MXPA06002267A - Inhibidores de caspasa que contienen anillo de isoxazolina. - Google Patents

Inhibidores de caspasa que contienen anillo de isoxazolina.

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Abstract

La presente invencion se refiere a un derivado de isoxazolina como un inhibidor contra varias caspazas, a un procedimiento para preparar el mismo y a una composicion terapeutica para prevenir la inflamacion y la apoptosis que comprende al mismo.

Description

INHIBIDORES DE CASPASA QUE CONTIENEN ANILLO DE ISOXAZOLINA La presente invención se refiere a un derivado de isoxazolina como un inhibidor contra varias caspasas incluyendo la caspasa-1 [enzima convertidora de interleucina-?ß , ICE] y la caspasa-3 [apopaina/CPP-32] , a un procedimiento para preparar el mismo y a una composición terapéutica para prevenir la inflamación y la apoptosis que comprende al mismo. La caspasa es un nuevo tipo de cisterna proteasa en la forma de a2B2 descubierta durante los últimos 10 años. Hasta ahora se conocen aproximadamente 14 tipos de la misma. La caspasa-1 (ICE), uno de estos, es un tipo de citocina y participa en la conversión de la prointerleucina-?ß inactiva a la interleucina-?ß activa. La interleucina-1 consiste en interleucina-? e interleucina-?ß, las cuales son sintetizadas en monocitos en la forma de un precursor que tiene 31kDa. Sólo la prointerleucina-?ß es activada por la ICE. Las posiciones hidrolizadas por la caspasa-1 son Asp27-Gly28 y Asp116-Ala1:L . La hidrólisis de esta última posición da la interleucina-?ß . Se ha informado que la interleucina-?ß actúa como un mediador importante para provocar inflamación (1, 3) . La caspasa-1 fue descubierta por primera vez en 1989 y en dos grupos de estudio independientes se determinó la estructura tridimensional de la misma por el método cristalográfico de rayos X. La caspasa-3 (CPP-32) es estudiada ampliamente con respecto a su rol o mecanismo de "acción y su "estructura tridimensional fue determinada en 1996 (2) . La caspasa-3 (apopaina) activada a partir de la procaspasa-3 hidroliza el motivo (P4)Asp-X-X-Asp(Pl), y los substratos conocidos incluyen la poli (ADP-ribosa) polimerasa, la ribonucleoproteina nuclear pequeña de Ul 70.000 Mr y la subunidad catalítica de la proteína quinasa dependiente de DNA de 460.000 Mr, etc. Se ha informado que la estructura de rayos X de la caspasa-7 es muy similar a la de la caspasa-3 (4) . Las caspasas-8 y 9 están presentes en la corriente arriba de las caspasas-3, 6, 7 y se sabe que estas caspasas participan en la cascada de la apoptosis. La estructura de rayos X de la caspasa-8 fue determinada en 1999 (5) y particularmente los inhibidores de la misma pueden ser usados ventajosamente para tratar las enfermedades relacionadas con la apoptosis. Los inhibidores de la caspasa significan aquellos compuestos que inhiben la actividad de la caspasa, y así controlan síntomas tales como inflamación, apoptosis, etc. provocados por la actividad de la caspasa. Las enfermedades o síntomas que pueden ser tratados o atenuados por la administración de los inhibidores incluyen los siguientes: artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de injerto vs. huésped, sepsis, osteoartritis, osteoporosis, leucemia mielogénica aguda y crónica, meningitis, salpingitis, shock séptico, colangitis, colitis, encefalitis, endocarditis, glomerulonefritis, hepatitis, miocarditis, pancreatitis, diabetes mellitus tipo I, esclerosis múltiple, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, hepatocirrosis (6) . Entre los inhibidores de la caspasa conocidos hasta ahora, los inhibidores irreversibles más importantes son los siguientes: IDN-1965 MX-1013 Los dos inhibidores arriba mencionados desarrollan su actividad en base al mecanismo en común por el cual inactivan irreversiblemente la enzima para suprimir la apoptosis celular (inhibidor de amplio espectro, irreversible) . Se ha informado que el inhibidor irreversible tiene una actividad inhibidora mucho más efectiva cuando se comparan los inhibidores reversibles e irreversibles (7). Se ha informado que tanto el IDN-1965 de IDUN Co. como el MX-1013 de Maxim Co. muestran actividad en el modelo de apoptosis celular para la lesión hepática (8,9). Estos compuestos se encuentran ahora en la etapa de prueba pre-clinica. El inhibidor irreversible IDN-6556, cuya estructura ha sido informada recientemente se encuentra ahora en la etapa de prueba clínica fase II como un agente terapéutico para la lesión hepática (10, 11) .
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Como resultado, los inventores han descubierto que un compuesto de la siguiente fórmula (1) cumple con tales requerimientos y completaron la presente invención: en donde: A, B, R, R1, R2 y X se definen como se describen más abajo. Por lo tanto, la presente invención provee el nuevo derivado de isoxazolina de fórmula (1) , sal o estereoisóemro del mismo que tiene actividad inhibidora efectiva contra las caspasas. Otro objeto de la presente invención es proveer un procedimiento para preparar el compuesto de fórmula (1) , sal o estereoisómero del mismo. Otro objeto" 'de la presente invención -es proveer una composición, un uso, o un método para inhibir a las caspasas, específicamente una composición terapéutica, un uso, o un método para prevenir la inflamación y la apoptosis, que comprende el compuesto de fórmula (1) , sal o estereoisómero del mismo como un ingrediente activo junto con el vehículo farmacéuticamente estable. La Figura 1 muestra la actividad inhibidora del Compuesto (Iii) contra la fibrosis hepática debido a acumulación de bilis: Aa) @ en la Figura 1 representa el caso de la operación de Sham, Ab) @ representa el caso de la operación BDL en donde sólo se administró el vehículo después de la ligadura del conducto biliar, Ac) @ representa el caso en donde el Compuesto (Iii) fue administrado oralmente a una dosis de 3 mg/kg dos veces por día durante 1 semana después de una semana de la ligadura del conducto biliar, y Ad) @ representa el caso en donde el Compuesto (Iii) fue administrado oralmente a una dosis de 10 mg/kg dos veces por día durante 1 semana después de una semana de la ligadura del conducto biliar. La Figura 2 muestra la actividad inhibidora del Compuesto (Iii) contra la apoptosis celular hepática debido a la acumulación de la bilis: Aa) @ en la Figura 2 representa el caso de la operación de Sham, Ab) @ representa el caso de la operación BDL en donde sólo se administró el vehículo después de la ligadura del conducto biliar, Ac) @ representa el caso en donde el "Compuestro- ("Iii)—fue~administrado-oralmente a- una dosis de 3 mg/kg dos veces por día durante 1 semana después de una semana de la ligadura del conducto biliar, y Ad) @ representa el caso en donde el Compuesto (Iii) fue administrado oralmente a una dosis de 10 mg/kg dos veces por día durante 1 semana después de una semana de la ligadura del conducto biliar y Ae)@ es un gráfico que muestra el número de células hepáticas sometidas a apoptosis en cada grupo de tratamiento. Antes de ilustrar la presente invención en detalle, se definen primero los siguientes términos importantes: a) Cadena alquilo simple (ASimple Alkyl ChainS, SAC, en adelante) significa un hidrocarburo que tiene 1 a 8 átomos de carbono en forma isomérica lineal o ramificada. b) Cadena cicloalquilo simple (ASimple CycloAlkyl Chain@ SCAC, en adelante) significa un radical ciclico que tiene 3 a 10 átomos de carbono. c) Grupo arilo (Ar, en adelante) incluye los grupos aromático y heteroaromático . El grupo aromático significa un ciclo insaturado simple o fusionado de 5 a 15 miembros. Uno o más hidrógenos pueden ser reemplazados con uno o más grupos seleccionados entre los siguientes: grupo acilo, amino, carboalcoxi, carboxi, carboxiamino, ciano, halo, hidroxi, nitro, tiol, alquilo, cicloalquilo, alcoxi, ariloxi, sulfoxi y guanido. El grupo heteroaromático significa el grupo aromático que contiene 1 a 5 heteroátomos seleccionados entre un grupo que consiste ~ err oxigeno, azufre-- y~ nitrógeno-.- 'Igualm.ent.-e7- uno o más hidrógenos pueden ser reemplazados con uno o más grupos seleccionados entre los siguientes: grupo acilo, amino, carboalcoxi, carboxi, carboxiamino, ciano, halo, hidroxi, nitro, tiol, alquilo, cicloalquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, sulfoxi y guanido. 0, por ejemplo, en el caso de piridilo, se puede agregar un grupo alquilo al átomo de nitrógeno para convertir el grupo piridilo en un grupo piridinio que tiene carga (+) en el átomo de nitrógeno . El grupo arilo incluye fenilo, bifenilo, 1-naftilo, 2-naftilo, piridinilo, N-alquil-piridinio, pirimidinilo, quinolinilo, benzotienilo, indolilo, pirazinilo, isoindolilo, isoquinolilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, ftalazinilo, imidazolinilo, isoxazolilo, pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo, indolizinilo, indazolilo, benzotiazolilo, benzimidazolilo, benzofuranilo, tienilo, pirrolilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, triazolilo, tetrazolilo, oxazolopiridinilo, imidazopiridinilo, isotiazolilo, cinolinilo, carbazolilo, isocromanilo, cromanilo, tetrahidroisoquinolinilo, isoindolinilo, isobenzotetrahidrofuranilo, isobenzo-tetrahidrotienilo, isobenzotienilo, benzoxazolilo, piridopiridinilo, benzotetrahidrof ranilo, benzotetra-hidrotienilo, purinilo, benzodioxolilo, triazinilo, fenoxazinilo, fenotiazinilo, pteridinilo, benzotiazolilo, imidazopiridinilo, imidazotiazolilo, dihidrobenzisoxazinilo, benzisoxazinilo, benzoxazinilo, ditódrObenzisotiiopiraniiro, irenzopiranilo, benzotiopiranilo, cumarinilo, isocumarinilo, cromonilo, cromanonilo, piridinil-N-óxido, tetrahidroquinolinil-N-óxido, dihidroquinolinilo, dihidroquinolinonilo, dihidroisoquinolinonilo, dihidrocumarinilo, dihidroisocumarinilo, isoindolinonilo, benzodioxanilo, benzoxazolinonilo, N-alquil-piridio, pirrolil-N-óxido, pirimidinil-N-óxido, pirazinil-N-óxido, quinolinil-N-óxido, indolil-N-óxido, indolinil-N-óxido, isoquinolil-N-óxido, quinazolinil-N-óxido, quinoxalinil-N-óxido, ftalazinil-N-óxido, imidazolinil-N-óxido, isoxazolil-N-óxido, oxazolil-N-óxido, tiazolil-N-óxido, indolizinil-N-óxido, indazolil-N-óxido, benzotiazolil-N-óxido, benzimidazolil-N-óxido, pirrolil-N-óxido, oxadiazolil-N-óxido, tiadiazolil-N-óxido, triazolil-N-óxido, tetrazolil-N-óxido, etc. d) Cadena alquilo simple sustituida por arilo (SAC-Ar, más abajo) significa un alquilo de cadena recta o ramificada que tiene 1 a 8 átomos de carbono y es sustituido por el grupo arilo arriba mencionado. e) Aminoácido natural incluye los siguientes: glicina, alananina, valina, leucina, isoleucina, serina, treonina, cisteina, metionina, prolina, ácido aspártico, asparagina, ácido glutámico, glutamina, Usina, arginina, histidina, fenilalanina, tirosina y triptófano. f) El grupo protector del éster simple es un hidrocarburo que tiene 1 a 8 átomos de carbono en forma isomérica lineal o ramificada. Además, la presente memoria incluye las siguientes abreviaturas: N-clorosuccinimida : NCS N-metilmorfolina : NMM 0- (7-azabenzotriazol-l-il) -N,N,N=, N=-tetrametiluroniohexa-fluorofosfato: HATÜ ?,?-dimetilformamida: DMF 1- (3-dimetilaminopropil) -3-etilcarbodiimida: EDC 1-hidroxibenzotriazol hidrato: HOBt ácido trifluoroacético : TFA t-butoxicarbonilo : Boc benciloxicarbonilo : Cbz metilo: Me etilo: Et equivalente: eq Los sustituyentes incluidos en la fórmula (1) arriba mencionada son definidos específicamente como sigue. I) R representa H, una cadena alquilo simple (-SAC) , una cadena cicloalquilo simple (-SCAC) , un grupo arilo (-Ar) , o una cadena alquilo simple sustituida por arilo (-SAC-Ar) , II) R1 representa -SAC, -SCAC, -Ar, -SAC-Ar, o un residuo de cadena lateral de todos los aminoácidos naturales; y el compuesto de fórmula (1) puede existir en una forma diastereomérica especifica, o mezclas de las mismas, cuando el carbono al cual estrá-"un±do "R1 se convierte en"un--estereocentro debido al grupo R1; o el compuesto de fórmula (1) puede tener un grupo protector en forma de éster (-C02R3, en donde R3 es -SAC) o en forma de sulfonamida (-CONHS02R4 en donde R4 es -SAC), o puede existir en forma de una sal farmacéuticamente aceptable, cuando R1 es un residuo de cadena lateral de un aminoácido que contiene una parte carboxilo; o el compuesto de fórmula (1) también puede existir en forma de una sal farmacéuticamente aceptable cuando R1 es un residuo de cadena lateral de un aminoácido que contiene una parte de base, III) R2 representa -SAC, -SCAC, -Ar, -SAC-Ar, o un residuo de cadena lateral de los aminoácidos naturales; y el compuesto de fórmula (1) puede existir en una forma diastereomérica especifica, o mezclas de las mismas, cuando el carbono al cual está unido R se convierte en un estereocentro debido al grupo R ; o el compuesto de fórmula (1) puede tener un grupo protector en forma de éster (-C02R5, en donde R5 es -SAC) o en forma de sulfonamida (-CONHS02R6, en donde R6 es -SAC) , o puede existir en forma de una sal farmacéuticamente aceptable, cuando R2 es un residuo de cadena lateral de un aminoácido que contiene una parte carboxilo; o el compuesto de fórmula (1) también puede existir en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable cuando R2 es un residuo de cadena lateral de un aminoácido que contiene una parte de base, o R2 representa además H; -(CH2)nOR7 en donde R7 es -SAC, -SCAC, -Ar, o -SAC-AR y n = 1 o 2; o - (CH2) nOC (=0) R8 en donde R8 es -SAC, -SCAC, -Ar, o -SAC-Ar y n = 1 o 2. IV) A representa -(CH2)n-(n = 0-4), -0-(CH2)n- (n = 0-4) o -NR9- (CH2)n- (n= 0-4) en donde Rs es -SAC, -SCAC, -Ar, o -SAC-Ar, V) B representa H, -SAC, -SCAC, -Ar, o -SAC-Ar, o VI) R y R1 pueden formar un ciclo junto con el átomo de carbono al cual están unidos, en donde -R-R1- es -(CH2)n-, -(CH2)n-0- (CH2)m, o - (CH2)n-NR10- (CH2)m- en donde n+m<9 y R10 es -SAC, -SCAC, -Ar, -SAC-Ar, -C(=0)-SAC, -C(=0)-SCAC, -C(=0)-Ar, o -C(=0) -SAC-Ar, VII) X representa -C (=0) CH2OR , en donde R11 es -SAC, -SCAC, -Ar, o -SAC-Ar; -C (=0) CH20C (=0) R12 en donde R12 es -SAC, -SCAC, -Ar, o -SAC-Ar; -CH=CH-C02R13 en donde R13 es -SAC, -SCAC, -Ar o -SAC-Ar; -CH=CH-S02R14 en donde R14 es -SAC, -SCAC, -Ar o-SAC-Ar; -C(=0)CH=CH2; o -C0CH2-W en donde W es -N2, -F, -Cl, -Br, -I, -NRi5Ri6 (Ri5 y Ri6 SQn cada uno _SACf -scAC, -Ar, o -SAC-Ar, o juntos pueden formar un grupo cíclico saturado o insaturado de 3 a 6 miembros), -SR17 (R17 es -SAC, -SCAC, -Ar o -SAC-Ar) o es la siguiente fórmula: en donde : Y es H, -OH, -0R18 (R = -SAC o -SCAC), -C(=0)R13 (R = -H, -SAC, o -SCAC), -F, -Cl, -Br, -I, -CN, -NC, -N3, -C02H, CF3, -C02R20 (R20 =r.SAC o -SCAC),^ -C =_Q)NHR21 _(R^==SA^_c?_ rSCAC) o -C (=0) NR22R23 (R22 y R23 son cada uno -SAC, -SCAC, -Ar, o -SAC-Ar), R24 es H, -SAC, -SAC-Ar, o -Ar. Los compuestos preferidos entre los compuestos de fórmula (1) mencionados más arriba son aquellos en donde: R representa H; R1 representa -CH2COOH, -CH2COOR3 (R3=SAC) , o -CH2CONHS02R4 (R4 = SAC) ; R2 representa H, -SAC, -Ar, o -(CH2)nOR7 (R7=-SAC, -SCAC, -Ar, o -SAC-Ar, y n = 1 o 2); o X representa -C (=0) CH2OAr, -C (=0) CH20C (=0) Ar, o-C0CH2- , en donde W es -N2, -F, -Cl, -Br, -I, -NR15R16 (R15 y R16 son cada uno -SAC, -SCAC, -Ar o -SAC-Ar, o juntos pueden formar un grupo cíclico saturado o insaturado de 3 a 6 miembros), o -SR17 (R17 es -SAC, -SCAC, -Ar o -SAC-Ar) . Los compuestos que más se prefieren entre los compuestos de fórmula (1) mencionados más arriba son aquellos en donde: I) R representa H, II) R1 representa -CH2C00H, -CH2COOR3 (R3=SAC) , o -CH2CONHS02R4 (R4 = SAC) , III) R2 representa H, -SAC, -Ar, o -(CH2)nOR7 (R7=-SAC, -SCAC, -Ar, o -SAC-Ar, y n = 1 o 2) , IV) A representa -(CH2)n (n = 0-4) o -0-(CH2)n- (n = 0-4), V) B representa H, -SAC, -SCAC, -Ar o -SAC-Ar, VI) X representa -C0CH2N2, -C0CH2F, -C0CH2C1, -C0CH2Br, -C0CH2I,- -C0CH20Ar, -COCH2OCOAr o -COCH2SR17 (R17 es -SAC, -SCAC, -Ar, o -SAC-Ar) .
Los compuestos particularmente preferidos son aquellos seleccionados entre el siguiente grupo: (1) ácido (3S) -5- [ (2, 6-diclorobenzoil) oxi] -3- ( { [5-metil-3-fenil-4 , 5-dihidro-5~isoxazolil] carbonil } amino) -4-oxopentanoico (Iaa) ; (2) ácido (3S)-3- ({ [5-metil-3-fenil-4 , 5-dihidro-5- isoxazolil] carbonil }amino) -4-oxo-5-fenoxipentanoico (Ibb) ; (3) ácido (3S)-3-({ [5-etil-3-fenil-4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil}amino) -4-oxo-5- (2, 3, 5, 6-tetrafluorofenoxi) pentanoico (Ice) ; (4) ácido (3S)-3-({ [5-etil-3- (1-naftil) -4 , 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil} amino) -4~oxo-5- (2,3,5,6-tetrafluorofenoxi) pentanoico (Idd) ; (5) ácido (3S) -3- ({ [5-etil-3- (2-naftil) -4 , 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil} amino) -4-oxo-5- (2,3,5,6-tetrafluorofenoxi) entanoico (lee) ; (6) ácido (3S) -3- ( { [5-etil-3- ( 1-isoquinolinil ) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil} amino) -4-oxo-5- (2, 3, 5, 6-tetrafluorofenoxi) pentanoico (Iff) ; (7) ácido 3- ({ [5-etil-3- (1-isoquinolinil) -4 , 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil} amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Igg) ; (8) etil 3- ({ [5-etil-3- (1-isoquinolinil) -4 , 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil} amino) -5-fluoro-4-oxopentanoato (Ihh) ; (9) ácido 5-fluoro-3- ({[ (5R) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil} amino) -4-oxopentanoico (Iii) ; (10) ácido 3- ( { [5-etil-3- (4-quinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Ij j ) ; (11) ácido 3- ( { [3- (benzotiofen-2-il) -5-etil- , 5-dihidro-5 isoxazolil] carbonil Jamino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Ikk) ; (12) ácido (35)-3-({ [3- (1, 3-dimetil-lH-indol-2-il) -5-etil-4, 5- dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -4-oxo-5- (2,3,5,6- tetrafluorofenoxi) entanoico (111) ; (13) ácido 3-({ [3-(l,3-dimetil-lH-indol-2-il)-5-etil-4,5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Imm) ; (14) ácido (3S)-3-({ [5-etil-3-(l-naftilmetil)-4,5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -4-oxo-5- (2, 3, 5, 6-tetrafluorofenoxi ) entanoico (Inn) ; (15) ácido (3S)-5-[ (2, 6-diclorobenzoil) oxi] -3- [ ( {5-etil-3- [2- (1-naftil) etil] - 4, 5-dihidro-5-isoxazolil} carbonil) amino] -4-oxopentanoico (loo) ; (16) ácido '(3S)-3-[ ( { 5-etil-3- [ (l-naftiloxi)metil] -4, 5-dihidro-5-isoxazolil } carbonil ) amino] -4-oxo-5- (2,3,5,6-tetrafluorofenoxi) entanoico (Ipp) ; (17) ácido (3S)-3- { [ (3-{ [ ( 4-cloro-l-naftil) oxi]metil}-5-etil-4, 5-dihidro-5-isoxazolil) carbonil] amino } -4-oxo-5- (2, 3,5,6-tetrafluorofenoxi) entanoico (Iqq) / (18) ácido (3S, 4E) -6-etoxi-3- ( { [ {5R) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil ) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -6-oxo-4-hexenoico (Irr) ; 119)- ácido (3S,4£r-3-({ [ (5J¾) -5^isopropil-3--(l-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -5- (metilsulfonil) -4- pentenoico (Iss) ; (20) ácido 5-fluoro-3- ( { [ (5S) -3- (1-isoquinolinil) -5-propil-4 , 5 dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -4-oxopentanoico (Itt) ; (21) ácido 3- ( { [ (5S) -5-etil-3- (1-naftil) -4, 5-dihidro-5 isoxazolil] carbonil lamino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iuu) ; (22) ácido 3- ( { [ (5S) -5-etil-3- (2-quinolinil) -4, 5-dihidro-5 isoxazolil] carbonil lamino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Ivv) ; (23) ácido 3- ( { [ (5i?) -5-etil-3- (3-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5 isoxazolil] carbonil lamino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iww) ; (24) ácido 3- ( { [5-etil-3- (8-quinolinil) -4, 5-dihidro-5 isoxazolil] carbonil lamino) -5-f1 uoro-4-oxopentanoico (Ixx) ; (25) ácido 3- ( { [5-etil-3- (3-quinolinil) -4, 5-dihidro-5 isoxazolil] carbonil lamino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iyy) ; (26) ácido 5-fluoro-3- ({[ (5R) -5-isopropil-3- (2-quinolinil) -4 , 5 dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -4-oxopentanoico (Izz) ; (27) ácido 3- ({ [5-etil-3~ (2-isopropilfenil) -4 , 5-dihidro-5 isoxazolil] carbonil lamino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaal) ; (28) ácido 3-[ ({3-[3-(tert-butil)fenil]-5-etil-4,5-dihidro-5 isoxazolil } carbonil) amino] -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaa2) ; (29) ácido 3- [ ( { 3- [4- ( tert-butil) fenil] -5-etil- , 5-dihidro-5 isoxazolil } carbonil) mino] -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaa3) ; (30) ácido 5-fluoro-3- ({[ (5R) -5-isopropil-3- (2-isopropilfenil) 4, 5-dihidro-5- isoxazolil] carbonil lamino) -4-oxopentanoico (Iaa4) " (31)—ácido 3-¦=¦¦[ ("{ (5R) -3--[-3-tt"ert-bu1:i-l)-f-e-nil-]-5-isopropil-4, 5 dihidro-5-isoxazolil} carbonil) amino] -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaa5) ; (32) ácido 3-{ [ (3- [1, 11 -bifenil] -3-il-5-isopropil-4, 5-dihidro-5-isoxazolil ) carbonil] amino } -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaa6) ; (33) ácido 3- ( { [5-etil~3- (2-piridinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil }amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaa7) ; (34) ácido 3- [ ( {3- [4- (tert-butil) -2-piridinil] -5-etil-4, 5-dihidro-5-isoxazolil } carbonil) amino] -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaa8) ; (35) ácido 3-[ ({ (5i?) -3- [4- (tert-butil ) -2-piridinil] -5-isopropil-4, 5-dihidro-5-isoxazolil } carbonil) amino] -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaa9) ; (36) ácido 3- ( { [5-etil-3- (4-isobutil-2-piridinil) -4, 5-dihidro -5-isoxazolil] carbonil lamino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (IaalO) ; (37) ácido 3- ( { [3- (4-acetil-2-piridinil) -5-etil-4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil Jamino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaall) ; (38) ácido 3- ( { [3- (4-ciclopropil-2-piridinil) -5-etil-4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil} amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaal2) ; (39) ácido 3-({ [3- (4-ciclopentil-2-piridinil) -5-etil-4r 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil} amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaal3) ; (40) ácido 3- ( { [ ( 5R) -3- (4-ciclopentil-2-piridinil) -5-isopropil-4 , 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaal4) ; (41) ácido 3-({ [3- (4-ciclohexil-2-piridinil) -5-etil-4f 5-dihidro-5-l"soxa"zolil]"carbonil } amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaal5) ; (42) ácido 3- ({ [5-etil-3- (5, 6, 7 , 8-tetrahidro-l-isoquinoli-nil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaal6) ; (43) ácido 5-fluoro-3- ( { [5-isopropil-3- (4-fenil-2-piridinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil} amino) -4-oxopentanoico (Iaal7) ; (44) ácido (3S)-5-[ (difenilfosforil) oxi] -3- ( { [ (5i) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil} amino) -4-oxopentanoico (Iaal8) ; (45) ácido (3S) -3- ( { [ {5R) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4 , 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil} amino) -4-oxo-5-{ [1 -fenil-3- (trifluorometil) -lfí-pirazol-5-il] oxi }pentanoico (Iaal9) ; (46) (3S) -5- [ (4-bencil-5-oxo-2, 5-dihidro-3-furanil) oxi-3- ({ [ (5R)-5-isopropil-3- ( 1-isoquinolinil) -4 , 5-dihidro-5~ isoxazolil] carbonil }amino) -4-oxopentanoico (Iaa20) (47) ácido (3S) -5-isobutiriloxi) -3- ( { [ (5R) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -4-oxopentanoico (Iaa21) ; (48) (3S)-3-({ [ (5fi) -5-isopropil-3-( 1-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -4-oxo-5-hexenoico (Iaa22) ; (49) ácido (3S) -3- ({[ {5R) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil }amino) -4-oxo-5- (2-piridiniloxi) entanoico (Iaa23) ; (50) ácido (3S) -3- ( { [5-etil-3- (2-isopropilfenil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -4-oxo-5- (2-piridiniloxi) -pentanoico (Iaa24) ' — - - - -- " ¦ (51) 2-{ [ (3S)-4-carboxi-3- ({ [ (5 )-5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil}amino) -2-oxobutil] oxi) -1-metilpiridinio trifluorometanosulfonato (Iaa25) ; (52) 2-{ [ (3S) -4-carboxi-3- ( { [5-etil-3- (2-isopropilfenil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carboniljamino) -2-oxobutil] oxi}-l-metilpiridinio trifluorometanosulfonato (Iaa26) ; (53) ácido 3-({ [3- (5-cloro-l-metil-lií-indol-2-il) -5-isopropil-4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil}amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaa27) ; (54) ácido 3- ({ [3- (1, 5-dimetil-lH-indol-2-il) -5-isopropil-4 , 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaa28); y (55) ácido (3S) -5-fluoro-3- ( { [3- {5R) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil }amino) -4-oxopentanoico (Iii-1) . El compuesto de fórmula (1) de acuerdo con la presente invención tiene dos (2) átomos de carbono asimétrico, y asi puede existir en su forma estereoisomérica incluyendo diastereómeros . Los compuestos particularmente preferidos entre los estereoisómeros son aquellos que tienen la siguiente fórmula (la) : y asi, otro objeto de la presente invención es proveer el compuesto de fórmula (la) en la forma estereoisomérica.
Entre los compuestos de fórmula (la) , por ejemplo, se puede obtener el compuesto de ácido (3S) -5-fluoro-3- ( { [ (5R) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil}amino) -4-oxopentanoico (Iii-1) por medio de un procedimiento que comprende los pasos de disolver una mezcla de (3S) y (3R) en metil t-butil éter, agregando una pequeña cantidad de ácido (3S) -5-fluoro-3- ({[ {5R) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) - , 5-dihidro-5-isoxazolil] -carboniljamino) -4-oxopentanoico como un material de germen para dar un cristal y recristalizar este cristal a partir del sistema de solventes acetato de etilo/n-hexano . Los compuestos que más se prefieren entre los compuestos de las fórmulas (1) y (la) son ácido 5-fluoro-3- ({[ (SR) -5-isopropil-3- (l-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] -carbonil}amino) -4-oxopentanoico (Iii) y (3S) -5-fluoro-3- ({ [ (5R) -5-isopropil-3- ( 1-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -4-oxopentanoico (Iii-1) . Los procedimientos para la preparación del nuevo derivado de isoxazolina de fórmula (1) que muestra una actividad inhibidora contra las caspasas se ilustran en los siguientes Esquemas de Reacción 1 a 5. Sin embargo, aquellos ilustrados en los siguientes Esquemas de Reacción representan sólo los procedimientos tipicos usados en la presente invención. El orden de manipulación puede cambiarse sin limitaciones, y asi los procedimientos no están restringidos a aquellos explicados a continuación. en donde: A, B y R2 son definidos como se describió más arriba, y P1 representa una cadena alquilo simple. En el Esquema de Reacción 1 ilustrado más arriba, un derivado aldehido (II) se hace reaccionar con clorhidrato de hidroxilamina y carbonato de sodio en una mezcla de solventes de alcohol-agua para dar un derivado oxima (III) (una mezcla de oximas syn y anti) . El derivado oxima resultante (III) es tratado con NCS (N-clorosuccinimida) en solución de dimetilformamida para dar un derivado de cloruro de hidroxamoilo (IV) . El derivado de cloruro de hidroxamoilo (IV) asi obtenido se hace reaccionar con un derivado acrilato (V) para dar un derivado de isoxazolina (VI) , el cual es hidrolizado luego, si se requiere, para dar un derivado de isoxazolina desprotegido (VII) . Si es apropiado, el derivado oxima (III) , el derivado acrilato (V) y NaOCl pueden reaccionar juntos en un recipiente de reacción (in situ) para dar directamente el derivado de isoxazolina (VI) (ver Preparaciones 16 y 17) . Esquema de Reacción 2 1 ) Dess-Martin 2) Desprotección si se requiere en donde A, B, R, R1, R2, R11, R12 y W son definidos como se describió más arriba. En el Esquema de Reacción 2 ilustrado más arriba, un derivado de ácido carboxilico (VII) es acoplado con un derivado de ácido aspártico (VIII) (ver el siguiente Esquema de Reacción 3) para dar un compuesto (IX) , que es sometido luego a la reacción de oxidación de periodinano de Dess-Martin, y a una reacción de desprotección, si se requiere, para dar el compuesto deseado de fórmula (1) . El grupo funcional Z en el compuesto (I) del Esquema de '""""Reacción "2 puede" ser- formado por medio de varios pasos como se ilustra en las siguientes Preparaciones 5 y 7 después de que el compuesto de ácido carboxilico (VII) en el lado izquierdo es combinado con un raetiléster del ácido aspártico (ß-t-Bu) . De otro modo, como se ilustra en el siguiente Esquema de Reacción 3, el compuesto (VIII) que ya tiene el Z deseado es sintetizado primero y acoplado con el compuesto (VII) (Ref . : WO 00/23421). Además, cuando W es F, el compuesto racémico puede ser preparado de acuerdo con un método conocido en Tetrahedron Letters, 1994, 35 (52), 9693-9696.
Esquema de Reacción 3 en donde Z es definido como se describió más arriba. El derivado acrilato (V) usado como un reactivo en el Esquema de Reacción 1 ilustrado más arriba puede ser preparado por dos vías (2) . Es decir, un compuesto (XV) puede ser preparado fácilmente a partir de un compuesto conocido (XIV) {Synthesis, 1982, pág. 924) como se ilustra en el siguiente Esquema de Reacción 4, o metil (etil) 2-i-propilacrilato, el compuesto (V) , puede ser preparado a partir de dimetil (dietil) malonato (J. Chemical Society Perkin Trans . 1, 1997, 1559-1570). Esquema de Reacción 4 en donde P^. y R¿ son definidos como se describió más arriba. El Esquema de Reacción 5 siguiente muestra un procedimiento de síntesis para preparar un compuesto en donde se introduce un éster a, ß-insaturado o una sulfona a, ß-insaturada en el sitio ??. De acuerdo con esto, el derivado de ácido carboxílico (VII) como se preparó en el Esquema de Reacción 1 se hace reaccionar con un derivado de amino alcohol (XVII) para dar un compuesto (XVI), que es sometido luego a oxidación de Dess-Martin y a reacción de Wittig para dar el compuesto (I) .
Esquema de Reacción 5 Desprotección si se requiere en donde : R, A, B, R1 y R2 son definidos como se describió más arriba, y Q representa -C02R13 o S02R14, en donde R13 y R14 son definidos como se describió más arriba. El compuesto de fórmula (1) de acuerdo con la presente invención tiene un amplio espectro de actividad inhibidora contra las caspasas como se demostró por los resultados de los siguientes Experimentos, y asi tiene un efecto para prevenir la inflamación y la apoptosis. Por lo tanto, la presente invención provee una composición para inhibir las caspasas, específicamente una composición terapéutica para prevenir la inflamación y la apoptosis, que comprende el compuesto de fórmula (1) como un ingrediente activo " junto con" el "vehículo- farmacéuticamente aceptable. Específicamente, la composición de la presente invención tiene un efecto terapéutico para la demencia, la isquemia cerebral, el deterioro cerebral debido a SIDA, diabetes, úlcera gástrica, lesión cerebral por hepatitis, enfermedades hepáticas inducidas por hepatitis, hepatitis aguda, insuficiencia hepática fulminante, cirrosis del hígado, sepsis, rechazo al transplante de órganos, artritis reumática o apoptosis de las células cardíacas debido a enfermedades cardíacas isquémicas, particularmente, específicamente para hepatitis aguda, cirrosis del hígado o artritis reumática. El inhibidor de la caspasa, particularmente el compuesto de fórmula (1) , puede ser formulado en varias formas farmacéuticas para el propósito · de su administración. Para preparar la composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención, una cantidad efectiva del inhibidor de la caspasa, particularmente el compuesto de fórmula (1) o su sal, se mezcla con un vehículo farmacéuticamente aceptable que puede tener una amplia variedad de formas dependiendo de la formulación a ser preparada . El compuesto inhibidor de la caspasa puede ser formulado como una inyección parenteral, o un preparado percutáneo u oral, dependiendo del propósito de su aplicación. Es especialmente ventajoso formular la composición en una forma de dosis unitaria para facilitar la administración y para la uniformidad de la dosificación. Para el preparado oral, se puede usar cualquier vehículo farmacéutico usual. Por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares pueden ser usados para tales preparados líquidos como suspensiones, jarabes, elixires y soluciones; o almidones, azúcares, caolín, lubricantes, ligantes, agentes desintegrantes y similares pueden ser usados para preparados sólidos tales como polvos, pildoras, cápsulas y comprimidos. Debido a su facilidad de administración, los comprimidos y cápsulas son las formas de dosificación unitarias más ventajosas. También es conveniente que los comprimidos y las pildoras sean formuladas como un preparado con recubrimiento entérico.
Para el preparado parenteral, se usa generalmente agua estéril como el vehículo, aunque se pueden usar otros ingredientes tales como auxiliares de solubilidad. Inyecciones, por ejemplo, suspensiones acuosas u oleosas esterilizadas para inyección, pueden ser preparadas de acuerdo con el procedimiento conocido usando un agente de dispersión adecuado, un agente humectante, o un agente de suspensión. Los solventes que se pueden usar para preparar inyecciones incluyen agua, fluido de Ringer, y solución de NaCl isotónica, y también se puede usar convenientemente aceite de fijación esterilizado como el solvente o el medio de suspensión. Se puede usar cualquier aceite de fijación no estimulante incluyendo mono-, di-glicéridos para este propósito. También" sé puede usar un acido graso" "tal" como ácido oleico para inyecciones.
Para la administración percutánea, el vehículo puede incluir un agente que aumenta la penetración y/o un agente humectante adecuado, opcionalmente combinado con aditivos adecuados que no producen irritación significativa de la piel. Dichos aditivos pueden facilitar la administración a través de la piel y/o pueden ayudar a la preparación de una composición deseada. Estos preparados percutáneos son administrados de diversas maneras, por ej . , como un parche transdérmico, un preparado para aplicar en el sitio (Aspot-on@) o un ungüento. Cuando se usa el inhibidor de la caspasa, específicamente el compuesto de fórmula (1) para propósitos clínicos, es administrado preferentemente al paciente en una cantidad que oscila entre 0,1 y 100 mg por kg de peso corporal por día. La dosis diaria total puede ser administrada de una sola vez o en varias aplicaciones. Sin embargo, la dosis de administración específica para un paciente individual puede variarse con el compuesto específico usado, el peso corporal, el sexo, la condición higiénica o la dieta del paciente, el tiempo o método de administración, la velocidad de excreción, la relación de mezclado del agente, la gravedad de la enfermedad a tratar, etc.
La presente invención · se explicará más específicamente por medio de los siguientes ejemplos. Sin embargo, debería entenderse que estos ejemplos pretenden ilustrar la presente invención pero no limitar de ninguna manera el alcance de la presente invención. Preparación 1 Benzaldehído oxima Se disolvió benzaldehído (5,31 g, 50,0 mmoles) en etanol (60 mi) -agua (30 mi) y clorhidrato de hidroxilamina (5,21 g, 1,5 eq.) y se agregó carbonato de sodio anhidro (Na2C03, 3,97 g, 0,75 eq.) a 01C. Cuando se formó una gran cantidad de sólido después de aproximadamente un minuto, se agregó agua-etanol (1:1, 60 mi), y la mezcla se agitó durante una hora. Se agregó una solución de cloruro de sodio acuosa saturada (100 mi) y la mezcla se extrajo dos veces con acetato de etilo (300 mi) . El extracto se lavó con solución de bicarbonato de sodio acuosa 1,0 N (NaHCC>3, 100 mi x 2), se secó (Na2SC> anhidro) y se concentró bajo presión reducida para dar el compuesto del título (6,06 g, rendimiento 99%) como un polvo blanco como una mezcla de cis y trans. ¦"¦H-NMR (500 MHz, CDC13) d 8,9 (br, 1H) , 8,1 (s, 1H) , 7,5 (m, 2H) , 7,3 (m, 3H) . Preparación 2 Cloruro de benzaldehído hidroxamoilo La oxima preparada en la Preparación 1 (3,00 g, 24,8 mmoles) se disolvió en dimetilformamida (100 mi) y se agregó N-clorosuccinimida (3,47 g, 1,05 eq.) . La solución resultante se _agitó durante una hora en un baño de agua de aprox. 401C, y el solvente volátil se removió por destilación bajo presión reducida. El residuo se disolvió en acetato de etilo-hexano (1:1, 150 mi) 7 se lavó con agua (100 mi x 3) , se secó (Na2S04 anhidro) y se concentró bajo presión reducida para dar el compuesto del titulo (3,86 g, rendimiento 99%). Este compuesto se usó en la reacción siguiente sin purificación ulterior. Preparación 3 Metil 5-metil-3-fenil-4 , 5-dihidro-5-isoxazolcarboxilato (Vía) El cloruro de hidroxamoilo preparado en la Preparación 2 (3,86 g, 24,8 mmoles) y metil metacrilato (4,0 mi, 37,2 mmoles, 1,5 eq. ) se disolvieron en éter dietilico seco (120 mi) bajo atmósfera de nitrógeno, la mezcla se mantuvo a -781C y se agregó trietilamina (6,9 mi, 2,0 eq. ) . La mezcla se agitó durante la noche mientras se calentaba lentamente a temperatura ambiente. Se agregó agua (100 mi) , y luego se extrajo la mezcla con acetato de etilo (100 mi x 2) , se lavó con agua (100 mi) , se secó ( a2S04 anhidro) y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (15% acetato de etilo-hexano) para dar el compuesto del titulo (5,34 g, rendimiento 98%), el que luego se identificó por 1H-NMR como una mezcla 1:1 de diastereómeros . ¦""H-NMR (400 MHz, CDCl3) d 6,7 (m, 2H) , 6,5 (m, 3H) , 3,0 (d, J=16,7Hz, 1H) , 2,9 (s, 3H) , 2,3 (d, J=16,7Hz, 1H) , 0,8 (s, 3H) . Preparación 4 Ácido 5-metil-3-fenil- , 5-dihidro-5-isoxazolcarboxílico (Vlla) ¦ - - El compuesto preparado en la- Preparación -3 (Vía, 5,34 g) se disolvió en tetrahidrofurano destilado (120 mi) y se agregó una solución de hidróxido de sodio acuoso 1N (36,5 mi, 1,5 eq.). Después de aproximadamente cuatro horas, la mezcla se neutralizó con una solución de ácido clorhídrico acuosa 1N y se destiló bajo presión reducida para remover la mayor parte del tetrahidrofurano . El residuo se disolvió en acetato de etilo en exceso (>700 mi) , se lavó con agua, se secó (Na2S04 anhidro) y se concentró bajo presión reducida para dar el compuesto del título (4,77 g, rendimiento 95%) como un polvo blanco. Este compuesto se usó en la siguiente reacción sin purificación ulterior. Preparación 5 (35) -3-{ [ (benciloxi) carbonil] amino}-5- ( t-butoxi) -2- hidroxi-5-oxopentil 2, 6-diclorobenzoato (Xlla) A ácido N-benciloxicarbonil-fi-t-butilaspártico (5,03 g, 15,6 mmoles) y NM (1,90 mi, 17,1 mmoles) se agregó tetrahidrofurano seco (60 mi) bajo atmósfera de nitrógeno, la mezcla se mantuvo a -151C y se agregó cloroformato de isobutilo (2,12 mi, 16,3 mmoles). La mezcla se agitó durante aprox. 20 minutos. A la mezcla de reacción que se mantuvo a 01C se agregó una solución de diazometano-éter (sintetizado a partir de 2,0 eq. de l-metil-3-nitro-l-nitroso-guanidina, 60 mi) para preparar un derivado de diazocetona (-30 minutos). Se agregó 30% HBr/AcOH (6,42 mi, 2,0 eq. ) a 01C. La mezcla resultante se agitó (30-60 minutos), se extrajo con aceto de etilo, se lavó dos veces con solución de bicarbonato ' de sodio " acuosa saturada y una -vez -con solución de cloruro de sodio acuosa, se secó (Na2S04 anhidro) y se concentró bajo presión reducida para dar el derivado de bromometil cetona (X, 6,4 g) . El derivado de bromometil cetona (X, 4,36 g) asi obtenido y ácido 2 , 6-diclorobenzoico (2,28 g, 1,1 eq. ) se disolvieron en dimetilformamida (18 mi), se agregó KF (1,58 g, 2,5 eq.) y la mezcla se agitó durante dos horas para dar el derivado 2,6-diclorobenzoiloximetil cetona (Xla) . Este compuesto se disolvió en metanol (20 mi) y se hizo reaccionar agregando una solución de NaBH4 (412 mg) -metanol (40 mi) (-101C-temperatura ambiente, dos horas) . La reacción se detuvo con ácido acético y la solución de reacción se destiló bajo presión reducida para remover el metanol. El residuo se extrajo con acetato de etilo (50 mi x 2) , se lavó con agua y solución acuosa de cloruro de sodio, se secó ( a2S04 anhidro) , se concentró bajo presión reducida y se separó-purificó por cromatografía en columna (acetato de etilo-hexano, 1:5) para dar el compuesto del título (4,80 g, rendimiento 86%) en una forma diastereomérica . 1H-N R (400 MHz, CDC13) d 7,3-7,2 (m, 8H) , 5,9 (m, 1H) , 5,2 (m, 4H) , 4,7 (m, 1H) , 2,9 (m, 1H) , 2,7 (m, 1H) , 1,4 (s, 9H) . Preparación 6 (3S) -3-amino-5- ( t-butoxi) -2-hidroxi-5-oxopentil 2, 6- diclorobenzoato (Vlla) El grupo benciloxicarbonilo del compuesto preparado en la Preparacrón" 5' fue- removido- --(Pd C)~ -bajo- un balón de hidrógeno durante 40 minutos para dar el compuesto del título (Rendimiento 100%) . """H- M (400 MHz, DMSO-d6) d 8,2 (br, 2H) , 7,6-7,5 (m, 3H) , 6,1 (m, 1H) , 4,4-3,9 (m, 3H) , 3,0-2,6 (m, 2H) , 1,4 (s, 9H) . Ejemplo 1 (35) -5- ( t-butoxi)-3-{ [ (5-metil-3-fenil-4, 5-dihidro-5- isoxazolil) carbonil] amino}-2, 5-dioxopentll 2, 6-dlclorobenzoato (la) Una mezcla del derivado de ácido carboxilico preparado en la Preparación 4 (Vlla, 300 mg, 1,46 mmoles) , el derivado de amino alcohol preparado en la Preparación 6 (Vlla, 667 mg, 1,1 eq.) y HATU (722 mg, 1,3 eq. ) se enfrió a 01C, se agregó trietilamina (0,82 mi, 4,0 eq.) en un solvente de DMF (5 mi), y la mezcla resultante se hizo reaccionar durante 5 horas. El solvente se destiló bajo presión reducida y el residuo se extrajo con acetato de etilo (200 mi x 2) , se lavó con agua, solución acuosa de bicarbonato de sodio y solución acuosa de cloruro de sodio, se secó ( a2S04 anhidro) , se concentró bajo presión reducida, y se purificó por cromatografía · en columna para dar el Compuesto (IXa) (810 mg, rendimiento 98%) . A este compuesto y a un reactivo de Dess- artin (1,70 g, 3,0 eq. ) se agregó diclorometano seco (25 mi) y la mezcla se agitó durante una hora a temperatura ambiente. La reacción se detuvo por medio de alcohol isopropílico (3 mi) . El sólido se removió por filtración bajo presión reducida a " través de Ce ite~;~"y"el" fTtrado" se 'extraj o con acetato de etilo (20 mi x 2), se lavó con agua, solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio acuosa saturada y solución acuosa de cloruro de sodio, se secó (Na2S0 anhidro), se concentró bajo presión reducida y se purificó preliminarmente por cromatografía en columna (36% acetato de etilo-hexano) para dar el compuesto del título diastereomérico (780 mg) . XH-NMR (400 MHz , CDCl3) d 7,8 (m, H, 1H) , 7,6 (m, 2H) , 7,3 (m, 3H) , 7,2 (m, 3H) , 5,1-5,0 (m, 2H) , 4,8 (m, 1H) , 3,8 (m, 1H) , 3,2 (m, 1H), 2,9-2,8 (m, 2H) , 1,7 (s, 3H) , 1,4 (s, 9H) . Ejemplo 2 Ácido (3S) -5- [ (2, 6-diclorobenzoil) oxi] -3-{ [ (5-metil-3- fenil-4, 5-dihidro-5-isoxazolil) carbonil] amino}-3-oxopentanoico (Iaa) El compuesto preparado en el Ejemplo 1 (44 mg) se disolvió en diclorometano (2 mi) y se agregó ácido trifluoroacético (1 mi) a 01C. La mezcla se agitó durante dos horas mientras se calentaba lentamente a temperatura ambiente y luego se concentró bajo presión reducida para dar el compuesto del título (Iaa) en una cantidad estequiométrica . ¦""H-NMR (500 MHz, CDC13) d 8,1 (m, 1H) , 7,5 (m, 2H) , 7,3 (m, 3H) , 7,2 (m, 3H) , 5,1-4,9 (m, 2H) , 4,9-4^8 (m, 1H) , 3,8 (m, 1H) , 3,2 (m,__lH ) 1 , 7 (m, 3H) . Preparación 7 t-Butil (3S) -3-amino-4-hidroxi-5-fenoxipentanoato (VIIIb) ácido "N^bencilOxicarbOnil-B-t-but-il-aspártico (10,0 g, 31,0 mmoles) y NMM (3,75 mi, 1,1 eq) se agregó tetrahidrofurano seco (120 mi) bajo atmósfera de nitrógeno y la mezcla se mantuvo a -151C. Se agregó cloroformato de isobutilo (4,22 mi, 1,05 eq. ) y la mezcla se agitó durante 20 minutos. Los reactivos se mantuvieron a 01C, lo que luego se mezcló con una solución de diazometano-éter (sintetizada a partir de 2,0 eq. de l-metil-3-nitro-l-nitrosoguanidina, 60 mi) para preparar un derivado de diazocetona (-30 minutos). Se agregó 30% HBr/AcOH (12,83 mi, 2,0 eq. ) para preparar el derivado de bromometil cetona (30-60 minutos) . El producto se extrajo con acetato de etilo, se lavó dos veces con solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y solución acuosa de cloruro de sodio, se secó ( a2S04 anhidro) y se concentró bajo presión reducida para dar un derivado de bromometil cetona (12,9 g) en una cantidad estequiométrica . El derivado de bromometil cetona asi obtenido (X, 12,9 g, 31,0 mmoles) y fenol (3,23 g, 1,2 eq.) se disolvieron en dimetilformaraida (30 mi), se agregó KF (4,53 g, 2,5 eq.) y la mezcla se agitó durante dos horas para dar el derivado de fenoximetil cetona (Xlb) . Este compuesto se disolvió en metanol (40 mi) -THF (100 mi) y se hizo reaccionar agregando NaBH (2,35 g) -solución de metanol (40 mi) (-lOlC-temperatura ambiente, dos horas) . La reacción se detuvo por medio de ácido acético y la mezcla de reacción se destiló bajo presión reducida para remover el metanol. El residuo se extrajo con acetato de etilo (50 mi x 2), se lavó con agua y solución de cloruro de sodio acuosa, se secó ( a2S04 anhidro) , se concentró bajo presión reducida, y se separó-purificó por cromatografía en columna (acetato de etilo-hexano, 1:7) para dar un compuesto (Xllb, 6,50 g, rendimiento 50%) en una forma diastereomérica cuyo grupo amino es protegido por benciloxicarbonilo. 1H-NMR (400 MHz, CDC13) d 7,3-7,2 (m, 8H) , 5,9 (m, 1H) , 5,2 (m, 4H) , 4,7 (m, 1H) , 2,9 (m, 1H) , 2,7 (m, 1H) , 1,4 (s, 9H) . El grupo benciloxicarbonilo del compuesto obtenido más arriba se removió (Pd/C) bajo un balón de hidrógeno para dar el compuesto del título (4,16 g, rendimiento 95%). ^Í-NMR (400 MHz, DMSO-d6) d 8,1 (br, 2H) , 7,3 (m, 5H) , 5,6 (m, 1H) , 4,1-4,0 (m, 3H) , 2,6 (m, 2H) , 1,4 (s, 9H) . Ejemplo 3 t-butil- (35) -3-{ [5-metil-3-fenil-4, 5-dihidro-5- isoxazolil) -carbonil] amino} -4-oxo-5-fenoxipentanoato (Ib) Una mezcla del derivado de ácido carboxílico preparado en la Preparación 4 (Vlla, 273 mg, 1,33 inmoles)," el derivado de amino alcohol preparado en la Preparación 7 (VlIIb, 412 mg, 1,1 eq.) y HATU (657 mg, 1,3 eq. ) se enfrió a 01C, se agregó trietilamina (0,74 mi, 4,0 eq.) en un solvente de DMF (5 mi), y la mezcla resultante se hizo reaccionar durante 5 horas. El solvente se destiló bajo presión reducida y el residuo se extrajo con acetato de etilo (200 mi x 2) , se lavó con agua, solución acuosa de bicarbonato de sodio y solución acuosa de cloruro de sodio, se secó ( a2"S04 anhidro")" ""se'""C"oricentró-bajO"- presión- reducida, y se purificó por cromatografía en columna (30-40% EA/Hex) para dar el Compuesto (IXb) (545 mg, rendimiento 88%) . A este compuesto y a un reactivo de Dess-Martin (1,43 g, 3,0 eq.) se agregó diclorometano seco (25 mi) y la mezcla se agitó durante una hora a temperatura ambiente. La reacción se detuvo por medio de alcohol isopropilico (2 mi) . El sólido se removió por filtración bajo presión reducida a través de Celite, y el filtrado se extrajo con acetato de etilo (20 mi x 2), se lavó con agua, solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y solución acuosa de cloruro de sodio, se secó (Na2S04 anhidro) , se concentró bajo presión reducida y se purificó preliminarmente por cromatografía en columna (eluyente: 25% acetato de etilo-hexano) para dar el compuesto del título diastereomérico (540 mg, rendimiento 99%) . Hl-NMR (400 MHz, CDC13) d 7,8 ( H, 1H) , 7,5 (m, 2H) , 7,3 (m, 3H) , 7,3 (m, 1H) , 7,1 (m, 1H) , 6,8 (m, 2H) , 6,7 (m, 1H) , 4,9 (s, 1H) , 4,7-4,6 (m, 2H) , 3,7 (d, J=17Hz, 1H) , 3,2 (d, J=17Hz, 1H) , 2,9 (m, 1H) , 2,8 (m, 1H) , 1,7 (s, 3H) , 1,4 (s, 9H) . Ejemplo 4 Ácido (35) -3-{ [ (5-metil-3-fenil-4, 5-dihidro-5- isoxazolil) carbonil] amino } -4-oxo-5-fenoxipentanoico (Ibb) El compuesto preparado en el Ejemplo 3 (530 mg, 1,136 mmoles) se disolvió en diclorometano (6 mi) y se agregó ácido trifluoroacético (3 mi) a 01C. La mezcla se agitó durante dos horas mientras se" calentaba lentamente a-temperatura ambiente, y se concentró bajo presión reducida para dar el compuesto del titulo (Ibb) (465 mg) con un rendimiento estequiométrico . 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) d 7,5 (m, 2H) , 7,3 (m, 3H) , 7,1 (NH, 1H) , 6,7 (m, 5H) , 5,0-4,6 (m, 2H) , 4,2 m, 1H) , 3,8 (m, 1H) , 3,2 (m, 1H) , 3,0-2,7 (m, 2H) , 1,6 (s, 3H) . Preparación 8 Etil 2-etilacrilato (XVb) A CuCN (26,9 g, secado antes bajo vacio) se agregaron bajo atmósfera de nitrógeno aprox. 500 mi de tetrahidrofurano seco. La mezcla se mantuvo a -781C y se agregaron lentamente 100 mi de bromuro de metil magnesio (solución de éter dietílico 3,0 M) bajo agitación mecánica. La mezcla espesa se agitó durante aprox. 30 minutos a -781C. Se agregó lentamente etil 2-bromometilacrilato (28,9 g, 150 mmoles, método de síntesis: Vinieras, J. y Rambaud, M. Synthesis, 1982, 914) disuelto en aprox. 30 mi de tetrahidrofurano seco. La temperatura de la mezcla de reacción se elevó lentamente a temperatura ambiente durante dos horas. La reacción se completó agregando lentamente solución de cloruro de amonio saturada (-50 mi) . La mezcla de reacción se filtró a través de Celite para remover los precipitados y luego se lavó con éter dietílico. La capa orgánica se lavó con agua y solución de bicarbonato de sodio saturada (300 mi x 2) , se secó ( a2S04 anhidro), y se concentró bajo presión reducida para dar 26,7 g (rendimiento estequiométrico) de un líquido transparente. Este líquido -se "identificó- "por -^?-???^d? "MH-z, eDGl3) ¦ y- se confirmó que era el compuesto del título que tenía aprox. 75% de pureza p/p. """H-NM (500 MHz, CDC13) d 6,12 (1H, s) , 5,50 (1H, s) , 4,20 (2H, q, J=7,3Hz), 2,31 (2H, qt) , 1,28 (3H, t, J=7,3Hz), 1,07 (3H, t, J=7, 8Hz) . Preparación 9 Etil-5-etil-3-fenil-4 , 5-dihidro-5-isoxazolcarboxilato (Vlb) El compuesto de la Preparación 8 (XVa) se hizo reaccionar de acuerdo con el mismo procedimiento que en la Preparación 3 para dar el compuesto del titulo. 1H-NMR (400 MHz, CDC13) d 7,6 (m, 2H) , 7,4-7,3 (m, 3H),"4,3-4,2 (m, 2H), 4,0 (d, J=17,2Hz, 1H) , 3,4 (d, J=17,2Hz, 1H) , 2,1-2,0 (m, 2H) , 1,3 (t, 3H) , 1,0 (t, 3H) . Preparación 10 t-Butil (3S) -3-amino-4-hidroxi-5- (2,3,5, 6-tetrafluorofe- noxi) pentanoato (VIIc) Se hizo reaccionar 2, 3, 5, 6-tetrafluorofenol de acuerdo con el mismo procedimiento que en las Preparaciones 5 y 6 para dar el compuesto del titulo con un rendimiento total de 72%. aH-NMR (400 MHz, DMSO-d6) d 8,2 (br, 2H) , 7,6-7,5 (m, 1H) , 5,9 (m, 1H), 4,3-4,1 (m, 3H) , 3,6 (m, 1H) , 2,7 (m, 1H) , 1,4 (s, 9H) . Ejemplo 5 '"¦ " ~ " t-Büt"ir "(3S)-3--{ [-( 5^etil--3-fenil-4-,-5-dihidro-5- isoxazolil) carbonil] amino } -4-oxo-5- (2,3,5,6- tetrafluorofenoxi) pentanoato (Ic) Los compuestos de las Preparaciones 9 y 10 se hicieron reaccionar de acuerdo con el mismo procedimiento que en la Preparación 4 y el Ejemplo 1 para dar el compuesto del titulo.
XH-NMR (400 MHz, CDC13) d 7,6 (dd, J=3,6, 1,6Hz, 1H) , 7,6 (m, 2H) , 7,4-7,3 (m, 3H) , 6,7 (m, 1H) , 5,1-4,9 (m, 2H) , 4,9-4,8 (m, 1H) , 3,7 (dd, J=17,6, 17,2 Hz, 1H) , 3,3 (1H, d, J=17,2 Hz) , 3,0-2,8 (m, 1H) , 2,8-2,7 (m, 1H) , 2,1 (m, 1H) , 1,9 (m, 1H) , 1,4-1,3 (dos s, 9H) , 1, 0 (m, 3H) . Ejemplo 6 Ácido (35)-3-{ [ (5-etil-3-fenil-4 f 5-dihidro-5-isoxazo- lil) carbonil] amino }-4-oxo~5- (2,3,5, 6-tetrafluorofenoxi) penta- noico (Ice) El compuesto del Ejemplo 5 se hizo reaccionar de acuerdo con el mismo procedimiento que el Ejemplo 2 para dar el compuesto del titulo . 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) d 7,6 (br, 1H) , 7,6-7,5 (m, 2H) , 7,4-7,3 (m, 3H) , 6,8-6,7 (m, 1H) , 4,9-4,8 (m, 1H) , 4,5 (br, 2H) , 3,7 (d, J=16Hz, 1H) , 3,3 (d, J=16Hz, 1H) , 3,3-3,0 (m, 1H) , 2,8-2,7 (m, 1H) , 2,1 (m, 1H) , 2,0-1,9 (m, 1H) , 1,0 (m, 3H) . MS [ +H]+ 497. Preparación 11 Etil 5-etil-3- (1-naftil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolcarbo- ~ - - - xilato - (VIc-)— Se hicieron reaccionar 1-naftaldehido y etil 2-etilacrilato de acuerdo con el mismo procedimiento que las Preparaciones 1, 2 y 3 para dar el ' compuesto del título. aH-NMR (400 MHz, CDC13) d 8,9 (d, J=8,8Hz, 1H) , 7,9-7,8 (m, 2H) , 7,6-7,4 (m, 4H) , 4,3-4,2 (m, 2H) , 4,0 (d, J=17,2Hz, 1H) , 3,4 (d, J=17,2Hz, 1H) , 2,1-2,0 (m, 2H) , 1,3 (t, 3H) , 1,0 (t, 3H) . Ejemplo 7 t-Butil (3S) -3-{ [ (5-etil-3- (1-naftil) -4 , 5-dihidro-5- isoxazolil) carbonil] amino}-4-oxo-5- (2,3,5,6- tetrafluorofenoxi) pentanoato (Id) Los compuestos de las Preparaciones 11 y 10 se hicieron reaccionar de acuerdo con el mismo procedimiento que en la Preparación 4 y el Ejemplo 1 para dar el compuesto del título. 1H-NMR (400 MHz, CDC13) d 8,9 (m, 1H) , 7,9-7,8 (m, 3H) , 7,6-7,4 (m, 4H), 6,5-6,9 (m, 1H) , 5,1-4,9 (m, 2H) , 4,9 (m, 1H) , 3,9 (dd, 1H), 3,5 (d, J=17,2 Hz, 1H) , 3,0-2,9 (m, 1H) , 2,8 (m, 1H) , 2,2 (m, 1H) , 2,0 (m, 1H) , 1,4-1,3 (dos s, 9H) , 1,1 (m, 3H) . Ejemplo 8 Ácido (3S) -3-{ [ (5-etil-3- (1-naftil) -4, 5-dihidro-5-isoxa- zolil) carbonil] amino } -4-oxo-5- (2, 3, 5, - tetrafluorofenoxi) pentanoico (Idd) El compuesto del Ejemplo 7 se hizo reaccionar de acuerdo con el mismo procedimiento que el Ejemplo 2 para dar el compuesto del título . ^KNMR- OO- MHz; CDCI3)- d~8,8 -(t?, -1?) , 7,9-7,7 (m, 3H) , 7,6-7,4 (m, 4H), 6,7 (m, 1H) , 4,9 (m, 1H) , 4,5 (br, 2H) , 3,9 (d, J=17,2Hz, 1H) , 3,5 (d, J=17,2Hz, 1H) , 3,1-2,9 (m, 1H) , 2,8-2,7 (m, 1H) , 2,2 (m, 1H) , 2,0 (m, 1H) , 1,0 (m, 3H) . MS [M+MeOH-Na] + 601. Preparación 12 Etil 5-etil-3- (2-naftil) -4, 5-dihidro-5-isoxazol-carboxi- lato (Vid) Se hicieron reaccionar 2-naftaldehido y etil 2-etilacrilato de acuerdo con el mismo procedimiento que las Preparaciones 1, 2 y 3 para dar el compuesto del titulo. XH-NMR (500 MHz, CDC13) d 8,7 (d, J=8,8Hz, 1H) , 7,8-7,7 (m, 2H) , 7,5-7,3 (m, 4H) , 4,3-4,2 (m, 2H) , 4,0 (d, J=17,2Hz, 1H) , 3,4 (d, J=17,2Hz, 1H), 2,1-2,0 (m, 2H) , 1,3 (t, 3H) , 1,0 (t, 3H) . Ejemplo 9 t-Butil (3S)-3-{ [ (5-etil-3- (2-naftil) -4 , 5-dihidro-5- isoxazolil) carbonil] amino}-4-oxo-5- (2,3,5,6- tetrafluorofenoxi) pentanoato (le) Los compuestos de las Preparaciones 12 y 10 se hicieron reaccionar de acuerdo con el mismo procedimiento que en la Preparación 4 y el Ejemplo 1 para dar el compuesto del titulo. 1H-NMR (400 MHz, CDC13) d 7,8-7,7 (m, 6H) , 7,5 (m, 2H) , 6,7 y 6,5 (m, 1H) , 5,1-4,9 (m, 2H) , 4,9-4,8 (m, 2H) , 3,8 (dd, J=16Hz, 1H) , 3,4 (d, J=16Hz, 1H) , 3,0 (m, 1H) , 2,8 (m, 1H) , 2,8-2,7 (m, 1H) , 2,2-2,1 (m, 1H) , 2,0 (m, 1H) , 1,4-1,3 (dos s, 9H) , 1,1-1,0 (m, 3H) . - Ejemplo 10 Ácido (3S)-3-({ [5-etil-3- (2-naftil) -4, 5-dihidro isoxazolil] arbonil lamino) -4-oxo-5- (2, 3,5, 6- tetrafluorofenoxi) entanoico (lee) El compuesto del Ejemplo 9 fue desprotegido de acuerdo con el mismo procedimiento que en el Ejemplo 2 y los isómeros se resolvieron por TLC-prep. para dar los siguientes dos compuestos. Diastereómero débilmente polar: ^- MR (400 MHz, DMSO-d6) d 12,4 (br, 1H) , 8,7 (br, 1H) , 8,1 (s, 1H) , 7,9-8,0 (m, 3H) , 7,8-7,9 (m, 1H) , 7,5-7,6 (m, 3H) , 5,2 (br, 2H) , 4,7 (br, 1H) , 3,8 (d, J=17,2Hz, 1H) , 3,5 (d, J=17,6Hz, 1H) , 2,7 (m, 1H) , 2,5 (m, 1H) , 2,0 (m, 1H) , 1,9 (m, 1H) , 0,9-0,8 (m, 3H) . MS [M+H]+ 547. Diastereómero fuertemente polar: aH-N R (400 MHz, DMSO-d6) d 8,6 (br, 1H) , 8,2 (s, 1H) , 8,0- 7,9 (m, 3H) , 7,9 (m, 1H) , 7,6 (m, 2H) , 7,4 (m, 1H) , 5,0 (br, 2H) , 4,8 (m, 1H) , 3,9 (d, J=17,6Hz, 1H) , 3,6 (d, J=17,6Hz, 1H) , 2,9-2,7 (m 2H), 2,1-2,0 (m, 1H) , 2,0-1,9 (m, 1H) , 0,9 (m, 3H) . Preparación 13 Etil 5-etil-3- (l-isoquinolinil) -4, 5-di idro-5-isoxazol- carboxilato (VIe) Se hicieron reaccionar 1-isoquinolinaaldehido y etil 2-etilacrilato de acuerdo con el mismo procedimiento que las Preparaciones 1," 2 y ~3. El compuesto del titulo en una forma isomérica quiral activa fue separado por Chiral OD HPLC (Daicel Chemical Industries, 2,00 cm x 25 cm, OD00CJ-1C005, 3% i-PrOH en hexano, 220 nm) , que luego se usó en la reacción siguiente. XH-NMR (400 Hz, CDC13) d 9,25 (m, 1H) , 8,55 (d, 1H) , 7,85 (d, 1H) , 7,74-7,65 (m, 3H) , 4,29 (m, 2H) , 4,13 (d, 1H) , 3,71 (d, 1H) , 2,11 (m, 2H) , 1,33 (t, 3H) , 1,06 (t, 3H) . Ejemplo 11 t-Butil (35) -3- ( { [5-etil-3- (1-isoquinolinil) -4 , 5-dihidro- 5-isoxazolil] carbonil } amino) -4-oxo-5- (2, 3,5,6- tetrafluorofenoxi) pentanoato (If) Los compuestos de las Preparaciones 13 y 10 se hicieron reaccionar de acuerdo con el mismo procedimiento que en la Preparación 4 y el Ejemplo 1 para dar el compuesto del titulo. 1H-NMR (400 MHz, CDC13) d 9,14 (m, 1H) , 8,53 (m, 1H) , 7,91-7,85 (m, 2H) , 7,74-7,76 (m, 3H) , 6,73-6,62 (m, 1H) , 5,30-4,91 (m, 3H) , 4,09 (dos d, 1H) , 3,72 (dos d, 1H) , 3,04-2,76 (m, 2H) , 2,24 (m, 1H) , 2,04 (m, 1H) , 1,45 y 1,35 (dos s, 9H) , 1,08 (dos t, 3H) . Ejemplo 12 Ácido (3S)-3-({ [5-etil-3- (1-isoquinolil) -4, 5-dihidro-5- isoxazolil] carbonil} amino) -4-oxo-5- (2, 3, 5, 6- tetrafluorofenoxi) pentanoico (Iff) El compuesto del Ejemplo 11 se hizo reaccionar de acuerdo con el mismo procedimiento que el Ejemplo 2 para dar el compuesto del título. aH-NMR (400 MHz, DMS0-d6) d 9,02 (m, 1H) , 8,76 (m, 1H) , 8,59 (m, 1H), 8, 08-7,73 (m, 4H) , 7,61-7,32 (m, 1H) , 5,19-5,10 (m, 2H) , 4,93-4,65 (m, 1H) , 3,91 (dos d, 1H) , 3,68 (dos d, 1H) , 2,91-2,52 (ra, 2H) , 2,10-1,94 (m, 2?) , 0,94 (dos t, 3H) . Masa: M+H 548. Ejemplo 13 t-Butil (35) -3- ( { [5-etil-3- (l-isoquinolinil) -4, 5-dihidro - 5-lsoxazolll] carbonll } amino) -5-fluoro-4-oxopentanoato (Iq) El compuesto de la Preparación 13 y t-butil 3-amino-5-fluoro-4-hidroxipentanoato se hicieron reaccionar de acuerdo con el mismo procedimiento que en la Preparación 4 y el Ejemplo 1 para dar el compuesto del titulo. 1H-NMR (400 MHz, CDC13) d 9,15 (m, 1H) , 8,55 (d, 1H) , 7,87-7,66 (m, 5H) , 5,22-4,89 (m, 3H) , 4,12 (dos d, 1H) , 3,72 (dos d, 1H) , 3,05-2,75 (m, 2H) , 2,22 (m, 1H) , 2,04 (m, 1H) , 1,45 y 1,34 (dos s, 9H) > 1,07 (dos t, 3H) . Ejemplo 14 Ácido 3- ( { [5-etil-3- (1-isoquinolil) -4 , 5-dihidro-5- isoxazolil] carbonil } amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Igg) El compuesto del Ejemplo 13 se hizo reaccionar de acuerdo con el mismo procedimiento que el Ejemplo 2 para dar el compuesto del titulo. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) d 9,03 (m, 1H) , 8,67-8,59 (m, 2H) , 8,08 (d, 1H) , 7, 97-7,78 (m, 3H) , 5,26-5,07 (m, 2H) , 4,75 (m, 1H) , 3,94 (dos d, 1H), 3,67 (dos d, 1H) , 2,88-2,58 (m, 2H) , 2,07-1,94 (m, 2H), 0,96 (dos t, 3H) . Masa: M+H 402.
Ejemplo 15 Etil 3-({ [5-etil-3- (1-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5- isoxazolil] carbonil lamino) -5-fluoro-4-oxopentanoato (I h) El compuesto del Ejemplo 14 se hizo reaccionar de acuerdo con un método conocido en Tetrahedron Letters, 1994, 35 (52), 9693-9696 para dar el compuesto del titulo. XH-NMR (400 MHz, CDC13) d 9,15 (m, 1H) , 8,55 (d, 1H) , 7,89-7,67 (m, 5H) , 5,23-4,94 (m, 3H) , 4,18 (m, 2H) , 4,11 (dos d, 1H) , 3,72 (dos d, 1H) , 3,08-2, 82 (m, 2H) , 2,22 (m, 1H) , 2,05 (m, 1H) , 1, 26-1, 04 (m, 6H) . Preparación 14 Metil 5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5- isoxazolcarboxilato y resolución (Vlf) Se hicieron reaccionar 1-isoquinolinaaldehído y metil 2-isopropilacrilato de acuerdo con el mismo procedimiento que las Preparaciones 1, 2 y 3 para dar el compuesto del titulo. Del compuesto asi obtenido se separó el isómero quiral (5R) -activo (9,7 min-11,7 min) por HPLC prep. usando una columna OD quiral (Daicel Chemical Industries, 2,00 cm x 25 cm, OD00CJ-1C005, 5% i-PrOH en hexano, 14 ml/min, 220 nm) (el otro isómero (5S) fue eluido durante el tiempo de retención de 15,3-20,1 min), el que luego se usó en la reacción siguiente (ver Preparación 23 para la resolución después de hidrólisis) . :I-I-NMR- (-5-00-MHz,-'CDCl3) d-9,24 (m, 1H) , 8,55 (d, 1H) , 7,85 (d, 1H) , 7,72 (t, 3H) , 7,67 (m, 2H), 4,11 (d, 1H) , 3,83 (s, 3H) , 2,74 (d, 1H) , 2,50 (septeto, 1H) , 1,07 (d, 3H) , 1,02 (d, 3H) . Ejemplo 16 t-Butil 5-fluoro-3- ( { [ [5R] -5-isopropil-3- (1-isoquinoli- nil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil) carbonil] amino } -4-oxopentanoato (Ih) El compuesto de la Preparación 14 y t-butil 3-amino-5-fluoro-4-hidroxipentanoato se hicieron reaccionar de acuerdo con el mismo procedimiento que en la Preparación 4 y el Ejemplo 1 para dar el compuesto del titulo. 1H-N R (500 MHz, CDC13) d 9,14 (m, 1H) , 8,55 (d, 1H) , 7,87- 7,65 (m, 5H) , 5,23-4,93 (m, 2H) , 4,90 (m, 1H) , 4,05-4,00 (dos d, 1H) , 3, 84-3, 79 (dos, 1H) , 3,06-2,74 (m, 2H) , 2,40 (m, 1H) , 1,45 y 1,34 (dos s, 9H) , 1,12-1,07 (m, 6H) . Ejemplo 17 Ácido 5-fluoro-3- ( { [ (5J?) -isopropil-3- (1-isoquinolil) -4, 5- dihidro-5-isoxazolil ) carbonil] amino } -4-oxopentanoico (Iii) El compuesto del Ejemplo 16 se hizo reaccionar de acuerdo con el mismo procedimiento que el Ejemplo 2 para dar el compuesto del titulo (el compuesto del isómero (5S) , Iii-u, se obtuvo de acuerdo con el mismo procedimiento) . 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) d 9,00 (m, 1H) , 8,63-8, 48 (m, 2H) , 8,08 (d, 1H), 7,97 (m, 1H) , 7, 87-7,76 (m, 2H) , 5,31-4,82 (br, 2H) , 4,74 (m, 1H) , 3,91 (dos d, 1H) , 3,73 (dos d, 1H) , 2,88-2,61 (m, 2H) , 2,33 (m, 1H) , 0,98 (m, 6H) . Masa: M+H 416.
Preparación 15 Etll 5-etil-3- (4-quinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolcar- boxllato (VIg) Se hicieron reaccionar 4-quinolinaaldehido y 2-etilacrilato de acuerdo con el mismo procedimiento que en las Preparaciones 1, 2 y 3 para dar el compuesto del titulo. 1H-NMR (400MHz, CDC13) d 8,95 (d, 1H) , 8,89 (m, 1H) , 8,11 (d, 1H) , 7,83 (m, 1H) , 7,71 (rn, 1H) , 7,65 (d, 1H) , 4,27 (m, 2H) , 4,01 (d, 1H), 3,67 (d, 1H) , 2,10 (m, 2H) , 1,31 (t, 3H) , 1,02 (t, 3H) . Ejemplo 18 t-Butil 3-({ [5-etil-3- (4-quinolinil) -4, 5-dihidro-5- isoxazolil] carbonil } amino) -5-fluoro-4-oxopentanoato (Ii) Se hicieron reaccionar el compuesto de la Preparación 15 y t-butil 3-amino-5-fluoro-4-hidroxipentanoato de acuerdo con el mismo procedimiento que en la Preparación 4 y el Ejemplo 1 para dar el compuesto del titulo. ^-NMR (400MHz, CDCl3) d 8,97 (d, 1H) , 8,89 (m, 1H) , 8,17 (d, 1H) , 7, 87-7, 64 (m, 3H) , 7,36 (d, 1H) , 5,21-4,93 (m, 3H) , 3,93 (dos d, 1H) , 3,48 (dos d, 1H) , 3,05-2,78 (m, 2H) , 2,24 (m, 1H) , 2, 03 (m, 1H) , 1,46 y 1,33 (dos s, 9H) , 1,06 (dos t, 3H) . Ejemplo 19 Ácido 3- ( { [5-etil-3- (4-quinolinil) - , 5-dihidro-5- isoxazolil] carbonil }amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Ij j ) Se hizo reaccionar el compuesto del Ejemplo 18 de acuerdo con el mismo procedimiento que en el Ejemplo 2 para dar el compuesto del titulo. XH-NMR (400MHz, DMS0-d6) d 9,16-9,10 (m, 2H) , 8,25-7,86 (m, 5H) , 5,20 (br, 2H) , 4,75 (m, 1H) , 4, 00-3,89 (dos d, 1H) , 3,73 (dos d, 1H) , 2,87-2,71 (m, 2H) , 2,26-2,05 (m, 2H) , 1,07 (dos t, 3H) . Masa: M+H 402. Preparación 16 Etil (3-benzotiofen-2-il) -5-etil-4, 5-dihidro-5-isoxazol- carboxilato (VIh) Un derivado de benzotiofen-2-aldehído oxima (400 mg, 2,26 mmoles) preparado de acuerdo con el mismo procedimiento que en la Preparación 1 se disolvió en THF (25 mi) y se mantuvo la mezcla a 01C. Se disolvieron etil 2-etilacrilato (434 mg, 1,5 q) y trietilamina (7 gotas) en THF (5 mi), la solución asi obtenida se agregó lentamente a la anterior y se agregó luego solución de hipoclorito de sodio (6,0 mi). Se calentó la solución de reacción a temperatura ambiente y se agitó durante 4 horas . Se agregó agua (20 mi) y se extrajo la mezcla con acetato de etilo (40 mi x 2) , se lavó con solución de cloruro de sodio acuosa (20 mi) , se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró bajo presión reducida. Se purificó el residuo por cromatografía en columna (20% acetato de etilo-hexano) para dar el compuesto del título (121 mg, rendimiento 18%) . XH-NMR (400MHz-, CDC13) d 7,82-7,75 (m, 2H) , 7,40-7,32 (m, 3H) , 4,28 (m, 2H) , 3r90 (d, 1H) , 3,31-(d, 1H) , 2,07 (mr 2H) , 1,33 (t, 3H) , 1, 01 (t, 3H) . Ejemplo 20 t-Butll 3- ( { [3- (benzotiofen-2-il) -5-etil-4 , 5-dihidro-5- isoxazolil] carbonil }amino) -5-fluoro-4-oxopentanoato (Ij ) Se hicieron reaccionar el compuesto de la Preparación 16 y t-butil 3-amino-5-fluoro-4-hidroxipentanoato de acuerdo con el mismo procedimiento que en la Preparación 4 y el Ejemplo 1 para dar el compuesto del titulo. ¦""H-NMR (400MHz, CDC13) d 7,83-7, 68 (m, 3H) , 7,42-7,35 (m, 3H) , 5,21-4,88 (m, 3H) , 3,80 (dos d, 1H) , 3,38 (dos d, 1H) , 3,03-2,78 (m, 2H) , 2,17 (m, 1H) , 2,01 (m, 1H) , 1,46 y 1,38 (dos s, 9H) , 1, 03 (dos t, 3H) . Ejemplo 21 Ácido 3- ( { [3- (benzotiofen-2-il) -5-etil-4, 5-dihidro-5- isoxazolil] carbonil}amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Ikk) Se hizo reaccionar el compuesto del Ejemplo 20 de acuerdo con el mismo procedimiento que en el Ejemplo 2 para dar el compuesto del titulo. 1H-NMR (400MHz, DMS0-d6) d 8,63 (m, 1H) , 8,11-7,79 (m, 3H) , 7,47-7,36 (m, 2H) , 5,24-5,06 (m, 2H) , 4,73 (m, 1H) , 3,79 (dos d, 1H) , 3,53 (dos d, 1H) , 2,83-2,58 (m, 2H) , 2,03-1,86 (m, 2H) , 0,91 (dos t, 3H) . Masa: M+H 407. - Preparación 17 Etil 3- (1, 3-dimetil-li?-indol-2-il) -5-etil-4 , 5-dihidro-5- isoxazolcarboxilato (Vli) Se disolvió un derivado de 1, 3-dimetil-lH-indol-2-aldehído oxima (356 mg, 2,07 mmoles) en diclorometano (20 mi) y se mantuvo la mezcla a 01C. Se disolvieron etil 2-etilacrilato (345 mg, 1,3 eq) y trietilamina (6 gotas) en diclorometano (5 mi) , la solución asi obtenida se agregó lentamente a la anterior y se agregó luego solución de hipoclorito de sodio (5,5 mi). Se calentó la solución de reacción a temperatura ambiente y se agitó durante 4 horas. Se agregó agua (20 mi) y se extrajo la mezcla con diclorometano (40 mi x 2), se lavó con solución de cloruro de sodio acuosa (20 mi), se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró bajo presión reducida. Se purificó el residuo por cromatografía en columna (acetato de etilo-hexano 15%) para dar el compuesto del título (230 mg, rendimiento 35%) . ¾-NMR (400MHz, CDC13) d 7,60 (d, 1H) , 7,31 (m, 2H) , 7,12 (m, 1H) , 4,29 (m, 2H) , 3,98 (d, 1H) , 3,94 (s, 3H) , 3,40 (d, 1H) , 2,47 (s, 3H) , 2,08 (m, 2H) , 1,34 (t, 3H) , 1,04 (t, 3H) . Masa: M+H 315. Ejemplo 22 t-Butil 3 (S)-({ [3-(l,3~dimetil-l#-indol-2-il)-5-etil-4,5- dihidro-5-isoxazolil] carbonil }amino) -4-oxo-5- (2, 3, 5, 6- tetrafluorofenoxi) pentanoato (Ik) Se hicieron reaccionar las Preparaciones 17 y 10 de acuerdo ' con " el" mismo procedimiento que en la -Preparación 4 y el Ejemplo 1 para dar el compuesto del título.
¦""H-NMR (400MHz, CDC13) d 7,85-7,79 (m, 1H), 7,57 (m, 1H) , 7,37-7,26 (m, 2H) , 7,13 (m, 1H) , 6,75-6,49 (m, 1H) , 5,12-4,90 (m, 3H) , 3,95 (dos d, 1H) , 3,89 (dos s, 3H) , 3,45 (dos d, 1H) , 3,03-2,79 (ra, 2H) , 2,44 (dos s, 3H) , 2,22 (m, 1H) , 2,01 (m, 1H) , 1,58 y 1,37 (dos s, 9H) , 1,05 (dos t, 3H) . Ejemplo 23 Ácido 3 (5) -3- ({ [3- (1, 3-dimetil-lg-indol-2-il) -5-etil-4, 5- dihidro-5-isoxazolil] carbonil}amino) -4-oxo-5- (2,3,5,6- tetrafluorofenoxi) pentanoico (111) Se hizo reaccionar el compuesto del Ejemplo 22 de acuerdo con el mismo procedimiento que en el Ejemplo 2 para dar el compuesto del titulo. 1H-NMR (400MHz, DMSO-d6) d 8,67 (br, 1H) , 7,61-7,43 (m, 3H) , 7,27 (m, 1H) , 7,08 (m, 1H) , 5,20 (br, 2H) , 4,83 (m, 1H) , 3,84 (dos s, 3H) , 3,76 (dos d, 1H) , 3,59 (dos d, 1H) , 2,91-2,60 (m, 2H) , 2,50 (dos s, 3H) , 2,07-1,91 (m, 2H) , 0,95 (dos t, 3H) . Ejemplo 24 t-Butil 3- ( { [3- (1, 3-dimetil-lH-indol-2-il) -5-etil-4, 5- dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -5-fluoro-4-oxopentanoato (ID Se hizo reaccionar el compuesto de la Preparación 17 y t-butil 3-amino-5-fluoro-4-hidroxipentanoato de acuerdo con el mismo procedimiento que en la Preparación 4 y el Ejemplo 1 para dar el compuesto—del - ±tuío-~. ¾-NMR (400MHz, CDC13) d 7,79 (m, 1H) , 7,60 (m, 1H) , 7,32 (m, 2H) , 7,13 (m, 1?) , 5,20-4,90 (m, 3H) , 3,97-3,89 (m, 4H) , 3,46 (dos d, 1H), 3,03-2,77 (m, 2H) , 2,21 (m, 1H) , 2,01 (m, 1H) , 1,46 y 1,38 (dos s, 9H) , 1,05 (dos t, 3H) . Ejemplo 25 Ácido 3-({ [3-(l,3-dimetil-lfl-indol-2-il)-5-etil-4,5- dlhidro-5-isoxazolil] carbonil }amino) -5-fluoro-4-oxopentanolco (Imm) Se hizo reaccionar el compuesto del Ejemplo 24 de acuerdo con el mismo procedimiento que en el Ejemplo 2 para dar el compuesto del titulo. 1H-NMR (400MHz, DMSO-d6) d 8,68 (br, 1H) , 7,60 (m, 1H) , 7,45 (m, 1H) , 7,26 (m, 1H) , 7,07 (m, 1H) , 5,20 (br, 2H) , 4,81 (m, 1H) , 3,84 (dos s, 3H) , 3,76 (dos d, 1H) , 3,59 (dos d, 1H) , 2,94-2,59 (m, 2H) , 2,38 (dos s, 3H) , 2,07-1,91 (m, 2H) , 0,95 (dos t, 3H) . Masa: M+H 418. Preparación 18 Etil 5-etil-3- (1-naftilmetil) -4 , 5-dihidro-5-isoxazolcar- boxilato (VIj) Se hicieron reaccionar 1-naftilacetaldehido y etil 2- etilacrilato de acuerdo con el mismo procedimiento que en las Preparaciones 1,_2_ y 3 para_ dar el compuesto del titulo. XH-NMR (500MHz, CDC13) d 8,1-8,0 (d, J=8Hz, 1H) , 7,8 (d, J=7,6Hz, 1H) , 7,8-7,7 (d, J=8Hz, 1H) , 7,5-7,4 (m, 2H) , 7,4-7,3 - ™(my 2?)·, ' 4,1-4, 0 (m, 4H) , 3,1 (d,— J=17 6Hz, 1H) , 2,6 (d, J=17,6Hz, 1H), 1,8-1,7 (m, 2H) , 1,2 (t, 3H) , 0,7 (t, 3H) .
Ejemplo 26 t-Butil 3 (S) - ( { [5-etil-3- (1-naftilmetil) -4 , 5-dihidro-5- isoxazolil] carbonil}amino) -4-oxo-5- (2,3,5,6- tetrafluorofenoxi) pentanoato (Im) Se hicieron reaccionar las Preparaciones 18 y 10 de acuerdo con el mismo procedimiento que en la Preparación 4 y el Ejemplo 1 para dar el compuesto del titulo. 1H-NMR (400MHz, CDC13) d 8,0 (m, 1H) , 7,8 (m, 1H) , 7,8 (m, 1H) , 7,7 (m, 1H) , 7,5 (m, 2H) , 7,4-7,3 (m, 2H) , 6,7 (m, 1H) , 5,0-4,9 (m, 2H), 4,9-4,8 (m, 1H) , 4,2-4,0 (m, 2H) , 3,1 (dd, J=24,8Hz, 1H) , 2,9-2,6 (m, 3H) , 1,9 (m, 1H) , 1,7 (m, 1H) , 1,4 (dos s, 9H) , 0, 8 (m, 3H) . Ejemplo 27 Ácido 3 (S) -3- ( { [5-etil-3- (1-naftilmetil) -4 , 5-dihidro-5- isoxazolil] carbonil } amino) -4-oxo-5- (2,3,5,6- tetrafluorofenoxi) pentanoico (Inn) Se hizo reaccionar el compuesto del Ejemplo 26 de acuerdo con el mismo procedimiento que en el Ejemplo 2 para dar el compuesto del titulo. 1H-NMR (400MHz, DMSO-d6) d 12,3 (br, 1H) , 8,4 (br, 1H) , 8,0 (m, 1H) , 7,9 (m, 1H) , 7,8 (m, 1H) , 7,5-7,4 (m, 5H) , 5,0 (br, 2H) , 4,7 (m, 1H) , 4,0 (s, 2H) , 3,3 (m, 1H) , 3,1 (m, 1H) , 2,8 (m, 2H) , 2,5 (m, 1H) , 1,8 (m, 1H) , 1,7 (m, 1H) , 0,8 (m, 3H) . MS [M+H]+ 561. Ejemplo 28 (3S) -5- ( t-butoxi) -3- [ ( { 5-etil-3- [2- (1-naftil) etil] -4,5- dihidro-5-isoxazolil} carbonil) amino] -2, 5-dioxopentil 2, 6- diclorobenzoato (In) Se hicieron reaccionar 1-naftilpropionaldehido y el compuesto de la Preparación 6 de acuerdo con el mismo procedimiento que en las Preparaciones 1, 2 , 3 y 4, y el Ejemplo 1 para dar el compuesto del titulo. 1H-NMR (400MHz, CDC13) d 8,00 (d, 1H) , 7,85 (m, 1H) , 7,76 (m, 2H) , 7, 57-7,28 (m, 7H) , 7,34-7,27 (m, 3H) , 5,20-5, 05 (m, 2H) , 4,94 y 4,88 (dos m, 1H) , 3,39-3,27 (m, 3H) 2,97-2,72 (m, 5H) , 2,07 (m, 1H) , 1,86 (m, 1H) , 1,46 y 1,45 (dos s, 9H) , 1,00 y 0,96 (dos t, 3H) . Ejemplo 29 Ácido (3S) -5- [ (2, 6-diclorobenzoil) oxi] -3- [ ( {5-etil-3- [2- (1-naftil) etil] - , 5-dihidro-5-isoxazolil} carbonil) amino] -4- oxopentanoico (loo) Se hizo reaccionar el compuesto del Ejemplo 28 de acuerdo con el mismo procedimiento que en el Ejemplo 2 para dar el compuesto del titulo. 1H-NMR (400MHz, DMSO-d6) d 8,45 (bd, 1H) , 8,06 (d, 1H) , 7,90 (d, 1H) , 7,77 (d, 1H) , 7, 60-7,37 (m, 7H) , 5,21-5,03 (m, 2H) , 4,73 (m, 1H) , 3,06 (m, 2H) , 2,65 (bd, 4H) , 1,91 y 1,74 (dos m, 2H) , 0, 84 (m, 3H) . Preparación 19 Etil 5-etil-3-[ (l-naftiloxi)metil] -4, 5-dihidro-5-isoxazol carboxilato (Vil) Se hicieron reaccionar el derivado de 2-nitroetanol piranil (ver Synthesis, 1993, 12, 1206-1208) y etil 2-etilacrilato y el producto resultante fue desprotegido para dar etil 5-etil-(3-hidroximetil) -4 , 5-dihidro-5-isoxazolcarbo-xilato (23%). Se sometió este compuesto a bromación (CBr¿ PPh3, 94%) y luego se hizo reaccionar con 1-naftol (NaH, DMF, 82%) para dar el compuesto del titulo. XH- MR (500MHz, CDC13) d 8,20 (m, 1H) , 7,81 (d, 1H) , 7,55-7,42 (m, 3H) , 7,36 (m, 1H) , 6,88 (d, 1H) , 5,01 (dd, 2H) , 4,22 (m, 2H) , 3,61 (d, 1H) , 3,07 (d, 1H) , 1,97 (m, 2H) , 1,27 (t, 3H) , 0, 93 (t, 3H) . Ejemplo 30 Ácido (3S) -3- [ ({5-etil-3- [ (1-naftiloxi) metil] -4, 5-dihidro- 5-isoxazolil } carbonil) amino] -4-oxo-5- (2, 3, 5, 6- tetrafluorofenoxi) pentanoico (Ipp) Se hicieron reaccionar los compuestos de las Preparaciones 19 y 10 de acuerdo con el mismo procedimiento que en la Preparación 4 y los Ejemplos 1 y 2 para dar el compuesto del titulo. XH-NMR (400MHz, DMSO-d6) d 8,51 (br, 1H) , 8,13 (m, 1H) , 7,87 (m, 1H) , 7,54-7,38 (m, 5H) , 7,02 (m, 1H) , 5,18-4,97 (m, 4H) , 4,71 (m, 1H) , 3,58 (dos d, 1H) , 3,21 (dos d, 1H) , 2,68 (m, 2H) , 1,97 (m, 1H) , 1,81 (m, 1H) , 0,86 (dos t, 3H) . Masa: M+H 577.
Ejemplo 31 Ácido (35) -3-{ [ (3-{ [ (4-cloro-l-naftil) oxi]metil}-5-etil- 4, 5-dihidro-5-isoxazolil) carbonil] amino }-4-oxo-5- (2,3,5,6- tetrafluorofenoxi) entanoico (Iqq) Se hizo reaccionar el derivado de bromo obtenido como un intermediario durante el procedimiento de la Preparación 19 y 4-cloro-l-naftol de acuerdo con el mismo procedimiento que en la Preparación 19 para dar etil 5-etil- [ (4-cloro-l-naftiloxi)metil] -4, 5-dihidro-5-isoxazolcarboxilato, el que se hizo reaccionar luego de acuerdo con el mismo procedimiento que en la Preparación 4 y los Ejemplos 1 y 2 para dar el compuesto del titulo. 1H-NMR (400MHz, DMSO-d6) d 8,65 (m, 1H) , 8,24-8,09 (m, 2H) , 7,78-7,35(m, 4H) , 7,06 (m, 1H) , 5,17-5,07 (m, 4H) , 4,82-4,69 (m, 1H) , 3,45 (dos d, 1H) , 3,23 (dos d, 1H) , 2,83-2,52 (m, 2H) , 1,96-1,79 (m, 2H) , 0,86 (dos t, 3H) . Masa: M+H 611. Preparación 20 tert-Butil (35) -3-amino-4-hidroxibutanoato A ácido N-benciloxicarbonil-ft-t-butilaspártico (3,0 g, 9,28 mmoles) y NMM (1,12 mi, 1,1 eq) se agregó tetrahidrofurano seco (20 mi) bajo atmósfera de nitrógeno. Se mantuvo la solución de reacción a 01C. Se agregó cloroformato de isobutilo (1,26 mi, 1,05 eq) y se agitó la mezcla durante aprox. 40 minutos. La lechada asi obteíTirda ~se filtró" "bajo nitrógeno y se agregó la solución resultante a NaBH4 (702 mg, 2,0 eq) solución [metanol (10 mi) -tetrahidrofurano seco (20 mi)] a -781C. Se calentó lentamente la mezcla resultante a temperatura ambiente (dos horas) . Se detuvo la reacción por medio de ácido acético (2,3 mi) y se destiló la solución de reacción bajo presión reducida para eliminar el metanol. Se extrajo el residuo con acetato de etilo (50 mi x 2) , se lavó con agua y solución de cloruro de sodio acuosa, se secó (Na2S04 anhidro) , se concentró bajo presión reducida y se purificó-separó por cromatografía en columna (acetato de etilo-hexano, 1:5) para dar un compuesto de alcohol (2,52 g, rendimiento 88%) . Se eliminó el grupo benciloxicarbonilo del compuesto obtenido más arriba (Pd/C) bajo un balón de hidrógeno durante una hora para dar el compuesto del titulo (rendimiento 100%) . """H-N R (400MHz, DMSO-d6) d 4,60 (bs, 1H) , 3,21 (m, 2H) , 2,96 (m, 1H) , 2,41 (dd, 1H) , 2,03 (dd, 1H) , 1,40 (s, 9H) . Preparación 21 tert-Butil (35) -4-hidroxi-3- ( { [ (5R) -5-isopropil-3- (1- isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil} amino) - butanoato' (XVI) Se hizo reaccionar el compuesto de la Preparación 14 de acuerdo con el mismo procedimiento que en la Preparación 4 para dar un derivado de ácido carboxilico activo (Vllf) . üna mezcla de derivado de ácido carboxilico activo (Vllf, 224 mg, 0,79 mmoles) , el derivado de amino alcohol preparado en la Preparación 20 (166 mg, 1,2 eq) y HATU (390 mg, 1,3 eq) , se enfrió a 01C, se agregó trietilamina (0,33 mi, 3,0 eq) en un solvente de DMS (5 mi) y se hizo reaccionar la mezcla resultante durante 2 horas. Se destiló el solvente bajo presión reducida y se extrajo el residuo con acetato de etilo (50 mi x 2) , se lavó con agua, solución de bicarbonato de sodio acuosa y solución de cloruro de sodio acuosa, se secó (Na2SC>4 anhidro) , se concentró bajo presión reducida y se purificó por cromatografía en columna (60-70% EA/Hex) para dar el compuesto del titulo (330 mg, rendimiento 95%) . 1H-NMR (400MHz, CDC13) d 9,16 (d, 1H) , 8,55 (d, 1H) , 7,85 (d, 1H) , 7,73-7,70 (m, 3H) , 7,56 ( H, d, 1H) , 4,26 (m, 1H) , 4,12 (d, 1H) , 4,04 (d, 1H), 3,79 (d, 1H) 3,75 (t, 2H) , 2,94 (bs, 1H) , 2,57 (m, 2H) , 2,41 (m, 1H) , 1,10 y 1,07 (dos d, 6H) . Ejemplo 32 6- (tert-Butil) l-etil (2E 4S) -4- ( { [ (5.R) -5-isopropil-3- (1- isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -2- hexenodioato (Iq) Al compuesto de la Preparación 21 (107 mg, 0,24 mmoles) y al reactivo de Dess-Martin (153 mg, 1,5 eq) se agregó diclorometano seco (4 mi) y se agitó la mezcla durante una hora a temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida. Se agregó al residuo THF seco (3 mi) y (carboetoximetileno) trifenilfosforano) (108 mg, 1,3 eq) y la mezcla se sometió a reflujo durante dos ""horas. Se extrajo "la mezcla de reacción "co ^acetato de etilo (20 mi x 2), se lavó con agua, solución de bicarbonato de sodio acuosa saturada y solución de cloruro de sodio acuosa, se secó (Na2S04 anhidro) , se concentró bajo presión reducida y se purificó preliminarmente por cromatografía prep. (40% acetato de etilo-hexano) para dar el compuesto del titulo (98 mg, 80%) con la relación diastereomérica de 3:1. 1H~NMR (500MHz, CDC13) del isómero principal d 9,15 (d, 1H) , 8,54 (d, 1H) , 7,86 (d, 1H) , 7,74-7,62 (m, 4H) , 6,93 (dd, 1H) , ' 6,00 (dd, 1H) , 4,98 (m, 1H) , 4,19 (qt, 2H) , 4,02 (d, 1H) , 3,81 (d, 1H), 2,58 (m, 2H) , 2,43 (m, 1H) , 1,36 (s, 9H) , 1,27 (t, 3H) , 1,07 y 1,06 (dos d, 6H) . Ejemplo 33 Ácido (35,4£) -6-etoxi-3- ( { [ (5R) -5-isopropil-3- (1- isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil}amino) -6-oxo- 4-hexenoico (Irr) Se hizo reaccionar el compuesto del Ejemplo 32 de acuerdo con el mismo procedimiento que en el Ejemplo 2 para dar el compuesto del titulo. XH-NMR (500MHz, MeOD-d3) del isómero principal d 9,04 (d, 1H) , 8,52 (d, 1H) , 7,95 (d, 1H) , 7,81-7,68 (m, 3H) , 6,94 (dd, 1H) , 6,00 (dd, 1H) , 5,01 (m, 1H) , 4,17 (qt, 2H) , 3,90 (d, 1H) , 3,82 (d, 1H), 2,71 (d, 2H) , 2,39 (septeto, 1H) , 1,26 (t, 3H) , 1, 07 y 1, 06 (dos d, 6H) . MS: M+H 454. Ejemplo"34 — tert-Butil (3S,4E) -3- ({ [ {5R) -5-isopropil-3- (1- isoquinolinil) -4 , 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -5- (metilsulfonil) -4-pentenoato (Ir) Se agregó diclorometano anhidro (4 mi) al compuesto del Ejemplo 21 (109 mg, 0,25 mmoles) y reactivo de Dess-Martin (157 mg, 1,5 eq) y se agitó la mezcla durante una hora a temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida. Se detuvo la reacción por alcohol isopropilico (0,5 mi). Se eliminó el sólido por filtración bajo presión reducida usando Celite. Se extrajo el filtrado con acetato de etilo (20 mi x 2) , se lavó con agua, solución de bicarbonato de sodio acuosa saturada y solución de cloruro de sodio acuosa, se secó (Na2S04 anhidro) y se concentró bajo presión reducida para dar un compuesto aldehido (540 mg, rendimiento 99%) . Se disolvió dietil metilsulfonometanofosfonato (113 mg, 2,0 eq, Synthesis, 1969, 170) en THF (3 mi) , NaH (60% en aceite mineral, 20 mg, 2,0 eq) y el compuesto aldehido obtenido más arriba y se sometió a reflujo la mezcla durante dos horas. Después de la extracción con acetato de etilo (20 mi x 2) se lavó el extracto con agua, solución de bicarbonato de sodio acuosa saturada y solución de cloruro de sodio acuosa, se secó ( a2SÜ4 anhidro) , se concentró bajo presión reducida y se purificó por cromatografía (60% acetato de etilo/hexano) para dar el compuesto del titulo (52 mg, 41%) con la relación diastereomérica de 4:1. 1H-NMR (500MHz r"CDCl3) del"isomero principal d 9,14 (d, 1H) , 8,55 (d, 1H) , 7,86 (d, 1H) , 7,76-7,65 (m, 4H) , 6,92 (dd, 1H) , 6,57 (dd, 1H) , 5,03 (m, 1H) , 4,02 (d, 1H) , 3,81 (d, 1H) , 2,94 (s, 3H) , 2,61 (m, 2H) , 2,41 (septeto, 1H) , 1,36 (s, 9H) , 1,10 y 1,08 (dos juegos de d, 6K) .
Ejemplo 35 Ácido (3S 4.E) -3- ( { [ ( 5J ) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) - 4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil}amino) -5- (metilsulfonil) -4- pentenoico (Iss) Se hizo reaccionar el compuesto del Ejemplo 34 de acuerdo con el mismo procedimiento que en el Ejemplo 2 para dar el compuesto del titulo. 1H-NMR (500MHz, MeOD-d3) del isómero principal d 9,04 (d, 1H) , 8,52 (d, 1H) , 7,95 (d, 1H) , 7,82-7, 69 (m, 3H) , 6,90 (dd, 1H) , 6,71 (dd, 1H) , 5,06 (m, 1H) , 3,86 (m, 2H) , 2,98 (s, 3H) , 2,76 (d, 2H), 2,39 (m, 1H) , 1,08 y 1,06 (dos juegos de d, 6H) . MS: M+H 460. Método de preparación de los Ejemplos 36-42 Los compuestos que se obtuvieron haciendo reaccionar (iso) quinolinaaldehido (o 1- o 2-naftaldehído) y etil 2-etil acrilato (o etil 2-propil acrilato) de acuerdo con el mismo procedimiento que en las Preparaciones 1, 2 y 3 (o Preparaciones 1 y 16) fueron purificados, de ser necesario, por HPLC prep. usando una columna OD quiral para aislar isómeros quirales activos. Los isómeros—quirales activos o isómeros quirales inactivos aislados fueron hidrolizados de acuerdo con el mismo procedimiento que en la Preparación 4 y se hicieron reaccionar los compuestos resultantes con t-butil 3-amino-5-fluoro-4-hidroxipentanoato de acuerdo con el mismo procedimiento que en los Ejemplos 1 y 2 para dar los compuestos del titulo de los Ejemplos 36-42 siguientes. Ejemplo 36 Ácido 5-fluoro-3- ( { [ (5S) -3- (1-isoquinolinil) -5-propil-4, 5- dihidro-5-isoxazolil] carbonil }amino) -4-oxopentanoico (Itt ) 1H-NMR (500MHz, DMSO-d6) d 9,02 (t, 1H) , 8,61 (m, 2H) , 8,08 (d, 1H) , 7,96 (m, 1H) , 7,85 (t, 1H) , 7,78 (m, 1H) , 5,05 (bs, 2H) , 4,73 (m, 1H) , 3,97-3,92 (dd, 1H) , 3,70-3,65 (dos d, 1H) , 2,90-2,70 (dos m, 2H) , 2,03 (m, 1H) , 1,91 (m, 1H) , 1,48 (m, 1H) , 1,32 (m, 1H) , 0, 93 (m, 3H) . Masa: M+H 416. Ejemplo 37 Ácido (3- ( { [ (55) -5-etil-3- (1-naftil ) -4 , 5-dihidro-5- isoxazolil] carbonil } amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico) (Iuu) """H-NMR (500MHz, DMS0-d6) d 8,84 (s, 1H) , 8,59 (bs, 1H) , 8,02 (m, 2H) , 7,75 (s, 1H) , 7,60 (m, 3H) , 5,01 (bs, 2H) , 4,73 (m, 1H) , 3,87-3,82 (dd, 1H) , 3,70-3, 65 (dos d, 1H) , 2,82-2,73 (dos m, 2H) , 2,05 (m, 1H) , 1,95 (m, 1H) , 0,96 (m, 3H) . Masa: M+H 401. Ejemplo 38 " Ácido' (3'-({ [ (5S) -5-et l-3--('2-quinolinil) -4 , 5-dihidro-5- isoxazolil] carbonil } amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico) (Ivv) 1H-NMR (500MHz, DMSO-d6) d 8,61 (dd, 1H) , 8,41 (m, 1H) , 8,02 (m, 3H) , 7,79 (t, 1H) , 7,65 (t, 1H) , 5,22-5,06 (m, 1H) , 4,72 (m, 1H) , 4, 49-4,28 (m, 1H) , 3,84 (m, 1H) , 3,54 (m, 1H) , 2,99-2,54 (dos m, 2H) , 2,01 (m, 1H) , 1,91 (m, 1H) , 0,91 (m, 3H) . Masa: M+H 402. Ejemplo 39 Ácido (3- ( { [ (5-) -5-etil-3- (3-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5- isoxazolil] carbonil } amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico) (Iww) ^-NMR (400MHz, CDC13) d 9,25 y 9,16 (dos s, 1H) , 8,08-7,64 (m, 5H) , 4, 90-4, 84 (m, 1H) , 4,79-4,54 (m, 2H) , 4,01-3,93 (dos d, 1H) , 3,54 (d, 1H) , 3,03-2,87 (m, 2H) , 2,27-2,19 y 2,10-2,01 (dos m, 2H) , 1, 10-1, 06 (m, 3H) . Masa: M+H 402. Ejemplo 40 Ácido 3- ({ [5-etil-3- (8-quinolinii) -4, 5-dihidro-5- isoxazolil] carbonil } amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Ixx) ¦""H-NMR (500MHz, CDCI3) d 8,98 y 8,93 (dos m, 1H) , 8,56-8,21 (m, 1H) , 8, 03-7, 94 (m, 2H) , 7,73 (bs, 1H) , 7,60 (m, 1H) , 7,53- 7,48 (dos m, 1H) , 4,94-4,64 (m, 3H) , 4,27-4,22 (dos d, 1H) , 3,77 (d, 1H), 3,07 y 2,92 (dos m, 2H) , 2,31-2,22 (m, 1H) , 2,12-2,05 (ra, 1H) , 1, 10 (t, 3H) . Masa: M+H 402. Ejemplo 41 - - - - 'Ácido "3- ("{~["5-etil-3- (3-quinolinil ) -4 ,-5—dihidro-5- isoxazolil] carbonil lamino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iyy) 1H-NMR (400MHz, CDC13) d 9,32 y 9,25 (dos d, 1H) , 8,16-8,03 (m, 2H) , 7,83-7,73 (m, 3H) , 7,62-7,55 (m, 1H) , 4,95-4,76 (m, 3H) , 3,86 (dos d, 1H) , 3,45-3,39 (dos d, 1H) , 3,17-3,01 (dos m, 1H) , 2,90-2, 82 (m, 1H) , 2,27-2,20 (m, 1H) , 2,09-2, 00 (m, 1H) , 1,10-1,05 (m, 3H) . Masa: M+H 402. Ejemplo 42 Ácido 5-fluoro-3- ( { [ (5i¾) -5-isopropil-3- (2-quinolinil) -4, 5- dihidro-5-isoxazolil3 carbonil } amino) -4-oxopentanoico (Izz) ½-NMR (400MHz, CDCI3) d 8,24 (m, 1H) , 8,14 (m, 1H) , 8,04 (d, 1H) , 7,88 (d, 1H) , 7,79 (m, 1H) , 7,65 (m, 1H) , 7,51 (bs, 1H) , 5,13-4,35 (m, 3H) , 4,05-4,00 (dos d, 1H) , 3,73 (d, 1H) , 3,05-2,82 (m, 2H) , 2,42 (m, 1H) , 1,10 (m, 6H) . Masa: M+H 416. Método de preparación de los Ejemplos 43-48 Los compuestos obtenidos haciendo reaccionar un aldehido aromático (Bioorg. Med. Chem. Lett . , 1996, 6, p2173, J. Org. Chem., 1978, 43, 1372) y etil 2-etil acrilato (o etil 2-isopropil acrilato) de acuerdo con el mismo procedimiento que en las Preparaciones 1, 2 y 3 (o Preparaciones 1 y 16) , fueron purificados, de ser necesario, por HPLC prep . usando una columna OD quiral para aislar isómeros quirales activos. Los isómeros quirales activos o isómeros quirales inactivos aislados fueron hidrollzadós" " de- acuerdcr con el "mismo" procedimiento que en la Preparación 4 y se hicieron reaccionar los compuestos resultantes con t-butil 3-amino-5-fluoro-4-hidroxipentanoato de acuerdo con el mismo procedimiento que en los Ejemplos 1 y 2 para dar los compuestos del título de los Ejemplos 43-48 siguientes. Ejemplo 43 Ácido 3- ( { [5-etil-3- (2-isopropilfenil) -4, 5-dihidro-5- isoxazolil] carbonil}amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaal) a?—NMR (500MHz, DMSO-d6) d 8,53 (bs, 1H) , 7,40 (m, 2H) , 7,32 (m, 1H) , 7,25 (m, 1H) , 5,02 (bs, 2H) , 4,72 (m, 1H) , 3,60-3,54 (dos d, 1H), 3,46-3,43 (dos d, 1H) , 3,40 (m, 1H) , 2,78-2,60 (dos m, 2H) , 1,95 (m, 1H) , 1,85 (m, 1H) , 1,14 (s, 6H) , 0,88 (m, 3H) . Masa: M+H 393. Ejemplo 44 Ácido 3- [ ( { 3- [3- ( tert-butil) fenil] -5-etil-4, 5-dihidro-5- isoxazolil } carbonil) amino] -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaa2) 1H-NMR (400MHz, DMSO-d6) d 8,56 (dd, 1H) , 7,67 (s, 1H) , 7,48 (m, 1H) , 7,38 (d, 2H) , 5,24-5,12 (q, 1H) , 4,76-4, 69 (m, 1H) , 4,59-4,26 (m, 1H) , 3,68 (m, 1H) , 3,49-3,43 (dos d, 1H) , 2,96-2,56 (dos m, 2H) , 1,98 (m, 1H) , 1,85 (m, 1H) , 1,29 (s, 9H) , 0,89 (d, 3H) . Masa: M+H 407. Ejemplo 45 Ácido 3- [ ( {3- [4- (tert-butil) fenil] -5-etil-4, 5-dihidro-5- isoxazolil } carbonil) amino] -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaa3) XH- MR (500MHz,- DMSO-d6)- d~8>-52- (bs, 1H)-, 7,58 (m, 2H) , 7,43 (dd, 2H) , 5,10 (bs, 2H) , 4,71-4,65 (m, 1H) , 3, 65-3,59 (dos d, 1H) , 3,40-3,35 (dos d, 1H) , 2,86-2,60 (dos m, 2H) , 1,94 (m, 1H) , 1,82 (ra, 1H) , 1,24 (s, 9H) , 0,86 (m, 3H) . Masa: M+H 407. Ejemplo 46 Ácido 5-fluoro-3- ( { [ (5R) -5-isopropil-3- (2-isopropil- fenil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil} amino) -4-oxopenta- noico (Iaa4) 1H-NMR (500MHz, CDC13) d 7, 60-7,53 (m, 1H) , 7,41 (m, 2H) , 7,27-7,23 (m, 2H) , 5,20-4,91 (ra, 1H) , 4,71 (m, 1H) , 4,54-4,42 (m, 1H) , 3, 69-3,64 (dos d, 1H) , 3, 45-3,38 (m, 2H) , 3,12-2,77 (m, 2H) , 2,32 (m, 1H) , 1,22 (d, 6H) , 1,05 (d, 6H) - Masa: M+H 407. Ejemplo 47 Ácido 3-[ ({ (5£)-3-[3-(tert-butil)fenil]-5-isopropil~4,5- dihidro-5-isoxazolil } carbonil) amino] -5- luoro-4-oxopentanoico (Iaa5) 1H-ÑMR (500MHz, CDCI3) d 7,69 (s, 1H) , 7,48 (d, 1H) , 7,41 (d, 1H) , 7,35 (t, 1H), 4, 74-4,50 (m, 3H) , 3,69 (d, 1H) , 3,40 (d, 1H) , 3,06-2,77 (m, 2H) , 2,32 (m, 1H) , 1,33 (s, 9H) , 1,04 (m, 6H) . Masa: M+H 421. Ejemplo 48 Ácido 3-{ [ (3- [1, 1 ' -bifenil] -3-il-5-isopropil-4 , 5-dihidro - 5-isoxazolil) carbonil] amino } -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaa6) Se "usó' 3—bifenil'carboxaldehído~~ (ver Synthesis, 2003, 337) como un material de partida para dar el compuesto del titulo.
XH-NMR (500MHz, DMSO-d6) d 8,42 (bs, 1H) , 7,87 (d, 1H) , 7,73-7,69 (m, 4H) , 7,52 (m, 1H) , 7,45 (m, 2H) , 7,38 (m, 1H) , 5,03 (bs, 2H) , 4,63 (m, 1H) , 3,73-3,57 (m, 2H) , 2,67-2, 63 (dos m, 2H) , 2,22 (m, 1H) , 0,89 (m, 6H) . Masa: M+H 441. Método de preparación de los Ejemplos 49-59 Se obtuvieron piridina 2-carboxaldehidos 4-sustituidos por un método conocido de la US 6043248, JOC 1982, 47, p4315, y se hicieron reaccionar de acuerdo con el mismo procedimiento que en las Preparaciones 1, 2 y 3 (o Preparaciones 1 y 16) . Se purificaron los compuestos resultantes, de ser necesario, por HPLC prep. usando una columna OD quiral para aislar isómeros quirales activos. Los isómeros quirales activos o isómeros quirales inactivos aislados fueron hidrolizados de acuerdo con el mismo procedimiento que en la Preparación 4 y se hicieron reaccionar los compuestos resultantes con t-butil 3-amino-5-fluoro-4-hidroxipentanoato de acuerdo con el mismo procedimiento que en los Ejemplos 1 y 2 para dar los compuestos del titulo de los Ejemplos 49-59 siguientes. Ejemplo 49 Ácido 3- ( { [5-etil-3- (2-piridinil) -4, 5-dihidro-5-isoxa- zolil] carbonil }amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaa7) 1H=-'NMR (SOOMHz; "DMS0-d6) d 12,41 (bs, 1H) , 8,61 (s, 1H) , 8,59-8,43 (dd, 1H) , 7,87 (m, 1H) , 7,44 (m, 1H) , 5,19-5,04 (dos d, 1?)', 4,70 (m, 1?), 4,45-4,27 (m, 1H) , 3,67 (m, 1H) , 3,42 (m, 1H) , 2,95-2,53 (dos m, 2H) , 1,96 (m, 1H) , 1,86- (m, 1H) , 0,85 (m, 3H) . Masa: M+H 352. Ejemplo 50 Ácido 3-[ ({3- [4- (tert-butil) -2-piridinil] -5-etil-4 , 5- dihidro-5-isoxazolil}carbonil) amino] -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaa8) 1H-NMR (400MHz, CDC13) d 8,58 (dd, 1H] , 7,90 (s, 1H) , 7,65 (bs, 1H) , 7, 45-7,39 (m, 1H) , 4, 98-4,68 (m, 3H) , 3,92 y 3,88 (dos d, 1H), 3,52 y 3,47 (dos d, 1H) , 3,05-2,86 (m, 2H) , 2,23-2,18 (m, 1H) , 2,08-2,00 (m, 1H) , 1,38 (s, 9H) , 1,05 (t, 3H) . Masa: M+H 408. Ejemplo 51 Ácido 3-[ ({ (5i¾)-3-[4- (tert-butll)-2-pirldlnil]-5- isopropil-4 , 5-dihidro-5-isoxazolil } carbonil ) amino] -5-fluoro-4- oxopentanoico (Iaa9) ' 1H-NMR (400MHz, CDC13) d 8,58 (d, 1H) , 7,88 (d, 1H) , 7,61 (bs, 1H) , 7,43 (m, 1H) , 4,84 (m, 1H) , 4,60 (bs, 2H) , 3,89-3,82 (dos d, 1H) , 3,60-3,55 (dos d, 1H) , 3, 04-2, 86 (m, 2H) , 2,38 (m, 1H) , 1,38 (s, 9H), 1,07 (m, 6H) . Masa: M+H 422. Ejemplo 52 Ácido 3- ( { [5-etil-3- (4-isobutil-2-piridinil) -4, 5-dihidro- 5-isóx"ázoliI] cafbon'íl } áírinü) -5"-fluoro-4-ox'opentanoico (IaalO) ^- MR (500MHz, DMSO-d6) d 8,58-8,52 (dd, 1H) , 8,49 (s, 1H) , 7,68 (s, 1H), 7,27 (s, 1H) , 5,19-5,04 (m, 1H) , 4,69 (m, 1H) , 4,46-4,29 (m, 1H) , 3,68 (m, 1H) , 3,41-3,37 (dd, 1H) , 2,93-2,46 (m, 4H) , 1,95-1, 85 (dos m, 3H) , 0, 86-0,82 (m, 9H) . Masa: M+H 408. Ejemplo 53 Ácido 3- ( { [3- (4-acetil-2-plridinll) -5-etil-4 , 5-dihidro-5~ isoxazolil] carbonil jamino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaall) ¾-NMR (500MHz, CDC13) d 8,79 (d, 1H) , 8,35 (s, 1H) , 7,76 (d, 1H) , 7,46 (bs, 1H) , 4, 84-4,40 (m, 3H) , 3,90-3,85 (dos d, 1H) , 3,51-3,46 (dos d, 1H) , 3,04-2,84 (m, 2H) , 2,65 (s, 3H) , HHHkdkdk2,16 (m, 1H) , 2,02 (m, 1H) , 1,03 (m, 3H) . Masa: M+H 394. Ejemplo 54 Ácido 3- ( { [3- (4-ciclopropil-2-piridinil) -5-etil-4, 5- dihidro-5-isoxazolil] carbonil }amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaal2) ^- MR (500MHz, DMS0-d6) d 12,39 (bs, 1H) , 8,41 (t, 1H) , 7,56 (d, 1H) , 7,12 (m, 1H) , 5,19-5,04 (m, 1H) , 4,72-4, 66 (m, 1H) , 4,46-4,27 (m, 1H) , 3, 69-3, 63 (m, 1H) , 3,39-3,35 (dos d, 1H) , 2,80-2,74 (m, 1H) , 2,63-2,52 (m, 1H) , 2,00-1,80 (m, 3H) , 1,06 (m, 2H) , 0,86-0,80 (m, 5H) . Masa: M+H 392. Ejemplo 55 Ácido ¦ 3- ( { [3- (4-ciclopentil-2-piridinil) -5-etil-4, 5- dihidro-5-isoxazolil] carbonil }amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaal3) XH-NMR (500MHz, CDC13) d 8,50 (d, 1H) , 7,67 (m, 2H) , 7,26 (m, 1H) , 4, 88-4, 82 (m, 1H) , 4,65 (bs, 2H) , 3,88-3,81 (dos d, 1H) , 3,45-3,41 (dos d, 1H) , 3,05 (m, 1H) , 2,96-2,80 (m, 2H) , 2,20-2,12 (m, 3H) , 2, 02-1,96 (m, 1H) , 1,83 (m, 2H) , 1,72 (m, 2H) , 1,60 (m, 2H) , 1, 01 (t, 3H) . Masa: M+H 420. Ejemplo 56 Ácido 3- ( { [ [5R) -3- ( 4-clclopentll-2-piridinil) -5-isopropil- 4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -5-fluoro-4- oxopentanoico (Iaal4) """H-NMR (400MHz, CDC13) d 8,58 (m, 1H) , 7,74 (d, 1H) , 7,63 (bs, 1H), 7, 38-7,32 (dd, 1H) , 4,88-4,81 (m, 1H) , 4,53 (bs, 2H) , 3,87-3,79 (dos d, 1H) , 3,56-3,53 (dos d, 1H) , 3,12-3,04 (m, 1H) , 3,02-2,85 (m, 2H) , 2,38 (m, 1H) , 2,16 (m, 2H) , 1,88 (m, 2H) , 1,78 (m, 2H) , 1,65 (m, 2H) , 1,07 (m, 6H) . Masa: M+H 434. Ejemplo 57 Ácido 3-({ [3- (4-ciclohexil-2-piridinil) -5-etil-4, 5- dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaal5) ¦""H-NMR (400MHz, CDCI3) d 8,61 (m, 1H) , 7,75 (d, 1H) , 7,64 (bs, 1H), 7,39-7,33 (dd, 1H) , 4, 86-4, 53 (dos m, 3H) , 3,87 (t, 1H) , 3, 50-3; 45--(dd, lH)v 3, 05-2-, 85 -(dos- -m>- 2H) ,- 2, 63 (m, 1H) , 2,22 (m, 1H) , 2,03 (m, 1H) , 1,93-1,80 (dos m, 5H) , 1,44 (m, 5H) , 1, 05 (t, 3H) . Masa: M+H 434. Ejemplo 58 Ácido 3- ( { [5-etil-3- (5,6,7, 8-tetrahidro-l-isoquinolinil) - 4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -5-fluoro-4- oxopentanoico (Iaal6) ^- MR (500MHz, DMSO-d6) d 8, 60-8,53 (dd, 1H) , 8,30 (d, 1H) , 7,15 (d, 1H) , 5,20-5,05 (m, 1H) , 4,74-4,66 (m, 1H) , 4,45-4,25 (m, 1H) , 3,75-3, 68 (m, 1H) , 3,47-3,41 (m, 1H) , 2,94-2, 88 (m, 2H) , 2, 80-2,72 (m, 3H) , 2, 62-2,53 (ra, 1H) , 1, 99-1, 93 (m, 1H) , 1,88-1,80 (ra, 1H) , 1,71-1,69 (m, 4H) , 0,88-0, 84 (m, 3H) Masa: M+H 406 Ejemplo 59 Ácido 5-fluoro- 3- ( { [5-isopropil-3- (4-fenil-2-piridinil) - 4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -4-oxopentanoico (Iaal-7) ^- R (400MHz, CDC13) d 8,68 (d, 1H) , 8,14 (s, 1H) , 7,68 (ra, 1H) , 7,58 (m, 1H) , 7,54-7, 43 (m, 5H) , 4, 86-4, 60 (m, 3H) , 3,92-3,87 (dos d, 1H) , 3,62 (d, 1H) , 3,09-2, 86 (m, 2H) , 2,39 (m, 1H) , 1,11-1,06 (m, 6H) Masa: M+H 442 Método de preparación de los Ejemplos 60-63 Se hizo reaccionar ácido (2S) -4- ( tert-butoxi) 2- ( { [ (52) -5-isopfopil-3- (l-l'soqurnolxnil) -A, 5-d±tridro-5-isoxazolil] carbonil} amino ) -4-oxobutanoico [obtenido por reacción de acoplamiento del compuesto (Vllf) con Asp (O-t-Bu) -OMe e hidrólisis] de acuerdo con el mismo procedimiento que en la Preparación 5 para dar un derivado de bromometil cetona (tert-butil (35) -5-bromo-3- ( { [ (5R) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4,5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil }amino) -4-oxopentanoato) . Se hizo reaccionar este derivado de bromometil cetona con ácido difenilfosfinico en F/DMF (ver Preparación 5) para dar el derivado difenilfosforiloximetil cetona, que se hizo reaccionar luego de acuerdo con el mismo procedimiento que en el Ejemplo 2 para dar el compuesto del titulo (Compuesto del Ejemplo 60) . Los compuestos de los Ejemplos 61-63 siguientes se obtuvieron a partir de 1-fenil-3- (trifluorometil) -lií-pirazol-5-ol, 3-bencil-4-hidroxi-2 (5íf) -furanona, o ácido isobutirico de acuerdo con el mismo procedimiento que se indicó más arriba. Ejemplo 60 Ácido (35) -5- [ (difenilfosforil) oxi] -3- ( { [ {5R) -5-isopropil-3- (l-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil }amino) -4- oxopentanoico (Iaal8) XH-NMR (500MHz, DMSO-d6) d 8,92 (m, 1H) , 8,58 (m, 1H) , 8,05 (m, 1H), 7,94 (m, 1H) , 7,81 (m, 1H) , 7,75-7,72 (m, 3H) , 7,57 (m, 3H) , 7,49 (m, 4H) , 7,35 (m, 2H) , 4,90-4,65 (dos m, 3H) , 3,79-3,75 (dos d, 1H) , 3, 69-3, 67 (dos d, 1H) , 2,65 (dos m, 2H) , 2,22 (m, 1H) , 0, 84 (m, 6H) . Masa: M+H 614.
Ejemplo 61 Ácido (35) -3- ( { [ (5R) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4,5- dihidro-5-isoxazclil] carbonil lamino) -4-oxo-5-{ [l-fenil-3- (trifluorometil) -lfí-pirazol-5-il] oxi}pentanoico (Iaal9) 1H-NMR (500MHz, DMS0-d6) d 8,95 (ra, 1H) , 8,83 (d, 1H) , 8,57 (m, 1H) , 8,03 (d, 1H) , 7,92 (d, 1H) , 7,80 (m, 1H) , 7,74 (m, 1H) , ,55 (d, 1H), 7,57 (m, 1H) , 7,51-7,34 (m, 3H) , 6,27 (s, 1H) , ,29-5,15 (ra, 2H) , 4,76 (ra, 1H) , 3,92-3,88 (ra, 1H) , 3,75-3, 69 (ra, H) , 2,84-2, 60 (ra, 2H) , 2,23 (ra, 1H) , 0,96 (ra, 6H) . Masa: M+H' 624. Ejemplo 62 Ácido (35) -5- [ (4-bencil-5-oxo-2, 5-dihidro-3-furanil) oxi] - 3- ( { [ {5R) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5- isoxazolil] carbonil lamino) -4-oxopentanoico (Iaa20) 1H-NMR (500MHz, DMSO-d6) d 8,97 (t, 1H) , 8,58 (d, 1H) , 8,04 (d, 1H) , 7,92 (d, 1H) , 7,81 (m, 1H) , 7,73 (m, 1H) , 7,23-7,07 (m, H) , 7,51 (ra, 4H) , 4,79-4, 65 (ra, 3H) , 3,92-3,87 (dos d, 1H) , ,74-3,68 (dos d, 1H) , 2, 82-2,58 (ra, 2H) , 2,31 (ra, 1H) , 0,95 (ra, H) . Masa: M+H 586. Ejemplo 63 Ácido (35) -5- (isobutiriloxi) -3- ( { [ {5R) -5-isopropil-3- (1- isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -4- oxopentanoico (Iaa21) 1H-NMR (500MHz, DMSO-d6) d 12,39 (bs, 1H) , 8,96 (t, 1H) , 8,73 (m, 1H), 8,58 (dd, 1H) , 8,04 (d, 1H) , 7,92 (d, 1H) , 7,81 (t, 1H) , 7,73 (m, 1H) , 4,78 (m, 2H) , 4,68 (m, 1H) , 3,87 (t, 1H) , 3,73-3,68 (dos d, 1H), 2,79-2,60 (dos m, 2H) , 2,56 (m, 1H) , 2,31 (mr 1H) , 1,05 (d, 3H) , 0,95 (m, 9H) . Masa: M+H 484. Ejemplo 64 Ácido (3S) -3- ( { [ {5R) -5-isopropil-3- ( 1-isoquinolinil) -4,5- dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -4-oxo-5-hexenoico (Iaa22) Se hicieron reaccionar el derivado de la amida de Weinreb del ácido ¦ (2S) -4- ( tert-butoxi) -2- ( { [ (51?) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -4-oxobutanoico (derivado condensado con N, O-dimetil-hidroxilamina) y bromuro de vinil magnesio, y se hizo reaccionar el compuesto resultante de acuerdo con el mismo procedimiento que en el Ejemplo 2 para dar el compuesto del título. 1H-NMR (400MHz, DMSO-d6) d 12,27 (bs> 1H) , 8,95 (t, 1H) , 8, 74-8, 67 (dos d, 1H) , 8,58 (m, 1H) , 8,04 (d, 1H) , 7,92 (d, 1H) , 7,83-7,72 (m, 2H) , 6,47 (m, 1H) , 6,22-6,11 (dos dd, 1H) , 5,71-5,62 (dos dd, 1H) , 4,77 (m, 1H) , 3,90-3,79 (m, 1H) , 3,72-3,64 (m, 1H) , 2,82 (m, 1H) , 2,62-2,49 (m, 1H) , 2,30 (m, 1H) , 0,94 (m, 6H) . Masa: M+H 410. Preparación 22 t-Butil (3S) -3-amino-4-hidroxi-5- (2-piridiniloxi) - pentanoato (VlIIf) El derivado de bromometil cetona X (3,2 g, 7,93 mmoles) , un intermediario en la Preparación 5, se disolvió en benceno (30 mi), se agregaron i¾g2CC>3 (2, 62 g, 1,2 eq) y 2-hidroxipiridina (0,93 g, 1,2 eq) , y se agitó la mezcla bajo reflujo a 801C durante 3 dias . Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, se concentró bajo presión reducida y se purificó por cromatografía en columna para dar un derivado de 2-piridiniloximetil cetona (XIf) (466 g, rendimiento 14%) . El derivado de 2-piridiniloximetil cetona (XIf) (227 mg, 0,548 mmoles) así obtenido se disolvió en una mezcla de solventes de tetrahidrofurano/metanol (3:2 v/v) (10 mi), se agregó NaBH4 (43 mg, 2,0 eq) a 01C y se agitó la mezcla durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se detuvo la reacción por medio de solución de cloruro de amonio saturada y se concentró la solución de reacción bajo presión reducida. Se extrajo el residuo con acetato de etilo, se lavó con solución de cloruro de sodio acuosa, se secó (Na2SC>4 anhidro) y se concentró bajo presión reducida para dar el Compuesto (Xllf) (230 mg) en donde el grupo cetona fue reducido al grupo hidroxilo. Se eliminó el grupo benciloxicarbonilo del compuesto preparado más arriba (Pd/C) bajo un balón de hidrógeno durante 40 minutos para dar el compuesto del título (155 mg, 99%) . Método de preparación de los Ejemplos 65-66 Se hizo reaccionar el Compuesto Vllf (o VIIu) y VlIIf de acuerdo con el mismo procedimiento que en los Ejemplos 1 y 2 para dar los compuestos del título de los Ejemplos 65-66. Aquí, VIIu representa ácido 5-etil-3- (2-isopropilfenil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolcarboxilico . Ejemplo 65 Ácido (35) -3- ( { [ (5R) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4,5- dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -4-oxo-5- (2- piridiniloxi) pentanoico (Iaa23) 1H-NMR (500MHz, MeOH-d4) d 9,04 (d, 1H) , 8,50 (d, 1H) , 7,95 (d, 1H), 7,81 (d, 1H), 7,77 (t, 1H) , 7,69 (t, 1H) , 7,59 (m, 1H) , 6, 85-6,80 (m, 2H) , 6,67 (bs, 1H) , 5,07 (bs, 1H) , 4,95 (t, 1H) , 4,84 (m, 1H) , 3,94-3,79 (Abq, 2H) , 2,92-2,80 (m, 2H) , 2,39 (m, 1H) , 1, 09 (m, 6H) . Masa: M+H 491. Ejemplo 66 Ácido (35) -3- ( { [5-etil-3- (2-isopropilfenil) - , 5-dihidro-5- isoxazolil] carbonil } amino) -4-oxo-5- (2-piridiniloxi) -pentanoico (Iaa24) 1H-NMR (500MHz, DMSO-d6) d 8,71 (bs, 1H) , 8,02-7,94 (dos bs, 1H) , 7,71-7,64 (m, 1H) , 7,42-7,18 (m, 4H) , 6, 96-6,90 (dos t, 1H) , 6, 85-6,80 (dos d, 1H) , 4,99 (bs, 2H) , 4, 86-4,78 (m, 1H) , 3,58 (dos d, 1H) , 3,48 (dos d, 1H) , 3,36 (m, 1H) , 2,81-2,61 (m, 2H) , 2,05-1,80 (dos m, 2H) , 1,14-1,03 (m, 6H) , 0,93-0,88 (m, 3H) .
Masa: M+H 468,21 Ejemplo 67 2-{ [ (35) -4-carboxi-3- ( { [ (5R) -5-isopropil-3- (1- isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -2-oxobutil] oxi } -1-metilpiridinio trifluorometanosulfonato (Iaa25) Se disolvió el intermediario t-butil ( (3S) -3- ( { [ (5R) -5-isopropil-3- ( l-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] -carbonil }amino) -4-OXO-5- (2-piridiniloxi) -pentanoato (49 mg, 90 umoles) obtenido después de la reacción de oxidación de Dess-Martin en el Ejemplo 65, en diclorometano (2 mi), se agregó metil trifluorometano-sulfonato (1,1 eq, 10,1 mi), y se agitó la mezcla de reacción durante un dia a temperatura ambiente. Después de la concentración a presión reducida, se sometió el residuo al mismo procedimiento que en el Ejemplo 2 para dar el compuesto del titulo (60 mg) . 1H-NMR (500MHz, DMSO-d6) d 9,00-8,91 (m, 2H) , 8,76-8,57 (m, 2H) , 8,42 (m, 1H) , 8r04 (m, 1H) , 7,93 (m, 1H) , 7,80 (m, 1H) , 7,75 (m, 1H), 7,54 (m, 1H) , 5,77-5,48 (m, 2H) , 4,85-4,81 (m, 1H) , 4,00 (s, 3H) , 3,94-3, 69 (m, 2H) , 2,87-2,60 (m, 2H) , 2,33 (m, 1H) , 0,98 y 0, 94 (dos d, 6H) . Masa: M+ 505,20. Ejemplo 68 2-{ [ (35) -4-carboxi-3- ( { [5-etil-3- (2-isopropilfenil) -4,5- dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -2-oxobutil] oxi}-l- metilpiridinio trifluorometanosulfonato (Iaa26) Se disolvió el intermediario t-butil (3S) -3- ( { [5-etil-3- (2-isopropilfenil-) —4y-5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -4-oxo-5-(2-piridiniloxi) -pentanoato (55 mg, 0,105 mmoles) obtenido después de la reacción de oxidación de Dess-Martin en el Ejemplo 66, en diclorometano (2 mi) , se agregó metil trifluorometanosulfonato (1,1 eq. , 13 mi), y se agitó la mezcla de reacción durante un dia a temperatura ambiente. Después de la concentración a presión reducida, se sometió el residuo al mismo procedimiento que en el Ejemplo 2 para dar el compuesto del titulo (59 mg, 94%) . 1H-NMR (500MHz, DMSO-d6) d 8, 80-8,73 (dos d, 1H) , 8,65 (m, 1H) , 8,45-8,38 (m, 1H) , 7,56-7,51 (m, 2H), 7,43-7,31 (m, 3H) , 7,24-7,12 (m, H) , 5,72-5,48 (m, 2H) , 4,91 (m, 1H) , 4,01 y 3,99 (dos s, 1H), 3,64 (dos d, 1H) , 3,48 (dos d, 1H) , 3,42 (m, 1H) , 2, 90-2, 62 (m, 2H) , 2,05-1,80 (dos m, 2H) , 1,15-1,03 (m, 6H) , 0,93 y 0,88 (m, 3H) . Masa: M+ 482,17. Método de preparación de los Ejemplos 69-70: Se hizo reaccionar el derivado oxima de 5-clóro-l-metil-l.H'-indol-2-aldehido o 1, 5-dimetil-li?-indol-2-aldehido con t-butil 3-amino-5-fluoro-4-hidroxipentanoato de acuerdo con el mismo procedimiento que en las Preparaciones 1, 17, 4 y los Ejemplos 1 y 2 para dar los compuestos del titulo de los Ejemplos 69-70. Ejemplo 69 Ácido 3- ( { [3- (5-cloro-l-metil-lff-indol-2-il) -5-isopropil- 4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil} amino) -5-fluoro-4- — - —oxopen-ta-noico ( Iaa27 ) ^"H-NMR (500MHz, CDC13) d 7,59 (s, 1H) , 7,46-7,39 (dos d, 1H) , 7,30-7,23 (m, 3H) , 5,01 (m, 1H) , 4,75-4,46 (ra, 2H) , 4,02 (d, 1?) , 3,95 (s, 3H) , 3,71 (d, 1H) , 2,95 (m, 1H) , 2,77 (m, 1H) , 2,35 (m, 1H) , 1,04 (m, 6H) . Masa: M+H 452. Ejemplo 70 Ácido 3- ( { [3- (1, 5-dimetil-lj-"-indol-2-il) -5-isopropil-4 , 5- dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico) (Iaa28) ^•H-NMR (500MHz, CDC13) d 7,48 (bs, 1H) , 7,39 (d, 1H) , 7,23-7,14 (m, 3H) , 4,76 (m, 1H) , 4,70-4,50 (m, 2H) , 4, 07-4,02 (dos d, 1H) , 3,99, 3,94 y 3,93 (tres s, 3H) , 3,75-3,48 (m, 1H) , 2,94-2,82 (dos m, 1H) , 2,46-2,43 (dos s, 3H) , 2,34 (m, 1H) , 1,05 (m, 6H) . Masa: M+H 432. Preparación 23 Resolución del ácido (5S) -5-isopropil-3- (l-isoquinolinil) - 4, 5-dihidro-5-isoxazol carboxílico Se disolvió el ácido 5-isopropil-3- (l-isoquinolinil) -4 , 5-di idro-5-isoxazolcarboxílico en acetona (190 mi) calentando a 601C, y se agregó (S) - -metil-bencilamina (14,5 mi, 112 mmoles) . La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se agitó durante 4 horas. El precipitado resultante se filtró y se lavó tres veces con acetona (40 mi) . La sal ( S) -a-metil-bencilamina del ácido (5JR) -5-isopropil-3-(l-iso'quinolinil) -4 , 5^dihidro-5-i-soxazolcarboxíli-co asi obtenida se disolvió en la mezcla (150 mi) de acetona y agua (4:1) calentando a 901C, se enfrió a temperatura ambiente y se agitó durante 3 horas. El precipitado resultante se filtró y se lavó con acetona (40 mi) tres veces para dar la sal (S) -a-metil-bencilamina pura del ácido (5R) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolcarboxílico (12,8 g, 24,3%, 99,8% ee) . La pureza óptica del ácido (5R) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolcarboxilico se calculó usando una columna ChiralCel OD (4, 6 x 250 mm, 5 µp?) . La mezcla de n-hexano/isopropanol/ácido trifluoroacético (92/8/0,1) se usó como la fase móvil al caudal de 1 ml/min, la temperatura de la columna era 401C, y la longitud de onda de detección era 225 nm. Se observaron los dos isómeros ópticos a los tiempos de retención de 7,8 min (isómero R) y 21,1 min (isómero S) , respectivamente. Ejemplo 71 Resolución del Compuesto (Iii-1) 1) Aislamiento del compuesto germen Los dos diastereómeros del Ejemplo 16 se separaron usando una columna de sílice de cromatografía líquida preparativa (diámetro 40 mm, DYNAMAX-100?) . La mezcla' de n-hexano/etanol/ácido trifluoroacético (4000/32/2) se usó como la fase móvil al caudal de 50 ml/min, y el diastereómero deseado se recogió con la relación de 99:1 durante el tiempo de retención de 62-66 min a la longitud de detección de 227 nm (los dos diastereómeros se elüyeron "ampliamente con la relación que cambiaba continuamente hasta 86 min) . El diastereómero así obtenido de la relación 99:1 fue desprotegido y usado como el germen para la resolución. La pureza óptica se calculó usando una columna Atlantis Ci8 (4,6 x 250 itm, 5 pm) . La mezcla de acetonitrilo/agua/ácido trifluoroacético se usó como la fase móvil al caudal de Iml/min de acuerdo con el siguiente gradiente: t = 0 min, 0:100:0,1 3 min, 20:80:0,1 50 min, 100:0:0,1 Bajo la longitud de onda de detección de 227 nm, se observaron los dos isómeros ópticos a los tiempos de retención de 36,6 min (isómero 3R, 5R) y 37,1 min (isómero 3S, 5R) , respectivamente . (Isómero 3S, 5R) : tert-butil (3S) -5-fluoro-3- ( { [ {5R) -5- isopropil-3- (1-isoguinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] - carbonil lamino) -4-oxopentanoato 1H- (500 MHz, CDC13) d 9,13 (d, 1H) , 8,55 (d, 1H) , 7,85 (d, 1H) , 7,78-7,65 (m, 4H) , 5,22-5,02 (dos m, 2H) , 4,90 (m, 1H) , 4,02 (d, 1H), 3,80 (d, 1H) , 2,92-2,88 (dd, 1H) , 2,79-2,75 (dd, 1H) , 2,41 (m, 1H) , 1,34 (s, 9H) , 1,09 (m, 6H) . Masa: M+H 472 (Isómero 3R, 5R) : tert-butil (3R) -5-fluoro-3- ({[ (5. ) -5- isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4 , 5-dihidro-5-isoxazolil] - carbonil} amino) -4-oxopentanoato 1H-NMR (400 MHz, CDC13) d 9,14 (d, 1H) , 8,56 (d, 1H) , 7,87 (d, 1H) , 7, 77-7, 64 (ra, 4H) , 5,25-5,00 (dos q, 2H) , 4,90 (m, 1H) , ,03(d, 1H) , 3,82 (d, 1H) , 2,93 (dd, 1H) , 2,77 (dd, 1H) , 2,42 (m, H) , 1,35 (s, 9H), 1,11 (m, 6H) . Masa: M+H 472 Ácido (35) -5-fluoro-3- ( { [ (5R) -5-isopropil-3- (1- isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] -carbonil} amino) -4- oxopentanoico (Iii-1) XH-NMR (400 MHz, CDC13) d 9,07 (d, 1H) , 8,57 (d, 1H) , 7,89 (d, 1H) , 7,78-7, 69 (m, 3H) , 7,69 (d, 1H) , 4, 88-4, 79 (m, 2H) , , 88-4, 79 (m, 2H) , 4,67 (bs, 1H) , 4,07 (d, 1H) , 3,81 (d, 1H) , ,08-2,93 (m, 1H) , 2,91-2,82 (m, 1H) , 2,43 (m, 1H) , 1,12 (m, 6H) . Masa: M+H 416 Ácido (3R) -5-fluoro-3- ({ [ (5J¾) -5-isopropil-3- (1- isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] -carbonil} amino) -4- oxopentanoico (Iii-2) 1H-NMR (500 MHz, CDC13) d 9,07 (d, 1H) , 8,55 (d, 1H) , 7,87 (d, 1H) , 7,75-7, 68 (m, 3H) , 7,52 (bs, 1H) , 5,20-4,35 (m, 3H) , ,02 (d, 1H) , 3,80 (d, 1H) , 3,13-2,90 (m, 2H) , 2,39 (m, 1H) , 1,08 (m, 6H) . Masa: M+H 416 2) Recristalización Ácido (3S) -5-fluoro-3- ( { [ (5.R) -5-isopropil-3- (1- isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -4- " oxopentanoico" (Iii-1) Se disolvió t-butil 5-fluoro-3- ({[ (5R) -5-isopropil-3- (1- isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil) carbonil] amino}-4-oxopentanoato crudo (366 g) en cloruro de metileno (1,9 kg) y se enfrió a 01C. Se agregaron trietilsilano (235 g) y ácido trifluoroacético (1,88 kg) y se agitó durante una hora a 01C. La mezcla de reacción se destiló bajo presión reducida, se volvió a disolver en acetato de etilo (2,4 kg) y se ajustó el pH a 5,2 agregando una solución de hidróxido de sodio acuosa 2N (3,1 1) . La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo una vez con acetato de etilo (2,4 kg) . La capa orgánica combinada se destiló bajo presión reducida para remover el solvente, se disolvió el residuo resultante en metil t-butil éter (530 g) , y se agregó una pequeña cantidad de ácido (3S) -5-fluoro-3- ( { [ {5R) -isopropil-3- ( 1-isoquinolil) -4 , 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil }amino) -4-oxopentanoico cristalino. Después de agitar durante 16 horas a temperatura ambiente, se filtró el precipitado resultante y se lavó con la mezcla 9:1 de metil t-butil éter y n-hexano (210 mi) . El ácido (3S) -5-fluoro-3- ({ [ (5i¾) -isopropil-3- (1-isoquinolil) -4 , 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -4-oxopentanoico asi obtenido se disolvió en acetato de etilo (240 mi) calentando a 501C, se agregó lentamente n-hexano (240 mi) y se enfrió gradualmente a temperatura ambiente. Después de agitar durante 24 horas a temperatura ambiente, se filtró el precipitado resultante y se ~±avó" "con la mezcla-1:1 de acetato de etilo y n-hexano (30 mi) para dar el compuesto del titulo (Iii-1, 46,0 g, 3S/3R=94/6, 0) . La pureza óptica se calculó usando una columna Luna (4,6 x 250 mm, 5 um, <¾) . La mezcla de acetonitrilo/20 mM de NH4OAc (pH 6) (30/70) se usó como la fase móvil al caudal de 1 ml/mn. Bajo la longitud de onda de detección de 227 nm, se observaron los dos isómeros ópticos a los tiempos de retención de 8,0 min (isómero 3R) y 9,0 min (isómero 3S) , respectivamente. Experimento 1 Determinación del efecto inhibidor de caspasa La caspasa-1 y la caspasa-8 conocidas como cisterna proteasas en la forma de a.2S>2 fueron expresadas, purificadas y activadas por medio de la modificación de un método conocido de Thornberry, N. A. y col., Nature, 1992, 356, 768. Thornberry, N. A., ethods in Enzymology, 1994, 244, 615. Walker, N.P.C. y col., Cell, 1994, 78, 343, y la caspasa-9 también fue purificada por medio de un método similar, y se probó la actividad inhibidora contra las mismas. Describiendo brevemente, se expresaron las subunidades plO y p20 (Thornberry, N. A. y col., Nature, 1992, 356, 768) en E. coli y se purificaron por medio de una columna de níquel y cromatografía de intercambio aniónico para dar la caspasa-1, la caspasa-8 y la caspasa-9. El substrato fluorescente AcYVAD-AFC para la caspasa-1 asi obtenida, AcDEVD-AFC para la caspasa-8 y AcLEHD-AFC para la caspasa-9 se usaron para determinar la actividad específica de los inhibidores sintetizados. La reacción enzimática se llevó a cabo a 251C con diversas concentraciones de los inhibidores en una solución tampón que contenía 50 mM de HEPES (pH 7,50), 10% (p/v) de sacarosa, 0,1% (p/v) de CHAPS, 100 mM de NaCl, 1 mM de EDTA, y 10 mM de DTT en presencia de 50 µ? de AcYVAD-AFC para 10 nM de caspasa-1, 50 µ? de AcDEVD-AFC para 2,1 nM de caspasa-8,y 150 µ? de AcLEHD-AFC para 200 nM de caspasa-9. Las constantes inhibidoras K± y Kobs de los inhibidores fueron determinadas midiendo la velocidad de reacción con el lapso de tiempo usando un espectrómetro fluorescente y obteniendo la constante de velocidad inicial. Se calculó K± de la representación gráfica Lineweaver Burk Plot y KQbs de la siguiente Ecuación 1. Ecuación 1 Kobs = -ln(l-At/Aoo) /t en donde: At significa velocidad de división (%) en tiempo t, y A0o significa la velocidad de división máxima (%) . Se usó un espectrómetro fluorescente Spectra MAX GeminiXS de Molecular Device Co. a la longitud de onda de excitación de 405 nm y longitud de onda de emisión de 505 nm. La actividad inhibidora in vivo de los inhibidores fue determinada sometiendo células Jurkat (ATCC TIB-152) a apoptosis usando anticuerpo Fas (üpstate Biotech 05-201) y detectando el cambio de color de acuerdo con el método de WST-1 conocido de Francoeur, A. M. y Assalian, A. (1996) Biochemica 3, 19-25 para observar la cantidad de células Jurkat vivas cuando se trataron las células con el inhibidor. Se usó el espectrómetro Spectra MAX 340 de Molecular Device Co. a la longitud de onda de absorbancia de 440 nía.
Tabla 1 Com . Caspasa-1 Caspasa-8 Caspasa-9 Células No. Kohs/[I] (M" Koba/CI] (M- Kobs/ [I] ( - Jurkat 1min~1) ^in"1) ^i -1) CI50 (µ?) Ice 1,9 E5 3,3 E4 22,5 Idd 3,1 E5 1,9 E5 4,25 lee 1,8 E5 32, 6 Iff 5,0 E5 1,2 Igg 2,7 E6 1,5 E6 3,2 E5 0,17 Iii 1,1 E6 1,3 E7 2,0 E5 0,1 Iii-u* 1,9 E5 0,71 Iii-1 2,3 E7 Comp. Caspasa-1 Caspasa-8 Caspasa-9 Células No. Kobe/[I] (M" Kobe/tl] ( " Kobs/[I] (M~ Jurkat ½1?_1) 1min~1) CI50 (µ?) Iii-2 4,7 E5 Ijj 1,9 E5 4,7 Ikk 1,2 E5 1,1 111 1,3 E5 39,2 Imm 1,6 E5 2,0 Inn 2,6 E5 6,5 loo 2,0 E4 50 Ipp 2,3 E6 1,7 E5 3,5 iqq 3,3 E6 1,4 E5 37 ¦ - -- - - ¦ — Irr Sin Com . Caspasa-1 Caspasa-8 Caspasa-9 Células No. 0bs/ [I] (M~ 0bs/[I] (M- 0bs/[I] (M" Jurkat ½1?_1) ^iirT1) ^ain"1) CIso (µ?) Iaa2 3,2 E5 0,56 Iaa3 1,4 E5 2, 65 Iaa4 5,0 E5 0, 67 Iaa5 3,0 E5 0,3 Iaa6 2,0 E5 2,45 Iaa7 4,4 E4 2,27 Iaa8 4,5 E5 0,70 Iaa9 2,3 E5 1,24 IaalO 1,5 E5 1, 02 Iaall 6,4 E4 31 Comp . Caspasa-1 Caspasa-8 Caspasa-9 Células No. Kobs/[I] ( ~ obs/[I] (M" Kobs/[I] (M~ Jurkat 1min_1 ) ???_1) CI50 (µ?) Iaal2 1,9 E5 0,70 Iaal3 3,1 E5 0,35 Iaal4 4,1 E5 0,79 Iaal5 4,3 E5 0, 72 Iaal6 6,2 E5 0, 73 Iaal7 1,8 E5 1,14 Iaal8 5,2 E5 1,5 Iaal9 1,6 E4, Sin actividad Iaa20 3,7 E4 Sin actividad Com . Caspasa-1 Caspasa-8 Caspasa-9 Células No. KobS/[I] (M" 0bs/[I] (M~ Koba/[I] ( - Jurkat 1min-1) •Snin"1 ) CI50 (µ?) Iaa21 Sin Sin actividad actividad Iaa22 Sin actividad Iaa23 2,9 E4 Sin actividad Iaa24 Sin actividad Iaa25 1,7 E5 Sin actividad Iaa26 3,1 E4 Sin actividad Iaa27 8,2 E5 1,3 Comp . Caspasa-1 Caspasa-8 Caspasa-9 Células No. obs/[I] (M" Kobs/[U ( - 0bs/[I] (M- Jurkat 1min~1) ^in"1) ???_1) CI50 (µ?) Iaa28 1,8 E6 0, 6 * Compuesto Iii-u es la forma (5S) del compuesto Iii. Experimento 2 Efecto terapéutico sobre la hepatitis aguda inducida por LPS en el ratón Paso 1) Preparación de la muestra de sangre Se mantuvieron ratones Balb/c hembras (6 semanas, Charles Ri er Laboratory, Osaka, Japón) bajo las condiciones de 221C, 55% de humedad relativa y un ciclo de luz-oscuridad de 12 horas. Se suministraron alimentos y agua ad libitum. En solución salina libre de pirógenos se disolvieron LPS (lipopolisacáridos) y D-galactosamina en concentraciones de 0,4 mg/ml y 280 mg/ml, respectivamente, y su mezcla 1:1 se inyectó a ratones en la cantidad de 5 ml/kg. Inmediatamente después de la inyección de LPS y D-galactosamina, se inyectó intraperitonealmente a los ratones el vehículo (una mezcla de PEG400 : etanol : Tween80 = 15:7,5:2,5 se diluyó cinco veces con solución salina) en donde se disolvió el compuesto de prueba o el vehículo sólo. Después de 8 horas de la inyección de la droga, se obtuvieron muestras de sangre de los corazones. Paso 2: Determinación de la actividad de aminotransferasa plasmática La actividad ALT plasmática se determinó para las muestras de sangre obtenidas en el Paso 1 usando el kit de ensayo ALT (Asan Pharm. Co. , Seúl, Corea) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Como resultado, se observó que la inyección de LPS y D-galactosamina aumenta marcadamente la actividad ALT en plasma y los compuestos de la prueba inhiben la actividad enzimática aumentada en una manera dependiente de la dosis. En base a estos resultados, se calcularon los valores DE50 de los compuestos de prueba usando software Prism de GraphPad Co. para dar 0,01-10 mg/kg. Experimento 3 Efecto inhibidor contra la fibrosis hepática en ratas SD Paso 1) Inducción de fibrosis hepática y administración Se mantuvieron ratas Sprague-Dawley machos (6 semanas, Korea Biolink) bajo las condiciones de 221C, 55% de humedad relativa y ciclos de luz-oscuridad de 12 horas. Se suministraron alimentos y agua ad libitum. Para la ligadura del conducto biliar, se anestesiaron las ratas por inhalación de 1% de halotano, se abrió el abdomen de las ranas, se ligaron los conductos biliares distal y proximal, se cortó la parte entre los sitios de ligadura, se inyectaron 2 mi de solución salina y se suturó. El compuesto de prueba (Iii) se administró oralmente a una dosis de 3 mg/kg o 10 mg/kg dos veces por día. Es decir, el compuesto se disolvió en un cosolvente (PEG400 : etanol : Tween80 = 15:7,5:2,5), se diluyó con tampón fosfato (pH 7,4) cinco veces y se administró. Al grupo control se le administró la solución sin el compuesto de prueba. La administración se realizó durante 1 semana, una semana después de la ligadura del conducto biliar. Paso 2: Preparación de una sección de tejido y coloración con rojo Sirius Después de la administración se sacrificaron las ratas. Los hígados se fijaron con 10% de formalina neutra y se preparó una sección de parafina de 5 µ?a de espesor y se coloreó con 0,1% de rojo Sirius (Direct red 80, Sigma) . Se investigó la sección de tejido por medio de un microscopio óptico para observar las fibras de colágeno coloreadas con rojo y los resultados se representan en la Figura 1. Experimento 4 Efecto inhibidor contra apoptosis durante la acumulación de bilis en ratas SD El compuesto de prueba (Iii) se administró a las ratas SD cuyos conductos biliares fueron ligados de acuerdo con el procedimiento del Paso 1 del Experimento 3. Después de 2 semanas de la operación se sacrificaron las ratas. Los hígados fueron fijados con 10% de formalina neutra y se preparó una sección de parafina de 5 µ?t? de espesor. Se llevó a cabo la coloración TUNEL usando el kit de detección de apoptosis in situ de peroxidasa ApopTag Peroxidasa (Chemicon) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Más de 10 sitios del tejido hepático coloreado con TUNEL fueron fotografiados con amplificación de 200 sin superposiciones, cuyo resultado se muestra en la Figura 2. Se contó el número de células que mostraban apoptosis en cada grupo de prueba y se representó en la siguiente Tabla 2. En la siguiente tabla, la operación de Sham significa el caso en donde se expuso el conducto biliar pero no se ligó, y la operación BDL significa el caso en donde sólo se administró el vehículo después de la ligadura del conducto biliar.
Tabla 2 Efecto inhibidor del compuesto (Iii) contra apoptosis de las células hepáticas durante la acumulación de bilis (Unidad: células TUNEL positivas/campo) Operación Operación BDL+Compuesto BDL+Compuesto SHAM BDL (Iü) (Iü) 3 mg/kg 10 mg/kg 0,76 V 16, 7 V 4,12 V 1,3 5,66 V 1,34 0,15 2,75 Conclusión La inhibición efectiva de la apoptosis (75% de inhibición) por el Compuesto (Iii) se demostró por la coloración TUNEL en un modelo establecido por la inducción de fibrosis hepática por medio de la acumulación de bilis. Además, la coloración con rojo Sirius mostró una fibrosis grave en el grupo control, pero casi no se observó fibrosis en el grupo tratado con el Compuesto (Iii) . Este resultado demuestra el efecto inhibidor del Compuesto (Iii) contra la fibrosis hepática en ratas, y asi se espera que el Compuesto (Iii) pueda mostrar la actividad farmacológica de suprimir la cirrosis del higado inhibiendo la apoptosis de las células hepáticas en la aplicación clínica. La aplicación puede ampliarse no sólo a la cirrosis hepática por acumulación de bilis, sino también a varias enfermedades hepáticas en donde está incluida la fibrosis hepática debido a la apoptosis. Experimento 5 Efecto antiflogístico en ratas Se mantuvieron ratas SD machos (6 semanas, Orient) bajo las condiciones de 221C, 55% de humedad relativa, y ciclos de luz- oscuridad de 12 horas. Se suministraron alimentos y agua ad libitum. Antes de la inducción del edema, se midió el volumen de la pata de cada rata por. un pletismógrafo . Antes de la inducción del edema, se administró oralmente a las ratas el vehículo (una • -mezcla- de PEG400 : etanol -: Tween80 =- 15 : 7 , 5 : 2-, 5 se diluyó diez veces con tampón fosfato) en donde se disolvió el compuesto de prueba o el vehículo solamente. Se disolvió carragenina (gamma) a la concentración de 1% en solución salina, y se inyectó subcutáneamente en la pata posterior derecha de las ratas a la dosis de 100 µ?. Después de 3 horas, se midió nuevamente el volumen de la pata derecha por medio del pletismógrafo . El efecto del compuesto de prueba se mostró por la inhibición del edema (%) (ver Tabla 3) . La inhibición del edema (%) fue calculada de acuerdo con la siguiente Ecuación 2. Ecuación 2 Inhibición del edema (%) = 100 x (Promedio del volumen aumentado de la pata en el grupo al que se administró el vehículo - Volumen aumentado de la pata en el grupo al que se le administró el compuesto de prueba) /Promedio del volumen aumentado de la pata en el grupo al que se le administró el vehículo. Tabla 3 Efecto de inhibición del edema por el Compuesto (Iii) Efecto de inhibición del edema (%) Dosis (mg/kg) Promedio SEM 3 2,3 7,7 20, 7 9,7 Experimento 6 Efecto terapéutico sobre la artritis reumática en ratas Ratas Lewis hembras (7 semanas, Charles Ri er, Japón) se mantuvieron bajo las condiciones de 221C, 55% de humedad relativa y ciclos de luz-oscuridad de 12 horas. Se suministraron alimentos y agua ad libitum. Se disolvió colágeno (bovino) tipo II en 0,05M de ácido acético en una concentración de 2 mg/ml a 41C, y se agregó la misma cantidad de adyuvante de Freund completo para emulsionar la solución a 41C. Se inyectaron subcutáneamente en la cola de las ratas Lewis 0,1 mi de la solución asi emulsionada. Después de 7 dias, se inyectó nuevamente la solución emulsionada de la misma manera. A partir de la fecha en la cual se inyectó la segunda solución emulsionada, se administró' oralmente a las ratas cada día un vehículo (una mezcla de PEG400 : etanol : Tween80 = 15:7,5:2,5 se diluyó diez veces con tampón fosfato) en donde se disolvió el compuesto de prueba o el vehículo solamente. El día 14 después de la primera inyección de la solución emulsionada que contenía colágeno, se midió nuevamente el volumen de la pata posterior derecha por medio del pletismógrafo (ver Tabla 4). Se determinó la inhibición del edema (%) por medio de la siguiente "Ecuación"3". ~~ Ecuación 3 Inhibición del edema (%) = 100 x (Promedio del volumen aumentado de la pata en el grupo al que se administró el vehículo el día 14- Volumen aumentado de la pata en el grupo al que se le administró el compuesto de prueba el día 14) /Promedio del volumen aumentado de la pata en el grupo al que se le administró el vehículo el día 14. Además, se calculó el valor p por medio de la prueba t de Student a partir del volumen aumentado de la pata el día 14 para confirmar la significancia. Tabla 4 Efecto de inhibición del edema de la pata Dosis del Volumen de la pata (mi) Efecto de compuesto inhibición del (Iü) edema (%) (mg/kg) Día 0 Día 14 Día 14 Prornedi SEM Promedi SE Promedi SEM o o o 0 1,115 0,03 1,975 0,25 - 6 7 10 1, 134 0, 03 1, 394* 0,08 69,8 10,8 2 9 * valox ? = 0,032 En la prueba del edema de la pata en ratas, el Compuesto (Iii) mostró un efecto de inhibición del edema dependiente de la dosis de aprox. 2, 21 y 23% a una dosis de 3, 30 y 100 mg/kg, respectivamente. En el modelo de artritis reumática, el edema de la pata disminuyó significativamente (aprox. 70% de disminución) en el grupo al que se le administró el Compuesto (Iii) el dia 14 cuando el grupo control negativo mostró el edema máximo. Por lo tanto, se considera que el Compuesto (lii) tiene un efecto inhibidor contra el progreso de la inflamación en un modelo de enfermedad inflamatoria y asi puede tratar a las enfermedades inflamatorias autoinmunes . Experimento 7 Comparación del efecto con el compuesto conocido Se probaron el Compuesto (Iii) de acuerdo con la presente invención y el LB8 068MP (Compuesto 68) conocido de la PCT/KR00/01047 (WO 01/21600) y los resultados se muestran en la siguiente Tabla 5.
LB84068MP Iii obs/.I] contra caspasa-8 1,02 E6 (M"½in" 1,30 E7 (M_1min~ X) CIso (célula Jurkat) 1,6 µ? 0,1 µ? o menos DE50 (LPS + Gal) 0,99 mg/kg 0,01 mg/kg Solubil. (pH=7,44 0,93 mg/ml o 7,8 g/ml fosfato) menos Como se puede observar de la Tabla 5 arriba ilustrada, el Compuesto (Iii) de acuerdo con la presente invención mostró una actividad inhibidora aumentada en 10 veces o más contra la caspasa-8 y la célula Jurkat en comparación con el LB84068MP, y aprox. 100 veces contra el modelo de hepatitis aguda inducida por LPS (ratón) . Además, con respecto a las propiedades fisicoquímicas, el compuesto mostró solubilidad mejorada y asi puede ser usado fácilmente como una inyección. Es decir, el compuesto de la presente invención muestra efectos mucho mejores que el compuesto comparativo de LB84068MP en ambos aspectos, la actividad y las propiedades fisico-quimicas .

Claims (21)

  1. REIVINDICACIONES Un compuesto de la siguiente fórmula caracterizado porque: I) R representa H, una cadena alquilo simple (-SAC) , una cadena cicloalquilo simple (-SCAC) , un grupo arilo (-Ar) , o una cadena alquilo simple sustituida por arilo (-SAC-Ar) , II) R1 representa -SAC, -SCAC, -Ar, -SAC-Ar, o un residuo de cadena lateral de todos los aminoácidos naturales; y el compuesto de fórmula (1) puede existir en una forma diastereomérica especifica, o mezclas de las mismas, cuando el carbono al cual está unido R1 se convierte en un estereocentro debido al grupo R1; o el compuesto de fórmula (1) puede tener un grupo protector en forma de éster (-C02R3, en donde R3 es -SAC) o en forma de sulfonamida (-CONHS02R4 en donde R4 es -SAC) , o puede existir en forma de una sal farmacéuticamente aceptable, cuando R1 es un residuo de cadena lateral de un aminoácido que contiene una parte carboxilo; o el compuesto de fórmula (1) también puede existir en forma de una sal farmacéuticamente aceptable cuando R1 es un residuo de cadena lateral de un aminoácido que contiene una parte de base, III) R2 representa -SAC, -SCAC, -Ar, -SAC-Ar, o un residuo de cadena lateral de los aminoácidos naturales; y el compuesto de fórmula (1) puede existir en una forma diastereomérica especifica, o mezclas de las mismas, cuando el carbono al cual está unido R2 se convierte en un estereocentro debido al grupo R2; o el compuesto de fórmula (1) puede tener un grupo protector en forma de éster (-C02R5, en donde R5 es -SAC) o en forma de sulfonamida (-CONHS02R6, en donde R6 es -SAC), o puede existir en forma de una sal farmacéuticamente aceptable, cuando R2 es un residuo de cadena lateral de un aminoácido que contiene una parte carboxilo; o el compuesto de fórmula (1) también puede existir en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable cuando R2 es un residuo de cadena lateral de un aminoácido que contiene una parte de base, o R2 representa además H; -(CH2)nOR7 en donde R7 es -SAC, -SCAC, -Ar, o -SAC-AR y n = 1 o 2; o - (CH2) nOC (=0) R8 en donde R8 es -SAC, -SCAC, -Ar, o -SAC-Ar y n = 1 o 2. IV) A representa -{CH2)n-(n = 0-4), -0-(CH2)n- (n = 0-4) o -NR9- (CH2)n- (n= 0-4) en donde R9 es -SAC, -SCAC, -Ar, o -SAC-Ar,
  2. V) B representa H, -SAC, -SCAC, -Ar, o -SAC-Ar, o VI) R y R1 pueden formar un ciclo junto con el átomo de carbono al cual están unidos, en donde -R-R1- es -(CH2)n-, -(CH2)n-0- (CH2)m/ o - (CH2)n-NR10- (CH2)m- en donde n+m<9 y R10 es -SAC, -SCAC, -Ar, -SAC-Ar, -C(=0)-SAC, -C(=0)-SCAC, -C(=0)-Ar, o -C (=0) -SAC-Ar, VII) X representa -C (=0) CH2OR11, en donde R11 es -SAC, -SCAC, -Ar, o -SAC-Ar; -C (=0) CH20C (=0) R12 en donde R12 es -SAC, -SCAC, -Ar o - SAC-Ar; -CH=CH-C02R13 en donde R13 es -SAC, -SCAC, -Ar o -SAC-Ar; -CH=CH-S02R1 en donde R14 es -SAC, -SCAC, -Ar o -SAC-Ar; -C(=0)CH=CH2; o -COCH2-W en donde W es -N2, -F, -Cl, -Br, -I, -NRi5Ri6 ^Ri5 y Rie son cada uno _SAC^ -SCAC, -Ar, o -SAC-Ar, o juntos pueden formar un grupo cíclico saturado o insaturado de 3 a 6 miembros), -SR17 (R17 es -SAC, -SCAC, -Ar o -SAC-Ar) o es la siguiente fórmula: en donde : Y es H, -OH, -OR18 (R18 = -SAC o -SCAC), -C(=0)R19 (R19 = -H, - SAC, o -SCAC), -F, -Cl, -Br, -I, -CN, -NC, -N3, -C02H, CF3, -C02R20 (R20= -SAC o -SCAC), -C(=0)NHR21 (R21=-SAC o -SCAC), o -C (=0) NR22R23 (R22 y R23 son cada uno -SAC, -SCAC, -Ar, o -SAC-Ar) , R24 es H, -SAC, -SAC-Ar o -Ar, una sal, o un estereoisómero del mismo. 2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque R representa H.
  3. 3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque R1 representa -CH2C0OH, -CH2COOR3 (R3=SAC) o -CH2CONHS02R4 (R4 = SAC) .
  4. 4. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque R2 representa H, -SAC, -Ar, o -(CH2)nOR7 (R7 = -SAC, -SCAC, -Ar, o -SAC-Ar, y n = 1 o 2) .
  5. 5. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque X representa -C (=0) CH20Ar, -C(=0)CH2OC(=0)Ar o -C0CH2-W, en donde W es -N2, -F, -Cl, -Br, -I, -NR15R16 (R15 y R16 son cada uno -SAC, -SCAC, -Ar o -SAC-Ar, o juntos pueden formar un grupo cíclico saturado o insaturado de 3 a 6 miembros) o -SR17 (R17 es -SAC, -SCAC, -Ar o -SAC-Ar) .
  6. 6. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque: I) R representa H, II) R1 representa -CH2COOH, -CH2C00R3 (R3=SAC) o -C¾CONHS02R4 (R4 = SAC) , III) R2 representa H, -SAC, -Ar, o -(CH2)nOR7 (R7=-SAC, -SCAC, -Ar, o -SAC-Ar, y n = 1 o 2) , IV) A representa -(CH2)n (n = 0-4) o -0-(CH2)n- (n = 0-4), V) B representa H, -SAC, -SCAC, -Ar o -SAC-Ar, VI) X representa -COCH2N2, -COCH2F, -C0CH2C1, -COCH2Br, -COCH2I, -COCH2OAr, -COCH2OCOAr o -COCH2SR17 (R17 es -SAC, -SCAC, -Ar, o -SAC-Ar) .
  7. 7. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que es seleccionado entre el siguiente grupo: (1) ácido (35) -5- [ (2, 6-diclorobenzoil) oxi] -3- ( { [5-metil-3-fenil-4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil} amino) -4-oxopentanoico (Iaa) ; (2) ácido (3S) -3- ( { [5-metil-3-fenil-4 , 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil }amino) -4-oxo-5-fenoxipentanoico (Ibb) ; (3) ácido (3S) -3- ({ [5-etil-3-fenil-4 , 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -4-oxo-5- (2,3,5,6-tetrafluorofenoxi ) entanoico (Ice) ; (4) ácido [3S)-3-({ [5-etil-3- (1-naftil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -4-oxo-5- (2, 3, 5, 6-tetrafluorofenoxi) entanoico (Idd) ; (5) ácido (3S)-3-({ [5-etil-3- (2-naftil) -4 , 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino ) -4-oxo-5- (2, 3, 5, 6-tetrafluorofenoxi) entanoico (lee) ; (6) ácido (3S)-3-({ [5-etil-3- (1-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -4-oxo-5- (2,3,5,6-tetrafluorofenoxi) pentanoico (Iff) ; (7) ácido 3- ({ [5-etil-3- (1-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Igg) / (8) etil 3- ({ [5-etil-3- (1-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -5-fluoro-4-oxopentanoato (Ihh) ; (9) ácido 5-fluoro-3- ({[ (5R) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4, 5-díhidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -4-oxopentanoico (Iii) ; (10) ácido 3- ({ [5-etil-3- (4-quinolinil) -4, 5-dihidro-5- isoxazolil] carbonil lamino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Ijj); (11) ácido 3- ( { [3- (benzotiofen-2-il) -5-etil-4, 5-dihidro-5 isoxazolil] carbonil lamino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Ikk) / (12) ácido (3S)-3-({ [3- (1, 3-dimetil-líí-indol-2-il) -5-etil-4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -4-oxo-5- (2,3,5,6-tetrafluorofenoxi) pentanoico (111); (13) ácido 3-({ [3- (1, 3-dimetil-lH-indol-2-il) -5-etil-4, 5-dihidro* 5-isoxazolil] carbonil} amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Imm) ; (14) ácido (35)-3-({ [5-etil-3-(l-naftilmetil)-4,5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -4-oxo-5- (2,3,5,6-tetrafluorofenoxi) entanoico (Inn) ; (15) ácido (35) -5-[ (2, 6-diclorobenzoil) oxi]-3- [ ({5-etil-3- [2- (1 naftil ) etil] - 4 , 5-dihidro-5-isoxazolil} carbonil) amino] -4· oxopentanoico (loo) ; (16) ácido (35) -3- [ ( { 5-etil-3- [ (1-naftiloxi) metil] -4, 5-dihidro-5 isoxazolil } carbonil) amino] -4-oxo-5- (2,3,5,6-tetrafluorofenoxi) entanoico (Ipp) ; (17) ácido (35) -3- { [ (3-{ [ (4-cloro-l-naftil) oxi]metil} -5-etil 4 , 5-dihidro-5-isoxazolil) carbonil] amino} -4-oxo-5- (2,3,5,6-tetrafluorofenoxi) pentanoico (Iqq) ; (18) ácido (35, 4fí) -6-etoxi-3- ( { [ (5R) -5-isopropil-3- (1 isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil} amino) -6-oxo-4 hexenoico (Irr) ; (19) ácido (35, £)-3-({ [ (5R) -5-isopropil-3- (l-isoquinolinil) -4, 5 dihidro-5-isoxazolil] carbonil} amino) -5- (metilsulfonil) -4-pentenoico (Iss) ; (20) ácido 5-fluoro-3- ({[ (55) -3- (l-isoquinolinil) -5-propil-4, 5 dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -4-oxopentanoico (Itt) ; (21) ácido 3-({ [ (55) -5-etil-3- (1-naftil) -4,5-dihidro-5 isoxazolil] carbonil } amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iuu) ; (22) ácido 3- ( { [ (5S) -5-etil-3- (2-quinolinil) -4, 5-dihidro-5 isoxazolil] carbonil} amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iw) ; (23) ácido 3- ( { [ (5R) -5-etil-3- (3-isoquinolinil) -4, 5-di idro-5 isoxazolil] carbonil} amino ) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iww) ; (24) ácido 3- ({ [5-etil-3- (8-quinolinil) -4, 5-dihidro-5 isoxazolil] carbonil} amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Ixx) ; (25) ácido 3- ( { [5-etil-3- (3-quinolinil) -4, 5-dihidro-5 isoxazolil] carbonil } amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iyy) ; (26) ácido 5-fluoro-3- ( { [ (5R) -5-isopropil-3- (2-quinolinil) -4, 5 dihidro-5-isoxazolil] carbonil} amino) -4-oxopentanoico (Izz) ; (27) ácido 3- ( { [5-etil-3- (2-isopropilfenil) -4, 5-dihidro-5 isoxazolil] carbonil} amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaal) ; (28) ácido 3-[ ({3-[3-(tert-butil)fenil]-5-etil-4,5-dihidro-5 isoxazolil } carbonil) amino] -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaa2) ; (29) ácido 3-[ ({3-[4-(tert-butil)fenil]-5-etil-4,5-dihidro-5 isoxazolil} carbonil) amino] -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaa3) ; (30) ácido 5-fluoro-3- ({[ (5R) -5-isopropil^3- (2-isopropilfenil) 4, 5-dihidro-5- isoxazolil] carbonil} amino) -4-oxopentanoico (Iaa4) (31) ácido 3-[ ({ (5i)-3-[3-(tert-butil)fenil]-5-isopropil-4,5 dihidro-5-isoxazolil} carbonil) amino] -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaa5); (32) ácido 3-{ [ (3- [1, 1' -bifenil] -3-il-5-isopropil- , 5-dihidro-5 isoxazolil) carbonil] amino } -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaa6) ; (33) ácido 3- ( { [5-etil-3- (2-piridinil) -4, 5-dihidro-5 isoxazolil] carbonil} amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaa7) ; (34) ácido 3- [ ( { 3- [4- ( tert-butil) -2-piridinil] -5-etil-4 , 5 dihidro-5-isoxazolil} carbonil) amino] -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaa8); (35) ácido 3-[({ (5i¾)-3-[4-(tert-butil)-2-piridinil]-5-isopropil- , 5-dihidro-5-isoxazolil } carbonil) amino] -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaa9); (36) ácido 3- ( { [5-etil-3- (4-isobutil-2-piridinil) -4, 5-dihidro -5-isoxazolil] carbonil }amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (IaalO) ; (37) ácido 3-({ [3- (4-acetil-2-piridinil) -S-etil^S-dihidro-S-isoxazolil] carbonil lamino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaall) ; (38) ácido 3- ( { [3- (4-ciclopropil-2-piridinil) -5-etil-4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaal2) ; (39) ácido 3-({ [3- (4-ciclopentil-2-piridinil) -5-etil-4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaal3) ; (40) ácido 3- ( { [ {5R) -3- (4-ciclopentil-2-piridinil) -5-isopropil-4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaal4) ; (41) ácido 3- ( { [3- (4-ciclohexil-2-piridinil) -5-etil-4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaal5) ; (42) ácido 3- ( { [5-etil-3- (5, 6, 7 , 8-tetrahidro-l-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaal6) ; (43) ácido 5-fluoro-3- ( { [5-isopropil-3- (4-fenil-2-piridinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -4-oxopentanoico (Iaal7 ) ; (44) ácido- (3S)--5- [ ("difenilfosforil) oxi] -3- ( { [ (5. ) -5-isopropil-3-(1-isoquinolinil) -4 , 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -4-oxopentanoico (Iaal8) ; (45) ácido (3S) -3- ({ [ (5R) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil }amino) -4-oxo-5-{ [1 -fenil-3- (trifluorometil) -lH-pirazol-5-il] oxilpentanoico (Iaal9) ; (46) (3S)-5-[ (4-bencil-5-oxo-2,5-dihidro-3-furanil)oxi-3-({ [ (5R) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4 r 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -4-oxopentanoico (Iaa20) ; (47) ácido (35) -5-isobutiriloxi) -3- ( { [ (5¿?) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4 , 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil} amino) -4-oxopentanoico (Iaa21) ; (48) (3S) -3- ( { [ (5J?) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4,5-dihidro 5-isoxazolil] carbonil}amino) -4-oxo-5-hexenoico (Iaa22) ; (49) ácido (3S) -3- ( { [ (5R) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4, 5 dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -4-oxo-5- (2-piridiniloxi) pentanoico (Iaa23) ; (50) ácido (35) -3- ( { [5-etil-3- (2-isopropilfenil) -4, 5-dihidro-5 isoxazolil] carbonillamino) -4-oxo-5- (2-piridiniloxi) -pentanoico (Iaa24) ; (51) 2-{ [ (3S) -4-carboxi-3- ( { [ (5R) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -2-oxobutil] oxi) -1-metilpiridinio trifluorometanosulfonato (Iaa25) (52) 2-{ [ (35) -4-carboxi-3- ( { [5-etil-3- (2-isopropilfenil) -4,5-di idro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -2-oxobutil] oxi}-l-metilpiridinio trifluOrometanosu fonato -(Iaa26) ; (53) ácido 3- ( { [ 3- ( 5-cloro-l-metil-lH-indol-2-il) -5-isopropil 4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil}amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaa27); (54) ácido 3-({ [3- (l,5-dimetil-lH-indol-2-il) -5-isopropil-4,5~ dihidro-5-isoxazolil] carbonil } amino) -5-fluoro-4-oxopentanoico (Iaa28); y (55) ácido (3S)-5-fluoro-3-({ [3- (52?) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -4-oxopentanoico (Iii-1) .
  8. 8. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que es ácido 5-fluoro-3- ( { [ (5J¾) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4 , 5-dihidro-5-isoxazolil] -carbonil lamino) -4-oxopentanoico (Iii) .
  9. 9. ün compuesto de la siguiente fórmula (la) : caracterizado porque: ?, B, R, R1, R2 y X son definidos como se describió en la reivindicación 1.
  10. 10. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 9, que es ácido (3S) -5-fluoro-3- ( { [ (52?) -5-isopropil-3- ( 1-isoquinoli-nil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil} amino) -4-oxopentanoico (Iii-1) .
  11. 11. Un procedimiento para preparar el compuesto (Iii-1) como se definió en la reivindicación 10, caracterizado porque comprende los pasos de disolver una mezcla de ácido (3S) -5-fluoro-3-( { [ (52?) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4 , 5-dihidro-5- isoxazolil] carbonil} amino) -4-oxopentanoico y ácido {3R) -5-fluoro-3- ( { [ (5i?) -5-isopropil-3- ( 1-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil} amino) -4-oxopentanoico en metil t-butil éter, agregando una pequeña cantidad de ácido (35) -5-fluoro-3- ( { [ (5i?) -5-isopropil-3- (1-isoquinolinil) -4, 5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil lamino) -4-oxopentanoico cristalino como un material de germen para dar un cristal y recristalizar este cristal a partir del sistema de solventes acetato de etilo/ n-hexano .
  12. 12. Una composición terapéutica para prevenir la inflamación y la apoptosis caracterizada porque comprende el compuesto inhibidor de la caspasa de fórmula (1) , una sal o un estereoisómero del mismo como se definió en la reivindicación 1, como un ingrediente activo junto con el vehículo farmacéuticamente aceptable.
  13. 13. La composición de acuerdo con la reivindicación 12, para el tratamiento de demencia, isquemia cerebral, deterioro cerebral debido a SIDA, diabetes, úlcera gástrica, lesión cerebral por hepatitis, enfermedades hepáticas inducidas por hepatitis, hepatitis aguda, insuficiencia hepática fulminante, cirrosis hepática, sepsis, rechazo al transplante de órganos, artritis reumática o apoptosis de las células cardíacas debido a enfermedades cardíacas isquémicas.
  14. 14. "La composición dé 'acuerdó'-con" la reivindicación 12, para el tratamiento de hepatitis aguda o cirrosis hepática.
  15. 15. La composición de acuerdo con la reivindicación 12, para el tratamiento de artritis reumática.
  16. 16. La composición de acuerdo con la reivindicación 12, que es formulada como un preparado oral, una inyección, o un parche.
  17. 17. La composición de acuerdo con la reivindicación 12, caracterizada porque comprende el compuesto (Iii) como se definió en la reivindicación 8 como un ingrediente activo.
  18. 18. La composición de acuerdo con la reivindicación 12, caracterizada porque comprende el compuesto (Iii-1) como se definió en la reivindicación 10 como un ingrediente activo.
  19. 19. Un procedimiento para preparar la composición terapéutica para prevenir la inflamación y la apoptosis como se definió en la reivindicación 12, caracterizado porque comprende mezclar el compuesto inhibidor de la caspasa de fórmula (1) , una sal, o un estereoisómero del mismo, como se definió en la reivindicación 1, con un vehículo farmacéuticamente aceptable.
  20. 20. Un método para prevenir la inflamación y la apoptosis, caracterizado porque comprende administrar una cantidad efectiva del compuesto inhibidor de la caspasa de fórmula (1) , una sal, o un estereoisómero del mismo como se definió en la reivindicación 1, a un paciente que padece de inflamación y apoptosis.
  21. 21. Un uso del compuesto inhibidor de la caspasa de fórmula (1) , una sal o un estereoisómero del mismo como se definió en la reivindicación 1 para prevenir la inflamación y la apoptosis.
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