EA013517B1 - Применение козьей сыворотки, полученной иммунизацией козы вич, для изготовления лекарственных средств - Google Patents
Применение козьей сыворотки, полученной иммунизацией козы вич, для изготовления лекарственных средств Download PDFInfo
- Publication number
- EA013517B1 EA013517B1 EA200400134A EA200400134A EA013517B1 EA 013517 B1 EA013517 B1 EA 013517B1 EA 200400134 A EA200400134 A EA 200400134A EA 200400134 A EA200400134 A EA 200400134A EA 013517 B1 EA013517 B1 EA 013517B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- hiv
- hba
- goat
- antibodies
- serum
- Prior art date
Links
- 241000283707 Capra Species 0.000 title claims abstract description 123
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 title claims abstract description 87
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims description 21
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 10
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 title description 4
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 title description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 35
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims abstract description 19
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 14
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 12
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 claims description 6
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 claims description 3
- 206010029240 Neuritis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 claims 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 abstract description 16
- 238000002347 injection Methods 0.000 abstract description 16
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 9
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 abstract 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 77
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 64
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 52
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 49
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 48
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 46
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 33
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 32
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 description 29
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 27
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 27
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 27
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 27
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 27
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 26
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 24
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 21
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 18
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 16
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 16
- 230000004044 response Effects 0.000 description 15
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 15
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 14
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 13
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 13
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 12
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 12
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 12
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 12
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 11
- 102000015554 Dopamine receptor Human genes 0.000 description 11
- 108050004812 Dopamine receptor Proteins 0.000 description 11
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 11
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 11
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 11
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 11
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 9
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 9
- 102000007339 Nerve Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 9
- 108010032605 Nerve Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 9
- 230000007503 antigenic stimulation Effects 0.000 description 9
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 9
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 description 9
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 9
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 9
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 9
- 102000040125 5-hydroxytryptamine receptor family Human genes 0.000 description 8
- 108091032151 5-hydroxytryptamine receptor family Proteins 0.000 description 8
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 8
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 8
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 8
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 8
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 6
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 6
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 6
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical class N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 5
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 5
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 5
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 5
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 5
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 4
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 4
- 101000686985 Mouse mammary tumor virus (strain C3H) Protein PR73 Proteins 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 4
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 4
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 4
- 210000004201 immune sera Anatomy 0.000 description 4
- 229940042743 immune sera Drugs 0.000 description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- 231100000617 superantigen Toxicity 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 3
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 3
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 3
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 3
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 3
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 3
- 238000007799 mixed lymphocyte reaction assay Methods 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 3
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 3
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 229940033330 HIV vaccine Drugs 0.000 description 2
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 2
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 2
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 230000002973 anti-dopamine Effects 0.000 description 2
- -1 bacterial and tropical Diseases 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 208000017760 chronic graft versus host disease Diseases 0.000 description 2
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 2
- 238000011443 conventional therapy Methods 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 229960003638 dopamine Drugs 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 2
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 229960003127 rabies vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- JCVDICFLPGDHAT-DJLDLDEBSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-3,5-dimethylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1N(C)C(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 JCVDICFLPGDHAT-DJLDLDEBSA-N 0.000 description 1
- 229940124718 AIDS vaccine Drugs 0.000 description 1
- 206010000807 Acute HIV infection Diseases 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 208000007848 Alcoholism Diseases 0.000 description 1
- 206010004146 Basal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 description 1
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 description 1
- 206010065553 Bone marrow failure Diseases 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000005635 Caprylic acid (CAS 124-07-2) Substances 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 102000009410 Chemokine receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050000299 Chemokine receptor Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 101000940468 Drosophila melanogaster COP9 signalosome complex subunit 2 Proteins 0.000 description 1
- 241000353621 Eilat virus Species 0.000 description 1
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 101000611023 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 6 Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102100026879 Interleukin-2 receptor subunit beta Human genes 0.000 description 1
- 241001026509 Kata Species 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 101100404841 Leptosphaeria maculans NIIA gene Proteins 0.000 description 1
- 108700002010 MHC class II transactivator Proteins 0.000 description 1
- 102100026371 MHC class II transactivator Human genes 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000028389 Nerve injury Diseases 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 208000005374 Poisoning Diseases 0.000 description 1
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108091006629 SLC13A2 Proteins 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 101710187830 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B Proteins 0.000 description 1
- 102100040403 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 6 Human genes 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 241001441550 Zeiformes Species 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 201000007930 alcohol dependence Diseases 0.000 description 1
- 235000021120 animal protein Nutrition 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000007234 antiinflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- RIIWUGSYXOBDMC-UHFFFAOYSA-N benzene-1,2-diamine;hydron;dichloride Chemical compound Cl.Cl.NC1=CC=CC=C1N RIIWUGSYXOBDMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BLFLLBZGZJTVJG-UHFFFAOYSA-N benzocaine Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 BLFLLBZGZJTVJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000011545 carbonate/bicarbonate buffer Substances 0.000 description 1
- 231100000481 chemical toxicant Toxicity 0.000 description 1
- 230000014564 chemokine production Effects 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 229920003045 dextran sodium sulfate Polymers 0.000 description 1
- 239000012471 diafiltration solution Substances 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000013403 hyperactivity Diseases 0.000 description 1
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 1
- 230000008004 immune attack Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000006749 inflammatory damage Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 231100000682 maximum tolerated dose Toxicity 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000036651 mood Effects 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 1
- 210000003007 myelin sheath Anatomy 0.000 description 1
- 230000031990 negative regulation of inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 230000008764 nerve damage Effects 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000007514 neuronal growth Effects 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 229960002446 octanoic acid Drugs 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000004789 organ system Anatomy 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 1
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 1
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 208000011571 secondary malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 206010062261 spinal cord neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
- C07K16/1045—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV
- C07K16/1063—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV env, e.g. gp41, gp110/120, gp160, V3, PND, CD4 binding site
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/16—Blood plasma; Blood serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/42—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum viral
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
- C07K16/1045—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2833—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against MHC-molecules, e.g. HLA-molecules
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/286—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against neuromediator receptors, e.g. serotonin receptor, dopamine receptor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Virology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Neurology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Obesity (AREA)
Abstract
Анти-HLA- и другие антитела, присутствующие в сыворотке козы после введения материала ВИЧ-антигена, и основа, входящая в состав для наиболее эффективного лечения ВИЧ, рассеянного склероза и других заболеваний.
Description
Настоящее изобретение относится к терапевтическому агенту, в частности, но не исключительно, к терапевтическому агенту для лечения заболеваний, в которые вовлечен пролиферативный иммунный ответ.
Предпосылки к созданию изобретения
Международная заявка XVО 97/02839 относится к подавлению вирусов, лечению и профилактике вирусных инфекций. Она относится к способу выработки нейтрализующих антител для лечения вирусной инфекции у пациента, включающему в себя следующие стадии:
a) воздействие на млекопитающее вирусом таким образом, чтобы указанное млекопитающее вырабатывало нейтрализующие антитела против указанного вируса, и
b) выделение указанных нейтрализующих антител от указанного млекопитающего.
В приведенных примерах вакцину против ВИЧ, обозначенную ЛЛУ2, получают, смешивая вирус ВИЧ с ВИЧ-нейтрализующими антителами, полученными от козы.
Международная заявка νθ 01/60156 относится к композициям нейтрализующих антител и иммуномодулирующим усиливающим иммунный ответ композициям. Она относится к иммуномодулирующей композиции, включающей в себя гетерологичные антитела, специфичные в отношении антигена, и антиген, причем гетерологичные антитела образуют комплекс с антигеном для объединения с фармацевтическим носителем.
Данные примеры сходны с примерами в международной заявке νθ 97/02839, и вакцину против ВИЧ, обозначенную ЛЛУ2, также получают, смешивая вирус ВИЧ с ВИЧ-нейтрализующими антителами, полученными от козы.
Международная заявка νθ 02/07760 относится к терапевтическому агенту. Она относится к способу профилактики ВИЧ-инфекции или лечению индивида, инфицированного ВИЧ, который включает в себя следующие стадии:
(1) воздействие ВИЧ на иммунную систему козы;
(2) выделение из организма козы антител после антигенной стимуляции ВИЧ и (3) лечение индивида антителами, полученными на стадии 2 выше.
В ходе предварительных клинических испытаний продукта на основе антител, полученных, как описано в νθ 02/07760, пациентов с ВИЧ успешно лечили сывороткой, полученной от козы после антигенной стимуляции ВИЧ.
Предпочтительно при лечении используется сывороточная композиция, которую можно получить с помощью процесса, включающего в себя выработку эффективных антител у козы, взятие крови у козы, демонстрацию ВИЧ-нейтрализующей способности взятой крови, осаждение твердых веществ с использованием перенасыщенного раствора сульфата аммония или другого подходящего осаждающего агента, отделение осадка, растворение осадка в подходящей водной среде и диализ раствора с отсекающей величиной от 5 до 50000 Да, предпочтительно от 7 до 30000 Да, более предпочтительно от 8500 до 10000 Да, особенно около 10000 Да. Способ иммунизации козы может быть внутримышечным, но также можно использовать и другие стандартные методики, такие как подкожное или внутрикожное введение. Процесс выделения также можно выполнять с помощью других общепринятых способов фракционирования (например, с каприловой кислотой), обеспечивающих использование всего остатка.
Более конкретно для лечения обычно применяют сыворотку козы, полученную следующим путем.
Пример получения сыворотки козы
Козе вводили посредством внутримышечной инъекции лизированный вирус ВИЧ-3Ь, суспендированный в обычной коммерчески доступной надосадочной жидкости, с использованием внутримышечной инъекции ВИЧ-3Ь в концентрации 109 вирусных частиц на 1 мл. Вирус предварительно убивали нагреванием до 60°С в течение 30 мин. Образцы крови отбирали после подходящего интервала, например в две недели, для исходной оценки. При оптимизированной процедуре козе производили инъекции каждую неделю в течение четырех недель, затем в шесть недель у животного брали кровь для получения реагента.
В стерильных условиях у козы брали около 400 см3 крови. Область введения иглы брили и обрабатывали бетадином. Для взятия приблизительно 400 см3 крови у животного использовали иглу калибра 18. Следует отметить, что животное может перенести взятие крови в объеме около 400 см3 без какого бы то ни было вреда. Животное не нужно умерщвлять. У животного можно повторно брать кровь приблизительно через 10-14 дней после того, как оно восстановит объем крови.
Получали подтверждение наличия потенциально пригодных антител. После подтверждения наличия указанных реагентов у козы затем брали кровь между 4-6 неделями и центрифугировали для отделения сыворотки. 300 мл сыворотки затем фильтровали для удаления больших сгустков и твердых частиц. Затем сыворотку обрабатывали перенасыщенным раствором сульфата аммония (45% раствором при комнатной температуре), для осаждения антител и другого материала. Полученный раствор центрифугировали при 5000 об./мин в течение 5 мин, после чего удаляли надосадочную жидкость. Осажденный иммуноглобулин ресуспендировали в объеме физиологического раствора с фосфатным буфером (буфер РВ8, см. 8ашЬгоок с1 а1., Мо1еси1аг οΐοηίπμ. А ЬаЬога1огу Мапиа1, 1989), достаточном для повторного
- 1 013517 растворения осадка.
Раствор затем диализировали через мембрану с отсекающей величиной молекулярной массы 10000 Да. Диализ проводили в буфере РВ8, который меняли каждые 4 ч в течение 24 ч. Диализ проводили при 4°С.
После 24-часового диализа содержимое диализного мешка переносили в стерильный химический стакан. Производили доводку раствора таким образом, чтобы величина массы на единицу объема составляла 10 мг на 1 мл. Разбавление осуществляли с использованием РВ8. Полученный раствор затем фильтровали через фильтр с размером пор 0,2 мкм в стерильный контейнер. После фильтрования раствор разделяли на аликвоты однократных доз по 1 мл и хранили при -22°С до использования.
Реагент затем был готов для применения.
В данную процедуру можно вносить изменения, такие, например, как изменения концентрации раствора сульфата аммония или использование других реагентов. Подобно этому, отсекающая величина при диализе не обязательно должна составлять 10000 Да.
Изобретение
В части лечения с использованием сыворотки козы были отмечены другие благоприятные результаты. Например, у пациентов с ВИЧ, страдающих диабетом I типа, было отмечено улучшение не только в отношении их основной ВИЧ-инфекции, но также и симптомов диабета. У пациентов с ВИЧ, страдающих определенными видами злокачественных опухолей, отмечали ремиссии в отношении злокачественных опухолей, а также симптомов ВИЧ.
Обнаружение значительного клинического улучшения у пациентов, инфицированных ВИЧ, а также у пациентов с другими состояниями, такими как рассеянный склероз (РС) и некоторые виды злокачественных опухолей, свидетельствует о наличии между ними той потенциальной связи, что все указанные заболевания представляют собой хронические воспалительные состояния.
В соответствии с настоящим изобретением, авторы установили, что сыворотка козы обязана своей активностью наличию анти-НЬЛ-активности.
К удивлению авторов, им легко удалось продемонстрировать, что козы, иммунизированные ВИЧ, продуцируют сыворотку, которая способна остановить реакцию смешанного лимфоцитарного ответа, которая представляет собой один из классических анализов активации, используемых ίη νίίτο. Авторы, полагая, что этот факт может представлять собой некое свойство, присущее сыворотке козы, подчеркивают, что сыворотки от коз, которым инъекции не производились, не обладали никакой активностью в упомянутых анализах.
Авторы показали также, что указанная активность тесно связана с активностью против антител к НЬА класса II. Авторы не знают, связано ли это с молекулярной мимикрией или распознает ли организм козы НЬА класса II, которые несет вирус по мере своего размножения и высвобождения из инфицированных клеток, или что молекулы НЬА (молекулы МНС) распространяются отдельно от вируса, но выделяются вместе с ним, так, что антитела вырабатываются также и против указанных компонентов клеточной оболочки. На самом деле для авторов не остался незамеченным тот факт, что молекулы клеточной оболочки, такие как рецепторы хемокинов и родственные молекулы, также могут находиться в препарате и индуцировать антительные ответы, которые модулируют благоприятный терапевтический эффект. Однако если это действительно происходит, представляется, что анти-НЬА-ответы являются очень доминантными, и авторы полагают, что это может играть значительную, но не необходимую, отдельную роль в индукции наблюдавшихся противовоспалительных ответов.
Авторы исследовали сыворотки от разных коз, иммунизированных различными вирусными/клеточными препаратами, и могут показать, что смесь антигенов, инъецированная козам, вызывает иммунный ответ, который распознает многие из критических, т.е. «молчащих», частей оболочки ВИЧ, которые могут быть очень важны для создания будущей вакцины.
Одна особенность настоящего изобретения относится к антителу, которое распознает антиген НЬА класса II, для применения при заболевании, в которое вовлечен пролиферативный иммунный ответ.
При высоких титрах антител против НЬА как класса I, так и класса II в сыворотках, те из них, которые имеют самые высокие уровни антител, являются теми сыворотками, которые останавливают реакцию смешанного лимфоцитарного ответа наиболее эффективно, и, как представляется, обладают наилучшей эффективностью в клинической ситуации.
Неожиданно авторы установили, что уровни антител против РА8, главного лиганда апоптоза, были чрезвычайно высоки. На самом деле, они коррелировали с антителами против МНС класса II. Не имея намерения связывать себя какой-либо теорией, авторы выдвинули гипотезу, которая заключается в том, что высокий титр антител против РА8 может приводить к немедленному апоптозу через несколько минут после связывания антитела с антигеном РА8, и клетки могут быть убиты. Это может привести к ингибированию токсичных хемокинов, которые, как полагают, принимают участие в инвалидизации при РС.
Таким образом, в настоящем изобретении авторы сообщают, что антитела против РА8 могут играть важную роль для лечения ВИЧ, рассеянного склероза и других состояний и могут оказывать при лечении совместное благоприятное действие с другими антителами против класса II и класса I.
- 2 013517
Одна особенность настоящего изобретения относится к анти-РЛ8-антителу для применения при лечении заболевания, поддающегося указанному лечению.
Кроме того, настоящее изобретение относится также к композициям, содержащим анти-НЬЛантитело и/или анти-ЕА8-антитело, и к способам лечения с использованием указанных комбинаций.
Основное применение настоящего изобретения относится к сывороткам, содержащим анти-НЬА-, в качестве лечения заболеваний, при которых наблюдаются патологически высокие уровни НЬА. Указанные заболевания включают в себя рассеянный склероз, ревматоидный артрит, сахарный диабет, первичный билиарный цирроз, аутоиммунный цирроз и аутоиммунные состояния при вирусе Ь и с, поражающие сердце, легкие, кожу, желудочно-кишечный тракт, почки, головной мозг, ЦНС. Более обобщенно, состояния, которые можно лечить с использованием настоящего изобретения, включают в себя ВИЧ, воспалительные заболевания, аутоиммунные заболевания, повреждение аксонов или нервов или связанные с ними нарушения, или злокачественные опухоли и другие заболевания или состояния с участием воспалительного компонента.
Присутствие анти-РЛ8 делает сыворотки особенно подходящими для заболеваний, связанных с хронически активированными клетками, которые могут секретировать повреждающие мессенджеры, такие как цитокины и хемокины. Указанные заболевания включают в себя рассеянный склероз, все формы хронических воспалительных состояний нервной системы, а также хронические инфекции, такие как вирусные, бактериальные и тропические, злокачественные опухоли, связанные с хроническими воспалительными повреждениями, в частности, легких, поджелудочной железы, печени, кишечника, лимфатических узлов, кожи, особенно чешуйчатоклеточный и базально-клеточный рак; также благоприятным может быть указанное лечение для первичных и вторичных опухолей головного и спинного мозга.
Наблюдающиеся улучшения функции нервной системы у людей с травматическими повреждениями нервов наводят на мысль о свойстве фактора роста нейронов и, следовательно, о возможном применении при травме, постинфекционных поражениях, болезни Гийена-Варре, злокачественном повреждении и т.п., невропатиях, связанных с диабетом, алкоголизмом, отравлением металлами или другими токсинами и т. п.
Наблюдающееся благоприятное действие на волосы и тон и цвет кожи предполагают другие уникальные свойства, которые нельзя объяснить приведенными выше наблюдениями, относящимися к антителам, и т.п., которые имеются в настоящее время, т.е. действие против старения; сообщения о снижении вторичной раковой активности под действием данной сыворотки предполагают прямую противораковую активность, которая может быть связана с активностью РЛ8, но также может быть связана с еще неидентифицированными агентами.
В одном аспекте антитело предпочтительно получают от козы, которую вакцинировали против бешенства.
Как вариант, настоящее изобретение относится к антителу, получаемому от лошади, овцы и других подходящих животных. Антитело можно получать способом, сходным с описанным для получения антитела от козы, и оценивать на предмет анти-НЬА- и/или анти-ЕА8-активности. В еще одном варианте применение вируса ВИЧ в качестве иммуногена для получения антитела не является необходимым, и для получения эффективного препарата антител в качестве иммуногена используют человеческие белые кровяные клетки или мембранные антигены клеточных линий, полученных от человека. Кроме того, авторы рассматривают возможность замены антитела на иммуноген, т.е. возможность того, что терапевтическая композиция может содержать материал ВИЧ или белые кровяные клетки.
Еще в одном варианте после инактивации нагреванием надосадочный раствор, в котором выращивалась вирусная культура, или другой раствор, подходящий для этих целей, но который не использовали для выращивания культуры, также можно использовать в качестве иммуногена, который будет продуцировать желательный антительный ответ. Любой надосадочный раствор или другую среду, которая подходит для выращивания ίη νίΐτο ВИЧ или другого вируса, можно использовать для получения приемлемого иммуногена, который будет вызывать эффективный антительный ответ. В качестве примера приводится надосадочная жидкость ростовой среды для клеточных линий, таких как РМВС или раковая бессмертная клеточная линия, которая используется для выращивания ВИЧ ШЬ. ВИЧ или другой выбранный вирус не обязательно должен присутствовать для получения эффективного иммуногена для создания препарата антител.
Предпочтительно антитело согласно изобретению представляет собой поликлональное антитело, которое распознает спектр антигенов НЬА класса II и антигена др 120, или которое распознает ЕА8. Данные, полученные авторами, предполагают, что предпочтительно иметь антиген НЬА класса II.
Подходящие антитела можно получить, применяя в качестве иммуногена подборку антигенов, предпочтительно смесь антигенов. Возможно, использование ряда различных антигенов способствует выработке антитела, которое распознает общие структуры антигенов, вызывая более сильный ответ у пациента. Авторы выдвинули гипотезу о том, что селекция изолятов ВИЧ дает эпитопы с минимальными структурными вариациями, и в результате получается панантитело.
Таким образом, для получения сыворотки авторы предпочитают применять смесь различных вирусов ВИЧ, выращенных, главным образом, на РВМС, а не использовать только Т-клетки в отдельности.
- 3 013517
Удобно, если смесь содержит 2, 3, 4, 5, 6 или более указанных вирусов. Вирусы предпочтительно находятся в форме лизатов. Примеры предпочтительных лизатов включают в себя следующие изоляты ВИЧ1: 9Ш8056, 92НТ593, 92И8723, 92И8657, 92И8660 и 92И8714. Предпочтительно смесь включает в себя по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или все 6 из указанных конкретных изолятов.
Активация клеток, например, с помощью Конканавалина А (Соп А) может давать преимущества, и, например, с использованием Соп А можно достигать более высоких уровней антидофаминовой активности. 8НИЬА (неактивированный) не вызывает достоверного подъема антидофаминовых В-уровней по сравнению с фоновыми уровнями, определяемыми по О.П. Между тем, ВИЧ 3В (среднее от 12 коз и кролика) это делает. Наблюдался также подъем В-уровней дофамина среди клеток РВМС, активированных Соп-А, в смеси.
Еще в одном варианте надосадочный раствор, подходящий для выращивания ίη νίίτο вируса ВИЧ, но не ограничиваясь ВИЧ, будет супернатантом клеток РВМС или другой средой, такой как среда из-под бессмертной клеточной линии, такой, которая используется, например, для выращивания ВИЧ ШЬ, сама по себе, без внедрения вируса, если вирус ВИЧ, убитый нагреванием обычным способом, не должен присутствовать, дает эффективный препарат антител.
Указанные антитела также можно получить с использованием белков, содержащих пептиды, выделенные из лизатов ВИЧ, синтетических пептидов, бактериальных слитых белков и белков/пептидов из филогенетически неродственных источников, которые содержат или имитируют желательную клеточную культуру или другой надосадочный дебрис. Можно получить и исследовать антитела против лизата.
Не будучи связанными имеющейся в настоящее время теорией, авторы предполагают, что антитело согласно изобретению действует угнетающе на клеточную пролиферацию того вида, который требуется для ВИЧ или для других условий, требующихся для данного иммунного ответа. Так, например, настоящее изобретение находит применение для лечения рассеянного склероза.
Теперь зная, как важны анти-НЬА- и анти-ЕА8-активности антитела из сыворотки козы, можно оценить вероятную пригодность ряда указанных сывороток козы. Простой анализ может дать возможность оценить наличие анти-НЬА- и/или анти-ЕА8-активности и позволить идентифицировать сыворотку-кандидат, подходящую для введения пациентам.
Согласно настоящему изобретению создан способ изготовления сыворотки, особенно сыворотки козы, который включает в себя введение одного или более, предпочтительно, по меньшей мере, нескольких, изолятов ВИЧ животному, ожидание развития иммунного ответа, взятие крови у животного, мониторинг наличия анти-НЬА-антитела и/или анти-ЕА8-антитела и изготовление анти-НЬА- и/или антиЕА8-сыворотки, пригодной для лечения человека.
Обычно будет использовано множество животных, и животных можно оценивать с точки зрения наибольшего выхода эффективной сыворотки. Указанных лучших животных можно затем разводить для получения линии животных, особенно пригодных для реализации настоящего изобретения.
Обычно процедуры контроля качества будут адаптированы таким образом, чтобы убедиться в наличии анти-НЬА-антитела, обычно ряда анти-НЬА-антител, и/или анти-ЕА8-антитела, обычно ряда антиЕА8-антител. Можно проводить корреляции между сериями, чтобы получить стандартизированный продукт.
Основываясь на способности сыворотки резко ингибировать МЬВ, предполагают, что данная сыворотка может действовать как мощный противовоспалительный агент. Существует ряд механизмов, посредством которых это может происходить, и ингибирование распознавания НЬА представляет собой один из наиболее вероятных.
Другой механизм действия вполне может объясняться тем фактом, что в активности такой козьей плазмы участвует комплемент, поскольку это единственная активность, о которой известно, что ее предотвращает термическая обработка. Комплемент вполне способен придавать активность ослабленным детекторным механизмам пациента. Например, уничтожение вирусов и опухолевых клеток с помощью нацеленных антител, а также уничтожение, опосредованное клетками и направленными антителами, оба, требуют комплемента, и наблюдается тотальное отсутствие эффекта механизма в отсутствие комплемента.
Кроме того, изобретение относится к композиции, включающей в себя активный компонент, который может быть получен из крови козы после должным образом проведенной антигенной стимуляции, посредством методики получения сыворотки, которая не предназначена для выделения отдельных, специфичных антител. В частности, в изобретении рассматривается вопрос о выделении активного компонента, возможно, смеси совместно действующих анти-НЬА-антител и/или ЕА8-антител, из сыворотки крови козы после антигенной стимуляции, без истощающей очистки и экстракции для получения отдельного антитела.
Обычно инъекция человеку антител, полученных от хозяина, не являющегося человеком, противопоказана. Против самих чужеродных антител обычно развивается мощный иммунный ответ. Однако неожиданно было установлено, что применение экстракта сыворотки козы не провоцирует иммунных реакций, которые прогнозируются после введения других чужеродных животных белков. Инъекцию экстракта сыворотки козы переносят как пациенты со сниженной функцией иммунной системы, так и здоровые люди.
- 4 013517
В настоящем изобретении особым образом применяется экстракт сыворотки, который, возможно, включает в себя общую популяцию молекул антител, полученную от козы после антигенной стимуляции ВИЧ. Не желая быть связанными теорией, авторы полагают, что подобный подход обладает значительными преимуществами. У пациентов, которых лечили экстрактом сыворотки, наблюдалось выраженное благоприятное действие через минуты после введения.
Убитый вирус инъецируют специально идентифицированной козе путем внутримышечной инъекции и позволяют инкубироваться, после чего производят взятие определенного количества крови и обрабатывают соответствующим образом.
Сыворотку необязательно тестируют на желаемую антительную активность и, необязательно, на одну или более антигибридизационных способностей, на нейтрализацию вируса СПИД, на ее способность усиливать фагоцитоз и на ее приемлемость для человеческого организма.
После инокуляции выбранной козе вируса ВИЧ был отмечен иммунный ответ после воздействия чужеродным белковым антигеном, в соответствии с более ранними исследованиями. Извлеченную сыворотку затем подвергали дальнейшей обработке, чтобы подготовить ее для применения у человека.
Реагенты, выработанные в ответ на инокуляцию животному ВИЧ и модифицированные и очищенные с помощью настоящих процедур, как было показано, вызывают полное обратное развитие комплекса СПИДа.
Объяснение того, как это происходит на самом деле, является сложным, однако результатом введения индивиду, который является ВИЧ-положительным или имеет полностью развившийся СПИД, является следующее.
1. Почти немедленное улучшение качества жизни пациентов.
2. Генерируется пролиферация клеток СИ4 и СИ8, в результате чего повышается содержание клеток СХ4 и СИ8.
3. Снижение у пациентов вирусной нагрузки до теоретического нуля, обычно с инкрементом 0,5 1од.
4. Сокращение величин Р24 до нуля.
По сути, это означает, что возможно возвращение иммунной системы пациентов к норме и что возможно элиминировать вирус, хотя то, как долго это состояние будет продолжаться, в настоящее время не известно, при трех годах и продолжающемся в настоящее время наблюдении.
Приблизительно двести человек в возрасте 10 лет и старше, обоих полов, успешно лечили данным лекарственным средством; при этом ни один из них не имел рецидивов и не страдал от каких бы то ни было побочных эффектов.
Лечение осуществлялось посредством подкожной инъекции, в количествах, варьирующих от одной десятой до десяти см3, и было устроено таким образом, чтобы как можно быстрее доставить лекарственное средство в лимфатическую систему. Согласно настоящему изобретению предпочтительная доза для ВИЧ-инфицированного пациента обычно составляет 1 мл еженедельно или как потребуется, в виде разделенной дозы с введением в обе руки. Введение каждые 2 или 3 недели становится обычным, затем каждые 3 месяца. Для пациентов со злокачественными опухолями наилучшим представляется введение 0,3 мл еженедельно.
В большинстве случаев лечение проводилось один раз каждые четыре недели в течение периода времени три месяца. Были сделаны следующие наблюдения:
1. Депрессия, от умеренной до тяжелой, подвергалась обратному развитию менее чем через 60 мин после инъекции.
2. Обычно к пациентам в течение 2 ч после инъекции возвращался аппетит, и они активно искали пищу.
3. В течение приблизительно двух недель после первого введения пациенты начинали набирать вес.
4. Независимые лабораторные исследования подтвердили, что через 4-6 недель после первого введения вирусные нагрузки и величины Р24 значительно уменьшились и что содержание клеток СИ4 и СИ8 резко увеличилось.
5. Побочных эффектов не наблюдалось.
Важно отметить, что настоящее лекарственное средство, в отличие от имеющихся в настоящее время способов лечения, не требует от пациента строгого почасового или суточного режима и основано на простой инъекции, которую производят еженедельно или ежемесячно.
Предпочтительно композиция является очищенной и состоит практически только из очищенного экстракта сыворотки. Еще в одном варианте антитела можно также очищать как целое или отбирать и группировать в соответствии с особыми требованиями при конкретном заболевании в отношении сложной смеси сыворотки или плазмы, с помощью обычной или любой другой подходящей процедуры, включая, без ограничения, например, иммуноаффинную хроматографию, солевое осаждение, ионообменную хроматографию, хроматографию по размерам, аффинную хроматографию, в комбинации, как это необходимо или желательно.
Также можно рассматривать, но не обязательно, комбинированную терапию анти-НЕА-антителом и/или анти-ЕА8-антителом согласно изобретению.
- 5 013517
Экстракт сыворотки козы, полученный, как описано в настоящем документе, можно изготавливать, в соответствии с настоящим изобретением, в виде композиции для ингибирования репликации вируса ίη νίΐΓΟ или ίη νίνο. В качестве такового, настоящее изобретение относится также к фармацевтическим композициям, включающим в себя реагент козы согласно изобретению, подходящим для лечения заболевания, такого как вирусное заболевание. Реагент согласно изобретению можно смешивать с подходящими фармацевтически приемлемыми носителями.
Примеры фармацевтических композиций включают в себя любую твердую форму (таблетки, пилюли, капсулы, гранулы и т.п.) подходящего состава, или формы для перорального, местного или парентерального введения, и они могут включать в себя носитель. Композиции должны быть стерильными, если предназначаются для парентерального введения.
Обычно используют тест-дозу, чтобы увидеть, развивается ли у человека аллергическая реакция на гипериммунную сыворотку козы. Внутрикожная инъекция сопровождается 30-минутным ожиданием, чтобы увидеть, есть ли промежуточная реакция, которая проявляется как отек, эритема и зуд. Если данная реакция отрицательна, то можно сделать предположение о том, что наиболее вероятно, будет наблюдаться реакция гиперчувствительности немедленного типа. Аллергическая реакция, однако, не мешает пациенту принять потенциально спасающее жизнь лечение из-за возможной аллергической реакции.
Введение композиции согласно изобретению можно осуществлять любым подходящим способом, таким как внутривенная инфузия, подкожное введение, внутримышечная инъекция, пероральное, интраперитонеальное и внутривенное введение. Адекватная доза будет варьировать в зависимости от конкретной композиции, способа применения и конкретной области, хозяина и состояния, подвергаемых лечению. Должны приниматься во внимание и другие факторы, такие как возраст, масса тела, пол, диета, время введения, скорость экскреции, состояние хозяина, комбинации лекарственных средств, реакции чувствительности и тяжесть заболевания. Введение можно выполнять непрерывно или периодически в пределах максимальной переносимой дозы.
Данный продукт, в отличие от имеющихся в настоящее время способов лечения, не требует от пациента строгого почасового или суточного режима его приема и основан на введении простой периодической инъекции. Иммунная система пациентов, которых лечили более двух лет назад и которые остаются в данном проекте, как представляется, стабилизировалась и возвратилась на нормальный оперативный уровень.
При лечении ВИЧ данный продукт предназначен для уменьшения воспаления, вызванного ВИЧ, позволяя, таким образом, иммунной системе человека, при отсутствии необходимости в высокотоксичных химических веществах, переориентировать себя против вируса. Данное лекарственное средство, в отличие от его конкурентов, можно использовать в более низких дозах, как профилактическое средство при подозрении на инфекцию, или на ранних стадиях заболевания.
В отличие от существующих лекарственных средств, которые зачастую пациенту необходимо принимать ежедневно в течение всей жизни, предлагаемое лечение основано на простой инъекции, которую производит врач еженедельно или ежемесячно. Обычная программа лечения продолжается три месяца, с предполагаемой программой последующего наблюдения в течение шести месяцев, двенадцати месяцев и двух лет, или же по необходимости, если вирус вновь появляется.
Композицию согласно изобретению можно применять с другими лекарственными средствами для обеспечения комбинированной терапии. Другие лекарственные средства могут составлять часть этой же композиции или обеспечиваться в виде отдельной композиции для введения в то же время.
Изобретение также относится к способу получения защитной композиции, включающей в себя реагент для применения для защиты видов животных, не относящихся к козам; способ включает в себя иммунизацию козы антигеном, не принадлежащим козе (например, вирусом или чужеродным белком), и очистку экстракта сыворотки, полученной от козы после антигенной стимуляции. Реагент затем можно применять для защиты животного, не относящегося к козам, от антигена, использованного в качестве иммуногена.
Настоящее изобретение относится также к применению в медицине композиции, включающей в себя экстракт сыворотки козы после антигенной стимуляции человеческим вирусом ВИЧ, и к применению композиции, включающей в себя общую популяцию антител козы после антигенной стимуляции человеческим вирусом ВИЧ для изготовления лекарственного средства для лечения состояний, включая ВИЧ и СПИД.
Предпочтительно композицию согласно изобретению обрабатывают путем проведения одной или всех из следующих процедур: осаждения 45% раствором сульфата аммония, замораживания при -70°С в течение 24 ч или микрофильтрации.
Антительный продукт согласно изобретению предназначен для применения для лечения заболеваний с воспалительным компонентом, которые включают в себя не только ВИЧ, но также и диабет, ревматоидный артрит, неврит, множественную миелому, рак толстого кишечника и прямой кишки и т.п. Дополнительные примеры приводятся в статьях Н. Вайт, которые можно найти на веб-сайте по адресу \у\у\у.кс1.ас.ик.Ак/5с1юо15/ПГе_5с1епсе5/1|Ге_5с|/Ьаит.111т1. особенно в его статье о молекулярной мимикрии в !ттипо1оду Тобау, 1996, ЕеЬгиагу 17, 64-70, включенной в настоящий документ в качестве ссылки.
- 6 013517
В одном аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения пациентов, не больных ВИЧ. В частности, данный способ лечения может использоваться для лечения диабета или злокачественной опухоли у пациентов, которые не имеют ВИЧ.
Выздоровление, наблюдающееся у многих пациентов, страдающих РС, вместе с улучшением настроения, как сообщалось, в течение часа после начала лечения, также навело авторов на мысль о поиске активности в отношении рецепторов в ЦНС, которые могут участвовать в стимуляции и возможной регенерации нервов. Авторы провели скрининг различных сывороток на активность против ряда антигенов и обнаружили активность против дофаминового рецептора, серотонинового рецептора, рецептора фактора роста нервов р75 и хемокина СХСЬ10 (1Р10).
Соответственно, изобретение относится к антителу против одного или более из дофаминового рецептора, серотонинового рецептора, рецептора фактора роста нервов р75 и хемокина СХСЬ10 (1Р10). Одна или более из данных активностей антител может присутствовать отдельно или в комбинации с анти-НЬА- и/или анти-ЕАЗ-активностью.
С имеющимся теперь знанием о важности активности против дофаминового рецептора, серотонинового рецептора, рецептора фактора роста нервов р75 и хемокина СХСЬ10 антитела из сыворотки козы становится возможным оценить возможную пригодность ряда указанных сывороток козы. Простым анализом можно оценить наличие указанной активности и идентифицировать сыворотку-кандидат, подходящую для введения пациентам. В частности, комбинация анти-РАЗ- и/или анти-НЬА-антител может быть важной, вместе с антителом против одного или более из дофаминового рецептора, серотонинового рецептора, рецептора фактора роста нервов р75 и хемокина СХСЬ10, и, таким образом, анализы могут быть направлены на различные виды активности антител, чтобы убедиться в их наличии в продукте.
Настоящее изобретение относится также к композициям, содержащим антитело против одного или более из дофаминового рецептора, серотонинового рецептора, рецептора фактора роста нервов р75 и хемокина СХСЬ10, обычно также с анти-РАЗ-антителом и/или анти-НЬА-антителом, и к способам лечения с использованием указанных композиций.
В одном варианте настоящее изобретение относится к антителу, получаемому от лошади, овцы и других подходящих животных. Антитело можно получать сходным способом, описанным для получения антитела от козы, и оценивать на предмет активности против одного или более из НЬА, РАЗ, дофаминового рецептора, серотонинового рецептора, рецептора фактора роста нервов р75 и хемокина СХСЬ10. Еще в одном варианте применение вируса ВИЧ в качестве иммуногена для получения антитела не является необходимым, и для получения эффективного препарата антител в качестве иммуногена используют человеческие белые кровяные клетки. Кроме того, авторы рассматривают возможность замены антитела на иммуноген, т. е. когда терапевтическая композиция содержит материал ВИЧ или белые кровяные клетки.
В более общем смысле представляется, что эффективные антитела можно получить, используя в качестве иммуногена клетки (или белковые смеси), полученные от человека. Антитела из указанных человеческих клеток затем вырабатываются в организме-хозяине, а окончательный антительный продукт используется вновь для человека. Белковые смеси могут быть чрезвычайно гомологичными между оригинальным донором и реципиентом. Такая гомологичность допускает концепцию о том, что белки или клетки, например, которые происходят из нервной системы обезьяны, способны действовать в организме человека. Интерес представляют смеси высококонсервативных белков от близкородственного животного.
Ожидается также, что будет выявлена связь между типом НЬА лица, от которого получена оригинальная клетка, и типом НЬА реципиента. Это взаимоотношение может объяснить некоторую вариабельность, которая наблюдалась, и может приниматься во внимание при отборе композиции, подходящей для пациента.
Кроме того, авторы рассматривают вопрос об использовании активированных или раковых клеточных линий из различных областей организма, включая клеточные линии из нейробластом, раковых опухолей поджелудочной железы, предстательной железы и чешуйчатоклеточных раковых опухолей. Можно прогнозировать, что неуловимые различия вырабатываемых антител к указанным различным типам клеток дадут очень отличающийся профиль и могут способствовать нацеливанию на определенные системы органов в очень широком аспекте.
Существуют некоторые данные о том, что вакцина против бешенства, которую вводят козам, может быть причиной наблюдающегося терапевтического эффекта. Авторы подвергли скринингу сыворотки коз, полученные в Уэльсе, включая пул из 3 различных сывороток (нормальных сывороток), и от козленка-донора, которому не вводили антирабическую или другие профилактические вакцины. У этих животных не было активного антитела.
Еще в одном варианте авторы рассматривают вопрос о том, что компоненты клеточной оболочки, распространяющиеся во время размножения клеток ίη νίίτο, могут обеспечивать антигены, против которых у козы или другого вида могут быть направлены антительные ответы. Указанный факт может наблюдаться в отсутствие вирусной инфекции.
Чертежи
Фиг. 1-9 относятся к определению наличия антител анти-НЬА класса II;
- 7 013517 фиг. 10-16 относятся к исследованию МЬК;
фиг. 17-19 относятся к определению наличия анти-РА8-антител;
фиг. 20-29 относятся к определению наличия других дополнительных антител; и фиг. 30 представляет собой профили сывороток коз, иммунизированных различными иммуногенами.
Примеры изобретения
Следующие детали характеризуют предлагаемую авторами изобретения процедуру для изготовления антительного продукта.
Пример получения сыворотки козы
Козе путем внутримышечной инъекции вводили смесь лизированных вирусов ВИЧ, изготовленную с добавлением адъюванта Фрейнда. Вирус предварительно убивали нагреванием при 60°С в течение 30 мин. Образцы крови отбирали после подходящего интервала времени, такого как две недели, для исходной оценки. При оптимизированной процедуре козе производили инъекции каждую неделю в течение четырех недель, затем в шесть недель у животного брали кровь для получения реагента.
В стерильных условиях у козы брали около 400 см3 крови. Область введения иглы брили и обрабатывали бетадином. Для взятия у животного приблизительно 400 см3 крови использовали иглу калибра 18. Следует отметить, что животное может перенести взятие крови в объеме около 400 см3 без какого бы то ни было вреда. Животное не нужно умерщвлять. У животного затем можно повторно брать кровь приблизительно через 10-14 дней после того, как оно восстановит объем крови.
Получали подтверждение наличия потенциально пригодных антител, с точки зрения желательной антительной активности. После подтверждения наличия указанных реагентов у козы затем брали кровь между 4-6 неделями.
Основной кровяной продукт с целью получения реагента затем центрифугировали для отделения сыворотки. 300 мл сыворотки затем фильтровали для удаления больших сгустков и твердых частиц. Затем сыворотку обрабатывали перенасыщенным раствором сульфата аммония (45% раствором при комнатной температуре) для осаждения антител и другого материала. Полученный раствор центрифугировали при 5000 об./мин в течение 5 мин, после чего удаляли надосадочную жидкость. Осажденный иммуноглобулин ресуспендировали в объеме физиологического раствора с фосфатным буфером (буфер РВ8, см. 8ашЬгоок с1 а1., Мо1еси1аг ο1οηίη§. А ЬаЬога1огу Мапиа1, 1989), достаточного для повторного растворения осадка.
Раствор затем диализировали через мембрану с отсекающей величиной молекулярной массы 10000 Да. Диализ проводили в буфере РВ8, который меняли каждые 4 ч в течение 24 ч. Диализ проводили при 4°С.
После 24-часового диализа содержимое диализного мешка переносили в стерильный химический стакан. Производили доводку раствора таким образом, чтобы величина массы на единицу объема составляла 10 мг на 1 мл. Разбавление осуществляли с использованием РВ8. Полученный раствор затем фильтровали через фильтр с размером пор 0,2 мкм в стерильный контейнер. После фильтрования раствор разделяли на аликвоты однократных доз по 1 мл и хранили при -22°С до использования.
Реагент затем был готов для применения.
Превращение плазмы в сыворотку.
Материалы.
| Реагент | Состав | Сорт | Количество, требующееся на литр воды |
| Хлорид натрия | ЫаС1 | игр/ЕР/вр | 8,76 г |
| Дигидроортофосфат натрия | ЫаНгРО4 | изр/ЕР/вр | 0,2 г |
| Гидроортофосфат натрия | НагНРО4 | изр/ЕР/вр | 1,55 г |
| Декстрансульфат | Натриевая соль, мол. масса 500 000 | 100 г |
- 8 013517
| Вода для промывания | Ν/Α | Вахбег | 1 литр |
| 1x150 мл стерилизованного □игап | Ν/Α | Ν/Α | Ν/Α |
| 2х2-литровых стерилизованных Оигап | Ν/Α | Ν/Α | Ν/Α |
| Пластина магнитной мешалки и стерилизованные магнитные бусы | Ν/Α | Ν/Α | Ν/Α |
| 1хфильтр ЗагРо1аЬ или МгсПзаг-Ь | Ν/Α | 0,2 мкм | Ν/Α |
| 6χ1 л мешков ЗбесПт | |||
| 1x100 мл стерильный мешок | Ν/Α | Ν/Α | Ν/Α |
Приготовление раствора декстрансульфата 100 мг/мл.
Растворяют требующееся количество хлорида натрия, дигидроортофосфата натрия и гидроортофосфата натрия в 1 л воды для получения 1 л физиологического раствора с фосфатным буфером (РВ8).
После полного растворения медленно высыпают 10 г декстрансульфата в 100 мл РВЗ, перемешиваемого на магнитной мешалке. Перемешивают по меньшей мере в течение 10 мин для полного растворения. Фильтруют через фильтр 0,2 мкм в стерильный контейнер (например, 100 мл мешок) и хранят при комнатной температуре, если не требуется для немедленного использования. Это - маточный раствор декстрансульфата.
Превращение плазмы в сыворотку.
Взвешивают требующийся объем плазмы, предназначенной для обработки, с использованием переводного коэффициента 1,0275, т.е. 1000 мл весят 1027,5 г.
Добавляют 10 мл маточного раствора декстрансульфата в каждые 1000 мл плазмы (конечная концентрация 1 мг/мл).
Перемешивают на магнитной мешалке при комнатной температуре в течение 30 мин. Переносят в 1-литровые мешки 31еб1ш.
Центрифугируют при 4000-4200 об./мин (относительная сила центрифугирования=4910 д) по меньшей мере в течение 30 мин при 22°С.
Осторожно отсасывают надосадочную жидкость в 1 л мешок 31еб1ш и сливают осадок.
Наполняют требующееся количество 1 л мешков 31еб1ш.
Фильтруют надосадочную жидкость через фильтр 0,2 мкм в 1 л мешки 31еб1ш. Каждый мешок содержит приблизительно 500 мл профильтрованной надосадочной жидкости.
Записывают объем сыворотки в каждом мешке. Нумеруют и идентифицируют каждый мешок.
Если сыворотка не предназначается для немедленной дальнейшей обработки, ее хранят до 7 дней в холодильнике при температуре 4-8°С или при температуре -20°С для более продолжительного хранения.
Изготовление 36% (мас./об.) раствора сульфата натрия.
Материалы.
| Реагент | Состав | Сорт | Количество, требующееся на литр воды |
| Безводный сульфат натрия | бзр/ер/вр | 360 г | |
| Вода для промывания | Ν/Α | ВахЕег | 1,5 литра |
| 1х2-литровый стерилизованный Бигап | Ν/Α | Ν/Α | Ν/Α |
| Пластина магнитной мешалки и стерилизованные магнитные бусы | Ν/Α | Ν/Α | Ν/Α |
| 1хфильтр ЗагЕоТаЬ или МШгзагЕ | Ν/Α | 0,2 мкм | Ν/Α |
| 2x1 л мешка ЗЕесПт | Ν/Α | Ν/Α | Ν/Α |
- 9 013517
Взвешивают 1,5 л воды (допуская, что 1 мл = 1 г) в 2 л стерилизованный Эигап.
Подогревают воду до 30-35°С путем помещения Эигап в предварительно нагретый термостат по меньшей мере на 1 ч.
Вводят стерильные магнитные бусы и помещают на магнитную мешалку.
Медленно добавляют 360 г сульфата натрия при перемешивании.
Продолжают перемешивание до полного растворения соли и прозрачности раствора.
Если раствор не был достаточно теплым или ему дали остыть, соль начинает кристаллизоваться из раствора. Соль можно ресолюбилизировать нагреванием раствора до 50°С.
Фильтруют 1 л 36% (мас./об.) раствора сульфата натрия через фильтр 0,2 мкм в 1-литровый мешок 81ей1ш. Помещают на мешок соответствующую этикетку.
Фильтруют оставшиеся 500 мл в отдельный мешок 81ей1ш. Добавляют дополнительно 500 мл воды для инъекций через фильтр и надписывают данный мешок как 18% (мас./об.) раствор сульфата натрия.
Осаждение иммуноглобулинов из сыворотки с помощью сульфата натрия.
На заметку. Плазма должна быть дефибринирована способом с использованием декстрансульфата до обработки сульфатом натрия.
Материалы.
| Реагент | Состав | Сорт | Количество |
| Профильтрованная сыворотка | 1 литр | ||
| 36% раствор сульфата натрия | Ν/Α | 1,5 литра | |
| 18% раствор сульфата натрия | Ν/Α | 1 литр | |
| Физиологический раствор с фосфатным буфером | Ν/Α | 2 литра | |
| Вода для промывания | Ν/Α | ВахРег | Ν/Α |
| Глубинный фильтр | Ν/Α | Ν/Α | Ν/Α |
| 0,2 мкм фильтр | Ν/Α | 0,2 мкм | Ν/Α |
| Мешок ЗРесНт для диафиль трации | Ν/Α | Ν/Α | Ν/Α |
Подогревают профильтрованную сыворотку в мешках 81ей1ш с использованием режима термостата 30-35°С. Берут два образца по 5 мл.
Добавляют равный объем теплого 36% раствора сульфата натрия к сыворотке в мешках, например, 500 мл солевого раствора:500 мл сыворотки.
Осторожно перемешивают смесь соль:сыворотка (похожий на сливки белый раствор), покачивая мешком вручную или помещая на пластину качалки. Перемешивают в течение 30 мин.
Взвешивают и уравновешивают мешки и центрифугируют при 4000-4200 об./мин по меньшей мере в течение 30 мин при 25-30°С.
Осторожно отсасывают надосадочную жидкость в качестве отходов. Стараются не касаться осадка. Берут 1x5 мл образец надосадочной жидкости.
В каждый мешок с осадком добавляют достаточный объем 18% (мас./об.) раствора сульфата натрия, чтобы довести массу каждого мешка приблизительно до 1000 г.
Перемешивают вручную или с помощью качалки по меньшей мере в течение 10 мин для отмывания захваченного альбумина из иммуноглобулинового осадка.
Переносят мешки в центрифугу и повторяют центрифугирование, как описано выше.
Осторожно отсасывают надосадочную жидкость в качестве отходов. Стараются не всколыхнуть осадок.
В каждый мешок с осадком добавляют достаточный объем физиологического раствора с фосфатным буфером, чтобы довести массу каждого мешка приблизительно до 1000 г.
Перемешивают вручную или с помощью качалки по меньшей мере в течение 10 мин и переносят мешки в холодильник для хранения в течение ночи.
Извлекают мешки из места их хранения и убеждаются, что осадок ресолюбилизирован.
Фильтруют через 0,2 мкм фильтр в мешок для диафильтрации подходящего размера.
Берут 2 образца по 5 мл.
Составление всего объема раствора иммуноглобулинов.
Устанавливают на устройство для ультрафильтрации (ИБ) по меньшей мере одну мембрану 0,1 м2 30000 М\СО.
Прочищают систему путем рециркуляции 0,5-1 М раствора гидроксида натрия по меньшей мере в течение 30 мин.
- 10 013517
Сливают из системы раствор гидроксида натрия и промывают водой для промывки вплоть до достижения нейтральных значений рН смыва.
Подсоединяют мешок для диафильтрации, содержащий раствор иммуноглобулинов, к ИР.
Подсоединяют мешок, содержащий РВ8 (10хобъем раствора иммуноглобулинов), через перистальтический насос к мешку для диафильтрации.
Подсоединяют задерживающую линию к мешку для диафильтрации.
Подсоединяют диафильтрационную линию к мешку для отходов.
Медленно пропускают продукт через утрафильтрационное устройство, при подборе величин давления на входе и выходе в размере 2,0 бар на входе и 0,5 бар на выходе, с использованием скорости насоса и конфигурации клапанов.
Концентрируют раствор иммуноглобулинов приблизительно до 50 г/л. Расчет производят с учетом исходной концентрации и измеряя количество удаленной жидкости.
Например:
Исходный раствор составляет 2 л с концентрацией 25 г/л=50 г. Объем раствора, переместившегося в диафильтрат, составляет 1 л. Таким образом, концентрация составляет 50/1=50 г/л.
Измеряют скорость диафильтрационного потока и подбирают скорость насоса таким образом, чтобы скорость потока из мешка, содержащего РВ8, была равна указанной скорости.
Продолжают диафильтрацию до тех пор, пока не будет заменено 10 объемов буфера, т.е. 1 л раствора 1дС требует 10 л РВ8.
Сливают из системы концентрированный диафильтрационный раствор 1дС в мешок для диафильтрации. Отсоединяют мешок и подсоединяют мешок с РВ8 в количестве по меньшей мере 1 л напрямую к системе.
Дают возможность промывающему раствору РВ8 рециркулировать и собирают промывные воды в мешок, содержащий раствор ЦС.
Фильтруют через 0,2 мкм фильтр весь объем раствора 1дС в предварительно взвешенный мешок 8!ей1т.
По окончании берут 1 мл образец профильтрованного раствора и оценивают в нем концентрацию белка.
Взвешивают мешок и рассчитывают объем раствора 1дС.
Используя концентрацию белка и объем 1дС, рассчитывают объем РВ8, который требуется для разбавления раствора до конечной концентрации 10 мг/мл, например:
объем 1дС= 1300 мл; концентрация белка = 30 мг/мл;
общее количество 1дС=39000 мг;
требуется = конечная концентрация 10 мг/мл.
Таким образом, требующийся конечный объем=39000/10=3900 мл. Текущий объем составляет 1300 мл. Таким образом, требующийся для добавления объем РВ8 составляет 3900-1300=2600 мл.
Фильтруют РВ8 в мешок, содержащий основную массу раствора 1дС, для достижения требующегося конечного объема с концентрацией 10 мг/мл.
Реагент готов для использования, и его можно хранить в холодильнике до 1 недели или в замороженном виде предпочтительно при -20°С, если требуется более длительное хранение.
В описанных процедурах можно производить изменения, например изменяя концентрацию раствора сульфата натрия или переключаясь на его реагенты. Подобно этому, отсекающая величина для диализа не обязательно должна составлять 10000 Да.
Вид активности.
Введение.
Частные наблюдения показывают, что состояние пациентов, страдающих СПИДом, которым вводят сыворотку коз, иммунизированных ВИЧ, как представляется, в некоторых случаях резко улучшается, и авторы заняты выяснением потенциального механизма. Несмотря на то, что козам инъецируют ВИЧ и иммунный ответ, как представляется, является высокоспецифичным, это еще не объясняет наблюдающееся благоприятное действие для пациентов, страдающих рассеянным склерозом и, в некоторых случаях, злокачественной опухолью.
Научное обоснование исследования
Несмотря на то, что несколько лет назад Оа1д1е1511 и его коллеги установили, что рецептор для СИ4 является главным входом для ВИЧ, классическая интерпретация, что ВИЧ убивает клетки СИ4, количество которых измеримым образом уменьшается по мере прогрессирования инфекции до СПИДа, не подходила для объяснения патогенеза. Главные наблюдения, которые не слишком хорошо соответствуют данной интерпретации, включают в себя следующие:
(1) продолжительный период времени от заражения до начала СПИДа (приблизительно десять лет);
(2) отсутствие болезни почти у всех шимпанзе и приблизительно у 5% ВИЧ-инфицированных людей. У шимпанзе имеются те же рецепторы и сорецепторы, что и у людей, и вирус легко выявляется у инфицированных шимпанзе, у которых содержание СИ4 не снизилось.
- 11 013517
Основываясь на этих наблюдениях, исследователи искали определяющее различие между теми индивидами, у которых развилось заболевание после заражения, и теми, у которых оно не развилось. Главным прогностическим признаком заболевания является степень иммунной активации после первоначального заражения и тот уровень, на котором она персистирует. Иными словами, чем выше иммунная активация, тем короче период времени до болезни. Умеренная степень активации может приводить к более длительному периоду времени до развития СПИДа, а отсутствие иммунной активации даже при имеющейся репликации вируса играет важную роль у шимпанзе и редко встречающихся индивидов.
Важно подчеркнуть, что термин «иммунная активация» в данном контексте означает тотальную иммунную активацию, т. е. когда все аспекты иммунной системы активируются, что включает все субпопуляции Т-клеток, а также В-клеток. Существуют только три признанных причины тотальной иммунной активации.
Первой причиной является гипервариабельность антигена, которую отчетливо демонстрирует ВИЧ, однако, гипервариабельность выявляют у инфицированных людей и шимпанзе, у которых инфекция не прогрессирует.
Второй возможностью является суперантиген, который обходит антиген-специфичный механизм и вызывает активацию всей иммунной системы. Несмотря на первоначальный энтузиазм, десятилетие назад, не было найдено убедительного суперантигена, связанного с ВИЧ, который объяснял бы данные открытия. АсЧЬу и Ωαϊβίοίδΐι показали, что вариабельность спектра Т-клеток, которая предполагает возможность наличия суперантигена, была целиком результатом уменьшения популяции СЭ4, а различия можно было объяснить случайной деструкцией СЭ4.
Единственным другим объяснением является то, что организм распознал чужеродную клетку или орган и развил на них хронический ответ. Клинически это явление часто наблюдается после трансплантации и, в частности, после трансплантации костного мозга, и известно как хроническая болезнь трансплантат против хозяина (СУН). В данном сценарии выживания даже немногих чужеродных клеток достаточно для активации всей иммунной системы, что приводит к развитию агрессивных аутоиммунных ответов, подобных тем, которые наблюдаются у ВИЧ-инфицированных пациентов. Клинические признаки данного заболевания настолько сходны со СПИДом, что еще до открытия этого вируса ведущий иммунолог США Сепе 8йеагег из ΝΙΗ (США) высказал предположение, что данное заболевание может быть индуцировано чужеродными клетками, передающимися путем переливания крови или при половом акте. Открытие вируса через несколько следующих месяцев и передачи фактором VIII (продуктом, не содержащим клеток), привело к тому, что принципиальность данного наблюдения была проигнорирована.
Отсутствие другого объяснения тотальной активации побудило Оа1Де1511 и НаЬекйает искать свидетельства того, что вирус может быть способен имитировать НЬА класса I или класса II (которые являются молекулами, определяющими собственные и присутствующие антигены). Несмотря на то, что уже опубликованы некоторые последовательности СР120 с незначительной гомологией с НЬА, авторам удалось идентифицировать большую область оболочки ВИЧ (СР120), которая обладает выраженной структурной гомологией как с НЬА класса I, так и с НЬА класса II. Е^аЬеШ НоипкеП (МКС) удалось смоделировать СР120 на основе тех молекул НЬА, структура которых известна в деталях. На основе данных молекул и последовательностей НаЬекйает и НоипкеП предсказали, что вирус может распознаваться как чужеродный лицами с НЬА-В8, а также может распознаваться как свой лицами с НЬА-В27. В настоящее время имеется публикация о том, что только различия в НЬА в исследовании пан-ВИЧ-маркера НЬА, проведенном в Великобритании МКС, играют роль в том, что у лиц с НЬА-В8 заболевание развивается гораздо быстрее, чем в остальной популяции, и что лица, у которых заболевание длительное время не развивается или развивается крайне медленно, имеют НЬА-В27. Последующая работа показала следующее.
(1) Т-клетки-киллеры, количество которых увеличилось в ответ на антигенную стимуляцию чужеродными клетками (т.е. с другим типом НЬА), также будут убивать собственные ВИЧ-инфицированные клетки.
(2) Что оболочка вируса ВИЧ, известная как СР120 (которая, как полагают авторы, обладает структурной гомологией с молекулами НЬА, которые определяют свое), может связывать пептиды очень сходным с НЬА образом. Более того, Т-клетки, направленные на пептиды и НЬА, которые имитируют СР120, будут также отвечать на СР120 с пептидом, но не на СР120 без пептида, что наводит на мысль, что способность связывать пептиды может быть очень важна для подтверждения и, следовательно, способности вызывать хроническую иммунную активацию у чувствительных к этому субъектов.
(3) Позже авторы показали, что область, где пептиды связываются с НЬА, присутствует на СР120, и что если данную часть молекулы удалить, как это было любезно выполнено профессором 8οάΐΌ51<ί в Эапа ЕаЬег в Бостоне, пептиды более не будут связываться.
Влияние приведенных выше наблюдений наводит на мысль, что иммунную активацию системы теоретически можно отключить, и что заболевание, таким образом, может не прогрессировать. С этой точки зрения существует два главных наблюдения, одно из которых представляло собой клиническое испытание как результат этих научных данных, в котором пациентов, которые больше не могли принимать ΛΖΤ из-за угнетения костного мозга, переводили на стероиды, классический сильнодействующий
- 12 013517 противовоспалительный агент, который нельзя давать в течение длительных периодов времени без значительных побочных эффектов. Авторы наблюдали выраженное улучшение при использовании стероидов у очень больных пациентов с классическими признаками, сильно напоминающими заболевание ОИН, и им удалось показать, что доза, которая требуется для получения этого эффекта, является крайне высокой и не может представлять собой практическое предложение на длительный срок. Позже группа исследователей из университета Пике (США) показала, что у пациентов, которым вводят стероиды в связи с ВИЧ, вирусная нагрузка падает, поэтому в настоящее время это осуществляют все больше и больше, чтобы бороться с тем, что считают аутоиммунитетом (классическим признаком хронической болезни «трансплантат против хозяина»). Кратко, существует научное обоснование того, что противовоспалительный агент, который преимущественно действует на пути, индуцированные НЬА класса I или НЬА класса II, может оказывать благоприятное действие при ВИЧ-инфекции.
Исследования и результаты
Для того чтобы выяснить, обладает ли сыворотка козы какими-либо противовоспалительными свойствами, авторы добавляли ее в реакционные смеси, образованные в результате смешивания клеток двух различных индивидов с различным генетическим фоном. К удивлению авторов, она оказалась чрезвычайно эффективной для ингибирования данной реакции. Используя большое количество молекулярных антител, авторы установили, что только антитело, которое близко подходило к реактивности козы, представляло собой анти-НЬА класса II. Антитела против класса I только частично редуцировали данную реакцию. Большой интерес представляет тот факт, что антитела к петле У3 ВИЧ, которую большинство научного сообщества считает главной мишенью вакцины, действительно ухудшают эту тотальную активацию. Это открытие должно соответствовать теории иммунной активации, поскольку иммунный ответ на вирус на самом деле способствует росту и активности вируса в отношении уничтожения клеток, и это может объяснить, почему вакцины, направленные против данной области, являются столь неэффективными.
Помня, что козам часто приписывают магические свойства, и что сыворотки от других животных могут обладать неожиданной активностью в конкретных анализах, авторы получили сыворотки от невакцинированных коз, которые совсем не обладали активностью. Затем были получены сыворотки от различных коз с различными схемами вакцинации. Неожиданно удалось показать, что данная сыворотка распознает только оболочку ВИЧ и НЬА класса II. В самом деле, более маленькие части вируса, которые, как известно, обладают значительной гомологией с НЬА, сыворотками не распознавались.
Таким образом, совершенно неожиданно авторы обнаружили большое различие между инъекцией смеси и одной отдельной инъекцией, в том, что спектр консервативных областей НЬА в СР120 активно распознается сыворотками коз, которым инъецировали смесь.
Интерпретацию приведенных данных суммирует тот факт, что козы, которым инъецировали ВИЧ, продуцировали мощный ответ, подобный ответу против МНС класса II, который можно расширить использованием различных изолятов. Возможной интерпретацией того, каким образом это происходит, является следующее.
(1) Оболочка ВИЧ является настолько сходной с НЬА класса II, что она и распознается в качестве такового иммунной системой коз, которая имеет полностью отличный спектр НЬА.
(2) Второй возможностью является то, что в иммуногене, т.е. препарате вируса, НЬА, который находится на поверхности клеток, через которые размножается вирус, «ловится», и что иммунный ответ наблюдается не на вирус, а на связанный с ним НЬА.
(3) В третьем объяснении участвует комбинация двух объяснений, приведенных выше. Возможно, что размножающийся вирус сливается с НЬА при изготовлении препарата, и что данная комбинация весьма эффективно распознается сыворотками коз. Недавняя публикация показала, что до тех пор, пока вирус размножается посредством клетки с НЬА и инкорпорирует НЬА в мембрану, он остается неинфекционным. Это означает, что он должен иметь некоторое количество НЬА, полученное от клетки-хозяина, для активации механизма проникновения в клетку.
В настоящем документе авторы показали, что козы, которым инъецировали препараты ВИЧ, продуцируют мощный антительный ответ на молекулу НЬА класса II. Известно, что при ряде заболеваний возникают деструктивные воспалительные повреждения только потому, что участвующие клетки экспрессируют НЬА класса II в избыточном количестве. Несмотря на то, что многие типы аутоиммунных заболеваний обладают этим свойством, одним из наиболее известных примеров является рассеянный склероз. Таким образом, может иметь место то, что иммунный ответ козы устраняет толерантность к данным молекулам, и что данный процесс может вызывать сильный противовоспалительный процесс ίη νίνο, что может быть связано с клинически благоприятным действием. Если это так, то будут очевидны преимущества перед длительным использованием стероидов в высоких дозах, если постоянное введение сыворотки козы не имеет значительных побочных эффектов.
Анти-ВИЧ-ответ, который представляет собой сильный анти-НЬА класса II ответ, вполне может обеспечить успешность действия жизненно необходимой вакцины против СПИДа, и авторы намерены расчленить данный ответ, чтобы получить вакцину против ВИЧ.
Сыворотки козы, иммунизированной ВИЧ-1, и противовоспалительные свойства.
- 13 013517
Введение.
Получали козьи сыворотки от животных, иммунизированных вирусным лизатом ВИЧ-3В или вирусной смесью ΝΙΗ из 6 различных изолятов ВИЧ-1. Некоторые из этих сывороток ранее использовали как часть экспериментальных схем лечения с хорошим эффектом, однако, механизм, посредством которого они действуют, не известен. Для определения механизма действия авторы провели скрининг сывороток на планшетах для ЕЫ8А против др120 ВИЧ-1, НЬА-ПК.1 и выбранных пептидов из различных областей поверхностного гликопротеина вируса, некоторые из которых имели гомологичные последовательности с НЬА.
Материалы и методы.
Сыворотки и антитела.
Получали образцы сывороток коз, иммунизированных оригинальным ВИЧ-3В, которые использовали для лечения пациентов, вместе с образцами от ряда коз, иммунизированных вирусным лизатом ВИЧ-3В (животные №№ 0125, 0126, 0127, 0128, 0129, иммунизированные 14 сентября 1999 г., 21 сентября 1999 г. и, вновь, 29 сентября и 7 ноября 2000 г.), а также информацию, касающуюся дат взятия крови и иммунизации. Для проведения ЕЫ8А авторы просто предпочли выполнить скрининг образцов сывороток крови, взятой на более поздних стадиях (30 ноября 2000 г. и 1 декабря 2000 г.). Животное № 378 иммунизировали вирусной смесью ΝΙΗ, состоящей из следующих изолятов ВИЧ 92НТ593, 92И8657, 92И8660, 92И8714, 92И8723, 91И8056. Иммунизации осуществляли 7 и 28 ноября. Сыворотки крови, взятой 25 января 2001 г., использовали для скрининга посредством ЕЬ18А. Получали также контрольные сыворотки козы. Помимо сывороток авторы включили античеловеческий НЬА-ПК и античеловеческий НЬА-ОВ, ΌΡ и ЭО (Рйаттшдеп) как в ЕЫ8А, так и в исследования смешанной реакции лимфоцитов, а также мышиные анти-др 120 1дС (ЕУА3047), специфичные в отношении домена У3 ВИЧ-ί ШЬ (ΙΒΙρΒΟΡΟΒ), полученные у доктора 1. Ьатал при содействии доктора Натуеу Но1тек (программа МКС ΛΙΩ8 теадеп18 ргодгатте, №10опа1 1п81йи1е Юг Вю1одюа1 81апбай8 апб Соп1то1, Ройет'к Ваг, ИК), во время исследования МЬК.
Пептиды и белки.
Рекомбинантный др120 ВИЧ-ί ΙΙΙΒ был получен в клетках яичника китайского хомячка и поставлен в программу реагентов МКС АЮ8 доктором 1. Ката при содействии доктора Натуеу Но1тек. Рекомбинантный НЬА-ОК! был тем же белком, полученным профессором Поп С. ^МПеу. который использовал его во время экспериментов по связыванию пептидов. Пептиды ВИЧ-1, использованные в исследовании, перечислены в табл. 1. Пептиды АКР7022, АКР7 10, АКР740-23, -28, -42, -44, -45, -46 и -47 были получены у доктора Натуеу Но1тек в программе МКС АЮЗ геадепй. Контрольный пептид Р12 представляет собой последовательность С8 области др120 ВИЧ-1 и был предоставлен профессором Е.Р. Ноипкей, 8с1юо1 ой Вю1одюа1 апб С1ет1са1 8с1епсек, ВйкЬеск Со11еде 1опбоп. ИК. Пептиды хранили в виде аликвот при -20°С до использования.
Анализы ЕМЗА.
Анализы ЕЫ8А выполняли по протоколу, сходному с протоколом, описанным Вго\уп е! а1. (1. Ι ттипо1одюа1 теИобк 1997, 200:79-88). Пептиды и белки смешивали с 0,05 М рН 9,6 связывающим карбонатным/бикарбонатным буфером с содержанием 16 и 1 мкг/мл соответственно и наносили их в двух повторностях на микротитрационные планшеты с высокой связывающей способностью Iтти1оп 4 ЫВХ (Пупех Тесйпо1од1е8, ΙΝΟ. 14340 8и11уйе1б С1гс1е, СНапППу, УА 20151-1683, И8А) на ночь при 40°С. Лунки блокировали с использованием казеина 5 мг/мл в РВ8 и оставляли на ночь при 40°С. Козьи сыворотки разводили в 1/500 и 1/1000 раз в РВ8/0,25% казеине, в то время как очищенные антитела разводили в 1/1000 и 1/3000 раз, соответственно, и инкубировали в течение 1 ч при 37°С. Лунки промывали 3 раза РВ8/0,05% Т\тееп 20, с использованием машины для промывания лунок ^еИ^акй 4 (Пеп1еу).
Иммобилизованные козьи антитела обнаруживали с использованием конъюгированных с пероксидазой мышиного моноклинального клона СТ-34 (8ЮМА) антикозьих антител/овечьих Ι§Ο, разведенных 1/1000 раз в РВ8/0,25% казеине/0,01 Т\тееп 20, а анти-НЬА-антитела обнаруживали с использованием козьих антимышиных ^С в виде конъюгата с пероксидазой (8ЮМА), инкубированных в течение 1 ч при 37°С. После еще одного цикла промываний в лунках инкубировали свежеприготовленный субстрат дигидрохлорид О-фенилендиамина (ОРО; 8ЮМА) при комнатной температуре в темноте, и реакции останавливали через 15 мин добавлением 2,5 М Н28О4 50 мкл на лунку. Величины ОП измеряли при 492 нм с использованием микропланшет-ридера.
Таблица 1
Пептиды, использованные для анализов
АКР7022: ДОРЬЕС^ССЗСКЕЮТТАУР^С)
Пептид из 24 остатков из консервативной области др41 ВИЧ (593-616) распознавался большинством европейских и африканских ВИЧ-положительных сывороток.
АКР710: (VКIЕΡ^СVΛΡТКΛКККVV^КЕКК)
Пептид из 23 остатков, полученный из консервативного С-концевого домена (С8) др120 ВИЧ (486508), ведущего к сайту расщепления др120/41, содержит структурную гомологию с НЬА.
- 14 013517
АКР740/23: (КРУУ8ТрЬЬЬМ6§ЬАЕЕЕУУ)
Пептид из 20 остатков, полученный из С2-области др120 (252-271), содержит гомологичную последовательность с β-цепью НЬА ΌΚ4.
АКР740/28: (ЫТККШШрКбРбКАЕУТЮ) (302-321)
Пептид из 20 остатков, полученный из петли ν3 др120 ВИЧ-1.
АКР740/42: (С1О1НС88\1ТС11.1.1.Т1ШС1С1\8) (438-458) обладает гомологией с цепью ΌΚ-β1.
АКР740/44: (ΝΝΕδΕΙΕΚΕΟΟΟΌΜΚΌΝνΚδ) (459-478) обладает гомологией с последовательностью НЬА-А2.
АКР740/45: (С1С)1)\11Ш\т'Н8Е1.УК¥К\ЛК1) (469-488)
Последовательность, распознаваемая М38, антителом, который перекрестно реагирует с НЬА-С и областью С5.
АКР740/46: (ЕЬУКУКУУКШРЬбУАРТКА) (469-478)
Пептид из 20 остатков, полученный из С5-конца др 120, содержит первые 3 гомологичных остатка на С-конце.
АКР740/47: (ЕРЬбУАРТКАКККУУРЕЕКК) (479-498)
Пептид из 20 остатков, полученный из С5-области др120, обладает структурной гомологией с НЬА. Р12. (КАКТУЕККУЕКЯК)
Последовательность С8-домена др120 ВИЧ, полученная от Е. Ноипзе11. Не распознается ννположительными сыворотками. Контрольная последовательность.
Анализы ингибирования смешанной лимфоцитарной реакции.
Доноры крови.
Не подходящие друг другу по НЬА класса II образцы крови, с согласия доноров, были получены через службу крови 8ои111 ТНатез В1ооб йапзГизюп зеМсе, Тоойпд, Лондон.
Получение РВМС.
Только что взятую венозную кровь разбавляли сбалансированным солевым раствором Хенкса (НВ88; 8ЮМА), осторожно наслаивали на Н|з1орас.|ие (8ЮМА) и центрифугировали при 800 д в течение 25 мин при 20°С. РВМС собирали на границе раздела плотности пастеровской пипеткой, промывали 3 раза в НВ88 и подсчитывали на счетчике Весктап СоиНег.
Анализы ингибирования смешанных лимфоцитов.
Для данной МЬК, РВМС от двух не подходящих друг другу по НЬА класса II индивидов ресуспендировали в среде ΚРΜI 1640, содержавшей 10% инактивированной нагреванием человеческой АВ сыворотки (8ЮМА), 4 нМ Ь-глутамина, пенициллин (100 Ед/мл) и стрептомицин (100 мкг/мл) (8ЮМА), и обозначали для клеток-стимуляторов или клеток-респондеров. Клетки засевали в трех повторностях со стимуляторами в количестве 1 х клеток на лунку и респондерами в количестве 1x10— клеток на лунку для получения соотношения респондер-стимулятор 10:1. Для определения любого ингибирующего влияния на клеточную пролиферацию под действием козьих сывороток и различных антител, 3 мкл неразведенной козьей сыворотки или 1 мкл очищенного антитела добавляли в лунки, содержащие смешанные клеточные культуры, и инкубировали при 37°С с 5% СО2 в течение 6 дней. В культуры добавляли 1 мкКи меченного по тритию метилтимидина (3Н-Тйб; Атегзйат) на 5 день, за 18 ч до сбора клеток. Клетки собирали с помощью клеточного харвестера Тот1ес НагтезЮг 96 МасН III на фильтровальные полоски из стекловолокна, и включение 3Н-Тйб измеряли с использованием жидкостного сцинтилляционного счетчика Vа11ас 1450 тюгоЬе1а. Результаты представлены как среднее количество импульсов в минуту (имп/мин).
Результаты.
Антитела анти-НЬА класса II, присутствующие в козьих сыворотках.
Авторы изучали степень распознавания различными козьими сыворотками пептидов др120 ВИЧ-1, взятых из различных участков др120 ВИЧ-1, множества несущих последовательностей и структурной гомологии с НЬА (табл. 1). В эти исследования были включены также растворимый др120 ВИЧ-1 и НЬАΌΚΤ. Результаты показаны на фиг. 1-9. Вд означает фоновые уровни. Уровень ОП выше 0,1 был принят за положительный результат, дающий отсутствие реактивности на любой из антигенов, распознаваемых преиммунными сыворотками.
Различные сыворотки давали различающиеся результаты, но обычно имели тенденцию реагировать с НЬА-ЭКТ. Преиммунные сыворотки не реагировали ни с одним из отобранных путем скрининга пептидов или белков, а сыворотки №№ 0125 и 0126 не проявили большой реактивности. Однако все остальные сыворотки проявили высокие уровни реактивности к НЬА-ОК.1, в частности № 0127 и № 0128, которые обладали очень высокой реактивностью. Реактивность к НЬА-ОК.1 на фиг. 9 для ясности сравнивают с античеловеческим НЬА-ОВ и античеловеческим НЬА ΌΒ, ЭР и ЭР.
Анти-НЬА-активность представляет интерес, поскольку она, наиболее вероятно, представляет собой активность против молекул НЬА из тех самых клеток, в которых культивировался вирус до иммунизации. Поскольку ВИЧ имеет тенденцию нести в своей оболочке больше молекул НЬА, чем он экспрессирует молекул др120, особенно молекул НЬА класса II, количество которых он в клетках увеличивает,
- 15 013517 объединенная активность анти-др120 и анти-НЬА класса II может представлять собой хороший защитный ответ против ВИЧ. В случае некоторых сывороток, особенно № 0127 и № 0128, сильный аллоответ был индуцирован у этих коз после иммунизации вирусом, который нес на своей поверхности высокие уровни молекул класса II.
Сыворотка № 0378 от козы, иммунизированной вирусной смесью ΝΊΗ, обладала самой лучшей суммарной перекрестной реактивностью в отношении множества пептидов ВИЧ-ί, с уровнями анти-НЬА ΌΡ.1, приблизительно такими же, что и у исходной анти-ЫЬУ-ЗВ козьей сыворотки, что предполагает, что данная сыворотка может лучше других действовать против ВИЧ. Эта сыворотка очень хорошо реагирует с рядом пептидов ВИЧ-1, гомологичных НЬА. Ни одна их сывороток не реагировала с контрольной последовательностью Р12, что указывает на то, что реактивность является специфичной в отношении пептидов ЬПУ. Сыворотки № 0127 и № 0128 представляют собой лучшие сыворотки с точки зрения связывания с др120 ВИЧ-ί, в то же время обладающие очень высокой анти-НЬА ΌΒ-активностью.
Ингибирование МЬК. козьими сыворотками.
В МЬК, представленных на фиг. 10 и 11, использовали клетки от случайных, не подходящих друг другу индивидов. Хотя это не обязательно давало наибольшую пролиферацию (в то время имелись проблемы со средами), возникла тенденция, свидетельствующая об ингибировании пролиферации в процессе МЬК. под действием козьих сывороток (в каждом случае использовали сыворотки животных, иммунизированных исходным ВМЧ-ЗВ). Впоследствии авторы начали использовать клетки, не подходящие друг другу по НЬА класса II (фиг. 12), которые давали более высокую пролиферацию. Как в случае с антиНЬА ΌΚ-антителом, козья сыворотка успешно полностью ингибирует клеточную пролиферацию, и может оказаться, что она обладает противовоспалительной активностью.
Судя по результатам ЕЫ8А. которые наблюдали авторы, весьма вероятно, что анти-НЬА ΌΚантитела являются ответственными за ингибирующие эффекты. Авторы подчеркивают скорее роль антиНЬА ΌΚ, чем антикласса II в целом, поскольку антитело с широким спектром не ингибирует пролиферацию даже приблизительно столь же эффективно, как анти-НЬА ЭК в отдельности. Почему это так, остается загадкой, однако, может быть, что НЬА ЭК является главным антигеном класса II, участвующим в воспалительной активности, и антитела против него могут приводить к возникновению в клетках сигнала к ингибированию репликации. Сыворотки козы, таким образом, могли действовать как противовоспалительный агент, подавляя клеточную пролиферацию. Это могло бы быть прогнозом положительного исхода в случае инфекции ВИЧ-1, когда индуцированная вирусом клеточная активация является необходимой для репликации вируса. Хотя при поверхностном взгляде это может показаться контрпродуктивным, введение мягкого иммунодепрессанта могло бы действовать как ингибитор репликации вируса и контролировать заболевание, поскольку ВИЧ, в отличие от родственных ретровирусов НТЬУ-1 или НТЬУ-2, не вызывает иммортализацию клетки, вызывая злокачественные опухоли, поэтому он полностью зависит от клеточной активации для пролиферации.
В настоящее время для ВИЧ не известен Т-клеточный суперантиген, который позволяет заключить, каким образом вирус, который представляется относительно плохо оснащенным для активации клеток, которые он инфицирует, может вызывать заболевание. Авторы изучают теорию о том, что в основе лежит индуцированная вирусом аллоактивация, будь она связана со связанными с вирусом молекулами НЬА или с молекулярной мимикрией, наблюдающейся между ВИЧ и НЬА. Сыворотки козы, возможно, улучшают состояние пациента, просто ограничивая описанную тотальную активацию. Сходные наблюдения описаны и в статье 8айиббш М. с1 а1. (С1ш. Ехр. [ттипо1оду 2000, 221: 324-331), показывая значение молекул НЬА класса II, в частности НЬА-ЭК, для репликации вируса. Они отметили, что антитела к молекулам НЬА класса II ингибировали экспрессию вируса в клетках, экспрессирующих класс II, и предположили участие индуцируемого трансактиватора МНС класса II (СИТА) в усилении транскрипции ВИЧ-1. Эти эффекты с успехом наблюдались в случае козьих сывороток. Сравните это с антителом против петли У3, которое вызывает повышение пролиферации и может быть, следовательно, контрпродуктивным в общем ходе событий. Высоковариабельная область петли У3 др120 не только позволяет появляться вирусным «ускользнувшим» мутантам, но также действует как западня для иммунной системы в дальнейших циклах активации. К сожалению, преоккупация данной области является крайне благоприятной для вируса и отводит иммунный ответ от более консервативных областей, активность против которых могла бы быть более полезной.
Если противовоспалительные эффекты действительно являются главным способом действия сывороток, это может оказаться полезным при ряде других состояний, при которых гиперактивность и клеточная пролиферация лежат в основе симптомов болезни, например рассеянного склероза. Для будущих экспериментов важно повторить анализы ЕЫ8А для всех сывороток, чтобы подтвердить степень антиНЬА- и др120-активности. В данном случае авторы очень заинтересованы в сыворотке № 0378 от животного, иммунизированного вирусной смесью ИЬН, поскольку она эффективно реагирует с многими пептидами ВИЧ, имеющими гомологию с антигенами НЬА, а также НЬА-ЭК.1.
Дальнейшие эксперименты.
Следующие данные получены из экспериментов, сходных с теми, которые были предприняты ранее, где были идентифицированы анти-НЬА-антитела в козьих сыворотках, которые использовали для
- 16 013517 лечения добровольцев, страдающих рассеянным склерозом и СПИДом, когда обычная терапия более не была целесообразна. Эта работа включает в себя изучение предполагаемого противовоспалительного механизма действия козьих сывороток в выздоровлении указанных пациентов после лечения. Это было предложено ранее, когда были выявлены анти-НЬА-антитела. Однако в настоящее время авторы также добавляют и роль анти-ЕА8-антител, присутствующих в козьих сыворотках, вызывающих индукцию в течение часов апоптоза клеток, экспрессирующих рецептор ЕА8.
ЕА8/АРО-1 (ΟΌ95) заметно присутствует в большом количестве на активных лимфоцитах, через которые передаются сигналы, которые могут побудить клетку к самоуничтожению после перекрестного связывания с лигандом ЕА8 или анти-ЕА§-антителом. Роль этих молекул крайне важна не только в цитотоксическом иммунном ответе для уничтожения инфицированных клеток, но также в снижении иммунного ответа после исчезновения антигена, для предотвращения постоянной пролиферации клеток, которая может принести вред хозяину. Таким образом, данный путь представляется жизненно важным для поддержания сбалансированного иммунного ответа.
В случае ВИЧ-инфекции иммунная система, как представляется, является патологически активной, давая большие возможности для репликации вируса, так как он требует для данного процесса наличия активированных клеток. У пациентов, страдающих рассеянным склерозом, высокоактивированные клетки проходят через гематоэнцефалический барьер и являются ответственными за повреждение миелиновой оболочки, что приводит к образованию бляшек и утрате невральной функции.
Противовоспалительный механизм, опосредованный активностью анти-НЬА-антител (по крайне мере, анти-НЬА ЭР), присутствующих в козьих сыворотках, может являться тем механизмом, который стоит за выздоровлением пациента. В настоящее время авторы установили, что анти-ЕА8-антитела в козьих сыворотках присутствуют в различной степени, и предлагают рассматривать суммарное действие анти-НЬА- и анти-РА8-антител в предложенном противовоспалительном механизме действия у пациентов с рассеянным склерозом и СПИДом. Предполагается, что указанные антитела нацелены на наиболее высокоактивные клетки, что приводит к их гибели, в то время как анти-НЬА-антитела тормозят любую иммунную активность. Затем может последовать резкое снижение выработки цитокинов и хемокинов, приводящее к прекращению иммунной атаки на миелин в случае рассеянного склероза или к снижению вирусной нагрузки в случае ВИЧ-инфицированных пациентов, приводя к отсутствию активированных клеток и гибели клеток, секретирующих вирус, или тех, которые вскоре начнут секретировать вирус.
Экспериментальная работа.
Авторы начали поиск анти-РА8-антител, в результате которого были сделаны наблюдения, что козья сыворотка от респондеров повреждала клетки, когда ее добавляли в смешанные реакции лимфоцитов (МЬК). МЬК являются результатом смешения лимфоцитов от 2 разных людей с различными типами НЬА, реагирующих неспецифическим образом, что приводит к пролиферации и повышению турновера лимфоцитов. Авторы полагают, что это является хорошей системой для тестирования противовоспалительных антител, поскольку все аутоиммунные реакции направлены на неадекватную экспрессию своих пептидов на молекулах НЬА класса 2.
Фиг. 13-16 представляют собой фотографии некоторых недавних МЬК, с сыворотками и без них.
Фиг. 13 представляет собой фотографию смешанной реакции лимфоцитов через 72 ч.
Фиг. 14 представляет собой МЬК, смешанную с преиммунной сывороткой, через 72 ч.
Во всех случаях не наблюдалось значимых изменений по сравнению с самой МЬК. Действительно, преиммунная сыворотка ускоряет МЬК.
Фиг. 15 представляет собой МЬК с добавленной сывороткой № 0125. Эта сыворотка получена от козы, которая, как считали, не реагировала на иммунизацию, так как у нее наблюдалось присутствие малого или крайне малого количества НЬА- и/или РА8-антител, что коррелировало с предварительными результатами ЕЬР5А, полученными при идентификации анти-НЬА ОК у респондеров.
Фиг. 16 представляет собой МЬК с добавленной сывороткой № 0127, которая, как было показано, оказалась очень хорошим респондером. В МЬК наблюдалась значительная клеточная деструкция многих РВМС. Этот результат обычно является сходным у всех сильных респондеров при использовании препарата сыворотки для лечения.
Авторы занялись поиском антитела, способного индуцировать деструкцию высокоактивных клеток, как это могло происходить в случае МЬК. Таким образом, они пытались обнаружить наличие антитела против ЕА8, которое могло бы перекрестно реагировать с рецептором ЕА8 и индуцировать сигналы, необходимые для возникновения апоптоза. В результате ЕЫ8А против ЕА8 удалось выявить наличие указанных антител в сыворотках коз, которые считались самыми лучшими респондерами, и это обогатило предыдущие результаты анти-НЬА-антителами.
Эти результаты, вместе с ранее полученными авторами данными, хорошо коррелируют со всем тем, что наблюдалось в МЬК с пониженной клеточной пролиферацией благодаря клеточной деструкции.
На основании полученных результатов ЕЫ8А авторы предприняли идентификацию дальнейших возможных активных компонентов в козьих сыворотках, которые использовались для лечения добровольцев, страдающих рассеянным склерозом (М8) и СПИДом, когда обычная терапия более не была целесообразна.
- 17 013517
Ниже приведены данные скрининга с использованием ЕЬ18А в разведении 1 к 1000 преиммунных сывороток. Антигенами для скрининга были овальбумин, НЬА-ОКТ (ΌΚ1), Еа§, рецептор р75 фактора роста нервов (ΝΟΕγ), серотониновый рецептор (8ег К), дофаминовый рецептор (Όορ К), СХСЬ 10 и монокин, индуцированный интерфероном-γ (МЮ).
Уже очевидно, что антитело против дофаминового рецептора присутствует в высоких концентрациях в сыворотках, в то время как активности против любого из остальных антигенов не наблюдается. Однако имеется активность против многих из этих антигенов в исходной ЗВ-сыворотке, которую ранее использовали для лечения, и в сыворотке 0127, полученной от козы, иммунизированной ВИЧ ШЬ, полученным на Т-клеточной линии, включая активность против ΝΟΕγ, дофаминового рецептора и СХСЬ10. Активность против НЬА и ЕА8 вновь очевидна и соответствует противовоспалительному механизму, который уже предполагали авторы. К этому авторы могут теперь добавить активность против СХСЬ 10 и рецептора р75 фактора роста нервов (Ν6Ε К р75). Антисыворотка против СХСЬ 10, как было недавно показано, обладает благоприятным действием в отношении выраженного уменьшения тяжести заболевания на мышиной модели рассеянного склероза, посредством снижения инвазии ЦНС СЭ4+ Т-клетками и макрофагами, уменьшая экспрессию ТН1 цитокина ΙΕΝ-γ и увеличивая ремиелинизацию. Это представляет интерес, так как локальные клетки в воспалительных повреждениях обычно продуцируют СХСЬ 10, который связывается и привлекает воспалительные ТН1 клетки посредством рецептора СХСКЗ. Следовательно, нейтрализация названного хемокина или блокада его рецептора антителами в козьей сыворотке вполне может быть частью противовоспалительного механизма действия, который предположили авторы для козьей сыворотки.
Тем временем антитела к низкоаффинному рецептору фактора роста нервов Ν6Ε К р75 ассоциированы с гибелью ВИЧ-инфицированных моноцитов и макрофагов в результате блокады ΝΟΕ, не допускающей достижения ими рецептора, что также представляет собой другой противовоспалительный механизм. Интересен факт обнаружения высочайших уровней антител против указанных рецепторов в сыворотке 0378, полученной путем иммунизации коз смесью 6 различных вирусов ВИЧ, продуцированных скорее в РВМС, чем в Т-клетках в отдельности. Активность оставалась очень высокой даже в разведении 1 к 4000.
Таким образом, вкладом авторов явилось добавление активности против этих антигенов в противовоспалительный механизм действия сывороток в случае обоих заболеваний. Вкладом авторов явилось также добавление активности в отношении дофаминовых и серотониновых рецепторов как ответственных за улучшение самочувствия, связанное с лечением.
Было отобрано много новых коз (707-718), которых недавно вакцинировали ВИЧ, а также получены пре-иммунные сыворотки от этих коз. Несмотря на то, что ни в одной из них не было обнаружено антител против дофаминового рецептора, как и в исходных пре-иммунных сыворотках, описанных выше, некоторые из коз имели в среднем более высокий уровень такого антитела при сравнении с козами из Уэльса, которым никогда не вводили вакцину против бешенства. Более высокие уровни, наблюдавшиеся в исходном преиммунном образце, могут быть обязаны своим появлением воздействию некоего фактора окружающей среды когда-то в прошлом, с последующим сильным ответом.
Альтернативный иммуноген.
Еще в одном варианте, применение вируса ВИЧ в качестве иммуногена для получения антитела не требуется, и в качестве иммуногена для получения эффективного антительного препарата применяются человеческие лейкоциты. На фиг. 30 показаны профили сывороток от коз, иммунизированных смесью ВИЧ и человеческими лейкоцитами, обозначенных 8НИЬА.
Claims (5)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Применение козьей сыворотки, полученной путем иммунизации козы ВИЧ, для изготовления лекарственного средства для лечения рассеянного склероза.
- 2. Применение козьей сыворотки, полученной путем иммунизации козы ВИЧ, для изготовления лекарственного средства для лечения артрита.
- 3. Применение козьей сыворотки, полученной путем иммунизации козы ВИЧ, для изготовления лекарственного средства для лечения неврита.
- 4. Применение козьей сыворотки, полученной путем иммунизации козы ВИЧ, для изготовления лекарственного средства для лечения хронического воспалительного состояния нервной системы.
- 5. Применение по любому из пп.1-4, где сыворотка козы содержит антитела к НЬА.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB0116151A GB0116151D0 (en) | 2001-07-02 | 2001-07-02 | Therapeutic agent |
| GB0128638A GB0128638D0 (en) | 2001-11-29 | 2001-11-29 | Therapeutic agent |
| GBGB0201896.8A GB0201896D0 (en) | 2002-01-28 | 2002-01-28 | Treatment |
| GB0207509A GB0207509D0 (en) | 2002-03-28 | 2002-03-28 | Therapeutic agent |
| PCT/GB2002/003037 WO2003004049A2 (en) | 2001-07-02 | 2002-07-02 | Use of polyclonal anti-hiv goat serum as a therapeutic agent |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA200400134A1 EA200400134A1 (ru) | 2004-08-26 |
| EA013517B1 true EA013517B1 (ru) | 2010-06-30 |
Family
ID=27447968
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA200400134A EA013517B1 (ru) | 2001-07-02 | 2002-07-02 | Применение козьей сыворотки, полученной иммунизацией козы вич, для изготовления лекарственных средств |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US20100291102A1 (ru) |
| EP (1) | EP1404367B1 (ru) |
| JP (2) | JP5014562B2 (ru) |
| KR (2) | KR20040030786A (ru) |
| CN (1) | CN100423776C (ru) |
| AT (1) | ATE478681T1 (ru) |
| AU (1) | AU2002317285B2 (ru) |
| BR (1) | BR0210772A (ru) |
| CA (1) | CA2452986C (ru) |
| DE (1) | DE60237447D1 (ru) |
| DK (1) | DK1404367T3 (ru) |
| EA (1) | EA013517B1 (ru) |
| HK (1) | HK1064936A1 (ru) |
| HU (1) | HU228957B1 (ru) |
| IL (2) | IL159682A0 (ru) |
| MX (1) | MXPA04000147A (ru) |
| NZ (1) | NZ530393A (ru) |
| PL (1) | PL216741B1 (ru) |
| WO (1) | WO2003004049A2 (ru) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2003202093B2 (en) * | 2001-07-02 | 2010-05-13 | Aimsco Limited | Treatment of MS with goat serum |
| GB0201896D0 (en) * | 2002-01-28 | 2002-03-13 | Ice Biolog Ltd | Treatment |
| IL159682A0 (en) * | 2001-07-02 | 2004-06-20 | Aimsco Ltd | Use of polyclonal anti-hiv goat serum as a therapeutic agent |
| EP2184085B1 (en) | 2004-04-05 | 2014-11-05 | Aimsco Limited | Treatment of diseases |
| AU2005276242B2 (en) * | 2004-07-08 | 2011-08-25 | Aimsco Limited | Medicament |
| GB0415359D0 (en) * | 2004-07-08 | 2004-08-11 | Aimsco Ltd | Medicament |
| GB0502083D0 (en) * | 2005-02-02 | 2005-03-09 | Aimsco Ltd | Bioactive compounds |
| GB0508153D0 (en) * | 2005-04-22 | 2005-06-01 | Aimsco Ltd | Therapeutic agent |
| GB0509052D0 (en) * | 2005-05-04 | 2005-06-08 | Aimsco Ltd | Combination therapy |
| GB0600202D0 (en) * | 2006-01-06 | 2006-02-15 | Aimsco Ltd | Treatment of HIV |
| ES2694805T7 (es) * | 2006-09-11 | 2021-10-21 | Seqirus Uk Ltd | Fabricación de vacunas contra virus de la gripe sin usar huevos |
| US8734852B2 (en) * | 2011-11-30 | 2014-05-27 | Manu Chaudhary | Parenteral controlled release formulations of NSAID's |
| EP2701728B1 (en) | 2012-06-25 | 2015-05-06 | Aimsco Limited | Formulation comprising crh and alpha-2-macroglobulin |
| UA114108C2 (uk) | 2012-07-10 | 2017-04-25 | Борд Оф Ріджентс, Дзе Юніверсіті Оф Техас Сістем | Моноклональне антитіло для застосування в діагностиці і терапії злоякісних пухлин і аутоімунного захворювання |
| AU2017396784B2 (en) | 2017-01-31 | 2022-06-02 | Illumina, Inc. | Fluidic devices and methods of manufacturing the same |
| CN117538549A (zh) * | 2023-09-27 | 2024-02-09 | 上海交通大学医学院附属瑞金医院 | 一种评估血浆置换清除dsa临床疗效的预测体系 |
Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02237935A (ja) * | 1989-03-10 | 1990-09-20 | Bio Kagaku Kenkyusho:Kk | エイズ処置剤 |
| WO1996020215A2 (en) * | 1994-12-23 | 1996-07-04 | Laboratoires Om S.A. | Use of mhc-ii binding and/or mhc-ii mimicking molecules for the prevention and/or treatment of inflammatory diseases |
| WO1996040941A1 (en) * | 1995-06-07 | 1996-12-19 | Connaught Laboratories Limited | Chimeric antibodies for delivery of antigens to selected cells of the immune system |
| WO1997002839A1 (en) * | 1995-07-13 | 1997-01-30 | Gkc Research, Inc. | Viral suppression, treatment and prevention of viral infections |
| WO1998013066A1 (en) * | 1996-09-24 | 1998-04-02 | Celltech Therapeutics Limited | Anti-class ii mhc binding agents for use in xenotransplantation |
| WO2000012560A1 (en) * | 1998-08-28 | 2000-03-09 | Dendreon Corporation | Selective apoptosis of neoplastic cells by an hla-dr specific monoclonal antibody |
| WO2000071160A1 (fr) * | 1999-05-24 | 2000-11-30 | Sankyo Company, Limited | Compositions medicinales contenant un anticorps anti-fas |
| EP1156062A1 (en) * | 2000-05-12 | 2001-11-21 | GPC Biotech AG | Immunomodulatory human MHC class II antigen-binding peptides/proteins |
| EP1156060A1 (en) * | 2000-05-12 | 2001-11-21 | GPC Biotech AG | Human peptides/proteins causing or leading to the killing of cells including lymphoid tumor cells |
| WO2002007760A2 (en) * | 2000-07-21 | 2002-01-31 | Ice Biologics Limited | Therapeutic agent against aids comprising anti hiv goat antibody |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4931543A (en) * | 1987-05-11 | 1990-06-05 | Cetus Corporation | Process for recovering microbially produced interleukin-2 |
| US5763160A (en) * | 1988-02-12 | 1998-06-09 | United Biomedical, Inc. | Synthetic peptides and process of using same for the detection of antibodies to human immunodeficiency virus (HIV) gp120 envelope protein, diagnosis of AIDS and pre-AIDS conditions and as vaccines |
| WO1997039119A1 (en) * | 1996-04-15 | 1997-10-23 | Vanderbilt University | Mammalian genes involved in viral infection and tumor suppression |
| US6682736B1 (en) * | 1998-12-23 | 2004-01-27 | Abgenix, Inc. | Human monoclonal antibodies to CTLA-4 |
| CA2270600A1 (en) * | 1999-05-03 | 2000-11-03 | Infectio Recherche Inc. | Method and formulations for the treatment of diseases, particularly those caused by human immunodeficiency virus and leishmania |
| EP1194167B1 (en) * | 1999-06-09 | 2009-08-19 | Immunomedics, Inc. | Immunotherapy of autoimmune disorders using antibodies which target b-cells |
| WO2001060156A1 (en) * | 2000-02-14 | 2001-08-23 | Gary R. Davis, M.D., L.L.C. | Neutralizing antibody and immunomodulatory enhancing compositions |
| IL159682A0 (en) * | 2001-07-02 | 2004-06-20 | Aimsco Ltd | Use of polyclonal anti-hiv goat serum as a therapeutic agent |
-
2002
- 2002-07-02 IL IL15968202A patent/IL159682A0/xx not_active IP Right Cessation
- 2002-07-02 PL PL367828A patent/PL216741B1/pl unknown
- 2002-07-02 AT AT02745565T patent/ATE478681T1/de active
- 2002-07-02 CN CNB028171705A patent/CN100423776C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-07-02 US US10/482,399 patent/US20100291102A1/en not_active Abandoned
- 2002-07-02 NZ NZ530393A patent/NZ530393A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-07-02 BR BR0210772-4A patent/BR0210772A/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-07-02 KR KR10-2004-7000049A patent/KR20040030786A/ko not_active Application Discontinuation
- 2002-07-02 EA EA200400134A patent/EA013517B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2002-07-02 DK DK02745565.8T patent/DK1404367T3/da active
- 2002-07-02 AU AU2002317285A patent/AU2002317285B2/en not_active Ceased
- 2002-07-02 KR KR1020097007314A patent/KR100938590B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2002-07-02 CA CA2452986A patent/CA2452986C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-07-02 HU HU0401392A patent/HU228957B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2002-07-02 WO PCT/GB2002/003037 patent/WO2003004049A2/en active Application Filing
- 2002-07-02 MX MXPA04000147A patent/MXPA04000147A/es active IP Right Grant
- 2002-07-02 DE DE60237447T patent/DE60237447D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-07-02 JP JP2003510059A patent/JP5014562B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2002-07-02 EP EP02745565A patent/EP1404367B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2004
- 2004-10-06 HK HK04107658.4A patent/HK1064936A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2009
- 2009-04-03 JP JP2009091136A patent/JP5128539B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2011
- 2011-12-09 US US13/315,830 patent/US20120100156A1/en not_active Abandoned
-
2012
- 2012-08-30 IL IL221708A patent/IL221708A/en not_active IP Right Cessation
-
2013
- 2013-02-08 US US13/763,435 patent/US20130230600A1/en not_active Abandoned
-
2015
- 2015-07-07 US US14/793,716 patent/US20160002320A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02237935A (ja) * | 1989-03-10 | 1990-09-20 | Bio Kagaku Kenkyusho:Kk | エイズ処置剤 |
| WO1996020215A2 (en) * | 1994-12-23 | 1996-07-04 | Laboratoires Om S.A. | Use of mhc-ii binding and/or mhc-ii mimicking molecules for the prevention and/or treatment of inflammatory diseases |
| WO1996040941A1 (en) * | 1995-06-07 | 1996-12-19 | Connaught Laboratories Limited | Chimeric antibodies for delivery of antigens to selected cells of the immune system |
| WO1997002839A1 (en) * | 1995-07-13 | 1997-01-30 | Gkc Research, Inc. | Viral suppression, treatment and prevention of viral infections |
| WO1998013066A1 (en) * | 1996-09-24 | 1998-04-02 | Celltech Therapeutics Limited | Anti-class ii mhc binding agents for use in xenotransplantation |
| WO2000012560A1 (en) * | 1998-08-28 | 2000-03-09 | Dendreon Corporation | Selective apoptosis of neoplastic cells by an hla-dr specific monoclonal antibody |
| WO2000071160A1 (fr) * | 1999-05-24 | 2000-11-30 | Sankyo Company, Limited | Compositions medicinales contenant un anticorps anti-fas |
| EP1156062A1 (en) * | 2000-05-12 | 2001-11-21 | GPC Biotech AG | Immunomodulatory human MHC class II antigen-binding peptides/proteins |
| EP1156060A1 (en) * | 2000-05-12 | 2001-11-21 | GPC Biotech AG | Human peptides/proteins causing or leading to the killing of cells including lymphoid tumor cells |
| WO2002007760A2 (en) * | 2000-07-21 | 2002-01-31 | Ice Biologics Limited | Therapeutic agent against aids comprising anti hiv goat antibody |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| DATABASE WPI Section Ch, Week 199044 Derwent Publications Ltd., London, GB; Class B04, AN 1990-331416 XP002227065 & JP 02237935 A (BIO KAGAKU KENKYUSH), 20 September 1990 (1990-09-20) abstract * |
| JONES-BRANDO LORRAINE V. ET AL.: "Metabolites of the antipsychotic agent clozapine inhibit the replication of human immunodeficiency virus type 1". SCHIZOPHRENIA RESEARCH, vol. 25, no. 1, 1997, pages 63-70, XP002227062 ISSN: 0920-9964 abstract * |
| KUTSCH O. ET AL.: "Induction of the chemokines interleukin-8 and IP-10 by human immunodeficiency virus type 1 Tat in astrocytes". JOURNAL OF VIROLOGY, vol. 74, no. 19, October 2000 (2000-10), pages 9214-9221, XP002227063 ISSN: 0022-538X abstract * |
| SAIFUDDIN M. ET AL.: "Expression of MHC class II in T cells is associated with increased HIV-1 expression". CLINICAL AND EXPERIMENTAL IMMUNOLOGY, vol. 121, no. 2, August 2000 (2000-08), pages 324-331, XP002227061 ISSN: 0009-9104 abstract; discussion * |
| SILVESTRIS FRANCO ET AL.: "Autoreactivity in HIV-1 infection: The role of molecular mimicry". CLINICAL IMMUNOLOGY AND IMMUNOPATHOLOGY, vol. 75, no. 3, 1995, pages 197-205, XP002227064 ISSN: 0090-1229 the whole document * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5128539B2 (ja) | 治療薬 | |
| JP2018135370A (ja) | 感染性疾患を治療及び予防する組み合わせ医薬組成物及び方法 | |
| Rose et al. | Autoimmunity in myocarditis: models and mechanisms | |
| JPS59196822A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| AU2002317285A1 (en) | Use of polyclonal anti-HIV goat serum as a therapeutic agent | |
| RU2531548C2 (ru) | Композиция для лечения заболевания | |
| CA2473754C (en) | Treatment of ms with goat serum | |
| JPH10503473A (ja) | 細胞傷害性ｔリンパ球刺激およびｈｃｖ曝露診断用ｃ型肝炎ウイルスコアペプチド | |
| AU2003202093A1 (en) | Treatment of MS with goat serum | |
| RU2179862C1 (ru) | Лекарственное средство для предотвращения отторжения трансплантата, моноклональное антитело к cd3-антигену т-лимфоцитов человека, гибридома и способ лечения больных, имеющих реакцию острого отторжения трансплантата после пересадки почки | |
| JP2005526729A (ja) | レトロウイルス免疫療法の戦略 | |
| JPS63294795A (ja) | ヒト免疫不全ウイルス（ｈｉｖ）の検出と治療のための方法および物質 | |
| ES2351207T3 (es) | Uso de suero policlonal de cabra anti-vih como agente terapéutico. | |
| JPH03505668A (ja) | Ｇｐ４８に対する特異抗体 | |
| EA014287B1 (ru) | Способ лечения заболевания двигательных нейронов козьей сывороткой | |
| ZA200405665B (en) | Treatment of ms with goat serum | |
| WO1994008618A1 (en) | Oral tolerance and immune suppression in the treatment of aids |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM |
|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): RU |