EA021723B1 - ПРОИЗВОДНЫЕ 4,7-ДИГИДРОПИРАЗОЛО[1,5-a]ПИРАЗИН-6-ИЛАМИНА, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ БЕТА-СЕКРЕТАЗЫ (ВАСЕ) - Google Patents

Abstract

Настоящее изобретение относится к новым производным 4,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-ил-амина формулы I, где значения радикалов раскрыты в формуле изобретенияиспользуемым в качестве ингибиторов β-секретазы, известной также в качестве фермента, расщепляющего β-сайт амилоида, ВАСЕ, BACE1, Asp2 или мемапсина 2. Изобретение относится также к фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения, к способам получения таких соединений и композиций и к применению таких соединений и композиций для предотвращения и лечения нарушений, в которых принимает участие β-секретаза, таких как болезнь Альцгеймера (AD), умеренное когнитивное расстройство, старение, деменция, деменция с тельцами Леви, синдром Дауна, деменция, связанная с инсультом, деменция, связанная с болезнью Паркинсона, или деменция, связанная с β-амилоидом.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к новым производным 4,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-иламина, используемым в качестве ингибиторов β-секретазы, известной также в качестве фермента, расщепляющего β-сайт амилоида, ВАСЕ, ВАСЕ1, А§р2 или мемапсина 2. Изобретение относится также к фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения, к способам получения таких соединений и композиций и к применению таких соединений и композиций для предотвращения и лечения нарушений, в которых принимает участие β-секретаза, таких как болезнь Альцгеймера (АО), умеренное когнитивное расстройство, старение, деменция, деменция с тельцами Леви, синдром Дауна, деменция, связанная с инсультом, деменция, связанная с болезнью Паркинсона, или деменция, связанная с β-амилоидом.

Уровень техники

Болезнь Альцгеймера (АО) является нейродегенеративным заболеванием, связанным со старением. Пациенты с болезнью Альцгеймера страдают нарушением познавательной способности и потерей памяти, а также поведенческими проблемами, такими как тревога (страх). Более 90% пациентов, пораженных АО, имеют спорадическую форму нарушения, в то время как менее 10% случаев таких нарушений являются семейными или наследственными. В Соединенных Штатах примерно 1 из 10 человек в возрасте 65 лет имеет АО, тогда как в возрасте 85 лет 1 человек из каждых двух лиц поражен АО. Средняя продолжительность жизни от первоначального диагноза составляет 7-10 лет, и пациентам с АО требуется тщательный уход для помощи в жизнеобеспечении пациента либо лицом, осуществляющим уход за больным, что очень дорого, либо членами семьи. В связи с ростом числа пожилых людей среди жителей АО является увеличивающейся медицинской проблемой. Доступные в настоящее время терапии для АО только лечат симптомы заболевания и включают в себя применение ингибиторов ацетилхолинэстеразы для улучшения когнитивных свойств, а также транквилизаторов и антипсихотических средств для ослабления поведенческих проблем, связанных с этим недугом.

Отличительными патологическими признаками мозга пациентов с АО являются нейрофибриллярные клубки, которые генерируются гиперфосфорилированием τ-белка, и амилоидные бляшки, которые образуются агрегированием пептида β-амилоида 1-42 (Ав 1-42). Ав 1-42 образует олигомеры и затем фибриллы и в конце концов амилоидные бляшки. Считается, что олигомеры и фибриллы являются особенно нейротоксичными и могут вызвать большинство неврологических повреждений, связанных с АО. Агенты, которые препятствуют образованию Аβ 1-42, имеют потенциал быть модифицирующими заболевание агентами для лечения АО. Аβ 1-42 образуется из амилоидного белка-предшественника (АРР), состоящего из 770 аминокислот. Ν-конец Аβ 1-42 расщепляется β-секретазой (ВАСЕ), а затем γ-секретаза расщепляет С-конец. Помимо Аβ 1-42 γ-секретаза выделяет также Аβ 1-40, которая является основным продуктом расщепления, а также Аβ 1-38 и Аβ 1-43. Эти формы Аβ могут также агрегироваться с образованием олигомеров и фибрилл. Таким образом, можно предположить, что ингибиторы ВАСЕ предотвращают образование Аβ 1-42, а также Аβ 1-40, Аβ 1-38 и Аβ 1-43 и могут быть потенциальными терапевтическими агентами при лечении АО.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к соединению формулы (I)

или его таутомерной или стереоизомерной форме, в которой К¹ и К² независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, фтора, циано, С1_-3алкила, моно- и полигалогенС1_-3алкила и С_3-6циклоалкила, или

К¹ и К², взятые вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, могут образовывать С_1-3 циклоалкандиильное кольцо;

К³ выбран из группы, состоящей из водорода, С_!-3алкила, С_3-6циклоалкила, моно- и полигалогенС_!-3 алкила, гомоарила и гетероарила;

X¹, X², X³, X⁴ независимо представляют собой С(К⁴) или Ν, при условии, что не более чем два из них представляют собой Ν; каждый К⁴ выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, С1_-3алкила, моно- и полигалогенС1_-3алкила, циано, С1_-3алкилокси, моно- и полигалогенС1_-3алкилокси;

Ь представляет собой связь или -ЩК⁵)СО-, где К⁵ представляет собой водород или С1_-3алкил;

К⁶ представляет собой водород или трифторметил;

Аг представляет собой гомоарил или гетероарил;

гомоарил представляет собой фенил или фенил, замещенный одним, двумя или тремя заместителя- 1 021723 ми, выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, С_|-3алкила. С_|-3алкилокси. моно- и полигалогенС^залкила и моно- и полигалогенС_1-3алкилокси;

гетероарил выбран из группы, состоящей из пиридила, пиримидила, пиразила, пиридазила, фуранила, тиенила, пирролила, пиразолила, имидазолила, триазолила, тиазолила, тиадиазолила, оксазолила и оксадиазолила, каждый из которых необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, С_|-залкила, С_|-залкилокси, моно- и полигалогенС_|-з алкила и моно- и полигалогенС_|-залкилокси, или его аддитивной соли или сольвату.

Иллюстрацией изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и любое из соединений, описанных выше. Иллюстрацией изобретения является фармацевтическая композиция, изготовленная смешиванием любого из соединений, описанных выше, и фармацевтически приемлемого носителя. Иллюстрацией изобретения является способ изготовления фармацевтической композиции, содержащий смешивание любого из соединений, описанных выше, и фармацевтически приемлемого носителя.

Репрезентацией изобретения являются способы лечения нарушения, опосредуемого ферментом βсекретазой, включающие в себя введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества любого из описанных выше соединений или фармацевтических композиций.

Следующей репрезентацией изобретения являются способы ингибирования фермента β-секретазы, содержащие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества любого из описанных выше соединений или фармацевтических композиций.

Примером изобретения является способ лечения нарушения, выбранного из группы, состоящей из болезни Альцгеймера, умеренного когнитивного расстройства, старения, деменции, деменции с тельцами Леви, синдрома Дауна, деменции, связанной с инсультом, деменции, связанной с болезнью Паркинсона, и деменции, связанной с β-амилоидом, предпочтительно болезни Альцгеймера, включающий в себя введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества любого из описанных выше соединений или фармацевтических композиций.

Другим примером изобретения является любое из описанных выше соединений для применения при лечении (а) болезни Альцгеймера, (Ь) умеренного когнитивного расстройства, (с) старения, (б) деменции, (е) деменции с тельцами Леви, (ί) синдрома Дауна, (д) деменции, связанной с инсультом, (Ь) деменции, связанной с болезнью Паркинсона, и (ί) деменции, связанной с β-амилоидом, у субъекта, нуждающегося в этом.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I), в которой символы имеют значения, указанные выше, и их фармацевтически приемлемым солям и сольватам. Соединения формулы (I) являются ингибиторами фермента β-секретазы (известной также как фермент расщепления β-сайта, ВАСЕ, ВАСЕ1, Азр2 или мемапсин 2) и являются применимыми при лечении болезни Альцгеймера, умеренного когнитивного нарушения, старения, деменции, деменции, связанной с инсультом, деменции с тельцами Леви, синдрома Дауна, деменции, связанной с болезнью Паркинсона, и деменции, связанной с βамилоидом, предпочтительно болезни Альцгеймера, умеренного когнитивного нарушения или деменции, более предпочтительно болезни Альцгеймера.

В варианте осуществления настоящего изобретения предложено соединение, у которого

К¹ и К² независимо выбраны из водорода и С_1-3алкила;

X¹, X², X³, X⁴ независимо представляют собой С(К⁴), где каждый К⁴ выбран из водорода и галогена;

Ь представляет собой связь или -И(К⁵)СО-, где К⁵ представляет собой водород;

Аг представляет собой гомоарил или гетероарил;

гомоарил представляет собой фенил или фенил, замещенный одним или двумя заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, С_1-3алкила и С_1-3алкилокси;

гетероарил выбран из группы, состоящей из пиридила, пиримидила и пиразила, каждый из которых необязательно замещен одним или двумя заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, С_1-3алкила и С_1-3алкилокси;

или его аддитивная соль или сольват.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения, предложено соединение, у которого

К¹ и К² независимо выбраны из водорода;

X¹, X², X³, X⁴ независимо представляют собой СН;

Ь представляет собой связь или -И(К⁵)СО-, где К⁵ представляет собой водород;

Аг представляет собой гомоарил или гетероарил; гомоарил представляет собой фенил, замещенный хлором;

гетероарил выбран из группы, состоящей из пиридила и пиримидила, каждый из которых необязательно замещен одним или двумя заместителями, выбранными из группы, состоящей из хлора, фтора, циано, метила и метокси;

или его аддитивная соль или сольват.

- 2 021723

В другом варианте осуществления атом углерода, замещенный К³, имеет К-конфигурацию.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения предложено соединение, у которого К¹ и К² представляют собой водород;

X¹ представляет собой СН или СР и X², X³, X⁴ представляют собой СН;

Ь представляет собой -Ы(К⁵)СО-, где К⁵ представляет собой водород;

Аг представляет собой пиридинил, замещенный одним или двумя атомами галогена, или пиразинил, замещенный метокси, или его соль или сольват.

Определения

Галоген будет означать фтор, хлор и бром;

С_1-3алкил будет означать неразветвленную или разветвленную насыщенную алкильную группу, имеющую 1, 2 или 3 атома углерода, например метил, этил, 1-пропил и 2-пропил;

С_1-3алкилокси будет означать радикал простого эфира, у которого С_1-3алкил имеет значения, указанные выше;

моно- и полигалогенС_1-3алкил будет означать С_1-3алкил, который имеет значения, указанные выше, и замещен 1, 2, 3 или в случае, когда возможно, большим числом атомов галогена, которые имеют значения, указанные выше, моно- и полигалогенС_1-3алкилокси будет означать радикал простого эфира, у которого моно- и полигалогенС_1-3алкил имеет значения, указанные выше;

С_3-6циклоалкил будет означать циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил;

С_3-6циклоалкандиил будет означать двухвалентный радикал, такой как циклопропандиил, циклобутандиил, циклопентандиил и циклогександиил.

Термин субъект, применяемый в контексте, относится к животному, предпочтительно млекопитающему, наиболее предпочтительно человеку, который является или являлся объектом лечения, наблюдения или эксперимента.

Термин терапевтически эффективное количество, применяемый в контексте, означает, что количество активного соединения или фармацевтического агента, которое вызывает биологический или лекарственный ответ в системе ткани, организме животного или человека, которого добивается исследователь, ветеринар, врач или другой клиницист, и которое включает облегчение симптомов подвергаемой лечению болезни или нарушения.

Предполагается, что в данном контексте термин композиция включает в себя продукт, содержащий указанные ингредиенты в указанных количествах, а также любой продукт, который получают непосредственно или опосредованно из комбинаций указанных ингредиентов в указанных количествах.

Следует иметь в виду, что некоторые из соединений формулы (I) и их аддитивные соли, гидраты и сольваты могут содержать один или несколько центров хиральности и могут существовать в виде стереоизомерных форм.

Термин стереоизомерные формы, используемый в контексте ранее или позже, означает все возможные стереоизомерные формы, которые могут иметь соединения согласно формуле (I) и их аддитивные соли. Если не оговорено или не указано иное, химическое определение соединений означает смесь всех возможных стереохимически изомерных форм, причем указанные смеси содержат все диастереомеры и энантиомеры основной молекулярной структуры, а также каждую из индивидуальных изомерных форм согласно формуле (I) и их солей, сольватов, по существу, индивидуальных, т.е. связанных менее чем с 10%, предпочтительно менее чем с 5%, в частности менее чем с 2% и наиболее предпочтительно менее чем с 1% других изомеров.

Когда соединения согласно данному изобретению имеют по крайней мере один хиральный центр, они могут соответственно существовать в виде энантиомеров. Когда соединения обладают двумя или более хиральными центрами, они могут дополнительно существовать в виде диастереомеров. Должно быть понятно, что все такие изомеры и их смеси включены в объем настоящего изобретения. Когда соединение присутствует в виде энантиомера, энантиомер предпочтительно присутствует при энантиомерном избытке, который превышает или равен приблизительно 80%, более предпочтительно при энантиомерном избытке, который превышает или равен приблизительно 90%, еще более предпочтительно при энантиомерном избытке, который превышает или равен приблизительно 95%, еще более предпочтительно при энантиомерном избытке, который превышает или равен приблизительно 98%, наиболее предпочтительно при энантиомерном избытке, который превышает или равен приблизительно 99%. Аналогично этому, когда соединение присутствует в виде диастереомера, диастереомер присутствует при диастереомерном избытке, который превышает или равен приблизительно 80%, более предпочтительно при диастереомерном избытке, который превышает или равен приблизительно 90%, еще более предпочтительно при диастереомерном избытке, который превышает или равен приблизительно 95%, еще более предпочтительно при диастереомерном избытке, который превышает или равен приблизительно 98%, наиболее предпочтительно при диастереомерном избытке, который превышает или равен приблизительно 99%.

Кроме того, некоторые из кристаллических форм соединений настоящего изобретения могут существовать в виде полиморфов, и предполагается, что как таковые они включены в настоящее изобретение.

- 3 021723

Кроме того, некоторые из соединений настоящего изобретения могут образовывать сольваты с водой (т.е. гидраты) или обычными органическими растворителями, и предполагается, что такие сольваты также включены в объем данного изобретения.

Для применения в медицине соли соединений данного изобретения относятся к нетоксичным фармацевтически приемлемым солям. Другие соли, однако, могут быть применимыми при получении соединений согласно данному изобретению или их фармацевтически приемлемых солей. Подходящие фармацевтически приемлемые соли соединений включают в себя аддитивные соли кислот, которые можно, например, получить смешиванием раствора соединения с раствором фармацевтически приемлемой кислоты, такой как хлористо-водородная кислота, серная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, янтарная кислота, уксусная кислота, бензойная кислота, лимонная кислота, винная кислота, угольная кислота или фосфорная кислота. Кроме того, когда соединения по изобретению содержат кислотный остаток, их подходящие фармацевтически приемлемые соли могут включать в себя соли щелочных металлов, например соли натрия или калия, соли щелочно-земельных металлов, например соли кальция или магния, и соли, образованные с подходящими органическими лигандами, например соли четвертичного аммония.

Репрезентативные кислоты, которые можно применять при получении фармацевтически приемлемых солей, включают, но не ограничиваются перечисленным, уксусную кислоту, 2,2-дихлоруксусную кислоту, ацилированные аминокислоты, адипиновую кислоту, альгиновую кислоту, аскорбиновую кислоту, Ь-аспарагиновую кислоту, бензолсульфоновую кислоту, бензойную кислоту, 4ацетамидобензойную кислоту, (+)-камфорную кислоту, камфорасульфоновую кислоту, каприновую кислоту, капроновую кислоту, каприловую кислоту, коричную кислоту, лимонную кислоту, цикламовую кислоту, этан-1,2-дисульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, 2-гидроксиэтансульфоновую кислоту, муравьиную кислоту, фумаровую кислоту, галактаровую кислоту, гентизиновую кислоту, глюкогептоновую кислоту, Ό-глюконовую кислоту, Ό-глюкуроновую кислоту, Ь-глутаминовую кислоту, бетаоксоглутаровую кислоту, гликолевую кислоту, гиппуровую кислоту, бромистоводородную кислоту, хлористо-водородную кислоту, (+)-Ь-молочную кислоту, (±)-ОЬ-молочную кислоту, лактобионовую кислоту, малеиновую кислоту, (-)-Ь-яблочную кислоту, малоновую кислоту, (±)-ОЬ-миндальную кислоту, метансульфоновую кислоту, нафталин-2-сульфоновую кислоту, нафталин-1,5-дисульфоновую кислоту, 1гидрокси-2-нафтойную кислоту, никотиновую кислоту, азотную кислоту, олеиновую кислоту, оротовую кислоту, щавелевую кислоту, пальмитиновую кислоту, памовую кислоту, фосфорную кислоту, Ьпироглутаминовую кислоту, салициловую кислоту, 4-аминосалициловую кислоту, себациновую кислоту, стеариновую кислоту, янтарную кислоту, серную кислоту, дубильную кислоту, (+)-Ь-винную кислоту, тиоциановую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, трифторметилсульфоновую кислоту и ундециленовую кислоту. Репрезентативные основания, которые можно применять при получении фармацевтически приемлемых солей, включают, но не ограничиваются перечисленным, аммиак, Ь-аргинин, бенетамин, бензатин, гидроксид кальция, холин, диметилэтаноламин, диэтаноламин, диэтиламин, 2(диэтиламино)этанол, этаноламин, этилендиамин, Ν-метилглюкамин, гидрабамин, 1Н-имидазол, Ьлизин, гидроксид магния, 4-(2-гидроксиэтил)морфолин, пиперазин, гидроксид калия, 1-(2гидроксиэтил)пирролидин, вторичный амин, гидроксид натрия, триэтаноламин, трометамин и гидроксид цинка.

Химические названия соединений настоящего изобретения создавали согласно правилам номенклатуры, принятым Сйеш1са1 АЬЧрас® §етуюе. Соединений согласно формуле (I) могут также существовать в их таутомерной форме. Предполагается, что такие формы, хотя они и не указаны непосредственно в приведенной выше формуле, включены в объем настоящего изобретения.

А. Получение конечных соединений.

Экспериментальная процедура 1.

Конечные соединения формулы согласно формуле (I) можно получить взаимодействием промежуточного соединения формулы (II) с подходящим источником аммиака, таким как, например, хлорид аммония или водный раствор аммиака, согласно схеме реакции (1), реакции, которую проводят в подходящем инертном в условиях реакции растворителе, таком как, например, вода или метанол, при таких термических условиях, как, например, нагревание реакционной смеси при 60°С, например, в течение 6 ч. На схеме реакции (1) все символы имеют значения, указанные, как для формулы (I).

- 4 021723

Экспериментальная процедура 2.

Конечные соединения согласно формуле (Ι-а), в которой Ь представляет собой -Ы(К⁵)СО-, можно получить взаимодействием промежуточного соединения формулы (ΙΙΙ-а) с промежуточным соединением формулы (IV) согласно схеме реакции (2), реакции, которую проводят в подходящем инертном в условиях реакции растворителе, таком как, например, Ν,Ν-диметилформамид, в присутствии подходящего основания, такого как, например, К₃РО₄, медного катализатор, такого как, например, Си1, и диамина, такого как, например, (1К,2К)-(-)-1,2-диаминоциклогексан, при таких термических условиях, как, например, нагревание реакционной смеси при 180°С в течение, например, 135 мин при микроволновом излучении. На схеме реакции (2) все символы имеют значения, указанные, как для формулы (I), и А представляет собой галоген.

Экспериментальная процедура 3.

Кроме того, конечные соединения согласно формуле (Ι-а) можно получить взаимодействием промежуточного соединения формулы (ΙΙΙ-Ь) с промежуточным соединением формулы (V) согласно схеме реакции (3), реакции, которую проводят в подходящим инертном в условиях реакции растворителе, таком как, например, дихлорметан, в присутствии подходящего основания, такого как, например, триэтиламин, в присутствии агента конденсации, такого как, например, гексафторфосфат О-(7-азабензотриазол1-ил)-КК№,№-тетраметилурония [НАТИ, СА§ 148893-10-1], при таких термических условиях, как, например, нагревание реакционной смеси при 25°С, например, в течение 2 ч. На схеме реакции (3) все символы имеют значения, указанные как для формулы (Ι).

Экспериментальная процедура 4.

Кроме того, конечные соединения формулы (Ι-а) можно получить взаимодействием промежуточного соединения формулы (ΙΙΙ-Ь) с промежуточным соединением формулы (νΙ) согласно схеме реакции (4), реакции, которую проводят в подходящем инертном в условиях реакции растворителе, таком как, например, дихлорметан, в присутствии подходящего основания, такого как, например, пиридин, в таких термических условиях, как, например, нагревание реакционной смеси при 25°С, например, в течение 2 ч. На схеме реакции (4) все символы имеют значения, указанные, как для формулы (Ι), и Υ представляет собой галоген.

Экспериментальная процедура 5.

Конечные соединения формулы (Ι-Ь), в которой Ь представляет собой связь, можно получить взаимодействием промежуточного соединения формулы (ΙΙΙ-а) с промежуточным соединением формулы (νΙΙ) согласно схеме реакции (5), реакции, которую проводят в подходящем инертном в условиях реакции растворителе, таком как, например, смеси инертных растворителей, таких как, например, 1,4- 5 021723 диоксан/этанол, в присутствии подходящего основания, такого как, например, водный К₃СО₃, катализатора, комплексного соединения Рб, такого как, например, тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) [СА§ 14221-01-3], при таких термических условиях, как, например, нагревание реакционной смеси при 80°С, например, в течение 20 ч или, например, нагревание реакционной смеси при 150°С в течение от 10 до 30 мин в условиях микроволнового излучения. В схеме реакции (5) все символы имеют значения, указанные, как для формулы (I), и представляет собой галоген. К⁷ и К⁸ могут быть водородом или алкилом или могут быть взяты вместе с образованием, например, двухвалентного радикала формулы -СН₂СН₂-, -СН₂СН₂СН₂- или -С(СН₃)₂С(СН₃)₂-.

Ряд промежуточных соединений и исходных веществ в предыдущих получениях являются известными соединениями, которые можно получить согласно известным в данной области методикам получения указанных или аналогичных соединений, и некоторые промежуточные соединения являются новыми соединениями. Ряд таких способов получения будет описан ниже более подробно.

В. Получение промежуточных соединений.

Экспериментальная процедура 6.

Промежуточные продукты согласно формуле (II) можно получить взаимодействием промежуточного соединения формулы (VIII) с подходящим, являющимся донором серы реагентом для синтеза тиоамидов, таким как, например, пентасульфид фосфора или 2,4-бис-(4-метоксифенил)-1,3-дитиа-2,4дифосфетан-2,4-дисульфид [реагент Лавессона, СА§ 19172-47-5], согласно схеме реакции (6), реакции, которую проводят в инертном в условиях реакции растворителе, таком как, например, тетрагидрофуран или толуол, в присутствии подходящего основания, такого как, например, пиридин, при таких термических условиях, как, например, нагревание реакционной смеси при 90°С, например, в течение 18 ч. На схеме реакции (6) все символы имеют значения, указанные, как для формулы (I).

Экспериментальная процедура 7.

Промежуточные соединения формулы (VIII), в которой Ь представляет собой связь, можно получить взаимодействием промежуточного соединения формулы ^Х-а) с промежуточным соединением формулы (VII) согласно схеме реакции (7), реакции, которую проводят в подходящей смеси инертных растворителей, такой как, например, 1,4-диоксан/вода, в присутствии подходящего основания, такого как, например, водный раствор №-ьСО₃. катализатора, комплексного соединения Рб, такого как, например, тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) [СА§ 14221-01-3], при таких термических условиях, как, например, нагревание реакционной смеси при 80°С, например, в течение 20 ч, или, например, нагревание реакционной смеси при 150°С, например, в течение 15 мин в условиях микроволнового излучения. На схеме реакции (7) все символы имеют значения, указанные, как для формулы (I), и представляет собой галоген. К⁷ и К⁸ могут быть водородом или алкилом или могут быть взяты вместе с образованием, например, двухвалентного радикала формулы -СН2СН2-, -СН2СН2СН2- или -С (СН3)2С (СН3)2-.

- 6 021723

Экспериментальная процедура 8.

Промежуточные соединения согласно формуле (Ш-Ь) можно получить из соответствующих промежуточных соединений формулы (Ш-а) известными в данной области процедурами сочетания типа Бухвальд-Хартвига согласно схеме реакции (8). Указанное сочетание можно проводить обработкой промежуточных соединений формулы (Ш-а) промежуточным соединением формулы (X) в подходящем инертном в условиях реакции растворителе, таком как, например, этанол, или смеси инертных растворителей, такой как, например, 1,2-диметоксиэтан/вода/этанол, в присутствии подходящего основания, такого как, например, водный К₃РО₄ или Ск₂СО₃, катализатора, комплексного соединения Рб, такого как, например, [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(11) [СЛ8 72287-26-4] или диацетат трансбис(дициклогексиламин)палладия [ЭЛРСу, СЛ8 628339-96-8] в термических условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 80°С, например, в течение 20 ч, или, например, нагревание реакционной смеси при 130°С, например, в течение 10 мин в условиях микроволнового излучения. На схеме реакции (8) все символы имеют значения, указанные, как для формулы (I), и V представляет собой галоген. К⁵ представляет собой водород или С^алкил.

Экспериментальная процедура 9.

Кроме того, промежуточные соединения согласно формуле (ΙΙΙ-Ь), в которой К⁵ представляет собой водород, можно получить из соответствующих промежуточных соединений формулы (Ш-С)известными в данной области процедурами восстановления нитрогруппы в аминогруппу по схеме реакции (9). Указанное восстановление можно преимущественно проводить известными в данной области процедурами каталитического гидрирования. Например, указанное восстановление можно проводить перемешиванием реагентов в атмосфере водорода и в присутствии подходящего катализатора, такого как, например, палладий на угле, платина на угле, никель Ренея, и подобных катализаторов. Подходящими растворителями являются, например, вода, спирты, например метанол, этанол и тому подобное, сложные эфиры, например этилацетат и тому подобное. Для того чтобы повысить скорость указанной реакции восстановления, можно подходящим образом повысить температуру и/или давление реакционной смеси. Нежелательное дальнейшее гидрирование некоторых функциональных групп в реагентах и продуктах реакций можно предотвратить добавлением каталитического яда, такого как, например, тиофен и тому подобное, к реакционной смеси. На схеме реакции (9) все символы имеют значения, указанные, как для формулы (I).

к⁶ к⁶

(Ш-с)

ΝΗΚСхема реакции 9

Экспериментальная процедура 10.

Промежуточные соединения формул (ΙΙΙ-а) и (ΙΙΙ-с) обычно получают по стадиям реакций, показанным ниже на схемах реакций (10), (11), (12) и (13).

Производные амидинов формул (ΙΙΙ-а) и (ΙΙΙ-с) на схеме реакции (10) можно преимущественно получить из соответствующих производных тиоамидов формул (ΧΙ-а) и (ХНфизвестными в данной области

- 7 021723 процедурами превращения тиоамида в амидин (стадия А реакции). Указанное превращение можно подходящим образом проводить обработкой промежуточных соединений формул (ΧΙ-а) и (ΧΙ-с) источником аммиака, таким как, например, хлорид аммония или водный раствор аммиака, в подходящем, инертном в условиях реакции растворителе, таком как, например, вода или метанол и тому подобное, в таких термических условиях, как, например, нагревание реакционной смеси при 60°С, например, в течение 6 ч.

Производные тиоамидов формул (ΧΙ-а) и (ΧΙ-с) на схеме реакции (10) можно получить из производных амидов формулы (ΙΧ-а) и (ΙΧ-с) известными в данной области процедурами осернения (стадия В реакции). Указанное превращение можно подходящим образом проводить обработкой промежуточных соединений формул (ΙΧ-а) и (ΙΧ-с) агентом осернения, таким как, например, пентасульфид фосфора или 2,4-бис-(4-метоксифенил)-1,3-дитиа-2,4-дифосфетан-2,4-дисульфид [реагент Лавессона, СА8 19172-475], в инертном в условиях реакции растворителе, таком как, например, тетрагидрофуран или 1,4-диоксан и тому подобное, при таких термических условиях, как, например, нагревание реакционной смеси при 50°С, например, в течение 50 мин.

Производные амидов формул (ΙΧ-а) и (ΙΧ-с) на схеме реакции (10) можно получить из соответствующих промежуточных соединений формул (ΧΙΙ-а) и (ΧΙΙ-с) известными в данной области процедурами циклизации (стадия с реакции). Указанную циклизацию можно подходящим образом проводить обработкой промежуточных соединений формул (ΧΙΙ-а) и (ΧΙΙ-с) подходящим основанием, таким как гидрид натрия, в подходящем инертном в условиях реакции растворителе, таком как, например, тетрагидрофуран и тому подобное, при температуре от -80 до 100°С, предпочтительно от -15 до 25°С в течение от 30 мин до 100 ч, предпочтительно от 1 до 24 ч.

- 8 021723

А: превращение тиоамида в амидин.

В: превращение амида в тиоамид (осернение).

С: циклизация.

Ό: Ν-ацилирование.

Промежуточные соединения формул (ΧΙΙ-а) и (ΧΙΙ-с) на приведенной выше схеме реакций (10) можно получить из соответствующих промежуточных соединений формул (ΧΙΙΙ-а) и (ΧΙΙΙ-с) известными в данной области процедурами Ν-ацилирования (стадия Ό реакции). Указанное Ν-ацилирование можно подходящим образом проводить обработкой промежуточных соединений формул (ΧΙΙΙ-а) и (ΧΙΙΙ-с) промежуточным соединением формулы (ΧΙν) в присутствии основания, такого как бикарбонат натрия, или смеси оснований, такой как бикарбонат натрия^^-диизопропилэтиламин, в подходящем инертном в условиях реакции растворителе, таком как, например, этанол, или смеси инертных растворителей, такой как, например, этанол/дихлорметан, при температуре от -80 до 100°С, предпочтительно от -15 до 25°С, в

- 9 021723 течение от 30 мин до 100 ч, предпочтительно от 1 до 24 ч.

Промежуточные соединения формул (ΧΙΙΙ-а) и (ΧΙΙΙ-с) на схеме реакций (11) можно получить из соответствующих промежуточных соединений формул (XV-а) и (XV-с), в которых Ζ¹ представляет собой подходящую защитную группу системы пиразола, такую как, например, диметилсульфамоильная группа, и Ζ² представляет собой подходящую защитную группу аминов, такую как, например, третбутансульфинильная группа, известными в данной области процедурами Ν-снятия защиты (стадия Е реакции). Указанное Ν-снятие защиты можно подходящим образом проводить обработкой соответствующих промежуточных соединений формул (ХУ-а) и (ХУ-с) подходящим кислотным агентом, таким как, например, хлористо-водородная кислота, в подходящем инертном растворителе, таком как, например, 1,4-диоксан, при умеренно высокой температуре, такой как, например, 25°С, например, в течение 1 ч.

Промежуточные соединения согласно формулам (ХУ-а) и (ХУ-с) на схеме реакции (11) можно получить взаимодействием промежуточных соединений формул (ХУП-а) и (ХУП-с) известными в данной области процедурами превращения имина в алкиламин (стадия Р реакции). Указанное превращение можно подходящим образом проводить обработкой соответствующих промежуточных соединений формул (ХУП-а) и (ХУП-с) промежуточным соединением формулы (ХУ!), в которой Υ представляет собой галоген, в подходящем, инертном в условиях реакции растворителе, таком как, например, тетрагидрофуран, при низкой температуре, такой как, например, 0°С, например, в течение 2 ч.

- 10 021723

Е: Ν-снятие защиты.

Р: превращение имина в алкиламин.

О: превращение кетона в имин.

Н: окисление спиртовой группы в карбонил.

I: орто-литиирование-алкилирование.

Промежуточные соединения согласно формулам (ΧνΐΙ-а) и (ΧνΐΙ-с) на приведенной выше схеме реакций (11) можно получить взаимодействием промежуточных соединений формул (ΧΙΧ-а) и (ΧΙΧ-с) по известным в данной области методикам превращения кетона в имин (стадия О реакции). Указанное превращение можно подходящим образом проводить обработкой соответствующих промежуточных соединений формул (ΧΙΧ-а) и (ΧΙΧ-с) промежуточным соединением формулы (ΧνΐΙΙ), в которой Ζ² представляет собой алкилсульфинильную группу, такую как, например, трет-бутансульфинильная группа, в присутствии подходящего катализатора, кислоты Льюиса, такой как изопропоксид титанаДУ), в подходящем инертном в условиях реакции растворителе, таком как, например, толуол, при таких термических условиях, как, например, нагревание реакционной смеси при 110°С, например, в течение 24 ч.

Промежуточные соединения формул (ΧΙΧ-а) и (ΧΙΧ-с) в приведенной выше схеме реакций (11) можно получить взаимодействием промежуточных соединений формул (ХХ-а) и (ΧΧ-с) известными в данной области процедурами окисления спиртовой группы в карбонил (стадии Н реакции). Указанное окисление можно подходящим образом проводить обработкой соответствующих промежуточных соединений формул (ХХ-а) и (ХХ-с) окисляющим агентом, таким как, например, периодинан Десс-Мартина [СА§: 87413-09-0], в подходящем, инертном в условиях реакции растворителе, таком как, например, дихлорметан, при низких температурах, таких как, например, 0°С, например, в течение 10 мин и затем при умеренно высокой температуре, такой как, например, 25°С, например, в течение 1 ч.

Промежуточные соединения согласно формулам (ХХ-а) и (ХХ-с) на приведенной выше схеме реакции (11) можно получить взаимодействием промежуточных соединений формул (ΧΧΙΙ-а) и (ΧΧΙΙ-с) известными в данной области процедурами ортолитиирования-алкилирования (стадия Ι реакции). Указанное превращение можно подходящим образом проводить обработкой соответствующих промежуточных соединений формул (ΧΧΙΙ-а) и (ΧΧΙΙ-с) подходящим литийорганическим реагентом, таким как, например, н-бутиллитий, в подходящем инертном в условиях реакции растворителе, таком как, например, тетрагидрофуран, при низких температурах, таких как, например, -78°С, например, в течение 45 мин, с последующей обработкой промежуточными соединениями формул (ΧΧΙ-а) и (ΧΧΙ-с) при низкой температуре, такой, как, например, -78°С, например, в течение 45 мин.

Промежуточные соединения формул (ΧΧΙΙ-а) и (ΧΧΙΙ-с), в которых Ζ¹ представляет собой подходящую защитную группу системы пиразола, такую как, например, диметилсульфамоильную группу, обычно получают известными в данной области процедурами типа Ν-защиты, описанным в литературе.

1: превращение амида Вейнреба в кетон. К: получение амида Вейнреба.

- 11 021723

Кроме того, промежуточные соединения формул (ΧΙΧ-а) и (ΧΙΧ-с), в которых К⁶ представляет собой водород, на приведенной выше схеме реакций (12) можно получить взаимодействием промежуточных соединений формул (ΧΧΙν-а) и (ΧΧΙν-с) известными в данной области процедурами превращения амида Вейнреба в кетон (стадия I реакции). Указанное превращение можно подходящим образом проводить обработкой соответствующих промежуточных соединений формул (ΧΧΙν-а) и (ΧΧΙν-с) промежуточными соединениями формул (ΧΧΙΙΙ-а) и (ΧΧΙΙΙ-с), в которых Υ представляет собой галоген, в подходящем инертном в реакционных условиях растворителе, таком как, например, тетрагидрофуран, при низкой температуре, такой как, например, -78°С, например, в течение 1 ч и затем при умеренно высокой температуре, такой как, например, 25°С, например, в течение 5 ч.

Промежуточные соединения формул (ΧΧΙν-а) и (ΧΧΙν-с) на приведенной выше схеме реакций (12) можно получить взаимодействием промежуточных соединений формул (ΧΧν-а) и (ΧΧν-с) по известным процедурам получения амида Вейнреба (стадия К реакции). Указанное превращение можно подходящим образом проводить обработкой соответствующих промежуточных соединений формул (ΧΧν-а) и (ΧΧν-с) Ν,Ο-диметилгидроксиламином в присутствии подходящего основания, такого как, например, изопропилмагнийхлорид, в подходящем инертном в условиях реакции растворителе, таком как, например, дихлорметан, при низкой температуре, такой как, например, -78°С, например, в течение 1 ч и затем при умеренно высокой температуре, такой как, например, 25°С, например, в течение 24 ч.

Промежуточные соединения формул (ΧΧν-а) и (ΧΧΥ-с), в которых Ζ¹ представляет собой подходящую защитную группу системы пиразола, такую как, например, диметилсульфамоильная группа, являются коммерчески доступными.

Кроме того, промежуточные соединения формул (ΧΙΙΙ-а) и (ΧΙΙΙ-с), в которых К⁶ представляет собой водород, на схеме реакции (13) можно получить из соответствующих промежуточных соединений формул (ΧΧνΙ-а) и (ΧΧνΙ-с), в которых Ζ³ представляет собой защитную группу для аминов, такую как, например, трет-бутоксикарбонильная группа (стадия Е реакции), известными в данной области процедурами Ν-снятия защиты, таким как процедуры, описанные на схеме реакции (11) (стадия Е реакции).

Промежуточные соединения формул (ΧΧνΙ-а) и (ΧΧνΙ-с) на схеме реакций (13) можно получить взаимодействием промежуточных соединений формул (ΧΧνΙΙ-а) и (ΧΧνΙΙ-с) известными в данной области процедурами образования кольца пиразола (стадия Ь реакции). Указанное образование кольца пиразола можно подходящим образом проводить обработкой соответствующих промежуточных соединений формул (ΧΧνΙΙ-а) и (ΧΧνΙΙ-с) в подходящем инертном растворителе, таком как, например, этанол, в присутствии гидразина, при умеренно высокой температуре, такой как, например, 25°С, например, в течение 1 ч.

Промежуточные соединения формул (ΧΧνΙΙ-а) и (ΧΧνΙΙ-с) на схеме реакций (13) можно получить взаимодействием промежуточных соединений формул (ΧΧνΊΙΙ-а) и (ΧΧνΙΙΙ-с) известными в данной области процедурами окисления спиртовой группы в карбонил, таким как процедуры, описанные на схеме реакций (11) (стадия Н реакции).

- 12 021723

Е: Ν-удаление защиты.

Ь: образование кольца пиразола.

Н: окисление спиртовой группы в карбонил.

М: превращение альдегидной группы в гидроксиалкинил.

Промежуточные соединения согласно формулам (ΧΧνΐΙΙ-а) и (ΧΧνΐΙΙ-с) на приведенной выше схеме реакций (13) можно получить взаимодействием промежуточных соединений формул (ΧΧΙΧ-а) и (ΧΧΙΧ-с) известными в данной области процедурами превращения альдегидной группы в гидроксиалкинил (стадии М реакции). Указанное превращение можно подходящим образом проводить обработкой соответствующих промежуточных соединений формул (ΧΧΙΧ-а) и (ΧΧΙΧ-с) подходящим магниевым реагентом, таким как, например, этинилмагнийбромид, в подходящем, инертном в условиях реакции растворителе, таком как, например, тетрагидрофуран, при низкой температуре, такой как, например, 0°С, например, в течение 10 мин и затем при умеренно высокой температуре, такой как, например, 25°С, например, в течение 30 мин.

Промежуточные соединения формул (ΧΧΙΧ-а) и (ΧΧΙΧ-с) на приведенной выше схеме реакций (13) можно получить взаимодействием промежуточных соединений формул (ХХХ-а) и (ΧΧΧ-с) известными в

- 13 021723 данной области процедурами окисления спиртовой группы в карбонил, такими как процедуры, описанные на схеме реакций (11) (стадия Н реакции).

Промежуточные соединения формул (ХХХ-а) и (ХХХ-с), в которых Ζ³ представляет собой защитную группу для аминов, такую как, например, трет-бутоксикарбонильная группа, обычно получают известными в данной области процедурами типа 81гссксг. описанными в литературе.

Фармацевтические композиции

Настоящее изобретение также относится к композициям для предотвращения или лечения заболеваний, при которых ингибирование β-секретазы является благоприятным, таких как болезнь Альцгеймера (ΑΌ), умеренное когнитивное расстройство, старение, деменция, деменция с тельцами Леви, синдром Дауна, деменция, связанная с инсультом, деменция, связанная с болезнью Паркинсона, и деменция, связанная с β-амилоидом. Указанные композиции содержат терапевтически эффективное количество соединения формулы (Ι) и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

Хотя активный ингредиент можно вводить отдельно, предпочтительным является его применение в составе фармацевтической композиции. Соответственно этому настоящее изобретение относится далее к фармацевтической композиции, содержащей соединение согласно настоящему изобретению вместе с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Носитель или разбавитель должен быть приемлемым в смысле совместимости с другими ингредиентами композиции и должен быть невредным для его реципиентов.

Фармацевтические композиции данного изобретения можно получить любыми способами, хорошо известными в области фармации. Терапевтически эффективное количество конкретного соединения в форме основания или в форме аддитивной соли, в качестве активного ингредиента объединяют с образованием однородной смеси с фармацевтически приемлемым носителем, который может принимать различные формы в зависимости от формы препарата, требуемого для введения. Эти фармацевтические композиции являются желательными в виде дозированной лекарственной формы, подходящей предпочтительно для системного введения, такого как пероральное, чрескожное или парентеральное введение, или местного введения, такого как введение посредством ингаляции, спрея для носа, глазных капель или посредством крема, геля, шампуня или тому подобного. Например, при получении композиций в пероральной лекарственной форме можно применять любую из обычных фармацевтических сред, таких как, например, вода, гликоли, масла, спирты и тому подобное, в случае пероральных жидких препаратов, таких как суспензии, сиропы, эликсиры и растворы; или твердые носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, смазывающие вещества, связывающие вещества, дезинтегрирующие агенты и тому подобное в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток. Из-за легкости их введения таблетки и капсулы представляют собой наиболее подходящую пероральную дозированную лекарственную форму, в этом случае, несомненно, применяют твердые фармацевтические носители. Для парентеральных композиций носитель обычно содержит стерильную воду, по меньшей мере, в значительном количестве, хотя могут быть включены другие ингредиенты, например, для повышения растворимости. Например, можно получить растворы для инъекций, в которых носитель содержит солевой раствор, раствор глюкозы или смесь солевого раствора и раствора глюкозы. Можно также получить суспензии для инъекций, в этом случае можно применять подходящие жидкие носители, суспендирующие агенты и тому подобное. В композициях, подходящих для подкожного введения, носитель необязательно содержит повышающий проникновение агент и/или подходящий смачивающий агент, необязательно в сочетании с подходящими добавками любой природы в небольших пропорциях, такие добавки не оказывают никакие существенные вредные действия на кожу. Указанные добавки могут облегчить введение в кожу и/или могут быть полезными при получении желаемых композиций. Эти композиции можно вводить различными путями, например в виде чрескожного пластыря, в виде пятна или в виде мази.

Особенно подходящим является изготовление вышеуказанных фармацевтических композиций в дозированной лекарственной форме для простоты введения и однородности дозировки. Дозированная лекарственная форма, применяемая в описании и формуле изобретения, относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единичных доз, причем каждая единица содержит заданное количество активного ингредиента, рассчитанное для получения желаемого терапевтического действия, в сочетании с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами таких дозированных лекарственных форм являются таблетки (включая таблетки с насечками или таблетки, покрытые оболочкой), капсулы, пилюли, пакетики с порошком, облатки, растворы или суспензии для инъекции, чайные ложки с препаратом, столовые ложки с препаратом и тому подобное, и их сегрегированные многократные дозы.

Точная дозировка и частота введения зависят от конкретного применяемого соединения формулы (Ι), конкретного подвергаемого лечению состояния и тяжести состояния, подвергаемого лечению, возраста, массы, пола, степени нарушения и общего физического состояния конкретного пациента, а также другой лекарственной терапии, которую может принимать индивидуум, что хорошо известно специалистам в данной области. Кроме того, очевидно, что указанное эффективное суточное количество можно уменьшить или увеличить в зависимости от реакции подвергаемого лечению субъекта и/или в зависимости от оценки врача, прописывающего соединения настоящего изобретения.

- 14 021723

В зависимости от способа введения фармацевтическая композиция будет содержать от 0,05 до 99 мас.%, предпочтительно от 0,1 до 7 0 мас.%, более предпочтительно от 0,1 до 50 мас.% активного ингредиента и от 1 до 99,95 мас.%, предпочтительно от 30 до 99,9% мас.%, более предпочтительно от 50 до 99,9 мас.% фармацевтически приемлемого носителя, причем все проценты основаны на общей массе композиции.

Данные соединения можно применять для системного введения, такого как пероральное, чрескожное или парентеральное введение, или местного введения, такого как введение посредством ингаляции, спрея для носа, глазных капель или посредством крема, геля, шампуня или тому подобного. Соединения предпочтительно вводят перорально. Точная дозировка и частота введения зависят от конкретного применяемого соединения согласно формуле (Ι), конкретного подвергаемого лечению состояния, тяжести состояния, подвергаемого лечению, возраста, массы, пола, степени нарушения и общего физического состояния конкретного пациента, а также другой лекарственной терапии, которую может принимать индивидуум, что хорошо известно специалистам в данной области. Кроме того, очевидно, что указанное эффективное суточное количество можно уменьшить или увеличить в зависимости от реакции подвергаемого лечению субъекта и/или в зависимости от оценки врача, прописывающего соединения настоящего изобретения.

Количество соединения формулы (Ι), которое может быть объединено с веществом-носителем для изготовления лекарственной формы для разового применения, будет изменяться в зависимости от подвергаемого лечению заболевания, вида млекопитающего и конкретного способа введения. Тем не менее, в качестве общего руководства подходящие единичные дозы соединений настоящего изобретения могут, например, предпочтительно содержать от 0,1 до 1000 мг активного вещества. Предпочтительная единичная доза составляет от 1 до приблизительно 500 мг. Более предпочтительной единичной дозой является доза от 1 до приблизительно 300 мг. Еще более предпочтительной дозой является доза от 1 до 100 мг. Такие единичные дозы можно вводить более одного раза в день, например 2, 3, 4, 5 или 6 раз в день, но предпочтительно 1 или 2 раза в день, так, чтобы общая доза для взрослого пациента массой 70 кг была в диапазоне от 0,001 до приблизительно 15 мг на 1 кг массы субъекта на одно введение. Предпочтительная доза составляет от 0,01 до приблизительно 1,5 мг на 1 кг массы субъекта на одно введение, и такая терапия может продолжаться в течение ряда недель или месяцев, а в некоторых случаях лет. Однако должно быть понятно, что конкретный уровень дозы для любого конкретного пациента будет зависеть от целого ряда факторов, включающих в себя активность конкретного используемого соединения, возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол и питание подвергаемого лечению пациента; время и путь введения; скорость выведения; другие лекарственные средства, которые ранее были введены, и тяжести конкретного заболевания, подвергаемого лечению, что хорошо знают специалисты в данной области.

В некоторых случаях может быть необходимо применять дозы вне этих диапазонов, что должно быть очевидно специалистам в данной области. Кроме того, обращается внимание на то, что клиницист или лечащий врач должен знать, как и когда начать, прервать, регулировать или прекратить терапию в зависимости от реакции отдельного пациента.

Имеется в виду, что следующие примеры иллюстрируют, но не ограничивают объем настоящего изобретения.

Экспериментальная часть

В дальнейшем т.пл означает точку плавления, вод. означает водный, р.с. означает реакционную смесь, к.т. означает комнатную температуру, ΌΙΡΕΑ означает диизопропилэтиламин, ΌΙΡΕ означает диизопропиловый простой эфир, Εΐ₂Ο означает диэтиловый простой эфир, ТГФ означает тетрагидрофуран, ДМФА означает диметилформамид, ΌίΜ означает дихлорметан, АсОЕГ означает этилацетат, АсОН означает уксусную кислоту, МеОН означает метанол, ΕΐΟΗ означает этанол, рац. означает рацемический, нас. означает насыщенный, 8РС означает сверхкритическую жидкостную хроматографию, 8РС-МС означает сверхкритическую жидкостную хроматографию/массспектрометрию, ЬСМ§ означает жидкостную хроматографию/масс-спектрометрию, ВЭЖХ означает высокоэффективную жидкостную хроматографию, ΌΜΤΜΜ означает хлорид 4-(4,6-диметокси-1,3,5триазин-2-ил)-4-метилморфолиния, НАТИ означает гексафторфосфат О-(7-азабензотриазол-1-ил)Ν,Ν,Ν',Ν'-тетраметилурония.

А. Получение промежуточных соединений.

Пример А1. Получение промежуточного соединения 1: рац-2-амино-2-(3-бромфенил)пропаннитрила

Триметилсилилцианид (20 г, 200 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору 3бромацетофенона (20 г, 100 ммоль) и ΝΗ₄Ο (11 г, 200 ммоль) в растворе ΝΗ,/МсОН (400 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 дней. Затем растворитель упаривали в вакууме и остаток помещали в АсОЕ1 (100 мл). Твердое вещество отфильтровывали и фильтрат упаривали в вакуу- 15 021723 ме, получая при этом рац-2-амино-2-(3-бромфенил)пропионитрил (20 г, выход 86%), который применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

Пример А2. Получение промежуточного соединения 2: рац-метил-2-амино-2-(3-бромфенил)пропаноата

рац-2-Амино-2-(3-бромфенил)пропионитрил (20 г, 88,9 ммоль) растворяли в растворе НС1/МеОН (500 мл) и смесь кипятили с обратным холодильником в течение 4 дней. После охлаждения до комнатной температуры добавляли АсОЕ1 (100 мл) и воду (100 мл) и смесь экстрагировали АсОЕ! (2x100 мл). Объединенные водные слои подщелачивали водным раствором аммиака до рН 8 и экстрагировали АсОЕ! (5x100 мл). Объединенные органические слои сушили (Ыа₂8О₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме, получая при этом метиловый эфир рац-2-амино-2-(3-бромфенил)пропионовой кислоты (10,6 г, 46% выход) в виде масла.

Пример А3. Получение промежуточного соединения 3: рац-2-амино-2-(3-бромфенил)пропан-1-ола

Литийалюминийгидрид (1М в ТГФ; 22 мл, 22 ммоль) добавляли по каплям к перемешиваемому раствору метилового эфира рац-2-амино-2-(3-бромфенил)пропионовой кислоты (7,5 г, 29,1 ммоль) в ТГФ (200 мл) при -15°С. Смесь оставляли для медленного прогревания до 0°С в течение 1 ч. Затем по каплям добавляли еще ТГФ (150 мл) и нас. раствор Ыа₂ЗО₄ до тех пор, пока больше не образовывался водород. Затем добавляли безводный Ыа₂ЗО₄ и смесь перемешивали на протяжении ночи при комнатной температуре. Смесь фильтровали через диатомовую землю, промывали ТГФ и растворитель выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель, 7М раствор аммиака в растворе метанола в ЭСМ, от 0/100 до 3/97). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом рац-2-амино-2-(3-бромфенил)пропан-1-ол (5,70 г, выход 85%) в виде масла.

Пример А4. Получение промежуточного соединения 4: (К)-2-амино-2-(3-бромфенил)пропан-1-ола

Образец рац-2-амино-2-(3-бромфенил)пропан-1-ола (15,4 г) разделяли на соответствующие энантиомеры препаративной 8РС (на СЫга1рак® Эа1сс1 АЭх250 мм). Подвижная фаза (СО₂, МеОН с 0,2% ιΡγΝΗ₂), получая при этом (К)-2-амино-2-(3-бромфенил)пропан-1-ол (7,21 г, выход 40%).

α_η=-14,9° (589 нм, с 0,2946 мас./об.%, МеОН, 20°С).

Пример А5. Получение промежуточного соединения 5: рац-трет-бутилА-[1-(3-бромфенил)-2гидрокси-1 -метилэтил]карбамат

ди-трет-Бутилдикарбонат (4,84 г, 22,16 ммоль) добавляли порциями к перемешиваемому раствору рац-2-амино-2-(3-бромфенил)пропан-1-ола (1,7 г, 7,39 ммоль) в смеси нас. Ν;·ιΗί'.Ό₃, (15 мл) и ТГФ (15 мл) при 0°С. Смесь перемешивали при 0°С в течение 10 мин и при комнатной температуре в течение 15 ч. Смесь охлаждали на бане с ледяной водой и подкисляли при перемешивании до рН 1-2 посредством КН8О₄. Органический слой отделяли и водный слой далее экстрагировали АсОЕ!. Объединенные органические слои отделяли, сушили (МдЗО₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (диоксид кремния; АсОЕ! в ЭСМ, от 0/100 до 20/80). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом трет-бутиловый эфир рац-[1-(3-бромфенил)-2-гидрокси-1-метилэтил]карбаминовой кислоты (2,36 г, выход 93%) в виде бесцветного масла.

Пример А6. Получение промежуточного соединения 6: рац-трет-бутилА-[1-(3-бромфенил)-1метил-2-оксоэтил]карбамата

- 16 021723

Периодинан Десса-Мартина (3,55 г, 8,36 ммоль) добавляли порциями на протяжении 5 мин к раствору трет-бутилового эфира рац-[1-(3-бромфенил)-2-гидрокси-1-метилэтил]карбаминовой кислоты (2,3 г, 6,97 ммоль) в сухом ЭСМ (45 мл) при 0°С. Смесь перемешивали при 0°С в течение 10 мин и при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь гасили NаНСОз (водн. нас. раствор) с последующим гашением Ν;·ιΗ5>Ο₃ (водн. нас. раствор). Затем добавляли Εΐ₂Ο и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Органический слой отделяли и водный слой далее экстрагировали Εΐ₂Ο. Объединенные органические слои отделяли, сушили (М§§0₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; ЭСМ). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом трет-бутиловый эфир рац-[1-(3бромфенил)-1-метил-2-оксоэтил]карбаминовой кислоты (2 г, выход 80%) в виде бесцветного масла.

Пример А7. Получение промежуточного соединения 7: рац-трет-бутил-^[1-(3-бромфенил)-2гидрокси-1-метилбут-3-инил]карбамат

0,5М раствор этинилмагнийбромида в ТГФ (23,89 мл, 11,94 ммоль) по каплям добавляли к раствору трет-бутилового эфира рац-[1-(3-бромфенил)-1-метил-2-оксоэтил]карбаминовой кислоты (1,96 г, 5,97 ммоль) в ТГФ (60 мл) при 0°С в атмосфере азота. Смесь перемешивали при 0°С в течение 15 мин и при комнатной температуре в течение 30 мин. Смесь разбавляли ΝΗ₄Ο (водн. нас. раствор) и экстрагировали ЭСМ. Органический слой отделяли, сушили (М§§0₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме, получая при этом трет-бутиловый эфир рац-[1-(3-бромфенил)-2-гидрокси-1-метил-бут-3-инил]карбаминовой кислоты (2,11 г, выход 99%) в виде масла, которое применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

Пример А8. Получение промежуточного соединения 8: рац-трет-бутил-^[1-(3-бромфенил)-1метил-2-оксобут-3-инил]карбамата

Периодинан Десса-Мартина (3,04 г, 7,16 ммоль) добавляли порциями на протяжении 5 мин к раствору трет-бутилового эфира рац-[1-(3-бромфенил)-2-гидрокси-1-метилбут-3-инил]карбаминовой кислоты (2,12 г, 5,97 ммоль) в сухом ЭСМ (20 мл) при 0°С. Смесь перемешивали при 0°С в течение 10 мин и при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь гасили NаНСΟз (водн. нас. раствор) с последующим гашением Ν;·ιΗ5>Ο₄ (водный нас. раствор). Затем добавляли Εΐ₂Ο и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Органический слой отделяли и водный слой дополнительно экстрагировали Εΐ₂Ο. Объединенные органические слои отделяли, сушили (М§§0₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель, ЭСМ). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом трет-бутиловый эфир рац-[1-(3-бромфенил)-1-метил-2-оксобут-3-инил]карбаминовой кислоты (1,89 г, выход 90%) в виде масла.

Пример А9. Получение промежуточного соединения 9: рац-трет-бутил-^[1-(3-бромфенил)-1-(1Нпиразол-3 -ил)этил] карбамата

Гидразингидрат (2,48 мл, 51,10 ммоль) добавляли к раствору трет-бутилового эфира рац-[1-(3бромфенил)-1-метил-2-оксо-бут-3-инил]карбаминовой кислоты (1,8 г, 5,11 ммоль) в ΕΐΟΗ (30 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Растворитель удаляли в вакууме и остаток растворяли в ЭСМ и промывали водой. Органический слой отделяли, сушили (М^^Д фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силика- 17 021723 гель; АсОЕ! в ЭСМ. от 0/100 до 50/50). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом трет-бутиловый эфир рац-[1-(3-бромфенил)-1-(1Н-пиразол-3-ил)этил]карбаминовой кислоты (1,62 г, выход 87%) в виде твердого вещества белого цвета.

Пример А10. Получение промежуточного соединения 10: рац-1-(3-бромфенил)-1-(1Н-пиразол-3ил)этанамина

4М хлористо-водородную кислоту в диоксане (7,88 мл, 31,54 ммоль) добавляли к трет-бутиловому эфиру рац-[1-(3-бромфенил)-1-(1Н-пиразол-3-ил)этил]карбаминовой кислоты (1,65 г, 4,51 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Растворитель выпаривали в вакууме. Остаток суспендировали в ЭСМ и промывали ЫаНСОз (водн. нас. раствор). Органический слой отделяли, сушили (Мд§О₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме, получая при этом рац-1-(3-бромфенил)-1-(1Н-пиразол-3-ил)этиламин (1,2 г, выход 100%) в виде твердого вещества белого цвета, которое применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

Пример А11. Получение промежуточного соединения 11: рац-Ы-[1-(3-бромфенил)-1-(1Н-пиразол-3ил)этил] -2-хлорацетамида

ΌΙΡΕΑ (1,18 мл, 6,77 ммоль) добавляли к раствору рац-1-(3-бромфенил)-1-(1Н-пиразол-3ил)этиламина (1,2 г, 4,51 ммоль) в ЭСМ (20 мл) и смесь охлаждали на ледяной бане. Затем добавляли хлорацетилхлорид (0,40 мл, 4,96 ммоль) и смесь перемешивали при 0°С в течение 3 ч. Смесь разбавляли ΝΗ.-,Ο (водн. нас. раствор) и экстрагировали ЭСМ. Органический слой отделяли, сушили (Мд§О₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэшхроматографией (силикагель, АсОЕ! в ЭСМ, от 0/100 до 20/80). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в этаноле (10 мл) и NаНСО₃ (водн. нас. раствор) (1 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Смесь разбавляли водой и продукт экстрагировали ЭСМ. Объединенные органические слои концентрировали в вакууме, получая при этом рац-Ν[1-(3-бромфенил)-1-(1Н-пиразол-3-ил)этил]-2-хлорацетамид (1,22 г, выход 79%) в виде бесцветного масла, которое применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

Пример А12. Получение промежуточного соединения 12: рац-4-(3-бромфенил)-4-метил-4,5дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-6-она

Раствор рац^-[1-(3-бромфенил)-1-(1Н-пиразол-3-ил)этил]-2-хлорацетамида (1,22 г, 3,56 ммоль) в ТГФ (40 мл) по каплям добавляли к суспензии гидрида натрия (0,28 г, 7,12 ммоль) в ТГФ (40 мл) при 0°С в атмосфере азота. Смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч. Смесь разбавляли водой и продукт экстрагировали ЭСМ. Органический слой отделяли, сушили (Мд§О₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель: АсОЕ! в ЭСМ, от 50/50 до 100/0). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом рац-4-(3бромфенил)-4-метил-4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-он (0,7 г, выход 64%) в виде твердого вещества белого цвета.

Пример А13. Получение промежуточного соединения 13: рац-4-(3-бромфенил)-4-метил-4,5дигидропиразоло [1,5-а] пиразин-6-тиона

Пентасульфид фосфора (1,02 г, 4,57 ммоль) добавляли к раствору рац-4-(3-бромфенил)-4-метил-4,5дигидропиразоло [1,5-а]пиразин-6-она (0,7 г, 2,29 ммоль) в пиридине (10 мл) и смесь нагревали при 95°С в течение 18 ч. Затем растворитель выпаривали в вакууме и остаток очищали колоночной флэшхроматографией (силикагель; раствор АсОЕ! в ЭСМ, от 0/100 до 10 0/0). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом рац-4-(3-бромфенил)-4-метил-4,5-дигидропиразоло[1,5- 18 021723

а]пиразин-6-тион (0,45 г, выход 61%) в виде твердого вещества белого цвета.

Пример А14. Получение промежуточного соединения 14: рац-4-(3-бромфенил)-4-метил-4,7-

ΝΗ.·|Ο (0,15 г, 2,79 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору рац-4-(3-бромфенил)-4-метил4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-тиона (0,45 г, 1,40 ммоль) в ЕЮН (50 мл) и смесь нагревали при 80°С в течение 28 ч. Растворитель удаляли в вакууме и остаток растворяли в ЭСМ и промывали водой. Органический слой отделяли, сушили (Мд§О₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; 7М раствор аммиака в растворе метанола в АсОЕЬ от 0/100 до 20/80). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом рац-4-(3-бромфенил)-4-метил-4,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-иламин (0,42 г, выход 99%) в виде желтого твердого вещества.

Пример А15. Получение промежуточного соединения 15: рац-4-[3-(бензгидрилиденамино)фенил]-4метил-4,7 -дигидропиразоло [1,5-а] пиразин-6 -амина

Толуол (10 мл) добавляли к смеси рац-4-(3-бромфенил)-4-метил-4,7-дигидропиразоло[1,5а]пиразин-6-иламина (0,39 г, 1,28 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладия(0) (0,12 г, 0,13 ммоль), рац-2,2'-бис(дифенилфосфино)-1,1'-бинафтила (0,24 г, 0,38 ммоль) и трет-бутоксида натрия (0,22 г, 2,3 ммоль) в запаянной трубке в атмосфере азота при комнатной температуре. Смесь продували азотом в течение нескольких минут и затем добавляли имин бензофенона (0,43 мл, 2,56 ммоль) и смесь перемешивали при 100°С в течение 2 ч. После охлаждения смесь разбавляли водой и экстрагировали ЭСМ. Органический слой отделяли, сушили (Мд§О₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (диоксид кремния; 7М раствор аммиака в растворе метанола в ЭСМ, от 0/100 до 3/97). Требуемые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом рац-4-[3 -(бензгидрилиденамино)фенил] -4-метил-4,7-дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-6-иламин (0,37 г, выход 70%) в виде желтой пены.

Пример А16. Получение промежуточного соединения 16: рац-4-(3-аминофенил)-4-метил-4,7-

37% хлористо-водородную кислоту в Н₂О (0,14 мл) добавляли к раствору рац-4-[3(бензгидрилиденамино)фенил]-4-метил-4,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-иламина (0,37 г, 0,9 ммоль) в изопропаноле (10 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Добавляли ЕьО и смесь перемешивали в течение 15 мин. Осажденное твердое вещество отделяли фильтрованием, промывали ЕьО и сушили в вакууме. Остаток суспендировали в ЭСМ и промывали NаНСОз (водн. нас. раствор). Органический слой отделяли, сушили (Мд§О₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме, получая при этом рац-4-(3-аминофенил)-4-метил-4,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-амин (0,21 г, выход 97%) в виде твердого вещества белого цвета, которое применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

Пример А17. Получение промежуточного соединения 17: 1Н-пиразол-3-карбоновой кислоты

Раствор перманганата калия (16,17 г, 102,31 ммоль) в воде (150 мл) добавляли к раствору 3метилпиразола (4,2 г, 51,15 ммоль) в воде (100 мл) и смесь кипятили с обратным холодильником на протяжении ночи. После охлаждения до комнатной температуры нерастворимое вещество удаляли фильтрованием. Фильтрат концентрировали до 30 мл и 2н. НС1 добавляли до осаждения твердого вещества.

- 19 021723

Твердое вещество отделяли фильтрованием, промывали холодной водой и сушили в вакууме, получая при этом 1Н-пиразол-3-карбоновую кислоту (3,1 г, выход 54%) в виде твердого вещества белого цвета, которое применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

Пример А18. Получение промежуточного соединения 18: метил-1Н-пиразол-3-карбоксилата

Серную кислоту (5,8 мл) добавляли по каплям к перемешиваемому раствору 1Н-пиразол-3карбоновой кислоты (1 г, 8,92 ммоль) в МеОН (65 мл) при 0°С. После завершения добавления смеси предоставляли возможность для нагревания до комнатной температуры и перемешивали в течение 18 ч. Смесь концентрировали в вакууме и остаток растворяли в воде и подщелачивали Ν;·ιΗίΌ₃, (водн. нас. раствор). Смесь экстрагировали ЛсОЕУ Органический слой отделяли, сушили (Мд§О₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме, получая при этом метиловый эфир 1Н-пиразол-3-карбоновой кислоты (0,7 г, выход 62%) в виде твердого вещества белого цвета, которое применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

Пример А19. Получение промежуточного соединения 19: метил-1-(диметилсульфамоил)-1Нпиразол-3 -карбоксилата

Гидрид натрия (1,57 г, 41,03 ммоль) добавляли к раствору метилового эфира 1Н-пиразол-3карбоновой кислоты (3,45 г, 27,36 ммоль) в ТГФ (20 мл) при 0°С. Смесь перемешивали при 0°С в течение 30 мин. Затем добавляли диметилсульфамоилхлорид (4,41 мл, 41,03 ммоль) и смесь оставляли для нагревания до комнатной температуры и перемешивали в течение 18 ч. Смесь разбавляли водой и продукт экстрагировали АсОЕ1. Органический слой отделяли, сушили (М§§0₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; АсОЕ1 в ЭСМ, от 0/100 до 10/90). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом метиловый эфир 1-диметилсульфамоил-1Н-пиразол-3-карбоновой кислоты (4,8 г, выход 75%) в виде бесцветного масла.

Пример А20. Получение промежуточного соединения 20: 1-(диметилсульфамоил)-№метокси-№ метил-1Н-пиразол-3-карбоксилата

Метиловый эфир 1-диметилсульфамоил-1Н-пиразол-3-карбоновой кислоты (4 г, 17,15 ммоль) и гидрохлорид Ν,Ο-диметилгидроксиламина (2,18 г, 22,29 ммоль) суспендировали в Ό0Μ (20 мл). Смесь продували азотом и охлаждали до -78°С. Затем по каплям добавляли раствор изопропилмагнийхлорида (2М В ТГФ) (24,01 мл, 48,02 ммоль). Когда добавление завершали, смесь оставляли для нагревания до комнатной температуры и перемешивали на протяжении ночи. Смесь гасили ΝΗ₄Ο1 (водн. нас. раствор) и продукт экстрагировали АсОЕЕ Органический слой отделяли, сушили (М§§0₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель, АсОЕ1 в ЭСМ. от 0/100 до 100/0). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом метоксиметиламид 1-диметилсульфамоил-1Н-пиразол-3-карбоновой кислоты (3,2 г, выход 71%) в виде бледно-желтого цвета масла.

Пример А21. Получение промежуточного соединения 21: 3-(3-хлорфенил)карбонил-^№диметил1Н-пиразол-1-сульфонамида

Раствор 3-хлорфенилмагнийбромида (0,5М в ТГФ) (15,89 мл, 7,95 ммоль) добавляли к раствору метоксиметиламида 1-диметилсульфамоил-1Н-пиразол-3-карбоновой кислоты (1,60 г, 6,11 ммоль) в ТГФ (20 мл) при -78°С в атмосфере азота. Смесь перемешивали при -78°С в течение 1 ч и затем дополнительно перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. Смесь гасили ΝΗ₄Ο (водн. нас. раствор) и

- 20 021723 продукт экстрагировали АсОЕ!. Органический слой отделяли, сушили (Мд§О₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; ЛсОЕ! в ЭСМ. от 0/100 до 10/90). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом диметиламид 3-(3-хлорбензоил)-1Н-пиразол-1-сульфоновой кислоты (1,68 г, выход 88%) в виде бледно-желтого твердого вещества.

Пример А22. Получение промежуточного соединения 22: 3-{[(трет-бутилсульфинил)имино]-(3хлорфенил)метил}-П,П-диметил-1Н-пиразол-1-сульфонамида

Изопропоксид титана(1У) (3,22 мл, 10,71 ммоль) добавляли к смеси диметиламида 3-(3хлорбензоил)-1Н-пиразол-1-сульфоновой кислоты (1,68 г, 5,35 ммоль) и 2-метил-2-пропансульфинамида (0,71 г, 5,89 ммоль) в толуоле (32 мл) в атмосфере азота. Смесь перемешивали при 110°С в течение 24 ч. Смесь охлаждали и выливали в солевой раствор при быстром перемешивании. Смесь фильтровали через диатомовую землю и осадок на фильтре промывали АсОЕ!. Фильтрат переносили в делительную воронку, где органический слой отделяли, сушили (М§§0₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; АсОЕ! в ΌΟΜ, от 0/100 до 10/90). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом диметиламид 3-[(3хлорфенил)-(2-метилпропан-2-сульфинилимино)метил]пиразол-1-сульфоновой кислоты (2,17 г, выход 97%) в виде желтого масла.

Пример А23. Получение промежуточного соединения 23: 3-[1-(трет-бутилсульфиниламино)-1-(3хлорфенил)этил] -Ν,Ν-диметил-1Н-пиразол-1 -сульфонамида

Метилмагнийбромид (15,08 мл, 21,11 ммоль) добавляли к раствору диметиламида 3-[(3хлорфенил)-(2-метилпропан-2-сульфинилимино)метил]пиразол-1-сульфоновой кислоты (2,2 г, 5,28 ммоль) в ТГФ (25 мл) при 0°С в атмосфере азота. Смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч, гасили ΝΠ·|0 (водн. нас. раствор) и продукт экстрагировали ΌΟΜ. Органический слой отделяли, сушили (Мд§О₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; АсОЕ! в ΌΟΜ, от 0/100 до 100/0). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом диметиламид 3-[1-(3-хлорфенил)-1-(2-метилпропан-2сульфиниламино)этил]пиразол-1-сульфоновой кислоты (2,28 г, выход 99%) в виде бесцветного масла, которое затвердевает при стоянии.

Пример А24. Получение промежуточного соединения 24: рац-1-(3-хлорфенил)-1-(1Н-пиразол-3ил)этанамина

4М хлористо-водородную кислоту в диоксане (19,79 мл, 79,15 ммоль) добавляли к раствору диметиламида 3-[1-(3-хлорфенил)-1 -(2-метилпропан-2-сульфиниламино)этил]пиразол-1 -сульфоновой кислоты (2,29 г, 5,28 ммоль) в МеОН (5 мл) и смесь перемешивали при 80°С в запаянной трубке в течение 18 ч. Растворитель выпаривали в вакууме. Остаток выливали в NаНСОз (водн. нас. раствор) и экстрагировали ΌΟΜ. Органический слой отделяли, сушили (Мд§О₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме, получая при этом рац-1-(3-хлорфенил)-1-(1Н-пиразол-3-ил)этиламин (1 г, выход 86%) в виде бледножелтого твердого вещества, которое применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

Пример А25. Получение промежуточного соединения 25: рац-2-хлор-^[1-(3-хлорфенил)-1-(1Нпиразол-3 -ил)этил] ацетамида

- 21 021723

Промежуточное соединение 25 синтезировали таким же способом, как способ, описанный в примере А11. Исходя из промежуточного соединения 24 (1 г, 4,51 ммоль), промежуточное соединение 25 получили (0,73 г, выход 54%) в виде твердого вещества белого цвета.

Пример А26. Получение промежуточного соединения 26: рац-4-(3-хлорфенил)-4-метил-4,5дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-6-она

Промежуточное соединение 26 синтезировали таким же способом, как способ, описанный в примере А12. Исходя из промежуточного соединения 25 (0,73 г, 2,43 ммоль), промежуточное соединение 26 получили (0,45 г, выход 71%) в виде твердого вещества белого цвета.

Пример А27. Получение промежуточного соединения 27: рац-4-метил-4-(3-пиримидин-5-илфенил)4,5 -дигидропиразоло [1,5-а] пиразин-6 -он

Ацетат палладия(П) (0,017 г, 0,075 ммоль) добавляли к перемешиваемой суспензии рац-4-(3хлорфенил)-4-метил-4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-она (0,13 г, 0,50 ммоль), пиримидин-5бороновой кислоты (0,19 г, 1,49 ммоль), 2-дициклогексилфосфино-2',6'-диметоксибифенила (0,061 г, 0,149 ммоль) и фосфата калия (0,21 г, 0,99 ммоль) в толуоле (5 мл) и ΕΐΟΗ (0,5 мл) при комнатной температуре и в атмосфере азота. Смесь перемешивали при 150°С в течение 30 мин в условиях микроволнового излучения. Затем смесь фильтровали через диатомовую землю и промывали АсОЕР Фильтрат выпаривали в вакууме. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; АсОЕР). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом рац-4-метил-4-(3-пиримидин-5илфенил)-4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-он (0,09 г, выход 59%) в виде твердого вещества белого цвета.

Пример А28. Получение промежуточного соединения 28: рац-4-метил-4-(3-пиримидин-5-илфенил)4,5 -дигидропиразоло [1,5-а] пиразин-6 -тиона

Реагент Лавессона (0,14 г, 0,35 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору рац-4-метил-4-(3пиримидин-5-илфенил)-4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-тиона (0,09 г, 0,30 ммоль) в пиридине (2 мл) при комнатной температуре. Смесь нагревали при 95°С в течение 18 ч. Растворитель выпаривали в вакууме и неочищенный продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; АсОЕР в Ό0Μ, от 0/100 до 20/80). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом рац-4-метил-4-(3-пиримидин-5-ил-фенил)-4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-тион (0,02 г, выход 21%) в виде твердого вещества белого цвета.

Пример А29. Получение промежуточного соединения 29: рац-4-[3-(5-метоксипиридин-3-ил)фенил]4 -метил-4,5 -дигидропиразоло [1,5-а] пиразин-6 -она

Ацетат палладия(11) (0,022 г, 0,097 ммоль) добавляли к перемешиваемой суспензии рац-4-(3хлорфенил)-4-метил-4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-она (0,17 г, 0,65 ммоль), 5-метоксипиридин-3бороновой кислоты (0,15 г, 0,97 ммоль), 2-дициклогексилфосфино-2',6'-диметоксибифенила (0,080 г, 0,195 ммоль) и фосфата калия (0,28 г, 1,30 ммоль) в толуоле (2 мл) и ΕΐΟΗ (0,2 мл) при комнатной тем- 22 021723 пературе и в атмосфере азота. Смесь перемешивали при 150°С в течение 30 мин в условиях микроволнового излучения. Затем смесь фильтровали через диатомовую землю и промывали АсОЕ!. Фильтрат выпаривали в вакууме. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; АсОЕ!). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом рац-4-[3-(5-метоксипиридин-3ил)фенил]-4-метил-4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-он (0,11 г, выход 51%) в виде твердого вещества белого цвета.

Пример А30. Получение промежуточного соединения 30: рац-4-[3-(5-метоксипиридин-3-ил)фенил]4 -метил-4,5 -дигидропиразоло [1,5-а] пиразин-6 -тио на

Пиридин (3 мл) добавляли к смеси рац-4-[3-(5-метоксипиридин-3-ил)фенил]-4-метил-4,5дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-она (0,11 г, 0,31 ммоль) и пентасульфида фосфора (0,07 г, 0,31 ммоль), смесь нагревали при 80°С в течение 5 ч. Затем добавляли еще пентасульфид фосфора (0,07 г, 0,31 ммоль) и смесь нагревали при 100°С в течение 18 ч. Затем растворитель выпаривали в вакууме и остаток очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; МеОН в ЭСМ. от 0/100 до 3/97).

Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом рац-4-[3-(5метоксипиридин-3-ил)фенил]-4-метил-4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-тион (0,1 г, выход 93%) в виде твердого вещества белого цвета.

Пример А31. Получение промежуточного соединения 31: рац-4-(5-бром-2,4-дифторфенил)-4-метил4,5-дигидропиразоло [1,5-а] пиразин-6 -тиона

Пентасульфид фосфора (2,53 г, 11,40 ммоль) добавляли к раствору рац-4-(5-бром-2,4дифторфенил)-4-метил-4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-она (3 г, 8,77 ммоль), полученного по такой же методике, как описана ранее для получения промежуточного рац-4-(3-бромфенил)-4-метил-4,5дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-она, в пиридине (30 мл) и смесь нагревали при 95°С в течение 18 ч. Затем растворитель выпаривали в вакууме и остаток очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; АсОЕ! в ЭСМ, от 0/100 до 40/60). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом рац-4-(5-бром-2,4-дифторфенил)-4-метил-4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-тион (2,4 г, выход 76%) в виде твердого вещества белого цвета.

Пример А32. Получение промежуточного соединения 32: рац-4-(5-бром-2,4-дифторфенил)-4-метил4,5 -дигидропиразоло [1,5-а] пиразин-6 -амина

ΝΗ.·|Ο (0,72 г, 13,4 ммоль) добавляли к перемешиваемой суспензии рац-4-(5-бром-2,4дифторфенил)-4-метил-4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-тиона (2,4 г, 6,7 ммоль) в 2М растворе аммиака в Е!ОН (67 мл) и смесь нагревали при 85°С в течение 18 ч. Растворитель удаляли в вакууме и остаток суспендировали в ЭСМ и промывали водой. Органический слой отделяли, сушили (Мд§О₄), фильтровали и растворитель выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэшхроматографией (силикагель; 7М раствор аммиака в растворе метанола в АсОЕ!, от 0/100 до 20/80). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом рац-4-(5-бром-2,4дифторфенил)-4-метил-4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-иламин (1,8 г, выход 78%) в виде желтого твердого вещества.

Пример А33. Получение промежуточного соединения 33: (К)-трет-бутил-^[1-(3-бромфенил)-2гидрокси-1 -метилэтил] карбамата

Промежуточное соединение 33 синтезировали по такой же методике, как описана в примере А5.

- 23 021723

Исходя из (К)-2-амино-2-(3-бромфенил)пропан-1-ола (4,7 г, 20,43 ммоль), промежуточное соединение 33 получали (6,4 г, выход 95%) в виде бесцветного масла, которое отверждалось при стоянии.

Пример А34. Получение промежуточного соединения 34: (К)-трет-бутил-Щ1-(3-бромфенил)-1метил-2 -оксоэтил] карбамата

Промежуточное соединение 34 синтезировали по такой же методике, как описана в примере А6. Исходя из промежуточного соединения 33 (6,4 г, 19,38 ммоль), промежуточное соединение 34 получали (5,7 г, выход 90%) в виде бесцветного масла, которое отверждалось при стоянии.

Пример А35. Получение промежуточного соединения 35: диастереоизомерной смеси (1К,2К)- и (1К,2§)-трет-бутил^-[1-(3-бромфенил)-2-гидрокси-1-метилбут-3-инил]карбамата

Промежуточное соединение 35 синтезировали по такой же методике, как методика, описанная в примере А7. Исходя из промежуточного соединения 34 (5,7 г, 17,38 ммоль), промежуточное соединение 35 получали (5,4 г, выход 88%) в виде диастереоизомерной смеси в форме масла, которое использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

Пример А36. Получение промежуточного соединения 36: (К)-трет-бутил-^[1-(3-бромфенил)-1метил-2 -оксобут-3 -инил] карбамата

Промежуточное соединение 36 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А8. Исходя из промежуточного соединения 35 (5,4 г, 15,24 ммоль), промежуточное соединение 36 получали (5,3 г, выход 99%) в виде масла бледно-желтого цвета.

Пример А37. Получение промежуточного соединения 37: (К)-трет-бутил-^[1-(3-бромфенил)-1(1Н-пиразол-3 -ил)этил]карбамата

Промежуточное соединение 37 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А9. Исходя из промежуточного соединения 36 (5,3 г, 15,05 ммоль), промежуточное соединение 37 получали (5 г, выход 91%) в виде пены.

Пример А38. Получение промежуточного соединения 38: (К)-1-(3-бромфенил)-1-(1Н-пиразол-3ил)этанамина

Промежуточное соединение 38 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А10. Исходя из промежуточного соединения 37 (5 г, 13,65 ммоль), промежуточное соединение 38 получали (3,5 г, выход 96%) в виде твердого вещества белого цвета, которое использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

Пример А39. Получение промежуточного соединения 39: (К)-^[1-(3-бромфенил)-1-(1Н-пиразол-3ил)этил]-2-хлорацетамида

- 24 021723

Промежуточное соединение 39 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А11. Исходя из промежуточного соединения 38 (3,5 г, 13,15 ммоль), промежуточное соединение 39 получали (3,5 г, выход 78%) в виде бесцветного масла.

Пример А40. Получение промежуточного соединения 40: (К)-4-(3-бромфенил)-4-метил-4,5дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-6-она

Промежуточное соединение 40 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А12. Исходя из промежуточного соединения 39 (3,5 г, 10,22 ммоль), промежуточное соединение 40 получали (2,15 г, выход 69%) в виде твердого вещества белого цвета.

Пример А41. Получение промежуточного соединения 41: (К)-4-(3-бромфенил)-4-метил-4,5-

Промежуточное соединение 41 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А13. Исходя из промежуточного соединения 40 (2,1 г, 6,86 ммоль), промежуточное соединение 41 получали (1,8 г, выход 81%) в виде пены.

Пример А42. Получение промежуточного соединения 42: (К)-4-(3-бромфенил)-4-метил-4,7-

32% водный раствор аммиака (11,9 мл, 201,1 ммоль) добавляли к перемешиваемой смеси (К)-4-(3бромфенил)-4-метил-4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-тиона (1,8 г, 5,59 ммоль) в 7н. растворе аммиака в метаноле (11,97 мл, 83,79 ммоль) в запаянной трубке. Смесь перемешивали при 60°С в течение 90 мин. После охлаждения до комнатной температуры смесь разбавляли водой и Ыа₂СО₃ (водн. нас. раствор) и экстрагировали ИСМ. Органический слой отделяли, сушили (Ыа₂8О₄)), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; 7М раствор аммиака в растворе метанола в ИСМ, от 0/100 до 2/98, до 3/97, до 10/90). Требуемые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом (К)-4-(3-бромфенил)-4-метил-4,7дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-иламин (1,4 г, выход 82%) в виде желтого твердого вещества.

Пример А43. Получение промежуточного соединения 43: Ы,М-диметил-3-(трифторметил)-1Нпиразол-1 -сульфонамида /

1,4-Диазабицикло[2.2.2]октан (5,44 г, 48,5 ммоль) и диметилсульфамоилхлорид (4,76 мл, 44,46 ммоль) добавляли к раствору 3-(трифторметил)пиразола (5,5 г, 40,42 ммоль) в ацетонитриле (50 мл) при 0°С. Смеси предоставляли возможность для нагревания до комнатной температуры и перемешивали в течение 18 ч. Смесь концентрировали в вакууме и остаток разбавляли водой. Продукт экстрагировали АсОЕЕ Органический слой отделяли, сушили (М§§О₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; ИСМ). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом промежуточное соединение 43 (9,4 г, выход 95%) в виде бесцветного масла.

Пример 44. Получение промежуточного соединения 44: 5-[(3-бромфенил)(гидрокси)метил]-ЦЫдиметил-3 -(трифторметил) -1Н-пиразол-1 -сульфонамида

- 25 021723

Раствор бутиллития (2,5М в гексанах) (15,2 мл, 37,9 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 43 (8,4 г, 34,54 ммоль) в ТГФ (125 мл) при -78°С в атмосфере азота. Смесь перемешивали при -78°С в течение 45 мин и затем по каплям добавляли 2-бромбензальдегид (6 мл, 51,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при -78°С в течение 30 мин и давали ей возможность нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 ч. Смесь гасили ΝΗ₄0 (водн. нас. раствор) и продукт экстрагировали ЛсОЕГ Органический слой отделяли, сушили (М§§0₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; ЭСМ в гептанах, от 0/100 до 10/90). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом промежуточное соединение 44 (13,2 г, выход 89%) в виде бесцветного масла.

Пример А45. Получение промежуточного соединения 45: 5-[(3-бромфенил)карбонил]А^-диметил3-(трифторметил)-1Н-пиразол-1-сульфонамида

Диоксид марганца (15,4 г, 169,3 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 44 (14,5 г, 33,86 ммоль) в 1,4-диоксане (150 мл). Смесь перемешивали при 120°С в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали до 40°С и фильтровали через диатомовую землю. Растворитель выпаривали в вакууме, получая при этом промежуточное соединение 45 (25,6 г, выход 97%) в виде твердого вещества белого цвета, которое использовали как таковое на следующей стадии.

Пример А46. Получение промежуточного соединения 46: 5-[(3-бромфенил)[(трет-бутилсульфинил) имино]метил]А^-диметил-3-(трифторметил)-1Н-пиразол-1-сульфонамида

Изопропоксид титанаДУ) (11,35 мл, 46,9 ммоль) добавляли к смеси промежуточного соединения 45 (10 г, 23,46 ммоль) и 2-метил-2-пропансульфинамида (3,128 г, 25,81 ммоль) в толуоле (140 мл) в атмосфере азота. Смесь перемешивали при 110°С в течение 8 ч. Смесь охлаждали и выливали в солевой раствор при быстром перемешивании. Смесь фильтровали через диатомовую землю и осадок на фильтре промывали ЛсОЕГ Фильтрат переносили в делительную воронку и органический слой отделяли, сушили (М§§0₄), фильтровали и растворитель выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; ЛсОЕ! в ЭСМ. от 0/100 до 10/90). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом промежуточное соединение 46 (4 г, выход 32%) в виде желтого масла.

Пример А47. Получение промежуточного соединения 47: рац-5-[1-(3-бромфенил)-1-[(третбутилсульфинил)амино] этил] -Ν,Ν-диметил-3 -(трифторметил)-1Н-пиразол-1 -сульфонамида

- 26 021723

Метилмагнийбромид (3М раствор в диэтиловом простом эфире, 6,3 мл, 18,89 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 46 (4 г, 7,56 ммоль) в ТГФ (56 мл) при -78°С в атмосфере азота. Смесь перемешивали при -78°С в течение 30 мин и затем давали ей возможность нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 18 ч. Реакционную смесь гасили ΝΗ₄Ο1 (водн. нас. раствор) и продукт экстрагировали Ό0Μ. Органический слой отделяли, сушили (Μ§δΟ₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; ЛсОЕ1 в Ό0Μ, от 0/100 до 100/0). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом промежуточное соединение 47 (3,6 г, выход 87%) в виде бесцветного масла, которое отверждается при стоянии.

Пример А48. Получение промежуточного соединения 48: рац-5-[1-амино-1-(3-бромфенил)этил]^^диметил-3-(трифторметил)-1Н-пиразол-1-сульфонамида

4М хлористо-водородную кислоту в диоксане (24,7 мл, 99 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 47 (3,6 г, 6,6 ммоль) в МеОН (5 мл) и смесь перемешивали при 80°С в запаянной трубке в течение 18 ч. Растворитель выпаривали в вакууме. Остаток выливали в NаΗСΟз (водн. нас. раствор) и экстрагировали Ό0Μ. Органический слой отделяли, сушили (Μ§δΟ₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; раствор метанола в Ό0Μ, от 0/100 2/98). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом промежуточное соединение 48 (1,5 г, выход 54%) в виде бледно-желтого твердого вещества.

Пример А49. Получение промежуточного соединения 49: рац-И-{1-(3-бромфенил)-1-[3(трифторметил)-1Н-пиразол-5-ил]этил}-2-хлорацетамида

ΌΙΡΕΆ (1,9 мл, 11,2 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 48 (1,5 г, 4,49 ммоль) в Ό0Μ (20 мл) и смесь охлаждали на ледяной бане. Затем добавляли хлорацетилхлорид (0,429 мл, 5,38 ммоль) и смесь перемешивали при 0°С в течение 3 ч. Смесь разбавляли ΝΗ₄Ο1 (водн. нас. раствор) и экстрагировали Ό0Μ. Органический слой отделяли, сушили (Μ§δΟ₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель, ΆοΟΕί в Ό0Μ, от 0/100 до 30/70). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом промежуточное соединение 49 (1,1 г, выход 60%) в виде бледно-желтого твердого вещества.

Пример А50. Получение промежуточного соединения 50: рац-4-(3-бромфенил)-4-метил-2(трифторметил) -4,5 -дигидропиразоло [1,5-а] пиразин-6 -о на

Раствор промежуточного соединения 49 (1,1 г, 2.68 ммоль) в ТГФ (40 мл) добавляли по каплям к суспензии гидрида натрия (0,214 г, 5,36 ммоль) в ТГФ (40 мл) при 0°С в атмосфере азота. Смесь перемешивали 0°С в течение 1 ч. Смесь разбавляли водой и продукт экстрагировали Ό0Μ. Органический слой отделяли, сушили (Μ§δΟ₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; ЛЮЕ! в Ό0Μ, от 0/100 до 20/80). Целевые фракции со- 27 021723 бирали и концентрировали в вакууме, получая при этом промежуточное соединение 50 (0,92 г, выход 92%) в виде твердого вещества белого цвета.

Пример А51. Получение промежуточного соединения 51: рац-4-(3-бромфенил)-4-метил-2(трифторметил) -4,5 -дигидропиразоло [1,5-а] пиразин-6 -тиона

Пентасульфид фосфора (0,82 г, 3,69 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 50 (0,92 г, 2,46 ммоль) в пиридине (10 мл) и смесь нагревали при 90°С в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; АсОЕ! в ΌΟΜ, от 0/100 до 100/0). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом промежуточное соединение 51 (0,27 г, выход 28%) в виде бледно-желтого твердого вещества.

Пример А52. Получение промежуточного соединения 52: рац-4-(3-бромфенил)-4-метил-2(трифторметил) -4,5 -дигидропиразоло [1,5-а] пиразин-6 -амина

ΝΗ₄ί'Ί (0,148 г, 2,77 ммоль) добавляли к перемешиваемой суспензии промежуточного соединения 51 (0,27 г, 0,69 ммоль) в 2М растворе аммиака в Е!ОН (6 мл) и смесь нагревали при 80°С в течение 18 ч. Растворитель удаляли в вакууме и остаток суспендировали в ЭСМ и промывали водой. Органический слой отделяли, сушили (Мд§О₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; 7М раствор аммиака в растворе метанола в ЭСМ. от 0/100 до 2/98). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом промежуточный продукт 52 (0,195 г, выход 75%) в виде бежевого твердого вещества.

Пример А53. Получение промежуточного соединения 53: рац-5-[(5-бром-2-фторфенил)(гидрокси) метил]^Х-диметил-3-(трифторметил)-1Н-пиразол-1-сульфонамида

Промежуточное соединение 53 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А44. Исходя из промежуточного соединения 43 (17 г, 69,9 ммоль) промежуточное соединение 53 получали (28 г, выход 76%) в виде бесцветного масла.

Пример А54. Получение промежуточного соединения 54: рац-5-[(5-бром-2-фторфенил)карбонил]^^диметил-3-(трифторметил)-1Н-пиразол-1-сульфонамида

Вг

Промежуточное соединение 54 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А45. Исходя из промежуточного соединения 53 (28 г, 53,3 ммоль) промежуточное соединение 54 получали (25 г, выход 97%) в виде твердого вещества белого цвета, которое применяли как таковое на следующей стадии.

Пример А55. Получение промежуточного соединения 55: рац-5-[(5-бром-2-фторфенил)[(трет- 28 021723 бутилсульфинил)имино]метил]-Ы^-диметил-3-(трифторметил)-1Н-пиразол-1-сульфонамида

Промежуточное соединение 55 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А46. Исходя из промежуточного соединения 54 (25,6 г, 57,6 ммоль) промежуточное соединение 55 получали (21 г, выход 67%) в виде бледно-желтого твердого вещества.

Пример А56. Получение промежуточного соединения 56: рац-5-[1-(5-бром-2-фторфенил)-1-[(третбутилсульфинил)амино] этил] -Ν,Ν-диметил-3 -(трифторметил)-1Н-пиразол-1 -сульфонамида

Промежуточное соединение 56 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А47. Исходя из промежуточного соединения 55 (21 г, 38,36 ммоль) промежуточное соединение 56 получали (19 г, выход 88%) в виде бесцветного масла, которое отверждается при стоянии.

Пример А57. Получение промежуточного соединения 57: рац-1-(5-бром-2-фторфенил)-1-[3(трифторметил)-1Н-пиразол-5-ил]этанамина

1,25М хлористо-водородную кислоту в метаноле (159 мл, 199 ммоль) добавляли к промежуточному соединению 56 (18,7 г, 33,2 ммоль) и смесь перемешивали при 60°С в запаянной трубке в течение 3 ч. Растворитель выпаривали в вакууме. Остаток выливали в NаНСОз (вод. нас. раствор) и экстрагировали ЭСМ. Органический слой отделяли, сушили (Мд§О₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме, получая при этом промежуточное соединение 57 (11,5 г, выход 98%) в виде бледно-желтого твердого вещества, которое применяли как таковое на следующей стадии без дополнительной очистки.

Пример А58. Получение промежуточного соединения 58: рац-Ы-{1-(5-бром-2-фторфенил)-1-[3(трифторметил)-1Н-пиразол-5-ил]этил}-2-хлорацетамида

Промежуточное соединение 58 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А49. Исходя из промежуточного соединения 57 (11,5 г, 32,66 ммоль) промежуточное соединение 58 получали (6,6 г, выход 47%) в виде бледно-желтого твердого вещества.

Пример А59. Получение промежуточного соединения 59: рац-4-(5-бром-2-фторфенил)-4-метил-2(трифторметил)-4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-она

Промежуточное соединение 59 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А50. Исходя из промежуточного соединения 58 (6,6 г, 15,4 ммоль) промежуточное соединение 59

- 29 021723 получали (6 г, выход 99%) в виде твердого вещества белого цвета.

Пример А60. Получение промежуточного соединения 60: рац-4-(5-бром-2-фторфенил)-4-метил-2(трифторметил) -4,5 -дигидропиразоло [1,5-а] пиразин-6 -тиона

Пентасульфид фосфора (2,27 г, 10,2 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 59 (4 г, 10,2 ммоль) в диоксане (80 мл) и смесь нагревали при 80°С в течение 18 ч. Реакционную смесь фильтровали через диатомовую землю. Затем фильтрат упаривали в вакууме и остаток очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; ΌΟΜ). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом промежуточное соединение 60 (2,3 г, выход 55%) в виде бледно-желтого твердого вещества.

Пример А61. Получение промежуточного соединения 61: рац-4-(5-бром-2-фторфенил)-4-метил-2(трифторметил) -4,5 -дигидропиразоло [1,5-а] пиразин-6 -амина

Промежуточное соединение 61 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А52. Исходя из промежуточного соединения 60 (2 г, 4,9 ммоль) промежуточное соединение 61 получали (1,5 г, выход 7 8%) в виде твердого вещества белого цвета.

Пример А62. Получение промежуточного соединения 62: рац-4-[5-(бензгидрилиденамино)-2фторфенил] -4-метил-2-(трифторметил)-4,7-дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-6-амина

Р₃С

Промежуточное соединение 62 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А15. Исходя из промежуточного соединения 61 (0,67 г, 1,59 ммоль) промежуточное соединение 62 получали (0,53 г, выход 67%) в виде бледно-желтого твердого вещества.

Пример А63. Получение промежуточного соединения 63: рац-4-(5-амино-2-фторфенил)-4-метил-2(трифторметил)-4,7-дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-6-амина

Промежуточное соединение 63 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А16. Исходя из промежуточного соединения 62 (0,525 г, 1,07 ммоль) промежуточное соединение 63 получали (0,225 г, выход 64%) в виде бледно-желтого твердого вещества.

Пример А64. Получение промежуточного соединения 64: (5-бром-2-фторфенил)(оксо)уксусной кислоты

5'-Бром-2'-фторацетофенон [(СА§ 198477-89-3), г, 322 ммоль] и диоксид селена (71,6 г, 645 ммоль) растворяли в пиридине (520 мл). Реакционную смесь перемешивали при 100°С в течение 2 ч. Растворитель выпаривали и добавляли водный 1н. раствор НС1. Водный слой экстрагировали Е!ОАс. Объединенные органические слои сушили (Мд₂§О₄), фильтровали и концентрировали в вакууме, получая при этом промежуточное соединение 64 (62 г, выход 78%), которое применяли на следующей реакции.

Пример А65. Получение промежуточного соединения 65: трет-бутил-(5-бром-2-фторфенил)(оксо) ацетата

Тионилхлорид (72 г, 607 ммоль) добавляли по каплям к перемешиваемому раствору промежуточного соединения 64 (50 г, 202 ммоль) в толуоле (500 мл) при 0°С. Смесь перемешивали при 60°С в течение 1,5 ч. Растворители выпаривали в вакууме. Добавляли ЭСМ и затем смесь концентрировали снова в вакууме. Сырой продукт растворяли в ЭСМ (100 мл). Осторожно добавляли трет-бутанол (30 г, 404 ммоль), пиридин (16 мл, 202 ммоль) и безводный ЭСМ (100 мл). Смесь перемешивали при к.т. в течение 1,5 ч. Растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; ЭСМ). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом промежуточное соединение 65 (45,5 г, выход 74%).

Пример А66. Получение промежуточного соединения 66: (§)-1-метилэтил-(5-бром-2-фторфенил) [(трет-бутилсульфинил)имино]ацетата

Изопропоксид титанаДУ) (85 мл, 283 ммоль) добавляли к перемешиваемой смеси промежуточного соединения 65 (43 г, 142 ммоль) и (§)-2-метил-2-пропансульфинамида (25,8 г, 212 ммоль) в н-гептане (1000 мл). Смесь перемешивали при 80°С в течение 18 ч. Смесь частично концентрировали в вакууме, затем разбавляли Е!ОАс. Смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли воду. Образовавшуюся смесь фильтровали через подушку диатомовой земли и промывали Е!ОАс и водой. Органический слой отделяли, сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; элюенты н-гептан/Е!ОАс, от 90/10 до 8 0/20). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом промежуточное соединение 66 (44 г, выход 79%).

Пример А67. Получение промежуточного соединения 67: изопропил-(2К)-2-(5-бром-2-фторфенил)2-[[(§)-трет-бутилсульфинил]амино]-2-циклопропилацетата

Циклопропилмагнийбромид (0,5М, 174 мл, 87 ммоль) добавляли по каплям к перемешиваемому раствору промежуточного соединения 66 в ЭСМ (38 8 мл) при -78°С. Смесь перемешивали при такой температуре в течение 30 мин и затем реакцию гасили добавлением нас. водн. раствора ΝΗ₄Ο, с последующим добавлением воды. Смесь экстрагировали ЭСМ. Органический слой отделяли, сушили (Мд§О₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме, получая при этом промежуточное соединение 67 (26,4, выход 98%) в виде желтоватого масла, которое применяли как таковое на следующей стадии.

Пример А68. Получение промежуточного соединения 68: изопропил-(2К)-2-амино-2-(5-бром-2фтор фенил) -2 -циклопропилацетата

Раствор промежуточного соединения 67 (23,9 г, 55 ммоль) в 4М растворе НС1 в диоксане (27 мл) перемешивали при к.т. в течение 15 мин. Растворитель выпаривали в вакууме. Сырой продукт растворяли в Е!ОАс и добавляли нас. NаНСОз. Смесь перемешивали в течение 1 ч. Органический слой отделяли, сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали в вакууме, получая при этом промежуточное соедине- 31 021723 ние 68 (16,6 г, выход 91%) в виде желтоватого масла, которое применяли как таковое на следующей стадии.

Пример А69. Получение промежуточного соединения 69: (2К)-2-амино-2-(5-бром-2-фторфенил)-2циклопропилэтанола

Литийалюминийгидрид (1М в ТГФ, 38 мл, 38 ммоль) добавляли по каплям к перемешиваемому раствору промежуточного соединения 68 (16,6 г, 50,2 ммоль) в ТГФ (34 6 мл) при -15°С. Смесь перемешивали в течение 1 ч при медленном нагревании до 0°С. К смеси добавляли твердый декагидрат Ν;·ι₂δΟ₄ до тех пор, пока не наблюдали прекращения выделения газа. Смесь перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре. Смесь фильтровали через подушку диатомовой земли и промывали ТГФ. Собранный органический слой выпаривали досуха в вакууме и образовавшееся твердое вещество очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; 7н. ΝΗ₃ в смеси МЮН/ОСМ, от 0/100 до 3/97). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом промежуточное соединение 69 в виде желтого масла (13,8 г, выход количественный).

Пример А70. Получение промежуточного соединения 70: трет-бутил-[(1К)-1-(5-бром-2-фторфенил)1 -циклопропил-2-гидроксиэтил] карбамата

Промежуточное соединение 70 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А5. Исходя из промежуточного соединения 69 (4,35 г, 6,03 ммоль) промежуточное соединение 70 получали (3,29 г) в виде желтого масла, которое отверждалось при стоянии.

Пример А71

Получение промежуточного цикло пропил-2 -оксоэтил] карбамата соединения 71: трет-бутил-[(1К)-1-(5-бром-2-фторфенил)-1-

Промежуточное соединение 71 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А5. Исходя из промежуточного соединения 70 (4,52 г, 12,08 ммоль) промежуточное соединение 71 получали (4 г, выход 89%) в виде бледно-желтого цвета масла.

Пример А72. Получение промежуточного соединения 72: трет-бутил-[(1К)-1-(5-бром-2-фторфенил)1 -циклопропил-2-гидроксибут-3 -ин-1 -ил] карбамата

Промежуточное соединение 72 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А7. Исходя из промежуточного соединения 71 (4 г, 10,75 ммоль) промежуточное соединение 72 получали (3,9 г, выход 91%) в виде диастереомерной смеси в форме масла, которое применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

Пример А73. Получение промежуточного соединения 73: трет-бутил-[(1К)-1-(5-бром-2-фторфенил)1 -циклопропил-2-оксобут-3 -ин-1 -ил] карбамата

Промежуточное соединение 73 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А8. Исходя из промежуточного соединения 72 (3,9 г, 9,8 ммоль) промежуточное соединение 73 получали (3,4 г, выход 88%) в виде желтого масла.

Пример А74. Получение промежуточного соединения 74: трет-бутил-^[(К)-(5-бром-2- 32 021723 фторфенил)циклопропил-(1Н-пиразол-3 -ил)метил] карбамата

Промежуточное соединение 74 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А9. Исходя из промежуточного соединения 73 (3,4 г, 8,58 ммоль) промежуточное соединение 74 получали (3,45 г, выход 98%) в виде пены.

Пример А75. Получение промежуточного соединения 75: (К)-(5-бром-2-фторфенил)циклопропил(1Н-пиразол-3 -ил)метанамина

Промежуточное соединение 75 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А10. Исходя из промежуточного соединения 74 (3,45 г, 8,41 ммоль) промежуточное соединение 75 получали (2,85 г) в виде желтой пены, которую применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

Пример А76. Получение промежуточного соединения 76: ^[(К)-(5-бром-2-фторфенил)циклопропил-(1Н-пиразол-3 -ил)метил] -2 -хлорацетамида

Промежуточное соединение 76 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере Α11. Исходя из промежуточного соединения 75 (2,8 г, 9,03 ммоль) промежуточное соединение 76 получали (1,03 г, выход 30%) в виде твердого вещества.

Пример А77. Получение промежуточного соединения 77: (К)-4-(5-бром-2-фторфенил)-4циклопропил-4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-она

Промежуточное соединение 77 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А12. Исходя из промежуточного соединения 76 (0,765 г, 1,98 ммоль) промежуточное соединение 77 получали (0,52 г, выход 75%) в виде твердого вещества белого цвета.

Пример А78. Получение промежуточного соединения 78: (К)-4-(5-бром-2-фторфенил)-4циклопропил-4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-тиона

Промежуточное соединение 78 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А13. Исходя из промежуточного соединения 77 (0,62 г, 1,77 ммоль) промежуточное соединение 78 получали (0,46 г, выход 70%) в виде светло-красного твердого вещества.

Пример А79. Получение промежуточного соединения 79: (К)-4-(5-бром-2-фторфенил)-4цикло пропил-4,5 -дигидропиразоло [1,5-а] пиразин-6 -амина

- 33 021723

32% водный раствор аммиака (3 мл, 50,7 ммоль) добавляли к перемешиваемой смеси промежуточного соединения 78 (0,46 г, 1,26 ммоль) и 7н. раствора аммиака в метаноле (7 мл, 49 ммоль) в запаянной трубке. Смесь перемешивали при 70°С в течение 8 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь разбавляли водой и №₂СО₃ (водн. нас. раствор) и экстрагировали ЭСМ. Органический слой отделяли, сушили (№₂8О₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; 7М раствор аммиака в смеси метанола и ЭСМ, от 0/100 до 2/98, до 3/97, до 10/90). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом промежуточное соединение 79 (0,34 г, выход 78%) в виде желтой пены.

Пример А80. Получение промежуточного соединения 80: (К)-4-[5-(бензгидрилиденамино)-2фторфенил] -4-циклопропил-4,7-дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-6-амина

Промежуточное соединение 80 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А15. Исходя из промежуточного соединения 79 (0,34 г, 0,974 ммоль) промежуточное соединение 80 получали (0,38 г, выход 61%) в виде желтого твердого вещества.

Пример А81. Получение промежуточного соединения 81: (К)-4-(5-амино-2-фторфенил)-4циклопропил-4,7-дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-6-амина

Промежуточное соединение 81 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере А16. Исходя из промежуточного соединения 80 (0,38 г, 0,845 ммоль) промежуточное соединение 81 получали (0,16 г, выход 66%) в виде бледно-желтого твердого вещества.

Получение конечных соединений.

Пример В1. Получение соединения 1: рац-4-метил-4-(3-пиримидин-5-илфенил)-4,7дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-6-амина

ΝΗ.·|Ο (0,007 г, 0,121 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору промежуточного соединения 28 (0,026 г, 0,081 ммоль) в ЕЮН (3 мл) и смесь нагревали при 75°С в течение 18 ч. Растворитель удаляли в вакууме и остаток растворяли в ЭСМ и промывали водой. Органический слой отделяли, сушили (Мд§О₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; 7М раствор аммиака в смеси метанола и АсОЕ1, от 0/100 до 20/80). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом соединение 1 (0,02 г, выход 81%) в виде бледно-желтого твердого вещества.

Пример В2. Получение соединения 2: рац-4-[3-(5-метоксипиридин-3-ил)фенил]-4-метил-4,7дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-6-амина

Соединение 2 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере В1. Исходя из промежуточного соединения 30 (0,1 г, 0,285 ммоль) соединение 2 получали (0,06 г, выход 63%) в виде твердого вещества белого цвета.

Пример В3. Получение соединения 3: рац-№[3-(6-амино-4-метил-4,7-дигидропиразоло[1,5а]пиразин-4-ил)фенил]-5-хлорпиридин-2-карбоксамида

- 34 021723

Ν,Ν-Диметиланилин (0,24 мл, 1,92 ммоль) добавляли к суспензии 5-хлор-2-пиридинкарбоновой кислоты (0,15 г, 0,96 ммоль) и НАТи (0,40 г, 1,04 ммоль) в ИСМ (15 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. Затем добавляли промежуточное соединение 16 (0,21 г, 0,87 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Смесь разбавляли ΝΗ.·|Ο (водн. нас. раствор) и экстрагировали ИСМ. Органический слой отделяли, сушили (М§§О₄), фильтровали, и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; 7 М раствор аммиака в смеси метанола и ИСМ, от 0/100 до 5/95). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом соединение 3 (0,070 г, выход 21%) в виде твердого вещества белого цвета.

Пример В4. Получение соединения 4: рац-4-(2,4-дифтор-5-пиримидин-5-илфенил)-4-метил-4,7дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-6-амина

Тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (0,025 г, 0,02 ммоль) добавляли к перемешиваемой суспензии промежуточного соединения 32 (0,15 г, 0,44 ммоль), пиримидин-5-бороновой кислоты (0,16 г, 1,32 ммоль) и карбоната калия (0,18 г, 1,32 ммоль) в 1,4-диоксане (4 мл) и этаноле (0,4 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота. Смесь перемешивали при 150°С в течение 30 мин при микроволновом излучении. Затем смесь разбавляли водой и экстрагировали ИСМ. Органический слой отделяли, сушили (М§§О₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; 7М раствор аммиака в смеси метанола и ИСМ, от 0/100 до 3/97). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом соединение 4 (0,081 г, выход 54%) в виде твердого вещества белого цвета.

Пример В5. Получение соединения 7: (К)-4-(3'-метоксибифенил-3-ил)-4-метил-4,7дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-6-амина

Тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (0,028 г, 0,025 ммоль) добавляли к перемешиваемой суспензии промежуточного соединения 42 (0,15 г, 0,49 ммоль), 5-метоксипиридин-3-бороновой кислоты (0,23 г, 1,48 ммоль) и карбоната калия (0,20 г, 1,48 ммоль) в 1,4-диоксане (4 мл) и этаноле (0,4 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота. Смесь перемешивали при 150°С в течение 30 мин при микроволновом излучении. Затем смесь разбавляли водой и экстрагировали ИСМ. Органический слой отделяли, сушили (М§§О₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; 7М раствор аммиака в смеси метанола и ИСМ, от 0/100 до 3/97). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме, получая при этом соединение 7 (0,12 г, выход 73%) в виде твердого вещества белого цвета.

Пример В6. Получение соединения 10: (§*)^-[3-(6-амино-4-метил-4,7-дигидропиразоло[1,5а]пиразин-4-ил)-4-фторфенил]-5-хлорпиридин-2-карбоксамида и соединения 11: (К*)^-[3-(6-амино-4метил-4,7-дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-4-ил)-4-фторфенил] -5 -хлорпиридин-2-карбоксамида

Образец [3-(6-амино-4-метил-4,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-4-ил)-4-фторфенил]амида рац-5хлорпиридин-2-карбоновой кислоты (0,182 г) разделяли на соответствующие энантиомеры препаративной §РС на колонке СЫга1рак® АО Эа1се1 (10 мкм, 4,6x250 мм) при 35°С со скоростью потока 3,0 мл/мин. Подвижной фазой был СО₂, 50% этанол, 50% ЕЮН (содержащий 0,3% 1РгН₂) пропускали в тече- 35 021723 ние 7 мин, получая при этом соединение 11 (0,07 г; выход 38%) и соединение 10 (0,06 г, выход 33%).

Пример В7. Получение соединения 21: рац-4-[3-(5-метоксипиридин-3-ил)фенил]-4-метил-2(трифторметил)-4,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-амина и соединения 22: (К*)-4-[3-(5метоксипиридин-3 -ил)фенил] -4-метил-2-(трифторметил)-4,7-дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-6-амина и соединения 23: (§*)-4-[3-(5-метоксипиридин-3-ил)фенил]-4-метил-2-(трифторметил)-4,7-дигидропиразоло[1,5-а] пиразин-6 -амина

Тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (0,031 г, 0,027 ммоль) добавляли к перемешиваемой суспензии промежуточного соединения 52 (0,2 г, 0,54 ммоль), 5-метоксипиридин-3-бороновой кислоты (0,163 г, 1,07 ммоль) и карбоната калия (0,222 г, 1,61 ммоль) в 1,4-диоксане (6 мл) и этаноле (0,6 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота. Смесь перемешивали при 80°С в течение 24 ч. Затем смесь разбавляли водой и экстрагировали ЭСМ. Органический слой отделяли, сушили (М§§0₄), фильтровали и растворители выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; 7М раствор аммиака в смеси метанола и ЭСМ, от 0/100 до 3/97). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме. Остаток растирали в диэтиловом простом эфире, обрабатывали ультразвуком, фильтровали и сушили в вакууме при 50°С, получая при этом соединение 21 (0,13 г, выход 60%) в виде твердого вещества белого цвета. Это рацемическое соединение затем разделяли препаративной §РС на колонке СЫга1рак® ΛΌ-Η (20x250 мм), подвижная фаза (СО₂, ίΡτΟΗ с 0,3% ιΡγΝΗ₂), получая при этом соединение 22 (0,047 г, выход 22%) и соединение 23 (0,051 г, выход 24%) в виде чистых энантиомеров (оба в виде твердых соединений).

Пример В8. Получение соединения 24: рац-4-[5-(5-хлорпиридин-3-ил)-2-фторфенил]-4-метил-2(трифторметил)-4,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-амина и соединения 25: (К*)-4-[5-(5-хлорпиридин3-ил)-2-фторфенил]-4-метил-2-(трифторметил)-4,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-амина и соединения 26: (§*)-4-[5-(5-хлорпиридин-3-ил)-2-фторфенил]-4-метил-2-(трифторметил)-4,7-дигидропиразоло[1,5а] пиразин-6 -амина

Соединение 24 синтезировали такой же методикой, как методика, описанная в примере В7. Исходя из промежуточного соединения 61 (0,3 г, 0,77 ммоль) соединение 24 получали (0,21 г, выход 64%) в виде твердого вещества белого цвета. Это рацемическое соединение затем разделяли препаративной §РС на колонке СЫга1рак® АИ-Н (20x250 мм), подвижная фаза (СО₂, ίΡτΟΗ с 0,3% ιΡγΝΗ₂), получая при этом соединение 25 (0,089 г, выход 27%) и соединение 26 (0,092 г, выход 28%) в виде чистых энантиомеров (оба в форме твердых соединений).

Пример В9. Получение соединения 27: рац-^{3-[6-амино-4-метил-2-(трифторметил)-4,7дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-4-ил]-4-фторфенил}-3,5-дихлорпиридин-2-карбоксамида и соединения 28: (Κ*)-Ν-{ 3 -[6-амино-4-метил-2-(трифторметил)-4,7-дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-4-ил] -4-фторфенил}-3,5-дихлорпиридин-2-карбоксамида и соединения 29: (§*)-^{3-[6-амино-4-метил-2-(трифторметил)-4,7-дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-4-ил] -4-фторфенил}-3,5-дихлорпиридин-2-карбоксамида

3,5-Дихлор-2-пиридинкарбоновую кислоту (0,54 г, 0,81 ммоль) растворяли в МеОН (4 мл) и добавляли ЭМТММ (0,223 г, 0,81 ммоль). После перемешивания смеси в течение 5 мин при 0°С добавляли раствор промежуточного соединения 63 (0,22 г, 0,67 ммоль) в МеОН (4 мл) и смесь перемешивали в течение дополнительных 4 ч. Растворитель выпаривали в вакууме.

- 36 021723

Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; 7М раствор аммиака в растворе метанол/ЭСМ, от 0/100 до 5/95). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме. Остаток кристаллизовали из ЭРЕ, получая при этом соединение 27 (0,124 г, выход 37%) в виде твердого вещества белого цвета. Это рацемическое соединение затем разделяли препаративной 8РС на колонке С1йга1рак® АЭ-Н (20x250 мм), подвижная фаза (СО₂, Е!ОН с 0,3% 1Р^Н₂), получая при этом соединение 28 (0,038 г, выход 11%) и соединение 29 (0,036 г, выход 11%) в виде чистых энантиомеров (оба в форме твердых соединений).

Пример В10. Получение соединения 33: (К)-^{3-[6-амино-4-циклопропил-4,7-дигидропиразоло[1,5 -а] пиразин-4-ил] -4 -фторфенил} -5 -хлор-3 -фторпиридин-2-карбоксамида

5-Хлор-3-фторпиридин-2-карбоновую кислоту (0,052 г, 0,26 ммоль) растворяли в МеОН (1,5 мл) и добавляли ОМТММ (0,086 г, 0,31 ммоль). После перемешивания смеси в течение 5 мин при 0°С добавляли раствор промежуточного соединения 81 (0,074 г, 0,26 ммоль) в МеОН (1,5 мл) и смесь перемешивали в течение дополнительных 24 ч. Растворитель выпаривали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; 7М раствор аммиака в растворе метанол/ЭСМ, от 0/100 до 5/95). Целевые фракции собирали и концентрировали в вакууме. Остаток сушили в вакууме, получая при этом соединение 33 (0,084 г, выход 73%) в виде твердого вещества белого цвета.

Таблица 1

№ соед.	N° прим.	X'	X3	—1-Аг	Сг- стереохимия
1	В1	СН	СН	V	К5
2	В2	СН	СН	, ·. -О 1 N	КЗ
3	вз	СН	СН	О ·. к N И 1 I 01	КЗ
4	В4	СР	сг	О ы	КЗ
5	В4	СР	сг	.А О. к'1	КЗ
6	В4	СР	сг	- . , о II,)	КЗ
7	В5	СН	СН	-··. о, о	К
8	В5	СН	СН	Ак N	К
9	В5	СН	СН	О. ]| Ί Ν'	К.
10	В6	СР	СН	О - к N Ν γ Ί Н I ,1 -С1	8”*
11	В6	СР	СН	о и к к •-Ν'- 'С1	К*
12	В5	СР	СР	О	КЗ
13	ВЗ	СР	СН	о к ,Ν, И [ ] С1	КЗ
14	В4	СН	СН	.А. Р ϊ 1 'к Р	К
15	В4	СР	СН	• . С1 г С1	КЗ
16	В4	СР	СН	Τ'ϊ Ν’	К5
17	ВЗ	СН	СН	О к N и ι ;ι С1	К
18	В4	СР	СР	„ N 'ту	КЗ
19	В5	СН	СН	... . ОСРз соль НС1	К
20	В5	СН	СН	·- ''< -С1 И к Ί С1	К

- 37 021723

Таблица 2

№ соед	№ прим.	X1	X5	—-Ь-Аг	С4- стереохимия
21	В7	сн	сн	·. .о, ΐ :г ' N	К5
22	В7	сн	сн	О. ίί а ' N	К*
23	В7	сн	сн	·, с. О, ΐ: ' Ν	8*
24	В8	СР	СН	. С1 Ν'	КЗ
25	В8	СР	сн	---. ..С1 у	к*
26	В8	СР	СН	, С1 ί '1 Ν	8*
27	В9	СР	СН	О ·Ν . N сг' '01	К5
28	В9	СР	сн	о - я N 4 Ϊ 3 СГ ΌΙ	К*
29	В9	СР	сн	н А „1 СГ С1	5*
30	В9	СР	сн	о '-Ν ' (С '0'	К5
31	В9	СР	сн	А· -Ν· и О . Ν О'	К*
32	В9	СР	сн	--Ν ° . Ж. И А А . Ν Ό'	8*

Таблица 3

С. Аналитическая часть.

ЖХМС.

Для (ЖХ)МС-характеристики соединений настоящего изобретения применяли следующие способы.

Общая процедура А.

Измерение при ВЭЖХ проводили при помощи системы ΗΡ 1100 (АдПеп! ТссНпо1од1С5). содержащей насос (4-ступенчатый или 2-ступенчатый) с аппаратом для дегазации, автопробоотборник, печь для колонки, диодный матричный детектор (ОАЭ) и колонку, указываемую в соответствующих способах. МСдетектор был расположен с источником ионизации электрораспылением. Азот применяли в качестве газа-распылителя. Температуру источника поддерживали либо при 140°С либо при 100°С. Сбор данных проводили программным обеспечением Ма88Ьупх-Ореп1упх (^а1егз).

Общая процедура В.

Измерение при ИРЬС (ультраэффективной жидкостной хроматографии) проводили при помощи системы АссцШу ИРЬС (^а1ег8), содержащей устройство для подачи образца, 2-ступенчатый насос с аппаратом для дегазации, печь для четырех колонок, диодный матричный детектор (ОАЭ) и колонку, указываемую в соответствующих способах. МС-детектор расположен с источником двойной ионизации Εδί',Ί (электрораспыление в сочетании с химической ионизацией при атмосферном давлении). Азот применяли в качестве газа-распылителя. Температуру источника поддерживали при 140°С. Сбор данных проводили программным обеспечением Ма88Ьупх-Ореп1упх (^а1егз).

- 38 021723

Общая процедура С.

Измерение при ЖХ проводили при помощи системы ИРЬС (ультраэффективной жидкостной хроматографии) ЛссцШу (^а!ег8), содержащей 2-ступенчатый насос с аппаратом для дегазации, автопробоотборник, диодный матричный детектор (ПАИ) и колонку, указываемую ниже в соответствующих способах, температуру колонки поддерживали на уровне 40°С. Поток из колонки направляли в МСдетектор. МС-детектор был расположен с источником ионизации электрораспылением. Напряжение иглы капилляра было 3 кВ и температуру источника поддерживали при 130°С на Циайго (тройной квадрупольный масс-спектрометр от \Уа1егк). Азот применяли в качестве газа-распылителя. Сбор данных проводили программным обеспечением Ма88Ьуих-Ореп1уих (\Уа1егк).

Способ 1.

Добавление к общей процедуре А: ВЭЖХ с обращенной фазой проводили на колонке Есйрке Р1и8С18 (3,5 мкм, 2,1x30 мм) от Адйеи! при скорости потока 1,0 мл/мин и при 60°С. Применяли следующие градиентные условия: от 95% А (0,5 г/л раствора ацетата аммония+5% ацетонитрила) и 5% В (ацетонитрил) до 100% В за 5,0 мин, поддерживали 100% В в течение 5,15 мин и проводили уравновешивание до начальных условий за время от 5,3 до 7,0 мин. Объем ввода 2 мкл. Масс-спектрометрию высокого разрешения (Типе οί Ε1ί§1ιΙ, ТОР йе!ес!ог) проводили сканированием от 100 до 750 за 0,5 с с применением времени задержки 0,3 с. Напряжение иглы капилляра было 2,5 кВ для режима определения положительных ионов и 2,9 кВ для режима определения отрицательных ионов. Напряжение конуса было 20 В как для режима определения положительных ионов, так и для режима определения отрицательных ионов. Лейцин-энкефалин был стандартным веществом, применяемым для калибровки фиксированной массы.

Способ 2.

Применяли такой же градиент для ВЭЖХ, как в способе 1. Масс-спектрометрию высокого разрешения (Типе οί Ε1ί§1ιΙ, ТОР йе!ес!ог) проводили только в режиме определения положительных ионов сканированием от 100 до 750 за 0,5 с с применением времени задержки 0,1 с. Напряжение иглы капилляра было 2,5 кВ для режима определения положительных ионов, и напряжение конуса было 20 В. Лейцинэнкефалин был стандартным веществом, применяемым для калибровки фиксированной массы.

Способ 3.

Добавление к общей процедуре А: ВЭЖХ с обращенной фазой проводили на колонке Есйрке Р1и8С18 (3,5 мкм, 2,1x30 мм) от Адйеи! со скоростью потока 1,0 мл/мин при 60°С без направления ответвленного потока к МС-детектору. Применяли следующие градиентные условия: смесь 95% А (0,5 г/л раствора ацетата аммония + 5% ацетонитрила) и 5% В (смесь ацетонитрил/метанол, 1/1) пропускали в течение 0,2 мин, повышали концентрацию В до 100% за 3,0 мин, поддерживали 100% В до 5,15 мин и уравновешивание до начальных условий проводили за время от 3,30 до 5,0 мин. Объем ввода 2 мкл. Массспектрометрию низкого разрешения (одинарный квадруполь, детектор 5>ОЭ) проводили сканированием от 100 до 1000 за 0,1 с с применением интерканальной задержки 0,08 с. Напряжение иглы капилляра было 3 кВ. Напряжение конуса было 20 В и 50 В для режима определения положительных ионов и 30 В для режима определения отрицательных ионов.

Способ 4.

Добавление к общей процедуре В: ВЭЖХ с обращенной фазой проводили на колонке ККНИ ЕсПрке Р1и8-С18 (1,8 мкм, 2,1x50 мм) от Адйеи! со скоростью потока 1,0 мл/мин при 50°С без направления ответвленного потока к МС-детектору. Применяли следующие градиентные условия: от 95% А (0,5 г/л раствора ацетата аммония+5% ацетонитрила) и 5% В (ацетонитрил) до 40% А и 60% В за 3,8 мин, до 5% А и 95% В за 4,6 мин, сохранение такого градиента до 5,0 мин. Объем ввода 2,0 мкл. Масс-спектрометрию низкого разрешения (одинарный квадруполь, детектор БОИ) проводили сканированием от 100 до 1000 за 0,1 с с применением интерканальной задержки 0,08 с. Напряжение иглы капилляра было 3 кВ. Напряжение конуса было 25 В для режима определения положительных ионов и 30 В для режима определения отрицательных ионов.

Способ 5.

Применяли такой же градиент, как в способе 4; применяли колонку ККНИ ЕсПрке Р1ик-С18 (1,8 мкм, 2,1x50 мм) от Адйеи!.

Способ 6.

Добавление к общей процедуре С: ВЭЖХ с обращенной фазой проводили на колонке \Уа1егк АсС|ш1у ВЕН (гибрид мостиковый этилсилоксан/диоксид кремния) Рйеиу1-Неху1 (1,7 мкм, 2,1x100 мм) при скорости потока 0,343 мл/мин. Применяли две подвижные фазы (подвижная фаза А: 95% 7 мМ ацетата аммония/5% ацетонитрила; подвижная фаза В: 100% ацетонитрил) для создания градиентного условия от 84,2% А и 15,8% В (выдерживали в течение 0,49 мин) до 10,5% А и 89,5% В за 2,18 мин, выдерживание такого градиента 1,94 мин и возвращение к начальным условиям за 0,73 мин, выдерживание их в течение 0,73 мин. Применяли объем ввода 2 мл. Напряжение конуса было 20В для режима определения положительных и отрицательных ионов. Масс-спектрометрию проводили сканированием от 100 до 1000 за 0,2 с с применением задержки интерсканирования 0,1 с.

- 39 021723

Способ 7.

Добавление к общей процедуре А: ВЭЖХ с обращенной фазой проводили на колонке Есйрке Р1и8С18 (3,5 мкм, 2,1x30 мм) от АдЛеп! со скоростью потока 1,0 мл/мин при 60°С без направления ответвленного потока к МС-детектору. Применяли следующие градиентные условия: от 95% А (0,5 г/л раствора ацетата аммония+5% ацетонитрила) и 5% В (смесь ацетонитрил/метанол, 1/1) до 100% В за 5,0 мин, выдерживание 100% В до 5,15 мин и уравновешивание до начальных условий за время от 5,30 до 7,0 мин. Объем ввода 2 мкл. Масс-спектрометрию низкого разрешения (одинарный квадруполь, детектор 5>ОЭ) проводили сканированием от 100 до 1000 за 0,1 с с применением интерканальной задержки 0,08 с. Напряжение иглы капилляра было 3 кВ. Напряжение конуса было 20 В для режима определения положительных ионов и 30 В для режима определения отрицательных ионов.

Точки плавления.

Величинами точек плавления являются либо пиковые величины, либо диапазоны величин точек плавления, эти величины получали с экспериментальными погрешностями, которые обычно связаны с аналитическим способом.

Аппаратура Мей1ег РР81НТ/РР90 (указанная как РР90 в табл. 3).

Для ряда соединений точки плавления определяли в открытых капиллярных трубочках на аппаратуре Мей1ег РР81НТ/РР90. Точки плавления измеряли с температурным градиентом 1, 3, 5 или 10°С/мин. Максимальная температура была 300°С. Точку плавления считывали с цифрового дисплея.

Таблица 4

Аналитические данные - К1 означает время удерживания (в минутах), [М+Н]+ означает протонированную массу соединения, способ относится к способу, применяемому для (ЖХ)МС

№ соед.	к,	[М+Н]+	Способ	Точка плавления
1	1.77	305	3	не определяли
2	2.49	334	2	191.8 °С (РР90)
3	1 79	381	4	194 9 °С (РР90)
4	2.14	341	1	207 °С (РР 90)
5	2.76	370	1	161.6 °С(РР 90)
6	2.26	369	4	171.1 °С (РР 90)
7	2.7	333	3	153.8 °С (РР 90)
8	0.86	305	4	не определяли
9	1.35	334	4	100.5 °С (РР 90)
10	2.43	399	6	199°С(РР90)
11	2.43	399	6	не определяли
12	2.31	339	4	105.3 °С (РР 90)
13	3.01	399	7	202.3 °С (РР 90)
14	2.41	339	5	55.5 °С (РР 90)
15	3 07	389	5	198.6 °С (РР 90)
16	1.02	323	5	разложение
17	1.8	381	4	не определяли
18	2.11	364	4	202.9 С (РР 90)
19	2.75	387	4	96.5°С (РР 90)
20	2.88	371	4	112С(РР90)
21	3.47	402	7	89.3 °С (РР90)
22	2.67	402	6	не определяли
23	2.66	402	6	не определяли
24	3.84	424	7	175.2'-’С (РР90)

- 40 021723

№ соед.	К.	[М+Н]+	Способ	Точка плавления
25	2.96	424	6	не определяли
26	2.96	424	6	не определяли
27	2.94	501	5	198 'С (РР90)
28	3,01	501	6	не определяли
29	3.01	501	6	не определяли
30	2.62	464	5	218.1 °С (РР90)
31	2.82	464	6	не определяли
32	2.82	464	6	не определяли
33	2.12	443	5	272.6 :С (РР90)
34	1.95	422	5	227.8 ’С (РР90)

Оптическое вращение.

Оптическое вращение измеряли на поляриметре Реткт-Е1тет 341 с натриевой лампой.

Таблица 5

Аналитические данные - величины оптического вращения для энантиомерно чистых соединений

№ соед.	Оф(°)	Длина волны (нм)	Концентрация, масс./об.%	Раство- ритель	Темп. ГС)
7	-42.6	589	0.54	ДМФА	20
8	-48.4	589	0.5	МеОН	20
9	-26.2	589	0.62	МеОН	20
10	-27.7	589	0.52	ДМФА	20
11	27.3	589	0.52	ДМФА	20
17	-64.2	589	0.52	ДМФА	20
19	-33.6	589	0.56	ДМФА	20
20	-56.7	589	0.53	ДМФА	20
22	-29.2	589	0 5	ДМФА	20
23	41.3	589	0.5	ДМФА	20
25	146	589	0.55	ДМФА	20
26	-14.9	589	0.52	ДМФА	20
33	45.3	589	0.59	ДМФА	20
34	46.6	589	0.59	ДМФА	20

Способы 8РС-МС.

Общая процедура для способов 8РС-МС.

Измерение 8РС проводили с применением аналитической системы §РС от Вегдег И181гитеп18 (№теагк, ΌΕ, И8А), содержащей модуль регулирования жидкости сдвоенным насосом РСМ-1200 для доставки диоксида углерода (СО₂) и модификатор, аналитический автоматический пробоотборник жидкости СТС, модуль термического регулирования ТСМ-20000 для нагрева колонки от комнатной температуры до 80°С. Применяли фотодиодный матричный детектор АдПеи! 1100 ИУ, снабженный проточной ячейкой высокого давления, установленной до 40 МПа (400 бар). Ответвление потока из колонки направляли в МС-спектрометр. МС-детектор устанавливали с источником ионизации при атмосферном давлении. Параметры ионизации для масс-спектрометра ТОа1ег8 ΖΟ были следующими: коронный разряд: 9 мкА, темп, источника: 140°С, напряжение конуса: 30 В, темп. датчика: 450°С, экстрактор: 3 В, газ десольватации: 400 л/ч, газ конуса: 70 л/ч. Азот применяли в качестве газа-распылителя. Для получения данных применяли систему данных ТОа1ет8-М1стота88 Ма88Ьупх-Ореп1уих.

Способ 1.

Добавление к общей процедуре. Хиральное разделение способом §РС проводили на колонке СН1КАРРАК АО ПА1СЕЬ (10 мкм, 4,6x250 мм) при 35°С со скоростью потока 3,0 мл/мин. Подвижной фазой был СО₂, 50% этанол, 50% ЕЮН (содержащий 0,3% ίΡτΝΗ₂) пропускали 7 мин.

Способ 2.

Добавление к общей процедуре А. Хиральное разделение способом §РС проводили на колонке СШКАРРАК АО ПА1СЕР (10 мкм, 4,6x250 мм) при 35°С со скоростью потока 3,0 мл/мин. Подвижной фазой был СО₂, 20% метанол (содержащий 0,3% ίΡτΝΗ₂) пропускали 7 мин.

Способ 3.

Добавление к общей процедуре А. Хиральное разделение способом §РС проводили на колонке

- 41 021723

СНГОАЬРАК АО ОА1СЕЬ (10 мкм, 4,6x250 мм) при 35°С со скоростью потока 3,0 мл/мин. Подвижной фазой был СО₂, 25% изопропанол (содержащий 0,3% ιΡγΝΗ₂) пропускали 7 мин.

Способ 4.

Добавление к общей процедуре А. Хиральное разделение способом 8РС проводили на колонке СНГОАЬРАК АО ОА1СЕЬ (10 мкм, 4,6x250 мм) при 35°С со скоростью потока 3,0 мл/мин. Подвижной фазой был СО₂, 30% этанол (содержащий 0,3% ιΡγΝΗ₂) пропускали 7 мин.

Таблица 6

Аналитические данные 8РС - КТ означает время удерживания (в минутах), [М+Н]+ означает протонированную массу соединения, способ относится к способу, применяемому для анализа способом 8РС/МС энантиомерно чистых соединений

№ соед.	к.	[М+Н]+	УФ-площадь, %	Способ	Порядок элюирования изомера
10	2.50	399	100	1	А
11	4.27	399	100	1	В
22	2.91	402	100	2	А
23	4.81	402	100	2	В
25	2.73	424	100	3	А
26	3.67	424	100	3	В
28	2.83	501	100	4	А
29	3.83	501	100	4	В
31	2.21	464	100	4	А
32	3.49	464	100	4	В

Фармакологические примеры.

Предложенные соединения настоящего изобретения являются ингибиторами фермента 1, расщепляющего β-сайт АРР (ВАСЕ1). Считается, что ингибирование ВАСЕ1, аспарагиновой протеазы, является применимым для лечения болезни Альцгеймера (АО). Считается, что продуцирование β-амилоидных пептидов (Ав) из β-амилоидного белка-предшественника (АРР) и накопление их играет ключевую роль в возникновении и развитии АО. Ав продуцируются из амилодного белка-предшественника (АРР) последовательным расщеплением Ν- и С-концов домена Ав β-секретазой и γ-секретазой соответственно.

Предполагается, что соединения формулы (I) обладают действием по существу на ВАСЕ1 благодаря их способности ингибировать ферментативную активность. Поведение таких ингибиторов тестировали при помощи анализа, основанного на биохимическом переносе флуоресцентной резонансной энергии (РКЕТ), и клеточного аГОа-анализа в описанных ниже клетках 8КЫВЕ2, которые являются подходящими для идентификации таких соединений и более конкретно соединений согласно формуле (I), которые показаны в табл. 1.

Биохимический анализ, основанный на РКЕТ.

Данный анализ является анализом, основанным на анализе переноса флуоресцентной резонансной энергии (РКЕТ). Субстратом для этого анализа является образованный из АРР пептид с 13 аминокислотами, который содержит мутацию 8\ус6Ы1 Елъ-МсЕАхп-Бси сайта расщепления β-секретазы амилоидного белка-предшественника (АРР). Этот субстрат содержит также два флуорофора: (7-метоксикумарин4-ил)уксусную кислоту (Мса), которая является флуоресцентным донором с длиной волны возбуждения при 320 нм и эмиссии при 405 нм, и 2,4-динитрофенил (Опр), который является фирменным акцептором агента гашения флуоресценции. Расстояние между этими двумя группами выбирают так, чтобы при возбуждении света энергия флуоресценции донора значительно гасилась акцептором посредством переноса резонансной энергии. После расщепления посредством ВАСЕ1 флуорофор Мса отделяется от группы гашения Опр, восстанавливая полную флуоресцентную способность донора. Повышение флуоресценции линейно связано со скоростью протеолиза (Ко1ке Н. е! а1.1. ВюсНст. 1999, 126, 235-42).

Вкратце, в 384-луночном формате рекомбинантный белок ВАСЕ1 при конечной концентрации 1 мкг/мл инкубируют в течение 120 мин при комнатной температуре с 10 мкМ субстратом в буфере для инкубации (40 мМ цитратный буфер, рН 5,0, 0,04% ПЭГ, 4% ДМСО) в отсутствие или в присутствии соединения. Затем количество протеолиза непосредственно измеряют измерением флуоресценции при Т=0 и Т=120 (возбуждение при 320 нм и эмиссия при 405 нм). Результаты выражают в КРИ, как разность между Т120 и Т0. Кривую наилучшей подгонки получали способом минимальной суммы квадратов для графика % контрольного минимума в зависимости от концентрации соединения. Из нее можно получить величину 1С₅₀ (концентрация, вызывающая 50% ингибирование активности).

ЬС = медиана величин низкого контроля, = низкий контроль: реакция без фермента,

НС = медиана величин высокого контроля,

- 42 021723 = высокий контроль: реакция с ферментом, % действие = 100 - [(образец-ЬС)/(НС-ЬС)-100], % контроль = (образец)/(НС)-100, % контрольный минимум = (образец-ЬС)/(НС-ЬС)-100.

Следующие примерные соединения тестировали, по существу, так, как описано выше, и они обнаружили следующую активность.

Таблица 7

Клеточный аНка-анализ в клетках 8ΚΝΒΕ2.

В двух аНка-анализах количественно определяют уровни общих Аβ и Аβ42, продуцированных и секретированных в среду клеток 8ΚΝΒΕ2 нейробластомы человека. Анализ основан на клетках 8ΚΝΒΕ2 нейробластомы человека, экспрессирующих амилоидный белок-предшественник дикого типа (ИАРР695). Соединения разводят и добавляют к этим клеткам, инкубируют в течение 18 ч и затем измеряют Аβ42 и общие Аβ. Общие Аβ и Аβ42 измеряют анализом сэндвич-аЬка. аНка является сэндвич-анализом, в котором применяют биотинилированное антитело ΆΒΝ/25, присоединенное к покрытым стрептавидином гранулам, и антитело АЬ4О8 или сАЬ42/26, конъюгированное с гранулами-акцепторами, для детектирования общих Аβ и Аβ42 соответственно. В присутствии общих Аβ или Аβ42 гранулы находятся в непосредст- 43 021723 венной близости. Возбуждение гранул-доноров вызывает выделение молекул синглетного кислорода, которые запускают каскад переноса энергии в гранулы-акцепторы, что приводит к эмиссии света. Эмиссию света измеряют после 1 ч инкубации (возбуждение при 650 нм и эмиссия при 615 нм).

Кривую наилучшей подгонки получали способом минимальной суммы квадратов для графика % контрольного минимума в зависимости от концентрации соединения. Из нее можно получить величину Ю50 (концентрация, вызывающая 50% ингибирование активности).

ЬС = медиана величин низкого контроля, = низкий контроль: клетки, преинкубированные без соединения, без биотинилированного ЛЬ при проведении анализа аПка,

НС = медиана величин высокого контроля, = высокий контроль: клетки, преинкубированные без соединения, % действия = 100 - [(образец-ЬС)/(НС-ЬС)-100], % контроль = (образец)/(НС)-100, % контрольный минимум = (образец-ЬС)/(НС-ЬС)-100.

Следующие примерные соединения тестировали, по существу, так, как описано выше, и они обнаружили следующую активность.

Таблица 8

- 44 021723

Со. Νγ.	Клеточный «Нм»-анализ АВ42 в клетках 5ΚΝΒΕ2, ρΚΑίι	Клеточный οΙϊϊη-анализ в общих АВ в клетках 5ΚΝΒΕ2, р1С50
29	<5	<5
30	6.8	6.78
31	6.92	6.99
32	6.56	6.54
33	7.59	7 68
34	7.11	7.19

η.ΐ. означает не тестировали

Определение эффективности ίη νΐνο.

Агенты изобретения, снижающие содержание пептида Ав, можно применять для лечения АО у млекопитающих, таких как люди, или же для демонстрации эффективности на животных моделях, таких как, но без ограничения указанным, мышь, крыса или морская свинка. Млекопитающее может не иметь диагностированную АО или может не иметь генетическое предрасположение к АО, но может быть трансгенным, так что оно перепродуцирует и в результате депонирует Ав способом, аналогичным способу, наблюдаемому у людей, пораженных АО.

Агенты, уменьшающие пептиды Ав, можно вводить в любой стандартной форме с применением любого стандартного способа. Например, но без ограничения указанным, агенты, уменьшающие пептиды Ав, могут быть в форме жидкости, таблеток или капсул, которые вводят перорально или инъекцией. Агенты, уменьшающие пептиды Ав, можно вводить при любой дозе, которая является достаточной для значительного снижения уровней пептидов Ав в крови, плазме крови, сыворотке, цереброспинальной жидкости (СЗР) или головном мозге.

Для определения того, может ли введение при острых случаях болезни агента, уменьшающего пептид Ав42, снизить уровни пептидов Ав ίη νΐνο, применяли нетрансгенных грызунов, например мышей или крыс. Животных, обработанных агентом, уменьшающим пептиды Ав, обследовали и сравнивали с животными, необработанными или обработанными носителем, и уровни растворимого Ав42 и общих Ав в головном мозге количественно определяли стандартными методиками, например, с применением ЕЫЗА. Периоды обработки варьировали от часов (ч) до дней и регулировали на основе результатов снижения Ав42, как только можно было установить время появление действия.

Показан типичный протокол измерения уменьшений Ав42 ίη νΐνο, но он является только одним из многих вариантов, которые можно применять для оптимизации уровней детектируемых Ав. Например, уменьшающие пептиды Ав соединения изготовляют в виде препарата в 20% гидроксипропил-вциклодекстрина. Уменьшающие пептиды Ав агенты вводили в виде одноразовой пероральной дозы (р.о.) или одноразовой подкожной дозы (в.с.) на протяжении ночи голодающим животным. После определенного времени, обычно 2-4 ч, животных умерщвляли и анализировали уровни Ав42.

Кровь собирали декапитацией и кровотечением в ΕΌΤΑ-обработанные пробирки для сбора образцов. Кровь центрифугировали при 1900/д в течение 10 мин при 4°С и плазму выделяли и быстро замораживали для более позднего анализа. Головной мозг удаляли из черепа и ромбовидного мозга. Мозжечок удаляли и левую и правую полусферы разделяли. Левую сферу сохраняли при -18°С для количественного анализа уровней тестируемых соединений. Правую полусферу промывали физиологическим раствором с фосфатным буфером (РВЗ) и немедленно замораживали на сухом льду и сохраняли при 80°С до гомогенизации для биохимических анализов.

Головной мозг мышей нетрансгенных животных ресуспендировали в 8 объемах смеси 0,4% ΌΕΑ (диэтиламина)/50 мМ №С1, содержащей ингибиторы протеазы (КосЬе-11873580001 или 04693159001) на грамм ткани, например, для 0,158 г головного мозга добавили 1,264 мл 0,4% ΌΕΑ. Все образцы гомогенизировали в системе Рав1Ртер-24 (ΜΡ Вютейюа1в) при помощи матрицы лизиса Ό (ΜΡΒίο #6913-100) при 6 м/с в течение 20 с. Гомогенаты центрифугировали при 221300/д в течение 50 мин. Образовавшиеся супернатанты центрифугирования при высокой скорости вращения затем переносили в свежие пробирки Эппендорфа. Девять частей супернатанта нейтрализовали 1 частью 0,5 М трис-НС1, рН 8,8, и применяли для количественного определения общих Ав и Ав42.

Для определения количества общих Ав и Ав42 в растворимой фракции гомогенатов головного мозга применяли анализы связанного с ферментом иммуносорбента. Вкратце, стандарты (продукты разведения синтетических Ав 1-40 и Ав 1-42, ВасЬет) получали в 1,5 мл пробирке Эппендорфа в иКгасиИиге с конечными концентрациями в диапазоне от 10000 до 0,3 пг/мл. Образцы и стандарты совместно инкубировали с ΗΚΡΟ-меченым Ν-концевым антителом для определения Ав42 и с биотинилированным сред- 45 021723 ним доменовым антителом 408 для определения общих Αβ. 50 мкл смесей конъюгат/образец или конъюгат/стандарты затем добавляли к покрытому антителом планшету (иммобилизованные антитела селективно распознают С-конец Λβ42, антитело !ΚΡΚΑβ42/26, для детектирования Λβ42 и Ν-конец Ав, антитело ΙΚΡ/τΑβ/2, для детектирования общих Аβ). Планшету предоставляли возможность для инкубирования на протяжении ночи при 4°С для образования комплекса антитело-амилоид. После этого инкубирования и последующих стадий промывания анализ ЕЫ8А для количественного определения Аβ42 завершали добавлением субстрата флуорогенной пероксидазы Циайа В1и согласно инструкциям производителя (Йетсе Согр., КоскГотй, ΙΙ). Считывание данных проводили спустя 10-15 мин (возбуждение при 320 нм/эмиссия при 420 нм).

Для детектирования общих Αβ добавляли конъюгат стрептавидин-пероксидаза с последующей спустя 60 мин дополнительной стадией промывания и добавлением субстрата флуорогенной пероксидазы СиаШа В1и согласно инструкциям производителя (Йетсе Согр., КоскГотй, ΙΙ). Считывание данных проводили спустя 10-15 мин (возбуждение при 320 нм/эмиссия при 420 нм).

При применении этой модели может быть подходящим по меньшей мере 20% снижение Аβ42 по сравнению с необработанными животными.

Следующие примерные соединения тестировали, по существу, как описано выше, и они показали следующую активность.

Таблица 9

№	Αβ42	Общие Αβ	Доза	Путь	Время после
соед.	(средний %	(средний й		введения	введения
	контроль)	контроль)
2	109	116	3 0 мпк	5С	4 часа
11	71	80	3 0 мпк	5С	4 часа
20	86	80	3 0 мпк	5С	4 часа

к.с. означает подкожный; р.о. означает пероральный

Claims (8)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение формулы (Ι) или его таутомерная или стереоизомерная форма, у которого

   К¹ и К² представляют собой водород;

   К³ выбран из группы, состоящей из Ср₃алкила и С_3-6циклоалкила;

   Х¹ и Х³ представляют собой СН или Р;

   Х² и Х⁴ представляют собой СН;

   Ь представляет собой связь или -^К⁵)СО-, где К⁵ представляет собой водород или С1_-3алкил;

   К⁶ представляет собой водород или трифторметил;

   Аг представляет собой гомоарил или гетероарил;

   гомоарил представляет собой фенил или фенил, замещенный одним, двумя или тремя заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, С1_-3алкила, С1_-3алкилокси, моно- и полигалогенС1_-3алкила и моно- и полигалогенС1_-3алкилокси;

   гетероарил выбран из группы, состоящей из пиридила, пиримидила, пиразила, необязательно замещенных одним, двумя или тремя заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, С1_-3алкила, С1_-3алкилокси, моно- и полигалогенС1_-3алкила и моно- и полигалогенС1_-3алкилокси, или его аддитивная соль или сольват.
2. 2. Соединение по п.1, у которого

   Ь представляет собой связь или -Ν(Κ⁵)0Ο-, где К⁵ представляет собой водород;

   Аг представляет собой гомоарил или гетероарил;

   гомоарил представляет собой фенил или фенил, замещенный одним или двумя заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, Ср₃алкила и С1_-3алкилокси;

   гетероарил выбран из группы, состоящей из пиридила, пиримидила и пиразила, каждый из которых

   - 46 021723 необязательно замещен одним или двумя заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, С1_-3алкила и С1_-3алкилокси;

   или его аддитивная соль или сольват.
3. 3. Соединение по п.1, у которого

   X¹, X², X³, X⁴ представляют собой СН;

   Ь представляет собой связь или -Ν(Κ⁵^Ο-, где К⁵ представляет собой водород;

   Аг представляет собой гомоарил или гетероарил; гомоарил представляет собой фенил, замещенный хлором;

   гетероарил выбран из группы, состоящей из пиридила и пиримидила, каждый из которых необязательно замещен одним или двумя заместителями, выбранными из группы, состоящей из хлора, фтора, циано, метила и метокси;

   или его аддитивная соль или сольват.
4. 4. Соединение по п.1, у которого атом углерода, замещенный К³, имеет К-конфигурацию.
5. 5. Фармацевтическая композиция для лечения болезни Альцгеймера, умеренного когнитивного расстройства, старения, деменции, деменции с тельцами Леви, синдрома Дауна, деменции, связанной с инсультом, деменции, связанной с болезнью Паркинсона, и деменции, связанной с β-амилоидом, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп. 1-4 и фармацевтически приемлемый носитель.
6. 6. Способ получения фармацевтической композиции по п.5, отличающийся тем, что фармацевтически приемлемый носитель смешивают с терапевтически эффективным количеством соединения по любому из пп.1-4.
7. 7. Применение соединения по любому из пп.1-4 для лечения, предупреждения или профилактики болезни Альцгеймера (ΑΌ), умеренного когнитивного расстройства, старения, деменции, деменции с тельцами Леви, синдрома Дауна, деменции, связанной с инсультом, деменции, связанной с болезнью Паркинсона, или деменции, связанной с β-амилоидом.
8. 8. Способ лечения нарушения, выбранного из группы, состоящей из болезни Альцгеймера, умеренного когнитивного расстройства, старения, деменции, деменции с тельцами Леви, синдрома Дауна, деменции, связанной с инсультом, деменции, связанной с болезнью Паркинсона, и деменции, связанной с β-амилоидом, содержащий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-4.