TW201023891A - Anti-ferroportin 1 monoclonal antibodies and uses thereof - Google Patents

Anti-ferroportin 1 monoclonal antibodies and uses thereof Download PDF

Info

Publication number
TW201023891A
TW201023891A TW098140185A TW98140185A TW201023891A TW 201023891 A TW201023891 A TW 201023891A TW 098140185 A TW098140185 A TW 098140185A TW 98140185 A TW98140185 A TW 98140185A TW 201023891 A TW201023891 A TW 201023891A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
ser
thr
val
gly
leu
Prior art date
Application number
TW098140185A
Other languages
English (en)
Inventor
Donmienne Doen Mun Leung
Peng Luan
Joseph Vincent Manetta
Ying Tang
Derrick Ryan Witcher
Original Assignee
Lilly Co Eli
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lilly Co Eli filed Critical Lilly Co Eli
Publication of TW201023891A publication Critical patent/TW201023891A/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

201023891 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種結合轉鐵蛋白l(FPNl)之抗體及其在 治療貧血中的用途。 【先前技術】 鐵為許多細胞功能所需之必需微量元素。在哺乳動物 中，身體之鐵供應經調節以使身體之鐵需求與十二指腸腸 上皮細胞之鐵吸收含量相匹配。轉運鐵穿過腸上皮細胞之 基底側膜（basolateral membrane)被認為由轉鐵蛋白1(亦稱 為鐵調節轉運體1(IREG_1)、金屬轉運體蛋白UMTP1)及 SLC40A1)(下文稱為FPN1)介導。 現已知FPN1為海帕西啶（hepcidin)之受體，海帕西啶為 一種肝應答鐵儲存及發炎所產生之多肽激素。成熟海帕西 啶與FPN1結合引起FPN1内化及降解，從而阻止細胞鐵輸 出，且其為全身鐵體内平衡之主要控制因素。 美國專利第7,166,448號尤其揭示編碼人類FPN1蛋白之 核苷酸序列、具有鐵轉運功能之人類FPN1蛋白，及針對 由人類FPN1之C末端之19個胺基酸組成之肽所產生的兔多 株抗血清。PCT國際專利申請公開案第W02009/094551號 描述轉鐵蛋白Mab及使用其治療鐵體内平衡相關病症的方 法。更特定言之，W02009/094551描述針對人類FPN1蛋白之 各種抗原決定基的齧齒動物單株抗體及完全人類單株抗體。 鑒於鐵轉運中涉及FPN1且FPN1突變與鐵體内平衡相關 疾病有關，故對需要治療上適用之FPN1拮抗劑，該等拮 144516.doc 201023891 抗劑應以高親和力與FPN1之細胞外抗原決定基結合，且 在結合後抑制成熟海帕西啶介導之FPN1内化，從而維持 或增強鐵自細胞内儲存之輸出。此外，用Mab或其抗原結 合片段治療性靶向FPN1以達到抑制FPN1與成熟海帕西 啶之細胞外抗原決定基結合之目的，必須足夠精確地完 成，以便在抗體與其標靶結合之後不會明顯干擾細胞鐵 之流出及/或誘導内化。此外，意欲用於人類醫學療法中 的抗FPN抗體必須展現足以允許其用於治療用途之藥物 動力學及藥效學特徵，包括活體内穩定性。本文中所揭 示之各種抗人類FPN1抗體結合人類FPN1，且詳言之，其 403SPFEDIRSRFIQGESITPTK422(SEQ ID NO: 12)片段；且 具有此等及其他所要效應及特徵，從而使其成為適用於治 療及/或預防需要該治療之個體之貧血的藥劑。 【發明内容】 因而，在各種態樣中，本發明提供： 單株抗體或其抗原結合片段，其在包含屬於如SEQ ID NO: 12中所示之胺基酸序列中之胺基酸之抗原決定基處結 合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列組成之人類FPN1及 其片段。 在一些實施例中，本發明提供Mab或其抗原結合片段， 其包含分別包含 SEQ ID NO: 37、129、22、107、118 及 120中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及HCDR3，且Mab或抗原結合片段在包含 屬於如SEQ ID NO: 12中所示之胺基酸序列之胺基酸的抗 144516.doc 201023891 原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列組成 的人類FPN 1，其中如由表面電漿共振（SPR)對於Mab較佳 在25°C下及對於Fab較佳在37°C下所測定，KD為約100 nM 或100 nM以下。 在一些實施例中，Mab或其抗原結合片段包含六個選自 由以下組成之群的CDR : ⑴分別包含SEQ ID NO: 20、32、33、30、31及19中所 示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、 ❹ HCDR2及 HCDR3 ; (ii) 分別包含 SEQ ID NO: 42、32、33、30、43 及 19 中 所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、 HCDR2及 HCDR3 ; (iii) 分別包含 SEQ ID NO: 42、27、22、23、41 及 19 中 所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、 HCDR2及 HCDR3 ; φ (iv)分別包含 SEQ ID NO: 42、32、33、23、41 及 19 中 所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、 HCDR2及 HCDR3 ; * (v)分別包含 SEQ ID NO: 20、21、22、17、18 及 19 中 . 所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、 HCDR2 及 HCDR3 ; (vi)分別包含SEQ ID NO: 20、27、29、23、24 及 19 中 所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、 HCDR2及 HCDR3 ; 144516.doc 201023891 (vii) 分別包含 SEQ ID NO: 37、27、22、23、41 及 19 中 所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、 HCDR2及 HCDR3 ; (viii) 分別包含 SEQ ID NO: 170、171、172、182、173 及19中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及 HCDR3 ; (ix) 分別包含 SEQ ID NO: 3 7、127、22、23、116及 19 中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及 HCDR3 ; (X)分別包含 SEQ ID NO: 37、125、22、23、110 及 19 中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及 HCDR3 ; (xi) 分別包含 SEQ ID NO: 37、122、22、23、110 及 19 中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及 HCDR3 ; (xii) 分別包含 SEQ ID NO: 37、129、22、107、118 及 120中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及 HCDR3 ; (xiii) 分別包含 SEQ ID NO: 37、128、22、105、41 及 119中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及 HCDR3 ; (xiv) 分別包含 SEQ ID NO: 37、174、22、175、176 及 120中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及 HCDR3 ; 144516.doc -6- 201023891 (xvi) 分別包含 SEQ ID NO: 37、128、22、105、117 及 19中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及 HCDR3 ;及 (xvii) 分別包含 SEQ ID NO: 37、177、22、23、112 及 19中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及HCDR3 ;且在由屬於選自由以下組成 之群之胺基酸序列之胺基酸組成或基本上由該（等）胺基酸 組成的抗原決定基處結合由SEQ ID NO·· 1中所示之胺基酸 序列組成之人類FPN1 : a) 4〇3SPFEDIRSRFIQGESITPTK422(SEQ ID NO: 12)； b) 406EDIRSRFIQGESIT419(SEQ ID NO: 13); c) 409RSRFIQGESITPTK422(SEQ ID NO: 14); d) 4〇3SPFEDIRSRFIQG4i5(SEQ ID NO: 15)； e) 4〇9RSRFIQGESIT419(SEQ ID NO: 16);及 f) 409RSRFIQG415(SEQ ID NO: 95)， 如由SPR對於Mab較佳在25艺下及對於Fab較佳在37°C下所 測定，KD為約100 nM或100 nM以下。 在特定實施例中，Mab或其抗原結合片段抑制海帕西啶 誘導之人類FPN1之内化及/或降解，從而維持個體（較佳人 類個體）之1)自細胞中轉運出之鐵；2)血清鐵含量；3)網狀 細胞計數；4)紅血球計數；5)血紅素；及/或6)血球比容， 或與該個體在無該Mab或其抗原結合片段存在時相比，使 該等因素增加至少約10%。 在另一態樣中，提供聚核苷酸，其包含編碼本發明之 144516.doc 201023891 抗-人類FPN1 Mab或其抗原結合片段之核苷酸序列。 在另一態樣中，提供醫藥組合物，其包含本文中所述之 任何Mab或其抗原結合片段，及醫藥學上可接受之載劑、 稀釋劑或賦形劑。亦提供：^本文中所揭示之Mab或其抗 原結合片段在療法（較佳治療或預防貧血之療法）中的用 途，2)本文中所揭示之Mab或其抗原結合片段在組合療法 (較佳治療或預防貧血之組合療法）中的用途；3)本文中所 揭不之Mab或其抗原結合片段用於治療或預防貧血、維持 或增加個體（較佳人類）之血清鐵含量、網狀細胞計數、紅 血球計數、血紅素及/或血球比容的用途；4)本文中所揭示 之Mab或其抗原結合片段用於製造供治療或預防貧血、維 持或增加個體（較佳人類）之血清鐵含量、網狀細胞計數、紅 血球计數、血紅素及/或血球比容之藥劑的用途；及5)本文 中所揭示之Mab或其抗原結合片段在製造用於治療或預防貧 血、增加人類之血清鐵含量、網狀細胞計數、紅血球計 數、血紅素及/或血球比容之組合療法之藥劑中的用途其 中該藥劑將與一或多種ESA或慣用於治療貧血、維持或增加 人類之血清鐵含量、網狀細胞計數、紅血球計數、血紅素 及/或血球比容的其他治療劑或治療性處理組合投與。 在又一態樣中，提供：1)維持或增加個體（較佳人類）之 血π鐵含量、網狀細胞計數、紅血球計數、血紅素及/或 血球比容之方法，該方法包含向有需要之個體投與有效量 的本文所揭不之Mab或其抗原結合片段；2)治療或預防貧 血（包括（但不限於）慢性病貧血、癌症貧血及發炎貧血）之 144516.doc 201023891
方法，該方法包含向有需要之個體（較佳人類）投與有效量 的本文所揭示之Mab或其抗原結合片段；3)治療或預防貧 血（包括（但不限於）慢性病貧血、癌症貧血及發炎貧血）之 方法，該方法包含向有需要之個體（較佳人類患者）投與有 效量的本文所揭示之Mabs*其抗原結合片段之組合或本 文所揭示之至少一種Mab與至少一種抗原結合片段之混合 物；及4)上述方法丨至3中之任一種，進一步包含向該人類 患者投與ESA或其他投與以維持或增加人類之血清鐵含 量、網狀細胞計數、紅血球計數、血紅素及/或血球比容 的治療劑或治療性處理。 在又態樣中，提供抑制成熟海帕西咬所誘導之ρρΝ1 之内化及降解的方法，該等方法包含使該1與有效量 的至少一種本文所揭示之Mab或其抗原結合片段接觸。 亦k供種降低成熟人類海帕西嚏與人類fpn 1結合的 方法，該方法包含使該人類FPN1與有效量的至少一種本 文所揭示之Mab及/或其抗原結合片段接觸。 亦提供一種減少表現FPN1蛋白之細胞所内化之”川蛋 白之量的方法’該方法包含向有需要之人類患者投與有效 量的至少一種本文所揭示之Mabs&/或其抗原結合片段。 【實施方式】 本文中使用以下縮寫：BCA:聯辛可寧酸 acid) ; BSA :牛血清白蛋白；CDR :互補決定區；dtt : 良伊格爾培養基 D-PBS :杜爾貝科 一硫蘇糖醇；DMEM :杜爾貝科改 (Dulbecco s Modified Eagle's medium)； 144516.doc 201023891 磷酸鹽緩衝鹽水；EDTA :乙二胺四乙酸；ELISA :酶聯免 疫吸附檢定；ESA :紅血球生成刺激劑；FAC :擰檬酸鐵 銨；FBS :胎牛血清；Fe:NTA :氮基三乙酸鐵；FLU :螢 光單位；GFP :綠色螢光蛋白；I.V.:靜脈内；IPTG :異 丙基β-D-l-硫代哌喃半乳糖苷；IMAC :固定金屬離子親 和力層析；Mab :單株抗體；Mabs :多個單株抗體； OPD :鄰苯二胺二鹽酸鹽；PBS :磷酸鹽緩衝鹽水； PBST :磷酸鹽緩衝鹽水Tween-20 ; SDS :十二烷基硫酸 鈉；TBS : Tris緩衝鹽水；Tris :參（羥曱基）胺基曱烷； Triton-X : 4-(1,1,3,3-四曱基丁基）苯基-聚乙二醇第三辛基 苯氧基聚乙氧基乙醇聚乙二醇第三辛基苯基醚；Tween-20 : 聚山 梨醇酯 20 。 本發明之Mab或其抗原結合片段結合如下之抗原決定 基：其包含屬於具有如SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列 之人類FPN1多肽之胺基酸403-422(SEQ ID NO: 12)的胺基 酸，或基本上由該（等）胺基酸組成，或由該（等）胺基酸組 成。在較佳實施例中，此等抗體或其抗原結合片段抑制成 熟人類海帕西啶誘導之人類FPN1之内化及/或降解，從而 活體外及活體内增加自細胞中轉運出之鐵，且活體内提高 血清鐵含量。舉例而言，在較佳實施例中，本發明抗體顯 著降低成熟海帕西啶誘導之Caco-2細胞（一種活體外内源 性表現FPN1之人類腸上皮細胞細胞株）内之鐵蛋白積聚（參 看實例5)。 呈天然存在狀態之全長抗體為包含經由二硫鍵相互連接 144516.doc -10- 201023891 之2個重（Η)鏈及2個輕（L)鏈的免疫球蛋白分子。各鏈之胺 基末端部分包括具有約100-110個或更多胺基酸的可變 區，該可變區主要負責經由其中所含之CDR識別抗原。各 鏈之羧基末端部分界定主要負責效應功能（effector function)之怪定區。 如本文中所使用之術語「CDR」意欲意謂可見於重鏈與 輕鏈多肽之可變區中之非鄰近抗原組合位點。Kabat等 人，J. Biol. Chem. 252，6609-6616 (1977) ; Kabat等人， Sequences of protein of immunological interest, (1991)；及 Chothia等人，J. Mol· Biol· 196:901-917 (1987)及MacCallum 等人，J. Mol. Biol., 262:732-745 (1996)已描述此等特定 區，其中當該等定義相互比較時，其包括重疊之胺基酸殘 基或胺基酸殘基之子集。 CDR中間雜有稱為構架區（「FR」）之更保守區。各輕鏈 可變區（LCVR)及重鏈可變區（HCVR)由3個CDR及4個FR構 成，自胺基末端至羧基末端按如下順序排列：FR1、 CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。輕鏈之3個 CDR 稱為「LCDR1、LCDR2及LCDR3」，且重鏈之3個CDR稱為 「HCDR1、HCDR2及HCDR3」。CDR含有大部分與抗原形 成特異性相互作用之殘基。LCVR及HCVR區内CDR胺基酸 殘基之編號及定位係根據眾所周知的規定（例如 Kabat(1991)及/或 Chothia(1987))進行。 如本文中所使用之短語「Kabat編號」為此項技術所認 可且係指對抗體之重鏈區及輕鏈區中比其他胺基酸殘基更 144516.doc 201023891 具變異性（亦即，高變異性）之胺基酸殘基進行編號的系統 (Kabat等人，Ann. NY Acad. Sci·，190:382-93 (1971) ; Kabat 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest第 5 版，U.S. Department of Health and Human Services, NIH 出 版號 91-3242 (1991))。 如本文中所使用，術語「單株抗體」（Mab)係指衍生自 單一複本或純系（包括例如任何真核純系、原核純系或噬 菌體純系）的抗體或其抗原結合片段，而非產生其之方 法。本發明之Mab較佳以均質或實質上均質之群體形式存 在。完全Mab含有2個重鏈及2個輕鏈。該等Mab之「抗原 結合片段」包括例如Fab片段、Fab1片段、F(ab')2#段及單 鏈Fv片段。本發明之單株抗體及其抗原結合片段可利用例 如重組技術、噬菌體呈現技術、合成技術（例如CDR移植） 或該等技術之組合，或此項技術已知之其他技術來產生。 除非另外指示，否則術語「抗體」或其語法變化形式係 指Mab、其抗原結合片段以及其組合，包括例如Fab之組 合及Mab與Fab之組合。展現與本發明抗體類似之功能性 質的其他抗體可利用習知方法產生。舉例而言，可用例如 FPN1表現細胞、FPN1或其片段使小鼠免疫，可回收及純 化所得抗體，且確定其是否具有與本文中所揭示之抗體相 似或相同之結合、藥物動力學及功能性質可由下文實例3 至9中所揭示之方法來評定。亦可利用此項技術中眾所周 知的習知方法製備抗原結合片段。在此項技術中亦眾所周 知產生及純化抗體及抗原結合片段的方法。 144516.doc -12- 201023891 本發明亦提供經分離之聚核苷酸，其包含編碼Mab或其 抗原結合片段之核苷酸序列。在特定實施例中，本發明亦 提供經分離之聚核苷酸，其包含編碼以下之核苷酸序列： i)具有如 SEQ ID NO: 50、51、52、150、152、156、160 及 164中所示之胺基酸序列的重鏈多肽；及/或具有如SEq ID NO: 53、54、55、151、154、158、162及 166中所示之 胺基酸序列的輕鏈多肽。
在另一實施例中’本發明提供重組表現載體，其包含編 碼Mab或其抗原結合片段之聚核苷酸。在特定實施例中， 本發明亦提供重組表現載體，其包含編碼以下之聚核苷 酸：⑴具有如 SEQ ID NO: 50、51、52、150、152、156、 160及164中所示之胺基酸序列的重鏈多肽；及/或⑴具有 如 SEQ ID NO: 53、54、55、151、154、158、162及 Μ 中 所示之胺基酸序列的輕鏈多肽。 當用於本文時，術言吾「海帕西唆」係指已知存在於哺乳 動物中之任何形式之㈣㈣蛋白。當用於本文時，術狂 「成熟海帕西咬」係指表現於魏動物中之任何具生物活 性之成熟形式的海帕西啶蛋白。當用於本文時，短任「人 類海帕西唆」係、指存在於人類中之^何形式之海^唆蛋 白。當用於本文時，短語「成孰人2 成熟人頰海帕西啶」係指已知 存在於人類中之任何且生物、.壬 H、㈣活性之成熟形式的海帕 白。成熟人類海帕西啶」較佳 人類海帕西咬，
一種具有如SEQ ID NO: 91中斛- J 帕西咬之成熟形式。 類海 144516.doc -13· 201023891 提及成熟海帕西啶多肽（諸如海帕西啶_25)時，術語「生 物活I1 生」包括（但不限於）成熟海帕西咬與其受體FpN 1之特 異性結合、成熟海帕西啶之一或多種Fpm介導之功能， 諸如a)成熟海帕西啶誘導之卯川之内化及/或降解（參看例 如 Nemeth，E.等人，306:2〇9〇_2〇93,（2〇〇4));…成 熟海帕西销FPN1介導之以下因素之調節：_流出；⑴ 血清鐵含量；iii)網狀細胞計數；iv)紅血球計數；V)▲紅 素3量，VI)血球比容；vu)海帕西啶多肽表現含量；及/或 Viii)海帕西啶多肽之組織分布。 短語「人類經工程改造之抗體」係指本文中所揭示之某 些抗趙’以及具有與本文中所揭示之抗體相似的根據本發 明之結合及功能性質且具有實質上為人類的或完全為人類 的環繞衍生自本文中所揭示之非人類抗體或其抗原結合片 段之CDR的構架區的抗體。「構架區」或「構架序列」係 指構架區1至4中之任-者。本發明所涵蓋之人類經工程改 造之抗體及其抗原結合片段包括如下分子：在該等分子中 構架區!至4中之任何一或多者實質上或完全為人類的，亦 即’在該等分子中存在個別實質上或完全為人類的構架區i 至4之任何可能之組合。舉例而言，此包括如下分子：在該 等分子中構架區1及構架區2、構架區!及構架區3、構架區 1、2及3等實質上或完全為人類的。實質上為人類的構 與已知之人類生殖系構架序列具有至少約8〇%之序列二 性的構架。"上為人類的構架較佳與已知之人類生殖系 構架序列具有至少約85%、約9〇%或約抓之序列—致性’、 144516.doc -14- 201023891 完全人類構架為與已知之人類生殖系構架序列相同的構 架。人類構架生殖系序列可經由ImMunoGeneTics(IMGT) 之網站 http://imgt.cines.fr獲得，或自 JTze Facts Book, Marie-Paule Lefranc 及 Gerard Lefranc, Academic Press，2001，ISBN 012441351獲得。舉例而言，生殖系輕鏈 構架可選自由以下組成之群：All、A17、A18、A19、 A20 、 A27 、 A30 、 LI 、 Lll 、 L12 、 L2 、 L5 、 L15 、 L6 、 L8、Oi2、02及08 ;且生殖系重鏈構架區可選自由以下組 ❹ 成之群：¥112_5、乂112-26、¥112-70、¥113-2()、¥113-72、¥111· 46、VH3-9、VH3-66、VH3-74、VH4-31、VH1-18、VH1-69、 VH3-7 ' VH3-11 ' VH3-15 ' VH3-21 ' VH3-23 ' VH3-30 ' VH3-48、VH4-39、VH4-59及VH5-51。較佳地，生殖系輕鏈構架 係選自由02、018及L12、L1組成之群，且生殖系重鏈構 架區係選自由Vm-69、VH1-18或VH1-46組成之群。更佳 地，生殖系輕鏈構架係選自由02及L1組成之群，且生殖系 φ 重鏈構架係選自由VH1-69及VH1-18組成之群。最佳地， 生殖系輕鏈構架為02且生殖系重鏈構架區為VH1-69。 除本文中所揭示之人類經工程改造之抗體以外，可使用 若干不同方法來產生展現與本發明抗體相似之功能性質的 . 人類經工程改造之抗體。可使用本文中所揭示之特異性抗 體作為模板或親本抗體來製備其他抗體。在一種方法中， 將親本抗體之CDR移植至與該親本抗體構架具有高序列一 致性的人類構架中。新構架之序列一致性一般應為與親本 抗體中之相應構架之序列至少約80% '至少約85%、至少 144516.doc -15- 201023891 約90%、至少約95%或至少約99% —致。此移植可導致結 合親和力與親本抗體相比降低。若情況如此，則可基於 Queen等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:2869 (1991)所 揭示之特定準則使該構架在某些位置處回復突變成親本構 架。描述適用於使小鼠抗體人類化之方法的其他參考文獻 包括美國專利第4,816,397號、第5,225,539號及第5,693,761 號；如 Levitt, J·，Mol. Biol. 168:595-620 (1983)中所述之電 腦程式ABMOD及ENCAD ;及Winter及其合作者（Jones等 人，Nature 321:522-525 (1986) ; Riechmann等人，Nature， 332:323-327 (1988);及 Verhoeyen 等人，Science， 239:1534-1536(1988))之方法。 考慮用於回復突變之殘基可如下進行鑑別： 當胺基酸屬於以下類別時，所使用之人類生殖系序列 (「受體構架」）之構架胺基酸經親本抗體之構架（「供體構 架」）之構架胺基酸置換： (a) 受體構架之人類構架區中的胺基酸在該位置處對 人類構架而言並不常見，而供體免疫球蛋白中之相應胺 基酸在該位置處對人類構架而言為典型的； (b) 胺基酸之位置緊鄰一個CDR;或 (c) 在三維免疫球蛋白模型中，構架胺基酸之任何側 鏈原子均在CDR胺基酸之任何原子的約5-6埃内（中心至 中心）。 當受體構架之人類構架區中的各胺基酸及供體構架中之 相應胺基酸在該位置處對人類構架而言一般不常見時，可 144516.doc -16- 201023891 用在該位置處對人類構架而言典型之胺基酸置換該胺基 酸。此回復突變準則使得能夠恢復親本抗體之活性。 產生展現與本文中所揭示之抗體相似之功能性質之人類 經工程改造之抗體的另一方法包括：在不改變構架的情況 下在移植之CDR内隨機使胺基酸突變，且篩選結合親和力 及其他功能性質與親本抗體一樣好或比親本抗體好之所得 分子。亦可在各CDR内之各胺基酸位置處引入單一突變， ^ 接著評定該等突變對結合親和力及其他功能性質的效應。可 組合產生改良性質之單一突變以評定其彼此組合時之效應。 此外’亦有可能為上述兩種方法之組合。CDR移植後， 除了在CDR中引入胺基酸變化外，亦可使特異性構架區回 復突變。此方法描述於Wu等人，乂 Mo/.价〇/. 294:151-162 (1999)中。構架内之胺基酸取代較佳侷限於本文中所揭示 之輕鏈及/或重鏈構架區（亦即，圖2_5中所示之構架區）中 之任何一或多者内之1、2或3個位置。CDR内之胺基酸取 φ 代較佳侷限於3個輕鏈及/或重鏈CDR中之任何一或多者内 的1、2或3個位置。本文亦預期所述構架區及cdr内之各 種變化之組合》在本發明之此態樣的特定實施例中，該等 -人類經工程改造之Mab或其抗原結合片段之所有輕鏈及重 - 鏈可變區構架區完全為人類的。 下表1A及1B描繪本發明之較佳抗體或其抗原結合片段 之CDR胺基酸序列及共同胺基酸序列。下表2 a及2b描繪 本發明之更佳抗體或其抗原結合片段之CDR胺基酸序列及 共同胺基酸序列。 144516.doc 201023891 表ΙΑ Fab HCDR1 HCDR2 HCDR3 34A9 GYAFTNFLIE TINPETGGTKYNEKFRG EFFDY (SEQIDNO: 17) (SEQ ID NO: 18) (SEQ ID NO: 19) 1B1 GYAFTSFLIE (SEQIDNO: 23) (SEQ ID NO: 18) (SEQ ID NO: 19) 1D2 (SEQIDNO: 17) TINPRTGGTKYNEKFRG (SEQ ID NO: 24) (SEQ ID NO: 19) 1E3 (SEQ ID NO: 17) TINPKTGGTKYNEKFRG (SEQ ID NO: 25) (SEQ ID NO: 19) 2A6 (SEQ ID NO: 17) TINPETGGTKYNAKFRG (SEQ ID NO: 26) (SEQ ID NO: 19) 2H10 (SEQ ID NO: 17) (SEQ ID NO: 18) (SEQ ID NO: 19) 3A8 (SEQ ID NO: 17) (SEQ ID NO: 18) (SEQ ID NO: 19) 2G9 (SEQ ID NO: 17) (SEQ ID NO: 18) (SEQ ID NO: 19) 1A3 (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 25) (SEQ ID NO: 19) 2E2 (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 24) (SEQ ID NO: 19) 2A5 (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 25) (SEQ ID NO: 19) 2B2 (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 25) (SEQ ID NO: 19) 1D1 (SEQ ID NO: 23) TINPKTGGTKYNAKFRG (SEQ ID NO: 34) (SEQ ID NO: 19) 1E2 (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 24) (SEQ ID NO: 19) hu-1 (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 24) (SEQ ID NO: 19) 1G9 (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 24) (SEQ ID NO: 19) huGl (SEQ ID NO: 23) TSNPRTGGTKYNEKFRG (SEQ ID NO: 35) (SEQ ID NO: 19) huA2 (SEQ ID NO: 23) TINPRTGGTKYKEKFRG (SEQ ID NO: 36) (SEQ ID NO: 19) huA3 (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 24) (SEQ ID NO: 19) huB3 (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 24) (SEQ ID NO: 19) huD3 (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 24) (SEQ ID NO: 19) huH5 (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 24) (SEQ ID NO: 19) huH6 (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 24) (SEQ ID NO: 19) 1D5 (SEQ ID NO: 23) TSNPRTGGTKYKEKFRG (SEQ ID NO: 41) (SEQ ID NO: 19) 2G5 (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 41) (SEQ ID NO: 19) 3D8 (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 41) (SEQ ID NO: 19) *C1 GYAFTXiFLIE (SEQ ID NO: 30) TINPX2TGGTKYNX3KFRG (SEQ ID NO: 31) (SEQ ID NO : 19) *C2 (SEQ ID NO: 30) TX6NPX2TGGTKYX7X3KFRG (SEQ ID NO: 43) (SEQ ID NO: 19) *C3 (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 41) (SEQ ID NO: 19) *C4 (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 41) (SEQ ID NO: 19) *C5 (SEQ ID NO: 30) (SEQ ID NO: 43) (SEQ ID NO: 19)
144516.doc 18- 201023891
表IB
Fab LCDR1 LCDR2 LCDR3 34A9 RASKSISKYLA AGSTLHS QQHNEYPYT (SEQIDNO: 20) (SE〇 ID NO: 21) (SEO ED NO: 22) 1B1 (SEQIDNO: 20) (SEQ ID NO: 21) (SE〇 ID NO: 22) 1D2 (SEQIDNO: 20) (SE〇 ID NO: 21) (SE〇 ID NO: 22) 1E3 (SEQIDNO: 20) (SE〇 ID NO: 21) (SE〇 ID NO: 22) 2A6 (SEQIDNO: 20) (SE〇 ID NO: 21) (SE〇 ID NO: 22) 2H10 (SEQIDNO: 20) AGSKLHS (SE〇 ID NO: 27) (SEQ ID NO: 22) 3A8 (SEQIDNO: 20) AGSRLHS (SE〇 ID NO: 28) (SEQ ID NO: 22) 2G9 (SEQIDNO: 20) AGSTLHS (SEO ID NO: 21) FQHNEYPYT (SE〇 ID NO: 29) 1A3 (SEQIDNO: 20) (SE〇 ID NO: 21) (SE〇 ID NO: 22) 2E2 (SEQIDNO: 20) (SEQ ID NO: 21) (SE〇 ID NO: 22) 2A5 (SEOIDNO: 20) (SE〇 ID NO: 27) (SE〇 ID NO: 22) 2B2 (SEQ ID NO: 20) (SE〇 ID NO: 27) (SE〇 ID NO: 29) 1D1 (SEOIDNO: 20) (SE〇 ID NO: 21) (SE〇 ID NO: 29) 1E2 (SE〇 ID NO: 20) (SEO ID NO: 21) (SE〇 ID NO: 29) 1G9 (SE〇IDNO:20) (SE〇 ID NO: 27) (SE〇 ID NO: 29) hu-1 (SEQIDNO: 20) (SE〇 ID NO: 27) (SEQ ID NO: 29) huGl (SEQIDNO: 20) (SE〇 ID NO: 27) (SE〇 ID NO: 29) huA2 (SEQIDNO: 20) (SE〇 ID NO: 27) (SE〇 ID NO: 29) huA3 RASKSISKYTA (SE〇 ID NO: 37) (SEQ ID NO: 27) (SEQ ID NO: 29) huB3 RASKSISKYSA (SE〇 ID NO: 38) (SEQ ID NO: 27) (SEQ ID NO: 29) huD3 RASKSISKYAA (SE〇 ID NO: 39) (SEQ ID NO: 27) (SEQ ID NO: 29) huHS (SEO ID NO: 20) (SE〇 ID NO: 27) (SEO ID NO: 22) huH6 (SEQ ID NO: 20) (SEQ ID NO: 27) HQHNEYPYT (SEO ID NO: 40) 1D5 (SEO ID NO: 39) (SEQ ID NO: 27) (SE〇 ID NO: 22) 2G5 (SE〇 ID NO: 38) (SE〇 ID NO: 27) (SE〇 ID NO: 22) 3D8 (SEO ID NO: 37) (SEQ ID NO: 27) (SEO ID NO: 22) *C1 (SEQ ID NO: 20) AGSX4LHS (SEQ ID NO: 32) XsQHNEYPYT (SE〇 ID NO: 33) *C2 RASKSISKYXsA (SE〇 ID NO: 42) (SEQ ID NO: 32) (SEQ ID NO: 33) *C3 (SE〇 ID NO: 42) (SEQ ID NO: 27) (SEO ID NO: 22) *C4 (SE〇 ID NO: 42) (SEQ ID NO: 32) (SE〇 ID NO: 33) *C5 (SE〇 ID NO: 42) (SE〇 ID NO: 32) (SE〇 ID NO: 33) *表1A及IB，共同序列1-5(C1-C5)，其中乂丨為]^或S ; X2為E、K 或R ; Χ3為Ε或A ; Χ6為S或I ; Χ7為Ν或Κ ; Χ4為Τ、Κ或R ; Χ5為 F、Η、Q ; Χ8為 L、Τ、S 或 Α。 144516.doc -19- 201023891
表2A
Fab HCDR1 HCDR2 HCDR3 3D8 GYAFTSFLIE TSNPRTGGTKYKEKFRG EFFDY (SEOIDNO: 23) (SEQ ID NO: 41) (SEQ ID NO: 19) 1G9 (SEQIDNO: 23) (SEQ ID NO: 24) (SEQ ID NO: 19) 2G2 GRAFTSFLIE (SEQIDNO: 103) (SEQ ID NO: 41) (SEQ ID NO: 19) 2A1 GKAFTSFLIE (SEQIDNO: 104) (SEQ ID NO: 41) (SEQ ID NO: 19) 4H2 GYRFTSFLIE (SEQIDNO: 105) (SEQ ID NO: 41) (SEQ ID NO: 19) 4C2 GYAFRSFLIE (SEQIDNO: 106) (SEQ ID NO: 41) (SEQ ID NO: 19) 4A11 (SEQIDNO: 23) TSNPRTRGTKYKEKFRG (SEQ ID NO: 108) (SEQ ID NO: 19) 5A2 (SEQIDNO: 23) TSNPRTGRTKYKEKFRG (SEQ ID NO: 109) (SEQ ID NO: 19) 4A10 (SEQIDNO: 23) TSNPRTGGRKYKEKFRG (SEQ ID NO: 110) (SEQ ID NO: 19) 1E3 (SEQIDNO: 23) TSNPRTGGTKYKTKFRG (SEQ ID NO: 111) (SEQ ID NO: 19) 1F10 (SEQIDNO: 23) TSNPRTGGTKYKSKFRG (SEQ ID NO: 112) (SEQ ID NO: 19) 3D1 (SEQIDNO:23) TSNPRTGGTKYKWKFRG (SEQ ID NO: 113) (SEQ ID NO: 19) 1E4 (SEQ ID NO: 23) TSNPRTGGTKYKEVFRG (SEQ ID NO: 114) (SEQ ID NO: 19) 4H6 (SEQIDNO: 23) TSNPRTGGTKYKEKFRR (SEQ ID NO: 115) (SEQ ID NO: 19) 1G3 (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 41) EFFVY (SEQ ID NO: 119) 1B5 (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 41) (SEQ ID NO: 19) L2.2 (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 41) (SEQ ID NO: 19) L2.6 (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 41) (SEQ ID NO: 19) 7C8 (SEQ ID NO: 23) (SE〇 ID NO: 41) (SEQ ID NO: 19) 6H4 (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 41) (SEQ ID NO: 19) 7E4 (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 41) (SEQ ID NO: 19) Combi-11 (SEQ ID NO: 23) TSNPRTGRTKYKSKFRG (SEQ ID NO: 116) (SEQ ID NO: 19) 4A10-3 (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 110) (SEQ ID NO: 19) L2.2-4 (SE〇 ID NO: 23) (SEQ ID NO: 110) (SEQ ID NO: 19) 1F8 GYRFTSFLIE (SEQ ID NO: 105) TSNPRTGRTKYKIXFRG (SEQ ID NO: 117) (SEQ ID NO: 19) 1B7 GYRFTSFLIE (SEQ ID NO: 105) (SEQ ID NO: 41) (SEQ ID NO: 119) COM11GY (SEQ ID NO: 23) (SEQ ID NO: 112) (SEQ ID NO: 19) 共同序列6* GX!X2FX3SFLIE TSNPRTX4X5X6KYKX7X8FRX9 EFFX10Y (SEQ ID NO: 107) (SEQ ID NO: 118) (SEQ ID NO: 120)
144516.doc •20- 201023891
表2B
Fab LCDR1 r LGDR2 LCDR3 3D8 RASKSISKYTA AGSKLHS QQHNEYPYT (SEQIDNO: 37) (SEQ ID NO: 27) (SEQ ID NO: 22) 1G9 (SEQ ID NO: 20) r (SEQ ID NO: 27) (SEQ ID NO: 29) 2G2 (SEQ ID NO: 37) (SEQ ID NO: 27) (SEQ ID NO: 22) 2A1 (SEQ ID NO: 37) (SEQ ID NO: 27) (SEQ ID NO: 22) 4H2 (SEQ ID NO: 37) (SEQ ID NO: 27) (SEQ ID NO: 22) 4C2 (SEQ ID NO: 37) (SEQ ID NO: 27) (SEQ ID NO: 22) 4A11 (SEQ ID NO: 37) (SEQ ID NO: 27) (SEQ ID NO: 22) 5A2 (SEQ ID NO: 37) (SEQ ID NO: 27) (SEQ ID NO: 22) 4A10 (SEQ ID NO: 37) (SEQ ID NO: 27) (SEQ ID NO: 22) 1E3 (SEQ ID NO: 37) (SEQ ID NO: 27) (SEQ ID NO: 22) 1F10 (SEQ ID NO: 37) r (SEQ ID NO: 27) (SEQ ID NO: 22) 3D1 (SEQ ID NO: 37) (SEQ ID NO: 27) (SEQ ID NO: 22) 1£4 (SEQ ID NO: 37) (SEQ ID NO: 27) (SEQ ID NO: 22) 4H6 (SEQ ID NO: 37) (SEQ ID NO: 27) (SEQ ID NO: 22) 1G3 (SEQ ID NO: 37) (SEQ ID NO: 27) (SEQ ID NO: 22) 1B5 (SEQ ID NO: 37) AGSKRHS (SEQ ID NO: 121) (SEQ ID NO: 22) L2.2 (SEQ ID NO: 37) AGSKLRS (SEQ ID NO: 122) (SEQ ID NO: 22) L2.6 (SEQ ID NO: 37) AGSKLVS (SEQ ID NO: 123) (SEQ ID NO: 22) 7C8 (SEQ ID NO: 37) AGSKLYS (SEQ ID NO: 124) (SEQ ID NO: 22) 6H4 (SEQ ID NO: 37) AGSKLHW (SEQ ID NO: 125) (SEQ ID NO: 22) 7E4 (SEQ ID NO: 37) AGSKLHY (SEQ ID NO: 126) (SEQ ID NO: 22) Combi-11 (SEQ ID NO: 37) AGSKRHW (SEQ ID NO: 127) (SEQ ID NO: 22) 4A10-3 (SEQ ID NO: 37) (SEQ ID NO: 125) (SEQ ID NO: 22) L2.2-4 (SEQ ID NO: 37) (SEQ ID NO: 122) (SEQ ID NO: 22) 1F8 (SEQ ID NO: 37) AGSKRYY (SEQ ID NO: 128) (SEQ ID NO: 22) 1B7 (SEQ ID NO: 37) (SEQ ID NO: 128) (SEQ ID NO: 22) COM11GY (SEQ ID NO: 37) AGSKRHY (SEQ ID NO: 177) (SEQ ID NO: 22) 共同序列61 RASKSISKYTA AGSKXnXi2Xi3 QQHNEYPYT (SEQ ID NO: 37) (SEQ ID NO: 129) (SEQ ID NO: 22) 144516.doc -21 - 1 表2A及2B，共同序列6，其中又1為丫、R或K ; X2為A或R ; X3為T 或R ; Χ4為 G或 R ; Χ5為 G或R ; Χ6 為 Τ或 R ; Χ7為 Ε、Τ、S 或 W ; Χ8 為Κ或V ; Χ9為G或R ; X1(D為D或V ; 乂11為1^或R ;又12為11、R、V或 Y ;又13為8、W或Y。 201023891 本發明之更佳之抗體或抗原結合片段包含分別包含SEQ ID NO: 170、171、172、23、173及19中所示之胺基酸序 列，或分別包含 SEQ ID NO: 170、171、172、182、173 及 19中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及HCDR3。本發明之更佳之抗體或抗原 結合片段包含分別包含SEQ ID NO: 37、174、22、175、 176及120中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、 LCDR3、HCDR1、HCDR2及HCDR3。基於例示性抗-FPN1 Mab或其抗原結合片段之藥物動力學（例如參看實例11)及 藥效學（例如參看實例12)之特徵以及功能性質（例如參看實 例3(抗原決定基定位）、實例4(親和力）、實例5(活體外對 細胞中之鐵蛋白濃度的效應）、實例6(活體外對經工程改造 以表現FPN1-GFP融合蛋白之細胞結合成熟海帕西变的效 應）、實例7及實例9(活體外對海帕西啶誘導之FPN1之内化 及降解的效應）及實例8(活體内對血清鐵含量的效應）），本 發明之最佳Mab或其抗原結合片段為Mab 4A10-3、Mab L2.2-4犮Mab ComllGY或其抗原結合片段。編碼重鏈、輕 鏈、重鏈及輕鏈可變區以及Mab 34 A9、Mab 1G9、Mab 3D8、Mab Combill、Mab 4A10-3、Mab L2.2-4、Mab lB7、Mab 1F8及Mab ComllGY之CDR的胺基酸序列係藉 由引用SEQ ID NO示於下表3(a)及表3(b)中。 144516.doc -22- 201023891 表 3(a)
Mab 重鏈 HCVR HC CDR1 HC CDR2 HC CDR3 34A9 50 44 17 18 19 1G9 51 45 23 24 19 3D8 52 46 23 41 19 Combill 150 130 23 116 19 4A10-3 152 134 23 110 19 L2.2-4 156 138 23 110 19 1B7 160 146 105 41 119 1F8 164 142 105 117 19 ComllGY 179 178 23 112 19
表 3(b)
Mab 輕鏈 LCVR LC CDR1 LC CDR2 LC CDR3 34A9 53 47 20 21 22 1G9 54 48 20 27 29 3D8 55 49 37 27 22 Combi-11 151 132 37 127 22 4A10-3 154 136 37 125 22 L2.2-4 158 140 37 122 22 1B7 162 148 37 128 22 1F8 166 144 37 128 22 ComllGY 181 180 37 177 22
在一些實施例中，本文中所揭示之抗-FPN1 Mab或其抗 原結合片段可與一或多種ESA組合使用，以便與單獨投與 ESA療法相比，在以下方面提供額外益處：增加血清鐵含 量、增加血球比容、增加血紅素含量、減少輸血需要及/ 或改良貧血患者之功能狀態、生產力及生活品質。短語 「組合療法」或「組合」意謂與另一藥劑分開、同時或依 序投與本發明之抗-FPN1 Mab或其抗原結合片段，與單獨 144516.doc -23- 201023891 投與抗-FPNl Mab或其抗原結合片段相比，該另一藥劑預 定增加企清鐵含量、增加血球比容、增加血紅素含量、減 少輸血需要及/或改良貧血患者之功能狀態、生產力及生 活品質。 在一些實施例中，本文中所揭示之抗-FPNl Mab或其抗 原結合片段可代替ESA療法投與不耐受或不應答ESA療法 之患者。 短語「紅金球生成刺激劑（erythropoiesis stimulating agent/erythropoiesis stimulator)」意謂例如藉由結合紅血 球生成素受體或引起該受體二聚合，或者藉由刺激内源性 紅血球生成素表現直接或間接引起紅血球生成素受體活化 的化合物。ES A包括結合且活化紅血球生成素受體的紅血 球生成素及其變異體、類似物或衍生物；結合紅血球生成 素受體且活化該受體的抗體；或結合且活化紅血球生成素 受體的肽；或結合且活化紅血球生成素受體且分子量視情 況小於約1000道爾頓的小分子有機化合物。ESA包括（但不 限於）依伯汀a(epoetin alfa)、依伯汀β、依伯汀δ、依伯汀 ω、依伯汀ι、依伯汀ζ及其類似物、聚乙二醇化紅血球生 成素、胺基曱醯化紅血球生成素、擬肽（包括ΕΜΡ1 /赫馬德 (hematide))、擬抗體及HIF抑制劑（參看美國專利公開案第 2005/0020487號）。例示性ESA包括紅血球生成素、達依泊 汀（darbepoetin)、紅血球生成素激動劑變異體，及結合且 活化紅血球生成素受體之肽或抗體，包括美國專利申請公 開案第2003/0215444號及第2006/0040858號中所報導之化 144516.doc -24- 201023891 合物，以及此項技術中亦已知之紅血球生成素分子或其變 異體或類似物。紅血球生成素包括（但不限於）包含如SEQ ID NO: 88中所列之胺基酸序列的多肽。術語「依泊汀」 包括（但不限於）依伯汀α、依伯汀β、依伯汀δ、依伯汀ω、 依伯、依伯汀γ、依伯汀ζ及其類似物。此外，依伯汀亦 包括例如經一或多種水溶性聚合物（諸如聚乙二醇’包括 PEG-EPO-β)化學修飾之任何上述依伯汀。重組人類紅血球 生成素之例示性序列、製造、純化及用途描述於許多專利 公開案中’包括（但不限於）美國專利第4,7〇3,〇〇8號及第 4,667,016號。達依泊汀及其他紅血球生成素類似物之例示 性序列、製造、純化及用途描述於許多專利公開案中，包 括Strickland等人，91/05867，及PCT國際專利申請公開案 第 WO 95/05465號、第 WO 00/24893號及第 WO 01/81405號 中。天然存在之多肽或類似多肽之衍生物包括已經化學修 飾以例如連接水溶性聚合物（例如聚乙二醇化）、放射核種 或其他診斷或把向或治療部分之多肽。 術语「紅jk球生成活性」意謂如例如缺氧多企型小鼠檢 定（參看例如 Cotes及 Bangham，Nature, 191:1065 (1961))之 活體内檢定中所顯示的刺激紅血球生成之活性。 術《吾抗原決疋基」係指能夠在一或多個抗體之抗原結 合區處被抗體識別且結合的任何分子之部分。抗原決定基 通常由分子之化學活性表面基團（諸如胺基酸或糖側鏈）組 成，且具有特異性三維結構特徵以及特異性電荷特徵。提 供在FPN1之一級胺基酸結構（SEQ id NO: 1)之情況下的本 I44516.doc •25- 201023891 文中所揭示之人類FPN1抗原決定基。然而，一些抗原決 定基可能為不連續的，而不是連續的；此係由於胺基酸殘 基可能由於FPN1之三級或四級結構及其在此分子表面上 之所得存在方式而與彼此在空間上接近，而不是存在於連 續的肽鍵聯中。本發明之抗-FPN1 Mab或其抗原結合片段 較佳在包含屬於SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列之胺基 酸、或基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸組 成的抗原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序 列組成的人類FPN1。本發明之抗-FPN1 Mab或其抗原結合 片段更佳在包含屬於選自由SEQ ID NO: 12、13、14、 15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺基酸、或基本上由 該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸組成的抗原決定基 處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列組成的人類 FPN1。本發明之抗-FPN1 Mab或其抗原結合片段更佳在包 含屬於選自由以下組成之群之胺基酸序列的胺基酸、或基 本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸組成的抗原 決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列組成的 人類FPN1 : a) 403SPFEDIRSRFIQGESITPTK422(SEQ ID NO: 12); b) 406EDIRSRFIQGESIT419(SEQ ID NO: 13); c) 409RSRFIQGESITPTK422(SEQ ID NO: 14); d) 409RSRFIQGESIT419(SEQIDNO: 16);及 e) 409RSRFIQG415(SEQ ID NO: 95)。 抗-FPN1 Mab或其抗原結合片段最佳不結合一或多種選自 144516.doc •26- 201023891 由SEQ ID NO: 183-214組成之群的肽。 本發明抗體亦結合石蟹獼猴FPN1(SEQ ID NO: 3)，從而 有助於在一或多種靈長類動物模型中進行具有絕對臨床前 安全性及效力之治療藥物的開發研究。 短語「人類轉鐵蛋白1」或者「人類FPN1」係指表現於 人類中且具有如SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列的鐵轉 運蛋白，以及保留應答與成熟人類海帕西咬之相互作用而 # 輸出細胞鐵之能力的變異體。 在特定實施例中，本發明之抗_FPN1 Mab或其抗原結合 片段之特徵在於’在包含屬於選自由SEq ID no: 12、 13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺基酸、或 基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸組成的抗 原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列組 成的人類FPN1 ’其中如由SPR對於Mab較佳在25。(：下及對 於Fab較佳在37°C下所測定，KD小於約1〇〇 nM，小於約 ❹ 75 nM，小於約50 nM，小於約25 nM或小於約10 nM。 抗-FPN1 Mab或其抗原結合片段較佳不結合一或多種選自 由SEQ ID NO: 183-214組成之群的肽。 在特定實施例中’本發明之抗_FPN1 Mab或其抗原結合 片段之特徵在於，在包含屬於選自由SEq ID NO: 12、 13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺基酸、或 基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸組成的抗 原決定基處結合由SEQ SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列 組成的人類FPN1，其中如由SPR對於Mab較佳在25°C下及 144516.doc -27- 201023891 對於Fab較佳在37°C下所測定，KD介於約100 nM至約0.5 nM之間，較佳介於約1〇〇 nM至約〇·5 nM之間，更佳介於 約75 nM至約5 nM之間，更佳介於約50 nM至約10 nM之 間’更佳介於約15 nM至約10 nM之間，更佳介於約1〇 nM 至約0.5 nM之間，更佳介於約5 nM至約0.5 nM之間，更佳 介於約5 nM至約〇·7 nM之間’更佳介於約3 nM至約0.7 nM 之間’或最佳介於約3 nM至約1 nM之間。抗-FPN1 Mab或 其抗原結合片段較佳不結合一或多種選自由SEq ID no: 183-214組成之群的肽。 在特定實施例中，本發明之抗-FPN1 Mab或其抗原結合 片段之特徵在於，在包含屬於選自由SEq ID no: 12、 13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺基酸、或 基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸組成的抗 原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列組成 的人類FPN1，其中如由SPR對於Mab較佳在25eC下及對於 Fab較佳在37°C下所測定，針對人類轉鐵蛋白i之解離速率 (koff)介於約7.5X10·3 s·1與約lxio-4 s-i之間，較佳介於約 2.5X10·3 s_i與約lxl0-4 s-i之間，更佳介於約1χ1〇_3 ,與約 lxlO·4 s·1之間且更佳介於約5xl0-4 s-i與約1χ1〇_4，之間。 抗-FPN1 Mab或其抗原結合片段較佳不結合一或多種選自 由SEQ ID NO: 183-214組成之群的肽。 在特定實施例中，本發明之抗-FPN1 Mab或其抗原結合 片段之特徵在於，在包含屬於選自由SEQ ID NO: 12、 13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺基酸或 144516.doc -28 - 201023891 基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸組成的抗 原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列組成 的人類FPN1 ’其中如由SPR對於Mab較佳在25°C下及對於
Fab較佳在37°C下所測定，KD小於約100 nM，小於約75 nM ’小於約50 nM ’小於約25 nM或小於約10 nM，且針對 人類轉鐵蛋白1之解離速率（]^。„)介於約7· 5 xIO-3 s·1與約 1χ1〇_4 s·1之間’較佳介於約2.5xl0_3 S·1與約lxl〇-4 s·1之 間，更佳介於約lx 1〇·3 s-1與約1 xlO·4 s·1且更佳介於約 霉 5xl〇_4〆與約lxl0_4 s-i之間。抗_FpNi Mab或其抗原結合 片段較佳不結合一或多種選自由SEQ ID NO: 183-214組成 之群的狀。 在特定實施例中，本發明之抗-FPN1 Mab或其抗原結合 片段之特徵在於，在包含屬於選自由SEq ID NO: 12、 13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺基酸、或 基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸組成的抗 φ 原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列組成 的人類FPN1，其中如由SPR對於Mab較佳在25°C下及對於 Fab較佳在37°C下所測定，KD介於約100 nM至約0.5 nM之
• 間’較佳介於約100 nM至約1 nM之間，更佳介於約75 nM • 至約5 nM之間，更佳介於約50 nM至約10 nM之間，更佳 介於約1 5 nM至約1 〇 nM之間，更佳介於約1 〇 nM至約 〇·5 nM之間’更佳介於約5 nM至約0.5 nM之間，更佳介於 約5 nM至約〇_7 nM之間，更佳介於約3 nM至約0.7 nM之 間’或最佳介於約3 nM至約1 nM之間，且針對人類轉鐵蛋 144516.doc -29- 201023891 白1之解離速率（koff)介於約7.5χ10·3 與約lxlO·4 s·1之 間，較佳介於約2.5χ10·3 s·1與約ΙχΙΟ·4 s·1之間，更佳介於 約lxl0_3 s·1與約Ixl0_4 s·1之間且更佳介於約5><10_4 s·1與約 lxl(T4 s“之間。抗-FPN1 Mab或其抗原結合片段較佳不結 合一或多種選自由SEQ ID NO: 183-214組成之群的肽。 在特定實施例中，本發明之抗-FPN1 Mab或其抗原結合 片段包含分別包含SEQ ID NO: 37、129、22、107、118及 120中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及HCDR3，且在包含屬於選自由SEQ ID NO: 12、13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺 基酸、或基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸 組成的抗原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸 序列組成的人類FPN1，其中如由SPR對於Mab較佳在25°C 下及對於Fab較佳在37°C下所測定，KD小於約100 nM，小 於約75 nM，小於約50 nM，小於約25 nM或小於約10 nM。 抗-FPN1 Mab或其抗原結合片段較佳不結合一或多種選自 由SEQ ID NO: 183·214組成之群的肽。 在一些實施例中，本發明之抗-FPN1 Mab或其抗原結合 片段包含分別包含SEQ ID NO: 37、129、22、107、118及 120中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及HCDR3，且在包含屬於選自由SEQ ID NO: 12、13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺 基酸、或基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸 組成的抗原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸 144516.doc •30- 201023891 序列組成的人類FPNl，其中如由SPR對於Mab較佳在25°C 下及對於Fab較佳在37。(：下所測定，KD介於約100 nM至約 0.5 nM之間，較佳介於約1 〇〇 ηΜ至約1 nM之間，更佳介於 約75 nM至約5 nM之間，更佳介於約50 nM至約10 nM之 間，更佳介於約15 nM至約10 nM之間，更佳介於約1〇 nM 至約0.5 nM之間，更佳介於約5 nM至約0.5 nM之間，更佳 介於約5 nM至約0.7 nM之間，更佳介於約3 nM至約0.7 nM 之間’或最佳介於約3 nM至約1 nM之間。抗-FPN1 Mab或 其抗原結合片段較佳不結合一或多種選自由SEQ ID NO: 183-214組成之群的肽。 在其他實施例中，本發明提供Mab或其抗原結合片段， 其包含分別包含 SEQ ID NO: 37、129、22、107、118及 120中所示之胺基酸序列之lcDRI、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及HCDR3，且在包含屬於選自由SEq ID NO: 12、13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺 基酸、或基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸 組成的抗原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸 序列組成的人類FPN1，其中如由SPR對於Mab較佳在25〇C 下及對於Fab較佳在37C下所測定’針對人類轉鐵蛋白1之 解離速率（koff)介於約7.5X10—3 S·1與約卜10-4 s-i之間，較佳 介於約2.5X10-3 s-1與約1x10-4 s_i之間，更佳介於約1χ1〇.3， 與約lxlO·4 s·1之間且更佳介於約5x10-4 s-!與約1χ1〇·4 s•丨之 間。抗-FPN1 Mab或其抗原結合片段較佳不結合一或多種 選自由SEQ ID NO: 183-214組成之群的肽。 144516.doc -31· 201023891 在特定實施例中，本發明之抗-FPNl Mab或其抗原結合 片段包含分別包含SEQ ID NO: 37、129、22、107、118及 120中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及HCDR3，且在包含屬於選自由SEQ ID NO: 12、13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺 基酸、或基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸 組成的抗原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸 序列組成的人類FPN1，其中如由SPR對於Mab較佳在25°C 下及對於Fab較佳在37°C下所測定，KD小於約100 nM，小 於約75 nM，小於約50 nM，小於約25 nM或小於約10 nM， 且針對人類轉鐵蛋白1之解離速率（U介於約7.5xlO·3 s·1 與約1χ1(Γ4 s·1之間，較佳介於約2.5χ1(Γ3 s·1與約1χ10·4 s·1 之間，更佳介於約lxl0_3 s_1與約1χ10_4 s_1之間且更佳介於 約5xl0·4 s·1與約lxl〇_4 s·1之間。抗-FPNl Mab或其抗原結 合片段較佳不結合一或多種選自由SEQ ID NO: 183-214組 成之群的肽。
在一些實施例中，本發明之抗-FPNl Mab或其抗原結合 片段包含分別包含SEQ ID NO: 37、129、22、107、118及 120中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及HCDR3，且在包含屬於選自由SEQ ID NO: 12、13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺 基酸、或基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸 組成的抗原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸 序列組成的人類FPN1，其中如由SPR對於Mab較佳在25°C 144516.doc -32- 201023891 下及對於Fab較佳在3rC下所測定，Kd介於約1〇〇 nM至約 0.5 nM之間，較佳介於約100 nM至約1 nM之間，更佳介於 約75 nM至約5 nM之間，更佳介於約50 nM至約1〇 nMi 間，更佳介於約15 ιιΜ至約1 ο nM之間，更佳介於約1 〇 nM 至約0.5 nM之間，更佳介於約5 nM至約〇 5 nM之間，更佳 介於約5 nM至約0.7 nM之間，更佳介於約3 nM至約〇 7 nM 之間，或最佳介於約3 nM至約1 nM之間，且針對人類轉鐵 ⑩ 蛋白1之解離速率（koff)介於約7.5xl〇·3 s·1與約lxl〇-4 s-i之 間，較佳介於約2.5X10·3 s·1與約lxl0-4 s-i之間，更佳介於 、·勺1 10 s與約1X1 〇 4 s 1之間且更佳介於約$ χ 1 〇_4 丨與約 1x10 4 s·1之間。抗_FPN1 Mab或其抗原結合片段較佳不結 合一或多種選自由SEQ ID NO: 183-214組成之群的肽。 術語「抑制」意謂能夠實質上拮抗、制止、阻止、限 制、延緩、破壞、消除、終止、降低或逆轉Fpm之生物 效應及/或成熟海帕西啶之生物活性，例如包括（但不限於） 參下文實例5、6、7、8或9中所測量之成熟人類海帕西啶之 生物活性。 ^特定實施例中，本發明之抗·;ρΡΝ1祕或其抗原結合 又之特徵在於，在海帕西咬_25生物活性之活體内檢定 中，ic50介於約250 nM與約25 nM之間，較佳介於⑺〇 與約25 nM之間或更佳介於5〇 nM與約25 nM之間❶活體内 檢定較佳測量IL-6誘導之血清鐵含量之下降。 或者或另外，本發明之抗·]ρΡΝ1 Mab或其抗原結合片段 之特徵在於，在海帕西啶_25生物活性之活體外檢定中， 144516.doc -33- 201023891 IC5〇介於約100 nM與約1 nM之間，較佳介於約75 nM與約 1 nM之間，更佳介於約50 nM與約1 nM之間，更佳介於約 25 nM與約1 nM之間。海帕西啶-25生物活性檢定之活體外 檢定較佳測量海帕西啶誘導之轉鐵蛋白1之内化及/或降 解。抗-FPN1 Mab或其抗原結合片段更佳不結合一或多種 選自由SEQ ID NO: 183-214組成之群的肽。 在特定實施例中，本發明之抗-FPN1 Mab或其抗原結合 片段之特徵在於，在包含屬於選自由SEQ ID NO: 12、 13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺基酸、或 基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸組成的抗 原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列組成 的人類FPN1，其中如由SPR對於Mab較佳在25°C下及對於 Fab較佳在37°C下所測定，KD小於約1 〇〇 nM，小於約75 nM， 小於約50 nM，小於約25 nM或小於約10 nM，且在海帕西 啶-25生物活性之活體内檢定中，IC5〇介於約250 nM與約25 nM之間，較佳介於100 nM與約25 nM之間，或更佳介於50 nM與約25 nM之間。活體内檢定較佳測量IL-6誘導之血清 鐵含量之下降。抗-FPN1 Mab或其抗原結合片段更佳不結 合一或多種選自由SEQ ID NO: 183-214組成之群的肽。 在特定實施例中，本發明之抗-FPN1 Mab或其抗原結合 片段之特徵在於，在包含屬於選自由SEQ ID NO: 12、 13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺基酸、或 基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸組成的抗 原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列組成 144516.doc -34- 201023891 的人類FPNl，其中如由SPR對於Mab較佳在25°C下及對於 Fab較佳在37°C下所測定，KD介於約100 nM至約0.5 nM之 間，較佳介於約1 00 nM至約1 nM之間，更佳介於約75 nM 至約5 nM之間，更佳介於約50 nM至約10 nM之間，更佳 介於約15 nM至約10 nM之間，更佳介於約10 nM至約0.5 nM '之間，更佳介於約5 nM至約0.5 nM之間，更佳介於約5 nM 至約0.7 nM之間，更佳介於約3 nM至約0.7 nM之間，或最 佳介於約3 nM至約1 nM之間；且其特徵進一步在於，在海 ® 帕西啶-25生物活性之活體内檢定中，IC5〇介於約250 nM與 約25 nM之間，較佳介於100 nM與約25 nM之間，或更佳 介於50 nM與約25 nM之間。活體内檢定較佳測量IL-6誘導 之血清鐵含量之下降。抗-FPNl Mab或其抗原結合片段更 佳不結合一或多種選自由SEQ ID NO: 183-214組成之群的 肽。 在特定實施例中，本發明之抗-FPNl Mab或其抗原結合 φ 片段之特徵在於，在包含屬於選自由SEQ ID NO: 12、 13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺基酸、或 基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸組成的抗 - 原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列組成 的人類FPN1，其中如由SPR對於Mab較佳在25°C下及對於 Fab較佳在37°C下所測定，KD介於約100 nM至約0.5 nM之 間，較佳介於約1 00 nM至約1 nM之間，更佳介於約75 nM 至約5 nM之間，更佳介於約50 nM至約10 nM之間，更佳 介於約15 nM至約10 nM之間，更佳介於約10 nM至約0.5 144516.doc -35- 201023891 nM之間，更佳介於約5 nM至約0.5 nM之間，更佳介於約5 nM至約〇.7nM之間，更佳介於約3nM至約0.7nM之間，或 最佳介於約3 nM至約1 nM之間；如由SPR對於Mab較佳在 25°C下及對於Fab較佳在37°C下所測定，針對人類轉鐵蛋 白1之解離速率（koff)介於介於約7_5χ10—3 s·1與約lxl〇-4 s-] 之間’較佳介於約2,5xl0·3 s·1與約lxl〇_4 s.1之間，更佳介 於約lxlO·3 s·1與約lxl〇_4 s·1之間且更佳介於約5xl〇-4 與 約lxlO·4 s·1之間；且其特徵進一步在於，在海帕西啶_25 生物活性之活體内檢定中，ICm介於約250 nM與約25 nM 之間，較佳介於100 nM與約25 nM之間，或更佳介於5〇 nM 與約25 nM之間。活體内檢定較佳測量il-6誘導之血清鐵 含量之下降。抗-FPN1 Mab或其抗原結合片段更佳不結合 一或多種選自由SEQ ID NO: 183-214組成之群的肽。 在特定實施例中，本發明之抗-FPN1 Mab或其抗原結合
片段包含分別包含SEQ ID NO: 37、129、22、107、118及 120中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及HCDR3，且在包含屬於選自由SEQ ID NO: 12、13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺 基酸、或基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸 組成的抗原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸 序列組成的人類FPN1，其中如由SPR對於Mab較佳在25〇C 下及對於Fab較佳在37°C下所測定，KD小於約1〇〇 nM，小 於約75 nM，小於約50 nM ’小於約25 nM或小於約10 nM，且如由SPR對於Mab較佳在25。(：下及對於Fab較佳在 144516.doc -36 - 201023891 37°C下所測定，斜斛A叙±± _ 对對人類轉鐵蛋白1之解離速率（k^f)介於 力7.5X10 S與約1x10-4 s·1之間，較佳介於約2.5xl0·3 s·1 與約1X10 s之間，更佳介於約lxl〇-3 s-i與約lxl〇-4 s-i之 間且更佳介於約5x1G.4 一與約1χ1().4，之間；且其特徵進 步在於在海帕西啶-25生物活性之活體内檢定中，IC5〇 )丨於、力250 nM與約25 nM之間，較佳介於1〇〇 nM與約25 nM之間，或更佳介於5〇 nM與約25 之間。活體内檢定 ❹較佳測1IL-6誘導之血清鐵含量之下降。抗·Fpm 或 其抗原結合片段更佳不結合一或多種選自由SEQ ID N〇: 183-214組成之群的肽。
在一些實施例中，本發明之抗_FPNi Mab或其抗原結合 片段包含分別包含SEQ ID NO: 37、129、22、107、118及 120中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及HCDR3，且在包含屬於選自由SEQ ID NO: 12、13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺 ❿ 基酸、或基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸 組成的抗原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸 序列組成的人類FPN1，其中如由SPR對於Mab較佳在25°C 下及對於Fab較佳在37。(：下所測定，KD介於約100 nM至約 0.5 nM之間，較佳介於約1 〇〇 nM至約1 nM之間，更佳介於 約75 nM至約5 nM之間，更佳介於約50 nM至約10 nM之 間’更佳介於約15 nM至約10 nM之間，更佳介於約10 nM 至約〇·5 nM之間，更佳介於約5 nM至約0.5 nM之間，更佳 介於約5 nM至約0.7 nM之間，更佳介於約3 nM至約0.7 nM 144516.doc 37- 201023891 之間，或最佳介於約3 nM至約i nM之間，且如由spR對於 Mab較佳在25°C下及對於Fab較佳在所測定，針對 人類轉鐵蛋白1之解離速率（k〇ff)介於約7 5χ1〇·3 ^與約 lxio S之間，較佳介於約2 5xl〇-3 s·!與約ΐχΐ〇 4 s-丨之 間，更佳介於約lx10·3 與約1χ1〇-4〆之間且更佳介於約 5xH)·4 s·1與約1X10-4 ,之間；且其特徵進一步在於，在海 帕西咬25生物活性之活體内檢定中，IC5〇介於約與 約25 nM之間，較佳介於1〇〇 nM與約25 nM之間或更佳 介於50 nM與約25 nM之間。活體内檢定較佳測量比_6誘導 之血清鐵含量之下降。抗_FPN1 Mab或其抗原結合片段更 佳不結合一或多種選自由SEQ id no: m-214組成之群的 肽。 在本發明之一些實施例中，抗_FPN1 Mab或其抗原結合 片段之特徵在於，在包含屬於選自由SEq ID NO: 12、 13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺基酸、或 基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸組成的抗 原決疋基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列組成 的人類FPN1 ’其中如由SPR對於Mab較佳在25°C下及對於 Fab較佳在37°C下所測定，kd小於約75 nM，小於約50 nM，小於約25 nM或小於約1〇 nM，且在海帕西啶-25生物 活性之活體内檢定中’ 1(：5〇介於約25〇 nM與約25 nM之 間，較佳介於100 nM與約25 nM之間，或更佳介於50 nM 與約25 nM之間，且其特徵進一步在於，在海帕西。定_25生 物活性之活體外檢定中’ ICm介於約1〇〇 ηΜ與約1 ηΜ之 144516.doc •38· 201023891 間，較佳介於約75 nM與約1 nM之間，更佳介於約50 nM 與約1 nM之間，更佳介於約25 nM與約1 nM之間。活體内 檢定較佳測量IL-6誘導之血清鐵含量之下降。海帕西咬-25 生物活性檢定之活體外檢定較佳測量海帕西唆誘導之轉鐵 蛋白1之内化及/或降解。抗-FPN1 Mab或其抗原結合片段 ' 更佳不結合一或多種選自由SEQ ID NO: 183-214組成之群 的肽。 在特定實施例中，本發明之抗-FPN1 Mab或其抗原結合 ® 片段之特徵在於，在包含屬於選自由SEQ ID NO: 12、 13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺基酸、或 基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸組成的抗 原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列組成 的人類FPN1，其中如由SPR對於Mab較佳在25°C下及對於 Fab較佳在37°C下所測定，KD介於約100 nM至約0.5 nM之 間，較佳介於約100 nM至約1 nM之間，更佳介於約75 nM ^ 至約5 nM之間，更佳介於約50 nM至約10 nM之間，更佳 介於約15 nM至約10 nM之間，更佳介於約10 nM至約0.5 nM之間，更佳介於约5 nM至約0.5 nM之間，更佳介於約5 nM至約0.7 nM之間，更佳介於約3 nM至約0.7 nM之間，或 最佳介於約3 nM至約1 nM之間；且在海帕西咬-25生物活 性之活體内檢定中，IC50介於約250 nM與約25 nM之間， 較佳介於100 nM與約25 nM之間，或更佳介於50 nM與約 25 nM之間；且其特徵進一步在於，在海帕西啶-25生物活 性之活體外檢定中，IC50介於約100 nM與約1 nM之間，較 144516.doc -39- 201023891 佳介於約75 nM與約1 nM之間，更佳介於約50 nM與約1 nM之間，更佳介於約25 nM與約1 nM之間。活體内檢定較 佳測量IL-6誘導之血清鐵含量之下降。海帕西啶-25生物活 性檢定之活體外檢定較佳測量海帕西咬誘導之轉鐵蛋白1 之内化及/或降解。抗-FPN1 Mab或其抗原結合片段更佳不 結合一或多種選自由SEQ ID NO: 183-214組成之群的肽。 在一些實施例中，本發明提供Mab或其抗原結合片段， 其在包含屬於選自由SEQ ID NO: 12、13、14、15、16及 95組成之群之胺基酸序列的胺基酸、或基本上由該（等）胺 基酸組成、或由該（等）胺基酸組成的抗原決定基處結合由 SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列組成之人類FPN1，且1) 如由SPR對於Mab較佳在25°C下及對於Fab較佳在37°C下所 測定，KD介於約100 nM至約0.5 nM之間，較佳介於約100 nM至約1 nM之間，更佳介於約75 nM至約5 nM之間，更佳 介於約50 nM至約10 nM之間，更佳介於約15 nM至約10 nM之間，更佳介於約10 nM至約0.5 nM之間，更佳介於約 5 nM至約0.5 nM之間，更佳介於約5 nM至約0.7 nM之間， 更佳介於約3 nM至約0.7 nM之間，或最佳介於約3 nM至約 1 nM之間；2)在海帕西啶-25生物活性之活體内檢定中， IC5〇介於約250 nM與約25 nM之間，較佳介於100 nM與約 25 nM之間，或更佳介於50 nM與約25 nM之間；3)在海帕 西啶-25生物活性之活體外檢定中，IC5〇介於約100 nM與約 1 nM之間，較佳介於約75 nM與約1 nM之間，更佳介於約 50 nM與約1 nM之間，更佳介於約25 nM與約1 nM之間； 144516.doc -40- 201023891 及4)如由SPR對於Mab較佳在25°C下及對於Fab較佳在37°C 下所測定，針對人類轉鐵蛋白1之解離速率（]<:。„)介於約 7·5χ10_3 s·1 與約 lxlO·4 s_1 之間，較佳介於約 2.5xl0·3 s·1 與 約lxlO·4 s·1之間，更佳介於約1χ10_3 s_1與約lxlO·4 s·1之 間，且更佳介於約5xl0_4 s·1與約1χ10_4 s_1之間。活體内檢 定較佳測量IL-6誘導之血清鐵含量之下降。海帕西啶-25生 物活性檢定之活體外檢定較佳測量海帕西唆誘導之轉鐵蛋 白1之内化及/或降解。抗-FPN1 Mab或其抗原結合片段更 佳不結合一或多種選自由SEQ ID NO: 183_214組成之群的 肽。 在特定實施例中，本發明之抗-FPN1 Mab或其抗原結合 片段包含分別包含SEQ ID NO: 37、129、22、107、118及 120中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及HCDR3，且其特徵在於在海帕西啶-25 生物活性之活體内檢定中，IC5〇介於約250 nM與約25 nM 之間，較佳介於100 nM與約25 nM之間，或更佳介於50 nM與約25 nM之間。活體内檢定較佳測量IL-6誘導之血 清鐵含量之下降。抗-FPN1 Mab或其抗原結合片段更佳 不結合一或多種選自由SEQ ID NO: 183-2 14組成之群的 肽。 在特定實施例中，本發明之抗-FPN1 Mab或其抗原結合 片段包含分別包含SEQ ID NO: 37、129、22、107、118及 120中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及HCDR3，且其特徵在於在海帕西啶-25 144516.doc -41 - 201023891 生物活性之活體内檢定中，IC5〇介於約250 nM與約25 nM 之間，較佳介於100 nM與約25 nM之間，或更佳介於50 nM與約25 nM之間，且在海帕西啶-25生物活性之活體外 檢定中，IC50介於約100 nM與約1 nM之間，較佳介於約75 nM與約1 nM之間，更佳介於約50 nM與約1 nM之間，更佳 介於約25 nM與約1 nM之間。活體内檢定較佳測量IL-6誘 導之血清鐵含量之下降。海帕西咬-25生物活性檢定之活 體外檢定較佳測量海帕西啶誘導之轉鐵蛋白1之内化及/或 降解。抗-FPN1 Mab或其抗原結合片段更佳不結合一或多 種選自由SEQ ID NO: 183-214組成之群的肽。 在特定實施例中，本發明之抗-FPN1 Mab或其抗原結合 片段包含分別包含SEQ ID NO: 37、129、22、107、118及 120中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及HCDR3，且在包含屬於選自由SEQ ID NO: 12、13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺 基酸、或基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸 組成的抗原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸 序列組成的人類FPN1，其中如由SPR對於Mab較佳在25°C 下及對於Fab較佳在37°C下所測定，KD小於約100 nM，小 於約75 nM，小於約50 nM，小於約25 nM或小於約10 nM，且在海帕西啶-25生物活性之活體内檢定中，IC50介 於約250 nM與約25 nM之間，較佳介於100 nM與約25 nM 之間，或更佳介於50 nM與約25 nM之間。活體内檢定較佳 測量IL-6誘導之血清鐵含量之下降。抗-FPN1 Mab或其抗 144516.doc -42- 201023891 原結合片段更佳不結合一或多種選自由SEQ ID NO: 183-214組成之群的肽。 在特定實施例中，本發明之抗-FPN1 Mab或其抗原結合 片段包含分別包含SEQ ID NO: 37、129、22、107、118及 120中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及HCDR3，且在包含屬於選自由SEQ ID NO: 12、13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺 基酸、或基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸 組成的抗原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸 序列組成的人類FPN1，其中如由SPR對於Mab較佳在25°C 下及對於Fab較佳在37°C下所測定，KD介於約100 nM至約 0.5 nM之間，較佳介於約100 nM至約1 nM之間，更佳介於 約75 nM至約5 nM之間，更佳介於約50 nM至約10 nM之 間，更佳介於約15 nM至約10 nM之間，更佳介於約10 nM 至約0.5 nM之間，更佳介於約5 nM至約0.5 nM之間，更佳 φ 介於約5 nM至約0.7 nM之間，更佳介於約3 nM至約0.7 nM 之間，或最佳介於約3 nM至約1 nM之間；且其特徵進一步 在於，在海帕西唆-25生物活性之活體内檢定中，IC5〇介於 - 約250 nM與約25 nM之間，較佳介於100 nM與約25 nM之 . 間，或更佳介於50 nM與約25 nM之間。活體内檢定較佳測 量IL-6誘導之血清鐵含量之下降。抗-FPN1 Mab或其抗原 結合片段更佳不結合一或多種選自由SEQ ID NO: 183-214 組成之群的肽。 在特定實施例中，本發明之抗-FPN1 Mab或其抗原結合 144516.doc -43- 201023891 片段包含分別包含SEQ ID NO: 37、129、22、107、、118 及120中所示之胺基酸序列的lcdRI、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及HCDR3，且在包含屬於選自由SEQ ID NO: 12、13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺 基酸、或基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸 組成的抗原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸 序列組成的人類FPN1，如由SPR對於Mab較佳在25。(：下及 對於Fab較佳在37。(：下所測定，KD介於約100 nM至約0.5 nM之間，較佳介於約1〇〇 nM至約1 nM之間，更佳介於約 75 nM至約5 nM之間’更佳介於約50 nM至約10 nM之間， 更佳介於約15 nM至約10 nM之間，更佳介於約1 〇 nM至約 0.5 nM之間，更佳介於約5 nM至約0.5 nM之間，更佳介於 約5 nM至約0.7 nM之間，更佳介於約3 nM至約0.7 nM之 間’或最佳介於約3 nM至約1 nM之間；如由SPR對於Mab 較佳在25°C下及對於Fab較佳在37t下所測定，針對人類 轉鐵蛋白1之解離速率（koff)，介於約7.5xl〇-3 s·1與約lx10.4 s-1之間，較佳介於約2·5 xlO-3 s-1與約lxl 〇_4 s·1之間，更佳介 於約lxlO·3 s·1與約lxl〇-4 s·1之間，且更佳介於約5xl〇-4 , 與約lxlO·4 s·1之間；且其特徵進一步在於在海帕西啶_25 生物活性之活體内檢定中，ICw介於約250 nM與約25 nM 之間’較佳介於100 nM與約25 nM之間，或更佳介於5〇 nM與約25 nM之間。活體内檢定較佳測量IL_6誘導之血清 鐵含量之下降。抗-FPN1 Mab或其抗原結合片段更佳不結 合一或多種選自由SEQ ID NO: 183-214組成之群的肽。 144516.doc • 44· 201023891 在特定實施例中，本發明之抗-FPNl Mab或其抗原結合 片段包含分別包含SEQ ID NO: 37、129、22、107、118及 120中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及HCDR3，且在包含屬於選自由SEQ ID NO: 12、13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺 基酸、或基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸 組成的抗原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸 序列組成的人類FPN1，其中如由SPR對於Mab較佳在25°C 下及對於Fab較佳在3 7°C下所測定，KD小於約1 00 nM，小 於約75 nM，小於約50 nM，小於約25 nM或小於約10 nM ;且如由SPR對於Mab較佳在25°C下及對於Fab較佳在 37°C下所測定，針對人類轉鐵蛋白1之解離速率（k^f)介於 約 7.5X10-3 s·1 與約 lxl〇-4 s·1 之間，較佳介於約 2.5X10·3 s·1 與約lxlO·4 s·1之間，更佳介於約lxl〇-3 s·1與約ΐχΐ〇_4 s·1之 間且更佳介於約5xl〇-4 s_1與約lxl〇-4 s-〗之間；且其特徵進 一步在於，在海帕西啶-25生物活性之活體内檢定中，IC50 介於約250 nM與約25 nM之間，較佳介於100 nM與約25 nM之間，或更佳介於50 nM與約25 nM之間。活體内檢定 較佳測量IL-6誘導之血清鐵含量之下降。抗-FPNl Mab或 其抗原結合片段更佳不結合一或多種選自由SEQ ID NO: 183-214組成之群的肽。 在本發明之一些實施例中，抗-FPNl Mab或其抗原結合 片段包含分別包含SEQ ID NO: 37、129、22、107、118及 120中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 144516.doc -45- 201023891 HCDRl、HCDR2及HCDR3，且在包含屬於選自由SEQ ID NO: 12、13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺 基酸、或基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸 組成的抗原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸 序列組成的人類FPN1，其中如由SPR對於Mab較佳在25°C 下及對於Fab較佳在37°C下所測定，KD小於約75 nM，小 於約50 nM，小於約25 nM或小於約10 nM ;且在海帕西啶-25生物活性之活體内檢定中，IC5〇介於約250 nM與約25 nM之間，較佳介於100 nM與約25 nM之間，或更佳介於50 nM與約25 nM之間；且其特徵進一步在於，在海帕西啶-25生物活性之活體外檢定中，IC5〇介於約100 nM與約1 nM 之間，較佳介於約75 nM與約1 nM之間，更佳介於約50 nM與約1 nM之間，更佳介於約25 nM與約1 nM之間。活體 内檢定較佳測量IL-6誘導之血清鐵含量之下降。海帕西啶-2 5生物活性檢定之活體外檢定較佳測量海帕西啶誘導之轉 鐵蛋白1之内化及/或降解。抗-FPN1 Mab或其抗原結合片 段更佳不結合一或多種選自由SEQ ID NO: 183-214組成之 群的肽。 在特定實施例中，本發明之抗-FPN1 Mab或其抗原結合 片段包含分別包含SEQ ID NO: 37、129、22、107、118及 120中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDRl、HCDR2及HCDR3，且在包含屬於選自由SEQ ID NO: 12、13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺 基酸、或基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸 144516.doc -46- 201023891 組成的抗原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸 序列組成的人類FPN1，其中如由SPR對於Mab較佳在25°C 下及對於Fab較佳在37°C下所測定，KD介於約100 nM至約 0.5 ηΜ之間，較佳介於約100 nM至約1 nM之間，更佳介於 約75 nM至約5 nM之間，更佳介於約50 nM至約10 nM之 間，更佳介於約1 5 nM至約10 nM之間，更佳介於約1 0 nM 至約0.5 nM之間，更佳介於約5 nM至約0.5 nM之間，更佳 介於約5 nM至約0.7 nM之間，更佳介於約3 nM至約0.7 nM 之間，或最佳介於約3 nM至約1 nM之間；且在海帕西唆-25生物活性之活體内檢定中，IC50介於約250 nM與約25 nM之間，較佳介於100 nM與約25 nM之間，或更佳介於50 nM與約25 nM之間；且其特徵進一步在於，在海帕西啶-25生物活性之活體外檢定中，IC5〇介於約100 nM與約1 nM 之間，較佳介於約75 nM與約1 nM之間，更佳介於約50 nM與約1 nM之間，更佳介於約25 nM與約1 nM之間。活體 内檢定較佳測量IL-6誘導之血清鐵含量之下降。海帕西咬-2 5生物活性檢定之活體外檢定較佳測量海帕西唆誘導之轉 鐵蛋白1之内化及/或降解。抗-FPN1 Mab或其抗原結合片 段更佳不結合一或多種選自由SEQ ID NO: 183-214組成之 群的肽。
在特定實施例中，本發明之抗-FPN1 Mab或其抗原結合 片段包含分別包含SEQ ID NO: 37、129、22、107、118及 120中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及HCDR3，且在包含屬於選自由SEQ ID 144516.doc -47- 201023891 NO: 12、13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺 基酸、或基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸 組成的抗原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸 序列組成的人類FPN1，且1)如由SPR對於Mab較佳在25°C 下及對於Fab較佳在37°C下所測定，KD介於約1〇0 nM至約 0.5 nM之間，較佳介於約1〇〇 nM至約1 nM之間，更佳介於 約75 nM至約5 nM之間，更佳介於約50 nM至約1〇 nM之 間’更佳介於約15 nM至約10 nM之間，更佳介於約10 nM 至約0_5 nM之間’更佳介於約5 nM至約〇·5 nM之間，更佳 介於約5 nM至約0.7 nM之間，更佳介於約3 nM至約0.7 nM 之間，或最佳介於約3 nM至約1 nM之間；2)在海帕西咬_ 25生物活性之活體内檢定中’ ICm介於約250 nM與約25 nM之間，較佳介於100 nM與約25 nM之間，或更佳介於5〇 nM與約25 nM之間，3)在海帕西咬-25生物活性之活體外檢 定中，IC5〇介於約100 nM與約1 nM之間，較佳介於約75 nM與約1 nM之間’更佳介於約50 nM與約1 nM之間，更佳 介於約25 nM與約1 nM之間；及4)如由SPR對於Mab較佳在 25°C下及對於Fab較佳在37°C下所測定，針對人類轉鐵蛋 白1之解離速率（1<:。订）介於約7.5><10_33-1與約1><1〇-48-1之 間，較佳介於約2.5X10·3 s·1與約lxl〇-4 s-1之間，更佳介於 約lxl〇-3 S·1與約lxlO·4 s-1之間，且更佳介於約5xl〇-4 s]與 約lxl〇-4 S·1之間。活體内檢定較佳測量IL-6誘導之血清鐵 含量之下降。海帕西啶-25生物活性檢定之活體外檢定較 佳測量海帕西啶誘導之轉鐵蛋白1之内化及/或降解。抗· 144516.doc • 48 - 201023891 FPNl Mab或其抗原結合片段更佳不結合一或多種選自由 SEQ ID NO: 183-214組成之群的肽。 在特定實施例中，本發明之抗-FPNl Mab或其抗原結合 片段包含分別包含SEQ ID NO: 37、125、22、23、110及 19中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及HCDR3，且在包含屬於選自由SEQ ID NO·· 12、13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺 基酸、或基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸 組成的抗原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸 序列組成的人類FPN1 ;且其特徵在於如由SPR對於Mab較 佳在25°C下及對於Fab較佳在37°C下所測定，KD介於約100 nM至約0.5 nM之間，較佳介於約1〇〇 nM至約1 nM之間， 更佳介於約75 nM至約5 nM之間，更佳介於約50 nM至約 1 0 nM之間，更佳介於約15 nM至約10 nM之間，更佳介於 約10 nM至約0.5 nM之間，更佳介於約5 nM至約0.5 nM之 間，更佳介於約5 nM至約0.7 nM之間，更佳介於約3 nM至 約0_7 nM之間，或最佳介於約3 nM至約1 nM之間；2)在海 帕西啶-25生物活性之活體内檢定中，ic50介於約250 nM與 約25 nM之間，較佳介於1〇〇 nM與約25 nM之間，或更佳 介於50 nM與約25 nM之間；3)在海帕西啶-25生物活性之 活體外檢定中，IC50介於約100 nM與約1 nM之間，較佳介 於約75 nM與約1 nM之間，更佳介於約50 nM與約1 nM之 間’更佳介於約25 nM與約1 nM之間；及4)如由SPR對於 Mab較佳在25°C下及對於Fab較佳在37°C下所測定，針對 144516.doc •49· 201023891 人類轉鐵蛋白1之解離速率（kQff)介於約7 5xi〇·3 S ^與約 1x10 s之間，較佳介於約2 5xl0-3 S-1與約lxl〇-4 d之 間，更佳介於約lx1〇-3 S-1與約1χ1〇·4 s-丨之間，且更佳介於 約5><10431與約1><1〇-4一之間。活體内檢定較佳測量比_6 誘導之血清鐵含量之下降。海帕西啶-25生物活性檢定之 活體外檢定較佳測量海帕西啶誘導之轉鐵蛋白丨之内化及/ 或降解。抗-FPN1 Mab或其抗原結合片段更佳不結合一或 多種選自由8£(^1〇]^0:183-214組成之群的肽。抗_171^1 Mab或其抗原結合片段更佳不結合一或多種選自由seq⑴ NO: 183-214組成之群的肽。 在特定實施例中，本發明之抗_FPN1 Mab或其抗原結合 片段包含分別包含SEQ ID NO: 37、177、22、23、112及 19中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及HCDR3，且在包含屬於選自由SEQ ID NO: 12、13、14、15、16及95組成之群之胺基酸序列的胺 基酸、或基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸 組成的抗原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸 序列組成的人類FPN1 ;且其特徵在於1)如由SPR對於Mab 較佳在25°C下及對於Fab較佳在37°C下所測定，KD介於約 100 nM至約0.5 nM之間，較佳介於約1〇〇 nM至約1 nM之 間’更佳介於約75 nM至約5 nM之間，更佳介於約50 nM 至約10 nM之間’更佳介於約15 nM至約10 nM之間，更佳 介於約10 nM至約0.5 nM之間，更佳介於約5 nM至約0.5 nM之間’更佳介於約5 nM至約0.7 nM之間，更佳介於約3 144516.doc •50· 201023891 nM至約〇·7 nM之間，或最佳介於約3 nM至約j nM之間； 2)在海帕西啶_25生物活性之活體内檢定中，IC5〇介於約 250 nM與約25 nM之間，較佳介於10〇 nM與約25 nM之 間’或更佳介於50 nM與約25 nM之間；3)在海帕西啶-25 生物活性之活體外檢定辛’ jCw介於約丨〇〇 與約1 nM之 -間’較佳介於約75 nM與約1 nM之間，更佳介於約50 nM 與約1 nM之間，更佳介於約25 nM與約1 nM之間；及4)如 ❿ 由對於Mab較佳在25 °C下及對於Fab較佳在3 7°C下所測 定：針對人類轉鐵蛋白1之解離速率（k(>ff)介於約75χ1〇·3 , 與約lxl〇-4 s·1之間，較佳介於約2 5xl〇-3 s-i與約1χ1〇·4 之間’更佳介於約lxl〇_3 s·1與約lxl0-4 s-i之間，且更佳介 於約5X10·4 s-i與約lxl0-4 s-!之間。活體内檢定較佳測量 IL-6誘導之血清鐵含量之下降。海帕西啶_25生物活性檢定 之活體外檢定較佳測量海帕西啶誘導之轉鐵蛋白1之内化 及/或降解。抗_FPN 1 Mab或其抗原結合片段更佳不結合一 φ 或多種選自由SEQ ID NO: 183-214組成之群的肽。 在特定實施例中’本發明之抗-FPN1 Mab或其抗原結合 片段包含分別包含SEQ ID NO: 37、122、22、23、110及 19中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、LCDR3、 HCDR1、HCDR2及HCDR3，且在包含屬於選自由SEQ ID NO·· 12、13、14、I5、Ιό及95組成之群之胺基酸序列的胺 基酸、或基本上由該（等）胺基酸組成、或由該（等）胺基酸 組成的抗原決定基處結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸 序列經成的人類FPN1 ;且其特徵在於1)如由SPR對於Mab 144516.doc •51 · 201023891 較佳在25 °C下及對於Fab較佳在37°C下所測定，KD介於約 100 nM至約0.5 nM之間，較佳介於約100 nM至約1 nM之 間，更佳介於約75 nM至約5 nM之間，更佳介於約50 ιιΜ 至約10 nM之間，更佳介於約15 nM至約10 nM之間，更佳 介於約10 nM至約0.5 nM之間，更佳介於約5 nM至約0.5 nM之間’更佳介於約5 nM至約0.7 nM之間，更佳介於約3 nM至約0.7 nM之間，或最佳介於約3 nM至約1 nM之間； 2)在海帕西咬_25生物活性之活體内檢定中，ic5〇介於約 250 nM與約25 nM之間，較佳介於1〇〇 nM與約25 nM之 參 間’或更佳介於50 nM與約25 nM之間；3)在海帕西咬_25 生物活性之活體外檢定中，1〇5〇介於約1 〇〇 nM與約1 nM之 間，較佳介於約75 nM與約1 nM之間，更佳介於約50 nM 與約1 nM之間’更佳介於約25 nM與約1 nM之間；及4)如 由SPR對於Mab較佳在25。(：下及對於Fab較佳在37°C下所測 疋’針對人類轉鐵蛋白1之解離速率（kQff)介於約7 5xl〇-3 s_i 與約lxlO·4 s·1之間，較佳介於約2 5xl〇-3 s-i與約1χ1〇·4 s」 之間，更佳介於約lxl〇-3 s-i與約1χ1〇·4 ^之間且更佳介 Ο 於約5χ1〇-4…與約lxl〇·4 ,之間。活體内檢定較佳測量 IL-6誘導之血清鐵含量之下降。海帕西啶_25生物活性檢定 之活體外檢定較佳測量海帕西啶誘導之轉鐵蛋白丨之内化 及/或降解。抗_FPN1 Mab或其抗原結合片段更佳不結合一 或多種選自由SEQ ID NO: 183-2 14組成之群的肽。 在特定實施例中，本發明之抗_FPN1 Mab或其抗原結合 片段包含： 144516.doc -52- 201023891 a. 分別如SEQ ID NO: 154及SEQ ID NO: 152中所示之輕 鏈及重鏈； b. 分別如SEQ ID NO: 181及SEQ ID NO: 179中所示之輕 鍵及重鍵；或 c. 分別如SEQ ID NO: 158及SEQ ID NO: 156中所示之輕 鍵及重鍵， 且在包含屬於選自由SEQ ID NO: 12、13、14、15、16及 95組成之群之胺基酸序列的胺基酸、或基本上由該（等）胺 基酸組成、或由該（等）胺基酸組成的抗原決定基處結合由 SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列組成的人類FPN1 ;且其 特徵在於1)如由SPR對於Mab較佳在25°C下及對於Fab較佳 在3 7°C下所測定，KD介於約1 00 nM至約0.5 nM之間，較佳 介於約100 nM至約1 nM之間，更佳介於約75 nM至約5 nM 之間，更佳介於約50 nM至約10 nM之間，更佳介於約15 nM至約10 nM之間，更佳介於約10 nM至約0.5 nM之間， 更佳介於約5 nM至約0.5 nM之間，更佳介於約5 nM至約 0·7 nM之間，更佳介於約3 nM至約0·7 nM之間，或最佳介 於約3 nM至約1 nM之間；2)在海帕西啶-25生物活性之活 體内檢定中，IC50介於約250 nM與約25 nM之間，較佳介 於100 nM與約25 nM之間，或更佳介於50 nM與約25 nM之 間；3)在海帕西啶-25生物活性之活體外檢定中，IC5〇介於 約100 nM與約1 nM之間，較佳介於約75 nM與約1 nM之 間，更佳介於約50 nM與約1 nM之間，更佳介於約25 nM 與約1 nM之間；及4)如由SPR對於Mab較佳在25°C下及對 144516.doc -53- 201023891 於Fab較佳在37〇C下所測中，处油上，上 】疋針對人類轉鐵蛋白1之解離速 率（让。打）介於約7.5><1〇-33-1盥的1><1〇-4-1 與約1x10 s 1之間，較佳介於約 2.5ΧΠ)· s-i與約lxl0-4s·、間，更佳介於約μο υ斑約 WO·4 s·1之間，且更佳介於約5χ1〇-4〆與約ΐχΐ〇4〆之 間。活體内檢純佳測量IL_6誘導之血清鐵含量之下降。 海帕西㈣生物活性檢定之活體外檢定較佳測量海帕西 啶誘導之轉鐵蛋白1之内化及/或降解。 術語「治療」係指減緩、中斷、遏制、控制、終止 '降 低或逆轉症狀、病症、病㈣疾病之進展或嚴重程度，但 未必包括完全消除所有與疾病相關之症狀、病狀或病症。 術語「預防」意謂制止、限制或抑制症狀、病症、病狀 或疾病發生或出現。可治療及預防急性事件及慢性病狀。 在急除事件巾，在症狀、病症、病狀或疾病發作時投與抗 體或其抗原結合片段，且在急性事件結束時中止。相反， 慢性症狀、病症、病狀或疾病在較長時間範圍内治療 病症」為將受益於本發明之治療的任何病狀。術語 「病症」、「病狀」及「疾病」在本文中可互換使用，且包 括成熟海帕西啶引發之慢性及急性病症，包括（但不限於） 貧血，包括（但不限於）慢性病貧血。 術語「慢性病貧血」係指因例如長期感染、發炎及贅生 性病症而發展的任何貧血。所發展之貧血的特徵通常為參 血球壽命縮短及巨噬細胞中之鐵螯合，該螯合導致可用於 製造新紅血球之鐵的量減少。與慢性病貧血相關之病狀包 括（但不限於）慢性細菌性心内膜炎、骨髓炎、風濕熱、冰 144516.doc -54- 201023891 瘍性結腸炎及贅生性病症。其他病狀包括與感染、發炎及 贅瘤相關之其他疾病及病症，包括例如發炎性感染（例如 肺膿腫、肺結核）、發炎性非傳染性病症（例如類風濕性關 節炎、全身性紅斑性狼瘡、克羅恩氏病（Crohis disease)、 肝炎、發炎性腸病）及各種癌症、腫瘤及惡性腫瘤（例如癌 瘤、肉瘤、淋巴瘤）。慢性病貧血係與低血鐵及網狀内皮 細胞鐵螯合有關。 發炎性細胞激素為海帕西咬表現之有效誘導物，且海帕 西啶過量可在此等患者之貧血發病機制中起關鍵作用 (Weiss等人，N. Engl. J. Med.，352:1011-1023 (2005); Pigeon 等人，J. Biol. Chem. 276:7811-7819 (2001);
Nicolas 等人，J. Clin. Invest. 110:1037-1044 (2002);
Nemeth 等人，J. Clin. Invest. 113:1271-1276 (2004);
Nemeth等人，Blood，101:2461-2463 (2003) ; Lee 等人， Proc. Natl. Acad· Sci· USA.，102..1906-1910 (2005))。發炎 介體（諸如IL-6)可經由STAT3調節海帕西啶表現（Wrighting 等人，Blood，108:3204-3209 (2006) ; Verga Falzacappa等 人，Blood，109:353-358 (2007) ; Pietrangelo 等人，
Gastroenterology, 132:294-300 (2007))。本文所提供之數 據提供本發明之抗-FPN1 Mab增加血清鐵含量的活體内證 據。 本發明亦提供治療貧血之方法，該等方法包含投與本發 明之抗-FPN1 Mab或其抗原結合片段。在一些實施例中， 治療貧血之方法包含如下步驟：使用標準投藥技術，向處 144516.doc -55- 201023891 於如本文所述之病理學（例如貧血病症）風險下或展現如本 文所述之病理學（例如貧血病症）的個體投與包含抗_FPN1 Mab或其抗原結合片段的醫藥組合物。 本文中所用之短語「有效量」係指達到所要治療結果所 需之量（視劑量及持續時段及投藥方式而定）。抗體之有效 里可隨以下因素變化：諸如個體之疾病狀態、年齡、性別 及體重，以及抗體或抗體部分在個體中引發所要反應的能 力。有效量亦為抗體治療上有益之效應大於抗體之任何毒 性或有害效應的量。 有效量至少為活性劑向個體提供治療益處所需且小於有 毒量之最小量。換言之，本發明抗體之有效量或治療有效 量為在哺乳動物（較佳人類）中實現以下之量：⑴增加血清 鐵含量、網狀細料數、紅血球計數、血紅素及/或血球 比谷，或（u)治療成熟海帕西啶之存在所引起或造成不想 要病理學效應的病症；或（Hi)成熟海帕西啶之生物活性之 降低使哺乳動物（較佳人類）產生有益的治療效應：包括（但 不限於）貧血，包括（但不限於）慢性病貧血，包括（但不限 ;)感染發炎及/或癌症所產生之貧血。本發明抗體之有 效量可以單劑量或以多劑量投與。此外，本發明抗體之有 效量可以多次劑量投與，若投與不超過一次，其量小於有 效量。 =醫學技術中眾所周知，任—個體之劑量係視許多因素 而定二該等因素包括患者之體型、體表面積、年齡、投與 之特定化合物、性別、投藥時間及途經、一般健康狀況及 1445l6.doc 201023891 同時技與之其他藥物。劑量可進一步視疾病類型及嚴重程 度而變化。典型劑量可例如在約1 mg至約100 mg範圍内； 較佳為約2 mg至約1〇〇 mg ;更佳為約5 mg至約1〇〇吨；更 佳為約5 mg至約50 mg ;更佳為約5 mg至約25 mg ;更佳為 、·勺5 mg至約20 mg，更佳為約5 mg至約15 mg ;然而，尤其 考慮上述因素，預定劑量可低於或高於此例示性範圍。每 曰非經腸給藥方案可為約1〇 pg/kg至約1〇〇 mg/kg，較佳為 ❹ 約100叩/kg至約100 rng/kg，更佳為約！ mg/kg至約100 mg/kg，更佳為約！ mg/kg至約3〇叫心；更佳為約3 mg/kg 至約30 mg/kg，或最佳為約3 mg/kg至約3〇 。可利用 週期性評定監測進展，且據此調節劑量。 此等所建議之抗-FPN1抗體之量以大量治療判斷為依 據。在選擇適當劑量及時程中，關鍵因素為所獲得之結 果。本文中考慮之因素包括所治療之特定病症、個體患者 之臨床病狀、病因、傳遞抗體到達之部位、特定抗體類 • 型、投藥方法、投藥時程及醫學從業者已知的其他因素。 本發明之抗體化合物可用作人類醫學中經由多種途徑投 與的藥劑。該專組合物最佳用於非經腸投藥。該等醫藥乡且 - 合物可由此項技術中眾所周知之方法製備。參看例如 . Remington ·· The Science and Practice of Pharmacy, % \9 版（1995)，Gennaro, A_等人，Mack Publishing Co.，且包含 本文中揭示之一或多種抗體及醫藥學上可接受之載劑、稀 釋劑或賦形劑。 如本文中所使用之術語非經腸包括靜脈内、肌肉内、皮 144516.doc •57· 201023891 下、經直腸、經陰道或腹膜内投藥。經由靜脈内或腹膜内 或皮下注射之非經腸傳遞較佳。皮下注射最佳。適用於該 等注射液之媒劑在此項技術中眾所周知。 醫藥組合物在製造及於所提供之容器中儲存之條件下通 常必須無菌且穩定，該容器包括例如密封小瓶、注射器或 其他傳遞裝置，例如筆。因此，可在製造調配物後無菌過 濾醫藥組合物，或者使其在微生物方面為可接受的。 本發明抗體可併入適於投與人類個體之醫藥組合物中。 本發明抗體可單獨或與醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋 劑組合以單劑量或多劑量投與人類個體。該等醫藥組合物 係經什以適於所選擇之投藥模式，且適當時使用醫藥學 上可接受之稀釋劑、載劑及/或賦形劑，諸如分散劑、緩 衝劑、界面活性劑、防腐劑、增溶劑、等張劑（包括（但不 限於）氣化鈉）、穩定劑及其類似物。該等組合物可根據例 如 Remington，772e We似e o/P/mrwac少，第 19 版 Gennaro,編，Mack Publishing Co·, Easton, PA (1995) 中所揭示之習知技術進行設計，該文獻簡述從業者普遍已 知的調配技術。適用於醫藥組合物之載劑包括當與本發明 抗體組合時保持分子活性且不與個體之免疫系統反應的任 何物質。 在本文中可互換使用之術語「個體」及「患者」係指哺 乳動物’較佳指人類《在某些實施例中，患者患有將受益 於成熟海帕西咬含量降低、成熟海帕西咬生物活性降低 及/或血清鐵含量、網狀細胞計數、紅血球計數、血紅素 144516.doc * 58 - 201023891 及/或血球比容增加的病症。 單獨投與FPN1抗體化合物可適用於因例如不想要之副 作用而不耐受一或多種任何劑量或僅高劑量之ES A的患 者。單獨或與ESA組合投與的本發明之FPN1 Mab或其抗原 結合片段亦可適用於單獨用習知劑量或高劑量之ESA不能 - 達到血球比容目標的抗ESA患者。 當組合藥物療法（包括使用ESA)不足以使患者達到其血 球比容目標時，亦可投與本發明之FPN1 Mab或其抗原結 合片段。 以下非限制性實例說明本文中所揭示之抗-FPN1抗體的 各種性質。 實例1:產生人類海帕西啶-25 人類海帕西啶-25可自商業來源（例如Peptide International(Louisville，Kentucky))獲得或由此項技術已 知之多種合成技術或重組技術產生。或者，在大腸桿菌中 φ 表現包含人類海帕西啶-25序列之25個胺基酸且具有如SEQ ID NO: 91中所示之胺基酸序列的融合蛋白。在37°C下用 1 mM IPTG誘導3至6小時之後，自3公升表現人類海帕西 - 唆融合蛋白之大腸桿菌中分離包涵體（inclusion body)。將 . 該等包涵體溶解於緩衝液A(50 mM Tris及8 Μ脲（pH 8.0)) 中。使上清夜穿過IMAC管柱（20 mL樹脂）。用緩衝液A洗 滌管柱直至吸光度返回至基線，且以於缓衝液A中之0.5 Μ 咪唑自管柱中分批溶離出結合之多肽。彙集人類海帕西 啶-25融合蛋白，且用50 mM DTT還原。接著，藉由將所 144516.doc -59- 201023891 彙集之物質稀釋於2 Μ脲、3 mM半胱胺酸、50 mM Tris(pH 8·0)中直至最終蛋白質濃度小於50 gg/mL使此融合 蛋白再摺疊。在室溫下攪拌此物質，且用空氣氧化48小 時。使經氧化之多肽以5 mL/min之流速穿過IMAC管柱（20 mL)，且以於緩衝液A中之0.5 Μ咪唑自管柱中分批溶離出 人類海帕西啶-25融合蛋白。濃縮含有人類海帕西啶-25融 合蛋白的彙集溶離份，且使之以3 mL/min之流速穿過經5 0 mM Tris、4 Μ脲（pH 8.0)平衡之Superdex 75(GE Healthcare， XK26/60)尺寸分級管柱（sizing column)。彙集單體融合蛋 白，且接著稀釋於50 mM Tris、2 Μ脲、5 mM CaCl2(pH 8_0)中，且接著用腸激酶裂解以產生SEQ ID NO: 1之人類 海帕西啶-25。由被動IMAC層析（如上文所述）移除未裂解 之人類海帕西啶-25融合蛋白。接著使自IMAC管柱流出之 流以4.0 mL/min之流速穿過C-18逆相管柱。用於水中之 0.1% TFA洗滌管柱直至吸光度返回至基線，且用20%至 40%具有0.1% TFA之ACN之線性梯度以0.5%/min之速率自 管柱溶離出結合之多肽。彙集含有人類海帕西°定-25多肽 之溶離份，且藉由N末端胺基酸之定序分析及利用基質辅 助雷射脫附/離子化質譜（matrix assisted laser desorption/ionization mass spectrometry ; MALDI-MS)加以 分析。編碼大鼠、小鼠及石蟹獼猴海帕西啶-25及人類海 帕西啶-25之各種N末端截短形式（包括海帕西啶-22及海帕 西咬-20)之多肽可自市面上（例如Peptide International)獲 得。 144516.doc -60- 201023891 實例2 :產生34A9 Fab 可藉由用具有如SEQ ID NO: 11中所示之胺基酸序列的 免疫原肽使小鼠免疫來獲得抗-FPN1抗體。更特定言之， 可使用包含經由肽連接子連接於SEQ ID NO: 12中所示之 胺基酸序列（視為人類FPN1之細胞外環的至少一部分）之 OVA抗原決定基的免疫原肽使小鼠免疫。免疫之後，收集 小鼠之脾，且利用磁性活化細胞分類術（Magnetic Activated Cell Sorting)使用具有 SEQ ID NO: 12 中所示之胺 基酸序列的經生物素標記之肽及抗生蛋白鏈菌素珠粒分類 脾細胞。自抗原結合細胞中分離出RNA，且使用寡聚脫氧 胸苷使之轉化成cDNA。藉由PCR使用抗體構架引物獲得 抗體重鏈及輕鏈可變區，且選殖於噬菌體載體中以產生 Fab抗體文庫。用例如100 nM具有SEQ ID NO: 12中所示之 胺基酸序列的經生物素標記之肽筛選噬菌體抗體文庫。接 著，藉由DNA定序分析、Fab表現及與免疫肽及/或表現人 類轉鐵蛋白之細胞結合來表徵陽性結合純系。 按照基本上如上文所述之程序鑑別Fab 34A9。 實例3 :抗-FPN1 Mab之抗原決定基定位 可在墨點雜化（dot blot hybridization)實驗中使用含有與 FPN1相關之免疫原之部分序列的肽來確定小鼠Mab 34A9 之抗原決定基。可合成以下肽，且溶解於水中（加下劃線 之胺基酸表示實際FPN1之胺基酸序列）：
FpnE3a (SEQ ID NO: 96) ： GGSPFEDIRSRFIOGESITPTKGC
060719Z (SEQ ID NO: 97) ： GGSPFEDIRSRFIOGC 144516.doc -61 - 201023891 060719Y (SEQ ID NO: 98) ： GGIOGESITPTKIPEITTEGC 0708L4A (SEQ ID NO: 99) ： GGMPGSPLDLSVSPFEDGC 0708L4B (SEQ ID NO: 100) ： GGSPLDLSVSPFEDIRSGC 0708L4C (SEQ ID NO: 101) ： GGEDIRSRFIOGESITGC 0708L4D (SEQ ID NO: 102) ： GGRSRFIOGESITPTKGC 對於各肽，將3 μΐ 1-5 pg/mL肽在一片硝化纖維素膜上 點樣且風乾。用阻斷緩衝液（例如含有1% BSA之PBS)阻斷 該膜，接著在室溫下與於阻斷緩衝液中之3-5 pg/mL FPN1 抗體一起培育1小時。根據製造商之方案（LiCor，Inc ; Lincoln，NE)，用 lxPBST(10 mM填酸鈉、150 mM NaCl、 0.1% Tween-20，pH 7.4)洗滌膜3次，每次5分鐘，之後與 標記IR700之山羊抗-小鼠抗體一起培育。用lxPBST洗滌膜 3次，每次5分鐘，且在Odyssey成像系統及Odyssey軟體 (LiCor, Inc)上成像。 圖 1指示 Mab 34A9 與肽 FpnE3a、060719Z、0708L4C 及 0708L4D結合，所有肽均含有SEQ ID NO: 1之胺基酸409至 415。如與肽0708L4D之結合所指示，Mab 34A9不需要EDI 之胺基酸序列。Mab 34A9與肽060719Z之結合比0708L4C 弱；後一種肽含有FPN1(SEQ ID NO: 1)之胺基酸416-419 ° 實例4 :如由SPR所測定之抗-FPN1 Fab及Mab之親和力 FPN1結合Fab及Mab之親和力可在Biacore T100上且在 Biacore T100評估軟體（BIAcore® AB，Upsala，Sweden)中使 用1:1結合模型來確定。簡言之，使用T-REx系統（一種不 144516.doc •62· 201023891 含病毒轉錄活化子之市售四環素調控表現系統 (Invitrogen，Carlsbad，CA))在 T-Rex HEK 293細胞中產生 穩定的細胞株。所有生長條件均描述於Invitrogen所提供 之T-REx手冊中。FPN1在C末端處與GFP融合。用1-1〇 ng/mL多西環素（doxycycline)誘導FPN1-GFP之表現1 -24小 時。藉由自燒瓶刮下收集經誘導之細胞，且接著用1 xPBS 洗滌。在使用之前，可將細胞小球儲存在-80°C下。將約 5,000,000個經誘導之細胞再懸浮於含0.2% Tween-20及蛋 白酶抑制劑（例如CompleteTM蛋白酶抑制劑混合液鍵劑 (Roche Diagnostics Corp.，Indianapolis, IN))的 10 mM磷酸 鹽緩衝液中。使用3次冷凍/解凍/音波處理循環來溶解細 胞。用Biacore操作緩衝液將溶解產物稀釋兩倍，且離心以 移除殘骸。 在Biacore T100上，將兔抗-GFP抗體或山羊抗-GFP抗體 以5000-15 000 Ru固定在CM5晶片之流量槽1至4上。自經誘 導之細胞之溶解產物中捕獲FPN1-GFP至流量槽2、3或4 上。使用流量槽1作為參考。接著，以不同濃度之抗體注 射所有流量槽，以便評估結合及動力學。在使親和力效應 最小化方面，使用單價抗原結合片段（諸如Fab)的基於表面 電漿共振之測量一般優於在此檢定格式中使用多價抗體之 測量。表4a及4b分別顯示使用兔抗-GFP抗體（Invitrogen， Carlsbad，CA(目錄號 All 122))及山羊抗-GFP 抗體（R&D Systems，Minneapolis，MN(目錄號 AF4240))時，抗-人類 FPN1結合Fab之結合特徵。 144516.doc -63- 201023891 表4(a) : FPN1抗體之Fab對人類FPN1的結合動力學 (由 Biacore T100在 37°C 下測定）
Fab Kon (M Y1) Koffis1) 動力學Kd(M>) 34A9 6.321E+04 2.620E-03 4.145E-08 1G9 1.269E+05 8.974E-04 7.707E-09 3D8 1.920E+05 2.000E-03 1.042E-08 如表4(a)中所示，如在此檢定格式中由SPR在3 7°C下所 測定’小鼠Fab 34A9對人類FPN1的KD為約41 nM。如由 SPR在37°C下所測定，小鼠Fab 1G9(—種小氡Fab 34A9之 親和力成熟形式）對人類FPN1的KD為約7·7 nM，結合親和 力提高約5倍。如在此檢定格式中由SPR在3 7 °C下所測定，
Fab 3D8(—種小鼠Fab 1G9之具有人類重鏈構架VH1-69及 輕鏈構架02的人類化形式）顯示對人類FPN1之Kd為約10 nM。 表4(b) : FPN1抗體之Fab對人類FPN1的結合動力學 (由 Biacore T100在 37°C 下測定）°
Fab ⑻ Kon (m V1) Koffis1) 動力學Kn(M) 小鼠1G9 4 1.726E+05 4.968E-04 L__2.900E-09 人類3D8 3 3.284E+05 2.061E-03 ___6.293E-09 人類4A10-3 4 8.443E+05 1.483E-03 1-761E-09 人類 Combill 3 2.309E+06 6.369E-03 2.395E-09 人類L2.2-4 3 4.308E+05 7.905E-04 1.959E-09 如表4(b)中所示，如在此檢定格式中由SPR在3 7°C下所 測定，小鼠Fab 1 G9( —種小鼠Fab 34A9之親和力成熟形式） 對人類FPN1的KD為約2.9 nM。如在此檢定格式中由SPR在 37°C下所測定，Fab 3D8(—種小鼠Fab 1G9之具有人類重 鏈構架VH1-69及輕鏈構架02的人類化形式）顯示對人類 144516.doc -64- 201023891 FPN1之KD為約6.3 nM。如在此檢定格式中由SPR在37°C下 所測定，親和力成熟Fab 4A10-3、Combill及L2.2-4顯示對 人類FPN1之KD介於約2.4 nM至約1.8 nM之間。 表5顯示使用兔抗-GFP抗體（Invitrogen, Carlsbad, CA(目 錄號A11122))時，抗-人類FPN1結合Mab之結合特徵。 表5 : Mab對人類FPN1的結合動力學 (由 Biacore T100在 25°C 或 37°C 下測定）
Mab 溫度 Kon (M^s1) Koffis1) 動力學Kd(M) 小鼠34A9 25°C 6.901E+04 8.155E-05 1.182E-09 小鼠1G9 25〇C 1.348E+05 9.813E-05 7.281E-10 人類3D8 37〇C 3.252E+05 1.095E-03 3.366E-09
如由SPR在25°C下所測定，小鼠34A9 Mab對人類FPN1 的KD為約1.1 nM。如由SPR在25°C下所測定，小鼠1G9 Mab(—種小鼠34A9 Mab之親和力成熟形式）對人類FPN1的 KD為約0.73 nM。如由SPR在37°C下所測定，一種小鼠1G9 Mab之人類化形式3D8 Mab(具有分別為VH1-69及02之人 類重鏈及輕鏈構架）顯示對人類FPN1之KD為約3.4 nM。 如此實例中所述所測定之對人類FPN1之KD說明人類 FPN1之抗體的產生，該等抗體以高親和力結合人類 FPN1，且更特定言之，即使當人類FPN1由細胞表現且定 位於細胞膜中時，亦結合所存在之FPN1之抗原決定基。 實例5 : FPN1 Mab對細胞鐵蛋白含量之效應的活體外檢定 可監測内源性表現FPN1之Caco-2細胞（一種人類腸上皮 細胞細胞株）之鐵蛋白的變化。可藉由添加外源性鐵源增 加Caco-2細胞之鐵蛋白濃度，且該濃度可藉由添加可阻止 144516.doc -65- 201023891 鐵輸出之海帕西啶而進一步增加。因此，可如下測定抗_ 人類FPN1抗體對Caco-2細胞中成熟海帕西咬調節之鐵調節 的效應。 使用胰蛋白酶（Invitrogen，Carlsbad，CA)自細胞培養容器 中移出Caco-2細胞。收集細胞，且以生長培養基（例如 DMEM+10% FBS + 1%非必需胺基酸+ 1%抗生素/抗黴劑）洗 滌，且藉由平緩離心收集。將細胞再懸浮於培養基中且計 數。以生長培養基調節細胞濃度為1 x 1 〇6個細胞/毫升，且 向細胞中添加2.5 μΜ Fe:NTA(以I··4莫耳比製備）。向96孔 平底板之各孔中添加100 μΐ細胞，接著在37°c、5% c〇2下 培育24小時。在生長培養基中製備6x最終濃度的小鼠 IgG!(陰性對照組）及對人類FPN1之親和力不同的兩種抗 體。以一式三份向各孔中添加抗體稀釋液（25 pL)或培養 基。在至溫下培育板15分鐘’此時向適當的孔中添加25 pL含或不含600 nM海帕西啶（最終濃度為1〇〇 nM)之5 μΜ Fe:NTA。將細胞在37°C、5% C02下培育24小時，且接著 用200 μΐ杜爾貝科PBS(Dulbecco's PBS)洗滌3次，且溶解於 50 pL放射免疫沈澱檢定緩衝液（5〇 mM Tris(pH 7.5)、150 mM NaCl、0.1% SDS、1% Triton-ΧΙΟΟ® 及 0.5% 脫氧膽酸 鈉）+蛋白酶抑制劑（例如(：0111卩16161^蛋白酶抑制劑混合液錠 劑（Roche Diagnostics Corp.，Indianapolis, IN))中、混合且 在-70°C下冷凍直至使用ELIS A檢定鐵蛋白。 簡言之，每孔用110 μί 1 pg/mL之抗-人類鐵蛋白（Leinco Technologies, St. Louis, MO)塗布微量滴定板，且在4°C下 144516.doc -66- 201023891 培育隔夜。用洗滌緩衝液（0.02 M Tris、0.15 M NaCl、 0.1% Tween 20，pH 7.4)洗滌板 2次，且用 150 pL 於 PBS 中 之 1% 路蛋白（Thermo Fisher Scientific, Rockford, IL)阻 斷。在室溫下培育板1小時。向適當的孔中添加100 pL溶 解產物及標準物（人類肝鐵蛋白，Calbiochem/EMD Biosciences，La Jolla, CA)，且在室溫下培育1小時。洗蘇 板3次，且每孔使用100 pL按1:2000稀釋之抗-鐵蛋白-HRP 結合物（1^丨11(：0丁6〇1111〇1〇§丨63)且在室溫下培育1小時來偵測 結合之鐵蛋白。洗滌板4次，且向所有孔中分配100 pL OPD受質（5 mg受質錠劑，溶解於12.5 mL具有530% H2〇2之0.1 M Na2HP04、0.05 Μ檸檬酸（pH 5.0)中）。10分 鐘後，用100 pL 1 N HC1終止反應。使用適當的ELISA板 讀取器讀取490 nm下之吸光度（A490)。亦使用BCA蛋白質 檢定套組（Thermo Fisher Scientific)測量各樣品之蛋白質濃 度。考慮到孔與孔之間在細胞數目上可能存在差異，相對 φ 於蛋白質濃度校正鐵蛋白濃度數據，且以抑制百分比表示 所添加之抗體的效應。 如此實例中所述進行之實驗表明，人類海帕西啶-25對 • 細胞中鐵蛋白濃度之效應受Mab 34A9及1G9抑制（表6)。此 外，結果顯示，抗-FPN1 Mab之親和力與其功能性直接相 關。更特定言之，親和力較低之Mab 34A9即使處於最高濃 度（200 pg/mL)亦僅稍微抑制成熟海帕西啶誘導之效應 (25%抑制±0.5%)，而親和力較高之Mab 1G9展現顯著的呈 劑量依賴性方式之抑制。 144516.doc -67- 201023891 表6 樣品 鐵蛋白(ug)/蛋白質(pg) STD 抑制％ 僅 NTA:Fe 5.11 0.25 ΝΑ NTA+Fe+海帕西咬 9.95 0.86 ΝΑ 200 pg/mL mlgGi 9.40 0.25 11.6 100 pg/mLmlgGi 9.78 0.68 3.5 50 pg/mL mlgGi 10.06 0.96 0 25 pg/mL mlgGi 9.6 1.29 7.2 12.5 pg/mLmlgGi 10.01 1.11 0 6.25 pg/mL mlgGi 10.45 2.05 0 200pg/mLMablG9 6.07 0.34 80.2 100pg/mLMab 1G9 5.68 0.34 88.2 50 pg/mL Mab 1G9 7.11 0.54 58.7 12·5 pg/mLMab 1G9 7.93 0.43 41.7 6.25 pg/mL Mab 1G9 8.02 0.45 39.9 200pg/mLMab34A9 8.74 0.50 25 50 pg/mL Mab 34A9 9.65 0.80 6.2 此數據說明，Mab 1G9及34A9阻斷人類海帕西啶-25誘導 轉鐵蛋白内化及降解的能力，且因此減少自細胞之鐵輸出。 實例6:對人類海帕西啶-25與FPN1之結合之抑制的檢定 將經穩定轉染之FPN-GFP/293細胞於80 kL檢定培養基 (DMEM 11965、10% 透析 FBS，20 μΜ FAC、青黴素-鏈黴 素）中以每孔60,000個細胞塗於經聚-D-離胺酸塗布之板 中，且在37°C、10% C02下培育4小時。添加多西環素直至 最終濃度為11.2 nM，以便誘導FPN1表現。在37°C下培育 經多西環素誘導及未經多西環素誘導之對照細胞隔夜。接 著，捨棄生長培養基，且以於30 pL檢定培養基中之測試 抗體或同型對照抗體或以僅作為對照之30 μΐ^檢定培養基 替換，且在37°C下培育1小時。接著，向各孔中添加20 μΐ^ 經生物素標記之成熟人類海帕西啶直至最終濃度為30 nM。 將樣品在37°C下擱置1小時，之後用200 pL 2% FBS、D- 144516.doc -68 - 201023891 PBS(Invitrogen, Carlsbad, CA)洗蘇 4次。接著，添加 65 pL 溶解緩衝液（0.5% Triton X-100、10 mM EDTA)，且震盪板 10分鐘。接著，將各孔中之50 pL溶液轉移至經抗生蛋白 鏈菌素塗布之板（60 μΐ^ 2 gg/mL之抗生蛋白鏈菌素之PBS溶 液，在4°(：下培育隔夜，洗滌2次（0.1%丁〜661120、丁88)， 用酪蛋白/PBS阻斷）的個別孔中，且接著在室溫下培育1小 時。接著，洗滌板之各孔3次（0.1 % Tween 20、TBS)，且 添加50 pL 0.5 pg/mL之抗-人類海帕西啶-25 Mab 3.23，且 在室溫下培育樣品1小時。抗-人類海帕西啶-25 Mab 3.23 描述於PCT國際專利申請公開案WO 2009/058797中。接 著，洗滌板3次，且添加50 pL按1:2000稀釋之抗-人類IgG-辣根過氧化酶（HRP)。在室溫下培育1小時之後，添加50 pL OPD受質。4分鐘後，用1〇〇 pL 1 N HC1終止反應。使 用適當的ELISA板讀取器讀取490 nm下之吸光度（A490)。 表7 抑制％ 抗體濃度 抗體 1.2 uM ❶·3ιιΜ 0.75 uM 0.019 uM 1G9 平均值 58.1 55.5 33.7 17.5 SD 1.7 6.7 20.4 8.7 抗體濃度 6.0 uM 1.2 uM 0.24 uM 0.048 uM 34A9 平均值 26.4 31.2 9.6 -7.2 SD 26.8 6.9 6.0 12.1 ms IgGl 平均值 -3.4 0.5 -4.0 -11.0 SD 8.8 6.1 7.3 9.6 144516.doc •69- 201023891 基本上如實例6中所述進行之實驗中產生的數據顯示， Mab 1G9及34A9抑制人類海帕西啶-25結合人類FPN1之能 力。 實例7 :對抗-FPN1抗體抑制海帕西啶-25誘導之内化及降 解的基於細胞之檢定 可使用基於細胞之活體外檢定測量Mab或其抗原結合片 段針對人類FPN1之成熟海帕西啶中和活性。此種檢定可 能基於成熟海帕西唆誘導之其受體FPN1之内化及降解。 舉例而言，製備允許FPN1之誘導性表現的HEK 29；3穩定細 胞株。出於示蹤之目的，使FPN1在C末端處與GFP融合。 使用 T-REx 系統（Invitrogen，Carlsbad，CA)控制 FPN1-GFP分 子之誘導性表現。將FPN1-GFP編碼序列選殖於 PCDNA4/TO載體中，該載體含有誘導性啟動子及抗勻黴素 (Zeocin)標記。將所得構築體轉染於表現多西環素誘導性 表現所需之調控蛋白的T-REx-293細胞中。測試抗勻黴素 純系之FPN-GFP之誘導性表現。細胞生長條件基本上如T-REx系統（Invitrogen)之製造商之用戶手冊中所述。簡言 之，使細胞在DMEM、10% 透析 FBS、20 μΜ FAC+5 pg/mL 青黴素-鏈黴素中生長。用100 pg/mL勻黴素及5 pg/mL殺 稻瘟菌素（blasticidin)維持選擇。將細胞塗於經聚-D-離胺 酸塗布之96孔黑色/透明板上。使用高解析度螢光板讀取 器Acumen Explorer HTS讀取每孔之總螢光。 以胰蛋白酶處理後，使用FPNl-GFP/TREx 293穩定細胞 株使96孔檢定板每孔接種9,000個細胞。每孔之接種體積 144516.doc -70- 201023891 為80 pL。允許細胞附著隔夜。次日清早，向各孔中添加9 μι 30 ng/mL多西環素以誘導FPN1-GFP表現。在37°C誘導8 小時後，吸出培養基且以每孔150 pL PBS小心地洗滌各 孔。 將所要處理物（例如人類海帕西啶-25及/或測試抗體）設 置成96孔格式，以便在洗滌後快速添加至檢定板中。每孔 之最終檢定體積為45 pL。添加處理物後即刻使用Acumen Explorer(通道1設定為550伏特）讀取檢定板。此讀數一般 為〇小時讀數，且用於校正每孔之細胞數目，該細胞數目 與每孔之總螢光單位（FLU)相關。對於成熟人類海帕西啶 誘導之FPN1内化及降解，在0.5 μΜ成熟人類海帕西啶時可 見最大效應。成熟人類海帕西啶之IC5G為約10 ηΜ。對於 抗-FPN1抗體中和檢定，保持人類海帕西啶-25濃度在120 ηΜ，且在 600 ηΜ、200 ηΜ、67 ηΜ、22 ηΜ及 7.4 ηΜ下測 試抗-FPN1 Mab。培育板24小時，此後，再對其讀數，且 數據以24小時之每孔總FLU除以0小時之每孔總FLU的比率 表示。所有數據點均以一式四份進行。抑制百分比（％)既 定為減去120 ηΜ成熟人類海帕西啶處理物之值，且接著將 經FPN1抗體處理之值除以未經人類海帕西啶-25處理之 值。 在基本上如上文所述進行之活體外檢定中，用各種抗-FPN1 Mab中和人類海帕西啶-25之生物活性，其中所測量 之抑制百分比如下表8中所示。 144516.doc -71 - 201023891 表8 :抗-FPNl Mab對成熟人類海帕西啶誘導之内化及 降解的活體外抑制百分比（％)
Mab 34A9 Mab 1G9 Mab 3D8 Mab在600 nM 時 39.0% 67.9% 66.4% Mab 在200 nM 時 30.8% 62.4% 63.8% Mab在67 nM 時 23.6% 61.8% 55.7% Mab 在 22 nM 時 14.1% 49.9% 50.2% Mab在 7.4 nM 時 4.8% 24.3% 28.1% 基本上如實例7中所述進行之實驗中所產生的數據支持 如下結論：Mab 1G9、34A9及3D8大幅抑制人類海帕西啶-25活體外引起人類FPN1内化及降解的能力。 實例8:向石蟹獼猴單次靜脈内給藥後，Mab 1G9相對於 對照鼠類IgGl的生物活性 藉由以單次靜脈内劑量向雄性石蟹獼猴（Cynomolgus monkey/Macaca /asc/cw/aWi· ; 3-4 kg)投與 Mab且將其效應 與鼠類IgGl之對照投藥相比來研究抗-人類FPN1鼠類Mab 1G9對血清海帕西咬含量及血清鐵含量之生理學效應。投 藥後，收集血液樣品供分析血清鐵及血清海帕西啶。以注 射液形式經由隱靜脈投與劑量（30 mg/kg)。在投藥之後但 在自動物移除針之前，即刻用約2 mL鹽水沖洗給藥裝置。 表9 濃度 體積 (mg/mL) (mL/kg) 1 鼠類IgGl對照組 9.53 3.15 2 鼠類1G9 12.6 2.38 取樣供分析血清海帕西咬： 144516.doc -72- 201023891 在給藥之前及在給藥後0.5、1、3、6、10、24、48、 72、96及168小時收集血液。經由股靜脈收集血液（約0.5 mL)於不含抗凝血劑之試管中。在離心之前允許血液在環 境條件下凝結以獲得血清。血清樣品在於約-70°C下儲存 之前置於乾冰上。 取樣供分析血清鐵·· 在給藥之前及在給藥後1、3、6、24、48、72、96及168 小時收集血液。收集所有血液樣品，加以處理、加工、儲 存，且根據醫學界内視為可接受之方法進行分析。可由此 項技術中已知且醫學界内一般視為測量總血清鐵（Fe)之可 接受方法的任何方法測量血清鐵含量。由基本上如Murphy 等人，Blood, 110:1048-54(2007)中所述之液相層析-質譜 法來測定海帕西啶之血清濃度。測量血清鐵之檢定在此項技 術中眾所周知（參看例如Goodwin, J.F.等人，Clinical Chemistry 12: 47-57 (1966)及J. Clin· Path·, 24:334-335 (1971))。 血清海帕西啶濃度不受投與對照鼠類IgGl影響，且在所 研究之時程内在1.5 ng/mL至3 1 ng/mL範圍内。對照動物之 平均海帕西啶含量為11.5±8.8 ng/mL(平均值土SD)。投與鼠 類Mab 1G9後，血清海帕西啶含量自基線7.6 ng/mL及14.7 ng/mL分別升高至峰值49.7 ng/mL及79.1 ng/mL。血清海帕 西啶之峰值出現在投與鼠類Mab 1G9後約10小時（圖6)。血 清海帕西啶升高很可能歸因於鼠類Mab 1G9與其標靶FPN1 之相互作用，該標靶在結合FPN1後即阻斷FPN1與海帕西 啶之相互作用，從而延緩FPN1之清除及/或内化。 144516.doc -73- 201023891 在用對照鼠類igG處理之動物中’血清鐵未升高’且在 所研究之時間範圍内在64阳/dL至97 Kg/dL範圍内。投與 鼠類Mab 1G9後，企清鐵含量自基線136 M"g/dL及144 Kg/dL 分別升高至峰值306 pg/dL及292 pg/dL。血清鐵之峰值出 現在投與鼠類Mab 1G9後約48小時（圖7)。截至投藥後96小 時，血清鐵含量逐步返回至基線，表明血清鐵含量之升高 不可逆。 實例9 :對抗-FPN1抗體抑制海帕西啶-25誘導之内化及降 解的基於細胞之檢定 基本上如上文實例7中所述進行之實驗顯示，與Mab 34A9、3D8 及 1G9相比，Mab Combi-11、4A10-3 及 L2.2-4 活體外更有效地抑制人類海帕西啶-25誘導之人類FPN1之 内化及降解（參看表10)。更特定言之，以始於900 nM且進 行3倍連續稀釋的9點濃度曲線測試抗-FPN1 Mab。抑制百 分比（％)既定為減去120 nM海帕西啶處理物之值，且接著 將經Mab處理之值除以未經人類海帕西啶處理之值。在 Sigma Plot中確定相對IC50。最高抑制百分比（％)以及相對 IC5〇及絕對IC50顯不於表1〇中。 表10
Mab (IgG4) 最大抑制％ (n=3) 相對 IC5e(nM) (n=3) 絕對 ICso(nM) (n=3) Combi 11 92.6±4.5 3.7±0.2 3.8±0.1 4A10-3 85.9±2·2 4.7±1.5 5.7±1.7 L2.2-4 81.6±1.〇 4.8 ±1.2 6.2^1.6 3D8 86.8±7.〇 10.2±2.2 13.7±3.4 1G9 69.0±8.0 9.2±3.3 18.8±8.1 34A9 55.2±7ΤΪ 58.9±18.6 N.C. N.C..由於擬合曲線頂部未達到5〇%，因此無法計算絕對IC知。 144516.doc -74· 201023891 實例ίο .人類化抗-轉鐵蛋白單株抗體4A1〇 3在石蟹獼猴 中之藥效學效應 可在根據熟習此項技術者已知的方法向雄性石蟹獼猴投 與靜脈内劑篁後研究抗-轉鐵蛋白Mab之藥效學。舉例而 吕，在5個獨立的研究中，以單次靜脈内推注（每組n=4)向 石蟹獼猴投與劑量為0.3、1.〇、3.0、1〇及3〇 mg/kg之Mab 4A10-3。在第一次給藥之前及給藥後1、6、12、24、48、 ❿ 72、96、168及264小時獲取血液樣品（約〇 5 mL，用於鐵 參數分析）。在較高劑量下，在給藥後36〇、456、552及 648小時再獲取血液樣品。在給藥時，動物體重介於2 kg 至3 kg之間。經由股靜脈自各動物收集血液樣品於不含抗 凝血劑之試管中。 經靜脈内向雄性石蟹摘猴投與〇 3、1.〇、3.0、10及30 mg/kg Mab 4A10-3後，血清鐵濃度_時間分布與血清鐵之 劑量依賴性增加相關’企清鐵在給藥後24小時達到峰值。 ❿ 在10 mg/kg與30 mg/kg劑量之間，在峰值鐵反應（增加約2 倍）或反應持續時間方面未觀察到差異。在投與〇 3、1 〇及 3.0 mg/kg劑量之動物中，血清鐵在給藥後約48小時返回至 基線值。在投與10 mg/kg& 3〇 mg/kg劑量之動物中，血清 鐵在給藥後約7 2小時返回至基線值。 此外’在單一研究中，投與劑量為10 mg/kg之Mab 4A10-3單次皮下注射液在血清鐵之濃度及持續時間中產生 與相等靜脈内劑量後所觀察（n=4 ;平均值±SD)_致的反應 (n=2 ;平均值±SD)。 144516.doc •75- 201023891 資例11 ··人類化抗-轉鐵蛋白單株抗髏在大鼠及石蟹獼猴 中的藥物動力學 可根據熟習此項技術者眾所周知的方法活體内研究抗_ 轉鐵蛋白Mab之藥物動力學。在例示性研究中，在向雄： 石蟹鞠猴及普拉格-道利（Sprague Dawley)大鼠進行單次靜 脈内給藥後，研究抗-FPN1 Mab 4A1〇_3&c〇mM u之藥物 動力學。在給藥時，所使用之石蟹獼猴的體重介於2 2 0 與5.5 1^之間，且普拉格_道利大鼠之體重介於24〇§與265经 之間。 分3個階段進行在石蟹獼猴中進行之藥物動力學研究， 以約2週為間隔投與lo mg/kg、3 〇 mg/k^〇 3 mg/kg之劑 量。在各階段，以單次靜脈内推注投與Mab 4A1〇_3或Mab Combill(每組n=4)。在第一次給藥之前及在給藥後1、6、 12、24、48、72、96、168及264小時獲取血液樣品。 在大鼠中，以單次靜脈内推注投與劑量為3 mg/kg之Mab 4A10-3或Mab Combi 11(每組n=3)。在給藥之前及在給藥 後 0.08、1、4、8、24、48、72、120 及 168小時獲取連續 血液樣品。 使用人類IgG夾層ELISA格式測定Mab 4A10-3及Combi 11之血清濃度。標準曲線範圍為5 ng/mL至400 ng/mL，其 中工作定量下限（LLOQ)既定為1 〇 ng/mL。使用WinNonlin (5.2版）中之非隔室分析測定藥物動力學參數。 經靜脈内向雄性石蟹獼猴投藥後所得之血清濃度-時間 分布繪製於圖1〇中。在所研究之所有劑量下，Mab 4A10-3 144516.doc •76- 201023891 之清除比Mab Combill緩慢得多（約5倍）。當Mab Combill 之血清濃度為Mab 4A10-3所觀察到之血清濃度的約5〇0/〇 時’在第一個檢驗時間點（1小時）之差異明顯。在給藥後24 小時’ Mab 4A10-3之血清濃度為Cmax之20-33°/。，相比之 下 ’ Combill 僅為 6-9%。在 0.3 mg/kg 劑量後，Mab
Combill之周邊濃度不明顯。與3 mg/kg劑量相比，Mab 4A10-3在兩個較低劑量下之清除稍快。Mab 4八10-3之丁1/2 在2天至3天範圍内。然而，Mab Combill之T1/2在約12小 時至約27小時範圍内。 假設Mab Combill之清除相對於Mab 4Α10-3增加係由於 Mab Combil 1與細胞表面蛋白之非特異性相互作用（Mab 4A10-3不發生此相互作用）增加而引起。為了評估此假 設’在大鼠中研究Mab 4A10-3及Mab Combill之藥物動力 學，此係由於兩種Mab均不有效結合大鼠轉鐵蛋白。 經靜脈内向雄性大鼠投藥後所得之血清濃度-時間分布 繪製於圖11中。與靈長類動物中之觀察結果類似，在大鼠 中Mab 4A10-3之清除比Mab Combill慢（約5倍）（數據未圖 示）。又’當Mab Combill之血清濃度為Mab 4A10-3所觀察 到之血清濃度的約50。/。時，在第一個檢驗時間點（〇 〇8小 時）之差異明顯。在大鼠中’ Mab 4A10-3及Mab Combill之 Tw分別為約4·5天及3天（數據未圖示）。 此等數據強有力地表明，關於Mab Combi 11所觀察到之 更快速清除並非由標靶受體介導之清除造成，因為Mab 4A10-3與Mab Combill均不結合大鼠轉鐵蛋白。 144516.doc •77· 201023891
實例12:產生具有延遲之清除且較少非特異性（海帕西啶） 結合的Mab ComllGY 上文實例11中所述之Mab Combill之藥物動力學研究表 明，與Mab 4A10-3相比，Mab Combill更快速地自血清中 清除。數據亦表明，與Mab 4A10-3相比，Mab Combill更 快速地清除並非由標靶受體介導之Mab Combil 1之清除相 對於Mab 4A10-3增加所造成。 由於在Mab Combil 1工程改造期間已引入多個精胺酸殘 基，因此猜想，與Mab 4A10-3相比，所造成之Mab Combi 11之正電荷的增加例如導致與帶負電之膜表面及與 肝素之不想要的非特異性結合增加。實際上，Mab Combill之結構的建模顯示，Mab Combill表面上之塊斑 帶有強正電荷，與一些其他人類工程改造之抗-FPN1 Mab(包括Mab 4A10-3及Mab L2.2-4)相比，此現象在Mab Combi 11中更明顯。 根據熟習此項技術者已知的方法，使用肝素ELISA測試 Mab Combill、4A10-3及L2.2-4之非特異性肝素結合。亦 測試 Mab Combill、4A10-3、3D8 及 L2.2-4 與表現人類 FPN1之HEK 293細胞之結合，以及與缺乏表現於細胞表面 上之人類FPN1的對照HEK 293細胞之結合。 使用 Mab Combi-11 之肝素 ELISA 顯示，Mab Combill 較 強結合肝素，而Mab 4A10-3及L2.2-4則不然。此外’ Mab Combi-11亦較強結合表現人類FPN1之HEK 293細胞與缺乏 表現於細胞表面上之人類FPN1之對照HEK 293細胞。另一 144516.doc -78- 201023891 方面，Mab 4A10-3、3D8及L2.2-4顯著結合表現人類FPNl 之HEK 293細胞，但不結合對照HEK 293細胞。 因此產生Mab Com 11GY以藉由以甘胺酸胺基酸殘基替 代HCDR2中之精胺酸胺基酸殘基來減少關於Mab Combi 11 所觀察到之非特異性結合。此外，在Mab Com 11 GY中， 用酪胺酸胺基酸殘基取代Mab Combill中可見之另一潛在 成問題之胺基酸殘基，即LCDR2中之色胺酸胺基酸殘基。 使用來自表現Mab Com 11GY之細胞之上清液所得的初步 結合數據顯示，無與對照HEK 293細胞（亦即，不表現人類 FPN1之細胞）之非特異性結合，而Mab 1B7與ljrg均顯示與 相同對照細胞之非特性結合顯著更多。 實例13:對人類海帕西啶-25舆FPN1之結合之抑制的檢定 可檢定人類工程改造之親和力成熟抗-人類Fp：Kf丨抗胃< 抑制人類海帕西。定-25結合表現於HEK 293細胞中> 『 < 人類 FPN1的能力，該檢定基本上如實例6中所述。 簡言之，將經轉染之FPN/293細胞於80 pL檢定培養茂 (DMEM 11965、10% 透析 FBS、20 μΜ FAC、青黴素鍵徽 素）中以每孔40,000個細胞塗於96孔板（BD Biosciences 8如 Jose, CA ; BD Biocoat板，目錄號35 4640)上之經聚七雜 胺酸塗布之板中，以1000轉/分鐘離心1分鐘，且接著在 37。(：、10% C〇2下培育4小時。藉由向所塗之細胞中添加 μι 10 nM多西環素（多西環素之最終濃度為2 nM)來講導 FPN1表現。在37°C、1〇% C〇2下培育經多西環素誘導之細 胞及未經誘導之對照細胞5小時。接著，藉由用i 144516.doc -79· 201023891 滌板2次移除誘導劑。在100 μί檢定培養基中培育細胞隔 夜。接著，移除檢定培養基，且一式三份用40 μί測試抗 體或同型對照抗體溶液替換，且在37°C、10% C02下培育 20分鐘。接著，向各孔中添加20 pL經生物素標記之成熟 人類海帕西啶直至每孔之最終濃度為30 nM。在37°C、 10% C02下培育樣品1小時，之後用200 μί 2% FBS、D-PBS(Gibco，目錄號14040)洗滌4次。接著，向所有孔中添 加 65 μι 溶解缓衝液（0.5% Triton X-100、10 mM EDTA)， 且震盪板10分鐘。接著，將各孔中之50 μί溶液轉移至經 抗生蛋白鏈菌素塗布之Greiner微量滴定板（60 pL 2 pg/mL 抗生蛋白鍵菌素（Sigma, St. Louis, MO ;目錄號S4762)之 PBS溶液，在4°C培育隔夜，洗滌2次（0.1°/。Tween 20， TBS)，用酪蛋白/PBS阻斷）的個別孔中，且接著在室溫下 培育1小時。接著，洗滌板之各孔3次（0.1% Tween 20， TBS)，且添力口 5 0 μΧ 0.5 pg/mL抗-人類海帕西咬-25 Mab 3.23，且在室溫下培育樣品1小時。抗-人類海帕西啶-25 Mab 3.23描述於PCT國際專利申請公開案WO 2009/058797 中。接著，洗滌板3次，且添加按1:2000稀釋之50 pL山羊 抗-人類IgG-辣根過氧化酶（Southern Biotech，目錄號2060-05)。在室溫下培育1小時後，洗滌板4次，且添加50 pL OPD受質（Sigma ;目錄號P6912)。4分鐘後用100 μι 1 N HC1終止反應。使用適當的ELISA板讀取器讀取490 nm下 之吸光度（A49G)。檢定範圍既定為自接受對照抗體之誘導 孔中減去未經誘導之孔的A490。 144516.doc -80· 201023891 表11 抑制％ 抗體濃肩 抗體 2000 nM 500 nM 125 nM 31.25 nM 7.8 nM 3D8 — 平均值 54.7 64.7 21.8 4.0 -2.8 SD 9.0 2.5 14.9 11.5 2.7 ------ 4A10-3 平均值 95.3 84.9 59.3 13.4 5.4 SD 2.1 1.7 6.4 4.2 14.4 combi 11 平均值 79.9 81.6 88.4 32.1 18.7 — SD 9.0 8.8 4.8 3.1 8.4 L2.2-4 平均值 85. 1 99.8 76.5 27.5 -0.1 SD 20.8 6.5 9.3 3.9 2.9 對照IgG 平均值 -2.5 -0.7 1.9 7.9 2.5 SD 5.8 10.3 6.2 6.5 14.1 言主解：用於計算抗體濃度之分子量為75 kg/rn〇i。
此等數據顯示，人類化Mab 3D8及其親和力成熟變異體 顯著抑制人類海帕西啶_25結合人類FPN1之能力。更特定 言之，如在此檢定格式中所測定，Mab 3D8(—種小鼠Mab 1G9之具有人類重鏈構架VH1-69及輕鏈構架02的人類化形 式）顯示IC5G為約400 nM。如在此檢定格式中所測定，親和 力成熟Mab 4A10-3、Combil 1及L2.2-4顯示顯著改良對結 合之抑制。 【圖式簡單說明】 144516.doc -81 · 201023891 圖1描繪包含用於產生抗-FPN1抗體之免疫原片段的各種 肽之序列及使用該等肽確定抗-FPN1 Mab 34A9之抗原決定 基的肽-抗體結合實驗的結果。加有下劃線之胺基酸表示 實際轉鐵蛋白序列。Mab 34A9結合肽FpnE3a、060719Z、 0708L4C及0708L4D，所有該等肽均含有常見胺基酸序列 RSRFIQG(SEQ ID NO: 95)； 圖2A顯示間雜有CDR之完全人類輕鏈構架02的胺基酸 序列。4個構架區標記為FRL1、FRL2、FRL3及FRL4(分別 為 SEQ ID NO: 74、75、76及 77); 圖2B顯示間雜有CDR之人類重鏈構架VH1-69的胺基酸 序列。4個構架區標記為FRH1至FRH4(分別為SEQ ID NO: 78至81); 圖3A顯示間雜有CDR之人類輕鏈構架018的胺基酸序 列。4個構架區標記為FRL1、FRL2、FRL3及FRL4(分別為 SEQ ID NO: 74、75、82及77)。與02殘基不同之殘基以粗 體表示且加有下劃線； 圖3B顯示間雜有CDR之人類重鏈構架VH1-18的胺基酸 序列。4個構架區標記為FRH1、FRH2、FRH3及FRH4(分 別為SEQ ID NO: 83、79、84及81)。與VH1-69殘基不同之 殘基以粗體表示且加有下劃線； 圖4A顯示間雜有CDR之人類輕鏈構架L12的胺基酸序 列。4個構架區標記為FRL1、FRL2、FRL3及FRL4(分別為 SEQ ID NO: 85、75、86及77)。與02殘基不同之殘基以粗 體表示且加有下劃線； 144516.doc -82- 201023891 圖4B顯示間雜有CDR之人類重鏈構架vhI-46的胺基酸 序列。4個構架區標記為frhI、FRH2、FRH3及FRH4(分 別為SEQ ID NO: 83、79、87及81)。與VH1-69殘基不同之 殘基以粗體表示且加下劃線； 圖5顯示間雜有CDR之人類輕鏈構架L1的胺基酸序列。4 個構架區標記為FRL1、FRL2、FRL3及FRL4(分別為SEQ ID NO: 74、168、76及169)。與02殘基不同之殘基以粗體 ❹表示且加有下劃線。人類輕鏈構架L 12之FR1區的生殖系 序列如SEQ ID NO: 85中所示；在本發明之某些實施例 中’涵蓋人類輕鏈構架L1之FR1區的胺基酸序列如SEQ ID NO: 74中所示的變異； 圖6顯示以30 mg/kg之單次靜脈内劑量投與對照鼠類 kGl或鼠類Mab 1G9後，雄性石蟹獼猴之血清海帕西啶含 量曲線。數據來自個別動物； 圖7顯示以30 mg/kg之單次靜脈内劑量投與對照鼠類 φ IgG 1或鼠類Mab 1G9之投藥後，雄性石蟹彌猴之血清鐵含 量曲線。數據來自個別動物； 圖8顯示本發明之抗體及其抗原結合片段之較佳重鏈可 ' 變區的胺基酸序列及共同胺基酸序列。句點（.）指示該位置
處之胺基酸與1號序列之相應胺基酸相同。1號序列之CDR 加有下劃線且以粗體表示；
圖9顯示本發明之抗體及其抗原結合片段之較佳輕鏈可 變區的胺基酸序列及共同胺基酸序列。句點（·）指示該位置 處之胺基酸與1號序列之相應胺基酸相同。1號序列之CDR 144516.doc •83- 201023891 加有下劃線且以粗體表示； 圖10描繪0.3 mg/kg、1.0 mg/kg或3.0 mg/kg之單次靜脈 内推注劑量後，石蟹獨猴之Mab 4A10-3及Mab Combi 11之 血清濃度。劑量為0.3 mg/kg時Mab Combill之血清濃度低 於檢定之偵測極限（<20 ng/mL)。數據為平均值±SD ;及 圖11描繪3.0 mg/kg之單次靜脈内推注劑量後，普拉格-道利大鼠之Mab 4A10-3及Mab Combill之血清濃度。數據 為平均值士SD。 144516.doc -84 - 201023891 序列表 <11〇>美國禮來大藥廠 <120>抗-轉鐵蛋白1之單株抗體及其用途 <130> X18276 <140> 098140185 <141> 2009-11-25 <150> US 61/120076 <151> 2008-12-05 <150> US 61/239818 <151> 2009-09-04 <160> 214 <170> Patcntin version 3.5
<210> 1 <211> 571 <212> PRT <213>智人 <400> 1
Met Thr Arg Ala Gly Asp His Asn Arg Gin Arg Gly Cys Cys Gly Ser 15 10 15
Leu Ala Asp Tyr Leu Thr Ser Ala Lys Phe Leu Leu Tyr Leu Gly His 20 25 30
Ser Leu Ser Thr Trp Gly Asp Arg Met Trp His Phc Ala Val Ser Val 35 40 45
Phe Leu Val Glu Leu Tyr Gly Asn Ser Leu Leu Leu Thr Ala Val Tyi 50 55 60
Gly Leu Val Val Ala Gly Ser Val Leu Val Leu Gly Ala lie lie Gly 65 70 75 80
Asp Trp Val Asp Lys Asn Ala Arg Leu Lys Val Ala Gin Thr Ser Leu 85 90 95
Val Val Gin Asn Val Ser Val lie Leu Cys Gly lie lie Leu Met Met 100 105 110
Val Phe Leu His Lys His Glu Leu Leu Thr Met Tyr His Gly Trp Val 115 120 125
Leu Thr Ser Cys Tyr lie Leu lie lie Thr lie Ala Asn lie Ala Asn 130 135 140
Leu Ala Ser Thr Ala Thr Ala lie Thr lie Gin Arg Asp Trp lie Val 145 150 155 160
Val Val Ala Gly Glu Asp Arg Ser Lys Leu Ala Asn Met Asn Ala Thr 165 170 175 lie Arg Arg lie Asp Gin Leu Thr Asn lie Leu Ala Pro Met Ala Val 180 185 190
Gly Gin lie Met Thr Phc Gly Ser Pro Val lie Gly Cys Gly Phe lie 195 200 205 144516-序列表.doc 201023891
Ser Gly Trp Asn Leu Val Ser Met Cys Val Glu Tyr Val Leu Leu Trp 210 215 220
Lys Val Tyr Gin Lys Thr Pro Ala Leu Ala Val Lys Ala Gly Leu Lys 225 230 235 240
Glu Glu Glu Thr Glu Leu Lys Gin Leu Asn Leu His Lys Asp Thr Glu 245 250 255
Pro Lys Pro Leu Glu Gly Thr His Leu Met Gly Val Lys Asp Ser Asn 260 265 270 lie His Glu Leu Glu His Glu Gin Glu Pro Thr Cys Ala Ser Gin Met 275 280 285
Ala Glu Pro Phe Arg Thr Phe Arg Asp Gly Trp Val Ser Tyr Tyr Asn 290 295 300
Gin Pro Val Phe Leu Ala Gly Met Gly Leu Ala Phe Leu Tyr Met Thr 305 310 315 320
Val Leu Gly Phe Asp Cys lie Thr Thr Gly Tyr Ala Tyr Thr Gin Gly 325 330 335
Leu Ser Gly Ser lie Leu Ser lie Leu Met Gly Ala Ser Ala lie Thr 340 345 350
Gly lie Met Gly Thr Val Ala Phe Thr 丁rp Leu Arg Arg Lys Cys Gly 355 360 365
Leu Val Arg Thr Gly Leu lie Ser Gly Leu Ala Gin Leu Ser Cys Leu 370 375 380 lie Leu Cys Val lie Ser Val Phe Met Pro Gly Ser Pro Leu Asp Leu 385 390 395 400
Ser Val Ser Pro Phe Glu Asp lie Arg Ser Arg Phe lie Gin Gly Glu 405 410 415
Ser lie Thr Pro Thr Lys lie Pro Glu lie Thr Thr Glu ile Tyr Met 420 425 430
Ser Asn Gly Ser Asn Ser Ala Asn Ile Val Pro Glu Thr Ser Pro Glu 435 440 445
Ser Val Pro Ile Ile Ser Val Ser Leu Leu Phe Ala Gly Val Ile Ala 450 455 460
Ala Arg Ile Gly Leu Trp Ser Phe Asp Leu Thr Val Thr Gin Leu Leu 465 470 475 480
Gin Glu Asn Val Ile Glu Ser Glu Arg Gly Ile Ile Asn Gly Val Gin 485 490 495
Asn Ser Met Asn Tyr Leu Leu Asp Leu Leu His Phe Ile Met Val Ile •1· 144516-序列表.doc
201023891 500 505 510
Leu Ala Pro Asn Pro Glu Ala Phe Gly Leu Leu Val Leu lie Ser Val 515 520 525
Ser Phe Val Ala Met Gly His lie Wet Tyr Phe Arg Phe Ala Gin Asn 530 535 540
Thr Leu Gly Asn Lys Leu Phe Ala Cys Gly Pro Asp Ala Lys Glu Val 545 550 555 560
Arg Lys Glu Asn Gin Ala Asn Thr Ser Val Val 565 570 <210> 2 <211> 1716 <212> DNA <213>智人 <400> 2 atgaccaggg cgggagatca caaccgccag agaggatgct gtggatcctt ggccgactac ctgacctctg caaaattcct tctctacctt ggtcattctc tctctacttg gggagatcgg atgtggcact ttgcggtgtc tgtgtttctg gtagagctct atggaaacag cctccttttg acagcagtct acgggctggt ggtggcaggg tctgttctgg tcctgggagc catcatcggt gactgggtgg acaagaatgc tagacttaaa gtggcccaga cctcgctggt ggtacagaat gtttcagtca tcctgtgtgg aatcatcctg atgatggttt tcttacataa acatgagctt ctgaccatgt accatggatg ggttctcact tcctgctata tcctgatcat cactattgca aatattgcaa atttggccag tactgctact gcaatcacaa tccaaaggga ttggattgtt gttgttgcag gagaagacag aagcaaacta gcaaatatga atgccacaat acgaaggatt gaccagttaa ccaacatctt agcccccatg gctgttggcc agattatgac atttggctcc ccagtcatcg gctgtggctt tatttcggga tggaacttgg tatccatgtg cgtggagtac gttctgctct ggaaggttta ccagaaaacc ccagctctag ctgtgaaasc tggtcttaaa gaagaggaaa ctgaattgaa acagctgaat ttacacaaag atactgagcc aaaacccctg gagggaactc atctaatggg tgtgaaagac tctaacatcc atgagcttsa acatgagcaa gagcctactt gtgcctccca gatggctgag cccttccgta ccttccgaga tggatgggtc tcctactaca accagcctgt gtttctggct ggcatgggtc ttgctttcct ttatatgact gtcctgggct ttgactgcat caccacaggg tacgcctaca ctcagggact gagtggttcc atcctcagta ttttgatggg agcatcagct ataactggaa taatgggaac tgtagctttt acttggctac gtcgaaaatg tggtttggtt cggacaggtc tgatctcagg attggcacag ctttcctgtt tgatcttgtg tgtgatctct gtattcatgc ctggaagccc cctggacttg tccgtttctc cttttgaaga tatccgatca aggttcattc aaggagagtc aattacacct accaagatac ctgaaattac aactgaaata tacatgtcta atgggtctaa ttctgctaat attgtcccgg agacaagtcc tgaatctgtg cccataatct ctgtcagtct gctgtttgca ggcgtcattg ctgctagaat cggtctttgg tcctttgatt taactgtgac acagttgctg caagaaaatg taattgaatc tgaaagaggc attataaatg gtgtacagaa ctccatgaac 144516-序列表.doc 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 201023891 tatcttcttg atcttctgca tttcatcatg gtcatcctgg ctccaaatcc tgaagctttt ggcttgctcg tattgatttc agtctccttt gtggcaatgg gccacattat gtatttccga tttgcccaaa atactctggg aaacaagctc tttgcttgcg gtcctgatgc aaaagaagtt aggaaggaaa atcaagcaaa tacatctgtt gtgtag <210> 3 <211> 573 <212> ΗΤΓ <213>石蟹獼猴 <400> 3
Met Thr Arg Ala Gly Asp His Asn Arg Gin Arg Gly Cys Cys Gly Ser 15 10 15
Leu Ala Asp Tyr Leu Thr Ser Ala Lys Phe Leu Leu Tyr Leu Gly His 20 25 30
Ser Leu Ser Thr Trp Gly Asp Arg Met Trp His Phe Ala Val Ser Val 35 40 45
Phe Leu Val Glu Leu Tyr Gly Asn Scr Leu Leu Leu Thr Ala Val Tyr 50 55 60
Gly Leu Val Val Ala Gly Ser Val Leu Val Leu Gly Ala lie He Gly 65 70 75 80
Asp Trp Val Asp Lys Asn Ala Arg Leu Lys Val Ala Gin Thr Ser Leu 85 90 95
Val Val Gin Asn Val Ser Val lie Leu Cys Gly lie lie Leu Met Met 100 105 110
Val Phe Leu His Lys His Glu Leu Leu Thr Met Tyr His Gly Trp Val 115 120 125
Leu Thr Ser Cys Tyr lie Leu He lie Thr lie Ala Asn lie Ala Asn 130 135 140
Leu Ala Ser Thr Ala Thr Ala lie Thr lie Gin Arg Asp Trp lie Val 145 150 155 160
Val Val Ala Gly Glu Asp Arg Ser Lys Leu Ala Asn Met Asn Ala Thr 165 170 175 lie Arg Arg lie Asp Gin Leu Thr Asn lie Leu Ala Pro Met Ala Va] 180 185 190
Gly Gin lie Met Thr Phe Gly Ser Pro Val lie Gly Cys Gly Phe lie 195 200 205
Ser Gly Trp Asn Leu Val Ser Met Cys Val Glu Tyr Phe Leu Leu Trp 210 215 220
Lys Val Tyr Gin Lys Thr Pro Ala Leu Ala Val Lys Ala Ala Phe Lys 225 230 235 240 •4· 1560 1620 1680 1716 144516-序列表.doc 201023891
Glu Glu Glu Thr Glu Leu Lys Gin Leu Asn Leu His Lys Asp Thr Glu 245 250 255
Pro Lys Pro Leu Glu Gly Thr His Leu Met Gly Val Lys Asp Ser Asn 260 265 270 lie His Glu Leu Glu His Glu Gin Glu Pro Thr Cys Ala Ser Gin Met 275 280 285
Ala Glu Pro Phe Arg Thr Phe Arg Asp Gly Trp Val Ser Tyr Tyr Asn 290 295 300
Gin Pro Val Phe Leu Ala Gly Met Gly Leu Ala Phe Leu Tyr Met Thr 305 310 315 320
Val Leu Gly Phe Asp Cys lie Thr Thr Gly Tyr Ala Tyr Thr Gin Gly 325 330 335
Leu Ser Gly Ser lie Leu Ser lie Leu Met Gly Ala Ser Ala lie Thr 340 345 350
Gly I1C Met G.y Val Ala Phe Trp Leu Arg Arf Lys Cys Gly
Leu Val Arg Thr Gly Leu He Ser Gly Leu Ala Gin Leu Ser Cys Leu 370 375 380 lie Leu Cys Val lie Set Val Phe Met Pro Gly Ser Pro Leu Asp Leu 385 390 395 400
Ser Val Ser Pro Phe Glu Asp lie Arg Ser Arg Phe lie Gin Gly Glu 405 410 415
Ser He Thr Pro Thr Lys lie Pro Glu Thr lie He Thr Thr Glu lie 420 425 430
Tyr Met Ser Asn Gly Ser Asn Ser Ala Asn lie Val Pro Glu Thr Ser 435 440 445
Pro Glu Ser Val Pro lie lie Ser Val Ser Leu Leu Phe Ala Gly Val 450 455 460 lie Ala Ala Arg lie Gly Leu Trp Ser Phe Asp Leu Thr Val Thr Gin 465 470 475 480
Leu Leu Gin Glu Asn Val lie Glu Ser Glu Arg Gly lie lie Asn Gly 485 490 495
Val Gin Asn Ser Met Asn Tyr Leu Leu Asp Leu Leu His Phe lie Met 500 505 510
Val lie Leu Ala Pro Asn Pro Glu Ala Phe Gly Leu Leu Val Leu lie 515 520 525
Ser Val Scr Phe Val Ala Met Gly His lie Met Tyr Phe Arg Phe Ala 530 535 540 144516·序列表.doc 201023891
His Asn Thr Leu Gly Asn Lys Leu Phe Ala Cys Gly Pro Asp Ala Lys 545 550 555 560
Glu Val Arg Lys Glu Asn Gin Ala Asn Thr Ser Val Val 565 570
<210> 4 <211> 1320 <212> DNA <213>人工 <220> <223>合成 <400> 4 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg catctggcta cgccttcact tcgttcttga tagagtgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaacg agtaatccta ggactgggag gacgaagtat 180 aaatccaagt tcaggggcag agtcaccatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgcgagttt 300 tttgactact ggggccaagg aaccacggtc accgtctcct cagcctccac caagggccca 360 tcggtcttcc cgctagcgcc ctgctccagg agcacctccg agagcacagc cgccctgggc 420 tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg 480 accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc ctacagtcct caggactcta ctccctcagc 540 agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcttg ggcacgaaga cctacacctg caacgtagat 600 cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag agagttgagt ccaaatatgg tcccccatgc 660 ccaccctgcc cagcacctga ggccgccggg ggaccatcag tcttcctgtt ccccccaaaa 720 cccaaggaca ctctcatgat ctcccggacc cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg 780 agccaggaag accccgaggt ccagttcaac tggtacgtgg atggcgtgga ggtgcataat 840 gccaagacaa agccgcggga ggagcagttc aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900 accgtcctgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960 ggcctcccgt cctccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagagcca 1020 caggtgtaca ccctgccccc atcccaggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080 tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggaaag caatgggcag 1140 ccggagaaca actacaagac cacgcctccc £tgctg£act ccgacggctc cttcttcctc 1200 tacagcaggc taaccgtgga caagagcagg tggcaggagg ggaatgtctt ctcatgctcc 1260 gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acacagaaga gcctctccct gtctctgggt 1320 <210>
570S <21】> <212> <213〉 <400> 5
Met Thr Lys Ser Arg Asp Gin Thr His Gin Glu Gly Cys Cys Gly Ser 15 10 15 -6· 144516-序列表.doc 201023891
Leu Ala Asn Tyr Leu Thr Scr Ala Lys Phe Leu Leu Tyr Leu Gly His 20 25 30
Ser Leu Ser Thr Trp Gly Asp Arg Met Trp His Phe Ala Val Ser Val 35 40 45
Phe Leu Val Glu Leu Tyr Gly Asn Ser Leu Leu Leu Thr Ala Val Tyr 50 55 60
Gly Leu Val Val Ala Gly Ser Val Leu Val Leu Gly Ala He lie Gly 65 70 75 80
Asp Trp Val Asp Lys Asn Ala Arg Leu Lys Val Ala Gin Thr Ser Leu 85 90 95
Val Val Gin Asn Val Ser Val lie Leu Cys Gly lie lie Leu Met Met 100 105 110
Val Phe Leu His Lys Asn Glu Leu Leu Asn Met Tyr His Gly Trp Val 115 120 125
Leu Thr Val Cys Tyr lie Leu lie He Thr lie Ala Asn lie Ala Asn 130 135 140
Leu Ala Ser Thr Ala Thr Ala lie Thr lie Gin Arg Asp Trp lie Val 145 150 155 160
Val Val Ala Gly Glu Asn Arg Set Arg Leu Ala Asp Met Asn Ala Tht 165 170 275 lie Arg Arg lie Asp Gin Leu Thr Asn lie Leu Ala Pro Met Ala Val 180 185 190
Gly Gin lie Met Thr Phe Gly Ser Pro Val lie Gly Cys Gly Phe lie 195 200 205
Ser Gly Trp Asn Leu Val Ser Met Cys Val Glu Tyr Phe Leu Leu Trp 210 215 220
Lys Val Tyr Gin Lys Thr Pro Ala Leu Ala Val Lys Ala Ala Leu Lys 225 230 235 240
Val Glu Glu Ser Glu Leu Lys Gin Leu Thr Ser Pro Lys Asp Thr Glu 245 250 255
Pro Lys Pro Leu Glu Gly Thr His Leu Met Gly Glu Lys Asp Ser Asn 260 265 270 lie Arg Glu Leu Glu Cys Glu Gin Glu Pro Thr Cys Ala Scr Gin lie 275 280 285
Ala Glu Pro Phe Arg Thr Phe Arg Asp Gly Trp Val Ser Tyr Tyr Asn 290 295 300
Gin Pro Val Phe Leu Ala Gly Met Gly Leu Ala Phe Leu Tyr Met Thr 305 310 315 320 144516-序列表.doc 201023891
Val Leu Gly Phe Asp Cys lie Thr Thr Gly Tyr Ala Tyr Thr Gin Gly 325 330 335
Leu Ser Gly Ser lie Leu Ser Val Leu Met Gly Ala Ser Ala lie Thr 340 345 350
Gly lie Met Gly Thr Val Ala Phe Thr Trp Leu Arg Arg Lys Cys Gly 355 360 365
Leu Val Arg Thr Gly Leu Phe Ser Gly Leu Ala Gin Leu Ser Cys Leu 370 375 380 lie Leu Cys Val lie Ser Val Phe Met Pro Gly Ser Pro Leu Asp Leu 385 390 395 400
Scr Val Ser Pro Phe Glu Asp lie Arg Ser Arg Phe lie His Glu Glu 405 410 415
Ala Val Ser Ser Thr Thr Lys lie Pro Glu Thr Glu Met Leu Met Ser 420 425 430
Asn Val Ser Asn Val Val Asn Thr Val His Glu Met Ser Thr Lys Ser 435 440 445
Val Pro lie lie Ser Val Ser Leu Leu Phe Ala Gly Val lie Ala Ala 450 455 460
Arg lie Gly Leu Trp Ser Phe Asp Leu Thr Val Thr Gin Leu Leu Gin 465 470 475 480
Glu Asn Val lie Glu Ser Glu Arg Gly lie lie Asn Gly Val Gin Asn 485 490 495
Ser Met Asn Tyr Leu Leu Asp Leu Leu His Phe He Met Val lie Leu 500 505 510
Ala Pro Asn Pro Glu Ala Phe Gly Leu Leu Val Leu lie Ser Val Ser 515 520 525
Phe Val Ala Met Gly His Leu Met Tyr Phe Arg Phe Ala Gin Lys Thr 530 535 540
Leu Gly Asn Gin lie Phe Val Cys Ala Pro Asp Glu Lys Glu Val Thr 545 550 555 560
Asp Glu Ser Gin Pro Asn Thr Ser Val Val 565 570 <210> 6 <211> 1713 <212> DNA <213>大鼠屬 <400> 6 atgaccaagt caagagatca gacccatcag gaaggatget gtggatcttt agcaaactac ctgacctcag caaaattcct cctctacctt ggccactctc tctccacttg gggggatcgg 144516序歹(J表.doc ❹
201023891 atgtggcact ttgcagtgtc tgtgtttctg gtggaactct acggaaacag cctcctcttg acagctgtct acgggttggt ggtggcaggc tctgttctgg tcctgggagc catcattggt gactgggtgg ataagaatgc cagacttaaa gtggcccaga cgtccctggt ggttcagaat gtatcagtca ttctctgcgg gatcatcctg atgatggttt tcttacacaa gaatgagctt ctgaacatgt atcatggatg ggtccttact gtctgctaca tcctgatcat caccattgca aacattgcga atttggccag tactgccact gcaattacaa tccaaaggga ctggattgtt gtcgtagcas gagaaaacag gagcagatta gcagacatga atgctaccat tagaaggatt gaccagctaa ccaacatcct ggcccccatg gctgttggcc agattatgac attcggttcc ccagtcattg gctgtggttt catttctggt tggaatttgg tgtccatgtg tgtggagtac ttcttgctct ggaaggttta ccagaagacc cctgctctgg ctgtaaaagc tgctctcaag gtagaggagt cagaactgaa gcagctgacc tcacctaaag atactgagcc aaaacctttg gagggaactc acctaatggg tgagaaagac tctaacatcc gtgaacttga atgtgaacaa gaacccacct gtgcctccca gatcgcagaa cccttccgca cttttcgaga tggatgggtc tcctactata accagcccgt atttttggct ggcatgggcc tggctttcct ctatatgaca gtcctgggct tcgactgtat caccacagga tatgcttaca ctcagggact gagtggttcc atcctcagtg ttttgatggg agcatcagca ataactggaa taatgggaac tgtggccttc acttggctac gtcgaaaatg tggccttgtt cggactggtc tgttctcagg actggctcag ctttcttgtt tgatcttgtg tgtgatctcc gtgttcatgc ctggaagccc cttggacctg tctgtttctc catttgaaga tatccgttct aggtttatac atgaggaggc agtgtcctca actaccaaaa tacctgaaac agaaatgctt atgtctaatg tgtctaatgt tgtcaatacc gtccatgaga tgagtactaa atccgtcccc ataatctccg tcagcctgct gtttgcagga gtcattgctg ctagaatcgg tctttggtcc tttgatttga ctgtgacaca gttgctgcaa gaaaatgtaa ttgaatcaga aagaggcatt atcaatggtg tgcagaactc catgaactac cttctcgacc ttctgcattt catcatggtc atcttggccc caaatcctga agcttttggc ttgctagtat tgatttcagt ctcctttgtg gcaatgggac atcttatgta tttccgtttt gcccagaaga ctctgggcaa ccagattttt gtttgtgctc ctgatgaaaa ggaagttaca gatgaaagtc agcctaatac atctgttgtg tag <210> 7 <211> 570 <212> PRT <213>小鼠屬 <400> 7
Met Thr Lys Ala Arg Asp Gin Thr His Gin Glu Gly Cys Cys Gly Scr 15 10 15
Leu Ala Asn Tyr Leu Thr Ser Ala Lys Phe Leu Leu Tyr Leu Gly His 20 25 30
Ser Leu Ser Thr Trp Gly Asp Arg Met Trp His Phe Ala Val Ser Val 35 40 45
Phe Leu Val Glu Leu Tyr Gly Asn Ser Leu Leu Leu Thr Ala Val Tyr 144516-序歹丨j表.doc 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1713 -9- 201023891 50 55 60
Gly Leu Val Val Ala Gly Ser Val Leu Val Leu Gly Ala lie lie Gly 65 70 75 80
Asp Trp Val Asp Lys Asn Ala Arg Leu Lys Val Ala Gin Thr Ser Leu 85 90 95
Val Val Gin Asn Val Ser Val lie Leu Cys Gly lie lie Leu Met Met 100 105 110
Val Phe Leu His Lys Asn Glu Leu Leu Thr Met Tyr His Gly Trp Val 115 120 125
Leu Thr Val Cys Tyr lie Leu lie lie Thr He Ala Asn lie Ala Asn 130 135 140
Leu Ala Ser Thr Ala Thr Ala lie Thr lie Gin Arg Asp Trp lie Val 145 150 155 160
Val Val Ala Gly Glu Asn Arg Ser Arg Leu Ala Asp Met Asn Ala Thr 165 170 175 lie Arg Arg lie Asp Gin Leu Thr Asn lie Leu Ala Pro Met Ala Val 180 185 190
Gly Gin lie Met Thr Phe Gly Ser Pro Val lie Gly Cys Gly Phe He 195 200 205
Ser Gly Trp Asn Leu Val Ser Met Cys Val Glu Tyr Phe Leu Leu Trp 210 215 220
Lys Val Tyr Gin Lys Thr Pro Ala Leu Ala Val Lys Ala Ala Leu Lys 225 230 235 240
Val Glu Glu Ser Glu Leu Lys Gin Leu Thr Ser Pro Lys Asp Thr Glu 245 250 255
Pro Lys Pro Leu Glu Gly Thr His Leu Met Gly Glu Lys Asp Ser Asn 260 265 270 lie Arg Glu Leu Glu Cys Glu Gin Glu Pro Thr Cys Ala Ser Gin Met 275 280 285
Ala Glu Pro Phe Arg Thr Phe Arg Asp Gly Trp Val Ser Tyr Tyr Asn 290 295 300
Gin Pro Val Phe Leu Ala Gly Met Gly Leu Ala Phe Leu Tyr Met Thr 305 310 315 320
Val Leu Gly Phe Asp Cys lie Thr Thr Gly Tyr Ala Tyr Thr Gin Gly 325 330 .335
Leu Ser Gly Ser lie Leu Ser lie Leu Met Gly Ala Ser Ala lie Thr 340 345 350 10- 144516-序歹丨J表.doc 201023891
Gly lie Met Gly Thr Val Ala Phe Thr Ττρ Leu Arg Arg Lys Cys Gly 355 360 365
Leu Val Arg Thr Gly Leu Phe Ser Gly Leu Ala Gin Leu Ser Cys Leu 370 375 380 lie Leu Cys Val lie Scr Val Phe Met Pro Gly Ser Pro Leu Asp Leu 385 390 395 400
Ser Val Ser Pro Phe Glu Asp lie Arg Ser Arg Phe Val Asn Val Glu 405 410 415
Pro Val Ser Pro Thr Thr Lys lie Pro Glu Thr Val Phe Thr Thr Glu 420 425 430
Met His Met Ser Asn Met Ser Asn Val His Glu Met Ser Thr Lys Pro 435 440 445 lie Pro lie Val Ser Val Ser Leu Leu Phe Ala Gly Val lie Ala Ala
Arg lie Gly Leu Trp Ser Phe Asp Leu Thr Val Thr Gin Leu Leu Gin 465 470 475 480
Glu Asn Val lie Glu Ser Glu Arg Gly lie lie Asn Gly Val Gin Asn 485 490 495
Ser Met Asn Tyr Leu Leu Asp Leu Leu His Phe lie Met Val lie Leu 500 505 510
Ala Pro Asn Pro Glu Ala Phe Gly Leu Leu Val Leu lie Ser Val Ser 515 520 525
Phe Val Ala Met Gly His Leu Met Tyr Phe Arg Phe Ala Gin Lys Thr 530 535 540
Leu Gly Asn Gin lie Phe Val Cys Gly Pro Asp Glu Lys Glu Val Thr 545 550 555 560 ❹
Asp Glu Asn Gin Pro Asn Thr Ser Val Val 565 570 <210> 8 <211> 1713 <212> DNA <213>小鼠屬 <400> 8 atgaccaagg caagagatca aacccatcag gaaggatget gtggatcctt agcaaactac ctgacctcag caaaattcct cctctacctt ggccactctc tctccacttg gggggatcgg atgtggcact ttgcagtgtc tgtgtttctg gtggaactct atggaaacag ccttctcttg acagctgtct atggactggt ggtggcaggc tctgttctgg tcctgggagc catcattggt gactgggtgg ataagaatgc cagacttaaa gtggcccaga cgtcactagt ggttcagaat gtgtccgtca tcctctgcgg aatcatcctg atgatggttt tcctacacaa gaatgagctc ctgaccatgt accatggatg ggtccttact gtctgctaca tcctgatcat cactattgca • 11 · 144516·序列表.doc 201023891 aacattgcaa atttggccag tactgccact gcgatcacaa tccaaasgga ctggattgtt 480 gttgtggcag gagaaaacag gagcagatta gcagacatga atgctaccat tagaaggatt 540 gaccagctaa ccaacatcct ggcccccatg gctgtcggcc agattatgac atttggttct 600 ccagtcattg gctgtggttt catttccggt tggaatttgg tgtccatgtg tgtggagtac 660 ttcttgctct ggaaggttta ccagaagacc cctgctctgg ctgtaaaagc tgctctcaag 720 gtagaggagt cagaactgaa gcagctgacc tcacctaaag atactgagcc aaaacctttg 780 gagggaactc atctaatggg tgagaaagac tccaacatcc gtgaacttga atgtgaacaa 840 gagcccacct gtgcctccca gatggcagag cccttccgca ctttccgaga tggatgggtc 900 tcctactata accagccagt gtttctggct ggcatgggcc tggctttcct ctatatgaca 960 gtcctgggct ttgactgtat cactacaggg tacgcctaca ctcaggggct gagtggatcc 1020 atccttagta ttttgatggg agcatcagca ataactggaa taatgggaac tgtggccttc 1080 acctggctac gtcgaaaatg tggccttgtt cggactggtc tattctcagg actagcccag 1140 ctttcctgtt taatcttgtg tgtgatctcc gtattcatgc ctggaagccc cttggacctg 1200 tctgtttctc catttgaaga tatccgttct aggtttgtga atgtggagcc agtgtcccca 1260 actaccaaaa tacctgagac cgtctttaca acagaaatgc atatgtccaa catgtctaat 1320 gtccatgaga tgagtactaa acccatcccc atagtctctg tcagcctgct gtttgcagga 1380 gtcattgctg ctagaatcgg tctttggtcc tttgatttga cggtgacaca gttgctgcaa 1440 gaaaatgtaa ttgaatctga aagaggcatt atcaatggtg tgcagaactc catgaactac 1500 cttcttgacc ttctgcattt catcatggtc atcttggccc caaatcctga agcttttggc 1560 ttgctggtat tgatttcagt ctcctttgtg gcaatgggac atcttatgta tttccgattt 1620 gcccagaaga ctctgggcaa ccagattttt gtttgtggtc ctgatgaaaa agaagttaca 1680 gatgaaaatc aaccgaatac atctgttgta tag 1713 <210> 9 <211> 56 <212> PRT <213>智人 <400> 9
Pro Gly Ser Pro Leu Asp Leu Ser Val Ser Pro Phe Glu Asp lie Arg 1 5 10 15
Ser Arg Phe He Gin Gly Glu Ser lie Thr Pro Thr Lys lie Pro Glu 20 25 30
He Thr Thr Glu lie Tyr Met Ser Asn Gly Ser Asn Ser Ala Asn lie 35 40 45
Va] Pro Glu Thr Ser Pro Glu Ser 50 55
<210> 10 <211> 642 <212> DNA <213>人工 <220> 12- 1445〗6-序列表_doc 201023891 <223>合成 <400> 10 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgca gggcgagtaa gagcattagc aaatatacag cctggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gggtccaagc ggcactgggg agtcccatca aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct gaagattttg caacttacta ttgtcaacaa cataatgaat acccgtacac gttcggcgga ' gggaccaagg tggagatcaa acggactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat • cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gc 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 642
<2i0> 11 <211> 39 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 11 lie Ser Gin Ala Val His Ala Ala His Ala Glu lie Asn Glu Gly Pro 15 10 15
Gly Pro Gly Ser Pro Phe Glu Asp lie Arg Ser Arg Phc lie Gin Gly 20 25 30
Glu Ser lie Thr Pro Thr Lys 35 參 <210> 12 <211> 20 <212> PRT <213>智人 <400> 12 Ser Pro Phe Glu Asp lie Arg Ser Arg Phe lie Gin Gly Glu Scr lie 1 5 10 15
Thr Pro Thr Lys 20 <210> 13 <211> 14 <212> PRT <213>智人 <400> 13 Glu Asp lie Arg Ser Arg Phe lie Gin Gly Glu Ser lie Thr 1 5 10 <210> 14 144516-序歹[|表.doc -13- 201023891 <211> 14 <212> PRT <213>智人 <400> 14
Arg Ser Arg Phe lie Gin Gly Glu Ser lie Thr Pro Thr Lys 10 <210> 15 <211> 13 <212> PRT <213>智人 <400> 15
Ser Pro Phe Glu Asp lie Arg Ser Arg Phe lie Gin Gly 1 5 10 <210> 16 <211> 11 <212> PRT <213>智人 <400> 36
Arg Ser Arg Phe He Gin Gly Glu Ser lie Thr 1 5 10 <210> 17 <211> 10 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 17
Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Phe Leu lie Glu 1 5 10 <210> 18 <211> 27 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 18
Thr He Asn Pro Glu Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Arg 15 10 15
Gly <210> 19 <211> 5 <212> PRT <213〉人工 <220> <223>合成 <400> 19
Glu Phe Phe Asp Tyr 14- 144516-序列表.doc 201023891 <210> 20 <211> 11 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 20
Arg Ala Ser Lys Ser lie Ser Lys Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 21 <211> 7 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成
<400> 21
Ala Gly Ser Thr Leu His Ser <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 22
Gin Gin His Asn Glu Tyr Pro Tyr Thr
<210> 23 <211> 10 <212> PRT <213>人工 <220> <223〉合成 <400> 23
Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Phe Leu lie Glu 1 5 10
<210> 24 <211> 17 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 24
Thr lie Asn Pro Arg Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Arg 15 10 15
Gly -15- 144516-序列表.doc 201023891 57^^ 2 1 p人 0>1>2>3> <21<21<21<21 <220> <223>合成 <400> 25
Thr lie Asn Pro Lys Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Arg 15 10 15
Gly <210> 26 <211> 17 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 26
Thr lie Asn Pro Glu Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Ala Lys Phe Arg 15 10 15
Gly <210> 27 <211> 7 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 27
Ala Gly Ser Lys Leu His Ser
<210> 28 <211〉 7 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 28
Ala Gly Ser Arg Leu His Ser <210> 29 <211> 9 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 29 16- 144516-序歹丨J表.doc 201023891
Phe Gin His Asn Glu Tyr Pro Tyr Thr <210> 30 <211> 10 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <220> <221> MISC—FEATURE <222> (6)..(6) <223> *aa為入sn 或Ser <400> 30
Gly Tyr Ala Phe Thr Xaa Phe Leu lie Glu 1 5 10
<210> 31 <211> 17 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <220> <221〉MISC一 FEATURE <222> (5)..(5) <223> *aa為Glu、Lys或Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> 文 aa 為 Glu 或 Ala <400> 31
Thr lie Asn Pro Xaa Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Xaa Lys Phe Arg 15 10 15
Gly <210> 32 <211> 7 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> *aa 為Thr、Lys 或Arg <400> 32
Ala Gly Ser Xaa Leu His Ser <210> 33 17- 144516-序列表.doc 201023891 <211> 9 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <220> <221> MISC„FEATURE <222> (1)..(1) <2Ϊ3> 為fhe、His 或Gin <400> 33
Xaa Gin His Asn Glu Tyr Pro Tyr Thr <210> 34 <211> 17 <212〉 PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 34
Thr ile Asn Pro Lys Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Ala Lys Phe Arg 15 10 15
Gly <210> 35 <211> 17 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 35
Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Arg 1 5 10 15
Gly
<210> 36 <231> 17 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 36
Thr Ile Asn Pro Arg Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Lys Glu Lys Phe Arg 15 10 15
Gly <210> 37 <211> 11 • 18· 144516·序列表.doc 201023891
<212〉 PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 37
Arg Ala Ser Lys Ser lie Ser Lys Tyr Thr Ala 1 5 10 T工 81R 】 31P人 ^ > > > 012 3 <21<21<21<21 <220> <223>合成 <400> 38
Arg Ala Ser Lys Ser lie Ser Lys Tyr Ser Ala 1 5 10 ❿ <210> 39 <211> 11 <212> PRT <213>人工 <220〉 <223>合成 <400> 39
Arg Ala Ser Lys Ser lie Ser Lys Tyr Ala Ala 1 5 10
0>1>2>3> 11 1Λ 11 11 <220> <223>合成 <400> 40 鲁
His Gin His Asn Glu Tyr Pro Tyr Thr <210> 41 <211> 17 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 41
Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Lys Glu Lys Phe Arg 15 10 15
Gly
<210> 42 <211> 11 <212〉 PRT 19- 144516-序歹 IJ表.doc 201023891 <213〉人工 <220> <223>合成 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> 父肪為Leu、Thr、Ser或Ala <400> 42
Arg Ala Ser Lys Ser lie Ser Lys Tyr Xaa Ala 1 5 10
<210> 43 <211> 17 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <220>
<221> MISCJFEATURE <222> (2)..(2) <223> 為 έβτ或Ee <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> 為、Lys 或Arg <220>
<221> MISC.FEATURE <222> (12)..(12) <223> 為Asn 或Lys <220> <221> MISC.FEATORE <222> (13)..(13) <223> Xaa 為GIu或Ala <400> 43
Thr Xaa Asn Pro Xaa Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe Arg 15 10 15
Gly <210〉 44 <211> 114 <212> PRT <213>小鼠屬 <400> 44
Gin Val Gin Leu Lys Gin Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Phe 20 25 30
Leu lie Glu Trp Leu Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45 -20- 144516-序列表.doc 201023891
Gly Thr lie Asn Pro Glu Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Gin Leu Asn Scr Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95
Val Arg Glu Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Ser Leu Thr Val 100 105 110
Ser Ser
514S 4 1 p人 > > > > 012 3 1x i— 22 2 2 < < < V 參 <220> <223>合成 <400〉 45
Gin Val Gin Leu Lys Gin Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Phe 20 25 30
Leu lie Glu Trp Leu Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Thr lie Asn Pro Arg Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Gin Leu Asn Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95
Val Arg Glu Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Ser Leu Thr Val 100 105 110
Ser Scr <210> 46 <2il> 114 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 46
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15 -21 - 144516-序列表.doc 201023891
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Phe 20 25 30
Leu He Glu Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Lys Glu Lys Phe 50 55 60
Arg Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val 100 105 110
Ser Ser <210> 47 <211> 107 <212> PRT <213>小鼠屬 <400> 47
Glu Thr Thr Val Thr Gin Ser Pro Ser Tyr Leu Ala Ala Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Thr He Thr lie Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser lie Ser Lys Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gin Glu Lys Pro Gly Lys Thr Asn Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Gly Ser Thr Leu His Ser Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gin Gin His Asn Glu Tyr Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 48 <211> 107 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 48
Glu Thr Thr Val Thr Gin Ser Pro Ser Tyr Leu Ala Ala Ser Pro Gly -22- 144516-序列表.doc 201023891 15 10 15
Glu Thr lie Thr lie Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser lie Ser Lys Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gin Glu Lys Pro Gly Lys Thr Asn Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Gly Ser Lys Leu His Ser Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Phe Gin His Asn Glu Tyr Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 49 <211> 107 <212> PRT <213〉人工 <220> <223>合成 <400> 49
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Lys Ser lie Ser Lys Tyr 20 25 30
Thr Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Gly Ser Lys Leu His Ser Gly Val Pro Set Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin His Asn Glu Tyr Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 50 <211> 438 <212> PRT <213>小鼠屬 <400> 50
Gin Val Gin Leu Lys Gin Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 -23- 144516-序列表_(1(«: 201023891
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Phe 20 25 30
Leu lie Glu Trp Leu Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Thr lie Asn Pro Glu Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Gin Leu Asn Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95
Val Arg Glu Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Ser Leu Thr Val 100 105 110
Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly 115 120 125
Ser Ala Ala Gin Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys 130 135 140
Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu 145 150 155 160
Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr 165 170 175
Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu 180 185 190
Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp 195 200 205
Lys Lys lie Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys lie Cys Thr 210 215 220
Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 225 230 235 240
Val Leu Thr lie Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp 245 250 255 lie Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gin Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp 260 265 270
Val Glu Val His Thr Ala Gin Thr Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn 275 280 285
Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro lie Met His Gin Asp Trp 290 295 300
Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro 305 310 315 320 •24· 144516-序列表.doc 201023891
Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala 325 330 335
Pro Gin Val Tyr Thr lie Pro Pro Pro Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp 340 345 350
Lys Val Ser Leu Thr Cys Met lie Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp lie 355 360 365
Thr Val Glu Trp Gin Trp Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn 370 375 380
Thr Gin Pro lie Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys 385 390 395 400
Leu Asn Val Gin Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys 405 410 415
Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu 420 425 430
Ser His Ser Pro Gly Lys 435 <210> 51 <211> 438 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 51
Gin Val Gin Leu Lys Gin Ser Gly Ala Glu Leu Val Aig Pro Gly Thr 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Phe 20 25 30
Leu lie Glu Trp Leu Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie ⑩ 35 40 45
Gly Thr lie Asn Pro Arg Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ma Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Gin Leu Asn Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95
Val Arg Glu Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Ser Leu Thr Val 100 105 110
Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly 115 120 125 -25- 144516-序列表.doc 201023891
Ser Ala Ala Gin Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys 130 135 140
Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu 145 150 155 160
Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr 165 170 175
Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Scr Thr Trp Pro Ser Glu 180 185 190
Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp 195 200 205
Lys Lys lie Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys lie Cys Thr 210 215 220
Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 225 230 235 240
Val Leu Thr lie Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp 245 250 255 lie Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gin Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp 260 265 270
Val Glu Val His Thr Ala Gin Thr Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn 275 280 285
Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro lie Met His Gin Asp Trp 290 295 300
Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro 305 310 315 320
Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala 325 330 335
Pro Gin Val Tyr Thr lie Pro Pro Pro Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp 340 345 350
Lys Val Ser Leu Thr Cys Met lie Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp lie 355 360 365
Thr Val Glu Trp Gin Trp Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn 370 375 380
Thr Gin Fro lie Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyx Ser Lys 385 390 395 400
Leu Asn Val Gin Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys 405 410 415
Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu 420 425 430 -26- 144516-序歹[J表-doc 201023891
Ser His Ser Pro Gly Lys 435
<210> 52 <211> 440 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 52
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Phe 20 25 30
Leu He Glu Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Lys Glu Lys Phe 50 55 60
Arg Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val 100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys 115 120 125
Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys 130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu 145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu 165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 180 185 190
Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val 195 200 205
Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 210 215 220
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 225 230 235 240 -27- 144516-序歹丨J表.doc 201023891
Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 245 250 255
Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr 260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 275 280 285
Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 290 295 300
Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 305 310 315 320
Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin 325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met 340 345 350
Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 355 360 365
Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn 370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 385 390 395 400
Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val 405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin 420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 <210〉 53 <211> 214 <212> PRT <213>小鼠屬 <400> 53
Glu Thr Thr Val Thr Gin Ser Pro Ser Tyr Leu Ala Ala Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Thr He Thr lie Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser lie Ser Lys Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gin Glu Lys Pro Gly Lys Thr Asn Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Gly Ser Thr Leu His Ser Gly He Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 -28- 144516-序列表.doc 201023891
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gin Gin His Asn Glu Tyr Pro Tyr S5 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala 100 105 110
Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gin Leu Thr Ser Gly 115 120 125
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pto Lys Asp lie 130 135 140
Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg Gin Asn Gly Val Leu 145 150 355 160
Asn Ser Trp Thr Asp Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr 180 185 190
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro lie Val Lys Ser 195 200 205
Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210
<210> 54 <211> 214 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 54
Glu Thr Thr Val Thr Gin Ser Pro Ser Tyr Leu Ala Ala Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Thr He Thr lie Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser lie Ser Lys Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gin Glu Lys Pro Gly Lys Thr Asn Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Gly Ser Lys Leu His Ser Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Phe Gin His Asn Glu Tyr Pro Tyr 85 90 95 -29- 144516·序列表.doc 201023891
Thr Fhe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala 100 105 110
Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gin Leu Thr Ser Gly 115 120 125
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp lie 130 135 140
Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg Gin Asn Gly Val Leu 145 150 155 160
Asn Ser Trp Thr Asp Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser 165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr 180 185 190
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro lie Val Lys Ser 195 200 205
Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210 <210> 55 <211> 214 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 55
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Lys Ser lie Ser Lys Tyr 20 25 30
Thr Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Gly Ser Lys Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin His Asn Glu Tyr Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala -30- 144516-序列表.doc 201023891 130 135 140
Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210〉 56 <211> 114 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <220> <221> MISC.FEATURH <222> (28)..(28) <223> kaa為Ala或Arg <220〉 <221> MISC.FEATURH <222> (57)..(57) <223> Xaa為Gly或Arg <220> <221> MISC FEATURE <222> (58)7,(58) <223> iaa 為 Τΐιτ 或Arg <220> <221> MISC FEATURE <222> (62)..(62) <223> 為Glu、Ser或Thr <220> <221> MISC FEATURE <222> (102)..(102) <223> Xaa為Asp 或Val <400> 56
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Scr 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Xaa Phe Thr Ser Phe 20 25 30
Leu lie Glu Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Xaa Xaa Lys Tyr Lys Xaa Lys Phe 50 55 60 -31 - 144516-序列表.doc 201023891
Arg Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Phe Phe Xaa Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val 100 105 110
Ser Ser K7K >>·>> 0 12 3 1Λ 1i 2 2 2 <220> <223>合成 <220> <221> MISC.FEATURE <222> (54)..(54) <223> Xaa 為 Leu 或Arg <220> <221> MISC.FEATURE <222> (55)..(55) <223> Xaa為His、Arg 或Tyr <220> <221> MISC.FEATURE <222> (56)..(56) <223> 文aa為 Ser、Tip 或Tyr <400> 57
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Lys Ser lie Ser Lys Tyr 20 25 30
Thr Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Gly Ser Lys Xaa Xaa Xaa Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin His Asn Glu Tyr Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 58 <211> 342 <212> DNA <213>小鼠屬 -32- 144516·序列表.doc
201023891 <400> 58 caggtgcagc tgaagcagtc tggagctgaa ctggtaaggc ctgggacttc agtgaaggtg tcctgcaagg cttctggata cgccttcact aatttcttga tagagtggtt aaagcagagg cctggacagg gccttgagtg gattggaacg attaatcctg aaactggtgg tactaagtat aatgagaagt tcaggggcaa ggcaacactg actgctgaca aatcttccag cactgcctat atgcagctca acagcctgac atctgatgac tctgcggtct atttctgtgt cagagagttt tttgactact ggggccaagg caccagtctc acagtctcct ca <210> 59 <211> 321 <212> DNA <213>小鼠屬 <400> 59 gaaacaactg tgacccagtc tccatcttat cttgctgcat ctcctggaga aaccattact attaattgca gggcgagtaa gagcattagc aaatatttag cctggtttca agagaaacct gggaaaacta ataagcttct tatctacgct ggatccactt tgcactctgg aattccatca aggttcagtg gcagtggatc cggtacagat ttcactctca ccatcagtag cctggagcct gaagattttg caatgtatta ctgtcaacaa cataatgaat acccgtacac gttcggagga gggaccaagc tggagctgaa a <210> 60 <211> 342 <212> E^JA <213>人工 <220> <223>合成 <400> 60 caggtgcagc tgaagcagtc tggagctgaa ctggtaaggc ctgggacttc agtgaaggtg tcctgcaagg cttctggata cgccttcact tcgttcttga tagagtggtt aaagcagagg cctggacagg gccttgagtg gattggaacg attaatccta ggactggtgg tactaagtat aatgagaagt tcaggggcaa ggcaacactg actgctgaca aatcttccag cactgcctat atgcagctca acagcctgac atctgatgac tctgcggtct atttctgtgt cagagagttt tttgactact ggggccaagg caccagtctc acagtctcct ca <210> 61 <211> 321 <212> DNA <213>人工 <220> <223>合成 <400> 61 gaaacaactg tgacccagtc tccatcttat cttgctgcat ctcctggaga aaccattact attaattgca gggcgagtaa gagcattagc aaatatttag cctggtttca agagaaacct gggaaaacta ataagcttct tatctacgct ggatccaagt tgcactctgg aattccatca aggttcagtg gcagtggatc cggtacagat ttcactctca ccatcagtag cctggagcct gaagattttg caatgtatta ctgtttccaa cataatgaat acccgtacac gttcggagga gggaccaagc tggagctgaa a 144516-序列表 _doc 33· 60 120 180 240 300 342 60 120 180 240 300 321 60 120 180 240 300 342 60 120 180 240 300 321 201023891 <210> 62 <211> 342 <212> DNA <213>人工 <220> <223>合成 <400> 62 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtsaagaagc ctgggtcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg catctggcta cgccttcact tcgttcttga tagagtgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaacg attaatccta ggactggtgg tactaagtat 180 aatgagaagt tcaggggcag agtcaccatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgcgagttt 300 tttgactact ggggccaagg aaccacggtc accgtctcct ca 342 <210> 63 <211> 321 <212> DNA <213>人工 <220> <223>合成 <400> 63 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgca gggcgagtaa gagcattagc aaatatttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct ggatccaagt tgcactctgg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttacta ttgtttccaa cataatgaat acccgtacac gttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 64 <211> 342 <212> mk <213>人工 <220> <223>合成 <400> 64 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg catctggcta cgccttcact tcgttcttga tagagtgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaacg agtaatccta ggactggtgg tactaagtat 180 aaagagaagt tcaggggcag agtcaccatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgcgagttt 300 tttgactact ggggccaagg aaccacggtc accgtctcct ca 342 <210> 65 <211> 321 <212> DNA <213>人工 <220> <223>合成 1Φ1516·序列表 _doc 34- 201023891 <400> 65 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgca gggcgagtaa gagcattagc aaatatacag cctggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gggtccaagt tgcactctgg agtcccatca aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct gaagattttg caacttacta ttgtcaacaa cataatgaat acccgtacac gttcggcgga gggaccaagg tggagatcaa a
<210> 66 <211> 329 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 66
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 60 120 180 240 300 321
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr 65 70 75 80
Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175
Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190
His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 -35- 144516-序列表.doc 201023891
Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie GIu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220
Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phc Tyr 245 250 255
Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn 260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285
Leu Tyr Ser Lys LeU Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn 290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320
Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 67 <21]> 329 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 67
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 15 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr 65 70 75 80
Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 -36- 144516-序列表.doc 201023891
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175
Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190
His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220
Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255
Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn 260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn 290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320
Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210〉 68 <211> 325 <212> PRT <213>智人 <400> 68
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 15 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 -37· 144516-序列表.doc 201023891
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr 65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Ixu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125
Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160
Met Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn 165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp 180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205
Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu 210 215 220
Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240
Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie 245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu 305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly 325
<210〉 69 <211> 326 <212> PRT <213>人工 <220> * 38 - 144516·序列表.doc 201023891 <223>合成 <400> 69
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 15 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125
Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140
Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe 165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp 180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205
Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg 210 215 220
Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240
Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 -39- 144516-序列表.doc 201023891
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser 305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly 325 <210> 70 <211> 326 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 70
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110
Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125
Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140
Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe 165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp 180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 •40- 144516•序歹(1表.doc 201023891
Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg 210 215 220
Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240
Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 2S5
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 ❿
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser 305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly 325 8AL 7197DNAX 0>1>2>3> 1* li 1Λ 11 <2<2<2<2 ❿ <220> <223>合成 <400> 71 gcctccacca agcacagccg tggaactcag ggactctact tacacctgca aaatatggtc ttcctgttcc tgcgtggtgg ggcgtggagg cgtgtggtca tgcaaggtct gggcagcccc aaccaggtca tgggaaagca gacggctcct aatgtcttct ctctccctgt agggcccatc ccctgggctg gcgccctgac ccctcagcag acgtagatca ccccatgccc ccccaaaacc tggacgtgag tgcataatgc gcgtcctcac ccaacaaagg gagagccaca gcctgacctg atgggcagcc tcttcctcta catgctccgt ctctgggt ggtcttcccg cctggtcaag cagcggcgtg cgtggtgacc caagcccagc accctgccca caaggacact ccaggaagac caagacaaag cgtcctgcac cctcccgtcc ggtgtacacc cctggtcaaa ggagaacaac cagcaggcta gatgcatgag ctagcgccct gactacttcc cacaccttcc gtgccctcca aacaccaagg gcacctgagg ctcatgatct cccgaggtcc ccgcgggagg caggactggc tccatcgaga ctgcccccat ggcttctacc tacaagacca accgtggaca gctctgcaca gctccaggag ccgaaccggt cggctgtcct gcagcttggg tggacaagag ccgccggggg cccggacccc agttcaactg agcagttcaa tgaacggcaa aaaccatctc cccaggagga ccagcgacat cgcctcccgt agagcaggtg accactacac cacctccgag gacggtgtcg acagtcctca cacgaagacc agttgagtcc accatcagtc tgaggtcacg gtacgtggat cagcacgtac ggagtacaag caaagccaaa gatgaccaag cgccgtggag gctggactcc gcaggagggg acagaagagc 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 978 •41 - 144516-序列表.doc 201023891 u e G1ph p n s 5 s A1 A r n} 6 so s A3 o u prLe 0 u Γ c p ru 6 s phcy e I lo 1 1 V c n phV325 1 Γ a e V s r a e 1 s A 0 r prTh ay 1 1 A5 G a Γ 1 Co A S2 STKnrvaULy 0>1>2>3>0>Thu •1 1Λ11 oo Ώ 含含<4ArlG1
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin 35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser 85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 73 <211> 321 <212> DNA <213>智人 <400> 73 cggactgtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60 ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aaettetate ccagagaggc caaagtacag 120 tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agageaggae 180 agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240 aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300 agcttcaaca ggggagagtg c 321 sPRTiMeGl 0>1>2>3>)0>311 11 n 3 J p <2<2<2<2<4As’ G, a,5 VI Γ e s a Γ e s u Le Γ 60 SI T c s o pr Γ c s n G1 Γ Γ Th e I Γ Th20 val rg A p As 55^rA 71^智 0717雾 1i <2<2<2<2 42- 14451卜序列表.doc 201023891 <400> 75
Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 15 10 15 <210> 76 <211> 32 <212> PRT <213>智人 <400> 76
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Set Gly Thr Asp Phe Thr 15 10 15
Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 77 <211> 10 <212> PRT <213>智人
<400> 77
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 10 <210〉 78 <211> 25 <212> PRT <213>智人 <400> 78
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser 20 25 <210〉 79 <211> 14 <212> PRT <213>智人 <400> 79
Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 80 <211> 32 <212> PRT <213>智人 <400> 80
Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 81 <211> 11 -43- 1445〗6-序歹!J表.doc 201023891 <212> PRT <213>智人 <400> 81
Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 82 <211> 32 <232> PRT <213>智人 <400> 82
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 15 10 15
Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 83 <211> 25 <212> PRT <213>智人 <400> 83
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser 20 25 T人 8432? 0>1>2>3> 11 ΊΛ 11 1— <2<2<2<2 <400> 84
Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 15 10 15
Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 85 <211> 23 <212> PRT <213>智人 <400> 85
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys 20 <210> 86 <211> 32 <212> PRT <213>智人 <400> 86 •44· 144516-序列表.doc 201023891
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr 10 15
Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 87 <211> 32 <212> PRT <213>智人 <400> 87
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu 1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30
<210> 88 <211> 193 <212> PRT <213>智人 <400> 88
Met Gly Val His Glu Cys Pro Ala Trp Leu Trp Leu Leu Leu Ser Leu 15 10 15
Leu Ser Leu Pro Leu Gly Leu Pro Val Leu Gly Ala Pro Pro Arg Leu 20 25 30 lie Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu 35 40 45
Ala Glu Asn lie Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu 50 55 60
Asn lie Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg 65 70 75 80
Met Glu Val Gly Gin Gin Ala Val Glu Val Trp Gin Gly Leu Ala Leu 85 90 95
Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gin Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser 100 105 110
Gin Pro Trp Glu Pro Leu Gin Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly 115 120 125
Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gin Lys Glu 130 135 140
Ala lie Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr lie 145 150 155 160
Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu 165 170 175 -45- 144516-序歹!J表·doe 201023891
Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp 180 1S5 190
Arg <210> 89 <211> 84 <212> PRT <213>智人 <400> 89
Met Ala Leu Ser Ser Gin lie Trp Ala Ala Cys Leu Leu Leu Leu Leu 15 10 15
Leu Leu Ala Ser Leu Thr Ser Gly Ser Val Phe Pro Gin Gin Thr Gly 20 25 30
Gin Leu Ala Glu Leu Gin Pro Gin Asp Arg Ala Gly Ala Arg Ala Ser 35 40 45
Trp Met Pro Met Phe Gin Arg Arg Arg Arg Arg Asp Thr His Phe Pro 50 55 60 lie Cys lie Phe Cys Cys Gly Cys Cys His Arg Ser Lys Cys Gly Met 65 70 75 80
Cys Cys Lys Thr <210> 90 <211> 61 <212> PRT <213>智人 <400> 90
Gly Ser Val Phe Pro Gin Gin Thr Gly Gin Leu Ala Glu Leu Gin Pro 15 10 15
Gin Asp Arg Ala Gly Ala Arg Ala Ser Trp Met Pro Met Phe Gin Arg 20 25 30
Arg Arg Arg Arg Asp Thr His Phe Pro lie Cys lie Phe Cys Cys Gly 35 40 45
Cys Cys His Arg Scr Lys Cys Gly Met Cys Cys Lys Thr 50 55 60 <210> 91 <211> 25 <212> PRT <213>智人 <400> 91
Asp Thr His Phe Pro lie Cys lie Phe Cys Cys Gly Cys Cys His Arg 15 10 15
Ser Lys Cys Gly Met Cys Cys Lys Thr 20 25 -46- 144516-序列表.doc 201023891 <210> 92 <211> 25 <212> PRT <213> 猴 <400> 92
Asp Thr His Phe Pro lie Cys lie Phe Cys Cys Gly Cys Cys His Arg 15 10 15
Ser Lys Cys Gly Met Cys Cys Arg Thr 20 25 <210> 93 <211> 25 <212> PRT <2i3>大鼠屬 <400> 93
Asp Thr Asn Phe Pro lie Cys Leu Phe Cys Cys Lys Cys Cys Lys Asn 15 10 15 參
Ser Ser Cys Gly Leu Cys Cys lie Thr 20 25 <210> 94 <211> 25 <212> PRT <213>小鼠屬 <400> 94
Asp Thr Asn Phe Pro lie Cys lie Phe Cys Cys Lys Cys Cys Asn Asn 15 10 15
Ser Gin Cys Gly lie Cys Cys Lys Thr 20 25 <210> 95 <211> 7 <212> PRT <213>智人 <400> 95
Arg Ser Arg Phe lie Gin Gly
<230> 96 <211> 24 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 96
Gly Gly Ser Pro Phe Glu Asp lie Arg Ser Arg Phe lie Gin Gly Glu 15 10 15
Ser lie Thr Pro Thr Lys Gly Cys 20 47- 144516-序列表.doc 201023891 <210> 97 <211> 16 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 97
Gly Gly Ser Pro Phe Glu Asp lie Arg Ser Arg Phe lie Gin Gly Cys 15 10 15 <210> 98 <211> 21 <212〉 PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 98
Gly Gly lie Gin Gly Glu Ser lie Thr Pro Thr Lys lie Pro Glu lie 15 10 15
Thr Thr Glu Gly Cys 20
<210> 99 <211> 19 <212〉 PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 99
Gly Gly Met Pro Gly Ser Pro Leu Asp Leu Ser Val Ser Pro Phe Glu 15 10 15
Asp Gly Cys
<210> 100 <211> 19 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 100
Gly Gly Ser Pro Leu Asp Leu Ser Val Ser Pro Phe Glu Asp lie Arg 15 10 15
Ser Gly Cys <210> 101 <211> 18 <2I2> PRT <213〉人工 <220〉 48· 144516-序列表.doc 201023891 <223>合成 <400> 101
Gly Gly Glu Asp lie Arg Ser Arg Phe lie Gin Gly Glu Ser lie Thr 15 10 15
Gly Cys
<210> 102 <211> 18 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 102 6 ph rg A 5 Γ 6 s rg A y G1 y G1l e s u lo G1 y 14 G n G,
Lv Γ o pr T Th c
Gly Cys <210〉 103 <211> 10 <212〉 PRT <213〉人工 <220> <223>合成 <400> 103
Gly Arg Ala Phe Thr Ser Phe Leu lie Glu 1 5 10 <210> 104 <211> 10 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 104
Gly Lys Ala Phe Thr Ser Phe Leu lie Glu 1 5 10 <210> 105 <211> 10 <212> PRT <213>人工 <220〉 <223>合成 <400> 105
Gly Tyr Arg Phe Thr Ser Phe Leu lie Glu 1 5 10 <2I0> 106 <211> 10 <212> PRT • 49. 144516·序列表.doc 201023891 <213>人工 <220> <223>合成 <400> 106
Gly Tyr Ala Phe Arg Ser Phe Leu lie Glu 1 5 10 <210> 107 <211〉 10 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <220> <221> MISC FEATURE <222〉 （2)..(2) <223> Xaa為Tyr、Arg或Lys <220> <221> MISC..FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa為入la或Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222〉 （5)..(5) <223> )^aa為Thr或Arg <400> 107
Gly Xaa Xaa Phe Xaa Ser Phe Leu lie Glu 1 5 10 <210> 108 <211> 17 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 108
Thr Ser Asn Pro Arg Thr Arg Gly Thr Lys Tyr Lys Glu Lys Phe Arg 15 10 15
Gly
<210> 109 <211> 17 <212> PRT <213>人工 <220〉 <223>合成 <400> 109
Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Arg Thr Lys Tyr Lys Glu Lys Phe Arg 15 10 15
Gly •50- 144516-序歹 U表.doc 201023891
<210> 110 <211> 17 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 110
Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Gly Arg Lys Tyr Lys Glu Lys Phe Arg 15 10 15
Gly <210> 111 <211> 17 <212> PRT <213>人工 <220>
<223>合成 <400> 111
Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Lys Thr Lys Phe Arg 15 10 15
Gly <210〉 112 <211> 17 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 112
Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Lys Ser Lys Phe Arg 1 5 10 15
Gly
<210〉 113 <211> 17 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 113
Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Lys Trp Lys Phe Arg 1 5 10 15
Gly <210〉 114 -51 - 144516-序歹丨J表.doc 201023891 <211> 17 <212> PRT <213〉人工 <220> <223>合成 <400> 114
Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Lys Glu Val Phe Arg 15 10 15
Gly 0>1>2>3> <21<21<21<21 <220> <223>合成 <400> 115
Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Lys Glu Lys Phe Arg 15 10 15
Arg 0>1>2>3> <21<21<21<21 <220〉 <223>合成 <400> 116
Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Arg Thr Lys Tyr Lys Ser Lys Phe Arg 15 10 15
Gly <210> 117 <211> 17 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400〉 117
Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Arg Thr Lys Tyr Lys Thr Lys Phe Arg 15 10 15 GIv mns 0>1>2>3> 1 IX 1S 1J <2<2<2<2 52- 144516-序列表.doc 201023891 <220> <223> 合成 <220> <221> MISC FEATURE <222> (7)..(7) <223> 文aa為01y或Arg <220> <221> MISC FEATURE <222> (8).7(8) <223> Xaa 為 Gly 或 Arg <220> <221> MISC FEATURE <222> (9)..(9) <223> 文aa為Thr或Arg <220> <221> MISC FEATURE <222> (13)7.(13) <223> Xaa 為 Glu、Thr、Ser 或 Trp <220> <221> MISC FEATURE <222> (14)..(14) <223> kaa 為 Lys 或 Val <220> <221> MISC FEATURE <222> 07)..(17) <223> 文aa為Gly政Arg <400> 118
Thr Ser Asn Pro Arg Thr Xaa Xaa Xaa Lys Tyr Lys Xaa Xaa Phe Arg 15 10 15
Xaa <210> 119 <2Π> 5 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 合成 <400〉 119 Glu Phe Phe Val Tyr §5prt1 0>1>2>3> 11 ΊΛ -1 ΊΛ <2<2<2<2 <220> <223> 合成 <220> <221> MISC FEATURE <222> (4).7(4) <223> kaa 為 Asp 或 Val <400> 120 144516-序列表.doe -53· 201023891
Glu Phe Phe Xaa Tyr 1 5 <210> 121 <211> 7 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 121
Ala Gly Ser Lys Arg His Ser <210> 122 <211> 7 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 122
Ala Gly Ser Lys Leu Arg Ser <210〉 123 <211> 7 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 123
Ala Gly Ser Lys Leu Val Ser <210> 124 <211> 7 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 124
Ala Gly Ser Lys Leu Tyr Ser <210> 125 <211> 7 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 125
Ala Gly Ser Lys Leu His Trp <210〉 126 •54 144516-序列表.doc 201023891 ❿ 參 <211> 7 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 合成 <400> 126 Ala Gly Ser Lys Leu His Tyr 1 5 <210> 127 <211> 7 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 合成 <400> 127 Ala Gly Ser Lys Arg His Trp 1 5 <210> 128 <211> 7 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 合成 <400> 128 Ala Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr 1 5 <210> 129 <211> 7 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 合成 <220> <221> MISC FEATURE <222> (5)..(5) <223〉 Xaa 為 Leu 或 Arg <220> <221> MISC FEATURE <222〉 (6)..(6) <223> Xaa 為 His 、Arg ' Val 或 T <220> <221> MISC.FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa 為 Ser 、Trp 或 Tyr <400> 129 Ala Gly Ser Lys Xaa Xaa Xaa 04T工 3 1,r」 r—t i—I ΡΛ '>>>> 012 3 11 11 1J 11 <2<2<2<2 144516-序列表.doc •55· 201023891 <220> <223>合成 <400> 130
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Phe 20 25 30
Leu lie Glu Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Arg Thr Lys Tyr Lys Ser Lys Phe 50 55 60
Arg Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val 100 105 110
Ser Ser <210> 131 <211> 342 <212> <213>人工 <220> <223>合成 <400> 131 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaage ctgggtcctc agtgaaggtt tcctgcaagg catctggcta cgccttcact tcgttcttga tagagtgggt gcgacaggcc cctggacaag ggcttgagtg gatgggaacg agtaatccta ggactgggag gaegaagtat aaatccaagt tcaggggcag agtcaccatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac atggagctga gcagcctgag atetgaggae acggccgtgt attactgtgc gcgcgagttt tttgactact ggggccaagg aaccacggtc accgtctcct ca <210> 132 <211> 107 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 132
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Lys Ser lie Ser Lys Tyr 56- 60 120 180 240 300 342 144516-序列表_<1(^ 201023891 20 25 30 Ήιγ Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Gly Ser Lys Arg His Trp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin His Asn Glu Tyr Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105
<210〉 133 <211> 321 <212> DNA <213>人工 <220> <223>合成 <400> 133 60 120 180 240 300 321 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgca gggcgagtaa gagcattagc aaatatacag cctggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gggtccaagc ggcactgggg agtcccatca aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct gaagattttg caacttacta ttgtcaacaa cataatgaat acccgtacac gttcggcgga gggaccaagg tggagatcaa a
<210> 134 <211> 114 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 134
Gin Va】Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Set Phe 20 25 30
Leu lie Glu Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Gly Arg Lys Tyr Lys Glu Lys Phe 50 55 60
Arg Gly Arg Val Thr He Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 -57 144516-序列表.doc 201023891
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val 100 105 110
Ser Ser <210> 135 <211> 342 <212> mk <213>人工 <22Q> <223>合成 <400> 135 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaage ctgggtcctc agtgaaggtt tcctgcaagg catctggcta cgccttcact tcgttcttga tagagtgggt gcgacaggcc cctggacaag ggcttgagtg gatgggaacg agtaatccta ggactggtgg teggaagtat aaagagaagt tcaggggcag agtcaccatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac atggagctga gcagcctgag atetgaggae acggccgtgt attactgtgc gcgcgagttt tttgactact ggggccaagg aaccacggtc accgtctcct ca
<210> 136 <211〉 107 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400〉 136
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Lys Ser lie Ser Lys Tyr 20 25 30
Thr Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Gly Ser Lys Leu His Trp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly .50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin His Asn Glu Tyr Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105
<210> 137 <211> 321 <212> DNA -58 - 144516-序列表.doc 201023891 <213〉人工 <220> <223>合成 <400> 137 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgca gggcgagtaa gagcattagc aaatatacag cctggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gggtccaagc tgcactgggg agtcccatca aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct gaagattttg caacttacta ttgtcaacaa cataatgaat acccgtacac gttcggcgga gggaccaagg tggagatcaa a 60 120 180 240 300 321 <210> 138 <211> 114 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 138 Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phc Thr Ser Phc 20 25 30
Leu lie Glu Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Gly Arg Lys Tyr Lys Glu Lys Phe 50 55 60
Arg Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Scr Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 ❿ Ala Arg Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val 100 105 110
Ser Ser <210> 139 <211> 342 <212> DNA <213>人工 <220> <223>合成 <400> 139 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc agtgaaggtt tcctgcaagg catctggcta cgccttcact tcgttcttga tagagtgggt gcgacaggcc cctggacaag ggcttgagtg gatgggaacg agtaatccta ggactggggg gaggaagtat 60 120 180 144516·序列表.doc -59- 201023891 aaagagaagt tcagggggag agtcaccatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgcgagttt tttgactact ggggccaagg aaccacggtc accgtctcct ca <210> 140 <211> 107 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 140
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Lys Ser lie Ser Lys Tyr 20 25 30
Thr Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Gly Ser Lys Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin His Asn Glu Tyr Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 141 <211> 321 <212> DNA <213〉人工 <220> <223>合成 <400> 141 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgca gggcgagtaa gagcattagc aaatatacag cctggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gggtccaagt tgcggtctgg agtcccatca aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct gaagattttg caacttacta ttgtcaacaa cataatgaat acccgtacac gttcggcgga gggaccaagg tggagatcaa a 4214S^ 11 p 人 ▲口 0>1>2>3>0>3> 11 11 1x 11 OA <2<2<2<2<2<2 60- 144516-序列表.doc 201023891 <400> 142
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15
Ser Val Lys Va. Ser Cys Lys Ala Ser G,y Tyr Arg I.c ?〇r Ser Phe
LeuIleGluTrpVa. ArS Gin Ala Pr〇 Gly Gly Leu Glu Trp Met
CvThrScrAsnProAr^rGlyAr^rL^TyrLys^LysPhe
Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val 100 105 110
Ser Ser
<210> 143 <211> 342 <212> DNA <213>人工 <220> <223>合成 <400> 143
60 120 180 240 300 342 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc agtgaaggtt tcctgcaagg catctggcta ccgcttcact tcgttcttga tagagtgggt gcgacaggcc cctggacaag ggcttgagtg gatgggaacg agtaatccta ggactggtag gacaaagtat aaaaccaagt tcaggggcag agtoaccatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgcgagttt tttgactact ggggccaagg aaccacggtc accgtctcct ca
<210> 144 <211> 107 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 144
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Lys Ser lie Ser Lys Tyr 20 25 30 -61· 144516-序列表.doc 201023891
Thr Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Gly Val Pro Scr Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Scr Scr Leu Gin Pro 65 70 75 80 GIu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin His Asn Glu Tyr Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105
<210> 145 <211> 321 <212> DNA <213>人工 <220> <223>合成 <400> 145 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgca gggcgagtaa gageattage aaatatacag cctggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaagctcct gatetatget gggtccaagc ggtactacgg agtcccatca aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct gaagattttg caacttacta ttgtcaacaa cataatgaat acccgtacac gttcggcgga gggaccaagg tggagatcaa a
<210> 146 <211> 114 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 146
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Ser Phe 20 25 30
Leu lie Glu Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Lys Glu Lys Phe 50 55 60
Arg Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 -62- 60 120 180 240 300 321 144516-序列表.doc 201023891
Ala Arg Glu Phe Hie Val Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val 100 105 110
Ser Ser
<210> 147 <211> 342 <212> DNA <213>人工 <220> <223>合成 <400> 147
60 120 180 240 300 342 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc agtgaaggtt tcctgcaagg catctggcta ccgcttcact tcgttcttga tagagtgggt gcgacaggcc cctggacaag ggcttgagtg gatgggaacg agtaatccta ggactggtgg gacaaagtat aaagagaagt tcaggggcag agtcaccatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgcgagttt tttgtctact ggggccaagg aaccacggtc accgtctcct ca <210> 148 <211> 107 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 148
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Va】Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Lys Ser lie Ser Lys Tyr 20 25 30
Thr Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Tlir Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin His Asn Glu Tyr Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 149 <211> 321 <212> DNA <213>人工 <220> -63- 144516-序列表.doc 201023891 <223>合成 <400> 149 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgca gggcgagtaa gagcattagc aaatatacag cctggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gggtccaagc ggtactacgg agtcccatca aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct gaagattttg caacttacta ttgtcaacaa cataatgaat acccgtacac gttcggcgga gggaccaagg tggagatcaa a <210> 150 <211> 440 <212> PRT <213〉人工 <220> <223>合成 <400> 150
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Phe 20 25 30
Leu lie Glu Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Arg Thr Lys Tyr Lys Ser Lys Phe 50 55 60
Arg Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val 100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys 115 120 125
Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys 130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu 145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu 165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 180 185 190
Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pto Ser Asn Thr Lys Val 64- 60 120 180 240 300 321 144516-序列表.doc 201023891 195 200 205
Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 210 215 220
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phc Pro Pro Lys 225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 245 250 255
Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr 260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 275 280 285
Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 290 295 300
Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 305 310 315 320
Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin 325 330 335
Pro Arg G]u Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met 340 345 350
Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 355 360 365
Ser Asp lie Ala Val Glu Ττρ Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn 370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 385 390 395 400
Tyr Ser Arg Leu Thr Va! Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val 405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin 420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 <210> 151 <211> 214 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 151
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15 -65- 144516-序歹[J表.doc 201023891
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Lys Ser lie Ser Lys Tyr 20 25 30
Thr Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Gly Ser Lys Arg His Trp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Set Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin His Asn G]u Tyr Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140
Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 152 <211> 440 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 152
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15
Ser Val Lys Va】Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr A】a Phe Thr Ser Phe 20 25 30
Leu He Glu Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 •66- 144516-序列表.doc 201023891
Gly Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Gly Arg Lys Tyr Lys Glu Lys Phe 50 55 60
Arg Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys * 85 90 95
Ala Arg Glu Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val 100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys 115 120 125
Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys 130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu 145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu 165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 180 185 190
Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val 195 200 205
Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 210 215 220
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 245 250 255
Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr 260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 275 280 285
Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 290 295 300
Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 305 310 315 320
Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin 325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met 340 345 350 -67- 144516-序歹[1表.doc 201023891
Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 355 360 365
Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn 370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 385 390 395 400
Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val 405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin 420 425 430
Lys Scr Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 <210> 153 <211> 1320 <212> DNA <213>人工 <220> <223>合成 <400> 153 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaage ctgggtcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg catctggcta cgccttcact tegitettga tagagtgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaacg agtaatccta ggactggtgg teggaagtat 180 aaagagaagt tcaggggcag agtcaccatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atetgaggae acggccgtgt attactgtgc gcgcgagttt 300 tttgactact ggggccaagg aaccacggtc accgtctcct cagcctccac caagggccca 360 tcggtcttcc cgctagcgcc ctgctccagg agcacctccg agagcacagc cgccctgggc 420 tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg 480 accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc ctacagtcct caggactcta ctccctcagc 540 agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcttg ggeaegaaga cctacacctg caacgtagat 600 cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag agagttgagt ccaaatatgg tcccccatgc 660 ccaccctgcc cagcacctga ggccgccggg ggaccatcag tcttcctgtt ccccccaaaa 720 cccaaggaca ctctcatgat ctcccggacc cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg 780 agecaggaag accccgaggt ccagttcaac tggtacgtgg atggcgtgga ggtgcataat 840 gccaagacaa agccgcggga ggascagttc aacagcacgt accgtstggt cagcgtcctc 900 accgtcctgc accaggactg getgaaegge aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960 ggcctcccgt cctccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagagcca 1020 caggtgtaca ccctgccccc atcccaggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080 tgcctggtca aaggetteta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggaaag caatgggcag 1140 ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200 • 68 - 144516,序歹(I表.doe 1260 201023891 1320 tacagcaggc taaccgtgga caagagcagg tggcaggagg ggaatgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acacagaaga gcctctccct gtctctgggt <210〉 154 <211> 214 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 154
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Lys Ser lie Ser Lys Tyr 20 25 30
Thr Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Gly Ser Lys Leu His Trp G]y Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin His Asn Glu Tyr Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu He Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140
Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 345 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 155 <211> 642 <212> DNA <213>人工 -69- 144516-序列表.doc 201023891 <220> <223>合成 <400> 155 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgca gggcgagtaa gagcattagc aaatatacag cctggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gggtccaagc tgcactgggg agtcccatca aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct gaagattttg caacttacta ttgtcaacaa cataatgaat acccgtacac gttcggcgga gggaccaagg tggagatcaa acggactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gc <210> 156 <211> 440 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 156
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Scr Phe 20 25 30
Leu lie Glu Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Gly Arg Lys Tyr Lys Glu Lys Phe 50 55 60
Arg Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val 100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys 115 120 125
Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys 130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu •70· 144516-序列表.doc 201023891 145 150 155 160
Phe Pro Ala Val Leu Gin 170
Ser Ser Gly Leu 175
Ser Leu Gly Thr 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Val 180
Val Thr Val Pro Ser Ser 185
Asn Thr Lys Val 205
Lys Thr Tyr Thr Cys Asn 195
Val Asp His Lys Pro Ser 200
Pro Pro Cys Pro
Asp Lys Arg Val Glu Ser 210
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys 215 220
Phe pro Pro
Ala Pro Glu Ala Ala Gly 225 230
Gly Pro Ser Val Phe Leu 235 參
Pro Lys Asp Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu 250
Val Thr Cys Val 255
Val Val Asp Val Ser Gin 260
Glu Asp Pro Glu Val Gin 265
Phe Asn Trp Tyr 270
Pro Arg Glu Glu 285
Val Asp Gly Val Glu Val 275
His Asn Ala Lys Thr Lys 280
Thr Val Leu His
Gin Phe Asn Ser Thr Tyr 290
Arg Val Va】Ser Val Leu 295 300
Val Scr Asn Lys 320
Gin Asp Trp Leu Asn Gly 305 310
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 315
Ala Lys Gly Gin 335
Gly Leu Pro Ser Ser He
Glu Lys Thr lie Ser Lys 330
Gin Glu Glu Met 350
Pro Arg Glu Pro Gin Val 340
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 345
Gly Phe Tyr Pro 365
Thr Lys Asn Gin Val Ser 355
Leu Thr Cys Leu Val Lys 360
Pro Glu Asn Asn
Ser Asp lie Ala Val Glu 370
Trp Glu Ser Asn Gly Gin 375 380
Ser PHe Phe
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390
Val Leu Asp Ser Asp Gly 395
Glu Gly Asn Val 415
Tyr Ser Arg Leu Thr Val 405
Asp Lys Ser Arg Trp Gin 410
His Tyr Thr Gin 430
Phe Ser Cys Ser Val Met 420
His Glu Ala Leu His Asn 425
Leu Gly 440 -71·
Lys Ser Leu Ser Leu Scr 435 144516-序歹[j表.doc 201023891
<210> 157 <211> 1320 <212> DNA <213>人工 <220> <223>合成 <400> 157 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg catctggcta cgccttcact tcgttcttga tagagtgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaacg agtaatccta ggactggggg gaggaagtat 180 aaagagaagt tcagggggag agtcaccatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgcgagttt 300 tttgactact ggggccaagg aaccacggtc accgtctcct cagcctccac caagggccca 360 tcggtcttcc cgctagcgcc ctgctccagg agcacctccg agagcacagc cgccctgggc 420 tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg 480 accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc ctacagtcct caggactcta ctccctcagc 540 agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcttg ggcacgaaga cctacacctg caacgtagat 600 cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag agagttgagt ccaaatatgg tcccccatgc 660 ccaccctgcc cagcacctga ggccgccggg ggaccatcag tcttcctgtt ccccccaaaa 720 cccaaggaca ctctcatgat ctcccggacc cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg 780 agccaggaag accccgaggt ccagttcaac tggtacgtgg atggcgtgga ggtgcataat 840 gccaagacaa agccgcggga ggagcagttc aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900 accgtcctgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960 ggcctcccgt cctccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagagcca 1020 caggtgtaca ccctgccccc atcccaggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080 tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggaaag caatgggcag 1140 ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200 tacagcaggc taaccgtgga caagagcagg tggcaggagg ggaatgtctt ctcatgctcc 1260 gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acacagaaga gcctctccct gtctctgggt 1320 84T工 1521PRM 0>1>2>3> 11 1 n 11 <2<2<2<2 <220> <223>合成 <400> 158
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Lys Ser lie Ser Lys Tyr 20 25 30
Thr Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45 -72- 144516-序列表.doc 201023891
Tyr Ala Gly Ser Lys Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin His Asn Glu Tyr Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140
Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 159 <211> 642 <212> DNA <213>人工 <220> <223>合成 <400> 159 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 642 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgca gggcgagtaa gageattage aaatatacag cctggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaagctcct gatetatget gggtccaagt tgcggtctgg agtcccatca aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct gaagattttg caacttacta ttgtcaacaa cataatgaat acccgtacac gttcggcgga gggaccaagg tggagatcaa acggactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca tetgatgage agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taaettetat cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gegaagteae ccatcagggc ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gc •73- 144516·序列表.doc 201023891 OOT工 1644PR人 0>1>2>3> 1* 1* lx 220^0^ <220> <223>合成 <400> 160
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Ser Phe 20 25 30
Leu lie Glu Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Lys Glu Lys Phe 50 55 60
Arg Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Phe Phe Val Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val 100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys 115 120 125
Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys 130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu 145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu 165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 180 185 190
Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val 195 200 205
Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 210 215 220
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 245 250 255 -74- 144516-序列表.doc 201023891
Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr 260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 275 280 285
Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 290 295 300
Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 305 310 315 320
Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin 325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met 340 345 350
Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 355 360 365
Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn 370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 385 390 395 400
Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val 405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin 420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 <210> 161 <211> 1320 <212> Wk <213>人工 <220> <223>合成 <400> 161 60 120 180 240 300 360 420 480 540 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc agtgaaggtt tcctgcaagg catctggcta ccgcttcact tcgttcttga tagagtgggt gcgacaggcc cctggacaag ggcttgagtg gatgggaacg agtaatccta ggactggtgg gacaaagtat aaagagaagt tcaggggcag agtcaecatt accgcggaca aatccacgas cacagcctac atggagctga gcagcctgag atetgaggae acggccgtgt attactgtgc gcgcgagttt tttgtctact ggggccaagg aaccacggtc accgtctcct cagcctccac caagggccca tcggtcttcc cgctagcgcc ctgctccagg agcacctccg agagcacagc cgccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc ctacagtcct caggactcta ctccctcagc 75- 144516-序歹11表.doc 201023891 agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcttg ggcacgaaga cctacacctg caacgtagat 600 cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag agagttgagt ccaaatatgg tcccccatgc 660 ccaccctgcc cagcacctga ggccgccggg ggaccatcag tcttcctgtt ccccccaaaa 720 cccaaggaca ctctcatgat ctcccggacc cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg 780 agccaggaag accccgaggt ccagttcaac tggtacgtgg atggcgtgga ggtgcataat 840 gccaagacaa agccgcggga ggagcagttc aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900 accgtcctgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960 ggcctcccgt cctccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagagcca 1020 caggtgtaca ccctgccccc atcccaggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 10S0 tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggaaag caatgggcag 1140 ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200 tacagcaggc taaccgtgga caagagcagg tggcaggagg ggaatgtctt ctcatgctcc 1260 gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acacagaaga gcctctccct gtctctgggt 1320
<210> 162 <211> 214 <212> WT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 162
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Scr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Lys Ser lie Scr Lys Tyr 20 25 30
Thr Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin His Asn Glu Tyr Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140
Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin -76- 144516-序列表.doc 201023891 145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys . 210 3i2A 工 1664DNAJ '>>>> ο 1 z 3 2220^ <220> <223>合成 <400> 163 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgca gggcgagtaa gagcattagc aaatatacag cctggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gggtccaagc ggtactacgg agtcccatca aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct gaagattttg caacttacta ttgtcaacaa cataatgaat acccgtacac gttcggcgga gggaccaagg tggagatcaa acggactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gc
<210> 164 <211> 440 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 164
Gin Val Gin Leu Val Gin Set Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15
Scr Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Ser Phe 20 25 30
Leu He Glu Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Arg Thr Lys Tyr Lys Thr Lys Phe 50 55 60 ·77· 144516-序歹!| 表.doc 201023891
Arg Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val 100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys 115 120 125
Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys 130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu 145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu 165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 180 185 190
Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val 195 200 205
Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 210 215 220
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 245 250 255
Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr 260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 275 280 285
Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 290 295 300
Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 305 310 315 320
Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin 325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met 340 345 350
Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro -78- 144516-序列表 _doc
201023891 355 360 365
Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn 370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 385 390 395 400
Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val 405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin 420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 <210> 165 <211> 1320 <212> Wk <213>人工 <220> <223>合成 <400> 165 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc agtgaaggtt tcctgcaagg catctggcta ccgcttcact tcgttcttga tagagtgggt gcgacaggcc cctggacaag ggcttgagtg gatgggaacg agtaatccta ss^ctggtag gacaaagtat aaaaccaagt tcaggggcag agtcaccatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgcgagttt tttgactact ggggccaagg aaccacggtc accgtctcct cagcctccac caagggccca tcggtcttcc cgctagcgcc ctgctccagg agcacctccg agagcacagc cgccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcttg ggcacgaaga cctacacctg caacgtagat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag agagttgagt ccaaatatgg tcccccatgc ccaccctgcc cagcacctga ggccgccggg ggaccatcag tcttcctgtt ccccccaaaa cccaaggaca ctctcatgat ctcccggacc cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg agccaggaag accccgaggt ccagttcaac tggtacgtgg atggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagttc aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa ggcctcccgt cctccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagagcca caggtgtaca ccctgccccc atcccaggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggaaag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaggc taaccgtgga caagagcagg tggcaggagg ggaatgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acacagaaga gcctctccct gtctctgggt 144516·序歹！I表.doc 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 -79- 201023891
<210> 166 <211> 214 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 166
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Lys Ser lie Ser Lys Tyr 20 25 30
Thr Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin His Asn Glu Tyr Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140
Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210> 167 <211> 642 <212> DNA <213>人工 <220> <223>合成 -80- 144516-序列表.doc 201023891 <400> 167 gacatccaga atcacttgca gggaaagccc aggttcagtg gaagattttg gggaccaagg tctgatgagc cccagagagg gagagtgtca ctgagcaaag ctgagctcgc tgacccagtc gggcgagtaa ctaagctcct gcagtggatc caacttacta tggagatcaa agttgaaatc ccaaagtaca cagagcagga cagactacga ccgtcacaaa tccatcctcc gagcattago gatctatgct tgggacagat ttgtcaacaa acggactgtg tggaactgcc gtggaaggtg cagcaaggac gaaacacaaa gagcttcaac ctgtctgcat aaatatacag gggtccaagc ttcactctca cataatgaat gctgcaccat tctgttgtgt gataacgccc agcacctaca gtctacgcct aggggagagt ctgtaggaga cctggtatca ggtactacgg ccatcagcag acccgtacac ctgtcttcat gcctgctgaa tccaatcggg gcctcagcag gcgaagtcac gc cagagtcacc gcagaaacca agtcccatca tctgcaacct gttcggcgga cttcccgcca taacttctat taactcccag caccctgacg ccatcagggc 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 642 <210> 168 <211> 14 <212> PRT <213>智人 <400> 168
Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu lie 1 5 10 <210> 169 <211> 10 <212> PRT <213>智人 <400> 169 G, Leu s Ly Γ Thc y G1 n Gl y G1 c ph1
Lvlo ❿ ^> > > ^ > 1111 22 人 <1 <220>
<221> MISC.FEATURE <222> (10)..(10) <223> 為 ώι或Thr <400> 170
Arg Ala Scr Lys Ser lie Ser Lys Tyr Xaa Ala 1 5 10 <210> 171 <211> 7 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 -81 - 144516-序歹丨J表·doc 201023891 <220> <221> MISC_FEATURE <222〉 （5)..(5) <223> Xaa 為 Leu 或Arg <220> <221> MISC FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa為 Ser、Tyr或Tip <400> 171
Ala Gly Ser Lys Xaa His Xaa <210> 172 <211> 9 <212〉 PRT <213> 人工 <220> <223> 合成 <220> <221〉 MISC FEATURE <222> (1)·, 「（1) <223> Xaa 為 Gin 或 Phe <400> 172
Xaa Gin His Asn Glu Tyr Pro Tyr Thr <210> 173 <211> 17 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <220> <221> MISC.FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa為 Ser或He <220〉 <221> MISC_FEATORE <222> (8)..(8) <223> Xaa為Arg 或Gly <220> <221> MISC一FEATURE <222> (12)..(12) <223〉]kaa 為 Lys ^Asn <220> <221> MISC.FEATORE <222> (13)..(13) <223> Xaa為 Ser 或Glu <400> 173
Thr Xaa Asn Pro Arg Thr Gly Xaa Thr Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe Arg 1 5 10 15
Gly 82- 144516-序列表.doc 201023891 <210> 174 <211> 7 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> 文aa 為teu 或Arg <220> <221> MI SC FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa 為 Hs、Arg 或Tyr <220> <221> MISCJFEATTJRE <222> (7)..(7) <223> 文邱為:^er、Tip或Tyr <400> 174
Ala Gly Scr Lys Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 175
<211> 10 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <220〉 <221> MISC.FEATURE <222> (3)..(3) <223〉文aa 為Ala 或Arg <400> 175
Gly Tyr Xaa Phe Thr Ser Phe Leu lie Glu 1 5 10
<210> 176 <211> 17 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa為Gly或Arg <220> <221> MISC^FEATURE <222〉 （9)..(9) <223> 文aa為Thr 或Arg <220> <221> MISC.FEATTJRE <222> (13)..(13) <223> iaa 為 Glu、Thr 或 Ser -83· 144516·序列表.doc 201023891 <400> 176
Thr Ser Asn Pro Are Thr Gly Xaa Xaa Lys Tyr Lys Xaa Lys Bie Arg 15 10 15
Gly <210> 177 <211> 7 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 177
Ala Gly Ser Lys Arg His Tyr <210> 178 <211> 114 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 178
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Phe 20 25 30
Leu lie Glu Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Lys Ser Lys Phe 50 55 60
Arg Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val 100 105 110
Ser Ser <210> 179 <211> 440 <212> PRT <213〉人工 <220> <223>合成 <400> 179 -84- 144516-序列表.doc 201023891
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Phe 20 25 30
Leu lie Glu Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Thr Ser Asn Pro Arg Thr Gly Gly Thr Lys Tyr Lys Ser Lys Phe 50 55 60
Arg Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly ThT Thr Val Thr Val 100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys 115 120 125
Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys 130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu 145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu 165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 180 185 190
Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val 195 200 205
Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 210 215 220
Ala Pro Giu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 245 250 255
Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr 260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 275 280 285
Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 290 295 300 -85- 144516-序列表.doc 201023891
Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 305 310 315 320
Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin 325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met 340 345 350
Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 355 360 365
Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn 370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 385 390 395 400
Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val 405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin 420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 <210> 180 <211> 107 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成 <400> 180
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Lys Ser lie Ser Lys Tyr 20 25 30
Thr Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Gly Ser Lys Arg His Tyr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin His Asn Glu Tyr Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 -86 - 144516·序列表.doc 201023891 14!7工 81¾ L 12P人 >>> Λ > 0 12 3 22 2 2 < < < < <220> <223>合成 <400> 181
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Lys Ser lie Ser Lys Tyr 20 25 30
Thr Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Gly Ser Lys Arg His Tyr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 參
O
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin His Asn Glu Tyr Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140
Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 0>1>2>3> 11 11 11 1* <2<2<2<2
2th 8 0,IrJ 11 p »A <220> <223>合成 144516-序列表.doc -87 - 201023891 <220> <221> MISC.FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa 為 Ala 或 Arg <400> 182
Gly Tyr Xaa Phe Thr Ser Phe Leu lie Glu 1 5 10 <210> 183 <211> 11 <212> PRT <213> 智人 <400> 183
Ala Asn lie Val Pro Glu Thr Ser Pro Glu Ser 1 5 10 <210> 184 <211> 10 <212> PRT <213>智人 <400> 184 lie Val Pro Glu Thr Ser Pro Glu Ser Val 1 5 10 ,77/\17 012 3 li T1 11 11 22ΛΖ2 < < V < 5 T人 1810叩智 <400> 185
Asn lie Val Pro Glu Thr Ser Pro Glu Ser 1 5 10 <210> 186 <211> 8 <212> PRT <213>智人 <400> 186
Va1 Pro Glu Thr Ser Pro Ser Val i§7PRTi 10>11>12>13> 212 2 2 < < < < <400〉187
Pro Glu Thr Ser Pro Glu Ser Val Pro lie 1 5 10 8 T人 8000 11 1i Dl ^ > > > Q 1 2 3 11 11 <2<2<2<2 <400> 188
Thr Ser Pro Glu Ser Val Pro lie lie Ser 88 144516-序列表.doc 201023891
ΓΚ > > > > 012 3 11 11 1Λ 11 < V < V <400> 189
Ala Asn lie Val Pro Glu Thr Ser Pro 1 5 <210> 190 <211〉 9 <212> PRT <213>智人 <400> 190 lie Val Pro Glu Thr Ser Pro Glu Ser 參 <210> 191 <211> 8 <212> PRT <213>智人 <400> 191
Ala Asn lie Val Pro Glu Thr Ser 1 5 0>1>2>3> 11 11 11 11 2222 92 PRT智 <400> 192 lie Val Pro Glu Thr Ser Pro Glu 參 <210> 193 <211> 7 <212> PRT <213>智人 <400> 193 lie Val Pro Glu Thr Ser Pro <210> 194 <211> 5 <212> PRT <213>智人 <400> 194
He Gin Gly Glu Ser <210> 195 <211> 10 <212> PRT <213>智人 <400> 195 -89- 144516-序歹丨」表.doc 201023891 lie Thr Pro Thr Lys lie Pro Glu lie Thr 1 5 10 <210> 196 <211> 10 <212> PRT <213>智人 <400> 196 lie Gin Gly Glu Ser lie Thr Pro Thr Lys 1 5 10 <210> 197 <211> 10 <212> PRT <213>智人 <400> 197
Gin Gly Glu Ser lie Thr Pro Thr Lys He 1 5 10 <210> 198 <211> 10 <212> PRT <213>智人
<400> 19S
Gly Glu Ser lie Thr Pro Thr Lys lie Pro 1 5 10 <210> 199 <211> 10 <212> PRT <213>智人 <400> 199
Glu Ser lie Thr Pro Thr Lys lie Pro Glu 1 5 10 <210> 200 <211> 10 <212> PRT <213>智人 <400> 200
Ser He Thr Pro Thr Lys lie Pro Glu lie 1 5 10 <210> 201 <211> 10 <212> PRT <213>智人 <400> 201
He Thr Pro Thr Lys lie Pro Glu lie Thr 1 5 10 <210> 202 <211> 13 <212> PRT <213>智人 •90- 144516-序列表.doc 201023891 <400> 202 lie Thr Thr Glu lie Tyr Met Ser Asn Gly Ser Asn Ser 1 5 10 <210> 203 <211> 12 <212> PRT <213>智人 <400> 203
Thr Glu lie Tyr Met Ser Asn Gly Ser Asn Ser Ala 1 5 10 <210> 204 <211> 10 <212> PRT <213>智人 <400> 204 lie Thr Thr Glu lie Tyr Met Ser Asn Gly m 1 5 10 05oRT°A 2 1 ρ '>>>> 0123 11 n 11 1 2 2 22 <400>205
Thr Thr Glu lie Tyr Met Ser Asn Gly Ser 1 5 10 <210> 206 <211> 10 <212> PRT <213>智人 <400> 206
Thr Glu lie Tyr Met Ser Asn Gly Ser Asn 1 5 10 <210> 207 <211> 10 <212> PRT <213>智人 <400> 207
Glu lie Tyr Met Ser Asn Gly Ser Asn Ser 1 5 10 8 T人 2010四智 b> Λ > 1 2 3 ΙΑ 14 υ 2 2 2 2 <400> 208 lie Tyr Met Ser Asn Gly Ser Asn Ser Ala 1 5 10 <210> 209 <211> 10 -91 - 144516-序列表.doc 201023891 <212> PRT <213>智人 <400> 209
Arg Asp Gly Trp Val Ser Tyr Tyr Asn Gin 10 <210> 210 <211> 7 <212> PRT <213>智人 <400> 210 1 <210> 211 <211> 8 <212> PRT <213> 智人 <400> 211
Glu He Tyr Met Ser Asn Gly
He Tyr Met Ser Asn Gly Ser Asn <210〉 212 <211> 5 <212> PRT <213> 智人 <400> 212 lie Thr Pro Thr Lys 1 5 <210> 213 <211> 10 <212> PRT <213>智人 <400> 213
Ser lie Thr Pro Thr Lys lie Pro Glu lie 1 5 10 <210〉 214 <211> 10 <212> PRT <213> 智人 <400> 214 Glu lie Tyr Met Ser Asn Gly Ser Asn Ser 1 5 10 -92 144516-序列表.doc

Claims (1)

  1. 201023891 七、申請專利範圍： 1. 一種單株抗體或其抗原結合片段，其結合由SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列組成的人類轉鐵蛋白（ferroportin) 1 及至少一個選自由 SEQ ID NO: 12、SEQ ID NCh 13、 SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16及 SEQ - ID NO: 95組成之群之其肽片段，且包含分別包含SEQ ID NO: 37、129、22、107、118及120中所示胺基酸序列 的 LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2 及 ® HCDR3。 2. 如請求項1之單株抗體或抗原結合片段，其包含分別包 含SEQ ID NO: 37、174、22、175、176及 120中所示胺基 酸序列的 LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2及 HCDR3。 3. 如請求項1之單株抗體或抗原結合片段，其包含分別包 含SEQ ID NO: 37、125、22、23、110及 19中所示胺基酸 序列的 LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2 及 參 HCDR3。 4. 如請求項1之單株抗體或抗原結合片段，其包含分別包 • 含SEQ ID NO: 37、177、22、23、112及 19中所示胺基酸 序列的 LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2 及 HCDR3。 5. 如請求項1之單株抗體或抗原結合片段，其包含分別包 含 SEQ ID NO: 37、122、22、23、110及 19中所示胺基酸 序列的 LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2 及 144516.doc 201023891 HCDR3。 6. 如請求項1之單株抗體或抗原結合片段，其包含分別如 SEQ ID NO: 136及SEQ ID NO: 134中所示之輕鏈可變區 及重鏈可變區。 7. 如請求項1之單株抗體或抗原結合片段，其包含分別如 SEQ ID NO: 180及SEQ ID NO: 178中所示之輕鏈可變區 及重鏈可變區。 8. 如請求項1之單株抗體或抗原結合片段，其包含分別如 SEQ ID NO: 140及SEQ ID NO: 138中所示之輕鏈可變區 及重鏈可變區。 9. 如請求項1之單株抗體或抗原結合片段，其包含： a. 分別如SEQ ID NO: 154及SEQ ID NO: 152中所示之 輕鏈及重鏈； b. 分別如SEQ ID NO: 181及SEQ ID NO: 179中所示之 輕鍵及重鍵；或 c. 分別如SEQ ID NO: 158及SEQ ID NO: 156中所示之 輕鍵及重鍵。 10. 如請求項9之單株抗體或抗原結合.片段，其包含兩個輕 鏈多肽及兩個重鏈多肽，其中該等輕鏈多肽各具有如 SEQ ID NO: 154中所示之胺基酸序列，該等重鏈多肽各 具有如SEQ ID NO: 152中所示之胺基酸序列。 11. 如請求項9之單株抗體或抗原結合片段，其包含兩個輕 鏈多肽及兩個重鏈多肽，其中該等輕鏈多肽各具有如 SEQ ID NO: 181中所示之胺基酸序列，該等重鏈多肽各 144516.doc 201023891 具有如SEQ ID NO: 179中所示之胺基酸序列。 12. 如請求項9之單株抗體或抗原結合片段’其包含兩個輕 鏈多肽及兩個重鏈多肽，其中該等輕鏈多肽各具有如 SEQ ID NO: 158中所示之胺基酸序列，該等重鏈多肽各 具有如SEQ ID NO: 156中所示之胺基酸序列。 13. 如請求項12之單株抗體，其結合人類轉鐵蛋白1之kd小 於約10 nM，如表面電漿共振在25。(：所測定。 14. 如請求項13之單株抗體或抗原結合片段，其包含Fab， 其結合人類轉鐵蛋白1之KD小於約100 nM，如表面電梁 共振在37°C所測定。 15. 如請求項14之單株抗體或抗原結合片段，其中該Fab對 人類轉鐵蛋白1之解離速率（kw)介於約7·5χ1〇-3 s.1與約 9xl0_4 s·1之間，如SPr在37°c所測定。 16. 如請求項14之單株抗體或抗原結合片段，其中該Fab結 合人類轉鐵蛋白1之KD介於約100 nM至約1 nM之間。 φ 17.如請求項16之單株抗體或抗原結合片段，其中該Fab結 合人類轉鐵蛋白1之KD介於約10nM至約0·5ηΜ之間。 18. 如請求項17之單株抗體或抗原結合片段，其中在海帕西 ‘ °定-25(hepcidin-25)之生物活性之活體外檢定中，該單株 . 抗體或抗原結合片段之IC5〇介於約100 nM與約1 nM之 間。 19. 如請求項18之單株抗體或抗原結合片段，其中該IC50介 於約100 nM與約10 nM之間。 20. 如請求項19之單株抗體或抗原結合片段，其中該海帕西 144516.doc 201023891 啶-25之生物活性為轉鐵蛋白1之内化及/或降解。 21. 22. 23. 24. 25. 26. 27. 28. 29. 30. 31. 如請求項20之單株抗體或抗原結合片段，其中在海帕西 啶-25之生物活性之活體内檢定中，該單株抗體或抗原結 合片段之IC5〇介於約1〇〇 nM與約1 nM之間。 如言月求項21之單株抗體或抗原結合片段，其中該檢定測 量靈長類動物由IL-6誘導之血清鐵含量的下降。 一種聚核苷酸’其包含編碼如請求項丨之單株抗體或抗 原結合片段的核普酸序列.。 一種重組表現载體’其包含如請求項23之聚核苷酸。 一種宿主細胞，其已經如請求項24之表現載體轉型。 如請求項25之宿主細胞，其中該細胞為中國倉鼠卵巢 (Chinese hamster ovary，CHO)細胞、NS0骨髓瘤細胞、 COS細胞或SP2/0細胞。 如請求項1之單株抗體或抗原結合片段，其用於治療。 如請求項1之單株抗體或抗原結合片段，其用於治療貧 〇 一種如請求項1之單株抗體或抗原結合片段的用途，其 用於製備供治療或預防個體貧血的藥劑。 一種如請求項1之單株抗體或抗原結合片段的用途，其 用於增加人類之血清鐵含量、網狀細胞計數、紅血球計 數、血紅素及/或企球比容。 一種如請求項1之單株抗體或抗原結合片段的用途，其 用於製造增加人類之血清鐵含量、網狀細胞計數、紅血 球計數、血紅素及/或血球比容的藥劑。 144516.doc 201023891 32. —種如請求項1之單株抗體或抗原結合片段的用途，其 用於製造用於組合療法中以增加人類之血清鐵含量、網 狀細胞計數、紅血球計數、血紅素及/或血球比容的藥 劑，其中該藥劑與一或多種選自由以下組成之群的 ESAs ·依伯汀 a(epoetin alfa)、依伯汀p(ep〇ietin 、 達依泊汀《(darbepoetin aifa)、赫馬德（hematide)、甲氧 基聚乙二醇-依伯汀β，或其他慣用於增加人類之血清鐵 2量、網狀細胞計數、紅血球計數、血紅素及/或血球比 容的治療劑或治療性處理組合投與。 33. —種增加血清鐵含量、網狀細胞計數、紅血球計數、血 素及/或血球比容的方法，該方法包含向個體投與有效 量的如請求項1之單株抗體或抗原結合片段。 34. -種醫藥組合物，其包含如請求項i之單株抗體或抗原 結合片段’及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形 參35,種產生單株抗體或抗原結合片段之方法，該方法包含 乂下步驟.⑴如凊求項26之宿主細胞在適於表現該單株 =或抗原結合片段的條件下培養；及⑼回收該表現之 . 早株抗體或抗原結合片段。 .从-種單株抗體或抗原結合片段，其可 法獲得。 乍〕）乙万 144516.doc
TW098140185A 2008-12-05 2009-11-25 Anti-ferroportin 1 monoclonal antibodies and uses thereof TW201023891A (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US12007608P 2008-12-05 2008-12-05
US23981809P 2009-09-04 2009-09-04

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW201023891A true TW201023891A (en) 2010-07-01

Family

ID=41683589

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW098140185A TW201023891A (en) 2008-12-05 2009-11-25 Anti-ferroportin 1 monoclonal antibodies and uses thereof

Country Status (26)

Country Link
EP (1) EP2373335B1 (zh)
JP (1) JP5713917B2 (zh)
KR (1) KR101353117B1 (zh)
CN (1) CN102238962B (zh)
AR (1) AR074398A1 (zh)
AU (1) AU2009322587B2 (zh)
BR (1) BRPI0922288A2 (zh)
CA (1) CA2745618C (zh)
CY (1) CY1117355T1 (zh)
DK (1) DK2373335T3 (zh)
EA (1) EA020472B1 (zh)
ES (1) ES2566343T3 (zh)
HK (1) HK1158977A1 (zh)
HR (1) HRP20160302T1 (zh)
HU (1) HUE028585T2 (zh)
IL (1) IL212731A0 (zh)
MX (1) MX2011005939A (zh)
NZ (1) NZ592545A (zh)
PA (1) PA8849601A1 (zh)
PL (1) PL2373335T3 (zh)
SG (1) SG171960A1 (zh)
SI (1) SI2373335T1 (zh)
TW (1) TW201023891A (zh)
UA (1) UA104741C2 (zh)
WO (1) WO2010065496A1 (zh)
ZA (1) ZA201103941B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20150013277A (ko) * 2012-05-14 2015-02-04 제넨테크, 인크. 종양의 진단 및 치료를 위한 조성물 및 방법
CN110806486B (zh) * 2019-11-23 2023-03-21 中南大学湘雅三医院 Mafg/as1/pcbp2/fpn1调控轴作为靶位点检测试剂的应用
CN113980987A (zh) * 2021-12-06 2022-01-28 上海市农业科学院 一种提高植物抗镍性能的PgIREG1S和AlATP-PRTS双基因组及其应用

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7166448B1 (en) * 1999-05-10 2007-01-23 Children's Medical Center Corproation Ferroportin1 nucleic acids and proteins
IT1319221B1 (it) * 2000-10-17 2003-09-26 Antonello Pietrangelo Mutazioni nel gene della ferroportina 1 associata ad emocromatosiereditaria.
ES2500066T3 (es) * 2008-01-25 2014-09-30 Amgen, Inc Anticuerpos frente a ferroportina y métodos de uso

Also Published As

Publication number Publication date
HUE028585T2 (en) 2016-12-28
SI2373335T1 (sl) 2016-04-29
KR20110084996A (ko) 2011-07-26
JP5713917B2 (ja) 2015-05-07
EA201170764A1 (ru) 2011-12-30
HRP20160302T1 (hr) 2016-04-22
CY1117355T1 (el) 2017-04-26
PL2373335T3 (pl) 2016-08-31
KR101353117B1 (ko) 2014-02-17
JP2012510814A (ja) 2012-05-17
PA8849601A1 (es) 2010-07-27
EA020472B1 (ru) 2014-11-28
BRPI0922288A2 (pt) 2018-08-28
EP2373335B1 (en) 2016-02-24
CA2745618C (en) 2014-06-10
WO2010065496A1 (en) 2010-06-10
NZ592545A (en) 2012-12-21
DK2373335T3 (en) 2016-05-02
SG171960A1 (en) 2011-07-28
EP2373335A1 (en) 2011-10-12
CN102238962A (zh) 2011-11-09
ZA201103941B (en) 2012-11-28
AU2009322587A1 (en) 2011-07-28
AR074398A1 (es) 2011-01-12
CA2745618A1 (en) 2010-06-10
CN102238962B (zh) 2014-02-12
HK1158977A1 (zh) 2012-07-27
UA104741C2 (uk) 2014-03-11
IL212731A0 (en) 2011-07-31
ES2566343T3 (es) 2016-04-12
AU2009322587B2 (en) 2013-09-26
MX2011005939A (es) 2011-06-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102473028B1 (ko) 항-tim-3 항체 및 조성물
CN113423733B (zh) 结合tslp的抗体及其用途
KR101915496B1 (ko) Ｐｃｓｋ9 길항제
JP6853178B2 (ja) ＦｃＲｎ抗体およびその使用方法
CN113150144A (zh) 肿瘤坏死因子样配体1a特异性抗体及其组合物和用途
KR20150139909A (ko) Fap 및 dr5에 특이적인 이중특이성 항체, dr5에 특이적인 항체 및 사용 방법
AU2016322814A1 (en) Polyomavirus neutralizing antibodies
RU2730674C2 (ru) Антитела, связывающиеся с человеческим каннабиноидным рецептором 1 (св1)
TW201008579A (en) Anti-Fn14 antibodies and uses thereof
KR20200067924A (ko) β-KLOTHO, FGF 수용체 및 이들의 복합체에 결합하는 인간 항원 결합 단백질
TW201041592A (en) Anti-TNF-α antibodies and their uses
US8679497B2 (en) Anti-ferroportin 1 monoclonal antibodies and uses thereof
WO2021063352A1 (zh) 一种抗pd-l1抗原结合蛋白及其应用
KR20210044262A (ko) Cd200r 효능제 항체 및 그의 용도
CN108601833B (zh) 甲状旁腺激素-抗rankl抗体融合化合物
DK2373335T3 (en) Monoclonal anti-ferroportin 1 antibodies and uses thereof
AU2020322569A1 (en) Humanized anti-IL17A antibody and use thereof
KR20210018192A (ko) 항인간 tlr7 항체
US11597770B2 (en) Anti-E-selectin antibodies, compositions and methods of use
RU2804963C2 (ru) Гуманизированное антитело против il17a и его применение
RU2808123C2 (ru) Антитело против человеческого tlr7
CA3225077A1 (en) Methods of treating neurological diseases
TW202246350A (zh) 血漿激肽釋放素抗體及其用途