСМ/метанол 100/0-90/10. Соединение 48 получают в виде твердого бесцветного вещества (45,3 мг; 80%). ЯМР 1Н (500 МГц, ДМСО-б6): 0,76 (д, 1=5,9 Гц, 3Н); 0,78 (д, 1=5,9 Гц, 3Н); 1,00 (с, 3Н); 1,04 (д, Д=6,8 Гц, 3Н); 1,12 (с, 3Н); 1,29 (м, 1Н); 1,50-1,61 (м, 2Н); 1,80 (м, 1Н); 2,15 (с, 3Н); 2,28 (м, 1Н); 2,52 (т, 1=6,4 Гц, 2Н); 2,56 (т, 1=6,4 Гц, 2Н); 2,63-2,73 (м, 2Н); 2,94-3,06 (м, 3Н); 3,25-3,35 (м частично экранирован, 1Н); 3,48 (с, 2Н); 3,49-3,51 (м, 12Н); 3,52 (т, >6,4 Гц, 2Н); 3,63 (т, 1=6,4 Гц, 2Н); 3,81 (с, 3Н); 3,87 (д, 1=1,5 Гц, 1Н); 4,25 (ддд, 1=3,4 и 8,3 и 11,5 Гц, 1Н); 4,55 (д шир., 1=5,0 Гц, 2Н); 4,91 (дд, 1=3,7 и 9,5 Гц, 1Н); 5,11 (ддд, 1=1,5 и 5,7 и 11,5 Гц, 1Н); 5,19 (дм, 1=10,3 Гц, 1Н); 5.29 (дм, 1=17,6 Гц, 1Н); 5,80 (дд, 1=1,5 и 15,2 Гц, 1Н); 5,90 (м, 1Н); 6,47 (ддд, 1=3,7 и 11,5 и 15,2 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,5 Гц, 1Н); 7,17 (дд, 1=2,0 и 8,5 Гц, 1Н); 7,22 (дд, 1=2,9 и 9,8 Гц, 1Н); 7,25 (д, 1=8,3 Гц, 2Н); 7,28 (д, 1=2,0 Гц, 1Н); 7.30 (д, 1=8,3 Гц, 2Н); 8,35 (д, 1=8,3 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): ЕЗ тЦ=1000 [М+Н]+; тЦ=500,5 [М+2Н]2+; тЦ=1044 [М-Н+НСО2Н]-; 0=1, 01 мин.
Соединение 49. (2-{2-[2-(2-{4-[(2К,3К)-3-((З)-1-{(Е)-(3З,10К,16З)-10-[3-Хлор-4-метоксибензил]-3изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил}этил)оксиранил]бензиламино}этокси)этокси]этокси}этокси)пропановая кислота
Растворяют 19 мг (18,9 мкмоль) соединения 48 в 3,8 мл безводного ТНР и продувают аргоном. К смеси прибавляют 6 мкл (18,9 мкмоль) диэтиламина и перемешивают 15 мин при КТ, затем добавляют 4,45 мг (19,8 мкмоль) ацетата палладия(П) и 18,89 мг трифенилфосфина на носителе. Перемешивание ведут в течение 6 суток при КТ: исходное соединение еще остается, но реакция дальше не развивается. Смесь фильтруют, концентрируют досуха, поглощают посредством 2 мл безводного ТНР и обрабатывают 10 мкл (31,5 мкмоль) диэтиламина и 10 мл тетракис(трифенилфосфин)палладия в течение 1 ч. Смесь гидролизуют посредством 2 мл 2 М водного раствора гидросульфата натрия и экстрагируют 3x2 мл ЭСМ. Органические слои объединяют, промывают насыщенным раствором №С1 (2 мл) и сушат над М§ЗО4. После фильтрации и концентрирования при ПД неочищенный продукт очищают хроматографи- 48 024627 ей на силикагеле с привитыми диольными группами, элюируя смесью ИСМ/метанол 98/2-90/10. Соединение 49 получают в виде твердого бесцветного вещества (5,4 мг; 30%). 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6): 0,76 (т, 1=5,9 Гц, 3Н); 0,78 (т, >5,9 Гц, 3Н); 1,00 (с, 3Н); 1,04 (д, >6,8 Гц, 3Н); 1,12 (с, 3Н); 1,31 (м, 1Н); 1,51-1,62 (м, 2Н); 1,80 (м, 1Н); 2,15 (с, 3Н); 2,28 (м, 1Н); 2,42 (т, >6,4 Гц, 2Н); 2,52 (т, >6,4 Гц, 2Н); 2,642,73 (м, 2Н); 2,94-3,04 (м, 3Н); 3,25-3,44 (м частично экранирован, 3Н); 3,45-3,51 (м, 12Н); 3,53 (т, >6,4 Гц, 2Н); 3,59 (т, >6,4 Гц, 2Н); 3,81 (с, 3Н); 3,87 (д, >2,0 Гц, 1Н); 4,25 (ддд, >4,2 и 7,8 и 11,5 Гц, 1Н); 4,91 (дд, 1=3,4 и 9,8 Гц, 1Н); 5,11 (дд, >5,4 и 11,2 Гц, 1Н); 5,80 (д, 1=15,2 Гц, 1Н); 6,47 (ддд, 1=3,7 и 11,2 и 15,2 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,3 Гц, 1Н); 7,17 (дд, 1=2,0 и 8,3 Гц, 1Н); 7,21-7,27 (м, 3Н); 7,28-7.32 (м, 3Н); 8,38 (д шир., 1=7,8 Гц, 1Н); 11,22 (м оч. ушир., 1Н). ЖХМС (А2): Е8 т//=960 [М+Н]+; т//=480,5 [М+2Н]2+ пик молекулярного иона; т//=958 [М-Н]-; 1|<=0,90 мин.
Пример 15. 2,5-Диоксопирролидин-1-ил-(2-{2-[2-(2-{4-[(2К,3К)-3-((8)-1-{(Е)-(38,10К,168)-10-[3хлор-4-метоксибензил]-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец13-ен-16-ил}этил)оксиранил]бензилметиламино}этокси)этокси]этокси}этокси)пропаноат кислота
Соединение примера 15 может быть получено путем активирования кислоты 49 согласно способу, описанному для примера 18.
Пример 16. 2,5-Диоксопирролидин-1-ил-(2-{2-[2-(4-{(2К,3К)-3-[(§)-1-((Е)-(3§,10К,16§)-10-{3-хпор4-метоксибензил}-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен16-ил)этил]оксиранил}бензилпиперазин-1-ил)этокси]этокси}этокси)пропаноат
Соединение 50. 3-{2-[2-(2-Гидроксиэтокси)этокси]этокси}пропановая кислота
К раствору 300 мг (1,08 ммоль) трет-бутил-12-гидрокси-4,7,10-триоксадодеканоата в 6 мл ИСМ прибавляют 1,6 мл (21,56 ммоль) ТРА. Перемешивание ведут в течение 3 ч при КТ. Смесь концентрируют досуха, обрабатывают минимальным количеством ИСМ и несколько раз осуществляют перегонку с толуолом с получением соединения 50 в виде бледно-желтого масла (240 мг, количественный выход).
Соединение 51. Аллил-3 -{2-[2-(2-гидроксиэтокси)этокси]этокси}пропаноат
К раствору 240 мг (1,08 ммоль) соединения 50 в 3 мл ИСМ последовательно прибавляют 248 мг (1,29 ммоль) ЕИС1, 13,2 мг (1,29 ммоль) ИМАР и 88 мкл (1,29 ммоль) аллилового спирта. Перемешивание ведут в течение 15 ч при КТ, затем смесь концентрируют досуха при ПД и неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, используя в качестве элюента смесь ИСМ/метанол 98/2-90/10. Получают соединение 51 в виде бесцветного масла (144 мг, 51%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): 2,57 (т, 1=6,2 Гц, 2Н); 3,41 (м, 2Н); 3,46-3,52 (м, 10Н); 3,65 (т, 1=6,2 Гц, 2Н); 4,52 (т, 1=5,5 Гц, 1Н); 4,56 (м, 2Н); 5,20 (дм, 1=10,5 Гц, 1Н); 5,50 (дм, 1=17,4 Гц, 1Н); 5,90 (м, 1Н).
Соединение 52. трет-Бутил-4-(2-{2-[2-(2-аллилоксикарбонилэтокси)этокси]этокси}этил)пиперазин1-карбоксилат
К раствору, охлажденному до 0°С, 94 мг (357 мкмоль) соединения 51 в 3,7 мл ИСМ последовательно прибавляют 125 мкл (893 мкмоль) ТЕА и 30,4 мкл (393 мкмоль) мезилхлорида, перемешивание осуществляют в течение 1 ч при КТ. Смесь концентрируют досуха при ПД, затем обрабатывают 5 мл ацетонитрила. К раствору прибавляют 249 мкл (1,785 ммоль) ТЕА и 200 мг (1,071 ммоль) Вос-пиперазина, смесь перемешивают и нагревают 15 ч при 40°С. После возвращения к комнатной температуре смесь концентрируют досуха и очищают хроматографией на силикагеле, используя в качестве элюента смесь ИСМ/метанол 98/2-90/10. Получают соединение 52 в виде бесцветного масла (69 мг, 45%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): 1,39 (с, 9Н); 2,33 (м, 4Н); 2,46 (т, 1=5,9 Гц, 2Н); 2,57 (т, 1=6,2 Гц, 2Н);3,28 (м частично экранирован, 4Н); 3,45-3,53 (м, 10Н); 3,64 (т, 1=6,2 Гц, 2Н); 4,55 (м, 2Н); 5,20 (дм, 1=10,5 Гц, 1Н); 5,30 (дм, 1=17,2 Гц, 1Н); 5, 90 (м, 1Н).
Соединение 53. Аллил-3-{2-[2-(2-пиперазин-1-илэтокси)этокси]этокси}пропаноат
К раствору 110 мг (256 мкмоль) соединения 52 в 10 мл ИСМ прибавляют 380 мкл (5,11 ммоль) ТРА.
- 49 024627
Перемешивание продолжают 24 ч при КТ. Смесь концентрируют досуха, обрабатывают минимальным количеством ИСМ и затем проводят несколько перегонок с толуолом. Неочищенный продукт очищают фильтрацией 8ΡЕ на кондиционированном картридже 8СХ ^апап) и промывают метанолом, затем элюируют 0,5н. раствором аммиака в метаноле. Соединение 53 получают в виде бесцветного масла (47 мг, 55%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): 2,58 (т, 1=6,2 Гц, 2Н); 3,10-3,36 (м шир., 6Н); 3,45-3,78 (м частично экранирован, 16 Н); 4,56 (м, 2Н); 5,20 (дм, 1=10,5 Гц, 1Н); 5,30 (дм, 1=17,2 Гц, 1Н); 5,90 (м, 1Н); 9,00 (м уш., 1Н).
Соединение 54. Аллил-(2-{2-[2-(4-{(2К,3К)-3-[(8)-1-((Е)-(38,10К,168)-10-{3-хлор-4метоксибензил}-3 -изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13 -ен16-ил)этил]оксиранил}бензилпиперазин-1-ил)этокси]этокси}этокси)пропаноат
Соединение 54 может быть получено путем нуклеофильного замещения хлоргруппы производного 2 на амин 53, используя способ, описанный для получения соединения 30.
Соединение 55. (2-{2-[2-(4-{(2К,3К)-3-[(8)-1-((Е)-(38,10К,168)-10-{3-Хлор-4-метоксибензил}-3изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил]оксиранил}бензилпиперазин-1-ил)этокси]этокси}этокси)пропановая кислота
Соединение 55 может быть получено согласно способу, описанному для соединения 41.
Пример 16. 2,5-Диоксопирролидин-1-ил-(2-{2-[2-(4-{(2К,3К)-3-[(8)-1-((Е)-(38,10К,168)-10-{3-хлор4-метоксибензил}-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен16-ил)этил]оксиранил}бензилпиперазин-1-ил)этокси]этокси}этокси)пропаноат
Соединение примера 16 может быть получено согласно способу, описанному для примера 18. Пример 17. 2,5-Диоксопирролидин-1-ил-3-(2-{2-[2-(2-{2-[4-(4-{4-[(2К,3К)-3-((8)-1-{(Е)-(10К,168)10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил}этил)оксиранил]бензил}пиперазин-1-ил)-1,1-диметил-4-оксобутилсульфанил]ацетиламино}этокси)этокси]этокси}этокси)пропаноат
Соединение 56. 2,5-Диоксопирролидин-1-ил-3-(2-{2-[2-(2-{2-бромацетиламино}этокси)этокси]этокси}этокси)пропаноат
К раствору 3-(2-{2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]этокси}этокси)пропионовой кислоты (671 мг, 2,53 ммоль) в ИСМ (10 мл) прибавляют раствор 2,5-диоксопирролидин-1-илбромацетата (2,53 ммоль) в 4,7 мл ИСМ. Перемешивание продолжают 15 мин при КТ, затем к смеси прибавляют ЭСС. После 4 ч проведения реакции смесь фильтруют через фриттированное стекло, затем фильтрат выпаривают и очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ИСМ/метанол 99/1-94/6. Полученное масло (800 мг) снова очищают хроматографией на силикагеле с привитыми цианогруппами, элюируя смесью ИСМ/метанол 99/1. Получают соединение 56 в виде бесцветного масла (611 мг, 50%). 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6): 2,81 (с, 4Н); 2,92 (т, 1=5,9 Гц, 2Н); 3,23 (к, 1=5,9 Гц, 2Н); 3,43 (т, 1=5,9 Гц, 2Н); 3,48-3,55 (м, 12Н); 3,72 (т, 1=5,9 Гц, 2Н); 3,85 (с, 2Н); 8,30 (т шир., 1=5,9 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): Е8 т/ζ 483 [М+Н]+; т//=481 [М-Н]-; !К=0,51 мин.
Соединение 7. (Е)-(38,10К,168)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-16-[(8)-1((2К,3К)-3-{4-[4-(4-метил-4-метилдисульфанилпентаноил)пиперазин-1 -илметил] фенил}оксиранил)этил] 1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраон
К раствору, продуваемому аргоном, соединения 2 (19,8 мг, 27,6 мкмоль) в безводном ацетонитриле (2,5 мл) последовательно прибавляют ТЕА (138 мкмоль) и гидрохлорид 4-метил-4-метилдисульфанил-1- 50 024627 пиперазин-1-илпентан-1-она 6 (83 мкмоль).
Перемешивание осуществляют при 40°С в течение 24 ч, затем смесь разбавляют посредством АсОЕ! (10 мл). Органический слой промывают водой (2x10 мл), насыщенным водным раствором NаНСΟз (10 мл) и насыщенным водным раствором №С1 (10 мл). После сушки над Мд§О4 и фильтрации растворители выпаривают при ПД. Неочищенный продукт реакции очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ЭСМ/метанол 99/1-90/10. Получают соединение 7 в виде белого порошка (19,4 мг; 75%). ТСХ (ЭСМ 90/МеОН 10): К=0,6; Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): 0,75-0,81 (м, 6Н); 1,01 (с, 3Н); 1,05 (д, 1=6,8 Гц, 3Н); 1,12 (с, 3Н); 1,26 (с, 6Н); 1,28-1,33 (м, 1Н); 1,52-1,61 (м, 2Н); 1,76-1,83 (м, 2Н); 2,27-2,38 (м, 4Н); 2,39 (с, 3Н); 2,64-2,74 (м, 2Н); 2,95-3,05 (м, 2Н); 3,24-3,34 (м, 6Н); 3,44 (шир. с, 4Н); 3,49 (с, 2Н); 3,81 (с, 3Н); 3,88 (д, 1=1,7 Гц, 1Н); 4,22-4,29 (м, 1Н); 4,92 (дд, 1=9,9, 3,5 Гц, 1Н); 5,08-5, 15 (м, 1Н); 5,81 (д, 1=14,2 Гц, 1Н); 6,48 (ддд, 1=15,2, 11,3, 3,5 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,6 Гц, 1Н); 7,17 (дд, 1=8,4, 2,3 Гц, 1Н); 7,22 (д, 1=9,3 Гц, 1Н); 7,25-7,34 (м, 5Н); 8,34 (д, 1=8,1 Гц, 1Н). ЖХМС (А1): Е§ тЦ=943 [М+Н]+; тЦ=941 [М-Н]-;
!К=4,03 мин.
Примечание: соединение 7 может быть получено также из О=ОМ5 (см. пример 1).
Соединение пр.1. (Е)-(3§,10К,16§)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-16-[(§)1-((2К,3К)-3-{4-[4-(4-меркапто-4-метилпентаноил)пиперазин-1-илметил]фенил}оксиранил)-этил]-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраон о
I
Ν , N
О и
-· N
Пп1 '3 ’ о ,с /с
- ° ί
ΗΝ ·
Ν О
Η
С1 о
Соединение 7 (17,9 мг; 18,97 мкмоль) растворяют в смеси этанола (2,2 мл)/воды (1,8 мл) и смесь встряхивают. Затем добавляют ТСЕР (47,4 мкмоль) и смесь перемешивают 3 ч при КТ, затем разбавляют введением АсОЕ! (20 мл) и органический слой промывают смесью 1/1 воды и насыщенного водного раствора МН4С1 (20 мл), затем 20 мл насыщенного раствора ЫаС1. После сушки органического слоя над Мд§О4, фильтрации и выпаривания растворителей при ПД получают продукт пр. 1 в виде твердого белого вещества (15,6 мг; 92%). ТСХ (ТОСМ 90/МеОН 10); К=0,56; Ή ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6): 0,76-0,81 (м, 6Н); 1,01 (с, 3Н); 1,06 (д, 1=6,8 Гц, 3Н); 1,13 (с, 3Н); 1,24 (с, 6Н); 1,27-1,31 (м, 1Н); 1,56-1,64 (м, 2Н); 1,73-1,85 (м, 3Н); 2,26-2,33 (м, 3Н); 2,36-2,45 (м, 4Н); 2,63-2,75 (м, 2Н); 2,95-3,06 (м, 3Н); 3,34-3.36 (м, 1Н); 3,42-3,51 (м, 6Н); 3,82 (с, 3Н); 3,89 (с, 1Н); 4,22-4,29 (м, 1Н); 4,92 (дд, 1=9,8, 3,4 Гц, 1Н); 5,12 (дд, 1=10,8, 4,9 Гц, 1Н); 5,81 (д, 1=15,2 Гц, 1Н); 6,48 (ддд, 1=15,0, 11,4, 3,4 Гц, 1Н); 7,06 (д, 1=8,3 Гц, 1Н); 7,18 (дд, 1=8,3, 1,5 Гц, 1Н); 7,24 (д, 1=9,8 Гц, 1Н); 7,26-7,36 (м, 5Н); 8,37 (д, 1=7,8 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): Е§ т//=897 [М+Н]+; т/ζ 895 [М-Н]-; !К=0,97 мин.
Пример 17. 2,5-Диоксопирролидин-1-ил-3-(2-{2-[2-(2-{2-[4-(4-{4-[(2К,3К)-3-((§)-1-{(Е)-(10К,16§)10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил}этил)оксиранил]бензил}пиперазин-1-ил)-1,1-диметил-4-оксобутилсульфанил]ацетиламино}этокси)этокси]этокси}этокси)пропаноат
К раствору, продуваемому аргоном, соединения пр.1 (15,6 мг, 17,8 мкмоль) в безводном ацетонитриле (1,0 мл) последовательно прибавляют Э1РЕА (19,12 мкмоль) и соединение 56 (19,12 мкмоль). Перемешивание ведут в течение 4 ч при КТ, затем вводят дополнительно 29,5 мкмоль Э1РЕА и перемешивание продолжают в течение 16 ч. На следующие сутки прибавляют дополнительно 2 9,5 мкмоль соединения 56 и Э1РЕА и смесь нагревают при 50°С. После дополнительных 24 ч реакции прибавляют 22,6 мкмоль соединения 56 и 29,5 мкмоль Э1РЕА и смесь нагревают при 60°С в течение дополнительных 24 ч. Затем нагревание прекращают и продолжают перемешивание при КТ в течение 64 ч. Смесь разбавляют 10 мл АсОЕ! и органический слой промывают водой 2x10 мл, затем 10 мл насыщенного раствора ЫаС1. После сушки органического слоя над Мд§О4, фильтрации и выпаривания растворителей при ПД, неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ОСМ/метанол 99/1-90/10. Получают продукт пр.17 в виде бесцветного твердого вещества (9,2 мг; 41%). 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСОб6): 0,77-0,82 (м, 6Н); 1,02 (с, 3Н); 1,06 (д, 1=6,9 Гц, 3Н); 1,13 (с, 3Н); 1,23 (с, 6Н); 1,26-1,35 (м, 1Н); 1,521,64 (м, 2Н); 1,68-1,77 (м, 2Н); 1,78-1,86 (м, 1Н); 2,26-2,33 (м, 3Н); 2,35-2,41 (м, 4Н); 2,68-2,76 (м, 2Н); 2,82 (с, 4Н); 2,93 (т, 1=6.0 Гц, 2Н); 2,96-3,07 (м, 4Н); 3,13 (с, 2Н); 3,20 (кв., 1=5,8 Гц, 2Н); 3,33 (м, 1Н); 3,38-3,57 (м, 18Н); 3,73 (т, 1=5,8 Гц, 2Н); 3,83 (с, 3Н); 3,89 (с, 2Н); 4,27 (м, 1Н); 4,93 (дд, 1=3,8 и 10,0 Гц, 1Н); 5,13 (м, 1Н); 5,82 (д, 1=15,4 Гц, 1Н); 6,49 (ддд, 1=3,8 и 11,1 и 15,4 Гц, 1Н); 7,07 (д, 1=8,8 Гц, 1Н); 7,157,37 (м, 7Н); 8,01 (т, 1=5,8 Гц, 1Н); 8,35 (д, 1=8,0 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): Е§ тЦ=1299 [М+Н]+; тЦ=650 [М+2Н]2+; т/ζ 1297 [М-Н]-; !К=0,92 мин.
- 51 024627
Пример 18. 2,5-Диоксопирролидин-1-ил-3-(2-{2-[2-(2-{4-[^^)-3-(^)-1-{(Е)-^,10К,^)-10-[3хлор-4-метоксибензил]-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец13-ен-16-ил}этил)оксиранил]бензилоксикарбониламино}этокси)этокси]этокси}этокси)пропаноат
Соединение 58. 4-Нитрофенил-4-(^^)-3-{^)-1-[(Е)-^,10К,^)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил]этил}оксиранил)бензилкарбонат
Производное 57 (20 мг; 28,6 мкмол, получено согласно А1-а\уаг Κ.δ., е! а1., 1. Меб. СЬет. 2003, 46, 2985-3007) растворяют в безводном ИСМ (0,3 мл), раствор продувают аргоном и затем прибавляют сначала ТЕА (40 мкмоль), затем 4-нитрофенилхлорформиат (32,32 мкмоль). Спустя 3 ч 30 мин перемешивания при КТ смесь гидролизуют и разбавляют в 7 мл АсОЕ!. Органический слой промывают водой, затем насыщенным раствором ЯаС1, сушат над М^О4, фильтруют и выпаривают досуха с получением соединения 58 в виде твердого белого вещества (23 мг, 93%). ЖХМС (А3): Еδ т//=864 [М+Н]+; т//=908 [М+НСО2Н-Н]-; !К=1,43 мин.
Соединение 59. 3-(2-{2-[2-(2-{4-[^^)-3-(^)-1-{(Е)-^,10К,^)-10-[3-Хлор-4-метоксибензил]-3изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил}этил)оксиранил]бензилоксикарбониламино}этокси) этокси]этокси}этокси)пропановая кислота
К раствору, продуваемому аргоном, соединения 58 (23 мг, 26,6 мкмоль) в безводном ацетонитриле (1,6 мл) последовательно прибавляют 3-(2-{2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]этокси}этокси)пропионовую кислоту (39,9 мкмоль) и ТЕА (53,2 мкмоль). После перемешивания при КТ в течение 24 ч смесь разбавляют посредством 10 мл АсОЕ!. Органический слой промывают 10 мл воды, содержащей 250 мкл 0,1н. НС1 (рН«4). Водный слой экстрагируют 10 мл АсОЕ! (2 раза); органические слои объединяют, промывают 10 мл воды, затем 10 мл насыщенного раствора ЯаС1, сушат над М^О4, фильтруют и выпаривают досуха с получением соединения 59 в виде твердого вещества очень бледно-желтого цвета (18,5 мг, 70%). ЖХМС (А3): Еδ т/ζ 990 [М+Н]+; т/ζ 988 [М-Н]-; !К=1,32 мин.
Пример 18. 2,5-Диоксопирролидин-1-ил-3-(2-{2-[2-(2-{4-[^^)-3-(^)-1-{(Е)-^,10К,^)-10-[3хлор-4-метоксибензил]-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец13-ен-16-ил}этил)оксиранил]бензилоксикарбониламино}этокси)этокси]этокси}этокси)пропаноат
К раствору, продуваемому аргоном, соединения 59 (18,5 мг, 18,6 мкмоль) в ТНР (1,5 мл) последовательно прибавляют ИГРЕА (55,8 мкмоль) и Ν,Ν'-дисукцинимидилкарбонат (37,2 мкмоль). После 19 ч перемешивания при КТ смесь разбавляют 10 мл АсОЕ!, промывают 10 мл воды (2 раза), затем 10 мл насыщенного раствора ЯаС1, сушат над М^О4 и выпаривают досуха. Неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью гептан/АсОЕ! 100/0-0/100, содержащей 10% изопропанола. Продукт пр.17 получают в виде твердого белого вещества (6,08 мг; 30%). 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6): 0,83-0,88 (м, 6Н); 0,97 (д, 1=7,1 Гц, 3Н); 1,02 (с, 3Н); 1,15 (с, 3Н); 1,47-1,56 (м, 1Н); 1,58-1,68 (м, 2Н); 1,821,90 (м, 1Н); 2,39-2,47 (м, 1Н); 2,60-2,66 (м, 1Н); 2,71 (дд, 1=11,5 и 14,4 Гц, 1Н); 2,80 (с, 4Н); 2.91 (т, 1=6,0 Гц, 2Н); 2,94-3,07 (м, 3Н); 3,14 (кв., 1=6,0 Гц, 2Н); 3,37-3,56 (м частично экранирован, 15Н); 3,71 (т, 1=6,0 Гц, 2Н); 3,79 (м, 1Н); 3,81 (с, 3Н); 4,27 (ддд, 1=3,8 и 8,0 и 11,3 Гц, 1Н); 4,96-5,05 (м, 3Н); 5,11 (м, 1Н); 5,88 (д, 1=15,4 Гц, 1Н); 6,48 (ддд, 1=3,8 и 11,3 и 15,4 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,8 Гц, 1Н); 7,14-7,39 (м, 8Н); 8,40 (д, 1=8,0 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): Еδ т//=108 [М+Н]+; т//=1085 [М-Н]-; !К=1,09 мин.
- 52 024627
Пример 19. 2,5-Диоксопирролидин-1-ил-(1-{4-[(2К,3К)-3-((δ)-1-{(Е)-(3δ,10К,16δ)-10-[3-хлор-4метоксибензил] -3 -изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13 -ен16-ил}этил)оксиранил]бензил}-1Н-1,2,3-триазол-4-ил)бутаноат
Соединение 60. (Е)-(3К,10К,16δ)-16-{(δ)-1-[(2К,3К)-3-(4-Азидометилфенил)оксиранил]этил}-10-(3хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраон
К раствору, продуваемому аргоном, 60 мг (85,8 мкмоль) соединения 1 в 9 мл безводного ТНЕ прибавляют 25,9 мкл (120 мкмоль) дифенилфосфоразида. Смесь перемешивают при КТ в течение 10 мин, затем охлаждают до 0°С, после этого добавляют 18,0 мкл (120 мкмоль) ΌΒΉ. Перемешивание проводят при КТ в течение 15 ч. Реакция полностью не завершена: прибавляют 25,9 мкл (120 мкмоль) цифенилфосфоразида и 18,0 мкл (120 мкмоль) ЭВи, затем продолжают перемешивание в течение 24 ч. В реакции остается еще исходное соединение 1: снова добавляют 25,9 мкл (120 мкмоль) дифенилфосфоразида и 18,0 мкл (120 мкмоль) ЭВи, затем перемешивание продолжают в течение 24 ч. Реакционную среду гидролизуют введением 6 мл воды, затем экстрагируют посредством ЭСМ (3x6 мл). Органические слои объединяют, промывают насыщенным раствором Ν;·ιΟ (8 мл) и сушат над М^О4. После фильтрации и концентрирования при ПД неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, используя в качестве элюента смесь ЭСМ/метанол 100/0-90/10. Соединение 60 получают в виде твердого белого вещества (46 мг; 74%). !Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-й6): 0,76 (д, 1=6,3 Гц, 3Н); 0,78 (д, 1=6,3 Гц, 3Н);1,00 (с, 3Н); 1,05 (д, 1=6,9 Гц, 3Н); 1,12 (с, 3Н); 1,30 (м, 1Н); 1,49-1,63 (м, 2Н); 1,82 (м, 1Н); 2,27 (м, 1Н); 2,63-2,74 (м, 2Н); 2,95-3,05 (м, 3Н); 3,25-3,38 (м частично экранирован, 1Н); 3,81 (с, 3Н); 3,92 (д, 1=1,9 Гц, 1Н); 4,25 (ддд, 1=3,6 и 8,0 и 11,5 Гц, 1Н); 4,46 (с, 2Н); 4,92 (дд, 1=3,6 и 9,6 Гц, 1Н); 5,11 (ддд, 1=1,5 и 5,7 и 11,3 Гц, 1Н); 5,80 (дд, 1=1,5 и 15,1 Гц, 1Н); 6,48 (ддд, 1=3,8 и 11,3 и 15,1 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,6 Гц, 1Н); 7,17 (дд, 1=2,2 и 8,6 Гц, 1Н); 7,22 (дд, 1=2, 6 и 9,5 Гц, 1Н); 7,28 (д, 1=2,2 Гц, 1Н); 7,34 (д, 1=8,3 Гц, 2Н); 7,38 (д, 1=8,3 Гц, 2Н); 8,34 (д, 1=8,0 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): Еδ т/ζ 724 [М+Н]+; т/ζ 722 [М-Н]-; т/ζ 768 [МН+НСО2Н]- пик молекулярного иона; !К=1,18 мин.
Соединение 61. (1-{4-[(2К,3К)-3-((δ)-1-{(Е)-(3К,10К,16δ)-10-[3-Хлор-4-меτоксибензил]-3-изобуτил6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил}этил)оксиранил]бензил}-1Н-1,2,3-триазол-4-ил)бутановая кислота
К суспензии 22 мг (30,4 мкмоль) соединения 60 в 500 мкл воды прибавляют раствор 6,8 мг (60,8 мкмоль) 5-гексиновой кислоты в 500 мкл ТНЕ. Затем прибавляют 122 мкл (12,2 мкмоль) 0,1 М водного раствора сульфата меди и 122 мкл (24,3 мкмоль) 0,2 М водного раствора аскорбата натрия. Перемешивание продолжают в течение 2 ч при КТ. Смесь гидролизуют добавлением 2 мл воды, затем экстрагируют посредством АсОЕ! (3x2 мл). Органические слои объединяют, промывают насыщенным раствором №С1 (3 мл) и сушат над МдδΟ4. После фильтрации и концентрирования при ПД неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, используя в качестве элюента смесь ЭСМ/метанол 98/2-90/10. Соединение 61 получают в виде твердого белого вещества (19,4 мг, 76%). 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-й6): 0,73 (д, 1=6,4 Гц, 3Н); 0,75 (д, 1=6,4 Гц, 3Н);1,00 (с, 3Н); 1,04 (д, 1=6,9 Гц, 3Н); 1,11 (с, 3Н); 1,29 (м, 1Н);
I, 50-1,59 (м, 2Н); 1,76-1,85 (м, 3Н); 2,20-2,30 (м, 3Н); 2,62 (т, 1=7,7 Гц, 2Н); 2,65-2,72 (м, 2Н); 2,94-3,04 (м, 3Н); 3,28-3,38 (м частично экранирован, 1Н); 3,81 (с, 3Н); 3,89 (д, 1=1,6 Гц, 1Н); 4,25 (ддд, 1=3,6 и 8,0 и
II, 5 Гц, 1Н); 4,90 (дд, 1=3,6 и 9,6 Гц, 1Н); 5,10 (ддд, 1=1,6 и 5,2 и 11,2 Гц, 1Н); 5,53 (с, 2Н); 5,78 (дд, 1=1,6 и 15,0 Гц, 1Н); 6,46 (ддд, 1=3,7 и 11,2 и 15,0 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,5 Гц, 1Н); 7,17 (дд, 1=1,9 и 8,5 Гц, 1Н); 7,22 (дд, 1=2,3 и 9,5 Гц, 1Н); 7,28 (д, 1=1,9 Гц, 1Н); 7,31 (с, 4Н); 7,92 (с, 1Н); 8,37 (д шир., 1=8,0 Гц, 1Н); 12,03 (м оч. ушир., 1Н). ЖХМС (А2): Еδ т//=836 [М+Н]+; т//=418,5 [М+2Н]2+ пик молекулярного иона; т2=834 [М-Н]-; !К=1,04 мин.
- 53 024627
Соединение 62. Метил-(1-{4-[(2К,3К)-3-((8)-1-{(Е)-(3К,10К,168)-10-[3-хлор-4-метоксибензил]-3изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил}этил)оксиранил]бензил}-1Н-1,2,3 -триазол-4 -ил)бутаноат
К раствору 5 мг (6 мкмоль) соединения 61 в 500 мкл ЭСМ и 200 мкл метанола прибавляют 4,5 мкл (9,0 мкмоль) 2 М раствора триметилсилилдиазометана в гексане. Перемешивание ведут 30 мин. Смесь концентрируют при ПД и очищают фильтрацией на силикагеле, элюируя смесью ЭСМ/метанол 98/2. Получают соединение 62 в виде твердого белого вещества (5 мг, 98%). 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-Б6): 0,72 (д, 1=6,4 Гц, 3Н); 0,75 (д, 1=6,4 Гц, 3Н); 0,99 (с, 3Н); 1,04 (д, 1=6,8 Гц, 3Н); 1,11 (с, 3Н); 1,28 (м, 1Н);
I, 50-1,59 (м, 2Н); 1,79 (м, 1Н); 1,83 (м, 2Н); 2,25 (м, 1Н); 2,35 (т, 1=7,6 Гц, 2Н); 2,62 (т, 1=7,6 Гц, 2Н); 2,652,72 (м, 2Н); 2,94-3,05 (м, 3Н); 3,25-3,38 (м частично экранирован, 1Н); 3,57 (с, 3Н); 3,81 (с, 3Н); 3,89 (д, 1=1,5 Гц, 1Н); 4,25 (ддд, 1=3,7 и 8,3 и 11,4 Гц, 1Н); 4,89 (дд, 1=3,4 и 9,8 Гц, 1Н); 5,09 (ддд, 1=1,5 и 5,4 и
II, 4 Гц, 1Н); 5,53 (с, 2Н); 5,78 (дд, 1=1,5 и 15,2 Гц, 1Н); 6,46 (ддд, 1=3,4 и 11,4 и 15,2 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,8 Гц, 1Н); 7,17 (дд, 1=2,0 и 8,8 Гц, 1Н); 7,22 (дд, 1=2,5 и 9,8 Гц, 1Н); 7,28 (д, 1=2,0 Гц, 1Н); 7,31 (с, 4Н); 7,92 (с, 1Н); 8,34 (д, 1=8,3 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): Е8 т//=850 [М+Н]+; т//=425,5 [М+2Н]2+ пик молекулярного иона; т//=848 [М-Н]-; т//=894 [М-Н+НСО2Н]- пик молекулярного иона; !К=1,11 мин.
Пример 19. 2,5-Диоксопирролидин-1-ил-(1-{4-[(2К,3К)-3-((8)-1-{(Е)-(38,10К,168)-10-[3-хлор-4метоксибензил] -3 -изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13 -ен16-ил}этил)оксиранил]бензил}-1Н-1,2,3-триазол-4-ил)бутаноат
К раствору, продуваемому аргоном, 13,4 мг (16 мкмоль) соединения 61 в 1,2 мл ТНР последовательно прибавляют 8,4 мкл (48,1 мкмоль) Э1РЕА и 8,21 мг (32,04 мкмоль) И,И'дисукцинимидилкарбоната. Перемешивание ведут в течение 26 ч при КТ. Смесь гидролизуют добавлением 2 мл воды, затем экстрагируют 2x2 мл АсОЕЕ Органические слои объединяют и сушат над М§8О4. После фильтрации и концентрирования при ПД неочищенный продукт очищают фильтрацией на силикагеле, элюируя смесью ЭСМ/метанол 98/2. Полученный продукт содержит 0,15 моль ИН8. Обрабатывают его 2 мл ЭСМ и промывают водой (2x3 мл), затем сушат над М§8О4. После фильтрации и концентрирования досуха получают соединение пр.19 в виде твердого белого вещества (12,56 мг; 84%). 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-Б6): (0,73 (д, 1=6,3 Гц, 3Н); 0,75 (д, 1=6,6 Гц, 3Н); 1,00 (с, 3Н); 1,04 (д, 1=6,9 Гц, 3Н); 1,11 (с, 3Н); 1,30 (м, 1Н); 1,49-1,60 (м, 2Н); 1,79 (м, 1Н); 1,95 (кв., 1=7,5 Гц, 2Н); 2,26 (м, 1Н); 2,65-2,77 (м, 6Н); 2,81 (с шир., 4Н); 2,92-3,05 (м, 3Н); 3,34 (м частично экранирован, 1Н); 3,81 (с, 3Н); 3,89 (д, 1=1,9 Гц, 1Н); 4,25 (ддд, 1=3,7 и 8,1 и 11,5 Гц, 1Н); 4,90 (дд, 1=3,6 и 9,6 Гц, 1Н); 5,09 (ддд, 1=1,4 и 5,5 и 11,3 Гц, 1Н); 5,54 (с, 2Н); 5,79 (дд, 1=1,4 и 15,1 Гц, 1Н); 6,46 (ддд, 1=3,8 и 11,3 и 15,1 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,5 Гц, 1Н); 7,17 (дд, 1=2,2 и 8,5 Гц, 1Н); 7,21 (дд, 1=2,5 и 9,6 Гц, 1Н); 7,28 (д, 1=2,2 Гц, 1Н); 7,31 (с, 4Н); 7,95 (с, 1Н); 8,33 (д, 1=8,1 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): Е8 т//=933 [М+Н]+; т//=467 [М+2Н]2+ пик молекулярного иона; т//=977 [М-Н+НСО2Н]- пик молекулярного иона; ΐκ=1,08 мин.
Пример 20. 2,5-Диоксапирролидин-1-ил-3-(2-{2-[2-(2-{1-[1-(4-{(2К,3К)-3-[(8)-1-((Е)-(10К,168)-10(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил]оксиранил}бензил)-1,2,3-триазол-1-ил]метокси}этокси)этокси]этокси}этокси)пропаноат о
Соединение 63. 2-{2-[2-(2-Проп-2-инилоксиэтокси)этокси]этокси}этанол
К раствору, продуваемому аргоном и охлажденному до 0°С, 1 г (5,15 ммоль) тетраэтиленгликоля в 25 мл безводного ТНР прибавляют 144 мг (3,60 ммоль) 60%-ного ИаН в виде дисперсии в минеральном масле. Перемешивание ведут 30 мин при 0°С, затем добавляют 194 мкл (2,58 ммоль) пропаргилбромида. Перемешивание продолжают при КТ в течение 15 ч. Смесь концентрируют при ПД, затем неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, используя в качестве элюента смесь ЭСМ/метанол 98/2-90/10. Соединение 63 получают в виде бесцветного масла (789 мг, 65%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО- 54 024627 й6): 3,40 (т, 1=2,4 Гц, 1Н); 3,42 (т, 1=5,5 Гц, 2Н); 3,48 (к, 1=5,5 Гц, 2Н); 3,51-3,58 (м, 12Н); 4,14 (д, 1=2,4 Гц, 2Н); 4,53 (т, 1=5,5 Гц, 1Н); ЖХМС (А2): Е8 т//=233[М+Н]+; !к=0,38 мин.
Соединение 64. трет-Бутил-3-(2-{2-[2-(2-проп-2-инилоксиэтокси)этокси]этокси}этокси)пропаноат
К раствору, продуваемому аргоном, 790 мг (3,40 ммоль) соединения 63 в 8,8 мл безводного ТНР прибавляют 4,4 мг (190 мкмоль) натрия. Смесь нагревают при 40°С в течение 2 ч до полной солюбилизации; после возвращения к КТ к смеси прибавляют 740 мкл (5,09 ммоль) трет-бутилакрилата. Перемешивание продолжают 15 ч при КТ, затем смесь концентрируют при ПД и неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, используя в качестве элюента смесь ЭСМ/метанол 98/2-90/10. Соединение 64 получают в виде бесцветного масла (944 мг, 77%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-й6): 1,44 (с, 9Н); 2,41 (т, 1=6,2 Гц, 2Н); 3,38 (т, 1=2,4 Гц, 1Н); 3,46-3,62 (м, 16Н); 3,59 (т, 1=6,2 Гц, 2Н); 4,14 (д, 1=2,4 Гц, 2Н). ЖХМС (А1): Е8 т//=361 [М+Н]+; т//=383 [М+№а]+; !к=3,79 мин.
Соединение 65. 3-(2-{2-[2-(2-Проп-2-инилоксиэтокси)этокси]этокси}этокси)пропановая кислота
и
К раствору 944 мг (2,62 ммоль) соединения 64 прибавляют 2 мл (52,4 ммоль) ТРА. Смесь перемешивают 6 ч при КТ, затем концентрируют досуха, обрабатывают минимальным количеством ЭСМ и несколько раз перегоняют с толуолом. Соединение 65 получают в виде бесцветного масла (722 мг, 91%). 'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-й6): 2,44 (т, 1=6,4 Гц, 2Н); 3,39 (т, 1=2,4 Гц, 1Н); 3,46-3,56 (м, 16Н); 3,60 (т, 1=6,4 Гц, 2Н); 4,14 (д, 1=2,4 Гц, 2Н); 7,44-9,73 (м оч.уш., 1Н). ЖХМС (А2): Е8 т//=305 [М+Н]+; т//=303 [М-Н]-; !р=0, 48 мин.
Пример 20. 2,5-Диоксапирролидин-1-ил-3-(2-{2-[2-(2-{1-[1-(4-{(2К,3К)-3-[(8)-1-((Е)-(10К,168)-10(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил]оксиранил}бензил)-1,2,3-триазол-1-ил]метокси}этокси)этокси]этокси}этокси)пропаноат
Соединение примера 20 может быть получено из соединений 60 и 65 согласно способу, описанному для соединения 61, с последующим активированием кислоты согласно способу, описанному для примера 19.
Пример 21. 2,5-Диоксопирролидин-1-ил-(4-{1-[(4-{(2К,3К)-3-[(8)-1-((Е)-(38,10К,168)-10-{3-хлор-4метоксибензил}-3 -изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13 -ен16-ил)этил]оксиранил}бензил)метиламино]метил}-1,2,3-триазол-1-ил)бутаноат
Соединение 66. (Е)-(3К,10К,168)-10-(3-Хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-16-[(8)-1((2К,3К)-3-{4-[(метилпроп-2-иниламино)метил]фенил}оксиранил)этил]-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраон
К раствору, продуваемому аргоном, 40 мг (55,7 мкмоль) соединения 2 в 5 мл безводного ацетонитрила последовательно прибавляют 48,5 мкл (279 мкмоль) Э1РЕА и 13,9 мкл (167 мкмоль) Νметилпропаргиламина. Смесь нагревают при 40°С в течение 15 ч. Остается в реакции исходное соединение 2: снова прибавляют 48,5 мкл (279 мкмоль) Э1РЕА и 13,9 мкл (167 мкмоль) Ν-метилпропаргиламина. После 24 ч перемешивания при 40°С смесь разбавляют 5 мл АсОЕ!, затем промывают 5 мл воды. Водный слой экстрагируют 3x5 мл АсОЕ!, оганические слои объединяют, промывают насыщенным раствором NаНСОз (10 мл), насыщенным раствором Ν;·ιΟ (10 мл) и сушат над М§8О4. После фильтрации и концентрирования при ПД неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, используя в качестве элюента смесь ЭСМ/метанол 98/2-90/10. Соединение 66 получают в виде твердого белого вещества (45 мг; количественный выход). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-й6): 0,78 (м, 6Н); 1,00 (с, 3Н); 1,05 (д, 1=6,8 Гц, 3Н); 1,12 (с, 3Н); 1,30 (м, 1Н); 1,49-1,61 (м, 2Н); 1,81 (м, 1Н); 2,20 (с, 3Н); 2,28 (м, 1Н); 2,63-2,76 (м, 2Н); 2,92-3,07 (м, 3Н); 3,17 (т, 1=2,4 Гц, 1Н); 3,27 (д, 1=2,4 Гц, 2Н); 3,33 (м частично экранирован, 1Н); 3,50 (с, 2Н); 3,81 (с, 3Н); 3,88 (д, 1=1,7 Гц, 1Н); 4,25 (ддд, 1=3,4 и 7,8 и 11,4 Гц, 1Н); 4,92 (дд, 1=3,5 и 9,7 Гц, 1Н);
- 55 024627
5,11 (ддд, 1=1,5 и 5,5 и 11,2 Гц, 1Н); 5,80 (дд, 1=1,5 и 15,0 Гц, 1Н); 6,47 (ддд, 1=3,9 и 11,2 и 15,0 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,6 Гц, 1Н); 7,17 (дд, 1=2,1 и 8,6 Гц, 1Н); 7,22 (дд, 1=2,1 и 9,4 Гц, 1Н); 7,25-7,33 (м, 5Н); 8,33 (д, 1=7,8 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): Εδ тА=750 [М+Н]+; Εδ тА=375,5 [М+2Н]2+ пик молекулярного иона; Εδ т//=748 [М-Н]-; т/ζ 794 [М-Н+НСО2Н]-; ΐκ=0,91 мин. Соединение 67. Этил-4-азидобутират
Растворяют 2,86 мл (20 ммоль) этил-4-бромбутаноата и 2,6 г (40 ммоль) ΝαΝ3 в 30 мл смеси ацетон/вода 2/1. Смесь нагревают 7 ч с обратным холодильником. После возвращения к КТ и концентрирования при ПД остаток обрабатывают 50 мл воды. Водный слой экстрагируют 3x30 мл ЭСМ. Органические слои объединяют, сушат над М^О4, фильтруют и концентрируют при ПД с получением соединения 67 в виде бесцветного масла (3 г, 95%). 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-б): 1,27 (т, 1=7, 2 Гц, 3Н); 1,92 (м, 2Н); 2,41 (т, 1=7,2 Гц, 2Н); 3,36 (т, 1=6,7 Гц, 2Н); 4,15 (к, 1=7,2 Гц, 2Н).
Соединение 68. 4-Азидобутановая кислота о ·' о ' §1
К раствору 3 г (19,9 ммоль) соединения 67 в 47 мл метанола и 37 мл воды прибавляют маленькими порциями 5,58 г (99,5 ммоль) едкого калия. Смесь перемешивают при КТ в течение 6 ч, затем концентрируют при ПД до объема примерно 28 мл. Остаток разбавляют 25 мл воды и экстрагируют 2x20 мл ЭСМ. Водный слой подкисляют до рН« 1 добавлением концентрированной НС1, затем экстрагируют диэтиловым эфиром 3x25 мл. Органические слои объединяют, промывают насыщенным раствором №С1 (25 мл) и сушат над М^О4. После фильтрации и концентрирования при ПД получают соединение 68 в виде бесцветного масла (2,05 г, 80%). 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-б): 1,93 (м, 2Н); 2,49 (т, 1=7,1 Гц, 2Н); 3,39 (т, 1=6,7 Гц, 2Н); 11,24 (м уш., 1Н).
Соединение 69. (4-{1-[(4-{(2Κ,3Κ)-3-[(δ)-1-((Ε)-(3δ,10Κ,16δ)-10-{3-{лор-4-метоксибензил}-3изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил]оксиранил}бензил)метиламино] метил} -1,2,3 -триазол-1 -ил)бутановая кислота
К раствору 24 мг (32 мкмоль) соединения 66 в 545 мкл ТНР последовательно прибавляют 8,3 мг (13 мкмоль) соединения 68, 545 мкл воды, 128 мкл 0,1 М водного раствора сульфата меди и 128 мкл 0,2 М водного раствра аскорбата натрия. Смесь перемешивают 45 мин при КТ, затем разбавляют 2 мл воды. Водный слой экстрагируют 3x2 мл ΑсОΕΐ. Оганические слои объединяют, промывают насыщенным раствором №С1 (2 мл) и фильтруют М^О4. После фильтрации и концентрирования при ПД неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле с привитыми диольными группами, используя в качестве элюента смесь ЭСМ/метанол 98/2-90/10. Соединение 69 получают в виде твердого белого вещества (22,6 мг; 80%). Ή ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6): 0,76 (д, 1=6,6 Гц, 3Н); 0,78 (д, 1=6,6 Гц, 3Н); 1,00 (с, 3Н); 1,05 (д, 1=6,9 Гц, 3Н); 1,11 (с, 3Н); 1,30 (м, 1Н); 1,50-1,62 (м, 2Н); 1,81 (м, 1Н); 2,03 (м, 2Н); 2,10 (с, 3Н); 2,20 (т, 1=7,0 Гц, 2Н); 2,30 (м, 1Н); 2,64-2,74 (м, 2Н); 2,94-3,03 (м, 3Н); 3,35 (м частично экранирован, 1Н); 3,48 (с, 2Н); 3,61 (с, 2Н); 3,81 (с, 3Н); 3,87 (д, 6=1,6 Гц, 1Н); 4,25 (ддд, 1=3,7 и 7,7 и 11,5 Гц, 1Н); 4,37 (т, 1=7,0 Гц, 2Н); 4,91 (дд, 1=3,6 и 9,6 Гц, 1Н); 5,11 (ддд, 1=1,5 и 5,5 и 11,3 Гц, 1Н); 5,80 (дд, 1=1,5 и 15,1 Гц, 1Н); 6,47 (ддд, 1=3,7 и 11,3 и 15,1 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,5 Гц, 1Н); 7,17 (дд, 1=2,2 и 8,5 Гц, 1Н); 7,23 (дд, 1=2,5 и 9,8 Гц, 1Н); 7,26 (д, 1=8,5 Гц, 2Н); 7,28 (д, 1=2,2 Гц, 1Н); 7,34 (д, 1=8,5 Гц, 2Н); 8,02 (с, 1Н); 8,39 (д шир., 1=7,7 Гц, 1Н); 12,14 (м ушир., 1Н). ЖХМС (А2): Εδ тА=879 [М+Н]+; тА=877 [М-Н]-; ΐκ=0,86 мин.
Соединение 70. Меτил-(4-{1-[(4-{(2Κ,3Κ)-3-[(δ)-1-((Е)-(3δ,10Κ,16δ)-10-{3-хлор-4-меτоксибензил}3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил]оксиранил} бензил)метиламино] метил} -1,2,3 -триазол-1 -ил)бутаноат
К раствору, продуваемому аргоном, 5,5 мг (6,2 мкмоль) соединения 69 в 0,5 мл ЭСМ и 0,2 мл метанола прибавляют 4,7 мкл (9,3 мкмоль) триметилсилилдиазометана. Смесь перемешивают 45 мин при КТ, затем концентрируют досуха. Неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, используя в качестве элюента смесь ЭСМ/метанол 98/2-95/5. Соединение 70 получают в виде твердого белого вещества (3,4 мг; 62%). Ή ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6): 0,75 (д, 1=6,6 Гц, 3Н); 0,77 (д, 1=6,6 Гц, 3Н); 1,00 (с, 3Н); 1,05 (д, 1=6,9 Гц, 3Н); 1,11 (с, 3Н); 1,28 (м, 1Н); 1,49-1,61 (м, 2Н); 1,80 (м, 1Н); 2,07 (м, 2Н); 2,10 (м, 3Н); 2,26 (м, 1Н); 2,31 (т, 1=7,0 Гц, 2Н); 2,62-2,74 (м, 2Н); 2,93-3,04 (м, 3Н); 3,27-3,37 (м частично экранирован, 1Н); 3,48 (с, 2Н); 3,58 (с, 3Н); 3,61 (с, 2Н); 3,81 (с, 3Н); 3,87 (д, 1=2,0 Гц, 1Н); 4,25 (ддд, 1=3,7 и
- 56 024627
8,2 и 11,6 Гц, 1Н); 4,38 (т, 1=7,0 Гц, 2Н); 4,91 (дд, 1=3,9 и 9,8 Гц, 1Н); 5,11 (ддд, 1=1,5 и 5,3 и 11,2 Гц, 1Н); 5,79 (дд, 1=1,5 и 15,2 Гц, 1Н); 6,47 (ддд, 1=3,9 и 11,2 и 15,2 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,6 Гц, 1Н); 7,16 (дд, 1=2,2 и 8,6 Гц, 1Н); 7,22 (дд, 1=2,4 и 9,8 Гц, 1Н); 7,26 (д, 1=8,6 Гц, 2Н); 7,28 (д, 1=2,2 Гц, 1Н); 7,33 (д, 1=8,6 Гц, 2Н); 8,03 (с, 1Н); 8,34 (д, 1=8,2 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): ЕЗ т//=893 [М+Н]+; т//=447 [М+2Н]2+ пик молекулярного иона; т//=891 [М-Н]-; т//=937 [М-Н+НСО2Н]- пик молекулярного иона; !К=0,90 мин.
Пример 21. 2,5-Диоксопирролидин-1-ил-(4-{1-[(4-{(2К,3К)-3-[(З)-1-((Е)-(3З,10К,16З)-10-{3-хлор-4метоксибензил}-3 -изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13 -ен16-ил)этил]оксиранил}бензил)метиламино]метил}-1,2,3-триазол-1-ил)бутаноат
Соединение примера 21 может быть получено путем активации кислоты 69 согласно способу, описанному для примера 19.
Пример 22.
О
Ν ΝΗ,
К г
Соединение 71. (Е)-(3К,10К,16З)-16-{(З)-1-[(2З,3З)-3-(4-Азидометилфенил)оксиранил]этил}-10-(3хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраон
Спирт 57 (36 мг; 51,48 мкмол, получен согласно А1-амаг К.З., е! а1., 1. Меб. СЬет. 2003, 46, 29853007) растворяют в безводном ТНР (2 мл). Раствор продувают аргоном и охлаждают на бане с ледяной водой, после этого добавляют ИРРА (74 мкмоль), затем ИВИ (80 мкмоль). Смеси дают вернуться к КТ и продолжают перемешивание всю ночь. На следующие сутки раствор снова охлаждают на бане с ледяной водой, затем прибавляют дополнительно 74 мкмоль ИРРА и 80 мкмоль ИВИ. После 2 ч проведения реакции при 0°С и 2 ч при КТ, смесь гидролизуют 5 мл воды и затем экстрагруют 3 раза посредством ИСМ. Органические слои объединяют и сушат над №ьЗО+ фильтруют ивыпаривают при ПД. Неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ИСМ/метанола 100/0-95/5. Соединение 57 получают в виде твердого бесцветного вещества (24 мг, 64%). 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6) δ (м.д.): 0,84 (д, 1=6,3 Гц, 3Н); 0,86 (д, 1=6,3 Гц, 3Н);0,98 (д, 1=7,1 Гц, 3Н); 1,03 (с, 3Н); 1,15 (с, 3Н); 1,481,67 (м, 3Н); 1,88 (м, 1Н); 2,45 (м, 1Н);2,63 (м, 1Н); 2,71 (дд, 1=11,5 и 14,0 Гц, 1Н); 2,97-3,08 (м, 3Н); 3,36 (м частично экранирован, 1Н); 3,82 (с шир., 4Н); 4,28 (ддд, 1=3,6 и 8,0 и 11,5 Гц, 1Н); 4,44 (с, 2Н); 4,99 (дд, 1=3,7 и 9,5 Гц, 1Н); 5,12 (ддд, 1=1,4 и 5,7 и 11,4 Гц, 1Н); 5,88 (дд, 1=1,4 и 15,2 Гц, 1Н); 6,49 (ддд, 1=3,8 и 11,4 и15,2 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,5 Гц, 1Н); 7,18 (дд, 1=2,2 и 8,5 Гц, 1Н); 7,26-7,32 (м, 4Н); 7,36 (д, 1=8,5 Гц, 2Н); 8,40 (д, 1=8,0 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): ЕЗ т/ζ 722 [М-Н]-; т/ζ 724 [М+Н]+; т/ζ 768 [М+НСО2НН]-; !К=1,19 мин.
Соединение 72. (Е)-(3К,10К,16З)-16-{(З)-1-[(2З,3З)-3-(4-Аминометилфенил)оксиранил]этил}-10-(3хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраон
Растворяют соединение 71 (22 мг, 30,38 мкмоль) в смеси метанола (1 мл)/воды (0,2 мл), а затем добавляют ТСЕР (34,89 мкмоль). Полученный раствор оставляют для перемешивания на всю ночь при КТ, затем концентрируют при ПД. Остаток обрабатывают насыщенным водным раствором NаΗСО3 и экстрагируют 3 раза при помощи ИСМ. Объединенные органические слои сушат над №2ЗО4, фильтруют и концентрируют при ПД. Получают таким путем промежуточное соединение 72 в виде твердого бесцветного вещества (21 мг, 99%), которое используют неочищенным на следующей стадии. ЖХМС (А5): ЕЗ ιη/ζ=696 [М-Н]-; т^=698 [М+Н]+; т^=742 [М+НСО2Н-Н]-; !К=3,19 мин.
Соединение 74. РтосУа1-Сб-РАВАС-а-аминокриптофицин 72.
- 57 024627
Растворяют соединение 72 (21 мг, 30,08 мкмоль) в смеси ацетонитрила (2 мл)/безводного ЭМР (0,5 мл), затем прибавляют раствор соединения 73 (23 мг, 30,1 мкмол; получено согласно \УО 2006/110476) в ацетонитриле (2 мл)). Смесь оставляют на 22 ч для перемешивания при КТ, затем концентрируют при ПД. Остаток обрабатывают посредством ЭСМ и промывают насыщенным водным раствором МаНСО3, затем сушат над Ма28О4, фильтруют и концентрируют при ПД. Неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ЭСМ/метанол 100/0-90/10. Соединение 74 получают в виде твердого белого вещества (22 мг), которое используют неочищенным на следующей стадии. ЖХМС (А5): Е8 т//=1325 [М+Н]+; т/ζ 1369 [М+НСО2Н-Н]-; О =4,30 мин.
Соединение 75. Уа1-СП-РЛВАС-а-аминокриптофицин 72
N КН.
7$
Растворяют соединение 74 (22 мг, 16,59 мкмоль) в ЭМР (3 мл), затем прибавляют пиперидин (150 мкл, 1,51 ммоль) и перемешивают 30 мин при КТ. Смесь концентрируют при ПД; остаток растворяют в минимальном количестве метанола и осаждают простым эфиром. Соединение 75 получают в виде твердого белого вещества (15 мг, 82%). ЖХМС (А5): Е8 т//=1103 [М+Н]+; т//=1101 [М-Н]-; т//=1148 [М+НСО2Н-Н]-; 0=3,38 мин.
Соединение 76. Уа1-С^!-ΡЛВЛС-α-аминокрипτофицинглуτаровая кислота 72
Раствор глутарового ангидрида (8 мг, 70 мкмоль) в безводном ЭМР (200 мкл) прибавляют к соединению 75 (15 мг, 13,59 мкмоль), находящемуся в атмосфере аргона. Полученный раствор перемешивают всю ночь при КТ, после этого вводят насыщенный водный раствор МН4С1 и экстрагируют 3 раза посредством ЭСМ. Объединенные органические слои сушат над Ма28О4, фильтруют и концентрируют при ПД. Полученный остаток обрабатывают с помощью ЭСМ и осаждают простым эфиром. После фильтрации через фриттированное стекло и промывки простым эфиром получают соединение 76 в виде твердого бежевого продукта (8 мг, 48%). 'Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-Д6) δ (м.д.): 0,80-0,92 (м, 12Н); 0,96 (д, 1=7,1 Гц, 3Н); 1,02 (с, 3Н); 1,15 (с, 3Н); 1,30-1,72 (м, 9Н); 1,86 (м, 1Н); 2,00 (м, 1Н); 2,11-2,26 (м, 4Н); 2,42 (м, 1Н); 2,60-2,74 (м, 2Н); 2,91-3,11 (м, 5Н); 3,38 (м частично экранирован, 1Н); 3,76 (д, 1=1,8 Гц, 1Н); 3,81 (с, 3Н); 4,17 (м, 3Н); 4,27 (м, 1Н); 4,37 (м, 1Н); 4,90-5,04 (м, 3Н); 5,11 (м, 1Н); 5,50 (м шир., 2Н); 5,88 (д шир., 1=15,2 Гц, 1Н); 6,20 (м ушир., 1Н); 6,48 (м, 1Н); 7,06 (д, 1=8,3 Гц, 1Н); 7,11-7,32 (м, 9Н); 7,60 (м, 2Н); 7,75 (м, 1Н); 7,89 (м, 1Н); 8,28 (м ушир., 1Н); 8,41 (д, 1=7,8 Гц, 1Н); 9,92 (с шир., 1Н); 12,06 (м ушир., 1Н). ЖХМС (А2): Е8 ω/ζ=1217 [М+Н]+; μ/ζ=1215 [М-Н]-; 0=1,05 мин.
Пример 22.
Растворяют соединение 76 (6 мг, 4,93 мкмоль) в смеси ЭСМ (0,5 мл) и ЭМР (0,1 мл), затем последовательно прибавляют Ν,Ν'-дисукцинимидилкарбонат (6 мг, 23,42 мкмоль) и ОГРЕА (4 мкл, 22,96 мкмоль). После 3 ч проведения рекции при КТ прибавляют насыщенный водный раствор ХН4С1 и смесь экстрагируют 3 раза при помощи ЭСМ. Объединенные органические слои сушат над №28О4, фильтруют и концентрируют при ПД. Неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ЭСМ/метанол 100/0-90/10. Получают соединение пр.22 в виде твердого белого продукта (4 мг, 61%). 'Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-Д6) δ (м.д.): 0,80-0,90 (м, 12Н); 0,96 (д, 1=7,3 Гц, 3Н); 1,03 (с, 3Н); 1,15 (с,3Н); 1,32-1,76 (м, 7Н); 1,80-1,89 (м, 3Н); 1,97 (м, 1Н); 2,29(м, 2Н); 2,44 (м, 1Н); 2,60-2,75 (м, 4Н); 2,81 (с, 4Н); 2,89-3,08 (м, 5Н); 3,41 (м частично экранирован, 1Н); 3,77 (д, 1=2,0 Гц, 1Н); 3,81 (с, 3Н); 4,14-4,24 (м, 3Н); 4,27 (ддд, 1=3,9 и 8,3 и 11,5 Гц, 1Н); 4,38 (м, 1Н); 4,93-5,03 (м, 3Н); 5,11 (м, 1Н); 5,39 (с шир., 2Н); 5,88 (д шир., 1=15,2 Гц, 1Н); 5,96 (т, 1=5,9 Гц, 1Н); 6,48 (ддд, 1=3,7 и 11,1 и 15,2 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,3 Гц, 1Н); 7,16-7,36 (м, 9Н); 7,59 (д, 1=7,8 Гц, 2Н); 7,76 (т, 1=6,1 Гц, 1Н); 7,88 (д, 1=8,8 Гц, 1Н); 8,10 (д, 1=7,3 Гц, 1Н); 8,41 (д, 1=8,3 Гц, 1Н); 9,97 (с шир., 1Н). ЖХМС (А2): Е8 ω/ζ=1314 [М+Н]+; тО=1358 [М+НСО2НН]-; 0=1,06 мин.
- 58 024627
Пример 23.
Соединение 77. (Е)-(3К,10К,168)-16-{(§)-1-[(2К,3К)-3-(4-Аминометилфенил)оксиранил]этил}-10-(3хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраон
Растворяют соединение 60 (23 мг, 31,76 мкмоль) в смеси метанола (1 мл) и воды (0,2 мл), после этого добавляют ТСЕР (34,90 мкмоль) и Όί'.Μ (количество, необходимое для солюбилизации). Полученный раствор оставляют для перемешивания на всю ночь при КТ, затем концентрируют при ПД. Затем остаток обрабатывают насыщенным водным раствором NаΗСΟз и экстрагируют 3 раза с помощью Όί','Μ. Объединенные органические слои сушат над №28О4, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ^СΜ/метанол 100/0-90/10. Соединение 77 получают в виде твердого белого вещества (12 мг, 59%). 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-а6) δ (м.д.): 0,78 (д, 1=6,4 Гц, 6Н); 1,00 (с, 3Н); 1,05 (Д, 1=6,9 Гц, 3Н); 1,12 (с, 3Н); 1,30 (м, 1Н); 1,47-1,62 (м, 2Н); 1,79 (м, 1Н); 2,22-2,32 (м, 3Н); 2,63-2,73 (м, 2Н); 2,92-3,05 (м, 3Н); 3,35 (м частично экранирован, 1Н); 3,71 (с, 2Н); 3,81 (с, 3Н); 3,86 (д, 1=1,6 Гц, 1Н;; 4,25 (ддд, 1=3,6 и 8,0 и 11,3 Гц, 1Н); 4,90 (дд, 1=3,6 и 9,6 Гц, 1Н); 5,11 (ддд, 1=1,5 и 5,2 и 11,3 Гц, 1Н); 5,79 (дд, 1=1,5 и 15,0 Гц, 1Н); 6,47 (ддд, 1=3,6 и 11,3 и 15,0 Гц, 1Н); 7,05 (д, 1=8,5 Гц, 1Н); 7,17 (дд, 1=1,9 и 8,5 Гц, 1Н); 7,19-7,26 (м, 3Н); 7,28 (д, 1=1,9 Гц, 1Н); 7,34 (д, 1=8,0 Гц, 2Н); 8,34 (д, 1=8,0 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): Ε8 т//=698 [Μ+НЦ т//=696 [М-Н]-; т//=742 [М+НСО2Н-Н]-; !К=0,87 мин.
Соединение 78. РтосVа1-С^ΐ-ΡΑΒΑС-α-аминокрипτофицин 77.
Растворяют соединение 77 (10 мг, 14,32 мкмоль) в безводном ΌΜΤ (0,1 мл), после этого прибавляют раствор промежуточного соединения 73 (11 мг, 14,35 мкмол; получено согласно АО 2006/110476) в смеси ацетонитрила (1 мл) и ΌΜΤ (0,1 мл)). Смесь перемешивают 3 ч при КТ, затем концентрируют при ПД. Затем остаток очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ^СΜ/метанол 100/0-90/10. Соединение 78 получают в виде твердого белого вещества (18 мг, 95%). ЖХМС (А5): Ε8 т//=1325 [Μ+НЦ т/ζ 1369 [Μ+НСО^-Н]-; !К=4,32 мин.
Соединение 79. Vа1-С^ΐ-ΡΑΒΑС-α-аминокрипτофицин 77.
Растворяют соединение 78 (42 мг, 31,68 мкмоль) в ΌΜΤ (5 мл), после этого прибавляют пиперидин (150 мкл, 1,51 ммоль) и перемешивают 30 мин при КТ. Смесь концентрируют при ПД и остаток растворяют в минимальном количестве метанола и осаждают простым эфиром. Соединение 79 получают в виде твердого белого вещества (21 мг, 60%). ЖХМС (А4): Ε8 т//=1103 [Μ+НЦ т//=1101 [М-Н]-; т//=1147 [Μ+НСО^-Н]-; !К=3,67 мин.
Соединение 80. Vа1-С^ΐ-ΡΑΒΑС-α-аминокрипτофицинглуτаровая кислота 77.
Растворяют соединение 79 (20 мг, 18,12 мкмоль) в смеси ΌΜΓ (100 мкл) и безводного ΌΟΜ (500 мкл), после этого прибавляют глутаровый ангидрид (4 мг, 35,06 мкмоль). Полученный раствор перемешивают всю ночь при КТ, затем концентрируют при ПД. Полученный остаток обрабатывают минимальным количеством Όί'.Μ и метанола, осаждают смесью простого эфира и пентана и фильтруют через фриттированное стекло. Соединение 80 получают в виде твердого белого продукта (23 мг, 104% неочищенный продукт), которое используют неочищенным на следующей стадии. 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСОά6): 0,78 (д, 1=6,3 Гц, 6Н); 0,84 (д, 1=6,6 Гц, 3Н); 0,86 (д, 1=6,6 Гц, 3Н); 1,00 (с, 3Н); 1,04 (д, 1=6,9 Гц, 3Н); 1,12 (с, 3Н); 1,22-1,47 (м, 3Н); 1,51-1,64 (м, 3Н); 1,72 (м, 3Н); 1,80 (м, 1Н); 1,99 (м, 1Н); 2,20 (м, 4Н); 2,28 (м, 1Н); 2,59-2,73 (м, 2Н); 2,90-3,07 (м, 5Н); 3,32 (м частично экранирован, 1Н); 3,81 (с, 3Н); 3,87 (с шир., 1Н); 4,19 (м, 3Н); 4,24 (м, 1Н); 4,38 (м, 1Н); 4,91 (дд, 1=3,3 и 9,6 Гц, 1Н); 4,97 (с шир., 2Н); 5,10 (дд, 1=4,4
- 59 024627 и 10,7 Гц, 1Н); 5,40 (с шир., 2Н); 5,79 (д шир., 1=15,1 Гц, 1Н); 5,99 (м шир., 1Н); 6,47 (ддд, 1=3,6 и 11,3 и 15,1 Гц, 1Н); 7,05 (ц, 1=8,5 Гц, 1Н); 1,11 (д шир., 1=8,5 Гц, 1Н); 7,20-7,34 (м, 8Н); 7,60 (д шир., 1=8,2 Гц, 2Н); 7,76 (т шир., 1=5,4 Гц, 1Н); 7,83 (д, 1=8,5 Гц, 1Н); 8,09 (д шир., 1=7,1 Гц, 1Н); 8,34 (д, 1=8,0 Гц, 1Н); 9,95 (с шир., 1Н); 11,98 (м ушир., 1Н). ЖХМС (А2): Е8 т//=1217 [М+Н]+; т//=1215 [М-Н]-; ΐκ=1,03 мин.
Пример 23.
Соединение пример 23 может быть получено путем активирования кислоты 80 согласно способу, описанному для примера 22.
Пример 24. [2-Метил-2-(пиридин-2-илдисульфанил)пропил]метилкарбамат (4-((28,38)-3-{(8)-1-[(Е)(38,10К, 168)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11диазациклогексадец-13-ен-16-ил]этил}оксиранил}бензила . ти х %°о ΗΝ
Ти ι'α°
Соединение 81. Метил-[2-метил-2-(пиридин-2-илдисульфанил)пропил]амин
К раствору амина 15 (478 мг, 2,90 ммоль) в МеОН (35 мл) прибавляют ТСЕР (831 мг, 2,9 ммоль). После 2 ч проведения реакции при КТ полученный раствор прибавляют по каплям в атмосфере аргона к раствору 2,2'-дипиридилдисульфида (960 мг, 4,36 ммоль) в этаноле (70 мл). Реакцию ведут дополнительно в течение 2 ч при КТ, затем смесь концентрируют при ПД. Остаток обрабатывают ИСМ и промывают насыщенным водным раствором NаНСО3. Органический слой отделяют, а водный слой снова экстрагируют 2 раза с помощью ИСМ. Объединенные органические слои сушат над №28О4, фильтруют и концентрируют при ПД. Неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ИСМ/метанол 98/2-85/15. Получают соединение 81 в виде масла бледно-желтого цвета (587 мг, 89%). 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6): 1,25 (с, 6Н); 1,80 (м уш. 1Н); 2,19 (с, 3Н); 2,45 (с, 2Н); 7,22 (ддд, 1=1,5 и 5,0 и 7,0 Гц, 1Н); 7,74-7,85 (м, 2Н); 8,42 (ддд, 1=1,1 и 1,5 и 5,0 Гц, 1Н).
Пример 24. [2-Метил-2-(пиридин-2-илдисульфанил)пропил]метилкарбамат (4-((28,38)-3-{(8)-1-[(Е)(38,10К,168)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11диазациклогексадец-13-ен-16-ил]этил}оксиранил}бензила
К раствору промежуточного соединения 58 (21 мг, 24,3 мкмоль) в безводном ИСМ последовательно прибавляют амин 81 (10 мг, 43,79 мкмоль) и ИГРЕА (8 мкл, 45,43 мкмоль). После проведения реакции в течение 24 ч при КТ прибавляют насыщенный водный раствор NаНСО3 и смесь экстрагируют 3 раза с помощью ИСМ. Объединенные органические слои сушат над №28О4, фильтруют и концентрируют при ПД. Неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ИСМ/метанол 100/0-95/5. Получают соединение пр24 в виде твердого бесцветного вещества (7 мг, 30%). 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6): 0,82 (д, 1=6,0 Гц, 3Н); 0,84 (д, 1=6,0 Гц, 3Н); 0,97 (д, 1=6,8 Гц, 3Н); 1,03 (с, 3Н); 1,14 (с, 3Н); 1,25 (с шир., 6Н); 1,45-1,68 (м, 3Н); 1,88 (м, 1Н); 2,42 (м частично экранирован, 1Н); 2,58-2,75 (м, 2Н); 2,83-3,09 (м, 6Н); 3,34 (м частично экранирован, 1Н); 3,46 (с шир., 2Н); 3,81 (с шир., 4Н); 4,28 (м, 1Н); 4,91-5,17 (м, 4Н); 5,88 (д шир., 1=15,2 Гц, 1Н); 6,49 (м, 1Н); 7,05 (д, 1=8,6 Гц, 1Н); 7,15-7,38 (м, 8Н); 7,80 (м шир., 2Н); 8,39 (д, 1=7,8 Гц, 1Н); 8,43 (д шир., 1=4,6 Гц, 1Н). ЖХМС (А2): Е8 т//=953 [М+Н]+; т//=477 [М+2Н]2+; т//=997 [М+НСО2Н-Н]-; ΐκ=1,23 мин.
Пример 25. Ьи2Н11-пр.17
В соответствии с общим способом 8,31 мг (0,057 мкмол, 1,468 мл) голых антител Ьи2Н11 в концентрации 5,66 мг/мл обрабатывают 5 экв. соединения пр.17 (0,442 мг, 0,340 мкмоль), растворенного в 37,3 мкл ИМА так, чтобы конечная концентрация антител в смеси была 3 мг/мл. После очистки на матрице 8ирегбех 200 рд и концентрирования на приборе Атюоп иИга-15 (мембрана И11гасе1 50к, МПЬроге), получают 2,15 мл конъюгата в концентрации 2,48 мг/мл, содержащего в среднем 2,2 цитотоксического соединения на антитело, и с мономерной чистотой 99,7% в водном буфере рН 6,5, содержащем 0,01 М
- 60 024627 фосфата, 0,14 М №С1 и 20% об. ЯМР. Окончательную замену буфера осуществляют в водном буфере рН 6,5, содержащем 0,01 М фосфата и 0,14 М №С1 на 1 мл конъюгата. Получают таким путем 1,5 мл раствора конъюгата пр25 в концентрации 1,06 мг/мл, содержащего в среднем 2,8 производных кристофицина (определено УФ-анализом) на антитело, и с мономерной чистотой 99,7%.
Пример 26. йи2Н11-пр.18
В соответствии с общим способом 7,8 мг (0,053 мкмол, 1,458 мл) голых антител 1ш2Н11 в концентрации 5,35 мг/мл обрабатывают 6 экв. соединения пр18 (0,578 мг, 0,531 мкмол, чистота 60%), растворенного в 272 мкл ОМА так, чтобы конечная концентрация антител в смеси была 3 мг/мл. После очистки на матрице Зирегбех 200 р§ и концентрирования на приборе Атюоп ийга-15 (мембрана ИЙгасе1 50к, МПНроге), получают 2,35 мл конъюгатов в концентрации 2,49 мг/мл, содержащих в среднем 2,5 производных криптофицина на антитело, и с мономерной чистотой 100% в водном буфере рН 6,5, содержащем 0,01 М фосфата, 0,14 М №С1 и 20% об. ЯМР. Окончательную замену буфера осуществляют в водном буфере рН 6,5, содержащем 0,01 М фосфата и 0,14 М хлорида натрия на 1 мл конъюгата. Получают таким путем 1,5 мл раствора конъюгата пр26 в концентрации 0,84 мг/мл, содержащего в среднем 2,22 производных кристофицина (определено УФ-анализом) на антитело, и с мономерной чистотой 99,9%.
Пример 27. йи2Н11-пр.9.
В соответствии с общим способом 12 мг (81,7 мкмоль, 1,172 мл) голых антител 1ш2Н11 в концентрации 10,24 мг/мл обрабатывают 2x5 экв. соединения пр19 (0,382 мг, 0,41 мкмоль), растворенного в 44,3 мкл ОМА так, чтобы конечная концентрация антител в реакционной среде была 3 мг/мл. После очистки на матрице Зирегбех 200 р§ в присутствии 20% ЯМР и концентрирования на приборе Атюоп иНга-15 (мембрана И11гасе1 50к, МПНроге), получают 1,04 мл конъюгатов в водном буфере рН 6,5, содержащем 0,01 М фосфата, 0,14 М ЯаС1 и 20% об. ЯМР. Окончательную замену буфера осуществляют в водном буфере рН 6,5, содержащем 0,01 М гистидина, 10% сахарозы (м/об.) и 5% ЯМР (об./об.). Получают 1,5 мл раствора конъюгата пр.27 в концентрации 2,66 мг/мл, содержащего в среднем 1,4 производных кристофицина (НКМЗ) на антитело, и с мономерной чистотой 99,8%.
Примеры, приведенные ниже, осуществляли с конкретным производным криптофицина (чаще с производным Όι), но может быть использовано другое производное из группы Όι-Ό8 или производное криптофицина общей формулы (ΙΙ). Аналогично этому, получение конъюгатов согласно примерам 10, 11, 12, 25, 26 и 27 может быть применено к другим антителам, отличающимся от 1ш2Н11.
Примечание: в указанных примерах -Ьу8- означает, что связывание происходит по ε-аминогруппам лизина антитела.
Пример 28. Оценка ингибирования пролиферации клеток линий МЭА-МВ-231, МОА-А1 и НСТ116 с помощью цитотоксических соединений, это исследование осуществляли с использованием соединений формулы (II) типа 3Ζ3, где Ζа=ЗΜе или типа -С(=О)^ЪКЪ, где ΖЪΚЪ=Оше.
Клетки МОА-МВ-231, МОА-А1 или НСТ116 в фазе их экспоненциального роста трипсинизировали и суспензировали в соответствующей культуральной среде (ЭМЕМ/Р12 С'зЪсо #21331, 10% ЗУР СЪсо #10500-056, 2 нМ глутамин СЪсо #25030 для клеток МОА; ОМЕМ СЪсо #11960, 10% ЗУР СЪсо #10500-056, 2 нМ глутамин СЪсо #25030 для клеток НСТ116). Клеточную суспензию засевали в 96луночные культуральные планшеты СуГОЦаг (СЕ НеаИйсаге Еигоре, #КРЯЦ0163) в полной культуральной среде, содержащей сыворотку, с плотностью 5000 клеток/лунку (МОА-МВ-231, МОА-А1 и НСТ116). После 4 ч инкубирования добавляли в лунки последовательно разведенные производные криптофицина в уменьшающихся концентрациях от 10-7 до 10-12 М (три параллельных опыта для каждой концентрации). Клетки выращивали в течение 3 суток при 37°С в атмосфере, содержащей 5% СО2, в присутствии цитотоксических соединений. На 4-ый день добавляли в каждую лунку по 10 мкл раствора тимидина 14С (0,1 мкКи/лунку, от Регкш Е1тег #ЯЕС56825000). Включение тимидина 14С измеряли спустя 96 ч после начала эксперимента с помощью радиоактивного счетчика МюгоЪе1а (от Регкш Е1тег). Данные выражали в процентах выживаемости, используя соотношение между измерением, полученным с клетками, обработанными цитотоксическими соединениями, и измерением, полученным с клетками контрольных лунок (обработанных только культуральной средой).
- 61 024627
Таблица III
Пример 29. Оценка ингибирования пролиферации клеток линий МИА-МВ-231, МИА-А1 и НСТ116 с помощью конъюгатов антитело-цитотоксическое соединение.
Клетки МИА-МВ-231, МИА-А1 и НСТ116 в фазе их экспоненциального роста трипсинизировали и суспензировали в соответствующей культуральной среде (ИМЕМ/Р12 СлЬсо #21331, 10% 8\Т СлЬсо #10500-056, 2 нМ глутамин ОФсо #25030 для клеток МИА; ИМЕМ О1Ьсо #11960, 10% 8νΤ О1Ьсо #10500-056, 2 нМ глутамин ОФсо #25030 для клеток НСТ116). Клеточную суспензию засевали в 96луночные культуральные планшеты Су!ов!аг (ОЕ НеаЙЬсаге Еигоре, #ΡΡΝΟ0163) в полной культуральной среде, содержащей сыворотку, с плотностью 5000 клеток/лунку (МИА-МВ-231, МИА-А1 и НСТ116). После 4 ч инкубирования добавляли в лунки последовательно разведенные производные криптофицина в уменьшающихся концентрациях от 10-7 до 10-12 М (три параллельных опыта для каждой концентрации). Клетки выращивали в течение 3 суток при 37°С в атмосфере, содержащей 5% СО2, в присутствии иммуноконъюгатов антитело-цитотоксическое соединение. На 4-й день добавляли в каждую лунку по 10 мкл раствора тимидина 14С (0,1 мкКи/лунку, от Ρе^к^η Е1тег #№ЕС56825000). Включение тимидина 14С измеряли спустя 96 ч после начала эксперимента с помощью радиоактивного счетчика М1сгоЬе1а (от Ρе^к^η Е1тег). Данные выражали в процентах выживаемости, используя соотношение между измерением, полученным с клетками, обработанными иммуноконъюгатом, и измерением, полученным с клетками контрольных лунок (обработанных только культуральной средой). В некоторых экспериментах добавляли в лунки голые антитела Ьи2Н 11 в концентрации 1 мкМ в начале эксперимента и ингибирование пролиферации измеряли, как описано выше.
ТаблицаIV
Claims (10)
1. Производное криптофицина формулы (II) в которой К3 означает (С1-С6)алкильную группу;
К6 и К7 означают, независимо один от другого, Н или (С1-С6)алкильную группу;
К8 и К9 означают, независимо один от другого, Н или (С1-С6)алкильную группу;
К10 означает Н или по меньшей мере один заместитель фенильного кольца, выбранный из групп (С1-С4)алкокси, атома хлора;
К11 означает Н или по меньшей мере один заместитель, выбранный из (С1-С4)алкильной группы;
- 62 024627
Ь означает линкер в положении орто(о)-, мета(м)- или пара(п)-, выбранный из
К12 означает Н или (С1-С6)алкильную группу;
ζ, означает Н или группу -δΡ,,, где Ка означает группу (С2-С6)алкил;
Ζ|, означает простую связь, -О- или -ΝΉ-, причем Кь означает Н или группу (С1 -С6)алкил;
где группу -δΖ3 или -С(=О)^|:К1:1 обозначают как химическую реакционноспособную группу (ОСК1).
2. Производное криптофицина по п.1, описанное одной из следующих формул:
3. Производное криптофицина по п.1, выбранное из
- 63 024627 в котором Ζ3, ΖЬ и КЬ определены в п.1.
4. Применение производного криптофицина по одному из пп.1-3 для образования конъюгата с моноклональным антителом.
5. Способ получения конъюгата, представляющего собой моноклональное антитело, с которым ковалентно связано по меньшей мере одно производное криптофицина формулы (ίί) по п.1, содержащее реакционноспособную химическую группу (ОСК1), состоящий в том, что (ί) вводят в контакт и подвергают взаимодействию водный раствор моноклонального антитела и раствор производного криптофицина, такого как определен в п.1.
6. Способ по п.5, в котором водный раствор моноклонального антитела является забуференным.
7. Способ по п.5 или 6, в котором дополнительно (ίί) отделяют конъюгат, полученный на стадии (ί), от производного криптофицина, и/или непрореагировавшего моноклонального антитела, и/или от возможно образовавшихся агрегатов.
8. Способ по одному из пп.5-7, в котором в случае производного криптофицина, содержащего реакционноспособную химическую группу ОСК1 типа -δΖ3, подвергают взаимодействию производное криптофицина с моноклональным антителом, содержащим дисульфидные химические группы, если ОСК1 означает -δ№ тиольные химические группы, если ОСК1 означает -δΖ3, где ΖΗ>4; малеимидо или иодацетамидо химические группы, если ОСК1 означает -δ№ в случае производного криптофицина, содержащего реакционноспособную химическую группу ОСК1 типа -С(=О)^ЬКЬ, подвергают взаимодействию производное криптофицина с аминофункциями моноклонального антитела.
9. Способ по одному из пп.5-8, в котором в случае производного криптофицина, содержащего реакционноспособную химическую группу ОСК1 типа -δΖ3, моноклональное антитело модифицируют с помощью модифицирующего агента, выбранного из соединения формулы в которой К означает группу (С1-С6)алкил и АЬК означает (С1-С6)алкиленовую группу; в случае производного криптофицина, содержащего реакционноспособную химическую группу
ОСК1 типа -δΚ моноклональное антитело модифицируют с помощью модифицирующего агента, выбранного из сукцинимидил-4-(№малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилата; сульфосукцинимидил-4(№малеимидометил)циклогексан-1 -карбоксилата;
сукцинимидил-№бромацетата; сукцинимидил-3-(№бромацетамидо)пропионата;
причем АЬК означает (С1-С12)алкиленовую группу и Ь является целым числом между 0 и 2000.
10. Конъюгат для применения в качестве противоракового агента, получаемый способом по одному из пп.5-9.
- 64 024627
Фиг. 2
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR0903170A FR2947269B1 (fr) | 2009-06-29 | 2009-06-29 | Nouveaux composes anticancereux |
FR0905651A FR2947271B1 (fr) | 2009-06-29 | 2009-11-25 | Nouveaux composes anticancereux |
PCT/FR2010/050986 WO2011001052A1 (fr) | 2009-06-29 | 2010-05-20 | Nouveaux conjugues, leur preparation et leur application en therapeutique |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA201270096A1 EA201270096A1 (ru) | 2012-07-30 |
EA024627B1 true EA024627B1 (ru) | 2016-10-31 |
Family
ID=41611078
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA201270096A EA024627B1 (ru) | 2009-06-29 | 2010-05-20 | Производные криптофицина и его конъюгаты, их получение и применение в терапии |
Country Status (30)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8952147B2 (ru) |
EP (1) | EP2448929A1 (ru) |
JP (1) | JP5746692B2 (ru) |
KR (1) | KR101770584B1 (ru) |
CN (1) | CN102482238B (ru) |
AR (1) | AR078131A1 (ru) |
BR (1) | BRPI1015131A2 (ru) |
CA (1) | CA2766762C (ru) |
CL (1) | CL2011003229A1 (ru) |
CO (1) | CO6430462A2 (ru) |
CR (1) | CR20110670A (ru) |
DO (1) | DOP2011000376A (ru) |
EA (1) | EA024627B1 (ru) |
EC (1) | ECSP11011553A (ru) |
FR (2) | FR2947269B1 (ru) |
HN (1) | HN2011003414A (ru) |
IL (1) | IL217208A (ru) |
MA (1) | MA33465B1 (ru) |
MX (1) | MX2011013764A (ru) |
MY (1) | MY156684A (ru) |
NI (1) | NI201100219A (ru) |
NZ (1) | NZ597136A (ru) |
PE (1) | PE20121031A1 (ru) |
SG (2) | SG10201607595WA (ru) |
SV (1) | SV2011004086A (ru) |
TN (1) | TN2011000636A1 (ru) |
TW (1) | TW201110986A (ru) |
UY (1) | UY32745A (ru) |
WO (1) | WO2011001052A1 (ru) |
ZA (1) | ZA201109537B (ru) |
Families Citing this family (43)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SI1928503T1 (sl) | 2005-08-24 | 2012-11-30 | Immunogen Inc | Postopek za pripravo konjugatov majtansinoid protitelo |
TR201907573T4 (tr) | 2009-06-03 | 2019-06-21 | Immunogen Inc | Konjugasyon yöntemleri̇ |
AR077280A1 (es) | 2009-06-29 | 2011-08-17 | Incyte Corp | Pirimidinonas como inhibidores de pi3k, y composiciones farmaceuticas que los comprenden |
US8759359B2 (en) | 2009-12-18 | 2014-06-24 | Incyte Corporation | Substituted heteroaryl fused derivatives as PI3K inhibitors |
AR081823A1 (es) | 2010-04-14 | 2012-10-24 | Incyte Corp | DERIVADOS FUSIONADOS COMO INHIBIDORES DE PI3Kd |
WO2011163195A1 (en) | 2010-06-21 | 2011-12-29 | Incyte Corporation | Fused pyrrole derivatives as pi3k inhibitors |
CA2822070C (en) | 2010-12-20 | 2019-09-17 | Incyte Corporation | N-(1-(substituted-phenyl)ethyl)-9h-purin-6-amines as pi3k inhibitors |
WO2012125629A1 (en) | 2011-03-14 | 2012-09-20 | Incyte Corporation | Substituted diamino-pyrimidine and diamino-pyridine derivatives as pi3k inhibitors |
WO2012135009A1 (en) | 2011-03-25 | 2012-10-04 | Incyte Corporation | Pyrimidine-4,6-diamine derivatives as pi3k inhibitors |
KR20220009505A (ko) | 2011-03-29 | 2022-01-24 | 이뮤노젠 아이엔씨 | 일-단계 방법에 의한 메이탄시노이드 항체 접합체의 제조 |
DK2751109T3 (en) | 2011-09-02 | 2017-01-23 | Incyte Holdings Corp | HETEROCYCLYLAMINES AS PI3K INHIBITORS |
AR090548A1 (es) | 2012-04-02 | 2014-11-19 | Incyte Corp | Azaheterociclobencilaminas biciclicas como inhibidores de pi3k |
US10035817B2 (en) | 2012-10-04 | 2018-07-31 | Immunogen, Inc. | Method of purifying cell-binding agent-cytotoxic agent conjugates with a PVDF membrane |
US9359400B2 (en) | 2013-07-11 | 2016-06-07 | Novartis Ag | Site-specific chemoenzymatic protein modifications |
US10077277B2 (en) | 2014-06-11 | 2018-09-18 | Incyte Corporation | Bicyclic heteroarylaminoalkyl phenyl derivatives as PI3K inhibitors |
SG11201701455SA (en) * | 2014-09-03 | 2017-03-30 | Immunogen Inc | Cytotoxic benzodiazepine derivatives |
GB201416960D0 (en) | 2014-09-25 | 2014-11-12 | Antikor Biopharma Ltd | Biological materials and uses thereof |
TWI748941B (zh) | 2015-02-27 | 2021-12-11 | 美商英塞特公司 | Pi3k抑制劑之鹽及製備方法 |
EP3069734A1 (en) | 2015-03-17 | 2016-09-21 | Exiris S.r.l. | Cryptophycin-based antibody-drug conjugates with novel self-immolative linkers |
US9988401B2 (en) | 2015-05-11 | 2018-06-05 | Incyte Corporation | Crystalline forms of a PI3K inhibitor |
WO2016183060A1 (en) | 2015-05-11 | 2016-11-17 | Incyte Corporation | Process for the synthesis of a phosphoinositide 3-kinase inhibitor |
CN107029242A (zh) | 2015-11-03 | 2017-08-11 | 财团法人工业技术研究院 | 抗体药物复合物及其制造方法 |
TWI714661B (zh) * | 2015-11-05 | 2021-01-01 | 法商賽諾菲公司 | 新穎念珠藻素化合物及接合物、其製備與其治療用途 |
WO2017136769A1 (en) * | 2016-02-04 | 2017-08-10 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Peptide drug conjugates |
WO2018178277A1 (en) | 2017-03-29 | 2018-10-04 | Avicenna Oncology Gmbh | New targeted cytotoxic isocombretaquinoline derivatives and conjugates thereof |
EP3621658A1 (en) * | 2017-05-10 | 2020-03-18 | Sanofi | Peptidic linkers and cryptophycin conjugates, useful in therapy, and their preparation |
WO2019030284A1 (en) | 2017-08-09 | 2019-02-14 | Helmholtz-Zentrum für Infektionsforschung GmbH | NOVEL TARGETED CYTOTOXIC RATJADONE DERIVATIVES AND CONJUGATES THEREOF |
SG11202005678UA (en) * | 2017-12-22 | 2020-07-29 | Univ Cornell | 18f-labeled peptide ligands useful in pet and cerenkov luminescene imaging |
SG11202100934PA (en) | 2018-08-02 | 2021-02-25 | Dyne Therapeutics Inc | Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies |
US12018087B2 (en) | 2018-08-02 | 2024-06-25 | Dyne Therapeutics, Inc. | Muscle-targeting complexes comprising an anti-transferrin receptor antibody linked to an oligonucleotide and methods of delivering oligonucleotide to a subject |
WO2020028864A1 (en) | 2018-08-02 | 2020-02-06 | Dyne Therapeutics, Inc. | Muscle targeting complexes and uses thereof for treating facioscapulohumeral muscular dystrophy |
US11168141B2 (en) | 2018-08-02 | 2021-11-09 | Dyne Therapeutics, Inc. | Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies |
US11911484B2 (en) | 2018-08-02 | 2024-02-27 | Dyne Therapeutics, Inc. | Muscle targeting complexes and uses thereof for treating myotonic dystrophy |
FR3085952B1 (fr) | 2018-09-17 | 2020-10-30 | Centre Nat Rech Scient | Conjugue anticorps-medicament comprenant des derives de quinoline |
EP4038085A1 (en) | 2019-09-30 | 2022-08-10 | The Regents of The University of Michigan | Biocatalytic synthesis of cryptophycin anticancer agents |
EP4046996A1 (en) | 2021-02-19 | 2022-08-24 | Universität Bielefeld | Cryptophycin compounds and conjugates thereof |
US11969475B2 (en) | 2021-07-09 | 2024-04-30 | Dyne Therapeutics, Inc. | Muscle targeting complexes and uses thereof for treating facioscapulohumeral muscular dystrophy |
US11672872B2 (en) | 2021-07-09 | 2023-06-13 | Dyne Therapeutics, Inc. | Anti-transferrin receptor antibody and uses thereof |
US11633498B2 (en) | 2021-07-09 | 2023-04-25 | Dyne Therapeutics, Inc. | Muscle targeting complexes and uses thereof for treating myotonic dystrophy |
US11638761B2 (en) | 2021-07-09 | 2023-05-02 | Dyne Therapeutics, Inc. | Muscle targeting complexes and uses thereof for treating Facioscapulohumeral muscular dystrophy |
US11771776B2 (en) | 2021-07-09 | 2023-10-03 | Dyne Therapeutics, Inc. | Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies |
WO2023057564A1 (en) | 2021-10-07 | 2023-04-13 | Sanofi | IMIDAZO[4,5-c]QUINOLINE-4-AMINE COMPOUNDS AND CONJUGATES THEREOF, THEIR PREPARATION, AND THEIR THERAPEUTIC APPLICATIONS |
US11931421B2 (en) | 2022-04-15 | 2024-03-19 | Dyne Therapeutics, Inc. | Muscle targeting complexes and formulations for treating myotonic dystrophy |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1998008505A1 (en) * | 1996-08-30 | 1998-03-05 | Eli Lilly And Company | Pharmaceutical compounds |
WO2005116255A2 (en) * | 2004-04-15 | 2005-12-08 | Archemix Corporation | Aptamer-toxin molecules and method for using same |
WO2009002993A1 (en) * | 2007-06-25 | 2008-12-31 | Endocyte, Inc. | Conjugates containing hydrophilic spacer linkers |
Family Cites Families (35)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US2719170A (en) | 1954-07-28 | 1955-09-27 | Du Pont | Alkyl omega-carboxyalkyl disulfides and their lower alkyl esters |
US4981979A (en) | 1987-09-10 | 1991-01-01 | Neorx Corporation | Immunoconjugates joined by thioether bonds having reduced toxicity and improved selectivity |
JPH04502469A (ja) | 1988-12-22 | 1992-05-07 | ゾマ コーポレイション | ヒンダードカップリング剤および方法 |
US5208020A (en) | 1989-10-25 | 1993-05-04 | Immunogen Inc. | Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use |
CA2056039A1 (en) | 1991-01-22 | 1992-07-23 | Philip L. Fuchs | Carbacyclin analogs |
NZ305571A (en) | 1995-03-07 | 1999-02-25 | Univ Hawaii | Cryptophycin derivatives, use in pharmaceutical compositions to inhibit mammalian cell proloferation and treat neoplasia |
WO2000023429A2 (en) | 1998-10-16 | 2000-04-27 | Eli Lilly And Company | Stereoselective process for producing cryptophycins |
AU1930100A (en) | 1998-12-07 | 2000-06-26 | Eli Lilly And Company | Crotylboration process to produce cryptophycin compounds |
JP2005511627A (ja) * | 2001-11-20 | 2005-04-28 | シアトル ジェネティクス,インコーポレーテッド | 抗cd30抗体を使用する免疫学的疾患の治療 |
AU2003259163B2 (en) | 2002-08-16 | 2008-07-03 | Immunogen, Inc. | Cross-linkers with high reactivity and solubility and their use in the preparation of conjugates for targeted delivery of small molecule drugs |
US7230101B1 (en) | 2002-08-28 | 2007-06-12 | Gpc Biotech, Inc. | Synthesis of methotrexate-containing heterodimeric molecules |
EA010570B1 (ru) | 2002-11-07 | 2008-10-30 | Иммьюноджен, Инк. | Антитело к cd33 и способы его применения |
WO2004103272A2 (en) | 2003-05-20 | 2004-12-02 | Immunogen, Inc. | Improved cytotoxic agents comprising new maytansinoids |
ATE496944T1 (de) | 2003-07-21 | 2011-02-15 | Immunogen Inc | Ca6-antigenspezifisches zytotoxisches konjugat und verfahren zu dessen anwendung |
US20050175619A1 (en) | 2004-02-05 | 2005-08-11 | Robert Duffy | Methods of producing antibody conjugates |
US7375078B2 (en) | 2004-02-23 | 2008-05-20 | Genentech, Inc. | Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates |
AR048098A1 (es) | 2004-03-15 | 2006-03-29 | Wyeth Corp | Conjugados de caliqueamicina |
TW200630106A (en) | 2004-10-08 | 2006-09-01 | Wyeth Corp | Immunotherapy of autoimmune disorders |
EP1669358A1 (en) | 2004-12-07 | 2006-06-14 | Aventis Pharma S.A. | Cytotoxic agents comprising new taxanes |
BRPI0515745A (pt) * | 2004-12-09 | 2008-08-05 | Centocor Inc | imunoconjugados de antiintegrina, métodos e usos |
US7385028B2 (en) | 2004-12-22 | 2008-06-10 | Ambrx, Inc | Derivatization of non-natural amino acids and polypeptides |
JP2008536485A (ja) * | 2005-03-07 | 2008-09-11 | アーケミックス コーポレイション | Psmaに対する安定化したアプタマーおよび前立腺癌治療薬としてのそれらの使用 |
US7714016B2 (en) | 2005-04-08 | 2010-05-11 | Medarex, Inc. | Cytotoxic compounds and conjugates with cleavable substrates |
RS52060B (en) | 2006-01-25 | 2012-04-30 | Sanofi | CYTOTOXIC AGENTS CONTAINING NEW TOMAIMYCIN DERIVATIVES |
EP1832577A1 (en) | 2006-03-07 | 2007-09-12 | Sanofi-Aventis | Improved prodrugs of CC-1065 analogs |
EP2010475A2 (en) | 2006-04-27 | 2009-01-07 | Intezyne Technologies Incorporated | Heterofunctional poly(ethylene glycol) containing acid-labile amino protecting groups and uses thereof |
EP1864682A1 (en) | 2006-06-09 | 2007-12-12 | Sanofi-Aventis | Leptomycin derivatives |
ES2673822T3 (es) | 2006-07-18 | 2018-06-25 | Sanofi | Anticuerpo antagonista contra EphA2 para el tratamiento de cáncer |
EP1914242A1 (en) | 2006-10-19 | 2008-04-23 | Sanofi-Aventis | Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer |
PT2019104E (pt) | 2007-07-19 | 2013-12-03 | Sanofi Sa | Agentes citotóxicos compreendendo novos derivados de tomaimicina e sua utilização terapêutica |
EP2185188B1 (en) | 2007-08-22 | 2014-08-06 | Medarex, L.L.C. | Site-specific attachment of drugs or other agents to engineered antibodies with c-terminal extensions |
EP2276509B1 (en) | 2008-04-11 | 2016-06-15 | Seattle Genetics, Inc. | Detection and tratment of pancreatic, ovarian and other cancers |
KR101764081B1 (ko) | 2008-04-30 | 2017-08-01 | 이뮤노젠 아이엔씨 | 가교제 및 그 용도 |
SG189817A1 (en) | 2008-04-30 | 2013-05-31 | Immunogen Inc | Potent conjugates and hydrophilic linkers |
WO2010014812A2 (en) | 2008-07-30 | 2010-02-04 | The Research Foundation Of State University Of New York | Peptide compositions and methods of use |
-
2009
- 2009-06-29 FR FR0903170A patent/FR2947269B1/fr not_active Expired - Fee Related
- 2009-11-25 FR FR0905651A patent/FR2947271B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2010
- 2010-05-20 JP JP2012518108A patent/JP5746692B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2010-05-20 KR KR1020117031276A patent/KR101770584B1/ko active IP Right Grant
- 2010-05-20 SG SG10201607595WA patent/SG10201607595WA/en unknown
- 2010-05-20 MA MA34580A patent/MA33465B1/fr unknown
- 2010-05-20 EP EP10728799A patent/EP2448929A1/fr not_active Withdrawn
- 2010-05-20 BR BRPI1015131-1A patent/BRPI1015131A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2010-05-20 MX MX2011013764A patent/MX2011013764A/es active IP Right Grant
- 2010-05-20 CN CN201080038575.2A patent/CN102482238B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2010-05-20 NZ NZ597136A patent/NZ597136A/en not_active IP Right Cessation
- 2010-05-20 CA CA2766762A patent/CA2766762C/fr not_active Expired - Fee Related
- 2010-05-20 SG SG2011097193A patent/SG177419A1/en unknown
- 2010-05-20 WO PCT/FR2010/050986 patent/WO2011001052A1/fr active Application Filing
- 2010-05-20 EA EA201270096A patent/EA024627B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2010-05-20 MY MYPI2011006289A patent/MY156684A/en unknown
- 2010-05-20 PE PE2011002178A patent/PE20121031A1/es not_active Application Discontinuation
- 2010-06-28 TW TW099121094A patent/TW201110986A/zh unknown
- 2010-06-28 AR ARP100102290A patent/AR078131A1/es unknown
- 2010-06-29 UY UY0001032745A patent/UY32745A/es not_active Application Discontinuation
-
2011
- 2011-12-05 DO DO2011000376A patent/DOP2011000376A/es unknown
- 2011-12-12 TN TNP2011000636A patent/TN2011000636A1/fr unknown
- 2011-12-13 CR CR20110670A patent/CR20110670A/es unknown
- 2011-12-15 SV SV2011004086A patent/SV2011004086A/es unknown
- 2011-12-19 NI NI201100219A patent/NI201100219A/es unknown
- 2011-12-20 CL CL2011003229A patent/CL2011003229A1/es unknown
- 2011-12-20 US US13/331,259 patent/US8952147B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2011-12-23 ZA ZA2011/09537A patent/ZA201109537B/en unknown
- 2011-12-26 EC EC2011011553A patent/ECSP11011553A/es unknown
- 2011-12-26 IL IL217208A patent/IL217208A/en not_active IP Right Cessation
- 2011-12-28 HN HN2011003414A patent/HN2011003414A/es unknown
- 2011-12-29 CO CO11180696A patent/CO6430462A2/es active IP Right Grant
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1998008505A1 (en) * | 1996-08-30 | 1998-03-05 | Eli Lilly And Company | Pharmaceutical compounds |
WO2005116255A2 (en) * | 2004-04-15 | 2005-12-08 | Archemix Corporation | Aptamer-toxin molecules and method for using same |
WO2009002993A1 (en) * | 2007-06-25 | 2008-12-31 | Endocyte, Inc. | Conjugates containing hydrophilic spacer linkers |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
AL-AWAR RIMA S, ET AL: "A convergent approach to Cryptophycin 52 analogues: Synthesis and biological evaluation of a novel series of fragment a epoxides and chlorohydrins.", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, US, vol. 46, no. 14, 3 July 2003 (2003-07-03), US, pages 2985 - 3007, XP002467582, ISSN: 0022-2623, DOI: 10.1021/jm0203884 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EA024627B1 (ru) | Производные криптофицина и его конъюгаты, их получение и применение в терапии | |
KR102548191B1 (ko) | 표적 단백질 분해 화합물, 이의 항종양 응용, 이의 중간체 및 중간체의 응용 | |
JP5814366B2 (ja) | 抗癌性誘導体、この調製および治療への使用 | |
EA026488B1 (ru) | Конъюгаты димеров пирроло[1,4]бензодиазепина в качестве противоракового средства | |
TWI839055B (zh) | 聚乙二醇化的藥物-連接劑及其中間體 | |
JP5923373B2 (ja) | 免疫アジュバントの調製のための化合物 | |
EP3088401B1 (en) | (6s,9as)-n-benzyl-6-((4-hydroxyphenyl)methyl)-4,7-dioxo-8-((6-(3-(piperazine-1-yl)azetidine-1-yl)pyridine-2-yl)methyl)-2-(prop-2-en-1-yl)-octahydro-1h-pyrazino(2,1-c)(1,2,4)triazine-1-carboxamide compound | |
CA3136088A1 (en) | Mcl-1 inhibitor antibody-drug conjugates and methods of use | |
CN112513025A (zh) | 用于制备苯基哌啶基吲哚衍生物的化学方法 | |
CA3085264A1 (en) | Compounds and their use in treating cancer | |
JP6929292B2 (ja) | 新規なクリプトフィシン化合物およびコンジュゲート、これらの製造およびこれらの治療用途 | |
NZ713233A (en) | Methods and compositions for the treatment and/or prophylaxis of clostridium difficile associated disease | |
EP2945957B1 (fr) | Nouveaux agents complexants hydrosolubles et complexes de lanthanide correspondants | |
EA029088B1 (ru) | Макроциклические и бициклические ингибиторы вируса гепатита c | |
TW202140424A (zh) | Gpr40激動劑 | |
TW202140440A (zh) | Gpr40激動劑 | |
JP4723526B2 (ja) | アルジトールまたはイノシトール誘導体を骨格とする分子輸送体 | |
GB2205100A (en) | Derivatives of tetrahydrofuran and tetrahydrothiophen | |
CA3199295A1 (en) | New crystalline forms of a kras g12c inhibitor compound | |
US20080039421A1 (en) | Molecular Transporters Based On Alditol Or Inositol And Processes For The Preparation Thereof | |
WO2021083438A1 (en) | Inhibitors of purine nucleoside phosphorylase - synthesis and use thereof for treatment of t-cell acute lymphoblastic leukemia and lymphoma | |
US10280143B1 (en) | Process for preparing deuterated desmosine and derivatives thereof | |
US20240262859A1 (en) | Chimeric nucleic acid oligomer including phosphorothioate and boranophosphate, and method for producing same | |
WO2017040702A1 (en) | Bipolar tetraether lipids | |
EP4265621A1 (en) | Pyrrole derivative, and preparation method and use therefor |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): KZ MD RU |