JP2023553938A - Ｓｆｒｐ２アンタゴニストを含む組成物及び方法 - Google Patents

Abstract

本開示は、ＳＦＲＰ２に特異的に結合するヒト化抗体及びその抗原結合断片、ならびにそのようなヒト化抗体またはその抗原結合断片を含む組成物を提供する。いくつかの態様では、ヒト化抗体または抗原結合断片を使用して、がんなどの、ＳＦＲＰ２の増加に関連する疾患または状態を治療することができる。いくつかの態様では、抗体または抗原結合断片を使用して、骨肉腫を治療することができる。【選択図】なし

Description

１．関連出願の相互参照
この出願は、２０２０年１２月１１日に出願された米国仮出願第６３／１２４，３４５号の優先権の利益を主張し、これはその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

２．電子的に提出された配列表の参照
本出願とともに出願されたＡＳＣＩＩテキストファイル内の電子的に送信された配列表の内容（名前：４２１＿４９７＿ＰＣＴ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ；サイズ：２７キロバイト、及び作製日２０２１年１２月８日）は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

３．技術分野
本開示は、概して、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体及びその抗原結合断片、そのような抗体及びその抗原結合断片を含む組成物、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体及びその抗原結合断片の作製方法及び使用方法、ならびにがんなどの疾患を治療する方法に関し、上記方法は、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体及びその抗原結合断片を、任意選択で、併用療法の一部として、それを必要とする対象に投与することを含む。

４．背景技術
分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質－２（ＳＦＲＰ２）は、乳癌（Ｌｅｅ，Ｊ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ Ｔｒｅａｔ ８４（２）：１３９－４９（２００４）、Ｂｈａｔｉ Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １７２（５）：１３８１－９０（２００８）、Ｆｏｎｔｅｎｏｔ，Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ １２（５）：６８５－９５（２０１３）、Ｌｅｅ，Ｊ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ Ｔｒｅａｔ．１００（１）：４９－５８（２００６））、血管肉腫（Ｂｈａｔｉ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ．１７２（５）：１３８１－９０（２００８）、Ｆｏｎｔｅｎｏｔ，Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ １２（５）：６８５－９５（２０１３））、骨肉腫（Ｔｅｃｈａｖｉｃｈｉｔ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ １６（１）：８６９（２０１６））、横紋筋肉腫（Ｓｉｎｇｈ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ １７７（４）：２０５５－６６（２０１０））、胞巣状軟部肉腫（Ｔａｎａｋａ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ７７（４）：８９７－９０７（２０１７））、悪性神経膠腫（Ｒｏｔｈ，Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ１９（３７）：４２１０－２０（２０００））、多発性骨髄腫（Ｏｓｈｉｍａ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０６（９）：３１６０－５（２００５））、腎細胞癌（Ｙａｍａｍｕｒａ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ９（６）：１６８０－７（２０１０））、前立腺癌（Ｓｕｎ，Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ３５（３３）：４３２１－３４（２０１６））、肺癌（Ｘｉａｏ，Ｘ．，ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｌ Ｒｅｐ ３４（５）：２２５９－６６（２０１５））、及び黒色腫（Ｋａｕｒ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５３２（７５９８）：２５０－４（２０１６））などの多くのがんにおける腫瘍増殖を促進することが示されている。

骨肉腫（ＯＳ）は、小児集団における一般的な原発性悪性骨腫瘍である。現在の標準治療は、化学療法及び腫瘍の外科的切除からなる。しかしながら、化学療法を用いる場合であっても、切除可能な疾患を有する患者の３分の２のみが治癒する。長期生存は、転移性または再発性腫瘍を有する患者の＜３０％にのみ生じる（Ｎ．Ｃ．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｓ．Ｄａｔａｂａｓｅ，Ｅｄ．（２０１７），ｖｏｌ．２０１７）。肺は最も一般的な転移部位であり、転移の約８０％はこの解剖学的位置で発生する（Ｌｉｎｄｓｅｙ，Ｂ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ Ｔｈｅｒ４：２５－４３（２０１７））。

ＯＳ患者試料中のＳＦＲＰ２発現レベルの増加は、生存率の低下と相関し、ＳＦＲＰ２過剰発現は、正常な骨芽細胞分化を抑制し、ＯＳ特徴を促進し、血管新生を容易にする（Ｋｉｍ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ．Ｓ．Ａ．１１５：Ｅ１１１２８－Ｅ１１１３７（２０１８））。機能的研究は、局在化ヒト及びマウスＯＳ細胞内でのＳＦＲＰ２の安定した過剰発現が、インビトロでの細胞移動及び侵襲能力を有意に増加させ、インビボでの転移の可能性を増大させたことを明らかにした（Ｔｅｃｈａｖｉｃｈｉｔ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ １６：８６９（２０１６））。さらに、転移性ＯＳ細胞内でＳＦＲＰ２をノックダウンすることは、インビトロでの細胞移動及び侵入能力の減少を示し、したがって、ＳＦＲＰ２によって実行される決定的な生物学的表現型を裏付けた（Ｔｅｃｈａｖｉｃｈｉｔ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ１６：８６９（２０１６））。したがって、ＳＦＲＰ２は、骨肉腫の潜在的な治療標的として浮上しているが、新しい活性剤の欠如は、３０年以上にわたって生存期間の増加の進歩を妨げており、したがって、新規の治療アプローチが深刻に必要とされている（Ｗｅｄｅｋｉｎｄ，Ｍ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｅｄｉａｔｒ Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ６５：ｅ２７２２７（２０１８））。

さらに、骨肉腫におけるＰＤ－Ｌ１の発現は、免疫細胞浸潤と相関し、貧弱な５年無事象生存（ＥＦＳ）と有意に関連することが見出されている（Ｋｏｉｒａｌａ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，ＳｃｉＲｅｐ６：３００９３（２０１６））。これらの知見にもかかわらず、ペムブロリズマブ（ＳＡＲＣ０２８）の第ＩＩ相試験では、骨肉腫の治療における有効性が欠如しており、そこでは、転移性骨肉腫患者のわずか５％のみが客観的奏効を有した（Ｔａｗｂｉ，Ｈ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌ１８：１４９３－１５０１（２０１７））。これらの知見は、骨肉腫の新しい治療法の緊急の必要性をさらに示している。

５．発明の概要
本開示は、概して、分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片に関し、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１、２、３、または４のアミノ酸配列を含むポリペプチドと少なくとも９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチドを含み、さらに、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５、６、７、８、または９のアミノ酸配列を含むポリペプチドに対して少なくとも９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む。

さらに、本開示は、概して、分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片に関し、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１及び配列番号６のアミノ酸配列（Ａｂ１）をそれぞれ含む可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド及び可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む。

さらに、本開示は、概して、分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片に関し、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１及び配列番号７のアミノ酸配列（Ａｂ２）をそれぞれ含む可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド及び可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む。

さらに、本開示は、概して、分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片に関し、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１及び配列番号８のアミノ酸配列（Ａｂ３）をそれぞれ含む可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド及び可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む。

さらに、本開示は、概して、分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原発現断片に関し、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１及び配列番号９のアミノ酸配列（Ａｂ４）をそれぞれ含む可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド及び可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む。

さらに、本開示は、概して、分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片に関し、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２及び配列番号６のアミノ酸配列（Ａｂ５）をそれぞれ含む可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド及び可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む。

さらに、本開示は、概して、分泌性ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片に関し、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２及び配列番号７のアミノ酸配列（Ａｂ６）をそれぞれ含む可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド及び可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む。

さらに、本開示は、概して、分泌性ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片に関し、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２及び配列番号８のアミノ酸配列（Ａｂ７）をそれぞれ含む可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド及び可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む。

さらに、本開示は、概して、分泌性ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片に関し、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２及び配列番号９のアミノ酸配列（Ａｂ８）をそれぞれ含む可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド及び可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む。

いくつかの態様では、本明細書において、分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片が提供され、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む相補的決定領域（ＣＤＲ）Ｈ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ２、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ３、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ２、及び配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ３（Ａｂ８）を含む。

いくつかの態様では、本明細書において、分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片が提供され、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１５及び配列番号１６のアミノ酸配列（Ａｂ８）をそれぞれ含む、重鎖ポリペプチド及び軽鎖ポリペプチドを含む。

さらに、本開示は、概して、分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片に関し、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３及び配列番号６のアミノ酸配列（Ａｂ９）をそれぞれ含む、可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド及び可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む。

さらに、本開示は、概して、分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片に関し、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３及び配列番号７のアミノ酸配列（Ａｂ１０）をそれぞれ含む、可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド及び可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む。

さらに、本開示は、概して、分泌性ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片に関し、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４及び配列番号８のアミノ酸配列（Ａｂ１１）をそれぞれ含む、可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド及び可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む。

さらに、本開示は、概して、分泌性ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片に関し、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４及び配列番号９のアミノ酸配列（Ａｂ１２）をそれぞれ含む、可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド及び可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む。

さらに、本開示は、概して、分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片に関し、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３及び配列番号５のアミノ酸配列（Ａｂ１３）をそれぞれ含む、可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド及び可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む。

さらに、本開示は、概して、分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片に関し、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３及び配列番号９のアミノ酸配列（Ａｂ１４）をそれぞれ含む、可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド及び可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む。

さらに、本開示は、概して、分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片に関し、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１及び配列番号５のアミノ酸配列（Ａｂ１５）をそれぞれ含む、可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド及び可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む。

さらに、本開示は、概して、分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片に関し、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２及び配列番号５のアミノ酸配列（Ａｂ１６）をそれぞれ含む、可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド及び可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む。

さらに、本開示は、概して、分泌性ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片に関し、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４及び配列番号５のアミノ酸配列（Ａｂ１７）をそれぞれ含む、可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド及び可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む。

さらに、本開示は、概して、分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片に関し、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３及び配列番号８のアミノ酸配列（Ａｂ１８）をそれぞれ含む、可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド及び可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む。

さらに、本開示は、概して、分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片に関し、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４及び配列番号６のアミノ酸配列（Ａｂ１９）をそれぞれ含む、可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド及び可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む。

さらに、本開示は、概して、分泌性ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片に関し、上記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４及び配列番号７のアミノ酸配列（Ａｂ２０）をそれぞれ含む、可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド及び可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む。

さらに、本開示は、概して、分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片に関し、上記抗体またはその抗原結合断片は、ｉ．それぞれ、配列番号１及び配列番号６（Ａｂ１）、ｉｉ．それぞれ、配列番号１及び配列番号７（Ａｂ２）、ｉｉｉ．それぞれ、配列番号１及び配列番号８（Ａｂ３）、ｉｖ．それぞれ、配列番号１及び配列番号９（Ａｂ４）、ｖ．それぞれ、配列番号２及び配列番号６（Ａｂ５）、ｖｉ．それぞれ、配列番号２及び配列番号７（Ａｂ６）、ｖｉｉ．それぞれ、配列番号２及び配列番号８（Ａｂ７）、ｖｉｉｉ．それぞれ、配列番号２及び配列番号９（Ａｂ８）、ｉｘ．それぞれ、配列番号３及び配列番号６（Ａｂ９）、ｘ．それぞれ、配列番号３及び配列番号７（Ａｂ１０）、ｘｉ．それぞれ、配列番号４及び配列番号８（Ａｂ１１）、ｘｉｉ．それぞれ、配列番号４及び配列番号９（Ａｂ１２）、ｘｉｉｉ．それぞれ、配列番号３及び配列番号５（Ａｂ１３）、ｘｉｖ．それぞれ、配列番号３及び配列番号９（Ａｂ１４）、ｘｖ．それぞれ、配列番号１及び配列番号５（Ａｂ１５）、ｘｖｉ．それぞれ、配列番号２及び配列番号５（Ａｂ１６）、ｘｖｉｉ．それぞれ、配列番号４及び配列番号５（Ａｂ１７）、ｘｖｉｉｉ．それぞれ、配列番号３及び配列番号８（Ａｂ１８）、ｘｉｘ．それぞれ、配列番号４及び配列番号６（Ａｂ１９）、またはｘｘ．それぞれ、配列番号４及び配列番号７（Ａｂ２０）のアミノ酸配列を含むＶＨ鎖ポリペプチド及びＶＬ鎖ポリペプチドを含む。

いくつかの態様では、抗体または抗原結合断片は、重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を含む。いくつかの態様では、抗体または抗原結合断片は、モノクローナル抗体である。いくつかの態様では、本抗体は、完全長抗体である。いくつかの態様では、抗体または抗原結合断片は、抗原結合断片である。

いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０及び１１のＶＨ鎖ポリペプチド及びＶＬ鎖ポリペプチド（Ｍｏ．１）をそれぞれ含む抗体またはその抗原結合断片のＩＣ５０値に対して０．７以下、０．６以下、または０．５以下のＩＣ５０値を含み、これらのＩＣ５０値は、ＥＬＩＳＡアッセイによって測定される。

さらに、本開示は、概して、本明細書で論じられる抗体または抗原結合断片の、抗体またはその抗原結合断片の重鎖可変領域または重鎖をコードする核酸分子を含む単離されたポリヌクレオチドに関する。いくつかの態様では、核酸分子は、配列番号１、２、３、または４のＶＨをコードする。

さらに、本開示は、概して、本明細書で論じられる抗体または抗原結合断片の、抗体またはその抗原結合断片の軽鎖可変領域または軽鎖をコードする核酸分子を含む単離されたポリヌクレオチドに関する。いくつかの態様では、核酸分子は、配列番号５、６、７、８、または９のＶＬをコードする。

さらに、本開示は、概して、本明細書で論じられる抗体または抗原結合断片の、抗体またはその抗原結合断片の重鎖可変領域または重鎖、及び本明細書で論じられる抗体または抗原結合断片の、抗体またはその抗原結合断片の軽鎖可変領域または軽鎖をコードする核酸分子を含む単離されたポリヌクレオチドに関する。

さらに、本開示は、概して、本明細書で論じられるポリヌクレオチド、例えば、本明細書で論じられる抗体または抗原結合断片の、抗体またはその抗原結合断片の重鎖可変領域または重鎖をコードする核酸分子を含む単離されたポリヌクレオチド、例えば、本明細書で論じられる抗体または抗原結合断片の、抗体またはその抗原結合断片の軽鎖可変領域または軽鎖を含む単離されたベクターに関する。

さらに、本開示は、概して、（ａ）本明細書で論じられるポリヌクレオチド、（ｂ）本明細書で論じられるベクター、または（ｃ）本明細書で論じられる抗体もしくは抗原結合断片の、抗体もしくはその抗原結合断片の重鎖可変領域もしくは重鎖をコードする核酸分子を含む第１のベクター、及び本明細書で論じられる抗体もしくは抗原結合断片の、抗体もしくはその抗原結合断片の軽鎖可変領域もしくはその軽鎖をコードする核酸分子を含む第２のベクターを含む宿主細胞に関する。いくつかの態様では、宿主細胞は、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、酵母、ＣＨＯ、ＹＢ／２０、ＮＳ０、ＰＥＲ－Ｃ６、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＮＩＨ－３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＢＨＫ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２／０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＢＭＴ１０細胞、組織培養中の植物細胞、昆虫細胞、及びヒト細胞からなる群から選択される。いくつかの態様では、宿主細胞は、ＣＨＯ細胞である。

さらに、本開示は、概して、ＳＦＲＰ２に結合する抗体またはその抗原結合断片を産生する方法であって、核酸分子が発現され、抗体またはその抗原結合断片が産生されるように、本明細書で論じられる宿主細胞を培養することを含み、任意選択で、この方法は、抗体またはその抗原結合断片を培養物から単離することをさらに含む、上記方法に関する。いくつかの態様では、単離された抗体またはその抗原結合断片は、沈殿物を実質的に含まない。いくつかの態様では、単離された抗体またはその抗原結合断片は、ヒト化抗体を含む。

さらに、本開示は、概して、分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に特異的に結合し、本明細書に記載されるポリヌクレオチドによってコードされるか、または本明細書に記載される方法によって産生される、単離された抗体またはその抗原結合断片に関する。

さらに、本開示は、概して、治療有効量の本明細書で論じられる抗体またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される賦形剤とを含む、薬学的組成物に関する。

さらに、本開示は、概して、患者のがんを治療する方法であって、患者に、本明細書で論じられる薬学的組成物を投与することを含む、上記方法に関する。いくつかの態様では、がんは、乳癌、悪性神経膠腫、多発性骨髄腫、腎細胞癌、腎癌、前立腺癌、肺癌、黒色腫、非小細胞肺癌、膵臓癌、結腸直腸癌、膀胱癌、肝細胞癌、消化管癌、ならびに血管肉腫、骨肉腫、横紋筋肉腫、及び胞巣状軟部肉腫を含むがこれらに限定されない肉腫である。いくつかの態様では、がんは、骨肉腫である。いくつかの態様では、患者のがんを治療する方法は、阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストを投与することをさらに含み、任意選択で、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ－１である。いくつかの態様では、ＰＤ－１のアンタゴニストは、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片であり、任意選択で、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ＭＥＤＩ－０６８０（ＡＭＰ－５１４）、カムレリズマブ（ＳＨＲ－１２１０）、チスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、及びスパルタリズマブ（ＮＰＶＰＤＲ００１、ＮＶＳ２４０１１８、ＰＤＲ００１）からなる群から選択される。

６．図面の簡単な説明
実施例１に従う様々な異なる精製ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体のクーマシーブルー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルの画像を提示する。ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルのレーンは、以下のようにロードした。１＝ＭＷマーカー、２＝Ａｂ１、３＝Ａｂ２、４＝Ａｂ３、５＝Ａｂ４、６＝Ａｂ５、７＝Ａｂ６、８＝Ａｂ７、９＝Ａｂ８、１０＝Ａｂ９、１１＝ＭＷマーカー、１２＝ＭＷマーカー、１３＝Ａｂ１０、１４＝Ａｂ１１、１５＝Ａｂ１２、１６＝ＭＷマーカー、１７＝Ａｂ１３、及びレーン１８＝Ａｂ１４。

実施例１に従う様々な異なる精製キメラ抗体のクーマシーブルー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルの画像を提示する。ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルのレーンは、以下のようにロードした。１＝ＭＷマーカー、２＝ＨＥＫ細胞から精製したＣｈｉ．１、３＝ＨＥＫ細胞から精製したＣｈｉ．２、４＝ＭＷマーカー、５＝ＮＳ０細胞から精製したＣｈｉ．１、６＝ＮＳ０細胞から精製したＣｈｉ．２。

実施例２に従う様々な異なるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体の相対ＩＣ_５０値の表を提示する。各抗体の相対ＩＣ_５０値は、試験抗体のＩＣ５０値を、同じＥＬＩＳＡプレート上でアッセイした抗体Ｍｏ．１のＩＣ_５０値で除算することによって計算した。

実施例２に従って採取された内皮管形成アッセイの画像を提示する。図３では、１＝対照、２＝Ａｂ８を用いる処理、及び３＝Ａｂ１１を用いる処理。

実施例３に従って実施される細胞ベースのアッセイのグラフ表示を提示する。Ａは、骨肉腫モデル細胞株（ＲＦ５７７細胞株）をＩｇＧ１（対照）またはＡｂ８のいずれかで処理したアッセイのグラフ表示を提示する。Ｂは、Ｔ細胞をＡｂ８で処理したＴ細胞アポトーシスアッセイのグラフ表示を提示し、さらに陽性対照及び陰性対照を提示する。

実施例４に従って、様々な異なる処置を投与された様々な異なるマウスのＳＦＲＰ２血清レベルのグラフ表示を提示する。腫瘍のないマウスのＳＦＲＰ２レベル、及びＩｇＧ１、ＰＤ－１ ｍＡｂ単独、Ａｂ８単独、またはＡｂ８とＰＤ－１ ｍＡｂとの組み合わせで処置された転移性骨肉腫を有するマウスのＳＦＲＰ２レベルを提示する。Ｘ軸は投与された処置を表し、Ｙ軸はＳＦＲＰ２血清濃度（ｎｇ／ｍｌ）を表す。

実施例５に従って、ＣＤ３８レベルを測定したウエスタンブロットの画像を提示する。転移性骨肉腫を有するマウスの脾細胞を、ＩｇＧ１またはＡｂ８のいずれかで処理し、その後、実施例５に従ってウエスタンブロット分析を実施した。アクチンを正規化のために使用した。

実施例６に従う、転移性骨肉腫増殖の処置に関連するデータのグラフ表示を提示する。Ａは、実施例６に従って実施されたインビボでの転移性ＲＦ５７７骨肉腫実験のグラフ表示を提示する。Ｘ軸は使用された処置を表し、Ｙ軸は観察された肺表面転移の数を表す。Ｂは、実施例６に従って実施された毒性試験のグラフ表示を提示する。Ｘ軸はマウスの処置週を表し、Ｙ軸はマウスの体重を表す。黒丸はＩｇＧ１を表し、黒四角はＰＤ１ ｍＡｂを表し、三角形はＡｂ８を表し、逆三角形はＡｂ８とＰＤ１ ｍＡｂとの組み合わせ処置を表す。

実施例６に従う転移性骨肉腫の増殖の処置に関連するデータのグラフ表示を提示する。Ｘ軸は使用した処置を表し、Ｙ軸は観察された腫瘍によって占められる肺の面積の割合を表す。腫瘍によって占められる肺の割合は、腫瘍面積を正常肺面積で除算し、１００倍して計算した。処置は対照に対して正規化された。

実施例２に従う内皮管形成アッセイの画像（図９Ａ）、及び内皮管形成アッセイの結果のグラフ表示（図９Ｂ）を提示する。図９Ａにおいて、１＝対照、２＝Ａｂ１１、及び３＝Ａｂ８である。図９Ｂは、実施例２に従う管形成アッセイにおいて各抗体によって示されるような、対照に対する管分岐点（処置した＃分岐点／対照における＃分岐点）のグラフ表示を提示する。より低いパーセンテージは、内皮管形成のより強い阻害を示す。 実施例２に従う内皮管形成アッセイの画像（図９Ａ）、及び内皮管形成アッセイの結果のグラフ表示（図９Ｂ）を提示する。図９Ａにおいて、１＝対照、２＝Ａｂ１１、及び３＝Ａｂ８である。図９Ｂは、実施例２に従う管形成アッセイにおいて各抗体によって示されるような、対照に対する管分岐点（処置した＃分岐点／対照における＃分岐点）のグラフ表示を提示する。より低いパーセンテージは、内皮管形成のより強い阻害を示す。

フルオロフォアでタグ付けされたナノ粒子を対照及び乳癌モデルマウスに尾静脈注射処置後のマウスにおけるＩｇＧ１及びｈＳＦＲＰ２ ｍＡＢの生体内分布の画像を提示する。矢印は腫瘍を指す。

ｈＳＦＲＰ２ ｍＡＢを使用したインビボ腫瘍阻害試験のグラフ表示を提示する。１９日目に開始するｈＳＦＲＰ２ ｍＡＢまたはＩｇＧ１を用いる処置に応答して、９７日間の期間にわたる腫瘍体積（ｍｍ^３）を提示する。 ｈＳＦＲＰ２ ｍＡＢを使用したインビボ腫瘍阻害試験のグラフ表示を提示する。ｈＳＦＲＰ２ ｍＡＢまたはＩｇＧ１を用いる処置に応答して、９７日間の期間後に遠隔転移を有した、本研究における動物のパーセンテージを提示する。 ｈＳＦＲＰ２ ｍＡＢを使用したインビボ腫瘍阻害試験のグラフ表示を提示する。９７日間の期間にわたって毎週測定したｈＳＦＲＰ２ ｍＡＢ処置動物及びＩｇＧ１処置動物の重量を提示する。

７．発明を実施するための形態
ＳＦＲＰ２に結合するヒト化抗体及びその抗原結合断片が本明細書に提供される。いくつかの態様では、本明細書に提供されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体及びその抗原結合断片は、ＳＦＲＰ２発現レベルの増加に関連する疾患、例えば、様々な異なるがん、例えば、骨肉腫の治療のために使用される。ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体及びその抗原結合断片は、例えば、ＳＦＲＰ２発現骨肉腫細胞及び／または他の腫瘍細胞のアポトーシスを選択的に誘導することができ、例えば、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体は、Ｔ細胞におけるアポトーシスを誘導しないが、骨肉腫細胞及び／または他の腫瘍細胞のアポトーシスを誘導し、細胞内のＳＦＲＰ２の量を低減し、治療された対象におけるＳＦＲＰ２の血清レベルを低減し、対象における骨肉腫及び／または他の腫瘍タイプの転移性腫瘍の増殖を低減し、患者における骨肉腫肺転移の量を低減し、及び／または患者におけるＣＤ３８タンパク質の量を低減する。ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体及びその抗原結合断片のこれらの活性は、ＳＦＲＰ２が過剰発現される疾患、及び／またはＳＦＲＰ２発現もしくは過剰発現が様々な異なるがん、例えば、骨肉腫などの疾患状態に関連する疾患の効果的な治療を促進し得る。

そのようなヒト化抗体及びその抗原結合断片をコードする相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）等の単離された核酸（ポリヌクレオチド）もまた本明細書に提供される。そのようなヒト化抗体及びその抗原結合断片をコードする核酸（ポリヌクレオチド）を含むベクター（例えば、発現ベクター）及び細胞（例えば、宿主細胞）がさらに提供される。そのようなヒト化抗体及びその抗原結合断片の作製方法もまた提供される。

他の態様では、そのようなヒト化抗体及びその抗原結合断片を使用して、例えば、ＳＦＲＰ２活性を調節するための方法が本明細書に提供される。ＳＦＲＰ２活性は、例えば、本明細書に記載されるヒト化抗体及び抗原結合断片のＳＦＲＰ２への結合によって調節され得る。本明細書に記載の抗体及び抗原断片によるＳＦＲＰ２活性の調節は、細胞内のＳＦＲＰ２の量の低減、治療された対象におけるＳＦＲＰ２の血清レベルの低減、対象における転移性骨肉腫の増殖の低減、患者における骨肉腫肺転移の量の低減、骨肉腫細胞のアポトーシスの選択的誘導をもたらし得、例えば、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体は、Ｔ細胞内のアポトーシスを誘導しないが、骨肉腫細胞のアポトーシスを誘導し、及び／または対象におけるＣＤ３８タンパク質の量の低減を誘導する。

さらなる態様では、本明細書に提供されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体及びその抗原結合断片は、がん、例えば、骨肉腫などの疾患を治療するために使用される。いくつかの態様では、治療は、有効量の本明細書に記載される１つ以上のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体及びその抗原結合断片をそれを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの態様では、そのような疾患には、例えば、乳癌、悪性神経膠腫、多発性骨髄腫、腎細胞癌、腎臓癌、前立腺癌、肺癌、黒色腫、非小細胞肺癌、膵臓癌、結腸直腸癌、膀胱癌、肝細胞癌、消化管癌、ならびに血管肉腫、骨肉腫、横紋筋肉腫、及び胞巣状軟部肉腫を含むがこれらに限定されない肉腫などのがんが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、このような疾患には、ＳＦＲＰ２の発現の増加、ＳＦＲＰ２の過剰発現、及び／または疾患状態に関連するＳＦＲＰ２の発現レベルが生じる疾患、例えば、乳癌、悪性神経膠腫、多発性骨髄腫、腎細胞癌、腎臓癌、前立腺癌、肺癌、黒色腫、非小細胞肺癌、膵臓癌、結腸直腸癌、膀胱癌、肝細胞癌、消化管癌、ならびに血管肉腫、骨肉腫、横紋筋肉腫、及び胞巣状軟部肉腫を含むがこれらに限定されない肉腫が含まれる。

６．１用語
本明細書で使用されるとき、「ＳＦＲＰ２」という用語は、天然のＳＦＲＰ２ポリペプチド及びその任意の天然に存在するバリアントを含むがこれらに限定されない、分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２ポリペプチドを指す。本明細書で使用されるとき、「ヒトＳＦＲＰ２」という用語は、配列番号１２のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。「ＳＦＲＰ２ポリヌクレオチド」、「ＳＦＲＰ２ヌクレオチド」、または「ＳＦＲＰ２核酸」は、上記のものを含む、任意のＳＦＲＰ２をコードするポリヌクレオチドを指す。

「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１つの抗原認識部位を介して、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、または前述の組み合わせ（例えば、糖タンパク質）などの標的を認識し、それに特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本明細書で使用されるとき、「抗体」という用語は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、及び抗体が所望の生物学的活性を示す限り、任意の他の免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、免疫グロブリンの５つの主要なクラスのいずれかであり得る。ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、またはそのサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）は、それらの重鎖定常ドメインの同一性に基づいて、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューと称される。免疫グロブリンの異なるクラスは、異なる及び周知のサブユニット構造及び三次元構成を有する。抗体は、裸であるか、融合タンパク質の一部であるか、または毒素、放射性同位体などの他の分子にコンジュゲートすることができる。

「抗体断片」という用語は、抗体の一部を指す。「抗原結合断片」、「抗原結合ドメイン」、または「抗原結合領域」は、抗原に結合する抗体の一部を指す。抗原結合断片は、抗体の抗原決定領域（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））を含有することができる。抗原結合断片は、抗体のＶＨ及び／またはＶＬ鎖ポリペプチドの一部または全てを含有することができる。抗体の抗原結合断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、直鎖抗体、ならびに一本鎖抗体が含まれるが、これらに限定されない。抗体の抗原結合断片は、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、またはハムスター）及びヒトなどの任意の動物種に由来することができるか、または人工的に産生することができる。

「抗ＳＦＲＰ２抗体」、「ＳＦＲＰ２抗体」、及び「ＳＦＲＰ２に結合する抗体」という用語は、抗体が、診断、治療、及び／またはＳＦＲＰ２活性の調節剤として有用であるように、十分な親和性でＳＦＲＰ２に結合することができる抗体を指す。

「モノクローナル」抗体またはその抗原結合断片は、単一の抗原決定基またはエピトープの高度に特異的な認識及び結合に関与する均一な抗体または抗原結合断片集団を指す。これは、典型的には、異なる抗原決定基に対して指向される異なる抗体を含むポリクローナル抗体とは対照的である。「モノクローナル」抗体またはその抗原結合断片という用語は、無傷かつ完全長のモノクローナル抗体、ならびに抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）の両方、一本鎖（ｓｃＦｖ）変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、及び抗原認識部位を含む任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。さらに、「モノクローナル」抗体またはその抗原結合断片は、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、及びトランスジェニック動物を含むがこれらに限定されない、任意の数の様式で作製されたこのような抗体及びその抗原結合断片を指す。

本明細書で使用されるとき、「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、交換可能に使用され、当該技術分野では一般的である。可変領域は、典型的には、抗体の一部、概して、軽鎖または重鎖の一部を指し、典型的には、成熟重鎖におけるアミノ末端１１０～１２０アミノ酸または１１０～１２５アミノ酸、及び成熟軽鎖における約９０～１１５アミノ酸についてであり、これらは、抗体間で配列が広範囲に異なり、その特定の抗原に対する特定の抗体の結合及び特異性において使用される。

「ＶＬ」及び「ＶＬドメイン」という用語は、抗体の軽鎖可変領域を指すために交換可能に使用される。

「ＶＨ」及び「ＶＨドメイン」という用語は、抗体の重鎖可変領域を指すために交換可能に使用される。

各鎖の「超可変領域」は、ＦＲによって近接して一緒に保持され、他の鎖からの超可変領域とともに、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，１９９２、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎｓ．Ｎａｔｕｒｅ（１９８９）３４２：８７７－８３．を参照されたい）。本明細書で使用されるとき、「超可変領域」という用語は、抗原結合の原因となる抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、概して、「相補的決定領域」または「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基を含み、後者は、最高の配列可変性及び／または抗原認識に関与する。

「Ｋａｂａｔ番号付け」という用語及び同様の用語は、当該技術分野で認識され、抗体またはその抗原結合断片の重鎖及び軽鎖可変領域内のアミノ酸残基を番号付けするシステムを指す（例えば、Ｋａｂａｔ ＥＡ ＆ Ｗｕ ＴＴ（１９７１）Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ １９０：３８２ －３９１及びＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２を参照されたい）。

本明細書で使用されるとき、「定常領域」または「定常ドメイン」という用語は、交換可能であり、当該技術分野で共通の意味を有する。定常領域は、抗体部分、例えば、抗原への抗体の結合に直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用などの様々なエフェクター機能を示すことができる、軽鎖及び／または重鎖のカルボキシル末端部分である。免疫グロブリン分子の定常領域は、概して、免疫グロブリン可変ドメインと比較して、より保存されたアミノ酸配列を有する。ある特定の態様では、抗体または抗原結合断片は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）のために十分な定常領域またはその一部を含む。

本明細書で使用されるとき、「重鎖」という用語は、抗体に関して使用される場合、ＩｇＧのサブクラス、例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、及びＩｇＧ_４を含む、それぞれ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭクラスを生じさせる、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、任意の別個のタイプ、例えば、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、及びミュー（μ）を指すことができる。重鎖アミノ酸配列は、当該技術分野において周知である。いくつかの態様では、重鎖は、ヒト重鎖である。

本明細書で使用されるとき、「軽鎖」という用語は、抗体に関して使用される場合、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、任意の別個のタイプ、例えば、カッパ（κ）またはラムダ（λ）を指すことができる。軽鎖アミノ酸配列は、当該技術分野で周知である。いくつかの態様では、軽鎖は、ヒト軽鎖である。

「キメラ」抗体またはその抗原結合断片という用語は、アミノ酸配列が２つ以上の種から誘導される、抗体またはその抗原結合断片を指す。典型的には、軽鎖及び重鎖の両方の可変領域は、所望の特異性、親和性、及び能力を有する哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギなど）の１つの種に由来する抗体またはその抗原結合断片の可変領域に対応し、一方、定常領域は、その種の免疫応答を誘発することを回避するために、別の（通常はヒト）に由来する抗体またはその抗原結合断片の配列に対して相同的である。

「ヒト化」抗体またはその抗原結合断片という用語は、最小限の非ヒト（例えば、マウス）配列を含有する、特異的免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリン、またはその断片である、非ヒト（例えば、マウス）抗体または抗原結合断片の形態を指す。典型的には、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター）のＣＤＲからの残基によって置き換えられている（「ＣＤＲ移植された」）ヒト免疫グロブリンである（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６（１９８８））。ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、Ｆｖフレームワーク領域内及び／または置換された非ヒト残基内のいずれかの追加の残基の置換によってさらに修飾され、抗体またはその抗原結合断片の特異性、親和性、及び／または能力を精緻化及び最適化することができる。一般に、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、非ヒト免疫グロブリンに対応するＣＤＲ領域の少なくとも１つ、典型的には２つまたは３つの実質的に全てを含むＶＨ及びＶＬを含むが、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体またはその抗原結合断片はまた、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンの免疫グロブリン定常領域またはドメインの少なくとも一部を含み得る。ヒト化抗体を生成するために使用される方法の例は、米国特許第５，２２５，５３９号、Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，９１（３）：９６９－９７３（１９９４）、及びＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．９（１０）：８９５－９０４（１９９６）に記載されている。いくつかの態様では、「ヒト化抗体」は、再表面化した（ｒｅｓｕｒｆａｃｅｄ）抗体である。

「結合親和性」は、概して、分子の単一の結合部位（例えば、抗体またはその抗原結合断片）とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の合計の強度を指す。別途示されない限り、本明細書で使用されるとき、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体またはその抗原結合断片及び抗原）との間の１：１の相互作用を反映する本質的な結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、概して、解離定数（Ｋ_Ｄ）によって表すことができる。親和性は、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）、及び平衡会合定数（Ｋ_Ａ）を含むが、これらに限定されない、当該技術分野で既知の多くの方法で測定及び／または表現することができる。Ｋ_Ｄは、ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎの商から計算され、Ｋ_Ａは、ｋ_ｏｎ／ｋ_ｏｆｆの商から計算される。ｋ_ｏｎは、例えば、抗体またはその抗原結合断片の抗原に対する会合速度定数を指し、ｋ_ｏｆｆは、例えば、抗原からの抗体またはその抗原結合断片の解離速度定数を指す。ｋ_ｏｎ及びｋ_ｏｆｆは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）またはＫｉｎＥｘＡなどの当業者に公知の技術によって決定することができる。

本明細書で使用されるとき、「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、「特異的に結合する」、及び「特異的に認識する」という用語は、抗体またはその抗原結合断片の文脈における類似の用語である。これらの用語は、抗体またはその抗原結合断片が、その抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、及び、その結合が、抗原結合ドメインとエピトープとの間の相補性を伴うことを示す。したがって、ヒトＳＦＲＰ２（例えば、配列番号１２）に「特異的に結合する」抗体は、他の種からのＳＦＲＰ２及び／または他のヒト対立遺伝子から産生されるＳＦＲＰ２タンパク質にも結合し得る。

「遮断している」もしくは「遮断する」、または「阻害性である」もしくは「阻害する」抗体は、抗体が標的タンパク質に結合しているときに、その標的タンパク質の１つ以上のリガンドへの結合を（部分的にまたは完全に）低減または阻害する、及び／または抗体が標的タンパク質に結合しているときに、標的タンパク質の１つ以上の活性または機能を（部分的にまたは完全に）低減または阻害する抗体である。

本明細書で使用されるとき、「エピトープ」は、当該技術分野での用語であり、抗体またはその抗原結合断片が特異的に結合することができる抗原の局所領域を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの連続アミノ酸（線状または連続エピトープ）であり得るか、またはエピトープは、例えば、ポリペプチド（複数可）の２つ以上の非連続領域（コンフォメーション、非線形、不連続、または非連続エピトープ）から一緒になることができる。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合断片が結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析（例えば、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）と連動した水素／重水素交換、アレイベースのオリゴペプチド走査アッセイ、及び／または変異誘発マッピング（例えば、アラニンスキャンニングまたは他の部位特異的変異誘発マッピング）によって決定され得る。Ｘ線結晶学のために、結晶化は、当該技術分野の既知の方法のいずれかを使用して達成され得る（例えば、Ｇｉｅｇｅ Ｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５０（Ｐｔ ４）：３３９－３５０、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９９０）Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １８９：１－２３、Ｃｈａｙｅｎ ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５：１２６９－１２７４、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９７６）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５１：６３００－６３０３）。抗体またはその抗原結合断片及びその抗原の結晶は、周知のＸ線回折技術を使用して研究することができ、Ｘ－ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．によって配布；例えば、Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅ １１４ ＆ １１５、ｅｄｓ Ｗｙｃｋｏｆｆ ＨＷ ｅｔ ａｌ．，、Ｕ．Ｓ．２００４／００１４１９４を参照されたい）、及びＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９３）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ４９（Ｐｔ１）：３７－６０、Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９７）Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２７６Ａ：３６１－４２３、ｅｄ Ｃａｒｔｅｒ ＣＷ、Ｒｏｖｅｒｓｉ Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５６（Ｐｔ １０）：１３１６－１３２３）などのコンピュータソフトウェアを使用して精緻化され得る。変異誘発マッピング研究は、当業者に知られている任意の方法を使用して達成することができる。例えば、アラニンスキャン変異誘発技術を含む、変異誘発技術の説明のための、Ｃｈａｍｐｅ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７０：１３８８－１３９４及びＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＢＣ ＆ Ｗｅｌｌｓ ＪＡ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１－１０８５を参照されたい。

抗体は、そのエピトープまたは重複するエピトープに優先的に結合して、参照抗体のエピトープへの結合をある程度遮断する場合、所与のエピトープへの参照抗体の結合を「競合的に阻害する」と言われる。競合阻害は、当該技術分野で既知の任意の方法、例えば、競合ＥＬＩＳＡアッセイによって決定され得る。

「単離された」ポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、天然には見出されない形態のポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物である。単離されたポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物には、それらが、もはやそれらが天然に見出される形態ではない程度にまで精製されたものが含まれる。いくつかの態様では、単離された抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、実質的に純粋である。

「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指すために、本明細書で交換可能に使用される。ポリマーは、直鎖状または分枝状であり得、これは、修飾アミノ酸を含み得、これは、非アミノ酸によって中断され得る。この用語はまた、天然にまたは介入によって修飾されたアミノ酸ポリマー、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識成分とのコンジュゲーションなどの任意の他の操作もしくは修飾を包含する。定義内には、例えば、アミノ酸の１つ以上の類似体（例えば、非天然アミノ酸などを含む）を含有するポリペプチド、ならびに当該技術分野で既知の他の修飾を含有するポリペプチドも含まれる。本開示のポリペプチドは抗体に基づくため、いくつかの態様では、ポリペプチドは、単鎖または関連鎖として生じ得ることが理解される。

本明細書で使用されるとき、「宿主細胞」という用語は、任意のタイプの細胞、例えば、初代細胞、培養中の細胞、または細胞株からの細胞であり得る。いくつかの態様では、「宿主細胞」という用語は、核酸分子及びそのような細胞の子孫または潜在的な子孫を用いてトランスフェクトされた細胞を指す。このような細胞の子孫は、例えば、後続の世代で生じ得る変異もしくは環境影響、または宿主細胞ゲノムへの核酸分子の組み込みに起因して、核酸分子を用いてトランスフェクトされた親の細胞と同一ではない場合がある。

本明細書で使用されるとき、「薬学的製剤」という用語は、活性成分の生物学的活性が有効であることを可能にするような形態であり、製剤が投与される対象に許容できないほど有毒である追加の成分を含有しない調製物を指す。製剤は滅菌することができる。

本明細書で使用されるとき、「薬学的に許容される担体」という言葉は、薬学的投与に適合する、任意及び全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤ならびに吸収遅延剤などを含むことが意図される。薬学的に活性な物質のためのこのような媒体及び薬剤の使用は、当該技術分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性化合物と不適合である場合を除外する限り、組成物中でのそれらの使用が企図される。補足的な活性化合物を組成物に組み込むこともできる。

「投与する」、「投与すること」、「投与」などの用語は、本明細書で使用されるとき、薬物、例えば、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片を生物学的作用の所望の部位に送達するために使用され得る方法を指す。本明細書に記載の薬剤及び方法で用いることができる投与技術は、例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ、及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａにおいて見出される。

本明細書で使用されるとき、「対象」及び「患者」という用語は、交換可能に使用される。対象は、非ヒト動物（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット、マウス、サル、または他の霊長類など）などの哺乳動物であり得る。いくつかの態様では、対象は、マウスである。いくつかの態様では、対象は、カニクイザルである。いくつかの態様では、対象は、ヒトである。

「治療有効量」という用語は、対象の疾患または状態を治療するために有効な薬物、例えば、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片の量を指す。がんの場合において、治療有効量の薬物は、がん細胞の数を低減させることができ、腫瘍サイズまたは負荷を低減させることができ、末梢臓器へのがん細胞浸潤を阻害する（すなわち、ある程度まで減速させ、ある態様では停止させる）ことができ、腫瘍転移を阻害する（すなわち、ある程度まで減速させ、ある態様では停止させる）ことができ、腫瘍増殖をある程度阻害することができ、ある程度まで血管新生を阻害することができ、がんに関連する症状のうちの１つ以上をある程度緩和することができ、及び／または無増悪生存（ＰＦＳ）、無病生存（ＤＦＳ）、または全生存（ＯＳ）、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）などの好ましい応答、またはある場合には安定した疾患（ＳＤ）、進行性疾患（ＰＤ）の減少、進行までの時間の低減（ＴＴＰ）、またはそれらの任意の組み合わせをもたらすことができる。薬物が増殖を防止及び／または既存のがん細胞を殺傷することができる程度に、それは細胞抑制性及び／または細胞傷害性であり得る。

「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「治療」または「治療すること（ｔｏ ｔｒｅａｔ）」または「緩和すること（ａｌｌｅｖｉａｔｉｎｇ）」または「緩和すること（ｔｏ ａｌｌｅｖｉａｔｅ）」などの用語は、診断された病理学的状態または障害の症状を治癒、遅らせる、軽減する、及び／または進行を停止させる治療措置を指す。したがって、治療を必要とする人には、すでにその障害を有すると診断された人またはその疑いのある人が含まれる。いくつかの態様では、患者が、以下のうちの１つ以上を示す場合、本明細書に提供される方法に従って、対象は、がんのために首尾よく「治療される」：がん細胞の数の低減または完全な非存在、腫瘍サイズの低減、例えば、軟部組織及び骨へのがんの拡散を含む末梢臓器へのがん細胞の浸潤の阻害または欠如、腫瘍転移の阻害または非存在、非腫瘍成長の阻害または非存在、特定のがんに関連する１つ以上の症状の緩和、罹患率及び死亡率の低減、生活の質の改善、腫瘍の腫瘍原性、腫瘍原性頻度、または腫瘍原性容量の低減、腫瘍におけるがん幹細胞の数または頻度の低減、腫瘍原性細胞の非腫瘍状態への分化、無増悪生存（ＰＦＳ）、無病生存（ＤＦＳ）、または全生存（ＯＳ）、ＣＲ（完全奏効）、部分奏効（ＰＲ）、安定した疾患（ＳＤ）の増加、進行性疾患（ＰＤ）の減少、進行までの時間の低減（ＴＴＰ）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、治療は、細胞内のＳＦＲＰ２の量を、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片と上記細胞とを接触させることによって低減させることと、治療有効量の本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片を患者に投与することによって上記患者の血清ＳＦＲＰ２レベルを低減させることと、患者の骨肉腫細胞のアポトーシスを選択的に誘導すること、例えば、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体がＴ細胞中ではアポトーシスを誘導しないが、骨肉腫細胞のアポトーシスを誘導することと、本明細書に記載される治療有効量のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片を患者に投与することによって上記患者の転移性骨肉腫成長の低減することと、本明細書に記載される治療有効量のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片を患者に投与することによって上記患者の骨肉腫肺転移の量を低減することと、本明細書に記載される治療有効量のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片を患者に投与することによって上記患者のＣＤ３８タンパク質の量を低減することと、本明細書に記載される治療有効量のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片を患者に投与することによって骨肉腫と診断された上記患者を治療することとを含む。いくつかの態様では、治療は、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片を用いる治療を含む単独療法治療である。いくつかの態様では、治療は、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片、及び阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストを用いる治療を含む併用療法を含み、任意選択で、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ－１である。いくつかの態様では、ＰＤ－１のアンタゴニストは、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片であり、任意選択で、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ＭＥＤＩ－０６８０（ＡＭＰ－５１４）、カムレリズマブ（ＳＨＲ－１２１０）、チスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、及びスパルタリズマブ（ＮＰＶＰＤＲ００１、ＮＶＳ２４０１１８、ＰＤＲ００１）からなる群から選択される。

「がん」及び「がん性」という用語は、細胞の集団が無制御な細胞増殖によって特徴付けられる哺乳動物における生理学的状態を指すか、またはそれを説明する。いくつかの態様では、がんは、疾患状態を示すＳＦＲＰ２の増加した発現及び／またはＳＦＲＰ２発現レベルを含む。例には、乳癌、悪性神経膠腫、多発性骨髄腫、腎細胞癌、腎臓癌、前立腺癌、肺癌、黒色腫、非小細胞肺癌、膵臓癌、結腸直腸癌、膀胱癌、肝細胞癌、消化管癌、ならびに血管肉腫、骨肉腫、横紋筋肉腫、及び胞巣状軟部肉腫を含むがこれらに限定されない肉腫が含まれる。

本開示及び特許請求の範囲において使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が別段に明確に指示しない限り、複数形を含む。

「を含む」という言葉を用いて本明細書に記載される態様の場合は常に、「からなる」及び／または「から本質的になる」の観点から説明される他の類似の態様もまた提供されることが理解される。本開示では、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含有すること」、及び「有する」などは、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などを意味することができ、「から本質的になること」または「から本質的になる」はオープンエンドであり、列挙されるものの基本的または新規な特性が列挙されるものよりも多くのものの存在によって変化されないが、従来技術の態様を除外する限り、列挙されるものよりも多くのものの存在を可能にする。

本明細書で使用されるとき、特に明記されていないか、または文脈から明らかでない限り、「または」という用語は、包括的であると理解される。本明細書の「Ａ及び／またはＢ」などの句で使用されるときの「及び／または」という用語は、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」、及び「Ｂ」の両方を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの句で使用されるときの「及び／または」という用語は、以下の態様のそれぞれを包含することが意図される。Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）。

本明細書で使用されるとき、「約」及び「およそ」という用語は、数値または数値範囲を修正するために使用される場合に、その値または範囲を最大１０％上回る、及びそれを１０％まで下回る偏差が、列挙された値または範囲の意図された意味内にとどまることを示す。「約」または「およそ」の数値または範囲という言葉を用いて本明細書に記載されるいかなる態様も、特定の数値または範囲を参照する、他の点では類似の態様も提供されることが理解される。

「配列同一性」は、２つの配列（例えば、アミノ酸配列または核酸配列）間の同一性の程度を指す。配列同一性は、２つの配列を整列させ、配列間の同一性を最大化するためにギャップを導入することによって決定することができる。整列は、当該技術分野で公知のプログラムを使用して生成することができる。本明細書の目的のために、ヌクレオチド配列の整列は、デフォルトパラメータに設定されたｂｌａｓｔｎプログラムを用いて実施することができ、アミノ酸配列の整列は、デフォルトパラメータに設定されたｂｌａｓｔｐプログラムを用いて実施することができる（ワールドワイドウェブ上の、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖのＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）を参照されたい）。

本明細書に提供される任意の組成物または方法は、本明細書に提供される他の組成物及び方法のうちのいずれかのうちの１つ以上と組み合わせることができる。

６．２抗体
一態様では、ヒトＳＦＲＰ２等のＳＦＲＰ２に結合するヒト化抗体及びその抗原結合断片が本明細書に提供される。特定の態様では、ヒトＳＦＲＰ２に特異的に結合するヒト化抗体及びその抗原結合断片が本明細書に提供される。ヒトＳＦＲＰ２のアミノ酸配列は、当該技術分野で既知であり、配列番号１２に表されるように、本明細書に提供される。
ＭＬＱＧＰＧＳＬＬＬＬＦＬＡＳＨＣＣＬＧＳＡＲＧＬＦＬＦＧＱＰＤＦＳＹＫＲＳＮＣＫＰＩＰＶＮＬＱＬＣＨＧＩＥＹＱＮＭＲＬＰＮＬＬＧＨＥＴＭＫＥＶＬＥＱＡＧＡＷＩＰＬＶＭＫＱＣＨＰＤＴＫＫＦＬＣＳＬＦＡＰＶＣＬＤＤＬＤＥＴＩＱＰＣＨＳＬＣＶＱＶＫＤＲＣＡＰＶＭＳＡＦＧＦＰＷＰＤＭＬＥＣＤＲＦＰＱＤＮＤＬＣＩＰＬＡＳＳＤＨＬＬＰＡＴＥＥＡＰＫＶＣＥＡＣＫＮＫＮＤＤＤＮＤＩＭＥＴＬＣＫＮＤＦＡＬＫＩＫＶＫＥＩＴＹＩＮＲＤＴＫＩＩＬＥＴＫＳＫＴＩＹＫＬＮＧＶＳＥＲＤＬＫＫＳＶＬＷＬＫＤＳＬＱＣＴＣＥＥＭＮＤＩＮＡＰＹＬＶＭＧＱＫＱＧＧＥＬＶＩＴＳＶＫＲＷＱＫＧＱＲＥＦＫＲＩＳＲＳＩＲＫＬＱＣ

いくつかの態様では、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片は、ＳＦＲＰ２、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合し、表１から選択されるＶＨ鎖に対して少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性、または１００％の配列同一性を有するＶＨ鎖を含む。

いくつかの態様では、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片は、ＳＦＲＰ２、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合し、表２から選択されるＶＬ鎖に対して少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性、または１００％の配列同一性を有するＶＬ鎖を含む。

いくつかの態様では、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片は、ＳＦＲＰ２、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合し、表１のＶＨ鎖及び表２のＶＬ鎖を含む。

いくつかの態様では、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片は、ＳＦＲＰ２、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合し、表３に列挙されるＶＨ鎖及びＶＬ鎖を含む。

いくつかの態様では、重鎖及び軽鎖を含むヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体が本明細書に提供される。重鎖に関して、いくつかの態様では、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体の重鎖は、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）またはミュー（μ）重鎖であり得る。いくつかの態様では、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体の重鎖は、ヒトアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、またはミュー（μ）重鎖を含むことができる。いくつかの態様では、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体は、重鎖を含み、ＶＨドメインのアミノ酸配列は、表１に示されるアミノ酸配列を含み、重鎖の定常領域は、ヒトガンマ（γ）重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合する抗体は、ＶＨドメインのアミノ酸配列が表１に示されるアミノ酸配列を含み、重鎖の定常領域がＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合する抗体は、ＶＨドメインのアミノ酸配列が表１に記載の配列を含み、重鎖の定常領域が本明細書に記載の、または当該技術分野で既知のヒト重鎖のアミノ酸を含む重鎖を含む。ヒト定常領域配列の非限定的な例は、当該技術分野に記載されており、例えば、米国特許第５，６９３，７８０号及びＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）、前出を参照されたい。いくつかの態様では、重鎖は、配列番号２に対応するＶＨドメインを含む。いくつかの態様では、重鎖は、配列番号１５の配列を含む。いくつかの態様では、重鎖は、配列番号１７のポリヌクレオチド配列によってコードされる。

軽鎖に関して、いくつかの態様では、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体の軽鎖は、カッパ軽鎖である。いくつかの態様では、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体の軽鎖は、ラムダ軽鎖である。いくつかの態様では、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体の軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖である。いくつかの態様では、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体の軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖である。いくつかの態様では、軽鎖は、配列番号９に対応するＶＬドメインを含む。いくつかの態様では、軽鎖は、配列番号１６の配列を含む。いくつかの態様では、軽鎖は、配列番号１８のポリヌクレオチド配列によってコードされる。

いくつかの態様では、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合する抗体は、ＶＬドメインのアミノ酸配列が表２に示される配列を含み、軽鎖の定常領域がヒトカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合する抗体は、ＶＬドメインのアミノ酸配列が表２に示される配列を含み、軽鎖の定常領域がヒトラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合する抗体は、ＶＬドメインのアミノ酸配列が表２に示される配列を含み、軽鎖の定常領域がヒトカッパまたはラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ヒト定常領域配列の非限定的な例は、当該技術分野に記載されており、例えば、米国特許第５，６９３，７８０号及びＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）、前出を参照されたい。

いくつかの態様では、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合する抗体は、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体のいずれかのアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子、またはヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合する抗体は、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体のいずれかのアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、定常領域は、免疫グロブリン分子のＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ）の定常領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、定常領域は、免疫グロブリン分子のヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ）の定常領域のアミノ酸配列を含む。

いくつかの態様では、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合する抗体は、ＶＨドメインのアミノ酸配列が表１に記載のアミノ酸配列を含み、重鎖の定常領域がＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、及び／またはＶＬドメインのアミノ酸配列が表２に記載の配列を含み、軽鎖の定常領域がヒトカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

いくつかの態様では、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合する抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、（ｉ）重鎖は、表１に列挙される抗体のアミノ酸配列（例えば、配列番号１、２、３、または４）を含むＶＨドメインを含み、（ｉｉ）軽鎖は、表２に列挙される同じ抗体のアミノ酸配列（例えば、配列番号５、６、７、８、または９）を含むＶＬドメインを含み、（ｉｉｉ）重鎖は、ヒトＩｇＧ１重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常重鎖ドメインをさらに含み、（ｉｖ）軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常軽鎖ドメインをさらに含む。いくつかの態様では、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合する抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、及び／または軽鎖は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、重鎖は、配列番号１５に対して少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、軽鎖は、配列番号１６に対して少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、重鎖及び／または軽鎖は、表４に示されるアミノ酸配列を含む。

いくつかの態様では、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合する抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含み、及び／または軽鎖は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。

いくつかの態様では、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合する抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む相補的決定領域（ＣＤＲ）Ｈ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ２、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ３、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ２、及び配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ３を含む。いくつかの態様では、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体は、表５に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ配列を含む。

ヒト定常領域の非限定的な例は、当該技術分野に記載されており、例えば、Ｋａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）前出を参照されたい。

いくつかの態様では、抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片は、キメラ抗体を含む。いくつかの態様では、キメラ抗ＳＦＲＰ２抗体は、配列番号１０のＶＨ鎖ポリペプチド、及び配列番号１１のＶＬ鎖ポリペプチドを含む（Ｃｈｉ．１と称される）。いくつかの態様では、キメラ抗ＳＦＲＰ２抗体は、配列番号１０のＶＨ鎖ポリペプチド、及び配列番号１３のＶＬ鎖ポリペプチドを含む（Ｃｈｉ．２と称される）。いくつかの態様では、キメラ抗ＳＦＲＰ２抗体は、本明細書で論じられるもののいずれかなどのヒト定常領域を含む。いくつかの例では、キメラ抗ＳＦＲＰ２抗体は、ＩｇＧ１定常領域を含む。

６．３抗体活性
いくつかの態様では、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合する抗体は、配列番号１０及び１１のＶＨ鎖ポリペプチド及びＶＬ鎖ポリペプチドをそれぞれ含む抗体またはその抗原結合断片のＩＣ５０値に対して、０．７以下、０．６以下、または０．５以下のＩＣ５０値を含む。相対ＩＣ５０値は、例えば、実施例２に記載される方法を使用して計算され得る。例えば、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片は、希釈シリーズとして調製することができ、その後、ペプチドＢ（配列番号１４）で予めコーティングされたマイクロタイタープレート上にて室温でインキュベートする前に、配列番号１０及び１１を含む一定濃度のビオチン化抗体と予混合することができ、ペプチドは、ヒトＳＦＲＰ２（配列番号１２）のアミノ酸２０２～２２０を含む。競合ＥＬＩＳＡ分析から得られた結果を使用して、各抗体のＩＣ_５０値を計算することができ、その値を、次いで、各ＥＬＩＳＡプレートに含まれる配列番号１０及び１１を含む抗体のＩＣ_５０値に正規化することができる。

いくつかの態様では、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合する抗体は、内皮管形成を阻害する。内皮管形成の阻害は、実施例２に記載されるように測定することができる。例えば、２Ｈ１１細胞を使用する内皮管形成アッセイを実施することができ、ここで、管形成を促進するＳＦＲＰ２で処理された２Ｈ１１マウス内皮細胞は、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体または対照抗体、例えば、ＩｇＧ１処置を用いてさらに処理され、分岐点の数が測定され、陽性及び陰性対照と比較される。また、ＳＶＲ血管肉腫細胞を使用する内皮管形成アッセイを実施することができ、ＳＶＲ血管肉腫細胞は、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体または対照抗体、例えば、ＩｇＧ１処置で処置され、分岐点の数がカウントされ、及び／または阻害の割合が計算される。このような管形成アッセイの結果によって示されるように、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体Ａｂ８は、対照処置と比較して、統計的に有意に管形成を阻害する唯一の抗体であった（＊ｐ＝０．０３）。この結果は、例えば、Ａｂ８の重鎖が、単一のアミノ酸によってＡｂ２及びＡｂ３の重鎖と異なり、一方、Ａｂ８の軽鎖は、単一のアミノ酸において、Ａｂ１１の軽鎖と異なっているため、驚くべきものであった。しかしながら、Ａｂ２、Ａｂ３、及びＡｂ１１は、統計的に有意に管形成を阻害しなかった。このようにして、このような内皮管形成アッセイの結果は、配列番号２の可変重鎖アミノ酸配列及び配列番号９の可変軽鎖アミノ酸配列、すなわち、Ａｂ８を含むヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体の独特かつ驚くべき特性を示す。

いくつかの態様では、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合する抗体は、ＳＦＲＰ２発現骨肉腫細胞のアポトーシスを誘導する。いくつかの態様では、そのようなアポトーシスの誘導は、実施例３に記載されるように測定され得る。例えば、ＳＦＲＰ２を内因性に発現するＲＦ５７７細胞株をプレートし、その後、様々な濃度のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはＩｇＧ１対照抗体で処理し、当該技術分野で知られている技術を使用してアポトーシスを測定することができる。いくつかの態様では、骨肉腫細胞のアポトーシスは、対照処置、例えば、ＩｇＧ抗体による処置と比較して、１０％以上、２０％以上、３０％以上、または４０％以上増加する。いくつかの態様では、ＳＦＲＰ２発現骨肉腫細胞のアポトーシスのヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体誘導性誘導は選択的であり、例えば、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体は、Ｔ細胞におけるアポトーシスを誘導しない。いくつかの例では、そのような測定は、実施例３に記載されるように実施され得る。例えば、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋細胞は、当該技術分野で既知の方法に従って、供給源、例えば、マウス脾細胞から単離され、その後、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体または対照、例えば、ＩｇＧ１抗体で処理され得る。処理後、細胞を染色し、フローサイトメトリーによって分析して、細胞の測定アポトーシスを検出することができる。いくつかの態様では、アポトーシス細胞のパーセンテージは、対照試料と比較して変化せず、及び／またはアポトーシス細胞のパーセンテージは、アポトーシスが生じる陽性対照における細胞の数よりも少ない。

いくつかの態様では、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合する抗体は、単独療法として、またはＰＤ－１阻害剤、例えば、ＰＤ－１ ｍＡｂと組み合わせて投与される場合のいずれかとして、骨肉腫関連肺転移を阻害する。このような阻害は、実施例６に一般的に記載されるように測定することができる。例えば、骨肉腫肺転移は、ＲＦ５７７腫瘍細胞を用いるＣ５７／Ｂｌ６マウスにおける尾静脈注射によって生成され得る。処置は、腫瘍細胞注射後の所定の長さの時間、例えば１２日後に開始することができ、ＩｇＧ１対照抗体、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体、ＰＤ－１阻害剤、またはヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体とＰＤ－１阻害剤の組み合わせを含む。所定の長さの時間後、撮影された高解像度の写真を使用してマウスの肺を分析し、各処理群の転移性表面肺結節の数を定量化することができる。いくつかの態様では、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片を用いる処置は、単独療法として投与される場合、または阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストと組み合わせて投与される場合のいずれかで、ＩｇＧ１対照と比較して肺表面転移の数を低減させ、任意選択で、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ－１である。いくつかの態様では、ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片は、例えば、単剤療法として投与された場合、例えば、阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストと組み合わせて投与された場合、対照と比較して肺転移性腫瘍体積を５０％以上、６０％以上、７０％以上、または８０％以上低減させる。

いくつかの態様では、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合する抗体は、単独療法として、または阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストと組み合わせて投与される場合のいずれかで、ＳＦＲＰ２血清レベルを低減させ、任意に、免疫チェックポイント分子はＰＤ－１である。このような低減は、実施例４に概して記載されるように測定することができる。例えば、ＩｇＧ１対照抗体、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体、阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニスト、例えば、ＰＤ－１阻害剤、または両方の抗体の組み合わせを用いて処置した対照マウスまたはＲＦ５７７担持マウスからの血液を採取し、血清の分離を実施することができる。次いで、血清試料を、製造業者のプロトコルに従って、ＲａｙＢｉｏｔｅｃｈ Ｍｏｕｓｅ ＳＦＲＰ２ ＥＬＩＳＡキット（ＥＬＭ－ＳＦＲＰ－２；Ｐｅａｃｈｔｒｅｅ Ｃｏｒｎｅｒｓ，ＧＡ，ＵＳＡ）を使用して処理することができる。いくつかの態様では、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合する抗体は、単独療法、または阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストと組み合わせて投与されるときのいずれかで、ＳＦＲＰ２血清レベルを、対照、例えば、ＩｇＧ１を用いる処置と比較して低減させる。

いくつかの態様では、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合する抗体は、ＣＤ３８レベルを低減させる。このような低減は、実施例５に概して記載されるように測定することができる。例えば、ＲＦ５７７ ＯＳ肺転移を有するマウスは、当該技術分野で既知であるように調製することができ、脾細胞は、所定の時間にこれらのマウスから採取することができる採取後、脾細胞は、ＩｇＧ１対照抗体またはヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体を用いて処置することができる。処置後、脾細胞を溶解し、標準プロトコルを使用してＣＤ３８レベルを探索するウエスタンブロット分析のために調製することができる。いくつかの態様では、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体は、対照、例えば、ＩｇＧ１による処置と比較して、ＣＤ３８レベルを５０％以上、６０％以上、７０％以上、または８０％以上低減させる。

６．４抗原結合断片
いくつかの態様では、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＰＲ２抗体、例えば、ヒトＳＦＲＰ２に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体の抗原結合断片が提供される。例示的な抗原結合断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びｓｃＦｖが含まれるが、これらに限定されず、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖは、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体の重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を含む。Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖは、以下で論じられるものを含むが、これらに限定されない、当業者に知られている任意の技術によって生成することができる。いくつかの態様では、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖなどの抗原結合断片は、インビボで抗体の半減期を延長する部分をさらに含む。この部分はまた、「半減期延長部分」とも呼ばれる。インビボで、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖなどの抗原結合断片の半減期を延長するために当業者に知られている任意の部分を使用することができる。例えば、半減期延長部分は、Ｆｃ領域、ポリマー、アルブミン、またはアルブミン結合タンパク質もしくは化合物を含むことができる。ポリマーは、天然または合成の、任意に置換された直鎖または分岐鎖のポリアルキレン、ポリアルケニレン、ポリオキシルアルキレン、多糖類、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、メトキシポリエチレングリコール、ラクトース、アミロース、デキストラン、グリコーゲン、またはその誘導体を含むことができる。置換基は、１つ以上のヒドロキシ基、メチル基、またはメトキシ基を含むことができる。いくつかの態様では、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖなどの抗原結合断片は、半減期延長部分の結合のための１つ以上のＣ末端アミノ酸の添加によって修飾され得る。いくつかの態様では、半減期延長部分は、ポリエチレングリコールまたはヒト血清アルブミンである。いくつかの態様では、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖなどの抗原結合断片は、Ｆｃ領域に融合される。

ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片は、検出可能な標識または物質に融合またはコンジュゲート（例えば、共有結合または非共有結合）され得る。検出可能な標識または物質の例としては、グルコースオキシダーゼ等の酵素標識、ヨウ素（１２５Ｉ，１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１２１Ｉｎ）、及びテクネチウム（９９Ｔｃ）等の放射性同位体、ルミノール等の発光標識、ならびにフルオレセイン及びローダミン等の蛍光標識、ならびにビオチンが挙げられる。

６．５抗体産生
ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体及びその抗原結合断片は、ヒト化抗体及び抗原結合断片の合成のための当該技術分野で既知の任意の方法によって産生することができる。本明細書に記載される方法は、別段の指示がない限り、分子生物学、微生物学、遺伝子解析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成及び修飾、核酸ハイブリダイゼーション、ならびに当業者の範囲内の関連分野における従来の技術を利用する。これらの技術は、例えば、本明細書で引用される参考文献に記載されており、文献の中で完全に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ、Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９８７及び年次更新）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９８７及び年次更新）、Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）（１９９１）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、Ｂｉｒｒｅｎ Ｂ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．）（１９９９）Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓを参照されたい。

ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞または宿主細胞（例えば、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドを含む細胞または宿主細胞）を培養することを含む、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片を作製する方法が本明細書に提供される。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞または宿主細胞（例えば、本明細書に記載の抗体または抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドを含む細胞または宿主細胞）を使用して、抗体またはその抗原結合断片を発現する（例えば、組換え発現する）ことを含む、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片を作製する方法が本明細書に提供される。いくつかの態様では、細胞は、単離された細胞である。いくつかの態様では、コードポリヌクレオチドは、細胞に導入されている。いくつかの態様では、この方法は、細胞または宿主細胞から得られる抗体または抗原結合断片を精製する工程をさらに含む。

モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ハイブリドーマ、組換え、ファージディスプレイ技術、酵母ベースの提示技術、またはこれらの組み合わせの使用を含む、当該技術分野で公知の多種多様な技術を使用して調製することができる。例えば、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、当該技術分野で既知であり、例えば、Ｈａｒｌｏｗ Ｅ ＆ Ｌａｎｅ Ｄ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ，１９８８）、Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ ＧＪ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３ ６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）で教示されるか、またはＫｏｈｌｅｒ Ｇ ＆ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ Ｃ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５に記載される技術を含む、ハイブリドーマ技術を使用して産生され得る。本明細書に記載の抗体を選択し、生成するために利用することができる酵母ベースの提示方法の例としては、例えば、ＷＯ２００９／０３６３７９Ａ２、ＷＯ２０１０／１０５２５６、及びＷＯ２０１２／００９５６８に開示されるものが挙げられ、これらの各々は、その全体が本明細書に参照により組み込まれる。

いくつかの態様では、モノクローナル抗体または抗原結合断片は、クローン細胞（例えば、ハイブリドーマまたは組換え抗体もしくは抗原結合断片を産生する宿主細胞）によって産生される抗体または抗原結合断片であり、この抗体または抗原結合は、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの態様では、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、Ｆａｂ断片またはＦ（ａｂ’）２断片であり得る。本明細書に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ Ｇ ＆ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ Ｃ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５に記載されているようなハイブリドーマ法によって作製することができ、例えば、本明細書に記載される技術を使用して、ファージライブラリから単離することができる。クローン細胞株及びそれによって発現されるモノクローナル抗体及びその抗原結合断片の調製のための他の方法は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２００２）５ｔｈ Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．，前出の１１章を参照されたい）。

本明細書に記載される抗体の抗原結合断片は、当業者に知られている任意の技術によって生成することができる。例えば、本明細書に記載のＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片は、パパイン（Ｆａｂ断片を生成するため）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２断片を生成するため）などの酵素を使用して、免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断によって生成することができる。Ｆａｂ断片は、四量体抗体分子の２つの同一のアームのうちの１つに対応し、重鎖のＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインと対合した完全な軽鎖を含有する。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジ領域のジスルフィド結合によって連結された四量体抗体分子の２つの抗原結合アームを含有する。

いくつかの態様では、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片は、抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸分子（複数可）が発現されるように、ＣＨＯ細胞などの宿主細胞を培養することによって産生され、それによって、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片を産生し、任意選択で、抗体またはその抗原結合断片を培養物から単離する。いくつかの態様では、宿主細胞は、ＣＨＯ細胞である。いくつかの態様では、単離された抗体またはその抗原結合断片は、沈殿物を実質的に含まず、すなわち、例えば、眼、Ａ２８０、サイズ排除クロマトグラフィー、及び／または動的光散乱によって検査されたときに沈殿物を含まない。いくつかの態様では、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片は、ベクター、例えば、本明細書に記載されるヒト化抗体または抗原結合断片を発現するために開発された遺伝子構築物から作製されたレトロベクター（ＧＰＥＸベクター）を用いて形質導入された２９３ ＧＰ細胞から収集されるベクターを用いて形質導入されるＣＨＯ細胞によって産生される。

６．６ポリヌクレオチド
ある特定の態様では、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、ならびに、ベクター、例えば、宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ及び哺乳動物細胞）における組換え発現のためのこのようなポリヌクレオチドを含むベクターが本明細書に提供される。

特定の態様では、本明細書に記載されるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。

また、本明細書で提供されるのは、配列番号１～９及び配列番号１５～１６からなる群から選択される配列を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。

また、本明細書では、（ｉ）配列番号１、２、３、または４のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、及び（ｉｉ）配列番号５、６、７、８、または９のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチドを含むキット、ベクター、または宿主細胞も提供される。このような第１及び第２のポリヌクレオチドを含むキットでは、第１及び第２のポリヌクレオチドは、同じベクター内にあり得るか、または異なるベクター内にあり得る。このような第１及び第２のポリヌクレオチドを含む宿主細胞では、第１及び第２のポリヌクレオチドは、同じベクター内にあり得るか、または異なるベクター内にあり得る。

いくつかの態様では、本明細書に提供されるのは、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体もしくはその抗原結合断片、または本明細書に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含むその断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである（例えば、表１を参照されたい）。いくつかの態様では、本明細書に提供されるのは、本明細書に記載のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含むヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである（例えば、表２を参照されたい）。

いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、重鎖可変領域（例えば、配列番号１、２、３、または４のアミノ酸配列を含むＶＨ）及び重鎖定常領域、例えば、ヒトガンマ（γ）重鎖定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ１定常領域をコードする核酸配列を含む。

いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、軽鎖可変領域（例えば、配列番号５、６、７、８、または９のアミノ酸配列を含むＶＬ）及び軽鎖定常領域、例えば、ヒトラムダまたはカッパ軽鎖定常領域、例えば、ヒトカッパ軽鎖定常領域をコードする核酸配列を含む。

例えば、コドン／ＲＮＡ最適化、異種シグナル配列による置換、及びｍＲＮＡ不安定性要素の除去によって最適化される、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片またはそのドメインをコードするポリヌクレオチドも本明細書に提供される。組換え発現のためのヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片またはそのドメイン（例えば、重鎖、軽鎖、ＶＨドメイン、またはＶＬドメイン）をコードする最適化された核酸を、コドン変化（例えば、遺伝子コードの縮重に起因する同じアミノ酸をコードするコドン変化、本明細書中以下の表６を参照されたい）を導入することによって、及び／またはｍＲＮＡの阻害領域を除去することによって生成する方法は、それに応じて、例えば、米国特許第５，９６５，７２６号、同第６，１７４，６６６号、同第６，２９１，６６４号、同第６，４１４，１３２号、及び同第６，７９４，４９８号に記載されている最適化方法を適応させることによって実行することができる。

本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片またはそのドメインをコードするポリヌクレオチドは、当該技術分野で周知の方法（例えば、ＰＣＲ及び他の分子クローニング方法）を使用して、適切な供給源（例えば、ハイブリドーマ）からの核酸から生成することができる。例えば、既知の配列の３’末端及び５’末端にハイブリダイゼーション可能な合成プライマーを使用するＰＣＲ増幅は、関心対象の抗体を産生するハイブリドーマ細胞から得られたゲノムＤＮＡを使用して実施することができる。このようなＰＣＲ増幅方法を使用して、抗体またはその抗原結合断片の軽鎖及び／または重鎖をコードする配列を含む核酸を得ることができる。このようなＰＣＲ増幅方法を使用して、抗体またはその抗原結合断片の可変軽鎖領域及び／または可変重鎖領域をコードする配列を含む核酸を得ることができる。増幅された核酸は、宿主細胞内での発現のために、及びさらなるクローニングのために、例えば、ヒト化抗体またはその抗原結合断片を生成するために、ベクターにクローニングされ得る。

本明細書で提供されるポリヌクレオチドは、例えば、ＲＮＡの形態またはＤＮＡの形態であり得る。ＤＮＡは、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡを含み、ＤＮＡは、二本鎖または一本鎖であり得る。一本鎖の場合、ＤＮＡは、コード鎖または非コード（アンチセンス）鎖であり得る。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、ｃＤＮＡまたは１つ以上の内因性イントロンを欠くＤＮＡである。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、非天然ポリヌクレオチドである。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、組換えで産生される。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、単離される。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、実質的に純粋である。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、天然成分から精製される。

６．７細胞及びベクター
ある特定の態様では、本明細書に提供されるのは、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体及びその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、または宿主細胞、好ましくは哺乳動物細胞における組換え発現のためのそのドメインを含むベクター（例えば、発現ベクター）である。また、本明細書に提供されるのは、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片、例えば、Ａｂ１～Ａｂ２０、例えば、配列番号１、２、３、または４のＶＨ鎖ポリペプチド、及び配列番号５、６、７、８、または９のＶＬ鎖ポリペプチドを含む抗体を組換え発現するためのそのようなベクターを含む細胞、例えば宿主細胞である。いくつかの態様では、宿主細胞内でそのような抗体またはその抗原結合断片を発現することを含む、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を産生するための方法が本明細書に提供される。

いくつかの態様では、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片またはそのドメイン（例えば、本明細書に記載の重鎖または軽鎖）の組換え発現は、抗体またはその抗原結合断片またはそのドメインをコードするポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの構築を伴う。一旦、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片またはそのドメイン（例えば、重鎖または軽鎖可変ドメイン）をコードするポリヌクレオチドが得られると、当該技術分野で周知の技術を使用して、組換えＤＮＡ技術によって、抗体またはその抗原結合断片の産生のためのベクターを産生することができる。したがって、ヌクレオチド配列をコードする抗体またはその抗原結合断片またはそのドメイン（例えば、軽鎖または重鎖）を含有するポリヌクレオチドを発現させることによってタンパク質を調製するための方法が本明細書に記載される。当業者に周知の方法を使用して、抗体またはその抗原結合断片またはそのドメイン（例えば、軽鎖または重鎖）コード配列ならびに適切な転写及び翻訳制御シグナルを含有する発現ベクターを構築することができる。これらの方法には、例えば、インビトロ組換えＤＮＡ技術、合成技術、及びインビボ遺伝子組換えが含まれる。また、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片、重鎖もしくは軽鎖、重鎖もしくは軽鎖可変ドメイン、または重鎖もしくは軽鎖ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含み、プロモーターに作動可能に連結されている、複製可能なベクターも提供される。このようなベクターは、例えば、抗体またはその抗原結合断片の定常領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、国際公開第ＷＯ８６／０５８０７号及び同第ＷＯ８９／０１０３６号、ならびに米国特許第５，１２２，４６４号を参照されたい）を含み得、抗体またはその抗原結合断片の可変ドメインは、重鎖全体、軽鎖全体、または重鎖と軽鎖の両方の発現のために、このようなベクターにクローニングされ得る。

発現ベクターは、従来の技術によって細胞（例えば、宿主細胞）に移入され、次いで、得られた細胞は、従来の技術によって培養されて、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片、例えば、Ａｂ１－Ａｂ２０、例えば、配列番号１、２、３、または４のＶＨ鎖ポリペプチドを含み、配列番号５、６、７、８、または９のＶＬ鎖ポリペプチドを含む抗体を産生することができる。したがって、本明細書では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチド、例えば、Ａｂ１－Ａｂ２０、例えば、配列番号１、２、３、または４のＶＨ鎖ポリペプチドを含み、配列番号５、６、７、８、または９のＶＬ鎖ポリペプチド、またはそのドメインを含有し、宿主細胞内でそのような配列の発現のためにプロモーターに作用可能に連結されている宿主細胞が提供される。いくつかの態様では、二本鎖抗体またはその抗原結合断片の発現のために、重鎖と軽鎖の両方を個別にコードするベクターを、以下に詳述するように、免疫グロブリン全体の発現のために宿主細胞内で共発現させることができる。いくつかの態様では、宿主細胞は、本明細書に記載の抗体、例えば、Ａｂ１～Ａｂ２０、例えば、配列番号１、２、３、または４のＶＨ鎖ポリペプチドを含み、配列番号５、６、７、８、または９のＶＬ鎖ポリペプチド、またはそのドメインを含む抗体の重鎖と軽鎖の両方をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含有する。いくつかの態様では、宿主細胞は、２つの異なるベクター、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片の重鎖または重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクター、及び本明細書に記載の抗体またはそのドメインの軽鎖または軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含有する。いくつかの態様では、第１の宿主細胞は、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片の重鎖または重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターを含み、第２の宿主細胞は、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片の軽鎖または軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含む。いくつかの態様では、重鎖／重鎖可変領域は、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片を形成するために、第２の細胞の軽鎖／軽鎖可変領域に関連する第１の細胞によって発現される。いくつかの態様では、そのような第１の宿主細胞及びそのような第２の宿主細胞を含む宿主細胞の集団が本明細書に提供される。

いくつかの態様では、本明細書に提供されるのは、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片の軽鎖／軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターと、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片の重鎖／重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターとを含むベクターの集団である。あるいは、重鎖ポリペプチドと軽鎖ポリペプチドの両方をコードし、発現することができる単一のベクターを使用することができる。

様々な宿主発現ベクター系を利用して、本明細書に記載の抗体及びその抗原結合断片（例えば、配列番号１、２、３、または４のＶＨ鎖ポリペプチドを含み、配列番号５、６、７、８、または９のＶＬ鎖ポリペプチドを含む、抗体またはその抗原結合断片）を発現することができる（例えば、米国特許第５、８０７，７１５号を参照されたい）。そのような宿主発現系は、関心対象のコード配列を産生し、その後精製することができるビヒクルを表すが、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換またはトランスフェクトされたときに、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片をインサイチュで発現することができる細胞もまた表す。これらには、抗体コード配列を含有する組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡまたはコスミドＤＮＡ発現ベクターを用いて形質転換された細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ及びＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、抗体コード配列を含有する組換え酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ Ｐｉｃｈｉａ）、抗体コード配列を含有する組換え酵母発現ベクターを用いて形質転換された昆虫細胞系、抗体コード配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）で感染された昆虫細胞系、組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ、タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）で感染されたか、または抗体コード配列を含有する組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系（例えば、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉなどの緑藻類）、あるいは、哺乳動物細胞のゲノムに由来するプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）または哺乳動物ウイルスに由来するプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター、ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含有する組換え発現構築物を有する、哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ ２９３、ＮＳ０、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨｅＬａ、及びＮＩＨ３Ｔ３、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０及びＢＭＴ１０細胞）が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体及びその抗原結合断片を発現するための細胞（例えば、配列番号１、２、３、または４のＶＨ鎖ポリペプチドを含み、配列番号５、６、７、８、または９のＶＬ鎖ポリペプチドを含む抗体またはその抗原結合断片）は、ＣＨＯ細胞、例えば、ＧＰＥｘ（登録商標）チャイニーズハムスター卵巣（ＧＣＨＯ）細胞株である。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体を発現するための細胞は、ヒト細胞、例えば、ヒト細胞株である。いくつかの態様では、哺乳動物発現ベクターは、ｐＯｐｔｉＶＥＣ（商標）またはｐｃＤＮＡ３．３である。いくつかの態様では、特に全組換え抗体分子の発現のために、Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌細胞、または真核細胞（例えば、哺乳動物細胞）が、組換え抗体分子の発現のために使用される。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要な中間初期遺伝子プロモーターエレメント等のベクターと併せて、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞等の哺乳動物細胞は、抗体の有効な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ ＭＫ ＆ Ｈｏｆｓｔｅｔｔｅｒ Ｈ（１９８６）Ｇｅｎｅ ４５：１０１－１０５、及びＣｏｃｋｅｔｔ ＭＩ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ８：６６２－６６７）。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、ＣＨＯ細胞またはＮＳ０細胞によって産生される。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、ベクターを用いて形質導入されるＣＨＯ細胞によって産生される。

加えて、挿入された配列の発現を調節するか、または所望される特定の様式で遺伝子産物を修飾及び処理する宿主細胞株を選択することができる。タンパク質産物のそのような修飾（例えば、グリコシル化）及び処理（例えば、切断）は、タンパク質の機能に寄与することができる。この目的のために、遺伝子産物の一次転写産物、グリコシル化、及びリン酸化の適切な処理のための細胞機構を有する真核宿主細胞を使用することができる。そのような哺乳動物宿主細胞には、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２Ｏ、及びＴ４７Ｄ、ＮＳ０（内因的にいかなる免疫グロブリン鎖も産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、ＢＭＴ１０、及びＨｓＳ７８Ｂｓｔの細胞が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片（配列番号１、２、３または４のＶＨ鎖ポリペプチドを含み、配列番号５、６、７、８または９のＶＬ鎖ポリペプチドを含む抗体またはその抗原結合断片）は、ＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞で産生される。

一旦、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片が組換え発現によって産生されると、それは、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、特にプロテインＡ後の特定の抗原に対する親和性、及びサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、示差的溶解度、またはタンパク質の精製のための任意の他の標準技術によって、免疫グロブリン分子の精製のための当該技術分野で既知の任意の方法によって精製され得る。さらに、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、精製を容易にするために、本明細書に記載されるか、さもなくば当該技術分野で既知である異種ポリペプチド配列に融合させることができる。

いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、単離されるか、または精製される。一般に、単離された抗体またはその抗原結合断片は、単離された抗体またはその抗原結合断片とは異なる抗原特異性を有する他の抗体またはその抗原結合断片を実質的に含まないものである。例えば、いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片の調製物は、細胞材料及び／または化学前駆体を実質的に含まない。さらに、いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、単離されるか、または精製され、例えば、部分的に精製され、単離されるか、または精製される抗体またはその抗原結合断片は、沈殿物を実質的に含まず、すなわち、例えば、眼、Ａ２８０、サイズ排除クロマトグラフィー、及び／または動的光散乱によって検査されるときに沈殿物を含まない。

６．８薬学的組成物
本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片を含み、いくつかの事例では、阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストをさらに含む組成物が本明細書に提供される。いくつかの態様では、所望の純度を有するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片は、例えば、生理学的に許容される担体、賦形剤または安定剤を含む薬学的組成物中に存在する（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる投与量及び濃度でレシピエントに対して非毒性である。非経口投与のために好適な製剤としては、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、及び意図されるレシピエントの血液と製剤を等張にする溶質を含むことができる水性及び非水性の等張滅菌注射液、ならびに懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、及び防腐剤を含むことができる水性及び非水性滅菌懸濁液が挙げられる。

いくつかの態様では、薬学的組成物は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、例えば、約ｐＨ７．４のＰＢＳを含む。いくつかの態様では、薬学的製剤は、酢酸ナトリウム及び／または塩化ナトリウム、例えば、約１０ｍＭの酢酸ナトリウム及び約１００ｍＭの塩化ナトリウムを、約５．５のｐＨで含む。いくつかの態様では、薬学的製剤は、酢酸ナトリウム及び／または塩化ナトリウム、例えば、約２０ｍＭの酢酸ナトリウム及び約１００ｍＭの塩化ナトリウムを、約５．５のｐＨで含む。いくつかの態様では、薬学的製剤は、クエン酸塩及び／または塩化ナトリウム、例えば、約１０ｍＭのクエン酸塩及び約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを、約５のｐＨで含む。いくつかの態様では、薬学的製剤は、クエン酸塩及び／または塩化ナトリウム、例えば、約２０ｍＭのクエン酸塩及び約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを、約５のｐＨで含む。いくつかの態様では、薬学的製剤は、ヒスチジン及び／または塩化ナトリウム、例えば、約１０ｍＭのヒスチジン及び約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを、約６のｐＨで含む。いくつかの態様では、薬学的製剤は、ヒスチジン及び／または塩化ナトリウム、例えば、約２０ｍＭのクエン酸塩及び約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを、約６のｐＨで含む。いくつかの態様では、薬学的製剤は、リン酸塩及び／または塩化ナトリウム、例えば、約１０ｍＭのリン酸塩及び約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを、約７のｐＨで含む。いくつかの態様では、薬学的製剤は、リン酸塩及び／または塩化ナトリウム、例えば、約２０ｍＭのリン酸塩及び約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを、約７のｐＨで含む。いくつかの態様では、薬学的製剤は、リン酸塩及び／または塩化ナトリウム、例えば、約１０ｍＭのリン酸塩及び約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを、約８のｐＨで含む。いくつかの態様では、薬学的製剤は、リン酸塩及び／または塩化ナトリウム、例えば、約２０ｍＭのリン酸塩及び約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを、約８のｐＨで含む。いくつかの態様では、薬学的製剤は、ｔｒｉｓ及び／または塩化ナトリウム、例えば、約１０ｍＭのｔｒｉｓ及び約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを、約９のｐＨで含む。いくつかの態様では、薬学的製剤は、ｔｒｉｓ及び／または塩化ナトリウム、例えば、約２０ｍＭのリン酸塩及び約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを、約９のｐＨで含む。いくつかの態様では、薬学的組成物は、１つ以上の賦形剤を含む。いくつかの態様では、１つ以上の賦形剤は、塩化ナトリウム、ポリソルベート、例えば、ポリソルベート８０、スクロース、及び／またはアルギニンを含む。いくつかの態様では、薬学的組成物は、所望のｐＨでの緩衝液を含み、塩化ナトリウム、例えば、約１００ｍＭの塩化ナトリウム、例えば、約１２０ｍＭの塩化ナトリウムをさらに含む。いくつかの態様では、薬学的組成物は、所望のｐＨでの緩衝液を含み、塩化ナトリウム及びポリソルベート、例えば、約１２０ｍＭの塩化ナトリウム及び０．０１％ポリソルベート８０、例えば、１５０ｍＭのＮａＣｌ及び０．０５％ポリソルベート２０、例えば、７５ｍＭのＮａＣｌ及び０．０５％ポリソルベート２０をさらに含む。いくつかの態様では、薬学的組成物は、所望のｐＨでの緩衝液を含み、さらに、スクロース、例えば、約６％のスクロースを含む。いくつかの態様では、薬学的組成物は、所望のｐＨでの緩衝液を含み、スクロース及びポリソルベート、例えば、約６％スクロース及び約０．０１％ポリソルベート８０、例えば、約１０％スクロース及び約０．０５％ポリソルベート２０をさらに含む。いくつかの態様では、薬学的組成物は、所望のｐＨでの緩衝液を含み、スクロース、アルギニン、及びポリソルベート、例えば、約１０％のスクロース、約５０ｍＭのアルギニン、及び約０．０５％ポリソルベート２０をさらに含む。いくつかの態様では、薬学的組成物は、所望のｐＨでの緩衝液を含み、アルギニン及びポリソルベート、例えば、約５０ｍＭのアルギニン及び約０．０５％ポリソルベート２０をさらに含む。いくつかの態様では、薬学的組成物は、所望のｐＨでの緩衝液を含み、塩化ナトリウム、スクロース、アルギニン、及びポリソルベート、例えば、約７５ｍＭのＮａＣｌ、約５％スクロース、約５０ｍＭのアルギニン、及び約０．０５％ポリソルベート２０をさらに含む。

いくつかの態様では、薬学的組成物は、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片、及び薬学的に許容される担体を含む（例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ｗｉｔｈ Ｆａｃｔｓ ａｎｄ ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｓＤｒｕｇｆａｃｔｓ Ｐｌｕｓ，２０ｔｈ ｅｄ．（２００３）、Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００４）、Ｋｉｂｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（２０００）を参照されたい）。本明細書に記載される薬学的組成物は、いくつかの態様では、医薬としての使用のためのものである。インビボ投与に使用される組成物は、滅菌することができる。これは、例えば、滅菌濾過膜を介した濾過によって容易に達成される。

本明細書に記載の薬学的組成物を使用して、インビボまたはインビトロで生物学的効果（複数可）を発揮することができる。例えば、本明細書に記載の薬学的組成物を使用して、ＳＦＲＰ２発現骨肉腫細胞のアポトーシスを選択的に誘導することができる。例えば、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体は、Ｔ細胞におけるアポトーシスを誘導しないが、骨肉腫細胞のアポトーシスを誘導し、細胞内のＳＦＲＰ２の量を低減し、治療された対象におけるＳＦＲＰ２の血清レベルを低減し、対象における転移性骨肉腫の増殖を低減し、患者における骨肉腫肺転移の量を低減し、患者におけるＣＤ３８タンパク質の量を低減し、及び／または、ＳＦＲＰ２が過剰発現し、及び／またはＳＦＲＰ２発現もしくは過剰発現が、様々ながん、例えば、骨肉腫などの疾患状態に関連する疾患または状態を治療する。

いくつかの態様では、本明細書に提供される薬学的組成物は、がんなどの疾患または状態の治療に使用される。本明細書に提供されるように治療することができるがんの例には、乳癌、血管肉腫、骨肉腫、横紋筋肉腫、胞巣状軟部肉腫、悪性神経膠腫、多発性骨髄腫、腎細胞癌、前立腺癌、肺癌、及び黒色腫が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、がんは、早期がんまたは後期がんである可能性がある。いくつかの態様では、がんは、原発性腫瘍である。

６．９使用方法及び方法
様々な態様では、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片、または本明細書に記載の薬学的組成物を使用するインビトロ及びインビボ方法が本明細書に提供される。そのような方法には、ＳＦＲＰ２発現骨肉腫細胞のアポトーシスの誘導、例えば、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体は、Ｔ細胞におけるアポトーシスを誘導しないが、骨肉腫細胞のアポトーシスを誘導する、細胞内のＳＦＲＰ２の量の低減、治療された対象におけるＳＦＲＰ２の血清レベルの低減、対象における転移性骨肉腫の増殖の低減、患者における骨肉腫肺転移の量の低減、患者におけるＣＤ３８タンパク質の量の低減、及び／またはＳＦＲＰ２が過剰発現し、及び／またはＳＦＲＰ２発現もしくは過剰発現が、様々な異なるがん、例えば、骨肉腫などの疾患状態に関連する疾患または状態の治療が含まれる。

いくつかの態様では、がんを治療するための方法が本明細書に提供される。いくつかの態様では、がんの治療は、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体もしくはその抗原結合断片またはその薬学的組成物と細胞を接触させることによって上記細胞中のＳＦＲＰ２の量を低減させること、治療有効量の本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体もしくはその抗原結合断片またはその薬学的組成物を上記患者に投与することによって患者の血清ＳＦＲＰ２レベルを低減させること、患者の骨肉腫細胞のアポトーシスを選択的に誘導し、例えば、上記ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体は、Ｔ細胞におけるアポトーシスを誘導しないが、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片またはその薬学的組成物を投与することによって骨肉腫細胞のアポトーシスを誘導すること、患者に、本明細書に記載される治療有効量のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片またはその薬学的組成物を投与することによって上記患者の転移性骨肉腫の増殖を低減すること、本明細書に記載される治療有効量のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片またはその薬学的組成物を上記患者に治療的に投与することによって患者の骨肉腫肺転移の量を低減すること、治療有効量の本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体もしくはその抗原結合断片またはその薬学的組成物を患者に投与することによって上記患者のＣＤ３８タンパク質の量を低減すること、治療有効量の本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体もしくはその抗原結合断片またはその薬学的組成物を骨肉腫と診断された患者に投与することによって上記患者を治療することを含む。いくつかの態様では、治療は、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体もしくはその抗原結合断片またはその薬学的組成物を用いる治療を含む単独療法治療である。いくつかの態様では、治療は、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片と、任意選択でＰＤ－１である阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストとを用いた治療を含む併用療法、またはその薬学的組成物を含む。いくつかの態様では、本発明の方法によって治療されるがんは、ＳＦＲＰ２が増加したがん（例えば、ＳＦＲＰ２ ｍＲＮＡが増加したがん及び／またはＳＦＲＰ２タンパク質が増加したがん）である。いくつかの態様では、がんは、骨肉腫である。

さらに、いくつかの態様では、本明細書に記載の方法によって治療されるがんは、乳癌、悪性神経膠腫、多発性骨髄腫、腎細胞癌、腎臓癌、前立腺癌、肺癌、黒色腫、非小細胞肺癌、膵臓癌、結腸直腸癌、膀胱癌、肝細胞癌、消化管癌、ならびに血管肉腫、骨肉腫、横紋筋肉腫、及び胞巣状軟部肉腫を含むがこれらに限定されない肉腫を含む、がんの治療方法が本明細書に提供される。いくつかの態様では、がんは、早期がんまたは後期がんである可能性がある。いくつかの態様では、がんは、原発性腫瘍である。いくつかの態様では、がんは、正常状態と比較したＳＦＲＰ２発現レベル、例えば、ＳＦＲＰ２過剰発現が、疾患状態及び／またはがん状態を示すがんである。いくつかの態様では、がんの治療は、細胞を、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体もしくはその抗原結合断片またはその薬学的組成物と接触させることによって、上記細胞中のＳＦＲＰ２の量を低減させること、患者に、治療有効量の、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体もしくはその抗原結合断片またはその薬学的組成物を投与することによって、上記患者の血清ＳＦＲＰ２レベルを低減させること、患者のがん細胞のアポトーシスを選択的に誘導すること、例えば、本明細書に記載のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片またはその薬学的組成物を投与することによって、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体は、Ｔ細胞におけるアポトーシスを誘導しないが、がん性細胞のアポトーシスを誘導すること、患者に、治療有効量の本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片またはその薬学的組成物を投与することによって、上記患者における転移性がんの増殖を低減させること、患者に、治療有効量の本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片またはその薬学的組成物を投与することによって、上記患者の転移、例えば肺転移の量を低減させること、患者に、治療有効量の本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体もしくはその抗原結合断片またはその薬学的組成物を投与することによって、上記患者のＣＤ３８タンパク質の量を低減させること、がんと診断された患者に、治療有効量の本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体もしくはその抗原結合断片またはその薬学的組成物を投与することによって、上記患者を治療すること、必要とする患者に、治療有効量の本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体もしくはその抗原結合断片またはその薬学的組成物を投与することによって、上記患者における増殖性がん細胞の量を低減させること、必要とする患者に、本明細書に記載される治療有効量のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体もしくはその抗原結合断片または薬学的組成物を投与することによって、上記患者における壊死性がん細胞の量を増加させること、必要とする患者に、治療有効量のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体もしくはその抗原結合断片、または本明細書に記載の薬学的組成物を投与することによって、上記患者の腫瘍（単数または複数）の体積を低減させること、必要とする患者に、治療有効量のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体もしくはその抗原結合断片、または本明細書に記載の薬学的組成物を上記患者に投与することによって、上記患者のＴ細胞中のＰＤ－１レベルを選択的に低減させることを含む。いくつかの態様では、治療は、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片またはその薬学的組成物を用いる治療を含む単独療法治療である。いくつかの態様では、治療は、本明細書に記載されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片と、任意選択でＰＤ－１である阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストとを用いた治療を含む併用療法、またはその薬学的組成物を含む。いくつかの態様では、本発明の方法によって治療されるがんは、ＳＦＲＰ２が増加したがん（例えば、ＳＦＲＰ２ ｍＲＮＡが増加したがん及び／またはＳＦＲＰ２タンパク質が増加したがん）である。

いくつかの態様では、がん、例えば、乳癌、血管肉腫、骨肉腫、横紋筋肉腫、胞巣状軟部肉腫、悪性神経膠腫、多発性骨髄腫、腎細胞癌、前立腺癌、肺癌、または黒色腫を治療する方法が提供され、この方法は、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片、またはその薬学的組成物を投与することを含み、この方法は、阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストを投与することをさらに含む。いくつかの態様では、阻害性チェックポイント分子は、ＰＤ－１（プログラム細胞死タンパク質－１）である。いくつかの態様では、ＰＤ－１のアンタゴニストは、ＰＤ－１に対する抗体である。ＰＤ－１抗体には、例えば、ＯＰＤＩＶＯ（ニボルマブ）、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（ペムブロリズマブ）、ＭＥＤＩ－０６８０（ＡＭＰ－５１４；ＷＯ２０１２／１４５４９３）、カムレリズマブ（ＳＨＲ－１２１０）、チスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、またはスパルタリズマブ（ＮＰＶＰＤＲ００１、ＮＶＳ２４０１１８、ＰＤＲ００１）が含まれる。ＡＭＰ－２２４と呼ばれる、ＩｇＧｌのＦｃ部分に融合されたＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣ）の細胞外ドメインから構成される組換えタンパク質を使用して、ＰＤ－１受容体をアンタゴナイズすることもできる。いくつかの態様では、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片、またはその薬学的組成物は、放射線療法及び／または化学療法剤と組み合わせて投与される。

６．１０投与（Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）及び投与（Ｄｏｓｉｎｇ）
本明細書に提供されるヒト化ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片、または本明細書に提供されるその薬学的組成物は、非経口、肺内、鼻腔内、腫瘍内、病変内投与、脳脊髄内、頭蓋内、脊髄内、滑膜内、くも膜下腔内、経口、局所、または吸入経路を含む任意の好適な手段によって投与され得る。非経口注入としては、ボーラスとして、または一定時間にわたる連続注入による筋肉内、静脈内投与、動脈内、関節内、腹腔内、または皮下投与が挙げられる。いくつかの態様では、投与は、静脈内投与である。いくつかの態様では、投与は、皮下である。

本明細書に提供されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片、または本明細書に提供される薬学的組成物の適切な投与量及び投与レジメンは、単独で、または１つ以上の他の追加の治療薬、例えば、阻害性免疫チェックポイント分子の１つ以上のアンタゴニストと組み合わせて使用される場合、治療される疾患、疾患の重症度及び経過、投与経路、及び他の要因に依存する。

いくつかの態様では、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片は、例えば、それを必要とする患者に、０．１ｍｇ／ｋｇ体重～２００ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、約１～３０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、約５～１５ｍｇ／ｋｇ体重の量で投与される。いくつかの態様では、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片は、０．１ｍｇ／ｋｇ体重以下、０．２５ｍｇ／ｋｇ体重以下、０．５０ｍｇ／ｋｇ体重以下、０．７５ｍｇ／ｋｇ体重以下、１ｍｇ／ｋｇ体重以下、２ｍｇ／ｋｇ体重以下、３ｍｇ／ｋｇ体重以下、４ｍｇ／ｋｇ体重以下、５ｍｇ／ｋｇ体重以下、６ｍｇ／ｋｇ体重以下、７ｍｇ／ｋｇ体重以下、８ｍｇ／ｋｇ体重以下、９ｍｇ／ｋｇ体重以下、１０ｍｇ／ｋｇ体重以下、１５ｍｇ／ｋｇ体重以下、２０ｍｇ／ｋｇ体重以下、２５ｍｇ／ｋｇ体重以下、３０ｍｇ／ｋｇ体重以下、３５ｍｇ／ｋｇ体重以下、４０ｍｇ／ｋｇ体重以下、４５ｍｇ／ｋｇ体重以下、５０ｍｇ／ｋｇ体重以下、または６０ｍｇ／ｋｇ体重以下、７０ｍｇ／ｋｇ体重以下、８０ｍｇ／ｋｇ体重以下、９０ｍｇ／ｋｇ体重以下、１００ｍｇ／ｋｇ体重以下、または２００ｍｇ／ｋｇ体重以下で投与される。いくつかの態様では、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片は、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約０．５ｍｇ／ｋｇ体重～約５０ｍｇ／ｋｇ体重、約１．０ｍｇ／ｋｇ体重～約４０ｍｇ／ｋｇ体重、約１．０～約３０．０ｍｇ／ｋｇ体重、約１．０ｍｇ／ｋｇ体重～約２５ｍｇ／ｋｇ体重、約１．０ｍｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重、約１．０ｍｇ／ｋｇ体重～約１５ｍｇ／ｋｇ体重、約２．０～約３０ｍｇ／ｋｇ体重、約２．０～約２５ｍｇ／ｋｇ体重、約２．０～約２０ｍｇ／ｋｇ体重、約２．０～約１５ｍｇ／ｋｇ体重、約３．０～約３０ｍｇ／ｋｇ体重、約３．０～約２５ｍｇ／ｋｇ体重、約３．０～約２０ｍｇ／ｋｇ体重、約３．０～約１５ｍｇ／ｋｇ体重、約４．０～約３０ｍｇ／ｋｇ体重、約４．０～約２５ｍｇ／ｋｇ体重、約４．０～約２０ｍｇ／ｋｇ体重、約４．０～約１５ｍｇ／ｋｇ体重、約５．０～約３０ｍｇ／ｋｇ体重、約５．０～約２５ｍｇ／ｋｇ体重、約５．０～約２０ｍｇ／ｋｇ体重、または約５．０～約１５ｍｇ／ｋｇ体重で投与される。

いくつかの態様では、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片は、例えば、それを必要とする患者に、本明細書に記載される量で併用療法の一部として投与される。いくつかの態様では、併用療法は、阻害性免疫チェックポイント分子の１つ以上のアンタゴニスト、例えば、１つ以上のＰＤ－１阻害剤を含む。いくつかの態様では、併用療法は、１つ以上のＰＤ－１阻害剤を含み、この阻害剤は、０．１ｍｇ／ｋｇ体重～２００ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重の量で投与される。いくつかの態様では、１つ以上のＰＤ－１阻害剤は、０．１ｍｇ／ｋｇ体重以下、０．２５ｍｇ／ｋｇ体重以下、０．５０ｍｇ／ｋｇ体重以下、０．７５ｍｇ／ｋｇ体重以下、１ｍｇ／ｋｇ体重以下、２ｍｇ／ｋｇ体重以下、３ｍｇ／ｋｇ体重以下、４ｍｇ／ｋｇ体重以下、５ｍｇ／ｋｇ体重以下、６ｍｇ／ｋｇ体重以下、７ｍｇ／ｋｇ体重以下、８ｍｇ／ｋｇ体重以下、９ｍｇ／ｋｇ体重以下、１０ｍｇ／ｋｇ体重以下、１５ｍｇ／ｋｇ体重以下、２０ｍｇ／ｋｇ体重以下、２５ｍｇ／ｋｇ体重以下、３０ｍｇ／ｋｇ体重以下、３５ｍｇ／ｋｇ体重以下、４０ｍｇ／ｋｇ体重以下、４５ｍｇ／ｋｇ体重以下、５０ｍｇ／ｋｇ体重以下、６０ｍｇ／ｋｇ体重以下、７０ｍｇ／ｋｇ体重以下、８０ｍｇ／ｋｇ体重以下、９０ｍｇ／ｋｇ体重以下、１００ｍｇ／ｋｇ体重以下、または２００ｍｇ／ｋｇ体重以下の量で投与される。いくつかの態様では、１つ以上のＰＤ－１阻害剤は、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．５ｍｇ／ｋｇ体重～約１５ｍｇ／ｋｇ体重、約１．０ｍｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約２．０ｍｇ／ｋｇ体重～約１０．０ｍｇ／ｋｇ体重、約３．０ｍｇ／ｋｇ体重～約１０．０ｍｇ／ｋｇ体重、約４．０ｍｇ／ｋｇ体重～約１０．０ｍｇ／ｋｇ体重、約５．０ｍｇ／ｋｇ体重～約１０．０ｍｇ／ｋｇ体重、約６．０ｍｇ／ｋｇ体重～約１０．０ｍｇ／ｋｇ体重、約７．０ｍｇ／ｋｇ体重～約１０．０ｍｇ／ｋｇ体重、約７．５ｍｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、または約８．０ｍｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重の量で投与される。

いくつかの態様では、ＰＤ－１アンタゴニストは、毎日、３日に１回、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、６週間に１回、８週間に１回、または１２週間に１回投与される。

いくつかの態様では、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片、及び１つ以上のＰＤ－１阻害剤は、少なくとも３日間、少なくとも３０日間、少なくとも４２日間、少なくとも８週間、少なくとも１２週間、少なくとも２４週間、少なくとも６ヶ月、または少なくとも１２ヶ月間、またはがんが再発するまで投与される。

いくつかの態様では、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片は、２回以上、２回の投与の間に間隔を伴って投与される。いくつかの態様では、間隔は、少なくとも約１時間、少なくとも約１２時間、少なくとも約１日、少なくとも約２日、少なくとも約３日、少なくとも約４日、少なくとも約５日、少なくとも約６日、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、少なくとも約４週間、少なくとも約１ヶ月、少なくとも約５週間、少なくとも約６週間、少なくとも約７週間、少なくとも約８週間、少なくとも約２ヶ月、少なくとも約９週間、少なくとも約１０週間、少なくとも約１１週間、少なくとも約１２週間、少なくとも約３ヶ月、少なくとも約６ヶ月、または少なくとも約１２ヶ月である。いくつかの態様では、間隔は、約１時間、約１２時間、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約２ヶ月、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約３ヶ月、約６ヶ月、または約１２ヶ月である。いくつかの態様では、間隔は、用量全体で同じである。いくつかの態様では、間隔は、用量全体で異なる。

いくつかの態様では、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片は、阻害性免疫チェックポイント分子の１つ以上のアンタゴニスト、例えば、１つ以上のＰＤ－１阻害剤を含む併用療法として投与される。いくつかの態様では、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片、及び阻害性免疫チェックポイント分子の１つ以上のアンタゴニストは、同時に、別々に、または連続して投与される。いくつかの態様では、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片を最初に投与し、阻害性免疫チェックポイント分子の１つ以上のアンタゴニストを一定時間間隔後に投与する。いくつかの態様では、阻害性免疫チェックポイント分子の１つ以上のアンタゴニストを最初に投与し、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片を一定時間間隔後に投与する。いくつかの態様では、間隔は、少なくとも約１時間、少なくとも約１２時間、少なくとも約１日、少なくとも約２日、少なくとも約３日、少なくとも約４日、少なくとも約５日、少なくとも約６日、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、少なくとも約４週間、少なくとも約１ヶ月、少なくとも約５週間、少なくとも約６週間、少なくとも約７週間、少なくとも約８週間、少なくとも約２ヶ月、少なくとも約９週間、少なくとも約１０週間、少なくとも約１１週間、少なくとも約１２週間、少なくとも約３ヶ月、少なくとも約６ヶ月、または少なくとも約１２ヶ月である。いくつかの態様では、間隔は、約１時間、約１２時間、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約２ヶ月、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約３ヶ月、約６ヶ月、または約１２ヶ月である。いくつかの態様では、間隔は、用量全体で同じである。いくつかの態様では、間隔は、用量全体で異なる。

いくつかの態様では、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片は、例えば、それを必要とする患者に、阻害性免疫チェックポイント分子の１つ以上のアンタゴニストの投与を任意に含む併用療法の一部として投与され、この併用療法は、放射線療法、化学療法、サイトカイン療法、及び／または遺伝子療法をさらに含む。

いくつかの態様では、本明細書に提供されるのは、薬剤として使用するためのヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片または本明細書に提供される薬学的組成物である。

いくつかの態様では、がん、例えば、骨肉腫の治療のための方法における使用のための、本明細書に提供されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片または薬学的組成物が本明細書に提供される。いくつかの態様では、本明細書に提供される有効量のヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片、または薬学的組成物を対象に投与することを含む、対象のがんの治療のための方法における使用のための、本明細書に提供されるヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片、または薬学的組成物が本明細書に提供される。

８．実施例
実施例１：ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体の調製
本実施例では、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体を、以下のとおり調製した。まず、可変重鎖及び可変軽鎖領域の配列決定を、Ｍｏ．１抗体の抗ＳＦＲＰ２ハイブリドーマから得られたマウス抗ＳＦＲＰ２抗体可変領域遺伝子に対して実施した（配列番号１０のＶＨ鎖、配列番号１１のＶＬ鎖）。配列決定後、配列情報を使用して、一連のヒト化抗体バリアントを設計した。複合Ｖ領域遺伝子は、選択されたヒト配列セグメントの組み合わせをコードする合成オリゴヌクレオチドを使用して生成した。次いで、ＶＨ及びＶＬ鎖構築物を、ＩｇＧ１重鎖またはカッパ軽鎖のいずれかを含有するベクターにクローニングした。ベクターにクローニングされた可変重鎖及び可変軽鎖領域のアミノ酸配列及び配列識別子を、以下の表１及び表２に提示する。

ＶＨ鎖とＶＬ鎖の各可能な組み合わせ、すなわち、合計２０個のペアリングを、発現試験のためにエレクトロポレーションを介してＮＳ０細胞に安定してトランスフェクトした。これらの組み合わせは、以下の表３に提示される。

評価されたＶＨ鎖とＶＬ鎖の組み合わせの大部分について、トランスフェクションの成功及び安定したクローン選択が達成されたが、いくつかの鎖の組み合わせ、例えば、ＶＫ１を含有するもののうちのいくつかは、クローンを提供しなかった（例えば、ＶＨ１／ＶＫ１、ＶＨ２／ＶＫ１、及びＶＨ４／ＶＫ１）。

ＮＳ０細胞から発現される種々の異なる抗体を、プロテインＡセファロースカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上の細胞培養上清から精製し、緩衝液をＰＢＳ ｐＨ７．４に交換し、還元型ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析した（図１Ａを参照）。ＶＨ鎖及びＶＬ鎖ポリペプチドの予測サイズに対応するバンドが、それぞれの場合に観察された（図１Ａを参照）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルのレーンは、以下のようにロードした。１＝ＭＷマーカー、２＝Ａｂ１、３＝Ａｂ２、４＝Ａｂ３、５＝Ａｂ４、６＝Ａｂ５、７＝Ａｂ６、８＝Ａｂ７、９＝Ａｂ８、１０＝Ａｂ９、１１＝ＭＷマーカー、１２＝ＭＷマーカー、１３＝Ａｂ１０、１４＝Ａｂ１１、１５＝Ａｂ１２、１６＝ＭＷマーカー、１７＝Ａｂ１３、及びレーン１８＝Ａｂ１４（図１Ａを参照）。

前出で論じられるヒト化抗体Ａｂ１～Ａｂ２０に加えて、２つのキメラ抗体、Ｃｈｉ．１及びＣｈｉ．２を以下のように調製した。Ｍｏ．１ ＶＨ鎖及びＶＬ鎖（それぞれ配列番号１０及び１１）を、ＩｇＧ１ ＶＨ鎖及びＶＫ鎖発現ベクターにクローニングした。Ｃｈｉ．１抗体を最初に生成し、配列決定した。配列決定の際に、Ｃｈｉ．１はＫａｂａｔ位置１０６ａにリジンを含み、Ｍｏ．１はＫａｂａｔ位置１０６ａにグルタミンを含むことが留意された。したがって、第２のキメラ抗体、Ｃｈｉ．２を調製し、これは、位置１０６ａ Ｋａｂａｔにグルタミンを含む。Ｋａｂａｔ位置１０６ａでの１つの残基の違いは、キメラ抗体のＳＦＲＰ２への結合に影響を与えることが見出されなかった（データ示さず）。Ｃｈｉ．１のＶＨ鎖及びＶＬ鎖は、それぞれ、配列番号１０及び配列番号１１のアミノ酸配列を含んでいた。Ｃｈｉ．２のＶＨ鎖及びＶＬ鎖は、それぞれ、配列番号１０及び配列番号１３のアミノ酸配列を含んでいた。

ＨＥＫ細胞及びＮＳ０細胞において独立して発現されるＣｈｉ．１及びＣｈｉ．２を、プロテインＡセファロースカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上の細胞培養上清から精製し、緩衝液をＰＢＳ ｐＨ７．４に交換し、還元型ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析した（図１Ｂを参照）。ＶＨ鎖及びＶＬ鎖ポリペプチドの予測サイズに対応するバンドが、それぞれの場合に観察された（図１Ｂを参照）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルのレーンは、以下のようにロードした。１＝ＭＷマーカー；２＝ＨＥＫ細胞から精製したＣｈｉ．１；３＝ＨＥＫ細胞から精製したＣｈｉ．２；４＝ＭＷマーカー；５＝ＮＳ０細胞から精製したＣｈｉ．１；６＝ＮＳ０細胞から精製したＣｈｉ．２。Ｃｈｉ．２と比較して、Ｃｈｉ．１の発現または純度に有意な差は認められなかった。

実施例２：抗ＳＦＲＰ２抗体の比較解析
本実施例では、実施例１のように調製した抗体Ａｂ１－Ａｂ１４を比較解析した。さらに、抗体がＳＦＲＰ２（配列番号１２）に結合する親マウス抗体、Ｍｏ．１と、Ａｂ１－Ａｂ１４を比較した。マウス抗体Ｍｏ．１は、配列番号１０のＶＨ鎖ポリペプチド配列及び配列番号１１のＶＬ鎖ポリペプチド配列を含んでいた。

種々の異なる抗体構築物のそれぞれの性能を、互いに、及びＭｏ．１と比較するために、抗体Ａｂ１－Ａｂ１４及びＭｏ．１のそれぞれを、競合結合アッセイ（ＥＬＩＳＡ）で評価した。簡潔に述べると、１０μｇ／ｍｌ～０．００４６μｇ／ｍｌのそれぞれのＡｂ１－Ａｂ１４の希釈シリーズ（３倍）を、一定濃度のビオチン化Ｍｏ．１抗体（０．１６μｇ／ｍｌ、最終濃度）で予混合した後、炭酸塩緩衝液中で希釈した１／５０００希釈のペプチドＢ（配列番号１４）を事前にコーティングしたＮＵＮＣ ＩＭＭＵＮＯ ＭＡＸＩＳＯＲＰ（商標）９６ウェル平底マイクロタイタープレート上で室温にて１時間インキュベートした。ビオチン化抗体の結合を、ストレプトアビジン－ＨＲＰ及びＴＭＢ基質を用いて検出した。

競合ＥＬＩＳＡ分析から得られた結果を使用して、各抗体のＩＣ_５０値を計算し、その値を、各ＥＬＩＳＡプレートに含まれたマウスＭｏ．１抗体のＩＣ_５０値に対して正規化した。得られた相対ＩＣ_５０値を図２に示す。得られたＩＣ_５０値から観察することができるように、試験した全ての抗体、すなわち、Ａｂ１－Ａｂ１４は、マウス抗体Ｍｏ．１と比較した場合、ＳＦＲＰ２／ペプチドＢへの改善された結合を示した。

抗体性能をさらに評価するために、抗体Ａｂ１－Ａｂ１４の各々を、内皮管形成アッセイで評価した。簡潔に述べると、２Ｈ１１マウス内皮細胞（＃ＣＲＬ－２１６３，ＡＴＣＣ（登録商標），Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）を、５％熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ，＃ＦＢ－１２，Ｏｍｅｇａ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｂｉｅｌ／Ｂｉｅｎｎｅ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）及び１％ペニシリン／ストレプトマイシン（ｖ／ｖ）を含むＯｐｔｉ－ＭＥＭ（＃２２６００１３４，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）中で培養した。細胞を、加湿した５％ＣＯ２－９５％の室内空気雰囲気中で、３７℃で培養した。次いで、培養した２Ｈ１１内皮細胞を、５％ＦＢＳを有するＯｐｔｉ－ＭＥＭ中に配置し、２４時間沈降させた。Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ中の細胞を２．５％のＦＢＳで一晩維持することによって静止を誘導した。Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）（＃ＥＣＭ６２５，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ，ＵＳＡ）を、Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ Ａｓｓａｙ ｐｒｏｔｏｃｏｌ（＃ＥＣＭ６２５ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に従って、９６ウェルプレートのウェル内で重合した。このアッセイでは、ＩｇＧ１対照（５ｕＭ）を、各抗体について０．５、１、５、１０、または２０ｕＭの増加濃度でＡｂ１－Ａｂ１４の１つでそれぞれ独立して処理した試料と比較した。ＩｇＧ１のみで処理した陰性対照を除いて、各試料を３０ｎＭのＳＦＲＰ２で処理し、これが管形成を促進した。陽性対照を、ＩｇＧ１とＳＦＲＰ２の両方で処置した。２．５％ＦＢＳを用いてＯｐｔｉ－ＭＥＭに再懸濁した処理物を、細胞に添加する前に、３７℃、５％ＣＯ_２のロッカー上で９０分間プレインキュベートした。１．９ｘｌ０^４個の細胞を、１５０ｍｌのプレインキュベート処理物に再懸濁し、次いで、３７℃、５％ＣＯ_２のロッカー上でさらに３０分間インキュベートした。最後に、細胞懸濁液を、重合したＭａｔｒｉｇｅｌ（商標）で事前にコーティングされた各ウェルに添加した。２．５％ＦＢＳ及び５ｍＭのＩｇＧ１を有する新鮮なＯｐｔｉ－ＭＥＭを対照細胞に与えた。各処理条件について、３７℃、５％ＣＯ_２でのインキュベーションの４時間後、ＥＶＯＳ ＦＬデジタルイメージングシステム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）の４倍対物レンズを使用して画像を取得した。

ここで図３を参照すると、図３は、対照アッセイ（図３の１を参照）のアッセイの代表的な結果、ならびにＡｂ８を用いる処理（図３の２を参照）またはＡｂ１１を用いる処理（図３の３を参照）を示す。図３の画像において観察できるように、Ａｂ８及びＡｂ１１は、両方とも、対照と比較して、内皮分岐点の数を有意に低減させた。

ＳＶＲ血管肉腫細胞を使用する管形成アッセイにおいて、抗体性能をさらに評価した。簡潔に述べると、ＳＶＲ血管肉腫細胞を１２，０００細胞／ウェルでＭａｔｒｉｇｅｌ中にプレーティングし、１００ｎｇ／μｌで対照、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ８、Ａｂ１１、またはＡｂ１２のいずれかで処理した（１群あたりｎ＝４）。４時間後、顕微鏡下のウェル内の管の写真が撮影され、画像Ｊによって分岐点がカウントされる。これは、マウスを使用して画像の各分岐点をクリックすることによって行われる。クリックするたびに、カウントされたタイプに対応するカラー番号が画像に表示され、対応するカウンタが更新され、画像上の全ての分岐点がカウントされる。

ここで図９Ａを参照すると、図９Ａは、対照処置（図９Ａの１を参照）、ならびにＡｂ１１を用いる処置（図９Ａの２を参照）またはＡｂ８を用いる処置（図９Ａの３を参照）についてのアッセイの代表的な結果を提示する。図９Ａの画像において観察できるように、Ａｂ８は、Ａｂ１１と対照の両方と比較して、内皮分岐点の数を有意に低減させた。

ここで図９Ｂを参照すると、上記の管形成アッセイから得られたデータは、パーセント阻害（処理／対照）×１００として提示される。両側Ｔ検定を実施し、Ｐ＜０．０５で有意であった。形成アッセイの結果を、パーセント阻害（処置／対照）×１００として定量した。図９Ｂにおいて観察できるように、対照と比較して、Ａｂ８を用いる処置が、管形成を有意に阻害した唯一の処置であった（＊ｐ＝０．０３）。

実施例３：ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体は、Ｔ細胞ではなく、骨肉腫細胞においてアポトーシスを選択的に誘導する
本実施例では、ＲＦ５７７骨肉腫細胞の処置に対するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体、Ａｂ８の効果を測定した。さらに、Ｔ細胞アポトーシスに対するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体Ａｂ８の効果を測定した。

ＲＦ５７７細胞株アッセイのために、ＳＦＲＰ２を内因性に発現するＲＦ５７７細胞株を、９６ウェルプレート（＃００３０７３０１１９；Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ，Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に１．０ｘ１０^４細胞／ウェルでプレートした。翌日、細胞を、１０μＭのＡｂ８、または１０μＭのＩｇＧ１対照を用いて、３７℃、５％ＣＯ_２で１時間処理した。アポトーシスは、アポトーシス検出キット（＃ＰＫ－ＣＡ７０７－３００１７；ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ，ＧｍｂＨ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）のプロトコルに従って測定した。アポトーシス細胞はＦＩＴＣ陽性であり、壊死細胞はＴｅｘａｓ Ｒｅｄ陽性であった。画像は、ＥＶＯＳ ＦＬｃデジタルイメージングシステム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）の１０倍対物レンズを使用して取得した。ＩｍａｇｅＪ細胞計数ソフトウェアを使用して細胞を計数した。各データポイントは、それぞれが４つの別々のウェル（ｎ＝１２）を含有する３つの独立した実験の結果である。

ここで図４Ａを参照すると、Ａｂ８を用いる処理後のアポトーシス細胞のパーセンテージが有意に増加した。ＲＦ５７７細胞において、Ａｂ８は、ＩｇＧ処理細胞における１１．８±０．３％から、アポトーシスを５２．４±０．０８％まで増加させた（ｎ＝１２、＊＊ｐ＜０．０００１）（図４Ａを参照）。

Ｔ細胞アポトーシスアッセイのために、Ｃ５７ｂｌ６マウスから単離された脾細胞を、ＴＣＲ及び６０００Ｕ／ｍＬ ＩＬ－２中で４８時間刺激した。刺激後、次いで、脾細胞をウェルから除去し、ＰＢＳで２回洗浄し、１：２００で希釈した以下のビオチン化抗体の混合物を使用して、負の減算によってＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞を選択した。ＴＥＲ１１９（＃１１６２０４）、ＣＤ２５（＃１０２００４）、ＧＲ－１（＃１０８４０４）、ＮＫ１．１（＃１０８７０４）、ＣＤ１１Ｃ（＃１１７３０４）、ＣＤ１１Ｂ（＃１０１２０４）、ＣＤ１９（＃１０１５０４）、これらは全てＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）からのものであり、その後１５分間氷上でインキュベートした。次いで、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ，ＵＳＡ）からの２００μＬのストレプトアビジン結合ビーズ溶液（＃５５７８１２）を含む磁気チューブホルダー上で、細胞を２０分間、ＲＴでインキュベートした。ＣＤ４＋及びＣＤ８＋細胞を上清から単離し、ビーズに結合した他の細胞を廃棄した。

Ｔ細胞アポトーシスに対するＡｂ８の効果を測定するために、Ｔ細胞（ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋）を上記のように単離し、ＩｇＧ１（１０μＭ）またはＡｂ８（１０μＭ）で２４時間処理し、Ｈｏｅｃｈｓｔ及びアネキシンＶについて染色し、次いでフローサイトメトリーによって分析した。実験のために使用したＤＭＳＯ含有培地中の様々な凍結／融解サイクルを通したＴ細胞から、アポトーシスの陽性対照を得た。ＩｇＧ１対照処置試料中のアポトーシス細胞の割合は、陽性対照群よりも有意に低かった（ｎ＝３、＊ｐ＜０．００１）（図４Ｂを参照）。ＩｇＧ１処置試料と比較して、アポトーシス細胞のパーセンテージは、Ａｂ８処置試料中で変化しないままであった（ｎ＝３、ｐ＝ＮＳ）（図４Ｂを参照）。

実施例４：ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体を含む単独療法及び併用療法は、ＳＦＲＰ２血清レベルを低減させる
本実施例では、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体Ａｂ８の使用を含む単独療法及び併用療法の効果を、ＳＦＲＰ２血清レベルの低減について評価した。

ＩｇＧ１（ｎ＝９）、Ａｂ８（ｎ＝１２）、ＰＤ－１ ｍＡｂ（ｎ＝８）（Ｂｉｏｘｃｅｌｌ，Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ ＵＳＡ（＃ＢＥ０２７３）から購入した抗マウスＰＤ－１／ＣＤ２７９モノクローナル抗体）、または両方の抗体の組み合わせ（ｎ＝１２）で処置したＣ５７ＢＬ６対照マウス（ｎ＝３）またはＲＦ５７７担持マウスからの血液を、安楽死及び腹腔切開の直後に下大静脈から採取した。製造業者のプロトコルに従って、ＢＤ Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ ＥＤＴＡ ＳＳＴチューブ（＃３６７９８１；Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ，ＵＳＡ）を使用して血清の分離を実施した。次いで、血清試料を、製造業者のプロトコルに従って、ＲａｙＢｉｏｔｅｃｈ Ｍｏｕｓｅ ＳＦＲＰ２ ＥＬＩＳＡキット（ＥＬＭ－ＳＦＲＰ－２；Ｐｅａｃｈｔｒｅｅ Ｃｏｒｎｅｒｓ，ＧＡ，ＵＳＡ）を使用して処理した。最後に、Ｇｅｎ５ ２．０６ソフトウェア（ＢｉｏＴｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ，ＵＳＡ）を使用して、Ｓｙｎｅｒｇｙ２プレートリーダーを用いて４５０ｎｍで吸光度を読み取った。

ここで図５を参照すると、ＥＬＩＳＡを使用して、転移性ＲＦ５７７ ＯＳを有するＣ５７／ＢＬ６マウス及び腫瘍のないＣ５７／ＢＬ６マウスの全ての処置群におけるＳＦＲＰ２の血清レベルを比較した。対照腫瘍保有マウス（ｎ＝９）の血清中のＳＦＲＰ２タンパク質レベルは、非腫瘍保有マウス（ｎ＝８）と比較して増加した（それぞれ、３２．６±２．６４ｎｇ／ｍｌ対９．３０±２．５２ｎｇ／ｍＬ、ｐ＜０．０１、図５）。加えて、処置群間のＳＦＲＰ２レベル（対照（ｎ＝９）、ＰＤ－１ ｍＡｂ（ｎ＝８）、Ａｂ８（ｎ＝１２）、及び併用療法（ｎ＝１２））を比較した。全ての処置群は、ＩｇＧ対照処置マウスと比較して有意に低いＳＦＲＰ２レベルを有した（ＩｇＧ対照については３２．６±２．６４ｎｇ／ｍｌ；ＰＤ－１ ｍＡｂについては１１．７±３．１２ｎｇ／ｍｌ；Ａｂ８については９．１４±２．０２ｎｇ／ｍｌ；併用療法については１０．５±２．３０ｎｇ／ｍｌ；ｐ＜０．０１；図５）。

実施例５：ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体を用いる転移性骨肉腫の処置は、ＣＤ３８レベルを低下させる
本実施例では、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体であるＡｂ８で転移性骨肉腫を処置することのＣＤ３８レベルに対する効果を評価した。

ＲＦ５７７ ＯＳ肺転移を有するマウスを、上記の実施例４に概して記載されるように調製した。４９日目にこれらのマウスから脾細胞を採取し、ＩｇＧ１対照（ｎ＝５）またはＡｂ８（ｎ＝５）で処置した。処置後、脾細胞を溶解し、標準プロトコルを使用してＣＤ３８についてウエスタンブロット分析プロービングのために調製した。ＩｍａｇｅＪ上にて、負荷対照と目的とするタンパク質とを比較して、密度測定を実施した。密度は、平均強度に各バンドの表面を乗じて計算した。試料間の変動を排除するために、ロード制御を使用した。最終結果は、各値を未処理の対照に対して正規化することによって得た。

ここで図６を参照すると、アクチンに対して正規化された平均相対ＣＤ３８タンパク質レベルは、ＩｇＧ１で処置した対照群と比較して、Ａｂ８で処置したマウス由来のＴ細胞中で８２％低減した（ｐ＝０．００４）。

実施例６：ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体を含む単独療法及び併用療法は、骨肉腫肺転移を阻害する
本実施例では、インビボモデルにおける骨肉腫肺転移の阻害におけるそれらの効果について、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体Ａｂ８の使用をそれぞれ含む単独療法及び併用療法を評価した。

事前に濾過し、ＰＢＳに再懸濁した５×１０^５ＲＦ５７７腫瘍細胞／１００μｌを用いて、Ｃ５７／Ｂｌ６マウスにおける尾静脈注射によって、骨肉腫肺転移を生成した。合計６２匹のマウスに注射した。腫瘍細胞注射の１２日後に、ＩｇＧ１対照抗体（４ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、毎週；ｎ＝１３）、ＰＤ－１ ｍＡｂ（２００μｇ／１００μＬ ｉｐ、ｑ３日、ｎ＝１４）、Ａｂ８（４ｍｇ／ｋｇ ｉｖ、ｑ３日、ｎ＝１５）、または両方の処置の組み合わせ（ｎ＝１４）のいずれかを用いて処置を開始し、４９日間継続した。４９日後、マウスを安楽死させ、肺を切除した。高解像度の写真を撮影し、各処置群の転移性肺表面結節を定量化するために利用した。使用したＰＤ－１ ｍＡｂは、Ｂｉｏｘｃｅｌｌ，Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ ＵＳＡ（＃ＢＥ０２７３）から購入した抗マウスＰＤ－１／ＣＤ２７９モノクローナル抗体であった。

このデータの定量化を図７Ａに示す。図７Ａを参照すると、処置４９日目に分析した５６匹のマウスでの表面転移の数は、ＩｇＧ１処置群で１１．５±２．５、ＰＤ－１ ｍＡｂ処置群で６．７±３、Ａｂ８処置群で７．８±１．３であり、併用療法は４．２±１．１であった（ｐ＝０．０１８、ＩｇＧ１対組み合わせを比較；図７Ａを参照）。図７Ａに提示されるデータから観察できるように、併用療法は、ＩｇＧ１対照と比較して肺表面転移を有意に減少させた（＊ｐ＝０．０１８）。図７Ａに提示されるデータから観察できるように、Ａｂ８を用いる単独療法も、ＩｇＧ１対照と比較して肺表面転移を減少させた。

上記の研究と並行して、動物の体重を、処置の最初の日に開始し、その後、処置の最後の週まで毎週測定した。収集されたデータは、図７Ｂに提示される。図７Ｂに提示されるように、どの処置群においても、体重の有意な低減は見られなかった。

上記の研究と同様の第２の研究を実施して、ヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体Ａｂ８を用いた骨肉腫肺転移の処置を含む単独療法及び併用療法の効果を評価した。本研究は、概して上記のように実施したが、この場合、腫瘍によって占有されるマウス肺の割合は、マウス肺の採取後に測定した。この測定値は、腫瘍面積を正常肺面積で除算し、１００倍して計算し、処置を対照に対して正規化した。本研究から得られた結果を図８に示す。図８に見ることができるように、Ａｂ８を用いる処置は、対照と比較して、肺転移性腫瘍体積を７１％低減させ、併用療法は、対照と比較して、腫瘍体積を８２％低減させた。

実施例７：ＭＤＡ－２３１ヒトトリプルネガティブ乳癌におけるｈＳＦＲＰ２ ｍＡｂの有効性及び生体内分布
方法
治験デザイン。同所性モデルを、ヒトトリプルネガティブ乳癌ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を有するヌードマウスで使用し、ＮＩＲ－フルオロフォアにコンジュゲートされたｈＳＦＲＰ２ ｍＡｂの処置を通して、ｈＳＦＲＰ２ ｍＡｂのインビボ動態を評価した。ｍＡｂの細胞会合を、インビボＭａｅｓｔｒｏイメージングシステムを用いて、７２時間にわたって放出Ｄｙｌｉｇｈｔ ７５５を測定することによってモニターした。ＮＩＲタグ付きＩｇＧ１対照を処置対照として使用し、腫瘍を含まないマウスを健常対照として使用した。ｈＳＦＲＰ２ ｍＡｂ処理の有効性を、同じ同所性モデルを用いた別個のインビボ実験で調査した。

細胞培養。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）を、１０％熱不活性化ＦＢＳ（＃ＢＴ２０１－５００－Ｄ，ＢｉｏＦｌｕｉｄ，Ｆｌｅｍｉｎｇ Ｉｓｌａｎｄ，ＦＬ，ＵＳＡ）及び１％ペニシリン／ストレプトマイシン（＃ＭＴ３０００９Ｃ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）を含むＤＭＥＭ（＃３０－２０２，ＡＴＣＣ（登録商標））中、３７℃、５％ＣＯ_２及び９５％湿度で培養した。細胞はＡＴＣＣ（登録商標）によって認証されており、インビボ注射の前に、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｉｍａｌ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）によってげっ歯動物病原体について試験した。

抗体及びタンパク質対照ＩｇＧ１は、オマリズマブ（＃ＮＤＣ５０２４２－０４０－６２）としてＮｏｖａｒｔｉｓ（Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）から得た。それをパッケージングごとに再構成し、ＰＢＳで希釈して、インビボ処置のために４ｍｇ／ｋｇの用量にした。ヒト化ＳＦＲＰ２ ｍＡｂ（Ａｂ８）を、実施例１において前述のように構築し、精製してエンドトキシンを除去した。インビボ処置のために、ＰＢＳで４ｍｇ／ｋｇの用量に希釈した。

マウス。
イメージングを用いるインビボ生体内分布
雌のヌードマウスは、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した。マウスの半数（ｎ＝６）を、５０％ ＨＢＳＳ及び５０％ Ｍａｔｒｉｇｅｌ（＃３５４２３４、Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｃｏｒｎｉｎｇ ＮＹ，ＵＳＡ）の１００μＬ 懸濁液中の５００万個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を注射した。マウスが触知可能な腫瘍を有するときに画像化し、対照として非腫瘍保有マウスを画像化した。ｈＳＦＲＰ２ ｍＡｂまたはＩｇＧ１対照の処置を、４ｍｇ／ｋｇの濃度で尾静脈注射を介して投与した。

同所性トリプルネガティブ乳癌モデルにおけるｈＳＦＲＰ２ ｍＡｂ処置のインビボ研究
雌のヌードマウスは、８週齢でＥｎｖｉｇｏから購入した。マウスに、５０％ ＨＢＳＳ及び５０％ 基底膜ＨＣ Ｍａｔｒｉｇｅｌフェノールレッドフリー（＃３５４２６２、Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｃｏｒｎｉｎｇ ＮＹ、ＵＳＡ）の１００μＬ懸濁液中の５００万個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を、右乳房脂肪パッド中に注射した。腫瘍サイズは、キャリパーを用いて３日ごとに測定し、体積は式（Ｌ×Ｗ２）／２を使用して計算した。一旦腫瘍が１９日目に体積５０ｍｍ^３に近づくと、処置を開始した。マウスを、ＩｇＧ１対照処置群（ｎ＝１１）またはｈＳＦＲＰ２ ｍＡｂ処置群（ｎ＝１１）のいずれかにランダムに分配した。実験が終了したときに対照腫瘍が２ｃｍに達するまで、３日ごとに４ｍｇ／ｋｇで静脈内に尾静脈注射を介して処置薬を送達した。ＩｇＧ１を毎週投与し、ｈＳＦＲＰ２ ｍＡｂを、以前のＭＴＤ及びＰＫ研究に従って３日ごとに投与した。腫瘍体積は治療中に３日ごとに測定し、体重は毎週記録した。対照腫瘍が２ｃｍの最大寸法に達した７８日後に処置が終了した。

イメージング。Ｍａｅｓｔｒｏインビボイメージングシステムを使用して、各処置の蛍光標識を通じて、マウスにおけるＩｇＧ１及びｈＳＦＲＰ２ ｍＡｂの生体内分布を評価した。イメージングは、注射の前、注射の直後、ならびに注射の２４、４８、７２、及び９６時間後に行った。

統計。ＩｇＧ１対照群及びｈＳＦＲＰ２ ｍＡｂ処置群の腫瘍体積を、相互作用を伴うＡＮＯＶＡと比較した。複数の比較のための調整は、Ｓｉｄａｋテクニックを使用して行われた。ｐ値＜０．０５は、全ての解析において統計学的に有意であると考えられた。統計解析は、ＳＴＡＴＡ統計ソフトウェアパッケージ（バージョン１５．０）を使用して完了した。

結果
ヒト化ＳＦＲＰ２ ｍＡｂは、インビボで腫瘍に優先的に局在する。
トリプルネガティブ乳癌の同所性モデルにおけるｈＳＦＲＰ２ ｍＡｂ処置の生体内分布を決定するために、ＮＩＲタグ付きｈＳＦＲＰ２ ｍＡｂを、尾静脈注射を介して腫瘍保有マウスに投与し、蛍光をＭａｅｓｔｒｏインビボイメージングシステムによって９６時間にわたって測定した（図１０）。蛍光を、対照としてｈＳＦＲＰ２ ｍＡｂを受けた３匹の非腫瘍保有マウスと比較した。２４時間時点で、腫瘍保有マウスにおいて、蛍光を肝臓、膀胱、及び腫瘍内で可視化した。７２時間にわたって、蛍光は、以前に決定された半減期に従って、腫瘍内で持続した。この間に蛍光は肝臓から消散し、膀胱は尿中排泄に起因して予想されたように蛍光を維持した。非腫瘍保有マウスは、乳房脂肪パッドにおいても、膀胱以外の任意の他の特定の領域においても蛍光を示さなかった。腫瘍保有マウス（ｎ＝３）及び非腫瘍保有マウス（ｎ＝３）に、対照としてＮＩＲタグ付きＩｇＧ１を投与した。ｈＳＦＲＰ２ ｍＡｂ ＮＩＲタグは、腫瘍内で蛍光を発現しなかったＩｇＧ１ ＮＩＲタグ付き対照とは対照的に３匹のマウス全てにおける蛍光の分布を示し、腫瘍に特異的に位置付けした。

ヒト化ＳＦＲＰ２ ｍＡｂは、インビボで腫瘍増殖を阻害する
ｈＳＦＲＰ２ ｍＡｂがインビボで腫瘍増殖を阻害するかどうかを評価するために、ヌードマウスの乳房脂肪パッド中のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞の同所性トリプルネガティブ乳癌モデルを使用した。処置は、腫瘍細胞接種後１９日目に腫瘍体積が５０ｍｍ^３に達したときに開始した。マウスに、ｈＳＦＲＰ２ ｍＡｂ（３日ごとに４ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１１）またはＩｇＧ１対照（週に４ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１１）のいずれかを１１週間、尾静脈を介して注射した。腫瘍をキャリパーで３日ごとに測定し、体積を計算した（Ｌ×Ｗ＾２）／２。処置の過程で、１匹のＩｇＧ１対照処置マウスは、腹水のために早期に期限切れになった。このマウスは解剖で原発腫瘍がなく、研究から除外された。研究の終了時には、剖検で腫瘍が存在しなかったため、各処置群から１匹のマウスも除外された。実験終了時の平均腫瘍体積は、ＩｇＧ１対照群で２９９８ｍｍ^３（ｎ＝９、９５％ＣＩ）、ｈＳＦＲＰ２群で１１５９ｍｍ^３（ｎ＝１０、９５％ＣＩ ８００－１５１９ｍｍ^３）であった。ＨＳＦＲＰ２ ｍＡｂ処置群は、腫瘍体積が６１％低減し、これは、ＩｇＧ１対照群と比較して、腫瘍体積の有意な低減であった（ｐ＜０．００１、図１１Ａ）。剖検では、４匹のＩｇＧ１対照処置マウス（４０％）が遠隔転移を有し、１匹のｈＳＦＲＰ２処置マウスが遠隔転移を有した（１０％）（図１１Ｂ）。処置の経過にわたって、いずれのマウスにおいても、有意な体重減少、脱毛、または嗜眠はなかった（図１１Ｃ）。

本発明は、本明細書に記載の特定の態様によって範囲が限定されるべきではない。実際に、説明されたものに加えて、本発明の様々な改変は、前述の説明及び添付の図面から当業者には明らかになるであろう。このような改変は、添付の特許請求の範囲内に入ることが意図される。

本明細書で引用される全ての参考文献（例えば、刊行物または特許または特許出願）は、各個別の参考文献（例えば、刊行物または特許または特許出願）が、あたかも全ての目的のためにその全体が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているかのであるのと同程度に、それらの全体が、全ての目的のために本明細書に組み込まれる。

他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内にある。

Claims (25)

1. 分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片であって、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片が、配列番号２及び配列番号９のアミノ酸配列をそれぞれ含む可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド及び可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片。
2. 分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片であって、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１９のアミノ酸配列を含む相補的決定領域（ＣＤＲ）Ｈ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ２、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ３、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ２、及び配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ３を含む、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片。
3. 分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に結合するヒト化抗ＳＦＲＰ２抗体またはその抗原結合断片であって、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１５及び配列番号１６のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ポリペプチド及び軽鎖ポリペプチドを含む、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片。
4. 前記ヒト化抗体または抗原結合断片が、重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を含む、請求項１または請求項２に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
5. 前記ヒト化抗体または抗原結合断片が、モノクローナル抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
6. 完全長抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
7. ヒト化抗原結合断片である、先行請求項のいずれか１項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
8. 前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ配列番号１０及び１１のＶＨ鎖ポリペプチド及びＶＬ鎖ポリペプチドを含む抗体またはその抗原結合断片のＩＣ５０値に対して０．７以下のＩＣ５０値を含み、前記ＩＣ５０値が、ＥＬＩＳＡアッセイによって測定される、先行請求項のいずれか１項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
9. 請求項１～８のいずれか１項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片の重鎖可変領域または重鎖をコードする核酸分子を含む、単離されたポリヌクレオチド。
10. 前記核酸分子が、配列番号２のＶＨをコードする、請求項９に記載の単離されたポリヌクレオチド。
11. 請求項１～８のいずれか１項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片の軽鎖可変領域または軽鎖をコードする核酸分子を含む、単離されたポリヌクレオチド。
12. 前記核酸分子が、配列番号９のＶＬをコードする、請求項１１に記載の単離されたポリヌクレオチド。
13. 請求項１～８のいずれか１項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片の重鎖可変領域または重鎖と、請求項１～８のいずれか１項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片の軽鎖可変領域または軽鎖とをコードする核酸分子を含む、単離されたポリヌクレオチド。
14. 請求項９～１３のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含む、単離されたベクター。
15. （ａ）請求項９～１３のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、（ｂ）請求項１４に記載のベクター、または（ｃ）請求項９もしくは１０に記載のポリヌクレオチドを含む第１のベクター、及び請求項１１もしくは１２に記載のポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含む、宿主細胞。
16. Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、酵母、ＣＨＯ、ＹＢ／２０、ＮＳ０、ＰＥＲ－Ｃ６、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＮＩＨ－３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＢＨＫ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２／０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＢＭＴ１０の細胞、組織培養中の植物細胞、昆虫細胞、及びヒト細胞からなる群から選択される、請求項１５に記載の宿主細胞。
17. 前記宿主細胞が、ＣＨＯ細胞である、請求項１５または請求項１６に記載の宿主細胞。
18. ＳＦＲＰ２に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片を産生する方法であって、核酸分子が発現され、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片が産生されるように、請求項１４～１７のいずれか１項に記載の宿主細胞を培養することを含み、任意選択で、前記方法が、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片を培養物から単離することをさらに含む、前記方法。
19. 前記単離されたヒト化抗体またはその抗原結合断片が、沈殿物を実質的に含まない、請求項１８に記載の方法。
20. 分泌型ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質２（ＳＦＲＰ２）に特異的に結合し、請求項９～１３のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドによってコードされるか、または請求項１８に記載の方法によって産生される、単離されたヒト化抗体またはその抗原結合断片。
21. 治療有効量の請求項１～８及び２０のいずれか１項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される賦形剤とを含む、薬学的組成物。
22. 患者のがんを治療する方法であって、前記患者に、請求項２１に記載の薬学的組成物を投与することを含む、前記方法。
23. 前記がんが、乳癌、血管肉腫、骨肉腫、横紋筋肉腫、胞巣状軟部肉腫、悪性神経膠腫、多発性骨髄腫、腎細胞癌、腎臓癌、前立腺癌、肺癌、黒色腫、非小細胞肺癌、膵臓癌、結腸直腸癌、膀胱癌、肝細胞癌、肉腫、及び消化管癌である、請求項２２に記載の方法。
24. 阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストを投与することをさらに含み、任意選択で、前記免疫チェックポイント分子がＰＤ－１である、請求項２２～２３のいずれか１項に記載の方法。
25. 前記ＰＤ－１のアンタゴニストが、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片であり、任意選択で、前記抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ＭＥＤＩ－０６８０（ＡＭＰ－５１４）、カムレリズマブ（ＳＨＲ－１２１０）、チスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、及びスパルタリズマブ（ＮＰＶＰＤＲ００１、ＮＶＳ２４０１１８、ＰＤＲ００１）からなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。

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