EA012080B1 - Ингибиторы каспазы, содержащие изоксазолиновый цикл - Google Patents

Ингибиторы каспазы, содержащие изоксазолиновый цикл Download PDF

Info

Publication number
EA012080B1
EA012080B1 EA200600465A EA200600465A EA012080B1 EA 012080 B1 EA012080 B1 EA 012080B1 EA 200600465 A EA200600465 A EA 200600465A EA 200600465 A EA200600465 A EA 200600465A EA 012080 B1 EA012080 B1 EA 012080B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
amino
dihydro
carbonyl
isoxazolyl
ethyl
Prior art date
Application number
EA200600465A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200600465A1 (ru
Inventor
Хие-Киунг Чанг
Йеонг-Соо Ох
Чеол-Вон Парк
Йонг-Дзин Дзанг
Тае-Кио Парк
Сунг-Суб Ким
Мин-Дзунг Ким
Ми-Дзеонг Парк
Дзунг-Гиу Парк
Хее-Донг Парк
Киеонг-Сик Мин
Тае-Соо Ли
Санг-Киун Ли
Соо-Хиеон Ким
Хее-Киунг Дзеонг
Сун-Хва Ли
Хва-Донг Ким
Ае-Ри Ким
Ки-Соок Парк
Хиун-Ик Шин
Хиеонг-Воок Чой
Киу-Воонг Ли
Дзае-Хоон Ли
Тае-Хо Хео
Хо-Дзун Ким
Тае-Сик Квон
Original Assignee
Эл Джи Лайф Сайенсиз Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Эл Джи Лайф Сайенсиз Лтд. filed Critical Эл Джи Лайф Сайенсиз Лтд.
Publication of EA200600465A1 publication Critical patent/EA200600465A1/ru
Publication of EA012080B1 publication Critical patent/EA012080B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D261/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings
    • C07D261/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings
    • C07D261/04—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Abstract

Настоящее изобретение относится к производному изоксазолина, пригодному в качестве ингибитора различных каспаз, способу его получения и содержащей его терапевтической композиции для предотвращения воспаления и апоптоза.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к производному изоксазолина, пригодному в качестве ингибитора различных каспаз, включая каспазу-1 [интерлейкин-1 β превращающий фермент, 1СЕ] и каспазу-3 [апопаин/СРР-32], способу его получения и терапевтической композиции для предотвращения воспаления и апоптоза, включающей его.
Уровень техники
Каспаза представляет собой новый вид цистеинпротеазы в форме α2β2, исследованный в течение последних 10 лет. К настоящему времени известно примерно 14 ее видов. Каспаза-1 (1СЕ), одна из них, представляет вид цитокинов и принимает участие в превращении неактивного проинтерлейкина-1 β в активный интерлейкин-1 β. Интерлейкин-1 состоит из интерлейкина-1а и интерлейкина-1 β, оба синтезируются в моноцитах в виде предшественника, имеющего молекулярную массу 31 кДа. Только проинтерлейкин-1 β активируется под действием 1СЕ. Положениями, подвергающимися гидролизу под действием каспазы-1, являются А§р27-О1у28 и А§р116-А1а117. Гидролиз последнего положения приводит к образованию интерлейкина-^. Сообщалось, что интерлейкин-1 β действует в качестве важного медиатора в развитии воспаления (1,3). Каспаза-1 впервые была открыта в 1989 г. двумя независимыми исследовательскими группами, ее трехмерную пространственную структуру определили с помощью рентгеновской кристаллографии.
Интенсивно исследовалась каспаза-3 (СРР-32) в отношении ее роли или механизма действия, и ее трехмерную пространственную структуру определили в 1996 г. (2). Каспаза-3 (апопаин), активированная из прокаспазы-3, гидролизует фрагмент (Р4)А§р-Х-Х-А§р(Р1), и известные субстраты включают поли(АДФ-рибоза)полимеразу, И1 70000 Мг небольшой ядерный рибонуклеопротеин и каталитическую субъединицу 460000 Мг, ДНК-зависимой протеинкиназы и т.д. С помощью рентгеновского исследования было подтверждено, что структура каспазы-7 очень схожа с таковой у каспазы-3 (4).
Каспаза-8 и каспаза-9 активируют каспазы-3,6,7, и известно, что данные каспазы принимают участие в каскаде развития апоптоза. С помощью рентгеновских исследований в 1999 г. (5) была определена структура каспазы-8, и, в частности, ее ингибиторы можно преимущественно использовать для лечения заболеваний, связанных с апоптозом.
Ингибиторы каспазы представляют соединения, которые ингибируют активность каспазы и, таким образом, контролируют такие симптомы, как воспаление, апоптоз и т.д., вызванные активностью каспазы. Заболевания или симптомы, которые можно лечить или ослаблять введением ингибиторов, включают следующие: ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника, синдром трансплантат против хозяина, сепсис, остеоартрит, остеопороз, острая и хроническая миелоидная лейкемия, менингит, сальпингит, септический шок, холангит, колит, энцефалит, эндокардит, гломерулонефрит, гепатит, миокардит, панкреатит, сахарный диабет типа 1, рассеянный склероз, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, цирроз печени (6).
Среди известных в настоящее время ингибиторов каспаз наиболее распространенными необратимыми ингибиторами являются следующие:
о о
ΙϋΝ-1965 МХ-1013
Оба вышеуказанных ингибитора проявляют свою активность на основе общего механизма действия, заключающегося в том, что они необратимо инактивируют фермент с ингибированием апоптоза клеток (необратимый ингибитор широкого спектра действия). Сообщалось, что необратимый ингибитор обладает значительно более высокой ингибирующей активностью при сравнении обратимых и необратимых ингибиторов (7). Сообщалось, что оба, ΙΌΝ-1965 производства ΙΌϋΝ Со. и МХ-1013 производства Мах1т Со., проявляют активность на модели апоптоза клеток при повреждении печени (8, 9). Данные препараты в настоящее время находятся на стадии доклинических испытаний. Необратимый ингибитор ΙΌΝ-6556, недавно имелись сообщения о его структуре, в настоящее время находится на стадии клинических испытаний фазы II в качестве терапевтического средства при повреждении печени (10, 11).
О К ©Ν-6556
- 1 012080
Источники:
(1) йШаттабои: Вабс ΡΓίηοίρΙοκ аиб Сйшса1 Соггс1а1с5. 2'1 еб., еб Ьу Са11ш, Со1бк!еш аиб 8иубегтаи. Касеи Ргекк Ь!б., Хеи Уогк. 1992, ρρ. 211-232; В1ооб. 1996, 87(6), 2095-2147.
(2) \\й1кои К.Р. е! а1., Синге, 1994, 370. 270; №а1кег Ы.Р.С. е! а1. Се11, 1994, 78, 343; ХаИие 8!гис!ига1 Вю1оду, 1996, 3(7), 619.
(3) ТйотЬепу Ν.Α. е! а1., ИаШге, 1992, 356, 768; №11иге Вю!есйио1оду, 1996, 14, 297; Рго!еш 8с1еисе, 1995, 4, 3; ΝιΙιιι<\ 1995, 376 (1и1у 6), 37; Рго!ет 8с1еисе, 1995, 4, 2149.
(4) \Уе1 Υ. е! а1., Сйет1к1гу аиб Вю1оду, 2000, 7, 423.
(5) В1аисйагб Н. е! а1., 81гис!иге, 1999, 7, 1125; В1аисйагб Н. е! а1., 1. оЕ Мо1. В1о1., 2000, 302, 9.
(6) Источники, касающиеся связанных с каспазами заболеваний.
Деменция: Агсй №иго1 2003 Маг; 60(3):369-76, Сакраке деие ехргеккюи ш 1йе Ьгат ак а Гипсйои оЕ 1йе с11шса1 ргодгеккюи оЕ А1хйейпег б1кеаке. Ротр1 РХ, Υети1 8, Х1аид Ζ, Но Ь, Нагои!ишаи V, Ригой! Ό, Мойк К, Ракте!б СМ.
Мозговой инсульт: Ргос №11 Асаб 8с1 И8А 2002 йог 12; 99 (23) :15188-93, Сакраке асбуабои аиб иеигорго!есбои ш сакраке-3- беДшеи! писе аГ!ег т угуо сегеЬга1 бсйепка аиб ш уйго охудеи д1исоке бербуабои. Ье ΌΑ, \Уи Υ., Ниаид Ζ., Ма!кикййа К., Р1екш1а Ν., Ацдцкбиаск Е.С., Нутаи В.Т., Υиаη Е., Кшба К., Р1ауе11 К.А., Мокко\\'йх М.А.
Повреждение мозга в результате СПИДа: Е №игокс1 2002 Мау 15; 22 (10):4015-24, Сакраке саксабек 1и йитаи 1ттииобейс1еису У1гик-аккос1а!еб иеигобедеиегабои. Сагбеи СА, Вибб 8Ь, Тка1 Е., Наикои Ь., Каи1 М., И'ЕтШа И.М., Рпебйтбег К.М., Υиаи Е., Макйай Е., Ыр!ои 8.А.
Диабет: П1аЬе!ек 2002 Еии; 51 (6):1938-48, Нурегд1усет1а-тбисеб арор!обк ш тоике туосагбшт: ий!осйоибба1 су!осйготе С-теб1а!еб сакраке-3 асбуабои ра1й\гау. Са1 Ь., Ь1 ^., \Уаид С., Сио Ь., баид Υ., Каид Υ1.
Язва желудка: Е Рйук1о1 Рйагтасо1 1998 Эес; 49 (4):489-500, Ко1е оЕ Ьабс йЬгоЫак! дгоМй Еас!ог ш !йе кирргеккюи оЕ арор!обс сакраке-3 бибид сйгошс дакбЕс и1сег йеайид. 81от1аиу ВЬ., Р1о1гоикк1 1., 81от1аиу А.
Повреждение мозга в результате гепатита: Ε νίΓη1 Нера! 2003 Маг; 10(2):81-6, СегеЬга1 букЕцисбои ш сйгошс йераббк С бЕесиои. Робои И.М., Тау1ог-КоЬшкои 8.Ό., Тйотак Н.С.
Скоротечная печеночная недостаточность: Сак!гоеи!его1оду 2000 Аид; 119(2):446-60, Титог иесгобк Еас!ог а1рйа ш !йе ра!йодеиек1к оЕ йитаи аиб тцбие Ейттаи! йерабс Еайиге. 81гее1х К., Вебе1б Ь., Сгиибтаии Ό., Катакегк Е., Ескеб К., 8реид1ег и., Вгеииег Ό., Маиик М., Тгаи!иеш С.
Сепсис: Ха! 1ттиио1 2000 Эес; 1(6):496-501, Сакраке гийЛЬкотк бтргоуе кшугуа1 ш кербк: а сббса1 го1е оЕ !йе 1утрйосу!е. Но!сйк1кк К8, Сйаид КС, 8иаикои Р.Е., Тшк1еу К.^., Нш Еб., К1еибег Р., Хаи!йоибак1к 8., Коу 8., В1аск С., Сбтт Е., Акрюбк К., Наи Υ., №сйо1кои Ό.^., Каг1 1.Е.
Отторжение органов во время трансплантации: Хеио!гаикр1аи1абои 2001 Мау; 8(2):115-24, 1и уйго ргеуеибои оЕ се11-теб1а!еб хеио-дгаЕ! ге.)есбои У1а !йе Рак/РакЬ-ра!йиау ш СгтА-баикбис!еб рогсше к1биеу се11к. Руто М., Ь1 Х.К., 8иба Т., Накйгто!о М., ОкаЬе К., Υад^иита Н., М1кокйгЬа К., Сио Ь., Окиуата Т., Еиокаиа 8., АтетЛуа Н., Атаио Т., 8ι.ιζι.ι16 8.
Ревматоидный артрит: Ргод Меб Сйет 2002; 39:1-72, Сакраке шйгЬйогк ак аиб-шДатта!огу аиб аибарор!обс адеи!к. С^асζук Р.Р.
Ишемические заболевания сердца: Ат Е Рйукю1 Неаб Сбс Рйукю1 2002 8ер; 283 (3):Н990-5, Нурох1а-шбисеб с1еауаде оЕ сакраке-3 аиб ПРР45/1САО т йитаи Еайеб сагбютуосу!ек. Тобог А., 8йагоу ν.Ο., Таийейсо Еб., 86^^111311 Ν., ВетаЬе1 А., 8аЬЬай ΉΝ.
Противовоспалительное действие: Е 1ттиио1 2003 Маг 15; 170 (6) :3386-91, А Ьгоаб-кресбит сакраке гийЛЬбог айеииа!ек а11егдю аииау Маттакои т тибие ак!йта тобе1. Ι\ν;·ιΙ;·ι А., №кйю К., \Утп К.К., Сйг ЕУ., Неибегкои ^.К. Ег, Наг1аи Е.М.
Цирроз: ί) Е. Рйагтасо1 Ехр Тйег. 2004 Маг; 308 (3):1191-6, Тйе сакраке гийЛЬбог 1би-6556 а!!еииа!ек йерабс пушу аиб бЬгобк т !йе Ьйе бис! йда!еб тоике. СаиЬау А., Р1ебк!ет А., Ваккш-Веу Е., Вгоик Р.8. Согек Сб.; и) Нера!о1оду. 2004 РеЬ; 39(2):273-8, Арор!обк: !йе иехик оЕ йуег щ)шу аиб ДЬюбк. СаиЬау А., Рбебтаи 8., Согек Сб.; ίίί) Нера!о1оду. 2003 йог; 38 (5):1188-98, КирЕЕег се11 еиди1Етеи! оЕ арор!обс Ьоб1ек кбти1а!ек беа!й йдаиб аиб су!окте ехргеккюи. СаиЬау А., Ре1бк!еш А.Е., Шдисйг Н., ХУегпеЬигд Ν., СгатЬ1й1ег А., Вгоик 8.Р., Согек Сб.
(7) \Уи Е. е! а1. Ме!йобк: А Сотрашои !о Ме!йобк ш Еηζуто1оду, 1999, 17, 320.
(8) Нод1еи Ν.Ο. е! а1. Е. оЕ Рйагтасо1оду аиб Ехрептеи!а1 Тйегареибск, 2001, 297, 811.
(9) Еаексйке Н. е! а1. Тохюо1оду аиб Аррйеб Рйагтасо1оду, 2000, 169, 77.
(10) Но1деи Ν.Ο. е! а1. Е. Рйагтасо1 Ехр. Тйег., 2004, 309(2):634. Сйа^ас!е^^ζа!^ои оЕ ΙΌΝ-6556 (3-[2-(2!еή-Ьиΐу1-ρйеиу1ат^иооxа1у1)-ат^ио]-ρ^оρ^оиу1ат^ио]-4-оxо-5-(2,3,5,6-!ейаДио^о-ρйеиоxу)-ρеи!аηо^с ас1б): а 1гуегйагде!еб сакраке гийЛЬбог;
(11) СаиЬау А. е! а1. Е. РйагтасоЕ Ехр. Тйег., 2004, 308(3), 1191. Тйе сакраке шйгЬйог ΙΌΝ-6556 а!!еииа!ек йерабс щиту аиб ДЬгобк ш !йе Ьйе бис! йда!еб тоике.
Сущность изобретения
Авторы настоящего изобретения сконструировали и синтезировали некоторые новые соединения,
- 2 012080 которые можно использовать в качестве эффективных ингибиторов каспаз и которые имеют характерную структуру и высокую избирательность в отношении подобных ферментов, и определили их связывающую способность и ингибирующую активность для каспаз. В результате авторы установили, что соединение следующей формулы (1) соответствует таким требованиям, и создали настоящее изобретение.
(1) в которой
I) К представляет Н,
II) К1 представляет остаток боковой цепи любой из природных аминокислот;
и соединение формулы (1) может находиться в форме конкретного диастереомера или их смесей, когда атом углерода, с которым связан К1, становится стереоцентром за счет К1-группы; или соединение формулы (1) может иметь защитную группу в виде эфира (-СО2К3, где К3 представляет -8АС), или может находиться в виде фармацевтически приемлемой соли, когда К1 является остатком боковой цепи аминокислоты, содержащим карбоксильную группу; или соединение формулы (1) может также находится в виде фармацевтически приемлемой соли, когда К является остатком боковой цепи аминокислоты, со держащим основную группу,
III) К2 представляет Н, -8АС, -8САС или -8 АС-А г; и соединение формулы (1) может находиться в форме конкретного диастереомера или их смесей, когда атом углерода, с которым связан К2, становится стереоцентром за счет К2-группы;
IV) А представляет -(СН2)П- (п=0-4) или -О-(СН2)П- (п=0-4),
V) В представляет -Аг и
VI) X представляет -С(=О)СН2ОК11, где К11 является -8АС, -8САС, -Аг или -8АС-Аг; -С(=О)СН2ОС(=О) К12, где К12 является -8АС, -8САС, -Аг или -8АС-Аг; -СН=СН-СО2К13, где К13 является -8АС, -8САС, -Аг или -8АС-Аг; -СН=СН-8О2К14, где К14 является -8АС, -8САС, -Аг или -8АС-Аг; -С(=О)СН=СН2 или -СОСН:-\¥, где представляет -Р, -С1, -Вг, -I, или имеет следующую формулу:
в которых
Υ представляет Н или СР3,
К24 представляет Н, -8АС, -8АС-Аг или -Аг.
Следовательно, настоящее изобретение обеспечивает новое производное изоксазолина формулы (1), его соль или стереоизомер, обладающее ингибирующей активностью в отношении каспаз.
Другим предметом изобретения является обеспечение способа получения соединения формулы (1), его соли или стереоизомера.
Также еще одним предметом настоящего изобретения является обеспечение композиции, применения или способа ингибирования каспаз, в частности терапевтической композиции, применения или способа предотвращения воспаления и апоптоза, включающих соединение формулы (1), его соль или стереоизомер в качестве активного ингредиента вместе с фармацевтически приемлемым носителем.
Краткое описание фигур
На фиг. 1 показана ингибирующая активность соединения (Ш) в отношении фиброза печени, возникшего в результате застоя желчи: «а)» на фиг. 1 представляет вариант симуляции операции, «Ь)» представляет вариант операции ВОЙ, когда вводили только растворитель после наложения лигатуры на желчный проток, «с)» представляет вариант, когда соединение (Ш) вводили перорально в дозе 3 мг/кг дважды в сутки в течение 1 недели через неделю после наложения лигатуры на желчный проток, и «б)» представляет вариант, когда соединение (Ш) вводили перорально в дозе 10 мг/кг дважды в сутки в течение 1 недели через неделю после наложения лигатуры на желчный проток.
На фиг. 2 показана ингибирующая активность соединения (Ш) в отношении апоптоза клеток печени, возникшего в результате застоя желчи: «а)» на фиг. 2 представляет вариант симуляции операции, «Ь)» представляет вариант операции ВОЙ, когда вводили только растворитель после наложения лигатуры на желчный проток, «с)» представляет вариант, когда соединение (Ш) вводили перорально в дозе 3 мг/кг дважды в сутки в течение 1 недели через неделю после наложения лигатуры на желчный проток, «б)» представляет вариант, когда соединение (Ш) вводили перорально в дозе 10 мг/кг дважды в сутки в течение 1 недели через неделю после наложения лигатуры на желчный проток и «е)» представляет график, показывающий количество клеток печени, подвергшихся апоптозу, в каждой опытной группе.
Подробное описание предпочтительного варианта осуществления изобретения
Перед подробным описанием настоящего изобретения вначале даются определения следующим
- 3 012080 важным терминам:
a) простая алкильная цепь (далее - 8АС) означает углеводород, имеющий 1-8 атомов углерода в линейной или разветвленной изомерной форме;
b) простая циклоалкильная цепь (далее - 8СЛС) означает циклический радикал, имеющий 3-10 атомов углерода;
c) арильная группа (далее - Аг) включает ароматическую и гетероароматическую группы. Ароматическая группа означает 5-15-членный одиночный или конденсированный ненасыщенный цикл. Гетероароматическая группа означает ароматическую группу, содержащую 1-5 гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из атомов кислорода, серы и азота.
Арильная группа включает фенил, бифенил, 1-нафтил, 2-нафтил, пиридинил, Ν-алкилпиридиний, пиримидинил, хинолинил, бензотиенил, индолил, пиразинил, изоиндолил, изохинолил, хиназолинил, хиноксалинил, фталазинил, имидазолинил, изоксазолил, пиразолил, оксазолил, тиазолил, индолизинил, индазолил, бензотиазолил, бензимидазолил, бензофуранил, тиенил, пирролил, оксадиазолил, тиадиазолил, триазолил, тетразолил, оксазолопиридинил, имидазопиридинил, изотиазолил, циннолинил, карбазолил, изохроманил, хроманил, тетрагидроизохинолинил, изоиндолинил, изобензотетрагидрофуранил, изобензотетрагидротиенил, изобензотиенил, бензоксазолил, пиридопиридинил, бензотетрагидрофуранил, бензотетрагидротиенил, пуринил, бензодиоксолил, триазинил, феноксазинил, фенотиазинил, птеридинил, бензотиазолил, имидазопиридинил, имидазотиазолил, дигидробензизоксазинил, бензизоксазинил, бензоксазинил, дигидробензизотиопиранил, бензопиранил, бензотиопиранил, кумаринил, изокумаринил, хромонил, хроманонил, пиридинил-Ы-оксид, тетрагидрохинолинил-Ы-оксид, дигидрохинолинил, дигидрохинолинонил, дигидроизохинолинонил, дигидрокумаринил, дигидроизокумаринил, изоиндолинонил, бензодиоксанил, бензоксазолинонил, Ν-алкилпиридий, пирролил-Ы-оксид, пиримидинил-Ы-оксид, пиразинил-К-оксид, хинолинил-Ы-оксид, индолил-Ы-оксид, индолинил-Ы-оксид, изохинолил-Ы-оксид, хиназолинил-Ы-оксид, хиноксалинил-Ы-оксид, фталазинил-№оксид, имидазолинил-Ы-оксид, изоксазолил-Νоксид, оксазолил-Ы-оксид, тиазолил-Ы-оксид, индолизинил-Ы-оксид, индазолил-Ы-оксид, бензотиазолилΝ-оксид, бензимидазолил-Ы-оксид, пирролил-Ы-оксид, оксадиазолил-Ы-оксид, тиадиазолил-Ы-оксид, триазолил-Ы-оксид, тетразолил-№оксид и т.д.;
б) простая алкильная цепь, замещенная арилом (далее - 8АС-Аг), означает линейный или разветвленный алкил, имеющий 1-8 атомов углерода и замещенный вышеуказанной арильной группой;
е) природная аминокислота включает следующее: глицин, аланин, валин, лейцин, изолейцин, серин, треонин, цистеин, метионин, пролин, аспарагиновую кислоту, аспарагин, глутаминовую кислоту, глутамин, лизин, аргинин, гистидин, фенилаланин, тирозин и триптофан;
1) защитная группа простого эфира представляет углеводород, имеющий 1-8 атомов углерода в линейной или разветвленной изомерной форме.
Кроме того, настоящее описание включает следующие сокращения:
Ν-хлорсукцинимид: NС8
Ν-метилморфолин: ΝΜΜ О-(7-азабензотриазол-1-ил)-Ы,^№,№-тетраметилурония гексафторфосфат: НАТи Ν,Ν-диметилформамид: ДМФА
1-(3 -диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид: БОС
1-гидроксибензотриазол гидрат: НОВ!
трифторуксусная кислота: ТРА трет-бутоксикарбонил: Вос бензилоксикарбонил: СЬх метил: Ме этил: Εΐ эквивалент: экв.
Заместители, входящие в вышеуказанную формулу (1), конкретно имеют следующие значения.
I) В представляет Н,
II) В1 представляет остаток боковой цепи любой из природных аминокислот; и соединение форму- лы (1) может находиться в форме конкретного диастереомера или их смесей, когда атом углерода, с которым связан В1, становится стереоцентром за счет В'-группы; или соединение формулы (1) может иметь защитную группу в виде эфира (-СО2В3, где В3 представляет -8АС), или может находиться в виде фармацевтически приемлемой соли, когда В1 является остатком боковой цепи аминокислоты, содержащим карбоксильную группу; или соединение формулы (1) может также находится в виде фармацевтически приемлемой соли, когда В1 является остатком боковой цепи аминокислоты, содержащим основную группу, 2
III) В2 представляет Н, -8АС, -8САС, -Аг, -8АС-Аг; и соединение формулы (1) может находиться в форме конкретного диастереомера или их смесей, когда атом углерода, с которым связан В2, становится стереоцентром за счет В2-группы;
IV) А представляет -(Сн2)п- (п=0-4) или -О-(СН2)П- (п=0-4),
V) В представляет -Аг и
- 4 012080
VI) X представляет -С(=О)СН2ОК41, где К11 является -8АС, -8САС, -Аг или -8АС-Ат; -С(=О)СН2ОС(=О)К12, где К12 является -8АС, -8САС, -Аг или -8АС-Ат; -СН=СН-СО2К13, где К13 является -8 АС, -8САС, -Аг или -8АС-Ат; -СН=СН-8О2К14, где К14 является -8 АС, -8САС, -Аг или -8АС-Ат; -С(=О)СН=СН2 или -СОСН2-\У. где представляет -Е, -С1, -Вг, -I или имеет следующую формулу:
в которых
Υ представляет Н или СЕ3,
К24 представляет Н, -8АС, -8АС-Аг или -Аг.
Предпочтительными соединениями среди соединений формулы (1), представленной выше, являются таковые, в которых
К представляет Н;
К1 представляет -СН2СООН или -СН2СООК3 (К3=8АС);
К2 представляет Н или -8АС; или
X представляет -С(=О)СН2ОАг, -С(=О)СН2ОС(=О)Аг или -СОСН2-^, где представляет -Е, -С1,
-Вг или -I.
Более предпочтительными соединениями среди соединений формулы (1), представленной выше, являются таковые, в которых
I) К представляет Н,
II) К1 представляет -СН2СООН или -СН2СООК3 (К3=8АС),
III) К2 представляет Н или -8АС,
IV) А представляет -(СН2)П- (п=0-4) или -О-(СН2)П- (п=0-4),
V) В представляет -Аг,
VI) X представляет -СОСН2Е, -СОСН2С1, -СОСН2Вг, -СОСНД, -СОСН2ОАг или -СОСН2ОСОАг.
Особенно предпочтительными соединениями являются таковые, выбранные из следующей группы, состоящей из (1) (38)-5-[(2,6-дихлорбензоил)окси]-3-({[5-метил-3-фенил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-4-оксопентановой кислоты (Заа);
(2) (38)-3-({[5-метил-3-фенил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксо-5-феноксипентановой кислоты (ГЬЪ);
(3) (38)-3-({[5-этил-3-фенил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксо-5-(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентановой кислоты Вес);
(4) (38)-3-({[5-этил-3-(1-нафтил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксо-5-(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентановой кислоты (Збб);
(5) (38)-3-({[5-этил-3-(2-нафтил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксо-5-(2,3,5,6тетрафторфенокси)пентановой кислоты Все);
(6) (38)-3-({[5-этил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксо-5-(2,3, 5,6-тетрафторфенокси)пентановой кислоты (ИГ);
(7) 3-({[5-этил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентановой кислоты Οββ);
(8) этил 3-({[5-этил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4- оксопентаноата (31111);
(9) 5-фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-
4-оксопентановой кислоты (Ш);
(10) 3-({[5-этил-3-(4-хинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентановой кислоты (Щ);
(11) 3-({ [3-(бензотиофен-2-ил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентановой кислоты ^кк);
(12) (38)-3-({[3-(1,3-диметил-1Н-индол-2-ил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-
4- оксо-5-(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентановой кислоты (III);
(13) 3-({[3-(1,3-диметил-1Н-индол-2-ил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5фтор-4-оксопентановой кислоты (Iтт);
(14) (38)-3-(([5-этил-3-(1-нафтилметил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксо-5-(2,3, 5,6-тетрафторфенокси)пентановой кислоты (Iηη);
(15) (38)-5-[(2,6-дихлорбензоил)окси]-3-[({5-этил-3-[2-(1-нафтил)этил]-4,5-дигидро-5-изоксазолил} карбонил)амино]-4-оксопентановой кислоты (ко);
(16) (38)-3-[({5-этил-3-[(1-нафтилокси)метил]-4,5-дигидро-5-изоксазолил}карбонил)амино]-4-оксо-
5- (2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентановой кислоты (Зрр);
- 5 012080 (17) (38)-3-{[(3-{[(4-хлор-1-нафтил)окси]метил}-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил)карбонил]амино}-4-оксо-5-(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентановой кислоты (1с|С|);
(18) (38,4Е)-6-этокси-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-6-оксо-4-гексеновой кислоты (1гг);
(19) (38,4Е)-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-(метилсульфонил)-4-пентеновой кислоты (Г§8);
(20) 5-фтор-3-({[(58)-3-(1-изохинолинил)-5-пропил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4оксопентановой кислоты (Ш);
(21) 3-({[(58)-5-этил-3-(1-нафтил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентановой кислоты (1ии);
(22) 3-({[(58)-5-этил-3-(2-хинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентановой кислоты (Ινν) ;
(23) 3-({[(5К)-5-этил-3-(3-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4оксопентановой кислоты (Гетет);
(24) 3-({[5-этил-3-(8-хинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентановой кислоты (Гхх);
(25) 3-({[5-этил-3-(3-хинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентановой кислоты (Гуу);
(26) 5-фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(2-хинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4оксопентановой кислоты (Γζζ);
(27) 3-({[5-этил-3-(2-изопропилфенил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентановой кислоты (Гаа1);
(28) 3 -[({ 3 -[3 -(трет-бутил)фенил]-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил}карбонил)амино]-5-фтор-4оксопентановой кислоты (Гаа2) ;
(29) 3-[({3-[4-(трет-бутил)фенил]-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил}карбонил)амино]-5-фтор-4оксопентановой кислоты (Гаа3);
(30) 5-фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(2-изопропилфенил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-4-оксопентановой кислоты (Гаа4);
(31) 3-[({(5К)-3-[3-(трет-бутил)фенил]-5-изопропил-4,5-дигидро-5-изоксазолил}карбонил)амино]-5фтор-4-оксопентановой кислоты (Гаа5);
(32) 3-{[(3-[1,1'-бифенил]-3-ил-5-изопропил-4,5-дигидро-5-изоксазолил)карбонил]амино}-5-фтор-4оксопентановой кислоты (Гаа6);
(33) 3-({[5-этил-3-(2-пиридинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентановой кислоты (Гаа7);
(34) 3-[({3-[4-(трет-бутил)-2-пиридинил]-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил}карбонил)амино]-5фтор-4-оксопентановой кислоты (Гаа8);
(35) 3-[({(5К)-3-[4-(трет-бутил)-2-пиридинил]-5-изопропил-4,5-дигидро-5-изоксазолил}карбонил) амино]-5-фтор-4-оксопентановой кислоты (Гаа9);
(36) 3-({[5-этил-3-(4-изобутил-2-пиридинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-
4-оксопентановой кислоты (Гаа10);
(37) 3-({[3-(4-ацетил-2-пиридинил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4оксопентановой кислоты (Гаа11);
(38) 3-({[3-(4-циклопропил-2-пиридинил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5фтор-4-оксопентановой кислоты (Гаа12);
(39) 3-({[3-(4-циклопентил-2-пиридинил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5фтор-4-оксопентановой кислоты (Гаа13);
(40) 3-({[(5К)-3-(4-циклопентил-2-пиридинил)-5-изопропил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-5-фтор-4-оксопентановой кислоты (Гаа14);
(41) 3-({[3-(4-циклогексил-2-пиридинил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5фтор-4-оксопентановой кислоты (Гаа15);
(42) 3-({[5-этил-3-(5,6,7,8-тетрагидро-1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентановой кислоты (Гаа16);
(43) 5-фтор-3-({[5-изопропил-3-(4-фенил-2-пиридинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановой кислоты (Гаа17);
(44) (38)-5-[(дифенилфосфорил)окси]-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановой кислоты (Гаа18);
(45) (38)-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4оксо-5-{[1-фенил-3-(трифторметил)-1Н-пиразол-5-ил]окси}пентановой кислоты (Гаа19);
(46) (38)-5-(4-бензил-5-оксо-2,5-дигидро-3-фуранил)окси-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановой кислоты (Гаа20);
(47) (38)-5-(изобутирилокси)-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановой кислоты (Гаа21);
- 6 012080 (48) (38)-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4оксо-5-гексеновой кислоты (1аа22);
(49) (38)-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4оксо-5-(2-пиридинилокси)пентановой кислоты (1аа23);
(50) (38)-3-({[5-этил-3-(2-изопропилфенил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксо-5(2-пиридинилокси)пентановой кислоты (1аа24);
(51) 2-{[(38)-4-карбокси-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил] карбонил }амино)-2-оксобутил]окси}-1-метилпиридиния трифторметансульфоната (1аа25);
(52) 2-{[(38)-4-карбокси-3-({[5-этил-3-(2-изопропилфенил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-2-оксобутил]окси}-1-метилпиридиния трифторметансульфоната (1аа26);
(53) 3-({[3-(5-хлор-1-метил-1Н-индол-2-ил)-5-изопропил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-5-фтор-4-оксопентансвой кислоты (1аа27);
(54) 3-({[3-(1,5-диметил-1Н-индол-2-ил)-5-изопропил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-
5-фтор-4-оксопентановой кислоты (1аа28) и (55) (38)-5-фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-4-оксопентановой кислоты (Ιϋ-1).
Соединение формулы (1) по настоящему изобретению имеет два (2) асимметричных атома углерода, и таким образом может находиться в форме его стереоизомера, включая диастереомер. Особенно предпочтительными соединениями среди стереоизомеров являются таковые, имеющие следующую формулу (1а):
и таким образом другим предметом настоящего изобретения является обеспечение соединения формулы (1а) в форме стереоизомера.
Среди соединений формулы (1а), например, соединение (38)-5-фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановая кислота (Ιίί) можно получить способом, включающим стадии растворения смеси (38) и (3К) в метил-трет-бутиловом эфире, добавления небольшого количества кристаллической (38)-5-фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановой кислоты в качестве затравки с получением кристаллов и перекристаллизации данных кристаллов из системы растворителей этилацетат/н-гексан.
Наиболее предпочтительными соединениями формул (1) и (1а) являются 5-фтор-3-({[(5К)-5изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановая кислота (Ιίί) и (38)-5-фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановая кислота (Ιϋ-1).
Способы получения нового производного изоксазолина формулы (1), которые проявляют ингибирующую активность в отношении каспаз, представлены на последующих схемах реакций 1-5. Однако представленные на последующих схемах реакций являются только типичными способами, используемыми в настоящем изобретении. Без ограничения можно менять последовательность манипуляций, и таким образом, способы не ограничиваются теми, которые поясняются ниже.
Схема реакций 1
на которой А, В и К2 имеют значения, определенные выше, и Ρι представляет простую алкильную цепь.
На схеме реакций 1, представленной выше, альдегид (ΙΙ) подвергают взаимодействию с гидрохлоридом гидроксиламина и карбонатом натрия в смеси растворителей спирт-вода с получением оксима (ΙΙΙ) (смеси син- и антиоксимов). Полученный оксим (III) обрабатывают N08 (Ν-хлорсукцинимидом) в диметилформамиде с получением гидроксамоилхлорида (IV). Полученный таким образом гидроксамоилхлорид (IV) подвергают взаимодействию с акрилатом (V) с получением производного изоксазолина (VI),
- 7 012080 которое затем гидролизуют, если необходимо, с получением производного изоксазолина со снятой защитой (VII). Если требуется, то оксим (III), акрилат (V) и №ОС1 можно подвергнуть взаимодействию в реакционном сосуде (ίη зйи) с непосредственным получением производного изоксазолина (VI) (смотри получения 16 и 17).
на которой А, В, К, К1, К2, К11, К12 и имеют значения, определенные выше.
На схеме реакций 2, представленной выше, производное карбоновой кислоты (VII) подвергают конденсации с производным аспарагиновой кислоты (VIII) (см. последующую схему реакций 3) с получением соединения (IX), которое затем подвергают окислению Десс-Мартина периодинаном и снятию защиты, если необходимо, с получением желаемого соединения формулы (1).
Функциональную группу Ζ в соединении (I) на схеме реакций 2 можно получить в несколько стадий, как представлено в качестве примера в получениях 5 и 7, после того, как производное карбоновой кислоты (VII) с левой стороны соединяют с (β-трет-Ви) метиловым эфиром аспарагиновой кислоты. Иначе, как представлено на последующей схеме реакций 3, вначале синтезируют соединение (VIII), уже имеющее желаемую группу Ζ, и конденсируют с соединением (VII) (источник: ΨΟ 00/23421). Кроме того, когда представляет Е, то рацемическое соединение можно получить способом, описанным в Те1гаЬеОгоп Еейегз, 1994, 35 (52), 9693-9696.
Схема реакций 3
О ΟόζΝΗ. Л Υ^ΟΗ -- О СЬгМН^Д^Вг О | ΟΰζΝΗ^
О Χ^ζ-ОШи О Ч^О1Ви О
X XI
он он
0&ζΝΗ4 . НК
Ч^СЛВи Ч^/ΟίΒυ
О О
XII VIII
на которой Ζ имеет значения, определенные выше.
Акрилат (V), используемый в качестве реагента на вышепредставленной схеме реакций 1, можно получить двумя (2) путями. А именно, соединение (XV) легко получить из известного соединения (XIV) (8упФеы§, 1982, р. 924), как представлено на последующей схеме реакций 4, или метил(этил)2изопропилакрилат, соединение (V), можно получить из диметил(диэтил)малоната (1. Сйеш1еа1 8ое1е1у Регкш Тгапз. 1, 1997, 1559-1570).
на которой Р1 и К2 имеют значения, определенные выше.
- 8 012080
На последующей схеме реакций 5 представлен способ синтеза для получения соединения, в котором α,β-ненасыщенный эфир или α,β-ненасыщенный сульфон вводят в положение Ρι. Согласно этому производное карбоновой кислоты (VII), полученное как представлено на схеме реакций 1, подвергают взаимодействию с аминоспиртом (XVII) с получением соединения (XVI), которое затем подвергают окислению Десс-Мартина и реакции Виттига с получением соединения (I).
на которой В, А, В, В1 и В2 имеют значения, определенные выше, и р представляет -СО2В13 или 8О2В14, где В13 и В14 имеют значения, определенные выше.
Соединение формулы (1) по настоящему изобретению обладает широким спектром ингибирующей активности в отношении каспаз, что показано результатами последующих опытов, и, таким образом, обладает действием для предотвращения воспаления и апоптоза. Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает композицию для ингибирования каспаз, в частности терапевтическую композицию для предотвращения воспаления и апоптоза, содержащую соединение формулы (1) в качестве активного ингредиента вместе с фармацевтически приемлемым носителем. Конкретно композиция по настоящему изобретению обладает терапевтическим действием в отношении деменции, мозгового инсульта, повреждения мозга в результате СПИДа, диабета, язвы желудка, церебрального нарушения в результате гепатита, индуцированных гепатитом заболеваний печени, острого гепатита, скоротечной печеночной недостаточности, цирроза печени, сепсиса, отторжения органа при трансплантации, ревматоидного артрита или апоптоза клеток сердца в результате ишемических заболеваний сердца, в частности, особенно гепатита, цирроза печени или ревматоидного артрита.
Ингибитор каспаз, в частности соединение формулы (1), для введения можно изготовить в виде различных фармацевтических форм. Для приготовления фармацевтической композиции по настоящему изобретению эффективное количество ингибитора каспаз, в частности соединения формулы (1) или его соли, смешивают с фармацевтически приемлемым носителем, который может иметь различные формы в зависимости от композиции, которую готовят.
Ингибирующее каспазу соединение можно формулировать в виде инъекционного раствора для парентерального введения или препарата для перкутанного или перорального введения в зависимости от цели применения. Является особенно преимущественным изготовление композиции в разовой лекарственной форме для простоты введения и однородности дозировки.
Для препарата для перорального введения можно использовать любой обычный фармацевтический носитель. Например, можно использовать воду, гликоли, масла, спирты и тому подобное для таких жидких препаратов для перорального введения как суспензии, сиропы, эликсиры и растворы; или можно использовать крахмалы, сахара, каолин, скользящие вещества, связующие вещества, разрыхлители и тому подобное для таких твердых препаратов как порошки, пилюли, капсулы и таблетки. За счет простоты введения таблетки и капсулы являются наиболее преимущественными разовыми лекарственными формами. Также является желательным для таблеток и пилюль формулировать их в покрытый кишечной оболочкой препарат.
Для препарата для парентерального введения в качестве носителя обычно используют стерильную воду, хотя можно применять другие ингредиенты, такие как вещества, способствующие растворению. Инъекционные препараты, например стерильную водную или масляную суспензию для инъекций, можно приготовить согласно известным методам с использованием подходящих разрыхлителей, смачивающего вещества или суспендирующего вещества. Растворители, которые можно использовать для приготовления инъекционных препаратов, включают воду, раствор Рингера и изотонический раствор ЫаС1, и также можно преимущественно использовать стерильное нелетучее масло в качестве растворителя или суспендирующей среды. Для этой цели можно использовать любое вызывающее раздражение нелетучее масло, включая моно-, диглицериды. Для инъекционных растворов можно также использовать жирную кислоту, такую как олеиновая кислота.
- 9 012080
Для чрескожного введения носитель может включать вещество, усиливающее проникновение и/или подходящее смачивающее вещество, необязательно в сочетании с подходящими добавками, не обладающими значительным раздражающим действием на кожу. Указанные добавки могут способствовать введению через кожу и/или помогать проникновению желаемой композиции. Данные препараты для чрескожного введения применяют различными способами, например в виде трансдермального пластыря, небольшого кусочка пластыря или мази.
В тех случаях, когда ингибитор каспаз, в частности соединение формулы (1), используют для клинических целей, то предпочтительно вводить его конкретному пациенту в количестве в пределах от 0,1 до 100 мг на кг массы тела в сутки. Общую суточную дозу можно вводить один или несколько раз. Однако конкретная дозировка для введения индивидуальному пациенту может варьироваться в зависимости от конкретного используемого соединения, массы тела, пола, общего состояния здоровья или рациона конкретного пациента, времени или способа введения, скорости выделения, соотношения смешения агента, тяжести заболевания, которое лечится и т. д.
Настоящее изобретение будет конкретнее пояснено последующими примерами. Однако следует понимать, что данные примеры предназначены для иллюстрации настоящего изобретения и ни коим образом не ограничивают объем настоящего изобретения.
Получение 1.
Оксим бензальдегида.
Бензальдегид (5,31 г, 50,0 ммоль) растворяли в смеси этанол (60 мл) - вода (30 мл) и добавляли гидроксиламин гидрохлорид (5,21 г, 1,5 экв.) и безводный карбонат натрия (№12СО3. 3,97 г, 0,75 экв.) при 0°С. Когда образовывалось большое количество твердого вещества примерно через 1 мин, добавляли смесь вода-этанол (1:1, 60 мл) и смесь перемешивали в течение 1 ч. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (100 мл) и смесь экстрагировали дважды этилацетатом (300 мл). Экстракт промывали 1,0 Н водным раствором бикарбоната натрия ΝαΗ^Ο3, 100 млх2), высушивали (безводный №ь8О4) и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (6,06 г, выход 99%) в виде белого порошка в виде смеси цис- и транс-изомеров.
1Н-ЯМР (500 МГц, СЭС13) δ 8,9 (шир, 1Н), 8,1 (с, 1Н), 7,5 (м, 2Н), 7,3 (м, 3Н).
Получение 2.
Бензальдегид гидроксамоилхлорид.
Оксим, полученный в получении 1 (3,00 г, 24,8 ммоль), растворяли в диметилформамиде (100 мл) и добавляли Ν-хлорсукцинимид (3,47 г, 1,05 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 1 ч на водяной бане примерно при 40°С и летучий растворитель удаляли выпариванием при пониженном давлении. Остаток растворяли в смеси этилацетат-гексан (1:1, 150 мл), промывали водой (100 млх3), высушивали (безводный №ь8О4) и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (3,86 г, выход 99%) . Данное соединение использовали в последующей реакции без дополнительной очистки.
Получение 3.
Метил 5-метил-3-фенил-4,5-дигидро-5-изоксазолкарбоксилат (VI;).
Гидроксамоилхлорид, полученный в получении 2 (3,86 г, 24,8 ммоль), и метилметакрилат (4,0 мл,
37,2 ммоль, 1,5 экв.) растворяли в сухом диэтиловом эфире (120 мл) в атмосфере азота, смесь выдерживали при -78°С и добавляли триэтиламин (6,9 мл, 2,0 экв.). Смесь перемешивали в течение ночи, в это время она медленно подогревалась до комнатной температуры. Добавляли воду (100 мл) и затем смесь экстрагировали этилацетатом (100 млх2), промывали водой (100 мл), высушивали (безводный №ь8О4) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией (смесь 15% этилацетат-гексан) с получением указанного в заголовке соединения (5,34 г, выход 98%), которое затем идентифицировали !Н-ЯМР как смесь диастереомеров 1:1.
Ή-ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 6, 7 (м, 2Н), 6,5 (м, 3Н), 3,0 (д, 1=16,7 Гц, 1Н), 2,9 (с, 3Н), 2,3 (д, 1=16,7 Гц, 1Н), 0,8 (с, 3Н).
Получение 4.
5-Метил-3-фенил-4,5-дигидро-5-изоксазолкарбоновая кислота (VII;·!).
Соединение, полученное в получении 3 (соединение У!а, 5,34 г), растворяли в перегнанном тетрагидрофуране (120 мл) и добавляли 1Н водный раствор гидроокиси натрия (36,5 мл, 1,5 экв.) . Примерно через 4 ч смесь нейтрализовали 1Н водным раствором соляной кислоты и упаривали при пониженном давлении для удаления большей части тетрагидрофурана. Остаток растворяли в избытке этилацетата (>700 мл), промывали водой, высушивали (безводный №28О4) и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (4,77 г, выход 95%) в виде белого порошка. Данное соединение использовали в последующей реакции без дополнительной очистки.
Получение 5.
(38)-3-{[(Бензилокси)карбонил]амино}-5-(трет-бутокси)-2-гидрокси-5-оксопентил-2,6-дихлорбензоат (Х11а).
К N-бензилоксикарбонил-β-трет-бутиласпарагиновой кислоте (5,03 г, 15,6 ммоль) и ΝΜΜ (1,90 мл,
- 10 012080
17.1 ммоль) добавляли сухой тетрагидрофуран (60 мл) в атмосфере азота, смесь выдерживали при -15°С и к этому добавляли изобутилхлорформиат (2,12 мл, 16,3 экв.). Смесь перемешивали примерно в течение 20 мин. К реакционной смеси, выдерживаемой при 0°С, затем добавляли раствор диазометан-эфир (синтезирован из 2,0 экв. 1-метил-3-нитро-1-нитрозогуанидина, 60 мл) с получением диазокетона (= 30 мин). Добавляли смесь 30% НВг/АсОН (6,42 мл, 2,0 экв.) при 0°С. Полученную смесь перемешивали (30-60 мин), экстрагировали этилацетатом, дважды промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, высушивали (безводный Ыа28О4) и концентрировали при пониженном давлении с получением производного бромметилкетона (соединение X, 6,4 г).
Полученное таким образом производное бромметилкетона (соединение X, 4,36 г) и 2,6дихлорбензойную кислоту (2,28 г, 1,1 экв.) растворяли в диметилформамиде (18 мл), добавляли КР (1,58 г, 2,5 экв.) и смесь перемешивали в течение 2 ч с получением 2,6-дихлорбензоилоксиметилкетона (Х1а). Данное соединение растворяли в метаноле (20 мл) и подвергали взаимодействию при добавлении раствора ΝαΒΗ4 (412 мг) - метанол (40 мл) (-10°С - комнатная температура, 2 ч). Реакцию останавливали уксусной кислотой и реакционную смесь упаривали при пониженном давлении для удаления метанола. Остаток экстрагировали этилацетатом (50 млх2), промывали водой и водным раствором хлорида натрия, высушивали (безводный №28О4). концентрировали при пониженном давлении и разделяли-очищали колоночной хроматографией (смесь этилацетат-гексан 1:5) с получением указанного в заголовке соединения (4,80 г, выход 86%) в форме диастереомера.
!Н-ЯМР (400 МГц, СПС13) δ 7,3-7,2 (м, 8Н), 5,9 (м, 1Н), 5,2 (м, 4Н), 4,7 (м, 1Н), 2,9 (м, 1Н), 2,7 (м, 1Н), 1,4 (с, 9Н).
Получение 6.
(38)-3-Амино-5-(трет-бутокси)-2-гидрокси-5-оксопентил-2,6-дихлорбензоат (УШа).
Бензилоксикарбонильную группу соединения, полученного в получении 5, удаляли (Ρά/С) в атмосфере баллонного водорода в течение 40 мин с получением указанного в заголовке соединения (выход 100%).
!Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-сР) δ 8,2 (шир, 2Н), 7,6-7,5 (м, 3Н), 6,1 (м, 1Н), 4,4-3,9 (м, 3Н), 3,0-2,6 (м, 2Н), 1,4 (с, 9Н).
Пример 1. (38)-5-(Трет-бутокси)-3-{[(5-метил-3-фенил-4,5-дигидро-5-изоксазолил)карбонил]амино}-2,5-диоксопентил 2,6-дихлорбензоат (1а).
Смесь производного карбоновой кислоты, полученного в получении 4 (УПа, 300 мг, 1,46 ммоль), производного аминоспирта, полученного в получении 6 (УШа, 667 мг, 1,1 экв.), и НАТи (722 мг, 1,3 экв.) охлаждали до 0°С, добавляли триэтиламин (0,82 мл, 4,0 экв.) в растворителе ДМФА (5 мл) и полученную смесь подвергали взаимодействию в течение 5 ч. Растворитель выпаривали при пониженном давлении и остаток экстрагировали этилацетатом (200 млх2), промывали водой, водным раствором бикарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, высушивали (безводный №28О4), концентрировали при пониженном давлении и очищали колоночной хроматографией с получением соединения (1Ха) (810 мг, выход 98%). К данному соединению и реактиву Десс-Мартина (1,70 г, 3,0 экв.) добавляли сухой дихлорметан (25 мл) и смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Реакцию останавливали изопропиловым спиртом (3 мл). Твердое вещество удаляли фильтрованием через целит при пониженном давлении и фильтрат экстрагировали этилацетатом (20 млх2), промывали водой, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, высушивали (безводный №28О4), концентрировали при пониженном давлении и предварительно очищали колоночной хроматографией (смесь 36% этилацетат-гексан) с получением диастереомера указанного в заголовке соединения (780 мг).
!Н-ЯМР (400 МГц, СПС13) δ 7,8 (м, ΝΉ, 1Н), 7,6 (м, 2Н), 7,3 (м, 3Н), 7,2 (м, 3Н), 5,1-5,0 (м, 2Н), 4,8 (м, 1Н), 3,8 (м, 1Н), 3,2 (м, 1Н), 2,9-2,8 (м, 2Н), 1,7 (с, 3Н), 1,4 (с, 9Н).
Пример 2. (38)-5-[(2,6-Дихлорбензоил)окси]-3-{[(5-метил-3-фенил-4,5-дигидро-5-изоксазолил)карбонил]амино}-4-оксопентановая кислота (1аа).
Соединение, полученное в примере 1 (44 мг), растворяли в дихлорметане (2 мл) и добавляли трифторуксусную кислоту (1 мл) при 0°С. Смесь перемешивали в течение 2 ч, при этом она медленно подогревалась до комнатной температуры, и затем концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (1аа) в стехиометрическом количестве.
!Н-ЯМР (500 МГц, СПС13) δ 8,1 (м, 1Н), 7,5 (м, 2Н), 7,3 (м, 3Н), 7,2 (м, 3Н), 5,1-4,9 (м, 2Н), 4,9-4,8 (м, 1Н), 3,8 (м, 1Н), 3,2 (м, 1Н), 1,7 (м, 3Н).
Получение 7.
Трет-бутил (38)-3-амино-4-гидрокси-5-феноксипентаноат (УШЬ).
К Ν-бензилоксикарбонил-в-трет-бутиласпарагиновой кислоте (10,0 г, 31,0 ммоль) и ΝΜΜ (3,75 мл,
1.1 экв.) добавляли сухой тетрагидрофуран (120 мл) в атмосфере азота и смесь выдерживали при -15°С. К этому добавляли изобутилхлорформиат (4,22 мл, 1,05 экв.) и смесь перемешивали примерно в течение 20 мин. Реагенты выдерживали при 0°С, затем смешивали с раствором диазометан-эфир (синтезирован из 2,0 экв. 1-метил-3-нитро-1-нитрозогуанидина, 60 мл) с получением производного диазокетона («30 мин).
- 11 012080
Добавляли смесь 30% НВг/АсОН (12,83 мл, 2,0 экв.) с получением производного бромметилкетона (30-60 мин). Продукт экстрагировали этилацетатом, дважды промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, высушивали (безводный Ыа28О4) и концентрировали при пониженном давлении с получением производного бромметилкетона (12,9 г) в стехиометрическом количестве.
Полученное таким образом производное бромметилкетона (X, 12,9 г, 31,0 ммоль) и фенол (3,23 г,
1,2 экв.) растворяли в диметилформамиде (30 мл), добавляли КР (4,53 г, 2,5 экв.) и смесь перемешивали в течение 2 ч с получением феноксиметилкетона (Х!Ъ). Данное соединение растворяли в смеси метанол (40 мл) - ТГФ (100 мл) и подвергали взаимодействию при добавлении раствора ЫаВН4 (2,35 г) - метанол (40 мл) (-10°С - комнатная температура, 2 ч). Реакцию останавливали уксусной кислотой и реакционную смесь упаривали при пониженном давлении для удаления метанола. Остаток экстрагировали этилацетатом (50 млх2), промывали водой и водным раствором хлорида натрия, высушивали (безводный Ыа28О4), концентрировали при пониженном давлении и разделяли-очищали колоночной хроматографией (смесь этилацетат-гексан 1:7) с получением соединения (ХПЬ, 6,50 г, выход 50%) в форме диастереомера, аминогруппа которого защищена бензилоксикарбонилом.
1Н-ЯМР (400 МГц, СЭСГ) δ 7,3-7,2 (м, 8Н), 5,9 (м, 1Н), 5,2 (м, 4Н), 4,7 (м, 1Н), 2,9 (м, 1Н), 2,7 (м, 1Н), 1,4 (с, 9Н).
Бензилоксикарбонильную группу полученного выше соединения удаляли (Рб/С) в атмосфере баллонного водорода с получением указанного в заголовке соединения (4,16 г, выход 95%).
1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-бе) δ 8,1 (шир, 2Н), 7,3 (м, 5Н), 5,6 (м, 1Н), 4,1-4,0 (м, 3Н), 2,6 (м, 2Н), 1,4 (с, 9Н).
Пример 3. Трет-бутил (38)-3-{[(5-метил-3-фенил-4,5-дигидро-5-изоксазолил)карбонил]амино}-4оксо-5-феноксипентаноат (!Ъ).
Смесь производного карбоновой кислоты, полученного в получении 4 (УПа, 273 мг, 1,33 ммоль), аминоспирта, полученного в получении 7 (УШЬ, 412 мг, 1,1 экв.), и НАТи (657 мг, 1,3 экв.) охлаждали до 0°С, добавляли триэтиламин (0,74 мл, 4,0 экв.) в растворителе ДМФА (5 мл) и полученную смесь подвергали взаимодействию в течение 5 ч. Растворитель выпаривали при пониженном давлении и остаток экстрагировали этилацетатом (200 млх2), промывали водой, водным раствором бикарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, высушивали (безводный Ыа28О4), концентрировали при пониженном давлении и очищали колоночной хроматографией (смесь 30-40% ЕА/гексан) с получением соединения (ГХЬ) (545 мг, выход 88%). К данному соединению и реактиву Десс-Мартина (1,43 г, 3,0 экв.) добавляли сухой дихлорметан (25 мл) и смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Реакцию останавливали изопропиловым спиртом (2 мл). Твердое вещество удаляли фильтрованием через целит при пониженном давлении и фильтрат экстрагировали этилацетатом (20 млх2), промывали водой, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, высушивали (безводный Ыа28О4), концентрировали при пониженном давлении и предварительно очищали колоночной хроматографией (элюент: смесь 25% этилацетат-гексан) с получением диастереомера указанного в заголовке соединения (540 мг, выход 99%).
1Н-ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 7,8 (1Н, 1Н), 7,5 (м, 2Н), 7,3 (м, 3Н), 7,3 (м, 1Н), 7,1 (м, 1Н), 6,8 (м, 2Н), 6,7 (м, 1Н), 4,9 (с, 1Н), 4,7-4,6 (м, 2Н), 3,7 (д, 1=17 Гц, 1Н), 3,2 (д, 1=17 Гц, 1Н), 2,9 (м, 1Н), 2,8 (м, 1Н), 1,7 (с, 3Н), 1,4 (с, 9Н).
Пример 4. (38)-3-{[(5-Метил-3-фенил-4,5-дигидро-5-изоксазолил)карбонил]амино}-4-оксо-5-феноксипентановая кислота (!ЬЬ).
Соединение, полученное в примере 3 (530 мг, 1,13 6 ммоль), растворяли в дихлорметане (6 мл) и добавляли трифторуксусную кислоту (3 мл) при 0°С. Смесь перемешивали в течение 2 ч, при этом она медленно подогревалась до комнатной температуры, и затем концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (ГЬЬ) (4 65 мг) в стехиометрическом количестве.
Ή-ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 7,5 (м, 2Н), 7,3 (м, 3Н), 7,1 (ΝΉ, 1Н), 6,7 (м, 5Н), 5,0-4,6 (м, 2Н), 4,2 (м, 1Н), 3,8 (м, 1Н), 3,2 (м, 1Н), 3,0-2,7 (м, 2Н), 1,6 (с, 3Н).
Получение 8.
Этил 2-этилакрилат (ХУЬ).
К СиСN (26,9 мг, высушенному заранее в вакууме) добавляли в атмосфере азота примерно 500 мл сухого тетрагидрофурана. Смесь выдерживали при -78°С и медленно добавляли 100 мл бромида метилмагния (3,0 М раствор в диэтиловом эфире) при механическом перемешиании. Густую смесь перемешивали примерно в течение 30 мин при -78°С. Этил 2-бромметилакрилат (28,9 г, 150 ммоль, способ синтеза: УШегак 1. апб КатЬаиб М. 8уп1Ье818, 1982, 914), растворенный примерно в 30 мл сухого тетрагидрофурана, медленно добавляли к этому. Температуру реакционной смеси медленно повышали до комнатной температуры в течение 2 ч. Реакцию останавливали медленным добавлением насыщенного раствора хлорида аммония (»50 мл). Реакционную смесь фильтровали через целит для удаления осадка и затем промывали диэтиловым эфиром. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором бикарбоната натрия (300 млх2), высушивали (безводный №28О4) и концентрировали при пониженном давлении
- 12 012080 с получением 26,7 г (стехиометрическое количество) прозрачной жидкости. Данную жидкость анализировали 1Н-ЯМР (500 МГц, СЭС13) и подтверждали, что указанное в заголовке соединение с чистотой примерно 75% мас./мас.
Ή-ЯМР (500 МГц, СЭС13) δ 6,12 (1Н, с), 5,50 (1Н, с), 4,20 (2Н, кв, 1=7,3 Гц), 2,31 (2Н, квт), 1,28 (3Н, т, 1=7,3 Гц), 1,07 (3Н, т, 1=7,8 Гц).
Получение 9.
Этил 5-этил-3-фенил-4,5-дигидро-5-изоксазолкарбоксилат (М!Ь).
Соединение из получения 8 (XV;) подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получении 3, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 7,6 (м, 2Н), 7,4-7,3 (м, 3Н), 4,3-4,2 (м, 2Н), 4,0 (д, 1=17,2 Гц, 1Н), 3,4 (д, 1=17,2 Гц, 1Н), 2,1-2,0 (м, 2Н), 1,3 (т, 3Н), 1,0 (т, 3Н).
Получение 10.
Трет-бутил (3§)-3-амино-4-гидрокси-5-(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентаноат (МШс).
2,3,5,6-тетрафторфенол подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получениях 5 и 6, с получением указанного в заголовке соединения с общим выходом 72%.
Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ 8,2 (шир, 2Н), 7,6-7,5 (м, 1Н), 5,9 (м, 1Н), 4,3-4,41 (м, 3Н), 3,6 (м, 1Н), 2,7 (м, 1Н), 1,4 (с, 9Н).
Пример 5. Трет-бутил (3§)-3-{[(5-этил-3-фенил-4,5-дигидро-5-изоксазолил)карбонил]амино}-4оксо-5 -(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентаноат Цс).
Соединения из получений 9 и 10 подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получении 4 и примере 1, с получением указанного в заголовке соединения.
!Н-ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 7,6 (дд, 1=3,6, 1,6 Гц, 1Н), 7,6 (м, 2Н), 7,4-7,3 (м, 3Н), 6,7 (м, 1Н), 5,1-4,9 (м, 2Н), 4,9-4,8 (м, 1Н), 3,7 (дд, 1=17,6, 17,2 Гц, 1Н), 3,3 (1Н, д, 1=17,2 Гц), 3,0-2,8 (м, 1Н), 2,8-2,7 (м, 1Н),
2,1 (м, 1Н), 1,9 (м, 1Н), 1,4-1,3 (два с, 9Н), 1,0 (м,3Н).
Пример 6. (3§)-3-{[(5-Этил-3-фенил-4,5-дигидро-5-изоксазолил)карбонил]амино}-4-оксо-5-(2,3,5,6тетрафторфенокси) пентановая кислота Осс).
Соединение из примера 5 подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в примере 2, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ 7,6 (шир, 1Н), 7,6-7,5 (м, 2Н), 7,4-7,3 (м, 3Н), 6,8-6,7 (м, 1Н), 4,9-4,8 (м, 1Н), 4,5 (шир, 2Н), 3,7 (д, 1=16 Гц, 1Н), 3,3 (д, 1=16 Гц, 1Н), 3,3-3,0 (м, 1Н), 2,8-2,7 (м, 1Н), 2,1 (м, 1Н), 2,0-1,9 (м, 1Н), 1,0 (м, 3Н).
МС [М+Н]+ 497.
Получение 11.
Этил 5-этил-3-(1-нафтил)-4,5-дигидро-5-изоксазолкарбоксилат (М!с).
1- Нафтальдегид и этил 2-этилакрилат подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получениях 1, 2 и 3, с получением указанного в заголовке соединения.
!Н-ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 8,9 (д, 1=8,8 Гц, 1Н), 7,9-7,8 (м, 2Н), 7,6-7,4 (м, 4Н), 4,3-4,2 (м, 2Н), 4,0 (д, 1=17,2 Гц, 1Н), 3,4 (д, 1=17,2 Гц, 1Н), 2,1-2,0 (м, 2Н), 1,3 (т, 3Н), 1,0 (т, 3Н).
Пример 7. Трет-бутил (3§)-3-({[5-этил-3-(1-нафтил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4оксо-(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентаноат (И).
Соединения из получений 11 и 10 подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получении 4 и примере 1, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 8,9 (м, 1Н), 7,9-7,8 (м, 3Н), 7,6-7,4 (м, 4Н), 6,5-6,9 (м, 1Н), 5,1-4,9 (м, 2Н), 4,9 (м, 1Н), 3,9 (дд, 1Н), 3,5 (д, 1=17,2 Гц, 1Н), 3,0-2,9 (м, 1Н), 2,8 (м, 1Н), 2,2 (м, 1Н), 2,0 (м, 1Н), 1,4-
1,3 (два с, 9Н), 1,1 (м, 3Н).
Пример 8. (3§)-3-({[5-Этил-3-(1-нафтил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксо-5(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентановая кислота (Иб).
Соединение из примера 7 подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в примере 2, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 8,8 (м, 1Н), 7,9-7,7 (м, 3Н), 7,6-7,4 (м, 4Н), 6,7 (м, 1Н), 4,9 (м, 1Н), 4,5 (шир, 2Н), 3,9 (д, 1=17,2 Гц, 1Н), 3,5 (д, 1=17,2 Гц, 1Н), 3,1-2,9 (м, 1Н), 2,8-2,7 (м, 1Н), 2,2 (м, 1Н), 2,0 (м, 1Н), 1,0 (м, 3Н).
МС [М + МеОН +Ыа]+ 601.
Получение 12.
Этил 5-этил-3-(2-нафтил)-4,5-дигидро-5-изоксазолкарбоксилат (М!б).
2- Нафтальдегид и этил 2-этилакрилат подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получениях 1, 2 и 3, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (500 МГц, СЭС13) δ 8,7 (д, 1=8,8 Гц, 1Н), 7,8-7,7 (м, 2Н), 7,5-7,3 (м, 4Н), 4,3-4,2 (м, 2Н), 4,0 (д, 1=17,2 Гц, 1Н), 3,4 (д, 1=17,2 Гц, 1Н), 2,1-2,0 (м, 2Н), 1,3 (т,3Н), 1,0 (т, 3Н).
Пример 9. Трет-бутил (3§)-3-({[5-этил-3-(2-нафтил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4оксо-5 -(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентаноат Це).
- 13 012080
Соединения из получений 12 и 10 подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получении 4 и примере 1, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, СЭСР) δ 7,8-7,7 (м, 6Н), 7,5 (м, 2Н), 6,7 и 6,5 (м, 1Н), 5,1-4,9 (м, 2Н), 4,9-4,8 (м, 2Н), 3,8 (дд, 1=16 Гц, 1Н), 3,4 (д, 1=16 Гц, 1Н), 3,0 (м, 1Н), 2,8 (м, 1Н), 2,8-2,7 (м, 1Н), 2,2-2,1 (м, 1Н), 2,0 (м, 1Н), 1,4-1,3 (два с, 9Н), 1,1-1,0(м, 3Н).
Пример 10. (38)-3-({[5-Этил-3-(2-нафтил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксо-5(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентановая кислота Дее).
С соединения из примера 9 снимали защиту по той же методике, описанной в примере 2, и изомеры разделяли препаративной ТСХ с получением следующих двух соединений.
Низкополярный диастереомер:
Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ 12,4 (шир, 1Н), 8,7 (шир, 1Н), 8,1 (с, 1Н), 7,9-8,0 (м, 3Н), 7,8-7,9 (м, 1Н), 7,5-7,6 (м, 3Н), 5,2 (шир, 2Н), 4,7 (шир, 1Н), 3,8 (д, 1=17,2 Гц, 1Н), 3,5 (д, 1=17,6 Гц, 1Н), 2,7 (м, 1Н), 2,5 (м, 1Н), 2,0 (м, 1Н), 1,9 (м, 1Н), 0,9-0,8 (м, 3Н).
МС [М+Н]+ 547.
Высокополярный диастереомер:
Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-бе) δ 8,6 (шир, 1Н), 8,2 (с, 1Н), 8,0-7,9 (м, 3Н), 7,9 (м, 1Н), 7,6 (м, 2Н), 7,4 (м, 1Н), 5,0 (шир, 2Н), 4,8 (м, 1Н), 3,9 (д, 1=17,6 Гц, 1Н,), 3,6 (д, 1=17,6 Гц, 1Н,), 2,9-2,7 (м, 2Н), 2,1-2,0 (м, 1Н), 2,0-1,9 (м, 1Н), 0,9 (м, 3Н).
Получение 13.
Этил 5-этил-3-(1 -изохинолинил)-4,5-дигидро-5 -изоксазолкарбоксилат (νΒ).
1-Изохинолинальдегид и этил 2-этилакрилат подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получениях 1, 2 и 3. Указанное в заголовке соединение в виде активного хирального изомера разделяли ВЭЖХ на хиральной колонке ΟΌ (Эа1се1 СИеш1са1 ШбикРпек, 2,00 смх25 см, ОЭ00С1-1С005. 3% ί-РгОН в гексане, 220 нм), которое затем использовали на последующей стадии.
Ή-ЯМР (400 МГц, СЭСР) δ 9,25 (м, 1Н), 8,55 (д, 1Н), 7,85 (д, 1Н), 7,74-7,65 (м, 3Н), 4,29 (м, 2Н), 4,13 (д, 1Н), 3,71 (д, 1Н), 2,11 (м, 2Н), 1,33 (т, 3Н), 1,06 (т, 3Н).
Пример 11. Трет-бутил (38)-3-({[5-этил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксо-(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентаноат (II).
Соединения из получений 13 и 10 подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получении 4 и примере 1, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, СССР) δ 9,14 (м, 1Н), 8,53 (м, 1Н), 7,91-7,85 (м, 2Н), 7,74-7,64 (м, 3Н), 6,73-6,62 (м, 1Н), 5,30-4,91 (м, 3Н), 4,09 (два д, 1Н), 3,72 (два д, 1Н), 3,04-2,76 (м, 2Н), 2,24 (м, 1Н), 2,04 (м, 1Н), 1,45 и 1,35 (два с, 9Н), 1,08 (два т, 3Н).
Пример 12. (38)-3-({[5-Этил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4оксо-(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентановая кислота (ИР).
Соединение из примера 11 подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в примере 2, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ 9,02 (м, 1Н), 8,76 (м, 1Н), 8,59 (м, 1Н), 8,08-7,73 (м, 4Н), 7,61-7,32 (м, 1Н), 5,19-5,10 (м, 2Н), 4,93-4,65 (м, 1Н), 3,91 (два д, 1Н), 3,68 (два д, 1Н), 2,91-2,52 (м, 2Н), 2,10-1,94 (м, 2Н), 0,94 (два т, 3Н).
Масс: М + Н 548.
Пример 13. Трет-бутил 3-({[5-этил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентаноат Сд).
Соединение из получения 13 и трет-бутил 3-амино-5-фтор-4-гидроксипентаноат подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получении 4 и примере 1, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, СССР) δ 9,15 (м, 1Н), 8,55 (д, 1Н), 7,87-7,66 (м, 5Н), 5,22-4,89 (м, 3Н), 4,12 (два д, 1Н), 3,72 (два д, 1Н), 3,05-2,75 (м, 2Н), 2,22 (м, 1Н), 2,04 (м, 1Н), 1,45 и 1,34 (два с, 9Н), 1,07 (два т, 3Н).
Пример 14. 3-({ [5-Этил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4оксопентановая кислота Цдд).
Соединение из примера 13 подвергали взаимодействию по той же методике, описанной примере 2, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ 9,03 (м, 1Н), 8,67-8,59 (м, 2Н), 8,С8 (д, 1Н), 7,97-7,78 (м, 3Н), 5,265,07 (м, 2Н), 4,75 (м, 1Н), 3,94 (два д, 1Н), 3,67 (два д, 1Н), 2,88-2,58 (м, 2Н), 2,07-1,94 (м, 2Н), 0,96 (два т, 3Н).
Масс: М + Н 402.
Пример 15. Этил 3-({[5-этил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5фтор-4-оксопентаноат (IЬЬ).
Соединение из примера 14 подвергали взаимодействию по методике, описанной в ТеРгаИебгоп ЬеРРегк, 1994, 35 (52), 9693-9696, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, СССР) δ 9,15 (м, 1Н), 8,55 (д, 1Н), 7,89-7,67 (м, 5Н), 5,23-4,94 (м, 3Н), 4,18 (м,
- 14 012080
2Н), 4,11 (два д, 1Н), 3,72 (два д, 1Н), 3,08-2,82 (м, 2Н), 2,22 (м, 1Н), 2,05 (м, 1Н), 1,29-1,04 (м, 6Н). Получение 14.
Метил 5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолкарбоксилат) и разделение (VI!).
1-Изохинолинальдегид и метил 2-изопропилакрилат подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получениях 1, 2 и 3, с получением указанного в заголовке соединения. Из полученного таким образом соединения выделяли (5К)-активный хиральный изомер (9,7 мин - 11,7 мин) препаративной ВЭЖХ на хиральной колонке ΘΌ (Эа1се1 Сйеш1еа1 1пби81пе8, 2,00 смх25 см, ОЭ00С1-1 СОО5, 5% 1РгОН в гексане, 14 мл/мин, 220 нм) (другой (58)-изомер элюировали со временем удерживания 15,3-20,1 мин), которое затем использовали на последующей стадии (см. получение 23 для разделения после гидролиза).
Ή-ЯМР (500 МГц, СЭС13) δ 9,24 (м, 1Н), 8,55 (д, 1Н), 7,85 (д, 1Н), 7,72 (т, 3Н), 7,67 (м, 2Н), 4,11 (д, 1Н), 3,83 (с, 3Н), 3,74 (д, 1Н), 2,50 (септет, 1Н), 1,07 (д, 3Н), 1,02 (д, 3Н) .
Пример 16. Трет-бутил 5-фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентаноат (П1).
Соединение из получения 14 и трет-бутил 3-амино-5-фтор-4-гидроксипентаноат подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получении 4 и примере 1, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (500 МГц, СЭС13) δ 9,14 (м, 1Н), 8,55 (д, 1Н), 7,87-7,65 (м, 5Н), 5,23-4,93 (м, 2Н), 4,90 (м, 1Н), 4,05-4,00 (два д, 1Н), 3,84-3,79 (два, 1Н), 3,06-2,74 (м, 2Н), 2,40 (м, 1Н), 1,45 и 1,34 (два с, 9Н), 1,121,07 (м, 6Н).
Пример 17. 5-Фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-4-оксопентановая кислота (Ш).
Соединение из примера 16 подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в примере 2, с получением указанного в заголовке соединения ((58)-изомер, ΐίί-и, получали по той же методике).
Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ 9,00 (м, 1Н), 8,63-8,48 (м, 2Н), 8,08 (д, 1Н), 7,97 (м, 1Н) 7,87-7,76 (м, 2Н), 5,31-4,82 (шир, 2Н), 4,74 (м, 1Н), 3,91 (два д, 1Н), 3,73 (два д, 1Н), 2,88-2,61 (м, 2Н), 2,33 (м, 1Н), 0,98 (м, 6Н).
Масс: М + Н 416.
Получение 15.
Этил 5-этил-3-(4-хинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолкарбоксилат (νΐ§).
4-Хинолинальдегид и этил 2-этилакрилат подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получениях 1, 2 и 3, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 8,95 (д, 1Н), 8,89 (м, 1Н), 8,11 (д, 1Н), 7,83 (м, 1Н), 7,71 (м, 1Н), 7,65 (д, 1Н), 4,27 (м, 2Н), 4,01 (д, 1Н), 3,67 (д, 1Н), 2,10 (м, 2Н), 1,31 (т, 3Н), 1,02 (т, 3Н).
Пример 18. Трет-бутил 3-({[5-этил-3-(4-хинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5фтор-4-оксопентаноат (ΐί).
Соединение из получения 15 и трет-бутил 3-амино-5-фтор-4-гидроксипентаноат подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получении 4 и примере 1, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 8,97 (д, 1Н), 8,89 (м, 1Н), 8,17 (д, 1Н), 7,87-7,64 (м, 3Н), 7,36 (д, 1Н), 5,21-4,93 (м, 3Н), 3,93 (два д, 1Н), 3,48 (два д, 1Н), 3,05-2,78 (м, 2Н), 2,24 (м, 1Н), 2,03 (м, 1Н), 1,46 и 1,33 (два с, 9Н), 1,06 (два т, 3Н).
Пример 19. 3-({ [5-Этил-3-(4-хинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4оксопентановая кислота (Щ).
Соединение из примера 18 подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в примере 2, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ 9,16-9,10 (м, 2Н), 8,25-7,86 (м, 5Н), 5,20 (шир, 2Н), 4,75 (м, 1Н), 4,00-3,89 (два д, 1Н), 3,73 (два д, 1Н), 2,87-2,71 (м, 2Н), 2,26-2,05 (м, 2Н), 1,07 (два т, 3Н).
Масс: М + Н 402.
Получение 16.
Этил 3-(бензотиофен-2-ил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолкарбоксилат (VIII).
Оксим бензотиофен-2-альдегида (400 мг, 2,26 ммоль), полученный по той же методике, описанной в получении 1, растворяли в ТГФ (25 мл) и смесь выдерживали при 0°С. Этил 2-этилакрилат (434 мг, 1,5 экв.) и триэтиламин (7 капель) растворяли в ТГФ (5 мл), полученный таким образом раствор медленно добавляли к вышеуказанному и затем добавляли раствор гипохлорита натрия (6,0 мл). Реакционный раствор подогревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 ч. Добавляли воду (20 мл) и смесь экстрагировали этилацетатом (40 млх2), промывали водным раствором хлорида натрия (20 мл), высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией (смесь 20% этилацетат-гексан) с получением указанного в заголовке соединения (121 мг, выход 18%).
Ή-ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 7,82-7,75 (м, 2Н), 7,40-7,32 (м, 3Н), 4,28 (м, 2Н), 3,90 (д, 1Н), 3,31 (д,
- 15 012080
1Н), 2,07 (м, 2Н), 1,33 (т, 3Н), 1,01 (т, 3Н).
Пример 20. Трет-бутил 3-({[3-(бензотиофен-2-ил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-5-фтор-4-оксопентаноат (Ц).
Соединение из получения 16 и трет-бутил 3-амино-5-фтор-4-гидроксипентаноат подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получении 4 и примере 1, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 7,83-7,68 (м, 3Н), 7,42-7,35 (м, 3Н), 5,21-4,88 (м, 3Н), 3,80 (два д, 1Н), 3,38 (два д, 1Н), 3,03-2,78 (м, 2Н), 2,17 (м, 1Н), 2,01 (м, 1Н), 1,46 и 1,38 (два с, 9Н), 1,03 (два т, 3Н).
Пример 21. 3-({[3-(Бензотиофен-2-ил)-5-этил-4, 5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5фатор-4-оксопентановая кислота.
(3-({[3-(Бензотиофен-2-ил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентановая кислота) (Iкк).
Соединение из примера 20 подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в примере 2, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ 8,63 (м, 1Н), 8,11-7,79 (м, 3Н), 7,47-7,36 (м, 2Н), 5,24-5,06 (м, 2Н), 4,73 (м, 1Н), 3,79 (два д, 1Н), 3,53 (два д, 1Н), 2,83-2,58 (м, 2Н), 2,03-1,86 (м, 2Н), 0,91 (два т, 3Н).
Масс: М + Н 407.
Получение 17.
Этил 3-(1,3-диметил-1Н-индол-2-ил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолкарбоксилат (VII).
Оксим 1,3-диметил-1Н-индол-2-альдегида (356 мг, 2,07 ммоль) растворяли в дихлорметане (20 мл) и смесь выдерживали при 0°С. Этил 2-этилакрилат (345 мг, 1,3 экв.) и триэтиламин (6 капель) растворяли в дихлорметане (5 мл), полученный таким образом раствор медленно добавляли к вышеуказанному и затем добавляли раствор гипохлорита натрия (5,5 мл). Реакционный раствор подогревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 ч. Добавляли воду (20 мл) и смесь экстрагировали дихлорметаном (40 млх2), промывали водным раствором хлорида натрия (20 мл), высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией (смесь 15% этилацетат-гексан) с получением указанного в заголовке соединения (230 мг, выход 35%).
Ή-ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 7,60 (д, 1Н), 7,31 (м, 2Н), 7,12 (м, 1Н), 4,29 (м, 2Н), 3,98 (д, 1Н), 3,94 (с, 3Н), 3,40 (д, 1Н), 2,47 (с, 3Н), 2,03 (м, 2Н), 1,34 (т, 3Н), 1,04 (т, 3Н).
Масс: М + Н 315.
Пример 22. Трет-бутил (38)-3-({[3-(1,3-диметил-1Н-индол-2-ил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил] карбонил}амино)-4-оксо-5-(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентаноат (Е<).
Соединения из получений 17 и 10 подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получении 4 и примере 1, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 7,85-7,79 (м, 1Н), 7,57 (м, 1Н), 7,37-7,26 (м, 2Н), 7,13 (м, 1Н), 6,75-6,49 (т, 1Н), 5,12-4,90 (м, 3Н), 3,95 (два д, 1Н), 3,89 (два с,3Н), 3,45 (два д, 1Н), 3,03-2,79 (м, 2Н), 2,44 (два с, 3Н), 2,22 (м, 1Н), 2,01 (м, 1Н), 1,58 и 1,37 (два с, 9Н), 1,05 (два т, 3Н).
Пример 23. (38)-3-({[3-(1,3-Диметил-1Н-индол-2-ил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-4-оксо-5-(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентановая кислота (П1).
Соединение из примера 22 подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в примере 2, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-сЕ) δ 8,67 (шир, 1Н), 7,61-7,43 (м, 3Н), 7,27 (м, 1Н), 7,08 (м, 1Н), 5,20 (шир, 2Н), 4,83 (м, 1Н), 3,84 (два с,3Н), 3,76 (два д, 1Н), 3,59 (два д ,1Н), 2,91-2,60 (м, 2Н), 2,50 (два с, 3Н), 2,07-1,91 (м, 2Н), 0,95 (два т, 3Н).
Пример 24. Трет-бутил 3-({[3-(1,3-диметил-1Н-индол-2-ил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил] карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентаноат (И).
Соединение из получения 17 и трет-бутил 3-амино-5-фтор-4-гидроксипентаноат подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получении 4 и примере 1, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 7,79 (м, 1Н), 7,60 (м, 1Н), 7,32 (м, 2Н), 7,13 (м, 1Н), 5,20-4,90 (м, 3Н), 3,97-3,89 (м, 4Н), 3,46 (два д, 1Н), 3,03-2,77 (м, 2Н), 2,21 (м, 1Н), 2,01 (м, 1Н), 1,46 и 1,38 (два с, 9Н), 1,05 (два т, 3Н).
Пример 25. 3-({[3-(1,3-Диметил-1Н-индол-2-ил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентановая кислота (Епт).
Соединение из примера 24 подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в примере 2, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ 8,68 (шир, 1Н), 7,60 (м, 1Н), 7,45 (м, 1Н), 7,26 (м, 1Н), 7,07 (м, 1Н), 5,20 (шир, 2Н), 4,81 (м, 1Н), 3,84 (два с, 3Н), 3,76 (два д, 1Н), 3,59 (два д, 1Н), 2,94-2,59 (м, 2Н), 2,38 (два с, 3Н), 2,07-1,91 (м, 2Н), 0,95 (два т, 3Н).
Масс: М + Н 418.
- 16 012080
Получение 18. Этил 5-этил-3-(1-нафтилметил)-4,5-дигидро-5-изоксазолкарбоксилат (VI)).
1-Нафтилацетальдегид и этил 2-этилакрилат подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получениях 1, 2 и 3, с получением указанного в заголовке соединения.
1Н-ЯМР (500 МГц, СЭС13) δ 8,1-8,0 (д, 1=8 Гц, 1Н), 7,8 (д, 1=7,6 Гц, 1Н), 7,8-7,7 (д, 1=8 Гц, 1Н), 7,5-
7,4 (м, 2Н), 7,4-7,3 (м, 2Н), 4,1-4,0 (м, 4Н), 3,1 (д, 1=17,6 Гц, 1Н), 2,6 (д, 1=17,6 Гц, 1Н), 1,8-1,7 (м, 2Н), 1,2 (т, 3Н), 0,7 (т, 3Н).
Пример 26. Трет-бутил (38)-3-({[5-этил-3-(1-нафтилметил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-4-оксо-5-(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентаноат (Чш).
Соединения из получений 18 и 10 подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получении 4 и примере 1, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 8,0 (м, 1Н), 7,8 (м, 1Н), 7,8 (м, 1Н), 7,7 (м, 1Н), 7,5 (м, 2Н), 7,4-7,3 (м, 2Н), 6,7 (м, 1Н), 5,0-4,9 (м, 2Н), 4,9-4,8 (м, 1Н), 4,2-4,0 (м, 2Н), 3,1 (дд, 1=24,С Гц, 1Н), 2,9-2,6 (м, 3Н), 1,9 (м, 1Н), 1,7 (м, 1Н), 1,4 (два с, 9Н), 0, 8 (м, 3Н) .
Пример 27. (38)-3-({[5-Этил-3-(1-нафтилметил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4оксо-5-(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентановая кислота Ции).
Соединение из примера 26 подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в примере 2, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ 12,3 (шир, 1Н), 8,4 (шир, 1Н), 8,0 (м, 1Н), 7,9 (м, 1Н), 7,8 (м, 1Н), 7,5-7,4 (м, 5Н), 5,0 (шир, 2Н), 4,7 (м, 1Н), 4,0 (с, 2Н), 3,3 (м, 1Н), 3,1 (м, 1Н), 2,8 (м, 2Н), 2,5 (м, 1Н), 1,8 (м, 1Н), 1,7 (м, 1Н), 0,8 (м, 3Н).
МС: [М+Н]+ 516.
Пример 28. (38)-5-(Трет-бутокси)-3-[({5-этил-3-[2-(1-нафтил)этил]-4,5-дигидро-5-изоксазолил}карбонил)амино]-2,5-диоксопентил 2,6-дихлорбензоат (Σπ).
1-Нафтилпропиональдегид и соединение из получения 6 подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получениях 1, 2, 3 и 4 и примере 1, с получением указанного в заголовке соединения.
1Н-ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 8,00 (д, 1Н), 7,85 (м, 1Н), 7,76 (м, 2Н), 7,57-7,28 (м, 7Н), 7,34-7,27 (м, 3Н), 5,20-5,05 (м, 2Н), 4,94 и 4,88 (два м, 1Н), 3,39-3,27 (м, 3Н), 2,97-2,72 (м,5Н), 2,07 (м, 1Н), 1,86 (м, 1Н), 1,46 и 1,45 (два с, 9Н), 1,00 и 0,96 (два т, 3Н).
Пример 29. (38)-5-[(2,6-Дихлорбензоил)окси]-3-[({5-этил-3-[2-(1-нафтил)этил]-4,5-дигидро-5-изоксазолил}карбонил)амино]-4-оксопентановая кислота (Чоо).
Соединение из примера 28 подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в примере 2, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ 8,45 (шд, 1Н), 8,06 (д, 1Н), 7,90 (д, 1Н), 7,77 (д, 1Н), 7,60-7,37 (м, 7Н), 5,21-5,03 (м, 2Н), 4,73 (м, 1Н), 3,06 (м, 2Н), 2,65 (шд, 4Н), 1,91 и 1,74 (два м, 2Н), 0,84 (м, 3Н).
Получение 19.
Этил 5-этил-3 -[(1 -нафтилокси)метил]-4,5-дигидро-5 -изоксазолкарбоксилат (VII).
Производное 2-нитроэтанолпиранила (смотри 8уп111С515. 1993, 12, 1206-1208) и этил 2-этилакрилат подвергали взаимодействию и с полученного продукта снимали защиту с получением этил 5-этил-(3гидроксиметил)-4,5-дигидро-5-изоксазолкарбоксилата (23%).
Данное соединение подвергали бромированию (СВг4, РРй3, 94%) и затем подвергали взаимодействию с 1-нафтолом ^аН, ДМФА, 82%) с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 8,20 (м, 1Н), 7,81 (д, 1Н), 7,55-7,42 (м, 3Н), 7,36 (м, 1Н), 6,88 (д, 1Н), 5,01 (дд, 2Н), 4,22 (м, 2Н), 3,61 (д, 1Н), 3,07 (д, 1Н), 1,97 (м, 2Н), 1,27 (т, 3Н), 0,93 (т, 3Н).
Пример 30. (38)-3-[({5-Этил-3-[(1-нафтилокси)метил]-4,5-дигидро-5-изоксазолил}карбонил)амино]-
4- оксо-5-(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентановая кислота Црр).
Соединения из получений 19 и 10 подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получении 4 и в примерах 1 и 2, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ 8,51 (шир, 1Н), 8,13 (м, 1Н), 7,87 (м, 1Н), 7,54-7,38 (м, 5Н), 7,02 (м, 1Н), 5,18-4,97 (м, 4Н), 4,71 (м, 1Н), 3,58 (два д, 1Н), 3,21 (два д, 1Н), 2,68 (м, 2Н), 1,97 (м, 1Н), 1,81 (м, 1Н), 0,86 (два т, 3Н).
Масс: М + Н 577.
Пример 31. (38)-3-{[(3-{[(4-Хлор-1-нафтил)окси]метил}-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил)карбонил]амино}-4-оксо-5-(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентановая кислота (Чс|с.|).
Бромпроизводное, полученное в качестве промежуточного продукта в получении 19, и 4-хлор-1нафтол подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получении 19, с получением этил
5- этил-3-[(4-хлор-1-нафтилокси)метил]-4,5-дигидро-5-изоксазолкарбоксилата, который затем подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получении 4 и примерах 1 и 2, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ 8,65 (м, 1Н), 8,24-8,09 (м, 2Н), 7,78-7,35 (м, 4Н), 7,06 (м, 1Н), 5,175,07 (м, 4Н), 4,82-4,69 (м, 1Н), 3,45 (два д, 1Н), 3,23 (два д, 1Н), 2,83-2,52 (м, 2Н), 1,96-1,79 (м, 2Н), 0,86
- 17 012080 (два т, 3Н).
Масс: М + Н 611.
Получение 20.
Трет-бутил (38)-3 -амино-4-гидроксибутаноат.
К Ν-бензилоксикарбонил-в-трет-бутиласпарагиновой кислоте (3,0 г, 9,28 ммоль) и ΝΜΜ (1,12 мл, 1,1 экв.) добавляли сухой тетрагидрофуран (20 мл) в атмосфере азота. Реакционный раствор выдерживали при 0°С. Добавляли изобутилхлорформиат (1,26 мл, 1,05 экв.) и смесь перемешивали примерно в течение 40 мин. Полученную таким образом суспензию фильтровали в атмосфере азота и полученный раствор добавляли к №ВН-| (702 мг, 2,0 экв.) [смесь метанол (10 мл) - сухой тетрагидрофуран (20 мл)] при -78°С. Полученную смесь медленно подогревали до комнатной температуры (в течение 2 ч). Реакцию останавливали уксусной кислотой (2,3 мл) и реакционный раствор упаривали при пониженном: давлении для удаления метанола. Остаток экстрагировали этилацетатом (50 млх2), промывали водой и водным раствором хлорида натрия, высушивали (безводный №ь8О4). концентрировали при пониженном давлении и разделяли-очищали колоночной хроматографией (смесь этилацетат-гексан, 1:5) с получением спирта (2,52 г, выход 88%).
Бензилоксикарбонильную группу полученного выше соединения удаляли (Рй/С) в атмосфере баллонного водорода с получением указанного в заголовке соединения (выход 100%).
Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-й6) δ 4,60 (шс, 1Н), 3,21 (м, 2Н), 2,96 (м, 1Н), 2,41 (дд, 1Н), 2,03 (дд, 1Н), 1,40 (с, 9Н).
Получение 21.
Трет-бутил (38)-4-гидрокси-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил] карбонил}амино)бутаноат (XVI).
Соединение из получения 14 подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получении 4, с получением активного производного карбоновой кислоты (VIII). Смесь указанного активного производного карбоновой кислоты (УНГ, 22 4 мг, 0,7 9 ммоль), аминоспирта, полученного в получении 20 (166 мг, 1,2 экв.), и НАТи (390 мг, 1,3 экв.) охлаждали до 0°С, добавляли триэтиламин (0,33 мл, 3,0 экв.) в растворителе ДМФА (5 мл) и полученную смесь подвергали взаимодействию в течение 2 ч. Растворитель выпаривали при пониженном давлении и остаток экстрагировали этилацетатом (50 млх2), промывали водой, водным раствором бикарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, высушивали (безводный №28О4), концентрировали при пониженном давлении и очищали колоночной хроматографией (смесь 60-70% ЕА/Нех) с получением указанного в заголовке соединения (330 мг, выход 95%).
Ή-ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 9,16 (д, 1Н), 8,55 (д, 1Н), 7,85 (д, 1Н), 7,73-7,70 (м, 3Н), 7,56 (ΝΠ, д, 1Н), 4,26 (м, 1Н), 4,12 (д, 1Н), 4,04 (д, 1Н), 3,79 (д, 1Н), 3,75 (т, 2Н), 2,94 (шс, 1Н), 2,57 (м, 2Н), 2,41 (м, 1Н), 1,10 и 1,07 (два д, 6Н).
Пример 32. 6-(Трет-бутил)1-этил(2Е,48)-4-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5изоксазолил]карбонил}амино)гексендиоат (к|).
К соединению из получения 21 (107 мг, 0,24 ммоль) и реактиву Десс-Мартина (153 мг, 1,5 экв.) добавляли сухой дихлорметан (4 мл), и смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре и концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли сухой ТГФ (3 мл) и (карбоэтоксиметилен)трифенилфосфоран) (108 мг, 1,3 экв.) и смесь кипятили с обратным холодильником в течение 2 ч. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (20 млх 2), промывали водой, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, высушивали (безводный Να28Ο4), концентрировали при пониженном давлении и предварительно очищали препаративной хроматографией (элюент: смесь 40% этилацетат-гексан) с получением указанного в заголовке соединения (98 мг, выход 80%) с соотношением диастереомеров 3:1.
Ή-ЯМР (500 МГц, СЭС13) большего изомера δ 9,15 (д, 1Н), 8,54 (д, 1Н), 7,86 (д, 1Н), 7,74-7,62 (м, 4Н), 6,93 (дд, 1Н), 6,00 (дд, 1Н), 4,98 (м, 1Н), 4,19 (квт, 2Н), 4,02 (д, 1Н), 3,81 (д, 1Н), 2,58 (м, 2Н), 2,43 (м, 1Н), 1,36 (с, 9Н), 1,27 (т, 3Н), 1,07 и 1,06 (два д, 6Н).
Пример 33. (38,4Е)-6-Этокси-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-6-оксо-4-гексеновая кислота Цгг).
Соединение из примера 32 подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в примере 2, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (500 МГц, МеОЭ-й3) большего изомера δ 9,04 (д, 1Н), 8,61 (д, 1Н), 8,52 (д, 1Н), 7,95 (д, 1Н), 7,81-7,68 (м, 3Н), 6,94 (дд, 1Н), 6,00 (дд, 1Н), 5,01 (м, 1Н), 4,17 (квт, 2Н), 3,90 (д, 1Н), 3,82 (д, 1Н), 2,71 (д, 2Н), 2,39 (септет, 1Н), 1,26 (т, 3Н), 1,07 и 1,06 (два д, 6Н).
МС: М + Н 454.
Пример 34. Трет-бутил (38,4Е)-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-(метилсульфонил-4-пентеноат) Цг).
Безводный дихлорметан (4 мл) добавляли к соединению из примера 21 (109 мг, 0,25 ммоль) и реактиву Десс-Мартина (157 мг, 1,5 экв.), и смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре, и концентрировали при пониженном давлении. Реакцию останавливали изопропиловым спиртом (0,5 мл).
- 18 012080
Твердое вещество удаляли фильтрованием с использованием целита при пониженном давлении. Фильтрат экстрагировали этилацетатом (20 млх 2), промывали водой, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, высушивали (безводный №28О4), концентрировали при пониженном давлении с получением альдегида (540 мг, выход 99%).
Диэтилметилсульфонометанфосфонат (113 мг, 2,0 экв., 8уиШе818, 1969, 170) растворяли в ТГФ (3 мл) и добавляли №1Н (60% дисперсия в минеральном масле, 20 мг, 2,0 экв.) и полученный выше альдегид, и смесь кипятили с обратным холодильником в течение 2 ч. После экстракции этилацетатом (20 млх 2) экстракт промывали водой, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, высушивали (безводный №28О4), концентрировали при пониженном давлении и очищали препаративной хроматографией (смесь 60% этилацетат/гексан) с получением указанного в заголовке соединения (52 мг, выход 41%) с соотношением диастереомеров 4:1.
Ή-ЯМР (500 МГц, СЭСЕ) большего изомера δ 9,14 (д, 1Н), 8,55 (д, 1Н), 7,86 (д, 1Н), 7,76-7,65 (м, 4Н), 6,92 (дд, 1Н), 6,57 (дд, 1Н), 5,03 (м, 1Н), 4,02 (д, 3,81 (д, 1Н), 2,94 (с, 3Н), 2,61 (м, 2Н), 2,41 (септет, 1Н), 1,36 (с, 9Н), 1,10 и 1,08 (два д, 6Н) .
Пример 35. (38,4Е)-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-(метилсульфонил)-4-пентеновая кислота (Ιδδ).
Соединение из примера 34 подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в примере 2, с получением указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (500 МГц, МеОО-сЕ) большего изомера δ 9,04 (д, 1Н), 8,52 (д, 1Н), 7,95 (д, 1Н), 7,82-7,69 (м, 3Н), 6,90 (дд, 1Н), 6,71 (дд, 1Н), 5,06 (м, 1Н), 3,86 (м, 2Н), 2,98 (с, 3Н), 2,76 (д, 2Н), 2,39 (м, 1Н), 1,08 и 1,06 (два д, 6Н).
МС: М + Н 460.
Способ получения примеров 36-42.
Соединения, которые получали взаимодействием (изо)хинолин-альдегида (или 1- или 2нафтальдегида) и этил 2-этилакрилата (или этил 2-пропилакрилата) по той же методике, описанной в получениях 1, 2 и 3 (или получениях 1 и 16), очищали, если необходимо, препаративной ВЭЖХ с использованием хиральной колонки ОЭ для выделения активных хиральных изомеров. Выделенные активные хиральные или неактивные хиральные изомеры гидролизовали по той же методике, описанной в получении 4, и полученные соединения подвергали взаимодействию с трет-бутил 3-амино-5-фтор-4гидроксипентаноатом по той же методике, описанной в примерах 1 и 2, с получением указанных в заголовках соединений из последующих примеров 36-42.
Пример 36. 5-Фтор-3-({[(58)-3-(1-изохинолинил)-5-пропил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-4-оксопентановая кислота (Ш).
Ή-ЯМР (500 МГц, ДМСО-а6) δ 9,02 (т, 1Н), 8,61 (м, 2Н), 8,08 (д, 1Н), 7,96 (м, 1Н), 7,85 (т, 1Н), 7,78 (м, 1Н), 5,05 (шс, 2Н), 4,73 (м, 1Н), 3,97-3,92 (дд, 1Н), 3,70-3,65 (два д, 1Н), 2,90-2,70 (два м, 2Н), 2,03 (м, 1Н), 1,91 (м, 1Н), 1,48 (м, 1Н), 1,32 (м, 1Н), 0,93 (м,3Н).
Масс: М + Н 416.
Пример 37. (3-({[(58)-5-Этил-3-(1-нафтил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4оксопентановая кислота (1ии).
Ή-ЯМР (500 МГц, ДМСО-а6) δ 8,84 (с, 1Н), 8,59 (шс, 1Н), 8,02 (м, 2Н), 7,75 (с, 1Н), 7,60 (м, 3Н), 5,01 (шс, 2Н), 4,73 (м, 1Н), 3,87-3,82 (дд, 1Н), 3,70-3,65 (два д, 1Н), 2,82-2,73 (два м, 2Н), 2,05 (м, 1Н), 1,95 (м, 1Н), 0,96 (м, 3Н).
Масс: М + Н 401.
Пример 38. (3-({ [(58)-5-Этил-3-(2-хинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-
4-оксопентановая кислота (Ινν).
Ή-ЯМР (500 МГц, ДМСО-ае) δ 8,61 (дд, 1Н), 8,41 (м, 1Н), 8.02 (м, 3Н), 7,79 (т, 1Н),7,65 (т, 1Н), 5,22-5,06 (м, 1Н), 4,72 (м, 1Н), 4,49-4,28 (м, 1Н), 3,84 (м, 1Н), 3,54 (м, 1Н), 2,99-2,54 (два м, 2Н), 2,01 (м, 1Н), 1,91, (м, 1Н), 0,91 (м, 3Н).
Масс: М + Н 402.
Пример 39. (3-({[(5К)-5-Этил-3-(3-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5фтор-4-оксопентановая кислота (Ι\ν\ν).
Ή-ЯМР (400 МГц, СОС1;) δ (9,25 и 9,16 (два с, 1Н), 8,08-7,64 (м, 5Н), 4,90-4,84 (м, 1Н), 4,79-4,54 (м, 2Н), 4,01-3,93 (два д, 1Н), 3,54 (д, 1Н), 3,03-2,87 (м, 2Н), 2,27-2,19 и 2,10-2,01 (два м, 2Н), 1,10-1,06 (м, 3Н).
Масс: М + Н 402.
Пример 40. 3-({ [5-Этил-3-(8-хинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4оксопентановая кислота (1хх).
Ή-ЯМР (500 МГц, С1)С13) δ 8,98 и 8,93 (два м, 1Н), 8,56-8,21 (м, 1Н), 8,03-7,94 (м, 2Н), 7,73 (шс, 1Н), 7,60 (м, 1Н), 7,53-7,48 (два м, 1Н), 4,94-4,64 (м, 3Н), 4,27-4,22 (два д, 1Н), 3,77 (д, 1Н), 3,07 и 2,92 (два м, 2Н), 2,31-2,22 (м, 1Н), 2,12-2,05 (м, 1Н), 1,10 (т, 3Н).
Масс: М + Н 402.
- 19 012080
Пример 41. 3-({[5-Этил-3-(3-хинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4оксопентановая кислота (Гуу).
Ή-ЯМР (400 МГц, СЭСЕ) δ 9,32 и 9,25 (два д, 1Н), 8,16-8,03 (м, 2Н), 7,83-7,73 (м, 3Н), 7,62-7,55 (м, 1Н), 4,95-4,76 (м, 3Н), 3,86 (два д, 1Н), 3,45-3,39 (два д, 1Н), 3,17-3,01 (два м, 1Н), 2,90-2,82 (м, 1Н), 2,272,20 (м, 1Н), 2,09-2,00 (м, 1Н), 1,10-1,05 (м, 3Н).
Масс: М + Н 402.
Пример 42. 5-фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(2-хинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-4-оксопентановая кислота (Γζζ).
Ή-ЯМР (400 МГц, СЭСЕ,) δ 8,24 (м, 1Н), 8,14 (м, 1Н), 8,04 (д, 1Н), 7,88 (д, 1Н), 7,79 (м, 1Н), 7, 65 (м, 1Н), 7,51 (шс, 1Н), 5,13-4,35 (м, 3Н), 4,05-4,00 (два д, 3,73 (д, 1Н), 3,05-2,82 (м, 2Н), 2,42 (м, 1Н), 1,10 (м, 6Н).
Масс: М + Н 416.
Способ получения примеров 43-48.
Соединения, полученные взаимодействием ароматического альдегида (Вюогд. Мей. Сйет. Ьей., 1996, 6, р. 2173, 1 Огд. Сйет., 1978, 43, 1372) и этил 2-этилакрилата (или этил 2-изопропилакрилата) по той же методике, описанной в получениях 1, 2 и 3 (или получениях 1 и 16), очищали, если необходимо, препаративной ВЭЖХ с использованием хиральной колонки ΟΌ для выделения активных хиральных изомеров. Выделенные активные хиральные или неактивные хиральные изомеры гидролизовали по той же методике, описанной в получении 4, и полученные соединения подвергали взаимодействию с третбутил 3-амино-5-фтор-4-гидроксипентаноатом по той же методике, описанной в примерах 1 и 2, с получением указанных в заголовках соединений из последующих примеров 43-48.
Пример 43. 3-({[5-Этил-3-(2-изопропилфенил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5фтор-4-оксопентановая кислота (Гаа1).
Ή-ЯМР (500 МГц, ДМСО-й6) δ 8,53 (шс, 1Н), 7,40 (м, 2Н), 7,32 (м, 1Н), 7,25 (м, 1Н), 5,02 (шс, 2Н), 4,72 (м, 1Н), 3,60-3,54 (два д, 1Н), 3,46-3,43 (два д, 1Н), 3,40 (м, 1Н), 2,78-2,60 (два м, 2Н), 1,95 (м, 1Н), 1,85 (м, 1Н), 1,14 (с, 6Н), 0,88 (м, 3Н).
Масс: М + Н 393.
Пример 44. 3-[({3-[3-(Трет-бутил)фенил]-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил}карбонил)амино]-5фтор-4-оксопентановая кислота (Гаа2).
Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-й6) δ 8,56 (дд, 1Н), 7,67 (с, 1Н), 7,48 (м, 1Н), 7,38 (д, 2Н), 5,24-5,12 (кв, 1Н), 4,76-4,69 (м, 1Н), 4,59-4,26 (м, 1Н), 3,68 (м, 1Н), 3,49-3,43 (два д, 1Н), 2,96-2,56 (два м, 2Н), 1,98 (м, 1Н), 1,85 (м, 1Н), 1,29 (с, 9Н), 0,89 (д, 3Н).
Масс: М + Н 407.
Пример 45. 3-[({3-[4-(Трет-бутил)фенил]-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил}карбонил)амино]-5фтор-4-оксопентановая кислота (Гаа3).
Ή-ЯМР (500 МГц, ДМСО-й6) δ 8,52 (шс, 1Н), 7,58 (м, 2Н), 7,43 (дд, 2Н), 5,10 (шс, 2Н), 4,71-4,65 (м, 1Н), 3,65-3,59 (два д, 1Н), 3,40-3,35 (два д, 1Н), 2,86-2,60 (два м, 2Н), 1,94 (м, 1Н), 1,82 (м, 1Н), 1,24 (с, 9Н), 0,86 (м, 3Н).
Масс: М + Н 407.
Пример 46. 5-Фтор-3-({[(5В)-5-изопропил-3-(2-изопропилфенил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановая кислота (Гаа4).
Ή-ЯМР (500 МГц, СЭСЕ,) δ 7,60-7,53 (м, 1Н), 7,41 (м, 2Н), 7,27-7,23 (м, 2Н), 5,20-4,91 (м, 1Н), 4,71 (м, 1Н), 4,54-4,42 (м, 1Н), 3,69-3,64 (два д, 1Н), 3,45-3,38 (м, 2Н), 3,12-2,77 (м, 2Н), 2,32 (м, 1Н), 1,22 (д, 6Н), 1,05 (д, 6Н).
Масс: М + Н 407.
Пример 47. 3-[({(5В)-3-[3-(Трет-бутил)фенил]-5-изопропил-4,5-дигидро-5-изоксазолил}карбонил) амино]-5-фтор-4-оксопентановая кислота (Гаа5).
Ή-ЯМР (500 МГц, СОС1;) δ 7,69 (с, 1Н), 7,48 (д, 1Н), 7,41 (д, 1Н), 7,35 (т, 1Н), 4,74-4,50 (м, 3Н), 3,69 (д, 1Н), 3,40 (д, 1Н), 3,06-2,77 (м, 2Н), 2,32 (м, 1Н), 1,33 (с, 9Н), 1,04 (м, 6Н).
Масс: М + Н 421.
Пример 48. 3-{[(3-[1,1'-Бифенил]-3-ил-5-изопропил-4,5-дигидро-5-изоксазолил)карбонил]амино}-5фтор-4-оксопентановая кислота (Гаа6).
3- Бифенилкарбоксальдегид (см. 8уШ11С515. 2003, 337) использовали в качестве исходного вещества для получения указанного в заголовке соединения.
Ή-ЯМР (500 МГц, ДМСО-й6) δ 8,42 (шс, 1Н), 7,87 (д, 1Н), 7,73-7,69 (м, 4Н), 7,52 (м, 1Н), 7,45 (м, 2Н), 7,38 (м, 1Н), 5,03 (шс, 2Н), 4,63 (м, 1Н), 3,73-3,57 (м, 2Н), 2,67-2,63 (два м, 2Н), 2,22 (м, 1Н), 0,89 (м, 6Н).
Масс: М + Н 441.
Способ получения примеров 49-59.
4- Замещенные пиридин-2-карбоксальдегиды получали способом, описанным в патенте США № 6043248, ЮС 1982, 47, р. 4315, и их подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в
- 20 012080 получениях 1, 2 и 3 (или получениях 1 и 16). Полученные соединения очищали, если необходимо, препаративной ВЭЖХ с использованием хиральной колонки ОЭ для выделения активных хиральных изомеров. Выделенные активные хиральные или неактивные хиральные изомеры гидролизовали по той же методике, описанной в получении 4, и полученные соединения подвергали взаимодействию с трет-бутил 3амино-5-фтор-4-гидроксипентаноатом по той же методике, описанной в примерах 1 и 2, с получением указанных в заголовках соединений из последующих примеров 49-59.
Пример 49. 3-({ [5-Этил-3-(2-пиридинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4оксопентановая кислота Цаа7).
Ή-ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6) δ 12,41 (шс, 1Н), 8,61 (с, 1Н), 8,59-8,53 (дд, 1Н), 7,87 (м, 1Н), 7,44 (м, 1Н), 5,19-5,04 (два д, 1Н), 4,70 (м, 1Н),4,45-4,27 (м, 1Н), 3,67 (м, 1Н), 3,42 (м, Ш), 2,95-2,53 (два м, 2Н), 1,96 (м, 1Н), 1,86 (м, 1Н), 0,85 (м, 3Н).
Масс: М + Н 352.
Пример 50. 3-[({3-[4-(Трет-бутил)-2-пиридинил]-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил}карбонил)амино]-5-фтор-4-оксопентановая кислота Цаа8).
Ή-ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 8,58 (д, 1Н), 7,90 (с, 1Н), 7,65 (шс, 1Н), 7,45-7,39 (м, 1Н), 4,98-4,68 (м, 3Н), 3,92 и 3,88 (два д, 1Н), 3,52 и 3,47 (два д, 1Н), 3,05-2,86 (м, 2Н), 2,23-2,18 (м, 1Н), 2,08-2,00 (м, 1Н), 1,38 (с, 9Н), 1,05 (т, 3Н).
Масс: М + Н 408.
Пример 51. 3-[({(5К)-3-[4-(Трет-бутил)-2-пиридинил]-5-изопропил-4,5-дигидро-5-изоксазолил}карбонил)амино]-5-фтор-4-оксопентановая кислота Паа9).
Ή-ЯМР (400 МГц, СОС1;) δ 8,58 (д, 1Н), 7,88 (д, 1Н), 7,61 (шс, 1Н), 7,43 (м, 1Н), 4,84 (м, 1Н), 4,60 (шс, 2Н), 3,89-3,82 (два д, 1Н), 3,60-3,55 (два д, 1Н), 3,04-2,86 (м, 2Н), 2,38 (м, 1Н), 1,38 (с, 9Н), 1,07 (м, 6Н).
Масс: М + Н 422.
Пример 52. 3-({[5-Этил-3-(4-изобутил-2-пиридинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-
5-фтор-4-оксопентановая кислота Цаа10).
Ή-ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6) δ 8,58-8,52 (дд, 1Н), 8,49 (с, 1Н), 7,68 (с, 1Н), 7,27 (с, 1Н), 5,19-5,04 (м, 1Н), 4,69 (м, 1Н), 4,46-4,29 (м, 1Н), 3,68 (м, 3,41-3,37 (дд, 1Н), 2,93-2,46 (м, 4Н), 1,95-1,85 (два м, 3Н), 0,86-0,82 (м, 9Н).
Масс: М + Н 408.
Пример 53. 3-({[3-(4-Ацетил-2-пиридинил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5фтор-4-оксопентановая кислота Цаа11).
Ή-ЯМР (500 МГц, СОС1;) δ 8,79 (д, 1Н), 8,35 (с, 1Н), 7,76 (д, 1Н), 7,46 (шс, 1Н), 4,84-4,40 (м, 3Н), 3,90-3,85 (два д, 1Н), 3,51-3,46 (два д, 1Н), 3,04-2,84 (м, 2Н), 2,65 (с, 3Н), НННкбкбк2,16 (м, 1Н), 2,02 (м, 1Н), 1,03 (м, 3Н).
Масс: М + Н 394.
Пример 54. 3-({ [3-(4-Циклопропил-2-пиридинил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}) амино)-5-фтор-4-оксопентановая кислота Цаа12)
Ή-ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6) δ 12,39 (шс, 1Н), 8,41 (т, 1Н), 7,56 (д, 1Н), 7,12 (м, 1Н), 5,19-5,04 (м, 1Н), 4,72-4,66 (м, 1Н), 4,46-4,27 (м, 1Н), 3,69-3,63 (м, 1Н), 3,39-3,35 (два д, 1Н), 2,80-2,74 (м, 1Н), 2,632,52 (м, 1Н), 2,00-1,80 (м, 3Н), 1,06 (м, 2Н), 0,86-0,80 (м, 5Н).
Масс: М + Н 392.
Пример 55. 3-({ [3-(4-Циклопентил-2-пиридинил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-5-фтор-4-оксопентановая кислота Цаа13).
Ή-ЯМР (500 МГц, СОС1;) δ 8,50 (д, 1Н), 7,67 (м, 2Н), 7,26 (м, 1Н), 4,88-4,82 (м, 1Н), 4,65 (шс, 2Н), 3,88-3,81 (два д, 1Н), 3,45-3,41 (два д, 1Н), 3,05 (м, 1Н), 2,96-2,80 (м, 2Н), 2,20-2,12 (м, 3Н), 2,02-1,96 (м, 1Н), 1,83 (м, 2Н), 1,72 (м, 2Н), 1,60 (м,2Н), 1,01 (т, 3Н).
Масс: М + Н 420.
Пример 56. 3-({ [(5К)-3-(4-Циклопентил-2-пиридинил)-5-изопропил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентановая кислота ЦааМ).
Ή-ЯМР (400 МГц, СОС1;) δ 8,58 (м, 1Н), 7,74 (д, 1Н), 7,63 (шс, 7,38-7,32 (дд, 1Н), 4,88-4,81 (м, 1Н), 4,53 (шс, 2Н), 3,87-3,79 (два д, 1Н), 3,56-3,53 (два д, 1Н), 3,12-3,04 (м, 1Н), 3,02-2,85 (м, 2Н), 2,38 (м, 1Н), 2,16 (м, 2Н), 1,88 (м, 2Н), 1,78 (м, 2Н), 1,65 (м, 2Н), 1,07 (м, 6Н).
Масс: М + Н 434.
Пример 57. 3-({[3-(4-Циклогексил-2-пиридинил]-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентановая кислота Цаа15).
Ή-ЯМР (400 МГц, СОС1;) δ 8,61 (м, 1Н), 7,75 (д, 1Н), 7,64 (шс, 1Н), 7,39-7,33 (дд, 1Н), 4,86-4,53 (два м, 3Н), 3,87 (т, 1Н), 3,50-3,45 (дд, 1Н), 3,05-2,85 (два м, 2Н), 2,63 (м, 1Н), 2,22 (м, 1Н), 2,03 (м, 1Н), 1,93-1,80 (два м, 5Н), 1,44 (м,5Н), 1,05 (т,3Н).
Масс: М + Н 434.
Пример 58. 3-({[5-Этил-3-(5,6,7,8-тетрагидро-1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбо
- 21 012080 нил}амино)-5-фтор-4-оксопентановая кислота (1аа16).
!Н-ЯМР (500 МГц, ДМСО-й6) δ 8,60-8,53 (дд, 1Н), 8,30 (д, 1Н), 7,15 (д, 1Н), 5,20-5,05 (м, 1Н), 4,744,66 (м, 1Н), 4,45-4,25 (м, 1Н), 3,75-3,68 (м, 1Н), 3,47-3,41 (м, 1Н), 2,94-2,88 (м, 2Н), 2,80-2,72 (м, 3Н), 2,62-2,53 (м, 1Н), 1,99-1,93 (м, 1Н), 1,88-1,80 (м, 1Н), 1,71-1,69 (м, 4Н), 0,88-0,84 (м, 3Н).
Масс: Μ + Н 406.
Пример 59. 5-Фтор-3-({[5-изопропил-3-(4-фенил-2-пиридинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановая кислота (1аа17).
!Н-ЯМР (400 МГц, δ 8,68 (д, 1Н), 8,14 (с, 1Н), 7,68 (м, 1Н), 7,58 (м, 1Н), 7,54-7,43 (м, 5Н),
4,86-4,60 (м, 3Н), 3,92-3,87 (два д, 1Н), 3,62 (д, 1Н), 3,09-2,86 (м, 2Н),2,39 (м, 1Н), 1,11-1,06 (м, 6Н).
Масс: Μ + Н 442.
Способ получения примеров 60-63. (28)-4-(трет-бутокси)-2-({[(5Я)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксобутановую кислоту [полученную сочетанием соединения (УНГ) с А8р(О-трет-Ви)ОМе и гидролизом] подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в получении 5, с получением производного бромметилкетона (трет-бутил (38)-5-бром-3-({[(5Я)-5-изопропил-3-(1изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентаноата). Данное производное бромметилкетона подвергали взаимодействию с дифенилфосфиновой кислотой в КР/ДМФА (см. получение 5) с получением производного дифенилфосфорилоксиметилкетона, которое затем подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в примере 2, с получением указанного в заголовке соединения (соединение из примера 60).
Соединения из последующих примеров 61-63 получали из 1-фенил-3-(трифторметил)-1Н-пиразол-
5-ола, 3-бензил-4-гидрокси-2(5Н)-фуранона или изомасляной кислоты по той же методике, описанной выше.
Пример 60. (38)-5-[(Дифенилфосфорил)окси]-3-({[(5Я)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановая кислота (1аа18).
!Н-ЯМР (500 МГц, ДМСО-а6) δ 8,92 (м, 1Н), 8,58 (м, 1Н), 8,05 (м, 1Н), 7,94 (м, 1Н), 7,81 (м, 1Н), 7,75-7,72 (м, 3Н), 7,57 (м, 3Н), 7,49 (м, 4Н), 7,35 (м, 2Н), 4,90-4,65 (два м, 3Н), 3,79-3,75 (два д, 1Н), 3,693,67 (два д, 1Н), 2,65 (два м, 2Н), 2,22 (м, 1Н), 0,84 (м, 6Н).
Масс: М + Н 614.
Пример 61. (38)-3-({[(5Я)-5-Изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-4-оксо-5-{[1-фенил-3-(трифторметил)-1Н-пиразол-5-ил]окси}пентановая кислота (1аа19) ' Н-ЯМР (500 МГц, ДМСО-а6) δ 8,95 (м, 1Н), 8,83 (д, 1Н), 8,57 (м, 1Н), 8,03 (д, 1Н), 7,92 (д, 1Н), 7,80 (м, 1Н), 7,74 (м, 1Н), 7,65 (д, 1Н), 7,57 (м, 1Н), 7,51-7,34 (м, 3Н), 6,27 (с, 1Н), 5,29-5,15 (м, 2Н), 4,76 (м, 1Н), 3,92-3,88 (м, 1Н), 3,75-3,69 (м, 1Н), 2,84-2,60 (м, 2Н), 2,33 (м, 1Н), 0,96 (м, 6Н) .
Масс: Μ + Н 624.
Пример 62. (38)-5-[(4-Бензил-5-оксо-2,5-дигидро-3-фуранил)окси]-3-({[(5В)-5-изопропил-3-(1изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановая кислота (1аа20).
!Н-ЯМР (500 МГц, ДМСО-а6) δ 8,97 (т, 1Н), 8,58 (д, 1Н), 8,04 (д, 1Н), 7,92 (д, 1Н), 7,81 (м, 1Н), 7,73 (м, 1Н), 7,23-7,07 (м, 6Н), 7,51 (м, 1Н), 4,79-4,65 (м, 3Н), 3,92-3,87 (два д, 1Н), 3,74-3,68 (два д, 1Н), 2,822,58 (м, 2Н), 2,31 (м, 1Н), 0,95 (м, 6Н).
Масс: Μ + Н 586.
Пример 63. (38)-5-(Изобутирилокси)-3-({[(5В)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановая кислота (1аа21).
!Н-ЯМР (500 МГц, ДМСО-а6) δ 12,39 (шс, 1Н), 8,96 (т, 1Н), 8,73 (м, 1Н), 8,58 (дд, 1Н), 8,04 (д, 1Н), 7,92 (д, 1Н), 7,81 (т, 1Н), 7,73 (м, 1Н), 4,78 (м, 2Н), 4,68 (м, 1Н), 3,87 (т, 1Н), 3,73-3,68 (два д, 1Н), 2,792,60 (два м, 2Н), 2,56 (м, 1Н), 2,31 (м, 1Н), 1,05 (д, 3Н), 0,95 (м, 9Н).
Масс: Μ + Н 484.
Пример 64. (38)-3-({[(5В)-5-Изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-4-оксо-5-гексеновая кислота (1аа22).
Производное амида Вейнреба (28)-4-(трет-бутокси)-2-({[(5В)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксобутановой кислоты (конденсированное производное с ХО-диметилгидроксиламином) и бромид винилмагния подвергали взаимодействию и полученное соединение подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в примере 2, с получением указанного в заголовке соединения.
' Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а6) δ 12,27 (шс, 1Н), 8,95 (т, 1Н), 8,74-8,67 (два д, 1Н), 8,58 (м, 1Н), 8,04 (д, 1Н), 7,92 (д, 1Н), 7,83-7,72 (м, 2Н), 6,47 (м, 1Н), 6,22-6,11 (два дд, 1Н), 5,71-5,62 (два дд, 1Н), 4,77 (м, 1Н), 3,90-3,79 (м, 1Н), 3,72-3,64 (м, 1Н), 2,82 (м, 1Н), 2,62-2,49 (м, 1Н), 2,30 (м, 1Н), 0, 94 (м, 6Н).
Масс: М + Н 410.
Получение 22.
Трет-бутил (38)-3-амино-4-гидрокси-5-(2-пиридинилокси)пен-таноат (УШГ).
Производное бромметилкетона X (3,2 г, 7,93 ммоль), промежуточное соединение в получении 5,
- 22 012080 растворяли в бензоле (30 мл), добавляли Ад2СО3 (2,62 г, 1,2 экв.) и 2-гидроксипиридин (0,93 г, 1,2 экв.) и смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником при 80°С в течение 3 суток. Реакционную смесь фильтровали через целит, концентрировали при пониженном давлении и очищали колоночной хроматографией с получением производного 2-пиридинилоксиметилкетона (XI!) (4 66 мг, выход 14%).
Полученное таким образом производное 2-пиридинилоксиметилкетона (XI!) (466 мг, 0,548 ммоль) растворяли в смеси растворителей тетрагидрофуран/метанол (3:2 об./об.) (10 мл), добавляли ЫаВН4 (43 мг, 2,0 экв.) при 0°С и смесь перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре. Реакцию останавливали насыщенным раствором хлорида аммония и реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении. Остаток экстрагировали этилацетатом, промывали водой и водным раствором хлорида натрия, высушивали (безводный Ыа28О4), концентрировали при пониженном давлении с получением соединения (XII!) (230 мг), где кетонную группу восстанавливали до гидроксильной группы.
Бензилоксикарбонильную группу полученного выше соединения удаляли (Рб/С) в атмосфере баллонного водорода в течение 40 мин с получением указанного в заголовке соединения (155 мг, выход 99%).
Способ получения примеров 65-66.
Соединение VII! (или УПи) и ΥΠΙ! подвергали взаимодействию по той же методике, описанной в примерах 1 и 2, с получением указанных в заголовках соединений примеров 65-66. В данном случае ΥΠυ представляет 5-этил-3-(2-изопропилфенил)-4,5-дигидро-5-изоксазолкарбоновую кислоту.
Пример 65. (38)-3-({[(5К)-5-Изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-4-оксо-5-(2-пиридинилокси)пентановая кислота (к1а23).
Ή-ЯМР (500 МГц, МеОО-б4) δ 9,04 (д, 1Н), 8,50 (д, 1Н), 7,95 (д, 1Н), 7,81 (д, 1Н), 7,77 (т, 1Н), 7,69 (т, 1Н), 7,59 (м, 1Н), 6,85-6,80 (м, 2Н), 6,67 (шс, 1Н), 5,07 (шс, 1Н), 4,95 (т, 1Н), 4,84 (м, 1Н), 3,94-3,79 (АЪд, 2Н), 2,92-2,80 (м, 2Н), 2,39 (м, 1Н), 1,09 (м, 6Н).
Масс: М + Н 491.
Пример 66. (38)-3-({[5-Этил-3-(2-изопропилфенил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4оксо-5-(2-пиридинилокси)пентановая кислота (Iаа24).
Ή-ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6) δ 8,71 (шс, 1Н), 8,02-7,94 (два шс, 1Н), 7,71-7,64 (м, 1Н), 7,42-7,18 (м, 4Н), 6,96-6,90 (два т, 1Н), 6,85-6,80 (два д, 1Н), 4,99 (шс, 2Н), 4,86-4,78 (м, 1Н), 3,58 (два д, 1Н), 3,48 (два д, 1Н), 3,36 (м, 1Н), 2,81-2,61 (м, 2Н), 2,05-1,80 (два м, 2Н), 1,14-1,03 (м, 6Н), 0,93-0,88 (м, 3Н).
Масс: М + Н 468,21.
Пример 67. 2-{[(38)-4-Карбокси-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-2-оксобутил]окси}-1-метилпиридиний трифторметансульфонат (Iаа25).
Промежуточный трет-бутил (38)-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксо-5-(2-пиридинилокси)пентаноат (49 мг, 90 мкмоль), полученный после окисления Десс-Мартина в примере 65, растворяли в дихлорметане (2 мл), добавляли метилтрифторметансульфонат (1,1 экв., 10,1 мл) и смесь перемешивали в течение 1 суток при комнатной температуре. После концентрирования при пониженном давлении остаток подвергали той же методике, описанной в примере 2, с получением указанного в заголовке соединения (60 мг).
Ή-ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6) δ 9,00-8,91 (м, 2Н), 8,76-8,57 (м, 2Н), 8,42 (м, 1Н), 8,04 (м, 1Н), 7,93 (м, 1Н), 7,80 (м, 1Н), 7,75 (м, 1Н), 7,54 (м, 1Н), 5,77-5,48 (м, 2Н), 4,85-4,81 (м, 1Н), 4,00 (с, 3Н), 3,94-3,69 (м, 2Н), 2,87-2,60 (м, 2Н), 2,33 (м, 1Н), 0,98 и 0,94 (два д, 6Н).
Масс: М + Н 505,20.
Пример 68. 2-{[(38)-4-Карбокси-({[5-этил-3-(2-изопропилфенил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-2-оксобутил]окси}-1-метилпиридиний трифторметансульфонат (Iаа26).
Промежуточный трет-бутил (3 8)-3-({ [5-этил-3-(2-изопропилфенил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксо-5-(2-пиридинилокси)пентаноат (55 мг, 0,105 ммоль), полученный после окисления Десс-Мартина в примере 66, растворяли в дихлорметане (2 мл), добавляли метилтрифторметансульфонат (1,1 экв., 13 мл) и смесь перемешивали в течение 1 суток при комнатной температуре. После концентрирования при пониженном давлении остаток подвергали той же методике, описанной в примере 2, с получением указанного в заголовке соединения (59 мг, выход 94%).
Ή-ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6) δ 8,80-8,73 (два д, 1Н), 8,65 (м, 1Н), 8,45-8,38 (м, 1Н), 7,56-7,51 (м, 2Н), 7,43-7,31 (м, 3Н), 7,24-7,12 (м, Н), 5,72-5,48 (м, 2Н), 4,91 (м, 1Н), 4,01 и 3,99 (два с, 3Н), 3,64 (два д, 1Н), 3,48 (два д, 1Н), 3,42 (м, 1Н), 2,90-2,62 (м, 2Н), 2,05-1,80 (два м, 2Н), 1,15-1,03 (м, 6Н), 0,93-0,88 (м,3Н).
Масс: М + Н 482,17.
Способ получения примеров 69-70.
Оксим 5-хлор-1-метил-1Н-индол-2-альдегида или 1,5-диметил-1Н-индол-2-альдегида подвергали взаимодействию с трет-бутил 3-амино-5-фтор-4-гидроксипентаноатом по той же методике, описанной в получениях 1, 17, 4 и примерах 1, 2, с получением указанных в заголовках примеров 69-70.
Пример 69. 3-({ [3-(5-Хлор-1-метил-1Н-индол-2-ил)-5-изопропил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентановая кислота (к1а27).
- 23 012080
Ή-ЯМР (500 МГц, СЭС13) δ 7,59 (с, 1Н), 7,46-7,39 (два д, 1Н), 7,30-7,23 (м, 3Н), 5,01 (м, 1Н), 4,754,46 (м, 2Н), 4,02 (д, 1Н), 3,95 (с, 3Н), 3,71 (д, 1Н), 2,95 (м, 1Н), 2,77 (м, 1Н), 2,35 (м, 1Н), 1,04 (м, 6Н).
Масс: М + Н 452.
Пример 70. 3-({ [3-(1,5-Диметил-1Н-индол-2-ил)-5-изопропил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентановая кислота (1аа28).
Ή-ЯМР (500 МГц, СОСЬ) δ 7,48 (шс, 1Н), 7,39 (д, 1Н), 7,23-7,14 (м, 3Н), 4,76 (м, 1Н), 4,70-4,50 (м, 2Н), 4,07-4,02 (два д, 1Н), 3,99, 3,94 и 3,93 (три с, 3Н), 3,75-3,48 (м, 1Н), 2,94-2,82 (два м, 1Н), 2,46-2,43 (два с, 3Н), 2,34 (м, 1Н), 1,05 (м, 6Н).
Масс: М + Н 432.
Получение 23.
Выделение (5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолкарбоновой кислоты.
5-Изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолкарбоновую кислоту растворяли в ацетоне (190 мл) при нагревании при 60°С и добавляли (8)-а-метилбензиламин (14,5 мл, 112 ммоль). Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 ч. Полученный осадок отфильтровывали и три раза промывали ацетоном (40 мл).
Полученную таким образом соль (8)-а-метилбензиламина (5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)4,5-дигидро-5-изоксазолкарбоновой кислоты растворяли в смеси (150 мл) ацетон-вода (4:1) при нагревании при 90°С, охлаждали до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 ч. Полученный осадок отфильтровывали и три раза промывали ацетоном (40 мл) с получением чистой соли (8)-аметилбензиламина (5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолкарбоновой кислоты (12,8 г, 24,3%, 99,8% ее).
Оптическую чистоту (5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолкарбоновой кислоты определяли с использованием хиральной колонки Се1 ΘΌ (4,6x250 мм, 5 мм). Смесь нгексан/изопропанол/трифторуксусная кислота (92/8/0,1) использовали в качестве подвижной фазы со скоростью 1 мл/мин, температура колонки равнялась 40°С, и длина волны детектирования равнялась 225 нм. Определяли два оптических изомера со временем удерживания соответственно 7,8 мин (К-изомер) и 21,1 мин (8-изомер).
Пример 71. Выделение соединения (Ш-1).
1) Выделение соединения, используемого в качестве затравки.
Два диастереомера из примера 16 разделяли при использовании препаративной жидкостной хроматографии на колонке с силикагелем (диаметр 40 мм, ΌΥΝΑΜΑΧ-100 А). Смесь нгексан/этанол/трифторуксусная кислота (4000/32/2) использовали в качестве подвижной фазы со скоростью 50 мл/мин, и желаемый диастереомер собирали в соотношении 99:1 при времени удерживания 6266 мин при длине волны детектирования 227 нм (два диастереомера широко элюировались при постоянном изменении соотношения до 86 мин). С полученного таким образом диастереомера при соотношении 99:1 снимали защиту и использовали в качестве затравки для разделения.
Оптическую чистоту определяли с использованием колонки АбапШ С18 (4,6x250 мм, 5 мм). Смесь ацетонитрил/вода/трифторуксусная кислота использовали в качестве подвижной фазы со скоростью 1 мл/мин по следующему градиенту:
1=0 мин, 0:100:0,1 мин, 20:80:0,1 мин, 100:0:0,1.
При длине волны детектирования 227 нм определяли два оптических изомера со временем удерживания соответственно 36,6 мин (38, 5К-изомер) и 37,1 мин (38, 5К-изомер).
(38,5К-Изомер): трет-бутил (38)-5-фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентаноат.
Ή-ЯМР (500 МГц, СОСС) δ 9,13 (д, 1Н), 8,55 (д, 1Н), 7,85 (д, 1Н), 7,78-7,65 (м, 4Н), 5,22-5,02 (два м, 2Н), 4,90 (м, 1Н), 4,02 (д, 1Н), 3,80 (д, 1Н), 2,92-2,88 (дд, 1Н), 2,79-2,75 (дд, 1Н), 2,41 (м, 1Н), 1,34 (с, 9Н), 1,09 (м, 6Н).
Масс: М + Н 472.
(3К,5К-Изомер) : трет-бутил (3К)-5-фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентаноат.
Ή-ЯМР (400 МГц, С12СС) δ 9,14 (д, 1Н), 8,56 (д, 1Н), 7,87 (д, 1Н), 7,77-7,64 (м, 4Н), 5,25-5,00 (два кв, 2Н), 4,90 (м, 1Н), 4,03 (д, 1Н), 3,82 (д, 1Н), 2,93 (дд, 1Н), 2,77 (дд, 1Н), 2,42 (м, 1Н), 1,35 (с, 9Н), 1,11 (м, 6Н).
Масс: М + Н 472.
(38)-5-Фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановая кислота (16-1).
Ή-ЯМР (400 МГц, δ 9,07 (д, 1Н), 8,57 (д, 1Н), 7,89 (д, 1Н), 7,78-7,69 (м, 3Н), 7,69 (д, 1Н),
4,88-4,79 (м, 2Н), 4,67 (шс, 1Н), 4,07 (д, 1Н), 3,81 (д, 1Н), 3,08-2,93 (м, 1Н), 2,91-2,82 (м, 1Н), 2,43 (м, 1Н), 1,12 (м, 6Н).
- 24 012080
Масс: М + Н 416.
(3К)-5-Фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановая кислота (Ш-Э).
Ή-ЯМР (500 МГц, СЭС13) δ 9,07 (д, 1Н), 8,55 (д, 1Н), 7,87 (д, 1Н), 7,75-7,68 (м, 3Н), 7,52 (шс, 1Н), 5,20-4,35 (м, 3Н), 4,02 (д, 1Н), 3,80 (д, 1Н), 3,13-2,90 (м, 2Н), 2,39 (м, 1Н), 1,08 (м, 6Н).
Масс: М + Н 416.
2) Перекристаллизация.
(38)-5-Фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановая кислота (Ш-!).
Сырой трет-бутил 5-фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил] карбонил}амино)-4-оксопентаноат (366 г) растворяли в метиленхлориде (1,9 кг) и охлаждали до 0°С. Добавляли триэтилсилан (2 35 г) и трифторуксусную кислоту (1,88 кг) и перемешивали в течение 1 ч при 0°С. Реакционную смесь упаривали при пониженном давлении, повторно растворяли в этилацетате (2,4 кг) и рН доводили до 5,2 добавлением 2Н водного раствора гидроокиси натрия (3,1 л).
Органический слой отделяли и водный слой экстрагировали один раз этилацетатом (2,4 кг). Объединенный органический слой упаривали при пониженном давлении для удаления растворителя, полученный остаток растворяли в метил-трет-бутиловом эфире (530 г) и добавляли небольшое количество кристаллической (38)-5-фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановой кислоты. После перемешивания в течение 16 ч при комнатной температуре полученный осадок отфильтровывали и промывали смесью метил-трет-бутиловый эфир и н-гексан 9:1 (210 мл).
Полученную таким образом (38)-5-фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановую кислоту растворяли в этилацетате (240 мл) при нагревании при 50°С, медленно добавляли н-гексан (240 мл) и постепенно охлаждали до комнатной температуры. После перемешивания в течение 24 ч при комнатной температуре полученный осадок отфильтровывали и промывали смесью 1:1 этилацетат и н-гексан (30 мл) с получением указанного в заголовке соединения (Ш-1, 46,0 г, 38/3К=94/6,0). Оптическую чистоту определяли с использованием колонки Ьипа (4,6x250 мм, 5 мм, С18). Смесь ацетонитрил/20 мМ NΠ4ΟАс (рН 6) (30/70) использовали в качестве подвижной фазы со скоростью 1 мл/мин. При длине волны детектирования 227 нм определяли два оптических изомера со временем удерживания соответственно 8,0 мин (3К-изомер) и 9,0 мин (38-изомер).
Опыт 1.
Определение ингибирующего действия в отношении каспазы.
Каспазу-1 и каспазу-8, известные как цистеинпротеазы, в виде α2β2 экспрессировали, очищали и активировали модифицированным методом, описанным ТйогпЬеггу, Ν.Α. е! а1., Шипе, 1992, 356, 768. ТйогпЬеггу, Ν.Α. Ме!йойк ш Еп7уто1о§у, 1994, 244, 615, ^а1кег, Ν.Ρ.Ο’. е! а1., Се11, 1994, 78, 343 и каспазу9 также очищали аналогичным методом и тестировали ингибирующую активность в их отношении. Описывая кратко, субъединицы р 10 и р20 (ТйогпЬеггу, Ν.Α. е! а1., №Шге, 1992, 356, 768) экспрессировали в Е. сой и очищали на никелевой колонке анионообменной хроматографией с получением каспазы-1, каспазы-8 и каспазы-9. Использовали флуоресцентный субстрат АсУУАЭ-АЕС для полученной таким образом каспазы-1, АсПЕУЭ-АЕС - для каспазы-8 и АсЬЕНО-АРС - для каспазы-9 для определения специфической активности синтезированных ингибиторов.
Ферментативную реакцию проводили при 25°С при различных концентрациях ингибиторов в буфере, содержащем 50 мМ НЕРЕ8 (рН 7,50), 10% (мас./об.) сахарозы, 0,1% (мас./об.) СНАР8, 100 мМ №С1, 1 мМ ЭДТА и 10 мМ ΌΤΤ в присутствии 50 мкМ ΑсΥУΑ^-ΑРС для 10 нМ каспазы-1, 50 мкМ АсОЕ^АРС для 2,1 нМ каспазы-8 и 150 мкМ АсЬЕНО-АРС для 200 нМ каспазы-9. Константы ингибирования К1 и КоЬк для ингибиторов устанавливали путем измерения скорости реакции во времени с использованием флуоресцентного спектрометра и при получении константы исходной скорости. Значение К1 рассчитывали по графику Шпе^еауег Вигк и значение КоЬк по следующему уравнению 1.
Уравнение 1
КоЬ8=-1п (1-А1/А00)/1, в котором А4 означает скорость расщепления (%) в момент времени ! и А00 означает максимальную скорость расщепления (%).
Использовали флуоресцентный спектрометр 8рес!га ΜΑX Сет^η^X8 производства Мо1еси1аг Эеу1се Со. при длине волны возбуждения 405 нм и длине волны эмиссии 505 нм.
Ингибирующую активность ингибиторов в условиях 1п у1уо определяли индукцией апоптоза клеток Шгка! (АТСС ΉΒ-152) с использованием Рак-антител Шрк1а1е Вю!есй 05-201) и при детектировании изменения цвета по методу ^8Т-1, описанному Ргапсоеиг А.М. апй Аккайап А. (1996) Вюсйетка 3, 19-25 для регистрации количества живых клеток Шгка! при обработке клеток ингибитором. Использовали спектрометр 8рес!га ΜΑX 340 производства Мо1еси1аг Эеуюе Со. при длине волны поглощения 440 нм.
- 25 012080
Номер соединения Каспаза-1 К (М’1 мин'1) Каспаза -8 Кь/Д (М''мин·’) Каспаза-9 Кь/Д (М’’ мин’) Клетки Лдгка1 1С (мкМ) VI
1сс 1.9 Е5 3.3 Е4 22.5
Ιάά 3.1 Е5 1.9 Е5 4.25
1ее 1.8 Е5 32.6
Ιίΐ 5.0 Е5 1.2
2.7 Е6 1.5 Еб 3.2 Е5 0.17
ΙΗ 1.1 Еб 1.3 Е7 2.0 Е5 0.1
Гп-и 1.9 Е5 0.71
Ш-1 2.3 Е7
Ш-2 4.7 Е5
Ш 1.9 Е5 4.7
1кк 1.2 Е5 1.1
II 1.3 Е5 39.2
1гпт 1.6 Е5 2.0
Ιηη 2.6 Е5 6.5
Ιοο 2.0 Е4 50
Ιρρ 2.3 Еб 1.7 Е5 3.5
1ЧЧ 3.3 Еб 1.4 Е5 37
Ιγγ Отсутствие активности
155 Отсутствие активности
ίη 4.3Е5 0.16
1ии 2.9Е5 0.98
Ινν 1.5Е6 0.15
Ινννν 1.1Е6 1.9
Ιχχ 4.0Е4 26.5
1уу 3.1Е5 31.2
Ιζζ 4.2Е5 1.25
1аа1 1.8Е5 0.33
1аа2 3.2Е5 0.56
1ааЗ 1.4Е5 2.65
1аа4 5.0Е5 0.67
1аа5 3.0Е5 0.3
1ааб 2.0Е5 2.45
1аа7 4.4Е4 2.27
1аа8 4.5Е5 0.70
1аа9 2.3Е5 1.24
1аа10 1.5Е5 1.02
1аа11 6.4Е4 31
1аа12 1.9Е5 0.70
1аа13 3.1Е5 0.35
1аа14 4.1Е5 0.79
1аа15 4.3Е5 0.72
1аа16 6.2Е5 0.73
1аа17 1.8Е5 1.14
1аа18 5.2Е5 1.5
1аа19 1.6Е4 Отсутствие активности
1аа20 3.7Е4 Отсутствие активности
1аа21 Отсутствие активности Отсутствие активности
1аа22 Отсутствие активности
1аа23 2.9Е4 Отсутствие активности
1аа24 Отсутствие активности
1аа25 1.7Е5 Отсутствие активности
1аа2б 3.1Е4 Отсутствие активности
1аа27 8.2Е5 1.3
1аа28 Ι.8Ε6 0.6
Соединение Ш-п представляет (58)-форму соединения ΐΐΐ.
Таблица 1.
- 26 012080
Опыт 2.
Терапевтическое действие при индуцированном БР8 остром гепатите у мышей.
Стадия 1) Получение проб крови.
Мышей-самок Ба1Ь/с (в возрасте 6 недель, СЕаг1ез В1уег ЬаЬога!огу, Озака, Япония) содержали в условиях при температуре 22°С, 55% относительной влажности и цикле свет-темнота по 12 ч. Корм и воду давали вволю. В апирогенном физиологическом растворе растворяли ЬР8 (липополисахарид) и I)галактозамин в концентрациях соответственно 0,4 мг/мл и 280 мг/мл и их смесь 1:1 вводили мышам в количестве 5 мл/кг. Сразу же после введения ЬР8 и ϋ-галактозамина мышам внутрибрюшинно вводили растворитель (смесь ПЭГ400:этанол:твин 80 = 15:7, 5:2, 5 разбавляли в 5 раз физиологическим раствором), в котором было растворено тестируемое соединение, или один растворитель. Через 8 ч после введения препаратов из сердца отбирали пробы крови.
Стадия 2) Определение активности аминотрансферазы плазмы крови.
Активность АЛТ плазмы крови определяли в пробах крови, полученных на стадии 1, с использованием набора для определения активности АЛТ (Азап РЕагт. Со., 8еои1, Корея) согласно инструкции изготовителя. В результате было установлено, что введение ЬР8 и ϋ-галактозамина максимально повышает активность АЛТ в плазме крови, и тестируемые соединения ингибируют повышенную активность фермента в зависимости от дозы. Основываясь на данных результатах, рассчитывали значения Εϋ50 тестируемых соединений с использованием Рг1зт программного обеспечения ОгарЕРаб Со. с получением значений в пределах 0,01-10 мг/кг.
Опыт 3.
Ингибирующее действие в отношении фиброза печени у крыс 81).
Стадия 1) Индукция фиброза печени и введение.
Крыс-самцов 8рагдие-1)а\\1еу (в возрасте 6 недель, Когеа Бю1шк) содержали в условиях при температуре 22°С, 55% относительной влажности и цикле свет-темнота по 12 ч. Корм и воду давали вволю. Для наложения лигатуры на желчный проток крыс анестезировали ингаляцией 1% галотана, вскрывали брюшную полость крыс, накладывали лигатуру на дистальный и проксимальный участки желчного протока, иссекали участок между лигатурами, вводили 2 мл физиологического раствора и накладывали швы.
Тестируемое соединение (Σίί) вводили перорально в дозе 3 мг/кг или 10 мг/кг дважды в сутки. А именно, соединение растворяли в сорастворителе (смесь ПЭГ400:этанол:твин80=15:7,5:2,5), разбавляли фосфатным буфером (рН 7,4) в 5 раз и вводили. Крысам контрольной группы вводили раствор без тестируемого соединения. Введение проводили в течение 1 недели через неделю после наложения лигатуры на желчный проток.
Стадия 2) Приготовление срезов ткани и окрашивание красителем Сириус красный.
После введения крыс подвергали эвтаназии. Пробы печени фиксировали в 10% нейтральном формалине и готовили срезы в парафине толщиной 5 мкм и окрашивали 0,1% красителем Сириус красным (Эйес! геб 80, 81дта). Срезы ткани исследовали под оптическим микроскопом для определения окрашенных в красный цвет коллагеновых волокон, и результаты представлены на фиг. 1.
Опыт 4.
Ингибирующее действие в отношении апоптоза во время застоя желчи у крыс 81).
Тестируемое соединение (Σίί) вводили крысам 81) с лигированными желчными протоками по методике на стадии 1 опыта 3. Через 2 недели после проведения операции крыс подвергали эвтаназии. Пробы печени фиксировали в 10% нейтральном формалине и готовили срезы в парафине толщиной 5 мкм. Окрашивание ΤϋΝΕΕ проводили с использованием набора для детектирования апоптоза ίη зИи Арор Тад Регох1базе (СКеписоп) согласно инструкции изготовителя. Делали снимки более 10 участков ткани печени, окрашенной ΤϋΝΕΕ, при 200-кратном увеличении без какого-либо перекрывания, результаты представлены на фиг. 2. Подсчитывали число клеток с апоптозом в каждой опытной группе, данные представлены в табл. 2. В последующей таблице операция 8Иат означает вариант, когда желчный проток подвергался воздействию, но не был лигирован, и операция В1)к означает вариант, когда после наложения лигатуры на желчный проток вводили только растворитель.
Таблица 2. Ингибирующее действие соединения (Εί) в отношении апоптоза клеток печени во время застоя желчи (Единица: клетки с положительным окрашиванием ΤϋΝΕΕ/в поле зрения)
Симуляция операции Операция ΒϋΒ ΒϋΣ+соединение (Ш) в дозе 3 мг/кг ВОЬ+соединение (Ιίί) в дозе 10 мг/кг
0,76±0,15 16,7±2,75 4,12±1,3 5,66±1,34
Заключение
При окрашивании ΤϋΝΕΕ было показано эффективное ингибирование апоптоза (ингибирование 75%) под действием соединения (Εί) на модели индукции фиброза печени в результате застоя желчи. Кроме того, в результате окрашивания Сириусом красным был выявлен тяжелый фиброз у животных в контрольной группе, но фиброз практически отсутствовал в группе животных, обработанных соединени
- 27 012080 ем (Ιΐΐ). Данный результат показывает ингибирующеее действие соединения (Ιΐΐ) в отношении фиброза печени у крыс и, таким образом, можно предполагать, что соединение (Ιΐΐ) может проявлять фармакологическую активность в подавлении цирроза печени ингибированием апоптоза клеток печени при клиническом применении. Применение можно расширить не только на цирроз печени в результате застоя желчи, но также на различные заболевания печени, в развитии которых имеет место фиброз печени в результате апоптоза.
Опыт 5.
Противовоспалительное действие у крыс.
Крыс-самцов 8Ώ (в возрасте 6 недель, Опей!) содержали в условиях при температуре 22°С, 55% относительной влажности и цикле свет-темнота по 12 ч. Корм и воду давали вволю. Перед индукцией отека определяли объем лапы у каждой крысы с помощью плетизмометра. Перед индукцией отека крысам перорально вводили растворитель (смесь ПЭГ400:этанол:твин80=15:7,5:2,5 разбавляли в 10 раз фосфатным буфером), в котором было растворено тестируемое соединение, или один растворитель. Каррагенан (гамма) растворяли в концентрации 1% в физиологическом растворе и вводили подкожно в правую заднюю лапу крыс в количестве 100 мкл. Через 3 ч вновь определяли объем правой лапы с помощью плетизмометра. Действие тестируемого соединения было показано по уменьшению отека (%) (см. табл. 3). Уменьшение отека (%) рассчитывали по следующему уравнению 2.
Уравнение 2
Уменьшение отека (%)=100х(среднее из увеличенного объема лапы в группе с введением растворителя - увеличенный объем лапы в группе с введением тестируемого соединения)/среднее из увеличенного объема лапы в группе с введением растворителя.
Таблица 3. Уменьшение отека под действием соединения (Ιίί).
Уменьшающее отек действие (%)
Доза (мг/кг) Среднее значение Стандартная ошибка средней
3 2,3 7,7
30 20,7 9,7
100 22,7 2,6
Опыт 6.
Терапевтическое действие в отношении ревматоидного артрита у крыс.
Крыс-самок Левис (в возрасте 7 недель, СИаг1е8 Кщег, Япония) содержали в условиях при температуре 22°С, 55% относительной влажности и цикле свет-темнота по 12 ч. Корм и воду давали вволю. Коллаген типа ΙΙ (бычий) растворяли в 0,05 М растворе уксусной кислоты в концентрации 2 мг/мл при 4°С и добавляли такое количество полного адъюванта Фрейнда для эмульгирования раствора при 4°С. 0,1 мл эмульгированного таким образом раствора вводили подкожно в основание хвоста крыс Левис. Через 7 суток вновь вводили эмульгированный раствор таким же образом. Со дня второго введения эмульгированного раствора вводили растворитель (смесь ПЭГ400:этанол:твин80 = 15:7, 5:2, 5 разбавляли в 10 раз фосфатным буфером), в котором было растворено тестируемое соединение, или один растворитель перорально крысам каждый день. На 14 сутки после первого введения содержащего коллаген эмульгированного раствора определяли объем правой задней лапы с помощью плетизмометра (см. табл. 4). Уменьшение отека (%) рассчитывали по следующему уравнению 3.
Уравнение 3
Уменьшение отека (%)=100х (среднее из увеличенного объема лапы в группе с введением растворителя на 14 сутки - увеличенный объем лапы в группе с введением тестируемого соединения на 14 сутки)/среднее из увеличенного объема лапы в группе с введением растворителя на 14 сутки.
Затем определяли р-значение по ΐ-тесту Стьюдента по данным увеличения объема лапы на 14 сутки для подтверждения достоверности.
Таблица 4. Уменьшение отека лапы.
Доза соединения (Ιϋ) (мг/кг) Объем лапы (мл) Уменьшающее отек действие (%)
0 сутки 14 сутки 14 сутки
Среднее значение Стандартная ошибка средней Среднее значение Стандартная ошибка средней Среднее значение Стандартная ошибка средней
0 1,115 0,036 1, 975 0,257 -
10 1,134 0,032 1,394 0,089 69, 8 10,8
р-значение=0,032
- 28 012080
В тесте отека лапы у крыс соединение (III) проявляло уменьшающее отек действие в зависимости от дозы примерно на 2, 21 и 23% соответственно для доз 3, 30 и 100 мг/кг. На модели ревматоидного артрита отек лапы достоверно уменьшался (уменьшение примерно на 70%) в группе животных, которым вводили соединение (III) на 14 сутки, в то время как в группе отрицательного контроля наблюдали максимальный отек.
Следовательно, предусматривается, что соединение (III) обладает подавляющим действием в отношении развития воспаления на модели воспалительного заболевания, и таким образом с его помощью можно лечить аутоиммунные воспалительные заболевания.
Опыт 7.
Сравнение действия с известным соединением.
Тестировали соединение (III) по настоящему изобретению и БВ84068МР (соединение 68), известное по РСТ/КК00/01047 (ΆΟ 01/21600), и результаты представлены в последующей табл. 5.
Таблица 5
Ы384068МР Ιίί
Коъз/[1] Для каспазы-8 1,02 Еб (М_1мин_1) 1,30 Е7 (М~1мин’1)
1С50 (клетки ЦикгаТ) 1,6 мкМ 0,1 мкМ или менее
Εϋ50 (ЬРЗ+Са1) 0,99 мг/кг 0,01 мг/кг
Растворимость (рН=7,44 фосфатный буфер) 0,93 мг/кг или менее 7,8 г/мл
Как следует из данных таблицы 5, соединение (III) по настоящему изобретению проявило ингибирующую активность в 10 и более раз выше в отношении каспазы-8 и клеток .1игеа1 по сравнению с соединением БВ84068МР и примерно в 100 раз выше на модели ЕР8-индуцированного острого гепатита (на мышах). Также, касаясь физико-химических свойств, соединение обладает лучшей растворимостью, и, следовательно, его легче использовать в качестве инъекционного препарата. Т.е. соединение по настоящему изобретению проявляет значительно более лучшие эффекты по сравнению с соединением БВ84068МР как в плане активности, так и физико-химических свойств.

Claims (20)

    ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
  1. (1) (38)-5-[(2,6-дихлорбензоил)окси]-3-({[5-метил-3-фенил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-4-оксопентановой кислоты (Гаа);
    1. Соединение следующей формулы (1) в которой
    I) К представляет Н,
    II) К1 представляет остаток боковой цепи любой из природных аминокислот;
    и соединение формулы (1) может находиться в форме конкретного диастереомера или их смесей, когда атом углерода, с которым связан К1, становится стереоцентром за счет К1-группы; или соединение формулы (1) может иметь защитную группу в виде эфира (-СО2К3, где К3 представляет -8АС), или может находиться в виде фармацевтически приемлемой соли, когда К1 является остатком боковой цепи аминокислоты, содержащим карбоксильную группу; или соединение формулы (1) может также находиться в виде фармацевтически приемлемой соли, когда К1 является остатком боковой цепи аминокислоты, содержащим основную группу,
    III) К2 представляет Н, -8АС, -8САС или -8АС-Аг; и соединение формулы (1) может находиться в форме конкретного диастереомера или их смесей, когда атом углерода, с которым связан К2, становится стереоцентром за счет К2-группы;
    IV) А представляет -(СН2)п- (п=0-4) или -О-(СН2)п- (п=0-4),
    V) В представляет -Аг и
    VI) X представляет -С(=О)СН2ОК11, где К11 является -8АС, -8САС, -Аг или -8АС-Аг; -С(=О)СН2ОС(=О)К12, где К12 является -8АС, -8САС, -Аг или -8АС-Аг; -СН=СН-СО2К13, где К13 является -8АС, -8САС, -Аг или -8АС-Аг; -СН=СН-8О2К14, где К14 является -8АС, -8САС, -Аг или -8АС-Аг; -С(=О)СН=СН2 или -СОС112-\ν, где представляет -Е, -С1, -Вг, -I, или имеет следующие формулы:
    - 29 012080 в которых
    Υ представляет Н или СР3,
    К24 представляет Н, -8АС, -8АС-Аг или -Аг, его соль или стереоизомер, причем 8АС означает углеводород, имеющий 1-8 атомов углерода; 8САС означает циклический радикал, имеющий 3-10 атомов углерода; -Аг включает ароматическую и гетероароматическую группы, где ароматическая группа означает 5-15-членный одиночный или конденсированный ненасыщенный цикл, а гетероароматическая группа означает 5-15-членный одиночный или конденсированный ненасыщенный цикл, содержащий 1-5 гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из атомов кислорода, серы и азота; и 8АС-Аг означает линейный или разветвленный алкил, имеющий 1-8 атомов углерода и замещенный группой -Аг.
  2. (2) (3 8)-3 -({[5 -метил-3-фенил-4,5-дигидро-5 -изоксазолил] карбонил } амино)-4-оксо-5-феноксипентановой кислоты (ГЬЬ);
    2. Соединение по п.1, в котором К1 представляет -СН2СООН или -СН2СООК3 (К3=8АС).
  3. (3) (38)-3-({[5-этил-3-фенил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксо-5-(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентановой кислоты (Гсс);
    3. Соединение по п.1, в котором К2 представляет Н или -8АС.
  4. 4-оксопентановой кислоты (№10);
    (37) 3-({[3-(4-ацетил-2-пиридинил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4оксопентановой кислоты (№11);
    (38) 3-({[3-(4-циклопропил-2-пиридинил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5фтор-4-оксопентановой кислоты (№12);
    (39) 3-({[3-(4-циклопентил-2-пиридинил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5фтор-4-оксопентановой кислоты (№13);
    (40) 3-({[(5К)-3-(4-циклопентил-2-пиридинил)-5-изопропил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-5-фтор-4-оксопентановой кислоты (№14);
    (41) 3-({[3-(4-циклогексил-2-пиридинил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5фтор-4-оксопентановой кислоты (№15);
    (42) 3-({[5-этил-3-(5,6,7,8-тетрагидро-1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентановой кислоты (№16);
    (43) 5-фтор-3-({[5-изопропил-3-(4-фенил-2-пиридинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановой кислоты (№17);
    (44) (38)-5-[(дифенилфосфорил)окси]-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановой кислоты (№18);
    (45) (38)-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4оксо-5-{[1-фенил-3-(трифторметил)-1Н-пиразол-5-ил]окси}пентановой кислоты (№19);
    (46) (38)-5-[(4-бензил-5-оксо-2,5-дигидро-3-фуранил)окси]-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановой кислоты (№20);
    (47) (38)-5-(изобутирилокси)-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановой кислоты (№21);
    (48) (38)-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4оксо-5-гексеновой кислоты (Iаа22);
    (49) (38)-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4оксо-5-(2-пиридинилокси)пентановой кислоты (Iаа23);
    - 31 012080
    (50) (38)-3-({[5-этил-3-(2-изопропилфенил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксо-5(2-пиридинилокси)пентановой кислоты Паа24);
    (51) 2-{[(38)-4-карбокси-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил] карбонил} амино)-2-оксобутил] окси}-1-метилпиридиния трифторметансульфоната Паа25);
    (52) 2-{[(38)-4-карбокси-3-({[5-этил-3-(2-изопропилфенил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-2-оксобутил]окси}-1-метилпиридиния трифторметансульфоната Паа26);
    (53) 3-({[3-(5-хлор-1-метил-1Н-индол-2-ил)-5-изопропил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-5-фтор-4-оксопентановой кислоты Паа27);
    (54) 3-({[3-(1,5-диметил-1Н-индол-2-ил)-5-изопропил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-
    4- оксопентановой кислоты (Гп);
    (4) (3 8)-3 -({[5 -этил-3-( 1 -нафтил)-4,5-дигидро-5 -изоксазолил] карбонил } амино)-4-оксо-5-(2,3,5,6тетрафторфенокси)пентановой кислоты (Гйй);
    4. Соединение по п.1, в котором X представляет -С(=О)СН2ОАг, -С(=О)СН2ОС(=О)Аг или -СОСН2^, где представляет -Р, -С1, -Вг или -Г.
  5. 5-фтор-4-оксопентановой кислоты Паа28) и (55) (38)-5-фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-4-оксопентановой кислоты (Ш-1).
    5- (2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентановой кислоты (Грр);
    (5) (3 8)-3 -({[5 -этил-3-(2-нафтил)-4,5-дигидро-5 -изоксазолил] карбонил } амино)-4-оксо-5-(2,3,5,6тетрафторфенокси)пентановой кислоты (Гее);
    5. Соединение по п.1, в котором
    Г) К представляет Н,
    ГГ) К1 представляет -СН2СООН или -СН2СООК3 (К3=8АС),
    ГГГ) К2 представляет Н или -8АС,
    ГУ) А представляет -(СН2)П- (п=0-4) или -О-(СН2)П- (п=0-4),
    V) В представляет -Аг и
    УГ) X представляет -СОСН2Р, -СОСН2С1, -СОСН2ВГ, -СОСН2Г, -СОСН2ОАГ или -СОСН2ОСОАГ.
  6. (6) (3 8)-3 -({[5 -этил-3-( 1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5 -изоксазолил] карбонил } амино)-4-оксо-5 (2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентановой кислоты (Г£Г);
    6. Соединение по п.1, которое выбрано из следующей группы, состоящей из:
  7. 7. Соединение по п.1, которое представляет 5-фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-4-оксопентановую кислоту (Ш).
    (7) 3 -({[5 -этил-3-( 1 -изохинолинил)-4,5-дигидро-5 -изоксазолил] карбонил } амино)-5-фтор-4-оксопентановой кислоты (Гдд);
  8. 8. Соединение следующей формулы (1а):
    в которой А, В, К, К1, К2 и X имеют значения, определенные в п.1.
    (8) этил 3-({[5-этил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4- оксопентаноата (ГИБ);
  9. 9. Соединение по п.8, которое представляет (38)-5-фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)4,5-дигидро-5-изоксазолил] карбонил} амино)-4-оксопентановую кислоту (Ш-1).
    (9) 5-фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-
  10. 10. Способ получения соединения (Ш-1), определенного в п.9, который включает стадии растворения смеси (38)-5-фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановой кислоты и (3К)-5-фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-4-оксопентановой кислоты в метил-трет-бутиловом эфире, добавления небольшого количества кристаллической (38)-5-фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксопентановой кислоты в качестве затравки с получением кристаллов и перекристаллизации данных кристаллов из системы растворителей этилацетат/н-гексан.
    (10) 3 -({[5 -этил-3-(4-хинолинил)-4,5-дигидро-5 -изоксазолил] карбонил } амино)-5-фтор-4-оксопентановой кислоты (Щ);
  11. 11. Терапевтическая композиция для предотвращения воспаления и апоптоза, содержащая ингибирующее каспазу соединение формулы (1), его соль или стереоизомер, определенные в п.1, в качестве активного ингредиента вместе с фармацевтически приемлемым носителем.
    (11) 3-({[3-(бензотиофен-2-ил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентановой кислоты (Гкк);
  12. 12. Композиция по п.11 для предотвращения воспаления и апоптоза с целью лечения деменции, мозгового инсульта, повреждения мозга в результате СПИДа, диабета, язвы желудка, церебрального нарушения в результате гепатита, индуцированных гепатитом заболеваний печени, острого гепатита, скоротечной печеночной недостаточности, цирроза печени, сепсиса, отторжения органа при трансплантации, ревматоидного артрита или апоптоза клеток сердца в результате ишемических заболеваний сердца.
    (12) (3 8)-3-( {[3-(1,3-диметил-1Н-индол-2-ил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4оксо-5-(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентановой кислоты (Г11);
  13. 13. Композиция по п.11 для предотвращения воспаления и апоптоза с целью лечения острого гепатита или цирроза печени.
    (13) 3-({[3-(1,3-диметил-1Н-индол-2-ил)-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5фтор-4-оксопентановой кислоты (Гтт);
  14. 14. Композиция по п.11 для предотвращения воспаления и апоптоза с целью лечения ревматоидного артрита.
    (14) (38)-3-({[5-этил-3-(1-нафтилметил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4-оксо-5(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентановой кислоты (Гпп);
  15. 15. Композиция по п.11, которую изготавливают в виде препарата для перорального введения, инъекционного препарата или пластыря.
    (15) (38)-5-[(2,6-дихлорбензоил)окси]-3-[({5-этил-3-[2-(1-нафтил)этил]-4,5-дигидро-5-изоксазолил} карбонил)амино]-4-оксопентановой кислоты (Гоо);
  16. 16. Композиция по п.11, содержащая соединение (Ш), определенное в п.7, в качестве активного ингредиента.
    (16) (38)-3-[({5-этил-3-[(1-нафтилокси)метил]-4,5-дигидро-5-изоксазолил}карбонил)амино]-4-оксо-
  17. 17. Композиция по п.11, содержащая соединение (Ίϊϊ-1), определенное в п.9, в качестве активного ингредиента.
    (17) (38)-3-{[(3-{[(4-хлор-1-нафтил)окси]метил}-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил)карбонил] амино }-4-оксо-5-(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентановой кислоты (^с]);
  18. 18. Способ получения терапевтической композиции для предотвращения воспаления и апоптоза, определенной в п.11, включающий смешивание ингибирующего каспазу соединения формулы (1), его соли или стереоизомера, определенных в п.1, с фармацевтически приемлемым носителем.
    (18) (3 8,4Е)-6-этокси-3-({[(5К)-5-изопропил-3-( 1 -изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-6-оксо-4-гексеновой кислоты (Ггг);
    - 30 012080
  19. 19. Способ предотвращения воспаления или апоптоза, включающий введение эффективного количества ингибирующего каспазу соединения формулы (1), его соли или стереоизомера, определенных в п.1, пациенту, страдающему от воспаления и апоптоза.
    (19) (38,4Е)-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(1-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-(метилсульфонил)-4-пентеновой кислоты (Ю);
    (20) 5-фтор-3-({[(58)-3-(1-изохинолинил)-5-пропил-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4оксопентановой кислоты (Ш);
    (21) 3-({[(58)-5-этил-3-(1-нафтил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентановой кислоты Ции);
    (22) 3-({[(58)-5-этил-3-(2-хинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентановой кислоты (Ет);
    (23) 3-({[(5К)-5-этил-3-(3-изохинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4оксопентановой кислоты (Гетте);
    (24) 3-({[5-этил-3-(8-хинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентановой кислоты Цхх);
    (25) 3-({[5-этил-3-(3-хинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентановой кислоты (ку);
    (26) 5-фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(2-хинолинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-4оксопентановой кислоты (кх);
    (27) 3-({[5-этил-3-(2-изопропилфенил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4оксопентановой кислоты (№1);
    (28) 3 -[({ 3 -[3 -(трет-бутил)фенил]-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил}карбонил)амино]-5-фтор-4оксопентановой кислоты (!аа2);
    (29) 3-[({3-[4-(трет-бутил)фенил]-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил}карбонил)амино]-5-фтор-4оксопентановой кислоты (№3);
    (30) 5-фтор-3-({[(5К)-5-изопропил-3-(2-изопропилфенил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил} амино)-4-оксопентановой кислоты (№4);
    (31) 3-[({(5К)-3-[3-(трет-бутил)фенил]-5-изопропил-4,5-дигидро-5-изоксазолил}карбонил)амино]-5фтор-4-оксопентановой кислоты (№ι5);
    (32) 3-{[(3-[1,1'-бифенил]-3-ил-5-изопропил-4,5-дигидро-5-изоксазолил)карбонил]амино}-5-фтор-4оксопентановой кислоты (№6);
    (33) 3-({[5-этил-3-(2-пиридинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-4-оксопентановой кислоты (№17);
    (34) 3-[({3-[4-(трет-бутил)-2-пиридинил]-5-этил-4,5-дигидро-5-изоксазолил}карбонил)амино]-5фтор-4-оксопентановой кислоты (№ι8);
    (35) 3-[({(5К)-3-[4-(трет-бутил)-2-пиридинил]-5-изопропил-4,5-дигидро-5-изоксазолил}карбонил) амино]-5-фтор-4-оксопентановой кислоты (№9);
    (36) 3-({[5-этил-3-(4-изобутил-2-пиридинил)-4,5-дигидро-5-изоксазолил]карбонил}амино)-5-фтор-
  20. 20. Применение ингибирующего каспазу соединения формулы (1), его соли или стереоизомера, определенных в п.1, для предотвращения воспаления и апоптоза.
EA200600465A 2003-08-27 2004-08-26 Ингибиторы каспазы, содержащие изоксазолиновый цикл EA012080B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20030059451 2003-08-27
PCT/KR2004/002139 WO2005021516A1 (en) 2003-08-27 2004-08-26 Caspase inhibitors containing isoxazoline ring

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200600465A1 EA200600465A1 (ru) 2006-08-25
EA012080B1 true EA012080B1 (ru) 2009-08-28

Family

ID=36102769

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200600465A EA012080B1 (ru) 2003-08-27 2004-08-26 Ингибиторы каспазы, содержащие изоксазолиновый цикл

Country Status (27)

Country Link
US (1) US7557133B2 (ru)
EP (1) EP1660464B1 (ru)
JP (1) JP4503017B2 (ru)
KR (1) KR100594544B1 (ru)
CN (1) CN1842521B (ru)
AP (1) AP2104A (ru)
AR (1) AR045503A1 (ru)
BR (1) BRPI0413848B8 (ru)
CA (1) CA2535711C (ru)
EA (1) EA012080B1 (ru)
EC (1) ECSP066378A (ru)
EG (1) EG25751A (ru)
HK (1) HK1092788A1 (ru)
IL (1) IL173638A (ru)
MA (1) MA27999A1 (ru)
MX (1) MXPA06002267A (ru)
MY (1) MY162110A (ru)
NO (1) NO335620B1 (ru)
NZ (1) NZ545216A (ru)
OA (1) OA13244A (ru)
PE (1) PE20050371A1 (ru)
TR (1) TR200600899T2 (ru)
TW (1) TWI346110B (ru)
UA (1) UA83240C2 (ru)
UY (1) UY28494A1 (ru)
WO (1) WO2005021516A1 (ru)
ZA (1) ZA200601586B (ru)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100774999B1 (ko) * 2005-02-26 2007-11-09 주식회사 엘지생명과학 이소옥사졸린 유도체 및 그의 제조 방법
US7754909B1 (en) * 2005-04-06 2010-07-13 The Florida State University Research Foundation, Inc. Compounds and methods of arylmethylation (benzylation) as protection for alcohol groups during chemical synthesis
KR101299720B1 (ko) * 2006-08-16 2013-08-28 주식회사 엘지생명과학 3-아미노-5-플루오로-4-디알콕시펜탄산 에스테르의 새로운제조방법
KR20080042290A (ko) * 2006-11-09 2008-05-15 주식회사 엘지생명과학 피리돈 구조를 포함하는 캐스파제 저해제
JP5128600B2 (ja) * 2007-08-10 2013-01-23 日本曹達株式会社 含窒素複素環化合物および有害生物防除剤
KR20090099886A (ko) * 2008-03-18 2009-09-23 주식회사 엘지생명과학 캐스파제 저해제의 프로드럭
CN102105485B (zh) 2008-05-21 2016-01-13 新世界实验室公司 选择性胱天蛋白酶抑制剂及其用途
US9034883B2 (en) 2010-11-15 2015-05-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Vasoprotective and cardioprotective antidiabetic therapy
CA2831704C (en) 2011-03-31 2019-10-01 Bayer Intellectual Property Gmbh Herbicidally and fungicidally active 3-phenylisoxazoline-5-carboxamides and 3-phenylisoxazoline-5-thioamides
US9944674B2 (en) * 2011-04-15 2018-04-17 Genesis Technologies Limited Selective cysteine protease inhibitors and uses thereof
JP6285937B2 (ja) * 2012-09-25 2018-02-28 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト 除草性および殺真菌性の５−オキシ置換３−フェニルイソオキサゾリン−５−カルボキサミドおよび５−オキシ置換３−フェニルイソオキサゾリン−５−チオアミド
ES2747483T3 (es) * 2012-09-25 2020-03-10 Bayer Cropscience Ag Derivados de 3-fenilisoxazolina con acción herbicida
US10104892B2 (en) 2012-09-25 2018-10-23 Bayer Cropscience Ag Herbicidally and fungicidally active 3-heteroaryl-isoxazoline-5-carboxamides and 3-heteroaryl-isoxazoline-5-thioamides
JP2017095353A (ja) * 2014-03-27 2017-06-01 日本曹達株式会社 イソオキサゾリン−５−カルボキサミド化合物および有害生物防除剤
AU2015259471A1 (en) 2014-05-12 2016-11-24 Conatus Pharmaceuticals, Inc. Treatment of the complications of chronic liver disease with caspase inhibitors
CN105753853B (zh) 2014-12-16 2020-08-04 沈阳中化农药化工研发有限公司 一种含异恶唑啉的脲嘧啶类化合物及其用途
WO2017079566A1 (en) 2015-11-05 2017-05-11 Conatus Pharmaceuticals, Inc. Caspase inhibitors for use in the treatment of liver cancer
RU2018127752A (ru) 2015-12-31 2020-01-31 Конатус Фармасьютикалз Инк. Способы применения ингибиторов каспаз при лечении заболеваний печени
US20190231770A1 (en) 2016-10-05 2019-08-01 Novartis Ag Combination compositions comprising fxr agonists for treating or preventing a fibrotic, cirrhotic disease or disorder
EP3572402B1 (en) * 2017-01-23 2022-05-04 Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co., Ltd. Linked cyclic compound as caspase inhibitor
US11597724B2 (en) 2017-06-13 2023-03-07 Bayer Aktiengesellschaft Herbicidally active 3-phenylisoxazoline-5-carboxamides of tetrahydro and dihydrofuran carboxylic acids and esters
US11613522B2 (en) 2017-06-13 2023-03-28 Bayer Aktiengesellschaft Herbicidally active 3-phenylisoxazoline-5-carboxamides of tetrahydro- and dihydrofurancarboxamides
WO2019034602A1 (de) 2017-08-17 2019-02-21 Bayer Aktiengesellschaft Herbizid wirksame 3-phenyl-5-trifluormethylisoxazolin-5-carboxamide von cyclopentylcarbonsäuren und -estern
DK3743411T3 (da) 2018-01-25 2023-02-13 Bayer Ag Herbicidt virksomt 3-phenylisoxazolin-5-carboxamider af cyclopentenylcarbonsyrederivater
BR112021017924A2 (pt) 2019-03-12 2021-11-16 Bayer Ag 3-fenilisoxazolina-5-carboxamidas herbicidamente ativas de ésteres de ácido ciclopentenil- carboxílico contendo s
EP3939976B1 (en) * 2019-04-19 2024-05-01 Lg Chem, Ltd. Prodrug of caspase inhibitor
JP7442914B2 (ja) * 2019-04-30 2024-03-05 エルジー・ケム・リミテッド カスパーゼ阻害剤のプロドラッグ
TW202237143A (zh) 2020-12-10 2022-10-01 南韓商Ｌｇ化學股份有限公司 酸（Ｂｏｒｏｎｉｃ Ａｃｉｄ）化合物
WO2022123062A1 (en) 2020-12-11 2022-06-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Blocking caspase and/or fasl for preventing fatal outcome in covid-19 patients
CN114908028A (zh) * 2022-04-19 2022-08-16 杭州师范大学 一种双相体系下化学酶法级联催化腈类化合物的一锅法合成工艺

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1994012481A1 (en) * 1992-11-20 1994-06-09 Pfizer Inc. Novel isoxazolines as antiinflammatory agents
WO1995014681A1 (en) * 1993-11-26 1995-06-01 Pfizer Inc. Isoxazoline compounds as antiinflammatory agents
WO1995014680A1 (en) * 1993-11-26 1995-06-01 Pfizer Inc. 3-aryl-2-isoxazolines as antiinflammatory agents
KR19990079268A (ko) * 1998-04-03 1999-11-05 성재갑 인터루킨-1β-컨버팅 효소 및 아포파인/CPP-32 에 대한 저해제
WO2001021600A1 (en) * 1999-09-17 2001-03-29 Lg Chem Investment Ltd. Caspase inhibitor

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL118325A0 (en) * 1995-05-25 1996-10-31 Pont Merck And Pharmaceutical Integrin receptor antagonists and pharmaceutical compositions containing them
US5710159A (en) * 1996-05-09 1998-01-20 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Integrin receptor antagonists
WO2001021599A1 (en) * 1999-09-17 2001-03-29 Lg Chemical Ltd. Caspase inhibitor

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1994012481A1 (en) * 1992-11-20 1994-06-09 Pfizer Inc. Novel isoxazolines as antiinflammatory agents
WO1995014681A1 (en) * 1993-11-26 1995-06-01 Pfizer Inc. Isoxazoline compounds as antiinflammatory agents
WO1995014680A1 (en) * 1993-11-26 1995-06-01 Pfizer Inc. 3-aryl-2-isoxazolines as antiinflammatory agents
KR19990079268A (ko) * 1998-04-03 1999-11-05 성재갑 인터루킨-1β-컨버팅 효소 및 아포파인/CPP-32 에 대한 저해제
WO2001021600A1 (en) * 1999-09-17 2001-03-29 Lg Chem Investment Ltd. Caspase inhibitor

Also Published As

Publication number Publication date
NO20061362L (no) 2006-03-24
KR100594544B1 (ko) 2006-06-30
JP4503017B2 (ja) 2010-07-14
ECSP066378A (es) 2006-08-30
CA2535711C (en) 2011-07-05
KR20050022364A (ko) 2005-03-07
IL173638A0 (en) 2006-07-05
CN1842521B (zh) 2012-09-05
TWI346110B (en) 2011-08-01
MXPA06002267A (es) 2006-05-17
AP2104A (en) 2010-02-06
TR200600899T2 (tr) 2006-09-21
HK1092788A1 (en) 2007-02-16
UA83240C2 (ru) 2008-06-25
OA13244A (en) 2007-01-31
JP2007503429A (ja) 2007-02-22
CA2535711A1 (en) 2005-03-10
EP1660464A4 (en) 2008-11-26
ZA200601586B (en) 2007-05-30
EP1660464B1 (en) 2015-02-25
EP1660464A1 (en) 2006-05-31
EG25751A (en) 2012-06-25
BRPI0413848B1 (pt) 2019-04-30
CN1842521A (zh) 2006-10-04
WO2005021516A1 (en) 2005-03-10
BRPI0413848A (pt) 2006-10-24
IL173638A (en) 2011-12-29
AP2006003509A0 (en) 2006-02-28
MA27999A1 (fr) 2006-07-03
NZ545216A (en) 2009-06-26
MY162110A (en) 2017-05-31
EA200600465A1 (ru) 2006-08-25
PE20050371A1 (es) 2005-08-17
BRPI0413848B8 (pt) 2021-05-25
US20060223848A1 (en) 2006-10-05
UY28494A1 (es) 2005-02-28
AR045503A1 (es) 2005-11-02
US7557133B2 (en) 2009-07-07
AU2004268895A1 (en) 2005-03-10
TW200512199A (en) 2005-04-01
NO335620B1 (no) 2015-01-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA012080B1 (ru) Ингибиторы каспазы, содержащие изоксазолиновый цикл
CN112521368B (zh) 作为lpa拮抗剂的三唑n-连接的氨基甲酰基环己基酸
TWI606039B (zh) Ａｐｊ受體之三唑激動劑
US10660888B2 (en) Aminoheteroaryl benzamides as kinase inhibitors
JP6698693B2 (ja) Ｒｓｖ抗ウイルス性ピラゾロおよびトリアゾロピリミジン化合物
EP1716135B1 (en) Piperidinylcarbonyl-pyrrolidines and their use as melanocortin agonists
CN108064224B (zh) 作为Rorγt的调节剂的酰胺取代的噻唑
EA027247B1 (ru) Новые производные пиридина
CN113473985A (zh) 作为lpa拮抗剂的环戊酸
EP3704106B1 (en) Alkene compounds as farnesoid x receptor modulators
CN109415358B (zh) 作为RORγt调节剂的6-氨基吡啶-3-基噻唑
TW201420565A (zh) 吡咯磺醯類衍生物、其製備方法及其在醫藥上的應用
EP3853232A1 (en) Oxabicyclo acids as lpa antagonists
EP3438103B1 (en) Griseofulvin compound
CN111217834B (zh) Rock激酶抑制剂的硝基氧衍生物
KR20210024630A (ko) 칼페인 억제제를 이용한 간 섬유증 치료 방법
WO2019089665A1 (en) Alkene spirocyclic compounds as farnesoid x receptor modulators
TW201710249A (zh) 飢餓素ｏ－醯基轉移酶抑制劑
EP1905762A1 (en) Pyrazolone derivative
EP2758059B1 (en) Substituted pyrimidines
EP1900728A1 (en) Pharmaceutical composition comprising pyrazolone derivative
TW201132630A (en) Imidazole derivatives
RU2572606C2 (ru) Замещенное пиридиновое соединение
TW201620886A (zh) 經芳基取代之雜環碸
TW201625588A (zh) 環狀胺衍生物

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): KG MD TJ TM

PD4A Registration of transfer of a eurasian patent in accordance with the succession in title