TW202246350A

TW202246350A - 血漿激肽釋放素抗體及其用途

Info

Publication number: TW202246350A
Application number: TW111104148A
Authority: TW
Inventors: 瓦埃比戴安; 普拉迪普比斯塔; 彼得哈爾溫; 托馬斯基瑟拉克; 強納森梵爾林
Original assignee: 美商奧斯提亞治療股份有限公司
Priority date: 2021-01-28
Filing date: 2022-01-28
Publication date: 2022-12-01
Also published as: KR20230137410A; MX2023008926A; WO2022165130A1; JP2024509497A; EP4284839A1; US20240218079A1; CO2023010721A2; CA3208312A1; AU2022214914A9; IL304587A; AU2022214914A1

Abstract

本文提供結合血漿激肽釋放素之抗體及含有此類抗體或其抗原結合片段之組合物。亦提供製備及使用此類抗體或其抗原結合片段之方法，諸如用於治療遺傳性血管性水腫或緩激肽依賴性水腫。

Description

血漿激肽釋放素抗體及其用途

本發明之領域為免疫學，特定言之治療性抗體，以及用彼等抗體治療疾病。

血漿激肽釋放素係一種絲胺酸蛋白酶，且為不同炎症、心血管、感染性(敗血症)及腫瘤疾病之潛在藥物靶標(Sainz I. M. 等人, Thromb Haemost98, 77-83, 2007)。血漿激肽釋放素之活化經由其對因子XII之反饋活化來放大內在凝血，且經由產生促炎性九肽緩激肽來增強炎症。作為循環中之主要激肽原酶，血漿激肽釋放素主要負責脈管系統中緩激肽的生成。血漿激肽釋放素之主要天然抑制劑C1抑制劑蛋白(C1-INH)中的遺傳缺陷導致遺傳性血管性水腫(HAE)。HAE患者遭受通常由未知觸發因素誘發之疼痛性水腫的急性發作(Zuraw B. L. 等人, N Engl J Med359, 1027-1036, 2008)。經由在動物模型中使用藥劑或遺傳研究，血漿激肽釋放素-激肽系統(血漿KKS)與各種疾病有關。血漿激肽釋放素結合蛋白( 例如抗體，例如抑制性抗體)為用於多種疾病及疾患，例如與血漿激肽釋放素活性水準相關之疾病及疾患的有用治療劑。

儘管迄今為止作出了努力，但仍需要靶向血漿激肽釋放素之治療性抗體。

本文描述之本發明部分基於與血漿激肽釋放素，例如人類血漿激肽釋放素結合之高親和力結合蛋白，例如抗體及抗原結合片段的發現。該等抗體對血漿激肽釋放素，例如人類血漿激肽釋放素具有高特異性。相對於前激肽釋放素，該等抗體對血漿激肽釋放素具有高選擇性，且與胰蛋白酶及其他絲胺酸蛋白酶缺乏顯著脫靶結合。此等結合蛋白亦可具有延長的半衰期，例如在血液中延長的半衰期。由於此等及其他特徵，抗體可適用於治療多种血漿激肽釋放素介導之疾病，諸如遺傳性血管性水腫及緩激肽依賴性水腫，且與其他抗體相比，亦有助於以較低劑量治療此等疾病及/或延長給藥間隔。

在本發明之一個態樣中，本文揭示結合血漿激肽釋放素之抗體，包括抗原結合片段。血漿激肽釋放素可為人類血漿激肽釋放素，例如具有如SEQ ID NO:32中所示之胺基酸序列的人類血漿激肽釋放素。

本文揭示之抗體及抗原結合片段可包括重鏈可變區(VH)，其包含HCDR1、HCDR2及HCDR3；及輕鏈可變區(VL)，其包含LCDR1、LCDR2及LCDR3。

例如，該抗體或其結合片段可具有一個VH，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 14、23、29或43中所示之胺基酸序列；HCDR2包含SEQ ID NO: 15、17、19、24、30或44中所示之胺基酸序列；且HCDR3包含SEQ ID NO: 16、25或31中所示之胺基酸序列；以及一個VL，其中LCDR1包含SEQ ID NO: 11、20或27中所示之胺基酸序列；LCDR2包含SEQ ID NO: 12、18、21或26中所示之胺基酸序列；且LCDR3包含SEQ ID NO: 13、22或28中所示之胺基酸序列。

例如，該抗體或其結合片段可具有一個VH，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 14中所示之胺基酸序列；HCDR2包含SEQ ID NO: 15、17或19中所示之胺基酸序列；且HCDR3包含SEQ ID NO: 16中所示之胺基酸序列；以及一個VL，其中LCDR1包含SEQ ID NO: 11中所示之胺基酸序列；LCDR2包含SEQ ID NO: 12或18中所示之胺基酸序列；且LCDR3包含SEQ ID NO: 13中所示之胺基酸序列。

例如，該抗體或其結合片段可具有一個VH，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 23中所示之胺基酸序列；HCDR2包含SEQ ID NO: 24中所示之胺基酸序列；且HCDR3包含SEQ ID NO: 25中所示之胺基酸序列；以及一個VL，其中LCDR1包含SEQ ID NO: 20中所示之胺基酸序列；LCDR2包含SEQ ID NO: 21或26中所示之胺基酸序列；且LCDR3包含SEQ ID NO: 22中所示之胺基酸序列；

例如，該抗體或其結合片段可具有一個VH，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 29中所示之胺基酸序列；HCDR2包含SEQ ID NO: 30中所示之胺基酸序列；且HCDR3包含SEQ ID NO: 31中所示之胺基酸序列；以及一個VL，其中LCDR1包含SEQ ID NO: 27中所示之胺基酸序列；LCDR2包含SEQ ID NO: 21或26中所示之胺基酸序列；且LCDR3包含SEQ ID NO: 28中所示之胺基酸序列。

例如，該抗體或其結合片段可具有一個VH，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 43中所示之胺基酸序列；HCDR2包含SEQ ID NO: 44中所示之胺基酸序列；且HCDR3包含SEQ ID NO: 25中所示之胺基酸序列；以及一個VL，其中LCDR1包含SEQ ID NO: 11中所示之胺基酸序列；LCDR2包含SEQ ID NO: 12或18中所示之胺基酸序列；且LCDR3包含SEQ ID NO: 28中所示之胺基酸序列。

例如，該抗體或其結合片段可具有一個VH，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 14中所示之胺基酸序列；HCDR2包含SEQ ID NO: 19中所示之胺基酸序列；且HCDR3包含SEQ ID NO: 16中所示之胺基酸序列；以及一個VL，其中LCDR1包含SEQ ID NO: 11中所示之胺基酸序列；LCDR2包含SEQ ID NO: 18中所示之胺基酸序列；且LCDR3包含SEQ ID NO: 13中所示之胺基酸序列。

例如，該抗體或其結合片段可具有一個VH，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 14中所示之胺基酸序列；HCDR2包含SEQ ID NO: 15中所示之胺基酸序列；且HCDR3包含SEQ ID NO: 16中所示之胺基酸序列；以及一個VL，其中LCDR1包含SEQ ID NO: 11中所示之胺基酸序列；LCDR2包含SEQ ID NO: 12中所示之胺基酸序列；且LCDR3包含SEQ ID NO: 13中所示之胺基酸序列。

例如，該抗體或其結合片段可具有一個VH，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 14中所示之胺基酸序列；HCDR2包含SEQ ID NO: 17中所示之胺基酸序列；且HCDR3包含SEQ ID NO: 16中所示之胺基酸序列；以及一個VL，其中LCDR1包含SEQ ID NO: 11中所示之胺基酸序列；LCDR2包含SEQ ID NO: 12中所示之胺基酸序列；且LCDR3包含SEQ ID NO: 13中所示之胺基酸序列。

例如，該抗體或其結合片段可具有一個VH，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 23中所示之胺基酸序列；HCDR2包含SEQ ID NO: 24中所示之胺基酸序列；且 HCDR3包含SEQ ID NO: 25中所示之胺基酸序列；以及一個VL，其中LCDR1包含SEQ ID NO: 20中所示之胺基酸序列；包含SEQ ID NO: 26中所示之胺基酸序列；且LCDR3包含SEQ ID NO: 22中所示之胺基酸序列。

例如，該抗體或其結合片段可具有一個VH，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 29中所示之胺基酸序列；HCDR2包含SEQ ID NO: 30中所示之胺基酸序列；且HCDR3包含SEQ ID NO: 31中所示之胺基酸序列；以及一個VL，其中LCDR1包含SEQ ID NO: 27中所示之胺基酸序列；CDR2包含SEQ ID NO: 26中所示之胺基酸序列；且LCDR3序列包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列。

例如，該抗體或其結合片段可具有一個VH，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 43中所示之胺基酸序列；HCDR2包含SEQ ID NO: 44中所示之胺基酸序列；且HCDR3包含SEQ ID NO: 25中所示之胺基酸序列；以及一個VL，其中LCDR1包含SEQ ID NO: 11中所示之胺基酸序列；LCDR2包含SEQ ID NO: 18中所示之胺基酸序列；且LCDR3包含SEQ ID NO: 28中所示之胺基酸序列。

例如，該抗體或其結合片段可具有一個VH，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 14中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列有至多1、2或3個胺基酸取代；CDR2包含SEQ ID NO: 15、17或19中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列具有至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13個胺基酸取代；且HCDR3包含SEQ ID NO: 16中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列有至多1、2、3、4、5、6、7、8或9個胺基酸取代；以及一個VL，其中LCDR1包含SEQ ID NO: 11中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列有至多1、2、3、4、5、6或7個胺基酸取代；LCDR2包含SEQ ID NO: 12或18中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列有至多1、2、3或4個胺基酸取代；且LCDR3包含SEQ ID NO: 13中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列有至多1、2、3或4個胺基酸取代。在一些抗體或結合片段中，HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3中之每一者包含至多一個胺基酸取代，而在其他抗體或結合片段中，至多一個選自HCDR1、HCDR2或HCDR3之CDR包含一個取代及/或至多一個選自LCDR1、LCDR2及/或LCDR3之CDR包含一個取代。

本文揭示之抗體或結合片段之VL可包括SEQ ID NO: 2、4或6，諸如SEQ ID NO: 6中所示之胺基酸序列。本文揭示之抗體或結合片段之VH可包括SEQ ID NO: NO: 1、3或5，諸如SEQ ID NO：5中所示之胺基酸序列。VH可包括SEQ ID NO：5中所示之胺基酸序列且VL可包括SEQ ID NO: 6中所示之胺基酸序列。VH可包括SEQ ID NO: 1、3或5中所示之胺基酸序列，且VL可包括SEQ ID NO: 2、4或6中所示之胺基酸序列。

本文揭示之抗體或結合片段之輕鏈可包括如SEQ ID NO: 8中所示之胺基酸序列。本文揭示之抗體或結合片段之重鏈可包括如SEQ ID NO: 10、9或7中所示之胺基酸序列。例如，輕鏈可包括SEQ ID NO: 8之胺基酸序列且重鏈可包括SEQ ID NO: 7之胺基酸序列。例如，輕鏈可包括SEQ ID NO: 8之胺基酸序列且重鏈可包括SEQ ID NO: 9之胺基酸序列。例如，輕鏈可包括SEQ ID NO: 8之胺基酸序列且重鏈可包括SEQ ID NO: 10之胺基酸序列。

抗體或抗原結合片段可具有VH區，其胺基酸序列與SEQ ID NO: 5、3或1中所示之胺基酸至少70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致，及/或VL區，其胺基酸序列與SEQ ID NO: 2、4或6中所示之胺基酸至少70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致。

抗體或抗原結合片段可具有一個重鏈胺基酸序列，其與SEQ ID NO: 10、9或7中所示之序列具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%百分比同源性，及/或一個輕鏈序列，其與SEQ ID NO: 8中所示之序列具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%百分比同源性。

本文揭示之抗體及結合片段之CDR序列可插入人類或人類化框架序列之間。抗體可為例如完整或全長抗體。

本文揭示之抗體或抗原結合片段可結合至以下殘基中之至少一者：具有SEQ ID NO:32中所示之胺基酸序列之人類血漿激肽釋放素的K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。例如，其可結合至以下殘基中之一或多者：具有SEQ ID NO:32中所示之胺基酸序列之人類血漿激肽釋放素的K550、R551、K585、S597、Y617或T625。

本文揭示之抗體或抗原結合片段可以小於或等於約1、2、3、4或5 ×10 ^-9M之K _D(如藉由表面電漿子共振(SPR)分析所量測)結合至人類血漿激肽釋放素，例如具有SEQ ID NO:32中所示之胺基酸序列的人類血漿激肽釋放素。其可具有在pH 6.0-7.4之間實質上與pH無關的K _D( 例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca ²⁺、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20之緩衝液中測定) 及/或對於人類血漿激肽釋放素在0.1 nM與5 nM之間的K _D( 例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca ²⁺、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20，pH 6.0或7.4之緩衝液中測定)；及/或對於人類血漿激肽釋放素在0.1 nM與5 nM之間的K _D，及對於前人類激肽釋放素在250 nM與2,000 nM之間的K _D(例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca ²⁺、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20，pH 6.0或7.4之緩衝液中測定)。

本發明亦關於與本文揭示之抗體或結合片段競爭結合至血漿激肽釋放素之抗體及其結合片段。例如，此類抗體可結合至人類血漿激肽釋放素上與本文揭示之抗體相同的表位。例如，此類抗體可結合至以下殘基中之一或多者：具有SEQ ID NO:32中所示之胺基酸序列之人類血漿激肽釋放素的K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。例如，此類抗體可結合至以下殘基中之一或多者：具有SEQ ID NO:32中所示之胺基酸序列之人類血漿激肽釋放素的K550、R551、K585、S597、Y617或T625。此類抗體可具有以下特徵中之一或多者：(i)至少20天之血清半衰期；(ii)在pH 6.0-7.4之間實質上與pH無關的K _D( 例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca ²⁺、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20之緩衝液中測定)；(iii)對於人類血漿激肽釋放素在0.1 nM與5 nM之間的K _D( 例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca ²⁺、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20，pH 6.0或7.4之緩衝液中測定)；及/或(iv)對於人類血漿激肽釋放素在0.1 nM與5 nM之間的K _D，及對於人類前激肽釋放素在250 nM與2,000 nM之間的K _D( 例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca ²⁺、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20，pH 6.0或7.4之緩衝液中測定)。

本文揭示之抗體或抗原結合片段可為單株抗體。其可為人類化抗體。其可具有選自IgG、IgA、IgD、IgE及IgM之一類重鏈恆定區。若恆定區為IgG類，則子類可選自IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。若重鏈恆定區為IgG1，則其可具有M252Y、S254T及T256E突變或M428L及N434S突變，如根據EU編號索引編號。重鏈可變區及輕鏈可變區可藉由或可不藉由連接子連接。若其藉由連接子連接，諸如在scFv抗體中，則連接子可為具有以下序列之肽連接子：(GGGGS) _n(SEQ ID NO:35)；(GGGGA) _n(SEQ ID NO: 36)，或其任何組合，其中各n獨立地為1-5。

在另一態樣中，本發明包括包含編碼本文揭示之抗體或結合片段之重鏈或重鏈可變區(VH)之核苷酸序列的經分離核酸，以及包含編碼本文揭示之抗體或抗原結合片段之輕鏈或輕鏈可變區(VL)之核苷酸序列的經分離核酸。重鏈及輕鏈可在相同核酸序列上編碼，或重鏈可在一個核酸上編碼，且輕鏈可由另一個核酸單獨編碼。VL及VH可在相同核酸序列上編碼，或VH可在一個核酸上編碼，且VL可由另一個核酸單獨編碼。表現載體可含有編碼重鏈及輕鏈之核酸，或表現載體可含有編碼VL及VH鏈之核酸。宿主細胞可含有包含編碼重鏈及輕鏈之核酸的表現載體，或宿主細胞可含有包含編碼重鏈之核酸的表現載體及包含編碼輕鏈之核酸的表現載體。宿主細胞可含有包含編碼VH及VL之核酸的表現載體，或宿主細胞可含有包含編碼VH之核酸的表現載體及包含編碼VL之核酸的表現載體。宿主細胞可在使其表現重鏈及輕鏈或VH及VL之條件下生長以產生本發明之抗體或抗原結合片段。

在另一態樣中，本發明提供醫藥組合物，該等醫藥組合物包含本文所揭示之抗體或抗原結合片段或編碼其之核酸。例如，醫藥組合物可為可注射的或可靜脈內投與的。

在另一態樣中，本發明提供治療個體之患有選自以下之疾病或病症之個體的方法：遺傳性血管性水腫、緩激肽依賴性水腫、糖尿病性黃斑水腫、視網膜水腫、因子XII相關的寒冷性自體炎症症候群(FACAS)、類風濕性關節炎、痛風、腸道疾病、口腔黏膜炎、神經性疼痛、炎症性疼痛、椎管狹窄-退化性脊柱疾病、動脈或靜脈血栓形成、術後腸梗阻、主動脈瘤、骨關節炎、血管炎、水腫、腦水腫、肺栓塞、中風、心室輔助裝置或支架誘發之凝血、頭部外傷或腫瘤周圍腦水腫、敗血症、急性大腦中動脈(MCA)缺血事件(中風)、再狹窄( 例如，血管成形術後)、全身性紅斑狼瘡腎炎或燒傷，該等方法藉由投與如本文所揭示之血漿激肽釋放素抗體或其抗原結合片段，或含有其之醫藥組合物。

所揭示之抗體或抗原結合片段可用於治療個體之血漿激肽釋放素介導之病症，包括遺傳性血管性水腫或緩激肽依賴性水腫的方法。所揭示之抗體或其抗原結合片段亦可用於製造治療上述疾患，諸如遺傳性血管性水腫或緩激肽依賴性水腫之藥劑。

所揭示之抗體或其結合片段亦可用於降低個體中之緩激肽含量，以降低或抑制個體中之緩激肽產生，及/或降低或抑制個體中之血漿激肽釋放素活性。

相關申請案之交叉引用

本申請案主張2021年1月28日申請之美國臨時專利申請案第63/142,748號；2021年3月10日申請之美國臨時專利申請案第63/159,323號；2021年7月9日申請之美國臨時專利申請案第63/220,194號；及2021年10月21日申請之美國臨時專利申請案第63/262,838號之優先權及權益，該等申請案各自之內容以引用方式整體併入本文中。

本文所述之抗體可具有以下特徵中之一或多者：(i)至少20天之血清半衰期；(ii)在pH 6.0-7.4之間實質上與pH無關的K _D( 例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca ²⁺、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20之緩衝液中測定)；(iii)對於人類血漿激肽釋放素在0.1 nM與5 nM之間的K _D( 例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca ²⁺、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20，pH 6.0或7.4之緩衝液中測定)；及/或(iv)對於人類血漿激肽釋放素在0.1 nM與5 nM之間的K _D，及對於人類前激肽釋放素在250 nM與2,000 nM之間的K _D( 例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca ²⁺、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20，pH 6.0或7.4之緩衝液中測定)。

此等結合蛋白亦可用於組合物，例如醫藥組合物中，用於治療多种血漿激肽釋放素介導之病症，諸如遺傳性血管性水腫及緩激肽依賴性水腫。 I. 血漿激肽釋放素抗體

如本文所用，術語「抗體」係指展現所需生物活性之任何形式的抗體。因此，術語「抗體」以最廣義使用，且具體涵蓋但不限於單株抗體(包括全長單株抗體)、多株抗體、多特異性抗體( 例如雙特異性抗體)、人類化抗體、全人類抗體、嵌合抗體及駱駝化單域抗體。本文所述之抗體包括全長或完整抗體，其含有與兩條免疫球蛋白輕鏈相關聯之兩條免疫球蛋白重鏈。

抗體輕鏈通常由一個可變區(V _L)及一個恆定區(C _L)組成。重鏈通常由一個可變區(V _H)及至少三個恆定區(CH ₁、CH ₂及CH ₃) (或更多個，取決於同型)組成。各輕鏈/重鏈對之可變區，通常發現於各鏈之胺基末端部分，形成抗體結合位點，該位點主要負責抗原識別且決定抗體之結合特異性。因此，一般而言，完整或全長抗體具有兩個結合位點，亦即，為二價的。兩個結合位點可相同，且靶向相同抗原；或者，如在雙功能或雙特異性抗體中，兩個結合位點可不同，例如，各結合位點靶向不同抗原，或相同抗原之不同表位。

免疫球蛋白重鏈之羧基末端部分可定義主要負責效應功能之恆定區。通常，人類輕鏈分為κ及λ輕鏈。此外，人類重鏈通常分類為μ、δ、γ、α或ε，且將抗體之同型分別定義為IgM、IgD、IgG ( 例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgA及IgE。

通常，抗體重鏈及輕鏈之可變域均包含三個高變區，亦稱為互補決定區(CDR)，位於四個相對保守的框架區(FR)內。CDR通常由框架區排列，從而能夠與特定表位結合。通常，自N端至C端，輕鏈及重鏈可變域均包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4。如本文所用，「HCDR1」、「HCDR2」及「HCDR3」分別指重鏈可變區之CDR1、2或3，且「LCDR1」、「LCDR2」及「LCDR3」分別指輕鏈可變區之CDR1、2或3。

通常，各CDR之胺基酸的分配係根據Kabat之定義(參見例如 Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat 等人; National Institutes of Health, Bethesda, Md.; 第5版; NIH公佈號91-3242 (1991)；Kabat (1978) Adv. Prot. Chem. 32:1-75；Kabat 等人, (1977) J. Biol. Chem. 252:6609-6616)或Chothia之定義(參見例如Chothia 等人, (1987) J Mol. Biol. 196:901-917或Chothia 等人, (1989) Nature 342:878-883)，儘管此項技術中已知替代定義，諸如IMGT (參見例如Lefranc (2005), Nucl. Acids Res., 33, D593-D597；Lefranc 等人, (2003), Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77；Lefranc 等人, (2005), Dev. Comp. Immunol., 29, 185-203 (2005)；Lefranc 等人, (2005), Dev. Comp. Immunol., 2005, 29, 917-938)或AbM (參見例如Martin, 等人, (1989) Proc. Natl Acad. Sci. USA, 86, 9268–9272；Pedersen 等人, (1992), Immunomethods, 1, 126；Rees 等人, (1996) Sternberg M.J.E. (編輯), Protein Structure Prediction. Oxford University Press, Oxford, 141–172)。

如本文所用，術語「親本抗體」用於指藉由在修飾抗體以用於預期用途，諸如抗體人類化以用作人類治療性抗體之前將免疫系統暴露於抗原而獲得的抗體。

如本文所用，除非另有說明，否則術語「抗體片段」或「抗原結合片段」係指抗體之抗原結合片段，亦即保留特異性結合至由全長或完整抗體結合之抗原之能力的抗體片段，例如保留一或多個CDR區之片段。抗體結合片段之實例包括但不限於Fab、Fab'、F(ab') ₂及Fv片段；雙體;線性抗體；單鏈抗體分子，例如sc-Fv；由抗體片段形成之奈米抗體及多特異性抗體；單域抗體；重組僅重鏈抗體(VHH)；及鯊魚僅重鏈抗體(VNAR)。

如本文所用，術語「Fab片段」被理解為意謂包含一條輕鏈以及一條重鏈之C _H1及可變區的抗體片段。

如本文所用，術語「Fc」區係指含有兩個各自包含至少抗體之C _H2及C _H3域之重鏈片段的抗體片段。

如本文所用，術語「Fab’片段」應理解為意謂含有一條輕鏈及一條重鏈之一部分或片段的抗體片段，該重鏈含有V _H域及C _H1域以及在C _H1與C _H2域之間的區域。在兩個Fab'片段之兩條重鏈之間形成的鏈間二硫鍵可形成F(ab') ₂片段。

如本文所用，術語「Fv區」係指包含來自重鏈及輕鏈之可變區但缺少恆定區的抗體區域。

術語「單鏈Fv」或「scFv」係指包含抗體之V _H及V _L域的抗體片段，其中此等域存在於單一多肽鏈中。通常，scFv多肽包括V _H與V _L域之間的多肽連接子，其使scFv能夠形成用於抗原結合之所需結構。有關scFv之綜述， 參見例如Pluckthun (1994) The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, 第113卷, Rosenburg及Moore編 Springer-Verlag, New York, 第269-315頁。亦參見國際專利申請公開案第WO 88/01649號及美國專利第4,946,778號及第5,260,203號。

如本文所用，術語「單株抗體」係指實質上同質的抗體群體，亦即除了可能存在的少量天然突變外，構成該群體之抗體分子在胺基酸序列上相同。相比之下，習知(多株)抗體製劑通常包括在其可變域中，尤其在其CDR中具有不同胺基酸序列之多種不同抗體，該等CDR通常對不同表位具有特異性。修飾語「單株」表示抗體之特徵為獲自實質上同質的抗體群體，且不應解釋為需要藉由任何特定方法來產生抗體。例如，根據本發明使用之單株抗體可藉由首先由Kohler 等人(1975) Nature256: 495描述之融合瘤方法製備，或者可藉由重組DNA方法製備( 參見例如美國專利第4,816,567號)。「單株抗體」亦可使用Clackson 等人(1991) Nature352: 624-628級Marks 等人(1991) J. Mol. Biol. 222: 581-597中所述之技術自噬菌體抗體文庫中分離。 亦參見Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116:731。

如本文所用，術語「嵌合抗體」應理解為意謂具有來自第一抗體之可變域及來自第二抗體之恆定域的抗體，其中第一及第二抗體來自不同物種， 參見例如美國專利第4,816,567號；及Morrison 等人, (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA81: 6851-6855)。

如本文所用，術語「人類化抗體」係指含有來自人類及非人類( 例如鼠類、大鼠)抗體之序列的抗體形式。例如，人類化抗體可包含可變區，其中CDR或其部分源自或對應於非人類免疫球蛋白之序列，且所有或實質上所有的FR或其部分源自或對應於人類免疫球蛋白之序列。人類化抗體可視情況包含人類免疫球蛋白恆定區之至少一部分( 例如人類輕鏈恆定區及/或人類重鏈恆定區，例如人類Fc，或人類CH1、CH2及/或CH3域)。本文所述之CDR序列可插入人類或人類化框架序列之間。

可進行人類化以降低抗體，例如非人類抗體在投與至人類時之免疫原性。在一種人類化方法中，產生嵌合蛋白，其中小鼠免疫球蛋白恆定區經人類免疫球蛋白恆定區取代。參見例如Morrison 等人, 1984, PROC. NAT. ACAD. SCI. 81:6851-6855，Neuberger 等人, 1984, Nature 312:604-608；美國專利第6,893,625號(Robinson)；第5,500,362號(Robinson)；及第4,816,567號(Cabilly)。

在一種稱為CDR移植的方法中，輕鏈及重鏈可變區之CDR被移植至另一物種之框架中。例如，鼠類CDR可移植至人類FR中。在一些實施例中，將抗體輕鏈及重鏈可變區之CDR移植至人類FR或共同人類FR中。為了產生共同人類FR，來自若干人類重鏈或輕鏈胺基酸序列之FR經比對以鑑定共同胺基酸序列。CDR移植描述於以下中：美國專利第7,022,500號(Queen)；第6,982,321號(Winter)；第6,180,370號(Queen)；第6,054,297號(Carter)；第5,693,762號(Queen)；第5,859,205號(Adair)；第5,693,761號(Queen)；第5,565,332號(Hoogenboom)；第5,585,089號(Queen)；第5,530,101號(Queen)；Jones 等人(1986) Nature 321: 522-525；Riechmann 等人(1988) Nature 332: 323-327；Verhoeyen 等人(1988) Science 239: 1534-1536；及Winter (1998) Febs Lett 430: 92-94。

在一種稱為「SUPERHUMANIZATION ^™」之方法中，基於人類CDR與待人類化之小鼠抗體的結構相似性，人類CDR序列選自人類生殖系基因。參見例如美國專利第6,881,557號(Foote)；及Tan 等人, 2002, J. Immunol. 169:1119-1125。

其他降低免疫原性之方法包括「重塑」、「超嵌合」及「貼面/表面重修」。參見例如Vaswami 等人, 1998, Annals Of Allergy, Asthma, & Immunol. 81:105；Roguska 等人, 1996, Prot. Engineer 9:895-904；及美國專利第6,072,035號(Hardman)。在貼面/表面重修方法中，鼠類抗體中表面可接近的胺基酸殘基經人類抗體中相同位置更常見的胺基酸殘基取代。此類型之抗體表面重修描述於例如美國專利第5,639,641號(Pedersen)中。

另一種將小鼠抗體轉化為適用於人類醫學用途之形式的方法稱為ACTIVMAB ^™技術(Vaccinex, Inc., Rochester, NY)，其涉及基於牛痘病毒之載體在哺乳動物細胞中表現抗體。可產生高水準之IgG重鏈及輕鏈組合多樣性。參見例如美國專利第6,706,477號(Zauderer)；第6,800,442號(Zauderer)；及第6,872,518號(Zauderer)。將小鼠抗體轉化為適用於人類之形式的另一種方法為由KaloBios Pharmaceuticals, Inc. (Palo Alto, CA)商業實踐之技術。此技術涉及使用專有的人類「受體」文庫來產生用於抗體選擇之「表位聚焦」文庫。將小鼠抗體修飾為適用於人類醫學用途之形式的另一種方法為HUMAN ENGINEERING ^™技術，該技術由XOMA (US) LLC商業實踐。參見例如國際(PCT)公開案第WO 93/11794號及美國專利第5,766,886號(Studnicka)；第5,770,196號(Studnicka)；第5,821,123號(Studnicka)；及第5,869,619號(Studnicka)。

本文揭示之抗體亦可轉化為不同類型，諸如轉化為人類IgG及諸如此類。藉由將抗體轉化為人類抗體，人類個體不應將抗體識別為外來抗體。將非人類IgG抗體轉化為人類IgG抗體係熟知的，且可在已知天然序列後常規進行。如本文所論述，可根據已知方法修飾抗體。此類方法描述於例如以下中：Riechmann L, Clark M, Waldmann H, Winter G (1988). Reshaping human antibodies for therapy」. Nature 332 (6162): 332–323；Tsurushita N, Park M, Pakabunto K, Ong K, Avdalovic A, Fu H, Jia A, Vásquez M, Kumar S. (2004)，其以引用方式整體併入本文中。因此，本發明之抗體可為人類化抗體。

如本文所用，術語「全人類抗體」係指僅包含人類免疫球蛋白蛋白質序列之抗體。若在小鼠、小鼠細胞或源自小鼠細胞之融合瘤中產生，則完全人類抗體可含有鼠類碳水化合物鏈。

如本文所用，術語「特異性結合」、「免疫特異性結合」、「免疫特異性地結合」或「特異性地結合」係指抗體與預定抗原( 例如血漿激肽釋放素)或抗原上存在之表位結合。在一些實施例中，抗體結合預定抗原( 例如血漿激肽釋放素)之解離常數(K _D)為10 ^-7M或更小，及/或結合至預定抗原之K _D比其結合至預定抗原以外之非特異性抗原( 例如BSA、酪蛋白或另一非特異性多肽)的K _D小至少兩倍。片語「識別血漿激肽釋放素之抗體」及「對血漿激肽釋放素具有特異性之抗體」在本文中可與術語「免疫特異性結合至血漿激肽釋放素之抗體」互換使用。在一些實施例中，抗體特異性或優先結合血漿激肽釋放素而非其他蛋白質，諸如但不限於人類前激肽釋放素。在一些實施例中，抗體或抗體之抗原結合片段與其抗原(血漿激肽釋放素)結合之親和力與任何其他抗原之親和力大至少2倍、大至少10倍、大至少20倍或大至少100倍。

藉由競爭性抑制確定mAb特異性及親和力之方法可見於Harlow 等人, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1988)，Colligan 等人編, Current Protocols in Immunology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience, N.Y., (1992, 1993)，及Muller, Meth. Enzymol. 92:589 601 (1983)中，該等參考文獻以引用方式整體併入本文中。

如本文所用，術語「同源物」係指與參考序列具有至少40%但小於100%序列同源性或一致性之蛋白質序列。兩條肽鏈之間的百分比一致性可藉由使用Vector NTI v.9.0.0 (Invitrogen Corp., Carlsbad, Calif.)之AlignX模組之預設設定或其他適合之比對軟體(諸如BLAST)之成對比對來確定。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段與本文所述之序列具有至少50、60、70、80、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99%同源性或一致性。在一些實施例中，與本文所述之序列相比，抗體具有保守取代。例示性保守替代說明於表1中且涵蓋於所揭示主題之範疇內。保守取代可存在於框架區或抗原結合位點中，只要其不會對抗體之特性產生不利影響即可。可進行取代以改善抗體特性，例如穩定性或親和力。保守取代將產生具有與進行此類修飾之彼等分子相似的功能及化學特徵之分子。例示性胺基酸取代在下表 1中示出。

表1：例示性保守替代：
原始殘基	例示性保守替代：
Ala	Val、Leu、Ile
Arg	Lys、Gln、Asn
Asn	Gln
Asp	Glu
Cys	Ser、Ala
Gln	Asn
Gly	Pro、Ala
His	Asn、Gln、Lys、Arg
Ile	Leu、Val、Met、Ala、Phe
Leu	Ile、Val、Met、Ala、Phe
Lys	Arg、Gln、Asn
Met	Leu、Phe、Ile
Phe	Leu、Val、Ile、Ala、Tyr
Pro	Ala
Ser	Thr、Ala、Cys
Thr	Ser
Trp	Tyr、Phe
Tyr	Trp、Phe、Thr、Ser
Val	Ile、Met、Leu、Phe、Ala

在一些實施例中，提供了本文提供之蛋白質及肽之變異體。在一些實施例中，變異體包含取代、缺失或插入。在一些實施例中，變異體包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10 ( 例如，1-10)個取代。如本文所述，取代可為保守取代。在一些實施例中，取代係非保守的。在一些實施例中，變異體包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10 ( 例如，1-10)個缺失。在一些實施例中，變異體包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10 ( 例如，1-10)個插入。在一些實施例中，取代、缺失或插入存在於本文提供之CDR中。在一些實施例中，取代、缺失或插入不存在於本文提供之CDR中。

通常，當活性在莫耳基礎上表示時，本文提供之變異體抗體或抗體之抗原結合片段保留其血漿激肽釋放素結合活性之至少10% (當與可為親本抗體之未修飾或參考抗體相比時)。在一些實施例中，相比於可為親本抗體之未修飾或參考抗體，本文提供之變異體抗體(或其抗原片段)或抗體之抗原結合片段保留血漿激肽釋放素結合親和力之至少20%、50%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%或更多。如本文所述，亦預期本發明之抗體或抗原結合片段可包括保守或非保守胺基酸取代，其亦可稱為抗體之「保守變異體」或「功能保守變異體」，不會實質上改變其生物活性。

如本文所用，術語「表位」係指能夠經抗體識別且結合於抗體之一或多個抗原結合區之任何分子的一部分。表位通常由諸如胺基酸或糖側鏈等分子之化學活性表面組群組成，且具有特定三維結構特徵以及特定電荷特徵。表位之實例包括但不限於本文提供之抗體結合至之殘基。表位可為線性或連續表位，亦即抗原一級結構之胺基酸的線性序列，例如人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO:32)。或者，在其他實施例中，當抗原呈現其二級結構時，表位可為具有特定三維形狀之構形表位。例如，構形表位可包含抗原之非線性，亦即非連續胺基酸。

本文揭示之抗體可為抑制性抗體，例如具有高效力、特異性及延長的血清駐留時間，其中高效力轉化為低藥物劑量下增加的功效，且高特異性降低了由於抑制相關脫靶絲胺酸蛋白酶所致之副作用。

結合至血漿激肽釋放素之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含如本文所提供之胺基酸序列或其變異體，可包含以下特徵中之一或多者：至少20天之血清半衰期；在pH 6.0-7.4之間實質上與pH無關的K _D( 例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca2+、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20之緩衝液中測定)；對於人類血漿激肽釋放素在0.1 nM與5 nM之間的K _D( 例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca2+、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20，pH 6.0或7.4之緩衝液中測定)；及/或對於人類血漿激肽釋放素在0.1 nM與5 nM之間的KD，及對於人類前激肽釋放素在250 nM與2,000 nM之間的K _D( 例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca2+、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20，pH 6.0或7.4之緩衝液中測定)。

在一些實施例中，抗體為結合至血漿激肽釋放素之單株抗體。在一些實施例中，抗體結合至血漿激肽釋放素之表位的胺基酸。在一些實施例中，血漿激肽釋放素為人類血漿激肽釋放素(UNIPROT P03952，KLKB1)，其具有以下胺基酸序列：

在一些實施例中，血漿激肽釋放素為食蟹猴血漿激肽釋放素(UNIPROT A0A2K5VTJ9-1，SEQ ID NO: 45)、兔血漿激肽釋放素(UNIPROT G1T127，SEQ ID NO: 46)或大鼠血漿激肽釋放素(UNIPROT P14272，SEQ ID NO: 47)。例如，抗體或其抗原結合片段可結合至兔、大鼠或猴血漿激肽釋放素。

如上所示之人類血漿激肽釋放素序列包括胺基酸殘基1-19之信號肽序列，其可在其轉譯後加工過程中裂解。在一些實施例中，抗體結合至無信號肽序列之人類血漿激肽釋放素，例如成熟人類血漿激肽釋放素。

在一些實施例中，抗體包含如本文所提供之胺基酸序列。

抗體之序列可經修飾以產生人類IgG抗體。本文提供之序列的轉化可經修飾以產生其他類型之抗體。CDR亦可與其他抗體、蛋白質或分子連接，以產生結合至血漿激肽釋放素之抗體片段。此可呈抗體藥物結合物(「ADC」)或多特異性分子之形式。該等序列亦可製成如本文所述之嵌合抗體。

在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列，該胺基酸序列包含本文提供之序列或其片段。在一些實施例中，抗體包含一或多種如本文提供之胺基酸序列、其抗原結合片段、或其人類IgG變異體。「其人類IgG變異體」係指當起始抗體不為人類IgG抗體時已被修飾為人類IgG之抗體。

抗體亦可被修飾為嵌合抗體或人類抗體。抗體亦可用於可注射醫藥組合物。亦如本文所述，抗體可為經分離抗體或工程化抗體。

在一些實施例中，提供抗體、片段、區域或其衍生物之「衍生物」，該術語包括由截短或修飾之基因編碼以產生功能上類似於免疫球蛋白片段之分子種類之彼等蛋白質。修飾包括但不限於添加編碼細胞毒性蛋白質，諸如植物及細菌毒素之基因序列。修飾亦可包括報導蛋白，諸如螢光或化學發光標籤。可以任何方式產生片段及衍生物。

由本文所述之抗體識別之此等抗原結合區及/或表位的鑑定提供了產生與本申請案之實施例平行的具有相似結合特徵及治療或診斷效用之額外單株抗體所必需的資訊。

本文所述之可變區可與任何類型之恆定區，包括人類恆定區或鼠類恆定區組合。編碼抗體、片段及區域之恆定(C)區之人類基因可藉由已知方法自人類胎肝文庫中獲得。人類C區基因可衍生自任何人類細胞，包括表現及產生人類免疫球蛋白之彼等細胞。人類C _H區可衍生自人類H鏈之任何已知類別或同型，包括γ、μ、α、δ或ε，及其亞型，諸如G1、G2、G3及G4。由於H鏈同型負責抗體之各種效應功能，因此C _H區之選擇將由所需效應功能指導，諸如補體固定或抗體依賴性細胞毒性(ADCC)中之活性。較佳地，C _H區衍生自γ1 (IgG1)、γ3 (IgG3)，γ4 (IgG4)或μ (IgM)。人類C _L區可來源於人類L鏈同型，κ或λ。

在一些實施例中，抗體包含Fc域。在一些實施例中，Fc域包含突變以延長抗體之半衰期。在一些實施例中，Fc域包含突變，諸如美國專利第7,670,600號中所述之彼等，該專利以引用方式整體併入本文中。在一些實施例中，相對於野生型人類IgG恆定域，恆定區在根據Kabat之EU編號索引編號之胺基酸殘基428位置處包含突變。不受任何特定理論束縛，與具有野生型人類IgG恆定域之IgG的半衰期相比，包含對應於殘基428之突變之抗體可具有增加的半衰期。在一些實施例中，突變為用蘇胺酸、白胺酸、苯丙胺酸或絲胺酸取代天然殘基。在一些實施例中，相對於對應野生型人類IgG恆定域，抗體進一步包含在根據Kabat EU編號索引編號之胺基酸殘基251-256、285-290、308-314、385-389及429-436中之一或多者處之一或多個胺基酸取代。在美國專利第7,670,600號中描述了此等位置處之特定突變或取代，該專利以引用方式整體併入本文中。

其他突變可用於Fc域中，諸如美國專利第8,394,925號中提供之突變，該專利以引用方式整體併入本文中。在一些實施例中，Fc區為在位置428及434處包含胺基酸取代之變異體Fc區，其中胺基酸取代為在位置428處不為野生型胺基酸之白胺酸及在位置434處不為野生型胺基酸之絲胺酸，其中多肽為抗體且其中編號係根據Kabat 等人之EU索引。在一些實施例中，Fc區包含S228P、L235E、M428L或N434S取代。在一些實施例中，Fc區包含M428L取代。在一些實施例中，Fc區包含N434S取代。在一些實施例中，Fc區包含M428L及N434S取代，其中編號係根據Kabat 等人之EU索引。在一些實施例中，Fc區包含M252Y、S254T及/或T256E取代或Fc區包含M252Y、S254T及T256E取代，其中編號係根據Kabat 等人之EU索引。

在一些實施例中，本文所述之抗體用於偵測抗原的存在。本發明抗體可用於任何裝置或方法以偵測抗原的存在。 I.A. 抗體 CDR 序列

本文揭示之抗體或抗原結合片段可由其CDR序列定義。例如，抗體或抗原結合片段可包括表 2 中提供之一或多個胺基酸序列，其為由Kabat編號定義之抗體或抗原結合片段的CDR。

表 2 ：由 *Kabat* *定義之* *CDR*
抗體名稱	LCDR1	LCDR2	LCDR3	HCDR1	HCDR2	HCDR3
MAb1	KASQDVGIAVA (SEQ ID NO: 11)	WASTRHT (SEQ ID NO: 12)	QQYRSYPLT (SEQ ID NO: 13)	SYWMN (SEQ ID NO: 14)	QIYPGDDDTNYNGKFKG (SEQ ID NO: 15)	SLMVTTGAPFDY (SEQ ID NO: 16)
MAb2	KASQDVGIAVA (SEQ ID NO: 11)	WASTRHT (SEQ ID NO: 12)	QQYRSYPLT (SEQ ID NO: 13)	SYWMN (SEQ ID NO: 14)	QIYPGDDDTNYNGKFQG (SEQ ID NO: 17)	SLMVTTGAPFDY (SEQ ID NO: 16)
MAb 3/4	KASQDVGIAVA (SEQ ID NO: 11)	YASHRGW (SEQ ID NO: 18)	QQYRSYPLT (SEQ ID NO: 13)	SYWMN (SEQ ID NO: 14)	QIYPGDDDTNYNAKFQG (SEQ ID NO: 19)	SLMVTTGAPFDY (SEQ ID NO: 16)

抗體或抗原結合片段可包括表 3 中提供之一或多個胺基酸序列，其為由Chothia編號定義之抗體或抗原結合片段的CDR。

表 3 ：由 *Chothia* *定義之* *CDR*
抗體名稱	LCDR1	LCDR2	LCDR3	HCDR1	HCDR2	HCDR3
MAb1	SQDVGIA (SEQ ID NO: 20)	WAS (SEQ ID NO: 21)	YRSYPLT (SEQ ID NO: 22)	GYAFSSY (SEQ ID NO: 23)	YPGDDD (SEQ ID NO: 24)	SLMVTTGAPFDY (SEQ ID NO: 25)
MAb2	SQDVGIA (SEQ ID NO: 20)	WAS (SEQ ID NO: 21)	YRSYPLT (SEQ ID NO: 22)	GYAFSSY (SEQ ID NO: 23)	YPGDDD (SEQ ID NO: 24)	SLMVTTGAPFDY (SEQ ID NO: 25)
MAb 3/4	SQDVGIA (SEQ ID NO: 20)	YAS (SEQ ID NO: 26)	YRSYPLT (SEQ ID NO: 22)	GYAFSSY (SEQ ID NO: 23)	YPGDDD (SEQ ID NO: 24)	SLMVTTGAPFDY (SEQ ID NO: 25)

抗體或抗原結合片段可包括表 4 中提供之一或多個胺基酸序列，其為由IMGT編號定義之抗體或抗原結合片段的CDR。

表 4. 由 *IMGT* *定義之* *CDR*
抗體名稱	LCDR1	LCDR2	LCDR3	HCDR1	HCDR2	HCDR3
MAb1	QDVGIA (SEQ ID NO: 27)	WAS (SEQ ID NO: 21)	QQYRSYPLT (SEQ ID NO: 28)	GYAFSSYW (SEQ ID NO: 29)	IYPGDDDT (SEQ ID NO: 30)	AGSLMVTTGAPFDY (SEQ ID NO: 31)
MAb2	QDVGIA (SEQ ID NO: 27)	WAS (SEQ ID NO: 21)	QQYRSYPLT (SEQ ID NO: 28)	GYAFSSYW (SEQ ID NO: 29)	IYPGDDDT (SEQ ID NO: 30)	AGSLMVTTGAPFDY (SEQ ID NO: 31)
MAb 3/4	QDVGIA (SEQ ID NO: 27)	YAS (SEQ ID NO: 26)	QQYRSYPLT (SEQ ID NO: 28)	GYAFSSYW (SEQ ID NO: 29)	IYPGDDDT (SEQ ID NO: 30)	AGSLMVTTGAPFDY (SEQ ID NO: 31)

抗體或抗原結合片段可包括表 5 中提供之一或多個胺基酸序列，其為由AbM編號定義之抗體或抗原結合片段的CDR。

表 5. 由 *ABM* *定義之* *CDR*
抗體名稱	LCDR1	LCDR2	LCDR3	HCDR1	HCDR2	HCDR3
MAb1	KASQDVGIAVA (SEQ ID NO: 11)	WASTRHT (SEQ ID NO: 12)	QQYRSYPLT (SEQ ID NO: 28)	GYAFSSYWMN (SEQ ID NO: 43)	QIYPGDDDTN (SEQ ID NO: 44)	SLMVTTGAPFDY (SEQ ID NO: 25)
MAb2	KASQDVGIAVA (SEQ ID NO: 11)	WASTRHT (SEQ ID NO: 12)	QQYRSYPLT (SEQ ID NO: 28)	GYAFSSYWMN (SEQ ID NO: 43)	QIYPGDDDTN (SEQ ID NO: 44)	SLMVTTGAPFDY (SEQ ID NO: 25)
MAb 3/4	KASQDVGIAVA (SEQ ID NO: 11)	YASHRGW (SEQ ID NO: 18)	QQYRSYPLT (SEQ ID NO: 28)	GYAFSSYWMN (SEQ ID NO: 43)	QIYPGDDDTN (SEQ ID NO: 44)	SLMVTTGAPFDY (SEQ ID NO: 25)

抗體或其抗原結合片段可包括具有SEQ ID NO: 11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或31之序列的重鏈或輕鏈CDR。例如，抗體之輕鏈CDR或其抗原結合片段可具有SEQ ID NO: 11、12、13、18、20、21、22、26、27或28之序列。例如，抗體之重鏈CDR或其抗原結合片段可具有SEQ ID NO: 14、15、16、17、19、23、24、25、29、30或31之序列。xx

本文所述之CDR可與上表所示的以不同定義(諸如Chothia及IMGT)為特徵之CDR互換。例如，由Kabat定義之LCDR1可與由Chothia、IMGT或AbM定義之LCDR1互換；由Kabat定義之LCDR2可與由Chothia、IMGT或AbM定義之LCDR2互換，諸如此類。例如，在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含具有LCDR1、LCDR2及LCDR3之輕鏈可變區，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 11、20或27之序列；LCDR2具有SEQ ID NO: 12、18、21或26之序列；且LCDR3具有SEQ ID NO: 13、22或28之序列；而在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含具有HCDR1、HCDR2及HCDR3之重鏈可變區，其中HCDR1具有SEQ ID NO: 14、23、29或43之序列；HCDR2具有SEQ ID NO: 15、17、19、24、30或44之序列；且HCDR3具有SEQ ID NO: 16、25或31之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含具有LCDR1、LCDR2及LCDR3之輕鏈可變區，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 11之序列，LCDR2具有SEQ ID NO: 12之序列，且LCDR3具有SEQ ID NO: 13之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含具有LCDR1、LCDR2及LCDR3之輕鏈可變區，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 11之序列，LCDR2具有SEQ ID NO: 18之序列，且LCDR3具有SEQ ID NO: 13之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含具有LCDR1、LCDR2及LCDR3之輕鏈可變區，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 20之序列，LCDR2具有SEQ ID NO: 21之序列，且LCDR3具有SEQ ID NO: 22之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含具有LCDR1、LCDR2及LCDR3之輕鏈可變區，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 20之序列，LCDR2具有SEQ ID NO: 26之序列，且LCDR3具有SEQ ID NO: 22之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含具有LCDR1、LCDR2及LCDR3之輕鏈可變區，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 27之序列，LCDR2具有SEQ ID NO: 21之序列，且LCDR3具有SEQ ID NO: 28之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含具有LCDR1、LCDR2及LCDR3之輕鏈可變區，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 27之序列，LCDR2具有SEQ ID NO: 26之序列，且LCDR3具有SEQ ID NO: 28之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含具有LCDR1、LCDR2及LCDR3之輕鏈可變區，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 11之序列，LCDR2具有SEQ ID NO: 12之序列，且LCDR3具有SEQ ID NO:28之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含具有LCDR1、LCDR2及LCDR3之輕鏈可變區，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 11之序列，LCDR2具有SEQ ID NO: 18之序列，且LCDR3具有SEQ ID NO: 28之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含具有HCDR1、HCDR2及HCDR3之重鏈可變區，其中HCDR1具有SEQ ID NO: 14之序列，HCDR2具有SEQ ID NO: 15之序列，且HCDR3具有SEQ ID NO: 16之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含具有HCDR1、HCDR2及HCDR3之重鏈可變區，其中HCDR1具有SEQ ID NO: 14之序列，HCDR2具有SEQ ID NO: 17之序列，且HCDR3具有SEQ ID NO: 16之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含具有HCDR1、HCDR2及HCDR3之重鏈可變區，其中HCDR1具有SEQ ID NO: 14之序列，HCDR2具有SEQ ID NO: 19之序列，且HCDR3具有SEQ ID NO: 16之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含具有HCDR1、HCDR2及HCDR3之重鏈可變區，其中HCDR1具有SEQ ID NO: 23之序列，HCDR2具有SEQ ID NO: 24之序列，且HCDR3具有SEQ ID NO: 25之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含具有HCDR1、HCDR2及HCDR3之重鏈可變區，其中HCDR1具有SEQ ID NO: 29之序列，HCDR2具有SEQ ID NO: 30之序列，且HCDR3具有SEQ ID NO: 31之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含具有HCDR1、HCDR2及HCDR3之重鏈可變區，其中HCDR1具有SEQ ID NO: 43之序列，HCDR2具有SEQ ID NO: 44之序列，且HCDR3具有SEQ ID NO: 25之序列。

不同CDR模體可以任何組合，包括上表中未描繪之彼等組合進行組合。例如，提供以下實施例作為此類組合之非限制性實例。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(i)輕鏈可變區，其包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 11之胺基酸序列；LCDR2具有SEQ ID NO: 12或18之胺基酸序列；且LCDR3序列具有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，及(ii)重鏈可變區，其包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中HCDR1序列具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；重鏈CDR2序列具有SEQ ID NO: 15、17或19之胺基酸序列；且重鏈CDR3序列具有SEQ ID NO: 16之胺基酸序列；或前述任一者之變異體。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(i)輕鏈可變區，其包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 11之胺基酸序列；LCDR2具有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列；且LCDR3序列具有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，及(ii)重鏈可變區，其包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中HCDR1序列具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；重鏈CDR2序列具有SEQ ID NO: 15之胺基酸序列；且重鏈CDR3序列具有SEQ ID NO: 16之胺基酸序列；或前述任一者之變異體。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(i)輕鏈可變區，其包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 11之胺基酸序列；LCDR2具有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列；且LCDR3序列具有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，及(ii)重鏈可變區，其包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中HCDR1序列具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；重鏈CDR2序列具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列；且重鏈CDR3序列具有SEQ ID NO: 16之胺基酸序列；或前述任一者之變異體。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(i)輕鏈可變區，其包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 11之胺基酸序列；LCDR2具有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列；且LCDR3序列具有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，及(ii)重鏈可變區，其包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中HCDR1序列具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；重鏈CDR2序列具有SEQ ID NO: 19之胺基酸序列；且重鏈CDR3序列具有SEQ ID NO: 16之胺基酸序列；或前述任一者之變異體。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(i)輕鏈可變區，其包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 11之胺基酸序列；LCDR2具有SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；且LCDR3序列具有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，及(ii)重鏈可變區，其包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中HCDR1序列具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；重鏈CDR2序列具有SEQ ID NO: 15之胺基酸序列；且重鏈CDR3序列具有SEQ ID NO: 16之胺基酸序列；或前述任一者之變異體。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(i)輕鏈可變區，其包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 11之胺基酸序列；LCDR2具有SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；且LCDR3序列具有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，及(ii)重鏈可變區，其包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中HCDR1序列具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；重鏈CDR2序列具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列；且重鏈CDR3序列具有SEQ ID NO: 16之胺基酸序列；或前述任一者之變異體。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(i)輕鏈可變區，其包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 11之胺基酸序列；LCDR2具有SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；且LCDR3序列具有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，及(ii)重鏈可變區，其包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中HCDR1序列具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；重鏈CDR2序列具有SEQ ID NO: 19之胺基酸序列；且重鏈CDR3序列具有SEQ ID NO: 16之胺基酸序列；或前述任一者之變異體。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(i)輕鏈可變區，其包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 20之胺基酸序列；LCDR2具有SEQ ID NO: 21或26之胺基酸序列；且LCDR3序列具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列，及(ii)重鏈可變區，其包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中HCDR1序列具有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列；重鏈CDR2序列具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；且重鏈CDR3序列具有SEQ ID NO: 25之胺基酸序列；或前述任一者之變異體。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(i)輕鏈可變區，其包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 20之胺基酸序列；LCDR2具有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列；且LCDR3序列具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列，及(ii)重鏈可變區，其包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中HCDR1序列具有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列；重鏈CDR2序列具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；且重鏈CDR3序列具有SEQ ID NO: 25之胺基酸序列；或前述任一者之變異體。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(i)輕鏈可變區，其包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 20之胺基酸序列；LCDR2具有SEQ ID NO: 26之胺基酸序列；且LCDR3序列具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列，及(ii)重鏈可變區，其包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中HCDR1序列具有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列；重鏈CDR2序列具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；且重鏈CDR3序列具有SEQ ID NO: 25之胺基酸序列；或前述任一者之變異體。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(i)輕鏈可變區，其包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 27之胺基酸序列；LCDR2具有SEQ ID NO: 21或26之胺基酸序列；且LCDR3序列具有SEQ ID NO: 28之胺基酸序列，及(ii)重鏈可變區，其包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中HCDR1序列具有SEQ ID NO: 29之胺基酸序列；重鏈CDR2序列具有SEQ ID NO: 30之胺基酸序列；且重鏈CDR3序列具有SEQ ID NO: 31之胺基酸序列；或前述任一者之變異體。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(i)輕鏈可變區，其包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 27之胺基酸序列；LCDR2具有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列；且LCDR3序列具有SEQ ID NO: 28之胺基酸序列，及(ii)重鏈可變區，其包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中HCDR1序列具有SEQ ID NO: 29之胺基酸序列；重鏈CDR2序列具有SEQ ID NO: 30之胺基酸序列；且重鏈CDR3序列具有SEQ ID NO: 31之胺基酸序列；或前述任一者之變異體。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(i)輕鏈可變區，其包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 27之胺基酸序列；LCDR2具有SEQ ID NO: 26之胺基酸序列；且LCDR3序列具有SEQ ID NO: 28之胺基酸序列，及(ii)重鏈可變區，其包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中HCDR1序列具有SEQ ID NO: 29之胺基酸序列；重鏈CDR2序列具有SEQ ID NO: 30之胺基酸序列；且重鏈CDR3序列具有SEQ ID NO: 31之胺基酸序列；或前述任一者之變異體。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(i)輕鏈可變區，其包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 11之胺基酸序列；LCDR2具有SEQ ID NO: 12或18之胺基酸序列；且LCDR3序列具有SEQ ID NO: 28之胺基酸序列，及(ii)重鏈可變區，其包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中HCDR1序列具有SEQ ID NO: 43之胺基酸序列；重鏈CDR2序列具有SEQ ID NO: 44之胺基酸序列；且重鏈CDR3序列具有SEQ ID NO: 25之胺基酸序列；或前述任一者之變異體。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(i)輕鏈可變區，其包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 11之胺基酸序列；LCDR2具有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列；且LCDR3序列具有SEQ ID NO: 28之胺基酸序列，及(ii)重鏈可變區，其包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中HCDR1序列具有SEQ ID NO: 43之胺基酸序列；重鏈CDR2序列具有SEQ ID NO: 44之胺基酸序列；且重鏈CDR3序列具有SEQ ID NO: 25之胺基酸序列；或前述任一者之變異體。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(i)輕鏈可變區，其包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 11之胺基酸序列；LCDR2具有SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；且LCDR3序列具有SEQ ID NO: 28之胺基酸序列，及(ii)重鏈可變區，其包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中HCDR1序列具有SEQ ID NO: 43之胺基酸序列；重鏈CDR2序列具有SEQ ID NO: 44之胺基酸序列；且重鏈CDR3序列具有SEQ ID NO: 25之胺基酸序列；或前述任一者之變異體。

在一些實施例中，HCDR1包含SEQ ID NO: 14中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列有至多1、2、3或4個胺基酸取代；HCDR2包含SEQ ID NO: 15、17或19中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列具有至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13個胺基酸取代；且HCDR3包含SEQ ID NO: 16中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列有至多1、2、3、4、5、6、7、8或9個胺基酸取代。在一些實施例中，LCDR1包含SEQ ID NO: 11中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列有至多1、2、3、4、5、6或7個胺基酸取代；LCDR2包含SEQ ID NO: 12或18中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列具有至多1、2、3或4個胺基酸取代；且LCDR3包含SEQ ID NO: 13中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列有至多1、2、3或4個胺基酸取代。胺基酸取代可為保守胺基酸取代。在一些實施例中，本段中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。此等變異體可源自本文提供之序列，例如，藉由親和力成熟、定點突變誘發、隨機突變誘發或此項技術中已知或本文中描述之任何其他方法。或者，此等變異體並非源自本文提供之序列，且可例如根據本文提供的用於獲得抗體之方法從頭分離。

在一些實施例中，HCDR1包含SEQ ID NO: 14、23、29或43中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列有至多1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代；HCDR2包含SEQ ID NO: 15、17、19、24、30或44中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列具有至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13個胺基酸取代；且HCDR3包含SEQ ID NO: 16、25或31中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列有至多1、2、3、4、5、6、7、8或9個胺基酸取代。在一些實施例中，LCDR1包含SEQ ID NO: 11、20或27中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列有至多1、2、3、4、5、6或7個胺基酸取代；LCDR2包含SEQ ID NO: 12、18、21或26中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列具有至多1、2、3或4個胺基酸取代；且LCDR3包含SEQ ID NO: 13、22或28中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列有至多1、2、3、4、5或6個胺基酸取代。胺基酸取代可為保守胺基酸取代。在一些實施例中，本段中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。此等變異體可源自本文提供之序列，例如，藉由親和力成熟、定點突變誘發、隨機突變誘發或此項技術中已知或本文中描述之任何其他方法。或者，此等變異體並非源自本文提供之序列，且可例如根據本文提供的用於獲得抗體之方法從頭分離。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(i) 具有LCDR1、LCDR2及LCDR3之輕鏈可變區，其中LCDR1具有選自SEQ ID NO: 11、20或27之序列，其中LCDR1包含至多一個保守胺基酸取代，LCDR2具有選自SEQ ID NO: 12、18、21及26之序列，其中LCDR2包含至多一個保守胺基酸取代，且LCDR3具有選自SEQ ID NO: 13、22及28之序列，其中LCDR3包含至多一個保守胺基酸取代，及(ii)包含HCDR1、HCDR2及HCDR3之重鏈可變區，其中HCDR1具有選自SEQ ID NO: 14、23或29之序列，其中HCDR1包含至多一個保守胺基酸取代，HCDR2具有選自SEQ ID NO: 15、19、24或30之序列，其中HCDR2包含至多一個保守胺基酸取代，且HCDR3具有選自SEQ ID NO: 16、25或31之序列，其中HCDR3包含至多一個保守胺基酸取代。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(i) 具有LCDR1、LCDR2及LCDR3之輕鏈可變區，其中LCDR1具有SEQ ID NO: 11之序列，其中LCDR1包含至多一個保守胺基酸取代，LCDR2具有SEQ ID NO: 18之序列，其中LCDR2包含至多一個保守胺基酸取代，且LCDR3具有選自SEQ ID NO: 13之序列，其中LCDR3包含至多一個保守胺基酸取代，及(ii)包含HCDR1、HCDR2及HCDR3之重鏈可變區，其中HCDR1具有SEQ ID NO: 14之序列，其中HCDR1包含至多一個保守胺基酸取代，HCDR2具有SEQ ID NO: 19之序列，其中HCDR2包含至多一個保守胺基酸取代，且HCDR3具有SEQ ID NO: 16之序列，其中HCDR3包含至多一個保守胺基酸取代。

在一些實施例中，輕鏈可變區CDR1經本文揭示之任何其他輕鏈CDR1序列置換。在一些實施例中，輕鏈可變區CDR2經本文揭示之任何其他輕鏈CDR2序列置換。在一些實施例中，輕鏈可變區CDR3經本文揭示之任何其他輕鏈CDR3序列置換。在一些實施例中，重鏈可變區CDR1經本文揭示之任何其他重鏈CDR1序列置換。在一些實施例中，重鏈可變區CDR2經本文揭示之任何其他重鏈CDR2序列置換。在一些實施例中，重鏈可變區CDR3經本文揭示之任何其他重鏈CDR3序列置換。 I.B. 抗體可變及全長序列

在一些實施例中，抗體包含具有如表 6中所提供之以下序列之一或多種肽，或其變異體：

表6
SEQ ID NO:	AB ID NO.	序列
1	MAb1重鏈可變區(VH)	QVQLQQSGAELVKPGASVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGEGLEWIGQIYPGDDDTNYNGKFKGKATLTVDKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCAGSLMVTTGAPFDYWGQGTTLTVSS
2	MAb1輕鏈可變區(VL)	DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQDVGIAVAWYQQKPGQSPKFLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSGTDFTLTIRNVQSEDLSDYFCQQYRSYPLTFGSGTKLELK
3	MAb2 VH	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYAFSSYWMNWVRQAPGQGLEWIGQIYPGDDDTNYNGKFQGRVTITVDKSTTTAYMELSSLRSEDTAVYFCAGSLMVTTGAPFDYWGQGTTVTVSS
4	MAb2 VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVGIAVAWYQQKPGKAPKFLIYWASTRHTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQQYRSYPLTFGQGTKLEIK
5	MAb3-VH MAb4-VH	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYAFSSYWMNWVRQAPGQGLEWIGQIYPGDDDTNYNAKFQGRVTITVDKSTTTAYMELSSLRSEDTAVYFCAGSLMVTTGAPFDYWGQGTTVTVSS
6	MAb3-VL MAb4-VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVGIAVAWYQQKPGKAPKFLIYYASHRGWGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQQYRSYPLTFGQGTKLEIK
7	MAb4全長重鏈(HC) IgG1形式	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYAFSSYWMNWVRQAPGQGLEWIGQIYPGDDDTNYNAKFQGRVTITVDKSTTTAYMELSSLRSEDTAVYFCAGSLMVTTGAPFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
8	MAb4全長輕鏈(LC)人類κ形式	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVGIAVAWYQQKPGKAPKFLIYYASHRGWGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQQYRSYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
9	MAb4重鏈(HC) IgG1形式，具有M428L及N434S半衰期延長取代(加底線)	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYAFSSYWMNWVRQAPGQGLEWIGQIYPGDDDTNYNAKFQGRVTITVDKSTTTAYMELSSLRSEDTAVYFCAGSLMVTTGAPFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV LHEALH SHYTQKSLSLSPG
10	MAb4重鏈(HC) IgG1形式，具有M252Y、S254T及T256E半衰期延長取代(加底線)	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYAFSSYWMNWVRQAPGQGLEWIGQIYPGDDDTNYNAKFQGRVTITVDKSTTTAYMELSSLRSEDTAVYFCAGSLMVTTGAPFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL YI TR EPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含選自以下序列中之一或多者的序列：SEQ ID NO: 1；SEQ ID NO: 2；SEQ ID NO: 3；SEQ ID NO: 4；SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10，或其變異體。

在一些實施例中，抗體或抗原結合片段含有包含SEQ ID NO: 1、3或5之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 2、4或6之胺基酸序列之輕鏈可變區。

在一些實施例中，抗體或抗原結合片段含有包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 2、4或6之胺基酸序列之輕鏈可變區。

在一些實施例中，抗體或抗原結合片段含有包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 2、4或6之胺基酸序列之輕鏈可變區。

在一些實施例中，抗體或抗原結合片段含有包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 2、4或6之胺基酸序列之輕鏈可變區。

在一些實施例中，抗體或抗原結合片段含有包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之輕鏈可變區，或抗體含有包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之重鏈，及包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之輕鏈。

在一些實施例中，抗體或抗原結合片段含有包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列之輕鏈可變區，或抗體含有包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之重鏈，及包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列之輕鏈。

在一些實施例中，抗體或抗原結合片段含有包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列之重鏈可變區，及包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗體含有包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列之重鏈，及包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之輕鏈。

在一些實施例中，抗體或抗原結合片段含有包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列之重鏈可變區，或抗體含有包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列之重鏈。

在一些實施例中，抗體或抗原結合片段含有包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之輕鏈可變區，或抗體含有包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之輕鏈。

在一些實施例中，抗體含有包含SEQ ID NO: 1、3、5、7、9或10之胺基酸序列之重鏈，及包含SEQ ID NO: 2、4、6或8之胺基酸序列之輕鏈。

在一些實施例中，抗體含有包含SEQ ID NO: 7、9或10之胺基酸序列之重鏈，及包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之輕鏈。

在一些實施例中，抗體含有包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之重鏈，及包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之輕鏈。

在一些實施例中，抗體含有包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之重鏈，及包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之輕鏈。

在一些實施例中，抗體含有包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列之重鏈，及包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之輕鏈。

在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含與SEQ ID NO: 1、3或5中所示之胺基酸序列至少70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。

本文提供之抗體或抗原結合片段可包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含在SEQ ID NO: 1、3或5中提供之胺基酸序列，具有至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、 22、23、24或25個胺基酸取代。例如，一或多個取代可僅在CDR區中、僅在框架區中或在CDR及框架區兩者中發現。例如，重鏈可變區可與SEQ ID NO: 1、3或5之胺基酸序列具有至少70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性，其中來自SEQ ID NO: 1、3或5之任何變異在HCDR1、HCDR2或HCDR3中不會出現。例如，變異發現於一或多個框架區中。在一些實例中，胺基酸取代可為(a)保守胺基酸取代。本段中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。此類變異體可源自本文提供之序列，例如，藉由親和力成熟、定點突變誘發、隨機突變誘發或此項技術中已知或本文中描述之任何其他方法。或者，此類變異體可能並非源自本文提供之序列，且可例如根據本文提供的用於獲得抗體之方法從頭分離。

在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含與SEQ ID NO: 2、4或6中所示之胺基酸序列至少70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。

本文提供之抗體或抗原結合片段可包含輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含在SEQ ID NO: 2、4或6中提供之胺基酸序列，具有至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、 22、23、24或25個胺基酸取代。例如，一或多個取代可僅在CDR區中、僅在框架區中或在CDR及框架區兩者中發現。例如，輕鏈可變區可與SEQ ID NO: 2、4或6具有至少70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性，其中來自SEQ ID NO: 2、4或6之任何變異在LCDR1、LCDR2或LCDR3中不會出現。例如，變異發現於一或多個框架區中。在一些實例中，胺基酸取代可為(a)保守胺基酸取代。本段中所述之抗體在本文中稱為「變異體」。此類變異體可源自本文提供之序列，例如，藉由親和力成熟、定點突變誘發、隨機突變誘發或此項技術中已知或本文中描述之任何其他方法。或者，此類變異體可能並非源自本文提供之序列，且可例如根據本文提供的用於獲得抗體之方法從頭分離。

重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)序列可呈任何形式，包括但不限於其中VH及VL區與肽連接子連接之scFv形式。可用於連接本文提供之各種肽之肽連接子的實例包括但不限於：(GGGGS) _n(SEQ ID NO: 35)；(GGGGA) _n(SEQ ID NO: 36)，或其任何組合，其中各n獨立地為1-5。在一些實施例中，可變區，例如重鏈可變區及輕鏈可變區不與連接子，例如肽連接子連接，而在其他實施例中，可變區，例如重鏈可變區及輕鏈可變區與連接子，例如肽連接子連接

在一些實施例中，抗體包含選自IgG、IgA、IgD、IgE及IgM之一類的重鏈恆定區。在一些實施例中，抗體包含IgG類及選自IgG1、IgG2、IgG3及IgG4之子類的重鏈恆定區。

在一些實施例中，抗體包含IgG1重鏈恆定區。在一些實施例中，IgG1重鏈恆定區包含野生型(WT)序列。在一些實施例中，IgG1重鏈恆定區包含根據EU編號索引編號之M252Y、S254T及T256E突變或M428L及N434S突變。在一些實施例中，IgG1重鏈恆定區包含根據Kabat EU編號索引編號之M252Y、S254T及T256E突變。在本文揭示為SEQ ID NO:9之重鏈胺基酸序列中，該序列含有M428L及N434S突變，M428L突變發生於重鏈序列之殘基432處，且N434S突變發生於重鏈序列之殘基438處。在本文揭示為SEQ ID NO:10之重鏈胺基酸序列中，該序列含有M252Y、S254T及T256E突變，M252Y突變發生於重鏈序列之殘基256處，S254T發生於重鏈序列之殘基258處，且T256E發生於重鏈序列之殘基260處。

在一些實施例中，重鏈包含如SEQ ID NO: 10、9或7中所示之胺基酸序列。

在一些實施例中，重鏈包含如SEQ ID NO: 10中所示之胺基酸序列。

在一些實施例中，重鏈包含如SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含具有如SEQ ID NO: 1-10及11-19中之任一者中所示之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含前述任一者之序列或變異體。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 1、3、5、7、9或10之胺基酸序列，或前述任一者之變異體。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 2、4、6或8之胺基酸序列，或前述任一者之變異體。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO: 2、4、6或8之胺基酸序列或其任何組合的V _L肽。V _L肽可包含如本文所提供之此等序列中之任一者的變異體。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO: 1、3、5、7、9或10之胺基酸序列或其任何組合的V _H肽。V _H肽可包含如本文所提供之此等序列中之任一者的變異體。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含V _H肽及V _L肽，其中V _H肽包含SEQ ID NO: 1、3、5、7、9或10之序列，且V _L肽包含SEQ ID NO: 2、4、6或8之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含V _H肽及V _L肽，其中V _H肽包含與SEQ ID NO: 1、3、5、7、9或10之序列至少70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的序列，且V _L肽包含與SEQ ID NO: 2、4、6或8之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含V _H肽及V _L肽，其中V _H肽包含與SEQ ID NO: 1、3、5、7、9或10之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之序列，且V _L肽包含與SEQ ID NO: 2、4、6或8之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之序列，限制條件為V _L肽包含具有SEQ ID NO: 11、12、13、18、20、21、22、26、27或28之序列的輕鏈CDR且V _H肽包含具有SEQ ID NO: 14、15、16、17、19、23、24、25、29、30、31、43或44之序列的重鏈CDR。在一些實施例中，V _H或V _L鏈中之CDR如本文提供之組合中所示。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含V _H肽及V _L肽，其中V _H肽包含與SEQ ID NO: 1、3、5、7、9或10之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之序列，且V _L肽包含與SEQ ID NO: 2、4、6或8之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之序列，限制條件為V _L肽包含具有選自SEQ ID NO: 11、20或27之序列的LCDR1；具有選自SEQ ID NO: 12、18、21及26之序列的LCDR2；及具有選自SEQ ID NO: 13、22及28之序列的 LCDR3；且V _H肽包含具有選自SEQ ID NO: 14、23、29或43之序列的HCDR1；具有選自SEQ ID NO: 15、17、19、24、30或44之序列的HCDR2；及具有選自SEQ ID NO: 16、25或31之序列的HCDR3。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含V _H肽及V _L肽，其中V _H肽包含與SEQ ID NO: 1、3、5、7、9或10之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之序列，且V _L肽包含與SEQ ID NO: 2、4、6或8之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之序列，限制條件為V _L肽包含具有選自SEQ ID NO: 11、20或27之序列的LCDR1，其中LCDR1包含至多一個保守胺基酸取代；具有選自SEQ ID NO: 12、18、21及26之序列的LCDR2，其中LCDR2包含至多一個保守胺基酸取代；及具有選自SEQ ID NO: 13、22及28之序列的 LCDR3，其中LCDR3包含至多一個保守胺基酸取代；且V _H肽包含具有選自SEQ ID NO: 14、23、29或43之序列的HCDR1，其中HCDR1包含至多一個保守胺基酸取代；具有選自SEQ ID NO: 15、17、19、24、30或44之序列的HCDR2，其中HCDR2包含至多一個保守胺基酸取代；及具有選自SEQ ID NO: 16、25或31之序列的HCDR3，其中HCDR3包含至多一個保守胺基酸取代。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含V _H肽及V _L肽，其中V _H肽包含SEQ ID NO: 1之序列，且V _L肽包含SEQ ID NO: 2之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含V _H肽及V _L肽，其中V _H肽包含SEQ ID NO: 1之序列，且V _L肽包含SEQ ID NO: 4、6或8之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含V _H肽及V _L肽，其中V _H肽包含SEQ ID NO: 3之序列，且V _L肽包含SEQ ID NO: 4之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含V _H肽及V _L肽，其中V _H肽包含SEQ ID NO: 3之序列，且V _L肽包含SEQ ID NO: 2、6或8之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含V _H肽及V _L肽，其中V _H肽包含SEQ ID NO: 5之序列，且V _L肽包含SEQ ID NO: 6之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含V _H肽及V _L肽，其中V _H肽包含SEQ ID NO: 5之序列，且V _L肽包含SEQ ID NO: 2、4或8之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含V _H肽及V _L肽，其中V _H肽包含SEQ ID NO: 7之序列，且V _L肽包含SEQ ID NO: 6之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含V _H肽及V _L肽，其中V _H肽包含SEQ ID NO: 7之序列，且V _L肽包含SEQ ID NO: 8之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含V _H肽及V _L肽，其中V _H肽包含SEQ ID NO: 7之序列，且V _L肽包含SEQ ID NO: 2或4之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含V _H肽及V _L肽，其中V _H肽包含SEQ ID NO: 9之序列，且V _L肽包含SEQ ID NO: 8之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含V _H肽及V _L肽，其中V _H肽包含SEQ ID NO: 9之序列，且V _L肽包含SEQ ID NO: 6之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含V _H肽及V _L肽，其中V _H肽包含SEQ ID NO: 9之序列，且V _L肽包含SEQ ID NO: 2或4之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含V _H肽及V _L肽，其中V _H肽包含SEQ ID NO: 10之序列，且V _L肽包含SEQ ID NO: 8之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含V _H肽及V _L肽，其中V _H肽包含SEQ ID NO: 10之序列，且V _L肽包含SEQ ID NO: 6之序列。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含V _H肽及V _L肽，其中V _H肽包含SEQ ID NO: 10之序列，且V _L肽包含SEQ ID NO: 2或4之序列。

除了此等特定組合之外，本文揭示之任何V _H肽可以與本文揭示之任何 V _L肽組合。

如本文所提供，本文所述之不同肽(V _H或V _L)可與肽連接子連接或不與肽連接子連接，而是用於連續序列。在一些實施例中，肽連接子包含(GGGGS) _n(SEQ ID NO: 35)；(GGGGA) _n(SEQ ID NO: 36)，或其任何組合，其中各n獨立地為1-5。連接的肽形式可由式V _H-Z-V _L或V _L-Z-V _H表示，其中Z為肽連接子。在一些實施例中，Z為(GGGGS) _n(SEQ ID NO: 35)；(GGGGA) _n(SEQ ID NO: 36)，或其任何組合，其中各n獨立地為1-5。 II. 抗體表位結合

在一些實施例中，抗體結合至人類血漿激肽釋放素上之表位，該表位包含野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之殘基K550或R551中之至少一者。在一些實施例中，抗體結合至人類血漿激肽釋放素上之表位，該表位包含野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之殘基K585或S597中之至少一者。在一些實施例中，抗體結合至人類血漿激肽釋放素上之表位，該表位包含野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之殘基K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596或S597中之至少一者。在一些實施例中，抗體結合至人類血漿激肽釋放素上之表位，該表位包含野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之殘基Y617或T625中之至少一者。在一些實施例中，抗體結合至人類血漿激肽釋放素上之表位，該表位包含野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之殘基Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625中之至少一者。在一些實施例中，抗體結合至人類血漿激肽釋放素上之表位，該表位包含野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之殘基K550、R551、K585、S597、Y617或T625中之至少一者。在一些實施例中，抗體結合至人類血漿激肽釋放素上之表位，該表位包含野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之殘基K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625中之至少一者。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少一者：SEQ ID NO: 32中所列之人類血漿激肽釋放素之K550、R551、K585、S597、Y617或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少兩者：SEQ ID NO: 32中所列之人類血漿激肽釋放素之K550、R551、K585、S597、Y617或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少三者：SEQ ID NO: 32中所列之人類血漿激肽釋放素之K550、R551、K585、S597、Y617或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少四者：SEQ ID NO: 32中所列之人類血漿激肽釋放素之K550、R551、K585、S597、Y617或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少五者：SEQ ID NO: 32中所列之人類血漿激肽釋放素之K550、R551、K585、S597、Y617或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基：SEQ ID NO: 32中所列之人類血漿激肽釋放素之K550、R551、K585、S597、Y617或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少一者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少兩者、三者、四者、五者、六者、七者、八者、九者、十者、十一者、十二者、十三者、十四者、十五者、十六者、十七者、十八者、十九者、二十者、二十一者、二十二者、二十三者或二十四者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少兩者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少三者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少四者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少五者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少六者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少七者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少八者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少九者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少十者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少十一者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少十二者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少十三者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少十四者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少十五者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少十六者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少十七者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少十八者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少十九者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少二十者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少二十一者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少二十二者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少二十三者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少二十四者：野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少K550。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少R551。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少K585。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少H586。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少N587。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少G588。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少M589。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少W590。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少R591。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少L592。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少V593。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少G594。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少I595。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少T596。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少S597。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少Y617。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少M618。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少D619。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少W620。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少I621。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少L622。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少E623。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少K624。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至野生型人類血漿激肽釋放素(SEQ ID NO: 32)之至少T625。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至人類血漿激肽釋放素之線性表位。例如，線性表位具有SEQ ID NO：37、38或39之胺基酸序列。抗體或其抗原結合片段可結合至此等線性表位中之一者、兩者或三者。在另外的實施例中，抗體或抗原結合片段不結合至具有SEQ ID NO:40、41及/或42之序列，及/或SEQ ID NO:40、41及/或42之胺基酸序列之任何胺基酸殘基的線性表位。 III. 抗體結合物

本文提供之抗體亦可與化學部分結合。化學部分尤其可為聚合物、放射性核種或細胞毒因子。化學部分可為MRI可偵測標記。在一些實施例中，此可稱為抗體藥物結合物。在一些實施例中，化學部分為增加抗體分子在個體體內之半衰期的聚合物。適合之聚合物包括但不限於聚乙二醇(PEG) ( 例如，分子量為2kDa、5kDa、10kDa、12kDa、20kDa、30kDa或40kDa之PEG)、葡聚糖及單甲氧基聚乙二醇(mPEG)。Lee 等人, (1999) (Bioconj. Chem. 10:973-981)揭示PEG結合之單鏈抗體。Wen 等人, (2001) (Bioconj. Chem. 12:545-553)揭示將抗體與連接至放射性金屬螯合劑(二乙烯三胺五乙酸(DTPA))之PEG結合。化學部分之實例包括但不限於抗有絲分裂劑，諸如卡奇黴素( 例如奧佐黴素(ozogamicin))、單甲基奧瑞他汀E、美坦辛(mertansine)等。其他實例包括但不限於生物活性抗微管劑、烷化劑及DNA小溝結合劑。化學部分可經由連接基團(順丁烯二醯亞胺)、可裂解連接子(諸如組織蛋白酶可裂解連接子(纈胺酸-瓜胺酸))及在一些實施例中經由一或多個間隔子( 例如對胺基芐基胺基甲酸酯)與抗體連接。

本發明之抗體及抗體片段亦可與標記結合，該等標記諸如 ⁹⁹Tc、 ⁹⁰Y、 ¹¹¹In、 ³²P、 ¹⁴C、 ¹²⁵I、 ³H、 ¹³¹I、 ¹¹C、 ¹⁵O、 ¹³N、 ¹⁸F、 ³⁵S、 ⁵¹Cr、 ⁵⁷To、 ²²⁶Ra、 ⁶⁰Co、 ⁵⁹Fe、 ⁵⁷Se、 ¹⁵²Eu、 ⁶⁷CU、 ²¹⁷Ci、 ²¹¹At、 ²¹²Pb、 ⁴⁷Sc、 ¹⁰⁹Pd、 ²³⁴Th 及 ⁴⁰K、 ¹⁵⁷Gd、 ⁵⁵Mn、 ⁵²Tr及 ⁵⁶Fe。

抗體及抗體片段亦可與螢光或化學發光標記結合，該等標記包括螢光團，諸如稀土螯合物、螢光素及其衍生物、若丹明及其衍生物、異硫氰酸酯、藻紅蛋白、藻藍蛋白、別藻藍蛋白、鄰苯二甲醛、螢光胺、 ¹⁵²Eu、丹磺醯、繖形酮、螢光素、管腔標記、異管腔標記、芳族吖啶酯標記、咪唑標記、吖啶鎓鹽標記、草酸酯標記、水母發光蛋白標記、2,3-二氫酞嗪二酮、生物素/抗生物素蛋白、自旋標記及穩定自由基。

抗體分子亦可結合至細胞毒性因子，諸如白喉毒素、 綠膿桿菌外毒素A鏈、蓖麻毒蛋白A鏈、相思子素A鏈、蒴蓮根毒素A鏈、α-帚曲黴素、油桐蛋白及化合物( 例如，脂肪酸) , 石竹素蛋白、 美洲商陆 (Phytoiacca americana)蛋白PAPI、PAPII及PAP-S、苦瓜抑制劑、麻风树毒蛋白(curcin)、巴豆毒蛋白(crotin)、 肥皂草抑制劑、丝裂蛋白(mitogellin)、局限曲菌素(restrictocin)、酚黴素(phenomycin)及依諾黴素(enomycin)。

可採用此項技術中已知用於將本發明之抗體分子與各種部分結合之任何方法，包括由以下所述之彼等方法：Hunter 等人, (1962) Nature 144:945；David 等人, (1974) Biochemistry 13:1014；Pain 等人, (1981) J. Immunol. Meth. 40:219；及Nygren, J., (1982) Histochem. and Cytochem. 30:407。用於結合抗體之方法為習知的且在此項技術中為熟知的。

在一些實施例中，本文提供抗體( 例如抗血漿激肽釋放素抗體)。在一些實施例中，抗體為結合至血漿激肽釋放素之重組抗體。在一些實施例中，血漿激肽釋放素蛋白為人類血漿激肽釋放素蛋白。在一些實施例中，抗體不特異性結合至前激肽釋放素蛋白。如本文所用，術語「重組抗體」係指非天然存在之抗體。在一些實施例中，術語「重組抗體」係指並非自人類個體中分離之抗體。 IV. 核酸及生產方法

本發明亦涵蓋編碼本文揭示之各抗體或抗原結合片段的核酸，包括編碼本文揭示之此類抗體之重鏈或輕鏈或重鏈或輕鏈可變區的核酸。因此，在一些實施例中，提供編碼本文揭示之抗體或片段之核酸分子。在一些實施例中，核酸編碼本文提供之抗體或其抗原結合片段、或重鏈或輕鏈、或重鏈或輕鏈可變區之胺基酸序列。

例如，在一個實施例中，核酸編碼SEQ ID NO: 1、3或5中任一者之重鏈可變區，而在另一實施例中，核酸編碼SEQ ID NO: 2、4或6中任一者之輕鏈可變區。在某些實施例中，核酸編碼SEQ ID NO: 7、9或10之重鏈序列，而在另一實施例中，核酸編碼SEQ ID NO:8之輕鏈序列。

在一個實施例中，核酸編碼重鏈或重鏈可變區，該重鏈或重鏈可變區包含具有SEQ ID NO: 14、23、29或43之胺基酸序列的HCDR1；具有SEQ ID NO: 15、17、19、24、30或44之胺基酸序列的HCDR2；及具有SEQ ID NO: 16、25或31之胺基酸序列的HCDR3。

在另一實施例中，核酸編碼輕鏈或輕鏈可變區，該輕鏈或輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO: 11、20或27之胺基酸序列的LCDR1；具有SEQ ID NO: 12、18、21或26之胺基酸序列的LCDR2；及具有SEQ ID NO: 13、22或28之胺基酸序列的LCDR3。

在另一實施例中，本發明之抗體包含由SEQ ID NO: 33之核酸序列編碼的重鏈可變區及由SEQ ID NO: 34之核酸序列編碼的輕鏈可變區。本發明之抗體亦可包含由SEQ ID NO: 48之核酸序列編碼的重鏈及由SEQ ID NO: 49之核酸序列編碼的輕鏈。

如本文所述，具有已知序列之抗體的產生係常規的且可藉由任何方法進行。用於產生抗體之方法，諸如本文揭示之彼等方法為此項技術中已知的。一旦知曉序列，亦可根據已知方法，包括根據本文提供之實例生成抗體。

例如，編碼輕鏈可變區及/或重鏈可變區之DNA分子可使用本文提供之序列資訊以化學方式合成。可將合成DNA分子連接至其他適當核苷酸序列，包括例如恆定區編碼序列及表現控制序列，以產生編碼所需抗體之習知基因表現構築體。確定的基因構築體之生產在此項技術之常規技術範圍內。或者，可藉由習知雜交技術或聚合酶鏈反應(PCR)技術，使用合成核酸探針自融合瘤中選殖出本文提供之序列，該等探針之序列係基於本文提供之序列資訊，或關於編碼融合瘤細胞中鼠類抗體之重鏈及輕鏈之基因的先前技術序列資訊。

可將編碼所需抗體之核酸併入(連接)至表現載體中，該等表現載體可經由習知轉染或轉化技術引入至宿主細胞中。例示性宿主細胞為 大腸桿菌細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、人類坯胎腎293 (HEK 293)細胞、HeLa細胞、幼倉鼠腎(BHK)細胞、猴腎細胞(COS)、人類肝細胞癌細胞( 例如，Hep G2)及骨髓瘤細胞，該等細胞不另外產生IgG蛋白。轉化之宿主細胞可在允許宿主細胞表現編碼免疫球蛋白輕鏈可變區及/或重鏈可變區之基因的條件下生長。因此，本發明提供包含編碼本發明之抗體或其片段之核酸的載體，以及包含此類核酸或載體之細胞。

特定表現及純化條件將根據所用表現系統而變化。例如，若欲在 大腸桿菌中表現基因，則首先藉由將工程化基因定位於適合之細菌啟動子( 例如Trp或Tac)及原核信號序列下游而將基因選殖至表現載體中。表現之分泌蛋白在折射體或包涵體中積聚，且可在藉由法式濾壓或超音波處理破壞細胞後收集。接著將折射體溶解，且藉由此項技術中已知之方法將蛋白質再折疊及裂解。

若工程化基因欲在真核宿主細胞，例如CHO細胞中表現，則首先將其插入至含有適合之真核啟動子、分泌信號、poly A序列及終止密碼子的表現載體中。視情況，載體或基因構築體可含有增強子及內含子。此表現載體視情況含有編碼恆定區之全部或部分的序列，使得能夠表現重鏈或輕鏈之全部或部分。可使用習知技術將基因構築體引入至真核宿主細胞中。宿主細胞表現V _L或V _H片段、V _L-V _H異二聚體、V _H-V _L或V _L-V _H單鏈多肽、完整的免疫球蛋白重鏈或輕鏈或其部分，其中之每一者可連接至具有另一種功能( 例如，細胞毒性)之部分。在一些實施例中，宿主細胞用表現多肽之單一載體轉染，該多肽表現整個或部分重鏈( 例如，重鏈可變區)或輕鏈( 例如，輕鏈可變區)。在一些實施例中，宿主細胞用編碼(a)包含重鏈可變區之多肽及包含輕鏈可變區之多肽，或(b)整個免疫球蛋白重鏈及整個免疫球蛋白輕鏈之單一載體轉染。在一些實施例中，宿主細胞用多於一種表現載體( 例如，一種表現包含整個或部分重鏈或重鏈可變區之多肽的表現載體，及另一種表現包含整個或部分輕鏈或輕鏈可變區之多肽的表現載體)共轉染。

包含免疫球蛋白重鏈可變區或輕鏈可變區之多肽可藉由在允許多肽表現之條件下生長(培養)宿主細胞來產生，該宿主細胞用編碼此類可變區之表現載體轉染。在表現後，可使用此項技術中已知之技術，例如親和標籤，諸如麩胱甘肽-S-轉移酶(GST)或組胺酸標籤來收集及純化或分離多肽。

結合血漿激肽釋放素或抗體之抗原結合片段的單株抗體可藉由生長(培養)用以下轉染之宿主細胞來產生：(a)編碼完整或部分免疫球蛋白重鏈之表現載體，及編碼完整或部分免疫球蛋白輕鏈之單獨表現載體；或(b)在允許表現兩條鏈之條件下編碼兩條鏈(例如，完整或部分重鏈及輕鏈)之單一表現載體。可使用此項技術中已知之技術，例如蛋白A、蛋白G、親和標籤，諸如麩胱甘肽-S-轉移酶(GST)或組胺酸標籤來收集及純化或分離完整抗體(或抗原結合片段)。自單一表現載體或自兩個單獨表現載體表現重鏈及輕鏈在此項技術之普通技藝範圍內。

編碼本文所述之抗體的核酸序列可為基因體DNA或cDNA，或編碼本文所述之可變區中之至少一者的RNA ( 例如mRNA)。使用染色體基因片段作為編碼V區抗原結合片段之DNA來源之一種方便的替代方案為使用cDNA構築嵌合免疫球蛋白基因，例如，如Liu 等人(Proc. Natl. Acad. Sci., USA 84:3439 (1987)及J. Immunology 139:3521 (1987)中所報導，該等參考文獻特此以引用方式整體併入本文中。使用cDNA需要將適合宿主細胞之基因表現元件與基因組合，以達成所需蛋白質的合成。使用cDNA序列優於基因體序列(其含有內含子)，因為cDNA序列可在缺乏適當RNA剪接系統之細菌或其他宿主中表現。

例如，編碼能夠偵測、結合或中和血漿激肽釋放素之V區抗原結合片段的cDNA可使用基於使用本文提供之胺基酸序列的已知方法來提供。因為遺傳密碼係簡併的，所以可使用超過一個密碼子來編碼特定胺基酸(Watson 等人，下文)。使用遺傳密碼，可鑑定一或多種不同的寡核苷酸，其中之每一者均將能夠編碼胺基酸。可藉由考慮異常鹼基配對關係及在表現抗體或片段之真核或原核細胞中實際使用特定密碼子(編碼特定胺基酸)之頻率來估計特定寡核苷酸將實際上構成實際XXX編碼序列的概率。此類「密碼子使用規則」由Lathe 等人, J. Molec. Biol. 183:1 12 (1985)揭示。使用Lathe之「密碼子使用規則」，識別出含有能夠編碼抗體可變區或恆定區序列之理論上「最可能」核苷酸序列的單一寡核苷酸或一組寡核苷酸。 V. 醫藥組合物及其投與

本文揭示之血漿激肽釋放素結合蛋白，包括抗體及其抗原結合片段，以及包括編碼其之核酸分子，可調配為醫藥組合物，例如用於向個體投與。

如本文所用，術語「醫藥組合物」係指一或多種活性劑(諸如本文所述之抗體或抗原結合片段)與適用於 活體內或離體診斷或治療用途之載劑(惰性或活性)的組合。

如本文所揭示之含有抗體、其片段或編碼此類抗體之核酸的醫藥組合物可以劑量單位形式存在且可藉由任何適合之方法製備。在一些實施例中，為了製備本文提供之抗血漿激肽釋放素抗體或其他蛋白質之醫藥或無菌組合物，將本文提供之抗體或其抗原結合片段或其他蛋白質與醫藥學上可接受之載劑或賦形劑混合。醫藥組合物應調配為與其預期投與途徑相容。有用的調配物可藉由製藥技術中已知之方法製備。例如，參見 Remington's Pharmaceutical Sciences, 第18版 (Mack Publishing Company, 1990)。

如本文所用，片語「醫藥學上可接受」及「藥理學上可接受」係指化合物、分子實體、組合物、材料及/或劑型在適當地向動物或人類投與時，不會產生不利、過敏或其他不良反應。對於人類投與，製劑應符合FDA生物製品辦公室標準所要求的無菌性、熱原性以及一般安全性及純度標準。「醫藥學上可接受」及「藥理學上可接受」可意謂由或可由聯邦或州政府之監管機構或美國以外國家之相應機構批准，或列入美國藥典或其他公認的藥典用於動物，且更特定言之，用於人類。

如本文所用，「載劑」係指材料、組合物或媒劑，諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或包封材料，其參與將諸如抗體或其結合片段之藥劑自一個器官或身體的一部分攜帶或運輸至另一個器官或身體的一部分。

如本文所用，「醫藥學上可接受之賦形劑」係指如下物質：幫助投與活性劑，例如抗體或其結合片段，及/或被個體吸收且可包括於本發明之組合物中而不會對患者造成顯著的不利毒理學影響。醫藥學上可接受之賦形劑之非限制性實例包括水、NaCl、生理鹽水溶液(諸如磷酸鹽緩衝鹽水溶液)、乳液(例如，油/水或水/油乳液)、乳酸林格氏液、普通蔗糖、普通葡萄糖、黏合劑、填充劑、崩解劑、潤滑劑、包衣劑、甜味劑、調味劑、鹽溶液(諸如林格氏溶液)、醇、油、明膠、碳水化合物(諸如乳糖、葡萄糖、直鏈澱粉或澱粉)、脂肪酸酯、羥甲基纖維素、聚乙烯吡咯啶及色素，及諸如此類。此類製劑可經滅菌，且必要時可與不會與本發明之組合物發生有害反應的助劑混合，該等助劑諸如潤滑劑、防腐劑、穩定劑、濕潤劑、乳化劑、影響滲透壓之鹽、緩沖劑、著色劑及/或芳香物質及諸如此類。關於賦形劑之實例，參見Martin, Remington’s Pharmaceutical Sciences, 第15版, Mack Publ. Co., Easton, PA (1975)。

適用於腸胃外投與之調配物組分包括無菌稀釋劑，諸如注射用水、鹽水溶液、不揮發油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶劑；抗菌劑，諸如苯甲醇或對羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，諸如EDTA；緩衝劑，諸如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；及用於調節張力之試劑，諸如氯化鈉或葡萄糖。

對於靜脈內投與，適合之載劑包括生理鹽水、抑菌水、Cremophor ELTM (BASF, Parsippany, NJ)、磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)或葡萄糖溶液。載劑在製造及儲存條件下應為穩定的，且應保藏免受微生物侵害。載劑可為含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇及液體聚乙二醇)及其適合混合物之溶劑或分散介質。

醫藥調配物較佳為無菌的。滅菌可例如藉由無菌過濾膜過濾來完成。在組合物經凍乾之情況下，可在凍乾及復原之前或之後進行過濾滅菌。

本文提供之抗體之調配物可藉由與呈例如凍乾粉末、漿液、水溶液或懸浮液形式之可接受載劑、賦形劑或穩定劑混合來製備(參見例如Hardman 等人(2001) Goodman and Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, NY; Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, NY；Avis 等人(編輯) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY；Lieberman 等人(編輯) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY；Lieberman 等人(編輯) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY；Weiner及Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, NY)。在一些實施例中，將抗體在pH 5-6之乙酸鈉溶液中稀釋至適當濃度，且添加NaCl或蔗糖以增強張力。可添加額外試劑，諸如聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80，以增強穩定性。

單獨或與另一藥劑組合投與之抗體組合物之毒性及治療功效可藉由細胞培養物或實驗動物中之標準藥學程序來確定， 例如，用於確定LD ₅₀(對50%群體致死之劑量)及ED ₅₀(在50%群體中治療有效之劑量)。毒性與治療作用之間的劑量比為治療指數(LD ₅₀/ED ₅₀)。在特定態樣中，展現高治療指數之抗體為合乎需要的。自此等細胞培養分析及動物研究中獲得的資料可用於製定用於人體之一系列劑量。此類化合物之劑量較佳處於循環濃度範圍內，其中包括ED ₅₀且毒性極小或無毒性。劑量可在此範圍內變化，其取決於所用劑型及投與途徑。

本發明之抗體組合物可例如根據Physicians’ Desk Reference 2003 (Thomson Healthcare; 第57版 (2002年11月1日))向個體投與。

投與方式可變化。適合之投與途徑包括經口、經直腸、經黏膜、經腸、腸胃外；肌內、皮下、皮內、髓內、鞘內、直接心室內、靜脈內、腹膜內、鼻內、眼內、吸入、吹入、局部、皮膚、透皮或動脈內。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段可藉由侵入性途徑，諸如藉由注射來投與。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段或其醫藥組合物經靜脈內、皮下、肌內、動脈內、關節內( 例如在關節炎關節中)、瘤內或藉由吸入、氣溶膠遞送來投與。藉由非侵入性途徑( 例如經口；例如在丸劑、膠囊或錠劑中)投與亦在本發明實施例之範疇內。藉由靜脈內輸注投與係一種可將抗體投與至個體之方式。

在一些實施例中，抗血漿激肽釋放素抗體或其抗原結合片段與至少一種額外治療劑，諸如但不限於用於治療本文提供之病症的任何治療劑組合投與。在一些實施例中，抗體與針對本文提供之病症的另一治療組合投與。例如，本發明之抗血漿激肽釋放素抗體可與用於治療HAE之一或多種額外療法一起投與，該一或多種額外療法諸如BERINERT ^®(C1酯酶抑制劑)、FIRAZYR ^®(艾替班特(icatibant)注射液)、KALBITOR ^®(艾卡拉肽(ecallantide))及RUCONEST ^®(C1酯酶抑制劑，康斯塔特阿法(contestat alfa))、CINRYZE ^®(C1酯酶抑制劑)、HAEGARDA ^®(C1酯酶抑制劑皮下)、TAKHZYRO ^®(拉那魯單抗(lanadelumab-flyo))、ORLADEYO ™ (貝羅司他(berotralstat))、加拉昔單抗(garadacimab)、多尼達洛森(donidalorsen)、合成17-α-烷基化雄激素，諸如達那唑(danazol)及速達樂(stanozolol)，及/或抗纖維蛋白溶解劑，諸如胺基己酸。抗血漿激肽釋放素抗體可與一或多種前述額外療法同時投與，例如，它其可共投與。抗血漿激肽釋放素抗體可在前述療法中之一者之前或之後依序投與，例如，在與任何前述額外療法不同天或不同周或甚至不同月投與。

組合物可用此項技術中已知的醫療裝置投與。例如，本發明之醫藥組合物可以藉由用皮下注射針(包括例如預填充注射器或自動注射器)注射來投與。

醫藥組合物亦可用無針皮下注射裝置投與；諸如美國專利第6,620,135號；第6,096,002號；第5,399,163號；第5,383,851號；第5,312,335號；第5,064,413號；第4,941,880號；第4,790,824號或第4,596,556號中揭示之裝置。

醫藥組合物亦可藉由輸注投與。熟知的用於投與醫藥組合物之植入物及模組之實例包括：美國專利第4,487,603號，其揭示一種用於以受控速率分配藥物之植入式微輸液泵；美國專利第4,447,233號，其揭示一種用於以精確輸液速率遞送藥物之藥物輸液泵；美國專利第4,447,224號，其揭示一種用於連續藥物遞送之可變流量植入式輸液裝置；美國專利第4,439,196號，其揭示一種具有多室隔室之滲透藥物遞送系統。許多其他此類植入物、遞送系統及模組對於熟習此項技術者係熟知的。輸注亦可藉由在規定時段內靜脈內遞送醫藥學上可接受之載體(諸如生理鹽水)中的抗體來進行。醫藥組合物之靜脈內遞送可經由植入個體之靜脈或動脈中的端口進行。

或者，可以局部而非全身方式投與抗體，例如，經由注射或在儲槽或緩釋調配物中。此外，可在靶向藥物遞送系統中投與抗體，例如，在塗有組織特異性抗體之脂質體中。

投與方案取決於若干因素，包括治療性抗體之血清或組織周轉率、症狀水準、治療性抗體之免疫原性以及生物基質中靶細胞之可及性。較佳地，給藥方案遞送足夠的治療性抗體以實現目標疾病狀態的改善，同時使非所需副作用最小化。因此，遞送之生物製劑的量部分取決於特定治療性抗體及所治療疾患之嚴重程度。可獲得對選擇治療性抗體之適當劑量的指導(參見例如Wawrzynczak (1996) Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK；Kresina (編輯) (1991) Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, NY；Bach (編輯) (1993) Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, NY；Baert 等人(2003) New Engl. J. Med.348:601-608；Milgrom 等人. (1999) New Engl. J. Med.341:1966-1973；Slamon 等人. (2001) New Engl. J. Med.344:783-792；Beniaminovitz 等人. (2000) New Engl. J. Med.342:613-619；Ghosh 等人. (2003) New Engl. J. Med.348:24-32；Lipsky 等人. (2000) New Engl. J. Med.343:1594-1602)。

可由臨床醫師確定適當劑量，例如，使用此項技術中已知或懷疑影響治療之參數或因素。通常，劑量自比最佳劑量稍少的量開始，且之後以小增量增加，直至相對於任何負面副作用達成所需或最佳效果。重要的診斷指標包括例如炎症症狀或所產生之炎性細胞介素水準。一般而言，期望使用之生物製劑來自與治療目標動物相同的物種，從而最大限度地減少對試劑之任何免疫反應。例如，在人類個體之情況下，可能需要嵌合、人類化及完全人類抗體。

抗體或其抗原結合片段可藉由連續輸注或藉由例如每天、每週1-7次、每週、每兩週、每月、每兩個月或每季度投與之劑量來提供。在一些實施例中，每週總劑量通常為至少0.05 μg/kg體重，更通常為至少0.2 μg/kg、0.5 μg/kg、1 μg/kg、10 μg/kg、100 μg/kg、0.25 mg/kg、1.0 mg/kg、2.0 mg/kg、5.0 mg/ml、10 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg或更多(參見例如Yang 等人(2003) New Engl. J. Med.349:427-434；Herold 等人(2002) New Engl. J. Med.346:1692-1698；Liu 等人(1999) J. Neurol. Neurosurg. Psych.67:451-456；Portielji 等人. (2003) Cancer Immunol. Immunother.52:133-144)。亦可提供劑量以達成個體血清中抗體之預定目標濃度，諸如0.1、0.3、1、3、10、30、100、300 µg/ml或更大。在其他實施例中，每週、每兩週、「每4週」、每月、每兩個月或每季度以10、20、50、80、100、200、500、1000、1500、2000或2500毫克/個體皮下或靜脈內投與抗體。 VI. 治療方法及醫藥用途

本文揭示之血漿激肽釋放素結合蛋白，包括抗體及其抗原結合片段可用於治療個體之疾病。

如本文所用，術語「治療(treat)」或「治療(treatment)」包括抑制或延遲與病症相關之症狀的發展及/或減輕此類病症之症狀的嚴重程度。該等術語進一步包含改善現有的不受控或非所要症狀、預防額外症狀以及改善或預防此類症狀之根本原因。

如本文所用，術語「治療有效量」、「治療有效劑量」及「有效量」係指抗體或其抗原結合片段之量，該量當單獨投與或與額外治療劑組合投與至細胞、組織或個體時，有效地引起疾病或疾患之一或多種症狀或此類疾病或疾患之進展的可量測改善，例如HAE或已知血漿激肽釋放素引起所觀測病理學之疾患。治療有效劑量進一步指抗體或其結合片段之量，該量足以使得症狀至少部分改善，例如治療、治癒、預防或改善相關醫學疾患，例如HAE或已知血漿激肽釋放素引起所觀測病理學之疾患，或增加治療、治癒、預防或改善此類疾患之速率。當應用於單獨投與之個別活性成分時，治療有效劑量係指單獨的該成分。當應用於組合時，治療有效劑量係指產生治療效果之活性成分的組合量，無論組合投與、連續投與或同時投與。有效量之治療劑將使得診斷指標或參數提高至少10%；通常至少20%；較佳至少約30%；更佳至少40%，且最佳至少50%。在使用主觀指標評估疾病嚴重程度之情況下，有效量亦可引起主觀指標的改善。在一些實施例中，若該量為可用於治療或預防HAE症狀或已知血漿激肽釋放素引起所觀測病理學之疾患的量，則該量為治療有效量。例如，治療有效量之本發明抗體或其結合片段可降低HAE發作之頻率，或可減輕HAE發作之嚴重程度，例如個體在發作期間經歷之水腫的程度。

如本文所用，術語「個體」係指任何生物體，諸如動物，包括哺乳動物( 例如，大鼠、小鼠、狗、貓、兔)及例如人類。在一個實施例中，個體為人類。個體亦可稱為患者。在一些實施例中，個體為有需要之個體。「有需要之」個體係指已被鑑定為需要治療待治療之疾患且以治療此類疾患之特定意圖進行治療的個體。疾患可為例如本文所述之任何疾患。「個體」可與「患者」互換使用。

在一些實施例中，方法包含將治療或預防有效量的一或多種本文所述之抗體或抗體之抗原結合片段或含有該治療有效量之醫藥組合物投與至易感個體或展現其中已知血漿激肽釋放素引起所觀測病理學之疾患的個體。可投與任何活性形式之抗體，包括但不限於scFv、Fab及F(ab') ₂片段以及本文提供之其他形式之抗體。

如本文所用，「血漿激肽釋放素相關病理」係指由血漿激肽釋放素之功能或異常表現引起的疾患。此等疾患包括但不限於遺傳性血管性水腫、緩激肽依賴性水腫、糖尿病性黃斑水腫、視網膜水腫、因子XII相關的寒冷性自體炎症症候群(FACAS)、類風濕性關節炎、痛風、腸道疾病、口腔黏膜炎、神經性疼痛、炎症性疼痛、椎管狹窄-退化性脊柱疾病、動脈或靜脈血栓形成、術後腸梗阻、主動脈瘤、骨關節炎、血管炎、水腫、腦水腫、肺栓塞、中風、心室輔助裝置或支架誘發之凝血、頭部外傷或腫瘤周圍腦水腫、敗血症、急性大腦中動脈(MCA)缺血事件(中風)、再狹窄( 例如，血管成形術後)、全身性紅斑狼瘡腎炎及燒傷。在一些實施例中，病理為遺傳性血管性水腫。在一些實施例中，病理為緩激肽依賴性水腫。

在一些實施例中，本文提供之抗體用於治療患有或懷疑患有血漿激肽釋放素相關病症之個體。血漿激肽釋放素相關病症係選自由以下組成之群：遺傳性血管性水腫、緩激肽依賴性水腫、糖尿病性黃斑水腫、視網膜水腫、因子XII相關的寒冷性自體炎症症候群(FACAS)、類風濕性關節炎、痛風、腸道疾病、口腔黏膜炎、神經性疼痛、炎症性疼痛、椎管狹窄-退化性脊柱疾病、動脈或靜脈血栓形成、術後腸梗阻、主動脈瘤、骨關節炎、血管炎、水腫、腦水腫、肺栓塞、中風、心室輔助裝置或支架誘發之凝血、頭部外傷或腫瘤周圍腦水腫、敗血症、急性大腦中動脈(MCA)缺血事件(中風)、再狹窄( 例如，血管成形術後)、全身性紅斑狼瘡腎炎及燒傷。

在一些實施例中，血漿激肽釋放素結合蛋白將與接觸活化系統( 亦即，內在活化系統)相關之異常凝血減少至少10%，如藉由例如APTT凝血分析所量測( 例如減少至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或甚至100% ( 亦即，無可偵測之異常凝血))。

在一些實施例中，本文提供之抗體可用於治療本文所述之病症，例如遺傳性血管性水腫、糖尿病性黃斑水腫、視網膜水腫、因子XII相關的寒冷性自體炎症症候群(FACAS)、類風濕性關節炎、痛風、腸道疾病、口腔黏膜炎、神經性疼痛、炎症性疼痛、椎管狹窄-退化性脊柱疾病、動脈或靜脈血栓形成、術後腸梗阻、主動脈瘤、骨關節炎、血管炎、水腫、遺傳性血管性水腫、腦水腫、肺栓塞、中風、心室輔助裝置或支架誘發之凝血、頭部外傷或腫瘤周圍腦水腫、敗血症、急性大腦中動脈(MCA)缺血事件(中風)、再狹窄( 例如，血管成形術後)、全身性紅斑狼瘡腎炎或燒傷；或促進傷口愈合。在一些實施例中，病症為遺傳性血管性水腫或緩激肽依賴性水腫。在一些實施例中，病症為遺傳性血管性水腫。

在一些實施例中，本文提供之抗體用於製造供治療本文所述之病症用的藥劑，該病症為例如遺傳性血管性水腫、糖尿病性黃斑水腫、視網膜水腫、因子XII相關的寒冷性自體炎症症候群(FACAS)、類風濕性關節炎、痛風、腸道疾病、口腔黏膜炎、神經性疼痛、炎症性疼痛、椎管狹窄-退化性脊柱疾病、動脈或靜脈血栓形成、術後腸梗阻、主動脈瘤、骨關節炎、血管炎、水腫、遺傳性血管性水腫、腦水腫、肺栓塞、中風、心室輔助裝置或支架誘發之凝血、頭部外傷或腫瘤周圍腦水腫、敗血症、急性大腦中動脈(MCA)缺血事件(中風)、再狹窄( 例如，血管成形術後)、全身性紅斑狼瘡腎炎或燒傷；或用於製造促進傷口愈合之藥劑。

個體之治療可包含投與治療有效量的本文所述之抗體或抗原結合片段，或含有此類抗體或片段之醫藥組合物。抗體可在套組，諸如本文提供之彼等套組中提供。抗體可單獨使用或投與，或與另一治療劑、鎮痛劑或診斷劑(諸如本文所提供)混合使用或投與。在向患者提供能夠結合至血漿激肽釋放素之抗體或其片段，或能夠保護受體患者免受血漿激肽釋放素影響之抗體時，所投與藥劑之劑量將取決於諸如患者年齡、體重、身高、性別、一般健康狀況、既往病史等因素而變化。

能夠治療與血漿激肽釋放素活性相關之病症或用於治療血漿激肽釋放素相關病理之抗體旨在以足以影響血漿激肽釋放素相關症狀或病理之減輕、消退或改善的量提供給個體。此類病理包括但不限於遺傳性血管性水腫、緩激肽依賴性水腫、遺傳性血管性水腫、糖尿病性黃斑水腫、視網膜水腫、因子XII相關的寒冷性自體炎症症候群(FACAS)、類風濕性關節炎、痛風、腸道疾病、口腔黏膜炎、神經性疼痛、炎症性疼痛、椎管狹窄-退化性脊柱疾病、動脈或靜脈血栓形成、術後腸梗阻、主動脈瘤、骨關節炎、血管炎、水腫、腦水腫、肺栓塞、中風、心室輔助裝置或支架誘發之凝血、頭部外傷或腫瘤周圍腦水腫、敗血症、急性大腦中動脈(MCA)缺血事件(中風)、再狹窄( 例如，血管成形術後)、全身性紅斑狼瘡腎炎及燒傷。例如，病理為遺傳性血管性水腫(HAE)。

因此，在一些實施例中，提供治療患有血漿激肽釋放素介導之病症之個體的方法。在一些實施例中，該方法包含投與包含治療有效量的如本文提供之抗體或其抗原結合片段之醫藥組合物。在一些實施例中，病症為遺傳性血管性水腫、緩激肽依賴性水腫、遺傳性血管性水腫、糖尿病性黃斑水腫、視網膜水腫、因子XII相關的寒冷性自體炎症症候群(FACAS)、類風濕性關節炎、痛風、腸道疾病、口腔黏膜炎、神經性疼痛、炎症性疼痛、椎管狹窄-退化性脊柱疾病、動脈或靜脈血栓形成、術後腸梗阻、主動脈瘤、骨關節炎、血管炎、水腫、腦水腫、肺栓塞、中風、心室輔助裝置或支架誘發之凝血、頭部外傷或腫瘤周圍腦水腫、敗血症、急性大腦中動脈(MCA)缺血事件(中風)、再狹窄( 例如，血管成形術後)、全身性紅斑狼瘡腎炎及燒傷。在一些實施例中，病症為遺傳性血管性水腫。在一些實施例中，病症為緩激肽依賴性水腫。

本文亦揭示降低或抑制有需要之個體中之血漿激肽釋放素活性的方法。例如，本文揭示之抗體或其結合片段可以治療有效量投與至個體以降低或抑制該個體中之血漿激肽釋放素，諸如人類血漿激肽釋放素的活性。個體可患有如本文所揭示之血漿激肽釋放素相關病症，諸如HAE。在一些實施例中，血漿激肽釋放素活性可以足以預防個體中之HAE發作至少一個月、兩個月、三個月、四個月、五個月、六個月或更長時間的量被降低或抑制。

本文亦揭示降低或抑制有需要之個體中之緩激肽產生或活性的方法。例如，本文揭示之抗體或結合片段可以治療有效量投與至個體以降低個體中緩激肽之含量或活性。個體可患有如本文所揭示之血漿激肽釋放素相關病症，諸如HAE。在一些實施例中，緩激肽產生或活性可以預防個體中之HAE發作至少一個月、兩個月、三個月、四個月、五個月、六個月或更長時間的量被降低或抑制。

如本文所提供，抗體或其抗原結合片段可與其他治療劑一起投與，該等其他治療劑可包括一或多種用於治療HAE之額外療法，諸如BERINERT ^®(C1酯酶抑制劑)、FIRAZYR ^®(艾替班特注射液)、KALBITOR ^®(艾卡拉肽)及RUCONEST ^®(C1酯酶抑制劑，康斯塔特阿法)、CINRYZE ^®(C1酯酶抑制劑)、HAEGARDA ^®(C1酯酶抑制劑皮下)、TAKHZYRO ^®(拉那魯單抗)、ORLADEYO ™ (貝羅司他)、加拉昔單抗、多尼達洛森、合成17-α-烷基化雄激素，諸如達那唑及速達樂，及/或抗纖維蛋白溶解劑，諸如胺基己酸。額外療法可與本文揭示之抗體同時或依次投與。

亦提供可用於實施本文所述之實施例的套組。本發明之套組可包含含有上述抗體或與上述抗體一起包裝的第一容器。該套組亦可包含另一容器，該容器含有對於實施該等實施例而言必需或方便的溶液或與該等溶液一起包裝。容器可由玻璃、塑膠或箔片製成，且可為小瓶、瓶子、小袋、管、袋子等。套組亦可含有書面資訊，諸如用於實施該等實施例之程序或分析資訊，諸如第一容器裝置中所含之試劑的量。容器可與書面資訊一起在另一容器裝置，例如盒子或袋子中。

在一些實施例中，提供了結合至血漿激肽釋放素蛋白之抗體。在一些實施例中，抗體係分離的。在一些實施例中，抗體特異性結合至血漿激肽釋放素。

在一些實施例中，抗體抑制或中和血漿激肽釋放素蛋白，例如人類血漿激肽釋放素之功能。如本文所用，術語「中和」意謂蛋白質之活性或功能被抑制。抑制可為完全的或部分的。在一些實施例中，蛋白質之活性或功能被抑制至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、95或99%。抑制百分比可基於不存在抗體時蛋白質之功能或活性。在一些實施例中，抗體抑制由血漿激肽釋放素促進之凝血功能。因此，本發明提供調節血漿激肽釋放素活性之方法，諸如使血漿激肽釋放素與本文揭示之血漿激肽釋放素抗體或包含該抗體之醫藥組合物接觸，以調節血漿激肽釋放素，諸如人類血漿激肽釋放素之活性。在一些實施例中，該方法包含向個體投與本文提供之抗體或包含該抗體之醫藥組合物，以調節個體中之血漿激肽釋放素活性。

在本發明中使用冠詞「一(a/an)」來指代冠詞之文法對象中之一或多者( 亦即，至少一者)，除非上下文不合適。舉例而言，「一個要素」意謂一個要素或多於一個要素。

除非另有說明，否則術語「及/或」在本發明中用於意謂「及」或「或」。除非自上下文中另外理解，否則與三個或更多個列舉對象相關之表述「及/或」應理解為具有相同含義。

應理解，除非自上下文及使用中另外理解，否則表述「至少一個」包括在該表述之後的各列舉對象以及兩個或更多個列舉對象之各種組合。

除非另有明確說明或自上下文中理解，否則術語「包括(include/includes/including)」、「具有(have/has/having)」、「含有(contain/contains/containing)」，包括其文法等效物的使用通常應理解為開放式及非限制性的，例如，不排除其他未列舉之要素或步驟。

除非另有明確說明，否則當術語「約」用於定量值之前時，本發明亦包括具體定量值本身。除非另有說明或自上下文中推斷，否則如本文所用，術語「約」係指與標稱值的±5 %變化。

如本文所用，術語「組合」意謂所述藥劑可以混合物形式在一起、作為單一藥劑同時或作為單一藥劑按任何順序依次投與至動物或個體。

除非另有說明或自上下文理解，否則在提供分子量而非例如聚合物之絕對值的情況下，則分子量應理解為平均分子量。

本文使用任何及所有實例或例示性語言，例如「諸如」或「包括」僅旨在更好地說明本發明且不構成對本發明範疇的限制，除非要求保護。說明書中之任何語言均不應被解釋為指示任何未要求保護之要素對於本發明之實踐必不可少。

應理解，步驟之順序或執行某些動作之順序係無關緊要的，只要本發明保持可操作即可。此外，可同時進行兩個或更多個步驟或動作。

在整個描述中，在組合物被描述為具有、包括或包含特定組分之情況下，或在過程及方法被描述為具有、包括或包含特定步驟之情況下，另外考慮存在基本上由或由所列舉組分組成之本發明組合物，且存在基本上由或由所列舉處理步驟組成之根據本發明之過程及方法。

在本申請案中，當要素或組分被稱為包括於及/或選自所列舉要素或組分之清單時，應理解，該要素或組分可為任一所列舉要素或組分，或者該要素或組分可選自由兩個或更多個所列舉要素或組分組成的組。

此外，應理解，本文所述之組合物及方法之要素及/或特徵可以多種方式組合而不背離本發明之精神及範疇，無論在本文中為明確的或暗示的。例如，在提及特定化合物之情況下，該化合物可用於本發明組合物之各種實施例中及/或本發明方法中，除非自上下文另有理解。換言之，在本申請案中，實施例已經以使得能夠書寫及繪製清晰及簡明申請案之方式進行描述及描繪，但預期且應理解的是，實施例可在不脫離本教示內容及發明之情況下以各種方式組合或分離。例如，應理解，本文描述及描繪之所有特徵均可適用於本文描述及描繪之本發明的所有態樣。

現參考以下實例來描述主題。提供此等實例僅用於說明目的，且申請專利範圍決不應解釋為限於此等實例，而是應解釋為包括由於本文提供之教示而變得明顯的任何及所有變化。熟習此項技術者將容易地認識到可改變或修改以產生基本類似結果之多個非關鍵參數。實例實例 1 ：新穎血漿激肽釋放素抗體的產生。

五隻前激肽釋放素(prekal)敲除小鼠經由飛節途徑用活性人類血漿激肽釋放素(pkal，Enzyme Research Labs, South Bend, IN)免疫。當血清滴度表明強烈免疫反應時，收集引流淋巴結，且使用電融合將淋巴球與骨髓瘤株融合。將所得融合瘤塗鋪在三十個384孔盤中，且藉由ELISA篩選與人類pkal及prekal之結合。優先結合至pkal之融合瘤細胞株經次選殖及擴增。

藉由ELISA重新測試單株IgG之pkal及prekal結合，且在螢光肽受質分析中篩選pkal (1 nM酶)酶活性之抑制作用(Kenniston 等人J Biol Chem. 2014年8月22日; 289(34):23596-608)。如圖 1中所示，證實了包括24L13在內的三個單株譜係對pkal具有選擇性。圖 2顯示，與陽性對照C1inh及另一抗體DX-2930 (描述於美國專利第8,816,055號中)相比，一個譜系(24L13，命名為MAb1之抗體)在酶分析中亦具有抑制性(Kenniston, 2014)。對該融合瘤進行定序以確定重鏈及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 1及SEQ ID NO: 2；MAb1)。如圖3中所示，重組表現之MAb1保留融合瘤源性IgG之抑制活性。MAb1之重鏈可變域之核酸序列提供為SEQ ID NO: 33且MAb1之輕鏈可變域之核酸序列提供為SEQ ID NO: 34。

藉由與IMGT (imgt.org)中列出之人類生殖系序列進行比較，鑑定了鼠類可變域之最接近人類生殖系序列。為重鏈及輕鏈設計了框架修飾之嵌套組，以使鼠類序列向人類生殖系進化，成對表現，且測試對pkal之結合親和力，以及對pkal酶活性之抑制效力。變異體VH5_VL4 (MAb2)保持結合親和力及抑制效力，且經最佳人類化(SEQ ID NO: 3，SEQ ID NO: 4)。此外，重鏈CDR2中之NG結構傾向被成功修飾為NA以降低脫醯胺風險(SEQ ID NO: 5)。

MAb1輕鏈CDR序列係多樣化的，且構築了Fab噬菌體展示文庫。用pkal連續選擇及用prekal取消選擇被用於富集pkal選擇性純系。選擇性純系表現為IgG且測試pkal酶活性的抑制( 圖 4)。輕鏈CDR2變異純系VL4_213T.05 (MAb3-VL；SEQ ID NO: 6)被鑑定為具有高pkal抑制效力之選擇性變異體。移植至人類化VL4變異體(SEQ ID NO: 6, MAb3-VL)之此輕鏈CDR2當用人類化、傾向固定重鏈可變區(SEQ ID NO: 5，MAb3-VH)表現時保持選擇性及活性。當表現為全長人類IgG1 κ形式時，MAb3 VL及VH序列之人類化及最佳化構築體被命名為MAb4 (重鏈SEQ ID NO: 7，輕鏈SEQ ID NO: 8)。

為了進一步最佳化MAb4之治療潛力，藉由引入LS (對應於根據EU編號之M428L及N434S)或YTE突變(對應於根據EU編號之M252Y、S254T及T256E) (分別為SEQ ID 9及SEQ ID 10)來修飾重鏈恆定域。當用輕鏈SEQ ID NO: 8表現時，此等人類化IgG構築體分別命名為MAb4-LS及MAb4-YTE。實例 2 ：血漿激肽釋放素抗體之 活體外表徵

在生理相關功能分析中測試了MAb4及其Fc變異體MAb4-YTE及MAb4-LS與DX-2930 相比的 活體外效力，DX-2930係一種已知可抑制血漿激肽釋放素之市售單株抗體以及治療HAE之臨床研究對象。特定言之，觀測各抗體抑制其天然受質高分子量激肽原(HMWK)之pkal裂解的能力。在此等實驗中，將10或30 nM pkal與抑制性抗體一起在室溫下預培育1小時，接著添加600 nM HMWK且培育20分鐘，且藉由添加0.5 µM AEBSF淬滅反應。在商業ELISA套組(Enzo, Farmingdale, NY)中使用反應產物之1/100稀釋度量測自pKal催化之HMWK釋放之緩激肽(BK)的濃度。在pKal抑制分析中新產生之抗體與參考抗體DX-2930的比較展示於圖 5中。與DX-2930相比，Mab4及Mab4-YTE及Mab4-LS構築體顯示出更有效的pKal抑制及更陡峭的Hill斜率。在此情況下，MAb4及其Fc變異體為pkal裂解HMWK之有效抑制劑，且展現約2之Hill斜率(參見例如圖 5)，與MAb4及其Fc變異體可為pkal之別位抑制劑的假設一致。此外，將YTE或LS修飾引入至Mab4構築體中並未顯著影響構築體在抑制分析中之效力。

HMWK分析參數為生理上相關的，因為所用高分子量激肽原之濃度為在人體中循環之濃度，且所用血漿激肽釋放素之濃度在發作期間來自遺傳性血管性水腫(HAE)患者之血漿中估計的濃度範圍內。Mab4-YTE及DX-2930均顯示出對緩激肽產生之劑量依賴性抑制，表明血漿激肽釋放素活性降低，且Mab4-YTE展現比DX-2930更強的對血漿激肽釋放素活性及緩激肽釋放之抑制效力，如圖 5中所示。

亦測定抗體之IC ₉₀值以提供相對效力指數。在HAE中，預防HAE發作之治療相關抑制水準被認為是大約90%的血漿激肽釋放素抑制。此對應於稱為IC90之量測值，其為產生90%抑制作用之藥劑濃度。在HMWK功能分析中，如圖 5中所示，IC ₉₀值為產生90%激肽釋放素活性抑制之抗體濃度，且被認為是治療相關抑制水準。DX-2930之IC ₉₀值為300 nM，而MAb4及其Fc變異體之IC ₉₀值為30 nM。因此，此 活體外HMWK功能分析表明MAb4-YTE之效力為DX-2930之約10倍。此分析之結果與針對DX-2930觀測到的臨床功效一致，因為DX-2930之臨床試驗已表明，需要200-300 nM之DX-2930穩態血漿含量以最佳地降低HAE發作率且最大化無發作持續時間。

在37℃及pH 7.4或pH 6.0下，藉由SPR檢查先導pkal抗體之動力學特性及選擇性。MAb4-LS (SEQ ID NO: 9及8)及MAb4-YTE (SEQ ID NO: 10及8)對pkal展現低個位數奈莫耳親和力，相比於prekal具有顯著選擇性( 圖 6)。事實上，MAb4-LS及MAb4-YTE以及DX-2930對血漿激肽釋放素之親和力為前激肽釋放素之1000倍以上。( 圖 6) MAb4-YTE相對於人類血漿激肽釋放素之K _D在pH 7.4下為1.1 nM且在pH 6.0下為0.9 nM，而MAb4-LS之K _D在pH 7.4下為2.2 nM且在pH 6.0下為1.2 nM。此等抗體在與人類血漿激肽釋放素結合之靶標中未展現任何顯著pH依賴性，尤其在pH 6.0至pH 7.4之範圍內。相比之下，參考抗體DX-2930在pH 7.4下展現之K _D為18 nM，且在pH 6.0下為236 nM ( 圖 6)。因此，與參考抗體DX-2930相比，Mab-YTE及Mab4-LS抗體對血漿激肽釋放素之結合親和力更強(大於5倍，例如8-16倍)，與在功能性血漿激肽釋放素抑制分析中，Mab4-YTE之效力為DX-2930之大約10倍係一致的。此外，DX-2930抗體在相同條件下顯示出相當大的pH敏感性。例如，當在pH 6與pH 7.4下量測時，DX-2930抗體顯示K _D降低超過10倍。表 7示出了基於如上述在pH 7.4，37℃下之SPR結合的MAb4-YTE及DX-2930之K _a、K _d及K _D值。

表7
	K _a(1/Ms)	K _d(1/s)	K _D(nM)
MAb4-YTE	6.9×10 ⁴	7.3×10 ^-5	1.1
DX-2930	3.1×10 ⁴	5.6×10 ^-4	18

總之，圖 6中呈現之資料展示抗體Mab4-YTE或Mab4-LS具有以下特徵中之一或多者： (a) 在pH 6.0-7.4之間實質上與pH無關的K _D( 例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca ²⁺、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20之緩衝液中測定)； (b) 對於人類血漿激肽釋放素在0.1 nM與5 nM之間的K _D( 例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca ²⁺、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20，pH 6.0或7.4之緩衝液中測定)；及 (c) 對於人類血漿激肽釋放素在0.1 nM與5 nM之間的K _D，及對於人類前激肽釋放素在250 nM與2,000 nM之間的K _D(例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca ²⁺、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20，pH 6.0或7.4之緩衝液中測定。

亦評估具有Fc突變之血漿激肽釋放素抗體(MAb4-LS及MAb4-YTE)的hFcRn結合。製備了MAb4-LS及MAb4-YTE之兩個稀釋系列：2000 nM至31.25 nM MAb4-LS及MAb4-YTE，pH 6.0及2000 nM至500 nM，pH 7.4，在含0.05% P20 (聚山梨醇酯20)之PBS 中。IgG1係用作對照抗體。使用Biacore T200經由SPR評估抗體樣品之FcRn結合。Biacore晶片為與人類FcRn偶聯之CM5 (Sino Biological，目錄號CT009-H08H)。使用之運行緩衝液為PBS 0.05% P20及pH 6或pH 7.4。pH 6.0下之hFcRn結合展示於表 8中。MAb4-LS及MAb4-YTE相比於未修飾之MAb4 (3.10×10 ²及2.77×10 ²K _d，相比於2.29×10 ¹K _d)以及相比於DX-2930 (1.67×10 ¹K _d)均具有增加的pH依賴性hFcRn結合，因為在pH 6.0下之解離速率降低(慢10倍)。在pH 7.4下，無證據證明所有三種抗體均結合，表明MAb4、MAb4-LS及MAb4-YTE之FcRn結合為pH依賴性的[資料未示出]。因此，不希望受理論束縛，與親本MAb4抗體相比，MAb4-LS及MAb4-YTE抗體均可更好地結合內體(pH 6)中之FcRn且更弱地結合血液(pH 7.4)中之FcRn，使得抗體經由IgG-FcRn再循環途徑再循環回血液中，從而使MAb4-LS及MAb4-YTE之循環半衰期為MAb4及DX-2930之約3至4倍(參見實例3中之表10)。

表8. pH 6.0 下之hFcRn 結合
	K _a(1/Ms)	K _d(1/s)	K _D(M)
MAb4	2.7×10 ⁵	2.29×10 ^-1	8.48×10 ^-7
MAb4-LS	2.96×10 ⁵	3.10×10 ^-2	1.05×10 ^-7
MAb4-YTE	1.84×10 ⁵	2.77×10 ^-2	1.50×10 ^-7
DX-2930	8.66×10 ⁵	1.67×10 ^-1	1.93×10 ^-7

亦顯示MAb4-YTE不僅可有效抑制人類，且亦可有效抑制食蟹猴、大鼠及兔血漿激肽釋放素活性，如使用pKal之小螢光受質Pro-Phe-Arg-AMC (PFR-AMC)所評估。MAb4-YTE抗體以如圖 7之圖表中所示之指定濃度與來自各物種之1 nM pKal一起在37℃下在三個重複孔中培育1小時。添加10 µM螢光報導受質PFR-AMC，且在螢光盤讀取器中以動力學模式量測pKal活性60分鐘。對各反應孔之前40分鐘受質釋放資料進行線性回歸分析，以獲得各抑制劑濃度之初始反應速率(RFU/min)。對初始反應速率進行擬合(4參數擬合)以獲得IC ₅₀值，且標準化以獲得擬合曲線之上限及下限內之酶活性百分比。IC ₅₀資料展示於表 9中。針對MAb4-YTE濃度(以nM計)作圖之pKal活性水準展示於圖 7中。此資料表明，MAb4-YTE不僅為人類之有效抑制劑，且亦為猴、兔及大鼠pKal之有效抑制劑。

表9. MAb4-YTE 之IC ₅₀ 值
	人類	猴	兔	大鼠
IC ₅₀(pM)	290	223	352	167

實例 3 ：血漿激肽釋放素抗體之 活體內藥物動力學表徵

MAb4 (SEQ ID NO: 7及8)、MAb4-LS (SEQ ID NO: 9及8)及MAb4-YTE (SEQ ID NO: 10及8)與另一种血漿激肽釋放素抗體DX-2930一起在食蟹猴藥物動力學研究中進行進一步表徵。此等抗體之此等研究係同時進行的，但為獨立研究，而非面對面的直接比較。食蟹猴，LM-初始或初始，3.0-4.0 kg，雄性，N=18係購自Hainan Jingang Biotech Co. LTD。抗體係在20 mM組胺酸、150 mM NaCl、0.01% Tween 80，pH 6.5中製備。在此等研究中，所有抗體均經由IV輸注在10分鐘內以5 mg/kg向雄性食蟹猴(N=3)投與。在各時間點將血液自頭靜脈及隱靜脈收集至預冷的檸檬酸管中。每週取樣一次，持續42天(DX-2930及MAb4)或84天(MAb4-YTE及MAb4-LS)。將血樣置於濕冰上且在4℃下離心，以在樣品採集後15分鐘內獲得血漿。將血漿樣品儲存在大約-70℃下。使用塗有抗人類抗體作為捕獲劑及人類IgG重鏈及輕鏈猴吸附抗體作為偵測試劑(Southern Biotech，目錄號：2049-01及Bethyl，目錄號A80-319P)之盤經由ELISA測定血漿樣品中各抗血漿激肽釋放素抗體的存在。使用SpectraMax M2讀取ELISA盤。

MAb4及DX-2930 (MAb4半衰期如圖 8中所示，DX-2930半衰期如圖 9中所示)之終末半衰期為10-12天，其與USFDA審查文件及出版物中關於非人類靈長類動物中之DX-2930的報導一致。相比之下，MAb4-LS展現約23天之終末半衰期且MAb4-YTE展現約34天之終末半衰期(參見圖 8)。MAb4-YTE之終末半衰期為針對DX-2930及MAb4觀測到的終末半衰期之約3至4倍。此等結果證明具有延長半衰期之MAb4抗體的優越性。此結果令人驚訝，因為發現將LS或YTE突變引入至另一血漿激肽釋放素抗體中不會增加半衰期(資料未示出)。此外，新產生的抗體之抑制效力增加及半衰期增加表明與DX-2930相比，有效量的MAb4-YTE或MAb4-LS可在活體內維持更長時間。圖 9顯示MAb4-YTE (中圖)及DX-2930 (上圖)與各抗體之pKal IC90相比的PK半衰期。(上圖及中圖中之資料在下圖中相互疊加以顯示MAb4-YTE及DX-2930兩者之血漿含量)。截至大約第10天，DX-2930之血漿含量低於預測的最低治療濃度(IC90)，而MAb4-YTE仍高於預測之最低治療濃度(IC90)，持續＞84天。表 10提供來自食蟹猴研究之PK資料的總結。不希望受理論束縛，實例2中所述之Fc修飾抗體之pH依賴性FcRn結合增加使得食蟹猴中之清除較慢且半衰期延長。

表10. 食蟹猴PK
	V ss (mL/kg) ( 平均值±SD)	CI (mL/ 天/kg) ( 平均值±SD)	T ½ ( 天) ( 平均值±SD)
MAb4	72.2 ± 11.1	4.85 ± 0.87	10.9 ± 0.4
MAb4-LS	114.4 ± 9.6	3.80 ± 0.13	23.2 ± 3.5
MAb4-YTE	66.8 ± 6.1	1.44 ± 0.33	33.6 ± 8.3
DX-2930	64.9 ± 15.5	5.09 ± 1.18	10.5 ± 1.6

對來自非人類靈長類動物研究之 活體外效力資料及半衰期結果的評估表明抗體之潛在效力持續時間。特定言之，在食蟹猴研究之各時間點量測之抗體血漿濃度可用於預測該時間點之血漿激肽釋放素抑制的預期水準，其基於在 活體外效力分析中針對該抗體濃度觀測到的血漿激肽釋放素抑制。

圖 10提供基於來自食蟹猴PK研究之血漿濃度及在 活體外功能分析中確定之pKal抑制的預測模型，該模型基於HMWK分析資料及 活體內PK資料與Mab4-YTE及DX-2930比較 活體內pKal抑制百分比。在食蟹猴研究中，DX-2930血漿含量截至大約第10天降至 活體外效力分析所預測之最低治療濃度或IC90以下，且截至第20天達到 活體外效力分析預測將產生大約50%血漿激肽釋放素抑制之含量。相反，在食蟹猴研究中，MAb4-YTE血漿含量保持高於 活體外效力分析所預測之IC90達84天，其為整個實驗持續時間。

此等臨床前資料表明，在相同劑量下，MAb4-YTE在人體中之半衰期為數月，且因此作用持續時間比DX-2930顯著更長。此可能使較低劑量之MAb4-YTE將具有比DX-2930更長的作用持續時間。因此，藉由長時間抑制血漿激肽釋放素之病理活性，MAb4-YTE可成為HAE患者之有效預防性療法。此外，抗體可不經常給藥，同時保持預防HAE發作所必需的治療有效血漿水準。因此，諸如MAb4-YTE或MAb4-LS之抗體可不頻繁地投與，例如每三個月，或甚至更長時間間隔。與目前可用的HAE療法(諸如DX-2930)相比，此將為一個顯著優勢。因此，MAb4-YTE可能組合不頻繁給藥、較低劑量及長期抑制HAE發作之優點。實例 4. 血漿激肽釋放素抗體之脫靶結合的 活體外表徵

進行膜蛋白質體陣列分析以鑑定MAb4之任何非特異性結合。對於MAb4未觀測到脫靶結合(資料未示出)。

此外，測試抗體以確定其是否含有效應功能。發現抗體不具有效應功能(資料未示出)。

亦藉由評估抗體是否與無關的絲胺酸蛋白酶結合來確定抗體之特異性。針對一組絲胺酸蛋白酶(約20個)篩選抗體且未觀測到顯著交叉反應性結合(資料未示出)。

開發且進行胰蛋白酶抑制分析以確定MAb4是否展現任何交叉反應性。將0.25 nM胰蛋白酶、人類胰酶(目錄號16-19-032000，Athens Research and Technology Inc)及開始於1 µM之MAb4-YTE稀釋系列與PFR-AMC (螢光受質，Bachem，目錄號4004023)一起在緩衝液中培育2小時。每5分鐘量測一次螢光強度。在開始於1 µM之稀釋系列中，甲磺酸加貝酯用作陽性對照。該分析一式兩份地進行。結果提供於圖 11及表 11中。MAb4-YTE不抑制胰蛋白酶活性且無法計算IC50。相比之下，抗體DX-2930以IC50 (243 nM至376 nM)抑制胰蛋白酶活性，該IC50在DX-2930抑制血漿激肽釋放素功能活性之效力範圍內(約300 nM)。因此，相對於DX-2930，Mab4-YTE表現出更好的蛋白酶選擇性概況。

表11
	化合物IC50 (M)
	資料1	資料2
甲磺酸加貝酯(GM)	2.13E-09	2.33E-09
DX-2930	2.43E-07	3.76E-07
MAb4-YTE	NA	NA

開發且進行額外絲胺酸蛋白酶抑制分析以確定MAb4是否展現任何交叉反應性。MAb4-YTE及DX-2930在10劑量分析中一式兩份地進行測試，針對16種蛋白酶自1 µM開始進行3倍連續稀釋。對照化合物在10劑量分析中進行測試，自10 µM 或100 uM (tPA、蛋白裂解酶2、激肽釋放素5、激肽釋放素2、激肽釋放素1、顆粒酶B及APC)開始進行3倍連續稀釋。蛋白酶活性被監測為來自螢光標記肽受質之螢光信號增加的時間過程量測，且分析信號斜率之初始線性部分(信號/分鐘)。在存在PBS緩衝液之情況下，相對於媒劑對照計算抗體滴定之%酶活性作為100%活性。MAb4-YTE及DX-2930對蛋白酶抑制之IC50值總結於下表 12中。

表12
	化合物IC50 (M)
MAb4-YTE	DX-2930	對照化合物 IC50 (M)	對照化合物標識
	目標：	複本1	複本2	複本1	複本2
1	活化蛋白C					6.48E-08	甲磺酸加貝酯(GM)
2	組織蛋白酶G					4.09E-06	胰凝乳蛋白酶抑素
3	因子VIIa					1.41E-07	PCI 27483
4	因子XIa					1.79E-07	甲磺酸加貝酯(GM)
5	因子XIIa					2.32E-08	甲磺酸萘莫司他
6	顆粒酶B					1.78E-07	IETD-CHO
7	絲胺酸穿膜蛋白酶			*＞1.00E-06	*＞1.00E-06	5.10E-08	甲磺酸加貝酯
8	激肽釋放素1					2.99E-06	亮肽素
9	激肽釋放素2					1.39E-07	甲磺酸加貝酯(GM)
10	激肽釋放素5					8.73E-06	甲磺酸加貝酯(GM)
11	激肽釋放素12					3.25E-08	甲磺酸加貝酯(GM)
12	蛋白裂解酶2					2.01E-07	甲磺酸加貝酯(GM)
13	纖溶酶					2.53E-07	甲磺酸加貝酯(GM)
14	tPA					1.06E-06	甲磺酸加貝酯(GM)
15	凝血酶a			*＞1.00E-06	*＞1.00E-06	8.37E-07	甲磺酸加貝酯(GM)
16	尿激酶					1.65E-08	甲磺酸加貝酯(GM)

空單元格表示無抑制或化合物活性無法擬合至IC50曲線。高於1 µM之IC50值係根據可用的最佳曲線擬合估計的。

無法計算MAb4-YTE針對此分析中測試之任何絲胺酸蛋白酶的IC50。估計DX-2930針對絲胺酸穿膜蛋白酶及凝血酶A之IC50大於1 µM (1.00E-06)。與DX-2930相比，絲胺酸蛋白酶抑制概況之差異與對Mab4-YTE更高的蛋白酶選擇性一致。

總之，MAb4-YTE不抑制胰蛋白酶活性或任何測試之絲胺酸蛋白酶，因此不展現脫靶抑制活性。相比之下，DX-2930血漿激肽釋放素抗體展示顯著胰蛋白酶抑制活性以及對於絲胺酸穿膜蛋白酶及凝血酶A之脫靶抑制活性，證明MAb4-YTE由於缺乏脫靶活性而對其靶標具有特異性及選擇性的優越特性。實例 5 ：血漿激肽釋放素抗體之表位表徵 競爭結合分析

基於SPR之競爭實驗(Biosensor Tools, Salt Lake City, UT)表明MAb4結合至不同於DX-2930之表位( 圖 12)，DX-2930已被證明是活性位點結合、競爭性抑制劑(Kenniston, 2014)。使用與10 mM NaAc pH 5.0偶聯之標準NHS/ECD，使DX-2930、MAb4-LS及MAb4-YTE與Xantec 30M感測器晶片胺偶聯。對於捕獲及堆疊研究，運行緩衝液含有含1.3 mM Ca++之HBS與1 mg/ml BSA及0.02% p20，pH 7.4。人類血漿激肽釋放素被捕獲至不同抗體表面上(時間0-180秒，1 µM)，且接著在各表面結合複合物上以1 µM測試各mAb。

當針對自身測試各抗體時未觀測到結合( 圖 12)。然而，MAb4-LS及MAb4-YTE均與由DX-2930抗體表面捕獲之激肽釋放素結合( 圖 12)。此外，DX-2930與由MAb4-LS及MAb4-YTE抗體捕獲之激肽釋放素結合( 圖 12)。此等結果表明MAb4-LS及MAb4-YTE結合至與DX-2930不同的表位。 pKal- 抗體複合物之交聯及質量指紋分析

首先，經由肽質量指紋圖譜分析對人類pKal進行表徵。對人類血漿激肽釋放素蛋白進行胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、Asp-N、彈性蛋白酶及嗜熱菌蛋白酶蛋白水解，然後進行nLC-QExactive+ Orbitrap MS/MS分析。使用與QExactive+質譜儀(Thermo Scientific)聯機之nLC Ultimate 3000-RSLC系統。7 μM人類pKal與1 μL DSS一起培育d0/d12 (2mg/mL；DMF)，隨後在室溫下培育180分鐘。在不添加交聯試劑之情況下製備對照樣品。將樣品在室溫下培育180分鐘。培育後，藉由添加1 μL碳酸氫銨(20 mM最終濃度)終止交聯反應，且在室溫下培育60分鐘。然後，在8M尿素再懸浮(10μL)之前，使用speedvac乾燥兩個管。混合後，將DTT (1 μL，500 mM)添加至兩個管中。然後將混合物在37℃下培育60分鐘。培育後，將碘乙醯胺(1 μL，1M)添加至各管中，隨後在室溫下在暗室中再培育60分鐘。培育後，向兩個管中添加100 μL蛋白水解緩衝液。胰蛋白酶緩衝液含有50mM Ambic pH 8.5，5%乙腈；胰凝乳蛋白酶緩衝液含有Tris HCl 100mM、CaCl2 10mM pH 7.8；ASP-N緩衝液含有磷酸鹽緩衝液50mM pH 7.8；彈性蛋白酶緩衝液含有Tris HCl 50mM pH 8.0，且嗜熱菌蛋白酶緩衝液含有Tris HCl 50mM、CaCl2 0.5mM pH 9.0。 胰蛋白酶水解

將100 μL還原/烷基化人類pKal與1 μL胰蛋白酶(Promega)以1/100比率混合。將蛋白水解混合物在37℃下培育隔夜。 胰凝乳蛋白酶蛋白水解

將100 μL還原/烷基化人類pKal與0.5 μL胰凝乳蛋白酶(Promega)以1/200比率混合。將蛋白水解混合物在25℃下培育隔夜。 ASP-N 蛋白水解

將100 μL還原/烷基化人類pKal與0.5 μL ASP-N (Promega)以1/200比率混合。將蛋白水解混合物在37℃下培育隔夜。 彈性蛋白酶蛋白水解

將100 μL還原/烷基化人類pKal與1 μL彈性蛋白酶(Promega)以1/100比率混合。將蛋白水解混合物在37℃下培育隔夜。 嗜熱菌蛋白酶蛋白水解

將100 μL還原/烷基化人類pKal與2 μL嗜熱菌蛋白酶(Promega)以1/50比率混合。將蛋白水解混合物在70℃下培育隔夜。

消化後，將1%最終甲酸添加至溶液中。蛋白水解後，將蛋白水解生成之1 μL肽溶液加載至奈米液相層析系統(Ultimate 3000-RSLC)上。根據製造商說明書進行Quadrupole-Orbitrap MS分析。基於蛋白水解MS結果獲得胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、ASP-N、彈性蛋白酶及嗜熱菌蛋白酶肽之重疊圖譜，覆蓋99.05%之人類pKal序列。

接下來，在與氘化交聯劑一起培育後，如上所述地測定人類pKal/MAb4-YTE及人類pKal/DX-2930複合物之表位。交聯肽富集後，藉由高解析度質譜(nLC-Quadrupole-Orbitrap MS)分析樣品，且使用XQuest及Stavrox軟體分析生成之資料。

將20 μL製備之人類pKal/MAb4-YTE (1.4 µM及0.8 µM)及人類pKal/DX-2930 (1.4 µM及0.4 µM)混合物與2 µL DSS混合d0/d12 (2mg/mL；DMF)且在室溫下培育180分鐘。培育後，藉由添加1 μL碳酸氫銨(20 mM最終濃度)終止反應，隨後在室溫下培育1小時。然後，在H2O 8M尿素懸浮液(20μL)之前使用speedvac乾燥溶液。混合後，將2 μL DTT (500 mM)添加至溶液中。然後將混合物在37℃下培育1小時。培育後，添加2 μL碘乙醯胺(1M)，隨後在室溫下在暗室中培育1小時。培育後，添加80 μL蛋白水解緩衝液。胰蛋白酶緩衝液含有50mM Ambic pH 8.5，5%乙腈；胰凝乳蛋白酶緩衝液含有Tris HCl 100mM、CaCl2 10mM pH 7.8；ASP-N緩衝液含有磷酸鹽緩衝液50MM pH 7.8；彈性蛋白酶緩衝液含有Tris HCl 50mM pH 8.0，且嗜熱菌蛋白酶緩衝液含有Tris HCl 50mM、CaCl2 0.5mM pH 9.0。使用針對pKal蛋白在上文所述之條件進行胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、ASP-N、彈性蛋白酶及嗜熱菌蛋白酶之蛋白水解。使用Xquest 2.0版及Stavrox 3.6軟體分析交聯肽。

使用化學交聯、高質量MALDI質譜及nLC-Orbitrap質譜表徵人類-PKAL與MAb4-YTE之間的分子界面。在對含氘化d0d12之蛋白複合物人類-PKAL/MAb4-YTE進行胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、ASP-N、彈性蛋白酶及嗜熱菌蛋白酶蛋白水解後，nLC-orbitrap MS/MS分析偵測到人類-PKAL與MAb4-YTE之間的十個交聯肽。

交聯資料分析表明，MAB4-YTE在人類pKal上之相互作用包括以下胺基酸：550、551、585、591、597、617、625。圖 13提供人類pKal及MAB4-YTE之肽相互作用圖。人類pKal序列顯示於底部，且Mab4-YTE之交聯表位指示於殘基550、551、585、597、617及625處。圖 14A-J顯示人類pKal上之抗體表位位點的條帶/表面及條帶模型。MAb4-YTE抗體表位位點以PDB結構6O1G為模型，該結構使用UNIPROT P03952作為參考序列。模型中以較深顏色指示之胺基酸對應於人類pKal序列之殘基550-551 (KR (SEQ ID NO:37))、殘基585-597 (KHNGMWRLVGITS (SEQ ID NO: 38))及殘基617-625 (YMDWILEKT (SEQ ID NO: 39)。

交聯資料分析表明，DX-2930在人類pKal上之相互作用包括以下胺基酸：434、446、475、482、555、558、560。圖 15提供人類pKal及DX-2930之肽相互作用圖。人類pKal序列顯示於底部，且DX-2930之交聯表位指示於殘基434、446、475、482、555、558及560處。圖 16A-J顯示人類pKal上之抗體表位位點的條帶/表面及條帶模型。DX-2930抗體表位位點以PDB結構6O1G為模型。模型中以較深顏色指示之胺基酸對應於人類pKal序列之殘基434-446 (HCFDGLPLQDVWR(SEQ ID NO: 40))、殘基475-482 (YKVSEGNH (SEQ ID NO: 41))及殘基555-560 (YKITQR (SEQ ID NO: 42))。圖 17提供顯示與抗體MAb4-YTE相比，藉由抗體DX-2930交聯之人類pKal殘基的圖譜

交聯質譜資料證實，與DX-2930相比，MAB4-YTE結合至人類pKal上之不同表位。不希望受理論束縛，與DX-2930相比，Mab4-YTE在血漿激肽釋放素上之不同結合位點可解釋改善的蛋白酶選擇性概況、血漿激肽釋放素結合之pH敏感性缺乏及Mab4-YTE與DX-2930相比整體優越的概況。 以引用方式併入

出於所有目的，本文引用之各專利及科學文獻之全部揭示內容均以引用方式併入本文中。 等效物

本發明實施例之範疇不受本文所述之特定實施例限制。實際上，根據前述描述及附圖，除了本文所述之彼等修改以外的各種修改對於熟習此項技術者將變得顯而易見。此類修改旨在落入實施例及任何隨附申請專利範圍之範疇內。

在不背離本發明之精神或本質特徵之情況下，本發明可以其他特定形式體現。因此，前述實施例在所有方面均被視為說明性的，而非限制本文所述之本發明。因此，本發明之範疇由隨附申請專利範圍而非由前述描述指示，且所有落入申請專利範圍之等同意義及範圍內的變化均旨在包含於其中。序列

SEQ ID NO:	描述	序列
1	MAb1-VH	QVQLQQSGAELVKPGASVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGEGLEWIGQIYPGDDDTNYNGKFKGKATLTVDKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCAGSLMVTTGAPFDYWGQGTTLTVSS
2	MAb1-VL	DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQDVGIAVAWYQQKPGQSPKFLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSGTDFTLTIRNVQSEDLSDYFCQQYRSYPLTFGSGTKLELK
3	MAb2-VH	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYAFSSYWMNWVRQAPGQGLEWIGQIYPGDDDTNYNGKFQGRVTITVDKSTTTAYMELSSLRSEDTAVYFCAGSLMVTTGAPFDYWGQGTTVTVSS
4	MAb2-VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVGIAVAWYQQKPGKAPKFLIYWASTRHTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQQYRSYPLTFGQGTKLEIK
5	MAb3-VH	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYAFSSYWMNWVRQAPGQGLEWIGQIYPGDDDTNYNAKFQGRVTITVDKSTTTAYMELSSLRSEDTAVYFCAGSLMVTTGAPFDYWGQGTTVTVSS
6	MAb3-VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVGIAVAWYQQKPGKAPKFLIYYASHRGWGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQQYRSYPLTFGQGTKLEIK
7	MAb4重鏈IgG1形式(恆定域以粗體顯示)	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYAFSSYWMNWVRQAPGQGLEWIGQIYPGDDDTNYNAKFQGRVTITVDKSTTTAYMELSSLRSEDTAVYFCAGSLMVTTGAPFDYWGQGTTVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
8	MAb4輕鏈人類κ形式(恆定域以粗體顯示)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVGIAVAWYQQKPGKAPKFLIYYASHRGWGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQQYRSYPLTFGQGTKLEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
9	具有M428L及N434S半衰期延長取代之MAb4重鏈IgG1形式(恆定域以粗體顯示)	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYAFSSYWMNWVRQAPGQGLEWIGQIYPGDDDTNYNAKFQGRVTITVDKSTTTAYMELSSLRSEDTAVYFCAGSLMVTTGAPFDYWGQGTTVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPG
10	具有M252Y、S254T及T256E半衰期延長取代之MAb4-重鏈IgG1形式(恆定域以粗體顯示)	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYAFSSYWMNWVRQAPGQGLEWIGQIYPGDDDTNYNAKFQGRVTITVDKSTTTAYMELSSLRSEDTAVYFCAGSLMVTTGAPFDYWGQGTTVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
11	LCDR1 MAb1、2、3、4 (Kabat、AbM)	KASQDVGIAVA
12	LCDR2 MAb 1、2 (Kabat、AbM)	WASTRHT
13	LCDR3 MAb 1、2、3、4 (Kabat)	QQYRSYPLT
14	HCDR1 MAb 1、2、3、4 (Kabat)	SYWMN
15	HCDR2 MAb 1 (Kabat)	QIYPGDDDTNYNGKFKG
16	HCDR3 MAb 1、2、3、4 (Kabat)	SLMVTTGAPFDY
17	HCDR2 MAb 2 (Kabat)	QIYPGDDDTNYNGKFQG
18	LCDR2 MAb 3、4 (Kabat、AbM)	YASHRGW
19	HCDR2 Mab 3、4 (Kabat)	QIYPGDDDTNYNAKFQG
20	LCDR1 MAb1、2、3、4 (Chothia)	SQDVGIA
21	LCDR2 MAb 1、2 (Chothia、IMGT)	WAS
22	LCDR3 MAb 1、2、3、4 (Chothia)	YRSYPLT
23	HCDR1 MAb 1、2、3、4 (Chothia)	GYAFSSY
24	HCDR2 MAb 1、2、3、4 (Chothia)	YPGDDD
25	HCDR3 MAb 1、2、3、4 (Chothia、AbM)	SLMVTTGAPFDY
26	LCDR2 MAb 3、4 (Chothia、IMGT)	YAS
27	LCDR1 MAb 1、2、3、4 (IMGT)	QDVGIA
28	LCDR3 MAb 1、2、3、4 (IMGT、AbM)	QQYRSYPLT
29	HCDR1 MAb 1、2、3、4 (IMGT)	GYAFSSYW
30	HCDR2 MAb 1、2、3、4 (IMGT)	IYPGDDDT
31	HCDR 3 MAb 1、2、3、4 (IMGT)	AGSLMVTTGAPFDY
32	人類血漿激肽釋放素序列(Uniprot P03952)	MILFKQATYFISLFATVSCGCLTQLYENAFFRGGDVASMYTPNAQYCQMRCTFHPRCLLFSFLPASSINDMEKRFGCFLKDSVTGTLPKVHRTGAVSGHSLKQCGHQISACHRDIYKGVDMRGVNFNVSKVSSVEECQKRCTNNIRCQFFSYATQTFHKAEYRNNCLLKYSPGGTPTAIKVLSNVESGFSLKPCALSEIGCHMNIFQHLAFSDVDVARVLTPDAFVCRTICTYHPNCLFFTFYTNVWKIESQRNVCLLKTSESGTPSSSTPQENTISGYSLLTCKRTLPEPCHSKIYPGVDFGGEELNVTFVKGVNVCQETCTKMIRCQFFTYSLLPEDCKEEKCKCFLRLSMDGSPTRIAYGTQGSSGYSLRLCNTGDNSVCTTKTSTRIVGGTNSSWGEWPWQVSLQVKLTAQRHLCGGSLIGHQWVLTAAHCFDGLPLQDVWRIYSGILNLSDITKDTPFSQIKEIIIHQNYKVSEGNHDIALIKLQAPLNYTEFQKPICLPSKGDTSTIYTNCWVTGWGFSKEKGEIQNILQKVNIPLVTNEECQKRYQDYKITQRMVCAGYKEGGKDACKGDSGGPLVCKHNGMWRLVGITSWGEGCARREQPGVYTKVAEYMDWILEKTQSSDGKAQMQSPA
33	MAb1之重鏈可變區核酸序列	CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGATTTCCTGCAAAGCTTCTGGCTACGCATTCAGTAGCTACTGGATGAACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGAGAGGGTCTTGAGTGGATTGGACAGATTTATCCTGGAGATGATGATACTAACTACAACGGAAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGTAGACAAATCCTCCACCACAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACCTCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAGGATCTTTGATGGTTACGACGGGGGCCCCCTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA
34	MAb1之輕鏈可變區核酸序列	GACATTGTGATGACCCAGTCTCACAAATTCATGTCCACATCAGTAGGAGACAGGGTCAGCATCACCTGCAAGGCCAGTCAGGATGTGGGTATTGCTGTTGCCTGGTATCAACAGAAACCAGGGCAATCTCCTAAATTTCTGATTTACTGGGCATCCACCCGGCACACTGGAGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATTAGGAATGTGCAGTCTGAAGACTTGTCAGATTATTTCTGTCAGCAATATAGGAGCTATCCTCTCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAACTAAAA
35	連接子序列	GGGGS
36	連接子序列	GGGGA
37	MAb4-YTE表位1	KR
38	MAb4-YTE表位2	KHNGMWRLVGITS
39	MAb4-YTE表位3	YMDWILEKT
40	DX-2930表位1	HCFDGLPLQDVWR
41	DX-2930表位2	YKVSEGNH
42	DX-2930表位3	YKITQR
43	HCDR1 MAb 1、2、3、4、5 (AbM)	GYAFSSYWMN
44	HCDR2 MAb 1、2、3、4、5 (AbM)	QIYPGDDDTN
45	食蟹獼猴(Macaca fascicularis) (Crab-eating macaque，亦稱為Cynomolgus monkey)血漿激肽釋放素序列(Uniprot A0A2K5VTJ9-1)	MILFKQATYFISLFATVSCGCLTQLYENAFFRGGDVASMYTPTAQHCQMMCTFHPRCLLFSFLPASSINDMEKRFGCFLKDSVTGTLPKVRRAGAISGHSLKQCGHQISACHRDIYKGIDMRGVNFNVSKVSSVEECQKRCTNNIRCQFFSYATQTFHNAEYRNTCLLKHSPGGTPTTIKVLNNVESGFSLKPCALSEIGCHMNIFQHLAFSDVDVARVLAPDAFVCRTICTYHPSCLFFTFYTNAWKIESQRNVCFLKTSESGTPSSSTPQENTTSGYSLLTCKRTLPEPCHSKIYPGVDFGGEELNVTFVKGVNVCQETCTKMIRCQFFTYSLLPEDCKEEKCKCFLRLSSDGSPTRITYGTQGSSGYSLRLCNTGDSSVCTTKTSSRIVGGTNSSWGEWPWQVSLQVKLMAQRHLCGGSLIGHQWVLTAAHCFDGLPLPDVWRIYSGILNLSDITKETPFSQIKEIIIHQNYRISEGNHDIALIKLQAPLNYTEFQKPICLPSKGDTNTIYTNCWVTGWGFSKEKGEIQDILQKVNIPLVTNEECQKRYQDYKITQRMVCAGYKEGGKDACKGDSGGPLACKHNGMWRLVGITSWGEGCARREQPGVYTKVAEYMDWILEKTQSSDGNARMQAPA
46	兔血漿激肽釋放素序列(Uniprot G1T127)	MIPFRQAAYFVCLFTTVSCGCLTQLYKNAFFRGGDVTSMYSPNAQHCQMMCTFHPRCLFFSFLPASSTNDAQKRFGCFLKDSVTGTLPRVHQTNAISGHSLKQCGHQINACHRATYEGIDMRGTNFNISKVQSVEECQKQCTDNIHCQFFTYATQTFYNAEHLNNCILKKSATGTPSSIKLLENVVSGFSLKPCALSESGCHMNLFQHLAFSDVDVARVLTPDAFVCRTICTYHSNCLFFTFYTNEWDTESQRNACFLKTSESGTPSFPTPQENTISGYSLLTCKKTLPEPCHFKIYSGVDFGGEELNVTFVKGVTLCQETCTKTIRCQFFTYSLLPEDCKGEKCRCSLRLSLDGSPTSITHGTQKSSGYSLRLCKTENGSVCTTKINARIVGGSNSSRGEWPWQVSLQVKLAAQSHVCGGSIIGHQWVLTAAHCFDGLPFPEIWRIYGGILYLSEVTKETAFSQIKEIIIHPKYKISETGHDIALIQLQAPLNDTDIQKPICLPSKDDTNAIYTNCWVTGWGFTKEKGEIQNILQKANIPLVTNEECQKSYRDHAITKQMVCAGYKEGGKDACKGDSGGPLVCKHNNIWLLVGITSWGEGCARREQPGVYTKVAEYVDWILQKMQEKD
47	大鼠血漿激肽釋放素序列(Uniprot P14272)	MILFKQVGYFVSLFATVSCGCLSQLYANTFFRGGDLAAIYTPDAQHCQKMCTFHPRCLLFSFLAVSPTKETDKRFGCFMKESITGTLPRIHRTGAISGHSLKQCGHQLSACHQDIYEGLDMRGSNFNISKTDSIEECQKLCTNNIHCQFFTYATKAFHRPEYRKSCLLKRSSSGTPTSIKPVDNLVSGFSLKSCALSEIGCPMDIFQHFAFADLNVSQVVTPDAFVCRTVCTFHPNCLFFTFYTNEWETESQRNVCFLKTSKSGRPSPPIIQENAVSGYSLFTCRKARPEPCHFKIYSGVAFEGEELNATFVQGADACQETCTKTIRCQFFTYSLLPQDCKAEGCKCSLRLSTDGSPTRITYEAQGSSGYSLRLCKVVESSDCTTKINARIVGGTNSSLGEWPWQVSLQVKLVSQNHMCGGSIIGRQWILTAAHCFDGIPYPDVWRIYGGILNLSEITNKTPFSSIKELIIHQKYKMSEGSYDIALIKLQTPLNYTEFQKPICLPSKADTNTIYTNCWVTGWGYTKERGETQNILQKATIPLVPNEECQKKYRDYVITKQMICAGYKEGGIDACKGDSGGPLVCKHSGRWQLVGITSWGEGCARKEQPGVYTKVAEYIDWILEKIQSSKERALETSPA
48	MAb4-YTE重鏈核苷酸序列	CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCTCCTCCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCTCCGGCTATGCATTCAGTAGCTACTGGATGAACTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGACAGGGTCTTGAGTGGATTGGACAGATTTATCCTGGAGATGACGATACTAACTACAATGCCAAGTTCCAGGGGAGGGTCACCATCACCGTGGACAAATCCACAACTACCGCCTACATGGAACTCAGCAGCCTACGCTCTGAGGACACAGCCGTCTATTTCTGTGCTGGCTCCCTGATGGTTACTACCGGCGCCCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCTTCTAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCTACATCACCCGGGAACCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGAGAGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATTCCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCCGGG
49	MAb4輕鏈核苷酸序列	GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAAAGCAAGTCAGGACGTGGGAATCGCTGTCGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGTTCCTGATCTATTACGCATCCCACCGCGGATGGGGCGTGCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTATTTCTGTCAACAGTACCGGTCTTATCCCCTGACCTTTGGCCAAGGGACCAAGCTGGAAATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGCTTAAGTCCGGAACTGCTAGCGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGAAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT

圖 1為顯示基於相對光單位(RLU)之各種融合瘤細胞株對人類血漿激肽釋放素之選擇性的條形圖。圖 2為顯示各種抗體對人類血漿激肽釋放素之抑制活性的圖。圖 3提供顯示各種抗體對人類血漿激肽釋放素之抑制活性的圖，其中pKal之濃度為1 nM (上圖)及10 nM (上圖)。圖 4提供顯示各種抗體對人類血漿激肽釋放素之抑制活性的圖，其中pKal之濃度為1 nM。圖 5提供顯示MAb4-YTE在 活體外抑制緩激肽產生方面比DX-2930更有效的圖。圖 6提供比較DX-2930、MAb4-YTE及MAb4-LS在pH 7.4及pH 6.0下對pKal (圖之上列)及preKal (圖之下列)之親和力的表面電漿子共振(SPR)結合資料圖。圖 7為顯示在如實例2中所述之跨物種pKal結合分析中針對MAb4-YTE濃度繪製血漿激肽釋放素(pKal)活性的圖。如圖所示，MAb4-YTE不僅為人類pKal之有效抑制劑，且亦為猴、大鼠及兔pKal之有效抑制劑。圖 8提供顯示MAb4、MAb4-LS及MAb4-YTE在食蟹猴中隨時間之濃度的藥物動力學資料圖。圖 9提供顯示MAb4-YTE在食蟹猴 活體內與DX-2930相比具有顯著延長之血漿半衰期的圖。DX-2930隨時間變化之抗體濃度顯示於上圖中，MAb4-YTE之該濃度顯示於中圖中，且來自上圖及中圖之資料一起顯示於下圖中。圖 10為顯示MAb4-YTE在 活體內之作用持續時間相對於比較抗體更長的圖。圖 11提供顯示甲磺酸加貝酯、DX-2930及MAb4-YTE在胰蛋白酶抑制分析中之IC50的圖。圖 12為顯示MAb4-LS及MAb4-YTE抗體與DX-2930表面之競爭性結合、MAb4-YTE及DX-2930抗體與MAb4-LS表面之競爭性結合以及MAb4-LS及DX-2930抗體與MAb4-YTE表面之競爭性結合的圖。圖 13為顯示人類pKal及MAb4-YTE之肽相互作用的圖。圖 14A-J顯示人類pKal與MAb4-YTE之間的相互作用。圖 14A顯示pKal-MAb4-YTE表位交聯作圖之前視圖的條帶/表面表示。圖 14B顯示pKal-MAb4-YTE表位交聯作圖之後視圖的條帶/表面表示。圖 14C顯示pKal-MAb4-YTE表位交聯作圖之側視圖1的條帶/表面表示。圖 14D顯示pKal-MAb4-YTE表位交聯作圖之側視圖2的條帶/表面表示。圖 14E顯示pKal-MAb4-YTE表位交聯作圖之頂視圖的條帶/表面表示。圖 14F顯示pKal-MAb4-YTE表位交聯作圖之前視圖的條帶表示。圖 14G顯示pKal-MAb4-YTE表位交聯作圖之後視圖的條帶表示。圖 14H顯示pKal-MAb4-YTE表位交聯作圖之側視圖1的條帶表示。圖 14I顯示pKal-MAb4-YTE表位交聯作圖之側視圖2的條帶表示。圖 14J顯示pKal-MAb4-YTE表位交聯作圖之頂視圖的條帶表示。圖 15為人類pKal及DX-2930之肽相互作用圖。圖 16A-J顯示人類pKal與DX-2930之間的相互作用。圖 16A顯示pKal-DX-2930表位交聯作圖之前視圖的條帶/表面表示。圖 16B顯示pKal-DX-2930表位交聯作圖之後視圖的條帶/表面表示。圖 16C顯示pKal-DX-2930表位交聯作圖之側視圖1的條帶/表面表示。圖 16D顯示pKal-DX-2930表位交聯作圖之側視圖2的條帶/表面表示。圖 16E顯示pKal-DX-2930表位交聯作圖之頂視圖的條帶/表面表示。圖 16F顯示pKal-DX-2930表位交聯作圖之前視圖的條帶表示。圖 16G顯示pKal-DX-2930表位交聯作圖之後視圖的條帶表示。圖 16H顯示pKal-DX-2930表位交聯作圖之側視圖1的條帶表示。圖 16I顯示pKal-DX-2930表位交聯作圖之側視圖2的條帶表示。圖 16J顯示pKal-DX-2930表位交聯作圖之頂視圖的條帶表示。圖 17為顯示與抗體MAb4-YTE相比由抗體DX-2930交聯之人類pKal殘基的圖，如下文實例5所述，且顯示此等抗體結合pKal上之不同表位。圖 18A-C顯示MAb4-YTE之重鏈的核酸序列(頂列；SEQ ID NO:48)及胺基酸序列(底列；SEQ ID NO: 10)。序列開始於圖 18A，延續至圖 18B且結束於圖 18C。圖 19A-B顯示MAb4-YTE之輕鏈的核酸序列(頂列；SEQ ID NO:9)及胺基酸序列(底列；SEQ ID NO: 8)。序列開始於圖 19A且結束於圖 19B。


          <![CDATA[<110> 美商奧斯提亞治療股份有限公司(ASTRIA THERAPEUTICS, INC.)]]>
          <![CDATA[<120> 血漿激肽釋放素抗體及其用途]]>
          <![CDATA[<130> AST-001TW]]>
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          <![CDATA[<141>]]>
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<400> 1]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Gly Ser Leu Met Val Thr Thr Gly Ala Pro Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
          <![CDATA[<210> 2]]>
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 2]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Phe Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Asn Val Gln Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Leu Ser Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Arg Ser Tyr Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 
                      100                 105         
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          <![CDATA[<400> 3]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Thr Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Gly Ser Leu Met Val Thr Thr Gly Ala Pro Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
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          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
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              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
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                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105         
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          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 
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          Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Asn Tyr Asn Ala Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Thr Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
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                      100                 105                 110         
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          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Arg Ser Tyr Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210> 7]]>
          <![CDATA[<211> 450]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 7]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Asn Tyr Asn Ala Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Thr Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Gly Ser Leu Met Val Thr Thr Gly Ala Pro Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210> 8]]>
          <![CDATA[<211> 214]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 8]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Tyr Ala Ser His Arg Gly Trp Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Arg Ser Tyr Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 
          <![CDATA[<210> 9]]>
          <![CDATA[<211> 450]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 9]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Asn Tyr Asn Ala Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Thr Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Gly Ser Leu Met Val Thr Thr Gly Ala Pro Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210> 10]]>
          <![CDATA[<211> 450]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 10]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Asn Tyr Asn Ala Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Thr Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Gly Ser Leu Met Val Thr Thr Gly Ala Pro Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr 
                          245                 250                 255     
          Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 
                  355                 360                 365             
          Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Pro Gly 
              450 
          <![CDATA[<210> 11]]>
          <![CDATA[<211> 11]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 11]]>
          Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala Val Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210> 12]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 12]]>
          Trp Ala Ser Thr Arg His Thr 
          1               5           
          <![CDATA[<210> 13]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 13]]>
          Gln Gln Tyr Arg Ser Tyr Pro Leu Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210> 14]]>
          <![CDATA[<211> 5]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 14]]>
          Ser Tyr Trp Met Asn 
          1               5   
          <![CDATA[<210> 15]]>
          <![CDATA[<211> 17]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 15]]>
          Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210> 16]]>
          <![CDATA[<211> 12]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 16]]>
          Ser Leu Met Val Thr Thr Gly Ala Pro Phe Asp Tyr 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210> 17]]>
          <![CDATA[<211> 17]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 17]]>
          Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210> 18]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 18]]>
          Tyr Ala Ser His Arg Gly Trp 
          1               5           
          <![CDATA[<210> 19]]>
          <![CDATA[<211> 17]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 19]]>
          Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Asn Tyr Asn Ala Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210> 20]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 20]]>
          Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala 
          1               5           
          <![CDATA[<210> 21]]>
          <![CDATA[<211> 3]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 21]]>
          Trp Ala Ser 
          1           
          <![CDATA[<210> 22]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 22]]>
          Tyr Arg Ser Tyr Pro Leu Thr 
          1               5           
          <![CDATA[<210> 23]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 23]]>
          Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 
          1               5           
          <![CDATA[<210> 24]]>
          <![CDATA[<211> 6]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 24]]>
          Tyr Pro Gly Asp Asp Asp 
          1               5       
          <![CDATA[<210> 25]]>
          <![CDATA[<211> 12]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 25]]>
          Ser Leu Met Val Thr Thr Gly Ala Pro Phe Asp Tyr 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210> 26]]>
          <![CDATA[<211> 3]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 26]]>
          Tyr Ala Ser 
          1           
          <![CDATA[<210> 27]]>
          <![CDATA[<211> 6]]>
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          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 27]]>
          Gln Asp Val Gly Ile Ala 
          1               5       
          <![CDATA[<210> 28]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 28]]>
          Gln Gln Tyr Arg Ser Tyr Pro Leu Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210> 29]]>
          <![CDATA[<211> 8]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 29]]>
          Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr Trp 
          1               5               
          <![CDATA[<210> 30]]>
          <![CDATA[<211> 8]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 30]]>
          Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr 
          1               5               
          <![CDATA[<210> 31]]>
          <![CDATA[<211> 14]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 31]]>
          Ala Gly Ser Leu Met Val Thr Thr Gly Ala Pro Phe Asp Tyr 
          1               5                   10                  
          <![CDATA[<210> 32]]>
          <![CDATA[<211> 638]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 智人(Homo sapiens)]]>
          <![CDATA[<400> 32]]>
          Met Ile Leu Phe Lys Gln Ala Thr Tyr Phe Ile Ser Leu Phe Ala Thr 
          1               5                   10                  15      
          Val Ser Cys Gly Cys Leu Thr Gln Leu Tyr Glu Asn Ala Phe Phe Arg 
                      20                  25                  30          
          Gly Gly Asp Val Ala Ser Met Tyr Thr Pro Asn Ala Gln Tyr Cys Gln 
                  35                  40                  45              
          Met Arg Cys Thr Phe His Pro Arg Cys Leu Leu Phe Ser Phe Leu Pro 
              50                  55                  60                  
          Ala Ser Ser Ile Asn Asp Met Glu Lys Arg Phe Gly Cys Phe Leu Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Ser Val Thr Gly Thr Leu Pro Lys Val His Arg Thr Gly Ala Val 
                          85                  90                  95      
          Ser Gly His Ser Leu Lys Gln Cys Gly His Gln Ile Ser Ala Cys His 
                      100                 105                 110         
          Arg Asp Ile Tyr Lys Gly Val Asp Met Arg Gly Val Asn Phe Asn Val 
                  115                 120                 125             
          Ser Lys Val Ser Ser Val Glu Glu Cys Gln Lys Arg Cys Thr Asn Asn 
              130                 135                 140                 
          Ile Arg Cys Gln Phe Phe Ser Tyr Ala Thr Gln Thr Phe His Lys Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Tyr Arg Asn Asn Cys Leu Leu Lys Tyr Ser Pro Gly Gly Thr Pro 
                          165                 170                 175     
          Thr Ala Ile Lys Val Leu Ser Asn Val Glu Ser Gly Phe Ser Leu Lys 
                      180                 185                 190         
          Pro Cys Ala Leu Ser Glu Ile Gly Cys His Met Asn Ile Phe Gln His 
                  195                 200                 205             
          Leu Ala Phe Ser Asp Val Asp Val Ala Arg Val Leu Thr Pro Asp Ala 
              210                 215                 220                 
          Phe Val Cys Arg Thr Ile Cys Thr Tyr His Pro Asn Cys Leu Phe Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Phe Tyr Thr Asn Val Trp Lys Ile Glu Ser Gln Arg Asn Val Cys 
                          245                 250                 255     
          Leu Leu Lys Thr Ser Glu Ser Gly Thr Pro Ser Ser Ser Thr Pro Gln 
                      260                 265                 270         
          Glu Asn Thr Ile Ser Gly Tyr Ser Leu Leu Thr Cys Lys Arg Thr Leu 
                  275                 280                 285             
          Pro Glu Pro Cys His Ser Lys Ile Tyr Pro Gly Val Asp Phe Gly Gly 
              290                 295                 300                 
          Glu Glu Leu Asn Val Thr Phe Val Lys Gly Val Asn Val Cys Gln Glu 
          305                 310                 315                 320 
          Thr Cys Thr Lys Met Ile Arg Cys Gln Phe Phe Thr Tyr Ser Leu Leu 
                          325                 330                 335     
          Pro Glu Asp Cys Lys Glu Glu Lys Cys Lys Cys Phe Leu Arg Leu Ser 
                      340                 345                 350         
          Met Asp Gly Ser Pro Thr Arg Ile Ala Tyr Gly Thr Gln Gly Ser Ser 
                  355                 360                 365             
          Gly Tyr Ser Leu Arg Leu Cys Asn Thr Gly Asp Asn Ser Val Cys Thr 
              370                 375                 380                 
          Thr Lys Thr Ser Thr Arg Ile Val Gly Gly Thr Asn Ser Ser Trp Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Glu Trp Pro Trp Gln Val Ser Leu Gln Val Lys Leu Thr Ala Gln Arg 
                          405                 410                 415     
          His Leu Cys Gly Gly Ser Leu Ile Gly His Gln Trp Val Leu Thr Ala 
                      420                 425                 430         
          Ala His Cys Phe Asp Gly Leu Pro Leu Gln Asp Val Trp Arg Ile Tyr 
                  435                 440                 445             
          Ser Gly Ile Leu Asn Leu Ser Asp Ile Thr Lys Asp Thr Pro Phe Ser 
              450                 455                 460                 
          Gln Ile Lys Glu Ile Ile Ile His Gln Asn Tyr Lys Val Ser Glu Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Asn His Asp Ile Ala Leu Ile Lys Leu Gln Ala Pro Leu Asn Tyr Thr 
                          485                 490                 495     
          Glu Phe Gln Lys Pro Ile Cys Leu Pro Ser Lys Gly Asp Thr Ser Thr 
                      500                 505                 510         
          Ile Tyr Thr Asn Cys Trp Val Thr Gly Trp Gly Phe Ser Lys Glu Lys 
                  515                 520                 525             
          Gly Glu Ile Gln Asn Ile Leu Gln Lys Val Asn Ile Pro Leu Val Thr 
              530                 535                 540                 
          Asn Glu Glu Cys Gln Lys Arg Tyr Gln Asp Tyr Lys Ile Thr Gln Arg 
          545                 550                 555                 560 
          Met Val Cys Ala Gly Tyr Lys Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Lys Gly 
                          565                 570                 575     
          Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Lys His Asn Gly Met Trp Arg Leu 
                      580                 585                 590         
          Val Gly Ile Thr Ser Trp Gly Glu Gly Cys Ala Arg Arg Glu Gln Pro 
                  595                 600                 605             
          Gly Val Tyr Thr Lys Val Ala Glu Tyr Met Asp Trp Ile Leu Glu Lys 
              610                 615                 620                 
          Thr Gln Ser Ser Asp Gly Lys Ala Gln Met Gln Ser Pro Ala 
          625                 630                 635             
          <![CDATA[<210> 33]]>
          <![CDATA[<211> 363]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 33]]>
          caggttcagc tgcagcagtc tggggctgag ctggtgaagc ctggggcctc agtgaagatt       60
          tcctgcaaag cttctggcta cgcattcagt agctactgga tgaactgggt gaagcagagg      120
          cctggagagg gtcttgagtg gattggacag atttatcctg gagatgatga tactaactac      180
          aacggaaagt tcaagggcaa ggccacactg actgtagaca aatcctccac cacagcctac      240
          atgcagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct atttctgtgc aggatctttg      300
          atggttacga cgggggcccc ctttgactac tggggccaag gcaccactct cacagtctcc      360
          tca                                                                    363
          <![CDATA[<210> 34]]>
          <![CDATA[<211> 321]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 34]]>
          gacattgtga tgacccagtc tcacaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc       60
          atcacctgca aggccagtca ggatgtgggt attgctgttg cctggtatca acagaaacca      120
          gggcaatctc ctaaatttct gatttactgg gcatccaccc ggcacactgg agtccctgat      180
          cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccattaggaa tgtgcagtct      240
          gaagacttgt cagattattt ctgtcagcaa tataggagct atcctctcac gttcggctcg      300
          gggacaaagt tggaactaaa a                                                321
          <![CDATA[<210> 35]]>
          <![CDATA[<211> 5]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 35]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5   
          <![CDATA[<210> 36]]>
          <![CDATA[<211> 5]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 36]]>
          Gly Gly Gly Gly Ala 
          1               5   
          <![CDATA[<210> 37]]>
          <![CDATA[<211> 2]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 未知(Unknown)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 未知之描述：MAb4-YTE表位1序列]]>
          <![CDATA[<400> 37]]>
          Lys Arg 
          1       
          <![CDATA[<210> 38]]>
          <![CDATA[<211> 13]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 未知(Unknown)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 未知之描述：MAb4-YTE表位2序列]]>
          <![CDATA[<400> 38]]>
          Lys His Asn Gly Met Trp Arg Leu Val Gly Ile Thr Ser 
          1               5                   10              
          <![CDATA[<210> 39]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 未知(Unknown)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 未知之描述：MAb4-YTE表位3序列]]>
          <![CDATA[<400> 39]]>
          Tyr Met Asp Trp Ile Leu Glu Lys Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210> 40]]>
          <![CDATA[<211> 13]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 未知(Unknown)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 未知之描述：DX2930表位1序列]]>
          <![CDATA[<400> 40]]>
          His Cys Phe Asp Gly Leu Pro Leu Gln Asp Val Trp Arg 
          1               5                   10              
          <![CDATA[<210> 41]]>
          <![CDATA[<211> 8]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 未知(Unknown)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 未知之描述：DX2930表位2序列]]>
          <![CDATA[<400> 41]]>
          Tyr Lys Val Ser Glu Gly Asn His 
          1               5               
          <![CDATA[<210> 42]]>
          <![CDATA[<211> 6]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 未知(Unknown)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 未知之描述：DX2930表位3序列]]>
          <![CDATA[<400> 42]]>
          Tyr Lys Ile Thr Gln Arg 
          1               5       
          <![CDATA[<210> 43]]>
          <![CDATA[<211> 10]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 43]]>
          Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr Trp Met Asn 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210> 44]]>
          <![CDATA[<211> 10]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 44]]>
          Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Asn 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210> 45]]>
          <![CDATA[<211> 638]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 食蟹獼猴(Macaca fascicularis)]]>
          <![CDATA[<400> 45]]>
          Met Ile Leu Phe Lys Gln Ala Thr Tyr Phe Ile Ser Leu Phe Ala Thr 
          1               5                   10                  15      
          Val Ser Cys Gly Cys Leu Thr Gln Leu Tyr Glu Asn Ala Phe Phe Arg 
                      20                  25                  30          
          Gly Gly Asp Val Ala Ser Met Tyr Thr Pro Thr Ala Gln His Cys Gln 
                  35                  40                  45              
          Met Met Cys Thr Phe His Pro Arg Cys Leu Leu Phe Ser Phe Leu Pro 
              50                  55                  60                  
          Ala Ser Ser Ile Asn Asp Met Glu Lys Arg Phe Gly Cys Phe Leu Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Ser Val Thr Gly Thr Leu Pro Lys Val Arg Arg Ala Gly Ala Ile 
                          85                  90                  95      
          Ser Gly His Ser Leu Lys Gln Cys Gly His Gln Ile Ser Ala Cys His 
                      100                 105                 110         
          Arg Asp Ile Tyr Lys Gly Ile Asp Met Arg Gly Val Asn Phe Asn Val 
                  115                 120                 125             
          Ser Lys Val Ser Ser Val Glu Glu Cys Gln Lys Arg Cys Thr Asn Asn 
              130                 135                 140                 
          Ile Arg Cys Gln Phe Phe Ser Tyr Ala Thr Gln Thr Phe His Asn Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Tyr Arg Asn Thr Cys Leu Leu Lys His Ser Pro Gly Gly Thr Pro 
                          165                 170                 175     
          Thr Thr Ile Lys Val Leu Asn Asn Val Glu Ser Gly Phe Ser Leu Lys 
                      180                 185                 190         
          Pro Cys Ala Leu Ser Glu Ile Gly Cys His Met Asn Ile Phe Gln His 
                  195                 200                 205             
          Leu Ala Phe Ser Asp Val Asp Val Ala Arg Val Leu Ala Pro Asp Ala 
              210                 215                 220                 
          Phe Val Cys Arg Thr Ile Cys Thr Tyr His Pro Ser Cys Leu Phe Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Phe Tyr Thr Asn Ala Trp Lys Ile Glu Ser Gln Arg Asn Val Cys 
                          245                 250                 255     
          Phe Leu Lys Thr Ser Glu Ser Gly Thr Pro Ser Ser Ser Thr Pro Gln 
                      260                 265                 270         
          Glu Asn Thr Thr Ser Gly Tyr Ser Leu Leu Thr Cys Lys Arg Thr Leu 
                  275                 280                 285             
          Pro Glu Pro Cys His Ser Lys Ile Tyr Pro Gly Val Asp Phe Gly Gly 
              290                 295                 300                 
          Glu Glu Leu Asn Val Thr Phe Val Lys Gly Val Asn Val Cys Gln Glu 
          305                 310                 315                 320 
          Thr Cys Thr Lys Met Ile Arg Cys Gln Phe Phe Thr Tyr Ser Leu Leu 
                          325                 330                 335     
          Pro Glu Asp Cys Lys Glu Glu Lys Cys Lys Cys Phe Leu Arg Leu Ser 
                      340                 345                 350         
          Ser Asp Gly Ser Pro Thr Arg Ile Thr Tyr Gly Thr Gln Gly Ser Ser 
                  355                 360                 365             
          Gly Tyr Ser Leu Arg Leu Cys Asn Thr Gly Asp Ser Ser Val Cys Thr 
              370                 375                 380                 
          Thr Lys Thr Ser Ser Arg Ile Val Gly Gly Thr Asn Ser Ser Trp Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Glu Trp Pro Trp Gln Val Ser Leu Gln Val Lys Leu Met Ala Gln Arg 
                          405                 410                 415     
          His Leu Cys Gly Gly Ser Leu Ile Gly His Gln Trp Val Leu Thr Ala 
                      420                 425                 430         
          Ala His Cys Phe Asp Gly Leu Pro Leu Pro Asp Val Trp Arg Ile Tyr 
                  435                 440                 445             
          Ser Gly Ile Leu Asn Leu Ser Asp Ile Thr Lys Glu Thr Pro Phe Ser 
              450                 455                 460                 
          Gln Ile Lys Glu Ile Ile Ile His Gln Asn Tyr Arg Ile Ser Glu Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Asn His Asp Ile Ala Leu Ile Lys Leu Gln Ala Pro Leu Asn Tyr Thr 
                          485                 490                 495     
          Glu Phe Gln Lys Pro Ile Cys Leu Pro Ser Lys Gly Asp Thr Asn Thr 
                      500                 505                 510         
          Ile Tyr Thr Asn Cys Trp Val Thr Gly Trp Gly Phe Ser Lys Glu Lys 
                  515                 520                 525             
          Gly Glu Ile Gln Asp Ile Leu Gln Lys Val Asn Ile Pro Leu Val Thr 
              530                 535                 540                 
          Asn Glu Glu Cys Gln Lys Arg Tyr Gln Asp Tyr Lys Ile Thr Gln Arg 
          545                 550                 555                 560 
          Met Val Cys Ala Gly Tyr Lys Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Lys Gly 
                          565                 570                 575     
          Asp Ser Gly Gly Pro Leu Ala Cys Lys His Asn Gly Met Trp Arg Leu 
                      580                 585                 590         
          Val Gly Ile Thr Ser Trp Gly Glu Gly Cys Ala Arg Arg Glu Gln Pro 
                  595                 600                 605             
          Gly Val Tyr Thr Lys Val Ala Glu Tyr Met Asp Trp Ile Leu Glu Lys 
              610                 615                 620                 
          Thr Gln Ser Ser Asp Gly Asn Ala Arg Met Gln Ala Pro Ala 
          625                 630                 635             
          <![CDATA[<210> 46]]>
          <![CDATA[<211> 629]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 家兔(Oryctolagus cuniculus)]]>
          <![CDATA[<400> 46]]>
          Met Ile Pro Phe Arg Gln Ala Ala Tyr Phe Val Cys Leu Phe Thr Thr 
          1               5                   10                  15      
          Val Ser Cys Gly Cys Leu Thr Gln Leu Tyr Lys Asn Ala Phe Phe Arg 
                      20                  25                  30          
          Gly Gly Asp Val Thr Ser Met Tyr Ser Pro Asn Ala Gln His Cys Gln 
                  35                  40                  45              
          Met Met Cys Thr Phe His Pro Arg Cys Leu Phe Phe Ser Phe Leu Pro 
              50                  55                  60                  
          Ala Ser Ser Thr Asn Asp Ala Gln Lys Arg Phe Gly Cys Phe Leu Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Ser Val Thr Gly Thr Leu Pro Arg Val His Gln Thr Asn Ala Ile 
                          85                  90                  95      
          Ser Gly His Ser Leu Lys Gln Cys Gly His Gln Ile Asn Ala Cys His 
                      100                 105                 110         
          Arg Ala Thr Tyr Glu Gly Ile Asp Met Arg Gly Thr Asn Phe Asn Ile 
                  115                 120                 125             
          Ser Lys Val Gln Ser Val Glu Glu Cys Gln Lys Gln Cys Thr Asp Asn 
              130                 135                 140                 
          Ile His Cys Gln Phe Phe Thr Tyr Ala Thr Gln Thr Phe Tyr Asn Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Glu His Leu Asn Asn Cys Ile Leu Lys Lys Ser Ala Thr Gly Thr Pro 
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Ile Lys Leu Leu Glu Asn Val Val Ser Gly Phe Ser Leu Lys 
                      180                 185                 190         
          Pro Cys Ala Leu Ser Glu Ser Gly Cys His Met Asn Leu Phe Gln His 
                  195                 200                 205             
          Leu Ala Phe Ser Asp Val Asp Val Ala Arg Val Leu Thr Pro Asp Ala 
              210                 215                 220                 
          Phe Val Cys Arg Thr Ile Cys Thr Tyr His Ser Asn Cys Leu Phe Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Phe Tyr Thr Asn Glu Trp Asp Thr Glu Ser Gln Arg Asn Ala Cys 
                          245                 250                 255     
          Phe Leu Lys Thr Ser Glu Ser Gly Thr Pro Ser Phe Pro Thr Pro Gln 
                      260                 265                 270         
          Glu Asn Thr Ile Ser Gly Tyr Ser Leu Leu Thr Cys Lys Lys Thr Leu 
                  275                 280                 285             
          Pro Glu Pro Cys His Phe Lys Ile Tyr Ser Gly Val Asp Phe Gly Gly 
              290                 295                 300                 
          Glu Glu Leu Asn Val Thr Phe Val Lys Gly Val Thr Leu Cys Gln Glu 
          305                 310                 315                 320 
          Thr Cys Thr Lys Thr Ile Arg Cys Gln Phe Phe Thr Tyr Ser Leu Leu 
                          325                 330                 335     
          Pro Glu Asp Cys Lys Gly Glu Lys Cys Arg Cys Ser Leu Arg Leu Ser 
                      340                 345                 350         
          Leu Asp Gly Ser Pro Thr Ser Ile Thr His Gly Thr Gln Lys Ser Ser 
                  355                 360                 365             
          Gly Tyr Ser Leu Arg Leu Cys Lys Thr Glu Asn Gly Ser Val Cys Thr 
              370                 375                 380                 
          Thr Lys Ile Asn Ala Arg Ile Val Gly Gly Ser Asn Ser Ser Arg Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Glu Trp Pro Trp Gln Val Ser Leu Gln Val Lys Leu Ala Ala Gln Ser 
                          405                 410                 415     
          His Val Cys Gly Gly Ser Ile Ile Gly His Gln Trp Val Leu Thr Ala 
                      420                 425                 430         
          Ala His Cys Phe Asp Gly Leu Pro Phe Pro Glu Ile Trp Arg Ile Tyr 
                  435                 440                 445             
          Gly Gly Ile Leu Tyr Leu Ser Glu Val Thr Lys Glu Thr Ala Phe Ser 
              450                 455                 460                 
          Gln Ile Lys Glu Ile Ile Ile His Pro Lys Tyr Lys Ile Ser Glu Thr 
          465                 470                 475                 480 
          Gly His Asp Ile Ala Leu Ile Gln Leu Gln Ala Pro Leu Asn Asp Thr 
                          485                 490                 495     
          Asp Ile Gln Lys Pro Ile Cys Leu Pro Ser Lys Asp Asp Thr Asn Ala 
                      500                 505                 510         
          Ile Tyr Thr Asn Cys Trp Val Thr Gly Trp Gly Phe Thr Lys Glu Lys 
                  515                 520                 525             
          Gly Glu Ile Gln Asn Ile Leu Gln Lys Ala Asn Ile Pro Leu Val Thr 
              530                 535                 540                 
          Asn Glu Glu Cys Gln Lys Ser Tyr Arg Asp His Ala Ile Thr Lys Gln 
          545                 550                 555                 560 
          Met Val Cys Ala Gly Tyr Lys Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Lys Gly 
                          565                 570                 575     
          Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Lys His Asn Asn Ile Trp Leu Leu 
                      580                 585                 590         
          Val Gly Ile Thr Ser Trp Gly Glu Gly Cys Ala Arg Arg Glu Gln Pro 
                  595                 600                 605             
          Gly Val Tyr Thr Lys Val Ala Glu Tyr Val Asp Trp Ile Leu Gln Lys 
              610                 615                 620                 
          Met Gln Glu Lys Asp 
          625                 
          <![CDATA[<210> 47]]>
          <![CDATA[<211> 638]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 褐鼠(Rattus norvegicus)]]>
          <![CDATA[<400> 47]]>
          Met Ile Leu Phe Lys Gln Val Gly Tyr Phe Val Ser Leu Phe Ala Thr 
          1               5                   10                  15      
          Val Ser Cys Gly Cys Leu Ser Gln Leu Tyr Ala Asn Thr Phe Phe Arg 
                      20                  25                  30          
          Gly Gly Asp Leu Ala Ala Ile Tyr Thr Pro Asp Ala Gln His Cys Gln 
                  35                  40                  45              
          Lys Met Cys Thr Phe His Pro Arg Cys Leu Leu Phe Ser Phe Leu Ala 
              50                  55                  60                  
          Val Ser Pro Thr Lys Glu Thr Asp Lys Arg Phe Gly Cys Phe Met Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Ser Ile Thr Gly Thr Leu Pro Arg Ile His Arg Thr Gly Ala Ile 
                          85                  90                  95      
          Ser Gly His Ser Leu Lys Gln Cys Gly His Gln Leu Ser Ala Cys His 
                      100                 105                 110         
          Gln Asp Ile Tyr Glu Gly Leu Asp Met Arg Gly Ser Asn Phe Asn Ile 
                  115                 120                 125             
          Ser Lys Thr Asp Ser Ile Glu Glu Cys Gln Lys Leu Cys Thr Asn Asn 
              130                 135                 140                 
          Ile His Cys Gln Phe Phe Thr Tyr Ala Thr Lys Ala Phe His Arg Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Tyr Arg Lys Ser Cys Leu Leu Lys Arg Ser Ser Ser Gly Thr Pro 
                          165                 170                 175     
          Thr Ser Ile Lys Pro Val Asp Asn Leu Val Ser Gly Phe Ser Leu Lys 
                      180                 185                 190         
          Ser Cys Ala Leu Ser Glu Ile Gly Cys Pro Met Asp Ile Phe Gln His 
                  195                 200                 205             
          Phe Ala Phe Ala Asp Leu Asn Val Ser Gln Val Val Thr Pro Asp Ala 
              210                 215                 220                 
          Phe Val Cys Arg Thr Val Cys Thr Phe His Pro Asn Cys Leu Phe Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Phe Tyr Thr Asn Glu Trp Glu Thr Glu Ser Gln Arg Asn Val Cys 
                          245                 250                 255     
          Phe Leu Lys Thr Ser Lys Ser Gly Arg Pro Ser Pro Pro Ile Ile Gln 
                      260                 265                 270         
          Glu Asn Ala Val Ser Gly Tyr Ser Leu Phe Thr Cys Arg Lys Ala Arg 
                  275                 280                 285             
          Pro Glu Pro Cys His Phe Lys Ile Tyr Ser Gly Val Ala Phe Glu Gly 
              290                 295                 300                 
          Glu Glu Leu Asn Ala Thr Phe Val Gln Gly Ala Asp Ala Cys Gln Glu 
          305                 310                 315                 320 
          Thr Cys Thr Lys Thr Ile Arg Cys Gln Phe Phe Thr Tyr Ser Leu Leu 
                          325                 330                 335     
          Pro Gln Asp Cys Lys Ala Glu Gly Cys Lys Cys Ser Leu Arg Leu Ser 
                      340                 345                 350         
          Thr Asp Gly Ser Pro Thr Arg Ile Thr Tyr Glu Ala Gln Gly Ser Ser 
                  355                 360                 365             
          Gly Tyr Ser Leu Arg Leu Cys Lys Val Val Glu Ser Ser Asp Cys Thr 
              370                 375                 380                 
          Thr Lys Ile Asn Ala Arg Ile Val Gly Gly Thr Asn Ser Ser Leu Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Glu Trp Pro Trp Gln Val Ser Leu Gln Val Lys Leu Val Ser Gln Asn 
                          405                 410                 415     
          His Met Cys Gly Gly Ser Ile Ile Gly Arg Gln Trp Ile Leu Thr Ala 
                      420                 425                 430         
          Ala His Cys Phe Asp Gly Ile Pro Tyr Pro Asp Val Trp Arg Ile Tyr 
                  435                 440                 445             
          Gly Gly Ile Leu Asn Leu Ser Glu Ile Thr Asn Lys Thr Pro Phe Ser 
              450                 455                 460                 
          Ser Ile Lys Glu Leu Ile Ile His Gln Lys Tyr Lys Met Ser Glu Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Tyr Asp Ile Ala Leu Ile Lys Leu Gln Thr Pro Leu Asn Tyr Thr 
                          485                 490                 495     
          Glu Phe Gln Lys Pro Ile Cys Leu Pro Ser Lys Ala Asp Thr Asn Thr 
                      500                 505                 510         
          Ile Tyr Thr Asn Cys Trp Val Thr Gly Trp Gly Tyr Thr Lys Glu Arg 
                  515                 520                 525             
          Gly Glu Thr Gln Asn Ile Leu Gln Lys Ala Thr Ile Pro Leu Val Pro 
              530                 535                 540                 
          Asn Glu Glu Cys Gln Lys Lys Tyr Arg Asp Tyr Val Ile Thr Lys Gln 
          545                 550                 555                 560 
          Met Ile Cys Ala Gly Tyr Lys Glu Gly Gly Ile Asp Ala Cys Lys Gly 
                          565                 570                 575     
          Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Lys His Ser Gly Arg Trp Gln Leu 
                      580                 585                 590         
          Val Gly Ile Thr Ser Trp Gly Glu Gly Cys Ala Arg Lys Glu Gln Pro 
                  595                 600                 605             
          Gly Val Tyr Thr Lys Val Ala Glu Tyr Ile Asp Trp Ile Leu Glu Lys 
              610                 615                 620                 
          Ile Gln Ser Ser Lys Glu Arg Ala Leu Glu Thr Ser Pro Ala 
          625                 630                 635             
          <![CDATA[<210> 48]]>
          <![CDATA[<211> 1353]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 48]]>
          caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggctcctc cgtgaaggtg       60
          tcctgcaagg cctccggcta tgcattcagt agctactgga tgaactgggt gaggcaggct      120
          cctggacagg gtcttgagtg gattggacag atttatcctg gagatgacga tactaactac      180
          aatgccaagt tccaggggag ggtcaccatc accgtggaca aatccacaac taccgcctac      240
          atggaactca gcagcctacg ctctgaggac acagccgtct atttctgtgc tggctccctg      300
          atggttacta ccggcgcccc ttttgactac tggggccagg gaaccacggt caccgtctcc      360
          tcagcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcttctaa gagcacctct      420
          gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg      480
          tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc      540
          tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag      600
          acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gagagttgag      660
          cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg      720
          ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctctacat cacccgggaa      780
          cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac      840
          tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgagaga ggagcagtac      900
          aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc      960
          aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc     1020
          tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag     1080
          gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac     1140
          atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc     1200
          gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tattccaagc tcaccgtgga caagagcagg     1260
          tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac     1320
          acgcagaaga gcctctccct gtctcccggg tga                                  1353
          <![CDATA[<210> 49]]>
          <![CDATA[<211> 645]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 49]]>
          gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc       60
          atcacttgca aagcaagtca ggacgtggga atcgctgtcg cctggtatca gcagaaacca      120
          gggaaagccc ctaagttcct gatctattac gcatcccacc gcggatgggg cgtgcctgac      180
          aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct      240
          gaagattttg caacttattt ctgtcaacag taccggtctt atcccctgac ctttggccaa      300
          gggaccaagc tggaaatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca      360
          tctgatgagc agcttaagtc cggaactgct agcgttgtgt gcctgctgaa taacttctat      420
          cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg aaactcccag      480
          gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg      540
          ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc      600
          ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag                      645

Claims

一種結合至血漿激肽釋放素之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區(VH)，其包含HCDR1、HCDR2及HCDR3；及輕鏈可變區(VL)序列，其包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中： a. (i) 該HCDR1包含在SEQ ID NO: 14、23、29或43中所示之胺基酸序列；該HCDR2包含在SEQ ID NO: 15、17、19、24、30或44中所示之胺基酸序列；且該HCDR3包含在SEQ ID NO: 16、25或31中所示之胺基酸序列；且 (ii) 該LCDR1包含在SEQ ID NO: 11、20或27中所示之胺基酸序列；該LCDR2包含在SEQ ID NO: 12、18、21或26中所示之胺基酸序列；且該LCDR3包含在SEQ ID NO: 13、22或28中所示之胺基酸序列； b. (i) 該HCDR1包含在SEQ ID NO: 14中所示之胺基酸序列；該HCDR2包含在SEQ ID NO: 15、17或19中所示之胺基酸序列；且該HCDR3包含在SEQ ID NO: 16中所示之胺基酸序列；且 (ii) 該LCDR1包含在SEQ ID NO: 11中所示之胺基酸序列；該LCDR2包含在SEQ ID NO: 12或18中所示之胺基酸序列；且該LCDR3包含在SEQ ID NO: 13中所示之胺基酸序列； c. (i)該HCDR1包含在SEQ ID NO: 23中所示之胺基酸序列；該HCDR2包含在SEQ ID NO: 24中所示之胺基酸序列；且該HCDR3包含在SEQ ID NO: 25中所示之胺基酸序列，且 (ii) 該LCDR1包含在SEQ ID NO: 20中所示之胺基酸序列；該LCDR2包含在SEQ ID NO: 21或26中所示之胺基酸序列；且該LCDR3包含在SEQ ID NO: 22中所示之胺基酸序列； d. (i) 該HCDR1包含在SEQ ID NO: 29中所示之胺基酸序列；該HCDR2包含在SEQ ID NO: 30中所示之胺基酸序列；且該HCDR3包含在SEQ ID NO: 31中所示之胺基酸序列，且 (ii) 該LCDR1包含在SEQ ID NO: 27中所示之胺基酸序列；該LCDR2包含在SEQ ID NO: 21或26中所示之胺基酸序列；且該LCDR3包含在SEQ ID NO: 28中所示之胺基酸序列；或 e. (i) 該HCDR1包含在SEQ ID NO: 43中所示之胺基酸序列；該HCDR2包含在SEQ ID NO: 44中所示之胺基酸序列；且該HCDR3包含在SEQ ID NO: 25中所示之胺基酸序列，且 (ii) 該LCDR1包含在SEQ ID NO: 11中所示之胺基酸序列；該LCDR2包含在SEQ ID NO: 12或18中所示之胺基酸序列；且該LCDR3包含在SEQ ID NO: 28中所示之胺基酸序列。
如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其中：該HCDR1包含在SEQ ID NO: 14中所示之胺基酸序列；該HCDR2包含在SEQ ID NO: 15、17或19中所示之胺基酸序列；且該HCDR3包含在SEQ ID NO: 16中所示之胺基酸序列；且該LCDR1包含在SEQ ID NO: 11中所示之胺基酸序列；該LCDR2包含在SEQ ID NO: 12或18中所示之胺基酸序列；且該LCDR3包含在SEQ ID NO: 13中所示之胺基酸序列。
如請求項1或2之抗體或其抗原結合片段，其中：該HCDR1包含在SEQ ID NO: 14中所示之胺基酸序列；該HCDR2包含在SEQ ID NO: 19中所示之胺基酸序列；且該HCDR3包含在SEQ ID NO: 16中所示之胺基酸序列；且該LCDR1包含在SEQ ID NO: 11中所示之胺基酸序列；該LCDR2包含在SEQ ID NO: 18中所示之胺基酸序列；且該LCDR3包含在SEQ ID NO: 13中所示之胺基酸序列。
如請求項1或2之抗體或其抗原結合片段，其中：該HCDR1包含在SEQ ID NO: 14中所示之胺基酸序列；該HCDR2包含在SEQ ID NO: 15中所示之胺基酸序列；且該HCDR3包含在SEQ ID NO: 16中所示之胺基酸序列；且該LCDR1包含在SEQ ID NO: 11中所示之胺基酸序列；該LCDR2包含在SEQ ID NO: 12中所示之胺基酸序列；且該LCDR3包含在SEQ ID NO: 13中所示之胺基酸序列。
如請求項1或2之抗體或其抗原結合片段，其中：該HCDR1包含在SEQ ID NO: 14中所示之胺基酸序列；該HCDR2包含在SEQ ID NO: 17中所示之胺基酸序列；且該HCDR3包含在SEQ ID NO: 16中所示之胺基酸序列；且該LCDR1包含在SEQ ID NO: 11中所示之胺基酸序列；該LCDR2包含在SEQ ID NO: 12中所示之胺基酸序列；且該LCDR3包含在SEQ ID NO: 13中所示之胺基酸序列。
如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其中：該HCDR1包含在SEQ ID NO: 23中所示之胺基酸序列；該HCDR2包含在SEQ ID NO: 24中所示之胺基酸序列；且該 HCDR3包含在SEQ ID NO: 25中所示之胺基酸序列；且該LCDR1包含在SEQ ID NO: 20中所示之胺基酸序列；該包含在SEQ ID NO: 26中所示之胺基酸序列；且該LCDR3包含在SEQ ID NO: 22中所示之胺基酸序列。
如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其中：該HCDR1包含在SEQ ID NO: 29中所示之胺基酸序列；該HCDR2包含在SEQ ID NO: 30中所示之胺基酸序列；且該HCDR3包含在SEQ ID NO: 31中所示之胺基酸序列；且該LCDR1包含在SEQ ID NO: 27中所示之胺基酸序列；該CDR2包含在SEQ ID NO: 26中所示之胺基酸序列；且該LCDR3序列包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列。
如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其中： (i) 該HCDR1包含在SEQ ID NO: 43中所示之胺基酸序列；該HCDR2包含在SEQ ID NO: 44中所示之胺基酸序列；且該HCDR3包含在SEQ ID NO: 25中所示之胺基酸序列，且 (ii) 該LCDR1包含在SEQ ID NO: 11中所示之胺基酸序列；該LCDR2包含在SEQ ID NO: 18中所示之胺基酸序列；且該LCDR3包含在SEQ ID NO: 28中所示之胺基酸序列。
一種抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區(VH)，其包含HCDR1、HCDR2及HCDR3；及輕鏈可變區(VL)，其包含LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中： a. 該HCDR1包含SEQ ID NO: 14中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列有至多1、2或3個胺基酸取代；該CDR2包含SEQ ID NO: 15、17或19中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列具有至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13個胺基酸取代；且該HCDR3包含SEQ ID NO: 16中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列有至多1、2、3、4、5、6、7、8或9個胺基酸取代；且 b. 該LCDR1包含SEQ ID NO: 11中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列有至多1、2、3、4、5、6或7個胺基酸取代；該LCDR2包含SEQ ID NO: 12或18中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列具有至多1、2、3或4個胺基酸取代；且該LCDR3包含SEQ ID NO: 13中所示之胺基酸序列，對該胺基酸序列有至多1、2、3或4個胺基酸取代。
如請求項9之抗體或抗原結合片段，其中HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3中之每一者包含至多一個胺基酸取代。
如請求項9或10之抗體或抗原結合片段，其中至多一個選自HCDR1、HCDR2或HCDR3之CDR包含取代。
如請求項9或10之抗體或抗原結合片段，其中至多一個選自LCDR1、LCDR2及/或LCDR3之CDR包含取代。
如請求項1至12中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該VL區包含SEQ ID NO: 2、4或6中所示之胺基酸序列。
如請求項1至13或14中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該VL區包含SEQ ID NO: 6中所示之胺基酸序列。
如請求項1至14中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該VH區包含SEQ ID NO:1、3或5中所示之胺基酸序列。
如請求項1至15中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該VH區包含SEQ ID NO: 5中所示之胺基酸序列。
如請求項1至12中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該VH區包含SEQ ID NO: 5中所示之胺基酸序列且該VL區包含SEQ ID NO: 6中所示之胺基酸序列。
如請求項1至12中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該VH區包含SEQ ID NO: 5中所示之胺基酸序列且該VL區包含SEQ ID NO: 2、4或6中所示之胺基酸序列。
如請求項1至12中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該VH區包含SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列且該VL區包含SEQ ID NO: 2、4或6中所示之胺基酸序列。
如請求項1至12中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該VH區包含SEQ ID NO: 3中所示之胺基酸序列且該VL區包含SEQ ID NO: 2、4或6中所示之胺基酸序列。
如請求項1至12中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該VH區包含SEQ ID NO: 1、3或5中所示之胺基酸序列且該VL區包含SEQ ID NO: 2中所示之胺基酸序列。
如請求項1至12中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該VH區包含SEQ ID NO: 1、3或5中所示之胺基酸序列且該VL區包含SEQ ID NO: 4中所示之胺基酸序列。
如請求項1至12中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該VH區包含SEQ ID NO: 1、3或5中所示之胺基酸序列且該VL區包含SEQ ID NO: 6中所示之胺基酸序列。
如請求項1至18中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中輕鏈包含如SEQ ID NO: 8中所示之胺基酸序列。
如請求項1至18或24中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中重鏈包含如SEQ ID NO: 7、9或10中所示之胺基酸序列。
如請求項1至18、24或25中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該重鏈包含如SEQ ID NO: 10中所示之胺基酸序列。
如請求項1至18、24或25中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該重鏈包含如SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列。
如請求項1至18、24或25中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該重鏈包含如SEQ ID NO: 10、9或7中所示之胺基酸序列，且該輕鏈包含如SEQ ID NO: 8中所示之胺基酸序列。
如請求項1至18、24至26或28中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該重鏈包含如SEQ ID NO: 10中所示之胺基酸序列，且該輕鏈包含如SEQ ID NO: 8中所示之胺基酸序列。
如請求項1至18、24、25、27或28中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該重鏈包含如SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列，且該輕鏈包含如SEQ ID NO: 8中所示之胺基酸序列。
如請求項1至18、24、25或28中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該重鏈包含如SEQ ID NO: 7中所示之胺基酸序列，且該輕鏈包含如SEQ ID NO: 8中所示之胺基酸序列。
如請求項1至12中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該VH區包含與SEQ ID NO: 1、3或5中所示之胺基酸序列至少70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的序列。
如請求項1至12中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該VL區包含與SEQ ID NO: 2、4或6中所示之胺基酸序列至少70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的序列。
如請求項32或33中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該VL區包含與SEQ ID NO: 6、4或2中所示之序列具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99% 百分比同源性之序列，且該VH區包含與SEQ ID NO: 1、3或5中所示之序列具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99% 百分比同源性之序列。
如請求項1至12中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該重鏈包含與SEQ ID NO:7、9或10中所示之序列具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%百分比同源性之序列。
如請求項1至12或35中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該輕鏈包含與SEQ ID NO: 8中所示之序列具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%百分比同源性之序列。
如請求項1至36中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該等CDR序列插入在人類或人類化框架序列之間。
如請求項1至37中任一項之抗體，其中該抗體為完整或全長抗體。
如請求項1至38中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該血漿激肽釋放素為具有SEQ ID NO:32中所示之胺基酸序列的人類血漿激肽釋放素。
如請求項1至39中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少一者：具有SEQ ID NO:32中所示之胺基酸序列之人類血漿激肽釋放素的K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。
如請求項1至40之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段結合至以下殘基中之至少一者、兩者、三者、四者、五者或六者：具有SEQ ID NO:32中所示之胺基酸序列之人類血漿激肽釋放素的K550、R551、K585、S597、Y617或T625。
如請求項1至41中任一項之方法，其中該抗體或其抗原結合片段以如藉由表面電漿子共振(SPR)分析所量測之小於或等於約1、2、3、4或5×10 ^-9M之K _D結合至人類血漿激肽釋放素 (SEQ ID NO: 32)。
如請求項1至42中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體具有以下特徵中之一或多者： a. 在pH 6.0-7.4之間實質上與pH無關的K _D( 例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca ²⁺、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20之緩衝液中測定) b. 對於人類血漿激肽釋放素在0.1 nM與5 nM之間的K _D( 例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca ²⁺、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20，pH 6.0或7.4之緩衝液中測定)；及 c. 對於人類血漿激肽釋放素在0.1 nM與5 nM之間的K _D及對於人類前激肽釋放素在250 nM與2,000 nM之間的K _D(例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca ²⁺、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20，pH 6.0或7.4之緩衝液中測定)。
一種經分離抗體或其結合片段，其與如請求項1至43中任一項之抗體競爭結合至血漿激肽釋放素。
一種經分離抗體或其結合片段，其與如請求項1至44中任一項之抗體結合至人類血漿激肽釋放素上之相同表位。
一種結合至血漿激肽釋放素之重組抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段視情況包含以下中之一或多者： a. 至少20天之血清半衰期； b. 在pH 6.0-7.4之間實質上與pH無關的K _D( 例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca ²⁺、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20之緩衝液中測定)； c. 對於人類血漿激肽釋放素在0.1 nM與5 nM之間的K _D( 例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca ²⁺、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20，pH 6.0或7.4之緩衝液中測定)；及 d. 對於人類血漿激肽釋放素在0.1 nM與5 nM之間的K _D及對於人類前激肽釋放素在250 nM與2,000 nM之間的K _D( 例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca ²⁺、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20，pH 6.0或7.4之緩衝液中測定)。
一種抗體或其抗原結合片段，其結合至以下殘基中之一或多者：具有SEQ ID NO:32中所示之胺基酸序列之人類血漿激肽釋放素的K550、R551、K585、H586、N587、G588、M589、W590、R591、L592、V593、G594、I595、T596、S597、Y617、M618、D619、W620、I621、L622、E623、K624或T625。
如請求項47之抗體或其抗原結合片段，其結合至以下殘基中之一或多者：具有SEQ ID NO:32中所示之胺基酸序列之人類血漿激肽釋放素的K550、R551、K585、S597、Y617或T625。
如請求項47或48中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段具有以下特徵中之一或多者： a. 在pH 6.0-7.4之間實質上與pH無關的K _D( 例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca ²⁺、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20之緩衝液中測定)； b. 對於人類血漿激肽釋放素在0.1 nM與5 nM之間的K _D( 例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca ²⁺、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20，pH 6.0或7.4之緩衝液中測定)；及 c. 對於人類血漿激肽釋放素在0.1 nM與5 nM之間的K _D及對於人類前激肽釋放素在250 nM與2,000 nM之間的K _D( 例如，如藉由SPR在37℃下在含有50 mM HEPES、150 mM NaCl、0.1或1.3 mM Ca ²⁺、1 mg/mL BSA、0.02% Tween-20，pH 6.0或7.4之緩衝液中測定)。
如請求項1至49中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體為單株抗體。
如請求項1至50中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體為人類化抗體。
如請求項1至51中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含選自IgG、IgA、IgD、IgE及IgM之一類的重鏈恆定區。
如請求項1至52中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含IgG類及選自IgG1、IgG2、IgG3及IgG4之子類的重鏈恆定區。
如請求項1至53中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含IgG1重鏈恆定區。
如請求項54之抗體或其抗原結合片段，其中該IgG1重鏈恆定區包含野生型(WT)序列。
如請求項54之抗體或其抗原結合片段，其中該IgG1重鏈恆定區包含如根據EU編號索引編號之M252Y、S254T及T256E突變或M428L及N434S突變。
如請求項54之抗體或其抗原結合片段，其中該IgG1重鏈恆定區包含如根據EU編號索引編號之M252Y、S254T及T256E突變。
如請求項1至57中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該重鏈可變區及該輕鏈可變區不藉由連接子連接。
如請求項1至57中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體結合片段為scFv抗體。
如請求項1至57或59中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該重鏈可變區及該輕鏈可變區藉由肽連接子連接。
如請求項60之抗體或其抗原結合片段，其中該肽連接子包含序列(GGGGS) _n(SEQ ID NO:35)；(GGGGA) _n(SEQ ID NO: 36)或其任何組合，其中各n獨立地為1-5。
一種經分離核酸，其包含編碼如請求項1至61中任一項之重鏈或重鏈可變區(VH)的核苷酸序列。
一種經分離核酸，其包含編碼如請求項1至61中任一項之輕鏈或輕鏈可變區(VL)的核苷酸序列。
一種包含如請求項62之核酸的表現載體。
一種包含如請求項63之核酸的表現載體。
如請求項65之表現載體，其進一步包含如請求項62之核酸。
一種包含如請求項64之表現載體及如請求項65之表現載體的宿主細胞。
一種包含如請求項66之表現載體的宿主細胞。
一種產生結合血漿激肽釋放素或其抗原結合片段之抗體的方法，該方法包含： (a) 使如請求項67或68之宿主細胞在使該宿主細胞表現包含重鏈或重鏈可變區及輕鏈可變區或輕鏈之一或多種多肽的條件下生長，從而產生該抗體或該抗體之抗原結合片段；及 (b) 純化該抗體或該抗體之抗原結合片段。
一種醫藥組合物，其包含如請求項1至61中任一項之抗體或抗原結合片段或如請求項62至63中任一項之核酸。
如請求項70之醫藥組合物，其中該組合物為可注射醫藥組合物。
一種治療個體之患有選自以下之疾病或病症之個體的方法：遺傳性血管性水腫、緩激肽依賴性水腫、糖尿病性黃斑水腫、視網膜水腫、因子XII相關的寒冷性自體炎症症候群(FACAS)、類風濕性關節炎、痛風、腸道疾病、口腔黏膜炎、神經性疼痛、炎症性疼痛、椎管狹窄-退化性脊柱疾病、動脈或靜脈血栓形成、術後腸梗阻、主動脈瘤、骨關節炎、血管炎、水腫、腦水腫、肺栓塞、中風、心室輔助裝置或支架誘發之凝血、頭部外傷或腫瘤周圍腦水腫、敗血症、急性大腦中動脈(MCA)缺血事件(中風)、再狹窄( 例如，血管成形術後)、全身性紅斑狼瘡腎炎或燒傷，該方法包含投與有效量的如請求項0至61中任一項之抗體或其抗原結合片段或包含該抗體或其抗原結合片段之醫藥組合物。
一種治療個體之血漿激肽釋放素介導之病症的方法，該方法包含向該個體投與有效量的如請求項1至61中任一項之抗體或包含該抗體或其抗原結合片段之醫藥組合物。
如請求項73之方法，其中該病症為遺傳性血管性水腫、緩激肽依賴性水腫、糖尿病性黃斑水腫、視網膜水腫、因子XII相關的寒冷性自體炎症症候群(FACAS)、類風濕性關節炎、痛風、腸道疾病、口腔黏膜炎、神經性疼痛、炎症性疼痛、椎管狹窄-退化性脊柱疾病、動脈或靜脈血栓形成、術後腸梗阻、主動脈瘤、骨關節炎、血管炎、水腫、腦水腫、肺栓塞、中風、心室輔助裝置或支架誘發之凝血、頭部外傷或腫瘤周圍腦水腫、敗血症、急性大腦中動脈(MCA)缺血事件(中風)、再狹窄( 例如，血管成形術後)、全身性紅斑狼瘡腎炎或燒傷。
如請求項1至61中任一項之抗體或其抗原結合片段或包含該抗體或其抗原結合片段之醫藥組合物，其用於治療選自以下之疾病或病症：遺傳性血管性水腫、緩激肽依賴性水腫、糖尿病性黃斑水腫、視網膜水腫、因子XII相關的寒冷性自體炎症症候群(FACAS)、類風濕性關節炎、痛風、腸道疾病、口腔黏膜炎、神經性疼痛、炎症性疼痛、椎管狹窄-退化性脊柱疾病、動脈或靜脈血栓形成、術後腸梗阻、主動脈瘤、骨關節炎、血管炎、水腫、腦水腫、肺栓塞、中風、心室輔助裝置或支架誘發之凝血、頭部外傷或腫瘤周圍腦水腫、敗血症、急性大腦中動脈(MCA)缺血事件(中風)、再狹窄( 例如，血管成形術後)、全身性紅斑狼瘡腎炎或燒傷。
如請求項1至61中任一項之抗體或其結合片段或包含該抗體或其抗原結合片段之醫藥組合物，其用於製造供治療選自以下之疾病或病症用的藥劑：遺傳性血管性水腫、緩激肽依賴性水腫、糖尿病性黃斑水腫、視網膜水腫、因子XII相關的寒冷性自體炎症症候群(FACAS)、類風濕性關節炎、痛風、腸道疾病、口腔黏膜炎、神經性疼痛、炎症性疼痛、椎管狹窄-退化性脊柱疾病、動脈或靜脈血栓形成、術後腸梗阻、主動脈瘤、骨關節炎、血管炎、水腫、腦水腫、肺栓塞、中風、心室輔助裝置或支架誘發之凝血、頭部外傷或腫瘤周圍腦水腫、敗血症、急性大腦中動脈(MCA)缺血事件(中風)、再狹窄( 例如，血管成形術後)、全身性紅斑狼瘡腎炎或燒傷。
一種如請求項1至61中任一項之抗體或其結合片段或包含該抗體或其抗原結合片段之醫藥組合物之用途，其用於治療選自以下之疾病或病症：遺傳性血管性水腫、緩激肽依賴性水腫、糖尿病性黃斑水腫、視網膜水腫、因子XII相關的寒冷性自體炎症症候群(FACAS)、類風濕性關節炎、痛風、腸道疾病、口腔黏膜炎、神經性疼痛、炎症性疼痛、椎管狹窄-退化性脊柱疾病、動脈或靜脈血栓形成、術後腸梗阻、主動脈瘤、骨關節炎、血管炎、水腫、腦水腫、肺栓塞、中風、心室輔助裝置或支架誘發之凝血、頭部外傷或腫瘤周圍腦水腫、敗血症、急性大腦中動脈(MCA)缺血事件(中風)、再狹窄( 例如，血管成形術後)、全身性紅斑狼瘡腎炎或燒傷。
一種在有需要之個體中降低緩激肽含量或抑制緩激肽產生之方法，其包含向該個體投與治療有效量的如請求項1至61中任一項之抗體或其結合片段或包含該抗體或其抗原結合片段之醫藥組合物。
一種在有需要之個體中降低或抑制血漿激肽釋放素活性之方法，其包含向該個體投與治療有效量的如請求項1至61中任一項之抗體或其結合片段或包含該抗體或其抗原結合片段之醫藥組合物。
如請求項72至79中任一項之方法，其中該疾病或病症為遺傳性血管性水腫。
如請求項72至79中任一項之方法，其中該疾病或病症為緩激肽依賴性水腫。