EA020472B1 - Моноклональные антитела против ферропортина 1 и их применение - Google Patents

Моноклональные антитела против ферропортина 1 и их применение Download PDF

Info

Publication number
EA020472B1
EA020472B1 EA201170764A EA201170764A EA020472B1 EA 020472 B1 EA020472 B1 EA 020472B1 EA 201170764 A EA201170764 A EA 201170764A EA 201170764 A EA201170764 A EA 201170764A EA 020472 B1 EA020472 B1 EA 020472B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
zeo
amino acid
mat
human
hepcidin
Prior art date
Application number
EA201170764A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201170764A1 (ru
Inventor
Донмьенн Доэн Мун Льюнг
Пэн Луань
Джозеф Винсент Манетта
Ин Тан
Деррик Райан Уитчер
Original Assignee
Эли Лилли Энд Компани
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Эли Лилли Энд Компани filed Critical Эли Лилли Энд Компани
Publication of EA201170764A1 publication Critical patent/EA201170764A1/ru
Publication of EA020472B1 publication Critical patent/EA020472B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к моноклональным антителам и их антигенсвязывающим фрагментам, связывающим FPN1 человека и подавляющим его активность, обладающим эффективностью в условиях поддержания или усиления транспорта железа из клеток млекопитающего и/или поддержания или повышения концентрации железа в сыворотке, числа ретикулоцитов, числа красных кровяных телец, гемоглобина и/или гематокрита в организме индивида in vivo.

Description

Настоящее изобретение относится к антителам, связывающим ферропортин 1 (ΡΡΝ1), и применению указанных антител для лечения анемии.
Железо является важным микроэлементом, участвующим во многих клеточных функциях. Запасание железа в организме млекопитающих регулируется для согласования потребности тела в данном микроэлементе с уровнем поглощения железа дуоденальными энтероцитами. Считается, что транспорт железа через базолатеральную мембрану энтероцитов происходит при участии ферропортина 1 (также обозначаемого как железорегулируемый транспортер 1 (ΙΡΕΟ-1), белка, переносящего ионы металлов 1 (МТР1) и 8ЬС40Л1), обозначаемого далее в настоящей заявке как ΡΡΝ1.
В настоящее время известно, что ΡΡΝ1 является рецептором гепцидина, гормона полипептидной природы, вырабатываемого печенью в ответ на запасание железа и воспалительный процесс. Связывание зрелого гепцидина с ΡΡΝ1 приводит к интернализации и разрушению ΡΡΝ1, что препятствует выведению железа из клетки и является основным фактором, контролирующим системный гомеостаз железа.
В патенте США № 7166448 описаны, в том числе, нуклеотидные последовательности, кодирующие белки ΡΡΝ1 человека, белки ΡΡΝ1 человека, несущие функцию транспорта железа, и поликлональная антисыворотка кролика, полученная против пептида, состоящего из 19 С-концевых аминокислот ΡΡΝ1 человека. Международная публикация на патент № №0 2009/094551 описывает моноклональные антитела (МАТ) к ферропортину и способы их применения для лечения нарушений гомеостаза железа. В частности, публикация №0 2009/094551 описывает моноклональные антитела грызунов и полные моноклональные антитела человека против различных эпитопов белков ΡΡΝ1 человека.
Ввиду участия ΡΡΝ1 в транспорте железа и связи мутаций по ΡΡΝ1 с нарушениями гомеостаза железа, существует потребность в разработке терапевтически применимых антагонистов ΡΡΝ1, с высокой аффинностью связывающихся с внеклеточным эпитопом ΡΡΝ1 и, как результат связывания, ингибирующих интернализацию зрелого ΡΡΝ1, опосредуемую гепцидином, и, следовательно, поддерживающих или усиливающих поступление железа из внутриклеточных пулов. Также направленную терапию ΡΡΝ1 при помощи МАТ или его антиген-связывающего фрагмента с целью ингибирования связывания зрелого гепцидина с внеклеточным эпитопом ΡΡΝ1 следует проводить с такой точностью, чтобы антитело значительно не нарушало выведение железа из клетки и/или индуцировало интернализацию вследствие связывания с мишенью. Также, антитела против ΡΡΝ, предназначенные для применения в лекарственной терапии человека, должны обладать соответствующими фармакокинетическими и фармакодинамическими свойствами, включая стабильность в условиях ίη νίνο и/или период полувыведения, для возможности их терапевтического применения. Одно или более из антител против ΡΡΝ1 человека, описанных в настоящей заявке, специфически связывают ΡΡΝ1 человека, включая по меньшей мере один его пептидный фрагмент, выбранный из группы, состоящей из:
a) 403δΡΡΕΌΙΚ8ΚΡΐρθΕ8ΙΤΡΤΚ422 (δΕΟ ΙΌ Ν0:12);
b) 4(.ΕυΐΗΗΗΙΊΟΟΙ'ΑΙΊΗ (δΕβ ΙΌ Ν0:13);
c) 4С .ΗδΗΙΊΟΟΕδΙΤΡΤΚ422 (δΕβ ΙΌ Ν0:14); ά) 403δΡΡΕΌΙΚ8ΚΡΙβθ415 (δΕβ ΙΌ Ν0:15); е) 409ΚδΚΕΙβΟΕδΙΤ419 (δΡΟ ΙΌ Ν0:16) и
ί) 409ΚδΚΡΙβΟ4ι5 (δΕΟ ΙΌ Ν0:95), блокируют связывание гепцидина с ферропортином, значительно ингибируют активность гепцидина ίη νίίτο, в зависимости от дозы повышают уровни железа в сыворотке ίη νίνο, а также обладают приемлемой растворимостью, стабильностью ίη νίνο и характеризуются такой величиной периода полувыведения, которые обеспечивают их пригодность для лечения и/или профилактики развития анемии у индивида, при необходимости, при введении путем внутривенной инфузии или возможно даже путем подкожной инъекции.
Таким образом, в различных аспектах настоящее изобретение обеспечивает моноклональные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, специфично связывающиеся с ферропортином 1 человека, содержащим аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ Ν0:1, в эпитопе, содержащем аминокислоты, находящиеся в составе одной или более аминокислотных последовательностей, выбранных из группы, состоящей из:
a) 403δΡΡΕΌΙΚδΚΡΙβΟΕδΙΤΡΤΚ422 (δΕΟ ΙΌ Ν0:12);
b) 406ΕΌΙΚδΡΡΙβΟΕδΙΤ419 (δΕΟ ΙΌ Ν0:13);
c) 409ΚδΚΕΙβΟΕδΙΤΡΤΚ422 (δΕΟ ΙΌ Ν0:14); ά) 403δΡΡΕΌΙΚδΚΡΙβΟ415 (δΕΟ ΙΌ Ν0:15); е) 409ΚδΚΕΙβΟΕδΙΤ419 (δΕΟ ΙΌ Ν0:16) и
ί) 4 ΡδΗΡΙΟΟ., (δΕΟ ΙΌ Ν0:95).
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к моноклональным антителам (МАТ) или их антигенсвязывающим фрагментам, содержащим участки ЬСОК1, ЬСОК2, ЬСОК3, ΗΟΌΚ.1, ΗΟΌΚ2 и ΗΟΌΚ.3, содержащие аминокислотные последовательности δΕΟ ΙΌ Ν0:37, 129, 22, 107, 118 и 120 соответственно, где МАТ или его антигенсвязывающий фрагмент связывает ΙΡΝ 1 человека, содержащий аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ Ν0:1 в эпитопе, содержащем аминокислоту или аминокислоты, находящиеся в составе аминокислотной последовательности δΕΟ ΙΌ Ν0:12 с Кс, значение которой определено с помощью поверхностного плазмонного резонанса (НИР), предпочти- 1 020472 тельно, при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЪ и составляет приблизительно 100 нМ или менее.
В некоторых вариантах осуществления, МАТ или его антигенсвязывающий фрагмент содержит шесть участков СОК, выбранных из группы, состоящей из:
(ί) ЬСОК1, ЬСОК2, ЬСОКЗ, НСОК1, НСОК2 и НСОК3, содержащих аминокислотные последовательности 8ЕО ГО N0:20, 32, 33, 30, 31 и 19 соответственно;
(и) ЬСОК1, ЬСОК2, ЬСОК3, НСОК1, НСОК2 и НСОК3, содержащих аминокислотные последовательности 8Е0 ГО N0:42, 32, 33, 30, 43 и 19 соответственно;
(ίίί) ЬСОК1, ЬСОК2, ЬСОК3, НСОК1, НСОК2 и НСОК3, содержащих аминокислотные последовательности 8Е0 ГО N0:42, 27, 22, 23, 41 и 19 соответственно;
(ίν) ЬСОК1, ЬСОК2, ЬСОК3, НСОК1, НСОК2 и НСОК3, содержащих аминокислотные последовательности 8Е0 ГО N0:42, 32, 33, 23, 41 и 19 соответственно;
(ν) ЬСОК1, ЬСОК2, ЬСОК3, НСОК1, НСОК2 и НСОК3, содержащих аминокислотные последовательности 8Е0 ГО N0:20, 21, 22, 17, 18 и 19 соответственно;
(νί) ЬСОК1, ЬСОК2, ЬСОК3, НСОК1, НСОК2 и НСОК3, содержащих аминокислотные последовательности 8Е0 ГО N0:20, 27, 29, 23, 24 и 19 соответственно;
(νίί) ЬСОК1, ЬСОК2, ЬСОК3, НСОК1, НСОК2 и НСОК3, содержащих аминокислотные последовательности 8Е0 ГО N0:37, 27, 22, 23, 41 и 19 соответственно;
(νίίί) ЬСОК1, ЬСОК2, ЬСОК3, НСОК1, НСОК2 и НСОК3, содержащих аминокислотные последовательности 8Е0 ГО N0:170, 171, 172, 182, 173 и 19 соответственно;
(ίχ) ЬСОК1, ЬСОК2, ЬСОК3, НСОК1, НСОК2 и НСОК3, содержащих аминокислотные последовательности 8Е0 ГО N0:37, 127, 22, 23, 116 и 19 соответственно;
(х) ЬСОК1, ЬСОК2, ЬСОК3, НСОК1, НСОК2 и НСОК3, содержащих аминокислотные последовательности 8Е0 ГО N0:37, 125, 22, 23, 110 и 19 соответственно;
(χί) ЬСОК1, ЬСОК2, ЬСОК3, НСОК1, НСОК2 и НСОК3, содержащих аминокислотные последовательности 8Е0 ГО N0:37, 122, 22, 23, 110 и 19 соответственно;
(χίί) ЬСОК1, ЬСОК2, ЬСОК3, НСОК1, НСОК2 и НСОК3, содержащих аминокислотные последовательности 8Е0 ГО N0:37, 12 9, 22, 107, 118 и 120 соответственно;
(χίίί) ЬСОК1, ЬСОК2, ЬСОК3, НСОК1, НСОК2 и НСОК3, содержащих аминокислотные последовательности 8Е0 ГО N0:37, 12 8, 22, 105, 41 и 119 соответственно;
(χίν) ЬСОК1, ЬСОК2, ЬСОК3, НСОК1, НСОК2 и НСОК3, содержащих аминокислотные последовательности 8Е0 ГО N0:37, 17 4, 22, 175, 176 и 120 соответственно;
(χνί) ЬСОК1, ЬСОК2, ЬСОК3, НСОК1, НСОК2 и НСОК3, содержащих аминокислотные последовательности 8Е0 ГО N0:37, 12 8, 22, 105, 117 и 19 соответственно; и (χνίί) ЬСОК1, ЬСОК2, ЬСОК3, НСОК1, НСОК2 и НСОК3, содержащих аминокислотные последовательности 8Е0 ГО N0:37, 177, 22, 23, 112 и 19, соответственно, и связывает ЕРШ человека, содержащий аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:1, в эпитопе, содержащем или преимущественно содержащем аминокислоту или аминокислоты, находящиеся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из:
a) 4038РЕЕО1К§КЕ1РОЕ§1ТРТК422 (8ЕЕ) ГО N0:12);
b) 406ЕО1К8КЕ1РОЕ81Т419 (8ЕО ГО N0:13);
c) 409К8КЕ1РОЕ81ТРТК422 (8ЕО ГО N0:14); б) 4 АЕЕЕЫЮКЕГОС, .. (8ЕЕ) ГО N0:15); е) 4 К8КЕГОС.Е8ПЕ (8ЕО ГО N0:16) и
Г) 409К8КР1РО415 (8ЕС) ГО N0:95) с Кс, значение которой определено методом ПНР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для ЕаЪ и составляет менее приблизительно 100 нМ.
В отдельных вариантах осуществления МАТ или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, ингибирует интернализациию и/или разрушение ЕРШ человека, индуцируемые гепцидином, таким образом, поддерживая или повышая 1) транспорт железа из клеток, 2) уровень железа в сыворотке, 3) число ретикулоцитов, 4) число красных кровяных телец, 5) гемоглобин, и/или 6) гематокрит в организме индивида, предпочтительно человека, по меньшей мере до 10% по сравнению с показателями указанного индивида при отсутствии МАТ или его антигенсвязывающего фрагмента.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к полинуклеотидам, содержащим нуклеотидную последовательность, кодирующую МАТ против ЕРШ человека, или их антигенсвязывающие фрагменты.
В еще одном аспекте, изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим в составе любые из описанных в настоящей заявке МАТ или их антигенсвязывающие фрагменты, а также фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель. Также изобретение относится к:
1) применению МАТ или их антигенсвязывающих фрагментов, описанных в настоящей заявке, для терапии, предпочтительно, для терапии, направленной на лечение или профилактику развития анемии,
2) применению МАТ или их антигенсвязывающих фрагментов, описанных в настоящей заявке, для комбинированной терапии, предпочтительно для комбинированной терапии, направленной на лечение
- 2 020472 или профилактику развития анемии,
3) применению МАТ или их антигенсвязывающих фрагментов, описанных в настоящей заявке, для лечения или профилактики развития анемии, поддержания или повышения уровней железа в сыворотке, числа ретикулоцитов, числа красных кровяных телец, гемоглобина и/или гематокрита в организме индивида, предпочтительно, человека,
4) применению МАТ или их антигенсвязывающих фрагментов, описанных в настоящей заявке, для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики развития анемии, поддержания или повышения уровней железа в сыворотке, числа ретикулоцитов, числа красных кровяных телец, гемоглобина и/или гематокрита в организме индивида, предпочтительно человека, и
5) применению МАТ или их антигенсвязывающих фрагментов, описанных в настоящей заявке, для получения лекарственного средства, предназначенного для применения в комбинированной терапии, направленной на лечение или профилактику развития анемии, повышение уровней железа в сыворотке, числа ретикулоцитов, числа красных кровяных телец, гемоглобина и/или гематокрита в организме человека, при этом указанное лекарственное средство вводят в сочетании с одним или более ΕδΑ или другим терапевтическим средством, или в сочетании с терапевтическим лечением, обычно используемым для лечения анемии, поддержания или повышения уровней железа в сыворотке, числа ретикулоцитов, числа красных кровяных телец, гемоглобина и/или гематокрита в организме человека.
В другом аспекте, изобретение относится к способам:
1) поддержания или повышения уровней железа в сыворотке, числа ретикулоцитов, числа красных кровяных телец, гемоглобина и/или гематокрита в организме индивида, предпочтительно человека, включающие введение индивиду, при необходимости, эффективных количеств МАТ или его антигенсвязывающего фрагмента, описанного в настоящей заявке,
2) лечения или прифилактики развития анемии, включая, но не ограничиваясь, анемию хронических заболеваний, анемию в результате злокачественного процесса и анемию воспалительного характера, включающие введение индивиду, предпочтительно человеку, при необходимости, эффективного количества МАТ или его антигенсвязывающего фрагмента, описанного в настоящей заявке,
3) способ лечения или профилактики развития анемии, включая, но не ограничиваясь, анемию хронических заболеваний, анемию в результате злокачественного процесса и анемию воспалительного характера, включающие введение индивиду, предпочтительно пациент-человеку, при необходимости, эффективного количества комбинации МАТ или их антигенсвязывающих фрагментов, описанных в настоящей заявке, или смеси по меньшей мере одного МАТ и по меньшей мере одного антигенсвязывающего фрагмента, описанного в настоящей заявке, и
4) любой из приведенных выше способов 1-3, дополнительно включающий введение указанному пациенту-человеку ΕδΑ или другого терапевтического средства, или применение терапевтического лечения, обычно используемого для поддержания или повышения уровней железа в сыворотке, числа ретикулоцитов, числа красных кровяных телец, гемоглобина и/или гематокрита в организме человека.
В еще одном аспекте, изобретение относится к способам ингибирования интернализации и разрушения ΡΡΝ1, индуцированных зрелым гепцидином, включающие приведение указанного ΡΡΝ1 во взаимодействие с эффективным количеством по меньшей мере одного МАТ или его антигенсвязывающего фрагмента, описанных в настоящей заявке.
Также настоящее изобретение относится к способу уменьшения связывания зрелого гепцидина человека с ΡΡΝ1 человека, включающему приведение указанного ΡΡΝ1 человека во взаимодействие с эффективным количеством по меньшей мере одного МАТ и/или его антигенсвязывающего фрагмента, описанных в настоящей заявке.
Также настоящее изобретение относится к способу снижения количества белков ΡΡΝ1, интернализованных клеткой, экспрессирующей белки ΡΡΝ1, включающему введение пациенту-человеку, при необходимости, эффективного количества по меньшей мере одного МАТ и/или его антигенсвязывающего фрагмента, описанных в настоящей заявке.
На фиг. 1 представлены последовательности различных пептидов (δΕΟ ГО ΝΟ:96-102), содержащих в составе фрагменты иммуногена, применявшегося для создания антител против ΡΡΝ1, и результаты экспериментов по связыванию пептидов антителами, в ходе которых применяли пептиды для определения эпитопа ΜΑΤ 34Α9 против ΡΡΝ1. Подчеркнутые аминокислоты обозначают реальные последовательности ферропортина. ΜΑΤ 34Α9 связывается с пептидами РриЕЗа (δΕΟ ΙΌ ΝΟ:96), 060719Ζ (δΕΟ ΙΌ ΝΟ:97), 0708Ь4С (δΕΟ ΙΌ ΝΟ:101) и 0708Б40 (δΕΟ ΙΌ ΝΟ:102), каждый из которых содержит общую аминокислотную последовательность ΡδΡΕΙΟΟ (δΕΟ ΙΌ ΝΟ:95).
На фиг. 2А представлены аминокислотные последовательности полноразмерной каркасной области 02 легкой цепи человека с рассеянными участками СОК. Четыре каркасные области обозначены как ЕКЬ1, 2, 3 и 4 (δΕΟ ΙΌ ΝΟ:74, 75, 76 и 77 соответственно).
На фиг. 2В представлена аминокислотная последовательность каркасной области УН1-69 тяжелой цепи человека с рассеянными участками СОК. Четыре каркасные области обозначены как ЕКН1-4 (δΕΟ ГО ΝΟ:78-81 соответственно).
На фиг. 3А представлены аминокислотные последовательности каркасной области 018 легкой цепи
- 3 020472 человека с рассеянными участками СГОР. Четыре каркасные области обозначены как ЕКЬ1, 2, 3 и 4 (8ЕО ГО N0:74, 75, 82 и 77 соответственно). Остатки, отличные от остатков в составе 02, выделены жирным шрифтом и подчеркнуты.
На фиг. 3В представлена аминокислотная последовательность каркасной области УН1-18 тяжелой цепи человека с рассеянными участками СОК. Четыре каркасные области обозначены как ЕКН1, 2, 3 и 4 (8Е0 ГО N0:83, 79, 84 и 81 соответственно). Остатки, отличные от остатков в составе УН1-69, выделены жирным шрифтом и подчеркнуты.
На фиг. 4А представлены аминокислотные последовательности каркасной области Ь12 легкой цепи человека с рассеянными участками СОК. Четыре каркасные области обозначены как РКР1, 2, 3 и 4 (8Е0 ГО N0:85, 75, 86 и 77, соответственно). Остатки, отличные от остатков в составе 02, выделены жирным шрифтом и подчеркнуты.
На фиг. 4В представлена аминокислотная последовательность каркасной области УН1-46 тяжелой цепи человека с рассеянными участками СОК. Четыре каркасные области обозначены как ЕКН1, 2, 3 и 4 (8Е0 ГО N0:83, 79, 87 и 81, соответственно). Остатки, отличные от остатков в составе УН1-69, выделены жирным шрифтом и подчеркнуты.
На фиг. 5 представлены аминокислотные последовательности каркасной области Ь1 легкой цепи человека с рассеянными участками СОК. Четыре каркасные области обозначены как РКР1, 2, 3 и 4 (8Е0 ГО N0:74, 168, 76 и 169 соответственно). Остатки, отличные от остатков в составе 02, выделены жирным шрифтом и подчеркнуты. Последовательность участка РК1 каркасной области Ь12 легкой цепи зародышевой линии человека представлена в 8Е0 ГО N0:85; согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения также предложен вариант, в котором аминокислотная последовательность участка РК1 каркасной области Ь1 легкой цепи человека соответствует последовательности 8Е0 ГО N0:74.
На фиг. 6 представлен график, отражающий уровни гепцидина в сыворотке самцов яванского макака после внутривенного (В.В.) введения 1д01 мыши в качестве контроля или МАТ 109 мыши в однократной дозе, составлявшей 30 мг/кг. Данные получены на отдельных животных.
На фиг. 7 представлен график, отражающий уровни железа в сыворотке самцов яванского макака после внутривенного (В.В.) введения 1д01 мыши в качестве контроля или МАТ 109 мыши в однократной дозе, составлявшей 30 мг/кг. Данные получены на отдельных животных.
На фиг. 8 представлены аминокислотные последовательности и консенсусная аминокислотная последовательность предпочтительных вариабельных участков тяжелой цепи для антител и их антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению. Точка (.) обозначает, что аминокислота в указанном положении идентична соответствующей аминокислоте в составе последовательности номер 1. Участки СОК подчеркнуты и выделены жирным шрифтом для последовательности номер 1.
На фиг. 9 представлены аминокислотные последовательности и консенсусная аминокислотная последовательность предпочтительных вариабельных участков легкой цепи для антител и их антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению. Точка (.) обозначает, что аминокислота в указанном положении идентична соответствующей аминокислоте в составе последовательности номер 1. Участки СОК подчеркнуты и выделены жирным шрифтом для последовательности номер 1.
На фиг. 10 представлены концентрации МАТ 4А10-3 и МАТ СотЬШ в сыворотке яванского макака после однократной В.В. болюсной инъекции в дозе, составлявшей 0,3, 1,0 или 3,0 мг/кг. Концентрации МАТ СотЬШ в сыворотке после введения дозы, составлявшей 0,3 мг/кг, были ниже предела чувствительности анализа (<20 нг/мл). Данные представлены в виде значений ± 8Ό.
На фиг. 11 представлены концентрации МАТ 4А10-3 и МАТ СотЬШ в сыворотке крыс линии §ргадие Оа\у1еу после однократной В.В. болюсной инъекции в дозе, составлявшей 3,0 мг/кг. Данные представлены в виде значений ± 8Ό.
В настоящей заявке использованы следующие аббревиатуры: БЦА: бицинхониновая кислота, БСА: альбумин бычьей сыворотки, СОК: гипервариабельный участок, ДТТ: дитиотреитол, ЭМЕМ: модифицированная по способу Дульбекко среда Игла, Д-ФСБ: фосфатно-буферный солевой раствор Дульбекко, ЭДТА: этилендиаминтетрауксусная кислота, ЕЬ1§А: иммуноферментный анализ, Е8А: средство, стимулирующий эритропоэз, РАС: железо аммиачное лимоннокислое - двойная лимоннокислая соль окиси железа и аммония, ФБС: эмбриональная бычья сыворотка, Ре:НТА: нитрилотриацетат железа, РЬИ: единицы флуоресценции, 0РР: зеленый флуоресцентный белок, В.В.: внутривенный, 1РТ0: изопропил-β-Ό1-тиогалактопиранозид, 1МАС: аффинная хроматография с использованием иммобилизованных металлов, МАТ: моноклональное антитело (моноклональные антитела), 0ΡΌ: о-фенилендиамин дигидрохлорид, ФСБ: фосфатно-буферный солевой раствор, ФСБ-Т: фосфатно-буферный солевой раствор с Т\\сеп20, δΌδ: натрий додецил сульфат, ТБС: трис-буферный солевой раствор, трис: трис-(гидроксиметил)аминометан, Тгйоп-Х: 4-(1,1,3,3-тетраметилбутил)-фенил-полиэтиленгликоль трет-октилфениловый эфир т-октилфеноксиполиэтоксиэтанол полиэтиленгликоля, Тетееи-20: полисорбат 20.
МАТ или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению связываются с эпитопом, содержащим или, по существу, состоящим из или состоящим из аминокислоты или аминокислот, находящихся в 403-422 положениях (8Е0 ГО N0:12) полипептида ЕРШ человека, характеризующегося
- 4 020472 аминокислотной последовательностью 8ЕЦ ГО N0:1. В предпочтительных вариантах осуществления указанные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты ингибируют интернализацию и/или разрушение ΡΡΝ1 человека, вызываемые зрелым гепцидином человека, и, следовательно, усиливают транспорт железа из клеток ίη νίίτο и ίη νίνο и повышают уровни железа в сыворотке ίη νίνο. Например, в предпочтительных вариантах осуществления антитела по настоящему изобретению значительно снижают накопление ферритина, вызываемое зрелым гепцидином, в клетках Сасо-2, линии клеток энтероцитов человека, эндогенно экспрессирующих ΡΡΝ1, ίη νίίτο (см. пример 5).
Полноразмерное антитело в естественных условиях представляет собой молекулу иммуноглобулина, состоящую из 2 тяжелых цепей и 2 легких цепей, связанных между собой дисульфидными связями. Аминоконцевой участок каждой цепи содержит вариабельную область, длина которой составляет примерно 100-110 аминокислот или более, отвечающую за первичное распознавание антигена посредством содержащихся в нем участков СОК. Карбоксиконцевой участок каждой цепи определяет константную область, ответственную за первичную эффекторную функцию.
Термин СОК используется в настоящей заявке для определения не перекрывающихся антигенсвязывающих активных центров антитела, находящихся в составе вариабельных областей полипептидов как тяжелой, так и легкой цепей. Указанные участки были описаны Каба1 е1 а1., 1. ΒίοΙ. СЬет. 252, 6609-6616 (1977), Каба1 еί а1., ^ециенеех οί ρ^οίе^η οί ίιηιηιιηο1ο§ίο;·ι1 нИегей. (1991) и С1ю1Фа еί а1., ί. ΜοΙ. ΒίοΙ. 196:901-917 (1987), а также МасСа11ит, еί а1., ί. Μο1. Βίοί, 262:732-745 (1996), определения которых включают перекрывание или составление наборов аминокислотных остатков при сравнении.
Участки СОК перемежаются более консервативными областями, называемыми каркасными областями (РК). Каждый вариабельный участок легкой цепи (ЬСУК) и вариабельный участок тяжелой цепи (НСУК) состоит из трех участков СОК и четырех РК, расположенных в следующем порядке в направлении от аминоконца к карбоксиконцу: РК1, СОК1, РК2, СОК2, РК3, СОК3, РК4. Три участка СОК в составе легкой цепи обозначают как ЬСОК1, ЬСОК2 и ЬСОКЗ, а три участка СОК в составе тяжелой цепи обозначают как НСОК1, НСОК2 и НСОКЗ. Участки СОК содержат большую часть аминокислотных остатков, вступающих в специфические взаимодействия с антигеном. Нумерация и расположение аминокислотных остатков, образующих СОК, в составе участков ЬСУК и НСУК соответствует широко известным обозначениям (например, КабаЕ (1991) и/или С1ю1Фа (1987)).
Выражение нумерация по КабаС, используемое в настоящем описании, является общепринятым в данной области техники и относится к системе нумерации более вариабельных аминокислотных остатков (то есть, гипервариабельных), чем другие аминокислотные остатки в составе участков тяжелой и легкой цепей антитела (КаЬаί еί а1., Αηη. ΝΥ Асаб. 8сЁ, 190:382-93 (1971); КаЬаί еί а1., Бедненек οί Ρτοίе^η8 οί Iттиηο1οд^са1 1Шеге5Е ΡίΓίΙι Εάίίίοη, υ.8. ОерагПпеШ οί НеаЬЬ апб Нитаη 8егуюе5, МН Ρι^Ι^Ιίοΐ'! Νο. 91-3242 (1991)).
Термин моноклональное антитело (МАТ), используемый в настоящей заявке, относится к антителу, полученному из одиночной копии или клона, включая, например, любой клон эукариотических, прокариотических клеток или фагов, но не к способу его создания. МАТ, предусматриваемые по настоящему изобретению, предпочтительно представлены в гомогенной или главным образом в гомогенной популяции. Полноразмерные МАТ содержат 2 тяжелых цепи и 2 легких цепи. Моноклональные антитела или их антиген-связывающие фрагменты по настоящему изобретению можно создавать, например, методами рекомбинации, фагового отображения, синтеза, например, СОК-прививки, или сочетания указанных методик или при помощи других технологий, известных в данной области техники.
Выражение антигенсвязывающие фрагменты в составе МАТ, используемые в настоящей заявке, включает, например, Раб-фрагменты, Раб'-фрагменты, Р(аб')2-фрагменты и одноцепочечные участки Ρν.
Термин антитело или его грамматические варианты, если не указано иное, относится к МАТ или их антигенсвязывающим фрагментам, а также к их комбинациям, включая, например, комбинации Рабфрагментов и комбинаций МАТ и Раб-фрагментов. Новые антитела, проявляющие такие же функциональные свойства, как и антитела по настоящему изобретению, можно создавать при помощи общепринятых способов. Например, можно проводить иммунизацию мышей, например, клетками, экспрессирующими ΡΡΝ1, ΡΡΝ1 или его фрагментами, можно выделять и очищать образуемые антитела и проводить исследования для определения того, обладают ли они связывающими, фармакокинетическими и функциональными свойствами, сходными или идентичными свойствам антител, описанных в настоящей заявке, при помощи способов, описанных ниже, в примерах 3-14. Антигенсвязывающие фрагменты также можно получать при помощи общепринятых методов, хорошо известных в данной области техники. Способы создания и очистки антител и их антигенсвязывающих фрагментов также хорошо известны в данной области техники.
Выражение специфически связывает, используемое в настоящей заявке, относится к способности антитела по настоящему изобретению связывать определенный полипептид или пептид, предпочтительно ферропортин 1 человека, содержащий аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО Ν0:1, или его определенный пептидный фрагмент, с Кс, значение которой, определяется, например, при анализе аффинности методом ЕЬ18А или НИР, согласно описанному в настоящей заявке, или в ходе сходных методов анализа, известных в данной области техники, и составляет менее приблизительно 1000 нМ, менее
- 5 020472 приблизительно 100 нМ, менее приблизительно 10 нМ, менее приблизительно 1 нМ, менее приблизительно 100 пМ или менее приблизительно 10 пМ.
Дополнительно, или в качестве альтернативного варианта, выражение специфически связывает, используемое в отношении антитела по настоящему изобретению, обозначает, что способность антитела связывать или обнаруживать ферропортин 1 человека, содержащий аминокислотную последовательность 8Еф ГО N0:1, или фрагмент его пептида, по меньшей мере приблизительно в 5 раз выше, по меньшей мере приблизительно в 10 раз выше, по меньшей мере приблизительно в 20 раз выше, по меньшей мере приблизительно в 50 раз выше, по меньшей мере приблизительно в 100 раз выше, по меньшей мере приблизительно в 200 раз выше, по меньшей мере приблизительно в 500 раз выше или по меньшей мере приблизительно в 1000 раз выше, чем способность указанного антитела связывать или обнаруживать другой полипептид (например, гепарин) или, возможно, другой определенный фрагмент пептида ферропортина 1 человека.
Также настоящее изобретение относится к выделенному полинуклеотиду, содержащему нуклеотидную последовательность, кодирующую МАТ или его антигенсвязывающий фрагмент. В отдельных вариантах осуществления настоящее изобретение также относится к выделенному полинуклеотиду, содержащему нуклеотидную последовательность, кодирующую: ί) полипептид тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность 8Еф ГО N0:50, 51, 52, 150, 152, 156, 160 и 164 и/или и) полипептид легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность 8Еф ГО N0:53, 54, 55, 151, 154, 158, 162 и 166.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к рекомбинантному вектору экспрессии, содержащему полинуклеотид, кодирующий МАТ или его антигенсвязывающий фрагмент. В отдельных вариантах осуществления настоящее изобретение также относится к рекомбинантному вектору-экспрессии, содержащему полинуклеотид, кодирующий (ί) полипептид тяжелой цепи, характеризующийся аминокислотной последовательностью 8Еф ГО N0:50, 51, 52, 150, 152, 156, 160 и 164 и/или и) полипептид легкой цепи, характеризующийся аминокислотной последовательностью 8Еф ГО N0:53, 54, 55, 151, 154, 158, 162 и 166.
Термин гепцидин, используемый в настоящей заявке, относится к любой форме белка гепцидина, обнаруживаемой в организме млекопитающих. Термин зрелый гепцидин, используемый в настоящей заявке, относится к любой зрелой, биологически активной форме белка гепцидина, экспрессируемой в организме млекопитающих. Выражение гепцидин человека, используемое в настоящей заявке, относится к любой форме белка гепцидина, обнаруживаемой в организме человека. Выражение зрелый гепцидин человека, используемое в настоящей заявке, относится к любой зрелой, биологически активной форме белка гепцидина, обнаруживаемой в организме человека. Предпочтительно, термин зрелый гепцидин человека относится к гепцидину-25 человека, зрелой форме гепцидина человека, характеризующейся аминокислотной последовательностью 8Еф ГО N0:91.
Термин биологическая активность, используемый в отношении зрелых полипептидов гепцидина, например, гепцидина-25, включает, но не ограничивается указанными, специфическое связывание зрелого гепцидина с его рецептором ЕРШ, одну или более функций зрелого гепцидина, опосредованных ЕРШ, например, а) интернализация и/или разрушение ЕРШ, индуцированные зрелым гепцидином (см., например, №ше1к Е. е! а1. , Заеисе, 306:2090-2093, (2004)), Ь) регуляция зрелым гепцидином опосредованных ЕРШ ί) выхода железа, к) уровней железа в сыворотке, ίίί) числа ретикулоцитов, ίν) числа красных кровяных телец, ν) уровня гемоглобина, νί) гематокрита, νίί) уровней экспрессии полипептидов гепцидина и/или νίίί) распределения полипептидов гепцидина в тканях.
Выражение сконструированные антитела человека относится к отдельным антителам, описываемым в настоящей заявке, а также к антителам, обладающим связывающими или функциональными способностями по настоящему изобретению, сходными с антителами, описываемыми в настоящей заявке и содержащими каркасные области, являющимися каркасными областями иммуноглобулина человека или, по существу, каркасными областями иммуноглобулина человека, связанными с участками СЭР, полученными из антитела, не являющегося антителом человека, или его антигенсвязывающих фрагментов, описываемых в настоящей заявке. Термин каркасная область или последовательность каркасной области относится к любой из каркасных областей с 1 по 4. Сконструированные антитела человека и их антиген-связывающие фрагменты, входящие в объем настоящего изобретения, включают молекулы, причем одна или более каркасных областей 1-4 является полностью или, по существу, областями иммуноглобулина человека, то есть, в их составе может присутствовать любая возможная комбинация полностью или, по существу, каркасных областей иммуноглобулина человека 1-4. Например, указанные молекулы включают молекулы, каркасная область 1 и каркасная область 2, каркасная область 1 и каркасная область 3, каркасные области 1, 2 и 3, и т.д., которых являются или, по существу, являются каркасными областями иммуноглобулина человека. Термин по существу, каркасные области человека относится к каркасным областям, характеризующимся последовательностью по меньшей мере на 80% идентичной известной последовательности каркасной области зародышевой линии человека. В предпочтительном варианте, последовательности каркасной области человека характеризуются последовательностью по меньшей мере приблизительно на 85%, приблизительно на 90% или приблизительно на 95% идентичной извест- 6 020472 ной последовательности каркасной области зародышевой линии человека.
К каркасным областям человека относятся каркасные области, идентичные известной последовательности каркасной области зародышевой линии человека. Последовательности каркасной области зародышевой линии человека доступны в 1тМипоСепеТ1С8 (ΙΜΟΤ) на их интернет-сайте Ьйр://1т§1.с1пе8.Гг или в ТЬе 1ттипод1оЪи1ш Рас18 Воок Майе-Раи1е ЬеГгапс апй Оегагй ЬеГгапс. Асайетк Рге88, 2001, Ι8ΒΝ 012441351. Например, каркасную область легкой цепи зародышевой линии можно выбрать из группы, состоящей из: А11, А17, А18, А19, А20, А27, А30, Ь1, Ь11, Ь12, Ь2, Ь5, Ь15, Ьб, Ь8, 012, 02 и 08, а каркасную область тяжелой цепи зародышевой линии можно выбрать из группы, состоящей из: УН2-5, VI 12-26, УН2-70, УН3-20, УН3-72, УН1-46, УН3-9, УН3-бб, УН3-74, УН4-31, УН1-18, УН1-69, νΐ-13-7, УН3-11, ^3-15, ^3-21, ν43-23, ^3-30, VI 1.3-48, VI 14-3‘λ VI14-59 и ^5-51. В предпочтительном варианте, каркасные области легкой цепи зародышевой линии выбирают из группы, состоящей из 02, 018 и Ь12, Ь1, а каркасные области тяжелой цепи зародышевой линии выбирают из группы, состоящей из νΉ1-69, νΉ1-18 или ν41-46. В более предпочтительном варианте, каркасные области легкой цепи зародышевой линии выбирают из группы, состоящей из 02 и Ь1, каркасные области тяжелой цепи зародышевой линии выбирают из группы, состоящей из νΠ1-69 и νΠ1-18. В наиболее предпочтительном варианте, каркасная область легкой цепи зародышевой линии представляет собой 02, а каркасная область тяжелой цепи зародышевой линии представляет собой νΠ1-69.
Кроме сконструированных антител человека, описанных в настоящей заявке, при помощи различных способов возможно создание сконструированных антител человека, проявляющих функциональные свойства, близкие к свойствам антител по настоящему изобретению. Определенные антитела, описываемые в настоящей заявке, можно использовать в качестве матриц или родительских антител для создания новых антител. В соответствии с одним из подходов, участки СЭР родительского антитела трансплантируют в каркасную область человека, обладающую высоким процентом идентичности каркасной области родительского антитела. Идентичность последовательности новой каркасной области в общем случае будет составлять по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95% или по меньшей мере приблизительно 99% идентичности последовательности соответствующей каркасной области в составе родительского антитела. Описанная трансплантация может приводить к снижению аффинности связывания по сравнению с показателями для родительского антитела. В таком случае, можно осуществить обратную мутацию каркасной области до родительской каркасной области в определенных положениях на основе специфичных критериев, описываемых Онеен е! а1. , Ргос. Ν;·ιΐ1. Асай. 8ст И8А., 88:2869 (1991). Дополнительные ссылки на описание способов, полезных при гуманизировании антител мыши, включают патенты США № 4816397; 5225539 и 5693761; компьютерные программы АВМ0Э и ΕΝΟΧΛΩ, описанные в ЬеуШ 1., Мо1. Вю1. 168:595-620 (1983); и способ Винтера и его коллег (1опе8 е! а1., №1иге 321:522-525 (1986); ШесЬтапп, е! а1., №1иге, 332:323-327 (1988); и Vе^Ьоеуеп е! а1., 8аепсе, 239:15341536 (1988).
Определение остатков, рассматриваемых для осуществления обратной мутации, можно осуществлять следующим способом.
Если аминокислота попадает в следующую категорию, используемую аминокислоту в составе каркасной области последовательности зародышевой линии человека (каркасной области-акцептора) замещают на аминокислоту из состава каркасной области родительского антитела (каркасной областидонора):
(a) аминокислота каркасной области человека каркасной области-акцептора является не характерной для каркасных областей человека в данном положении, тогда как соответствующая аминокислота в составе последовательности донорного иммуноглобулина является типичной для каркасных областей человека в данном положении;
(b) аминокислота в данном положении непосредственно граничит с одним из участков СЭР; или (c) любой атом боковой цепи аминокислоты в составе каркасной области расположен на расстоянии 5-6 ангстрем (от центра одного атома до центра другого атома) от любого атома аминокислоты в составе СЭР в трехмерной модели строения иммуноглобулина.
Если каждая из аминокислот каркасной области человека в составе каркасной области-акцептора и каждая из аминокислот каркасной области человека в составе каркасной области-донора является обычно не характерной для каркасных областей человека в данном положении, указанную аминокислоту можно заместить аминокислотой, являющейся типичной для каркасных областей человека в данном положении. Приведенное условие для обратной мутации позволяет восстанавливать активность родительского антитела.
Другой подход к созданию сконструированных антител человека, проявляющий функциональные свойства, близкие к свойствам антител, описываемых в настоящей заявке, включает внесение случайных мутаций в аминокислотный состав трансплантированных участков СЭР без изменения каркасной области, и скрининг образованных молекул по признаку аффинности связывания и других функциональных свойств, аналогичных свойствам родительского антитела или более сильных. Также можно вносить одиночные мутации в каждом аминокислотном положении в составе каждого участка СЭР, с последующей
- 7 020472 оценкой действия указанных мутаций на аффинность связывания и другие функциональные свойства. Одиночные мутации, внесение которых приводит к улучшению свойств, можно сочетать для оценки их действия в комбинациях.
Кроме того, возможно сочетание обоих описанных выше подходов. После трансплантации СОК. возможно осуществление обратной мутации определенных каркасных областей в дополнение к внесению замен аминокислот в участки СОК. Указанная методика описана в \\ль е( а1., I. Μοί. Βΐοΐ. 294:151162 (1999). В предпочтительном варианте, замены аминокислот в составе каркасных областей ограничивают одним, двумя или тремя положениями в пределах одной или более каркасной области тяжелой и/или легкой цепи, описываемых в настоящем документе (то есть, в каркасных областях, изображенных на фиг. 2-5). В предпочтительном варианте, замены аминокислот в участках СОК ограничивают одним, двумя или тремя положениями в пределах одного или более из любых трех участков СОК тяжелой и/или легкой цепи. Сочетания различных описанных замен в составе каркасной области и участков СОК также входят в объем настоящего изобретения. В отдельных вариантах осуществления данного аспекта настоящего изобретения все каркасные области вариабельных участков в составе легкой и тяжелой цепей указанных сконструированных МАТ человека или их антигенсвязывающих фрагментов являются областями иммуноглобулина человека.
Ниже, в табл. 1А и 1В приведены аминокислотные последовательности СОК и консенсусные аминокислотные последовательности предпочтительных антител или их антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению. Ниже, в табл. 2А и 2В, приведены аминокислотные последовательности СОК и консенсусные аминокислотные последовательности более нредночтительных антител или их антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению.
Таблица 1А
ГаЬ ΗΟϋΚΐ НСЦК2 НСОКЗ
34А9 ΟΥΑΕΤΝΕΊ,ΙΕ ΤΙΝΡΕΤ66ΤΚΥΝΕΚΡΚ0 ΕΕΈΌΥ
(ЗЕО Ю N0:17) (ЗЕО Ю N0:18) (ЗЕО Ю N0:19)
1В1 СУАРТЗРЫЕ (ЗЕО Ю N0:23) (ЗЕО Ю N0:18) (ЗЕО Ю N0:19)
Ш2 (ЗЕО Ю N0:17) ΤΙΝΡΚΤΟΘΤΚΥΝΕΚΓΚΟ (ЗЕО Ю N0:24) (ЗЕО Ю N0:19)
1ЕЗ (ЗЕО Ю N0:17) ΤΙΝΡΚΤ6βΤΚΥΝΕΚΓΚΟ (ЗЕО Ю N0:25) (ЗЕО Ю N0:19)
2А6 (ЗЕО Ю N0:17) ΤΙΝΡΕΤΟΘΤΚΥΝΑΚΓΚΟ (ЗЕО Ю N0:26) (ЗЕО Ю N0:19)
2Н10 (ЗЕО Ю N0:17) (ЗЕО Ю N0:18) (ЗЕО Ю N0:19)
ЗА8 (ЗЕО Ю N0:17) (ЗЕО Ю N0:18) (ЗЕО Ю N0:19)
209 (ЗЕО Ю N0:17) (ЗЕО Ю N0:18) (ЗЕО Ю N0:19)
1АЗ (ЗЕО Ю N0:23) (ЗЕО Ю N0:25) (ЗЕО Ю N0:19)
2Е2 (ЗЕО Ю N0:23) (ЗЕО Ю N0:24) (ЗЕО Ю N0:19)
2А5 (ЗЕО Ю N0:23) (ЗЕО Ю N0:25) (ЗЕО Ю N0:19)
2В2 (ЗЕО Ю N0:23) (ЗЕО Ю N0:25) (ЗЕО Ю N0:19)
Ю1 (ЗЕО 10 N0:23) ΤΙΝΡΚΤΟΟΤΚΥΝΑΚΕΡΟ (ЗЕО Ю N0:34) (ЗЕО Ю N0:19)
- 8 020472
1Е2 (5Е0 ТО N0:23) (ЗЕО ТО N0:24) (ЗЕО ТО N0:19)
Ьи-1 (ЗЕО ТО N0:23) (ЗЕО ТО N0:24) (ЗЕО Ю N0:19)
169 (ЗЕО ТО N0:23) (ЗЕО ТО N0:24) (ЗЕО Ю N0:19)
Ьи61 (ЗЕО ТО N0:23) Τ5ΝΡΚΤ66ΤΚΥΝΕΚΕΚ6 (ЗЕО ТО N0:35) (ЗЕО ТО N0:19)
НиА2 (ЗЕО ТО N0:23) ΤΙΝΡΒ.Τ66ΤΚΥΚΕΚΕΚ6 (ЗЕО ТО N0:36) (ЗЕО Ю N0:19)
ЬиАЗ (ЗЕО ТО N0:23) (ЗЕО ТО N0:24) (ЗЕО Ю N0:19)
ЬиВЗ (ЗЕО ТО N0:23) (ЗЕО ТО N0:24) (ЗЕО Ю N0:19)
НиИЗ (ЗЕО ТО N0:23) (ЗЕО ТО N0:24) (ЗЕО Ю N0:19)
ЬиН5 (ЗЕО ТО N0:23) (ЗЕО ТО N0:24) (ЗЕО ТО N0:19)
ЬиНб (ЗЕО ТО N0:23) (ЗЕО ТО N0:24) (ЗЕО Ю N0:19)
1В5 (ЗЕО ТО N0:23) Τ3ΝΡΚΤ66ΤΚΥΚΕΚΡΚ6 (ЗЕО Ю N0:41) (ЗЕО Ю N0:19)
265 (ЗЕО ТО N0:23) (ЗЕО ТО N0:41) (ЗЕО ТО N0:19)
3ϋ8 (ЗЕО ТО N0:23) (ЗЕО ТО N0:41) (ЗЕО Ю N0:19)
*С1 6ΥΑΓΤΧιΕΙΠΕ (ЗЕО ТО N0:30) ΤΙΝΡΧ2Τ66ΤΚΥΝΧ3ΚΡΒ6 (ЗЕО ТО N0:31) (ЗЕО Ю N0:19)
*С2 (ЗЕО ТО N0:30) ΤΧ6ΝΡΧ2Τ66ΤΚΥ Х7Х3КРК6 (ЗЕО ТО N0:43) (ЗЕО Ю N0:19)
*СЗ (ЗЕО ТО N0:23) (ЗЕО ТО N0:41) (ЗЕО ТО N0:19)
*С4 (ЗЕО ТО N0:23) (ЗЕО ТО N0:41) (ЗЕО ТО N0:19)
*С5 (ЗЕО ТО N0:30) (ЗЕО ТО N0:43) (ЗЕО ТО N0:19)
Таблица 1В
РаЬ ЬСБК1 ЬСБК.2 ьсвкз
34А9 ΚΑ5Κ3Ι3ΚΥΙΑ АбЗТЬНЗ ΟΟΗΝΕΥΡΥΤ
(ЗЕО ТО N0:20) (ЗЕО ТО N0:21) (ЗЕО ТО N0:22)
1В1 (ЗЕО ТО N0:20) (ЗЕО ТО N0:21) (ЗЕО ТО N0:22)
1Ό2 (ЗЕО ТО N0:20) (ЗЕО ТО N0:21) (ЗЕО ТО N0:22)
1ЕЗ (ЗЕО ТО N0:20) (ЗЕО ТО N0:21) (ЗЕО ТО N0:22)
2А6 (ЗЕО ТО N0:20) (ЗЕО ТО N0:21) (ЗЕО ТО N0:22)
2Н10 (ЗЕО ТО N0:20) АбЗКЬНЗ (ЗЕО Ю N0:27) (ЗЕО ТО N0:22)
- 9 020472
ЗА8 (ЗЕО Ю N0:20) АбЗКЬНЗ (ЗЕО Ю N0:28) (ЗЕО Ю N0:22)
269 (ЗЕО 10 N0:20) АбЗТЬНЗ (ЗЕО Ю N0:21) ΡΟΗΝΕΥΡΥΤ (ЗЕО Ю N0:29)
1АЗ (ЗЕО Ю N0:20) (ЗЕО Ю N0:21) (ЗЕО Ю N0:22)
2Е2 (ЗЕО Ю N0:20) (ЗЕО Ю N0:21) (ЗЕО Ю N0:22)
2А5 (ЗЕО Ю N0:20) (ЗЕО Ю N0:27) (ЗЕО Ю N0:22)
2В2 (ЗЕО Ю N0:20) (ЗЕО 10 N0:27) (ЗЕО Ю N0:29)
1О1 (ЗЕО Ю N0:20) (ЗЕО Ю N0:21) (ЗЕО Ю N0:29)
1Е2 (ЗЕО Ю N0:20) (ЗЕО Ю N0:21) (ЗЕО Ю N0:29)
169 (ЗЕО Ю N0:20) (ЗЕО Ю N0:27) (ЗЕО Ю N0:29)
Ьи-1 (ЗЕО Ю N0:20) (ЗЕО Ю N0:27) (ЗЕО Ю N0:29)
Ьи61 (ЗЕО Ю N0:20) (ЗЕО Ю N0:27) (ЗЕО Ю N0:29)
ЬиА2 (ЗЕО Ю N0:20) (ЗЕО Ю N0:27) (ЗЕО Ю N0:29)
ЬиАЗ ΚΑ3Κ5Ι3ΚΥΤΑ (ЗЕО Ю N0:37) (ЗЕО Ю N0:27) (ЗЕО Ю N0:29)
ЬиВЗ ΚΑ3Κ3Ι3ΚΥ3Α (ЗЕО Ю N0:38) (ЗЕО Ю N0:27) (ЗЕО Ю N0:29)
ЬиБЗ ΒΑ3Κ3Ι3ΚΥΑΑ (ЗЕО Ю N0:39) (ЗЕО Ю N0:27) (ЗЕО Ю N0:29)
ЬиН5 (ЗЕО Ю N0:20) (ЗЕО 10 N0:27) (ЗЕО Ю N0:22)
ЬиНб (ЗЕО Ю N0:20) (ЗЕО Ю N0:27) ΗΟΗΝΕΥΡΥΤ (ЗЕО Ю N0:40)
105 (ЗЕО Ю N0:39) (ЗЕО Ю N0:27) (ЗЕО Ю N0:22)
265 (ЗЕО Ю N0:38) (ЗЕО Ю N0:27) (ЗЕО Ю N0:22)
3ϋ8 (ЗЕО Ю N0:37) (ЗЕО Ю N0:27) (ЗЕО Ю N0:22)
*С1 (ЗЕО Ю N0:20) А63Х4ЬНЗ (ЗЕО Ю N0:32) χ5οηνευρυτ (ЗЕО Ю N0:33)
*С2 ΚΑ3Κ3Ι3ΚΥ ХвА (ЗЕО Ю N0:42) (ЗЕО Ю N0:32) (ЗЕО Ю N0:33)
*СЗ (ЗЕО Ю N0:42) (ЗЕО Ю N0:27) (ЗЕО Ю N0:22)
*С4 (ЗЕО Ю N0:42) (ЗЕО Ю N0:32) (ЗЕО Ю N0:33)
*С5 (ЗЕО Ю N0:42) (ЗЕО Ю N0:32) (ЗЕО Ю N0:33)
*Таблицы 1А и 1В, консенсусные последовательности 1-5 (С1-С5), где Χ1 представляет собой N или δ; Х2 представляет собой Е, К или К; Х3 представляет собой Е или А; Х представляет собой δ или I; Х7 представляет собой N или К, Х4 представляет собой Т, К или К; Х5 представляет собой Ρ, Н, С); Х8 представляет собой Б, Т, δ или А.
- 10 020472
Таблица 2А
ГаЬ НСЭК1 НСОК2 нсокз
3ϋ8 СУАЕТЗЕЫЕ (ЗЕО ГО N0:23) Τ3ΝΡΡΤ00ΤΚΥΚΕΚΕΡ0 (ЗЕО Ю N0:41) ΕΡΓΟΥ (ЗЕО Ю N0:19)
169 (ЗЕО ГО N0:23) (ЗЕО ГО N0:24) (ЗЕО Ю N0:19)
262 СКАЕТЗЕБ1Е (ЗЕО ГО N0:103) (ЗЕО ГО N0:41) (ЗЕО Ю N0:19)
2А1 СКАЕТ5ЕЫЕ (ЗЕО ГО N0:104) (ЗЕО ГО N0:41) (ЗЕО ГО N0:19)
4Н2 СУКЕТЗЕЫЕ (ЗЕО ГО N0:105) (ЗЕО Ю N0:41) (ЗЕО ГО N0:19)
4С2 ОУАЕКЗЕЫЕ (ЗЕО ГО N0:106) (ЗЕО ГО N0:41) (ЗЕО ГО N0:19)
4 АН (ЗЕО 10 N0:23) Τ3ΝΡΚΤΚ6ΤΚΥΚΕΚΕΡ0 (ЗЕО ГО N0:108) (ЗЕО ГО N0:19)
5А2 (ЗЕО ГО N0:23) Τ5ΝΡΚΤ6ΚΤΚΥΚΕΚΕΚ6 (ЗЕО ГО N0:109) (ЗЕО ГО N0:19)
4А10 (ЗЕО ГО N0:23) Τ3ΝΡΚΤ00ΚΚΥΚΕΚΕΡ0 (ЗЕО ГО N0:110) (ЗЕО Ю N0:19)
1ЕЗ (ЗЕО ГО N0:23) Τ3ΝΡΚΤ06ΤΚΥΚΤΚΕΚ0 (ЗЕО Ю N0:111) (ЗЕО ГО N0:19)
- 11 020472
1Р10 (ЗЕО Ю N0:23) Τ3ΝΡΚΤΟΟΤΚΥΚ3ΚΕΡΟ (ЗЕО Ю N0:112) (ЗЕО Ю N0:19)
3ϋ1 (ЗЕО Ю N0:23) Τ3ΝΡΚΤ00ΤΚΥΚΜΚΕΚ0 (ЗЕО Ю N0:113) (ЗЕО Ю N0:19)
1Ε4 (ЗЕО Ю N0:23) Τ3ΝΡΚΊΌ0ΤΚΥΚΕνΕΚ0 (ЗЕО Ю N0:114) (ЗЕО Ю N0:19)
4Η6 (ЗЕО Ю N0:23) Τ3ΝΡΡΤ00ΤΚΥΚΕΚΕΡΡ (ЗЕО Ю N0:115) (ЗЕО Ю N0:19)
163 (ЗЕО Ю N0:23) (ЗЕО Ю N0:41) ЕЕЕУУ (ЗЕО Ю N0:119)
1Β5 (ЗЕО Ю N0:23) (ЗЕО Ю N0:41) (ЗЕО ΙΌ N0:19)
Ь2.2 (ЗЕО Ю N0:23) (ЗЕО Ю N0:41) (ЗЕО Ю N0:19)
Ь2,б (ЗЕО Ю N0:23) (ЗЕО Ю N0:41) (ЗЕО Ю N0:19)
7С8 (ЗЕО Ю N0:23) (ЗЕО Ю N0:41) (ЗЕО Ю N0:19)
6Н4 (ЗЕО Ю N0:23) (ЗЕО Ю N0:41) (ЗЕО Ю N0:19)
7Е4 (ЗЕО Ю N0:23) (ЗЕО Ю N0:41) (ЗЕО Ю N0:19)
СошЬх-11 (ЗЕО Ю N0:23) Τ5ΝΡΡΤ0ΡΤΚΥΚ5ΚΕΡ0 (ЗЕО Ю N0:116) (ЗЕО Ю N0:19)
4А10-3 (ЗЕО Ю N0:23) (ЗЕО Ю N0:110) (ЗЕО Ю N0:19)
Б2.2-4 (ЗЕО Ю N0:23) (ЗЕО Ю N0:110) (ЗЕО Ю N0:19)
1Г8 СУРЕТЗЕЫЕ (ЗЕО Ю N0:105) Τ5ΝΡΡΤ0ΡΤΚΥΚΤΚΕΚ0 (ЗЕО Ю N0:117) (ЗЕО Ю N0:19)
1В7 СУРЕТЗЕЫЕ (ЗЕО Ю N0:105) (ЗЕО Ю N0:41) (ЗЕО Ю N0:119)
Сот116У (ЗЕО Ю N0:23) (ЗЕО Ю N0:112) (ЗЕО Ю N0:19)
Сопзепзи СХхХгЕХзЗЕЫЕ ( Τ3ΝΡΡΤΧ4Χ5Χ6ΚΥΚΧ7 ΕΡΕΧ10Υ
3 б* ЗЕО Ю N0:107) ХдЕРХд (ЗЕО ю N0:118) (ЗЕО Ю N0:120)
- 12 020472
Таблица 2В
РаЬ ЫЯЖ1 ЬСЦК2 ЬСЦКЗ
3ϋ8 ΚΑ3Κ3Ι3ΚΥΤΑ АСЗКЪНЗ ΟΟΗΝΕΥΡΥΤ
(ЗЕО Ю N0:37) (зео га N0:27) (ЗЕО га N0:22)
1С9 (ЗЕО Ιϋ N0:20) (зео га N0:27) (ЗЕО 10 N0:29)
262 (ЗЕО ΙΟ N0:37) (зео га N0:27) (ЗЕО 10 N0:22)
2А1 (ЗЕО га N0:37) (зео га N0:27) (ЗЕО 10 N0:22)
4Н2 (ЗЕО Ю N0:37) (зео га N0:27) (ЗЕО га N0:22)
4С2 (ЗЕО га N0:37) (зео га N0:27) (ЗЕО га N0:22)
4А11 (ЗЕО га N0:37) (зео га N0:27) (ЗЕО 10 N0:22)
5А2 (ЗЕО га N0:37) (зео га N0:27) (ЗЕО 10 N0:22)
4А10 (ЗЕО га N0:37) (зео га N0:27) (ЗЕО 10 N0:22)
1ЕЗ (ЗЕО га N0:37) (зео га N0:27) (ЗЕО 10 N0:22)
1Р1О (ЗЕО га N0:37) (зео га N0:27) (ЗЕО га N0:22)
ЗШ (ЗЕО 10 N0:37) (зео га N0:27) (ЗЕО га N0:22)
1Е4 (ЗЕО 10 N0:37) (зео га N0:27) (ЗЕО 10 N0:22)
- 13 020472
*Таблицы 2А и 2В, консенсусная последовательность 6, где Х1 представляет собой Υ, К или К; Х2 представляет собой А или К; Х3 представляет собой Т или К; Х4 представляет собой О или К; Х5 представляет собой О или К; Х представляет собой Т или К; Х7 представляет собой Е, Т, δ или ^; Х8 представляет собой К или V; Х9 представляет собой О или К; Х10 представляет собой О или V; Х11 представляет собой Ь или К; Х12 представляет собой Н, К, V или Υ; Х13 представляет собой δ, или Υ.
Еще более предпочтительные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению включают ЬСПК1, ЬСПК2, ЬСПК3, НСОК1, НСОК2 и НСОК3, содержащие аминокислотные последовательности δΕΡ ГО ΝΟ:170, 171, 172, 23, 173 и 19, соответственно, или δΕΟ ГО ΝΟ:170, 171, 172, 182, 173 и 19, соответственно. Еще более предпочтительные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению включают ЕСОК1, ЕСОК2, ЕСОК3, НСОК1, НСОК2 и НСОК3,
- 14 020472 содержащие аминокислотные последовательности 8Е0 ГО N0:37, 174, 22, 175, 176 и 120, соответственно. На основе фармакокинетических (см., например, пример 11) и фармакодинамических (см., например, примеры 10 и 12) характеристик, а также функциональных свойств примеров МАТ против ΡΡΝ1, или их антиген-связывающих фрагментов (см., например, примеры 3 (составление карты эпитопов), 4 (аффинность), 5 (действие на концентрации ферритина ίη νίΐίο), 6 (действие на связывание зрелого гепцидина клетками, сконструированными для экспрессии слитого белка ΡΡΝ1-ΟΡΡ ίη νίΐτο), 7 и 9 (действие на интернализацию и разрушение ΡΡΝ1, вызываемые гепцидином, ίη νίΐτο) и 8 (действие на уровни железа в сыворотке ίη νίνο)), наиболее предпочтительными МАТ или их антиген-связывающими фрагментами являются ΜΑΤ 4А10-3, Ь2.2-4 и САтПСУ, или их антигенсвязывающие фрагменты. Аминокислотные последовательности, кодирующие тяжелые цепи, легкие цепи и вариабельные участки тяжелых и легких цепей, а также участки СЭК для моноклональных антител 34А9, 1С9, 3Ώ8, ^тЫН, 4Α10-3, Ь2.2-4, 1В7, 1Ρ8 и ^тПСУ, приведены ниже, в табл. 3(а) и 3(Ь) посредством ссылки на номера последовательностей 8Р() ГО N0.
Таблица 3(а)
МАТ Тяжелая Цепь НСУК НС СОН1 НС СОК2 НС СОКЗ
34А9 50 44 17 18 19
1С9 51 45 23 24 19
3ϋ8 52 46 23 41 19
СотЫ11 150 130 23 116 19
4А10-3 152 134 23 110 19
12.2-4 156 138 23 110 19
1В7 160 146 105 41 119
1Г8 164 142 105 117 19
СотИСУ 179 178 23 112 19
Таблица 3(Ь)
В некоторых вариантах осуществления МАТ против ΡΡΝ1 или их антигенсвязывающие фрагменты, описываемые в настоящей заявке, можно использовать в комбинации с одним или более Е8А для достижения дополнительных преимуществ в отношении повышения уровней железа в сыворотке, повышения гематокрита, повышения уровней гемоглобина, снижения потребности в трансфузии и/или улучшения функционального состояния, продуктивности и качества жизни пациентов, страдающих анемией, по сравнению с терапией, заключающейся во введении Е8А отдельно. Под выражением комбинированная терапия или в комбинации с подразумевают, что МАТ против ΡΡΝ1 или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению вводят отдельно, одновременно или последовательно, вместе с другим агентом, направленным на повышение уровней железа в сыворотке, повышение гематокрита, повышение уровней гемоглобина, снижение потребности в трансфузии и/или улучшение функционального состояния, продуктивности и качества жизни пациентов, страдающих анемией, по сравнению с терапией, заключающейся во введении МАТ против ΡΡΝ1, отдельно.
В некоторых вариантах осуществления, МАТ против ΡΡΝ1 или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению можно вводить пациентам, не переносящим терапию с использованием по
- 15 020472
ΕδΑ, или не чувствительным к ней, вместо указанной терапии.
Выражение средство, стимулирующее эритропоэз или стимулятор эритропоэза относится к веществу, которое напрямую или опосредованно вызывает активацию рецептора эритропоэтина, например, посредством связывания с рецептором, приводящего к его димеризации, или посредством стимуляции эндогенной экспрессии эритропоэтина. ΕδΑ включают эритропоэтин и его варианты, аналоги или производные, связывающиеся с рецептором эритропоэтина и активирующие его; антитела, связывающиеся с рецептором эритропоэтина и активирующие указанный рецептор; или пептиды, связывающиеся и с рецептором эритропоэтина и активирующие его; или небольшие органические химические вещества, молекулярная масса которых может составлять менее приблизительно 1000 Дальтон, связывающиеся с рецептором эритропоэтина и активирующие его. ΕδΑ включают, но не ограничиваются следующими: эпоэтин альфа, эпоэтин бета, эпоэтин дельта, эпоэтин омега, эпоэтин йота, эпоэтин зета и их аналоги, пэгилированный эритропоэтин, карбамилированный эритропоэтин, пептиды-миметики (включая ВМП/гематид), антитела-миметики и ингибиторы ГИФ (см. публикацию патента США № 2005/0020487). Примеры ΕδΑ включают эритропоэтин, дарбэпоэтин, варианты агонистов эритропоэтина и пептиды или антитела, связывающие и активирующие рецептор эритропоэтина, включая вещества, описанные в публикациях заявок на патент США № 2003/0215444 и 2006/0040858, а также молекулы эритропоэтина или их варианты или аналоги, также известные в данной области техники. Молекулы эритропоэтина включают, но не ограничиваются указанными, полипептид, содержащий аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ ΝΟ:88. Значение термина эпоэтин включает, но не ограничивается, следующими веществами: эпоэтин альфа, эпоэтин бета, эпоэтин дельта, эпоэтин омега, эпоэтин йота, эпоэтин гамма, эпоэтин зета и им подобными. Также под эпоэтином также понимают любую из упомянутых выше молекул эпоэтина, подвергнутых химической модификации, например, посредством одного или более растворимых в воде полимеров, например, полиэтиленгликоля (включая ΡВО-ВΡΟ-бета). Примеры последовательностей, способов производства и применения рекомбинантного эритропоэтина человека описаны в нескольких патентных публикациях, включая, но не ограничиваясь патентами США № 4703008 и 4667016. Примеры последовательностей, способов получения и применения дарбэпоэтина и других аналогов эритропоэтина описаны в нескольких патентных публикациях, включая δΙπαΚΙαηά с1 а1., 91/058 67, и РСТ международные публикации заявок на патент № №Ο 95/05465, №Ο 00/24893 и №Ο 01/81405. Производные полипептидов, встречающихся в природе, или их аналогов включают полипептиды, подвергнутые химической модификации, например, с присоединением водорастворимых полимеров (например, пэгилированные), радионуклидов или других молекул, способствующих диагностике, направлению на мишень или терапии.
Термин эритропоэтическое действие обозначает действие, направленное на стимуляцию эритропоэза, подтвержденное в анализе ίη νίνο, например, в анализе методом постгипоксийных полицитемических мышей (см., например, Со1с5 апб ВапдЬат, №1иге, 191:1065 (1961)).
Термин эпитоп относится к участку любой молекулы, способному распознавать и связывать антитело в одном или более антигенсвязывающих фрагментов антитела. Эпитопы часто состоят из группировок таких молекул поверхности клетки, как аминокислоты или боковые цепи сахаров, обладающих химической активностью, и имеют определенные особенности трехмерной структуры и определенные характеристики заряда. Эпитопы ΕΡΝ1 человека, описанные в настоящей заявке, представлены в контексте первичной аминокислотной структуры ΕΡΝ1 (δΕΟ ΙΌ ΝΟ:1). Тем не менее, некоторые из эпитопов могут быть скорее прерывистыми, нежели непрерывными, поскольку аминокислотные остатки могут быть связаны не непрерывной пептидной связью, а находиться в пространственной близости вследствие третичной или четвертичной структуры ΕΡΝ1, в результате формирования которой они могут присутствовать на поверхности молекулы. В предпочтительном варианте МАТ против ΕΡΝ1 или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению связывает ΕΡΝ1 человека, характеризующийся аминокислотной последовательностью δΕΟ ΙΌ ΝΟ:1, в эпитопе, содержащем или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности δΕΟ ΙΌ ΝΟ:9. В более предпочтительном варианте, МАТ против ΕΡΝ1 или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, связывает ΕΡΝ1 человека, содержащего аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ ΝΟ:1 в эпитопе, содержащем или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из δΕΟ ГО ΝΟ:12, 13, 14, 15, 16 и 95. В еще более предпочтительном варианте МАТ против ΕΡΝ1 или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению связывает ΕΡΝ1 человека, содержащий аминокислотную последовательность δΕΟ ГО ΝΟ:1 в эпитопе, содержащем или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из δΕΟ ГО ΝΟ:12, 13, 14, 15, 16 и 95, но не связывает один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из δΕΟ ГО ΝΟ:98, 183-214.
Антитела по настоящему изобретению также связывают ΕΡΝ1 яванского макака (δΕΟ ГО ΝΟ:3), что облегчает обязательные преклинические исследования безопасности и эффективности при разработке лекарственного средства в одной или более моделях на приматах.
Выражение ферропортин 1 человека или, как альтернативный вариант, ΕΡΝ1 человека относит- 16 020472 ся к белку, переносящему железо, экспрессируемому в организме человека, характеризующемуся аминокислотной последовательностью 8ЕО ГО N0:1, а также к вариантам указанного белка, сохраняющим способность переноса клеточного железа в ответ на взаимодействие со зрелым гепцидином человека.
В предпочтительном варианте МАТ против ΡΡΝ1 или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению содержит:
1) вариабельный участок легкой цепи и вариабельный участок тяжелой цепи 8Е0 ГО N0:136 и 8Е0 ГО N0:134 соответственно;
2) вариабельный участок легкой цепи и вариабельный участок тяжелой цепи 8Е0 ГО N0:180 и 8Е0 ГО N0:178 соответственно или
3) вариабельный участок легкой цепи и вариабельный участок тяжелой цепи 8Е0 ГО N0:140 и 8Е0 ГО N0:138 соответственно. В еще более предпочтительном варианте МАТ против ЕРШ. или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, содержит:
1) легкую цепь и тяжелую цепь 8Е0 ГО N0:154 и 8Е0 ГО N0:152 соответственно;
2) легкую цепь и тяжелую цепь 8Е0 ГО N0:181 и 8Е0 ГО N0:179 соответственно или
3) легкую цепь и тяжелую цепь 8Е0 ГО N0:158 и 8Е0 ГО N0:156 соответственно. В еще более предпочтительном варианте моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, содержит:
1) два полипептида легкой цепи и два полипептида тяжелой цепи, при этом каждый из полипептидов легкой цепи характеризуется аминокислотной последовательностью 8Е0 ГО N0:154, и каждый из полипептидов тяжелой цепи характеризуется аминокислотной последовательностью 8Е0 ГО N0:152;
2) два полипептида легкой цепи и два полипептида тяжелой цепи, при этом каждый из полипептидов легкой цепи характеризуется аминокислотной последовательностью 8Е0 ГО N0:181, и каждый из полипептидов тяжелой цепи характеризуется аминокислотной последовательностью 8Е0 ГО N0:179 или
3) два полипептида легкой цепи и два полипептида тяжелой цепи, при этом каждый из полипептидов легкой цепи характеризуется аминокислотной последовательностью 8Е0 ГО N0:158, и каждый из полипептидов тяжелой цепи характеризуется аминокислотной последовательностью 8Е0 ГО N0:156.
Еще более предпочтительным является связывание моноклональным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению ферропортина 1 человека с Кс, значение которой определяется в ходе анализа поверхностного плазмонного резонанса при 25°С и составляет менее приблизительно 10 нМ. В еще более предпочтительном варианте, моноклональное антитело или антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению содержит фрагмент ЕаЬ, где ЕаЬ связывает ферропортин 1 человека с Кс, значение которой определяется в ходе анализа поверхностного плазмонного резонанса при 37°С и составляет менее приблизительно 100 нМ. В еще более предпочтительном варианте, значение степени диссоциации (ко££) для ЕаЬ определяется в ходе анализа ПНР при 37°С для ферропортина 1 человека и составляет приблизительно от 7,5х10-3 с-1 приблизительно до 9х10-4 с-1. В еще более предпочтительном варианте ЕаЬ связывает ферропортин 1 человека с Кс, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 нМ приблизительно до 1 нМ. В еще более предпочтительном варианте, ЕаЬ связывает ферропортин 1 человека с Кс, значение которой находится в интервале приблизительно от 10 нМ приблизительно до 5 нМ. В еще более предпочтительном варианте значение 1С50 для моноклонального антитела или антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению согласно анализу биологической активности гепцидина-25 ίη νίΐτο составляет приблизительно от 100 нМ приблизительно до 1 нМ. В еще более предпочтительном варианте значение 1С50 для моноклонального антитела или антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению находится в интервале приблизительно от 100 нМ приблизительно до 10 нМ согласно анализу биологической активности гепцидина-25 ш νίΐτο. В еще более предпочтительном варианте, биологической активностью гепцидина-25 является интернализация и/или разрушение ферропортина 1. В еще более предпочтительном варианте значение 1С50 для моноклонального антитела или антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению находится в интервале приблизительно от 100 нМ приблизительно до 1 нМ согласно анализу биологической активности гепцидина-25 ш νίνο. В еще более предпочтительном варианте, анализ биологической активности гепцидина-25 ш νίνο применяют для измерения снижения уровней железа в сыворотке примата, вызываемого 1Ь-6. В наиболее предпочтительном варианте МАТ против ЕРШ или их антигенсвязывающие фрагменты не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:98, 183-214.
В отдельных вариантах осуществления МАТ против ЕΡN1 или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению характеризуются связыванием ЕРШ человека, содержащего аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:1, в эпитопе, содержащем или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 5>Е0 ГО N0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, с Кс, значение которой определяется в ходе анализа ПНР, предпочтительно при 25°С для МАТ и 37°С для ЕаЬ и составляет менее приблизительно 100 нМ, менее приблизительно 75 нМ, менее приблизительно 50 нМ, менее приблизительно 25 нМ или менее приблизительно 10 нМ. В предпочтительном варианте, МАТ против ЕРШ, или их антигенсвязывающие
- 17 020472 фрагменты не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0:98, 183-214.
В отдельных вариантах осуществления для МАТ против ЕРШ, или их антигенсвязывающих фрагментов, по настоящему изобретению характерно связывание ЕРШ человека, содержащего аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:1, в эпитопе, содержащем или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, с Кс, значение которой определяется в анализе ПНР предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для ЕаЬ и составляет приблизительно от 100 нМ приблизительно до 0,5 нМ, предпочтительно, значение К находится в интервале приблизительно от 100 нМ приблизительно до 0,5 нМ, более предпочтительно, приблизительно от 75 нМ приблизительно до 5 нМ, еще более предпочтительно, приблизительно от 50 нМ приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно, приблизительно от 15 нМ приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно, приблизительно от 10 нМ приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно, приблизительно от 5 нМ приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно, приблизительно от 5 нМ приблизительно до 0,7 нМ, еще более предпочтительно, приблизительно от 3 нМ приблизительно до 0,7 нМ, или наиболее предпочтительно, приблизительно от 3 нМ приблизительно до 1 нМ. Предпочтительно МАТ против ЕРШ или их антигенсвязывающие фрагменты не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0:98, 183-214.
В отдельных вариантах осуществления для МАТ против ЕРШ, или их антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению характерно связывание ЕРШ человека, содержащего аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:1, в эпитопе, содержащем или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе последовательности, выбранной из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, с величиной степени диссоциации (ко££) для ферропортина 1 человека, составляющей приблизительно 7,5х10-3 с-1 и приблизительно 1х 10-4 с-1, предпочтительно находящейся в интервале приблизительно от 2,5х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, более предпочтительно приблизительно от 1х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1 , еще более предпочтительно приблизительно от 5х10-4 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, и определяемый в анализе ППР, предпочтительно, при 25°С для МАТ и при 37°С для ЕаЬ. Предпочтительно, МАТ против ЕРШ или их антигенсвязывающие фрагменты не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0:98, 183-214.
В отдельных вариантах осуществления для МАТ против ЕРШ или их антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению характерно связывание ЕРШ человека, содержащего аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:1, в эпитопе, содержащем или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, с Кс, значение которой составляет менее приблизительно 100 нМ, менее приблизительно 75 нМ, менее приблизительно 50 нМ, менее приблизительно 25 нМ или менее приблизительно 10 нМ и величиной степени диссоциации (ко££) для ферропортина 1 человека, находящейся в интервале приблизительно от 7,5х10-3 с-1 приблизительно до 1х 10-4 с-1, предпочтительно приблизительно от 2,5х10-3 с-1 приблизительно до 1х 10-4 с-1, более предпочтительно приблизительно от 1х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, еще более предпочтительно приблизительно от 5х10-4 с-1 приблизительно до 1х 10-4 с-1, и определяется в ходе анализа ПНР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для ЕаЬ. Предпочтительно МАТ против ЕРШ, или их антигенсвязывающие фрагменты, не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0:98, 183-214.
В отдельных вариантах осуществления для МАТ против ЕРШ или их антигенсвязывающих фрагментов, по настоящему изобретению, характерно связывание ЕРN1 человека, содержащего аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:1, в эпитопе, содержащем или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, с Кс, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 нМ приблизительно до 0,5 нМ, предпочтительно, приблизительно от 100 нМ приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 75 нМ приблизительно до 5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 50 нМ приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 15 нМ приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 10 нМ приблизительно до 0,5 нМ, приблизительно от 5 нМ приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 нМ приблизительно до 0,7 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 3 нМ приблизительно до 0,7 нМ, или наиболее предпочтительно, приблизительно от 3 нМ приблизительно до 1 нМ, с величиной степени диссоциации (ко££) для ферропортина 1 человека, находящейся в интервале приблизительно от 7,5х10-3 с-1 приблизительно до 1х 10-4 с-1, предпочтительно приблизительно от 2,5х10-3 с-1 приблизительно до 1 х 10-4 с-1, более предпочтительно, приблизительно от 1 х 10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1 и еще более предпочтительно, приблизительно от 5х10-4 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, определенных в ходе анализа ПНР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для ЕаЬ. Предпочтительно МАТ против ЕРШ или их антигенсвязывающие фрагменты, не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0:98, 183-214.
- 18 020472
В отдельных вариантах осуществления МАТ против ΡΡΝ1, или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат участки ЬСГОК!, ЬСОР2. ЬСОРЗ. НСЭР1. НСЭР2 и НСЭР3. содержащие аминокислотные последовательности 8ЕО ГО N0:37, 129, 22, 107, 118 и 120 соответственно, и связывают ΡΡΝ1 человека, содержащий аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:1, в эпитопе, содержащем, или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:12, 13, 14, 15, 16, и 95, с Кс, значение которой определено в ходе анализа НИР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЬ и составляет менее приблизительно 100 нМ, менее приблизительно 75 нМ, менее приблизительно 50 нМ, менее приблизительно 25 нМ или менее приблизительно 10 нМ. Предпочтительно МАТ против ΡΡΝ1, или их антигенсвязывающие фрагменты, не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 5>Е0 ГО N0:98, 183-214.
В некоторых вариантах осуществления МАТ против РΡN1 или их антигенсвязывающие фрагменты, по настоящему изобретению содержат участки БСГОРЕ ЬСПР2, ЬСПР3, НСГОРЕ НСГОР2 и НСОК3, содержащие аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:37, 129, 22, 107, 118 и 120 соответственно, и связывают ЕРШ человека, содержащий аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:1, в эпитопе, содержащем, или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, с Кс, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 нМ приблизительно до 0,5 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 нМ приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 75 нМ приблизительно до 5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 50 нМ приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 15 нМ приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 10 нМ приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 нМ приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 нМ приблизительно до 0,7 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 3 нМ приблизительно до 0,7 нМ или, наиболее предпочтительно приблизительно от 3 нМ приблизительно до 1 нМ и определено в ходе анализа НИР, предпочтительно, при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЬ. Предпочтительно МАТ против ЕΡN1 или их антигенсвязывающие фрагменты не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 5>Е0 ГО N0:98, 183-214.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения предложены МАТ или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие участки БСГОРЕ ЬСПР2, ЬСПР3, НСГОРЕ НСГОР2 и НСОР3, содержащие аминокислотные последовательности 8Е0 ГО N0:37, 129, 22, 107, 118 и 120 соответственно, связывающие РРШ человека, содержащий аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:1, в эпитопе, содержащем, или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 5>Е0 ГО N0:12, 13, 14, 15, 16 и 95 с величиной степени диссоциации (код) для ферропортина 1 человека, находящейся в интервале приблизительно от 7,5х10-3 с-1 приблизительно до 1 х 10'1 с-1, предпочтительно, приблизительно от 2,5х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, более предпочтительно, приблизительно от 1х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, и еще более предпочтительно, приблизительно от 5х10-4 с-1 приблизительно до 1х 10-4 с-1, и определенной в ходе анализа НИР, предпочтительно, при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЬ. Предпочтительно МАТ против ЕРЮ, или их антигенсвязывающие фрагменты, не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 5>Е0 ГО N0:98, 183-214.
В отдельных вариантах осуществления, МАТ против РΡN1 или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат участки БСГОРЕ ЬСПР2, ЬСПР3, НСГОРЕ НСГОР2 и НСЭР3, содержащие аминокислотные последовательности 8Е0 ГО N0:37, 129, 22, 107, 118 и 120, соответственно, и связывают ЕРШ человека, содержащий аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:1, в эпитопе, содержащем, или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, с Кс, значение которой составляет менее приблизительно 100 нМ, менее приблизительно 75 нМ, менее приблизительно 50 нМ, менее приблизительно 25 нМ или менее приблизительно 10 нМ, и величина степени диссоциации (ко[1) для ферропортина 1 человека находится в интервале приблизительно от 7,5х10-3 с-1 приблизительно до 1 х 10-4 с-1, предпочтительно приблизительно от 2,5х10-3 с-1 приблизительно до 1х 10-4 с-1, более предпочтительно приблизительно от 1х 10-3 с-1 приблизительно до 1х 10-4 с-1 и еще более предпочтительно приблизительно от 5х10-4 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, определенные в ходе анализа НИР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЬ. Предпочтительно МАТ против РРШ или их антигенсвязывающие фрагменты не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 5>Е0 ГО N0:98, 183-214.
В некоторых вариантах осуществления МАТ против РΡN1 или их антигенсвязывающие фрагменты, по настоящему изобретению, содержат участки БСГОРЕ ЬСПР2, ЬСПР3, НСГОРЕ НСГОР2 и НСГОР^х содержащие аминокислотные последовательности 8Е0 ГО N0:37, 12 9, 22, 107, 118 и 120, соответственно, и связывают РРШ человека, содержащий аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:1, в эпитопе, содержащем или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:12, 13, 14, 15, 16 и
- 19 020472 с Кс, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 нМ приблизительно до 0,5 нМ, предпочтительно, приблизительно от 100 нМ приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно, приблизительно от 75 нМ приблизительно до 5 нМ, еще более предпочтительно, приблизительно от 50 нМ приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно, приблизительно от 15 нМ приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно, приблизительно от 10 нМ приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно, приблизительно от 5 нМ приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно, приблизительно от 5 нМ приблизительно до 0,7 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 3 нМ приблизительно до 0,7 нМ или, наиболее предпочтительно, приблизительно от 3 нМ приблизительно до 1 нМ, и с величиной степени диссоциации (косс) для ферропортина 1 человека, находящейся в интервале приблизительно от 7,5χ10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, предпочтительно, приблизительно от 2,5х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, более предпочтительно, приблизительно от 1χ10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, и еще более предпочтительно, приблизительно от 5х10-4 с-1 приблизительно до 1 χ 10-4 с-1, причем указанные величины определены в ходе анализа НИР, предпочтительно, при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЪ. Предпочтительно, МАТ против ΡΡΝ1, или их антиген-связывающие фрагменты, не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 8ЕО ГО N0:98, 183-214.
Термин ингибирует обозначает способность проявлять антагонистическое действие, препятствовать, предотвращать, ограничивать, замедлять, прерывать, подавлять, останавливать, снижать или обращать вспять биологическое действие ΡΡΝ1 и/или биологическую активность зрелого гепцидина, включая, но не ограничиваясь биологической активностью зрелого гепцидина человека, измеряемой, например, согласно описанию, приведенному в примерах к настоящему изобретению 5-11, 13 или 14.
В отдельных вариантах осуществления МАТ против ΡΡΝ1 или их антигенсвязывающие фрагменты, по настоящему изобретению характеризуются 1С50, значение которой находится в промежутке приблизительно от 250 нМ приблизительно до 25 нМ, предпочтительно, приблизительно от 100 нМ приблизительно до 25 нМ или более предпочтительно приблизительно от 50 нМ приблизительно до 25 нМ и определено в ходе измерения биологической активности гепцидина-25 ίη νίνο.
Предпочтительно в ходе анализа ίη νίνο измеряют снижение уровней железа в сыворотке, вызываемое 1Ь-6.
В качестве дополнительного или альтернативного варианта МАТ против ΡΡΝ1 или их антигенсвязывающие фрагменты, по настоящему изобретению, характеризуются 1С50, значение которой находится в промежутке приблизительно от 100 нМ приблизительно до 1 нМ, предпочтительно приблизительно от 75 нМ приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно, приблизительно от 50 нМ приблизительно до 1 нМ, еще более предпочтительно, приблизительно от 25 нМ приблизительно до 1 нМ и определено в ходе измерения биологической активности гепцидина-25 ίη νίΐτο. Предпочтительно, в ходе анализа биологической активности гепцидина-25 ίη νίΐτο оценивают интернализацию и/или разрушение ферропортина 1, вызываемые гепцидином. В еще более предпочтительном варианте МАТ против ΡΡΝ1, или их антигенсвязывающие фрагменты не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 8Е0 ГО Ν0:98, 183-214.
В отдельных вариантах осуществления для МАТ против ΡΡΝ1 или их антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению характерно связывание ΡΡΝ1 человека, содержащего аминокислотную последовательность 8Е0 ГО Ν0:1, в эпитопе, содержащем или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 8Е0 ГО Ν0:12, 13, 14, 15, 16 и 95 с Кс, значение которой составляет менее приблизительно 100 нМ, менее приблизительно 75 нМ, менее приблизительно 50 нМ, менее приблизительно 25 нМ или менее приблизительно 10 нМ и определено в ходе анализа ПИР, предпочтительно, при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЪ, и 1С50, значение которой находится в интервале приблизительно от 250 нМ приблизительно до 25 нМ, предпочтительно, приблизительно от 100 нМ приблизительно до 25 нМ или более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 25 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίνο. Предпочтительно в ходе анализа ίη νίνο измеряют снижение уровней железа в сыворотке, вызываемое ГО-6. В еще более предпочтительном варианте МАТ против ΡΡΝ1, или их антигенсвязывающие фрагменты, не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 8Е0 ГО Ν0:98, 183-214.
В отдельных вариантах осуществления, для МАТ против ΡΡΝ1 или их антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению характерно связывание ΡΡΝ1 человека, содержащего аминокислотную последовательность 8Е0 ГО Ν0:1, в эпитопе, содержащем или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 8Е0 ГО Ν0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, с Кс, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 приблизительно до 0,5 нМ, предпочтительно, приблизительно от 100 приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 75 приблизительно до 5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 15 приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 10 приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 приблизительно до 0,5 нМ, еще более
- 20 020472 предпочтительно приблизительно от 5 приблизительно до 0,7 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 3 приблизительно до 0,7 нМ или наиболее предпочтительно приблизительно от 3 приблизительно до 1 нМ, и определено в ходе анализа НИР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЬ, и далее они характеризуются 1С50, значение которой находится в промежутке приблизительно от 250 приблизительно до 25 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 приблизительно до 25 нМ или более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 25 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη У1уо. Предпочтительно, в ходе анализа ίη У1уо измеряют снижение уровней железа в сыворотке, вызываемое 1Ь-6. В еще более предпочтительном варианте, МАТ против ЕРШ. или их антиген-связывающие фрагменты, не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 8ЕО ГО N0:98, 183-214.
В отдельных вариантах осуществления для МАТ против ЕРШ или их антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению характерно связывание ЕРШ человека, содержащего аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:1, в эпитопе, содержащем или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, с Кс, значение которой находится в промежутке приблизительно от 100 нМ приблизительно до 0,5 нМ, предпочтительно, приблизительно от 100 нМ приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 75 нМ приблизительно до 5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 50 нМ приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 15 нМ приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 10 нМ приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 нМ приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 нМ приблизительно до 0,7 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 3 нМ приблизительно до 0,7 нМ или, наиболее предпочтительно, приблизительно от 3 нМ приблизительно до 1 нМ, и определено в ходе анализа НИР, предпочтительно, при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЬ, с величиной степени диссоциации (косс) для ферропортина 1 человека, находящейся в интервале приблизительно от 7,5х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, предпочтительно приблизительно от 2,5х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, более предпочтительно приблизительно от 1х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1 и, еще более предпочтительно приблизительно от 5х10-4 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, и определено в ходе анализа ППР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЬ, и далее они характеризуются 1С50, значение которой находится в промежутке приблизительно от 250 нМ приблизительно до 25 нМ, предпочтительно, приблизительно от 100 нМ приблизительно до 25 нМ или, более предпочтительно, приблизительно от 50 нМ приблизительно до 25 нМ и определено в ходе измерения биологической активности гепцидина-25 ίη У1уо. Предпочтительно, в ходе анализа ίη У1уо измеряют снижение уровней железа в сыворотке, вызываемое ГО-6. В еще более предпочтительном варианте МАТ против ЕРШ1, или их антигенсвязывающие фрагменты, не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:98, 183-214.
В отдельных вариантах осуществления МАТ против ЕРШ, или их антигенсвязывающие фрагменты, по настоящему изобретению, содержат участки ЬСИГО, ЬСПК2, ЬСИЮ, НСИК1, НСИК2 и НСИК3, содержащие аминокислотные последовательности 8Е0 ГО N0:37, 129, 22, 107, 118 и 120, соответственно, и связывают ЕРШ человека, содержащий аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:1, в эпитопе, содержащем или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, с Кс, значение которой составляет менее приблизительно 100 нМ, менее приблизительно 75 нМ, менее приблизительно 50 нМ, менее приблизительно 25 нМ или менее приблизительно 10 нМ и определено в ходе анализа ПНР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для ЕаЬ, и с величиной степени диссоциации (косс) для ферропортина 1 человека, находящейся в интервале приблизительно от 7,5х10-3 с-1 приблизительно до 1х 10-4 с-1, предпочтительно приблизительно от 2,5х10-3 с-1 приблизительно до 1х 10-4 с-1, более предпочтительно приблизительно от 1 х 10-3 с-1 приблизительно до 1 х 10-4 с-1 и, еще более предпочтительно приблизительно от 5х10-4 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, определенной в ходе анализа НИР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для ЕаЬ, и далее характеризуются 1С50, значение которой находится в интервале приблизительно от 250 нМ приблизительно до 25 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 нМ приблизительно до 25 нМ или, более предпочтительно приблизительно от 50 нМ приблизительно до 25 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη У1уо. Предпочтительно в ходе анализа ίη У1уо измеряют снижение уровней железа в сыворотке, вызываемое ГО-6. В еще более предпочтительном варианте МАТ против ЕРШ или их антигенсвязывающие фрагменты не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:98, 183-214.
В некоторых вариантах осуществления МАТ против ЕРШ, или их антигенсвязывающие фрагменты, по настоящему изобретению, содержат участки ЬСИГО, ЬСПК2, ЬСИЮ, НСИК1, НСИК2 и НСИК3, содержащие аминокислотные последовательности, приведенные в 8Е0 ГО N0:37, 129, 22, 107, 118 и 120, соответственно, и связывают ЕРШ человека, содержащий аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:1, в эпитопе, содержащем или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находя- 21 020472 щихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 8ЕО ГО N0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, с Кс, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 нМ приблизительно до 0,5 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 нМ приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 75 нМ приблизительно до 5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 50 нМ приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 15 нМ приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 10 нМ приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 нМ приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 нМ приблизительно до 0,7 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 3 нМ приблизительно до 0,7 нМ или, наиболее предпочтительно приблизительно от 3 нМ приблизительно до 1 нМ, и определено в ходе анализа ПНР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЬ, и с величиной степени диссоциации (кД для ферропортина 1 человека, находящейся в интервале приблизительно от 7,5х10-3 с-1 приблизительно до 1 х 10-4 с-1, предпочтительно приблизительно от 2,5х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, более предпочтительно приблизительно от 1х 10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1 и, еще более предпочтительно приблизительно от 5х10-4 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, и определенной в ходе анализа ПНР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЬ, и далее характеризуются 1С50, значение которой находится в промежутке приблизительно от 250 нМ приблизительно до 25 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 нМ приблизительно до 25 нМ или, более предпочтительно приблизительно от 50 нМ приблизительно до 25 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίνο. Предпочтительно в ходе анализа ίη νίνο измеряют снижение уровней железа в сыворотке, вызываемое ГО-6. В еще более предпочтительном варианте МАТ против ΡΡΝ1 или их антигенсвязывающие фрагменты не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:98, 183-214.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения для МАТ против ΡΡΝ1 или их антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению характерно связывание ΡΡΝ1 человека, содержащего аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:1, в эпитопе, содержащем или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, с Кс, значение которой составляет менее приблизительно 75 нМ, менее приблизительно 50 нМ, менее приблизительно 25 нМ или менее приблизительно 10 нМ и определено в ходе анализа ППР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЬ, и 1С50, значение которой находится в интервале приблизительно от 250 приблизительно до 25 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 приблизительно до 25 нМ или, более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 25 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίνο, и, далее, они характеризуются 1С50, значение которой находится в промежутке приблизительно 100 нМ приблизительно до 1 нМ, предпочтительно приблизительно от 75 приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 1 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 25 приблизительно до 1 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίίτο. Предпочтительно в ходе анализа ίη νίνο измеряют снижение уровней железа в сыворотке, вызываемое ГО-6. Предпочтительно в ходе анализа биологической активности гепцидина-25 ίη νίίτο оценивают интернализацию и/или разрушение ферропортина 1, вызываемые гепцидином. В еще более предпочтительном варианте МАТ против ЕРШ, или их антигенсвязывающие фрагменты, не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0:98, 183-214.
В отдельных вариантах осуществления для МАТ против ЕРШ или их антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению характерно связывание ЕРШ человека, содержащего аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:1, в эпитопе, содержащем или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, с Кс, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 приблизительно до 0,5 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 75 приблизительно до 5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 15 приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 10 приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 приблизительно до 0,7 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 3 приблизительно до 0,7 нМ или наиболее предпочтительно приблизительно от 3 приблизительно до 1 нМ, и определено в ходе анализа ППР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЬ, и 1С50, значение которой находится в промежутке приблизительно от 250 приблизительно до 25 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 приблизительно до 25 нМ или более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 25 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίνο, и далее, они характеризуются 1С50, значение которой находится в промежутке приблизительно от 100 приблизительно до 1 нМ, предпочтительно, приблизительно от 75 приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно, приблизительно от 50 приблизительно до 1 нМ, еще более предпочтительно
- 22 020472 приблизительно от 25 приблизительно до 1 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίίτο. Предпочтительно, в ходе анализа ίη νίνο измеряют снижение уровней железа в сыворотке, вызываемое Ш-6. Предпочтительно, в ходе анализа биологической активности гепцидина-25 ίη νίίτο оценивают интернализацию и/или разрушение ферропортина 1, вызываемые гепцидином. В еще более предпочтительном варианте, МАТ против ΙΡΝ1, или их антиген-связывающие фрагменты, не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ Ν0:98, 183-214.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены МАТ против ΙΡΝ1 или их антигенсвязывающие фрагменты, связывающие ΙΡΝ1 человека, содержащий аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ Ν0:1, в эпитопе, содержащем или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ Ν0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, и 1) с Кс, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 нМ приблизительно до 0,5 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 нМ приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 75 нМ приблизительно до 5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 50 нМ приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 15 нМ приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 10 нМ приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 нМ приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 нМ приблизительно до 0,7 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 3 нМ приблизительно до 0,7 нМ или, наиболее предпочтительно приблизительно от 3 нМ приблизительно до 1 нМ, и определено в ходе анализа ίίί ИР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЬ, 2) ΙΟ50, значение которой находится в интервале приблизительно от 250 приблизительно до 25 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 приблизительно до 25 нМ или, более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 25 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίνο, 3) с ΙΟ50, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 приблизительно до 1 нМ, предпочтительно приблизительно от 75 приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 1 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 25 приблизительно до 1 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίίτο, и 4) с величиной степени диссоциации (к^) для ферропортина 1 человека, находящейся в интервале приблизительно от 7,5х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, предпочтительно приблизительно от 2,5х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, более предпочтительно приблизительно от 1х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1 и, еще более предпочтительно приблизительно от 5х10-4 с-1 приблизительно до 1х 10-4 с-1, и определенной в ходе анализа НИР, предпочтительно, при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЬ. Предпочтительно в ходе анализа ίη νίνο измеряют снижение уровней железа в сыворотке, вызываемое Ш-6. Предпочтительно, в ходе анализа биологической активности гепцидина-25 ίη νίίτο оценивают интернализацию и/или разрушение ферропортина 1, вызываемые гепцидином. В еще более предпочтительном варианте МАТ против ΙΡΝ1 или их антигенсвязывающие фрагменты не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ Ν0:98, 183-214.
В отдельных вариантах осуществления МАТ против ΙΡΝ1 или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат участки ΌΟΌΚ1, ΌΟΌΚ2, ΌΟΌΚ3, ΗΟΌΚ1, ΗΟΌΚ2 и ΗΟΌΚ3, содержащие аминокислотные последовательности δΕΟ ΙΌ Ν0:37, 129, 22, 107, 118 и 120, соответственно, и характеризуются ΙΟ50, значение которой находится в интервале приблизительно от 250 приблизительно до 25 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 приблизительно до 25 нМ или более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 25 нМ указанное значение определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίνο. Предпочтительно в ходе анализа ίη νίνο измеряют снижение уровней железа в сыворотке, вызываемое Ш-6. В еще более предпочтительном варианте МАТ против ΙΡΝ1 или их антигенсвязывающие фрагменты не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ Ν0:98, 183-214.
В отдельных вариантах осуществления МАТ против ΙΡΝ1 или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат участки ΌΟΌΚ1, ΌΟΌΚ2, ΌΟΌΚ3, ΗΟΌΚ1, ΗΟΌΚ2 и ΗΟΌΚ3, содержащие аминокислотные последовательности δΕΟ ΙΌ Ν0:37, 12 9, 22, 107, 118 и 120 соответственно, и характеризуются ΙΟ50, значение которой находится в интервале приблизительно от 250 приблизительно до 25 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 приблизительно до 25 нМ или более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 25 нМ, указанное значение определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίνο, и ΙΟ50, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 приблизительно до 1 нМ, предпочтительно приблизительно от 75 приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 1 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 25 приблизительно до 1 нМ, при этом значение определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίίτο. Предпочтительно в ходе анализа ίη νίνο измеряют снижение уровней железа в сыворотке, вызываемое Ш-6. Предпочтительно в ходе анализа биологической активности гепцидина-25 ίη νίίτο оценивают интернализацию и/или разрушение ферропортина 1, вызываемые гепцидином. В еще более предпочтительном варианте МАТ против ΙΡΝ1, или их антигенсвязывающие фрагменты, не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ Ν0:98,
- 23 020472
183-214.
В отдельных вариантах осуществления МАТ против ΡΡΝ1 или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат участки ЬСИК1, ЬСИК2, ЬСИК3, НСЭК1. НСЭК2 и НСЭКЗ. содержащие аминокислотные последовательности, приведенные в δΕΟ ГО N0:37, 129, 22, 107, 118 и 120 соответственно и связывают ΡΡΝ1 человека, содержащего аминокислотную последовательность δΕΟ ГО N0:1, в эпитопе, содержащем, или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из δΕΟ ГО N0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, с Кс, значение которой составляет менее приблизительно 100 нМ, менее приблизительно 75 нМ, менее приблизительно 50 нМ, менее приблизительно 25 нМ или менее приблизительно 10 нМ, при этом указанное значение определено в ходе анализа НИР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЬ, и 1С50, значение которой находится в интервале приблизительно от 250 нМ приблизительно до 25 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 нМ приблизительно до 25 нМ или, более предпочтительно приблизительно от 50 нМ приблизительно до 25 нМ, при этом значение определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίνο. Предпочтительно в ходе анализа ίη νίνο измеряют снижение уровней железа в сыворотке, вызываемое ГО-6. В еще более предпочтительном варианте МАТ против РРШ, или их антиген-связывающие фрагменты, не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из δΕΟ ГО N0:98, 183-214.
В отдельных вариантах осуществления МАТ против ΡΡN1 или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат участки ЬСГОКЕ ЬСИК2, ЬСИК3, НСИК1, НСГОК2 и НСИК3, содержащие аминокислотные последовательности δΕΟ ГО N0:37, 12 9, 22, 107, 118 и 120 соответственно, и связывают РРШ человека, содержащий аминокислотную последовательность δΕΟ ГО N0:1, в эпитопе, содержащем или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из δΕΟ ГО N0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, с Кс, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 приблизительно до 0,5 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 75 приблизительно до 5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 15 приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 10 риблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 приблизительно до 0,7 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 3 приблизительно до 0,7 нМ или наиболее предпочтительно приблизительно от 3 приблизительно до 1 нМ, при этом значение определено в ходе анализа НИР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЬ, и далее характеризуются 1С50, значение которой находится в интервале приблизительно от 250 приблизительно до 25 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 приблизительно до 25 нМ или более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 25 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίνο. Предпочтительно в ходе анализа ίη νίνο измеряют снижение уровней железа в сыворотке, вызываемое ГО-6. В еще более предпочтительном варианте МАТ против РРШ, или их антигенсвязывающие фрагменты, не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из δΕΟ ГО N0:98, 183-214.
В отдельных вариантах осуществления МАТ против ΡΡN1 или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат участки ЬСИК1, ЬСИК2, ЬСИК3, НСИК1, НСИК2 и НСИК3, содержащие аминокислотные последовательности δΕΟ ГО N0: 37, 12 9, 22, 107, 118 и 120 соответственно и связывают РРШ человека, содержащий аминокислотную последовательность δΕΟ ГО N0:1, в эпитопе, содержащем или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из δΕΟ ГО N0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, с Кс, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 приблизительно до 0,5 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 75 приблизительно до 5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 15 приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 10 приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 приблизительно до 0,7 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 3 приблизительно до 0,7 нМ или наиболее предпочтительно приблизительно от 3 приблизительно до 1 нМ, при этом указанное значение определено в ходе анализа ПИР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЬ, и величиной степени диссоциации (когг) для ферропортина 1 человека, находящейся в интервале приблизительно от 7,5х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, предпочтительно приблизительно от 2,5х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, более предпочтительно приблизительно от 1х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1 и еще более предпочтительно приблизительно от 5х10-4 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, определенной в ходе анализа ПИР, предпочтительно, при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЬ, и далее характеризуются 1С50, значение которой находится в интервале приблизительно от 250 приблизительно до 25 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 приблизительно до 25 нМ или более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 25 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίνο. Пред- 24 020472 почтительно, в ходе анализа ίη νίνο измеряют снижение уровней железа в сыворотке, вызываемое 1Ь-6. В еще более предпочтительном варианте, МАТ против ΡΡΝ1, или их антиген-связывающие фрагменты, не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 8ЕЦ ΙΌ Ν0:98, 183-214.
В отдельных вариантах осуществления МАТ против ΡΡΝ1 или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат участки ЬСОК1, ЬСОК2, ЬСОК3, НСОК1, НСГОР2 и НСЭР3, содержащие аминокислотные последовательности 8ЕЦ ГО Ν0:37, 129, 22, 107, 118 и 120 соответственно, и связывают ΡΡΝ1 человека, содержащий аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО Ν0:1, в эпитопе, содержащем или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО Ν0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, с Кс, значение которой составляет менее приблизительно 100 нМ, менее приблизительно 75 нМ, менее приблизительно 50 нМ, менее приблизительно 25 нМ или менее приблизительно 10 нМ, при этом указанное значение определено в ходе анализа НИР, предпочтительно, при 25°С для МАТ и при 37°С для Раб, и с величиной степени диссоциации (к^) для ферропортина 1 человека, находящейся в интервале приблизительно от 7,5х10-3 с-1 приблизительно до 1 х 10-4 с-1, предпочтительно, приблизительно от 2,5х103 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, более предпочтительно, приблизительно от 1х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1 и, еще более предпочтительно, приблизительно от 5х10-4 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, определенной в ходе анализа ППР, предпочтительно, при 25°С для МАТ и при 37°С для Раб, и далее характеризуются 1С50, значение которой находится в интервале приблизительно от 250 приблизительно до 25, предпочтительно, приблизительно от 100 приблизительно до 25 нМ или более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 25 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίνο. Предпочтительно, в ходе анализа ίη νίνο измеряют снижение уровней железа в сыворотке, вызываемое ГО-6. В еще более предпочтительном варианте МАТ против ΡΡΝ1 или их антигенсвязывающие фрагменты не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 8ЕО ГО Ν0:88, 183-214.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения МАТ против ΡΡΝ1 или их антигенсвязывающие фрагменты содержат участки ЬСОК1, ЬСОК2, ЬСОК3, НСГОР1, НСГОР2 и НСГОР3, содержащие аминокислотные последовательности 8ЕЦ ГО Ν0:37, 129, 22, 107, 118 и 120 соответственно, и связывают ΡΡΝ1 человека, содержащий аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО Ν0:1, в эпитопе, содержащем или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО Ν0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, с Кс, значение которой составляет менее приблизительно 75 нМ, менее приблизительно 50 нМ, менее приблизительно 25 нМ или менее приблизительно 10 нМ, при этом указанное значение определено в ходе анализа НИР, предпочтительно, при 25°С для МАТ и при 37°С для Раб, и с 1С50, значение которой находится в интервале приблизительно от 250 приблизительно до 25 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 приблизительно до 25 нМ или более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 25 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίνο, и далее характеризуются 1С50, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 приблизительно до 1 нМ, предпочтительно приблизительно от 75 приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 1 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 25 приблизительно до 1 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίίτο. Предпочтительно в ходе анализа ίη νίνο измеряют снижение уровней железа в сыворотке, вызываемое ГО-6. Предпочтительно в ходе анализа биологической активности гепцидина-25 ίη νίίτο оценивают интернализацию и/или разрушение ферропортина 1, вызываемые гепцидином. В еще более предпочтительном варианте МАТ против ΡΡN1 или их антигенсвязывающие фрагменты не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО Ν0:98, 183-214.
В отдельных вариантах осуществления МАТ против ΡΡN1 или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат участки ЬСОК1, ЬСОК2, ЬСОК3, НСГОР1, НСГОР2 и НСЭР3, содержащие аминокислотные последовательности 8ЕЦ ГО Ν0:37, 12 9, 22, 107, 118 и 120 соответственно, и связывают ΡΡN1 человека, содержащий аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО Ν0:1, в эпитопе, содержащем, или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО Ν0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, с Кс, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 приблизительно до 0,5 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 75 приблизительно до 5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 15 приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 10 приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 приблизительно до 0,7 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 3 приблизительно до 0,7 нМ или наиболее предпочтительно приблизительно от 3 приблизительно до 1 нМ, при этом указанное значение определено в ходе анализа НИР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для Раб, и с 1С50, значение которой находится в интервале приблизительно от 250 приблизительно до 25 нМ, предпочтительно прибли- 25 020472 зительно от 100 приблизительно до 25 нМ или более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 25 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίνο, и далее характеризуются 1С50, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 приблизительно до 1 нМ, предпочтительно приблизительно от 75 приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 1 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 25 приблизительно до 1 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίίτο. Предпочтительно в ходе анализа ίη νίνο измеряют снижение уровней железа в сыворотке, вызываемое 1Ь-6. Предпочтительно в ходе анализа биологической активности гепцидина-25 ίη νίίτο оценивают интернализацию и/или разрушение ферропортина 1, вызываемые гепцидином. В еще более предпочтительном варианте МАТ против ΡΡΝ1 или их антигенсвязывающие фрагменты не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 8ЕО ГО N0:98, 183-214.
В отдельных вариантах осуществления МАТ против ΡΡΝ1 или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат участки ЬСЭК.1, ЕСЭР2, Ь-СГОРЗ. НСГОРЕ НСГОР2 и НСГОР3, содержащие аминокислотные последовательности 8Е0 ГО N0:37, 129, 22, 107, 118 и 120, соответственно, и связывают ΡΡΝ1 человека, содержащий аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:1, в эпитопе, содержащем, или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, 1) с Кс, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 приблизительно до 0,5 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 75 приблизительно до 5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 15 приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 10 приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 нМ приблизительно до 0,7 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 3 приблизительно до 0,7 нМ или наиболее предпочтительно приблизительно от 3 приблизительно до 1 нМ, при этом указанное значение определено в ходе анализа ПНР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЬ, 2) с 1С50, значение которой находится в интервале приблизительно от 250 нМ приблизительно до 25 нМ, предпочтительно, приблизительно от 100 нМ приблизительно до 25 нМ или, более предпочтительно, приблизительно от 50 нМ приблизительно до 25 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίνο, 3) с 1С50, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 приблизительно до 1 нМ, предпочтительно приблизительно от 75 приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 1 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 25 приблизительно до 1 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίίτο, и 4) с величиной степени диссоциации (Цг) для ферропортина 1 человека, находящейся в интервале приблизительно от 7,5х10-3 с-1 приблизительно до 1х 10-4 с-1, предпочтительно приблизительно от 2,5х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, более предпочтительно приблизительно от 1х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1 и, еще более предпочтительно приблизительно от 5х10-4 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, и определенной в ходе анализа ПНР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЬ. Предпочтительно в ходе анализа ίη νίνο измеряют снижение уровней железа в сыворотке, вызываемое ГО-6. Предпочтительно в ходе анализа биологической активности гепцидина-25 ίη νίίτο оценивают интернализацию и/или разрушение ферропортина 1, вызываемые гепцидином. В еще более предпочтительном варианте МАТ против РРШ или их антигенсвязывающие фрагменты не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:98, 183-214.
В отдельных вариантах осуществления МАТ против ΡΡN1 или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению, содержат участки БСГОРЕ ЬСОР2, ЬСОР3, НСГОРЕ НСГОР2 и НСЭР3, содержащие аминокислотные последовательности 8Е0 ГО N0:37, 125, 22, 23, 110 и 19, соответственно, и связывают РРШ человека, содержащий аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:1, в эпитопе, содержащем, или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, и характеризуются Кс, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 нМ приблизительно до 0,5 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 75 приблизительно до 5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 15 приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 10 приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 н приблизительно до 0,7 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 3 приблизительно до 0,7 нМ или наиболее предпочтительно приблизительно от 3 приблизительно до 1 нМ, при этом указанное значение определено в ходе анализа ПНР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЬ, 2) 1С50, значение которой находится в интервале приблизительно от 250 приблизительно до 25 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 приблизительно до 25 нМ или, более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 25 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη
- 26 020472
У1уо, 3) 1С50, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 нМ приблизительно до 1 нМ, предпочтительно приблизительно от 75 нМ приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 50 нМ приблизительно до 1 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 25 нМ приблизительно до 1 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ш νίΐΐΌ, и 4) величиной степени диссоциации (коГГ) для ферропортина 1 человека, находящейся в интервале приблизительно от 7,5х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, предпочтительно приблизительно от 2,5х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, более предпочтительно приблизительно от 1х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1 и, наиболее предпочтительно приблизительно от 5х10-4 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, определенной в ходе анализа ПНР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЪ. Предпочтительно в ходе анализа ш νί\Ό измеряют снижение уровней железа в сыворотке, вызываемое 1Ь-6. Предпочтительно в ходе анализа биологической активности гепцидина-25 ш уПго оценивают интернализацию и/или разрушение ферропортина 1, вызываемые гепцидином. В еще более предпочтительном варианте МАТ против ΡΡΝ1, или их антиген-связывающие фрагменты, не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 8ΕΟ ГО N0:98, 183-214. В еще более предпочтительном варианте МАТ против ΡΡΝ1 или их антигенсвязывающие фрагменты не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 8Ε0 ГО N0:98, 183-214.
В отдельных вариантах осуществления, МАТ против ΡΡΝ1 или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат участки РСЭР1, РСЭР2, РСЭР3, НСЭР1, НСЭР2 и НСЭР3, содержащие аминокислотные последовательности 8Ε0 ГО N0:37, 177, 22, 23, 112 и 19, соответственно, и связывают ΡΡΝ1 человека, содержащий аминокислотную последовательность 8Ε0 ГО N0:1, в эпитопе, содержащем, или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 8Ε0 ГО N0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, и характеризуются 1) Кс, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 нМ приблизительно до 0,5 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 75 приблизительно до 5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 15 приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 10 приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 приблизительно до 0,7 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 3 приблизительно до 0,7 нМ или, наиболее предпочтительно приблизительно от 3 приблизительно до 1 нМ, при этом указанное значение определено в ходе анализа ПНР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЪ, 2) 1С50, значение которой находится в интервале приблизительно от 250 нМ приблизительно до 25 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 приблизительно до 25 нМ или, более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 25 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ш У1уо, 3) 1С50, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 приблизительно до 1 нМ, предпочтительно приблизительно от 75 приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 1 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 25 приблизительно до 1 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 в анализе ш νίΐΐΌ, и 4) величиной степени диссоциации (коГГ) для ферропортина 1 человека, находящейся в интервале приблизительно от 7,5х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, предпочтительно приблизительно от 2,5х10-3 с-1 приблизительно до 1х 10-4 с-1, более предпочтительно приблизительно от 1х 10-3 с-1 приблизительно до 1 х 10-4 с-1 и, еще более предпочтительно приблизительно от 5х10-4 с-1 приблизительно до 1 х 10-4 с-1, и определенный в ходе анализа ПНР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для РаЪ. Предпочтительно в ходе анализа ш νί\Ό измеряют снижение уровней железа в сыворотке, вызываемое 1Ь-6. Предпочтительно в ходе анализа биологической активности гепцидина-25 ш уЬго оценивают интернализацию и/или разрушение ферропортина 1, вызываемые гепцидином. В еще более предпочтительном варианте МАТ против РРШ или их антигенсвязывающие фрагменты не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 8Ε0 ГО N0:98, 183-214.
В отдельных вариантах осуществления МАТ против РΡN1 или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению, содержат участки РСЭР1, РСЭР2, РСЭР3, НСЭР1, НСЭР2 и НСЭР3, содержащие аминокислотные последовательности 8Ε0 ГО N0:37, 122, 22, 23, 110 и 19, соответственно, и связывают РРШ человека, содержащий аминокислотную последовательность 8Ε0 ГО N0:1, в эпитопе, содержащем, или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 8Ε0 ГО N0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, и характеризуются 1) Кс, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 приблизительно до 0,5 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 75 приблизительно до 5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 15 приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 10 приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 приблизительно до 0,7 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 3 приблизительно до 0,7 нМ
- 27 020472 или наиболее предпочтительно приблизительно от 3 приблизительно до 1 нМ, при этом указанное значение определено в ходе анализа ПНР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для ЕаЪ, 2) 1С50, значение которой находится в интервале приблизительно от 250 приблизительно до 25 нМ, предпочтительно от 100 приблизительно до 25 нМ или наиболее предпочтительно от 50 приблизительно до 25 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίνο, 3) 1С50, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 приблизительно до 1 нМ, предпочтительно приблизительно от 75 приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 50 приблизительно до 1 нМ, еще более предпочтительно, приблизительно от 25 приблизительно до 1 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίΐτο, и 4) величиной степени диссоциации (коГГ) для ферропортина 1 человека, находящейся в интервале приблизительно от 7,5х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, предпочтительно, приблизительно от 2,5х10~3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, более предпочтительно, приблизительно от 1х10-3 с-1 приблизительно до 1х10-4 с-1, еще более предпочтительно, приблизительно от 5х10-4 с-1 приблизительно до 1х 10-4 с-1, определенное в ходе анализа НИР, предпочтительно, при 25°С для МАТ и при 37°С для ЕаЪ. Предпочтительно в ходе анализа ίη νίνο измеряют снижение уровней железа в сыворотке, вызываемое 1Ь-6. Предпочтительно в ходе анализа биологической активности гепцидина-25 ίη νίΐτο оценивают интернализацию и/или разрушение ферропортина 1, вызываемые гепцидином. В еще более предпочтительном варианте, МАТ против ЕРШ. или их антигенсвязывающие фрагменты, не связывают один или более пептидов, выбранных из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:98, 183-214.
В отдельных вариантах осуществления МАТ против ЕРШ, или их антигенсвязывающие фрагменты, по настоящему изобретению, содержат:
a) легкую цепь и тяжелую цепь 8Е0 ГО N0:154 и 8Е0 ГО N0:152 соответственно;
b) легкую цепь и тяжелую цепь 8Е0 ГО N0:181 и 8Е0 ГО N0:179 соответственно или
c) легкую цепь и тяжелую цепь 8Е0 ГО N0:158 и 8Е0 ГО N0:156 соответственно, и связывают ЕРШ человека, содержащего аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:1, в эпитопе, содержащем или, по существу, состоящем из аминокислоты или аминокислот, находящихся в составе аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:12, 13, 14, 15, 16 и 95, и характеризуются 1) Кс, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 нМ приблизительно до 0,5 нМ, предпочтительно приблизительно от 100 нМ приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 75 нМ приблизительно до 5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 50 нМ приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 15 нМ приблизительно до 10 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 10 нМ приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 нМ приблизительно до 0,5 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 5 нМ приблизительно до 0,7 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 3 нМ приблизительно до 0,7 нМ или, наиболее предпочтительно приблизительно от 3 нМ приблизительно до 1 нМ, при этом указанное значение определено в ходе анализа ППР предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для ЕаЪ, 2) 1С50, значение которой находится в интервале приблизительно от 250 нМ приблизительно до 25 нМ, предпочтительно от 100 нМ приблизительно до 25 нМ или более предпочтительно от 50 нМ приблизительно до 25 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίνο, 3) 1С50, значение которой находится в интервале приблизительно от 100 нМ приблизительно до 1 нМ, предпочтительно приблизительно от 75 нМ приблизительно до 1 нМ, более предпочтительно приблизительно от 50 нМ приблизительно до 1 нМ, еще более предпочтительно приблизительно от 25 нМ приблизительно до 1 нМ и определено при измерении биологической активности гепцидина-25 ίη νίίτο, и 4) величиной степени диссоциации (кс£Г) для ферропортина 1 человека, находящейся в интервале приблизительно от 7,5х10-3 с-1 приблизительно до 1 х 10-4 с-1, предпочтительно приблизительно от 2,5х10-3 с-1 приблизительно до 1 х 10-4 с-1, более предпочтительно приблизительно от 1 х 10-3 с-1 приблизительно до 1х 10-4 с-1 и еще более предпочтительно приблизительно от 5х10-4 с-1 приблизительно до 1х 10-4 с-1, определенной в ходе анализа ППР, предпочтительно при 25°С для МАТ и при 37°С для ЕаЪ. Предпочтительно в ходе анализа ίη νίνο измеряют снижение уровней железа в сыворотке, вызываемое ГО-6. Предпочтительно в ходе анализа биологической активности гепцидина-25 ίη νίίτο оценивают интернализацию и/или разрушение ферропортина 1, вызываемые гепцидином.
Термин лечить или лечение относится к замедлению, прерыванию, приостановке, контролю, остановке, ослаблению или обращению вспять развития или тяжести симптома, нарушения, состояния или заболевания, но не обязательно включает полное устранение всех симптомов, состояний или нарушений, связанных с заболеванием.
Термин профилактика обозначает подавление, сдерживание или ингибирование распространения или частоты возникновения симптома, нарушения, состояния или заболевания. Острые нарушения и хронические состояния можно подвергать лечению и профилактике. В случае острого нарушения антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят при появлении симптома, нарушения, состояния или заболевания и прекращают применение после того, как острое нарушение проходит. Напротив, симптом, нарушение, состояние или заболевание с хроническим течением подвергают лечению в течение более
- 28 020472 продолжительного периода времени.
Термин нарушение обозначает любое состояние, которое возможно улучшить в результате лечения, предложенного по настоящему изобретению. Термины нарушение, состояние и заболевание используются в настоящей заявке взаимозаменяемо и включают хронические и острые нарушения, опосредуемые зрелым гепцидином, включая, но не ограничиваясь, анемией хронических заболеваний.
Термин анемия хронических заболеваний относится к любому виду анемии, развивающейся вследствие, например, продолжительной инфекции, воспаления и неопластических нарушений. Развивающаяся анемия часто характеризуется укороченной продолжительностью жизни красных кровяных телец и разрушением железа в макрофагах, что приводит к снижению количества железа, доступного для образования новых красных кровяных телец. Состояния, связанные с анемией хронических заболеваний, включают, но не ограничиваются следующими: хронический бактериальный эндокардит, остеомиелит, ревматическая лихорадка, язвенный колит и неопластические нарушения. Дополнительно, состояния включают другие заболевания и нарушения, связанные с инфекцией, воспалением и неоплазией, включая, например, воспалительные инфекции (например, абсцесс легких, туберкулез), воспалительные заболевания не инфекционного характера (например, ревматоидный артрит, системная красная волчанка, болезнь Крона, гепатит, воспалительное заболевание кишечника), а также различные формы рака, опухолей и злокачественных новообразований (например, карцинома, саркома, лимфома). Анемию хронических заболеваний связывают с пониженным содержанием железа в крови и разрешением железа клеток ретикулоэндотелия.
Воспалительные цитокины являются активными стимуляторами экспрессии гепцидина, и избыток гепцидина может играть ключевую роль в патогенезе анемии у пациентов с указанным симптомом (^е155, βΐ а1., Ν. Еп§1. I. Меб., 352:1011-1023 (2005); Ρί§βοη, βΐ а1., 1. Βίοί. СЬет. 276:7811-7819 (2001); ΝίεοΠδ, βΐ а1., 1. С1ш. Ιηνβδΐ. 110:1037-1044 (2002); №теЛ, βΐ а1., 1. С1ш. Ιηνβδΐ. 113:1271-1276 (2004); ΝβιηβίΚ βΐ а1. , Β1οο6, 101:2461-2463 (2003); Ьее, βΐ а1., Ρτοε. №ΐ1. Асаб. 8с1. И8А., 102:1906-1910 (2005)). Такие медиаторы воспаления, как 1Ь-6, способны регулировать экспрессию гепцидина посредством 8ΤΑΤ3 (\\ пуНпиц βΐ а1. , Β1οο6, 108:3204-3209 (2006); V егда Ракасарра βΐ а1., Β1οο6, 109:353-358 (2007); ΡίβΙππΐ8β1ο βΐ а1. , Са8ί^οеηΐе^οίο§у, 132:294-300 (2007)). Приведенные данные представляют доказательства, полученные ίη νίνο, того факта, что МАТ против ΡΡΝ1, по настоящему изобретению, повышают уровни железа в сыворотке.
Также настоящее изобретение относится к способам лечения анемии, включающим введение МАТ против ΡΡΝ1, или их антигенсвязывающих фрагментов, по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления способ лечения анемии включает этап введения фармацевтической композиции, содержащей в составе МАТ против ΡΡΝ1, или его антигенсвязывающий фрагмент, пациенту, подверженному риску проявления патологий, описываемых в настоящем документе, например, нарушений, связанных с анемией, при применении общепринятых методик введения.
Выражение эффективное количество, используемое в настоящей заявке, относится к количеству, необходимому (в дозах и в течение периодов времени, назначенных для введения) для достижения желаемого терапевтического действия. Эффективное количество антитела можно изменять в зависимости от таких факторов, как состояние заболевания, возраст, пол и масса тела пациента, а также способности антитела или участка антитела вызывать желаемую реакцию у пациента. Эффективным количеством также является количество, в котором благоприятное терапевтическое действие антитела превосходит любое токсическое или неблагоприятное действие.
Эффективное количество является количеством действующего вещества, по меньшей мере минимальным, необходимым для обеспечения терапевтически благоприятного действия для пациента, но не достигающим количества, в котором действующее вещество является токсичным. Другими словами, эффективное количество или терапевтически эффективное количество антитела по настоящему изобретению представляет собой количество в организме млекопитающих, предпочтительно человека, (ί) повышающее уровни железа в сыворотке, число ретикулоцитов, число красных кровяных телец, гемоглобин и/или гематокрит, или (ίί) позволяющее лечить нарушение, при котором присутствие зрелого гепцидина вызывает или вносит вклад в неблагоприятное патологическое действие или (ίίί) снижающее биологическую активность зрелого гепцидина, что приводит к благоприятному терапевтическому действию в организме млекопитающих, предпочтительно человека, включая, но не ограничиваясь указанными, анемию хронических заболеваний, включая, но не ограничиваясь анемией, развивающейся вследствие инфекции, воспаления и/или рака. Эффективное количество антитела по настоящему изобретению можно вводить в одиночной дозе или в нескольких дозах. Кроме того, эффективное количество антитела по настоящему изобретению можно вводить в многократных дозах, содержащих количества, меньшие, чем эффективное количество при введении не более одного раза.
В области медицины хорошо известно, что дозировки для каждого пациента зависят от многих факторов, включая массу тела пациента, площадь поверхности тела, возраст, конкретное вводимое вещество, пол, время и способ введения, общее состояние здоровья и другие одновременно вводимые лекарственные средства. Кроме того, дозу можно изменять в зависимости от формы и тяжести заболевания. Размер стандартной дозы может находится в интервале, например, приблизительно от 1 приблизительно до 100
- 29 020472 мг; предпочтительно приблизительно от 2 приблизительно до 100 мг; более предпочтительно приблизительно от 5 приблизительно до 100 мг; еще более предпочтительно приблизительно от 5 приблизительно до 50 мг, еще более предпочтительно приблизительно от 5 приблизительно до 25 мг; еще более предпочтительно приблизительно от 5 приблизительно до 20 мг; еще более предпочтительно приблизительно от 5 приблизительно до 15 мг; тем не менее, также предусматриваются и дозы, размер которых находится за пределами интервалов, приведенных в качестве примеров, в особенности с учетом упомянутых выше факторов интервалов. Ежедневная схема приема при парентеральном введении может составлять приблизительно от 10 приблизительно до 100 мг/кг, предпочтительно приблизительно от 100 приблизительно до 100 мг/кг, более предпочтительно приблизительно от 1 приблизительно до 100 мг/кг, еще более предпочтительно приблизительно от 1 приблизительно до 30 мг/кг, еще более предпочтительно приблизительно от 3 приблизительно до 30 мг/кг или наиболее предпочтительно приблизительно от 3 приблизительно до 30 мг/кг. Прогресс можно отслеживать путем периодических измерений и корректировать дозу в соответствии с результатами.
Предложенные выше количества антитела против ΡΡΝ1, в большой степени зависят от индивидуального выбора в ходе конкретной терапии. Ключевым фактором в выборе соответствующей дозы и схемы применения является полученный результат. Факторы, рассматриваемые в данном контексте, включают определенное заболевание, подвергаемое лечению, клиническое состояние конкретного пациента, причину заболевания, места доставки антитела, определенного типа антитела, способа введения, схемы введения и других факторов, известных врачам-терапевтам.
Антитела по настоящему изобретению можно использовать в качестве лекарственных средств, предназначенных для использования человеком, вводимых различными способами. Наиболее предпочтительными являются указанные композиции, предназначенные для парентерального введения. Указанные фармацевтические композиции можно изготавливать при помощи способов, хорошо известных в данной области. См., например, КепипдЮп: ТЬе Заспсс аиЛ РгасЬсе оГ РЬагшаеу, 19* еЛ. (1995), Сеииаго, А., е! а1., Маск РиЪЬкЫпд Со. В соответствии с этим в настоящем изобретении также предложены композиции, содержащие в составе одно или более антител по настоящему изобретению, в сочетании с одним или более фармацевтически приемлемым носителем, растворителем или наполнителем. В одном из вариантов осуществления фармацевтическая композиция также содержит один или более терапевтических средств.
Термин парентеральный, используемый в настоящей заявке, включает внутривенное, внутримышечное, подкожное, ректальное, вагинальное или внутрибрюшинное введение. Предпочтительной является парентеральная доставка путем внутривенной инфузии или внутривенной, внутрибрюшинной или подкожной инъекции. Наиболее предпочтительной формой введения является подкожная инъекция. Среды, подходящие для подобных инъекций, хорошо известны в данной области техники.
Обычно фармацевтическая композиция должна быть стерильной и стабильной в условиях производства и хранения в предоставляемой емкости, включая, например, шприц или другое устройство доставки, например, шприц-ручку. Следовательно, фармацевтические композиции можно подвергать стерильной фильтрации после получения лекарственной формы или приводить в микробиологически приемлемое состояние другими способами.
Антитело по настоящему изобретению можно включать в состав фармацевтической композиции, подходящей для введения человеку. Антитело по настоящему изобретению можно вводить человеку отдельно или в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем и/или растворителем в однократной дозе или множественных дозах. Указанные фармацевтические композиции разрабатывают соответствующим образом для выбранного способа введения, и фармацевтически приемлемые растворители, носителя и/или наполнители, например, диспергирующие агенты, буферы, поверхностно-активные вещества, консерванты, растворяющие агенты, агенты изотонического действия, включая, но не ограничиваясь хлоридом натрия, агенты стабилизирующего действия и им подобные, в их составе применяются соответствующим образом. Указанные композиции можно разрабатывать в соответствии с общепринятыми методиками, описанными, например, в КеттдФи, ТЬе 8с1еисе апЛ РгасЬсе оГ РЬагтасу, 19* ЕЛШои, Оеипаго, ЕЛ., Маск РиЪЬкЫид Со., Еайоп. РА (1995), где предоставлен перечень методик создания лекарственных форм, известных врачам-терапевтам. Носители, подходящие для использования в составе фармацевтических композиций, включают любое вещество, молекулы которого при взаимодействии с антителом по настоящему изобретению, сохраняют активность и не вступают во взаимодействие с иммунной системой индивида.
Термины индивид и пациент, используемые в настоящем описании, взаимозаменяемы, относятся к млекопитающему, предпочтительно к человеку. В отдельных вариантах осуществления у пациента наблюдается нарушение, при котором благоприятными могут быть снижение уровня зрелого гепцидина, снижение биологической активности зрелого гепцидина и/или повышение уровня железа в сыворотке, числа ретикулоцитов, числа красных кровяных телец, гемоглобина и/или гематокрита.
Введения вещества, содержащего антитело против ЕРШ, отдельно, подходит для пациентов, не переносящих один или более Е8А, в любой дозе или только в высоких дозах, например по причине нежелательных побочных эффектов. МАТ против ЕРШ, или их антиген-связывающие фрагменты, по настоя- 30 020472 щему изобретению, при введении их отдельно или в сочетании с ΕδΑ, также могут применяться пациентами, устойчивыми к действию ΕδΑ, для которых невозможно достижение желаемых показателей гематокрита при применении ΕδΑ отдельно как в стандартных, так и в высоких дозах.
МАТ против ΕΡΝ1 или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению также можно вводить как часть комбинированной лекарственной терапии, включая случаи, когда применение ΕδΑ является недостаточным для достижения желаемых показателей гематокрита.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения предложено применение моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению для производства лекарственного средства, предназначенного для повышения уровней железа в сыворотке, числа ретикулоцитов, числа красных кровяных телец, гемоглобина и/или гематокрита в организме человека.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента для производства лекарственного средства, предназначенного для применения в комбинированной терапии для повышения уровней железа в сыворотке, числа ретикулоцитов, числа красных кровяных телец, гемоглобина и/или гематокрита в организме человека, где указанное лекарственное средство следует вводить в сочетании с одним или более ΕδΑ, выбранных из группы, состоящей из следующих веществ: эпоэтин альфа, эпоэтин бета, дарбэпоэтин альфа, хематид, метоксиполиэтиленгликоль-эпоэтин бета или другое терапевтическое средство или терапевтическое лечение, обычно применяемые для повышения уровней железа в сыворотке, числа ретикулоцитов, числа красных кровяных телец, гемоглобина и/или гематокрита в организме человека.
В приведенных ниже примерах, не ограничивающих собой объем настоящего изобретения, показаны различные свойства антител против ΕΡΝ1, описываемых в настоящей заявке.
Пример 1. Производство гепцидина-25 человека
Гепцидин-25 человека можно получать из коммерческих источников (например, ΡορΙίόο Шегпакопа1 (Гои15уШс, КсШиску)) или получить при помощи различных методик синтеза или рекомбинации, известных в данной области техники. Также гибридный белок, содержащий двадцать пять аминокислот из состава последовательности гепцидина-25 человека, которому соответствует аминокислотная последовательность δΕΟ ΙΌ ΝΟ:91, можно экспрессировать в клетках Е. сок. Включения выделяли из 3 л культуры, содержащей Е. сок, экспрессирующей гибридный белок гепцидин, после индукции 1 мМ ИПТГ при 37°С в течение 3-6 ч. Тельца включения растворяли в буфере А (50 мМ Тг® и 8 М мочевина (рН 8,0)). Супернатант пропускали через колонку IΜΑС (20 мл ионит). Колонку промывали буфером А до достижения начального значения величины поглощения и связанные полипептиды элюировали из колонки при помощи 0,5 М имидазола в буфере А. Гибридный белок гепцидин-25 человека объединяли и восстанавливали при помощи 50 мМ ДТТ. После чего осуществляли рефолдинг данного гибридного белка путем разведения объединенного материала в 2 М мочевине, 3 мМ цистеине, 50 мМ Тг® (рН 8,0) до итоговой концентрации белка, составляющей менее 50 мкг/мл, после чего указанный материал перемешивали при комнатной температуре и подвергали окислению на воздухе в течение 48 ч. Окисленные полипептиды пропускали через колонку IΜΑС (20 мл) со скоростью потока, составляющей 5 мл/мин, и элюировали гибридный белок гепцидин-25 человека из колонки при помощи 0,5 М имидазола в буфере А. Объединенные фракции, содержащие гибридный белок гепцидин-25 человека, концентрируют и пропускают через эксклюзионную колонку διιροΓάοχ 75 (ΟΕ Неакксаге, ХК26/60), уравновешенную 50 мМ Тгк, 4 М мочевиной, рН 8,0, при скорости потока, составляющей 3 мл/мин. Мономерный гибридный белок объединяли и разводили в 50 мМ Тг®, 2 М мочевине, 5 мМ СаС12, рН 8,0, после чего расщепляли при помощи энтерокиназы с образованием гепцидина-25 человека δΕΟ ΙΌ ΝΟ:1. Нерасщепленный гибридный белок гецидин-25 человека удаляли при помощи пассивной хроматографии IΜΑС (согласно приведенному выше описанию). Проточную фракцию из колонки IΜΑС затем пропускали через колонку для обращено-фазовой хроматографии С-18 при скорости потока, составляющей 4,0 мл/мин. Колонку промывали 0,1% водный раствор ТФЭ до достижения начального значения величины поглощения, и связанные пептиды элюировали из колонки в линейном градиенте ацетонитрила от 20 до 40% с 0,1% ТФЭ при скорости потока, составляющей 0,5%/мин. Фракции, содержащие полипептид гепцидина-25 человека, объединяли и исследовали методом секвенирования Ν-концевой аминокислоты и масс-спектрометрии с лазерной ионизацией и десорбцией из матрицы (ΜΑΌΌΙ-Μδ). Полипептиды, кодирующие гепцидин-25 крысы, мыши и яванского макака, и различные усеченные с Ν-конца формы гепцидина-25 человека, включая гепцидин-22 и гепцидин-20, были получены из коммерческого источника (например, Ρерί^άе Шегпакопаф
Пример 2. Создание ЕаЬ-фрагмента 34А9
Антитела против ΕΡΝ1, можно получать путем иммунизации мышей иммуногенным полипептидом, содержащим аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ Ν0:11. В частности, для иммунизации мышей можно применять иммуногенный пептид, содержащий эпитоп ΟνΑ, связанный посредством пептидного линкера с аминокислотной последовательностью δΕΟ ΙΌ ΝΟ:12, которую считают по меньшей мере частью внеклеточной петли ΕΡΝ1 человека. После проведения иммунизации производили сбор селезенок мышей, и клетки селезенок сортировали способом магнитной сортировки клеток с применением биотинилированного пептида, аминокислотная последовательность которого представлена в δΕΟ ΙΌ ΝΟ:12, и
- 31 020472 гранул стрептавидина. РНК выделяют из антигенсвязывающих клеток и преобразуют в кДНК при применении оНдо άΤ. Вариабельные участки тяжелой и легкой цепей антитела получали методом ПЦР при применении праймеров каркасной области антитела и клонировали в фаговый вектор для создания библиотеки ЕаЬ-фрагментов антитела. Проводили скрининг фаговой библиотеки антитела при помощи биотинилированного пептида, например, 100 нМ, аминокислотная последовательность которого представлена в 8ЕР ГО N0:12. После этого положительные связывающие клоны описывали при помощи секвенирования ДНК, экспрессии ЕаЬ-фрагментов и связывания с пептидом, применяемым для иммунизации, и/или клетками, экспрессирующими ферропортин человека. ЕаЬ-фрагмент 34А9 определяли путем применения способа, по существу, описанного выше.
Пример 3. Составление карты эпитопов для МАТ против ЕРШ
Пептиды, содержащие неполные последовательности иммуногена, родственного ЕΡN1, можно применять в экспериментах по дот - блоттинг гибридизации для определения эпитопов МАТ 34А9 мыши. Можно синтезировать следующие пептиды и растворять в воде (подчеркнутые аминокислоты обозначают фактическую аминокислотную последовательность ЕРШ):
ЕрпЕЗа (ЗЕО Ю N0:96): СОЗРЕЕР1КЗКЕ10СЕ31ТРТКСС
060719Ζ (ЗЕО Ю N0:97): ССЗРЕЕ01К5КЕЮСС
060719Υ (ЗЕО Ю N0:98): ССЮСЕ31ТРТК1РЕ1ТТЕСС
0708Б4А (ЗЕО Ю N0:99): ССМРСЗРЬОЬЗУЗРЕЕОСС
0708Б4В (ЗЕО 10 N0:100) : ССЗРЬ0Ъ5У5РЕЕ01КЗСС
0708Б4С (ЗЕО Ιϋ N0:101) : 6СЕ01КЗКЕЮСЕ31ТСС
0708Б40 (ЗЕО ю N0:102) : ССК5КЕ10СЕ51ТРТКСС
Для каждого пептида, 3 мкл пептида, концентрация которого составляет 1-5 мкг/мл, наносили на мембрану из нитроцеллюлозы и высушивали на воздухе. Мембрану блокировали с помощью блокирующего буфера (например, ФСБ, содержащий 1% БСА), после чего инкубировали с 3-5 мкг/мл антитела против ЕΡN1, в блокирующем буфере при комнатной температуре в течение часа. Мембрану промывали три раза, каждый раз в течение 5 мин, 1х ФСБТ (10 мМ фосфат натрия, 150 мМ №С1, 0,1% Т^ееп-20, рН 7,4), после чего инкубировали с антителом козла, меченным ΙΚ700, против иммуноглобулинов мыши, в соответствии с инструкциями производителя (ЫСот, 1пс; ЕптсоЕт NЕ). Мембрану промывали три раза, каждый раз в течение 5 мин, 1х ФСБТ и получали изображение при помощи системы визуализации 0άуззеу и программного обеспечения 0буззеу (ЫСот, 1пс).
На фиг. 1 показано, что ΜΑΤ 34А9 связывается с пептидами ЕрпЕ3а, 060719Ζ, 0708Б4С и 0708Τ4Ώ, каждый из которых содержит 409-415 аминокислоты из 8ЕР ГО N0:1. Для ΜΑΤ 34А9 не требуется аминокислотной последовательности ЕЭ1, о чем говорит связывание с пептидом 0708Τ4Ώ. Связывание ΜΑΤ 34А9 с пептидом 060719Ζ слабее, чем с 0708Б4С; последний пептид включает 416-419 аминокислоты из состава последовательности ЕРШ (8ЕР ГО N0:1).
Пример 4. Показатели аффинности ЕаЬ-фрагментов и МАТ против ЕРШ, определенные с помощью анализа методом ППР
Показатели аффинности для ЕаЬ-фрагментов и МАТ, связывающих ЕРШ, можно определять с помощью прибора Ыасоте Т100 с применением модели связывания 1:1 для оценки на программном обеспечении Ыасоте Τ100 (В1Асоге® АВ, ирза1а, 8\\е6еп). Коротко, систему Τ-КЕх, представляющую собой коммерчески доступную систему экспрессии, регулируемую тетрациклином, без вирусных трансактивирующих факторов (1п\'Шоцеп, Сат1зЬаб, СА) применяют для создания стабильной линии клеток в клетках Τ-Кех НЕК 293. Все условия выращивания описаны в руководстве Τ-Кех, предоставляемом (птПгоцеп. ЕРШ связывали на С-конце с ОЕР. Экспрессию ЕРШ-ОЕР индуцировали с помощью доксициклина, концентрация которого составляет 1-10 нг/мл, в течение 1-24 ч. Сбор индуцированных клеток осуществляли путем соскабливания с поверхностей сосуда, с последующей промывкой 1х ФСБ. Хранение клеточной массы перед применением возможно при -80°С. Приблизительно пять миллионов индуцированных клеток ресуспендировали в 10 мМ фосфатном буфере с 0,2% Τ\ееη-20 и ингибиторами протеаз, например, Сошр1е1е™ Рто1еазе 1пЫЬйот Соск1аИ ΤаЬ1еί (Косйе ГТацпозИсз Согр., 1пб1апаро11з, Ш). Для лизиса клеток проводили три цикла замораживания/оттаивания/обработки ультразвуком. Лизат разводили в два раза в подвижном буфере В1асоте и центрифугировали для удаления остатков.
На приборе В1асоте Τ100 антитело кролика против ОЕР или антитело козла против ОЕР подвергали иммобилизации в проточной кювете 1-4 чипа СМ5 при 5000-15000 Киз. ЕРШ-ОЕР захватывают в проточную кювету 2, 3 или 4 из лизата индуцированных клеток. Проточную кювету 1 применяли в качестве стандарта. После этого во все проточные кюветы вводили антитела в различных концентрациях для оценки связывания и кинетических параметров. При использовании мультивалентных антител в данном виде анализа обычно предпочитают измерения, основанные на поверхностно-плазмонном резонансе с применением таких моновалентных антигенсвязывающих фрагментов, как ЕаЬ-фрагменты, для сведения к минимуму действия авидности. В табл. 4а и 4Ь приведены параметры связывания для ЕаЬ-фрагментов,
- 32 020472 направленных против ΡΡΝ 1 человека, полученные при применении антитела кролика против ΟΡΡ (ΙηνΐΙΐ'ομοη, СагЕЪад, СА (ΟΛίηΙομ #А11122)) антитела козла против ΟΡΡ (И&О 8уδΐетδ, Μΐηηοαροΐΐδ, ΜΝ (οαΐαΐομ #АР4240)) соответственно.
Таблица 4(а). Кинетические характеристики связывания РаЪ-фрагментов антител против ΡΡΝ1, с ΡΡΝ1 человека (полученные с помощью ΒίηοοΐΌ Т100 при 37°С)
ЕаЬ Коп (М-1с-1) Ко££ (с-1) Кинетическая Ко (М)
34А9 6,321Е+04 2,620Е-03 4,145Е-08
1С9 1,269Е+05 8,974Е-04 7,707Е-09
3ϋ8 1,920Е+05 2,000Е-03 1,042Е-08
Как показано в табл. 4 (а), значение Ко РаЪ 34А9 мыши для ΡΡΝ1 человека составляет приблизительно 41 нМ при определении в ходе анализа методом ППР при 37°С в данном виде исследования. Значение Ко РаЪ 1Ο9 мыши для ΡΡΝ1 человека, аффинно-зрелой формы РаЪ 34А9 мыши составляет приблизительно 7,7 нМ при определении в ходе анализа методом ППР при 37°С, улучшение в аффинности связывания является приблизительно 5-кратным. Для РаЪ 308 гуманизированной формы РаЪ 1Ο9 мыши, содержащей каркасную область тяжелой цепи иммуноглобулина человека УН1-69 и каркасную область легкой цепи 02, значение Ко для ΡΡN1 человека составляло приблизительно 10 нМ при определении в ходе анализа методом ППР при 37°С в данном виде исследования.
Таблица 4(Ъ) Кинетические характеристики связывания РаЪ-фрагментов антител против ΡΡN1, с ΡΡN1 человека (полученные с помощью Β^асο^е Т100 при 37°С)
ЕаЬ (п) Коп (М-1с-1) Ко££ (с-1) Кинетическая Ко (М)
1С9 мыши 4 1,726Е+05 4,968Е-04 2,900Е-09
3Ω8 человека 3 3,284Е+05 2,061Е-03 6,293Е-09
4А10-3 4 8,443Е+05 1,483Е-03 1,761Е-09
человека
СошЫИ 3 2,309Е+06 6,369Е-03 2,395Е-09
человека
Ь2.2-4 3 4,308Е+05 7,905Е-04 1,959Е-09
человека
Как показано в табл. 4 (Ъ) , значение Ко РаЪ 1Ο9 мыши для ΡΡN1 человека, аффинно-зрелой формы РаЪ 34А9 мыши составляет приблизительно 2,9 нМ при определении в ходе анализа методом ППР при 37°С в данном виде исследования. Для РаЪ 308 гуманизированной формы РаЪ 1Ο9 мыши, содержащей каркасную область тяжелой цепи иммуноглобулина человека УН1-69 и каркасную область легкой цепи 02, значение Ко для ΡΡN1 человека составляло приблизительно 6,3 нМ и было определено в ходе анализа методом ППР при 37°С в данном виде исследования. Для аффинно-зрелых РаЪ-фрагментов 4А10-3, ^тЫН и Р2.2-4 получали значения Ко для ΡΡN1 человека, находившиеся в интервале приблизительно от 2,4 нМ приблизительно до 1,8 нМ при определении в ходе анализа методом ППР при 37°С в данном виде исследования.
В табл. 5 приведены показатели связывания для МАТ, связывающих ΡΡN1 человека, полученные при применении антитела кролика против ΟΡΡ (ΊηνίΐΐΌΰοη, СагЕЪаб, СА (ολΙλΙοη #А11122)).
- 33 020472
Таблица 5. Кинетические параметры связывания для МАТ против РРХТ человека (Полученные с помощью Ыасоге Т100 при 25°С или 37°С) ΤΖ λ ~~~I ^”1 \
МАТ Темп. Коп (М-1с-1) Ко££ (с-1) Кинетическая Ко (М)
34А9 мыши 25°С 6,901Е+04 8,155Е-05 1,182Е-09
1С9 мыши 25°С 1,348Е+05 9,813Е-05 7,281Е-10
3ϋ8 человека 37°С 3,252Е+05 1,095Е-03 3,ЗббЕ-09
Значение Ко МАТ 34А9 мыши для РРХТ человека, определенное в ходе анализа методом ПНР при 25°С составляет приблизительно 1,1 нМ. Значение Ко МАТ Ю9 мыши для РРХТ человека, аффиннозрелой формы МАТ 34А9 мыши, определенное в ходе анализа методом ППР при 25°С, составляет приблизительно 0,73 нМ. Для МАТ 3Ό8, гуманизированной формы МАТ Ю9 мыши, содержащей каркасную область тяжелой цепи и каркасную область легкой цепи иммуноглобулина человека УН1-69 и 02, соответственно, значение Ко для РРХТ человека, определенное в ходе анализа методом ПНР при 37°С, составляло приблизительно 3,4 нМ.
Значение Ко для РРХТ человека, определенное согласно описанному в данном примере, служит доказательством создания антител против РРХТ человека, связывающих РРХТ человека с высокой аффинностью и, в частности, связывающихся с эпитопом РРХТ, присутствующим даже тогда, когда РРХТ человека экспрессируется клетками и локализован на мембране клеток.
Пример 5. Анализ влияния МАТ против РРХТ, на уровни ферритина в клетке ΐη νίΐίο
Изменения в содержании ферритина можно наблюдать на клетках Сасо-2, линии клеток энтероцитов человека, эндогенно экспрессирующих РРХТ. Концентрации ферритина в клетках Сасо-2 можно повышать путем добавления внешнего источника железа, и дальнейшего увеличения концентрации можно достигать путем добавления гепцидина, блокирующего транспорт железа за пределы клетки. Соответственно, влияние антител против РРХТ человека, на регуляцию содержания железа в клетках Сасо-2, модулируемую зрелым гепцидином, можно определять следующим образом.
Клетки Сасо-2 извлекали из сосуда для культивирования с помощью трипсина (1пуДгодеп, СагЬЬай, СА). Клетки собирали и промывали в среде для выращивания (например, ЭМЕМ + 10% ФБС + 1% аминокислот, не относящихся к незаменимым + 1% антибиотиков/антимикотических средств), после чего собирали с помощью слабого центрифугирования. Клетки ресуспендировали в среде для культивирования и производили подсчет. Концентрацию клеток доводили до значения, составляющего 1 х 106 клеток/мл, в среде для выращивания, и к ним добавляли и 2,5 мкМ Ре:ХТА (полученного в молярном соотношении 1:4). 100 мкл клеток вносили в лунки 96-луночного планшета, после чего инкубировали в течение 24 ч при 37°С, 5% СО2. Подготавливали 1дО1 мыши, применяемый в качестве отрицательного контроля, и два антитела с различными показателями аффинности по отношении к РРХТ человека, в среде для выращивания, в шестикратной итоговой концентрации. В лунки вносили разведения антител (25 мкл) или среду, в тройных повторах. Планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 15 мин, после чего в соответствующие лунки вносили по 25 мкл 5 мкМ Ре:ХТА с добавлением 600 нМ гепцидина или без (в итоговой концентрации, составляющей 100 нМ). Клетки инкубировали в течение 24 ч при 37°С, 5% СО2, после чего промывали 3х в 200 мкл ФСБ Дульбекко и подвергают лизису с помощью 50 мкл буфера для радиоиммунопреципитационного анализа (50 мМ ТЙ8, рН 7,5, 150 мМ ХаС1, 0,1% 8Ό8, 1% Тгйоп-Х100®, и 0,5% дезоксихолат натрия) с добавлением ингибиторов протеазы, например, Сотр1е1е™ Рго1еа8е 1пЫЬйог Соск1ай ТаЬ1е1 (РосНе П1адпо8Йс8 Согр., 1пй1апароЙ8, Ш), перемешивали и замораживали при -70°С до проведения исследования на ферритин с помощью метода ЕЫ5А.
Коротко, на микротитровальные планшеты по 110 мкл/лунку наносили ферритин, направленный против иммуноглобулинов человека, в концентрации, составляющей 1 мкг/мл (Ьетсо Тесйпо1од1е8, 81. Ьош8, МО), и инкубировали в течение ночи при 4°С. Планшеты промывали 2 раза в отмывочном буфере (0,02 М Тг18, 0,15М ХаС1, 0,1% Т\ееп 20, рН 7,4) и блокировали с помощью 150 мкл 1% раствора казеина в ФСБ (Тйегто р18Йег 8с1епййс, РоскЮгТ ТС) . Планшеты инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре. В соответствующие лунки вносили по 100 мкл лизатов и стандартов (ферритин печени человека, Са1Ыосйет/ЕМП Вю8с1епсе8, Ьа 1о11а, СА) и инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре. Планшеты промывали 3 раза и определяли связанный ферритин с помощью конъюгата с пероксидазой хрена, направленного против ферритина (анти-ферритин-НРР) (Ьетсо Тесйпо1од1е8) в разведении 1:2000, в объеме 100 мкл на лунку, после инкубации в течение 1 ч при комнатной температуре. Планшеты промывали 4 раза, и во все лунки вносили по 100 мкл субстрата ОФД (5 мг субстрата ТаЬ1е1, растворенного в 12,5 мл 0,1 М Ха2НР04, 0,05 М лимонной кислоты, рН 5,0 с 5 мкл 30% Н202) . Реакцию останавливали с помощью 100 мкл 1 н. НС1 через 10 мин. Величину поглощения при 490 нм (А490) считывали при помощи соответствующего планшет-ридера для ЕЫ8А. Концентрацию белка в каждом образце также измеряли с помощью набора для анализа белка ВСА (Тйегто р18Йег 8с1епййс). Принимая во внимание возможные различия в количестве клеток в лунках, данные по концентрации ферритина нормализовали
- 34 020472 относительно концентрации белка, и действие добавленных антител выражали через процент ингибирования.
Эксперименты, проводимые согласно описанному в данном примере, указывают на то, что влияние гепцидина-25 человека на концентрацию ферритина в клетках ингибируется ΜΑΤ 34А9 и Ю9 (табл. 6). Более того, полученные результаты говорят о том, что аффинность МАТ против ΡΡΝ1 имеет непосредственное влияние на его функциональную активность. В частности, более низкое аффинное ΜΑΤ 34А9, даже в самой высокой концентрации (200 мкг/мл) лишь в небольшой степени ингибировало влияние, индуцируемое зрелым гепцидином (25% ингибирования +0,5%), тогда как более высокоаффинное ΜΑΤ Ю9 проявляло явное ингибирование в зависимости от дозы.
Таблица 6
Образец Ферритин (нг)/ белок (мкг) 5Τϋ % Ингибирования
только ΝΤΑ:Κθ 5,11 0,25 ΝΑ
ΝΤΑ+Ге + гепцидин 9, 95 0, 86 ΝΑ
200 мкг/мл ηιΙςΟι 9,40 0,25 11,6
100 мкг/мл т1д6х 9,78 0, 68 3,5
50 мкг/мл тГдСх 10, 06 0, 96 0
25 мкг/мл т1дС1 9,6 1,29 7,2
12,5 мкг/мл т1дС1 10, 01 1,11 0
6,25 мкг/мл т1дС1 10,45 2,05 0
200 мкг/мл МАТ 1С9 6,07 0,34 80,2
100 мкг/мл МАТ 1С9 5, 68 0,34 88,2
50 мкг/мл МАТ 1С9 7,11 0,54 58,7
12,5 мкг/мл МАТ 1С9 7,93 0, 43 41,7
6,25 мкг/мл МАТ 1С9 8,02 0, 45 39, 9
200 мкг/мл МАТ 34А9 50 мкг/мл МАТ 34А9 со со (Л 0,50 0, 80 25 6,2
Приведенные данные указывают на то, что ΜΑΤ Ю9 и 34А9 блокируют способность гепцидина-25 человека вызывать интернализацию и/или разрушение ферропортина и, следовательно, уменьшают выведение железа из клеток.
Пример 6. Анализ ингибирования связывания гепцидина-25 человека с ΡΡΝ1
Клетки ΟΡΡ/293, стабильно трансфицированные ΡΡΝ1, наносили на планшет, покрытый поли-Όлизином, в количестве, составляющем 60000 клеток на лунку, в 80 мкл среды для анализа (ΌΜΕΜ 11965, 10% ФБС, подвергнутой диализу, 20 мкМ Р.ЛС, пенициллин-стрептомицин) и инкубировали в течение 4 часов при 37°С, 10% СО2. Для индуцирования экспрессии ΡΡΝ1 добавляли доксициклин в итоговой концентрации, составляющей 11,2 нМ. Индуцированные доксициклином и неиндуцированные клетки, применяемые в качестве контроля, инкубировали в течение ночи при 37°С. После чего среду для выращивания удаляли и замещали исследуемым антителом или изотипным контрольным антителом в 30 мкл среды для анализа или 30 мкл среды для анализа, применяемой в качестве контроля, и инкубируют при 37°С в течение 1 ч. После чего, в каждую лунку вносили по 20 мкл биотинилированного зрелого гепцидина человека в итоговой концентрации, составляющей 30 нМ. Образцы оставляли на 1 ч при 37°С, затем промывали 4 раза в 200 мкл 2% ФБС, Д-ФСБ ДпуДгодеп, СагНЬаб, СА). После чего добавляли 65 мкл лизирующего буфера (0,5% Τήίοη Х-100, 10 мМ ЭДТА), и планшеты ставили на шейкер на 10 мин. После чего по 50 мкл раствора из каждой лунки переносили на отдельные лунки планшета с нанесенным стрептавидином (60 мкл 2 мкг/мл стрептавидина в ФСБ), инкубировали при 4°С в течение ночи, промывали 2
- 35 020472 раза (0,1% Τ\\υοη 20, ТВ8), блокировали раствором казеин/ФСБ), после чего инкубировали в течение часа при комнатной температуре. Затем лунки планшета промывали 3 раза (0,1% Т/уеен 20, ТВ8) и добавляли 50 мкл МАТ 3.23 против гепцидина-25 человека, в концентрации, составляющей 0,5 мкг/мл, и планшеты инкубировали в течение одного часа при комнатной температуре. МАТ 3.23 против гепцидина-25 человека, описано в публикации заявки на международный патент РСТ АС) 2009/058797. После чего планшеты промывали три раза и вносили по 50 мкл конъюгата пероксидазы хрена, направленной против 1дО человека (НКР) в разведении 1:2000. После инкубации в течение часа при комнатной температуре добавляли по 50 мкл субстрата ОФД. Реакцию гасили с помощью 100 мкл 1 н. НС1 через 4 мин. Величину поглощения при 490 нм (А490) считывали с помощью соответствующего планшет-ридера для ЕЫ8А.
Таблица 7
1 % Ингибирования
Концентрация антитела
Антитело 1.2 мкМ О.ЗмкМ 0.75мкМ 0.019 мкМ
1С9 Значение 58.1 55.5 33.7 17.5
5ϋ 1.7 6.7 20.4 8.7
[ Концентрация антитела
б.ОмкМ 1.2 мкМ 0.24 мкМ 0.048 мкМ
34А9 Значение 26.4 31.2 9.6 -7.2
5Ό 26.8 6.9 6.0 12.1
те 1дС1 Значение -3.4 0.5 -4.0 -11.0
δϋ 8.8 6.1 7.3 9.6
Данные, полученные в ходе экспериментов, проводимых, по существу, согласно описанному в примере 6, указывают на то, что МАТ 1О9 и 34А9 ингибируют способность гепцидина-25 человека связывать ЕΡN1 человека.
Пример 7. Клеточный анализ ингибирования антителом против РР№, интернализации и разрушения, вызываемых гепцидином-25
Для оценки активности МАТ или их антигенсвязывающих фрагментов против СР\1 человека, по нейтрализации зрелого гепцидина, можно применять клеточный анализ ίη νίίΓο. Указанный анализ может быть основан на интернализации и разрушении зрелым гепцидином его рецептора, РР№. Например, подготавливали стабильную линию клеток НЕК 293, в которой возможна индуцируемая экспрессия РР№. СР\1 соединяли на С-конце с ОРР в целях отслеживания. Индуцируемую экспрессию молекулы РР№-ОРР контролировали при помощи системы Т-КЕх (ΙηνίίΓο§6η, Саг1зЬаб, СА) . Последовательность, кодирующую РР№-ОРР, клонировали в вектор рС’1)\А4 Г(0 содержащий индуцируемый промотор и маркер устойчивости к зеоцину. Образованную конструкцию трансфицировали в клетки Т-КЕх-293, экспрессирующие регуляторный белок, требуемый для экспрессии, индуцируемой доксициклином. Клоны, устойчивые к зеоцину, исследовали на индуцируемую экспрессию РР^ОРР. Условия выращивания клеток, по существу, соответствуют описанному в руководстве для пользователей производителя системы Т-КЕх (ΙηνίίΓο§6η). Коротко, клетки выращивали в ОМЕМ, 10% ФБС, подвергнутой диализу, 20 мкМ РАС, с добавлением 5 мкг/мл пенициллин-стрептомицина. Отбор осуществляли с помощью 100 мкг/мл зеоцина и 5 мкг/мл бластицидина. Клетки вносили на 96-луночные планшеты, покрытые поли-Олизином. Для считывания общего значения флуоресценции в лунке применяют планшет - ридер высокого разрешения Лситеи ЕхрМгег НТ8.
После трипсинизации 96-луночный планшет, в котором проводили анализ, засевали стабильной линией клеток РΡN1 -ОРР/ТКЕх 293 в количестве 9000 клеток/лунку. Объем посева составлял 80 мкл в лунку. Клетки оставляли для закрепления на ночь. На следующее утро, в каждую лунку вносили по 9 мкл доксициклина, концентрация которого составляет 30 нг/мл, для индуцирования экспрессии РР№-ОРР. По прошествии 8 часов индукции при 37°С, среду отсасывали и аккуратно промывали лунки ФСБ в объеме 150 мкл/лунку.
Исследуемые образцы (например, гепцидин-25 человека и/или исследуемые антитела) располагали соответственно 96 лункам для быстрого внесения на планшет, в котором проводили анализ, после отмывки. Итоговый объем анализа в лунке составлял 45 мкл. Непосредственно после внесения образцов производили считывание показаний на планшете с помощью Аситеη ЕхрМгег (установленного на 550 вольт на 1 канал). Указанное считывание, в общем, представляет собой снятие показаний в 0 час и применяется для нормализации числа клеток в лунке, коррелирующего с общими единицами флуоресценции (РЬи) в лунке. Для интернализации и разрушения РР№, вызываемых зрелым гепцидином человека, максимальный эффект наблюдают при 0,5 мкМ зрелого гепцидина человека. Значение 1С50 для зрелого гепцидина человека составляло приблизительно 10 нМ. Для анализов нейтрализации антител против РР№,
- 36 020472 концентрацию гепцидина-25 человека поддерживали на значении 12 0 нМ, и МАТ против ЕР№, исследовали при 600 нМ, 200 нМ, 67 нМ, 22 нМ и 7,4 нМ. Планшеты инкубировали в течение 24 ч, после чего снова производили снятие показателей, и данные получали как показатель общих ЕЙИ в лунке в точке 24 ч, разделенный на общие ЕЙИ в лунке в точке 0 ч. Все экспериментальные точки получали в четырех повторах. Процент (%) ингибирования определяли путем вычитания значений для 120 нМ при обработке зрелым гепцидином человека, и делением значений, полученных при обработке антителом против ЕР№, на значение, полученное при обработке гепцидином-25.
В ходе анализа ίη уйго, проводимого, по существу, согласно приведенному выше описанию, биологическую активность гепцидина-25 человека нейтрализовывали при помощи различных МАТ против ЕР№, полученный процент ингибирования приведен ниже, в табл. 8.
Таблица 8. Процент (%) ингибирования моноклональными антителами против ЕР№, интернализации и разрушения, вызываемых зрелым гепцидином человека, ίη уйго
Данные, полученные в ходе экспериментов, проводимых, по существу, согласно описанному в примере 7, подтверждают вывод о том, что МАТ 109, 34А9 и 3Ό8 существенным образом ингибируют способность гепцидина-25 человека вызывать интернализацию и разрушение ТРШ1 человека ίη уйго.
Пример 8. Биологическая активность МАТ 109 по сравнению с контрольным 1д01 мыши после внутривенного введения однократной дозы яванским макакам
Физиологическое влияние МАТ 109 мыши против ТРШ1 человека на уровни гепцидина в сыворотке и на уровни железа в сыворотке изучали путем введения МАТ в однократной внутривенной дозе самцам яванского макака (Масаса ГазеюШайз; 3-4 кг) и сравнения его влияния с влиянием введения 1д01 мыши в качестве контроля. После введения, производили забор образцов крови для анализа содержания железа в сыворотке и гепцидина в сыворотке. Дозу, составлявшую 30 мг/кг, вводили в форме инъекции в подкожную вену. Непосредственно после введения дозы, но до удаления иглы из вены животного, устройство для введения промывали солевым раствором в объеме, приблизительно составлявшем 2 мл.
Таблица 9
Концентрация (мг/мл) Объем (мл/кг)
1 контрольный 1дС1 мыши 9, 53 3, 15
2 1С9 мыши 12,6 2,38
Отбор образцов для анализа содержания гепцидина в сыворотке
Забор крови производили перед введением и во временных точках 0,5, 1, 3, 6, 10, 24, 48, 72, 96 и 168 часов после введения дозы. Забор крови (в объеме, составлявшем приблизительно 0,5 мл) производили из бедренной вены в пробирки, не содержащие антикоагулянт. Крови позволяли образовать сгусток при условиях внешней среды перед центрифугированием с получением сыворотки. Образцы сыворотки помещали на сухой лед перед помещением на хранения приблизительно при -70°С.
Отбор образцов для анализа содержания железа в сыворотке
Забор крови производили перед введением и во временных точках 1, 3, 6, 24, 48, 72, 96 и 168 ч после введения дозы. Все образцы крови отбирали, обрабатывали, анализировали и исследовали в соответствии со способами, считающимися приемлемыми у работников в медицине. Уровни железа в сыворотке можно измерять с помощью любого способа, известного в данной области техники, обычно считающегося приемлемым для измерения общего железа в сыворотке (Ее) у работников в области медицины. Концентрации гепцидина в сыворотке определяли с помощью жидкостной хроматографии и массспектрометрии, по существу, в соответствии с описанием, приведенным в Мигрйу е! а1., Б1оой, 110:104854 (2007). Анализы, предназначенные для измерения содержания железа в сыворотке, широко известны в данной области техники (см., например, СоосЬми, ТЕ., е! а1., СНшеа1 Сйет1з1гу 12: 47-57 (1966) и 1. Сйп. Ра1й, 24:334-335 (1971)).
На концентрации гепцидина в сыворотке не оказывало влияние введение контрольного 1д01 мыши, и они изменялись в интервале от 1,5 до 31 нг/мл во время проведения исследования. Средние уровни гепцидина в сыворотке контрольных животных составляли 11,5±8,8 нг/мл (значение ± 8Ό). После введения МАТ 109 мыши уровни гепцидина в сыворотке повышались от исходного уровня 7,6 и 14,7 нг/мл до пиковых значений, составлявших 49,7 и 79,1 нг/мл соответственно. Пик содержания гепцидина в сыво- 37 020472 ротке наступал приблизительно через 10 ч после введения МАТ 109 мыши (фиг. 6). Повышение уровня гепцидина в сыворотке, вероятно, происходило по причине взаимодействия МАТ 109 мыши с его мишенью ΡΡN1, которое, после связывания с ΡΡN1, блокирует взаимодействие ΡΡN1 и гепцидина, и, следовательно, замедляет выведение и/или интернализацию РР№.
Уровень железа не повышался в сыворотке животных, подвергнутых воздействию 1дО мыши, и изменялся в интервале от 64 до 97 мкг/дл во время проведения исследования. После введения МАТ 109 мыши уровни железа в сыворотке повышались от начального значения, составлявшего 136 и 144 мкг/дл, до пиковых значений, составлявших 306 и 292 мкг/дл соответственно. Пик содержания железа наступал приблизительно через 48 ч после введения МАТ 109 мыши (фиг. 7). Уровни железа в сыворотке постепенно возвращались к исходному значению к 96 ч после введения, что указывает на необратимый характер повышения уровней железа в крови.
Пример 9. Клеточный анализ ингибирования антителом против РР№, интернализации и разрушения, вызываемых гепцидином-25
В ходе экспериментов, проводимых, по существу, в соответствии с описанным выше, в примере 7, было показано, что МАТ ^μΒι-11, 4А10-3 и Б2.2-4 ингибируют интернализацию и разрушение РР\1 человека, вызываемые гепцидином-25 человека, более эффективно ίη νίίΓο по сравнению с МАТ 34А9, 3Ώ8 и 109 (см. табл. 10). В частности, МАТ против РР\1 анализировали по кривой концентраций, состоящей из 9 точек, с начальной точкой в 900 нМ с получением 3-кратных серийных разведений. Процент (%) ингибирования определяли путем вычитания значений, полученных для обработки 120 нМ гепцидином, и последующего деления значений, полученных в результате обработки МАТ, на значения, полученные в результате обработки гепцидином. Относительные значения 1С50 определяли с помощью δ^дта ΡΙοί. Верхние значения процента (%) ингибирования, а также относительные и абсолютные значения 1С50 приведены в табл. 10.
Таблица 10
МАТ Верхнее значение Относительное Абсолютное
(1дС4) % Ингибирования (п=3) Значение 1С50 (нМ) (п=3) Значение Ю50 (нМ) (п=3)
СотЫН 92,6±4,5 3,7±0,2 3,8±0,1
4А10-3 85,9±2,2 4,7±1,5 5,7±1,7
Б2.2-4 81,б±1,0 4,8±1,2 6,2±1,6
3ϋ8 86,8±7,0 10,2±2,2 13,7±3,4
169 69,0±8,0 9,2±3,3 18,8±8,1
34А9 55,2±7, 1 58,9±18,6 N.0.
N.0: Подогнанная вершина кривой не достигает 50%, в результате чего абсолютное значение 1С50 невозможно вычислить
Пример 10. Влияние на фармакодинамические параметры гуманизированных моноклональных антител 4А10-3 против ферропортина в организме яванских макак
Фармакодинамические характеристики МАТ против ферропортина можно исследовать после внутривенного введения доз самцам яванского макака в соответствии с методами, известными специалистам в данной области техники. Например, в ходе пяти независимых исследований МАТ 4А10-3 вводили яванским макакам в форме однократной внутривенной болюсной инъекции (п=4/в группе) в дозах, составлявших 0,3, 1,0, 3,0, 10 и 30 мг/кг. Образцы крови (в объеме, составлявшем приблизительно 0,5 мл для получения показателей для железа) отбирали до введения первой дозы и во временных точках 1, 6, 12, 24, 48, 72, 96, 168 и 264 ч после введения дозы. Для более высоких уровней доз во временных точках 360, 456, 552 и 648 ч после введения отбирали дополнительные образцы крови. Во время введения дозы вес животных находился в интервале от 2 до 3 кг. Образцы крови забирали у каждого животного из бедренной вены в пробирки, не содержащие антикоагулянта.
Графики зависимости концентрации железа в сыворотке от времени после внутривенного введения 0,3, 1,0, 3,0, 10 и 30 мг/кг МАТ 4А10-3 самцам яванского макака сопоставляли с возрастанием содержания железа в сыворотке в зависимости от дозы, пик которого наступал через 24 ч после введения. Пиковые реакции, выражавшиеся в изменении концентрации железа (приблизительно 2-кратное возрастание) и длительность реакций в дозах, составлявших 10 и 30 мг/кг, были сходными. В сыворотке животных, которым вводили дозы, составлявшие 0,3, 1,0 и 3,0 мг/кг, содержание железа возвращалось к исходным значениям приблизительно через 48 ч после введения. В сыворотке животных, которым вводили дозы, составлявшие 10 и 30 мг/кг, содержание железа возвращалось к исходным значениям приблизительно через 72 ч после введения.
Более того, в ходе одиночного исследования введение однократной подкожной инъекции МАТ 4А10-3 в дозе, составлявшей 10 мг/кг, приводило к аналогичной реакции (η=2; значение ± δΏ), выражен- 38 020472 ной в изменении концентраций железа в сыворотке как по интенсивности, так и по длительности, которую наблюдали после внутривенного введения эквивалентной дозы (η=4; значение ± 8Ό).
Пример 11. Фармакокинетические параметры гуманизированных моноклональных антител против ферропортина, в организме крыс и яванских макак
Фармакокинетические параметры МАТ против ферропортина можно исследовать ίη νίνο в соответствии со способами, известными в данной области техники. Фармакокинетические параметры МАТ, 4А10-3 и С'отЫ 11 против ЕРШ, исследовали после внутривенного введения однократных доз самцам яванского макака и крысам 8ргадие Оау1еу, например. Во время введения дозы вес яванских макак находился в интервале приблизительно от 2,2 до 5,5 кг, а вес крыс 8ргадие Эа\у1еу находился в интервале между 240 и 265 г.
Исследования фармакокинетических параметров в организме яванских макак проводили в три фазы в дозах, составлявших 1,0, 3,0 и 0,3 мг/кг, вводимых с интервалами приблизительно в 2 недели. В ходе каждой фазы МАТ 4А10-3 или МАТ СстЪШ внутривенно вводили в форме однократной болюсной инъекции (η=4 в группе). Образцы крови отбирали перед введением первой дозы и во временных точках 1, 6, 12, 24, 48, 72, 96, 168 и 264 ч после введения.
Крысам МАТ 4А10-3 или МАТ СютЫ 11 вводили в форме однократной болюсной инъекции в дозе, составлявшей 3 мг/кг (η = 3 в группе). Серийные образцы крови отбирали перед введением первой дозы и во временных точках 0,08, 1, 4, 8, 24, 48, 72, 120 и 168 после введения.
Концентрации МАТ 4А10-3 и СютЫ 11 в сыворотке определяли с помощью сэндвич - варианта ЕЫ8А с 1§О человека. Диапазон калибровочной кривой составлял от 5 до 400 нг/мл, нижний предел количественного анализа (ТГ00) был определен в 10 нг/мл. Фармакокинетические параметры определяли с помощью анализа без компартментализации на версии 5.2.
Графики зависимости концентрации в сыворотке от времени после внутривенного введения самцам яванского макака приведены на фиг. 10. МАТ 4А10-3 выводился значительно медленнее (приблизительно в 5 раз), чем МАТ СстЪШ во всех исследованных дозах. Различия были очевидны в первой анализируемой временной точке (1 ч), когда концентрации МАТ СοтЪШ в сыворотке составляли приблизительно 50% от концентрации МАТ 4А10-3. В точке 24 ч после введения концентрации МАТ 4А10-3 в сыворотке составляли 20-33% Стах по сравнению всего с 6-9% для СοтЪШ. Периферические концентрации МАТ СетЪШ не выявлялись после введения дозы, составлявшей 0,3 мг/кг. Выведение МАТ 4А10-3 происходило несколько быстрее в дозах, в 2 раза меньших, чем 3 мг/кг. Т1/2 для МАТ 4А10-3 варьировало от 2 до 3 дней. Тогда как Т1/2 для МАТ СοтЪШ варьировало приблизительно от 12 приблизительно до 27 ч.
Предполагают, что усиленное выведение МАТ СοтЪШ по сравнению с МАТ 4А10-3 является причиной не специфичных взаимодействий МАТ ^тЫН с белками поверхности клетки, в которые не вступает МАТ 4А10-3. Для проверки данной гипотезы, фармакокинетические параметры МАТ 4А10-3 и МАТ СοтЪШ исследовали на мышах, хотя ни одно из МАТ эффективно не связывается с ферропортином крысы.
Графики зависимости концентрации в сыворотке от времени после внутривенного введения самцам крыс приведены на фиг. 11. Сходным образом с данными, полученными на приматах, МАТ 4А10-3 выводился более медленно (приблизительно в 5-раз), чем МАТ СοтЪШ, в организме крыс (данные не приведены) . Также, различия были заметны в первой анализируемой временной точке (0,08 часов), когда концентрации МАТ СοтЪШ в сыворотки составляли приблизительно 50% концентраций, наблюдаемых для МАТ 4А10-3. Т1/2 для МАТ 4А10-3 и МАТ ^тЫН составляли приблизительно 4,5 дней и 3 дня, соответственно, в организме крыс (данные не приведены).
Приведенные данные убедительно указывают на то, что причиной более быстрого выведения МАТ СοтЪШ не является выведение, опосредуемое механизмом связывания мишень-рецептор, поскольку ни МАТ 4А10-3, ни МАТ СοтЪШ не связывают ферропортин крысы.
Пример 12. МАТ против ЕРШ человека, характеризующиеся задержанным выведением и/или низким не специфичным связыванием (гепарина)
Исследования фармакокинетических параметров МАТ СοтЪШ, описанное выше, в примере 11, позволяет предположить, что МАТ ^тЫН выводится из сыворотки быстрее, чем МАТ 4А10-3. Указанные данные также позволяют предположить, что причиной более быстрого выведения МАТ СетЪШ по сравнению с МАТ 4А10-3 не является повышение выведения МАТ СοтЪШ, опосредуемое механизмом мишень-рецептор, по сравнению с выведением МАТ 4А10-3.
Поскольку в ходе конструирования МАТ СοтЪШ в его состав были включены множественные остатки аргинина, предполагают, что полученное в результате увеличение положительного заряда молекулы МАТ СοтЪШ по сравнению с МАТ 4А10-3, например, привело к повышению не специфического связывания с отрицательно заряженными поверхностями мембраны и с гепарином.
Действительно, в ходе создания модели строения МАТ СοтЪШ показали наличие пэтча на поверхности МАТ СοтЪШ, несущего сильный положительный заряд, более ярко выраженный у МАТ СοтЪШ, чем у некоторых других сконструированных МАТ против ЕРШ человека, включая МАТ 4А10-3 и МАТ Б2.2-4.
МАТ СοтЪШ, 4А10-3 и Ь2.2-4 исследовали на признак неспецифичного связывания гепарина с по- 39 020472 мощью ЕЫ8А на гепарин в соответствии с методами, известными специалисту в данной области техники. МАТ СЪтбШ, 4А10-3, 3Ό8 и Ь2.2-4 также исследовали на признак связывания с клетками НЕК 293, экспрессирующими ΡΡN1 человека, а также с контрольными клетками НЕК 293, не экспрессирующими ΡΡN1 человека на поверхности.
В ходе ЕЬ18А на гепарин с применением МАТ СютЫ-Н показали, что МАТ СютЫ-Н сильно связывается с гепарином, тогда как МАТ 4А10-3 и Ь2.2-4 не образуют подобных связей. Более того, МАТ Сстб1-11 также сильно связывался как с клетками НЕК 293, экспрессирующими ΡΡN1 человека, так и с контрольными клетками НЕК 293, не экспрессирующими ΡΡN1 человека на поверхности. С другой стороны, МАТ 4А10-3, 3Ό8 и Б2.2-4 в значительной степени связывались с клетками НЕК 293, экспрессирующими ΡΡN1 человека, но не связывались с контрольными клетками НЕК 293.
В результате сконструировали МАТ Сοт11СΥ с целью снижения не специфичного связывания, наблюдавшегося для МАТ СстбШ, путем замещения аминокислотного остатка аргинина в составе НСЭК2 на аминокислотный остаток глицина. Также, другой потенциально способный вызывать нежелательные эффекты аминокислотный остаток в составе МАТ СотЫИ, аминокислотный остаток триптофана в составе ЬСОК2, при конструировании МАТ Сοт11СΥ заместили на аминокислотный остаток тирозина. Предварительные данные связывания, полученные с применением супернатантов клеток, экспрессирующих МАТ Сοт11СΥ, показывают отсутствие не специфичного связывания с контрольными клетками НЕК 293, то есть клетками, не экспрессирующими ΡΡN1 человека, тогда как для обоих МАТ 1Β7 и 1Р8 было показано значительное не специфичное связывание с теми же контрольными клетками.
Пример 13. Анализ ингибирования связывания гепцидина-25 человека с ΡΡN1
Сконструированные аффинно-зрелые антитела человека против ΡΡN1 человека можно исследовать по признаку способности ингибировать связывание гепцидина-25 человека с ΡΡN1 человека, экспрессированным в клетках НЕК 293. Коротко, трансфицированные клетки ΡΡN/293 помещали на 96-луночный планшет на нанесенным на него поли-Э-лизином (ΒΌ Β^ο8с^еηсе8, 8аη Фке, СА; ΒΌ Β^οсοаί р1а1е5 #35 4640) в количестве, составляющем 40000 клеток на лунку, в 80 мкл среды для анализа (ЭМЕМ 11965, 10% ФБС, подвергнутая диализу, 20 мкМ РАС, пенициллин-стрептомицин), центрифугировали в течение 1 минуты при 1000 оборотов в минуту, после чего инкубировали в течение 4 ч при 37°С, 10% СО2. Экспрессию ΡΡN1 индуцировали с помощью добавления к клеткам, внесенным на планшет, 20 мкл доксициклина в концентрации, составляющей 10 нМ (итоговая концентрация доксициклина составляет 2 нМ). Индуцированные доксициклином и не индуцированные контрольные клетки инкубировали в течение 5 ч при 37°С, 10% СО2. После чего, агент, вызывающий индукцию, удаляли путем 2Х промывания планшета ЭМЕМ. Клетки инкубировали в течение ночи в 100 мкл среды для анализа. После чего удаляли среду для анализа и замещали ее 40 мкл раствора исследуемого антитела или изотипного контрольного антитела в трех повторах и инкубировали при 37°С, 10% СО2 в течение 20 мин. После чего, в каждую лунку добавляли по 20 мкл биотинилированного зрелого гепцидина человека в итоговой концентрации, составляющей 30 нМ в лунке. Образцы инкубировали в течение 1 ч при 37°С, 10% 10% СО2, после чего 4 раза промывали планшет 200 мкл 2% ФСБ, Д-ФСБ (ΌίΦο, саФФд ηο. 14040) . После чего в лунки вносили по 65 мкл лизирующего буфера (0,5% ТпЮп Х-100, 10 мМ ЭДТА), и планшет ставили на шейкер на 10 минут. После чего 50 мкл раствора из каждой лунки переносили в отдельные лунки микротитровального планшета Грейнера с нанесенным на него стрептавидином (60 мкл стрептавидина в концентрации, составляющей 2 мкг/мл (81дта, 8ί. ΕοΦδ, МО; каталоговый № 84762) в ФСБ, инкубировали при 4°С в течение ночи, промывали 2 раза (0,1% Т\уеег1 20, ТΒ8), блокировали с помощью раствора казеин/ФСБ), после чего инкубировали в течение часа при комнатной температуре. Затем лунки планшета промывали 3 раза (0,1% Т\уеег1 20, ТΒ8) и вносили по 50 мкл МАТ 3.23 против гепцидина-25 человека в концентрации, составляющей 0,5 мкг/мл, и образцы инкубируют в течение часа при комнатной температуре. МАТ 3.23 против гепцидина-25 человека, описан в международной публикации заявки на патент РСТ \У0 2009/058797. После чего планшеты промывали три раза и добавляли по 50 мкл конъюгата 1дС козла против иммуноглобулинов человека - пероксидаза хрена (8οιιΙΦπί Β^οίесЬ саФФд ηο. 2060-05) в разведении 1:2000. После инкубирования в течение часа при комнатной температуре планшет промывали 4 раза и вносили по 50 мкл субстрата ОФД (81дта; каталоговый № Р6912). Реакцию гасили с помощью 100 мкл 1 н. НС1 через 4 мин. Величину поглощения считывали при 490 нм (А490) с помощью соответствующего планшет-ридера для ЕЬ18А. Диапазон результатов количественного анализа определяли путем вычитания значения А490 для лунок с не индуцированными клетками из значений для лунок с индуцированными клетками, обработанными контрольным антителом.
Данные, приведенные в табл. 11, указывают на то, что гуманизированное МАТ 3Ό8 и его аффиннозрелые варианты в значительной степени ингибируют способность гепцидина-25 человека связывать ΡΡN1 человека. В частности, для МАТ 3Ό8, гуманизированная форма МАТ 1С9 мыши, содержащие каркасную область тяжелой цепи УН1-69 и каркасную область легкой цепи 02, получили значение 1С50, составляющее приблизительно 400 нМ в приведенном виде анализа. Аффинно-зрелые МАТ 4А10-3, СютбШ и Ь2.2-4 проявляли значительно улучшенную способность к ингибированию связывания в приведенном виде анализа.
- 40 020472
Таблица 11
% Ингибирования
1 Концентрация антитела
Антитело 2000 нМ 500 нМ 125 нМ 31.25 нМ 7.8 нМ
3ϋ8 Значение 54.7 64.7 21.8 4.0 -2.8
5ϋ 9.0 2.5 14.9 11.5 2.7
4А10-3 Значение 95.3 84.9 59.3 13.4 5.4
5ϋ 2.1 1.7 6.4 4.2 14.4
сотЫ 11 Значение 79.9 81.6 88.4 32.1 18.7
5Э 9.0 8.8 4.8 3.1 8.4
Ι.2.2-4 Значение 85.1 99.8 76.5 27.5 -0.1
5ϋ 20.8 6.5 9.3 3.9 2.9
контрольный 1дС Значение -2.5 -0.7 1.9 7.9 2.5
5ϋ 5.8 10.3 6.2 6.5 14.1
Примечание: значение 75 кг/моль представляло собой молекулярную массу, применявшуюся для вычисления концентрации антитела
Пример 14. Анализ Ιη νίίτο влияния МАТ против РР№ на уровни ферритина в клетке
Как описано в примере 5, изменения уровней ферритина можно наблюдать в клетках Сасо-2, линии клеток энтероцитов человека, эндогенно экспрессирующих РРЖ. В ходе экспериментов, проводимых, по существу, в соответствии с описанным в примере 5, определяли влияние антител против РРЖ человека, на регуляцию уровней железа, модулируемую зрелым гепцидином, в клетках Сасо-2, и выражали через процент ингибирования, усредненный для нескольких независимых экспериментов, приведенный ниже, в табл. 12.
Приведенные данные указывают на то, что влияние гепцидина на концентрацию ферритина в клетках можно ингибировать с помощью МАТ против РРЖ человека, в зависимости от дозы. Как показывают значения ЕС50, некоторые МАТ против молекул организма человека, обладают большей активностью в ингибировании влияния гепцидина по сравнению с другими, например, ^шЬШ = 4А10-3 > Ь2-2-4 > 3Ώ8.
Таблица 12. Процент ингибирования (+ 8ЕМ) МАТ против РРЖ человека, повышения уровней ферритина в клетке, вызываемого зрелым гепцидином, в клетках Сасо-2 ΐη νίίτο
Концентрация (М) СотЫИ 4А10-3 Б2-2-4 3ϋ8 Контрольный 1дС4 человека
6,67Е-7 М 75,2 61, 9 61,7 29, 8 18,7
(7,4) (6,3) (3,9) (6,1) (3,8)
2,22Е-7 М 69,3 59, 6 53, 8 25,2 24,2
(6,2) (5,4) (11,7) (4,4) (5,2)
7,4Е-8 М 61,1 45, 6 40, 6 12,0 21,1
(5,6) (5,1) (10,3) (5,6) (4,4)
2,47Е-8 М 45,3 36,2 30, 1 3,4 22,1
(6,5) (8,1) (4,4) (4,7) (3,8)
8,0Е-9 М 31, 6 28,0 39,5 14,9 16, 1
(9,1) (7,5) (6,3) (3,6) (3,7)
- 41 020472
2,7Е-9 М 34,8 (5,7) 24,9 (7,6) 39, 6 (7,5) 10, 6 (10,6) 22,4 (3, 6)
9,0Е-10 М 23,3 19,5 24,4 8,6 17,5
(6,3) (4,8) (8,2) (6,4) (3,9)
3,0Е-10 М 14,2 12,0 24,1 7,3 15, 5
(5,6) (10,6) (9,8) (6,6) (3,2)
Количество экспериментов (п) 6 6 3 4 16
ЕС50 (нМ) 28 37 193 360 Ν.Ο.
Ν-С.: Отрицательный контроль ЕС50 невозможно вычислить
Список последовательностей <110> Ьеипд, Ьоптгеппе Ьоеп Мип Ьиап, Репд МапеЬЬа, бозерЬ Тапд, УЬпд ШЬсЬег, Ьеггиск <120> Моноклональные антитела против ферропортина 1 и их применение <130> Х18276 <150> из 61/120076 <151> 2008-12-05 <150> из 61/239818 <151> 2009-09-04 <150> РСТ/Ы52009/066187 <151> 2009-12-01 <160> 182 <170> РаЬепЫп νβΓ3ίοη 3.5 <210> 1 <211> 571 <212> Белок <213> Ното зартепз <400> 1
МеЬ ТНг 1 Агд А1а С1у Азр Низ Азп Агд С1п Агд СТу Суз Суз С1у 15 Зег
5 10
Ьеи А1а Азр Туг Ьеи ТЬг Зег А1а Ьуз РЬе Ьеи Ьеи Туг Ьеи С1у ΗΪ3
20 25 30
Зег Ьеи Зег ТЬг Тгр С1у Азр Агд МеЬ Тгр НФз РЬе А1а ба1 Зег ба1
35 40 45
РЬе Ьеи Уа1 С1и Ьеи Туг С1у Азп Зег Ьеи Ьеи Ьеи ТЬг А1а Уа1 Туг
50 55 60
С1у Ьеи Уа1 Уа1 А1а С1у Зег Уа1 Ьеи Уа1 Ьеи С1у А1а 11е 11е С1у
65 70 75 80
Азр Тгр Уа1 Азр Ьуз Азп А1а Агд Ьеи Ьуз Да1 А1а С1п ТЬг Зег Ьеи
85 90 95
Уа1 Уа1 С1п Азп Уа1 Зег Уа1 Не Ьеи Суз С1у 11е 11е Ьеи МеЬ МеЬ
100 105 110
Уа1 РЬе Ьеи ΗΪ3 Ьуз Н1з СТи Ьеи Ьеи ТЬг МеЬ Туг Н1з СТу Тгр Уа1
115 120 125
- 42 020472
- 43 020472
370 375 380
Не Ьеи Суз νβΐ Не Зег Уа1 РНе МеС Рго С1у Зег Рго Ьеи Азр Ьеи 385 390 395 400
Зег Х7а1 Зег Рго РЬе С1и Азр Не Агд Зег Агд РЬе Не С1п С1у С1и 405 410 415
Зег Не ТЬг Рго ТЬг Ьуз Не Рго С1и Не ТЬг ТЬг С1и Не Туг МеС 420 425 430
Зег Азп С1у Зег Азп Зег А1а Азп Не Уа1 Рго С1и ТЬг Зег Рго С1и 435 440 445
Зег \7а1 Рго Не Не Зег Уа1 Зег Ьеи Ьеи РЬе А1а С1у Х/а1 Не А1а 450 455 460
А1а Агд Не С1у Ьеи Тгр Зег РЬе Азр Ьеи ТЬг Х/а1 ТЬг С1п Ьеи Ьеи 465 470 475 480
С1п 01и Азп Уа1 Не С1и Зег С1и Агд С1у Не Не Азп 01у Уа1 С1п 485 490 495
Азп Зег МеС Азп Туг Ьеи Ьеи Азр Ьеи Ьеи НЬз РЬе Не МеС Уа1 Не 500 505 510
Ьеи А1а Рго Азп Рго С1и А1а РЬе С1у Ьеи Ьеи Уа1 Ьеи Не Зег Уа1 515 520 525
Зег РЬе Х/а1 А1а МеС 01у Нтз Не МеС Туг РЬе Агд РЬе А1а С1п Азп
530 535 540
ТЬг Ьеи С1у Азп Ьуз Ьеи РЬе А1а Суз С1у Рго Азр А1а Ьуз С1и \7а1 545 550 555 560
Агд Ьуз С1и Азп С1п А1а Азп ТЬг Зег \7а1 Уа1 565 570 <210> 2 <211> 1716 <212> ДНК <213> Ното зараепз <400> 2
аСдассаддд сдддадаСса саассдссад ададдаСдсС дСддаСссСС ддссдасСас 60
сСдассСсСд сааааССссС СсСсСассСС ддСсаССсСс СсСсСасССд дддадаСсдд 120
аСдСддсасС ССдсддСдСс СдСдСССсСд дСададсСсС аСддааасад ссСссССССд 180
- 44 020472
асадсадРсР асдддсРддР ддрддсаддд РсРдРРсРдд РссРдддадс саРсаРсддР 240
дасрдддрдд асаадааРдс РадасРРааа дрддсссада ссРсдсРддР ддРасадааР 300
дРРРсадРса РссРдРдРдд ааРсаРссРд аРдаРддРРР РсРРасаРаа асардадсрр 360
сРдассаРдР ассаРддаРд ддРРсРсасР РссРдсРаРа РссРдаРсаР сасРаРРдса 420
ааРаРРдсаа арррддссад РасРдсРасР дсааРсасаа Рссаааддда РРддаРРдРР 480
дррдррдсад дадаадасад аадсааасРа дсаааРаРда аРдссасааР асдааддаРР 540
дассадРРаа ссаасаРсРР адсссссаРд дсРдРРддсс адаРРаРдас аРРРддсРсс 600
ссадРсаРсд дсРдРддсРР РаРРРсддда РддаасРРдд РаРссаРдРд сдРддадРас 660
дРРсРдсРсР ддааддРРРа ссадаааасс ссадсРсРад срдрдааадс РддРсРРааа 720
даададдааа сРдааРРдаа асадсрдаар РРасасааад аРасРдадсс аааассссРд 780
дадддаасРс аРсРааРддд РдРдааадас РсРаасаРсс аРдадсРРда асаРдадсаа 840
дадссРасРР дРдссРссса даРддсРдад сссРРссдРа ссРРссдада РддаРдддРс 900
РссРасРаса ассадссРдР дРРРсРддсР ддсардддрс РРдсРРРссР РРаРаРдасР 960
дРссРдддсР РРдасРдсаР сассасаддд РасдссРаса сРсадддасР дадРддРРсс 1020
аРссРсадРа РРРРдаРддд адсаРсадсР аРаасРддаа РааРдддаас РдРадсРРРР 1080
асРРддсРас дРсдааааРд РддРРРддРР сддасаддрс РдаРсРсадд аРРддсасад 1140
сРРРссРдРР РдаРсРРдРд РдРдаРсРсР дРаРРсаРдс сРддаадссс ссРддасРРд 1200
РссдРРРсРс сРРРРдаада РаРссдаРса аддРРсаРРс ааддададРс ааРРасассР 1260
ассаадаРас сРдаааРРас аасРдаааРа РасаРдРсРа аРдддРсРаа РРсРдсРааР 1320
аРРдРсссдд адасаадрсс РдааРсРдРд сссаРааРсР срдрсадрср дсРдРРРдса 1380
ддсдРсаРРд сРдсРадааР сддРсРРРдд РссРРРдаРР РаасРдРдас асадррдсрд 1440
саадааааРд РааРРдааРс Рдааададдс аРРаРаааРд дрдрасадаа сРссаРдаас 1500
РаРсРРсРРд аРсРРсРдса РРРсаРсаРд дрсарссрдд сРссаааРсс РдаадсРРРР 1560
ддсРРдсРсд РаРРдаРРРс адРсРссРРР дрддсаардд дссасаРРаР дРаРРРссда 1620
РРРдсссааа аРасРсРддд ааасаадсРс РРРдсРРдсд дРссРдаРдс аааадаадРР 1680
аддааддааа аРсаадсааа РасаРсРдРР дрдрад 1716
<210> 3 <211> 573 <212> Белок <213> Масаса хгиз <400> 3
Мер ТЬг Агд А1а С1у Азр Шз Азп Агд С1п Агд С1у Суз Суз С1у Зег 15 10 15
- 45 020472
- 46 020472
- 47 020472
515 520 525
Зег Уа1 Зег РЬе Уа1 А1а Мер С1у Шз Не Мер Туг РЬе Агд РЬе А1а 530 535 540
ΗΪ3 Азп ТЬг Ьеи С1у Азп Ьуз Ьеи РЬе А1а Суз С1у Рго Азр А1а Ьуз 545 550 555 560
С1и Уа1 Агд Ьуз С1и Азп С1п А1а Азп ТЬг Зег Уа1 Уа1 565 570 <210> 4 <211> 1320 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 4
саддрдсадс РддРдсадРс рддддсрдад дрдаадаадс сРдддРссРс адРдааддРР 60
РссРдсаадд саРсРддсРа сдссРРсасР РсдРРсРРда РададРдддР дсдасаддсс 120
ссрддасаад ддсРРдадрд даРдддаасд адРааРссРа ддасРдддад дасдаадРаР 180
аааРссаадР Рсаддддсад адРсассаРР ассдсддаса ааРссасдад сасадссРас 240
аРддадсрда дсадссРдад аРсРдаддас асддссдрдр аРРасРдРдс дсдсдадРРР 300
РРРдасРасР ддддссаадд аассасддрс ассдРсРссР садссРссас саадддссса 360
РсддРсРРсс сдсРадсдсс сРдсРссадд адсассРссд ададсасадс сдсссРдддс 420
РдссРддРса аддасРасРР ссссдаассд дрдасддрдр сдРддаасРс аддсдсссРд 480
ассадсддсд РдсасассРР сссддсРдРс сРасадРссР саддасРсРа сРсссРсадс 540
адсдРддРда ссдРдсссРс садсадсРРд ддсасдаада ссРасассРд саасдрадар 600
сасаадссса дсаасассаа ддрддасаад ададРРдадР ссаааРаРдд РсссссаРдс 660
ссасссРдсс садсассРда ддссдссддд ддассаРсад РсРРссРдРР ссссссаааа 720
сссааддаса сРсРсаРдаР сРсссддасс ссРдаддРса сдрдсдрддр ддрддасдрд 780
адссаддаад ассссдаддР ссадРРсаас РддРасдРдд арддсдрдда ддРдсаРааР 840
дссаадасаа адссдсддда ддадсадррс аасадсасдр ассдРдРддР садсдРссРс 900
ассдРссРдс ассаддасРд дсРдаасддс ааддадраса адрдсааддр сРссаасааа 960
ддссРсссдР ссРссаРсда даааассаРс Рссааадсса аадддсадсс ссдададсса 1020
саддрдраса сссРдссссс аРсссаддад дадаРдасса адаассаддр садссРдасс 1080
РдссРддРса ааддсРРсРа ссссадсдас аРсдссдРдд адрдддааад сааРдддсад 1140
ссддадааса асРасаадас сасдссРссс дРдсРддасР ссдасддсРс сРРсРРссРс 1200
- 48 020472
Дасадсаддс ДаассдДдда саададсадд Дддсаддадд ддааДдДсДД сДсаДдсДсс 1260 дДдаДдсаДд аддсДсДдса саассасДас асасадаада дссДсДсссД дДсДсДдддД 1320
<210> 5
<211> 570
<212> Белок
<213> РаДДиз зр
<400> 5
МеД ТЬг Ьуз Зег ί
Ьеи А1а Азп Туг Ьеи ТЬг Зег А1а Ьуз РЬе Ьеи Ьеи Туг Ьеи С1у Ηίβ 20 25 30
Зег Ьеи Зег ТЬг Тгр С1у Азр Агд МеД Тгр Щз РЬе А1а Уа1 Зег Уа1 35 40 45
РЬе Ьеи Уа1 С1и Ьеи Туг С1у Азп Зег Ьеи Ьеи Ьеи ТЬг А1а Уа1 Туг 50 55 60
С1у Ьеи Уа1 Уа1 А1а С1у Зег Уа1 Ьеи Уа1 Ьеи С1у А1а Не 11е С1у 65 70 75 80
Азр Тгр \7а1 Азр Ьуз Азп А1а Агд Ьеи Ьуз Уа1 А1а С1п ТЬг Зег Ьеи 85 90 95
Уа1 Уа1 С1п Азп \7а1 Зег Уа1 11е Ьеи Суз С1у 11е 11е Ьеи МеД МеД 100 105 110 \7а1 РЬе Ьеи Н1з Ьуз Азп С1и Ьеи Ьеи Азп МеД Туг НЬз С1у Тгр Уа1 115 120 125
Ьеи ТЬг Уа1 Суз Туг 11е Ьеи 11е 11е ТЬг 11е А1а Азп 11е А1а Азп 130 135 140
Ьеи А1а Зег ТЬг А1а ТЬг А1а 11е ТЬг 11е С1п Агд Азр Тгр 11е Уа1 145 150 155 160
Уа1 Уа1 А1а С1у С1и Азп Агд Зег Агд Ьеи А1а Азр МеД Азп А1а ТЬг 165 170 175
11е Агд Агд 11е Азр С1п Ьеи ТЬг Азп 11е Ьеи А1а Рго МеД А1а Уа1 180 185 190
С1у С1п 11е МеД ТЬг РЬе С1у Зег Рго Уа1 11е С1у Суз С1у РЬе 11е 195 200 205
- 50 020472
Уа1 Рго Не 11е Зег Уа1 Зег Ьеи Ьеи РЬе АЬа С1у Уа1 11е АЬа АЬа 450 455 460
Агд 11е С1у Ьеи Тгр Зег РЬе Азр Ьеи ТЬг Уа1 ТЬг С1п Ьеи Ьеи С1п 465 470 475 480
СЬи Азп УаЬ 11е СЬи Зег СЬи Агд С1у 11е 11е Азп С1у Уа1 СЬп Азп 485 490 495
Зег МеЬ Азп Туг Ьеи Ьеи Азр Ьеи Ьеи НЬз РЬе 11е МеЬ УаЬ 11е Ьеи 500 505 510
А1а Рго Азп Рго С1и А1а РЬе 61у Ьеи Ьеи Уа1 Ьеи 11е Зег Уа1 Зег 515 520 525
РЬе Уа1 А1а МеС С1у НЬз Ьеи МеЬ Туг РЬе Агд РЬе А1а СЬп Ьуз ТЬг 530 535 540
Ьеи С1у Азп С1п 11е РЬе Уа1 Суз АЬа Рго Азр СЬи Ьуз С1и Уа1 ТЬг 545 550 555 560
Азр СЬи Зег СЬп Рго Азп ТЬг Зег Уа1 Уа1 565 570 <210> 6 <211> 1713 <212> ДНК <213> КаНиз зр <400> 6
аЬдассаадЬ саададаЬса дасссаЬсад дааддаЬдсЬ дЬддаЬсЬН адсааасЬас 60
сЬдассЬсад сааааНссЬ ссЬсЬассН ддссасЬсЬс ЬсЬссасЫд дддддаЬсдд 120
аЬдЬддсасЬ НдсадЬдЬс ЬдЬдЬЬЬсЬд дЬддаасЬсЬ асддааасад ссЬссЬсНд 180
асадсЬдЬсЬ асдддНддЬ ддЬддсаддс ЬсЬдНсЬдд ЬссЬдддадс саЬсаНддЬ 240
дасЬдддЬдд аЬаадааЬдс садасНааа дЬддсссада сдЬсссЬддЬ ддЫсадааЬ 300
дЬаЬсадЬса ЬЬсЬсЬдсдд даЬсаЬссЬд аЬдаЬддЬЫ ЬсЬЬасасаа дааЬдадсЫ 360
сЬдаасаЬдЬ аЬсаЬддаЬд ддЬссЫаск дЬсЬдсЬаса ЬссЬдаЬсаЬ сассаЬЬдса 420
аасаНдсда аЫЬддссад ЬасЬдссасЬ дсааНасаа Ьссаааддда сЬддаНдЫ 480
дЬсдЬадсад дадаааасад дадсадаНа дсадасаЬда аЬдсЬассаЬ ЬадааддаЫ 540
дассадсЬаа ссаасаЬссЬ ддсссссаЬд дсЬдНддсс адаЫаЬдас аНсддНсс 600
ссадЬсаЬЬд дсЬдЬддЬЫ. саЬЬЬсЬддЬ ЬддааЬЬЬдд ЬдЬссаЬдЬд ЬдЬддадЬас 660
ЫсЫдсЬсЬ ддааддЬНа ссадаадасс ссЬдсЬсЬдд сЬдЬаааадс ЬдсЬсЬсаад 720
дЬададдадЬ садаасЬдаа дсадсЬдасс ЬсассЬааад аЬасЬдадсс азаассНЬд 780
- 51 020472
дадддаасГс ассГааГддд Ьдадааадас ГсГаасаЬсс дГдаасГГда аГдГдаасаа 840
даасссассГ дГдссГссса даГсдсадаа сссГГссдса сГГГГсдада ГддаГдддГс 900
ГссГасГаГа ассадсссдГ аГГГГГддсГ ддсаГдддсс ГддсГГГссГ сГаГаГдаса 960
дГссГдддсЬ ЬсдасГдГаГ сассасадда ЬаГдсГГаса сГсадддасГ дадГддГГсс 1020
аГссГсадГд ГГГГдаГддд адсаГсадса аГаасГддаа ГааГдддаас ГдГддссГГс 1080
асГГддсГас дСсдааааЬд ЬддссГГдГГ сддасГддГс ГдГГсГсадд асГддсГсад 1140
сГГГсГГдГГ ГдаГсГГдГд ГдГдаГсГсс дГдГГсаЬдс сГддаадссс сГГддассГд 1200
ГсГдГГГсГс саГГГдаада ГаГссдГГсГ аддГГГаГас аГдаддаддс адГдЬссГса 1260
асГассаааа ГассГдааас адаааГдсГГ аГдГсГааГд ГдГсГааГдГ ГдГсааГасс 1320
дГссаГдада ГдадГасГаа аГссдГсссс аГааГсГссд ГсадссГдсГ дГГГдсадда 1380
дЬсаГГдсГд сГадааГсдд ГсГГГддГсс ГГГдаГГГда сГдГдасаса дГГдсГдсаа 1440
дааааГдГаа ГГдааГсада аададдсаГГ аГсааГддГд ГдсадаасГс саГдаасГас 1500
сГГсГсдасс ГГсГдсаГГГ саГсаГддГс аГсГГддссс саааГссГда адсГГГГддс 1560
ГГдсГадГаГ ГдаГГГсадГ сГссГГГдГд дсааГдддас аГсГГаГдГа ГГГссдГГГГ 1620
дсссадаада сГсГдддсаа ссадаГГГГГ дГГГдГдсГс сГдаГдаааа ддаадГГаса 1680
даГдааадГс адссГааГас аГсГдГГдГд Гад 1713
<210> 7 <211> 570 <212> Белок
<213> Миз . зр
<400> ’ 7
МеЬ ТЬг Ьуз А1а Агд Азр С1п ТЬг НЬз С1п С1и Е1у Суз Суз С1у Зег
1 5 10 15
Ьеи А1а Азп Туг Ьеи ТЬг Зег А1а Ьуз РЬе Ьеи Ьеи Туг Ьеи С1у НЬз
20 25 30
Зег Ьеи Зег ТЬг Тгр С1у Азр Агд МеГ Тгр Ηίδ РЬе А1а Уа1 Зег Ча1
35 40 45
РЬе Ьеи Уа1 С1и Ьеи Туг С1у Азп Зег Ьеи Ьеи Ьеи ТЬг А1а Уа1 Туг
50 55 60
С1у Ьеи Уа1 Уа1 А1а С1у Зег \7а1 Ьеи Уа1 Ьеи 61у А1а Не 11е С1у
65 70 75 80
Азр Тгр Уа1 Азр Ьуз Азп А1а Агд Ьеи Ьуз Уа1 А1а С1п ТЬг Зег Ьеи
90 95
Х/а1 Х7а1 С1п Азп \7а1 Зег Уа1 Не Ьеи Суз С1у Не Не Ьеи МеС МеС 100 105 110
Уа1 РЬе Ьеи Шз Ьуз Азп С1и Ьеи Ьеи ТЬг МеС Туг Шз С1у Тгр Уа1 115 120 125
Ьеи ТЬг Уа1 Суз Туг Не Ьеи Не Не ТЬг Не А1а Азп Не А1а Азп 130 135 140
Ьеи А1а Зег ТЬг А1а ТЬг А1а Не ТЬг Не С1п Агд Азр Тгр Не Х7а1 145 150 155 160
Уа1 Уа1 А1а С1у С1и Азп Агд Зег Агд Ьеи А1а Азр МеС Азп А1а ТЬг 165 170 175
Не Агд Агд Не Азр С1п Ьеи ТЬг Азп Не Ьеи А1а Рго МеС А1а Х/а1 180 185 190
С1у С1п Х1е МеС ТЬг РЬе С1у Зег Рго Уа1 Не С1у Суз С1у РЬе Не 195 200 205
Зег С1у Тгр Азп Ьеи Уа1 Зег МеС Суз Уа1 С1и Туг РЬе Ьеи Ьеи Тгр 210 215 220
Ьуз А/а1 Туг С1п Ьуз ТЬг Рго А1а Ьеи А1а Уа1 Ьуз А1а А1а Ьеи Ьуз 225 230 235 240
Уа1 С1и С1и Зег С1и Ьеи Ьуз С1п Ьеи ТЬг Зег Рго Ьуз Азр ТЬг С1и 245 250 255
Рго Ьуз Рго Ьеи С1и С1у ТЬг Н1з Ьеи МеС С1у С1и Ьуз Азр Зег Азп 260 265 270
Не Агд С1и Ьеи С1и Суз С1и С1п С1и Рго ТЬг Суз А1а Зег С1п МеС 275 280 285
А1а С1и Рго РЬе Агд ТЬг РЬе Агд Азр С1у Тгр Уа1 Зег Туг Туг Азп 290 295 300
С1п Рго Уа1 РЬе Ьеи А1а С1у МеС С1у Ьеи А1а РЬе Ьеи Туг МеС ТЬг 305 310 315 320
Уа1 Ьеи С1у РЬе Азр Суз Не ТЬг ТЬг С1у Туг А1а Туг ТЬг С1п 61у
325 330 335
- 53 020472
Ьеи Зег С1у Зег Не Ьеи Зег Не Ьеи Мер С1у А1а Зег А1а Не ТЬг 340 345 350
С1у Не Мер С1у ТЬг Уа1 А1а РЬе ТЬг Тгр Ьеи Агд Агд Ьуз Суз С1у 355 360 365
Ьеи Уа1 Агд ТЬг С1у Ьеи РЬе Зег 61у Ьеи А1а С1п Ьеи Зег Суз Ьеи 370 375 380
Не Ьеи Суз Уа1 Не Зег Уа1 РЬе Мер Рго С1у Зег Рго Ьеи Азр Ьеи 385 390 395 400
Зег Уа1 Зег Рго РЬе С1и Азр Не Агд Зег Агд РЬе Уа1 Азп \7а1 б1и 405 410 415
Рго Уа1 Зег Рго ТЬг ТЬг Ьуз Не Рго С1и ТЬг Уа1 РЬе ТЬг ТЬг С1и 420 425 430
МеР Ηίδ Мер Зег Азп МеР Зег Азп Уа1 Ηίδ С1и Мер Зег ТЬг Ьуз Рго 435 440 445
Не Рго Не Уа1 Зег Уа1 Зег Ьеи Ьеи РЬе А1а С1у Уа1 Не А1а А1а 450 455 460
Агд Не С1у Ьеи Тгр Зег РЬе Азр Ьеи ТЬг Уа1 ТЬг С1п Ьеи Ьеи С1п 465 470 475 480
С1и Азп Уа1 Не С1и Зег 01и Агд С1у Не Не Азп С1у Уа1 С1п Азп 485 490 495
Зег Мер Азп Туг Ьеи Ьеи Азр Ьеи Ьеи Нпз РЬе Не Мер Уа1 Не Ьеи 500 505 510
А1а Рго Азп Рго С1и А1а РЬе С1у Ьеи Ьеи Уа1 Ьеи Не Зег Уа1 Зег 515 520 525
РЬе 57а1 А1а Мер С1у Ηίδ Ьеи Мер Туг РЬе Агд РЬе А1а С1п Ьуз ТЬг 530 535 540
Ьеи С1у Азп С1п Не РЬе Уа1 Суз С1у Рго Азр С1и Ьуз С1и Уа1 ТЬг 545 550 555 560
Азр С1и Азп С1п Рго Азп ТЬг Зег Уа1 Уа1 565 570 <210> 8 <211> 1713 <212> ДНК
- 54 020472 <213> Миз зр <400> 8
аЕдассаадд саададаЕса аасссаЕсад дааддаЕдсЕ дЕддаЕссЕЕ адсааасЕас 60
сЕдассЕсад сааааЕЕссЕ ссЕсЕассЕЕ ддссасЕсЕс ЕсЕссасЕЕд дддддаЕсдд 120
аЕдЕддсасЕ ЕЕдсадЕдЕс ЕдЕдЕЕЕсЕд дЕддаасЕсЕ аЕддааасад ссЕЕсЕсЕЕд 180
асадсЕдЕсЕ аЕддасЕддЕ ддЕддсаддс ЕсЕдЕЕсЕдд ЕссЕдддадс саЕсаЕЕддЕ 240
дасЕдддЕдд аЕаадааЕдс садасЕЕааа дЕддсссада сдЕсасЕадЕ ддЕЕсадааЕ 300
дЕдЕссдЕса ЕссЕсЕдсдд ааЕсаЕссЕд аЕдаЕддЕЕЕ ЕссЕасасаа дааЕдадсЕс 360
сЕдассаЕдЕ ассаЕддаЕд ддЕссЕЕасЕ дЕсЕдсЕаса ЕссЕдаЕсаЕ сасЕаЕЕдса 420
аасаЕЕдсаа аЕЕЕддссад ЕасЕдссасЕ дсдаЕсасаа Ессаааддда сЕддаЕЕдЕЕ 480
дЕЕдЕддсад дадаааасад дадсадаЕЕа дсадасаЕда аЕдсЕассаЕ ЕадааддаЕЕ 540
дассадсЕаа ссаасаЕссЕ ддсссссаЕд дсЕдЕсддсс адаЕЕаЕдас аЕЕЕддЕЕсЕ 600
ссадЕсаЕЕд дсЕдЕддЕЕЕ саЕЕЕссддЕ ЕддааЕЕЕдд ЕдЕссаЕдЕд ЕдЕддадЕас 660
ЕЕсЕЕдсЕсЕ ддааддЕЕЕа ссадаадасс ссЕдсЕсЕдд сЕдЕаааадс ЕдсЕсЕсаад 720
дЕададдадЕ садаасЕдаа дсадсЕдасс ЕсассЕааад аЕасЕдадсс аааассЕЕЕд 780
дадддаасЕс аЕсЕааЕддд Едадааадас ЕссаасаЕсс дЕдаасЕЕда аЕдЕдаасаа 840
дадсссассЕ дЕдссЕссса даЕддсадад сссЕЕссдса сЕЕЕссдада ЕддаЕдддЕс 900
ЕссЕасЕаЕа ассадссадЕ дЕЕЕсЕддсЕ ддсаЕдддсс ЕддсЕЕЕссЕ сЕаЕаЕдаса 960
дЕссЕдддсЕ ЕЕдасЕдЕаЕ сасЕасаддд ЕасдссЕаса сЕсаддддсЕ дадЕддаЕсс 1020
аЕссЕЕадЕа ЕЕЕЕдаЕддд адсаЕсадса аЕаасЕддаа ЕааЕдддаас ЕдЕддссЕЕс 1080
ассЕддсЕас дЕсдааааЕд ЕддссЕЕдЕЕ сддасЕддЕс ЕаЕЕсЕсадд асЕадсссад 1140
сЕЕЕссЕдЕЕ ЕааЕсЕЕдЕд ЕдЕдаЕсЕсс дЕаЕЕсаЕдс сЕддаадссс сЕЕддассЕд 1200
ЕсЕдЕЕЕсЕс саЕЕЕдаада ЕаЕссдЕЕсЕ аддЕЕЕдЕда аЕдЕддадсс адЕдЕсссса 1260
асЕассаааа ЕассЕдадас сдЕсЕЕЕаса асадаааЕдс аЕаЕдЕссаа саЕдЕсЕааЕ 1320
дЕссаЕдада ЕдадЕасЕаа асссаЕсссс аЕадЕсЕсЕд ЕсадссЕдсЕ дЕЕЕдсадда 1380
дЕсаЕЕдсЕд сЕадааЕсдд ЕсЕЕЕддЕсс ЕЕЕдаЕЕЕда сддЕдасаса дЕЕдсЕдсаа 1440
дааааЕдЕаа ЕЕдааЕсЕда аададдсаЕЕ аЕсааЕддЕд ЕдсадаасЕс саЕдаасЕас 1500
сЕЕсЕЕдасс ЕЕсЕдсаЕЕЕ саЕсаЕддЕс аЕсЕЕддссс саааЕссЕда адсЕЕЕЕддс 1560
ЕЕдсЕддЕаЕ ЕдаЕЕЕсадЕ сЕссЕЕЕдЕд дсааЕдддас аЕсЕЕаЕдЕа ЕЕЕссдаЕЕЕ 1620
дсссадаада сЕсЕдддсаа ссадаЕЕЕЕЕ дЕЕЕдЕддЕс сЕдаЕдаааа адаадЕЕаса 1680
даЕдааааЕс аассдааЕас аЕсЕдЕЕдЕа Еад 1713
<210> 9
- 55 020472
<211> 56
<212> Белок
<213> Нопто зараепз
<400> 9
Рго С1у Зег Рго Ьеи Азр Ьеи Зег Уа1 Зег Рго РЬе С1и Азр Не Агд
1 5 10 15
Зег Агд РЬе Не С1п С1у 61и Зег Не ТЬг Рго ТЫ Ьуз Не Рго С1и
20 25 30
Не ТЬг ТЬг С1и 11е Туг МеЬ Зег Азп С1у Зег Азп Зег А1а Азп Не
35 40 45
Уа1 Рго С1и ТЬг Зег Рго С1и Зег
50 55
<210> 10 <2Η> 642 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 10
дасаЬссада ЬдасссадЬс ЬссаЬссЬсс сЬдЬсЬдсаЬ сЬдЬаддада сададЬсасс 60
аЬсасЬЬдса дддсдадЬаа дадсаЬЬадс аааЬаЬасад ссЬддЬаЬса дсадааасса 120
дддааадссс сЬаадсЬссЬ даЬсЬаЬдсЬ дддЬссаадс ддсасЬдддд адЬсссаЬса 180
аддЬЬсадЬд дсадЬддаЬс ЬдддасадаЬ ЬЬсасЬсЬса ссаЬсадсад ЬсЬдсаассЬ 240
даадаЬЬЬЬд саасЬЬасЬа ЬЬдЬсаасаа саЬааЬдааЬ асссдЬасас дЬЬсддсдда 300
дддассаадд ЬддадаЬсаа асддасЬдЬд дсЬдсассаЬ сЬдЬсЬЬсаЬ сЬЬсссдсса 360
ЬсЬдаЬдадс адЬЬдаааЬс ЬддаасЬдсс ЬсЬдЬЬдЬдЬ дссЬдсЬдаа ЬаасЬЬсЬаЬ 420
сссадададд ссааадЬаса дЬддааддЬд даЬаасдссс ЬссааЬсддд ЬаасЬсссад 480
дададЬдЬса сададсадда садсааддас адсассЬаса дссЬсадсад сасссЬдасд 540
сЬдадсааад садасЬасда дааасасааа дЬсЬасдссЬ дсдаадЬсас ссаЬсадддс 600
сЬдадсЬсдс ссдЬсасааа дадсЬЬсаас аддддададЬ дс 642
<210> 11 <211> 39 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная
- 56 020472 <400> 11
Не Зег Е1п А1а Уа1 Низ А1а А1а Низ А1а 10 СЬи Не Азп СЬи
1 5
С1у Рго СЬу Зег Рго РЪе СЬи Азр Не Агд Зег Агд РЪе Не
20 25 30
С1и Зег Не ТЪг Рго 35 ТЪг Ьуз
<210> 12
<211> 20
<212> Белок
<213> Ното зариепз
<400> 12
Зег Рго РЪе С1и Азр 11е Агд Зег Агд РЪе Не С1п С1у С1и
1 5 10
ТЪг Рго ТЪг Ьуз
20
<210> 13
<211> 14
<212> Белок
<213> Ното зариепз
<400> 13
51и Азр 11е Агд Зег Агд РЪе 11е С1п С1у С1и Зег Не ТЪг
1 5 10
<210> 14
<211> 14
<212> Белок
<213> Ното зариепз
<400> 14
Агд Зег Агд РЪе 11е С1п СЬу С1и Зег Не ТЪг Рго ТЪг Ьуз
1 5 10
<210> 15
<211> 13
<212> Белок
<213> Ното зариепз
<400> 15
Зег Рго РЪе С1и Азр 11е Агд Зег Агд РЪе Не С1п СЬу
10 <210> 16
- 57 020472
<211> 11
<212> Белок
<213> Ното зартепз
<400> 16
Агд Зег Агд РЬе 11е С1п С1у С1и Зег 11е ТЬг
10 <210> 17 <211> 10 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 17
С1у Туг А1а РЬе ТЬг Азп РЬе Ьеи Не С1и 15 10 <210> 18 <211> 17 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 18
ТЬг 11е Азп Рго 61и ТЬг С1у С1у ТЬг Ьуз Туг Азп С1и Ьуз РЬе Агд 15 10 15
С1у <210> 19 <211> 5 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 19
С1и РЬе РЬе Азр Туг
1 5
<210> 20
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственно созданная
<220>
<223> Синтезированная
<400> 20
Агд А1а Зег Ьуз Зег Не Зег Ьуз Туг Ьеи А1а 15 10 <210> 21 <211> 7 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 21
А1а С1у Зег ТЬг Ьеи НЬз Зег 1 5 <210> 22 <211> 9 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 22
С1п С1п НЬз Азп С1и Туг Рго Туг ТЬг 1 5 <210> 23 <211> 10 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 23
С1у Туг А1а РЬе ТЬг Зег РЬе Ьеи Не С1и 15 10 <210> 24 <211> 17 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 24
ТЬг 11е Азп Рго Агд ТЬг 61у С1у ТЬг Ьуз Туг Азп С1и Ьуз РЬе Агд 15 10 15
- 59 020472
С1у <210> 25 <211> 17 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 25
ТЬг Не Азп Рго Ьуз ТЬг С1у С1у ТЬг Ьуз Туг Азп С1и Ьуз РЬе Агд 15 10 15
С1у <210> 26 <211> 17 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 26
ТЬг 11е Азп Рго С1и ТЬг С1у С1у ТЬг Ьуз Туг Азп АЬа Ьуз РЬе Агд 15 10 15
С1у <210> 27 <211> 7 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 27
АЬа С1у Бег Ьуз Ьеи Шз Бег
1 5
<210> <211> <212> <213> 28 7 Белок Искусственно созданная
<220> <223> Синтезированная
<400> 28
- 60 020472
А1а С1у Зег Агд Ьеи Ηίδ Зег 1 5 <210> 29 <211> 9 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 29
РЬе С1п Ηίδ Αδη С1и Туг Рго Туг ТЬг 1 5 <210> 30 <211> 10 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <220>
<221> М13С_ГЕАТиКЕ <222> (6)..(6) <223> Хаа представляет собой Αδη или Зег <400> 30
С1у Туг А1а РЬе ТЬг Хаа РЬе Ьеи 11е С1и 15 10 <210> 31 <211> 17 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <220>
<221> М13С_ЕЕАТиКЕ <222> (5)..(5) <223> Хаа представляет собой С1и, Ьуз, или Агд <220>
<221> М15С_ЕЕАТиКЕ <222> (13)..(13) <223> Хаа представляет собой С1и или А1а <400> 31
ТЬг 11е Азп Рго Хаа ТЬг С1у С1у ТЬг Ьуз Туг Азп Хаа Ьуз РЬе Агд 15 10 15
- 61 020472 <210> 32 <211> 7 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная
С1у <220>
<221> М13С_ЕЕАТиКЕ <222> (4)..(4) <223> Хаа представляет собой ТЬг, Ьуз или Агд <400> 32
А1а С1у Зег Хаа Ьеи Нтз Зег
5 <210> 33 <211> 9 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <220>
<221> М15С_ЕЕАТиКЕ <222> (1) .. (1) <223> Хаа представляет собой РЬе, Щз, или С1п <400> 33
Хаа С1п Щз Азп С1и Туг Рго Туг ТЬг
5 <210> 34 <211> 17 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 34
ТЬг 11е Азп Рго Ьуз ТЬг С1у С1у ТЬг Ьуз Туг Азп А1а Ьуз РЬе Агд 15 10 15
С1у
- 62 020472 <210> 35 <211> 17 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 35
ТЬг Зег Азп Рго Агд ТЬг С1у 61у ТЬг Ьуз Туг Азп С1и Ьуз РЬе Агд 15 10 15
С1у <210> 36 <211> 17 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 36
ТЬг Не Азп Рго Агд ТЬг С1у С1у ТЬг Ьуз Туг Ьуз С1и Ьуз РЬе Агд 15 10 15
С1у <210> 37 <211> 11 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 37
Агд А1а Зег Ьуз Зег 11е Зег Ьуз Туг ТЬг А1а 15 10 <210> 38 <211> 11 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 38
Агд А1а Зег Ьуз Зег 11е Зег Ьуз Туг Зег А1а 15 10
- 63 020472 <210> 39 <211> 11 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 39
Агд А1а Зег Ьуз Зег 11е Зег Ьуз Туг А1а А1а 15 10 <210> 40 <211> 9 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 40
ΗΪ3 С1п Н±з Азп С1и Туг Рго Туг ТНг 1 5 <210> 41 <211> 17 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 41
ТЬг Зег Азп Рго Агд ТЬг С1у С1у ТЬг Ьуз Туг Ьу5 С1и Ьуз РЬе Агд 15 10 15
С1у <210> 42 <211> 11 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <220>
<221> М15С_ЕЕАТЫКЕ <222> (10)..(10) <223> Хаа представляет собой Ьеи, ТЬг, Зег или А1а <400> 42
- 64 020472
Агд А1а Зег Ьуз Зег 11е Зег Ьуз Туг Хаа А1а 15 10 <210> 43 <211> 17 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <220>
<221> М13С_ГЕАТиКЕ <222> (2)..(2) <223> Хаа представляет собой Зег или 11е <220>
<221> М13С_ЕЕАТиКЕ <222> (5)..(5) <223> Хаа представляет собой 61и, Ьуз, или Агд <220>
<221> М13С_ЕЕАТиКЕ <222> (12) .. (12) <223> Хаа представляет собой Азп или Ьуз <220>
<221> М13С_ЕЕАТиКЕ <222> (13)..(13) <223> Хаа представляет собой С1и или А1а <400> 43
ТЬг Хаа Азп Рго Хаа ТЬг С1у С1у ТЬг Ьуз Туг Хаа Хаа Ьуз РЬе Агд 15 10 15
С1у <210> 44 <211> 114 <212> Белок <213> Миз зр <400> 44
С1п \/а1 С1п Ьеи Ьуз С1п Зег С1у А1а С1и Ьеи Уа1 Агд Рго С1у ТЬг 15 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг А1а РЬе ТЬг Азп РЬе 20 25 30
Ьеи 11е С1и Тгр Ьеи Ьуз С1п Агд Рго С1у С1п С1у Ьеи С1и Тгр 11е 35 40 45
С1у ТЬг 11е Азп Рго С1и ТЬг С1у С1у ТЬг Ьуз Туг Азп С1и Ьуз РЬе
- 65 020472
50 55 60
Агд С1у Ьуз А1а ТЬг Ьеи ТЬг А1а Азр Ьуз Зег Зег Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Мер С1п Ьеи Азп Зег Ьеи ТЬг Зег Азр Азр Зег А1а Уа1 Туг РЬе Суз
85 90 95
Х/а1 Агд С1и РЬе РЬе Азр Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг Зег Ьеи ТЬг Уа1
100 105 110
Зег Зег
<210> 45
<211> 114
<212> Белок
<213> Искусственно созданная
<220>
<223> Синтезированная
<400> 45
С1п Уа1 С1п Ьеи Ьуз С1п Зег 61у А1а С1и Ьеи Уа1 Агд Рго С1у ТЬг
1 5 10 15
Зег 7а1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг А1а РЬе ТЬг Зег РЬе
20 25 30
Ьеи 11е С1и Тгр Ьеи Ьуз С1п Агд Рго С1у С1п С1у Ьеи С1и Тгр 11е
35 40 45
С1у ТЬг 11е Азп Рго Агд ТЬг С1у С1у ТЬг Ьуз Туг Азп С1и Ьуз РЬе
50 55 60
Агд С1у Ьуз А1а ТЬг Ьеи ТЬг А1а Азр Ьуз Зег Зег Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Мер С1п Ьеи Азп Зег Ьеи ТЬг Зег Азр Азр Зег А1а Уа1 Туг РЬе Суз
85 90 95
Уа1 Агд С1и РЬе РЬе Азр Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг Зег Ьеи ТЬг Уа1
100 105 110
Зег Зег <210> 46 <211> 114 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 46
С1п 17а1 С1п Ьеи А/а1 С1п Зег С1у А1а С1и \7а1 Ьуз Ьуз Рго С1у Зег 15 10 15
Зег Уа1 Ьуз УаЬ Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг А1а РЬе ТЬг Зег РЬе 20 25 30
Ьеи 11е С1и Тгр \7а1 Агд С1п А1а Рго С1у С1п С1у Ьеи С1и Тгр Мер 35 40 45
С1у ТЬг Зег Азп Рго Агд ТЬг С1у С1у ТЬг Ьуз Туг Ьуз С1и Ьуз РЬе 50 55 60
Агд С1у Агд А/а1 ТЬг 11е ТЬг А1а Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг 65 70 75 80
Мер С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95
А1а Агд С1и РЬе РЬе Азр Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 100 105 110
Зег Зег
<210> 47
<211> 107
<212> Белок
<213> Миз зр
<4 00> 47
С1и ТЬг ТЬг V,
С1и ТЬг 11е ТЬг 11е Азп Суз Агд А1а Зег Ьуз Зег 11е Зег Ьуз Туг 20 25 30
Ьеи А1а Тгр РЬе СЬп С1и Ьуз Рго С1у Ьуз ТЬг Азп Ьуз Ьеи Ьеи 11е 35 40 45
Туг А1а С1у Зег ТЬг Ьеи НЬз Зег С1у 11е Рго Зег Агд РЬе Зег С1у 50 55 60
- 67 020472
Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи С1и Рго 65 70 75 80
С1и Азр РЬе А1а МеЬ Туг Туг Суз 61п С1п НЬз Азп С1и Туг Рго Туг 85 90 95
ТЬг РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Ьеи С1и Ьеи Ьуз 100 105 <210> 48 <211> 107 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 48
С1и 1 ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг 5 С1п Зег Рго Зег Туг 10 Ьеи А1а А1а Зег Рго 15 С1у
С1и ТЬг Не ТНг 11е Азп Суз Агд А1а Зег Ьуз Зег Не Зег Ьуз Туг
20 25 30
Ьеи А1а Тгр РЬе С1п 61и Ьуз Рго С1у Ьуз ТЬг Азп Ьуз Ьеи Ьеи Пе
35 40 45
Туг А1а С1у Зег Ьуз Ьеи НЬз Зег С1у Не Рго Зег Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи С1и Рго
65 70 75 80
С1и Азр РЬе А1а МеЬ Туг Туг Суз РЬе С1п НЬз Азп С1и Туг Рго Туг
85 90 95
ТЬг РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Ьеи С1и Ьеи Ьуз
100 105
<210> 49
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственно созданная
<220>
<223> Синтезированная <400> 49
Азр 11е Е1п МеЬ ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у 15 10 15
- 68 020472
- 69 020472
- 70 020472
ТНг 385 С1п Рго 11е МеЬ Азр 390 ТНг Азр С1у Зег Туг 395 РНе Уа1 Туг Зег Ьуз 400
Ьеи Азп Уа1 С1п Ьуз Зег Азп Тгр С1и А1а С1у Азп ТНг РНе ТНг Суз
405 410 415
Зег Уа1 Ьеи Ηίδ С1и С1у Ьеи Низ Азп ΗΪ5 Ηίδ ТНг С1и Ьуз Зег Ьеи
420 425 430
Зег НЬз Зег Рго С1у Ьуз
435
<210> 51
<211> 438
<212> Белок
<213> Искусственно созданная
<220>
<223> ' Синтезированная
<400> 51
С1п Уа1 С1п Ьеи Ьуз С1п Зег С1у АЬа С1и Ьеи Уа1 Агд Рго С1у ТНг
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз АЬа Зег С1у Туг А1а РНе ТНг Зег РНе
20 25 30
Ьеи 11е С1и Тгр Ьеи Ьуз С1п Агд Рго С1у С1п С1у Ьеи С1и Тгр Не
35 40 45
С1у ТНг 11е Азп Рго Агд ТНг С1у С1у ТНг Ьуз Туг Азп С1и Ьуз РНе
50 55 60
Агд С1у Ьуз АЬа ТНг Ьеи ТНг АЬа Азр Ьуз Зег Зег Зег ТНг АЬа Туг
65 70 75 80
МеЬ С1п Ьеи Азп Зег Ьеи ТНг Зег Азр Азр Зег А1а Уа1 Туг РНе Суз
85 90 95
Уа1 Агд С1и РНе РНе Азр Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг Зег Ьеи ТНг Уа1
100 105 110
Зег Зег АЬа Ьуз ТНг ТНг Рго Рго Зег Уа1 Туг Рго Ьеи АЬа Рго С1у
115 120 125
Зег АЬа АЬа С1п ТНг Азп Зег МеЬ Уа1 ТНг Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз
130 135 140
- 71 020472
С1у Туг РНе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 ТЬг Тгр Азп Зег С1у Зег Ьеи 145 150 155 160
Зег Зег С1у Уа1 Шз ТЬг РЬе Рго А1а \/а1 Ьеи С1п Зег Азр Ьеи Туг 165 170 175
ТЬг Ьеи Зег Зег Зег Уа! ТЬг Уа1 Рго Зег Зег ТЬг Тгр Рго Зег С1и 180 185 190
ТЬг Уа1 ТЬг Суз Азп Уа1 А1а Шз Рго А1а Зег Зег ТЬг Ьуз Уа1 Азр 195 200 205
Ьуз Ьуз 11е Уа1 Рго Агд Азр Суз С1у Суз Ьуз Рго Суз 11е Суз ТЬг 210 215 220
Уа1 Рго С1и Уа1 Зег Зег Уа1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр 225 230 235 240
Уа1 Ьеи ТЬг 11е ТЬг Ьеи ТЬг Рго Ьуз Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр 245 250 255
11е Зег Ьуз Азр Азр Рго С1и Уа1 С1п РЬе Зег Тгр РЬе Уа1 Азр Азр 260 265 270
Уа1 С1и Уа1 Шз ТЬг А1а С1п ТЬг С1п Рго Агд С1и С1и С1п РЬе Азп 275 280 285
Зег ТЬг РЬе Агд Зег Уа1 Зег С1и Ьеи Рго 11е МеЬ Шз С1п Азр Тгр 290 295 300
Ьеи Азп С1у Ьуз С1и РЬе Ьуз Суз Агд Уа1 Азп Зег А1а А1а РЬе Рго 305 310 315 320
А1а Рго 11е С1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз ТЬг Ьуз С1у Агд Рго Ьуз А1а 325 330 335
Рго С1п Уа1 Туг ТЬг 11е Рго Рго Рго Ьуз С1и С1п МеЬ А1а Ьуз Азр 340 345 350
Ьуз Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз МеЬ 11е ТЬг Азр РЬе РЬе Рго С1и Азр 11е 355 360 365
ТНг \7а1 61и Тгр С1п Тгр Азп С1у С1п Рго А1а С1и Азп Туг Ьуз Азп 370 375 380
ТЬг С1п Рго 11е МеЬ Азр ТЬг Азр С1у Зег Туг РЬе Уа1 Туг Зег Ьуз 385 390 395 400
- 72 020472
Ьеи Азп УаЬ СЬп Ьуз 405 Зег Азп Тгр СЬи АЬа 410 СЬу Азп ТЪг РЪе ТЪг 415 Суз
Зег Х7а1 Ьеи НЬз 420 СЬи СЬу Ьеи НЬз Азп 425 НЬз Низ ТЪг СЬи Ьуз 430 Зег Ьеи
Зег НЬз Зег 435 Рго СЬу Ьуз
<210> 52
<211> 440
<212> Белок
<213> Искус?
<220>
<223> Синтезированная
<400> I 52
С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 СЬп Зег С1у А1а СЬи Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у Зег
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег СЬу Туг А1а РЪе ТЪг Зег РЪе
20 25 30
Ьеи 11е С1и Тгр Уа1 Агд С1п АЬа Рго С1у С1п С1у Ьеи СЬи Тгр Ме!
35 40 45
СЬу ТЪг Зег Азп Рго Агд ТЪг СЬу С1у ТЪг Ьуз Туг Ьуз СЬи Ьуз РЪе
50 55 60
Агд С1у Агд Уа1 ТЪг 11е ТЪг АЬа Азр Ьуз Зег ТЪг Зег ТЪг А1а Туг
65 70 75 80
Ме! С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа Агд СЬи РЪе РЪе Азр Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЪг ТЪг Уа1 ТЪг Уа1
100 105 110
Зег Зег АЬа Зег ТЪг Ьуз СЬу Рго Зег Уа1 РЪе Рго Ьеи АЬа Рго Суз
115 120 125
Зег Агд Зег ТЪг Зег С1и Зег ТЪг АЬа АЬа Ьеи СЬу Суз Ьеи Уа1 Ьуз
130 135 140
Азр Туг РЪе Рго СЬи Рго Уа1 ТЪг Уа1 Зег Тгр Азп Зег СЬу А1а Ьеи
145 150 155 160
- 73 020472
ТЬг Зег Б1у Уа1 Н1з ТЬг РЬе Рго А1а А/а1 Ьеи Б1п Зег Зег С1у Ьеи 165 170 175
Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг 180 185 190
Ьуз ТЬг Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр НЬз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 195 200 205
Азр Ьуз Агд Уа1 С1и Зег Ьуз Туг С1у Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго 210 215 220
А1а Рго С1и А1а А1а С1у 61у Рго Зег А/а1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз 225 230 235 240
Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЕ 11е Зег Агд ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 245 250 255
Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег С1п 61и Азр Рго Е1и Уа1 С1п РЬе Азп Тгр Туг 260 265 270
Уа1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 Щз Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и С1и 275 280 285
С1п РЬе Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Ηίδ 290 295 300
С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз С1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз 305 310 315 320
С1у Ьеи Рго Зег Зег 11е С1и Ьуз ТЬг Не Зег Ьуз А1а Ьуз С1у С1п 325 330 335
Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег С1п С1и С1и МеЕ 340 345 350
ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи \7а1 Ьуз С1у РЬе Туг Рго 355 360 365
Зег Азр 11е А1а \7а1 С1и Тгр С1и Зег Азп С1у С1п Рго С1и Азп Азп 370 375 380
Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи 385 390 395 400
Туг Зег Агд Ьеи ТЬг \7а1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1и С1у Азп Уа1 405 410 415
- 74 020472
РЬе Зег Суз Зег \7а1 МеЬ Шз С1и А1а Ьеи Шз Азп Нгз Туг ТЬг С1п 420 425 430
Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи С1у 435 440
<210> 53
<211> 214
<212> Белок
<213> Миз зр
<400> 53
С1и ТЬг ТЬг V.
С1и ТЬг 11е ТЬг 11е Азп Суз Агд А1а Зег Ьуз Зег 11е Зег Ьуз Туг 20 25 30
Ьеи А1а Тгр РЬе С1п С1и Ьуз Рго С1у Ьуз ТЬг Азп Ьуз Ьеи Ьеи 11е 35 40 45
Туг А1а С1у Зег ТЬг Ьеи НЬз Зег С1у 11е Рго Зег Агд РЬе Зег С1у 50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи С1и Рго 65 70 75 80
С1и Азр РЬе А1а МеЬ Туг Туг Суз С1п С1п ΗΪ3 Азп С1и Туг Рго Туг 85 90 95
ТЬг РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Ьеи С1и Ьеи Ьуз Агд А1а Азр А1а А1а 100 105 110
Рго ТЬг Уа1 Зег 11е РЬе Рго Рго Зег Зег С1и С1п Ьеи ТЬг Зег С1у 115 120 125
С1у А1а Зег Уа1 Уа1 Суз РЬе Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Ьуз Азр 11е 130 135 140
Азп Уа1 Ьуз Тгр Ьуз 11е Азр С1у Зег С1и Агд С1п Азп С1у Уа1 Ьеи 145 150 155 160
Азп Зег Тгр ТЬг Азр С1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег МеЬ Зег 165 170 175
Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи ТЬг Ьуз Азр С1и Туг С1и Агд Нтз Азп Зег Туг 180 185 190
- 75 020472
- 76 020472
Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи ТЬг Ьуз Азр С1и Туг С1и Агд НЬз Азп Зег Туг 180 185 190
ТЬг Суз 61и А1а ТЬг Низ Ьуз ТЬг Зег ТЬг Зег Рго Не Уа1 Ьуз Зег 195 200 205
РЬе Азп Агд Азп С1и Суз 210 <210> 55 <211> 214 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 55
Азр 11е С1п Мер ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у 15 10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Зег Ьуз Зег 11е Зег Ьуз Туг 20 25 30
ТЬг А1а Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е 35 40 45
Туг А1а С1у Зег Ьуз Ьеи Нтз Зег С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у 50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи С1п Рго 65 70 75 80
С1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз С1п С1п Нтз Азп С1и Туг Рго Туг 85 90 95
ТЬг РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз \/а1 С1и 11е Ьуз Агд ТЬг Уа1 А1а А1а 100 105 110
Рго Зег \/а1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр С1и С1п Ьеи Ьуз Зег С1у 115 120 125
ТЬг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд С1и А1а 130 135 140
Ьуз \7а1 С1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи С1п Зег 61у Азп Зег 61п 145 150 155 160
- 77 020472
С1и Зег Ъа1 ТЬг С1и С1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег 165 170 175
Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг С1и Ьуз Шз Ьуз Уа1 Туг 180 185 190
А1а Суз 61и Уа1 ТЬг Щз С1п С1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег 195 200 205
РЬе Азп Агд С1у С1и Суз 210 <210> 56 <211> 114 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <220>
<221> М13С_ГЕАТиКЕ <222> (28) .. (28) <223> Хаа представляет собой А1а или Агд <220>
<221> М13С_ГЕАТиРЕ <222> (57) .. (57) <223> Хаа представляет собой С1у или Агд <220>
<221> М15С_ЕЕАТОКЕ <222> (58) .. (58) <223> Хаа представляет собой ТЬг или Агд <220>
<221> М13С_ЕЕАТиРЕ <222> (62) .. (62) <223> Хаа представляет собой С1и, Зег, или ТЬг <220>
<221> М15С_ЕЕАТиКЕ <222> (102) . . (102) <223> Хаа представляет собой Азр или \7а1 <400> 56
С1п Уа1 С1п Ьеи \7а1 С1п Зег С1у А1а С1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у Зег 15 10 15
Зег 17а1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг Хаа РЬе ТЬг Зег РЬе 20 25 30
Ьеи Не 61и Тгр А7а1 Агд С1п А1а Рго С1у С1п 61у Ьеи С1и Тгр МеЬ 35 40 45
- 78 020472
С1у ТЬг 50 Зег Азп Рго Агд ТЬг 55 С1у Хаа Хаа Ьуз Туг 60 Ьуз Хаа Ьуз РЬе
Агд 65 С1у Агд Уа1 ТЬг Не 70 ТЬг А1а Азр Ьуз Зег 75 ТЬг Зег ТЬг А1а Туг 80
МеД С1и Ьеи Зег Зег 85 Ьеи Агд Зег С1и Азр 90 ТЬг А1а Уа1 Туг Туг 95 Суз
А1а Агд С1и РЬе 100 РЬе Хаа Туг Тгр С1у 105 С1п С1у ТЬг ТЬг Уа1 НО ТЬг Уа1
Зег Зег <210> 57 <211> 107 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <220>
<221> М13С_БЕАТиКЕ <222> (54)..(54) <223> Хаа представляет собой Ьеи или Агд <220>
<221> М13С_ЕЕАТиКЕ <222> (55) .. (55) <223> Хаа представляет собой Ηίδ, Агд, или Туг <220>
<221> М13С_ЕЕАТиРЕ <222> (56)..(56) <223> Хаа представляет собой Зег, Тгр, или Туг <400> 57
Азр Не С1п МеД ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг Не ТЬг Суз Агд А1а Зег Ьуз Зег Не Зег Ьуз Туг
20 25 30
ТЬг А1а Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не
35 40 45
Туг А1а С1у Зег Ьуз Хаа Хаа Хаа С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
- 79 020472
<210> 58 <211> 342 <212> ДНК <213> Миз зр <400> 58
саддСдсадс СдаадсадСс СддадсСдаа сСддСааддс сСдддасССс адСдааддСд 60
СссСдсаадд сССсСддаСа сдссССсасС ааСССсССда СададСддСС ааадсададд 120
ссСддасадд дссССдадСд даССддаасд аССааСссСд ааасСддСдд СасСаадСаС 180
ааСдадаадС Ссаддддсаа ддсаасасСд асСдсСдаса ааСсССссад сасСдссСаС 240
аСдсадсСса асадссСдас аСсСдаСдас СсСдсддСсС аСССсСдСдС садададССС 300
СССдасСасС ддддссаадд сассадСсСс асадСсСссС са 342
<210> 59 <211> 321 <212> ДНК <213> Миз зр <400> 59
дааасаасСд СдасссадСс СссаСсССаС сССдсСдсаС сСссСддада аассаССасС 60
аССааССдса дддсдадСаа дадсаССадс аааСаСССад ссСддСССса ададааассС 120
дддаааасСа аСаадсССсС СаСсСасдсС ддаСссасСС СдсасСсСдд ааССссаСса 180
аддССсадСд дсадСддаСс сддСасадаС ССсасСсСса ссаСсадСад ссСддадссС 240
даадаССССд сааСдСаССа сСдСсаасаа саСааСдааС асссдСасас дССсддадда 300
дддассаадс СддадсСдаа а 321
<210> 60 <211> 342 <212> ДНК <213> Искусственно созданная
<220> <223> Синтезированная
<400> 60 саддСдсадс СдаадсадСс СддадсСдаа сСддСааддс сСдддасССс адЪдааддЪд 60
СссСдсаадд сССсСддаСа сдссССсасС СсдССсССда СададСддСС ааадсададд 120
- 80 020472
ссРддасадд дссРРдадРд даРРддаасд аРРааРссРа ддасРддРдд РасРаадРаР 180
ааРдадаадР Рсаддддсаа ддсаасасРд асРдсРдаса ааРсРРссад сасРдссРаР 240
аРдсадсРса асадссРдас аРсРдаРдас РсРдсддРсР аРРРсРдРдР садададррр 300
РРРдасРасР ддддссаадд сассадРсРс асадРсРссР са 342
<210> 61 <211> 321 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 61 дааасаасРд РдасссадРс РссаРсРРаР сРРдсРдсаР сРссРддада аассаРРасР 60 аРРааРРдса дддсдадраа дадсаРРадс аааРаРРРад ссРддРРРса ададааассР 120 дддаааасРа аРаадсРРсР РаРсРасдсР ддаРссаадР РдсасРсРдд ааРРссаРса 180 аддРРсадРд дсадРддаРс сддрасадар РРсасРсРса ссаРсадРад ссРддадссР 240 даадаРРРРд сааРдРаРРа сРдРРРссаа саРааРдааР асссдРасас дРРсддадда 300 дддассаадс РддадсРдаа а 321 <210> 62 <211> 342 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 62 саддрдсадс РддРдсадРс Рддддсрдад дрдаадаадс сРдддРссРс адРдааддРР 60
РссРдсаадд саРсРддсРа сдссРРсасР РсдРРсРРда РададРдддР дсдасаддсс 120 ссрддасаад ддсРРдадрд даРдддаасд аРРааРссРа ддасРддРдд РасРаадРаР 180 ааРдадаадР Рсаддддсад адРсассаРР ассдсддаса ааРссасдад сасадссРас 240 аРддадсрда дсадссРдад аРсРдаддас асддссдрдр аРРасРдРдс дсдсдадРРР 300
РРРдасРасР ддддссаадд аассасддрс ассдРсРссР са 342 <210> 63 <211> 321 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 63 дасаРссада РдасссадРс РссаРссРсс сРдРсРдсаР сРдРаддада сададрсасс 60
- 81 020472
аЬсасЬЬдса дддсдадЬаа дадсаЬЬадс аааЬаЬЬЬад ссЬддЬаЬса дсадааасса 120
дддааадссс сЬаадсЬссЬ даЬсЬаЬдсЬ ддаЬссаадЬ ЬдсасЬсЬдд адЬсссаЬса 180
аддЬЬсадЬд дсадЬддаЬс ЬдддасадаЬ ЬЬсасЬсЬса ссаЬсадсад ЬсЬдсаассЬ 240
даадаЬЬЬЬд саасЬЬасЬа ЬЬдЬЬЬссаа саЬааЬдааЬ асссдЬасас дЬЬсддсдда 300
дддассаадд ЬддадаЬсаа а 321
<210> 64 <211> 342 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 64
саддЬдсадс ЬддЬдсадЬс ЬддддсЬдад дЬдаадаадс сЬдддЬссЬс адЬдааддЬЬ 60
ЬссЬдсаадд саЬсЬддсЬа сдссЬЬсасЬ ЬсдЬЬсЬЬда ЬададЬдддЬ дсдасаддсс 120
ссЬддасаад ддсЬЬдадЬд даЬдддаасд адЬааЬссЬа ддасЬддЬдд ЬасЬаадЬаЬ 180
ааададаадЬ Ьсаддддсад адЬсассаЬЬ ассдсддаса ааЬссасдад сасадссЬас 240
аЬддадсЬда дсадссЬдад аЬсЬдаддас асддссдЬдЬ аЬЬасЬдЬдс дсдсдадЬЬЬ 300
ЬЬЬдасЬасЬ ддддссаадд аассасддЬс ассдЬсЬссЬ са 342
<210> 65 <211> 321 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 65
дасаЬссада ЬдасссадЬс ЬссаЬссЬсс сЬдЬсЬдсаЬ сЬдЬаддада сададЬсасс 60
аЬсасЬЬдса дддсдадЬаа дадсаЬЬадс аааЬаЬасад ссЬддЬаЬса дсадааасса 120
дддааадссс сЬаадсЬссЬ даЬсЬаЬдсЬ дддЬссаадЬ ЬдсасЬсЬдд адЬсссаЬса 180
аддЬЬсадЬд дсадЬддаЬс ЬдддасадаЬ ЬЬсасЬсЬса ссаЬсадсад ЬсЬдсаассЬ 240
даадаЬЬЬЬд саасЬЬасЬа ЬЬдЬсаасаа саЬааЬдааЬ асссдЬасас дЬЬсддсдда 300
дддассаадд ЬддадаЬсаа а 321
<210> 66 <211> 329 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная
- 82 020472 <400> 66
А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег Уа1 1 5
РЬе Рго Ьеи АЬа Рго Зег Зег Ьуз 10 15
Зег ТЬг Зег С1у С1у ТЬг А1а АЬа 20
Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг 25 30
РЬе Рго СЬи Рго УаЬ ТЬг УаЬ Зег 35 40
Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег 45
С1у УаЬ НЬз ТЬг РЬе Рго А1а УаЬ 50 55
Ьеи СЬп Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег 60
Ьеи Зег Зег УаЬ УаЬ ТЬг УаЬ Рго 65 70
Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг 75 80
Туг 11е Суз Азп УаЬ Азп НЬз Ьуз 85
Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз 90 95
Ьуз УаЬ СЬи Рго Ьуз Зег Суз Азр 100
Ьуз ТЬг НЬз ТЬг Суз Рго Рго Суз 105 110
Рго АЬа Рго С1и Ьеи Ьеи С1у С1у 115 120
Рго Зег УаЬ РЬе Ьеи РЬе Рго Рго 125
Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е 130 135
Зег Агд ТЬг Рго С1и УаЬ ТЬг Суз 140
УаЬ Уа1 УаЬ Азр УаЬ Зег НЬз СЬи 145 150
Азр Рго С1и УаЬ Ьуз РЬе Азп Тгр 155 160
Туг Уа1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 НЬз 165
Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и 170 175
С1и СЬп Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд 180
Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи 185 190
НЬз СЬп Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз 195 200
С1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп 205
Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго 11е С1и 210 215
Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз С1у 220
С1п Рго Агд СЬи Рго 61п УаЬ Туг 225 230
ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр С1и 235 240
- 83 020472
Ьеи ТЬг Ьуз Азп С1п 245 Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз 250 Ьеи Уа1 Ьуз С1у РЬе 255 Туг
Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег Азп С1у С1п Рго С1и Азп
260 265 270
Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе
275 280 285
Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п С1у Азп
290 295 300
Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Ηίδ С1и А1а Ьеи ΗΪ5 Азп Ηίδ Туг ТЬг
305 310 315 320
С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у
325
<210> 67
<211> 329
<212> Белок
<213> Искусственно созданная
<220>
<223> ι Синтезированная
<400> 67
А1а Зег ТЬг Ьуз 61у Рго Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз
1 5 10 15
Зег ТЬг Зег С1у С1у ТЬг А1а А1а Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг
20 25 30
РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег
35 40 45
С1у Уа1 ΗΪ5 ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи С1п Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег
50 55 60
Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг Е1п ТЬг
65 70 75 80
Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп ΗΪ5 Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз
85 90 95
Агд Уа1 С1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг Ηίδ ТЬг Суз Рго Рго Суз
100 105 110
Рго А1а Рго С1и Ьеи Ьеи С1у С1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго
- 84 020472
115 120 125
Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Мер 11е Зег Агд ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз 130 135 140
Уа1 Уа1 Уа1 Азр А/а1 Зег Низ С1и Азр Рго С1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр 145 150 155 160
Туг Уа1 Азр С1у \/а1 С1и А/а1 Шз Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и 165 170 175
С1и С1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 \7а1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи 180 185 190
Шз С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз С1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп 195 200 205
Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго 11е С1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз С1у 210 215 220
С1п Рго Агд С1и Рго С1п А/а1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд С1и С1и 225 230 235 240
Мер ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг 245 250 255
Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег Азп С1у С1п Рго С1и Азп 260 265 270
Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе 275 280 285
Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п С1у Азп 290 295 300
Уа1 РЬе Зег Суз Зег \7а1 Мер Н1з С1и А1а Ьеи Щз Азп НЬз Туг ТЬг 305 310 315 320
С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у 325 <210> 68 <211> 325 <212> Белок <213> Ното зариепз <400> 68
А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Суз Зег Агд
- 85 020472
15
Зег ТНг Зег С1и Зег ТНг А1а А1а 20
Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг 25 30
РНе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег 35 40
Тгр Азп Зег СВу А1а Ьеи ТЬг Зег 45
С1у Уа1 Шз ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 50 55
Ьеи С1п Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег 60
Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго 65 70
Зег Зег Азп РНе С1у ТЬг С1п ТНг 75 80
Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр Шз Ьуз 85
Рго Зег Азп ТНг Ьуз Уа1 Азр Ьуз 90 95
ТЬг Уа1 С1и Агд Ьуз Суз Суз Уа1 100
СВи Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго 105 110
Рго Уа1 А1а С1у Рго Зег Уа1 РЬе 115 120
Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр 125
ТЬг Ьеи МеЬ 11е Зег Агд ТЬг Рго 130 135
СВи Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр 140
Уа1 Зег Шз С1и Азр Рго С1и \7а1 145 150
СВп РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у 155 160
МеЬ С1и Уа1 Шз Азп А1а Ьуз ТЬг 165
Ьуз Рго Агд СВи СВи СВп РЬе Азп 170 175
Зег ТЬг РЬе Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 180
Ьеи ТЬг Уа1 Уа1 НЬз С1п Азр Тгр 185 190
Ьеи Азп 61у Ьуз С1и Туг Ьуз Суз 195 200
Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз С1у Ьеи Рго 205
А1а Рго 11е С1и Ьуз ТЬг 11е Зег 210 215
Ьуз ТЬг Ьуз С1у С1п Рго Агд СВи 220
Рго С1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго 225 230
Зег Агд СВи С1и МеЬ ТЬг Ьуз Азп 235 240
С1п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 245
Ьуз СВу РЬе Туг Рго Зег Азр 11е 250 255
- 86 020472
А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег Азп С1у С1п Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг 260 265 270
ТЬг Рго Рго МеЕ Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз 275 280 285
Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз 290 295 300
Зег Уа1 МеЕ Ηίδ С1и А1а Ьеи Ηίδ Азп Ηίδ Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи 305 310 315 320
Зег Ьеи Зег Рго С1у 325 <210> 69 <211> 326 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 69
А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Суз Зег Агд 15 10 15
Зег ТЬг Зег С1и Зег ТЬг А1а А1а Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг 20 25 30
РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег 35 40 45
С1у Уа1 ΗΪ5 ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи 61п Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег 50 55 60
Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг Ьуз ТЬг 65 70 75 80
Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр Низ Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз 85 90 95
Агд Уа1 С1и Зег Ьуз Туг 61у Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго 100 105 110
С1и РЬе Ьеи С1у С1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз 115 120 125
Азр ТЬг Ьеи МеЕ 11е Зег Агд ТЬг Рго С1и Уа! ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1
- 87 020472
130 135 140
Азр Уа1 145 Зег С1п 61и Азр 150 Рго С1и УаЬ С1п РЬе 155 Азп Тгр Туг Уа1 Азр 160
С1у Уа1 С1и Уа1 ΗΪ5 Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и С1и Е1п РЬе
165 170 175
Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи НЬз С1п Азр
180 185 190
Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз С1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз С1у Ьеи
195 200 205
Рго Зег Зег 11е С1и Ьуз ТЬг Не Зег Ьуз А1а Ьуз С1у С1п Рго Агд
210 215 220
С1и Рго С1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег С1п С1и С1и Мер ТЬг Ьуз
225 230 235 240
Азп С1п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр
245 250 255
11е А1а Уа1 61и Тгр С1и Зег Азп С1у С1п Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз
260 265 270
ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег
275 280 285
Агд Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п 61и С1у Азп Уа1 РЬе Зег
290 295 300
Суз Зег Уа1 Мер НЬз С1и А1а Ьеи НЬз Азп НЬз Туг ТНг С1п Ьуз Зег
305 310 315 320
Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи С1у
325
<210> 70
<211> 326
<212> Белок
<213> : Искусственно созданная
<220>
<223> Синтезированная
<400> 70
А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Суз Зег Агд
1 5 10 15
- 88 020472
Зег ТЪг Зег С1и Зег ТЪг АЬа АЬа 20
Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг 25 30
РЪе Рго СЬи Рго УаЬ ТЪг УаЬ Зег 35 40
Тгр Азп Зег С1у АЬа Ьеи ТЪг Зег 45
СЬу УаЬ НЬз ТЪг РЪе Рго АЬа УаЬ 50 55
Ьеи СЬп Зег Зег СЬу Ьеи Туг Зег 60
Ьеи Зег Зег УаЬ УаЬ ТЪг УаЬ Рго 65 70
Зег Зег Зег Ьеи СЬу ТЪг Ьуз ТЪг 75 80
Туг ТЪг Суз Азп УаЬ Азр НЬз Ьуз 85
Рго Зег Азп ТЪг Ьуз \7а1 Азр Ьуз 90 95
Агд УаЬ СЬи Зег Ьуз Туг СЬу Рго 100
Рго Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго 105 110
С1и А1а А1а СЬу С1у Рго Зег Уа1 115 120
РЪе Ьеи РЪе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз 125
Азр ТЪг Ьеи Ме! 11е Зег Агд ТЪг 130 135
Рго С1и Х7а1 ТЪг Суз Х7а1 \7а1 Х7а1 140
Азр Уа1 Зег С1п С1и Азр Рго С1и 145 150
Х7а1 С1п РЪе Азп Тгр Туг Х7а1 Азр 155 160
СЬу Уа1 СЬи Уа1 НЬз Азп АЬа Ьуз 165
ТЪг Ьуз Рго Агд СЬи С1и СЬп РЪе 170 175
Азп Зег ТЪг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег 180
Уа1 Ьеи ТЪг ХГаЬ Ьеи НЬз СЬп Азр 185 190
Тгр Ьеи Азп СЬу Ьуз С1и Туг Ьуз 195 200
Суз Ьуз Х/а1 Зег Азп Ьуз СЬу Ьеи 205
Рго Зег Зег 11е С1и Ьуз ТЪг 11е 210 215
Зег Ьуз АЬа Ьуз СЬу С1п Рго Агд 220
СЬи Рго СЬп Х7а1 Туг ТЪг Ьеи Рго 225 230
Рго Зег С1п С1и С1и Ме! ТЪг Ьуз 235 240
Азп С1п Уа1 Зег Ьеи ТЪг Суз Ьеи 245
Уа1 Ьуз С1у РЪе Туг Рго Зег Азр 250 255
11е А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег Азп
СЬу С1п Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз
- 89 020472
<210> 71 <211> 978 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 71
дссРссасса адддсссаРс ддРсРРсссд сРадсдсссР дсРссаддад сассРссдад 60
адсасадссд сссРдддсРд ссРддРсаад дасРасРРсс ссдаассддр дасддрдрсд 120
РддаасРсад дсдсссРдас садсддсдрд сасассРРсс сддсРдРссР асадРссРса 180
ддасРсРасР сссРсадсад сдрддрдасс дРдсссРсса дсадсРРддд сасдаадасс 240
РасассРдса асдРадаРса саадсссадс аасассаадд Рддасаадад адРРдадРсс 300
аааРаРддРс ссссаРдссс асссРдссса дсассРдадд ссдссддддд ассаРсадРс 360
РРссРдРРсс ссссаааасс сааддасаср сРсаРдаРсР сссддасссс РдаддРсасд 420
рдсдрддрдд РддасдРдад ссаддаадас сссдаддРсс адРРсаасРд драсдрддар 480
ддсдрддадд РдсаРааРдс саадасааад ссдсдддадд адсадРРсаа садсасдРас 540
сдрдрддрса дсдРссРсас сдРссРдсас саддасРддс Рдаасддсаа ддадРасаад 600
РдсааддРсР ссаасааадд ссРсссдРсс РссаРсдада ааассаРсРс сааадссааа 660
дддсадсссс дададссаса ддрдрасасс сРдсссссаР сссаддадда даРдассаад 720
аассаддрса дссРдассРд ссРддРсааа ддсРРсРасс ссадсдасаР сдссдрддад 780
Рдддааадса аРдддсадсс ддадаасаас Расаадасса сдссРсссдР дсРддасРсс 840
дасддсРссР РсРРссРсРа садсаддсРа ассдрддаса ададсаддРд дсаддадддд 900
ааРдРсРРсР саРдсРссдР даРдсаРдад дсРсРдсаса ассасРасас асадаададс 960
сРсРсссРдР сРсРдддР 978
- 90 020472
<210> 72
<211> 107
<212> Белок
<213> Ното зархепз
<400> 72
Агд ТНг νβΐ А1а А1а Рго Зег Уа1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр С1и
1 5 10 15
С1п Ьеи Ьуз Зег С1у ТЬг АТа Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе
20 25 30
Туг Рго Агд С1и А1а Ьуз Уа1 С1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи С1п
35 40 45
Зег С1у Азп Зег С1п С1и Зег Ча1 ТЬг С1и С1п Азр Зег Ьуз Азр Зег
50 55 60
ТЬг Туг Зег Ьеи Зег Зег ТНг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг С1и
65 70 75 80
Ьуз НЬз Ьуз Уа1 Туг А1а Суз С1и Уа1 ТЬг НЬз С1п СТу Ьеи Зег Зег
85 90 95
Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег РЬе Азп Агд С1у С1и Суз
100 105
<210> 73 <211> 321 <212> ДНК <213> Ното зархепз <400> 73
сддасрдрдд сРдсассаРс РдРсРРсаРс РРсссдссаР сРдаРдадса дРРдаааРсР 60
ддаасрдсср сРдРРдРдРд ссРдсРдааР аасРРсРаРс ссадададдс сааадРасад 120
рддааддрдд аРаасдсссР ссааРсдддР аасРсссадд ададрдрсас ададсаддас 180
адсааддаса дсассРасад ссРсадсадс асссРдасдс Рдадсааадс адасрасдад 240
ааасасааад РсРасдссРд сдаадРсасс саРсадддсс РдадсРсдсс сдРсасааад 300
адсРРсааса ддддададРд с 321
<210> <211> <212> <213> 74
23 Белок Ното зар1епз
<400> 74
Азр 11е ! СТп Мер ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у
1 5 10 15
- 91 020472
- 92 020472 <400> 79
Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у С1п С1у Ьеи С1и Тгр МеГ С1у 15 10 <210> 80 <211> 32 <212> Белок <213> Ното зархепз <400> 80
Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг А1а Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг МеГ С1и 15 10 15
Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а УаЬ Туг Туг Суз А1а Агд 20 25 30
<210> 81
<211> 11
<212> Белок
<213> Ното
<400> 81
Тгр 61у 61η ι
<210> 82 <211> 32 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <400> 82
С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг 15 10 15
РЬе ТЬг 11е Зег Зег Ьеи С1п Рго С1и Азр 11е А1а ТЬг Туг Туг Суз 20 25 30 <210> 83 <211> 25 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <400> 83
С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег С1у А1а С1и Д/а1 Ьуз Ьуз Рго С1у А1а 15 10 15
Зег Уа1 Ьуз Да1 Зег Суз Ьуз А1а Зег 20 25 <210> 84
- 93 020472 <211> 32 <212> Белок <213> Ното зархепз <400> 84
Агд Уа1 ТЬг МеЬ ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг МеЪ С1и 15 10 15
Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а Агд 20 25 30 <210> 85 <211> 23 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <400> 85
Азр 11е С1п МеС ТЬг С1п Зег Рго Зег ТЬг Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у 15 10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз 20 <210> 86 <211> 32 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <400> 86
С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у Зег С1у Зег С1у ТЬг С1и РЬе ТЬг 15 10 15
Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи С1п Рго Азр Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз 20 25 30 <210> 87 <211> 32 <212> Белок <213> Ното заргепз <400> 87
Агд Уа1 ТЬг МеЬ ТЬг Агд Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг Уа1 Туг МеС С1и 15 10 15
Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а Агд 20 25 30 <210> 88 <211> 193 <212> Белок <213> Ното зартепз
- 94 020472 <400> 88
МеД С1у \7а1 Щз С1и Суз Рго А1а Тгр Ьеи Тгр Ьеи Ьеи Ьеи Зег Ьеи 15 10 15
Ьеи Зег Ьеи Рго Ьеи С1у Ьеи Рго Уа1 Ьеи С1у А1а Рго Рго Агд Ьеи 20 25 30
11е Суз Азр Зег Агд Уа1 Ьеи С1и Агд Туг Ьеи Ьеи С1и А1а Ьуз С1и 35 40 45
А1а С1и Азп 11е ТЬг ТЬг С1у Суз А1а С1и Шз Суз Зег Ьеи Азп С1и 50 55 60
Азп 11е ТЬг Уа1 Рго Азр ТЬг Ьуз Уа1 Азп РЬе Туг А1а Тгр Ьуз Агд 65 70 75 80
МеД С1и \7а1 С1у С1п С1п А1а Уа1 С1и \7а1 Тгр С1п С1у Ьеи А1а Ьеи 85 90 95
Ьеи Зег С1и А1а Уа1 Ьеи Агд С1у С1п А1а Ьеи Ьеи Уа1 Азп Зег Зег 100 105 110
С1п Рго Тгр С1и Рго Ьеи С1п Ьеи Шз Уа1 Азр Ьуз А1а Уа1 Зег С1у 115 120 125
Ьеи Агд Зег Ьеи ТЬг ТЬг Ьеи Ьеи Агд А1а Ьеи С1у А1а С1п Ьуз С1и 130 135 140
А1а 11е Зег Рго Рго Азр А1а А1а Зег А1а А1а Рго Ьеи Агд ТЬг 11е 145 150 155 160
ТЬг А1а Азр ТЬг РЬе Агд Ьуз Ьеи РЬе Агд Уа1 Туг Зег Азп РЬе Ьеи 165 170 175
Агд С1у Ьуз Ьеи Ьуз Ьеи Туг ТЬг С1у С1и А1а Суз Агд ТЬг С1у Азр 180 185 190
Агд <210> 89 <211> 84 <212> Белок <213> Ното зарЬепз <400> 89
МеД А1а Ьеи Зег Зег С1п 11е Тгр А1а А1а Суз Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи
- 95 020472
1 5 10 15
Ьеи Ьеи АЬа Зег Ьеи ТНг Зег С1у Зег Уа1 РНе Рго С1п С1п ТНг С1у
20 25 30
С1п Ьеи АЬа С1и Ьеи С1п Рго С1п Азр Агд АЬа 61у АЬа Агд АЬа Зег
35 40 45
Тгр МеН Рго МеН РНе Θΐη Агд Агд Агд Агд Агд Азр ТНг НЬз РНе Рго
50 55 60
Не Суз 11е РНе Суз Суз СЬу Суз Суз НЬз Агд Зег Ьуз Суз СЬу МеЬ
65 70 75 80
Суз Суз Ьуз ТНг
<210> 90
<211> 61
<212> Белок
<213> Ното зархепз
<400> 90
С1у Зег Уа1 РНе Рго С1п С1п ТНг С1у С1п Ьеи АЬа С1и Ьеи С1п Рго
1 5 10 15
С1п Азр Агд АЬа С1у АЬа Агд АЬа Зег Тгр МеН Рго МеН РНе С1п Агд
20 25 30
Агд Агд Агд Агд Азр ТНг Низ РНе Рго Не Суз Не РНе Суз Суз СЬу
35 40 45
Суз Суз Низ Агд Зег Ьуз Суз С1у МеН Суз Суз Ьуз ТНг
50 55 60
<210> 91
<211> 25
<212> Белок
<213> НОМО 3ΑΡΙΕΝ3
<400> 91
Азр ТНг ΗΪ3 РНе Рго 11е Суз Не РНе Суз Суз СЬу Суз Суз Низ Агд
1 5 10 15
Зег Ьуз Суз С1у МеН Суз Суз Ьуз ТНг 20 25 <210> 92 <211> 25
- 96 020472 <212> Белок <213> Масаса зр <400> 92
Азр ТЬг 1 НЬз РЬе Рго 5 11е Суз 11е РЬе Суз 10 Суз С1у Суз Суз НЬз 15 Агд
Зег Ьуз Суз С1у МеЬ Суз Суз Агд ТЬг
20 25
<210> 93
<211> 25
<212> Белок
<213> КАТТИЗ ЗР
<4 00> 93
Азр ТЬг Азп РЬе Рго 11е Суз Ьеи РЬе Суз Суз Ьуз Суз Суз Ьуз Азп
1 5 10 15
Зег Зег Суз С1у Ьеи Суз Суз 11е ТЬг
20 25
<210> 94
<211> 25
<212> Белок
<213> миз ЗР
<400> 94
Азр ТЬг Азп РЬе Рго 11е Суз 11е РЬе Суз Суз Ьуз Суз Суз Азп Азп
1 5 10 15
Зег С1п Суз С1у 11е Суз Суз Ьуз ТЬг 20 25
<210> <211> <212> <213> 95 7
Белок Ното зар^епз
<400> 95
Агд Зег Агд РЬе Не С1п С1у
5
<210> 96
<211> 24
<212> Белок
<213> Искусственно созданная
<220> <223> Синтезированная
<400> 96
- 97 020472
С1у С1у Зег Рго РЬе С1и Азр 11е Агд Зег Агд РЬе 11е С1п С1у С1и 15 10 15
Зег 11е ТЬг Рго ТЬг Ьуз С1у Суз 20 <210> 97 <211> 16 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 97
С1у С1у Зег Рго РЬе С1и Азр 11е Агд Зег Агд РЬе 11е С1п С1у Суз 15 10 15 <210> 98 <211> 21 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 98
С1у С1у 11е С1п С1у С1и Зег 11е ТЬг Рго ТЬг Ьуз 11е Рго С1и 11е 15 10 15
ТЬг ТЬг С1и 61у Суз 20 <210> 99 <211> 19 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 99
С1у С1у Мер Рго С1у Зег Рго Ьеи Азр Ьеи Зег Уа1 Зег Рго РЬе С1и 15 10 15
Азр С1у Суз <210> 100 <211> 19 <212> Белок <213> Искусственно созданная
- 98 020472 <220>
<223> Синтезированная ' ' <400> 100
С1у С1у Зег Рго Ьеи Азр Ьеи Зег Уа1 Зег Рго РЬе С1и Азр 11е Агд 15 10 15
Зег С1у Суз <210> 101 <211> 18 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 101
С1у С1у С1и Азр 11е Агд Зег Агд РЬе 11е С1п С1у 61и Зег 11е ТЬг 15 10 15
С1у Суз <210> 102 <211> 18 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 102
С1у С1у Агд Зег Агд РЬе 11е С1п С1у С1и Зег 11е ТЬг Рго ТЬг Ьуз 15 10 15
С1у Суз <210> 103 <211> 10 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 103
С1у Агд А1а РЬе ТЬг Зег РЬе Ьеи 11е С1и 15 10
- 99 020472
<220>
<221> М13С ΕΕΑΤϋΚΕ
<222> (2) . • (2)
<223> Хаа представляет собой Туг, Агд, или Ьуз
<220>
<221> М15С ЕЕАТиКЕ
<222> (3) . . (3)
<223> Хаа представляет собой А1а или Агд
<220>
- 100 020472 <221> М15С_ГЕАТиКЕ <222> (5)..(5)
<223> Хаа представляет собой ТЪг или Агд
<400> 107
С1у Хаа . Хаа РЪе Хаа Зег РЪе Ьеи 11е С1и
1 5 10
<210> 108
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственно созданная
<220>
<223> Синтезированная
<400> 108
ТЪг Зег Азп Рго Агд ТЪг Агд СЬу ТЪг Ьуз Туг Ьуз СЬи Ьуз РЪе Агд
1 5 10 15
С1у
<210> <211> <212> <213> 109 17 Белок Искусственно созданная
<220> <223> Синтезированная
<400> 109
ТЪг Зег Азп Рго Агд ТЪг СЬу Агд 1 5 ТЪг Ьуз Туг Ьуз 10 С1и Ьуз РЪе Агд 15
СЬу
<210> 110
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственно созданная
<220>
<223> Синтезированная
<400> 110
ТЪг Зег ' Азп Рго Агд ТЪг СЬу СЬу Агд Ьуз Туг Ьуз С1и Ьуз РЪе Агд
1 5 10 15
С1у
- 101 020472 <210> 111 <211> 17 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 111
ТЬг Зег Азп Рго Агд ТЬг С1у С1у ТЬг Ьуз Туг Ьуз ТЬг Ьуз РЬе Агд 15 10 15
С1у <210> 112 <211> 17 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 112
ТЬг Зег Азп Рго Агд ТЬг С1у С1у ТЬг Ьуз Туг Ьуз Зег Ьуз РЬе Агд 15 10 15
С1у <210> 113 <211> 17 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 113
ТЬг Зег Азп Рго Агд ТЬг С1у С1у ТЬг Ьуз Туг Ьуз Тгр Ьуз РЬе Агд 15 10 15
С1у <210> 114 <211> 17 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная
- 102 020472
- 103 020472 <210> 118 <211> 17 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <220>
<221> М13С_РЕАТиКЕ <222> (7)..(7) <223> Хаа представляет собой С1у или Агд <220>
<221> М15С_ЕЕАТиКЕ <222> (8) .. (8) <223> Хаа представляет собой 61у или Агд <220>
<221> М15С_ЕЕАТиКЕ <222> (9)..(9) <223> Хаа представляет собой ТЬг или Агд <220>
<221> М13С_ЕЕАТиКЕ <222> (13)..(13) <223> Хаа представляет собой С1и, ТЬг, Зег, или Тгр <220>
<221> М13С_ЕЕАТиКЕ <222> (14)..(14) <223> Хаа представляет собой Ьуз или Уа1 <220>
<221> М13С_ЕЕАТиКЕ <222> (17)..(17) <223> Хаа представляет собой 01у или Агд <400> 118
ТЬг Зег Азп Рго Агд ТЬг Хаа Хаа Хаа Ьуз Туг Ьуз Хаа Хаа РЬе Агд 15 10 15
Хаа <210> 119 <211> 5 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 119
С1и РЬе РЬе Уа1 Туг
5
- 104 020472
<210> <211> <212> <213> 120 5 Белок Искусственно созданная
<220> <223> Синтезированная
<220> <221> <222> <223> М13С БЕАТиКЕ (4) . . (4) Хаа представляет собой Азр или Уа1
<400> 120
С1и РНе РНе Хаа Туг
1 5
<210> <211> <212> <213> 121 7 Белок Искусственно созданная
<220> <223> Синтезированная
<400> 121
А1а С1у Зег Ьуз Агд Нтз Зег 1 5
<210> <211> <212> <213> 122 7 Белок Искусственно созданная
<220> <223> Синтезированная
<400> 122
А1а С1у Зег Ьуз Ьеи Агд Зег 1 5
<210> <211> <212> <213> 123 7 Белок Искусственно созданная
<220> <223> Синтезированная
<400> 123
А1а С1у Зег Ьуз Ьеи Уа1 Зег 1 5
- 105 020472 <210> 124 <211> 7 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 124
А1а С1у Зег Ьуз Ьеи Туг Зег 1 5 <210> 125 <211> 7 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 125
А1а С1у Зег Ьуз Ьеи Нтз Тгр 1 5 <210> 126 <211> 7 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 126
А1а С1у Зег Ьуз Ьеи НЬз Туг 1 5 <210> 127 <211> 7 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 127
А1а С1у Зег Ьуз Агд Шз Тгр
1 5
<210> 128
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственно созданная
<220>
<223> Синтезированная
- 106 020472 <400> 126
А1а 61у Зег Ьуз Агд Туг Туг <210> 129 <211> 7 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <220>
<221> М13С_ГЕАТиКЕ <222> (5) . .(5) <223> Хаа представляет собой Ьеи или Агд <220>
<221> М13С_ГЕАТиКЕ <222> (6)..(6) <223> Хаа представляет собой НЬз, Агд, Уа1, или Туг <220>
<221> М15С_ГЕАТиКЕ <222> (7)..(7) <223> Хаа представляет собой Зег, Тгр, или Туг <400> 129
А1а С1у Зег Ьуз Хаа Хаа Хаа
5 <210> 130 <211> 114 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 130
С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег С1у А1а Е1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у Зег 15 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг А1а РЬе ТЬг Зег РЬе 20 25 30
Ьеи 11е С1и Тгр Уа1 Агд С1п АЬа Рго С1у С1п С1у Ьеи С1и Тгр Меб 35 40 45
С1у ТЬг Зег Азп Рго Агд ТЬг С1у Агд ТЬг Ьуз Туг Ьуз Зег Ьуз РЬе 50 55 60
- 107 020472
<210> 131 <211> 342 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 131
саддСдсадс СддСдсадСс СддддсСдад дСдаадаадс сСдддСссСс адСдааддСС 60
СссСдсаадд саСсСддсСа сдссССсасС СсдССсССда СададСдддС дсдасаддсс 120
ссСддасаад ддсССдадСд даСдддаасд адСааСссСа ддасСдддад дасдаадСаС 180
аааСссаадС Ссаддддсад адСсассаСС ассдсддаса ааСссасдад сасадссСас 240
аСддадсСда дсадссСдад аСсСдаддас асддссдСдС аССасСдСдс дсдсдадССС 300
СССдасСасС ддддссаадд аассасддСс ассдСсСссС са 342
<210> 132 <211> 107 <212> Белок <213> Искусственно созданная
<220> <223> Синтезированная
<400> 132
Азр 11е С1п МеС ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Зег Ьуз Зег 11е Зег Ьуз Туг
20 25 30
ТЬг А1а Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг А1а С1у Зег Ьуз Агд Нтз Тгр С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
108
Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи С1п Рго 65 70 75 80
С1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз С1п С1п НЬз Азп С1и Туг Рго Туг 85 90 95
ТЬг РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и 11е Ьуз 100 105 <210> 133 <211> 321 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 133
дасаЕссада ЕдасссадЕс ЕссаЕссЕсс сЕдЕсЕдсаЕ сЕдЕаддада сададЕсасс 60
аЕсасЕЕдса дддсдадЕаа дадсаЕЕадс аааЕаЕасад ссЕддЕаЕса дсадааасса 120
дддааадссс сЕаадсЕссЕ даЕсЕаЕдсЕ дддЕссаадс ддсасЕдддд адЕсссаЕса 180
аддЕЕсадЕд дсадЕддаЕс ЕдддасадаЕ ЕЕсасЕсЕса ссаЕсадсад ЕсЕдсаассЕ 240
даадаЕЕЕЕд саасЕЕасЕа ЕЕдЕсаасаа саЕааЕдааЕ асссдЕасас дЕЕсддсдда 300
дддассаадд ЕддадаЕсаа а 321
<210> 134 <211> 114 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 134
С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег С1у А1а С1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у Зег 15 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг А1а РЬе ТЬг Зег РЬе 20 25 30
Ьеи 11е С1и Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у С1п С1у Ьеи С1и Тгр МеЕ 35 40 45
С1у ТЬг Зег Азп Рго Агд ТЬг С1у С1у Агд Ьуз Туг Ьуз 61и Ьуз РЬе 50 55 60
Агд С1у Агд УаЬ ТЬг 11е ТЬг А1а Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг 65 70 75 80
- 109 020472
МеГ 61и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95
А1а Агд С1и РЬе РЬе Азр Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 100 105 110
Зег Зег <210> 135 <211> 342 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 135
саддГдсадс ЬддГдсадГс ГддддсГдад дГдаадаадс сГдддГссГс адГдааддГГ 60
ГссГдсаадд саГсГддсГа сдссГГсасГ ГсдГГсГГда ГададГдддГ дсдасаддсс 120
ссГддасаад ддсГГдадГд даГдддаасд адГааГссГа ддасГддГдд ГсддаадГаГ 180
ааададаадГ Гсаддддсад адГсассаГГ ассдсддаса ааГссасдад сасадссГас 240
аГддадсГда дсадссГдад аГсГдаддас асддссдЬдГ аГГасГдГдс дсдсдадГГГ 300
ГГГдасГасГ ддддссаадд аассасддГс ассдГсГссГ са 342
<210> 136 <211> 107 <212> Белок <213> Искусственно созданная
<220> <223> Синтезированная
<400> 136
Азр 11е С1п МеГ ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Зег Ьуз Зег 11е Зег Ьуз Туг
20 25 30
ТЬг А1а Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не
35 40 45
Туг А1а С1у Зег Ьуз Ьеи ΗΪ8 Тгр С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи С1п Рго
- 110 020472
70 75 80
С1и Азр РНе А1а ТНг Туг Туг Суз С1п Εΐη Ηίδ Азп С1и Туг Рго Туг 85 90 95
ТЬг РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и 11е Ьуз 100 105 <210> 137 <211> 321 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 137
дасаДссада ДдасссадДс ДссаДссДсс сДдДсДдсаД сДдДаддада сададДсасс 60
аДсасДДдса дддсдадДаа дадсаДДадс аааДаДасад ссДддДаДса дсадааасса 120
дддааадссс сДаадсДссД даДсДаДдсД дддДссаадс ДдсасДдддд адДсссаДса 180
аддДДсадДд дсадДддаДс ДдддасадаД ДДсасДсДса ссаДсадсад ДсДдсаассД 240
даадаДДДДд саасДДасДа ДДдДсаасаа саДааДдааД асссдДасас дДДсддсдда 300
дддассаадд ДддадаДсаа а 321
<210> 138 <211> 114 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 138
С1п Уа1 Е1п Ьеи Уа1 С1п Зег С1у А1а С1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у Зег 15 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг А1а РЬе ТЬг Зег РЬе 20 25 30
Ьеи 11е С1и Тгр \7а1 Агд С1п А1а Рго С1у С1п Е1у Ьеи Е1и Тгр МеД 35 40 45
Е1у ТЬг Зег Азп Рго Агд ТЬг Е1у Е1у Агд Ьуз Туг Ьуз Е1и Ьуз РЬе 50 55 60
Агд Е1у Агд \7а1 ТЬг 11е ТЬг А1а Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг 65 70 75 80
111
МеЬ С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а \7а1 Туг Туг Суз 85 90 95
А1а Агд С1и РЬе РЬе Азр Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг ТЬг \7а1 ТЬг Уа1 100 105 110
Зег Зег <210> 139 <211> 342 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 139
саддЬдсадс ЬддЬдсадЬс ЬддддсЬдад дЬдаадаадс сЬдддЬссЬс адЬдааддЬЬ 60
ЬссЬдсаадд саЬсЬддсЬа сдссЬЬсасЬ ЬсдЬЬсЬЬда ЬададЬдддЬ дсдасаддсс 120
ссЬддасаад ддсЬЬдадЬд даЬдддаасд адЬааЬссЬа ддасЬддддд даддаадЬаЬ 180
ааададаадЬ Ьсадддддад адЬсассаЬЬ ассдсддаса ааЬссасдад сасадссЬас 240
аЬддадсЬда дсадссЬдад аЬсЬдаддас асддссдЬдЬ аЬЬасЬдЬдс дсдсдадЬЬЬ 300
ЬЬЬдасЬасЬ ддддссаадд аассасддЬс ассдЬсЬссЬ са 342
<210> 140 <211> 107 <212> Белок <213> Искусственно созданная
<220>
<223> ' Синтезированная
<400> 140
Азр 11е С1п МеЬ ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Зег Ьуз Зег 11е Зег Ьуз Туг
20 25 30
ТЬг А1а Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Х1е
35 40 45
Туг А1а С1у Зег Ьуз Ьеи Агд Зег 61у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи С1п Рго
65 70 75 80
- 112 020472
С1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз С1п С1п Шз Азп С1и Туг Рго Туг 85 90 95
ТЬг РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и Х1е Ьуз 100 105 <210> 141 <211> 321 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 141
дасаЬссада ЬдасссадЬс ЬссаЬссЬсс сЬдЬсЬдсаЬ сЬдЬаддада сададЬсасс 60
аЬсасЬЬдса дддсдадЬаа дадсаЬЬадс аааЬаЬасад ссЬддЬаЬса дсадааасса 120
дддааадссс сЬаадсЬссЬ даЬсЬаЬдсЬ дддЬссаадЬ ЬдсддЬсЬдд адЬсссаЬса 180
аддЬЬсадЬд дсадЬддаЬс ЬдддасадаЬ ЬЬсасЬсЬса ссаЬсадсад ЬсЬдсаассЬ 240
даадаЬЬЬЬд саасЬЬасЬа ЬЬдЬсаасаа саЬааЬдааЬ асссдЬасас дЬЬсддсдда 300
дддассаадд ЬддадаЬсаа а 321
<210> 142 <211> 114 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> < Синтезированная
<400> 142
С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег С1у А1а С1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у Зег
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг Агд РЬе ТЬг Зег РЬе
20 25 30
Ьеи 11е С1и Тгр Уа1 Агд 51п А1а Рго С1у С1п С1у Ьеи С1и Тгр МеЬ
35 40 45
С1у ТЬг Зег Азп Рго Агд ТЬг С1у Агд ТЬг Ьуз Туг Ьуз ТЬг Ьуз РЬе
50 55 60
Агд С1у Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг А1а Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЬ С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
- 113 020472
А1а Агд С1и РЪе РЪе Азр Туг Тгр СЬу С1п С1у ТЪг ТЪг \7а1 ТЪг Х7а1 100 105 110
Зег Зег <210> 143 <211> 342 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 143
саддЪдсадс ЪддЪдсадЪс ЪддддсЪдад дЪдаадаадс с!дддЪсс!с адЪдаадд!! 60
ЪссЪдсаадд са!с!ддс!а ссдсНсас! ЪсдНсНда ЪададЪддд! дсдасаддсс 120
ссЪддасаад ддсНдадЪд даЪдддаасд адЪааЪссЪа ддасЪддЪад дасааадба! 180
аааассаад! Ъсаддддсад адЪсассаЪЪ ассдсддаса ааЪссасдад сасадссЪас 240
а!ддадс!да дсадссЪдад а!с!даддас асддссдЪд! а!1ас!д!дс дсдсдад!!! 300
ЪЪЪдасЪас! ддддссаадд аассасддЪс ассд!с!сс! са 342
<210> 144 <211> 107 <212> Белок <213> Искусственно созданная
<220> <223> Синтезированная
<400> 144
Азр 11е С1п Ме! ТЪг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 СЬу
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЪг Не ТЪг Суз Агд АЬа Зег Ьуз Зег 11е Зег Ьуз Туг
20 25 30
ТЪг А1а Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг А1а С1у Зег Ьуз Агд Туг Туг С1у Уа1 Рго Зег Агд РЪе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТЪг Азр РЪе ТЪг Ьеи ТЪг 11е Зег Зег Ьеи СЬп Рго
65 70 75 80
С1и Азр РЪе АЬа ТЪг Туг Туг Суз С1п С1п НЬз Азп СЬи Туг Рго Туг
114
ТЬг РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и Не Ьуз 100 105 <210> 145 <211> 321 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 145
дасаЬссада ЬдасссадЬс ЬссаЬссЬсс сЬдЬсЬдсаЬ сЬдЬаддада сададЬсасс 60
аЬсасЬЬдса дддсдадЬаа дадсаЬЬадс аааЬаЬасад ссЬддЬаЬса дсадааасса 120
дддааадссс сЬаадсЬссЬ даЬсЬаЬдсЬ дддЬссаадс ддЬасЬасдд адЬсссаЬса 180
аддНсадЬд дсадЬддаЬс ЬдддасадаЬ НсасЬсЬса ссаЬсадсад ЬсЬдсаассЬ 240
даадаННд саасЬЬасЬа ЬЬдЬсаасаа саЬааЬдааЬ асссдЬасас дНсддсдда 300
дддассаадд ЬддадаЬсаа а 321
<210> 146 <211> 114 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 146
С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег О1у А1а С1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у Зег 15 10 15
Зег Уа1 Ьуз \/а1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг Агд РЬе ТЬг Зег РЬе 20 25 30
Ьеи Не С1и Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у С1п С1у Ьеи С1и Тгр МеЬ 35 40 45
С1у ТЬг Зег Азп Рго Агд ТЬг С1у С1у ТЬг Ьуз Туг Ьуз С1и Ьуз РЬе 50 55 60
Агд С1у Агд Уа1 ТЬг Не ТЬг А1а Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг 65 70 75 80
МеЕ С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а \7а1 Туг Туг Суз 85 90 95
- 115 020472
А1а Агд С1и РЬе РЬе Уа1 Туг Тгр С1у 61п С1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 100 105 110
Зег Зег <210> 147 <211> 342 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 147
саддЬдсадс ЬддЬдсадЬс ЬддддсЬдад дЬдаадаадс сЬдддЬссЬс адЬдааддЬЬ 60
ЬссЬдсаадд саЬсЬддсЬа ссдсЬЬсасЬ ЬсдЬЬсЬЬда ЬададЬдддЬ дсдасаддсс 120
ссЬддасаад ддсЬЬдадЬд даЬдддаасд адЬааЬссЬа ддасЬддЬдд дасааадЬаЬ 180
ааададаадЬ Ьсаддддсад адЬсассаЬЬ ассдсддаса ааЬссасдад сасадссЬас 240
аЬддадсЬда дсадссЬдад аЬсЬдаддас асддссдЬдЬ аЬЬасЬдЬдс дсдсдадЬЪЪ 300
ЬЬЬдЬсЬасЬ ддддссаадд аассасддЬс ассдЬсЬссЬ са 342
<210> 148 <211> 107 <212> Белок <213> Искусственно созданная
<220> <223> < Синтезированная
<400> 148
Азр Не С1п МеЬ ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг Не ТЬг Суз Агд А1а Зег Ьуз Зег Не Зег Ьуз Туг
20 25 30
ТЬг А1а Тгр Туг С1п 61п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не
35 40 45
Туг А1а С1у Зег Ьуз Агд Туг Туг С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи С1п Рго
65 70 75 80
С1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз С1п С1п НЬз Азп С1и Туг Рго Туг
90 95
- 116 020472
ТЬг РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и Не Ьуз 100 105 <210> 149 <211> 321 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 149
дасаРссада РдасссадРс РссаРссРсс сРдРсРдсаР сРдРаддада сададрсасс 60
аРсасРРдса дддсдадРаа дадсаРРадс аааРаРасад ссРддРаРса дсадааасса 120
дддааадссс сРаадсРссР даРсРаРдсР дддрссаадс ддРасРасдд адРсссаРса 180
аддРРсадРд дсадРддаРс РдддасадаР РРсасРсРса ссаРсадсад РсРдсаассР 240
даадаРРРРд саасРРасРа РРдРсаасаа саРааРдааР асссдРасас дРРсддсдда 300
дддассаадд РддадаРсаа а 321
<210> 150 <211> 440 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная
<400> 150
С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег С1у А1а С1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у Зег
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг А1а РЬе ТЬг Зег РЬе
20 25 30
Ьеи 11е 61и Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у С1п С1у Ьеи С1и Тгр Мер
35 40 45
С1у ТЬг Зег Азп Рго Агд ТЬг С1у Агд ТЬг Ьуз Туг Ьуз Зег Ьуз РЬе
50 55 60
Агд С1у Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг А1а Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Мер С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд С1и РЬе РЬе Азр Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1
100 105 но
117
- 118 020472
355 360 365
Зег Азр 11е АЬа Х7а1 С1и Тгр СЬи Зег Азп СЬу С1п Рго С1и Азп Азп 370 375 380
Туг Ьуз ТНг ТНг Рго Рго УаЬ Ьеи Азр Зег Азр СЬу Зег РНе РНе Ьеи 385 390 395 400
Туг Зег Агд Ьеи ТНг Х/а1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п СЬи СЬу Азп Х/а1 405 410 415
РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеН НЬз С1и АЬа Ьеи НЬз Азп НЬз Туг ТНг С1п 420 425 430
Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи СЬу 435 440
<210> 151
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственно созданная
<220>
<223> Синтезированная
<400> 151
Азр Не СЬп МеН ТНг СЬп Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег АЬа Зег Уа1 СЬу
10 15
Азр Агд Х/а1 ТНг 11е ТНг Суз Агд А1а Зег Ьуз Зег 11е Зег Ьуз Туг 20 25 30
ТНг А1а Тгр Туг С1п СЬп Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не 35 40 45
Туг АЬа С1у Зег Ьуз Агд НЬз Тгр СЬу Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу 50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТНг Азр РНе ТНг Ьеи ТНг Не Зег Зег Ьеи СЬп Рго 65 70 75 80
С1и Азр РНе АЬа ТНг Туг Туг Суз СЬп СЬп НЬз Азп СЬи Туг Рго Туг 85 90 95
ТНг РЬе СЬу СЬу СЬу ТНг Ьуз Х/а1 С1и Не Ьуз Агд ТНг Х7а1 АЬа АЬа 100 105 110
Рго Зег Х/а1 РЬе Не РНе Рго Рго Зег Азр С1и СЬп Ьеи Ьуз Зег СЬу 115 120 125
- 119 020472
ТЬг А1а 130 Зег Уа1 УаЬ Суз Ьеи 135 Ьеи Азп Азп РЬе Туг 140 Рго Агд Е1и А1а
Ьуз Уа1 Е1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи Е1п Зег С1у Азп Зег Е1п
145 150 155 160
Е1и Зег Уа1 ТЬг Е1и Е1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег
165 170 175
Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг Е1и Ьуз НЬз Ьуз Уа1 Туг
180 185 190
А1а Суз Е1и Уа1 ТЬг НЬз Е1п С1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег
195 200 205
РЬе Азп Агд С1у Е1и Суз
210
<210> 152
<211> 440
<212> Белок
<213> Искусственно созданная
<220>
<223> Синтезированная
<400> 152
Е1п Уа1 Е1п Ьеи Уа1 Е1п Зег С1у А1а С1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго 61у Зег
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг А1а РЬе ТЬг Зег РЬе
20 25 30
Ьеи 11е С1и Тгр Уа1 Агд Е1п А1а Рго Е1у О1п Е1у Ьеи С1и Тгр МеР
35 40 45
С1у ТЬг Зег Азп Рго Агд ТЬг Е1у Е1у Агд Ьуз Туг Ьуз Е1и Ьуз РЬе
50 55 60
Агд Е1у Агд Уа1 ТЬг 11е ТНг А1а Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеР Е1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег Е1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд С1и РНе РЬе Азр Туг Тгр Е1у Е1п Е1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1
100 105 но
- 120 020472
- 121 020472
Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи С1у 435 440 <210> 153 <211> 1320 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 153
саддбдсадс ЬддЬдсадЬс ЬддддсЬдад дЬдаадаадс сЬдддЬссЬс адЬдааддЫ 60
ЬссЬдсаадд саЬсЬддсЬа сдссНсас! ЬсдЫсНда ЬададЬдддЬ дсдасаддсс 120
ссЬддасаад ддсЫдадЬд даЬдддаасд адЬааЬссСа ддасЬддЬдд ЬсддаадЬаЬ 180
ааададаадЬ Ьсаддддсад адЬсассаН ассдсддаса ааЬссасдад сасадссЬас 240
аЬддадсЬда дсадссЬдад аЬсЬдаддас асддссдЪдЬ аНасЪдЪдс дсдсдадНЬ 300
ЬНдасЬасЬ ддддссаадд аассасддЬс ассдЬсЬссЬ садссСссас саадддссса 360
ЬсддЬсЪЬсс сдсДадсдсс сЬдсЬссадд адсассЬссд ададсасадс сдсссЬдддс 420
ЬдссЬддЬса аддасЬасЫ ссссдаассд дЬдасддЬдЬ сдЬддаасСс аддсдсссЬд 480
ассадсддсд ЬдсасассН сссддсЬдЬс сЬасадЬссЬ саддас+сЬа сЪсссЬсадс 540
адсдЬддЬда ссдЬдсссЬс садсадсНд ддсасдаада ссЬасассЬд саасдЬадаЬ 600
сасаадссса дсаасассаа ддЬддасаад ададНдад! ссаааЬа+дд СсссссаЬдс 660
ссасссЬдсс садсассЬда ддссдссддд ддассаЬсад ЬсЫссЬдЫ ссссссаааа 720
сссааддаса сЬсЬсаЬдаЬ сЪсссддасс ссЬдаддЬса сдЪдсдЬддЬ ддЪддасдЬд 780
адссаддаад ассссдаддЪ ссадНсаас ЬддЬасдЬдд аЬддсдЬдда ддЬдсаЬааЪ 840
дссаадасаа адссдсддда ддадсадНс аасадсасдЪ ассдЬдЬддЬ садсдЬссЬс 900
ассдЬссЬдс ассаддасЬд дсЬдаасддс ааддадЪаса адЬдсааддЬ сЬссаасааа 960
- 122 020472
ддссЕсссдЕ ссЕссаЕсда даааассаЕс Ессааадсса аадддсадсс ссдададсса 1020
саддЕдЕаса сссЕдссссс аЕсссаддад дадаЕдасса адаассаддЕ садссЕдасс 1080
ЕдссЕддЕса ааддсЕЕсЕа ссссадсдас аЕсдссдЕдд адЕдддааад сааЕдддсад 1140
ссддадааса асЕасаадас сасдссЕссс дЕдсЕддасЕ ссдасддсЕс сЕЕсЕЕссЕс 1200
Еасадсаддс ЕаассдЕдда саададсадд Еддсаддадд ддааЕдЕсЕЕ сЕсаЕдсЕсс 1260
дЕдаЕдсаЕд аддсЕсЕдса саассасЕас асасадаада дссЕсЕсссЕ дЕсЕсЕдддЕ 1320
<210> 154 <211> 214 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 154
Азр 1 11е С1п МеЕ ТЬг 5 С1п Зег Рго Зег Зег 10 Ьеи Зег А1а Зег Уа1 15 С1у
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Зег Ьуз Зег Х1е Зег Ьуз Туг
20 25 30
ТЬг А1а Тгр Туг 61п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг А1а С1у Зег Ьуз Ьеи Ηίε Тгр С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи С1п Рго
65 70 75 80
С1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз С1п С1п НЬз Азп С1и Туг Рго Туг
85 90 95
ТЬг РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и 11е Ьуз Агд ТЬг Уа1 А1а А1а
100 105 но
Рго Зег Уа1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр С1и С1п Ьеи Ьуз Зег С1у
115 120 125
ТЬг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд С1и А1а
130 135 140
Ьуз Уа1 С1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи С1п Зег С1у Азп Зег 61п
145 150 155 160
123
С1и Зег Уа1 ТЬг С1и С1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег 165 170 175
Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг С1и Ьуз Шз Ьуз Уа1 Туг 180 185 190
А1а Суз С1и Уа1 ТЬг Низ С1п С1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег 195 200 205
РЬе Азп Агд С1у С1и Суз 210 <210> 155 <211> 642 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 155
дасаРссада РдасссадРс РссаРссРсс сРдРсРдсаР сРдРаддада сададрсасс 60
аРсасРРдса дддсдадРаа дадсаРРадс аааРаРасад ссРддРаРса дсадааасса 120
дддааадссс сРаадсРссР даРсРаРдсР дддрссаадс РдсасРдддд адРсссаРса 180
аддРРсадРд дсадРддаРс РдддасадаР РРсасРсРса ссаРсадсад РсРдсаассР 240
даадаРРРРд саасРРасРа РРдРсаасаа саРааРдааР асссдрасас дРРсддсдда 300
дддассаадд РддадаРсаа асддасрдрд дсРдсассаР сРдРсРРсаР сРРсссдсса 360
РсРдаРдадс адРРдаааРс РддаасРдсс РсРдРРдРдР дссРдсРдаа РаасРРсРаР 420
сссадададд ссааадРаса дрддааддрд даРаасдссс РссааРсддд РаасРсссад 480
дададрдрса сададсадда садсааддас адсассРаса дссРсадсад сасссрдасд 540
сРдадсааад садасРасда дааасасааа дРсРасдссР дсдаадРсас ссаРсадддс 600
сРдадсРсдс ссдРсасааа дадсРРсаас аддддададр дс 642
<210> 156 <211> 440 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 156
С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег С1у А1а С1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у Зег 15 10 15
Зег Уа! Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг А1а РЬе ТЬг Зег РЬе
- 124 020472
- 125 020472
Уа1 Азр С1у 275 Уа1 С1и Уа1 Ηίδ Азп 280 А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго 285 Агд С1и С1и
С1п РЬе Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Нтз
290 295 300
С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз С1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз
305 310 315 320
С1у Ьеи Рго Зег Зег 11е С1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз С1у С1п
325 330 335
Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег С1п С1и С1и МеР
340 345 350
ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг Рго
355 360 365
Зег Азр 11е А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег Азп С1у С1п Рго С1и Азп Азп
370 375 380
Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго УаЬ Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи
385 390 395 400
Туг Зег Агд Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1и С1у Азп Уа1
405 410 415
РЬе Зег Суз Зег Уа1 Мер ΗΪ5 С1и А1а Ьеи Ηίδ Азп ΗΪ5 Туг ТЬг СТп
420 425 430
Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи С1у
435 440
<210> 157 <211> 1320 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 157
саддрдсадс РддРдсадРс Рддддсрдад дрдаадаадс сРдддРссРс адРдааддРР 60
РссРдсаадд саРсРддсРа сдссРРсасР РсдРРсРРда РададРдддР дсдасаддсс 120
ссрддасаад ддсРРдадрд даРдддаасд адРааРссРа ддасРддддд даддаадРаР 180
ааададаадР Рсадддддад адРсассаРР ассдсддаса ааРссасдад сасадссРас 240
аРддадсрда дсадссРдад аРсРдаддас асддссдрдр аРРасРдРдс дсдсдадРРР 300
- 126 020472
ДДДдасДасД ддддссаадд аассасддДс ассдДсДссД садссДссас саадддссса 360
ДсддДсДДсс сдсДадсдсс сДдсДссадд адсассДссд ададсасадс сдсссДдддс 420
ДдссДддДса аддасДасДД ссссдаассд дДдасддДдД сдДддаасДс аддсдсссДд 480
ассадсддсд ДдсасассДД сссддсДдДс сДасадДссД саддасДсДа сДсссДсадс 540
адсдДддДда ссдДдсссДс садсадсДДд ддсасдаада ссДасассДд саасдДадаД 600
сасаадссса дсаасассаа ддДддасаад ададДДдадД ссаааДаДдд ДсссссаДдс 660
ссасссДдсс садсассДда ддссдссддд ддассаДсад ДсДДссДдДД ссссссаааа 720
сссааддаса сДсДсаДдаД сДсссддасс ссДдаддДса сдДдсдДддД ддДддасдДд 780
адссаддаад ассссдаддД ссадДДсаас ДддДасдДдд аДддсдДдда ддДдсаДааД 840
дссаадасаа адссдсддда ддадсадДДс аасадсасдД ассдДдДддД садсдДссДс 900
ассдДссДдс ассаддасДд дсДдаасддс ааддадДаса адДдсааддД сДссаасааа 960
ддссДсссдД ссДссаДсда даааассаДс Дссааадсса аадддсадсс ссдададсса 1020
саддДдДаса сссДдссссс аДсссаддад дадаДдасса адаассаддД садссДдасс 1080
ДдссДддДса ааддсДДсДа ссссадсдас аДсдссдДдд адДдддааад сааДдддсад 1140
ссддадааса асДасаадас сасдссДссс дДдсДддасД ссдасддсДс сДДсДДссДс 1200
Дасадсаддс ДаассдДдда саададсадд Дддсаддадд ддааДдДсДД сДсаДдсДсс 1260
дДдаДдсаДд аддсДсДдса саассасДас асасадаада дссДсДсссД дДсДсДдддД 1320
<210> 158 <211> 214 <212> Белок <213> Искусственно созданная
<220>
<223> Синтезированная
<400> 158
Азр Не С1п МеД ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг Не ТЬг Суз Агд А1а Зег Ьуз Зег Не Зег Ьуз Туг
20 25 30
ТЬг А1а Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не
35 40 45
Туг А1а С1у Зег Ьуз Ьеи Агд Зег 61у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи С1п Рго
65 70 75 80
127 020472
<210> 159 <211> 642 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 159 дасаСссада СдасссадСс СссаСссСсс сСдСсСдсаС сСдСаддада сададСсасс 60 аСсасССдса дддсдадСаа дадсаССадс аааСаСасад ссСддСаСса дсадааасса 120 дддааадссс сСаадсСссС даСсСаСдсС дддСссаадС СдсддСсСдд адСсссаСса 180 аддССсадСд дсадСддаСс СдддасадаС ССсасСсСса ссаСсадсад СсСдсаассС 240 даадаССССд саасССасСа ССдСсаасаа саСааСдааС асссдСасас дССсддсдда 300 дддассаадд СддадаСсаа асддасСдСд дсСдсассаС сСдСсССсаС сССсссдсса 360
СсСдаСдадс адССдаааСс СддаасСдсс СсСдССдСдС дссСдсСдаа СаасССсСаС 420 сссадададд ссааадСаса дСддааддСд даСаасдссс СссааСсддд СаасСсссад 480
- 128 020472
дададЬдЬса сададсадда садсааддас адсассЬаса дссЬсадсад сасссЬдасд 540
сЬдадсааад садасЬасда дааасасааа дЬсЬасдссЬ дсдаадЬсас ссаЬсадддс 600
сЬдадсЬсдс ссдЬсасааа дадсЬЬсаас аддддададЬ дс 642
<210> 160 <211> 440 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> < Синтезированная
<400> 160
С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег С1у А1а С1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у Зег
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг Агд РЬе ТЬг Зег РЬе
20 25 30
Ьеи 11е 61и Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у С1п С1у Ьеи С1и Тгр МеЬ
35 40 45
61у ТЬг Зег Азп Рго Агд ТЬг С1у С1у ТЬг Ьуз Туг Ьуз С1и Ьуз РЬе
50 55 60
Агд С1у Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг А1а Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЬ С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд С1и РЬе РЬе Уа1 Туг Тгр 61у С1п С1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг νβΐ
100 105 110
Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег νβΐ РЬе Рго Ьеи А1а Рго Суз
115 120 125
Зег Агд Зег ТЬг Зег С1и Зег ТЬг А1а А1а Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз
130 135 140
Азр Туг РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи
145 150 155 160
ТЬг Зег С1у Уа1 Низ ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи С1п Зег Зег С1у Ьеи
165 170 175
Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг
180 185 190
129 020472
- 130 020472
435 440 <210> 161 <211> 1320 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 161
саддЕдсадс ЕддЕдсадЕс ЕддддсЕдад дЕдаадаадс сЕдддЕссЕс адЕдааддЕЕ 60
ЕссЕдсаадд саЕсЕддсЕа ссдсЕЕсасЕ ЕсдЕЕсЕЕда ЕададЕдддЕ дсдасаддсс 120
ссЕддасаад ддсЕЕдадЕд даЕдддаасд адЕааЕссЕа ддасЕддЕдд дасааадЕаЕ 180
ааададаадЕ Есаддддсад адЕсассаЕЕ ассдсддаса ааЕссасдад сасадссЕас 240
аЕддадсЕда дсадссЕдад аЕсЕдаддас асддссдЕдЕ аЕЕасЕдЕдс дсдсдадЕЕЕ 300
ЪЪ-Ьд-ЬсЪас'Ь ддддссаадд аассасддЕс ассдЕсЕссЕ садссЕссас саадддссса 360
ЕсддЕсЕЕсс сдсЕадсдсс сЕдсЕссадд адсассЕссд ададсасадс сдсссЕдддс 420
ЕдссЕддЕса аддасЕасЕЕ ссссдаассд дЕдасддЕдЕ сдЕддаасЕс аддсдсссЕд 480
ассадсддсд ЕдсасассЕЕ сссддсЕдЕс сЕасадЕссЕ саддасЕсЕа сЕсссЕсадс 540
адсдЕддЕда ссдЕдсссЕс садсадсЕЕд ддсасдаада ссЕасассЕд саасдЕадаЕ 600
сасаадссса дсаасассаа ддЕддасаад ададЕЕдадЕ ссаааЕаЕдд ЕсссссаЕдс 660
ссасссЕдсс садсассЕда ддссдссддд ддассаЕсад ЕсЕЕссЕдЕЕ ссссссаааа 720
сссааддаса сЕсЕсаЕдаЕ сЕсссддасс ссЕдаддЕса сдЕдсдЕддЕ ддЕддасдЕд 780
адссаддаад ассссдаддЕ ссадЕЕсаас ЕддЕасдЕдд аЕддсдЕдда ддЕдсаЕааЕ 840
дссаадасаа адссдсддда ддадсадЕЕс аасадсасдЕ ассдЕдЕддЕ садсдЕссЕс 900
ассдЕссЕдс ассаддасЕд дсЕдаасддс ааддадЕаса адЕдсааддЕ сЕссаасааа 960
ддссЕсссдЕ ссЕссаЕсда даааассаЕс Ессааадсса аадддсадсс ссдададсса 1020
саддЕдЕаса сссЕдссссс аЕсссаддад дадаЕдасса адаассаддЕ садссЕдасс 1080
ЕдссЕддЕса ааддсЕЕсЕа ссссадсдас аЕсдссдЕдд адЕдддааад сааЕдддсад 1140
ссддадааса асЕасаадас сасдссЕссс дЕдсЕддасЕ ссдасддсЕс сЕЕсЕЕссЕс 1200
Еасадсаддс ЕаассдЕдда саададсадд Еддсаддадд ддааЕдЕсЕЕ сЕсаЕдсЕсс 1260
дЕдаЕдсаЕд аддсЕсЕдса саассасЕас асасадаада дссЕсЕсссЕ дЕсЕсЕдддЕ 1320
<210> 162 <211> 214 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
- 131 020472 <223> Синтезированная <400> 162
Азр Не Θΐη МеЬ ТЪг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у 15 10 15
Азр Агд Уа1 ТЪг 11е ТЪг Суз Агд А1а Зег Ьуз Зег Не Зег Ьуз Туг 20 25 30
ТЪг А1а Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не 35 40 45
Туг А1а С1у Зег Ьуз Агд Туг Туг С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у 50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТЪг Азр РЪе ТЪг Ьеи ТЪг Не Зег Зег Ьеи С1п Рго 65 70 75 80
С1и Азр РЪе А1а ТЪг Туг Туг Суз С1п 61п Н1з Азп С1и Туг Рго Туг 85 90 95
ТЪг РЪе С1у С1у С1у ТЪг Ьуз νβΐ С1и Не Ьуз Агд ТЪг Уа1 А1а А1а 100 105 110
Рго Зег \7а1 РЪе Не РЪе Рго Рго Зег Азр С1и С1п Ьеи Ьуз Зег С1у 115 120 125
ТЪг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЪе Туг Рго Агд С1и А1а 130 135 140
Ьуз Уа1 С1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи С1п Зег С1у Азп Зег С1п 145 150 155 160
С1и Зег \7а1 ТЪг С1и С1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЪг Туг Зег Ьеи Зег 165 170 175
Зег ТЪг Ьеи ТЪг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг С1и Ьуз Шз Ьуз Уа1 Туг 180 185 190
А1а Суз С1и 7а1 ТЪг Шз С1п С1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЪг Ьуз Зег 195 200 205
РЪе Азп Агд С1у С1и Суз 210 <210> 163 <211> 642 <212> ДНК
- 132 020472 <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 163
даса!ссада !дасссад!с !сса!сс!сс с!д!с!дса! с!д!аддада садад!сасс 60
а!сас!!дса дддсдад!аа дадсаЪЪадс аааЪаЪасад сс!дд!а!са дсадааасса 120
дддааадссс с!аадс!сс! да!с!а!дс! дддЪссаадс дд!ас!асдд ад!ссса!са 180
аддИсадЪд дсадЪддаЪс Ъдддасада! !!сас!с!са сса!садсад !с!дсаасс! 240
даада!!!!д саас!!ас!а !!д!саасаа саЪааЪдаа! асссд!асас д!!сддсдда 300
дддассаадд !ддада!саа асддас!д!д дс!дсасса! с!д!с!1са1 с!!сссдсса 360
!с!да!дадс ад!!дааа!с !ддаас!дсс !с!д!!д!д! дсс!дс!даа !аас!!с!а! 420
сссадададд ссааад!аса д!ддаадд!д да!аасдссс !ссаа!сддд !аас!сссад 480
дададЪдЪса сададсадда садсааддас адсассЪаса дсс!садсад сассс!дасд 540
с!дадсааад садасЪасда дааасасааа д!с!асдсс! дсдаадЪсас сса!садддс 600
с!дадс!сдс ссд!сасааа дадс!!саас аддддадад! дс 642
<210> 164 <211> 440 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 164
С1п Уа1 С1п Ьеи Х/а1 С1п Зег С1у А1а С1и Х7а1 Ьуз Ьуз Рго С1у Зег 15 10 15
Зег Х7а1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег Е1у Туг Агд РЪе ТЪг Зег РЪе 20 25 30
Ьеи 11е С1и Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у С1п С1у Ьеи СЬи Тгр Ме! 35 40 45
С1у ТЪг Зег Азп Рго Агд ТЪг 61у Агд ТЪг Ьуз Туг Ьуз ТЪг Ьуз РЪе 50 55 60
Агд СЬу Агд Уа1 ТЪг 11е ТЪг А1а Азр Ьуз Зег ТЪг Зег ТЪг А1а Туг 65 70 75 80
Ме! С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95
- 133 020472
- 134 020472
ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг Рго 355 360 365
Зег Азр 11е А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег Азп С1у С1п Рго С1и Азп Азп 370 375 380
Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Ьа1 Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи
385 390 395 400
Туг Зег Агд Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр СЬп С1и С1у Азп \7а1
405 410 415
РЬе Зег Суз Зег \7а1 МеЬ Низ С1и А1а Ьеи НЬз Азп НЬз Туг ТЬг С1п 420 425 430
Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи С1у 435 440 <210> 165 <211> 1320 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 165
саддЬдсадс ЬддЬдсадЬс ЬддддсЬдад дЬдаадаадс сЬдддЬссЬс адЬдааддЬЬ 60
ЬссЬдсаадд саЬсЬддсЬа ссдсЬЬсасЬ ЬсдЬЬсЬЬда ЬададЬдддЬ дсдасаддсс 120
ссЬддасаад ддсЬЬдадЬд даЬдддаасд адЬааЬссЬа ддасЬддЬад дасааадЬаЬ 180
аааассаадЬ Ьсаддддсад адЬсассаЬЬ ассдсддаса ааЬссасдад сасадссЬас 240
аЬддадсЬда дсадссЬдад аЬсЬдаддас асддссдЬдЬ аЬЬасЬдЬдс дсдсдадЬЬЬ 300
ЬЬЬдасЬасЬ ддддссаадд аассасддЬс ассдЬсЬссЬ садссЬссас саадддссса 360
ЬсддЬсЬЬсс сдсЬадсдсс сЬдсЬссадд адсассЬссд ададсасадс сдсссЬдддс 420
ЬдссЬддЬса аддасЬасЬЬ ссссдаассд дЬдасддЬдЬ сдЬддаасЬс аддсдсссЬд 480
ассадсддсд ЬдсасассЬЬ сссддсЬдЬс сЬасадЬссЬ саддасЬсЬа сЬсссЬсадс 540
адсдЬддЬда ссдЬдсссЬс садсадсЬЬд ддсасдаада ссЬасассЬд саасдЬадаЬ 600
сасаадссса дсаасассаа ддЬддасаад ададЬЕдадЬ ссаааЬаЬдд ЬсссссаЬдс 660
ссасссЬдсс садсассЬда ддссдссддд ддассаЬсад ЬсЬЬссЬдЬЬ ссссссаааа 720
сссааддаса сЬсЬсаЬдаЬ сЬсссддасс ссЬдаддЬса сдЬдсдЬддЬ ддЬддасдЬд 780
адссаддаад ассссдаддЬ ссадЬЬсаас ЬддЬасдЬдд аЬддсдЬдда ддЬдсаЬааЬ 840
дссаадасаа адссдсддда ддадсадЬЬс аасадсасдЬ ассдЬдЬддЬ садсдЬссЬс 900
- 135 020472
ассдГссГдс ассаддасГд дсГдаасддс ааддадГаса адГдсааддГ сГссаасааа 960
ддссГсссдГ ссГссаГсда даааассаГс Гссааадсса аадддсадсс ссдададсса 1020
саддГдГаса сссЬдссссс аГсссаддад дадаГдасса адаассаддГ садссГдасс 1080
ГдссГддГса ааддсГГсГа ссссадсдас аГсдссдГдд адЬдддааад сааГдддсад 1140
ссддадааса асГасаадас сасдссГссс дГдсГддасГ ссдасддсГс сГГсГГссГс 1200
Гасадсаддс ГаассдГдда саададсадд Гддсаддадд ддааГдГсГГ сГсаГдсГсс 1260
дГдаГдсаГд аддсГсГдса саассасГас асасадаада дссГсГсссГ дГсГсГдддГ 1320
<210> 166 <211> 214 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 166
Азр 11е С1п МеГ ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег \7а1 С1у 15 10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Зег Ьуз Зег 11е Зег Ьуз Туг 20 25 30
ТЬг А1а Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не 35 40 45
Туг А1а С1у Зег Ьуз Агд Туг Туг С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у 50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи С1п Рго 65 70 75 80
С1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз С1п Θΐη НЬз Азп С1и Туг Рго Туг 85 90 95
ТЬг РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и Не Ьуз Агд ТЬг Уа1 А1а А1а 100 105 110
Рго Зег \/а1 РЬе Не РЬе Рго Рго Зег Азр С1и С1п Ьеи Ьуз Зег С1у 115 120 125
ТЬг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд С1и А1а 130 135 140
Ьуз Уа1 С1п Тгр Ьуз Уа! Азр Азп А1а Ьеи С1п Зег С1у Азп Зег С1п
136 020472
145 150 155 160
С1и Зег Уа1 ТНг С1и 61п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег 165 170 175
Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг С1и Ьуз НЬз Ьуз Уа1 Туг 180 185 190
А1а Суз С1и Уа1 ТЬг Нхз С1п С1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег 195 200 205
РЬе Азп Агд С1у 61и Суз 210 <210> 167 <211> 642 <212> ДНК <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 167
дасаЬссада ЬдасссадЬс ЬссаЬссЬсс сЬдЬсЬдсаЬ сЬдЬаддада сададЬсасс 60
аЬсасЬЬдса дддсдадЬаа дадсаЬЬадс аааЬаЬасад ссЬддЬаЬса дсадааасса 120
дддааадссс сЬаадсЬссЬ даЬсЬаЬдсЬ дддЬссаадс ддЬасЬасдд адЬсссаЬса 180
аддЬЬсадЬд дсадЬддаЬс ЬдддасадаЬ ЬЬсасЬсЬса ссаЬсадсад ЬсЬдсаассЬ 240
даадаЬЬ'ЬЬд саасЬЬасЬа НдЬсаасаа саЬааЬдааЬ асссдЬасас дЬЬсддсдда 300
дддассаадд ЬддадаЬсаа асддасЬдЬд дсЬдсассаЬ сЬдЬсЬЬсаЬ сЬЬсссдсса 360
ЬсЬдаЬдадс адЬЬдаааЬс ЬддаасЬдсс ЬсЬдЬЬдЬдЬ дссЬдсЬдаа ЬаасЬЬсЬаЬ 420
сссадададд ссааадЬаса дЬддааддЬд даЬаасдссс ЬссааЬсддд ЬаасЬсссад 480
дададЬдЬса сададсадда садсааддас адсассЬаса дссЬсадсад сасссЬдасд 540
сЬдадсааад садасЬасда дааасасааа дЬсЬасдссЬ дсдаадЬсас ссаЬсадддс 600
сЬдадсЬсдс ссдЬсасааа дадсЬЬсаас аддддададЬ дс 642
<210> 168 <211> 14 <212> Белок <213> Ното зархепз <400> 168
Тгр РЬе С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Зег Ьеи 11е 15 10 <210> 169
- 137 020472
<211> 10
<212> Белок
<213> Ното зартепз
<400> 169
РЬе С1у С1п С1у ТЬг Ьуз Ьеи С1и 11е Ьуз
1 5 10
<210> 170 <211> 11 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <220>
<221> М13С_ГЕАТиКЕ <222> (10) .. (10) <223> Хаа представляет собой Ьеи или ТЬг <400> 170
Агд А1а Зег Ьуз Зег 11е Зег Ьуз Туг Хаа А1а 15 10 <210> 171 <211> 7 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <220>
<221> М15С_ЕЕАТиКЕ <222> (5)..(5) <223> Хаа представляет собой Ьеи или Агд <220>
<221> М13С_ЕЕАТиКЕ <222> (7) .. (7) <223> Хаа представляет собой Зег, Туг или Тгр <400> 171
А1а С1у Зег Ьуз Хаа Ηίδ Хаа
1 5
<210> 172
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственно созданная
<220>
<223> Синтезированная
- 138 020472 <220>
<221> М15С_ЕЕАТиКЕ <222> (1)..(1) <223> Хаа представляет собой С1п или РЬе <400> 172
Хаа 61п Шз Азп С1и Туг Рго Туг ТЬг 1 5 <210> 173 <211> 17 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <220>
<221> М13С_ЕЕАТиКЕ <222> (2)..(2) <223> Хаа представляет собой Зег или 11е <220>
<221> М13С_ЕЕАТиКЕ <222> (8)..(8) <223> Хаа представляет собой Агд или С1у <220>
<221> М13С_ЕЕАТиКЕ <222> (12)..(12) <223> Хаа представляет собой Ьуз или Азп <220>
<221> М13С_ЕЕАТиКЕ <222> (13)..(13) <223> Хаа представляет собой Зег или Е1и <400> 173
ТЬг Хаа Азп Рго Агд ТЬг С1у Хаа ТЬг Ьуз Туг Хаа Хаа Ьуз РЬе Агд 15 10 15
С1у <210> 174 <211> 7 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <220>
<221> М15С_ЕЕАТиКЕ <222> (5)..(5)
- 139 020472 <223> Хаа представляет собой Ьеи или Агд <220>
<221> М15С_ГЕАТиКЕ <222> (6)..(6) <223> Хаа представляет собой Нтз, Агд или Туг <220>
<221> М13С_ГЕАТиКЕ <222> (7)..(7) <223> Хаа представляет собой Зег, Тгр или Туг <400> 174
А1а С1у Зег Ьуз Хаа Хаа Хаа
5 <210> 175 <211> 10 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <220>
<221> М13С_ЕЕАТиНЕ <222> (3)..(3) <223> Хаа представляет собой А1а или Агд <400> 175
С1у Туг Хаа РНе ТНг Зег РНе Ьеи 11е С1и
1 5 10
<210> 176
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственно созданная
<220>
<223> Синтезированная
<220> <221> М15С ΕΕΑΤϋΚΕ
<222> (8) . . (8)
<223> Хаа представляет собой С1у ИЛИ Агд
<220> <221> М13С ΕΕΑΤϋΚΕ
<222> (9) . (9)
<223> Хаа представляет собой ТЬг или Агд
<220> <221> М13С ΕΕΑΤϋΚΕ
<222> (13) -.(13)
<223> Хаа представляет собой С1и, ТЬг • или Зег
<400> 176
140 020472
ТЬг Зег Азп Рго Агд ТЬг С1у Хаа Хаа Ьуз Туг Ьуз Хаа Ьуз РЬе Агд 15 10 15
С1у <210> 177 <211> 7 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 177
А1а 61у Зег Ьуз Агд Ηίδ Туг 1 5 <210> 178 <211> 114 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 178
С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег С1у А1а С1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у Зег 15 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг А1а РЬе ТЬг Зег РЬе 20 25 30
Ьеи 11е С1и Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у С1п С1у Ьеи С1и Тгр МеЕ 35 40 45
С1у ТЬг Зег Азп Рго Агд ТЬг С1у С1у ТЬг Ьуз Туг Ьуз Зег Ьуз РЬе 50 55 60
Агд С1у Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг А1а Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг 65 70 75 80
МеЕ С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95
А1а Агд С1и РЬе РЬе Азр Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 100 105 110
Зег Зег
- 141 020472 <210> 179 <211> 440 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 179
Εΐη Уа1 С1п Ьеи А/а1 С1п Зег Е1у А1а Е1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у Зег 15 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег Е1у Туг А1а РЪе ТЪг Зег РЪе 20 25 30
Ьеи 11е Е1и Тгр Уа1 Агд Е1п А1а Рго Е1у Е1п Е1у Ьеи С1и Тгр МеЬ 35 40 45
С1у ТЪг Зег Азп Рго Агд ТЪг С1у Е1у ТЪг Ьуз Туг Ьуз Зег Ьуз РЪе 50 55 60
Агд Е1у Агд Уа1 ТЪг 11е ТЪг А1а Азр Ьуз Зег ТЪг Зег ТЪг А1а Туг 65 70 75 80
МеЬ С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95
А1а Агд Е1и РЪе РЪе Азр Туг Тгр Е1у Е1п С1у ТЪг ТЪг Уа1 ТЪг Уа1 100 105 110
Зег Зег А1а Зег ТЪг Ьуз С1у Рго Зег Уа1 РЪе Рго Ьеи А1а Рго Суз 115 120 125
Зег Агд Зег ТЪг Зег Е1и Зег ТЪг А1а А1а Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз 130 135 140
Азр Туг РЪе Рго 61и Рго Уа1 ТЪг Уа1 Зег Тгр Азп Зег Е1у А1а Ьеи 145 150 155 160
ТЪг Зег Е1у Уа1 Н1з ТЪг РЪе Рго А1а Уа1 Ьеи С1п Зег Зег Е1у Ьеи 165 170 175
Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЪг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи Е1у ТЪг 180 185 190
Ьуз ТЪг Туг ТЪг Суз 195
Азп
Уа1 Азр ΗΪ5 Ьуз Рго Зег Азп ТЪг Ьуз \7а1 200 205
- 142 020472
Азр Ьуз Агд Уа1 С1и Зег Ьуз Туг С1у Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго 210 215 220
А1а Рго С1и А1а А1а С1у С1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз 225 230 235 240
Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Мер 11е Зег Агд ТЬг Рго С1и А7а1 ТЬг Суз 17а1 245 250 255
Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег С1п С1и Азр Рго С1и А/а1 С1п РЬе Азп Тгр Туг 260 265 270
Уа1 Азр С1у А/а1 С1и Уа1 Низ Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и С1и 275 280 285
С1п РЬе Азп Зег ТЬг Туг Агд \7а1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг \7а1 Ьеи Нхз 290 295 300
С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз С1и Туг Ьуз Суз Ьуз А7а1 Зег Азп Ьуз 305 310 315 320
С1у Ьеи Рго Зег Зег 11е С1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз С1у С1п 325 330 335
Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег С1п С1и С1и МеР 340 345 350
ТЬг Ьуз Азп 01п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг Рго 355 360 365
Зег Азр 11е А1а \7а1 С1и Тгр С1и Зег Азп С1у С1п Рго С1и Азп Азп 370 375 380
Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи 385 390 395 400
Туг Зег Агд Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1и С1у Азп Уа1 405 410 415
РЬе Зег Суз Зег Уа1 Мер Нхз С1и А1а Ьеи Нхз Азп Нхз Туг ТЬг С1п 420 425 430
Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи С1у 435 440 <210> 180 <211> 107
- 143 020472 <212> Белок <213> Искусственно созданная <220>
<223> Синтезированная <400> 180
Азр 1 Не С1п Мер ТЬг 5 С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи 10 Зег АЬа Зег Уа1 15 С1у
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд АЬа Зег Ьуз Зег Не Зег Ьуз Туг
20 25 30
ТЬг А1а Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не
35 40 45
Туг А1а С1у Зег Ьуз Агд НЬз Туг С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи 61п Рго
65 70 75 80
С1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз С1п С1п НЬз Азп С1и Туг Рго Туг
85 90 95
ТЬг РЬе Е1у С1у С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и 11е Ьуз
100 105
<210> 181
<211> 214
<212> Белок
<213> : Искусственно созданная
<220>
<223> Синтезированная
<400> 181
Азр 11е С1п МеР ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег АЬа Зег Уа1 С1у
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд АЬа Зег Ьуз Зег 11е Зег Ьуз Туг
20 25 30
ТЬг А1а Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи Т1е
35 40 45
Туг А1а С1у Зег Ьуз Агд НЬз Туг С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи С1п Рго
144 020472
70 75 80
СЬи Азр РЬе АЬа ТЬг 85 Туг Туг Суз СЬп СЬп 90 НЬз Азп СЬи Туг Рго 95 Туг
ТЬг РЬе С1у С1у СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи 1Ье Ьуз Агд ТЬг УаЬ АЬа АЬа
100 105 110
Рго Зег УаЬ РЬе Ые РЬе Рго Рго Зег Азр СЬи СЬп Ьеи Ьуз Зег СЬу
115 120 125
ТЬг А1а Зег УаЬ УаЬ Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд СЬи АЬа
130 135 140
Ьуз УаЬ С1п Тгр Ьуз УаЬ Азр Азп АЬа Ьеи СЬп Зег СЬу Азп Зег СЬп
145 150 155 160
СЬи Зег УаЬ ТЬг СЬи СЬп Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег
165 170 175
Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз АЬа Азр Туг СЬи Ьуз НЬз Ьуз УаЬ Туг
180 185 190
А1а Суз СЬи УаЬ ТЬг Ηίδ СЬп С1у Ьеи Зег Зег Рго УаЬ ТЬг Ьуз Зег
195 200 205
РЬе Азп Агд С1у СЬи Суз
210
<210> 182
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственно созданная
<220>
<223> Синтезированная <220>
<221> М15С_ГЕАТиКЕ <222> (3) .. (3) <223> Хаа представляет собой А1а или Агд <400> 182
С1у Туг Хаа РЬе ТЬг Зег РЬе Ьеи 11е С1и

Claims (15)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые содержат участки БСИКЛ, БСИКЛ, БСИКЗ, НСИК1, НСИК2 и НСИК3, содержащие аминокислотные последовательности:
    a) 8ЕР ГО N0:37, 129, 22, 107, 118 и 120 соответственно;
    b) 8ЕР ГО N0:37, 174, 22, 175, 176 и 120 соответственно;
    c) 8ЕР ГО N0:37, 125, 22, 23, 110 и 19 соответственно;
    ά) 8ЕР ГО N0:37, 177, 22, 23, 112 и 19 соответственно или е) 8ЕР ГО N0:37, 122, 22, 23, 110 и 19 соответственно, и связывают ферропортин 1 человека, который состоит из аминокислотной последовательности 5Н(9 ГО N0:1.
  2. 2. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, содержащие вариабельный участок легкой цепи и вариабельный участок тяжелой цепи: 5Н(9 ГО N0:136 и 8ЕР ГО N0:134 соответственно.
  3. 3. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1, 2, содержащие легкую цепь и тяжелую цепь 8ЕР ГО N0:154 и 8ЕР ГО N0:152 соответственно.
  4. 4. Моноклональное антитело по любому из пп.1-3, содержащее два полипептида легкой цепи и два полипептида тяжелой цепи, где каждый полипептид легкой цепи содержит аминокислотную последова- 145 020472 тельность 8ЕО ΙΌ N0:154 и каждый полипептид тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность 8ЕО ГО N0:152.
  5. 5. Моноклональное антитело по любому из пп.1-3, содержащее два полипептида легкой цепи и два полипептида тяжелой цепи, где каждый полипептид легкой цепи содержит аминокислотную последовательность 8ЕО ГО N0:181 и каждый полипептид тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность 8ЕО ГО N0:179.
  6. 6. Моноклональное антитело по любому из пп.1-3, содержащее два полипептида легкой цепи и два полипептида тяжелой цепи, где каждый полипептид легкой цепи содержит аминокислотную последовательность 8ЕО ГО N0:158 и каждый полипептид тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность 8ЕО ГО N0:156.
  7. 7. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-6, связывающие ферропортин 1 человека с Ко, значение которой составляет менее приблизительно 10 нМ, при этом указанное значение определено с помощью анализа поверхностного плазмонного резонанса при 25°С.
  8. 8. Моноклональное антитело или 1щ антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-7, связывающиеся с одним или более пептидами, выбранными из:
    a) 4038ΡΡΕΏΙΚ8ΚΡΙ9ΟΕ8ΙΤΡΤΚ422 (8Е9 ГО N0:12);
    b) 406ΕΠΙΚ8ΚΡΙΩΘΕ8ΙΤ419 (8Е9 ГО N0:13);
    c) 409Κ8ΚΡI^ΟΕ8IΤΡΤΚ422 (8Е9 ГО N0:14); ά) ^РРЕШКЖР^О^ (8Е9 ГО N0:15); е) 409Κ8ΚΡI^ΟΕ8IΤ419 (8Е9 ГО N0:16) и
    ί) 409Κ8ΚΡΙΩΟ415 (8Е9 ГО N0:95).
  9. 9. Применение моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-8 для лечения или профилактики развития анемии, злокачественной анемии или хронической анемии у индивида.
  10. 10. Применение моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-8 для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики развития анемии, злокачественной анемии или хронической анемии у индивида.
  11. 11. Способ повышения уровней железа в сыворотке, числа ретикулоцитов, числа красных кровяных телец, гемоглобина и/или гематокрита, включающий введение индивиду эффективного количества моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-8.
  12. 12. Способ лечения анемии или злокачественной анемии у индивида, включающий введение указанному индивиду эффективного количества моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-8.
  13. 13. Способ по любому из пп.11, 12, дополнительно включающий введение указанному индивиду средства, стимулирующего эритропоэз, или другого терапевтического средства, обычно используемого для повышения уровней железа в сыворотке, числа ретикулоцитов, числа красных кровяных телец, гемоглобина и/или гематокрита у индивида.
  14. 14. Фармацевтическая композиция, содержащая моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-8 и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.
  15. 15. Фармацевтическая композиция по п.14, дополнительно содержащая средство, стимулирующее эритропоэз, или другое терапевтическое средство, обычно используемое для повышения уровней железа в сыворотке, числа ретикулоцитов, числа красных кровяных телец, гемоглобина и/или гематокрита у индивида.
EA201170764A 2008-12-05 2009-12-01 Моноклональные антитела против ферропортина 1 и их применение EA020472B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US12007608P 2008-12-05 2008-12-05
US23981809P 2009-09-04 2009-09-04
PCT/US2009/066187 WO2010065496A1 (en) 2008-12-05 2009-12-01 Anti-ferroportin 1 monoclonal antibodies and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201170764A1 EA201170764A1 (ru) 2011-12-30
EA020472B1 true EA020472B1 (ru) 2014-11-28

Family

ID=41683589

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201170764A EA020472B1 (ru) 2008-12-05 2009-12-01 Моноклональные антитела против ферропортина 1 и их применение

Country Status (26)

Country Link
EP (1) EP2373335B1 (ru)
JP (1) JP5713917B2 (ru)
KR (1) KR101353117B1 (ru)
CN (1) CN102238962B (ru)
AR (1) AR074398A1 (ru)
AU (1) AU2009322587B2 (ru)
BR (1) BRPI0922288A2 (ru)
CA (1) CA2745618C (ru)
CY (1) CY1117355T1 (ru)
DK (1) DK2373335T3 (ru)
EA (1) EA020472B1 (ru)
ES (1) ES2566343T3 (ru)
HK (1) HK1158977A1 (ru)
HR (1) HRP20160302T1 (ru)
HU (1) HUE028585T2 (ru)
IL (1) IL212731A0 (ru)
MX (1) MX2011005939A (ru)
NZ (1) NZ592545A (ru)
PA (1) PA8849601A1 (ru)
PL (1) PL2373335T3 (ru)
SG (1) SG171960A1 (ru)
SI (1) SI2373335T1 (ru)
TW (1) TW201023891A (ru)
UA (1) UA104741C2 (ru)
WO (1) WO2010065496A1 (ru)
ZA (1) ZA201103941B (ru)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2014145633A (ru) * 2012-05-14 2016-07-10 Дженентек, Инк. Композиции и способы для диагностики и лечения опухолей
CN110806486B (zh) * 2019-11-23 2023-03-21 中南大学湘雅三医院 Mafg/as1/pcbp2/fpn1调控轴作为靶位点检测试剂的应用
CN113980987A (zh) * 2021-12-06 2022-01-28 上海市农业科学院 一种提高植物抗镍性能的PgIREG1S和AlATP-PRTS双基因组及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7166448B1 (en) * 1999-05-10 2007-01-23 Children's Medical Center Corproation Ferroportin1 nucleic acids and proteins
WO2009094551A1 (en) * 2008-01-25 2009-07-30 Amgen Inc. Ferroportin antibodies and methods of use

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1319221B1 (it) * 2000-10-17 2003-09-26 Antonello Pietrangelo Mutazioni nel gene della ferroportina 1 associata ad emocromatosiereditaria.

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7166448B1 (en) * 1999-05-10 2007-01-23 Children's Medical Center Corproation Ferroportin1 nucleic acids and proteins
WO2009094551A1 (en) * 2008-01-25 2009-07-30 Amgen Inc. Ferroportin antibodies and methods of use

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DUNN ET AL.: "Iron uptake and metabolism in the new millennium", TRENDS IN CELL BIOLOGY, ELSEVIER SCIENCE, LTD., XX, vol. 17, no. 2, 6 February 2007 (2007-02-06), pages 93-100, XP005876274, ISSN: 0962-8924, figure 1 *
NEMETH ELIZABETA ET AL.: "Regulation of iron metabolism by hepcidin", ANNUAL REVIEW OF NUTRITION 2006, vol. 26, 2006, pages 323-342, XP002570407, ISSN: 0199-9885 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN102238962B (zh) 2014-02-12
KR20110084996A (ko) 2011-07-26
DK2373335T3 (en) 2016-05-02
TW201023891A (en) 2010-07-01
EP2373335A1 (en) 2011-10-12
AU2009322587A1 (en) 2011-07-28
HRP20160302T1 (hr) 2016-04-22
CN102238962A (zh) 2011-11-09
ES2566343T3 (es) 2016-04-12
NZ592545A (en) 2012-12-21
EP2373335B1 (en) 2016-02-24
PL2373335T3 (pl) 2016-08-31
AU2009322587B2 (en) 2013-09-26
HUE028585T2 (en) 2016-12-28
MX2011005939A (es) 2011-06-27
KR101353117B1 (ko) 2014-02-17
CA2745618C (en) 2014-06-10
CY1117355T1 (el) 2017-04-26
BRPI0922288A2 (pt) 2018-08-28
CA2745618A1 (en) 2010-06-10
ZA201103941B (en) 2012-11-28
UA104741C2 (ru) 2014-03-11
SG171960A1 (en) 2011-07-28
EA201170764A1 (ru) 2011-12-30
SI2373335T1 (sl) 2016-04-29
HK1158977A1 (zh) 2012-07-27
JP5713917B2 (ja) 2015-05-07
JP2012510814A (ja) 2012-05-17
AR074398A1 (es) 2011-01-12
IL212731A0 (en) 2011-07-31
WO2010065496A1 (en) 2010-06-10
PA8849601A1 (es) 2010-07-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2023002706A (ja) 抗ｐｄｌ１抗体、活性化可能抗ｐｄｌ１抗体、およびその使用方法
JP2011520885A (ja) 抗ｃｘｃｒ４抗体
EA020398B1 (ru) Антитела к с-мет
JP2013090632A (ja) 肝細胞成長因子（ｈｇｆ）結合蛋白質
EA021584B1 (ru) Ингибитор рецептора фактора роста фибробластов-3 (fgfr-3) и его применение
US11597764B2 (en) Anti-L1-CAM antibodies and uses thereof
US20220073616A1 (en) Methods of administering anti-tim-3 antibodies
CN103958542A (zh) 经修饰的白蛋白结合结构域及其用于改善药代动力学的用途
US20240043517A1 (en) Anti-gdf15 antibody and a dosage regimen for the treatment of cancer
MX2010012616A (es) Anticuerpos monoclonales para factor de crecimiento de fibroblastos basico.
US11787857B2 (en) Compounds that modulate the interaction of VISTA and VSIG3 and methods of making and using
KR102453573B1 (ko) 항-pacap 항체
ES2911663T3 (es) Anticuerpos humanos anti-IFN-alfa
CN113474362A (zh) 对cd44特异性的抗体
CN113423736A (zh) 对muc18特异性的抗体
EA020472B1 (ru) Моноклональные антитела против ферропортина 1 и их применение
US20130315902A1 (en) Antitumor peptide derived from a complementarity determining region of a humanized monoclonal antibody to nap12b transporter
US20210061861A1 (en) D-peptidic compounds for vegf
ES2946343T3 (es) Anticuerpos anti-CD137 para combinación con anticuerpos anti-PD-L1
CN113423830A (zh) 对muc18特异性的抗体
JP2023553938A (ja) Ｓｆｒｐ２アンタゴニストを含む組成物及び方法
CN114634567A (zh) 一种免疫调节剂的开发及其应用
US20110086027A1 (en) Anti-cxcr4 antibodies
CN114945593A (zh) 抗IL-1β抗体
CN116848137A (zh) 抗gdf15抗体以及用于治疗癌症的给药方案

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AZ BY KG MD TJ TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM KZ RU