EA008195B1 - Применение тория-227 в лучевой терапии заболеваний мягких тканей - Google Patents

Abstract

В изобретении предложен способ лечения заболевания мягких тканей у млекопитающего субъекта (предпочтительно у человека или собаки), включающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества обеспечивающего направленную доставку к мягким тканям комплекса тория-227 и комплексообразующего агента, причем указанное количество является таковым, что допустимое немиелотоксическое количество радия-223 образуется in vivo в результате распада введенного тория-227.

Description

Настоящее изобретение относится к способу радиотерапии, более конкретно, к способу, вовлекающему применение тория-227 в лечение заболевания мягких тканей.

Предпосылки изобретения

Киллинг определенных клеток может быть необходим для успешного лечения множества заболеваний у млекопитающих. Типичные примеры этого имеют место при лечении злокачественных заболеваний, таких как саркомы и карциномы. Однако избирательное уничтожение некоторых типов клеток может играть ключевую роль также в лечении других заболеваний, в частности, гиперпластических и неопластических заболеваний.

Наиболее распространенными способами избирательного лечения в настоящее время являются хирургия, химиотерапия и наружное лазерное облучение. Однако терапия радионуклидами с обеспечением направленной доставки является многообещающей и развивающейся областью с возможностью доставки высокоцитотоксического излучения к нежелательным типам клеток. В наиболее распространенных формах радиофармацевтических средств, разрешенных в настоящее время для применения у людей, используются бета-излучающие и/или гамма-излучающие радионуклиды. Однако существовал интерес к применению в терапии альфа-излучающих радионуклидов из-за их способности к более специфическому клеточному киллингу.

В физиологическом окружении диапазон излучения типичных источников альфа-излучения обычно составляет менее 100 мкм; что эквивалентно всего нескольким клеточным диаметрам. Это делает эти источники весьма подходящими для лечения опухолей, включая микрометастазы, поскольку лишь небольшая часть энергии излучения будет выходить за пределы клеток-мишеней, и, таким образом, повреждение окружающей здоровой ткани может быть сведено к минимуму (см. Еешепбещщп е! а1., К.ас11а1 Кез 148: 195-201 (1977)). В отличие от этого, в воде бета-частица имеет диапазон излучения 1 мм или более (см. \¥11Ъиг, АпйЪобу йптипосоп Кабюрйагт 4: 85-96 (1991)).

Энергия излучения альфа-частиц является высокой по сравнению с бета-частицами, гамма-лучами и рентгеновскими лучами и обычно составляет 5-8 МэВ, что в 5-10 раз выше, чем энергия бета-частиц, и в 20 или более раз выше, чем энергия гамма-лучей. Таким образом, такая локализация большого количества энергии на очень коротком расстоянии сообщает альфа-излучению исключительно высокий линейный перенос энергии (ЬЕТ, 1шеаг епег§у йапзГег), высокую относительную биологическую эффективность (КВЕ, ге1айуе Ыо1ощса1 еГйсасу) и низкий коэффициент кислородного усиления (ОЕК, оху^еп епНапсешетй гайо) по сравнению с гамма- и бета-излучением (см. На11, КасНоЪю1о§у Гог Изе гайюКщзГ, ΡίίΐΗ ес11ΐίοη, ЫрршсоН \¥1Шаш8 & ХУПЕлпз, РЫ1абе1рЫа РА, ЕГ8А, 2000). Это объясняет исключительную цитотоксичность альфа-излучающих радионуклидов, а также налагает строгие требования на уровень контроля и распределения альфа-излучающих радионуклидов, необходимых для того, чтобы избежать недопустимые побочные эффекты.

В настоящее время считают, что лишь немногие альфа-излучающие радионуклиды полезны для молекулярно-нацеленной терапии (см. выше, например, Еешепбе^еп апб А¥йЪиг). Для того чтобы установить, является ли конкретный нуклид подходящим, исследуемые нуклиды должны тщательно оцениваться на основании их физических характеристик, химических свойств, а также свойств продукта(ов) распада (т.е. их дочерних нуклидов). Часто бывает так, что дочерние нуклиды, образующиеся в результате распада потенциального терапевтического альфа-излучающего радионуклида, также представляют собой альфа-излучающие источники и/или в результате распада, в свою очередь, образуют дополнительные альфа-излучающие изотопы. Поэтому при оценке терапевтической эффективности альфа-излучающего источника необходимо учитывать свойства потенциальных дочерних нуклидов.

В табл. 1 ниже показаны физические свойства альфа-излучателей в результате распада, до сих пор широко предлагаемых в литературе в качестве источников, имеющих возможную терапевтическую эффективность.

Таблица 1

Исследуемый нуклид	Τΐ/2	Клинически исследовано для:
225Ас	10,0 дней	не исследовано
2ГА1	7,2 часа	глиобластомы
213Βΐ	46 минут	лейкоза
223Яа	11,4 дня .	метастазов в скелет
224Ва	3,66 дней	анкилозирующего спондилита

* Период полураспада

- 1 008195

До сих пор основное внимание было сфокусировано на ²¹¹Л1 и ²¹³Βί, и эти два нуклида были исследованы в клинических иммунотерапевтических испытаниях.

Некоторые из предложенных радионуклидов являются короткоживущими, т.е. имеют период полураспада менее 12 ч. Такой короткий период полураспада затрудняет производство и распространение радиофармацевтических средств на основе этих радионуклидов коммерческим способом. Введение короткоживущего нуклида также увеличивает долю дозы радиации, которая будет излучаться в организме 223 225 до того, как достигнет мишени. В этом отношении два долгоживущих нуклида Ва и Ас имеют более предпочтительные периоды полураспадов. Оба этих радионуклида имеют короткоживущие дочерние продукты распада (материнский нуклид и дочерние нуклиды испускают в совокупности четыре альфачастицы), которые могли бы создавать сильный каскад альфа-частиц при условии, что распад материнского и дочерних нуклидов происходит в одном и том же месте. Однако если дочерние нуклиды не удерживаются в участке-мишени, то эти нуклиды способны высвобождать большое количество разрушающего излучения в здоровые ткани. Важная и фундаментальная проблема состоит также в том, что отдача дочернего ядра после альфа-распада является высокоэнергетической (выброс ядра гелия со скоростью примерно 2% от скорости света сообщает остающемуся дочернему ядру значительный импульс).

Энергия отдачи от альфа-излучения во многих случаях вызывает утечку дочерних нуклидов из места распада родительского нуклида. Этой энергии отдачи достаточно для того, чтобы выбить многие дочерние ядра из химического окружения, которое, возможно, удерживало родительский нуклид, например, когда родительский нуклид образовывал комплекс слигандом, таким как хелатирующий агент. Это будет происходить даже тогда, когда дочерний нуклид химически сочетается, т.е. способен образовывать комплекс, с тем же самым лигандом. В равной степени этот эффект утечки будет даже больше в тех случаях, когда дочерний нуклид представляет собой газ, особенно инертный газ, такой как радон, или химически не сочетается с данным лигандом. Когда дочерние нуклиды имеют период полураспада больше нескольких секунд, тогда они могут диффундировать в кровеносную систему, не удерживаясь комплексообразующим соединением, которое удерживало родительский нуклид. Затем эти свободные радиоактивные дочерние нуклиды могут вызывать нежелательную системную токсичность.

Недавно внимание привлек актиний-225, однако, исследование этого нуклида было затруднено недостаточной доступностью исходного материала. Было показано, что ²²⁵Ас может быть соединен с моноклональными антителами и использован для направленной доставки к тканям, содержащим антиген. Однако исследования, проведенные до сих пор, показывают, что антитела, меченные ²²⁵Ас, являются очень токсичными в экспериментах на животных.

Другие нуклиды, которые были упомянуты в качестве кандидатов для терапии с использованием альфа-излучателя, включают ²²⁴Ва и ²²⁶Ва (Т_1/2 = 1600 лет), которые интенсивно использовали в начале прошлого столетия, но от которых затем отказались из-за отрицательных отдаленных последствий, включающих костный рак. Эти два радиевых нуклида имеют радоновые дочерние нуклиды, которые являются газообразными и быстро диффундируют из места, занимаемого родительским нуклидом. В общем случае также отсутствуют подходящие линкеры для присоединения радия к молекулярному агенту, обеспечивающему направленную доставку. Кроме того, чрезвычайно длинный период полураспада ²²⁶Ва является очень проблематичным с точки зрения радиационной безопасности и риска загрязнения.

Таким образом, большинство альфа-излучающих радионуклидов считаются в целом непригодными из-за неподходящих периодов полураспада или из-за того, что их продукты распада считаются несовместимыми с медицинским применением, например, из-за того, что дочерние нуклиды являются остеотропными (см. Маикпег, Меб Рйук 20, 503-509 (1993)). Так, например, радий, будучи аналогом кальция, представляет собой особенно сильный остеотроп, и известно, что при высвобождении из ²²⁷Тй ίη νίνο происходит нежелательное накопление дочернего нуклида ²²³Ва в скелете (см. Ми11ег, Ιηΐ 1 Ваб1а1 ΒίοΙ 20, 233243 (1971)), где можно ожидать значительную миелотоксичность.

Согласно Еетепбедеп и др. (А1рйа-етй1ег8 ίοτ теб1са1 Шетару 8есопб В1-Аппиа1 ^отккйор, Тоτοηΐο, 1ипе 1998, И8 Эер1. о£ Епегду Верой Νο. ΌΘΕ/ΝΕ-0116) существуют два потенциальных терапевтических радионуклида, которые распадаются, проходя по меньшей мере через три вторичных распада с альфа-излучением. Это ²²⁵Ас и ²²³Ва. Терапевтические исследования на животных моделях с помощью радиоиммуноконъюгатов актиния-225 (Т_1/2 = 10,0 дней) показали, что инъецируемые дозы 6,3 кБк (приблизительно 250 кБк/кг, исходя из предположения, что средняя масса животного составляет 25 г) могли бы сильно улучшить выживаемость мышей-носителей ксенотрансплантатов при диссеминированной лимфоме. Семейство актиния-225 высвобождает четыре альфа-частицы, первые три альфа-излучателя в этом семействе имеют периоды полураспада менее 5 мин, тогда как последний альфа-излучатель в этом семействе висмут-213 имеет период полураспада 46 мин.

Данные, демонстрирующие противоопухолевые эффекты ²²³Ва ш νίνο, до сих пор отсутствуют в литературе. Преимущество этого нуклида состоит в наличии короткоживущих дочерних нуклидов, т.е. дочерних нуклидов от высвобождения из ²¹⁹Вп (Т1/2 = 3,96 с) более чем двух альфа-частиц в течение нескольких секунд, хотя последний альфа-излучатель в этом семействе ²¹¹В1, которому предшествует ²¹¹РЬ (Т1/2 = 36,1 мин), имеет период полураспада 2,17 мин и может диффундировать далеко от ²²³Ва. В случае 223 225 ²²³Ва, а также ²²⁵Ас три альфа-излучателя из четырех будут распадаться вблизи материнского нуклида.

- 2 008195

Это сильно отличается от ²²⁷Тй, который имеет вторичные частицы, испускающие четыре альфачастицы, все из которых предшествуют периоду полураспада дочернего нуклида ²²³Ка, равному 11,4 дня. Вероятно, этот длительный период полураспада дочернего ²²³Ка будет вызывать почти полное смещение вторичных частиц по сравнению с материнским нуклидом ²²⁷Тй и, соответственно, значительные трудности при контролировании местонахождения этих четырех альфа-излучателей и, как результат, высокую вероятность нежелательных побочных эффектов.

Однако недавно торий-227 (Т_1/2 = 18,7 дней) был предложен (см. АО 01/60417 и АО 02/05859) в качестве терапевтического радионуклида, при условии использования системы носителя, которая позволяет удерживать дочерние нуклиды в замкнутой среде. В одном случае этот радионуклид помещают внутрь липосомы, и значительный размер этой липосомы (по сравнению с расстоянием отдачи) помогает удерживать дочерние нуклиды внутри липосомы. В другом случае используют остеотропные комплексы этого радионуклида, которые включаются в костный матрикс и тем самым ограничивают высвобождение дочерних нуклидов. Потенциально эти способы являются весьма выгодными, но введение липосом в некоторых случаях является нежелательным, и существует множество заболеваний мягкой ткани, при которых эти радионуклиды не могут быть окружены минерализованным матриксом с тем, чтобы удерживать дочерние изотопы.

Из общедоступной информации, касающейся токсичности радия, становится понятным, что при отсутствии таких специфических средств удержания радиевых дочерних нуклидов тория-227 невозможно использовать торий-227 в качестве терапевтического агента, так как дозы, необходимые для достижения терапевтического эффекта от распада тория-227, давали бы в результате высокотоксичную и, возможно, летальную дозу облучения от распада дочерних нуклидов радия, т.е. отсутствие терапевтического окна.

Поэтому сохраняется существенная потребность в разработке новых способов лечения мягких тканей радионуклидами, которые делают возможным терапевтическое лечение злокачественного и доброкачественного заболевания альфа-излучателями, не вызывая нежелательных побочных эффектов, особенно миелотоксичность.

Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что в терапевтическом лечении не существует окна, в котором субъекту (обычно млекопитающему) может быть введено терапевтически эффективное количество направленно доставляемого радионуклида тория-227 без образования радия-223 в количестве, достаточном для того, чтобы вызвать нежелательную миелотоксичность.

Краткое изложение сущности изобретения

Таким образом, как видно из первого аспекта, в настоящем изобретении предложен способ лечения заболевания мягких тканей у млекопитающего субъекта (преимущественно у человека или собаки), включающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества обеспечивающего направленную доставку к мягким тканям комплекса тория-227 и комплексообразующего агента, причем указанное количество является таким, что в результате распада введенного тория-227 ίη νίνο образуется допустимое немиелотоксическое количество радия-223.

Как видно из другого аспекта, в настоящем изобретении предложено применение тория-227 для изготовления лекарства, содержащего обеспечивающий направленную доставку к мягким тканям комплекс тория-227 и комплексообразующего агента, для использования в способе лечения заболевания мягких тканей.

Как видно из другого аспекта, в настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция, содержащая обеспечивающий направленную доставку к мягким тканям комплекс тория-227 и комплексообразующего агента вместе по меньшей мере с одним фармацевтическим носителем или эксципиентом.

Как видно из еще одного аспекта, в настоящем изобретении также предложен обеспечивающий направленную доставку к мягким тканям комплекс тория-227 и комплексообразующего агента.

Для того чтобы отличать их от нерадиоактивных комплексов тория, следует понимать, что комплексы тория и их композиции, заявленные в настоящем изобретении, содержат больше тория-227, чем относительная концентрация в природе, например, больше по меньшей мере на 20%. Это не влияет на определение способа по изобретению, где ясно видно, что требуется терапевтически эффективное количество тория-227.

Как видно из еще одного аспекта, в настоящем изобретении также предложен набор для использования в способе по изобретению, включающий раствор обеспечивающего направленную доставку к мягким тканям комплекса тория-227 и комплексообразующего агента, вместе с инструкциями для использования указанного раствора в способе по изобретению.

Как видно из еще одного аспекта, в настоящем изобретении также предложен набор для использования в способе по изобретению, включающий комплексообразующий агент, способный образовывать комплекс с ионами тория, где указанный комплексообразующий агент не является обеспечивающим направленную доставку к мягким тканям комплексообразующим агентом, соединение, обеспечивающее направленную доставку к мягким тканям, возможно вместе с линкерным соединением, которое может быть конъюгировано с указанным комплексообразующим агентом с получением обеспечивающего направленную доставку к мягким тканям комплексообразующего агента, и инструкции для приготовления

- 3 008195 из них обеспечивающего направленную доставку к мягким тканям комплекса тория-227 и комплексообразующего агента, и также возможно для использования указанного комплекса в способе по изобретению.

Краткое описание графических материалов

На чертеже представлен график, показывающий падение со временем радиоактивности в результате распада тория-227 и результирующее увеличение со временем радиоактивности в результате распада радия-223 после введения комплекса тория-227 по изобретению.

Подробное описание изобретения

Под обеспечением направленной доставки к мягким тканям в данном описании подразумевают, что рассматриваемое вещество, представленное в форме ториевого комплекса, служит для доставки тория к участку мягкой ткани, в котором желателен его радиоактивный распад. Это может осуществляться благодаря компоненту комплексообразующего агента, который связывается с поверхностными клеточными маркерами (например, с рецепторами), присутствующими на пораженных болезнью клетках или на клетках, находящихся вблизи от пораженных болезнью клеток (например, с белками, более интенсивно экспрессирующимися на поверхностях пораженных клеток, чем на поверхностях здоровых клеток, или более интенсивно экспрессирующимися на поверхностях клеток во время периодов роста или репликации, чем во время фаз покоя), или благодаря компоненту, который связывается с дополнительным агентом, связывающимся с мягкими тканями (в этом случае указанный дополнительный агент следует вводить первым в качестве зонда для ториевого комплекса). Альтернативно, это обеспечение направленной доставки может осуществляться к антигену, который ассоциирован с клетками-мишенями, но непосредственно к ним не присоединен. Обычно такие антигены находятся в матриксе между клеткамимишенями и, таким образом, окружены больной тканью. Примерами этого являются матриксные антигены, такие как танасцин, который ассоциирован с опухолями головного мозга, но экспрессируется в матриксе между клетками. Такие матриксные антигены могут становиться мишенями непосредственно или с помощью предварительно связывающегося агента, как обсуждено выше.

Термин мягкая ткань используется в данном описании для обозначения тканей, которые не имеют твердого минерализованного матрикса. В частности, мягкие ткани, как использовано здесь, могут представлять собой любые ткани, которые не являются скелетными тканями. Соответственно, заболевание мягких тканей, как использовано в данном описании, обозначает заболевание, встречающееся в мягкой ткани, как использовано здесь. Настоящее изобретение является особенно подходящим для лечения раковых заболеваний, и заболевание мягких тканей, таким образом, охватывает карциномы, саркомы, миеломы, лейкозы, лимфомы и смешанные типы раковых заболеваний, встречающихся в любой мягкой (т.е. неминерализованной) ткани, а также другие незлокачественные заболевания такой ткани. Злокачественное заболевание мягкой ткани включает в себя солидные опухоли, встречающиеся в мягких тканях, а также метастазирующие и микрометастазирующие опухоли. Действительно, указанное заболевание мягких тканей может включать в себя первичную солидную опухоль мягкой ткани и по меньшей мере одну метастазирующую опухоль в мягкой ткани того же пациента. Альтернативно, указанное заболевание мягких тканей может состоять только из солидной опухоли или только из метастазов, при этом первичная опухоль представляет собой заболевание скелета.

Используемый в данном описании термин допустимое немиелотоксическое используют для обозначения того, что наиболее важным является то, что количество образующегося радия обычно недостаточно для того, чтобы быть непосредственно летальным для субъекта. Однако специалисту обычно понятно, что степень повреждения спинного мозга (и возможность летальной реакции), которая будет представлять собой переносимый побочный эффект такого лечения, будет существенно меняться в зависимости от типа заболевания, которое лечат, целей схемы лечения и прогноза для этого субъекта. Хотя предпочтительными субъектами для настоящего изобретения являются люди, другие млекопитающие, особенно собаки, будут получать пользу от применения этого изобретения, и уровень допустимого повреждения спинного мозга также может зависеть от вида этого субъекта. Уровень допустимого повреждения спинного мозга обычно будет больше при лечении злокачественного заболевания, чем доброкачественного заболевания. Хорошо известным критерием уровня миелотоксичности является количество нейтрофильных клеток, и в настоящем изобретении допустимое немиелотоксическое количество ²²³Ка будет обычно означать количество, контролируемое таким образом, что нейтрофильная фракция в ее самой низкой точке (низший уровень) будет составлять не менее 10% от ее количества до лечения. Предпочтительно, когда допустимое немиелотоксическое количество ²²³Ка будет таким, что фракция нейтрофильных клеток будет составлять по меньшей мере 20% на низшем уровне и более предпочтительно по меньшей мере 30%. Наиболее предпочтительно, когда низший уровень фракции нейтрофильных клеток составляет по меньшей мере 40%.

Кроме того, если будет включена поддержка стволовыми клетками или сравнимый способ восстановления, то ²²⁷Тй-содержащие соединения могут быть использованы в схемах с высокими дозами, когда миелотоксичность образующего ²²³Ка в норме является недопустимой. В таких случаях количество нейтрофильных клеток может быть уменьшено до уровня менее 10% на низшем уровне и в исключительных случаях будет уменьшено до 5% или, при необходимости, до уровня менее 5%, при условии, что приня

- 4 008195 ты соответствующие меры предосторожности и дается последующая поддержка стволовыми клетками. Такие способы хорошо известны в данной области.

Торий-227 относительно легко производить и можно приготовить непрямым способом из облученного нейтронами ²²⁶К.а, который будет содержать материнский нуклид тория-227, т.е. актиний-227 (Т_1/2 = 22 года). Актиний-227 можно достаточно легко отделить от ²²⁶Ка-мишени и использовать в качестве генератора ²²⁷Т11. При необходимости, этот процесс можно масштабировать до промышленного уровня, и, следовательно, можно избежать проблемы снабжения, испытываемой с большинством других альфаизлучателей, рассматриваемых в качестве кандидатов для молекулярно-нацеленной радиотерапии.

Торий-227 распадается через радий-223. В этом случае первичный дочерний нуклид имеет период полураспада 11,4 дня. В течение первых нескольких дней источник чистого ²²⁷Т11 продуцирует лишь небольшое количество радия. Однако потенциальная токсичность ²²³На выше, чем потенциальная токсич227 223 ность ТИ, поскольку испускание альфа-частицы из На в пределах нескольких минут сопровождается испусканием трех дополнительных альфа-частиц из короткоживущих дочерних нуклидов (см. табл. 2 ниже, которая представляет последовательность распада для тория-227).

Таблица 2

Нуклид	Тип распада	Средняя энергия частицы (МэВ)	Период полураспада
227ТН	а	6,02	18,72 дня
223Ра	а	5,78	11,43 дня
	а	6,88	3,96 секунды
^Ро	а	7,53	1,78 мс
'7ПРЬ	β	0,45	36,1 минуты
^ΒΪ	а	6,67	2,17 минуты
	β	1,42	4,77 минуты
20/РЬ			Стабильный

Отчасти из-за того, что он генерирует потенциально вредные продукты распада, торий-227 (Т[/₂ =

18,7 дней) не рассматривался широко для терапии альфа-частицами.

Авторы настоящего изобретения впервые установили, что торий-227 можно вводить в количествах, достаточных для того, чтобы обеспечить желательные терапевтические эффекты без образования настолько большого количества радия-223, которое может вызвать недопустимое подавление костного мозга.

Исходя из предположения, что эффект киллинга опухолевых клеток будет определяться главным образом торием-227, а не его дочерними нуклидами, вероятно, что терапевтическая доза этого изотопа может быть установлена путем сравнения с другими альфа-излучателями. Например, для астата-211 терапевтическая доза для животных типично составляла 2-10 МБк на килограмм. После уточнения периода полураспада и энергии соответствующая доза для тория-227 должна составлять по меньшей мере 36-200 кБк на килограмм массы тела. Это значение должно устанавливать нижний предел для количества ²²⁷Т11, которое может быть полезным при введении в расчете на терапевтический эффект. Этот расчет предполагает сравнимое удержание тория и астата. Однако ясно, что период полураспада тория, составляющий

18,7 дней, вероятнее всего, будет приводить к большей элиминации этого изотопа перед его распадом. Поэтому в норме эту вычисленную дозу следует рассматривать в качестве минимального эффективного количества. Терапевтическая доза, выраженная на основе полностью удерживаемого ²²⁷Т11 (т.е. тория227, который не элиминирован из организма), обычно составляет по меньшей мере 18 или 25 кБк/кг, предпочтительно - по меньшей мере 36 кБк/кг, и более предпочтительно по меньшей мере 75 кБк/кг, например, 100 кБк/кг или больше. Можно было бы ожидать, что большее количество тория будет оказывать больший терапевтический эффект, но не может быть введено, если это приведет к неприемлемым побочным эффектам. Аналогично, если торий вводят в форме, имеющей короткий биологический период полураспада (т.е. полупериод перед элиминацией из организма, все еще несущего торий), то для терапевтического эффекта потребуются большие количества этого радиоизотопа из-за того, что много тория будет элиминировано до того, как он распадется. Однако будет происходить соответствующее уменьшение количества образующегося радия-223. Вышеупомянутые количества вводимого тория-227, когда этот изотоп полностью удерживается, можно легко соотнести с эквивалентными дозами с более короткими биологическими периодами полураспада. Такие расчеты приведены ниже в примерах 1 и 2.

В качестве примера можно привести расчет количества ²²⁷Т11, которое эквивалентно отдельной полностью удерживаемой дозе, с учетом пренебрежимо малого удержания в участке-мишени. В этом случае

Л - . _______ “ХЖД'+АГ,'

-5 008195 где Э_абб означает введенную дозу;

Э_ге1 означает эквивалент, полностью удерживаемую дозу;

Т_ть означает физический период полураспада ²²⁷Тй (18,7 дней) и

Т_В1О означает биологический период полураспада введенного ториевого комплекса.

Таким образом, может быть легко установлена минимальная эффективная доза ториевого комплекса. Более того, биологический период полураспада можно определить, не прибегая к применению радиоактивной формы ториевого комплекса.

Если радиоактивно меченое соединение высвобождает дочерние нуклиды, то важно знать судьбу этих радиоактивных дочерних нуклидов(а), если возможно. В случае тория-227 основным дочерним продуктом является ²²³Ка, который подвергают клинической оценке из-за его остеотропных свойств. Радий223 очень быстро выводится из крови и концентрируется либо в скелете, либо выделяется через кишечный и почечный пути (см. Ьаг5сп. 1 Νι.ιο1 Меб 43 (5, §ирр1ешеп1): 160Р (2002)). Поэтому радий-223, высвобождающийся ίη νίνο из ²²⁷Тй, возможно, не будет сильно повреждать здоровую мягкую ткань. В исследовании распределения ²²⁷Тй в виде растворенной соли лимонной кислоты (Ми11ег, Ιηΐ. 1. Каб1а1. Βίο1. 20: 223-243 (1971)) было обнаружено, что ²²³Ка, образующийся из ²²⁷Тй в мягких тканях, легко перераспределялся в кость или выделялся. Таким образом, эта известная токсичность ²²³Ка, особенно в отношении костного мозга, по-видимому, является ограничивающим фактором при использовании ²²⁷Тй ίη νίνο.

Авторы настоящего изобретения установили, что комплексы ²²⁷Тй (например, хелатированные ком227 223 плексы) после распада Т11 высвобождают Ка (см. ниже пример 6). Это может являться результатом отдачи ядра, или несовместимого хелатирования, или комбинации факторов. Это противоречит тому, что принято считать в данной области желательным свойством для альфа-излучателя (см., например, Егетепбедеп и др., 1998, выше), в том смысле, что альфа-излучающее соединение должно удерживать любые радиоактивные дочерние нуклиды в родительском хелатированном соединении, что является важной характеристикой безопасности.

Согласно имеющимся в настоящее время данным в данной области техники можно ожидать, что максимально переносимая доза радия-223 находится в диапазоне 39-113 кБк/кг (см. ниже пример 7). В данной области техники общепринято, что должна быть утверждена реальная и осторожная оценка токсических побочных эффектов дочерних изотопов (см., например, Опепбадеп (1998) выше) и, таким образом, для радия-223 допустимым следует считать максимальное значение 39 кБк/кг. Можно ожидать, что при любой дозе, большей, чем эта, радий будет летальным для субъекта, что, конечно, недопустимо.

223 227

Образование Ка ш νίνο будет изменяться в зависимости от времени удержания Т11. В случае

227 223

100%-ного удержания, 1 кБк Т11 будет образовывать количество атомов Ка, эквивалентное инъецируемой дозе 1,6 кБк полностью удерживаемого ²²³Ка. Таким образом, максимально переносимая доза радия-223 39 кБк/кг эквивалентна введению 24,4 кБк/кг полностью удерживаемого ²²⁷Тй. Это значительно ниже минимальной ожидаемой терапевтической дозы 36 кБк/кг, которая также установлена на основе полного удержания (см. обсуждение выше). Если удержание тория будет уменьшаться, то на единицу введенного тория будет образовываться меньше радия, но эффективность тория будет, соответственно, уменьшаться, и, следовательно, его доза должна быть увеличена. Таким образом, исходя из доступных в данной области фактов ожидали, что минимальное количество ²²⁷Тй, достаточное для обеспечения терапевтического эффекта, будет больше, чем то количество, которое должно вызывать летальную миелотоксичность. Таким образом, никакого терапевтического окна для введения ²²⁷Тй, вероятно, не может существовать.

Важно, что в настоящее время авторы изобретения установили, что ²²³Ка может вводиться людям и переноситься ими фактически в дозе по меньшей мере 200 кБк/кг. Эти данные представлены в примере 8 ниже. Поэтому сейчас можно считать, что весьма неожиданно, что терапевтическое окно, в пределах которого млекопитающему субъекту можно вводить терапевтически эффективное количество ²²⁷Тй (например, более 36 кБк/кг), не ожидая, что такой субъект будет испытывать нежелательный риск серьезной или даже летальной миелотоксичности, все же существует.

Количество ²²³Ка, образующегося из ²²⁷Тй-содержащего фармацевтического средства, будет зависеть от биологического периода полураспада этого радиоактивно меченого соединения. Идеальная ситуация состояла бы в применении комплекса с быстрым накоплением в опухоли, включая интернализацию в опухолевую клетку, прочное удержание в опухоли и короткий биологический период полураспада в нормальных тканях. Однако комплексы с меньшим чем идеальный биологическим периодом полураспада могут быть полезны до тех пор, пока доза ²²³Ка поддерживается в пределах допустимого уровня. Количество радия-223, образующегося т νίνο, будет представлять собой показатель количества введенного тория и времени биологического удержания ториевого комплекса. Количество радия-223, образующегося в любом конкретном случае, может быть легко рассчитано специалистом, и типичные расчеты приведены в примерах 1 и 2 ниже. Максимальное вводимое количество ²²⁷Тй будет определяться указанным количеством радия, образующегося ш νίνο, и должно быть меньше, чем количество, которое будет создавать недопустимый уровень побочных эффектов, в особенности миелотоксичности. Это количество обычно будет меньше 300 кБк/кг, в частности меньше 200 кБк/кг и более предпочтительно меньше 170 кБк/кг (например, меньше 130 кБк/кг).

- 6 008195

Таким образом, в способе по изобретению ториевый комплекс желательно вводить в дозе тория227, равной 18-400 кБк/кг массы тела, предпочтительно 36-200 кБк/кг (например, 50-200 кБк/кг), более предпочтительно 75-170 кБк/кг, особенно предпочтительно 100-130 кБк/кг. Более того, желательно, чтобы доза тория, комплексообразующий агент и путь введения были такими, чтобы доза радия-223, образующегося ίη νΐνο, была меньше 300 кБк/кг, более предпочтительно меньше 200 кБк/кг, еще более предпочтительно меньше 150 кБк/кг, особенно предпочтительно меньше 100 кБк/кг. Вышеуказанные дозовые уровни представляют собой предпочтительно полностью удерживаемую дозу ²²⁷Т11, но могут представлять собой введенную дозу, если принять во внимание, что некоторое количество ²²⁷Т11 будет выводиться из организма перед тем, как он распадется.

Когда биологический период полураспада ²²⁷Т11-содержащего комплекса короткий (например, менее 7 дней, в особенности, менее 3 дней), то могут понадобиться значительно большие вводимые дозы, чтобы обеспечить эквивалентную удерживаемую дозу. Так, например, согласно уравнению, представленному в этом описании выше, полностью удерживаемая доза 150 кБк/кг эквивалентна комплексу с периодом полураспада 5 дней, вводимому в дозе 711 кБк/кг. Используя это уравнение, эквивалентная вводимая доза для любой из вышеупомянутых удерживаемых доз может быть рассчитана на основе скорости биологического выведения этого комплекса.

Так как распад одного ядра ²²⁷Т11 дает один атом ²²³Ка, удержание и терапевтическая активность ²²⁷Т11 будут напрямую связаны с дозой ²²³Ка, которую сможет перенести пациент.

При упрощенном расчете образование ²²³Ка ίη νΐνο может быть связано с количеством введенного ²²⁷Т11, при условии отсутствия какого-либо значительного удержания в ткани-мишени. В таком случае максимально переносимую дозу ²²⁷Т1г можно выразить как

где Т_В10 означает биологический период полураспада ²²⁷Τ1ι-содержащего комплекса;

Т_ть означает физический период полураспада ²²⁷Т11, 18,7 дней;

Оасщ означает активность введенного ²²⁷Т11-содержащего комплекса, кБк/кг и

МахКа означает допустимое немиелотоксическое количество ²²³Ка, кБк/кг, как обсуждается в этом описании.

Поэтому в предпочтительном воплощении настоящего изобретения предложен способ лечения заболевания мягких тканей у млекопитающего субъекта, включающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества обеспечивающего направленную доставку к мягким тканям комплекса тория-227 и комплексообразующего агента, причем указанное количество которое рассчитывают по формуле I, приведенной ниже, такое, что в результате распада введенного тория-227 ίη νΐνο образуется допустимое немиелотоксическое количество радия-223, Э_{Ка Ώ} ЧУА

1,65 где Т_В10 означает биологический период полураспада обеспечивающего направленную доставку к мягким тканям комплекса тория-227 и комплексообразующего агента;

Т_ть означает физический период полураспада ²²⁷Т11, 18,7 дней;

Оасщ означает активность введенного ²²⁷Т11-содержащего комплекса, кБк/кг и

Э_Ка означает допустимое немиелотоксическое количество ²²³Ка, например, 75-200 кБк/кг. Биологический период полураспада любого конкретного, обеспечивающего направленную доставку к мягким тканям комплекса тория-227 и комплексообразующего агента, можно определить известными способами, используя нерадиоактивный торий, или путем измерения, например, характеристических гамма-излучений с использованием очень низких уровней тория-227 в комбинации с нерадиоактивным торием. Из этой формулы, например, можно видеть, что немиелотоксическая доза ²²³Ка 100 кБк/кг образуется из обеспечивающего направленную доставку к мягким тканям комплекса тория-227 и комплексообразующего агента, имеющего биологический период полураспада 10 дней, путем введения дозы [100 х

18,7 х (10-418,7^)1/1,65 = 173 кБк/кг.

Конечно, желательно свести к минимуму облучение субъекта дочерним изотопом ²²³Ка, если свойства этого изотопа не используются с пользой. Однако для того, чтобы количество введенного ²²⁷Т11 было достаточным, необходимо, чтобы образовывалось определенное количество радия. Это количество обычно означает такое количество радия, которое является достаточным для обеспечения терапевтически эффективного введения ²²⁷Т11, и обычно является большим, чем количество, которое раньше брали как максимально переносимое в свете ожидаемой миелотоксичности ²²³Ка (см. примеры 7 и 8 ниже и обсуждение выше). В частности, количество радия-223, образующегося ΐη νΐνο, составляет обычно более 40 кБк/кг, например более 60 кБк/кг. В некоторых случаях необходимо, чтобы количество образующегося ΐη νΐνο ²²³Ка составляло более 80 кБк/кг, например более 100 или 115 кБк/кг.

Комплексы, меченые торием-227, в подходящих растворах-носителях можно вводить внутривенно, внутриполостно (например, внутрибрюшинно), подкожно, перорально или местно в виде однократного введения или в режиме дробного введения. Предпочтительно эти комплексы вводят в виде растворов

-7008195 парентеральным путем, в частности внутривенно, или внутриполостным путем. Предпочтительно композиции для парентерального введения по настоящему изобретению приготавливают в виде препаратов в стерильном растворе.

В способах и продуктах по настоящему изобретению торий-227 может быть использован один или в комбинации с другими лечебными воздействиями, включающими хирургию, наружную лучевую радиотерапию, химиотерапию, другие радионуклиды или регулирование температуры тканей и т.д. Это создает еще одно предпочтительное воплощение способа по изобретению. В одном особенно предпочтительном воплощении субъект подвергают также лечению стволовыми клетками для уменьшения эффектов миелотоксичности, индуцированных радием-223.

Согласно этому изобретению ²²⁷Тй может образовывать комплексы с обеспечивающими направленную доставку комплексообразующими агентами. Обычно эти агенты имеют молекулярную массу от 100 г/моль до нескольких миллионов г/моль и предпочтительно имеют сродство к связанному с заболеванием рецептору и/или к подходящему предварительно введенному рецептору (например, биотину или авидину), связанному с молекулой, которая была направленно доставлена к участку заболевания заранее, до введения ²²⁷Тй. Подходящие, обеспечивающие направленную доставку группировки включают в себя поли- и олигопептиды, белки, фрагменты ДНК и РНК, аптамеры и т.д., предпочтительно белок, например авидин, стрептавидин, поликлональное или моноклональное антитело (включая антитела 1дО- и 1дМтипа), или смесь белков, или фрагменты, или конструкции белка. Особенно предпочтительными являются антитела, конструкции антител, фрагменты антител (например, ЕАБ-фрагменты), конструкции фрагментов (например, одноцепочечные антитела) или их смесь.

Для применения по настоящему изобретению также пригодны терапевтические конъюгаты ²²⁷Тй с пептидом, аминокислотой, стероидным или нестероидным гормоном, фолатом, эстрогеном, тестостероном, биотином или другими специфически связывающими соединениями с молекулярной массой обычно ниже 10000 г/моль.

Таким образом, обычно принимают во внимание, что обеспечивающий направленную доставку к мягким тканям комплексообразующий агент представляет собой бифункциональный агент: одна группировка должна служить для комплексообразования с ионом тория, желательно в хелатированном комплексе, т.е. в комплексе, в котором торий многократно подвергается комплексообразованию, а другая группировка должна служить вектором, обеспечивающим направленную доставку этого комплекса к мягкой ткани, которая подлежит лечению. Комплексообразующая группировка может состоять из одной или более функциональных групп, присутствующих на обеспечивающей направленную доставку группировке, или может быть введена в обеспечивающую направленную доставку группировку путем химической обработки. Однако чаще комплексообразующая группировка прямо или опосредованно (например, через линкерную группировку) конъюгирована с обеспечивающей направленную доставку группировкой. Такие конструкции из активного (например, терапевтически или диагностически активного) металла комплексообразующей группировки, возможной линкерной группировки, обеспечивающей направленную доставку группировки, хорошо известны в области радиофармацевтических средств для направленной доставки и визуализирующих агентов для направленной доставки и в случае тория могут быть выбраны и сконструированы аналогичным образом. В этом отношении можно привести ссылку, например, на НапбЬоок о£ Тагде1еб ЭеНуегу о£ 1тащпд Адепй, Еб. ТогсЫйп, СКС Ргс55. 1995.

Согласно настоящему изобретению торий-227 будет предпочтительно конъюгирован с обеспечивающей направленную доставку молекулой с использованием бифункциональных хелатообразующих агентов. Они могут представлять собой циклические, линейные или разветвленные хелатообразующие агенты. В частности, можно сослаться на полиаминополикислотные хелатообразующие агенты, которые содержат линейный, циклический или разветвленный полиазаалкановый скелет с кислотными (например, карбоксиалкильными) группами, присоединенными к азотным атомам скелета. Примеры подходящих хелатообразующих агентов включают в себя производные ЭОТА, такие как п-изотиоцианатобензил1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетрауксусная кислота (р-8СП-В7-ООТА), и производные ЭТРА, такие как п-изотиоцианатобензилдиэтилентриаминпентауксусная кислота (р-8СП-В7-ОТРА), при этом первые представляют собой циклические хелатообразующие агенты, а вторые - линейные хелатообразующие агенты.

Согласно настоящему изобретению производные 1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10тетрауксусной кислоты являются особенно предпочтительными хелатообразующими агентами для тория, но не известно, способны ли они образовывать координационные связи с четырехвалентными металлами, такими как торий. Неожиданно авторы настоящего изобретения обнаружили, что хотя стандартные способы не могут быть использованы для хелатирования тория с использованием производных ЭОТА, нагревание производного ЭОТА с этим металлом обеспечивает эффективное образование хелатированного комплекса, как показано в примерах ниже. Таким образом, в еще одном аспекте настоящего изобретения предложен способ образования комплекса по изобретению или комплекса, пригодного для использования в способах по настоящему изобретению, включающий нагревание тория-227 с производным 1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетрауксусной кислоты с образованием хелатированного тория-227 и последующее присоединение этого хелатированного тория-227 к обеспечивающей направ

- 8 008195 ленную доставку группировке Можно использовать любую подходящую, обеспечивающую направленную доставку группировку, такую как группировки, указанные в данном описании (например, ниже).

Металлирование комплексообразующей группировки может быть выполнено до или после присоединения комплексообразующей группировки к обеспечивающей направленную доставку группировке. Однако при использовании способа нагревания, указанного выше, предпочтительно, чтобы металл был координирован до присоединения к обеспечивающей направленную доставку группировке.

Предпочтительно хелатообразующие агенты представляют собой нефосфонатные молекулы, и в настоящем изобретении предпочтительно, чтобы ²²⁷ТЕ не был присоединен к какому-либо фосфонату или другой группе для направленной доставки к костям.

Типы соединений, обеспечивающих направленную доставку, которые могут связываться с торием227 через хелатообразующий агент, включают в себя моноклональные или поликлональные антитела, ростовые факторы, пептиды, гормоны и аналоги гормонов, фолат и производные фолата, биотин, авидин и стрептавидин или их аналоги. Другими возможными носителями могут быть РНК, ДНК или их фрагменты, олигонуклеотиды, углеводы, липиды или соединения, образованные путем объединения таких групп с белками или без белков и т.д.

Для облучения мягкой ткани с терапевтическими целями торий-227 подвергают конъюгированию с обеспечивающей направленную доставку группировкой с биосродством, предпочтительно за исключением остеотропов, липосом и фолат-конъюгированных антител или фрагментов антител.

Меченные торием-227 молекулы по настоящему изобретению могут быть использованы для лечения злокачественных и доброкачественных заболеваний путем направленной доставки к рецепторам, ассоциированным с заболеванием. Обычно такое медицинское применение ²²⁷ТЕ для лечения злокачественных или доброкачественных заболеваний осуществляется посредством радиоиммунотерапии, основанной на связывании ²²⁷ТЕ с помощью хелатообразующего агента с антителом, фрагментом антитела или конструкцией антитела или фрагментами антитела. Применение ²²⁷ТЕ в способах и фармацевтических средствах по настоящему изобретению является особенно подходящим для лечения любой формы злокачественного и ревматологического заболевания, особенно рака кожи, предстательной железы, шеи или молочной железы, или воспалительных заболеваний, таких как артрит или фиброз.

Представленные в данном описании эксперименты ίη νίίτο с моноклональными антителами, меченными торием, показали, что торий-227 может быть связан с молекулой-носителем через бифункциональный хелатообразующий агент. Также показано, что такие ²²⁷ТЕ-иммуноконъюгаты продемонстрировали специфическую связывающую активность в отношении клеток линии ΌΑυΌΙ лимфомы человека, экспрессирующих антиген ΟΌ20, и что с каждой клеткой может связываться подходящее количество атомов ²²⁷ТЕ. Тем самым впервые показано, что возможна направленная доставка к рецептору посредством молекулы, меченной торием-227.

Интересная особенность применения тория-227 заключается в том, что интенсивность излучения со временем будет увеличиваться из-за прироста излучения дочерних радионуклидов, т. е. доза, доставляемая к нормальным органам, может оставаться низкой во время фаз поглощения и элиминации. Это проиллюстрировано с помощью чертежа из прилагаемых графических материалов. Если бы удержание в опухоли было высоким, то мощность поглощенной дозы со временем увеличивалась бы из-за прироста дочерних нуклидов, зависящего от удержания опухолью дочернего нуклида. Однако из-за проблем, связанных с энергиями отдачи, эффективное удержание дочерних нуклидов в участке-мишени обычно требует очень специфических способов доставки, таких как доставка в липосомах, или таких, при которых радионуклид включается в минерализованную кость.

223 227

Количество высвобождаемого На могло бы быть уменьшено, если бы молекула, несущая ТЕ, имела короткий биологический период полуудержания ίη νίνο, поскольку этот радионуклид в основном 227 223 элиминируется до того, как большая часть ТЕ распадается до На. Однако согласно настоящему изобретению для того, чтобы оставаться терапевтически эффективным, количество ²²⁷ТЕ необходимо увеличивать. Предпочтительный биологический период полураспада ίη νίνο составляет менее 7 дней, предпочтительно менее 4 дней и особенно предпочтительно менее 2 дней. Если комплексообразующий агент выбран таким образом, чтобы доставлять ²²⁷ТЕ внутрь клеток-мишеней, то это дополнительно увеличивает специфическую цитотоксичность и уменьшает системный токсический эффект радиоактивных дочерних нуклидов из-за, по меньшей мере, частичного удержания дочерних изотопов в участке опухоли. Обе этих особенности расширяют терапевтическое окно для ²²⁷ТЕ и, таким образом, образуют предпочтительные воплощения изобретения.

В дополнительном воплощении изобретения пациенты с заболеванием как мягкой, так и скелетной 227 223 ткани могут подвергаться лечению как с помощью ТЕ, так и с помощью На, образующегося ίη νίνο при введении тория. В этом особенно полезном аспекте дополнительный терапевтический компонент для лечения происходит из допустимого немиелотоксического количества ²²³На при направленной доставке к скелетному заболеванию. В этом терапевтическом способе ²²⁷ТЕ обычно используют для лечения первичного и/или метастазирующего рака мягкой ткани путем направленной доставки к этой ткани, а ²²³На, образующийся в результате распада, используют для лечения сопутствующего скелетного заболевания у того же субъекта. Это скелетное заболевание может представлять собой метастазы в скелет, являющиеся

- 9 008195 результатом первичного рака мягких тканей, или может представлять собой первичное заболевание, при котором лечение мягких тканей должно противоречить лечению метастазирующего рака. Иногда заболевания мягких тканей и скелета могут быть не связаны друг с другом (например, дополнительное лечение скелетного заболевания у пациента с ревматологическим заболеванием мягких тканей).

При этом документы, на которые ссылаются в данном описании, включены посредством ссылки.

Изобретение теперь будет проиллюстрировано следующими не ограничивающими примерами.

Примеры

Основное предположение.

Как правило, масса опухолевой ткани у субъекта является незначительной по сравнению с массой тела, и даже если обеспечивается значительная концентрация и удержание ториевого комплекса в опухоли, как правило, 1% тория или меньше будет попадать в опухолевую ткань у людей. Поэтому облучение мягкой ткани может быть оценено на основе выведения ториевого комплекса из всего тела. Таким образом, в примерах 1 и 2 будут пренебрегать эффектом направленной доставки к опухоли, что демонстрирует влияние биологического периода полураспада на количество ²²³Ва, образующегося ίη νίνο, относительно количества введенного ²²⁷Тй.

Материалы.

Ацетат аммония (АтАс), Ь-аскорбиновая кислота (АксА), диэтилентриаминпентауксусная кислота (ЭТРА), этилендиаминтетрауксусная кислота (БИТА), карбонат натрия (Ыа₂СО₃), гидрокарбонат натрия (№НСО₃). тетраметиламмония ацетат (ТМАА, 90% чистоты) были получены от АНпсй (МИ^аикее, ^1, И8А) и, если не указано иначе, чистота превышала 99%. 2-(р-Изотиоцианатобензил)-1,4,7,10тетраазациклододекан (ЫС8-ООТА) был получен от Мастосусйск (Иа11ак, ТХ, И8А). Бычий сывороточный альбумин (БСА) и V фракция бычьего альбумина были получены от 8щта (81. Бошк, МО, И8А). Фосфатно-солевой буфер (ФСБ), фетальная бычья сыворотка (БВ8) и среда ВРМ1 1640 с глутамаксом были получены от О1Ьсо (Ра1к1еу, 8со11апб, иК). В среду ВРМ1 1640 добавляли 15% БВ8, пенициллин и стрептомицин. Анионообменник был получен от Вю-Ваб БаЬогаЮпек (Негси1ек, СА, И8А). МаЬ1йега (ритуксимаб) был получен от Е.Но££тапп-Ба Восйе АО (Ваке1, 8\\'йхег1апб). Используемая клеточная линия представляла собой СО20-положительную лимфому ИАиИ!, приобретенную в Европейской коллекции клеточных линий животных (ЕСАСС, 8айкЬшу, ИК).

Пример 1. Оценка образования ίη νί\Ό ²²³Ва после введения соединения, меченого торием, с 12 часовым периодом полуудержания тория во всем организме.

227 227

Эффективный период полураспада Тй (исходя из предположения, что фракция Тй, удерживаемая в опухоли, пренебрежимо мала) будет составлять ^1/Т1/2эфф ективный ^1/Т1/2физ^+1/Т1/2биол ^1/Т1/2эффективный ^{0,487 дней}.

Фракция ²²⁷Тй, распавшегося в организме, будет эквивалентна Тшэффек-швный/Тшфиз = 0,0262, что соответ9 223 227 ствует образованию 6,1-10 атомов Ва на 100 кБк инъецируемого Тй. Токсический компонент от дочерних нуклидов должен быть примерно эквивалентен дозе радия-223 4,3 кБк ²²³Ва на 100 кБк (первоначальных) ²²⁷Тй. Величина распада 0,0262 введенного тория эквивалентна 2,6 кБк полностью удерживаемого ²²⁷Тй на каждые введенные 100 кБк.

Пример 2. Оценка образования ²²³Ва ίη νί\Ό после введения соединения, меченного торием, с 4 дневным периодом полуудержания тория во всем организме.

Согласно вычислениям, произведенным как в примере 1, Т1_/2эфф_{ективны}й = 3,3 дня для выведения из организма. Эта величина эквивалентна фракции 0,176 атомов Тй, распадающихся в организме. Это соот10 223 227 ветствует 4,1-10 атомам Ва, образующихся на 100 кБк Тй. Токсический компонент от дочерних нуклидов должен быть примерно эквивалентен инъецируемой дозе 29 кБк ²²³Ва на 100 кБк инъецируемого ²²⁷Тй. При таком биологическом периоде полураспада 100 кБк введенного ²²⁷Тй эквивалентно 17,6 кБк полностью удерживаемого.

Пример 3: Получение ²²⁷Тй.

Торий-227 избирательно выделяли из смеси с ²²⁷Ас, которая накапливала дочерние нуклиды в течение двух недель, путем добавления в смесь Ас (упаренную досуха) 0,25 мл 7 М НЫО₃ и элюции этого раствора через анионообменную колонку. Колонка, содержащая приблизительно 70 мг анионообменной смолы АО-1 Х 8 (Вютаб БаЬотаФпек, Негси1ек, СА, И8А) (нитратной формы), имела внутренней диаметр 227 223 мм и длину 30 мм. Колонку промывали с помощью 2-4 мл 7 М НЫО₃ для удаления Ас, Ва и дочер

227 227 них нуклидов Ва, при удержании Тй. Затем Тй удаляли с колонки несколькими миллилитрами 12 М НС1. В заключение, НС1 выпаривали досуха, и ²²⁷Тй перерастворяли в 0,2 М НС1.

Пример 4. Мечение бифункционального хелатообразующего агента ЫС8-ПОТА торием-227.

Если не указано иначе, то используемые химические реагенты были получены от А1бпсй (МФтаикее, ^1, И8А) и имели чистоту 99% или выше. К 100 мкл ²²⁷Тй, растворенного в 0,2 М НС1 в полуграммовой пробирке, добавляли раствор, содержащий 25 мкл п-8СХ-бензил-ЭОТА (10 мг/мл) (Мастосусйск 1пс, Иа11ак, ТХ, И8А), 20 мкл Б-аскорбиновой кислоты (150 мг/мл) и 50 мкл ацетата тетраметиламмония (300 мг/мл) (90% чистоты), до рН примерно 5,5. Эту реакционную смесь выдерживали в шейкеретермостате (Тйеттот1хет Сот£ог1, Еррепбог£ АО, НатЬитд, Оеттапу) при 55°С в течение 1 ч. (Обычно это служит основанием для количественной элюции ²²⁷Тй через 0,5 мл колонку с 8ерйабех С-25 с исполь- 10 008195 зованием 2,5 мл 0,9%-ного раствора №1С1. тогда как ²²³На (не образующий комплексы) почти количественно удерживается на этой колонке. В контрольном эксперименте с ²²⁷ТИ в реакционном растворе без хелатообразующего агента также подтвердили. что более 90% и ²²⁷ТИ. и ²²³На удерживалось на колонке. Неочищенный реакционный продукт ²²⁷Тй-п-БСМ-бензил-ООТЛ использовали для мечения ритуксимаба.

Пример 5. Получение радиоиммуноконъюгата (РИК) на основе ²²⁷ТИ. Мечение выполняли с помощью двухстадийной методики. где на первой стадии ²²⁷ТИ и хелатообразующий агент подвергают реакции сочетания (описано в примере 4). На второй стадии радиоактивный хелатообразующий агент присоединяют к антителу. Реакционный раствор (пример 4) добавляли к 200 мкл ритуксимаба (10 мг/мл. МаЫйега®. Р.Нойтапп-ЬЛ НосИе АС. Ва5с1. 8\\'Цхег1апй). и этот реакционный раствор доводили до рН приблизительно 9 путем добавления примерно 100 мкл 1 М Ыа₂СО₃/ПаНСО₃. Этот реакционный раствор осторожно перемешивали на шейкере (ТИегтопихег СотГоП. ЕррепйогГ АС. НатЬигд. Сегтапу) при 35°С в течение 1 ч. После этого добавляли 50 мкл 10 мМ диэтилентриаминпентауксусной кислоты (ЭТРА. Р1ика СИенне АС Виск. №и-и1т. Сегтапу) и 200 мкл 0.2 М глицина в насыщенном борате (тетраборат натрия декагидрат. от Р1цка). и инкубацию продолжали в течение 5 мин. После этого реакционную смесь переносили на колонку 8ерйабех С-50 ΡΌ 10 и элюировали 1%-ным БСА (бычий альбумин. V фракция. 81дта СИет1са1 Со.. 81. Ьоцщ. МО. И8А) в ФСБ (С1Ьсо. Ращ1еу. 8со11апб. ИК). Элюат собирали фракциями примерно по 0.6 мл и считали на дозкалибраторе (СКС-127К, Сарш1ес. Напъеу. N1. И8А). и фракции. соответствующие белковому элюату. анализировали с помощью гамма-спектроскопии (детектор СЕМ15Р и компьютерная программа Саттасыоп 5.20. и то и другое от ЕС&С Ог1ес. Оак Ктбде. ΊΝ. И8А) для 227 223 определения гамма-квантов ТИ относительно гамма-квантов На в каждой фракции перед дальнейшим использованием. Использовали следующие гамма-пики: 236.0 кэВ (относительное содержание 11.6%). 256.3 кэВ (7.4%). 329.9 кэВ (2.8%) для ²²⁷ТИ; 154.2 кэВ (6.0%). 269.4 кэВ (13.6%). 323.9 кэВ (3.7%) для ²²³На соответственно. Использовали фракции 6 и 7. соответствующие приблизительно 50% белкового элюата (как подтверждено элюцией ¹²⁵1-меченного ритуксимаба через колонки ΡΌ-10). так как они. по существу. не содержали ²²³На. Фракции 8 и 9 содержали большие количества ²²³На. что указывает на значительное перекрывание между белком и маленькими молекулами в этих фракциях (при повторной очистке на колонке ΡΌ-10 эти две фракции давали примерно 50% ²²⁷ТИ во фракциях 6 и 7 из нового элюата. что подтверждало присутствие ²²⁷ТИ-ритуксимаба). На основе измерения элюированных с колонки ΡΌ-10 фракций на Се-детекторе установлено. что суммарный выход меченого продукта составлял приблизительно 12%. С помощью препарата. хранившегося 5 дней при 8°С. показано. что конъюгат ²²⁷ТИ и антитела может быть легко очищен на колонке ΡΌ-10 с удалением ²²³На. образующегося в результате распада ²²⁷ТИ. Таким образом. было показано. что ²²⁷ТИ может быть связан с обеспечивающей направленную доставку молекулой через бифункциональный хелатообразующий агент и очищен от дочерних продуктов. При хранении образующийся дочерний продукт ²²³На обычно высвобождается из хелатообразующего агента. и при использовании очистки гель-фильтрацией/фракционированием по размеру можно выделить чистый конъюгат ²²⁷ТИ и антитела.

Пример 6. Связывание ²²⁷ТИ-меченого антитела с клетками лимфомы человека ЭЛиОЕ

Клетки ПАИП1. приобретенные в Европейской коллекции клеточных линий животных (ЕСАСС. 8а115Ьшу. ПК). выращивали в соответствии с инструкциями поставщика. используя клеточную среду и добавки от С1Ьсо (ГаМеу. 8со11апб. ПК) и используя флаконы объемом 500 мл для культивирования (Се11 81аг. Стешет Вю-Опе СтЬН. Рпскепйащеп. Сегтапу). Клетки ПАИП1 (2х10⁷ клеток в 0.7 мл ФСБ) использовали для изучения связывания ш νίΙΐΌ ²²⁷ТИ-меченого ритуксимаба. В качестве контроля неспецифического связывания использовали клетки ПАиП1. предварительно насыщенные (блокированные) 40 мкг немеченого ритуксимаба в течение 15 мин. В тест-пробирки (полистироловые культуральные тестпробирки. 12х75 мм. Е1кау. 811ге\\ъЬшу. МА. И8А) добавляли ²²⁷ТИ-меченый ритуксимаб. соответствующий 1.3. 5.3 или 26 мкг/мл в указанном порядке. Этот эксперимент проводили в двух повторностях для каждого концентрационного уровня. используя неблокированные и блокированные клетки. Инкубацию осуществляли в течение 2 ч при 8°С. После инкубации клеточные суспензии измеряли на радиоактивность (Сгу§1а1 II Мц111бе1ес1ог. Еаскагй 1и81гитеп1 Сотрапу 1пс. Оо\\'пег5 Сгоуе. 1Ь. И8А) и промывали клетки 2 мл 1%-ного БСА (бычий альбумин. V фракция. 81дта С11е1тса1 Со.. 81. Ьоцщ. МО. И8А) в ФСБ (С1Ьсо. ЕаЫеу. 8^1^6. ИК). и центрифугировали (С’егИпГиде 5810 Н. ЕррепйогГ АС. НатЬигд. Сегтапу) при 200 об./мин в течение 5 мин. Это промывание/центрифугирование повторяли дважды. После этого клеточные осадки измеряли на радиоактивность. Результаты (среднее двух повторностей для каждого) представлены в табл. 3 ниже.

- 11 008195

Таблица 3

Концентрация добавл. РИК, мкг/мл	Среднее кол-во имп/мин на клеточный осадок	Количество связанных атомов тория- 227 на клетку
	Неблокировано	Блокировано	Неблокировано	Блокировано	Неспецифическое связывание
1,3	226	25	1,9	0,2	1,7
5,3	1186	97	10,1	0,8	9,3
26,0	4141	315	35,2	2,7	32,5

Эти результаты показывают, что ²²⁷Т11-меченый ритуксимаб специфически связывается с клетками ΟΑυϋΙ. В среднем примерно в 12 раз больше РИК связывалось с неблокированными клетками по сравнению с блокированными. Более того, на клетку приходилось терапевтически значимое количество связанных атомов ²²⁷Т11.

Таким образом, используя бифункциональный хелатообразующий агент, полезный для связывания с антителами, пептидами и витаминами и т.д., можно получить ²²⁷Т11-меченый РИК, способный специфи227-Г1 чески связывать терапевтически значимое количество атомов 1 η с опухолевыми клетками.

Пример 7. Оценка токсичности ²²³ Ра в предшествующем уровне техники.

Из-за отсутствия данных по токсичности радия-223 и радия-224 для человека, предполагаемую радиотоксичность для ²²³Иа можно получить следующим образом, используя опубликованные данные для радия-224 на собаках. Цепь распадов (включая распады дочерних нуклидов) как ²²³Ка, так и ²²⁴Ка приводит к испусканию четырех альфа-частиц в расчете на атом радия. Суммарные дозы альфа-частиц из ²²³Ка и ²²⁴К.а, уравновешенные дочерними нуклидами, составляют примерно 26,3 и 27,1 МэВ на превращение соответственно и, следовательно, являются почти эквивалентными. Период полураспада ²²⁴ И а составляет 3,62 дня, а для ²²³Ка - 11,43 дня. Это означает, что на инъецируемую единицу активности доза в скелете, происходящая из ²²³Ва, обычно является примерно в 3,1 раза большей, чем доза из ²²⁴Ва, с учетом энергии альфа-частиц и различий в периодах полураспада и при условии долговременного биологического удержания этого радионуклида (т.е. выведение определяется физическим периодом полураспада радионуклида). Это является обоснованным предположением, поскольку Ка является аналогом Са и быстро включается в скелет.

Из клеток крови сильнее всего после лечения с помощью ²²⁴ И а или ²²³ Иа поражаются нейтрофилы. Данные из опубликованного исследования о биологических эффектах ²²⁴Ка у взрослых собак (см. У觧епЬиг§, КасНа! Кез 146: 171-186, (1996)), который вводили в виде однократной внутривенной инъекции, показывают, что количество нейтрофильных клеток сильно уменьшалось при 120 и тем более при 350 кБк на кг массы тела (кБк/кг), как показано в табл. 4 ниже.

Таблица 4

Введенная активность (кБк/кг)	Дни до достижения низшего уровня	% от базового уровня при достижении низшего уровня	Количество субъектов
13	30	60	12
40	10	70	12
120	10	20	6
350	10	4	8

При 350 кБк/кг у некоторых субъектов (3 собаки из 8) наблюдали смерть, вызванную гематологической дискразией, возникающей из-за деструкции костного мозга. Поэтому можно предположить, что максимально переносимая доза ²²⁴Ка для собак находится в диапазоне от 120 до 350 кБк/кг. В пересчете на Ка, как описано выше, это соответствует 39-113 кБк/кг Ка. С учетом схожей гематологической токсичности у собак и людей, следует ожидать достижения максимально переносимой дозы для людей в пределах диапазона 39-113 кБк/кг ²²³ Иа. Обычно следует быть осторожным при сравнении данных для двух разных видов. Однако собаки и люди очень похожи в отношении токсического влияния излучения на спинной мозг (см. На11, КаФоЫо1о§у £ог 1Ие гасНо1ощ§1, Ырртсой АУПНатз & ХУПктз, РЫ1абе1рЫа, РА, и8А, 2000) и, таким образом, следовало бы ожидать, что эти расчеты дадут эффективную оценку максимально переносимой дозы ²²³ Ра для людей.

Пример 8. Лабораторное исследование ²²³Ра у людей.

В 1 фазе исследования пациентам с раком молочной железы или простаты давали дозовые уровни 37, 74, 130, 170 и 200 кБк/кг ²²³Ка в виде однократных доз. Фракции нейтрофильных клеток служили в

- 12008195 качестве чувствительного критерия контроля гематологической токсичности. Результаты представлены в табл. 5 ниже.

Таблица 5

Введенная активность (кБк/кг)	Дни до достижения низшего уровня	% от базового уровня при достижении низшего уровня	Количество субъектов
37	14	60	5
74	14	60	5	-
130	28	50	5
170	21	40	5
200	21	30	5

Таким образом, неожиданно обнаружили, что высокие дозовые уровни допустимы для людей, и это указывает на то, что с помощью ²²³Ка можно доставлять существенно более высокие дозы радиации к костным поверхностям, чем предполагалось раньше, не вызывая вредной гематологической токсичности. Пример 9. Дополнительное лабораторное исследование ²²³Ка у людей.

Эксперимент из примера 8 выполняли с помощью дозиметрии с высокой точностью градуировки. Дозовые уровни 46, 93, 163, 213 и 250 кБк/кг ²²³Ка давали в виде однократных доз, а также вводили ре жим многократных доз.

Пациенты и критерии исследования.

Тридцать один пациент с метастазами в скелет (10 - от рака молочной железы, и 21 - от рака простаты) участвовали в фазе ΙΑ и фазе ΙΒ испытаний. Пациенты с раком простаты имели возраст от 60 до 85 лет и массу тела, варьирующую от 50 до 120 кг. Все пациенты имели прогрессирующее заболевание, которое рассматривали как не поддающееся гормонотерапии.

Пациенты с раком молочной железы имели возраст от 40 до 75 лет и массу тела от 50 до 95 кг. Все они пришли к повторной гормонотерапии и/или химиотерапии. Главная цель заключалась в оценке безопасности и переносимости ²²³Ка.

Наблюдение.

Период наблюдения составлял 8 дней.

Дозовые уровни и режимы лечения.

При испытании с применением однократной инъекции использовали следующие средние дозовые уровни: 46, 93, 163, 213 и 250 кБк/кг массы тела. На каждый дозовый уровень было распределено по пять пациентов. Были включены 15 пациентов с раком простаты и 10 пациентов с раком молочной железы.

В режим повторной инъекции были включены 6 пациентов, все с раком простаты. Трем пациентам было назначено 5 доз с трехнедельными интервалами, каждая по 50 кБк/кг массы тела, и трем пациентам 2 дозы с шестинедельными перерывами, каждая по 125 кБк/кг массы тела.

Клиренс крови.

В разные моменты времени после инъекции забирали примерно 1 мл крови и использовали для измерения радиоактивности для того, чтобы определить профили клиренса крови у 25 пациентов, включенных в режим однократной инъекции. Определяли массу каждого образца крови и рассчитывали уровень радиоактивности на миллилитр крови (при условии, что 1 мл крови равен 1 г). Радиоактивность измеряли на счетчике с ячейкой №1 типа. Уровень этой активности сразу после инъекции рассчитывали с учетом, что первоначально в крови находилось 100% этой активности и что общая масса крови составляет 7 мас.% тела. Эти данные представлены в виде биологических данных, т.е. данных, откорректирован ных относительно радиоактивного распада от времени инъекции до времени измерения.

Получение радионуклидов.

Радий-223 получали из ²²⁷Ас/²²⁷Т11 и очищали с использованием Ас-смолы для иммобилизации ²²⁷Ас и ²²⁷Т11, как описано в XV О 0040275. Перед дальнейшим использованием концентрированный продукт, т.е. растворенный ²²³КаС1₂, тестировали на радионуклидную чистоту с помощью гамма-спектроскопии. Концентрат ²²³Ка в ЫаС1 и цитрате натрия переводили в стерильный продукт. Корректировали изотоничность, рН, объемную активность, отбирали пробу для тестирования на патогены и пирогены, и конечный продукт вносили в стерильные ампулы, которые затем герметически закрывали с помощью резиновой мембраны, проницаемой для шприцов. Эти ампулы вставляли в свинцовые контейнеры и отправляли в госпитали.

Побочные эффекты.

В исследовании с возрастающими дозами не наблюдали дозоограничивающей токсичности. Имела место обратимая миелосупрессия с наиболее низким уровнем в течение 2-3 недель после инъекции и восстановлением в течение периода наблюдения. Нейтропения максимальной третьей стадии имела место у двух из 25 пациентов. На тромбоцитах была обнаружена только первая степень токсичности, даже

-13008195 при двух самых высоких дозовых уровнях. В общем, с увеличением дозового уровня наблюдалась незначительная тенденция к более высокой миелотоксичности, но этот эффект не очевидный. Наблюдали несколько неблагоприятных случаев, самым частым случаем была тошнота, имевшая место у четырех из пяти пациентов с самым высоким дозовым уровнем. Обратимую диарею 1 и 2 степени, хорошо поддающуюся лечению, наблюдали во всех группах, получающих дозы, и в целом приблизительно у 50% пациентов. В группе, получающей самую высокую дозу, рвота имела место у четырех из пяти пациентов. В группах, получающих другие дозы, этого не наблюдали.

Режимы повторных инъекций.

Три пациента, получающих дозы в режиме 50x5, не чувствовали какой-либо дополнительной токсичности, связанной с повторным лечением. По-видимому, такое сглаживание гематологических профилей объясняется режимом дробного приема доз по сравнению с однократной дозой, составляющей в сумме дозу, аналогичную пяти фракциям вместе.

Неблагоприятные случаи, не связанные с ²²³Ка.

В режиме повторного дозирования фактически только один из пациентов получил вторую дозу в режиме 125x2. Из двух пациентов, которым не дали конечную дозу, один умер из-за прогрессирования метастазов в печень, а другой был признан непригодным для дальнейшего лечения из-за рецидива прежнего сердечного состояния.

Миел отоксичность.

Чтобы получить широкий диапазон измерения гематологической токсичности, контролировали влияние радия-223 на фракции нейтрофильных клеток, тромбоциты, количество лейкоцитов и гемоглобин. Влияние на нейтрофилы и лейкоциты было наиболее ярко выраженным, что указывало на то, что они являются чувствительными маркерами миелотоксичности. Эти результаты выражены как количество пациентов, демонстрирующих в исследовании определенный уровень токсичности по степени токсичности, оцениваемой по шкале ОКТ (общий критерий токсичности от англ. СТС, Сошшоп Тох1С11у Сгйепа), и представлены в табл. 6 ниже.

Таблица 6

Параметры	Степень токсичности по ОКТ	46 п=5	Однокр 93 п=5	атная доз 163 п=5	а/кБк/кг 213 п=5	250 п=5	Повторное лечение п=2	Многок дозирс кБ 5x50 п=3	ратное звание </кг 2x125 п=3
Т ромбоциты	0	5	5	4	5	2	2	2	3
1	0	0	1	0	3	0	1	0
Нейтрофил	0	4	3	3	2	2	2	1	3
1	0	1	0	1	0	0	0	0
2	1	1	1	2	2	0	2	0
3	0	0	1	0	1	0	0	0
Лейкоциты	0	4	4	3	2	2	2	1	2
1	0	0	0	0	0	0	0	0
2	1	1	1	2	2	0	2	1
3	0	0	1	1	1	0	0	0
Г емоглобин	0	4	2	4	2	2	1	0	0
1	0	2	0	2	3	1	2 I 1
2	1	1	1	1	0	0	1 2

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Claims (19)

1. Способ лечения заболевания мягких тканей у млекопитающего субъекта, включающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества обеспечивающего направленную доставку к мягким тканям комплекса тория-227 и комплексообразующего агента, причем указанное количество является таким, что в результате распада введенного тория-227 ίη νίνο образуется допустимое немиелотоксическое количество радия-223, при этом торий-227 конъюгирован с обеспечивающей направленную доставку группировкой с биосродством, за исключением остеотропов, липосом и фолатконъюгированных антител или фрагментов антител, и где терапевтически эффективное количество тория-227 составляет по меньшей мере 25 кБк/кг.

- 14 008195

2. Способ по π. 1, где указанный субъект представляет собой человека или собаку.

3. Способ по π. 1 или 2, где указанное терапевтически эффективное количество тория-227 составляет по меньшей мере 75 кБк на килограмм массы тела.

4. Способ по любому из пи. 1-3, где указанное допустимое немиелотоксическое количество радия223 составляет менее 300 кБк на килограмм массы тела.

5. Способ по п.4, где указанное допустимое немиелотоксическое количество радия-223 составляет менее 150 кБк на килограмм массы тела.

6. Способ по любому из пи. 1-5, где указанный комплекс содержит хелатированный торий-227, связанный с лигандом, выбранным из группы антител, конструкций антител, фрагментов антител, конструкций фрагментов антител и их смесей.

7. Способ по любому из пи. 1-6, где указанное заболевание мягких тканей представляет собой злокачественное заболевание.

8. Способ по п.7, где злокачественное заболевание представляет собой заболевание, выбранное из группы карцином, сарком, миелом, лейкозов, лимфом и раковых заболеваний смешанного типа.

9. Способ по любому из пп.1-8, где указанного субъекта лечат также с целью противодействия миелотоксичности образующегося в нем радия-223.

10. Способ по п.9, где указанного субъекта лечат стволовыми клетками.

11. Способ лечения заболевания мягких тканей у млекопитающего субъекта, включающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества обеспечивающего направленную доставку к мягким тканям комплекса тория-227 и комплексообразующего агента, причем указанное количество, которое рассчитывают по формуле I, приведенной ниже, такое, что в результате распада введенного тория-227 ίη νίνο образуется допустимое немиелотоксическое количество радия-223, Ό_{Κ3 л} +(^Г) _(|) ^аМ 1,65 где Т_Вю означает биологический период полураспада указанного обеспечивающего направленную доставку к мягким тканям комплекса тория-227 и комплексообразующего агента;

Т_ть означает физический период полураспада ²² Т11 (18,7 дней);

означает активность введенного комплекса ²²⁷Т11 (кБк/кг) и равно по меньшей мере 25 кБк/кг и

Ό р.., означает допустимое немиелотоксическое количество ²²³Ка;

и при этом торий-227 конъюгирован с обеспечивающей направленную доставку группировкой с биосродством, за исключением остеотропов, липосом и фолат-конъюгированных антител или фрагментов антител.

12. Способ по π. 11, где Ό_Κ3 равно 200 кБк/кг.

13. Способ по любому из пп.1-12 в комбинации по меньшей мере с одним дополнительным лечебным воздействием, выбранным из хирургии, наружной лучевой радиотерапии, химиотерапии, эндорадионуклидной терапии радионуклидами, отличными от ²²⁷Т11, и/или регулирования температуры тканей.

14. Фармацевтическая композиция, содержащая обеспечивающий направленную доставку к мягким тканям комплекс тория-227 и комплексообразующего агента вместе по меньшей мере с одним фармацевтическим носителем или эксципиентом, где торий-227 конъюгирован с обеспечивающей направленную доставку группировкой с биосродством, за исключением остеотропов, липосом и фолатконъюгированных антител или фрагментов антител, и где торий-227 присутствует в терапевтически эффективном количестве по меньшей мере 25 кБк/кг.

15. Обеспечивающий направленную доставку к мягким тканям комплекс тория-227 и комплексообразующего агента, где торий-227 конъюгирован с обеспечивающей направленную доставку группировкой с биосродством, за исключением остеотропов, липосом и фолат-конъюгированных антител или фрагментов антител, и где торий-227 присутствует в количестве эффективной дозы, равной по меньшей мере 25 кБк/кг.

16. Комплекс по и. 15, где торий-227 хелатирован производным 1,4,7,10-тетраазациклододекан1,4,7,10-тетрауксусной кислоты.

17. Способ образования комплекса по и. 16, включающий нагревание указанного тория-227 с указанным производным 1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетрауксусной кислоты с образованием хелатированного тория-227 и последующее присоединение указанного хелатированного тория-227 к обеспечивающей направленную доставку группировке.

18. Набор для использования в способе по любому из пи. 1-13, включающий раствор обеспечивающего направленную доставку к мягким тканям комплекса тория-227 и комплексообразующего агента вместе с инструкциями для использования указанного раствора в указанном способе, где торий-227 конъюгирован с обеспечивающей направленную доставку группировкой с биосродством, за исключением остеотропов, липосом и фолат-конъюгированных антител или фрагментов антител.

19. Набор для использования в способе по любому из пи. 1-13, включающий комплексообразующий агент, способный образовывать комплекс с ионами тория, где указанный комплексообразующий агент не является обеспечивающим направленную доставку к мягким тканям комплексообразующим агентом,

-15 008195 соединение, обеспечивающее направленную доставку к мягким тканям, возможно вместе с линкерным соединением, которое может быть конъюгировано с указанным комплексообразующим агентом с получением обеспечивающего направленную доставку к мягким тканям комплексообразующего агента, и инструкции для приготовления обеспечивающего направленную доставку к мягким тканям комплекса тория-227 и комплексообразующего агента, и также возможно для использования указанного комплекса в указанном способе, где обеспечивающий направленную доставку к мягким тканям комплекс представляет собой группировку с биосродством, за исключением остеотропов, липосом и фолатконъюгированных антител или фрагментов антител.