EA009995B1 - Стабилизированные жидкие композиции интерферона, не содержащие человеческий сывороточный альбумин - Google Patents

Стабилизированные жидкие композиции интерферона, не содержащие человеческий сывороточный альбумин Download PDF

Info

Publication number
EA009995B1
EA009995B1 EA200501699A EA200501699A EA009995B1 EA 009995 B1 EA009995 B1 EA 009995B1 EA 200501699 A EA200501699 A EA 200501699A EA 200501699 A EA200501699 A EA 200501699A EA 009995 B1 EA009995 B1 EA 009995B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
ιρν
composition according
concentration
preceding paragraphs
interferon
Prior art date
Application number
EA200501699A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200501699A1 (ru
Inventor
Фабрицио Самаритани
Алессандра Дель Рио
Original Assignee
Арес Трейдинг С.А.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Арес Трейдинг С.А. filed Critical Арес Трейдинг С.А.
Publication of EA200501699A1 publication Critical patent/EA200501699A1/ru
Publication of EA009995B1 publication Critical patent/EA009995B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/215—IFN-beta
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/12—Keratolytics, e.g. wart or anti-corn preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Приведено описание стабилизированной, не содержащей ЧСА, жидкой фармацевтической композиции интерферона (IFN), где препарат представляет собой раствор, содержащий буфер, поверхностно-активное вещество, агент, придающий изотоничность, и антиоксидант. Предпочтительно интерферон представляет собой человеческий рекомбинантный IFN-β.

Description

Настоящее изобретение относится в целом к фармацевтическим композициям, содержащим интерферон, более конкретно к стабилизированным препаратам интерферона-β, не содержащим человеческий сывороточный альбумин (ЧСА) в качестве дополнительного фармацевтического эксципиента.
Предпосылки создания изобретения
Интерфероны (ΙΝΕ) представляют собой цитокины, т.е. растворимые белки, которые обеспечивают передачу информации между клетками и играют существенную роль в иммунной системе, способствуя разрушению микроорганизмов, вызывающих инфекцию, и восстанавливая любые вызванные этим повреждения. Интерфероны в естественных условиях секретируются инфицированными клетками и они впервые были идентифицированы в 1957 г.
Их название произошло от того, что они «оказывают влияние (интерферируют)» на репликацию и продуцирование вирусов.
Интерфероны обладают как антивирусной, так и антипролиферативной активностью. На основе их биохимических и иммунологических свойств встречающиеся в естественных условиях человеческие интерфероны подразделяют на три основных класса:
интерферон-α (лейкоцитарный), интерферон-β (фибробластный), интерферон-γ (иммунная система).
α-интерферон в настоящее время утвержден в Соединенных Штатах и других странах в качестве средства лечения лейкемического ретикулёза, остроконечных кондилом, саркомы Капоши (тип рака, как правило, поражающий пациентов, страдающих синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД) и хроническим не-А- и не-В-гепатитом).
Кроме того, интерфероны представляют собой гликопротеины, продуцируемые организмом в ответ на вирусную инфекцию. Они ингибируют размножение вирусов в защищенных ими клетках. Поскольку они представляют собой низкомолекулярный белок, ΙΕΝ характеризуются неспецифичностью действия, т.е. ΙΕΝ, индуцируемый одним типом вируса, обладает эффективностью в отношении широкого спектра других вирусов. Однако они являются видоспецифичными, т.е. ΙΕΝ, продуцируемый одним видом, может стимулировать антивирусную активность только в клетках тех же самых или близкородственных типов. ΙΕΝ представляли собой первую группу цитокинов, которые нашли применение из-за присущей им противоопухолевой и антивирусной активности.
Три основных класса ΙΕΝ обозначают как ΙΕΝ-α, ΙΕΝ-β и ΙΕΝ-γ. Первоначально эти основные классы ΙΕΝ классифицировали согласно типам продуцирующих их клеток (лейкоцит, фибробласт или Т-клетка). Однако имеются данные о том, что одна клетка может продуцировать несколько типов ΙΕΝ. Поэтому в настоящее время лейкоцитарный ΙΕΝ называют ΙΕΝ-α, фибробластный ΙΕΝ называют ΙΕΝ-β и Т-клеточный ΙΕΝ называют ΙΕΝ-γ. Существует также четвертый тип ΙΕΝ, а именно лимфобластоидный ΙΕΝ, продуцируемый клетками линии Ν;·ιιηα1\να (выведенный из клеток лимфомы Беркитта), который, по-видимому, является смесью лейкоцитарного и фибробластного ΙΕΝ.
В качестве единицы интерферона или Международной единицы интерферона (Е или МЕ для международной меры) принято количество, необходимое для защиты 50% клеток от вирусного повреждения. В качестве метода анализа, пригодного для измерения биологической активности, можно применять описанный ниже метод анализа ингибирования цитопатического действия (К.иЫп81ет и др., 1981; РатШеЮ Р.С. и др., 1981). Согласно этому методу анализа антивирусной активности интерферона количество интерферона, необходимое для оказания 50% цитопатического действия, составляет примерно 1 ед./мл. Единицы определяют в соответствии с Международным референс-стандартом для человеческого ΙΕΝ-β (Ни-ΙΕΝ-β), разработанным Национальным институтом здравоохранения (Ναΐίοηαΐ !п811(и(е8 о£ НеаЙЬ) (Речка 8., 1986).
Каждый класс ΙΕΝ состоит из нескольких различных типов. ΙΕΝ-β и ΙΕΝ-γ, каждый, являются продуктом индивидуального гена.
Белки, относящиеся к классу ΙΕΝ-α, представляют собой наиболее разнообразную группу, насчитывающую примерно 15 типов. Существует кластер генов ΙΕΝ-α на хромосоме 9, включающий по меньшей мере 23 представителя, из которых 15 обладают активностью и способностью к транскрипции. Зрелые ΙΕΝ-α являются негликозилированными.
Все ΙΕΝ-α и ΙΕΝ-β имеют одинаковую длину (165 или 166 аминокислот) и обладают близкой биологической активностью. ΙΕΝ-γ состоят из 146 аминокислот и обладают меньшим сходством с представителями α- и β-классов. Только ΙΕΝ-γ могут активировать макрофаги или индуцировать созревание Т-клеток-киллеров. Эти новые типы терапевтических агентов иногда называют биологическими модификаторами (БМ), поскольку они оказывают влияние на ответную реакцию организма на опухоль, воздействуя на распознавание посредством иммуномодуляции.
Человеческий фибробластный интерферон (ΙΕΝ-β) обладает антивирусной активностью и может также стимулировать действие естественных клеток-киллеров в отношении опухолевых клеток. Он представляет собой полипептид с молекулярной массой примерно 20000 Да, индуцируемый вирусами и двух
- 1 009995 цепочечными РНК. Из нуклеотидной последовательности гена фибробластного интерферона, клонированной с помощью метода рекомбинантной ДНК (Эегупк и др., 1980), была выведена полная аминокислотная последовательность белка. Она состоит из 166 аминокислот.
8йерагб и др., 1981 описали мутацию на основании 842 (Сук^Туг в положении 141), которая устраняет антивирусную активность интерферона, и клон варианта с делецией нуклеотидов 1119-1121.
Магк и др., 1984 создали искусственную мутацию путем замены основания 469 (Т) на (А), что привело к аминокислотной замене Сук^8ег в положении 17. Было установлено, что образовавшийся ΙΕΝ-β обладал такой же активностью, что и нативный ΙΕΝ-β, и сохранял стабильность при хранении в течение продолжительного периода времени (при -70°С).
ВеЫГ® (рекомбинантный человеческий интерферон-β, разработанный фирмой 8егоио) является последней разработкой в области терапии рассеянного склероза (РС), основанной на использовании интерферона, и он представляет собой интерферон (ΙΕΝ)-β-1α. полученный из линий клеток млекопитающих. Его рекомендованное Международное непатентованное название (ΙΝΝ) Интерферон β-1η.
Как и для всех фармацевтических лекарственных средств на основе белков, основным препятствием, которое необходимо преодолевать при применении ΙΕΝ-β в качестве терапевтического агента, является потеря фармацевтической пригодности вследствие его нестабильности в фармацевтических композициях.
К обусловленным физическими факторами нестабильностям, влияющим на активность и эффективность полипептида в фармацевтических композициях, относятся денатурация и образование растворимых и нерастворимых агрегатов, тогда как к химическим нестабильностям относятся гидролиз, образование имидов, окисление, рацемизация и деаминирование. Известно, что некоторые из таких изменений приводят к потере или уменьшению фармацевтической активности представляющего интерес белка. В других случаях воздействия таких изменений точно неизвестны, однако образующиеся продукты разложения следует рассматривать как неприемлемые с фармацевтической точки зрения вследствие возможных нежелательных побочных действий.
Стабилизация полипептидов в фармацевтических композициях остается областью, в которой главную роль играет метод проб и ошибок (см. обзор ^апд, Ιηΐ. 1. Рйатш., 185, 1999, р. 129-188; \Уапд и Напкоп, 1. Рагеп1ега1 δοί. Теей., 42, 1988, 83-826). К эксципиентам, которые добавляют к полипептидным фармацевтическим композициям для повышения их стабильности, относятся буферы, сахара, поверхностно-активные вещества, аминокислоты, полиэтиленгликоли и полимеры, однако стабилизирующие действия этих химических добавок варьируются в зависимости от белка.
В современных композициях ΙΕΝ-β применяют ЧСА в качестве агента, повышающего растворимость ΙΕΝ-β. Однако использование ЧСА имеет некоторые недостатки. ЧСА представляет собой продукт, получаемый из человеческой крови, и поэтому его необходимо получать из организма человека. Хотя для снижения степени риска предпринимают определенные шаги, использование продуктов, полученных из человеческой крови, таких как ЧСА, сопряжено с возможным внесением человеческих вирусов, таких как вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) и вирус гепатита С (ВГС).
Таким образом, существует необходимость разработки дополнительных фармацевтических композиций ΙΕΝ-β, содержащих физиологически совместимые стабилизаторы, которые повышают растворимость этого белка и стабилизируют белок, предупреждая образование агрегатов, и тем самым повышают их фармацевтическую применимость.
Описание изобретения
В настоящем изобретении предложены стабилизированные фармацевтические композиции, содержащие интерферон (ΙΕΝ), и способы их получения. Эти композиции получают без использования человеческого сывороточного альбумина (ЧСА) и поэтому они не содержат указанный фармацевтический эксципиент. Такие композиции в настоящем описании названы не содержащими ЧСА фармацевтическими композициями ΙΕΝ, и они могут содержать интерферон (ΙΕΝ) или его изоформу, мутеин, слитый белок, функциональное производное, активную фракцию или ее соль, где указанная композиция представляет собой раствор, содержащий буфер, поверхностно-активное вещество, агент для придания изотоничности и антиоксидант.
Согласно одному из вариантов осуществления настоящего изобретения композиции содержат также бактериостатический агент.
Подразумевается, что понятие интерферон, или ΙΕΝ, в контексте настоящего описания относится к любой молекуле, обозначенной таким образом в литературе, в том числе к любому типу ΙΕΝ, указанному выше в разделе Предпосылки создания изобретения. В частности, под указанное выше определение подпадают ΙΕΝ-α, ΙΕΝ-β и ΙΕΝ-γ. Предпочтительным ΙΕΝ согласно настоящему изобретению является ΙΕΝ-β. ΙΕΝ-β, который можно применять согласно настоящему изобретению, поступает в продажу под товарными знаками РеЫГ® (фирма 8егопо), Ауопех® (фирма Вюдеп) или Ве1аЕегоп® (фирма 8ейеппд). Предпочтительно также применять согласно настоящему изобретению интерфероны человеческого происхождения. Подразумевается, что в контексте настоящего описания под понятие интерферон подпадают его изоформа, мутеин, слитый белок, функциональное производное, активная фракция или
- 2 009995 соль.
Подразумевается, что в контексте настоящего описания под понятие интерферон-β (ΙΕΝ-β) подпадает фибробластный интерферон прежде всего человеческого происхождения, который получают путем выделения из биологических жидкостей или с помощью методов рекомбинантной ДНК из прокариотических или эукариотических клеток, а также его соли, функциональные производные, варианты, аналоги и активные фрагменты. Подразумевается, что ΙΕΝ-β предпочтительно обозначает интерферон β-1η.
В контексте настоящего описания понятие мутеины относится к аналогам ΙΕΝ, в которых один или несколько аминокислотных остатков встречающегося в естественных условиях ΙΕΝ заменены другими аминокислотными остатками или подвергнуты делеции, или один или несколько аминокислотных остатков добавлены к встречающейся в естественных условиях последовательности ΙΕΝ без существенного изменения активности образовавшихся продуктов по сравнению с активностью ΙΕΝ дикого типа. Такие мутеины получают с помощью известных методов синтеза и/или сайт-направленного мутагенеза или с помощью любого другого известного пригодного для данной цели метода. К предпочтительным мутеинам относятся, например мутеины, описанные у 8Нератй и др., 1981 или у Магк и др., 1984.
Предпочтительно любой такой мутеин имеет аминокислотную последовательность, достаточно близкую к последовательности ΙΕΝ для того, чтобы он обладал практически одинаковой или даже более высокой активностью по сравнению с ΙΕΝ. Специалисту в данной области хорошо известна биологическая функция интерферона и соответствующие биологические стандарты утверждены и могут быть получены от Национального института по биологическим стандартам и контролю (Ναΐίοηαΐ [П8111и1е ίοτ Βίο1од1са1 81апйатйв апй Соп1го1) (ИрУЛттипо^ду.огд/Нпкв/МВЗС).
В литературе описаны методы биологического анализа, позволяющие определять активность ΙΕΝ. Анализ ΙΕΝ можно осуществлять, например, согласно методу, описанному у ВиЫп51еш и др., 1981. Таким образом, путем стандартных экспериментов можно определять, обладает ли рассматриваемый мутеин практически такой же или даже более высокой активностью, чем ΙΕΝ.
Мутеины ΙΕΝ, которые можно применять согласно настоящему изобретению, или кодирующая их нуклеиновая кислота включают конечный набор практически совпадающих последовательностей, например несущие замены пептиды или полинуклеотиды, которые специалист в данной области может получать без излишних экспериментов, основываясь на указаниях и руководстве, представленных в настоящем описании.
Предпочтительными заменами в мутеинах согласно настоящему изобретению являются замены, известные как консервативные. Консервативные аминокислотные замены в полипептидах или белках, предлагаемых в настоящем изобретении, могут представлять собой замены аналогичных аминокислот внутри группы аминокислот, которые обладают достаточно близкими физико-химическими свойствами, так что при замене одних представителей группы другими сохраняется биологическая функция молекулы. Очевидно, что в вышеуказанных последовательностях можно осуществлять также инсерции и делеции аминокислот без изменения их функции, прежде всего в том случае, когда инсерции или делеции касаются лишь небольшого количества аминокислот, например менее 30 и предпочтительно менее 10, и при этом не происходит удаления или замены аминокислот, которые имеют решающее значение для функциональной конформации, например цистеиновых остатков. Белки и мутеины, получаемые в результате таких делеций и/или инсерций, подпадают под объем настоящего изобретения.
Предпочтительно группы аналогичных аминокислот представляют собой группы, перечисленные в табл. Ι. Более предпочтительно группы аналогичных аминокислот представляют собой группы, перечисленные в табл. ΙΙ; и наиболее предпочтительно группы аналогичных аминокислот представляют собой группы, перечисленные в табл. ΙΙΙ.
- 3 009995
Таблица I
Предпочтительные группы аналогичных аминокислот Аминокислота Группа аналогичных аминокислот
8ег 8ег, ТЬг, (Лу, Азп
Агд Агд, О1п, Ьуз, (Ли, Ηίβ
Ьеи Не, РЬе, Туг, Ме1, Уа1, Ьеи
Рго 61у, А1а, ТЬг, Рго
ТЬг Рго, Зег, А1а, С1у, Ηίβ, О1п, ТЬг
А1а <Лу, ТЬг, Рго, А1а
Уа1 Ме1, Туг, РЬе, Не, Ьеи, Уа1
О1у А1а, ТЬг, Рго, 8ег, О1у
Не Ме1, Туг, РЬе, Уа1, Ьеи, Не
РЬе Тгр, Ме1, Туг, Не, Уа1, Ьеи, РЬе
Туг Тгр, Ме(, РЬе, Не, Уа1, Ьеи, Туг
Су5 8ег, ТЬг, Суз
Н15 (Ии, Ьуз, О1п, ТЬг, Агд, Ηίβ
σΐη О1и, Ьуз, Азп, Ηίβ, ТЬг, Агд, О1п
Азп О1п, Азр, 8ег, Азп
Ьуз (Ли, 01η, Ηίβ, Агд, Ьуз
Азр О1и, Авп, Авр
(Ли Азр, Ьуз, Авп, 01η, Ηίβ, Агд, (Ли
Ме1 РЬе, Не, Уа1, Ьеи, Ме1
Тгр Тгр
Таблица II
Более предпочтительные группы аналогичных аминокислот
Аминокислота Группа аналогичных аминокислот
Зег Зег
Агд Ηίβ, Ьуз, Агд
Ьеи Ьеи, Не, РЬе, Ме1
Рго А1а, Рго
ТЬг ТЬг
А1а Рго, А1а
Уа! Уа1, Ме1, Не
(Ну С1у
Не Не, Ме1, РЬе, Уа1, Ьеи
РЬе Ме1, Туг, Не, Ьеи, РЬе
Туг РЬе, Туг
Суз Суз, Зег
ΗΪ8 Ηίβ, СЛп, Агд
О1п (Ли, (Лп, Ηίβ
Азп Азр, Азп
Ьу8 Ьуз, Агд
Азр Азр, Азп
<Ли О1и, С1п
Ме1 Ме1, РЬе, Не, Уа1, Ьеи
Тгр Тгр
- 4 009995
Таблица III
Наиболее предпочтительные группы аналогичных аминокислот
Аминокислота Группа аналогичных аминокислот
8ег Зег
Агд Агд
Ьеи Ьеи, Не, Ме!
Рго Рго
ТЬг ТЬг
А1а А1а
Уа1 Уа1
С1у О1у
Не Не, Ме1, Ьеи
РЬе РЬе
Туг Туг
Суз Суз, 8ег
Н18 Η18
О1п СИп
Азп Азп
Ьуз Ьуз
Азр Азр
61и СНи
Ме! Ме!, Не, Ьеи
Тгр Ме!
Примерами методов получения аминокислотных замен в белках, которые можно использовать для создания мутеинов ΙΕΝ, которые можно применять согласно настоящему изобретению, могут служить любые стадии известного метода, такие как описанные в патентах США 4959314, 4588585 и 4737462 (Магк и др.); 5116943 (Ко1Й8 и др.), 4965195 (№ипеп и др.); 4879111 (СЬопд и др.) и 5017691 (Ьее и др.); и метод получения белков, несущих замены на остатках лизина, представленный в патенте США 4904584 (8Ьате и др.). Конкретные мутеины ΙΕΝ-β описаны, например, у Магк и др., 1984.
Понятие слитый белок относится к полипептиду, содержащему ΙΕΝ, или его мутеину, слитому с другим белком, который, например, обладает более продолжительным временем жизни в общей воде организма. Следовательно, ΙΕΝ можно сливать с другим белком, полипептидом и т.п., например иммуноглобулином или его фрагментом.
Понятие функциональные производные в контексте настоящего описания относится к производным ΙΕΝ и их мутеинам, а также слитым белкам, которые можно получать с помощью методов, известных в данной области, на основе функциональных групп, которые представляют собой боковые цепи на остатках или на Ν-, или С-концевых группах, и они подпадают под объем изобретения, если при этом остаются фармацевтически приемлемыми, т.е. если они не нарушают активность белка, которая остается практически аналогичной активности ΙΕΝ, и не придают токсические свойства содержащим их композициям. Такие производные могут включать, например, боковые полиэтиленгликольные цепи, которые могут маскировать антигенные сайты и увеличивать время жизни ΙΕΝ в общей воде организма. К другим производным относятся алифатические сложные эфиры карбоксильных групп, амиды карбоксильных групп, полученные путем взаимодействия с аммиаком или первичными или вторичными аминами, Ν-ацильные производные свободных аминогрупп на аминокислотных остатках, образованные с ацильными группами (например, алканоильными или карбоциклическими ароильными группами) или О-ацильными производными свободных гидроксильных групп (например, серильных или треонильных остатков), образованными с ацильными группами.
Понятие активные фракции ΙΕΝ или мутеины и слитые белки в контексте настоящего описания относится к любой группе или предшественникам полипептидной цепи молекулы белка индивидуально или в сочетании со связанными с ней молекулами или остатками, например остатками сахара или фосфата, или к агрегатам самих молекул белка или остатков сахара при условии, что указанные фракции не приводят к существенному снижению активности по сравнению с соответствующим ΙΕΝ.
- 5 009995
В контексте настоящего описания понятие соли относится как к солям, образованным с карбоксильными группами, так и к кислотно-аддитивным солям, образованным с аминогруппами указанных выше белков или их аналогов. Соли, образованные с карбоксильной группой, можно получить методами, известными в данной области, к которым относятся неорганические соли, например соли натрия, кальция, аммония, железа или цинка и т.п., и соли, образованные с органическими основаниями, например с аминами, такими как триэтаноламин, аргинин или лизин, пиперидином, прокаином и т.п. К кислотноаддитивным солям относятся, например, соли таких минеральных кислот, например, как соляная кислота или серная кислота, и соли органических кислот, таких, например, как уксусная кислота или щавелевая кислота. Очевидно, что любые такие соли должны сохранять биологическую активность белков (ΙΕΝ), предлагаемых в настоящем изобретении, т.е. обладать способностью связываться с соответствующим рецептором и инициировать проведение сигнала рецептором.
Согласно настоящему изобретению особенно предпочтительно применять также рекомбинантный человеческий ΙΕΝ-β и соединения, предлагаемые в изобретении.
В настоящее время описан особый тип варианта интерферона. Так называемые консенсусные интерфероны представляют собой не встречающиеся в естественных условиях варианты ΙΕΝ (И8 6013253). Согласно предпочтительному варианту осуществления изобретения соединения, предлагаемые в изобретении, применяют в сочетании с консенсусным интерфероном.
В контексте настоящего описания человеческий консенсусный интерферон (ΙΕΝ-соп) обозначает не встречающийся в естественных условиях полипептид, который содержит преимущественно аминокислотные остатки, являющие общими для поднабора ΙΕΝ-α, характерных для большинства встречающихся в естественных условиях последовательностей подтипа человеческого лейкоцитарного интерферона и включающими в одном или нескольких положениях, в которых нет аминокислот, общих для всех подтипов, аминокислоту, преимущественно встречающуюся в этом положении, и ни в коем случае не включают никаких аминокислотных остатков, которые не присутствуют в этом положении по меньшей мере в одном встречающемся в естественных условиях подтипе. К ΙΕΝ-соп относятся (но, не ограничиваясь ими) аминокислотные последовательности, обозначенные как ШЛ-соп1, ШЛ-соп2 и ΙΕΝ-сопЗ, которые описаны в И8 4695623, 4897471 и 5541293.
Последовательности ДНК, кодирующие ΙΕΝ-соп, можно получать согласно методам, описанным в указанных выше патентах, или любыми другими стандартными методами.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения слитый протеин включает ^-слияние. Слияние может быть непосредственным или через короткий линкерный пептид, состоящий из 1-3 или более аминокислотных остатков, например 13 аминокислотных остатков. Указанный линкер может представлять собой, например, трипептид, имеющий последовательность Ε-Ε-Μ (С1и-РНс-Мс1) или состоящую из 13 аминокислот линкерную последовательность С1и-Р11с-С1у-А1а-С1у-Еси-Уа1-Еси-С1у-С1у-С1п-Р11с-Мс1. встроенную между последовательностью ΙΕΝ и последовательностью иммуноглобулина. Образовавшийся слитый протеин может обладать улучшенными свойствами, такими как удлиненное время нахождения в общей воде организма (время полужизни), повышенная удельная активность, повышенный уровень экспрессии или облегченная очистка слитого протеина.
Еще в одном предпочтительном варианте осуществления изобретения ΙΕΝ сливают с константной областью молекулы Ι§. Предпочтительно ее сливают с областями тяжелой цепи, такими, например, как СН2- и СН3-домены человеческого ΙβΟ1. Для создания слитых белков, предлагаемых в настоящем изобретении, можно применять также другие изоформы молекул Ιβ, такие изоформы, как Ι§02, Ι§03 или Ι§04, или другие типы Ι§, такие, например, как Ι§Μ или Ι&Α. Слитые белки могут быть мономерными или мультимерными, гетеро- или гомомультимерными.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения функциональное производное содержит по меньшей мере один фрагмент, присоединенный к одной или нескольким функциональным группам, которые представляют собой одну или нескольких боковых цепей на аминокислотных остатках. Предпочтительно фрагмент представляет собой полиэтиленгликолевый (ПЭГ) фрагмент. ПЭГилирование можно осуществлять любыми известными методами, например такими, которые описаны в \\'О 99/55377.
Вводимая индивидууму доза в виде однократной дозы или нескольких доз может варьироваться в зависимости от различных факторов, включая фармакокинетические характеристики, путь введения, состояние пациента и его особенности (пол, возраст, вес тела, состояние здоровья, размер), серьезность симптомов, применяемые одновременно методы лечения, частоту обработок и требуемое действие.
Стандартные дозы человеческого ΙΕΝ-β составляют от 80000 до 200000 МЕ/кг в день или от 6 до 12 ММЕ (миллион международных единиц) на пациента в день или от 22 до 44 мкг на пациента. Согласно настоящему изобретению ΙΕΝ предпочтительно можно вводить в дозе примерно от 1 до 50 мкг, более предпочтительно примерно от 10 до 30 мкг или примерно от 10 до 20 мкг на пациента в день.
Введение действующих веществ согласно настоящему изобретению можно осуществлять внутривенным, внутримышечным или подкожным путем. Предпочтительным путем введения ΙΕΝ является
- 6 009995 подкожное введение.
ΙΕΝ можно вводить ежедневно, или через день, или реже. Предпочтительно ΙΕΝ вводят один, два или три раза в неделю.
Предпочтительным путем введения является подкожное введение, которое можно осуществлять, например, три раза в неделю. Другим предпочтительным путем введения является внутримышечное введение, которое можно осуществлять, например, один раз в неделю.
Предпочтительно подкожную инъекцию вводят три раза в неделю от 22 до 44 мкг или от 6 до 12 ММЕ ΙΕΝ-β.
ΙΕΝ-β можно вводить подкожно через день в дозе от 25 до 30 мкг или от 8,0 до 9,6 ММЕ. Кроме того, можно вводить внутримышечно один раз в неделю 30 мкг или 6 ММЕ ΙΕΝ-β.
Понятие стабильность относится к физической, химической и конформационной стабильности композиций интерферона, предлагаемых в настоящем изобретении (включая сохранение биологической активности). Нестабильность содержащих белок композиций может вызываться химическим разложением или агрегацией молекул белка с образованием высокомолекулярных полимеров, дегликозилированием, модификацией гликозилирования, окислением или любой другой структурной модификацией, которая приводит к снижению по меньшей мере одного вида биологической активности полипептида интерферона, предлагаемого в настоящем изобретении.
Стабильный раствор или композиция представляют собой раствор или композицию, в которых степень разложения, модификации, агрегации, потери биологической активности и т.п. белков сохраняется на приемлемом уровне и не становится с течением времени неприемлемой. Предпочтительно композиция сохраняет от 12 до 24 месяцев по меньшей мере или примерно 60%, более предпочтительно по меньшей мере или примерно 70%, наиболее предпочтительно по меньшей мере или примерно 80% заявленной активности интерферона. Стабилизированные не содержащие ЧСА композиции ΙΕΝ, предлагаемые в изобретении, предпочтительно имеют срок хранения по меньшей мере примерно 6, 12, 18 месяцев, более предпочтительно по меньшей мере 20 месяцев, еще более предпочтительно по меньшей мере примерно 22 месяца, наиболее предпочтительно по меньшей мере примерно 24 месяца при хранении при 2-8°С.
В данной области техники известны методы определения стабильности не содержащих ЧСА фармацевтических композиций ΙΕΝ, предлагаемых в изобретении, в том числе к ним относятся методы, указанные в примерах, приведенных в настоящем описании. Так, образование агрегатов ΙΕΝ в процессе хранения жидкой фармацевтической композиции, предлагаемой в изобретении, можно легко определять путем измерения изменения содержания растворимого ΙΕΝ в растворе с течением времени. Содержание растворимого полипептида в растворе можно определять количественно с помощью многих методов аналитического анализа, пригодных для обнаружения ΙΕΝ. К таким анализам относятся, например, жидкостная хроматография высокого разрешения с обращенной фазой ОФ-ЖХВР и абсорбционная УФ-спектроскопия, описание которых будет рассмотрено в приведенных ниже примерах.
Определение как растворимых, так и нерастворимых агрегатов в жидких композициях в процессе хранения можно осуществлять, например, путем аналитического ультрацентрифугирования, как указано в приведенных ниже примерах, для оценки того, какая часть растворимого полипептида присутствует в виде растворимых агрегатов, и какая часть присутствует в не агрегированном состоянии, т. е. в биологически активной молекулярной форме.
Подразумевается, что понятие применение нескольких доз относится к применению композиции интерферона, содержащейся в одном пузырьке, ампуле или картридже, более чем для одной инъекции, например для 2, 3, 4, 5, 6 или большего количества инъекций. Инъекции предпочтительно осуществляют в течение периода времени, составляющего по меньшей мере или приблизительно 12, 24, 48 ч и т.д., предпочтительно в течение периода времени, равного или составляющего примерно 12 дней. Инъекции можно осуществлять с интервалом, составляющим, например, 6, 12, 24, 48 или 72 ч.
Понятие буфер или физиологически приемлемый буфер относится к растворам соединений, в отношении которых известно, что они являются безопасными при применении в фармацевтических или ветеринарных композициях и которые обладают способностью поддерживать или контролировать значение рН композиции в диапазоне значений рН, требуемых для композиции. Приемлемыми буферами для контроля значений рН в диапазоне от умеренно кислых значений рН до умеренно основных значений рН являются (но не ограничиваясь ими) такие соединения, как фосфат, ацетат, цитрат, аргинин, Трис и гистидин. Трис обозначает 2-амино-2-гидроксиметил-1,3-пропандиол и любую его фармакологически приемлемую соль.
Предпочтительными буферами являются ацетатные буферы, содержащие физиологический раствор или приемлемую соль.
Агент для придания изотоничности представляет собой соединение, которое является физиологически переносимым и придает композиции требуемую тоничность для предупреждения чистого тока воды через клеточные мембраны, которые находятся в контакте с композицией. Для этих целей, как правило, используют такие соединения, как глицерин, в известных концентрациях. Другие пригодные для при
- 7 009995 дания изотоничности агенты включают (но не ограничиваясь ими) аминокислоты или белки (например, глицин или альбумин), соли (например, хлорид натрия) и сахара (например, декстрозу, маннит, сахарозу и лактозу). Предпочтительным агентом для придания изотоничности является маннит.
Понятие антиоксидант относится к соединению, которое препятствует взаимодействию кислорода или полученных из кислорода свободных радикалов с другими субстанциями. Антиоксиданты представляют собой одни из многочисленных эксципиентов, которые, как правило, добавляют в фармацевтические системы для повышения физической или химической стабильности. Антиоксиданты добавляют для того, чтобы минимизировать или замедлить процессы окисления при воздействии кислорода или в присутствии свободных радикалов. Эти процессы часто можно катализировать с помощью света, температуры, определенной концентрации водорода, присутствия редких металлов или пероксидов. В качестве антиоксидантов в лекарственных средствах часто применяют сульфиты, бисульфиты, тиомочевину, метионин, соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТК), бутилированный гидрокситолуол (БГТ) и бутилированный гидроксианизол (БГА). Установлено, что натрий ЭДТК повышает активность антиоксидантов путем образования хелатных комплексов с ионами металла, которые в противном случае катализируют окислительную реакцию. Наиболее предпочтительным антиоксидантом является метионин.
Понятие бактериостатический относится к соединению или композициям, которые добавляют к препарату для того, чтобы они действовали в качестве антибактериального агента. Пригодные для хранения содержащие интерферон композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, предпочтительно удовлетворяют установленным или регуляторным требованиям к эффективности консервации для поступающего в продажу жизнеспособного (содержащего живой организм) продукта, предназначенного для многократного использования. Примерами бактериостатических агентов являются фенол, метакрезол, паракрезол, ортокрезол, хлоркрезол, бензиловый спирт, алкилпарабен (метил-, этил-, пропил-, бутил- и т.п.), бензалконийхлорид, бензетонийхлорид, дегидроацетат натрия и тимеросал. Предпочтительным бактериостатическим агентом является бензиловый спирт.
Понятие поверхностно-активное вещество относится к растворимому соединению, которое снижает поверхностное натяжение жидкостей или снижает межфазное натяжение на границе раздела двух жидкостей или жидкости и твердого тела, где поверхностное натяжение представляет собой силу, действующую на поверхность жидкости, которая направлена на минимизацию площади поверхности. Поверхностно-активные вещества иногда применяют в фармацевтических композициях, включая композиции, предназначенные для доставки низкомолекулярных лекарственных средств и полипептидов, для модификации абсорбции лекарственного средства или его доставки к тканям-мишеням. Хорошо известными поверхностно-активными веществами являются полисорбаты (полиоксиэтиленовые производные; Твин), а также соединения из класса Р1итошс.
Было установлено, что согласно предпочтительному варианту осуществления изобретения при приготовлении композиции, содержащей интерферон вместе с поверхностно-активным веществом, выбранным из Р1игошс® Б77, Р1игошс Б87, Р1итошс Б88 и Р1итошс® Б68, особенно предпочтительно Р1игошс® Б68 (фирма ВА8Б, Р1итошс Б68 также известен под названием Ро1охатег 188), получают стабильные композиции, позволяющие минимизировать потерю действующего вещества вследствие адсорбции на поверхности пузырька и/или устройства для введения (например, шприца, насоса, катетера и т.д.). Было установлено, что при приготовлении композиции, содержащей интерферон вместе с поверхностно-активным веществом, выбранным из Р1итоп1с® Б77, Р1итошс Б87, Р1итошс Б88 и Р1итоп1с® Б68, особенно предпочтительно Р1игошс Б68 (фирма ВА8Б, Р1итошс Б68 также известен под названием Ро1охатег 188) получают стабильную композицию, которая обладает большей устойчивостью к окислению и образованию агрегатов белков.
Поверхностно-активные вещества, относящиеся к группе Р1итошс, представляют собой блоксополимеры этиленоксида (ЭО) и пропиленоксида (ПО). Пропиленоксидный блок (ПО) расположен в виде сэндвича между двумя этиленоксидными (ЭО) блоками
СН.
I 3
НО—(СН2СН2О)к-(СН2СНО)у-(СН2СН2О)х-Н
эо по ЭО
Поверхностно-активные вещества, относящиеся к группе Р1итошс, синтезируют с помощью двухстадийного процесса:
1. Создают гидрофобное вещество требуемой молекулярной массы путем контролируемого добавления пропиленоксида к двум гидроксильным группам пропиленгликоля.
2. Добавляют этиленоксид в сэндвич гидрофобных веществ между гидрофильными группами.
В Р1итошс® Б77 процент полиоксиэтиленовых (гидрофильных) групп составляет 70%, а молекулярная масса гидрофобных (полиоксипропиленовых) групп составляет примерно 2306 Да.
В Р1итошс Б87 процент полиоксиэтиленовых (гидрофильных) групп составляет 70%, а молекулярная масса гидрофобных (полиоксипропиленовых) групп составляет примерно 2644 Да.
В Р1итошс Б88 процент полиоксиэтиленовых (гидрофильных) групп составляет 80%, а молекуляр
- 8 009995 ная масса гидрофобных (полиоксипропиленовых) групп составляет примерно 2644 Да.
В Р1игошс Р68 процент полиоксиэтиленовых (гидрофильных) групп составляет 80%, а молекулярная масса гидрофобных (полиоксипропиленовых) групп составляет примерно 1967 Да.
Ниже приведены типичные свойства Р1игошс Р77.
Средняя молекулярная масса: 6600.
Температура плавления/точка текучести: 48°С.
Физическая форма при 20°С: твердое вещество.
Вязкость (по Брукфилду), сП: 480 [жидкость при 25°С, пастообразное вещество при 60°С и твердые частицы при 77°С].
Поверхностное натяжение при 25°С, дин/см:
концентрация 0,1%: 47,0;
концентрация 0,01%: 49,3;
концентрация 0,001%: 52,8.
Межфазное натяжение при 25°С по методу №уо1, дин/см:
концентрация 0,1%: 17,7;
концентрация 0,01%: 20,8;
концентрация 0,01%: 25,5.
Смачивание по методу Эгауез при 25°С, с:
концентрация 1,0%: >360;
концентрация 0,1%: >360.
Высота пены, мм:
по методу Во88 Мйез, 0,1% при 50°С: 100;
по методу Во88 Мйез, 0,1% при 26°С: 47;
динамическая, 0,1% при скорости 400 мл/мин: >600.
Температура помутнения в водном растворе, °С:
концентрация 1%: >100;
концентрация 10%: >100.
ГЛБ (гидрофильно-липофильный баланс): 25.
Ниже приведены типичные свойства Р1игошс Р87.
Средняя молекулярная масса: 7700.
Температура плавления/точка текучести: 49°С.
Физическая форма при 20°С: твердое вещество.
Вязкость (по Брукфилду), сП: 700 [жидкость при 25°С, пастообразное вещество при 60°С и твердые частицы при 77°С].
Поверхностное натяжение при 25°С, дин/см:
концентрация 0,1%: 44,0;
концентрация 0,01%: 47,0;
концентрация 0,001%: 50,2.
Межфазное натяжение при 25°С по методу Νπ)θ1, дин/см:
концентрация 0,1%: 17,4;
концентрация 0,01%: 20,3;
концентрация 0,01%: 23,3.
Смачивание по методу Эгауез при 25°С, с:
концентрация 1,0%: >360;
концентрация 0,1%: >360.
Высота пены, мм:
по методу Во88 Мйез, 0,1% при 50°С: 80;
по методу Во88 Мйез, 0,1 % при 26°С: 37;
динамическая, 0,1% при скорости 400 мл/мин: >600.
Температура помутнения в водном растворе, °С:
концентрация 1%: >100;
концентрация 10%: >100.
ГЛБ (гидрофильно-липофильный баланс): 24.
Ниже приведены типичные свойства Р1игошс Р88.
Средняя молекулярная масса: 11400.
Температура плавления/точка текучести: 54°С.
Физическая форма при 20°С: твердое вещество.
Вязкость (по Брукфилду), сП: 2300 [жидкость при 25°С, пастообразное вещество при 60°С и твердые частицы при 77°С].
Поверхностное натяжение при 25°С, дин/см:
концентрация 0,1%: 20,5;
концентрация 0,01%: 23,3;
- 9 009995 концентрация 0,001%: 55,7.
Межфазное натяжение при 25°С по методу №уо1, дин/см:
концентрация 0,1%: 20,5;
концентрация 0,01%: 23,3;
концентрация 0,01%: 27,0.
Смачивание по методу Эгауек при 25°С, с:
концентрация 1,0%: >360;
концентрация 0,1%: >360.
Высота пены, мм:
по методу Кокк Мйек, 0,1% при 50°С: 80;
по методу Кокк Мйек, 0,1% при 26°С: 37;
динамическая, 0,1% при скорости 400 мл/мин: >600.
Температура помутнения в водном растворе, °С: концентрация 1%: >100;
концентрация 10%: >100.
ГЛБ (гидрофильно-липофильный баланс): 28
Ниже приведены типичные свойства Р1игошс Р68.
Средняя молекулярная масса: 8400.
Температура плавления/точка текучести: 52°С.
Физическая форма при 20°С: твердое вещество.
Вязкость (по Брукфилду), сП: 1000 [жидкость при 25°С, пастообразное вещество при 60°С и твердые частицы при 77°С].
Поверхностное натяжение при 25°С, дин/см:
концентрация 0,1%: 50,3;
концентрация 0,01%: 51,2;
концентрация 0,001%: 53,6.
Межфазное натяжение при 25°С по методу №уо1, дин/см:
концентрация 0,1%: 19,8;
концентрация 0,01%: 24,0;
концентрация 0,01%: 26,0.
Смачивание по методу Эгауек при 25°С, с:
концентрация 1,0%: >360;
концентрация 0,1%: >360.
Высота пены, мм:
по методу Кокк Мйек, 0,1% при 50°С: 35;
по методу Кокк Мйек, 0,1% при 26°С: 40;
динамическая, 0,1% при скорости 400 мл/мин: >600.
Температура помутнения в водном растворе, °С: концентрация 1%: >100;
концентрация 10%: >100.
ГЛБ (гидрофильно-липофильный баланс): 29.
В композициях, предлагаемых в изобретении, можно использовать также другие полимеры, которые имеют свойства, аналогичные перечисленным выше. Предпочтительным поверхностно-активным веществом является Р1игошс Р68 и поверхностно-активные вещества с аналогичными свойствами.
Р1игошс, прежде всего Р1игошс Р68, предпочтительно присутствует в композиции в концентрации, которая является достаточной для поддержания стабильности интерферона в течение требуемого периода хранения (например, от 6 до 12 или до 24 месяцев), а также в концентрации, которая является достаточной для предупреждения потери белков из-за адсорбции на поверхностях, таких как пузырек, ампула, или картридж, или шприц.
Предпочтительно концентрация Р1игошс, прежде всего Р1игошс Р68, в жидких композициях имеет величину от равной или составляющей примерно 0,01 до равной или составляющей примерно 10 мг/мл, более предпочтительно от равной или составляющей примерно 0,05 до равной или составляющей примерно 5 мг/мл, еще более предпочтительно от равной или составляющей примерно 0,1 до равной или составляющей примерно 2 мг/мл, наиболее предпочтительно она равна или составляет примерно 1 мг/мл.
Предпочтительно концентрация ΙΡΝ-β в композиции имеет величину от равной или составляющей примерно 10 до равной или составляющей примерно 800 мкг/мл, более предпочтительно от равной или составляющей примерно 20 до равной или составляющей примерно 500 мкг/мл, еще более предпочтительно от равной или составляющей примерно 30 до равной или составляющей примерно 300 мкг/мл, наиболее предпочтительно она равна или составляет примерно 22, 44, 88 или 264 мкг/мл.
Предпочтительно рН композиций ФСГ, предлагаемых в настоящем изобретении, имеет значение от равного или составляющего примерно 3,0 до равного или составляющего примерно 5,0, более предпочтительно значение, равное или составляющее примерно 3,7 или 4,7. Предпочтительным буфером являет
- 10 009995 ся ацетатный буфер, в котором предпочтительные противоионы представляют собой ионы натрия или калия. Забуференные ацетатом физиологические растворы хорошо известны в данной области. Концентрации буферов в общем растворе могут варьироваться и быть равными или составлять примерно 5, 9,5, 10, 50, 100, 150, 200, 250 и 500 мМ. Предпочтительно концентрация буфера равна или составляет примерно 10 мМ. Наиболее предпочтительным является буфер с концентрацией ацетатных ионов 10 мМ, имеющий значение рН 3,5±0,2 или 4,5±0,2.
Предпочтительно в композиции, предлагаемой в настоящем изобретении, антиоксидант, например метионин, присутствует в концентрации от равной или составляющей примерно 0,01 до равной или составляющей примерно 5 мг/мл, более предпочтительно от равной или составляющей примерно 0,05 до равной или составляющей примерно 0,3 мг/мл, наиболее предпочтительно равной или составляющей примерно 0,1 мг/мл.
Предпочтительно концентрация агента для придания изотоничности (например, маннита) в жидких композициях составляет от равной или составляющей примерно 0,5 до равной или составляющей примерно 500 мг/мл, более предпочтительно от равной или составляющей примерно 1 до равной или составляющей примерно 250 мг/мл, еще более предпочтительно от равной или составляющей примерно 10 до равной или составляющей примерно 100 мг/мл, наиболее предпочтительно она равна или составляет примерно 55 мг/мл.
Изобретение относится также к жидким композициям. Предпочтительным растворителем является вода для инъекций.
Жидкие композиции могут находиться в форме однократной дозы или нескольких доз. Жидкие композиции интерферона, предлагаемые в изобретении, которые предназначены для применения в форме нескольких доз, предпочтительно содержат бактериостатический агент, такой как фенол, метакрезол, паракрезол, ортокрезол, хлоркрезол, бензиловый спирт, алкилпарабен (метил-, этил-, пропил-, бутил- и т.п.), бензалконийхлорид, бензетонийхлорид, дегидроацетат натрия и тримеросал. Особенно предпочтительными являются фенол, бензиловый спирт и метакрезол, более предпочтительными является бензиловый спирт. Бактериостатический агент применяют в количестве, обеспечивающем концентрацию, которая является эффективной для поддержания композиции в практически не содержащем бактерии состоянии (пригодном для инъекции) в течение периода времени, когда для инъекции применяют состоящую из нескольких доз композицию, который может быть равен или составлять от примерно 12 или 24 ч до равного или составляющего примерно 12 дней, предпочтительно от равного или составляющего примерно 6 до равного или составляющего примерно 12 дней. Бактериостатический агент предпочтительно присутствует в концентрации от равной или составляющей примерно 0,1% (масса бактериостатического агента/масса растворителя) до равной или составляющей примерно 2,0%, более предпочтительно от равной или составляющей примерно 0,2% до равной или составляющей примерно 1,0%. В случае бензилового спирта наиболее предпочтительными являются концентрации 0,2 или 0,3%. При этом применение консерванта, например бензилового спирта, не ограничено только композициями в форме нескольких доз, его можно добавлять также к композиции в форме однократной дозы.
Интерферон в композициях, предлагаемых в изобретении, присутствует в таких количествах, при которых после восстановления его концентрации составляют от примерно 1 мкг/мл до примерно 50 мг/мл, хотя возможно применение более низких и более высоких концентраций, и это зависит от предполагаемого устройства для введения, например методы введения композиций в виде раствора могут отличаться от методов введения, основанных на использовании трансдермальной бляшки, легочного, трансмукозального пути введения или введения с помощью осмотического насоса или микронасоса. Концентрация интерферона предпочтительно имеет величину от равной или составляющей примерно 5 мкг/мл до равной или составляющей примерно 2 мг/мл, более предпочтительно от равной или составляющей примерно 10 мкг/мл до равной или составляющей примерно 1 мг/мл, наиболее предпочтительно от равной или составляющей примерно 30 до равной или составляющей примерно 100 мкг/мл.
Предпочтительно в композициях, предлагаемых в изобретении, сохраняется в течение 24 месяцев по меньшей мере или примерно 60%, более предпочтительно по меньшей мере или примерно 70%, наиболее предпочтительно по меньшей мере или примерно 80% активности интерферона от активности в момент упаковки.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления изобретения предложен способ приготовления описанной выше жидкой фармацевтической композиции.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения предложен способ приготовления упакованной фармацевтической композиции, заключающийся в том, что в упаковку вносят раствор, содержащий действующее вещество и описанные выше эксципиенты.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления изобретения предложено изделие для применения в фармацевтических целях для человека, представляющее собой пузырек, содержащий описанные выше фармацевтические композиции и письменную информацию о том, что раствор можно хранить после первого применения в течение периода времени, равного или составляющего примерно 24 ч или более. Предпочтительно в письменной информации указано, что раствор можно хранить в течение периода времени, равного или составляющего примерно 12 дней.
- 11 009995
После первого применения композицию в форме нескольких доз можно хранить и применять в течение периода времени, равного или составляющего примерно 24 ч, предпочтительно в течение периода времени, равного или составляющего примерно 4, 5 или 6 дней, более предпочтительно вплоть до 12 дней. После первого применения композицию предпочтительно хранят при температуре ниже комнатной (т.е. ниже или составляющей примерно 25°С), более предпочтительно ниже или составляющей примерно 10°С, еще более предпочтительно ниже или составляющей примерно 2-8°С, наиболее предпочтительно при температуре, равной или составляющей примерно 4-6°С.
Композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, можно получать методом, который заключается в том, что к забуференному раствору добавляют рассчитанные количества эксципиентов и затем добавляют интерферон.
Затем образовавшийся раствор вносят в пузырьки, ампулы или картриджи. Специалисту в данной области должны быть очевидны варианты указанного метода. Факторами, которые можно оптимизировать для обеспечения требуемой концентрации и путей введения, являются, например, порядок добавления компонентов, применение дополнительных вспомогательных веществ, если это требуется, температура и значение рН, при которых приготавливают композицию.
В случае композиции в форме нескольких доз к раствору, содержащему действующее вещество (интерферон), можно добавлять бактериостатический агент или в альтернативном варианте его можно хранить в отдельном пузырьке или картридже и затем в момент применения смешивать с раствором, содержащим действующее вещество.
Композиции, предлагаемые в изобретении, можно вводить с помощью известных устройств. Примеры систем на основе одного пузырька включают автоматические инжекторные или ручные инжекторные устройства для введения растворов, такие как КеЬЦес1®.
Заявляемые продукты включают упаковочный материал. На упаковочном материале находится помимо информации, требуемой регулирующими органами, информация об условиях, при которых продукт можно применять. Упаковочный материал, предлагаемый в настоящем изобретении, включает инструкции для пациентов о том, как при необходимости приготавливать конечный раствор, и о том, как применять такой конечный раствор в течение 24 ч или более, в случае содержащегося в двух пузырьках влажного/сухого продукта. Для продукта, представляющего собой один пузырек с раствором, этикетка содержит информацию о том, что такой раствор можно хранить после первого применения в течение 24 ч или более. Заявляемые продукты можно применять в качестве фармацевтического продукта для человека.
Стабильные пригодные для хранения композиции могут поступать к пациентам в виде прозрачных растворов. Раствор может быть предназначен для однократного применения или для повторного многоразового применения, а также для одного или нескольких циклов лечения пациента, что является более удобной схемой применения по сравнению с существующими в настоящее время.
Интерферон в любых стабильных или пригодных для хранения композициях или растворах, представленных в настоящем описании, можно вводить пациенту согласно настоящему изобретению с помощью различных методов введения, включая 8С- или ΙΜ-инъекцию; трансдермально, легочно, трансмукозально, путем имплантации, с помощью осмотического насоса, картриджа, микронасоса, орально или с использованием других хорошо известных в данной области путей введения, выбранных лечащим врачом.
Понятие пузырек относится в широком смысле к резервуару, пригодному для сохранения интерферона в твердой или жидкой форме в герметичном стерильном состоянии. Примерами пузырька, который можно применять согласно изобретению, являются ампулы, картриджи, блистерные упаковки или другие аналогичные резервуары, которые можно применять для введения интерферона пациенту с помощью шприца, насоса (в том числе осмотического), катетера, трансдермальной бляшки, легочного или трансмукозального спрея. Пузырьки, пригодные для упаковки продуктов, предназначенных для парентерального, легочного, трансмукозального или трансдермального введения, хорошо известны и применяются в данной области.
Понятие лечение в контексте настоящего изобретения относится к любому благоприятному действию на развитие заболевания, включая ослабление, редукцию, снижение или уменьшение патологического развития после возникновения заболевания.
Фармацевтические композиции, предлагаемые в изобретении, которые содержат ΙΕΝ или изоформу, мутеин, слитый белок, функциональное производное, активную фракцию или соль, можно применять для установления диагноза, предупреждения и лечения (местного или системного) клинических показаний, поддающихся лечению с помощью указанного полипептида. К таким клиническим показаниям относятся, например нарушения или заболевания центральной нервной системы (ЦНС), головного мозга и/или спинного мозга, включая рассеянный склероз; аутоиммунные заболевания, в том числе ревматоидный артрит, псориаз, болезнь Крона; и различные типы рака, включая рак молочной железы, предстательной железы, мочевого пузыря, почки и ободочной кишки.
Все процитированные в настоящем описании ссылки, в том числе журнальные статьи или рефераты, опубликованные или неопубликованные заявки на патент США или иностранные заявки на патент, опубликованные в США или в иностранных патентах, или любые другие ссылки полностью включены в
- 12 009995 настоящее описание в качестве ссылки, включая все данные, таблицы, чертежи и текст, приведенные в процитированных ссылках. Кроме того, полное содержание ссылок, процитированных в ссылках, процитированных в настоящем описании, также полностью включено в описание в качестве ссылки.
Ссылки на стадии известного метода, стадии стандартных методов, известные методы или стандартные методы никоим образом не свидетельствуют о том, что какой-либо предмет, описание или вариант осуществления настоящего изобретения описан, изложен или подразумевается в соответствующем прототипе.
Приведенное выше описание конкретных вариантов осуществления изобретения должно отображать общую сущность изобретения в такой полноте, что другие специалисты в данной области на основе своих знаний (включая содержание процитированных в настоящем описании ссылок), не осуществляя излишних экспериментов, легко могут модифицировать и/или адаптировать такие конкретные варианты осуществления для различных приложений без отклонения от общей концепции настоящего изобретения. Таким образом, подразумевается, что такие адаптации и модификации считаются эквивалентами представленных в описании вариантов осуществления изобретения с учетом доктрины и руководства, представленных в описании. Следует иметь в виду, что использованная в описании фразеология или терминология применяется только для целей описания, а не для ограничения, так что специалисту в данной области следует интерпретировать терминологию или фразеологию настоящего описания в свете доктрины и руководства, представленных в описании, и с учетом знаний специалиста в данной области.
Описание чертежей
На чертежах показано:
фиг. 1 - процентное содержание окисленных форм, которые присутствуют в композициях интерферона β-1 а в форме нескольких доз, имеющих различные концентрации бензилового спирта, после хранения при 40°С;
фиг. 2 - процентное содержание окисленных форм, которые присутствуют в композициях интерферона β-1 а в форме нескольких доз, имеющих различные концентрации бензилового спирта, после хранения при 25°С;
фиг. 3 - процентное содержание окисленных форм, которые присутствуют в композициях интерферона β-1 а в форме нескольких доз, имеющих различные концентрации бензилового спирта, после хранения при 2-8°С;
фиг. 4 - процентное содержание всех агрегатов, которые присутствуют в композициях интерферона β-1 а в форме нескольких доз, имеющих различные концентрации бензилового спирта, после хранения при 40°С;
фиг. 5 - процентное содержание всех агрегатов, которые присутствуют в композициях интерферона β-1 а в форме нескольких доз, имеющих различные концентрации бензилового спирта, после хранения при 25°С;
фиг. 6 - процентное содержание всех агрегатов, которые присутствуют в композициях интерферона β-1 а в форме нескольких доз, имеющих различные концентрации бензилового спирта, после хранения при 2-8°С;
фиг. 7 - процентное содержание окисленных форм, которые присутствуют в композициях интерферона β-1 а в форме нескольких доз, содержащих альтернативные бактериостатические агенты, после хранения при 25°С;
фиг. 8 - процентное содержание окисленных форм, которые присутствуют в композициях интерферона β-1 а в форме нескольких доз, содержащих альтернативные бактериостатические агенты, после хранения при 2-8°С;
фиг. 9 - процентное содержание всех агрегатов, которые присутствуют в композициях интерферона β-1 а в форме нескольких доз, содержащих альтернативные бактериостатические агенты;
фиг. 10 - процентное содержание окисленных форм, которые присутствуют в композициях интерферона β-1 а в форме нескольких доз, содержащих ЭДТК, после хранения при 25°С;
фиг. 11 - процентное содержание всех агрегатов, которые присутствуют в композициях интерферона β-1 а в форме нескольких доз, содержащих ЭДТК, после хранения при 25°С;
фиг. 12 - эффективность 0,012% Ь-метионина в качестве антиоксиданта (при 2-8°С);
фиг. 13 - эффективность 0,012% Ь-метионина в качестве антиоксиданта (при 25±2°С).
Примеры
Пример 1. Жидкая не содержащая ЧСА композиция интерферона β-1 а в форме одной дозы, находящаяся в предварительно заполненных шприцах.
1.1. Предварительные опыты по оценке совместимости.
Для проверки защитного действия, оказываемого некоторыми эксципиентами, такими как антиоксидант и поверхностно-активные вещества, проводили предварительные эксперименты, поскольку ожидалось, что исключение человеческого сывороточного альбумина (ЧСА) из рассматриваемого продукта может оказывать влияние на продукт с точки зрения окисления, образования агрегатов и адсорбции к поверхностям.
- 13 009995
Приготавливали композиции интерферона β-^ с концентрацией 44 и 88 мкг/мл в натрий-ацетатном буфере, содержащем 54,6 мг/мл маннита в сочетании с несколькими эксципиентами, такими как 0,4% ЧСА, 0,012% Ь-метионин, Твин 20 (0,005, 0,007, 0,01%), Ро1охатег 188 (0,05, 0,1, 0,5%). Различные комбинации подвергали воздействию стрессовых условий (либо хранение при 40°С, либо перемешивание) и тестировали в отношении окисления (с помощью ОФ-ЖХВР) и агрегации (с помощью ГФ (гельфильтрация)-ЖХВР).
В табл. ΌΕΡ-1 и -2 обобщены данные об уровнях окисления и агрегации после хранения в течение 2 недель при 40°С. Комбинация интерферона β-^ с обоими тестируемыми поверхностно-активными веществами (Твин 20 и Ро1охатег 188) приводила к повышению уровня окисления, который для каждого типа поверхностно-активного вещества зависел от концентрации (табл. ЭЕР-1. комбинации № 4-6 и № 7-9); при процентном содержании Ро1охатег 188 (также обозначаемый как плуроник Ε-68, или Ε-68), составляющем 0,5%, происходило полное разложение лекарственной субстанции (табл. ЭЕР-Г № 9). При использовании Твин 20 была выявлена более высокая скорость разложения, которая, по-видимому, обусловлена наличием окислителей (например, пероксидов), которые могут присутствовать в остаточных количествах после синтеза.
Оба поверхностно-активные вещества в различных тестированных концентрациях не оказывали влияния на уровень агрегации при хранении при 40°С (табл. ЭЕР-2).
Таблица ЭЕР-1
Содержание окисленных форм (%) по данным ОФ-ЖХВР после хранения при 40°С
Т=0 2 недели
№1 ΙΡΝ 44 3,0 6,5
№2 ΙΡΝ 44 мкг + 0,4 ЧСА (применяемый в настоящее время) 2,4 5,5
№3 ΙΡΝ 44 мкг + 0,012% Ь-метионин 3,9 6,2
№4 ΙΡΝ 44 мкг 3,5 6,0
№5 ΙΡΝ 44 мкг 3,4 7,0
№6 ΙΡΝ 44 мкг 3,5 8,7
№7 ΙΡΝ 44 мкг 3,5 6,9
№8 ΙΡΝ 44 мкг 3,3 8,0
№9 ΙΡΝ 44 мкг 3,6 н. и.
№10 ΙΡΝ 44 мкг + 0,012% Ь-метионин + 0,07% Твин 20 3,5 6,9
№11 ΙΡΝ 44 мкг + 0,012% Ь-метионин 3,5 7,6
н.и. - не измеряли, поскольку происходило полное разложение.
Таблица ЭЕР-2
Общее содержание агрегатов (%) по данным ГФ-ЖХВР после хранения при 40°С
Т=0 2 недели
№1 ΙΡΝ 44 2,6 2,8
№4 ΙΡΝ 44 мкг 2,4 2,1
№5 ΙΡΝ 44 мкг 2,8 2,0
№6 ΙΡΝ 44 мкг 2,6 2,0
№7 ΙΡΝ 44 мкг 2,5 2,9
№8 ΙΡΝ 44 мкг 2,5 2,5
№9 ΙΡΝ 44 мкг 2,6 2,9
В табл. ЭЕР-3 показано, что оба поверхностно-активные вещества, Твин 20 и Ро1охатег 188 (Ε-68), применяемые в их критической концентрации мицелл (ККМ), способствуют предупреждению агрегации, индуцируемой перемешиванием в течение 5 мин.
- 14 009995
Таблица ΌΕΡ-3 Общее содержание агрегатов (%) по данным ГФ-ЖХВР после перемешивания в течение 5 мин
Т=0 2 недели
№1 ΙΡΝ 44 мкг 1,6 2,5
№3 ΙΓΝ44 мкг + 0,012 Ь-Ме( 1,4 2,4
№10 ΙΡΝ 44 мкг +0,012 Ь-Ме1 + 0,007% Твин 20 1,4 1,3
№11 ΙΡΝ 44 мкг +0,012 Ь-Ме1 +0,1% Е-68 1,3 1,3
1.1.1. Физико-химические характеристики.
Известно, что физико-химическими характеристиками, которые имеют решающее значение для качества продукта, представляющего собой лекарственное средство, являются содержание продуктов окисления и димеров/агрегатов. Эти характеристики изучали в опытах по оценке совместимости, результаты которых обобщены выше.
1.2. Эксципиенты.
1.2.1. 10 мМ натрий-ацетатный буфер, рН 3,5.
мМ натрий-ацетатный буфер с рН 3,5, содержащий 54,6 мг/мл маннита в качестве агента для придания изотоничности, стабилизирует продукт, как это было показано в процессе предыдущей разработки поступающего в настоящее время продукта (КеЫЕ®) и как это описано в ЕР 759775.
1.2.1. Ро1охатег 188.
Ро1охатег 188 (или Р1игошс Е-68) включали в композицию в количестве 0,1% (критическая концентрация мицелл) для предупреждения адсорбции лекарственной субстанции на поверхности контейнера в процессе производства; более высокие концентрации могут оказывать отрицательное воздействие на стабильность продукта (повышенная степень окисления); более низкие концентрации могут быть менее эффективными с точки зрения ограничения адсорбции.
Эффективность применения Ро1охатег 188 для предупреждения адсорбции лекарственной субстанции на поверхности в процессе производства была продемонстрирована в следующем опыте.
Растворы, содержащие 44 мкг/мл интерферона β-1 а, объединяли с растворами, содержащими 3 различные концентрации поверхностно-активного вещества (Твин 20 или Ро1охатег 188) или ЧСА, имитируя процесс производства; на различных стадиях отбирали образцы (смешивание, асептическая фильтрация, заполнение) и тестировали с помощью количественного метода ОФ-ЖХВР.
Отбирали следующие образцы:
до фильтрации (ДФ);
после 1-й фильтрации (ПФ1);
после 2-й фильтрации (ПФ2);
после заполнения (конечный продукт при Т=0).
Результаты обобщены в табл. ΌΕΡ-4 и выражены в виде процента выхода (%) по отношению к исходному значению (т.е. в смешанном растворе перед фильтрацией): Ро1охатег 188 является более эффективным, чем Твин 20, но менее эффективным по сравнению с ЧСА в отношении предупреждения адсорбции лекарственной субстанции в процессе приготовления.
Таблица ЭЕР-4
Выход интерферона β-1 а (%) в процессе приготовления
Без ЧСА/без поверхностноактивного вещества ЧСА 0,003% Твин 20 0,007% Твин 20 0,02% Твин 20 0,05% Р-68 0,1% Р-68 0,2% Р-68
ПФ1 97,8 97,5 98,2 97,7 99,1 98,3 98,6 98,9
ПФ2 94,5 97,3 96,3 96,6 97,6 97,0 98,4 98,3
т=о 93,8 96,9 95,8 95,7 96,3 96,5 97,0 98,0
Проводили исследование различных степеней очистки Ро1охатег 188, полученного от различных поставщиков, с точки зрения содержания продуктов окисления после ускоренного хранения условиях (2 недели при 40°С) для оценки необходимого для применения качества: был выбран Ро1охатег 188 от фирмы ВАЗЕ вследствие более низкого уровня окисления и того, что он поступает в продажу в виде фармацевтически чистого продукта. Результаты обобщены в табл. ЭЕР-5.
- 15 009995
Таблица ΌΕΡ-5
Содержание окисленных форм (%), выявленных в композициях, содержащих
0,1% Ро1охатег 188 (различные степени чистоты и поставщики)
Поставщик Качество т=о 1 неделя при 40°С 2 недели при 40°С
ВА5Р Фармацевтическая степень чистоты 2,6 - 3,2
Пика Чистота для ГХ - 3,8 4,7
81дта Чистота для биохимического анализа - 3,2 4,4
1.2.3. Ь-метионин.
Ь-метионин (Ь-Ме1) включают в состав композиции в концентрации порядка 0,012% для ограничения окисления. Эффективность указанной концентрации продемонстрирована путем сравнения с композицией, не содержащей Ь-метионин; более высокие концентрации (0,05, 0,1%) Ь-метионина оказывают близкое влияние на стабильность. Содержание продуктов окисления, обнаруженных после хранения при 40°С, представлено в табл. ЬЕР-6.
Таблица ЬЕР-6
Содержание окисленных форм (%) композиций интерферона β-^, содержащих различные концентрации Ь-метионина (Ь-Ме1)
Т=0 1 неделя при 40°С 4 недели при 40°С
ΙΡΝβ-13 44 мкг 2,8 3,8 7,6
ΙΓΝβ-13 44 мкг + 0,012% Ь-Ме1 - 2,9 5,3
1РМр-1а 44 мкг + 0,05% Ь-Ме1 - 3,0 5,1
ΙΡΝβ-Ιθ 44 мкг + 0,1% Ь-Ме1 - 2,6 5,0
В процессе разработки композиции эффективность Ь-метионина в качестве антиоксиданта была подтверждена результатами исследования стабильности в течение 3 месяцев при хранении при 2-8°С и 25±2°С, полученными для композиций, содержащих Ь-метионин в сочетании с поверхностно-активными веществами: Ь-метионин обладает эффективностью в качестве антиоксиданта в концентрации 0,012% и может обеспечивать стабильность, сопоставимую со стабильностью поступающего в продажу продукта (см. фиг. 12 и 13).
1.3. Продукт, представляющий собой лекарственное средство.
1.3.1. Разработка композиции.
Разработка новой композиции интерферона β-^, не содержащей ЧСА, была предпринята с целью подтверждения результатов предварительных исследований (эффективности Ь-метионина в качестве антиоксиданта, включения Ро1охатег 188 для предотвращения потерь в процессе производства) применительно к конечному продукту, содержащемуся в контейнере.
Получали растворы интерферона β-^ с концентрацией 44 и 88 мкг/мл, содержащие 54,6 мг/мл маннита в 10 мМ натрий-ацетатном буфере, рН 3,5, и добавляли следующие эксципиенты:
Твин 20 (0,003, 0,007, 0,02%);
Ро1охатег 188 (0,05, 0,1, 0,2%);
Ь-метионин (0, 0,012%);
ЧСА (0,4%, поступающая в продажу композиция, обозначенная как геГ).
Составы изученных композиций приведены в табл. ЬЕР-7.
Таблица ЬЕР-7
Составы композиций, содержащих интерферон β-^
Композиция ΙΡΝр-1а (мкг) Маннит (мг) Твин 20 (мг) Ро1охашег 188 (мг) ЧСА (мг) Ь- метионин (мг) 10мМ ацетатный буфер рН 3,5
ΙΡΝ-1 44 54,6 0,03 - д.8. до 1 мл
ΙΡΝ-2 44 54,6 0,07 - д.з. до 1 мл
ΙΡΝ-3 44 54,6 0,2 - Д.8. до 1 мл
ΙΡΝ-4 44 54,6 - 0,5 Д.8. до 1 мл
ΙΡΝ-5 44 54,6 - 1 Д.8. до 1 мл
ΙΡΝ-6 44 54,6 - 2 Д.8, до 1 мл
ΙΡΝ-7 (гсГ) 44 54,6 - - 4 Д.8. до 1 мл
1ΡΝ-8 44 54,6 - - Д.8. ДО 1 мл
ΙΡΝ-9 44 54,6 0.2 - 0,12 Д.8. ДО 1 мл
ΙΡΝ-10 44 54,6 - 2 0,12 д.8, до 1 мл
ΙΡΝ-11 88 54,6 - 1 0,12 Д.8, до 1 мл
- 16 009995
Композиции приготавливали согласно описанной ниже процедуре.
Приготавливали по 90 мл каждой композиции в асептических условиях путем смешения требуемого количества эксципиентов, растворенных в воде для инъекции (ΑΕΙ), с лекарственной субстанцией (интерферон в-1а); затем композиции фильтровали через мембрану с размером пор 0,22 мкм (фильтрацию осуществляли дважды через два мембранных фильтра) и по 0,5 мл каждого раствора вносили в стеклянные шприцы типа Нурак объемом 1 мл. Размер партии составлял примерно 180 шприцев.
Затем композиции помещали на хранение при 2-8°С, 25±2°С и 40±2°С и тестировали в отношении стабильности в течение периода времени вплоть до 12 недель (вплоть до 6 недель для образцов, хранившихся при 40±2°С).
В процессе разработки применяли следующие аналитические тесты и методы (более подробно эти методы анализа описаны в примере 2):
анализ биологической активности (биологический анализ цитопатогенного действия (ЦПД));
анализ (метод ОФ-ЖХВР);
анализ продуктов окисления (метод ОФ-ЖХВР);
анализ димеров/агрегатов (метод ГФ-ЖХВР и ДСН-ПААГ);
определение значения рН (потенциометрический метод);
измерение осмотического давления (измерение криоскопическим методом).
Результаты и их оценка обобщены в табл. ΌΕΡ-8-ΌΕΡ-17.
Таблица ΌΕΡ-8
Биологическая идентичность (ММЕ/мл)
2-8°С
0 4 недели 8 недель 12 недель
ΙΡΝ-1 11,7 12,4 11,6 11,0
ΙΡΝ-2 11,5 12,1 П,9 11,1
ΙΡΝ-3 п,з 10,0 9,9 9,7
ΙΡΝ-4 11,8 11,8 12,4 11,1
ΙΡΝ-5 12,1 12,3 12,6 11,6
ΙΡΝ-6 12,1 12,2 11,4 10,7
ΙΡΝ-7 12,1 12,4 12,6 11,1
ΙΡΝ-8 11,2 11,4 11,5 10,8
ΙΡΝ-9 11,2 12,4 12,7 11,9
ΙΡΝ-10 12,0 13,0 12,4 11,6
25°С
0 2 недели 4 недели 8 недель 12 недель
ΙΡΝ-1 11,7 11,2 11,5 11,0 10,7
ΙΡΝ-2 11,5 11,8 11,3 11,1 10,7
ΙΡΝ-3 11,3 10,7 10,6 10,4 8,9
ΙΡΝ-4 11,8 10,8 11,8 12,2 11,6
ΙΡΝ-5 12,1 12,3 12,5 12,0 10,9
ΙΡΝ-6 12,1 12,9 12,0 11,5 10,5
ΙΡΝ-7 12,1 11,2 12,7 12,8 п,з
ΙΡΝ-8 11,2 11,1 11,5 11,6 10,9
ΙΡΝ-9 И,2 11,0 12,1 11,5 10,9
ΙΡΝ-10 12,0 11,7 11,8 12,5 11,6
40°С
0 | 2 недели 4 недели 6 недель
ΙΡΝ-1 11,7 1 9,4 9,4 9,6
ΙΡΝ-2 И,5 10,0 9,7 9,6
ΙΡΝ-3 11,3 7,8 7,2 6,0
ΙΡΝ-4 11,8 10,9 11,4 13,0
ΙΡΝ-5 12,1 12,1 13,1 12,1
ΙΡΝ-6 12,1 11,6 12,7 11,4
ΙΡΝ-7 12,1 11,0 12,2 12,0
ΙΡΝ-8 11,2 н,о 11,6 12,0
ΙΡΝ-9 11,2 10,1 9,1 7,1
ΙΡΝ-10 12,0 12,3 12,0 11,0
Наклоны, рассчитанные методом линейной регрессии и обобщенные в табл. ΌΕΡ-9, свидетельствуют о снижении биологической активности всех композиций, содержащих Твин 20 (№ 1, 2, 3, 9), при хранении при 40°С; снижение биологической активности происходило также у композиций № 3 и № 6 (наибольшая концентрация поверхностно-активных веществ) после хранения при 25 и 2-8°С.
- 17 009995
Таблица ΌΕΡ-9
Анализ методом линейной регрессии биологической идентичности (наклоны выражены в виде ММЕ/млх неделю)
ΙΡΝ-1 ΙΡΝ-2 ΙΡΝ-3 ΙΡΝ-4 ΙΡΝ-5 ΙΡΝ-6 ΙΡΝ-7 ΙΡΝ-8 ΙΡΝ-9 ΙΡΝ- 10
2-8°С -0,07 -0,04 -0,12 -0,04 -0,03 -0,13 -0,06 -0,03 0,06 -0,06
25°С -0,08 -0,08 -0,17 0,03 -0,10 -0,17 -0,02 -0,01 -0,02 0,00
40°С -0,32 -0,29 -0,83 0,20 0,05 -0,05 0,06 0,16 -0,67 -0,17
Таблица ΌΕΡ-10
Анализ методом ОФ-ЖХВР (мкг/шприц)
2-8°С
0 4 недели 8 недель 12 недель
ΙΡΝ-Ι 23,4 21,5 22,8 21,2
ΙΡΝ-2 22,9 21,4 22,2 21,1
ΙΡΝ-3 22,4 20,8 20,8 20,2
ΙΡΝ-4 22,9 22,4 23,1 21,2
ΙΡΝ-5 23,6 23,3 21,7 22,2
ΙΡΝ-6 23,1 21,4 22,9 21,2
ΙΡΝ-7 23,0 22,8 23,4 22,0
ΙΡΝ-8 21,2 20,0 23,5 20,0
ΙΡΝ-9 23,0 21,7 21,6 22,1
1ΡΝ-10 22,8 22,6 22,7 23,2
ΙΡΝ-11 45,6 43,9 44,3 44,7 |
25°С
0 2 недели 4 недели 8 недель 12 недель
ΙΡΝ-1 23,4 20,5 20,75 20,7 20,1
ΙΡΝ-2 22,9 21,2 19,8 20,8 19,7
ΙΡΝ-3 22,4 19,9 19,1 17,6 16,6
ΙΡΝ-4 22,9 21,5 22,2 22,5 21,1
ΙΡΝ-5 23,6 23,4 23,0 23,6 21,4
ΙΡΝ-6 23,1 22,6 20,7 22,0 20,5
ΙΡΝ-7 23,0 23,1 22,9 23,2 22,6
ΙΡΝ-8 21,2 20,8 19,8 20,8 19,7
ΙΡΝ-9 23,0 20,5 20,2 18,2 18,6
ΙΡΝ-10 22,8 22,2 22,6 22,0 22,3
1ΡΝ-11 45,6 45,2 44,6 43,4 44,8
40°С
0 2 недели 4 недели 6 недель
ΙΡΝ-1 23,4 18,8 17,8 16,6
ΙΡΝ-2 22,9 18,5 16,2 15,4
ΙΡΝ-3 22,4 15,1 11,2 10,4
ΙΡΝ-4 22,9 20,1 19,8 18,7
ΙΡΝ-5 23,6 21,8 21,0 19,6
ΙΡΝ-6 23,1 20,7 18,8 18,7
ΙΡΝ-7 23,0 20,6 18,8 16,7
ΙΡΝ-8 21,2 19,6 18,3 18,1
ΙΡΝ-9 23,0 16,8 12,7 13,1
ΙΡΝ-10 22,8 20,5 19,8 19,9
ΙΡΝ-11 45,6 43,4 41,5 40,1
Наклоны, рассчитанные методом линейной регрессии и обобщенные в табл. ΌΕΡ-11, свидетельствуют о более высокой потере содержания белка в композициях, содержащих Твин 20 (№ 1, 2, 3, 9), которые хранили при 40°С; такая же тенденция обнаружена при 25°С, а также для композиций № 5 и 6. Выявлено существенное снижение содержания белка при хранении при 2-8°С для композиций № 1, 2, 3 (содержащих Твин 20), 4, 5 (содержащих Ро1охатег 188) и 9 (содержащей Твин 20 и Ь-метионин).
Таблица ΌΕΡ-11
Анализ методом линейной регрессии (наклоны выражены в мкг/шприцх неделю)
ΙΡΝ-1 ΙΓΝ-2 ΙΓΝ-3 ΙΡΝ-4 ΙΡΝ-5 ΙΡΝ-6 ΙΡΝ-7 ΙΡΝ-8 ΙΡΝ-9 ΙΡΝ-10 ΙΡΝ-11
2-8°С -0,13 -0,11 -0,16 -0,11 -0,14 -0,11 -0,06 -0,00 -0,07 -0,03 -0,06
25°С -0,19 -0,20 -0,44 -0,09 -0,15 -0,18 -0,03 -0,09 -0,34 -0,04 -0,10
40°С -1,10 -1,20 -2,00 -0,64 -0,64 -0,76 -1,00 -0,53 -1,70 -0,47 -0,92
- 18 009995
Таблица ЭЕР-12
Содержание окисленных форм, установленное с помощью ОФ-ЖХВР (%)
2-8°С
0 4 недели 8 недель 12 недель
ΙΡΝ-1 2,8 2,8 3,3 3,4
ΙΡΝ-2 2,5 2,9 3,4 3,4
ΙΡΝ-3 2,7 3,0 4,2 4,5
ΙΡΝ-4 2,6 2,6 3,6 3,2
ΙΡΝ-5 2,8 2,8 3,6 3,2
ΙΡΝ-6 2,5 3,1 4,5 4,4
ΙΡΝ-7 1,5 1,5 1,7 1,3
1ΡΝ-8 2,8 2,9 3,2 3,1
ΙΡΝ-9 3,3 3,4 3,4 3,6
ΙΡΝ-10 3,0 3,2 3,0 3,0
ΙΡΝ-11 2,6 2,9 2,9 2,9
25°С
0 2 недели 4 недели 8 недель 12 недель
ΙΡΝ-1 2,8 3,0 3,1 4,2 4,3
ΙΡΝ-2 2,5 3,0 3,1 3,4 4,6
ΙΡΝ-3 2,7 3,5 3,9 6,7 6,8
ΙΡΝ-4 2,6 3,0 3,1 4,7 4,8
ΙΡΝ-5 2,8 3,0 3,1 4,4 4,5
ΙΡΝ-6 2,5 3,0 3,2 5,3 5,7
ΙΡΝ-7 1,5 1,7 1,9 2,0 2,3
ΙΡΝ-8 2,8 3,1 2,9 4,1 4,3
ΙΕΝ-9 3,3 3,4 3,5 3,9 4,4
ΙΡΝ-10 3,0 3,0 3,2 3,3 3,5
ΙΡΝ-11 2,6 2,8 3,1 3,2 3,4
40°С
0 2 недели 4 недели 6 недель
ΙΡΝ-1 2,8 6,0 8,3 12,4
ΙΡΝ-2 2,5 3,7 8,7 10,7
ΙΡΝ-3 2,7 8,8 12,3 16,9
ΙΡΝ-4 2,6 4,1 6,7 10,3
ΙΡΝ-5 2,8 3,7 7,2 9,6
ΓΡΝ-6 2,5 4,9 7,6 13,3
ΙΡΝ-7 1,5 2,8 3,98 11,8
ΙΡΝ-8 2,8 3,8 7,6 10,7
ΙΡΝ-9 3,3 5,7 8,6 12,8
ΙΡΝ-10 3,0 3,6 9,3 9,7
ΙΡΝ-11 2,6 3,2 5,3 6,8
Наклоны, рассчитанные методом линейной регрессии и обобщенные в табл. ЭЕР-13. свидетельствуют о том, что композиции, содержащие Твин 20, характеризуются более высокой скоростью окисления по сравнению с композициями, содержащими Ро1охатег 188, и что степень окисления зависит от концентрации Твин 20.
Путем сравнения композиции № 9 (Твин 20+Ь-метионин) с композицией № 3 (Твин 20) и композиции № 10 (Ро1охатег 188+Ь-метионин) с композицией № 6 (Ро1охатег 188) продемонстрирована эффективность Ь-метионина в отношении ограничения окисления при различных тестированных температурах.
Таблица ЭЕР-13 Анализ методом линейной регрессии содержания окисленных форм (наклоны выражены в виде процентного содержания окисленных форм/неделю)
ΙΡΝ-1 ΙΡΝ-2 ΙΡΝ-3 ΙΡΝ-4 ΙΡΝ-5 ΙΡΝ-6 1ΡΝ-7 ΙΡΝ-8 1ΡΝ-9 ΙΡΝ- 10 ΙΡΝ- 11
2-8°С 0,06 0,08 0,17 0,07 0,05 0,17 -0,01 0,03 0,02 0,00 0,02
25 °С 0,14 0,16 0,38 0,21 0,16 0,29 0,06 0,14 0,09 0,04 0,06
40°С 1,60 1,50 2,30 1,30 1,20 1,80 1,60 1,4 1,60 1,30 0,74
- 19 009995
Таблица ЭЕР-14
Общее содержание агрегатов по данным ГФ-ЖХВР или ДСН-ПААГ (%)
2-8
0 4 недели
ΙΡΝ-1 0,8 0,5
ΙΡΝ-2 0,8 0,4
ΙΡΝ-3 1,1 0,6
1ΕΝ-4 1,2 0,9
ΙΓΝ-5 1,0 1,4
ΙΡΝ-6 1,1 1,8
ΙΡΝ-7* <3% <3%
ΙΡΝ-8 1,2 1,6
ΙΡΝ-9 1,7 1,4
ΙΡΝ-10 1,4 1,3
ΙΡΝ-И 1,4 0,9
25
0 2 недели
ΙΡΝ-1 0,8 0,4
ΙΡΝ-2 0,8 0,4
ΙΡΝ-3 1,1 0,6
ΙΡΝ-4 1,2 1,2
ΙΡΝ-5 1,0 0,6
ΙΡΝ-6 1,1 0,70
ΙΡΝ-7* <3% <3%
ΙΡΝ-8 1,2 0,8
1ΡΝ-9 1,7 0,6
ΙΡΝ-10 1,4 0,5
ΙΡΝ-11 1,4 1,1
40
0 2 недели
ΙΡΝ-1 0,8 0,50
ΙΡΝ-2 0,8 0,6
ΙΡΝ-3 1,1 0,7
ΙΡΝ-4 1,2 1,4
ΙΡΝ-5 1,0 0,9
ΙΡΝ-6 1,1 1,1
ΙΡΝ-7* <3% <3%
ΙΡΝ-8 1,2 0,8
ΙΡΝ-9 1,7 0,8
ΙΡΝ-10 1,4 0,8
ΙΡΝ-11 1,4 1,3
1°С
8 недель 12 недель
0,7 0,5
0,7 0,3
0,9 1,2
1,4 1,7
0,9 1,6
0,9 1,5
<3% <4,5%
1,2 2,0
1,7 1,2
1,3 1,3
0,4 1,7
°с .
4 недели 8 недель 12 недель
0,2 0,2 0,3
0,1 0,3 0,0
0,3 0,3 0,5
0,6 0,9 0,9
0,8 0,4 0,9
0,9 0,6 0,9
<3% <3% <4,5%
0,9 0,4 0,9
0,9 0,6 0,5
0,7 0,5 0,5
0,9 0,5 1,4
°С
4 недели 6 недель
0,4 0,9
0,6 0,8
0,53 0,6
0,6 1,1
1,1 1,4
1,2 1,4
<3% <4,5%
0,7 0,6
1,0 0,6
1,4 1,0
1,2 1,8
Наклоны, рассчитанные методом линейной регрессии и обобщенные в табл. ЭЕР-15. свидетельствуют о том, что не происходит никакого существенного увеличения общего содержания агрегатов при хранении при различных температурах.
Таблица ЭЕР-15
Анализ методом линейной регрессии общего содержания агрегатов (наклоны выражены в виде общего содержания (%) окисленных форм/неделю)
ΙΡΝ-1 ΙΡΝ-2 ΙΡΝ-3 ΙΡΝ-4 ΙΡΝ-5 ΙΡΝ-6 ΙΓΝ-8 ΙΡΝ-9 ΙΡΝ-10 ΙΡΝ-11
2-8°С -0,01 -0,03 0,01 0,04 0,04 0,01 0,05 -0,03 -0,01 0,01
25 °С -0,04 -0,05 -0,04 -0,03 -0,01 -0,03 -0,03 -0,07 -0,05 -0,01
40°С 0,01 0,01 -0,09 -0,07 0,07 0,05 -0,10 -0,15 -0,03 0,07
- 20 009995
Таблица ΌΕΡ-16
Значения рН при 2-8°С
2-8°С
0 4 недели 8 недель 12 недель 24 недели 104 недели
ΙΡΝ-1 3,7 3,7 3,7 3,7
ΙΡΝ-2 3,7 3,7 3,7 3,7
ΙΡΝ-3 3,7 3,7 3,6 3,6
ΙΡΝ-4 3,7 3,8 3,7 3,6
ΙΡΝ-5 3,7 3,7 3,7 3,7
ΙΡΝ-6 3,6 3,7 3,7 3,7 3,7
ΙΡΝ-7 3,6 3,5 3,6 3,6 3,6
ΙΡΝ-8 3,6 3,6 3,7 3,7 3,7
ΙΡΝ-9 3,6 3,7 3,6 3,7 -
ΙΡΝ-10 3,6 3,7 3,7 3,7 3,7
1ΡΝ-11 3,5 3,6 3,6 3,6 3,6 -
25°С
0 2 недели 4 недели 8 недель 12 недель 24 недели
ΙΡΝ-1 0,8 0,4 0,2 0,2 0,3
1ΡΝ-2 0,8 0,4 о,1 о,3 0,0
ΙΡΝ-3 1,1 0,6 0,3 0,3 0,5
ΙΡΝ-4 1,2 1,2 0,6 0,9 0,9
ΙΡΝ-5 1,0 0,6 0,8 0,4 0,9
ΙΡΝ-6 1,1 0,70 0,9 0,6 0,9
ΙΡΝ-7 <3% <3% <3% <3% <4,5%
ΙΡΝ-8 1,2 0,8 0,9 0,4 0,9
ΙΡΝ-9 1,7 0,6 0,9 0,6 0,5
ΙΡΝ-10 1,4 0,5 0,7 0,5 0,5
ΙΡΝ-11 1,4 1,1 0,9 0,5 1,4
40°С
0 2 недели 4 недели 6 недель
ΙΡΝ-1 0,8 0,50 0,4 0,9
ΙΡΝ-2 0,8 0,6 0,6 0,8
ΙΡΝ-3 1,1 0,7 0,53 0,6
ΙΡΝ-4 1,2 1,4 0,6 1,1
ΙΡΝ-5 1,0 0,9 1,1 1,4
ΙΡΝ-6 1,1 1,1 1,2 1,4
ΙΡΝ-7 <3% <3% <3% <4,5%
ΙΡΝ-8 1,2 0,8 0,7 0,6
ΙΡΝ-9 1,7 0,8 1,0 0,6
ΙΡΝ-10 1,4 0,8 1,4 1,0
ΙΡΝ-11 1,4 1,3 1,2 1,8
При хранении не было обнаружено никакого изменения значения рН.
Таблица ΌΕΡ-17
Осмотическое давление (ОСМ/кг)
1ΡΝ-1 0,348
ΙΡΝ-2 0,345
1ΡΝ-3 0,345
ΙΡΝ-4 0,346
ΙΡΝ-5 0,354
ΙΡΝ-6 0,358
ΙΡΝ-7 0,399
ΙΡΝ-8 0,354
ΙΡΝ-9 0,369
1ΡΝ-10 0,366
ΙΡΝ-11 0,361
- 21 009995
Осмотическое давление тестируемых композиций соответствует требуемому.
На основе результатов, полученных при разработке композиции, была выбрана следующая не содержащая ЧСА композиция:
или 88 мкг/мл интерферона β-1 а в натрий-ацетатном буфере с рН 3,5, содержащая
54,6 мг/мл маннита;
мг/мл Ро1охатег 188;
0,12 мг/мл Ь-метионина.
1.3.2. Продукты с просроченным сроком годности.
Продукты с просроченным сроком годности не применяли.
1.3.3. Физико-химические и биологические свойства.
Эти характеристики были изучены в процессе указанной выше разработки композиции.
1.4. Разработка процесса приготовления.
1.4.1. Разработка процесса приготовления.
Применяемый в настоящее время процесс производства был адаптирован для приготовления опытных партий новой композиции: лекарственную субстанцию смешивали непосредственно с ингредиентами; затем осуществляли двойную фильтрацию для имитации процесса промышленного производства, который предусматривает проведение асептической фильтрации с последующей осуществляемой в процессе приготовления (ш-Нпе) фильтрацией перед заполнением шприца. После этого шприцы заполняли вручную конечным стерильным раствором.
Как стадии фильтрации, так и заполнение шприца осуществляли в условиях ламинарного потока.
Ниже приведено описание каждой стадии процесса.
1.4.2. Предварительные расчеты.
Количество лекарственной субстанции, представляющей собой интерферон β-1α, Ό (мг), требуемое для получения раствора с концентрацией 44 мкг/мл:
Ό (мг)=44 мкг/млх90 мл=3960 мкг=3,96 мг.
Объем лекарственной субстанции, представляющей собой интерферон β-1α В (мл), соответствующей количеству Ό (мг):
В (мл)=3,96 мг:объемный титр (мг/мл).
Объем раствора эксципиента V (мл), необходимый для получения 90 мл раствора с концентрацией 44 мкг/мл:
V (мл)=90 мл-В (мл)* *плотность 6+1 г/мл.
1.4.3. Приготовление 1М раствора гидроксида натрия.
1М раствор гидроксида натрия получали в νΕΙ.
1.4.4. Приготовление 0,01М натрий-ацетатного буфера с рН 3,5.
К νΕΙ добавляли соответствующее количество ледяной уксусной кислоты и значение рН доводили до 3,5±0,2 с использованием 1М ΝαΟΗ или разбавленной 50% уксусной кислоты. Раствор доводили до конечного объема с помощью νΕΙ.
1.4.5. Приготовление раствора эксципиентов.
Рассчитанные количества эксципиентов (маннита, Твин или Ро1охатег 188, Ь-метионина) взвешивали и растворяли в необходимом количестве 0,01М натрий-ацетатного буфера с рН 3,5; затем проверяли и при необходимости регулировали значение рН до 3,5±0,2 с помощью 1М ΝαΟΗ или разбавленной 50% уксусной кислоты; после чего раствор доводили до конечной массы с помощью 0,01М натрий-ацетатного буфера.
1.4.6. Смешение с раствором лекарственной субстанции.
Требуемое количество В (г) лекарственной субстанции, представляющей собой интерферон β-1 а, добавляли к требуемому количеству раствора эксципиента V (г) и осторожно перемешивали до гомогенного состояния.
1.4.7. Первая стадия фильтрации раствора лекарственной субстанции.
После этого смешанный раствор фильтровали через нейлоновую мембрану с размером пор 0,2 мкм (типа ИШрог Ν66 0,2 мкм, 0 2,5 см, Ра11), закрепленную на держателе из нержавеющей стали, под давлением азота (максимальное давление 1 бар) и собирали в стеклянный химический стакан.
1.4.8. Вторая стадия фильтрации раствора лекарственной субстанции.
Раствор, полученный после предыдущей стадии фильтрации, фильтровали еще раз в тех же условиях через новую мембрану с размером пор 0,2 мкм.
1.4.9. Заполнение шприцев.
Стеклянные шприцы объемом 1 мл заполняли в асептических условиях 0,5 мл конечного раствора.
1.4.10. Температура в процессе приготовления.
В течение всего процесса приготовления температуру поддерживали по возможности на уровне, максимально близком к условиям охлаждения в холодильнике, путем использования охлажденной в холодильнике νΕΙ и хранения раствора эксципиентов при 2-8°С.
- 22 009995
Пример 2. Жидкая композиция интерферона β-1 а, не содержащая ЧСА, в форме нескольких доз в картриджах, пригодных для автоинжектора.
В процессе разработки новой не содержащей ЧСА композиции, предпринятой с целью исключения ЧСА из поступающего в настоящее время в продажу продукта в шприцах, возникла потребность создания продукта в картриджах в форме нескольких доз. Композиция в форме нескольких доз должна обеспечить большее удобство для пациента, позволяя осуществлять самостоятельное введение с помощью автоинжектора.
Сначала проводили изучение наиболее часто применяемых бактериостатических агентов (0,3% метакрезола, 0,5% фенола и 0,9% бензилового спирта) в сочетании с действующим веществом и сравнение с композицией в форме одной дозы в шприце, выбранной в рамках разработки препарата в форме одной дозы (44 или 88 мкг/мл интерферона β-^, 54,6 мг/мл маннита, 1 мг/мл Ро1охатег 188, 0,12 мг/мл Ь-метионина в 10 мМ натрий-ацетатном буфере, рН 3,5); при этом было установлено следующее:
включение любого из бактериостатических агентов в концентрациях, обычно используемых для предупреждения загрязнения микроорганизмами, приводит к повышению содержания окисленных форм и стимулирует резкое усиление агрегации;
использование 0,3% метакрезола и комбинации 0,5% фенола с 0,1% Ро1охатег 188 приводит к резкому усилению агрегации.
На основе информации, полученной перед созданием композиции, разработка композиции сначала была сосредоточена на применении бензилового спирта и фенола (без Ро1охатег 188), а также дополнительных бактериостатических агентов (хлорбутанола, фенилэтанола); при этом изучали также применение ЭДТК в сочетании с бензиловым спиртом: было установлено, что основными путями разложения являлись окисление и агрегация действующего вещества; было установлено, что уменьшение количества бензилового спирта в композиции приводит к увеличению срока хранения продукта.
Все остальные консерванты, тестированные на этой фазе исследования, не приводили к существенному увеличению стабильности продукта.
После завершения стадии разработки композиции были выявлены следующие перспективные композиции (композиции-кандидаты) в форме нескольких доз:
Композиция А - 264 мкг интерферона β-^, 163,8 мг маннита, 3 мг Ро1охатег 188, 0,36 мг Ь-метионина в 2,7 мл 11 мМ натрий-ацетатного буфера, рН 3,5, которую смешивали с 0,3 мл 3% бензилового спирта в νΕΙ, в результате чего получали конечную композицию в форме нескольких доз.
Композиция Б - 264 мкг интерферона β-^, 163,8 мг маннита, 3 мг Ро1охатег 188, 0,36 мг Ь-метионина, 6 мг бензилового спирта в 3 мл 10 мМ натрий-ацетатного буфера, рН 3,5.
Для каждой перспективной композиции приготавливали по три опытные партии и тестировали с помощью методов, позволяющих оценивать стабильность, в течение периода времени вплоть до 6 месяцев: для обеих перспективных композиций не было выявлено существенного разложения при хранении при 2-8°С; основной причиной разложения, которое происходило при ускоренном хранении (25°С), было окисление.
По завершении исследования были выявлены две перспективные композиции в форме нескольких доз, обладающие сопоставимым профилем стабильности:
Композиция А, представляющая собой композицию в форме нескольких доз, содержащая 0,3% бензилового спирта, которую получали путем смешения содержимого 2 картриджей (одного, содержащего действующее вещество и эксципиенты, и второго, содержащего требуемое количество бензилового спирта, для получения конечного продукта).
Композиция Б, представляющая собой готовую к применению композицию в форме нескольких доз, содержащую 0,2% бензилового спирта.
2.1. Цель исследования.
Цель этого исследования заключалась в разработке не содержащей ЧСА композиции интерферона β-^ в форме нескольких доз по 264 мкг в картриджах объемом по 3 мл, позволяющих осуществлять введение с помощью автоинжектора.
2.2. Экспериментальная часть.
2.2.1. Материалы.
Интерферон-β-1а (фирма 8егопо 8.Л.).
Маннит ΌΆΒ, Р1 Еиг, ВР, И8Р, ЕСС, Е421 (фирма Мегск).
Ледяная уксусная кислота 100% СВ (фирма Мегск).
Пеллеты гидроксида натрия СВ (фирма Мегск).
Ро1охатег 188 (Ьи1го1 Е 68 ЭЛС, иБР/ЯЕ, фирма ВЛ8Е).
Ь-метионин для биохимических исследований (фирма Мегск).
Метакрезол для синтеза (фирма Мегск).
Фенол для синтеза (фирма Мегск).
Бензиловый спирт Р1 Еиг, ВР, ΝΕ (фирма Мегск).
Хлорбутанол (фирма Л1йпс11).
- 23 009995
Фенилэтанол (фирма 81§та).
Метилпарабен натрия ВР, иЗР/ΝΕ (фирма ЕогтепЕ).
Пропилпарабен натрия ВР, иЗР/ΝΕ (фирма ЕогтепП).
Динатриевая соль ЭДТК (фирма Ника).
1,2-пропандиол высшей чистоты ΌΑβ, Рк Еиг, ВР, И8Р (фирма Мегск).
Ацетонитрил (фирма Мегск).
Трифторуксусная кислота (фирма Вакег).
Гептафтормасляная кислота (фирма Р1егсе).
2.2.2. Оборудование.
Системы ЖХВР (фирма ^а!етк).
Программное обеспечение МШешит 32 (фирма ^а!етк).
Осмометр (типа Октота! 030-Ό, фирма Сопо!ес).
ρΗ-метр (модель 654, фирма Ме!гокт).
Калиброванные пипетки (фирма СПкоп).
Нейлоновые мембраны типа ИШрог N66 0,2 мкм, ΕΤΚΝΕ, 0 4,7 см (фирма Ра11).
Нейлоновые мембраны типа ИШрог N66 0,2 мкм, ΝΚ14225, 0 14,2 см (фирма Ра11).
Держатели из нержавеющей стали, 0 4,7 см и 0 10 см (фирма ЗаЛотшк).
Контейнер из нержавеющей стали (фирма Зайотшк).
Колонка С4 5мкм (0,46x25 см) (фирма Вакег).
Колонка С4, 8ире1сокй ЬС-304, 5 мкм (0,46x25см) (фирма 8ире1со).
Колонка Τ8Κ. 620008^ХЬ (0,46x25 см) (фирма ТокоНаак).
2.3 Предварительные исследования перед созданием композиции.
Сначала проводили изучение наиболее часто применяемых бактериостатических агентов (0,3% метакрезол, 0,5% фенол и 0,9% бензиловый спирт) в сочетании с действующим веществом и различными смесями эксципиентов в конечном контейнере (картриджи объемом 3 мл): ацетатный буфер, ацетатный буфер/маннит, ацетатный буфер/маннит/Ь-Ме1/Ро1охатег 188. Изучали совместимость действующего вещества с различными средами с точки зрения окисления (с помощью ОФ-ЖХВР) и агрегации (с помощью ГФ-ЖХВР) в условиях хранения при 40°С. Обобщенные данные о композициях, изученных на различных стадиях этого предварительного исследования, представлены в табл. 1.
Влияние включения каждого бактериостатического агента сравнивали с композицией в форме одной дозы (композиция, с которой проводили сравнение, референс-композиция), отобранной в рамках разработки композиции в форме одной дозы в шприце (44 или 88 мкг/мл интерферона β-1 а, 54,6 мг/мл маннита, 1 мг/мл Ро1охатег 188, 0,12 мг/мл Ь-метионина в 10 мМ натрий-ацетатном буфере с рН 3,5).
Таблица 1
Составы композиции интерферона Ц-1а в форме нескольких доз (предварительные композиции)
Композиция Состав
Композиция, с которой проводили сравнение Асе/Мап/Р1и/Ме1 1
ц Асе/СК.
Е Асе/РН
Ж Асе/ВА
3 Асе
И Асе/Мап/СК.
К Асе/Мап/РН
Л Асе/Мап/ВА
М Асе/Мап
Н Асе/Мап/РН
О Асе/Мап/Ме11/РН
п Асе/Мап/Ме12/РН
Р Асе/Мап/Р1и/РН
с Асе/Мап/Р1и/Ме11/РН
т Асе/Мап/Р1и/Ме12/РН
У Асе/Мап/ВА
ф Асе/Мап/Ме11/ВА
X Асе/Мап/Ме12/В А
ц Асе/Мап/Р1и/ВА
ч Асе/Мап/Р1и/Ме11/ВА
ш Асе/Мап/Р1и/Ме12/ВА
Асе=10 мМ натрий-ацетатный буфер, рН 3,5; Мап=54,6 мг/мл; Р1и=1 мг/мл Ро1охатег 188; Ме!1=0,12 мг/мл Ь-метионина; Ме12=0,24 мг/мл Ь-метионина; СК=3 мг/мл метакрезола; РН=5 мг/мл фенола; ВА=9 мг/мл бензилового спирта.
- 24 009995
Разработка композиции.
На основе информации, полученной перед созданием композиции, разработка композиции сначала была сосредоточена на применении бензилового спирта и фенола; при этом изучали также применение дополнительных консервантов (хлорбутанол, фенилэтанол) и ЭДТК в сочетании с бензиловым спиртом. Композицию, с которой проводили сравнение (МБ-3). представляющую собой новую композицию интерферона β-Ιη. не содержащую ЧСА, в форме однократной дозы также приготавливали в картриджах и использовали для сравнения.
Состав (в мг/мл) композиций, разработанных на этой фазе, представлен в табл. 2-5.
Таблица 2
Композиции интерферона β-Ха в форме нескольких доз, содержащие бензиловый спирт (составы в мг/мл)
№ ΙΡΝ маннит Ро1охатег 188 Ь-Ме1 бензиловый спирт ацетатный буфер
МБ-3 (ге£.) 0,088 54,6 1 0,12 - ц.к, до 1 мл
МБ-13 0,088 54,6 I 0,12 1,5 ή.Β. до 1 мл
МБ-14 0,088 54,6 - 0,12 1,5 4.5. ДО 1 мл
МБ-15 0,088 54,6 X 0,12 3 ς.5. до 1 мл
МБ-16 0,088 54,6 - 0,12 3 Ц.5. ДО 1 МЛ
МБ-17 0,088 54,6 X 0,12 4,5 ς,Β. до 1 мл
МБ-18 0,088 54,6 - 0,12 4,5 ς.5. до 1 мл
МБ-1 0,088 54,6 1 0,12 9 ς.8. до 1 мл
МБ-2 0,088 54,6 0,12 9 Ч.5. ДО 1 мл
Таблица 3 Композиции интерферона β-Ха в форме нескольких доз, содержащие фенол (мг/мл)
№ ΙΡΝ Маннит пропиленгликоль фенол ацетатный буфер
М8-4 0,088 54,6 - 5 Я-5. до 1 мл
МБ-5 0,088 54,6 100 5 Я-8. до 1 мл
Таблица 4
Композиции интерферона β-Ха в форме нескольких доз, содержащие хлорбутанол и фенилэтанол (мг/мл)
№ ΙΡΝ маннит Ро1охашег 188 ь- Ме1 хлорбутанол фенилэтанол ацетатный буфер
МБ- 35 0,088 54,6 1 0,12 1 Я-8. до 1 мл
МБ- 34 0,088 54,6 1 0,12 - 1 Я-8. до 1 мл
МБ340 0,088 54,6 1 0,12 - 1 Ц.8. ДО 1 мл
-25 009995
Таблица 5
Композиции интерферона β-1 а в форме нескольких доз, содержащие ЭДТК (мг/мл)
№ ΙΡΝ маннит Ь-Ме! Ро1охашег 188 ЭДТК бензиловый спирт ацетатный буфер____ д.к. до 1 мл
М8-32 0,088 54,6 0,12 1 1 2
М8-33 0,088 54,6 - 1 1 2 Ц.8. ДО 1 мл
М8-36 0,088 54,6 0,12 1 0,5 1 д.8. до 1 мл
После завершения стадии разработки композиции были определены следующие перспективные композиции в форме нескольких доз:
Композиция А - 264 мкг интерферона β-1η в 2,7 мл ацетатного буфера с рН 3,5, содержащая
54,6 мг/мл маннита, 1 мг/мл Ро1охатег 188 и 0,12 мг/мл Ь-метионина, предназначенная для смешения с 0,3 мл 3% бензилового спирта в νΡΙ с получением конечной композиции в форме нескольких доз (0,3% бензилового спирта).
Композиция Б - 264 мкг интерферона Ц-1а в 3 мл ацетатного буфера с рН 3,5, содержащая
54,6 мг/мл маннита, 1 мг/мл Ро1охатег 188, 0,12 мг/мл Ь-метионина и 2 мг/мл бензилового спирта (0,2% бензилового спирта).
2.5. Тестирование эффективности консервантов.
Композиции в форме нескольких доз, содержащие различные концентрации бензилового спирта (от 0,2 до 0,9%), подвергали скринингу в отношении эффективности консервации согласно фармакопеям ЕР и И8Р.
Предварительные тесты проводили, используя в качестве индикаторов 81арйу1ососси5 аигеиз, Лзрегдй1и5 шдег и СапФИа а1Ысап§: тот факт, что кислые значения рН композиции сами по себе оказывают бактериостатическое действие на бактерии (81арйу1ососси5 аигеиз) и имеющиеся сведения о том, что некоторые штаммы СапбИа а1Ысап5 выживают даже при низких значениях рН (рН примерно 2) обусловили выбор СапШйа а1Ысап5 в качестве индикатора, имеющего решающее значение, при проведении теста. При этом применяли критерии применимости, принятые в опытах по определению эффективности консервантов согласно как фармакопеи ЕР, так и И8Р.
2.6. Перспективные композиции.
2.6.1. Композиция А.
Были приготовлены три опытные партии, содержащие примерно по 140 картриджей в партии, состав которых приведен в табл. 6.
Таблица 6
Состав композиции А интерферона Ц-1а в форме нескольких доз
ΙΡΝβ- 1° маннит Ро1охашег 188 ь- метионин 11мМ натрий-ацетатный буфер, рН 3,5
97,8 мкг 60,7 мг 1,11 мг 0,13 мг д.5, до 1,0 мл
Действующее вещество смешивали с раствором эксципиентов и затем фильтровали через нейлоновую мембрану с размером пор 0,22 мкм; картриджи заполняли, используя 2,7 мл конечного раствора. Отбирали образцы до, после фильтрации и после заполнения для мониторинга потерь действующего вещества в этом процессе.
Образцы помещали на хранение и тестировали в отношении стабильности при хранении при 2-8°С (6 месяцев), 25±2°С (3 месяца) и 40±2°С (1 месяц). Приготавливали шесть опытных партий 3% бензилового спирта в \νΕΙ. предназначенных для смешивания с находящимся в картриджах действующим веществом, составы партий приведены в табл. 7.
Таблица 7
Состав, содержащий 3% бензиловый спирт в νΡΙ
Бензиловый спирт ΨΡΙ
30 мг д.8, до 1,0 мл
Необходимое количество бензилового спирта добавляли к νΡΙ и затем фильтровали через мембрану типа Эигароге с размером пор 0,22 мкм; затем картриджи заполняли продуктом объемом 0,5 мл и окончательно стерилизовали путем автоклавирования.
- 26 009995
Образцы помещали на хранение при 25±2°С в течение периода времени вплоть до 1 месяца и определяли содержание бензилового спирта и значение рН.
2.6.2. Композиция Б.
Приготавливали три опытные партии объемом примерно 500 картриджей/партию, состав которых приведен в табл. 8.
Таблица 8
Состав композиции Б интерферона β-1 а в форме нескольких доз
ΙΡΝβ-1 маннит Ро1охатег 188 ьметионин бензиловый спирт 10мМ натрийацетат, рН 3,5
88 мкг 54,6 мг 1 мг 0,12 мг 2 мг д.з. до 1,0 мл
Действующее вещество смешивали с раствором эксципиентов и затем фильтровали через нейлоновую мембрану с размером пор 0,22 мкм; картриджи заполняли 3 мл конечного раствора. Отбирали образцы до, после фильтрации и после заполнения для мониторинга потерь действующего вещества в этом процессе.
Образцы помещали на хранение и тестировали в отношении стабильности при 2-8°С (6 месяцев), 25±2°С (6 месяцев) и 40±2°С (3 недели).
2.6.3. Тест по оценке эффективности консервантов.
Для обеих перспективных композиций оценивали эффективность консервантов согласно фармакопеям ЕР и И8Р.
2.7. Аналитические тесты и методы.
Для мониторинга стабильности опытных композиций применяли описанные ниже аналитические тесты и методы.
Измерение рН (измерение потенциометрическим методом).
Количественный анализ белка (ОФ-ЖХВР).
Количественный анализ белка осуществляли на колонке С4, \У|бс-Рогс Ви1у 1 5 мкм (фирма Вакег) при длине волны 214 нм и скорости элюирования 1 мл/мин с использованием указанных ниже подвижной фазы и градиента:
А=вода/трифторуксусная кислота 0,1%-Б=ацетонитрил/трифторуксусная кислота 0,1%-В=ацетонитрил.
Градиент:
0 мин 70% А 30% В 0%С
5,0 мин 70% А 30% В 0%С
6,0 мин 58% А 42% В 0%С
15,0 мин 57% А 43% В 0%С
30,0 мин 46% А 54% В 0%С
35,0 мин 45% А 55% В 0%С
40,0 мин 40% А 60% В 0% с
40,1 мин 20% А 80% В 0%С
45,0 мин 20% А 80% В 0%С
45,1 мин 0% А 0%В 100% с
50,0 мин 0% А 0%В 100% с
50,1 мин 70% А 30% В 0%С
65,0 мин 70% А 30% В 0%С
Время погона = 65 мин.
Образцы анализировали путем введения 100 мкл либо исходных образцов (образцы с 44 мкг/мл), либо после их разбавления (1:1) эквивалентным объемом плацебо (для образцов с 88 мкг/мл).
Количественную оценку образцов осуществляли с использованием стандартной кривой в диапазоне 0,0125-0,2 мг/мл, полученной для стандартного референс-продукта.
Окисленные формы (ОФ-ЖХВР).
Количественную оценку окисленных форм осуществляли на колонке С4, 8ире1со511 ЬС-304 (фирма 8ире1со), термостатированной при 40°С, при длине волны 208 нм и элюирование осуществляли при скорости потока 1 мл/мин с использованием указанных ниже подвижной фазы и градиента:
А=вода 60%/ацетонитрил 40%/гептафтормасляная кислота 0,14%-Б=вода 20%/ацетонитрил 80%/гептафтормасляная кислота 0,14%-В=вода 20%/ацетонитрил 80%/трифторуксусная кислота 0,1%.
- 27 009995
Градиент:
0’ 70%А 30%В 0%С
5’ 70%А 30%В 0%С
58’ 62%А 38%В 0%С кривая 6
63’ 0%А 100%В 0%С кривая 1
68’ 0%А 0%В 100%С кри
69’ 70%А 30%В 0%С кривая 6
Время погона: 96 мин (70 мин+уравновешивание в течение 26 мин).
Образцы анализировали в исходном виде путем введения 200 мкл (для образцов с 88 мкг/мл) или 400 мкл (для образцов с 44 мкг/мл).
Общее содержание агрегатов (ГФ-ЖХВР).
Обнаружение общего содержания агрегатов осуществляли на колонке типа ТЗК С20008^ХЬ (фирма ТокоНаак); элюирование проводили с использованием изократической формы при 0,5 мл/мин с использованием ацетонитрила:воды (30:70)+0,2% трифторуксусной кислоты при длине волны 214 нм.
Время погона = 20 мин.
Образцы анализировали в исходном виде путем введения 100 мкл (для образцов с 88 мкг/мл) или 200 мл (для образцов с 44 мкг/мл).
Биологическая активность (биологический анализ ίη νίίτο).
Биологическую активность оценивали с помощью анализа антивирусной активности, основанном на определении индуцируемого ΙΕΝ-β защитного действия в отношении клеток (^КН-клетки человеческой амниотической ткани) от цитопатического воздействия вируса (вирус везикулярного стоматита).
Осмотическое давление (измерение криоскопическим методом).
Измерение осмотического давления осуществляли путем измерения криоскопическим методом, основанного на определении понижения точки замерзания тестируемого раствора.
Анализ бензилового спирта (газовая хроматография (ГХ)).
В ГХ-методе (метод газовой хроматографии) для обнаружения бензилового спирта применяли подход, основанный на одноточечной калибровке с использованием в качестве стандарта бензилового спирта, поступающего в продажу от фирмы Мегск. В дополнение к этому использовали внутренний стандарт (фенилэтиловый спирт) для стандартизации площадей пиков обоих тестируемых образцов, раствора контрольного образца и стандартного раствора. Анализ проводили на колонке из нержавеющей стали размером 6 футовх2 мм (внутренний диаметр) с 10% СагЬо\\'ах 20М на супелкопорте 80/100 меш. В качестве детектора применяли ЕГО (пламенно-ионизационный детектор). Результаты выражали в миллиграммах бензилового спирта на 1 мл.
2.7.1. Результаты.
2.7.1.1. Предварительная композиция.
Содержание окисленных форм и общее содержание агрегатов, выявленных в стрессовых условиях (40°С), представлены в табл. 9 и 10.
- 28 009995
Таблица 9 Содержание окисленных форм (в %) в композициях интерферона β-1 а в форме нескольких доз после хранения при 40°С (по данным ОФ-ЖХВР)
Композиция Состав Т=0 Хранение в течение 3 дней при 4(ГС Хранение η течение 6 диен ври 4(РС
Композиция, с которой проводили сравнение 3.0 4.2
д Асе/СК 2,8 2,7 -
Е АсЕ/ГН 2,6 3,5 -
Ж Асе/ВА 2,6 6,3 -
3 Асе 3,6 2,7 -
И Асе/Мап/СК 2,3 3,0 -
к Асс/Мап/РН 3,6 2^5 . -
л Асе/Мап/Ва 4,0 4,7 -
м Асе/Мап 2,9 2,3 -
; Н Асе/Мап/РН 2,9 6,3
О Асе/Мап/Ме11/РН 2,7 5,3
П Лсе/Мап/Ме12/РН 2,5 4,9
Р Асе/Мап/Р 1и/Р11 2,3 - 6,8
С Асе/Мап/Р1п/Мег 1 /РН 2,2 7,2
Г Асс/Маи/Ρ 1и/Ме(2/РН 2,1 4,2
У Асс/Мап/Ва 2,6 5.0
Ф Лсе/Мап/МеН/Ва 2,7 5,0
X Аее/Мап/Ме12/В а 2,5 4,8
п Асе/Мап/Р1ц/Ва 2,5 5,0
ч Асе/Мап/Р1ц/Ме( 1/Ва 2,6 5,(1
ш Асе/М аи/Р 1и/Мег2/В а 3,0 6.2
Асе=10 мМ натрий-ацетатный буфер с рН 3,5; Мап=54,6 мг/мл; Р1и=1 мг/мл
Ро1охатег 188; Ме11=0.12 мг/мл Ь-метионина; Ме!2=0,24 мг/мл Ь-метионина; СК=3 мг/мл метакрезола; РН=5 мг/мл фенола; ВА=9 мг/мл бензилового спирта.
Таблица 10
Общее содержание (в %) агрегатов в композициях интерферона β-Ха в форме нескольких доз после хранения при 40°С (по данным ОФ-ЖХВР)
Композиция Состав Т=0 Хранение в течение 3 дней при 40°С Хранение в течение 6 дней при 40°С
Композиция, с которой проводили сравнение 3,2 3,2
д Асе/СК 1,8 9,4 8,5
Е АсЕ/РН 2,2 39,8 9,4
Ж Асе/ВА 2,0 4,7 7,2
3 Асе 2,8 2,5 1.7
И Асе/Мап/СК 2,4 15,6 20,1
К Асе/Мап/РН 2,0 2,3 2,1
л Асе/Мап/Ва 2,3 3,6 4,5
м Асе/Мап 3,0 3,2 2,3
н Асе/Мап/РН 2,2 4,4
О Асе/Мап/Ме( 1 /РН 2,2 5,8
п Асе/Мап/Ме12/РН 2,3 8,8
Р Асе/Мап/Р1и/РН 2,2 40,3
с Асе/Мап/Р1и/Ме(1/РН 2,3 46,3
т Асе/Мап/Р1и/Ме12/РН 2,3 35,9
У Асе/Мап/Ва 2,5 3,4
ф Асе/Мап/Ме11 /В а 2,6 5,4
X Асе/Мап/Ме(2/В а 1,4 3,0
ц Асе/Мап/Р1и/Ва 2,9 4,8
ч Асе/Мап/Р1и/Ме11/Ва 2,9 5,8
ш Асе/Мап/Р1и/Ме(2/Ва 1,6 5,8
Асе=10 мМ натрий-ацетатный буфер с рН 3,5; Мап=54,6 мг/мл; Р1и=1 мг/мл Ро1охашег 188; Ме11=0.12 мг/мл Ь-метионина; Ме12=0.24 мг/мл Ь-метионина; СК=3 мг/мл метакрезола; РН=5 мг/мл фенола; ВА=9 мг/мл бензилового спирта.
-29009995
Включение каждого из бактериостатических агентов в концентрациях, которые обычно применяют для предупреждения микробного заражения, приводило к увеличению содержания окисленных форм и стимулировало резкое увеличение содержания агрегатов по сравнению с композицией в форме одной дозы (композиция, с которой проводили сравнение, референс-композиция).
Комбинация 0,5% фенола и 0,1% Ро1охатег 188 оказывала отрицательное влияние на стабильность продукта, поскольку при ее использовании происходила примерно 40% агрегация (композиции Р-С-Т).
При дальнейшей разработке 0,3% метакрезол исключали из-за отрицательного воздействия на стабильность продукта в результате увеличения содержания агрегатов (композиция И).
2.7.1.2. Разработка композиции.
Все данные о стабильности (необработанные данные) обобщены в соответствующих таблицах; для оценки данных применяли анализ методом линейной регрессии.
2.7.1.2.1. Композиции, содержащие бензиловый спирт.
Наиболее высокая концентрация бензилового спирта (0,9%) оказывала отрицательное воздействие на стабильность продукта как с точки зрения содержания окисленных форм, так и агрегатов, что проиллюстрировано на фиг. 1-6.
В стрессовых условиях (40°С) увеличение окисления происходило в большей степени в композициях, содержащих 0,9% бензилового спирта (М8-1 и М8-2), что проиллюстрировано на фиг. 1.
В условиях ускоренного хранения (25°С) увеличение окисления для всех композиций, содержащих бензиловый спирт, было выше, чем в композиции, не содержащей бензиловый спирт (М8-3, композиция, с которой проводили сравнение), что проиллюстрировано на фиг. 2.
При продолжительном хранении (2-8°С) были выявлены более высокие скорости окисления в композициях, содержащих 0,9% бензилового спирта (М8-1 и М8-2); сопоставимые скорости разложения были выявлены для композиций, в которых содержание бензилового спирта составляло менее 0,45% (фиг. 3).
В отношении содержания агрегатов было установлено следующее.
В стрессовых условиях (40°С) для композиций, содержащих 0,9% бензилового спирта (М8-1 и М8-2), было выявлено увеличение содержания агрегатов (фиг. 4).
В условиях ускоренного хранения и при продолжительном хранении (25 и 2-8°С) для всех композиций не было обнаружено увеличения содержания агрегатов, что проиллюстрировано на фиг. 5 и 6.
Для композиций, содержащих 0,9% бензилового спирта (М8-1 и М8-2), при хранении при 40°С было обнаружено снижение биологической активности; указанное явление не было обнаружено при хранении тех же самых образцов при 25 и 2-8°С.
При хранении при всех температурах не было обнаружено уменьшения титра.
При хранении при всех температурах не было обнаружено изменения значения рН.
2.7.1.2.2. Композиции, содержащие альтернативные бактериостатические агенты (фенол, хлорбутанол, фенилэтанол).
Фенол (композиции М8-4 и М8-5) оказывал отрицательное влияние на стабильность продукта с точки зрения содержания окисленных форм, в то время как композиции, содержащие хлорбутанол (М8-35) и фенилэтанол (М8-34 и М8-34Ь), обладали стабильностью, сопоставимой со стабильностью раствора, с которым производили сравнение (М8-3, не содержащий бактериостатического агента), что проиллюстрировано на фиг. 7 и 8.
Касательно общего содержания агрегатов было выявлено резкое увеличение содержания агрегатов в стрессовых условиях (40°С) для композиций, содержащих фенол (М8-4 и М8-5), что проиллюстрировано на фиг. 9; при более низких температурах (25 и 2-8°С) не было выявлено увеличения содержания агрегатов.
2.7.1.2.3. Композиции, содержащие ЭДТК.
Добавление ЭДТК к композициям, содержащим 0,1-0,2% бензилового спирта (М8-32, М8-33, М8-36), не приводило к понижению уровня окисления (фиг. 10); в условиях ускоренного для композиций, содержащих 0,1% ЭДТК и 0,2% бензилового спирта (М8-32, М8-33) (фиг. 11), было обнаружено увеличение содержания агрегатов; сопоставимый уровень разложения был обнаружен при 2-8°С.
2.7.1.2.4 Результаты исследования эффективности консервантов.
Результаты скринингового исследования показали, что критерии фармакопей И8Р и ЕР удовлетворяются, по меньшей мере, для концентраций бензилового спирта, равных или превышающих 0,3% (в отношении СапФба а1Ь1сапк).
2.8. Композиции-кандидаты.
Оценку всех данных проводили следующим образом: для каждой партии проводили анализ методом линейной регрессии с последующим ковариантным анализом (значение Р>0,25) для оценки вариабельности между партиями, если не было обнаружено вариабельности при хранении, то не проводили формального статистического анализа.
- 30 009995
2.8.12. Композиция-кандидат А.
2.8.1.1. Выход в процессе приготовления.
Выход интерферона β-1 а в находящихся в процессе приготовления образцах (до и после фильтрации, конечный продукт), отобранных в процессе приготовления композиции-кандидата А, обобщены в табл. 11; при этом не было обнаружено существенной потери действующего вещества.
Таблица 11
Выход интерферона β-1 а (%) в процессе приготовления композиции-кандидата А
КТ-01 КТ-02 КТ-03
После 1-й фильтрации 98,6 99,7 98,0
После 2-й фильтрации 98,3 98,5 103,8
Конечный продукт в картридже 98,4 97,5 100,7
2.8.1.2. Стабильность действующего вещества.
Были рассчитаны осредненный наклон кривой и значение постоянного члена в уравнении регрессии для содержания окисленных форм в трех партиях, которые хранили при различных температурах; результаты статистического анализа приведены в табл. 12.
Таблица 12
Результаты статистического анализа композиции-кандидата А интерферона β-^ в форме нескольких доз (окисленные формы)
2-8°С 25°С 40°С
Осредненный наклон (%/недели) Осредненное значение постоянного члена в уравнении регрессии (%) Осредненный наклон (%/недели) Осредненное значение постоянного члена в уравнении регрессии (%) Осредненный наклон (%/недели) Осредненное значение постоянного члена в уравнении регрессии (%)
0,063 2,73 0,322 2,67 2,206 2,51
Не было обнаружено значительной вариабельности общего содержания агрегатов и их не анализировали и поэтому не осуществляли формальный статистический анализ. Различные содержания агрегатов для трех партий были обусловлены различными объемами, применявшимися для приготовления.
2.8.2. Композиция-кандидат Б.
2.8.2.1. Выход в процессе производства.
Выходы интерферона β-^ в образцах, отобранных в процессе производства (до и после фильтрации, в конечном продукте) композиции-кандидата Б, обобщены в табл. 13; не обнаружено существенных потерь действующего вещества.
Таблица 13
Выход интерферона β-^ (в %) в процессе производства композиции-кандидата Б
М8-01 М8-02 М8-03
После первой фильтрации 100,7 116,5 97,38
После второй фильтрации 101,2 114,9 98,82
Конечный продукт в картридже 100,6 112,0 95,76
2.8.2.2. Стабильность действующего вещества.
Статистический анализ содержания окисленных форм показал следующее.
Для 3 партий, хранившихся при 40°С, были рассчитаны осредненный наклон кривой и значение постоянного члена в уравнении регрессии: осредненный наклон кривой составлял 1,42%/неделю и осредненное значение постоянного члена в уравнении регрессии составляло 2,72%.
Для 3 партий, хранившихся при 25°С, нельзя было рассчитать осредненный наклон (значение Р=0,095); таким образом, применяли подход, основанный на использовании наихудшего варианта (партия Μ 8-03): после хранения в течение 1 месяца было выявлено увеличение содержания окисленных форм, составляющее 1,17% (0,27%/неделю).
Для 3 партий, хранившихся при 2-8°С, нельзя было рассчитать осредненный наклон (значение Р=0,016); таким образом, применяли подход, основанный на использовании наихудшего варианта (партия Μ8-03): после хранения в течение 1 месяца было выявлено увеличение содержания окисленных
- 31 009995 форм, составляющее 0,2% (0,047%/неделю).
Не было обнаружено значительной вариабельности уровня всех агрегатов и поэтому не осуществляли формальный статистический анализ.
Не было обнаружено никакого уменьшения биологической активности при хранении даже в стрессовых условиях (40°С).
2.9. Выводы.
После завершения исследования были идентифицированы две композиции-кандидата в форме нескольких доз, обладающие сопоставимым профилем.
Композиция-кандидат Б, представляющая собой готовую к применению композицию в форме нескольких доз, содержащую 0,2% бензилового спирта.
Композиция-кандидат А в форме нескольких доз, содержащая 0,3% бензилового спирта, которую получают путем смешения содержимого 2 картриджей (один из которых содержит активную субстанцию и эксципиент, а другой содержит необходимое для получения конечной композиции количество бензилового спирта).
Эти перспективные растворы тестировали также при более высоких значениях рН (4,5±0,2), при этом не было выявлено никаких существенных изменений профиля стабильности. При создании изобретения было установлено, что применение таких несколько более высоких значениях рН композиций, содержащих ΙΕΝ, повышает местную переносимость подкожных инъекций. Таким образом, указанные выше 2 раствора-кандидата с рН 4,5 или 4,7 могут обладать дополнительными преимуществами с точки зрения удобства для пациента при соблюдении режима и схемы лечения.
Пример 3. Метод приготовления композиции-кандидата А в форме нескольких доз.
Сначала получали 1н. раствор гидроксида натрия путем растворения 20 г гранул гидроксида натрия в 500 г νΕΙ.
Затем приготавливали 0,011М натрий-ацетатный буфер с рН 3,5±0,2 путем добавления 1,32 г ледяной уксусной кислоты к примерно 1,800 г νΕΙ. Значение рН раствора доводили до рН 3,5±0,2 с помощью 1н. №1ОН. Затем раствор доводили до конечной массы 2000 г. После этого значение рН снова доводили до 3,5±0,2 с помощью 1н. №1ОН или 50% разбавленной уксусной кислоты. Затем раствор доводили до конечной массы 2000 г.
Конечный раствор приготавливали следующим образом.
Взвешивали рассчитанные количества эксципиентов и растворяли в требуемом количестве 11 мМ натрий-ацетатного буфера с рН 3,5±0,2, проверяли значение рН и при необходимости регулировали; затем добавляли требуемое количество ^-Ь-интерферона-β-1а (полученного рекомбинантным путем из клеток линии СНО), конечную массу получали путем добавления 11 мМ натрий-ацетатного буфера с рН 3,5±0,2.
мл этого конечного раствора отбирали для тестирования с помощью количественной ОФ-ЖХВР (образец ДФ = до 1-й фильтрации).
Затем конечный раствор фильтровали через мембрану с размером пор 0,2 мкм, закрепленную на держателе из нержавеющей стали, и раствор собирали в стеклянный химический стакан.
мл этого конечного раствора отбирали для тестирования с помощью количественной ОФ-ЖХВР.
Конечный раствор фильтровали, как описано в предыдущем пункте, через вторую мембрану с размером пор 0,2 мкм, закрепленную на держателе из нержавеющей стали.
Отбирали образец указанного конечного раствора объемом 1 мл для тестирования с помощью количественной ОФ-ЖХВР.
Стеклянные картриджи объемом 3 мл заполняли 2,7 мл конечного раствора и закрывали крышкой.
Этот раствор представляет собой раствор, готовый для смешения с содержимым картриджа, содержащим 3% раствор бензилового спирта в νΕΙ.
Пример 4. Метод получения композиции-кандидата Б в форме нескольких доз.
Сначала приготавливали 1н. раствор гидроксида натрия путем растворения 20 г гранул гидроксида натрия в 500 г νΕΙ.
Затем приготавливали 0,011М натрий-ацетатный буфер с рН 3,5±0,2 путем добавления 1,32 г ледяной уксусной кислоты к примерно 1800 г νΕΙ. Значение рН раствора доводили до рН 3,5±0,2 с помощью 1н. №1ОН. После этого раствор доводили до конечной массы 2000 г. Затем еще раз доводили значение рН до 3,5±0,2 с помощью 1н. №1ОН или 50% разбавленной уксусной кислоты. После этого раствор доводили до конечной массы 2000 г.
Конечный раствор приготавливали следующим образом.
Взвешивали рассчитанные количества эксципиентов и растворяли в требуемом количестве 10 мМ натрий-ацетатного буфера, рН 3,5±0,2, проверяли и регулировали при необходимости значение рН раствора; затем добавляли требуемое количество ^-Ь-интерферона-β-1а (полученного рекомбинантным путем из клеток СНО); конечную массу получали путем добавления 10 мМ натрий-ацетатного буфера до рН 3,5±0,2.
- 32 009995
Отбирали образец этого конечного раствора объемом 1 мл для тестирования с помощью количественной ОФ-ЖХВР.
Затем конечный раствор фильтровали через мембрану с размером пор 0,2 мкм, закрепленную на держателе из нержавеющей стали и раствор собирали в стеклянный химический стакан.
мл этого конечного раствора отбирали для тестирования с помощью количественной ОФ-ЖХВР.
Конечный раствор фильтровали, как описано в предыдущем пункте, через вторую мембрану с размером пор 0,2 мкм, закрепленную на держателе из нержавеющей стали.
Отбирали образец указанного конечного раствора объемом 1 мл для тестирования с помощью ОФЖХВР.
Стеклянные картриджи объемом 3 мл заполняли 2,7 мл конечного раствора и закрывали крышкой.
Библиография
81ибу Сгоир., Т1е Ьаисе!; 352, 1998, с. 1498-1504.
С1едд и ВгуаШ, Ехр. Θρίη. РагтасоЛег; 2(4), 2001, с. 623-639.
Иегупк К. и др., №11иге; 285, 1980, с. 542-547.
ЕатШеИ Р.С., КиЬшк1еш 8. и РекЛа 8. А Сопуешеп! апб Кар1б СуЛраЛбс ЕГГес! 1п1иЬЛоп Аккау Гог 1п1егГегоп в МеЛобк ίη Еп7уто1оду, том 78, под ред. 8. РекЛа, Асабетбс Ргекк, №\ν Уогк, 1981, р. 387-394;
Нийдгеп С., МЛсй И.К., ХУеПапб О., 8а11Ьегд М. Т1е апйукаб сотроипб пЬаушп тобикИек Ле Т 1е1рег (Т1) 1/Т12 киЬке! Ьа1апсе ш Нера1111к В апб С У1гик-кресШс 1ттипе гекропкек. б. Сеп. У1го1.; 79, 1998, р. 2381-2391.
МсСогтбск 6.В., Ктд Ι.6., \УеЬЬ Р.А., 8спЬпег С.Ь., Сгауеп К.В., бойпкоп К.М., ЕШоИ Ь.Н., Ве1топ1ХУППатк К. Ьакка Геуег. ЕГГесЛ'е Легару νίΛ пЬаушп. Ν. Епд1. б. Меб., 314(1), 2 _)апиагу, 1986, р. 20-26.
Магк Ό.Ρ. и др., Ргос. №Л Асаб. 8ск И8А, 81 (18), 1984, р. 5662-5666.
Рек1ка 8. 1п1егГегопк 81апбагбк апб Сепега1 АЬЬгеу1абопк, т МеЛобк ш Еп/утокду, Ьу еб. 8. РекЛа, Асабетбс Ргекк, №\ν Уогк, 119, 1986, р. 14-23.
КиЬтк1ет 8., РатШеЛ Р.С. и РекЛа 8. Сопуешеп! Аккау Пог 1п1егГегопк. б. У1го1., 37, 1981, р. 755-758. 81ерагб Н.М. и др., №11иге; 294, 1981, с. 563-565.

Claims (31)

1. Стабилизированная не содержащая ЧСА жидкая фармацевтическая композиция интерферона-β (ΙΡΝ-β), где указанный препарат представляет собой раствор, содержащий буфер, поверхностноактивное вещество, агент для придания изотоничности и антиоксидант, причем указанный антиоксидант является метионином
2. Композиция по п.1, в которой ΙΡΝ-β представляет собой человеческий рекомбинантный ΙΡΝ-β.
3. Композиция по одному из предыдущих пунктов, в которой буфер присутствует в количестве, достаточном для поддержания значения рН композиции в пределах плюс или минус 0,5 единиц от конкретного значения рН, где конкретное значение рН составляет примерно от 3,0 до примерно 5,0.
4. Композиция по одному из предыдущих пунктов, в которой значение рН составляет 3,5±0,2.
5. Композиция по одному из предыдущих пунктов, в которой значение рН составляет 4,5±0,2.
6. Композиция по одному из предыдущих пунктов, в которой буфер присутствует в концентрации примерно от 5 до 500 мМ.
7. Композиция по одному из предыдущих пунктов, в которой буфер присутствует в концентрации примерно 10 мМ.
8. Композиция по одному из предыдущих пунктов, в которой буфер представляет собой ацетатный буфер.
9. Композиция по одному из предыдущих пунктов, в которой агент для придания изотоничности представляет собой маннит.
10. Композиция по одному из предыдущих пунктов, в которой агент для придания изотоничности присутствует в концентрации примерно от 0,5 до примерно 500 мг/мл.
11. Композиция по одному из предыдущих пунктов, в которой агент для придания изотоничности присутствует в концентрации примерно 55 мг/мл.
12. Композиция по одному из предыдущих пунктов, в которой поверхностно-активное вещество выбрано из Р1игошс® Р77, РЛгошс Р87, РЛгошс Р88 и Р1игошс Р68.
13. Композиция по одному из предыдущих пунктов, в которой поверхностно-активное вещество представляет собой Р1игошс Р68.
14. Композиция по одному из предыдущих пунктов, в которой поверхностно-активное вещество присутствует в концентрации от примерно 0,01 до примерно 10 мг/мл.
15. Композиция по одному из предыдущих пунктов, в которой поверхностно-активное вещество присутствует в концентрации примерно 1 мг/мл.
16. Композиция по одному из предыдущих пунктов, в которой антиоксидант присутствует в концентрации примерно от 0,01 до примерно 5,0 мг/мл.
- 33 009995
17. Композиция по одному из предыдущих пунктов, в которой антиоксидант присутствует в концентрации примерно 0,1 мг/мл.
18. Композиция по одному из предыдущих пунктов, в которой интерферон присутствует в концентрации примерно от 10 до примерно 800 мкг/мл.
19. Композиция по одному из предыдущих пунктов, в которой интерферон присутствует в концентрации примерно 22, 44, 88 или 264 мкг/мл.
20. Композиция по одному из предыдущих пунктов, представляющая собой водный раствор.
21. Композиция по одному из предыдущих пунктов, дополнительно содержащая бактериостатический агент.
22. Композиция по п.21, в которой бактериостатический агент представляет собой бензиловый спирт.
23. Композиция по п.21 или 22, в которой бактериостатический агент присутствует в концентрации примерно от 0,1 до примерно 2,0%.
24. Композиция по любому из пп.21-23, в которой бактериостатический агент присутствует в концентрации примерно 0,2 или 0,3%.
25. Способ приготовления стабилизированной не содержащей ЧСА жидкой фармацевтической композиции по пп.1-24, заключающийся в том, что к забуференному раствору добавляют рассчитанные количества поверхностно-активного вещества, антиоксиданта и агента, придающего изотоничность, и затем добавляют интерферон (ΙΕΝ-β).
26. Контейнер, герметически закрытый в стерильных условиях и пригодный для хранения до употребления, содержащий жидкую фармацевтическую композицию по одному из пп.1-24.
27. Контейнер по п.26, который представляет собой предварительно заполненный шприц для введения одной дозы.
28. Контейнер по п.26, который представляет собой пузырек.
29. Контейнер по п.26, который представляет собой картридж для автоинжектора.
30. Контейнер по п.27 или 28, который представляет собой контейнер для введения одной или нескольких доз.
31. Набор для введения нескольких доз фармацевтической композиции по одному из пп.20-23, который представляет собой первый контейнер, заполненный фармацевтической композицией по любому из пп.1-21, и второй картридж, заполненный раствором бактериостатического агента.
EA200501699A 2003-05-01 2004-04-29 Стабилизированные жидкие композиции интерферона, не содержащие человеческий сывороточный альбумин EA009995B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP03101210 2003-05-01
US53016903P 2003-12-17 2003-12-17
PCT/EP2004/004806 WO2004096263A2 (en) 2003-05-01 2004-04-29 Human serum albumin-free stabilized interferon liquid formulations

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200501699A1 EA200501699A1 (ru) 2006-06-30
EA009995B1 true EA009995B1 (ru) 2008-06-30

Family

ID=36908159

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200501699A EA009995B1 (ru) 2003-05-01 2004-04-29 Стабилизированные жидкие композиции интерферона, не содержащие человеческий сывороточный альбумин
EA200800327A EA200800327A1 (ru) 2003-05-01 2004-04-29 Стабилизированные жидкие композиции интерферона, не содержащие человеческий сыворотный альбумин

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200800327A EA200800327A1 (ru) 2003-05-01 2004-04-29 Стабилизированные жидкие композиции интерферона, не содержащие человеческий сыворотный альбумин

Country Status (29)

Country Link
US (1) US8309069B2 (ru)
EP (1) EP1617861B1 (ru)
JP (2) JP4870550B2 (ru)
KR (1) KR101116058B1 (ru)
CN (1) CN1816347B (ru)
AR (1) AR044147A1 (ru)
AU (2) AU2004233603B2 (ru)
BR (1) BRPI0410488B8 (ru)
CA (1) CA2521560A1 (ru)
DK (1) DK1617861T3 (ru)
EA (2) EA009995B1 (ru)
ES (1) ES2417061T3 (ru)
HK (1) HK1088847A1 (ru)
HR (1) HRP20130512T1 (ru)
IL (1) IL171709A (ru)
ME (1) ME00404B (ru)
MX (1) MXPA05011718A (ru)
MY (1) MY151121A (ru)
NO (1) NO335674B1 (ru)
NZ (2) NZ566625A (ru)
PL (1) PL1617861T3 (ru)
PT (1) PT1617861E (ru)
RS (1) RS52869B (ru)
SG (1) SG159389A1 (ru)
SI (1) SI1617861T1 (ru)
TW (1) TWI272948B (ru)
UA (2) UA80331C2 (ru)
WO (1) WO2004096263A2 (ru)
ZA (2) ZA200508124B (ru)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1691825B1 (en) * 2003-12-11 2011-09-28 Ares Trading S.A. Stabilized interferon liquid formulations
US7879320B2 (en) * 2004-05-17 2011-02-01 Ares Trading S.A. Hydrogel interferon formulations
JP2008500995A (ja) * 2004-06-01 2008-01-17 アレス トレーディング ソシエテ アノニム タンパク質安定化法
UA92146C2 (ru) * 2004-06-01 2010-10-11 Эйрэс Трейдинг С.А. Стабилизированная жидкая композиция, которая содержит интерферон
DK1951395T3 (da) * 2005-09-14 2012-04-02 Ares Trading Sa Fremgangsmåde til kvantitativ bestemmelse af poloxamerer
JP2009537605A (ja) 2006-05-24 2009-10-29 メルク セローノ ソシエテ アノニム 多発性硬化症を治療するためのクラドリビン・レジメン
WO2008066322A1 (en) * 2006-11-28 2008-06-05 Daewoong Co., Ltd. A stable hsa-free and antioxidant-free pharmaceutical composition comprising interferon-beta
JPWO2008065752A1 (ja) * 2006-11-30 2010-03-04 国立大学法人北海道大学 ｄｉＲＮＡを有効成分とする免疫治療用薬剤
SI2134353T1 (sl) 2007-03-30 2017-03-31 Xisle Pharma Ventures Trust Dvofazni sestavek lipidnih veziklov in postopek za zdravljenje cervikalne displazije z intravaginalnim dajanjem
WO2008145323A1 (en) * 2007-05-31 2008-12-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Pharmaceutical formulation for interferons
DK2234645T3 (da) * 2007-12-20 2012-07-09 Merck Serono Sa Peg-interferon-beta-formuleringer
EA201590790A1 (ru) 2012-10-26 2015-08-31 Люпин Лимитед СТАБИЛЬНАЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ОСНОВЕ PEG-ИНТЕРФЕРОНА АЛЬФА-2b
US10159646B2 (en) 2013-08-12 2018-12-25 Altum-Avro Pharma Partnership Biphasic lipid-vesicle compositions and methods for treating cervical dysplasia by intravaginal delivery
US8986732B2 (en) 2013-08-12 2015-03-24 Helix Biopharma Corporation Biphasic lipid-vesicle compositions and methods for treating cervical dysplasia by intravaginal delivery
EP3200767A1 (en) * 2014-09-23 2017-08-09 F.Hoffmann-La Roche Ag Stable, benzyl alcohol-free aqueous solution formulations containing alpha-type interferon
US9750785B2 (en) 2015-01-30 2017-09-05 Par Pharmaceutical, Inc. Vasopressin formulations for use in treatment of hypotension
US9937223B2 (en) 2015-01-30 2018-04-10 Par Pharmaceutical, Inc. Vasopressin formulations for use in treatment of hypotension
US9687526B2 (en) 2015-01-30 2017-06-27 Par Pharmaceutical, Inc. Vasopressin formulations for use in treatment of hypotension
US9744209B2 (en) 2015-01-30 2017-08-29 Par Pharmaceutical, Inc. Vasopressin formulations for use in treatment of hypotension
US9375478B1 (en) 2015-01-30 2016-06-28 Par Pharmaceutical, Inc. Vasopressin formulations for use in treatment of hypotension
US9925233B2 (en) 2015-01-30 2018-03-27 Par Pharmaceutical, Inc. Vasopressin formulations for use in treatment of hypotension
KR101943160B1 (ko) * 2016-10-06 2019-01-30 에이비온 주식회사 인터페론 베타 변이체의 안정화 제제

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0736303A2 (en) * 1995-04-06 1996-10-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Interferon solution
EP1250932A1 (en) * 1999-12-06 2002-10-23 Tianjin Hualida Bioengineering Co. Ltd. A stable aqua formulation of interferon, the preparation method and the uses thereof
US20020172661A1 (en) * 2001-04-09 2002-11-21 Chiron Corporation HSA- free formulations of interferon-beta

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6936694B1 (en) 1982-05-06 2005-08-30 Intermune, Inc. Manufacture and expression of large structural genes
US4588585A (en) 1982-10-19 1986-05-13 Cetus Corporation Human recombinant cysteine depleted interferon-β muteins
US4737462A (en) 1982-10-19 1988-04-12 Cetus Corporation Structural genes, plasmids and transformed cells for producing cysteine depleted muteins of interferon-β
US4959314A (en) 1984-11-09 1990-09-25 Cetus Corporation Cysteine-depleted muteins of biologically active proteins
US5116943A (en) 1985-01-18 1992-05-26 Cetus Corporation Oxidation-resistant muteins of Il-2 and other protein
US5017691A (en) 1986-07-03 1991-05-21 Schering Corporation Mammalian interleukin-4
US4879111A (en) 1986-04-17 1989-11-07 Cetus Corporation Treatment of infections with lymphokines
US4965195A (en) 1987-10-26 1990-10-23 Immunex Corp. Interleukin-7
US4904584A (en) 1987-12-23 1990-02-27 Genetics Institute, Inc. Site-specific homogeneous modification of polypeptides
IT1272252B (it) 1994-05-16 1997-06-16 Applied Research Systems Formulazioni liquide di interferone beta
US5858001A (en) * 1995-12-11 1999-01-12 Elan Medical Technologies Limited Cartridge-based drug delivery device
EA002754B1 (ru) * 1996-12-24 2002-08-29 Байоджен, Инк. Устойчивые жидкие составы интерферона
US6013253A (en) 1997-08-15 2000-01-11 Amgen, Inc. Treatment of multiple sclerosis using consensus interferon and IL-1 receptor antagonist
EP1224940B2 (de) * 1997-09-23 2010-08-11 Rentschler Biotechnologie GmbH Flüssige Interferon-Beta Formulierungen
US6299869B1 (en) * 1997-12-08 2001-10-09 Genentech, Inc. Human interferon-epsilon: a type I interferon
EA003789B1 (ru) 1998-04-28 2003-10-30 Апплайд Резеч Системз Арс Холдинг Н.В. КОНЪЮГАТЫ ПОЛИОЛ-β-ИНТЕРФЕРОН
CA2727762C (en) * 1998-05-11 2013-09-10 Basf Aktiengesellschaft Process for synthesizing thioether precursors of herbicides by reaction of anilines with dialkyl disulfides in the presence of an alkyl nitrite
US6465425B1 (en) * 2000-02-10 2002-10-15 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Microencapsulation and sustained release of biologically active acid-stable or free sulfhydryl-containing proteins
AR034749A1 (es) * 2001-07-09 2004-03-17 Schering Ag Formulaciones de interferon beta humano
EP1691825B1 (en) * 2003-12-11 2011-09-28 Ares Trading S.A. Stabilized interferon liquid formulations
US7879320B2 (en) * 2004-05-17 2011-02-01 Ares Trading S.A. Hydrogel interferon formulations
JP2008500995A (ja) * 2004-06-01 2008-01-17 アレス トレーディング ソシエテ アノニム タンパク質安定化法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0736303A2 (en) * 1995-04-06 1996-10-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Interferon solution
EP1250932A1 (en) * 1999-12-06 2002-10-23 Tianjin Hualida Bioengineering Co. Ltd. A stable aqua formulation of interferon, the preparation method and the uses thereof
US20020172661A1 (en) * 2001-04-09 2002-11-21 Chiron Corporation HSA- free formulations of interferon-beta

Also Published As

Publication number Publication date
AU2009201261A1 (en) 2009-04-23
WO2004096263A2 (en) 2004-11-11
NZ566625A (en) 2010-02-26
RS20050821A (en) 2007-12-31
ZA200708484B (en) 2008-10-29
CA2521560A1 (en) 2004-11-11
BRPI0410488A (pt) 2006-06-13
US8309069B2 (en) 2012-11-13
ZA200508124B (en) 2009-02-25
MEP60408A (en) 2011-05-10
RS52869B (sr) 2013-12-31
TW200503754A (en) 2005-02-01
CN1816347B (zh) 2010-07-21
ES2417061T3 (es) 2013-08-05
MXPA05011718A (es) 2006-01-23
US20070059285A1 (en) 2007-03-15
ME00404B (me) 2011-10-10
UA80331C2 (en) 2007-09-10
DK1617861T3 (da) 2013-07-29
NZ542912A (en) 2008-04-30
PL1617861T3 (pl) 2013-10-31
BRPI0410488B1 (pt) 2021-06-22
SG159389A1 (en) 2010-03-30
SI1617861T1 (sl) 2013-09-30
EA200501699A1 (ru) 2006-06-30
AR044147A1 (es) 2005-08-24
JP4870550B2 (ja) 2012-02-08
HK1088847A1 (en) 2006-11-17
EP1617861B1 (en) 2013-05-29
MY151121A (en) 2014-04-30
KR20060011976A (ko) 2006-02-06
TWI272948B (en) 2007-02-11
UA94032C2 (ru) 2011-04-11
CN1816347A (zh) 2006-08-09
PT1617861E (pt) 2013-08-28
JP2006525280A (ja) 2006-11-09
JP5346065B2 (ja) 2013-11-20
JP2011225599A (ja) 2011-11-10
IL171709A (en) 2016-03-31
NO335674B1 (no) 2015-01-19
EP1617861A2 (en) 2006-01-25
NO20055666L (no) 2005-11-30
HRP20130512T1 (hr) 2013-07-31
AU2004233603A1 (en) 2004-11-11
WO2004096263A3 (en) 2004-12-02
EA200800327A1 (ru) 2008-10-30
KR101116058B1 (ko) 2012-04-12
BRPI0410488B8 (pt) 2021-09-08
AU2004233603B2 (en) 2009-02-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4988562B2 (ja) 安定化したインターフェロン液体製剤
JP5346065B2 (ja) Ｈｓａを含まない安定なインターフェロン液体製剤
ES2224290T5 (es) Formulaciones l�?quidas estables de interferón.
US7846427B2 (en) Stabilized interferon liquid formulations
KR101191536B1 (ko) 안정화된 인터페론 액상 제제
MXPA06006579A (en) Stabilized interferon liquid formulations
MXPA06013308A (es) Formulaciones de hidrogel que contienen interferon.

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM