EA013977B1 - Способ определения в таблетке количества активных компонентов в виде аминокислот глицина, l-глутаминовой кислоты и l-цистина - Google Patents
Способ определения в таблетке количества активных компонентов в виде аминокислот глицина, l-глутаминовой кислоты и l-цистина Download PDFInfo
- Publication number
- EA013977B1 EA013977B1 EA201000173A EA201000173A EA013977B1 EA 013977 B1 EA013977 B1 EA 013977B1 EA 201000173 A EA201000173 A EA 201000173A EA 201000173 A EA201000173 A EA 201000173A EA 013977 B1 EA013977 B1 EA 013977B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- solution
- amino acid
- tablets
- standard
- amino acids
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
- G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
- G01N2030/8813—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials
- G01N2030/8818—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials involving amino acids
Landscapes
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Задача изобретения заключается в надежном качественном и количественном определении за короткий промежуток времени за один анализ при простой пробоподготовке входящих в общую композицию таблетки в равных долях трех аминокислот: L-цистина, L-глутаминовой кислоты и глицина. Способ включает последовательное выполнение приготовления в водном растворе натрия карбоната стандартного раствора аминокислот: глицина, L-глутаминовой кислоты и L-цистина, и испытуемого раствора таблеток, включающих перечисленные аминокислоты в равных долях, из порошка таблеток; приготовления растворов тозил-производных стандартного раствора аминокислот и испытуемого раствора таблеток введением в стандартный раствор и в испытуемый раствор аминокислот избыточного количества модифицирующего реагента, приготовленного растворением п-толуолсульфохлорида в ацетонитриле, а затем введением стоп-реагента в виде раствора ортофосфорной кислоты; проведения высокоэффективной жидкостной хроматографии растворов тозилпроизводных стандартного раствора аминокислот и испытуемого раствора таблеток с использованием в качестве мобильной фазы водного раствора калия фосфата однозамещенного с ацетонитрилом; осуществление идентификации аминокислот на полученных хроматограммах по времени удерживания стандартного раствора и испытуемого раствора с определением площадей пиков аминокислот; расчет содержания каждой аминокислоты в таблетке по определенным площадям пиков аминокислот в стандартном растворе аминокислот и в испытуемом растворе таблеток, а также по величинам навесок аминокислот в стандартном растворе аминокислот, навески порошка таблеток в испытуемом растворе таблеток и по величине массы таблетки.
Description
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а конкретно к способу определения в таблетке количества активных компонентов в виде аминокислот глицина, Ь-глутаминовой кислоты и Ьцистина.
Уровень техники
Исследования лекарственных возможностей композиции аминокислот Ь-цистина, Ь-глутаминовой кислоты и глицина проводятся достаточно давно. Известен препарат, включающий аминокислоты Ьцистин, Ь-глутаминовую кислоту и глицин при массовом соотношении компонентов 1:1:1 и при количественном содержании 0,1 г для каждого компонента, который используется в качестве средства, индуцирующего биосинтез глутатиона, активность глутатионтрансферазы и оказывающего антитоксическое, радиопротекторное и антигипоксическое действие (КИ 2096034 С1, МПК6 А61К 31/195, 1997).
При производстве такого лекарственного препарата или аналогичного, включающего равные доли аминокислот Ь-цистина, Ь-глутаминовой кислоты и глицина в большем или меньшем количестве, необходим надежный и простой метод контроля лекарственного препарата, предусматривающий качественное и количественное определение перечисленных аминокислот.
Известен способ качественного и количественного определения аминокислот с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, при котором хроматографическое определение производится с использованием предварительно полученных флуоресцентных Ы2-бензоксазолил производных аминокислот.
Этот известный способ не позволяет с достаточной степенью точности определить все входящие в препарат, представляющий собой таблетку, аминокислоты, в частности глицин и Ь-глутаминовую кислоту, пики которых на хроматограммах при недостаточном времени удерживания могут пересекаться, чему дополнительно способствуют наряду с свойствами этих аминоскислот входящие в таблетку вспомогательные вещества, а также равная концентрация аминокислот.
Сущность изобретения
Задача изобретения заключается в надежном качественном и количественном определении за короткий промежуток времени за один анализ при простой пробоподготовке входящих в общую композицию таблетки в равных долях трех аминокислот: Ь-цистина, Ь-глутаминовой кислоты и глицина.
Эту задачу решает способ определения в таблетке количества активных компонентов в виде аминокислот глицина, Ь-глутаминовой кислоты и Ь-цистина, который включает последовательное выполнение следующих операций:
приготовление в водном растворе натрия карбоната стандартного раствора аминокислот глицина, Ь-глутаминовой кислоты и Ь-цистина и испытуемого раствора таблеток, включающих перечисленные аминокислоты в равных долях, из порошка таблеток;
приготовление растворов тозил-производных стандартного раствора аминокислот и испытуемого раствора таблеток введением в стандартный раствор и в испытуемый раствор аминокислот избыточного количества модифицирующего реагента, приготовленного растворением п-толуолсульфохлорида в ацетонитриле (ПТСХ), а затем введением стоп-реагента в виде раствора ортофосфорной кислоты;
проведение высокоэффективной жидкостной хроматографии растворов тозил-производных стандартного раствора аминокислот и испытуемого раствора таблеток с использованием в качестве мобильной фазы водного раствора калия фосфата однозамещенного с ацетонитрилом;
осуществление идентификации аминокислот на полученных хроматограммах по времени удерживания стандартного раствора и испытуемого раствора с определением площадей пиков аминокислот;
расчет содержания каждой аминокислоты в таблетке по определенным площадям пиков аминокислот в стандартном растворе аминокислот и в испытуемом растворе таблеток, а также по величинам навесок аминокислот в стандартном растворе аминокислот, навески порошка таблеток в испытуемом растворе таблеток и по величине массы таблетки.
Для большей точности определения аминокислот глицина, Ь-глутаминовой кислоты и Ь-цистина возможно проведение идентификации модифицирующего реагента на полученных хроматограммах с определением площадей соответствующих ему пиков, а расчет содержания каждой аминокислоты в таблетке проводить с введением поправки на величину отношения площадей пиков модифицирующего реагента в стандартном растворе аминокислот и в испытуемом растворе таблеток.
Модифицирующий реагент, приготовленный растворением п-толуолсульфохлорида в ацетонитриле, удобный в работе, является своеобразным внутренним стандартом. Контроль над полнотой прохождения реакции дериватизации (получения тозил-производных аминокислот) в каждой отдельной пробирке - это важный момент, так как мы имеем дело с гетерофазной реакцией, на которую влияет множество факторов: температура внешней среды (реакция идет при комнатной температуре), концентрация реагентов, рН содового раствора (0,2 М раствор натрия карбоната) и его диссоциация; кроме того, при добавлении раствора ортофосфорной кислоты (стоп-реагента) происходит выделение газа, а следовательно, изменяется объем реакционной смеси, что также влияет на точность определения содержания аминокислот в препарате. П-толуолсульфохлорид не является по своей природе высокоспецифичным модифицирующим (дериватизирующим) агентом, так как может взаимодействовать не только с ИН2-группой ами
- 1 013977 нокислот и функциональной группой аминов (первичных и вторичных с образованием сульфамидных соединений), но и с гидроксильной ОН-группой или карбоксильной СООН-группой. ОН-группы, образующиеся при диссоциации 0,2 М водного раствора натрия карбоната, могут вступать в неконтролируемую реакцию с ПТСХ, и несмотря на то что ПТСХ взят в избытке (минимум 13-кратный избыток по отношению к модифицируемому веществу) для проведения реакции дериватизации, изобретение позволяет с достаточной степенью точности осуществлять расчет количественного содержания каждой аминокислоты в лекарственном препарате. В частности, по причине контролируемого прохождения реакций дери ватизации аминокислот перед их количественным определением.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения, когда характеристики высокоэффективной жидкостной хроматографии лежат для стандартных растворов аминокислот и испытуемых растворов препарата в интервалах по времени выхода пиков менее 2%, по площади пиков - менее 10% , а пробоподготовка стандартных растворов аминокислот и испытуемых растворов препарата четко отработана, хроматографический анализ может выполняться для трех порций стандартного раствора аминокислот и для трех порций испытуемого раствора таблеток. При этом расчет содержания каждой аминокислоты в таблетке в мг проводится по формуле:
ν. ,
Х(мг) =------------^АК о,*а где
8АК 1 - средняя по трем определениям площадь каждой аминокислоты в испытуемом растворе табле ток,
8АК сг - средняя по трем определениям площадь каждой аминокислоты в стандартном растворе ами нокислот, тАК сг - навеска каждой аминокислоты в стандартном растворе аминокислот, мг, тАК ср - средняя масса таблетки, мг, а - навеска порошка таблеток в испытуемом растворе таблеток, мг.
Если характеристики высокоэффективной жидкостной хроматографии не удовлетворяют указанным выше условиям, то хроматографический анализ выполняется также для трех порций стандартного раствора аминокислот и для трех порций испытуемого раствора таблеток, но расчет содержания каждой аминокислоты в таблетке в мг в этом случае проводят по формуле ν . АК , / ^ПТСХ ι) * тАК ст *
А (МГ) =--------------, где
8АК ι - средняя по трем определениям площадь аминокислоты в испытуемом растворе таблеток,
8ПТСХ ι - средняя по трем определениям площадь п-толуолсульфохлорида в испытуемом растворе таблеток,
8АК ст - средняя по трем определениям площадь каждой аминокислоты в стандартном растворе аминокислот,
8ПТСХ сг - средняя по трем определениям площадь п-толуолсульфохлорида в стандартном растворе аминокислот, тАК сг - навеска каждой аминокислоты в стандартном растворе аминокислот, мг,
Шер - средняя масса таблетки, мг, а - навеска порошка таблеток в испытуемом растворе таблеток, мг.
Поправка 8 ПТСХ ст / 8 ПТСХ 1 может быть введена в расчет благодаря использованию избыточного количества модифицирующего реагента, обеспечивающего контролируемое прохождение реакций дерива тизации аминокислот перед их количественным определением.
При осуществлении изобретения предпочтительно использовать 0,2 М водный раствор натрия карбоната.
Стандартный раствор аминокислот предпочтительно приготавливать растворением навесок по 10,015,0 мг каждой из аминокислот Ь-цистина, Ь-глутаминовой кислоты и глицина в 100-150 мл раствора натрия карбоната при перемешивании с последующим доведением объема раствора до 250 мл и его фильтрацией.
Испытуемый раствор таблеток предпочтительно приготавливать измельчением по меньшей мере трех таблеток и растворением навески в 35,0-40,0 мг полученного порошка в 100-150 мл раствора натрия карбоната с последующим доведением объема раствора до 250 мл и его фильтрацией.
Приготовление модифицирующего реагента в наилучшем варианте реализации изобретения осуществляют растворением 15,0 мг п-толуолсульфохлорида в 1,0 мл ацетонитрила с последующим встряхиванием со скоростью 1500 об./мин, в течение 2 мин.
Приготовление растворов тозил-производных стандартного раствора аминокислот и испытуемого раствора таблеток в наилучшем варианте реализации изобретения осуществляют добавлением по 50 мкл раствора модифицирующего реагента в 200 мкл, стандартного раствора аминокислот и в 200 мкл испытуемого раствора таблеток с последующим их встряхиванием со скоростью 1500 об./мин в течение 30 с и выдерживанием 30 мин при комнатной температуре, после чего в реакционные смеси добавляют по 25
- 2 013977 мкл стоп-реагента в виде 42,5% раствора ортофосфорной кислоты, а затем вновь встряхивают со скоростью 1500 об./мин, до окончания выделения углекислого газа в течение 0,45-1,5 мин.
Мобильная фаза для высокоэффективной жидкостной хроматографии может быть приготовлена растворением 7,0 г калия фосфата однозамещенного в 700 мл воды, после чего рН раствора доводят добавлением концентрированной ортофосфорной кислоты до значения 2,8, затем раствор перемешивают, добавляют 250 мл ацетонитрила, а затем объем раствора доводят водой до 1000 мл и фильтруют.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения в хроматограф вводят аликвоты по 40 мкл стандартного раствора аминокислот или испытуемого раствора таблеток, при этом хроматографию проводят с использованием колонки 150x4,6 мм в течение 8 мин в изократическом режиме при температуре колонки 50°С, объеме инжектора: 20 мкл и скорости потока элюента 1 мл/мин.
Пример осуществления изобретения
Осуществления изобретения поясняются примером количественного определения аминокислот: глицина, Ь-глутаминовой кислоты и Ь-цистина в лекарственном препарате в форме таблетки, содержащей каждой из перечисленных аминокислот в количестве 70 мг.
Вначале приготавливают растворы, необходимые для реализации способа, которые используют свежеприготовленными.
Для приготовления 0,2 М раствора натрия карбоната в мерной колбе вместимостью 1000 мл растворяют 21,2 г натрия карбоната в 700 мл воды очищенной на магнитной мешалке, доводят водой очищенной до метки и перемешивают.
Для приготовления стандартного раствора аминокислот навески Ь-цистина - 12,0 мг, Ьглутаминовой кислоты - 12,0 мг, глицина - 12,0 мг помещают в мерную колбу вместимостью 250 мл, растворяют в 100 мл ранее приготовленного 0,2 М раствора натрия карбоната при перемешивании в течение 20 мин на магнитной мешалке и доводят до метки 0,2 М раствором натрия карбоната, после чего раствор фильтруют через беззольный фильтр.
Для приготовления испытуемого раствора лекарственного препарата три таблетки растирают в фарфоровой ступке, затем навеску 37,5 мг полученного порошка помещают в мерную колбу вместимостью 250 мл, растворяют в 100 мл 0,2 М раствора натрия карбоната при перемешивании в течение 20 мин на магнитной мешалке и доводят до метки 0,2 М раствором натрия карбоната, после чего раствор также фильтруют через беззольный фильтр.
Для приготовления раствора модифицирующего реагента (ПТСХ) взвешивают 15,0 мг птолуолсульфохлорида (тозилхлорида), помещают в герметично закрывающуюся коническую пробирку (общий объем 1,7 мл) и растворяют в 1,0 мл ацетонитрила; встряхивают на автоматическом встряхивателе со скоростью 1500 об./мин в течение 2 мин.
Для приготовления 42,5% раствора ортофосфорной кислоты (стоп-реагента) в мерную колбу вместимостью 50 мл, содержащую 15-20 мл воды очищенной, помещают 25,0 мл концентрированной (85%) ортофосфорной кислоты, доводят водой, очищенной до метки, и перемешивают. Этот раствор имеет продолжительный срок хранения до 1 месяца.
Для приготовления мобильной фазы для высокоэффективной жидкостной хроматографии в мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 7,0 г калия фосфата однозамещенного, растворяют в 700 мл воды очищенной на магнитной мешалке, доводят рН добавлением концентрированной ортофосфорной кислоты до значения 2,8, перемешивают, добавляют 250 мл ацетонитрила, доводят водой, очищенной до метки, хорошо перемешивают, фильтруют через фильтр 0,45 мкм и дегазируют с помощью вакуумного насоса. Этот раствор также имеет продолжительный срок хранения до 1 месяца.
После приготовления указанных выше растворов осуществляют получение тозил-производных (дериватизацию) стандартного раствора аминокислот и испытуемого раствора лекарственного препарата.
Для этого механическим дозатором отбирают по 200 мкл стандартного раствора аминокислот для трех параллельных определений и испытуемого раствора препарата также для трех параллельных определений, переносят в конические пробирки, добавляют механическим дозатором по 50 мкл раствора модифицирующего реагента, закрывают крышки и интенсивно встряхивают на автоматическом встряхивателе со скоростью 1500 об./мин в течение 30 с, а затем выдерживают в течение 30 мин при комнатной температуре для прохождения реакции.
После этого в реакционные смеси добавляют механическим дозатором по 25 мкл 42,5% раствора ортофосфорной кислоты (стоп-реагент) и снова встряхивают полученные смеси на автоматическом встряхивателе со скоростью 1500 об./мин до окончания выделения углекислого газа (около 1 мин).
После окончания процесса модификации (дериватизации) по три параллельных образца стандартных растворов аминокислот и испытуемых растворов препарата должны быть сразу последовательно введены в хроматографическую колонку высокоэффективного жидкостного хроматографа, имеющего программно-аппаратный комплекс для сбора и обработки данных со спектрофотометрическим детектором и аналого-цифровым преобразователем сигнала, совместимым с компьютером. В колонку хроматографа последовательно вводят микрошприцем вместимостью 100 мкл аликвоты (40 мкл) полученных тозил-производных стандартных растворов аминокислот и испытуемых растворов препарата (по три образца).
- 3 013977
Хроматографические условия: колонка 150x4,6 мм, мобильная фаза - раствор калия фосфата однозамещенного (0,05 М) / ацетонитрил, изократический режим, температура колонки 500°С, объем инжектора 20 мкл, длина волны 254 нм, скорость потока элюента 1 мл/мин, время анализа 8 мин.
Средние значения характеристик высокоэффективной жидкостной хроматогорафии для стандартных растворов аминокислот и испытуемых растворов препарата должны быть в интервалах: времена выхода пиков - 2%, площади пиков - 10%. При больших отклонениях характеристик от заданных анализ повторяют до достижения необходимых параметров. Для обеспечения пригодности хроматографической системы возможно отклонение от указанных выше условий хроматографирования.
По результатам анализа получают хроматограммы, представленные на иллюстрации в описании, на которых по времени удерживания проводят идентификацию аминокислот и определяют площади пиков, соответствующих каждой аминокислоте, в стандартных растворах аминокислот и в испытуемых растворах препарата.
Расчет содержания каждой аминокислоты в таблетке в мг проводят по средним площадям пиков, исходя из трех параллельных определений как для стандартного раствора аминокислот, так и для испытуемого раствора препарата по формуле:
ν, , / ^ПТСХ ;) * тАК ст * тс.р
Л (мг) = —--------------(.^АК ап ^ПТСХ ст ) * й где §АК ι - средняя по трем определениям площадь каждой аминокислоты в испытуемом растворе таблеток;
8ПТСХ ι - средняя по трем определениям площадь ПТСХ в испытуемом растворе таблеток;
8ак ст - средняя по трем определениям площадь каждой аминокислоты в стандартном растворе ами нокислот;
8ПТСХ ст - средняя по трем определениям площадь ПТСХ в стандартном растворе аминокислот;
тАК ст - навеска каждой аминокислоты в стандартном растворе аминокислот, мг;
Шер - средняя масса таблетки, мг;
а - навеска порошка таблеток, мг.
Площади пиков и расчет содержания каждой аминокислоты осуществляются программно с использованием компьютера, который, как указано выше, связан с программно-аппаратным комплексом высокоэффективного жидкостного хроматографа.
Если средние значения характеристик хроматографической системы для стандартных растворов аминокислот и испытуемых растворов препарата находятся в интервалах по времени выхода пиков - менее 2%, по площади пиков - менее 10%, а пробоподготовка стандартных растворов аминокислот и испытуемых растворов препарата четко отработана (включая соблюдение всех вышеизложенных условий при приготовлении растворов, проведении дериватизации, прерывании прохождения реакции, условий хроматографирования и тому подобное), то расчет содержания каждой аминокислоты в таблетке в мг можно проводят по средним площадям пиков, исходя из трех параллельных определений как для стандартного раствора аминокислот, так и для испытуемого раствора препарата без учета соотношения площадей пиков модифицирующего реагента в испытуемом и стандартном растворах (в данном случае соотношение близко к единице и им можно пренебречь) по формуле
8АК ι - средняя по трем определениям площадь каждой аминокислоты в испытуемом растворе табле ток;
8АК ст - средняя по трем определениям площадь каждой аминокислоты в стандартном растворе ами нокислот;
тАК ст - навеска каждой аминокислоты в стандартном растворе аминокислот, мг;
Шср - средняя масса таблетки, мг;
а - навеска порошка таблеток, мг.
Способ позволяет определить количественное содержание аминокислот в одной таблетке с точностью ±5,3 мг, что соответствует допустимому пределу для таблетки лекарственного препарата, содержащей глицин, Ь-глутаминовую кислоту и Ь-цистин.
Для количественного определения аминокислот глицина, Ь-глутаминовой кислоты и Ь-цистина в лекарственном препарате в форме таблетки, содержащей каждой из перечисленных аминокислот в количестве 90 мг, способ реализуется с теми же параметрами.
Claims (11)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Способ определения в таблетке количества активных компонентов в виде аминокислот глицина, Ь-глутаминовой кислоты и Ь-цистина, включающий последовательное выполнение приготовления в водном растворе натрия карбоната стандартного раствора аминокислот глицина,- 4 013977Ь-глутаминовой кислоты и Ь-цистина, и испытуемого раствора таблеток из порошка таблеток, приготовления растворов тозилпроизводных стандартного раствора аминокислот и испытуемого раствора таблеток введением в стандартный раствор и в испытуемый раствор аминокислот избыточного количества модифицирующего реагента, приготовленного растворением п-толуолсульфохлорида в ацетонитриле, а затем введением стоп-реагента в виде раствора ортофосфорной кислоты, высокоэффективной жидкостной хроматографии растворов тозилпроизводных стандартного раствора аминокислот и испытуемого раствора таблеток с использованием в качестве мобильной фазы водного раствора калия фосфата однозамещенного с ацетонитрилом, идентификации аминокислот на полученных хроматограммах по времени удерживания стандартного раствора и испытуемого раствора с определением площадей пиков аминокислот, расчета содержания каждой аминокислоты в таблетке по определенным площадям пиков аминокислот в стандартном растворе аминокислот и в испытуемом растворе таблеток, а также по величинам навесок аминокислот в стандартном растворе аминокислот, навески порошка таблеток в испытуемом растворе таблеток и по величине массы таблетки.
- 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что проводят идентификацию модифицирующего реагента на полученных хроматограммах с определением площадей соответствующих ему пиков, а расчет содержания каждой аминокислоты в таблетке осуществляют с введением поправки на величину отношения площадей пиков модифицирующего реагента в стандартном растворе аминокислот и в испытуемом растворе таблеток.
- 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что выполняют хроматографический анализ для трех порций стандартного раствора аминокислот и для трех порций испытуемого раствора таблеток, а расчет содержания каждой аминокислоты в таблетке в мг проводят по формуле где 8дк ι - средняя по трем определениям площадь каждой аминокислоты в испытуемом растворе таблеток,8дк ст - средняя по трем определениям площадь каждой аминокислоты в стандартном растворе аминокислот, тАК ст - навеска каждой аминокислоты в стандартном растворе аминокислот, мг,Щср - средняя масса таблетки, мг, а - навеска порошка таблеток в испытуемом растворе таблеток, мг.
- 4. Способ по п.2, отличающийся тем, что выполняют хроматографический анализ для трех порций стандартного раствора аминокислот и для трех порций испытуемого раствора таблеток, а расчет содержания каждой аминокислоты в таблетке в мг проводят по формуле ν, . (^АК ! ^ПТСХ I) · ап * тсрX (мг) =---------------------($АК ст !8тех ст) где 8дк ι - средняя по трем определениям площадь аминокислоты в испытуемом растворе таблеток,8ПТСХ ι - средняя по трем определениям площадь п-толуолсульфохлорида в испытуемом растворе таблеток,8дк ст - средняя по трем определениям площадь каждой аминокислоты в стандартном растворе аминокислот,8ПТСХ ст - средняя по трем определениям площадь п-толуолсульфохлорида в стандартном растворе аминокислот,Ц'1дк ст - навеска каждой аминокислоты в стандартном растворе аминокислот, мг, тст - средняя масса таблетки, мг, а - навеска порошка таблеток в испытуемом растворе таблеток, мг.
- 5. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют 0,2 М водный раствор натрия карбоната.
- 6. Способ по п.1, отличающийся тем, что стандартный раствор аминокислот получают растворением навесок по 10,0-20,0 мг каждой из аминокислот Ь-цистина, Ь-глутаминовой кислоты и глицина, в 100150 мл раствора натрия карбоната при перемешивании с последующим доведением объема раствора до 250-300 мл и его фильтрацией.
- 7. Способ по п.1, отличающийся тем, что испытуемый раствор таблеток получают измельчением по меньшей мере трех таблеток и растворением навески в 35,0-45,0 мг полученного порошка в 100-150 мл раствора натрия карбоната с последующим доведением объема раствора до 250-300 мл и его фильтрацией.
- 8. Способ по п.1, отличающийся тем, что приготовление модифицирующего реагента осуществляют растворением 15,0 мг п-толуолсульфохлорида в 1,0 мл ацетонитрила с последующим встряхиванием со скоростью 1500 об./мин в течение 2 мин.
- 9. Способ по п.1, отличающийся тем, что приготовление растворов тозилпроизводных стандартного- 5 013977 раствора аминокислот и испытуемого раствора таблеток осуществляют добавлением по 50 мкл раствора модифицирующего реагента в 200 мкл стандартного раствора аминокислот и в 200 мкл испытуемого раствора таблеток с последующим их встряхиванием со скоростью 1500 об/мин в течение 30 с и выдерживанием 30 мин при комнатной температуре, после чего в реакционные смеси добавляют по 25 мкл стопреагента в виде 42,5% раствора ортофосфорной кислоты, а затем вновь встряхивают со скоростью 1500 об/мин до окончания выделения углекислого газа в течение 0,45-1,5 мин.
- 10. Способ по п.1, отличающийся тем, что приготовление мобильной фазы для высокоэффективной жидкостной хроматографии осуществляют растворением 7,0 г калия фосфата, однозамещенного в 700 мл воды, после чего рН раствора доводят добавлением концентрированной ортофосфорной кислоты до значения 2,8, затем раствор перемешивают, добавляют 250 мл ацетонитрила, после чего объем раствора доводят водой до 1000 мл и фильтруют.
- 11. Способ по п.1, отличающийся тем, что в хроматограф вводят аликвоты по 40 мкл стандартного раствора аминокислот или испытуемого раствора таблеток, при этом хроматографию проводят с использованием колонки 150x4,6 мм в течение 8 мин в изократическом режиме при температуре колонки 50°С, объеме инжектора 20 мкл и скорости потока элюента 1 мл/мин.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EA201000173A EA201000173A1 (ru) | 2009-12-18 | 2009-12-18 | Способ определения в таблетке количества активных компонентов в виде аминокислот глицина, l-глутаминовой кислоты и l-цистина |
| PCT/RU2010/000627 WO2011075002A1 (ru) | 2009-12-18 | 2010-10-28 | Способ определения в таблетке количества активных компонентов в виде аминокислот глицина, l-глутаминовой кислоты и l-цистина |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EA201000173A EA201000173A1 (ru) | 2009-12-18 | 2009-12-18 | Способ определения в таблетке количества активных компонентов в виде аминокислот глицина, l-глутаминовой кислоты и l-цистина |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA013977B1 true EA013977B1 (ru) | 2010-08-30 |
| EA201000173A1 EA201000173A1 (ru) | 2010-08-30 |
Family
ID=42779177
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201000173A EA201000173A1 (ru) | 2009-12-18 | 2009-12-18 | Способ определения в таблетке количества активных компонентов в виде аминокислот глицина, l-глутаминовой кислоты и l-цистина |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EA (1) | EA201000173A1 (ru) |
| WO (1) | WO2011075002A1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2700831C1 (ru) * | 2019-01-24 | 2019-09-23 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр экспертизы средств медицинского применения" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НЦЭСМП" Минздрава России) | Способ количественного определения глицина в биологических лекарственных препаратах методом гидрофильной высокоэффективной жидкостной хроматографии |
| CN111505151A (zh) * | 2020-04-30 | 2020-08-07 | 宜昌三峡普诺丁生物制药有限公司 | 高效液相色谱法测定l-缬氨酸原料中其他氨基酸的方法 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112903886B (zh) * | 2019-12-04 | 2024-05-24 | 四川科伦药物研究院有限公司 | 1-丁基磺酰氯有关物质的分离和检测方法 |
| CN115754071A (zh) * | 2022-11-24 | 2023-03-07 | 湖北三峡实验室 | 高效液相色谱测定反应液中甘氨酸和二酮哌嗪含量的方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04275298A (ja) * | 1991-03-02 | 1992-09-30 | Kikkoman Corp | ぺプチド及びこれを有効成分とするアンジオテンシン変換酵素阻害剤 |
| RU2096034C1 (ru) * | 1994-11-30 | 1997-11-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Медицинский научно-производственный комплекс "БИОТИКИ" | Фармацевтическая композиция, индуцирующая биосинтез глутатиона, активность глутатионтрансферазы и оказывающая антитоксическое, радиопротекторное и антигипоксическое действие, и способы лечения, профилактики и защиты с ее использованием |
| RU2167410C2 (ru) * | 1999-08-03 | 2001-05-20 | Пермская государственная фармацевтическая академия | Способ количественного определения алифатических аминокислот |
| RU2267115C2 (ru) * | 2003-06-23 | 2005-12-27 | ОАО "Фармстандарт-Лексредства" | Способ количественного определения состава многокомпонентных лекарственных препаратов жаропонижающего, аналгезирующего, противопростудного действия |
| RU2332662C2 (ru) * | 2005-09-26 | 2008-08-27 | Григорий Борисович Голубицкий | Способ определения количественного состава таблеток "пенталгин фс" |
| JP2009109406A (ja) * | 2007-10-31 | 2009-05-21 | Kowa Co | イブプロフェン、チペピジン及びチアミンの同時定量方法並びに当該方法を用いた有効成分含量の担保された製剤の製造方法 |
-
2009
- 2009-12-18 EA EA201000173A patent/EA201000173A1/ru active IP Right Revival
-
2010
- 2010-10-28 WO PCT/RU2010/000627 patent/WO2011075002A1/ru active Application Filing
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04275298A (ja) * | 1991-03-02 | 1992-09-30 | Kikkoman Corp | ぺプチド及びこれを有効成分とするアンジオテンシン変換酵素阻害剤 |
| RU2096034C1 (ru) * | 1994-11-30 | 1997-11-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Медицинский научно-производственный комплекс "БИОТИКИ" | Фармацевтическая композиция, индуцирующая биосинтез глутатиона, активность глутатионтрансферазы и оказывающая антитоксическое, радиопротекторное и антигипоксическое действие, и способы лечения, профилактики и защиты с ее использованием |
| RU2167410C2 (ru) * | 1999-08-03 | 2001-05-20 | Пермская государственная фармацевтическая академия | Способ количественного определения алифатических аминокислот |
| RU2267115C2 (ru) * | 2003-06-23 | 2005-12-27 | ОАО "Фармстандарт-Лексредства" | Способ количественного определения состава многокомпонентных лекарственных препаратов жаропонижающего, аналгезирующего, противопростудного действия |
| RU2332662C2 (ru) * | 2005-09-26 | 2008-08-27 | Григорий Борисович Голубицкий | Способ определения количественного состава таблеток "пенталгин фс" |
| JP2009109406A (ja) * | 2007-10-31 | 2009-05-21 | Kowa Co | イブプロフェン、チペピジン及びチアミンの同時定量方法並びに当該方法を用いた有効成分含量の担保された製剤の製造方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Metodicheskie rekomendatsii. Ispol'zovanie ningidrinovoy reaktsii dlya kolichestvennogo opredeleniya α-aminokislot v razlichnykh ob"ektakh. 21 06.2007, Volgograd, s. 13-14, 69-70 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2700831C1 (ru) * | 2019-01-24 | 2019-09-23 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр экспертизы средств медицинского применения" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НЦЭСМП" Минздрава России) | Способ количественного определения глицина в биологических лекарственных препаратах методом гидрофильной высокоэффективной жидкостной хроматографии |
| CN111505151A (zh) * | 2020-04-30 | 2020-08-07 | 宜昌三峡普诺丁生物制药有限公司 | 高效液相色谱法测定l-缬氨酸原料中其他氨基酸的方法 |
| CN111505151B (zh) * | 2020-04-30 | 2022-09-02 | 宜昌三峡普诺丁生物制药有限公司 | 高效液相色谱法测定l-缬氨酸原料中其他氨基酸的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EA201000173A1 (ru) | 2010-08-30 |
| WO2011075002A1 (ru) | 2011-06-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101915844B (zh) | 一种检测喹诺酮类化合物的方法及其专用量子点荧光免疫试剂盒 | |
| CN102906570A (zh) | 维生素d化合物的释放制剂 | |
| JP2010519532A (ja) | 両性イオン性固定相上でのｈｉｌｉｃを用いたメチルマロン酸およびコハク酸の質量分析的定量的検出 | |
| EA013977B1 (ru) | Способ определения в таблетке количества активных компонентов в виде аминокислот глицина, l-глутаминовой кислоты и l-цистина | |
| CN109725073A (zh) | 乙酰半胱氨酸对映异构体的分离检测方法 | |
| CN112782327A (zh) | 一种液相色谱法分离测定羧甲司坦及其杂质的方法 | |
| CN113933403A (zh) | 一种丙氨酰谷氨酰胺有关物质的测定方法 | |
| CA2869125A1 (en) | Lithium reagent composition and method and device for determining lithium ion amount using same | |
| US4141856A (en) | Reference material for establishing anion concentrations in analytical chemistry tests | |
| CN108828085A (zh) | 一种转移因子胶囊的总氨基酸定量检测方法 | |
| CN114728983A (zh) | β-内酰胺抗生素衍生化为质谱测量中的校准品/ISTD | |
| CN109991337B (zh) | 同时检测中华绒螯蟹蟹黄中四类药物及其代谢物的方法 | |
| Athanasiou-Malaki et al. | Kinetic-potentiometric determination of amino acids based on monitoring their reaction with dinitrofluorobenzene using a fluoride-selective electrode | |
| CN110007023B (zh) | 鱼体内磺胺类药物的高分辨质谱筛查方法及其与蛋白大分子相互作用的分析方法 | |
| Reed et al. | Simple, optimized liquid-chromatographic method for measuring total hydroxyproline in urine evaluated | |
| Storer et al. | Aracyl triflates for preparing fluorescent and UV absorbing derivatives of unreactive carboxylates, amines and other metabolites | |
| JP2005221425A (ja) | カルニチン類の測定方法 | |
| EP3081934B1 (en) | Lithium reagent composition, and method and device for quantifying lithium ions using same | |
| JPS6314303B2 (ru) | ||
| CN108088929B (zh) | 一种左旋苯甘氨酸乙基邓钾盐的分析方法 | |
| Cervantes et al. | Development and validation of an LC/MS method of glatiramer and its sequential amino acids, at pharmaceutical product | |
| CN110568119A (zh) | 一种同时检测甜菜碱盐酸盐和氯乙酸甲酯季铵盐的方法 | |
| RU2293320C2 (ru) | Способ количественного определения тиотриазолина и пирацетама в комплексных лекарственных препаратах | |
| Saputri et al. | 4-chloro-7-nitrobenzofurazan (nbd-cl) as pre and post-column derivatization reagent for amine groups analysis using chromatography: a mini-review | |
| SU1506338A1 (ru) | Способ количественного определени тропафена |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| TC4A | Change in name of a patent proprietor in a eurasian patent | ||
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU |
|
| NF4A | Restoration of lapsed right to a eurasian patent |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM RU |