JP2022550420A - 抗ｐｄ－ｌ１抗原結合タンパク質及びその応用 - Google Patents

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Abstract

本願は、ＰＤ－Ｌ１抗原結合タンパク質に関する。前記抗原結合タンパク質は、１×１０－８Ｍ又はより低いＫＤ値で霊長類動物由来のＰＤ－Ｌ１と結合できる。前記抗原結合タンパク質は、ＰＤ－１及びＣＤ８０とＰＤ－Ｌ１の結合を遮断し、免疫細胞におけるサイトカインの分泌を刺激することができ、腫瘍成長及び／又は腫瘍細胞増殖を抑制することができる。本願は、融合タンパク質をさらに提供する。前記融合タンパク質は、ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片及び前記抗原結合タンパク質を含む。本願は、前記抗原結合タンパク質及び／又は前記融合タンパク質の腫瘍又はがんの予防と治療においる応用をさらに提供する。

Description

本願発明は生物医薬分野に関する。具体的に、抗ＰＤ－Ｌ１抗原結合タンパク質及びその応用、並びに抗ＰＤ－Ｌ１且つ抗ＴＧＦＢの融合タンパク質及びその応用に関する。
プログラム細胞死受容体リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）は、分化クラスター２７４（ＣＤ２７４）又はＢ７同源タンパク質１（Ｂ７－Ｈ１）とも呼ばれており、４０ＫＤａのＩ型膜貫通タンパク質であり、一般的に、活性化したＴ細胞、Ｂ細胞、単球、樹状細胞、マクロファージ及び複数の非造血細胞に発現される。
ＰＤ－Ｌ１は、プログラム細胞死受容体１（ＰＤ－１）及びＢ７－１（ＣＤ８０）と結合することができる。その中、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１シグナル経路は、免疫反応において非常に重要な共抑制シグナル経路であり、Ｔ細胞免疫応答の負調節、Ｔ細胞活性の抑制、サイトカイン分泌の低減を実現する。研究の結果、ＰＤ－Ｌ１は、胃がん、肺がん、乳腺がん、膵臓がん、卵巣がん、結腸がん、肥満細胞腫並びに悪性黒色腫などを含む複数種の腫瘍組織に発現することができ、そして腫瘍微小環境に浸潤している骨髄細胞に発現し、腫瘍細胞を免疫攻撃から保護することができる。トランスフォーミング増殖因子－Ｂ（ＴＧＦＢ）は、免疫システムに著しい影響を与える強力なサイトカインであり、複数の増殖性及び非増殖性細胞過程に関与している。前記細胞過程は、例えば、細胞の増殖と分化、胚の発生、細胞外マトリックスの形成、骨骼の発育、創傷の治癒、造血作用並びに免疫及び炎症反応を挙げられる。既存の治療技術手段としては、化学療法又は腫瘍標的療法のいずれの場合でも、その有効性に影響を与える重要なボトルネックが腫瘍細胞が免疫耐性を生じることである。腫瘍細胞は、腫瘍微小環境において、複数種の免疫抑制メカニズムを利用して身体の免疫システムによる認識と攻撃から逃れる。これらの免疫抑制メカニズムは、免疫抑制型サイトカイン（例えば、ＴＧＦＢ）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇｓ）、共抑制シグナル経路分子、骨髄抑制性細胞などを含む。
免疫を抑制する複数種のメカニズムは、免疫治療の有効性を阻害する可能性がある。場合によっては、単剤免疫治療は、腫瘍に対して効果を発揮しづらく、ごく一部のがんの場合において完全な反応を示す。したがって、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１シグナル経路を遮断する能力を備える薬物を開発し、そしてＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路を抑制した上で、腫瘍微小環境の免疫抑制型サイトカインＴＧＦＢを標的して中和することは、腫瘍及び複数種の免疫システム関連疾患の治療に新しい解決方法をもたらすことができる。
本願発明は、１×１０－８Ｍ、又はより低いＫＤ値で霊長類動物由来のＰＤ－Ｌ１に結合することができるＰＤ－Ｌ１抗原結合タンパク質を提供する。前記抗原結合タンパク質は、ＰＤ－１及びＣＤ８０とＰＤ－Ｌ１との結合を遮断することができ、免疫細胞におけるＩＦＮ－γ及び／又はＩＬ２の分泌を刺激し、腫瘍成長及び／又は腫瘍細胞増殖を抑制することができる。本願発明は、ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片と前記抗原結合タンパク質を含む融合タンパク質をさらに提供する。本願発明は、前記抗原結合タンパク質及び／又は前記融合タンパク質の腫瘍又はがんの予防と治療における応用をさらに提供する。
一方、本願発明は、抗体重鎖可変領域ＶＨの中の少なくとも一つのＣＤＲを含み、前記ＶＨが配列番号１９３に示すアミノ酸配列を含み、好ましくは、前記ＶＨが配列番号９０－９３、９５及び９７－１０４のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、ＰＤ－Ｌ１に結合する単離された抗原結合タンパク質を提供する。
ある実施形態において、前記の単離された抗原結合タンパク質が抗体軽鎖可変領域ＶＬの中の少なくとも一つのＣＤＲを含み、前記ＶＬが配列番号１９４に示すアミノ酸配列を含み、好ましくは、前記ＶＬが配列番号１０８－１１４、１１６及び１１８のいずれかに示すアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、前記の単離された抗原結合タンパク質が抗体又はその抗原結合断片を含み、好ましくは、前記抗体の中、前記抗体がモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体及び完全ヒト抗体からなる群から選ばれ、好ましくは、前記抗原結合断片がＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ及び／又はｄＡｂを含む。
ある実施形態において、軽鎖可変領域ＶＬがＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号１８１に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号１８２に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号１９１に示すアミノ酸配列を含み、その中、重鎖可変領域ＶＨがＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１７９に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号１８０に示すアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、前記ＬＣＤＲ１が配列番号１８１、４８－５１のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号１８２、６３－６４のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号１９１、７７－７９のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１７９、１４、１６及び１７のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号１８０、２９－３３のいずれかに示すアミノ酸配列を含む
ある実施形態において、前記ＬＣＤＲ１が配列番号４８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記ＬＣＤＲ１が配列番号４９に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記ＬＣＤＲ１が配列番号４８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号３０に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７９に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号３１に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号３２に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号３３に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記ＬＣＤＲ１が配列番号４８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１６に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号３０に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記ＬＣＤＲ１が配列番号４８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号３０に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１６に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号３２に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号３２に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１６に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１６に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号３３に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号３３に示すアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、前記抗体重鎖可変領域ＶＨがフレーム領域Ｈ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３、及びＨ－ＦＲ４を含み、好ましくは、前記Ｈ－ＦＲ１のＣ末端と前記ＨＣＤＲ１のＮ末端とが接続され、配列番号１に示すアミノ酸配列を含み、且つ／又は前記Ｈ－ＦＲ２が前記ＨＣＤＲ１と前記ＨＣＤＲ２との間に位置しており、配列番号９に示すアミノ酸配列を含み、且つ／又は前記Ｈ－ＦＲ３が前記ＨＣＤＲ２と前記ＨＣＤＲ３との間に位置しており、配列番号１９２に示すアミノ酸配列を含み、且つ／又は前記Ｈ－ＦＲ４のＮ末端と前記ＨＣＤＲ３のＣ末端とが接続され、配列番号３８に示すアミノ酸配列を含み、更に好ましくは、前記Ｈ－ＦＲ３が配列番号２１、２２及び２４のいずれかに示すアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬがフレーム領域Ｌ－ＦＲ１、Ｌ－ＦＲ２、Ｌ－ＦＲ３、及びＬ－ＦＲ４を含み、好ましくは、前記Ｌ－ＦＲ１のＣ末端と前記ＬＣＤＲ１のＮ末端とが接続され、配列番号１８５に示すアミノ酸配列を含み、且つ／又は前記Ｌ－ＦＲ２が前記ＬＣＤＲ１と前記ＬＣＤＲ２との間に位置しており、配列番号１８６に示すアミノ酸配列を含み、且つ／又は前記Ｌ－ＦＲ３が前記ＬＣＤＲ２と前記ＬＣＤＲ３との間に位置しており、配列番号１８７に示すアミノ酸配列を含み、且つ／又は前記Ｌ－ＦＲ４のＮ末端と前記ＬＣＤＲ３のＣ末端とが接続され、配列番号１８８に示すアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、前記Ｌ－ＦＲ１が配列番号４１－４４のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、且つ／又は前記Ｌ－ＦＲ２が配列番号５６－５９のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、且つ／又は前記Ｌ－ＦＲ３が配列番号６９－７２のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、且つ／又は前記Ｌ－ＦＲ４が配列番号８５－８６のいずれかに示すアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号１９３に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１９４に示すアミノ酸配列を含み、
好ましくは、前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９０－９３、９５及び９７－１０４のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、
好ましくは、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１０８－１１４、１１６及び１１８のいずれかに示すアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９０に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１０８に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９０に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１０９に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９１に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１０に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９０に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１１に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９２に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１２に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９３に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１３に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９０に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９５に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１６に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９７に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１８に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９８に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１８に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９９に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１３に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号１００に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１３に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号１０１に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号１０３に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１６に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号１０４に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１６に示すアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、前記の単離された抗原結合タンパク質が抗体重鎖定常領域を含み、且つ前記抗体重鎖定常領域がヒトＩｇＧ定常領域を含み、好ましくは、その中、前記抗体重鎖定常領域が配列番号１７２－１７５のいずれかに示すアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、前記の単離された抗原結合タンパク質が抗体重鎖ＨＣを含み、且つ前記ＨＣが配列番号１２２－１２５、１２７及び１２９－１３７のいずれかに示すアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、前記の単離された抗原結合タンパク質が抗体軽鎖定常領域を含み、その中、前記抗体軽鎖定常領域が配列番号１７０に示すアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、前記の単離された抗原結合タンパク質が抗体軽鎖ＬＣを含み、且つ前記ＬＣが配列番号１５０－１５６、１５８及び１６０－１６３のいずれかに示すアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、前記の単離された抗原結合タンパク質が以下の性質の中の一種又は複数種を有する：
１）１×１０－８Ｍ又はより低いＫＤ値で霊長類動物由来のＰＤ－Ｌ１と結合することができる；
２）ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１の結合を遮断することができる；
３）ＣＤ８０とＰＤ－Ｌ１の結合を遮断することができる；
４）免疫細胞におけるＩＦＮ－γ及び／又はＩＬ２の分泌を刺激することができる；
５）腫瘍成長及び／又は腫瘍細胞増殖を抑制することができる；
６）コントロール抗体と比べて、霊長類動物由来のＰＤ－Ｌ１と完全に重なることがないエピトープと結合し、
その中、前記コントロール抗体が配列番号５２に示すＬＣＤＲ１、配列番号６５に示すＬＣＤＲ２及び配列番号８１に示すＬＣＤＲ３を含み、且つ前記コントロール抗体が配列番号６に示すＨＣＤＲ１、配列番号１５に示すＨＣＤＲ２及び配列番号３４に示すＨＣＤＲ３を含み、
又は、
その中、前記コントロール抗体が配列番号５３に示すＬＣＤＲ１、配列番号６６に示すＬＣＤＲ２及び配列番号８２に示すＬＣＤＲ３を含み、且つ前記コントロール抗体が配列番号５に示すＨＣＤＲ１、配列番号１８に示すＨＣＤＲ２及び配列番号３５に示すＨＣＤＲ３を含み、
又は、
前記コントロール抗体が配列番号５５に示すＬＣＤＲ１、配列番号６８に示すＬＣＤＲ２及び配列番号８４に示すＬＣＤＲ３を含み、且つ前記コントロール抗体が配列番号８に示すＨＣＤＲ１、配列番号２０に示すＨＣＤＲ２及び配列番号３７に示すＨＣＤＲ３を含む。
ある実施形態において、前記霊長類動物がヒト及び／又はサルを含む。
一方、本願発明が融合タンパク質を提供し、前記融合タンパク質が以下のものを含む：ａ）ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片；並びにｂ）前記の単離された抗原結合タンパク質。
ある実施形態において、前記の融合タンパク質が第一ポリペプチド及び第二ポリペプチドを含み、その中、前記第一ポリペプチドが前記単離された抗原結合タンパク質の重鎖又はその断片並びに前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片を含み、且つ前記第二ポリペプチドが前記単離された抗原結合タンパク質の軽鎖又はその断片を含み、好ましくは、前記抗体重鎖又はその断片が前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片とｉｎ－ｆｒａｍｅ融合して前記第一ポリペプチドを形成し、更に好ましくは、その中、前記抗体重鎖又はその断片のＣ端が直接又は間接的に前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片のＮ端と接続する。
ある実施形態において、前記第一ポリペプチドの前記重鎖又はその断片がＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１７９、１４、１６及び１７のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号１８０、２９－３３のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、且つ／又は前記第二ポリペプチドがＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号１８１、４８－５１のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号１８２、６３－６４のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号１９１、７７－７９のいずれかに示すアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１６に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含む；又は、
ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１６に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号３３に示すアミノ酸配列を含む；又は、
ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号３３に示すアミノ酸配列を含む；又は、
ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含む；又は、
ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、前記抗体重鎖又はその断片がリンカーによって前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片と接続し、好ましくは、前記のなかで、前記リンカーがペプチドリンカーであり、且つ前記ペプチドリンカーが配列番号１６７－１６９のいずれか一項に記載されたアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片がヒトＴＧＦＢＲＩＩの細胞外ドメインを含み、好ましくは、前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片が配列番号１７６－１７８のいずれかに示すアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、前記第一ポリペプチドの前記重鎖又はその断片と前記第二ポリペプチドの前記軽鎖又はその断片が組み合わせて特異的にＰＤ－Ｌ１に結合する抗原結合部分を形成する。
ある実施形態において、前記第一ポリペプチドが配列番号１３８、１３９、１４２、１４３及び１４５－１４８のいずれか一項に記載されたアミノ酸配列を含み、その中、前記第二ポリペプチドが配列番号１６２－１６３のいずれか一項に記載されたアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、前記第一ポリペプチドが配列番号１３８に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記第一ポリペプチドが配列番号１３９に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記第一ポリペプチドが配列番号１４２に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記第一ポリペプチドが配列番号１４３に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記第一ポリペプチドが配列番号１４５に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６３に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記第一ポリペプチドが配列番号１４６に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６３に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記第一ポリペプチドが配列番号１４７に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記第一ポリペプチドが配列番号１４８に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含む。
一方、本願発明が単離された一種又は複数種の核酸分子を提供し、前記核酸分子が前記の単離された抗原結合タンパク質又は前記の融合タンパク質をコードする。
一方、本願発明がベクターを提供し、前記ベクターが前記の核酸分子を含む。
一方、本願発明が細胞を提供し、前記細胞が前記の核酸分子又は前記のベクターを含む。
一方、本願発明が製造前記の単離された抗原結合タンパク質又は前記の融合タンパク質の方法を提供し、前記方法が前記の単離された抗原結合タンパク質、前記の融合タンパク質を発現させる条件下で前記の細胞を培養することを含む。
一方、本願発明がキメラ抗原受容体を提供し、前記キメラ抗原受容体が前記の単離された抗原結合タンパク質を含む。
一方、本願発明が遺伝子修飾された細胞を提供し、前記細胞が前記のキメラ抗原受容体を含む。
一方、本願発明が抗体薬物複合体を提供し、前記抗体薬物複合体が細胞毒性剤、並びに前記の単離された抗原結合タンパク質を含む。
一方、本願発明が医薬組成物を提供し、前記組成物が前記の単離された抗原結合タンパク質、前記の融合タンパク質、前記の核酸分子、前記のベクター、前記の細胞、前記のキメラ抗原受容体、前記の遺伝子修飾された細胞及び／又は前記の抗体薬物複合体、並びに任意の薬学的に許容されるベクターを含み、好ましくは、前記医薬組成物がホルモン製剤、標的小分子製剤、プロテアソーム抑制剤、造影剤、診断薬、化学療法剤、腫瘍溶解性薬物、細胞毒性剤、サイトカイン、共刺激分子の活性化剤、抑制性分子の抑制剤並びにワクチンからなる群から選ばれる一種又は複数種をさらに含む。
一方、本願発明が前記の単離された抗原結合タンパク質、前記の融合タンパク質、前記の核酸分子、前記のベクター、前記の細胞、前記のキメラ抗原受容体、前記の遺伝子修飾された細胞及び／又は前記の抗体薬物複合体及び／又は前記の医薬組成物の薬物の製造における使用を提供し、前記薬物が腫瘍やがんの予防、軽減及び／又は治療に利用され、腫瘍成長及び／又は腫瘍細胞増殖を抑制し、好ましくは、前記腫瘍やがんがＰＤ－Ｌ１の発現が異常である腫瘍やがんであり、好ましくは、前記腫瘍やがんが結腸直腸がんを含む。
一方、本願発明が腫瘍を予防、軽減又は治療して、腫瘍成長及び／又は腫瘍細胞増殖を抑制する方法を提供し、前記方法が必要とする被験者に対して前記の単離された抗原結合タンパク質、前記の融合タンパク質、前記の核酸分子、前記のベクター、前記の細胞、前記のキメラ抗原受容体、前記の遺伝子修飾された細胞及び／又は前記の抗体薬物複合体及び／又は前記の医薬組成物を投与することを含み、好ましくは、前記のなかで、前記腫瘍やがんがＰＤ－Ｌ１の発現が異常である腫瘍やがんであり、好ましくは、前記腫瘍やがんが結腸直腸がんを含む。
一方、本願発明は、がんの治療、腫瘍成長及び／又は腫瘍細胞増殖の抑制に使用される、前記の単離された抗原結合タンパク質、前記の融合タンパク質、前記の核酸分子、前記のベクター、前記の細胞、前記のキメラ抗原受容体、前記の遺伝子修飾された細胞及び／又は前記の抗体薬物複合体及び／又は前記の医薬組成物を提供する。
一方、本願発明がＰＤ－Ｌ１及び又はＣＤ８０とＰＤ－１の結合を抑制する方法を提供し、前記方法が前記の単離された抗原結合タンパク質、前記の融合タンパク質、前記の核酸分子、前記のベクター、前記の細胞、前記のキメラ抗原受容体、前記の遺伝子修飾された細胞及び／又は前記の抗体薬物複合体及び／又は前記の医薬組成物を投与することを含む。
一方、本願発明がキットを提供し、前記キットが前記の単離された抗原結合タンパク質、前記の融合タンパク質、前記の核酸分子、前記のベクター、前記の細胞、前記のキメラ抗原受容体、前記の遺伝子修飾された細胞及び／又は前記の抗体薬物複合体及び／又は前記の医薬組成物を含み、好ましくは、前記キットが（ｉ）投与装置、及び／又は（ｉｉ）使用説明をさらに含む。
当業者にとって、以下の詳細な説明から、本願の他の態様及び利点を容易に理解することができる。以下の詳細な説明では、本出願の例示的な実施形態のみが示され、説明されている。当業者が認識するように、本出願の内容よって、当業者が本願が関連する発明の趣旨及び範囲から逸脱しない前提で、開示された特定の実施形態に変更を加えることが可能である。したがって、本願の図面及び明細書の説明は、単なる例示であり、限定的なものではない。
本願に係る発明の具体的な特徴は、添付した請求の範囲に示されている。以下で詳細に説明される例示的な実施形態及び図面を参照することによって、本願に係る発明の特徴及び利点をよりよく理解することができる。図面の簡単な説明は、次のとおりである：
図１は、本願の前記抗原結合タンパク質がヒトＰＤ－Ｌ１を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞と結合することを示す。 図２は、本願の前記抗原結合タンパク質がカニクイザルＰＤ－Ｌ１を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞と結合することを示す。 図３は、本願の前記抗原結合タンパク質がヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質と結合することを示す。 図４は、本願の前記抗原結合タンパク質がカニクイザルＰＤ－Ｌ１タンパク質と結合することを示す。 図５は、本願の前記抗原結合タンパク質がヒトＰＤ－Ｌ１を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞とヒトＰＤ－１との結合を遮断することを示す。 図６は、本願の前記抗原結合タンパク質がヒトＰＤ－Ｌ１を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞とヒトＰＤ－１との結合を遮断することを示す。 図７は、本願の前記抗原結合タンパク質がビオチン化したヒトＰＤ－１タンパク質とヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質との結合を遮断することを示す。 図８は、本願の前記抗原結合タンパク質がビオチン化したヒトＢ７－１（ＣＤ８０）タンパク質とヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質との結合を遮断することを示す。 図９は、本願の前記抗原結合タンパク質のＰＤ－１シグナル経路に対する抑制作用を示す。 図１０は、本願の前記抗原結合タンパク質のＰＤ－１シグナル経路に対する抑制作用を示す。 図１１は、本願の前記抗原結合タンパク質とヒトＰＤ－Ｌ１の親和力を示す：（Ａ）ＰＲ０００２６５の単濃度抗原結合解離曲線、（Ｂ）ＰＲ０００２６６の単濃度抗原結合解離曲線、（Ｃ）ＰＲ０００２６５の多濃度抗原結合解離曲線、（Ｄ）ＰＲ０００１５１の多濃度抗原結合解離曲線、（Ｅ）ＰＲ００１５９８の多濃度抗原結合解離曲線。 図１２は、本願の前記抗原結合タンパク質が混合リンパ球反応（ＭＬＲ）においてサイトカイン分泌を刺激することを示す：一組目のドナーマッチングのＭＬＲ実験において、（Ａ）１２０時間後の上清中のＩＦＮ－γレベル、（Ｂ）７２時間後の上清中のＩＬ－２レベル；二組目のドナーマッチングのＭＬＲ実験において、（Ｃ）１２０時間後の上清中のＩＦＮ－γレベル、（Ｄ）７２時間後の上清中のＩＬ－２レベル。 図１３は、本願の前記抗原結合タンパク質の抗体に依存する細胞毒性の結果を示す：（Ａ－Ｃ）三つの異なるドナーのＰＢＭＣの腫瘍細胞ＭＤＡ－ＭＢ－２３１に対する殺傷；（Ｄ－Ｆ）三つの異なるドナーのＰＢＭＣの腫瘍細胞ＮＣＩ－Ｈ２９２に対する殺傷。 図１４が本願の前記抗原結合タンパク質の体内腫瘍抑制活性を示し、前記体内腫瘍抑制活性がそれぞれ腫瘍体積変化（Ａ）及びマウス体重変化（Ｂ）である。 図１５は、本願に記載の融合タンパク質がヒトＰＤ－Ｌ１を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞と結合することを示す：（Ａ）表２０－１に示す融合タンパク質、（Ｂ）表２０－２に示す融合タンパク質。 図１６は、本願に記載の融合タンパク質がヒトＰＤ－Ｌ１を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞とヒトＰＤ－１との結合を遮断することを示す：（Ａ）表２１－１に示す融合タンパク質、（Ｂ）表２１－２に示す融合タンパク質。 図１７は、本願に記載の融合タンパク質のＰＤ－１シグナル経路に対する抑制作用を示す。 図１８は、本願に記載の融合タンパク質がＴＧＦＢ１と結合することを示す：（Ａ）表２３－１に示す融合タンパク質、（Ｂ）表２３－２に示す融合タンパク質、（Ｃ）表２３－３に示す融合タンパク質。 図１９は、本願に記載の融合タンパク質のＴＧＦＢ１誘導Ｓｍａｄシグナル経路活性化に対する抑制作用を示す。 図２０は、本願の前記融合タンパク質は、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）において、ＴＧＦＢ１が存在しない又はＴＧＦＢ１を加えた条件下で、Ｔリンパ球を刺激してサイトカインを分泌するレベルを示す：（Ａ）７２時間後の上清中のＩＬ－２レベル、（Ｂ）１２０時間後の上清中のＩＦＮ－γレベル。 図２１は、本願の前記融合タンパク質の抗体に依存する細胞毒性結果を示す：（Ａ－Ｃ）三つの異なるドナーのＰＢＭＣの腫瘍細胞ＭＤＡ－ＭＢ－２３１に対する殺傷；（Ｄ－Ｆ）三つの異なるドナーのＰＢＭＣの腫瘍細胞ＮＣＩ－Ｈ２９２に対する殺傷。 図２２は、本願の前記融合タンパク質ＰＲ００１９０２の薬物動態学結果を示す。 図２３は、本願の前記融合タンパク質ＰＲ００１４８８の薬物動態学結果を示す。 図２４は、本願の前記融合タンパク質の腫瘍動物体内モデルに対する抗腫瘍活性を示し、前記抗腫瘍活性がそれぞれ腫瘍体積変化（Ａ）及びマウス体重変化（Ｂ）である。
以下は、特定の具体的な実施例によって本願発明の実施形態を説明する。この技術に詳しい人であれば、本明細書に公開された内容によって、本願発明の他の利点や効果を知るのは簡単である。
本願において、用語“抗原結合タンパク質”は、通常、抗原に結合する部分を含むタンパク質のことを指し、並びに任意に抗原に結合する部分が抗原結合タンパク質と抗原との結合を促進する構造を持つ骨子又は骨格部分を採用してもよい。典型的に、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）又は前記の両方を含む。ＶＨ及びＶＬ領域がさらに相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超変異領域に区分でき、それらはフレーム領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存的な領域に散布されている。一つのＶＨ及びＶＬが三つのＣＤＲ及び四つのＦＲ領域で構成でき、これらがアミノ端からカルボキシル基端まで以下の順で並んでもよい：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４。重鎖及び軽鎖の可変領域には、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗原結合タンパク質の例は、抗体、抗原結合断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ及び／又はｄＡｂ）、免疫複合体、多特異性抗体（例えば双特異性抗体）、抗体断片、抗体誘導体、抗体類似物又は融合タンパク質などを含むが、これらに限らなくて、必要とする抗原結合活性を示せばよい。
本願において、用語“融合タンパク質”は、通常、二種類又はそれ以上のポリペプチドで構成されたタンパク質のことを指す。前記ポリペプチドは、通常、自然状態では結合しないが、各自のアミノ及びカルボキシル基の末端が直接又は間接的に結合することで一つの連続ポリペプチドを形成することができる。ある場合において、本願の前記融合タンパク質を言い及ぶ時に、用語“融合タンパク質”が“抗体”と入れ替えてもよい。ある場合において、本願の前記融合タンパク質を言い及ぶ時に、用語“融合タンパク質”が“抗原結合タンパク質”と入れ替えてもよい。
本願において、用語“Ｆａｂ”は、通常、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含有し、且つ軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第一定常ドメイン（ＣＨ１）をさらに含む断片のことを指す；用語“Ｆａｂ’”は、通常、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル基端に少量の残基（一つ又は複数の抗体ヒンジ領域由来のシステインを含む）を加えて、Ｆａｂと異なる断片のことを指す；用語“Ｆ（ａｂ’）２”は、通常、Ｆａｂ’の二量体のことを指し、ヒンジ領域でのジスルフィド架橋により接続された二つのＦａｂ断片の抗体断片を含む。用語“Ｆｖ”は、通常、完全な抗原認識と結合サイトを含有する最小の抗体断片のことを指す。ある場合において、当該断片が一つの重鎖可変領域及び一つの軽鎖可変領域が緊密に非共有結合してなる二量体で構成されてもよい；用語“ｄｓＦｖ”は、通常、ジスルフィド結合により安定化されたＦｖ断片のことを指し、そのなかの単一の軽鎖可変領域と単一の重鎖可変領域の間の結合がジスルフィド結合である。用語“ｄＡｂ断片”は、通常、ＶＨドメインで構成された抗体断片のことを指す。本願において、用語“ｓｃＦｖ”は、通常、抗体の一つの重鎖可変ドメインと一つの軽鎖可変ドメインが柔性ペプチドリンカーによって、共有的に接続してマッチングすることにより形成される一価分子のことを指す；これらのｓｃＦｖ分子が以下のような一般的な構造を有してもよい：ＮＨ２－ＶＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＯＯＨ又はＮＨ２－ＶＨ－リンカー－ＶＬ－ＣＯＯＨ。
本願において、用語“可変”は、通常、以下のような事実を指し、即ち抗体の可変ドメインの配列のある部分の変化が激しく、これにより各種特定抗体のその特定抗原に対する結合と特異性を形成する。しかしながら、変異性は、抗体の全可変領域に均一的に分布するものではなく、軽鎖と重鎖可変領域中の三つの領域に集中している。これらは相補性決定領域（ＣＤＲ）又は超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれている。可変域において、より保存的な部分はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれている。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインがぞれぞれ四つのＦＲ領域（Ｈ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３、Ｈ－ＦＲ４、Ｌ－ＦＲ１、Ｌ－ＦＲ２、Ｌ－ＦＲ３、Ｌ－ＦＲ４）を含み、それらの大部分がβ－シートの構造をとり、三つのＣＤＲ構造ループ領域によって接続する。各鎖のＣＤＲがＦＲ領域により緊密に近づいており、もう一つの鎖由来のＣＤＲと共に抗体の抗原結合サイトを形成する。定常領域は、抗体と抗原の結合に直接に寄与しないが、異なる効果と機能を発揮する。例えば、抗体に依存する細胞毒性に寄与する。本分野において、複数種の方法で抗体のＣＤＲを定義できる。例えば、配列可変性に基づいたＫａｂａｔ定義規則（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）を参照）及び構造ループ領域位置に基づいたＣｈｏｔｈｉａ定義規則（Ａ１－ Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，ＪＭｏｌ Ｂｉｏｌ ２７３：９２７－４８，１９９７を参照）を挙げられる。本願において、Ｋａｂａｔ定義及びＣｈｏｔｈｉａ定義を含むＣｏｍｂｉｎｅｄ定義規則をさらに使用して、可変ドメイン配列と全長抗体配列中のアミノ酸残基を確定する。抗体ＣＤＲの定義方法は表１に示される。
Figure 2022550420000001
その中、Ｌａａ－Ｌｂｂは抗体軽鎖のＮ端からの第ａａ位（Ｃｈｏｔｈｉａコード規則）～第ｂｂ位（Ｃｈｏｔｈｉａコード規則）のアミノ酸配列を指してもよい；Ｈａａ－Ｈｂｂは抗体重鎖のＮ端からの第ａａ位（Ｃｈｏｔｈｉａコード規則）～第ｂｂ位（Ｃｈｏｔｈｉａコード規則）のアミノ酸配列を指してもよい。例えば、Ｌ２４－Ｌ３４はＣｈｏｔｈｉａコード規則に従う抗体軽鎖Ｎ端からの第２４位～第３４位のアミノ酸配列を指してもよい；Ｈ２６－Ｈ３２はＣｈｏｔｈｉａコード規則に従う抗体重鎖Ｎ端からの第２６位～第３２位のアミノ酸配列を指してもよい。
本願において、用語“単離された”抗原結合タンパク質は、通常、すでにその生成環境（例えば、自然のもの又は組換えたもの）の成分から認識、分離及び／又は回収された抗原結合タンパク質のことを指す。その生成環境の汚染成分は、通常、抗原結合タンパク質の研究、診断又は治療使用を妨げる物質であり、酵素、ホルモン及びその他のタンパク質又は非タンパク質溶質を含んでもよい。単離された抗原結合タンパク質又は抗体は、通常、少なくとも一つの精製ステップによって製造される。
本願において、用語“モノクローナル抗体”は、通常、実質的に同質である抗体群から得た抗体のことを指す。即ち、群において、ごく少量に存在する自然変異を除いて、各抗体は同じものである。モノクローナル抗体は、通常、一つの抗原サイトに対して、高度な特異性を有する。また、通常のポリクローナル抗体製剤（通常、異なる決定基を標的とする異なる抗体を有する）とは違い、各モノクローナル抗体は、抗原上の一つの決定基を標的とする。その特異性以外、ハイブリドーマで培養合成することができ、他の免疫グロブリンの汚染を受けないこともモノクローナル抗体の利点である。修飾語“モノクローナル”は実質的に同質な抗体群から得た抗体の特徴を指し、ある特定の方法で抗体を生成する必要があることに解釈されない。例えば、本発明に使用されるモノクローナル抗体はハイブリドーマ細胞で製造してもよく、ＤＮＡ組換え方法で製造してもよい。
本願において、用語“完全ヒト抗体”は、通常、人類の抗体をコードする遺伝子を遺伝子工程で改造された抗体遺伝子欠損動物に導入し、動物を発現させる抗体のことを指す。抗体のすべての部分（抗体の可変領域及び定常領域を含む）が人類由来の遺伝子にコードされる。完全ヒト抗体は、異源抗体が人体に引き起こす免疫副作用を大幅に減らすことができる。本分野において、完全ヒト抗体を得る方法はファージディスプレイ技術、トランスジェニックマウス技術、リボソームディスプレイ技術及びＲＮＡ－ペプチド技術などを含む。
本願において、用語“特異的に結合する”は、通常、抗体がその抗原結合ドメインによってエピトープと結合し、かつ当該結合には抗原結合ドメインとエピトープとの間のある程度の互補性が必要であることを指す。当該定義により、ランダムの、関連しないエピトープとの結合に比べて、抗体がその抗原結合ドメインによりエピトープに結合しやすい場合には、抗体が当該抗原に“特異的に結合する”と見なされる。“エピトープ”とは、抗原上の抗原結合タンパク質（例えば、抗体）と結合する特定の原子基（例えば、糖側鎖、ホスホリル、スルホニル）又はアミノ酸のことを指す。
本願において、用語“ＫＤ”、“ＫＤ”とは入れ替えて使用してもよく、通常、平衡解離定数のことを指す。“ＫＤ”は、解離速率定数（ｋｄｉｓ、“解離率（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）（ｋｏｆｆ）”又は“ｋｄ”とも呼ばれている）と結合速率定数（ｋｏｎ、“結合率（ｋｏｎ）”又は“ｋａ”とも呼ばれている）の比である。結合速率定数（ｋｏｎ）、解離速率定数（ｋｄｉｓ）及び平衡解離定数（ＫＤ）で示す抗原結合タンパク質（例えば抗体）の抗原に対する結合親和力を表してもよい。結合と解離速率定数を確定する方法は本分野において周知されており、以下のことを含むが、これらに限らない：バイオフィルム干渉法（ＢＬＩ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、平衡透析、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、共免疫沈降（Ｃｏ－ＩＰ）及びプロテインチップテクノロジー。異なる条件（例えば塩濃度、ｐＨ）で測定する場合、得られるある特定のタンパク質－タンパク質相互作用の親和力が違いてもよい。
本願において、用語“ＰＤ－Ｌ１”は、通常、プログラム性死亡リガンド１タンパク質、その機能性変体及び／又はその機能性断片のことを指す。ＰＤ－Ｌ１は分化クラスター２７４（ＣＤ２７４）又はＢ７ホモログ１（Ｂ７－Ｈ１）とも呼ばれており、ＣＤ２７４遺伝子がコードするタンパク質である（人類において）。ＰＤ－Ｌ１はその受容体、例えばプログラム性死亡１（ＰＤ－１）と結合する。前記ＰＤ－１は活性化したＴ細胞、Ｂ細胞及びマクロファージに発現する（Ｉｓｈｉｄａ ｅｔ ａｌ．，１９９２ ＥＭＢＯ Ｊ，１１：３８８７－３３９５； Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｉｌａｔｅｄ ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ ｉｎ ＰＤ－１ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｅ． Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００１； ２９１： ３１９－２２）。ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１の複合は、Ｔ細胞の増殖とサイトカインＩＬ－２及びＩＦＮ－γの生成を抑制することで免疫抑制作用を発揮する（Ｆｒｅｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ＰＤ－１ ｉｍｍｕｎｏｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｂｙ ａ ｎｏｖｅｌ Ｂ７ ｆａｍｉｌｙ ｍｅｍｂｅｒ ｌｅａｄｓ ｔｏ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，Ｊ． Ｅｘｐ．Ｍｅｄ． ２０００，１９２：１０２７－１０３４； Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＤ－１： ＰＤ－Ｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｐａｔｈｗａｙ ａｆｆｅｃｔｓ ｂｏｔｈ ＣＤ４（＋）ａｎｄ ＣＤ８（＋）Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｓ ｏｖｅｒｃｏｍｅ ｂｙ ＩＬ－２． Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２００２，３２：６３４－６４３）。用語“ＰＤ－Ｌ１”はいかなる脊椎動物由来のいかなる天然ＰＤ－Ｌ１を含み、前記いかなる脊椎動物が哺乳動物、例えば、霊長類（例えば、人）及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）を含む。前記用語は“全長”、加工されてないＰＤ－Ｌ１並びに細胞において加工されて生成するものなど、いかなる形式のＰＤ－Ｌ１を含む。ＰＤ－Ｌ１は膜貫通タンパク質又は可溶性タンパク質として存在してもよい。前記用語はさらに自然に存在するＰＤ－Ｌ１の変体、例えばスプライスバリアントや対立遺伝子バリアントを含む。ＰＤ－Ｌ１の基本構造が４つのドメインを含む：細胞外Ｉｇ様Ｖ型ドメイン及びＩｇ様Ｃ２型ドメイン、膜貫通ドメイン並びに細胞質ドメイン。ＰＤ－Ｌ１配列は本分野において知られている。例えばＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ Ｎｏ．２９１２６にＰＤ－Ｌ１遺伝子（ゲノムＤＮＡ配列を含む）に関する情報がある。他に、例えばＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ Ｎｏ．６０５３３にマウスＰＤ－Ｌ１遺伝子（ゲノムＤＮＡ配列を含む）に関する情報がある。他に、例えばＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ Ｎｏ。１０２１４５５７３にカニクイザルＰＤ－Ｌ１遺伝子（ゲノムＤＮＡ配列を含む）に関する情報がある。例示的な全長ヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質のアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ登録番号ＮＰ＿０５４８６２又はＵｎｉＰｒｏｔ登録番号Ｑ９ＮＺＱ７に見つけられる。例示的な全長マウスＰＤ－Ｌ１タンパク質配列はＮＣＢＩ登録番号ＮＰ＿０６８６９３又はＵｎｉｐｒｏｔ登録番号Ｑ９ＥＰ７３に見つけられる。例示的な全長カニクイザルＰＤ－Ｌ１タンパク質配列は、ＮＣＢＩ登録番号ＸＰ＿００５５８１８３６又はＵｎｉｐｒｏｔ登録番号Ｇ７ＰＳＥ７に見つけられる。
本願において、用語“ＰＤ－１”は、通常、プログラム性死亡１受容体（ＣＤ２７９とも呼ばれている）、その機能性変体及び／又はその機能性断片のことを指す。ＰＤ－１は、通常、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、活性化した単球及び樹突細胞（ＤＣ）に発現する。ＰＤ－１はそのリガンドＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２と結合できる。ＰＤ－１の定義には、さらに自然に存在する、ＰＤ－１のアミノ酸配列と異なるが、特異的にＰＤ－Ｌ１と結合する能力を保有する変体をさらに含む。ＰＤ－１の定義には、さらにＰＤ－Ｌ１の生物的活性を増強させる変体を含む。ＰＤ－１の配列は本分野において知られている。例えば、例示的な全長ヒトＰＤ－１タンパク質配列は、ＮＣＢＩ登録番号ＮＰ＿００５００９に見つけられる。例示的な全長カニクイザルのＰＤ－１タンパク質配列は、ＮＣＢＩ登録番号ＮＰ＿００１２７１０６５又はＵｎｉｐｒｏｔ登録番号Ｂ０ＬＡＪ３に見つけられる。
本願において、用語“ＣＤ８０”は、通常、分化クラスタータンパク質８０（Ｂ７－１とも呼ばれている）、その機能性変体及び／又はその機能性断片のことを指す。ＣＤ８０は、通常、抗原提示細胞（ＡＰＣ）に発現する。ＣＤ８０はＰＤ－Ｌ１と結合できる。ＣＤ８０の定義には、さらに自然に存在する、ＣＤ８０のアミノ酸配列と異なるが、特異的にＰＤ－Ｌ１と結合する能力を保有する変体を含む。例えば、本文に使用する用語“ＣＤ８０”がヒトＣＤ８０（ｈＣＤ８０）、ｈＣＤ８０の変体、アイソフォーム及び同種ホモログ、並びに少なくとも一種のｈＣＤ８０の一般的なエピトープを有する類似物を含む。例えば、用語“ＣＤ８０”は他の種、例えば、他の哺乳動物（例えば、ラット、マウス、兔、非ヒト霊長類動物、豚又は牛）由来のＣＤ８０をさらに含む。完全のヒトＣＤ８０配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ登録番号Ｐ３３６８１に見つけられる。
本願において、用語“ＴＧＦＢＲＩＩ”は、通常、トランスフォーミング増殖因子Ｂ（ＴＧＦＢ）の受容体（ＴＧＦＢＲ２とも呼ばれている）のことを指す。細胞表面のＴＧＦＢＲはトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦＢ）に結合されることで活性化され、ＳＭＡＤ経路によってシグナル伝達を行い、成長調節、抗炎症及び免疫調節の活性を有する。完全のヒトＴＧＦＢＲＩＩ配列はＵｎｉｐｒｏｔ登録番号Ｐ３７１７３に見つけられる。
本願において、用語“特定の抗ＰＤ－Ｌ１抗体”は、通常、本願の抗体と競合してＰＤ－Ｌ１に結合することができる抗体のことを指す。本願の抗原結合タンパク質は、特定抗ＰＤ－Ｌ１抗体と同じアミノ酸配列を有する抗体を含んでもよい。
本願において、用語“コントロール抗体”は、通常、本願実施例において、それと比較することで実験結果を評価する標準を提供するＰＤ－Ｌ１抗体のことを指す。ある場合において、コントロール抗体とは、本願実施例中のポジティブコントロール、例えばＰＲ０００１５１、ＰＲ００１５９８及びＰＲ００２４６６のことを指してもよい。
本願において、用語“霊長類動物”は、通常、サルと類人猿種のことを指し、サル種をさらに含む。例えば、マカク属（例えば、具体的に、カニクイザル（カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ））及び／又はアカゲザル（アカゲザル（Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ）））及びヒヒ（ピグテールヒヒ（Ｐａｐｉｏ ｕｒｓｉｎｕｓ））のサル、並びにキヌザル（キヌザル（Ｃａｌｌｉｔｈｒｉｘ）属の種）、リスザル（リスザル（Ｓａｉｍｉｒｉ）属の種）及びタマリン（タマリン（Ｓａｇｕｉｎｕｓ）属の種）、並びに類人猿種、例えば、チンパンジー（チンパンジー（Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ））、かつホモサピエンスをさらに含む。
本願において、用語“エピトープ”は、通常、抗原結合タンパク質（例えば、抗体）が特異的に結合する抗原のある区間又は領域のことを指す。エピトープは、通常、例えば、アミノ酸又は炭水化物又は糖側鎖分子の化学活性を有する表面基により構成され、通常、特異的な三次元構造特徴と特異的な電荷特徴を有する。エピトープは“線形エピトープ”又は“構造エピトープ”であってもよい。線形エピトープにおいて、タンパク質と相互作用する分子（例えば、抗体）との間のすべての相互作用サイトがタンパク質の一級アミノ酸配列に沿って線形に発生する。構造エピトープにおいて、相互作用サイトは互い分離するタンパク質上のアミノ酸に交叉的に発生する。特定の抗原結合タンパク質（例えば、抗体）がどのエピトープと結合するかを確認する方法（例えば、エピトープマッピング（Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ））は、本分野において知られているものであり、例えば、免疫ブロット及び免疫沈降測定、例えば、重ねる又は隣接するペプチド（例えば、ＰＤ－Ｌ１由来）と所定の抗原結合タンパク質（例えば、抗－ＰＤ－Ｌ１抗体）との反応性を測定することを含む。エピトープ空間構造を確定する方法は、本分野の技術と本願に記載された技術、例えば、Ｘ線晶体学、二次元ＮＭＲ及びＨＤＸ－ＭＳ（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ． ６６，Ｇ． Ｅ． Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）を参照する）を含む。用語“完全に重なることがない”のエピトープは、通常、二種類又はそれ以上の抗原結合タンパク質（例えば、抗体）の場合、各抗体は全く同じではないアミノ酸残基群又は完全に重なることがないアミノ酸残基群と結合することを指し、例えば、所定の方法で測定されたものである。本願の前記抗原結合タンパク質が比較抗体と同じエピトープに結合するかを確定するための技術は、例えば、エピトープマッピング方法、例えば、エピトープの原子分解能を提供する抗原：抗体複合体の結晶のｘ線分析、及び水素／重水素交換質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）を含む。抗体と抗原断片又は抗原の変異変体との結合をモニターする他の方法を使ってしてもよく、その中、抗原配列内のアミノ酸残基の修飾により損失される結合はエピトープ成分を示すことができる（例えば、アラニンスキャン変異誘発－Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ及Ｗｅｌｌｓ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１）。また、エピトープ定位の計算組み合わせ方法を使ってしてもよい。
本願において、用語“被験者”は、通常、哺乳動物のことを指す。哺乳動物は以下のことを含むが、これらに限らない：飼いならされた動物（例えば、牛、羊、猫、犬、及び馬）、霊長類（例えば、ヒト及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、及び齧歯動物（例えば、マウス及びラット）。
本願において、用語“核酸分子”は、通常、その自然環境から単離された、又は人工合成された、任意の長さを持つ単離形式のヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド又はその類似物のことを指す。
本願において、用語“ベクター”は、通常、適した宿主において自己複製できる核酸分子のことを指す。前記ベクターが挿入された核酸分子を宿主細胞の中に及び／又は宿主細胞の間に導入する。前記ベクターが主にＤＮＡ又はＲＮＡを細胞に挿入するためのベクター、主にＤＮＡ又はＲＮＡを複製させるためのベクター、並びに主にＤＮＡ又はＲＮＡを転写及び／又は翻訳させるための発現ベクターを含んでもよい。前記ベクターは、複数種の前記機能を有するベクターをさらに含む。前記ベクターが適した宿主細胞に導入される時、ポリペプチドに転写して翻訳されることができるポリヌクレオチドであってもよい。通常、前記ベクターを含む適した宿主細胞を培養することで、前記ベクターに所望の発現産物を生成させることができる。
本願において、用語“細胞”は、通常、本願の前記核酸分子のプラスミド又はベクターを含有できるか、又はすでに含有する細胞個体、細胞系又は細胞培養物、又は本願の前記抗体又はその抗原結合断片を発現できる細胞個体、細胞系又は細胞培養物のことを指す。前記細胞は、単一の宿主細胞の子代を含んでもよい。自然、意外又は意図される変異により、子代細胞と原始の親細胞とは形態上又はゲノム上に完全に同じものでない可能性があるが、本願の前記抗体又はその抗原結合断片を発現出来ればよい。前記細胞は本願の前記ベクターで細胞に体外トランスフェクションをすることにより得られる。前記細胞が原核細胞（例えば大腸菌）であってもよく、真核細胞（例えば酵母細胞、例えばＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ－１細胞、ＮＳ０細胞又は骨髄腫細胞）であってもよい。ある場合において、前記細胞が哺乳動物細胞であってもよい。例えば、前記哺乳動物細胞がＣＨＯ－Ｋ１細胞であってもよい。本願において、用語“組換え細胞”は、通常、組換え発現ベクターを導入された細胞のことを指す。前記組換え宿主細胞は、ある特定の細胞だけでなく、これらの細胞の後代をさらに含む。
本願において、用語“医薬組成物”は、通常、以下のような製剤のことを指す。前記製剤は、活性成分をその生物学活性が有効である形式で存在させ、同時に前記組成物を投与する対象に対して、受け入れない毒性を有する他の成分を含まない。組成物は無菌である。「無菌」組成物は滅菌されたものか、又はすべての生きている微生物及びそれらの胞子を含まないものである。
本願において、用語“治療”は、通常、治療する個体の自然病状を改善しようとし、且つ予防治療の実現のための、又は臨床疾患の経過に行われる臨床介入のことを指す。望ましい治療効果が以下のことを含むが、これらに限らない：疾患の発生又は再発の予防、症状の緩和、疾患の直接的又は間接的な病理学的影響の軽減、転移の予防、疾患の進行速度の低下、病状の改善又は改善、及び予後の緩和又は改善。ある場合において、抗体（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）は、疾患の進行を防ぐか、遅らせるために使用することができる。
本願において、用語“投与”は、通常、被験者（例えば、患者）にある程度の使用量の化合物（例えば、抗がん治療剤）又は医薬組成物（例えば、抗がん治療剤の医薬組成物を含む）を投与する方法を指す。投与は、任意の適した方式で行ってもよく、腸胃外、肺内及び鼻内、並びに（局所治療が必要とする場合）損傷内投与を含む。胃腸外注射は、例えば筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内又は皮下投与を含む。部分的投与は、短期的なものと長期的なものに分けられ、投与が任意の適した経路で行ってもよく、例えば注射（例えば、静脈内又は皮下注射）で行ってもよい。本文は、各種投与過程を含み、以下のことを含むが、これらに限らない：単回投与又は各種時点で複数回投与、ボーラス投与及びパルス注射。
本願において、用語“腫瘍”は、通常、すべての成長や増殖する腫瘍性細胞（悪性又は良性を問わず）とすべてのがん発症前又はがん性細胞と組織のことを指す。本願において、腫瘍が結腸がんを含んでもよい。
本願において、用語“……との間に”は、通常、あるアミノ酸断片のＣ端と第一アミノ酸断片のＮ端とが直接又は間接的に接続し、かつそのＮ端と第二アミノ酸断片のＣ端が直接又は間接的に接続することを指す。軽鎖において、例えば、前記Ｌ－ＦＲ２のＮ末端と前記ＬＣＤＲ１のＣ末端とが直接又は間接的に接続し、且つ前記Ｌ－ＦＲ２のＣ末端と前記ＬＣＤＲ２のＮ末端とが直接又は間接的に接続する。他に、例えば、前記Ｌ－ＦＲ３のＮ末端と前記ＬＣＤＲ２のＣ末端とが直接又は間接的に接続し、且つ前記Ｌ－ＦＲ３のＣ末端と前記ＬＣＤＲ３のＮ末端とが直接又は間接的に接続する。重鎖において、例えば、前記Ｈ－ＦＲ２のＮ末端と前記ＨＣＤＲ１のＣ末端とが直接又は間接的に接続し、且つ前記Ｈ－ＦＲ２のＣ末端と前記ＨＣＤＲ２のＮ末端とが直接又は間接的に接続する。他に、例えば、前記Ｈ－ＦＲ３のＮ末端と前記ＨＣＤＲ２のＣ末端とが直接又は間接的に接続し、且つ前記Ｈ－ＦＲ３のＣ末端と前記ＨＣＤＲ３のＮ末端とが直接又は間接的に接続する。本願において、“第一アミノ酸断片”及び“第二アミノ酸断片”は任意の、同じ又は異なるアミノ酸断片であってもよい。
本願において、用語“含む”は、通常、含み、総括、含有などの意義を含む。ある場合において、“…である”、“からなる”などの意義も含む。
本願において、用語“約”は、通常、指定の数値の上下０．５％－１０％の範囲内に変動することを指す。例えば指定の数値の上下０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、４．５％、５％、５．５％、６％、６．５％、７％、７．５％、８％、８．５％、９％、９．５％、又は１０％の範囲内に変動する。
抗原結合タンパク質
一つの方面において、本願発明が抗原結合タンパク質を提供し、前記抗原結合タンパク質が抗体軽鎖可変領域ＶＬの中の少なくとも一つのＣＤＲを含む。
本願において、前記抗原結合タンパク質がＬＣＤＲ１を含んでもよく、且つ前記ＬＣＤＲ１が配列番号１８１に示すアミノ酸配列を含んでもよい：
ＲＡＳＱＳＩＸ７Ｘ８ＷＬＡ（配列番号１８１）；その中、Ｘ７＝Ｆ、Ｓ又はＹ；Ｘ８＝Ｉ又はＳ。例えば、当該配列がＣｈｏｔｈｉａ定義規則により確定した配列であってもよい。
ある場合において、配列番号４８に示される抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１と比べて、前記ＬＣＤＲ１が少なくとも以下から選べる位置でのアミノ酸置換を含んでもよい：Ｘ７及び／又はＸ８でのアミノ酸置換。
ある場合において、配列番号４８に示される抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１と比べて、前記ＬＣＤＲ１が少なくともＸ７及び／又はＸ８でのアミノ酸置換を含んでもよく、その中、Ｘ７でのアミノ酸がＹ又はＦに置換されてもよい；Ｘ８でのアミノ酸がＳに置換されてもよい。
例えば、前記ＬＣＤＲ１が配列番号４８－５１のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
本願において、前記抗原結合タンパク質がＬＣＤＲ２を含んでもよく、且つ前記ＬＣＤＲ２が配列番号１８２に示すアミノ酸配列を含んでもよい：
ＫＡＳＳＬＥＸ７（配列番号１８２）；その中、Ｘ７＝Ｔ又はＳ。例えば、当該配列がＣｈｏｔｈｉａ定義規則により確定した配列であってもよい。
ある場合において、配列番号６３に示される抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ２と比べて、前記ＬＣＤＲ２が少なくとも以下から選べる位置でのアミノ酸置換を含んでもよい：Ｘ７でのアミノ酸置換。
ある場合において、配列番号６３に示される抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ２と比べて、前記ＬＣＤＲ２が少なくともＸ７でのアミノ酸置換を含んでもよく、その中、Ｘ７でのアミノ酸がＴに置換されてもよい。
例えば、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６３－６４のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
本願において、前記抗原結合タンパク質がＬＣＤＲ３を含んでもよく、且つ前記ＬＣＤＲ３が配列番号１８３に示すアミノ酸配列を含んでもよい：
ＱＱＹＸ４Ｘ５Ｘ６ＳＲＴ（配列番号１８３）；その中、Ｘ４＝Ｙ又はＨ；Ｘ５＝Ｇ、Ｔ又はＳ；Ｘ６＝Ｙ又はＳ。例えば、当該配列がＣｈｏｔｈｉａ定義規則により確定した配列であってもよい。
ある場合において、配列番号７７に示される抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ３と比べて、前記ＬＣＤＲ３が少なくとも以下から選べる位置でのアミノ酸置換を含んでもよい：Ｘ４、Ｘ５及び／又はＸ６でのアミノ酸置換。
ある場合において、配列番号７７に示される抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ３と比べて、前記ＬＣＤＲ３が少なくともＸ４、Ｘ５及び／又はＸ６でのアミノ酸置換を含んでもよく、その中、Ｘ４でのアミノ酸がＨに置換されてもよい；Ｘ５でのアミノ酸がＳ又はＴに置換されてもよい；Ｘ６でのアミノ酸がＳに置換されてもよい。
例えば、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７７－８０のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
ほかの場合において、前記ＬＣＤＲ３が配列番号１９１に示すアミノ酸配列を含んでもよい：
ＱＱＹＹＸ５Ｘ６ＳＲＴ（配列番号１９１）；その中、Ｘ５＝Ｇ又はＳ；Ｘ６＝Ｙ又はＳ。例えば、当該配列がＣｈｏｔｈｉａ定義規則により確定した配列であってもよい。
ある具体的な場合において、配列番号７７に示される抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ３と比べて、前記ＬＣＤＲ３が少なくとも以下から選べる位置でのアミノ酸置換を含んでもよい：Ｘ５及び／又はＸ６でのアミノ酸置換。
ある具体的な場合において、配列番号７７に示される抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ３と比べて、前記ＬＣＤＲ３が少なくともＸ５及び／又はＸ６でのアミノ酸置換を含んでもよく、その中、Ｘ５でのアミノ酸がＳに置換されでもよく；Ｘ６でのアミノ酸がＳに置換されてもよい。
例えば、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７７－７９のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
本願において、前記の抗原結合タンパク質がフレーム領域Ｌ－ＦＲ１を含んでもよい。前記Ｌ－ＦＲ１のＣ末端と前記ＬＣＤＲ１のＮ末端とが接続し、且つ前記Ｌ－ＦＲ１が配列番号１８５に示すアミノ酸配列を含んでもよい：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＸ１３ＳＶＧＸ１７ＲＶＴＸ２１ＴＣ（配列番号１８５）；その中、Ｘ１３＝Ｔ又はＡ；Ｘ１７＝Ｄ又はＨ；Ｘ２１＝Ｉ又はＶ。例えば、当該配列がＣｈｏｔｈｉａ定義規則により確定した配列であってもよい。
ある場合において、配列番号４１に示される抗原結合タンパク質のＬ－ＦＲ１と比べて、前記Ｌ－ＦＲ１が少なくとも以下から選べる位置でのアミノ酸置換を含んでもよい：Ｘ１３、Ｘ１７及び／又はＸ２１でのアミノ酸置換。
ある場合において、配列番号４１に示される抗原結合タンパク質のＬ－ＦＲ１と比べて、前記Ｌ－ＦＲ１が少なくともＸ１３、Ｘ１７及び／又はＸ２１でのアミノ酸置換を含んでもよく、その中、Ｘ１３でのアミノ酸がＡに置換されてもよい；Ｘ１７でのアミノ酸がＨに置換されてもよい；Ｘ２１でのアミノ酸がＶに置換されてもよい。
例えば、前記Ｌ－ＦＲ１が配列番号４１－４４のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
本願において、前記抗原結合タンパク質がＬ－ＦＲ２を含んでもよい。前記Ｌ－ＦＲ２が前記ＬＣＤＲ１と前記ＬＣＤＲ２との間に位置しており、且つ前記Ｌ－ＦＲ２が配列番号１８６に示すアミノ酸配列を含んでもよい：
ＷＹＱＱＸ５ＰＧＫＡＰＸ１１ＬＬＩＹ（配列番号１８６）；その中、Ｘ５＝Ｋ又はＨ；Ｘ１１＝Ｋ、Ｎ又はＤ。例えば、当該配列がＣｈｏｔｈｉａ定義規則により確定した配列であってもよい。
ある場合において、配列番号５６に示される抗原結合タンパク質のＬ－ＦＲ２と比べて、前記Ｌ－ＦＲ２が少なくとも以下から選べる位置でのアミノ酸置換を含む：Ｘ５及び／又はＸ１１でのアミノ酸置換。
ある場合において、配列番号５６に示される抗原結合タンパク質のＬ－ＦＲ２と比べて、前記Ｌ－ＦＲ２が少なくともＸ５及び／又はＸ１１でのアミノ酸置換を含んでもよく、その中、Ｘ５でのアミノ酸がＨに置換されてもよい；Ｘ１１でのアミノ酸がＤ又はＮに置換されてもよい。
例えば、前記Ｌ－ＦＲ２が配列番号５６－５９のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
本願において、前記抗原結合タンパク質がＬ－ＦＲ３を含んでもよい。前記Ｌ－ＦＲ３が前記ＬＣＤＲ２と前記ＬＣＤＲ３との間に位置しており、且つ前記Ｌ－ＦＲ３が配列番号１８７に示すアミノ酸配列を含む：
ＧＶＰＳＲＦＳＧＸ９ＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＸ２８ＴＹＸ３１Ｃ（配列番号１８７）；その中、Ｘ９＝Ｓ又はＮ；Ｘ２８＝Ａ又はＴ；Ｘ３１＝Ｙ又はＦ。例えば、当該配列がＣｈｏｔｈｉａ定義規則により確定した配列であってもよい。
ある場合において、配列番号６９に示すＬ－ＦＲ３と比べて、前記Ｌ－ＦＲ３が少なくとも以下から選べる位置でのアミノ酸置換を含んでもよい：Ｘ９、Ｘ２８及び／又はＸ３１でのアミノ酸置換。
ある場合において、配列番号６９に示される抗原結合タンパク質のＬ－ＦＲ３と比べて、前記Ｌ－ＦＲ３が少なくともＸ９、Ｘ２８及び／又はＸ３１でのアミノ酸置換を含んでもよく、その中、Ｘ９でのアミノ酸がＮに置換されてもよい；Ｘ２８でのアミノ酸がＴに置換されてもよい；Ｘ３１でのアミノ酸がＦに置換されてもよい。
例えば、前記Ｌ－ＦＲ３が配列番号６９－７２のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
本願において、前記抗原結合タンパク質がＬ－ＦＲ４を含んでもよく、前記Ｌ－ＦＲ４のＮ末端と前記ＬＣＤＲ３のＣ末端とが接続し、且つ前記Ｌ－ＦＲ４が配列番号１８８に示すアミノ酸配列を含んでもよい：
ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＸ１０（配列番号１８８）；その中、Ｘ１０＝Ｋ又はＲ。例えば、当該配列がＣｈｏｔｈｉａ定義規則により確定した配列であってもよい。
ある場合において、配列番号８５に示される抗原結合タンパク質のＬ－ＦＲ４と比べて、前記Ｌ－ＦＲ４が少なくとも以下から選べる位置でのアミノ酸置換を含む：Ｘ１０でのアミノ酸置換。
ある場合において、配列番号８５に示すＬ－ＦＲ４と比べて、前記Ｌ－ＦＲ４が少なくともＸ１０でのアミノ酸置換を含んでもよく、その中、Ｘ１０でのアミノ酸がＲに置換されてもよい。
例えば、前記Ｌ－ＦＲ４が配列番号８５－８６のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
本願において、前記抗原結合タンパク質が軽鎖可変領域ＶＬを含んでもよく、且つ前記ＶＬが配列番号１９０に示すアミノ酸配列を含んでもよい：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＸ１３ＳＶＧＸ１７ＲＶＴＸ２１ＴＣＲＡＳＱＳＩＸ３０Ｘ３１ＷＬＡＷＹＱＱＸ３９ＰＧＫＡＰＸ４５ＬＬＩＹＫＡＳＳＬＥＸ５６ＧＶＰＳＲＦＳＧＸ６５ＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＸ８４ＴＹＸ８７ＣＱＱＹＸ９２Ｘ９３Ｘ９４ＳＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＸ１０７（配列番号１９０）；その中、Ｘ１３＝Ｔ又はＡ；Ｘ１７＝Ｄ又はＨ；Ｘ２１＝Ｉ又はＶ；Ｘ３０＝Ｆ、Ｓ又はＹ；Ｘ３１＝Ｉ又はＳ；Ｘ３９＝Ｋ又はＨ；Ｘ４５＝Ｋ、Ｎ又はＤ；Ｘ５６＝Ｓ又はＴ；Ｘ６５＝Ｓ又はＮ；Ｘ８４＝Ａ又はＴ；Ｘ８７＝Ｙ又はＦ；Ｘ９２＝Ｙ又はＨ；Ｘ９３＝Ｇ、Ｔ又はＳ；Ｘ９４＝Ｙ又はＳ；Ｘ１０７＝Ｋ又はＲ。例えば、当該配列がＣｈｏｔｈｉａ定義規則により確定した配列であってもよい。
ある場合において、配列番号１０８に示すＶＬと比べて、前記ＶＬが少なくとも以下から選べる位置でのアミノ酸置換を含んでもよい：Ｘ１３、Ｘ１７、Ｘ２１、Ｘ３０、Ｘ３１、Ｘ３９、Ｘ４５、Ｘ５６、Ｘ６５、Ｘ８４、Ｘ８７、Ｘ９２、Ｘ９３、Ｘ９４、Ｘ１０７でのアミノ酸置換。
ある場合において、配列番号１０８に示すＶＬと比べて、前記ＶＬが少なくともＸ１３、Ｘ１７、Ｘ２１、Ｘ３０、Ｘ３１、Ｘ３９、Ｘ４５、Ｘ５６、Ｘ６５、Ｘ８４、Ｘ８７、Ｘ９２、Ｘ９３、Ｘ９４、Ｘ１０７でのアミノ酸置換を含んでもよく、その中、Ｘ１３でのアミノ酸がＡに置換されてもよく、Ｘ１７でのアミノ酸がＨに置換されてもよく、Ｘ２１でのアミノ酸がＶに置換されてもよく、Ｘ３０でのアミノ酸がＳ又はＹに置換されてもよく、Ｘ３１でのアミノ酸がＳに置換されてもよく、Ｘ３９でのアミノ酸がＨに置換されてもよく、Ｘ４５でのアミノ酸がＮ又はＤに置換されてもよく、Ｘ５６でのアミノ酸がＴに置換されてもよく、Ｘ６５でのアミノ酸がＮに置換されてもよく、Ｘ８４でのアミノ酸がＴに置換されてもよく、Ｘ８７でのアミノ酸がＦに置換されてもよく、Ｘ９２でのアミノ酸がＨに置換されてもよく、Ｘ９３でのアミノ酸がＴ又はＳに置換されてもよく、Ｘ９４でのアミノ酸がＳに置換されてもよく、Ｘ１０７でのアミノ酸がＲに置換されてもよい。
例えば、前記ＶＬ領域が配列番号１０８－１１６及び１１８のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
ある場合において、本願の前記ＶＬが配列番号１９４に示すアミノ酸配列を含んでもよい：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＸ１３ＳＶＧＸ１７ＲＶＴＸ２１ＴＣＲＡＳＱＳＩＸ３０Ｘ３１ＷＬＡＷＹＱＱＸ３９ＰＧＫＡＰＸ４５ＬＬＩＹＫＡＳＳＬＥＸ５６ＧＶＰＳＲＦＳＧＸ６５ＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＸ８４ＴＹＸ８７ＣＱＱＹＹＸ９３Ｘ９４ＳＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＸ１０７（配列番号１９４）；その中、Ｘ１３＝Ｔ又はＡ；Ｘ１７＝Ｄ又はＨ；Ｘ２１＝Ｉ又はＶ；Ｘ３０＝Ｆ、Ｓ又はＹ；Ｘ３１＝Ｉ又はＳ；Ｘ３９＝Ｋ又はＨ；Ｘ４５＝Ｋ、Ｎ又はＤ；Ｘ５６＝Ｓ又はＴ；Ｘ６５＝Ｓ又はＮ；Ｘ８４＝Ａ又はＴ；Ｘ８７＝Ｙ又はＦ；Ｘ９３＝Ｇ又はＳ；Ｘ９４＝Ｙ又はＳ；Ｘ１０７＝Ｋ又はＲ。例えば、当該配列がＣｈｏｔｈｉａ定義規則により確定した配列であってもよい。
ある場合において、配列番号１０８に示すＶＬと比べて、前記ＶＬが少なくとも以下から選べる位置でのアミノ酸置換を含んでもよい：Ｘ１３、Ｘ１７、Ｘ２１、Ｘ３０、Ｘ３１、Ｘ３９、Ｘ４５、Ｘ５６、Ｘ６５、Ｘ８４、Ｘ８７、Ｘ９３、Ｘ９４、Ｘ１０７でのアミノ酸置換。
ある場合において、配列番号１０８に示すＶＬと比べて、前記ＶＬが少なくともＸ１３、Ｘ１７、Ｘ２１、Ｘ３０、Ｘ３１、Ｘ３９、Ｘ４５、Ｘ５６、Ｘ６５、Ｘ８４、Ｘ８７、Ｘ９３、Ｘ９４、Ｘ１０７でのアミノ酸置換を含んでもよく、その中、Ｘ１３でのアミノ酸がＡに置換されてもよく、Ｘ１７でのアミノ酸がＨに置換されてもよく、Ｘ２１でのアミノ酸がＶに置換されてもよく、Ｘ３０でのアミノ酸がＳ又はＹに置換されてもよく、Ｘ３１でのアミノ酸がＳに置換されてもよく、Ｘ３９でのアミノ酸がＨに置換されてもよく、Ｘ４５でのアミノ酸がＮ又はＤに置換されてもよく、Ｘ５６でのアミノ酸がＴに置換されてもよく、Ｘ６５でのアミノ酸がＮに置換されてもよく、Ｘ８４でのアミノ酸がＴに置換されてもよく、Ｘ８７でのアミノ酸がＦに置換されてもよく、Ｘ９３でのアミノ酸がＳに置換されてもよく、Ｘ９４でのアミノ酸がＳに置換されてもよく、Ｘ１０７でのアミノ酸がＲに置換されてもよい。
例えば、前記ＶＬ領域が配列番号１０８－１１４、１１６及び１１８のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
本願の前記抗原結合タンパク質が軽鎖定常領域ＣＬを含んでもよく、且つ前記抗体軽鎖定常領域がヒトＩｇκ定常領域を含んでもよい。例えば、前記ＣＬ領域が下記に示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号１７０。
本願の前記抗原結合タンパク質が抗体軽鎖ＬＣを含んでもよく、前記抗体軽鎖が配列番号１５０－１５８及び１６０－１６３のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。又は、本願の前記抗原結合タンパク質の抗体軽鎖が配列番号１５０－１５６、１５８及び１６０－１６３のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
本願の前記抗原結合タンパク質前記抗原結合タンパク質が抗体重鎖可変領域ＶＨの中の少なくとも一つのＣＤＲを含んでもよい。
本願において、前記抗原結合タンパク質がＨＣＤＲ１を含んでもよく、且つ前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよい：
ＧＦＴＦＳＳＹ（配列番号５）。例えば、当該配列がＣｈｏｔｈｉａ定義規則により確定した配列であってもよい。
本願において、前記抗原結合タンパク質がＨＣＤＲ２を含んでもよく、且つ前記ＨＣＤＲ２が配列番号１７９に示すアミノ酸配列を含んでもよい：
ＫＱＸ３Ｘ４ＳＥ（配列番号１７９）；その中、Ｘ３＝Ｄ又はＥ；Ｘ４＝Ｇ又はＡ。例えば、当該配列がＣｈｏｔｈｉａ定義規則により確定した配列であってもよい。
ある場合において、配列番号１４に示される抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ２と比べて、前記ＨＣＤＲ２が少なくとも以下から選べる位置でのアミノ酸置換を含んでもよい：Ｘ３及び／又はＸ４でのアミノ酸置換。
ある場合において、配列番号１４に示される抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ２と比べて、前記ＨＣＤＲ２が少なくともＸ３及び／又はＸ４でのアミノ酸置換を含んでもよく、その中、Ｘ３でのアミノ酸がＥに置換されてもよく、Ｘ４でのアミノ酸がＡに置換されてもよい。
例えば、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１４、１６及び１７のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
本願において、前記抗原結合タンパク質がＨＣＤＲ３を含んでもよく、且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号１８０に示すアミノ酸配列を含んでもよい：
ＤＲＸ３ＶＡＧＡＸ８Ｘ９Ｘ１０（配列番号１８０）；その中、Ｘ３＝Ａ又はＰ；Ｘ８＝Ｆ又はＳ；Ｘ９＝Ｄ又はＡ；Ｘ１０＝Ｉ又はＦ。例えば、当該配列がＣｈｏｔｈｉａ定義規則により確定した配列であってもよい。
ある場合において、配列番号２９に示される抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ３と比べて、前記ＨＣＤＲ３が少なくとも以下から選べる位置でのアミノ酸置換を含んでもよい：Ｘ３、Ｘ８、Ｘ９及び／又はＸ１０でのアミノ酸置換。
ある場合において、配列番号２９に示される抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ３と比べて、前記ＨＣＤＲ３が少なくともＸ３、Ｘ８、Ｘ９及び／又はＸ１０でのアミノ酸置換を含んでもよく、その中、Ｘ３でのアミノ酸がＰに置換されてもよい；Ｘ８でのアミノ酸がＳに置換されてもよい；Ｘ９でのアミノ酸がＡに置換されてもよい；Ｘ１０でのアミノ酸がＦに置換されてもよい。
例えば、前記ＨＣＤＲ３が配列番号２９－３３のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
本願において、前記抗原結合タンパク質がフレーム領域Ｈ－ＦＲ１を含んでもよい。前記Ｈ－ＦＲ１のＣ末端と前記ＨＣＤＲ１のＮ末端とが接続し、且つ前記Ｈ－ＦＲ１が配列番号１に示すアミノ酸配列を含んでもよい：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（配列番号１）。例えば、当該配列がＣｈｏｔｈｉａ定義規則により確定した配列であってもよい。
本願において、前記抗原結合タンパク質がＨ－ＦＲ２を含んでもよく、前記Ｈ－ＦＲ２が前記ＨＣＤＲ１と前記ＨＣＤＲ２との間に位置しており、且つ前記Ｈ－ＦＲ２が配列番号９に示すアミノ酸配列を含んでもよい：
ＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩ（配列番号９）。例えば、当該配列がＣｈｏｔｈｉａ定義規則により確定した配列であってもよい。
本願において、前記抗原結合タンパク質がＨ－ＦＲ３を含んでもよく、前記Ｈ－ＦＲ３が前記ＨＣＤＲ２と前記ＨＣＤＲ３との間に位置しており、且つ前記Ｈ－ＦＲ３が配列番号１８４に示すアミノ酸配列を含んでもよい：
ＫＹＹＸ４ＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＸ２２ＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＸ３３ＴＡＶＸ３７ＹＣＡＲ（配列番号１８４）；その中、Ｘ４＝Ｖ又はＧ；Ｘ２２＝Ｌ又はＱ；Ｘ３３＝Ｄ又はＥ；Ｘ３７＝Ｙ又はＦ。例えば、当該配列がＣｈｏｔｈｉａ定義規則により確定した配列であってもよい。
ある場合において、配列番号２１に示すＨ－ＦＲ３と比べて、前記Ｈ－ＦＲ３が少なくとも以下から選べる位置でのアミノ酸置換を含んでもよい：Ｘ４、Ｘ２２、Ｘ３３及び／又はＸ３７でのアミノ酸置換。
ある場合において、配列番号２１に示される抗体のＨ－ＦＲ３と比べて、前記Ｈ－ＦＲ３が少なくともＸ４、Ｘ２２、Ｘ３３及び／又はＸ３７でのアミノ酸置換を含んでもよく、その中、Ｘ４でのアミノ酸がＧに置換されてもよい；Ｘ２２でのアミノ酸がＱに置換されてもよい；Ｘ３３でのアミノ酸がＥに置換されてもよい；Ｘ３７でのアミノ酸がＦに置換されてもよい。
例えば、前記Ｈ－ＦＲ３が配列番号２１－２４のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
又は、本願の前記Ｈ－ＦＲ３が配列番号１９２に示すアミノ酸配列を含んでもよい：
ＫＹＹＸ４ＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＸ３３ＴＡＶＸ３７ＹＣＡＲ（配列番号１９２）；その中、Ｘ４＝Ｖ又はＧ；Ｘ３３＝Ｄ又はＥ；Ｘ３７＝Ｙ又はＦ。例えば、当該配列がＣｈｏｔｈｉａ定義規則により確定した配列であってもよい。
ある場合において、配列番号２１に示すＨ－ＦＲ３と比べて、前記Ｈ－ＦＲ３が少なくとも以下から選べる位置でのアミノ酸置換を含んでもよい：Ｘ４、Ｘ３３及び／又はＸ３７でのアミノ酸置換。
ある場合において、配列番号２１に示される抗体のＨ－ＦＲ３と比べて、前記Ｈ－ＦＲ３が少なくともＸ４、Ｘ３３及び／又はＸ３７でのアミノ酸置換を含んでもよく、その中、Ｘ４でのアミノ酸がＧに置換されてもよい；Ｘ３３でのアミノ酸がＥに置換されてもよい；Ｘ３７でのアミノ酸がＦに置換されてもよい。
例えば、前記Ｈ－ＦＲ３が配列番号２１－２２及び２４のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
本願において、前記抗原結合タンパク質がＨ－ＦＲ４を含んでもよく、前記Ｈ－ＦＲ４のＮ末端と前記ＨＣＤＲ３のＣ末端とが接続し、且つ前記Ｈ－ＦＲ４が配列番号３８に示すアミノ酸配列を含んでもよい：
ＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号３８）。例えば、当該配列がＣｈｏｔｈｉａ定義規則により確定した配列であってもよい。
本願において、前記抗原結合タンパク質が重鎖可変領域ＶＨを含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号１８９に示すアミノ酸配列を含んでもよい：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＸ５４Ｘ５５ＳＥＫＹＹＸ６１ＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＸ７９ＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＸ９０ＴＡＶＸ９４ＹＣＡＲＤＲＸ１０１ＶＡＧＡＸ１０６Ｘ１０７Ｘ１０８ＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号１８９）；その中、Ｘ５４＝Ｄ又はＥ；Ｘ５５＝Ｇ又はＡ；Ｘ６１＝Ｖ又はＧ；Ｘ７９＝Ｌ又はＱ；Ｘ９０＝Ｄ又はＥ、Ｘ９４＝Ｙ又はＦ；Ｘ１０１＝Ａ又はＰ；Ｘ１０６＝Ｆ又はＳ；Ｘ１０７＝Ｄ又はＡ；Ｘ１０８＝Ｉ又はＦ。例えば、当該配列がＣｈｏｔｈｉａ定義規則により確定した配列であってもよい。
ある場合において、配列番号９０に示すＶＨと比べて、前記ＶＨが少なくとも以下から選べる位置でのアミノ酸置換を含んでもよい：Ｘ５４、Ｘ５５、Ｘ６１、Ｘ７９、Ｘ９０、Ｘ９４、Ｘ１０１、Ｘ１０６、Ｘ１０７及び／又はＸ１０８でのアミノ酸置換。
ある場合において、配列番号９０に示すＶＨと比べて、前記ＶＨが少なくともＸ５４、Ｘ５５、Ｘ６１、Ｘ７９、Ｘ９０、Ｘ９４、Ｘ１０１、Ｘ１０６、Ｘ１０７及び／又はＸ１０８でのアミノ酸置換を含んでもよく、その中、Ｘ５４でのアミノ酸がＥに置換されてもよく、Ｘ５５でのアミノ酸がＡに置換されてもよく、Ｘ６１でのアミノ酸がＧに置換されてもよく、Ｘ７９でのアミノ酸がＱに置換されてもよく、Ｘ９０でのアミノ酸がＥに置換されてもよく、Ｘ９４でのアミノ酸がＦに置換されてもよく、Ｘ１０１でのアミノ酸がＰに置換されてもよく、Ｘ１０６でのアミノ酸がＳに置換されてもよく、Ｘ１０７でのアミノ酸がＡに置換されてもよく、Ｘ１０８でのアミノ酸がＦに置換されてもよい。
例えば、前記ＶＨ領域が配列番号９０－９５及び９７－１０４のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
ある場合において、本願の前記ＶＨが配列番号１９３に示すアミノ酸配列を含んでもよい：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＸ５４Ｘ５５ＳＥＫＹＹＸ６１ＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＸ９０ＴＡＶＸ９４ＹＣＡＲＤＲＸ１０１ＶＡＧＡＸ１０６Ｘ１０７Ｘ１０８ＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号１９３）；その中、Ｘ５４＝Ｄ又はＥ；Ｘ５５＝Ｇ又はＡ；Ｘ６１＝Ｖ又はＧ；Ｘ９０＝Ｄ又はＥ、Ｘ９４＝Ｙ又はＦ；Ｘ１０１＝Ａ又はＰ；Ｘ１０６＝Ｆ又はＳ；Ｘ１０７＝Ｄ又はＡ；Ｘ１０８＝Ｉ又はＦ。例えば、当該配列がＣｈｏｔｈｉａ定義規則により確定した配列であってもよい。
ある場合において、配列番号９０に示すＶＨと比べて、前記ＶＨが少なくとも以下から選べる位置でのアミノ酸置換を含んでもよい：Ｘ５４、Ｘ５５、Ｘ６１、Ｘ９０、Ｘ９４、Ｘ１０１、Ｘ１０６、Ｘ１０７及び／又はＸ１０８でのアミノ酸置換。
ある場合において、配列番号９０に示すＶＨと比べて、前記ＶＨが少なくともＸ５４、Ｘ５５、Ｘ６１、Ｘ９０、Ｘ９４、Ｘ１０１、Ｘ１０６、Ｘ１０７及び／又はＸ１０８でのアミノ酸置換を含んでもよく、その中、Ｘ５４でのアミノ酸がＥに置換されてもよく、Ｘ５５でのアミノ酸がＡに置換されてもよく、Ｘ６１でのアミノ酸がＧに置換されてもよく、Ｘ９０でのアミノ酸がＥに置換されてもよく、Ｘ９４でのアミノ酸がＦに置換されてもよく、Ｘ１０１でのアミノ酸がＰに置換されてもよく、Ｘ１０６でのアミノ酸がＳに置換されてもよく、Ｘ１０７でのアミノ酸がＡに置換されてもよく、Ｘ１０８でのアミノ酸がＦに置換されてもよい。
例えば、前記ＶＨ領域が配列番号９０－９３、９５及び９７－１０４のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
本願の前記抗原結合タンパク質が重鎖定常領域ＣＨを含んでもよく、且つ前記抗体重鎖定常領域がヒトＩｇＧ定常領域を含んでもよい。ある場合において、前記ヒトＩｇＧ定常領域がヒトＩｇＧ１定常領域を含んでもよい。前記ヒトＩｇＧ１定常領域が天然や人工合成されたＩｇＧ１定常領域又はその変異体を含んでもよい。前記変異が以下の一つ又は複数の位置での変異を含んでもよい：Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７又はＫ４４７。例えば、一つ、二つ又はそれ以上の位置での変異を含んでもよい。変異がアミノ酸の欠損、挿入又は置換を含んでもよい。例えば、前記ヒトＩｇＧ１定常領域が以下の変異を含んでもよい：１）Ｎ２９７Ａ、２）Ｋ４４７欠損、３）Ｎ２９７Ａ及びＫ４４７欠損、４）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＫ４４７欠損。例えば、前記融合タンパク質のヒトＩｇＧ１定常領域が配列番号１７２－１７５のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
本願において、前記単離された抗原結合タンパク質がＬＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、前記ＬＣＤＲ１が配列番号１８１に示すアミノ酸配列を含んでもよい；前記ＬＣＤＲ２が配列番号１８２に示すアミノ酸配列を含んでもよい；且つ前記ＬＣＤＲ３が配列番号１８３に示すアミノ酸配列を含んでもよい。又は、本願の前記抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１が配列番号１８１に示すアミノ酸配列を含んでもよい；前記ＬＣＤＲ２が配列番号１８２に示すアミノ酸配列を含んでもよい；且つ前記ＬＣＤＲ３が配列番号１９１に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
ある場合において、本願の前記抗原結合タンパク質の前記ＬＣＤＲ１が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号４８－５１；前記ＬＣＤＲ２が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号６３－６４；且つ前記ＬＣＤＲ３が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号７７－８０。ほかの場合において、本願の前記抗原結合タンパク質の前記ＬＣＤＲ１が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号４８－５１；前記ＬＣＤＲ２が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号６３－６４；且つ前記ＬＣＤＲ３が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号７７－７９。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６４と同じＬＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＬＣＤＲ１が配列番号４８に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６５と同じＬＣＤＲ１－３を含んでもよく、その中、ＬＣＤＲ１が配列番号４９に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６６、ＰＲ０００２６１、ＰＲ０００２６２と同じＬＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＬＣＤＲ１が配列番号４８に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６７と同じＬＣＤＲ１－３を含んでもよく、その中、ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６８と同じＬＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＬＣＤＲ３が配列番号７９に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６９、ＰＲ０００２６３、ＰＲ０００２６４と同じＬＣＤＲ１－３を含んでもよく、その中、ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００７０、ＰＲ０００２６５、ＰＲ０００２６６と同じＬＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００７１と同じＬＣＤＲ１－３を含んでもよく、その中、ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ３が配列番号８０に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００７２、ＰＲ０００２６７、ＰＲ０００２６８と同じＬＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
本願において、前記単離された抗原結合タンパク質がＬ－ＦＲ１－４を含んでもよい。その中、前記Ｌ－ＦＲ１が配列番号１８５に示すアミノ酸配列を含んでもよい；前記Ｌ－ＦＲ２が配列番号１８６に示すアミノ酸配列を含んでもよい；前記Ｌ－ＦＲ３が配列番号１８７に示すアミノ酸配列を含んでもよい；且つ前記Ｌ－ＦＲ４が配列番号１８８に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
ある場合において、本願の前記抗原結合タンパク質の前記Ｌ－ＦＲ１が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号４１－４４；前記Ｌ－ＦＲ２が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号５６－５９；前記Ｌ－ＦＲ３が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号６９－７２；且つ前記Ｌ－ＦＲ４が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号８５－８６。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６４と同じＬ－ＦＲ１－４を含んでもよい。その中、Ｌ－ＦＲ１が配列番号４１に示すアミノ酸配列を含んでもよく、Ｌ－ＦＲ２が配列番号５６に示すアミノ酸配列を含んでもよく、Ｌ－ＦＲ３が配列番号６９に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＬ－ＦＲ４が配列番号８５に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６５と同じＬ－ＦＲ１－４を含んでもよい。その中、Ｌ－ＦＲ１が配列番号４２に示すアミノ酸配列を含んでもよく、Ｌ－ＦＲ２が配列番号５７に示すアミノ酸配列を含んでもよく、Ｌ－ＦＲ３が配列番号６９に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＬ－ＦＲ４が配列番号８５に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６６と同じＬ－ＦＲ１－４を含んでもよい。その中、Ｌ－ＦＲ１が配列番号４３に示すアミノ酸配列を含んでもよく、Ｌ－ＦＲ２が配列番号５８に示すアミノ酸配列を含んでもよく、Ｌ－ＦＲ３が配列番号７０に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＬ－ＦＲ４が配列番号８５に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６７と同じＬ－ＦＲ１－４を含んでもよい。その中、Ｌ－ＦＲ１が配列番号４２に示すアミノ酸配列を含んでもよく、Ｌ－ＦＲ２が配列番号５６に示すアミノ酸配列を含んでもよく、Ｌ－ＦＲ３が配列番号６９に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＬ－ＦＲ４が配列番号８５に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６８と同じＬ－ＦＲ１－４を含んでもよい。その中、Ｌ－ＦＲ１が配列番号４２に示すアミノ酸配列を含んでもよく、Ｌ－ＦＲ２が配列番号５６に示すアミノ酸配列を含んでもよく、Ｌ－ＦＲ３が配列番号７１に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＬ－ＦＲ４が配列番号８５に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００７１と同じＬ－ＦＲ１－４を含んでもよい。その中、Ｌ－ＦＲ１が配列番号４２に示すアミノ酸配列を含んでもよく、Ｌ－ＦＲ２が配列番号５６に示すアミノ酸配列を含んでもよく、Ｌ－ＦＲ３が配列番号６９に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＬ－ＦＲ４が配列番号８５に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６９、ＰＲ０００２６３、ＰＲ０００２６４と同じＬ－ＦＲ１－４を含んでもよい。その中、Ｌ－ＦＲ１が配列番号４２に示すアミノ酸配列を含んでもよく、Ｌ－ＦＲ２が配列番号５９に示すアミノ酸配列を含んでもよく、Ｌ－ＦＲ３が配列番号７２に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＬ－ＦＲ４配列番号８６に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００７０、ＰＲ０００２６５、ＰＲ０００２６６と同じＬ－ＦＲ１－４を含んでもよい。その中、Ｌ－ＦＲ１が配列番号４４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、Ｌ－ＦＲ２が配列番号５７に示すアミノ酸配列を含んでもよく、Ｌ－ＦＲ３が配列番号６９に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＬ－ＦＲ４が配列番号８５に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００７２、ＰＲ０００２６７、ＰＲ０００２６８と同じＬ－ＦＲ１－４を含んでもよい。その中、Ｌ－ＦＲ１が配列番号４２に示すアミノ酸配列を含んでもよく、Ｌ－ＦＲ２が配列番号５７に示すアミノ酸配列を含んでもよく、Ｌ－ＦＲ３が配列番号６９に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＬ－ＦＲ４が配列番号８５に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６１、ＰＲ０００２６２と同じＬ－ＦＲ１－４を含んでもよい。その中、Ｌ－ＦＲ１が配列番号４３に示すアミノ酸配列を含んでもよく、Ｌ－ＦＲ２が配列番号５８に示すアミノ酸配列を含んでもよく、Ｌ－ＦＲ３が配列番号６９に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＬ－ＦＲ４が配列番号８５に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
本願において、前記単離された抗原結合タンパク質がＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよい；前記ＨＣＤＲ２が配列番号１７９に示すアミノ酸配列を含んでもよい；且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号１８０に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
ある場合において、本願の前記抗原結合タンパク質の前記ＨＣＤＲ１が下記に示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号５；前記ＨＣＤＲ２が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号１４、１６及び１７；且つ前記ＨＣＤＲ３が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号２９－３３。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６４、ＰＲ００００６５、ＰＲ００００６７、ＰＲ００００７０と同じＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６６と同じＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号３０に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６８と同じＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号３１に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６９と同じＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号３２に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００７１、ＰＲ００００７２と同じＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号３３に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６１と同じＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１６に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号３０に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６２と同じＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１７に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号３０に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６３と同じＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１６に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号３２に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６４と同じＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１７に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号３２に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６５と同じＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１６に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６６と同じＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１７に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６７と同じＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１６に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号３３に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６８と同じＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１７に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号３３に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
本願において、前記単離された抗原結合タンパク質がＨ－ＦＲ１－４を含んでもよい。その中、前記Ｈ－ＦＲ１が配列番号１に示すアミノ酸配列を含んでもよい；前記Ｈ－ＦＲ２が配列番号９に示すアミノ酸配列を含んでもよい；前記Ｈ－ＦＲ３が配列番号１８４に示すアミノ酸配列を含んでもよい；且つ前記Ｈ－ＦＲ４が配列番号３８に示すアミノ酸配列を含んでもよい。又は、前記Ｈ－ＦＲ１が配列番号１に示すアミノ酸配列を含んでもよい；前記Ｈ－ＦＲ２が配列番号９に示すアミノ酸配列を含んでもよい；前記Ｈ－ＦＲ３が配列番号１９２に示すアミノ酸配列を含んでもよい；且つ前記Ｈ－ＦＲ４が配列番号３８に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
ある場合において、本願の前記抗原結合タンパク質の前記Ｈ－ＦＲ１が下記に示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号１；前記Ｈ－ＦＲ２が下記に示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号９；前記Ｈ－ＦＲ３が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号２１－２４；且つ前記Ｈ－ＦＲ４が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号３８。ほかの場合において、本願の前記抗原結合タンパク質の前記Ｈ－ＦＲ１が下記に示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号１；前記Ｈ－ＦＲ２が下記に示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号９；前記Ｈ－ＦＲ３が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号２１－２２及び２４；且つ前記Ｈ－ＦＲ４が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号３８。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＨ－ＦＲ１－４を含んでもよく、その中、前記Ｈ－ＦＲ１が配列番号１に示すアミノ酸配列を含んでもよく、前記Ｈ－ＦＲ２が配列番号９に示すアミノ酸配列を含んでもよく、前記Ｈ－ＦＲ３が配列番号２１に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記Ｈ－ＦＲ４が配列番号３８に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＨ－ＦＲ１－４を含んでもよく、その中、前記Ｈ－ＦＲ１が配列番号１に示すアミノ酸配列を含んでもよく、前記Ｈ－ＦＲ２が配列番号９に示すアミノ酸配列を含んでもよく、前記Ｈ－ＦＲ３が配列番号２２に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記Ｈ－ＦＲ４が配列番号３８に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＨ－ＦＲ１－４を含んでもよく、その中、前記Ｈ－ＦＲ１が配列番号１に示すアミノ酸配列を含んでもよく、前記Ｈ－ＦＲ２が配列番号９に示すアミノ酸配列を含んでもよく、前記Ｈ－ＦＲ３が配列番号２３に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記Ｈ－ＦＲ４が配列番号３８に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＨ－ＦＲ１－４を含んでもよく、その中、前記Ｈ－ＦＲ１が配列番号１に示すアミノ酸配列を含んでもよく、前記Ｈ－ＦＲ２が配列番号９に示すアミノ酸配列を含んでもよく、前記Ｈ－ＦＲ３が配列番号２４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記Ｈ－ＦＲ４が配列番号３８に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
本願において、前記単離された抗原結合タンパク質がＬＣＤＲ１－３及びＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、前記ＬＣＤＲ１が配列番号１８１に示すアミノ酸配列を含んでもよい；前記ＬＣＤＲ２が配列番号１８２に示すアミノ酸配列を含んでもよい；且つ前記ＬＣＤＲ３が配列番号１８３に示すアミノ酸配列を含んでもよい；前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよい；前記ＨＣＤＲ２が配列番号１７９に示すアミノ酸配列を含んでもよい；且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号１８０に示すアミノ酸配列を含んでもよい。又は、前記ＬＣＤＲ１が配列番号１８１に示すアミノ酸配列を含んでもよい；前記ＬＣＤＲ２が配列番号１８２に示すアミノ酸配列を含んでもよい；且つ前記ＬＣＤＲ３が配列番号１９１に示すアミノ酸配列を含んでもよい；前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよい；前記ＨＣＤＲ２が配列番号１７９に示すアミノ酸配列を含んでもよい；且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号１８０に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
ある場合において、本願の前記抗原結合タンパク質の前記ＬＣＤＲ１が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号４８－５１；前記ＬＣＤＲ２が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号６３－６４；且つ前記ＬＣＤＲ３が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号７７－８０；前記ＨＣＤＲ１が下記に示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号５；前記ＨＣＤＲ２が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号１４、１６及び１７；且つ前記ＨＣＤＲ３が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号２９－３３。ほかの場合において、本願の前記抗原結合タンパク質の前記ＬＣＤＲ１が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号４８－５１；前記ＬＣＤＲ２が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号６３－６４；且つ前記ＬＣＤＲ３が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号７７－７９；前記ＨＣＤＲ１が下記に示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号５；前記ＨＣＤＲ２が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号１４、１６及び１７；且つ前記ＨＣＤＲ３が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号２９－３３。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６４と同じＬＣＤＲ１－３及びＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＬＣＤＲ１が配列番号４８に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含んでもよく、その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６５と同じＬＣＤＲ１－３及びＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＬＣＤＲ１が配列番号４９に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含んでもよく、その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６６と同じＬＣＤＲ１－３及びＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＬＣＤＲ１が配列番号４８に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含んでもよく、その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号３０に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６７と同じＬＣＤＲ１－３及びＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含んでもよい；ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含んでもよい；ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含んでもよく、その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６８と同じＬＣＤＲ１－３及びＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＬＣＤＲ３が配列番号７９に示すアミノ酸配列を含んでもよく、その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号３１に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６９と同じＬＣＤＲ１－３及びＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含んでもよい；ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含んでもよい；ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含んでもよく、その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号３２に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００７０と同じＬＣＤＲ１－３及びＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含んでもよく、その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００７１と同じＬＣＤＲ１－３及びＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＬＣＤＲ３が配列番号８０に示すアミノ酸配列を含んでもよく、その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号３３に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００７２と同じＬＣＤＲ１－３及びＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含んでもよく、その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号３３に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６１と同じＬＣＤＲ１－３及びＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＬＣＤＲ１が配列番号４８に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含んでもよく、その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１６に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号３０に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６２と同じＬＣＤＲ１－３及びＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＬＣＤＲ１が配列番号４８に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含んでもよく、その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１７に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号３０に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６３と同じＬＣＤＲ１－３及びＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含んでもよく、その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１６に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号３２に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６４と同じＬＣＤＲ１－３及びＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含んでもよく、その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１７に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号３２に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６５及びＰＲ０００４１６と同じＬＣＤＲ１－３及びＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含んでもよく、その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１６に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６６と同じＬＣＤＲ１－３及びＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含んでもよく、その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１７に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６７と同じＬＣＤＲ１－３及びＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含んでもよく、その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１６に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号３３に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６８と同じＬＣＤＲ１－３及びＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含んでもよく、その中、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、ＨＣＤＲ２が配列番号１７に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つＨＣＤＲ３が配列番号３３に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
本願において、前記抗原結合タンパク質が軽鎖可変領域ＶＬ及び重鎖可変領域ＶＨを含んでもよい。前記ＶＬが配列番号１９４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号１９３に示すアミノ酸配列を含んでもよい。又は、前記ＶＬが配列番号１９０に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号１８９に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
ある場合において、前記抗原結合タンパク質の前記ＶＬが配列番号１０８－１１６及び１１８のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号９０－９５、９７－１０４のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。ほかの場合において、前記抗原結合タンパク質の前記ＶＬが配列番号１０８－１１４、１１６及び１１８のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号９０－９３、９５及び９７－１０４のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６４と同じＶＬ及びＶＨを含んでもよく、その中、前記ＶＬが配列番号１０８に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号９０に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６５と同じＶＬ及びＶＨを含んでもよく、その中、前記ＶＬが配列番号１０９に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号９０に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６６と同じＶＬ及びＶＨを含んでもよく、その中、前記ＶＬが配列番号１１０に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号９１に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６７と同じＶＬ及びＶＨを含んでもよく、その中、前記ＶＬが配列番号１１１に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号９０に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６８と同じＶＬ及びＶＨを含んでもよく、その中、前記ＶＬが配列番号１１２に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号９２に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６９と同じＶＬ及びＶＨを含んでもよく、その中、前記ＶＬが配列番号１１３に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号９３に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００７０と同じＶＬ及びＶＨを含んでもよく、その中、前記ＶＬが配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号９０に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００７１と同じＶＬ及びＶＨを含んでもよく、その中、前記ＶＬが配列番号１１５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号９４に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００７２と同じＶＬ及びＶＨを含んでもよく、その中、前記ＶＬが配列番号１１６に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号９５に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６１と同じＶＬ及びＶＨを含んでもよく、その中、前記ＶＬが配列番号１１８に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号９７に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６２と同じＶＬ及びＶＨを含んでもよく、その中、前記ＶＬが配列番号１１８に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号９８に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６３と同じＶＬ及びＶＨを含んでもよく、その中、前記ＶＬが配列番号１１３に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号９９に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６４と同じＶＬ及びＶＨを含んでもよく、その中、前記ＶＬが配列番号１１３に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号１００に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６５又はＰＲ０００４１６と同じＶＬ及びＶＨを含んでもよく、その中、前記ＶＬが配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号１０１に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６６と同じＶＬ及びＶＨを含んでもよく、その中、前記ＶＬが配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６７と同じＶＬ及びＶＨを含んでもよく、その中、前記ＶＬが配列番号１１６に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号１０３に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６８と同じＶＬ及びＶＨを含んでもよく、その中、前記ＶＬが配列番号１１６に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号１０４に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
ある場合において、前記抗原結合タンパク質が軽鎖定常領域及び重鎖定常領域を含んでもよく、その中、前記軽鎖定常領域が配列番号１７０に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記重鎖定常領域が配列番号１７２－１７５のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
ある場合において、前記抗原結合タンパク質が抗体軽鎖ＬＣ及び抗体重鎖ＨＣを含んでもよく、その中、前記抗体軽鎖ＬＣが下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号１５０－１５８及び１６０－１６３、且つ前記抗体重鎖ＨＣが下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号１２２－１２７及び１２９－１３７。
ある場合において、前記抗原結合タンパク質が抗体軽鎖ＬＣ及び抗体重鎖ＨＣを含んでもよく、その中、前記抗体軽鎖ＬＣが下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号１５０－１５６、１５８及び１６０－１６３、且つ前記抗体重鎖ＨＣが下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号１２２－１２５、１２７及び１２９－１３７。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６４と同じＬＣ及びＨＣを含んでもよく、その中、前記ＬＣが配列番号１５０に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＨＣが配列番号１２２に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６５と同じＬＣ及びＨＣを含んでもよく、その中、前記ＬＣが配列番号１５１に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＨＣが配列番号１２２に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６６と同じＬＣ及びＨＣを含んでもよく、その中、前記ＬＣが配列番号１５２に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＨＣが配列番号１２３に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６７と同じＬＣ及びＨＣを含んでもよく、その中、前記ＬＣが配列番号１５３に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＨＣが配列番号１２２に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６８と同じＬＣ及びＨＣを含んでもよく、その中、前記ＬＣが配列番号１５４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＨＣが配列番号１２４に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００６９と同じＬＣ及びＨＣを含んでもよく、その中、前記ＬＣが配列番号１５５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＨＣが配列番号１２５に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００７０と同じＬＣ及びＨＣを含んでもよく、その中、前記ＬＣが配列番号１５６に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＨＣが配列番号１２２に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００７１と同じＬＣ及びＨＣを含んでもよく、その中、前記ＬＣが配列番号１５７に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＨＣが配列番号１２６に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ００００７２と同じＬＣ及びＨＣを含んでもよく、その中、前記ＬＣが配列番号１５８に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＨＣが配列番号１２７に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６１と同じＬＣ及びＨＣを含んでもよく、その中、前記ＬＣが配列番号１６０に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＨＣが配列番号１２９に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６２と同じＬＣ及びＨＣを含んでもよく、その中、前記ＬＣが配列番号１６０に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＨＣが配列番号１３０に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６３と同じＬＣ及びＨＣを含んでもよく、その中、前記ＬＣが配列番号１６１に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＨＣが配列番号１３１に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６４と同じＬＣ及びＨＣを含んでもよく、その中、前記ＬＣが配列番号１６１に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＨＣが配列番号１３２に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６５と同じＬＣ及びＨＣを含んでもよく、その中、前記ＬＣが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＨＣが配列番号１３３に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６６と同じＬＣ及びＨＣを含んでもよく、その中、前記ＬＣが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＨＣが配列番号１３４に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６７と同じＬＣ及びＨＣを含んでもよく、その中、前記ＬＣが配列番号１６３に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＨＣが配列番号１３５に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００２６８と同じＬＣ及びＨＣを含んでもよく、その中、前記ＬＣが配列番号１６３に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＨＣが配列番号１３６に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＲ０００４１６と同じＬＣ及びＨＣを含んでもよく、その中、前記ＬＣが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＨＣが配列番号１３７に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
特定の抗ＰＤ－Ｌ１抗体
本願の前記単離された抗原結合タンパク質は、特定の抗ＰＤ－Ｌ１抗体と競合してＰＤ－Ｌ１に結合することができる。本願において、前記の特定抗ＰＤ－Ｌ１抗体がＬＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、前記ＬＣＤＲ１が配列番号１８１に示すアミノ酸配列を含んでもよい；前記ＬＣＤＲ２が配列番号１８２に示すアミノ酸配列を含んでもよい；且つ前記ＬＣＤＲ３が配列番号１９１に示すアミノ酸配列を含んでもよい。ある場合において、本願の前記の特定抗ＰＤ－Ｌ１抗体の前記ＬＣＤＲ１が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号４８－５１；前記ＬＣＤＲ２が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号６３－６４；且つ前記ＬＣＤＲ３が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号７７－７９。
本願において、前記の特定抗ＰＤ－Ｌ１抗体がＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよい；前記ＨＣＤＲ２が配列番号１７９に示すアミノ酸配列を含んでもよい；且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号１８０に示すアミノ酸配列を含んでもよい。ある場合において、本願の前記の特定抗ＰＤ－Ｌ１抗体の前記ＨＣＤＲ１が下記に示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号５；前記ＨＣＤＲ２が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号１４、１６及び１７；且つ前記ＨＣＤＲ３が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号２９－３３。
本願において、前記の特定抗ＰＤ－Ｌ１抗体がＬＣＤＲ１－３及びＨＣＤＲ１－３を含んでもよい。その中、前記ＬＣＤＲ１が配列番号１８１に示すアミノ酸配列を含んでもよい；前記ＬＣＤＲ２が配列番号１８２に示すアミノ酸配列を含んでもよい；且つ前記ＬＣＤＲ３が配列番号１９１に示すアミノ酸配列を含んでもよい；前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含んでもよい；前記ＨＣＤＲ２が配列番号１７９に示すアミノ酸配列を含んでもよい；且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号１８０に示すアミノ酸配列を含んでもよい。ある場合において、本願の前記の特定抗ＰＤ－Ｌ１抗体の前記ＬＣＤＲ１が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号４８－５１；前記ＬＣＤＲ２が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号６３－６４；且つ前記ＬＣＤＲ３が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号７７－７９；前記ＨＣＤＲ１が下記に示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号５；前記ＨＣＤＲ２が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号１４、１６及び１７；且つ前記ＨＣＤＲ３が下記のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい：配列番号２９－３３。
本願において、前記の特定抗ＰＤ－Ｌ１抗体が軽鎖可変領域ＶＬ及び重鎖可変領域ＶＨを含んでもよい。前記ＶＬが配列番号１９４に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号１９３に示すアミノ酸配列を含んでもよい。ある場合において、前記の特定抗ＰＤ－Ｌ１抗体の前記ＶＬが配列番号１０８－１１４、１１６及び１１８のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号９０－９３、９５、９７－１０４のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
検出方法
本分野に知られている各種の測定で本願の前記ＰＤ－Ｌ１抗原結合タンパク質又は融合タンパク質の物理／化学的特性及び／又は生物的活性を同定、スクリーニング又は評価してもよい。
一つの方面では、例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫ブロット（例えば、ウエスタンブロット）、フローサイトメトリー（例えば、ＦＡＣＳ）、免疫組織化学、免疫蛍光などの既知方法によって本願の抗原結合タンパク質又は融合タンパク質の抗原結合活性を測定してもよい。
本願において、前記単離された抗原結合タンパク質が１×１０－８Ｍ又はより低いＫＤ値で霊長類動物由来のＰＤ－Ｌ１と結合することができる。前記霊長類動物ＰＤ－Ｌ１抗原結合タンパク質のＰＤ－Ｌ１に対する結合親和力が本分野に知られているいかなる方法によって測定してもよい。ある場合において、結合親和力が表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、結合抗原沈降法、平衡透析法、バイオフィルム干渉（ＢＬＩ）によって測定してもよい。ある場合において、ＰＤ－Ｌ１抗原結合タンパク質のＰＤ－Ｌ１に対する結合親和力及びＫＤ値がバイオフィルム干渉（ＢＬＩ）によって測定してもよい。例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ分子相互作用アナライザーを使って、抗原と抗体の間の結合動態学的分析を行ってもよい。
本願において、前記単離された抗原結合タンパク質が１×１０－８Ｍ又はより低いＫＤ値で霊長類動物由来のＰＤ－Ｌ１と結合することができる。例えば、前記ＫＤの値が約１×１０－８Ｍ又は以下、約９×１０－９Ｍ又は以下、約８×１０－９Ｍ又は以下、約７×１０－９Ｍ又は以下、約６×１０－９Ｍ又は以下、約５×１０－９Ｍ又は以下、約４×１０－９Ｍ又は以下、約３×１０－９Ｍ又は以下、約２×１０－９Ｍ又は以下、約１×１０－９Ｍ又はより低い値でヒト由来のＰＤ－Ｌ１と結合することができ、例えば、ＦｏｒｔｉｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ分子相互作用アナライザーで測定したものである。
他の場合において、本願の前記ＰＤ－Ｌ１抗原結合タンパク質とＰＤ－Ｌ１の結合活性は、フローサイトメトリー又は酵素結合免疫吸着測定法を使って測定を行ってもよい。例えば、ＦＡＣＳ測定において、ヒトＰＤ－Ｌ１を安定発現する宿主細胞（例えば、ＣＨＯＫ１細胞）を使用して、前記ＰＤ－Ｌ１抗原結合タンパク質とＰＤ－Ｌ１のＥＣ５０値は、約０．０００１ｎＭから約１００ｎＭまでの範囲内にあり、例えば、約０．００１ｎＭから約１０ｎＭまでの範囲内、約０．０１ｎＭから約１０ｎＭまでの範囲内、約０．０５ｎＭから約５ｎＭまでの範囲内、約０．０５ｎＭから約１ｎＭまでの範囲内にある。他に、例えば、ＥＬＩＳＡにおいて、ヒトＰＤ－Ｌ１抗原タンパク質を使用して、前記ＰＤ－Ｌ１抗原結合タンパク質とＰＤ－Ｌ１のＥＣ５０値は、約０．０００１ｎＭから約１００ｎＭまでの範囲内にあり、例えば、約０．００１ｎＭから約１０ｎＭまでの範囲内、約０．００１ｎＭから約５ｎＭまでの範囲内、約０．００１ｎＭから約１ｎＭまでの範囲内、約０．０１ｎＭから約０．５ｎＭまでの範囲内、約０．０１ｎＭから約０．１ｎＭまでの範囲内にある。
もう一つの方面において、競合測定は、本願の前記いずれかの抗原結合タンパク質と競合してＰＤ－Ｌｌに結合する抗体の同定に使ってもよい。ある場合において、このような競合性抗体は本願の前記いずれかの抗原結合タンパク質が結合するエピトープと重ねるエピトープに結合する（例えば、線状又は配座エピトープ）。抗原結合タンパク質が結合したエピトープをマッピングするための例示的な方法は、以下のことを含むが、これらに限らない：Ｘ線共結晶及び低温電子顕微鏡法（ｃｒｙｏ－ＥＭ）、アレイベースのオリゴペプチドスキャン、部位特異的変異誘発マッピング、架橋結合質量分析及びバイオフィルム干渉法。
もう一つの方面において、本願の前記抗原結合タンパク質は、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１の結合を遮断することができる。ある場合において、前記抗原結合タンパク質がＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１の結合を遮断することは、フローサイトメトリーＦＡＣＳ、酵素結合免疫吸着測定法ＥＬＩＳＡによって測定してもよい。例えば、まずＰＤ－Ｌ１を安定発現する宿主細胞（例えば、ＣＨＯＫ１細胞）を順次減少量のマーカーがついてない前記抗原結合タンパク質とインキュベートして、次にビオチンマーカーがついているＰＤ－１タンパク質でインキュベートする。その後、ＦＡＣＳで細胞を分析し、前記抗原結合タンパク質がＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１結合を遮断することを証明する。他に、例えば、まずＰＤ－Ｌ１抗原タンパク質をプレートにコーティングし、順次減少量のマーカーがついてない前記抗原結合タンパク質及びビオチンマーカーがついているＰＤ－１タンパク質を混合した後、共にインキュベートする。その後、ＥＬＩＳＡで細胞を分析し、前記抗原結合タンパク質がＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１の結合を遮断することができることを検証した。
もう一つの方面において、本願の前記抗原結合タンパク質はＣＤ８０とＰＤ－Ｌ１の結合を遮断することができる。ある場合において、前記抗原結合タンパク質がＣＤ８０とＰＤ－Ｌ１の結合遮断することは、フローサイトメトリーＦＡＣＳ、酵素結合免疫吸着測定法ＥＬＩＳＡによって測定してもよい。例えば、まずＰＤ－Ｌ１を安定に発現する宿主細胞（例えば、ＣＨＯＫ１細胞）を順次減少量のマーカーがついてない前記抗原結合タンパク質とインキュベートして、次にビオチンマーカーがついているＣＤ８０タンパク質でインキュベートする。その後、ＦＡＣＳで細胞を分析して、前記抗原結合タンパク質がＣＤ８０とＰＤ－Ｌ１の結合を遮断したことを検証する。他に、例えば、まずＰＤ－Ｌ１抗原タンパク質をプレートにコーティングし、順次減少量のマーカーがついてない前記抗原結合タンパク質とビオチンマーカーがついているＣＤ８０タンパク質を混合した後、共にインキュベートする。その後、ＥＬＩＳＡで細胞を分析し、前記抗原結合タンパク質がＣＤ８０とＰＤ－Ｌ１の結合を遮断することができることを検証する。
本願の前記抗原結合タンパク質は、免疫細胞におけるＩＦＮ－γ及び／又はＩＬ２の分泌を刺激することができる。前記免疫細胞は、リンパ球、例えばＢ細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、髄系細胞、例えば単球、マクロファージ、肥満細胞、好塩基球及び顆粒球を含んでもよい。本分野の技術者が知る方法で免疫細胞におけるサイトカインの分泌を測定してもよい。例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）で免疫細胞（例えばＴ細胞）の増殖状況又は免疫細胞が生成したサイトカイン（例えばＴ細胞が生成するＩＦＮ－γ又はＩＬ－２）を定量的に測定してもよい。
コントロール抗体
本願の前記抗原結合タンパク質は、コントロール抗体と比べて、霊長類動物由来のＰＤ－Ｌ１と完全に重なることがないエピトープと結合することができる。ある場合において、前記コントロール抗体が抗ＰＤ－Ｌ１抗体ａｖｅｌｕｍａｂであってもよく、即ち、本願の前記抗体ＰＲ００１５９８であってもよい。ＰＲ００１５９８が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含んでもよく、前記コントロール抗体の軽鎖可変領域がＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含んでもよく、前記ＬＣＤＲ１が配列番号５３に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６６に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号８２に示すアミノ酸配列を含み、前記コントロール抗体の重鎖可変領域がＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号３５に示すアミノ酸配列を含み、前記コントロール抗体の軽鎖可変領域が配列番号１１９に示すアミノ酸配列を含み、前記コントロール抗体の重鎖可変領域が配列番号１０５に示すアミノ酸配列を含む。
ほかの場合において、前記コントロール抗体が抗ＰＤ－Ｌ１抗体アテゾリズマブ（ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ）であってもよく、即ち、本願の前記抗体ＰＲ０００１５１であってもよい。ＰＲ０００１５１が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含んでもよく、前記コントロール抗体の軽鎖可変領域がＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号５２に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号８１に示すアミノ酸配列を含み、前記コントロール抗体の重鎖可変領域がＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号６に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号３４に示すアミノ酸配列を含み、前記コントロール抗体の軽鎖可変領域が配列番号１１７に示すアミノ酸配列を含み、前記コントロール抗体の重鎖可変領域が配列番号９６に示すアミノ酸配列を含む。
ほかの場合において、前記コントロール抗体がＨｅｎｇｒｕｉ融合タンパク質９であってもよく、即ち、本願の前記抗体ＰＲ００２４６６であってもよい。ＰＲ００２４６６が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含んでもよく、前記コントロール抗体の軽鎖可変領域がＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号５５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号８４に示すアミノ酸配列を含み、前記コントロール抗体の重鎖可変領域がＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号２０に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号３７に示すアミノ酸配列を含み、前記コントロール抗体の軽鎖可変領域が配列番号１２１に示すアミノ酸配列を含み、前記コントロール抗体の重鎖可変領域が配列番号１０７に示すアミノ酸配列を含む。
本分野において、エピトープを測定する方法は、以下のことを含むが、これらに限らない：合成ペプチド法、免疫情報学予測法、ポリペプチド活性測定、エピトープペプチドスキャン技術、タンパク質切断法、ファージディスプレイ技術、Ｘ線回折と核磁気共鳴分析、並びにコンピューターソフトウェアを使用したエピトープ予測。ある実施形態において、バイオフィルム干渉法（ＢＬＩ）をベースにしたＯｃｔｅｔ分子相互作用分析プラットフォームを使用して本願の前記抗原結合タンパク質と前記コントロール抗体の抗原エピトープに対する競合性結合を行ってもよい。例えば、第一種の抗体を抗原と混合して、その後、第二種の抗体を入れて、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔで第二種の抗体の第一種抗体に対する競合性抑制率を測定し、競合性抑制率が８５％より低い場合（例えば、８４％より低い、８３％より低い、８０％より低い又はより低い）、第一種の抗体と第二種の抗体が結合する抗原のエピトープが完全に重なることがない。
融合タンパク質
一方、本願発明が融合タンパク質を提供し、前記融合タンパク質が以下のものを含んでもよい：ａ）ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片；並びにｂ）本願上記で記載された抗原結合タンパク質。
本願の前記融合タンパク質の前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片がヒトＴＧＦＢＲＩＩの細胞外ドメインを含んでもよい。ある場合において、前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片が配列番号１７６－１７８のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
本願において、前記融合タンパク質が本願の前記単離された抗原結合タンパク質を含んでもよい。前記単離された抗原結合タンパク質が軽鎖可変領域ＶＬ及び重鎖可変領域ＶＨを含んでもよい。ある場合において、前記ＶＬが配列番号１９０に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記ＶＨが配列番号１８９に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
前記単離された抗原結合タンパク質が抗体重鎖定常領域をさらに含んでもよく、且つ前記重鎖定常領域がヒトＩｇＧ定常領域を含んでもよい。ある場合において、前記ヒトＩｇＧ定常領域がヒトＩｇＧ１定常領域を含んでもよい。前記ヒトＩｇＧ１定常領域が天然や人工合成されたＩｇＧ１定常領域又はその変異体を含んでもよい。前記変異が以下の一つ又は複数の位置での変異を含んでもよい：Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７又はＫ４４７。例えば、一つ、二つ又はそれ以上の位置での変異を含んでもよい。変異がアミノ酸の欠損、挿入又は置換を含んでもよい。例えば、前記ヒトＩｇＧ１定常領域が以下の変異を含んでもよい：１）Ｎ２９７Ａ、２）Ｋ４４７欠損、３）Ｎ２９７Ａ及びＫ４４７欠損、４）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＫ４４７欠損。例えば、前記融合タンパク質のヒトＩｇＧ１定常領域が配列番号１７２－１７５のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
本願の前記融合タンパク質の単離された抗原結合タンパク質が抗体重鎖又はその断片を含んでもよい。ある場合において、前記抗体重鎖又はその断片が下記のいずれかに示すアミノ酸配列又はその一部を含んでもよい：配列番号１２２－１２７及び１２９－１３７。例えば、前記抗体重鎖又はその断片が下記のいずれかに示すアミノ酸配列又はその一部を含んでもよい：配列番号１２２及び１３３－１３７。本願の前記融合タンパク質の単離された抗原結合タンパク質が抗体軽鎖又はその断片を含んでもよい。ある場合において、前記抗体軽鎖又はその断片が下記のいずれかに示すアミノ酸配列又はその一部を含んでもよい：配列番号１５０－１５８及び１６０－１６３。例えば、前記抗体軽鎖又はその断片が下記のいずれかに示すアミノ酸配列又はその一部を含んでもよい：配列番号１５６及び１６２－１６３。前記融合タンパク質の前記重鎖又はその断片と前記軽鎖又はその断片が組み合わせて特異的にＰＤ－Ｌ１に結合する抗原結合部分を形成することができる。
本願の前記融合タンパク質に含まれる前記抗原結合タンパク質の前記抗体重鎖又はその断片は、前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片とｉｎ－ｆｒａｍｅ融合して融合ポリペプチドを形成する。ある場合において、前記抗体重鎖又はその断片のＮ端は、直接又は間接的に前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片のＣ端と接続してもよい。ある場合において、前記抗体重鎖又はその断片のＣ端は、直接又は間接的に前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片のＮ端と接続してもよい。例えば、前記抗体重鎖又はその断片のＣ端が直接的に前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片のＮ端と接続してもよい。ほかの場合において、前記抗体重鎖又はその断片がリンカーによって前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片と接続してもよい、例えば、前記ペプチドリンカーが配列番号１６７－１６９のいずれか一項に記載されたアミノ酸配列を含んでもよい。
本願において、前記融合タンパク質が第一ポリペプチド及び第二ポリペプチドを含んでもよい。前記第一ポリペプチドが前記単離された抗原結合タンパク質の重鎖又はその断片並びに前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片を含んでもよい。ある場合において、前記第一ポリペプチドのＮ端からＣ端までは順次に、前記抗原結合断片の重鎖又はその断片、前記ペプチドリンカー、並びに前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片を含んでもよい。例えば、前記第一ポリペプチドが配列番号１３８－１３９、１４２－１４３及び１４５－１４８のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。前記第二ポリペプチドが前記単離された抗原結合タンパク質の軽鎖又はその断片を含んでもよく、例えば、前記第二ポリペプチドが配列番号１６２－１６３のいずれかに示すアミノ酸配列を含んでもよい。
例えば、前記融合タンパク質の前記第一ポリペプチドが配列番号１３８に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含んでもよく、例えば、前記融合タンパク質がＰＲ００１４８７と同じ第一ポリペプチド及び第二ポリペプチドを含んでもよい；
前記第一ポリペプチドが配列番号１３９に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含んでもよく、例えば、前記融合タンパク質がＰＲ００１４８８と同じ第一ポリペプチド及び第二ポリペプチドを含んでもよい；
前記第一ポリペプチドが配列番号１４２に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含んでもよく、例えば、前記融合タンパク質がＰＲ００１９０１と同じ第一ポリペプチド及び第二ポリペプチドを含んでもよい；
前記第一ポリペプチドが配列番号１４３に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含んでもよく、例えば、前記融合タンパク質がＰＲ００１９０２と同じ第一ポリペプチド及び第二ポリペプチドを含んでもよい；
前記第一ポリペプチドが配列番号１４５に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６３に示すアミノ酸配列を含んでもよく、例えば、前記融合タンパク質がＰＲ００２２４７と同じ第一ポリペプチド及び第二ポリペプチドを含んでもよい
前記第一ポリペプチドが配列番号１４６に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６３に示すアミノ酸配列を含んでもよく、例えば、前記融合タンパク質がＰＲ００２２４８と同じ第一ポリペプチド及び第二ポリペプチドを含んでもよい；
前記第一ポリペプチドが配列番号１４７に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含んでもよく、例えば、前記融合タンパク質がＰＲ００２２４９と同じ第一ポリペプチド及び第二ポリペプチドを含んでもよい；
前記第一ポリペプチドが配列番号１４８に示すアミノ酸配列を含んでもよく、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含んでもよく、例えば、前記融合タンパク質がＰＲ００２２５１と同じ第一ポリペプチド及び第二ポリペプチドを含んでもよい。
本願の前記融合タンパク質が二つの前記第一ポリペプチドと二つの前記第二ポリペプチドを含んでもよい。
本願において、前記抗体結合タンパク質の各重鎖又は軽鎖アミノ酸配列の一部が特定種に由来する抗体の対応するアミノ酸配列と相同であり、又は特定のカテゴリに属する。例えば、軽鎖及び重鎖の可変領域と定常部分が同じ動物種（例えば、人）に由来する抗体の可変領域及定常領域。本願において、前記ホモログは、前記タンパク質及び／又は前記ポリペプチド（例えば、ＰＤ－Ｌ１タンパク質を特異的に結合する抗体又はその断片）のアミノ酸配列と、少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％又はより高い）配列相同性を有するタンパク質又はポリペプチドであってもよい。
本願において、前記相同性は、通常、二つ又は複数の配列の間の類似性、擬似又は関連性のことを指す。以下の形式で“配列相同性の百分率”を計算してもよい：比較しようとする二つの配列を比較ウィンドウで比較し、二つの配列に同じ核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ）又は同じアミノ酸残基（例えば、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｃｙｓ及びＭｅｔ）が存在する位置の数を確定し、マッチングした位置の数を得て、マッチングした位置の数を比較ウィンドウ中の合計位置数（即ち、ウィンドウの大きさ）で割り、結果に１００をかけて、配列相同性の百分率を得る。配列相同性の百分率を確定するために行う比較は、本分野に知られている複数種の方式で実現してもよく、例えば、開示されたコンピューターソフトウェア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使ってもよい。本分野の技術者にとって、配列の比較に適したパラメータを確定することができる。例えば、比較される全長配列内又は標的配列領域内での最大比較を実現するために、任意のアルゴリズムを使用してもよい。前記相同性が以下の方法によって測定してもよい：ＦＡＳＴＡ及びＢＬＡＳＴ。ＦＡＳＴＡアルゴリズムの説明は、Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ及びＤ．Ｊ．Ｌｉｐｍａｎの“Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ”、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．）、８５：２４４４－２４４８、１９８８；及びＤ．Ｊ．ＬｉｐｍａｎとＷ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎの“Ｆａｓｔ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｓｅａｒｃｈ”、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２７：１４３５－１４４１、１９８９を参考してもよい。ＢＬＡＳＴアルゴリズムの説明はＳ．Ａｌｔｓｃｈｕｌ、Ｗ．Ｇｉｓｈ、Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ、Ｅ．Ｗ．Ｍｙｅｒｓ及びＤ．Ｌｉｐｍａｎの“Ａ ｂａｓｉｃ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌ”、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、２１５：４０３－４１０、１９９０を参考してもよい。
核酸、ベクター、宿主細胞及び製造方法
もう一つの方面において、本願は、単離された一種又は複数種の核酸分子をさらに提供する。前記一種又は複数種の核酸分子が本願の前記抗原結合タンパク質をコードできる。例えば、前記一種又は複数種の核酸分子において、各核酸分子は、完全の前記抗原結合タンパク質をコードしてもよく、その一部（例えば、ＨＣＤＲ１－３、ＬＣＤＲ１－３、ＶＬ、ＶＨ、軽鎖又は重鎖の一種又は複数種）をコードしてもよい。
本願の前記核酸分子は単離されたものであってもよい。例えば、前記核酸分子が以下方法によって生成又は合成されたものであってもよい：（ｉ）体外で増幅されたもの、例えばポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅して生成されたもの、（ｉｉ）クローン組換えによって生成されたもの、（ｉｉｉ）精製されたもの、例えば酵素切断とゲル電泳分級分離によって精製されたもの、又は（ｉｖ）合成されたもの、例えば化学合成されたもの。ある実施形態において、前記単離された核酸が組換えＤＮＡ技術で製造された核酸分子である。
本願において、本分野に知られている複数種の方法で前記抗体、その抗原結合断片をコードする核酸を製造してもよい。これらの方法が以下のことを含むが、これらに限らない：制限フラグメント操作、又はオリゴヌクレオチドを合成するオーバーラップエクステンションＰＣＲ。具体的な手順はＳａｍｂｒｏｏｋなどの、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．,１９８９；及びＡｕｓｕｂｅなどのＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ 、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｎ．Ｙ．,１９９３を参照することができる。
もう一つの方面において、本願発明は一種又は複数種のベクターを提供する。前記ベクターが本願の前記一種又は複数種の核酸分子を含む。各ベクターには、一種又は複数種の前記核酸分子を含んでもよい。また、前記ベクターには、他の遺伝子、例えば適切な宿主細胞と適切な条件下で当該ベクターをスクリーニングするためのマーカー遺伝子をさらに含んでもよい。また、前記ベクターには、コード領域を適切な宿主において、正確に発現させるための発現制御要素をさらに含んでもよい。このような制御要素は、本分野の技術者に知られており、例えば、プロモーター、リボソーム結合サイト、エンハンサー及び遺伝子転写又はｍＲＮＡ翻訳を調節するその他の制御要素などを含んでもよい。ある実施形態において、前記発現制御配列は、調整できる要素である。前記発現制御配列の具体的構造は、動物種又は細胞種類の機能により変化されるが、通常、それぞれ転写及び翻訳初期に寄与する５’非転写配列及び５’と３’非翻訳配列、例えばＴＡＴＡボックス、キャッピングシーケンス、ＣＡＡＴ配列などを含む。例えば、５’非転写発現制御配列がプロモーター領域を含んでもよく、プロモーター領域が機能的に接続された核酸を制御し転写させるためのプロモーター配列を含んでもよい。前記発現制御配列がエンハンサー配列又は上流アクチベーター配列をさらに含んでもよい。本願において、適切なプロモーターが、例えばＳＰ６、Ｔ３及びＴ７ポリメラーゼのプロモーター、ヒトＵ６ＲＮＡプロモーター、ＣＭＶプロモーター及びその人工ハイブリッドプロモーター（例えば、ＣＭＶ）を含んでもよく、その中、プロモーターのある一部が他の細胞タンパク質（例えば、ヒトＧＡＰＤＨ、グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ）遺伝子プロモーターのある一部と融合してもよく、前記プロモーターが他のイントロンを含んでも含まなくでもよい。本願の前記一種又は複数種の核酸分子は、前記発現制御要素と操作できるように接続してもよい。
前記ベクターは、例えばプラスミド、コスミド、ウイルス、ファージ又は例えば遺伝工程によく使用される他のベクターを含んでもよい。例えば、前記ベクターが発現ベクターである。
もう一つの方面において、本願発明は宿主細胞を提供する。前記宿主細胞は、本願の前記一種又は複数種の核酸分子及び／又は本願の前記一種又は複数種のベクターを含んでもよい。ある実施形態において、各種又は各宿主細胞は、一つの又は一種の本願の前記核酸分子又はベクターを含んでもよい。ある実施形態において、各種又は各宿主細胞は、複数の（例えば、２つ又はそれ以上）又は複数種の（例えば、２種又はそれ以上）本願の前記核酸分子又はベクターを含んでもよい。例えば、本願の前記ベクターを前記宿主細胞に導入してもよい。細胞は、例えば真核細胞であり、例えば、植物由来の細胞、真菌又は酵母細胞などである。本分野に知られている方法で本願の前記ベクターを前記宿主細胞に導入してもよい。例えば、エレクトロポレーション、ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎｅトランスフェクション、ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎトランスフェクションなどを挙げられる。
もう一つの方面において、本願発明は、前記抗体又はその抗原結合断片を製造する方法を提供する。前記方法が、前記抗体又はその抗原結合断片を発現させる条件下で、前記本願の前記宿主細胞を培養することを含んでもよい。例えば、適切な培地、適切な温度及び培養時間などで行ってもよい。これらの方法は本分野技術者に知られている。
ある場合において、前記方法が前記抗体又はその抗原結合断片を分離及び／又は精製するステップをさらに含んでもよい。例えば、プロテインＧ－セファロース又はプロテインＡ－セファロースでアフィニティークロマトグラフィーを行ってもよく、ゲル電泳及び／又は高速液体クロマトグラフィーなどで本願の前記抗体又はその抗原結合断片を精製及び分離してもよい。
医薬組成物、方法、使用
もう一つの方面において、本願発明は医薬組成物を提供する。前記医薬組成物が本願の前記抗原結合タンパク質及び／又は前記融合タンパク質、前記核酸分子、前記ベクター、前記宿主細胞、並びに任意の薬学的に許容されるアジュバントを含んでもよい。
前記薬学的に許容されるアジュバントは、採用される使用量及び濃度下では、投与される者にとって無毒性あり、且つ以下のものを含んでもよい：バッファー、例えば、リン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸；酸化防止剤、アスコルビン酸とメチオニンを含み、防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム、ヘキサ炭化水素第四級アンモニウムクロリド（ｈｅｘａｍｅｔｈｏｎｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ベンジルアミンクロリド（ｂｅｎｚａｌｋｏｎｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ベンジルエトキシアンモニウムクロリド（ｂｅｎｚｅｔｈｏｎｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ベフェノール、ブタノール又はベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルパラベン又はプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；ロヘキサノール；３－ペンタノール及びｍ－クレゾール）；低分子量（小于約１０つの残基）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゲル、又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン酸、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン；単糖、二糖並びにその他の炭水化物、グルコース、マンノース又はデキストリンを含み、キレート化剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、ショ糖、マンニトール、トレハロース又はソルビトール；塩を形成する対イオン、例えば、ナトリウムイオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；及び／又はノニオン界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮＴＭ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭ又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）。本願の医薬組成物は、一種類以上の活性化合物をさらに含有してもよく、通常、相互に悪影響を及ぼさない補完的な活性を持つこれらの活性化合物を含有する。これらの薬物の類型や有効量、例えば製剤に存在する拮抗薬の量や類型、並びに被験者の臨床パラメータなどにより決められる。
前記医薬組成物は、腫瘍成長の抑制に使用できる。例えば、本願の医薬組成物は、疾患の発症又は進行を抑止又は遅延させることができ、腫瘍の大きさを減らし（基本的に腫瘍を消除することも可能）、及び／又は疾患の症状を軽減及び／又は安定させることができる。
本願の前記医薬組成物は、予防及び／又は治療の有効量の前記抗体、その抗原結合断片を含んでもよい。前記予防及び／又は治療の有効量は、疾患を患っている、又は進行リスクのある被験者の疾患又は病気及び／又は任意の合併症を予防及び／又は治療（少なくとも部分的に治療）するのに必要とする使用量である。
一方、本願発明は、前記抗原結合タンパク質及び／又は前記融合タンパク質が薬物の製造における使用を提供する。前記薬物は、治療がん、腫瘍成長及び／又は腫瘍細胞増殖の抑制に使用される。ある実施形態において、前記腫瘍やがんは、結直腸腫瘍やがんを含む。ある実施形態において、前記腫瘍やがんは、ＰＤ－Ｌ１の発現が異常である腫瘍やがん。本願は、以下に説明する、生物サンプルにおけるＰＤ－Ｌ１発現を測定する方法をさらに提供する。ある場合において、前記方法は、前記抗原結合タンパク質及び／又は融合タンパク質とＰＤ－Ｌ１の結合が可能である条件下で、生物サンプルを本願の前記抗原結合タンパク質及び／又は融合タンパク質と接触させること、及び前記抗原結合タンパク質及び／又は融合タンパク質とＰＤ－Ｌ１との間に複合物が形成させたかどうかを測定することを含む。例えば、前記腫瘍やがんは、腫瘍やがんではないサンプルと比べて、ＰＤ－Ｌ１発現が高くなる腫瘍やがんである。このような方法は、体外方法であってもよく、体内方法であってもよい。本願の前記抗原結合タンパク質及び／又は融合タンパク質は、例えば、免疫測定に使用してもよい。前記免疫測定は、例えば免疫組織化学（ＩＨＣ）、免疫蛍光（ＩＦ）、免疫ブロット（例えば、ウエスタンブロット）、フローサイトメトリー（例えば、ＦＡＧＳ）及び酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を含む。ある場合において、例えば、ＰＤ－Ｌ１が患者をスクリーニングするためのバイオマーカーである場合、前記抗原結合タンパク質及び／又は融合タンパク質は、本願の前記抗原結合タンパク質及び／又は融合タンパク質による治療法を適用できる被験者をスクリーニングするために使用される。本願は、前記抗原結合タンパク質及び／又は融合タンパク質の、被験者が疾患（例えば、がん又は免疫機能失調）を患っているかどうかを診断する方法における使用をさらに提供する。前記方法が以下のものを含む：サンプルを本発明の前記抗原結合タンパク質及び／又は融合タンパク質と接触させ、結合した前記抗原結合タンパク質及び／又は融合タンパク質の存在を検出することで、被験者由来のサンプル中のＰＤ－Ｌ１の存在又は発現レベルを確定する。
一方、本願発明は、ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１の結合を抑制する方法を提供する。前記方法は、本願の前記抗原結合タンパク質を投与することを含む。前記方法は、インビトロ又は体外方法であってもよい。ある場合において、前記方法は、前記抗原結合タンパク質及び／又はＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との結合が可能である条件下で、生物サンプルを本願の前記抗原結合タンパク質及び／又はＰＤ－１と接触させ、前記抗原結合タンパク質とＰＤ－Ｌ１との間に複合物が形成されたかどうかを検出すること、及びＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間に複合物が形成されたかどうかを検出することを含んでもよい。
一方、本願発明は、ＰＤ－Ｌ１とＣＤ８０の結合を抑制する方法を提供する。前記方法は、本願の前記抗原結合タンパク質を投与することを含む。前記方法は、インビトロ又は体外方法であってもよい。ある場合において、前記方法は、前記抗原結合タンパク質及び／又はＣＤ８０とＰＤ－Ｌ１の結合が可能である条件下で、生物サンプルを本願の前記抗原結合タンパク質及び／又はＣＤ８０と接触させ、前記抗原結合タンパク質とＰＤ－Ｌ１との間に複合物が形成されたかどうかを検出すること、及びＣＤ８０とＰＤ－Ｌ１との間に複合物が形成されたかどうかを検出することを含む。
一方、本願発明は、ＴＧＦＢとＴＧＦＢＲＩＩの結合を抑制する方法を提供する。前記方法は、本願の前記融合タンパク質を投与すること含む。前記方法は、インビトロ又は体外方法であってもよい。ある場合において、前記方法は、前記融合タンパク質及び／又はＴＧＦＢＲＩＩのレポーター遺伝子を発現する細胞とＴＧＦＢとの結合が可能である条件下で、生物サンプルを本願の前記融合タンパク質及び／又はＴＧＦＢＲＩＩのレポーター遺伝子を発現する細胞と接触させ、前記融合タンパク質がＴＧＦＢとＴＧＦＢＲＩＩの結合が誘導するＳｍａｄシグナル経路を抑制したかどうかを検出することを含む。
ある場合において、生物サンプルが組織又は細胞サンプルを含む。例えば、生物サンプルが健常者又はがん患者由来の細胞又は組織を含んでもよい。ある場合において、組織又は、細胞サンプルの供給源が例えば、新鮮な、冷凍された及び／又は防腐された臓器又は組織サンプル又は生検物又は吸引物の固形組織；血液又は任意の血液成分；体液、例えば、脳脊髄液、羊水、腹水、又は間質液；被験者に由来する妊娠又は発達の任意の時点の細胞であってもよい。ほかの場合において、前記生物サンプルは、体外組織又は細胞培養物から得られる。本願の生物サンプルの例は、以下のことを含むが、これらに限らない：腫瘍生検、循環腫瘍細胞、血清又は血漿、循環血漿タンパク質、腹水、腫瘍又は腫瘍のような特性を示した初代細胞に由来する培養物又は細胞系、並びに保存される腫瘍サンプル、例えば、ホルマリン固定パラフィン包埋した腫瘍サンプル又は凍結された腫瘍サンプル。
本願は、抗原結合タンパク質の、腫瘍やがんを患っている被験者を診断する方法における使用をさらに提供する。前記方法が以下のものを含む：サンプルを本願の抗原結合タンパク質と接触され、結合した抗体の存在を検出して、これにより被験者から得たサンプル中のＰＤ－Ｌ１の存在又は発現レベルを確定する。ある場合において、前記サンプルが以下ものから選べてもよい：組織サンプル、全血サンプル、血清サンプル及び血漿サンプル。ある場合において、前記組織サンプルが腫瘍サンプルであってもよい。ある場合において、前記腫瘍サンプルが腫瘍浸潤免疫細胞、腫瘍細胞、間質細胞及びこれらの任意の組み合わせを含んでもよい。
一方、本願発明は、被験者のがんを治療し、被験者の腫瘍成長及び／又は腫瘍細胞増殖を抑制する方法を提供する。前記方法は、必要とする被験者又は前記腫瘍細胞に対して本願の前記抗原結合断片及び／又は前記融合タンパク質、前記分子核酸、前記ベクター、前記宿主細胞及び／又は前記医薬組成物を投与することを含む。任意の適した方法によって投与してもよい。前記適した方法は、例えば、静脈内方式、筋肉内方式、皮下方式、経皮方式、経皮方式、動脈内方式、腹腔内方式、病変内方式、頭蓋内方式、関節内方式、関節内方式、前立腺内方式、胸膜内方式、気管内方式、髄腔内方式、鼻腔内方式、膣内方式、直腸内方式、局所方式、腫瘍内方式、腹膜方式、結膜下方式、結膜内眼内方式、眼窩内方式、経口方式、局所方式、皮内方式、ガラス体内（例えばガラス体内注射による）方式、点眼薬方式、吸入方式、注射方式、移植方式、注入方式、持続注入方式、標的細胞に直接かけるようにする局所注入方式、カテーテル方式、灌流方式、クリーム方式又は以脂質組成物などの形式を含む。本文描述の方法に使用する組成物は全身方式で投与してもよく、局所方式で投与してもよい。投与方法は、様々な原因に（例えば、投与する化合物又は組成物並びに治療する病状、疾患又は病症の重症度）より変化する。ある実施様態において、静脈内方式、筋肉内方式、皮下方式、局所方式、経口方式、経皮方式、腹腔内方式、眼窩内方式、移植方式、吸入方式、髄腔内方式、脳室内方式又は鼻腔内方式で抗がん療法（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）を実行する。投与が短期なのか長期なのかを部分的に考慮し、投与が任意の適した経路によって行ってもよく、例えば注射によって行ってもよく、例えば、静脈内又は皮下注射によって行ってもよい。本文は、各種投与スケジュールを含み、以下のことを含むが、これらに限らない：単回投与又は各種時点で多回投与、ボーラス投与及びパルス注射。
本願の前記抗原結合タンパク質又は医薬組成物は、良好な医療実践に適した方式で製造、投与及び投薬してもよい。この場合、考慮する要因は、治療する特定病症、治療する特定哺乳動物、患者個体の臨床病状、病症の病因、薬剤転送部位、投与方法、投与スケジュール及び医学業者に知られているその他の要因を含む。治療剤（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）は任意の、一種又は複数種の現在考慮する病症を予防又は治療する薬剤と共に製造及び／又は同時に投与してもよいが、しなくてもよい。これらのその他の薬剤の有効量は、製剤に存在する治療剤（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）の量、病症又は治療の類型並びに前記その他因素により決められる。これらの薬剤は、通常、経験／臨床で適切と確定された任意の使用量で、且つ経験／臨床で適切と確定された任意の経路によって使用することができる。単剤による治療と比べ、組み合わせ治療における投与する抗体の使用量を減らしてもよい。この治療法の進行は、従来の技術によって簡単にモニターできる。
キメラ抗原受容体
一方、本願発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。前記抗原受容体は、本願の前記核酸分子又は本願の前記抗原結合タンパク質を含んでもよい。ある実施形態において、それは、抗原と結合できる細胞外ドメイン（細胞外結合ドメイン）、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン（膜貫通領域）及び細胞質シグナルをドメインに転送させるポリペプチド（即ち細胞内シグナルドメイン）を含んでもよい。ヒンジドメインは、細胞外抗原結合領域に柔性を提供する部分と考えてもよい。細胞内シグナルドメインは、確定したシグナル伝導経路によって、セカンドメッセンジャーを生成させることで、情報を細胞内に伝達して、細胞活性を調節するタンパク質であり、又はこれらのメッセンジャーに応答してエフェクターとして効果を発揮するタンパク質であり、ＣＡＲの細胞（例えばＣＡＲ－Ｔ細胞）の免疫エフェクター機能を促進できるシグナルを生成する。細胞内シグナルドメインは、シグナル伝導ドメインを含んでもよく、共刺激分子由来の共刺激胞内ドメインをさらに含んでもよい。例えば、共刺激分子は４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ及び／又はＣＤ２８から選べてもよい。一方、本願発明は、遺伝子修飾された細胞を提供する。それは前記キメラ抗原受容体を含んでもよい。ある実施形態において、前記遺伝子修飾された細胞は真核細胞を含んでもよい。ある実施形態において、前記遺伝子修飾された細胞は、単離された人細胞を含んでもよい。ある実施形態において、前記遺伝子修飾された細胞は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、又はＮＫ細胞を含んでもよい。
抗体薬物複合体
一方、本願発明は抗体薬物複合体を提供する。前記複合体は、細胞毒性剤、並びに本願の前記抗原結合断片を含んでもよい。抗体薬物複合体は、通常、特定のリンカーで抗体と小分子細胞毒薬物を接続することを指し、その主要組成成分が抗体、リンカー及び小分子細胞毒薬物を含んでもよい。抗体薬物複合体の標的性がその抗体部分（抗体）に由来してもよく、毒性の大部分が小分子化薬毒物部分（ｐａｙｌｏａｄ）に由来してもよく、抗体部分が毒性（ＡＤＣＣとＣＤＣ）を持ってもよい。
キット
一方、本願発明はキットを提供する。前記キットは、本願の前記抗原結合タンパク質、キメラ抗原受容体、遺伝子修飾された細胞、抗体薬物複合体、及び／又は本願の前記医薬組成物を含んでもよい。前記キットは、単一の従来の容器に本願の前記抗原結合タンパク質、キメラ抗原受容体、遺伝子修飾された細胞、及び／又は抗体薬物複合体を含んでもよく、任意に一種又は複数種の治療剤と組み合わせて共に医薬組成物中に製造されてもよい。
ある場合において、前記キットは、本願の前記抗原結合タンパク質、キメラ抗原受容体、遺伝子修飾された細胞、抗体薬物複合体又は医薬組成物を投与する装置をさらに含んでもよい。例えば、前記装置は、内容物の投与方式により決められる。ある場合において、前記キットは添付文書を含んでもよく、前記添付文書がキットの抗原結合タンパク質、医薬組成物及び剤形に関する情報を含む。通常、これらの情報は、患者と医者がパッケージングされた抗原結合タンパク質、医薬組成物及び剤形を有効的に且つ安全的に使用するように役立つ。このようなキットに使用する容器は通常は、少なくとも一つのバイアル、試験管、フラスコ、ボトル、注射器又はその他の適した容器を含んでもよい。検出及び／又は治療用組成物の一種又は複数種が前記容器に置かれてもよく、且つ、適当に均等分されることが好ましい。さらに第二治療剤を提供する場合、キットが異なる第二容器を含有してもよい。当該第二検出及び／又は治療用組成物が前記第二容器に置かれてもよい。また、複数種の化合物が単一の医薬組成物に製造されてもよく、且つ単一の容器装置、例えば、バイアル、試験管、フラスコ、ボトル又はその他の適した単一容器にパッケージングされてもよい。
投与装置
一方、本願発明は投与装置（例えばプラスチック又はバイアル、例えば中空ビン又はシリンジバレル）を提供する。前記投与装置は本願の前記抗原結合タンパク質又はその医薬組成物の投与に利用される。当該設備は腸胃外経路（例えば筋肉内部、皮下又は静脈内）によってある物質を患者の体内に導入してもよい。例えば、注射設備が注射器であってもよい（例えば予め充填した本願の前記抗原結合タンパク質又はその医薬組成物を有する注射器、例えば自動注射器）、前記注射器が注射する流体を格納する（例えば本願の前記抗原結合タンパク質又はその医薬組成物）シリンジ及び針（皮膚及び／又は血管を貫通するために使用する）を含んでもよい。投与方式は変更されてもよい。投与経路が経口、筋肉注射、皮下注射、直腸投与などを含んでもよい。
一方、本願発明は以下の実施様態を提供する：
１．前記抗原結合タンパク質が抗体重鎖可変領域ＶＨの中の少なくとも一つのＣＤＲを含み、前記ＶＨが配列番号１９３に示すアミノ酸配列を含む、単離された抗原結合タンパク質。
２．前記ＶＨが配列番号９０－９３、９５及び９７－１０４のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、実施様態１に記載された単離された抗原結合タンパク質。
３．抗体軽鎖可変領域ＶＬの中の少なくとも一つのＣＤＲを含み、前記ＶＬが配列番号１９４に示すアミノ酸配列を含む、実施様態１－２のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
４．前記ＶＬが配列番号１０８－１１４、１１６及び１１８のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、実施様態３に記載された単離された抗原結合タンパク質。
５．抗体又はその抗原結合断片を含む、実施様態１－４のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
６．前記抗原結合断片がＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ及び／又はｄＡｂを含む、実施様態５に記載された単離された抗原結合タンパク質。
７．実施様態５－６のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質、その中、前記抗体が以下の群から選ばれる：モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体及び完全ヒト抗体。
８．特定の抗ＰＤ－Ｌ１抗体と競合してＰＤ－Ｌ１に結合し、その中、前記の特定抗ＰＤ－Ｌ１抗体が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、前記の特定抗ＰＤ－Ｌ１抗体の軽鎖可変領域がＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号１８１に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号１８２に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号１９１に示すアミノ酸配列を含み、前記の特定抗ＰＤ－Ｌ１抗体の重鎖可変領域がＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１７９に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号１８０に示すアミノ酸配列を含む、実施様態１－７のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
９．前記の特定抗ＰＤ－Ｌ１抗体の軽鎖可変領域が配列番号１９４に示すアミノ酸配列を含み、前記の特定抗ＰＤ－Ｌ１抗体の重鎖可変領域が配列番号１９３に示すアミノ酸配列を含む、実施様態８に記載された単離された抗原結合タンパク質。
１０．前記ＶＨがＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、その中、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含む、実施様態１－９のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
１１．前記ＨＣＤＲ２が配列番号１７９に示すアミノ酸配列を含む、実施様態１０に記載された単離された抗原結合タンパク質。
１２．前記ＨＣＤＲ２が配列番号１４、１６及び１７のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、実施様態１０－１１に記載された単離された抗原結合タンパク質。
１３．前記ＨＣＤＲ３が配列番号１８０に示すアミノ酸配列を含む、実施様態１０－１２のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
１４．前記ＨＣＤＲ３が配列番号２９－３３のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、実施様態１０－１３に記載された単離された抗原結合タンパク質。
１５．前記ＶＨがフレーム領域Ｈ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３、及びＨ－ＦＲ４を含む、実施様態１－１４のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
１６．前記Ｈ－ＦＲ１のＣ末端と前記ＨＣＤＲ１のＮ末端とが接続し、且つ前記Ｈ－ＦＲ１が配列番号１に示すアミノ酸配列を含む、実施様態１５に記載された単離された抗原結合タンパク質。
１７．前記Ｈ－ＦＲ２が前記ＨＣＤＲ１と前記ＨＣＤＲ２との間に位置しており、且つ前記Ｈ－ＦＲ２が配列番号９に示すアミノ酸配列を含む、実施様態１５－１６のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
１８．前記Ｈ－ＦＲ３が前記ＨＣＤＲ２と前記ＨＣＤＲ３との間に位置しており、且つ前記Ｈ－ＦＲ３が配列番号１９２に示すアミノ酸配列を含む、実施様態１５－１７のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
１９．前記Ｈ－ＦＲ３が配列番号２１、２２及び２４のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、実施様態１５－１８のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
２０．前記Ｈ－ＦＲ４のＮ末端と前記ＨＣＤＲ３のＣ末端とが接続し、且つ前記Ｈ－ＦＲ４が配列番号３８に示すアミノ酸配列を含む、実施様態１５－１９のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
２１．抗体重鎖可変領域ＶＨを含み、その中、前記ＶＨが配列番号１９３に示すアミノ酸配列を含む、実施様態１－２０のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
２２．前記ＶＨが配列番号９０－９３、９５及び９７－１０４のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、実施様態２１に記載された単離された抗原結合タンパク質。
２３．抗体重鎖定常領域を含み、且つ前記抗体重鎖定常領域がヒトＩｇＧ定常領域を含む、実施様態１－２２のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
２４．前記抗体重鎖定常領域が配列番号１７２－１７５のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、実施様態２３に記載された単離された抗原結合タンパク質。
２５．抗体重鎖ＨＣを含み、且つ前記ＨＣが配列番号１２２－１２５、１２７及び１２９－１３７のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、実施様態１－２４のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
２６．前記ＶＬがＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、その中、前記ＬＣＤＲ１が配列番号１８１に示すアミノ酸配列を含む、実施様態３－２５のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
２７．前記ＬＣＤＲ１が配列番号４８－５１のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、実施様態２６に記載された単離された抗原結合タンパク質。
２８．前記ＬＣＤＲ２が配列番号１８２に示すアミノ酸配列を含む、実施様態２６－２７のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
２９．前記ＬＣＤＲ２が配列番号６３－６４のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、実施様態２６－２８のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
３０．前記ＬＣＤＲ３が配列番号１９１に示すアミノ酸配列を含む、実施様態２６－２９のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
３１．前記ＬＣＤＲ３が配列番号７７－７９のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、実施様態２６－３０のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
３２．前記ＶＬがフレーム領域Ｌ－ＦＲ１、Ｌ－ＦＲ２、Ｌ－ＦＲ３、及びＬ－ＦＲ４を含む、実施様態３－３１のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
３３．前記Ｌ－ＦＲ１のＣ末端と前記ＬＣＤＲ１のＮ末端とが接続し、且つ前記Ｌ－ＦＲ１が配列番号１８５に示すアミノ酸配列を含む、実施様態３２に記載された単離された抗原結合タンパク質。
３４．前記Ｌ－ＦＲ１が配列番号４１－４４のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、実施様態３２－３３のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
３５．前記Ｌ－ＦＲ２が前記ＬＣＤＲ１と前記ＬＣＤＲ２との間に位置しており、且つ前記Ｌ－ＦＲ２が配列番号１８６に示すアミノ酸配列を含む、実施様態３２－３４のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
３６．前記Ｌ－ＦＲ２が配列番号５６－５９のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、実施様態３２－３５のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
３７．前記Ｌ－ＦＲ３が前記ＬＣＤＲ２と前記ＬＣＤＲ３との間に位置しており、且つ前記Ｌ－ＦＲ３が配列番号１８７に示すアミノ酸配列を含む、実施様態３２－３６のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
３８．前記Ｌ－ＦＲ３が配列番号６９－７２のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、実施様態３２－３７のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
３９．前記Ｌ－ＦＲ４のＮ末端と前記ＬＣＤＲ３のＣ末端とが接続し、且つ前記Ｌ－ＦＲ４が配列番号１８８に示すアミノ酸配列を含む、実施様態３２－３８のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
４０．前記Ｌ－ＦＲ４が配列番号８５－８６のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、実施様態３２－３９のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
４１．抗体軽鎖可変領域ＶＬを含み、その中、前記ＶＬが配列番号１９４に示すアミノ酸配列を含む、実施様態１－４０のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
４２．前記ＶＬが配列番号１０８－１１４、１１６及び１１８のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、実施様態４１に記載された単離された抗原結合タンパク質。
４３．抗体軽鎖定常領域を含み、その中、前記抗体軽鎖定常領域が配列番号１７０に示すアミノ酸配列を含む、実施様態１－４２のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
４４．抗体軽鎖ＬＣを含み、且つ前記ＬＣが配列番号１５０－１５６、１５８及び１６０－１６３のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、実施様態１－４３のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
４５．実施様態１－４４のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。前記結合タンパク質が以下の性質の中の一種又は複数種を有する：
１）１×１０－８Ｍ又はより低いＫＤ値で霊長類動物由来のＰＤ－Ｌ１と結合することができる；
２）ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１の結合を遮断することができる；
３）ＣＤ８０とＰＤ－Ｌ１の結合を遮断することができる；
４）免疫細胞におけるＩＦＮ－γ及び／又はＩＬ２の分泌を刺激することができる；
５）腫瘍成長及び／又は腫瘍細胞増殖を抑制することができる；
６）コントロール抗体と比べて、霊長類動物由来のＰＤ－Ｌ１と完全に重なることがないエピトープと結合し、
その中、前記コントロール抗体が配列番号５２に示すＬＣＤＲ１、配列番号６５に示すＬＣＤＲ２及び配列番号８１に示すＬＣＤＲ３を含み、且つ前記コントロール抗体が配列番号６に示すＨＣＤＲ１、配列番号１５に示すＨＣＤＲ２及び配列番号３４に示すＨＣＤＲ３を含み、
又は、
その中、前記コントロール抗体が配列番号５３に示すＬＣＤＲ１、配列番号６６に示すＬＣＤＲ２及び配列番号８２に示すＬＣＤＲ３を含み、且つ前記コントロール抗体が配列番号５に示すＨＣＤＲ１、配列番号１８に示すＨＣＤＲ２及び配列番号３５に示すＨＣＤＲ３を含み、
又は、
前記コントロール抗体が配列番号５５に示すＬＣＤＲ１、配列番号６８に示すＬＣＤＲ２及び配列番号８４に示すＬＣＤＲ３を含み、且つ前記コントロール抗体が配列番号８に示すＨＣＤＲ１、配列番号２０に示すＨＣＤＲ２及び配列番号３７に示すＨＣＤＲ３を含む。
４６．前記霊長類動物がヒト及び／又はサルを含む、実施様態４５に記載された単離された抗原結合タンパク質。
４７．融合タンパク質。前記融合タンパク質が以下のものを含む：ａ）ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片；並びにｂ）実施様態１－４６のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
４８．前記単離された抗原結合タンパク質が抗体重鎖又はその断片を含み、且つ前記抗体重鎖又はその断片が前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片とｉｎ－ｆｒａｍｅ融合して前記融合ポリペプチドを形成する、実施様態４７に記載された融合タンパク質。
４９．前記抗体重鎖又はその断片のＣ端が直接又は間接的に前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片のＮ端と接続する、実施様態４８に記載された融合タンパク質。
５０．前記抗体重鎖又はその断片がリンカーによって前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片と接続し、実施様態４８－４９のいずれか一項に記載された融合タンパク質。
５１．前記リンカーがペプチドリンカーであり、且つ前記ペプチドリンカーが配列番号１６７－１６９のいずれか一項に記載されたアミノ酸配列を含む、実施様態５０に記載された融合タンパク質。
５２．前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片がヒトＴＧＦＢＲＩＩの細胞外ドメインを含む、実施様態４７－５１のいずれか一項に記載された融合タンパク質。
５３．前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片が配列番号１７６－１７８のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、実施様態４７－５２のいずれか一項に記載された融合タンパク質。５４．第一ポリペプチド及び第二ポリペプチドを含み、
その中、前記第一ポリペプチドが前記単離された抗原結合タンパク質の重鎖又はその断片並びに前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片を含み、且つ
前記第二ポリペプチドが前記単離された抗原結合タンパク質の軽鎖又はその断片を含む、実施様態４７－５３のいずれか一項に記載された融合タンパク質。
５５．前記第一ポリペプチドの前記重鎖又はその断片と前記第二ポリペプチドの前記軽鎖又はその断片が組み合わせて特異的にＰＤ－Ｌ１に結合する抗原結合部分を形成する、実施様態５４前記融合タンパク質。
５６．前記第一ポリペプチドが配列番号１３８、１３９、１４２、１４３及び１４５－１４８のいずれか一項に記載されたアミノ酸配列を含む、実施様態５４－５５のいずれか一項に記載された融合タンパク質。
５７．前記第二ポリペプチドが配列番号１６２－１６３のいずれか一項に記載されたアミノ酸配列を含む、実施様態５４－５６のいずれか一項に記載された融合タンパク質。
５８．前記第一ポリペプチドが配列番号１３８に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記第一ポリペプチドが配列番号１３９に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記第一ポリペプチドが配列番号１４２に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記第一ポリペプチドが配列番号１４３に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記第一ポリペプチドが配列番号１４５に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドを含む配列番号１６３に示すアミノ酸配列；又は、
前記第一ポリペプチドが配列番号１４６に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６３に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記第一ポリペプチドが配列番号１４７に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含む；又は、
前記第一ポリペプチドが配列番号１４８に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含む、実施様態５４－５７のいずれか一項に記載された融合タンパク質。
５９．二つの前記第一ポリペプチドと二つの前記第二ポリペプチドを含む、実施様態５４－５８のいずれか一項に記載された融合タンパク質。
６０．実施様態１－４６のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質、及び／又は実施様態４７－５９のいずれか一項に記載された融合タンパク質をコードする、単離された一種又は複数種の核酸分子。
６１．実施様態６０に記載された核酸分子を含む、ベクター。
６２．実施様態６０に記載された核酸分子又は実施様態６１に記載されたベクターを含む、細胞。
６３．実施様態１－４６のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質、実施様態４７－５９のいずれか一項に記載された融合タンパク質を発現させる条件下で、実施様態４９に記載された細胞を培養することを含む、実施様態１－４６のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質及び／又は実施様態４７－５９のいずれか一項に記載された融合タンパク質を製造する方法。
６４．実施様態１－４６のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質を含む、キメラ抗原受容体。
６５．実施様態６４に記載されたキメラ抗原受容体を含む、遺伝子修飾された細胞。
６６．細胞毒性剤、並びに実施様態１－４６のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質を含む、抗体薬物複合体。
６７．実施様態１－４６のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質、実施様態４７－５９のいずれか一項に記載された融合タンパク質、実施様態６０に記載された核酸分子、実施様態６１に記載されたベクター、実施様態６２に記載された細胞、実施様態６４に記載されたキメラ抗原受容体、実施様態６５に記載された遺伝子修飾された細胞及び／又は実施様態６６に記載された抗体薬物複合体、並びに任意の薬学的に許容されるベクターを含む、医薬組成物。
６８．前記薬物が腫瘍やがんの予防、軽減及び／又は治療に利用され、腫瘍成長及び／又は腫瘍細胞増殖を抑制する、実施様態１－４６のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質、実施様態６０に記載された核酸分子、実施様態６１に記載されたベクター、実施様態６２に記載された細胞、実施様態６４に記載されたキメラ抗原受容体、実施様態６５に記載された遺伝子修飾された細胞、実施様態６６に記載された抗体薬物複合体及び／又は実施様態６７に記載された医薬組成物の薬物の製造における使用。
６９．前記腫瘍やがんがＰＤ－Ｌ１の発現が異常である腫瘍やがん、実施様態６８に記載された使用。
７０．前記腫瘍やがんが結腸直腸がんを含む、実施様態６８－６９のいずれか一項に記載された使用。
７１．必要とする被験者に対して、実施様態１－４６のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質、実施様態６０に記載された核酸分子、実施様態６１に記載されたベクター、実施様態６２に記載された細胞、実施様態６４に記載されたキメラ抗原受容体、実施様態６５に記載された遺伝子修飾された細胞、実施様態６６に記載された抗体薬物複合体及び／又は実施様態６７に記載された医薬組成物を投与することを含む、腫瘍を予防、軽減又は治療して、腫瘍成長及び／又は腫瘍細胞増殖を抑制する方法。
７２．前記腫瘍やがんがＰＤ－Ｌ１の発現が異常である腫瘍やがん、実施様態７１に記載された方法。
７３．前記腫瘍やがんが結腸直腸がんを含む、実施様態７１－７２のいずれか一項に記載された方法。
７４．がんの治療、腫瘍成長及び／又は腫瘍細胞増殖の抑制に使用される、実施様態１－４６のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質、実施様態６０に記載された核酸分子、実施様態６１に記載されたベクター、実施様態６２に記載された細胞、実施様態６４に記載されたキメラ抗原受容体、実施様態６５に記載された遺伝子修飾された細胞、実施様態６６に記載された抗体薬物複合体及び／又は実施様態６７に記載された医薬組成物。
７５．実施様態１－４６のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質、実施様態６０に記載された核酸分子、実施様態６１に記載されたベクター、実施様態６２に記載された細胞、実施様態６４に記載されたキメラ抗原受容体、実施様態６５に記載された遺伝子修飾された細胞、実施様態６６に記載された抗体薬物複合体及び／又は実施様態６７に記載された医薬組成物を投与することを含む、ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１の結合を抑制する方法。
７６．実施様態１－４６のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質、実施様態６０に記載された核酸分子、実施様態６１に記載されたベクター、実施様態６２に記載された細胞、実施様態６４に記載されたキメラ抗原受容体、実施様態６５に記載された遺伝子修飾された細胞、実施様態６６に記載された抗体薬物複合体及び／又は実施様態６７に記載された医薬組成物を投与することを含む、ＣＤ８０とＰＤ－Ｌ１の結合を抑制する方法。
７７．実施様態１－４６のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質、実施様態６０に記載された核酸分子、実施様態６１に記載されたベクター、実施様態６２に記載された細胞、実施様態６４に記載されたキメラ抗原受容体、実施様態６５に記載された遺伝子修飾された細胞、実施様態６６に記載された抗体薬物複合体、実施様態６７に記載された医薬組成物、及び／又は（ｉ）投与装置を含む、キット。
何らかの理論に制限させずに、以下の実施例は、本願の融合タンパク質、製造方法及び使用などを説明するためのものであり、本願発明の範囲を制限するものではない。
以下の実施例は、本発明の具体的な実施様態を説明するためのものであり、何らかの形式で本明細書又は特許請求の範囲を制限するものではない。実施例には既存の方法の詳しい説明を含まない。例えば、ベクター及びプラスミドを構築する方法、タンパク質をコードする遺伝子をこのようなベクター及びプラスミドに挿入する方法又はプラスミドを宿主細胞に導入する方法など。このような方法は、本分野の一般的な技術を持つ人にとって週知なものであり、複数の出版物にも登載されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、Ｊ．，Ｆｒｉｔｓｃｈ、Ｅ．Ｆ． ａｎｄ Ｍａｎｉａｉｓ、Ｔ．（１９８９）ＭｏｌｅｃｕＬａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｃｏｌｄ ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ。
実施例１ 抗原結合タンパク質又は融合タンパク質の製造及び特性分析
ＰＤ－Ｌ１抗原で実験動物を免疫されることによりＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体分子を得ることができる。当該実験動物がマウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ラクダなどであってもよい。通常、得られた抗体分子がヒト抗体ではない。非ヒト抗体を得た後、免疫原性を低下させ、成薬性を向上させるために、抗体工程技術でこれらの分子にヒト化改造を行う必要がある。しかしながら、抗体のヒト化過程には技術的な復雑性があり、ヒト化改造を経た分子の抗原に対する親和力が低下することがよくある。一方、遺伝子組換え技術の進歩によって、遺伝子工程化マウスの構築が可能となり、遺伝子工程化マウスがヒト免疫グロブリン免疫レパートリーを持ち、内因性マウス免疫レパートリーを欠損している。このような遺伝子組換えマウスが生成した抗体は、完全なヒト配列を持つため、さらなるヒト化改造を必要としない。よって、治療性抗体の開発の効率を大きく向上させている。Ｈａｒｂｏｕｒ Ｈ２Ｌ２マウス（Ｈａｒｂｏｕｒ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ＢＶ）がヒト免疫グロブリン免疫レパートリーを持つ遺伝子組換えマウスの一種であり、Ｈａｒｂｏｕｒ Ｈ２Ｌ２マウスが生成する抗体が完全のヒトの抗体可変ドメイン及びラット定常ドメインを有する。
１．１ ＰＤ－Ｌ１抗原でマウスを免疫させる
可溶性組換えヒトＰＤ－Ｌ１－ｍＦｃ融合タンパク質（Ｎｏｖｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｃ．品番ＣＭ０６、バッチ番号０３３０８３７）でＨａｒｂｏｕｒ Ｈ２Ｌ２マウスに対して複数回の免疫を行う。抗原タンパク質と免疫アジュバントを混合して免疫原試薬となり、その後、皮下鼠径部又は腹腔によって注射する。毎回の免疫において、各マウスが受ける総注射量は１００マイクロリットルである。最初の免疫において、各マウスが５０μｇ 抗原タンパク質（ヒトＰＤ－Ｌ１－ｍＦｃ）と完全フロイントアジュバント（Ｓｉｇｍａ、品番Ｆ５８８１）を１：１の体積比で混合して製造した免疫原試薬による免疫を受ける。その後の毎回の増強免疫において、各マウスが２５μｇ 抗原タンパク質とＳｉｇｍａ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ｓｙｓｔｅｍ アジュバント（Ｓｉｇｍａ、品番Ｓ６３２２）を混合して製造した免疫原試薬による免疫を受ける。毎回の増強免疫の間隔時間が少なくとも二週間であり、通常、増強免疫が五回を超えない。免疫時間が０、１４、２８、４２、５６、７０日目である；かつ４９、７７日目で、マウス血清の抗体価を測定する。細胞融合を行う３日前、各マウス２５μｇ 抗原タンパク質の量で最後の増強免疫を行う。
１．２ ハイブリドーマモノクローナル株と抗体配列を得る
測定したマウス血清のＰＤ－Ｌ１特異的抗体価がある程度のレベルに達した後、マウスの脾細胞を取り出して、骨髄腫細胞株と融合させてハイブリドーマ細胞を得る；ハイブリドーマ細胞に対して複数回のスクリーニングとクローンを行った後、いくつの抗－ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体分子を発現するハイブリドーマ細胞を分離する。単離されたハイブリドーマ細胞と前記細胞が発現するモノクローナル抗体が対応するクローン号で示す。例えば：６３Ｇ１１Ｈ３Ｇ９、９１Ｇ３Ｈ５Ｈ３など。単離されたハイブリドーマ細胞が完全なヒト可変ドメインとラット定常ドメインを有する重鎖及び軽鎖の抗体分子を発現する。前記モノクローナル抗体に対してさらなる鑑定を行い、ヒトＰＤ－Ｌ１に対する結合能力、カニクイザルＰＤ－Ｌ１に対する結合能力、ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１の結合を抑制する能力などパラメータで、いくつのハイブリドーマクローンを選べてシーケンシングを行う。通常のハイブリドーマシーケンシング手段で抗体分子の可変ドメインをコードするヌクレオチド配列及び対応するアミノ酸配列を得る。本実施例において、免疫したＨａｒｂｏｕｒ Ｈ２Ｌ２マウスから得られた抗ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体分子の可変ドメインの配列はヒト抗体配列である。抗体可変ドメインのＣＤＲ配列はＫａｂａｔやＣｈｏｔｈｉａ、又は他のＣＤＲ定義規則（例えば、Ｃｏｍｂｉｎｅｄ定義規則）で分析してもよい（表１のＣＤＲ定義を参考する）。表２は、ハイブリドーマ細胞、組換え抗体の可変領域配列、並びにＣＤＲ配列が対応する配列番号を示した。その中、ＣＤＲがＣｈｏｔｈｉａ定義規則を使用した。
１．３全ヒト組換え抗体の製造
抗体分子の軽、重鎖可変ドメインをコードする配列を得た後、通常の組換えＤＮＡ技術で、軽、重鎖可変ドメイン配列を対応するヒトの抗体の軽、重鎖定常ドメイン配列と融合発現して、組換え抗体分子を得ることができる。本実施例において、抗体重鎖可変ドメイン配列（ＶＨ）を遺伝子合成によってヒトＩｇＧ１抗体の重鎖定常ドメイン配列（配列番号１７２）又は前記配列がアミノ酸変異を含有する変体配列（配列番号１７３－１７５）をコードする哺乳動物細胞発現プラスミドベクターにクローンして、ヒトＩｇＧ抗体の全長重鎖（又はその変体）をコードして生成する；抗体軽鎖可変ドメイン配列（ＶＬ）を遺伝子合成によってヒト抗体κ軽鎖定常ドメイン配列（配列番号１７０）をコードする哺乳動物細胞発現プラスミドベクターにクローンして、抗体の全長κ軽鎖をコードして生成する；又はＶＬを遺伝子合成によってヒト抗体λ軽鎖定常ドメイン配列（配列番号１７１）をコードする哺乳動物細胞発現プラスミドベクターにクローンして、抗体の全長λ軽鎖をコードして生成する。表２が本実施例のＰＤ－Ｌ１抗体の軽鎖、重鎖可変ドメインのアミノ酸配列、軽鎖全長アミノ酸配列、重鎖（ヒトＩｇＧ１）全長アミノ酸配列及びＣｈｏｔｈｉａ定義規則で定義したＣＤＲのアミノ酸配列を示した。
抗体重鎖をコードするプラスミド及び抗体軽鎖をコードするプラスミドを同時に哺乳動物宿主細胞にトランスフェクションし（例えば、ヒト胚性腎臓細胞ＨＥＫ２９３）、通常の組換えタンパク質発現及び精製技術で、軽鎖重鎖が正確にペアリングしてアセンブリした、精製されたＰＤ－Ｌ１組換え抗体を得ることができる。具体的に、ＨＥＫ２９３細胞をＦｒｅｅＳｔｙｌｅ(商標) Ｆ１７ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｍｅｄｉｕｍ培地（Ｔｈｅｒｍｏ，Ａ１３８３５０４）で拡大培養する。一過性トランスフェクションが開始する前に、細胞濃度を６～８ｘ１０５細胞／ｍｌに調整して、３７℃で８％ＣＯ２シェーカーに２４時間培養し、細胞濃度を１．２ｘ１０６細胞／ｍｌにする。３０ｍＬの培養した細胞を準備した。前記抗体重鎖をコードするプラスミドと抗体軽鎖をコードするプラスミドを２：３の割合で混合し、合計３０μｇのプラスミドを１．５ｍＬ Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ血清減り培地（Ｔｈｅｒｍｏ，３１９８５０８８）に溶解して、０．２２μｍフィルターでろ過して除菌した。さらに１．５ｍＬ Ｏｐｔｉ－ＭＥＭを取り、１ｍｇ／ｍｌ ＰＥＩ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，２３９６６－２）１２０μｌを溶解し、５分間静置した。ＰＥＩを緩やかプラスミドに入れて、室温で１０分間インキュベートし、フラスコを振とうしながら緩やかにプラスミドＰＥＩ混合溶液を滴下し、３７℃で８％ ＣＯ２シェーカーに５日培養する。５日後に細胞生存率を観測する。培養物を採取して、３３００ｇの回転速度で１０分間遠心した後に上清を取る；その後、上清を高速遠心して不純物を除いた。ＰＢＳ（ｐＨ７．４）バッファーでＭａｂＳｅｌｅｃｔ(商標)（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，７１－５０２０－９１ ＡＥ）を含有する重力カラム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ，７３１１５５０）をバランシングさせて、２－５倍のカラム体積で洗浄した。上清サンプルをカラムに通過させた；５－１０倍カラム体積のＰＢＳでカラムを洗浄し、ｐＨ３．５の０．１Ｍグリシンで目標タンパク質を溶出させ、次にｐＨ８．０のＴｒｉｓ－ＨＣｌで中性に調整し、最後に限外ろ過管（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，ＵＦＣ９０１０２４）で濃縮してＰＢＳバッファーに入れ替え、精製された組換えタンパク質溶液を得た。最後ＮａｎｏＤｒｏｐ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ(商標) ＮａｎｏＤｒｏｐ(商標) Ｏｎｅ）で濃度を測定し、アリコートして、使用するまで保管する。
Figure 2022550420000002
１．４ ＰＤ－Ｌ１抗体の配列分析及び発現精製
抗体の重鎖可変ドメイン配列が染色体上の重鎖遺伝子群の生殖系列遺伝子Ｖ、Ｄ、Ｊ遺伝子断片の遺伝子再配列及び体細胞高頻度突然変異などのイベントに由来する；軽鎖可変ドメイン配列が軽鎖遺伝子群の生殖系列遺伝子Ｖ、Ｊ遺伝子断片の遺伝子再配列及び体細胞高頻度突然変異などのイベントに由来する。遺伝子再配列及び体細胞高頻度突然変異が抗体多様性を増やす主な因素である。同じ生殖系列Ｖ遺伝子断片に由来する抗体でも異なる配列を生成する可能性があるが、全体的に類似性が高い。あるアルゴリズム、例えばＩＭＧＴ／ＤｏｍａｉｎＧａｐＡｌｉｇｎ（ｈｔｔｐ：／／ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／３Ｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ＤＢ／ｃｇｉ／ＤｏｍａｉｎＧａｐＡｌｉｇｎ．ｃｇｉ）又はＮＣＢＩ／ＩｇＢＬＡＳＴ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｇｂｌａｓｔ／）を利用して、抗体の可変ドメイン配列により前記配列が遺伝子再配列の発生時に可能な生殖系列遺伝子断片を推測することができる。実施例１．３及び表２の抗体配列を分析し、その重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）の生殖系列遺伝子Ｖ遺伝子断片が表３に示す。
タンパク質又はポリペプチドアミノ酸鎖は、細胞に翻訳合成後、化学修飾させる場合があり、これが翻訳後修飾（ＰＴＭ）と言う。抗体にとって、あるＰＴＭサイトは非常に保存的なものであり、例えば、ヒトのＩｇＧ１抗体の定常ドメインの第２９７位（ＥＵ番号）の保存的なアミノ酸アスパラギンＡｓｎが通常糖基化修飾され、糖鎖を形成する。当該糖鎖構造は、抗体構造及び関連するエフェクター機能にとって、非常に重要なものである。ただし、もし抗体の可変ドメインに、特に抗原結合領域（例えば、ＣＤＲ）にＰＴＭが存在する場合、これらＰＴＭの存在が抗原の結合に大きい影響をもたらす可能性があり、抗体の物理化学性質を変化させる可能性もある。例えば、糖基化、脱アミド化、異性化、酸化などは、抗体分子の不安定性又は異質性を増やして、抗体開発の難易度とリスクを増やす可能性がある。故に、治療性抗体の開発にとって、ある潜在的なＰＴＭを避けることは非常に重要である。経験の積み重ねに連れて、あるＰＴＭとアミノ酸配列の組成との関連性、特に隣接アミノ酸組成の“パターン”との関連性が高い。故に、タンパク質の一級アミノ酸配列により潜在的なＰＴＭを予測することができる。例えば、Ｎ－ｘ－Ｓ／Ｔ（第一位はアスパラギンであり、第二位はプロリン以外の任意のアミノ酸であり、第三位はセリン又はスレオニンである）の配列パターンでＮ－結合型糖基化サイトが予測される。ＰＴＭを引き起こすアミノ酸配列パターンは、生殖系列遺伝子配列に由来する可能性があり、例えばヒト生殖系列遺伝子断片ＩＧＨＶ３－３３のＦＲ３領域には、自然的に糖基化パターンＮＳＴが存在する；体細胞高頻度突然変異に由来する可能性もある。表３は、実施例１．３の抗体の可変ドメインＶＨ及びＶＬの予測ＰＴＭを示した。具体的に、ＮＧＳ又はＮＬＴが糖基化サイトである可能性があり、ＤＧがアスパラギン酸の異性化を引き起こす可能性がある。
アミノ酸変異でＰＴＭのアミノ酸配列パターンを破壊し、特定ＰＴＭの形成を減少又は除去することができる。抗体配列やＰＴＭ配列パターンの違いにより、異なる変異設計方法がある。ある方法は、“ホットスポット”アミノ酸（例えば、ＮＳパターンのＮ又はＳ）を物理化学性質が類似するアミノ酸（例えば、ＮをＱに変異させる）に入れ替える。ＰＴＭ配列パターンが体細胞高頻度突然変異に由来し、生殖系列遺伝子配列には存在しない場合、他の方法として、当該配列パターンを対応する生殖系列遺伝子配列に入れ替えてもよい。実際の作業において、同一のＰＴＭ配列パターンに対して、複数種の変異設計方法を採用する可能性がある。
表４は、六つの実施例１．３の潜在的ＰＴＭサイトを有する抗体の配列に対して、アミノ酸変異を行って得られた新たな抗体分子（ＰＴＭ変体と称する）を示した。表５－１は、本実施例における、これらＰＴＭ変体の軽鎖、重鎖可変ドメインアミノ酸配列、軽鎖全長アミノ酸配列、重鎖（ヒトＩｇＧ１（Ｎ２９７Ａ））全長アミノ酸配列、及びＣｈｏｔｈｉａ定義規則で定義したＣＤＲのアミノ酸配列を示した。設計されたすべてのＰＴＭ変体は、実施例１．３に説明した方法により精製された組換え抗体を得て、後の機能実験においてさらなる検証を行った。
Figure 2022550420000003
Figure 2022550420000004
Figure 2022550420000005
表５－２が本願の実施例に使用したコントロール抗体ＰＲ０００１５１、ＰＲ００１５９８及びＰＲ０００２６５のＦｃ型のスイッチ抗体ＰＲ０００４１６の分子の配列号を示した。その中、ＰＲ０００１５１は、Ｒｏｃｈｅの抗ＰＤ－Ｌ１抗体ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ類似物であり、本文において、ＰＲ０００１５１とａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂとは入れ替えて使用してもよい；ＰＲ００１５９８はＭｅｒｃｋ ＫＧａＡの抗ＰＤ－Ｌ１抗体ａｖｅｌｕｍａｂ類似物であり、本文において、ＰＲ００１５９８とａｖｅｌｕｍａｂとは入れ替えて使用してもよい。前記抗体は実施例１．３の方法によって製造され精製される。
Figure 2022550420000006
実施例２ ヒト／カニクイザルＰＤ－Ｌ１を過剰発現する細胞と抗原結合タンパク質の結合（ＦＡＣＳ）
本実施例は、ＰＤ－Ｌ１抗原結合タンパク質が体外にヒト／カニクイザルＰＤ－Ｌ１を結合する活性を研究するため、ヒトＰＤ－Ｌ１を過剰発現するＣＨＯＫ１細胞株（ＣＨＯ－Ｋ１／ｈＰＤ－Ｌ１、南京ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、Ｍ００５４３）又はカニクイザルＰＤ－Ｌ１を過剰発現するＣＨＯＫ１細胞株（ＣＨＯＫ１／ｃｙｎｏＰＤ－Ｌ１、南京ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、Ｍ００５７３）を採用し、細胞レベルの結合実験を行った。簡単に言えば、ＰＤ－Ｌ１細胞を消化して、Ｆ－１２Ｋ完全培地で再懸濁し、細胞密度を１ｘ１０６細胞／ｍＬに調整した。１００μＬ細胞／ウェルで９６ウェルＶベースプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，３８９４）に播種し、次に１００μＬ／ウェルの、濃度が終濃度の２倍である、５倍の濃度で勾配希釈した被験抗原結合タンパク質を入れ、均一に混合する。その中、抗原結合タンパク質の最高終濃度が１００ｎＭであり、合計８つの濃度があり、同型抗体ｈＩｇＧ１ ｉｓｏをコントロールとする。細胞を４℃で放置し、遮光して１時間インキュベートする。その後、１００μＬ／ウェルの事前に冷却したＰＢＳを入れて細胞を２回リンスし、５００ｇ、４℃で５分間遠心して、上清を除いた。さらに１００μＬ／ウェル蛍光二次抗体（ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）第二抗体 Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ａ１１０１３，１：１０００希釈）を入れて、４℃で、遮光して３０分間インキュベートした。２００μＬ／ウェルの事前に冷却したＰＢＳで細胞を２回洗浄し、５００ｇ、４℃で５分間遠心して、上清を除いた。最後に、２００μＬ／ウェルの事前に冷却したＰＢＳで細胞を再懸濁した。ＢＤ ＦＡＣＳ ＣＡＮＴＯＩＩで蛍光発光シグナル値を読み取った。フローサイトメーターＢＤ ＦＡＣＳ ＣＡＮＴＯＩＩで蛍光発光シグナル値を読み取り、ソフトウェアＦｌｏｗＪｏ ｖ１０（ＦｌｏｗＪｏ，ＬＬＣ）でデータを処理、分析した。ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８を応用してデータ処理とマッピング分析を行い、四パラメータ非線形フィッティングによって、結合曲線とＥＣ５０値などのパラメータを得た。
図１と表６の結果は、すべての本願の前記ＰＤ－Ｌ１抗原結合タンパク質がヒトＰＤ－Ｌ１に結合できることを示した；図２及び表７の結果は、すべての前記ＰＤ－Ｌ１抗原結合タンパク質がカニクイザルＰＤ－Ｌ１に結合できることを示した；かつ、濃度依存効果を示した。
Figure 2022550420000007
Figure 2022550420000008
実施例３ 抗原結合タンパク質とヒト／カニクイザルＰＤ－Ｌ１タンパク質の結合
本実施例は酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を利用して、体外でのＰＤ－Ｌ１抗原結合タンパク質のヒト／カニクイザルＰＤ－Ｌ１タンパク質に結合する活性を研究した。
３．１ 抗原結合タンパク質とヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質の結合（ＥＬＩＳＡ）
ヒトＰＤ－Ｌ１（Ａｃｒｏｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，ＰＤ１－Ｈ５２２９）をＰＢＳで２μｇ／ｍｌに希釈し、９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，９０１８）に入れ、ウェルあたり１００μｌ、４℃で一晩インキュベートする。液体を捨てた後、ＰＢＳＴバッファーで（ｐＨ７．４、０．０５％ ｔｗｅｅｎ－２０を含む）３回洗浄して、２５０μｌ ２％ ＢＳＡブロッキング液を入れて、３７℃条件下で１時間インキュベートする。ブロッキング液を捨て、さらにＰＢＳＴバッファーで（ｐＨ７．４、０．０５％ｔｗｅｅｎ－２０を含む）３回洗浄して、被験抗原結合タンパク質を、１００ｎＭ濃度から、順次に５倍の濃度希釈を行い、合計８つの濃度勾配にして、ウェルあたりに１００μｌを入れて、３７℃で１時間インキュベートし、同型抗体ｈＩｇＧ１ ｉｓｏをコントロールとする。ＰＢＳＴバッファー（ｐＨ７．４、０．０５％ ｔｗｅｅｎ－２０を含む）で３回洗浄した後、４０００倍希釈したヒツジ抗ヒトＨＲＰ二次抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ａ１８８０５）を入れて、３７℃条件下で、遮光して１時間インキュベートする。ＰＢＳＴバッファー（ｐＨ７．４、０．０５％ ｔｗｅｅｎ－２０を含む）で３回洗浄した後、１００μｌ／ウェルＴＭＢ（Ｂｉｏｐａｎｄａ，ＴＭＢ－Ｓ－００３）を加えて、室温で遮光して約５分間放置する；ウェルあたりに５０μｌ／ウェル停止液（ＢＢＩ ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｅ６６１００６－０２００）を入れて反応を停止する。マイクロプレートリーダーＥｎｓｐｉｒｅ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｅｍｅｒ）で４５０ｎｍ吸収値（ＯＤ４５０）を測定した。ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８でデータ処理及びマッピング分析を行い、四パラメータ非線形フィッティングによって、結合曲線とＥＣ５０値などのパラメータを得た。
図３及び表８は、すべての本願の前記ＰＤ－Ｌ１抗原結合タンパク質がヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質に結合できることを示した。且つＰＴＭ変体も元抗体の結合活性を保有している。
Figure 2022550420000009
３．２ 抗原結合タンパク質とカニクイザルＰＤ－Ｌ１タンパク質の結合（ＥＬＩＳＡ）
カニクイザル（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ）のＰＤ－Ｌ１タンパク質（Ａｃｒｏｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，ＰＤ１－Ｃ５２Ｈ４）をＰＢＳで２μｇ／ｍｌに希釈し、９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，９０１８）に入れ、ウェルあたり１００μｌ、４℃で一晩インキュベートする。液体を捨てた後ＰＢＳＴで３回洗浄して、２５０μｌの２％ＢＳＡブロッキング液を入れて、室温条件下で１時間インキュベートする。ブロッキング液を捨て、ＰＢＳＴバッファーで（ｐＨ７．４、０．０５％ ｔｗｅｅｎ－２０を含む）３回洗浄して、被験抗原結合タンパク質の濃度を５μｇ／ｍｌに希釈し、１００μｌ／ウェルを入れて、３７℃で１時間インキュベートする。ＰＢＳＴバッファー（ｐＨ７．４、０．０５％ ｔｗｅｅｎ－２０を含む）で３回洗浄した後、４０００倍希釈した希釈ヒツジ抗ヒトＨＲＰ二次抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ａ１８８０５）を入れて、３７℃で１時間インキュベートする。洗浄後、１００μｌ／ウェルＴＭＢ（Ｂｉｏｐａｎｄａ，ＴＭＢ－Ｓ－００３）を加えて、室温で遮光して５分間放置する；ウェルあたりに５０μｌ／ウェル停止液（ＢＢＩ ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｅ６６１００６－０２００）を入れて反応を停止する。マイクロプレートリーダーＥｎｓｐｉｒｅ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｅｍｅｒ）で４５０ｎｍ吸収値（ＯＤ４５０）を測定した。
図４に示された結果の通り、すべての本願の前記ＰＤ－Ｌ１抗原結合タンパク質がカニクイザルＰＤ－Ｌ１タンパク質に結合できる。
実施例４ 抗原結合タンパク質はヒトＰＤ－Ｌ１を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞とヒトＰＤ－１の結合を遮断する
ヒトＰＤ－Ｌ１結合タンパク質の体外でのヒトＰＤ－１とヒトＰＤ－Ｌ１の結合を遮断する活性を研究するため、ヒトＰＤ－Ｌ１を過剰発現するＣＨＯＫ１細胞株（ＣＨＯ－Ｋ１／ｈＰＤ－Ｌ１、南京ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、Ｍ００５４３）を採用して、細胞レベルのヒトＰＤ－１／ヒトＰＤ－Ｌ１結合遮断実験を行った。簡単に言えば、ＣＨＯ－Ｋ１／ｈＰＤ－Ｌ１細胞を消化して、Ｆ－１２Ｋ完全培地で再懸濁させ、細胞密度を１ｘ１０６細胞／ｍＬに調整した。１００μＬ細胞／ウェルで９６ウェルＶベースプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，３８９４）に播種し、次に１００μＬ／ウェルで、終濃度の２倍である３倍の濃度勾配希釈した被験抗原結合タンパク質を入れて、均一に混合し、その中、抗原結合タンパク質最高終濃度が１００ｎＭであり、合計８つの濃度があり、同型抗体ｈＩｇＧ１ ｉｓｏをコントロールとする。細胞を４℃に放置し、遮光して１時間インキュベートする。その後、４℃で５分間遠心して、上清を除いた。次に５０μＬ／ウェルで、１μｇ／ｍＬ濃度のビオチンマーカーがついているヒトＰＤ－１タンパク質（Ａｃｒｏｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＰＤ１－Ｈ８２Ｆ２）を入れて、４℃、遮光して３０分間インキュベートする。１００μＬ／ウェルで事前に冷却したＰＢＳを入れて細胞を二回リンスし、５００ｇ、４℃で５分間遠心して、上清を除いた。１００μＬ／ウェル蛍光二次抗体ＰＥ ストレプトアビジン（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，５５４０６１，１：２００希釈）を入れて、４℃で、遮光して３０分間インキュベートする。２００μＬ／ウェルの事前に冷却したＰＢＳで細胞を二回洗浄し、５００ｇ、４℃で５分間遠心して、上清を除いた。最後に、２００μＬ／ウェルの事前に冷却したＰＢＳで細胞を再懸濁させ。ＢＤ ＦＡＣＳ ＣＡＮＴＯＩＩで蛍光発光シグナル値を読み取った。ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８でデータ処理及びマッピング分析を行い、四パラメータ非線形フィッティングによって、結合曲線とＩＣ５０値などのパラメータを得た。
図５及び表９は、すべての本願の前記ＰＴＭ変異前の抗原結合タンパク質がヒトＰＤ－１と細胞表面のヒトＰＤ－Ｌ１結合を遮断できることを示した；図６及び表１０は、すべての本願の前記ＰＴＭ変体の抗原結合タンパク質がヒトＰＤ－１と細胞表面のヒトＰＤ－Ｌ１結合を遮断できることを示した；遮断能力はａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ類似物に相当する。
Figure 2022550420000010
Figure 2022550420000011
実施例５ 抗原結合タンパク質がヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質とそのリガンドタンパク質の結合を遮断する
本実施例は、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を利用して、ＰＤ－Ｌ１抗原結合タンパク質の体外でのヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質とそのリガンドタンパク質ＰＤ－１又はＣＤ８０との結合を遮断する能力を研究した。
５．１ 抗原結合タンパク質がヒトＰＤ－Ｌ１とヒトＰＤ－１の結合を遮断する（ＥＬＩＳＡ）
ヒトＰＤ－Ｌ１（Ａｃｒｏｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，ＥＰ－１０１－９６ｔｅｓｔｓ，Ａ００１－２１４）をＰＢＳで２μｇ／ｍｌに希釈して、９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，９０１８）に入れて、ウェルあたり１００μｌ、４℃で一晩コーティングする。液体を捨てた後に、ＰＢＳＴバッファーで（ｐＨ７．４、０．０５％ ｔｗｅｅｎ－２０を含む）３回洗浄して、２５０μｌ ２％ ＢＳＡブロッキング液を入れて、３７℃条件下で１時間インキュベートする。ブロッキング液を捨て、ＰＢＳＴバッファーで（ｐＨ７．４、０．０５％ ｔｗｅｅｎ－２０を含む）３回洗浄して、被験抗原結合タンパク質を、ＰＢＳＴ ｗｉｔｈ ０．５％（ｗ／ｖ）ＢＳＡで異なる濃度勾配に希釈して、０．６μｇ／ｍｌ ヒトＰＤ－１－Ｂｉｏｔｉｎタンパク質（Ａｃｒｏｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，ＥＰ－１０１－９６ｔｅｓｔｓ，Ａ００２－２１４）と混合した後、ウェルプレートに入れて、同型抗体ｈＩｇＧ１ ｉｓｏをコントロールとし、３７℃条件下で１時間インキュベートする。３回洗浄した後、ウェルあたりに１００μｌ ストレプトアビジン－ＨＲＰ（Ａｃｒｏｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，ＥＰ－１０１－９６ｔｅｓｔｓ，Ａ００３－２１４）を入れて、３７℃条件下で、遮光して１時間反応する。３回洗浄した後、１００μｌ ＴＭＢ発色液を入れて、室温下で遮光して５分間発色する。停止液を入れて反応を停止する。マイクロプレートリーダーＥｎｓｐｉｒｅ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｅｍｅｒ）で４５０ｎｍ吸収値（ＯＤ４５０）を測定した。ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８でデータ処理及びマッピング分析を行い、四パラメータ非線形フィッティングによって、結合曲線とＩＣ５０値などのパラメータを得た。
図７及び表１１は、本願の前記抗原結合タンパク質がヒトＰＤ－１とヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質との結合を遮断できることを示した；遮断能力はａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ類似物に相当する。
Figure 2022550420000012
５．２ 抗原結合タンパク質がヒトＰＤ－Ｌ１とヒトＢ７－１（ＣＤ８０）の結合を遮断する（ＥＬＩＳＡ）
ヒトＰＤ－Ｌ１－ｈＦｃタンパク質（Ａｃｒｏｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，ＰＤ１－Ｈ５２５８）をＰＢＳで１μｇ／ｍｌに希釈して、９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，９０１８）に入れて、ウェルあたり１００μｌ、４℃で一晩コーティングする。液体を捨てた後ＰＢＳＴバッファーで（ｐＨ７．４、０．０５％ ｔｗｅｅｎ－２０を含む）３回洗浄して、２５０μｌ ２％ＢＳＡブロッキング液を入れて、３７℃条件下で１．５時間インキュベートする。ブロッキング液を捨て、ＰＢＳＴバッファーで（ｐＨ７．４、０．０５％ ｔｗｅｅｎ－２０を含む）３回洗浄して、被験抗原結合タンパク質を、ＰＢＳＴ ｗｉｔｈ ０．５％（ｗ／ｖ）ＢＳで異なる濃度勾配に希釈して、１０μｇ／ｍｌ ヒトＢ７－１－Ｂｉｏｔｉｎタンパク質（Ａｃｒｏｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｂ７１－Ｈ８２Ｆ２）と混合した後、ウェルプレートに入れて、同型抗体ｈＩｇＧ１ ｉｓｏをコントロールとし、３７℃条件下で１．５時間インキュベートする。３回洗浄した後ウェルあたりに１００μｌ ストレプトアビジン－ＨＲＰ（ＳＩＧＭＡ，Ｓ２４３８）を入れて、３７℃条件下で、遮光して１時間反応する。３回洗浄した後１００μｌ ＴＭＢ発色液を入れて、室温下で遮光して５分間発色する。停止液を入れて反応を停止する。マイクロプレートリーダーＥｎｓｐｉｒｅ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｅｍｅｒ）で４５０ｎｍ吸収値（ＯＤ４５０）を測定した。ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８でデータ処理及びマッピング分析を行い、四パラメータ非線形フィッティングによって、結合曲線とＩＣ５０値などのパラメータを得た。
図８及び表１２は、すべての本願の前記抗原結合タンパク質がヒトＢ７－１（ＣＤ８０）とヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質の結合を遮断できることを示した。
Figure 2022550420000013
実施例６ レポーター遺伝子細胞系を利用して、抗原結合タンパク質のＰＤ－１シグナル経路に対する抑制作用を測定する
共発現ヒトＰＤ－Ｌ１とＯＳ８（ＣＤ３単鎖抗体膜貫通タンパク質）のＨｅｐ３Ｂ（ｃｈｅｍｐａｒｔｎｅｒ（上海）が構築）細胞を９６ウェルプレートに播種し、細胞量が１．２５×１０４／ウェル、１００μｌ／ウェルである。３７℃、５％ ＣＯ２の環境下で一晩インキュベートする。上清液を除去し、５０μＬ／ウェルの被験抗原結合タンパク質希釈液を入れて、初期濃度が１００ｎＭであり、５倍で濃度希釈し、同型抗体ｈｌｇＧ１ ｉｓｏをコントロールとする。５×１０４／ウェルのＰＤ－１及びＮＦＡＴ－蛍光素酵素レポーター遺伝子を持続的に発現できるＪｕｒｋａｔレポーター細胞（ｃｈｅｍｐａｒｔｎｅｒ（上海）構築）５０μｌ／ウェルを入れて。３７℃、５％ ＣＯ２の環境下で６時間培養する。ＯＮＥ－ＧｌｏＴＭ蛍光素酵素試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，品番Ｅ６１１０）を入れて、室温で５分間インキュベートし、マイクロプレートリーダーで発光値を測定した。
図９と表１３並びに図１０と表１４は、本願の前記抗原結合タンパク質がＰＤ－１シグナル経路に対して抑制作用を有することを示した；ＰＲ００００７１を除いて、他の分子のＰＤ－１シグナル経路に対する抑制作用がａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ類似物に相当する。
Figure 2022550420000014
Figure 2022550420000015
実施例７．ＢＬＩ方法を利用して抗原結合タンパク質とヒトＰＤ－Ｌ１の親和力を測定する
７．１ 抗原結合タンパク質とヒトＰＤ－Ｌ１の解離定数の測定、単濃度抗原解離速率の比較
ヒスチジンタッグがついているヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質はＮｏｖｏＰｒｏｔｅｉｎ（品番Ｃ３１５）から購入した；測定バッファーは１ｘ動態学バッファー（１０ｘ動態学バッファー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、品番１８－１１０５）から希釈する）であり、親和力測定と抗原、抗体の希釈に利用される；バイオフィルム干渉（ＢＬＩ）技術によって、Ｏｃｔｅｔ分子相互作用アナライザー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、モデルＯｃｔｅｔ Ｒｅｄ９６ｅ）で、抗原抗体との間の結合動態学分析を行う。
抗原と抗体の親和力を測定する時、センサ回転速度が１０００転／分であり。まず一列に置いた２つのＡＨＣセンサを測定バッファーにおいて１０分間バランシングさせ、その後ＡＨＣセンサで被験抗原結合タンパク質を捕獲し、捕獲高度が０．９－１．１ｎＭであり、その後ＡＨＣセンサを測定バッファーにおいて２分間バランシングさせ、その後ＡＨＣセンサを抗原（６０ｎＭ並びに０ｎＭ）と３分間結合させて、最後に１５分間解離させた。ＡＨＣセンサを１０ｍＭ グリシン（ｐＨ１．５）溶液に浸漬して再生させ、センサに結合したタンパク質を溶出させた。
Ｏｃｔｅｔ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェア（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ、バージョン１１．０）でデータ分析を行う時、シングル控除パターン（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｗｅｌｌ）を選択して参照シグナルを控除し、「１：１ Ｌｏｃａｌ／ｆｕｌｌ ｆｉｔｔｉｎｇ」方法を選択してデータフィッティングを行い、抗原と抗体結合の動態学パラメータを計算して、ｋｏｎ（１／Ｍｓ）値、ｋｄｉｓ（１／ｓ）値及びＫＤ（Ｍ）値を得た。
結果は、図１１（Ａ－Ｂ）及び表１５－１に示された通り、ＰＲ０００２６５及びＰＲ０００２６６がＰＤ－Ｌ１に対して高い親和力を有する。
Figure 2022550420000016
７．２ 抗原結合タンパク質とヒトＰＤ－Ｌ１の結合定数及び親和力の測定（複数濃度の抗原）
実施例７．１の方法に従い、抗原（複数濃度）及び抗体の親和力を測定する。抗原（複数濃度）及び抗体の親和力を測定する時、センサ回転速度が１０００転／分である。まず二列のＡＨＣセンサ（一列あたりに８つのセンサを放置し；一列目を参照ＡＨＣセンサと称し、二列目を測定ＡＨＣセンサと称する）を測定バッファーにおいて１０分間バランシングさせた。その後、８つの測定ＡＨＣセンサで被験抗原結合タンパク質を捕獲し（濃度４０ｎＭ）、捕獲時間３０秒、捕獲高度が約０．７ｎＭである；８つの測定ＡＨＣセンサを測定バッファーにおいて２分間バランシングさせた後に、勾配希釈の抗原タンパク質（例えば、抗原濃度が５０－１．５６ｎＭであってもよい二倍勾配希釈並びに０ｎＭ）と結合させ、８つのセンサはそれぞれ最大８つの異なる濃度の抗原に浸漬してもよい；抗原と５分間結合させ、その後１５分間解離させた；最後にＡＨＣセンサを１０ｍＭグリシン（ｐＨ１．５）溶液に浸漬し再生させ、センサ上に結合したタンパク質を溶出させた。参照ＡＨＣセンサの実験ステップが測定ＡＨＣセンサと同じ、唯一の区別は第一のステップにおいて、８つの参照ＡＨＣセンサを被験分子を含まない測定バッファーに３０秒浸漬することにある。
Ｏｃｔｅｔ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェア（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ、バージョン１１．０）でデータ分析を行う時、ダブル控除パターン（ｄｏｕｂｌｅ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）を選択して参照シグナルを控除し、“１：１ Ｇｌｏｂａｌ ｆｉｔｔｉｎｇ”方法を選択してデータフィッティングを行い、抗原と抗原結合タンパク質との結合の動態学パラメータを計算し、ｋｏｎ（１／Ｍｓ）値、ｋｄｉｓ（１／ｓ）値及びＫＤ（Ｍ）値を得た。
結果は、図１１（Ｃ－Ｅ）及び表１５－２に示された通り、ＰＲ０００２６５とＰＤ－Ｌ１の親和力がＰＲ０００１５１（ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ類似物）及びＰＲ００１５９８（ａｖｅｌｕｍａｂ類似物）より高い。
Figure 2022550420000017
実施例８ ＢＬＩ方法を利用して抗原結合タンパク質がＰＤ－Ｌ１に結合するエピトープ競合を測定する
まず、ビオチン化キット（ＥＺ－Ｌｉｎｋ Ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ－ＬＣ－Ｂｉｏｔｉｎ，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，Ａ３９２５７）の明細書に従い、ヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質（ＮｏｖｏＰｒｏｔｅｉｎ，Ｃ３１５）をビオチン化させる。その後ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔプラットフォームで、得られた抗原結合タンパク質とＰＲ０００１５１（ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ類似物）並びにＰＲ００１５９８（ａｖｅｌｕｍａｂ類似物）に対して、エピトープ競合実験を行う。第一ステップ、抗体の１００％シグナルを得る：ＳＡセンサでビオチン化したＰＤ－Ｌ１タンパク質を捕獲し、捕獲高度が０．２５ｎｍである。センサを抗体に浸漬し（５０ｎＭ）、時間５００秒、当該抗体をＰＤ－Ｌ１と結合させ、最終シグナルを当該抗体の１００％シグナルとして記録した。第二ステップ、エピトープ競合実験：ＳＡセンサでビオチン化したＰＤ－Ｌ１タンパク質を捕獲し、捕獲高度が０．２５ｎｍである。センサを第一抗体に浸漬し（５０ｎＭ）、時間５００秒、さらにＳＡセンサを第一抗体と第二抗体の混合物に浸漬し（二種類抗体の終濃度が共に５０ｎＭである）、時間５００秒、最終シグナルを当該第二抗体のシグナルとして記録した。抑制率は以下の式によって計算する：
抑制率（％）＝（Ａ － Ｂ）／Ａ ＊ １００
Ａ：ある抗体の１００％シグナル（第一ステップから得る）、Ｂ：当該抗体が第二抗体としてのシグナル（第二ステップから得る）。
得られた抑制率が８５（％）より大きい場合、二種類の抗体のエピトープが完全に重なることを意味する；抑制率が８５（％）より小さい場合、二種類の抗体が結合するエピトープが完全に重なることがないことを意味する。
その中、抗体ＰＲ０００４１６は本願の前記抗原結合タンパク質ＰＲ０００２６５の重鎖定常領域を変異しないヒトＩｇＧ１定常領域に変更して得られた抗体である。
結果は、ＰＲ０００２６５（又はＰＲ０００４１６）とコントロール抗体ＰＲ０００１５１又はＰＲ００１５９８のエピトープとが完全に重なることがないことを示した、表１６－１及び表１６－２を参照する。
Figure 2022550420000018
Figure 2022550420000019
実施例９ 抗原結合タンパク質が混合リンパ球反応（ＭＬＲ）においてサイトカイン分泌を刺激する
Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，１７１４４００２）で第一ドナーの全血からＰＢＭＣ細胞を分離し、組換えヒトＩＬ－４（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，２０４－ＧＭＰ）及び組換えヒトＧＭ－ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，２１５－ＧＭ／ＣＦ）を入れて６日誘導した後、未成熟のヒトＣＤ１４＋樹状細胞（ｉＤＣ細胞）を得た；さらに１μｇ／ｍｌのリポ多糖（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ； Ｓｉｇｍａ，Ｌ２６３０）を入れて、２４時間誘導して、成熟の樹状細胞（ｍＤＣ細胞）を得た。Ｔ細胞分離キット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ，１７９５１）で第二ドナーのＰＢＭＣ細胞からＴリンパ球を分離した。１×１０５／ウェルのＴリンパ球及び１×１０４／ウェルのｍＤＣ細胞を１０：１割合で９６ウェルプレートに播種して、１０μｇ／ｍｌの各抗原結合タンパク質及びコントロール抗体を入れて、１０倍又は対応する倍数の希釈をした。３７℃、５％ ＣＯ２のインキュベータで５日間インキュベートした。７２時間後と１２０時間後の上清液をそれぞれ採取した。ＩＬ２ ＥＬＩＳＡキット（Ｔｈｅｒｍｏ，８８－７０２５－８８）で７２時間後の上清液中のＩＬ－２のレベルを測定した；ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡキット（Ｔｈｅｒｍｏ，８８－７３１６－８８）で１２０時間後の上清液中のＩＦＮ－γのレベルを測定した；具体的な作業が試薬明細書を参考する。
本実施例は四つのドナーのＰＢＭＣを使用して、二グループのドナーマッチングに分けて混合リンパ球反応（ＭＬＲ）を行った。図１２（Ａ－Ｄ）に示された結果の通り、二回の独立のＭＬＲ実験のいずれにおいても、抗原結合タンパク質が活性化したＴリンパ球のサイトカインＩＬ－２分泌及びＩＦＮ－γ分泌を増強させることができる。
実施例１０ 抗体に依存する細胞毒性実験
本実施例は、抗体に依存する細胞毒性（ＡＤＣＣ）を測定する。本実施例はＰＢＭＣをエフェクター細胞として使用し、複数種のＰＤ－Ｌ１高発現腫瘍細胞系を標的細胞（例えば、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（ＡＴＣＣ、ＨＴＢ－２６）、ＮＣＩ－Ｈ２９２細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ－１８４８））として使用する。具体的に、新鮮なＰＢＭＣを遠心し、上清を捨て、１０％ＦＢＳ－ＲＰＭＩ１６４０培地に再懸濁させ、３７℃のインキュベータに一晩培養する。その後ＰＢＭＣ細胞を採取し、遠心して上清を除き、２％ＦＢＳ－ＲＰＭＩ１６４０培地に再懸濁させて、カウントして、細胞密度を１×１０７／ｍｌに調整し、ＰＢＭＣを５０μＬ／ウェルでＵ型ベース９６ウェルプレートに入れた。標的細胞を採取して、遠心して上清を捨て、２％ＦＢＳ－ＲＰＭＩ１６４０培地に再懸濁させ、カウントして、細胞密度を４×１０５／ｍｌに調整して、標的細胞を２５μＬ／ウェルで到Ｕ型ベース９６ウェルプレートに入れた。エフェクター細胞と標的細胞割合が５０：１である。抗体を中間濃度までに希釈し、初期濃度が１．６ｎＭであり、５倍で勾配希釈して、合計３つの濃度がある。サンプルを２５μＬ／ウェルでＵ型ベース９６ウェルプレートに入れて、サンプルの最終初期濃度が０．４ｎＭである。細胞プレートをインキュベータに入れて３．５時間インキュベートして、標的細胞最大放出ウェルと体積参照ウェルに１０μＬライセートを入れて、さらに３０分間インキュベートし、細胞とサンプルが共にインキュベートする合計時間が４時間である。５０μＬ／ウェルの上清を取り出し、透明平ベース９６ウェルプレートに入れ、Ｐｒｏｍｅｇａ ＬＤＨキット（Ｐｒｏｍｅｇａ ＬＤＨ－Ｇｌｏ(商標)，Ｊ２３８０）検出試薬５０μＬ／ウェルを入れた。室温で２０分間インキュベートし、５０μＬ反応停止液を入れて、反応を停止する。マイクロプレートリーダーでＯＤ４５０ｎｍ 吸光値を読み取った。計算式により細胞毒性を計算した。
細胞毒性（％）＝（（ＥＲ － ＣＭＢ）－（ＥＳＲ － ＣＭＢ）－（ＴＳＲ － ＣＭＢ））／（ＴＭＲ －ＶＣＣ）× １００％
その中：
ＥＲ ＝ 実験ウェル、サンプル＋エフェクター細胞＋標的細胞
ＥＳＲ＝ エフェクター細胞の自然放出ウェル、エフェクター細胞＋培地
ＴＳＲ＝ 標的細胞の自然放出ウェル、標的細胞＋培地
ＴＭＲ＝ 標的細胞の最大放出ウェル、標的細胞＋培地＋ライセート
ＶＣＣ＝ 体積参照ウェル、培地＋ライセート
ＣＭＢ＝ 培地参照ウェル、培地
本実施例は三つのドナーのＰＢＭＣ及び二つの腫瘍細胞系を使用し、合計六つの独立ＡＤＣＣ実験をした。図１３（Ａ－Ｆ）に示された結果の通り、ＰＲ０００４１６（ＰＲ０００４１６はＰＲ０００２６５を変異しないヒトＩｇＧ１定常領域に変更して得られた抗体）はＰＲ００１５９８（ａｖｅｌｕｍａｂ類似物）より強いＡＤＣＣ作用を有する。
実施例１１ 抗原結合タンパク質の体内腫瘍抑制活性
ＭＣ３８－ｈＰＤ－Ｌ１（ヒトＰＤ－Ｌ１を過剰発現するＭＣ３８細胞）結腸がん細胞を５×１０５個／０．１ｍＬで雌Ｂ－ｈＰＤ－１ヒト化マウス（ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎ）の右側皮下に播種し、腫瘍が約１１８ｍｍ３に成長した時で、腫瘍体積によりランダムにグループ分けして、一グループあたり１０匹、合計５グループ、それぞれ：ヒト ＩｇＧ１（３ｍｇ／ｋｇ、ヒトＩｇＧ１同型コントロールグループ）、ＰＲ０００１５１（３ｍｇ／ｋｇ、Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ低使用量グループ）、ＰＲ０００１５１（１０ｍｇ／ｋｇ、Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ高使用量グループ）、ＰＲ０００２６５（３ｍｇ／ｋｇ、本願抗体低使用量グループ）及びＰＲ０００２６５（１０ｍｇ／ｋｇ、本願抗体高使用量グループ）。投与経路が腹腔注射であり、投与が２日に１度であり、合計１３回の投与をする（ｑ２ｄｘ１３）。毎週腫瘍体積と体重を２回測量して、マウス体重と腫瘍体積を記録した。
グループ別投与の２０日目で、ｈＩｇＧ１コントロールグループの腫瘍体積が１３５９±１７１ｍｍ３であった。抗ＰＤ－Ｌ１抗体ＰＲ０００１５１の３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇの使用量では、腫瘍体積がそれぞれ８９８±２３３ｍｍ３と７４１±２０３ｍｍ３であって、ＴＧＩがそれぞれ３３．９％及び４５．５％であった。抗ＰＤ－Ｌ１抗体ＰＲ０００２６５の３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇの使用量では、腫瘍体積がそれぞれ８８１±１６９ｍｍ３及び１０３５±４７２ｍｍ３であって、ＴＧＩがそれぞれ３５．１％及び２３．８％であった。グループ別投与の２４日目で、ヒト ＩｇＧ１コントロールグループ腫瘍体積が１８７６±２０３ｍｍ３であった。抗ＰＤ－Ｌ１抗体ＰＲ０００１５１の３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ使用量では腫瘍体積がそれぞれ１３４９±３０６ｍｍ３及び９４９±２６６ｍｍ３であって、ＴＧＩがそれぞれ２８．１％及び４９．４％であった。抗ＰＤ－Ｌ１抗体ＰＲ０００２６５の３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇの使用量では腫瘍体積がそれぞれ１２２８±１８７ｍｍ３及び９３７±２２５ｍｍ３であって、ＴＧＩがそれぞれ３４．５％及び５０．１％であった。ＰＲ０００１５１及びＰＲ０００２６５が３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇの使用量では著しい腫瘍抑制効果を示し、且つｈＩｇＧ１と比べて、統計的差異（Ｐ＜０．０５）があった。ＰＲ０００１５１及びＰＲ０００２６５効果が類似しており、グループ間の比較には統計的差異（Ｐ＞０．０５）を見られなかった。
図１４に示された結果の通り、ＰＲ０００１５１及びＰＲ０００２６５に著しい腫瘍抑制効果があり、実験過程において、各グループ動物の体重も増えた。これは動物の被験品に対する忍容性が良好であることを示した。動物に対して、著しい毒性作用が発生せず、安全性が良好である。
実施例１２ 抗ＰＤ－Ｌ１且つ抗ＴＧＦＢのバブル機能融合タンパク質の製造及び特性分析
１２．１融合タンパク質分子の構築
実施例１で得られた抗原結合タンパク質のＣ末端は、長さの相応しい柔性ペプチドセグメント（リンカー）によってヒトＴＧＦＢ受容体（ＴＧＦＢＲＩＩ）胞外領域の配列と融合してバブル機能融合タンパク質分子を構築した。ポリペプチド配列をコードするプラスミドで哺乳動物の宿主細胞（例えば、ＨＥＫ２９３又はＥｘｐｉＣＨＯ）をトランスフェクションして、実施例１．３の前記方法で融合タンパク質の組み換え発現と精製を行い、本願の前記融合タンパク質ＰＲ００１４８７、ＰＲ００１４８８、ＰＲ００１９０１、ＰＲ００１９０２、ＰＲ００２２４７、ＰＲ００２２４８、ＰＲ００２２４９及びＰＲ００２２５１を得た。各部分の構造が表１７に示され、抗体軽鎖、重鎖及び各ドメインの配列号が表１８に示される。また、タンパク質分子Ｍ７８２４（ＰＲ００１５９９とも呼ばれており、ｂｉｎｔｒａｆｕｓｐ ａｌｆａ類似物である）、タンパク質分子Ｈｅｎｇｒｕｉ融合タンパク質９（ＰＲ００２４６６とも呼ばれており、その配列が特許ＷＯ２０１８２０５９８５Ａ１に由来する）、並びにＴＧＦＢＲＩＩ Ｔｒａｐ（ＰＲ００２０４０とも呼ばれており、抗ニワトリリゾチーム抗体クローンＴＥＬ１６の配列をＴＧＦＢＲＩＩ胞外領域の切り取り配列と融合させることで得られる）を製造して実施例のコントロールとし、その各部分の構造及び配列号が表１７及び表１８に示される。
Figure 2022550420000020
Figure 2022550420000021
１２．２ ＨＰＬＣ－ＳＥＣでタンパク質の純度及びマルチマーを分析する
分析型分子サイズ排除クロマトグラフィー法（ＳＥＣ）でタンパク質サンプルの純度とマルチマー形式を分析した。分析型クロマトグラフィーカラムＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷｘｌ（Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，０８５４１，５μｍ，７．８ｍｍ ｘ ３０ｃｍ）を高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）（モデルＡｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ ＩＩ）に接続して、ＰＢＳバッファーを使い、室温下で少なくとも１時間バランシングする。適量のタンパク質サンプル（少なくとも１０μｇ、サンプル濃度が１ｍｇ／ｍｌに調整する）が０．２２μｍフィルターにろ過された後にシステムに注射され、ＨＰＬＣプログラムを設定する：ＰＢＳ（ｐＨ７．４）バッファーを使って、サンプルを１．０ｍＬ／ｍｉｎの流速でクロマトグラフィーカラムを通過させて、最大時間が２０分である；検出波長が２８０ｎｍである。採集した後、ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎソフトウェアでクロマトグラフィー図に対して積分計算を行い、関連データを計算し、分析報告を生成する。サンプル内の分子サイズが異なる成分の滞留時間を報告した。
１２．３ ＨＰＬＣ－ＨＩＣでタンパク質の純度及び疎水性を分析する
分析型疎水相互作用クロマトグラフィー法（ＨＩＣ）でタンパク質サンプルの純度及び疎水性を分析した。分析型クロマトグラフィーカラムＴＳＫｇｅ１ Ｂｕｔｙ１－ＮＰＲ（Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，１４９４７，４．６ｍｍ ｘ ３．５ｃｍ）を高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）（モデルＡｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ ＩＩ）に接続し、ＰＢＳバッファーを使い、室温下で少なくとも１時間バランシングする。設定方法が１６分間内で１００％ 移動相Ａ（２０ｍＭヒスチジン、１．８Ｍ硫酸アンモニウム、ｐＨ６．０）から１００％ 移動相Ｂ（２０ｍＭ ヒスチジン、ｐＨ６．０）までの線形勾配、流速が０．７ｍＬ／ｍｉｎに設定され、タンパク質サンプル濃度１ｍｇ／ｍｌ，注入体積 ２０μＬ，検出波長が２８０ｎＭである。採集した後、ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎソフトウェアでクロマトグラフィー図に対して積分計算を行い、関連データを計算し、分析報告を生成する。サンプル内の分子サイズが異なる成分の滞留時間を報告する。
１２．４ ＤＳＦでタンパク質分子の熱安定性を測定する
示差走査蛍光法（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｆｌｕｏｒｉｍｅｔｒｙ，ＤＳＦ）は、よく使われるタンパク質熱安定性を測定するためのハイスループット方法である。レアルタイム蛍光定量ＰＣＲ装置を使用して、折りたたみが解かれたタンパク質分子に結合する染料の蛍光強度の変化を監視することで、タンパク質の変性過程を反映し、タンパク質分子の熱安定性を反映する。本実施例はＤＳＦ方法でタンパク質分子の熱変性温度（Ｔｍ）を測定する。１０μｇタンパク質を９６－ウェルＰＣＲプレート（Ｔｈｅｒｍｏ，ＡＢ－０７００／Ｗ）に入れて、次に２μＬ１００Ｘ希釈した染料ＳＹＰＲＯＴＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，２００８１３８）を入れて、その後最終体積がウェルあたり４０μＬになるようにバッファーを入れる。ＰＣＲプレートを密閉し、レアルタイム蛍光定量ＰＣＲ装置（Ｂｉｏ－Ｒａｄ ＣＦＸ９６ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ）に置いて、まず２５℃で５分間インキュベートし、その後０．２℃／０．２分の勾配で徐々に２５℃から９５℃までに昇温させ、測定終了時に温度を２５℃までに下がらせた。ＦＲＥＴ走査パターンを使用して、Ｂｉｏ－Ｒａｄ ＣＦＸ Ｍａｅｓｔｒｏソフトウェアでデータ分析を行い、サンプルのＴｍを算出した。
１２．５ 融合タンパク質の発現及び特性分析
実施例１２．１で得られた融合タンパク質の発現及び物理化学性質が表１９に示される。結果は、ＰＲ００１４８８とＰＲ００１９０２がコントロールタンパク質ＰＲ００２４６６、ＰＲ００１５９９と比べてより高い産量を持ち、ＰＲ００１４８８とＰＲ００１９０２がコントロールタンパク質ＰＲ００１５９９と比べてより優れた親水性を持つこと（ＨＰＬＣ－ＨＩＣでのより短い滞留時間から見られる）を示した。総合的に、ＰＲ００１４８８とＰＲ００１９０２はＰＲ００１５９９より安定な物理化学物質を示した。
Figure 2022550420000022
実施例１３ 融合タンパク質がヒトＰＤ－Ｌ１を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞と結合する
実施例２の方法に従い、本願の前記融合タンパク質の体外でのヒトＰＤ－Ｌ１と結合する活性を測定した。
図１５（Ａ）と表２０－１並びに図１５（Ｂ）と表２０－２は、すべての本願の前記融合タンパク質がヒトＰＤ－Ｌ１を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞と結合できることを示した。
Figure 2022550420000023
Figure 2022550420000024
実施例１４ 融合タンパク質がヒトＰＤ－Ｌ１を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞とヒトＰＤ－１の結合を遮断する
実施例４の方法に従い、本願の前記融合タンパク質の体外でのヒトＰＤ－１とヒトＰＤ－Ｌ１結合を遮断する活性。
図１６（Ａ）と表２１－１並びに図１６（Ｂ）と表２１－２は、すべての本願の前記融合タンパク質がヒトＰＤ－Ｌ１を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞とヒトＰＤ－１の結合を遮断できることを示した。
Figure 2022550420000025
Figure 2022550420000026
実施例１５ レポーター遺伝子細胞系を利用して融合タンパク質のＰＤ－１シグナル経路に対する抑制作用を測定する
実施例６の方法に従い、レポーター遺伝子細胞系で本願の前記融合タンパク質のＰＤ－１シグナル経路に対する抑制作用を測定した。図１７及び表２２は、本願の前記融合タンパク質がＰＤ－１シグナル経路に対する抑制作用を有することを示した。
Figure 2022550420000027
実施例１６ 酵素免疫吸着実験法で融合タンパク質の体外でのＴＧＦＢ１と結合する作用を測定する
１μｇ／ｍｌ濃度のヒトＴＧＦＢ１（ＮｏｖｏＰｒｏｔｅｉｎ，ＣＡ５９）を抗原として、１００μｌ／ウェルで９６ウェルプレートをコーティングして、４℃で一晩中放置する。２００μｌ／ウェル１×ＰＢＳＴで３回洗浄して、２００μｌ／ウェル２％ＢＳＡを入れて、３７℃で２時間ブロッキングする。２００μｌ／ウェル１ｘＰＢＳＴを入れて３回洗浄して、５倍濃度勾配希釈した抗体を入れて、その中、抗体の最高終濃度が１００ｎＭであり、３７℃で１時間インキュベートする。２００μｌ／ウェル１×ＰＢＳＴで３回洗浄して、ウェルあたりに１００μｌ／ウェル抗ヒトＦＣ－ＨＲＰ二次抗体（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ａ０１７０，１：４０００希釈）を入れて、３７℃で１時間インキュベートする。２００μｌ／ウェル１×ＰＢＳＴで３回洗浄して、さらにウェルあたりに１００μｌ／ウェルＴＭＢを入れて、室温で１０分間インキュベートした後、５０μｌ／ウェル１Ｍ ＥＬＩＳＡ停止液を入れて反応を停止させる。マイクロプレートリーダーで４５０ｎｍと５７０ｎｍの吸収値を測定した。ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８でデータ処理及びマッピング分析を行い、四パラメータ非線形フィッティングによって、結合曲線とＥＣ５０値などのパラメータを得た。その中、ＴＧＦＢＲＩＩ－ＦｃはＴＧＦＢＲＩＩ胞外領域融合タンパク質（ＮｏｖｏＰｒｏｔｅｉｎ，ＣＣ１０）であり、ＰＲ００１５９９、ＰＲ００２０４０は前述コントロール融合タンパク質分子である。
図１８（Ａ）と表２３－１並びに図１８（Ｂ）と表２３－２並びに図１８（Ｃ）と表２３－３は、すべての本願の前記融合タンパク質が効果的にＴＧＦＢ１と結合できること、かつ薬物濃度使用量に依存する効果があることを示した。
Figure 2022550420000028
Figure 2022550420000029
Figure 2022550420000030
実施例１７ 融合タンパク質のＴＧＦＢ１誘導Ｓｍａｄシグナル経路活性化に対する抑制作用
当該実験は、ヒトＴＧＦＢＲＩ、及びＳＥＡＰレポーター遺伝子と融合したＳｍａｄ３／４遺伝子を高度発現するＨＥＫ－Ｂｌｕｅ(商標) ＴＧＦＢ細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｋｂ－ｔｇｆｂ）を使用して、細胞レベルで融合タンパク質のＴＧＦＢ１が誘導するＳｍａｄシグナル経路の活性化に対する抑制作用を研究した。１０μｌ／ウェルで、５倍濃度勾配希釈した被験融合タンパク質を９６ウェルプレートに入れて、最高終濃度が５０ｎＭである。次に、１０μｌ／ウェルで、終濃度が１ｎｇ／ｍｌであるヒトＴＧＦＢ１タンパク質（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、２４０－Ｂ／Ｆ）を９６ウェルプレートに入れた。ＴＧＦＢ１抗体（Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ、Ｂ５４８４）とＴＧＦＢＲＩＩ－Ｆｃ融合タンパク質（ＮｏｖｏＰｒｏｔｅｉｎ、ＣＣ１０）をコントロール分子とした。１８０μｌ、２．５×１０４細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種し、二酸化炭素インキュベータにさらに一晩インキュベートする。その後、そこからウェルあたりで２０μｌの細胞上清をもう一つの９６ウェルプレートに移して、その後ウェルあたりに１８０μｌ Ｑｕａｎｔｉ－Ｂｌｕｅ作動液（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｒｅｐ－ｑｂ１）を入れて、３７℃下で１時間インキュベートする。マイクロプレートリーダーで６５５ｎＭの吸収値を測定した。ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８でデータ処理及びマッピング分析を行い、四パラメータ非線形フィッティングによって、結合曲線とＩＣ５０値などのパラメータを得た。
図１９及び表２４に示された結果の通り、融合タンパク質は使用量に依存する形式でＴＧＦＢ１が誘導するｐＳＭＡＤ３レポーター活性を抑制する。ＰＲ００１９０２とポジティブコントロールＰＲ００１５９９（Ｍ７８２４）が相当する効果とＩＣ５０を有する；その抑制活性とＩＣ５０がポジティブコントロールＰＲ００２４６６（Ｈｅｎｇｒｕｉ融合タンパク質９）ならびにＴＧＦＢ抗体と比べて８倍強い。
Figure 2022550420000031
実施例１８ ＢＬＩで融合タンパク質とヒトＰＤ－Ｌ１の親和力を測定した結果
実施例７．２の前記方法で融合タンパク質とヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質の親和力を測定した。
表２５を示した結果の通り、本願の融合タンパク質とヒトＰＤ－Ｌ１の親和力ＫＤ値がいずれも１×１０－８Ｍより小さい。
Figure 2022550420000032
実施例１９ ＢＬＩ方法で融合タンパク質とヒトＴＧＦＢ１の親和力を測定する
まずビオチン化キット（ＥＺ－Ｌｉｎｋ Ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ－ＬＣ－Ｂｉｏｔｉｎ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ａ３９２５７）の明細書に従い、ヒトＴＧＦＢ１タンパク質（ＮｏｖｏＰｒｏｔｅｉｎ、ＣＡ５９）のビオチン化を行った。その後に、類似する実施例７．２の前記方法に従い、融合タンパク質とヒトＴＧＦＢ１の親和力を測定した。特に、まず二列のＳＡセンサ（一列あたりに８つのセンサを置いた；一列目は参照ＳＡセンサと称し、二列目は測定ＳＡセンサと称する）を０．０２％ｔｗｅｅｎを含有する１×ＰＢＳの測定バッファーにおいて、１０分間バランシングさせた。その後、測定ＳＡセンサでビオチン化したヒトＴＧＦＢ１を捕獲し、捕獲高度を０．３ｎｍに設定した。参照ＳＡセンサはバッファーに３０秒浸漬した。二列センサをさらに勾配希釈した被験融合タンパク質（例えば、被験融合タンパク質濃度が６．２５－０．３９ｎＭの両倍勾配希釈並びに０ｎＭであってもよい）と結合させた；３分間結合させて、その後１０分間解離させた。
Ｏｃｔｅｔ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェア（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ、バージョン１１．０）でデータ分析を行う時、バブル控除パターン（ｄｏｕｂｌｅ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）を選択して参照シグナルを控除し、“１：１ Ｇｌｏｂａｌ ｆｉｔｔｉｎｇ”方法を選択してデータフィッティングを行い、抗原と抗原結合タンパク質との結合の動態学パラメータを計算して、ｋｏｎ（１／Ｍｓ）値、ｋｄｉｓ（１／ｓ）値及びＫＤ（Ｍ）値を得た。
表２６に示した結果の通り、本願融合タンパク質とヒトＴＧＦＢ１のＫＤ値が１×１０９Ｍより低く、且つコントロール分子ＰＲ００１５９９及びＰＲ００２４６６より高い親和力を示した。
Figure 2022550420000033
実施例２０ ＢＬＩ方法で融合タンパク質がＰＤ－Ｌ１に結合するエピトープ競合を測定する
実施例８の方法に従い、融合タンパク質及びコントロール分子に対して、エピトープ競合実験を行った。表２７－１及び表２７－２に示された結果の通り、ＰＲ００１４８８及びＰＲ００１９０２は、コントロール分子ＰＲ００１５９９又はＰＲ００２４６６のエピトープと完全に重なることがない。
Figure 2022550420000034
Figure 2022550420000035
実施例２１ ＭＬＲ法により体外で融合タンパク質のＴ細胞に対する活性化作用を測定する
ＰＤ－Ｌ１／ＴＧＦＢ融合タンパク質のＴ細胞に対する協同活性化作用を研究するため、ヒト外週血単球（ＰＢＭＣ）を採取、精製して、単球（Ｍｅｌｔｅｎｙｉ、１３０－０５０－２０１）を分離し、完全培地（ＲＰＩ１６４０、５０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－４，１００ｎｇ／ｍＬ ＧＭ－ＣＳＦを含む）で６日間培養して、さらに１μｇ／ｍｌ ＬＰＳを入れて２４ｈ誘導し、成熟のＤＣ細胞を生成した。前記培養細胞を採取して遠心し、２％ＦＢＳを含むＰＢＳで４回洗浄して、新鮮な培地に再懸濁させて、密度を２ｘ１０５細胞／ｍＬに調整し、１００μｌ／ウェルで９６ウェル細胞培養プレート播種した。同時に、異なる個体からの新鮮ＰＢＭＣからＰａｎ Ｔ 細胞（Ｍｅｌｔｅｎｙｉ、１３０－０９６－５３５）を分離し、新鮮培地で再懸濁させ、細胞密度を１×１０６細胞／ｍｌに調整し、１００μｌ／ウェルで９６ウェル細胞培養プレートに播種した。異なる濃度の抗体を５０μｌ／ウェルで、終濃度が０．３ｎｇ／ｍｌであるヒトＴＧＦＢ１タンパク質（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、２４０－Ｂ／Ｆ）を５０μｌ／ウェルでそれぞれ前記９６ウェル細胞培養プレートの対応するウェルに入れて、細胞培養プレートを３７℃、５％ ＣＯ２のインキュベータに５日間インキュベートする。７２時間後及び１２０時間後の上清液をそれぞれ採取した。ＩＬ２ ＥＬＩＳＡキット（Ｔｈｅｒｍｏ，８８－７０２５－８８）で７２時間後の上清液中のＩＬ－２のレベルを測定した；ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡキット（Ｔｈｅｒｍｏ，８８－７３１６－８８）で１２０時間後の上清液中のＩＦＮ－γのレベルを測定した；具体的な作業が試薬明細書を参考する。
図２０に示された結果の通り、外からＴＧＦＢ１を加える条件下では、融合タンパク質は、活性化したＴリンパ球のサイトカインＩＬ－２（図２０（Ａ））分泌及びＩＦＮ－γ（図２０（Ｂ））分泌を強化することができ、ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体ＰＲ０００４１６、ポジティブコントロールＰＲ００１５９９、ＰＲ００２４４６と比べてより強い活性化作用を有する。
実施例２２ 腫瘍細胞が誘導する、抗体に依存する細胞毒性実験の結果
実施例１０の方法に従い、本願の前記融合タンパク質の腫瘍細胞が誘導する、抗体に依存する細胞毒性を測定した。本実施例は三つのドナーのＰＢＭＣ及び二つの腫瘍細胞系を使用し、合計六つの独立ＡＤＣＣ実験をした。図２１（Ａ－Ｆ）に示された結果の通り、ＰＲ００１４８８は、ポジティブコントロールＰＲ００１５９９と比べて、より強いＡＤＣＣ作用を有する。
実施例２３ 融合タンパク質の薬物動態学研究
本実施例が融合タンパク質の薬物動態学性能を測定した。その方法は以下のようなものである。体重１８～２２グラムの雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス３匹を選び、９．５３ｍｇ／ｋｇ ＰＲ００１９０２及び１０ｍｇ／ｋｇ ＰＲ００１４８８の使用量で静脈注射によって融合タンパク質薬物を投与する；投与する前と投与後の０．５時間、２４時間（１日）、２日目、４日目、７日目、１０日目及び１４日目で全血を採集し、全血を３０分間静置し凝固させ、次に４℃、２，０００ ｒｐｍで５分間遠心して、分離された血清サンプルを－８０℃で分析までに凍結保存する。本実施例は二種類のＥＬＩＳＡ方法でマウス血清中の薬物濃度を定量的に測定する。ＥＬＩＳＡ方法の一、即ちＦｃ端測定法であり、９６ウェルプレートにコーティングしたヤギ抗ヒトＦｃポリクローナル抗体でマウス血清中のヒトＦｃを含有する融合タンパク質を捕獲し、その後にＨＲＰマーカーがついているヤギ抗ヒトＦｃ第二抗体を入れて検出する；ＥＬＩＳＡ方法の二、即ちＴＧＦＢＲＩＩ端検出法であり、９６ウェルプレートにコーティングしたヒトＴＧＦＢ１タンパク質でマウス血清中のヒトＴＧＦＢＲＩＩドメインを含有する融合タンパク質を捕獲し、その後ＨＲＰマーカーがついているヤギ抗ヒトＦｃ第二抗体を入れて検出する。Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア６．４版を使用し、非コンパートメントモデル（ＮＣＡ）で血薬濃度のデータを分析してその薬物動態学を評価した。
図２２及び表２８は、融合タンパク質ＰＲ００１９０２の薬物動態学データを示す。結果によれば、Ｆｃ端検出法では、ＰＲ００１９０２のマウス体内での半減期が約１１日であり；ＴＧＦＢＲＩＩ端検出法では、ＰＲ００１９０２のマウス体内での半減期が約８．５日である。
Figure 2022550420000036
図２３及び表２９は、融合タンパク質ＰＲ００１４８８の薬物動態学データを示す。結果によれば、Ｆｃ端検出法では、ＰＲ００１４８８のマウス体内での半減期が約１０日であり；ＴＧＦＢＲＩＩ端検出法では、ＰＲ００１４８８のマウス体内での半減期が約５日である。
Figure 2022550420000037
実施例２４ 融合タンパク質の結腸がんＣＴ２６－ヒトＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１遺伝子組み換えマウスの動物体内モデルに対する抗腫瘍活性
本実施例は、被験薬物がマウス結腸がん細胞ＣＴ２６－ヒトＰＤＬ１（ｔｇ）－マウスＰＤＬ１（ＫＯ）（マウス結腸がん細胞ＣＴ２６の内因性マウスＰＤ－Ｌ１遺伝子をノックアウトして、外因性ヒトＰＤ－Ｌ１遺伝子組み換えを導入する、ｇｅｍｐｈａｒｍａｔｅｃｈ）移植免疫チェックポイントヒト化マウスＢＡＬＢ／ｃ－ヒトＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１（ＢＡＬＢ／ｃマウスに同時に外因性ヒトＰＤ－１遺伝子組み換えとヒトＰＤ－Ｌ１遺伝子組み換えを導入する、ｇｅｍｐｈａｒｍａｔｅｃｈ）における抗腫瘍作用を評価した。対数成長期のＣＴ２６－ヒトＰＤＬ１（ｔｇ）－ｍＰＤＬ１（ＫＯ）細胞をヒト化マウスＢＡＬＢ／ｃ－ヒトＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の脇の右側背部の皮下に播種し、平均腫瘍体積が８０－１２０ｍｍ３に達した時、腫瘍体積が大きい過ぎるマウス個体を除いた後、マウスを腫瘍体積によりランダムに３つグループに分け、一グループあたりに６匹がある。合計３つの測定グループがあり、それぞれ：ヒトＩｇＧ１（１０．４ｍｇ／ｋｇ、ヒトＩｇＧ１同型コントロールグループ）、Ｍ７８２４（１２．３ｍｇ／ｋｇ、ポジティブコントロール）及びＰＲ００１９０２（１２．２ｍｇ／ｋｇ、本願の融合タンパク質）である。グループ分けの当日に腹腔投与開始し、三日に一度で投与し、合計６回の投与をした（ｑ３ｄ × ６）。投与開始後、毎週に体重と腫瘍体積を二回測定し、腫瘍体積の計算方式は以下の通り：腫瘍体積（ｍｍ３）＝０．５×腫瘍長径×腫瘍短径２。実験終了後に、腫瘍のあるマウスを安楽死させて腫瘍を取り出して重量を測定した。各グループの動物の腫瘍体積、マウス体重などを計算し、実験結果は平均値±標準誤差（Ｍｅａｎ ±ＳＥＭ）として示される。複数のグループの間の比較は一元配置分散分析（ｏｎｅ ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）の検定方法で比較して、異なる治療グループとコントロールグループと比べて有意差があるかどうかを確認する。データはＳＰＳＳ １８．０で分析した。Ｐ＜０．０５を有意差があるとする。
図２４が示した結果の通り、融合タンパク質ＰＲ００１９０２とポジティブコントロールＭ７８２４は、いずれもＣＴ２６－ヒトＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１マウスの皮下移植腫瘍の成長を著しく抑制することができる。且つ、実験過程において、各グループ動物の体重も増えた。これは動物の被験品に対する忍容性が良好であることを示した。動物に著しい毒性作用が発生せず、安全性が良好である。
前述の詳細な説明はあくまで解釈及び例示として提示されるものており、添付の請求の範囲を限定することを意図するものではない。本出願で列挙されている実施形態への様々な変更は、当業者にとって明らかであり、添付の請求の範囲とそれらの同等物の範囲内に含まれる。

Claims (39)

  1. 抗体重鎖可変領域ＶＨの中の少なくとも一つのＣＤＲを含み、
    前記ＶＨが配列番号１９３に示すアミノ酸配列を含み、好ましくは、前記ＶＨが配列番号９０－９３、９５及び９７－１０４のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、ＰＤ－Ｌ１に結合する単離された抗原結合タンパク質。
  2. 抗体軽鎖可変領域ＶＬの中の少なくとも一つのＣＤＲを含み、
    前記ＶＬが配列番号１９４に示すアミノ酸配列を含み、好ましくは、前記ＶＬが配列番号１０８－１１４、１１６及び１１８のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、請求項１に記載された単離された抗原結合タンパク質。
  3. 抗体又はその抗原結合断片を含み、
    好ましくは、前記抗体が以下の群から選ばれる：モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体及び完全ヒト抗体、
    好ましくは、前記抗原結合断片がＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ及び／又はｄＡｂを含む、請求項１又は２に記載された単離された抗原結合タンパク質。
  4. 軽鎖可変領域ＶＬがＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号１８１に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号１８２に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号１９１に示すアミノ酸配列を含み、
    その中、重鎖可変領域ＶＨがＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１７９に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号１８０に示すアミノ酸配列を含む、請求項１－３のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
  5. 前記ＬＣＤＲ１が配列番号１８１、４８－５１のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号１８２、６３－６４のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号１９１、７７－７９のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１７９、１４、１６及び１７のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号１８０、２９－３３のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、請求項４に記載された単離された抗原結合タンパク質。
  6. 前記ＬＣＤＲ１が配列番号４８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記ＬＣＤＲ１が配列番号４９に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記ＬＣＤＲ１が配列番号４８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号３０に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７９に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号３１に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号３２に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号３３に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記ＬＣＤＲ１が配列番号４８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１６に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号３０に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記ＬＣＤＲ１が配列番号４８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号３０に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１６に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号３２に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６３に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号３２に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１６に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１６に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号３３に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み且つ前記ＨＣＤＲ３が配列番号３３に示すアミノ酸配列を含む、請求項５に記載された単離された抗原結合タンパク質。
  7. 前記抗体重鎖可変領域ＶＨがフレーム領域Ｈ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３、及びＨ－ＦＲ４を含み、好ましくは、前記Ｈ－ＦＲ１のＣ末端と前記ＨＣＤＲ１のＮ末端とが接続し、配列番号１に示すアミノ酸配列を含み、且つ／又は前記Ｈ－ＦＲ２が前記ＨＣＤＲ１と前記ＨＣＤＲ２との間に位置しており、配列番号９に示すアミノ酸配列を含み、且つ／又は前記Ｈ－ＦＲ３が前記ＨＣＤＲ２と前記ＨＣＤＲ３との間に位置しており、配列番号１９２に示すアミノ酸配列を含み、且つ／又は前記Ｈ－ＦＲ４のＮ末端と前記ＨＣＤＲ３のＣ末端とが接続し、配列番号３８に示すアミノ酸配列を含み、更に好ましくは、前記Ｈ－ＦＲ３が配列番号２１、２２及び２４のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、請求項１－６のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
  8. 前記抗体軽鎖可変領域ＶＬがフレーム領域Ｌ－ＦＲ１、Ｌ－ＦＲ２、Ｌ－ＦＲ３、及びＬ－ＦＲ４を含み、好ましくは、前記Ｌ－ＦＲ１のＣ末端と前記ＬＣＤＲ１のＮ末端とが接続し、配列番号１８５に示すアミノ酸配列を含み、且つ／又は前記Ｌ－ＦＲ２が前記ＬＣＤＲ１と前記ＬＣＤＲ２との間に位置しており、配列番号１８６に示すアミノ酸配列を含み、且つ／又は前記Ｌ－ＦＲ３が前記ＬＣＤＲ２と前記ＬＣＤＲ３との間に位置しており、配列番号１８７に示すアミノ酸配列を含み、且つ／又は前記Ｌ－ＦＲ４のＮ末端と前記ＬＣＤＲ３のＣ末端とが接続し、配列番号１８８に示すアミノ酸配列を含む、請求項１－７のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
  9. 前記Ｌ－ＦＲ１が配列番号４１－４４のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、且つ／又は前記Ｌ－ＦＲ２が配列番号５６－５９のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、且つ／又は前記Ｌ－ＦＲ３が配列番号６９－７２のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、且つ／又は前記Ｌ－ＦＲ４が配列番号８５－８６のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、請求項８に記載された単離された抗原結合タンパク質。
  10. 前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号１９３に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１９４に示すアミノ酸配列を含み、
    好ましくは、前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９０－９３、９５及び９７－１０４のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、
    好ましくは、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１０８－１１４、１１６及び１１８のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、請求項１－９のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
  11. 前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９０に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１０８に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９０に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１０９に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９１に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１０に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９０に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１１に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９２に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１２に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９３に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１３に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９０に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９５に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１６に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９７に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１８に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９８に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１８に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号９９に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１３に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号１００に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１３に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号１０１に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号１０２に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号１０３に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１６に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記抗体重鎖可変領域ＶＨが配列番号１０４に示すアミノ酸配列を含み、前記抗体軽鎖可変領域ＶＬが配列番号１１６に示すアミノ酸配列を含む、請求項１－１０のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
  12. 抗体重鎖定常領域を含み、且つ前記抗体重鎖定常領域がヒトＩｇＧ定常領域を含み、好ましくは、その中、前記抗体重鎖定常領域が配列番号１７２－１７５のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、請求項１－１１のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
  13. 抗体重鎖ＨＣを含み、且つ前記ＨＣが配列番号１２２－１２５、１２７及び１２９－１３７のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、請求項１－１２のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
  14. 抗体軽鎖定常領域を含み、その中、前記抗体軽鎖定常領域が配列番号１７０に示すアミノ酸配列を含む、請求項１－１３のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
  15. 抗体軽鎖ＬＣを含み、且つ前記ＬＣが配列番号１５０－１５６、１５８及び１６０－１６３のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、請求項１－１４のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
  16. 以下の性質の中の一種又は複数種を有する、請求項１－１５のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質：
    １）１×１０－８Ｍ又はより低いＫＤ値で霊長類動物由来のＰＤ－Ｌ１と結合することができる；
    ２）ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１の結合を遮断することができる；
    ３）ＣＤ８０とＰＤ－Ｌ１の結合を遮断することができる；
    ４）免疫細胞におけるＩＦＮ－γ及び／又はＩＬ２の分泌を刺激することができる；
    ５）腫瘍成長及び／又は腫瘍細胞増殖を抑制することができる；
    ６）コントロール抗体と比べて、霊長類動物由来のＰＤ－Ｌ１と完全に重なることがないエピトープと結合し、
    その中、前記コントロール抗体が配列番号５２に示すＬＣＤＲ１、配列番号６５に示すＬＣＤＲ２及び配列番号８１に示すＬＣＤＲ３を含み、且つ前記コントロール抗体が配列番号６に示すＨＣＤＲ１、配列番号１５に示すＨＣＤＲ２及び配列番号３４に示すＨＣＤＲ３を含み、
    又は、
    その中、前記コントロール抗体が配列番号５３に示すＬＣＤＲ１、配列番号６６に示すＬＣＤＲ２及び配列番号８２に示すＬＣＤＲ３を含み、且つ前記コントロール抗体が配列番号５に示すＨＣＤＲ１、配列番号１８に示すＨＣＤＲ２及び配列番号３５に示すＨＣＤＲ３を含み、
    又は、
    前記コントロール抗体が配列番号５５に示すＬＣＤＲ１、配列番号６８に示すＬＣＤＲ２及び配列番号８４に示すＬＣＤＲ３を含み、且つ前記コントロール抗体が配列番号８に示すＨＣＤＲ１、配列番号２０に示すＨＣＤＲ２及び配列番号３７に示すＨＣＤＲ３を含む。
  17. 前記霊長類動物がヒト及び／又はサルを含む、請求項１６に記載された単離された抗原結合タンパク質。
  18. 以下のものを含む、融合タンパク質：
    ａ）ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片；並びに
    ｂ）請求項１－１７のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質。
  19. 第一ポリペプチド及び第二ポリペプチドを含み、その中、前記第一ポリペプチドが前記単離された抗原結合タンパク質の重鎖又はその断片並びに前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片を含み、且つ前記第二ポリペプチドが前記単離された抗原結合タンパク質の軽鎖又はその断片を含み、好ましくは、前記抗体重鎖又はその断片が前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片とｉｎ－ｆｒａｍｅ融合して前記第一ポリペプチドを形成し、更に好ましくは、その中、前記抗体重鎖又はその断片のＣ端が直接又は間接的に前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片のＮ端と結合する、請求項１８に記載された融合タンパク質。
  20. 第一ポリペプチドの前記重鎖又はその断片がＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１７９、１４、１６及び１７のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号１８０、２９－３３のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、且つ／又は前記第二ポリペプチドがＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号１８１、４８－５１のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号１８２、６３－６４のいずれかに示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号１９１、７７－７９のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、請求項１８又は１９に記載された融合タンパク質。
  21. ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１６に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１６に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号３３に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    ＬＣＤＲ１が配列番号５０に示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号７７に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号３３に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    ＬＣＤＲ１が配列番号５１に示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号６４に示すアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号７８に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号５に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１４に示すアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号２９に示すアミノ酸配列を含む、請求項２０に記載された融合タンパク質。
  22. 前記抗体重鎖又はその断片がリンカーによって前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片と接続し、好ましくは、前記のなかで、前記リンカーがペプチドリンカーであり、且つ前記ペプチドリンカーが配列番号１６７－１６９のいずれか一項に記載されたアミノ酸配列を含む、請求項１８－２１のいずれか一項に記載された融合タンパク質。
  23. 前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片がヒトＴＧＦＢＲＩＩの細胞外ドメインを含み、好ましくは、前記ヒトＴＧＦＢＲＩＩ又はその断片が配列番号１７６－１７８のいずれかに示すアミノ酸配列を含む、請求項１８－２２のいずれか一項に記載された融合タンパク質。
  24. 前記第一ポリペプチドの前記重鎖又はその断片と前記第二ポリペプチドの前記軽鎖又はその断片が組み合わせて特異的にＰＤ－Ｌ１に結合する抗原結合部分を形成する、請求項１８－２３のいずれか一項に記載された融合タンパク質。
  25. 前記第一ポリペプチドが配列番号１３８、１３９、１４２、１４３及び１４５－１４８のいずれか一項に記載されたアミノ酸配列を含み、その中、前記第二ポリペプチドが配列番号１６２－１６３のいずれか一項に記載されたアミノ酸配列を含む、請求項１８－２４のいずれか一項に記載された融合タンパク質。
  26. 前記第一ポリペプチドが配列番号１３８に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記第一ポリペプチドが配列番号１３９に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記第一ポリペプチドが配列番号１４２に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記第一ポリペプチドが配列番号１４３に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記第一ポリペプチドが配列番号１４５に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６３に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記第一ポリペプチドが配列番号１４６に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６３に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記第一ポリペプチドが配列番号１４７に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含む；又は、
    前記第一ポリペプチドが配列番号１４８に示すアミノ酸配列を含み、且つ前記第二ポリペプチドが配列番号１６２に示すアミノ酸配列を含む、請求項１８－２５のいずれか一項に記載された融合タンパク質。
  27. 請求項１－１７のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質又は請求項１８－２６のいずれか一項に記載された融合タンパク質をコードする、単離された一種又は複数種の核酸分子。
  28. 請求項２７に記載された核酸分子を含む、ベクター。
  29. 請求項２７に記載された核酸分子又は請求項２８に記載されたベクターを含む、細胞。
  30. 請求項１－１７のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質、請求項１８－２６のいずれか一項に記載された融合タンパク質を発現させる条件下で、請求項２９に記載された細胞を培養することを含む、請求項１－１７のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質又は請求項１８－２６のいずれか一項に記載された融合タンパク質を製造する方法。
  31. 請求項１－１７のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質を含む、キメラ抗原受容体。
  32. 請求項３１に記載されたキメラ抗原受容体を含む、遺伝子修飾された細胞。
  33. 細胞毒性剤、並びに請求項１－１７のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質を含む、抗体薬物複合体。
  34. 請求項１－１７のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質、請求項１８－２６のいずれか一項に記載された融合タンパク質、請求項２７に記載された核酸分子、請求項２８に記載されたベクター、請求項２９に記載された細胞、請求項３１に記載されたキメラ抗原受容体、請求項３２に記載された遺伝子修飾された細胞及び／又は請求項３３に記載された抗体薬物複合体、並びに任意の薬学的に許容されるベクターを含み、好ましくは、ホルモン製剤、標的小分子製剤、プロテアソーム抑制剤、造影剤、診断薬、化学療法剤、腫瘍溶解性薬物、細胞毒性剤、サイトカイン、共刺激分子の活性化剤、抑制性分子の抑制剤並びにワクチンからなる群から選ばれる一種又は複数種をさらに含む、医薬組成物。
  35. 請求項１－１７のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質、請求項１８－２６のいずれか一項に記載された融合タンパク質、請求項２７に記載された核酸分子、請求項２８に記載されたベクター、請求項２９に記載された細胞、請求項３１に記載されたキメラ抗原受容体、請求項３２に記載された遺伝子修飾された細胞及び／又は請求項３３に記載された抗体薬物複合体及び／又は請求項３４に記載された医薬組成物の薬物の製造における使用であって、
    前記薬物が腫瘍やがんの予防、軽減及び／又は治療に利用され、腫瘍成長及び／又は腫瘍細胞増殖を抑制し、好ましくは、前記腫瘍やがんがＰＤ－Ｌ１の発現が異常である腫瘍やがんであり、好ましくは、前記腫瘍やがんが結腸直腸がんを含む、使用。
  36. 必要とする被験者に対して、請求項１－１７のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質、請求項１８－２６のいずれか一項に記載された融合タンパク質、請求項２７に記載された核酸分子、請求項２８に記載されたベクター、請求項２９に記載された細胞、請求項３１に記載されたキメラ抗原受容体、請求項３２に記載された遺伝子修飾された細胞及び／又は請求項３３に記載された抗体薬物複合体及び／又は請求項３４に記載された医薬組成物を投与することを含み、
    好ましくは、前記のなかで、前記腫瘍やがんがＰＤ－Ｌ１の発現が異常である腫瘍やがんであり、好ましくは、前記腫瘍やがんが結腸直腸がんを含む、腫瘍を予防、軽減又は治療して、腫瘍成長及び／又は腫瘍細胞増殖を抑制する方法。
  37. がんの治療、腫瘍成長及び／又は腫瘍細胞増殖の抑制に使用される、請求項１－１７のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質、請求項１８－２６のいずれか一項に記載された融合タンパク質、請求項２７に記載された核酸分子、請求項２８に記載されたベクター、請求項２９に記載された細胞、請求項３１に記載されたキメラ抗原受容体、請求項３２に記載された遺伝子修飾された細胞及び／又は請求項３３に記載された抗体薬物複合体及び／又は請求項３４に記載された医薬組成物。
  38. 請求項１－１７のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質、請求項１８－２６のいずれか一項に記載された融合タンパク質、請求項２７に記載された核酸分子、請求項２８に記載されたベクター、請求項２９に記載された細胞、請求項３１に記載されたキメラ抗原受容体、請求項３２に記載された遺伝子修飾された細胞及び／又は請求項３３に記載された抗体薬物複合体及び／又は請求項３４に記載された医薬組成物を投与することを含む、ＰＤ－Ｌ１及び又はＣＤ８０とＰＤ－１の結合を抑制する方法。
  39. 請求項１－１７のいずれか一項に記載された単離された抗原結合タンパク質、請求項１８－２６のいずれか一項に記載された融合タンパク質、請求項２７に記載された核酸分子、請求項２８に記載されたベクター、請求項２９に記載された細胞、請求項３１に記載されたキメラ抗原受容体、請求項３２に記載された遺伝子修飾された細胞及び／又は請求項３３に記載された抗体薬物複合体及び／又は請求項３４に記載された医薬組成物を含む、
    好ましくは、前記キットが（ｉ）投与装置、及び／又は（ｉｉ）使用説明書をさらに含む、キット。
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