EA015342B1 - Способы лечения аутоиммунных заболеваний с использованием слитой молекулы taci-ig - Google Patents

Abstract

В различных вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает способы и композиции для лечения аутоиммунных заболеваний, в том числе ревматоидного артрита, например, предусматривающие введение нуждающемуся в таком лечении пациенту слитой молекулы TACI-Ig. В одном варианте осуществления слитую молекулу TACI-Ig вводят в количестве, достаточном для замедления, супрессии или ингибирования индуцирующих пролиферацию функций BlyS и APRIL.

Description

Настоящая заявка претендует на приоритет по предварительной заявке США № 60/747270, поданной 15 мая 2006 г., содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки.

Область техники, к которой относится изобретение

В различных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам и композициям для лечения аутоиммунных заболеваний или нарушений иммунной системы, предусматривающим введение слитого белка ТАС1-1д, который блокирует функции факторов роста семейства ΤΝΒ.

Уровень техники

Семейство лигандов/рецепторов В1у8.

Было идентифицировано три рецептора: ТАС1 (трансмембранный активатор или кальциймодулирующий лиганд-взаимодействующий агент циклофилина), ВСМА (антиген созревания В-клеток) и ВАЕЕ-К (рецептор В-клеточного активирующего фактора, принадлежащий семейству ΤΝΕ), которые имеют уникальную аффинность связывания двух факторов роста: В1у8 (стимулятора В-лимфоцитов) и АРР1Ь (индуцирующего пролиферацию лиганда) (Магк!егк е! а1. Сигг. Βίο1. 2000; 10(13): 785-788; Тйотркоп е! а1. 8с1епсе 2001; 293:2108-2111). ТАС1 и ВСМА связывают как В1у8, так и АРК1Ь, в то время как ВАЕЕ-К, по-видимому, способен связывать только В1у8 с высокой аффинностью (Магк!егк е! а1. Сигг. Вю1. 2000; 10(13): 785-788; Тйотркоп е! а1. 8с1епсе 2001; 293: 2108-2111). В результате, В1у8 способен передавать сигнал через все три рецептора, в то время как АРК1Ь, по-видимому, способен передавать сигнал только через ТАС1 и ВСМА. Кроме того, циркулирующие в кровотоке гетеротримерные комплексы В1у8 и АРК1Б (группировки из трех белков, содержащие одну или две копии каждого из В1у8 и АРК1Ь), были идентифицированы в пробах сыворотки, взятых у пациентов с системными иммунопатологическими ревматическими заболеваниями, и было показано, что они индуцируют пролиферацию Вклеток ш νίΐτο (Коксйке е! а1. 1. 1ттипо1. 2002: 169: 4314-4321). Среди 1д-слитых белков для всех трех рецепторов, только ТАС1-Ес5 был способен блокировать биологическую активность указанных гетеротримерных комплексов (Коксйке е! а1. 1. 1ттипо1. 2002; 169: 4314-4321). В1у8 и ЛРК1Б являются сильными стимуляторами созревания, пролиферации и выживания В-клеток (Сгокк е! а1. №1иге 2000; 404: 995999, Сгокк е! а1. 1ттипйу 2001; 15(2): 289-302, Сгоот е! а1. 1. С1ш. 1^ек!. 2002; 109(1): 59-68). В1у8 и АРИШ могут быть необходимы для персистенции аутоиммунных заболеваний, в частности, заболеваний, в которых участвуют В-клетки. Трансгенные мыши, полученные генной инженерией для экспрессии высоких уровней В1у8, обнаруживают нарушения иммунных клеток и проявляют симптомы, сходные с симптомами, наблюдаемыми у пациентов с системной красной волчанкой (8ЬЕ) (Сйекоп е! а1. Ке\зкеб дшбейпек Гог б1адпок1к апб 1геа!теп!. В1ооб 1996; 87: 4990-4997, Сйеета е! а1. АгШпбк Кйеит 2001; 44(6): 1313-1319). Подобным образом увеличенные уровни В1у8/АРК1Е были измерены в пробах сыворотки, взятых у пациентов с системной красной волчанкой (8ЬЕ) и других пациентов с различными аутоиммунными заболеваниями, такими как ревматоидный артрит (Коксйке е! а1. 1. 1ттипо1. 2002; 169: 4314-4321; Мапейе X., Апп. Кйеит. ϋΐ₈. 2003; 62(2): 168-171; Найле е! а1. 1. Ехр. Меб. 1998; 188(6): 1185-1190), что распространяет ассоциацию В1у8 и/или АРКТБ и опосредованных В-клетками заболеваний от моделей животных к людям.

Ревматоидный артрит.

Ревматоидный артрит (КА) является хроническим воспалительным заболеванием, характеризующимся неспецифическим, обычно симметричным воспалением периферических суставов, потенциально приводящим к прогрессирующей деструкции суставных и околосуставных структур. Приблизительно 1% населения является пораженным, причем женщины поражаются в 2-3 раза чаще, чем мужчины. Хотя точная этиология указанного заболевания является невыясненной, сильное доказательство предполагает, что КА является аутоиммунным заболеванием. Несколько аутоантител ассоциированы с КА, в том числе ревматоидный фактор (КЕ), который часто ассоциируется с более тяжелым заболеванием, антинуклеарные факторы и антитела против нативного коллагена типа II и цитруллинированных пептидов.

Заметные иммунологические отклонения от нормы, которые могут быть важными в патогенезе КА, включают в себя иммунные комплексы, обнаруженные в клетках синовиальной жидкости и в васкулите. Указанным комплексам способствуют антитела (такие как КЕ), продуцируемые плазматическими клетками и хелперными Т-клетками, которые инфильтрируют синовиальную ткань и которые продуцируют провоспалительные цитокины. Макрофаги и их цитокины (например, Т№, СМС8-Е) также находятся в избытке в патологическом синовиуме. Повышенные уровни молекул адгезии способствуют миграции воспалительных клеток и их удерживанию в синовиальной ткани. Повышенные уровни происходящих из макрофагов клеток выстилки, а также уровни некоторых лимфоцитов тоже являются избыточными.

Роль Т-клеток в патогенезе КА хорошо установлена, в то время как роль В-клеток является менее понятной. Тем не менее, В-клетки играют многочисленные роли в патогенезе КА, включающие в себя действие в качестве антигенпрезентирующих клеток, секрецию провоспалительных цитокинов, продуцирование аутоантител ревматоидного фактора и активацию Т-клеток. Потенциальная роль В-клеток дополнительно подтверждается положительными результатами клинических испытаний тестирования ритуксимаба, моноклонального антитела против СЭ20. у пациентов с КА, наиболее ясно при предоставлении в комбинации с метотрексатом или циклофосфамидом. Указанные открытия предполагают, что В

- 1 015342 клетки являются подходящей мишенью для терапевтического вмешательства в КА.

Установленные способы лечения КА включают в себя модифицирующие заболевание антиревматические лекарственные средства (ИМАКИ), такие как гидроксихлорохин, сульфасалазин, метотрексат, лефлуномид, ритуксимаб, инфликсимаб, азатиоприн, И-пеницилламин, золото (орально или внутримышечно), миноциклин и циклоспорин, кортикостероиды, такие как преднизон, и нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (Ν8ΑΙΌ8). Указанные способы лечения являются обычно неспецифическими, часто ассоциированы с серьезными побочными действиями и не влияют существенно на прогрессирование деструкции суставов. Таким образом, имеется давно ощутимая потребность в данной области в развитии новых способов для лечения КА.

Сущность изобретения

В различных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам лечения аутоиммунных заболеваний. Иллюстративно, способы согласно изобретению включают в себя введение пациенту композиции, содержащей константный домен иммуноглобулина человека и внеклеточный домен ТАС1 или его фрагмент, который связывает В1у8 и/или АРК1Ь.

В другом варианте осуществления изобретение включает в себя способы лечения аутоиммунных заболеваний, в том числе КА, с использованием слитой молекулы ТАС1-1д, которая содержит внеклеточный домен ТАС1 или любой его фрагмент, который сохраняет способность связывать В1у8 и/или АРК1Ь.

В другом варианте осуществления изобретение включает в себя способы лечения КА, предусматривающие введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества слитой молекулы, содержащей константную цепь иммуноглобулина человека и внеклеточный домен ТАС1 или фрагмент внеклеточного домена ТАС1, который связывает В1у8 и/или АРКЛЬ. В одном варианте осуществления указанный фрагмент внеклеточного домена ТАС1 содержит один или два повторяющихся мотивов цистеина. В другом варианте осуществления указанным фрагментом является фрагмент, содержащий аминокислоты 30-110 внеклеточного домена ТАС1. Еще в одном варианте осуществления указанным фрагментом является фрагмент, содержащий аминокислоты 1-154 внеклеточного домена ТАСИ (8ЕО ΙΌ N0: 1).

В другом варианте осуществления изобретение включает в себя способы лечения КА введением пациенту композиции, содержащей слитый полипептид, ТАС1-Ее5, содержащий константный домен иммуноглобулина человека, Ес5, имеющий последовательность, представленную в виде 8Е0 ΙΌ N0: 2, и внеклеточный домен ТАС1, имеющий последовательность, представленную в виде 8Е0 ΙΌ N0: 1.

Еще в одном варианте осуществления изобретение включает в себя способы лечения КА путем введения пациенту композиции, содержащей слитый полипептид, содержащий константный домен иммуноглобулина человека с последовательностью, представленной в виде 8Е0 ΙΌ N0: 2, и полипептид, который связывает В1у8 и/или АРШЬ и который по меньшей мере на приблизительно 50%, по меньшей мере на приблизительно 60%, по меньшей мере на приблизительно 65%, по меньшей мере на приблизительно 70%, по меньшей мере на приблизительно 75%, по меньшей мере на приблизительно 80%, по меньшей мере на приблизительно 85%, по меньшей мере на приблизительно 90%, по меньшей мере на приблизительно 95% или по меньшей мере на приблизительно 99% идентичен 8Е0 ΙΌ N0: 1.

Другие аутоиммунные заболевания можно лечить способами согласно изобретению посредством введения пациенту слитого полипептида, содержащего константную цепь иммуноглобулина человека и внеклеточный домен ТАСЛ или фрагмент внеклеточного домена ТАСС который связывает В1у8 и/или АРКЛЬ. Такие аутоиммунные заболевания включают в себя, но не ограничиваются ими, системную красную волчанку (8ЬЕ), болезнь Грейвса, диабет типа Ι и типа ΙΙ, рассеянный склероз, синдром Шегрена, склеродермию, гломерулонефрит, отторжение трансплантата, например, аллотрансплантата органа или ткани или отторжения ксенотрансплантата и болезнь трансплантат против хозяина.

В одном варианте осуществления способы согласно изобретению предусматривают введение пациенту с КА слитой молекулы ТАСЫд в количествах от приблизительно 0,01 до приблизительно 10 мг/кг массы тела пациента. Слитую молекулу ТАСЫд можно вводить многократно с заранее предусмотренными интервалами. Например, указанную молекулу можно вводить 7 или более раз во время 12недельного интервала. За указанным начальным лечением слитым полипептидом ТАСЫд можно вводить указанный полипептид в режиме одного раза в две недели (каждую вторую неделю) в течение по меньшей мере еще 2 дополнительных недель, например указанный полипептид можно вводить по одному разу в неделю в течение дополнительных 2-30 недель. Альтернативно, указанный полипептид можно вводить на основе одного раза в неделю или одного раза в день.

Согласно способам настоящего изобретения слитый полипептид ТАСЫд можно вводить пациенту с КА подкожно, орально или внутривенно и в комбинации с другими лекарственными средствами. Такие лекарственные средства включают в себя, но не ограничиваются ими, ИМАКИ, такие как гидроксихлорохин, сульфасалазин, метотрексат, лефлуномид, ритуксимаб, инфликсимаб, азатиоприн, Ипеницилламин, золото (орально или внутримышечно), миноциклин и циклоспорин, кортикостероиды, такие как преднизон, №АЛИ8, цитокины, антицитокины и интерфероны.

Краткое описание фигур

Фиг. 1 - дерево эскалации дозы для лечения ТАС[-Ес5, фиг. 2 - диаграмма зон тела пациента, которые могут быть использованы для подкожных инъекций

- 2 015342 молекулы ТАС1-1д.

Подробное описание изобретения

В различных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам лечения аутоиммунного заболевания у пациента путем ингибирования взаимодействия В1у8 и/или АРКЙЬ с их рецепторами. Указанным пациентом может быть млекопитающее, например человек. В одном варианте осуществления указанные способы используют ингибитор, который содержит: 1) полипептид, который содержит домен, который, по меньшей мере, частично идентичен внеклеточному домену ТАС1, или его фрагмент, который связывает В1у8 и/или АРШЬ; и 2) константную цепь иммуноглобулина человека. В одном варианте осуществления в способах согласно изобретению используют слитую молекулу, содержащую константную цепь иммуноглобулина человека и любой полипептид, имеющий по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 65%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 75%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95% или по меньшей мере приблизительно 99% идентичность последовательности с внеклеточным доменом ТАС1. В патентах США №№ 5969102, 6316222 и 6500428 и заявках на патент США 09/569245 и 09/627206 (описания которых включены в настоящее описание в полном объеме в качестве ссылки) описаны последовательности для внеклеточного домена ТАС1, а также специфические фрагменты внеклеточного домена ТАС1, которые взаимодействуют с лигандами ТАС1, в том числе В1у8 и АРШЬ. Один иллюстративный фрагмент внеклеточного домена ТАС1 содержит один или два мотива повторяющегося цистеина. Другим иллюстративным фрагментом является фрагмент, содержащий аминокислоты 30-110 внеклеточного домена ТАС1 или его фрагменты. Еще одним иллюстративным фрагментом является фрагмент, содержащий аминокислоты 1-154 внеклеточного домена ТАС1 (8ЕО Ш N0: 1) или его фрагменты.

Другие слитые молекулы, применимые для способов согласно изобретению, включают в себя слитый полипептид между константной цепью иммуноглобулина человека и полным внеклеточным доменом ТАС1 или его ортологом или слитый полипептид между константной цепью иммуноглобулина человека и любым фрагментом внеклеточного домена ТАС1, который может связывать лиганды В1у8 и АРШЬ. Любая из слитых молекул, используемых в способах настоящего изобретения, может называться слитой молекулой ТАС1-1д.

ТАС1-Ее5 является одной из слитых молекул ТАС1-1д, применимых для способов согласно изобретению. ТАС1-Ее5 является рекомбинантным слитым полипептидом, содержащим внеклеточную лигандсвязывающую часть рецептора ТАС1 от приблизительно аминокислоты 1 до приблизительно аминокислоты 154 (8ЕО Ш N0: 1) и модифицированную Ее-часть иммуноглобулина человека, Ес5 (8ЕО Ш N0: 2). Другие молекулы ТАС1-1д, применимые для способов согласно изобретению, включают в себя слитую молекулу, содержащую полипептид с 8Е0 Ш N0: 2 и полипептид, который может связывать В1у8 и который может быть по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 65%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 75%, по меньшей мере приблизительно на 80%, по меньшей мере приблизительно на 85%, по меньшей мере приблизительно на 90%, по меньшей мере приблизительно на 95% или по меньшей мере приблизительно на 99% идетичным 8Е0 Ш N0: 1.

Варианты осуществления настоящего изобретения включают в себя способы применения слитой молекулы ТАС1-1д для лечения НА. Другие аутоиммунные заболевания, которые можно лечить способами согласно изобретению, включают в себя системную красную волчанку (8ЬЕ), болезнь Грейвса, диабет типа I и типа II, рассеянный склероз, синдром Шегрена, склеродермию, гломерулонефрит, отторжение трансплантата, например аллотрансплантата органа или ткани, и отторжение ксенотрансплантата, болезнь трансплантат против хозяина или любое другое аутоиммунное заболевание, которое можно лечить уменьшением количества циркулирующих зрелых В-клеток и секретирующих иммуноглобулин клеток и растворимых иммуноглобулинов, ассоциированных с такими заболеваниями.

Варианты осуществления включают в себя также способы лечения введением пациенту слитой молекулы, содержащей константный домен иммуноглобулина человека и полипептид, содержащий любой фрагмент внеклеточного домена ТАС1, который может связывать В1у8 и/или АРШЬ.

Слитую молекулу ТАС1-1д можно вводить пациенту в соответствии с любым подходящим способом введения, в том числе, но не только, орально, внутривенно или подкожно.

Готовые формы ТАС1-1д, применимые для способов согласно изобретению, можно готовить и хранить в виде замороженного, стерильного, изотонического раствора. Такие готовые формы могут включать в себя другие активные ингредиенты и эксципиенты, такие как, например, хлорид натрия, фосфатный буфер и гидроксид натрия или о-фосфорную кислоту (рН 6,0). Готовые формы ТАС1-1д можно вводить пациенту в комбинации с другими лекарственными средствами. Такие лекарственные средства включают в себя, но не ограничиваются ими, ОМАКО, такие как гидроксихлорохин, сульфасалазин, метотрексат, лефлуномид, ритуксимаб, инфликсимаб, азатиоприн, Ό-пеницилламин, золото (орально или внутримышечно), миноциклин и циклоспорин, кортикостероиды, такие как преднизон, №АШ8 и лекарственные средства для уменьшения боли. Способы согласно изобретению могут быть использованы в

- 3 015342 комбинации с другими способами лечения аутоиммунных заболеваний. Такие другие способы лечения включают в себя, но не ограничиваются ими, хирургию, акупунктуру (иглоукалывание), физическую терапию и генную терапию. Готовые формы ТАС1-1д могут вводиться до, одновременно или последовательно с другими способами лечения.

Было показано, что ТАС1-Ре5 ингибирует активацию В1у8 пролиферации В-клеток ίη νίίτο. Лечение мышей ТАС1-Рс5 приводит к частичному блокированию развития В-клеток, которое оказывает минимальное действие на предшественники В-клеток в костном мозге и линии дифференцировки других клеток, в том числе Т-клеток периферической крови, моноцитов и нейтрофилов. Трансгенные мыши, полученные генной инженерией, экспрессируют растворимую форму рецептора ТАС1 в крови, продуцируют меньше В-клеток и обнаруживают уменьшенные уровни циркулирующего антитела. ТАС1-Ре5трансгенные мыши имели нормальные количества клеток в тимусе, костном мозге и мезентериальном лимфатическом узле. Не было значимых различий в Т-клеточных популяциях в тимусе, лимфатическом узле и селезенке (Ого88 е! а1. 1шшипйу 2001; 15(2): 289-302).

Кроме того, ТАС1-1д может ингибировать антигенспецифическое продуцирование антител в иммунной реакции у мышей, независимо от того, вводят ли его во время первичной реакции или вторичной реакции на антиген. В указанных исследованиях не наблюдали Т-клеточной реакции на антигенную стимуляцию ех νΐνο. В модели системной красной волчанки животного лечение слитыми белками ТАС1-1д было эффективным в ограничении появления и прогрессирования указанного заболевания (Ого88 е! а1. №Шге 2000; 404: 995-999). Подобным образом в рамках мышиной модели индуцированного коллагеном артрита ТАС1-1д был способен ингибировать развитие коллагенспецифических антител и уменьшать как частоту возникновения воспаления, так и коэффициент появления заболевания (Ого88 е! а1. 1ттипйу 2001; 15(2): 289-302).

Композицию, содержащую слитую молекулу ТАС1-1д, можно вводить пациенту один раз или многократно на протяжении некоторого периода. Например, пациент может получать одну подкожную инъекцию молекул ТАС1-1д, после которой его или ее состояние может быть подвергнуто мониторингу. Пациентам, у которых наблюдается улучшение или, по меньшей мере, стабилизация их состояния, слитую молекулу ТАС1-1д можно вводить многократно в течение дополнительного периода. Дополнительный период может составлять от приблизительно 2 недель до приблизительно 30 недель. Например, пациенту можно вводить три дозы слитой молекулы ТАС1-1д во время четырехнедельного интервала. Альтернативно, пациенту можно водить дополнительно семь доз слитой молекулы ТАС1-1д во время двенадцатинедельного интервала. Введение молекул ТАС1-1д пациенту может выполняться один раз в день, один раз в два дня, один раз в неделю, один раз в две недели, один раз в месяц, один раз в два месяца и т.д.

Слитую молекулу ТАС1-1д вводят пациенту в количестве, эффективном для лечения состояния пациента. В одном варианте осуществления термин лечение в отношении конкретного заболевания или нарушения включает в себя, но не ограничивается ими, ингибирование указанного заболевания или нарушения, например остановку развития указанного заболевания или нарушения; ослабление указанного заболевания или нарушения, например индукцию регресса указанного заболевания или нарушения; или ослабление состояния, вызываемого или происходящего из указанного заболевания или нарушения, например ослабление, предупреждение или лечение симптомов указанного заболевания или нарушения. В другом варианте осуществления указанное количество может составлять от 0,01 мг на 1 кг массы тела пациента до 10 мг на 1 кг массы тела пациента. Оптимальная доза для лечения слитой молекулой ТАС11д может быть получена с использованием диаграммы фиг. 1, описанной более подробно в примере 5.

Слитая молекула ТАС1-1д может доставляться любым подходящим способом. В одном варианте осуществления указанную молекулу доставляют перитонеальной инъекцией. В другом варианте осуществления указанная перитонеальная инъекция выполняется через подкожную инъекцию. В другом варианте осуществления перитонеальную инъекцию вводят в переднюю брюшную стенку. При необходимости более одной инъекции для введения дозы указанные инъекции могут вводиться на расстоянии нескольких сантиметров и относительно близко во времени, например так близко, как это кажется приемлемым. Для многократного введения лекарственного средства место введения на передней брюшной стенке может сменяться по очереди или чередоваться. Примерные зоны для подкожной инъекции в переднюю брюшную стенку изображены на фиг. 2 и включают в себя правую верхнюю внешнюю зону, правую нижнюю внешнюю зону, левую верхнюю внешнюю зону, среднюю нижнюю зону, а также правое и левое бедра и плечи (фиг. 2). Альтернативно, слитая молекула ТАС1-1д настоящего изобретения может доставляться через внутривенные инъекции или орально в форме таблеток, капсул, жидких композиций или гелей и т.д.

Пример 1. Тестирование фармакологии, токсикологии и фармакокинетики ТАС1-Рс5 в экспериментальной модели животного.

ТАС1-Рс5 оценивали в модели резистентности (сопротивляемости) хозяина для прямой оценки функционального потенциала иммунной системы. Мышей стимулировали вирусом гриппа во время лечения ТАС1-Рс5. Дексаметазон, используемый в качестве положительного контроля, приводил к усиленной и пролонгированной вирусной инфекции. Введение однократной дозы ТАС1-Рс5 подкожным (8С) способом уменьшало способность животных выводить указанную вирусную инфекцию.

- 4 015342

Основные исследования безопасности фармакологии показали, что ТЛС1-Ее5 не индуцировал больших изменений нервной, дыхательной и сердечно-сосудистой систем в мышах или обезьянах до 8Сдозы 80 мг/кг. Только в мышах наблюдали слегка увеличенную гипербдительность и локомоторную активность, которые предполагают малое и транзиторное (преходящее) стимулирующее действие, при 80 мг/кг, причем уровень ненаблюдаемого действия (ΝΘΕΕ) был равен 20 мг/кг.

При введении мышам в виде однократной дозы внутривенным (IV) или подкожным (8С) способом ТЛС1-Ее5 не индуцировал смертность или видимые общие или локальные патологические действия в животных до наивысшей технически возможной дозы: 1200 мг/кг.

Введение обезьянам ТЛС1-Ее5 в виде однократной дозы 8С-способом при уровне дозы 240 мг/кг не приводил к смертности или к каким-либо большим токсичным действиям.

На основании результатов, полученных после 2 или 4 недель введения ТЛС1-Ее5 подкожным способом мышам при дозах 5, 20 и 80 мг/кг/каждый второй день, можно было сделать вывод, что указанное соединение хорошо переносилось в указанном виде при дозах до 80 мг/кг. При всех дозах были обнаружены связанные с лечением модификации, ограничивающиеся иммунной системой. Указанные изменения включают в себя уменьшения в общих количествах В-клеток и количествах зрелых В-клеток и уровнях сывороточных 1дС и 1дМ. Иммуногистохимические тесты, выполняемые в селезенке и лимфатических узлах, подтверждали истощение, ограниченное В-клетками, причем количество Т-клеток является неизмененным. Все указанные изменения, связанные со временем и дозой в некоторых случаях, рассматривали как излишне увеличенные фармакологические действия, ожидаемые в чувствительных видах после введения очень высоких доз ТЛС1-Ее5. В общем и целом, указанные действия наблюдали после 2 и 4 недель лечения без больших признаков прогрессирования во времени. По-видимому, они были почти полностью обратимыми после 4 недель после прекращения лечения, за исключением уменьшенных количеств В-клеток.

Для выяснения обратимости модуляции В-клеток дополнительное исследование на мышах проводили при дозах 5 и 20 мг/кг в течение 4 недель каждый второй день с более продолжительными периодами восстановления. Нормализация общих и зрелых циркулирующих В-клеток достигалась после двух месяцев после прекращения лечения при 5 мг/кг и после 4 месяцев при 20 мг/кг. Кроме того, указанная инъекция индуцировала слабое увеличение в сравнении с контролями-носителями воспалительных изменений в местах инъекций при всех дозах.

Подкожное введение ТЛС1-Ее5 в обезьянах не индуцировало основных признаков токсичности при любой из испытанных доз: 5, 20 или 80 мг/кг/каждый третий день при введении в течение 4 последовательных недель.

Локальную переносимость считали удовлетворительной до самой высокой испытанной дозы и при самой высокой испытанной дозе. Индуцировались зависимые от дозы и обратимые легкие или умеренные изменения воспалительного происхождения (в основном инфильтраты периваскулярных моноклональных и эозинофильных клеток), но авторы считали, что указанные изменения связаны с локальным присутствием экзогенных белков. Только при высокой дозе несколько животных обнаруживали слабое или умеренное подострое воспаление, ассоциированное с образованием кист в одном из них.

Наблюдали уменьшения количества циркулирующих В-клеток при определениях субпопуляций лимфоцитов, а также гистологическое истощение маргинальной фолликулярной зоны селезенки (известной как зона, зависимая от В-клеток) и уменьшения общих уровней 1дС и 1дМ в сыворотке. Они рассматривались как результат фармакологических свойств ТЛС1-Ее5, как показано фармакологическими экспериментами ίη νΐίτο и ίη νίνο. Их степень была избыточно увеличенной, как и ожидалось, в исследованиях токсикологии, в которых животным целенаправленно вводили высокие дозы тест-соединения. Хотя низкие сывороточные уровни 1дС и 1дМ и истощение лимфоцитов селезенки обнаруживали явную тенденцию в направлении нормализации в пределах допускаемого одного месяца после прекращения лечения, общие и зрелые циркулирующие В-клетки не обнаруживали сходного поведения, что указывало на необходимость более продолжительного времени для нормализации.

В конце периода лечения (неделя 4) самцы и самки группы с высокой дозой (80 мг/кг) обнаруживали слабое, но статистически значимое уменьшение средних величин общего белка в сравнении с контролями. Слабую тенденцию в направлении уменьшения наблюдали также при той же самой дозе при неделе 2 и в конце периода восстановления.

Модификации белка сыворотки в самках с высокой дозой в конце периода введения доз включают в себя уменьшение глобулина и увеличения процента альбумина и фракции α-1-глобулина. Фракция α-1глобулина была также более высокой, чем контроли в самках группы 3 (20 мг/кг).

Иммуногенность ТЛС1-Ее5 была низкой как в мышах (только несколько самок обнаруживали уровни циркулирующих связывающих антител во время и после периода лечения), так и в обезьянах (низкие уровни обнаруживали после периода восстановления в небольшом числе животных); ни в одном из видов не обнаруживали нейтрализующих антител.

ТЛС1-Ее5 испытывали с использованием стандартного набора тестов ш νίνο для детектирования токсикологии репродукции и фертильности (тест фертильности на самцах и самках мышей, обработанных 8С-способом при дозах 5, 20 и 80 мг/кг/каждый второй день до и во время спаривания и до периода

- 5 015342 имплантации) и эмбриофетального развития (эмбриофетального развития в самках мышей и кроликов, обработанных БС-способом при дозах 5, 20 и 80 мг/кг/каждый второй день во время периода органогенеза).

Тест фертильности в мышах показал зависимое от дозы увеличение пре- и постимлантационных потерь после подвергания действию 20 и 80 мг/кг/каждый второй день ТАС1-Рс5 в сравнении с контрольной группой.

Оценка данных, полученных в мышах эмбриофетального развития, показал, что не наблюдались токсические для эмбриона действия при любой дозе и не индуцировались связанные с соединением пороки развития плода.

У кроликов исследование эмбриофетального развития показало, что лечение вызывало зависимое от дозы более низкое увеличение массы и более низкое потребление корма у беременных животных, обработанных 20 или 80 мг/кг/каждый второй день. Вышеописанные материнские изменения были ассоциированы с увеличенной скоростью резорбций и более низкой массой тела плода при указанных двух более высоких дозах.

Полученные результаты предполагают возможное действие ТАС1-Рс5 на имплантацию мышиной бластоцисты в матку. Наблюдаемые действия ТАС1-Рс5 на увеличение материнской массы и потребление корма были, по-видимому, ответственными за наблюдаемые действия на жизнеспособность помета в кроликах, подвергаемых действию 20 или 80 мг/кг/каждый второй день во время органогенеза, и за то, что не было прямой токсичности ТАС1-Рс5 в отношении плода. Не было пороков развития, связанных с лечением ТАС1-Рс5, в указанных двух видах животных.

Кроме того, гистологическое исследование мужских и женских гонад и вспомогательных половых органов проводили в 2-недельных и 1-месячных исследованиях токсичности, при БС-способе в мышах и обезьянах, в которых ТАС1-Рс5 вводили каждый второй или каждый третий день соответственно, без получения связанных с лечением действий.

Исследование локальной переносимости у кроликов показало, что композиция ТАС1-Рс5 хорошо переносилась локально при инъекции подкожным способом кроликам при дозе 70 мг/мл.

Фармакокинетическое исследование с однократной дозой у самцов мышей при введении IV и БС проводили у мышей либо внутривенным способом при дозе 1 мг/кг, либо подкожным способом при дозах 1, 5 и 15 мг/кг.

Время до максимальной абсорбции (1_макс) было определено между 4 и 16 ч, причем было рассчитано, что величина 1_1/2 была равна 40-50 ч.

Наблюдали подобный инфузии профиль во время первых 30 мин после ΐν-болюсного введения, после чего ТАС1-Рс5 элиминировался из тела с полупериодом элиминации 44 ч. После подкожного введения отношение между АИС (площади под кривой), полученной при 3 дозах 1, 5 и 15 мг/кг, было 1:5:8 в сравнении с отношением доз 1:5:15, предполагающим потерю дозовой пропорциональности при высокой дозе.

Биодоступность ТАС1-Рс5 в мышах при подкожном способе введения была равна 76 и 89% при дозах 1 и 5 мг/кг, но была более низкой, чем ожидалось, при 15 мг/кг (0,42; как рассчитано против внутривенной дозы 1 мг/кг). Поскольку видимый полупериод элиминации не изменялся, более низкая биодоступность, наблюдаемая при указанной высокой дозе, могла бы объясняться увеличением как клиренса, так и объема распределения или более вероятно уменьшенной абсорбцией вследствие образования отложения в месте инъекции.

Фармацевтическое исследование с однократной дозой у самцов обезьян при введении IV и БС проводили у самцов собакоподобных обезьян, инъецированных либо внутривенным способом при дозе 1 мг/кг, либо подкожным способом при дозах 1, 5 и 15 мг/кг.

Шесть самцов обезьян распределяли на 2 группы из 3 животных каждая, и они получали 2 введения, разделенных 2-недельным периодом вымывания. Обработками периода 1 были 1 мг/кг IV (группа 1) и 1 мг/кг БС (группа 2) и обработками периода 2 были 5 мг/кг БС (группа 1) и 15 мг/кг (группа 2).

Время до максимальной абсорбции (1_макс) было определено между 6 и 8 ч, причем было рассчитано, что величина 1_1/2 была равна приблизительно 120-190 ч.

Наблюдали подобный инфузии профиль у 2 из 3 обезьян во время первых 15 мин после IVболюсного введения, после чего ТАСКГсЗ элиминировался из тела с полупериодом элиминации 179±29 ч. Объем распределения в стационарном состоянии, V,, был равен 382±82 мл/кг, т.е. объему, близкому к внутриклеточному объему жидкости.

После подкожного введения пропорциональность АИС относительно дозы была хорошей, т.е. 216, 1182 и 2732 ч мкг/мл для доз БС 1, 5 и 15 мг/кг. Биодоступность ТАСКГсЗ при подкожном способе (рассчитанная относительно дозы IV 1 мг/кг) была равна 0,92, 1,02 и 0,77 при низкой, промежуточной и высокой дозах. Таким образом, ТАСГ-Гс5 почти полностью абсорбировался подкожным способом.

Низкие уровни ТАСКГсЗ обнаруживали в пробах перед введением доз в течение периода 2 (между дозами 1 мг/кг посредством IV- или БС-способов, период 1, и дозами 5 или 15 мг/кг, соответственно, в периоде 2) для всех шести обезьян, так как во время 2-недельного периода вымывания истекали только 2 периода полувыведения, что является недостаточным для полной элиминации введенного соединения

- 6 015342 (которая требует 5 периодов полувыведения). Однако удалось оценить, что вклад ЛИС ранней дозы представлял только приблизительно 2% общей ЛИС в периоде 2.

Уровни ГдО в сыворотке показали уменьшение 10,2% после ГУ-введения доз. Доза 15 мг/кг 8С показала слегка более высокое действие, хотя не наблюдали различий между дозами 1 и 5 мг/кг (уменьшения 8,6, 8,4 и 12,3% после доз 1, 5 и 15 мг/кг соответственно). Уровни ГдМ в сыворотке показали уменьшение 18,0% после ГУ-введения доз. Не наблюдали различий между 3 дозами 8С (уменьшения 23,5, 23,0 и 24,2% после доз 1, 5 и 15 мг/кг соответственно).

Пример 2. Определение переносимой дозы ТЛСГ-Ге5 у здоровых волонтеров.

В настоящее время завершается первое исследование фазы Г ТЛСГ-Ге5. Это двойное слепое, контролируемое плацебо, проводимое с эскалацией доз исследование для определения безопасности, фармакокинетики и фармакодинамики однократных доз ТЛСГ-Ге5, вводимых подкожно здоровым волонтерам мужского пола. Ниже представлено описание плана исследования вместе с суммированием доступных данных.

ТЛСГ-Ге5 вводили здоровым волонтерам в двойном слепом, контролируемом плацебо, проводимом с эскалацией доз исследование для определения безопасности, фармакокинетики и фармакодинамики однократных доз ТЛСГ-Ге5, вводимых подкожно здоровым волонтерам мужского пола.

В исследование были включены четыре группы субъектов. В каждой группе введения доз один субъект был рандомизирован для получения инъекции плацебо, причем все другие получали ТЛСГ-Ге5. После выписки из места исследования при 24 ч после введения дозы субъекты приходили на прием в качестве амбулаторных больных в течение семи недель запланированных обследований. Системную и локальную переносимость ТЛСГ-Ге5 подвергали мониторингу в отношении показателей физического обследования, боли в месте инъекции, реакций локальной переносимости в месте инъекции (инъекций) (покраснения, опухания, гематом и зуда), показателей жизненно важных функций, ЭКГ (электрокардиограмм) с 12 отведениями, лабораторных оценок безопасности и регистрации вредных побочных действий.

Фармакокинетические и фармакодинамические маркеры подвергали мониторингу на протяжении семинедельного периода после введения доз. Фармакодинамическое действие ТЛСГ-Ге5 подвергали мониторингу с использованием ряда маркеров, включающих в себя: субпопуляции лимфоцитов при помощи ГАС8-анализа (плазматические клетки (СО138+), незрелые В-клетки (СО19+, ГдО-), зрелые В-клетки (СО19+, ГдЭ+), Т-хелперные клетки (СЭ5+, СО4+), цитотоксические Т-клетки (СО5+, СЭ8+), общие Тклетки (СЭ5+), свободный В1у8, комплекс В1у8/ТЛСГ-Ге5, ГдО, ГдМ, анти-ТЛСГ-Ге5-антитела.

Эскалация (увеличение) доз определялась алгоритмом в протоколе исследования на основе обзора данных через три недели после введения доз. Использовали четыре группы введения доз: группа 1 получала 2,1 мг; группа 2 получала 70 мг; группа 3 получала 210 мг, и группа 4 получала 630 мг.

Результаты: здоровым волонтерам мужского пола вводили однократные подкожные дозы ТЛСГ-Ге5 при дозах от 0,03 до 9 мг/кг. Данные безопасности и переносимости использовали вместе с анализом ГАС8 субпопуляций лимфоцитов при неделе 3 для ориентации эскалации доз между когортами. Исследовали четыре когорты, как показано в табл. 1.

Таблица 1

Распределение волонтеров

получали стандартизованную дозу.

^ь Вследствие ошибки разведения доза, введенная когорте 1, была в 10 раз более низкой, чем это было запланировано (0,3 мг/кг). Указанная ошибка была обнаружена после рассмотрения фармакокинетических данных из когорты 1, но после введения доз когорты 2. ^с В том числе 1 субъект, получающий плацебо.

^а Один волонтер прекратил прием доз перед инъекцией.

Демографические фоновые характеристики суммированы для указанной популяции по когортам и представлены в целом и показаны в табл. 2.

- 7 015342

Демографические характеристики

Таблица 2

Характеристика	Статистика	Когорта 1	Когорта 2	Когорта 3	Когорта 4	Всего
Возраст (годы)	η	б	б	б	5	23
Среднее (30)	30,2 (7,0)	33,0 (7,7)	25,3 (6,8)	35,0 (5,4)	30,7 (7,4)
Диапазон	23-43	23-43	19-34	30-44	19-44
Индекс массы тела (кг/м2)	η	6	б	б	5	23
Среднее (30)	24,7 (1,7)	26,0 (2,0)	24,0 (3,5)	25,3 (2,8)	24,8 (2,4)
Диапазон	22,2-26,6	23,1-28,9	18,7-28	22,3-27,5	18,7-28,9
Рост (м)	η	б	б	6	5	23
Среднее (ЗЭ)	1,82 (0,04)	1,80 (0,08)	1,77 (0,07)	1,73 (0,06)	1,78 (0,07)
Диапазон	1,77-1,88	1,71-1,91	1,67-1,85	1,68-1,78	1,67-1,91
Масса (кг)	η	б	б	б	5	23
Среднее (50)	81,7 (7,3)	84,2 (12,1)	74,7 (7,6)	76,2 (9,2)	79,0 (9,4)
Диапазон	71-91	69-101	67-84	63-89	63-101
Пол η (%)	η	б	б	б	5	23
Мужской	б (100%)	6 (100%)	6 (100%)	5 (100%)	23 (100%)
Диапазон	0 (0%)	0 (0%)	0 (0%)	0 (0%)	0 (0%)
Раса η (%)	η	б	б	б	5	23
Белая	б (100%)	6 (100%)	б (100%)	5 (100%)	23 (100%)
Другая	0 (0%)	0 (0%)	0 (0%)	0 (0%)	0 (0%)

В целом возраст (среднее±8Э) составлял 30,7±7,4 года, а индекс массы тела составлял 24,8 кг/м². Все волонтеры были белыми индивидами мужского пола.

ТЛС1-Ре5 хорошо переносился во всех группах. Не было видимых действий после определения показателей физического обследования, показателей жизненно важных функций или ЭКГ с 12 отведениями.

вызванных лечением побочных действий, сообщенных до настоящего

Таблица 3

Система тела	Предпочтительный термин	Лечение
ТАС1-Рс5 2,1 мг	ТАС1-Рс5 70 мг	ТАС1-Рс5 210 мг	ТАС1-Рс5 630 мг	Плацебо	Всего
N	N	N	N	N	N	%
Глазные нарушения	Отек век	1					1	2,1
Желудочно-кишечные нарушения	Боль живота верхней части						1	2,1
Диарея		1	1	1	1	4	8,5
Изъязвление полости рта				1	1	2	4,3
Тошнота		1		1	1	3	6,4
Рвота			1	1		2	4,3
Общие нарушения и состояния места введения	Подобное гриппу заболевание				1	2	3	6,4
Инфекции и инвазии	Назофарингит		4	1	1		6	10,6
Перианальный абсцесс	1					1	2,1
Повреждение, интоксикация и процедурные осложнения	Контузия					1	1	2,1
Повреждение суставов			1			1	2,1
Нарушения мышечноскелетной и соединительной ткани	Артралгия		1				1	2,1
Боль в спине					1	1	2,1
Нарушения нервной системы	Головная боль	1	2	2	2	1	8	17,0
Дыхательные торакальные и медиастинальные нарушения	Кашель		1		1	1	3	6,4
Заложенность носа			1		1	2	4,3
Фаринго-ларингеальная боль	1	2	1	2	1	7	14,9
Кожные и подкожные тканевые нарушения	Общая сыпь					1	1	2,1

Временное покраснение и опухание наблюдали в месте введения у некоторых субъектов, причем покраснение наблюдали у всех субъектов в когортах 3 и 4. Хотя частота встречаемости реакций места инъекции, по-видимому, увеличивается в группах более высоких доз, авторы считают, что это связано с увеличенным объемом (или числом) инъекций.

- 8 015342

Сорок восемь (48) возникающих вследствие лечения побочных реакций сообщались через семь недель после введения доз. Большинство из них (44 реакции, 91,7%) были слабыми, а остальные были умеренными (4 реакции, 8,3%). Не было тяжелых побочных реакций и не было серьезных побочных реакций во время указанного периода. Не было видимой взаимосвязи между дозами введенного ТАС1-Бс5 и частотой встречаемости, интенсивностью или определенной взаимосвязью вредных побочных реакций. Сообщенные до сих пор побочные реакции суммированы в табл. 3.

Считается, что ТАС1-Бс5 показал хорошую переносимость при дозах до 630 мг без вызывания значительных проблем, связанных с безопасностью. Полученные данные подтверждают предполагаемые дозы предложенных исследований субъектов.

Выполняли несистемный анализ концентраций ТАС1 в сыворотке. Указанный предварительный анализ выполняли с использованием номинальных временных точек взятия проб. Субъекты 2, 6 и 13 имели измеримые концентрации перед введением дозы, и, следовательно, фоновые концентрации вычитали из всех измерений после введения дозы перед анализом.

Фармакокинетические параметры после однократных подкожных доз 2,1, 70, 210 и 630 мг суммированы в табл. 4. Концентрации лекарственных средств были близкими к пределу количественного определения указанного анализа после дозы 2,1 мг ТАС1-Бс5, ограничивая ценность данных при указанном уровне дозы. При дозах 70 мг и выше, Т_макс (время до максимальной абсорбции) было в диапазоне 16-36 ч и общая медиана 1_1/2 (рассчитанная из терминальной части указанной кривой) была равна 303 ч. Кроме того, АиС (экстраполированная до бесконечности) и С_макс увеличивались более, чем пропорционально дозе.

Таблица 4

Фармакокинетические (ФК) параметры

Параметр	Обработка	η			Минимум	Медиана	Максимум	СУ
Смаке (МКГ/МЛ)	2,1 мг	5	0,015	0,011	0,005	0,013	0,032	74
Тмакс (я)	2,1 мг	5	-	-	8	72	336	-
Й/2 (Я)	2,1 мг	4	204	180	45	203	365	88
АИС (ч-мкг/мл)	2,1 мг	4	8,55	9,65	0,524	6,62	20,4	113
% АИС (экстрап.)	2,1 мг	4	36	24	13	32	69	65
СЬ/Р (л/ч)	2,1 мг	4	1,70	1,90	0,10	1,34	4,01	112
Смаке (МКГ/МЛ)	70 мг	5	0,617	0,236	0,426	0,496	0,985	38
Тмакс (Я)	70 мг	5	-	-	16	16	36	-
Й/2 (Я)	70 мг	5	255	23	219	264	276	9
лис (ч-мкг/мл)	70 мг	5	79,7	15,7	65,4	72,5	101	20
% АЬС (экстрап.)	70 мг	5	10	1	9	11	11	12
СЬ/Р (л/ч)	70 мг	5	0,90	0,17	0,69	0,97	1,07	18
Смаке (мкг/мл)	210 мг	5	3	0,902	1,84	2,90	4,16	30
Тмакс (я)	210 мг	5	-	-	12	16	36	-
11/2 (Я)	210 мг	5	429	160	169	433	568	37
АЬС (ч-мкг/мл)	210 мг	5	260	72	167	267	344	28
% АиС (экстрап.)	210 мг	5	6	3	1	6	9	54
СЬ/Р (л/ч)	210 мг	5	0,86	0,26	0,61	0,79	1,25	31

Смаке (МКГ/МЛ)	630 мг	4	13,9	2,79	11,4	13,7	16,7	20
Тмакс (я)	630 мг	4	-	-	16	16	16	-
11/2 (Я)	630 мг	4	313	16	291	316	329	5
АЬС (ч-мкг/мл)	630 мг	4	992	194	719	1040	1170	20
% АЬС (экстрап.)	630 мг	4	2	0	1	2	2	18
СЬ/Р (л/ч)	630 мг	4	0,66	0,15	0,54	0,61	0,88	23

Фармакодинамические анализы показали уменьшения фоновых уровней 1дМ через 7 недель после однократных доз 70, 210 или 630 мг. Хотя не удалось установить ясной взаимосвязи доза-ответ с пробами малого размера, степень уменьшения 1дМ была наивысшей в группе с наивысшей дозой. Субъекты в группе с дозой 70 мг обнаруживают, по-видимому, возврат уровней 1дМ к фону через 7 недель после введения дозы. Уровни в группах с более высокими дозами оставались подавленными в указанной временной точке. Не было видимых действий на уровни 1§С или на субпопуляции лимфоцитов, которые измеряли при помощи БАС8.

Имелось пропорциональное увеличение уровней комплексов В1у8/ТАС1-Бс5 во время указанного периода взятия проб, достигающее плато при приблизительно 600 ч после введения дозы. Вывод: данные для человека, полученные на здоровых волонтерах мужского пола, показали, что ТАС1-Бс5 является

- 9 015342 безопасным и хорошо переносится субъектами при дозах до 630 мг. Характер, частота встречаемости и тяжесть побочных реакций были сравнимы между группами обработки ТАС1-Рс5 и плацебо. Не было клинически значимых изменений в показателях физического обследования, показателях жизненно важных функций, ЭКГ с 12 отведениями или лабораторных параметрах безопасности. Локальная переносимость в месте введения была хорошей. Полученные данные поддерживают предложенные дозы в субъектах с ВСМ.

После однократных доз в здоровых субъектах мужского пола ТЛС1-Рс5 достигал Т_макс между 16 и 20 ч, ЛИС увеличивалась пропорциональным дозе образом, хотя увеличения С_макс были большими, чем пропорциональные дозе показатели. Медианный полупериод существования ТЛС1-Рс5 был равен приблизительно 300 ч. Фармакодинамическое действие отмечали на уровнях 1дМ при дозах 70, 210 и 630 мг. Не было видимого действия лечения на 1дС или субпопуляциях лимфоцитов после однократной дозы ТАС1-Рс5. Нет известных или ожидаемых рисков особой тяжести или серьезности, которые не были уже учтены в предложенных протоколах исследования.

Пример 3. Лечение пациентов с КА композициями ТАС1-Рс5.

Пациентов с КА клинически оценивали перед введением ТАС1-Рс5. Оценки фона определяли как оценки, выполняемые непосредственно перед первым введением ТАС1-Рс5. Первый день введения ТАС1Рс5 обозначали как день 1. Следующие процедуры выполняли перед введением пациенту первой дозы лекарственной терапии ТАС1-Рс5: ЭКГ; измерение показателя жизненно важных функций (У8); физическое обследование; оценка активности заболевания (см. пример 6); измерение роста и массы (только при первой дозе и при визите во время последующего наблюдения); рутинные лабораторные тесты (см. табл. 5); расчет отношения гидроксипиридинолин/лизилпиридинолин (НР/ЬР); фармакокинетическое (ФК) и фармакодинамическое (ФД) измерение концентрации свободного ТАС1-Рс5 и общей концентрации ТАС1-Рс5 в сыворотке, сывороточных уровней свободных АРК!Ь и В1у8, комплекса В1у8/ТАС1-Рс5, измерение количества клеток проточной цитометрией и измерение анти-ТАСГантител (только при первой дозе) и измерение биомаркеров в крови, включающих в себя субпопуляции лимфоцитов (крови, распределенной в три пробирки и фенотипированной анализом РАС8 в соответствии с табл. 6), 1дА, 1дМ, 1дС (в том числе субтипирование), аутоантитела против цитруллинированных пептидов, ревматоидные факторы (1дА-КР, 1дМ-КР, 1дО-КР), С-реактивный белок (СКР), ΪΝΕ-α, ΙΓΝ-γ, 1Ь-6, 1Ь-1, 1Ь-12 и 1Ь-8. В одной субпопуляции пациентов выполняют артроскопически направляемую синовиальную биопсию или взятие синовиальной жидкости пункцией с использованием иглы и выполняют оценки ФК, ФД и оценки биомаркеров в указанной синовиальной жидкости. В когортах с повторяемыми введениями доз многие или все указанные измерения выполняют непосредственно перед последующими введениями ТАС1-Рс5.

- 10 015342

Таблица 5

Рутинные лабораторные

Химия крови	Гематология
γ-глутамилтрансфераза	Гематокрит
Аланинтрансаминаза	Гемоглобин
Альбумин	Средний гемоглобин клетки
Щелочная фосфатаза	МСНС
Аспартаттрансаминаза	Средний объем клетки
Билирубин - прямой (только если общий билирубин вне нормального диапазона)	Количество тромбоцитов
Билирубин - общий	Количество эритроцитов
Кальций	Количество лейкоцитов2
Креатинин	Е5К (скорость осаждения эритроцитов)
Глюкоза (натощак)	Анализ мочи
Неорганический фосфор	рН
Калий	Лейкоциты
Белок - общий	Нитрит
Электрофорез белков	Глюкоза
Комплемент 3	Кетоны
Натрий	Белок3
Триглицериды1	Кровь3
Холестерин	Коагуляция
Мочевина	Активированное частичное тромбопластиновое время
Мочевая кислота	Протромбиновое время

1. Пациенты должны голодать в течение приблизительно 10 ч перед определением триглицеридов.

2. Количество лейкоцитов должно включать в себя определение лейкоцитарной формулы.

3. Если присутствуют белок, эритроциты или лейкоциты (КБС или \\'ВС). должно выполняться микроскопическое исследование пробы.

Таблица 6

Субпопуляции лимфоцитов

Пробирка	Антигенные маркеры
Пробирка 1	СБ45	СБЗ	СБ4	СЭ8
Пробирка 2	СЭ19	тз!дС	тзГдС	тз1дС (контроль)
Пробирка 3	СБ19	СБ38	СБ27	1дЦ

Пробирка 1.

% и ЛЬ СП45+/СЭ3+ (общие Т-клетки) % и АЬ СП45+/СП3+/СП4+/СП8- (Т-хелперные клетки) % и АЬ СЭ45СЭ4- 'СЭ8- (Т-цитотоксические/супрессорные клетки)

Пробирка 3: обратно рассчитанные АЬ с использованием общего количества В-клеток (СЭ19+) % и аЬ СЭ19+ (пан-В-клетки) % и АЬ СП19+/1дП-/СП27- (незрелая В-клетка) необученные В-клетки % и АЬ СП19+/1дП+/СП27- (зрелая В-клетка) необученные В-клетки % и АЬ СП19+/СЭ27+/СП38- (В-клетка памяти) % и АЬ СП19+/СЭ27+/СП38+ (секретирующие 1д клетки)

Через приблизительно 6 ч после введения дозы. за исключением когорты 6. выполняли следующие оценки: ЭКГ; У8; и взятие проб для ФК и ФД (только для когорт с однократной дозой).

Лечение с использованием ТАС1-Ее5 следует по плану когорт с последовательной эскалацией дозы. очерченной на фиг. 1. Первая когорта получает однократную дозу 70 мг ТАС1-Ее5 в день 1. Последующие когорты получают дозы на основе алгоритма эскалации дозы до максимальной дозы 2940 мг. Вторая когорта получает три дозы 70 мг ТАС1-Ее5 во время одномесячного периода. Третья когорта получает однократную дозу 210 мг ТАС1-Ее5. Четвертая когорта получает три дозы 210 мг ТАС1-Ее5 во время од

- 11 015342 номесячного периода. Пятая когорта получает однократную дозу 630 мг ТАС1-Рс5. Шестая когорта получает семь доз 420 мг ТАС1-Рс5 во время трехмесячного периода.

Оценки после введения доз, в том числе сбор проб для оценки ФК, ФД и биомаркеров и безопасности и активности заболевания, выполняют из всех когорт при заранее определенных интервалах до 14 недель после введения доз (в когортах с однократной дозой), до 18 недель после введения доз (в когортах 2 и 4 с повторяемыми дозами) и до 26 недель после введения доз (в когорте 6 с повторяемыми дозами). Табл. 7 описывает схему оценки после введения доз, начинающуюся со дня 2, когорт 1, 3 и 5 (когорт с однократными дозами). Табл. 8 описывает схему оценки после введения доз, начинающуюся с первого дня после конечной дозы (день 30) когорт 2 и 4. Табл. 9 описывает схему оценки после введения доз, начинающуюся в день введения второй дозы (день 15) когорты 6. Реакции места инъекции, побочные реакции и сопутствующие лекарственные средства и процедуры измеряют на протяжении указанного исследования для всех когорт. Данные побочных действий получают при запланированных или незапланированных визитах после физического обследования, на основе информации, спонтанно обеспечиваемой пациентом и посредством опроса пациента.

Побочная реакция определяется как любое неблагоприятное медицинское явление в форме признаков, симптомов, ненормальных лабораторных показателей или заболеваний, которые возникают или ухудшаются относительно фона (т.е. начального визита), независимо от причинной взаимосвязи и даже, если не вводился исследуемый продукт. Тяжесть побочной реакции может оцениваться с использованием следующих определений: (1) легкая - пациент знает о побочной реакции или побочном симптоме, но указанная побочная реакция или побочный симптом легко переносится; (2) умеренная (средняя) - пациент испытывает достаточный дискомфорт для того, чтобы препятствовать его или ее обычному уровню активности или уменьшать его или ее обычный уровень активности; (3) тяжелая - значительное ухудшение функционирования, когда указанный пациент неспособен выполнять обычные активности; и (4) очень тяжелая - жизнь пациента находится в опасности вследствие указанной побочной реакции. Связь указанной побочной реакции с введением ТЛС1-Ре5 может оцениваться с использованием следующих определений: (1) вероятная - причинная связь является клинически/биологически высоковероятной, и имеется вероятная временная последовательность между появлением побочной реакции и введением ТАС1-Рс5; (2) возможная - причинная связь является клинически/биологически вероятной, и имеется вероятная временная последовательность между появлением побочной реакции и введением ТАС1-Рс5; (3) маловероятная - причинная связь является невероятной и другая документированная причина указанной побочной реакции является более вероятной; и (4) не имеющая отношения - причинная связь может быть определенно исключена, и другая документированная причина указанной побочной реакции является наиболее вероятной. Медицинские состояния, присутствующие при фоне, которые не ухудшаются по тяжести или частоте встречаемости во время введения ТАС1-Рс5, не считаются побочными реакциями. Обострение КА рассматривается как часть оценки указанного заболевания и не считается побочной реакцией, если оно не является возможно или вероятно связанным с введением ТАС1-Рс5.

Таблица 7

Схема оценки после введения дозы когорт . 1, 3 и 5

изическое обследование

А: вызванное жалобой

В: АОЛ = оценка активности заболевания, измеренная по СКР в сыворотке, Б8К и отношению НР/БР в моче

С: ΥΤ8 = состояние вакцинной иммунизации

- 12 015342

Таблица 8

Схема оценки после введения дозы когорт 2 и 4

	ϋ30	ϋ33	ϋ36	ϋ43	ϋ57	ϋ71	ϋ85	ϋ99	Ы13-119
экг				X	X				X
У8 (показатель жизненно важной функции)				X	X	X		X	X
Физическое обследование Физическое обследованиеА				X	X	X		X	X
ΑϋΑθ					X				X
У18с									X
Рутинные лабораторные параметры				X	X	X		X	X
Е8К					X		X		X
НР/ЬР мочи					X		X		X
Антитело против ТАС1-Рс5									X
ФК/ФД	X	X	X	X	X	X	X	X	X
Биомаркеры	X	X	X	X	X	X	X	X	X
Количество В-клеток (РАС8)				X	X	X	X	X	X
Синовиальная биопсия					X

А: вызванное жалобой физическое обследование

В: ΆΌΆ = оценка активности заболевания, измеренная по СКР в сыворотке, Е8К и отношению НР/ЬР в моче

С: УГ8 = состояние вакцинной иммунизации

В: ΆΌΆ = оценка активности заболевания, измеренная по СКР в сыворотке, Е8К и отношению НР/ЬР в моче

С: УГ8 = состояние вакцинной иммунизации

Доза, схема введения и способ введения ТЛСГ-Ре5 представлены в табл. 10. Вкратце, в исследование включены 72 пациента с КА мужского и женского пола в возрасте между 18 и 70 годами. Указанные пациенты имеют установленный диагноз активного, умеренного - тяжелого КА в течение по меньшей мере 6 месяцев, они не имели успеха при лечении не более чем пятью ΌΜΑΚΟ и не использовали ΌΜΑΚΟ иной, чем метотрексат, в течение 4 или более недель перед днем 1. Кроме того, указанные пациенты являются КР-положительными и не являются беременными во время исследования и до 3 месяцев после последнего введения ТАСГ-Рс5. Указанных пациентов разделяют на 6 когорт. Три из указанных когорт имеют 8 пациентов, две из указанных когорт имеют 12 пациентов, и одна когорта имеет 24 пациента.

- 13 015342

Когорта

Когорта 1 (однократная доза 70 мг пациентов)

Доза и введение ТАС1-Ес5

Схема введения доз мг ТАС1-Ес5 или соответствующего плацебо в день 1

Таблица 10

Способ введения подкожная инъекция

0,5 мл утром

Когорта 2 (повторяемая доза 3x70 мг в 1 месяце пациентов) мг или соответствующего плацебо в дни 1, 15 и 20 подкожная инъекция

0,5 мл утром

210 мг ТАС1-ЕС5 или соответствующего плацебо в день 1 подкожная инъекция

1,5 мл утром

Когорта 4 (повторяемая доза 3x210 мг в 1 месяце пациентов)

210 мг или соответствующего плацебо в дни 1, 15 и 20 подкожная инъекция

1,5 мл утром

630 мг ТАС1-Ес5 или соответствующего плацебо в день 1 подкожные инъекции

1,5 мл утром

Когорта 6 (повторяемая доза 7x420 мг в 3 месяцах, пациента)

420 мг или соответствующего плацебо в дни 1, 15, 29, 43, 57, и 85 подкожные инъекции

1,5 мл утром

Пример 4. Процедура инъекции ТАС1-Ес5.

Если выбирают подкожный способ введения для доставки ТАС1-Ес5, то указанную молекулу инъецируют подкожно в брюшную стенку, и места чередуют согласно диаграмме ниже (фиг. 2). Соблюдается осторожность, чтобы не произошла инъекция в кровеносный сосуд. Крайне важно чередовать места введения для сохранения здоровой кожи. Повторяемые инъекции в одно и то же место могут вызывать рубцевание и затвердение жировой ткани. Следующие зоны должны использоваться для инъекции и чередоваться следующим образом (фиг. 2): первая инъекция в левую верхнюю внешнюю зону (фиг. 2, положение 1); вторая инъекция в правую нижнюю внешнюю зону (фиг. 2, положение 2); третья инъекция в левую нижнюю внешнюю зону (фиг. 2, положение 4) и пятая инъекция в среднюю нижнюю зону (фиг. 2, положение 5). Вышеупомянутая схема чередования повторяется для дополнительных инъекций.

Для пациентов, требующих более одной инъекции на дозу, инъекция начинается в положении 12 часов для зоны места, обозначенного для указанной инъекции (как на фиг. 2, места 1-5), и они чередуются последовательно по часовой стрелке, положение 2, 4, 6, 8 и/или 10 часов по мере необходимости для требуемого количества инъекций на дозу. Инъекции должны находиться на расстоянии по меньшей мере 2,5 см (1 дюйма) одна от другой и инъецироваться как можно ближе во времени. Не допускается инъекция более 1,5 мл в одно место инъекции. Если пациент испытывает трудность с инъекциями в живот, другими зонами, которые могут быть инъецированы, являются передние части бедер и плечи.

Обычные симптомы реакций мест инъекции включают в себя зуд, болезненность, местное повышение температуры и/или покраснение в месте инъекции.

Пример 5. Протокол эскалации дозы для введения молекулы ТАС1-Ес5.

Настоящий протокол эскалации дозы для оценки ТАС1-Ес5 в КА позволяет вводить дозы шести пациентам в первой когорте. Первая когорта получает однократную дозу 70 мг с последующими 4 неделями наблюдения. 8а1е1у Κονίονν Воагб (8КВ) рассматривает данные по безопасности, собранные в течение четырех недель после введения дозы, и в рекомендации 8КВ, указанная доза увеличивается до 210 мг, вводимых на протяжении 1 месяца (вторая когорта) или в виде однократной дозы (третья когорта). Девяти пациентам вводят дозу во второй когорте и шести пациентам вводят дозу в третьей когорте. Затем 8КВ рассматривает данные по безопасности, собранные из третьей когорты через семь недель после введения дозы, и в рекомендации 8КВ указанная доза увеличивается до 630 мг, вводимых на протяжении 1 месяца (четвертая когорта) или в виде однократной дозы (пятая когорта). Девяти пациентам вводят дозу в четвертой когорте и шести пациентам вводят дозу в пятой когорте. Затем 8КВ рассматривает данные по безопасности, собранные из пятой когорты через шесть недель после введения дозы, и в рекомендации 8КВ, когорта шесть получает 2940 мг на протяжении 3-месячного периода. Восемнадцати пациентам вводят дозу в шестой когорте.

Выбранные дозы основаны рационально на повторяемых исследованиях 8С-токсикологии в собакоподобных обезьянах и мышах, которые показали, что ТАС1-Ес5 хорошо переносился при 5, 20 и 80 мг/кг. Кроме действий на иммунные клетки, которые являются ожидаемыми результатами фармакодинамической активности ТАС1-Ес5, единственными показателями были значимое уменьшение общего белка плазмы и легкая подкожная реакция с наивысшей дозой 8С 80 мг/кг в обезьянах и временная (преходящая) гиперактивность в тесте Ирвина в мышах при дозе 80 мг/кг. Таким образом, 20 мг/кг является наивысшей дозой, не ассоциированной с побочными реакциями в обоих видах.

- 14 015342

Кроме того, дозы 2,1, 70, 210 и 630 мг вводили в виде однократных подкожных доз здоровым волонтерам. Не было проблем в отношении безопасности или переносимости, индуцированных при указанных дозах. На основании преклинических данных и предварительных результатов в здоровых волонтерах доза 70 мг была выбрана как подходящая начальная доза для пациентов с КА.

Дозы и схемы введения доз, предвиденные у пациентов с КА в настоящем исследовании, находятся в диапазоне от 1 до 9 мг/кг два раза в месяц (при нормализации для субъекта с массой тела 70 кг), что хорошо согласуется с диапазоном доз, исследованным в обезьянах. Повторяемое введение у обезьян показало зависимость доза-реакция.

Пример 6. Оценка прогрессирования заболевания.

Прогрессирование заболевания измеряют по оценке активности заболевания, глобальной оценке врачом активности заболевания, глобальной оценке пациентом активности заболевания, утренней тугоподвижности и оценке пациентом боли, активности заболевания и физической функции.

Оценка активности заболевания (ОА8) является комбинированным индексом, который был развит для измерения активности заболевания у пациентов с КА. Он был экстенсивно валидизирован для его применения в клинических испытаниях в комбинации с критериями реакции ЕИЬАК (Европейской лиги ревматологов). Исходный ИА8 включал в себя суставной индекс Ритчи, число опухших суставов 44, оценку скорости осаждения эритроцитов (Е8К) и общего здоровья на УА8. После валидизации числа 28 для неранжированных чисел суставов в отношении болезненности и опухания, был разработан ИА828, включающий в себя числа суставов 28. Результаты ИА8 и ИА828 не являются непосредственно взаимозаменяемыми.

С использованием ИА8 были разработаны несколько порогов для высокой активности заболевания, низкой активности заболевания или даже ремиссии. Кроме того, были разработаны критерии реакции на основе ИА8, так что, когда ИА8 пациента измеряют в двух временных точках, может быть оценена клиническая реакция.

Переменными показателями заболевания, необходимыми для расчета ИА828, являются число опухших суставов (28 суставов); число болезненных суставов (28 суставов); Е8К (мм после 1 ч); общее здоровье пациентов (СН) или глобальная активность заболевания (визуальная шкала аналогов (УА8) 100 мм) - в настоящем исследовании, названном глобальной оценкой активности заболевания пациентом. Оценки двадцати восьми болезненных и опухших суставов включают в себя следующие суставы: плечи, локти, кисти, пястно-фаланговые суставы, проксимальные межфаланговые суставы и колени.

Для расчета ИА8 используют следующую формулу:

ПА828=0,56-8дг1 (болезненные 28)+0,28-5дг1 (опухшие 28)+0,70+1п (Е8К)+0,014-СН

Указанный ИА8 обеспечивает число на шкале от 0 до 10, указывающее существующую активность ревматоидного артрита. ИА828 выше 5,1 обозначает высокую активность заболевания, а ИА828 ниже 3,2 обозначает низкую активность заболевания. Ремиссия достигается, когда ИА828 ниже 2,6. Посредством сравнения ИА828 из одного пациента в двух разных временных точках можно определить улучшение или реакцию.

Оценка боли пациентом и глобальная оценка активности заболевания пациентом выполняются с использованием горизонтальной визуальной шкалы аналогов (УАЗ).

Глобальная оценка врачом активности заболевания измеряет имеющуюся активность заболевания пациента с использованием 5-балльной ступенчатой шкалы (шкалы Ликерта), где 0=бессимптомное, 1=слабое, 2=умеренное, 3=тяжелое и 4=очень тяжелое.

Оценка пациентом физической функции измеряется на основе реакции пациента на опросник для оценки состояния здоровья и качества жизни (НАО). который задает вопросы пациенту в отношении способности пациента на протяжении предыдущей недели выполнять повседневные задачи, такие как одевание и уход за собой, прием еды, ходьба (гуляние), и в отношении того, требуется ли пациенту помощь (вспомогательные средства) или оснащение для выполнения какой-либо из вышеупомянутых задач.

Присутствие утренней тугоподвижности оценивается посредством беседы с пациентом, и, если она имеется, регистрируется ее продолжительность.

Claims (18)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Способ лечения ревматоидного артрита у пациента, предусматривающий введение пациенту композиции, содержащей слитую молекулу, содержащую:

   (ί) внеклеточный домен ТАС1 или его фрагмент, который связывает В1у8; и (ίί) константный домен иммуноглобулина человека, где указанную композицию вводят в количестве от 0,01 до 10 мг/кг массы тела пациента и где указанную композицию вводят в указанном количестве (ί) 7 раз в течение двенадцатинедельного интервала, или (ίί) 3 раза в течение четырехнедельного интервала, или (ш) каждую вторую неделю в течение 2-30 недель, или

   - 15 015342 (ίν) один раз в неделю.
2. 2. Способ по п.1, где указанный внеклеточный домен ТАС'Ч или его фрагмент имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную аминокислотам 30-110 аминокислотной последовательности БЕС ГО N0: 1.
3. 3. Способ по п.1, где указанный внеклеточный домен ТЛС'Ч или его фрагмент имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотам 30-110 аминокислотной последовательности БЕС ГО N0: 1.
4. 4. Способ по п.1, где указанный внеклеточный домен ТАО или его фрагмент имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную аминокислотам 30-110 аминокислотной последовательности БЕС ГО N0: 1.
5. 5. Способ по п.1, где указанный внеклеточный домен ТАО или его фрагмент имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную аминокислотам 30-110 аминокислотной последовательности БЕС ГО N0: 1.
6. 6. Способ по п.1, где указанный внеклеточный домен ТАО или его фрагмент включает аминокислоты 30-110 аминокислотной последовательности БЕС ГО N0: 1.
7. 7. Способ по п.1, где указанный внеклеточный домен ТАО или его фрагмент состоит из аминокислот 30-110 аминокислотной последовательности БЕС ГО N0: 1.
8. 8. Способ по любому из пп.1-7, где указанный константный домен иммуноглобулина включает модифицированную Ес-часть !§С человека, и указанная слитая молекула предпочтительно представляет собой слитую молекулу ТАО-Е^.
9. 9. Способ по любому из пп.1-8, где указанную композицию вводят в указанном количестве 7 раз в течение двенадцатинедельного интервала.
10. 10. Способ по п.9, где указанную композицию вводят в указанном количестве 7 раз в течение двенадцатинедельного интервала с последующими дополнительными введениями указанной композиции в указанном количестве.
11. 11. Способ по любому из пп.1-8, где указанную композицию вводят в указанном количестве 3 раза в течение четырехнедельного интервала.
12. 12. Способ по п.11, где указанную композицию вводят в указанном количестве 3 раза в течение четырехнедельного интервала с последующими дополнительными введениями указанной композиции в указанном количестве.
13. 13. Способ по любому из пп.1-8, где указанную композицию вводят в указанном количестве каждую вторую неделю в течение 2-30 недель.
14. 14. Способ по любому из пп.1-8, где указанную композицию вводят в указанном количестве один раз в неделю.
15. 15. Способ по любому из пп.1-14, дополнительно предусматривающий одновременное введение пациенту второго лекарственного средства.
16. 16. Способ по п.15, где указанное второе лекарственное средство выбрано из группы, состоящей из гидроксихлорохина, сульфасалазина, метотрексата, лефлуномида, ритуксимаба, инфликсимаба, азатиоприна, Ό-пеницилламина, золота (перорально или внутримышечно), миноциклина, циклоспорина, кортикостероида, нестероидного противовоспалительного лекарственного средства (№АГОБ), цитокина, антицитокина и интерферона.
17. 17. Способ по любому из пп.1-16, где указанную композицию вводят подкожно, орально или внутривенно.
18. 18. Способ по любому из пп.1-17, где пациентом является человек.

    - 16 015342

    Список последовательностей <110> Ηετνε, Вго1у

    ВизЬу, ЗЬагоп

    Сгозз, Дапп1£ег

    ΝβεύοΓον, Ιν8η <120> СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ АУТОИММУННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СЛИТОЙ МОЛЕКУЛЫ ТАС1-1С <130> 05558.0041.00РС00 <150> ϋδ 60/747270 <151> 2006-05-15 <160> 2 <170> Рабепб1п νθΓΞίοη 3.4 <210> 1 <211> 154 <212> Белок <213> ТАС1 <400> 1

    Меб 1 Зег <31у Ьеи С1у 5 Агд Зег Агд Агд 61у С1у 10 Агд Зег Агд Уа1 15 Азр 61п О1и С1и Агд РЬе Рго О1п 61у Ьеи Тгр ТЬг С1у Уа1 А1а Меб Агд 20 25 30 Зег Суз Рго О1и С1и С1п Туг Тгр Азр Рго Ьеи Ьеи С1у ТЬг Суз Меб 35 40 45 Зег Суз Ьуз ТЬг Не Суз Азп Н13 σΐη Зег (31п Агд ТЬг Суз А1а А1а 50 55 60 РЬе Суз Агд Зег Ьеи Зег Суз Агд Ьуз <31и <31п 61у Ьуз РЬе Туг Азр 65 70 75 80 ΗΪ5 Ьеи Ьеи Агд Азр Суя Не Зег Суз А1а Зег Не Суз <21у 61п Нхз 85 90 95 Рго Ьуз С1п Суз А1а Туг РЬе Суз (31и Азп Ьуз Ьеи Агд Зег Рго Уа1 100 105 110 Азп Ьеи Рго Рго С1и Ьеи Агд Агд (31п Агд Зег С1у <31и Уа1 61и Азп 115 120 125 Азп Зег Азр Азп Зег С1у Агд Туг <31п С1у Ьеи С1и ΗΪ3 Агд С1у Зег 130 135 140 С1и А1а Зег Рго А1а Ьеи Рго 61у Ьеи Ьуз 145 150

    <210> 2 .

    <211> 348 <212> Белок <213> Константный домен Ес5 иммуноглобулина человека

    - 17 015342 <400> 2

    Мек 1 Азр А1а Мек Ьуз 5 Агд <31у Ьеи Суз Суз 10 Уа1 Ьеи Ьеи Ьеи Суз 15 С1у А1а Уа1 РЬе Уа1 Зег Ьеи Зег 61п С1и 11е Низ А1а С1и Ьеи Агд Агд 20 25 30 РЬе Агд Агд А1а Мек Агд Зег Суз Рго О1и 51и 61п Туг Тгр Азр Рго 35 40 45 Ьеи Ьеи <31у ТЬг Суз Мек Зег Суз Ьуз ТЬг 11е Суз Азп Низ (31п Зег 50 55 60 61п Агд ТЬг Суз А1а А1а РЬе Суз Агд Зег Ьеи Зег Суз Агд Ьуз С1и 65 70 75 80 С1п С1у Ьуз РЬе Туг Азр Н13 Ьеи Ьеи Агд Азр Суз 11е Зег Суз А1а 85 90 95 Зег Не Суз С1у С1п Н13 Рго Ьуз <31п Суз А1а Туг РЬе Суз С1и Азп 100 105 110 Ьуз Ьеи Агд Зег С1и Рго Ьуз Зег Зег Азр Ьуз ТЬг Низ ТЬг Суз Рго 115 120 125 Рго Суз Рго А1а Рго С1и А1а С1и 61у А1а Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе 130 135 140 Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Мек 11е Зег Агд ТЬг Рго С1и Уа1 145 150 155 160 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Низ (31и Азр Рго <31и Уа1 Ьуз РЬе 165 170 175 Азп Тгр Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1 Низ Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго 180 185 190 Агд С1и 61и С1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг 195 200 205 Уа1 Ьеи Н13 61п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз С1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 210 215 220 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго Зег Зег 11е С1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а 225 230 235 240 Ьуз 61у О1п Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд 245 250 255 Азр С1и Ьеи ТЬг Ьуз Азп 61п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз 61у 260 265 270 РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 С1и Тгр <31и Зег Азп С1у (31п Рго 275 280 285 (31и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр <31у Зег 290 295 300 РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п 305 310 315 320 С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 Мек Низ О1и А1а Ьеи Низ Азп . Низ 325 330 335 Туг ТЬг (31п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у Ьуз 340 345

    - 18 015342

    Когорта 1: однократная доза 70 мг

    Когорты 2 и 3 будут иметь начало лечения приблизительно в одно и то же время нет

    Ί

    Козорты 4 и 5 будут иметь начало лечения приблизительно в одно и то же время

    Когорта 4: 630 мг на протяжении 1 месяца

    I когорта 5: Ί 630 мг в виде I ι однократной ! I___дозы : I

    ..- Остановить'--. ’ по соображениям ''-..безопасности?

    нет

    -Да

    Когорта 6: 2940 мг на протяжении

    3 месяцев

    Фиг. 1

    Схема эскалации дозы

    Фиг. 2