EA008058B1 - Цитотоксические агенты, содержащие новые сильнодействующие таксаны, и их терапевтическое применение - Google Patents

Цитотоксические агенты, содержащие новые сильнодействующие таксаны, и их терапевтическое применение Download PDF

Info

Publication number
EA008058B1
EA008058B1 EA200500300A EA200500300A EA008058B1 EA 008058 B1 EA008058 B1 EA 008058B1 EA 200500300 A EA200500300 A EA 200500300A EA 200500300 A EA200500300 A EA 200500300A EA 008058 B1 EA008058 B1 EA 008058B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
carbon atoms
group
linear
branched
alkyl
Prior art date
Application number
EA200500300A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200500300A1 (ru
Inventor
Эркан Бэлоглу
Майкл Миллер
Рави В. Дж. Чери
Original Assignee
Иммьюноджен, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Иммьюноджен, Инк. filed Critical Иммьюноджен, Инк.
Priority claimed from PCT/US2003/019558 external-priority patent/WO2004013093A2/en
Publication of EA200500300A1 publication Critical patent/EA200500300A1/ru
Publication of EA008058B1 publication Critical patent/EA008058B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D407/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00
    • C07D407/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings
    • C07D407/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/10—Anthelmintics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/10—Anthelmintics
    • A61P33/12—Schistosomicides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D305/00—Heterocyclic compounds containing four-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atoms
    • C07D305/14—Heterocyclic compounds containing four-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atoms condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D407/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00
    • C07D407/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Epoxy Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

Данное изобретение относится к сильнодействующим таксанам, имеющим группу связывания. Также настоящее изобретение относится к цитотоксическому агенту, содержащему один или более таксан, соединенный с агентом, связывающим клетки. Кроме того настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, предназначенной для индуцирования гибели клеток в выбранной популяции, включающей: (А) цитотоксическое количество одного или более таксана, ковалентно соединенного с агентом, связывающим клетки посредством группы связывания, и (В) фармацевтически доступный переносчик, разбавитель или наполнитель. Также настоящее изобретение относится к способу индуцирования гибели клеток в выбранных популяциях, заключающемуся в обработке клеток-мишеней или тканей, содержащих клетки-мишени, эффективным количеством цитотоксического агента, содержащего один или более таксан, соединенный с агентом, связывающим клетки.

Description

Настоящее изобретение относится к новым цитотоксическим агентам и их терапевтическому применению. Более детально настоящее изобретение относится к новым таксанам, новым цитотоксическим агентам, содержащим указанные таксаны, и их терапевтическому применению. Эти новые цитотоксические агенты находят терапевтическое применение, согласно которому таксаны доставляются в выбранную клеточную популяцию за счет химического соединения с агентом, который обладает способностью специфически связываться с выбранной клеточной популяцией-мишенью.
Предпосылки создания изобретения
Специфичность цитотоксических агентов может быть значительно повышена посредством их целенаправленной доставки к клеткам с помощью соединения этих цитотоксических агентов с агентами, связывающими клетки.
Появилось много работ, посвященных попыткам специфического связывания опухолевых клеток с помощью конъюгатов лекарственных препаратов и моноклональных антител (8е1а е! а1., 1ттипосоп]ида1с5 189-216 (С. Уоде1, еб. 1987); Ойоке е! а1., ίη Тагде!еб Отидк 1-22 (Е. Оо1бЬетд, еб. 1983); Э|епег е! а1., АпйЬобу теб1а!еб бейуегу кук!етк 1-23 (1. Воб^е11, еб. 1988); Вито1 е! а1., АпйЬобу теб1а!еб бейуегу кук!етк 55-79 (1. Воб^ей, еб. 1988)).
Цитотоксические лекарства, такие как метотрексат, даунорубицин, доксорубицин, винкристин, винбластин, мелфалан, митомицин С и хлорамбуцил были конъюгированы с различными моноклональными антителами мыши. В некоторых случаях молекулы лекарства связывали с молекулами антитела посредством промежуточной молекулы-носителя, например, сывороточного альбумина (Оатпей е! а1., Сапсег Век. 46:2412 (1986); 011ка\та е! а1., Сапсег 1ттипо1. 1ттипо1йег. 23:86 (1986); Епбо е! а1., Сапсег Век. 47:1076-1080 (1980)), декстрана (ΗιιπνίΙζ е! а1., Арр1. Вюсйет. 2:25-35 (1980); МапаЬ1 е! а1., Вюсйет. Рйагтасо1. 34:289-291 (1985); ЭШтап е! а1., Сапсег Век. 46:4886-4891 (1986); 81юуа1 е! а1., Ргос. №11. Асаб. 80. 85:8276-8280 (1988)) или полиглутаминовой кислоты (Ткикаба е! а1., 1. №11. Сапс. 1пк!. 73:721-729 (1984); Ка!о е! а1., 1. Меб. Сйет. 27:1602-1607 (1984); Ткикаба е! а1., Вг. ЕСапсет 52:111-116 (1985)).
Для получения указанных конъюгатов был использован широкий спектр линкерных технологий и были исследованы как расщепляемые, так и нерасщепляемые линкеры. В большинстве случаев, однако, полный цитотоксический потенциал лекарственных препаратов проявлялся только в том случае, если молекулы лекарства могли высвобождаться из конъюгатов в немодифицированной форме в сайтемишени.
Один из линкеров, который был применен для получения конъюгатов антитела с лекарством, представляет собой кислотно-лабильный линкер, основанный на цис-аконитовой кислоте, преимуществом которого является использование кислой среды различных внутриклеточных компартментов, в том числе эндосом, задействованных в опосредованном рецепторами эндоцитозе, и лизосом. 8йеп и Вукег использовали указанный метод для получения конъюгатов даунорубицина с макромолекулярными носителями (Вюсйет. Вюрйук. Век. Соттип. 102:1048-1054 (1981)). Уапд и Ве1к£е1б использовали этот же метод для получения конъюгатов даунорубицина с антителами к меланоме (1. №!1.Сапс. 1пк!. 80:11541159 (1988)). ЭШтап е! а1. также использовали кислотно-лабильный линкер сходным образом для получения конъюгатов даунорубицина с антителом к Т-клеткам (Сапсег Век. 48:6097-6102 (1988)).
В качестве альтернативного подхода Тгоие! е! а1. связали даунорубицин с антителом посредством пептидного спейсерного плеча (Ргос. №!1. Асаб. 80. 79:626-629 (1982)). Это было сделано при условии допущения, что свободное лекарство может высвобождаться из такого конъюгата за счет активности лизосомальных пептидаз. Однако тесты, проведенные ш уйго, выявили, что конъюгаты антитела с лекарством реально обеспечивают такую же цитотоксическую активность, что и свободные неконъюгированные лекарства. Указанные результаты позволяют предположить, что механизм, посредством которого молекулы лекарства высвобождаются из конъюгатов с антителами, является неподходящим.
В исследованиях активности цитотоксинов показано, что конъюгаты, сформированные посредством образования дисульфидных мостиков между моноклинальными антителами и каталитически активными белковыми токсинами, обладают более высокой цитотоксической активностью, чем конъюгаты, содержащие другие линкеры. См. БатЬей е! а1., 1. Вю1. Сйет. 260:12035-12041 (1985); БатЬей е! а1., в кн. 1ттипо!охшк 175-209 (А. Бгапке1, еб. 1988); Ойейе е! а1., Сапсег Век. 48:2610-2617 (1988). Это обусловлено высокой внутриклеточной концентрацией глутатиона, оказывающего влияние на эффективность расщепления дисульфидной связи между молекулой антитела и молекулой токсина. Несмотря на указанное, существует незначительное число примеров использования дисульфидных мостиков для получения конъюгатов лекарственных веществ и макромолекул. 8йеп е! а1. (1. Вю1. Сйет. 260:10905-10908 (1985)) описывают превращение метотрексата в производное меркаптоэтиламида с последующим конъюгированием с полиΌ-лизином с помощью дисульфидной связи. В другом сообщении раскрывается получение конъюгата трисульфида, содержащего токсический лекарственный препарат калихеамицин и антитело (Шпшап е! а1., Сапсег Век. 3336-3342 (1993)).
Одной из причин отсутствия конъюгатов антител и лекарственных препаратов на основе дисульфидных связей является отсутствие молекул цитотоксических лекарственных средств, содержащих группу с атомом серы, который используется для связывания лекарства с антителом посредством дисульфид
- 1 008058 ного мостика. Более того, химические модификации существующих лекарственных препаратов затруднены без нарушения их цитотоксического потенциала.
Другим препятствием создания конъюгатов лекарственных средств и антител является их неспособность обеспечивать необходимую концентрацию лекарства в сайте-мишени из-за ограниченного числа антигенов-мишеней и относительно умеренной цитотоксичности канцеростатических лекарств, таких, как метотрексат, даунорубицин и винкристин. Соответственно, для достижения существенной цитотоксичности становится необходимым связывание большого числа молекул лекарственного препарата с антителом как непосредственным образом, так с помощью молекулы полимерного носителя. Однако с такими трудностями модифицированные антитела часто обнаруживают нарушенное связывание с антигеном-мишенью и быстро высвобождаются из кровотока ίη νίνο.
Несмотря на описанные выше трудности, сообщалось об использовании полезных цитотоксических агентов, включающих связывающие клетки структуры и цитотоксические лекарственные средства, известные как мэйтанзиноиды (υδ 5208020, ϋδ 5416064, В.У.1. Сйап, Лбтапсеб Эгид Песету Ке\зе\\ъ 31:89-104 (1998)). Сходным образом, имеются данные о применении полезных цитотоксических агентов, включающих связывающие клетки структуры и аналоги и производные сильнодействующего противоопухолевого антибиотика СС-1065 (υδ 5475092, υδ 5585499).
Также было показано, что связывание высокоцитотоксичных лекарственных препаратов с антителами при использовании расщепляемого линкера, например, на основе дисульфидной связи, обеспечивает высвобождение полностью активного лекарства внутри клеток и такие конъюгаты являются цитотоксическими и специфичными к антигену (К..У.1. Сйап, Сапсег Кек. 52:127-131 (1992); υδ 5475092, υδ 5416064).
Таксаны относятся к семейству соединений, включающих паклитаксель (таксол), цитотоксический природный продукт и доцетаксель (таксотер), его полусинтетическое производное (см. фиг. 1 и 4), два вещества, которые широко используются для лечения рака (Е. Ва1од1и апб Ό.Ο.Ι. Κίη§5ΐοη, 1. №11. Ргоб. 62:1448-1472 (1999)). Таксаны являются ядами митотического веретена, которые ингибируют деполимеризацию тубулина, что приводит к гибели клеток. Несмотря на то, что доцетаксель и паклитаксель являются полезными лекарственными средствами для лечения рака, их противоопухолевая активность ограничена, поскольку они обладают неспецифической токсичностью по отношению к нормальным клеткам. Более того, соединения, подобные доцетакселю и паклитакселю, сами по себе не являются достаточно эффективными для того, чтобы быть использованными в составе конъюгатов, включающих агенты, связывающие клетки.
Недавно были описаны несколько новых аналогов доцетакселя с более высокой активностью, чем доцетаксель или паклитаксель (I. Орша е! а1., 1. Меб. Сйеш., 39: 3889-3896 (1996)). Однако указанные соединения не обладают подходящей функциональностью, обеспечивающей их связывание с агентами, взаимодействующими с клетками, посредством расщепляемой связи (фиг. 1).
Недавно был описан синтез новых таксанов, которые сохраняют высокую цитотоксичность и могут эффективно связываться с агентами, взаимодействующими с клетками (υδ 6340701, υδ 6372738, υδ 6436931, фиг. 2 и 4). В указанных публикациях раскрывается модификация таксанов с помощью химических веществ, в частности, содержащих тиоловые или дисульфидные группы, с которыми могут быть связаны подходящие агенты, взаимодействующие с клетками. В результате новые таксаны сохраняют и в некоторых случаях даже имеют более высокую цитотоксичность по сравнению с известными.
В таксанах, которые описаны в указанных выше патентах, связывающая группа была введена в положения С-10, С-7 или С-2'.
В тех случаях, когда связывающая группа находится в положении С-7, положение С-10 не имеет свободного гидроксильного заместителя, но имеет сложный эфир или карбамат в качестве заместителя. Предварительно было показано (I. Орша е! а1., 1. Меб. Сйеш., 39: 3889-3896 (1996)), что наличие сложного эфира или карбамата в качестве заместителя в положении С-10 обеспечивает получение таксоидов высокой эффективности. Однако отсутствуют исследования эффективности таксанов, имеющих свободную гидроксильную группу в положении С-10 и связывающую группу в положении С-7.
Как раскрывается в настоящем описании, эффективность таксанов, имеющих свободную гидроксильную группу в положении С-10 и связывающую группу в положении С-7, аналогична или превышает эффективность таксанов, имеющих сложный эфир или карбамат в качестве заместителя в положении С-10 и связывающую группу в положении С-7. Таким образом, в первую очередь, изобретение относится к новым таксанам, имеющим свободную гидроксильную группу в положении С-10 и связывающую группу в положении С-7, обладающим высокой цитотоксической активностью.
Более того, в таксанах, описанных в указанных выше патентах, связывающая группа была введена в положения С-10, С-7 или С-2'. Во всех таксанах заместителями в положениях С-3' N и С-3 являются -NΗСОК4 и К3 соответственно. Далее, заместитель в положении С-3' Ν -ΝΗΤΌΚ.-ι может представлять собой бензамидную группу (К4=бутоксил), как в паклитакселе, или группу четвертичного бутилоксикарбониламина (-ΝΗ-ΐ-ВОС, К4=!-бутоксил), как в доцетакселе. На основе опубликованных данных было высказано предположение, что изменение указанных заместителей может привести к потере эффективности. Заместитель в положении С-3' (К3) может быть арилом или линейной, разветвленной или циклической алкильной группой, имеющей 1-10 атомов углерода. Таким образом, на основе опубликованных
- 2 008058 данных считается, что заместители в положениях С-3' N и С-3 не могут быть изменены без потери лекарственной активности; связывающая группа всегда должна быть введена в различные положения таксанов, а именно С-10, С-7 или С-2'. Неспособность изменения заместителей в положениях С-3' или С-3' N значительно ограничивает разнообразие таксанов, содержащих дисульфидную группу, которые должны быть синтезированы.
Во втором аспекте настоящее изобретение также основано на неожиданном обнаружении того факта, что заместители в положениях С-3' N и С-3 не обязательно ограничены теми, которые присутствуют в известных таксанах. Как раскрывается в настоящем изобретении, эффективность таксанов, имеющих разнообразные заместители в положении С-3' Ν, аналогична или превышает эффективность таксанов, имеющих в этом положении заместитель, представляющий собой бензамидную группу или -ΝΗ-1-ВОС. Новый заместитель в положениях С-3' или С-3' N может также содержать связывающую группу, которая обеспечивает соединение заместителя с агентом, взаимодействующим с клетками. Настоящее изобретение раскрывает указанные новые сильнодействующие таксаны, имеющие различные заместители в положениях С-3' или С-3' N. Связывающая группа может быть включена в любое из следующих пяти положений: С-3', С-3' N С-10, С-7 или С-2'.
Краткое описание изобретения
Изобретение относится к новым таксанам, которые высокоцитотоксичны и поэтому могут эффективно использоваться для лечения многих заболеваний.
Изобретение также относится к новым таксанам, которые имеют свободную гидроксильную группу в положении С-10 и связывающую группу в положении С-7, обладающим высокой цитотоксической активностью.
Изобретение также относится к новым таксанам, имеющим различные заместители в положениях С-3' или С-3' N и связывающую группу в положениях С-3', С-3' N С-10, С-7 или С-2' и обладающих высокой активностью.
Изобретение также относится к цитотоксическому агенту, включающему один или более новых таксанов, ковалентно связанных с агентом, взаимодействующим с клетками, посредством связывающей группы.
Другим объектом изобретения является терапевтическая композиция, содержащая:
а) терапевтически эффективное количество одного или более новых таксанов, связанных с агентом, взаимодействующих с клетками, и
б) фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.
Изобретение также относится к способу индуцирования клеточной смерти в выбранных клеточных популяциях, содержащих контактирующие клетки-мишени или ткани, содержащие такие клетки, а также эффективное количество цитотоксического агента, включающего один или более новых таксанов, связанных с агентом, взаимодействующим с клетками.
Краткое описание фигур
На фиг. 1 приведена химическая формула, отражающая структуру различных таксанов, включающих некоторые из наиболее активных таксанов, описанных Орта с1 а1., см. выше.
На фиг. 2 - химическая формула, отражающая структуру некоторых дисульфидсодержащих таксанов в соответствии с настоящим изобретением, которые имеют свободную гидроксильную группу в положении С-10 и связывающую группу в положении С-7.
На фиг. 3 - структура трех таксанов. Таксан 1 имеет группу сложного эфира в положении С-10 и связывающую группу в положении С-7. Таксаны 2' и 3' имеют свободную гидроксильную группу в положении С-10 и связывающую группу в положении С-7.
На фиг. 4 - химическая формула, отражающая структуру различных таксанов, включающих некоторые из наиболее активных таксанов, описанных в патентах США 6340701, 6372738 и 6436931.
На фиг. 5 - химическая формула, отражающая структуру некоторых новых таксанов в соответствии с настоящим изобретением, имеющих заместители в положениях К3 и/или Кд, не описанные ранее.
На фиг. 6 - химическая формула, отражающая структуру некоторых новых дисульфидсодержащих таксанов в соответствии с настоящим изобретением, имеющих заместители в положениях К3 и/или Кд, не описанные ранее.
На фиг. 7 - структура 10-деацетилбаккатина III, который является исходным соединением для получения таксанов.
На фиг. 8 - схема синтеза таксана 2'.
На фиг. 9 - схема синтеза таксана 3'.
На фиг. 10 - результаты сравнения ίη νίίτο активности таксанов 1 и 2' по отношению к клеткам А431.
На фиг. 11 - результаты исследования цитотоксичности ίη νίίτο таксана 3' по отношению к клеткам А549 и МСЕ-7.
На фиг. 12 - результаты исследований противоопухолевого эффекта конъюгата антитела к рецептору ЕСЕ с таксаном по отношению к ксенотрансплантату чешуйчатоклеточного рака легкого (А431) у мышей 8СГО.
- 3 008058
На фиг. 13 - изменение массы тела мышей 8СГО, используемых в эксперименте, описанном в примере 8.
На фиг. 14 - результаты цитотоксической детерминации для конъюгата антитела к рецептору ЕСЕ с таксаном по отношению к антиген-позитивной линии клеток-мишеней А431 и для конъюгата на основе таксана N901 по отношению к линии клеток А431, не экспрессирующих антиген-мишень.
На фиг. 15 - результаты цитотоксической активности и избирательности действия конъюгата на основе таксана ТА1 по отношению к антиген-позитивной линии клеток-мишеней 8К-ВК-3 и по отношению к линии клеток А431, не экспрессирующих антиген-мишень.
На фиг. 16а, 16Ь и 16с - схемы синтеза новых таксанов согласно второму аспекту настоящего изобретения.
На фиг. 17а и 17Ь - схемы синтеза новых дисульфидсодержащих таксанов согласно второму аспекту настоящего изобретения.
На фиг. 18 - результаты цитотоксической активности ίη νίίτο новых таксанов согласно второму аспекту настоящего изобретения.
На фиг. 19а и 19Ь - результаты цитотоксической активности ίη νίίτο новых дисульфидсодержащих таксанов согласно второму аспекту настоящего изобретения.
Детальное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к новым таксанам, сохраняющим высокую цитотоксичность и способным эффективно связываться с агентами, взаимодействующими с клетками. Предварительно было показано, что таксаны, имеющие свободную гидроксильную группу в положении С-10, являются сильнодействующими (патенты США 6340701, 6372738 и 6436931). Первый аспект настоящего изобретения основан на том неожиданном факте, что положение С-10 не обязательно должно быть защищено для сохранения высокой активности. Таксаны, имеющие свободную гидроксильную группу в положении С-10, сохраняют высокую активность до тех пор, пока существует защищенная гидроксильная группа в положении С-7, такая как связывающая группа.
Настоящее изобретение также относится к способу синтеза и оценке ίη νίίτο активности таксанов, имеющих свободную гидроксильную группу в положении С-10 и связывающую группу в положении С-7.
Также предварительно было показано, что таксаны, имеющие бензамидную группу или группу четвертичного бутилоксикарбониламина (-ΝΗ-ί-ВОС) в качестве заместителей в положении С-3' N вместе с другим заместителем, который представляет собой арильную или линейную, разветвленную или циклическую алкильную группу, являются высокоэффективными. Второй аспект изобретения основан на неожиданном обнаружении того факта, что положение С-3' N не обязательно должно иметь бензамидную или -ΝΗ-ί-ВОС группу для сохранения высокой активности.
Различные амидные или карбаматные заместители, имеющие алкильную, алкенильную или гетероциклическую боковую цепь, могут быть использованы без снижения активности таксанов. Связывающая группа может быть введена в положения С-10, С-7 или С-2', а также С-3' N и С-3 боковых цепей.
Исходным веществом для синтеза таксанов является природное соединение 10-деацетилбаккатин III (10-ЭАВ) (фиг. 7). Может быть получено большое число таксанов, имеющих связывающую группу. Более того, указанное соединение имеет свободную гидроксильную группу в положении С-10. Таким образом, количество стадий синтеза, необходимых для получения цитотоксического таксана в соответствии с первым аспектом изобретения, может быть снижено, поскольку гидроксильная группа не обязательно должна быть преобразована в группу сложного эфира, простого эфира или карбамата. Выход таксанов, имеющих связывающую группу, также может быть повышен.
Настоящее изобретение относится к способу синтеза и оценке ίη νίίτο активности таксанов, имеющих новые заместители в положениях С-3' N и С-3, как со связывающей группой, так и без нее в положениях С-10, С-7, С-2' или в положениях С-3' N и С-3.
Уровень техники свидетельствует о том, что чрезвычайно трудно модифицировать существующие лекарственные препараты без снижения их цитотоксического потенциала. Настоящее изобретение преодолевает это предубеждение и относится к модификации описанных таксанов с помощью химических веществ, включающих в том числе вещества, содержащие тиоловую или дисульфидную группы, к которым могут быть прикреплены агенты, взаимодействующие с клетками. В результате описанные новые таксаны сохраняют активность и во многих случаях являются даже более сильнодействующими по сравнению с цитотоксической активностью известных таксанов. Комплексы таксанов с агентами, взаимодействующими с клетками, обеспечивают полное использование цитотоксической активности таксанов по отношению только к клеткам-мишеням, без побочных эффектов, вызванных повреждением здоровых клеток, не являющихся мишенями. Настоящее изобретение позволяет использовать таксаны точно по направлению, что ранее считалось невозможным. Таким образом, изобретение относится к полезным агентам для уничтожения больных или анормальных клеток, которые элиминируются или лизируются, например, опухолевых клеток (в особенности клеток твердых опухолей), инфицированных вирусами клеток, инфицированных микроорганизмами клеток, инфицированных паразитическими простейшими клеток, аутоиммунных клеток (клеток, которые экспрессируют аутоантитела, или клеток, которые регулируют продукцию аутоантител), активированных клеток (клеток, вовлеченных в отторжение трансплан
- 4 008058 тата или реакцию трансплантат против хозяина), а также любых других типов больных или анормальных клеток при минимальных побочных эффектах.
Цитотоксический агент согласно настоящему изобретению содержит один или более таксанов, соединенных с агентами, взаимодействующими с клетками, через связывающую группу. Связывающая группа является частью химической структуры, которая ковалентно связана с таксаном с помощью подходящих методов. В предпочтительном случае агент, взаимодействующий с клетками, может быть ковалентно связан с таксаном посредством дисульфидной или тиоэфирной связи.
В настоящем описании применительно к вариантам (1)-(9) используются следующие термины.
Термин алкил относится к линейным, разветвленным или циклическим молекулам, если специальным образом не оговаривается иное.
Примеры линейных алкилов включают метил, этил, пропил, бутил, пентил и гексил.
Примерами разветвленных алкилов являются изопропил, изобутил, вторичный бутил, четвертичный бутил, изопентил и 2-этилпропил.
Примерами циклических алкилов являются циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил.
Примерами алкенилов и циклоалкенилов являются изобутенил, гексенил, циклопентенил и циклогексенил.
Примерами простых арилов являются фенил и нафтил.
Примерами замещенных арилов являются арилы, описанные выше, замещенные алкильными группами, галогенами, такими, как С1, Вг или Г, нитрогруппами, аминогруппами, группами на основе сульфоновой кислоты, группами на основе карбоновых кислот, гидроксигруппами или алкоксигруппами.
Примерами гетероциклических соединений являются соединения, в которых гетероатомы выбраны из О, N и 8, и к таким соединениям относятся морфолино, пиперидино, пиперазино, Ν-метилпиперазино, пирроллил, пиридил, фурил, имидазолил, оксазолил, тиазолил, тиофенеил, индолил, бензофуранол и бензотиофенил.
Примерами карбаматов являются соединения, состоящие из алкильных, алкенильных, циклоалкильных, циклоалкенильных и арильных групп, таких как метил, этил, кротонил, циклогексил, циклогексенил и фенил, а также из азотсодержащих гетероциклов, таких как морфолино, пиперидино, пиперазино и Νметилпиперазино.
Примерами ариловых сложных эфиров, простых эфиров и карбаматов являются фениловые и нафтиловые сложные эфиры, простые эфиры и карбаматы.
Примерами линейных, разветвленных или циклических алкиловых или алкениловых сложных эфиров включают метиловый, этиловый, изопропиловый аллиловый пропениловый, циклогексиловый и циклогексениловый сложные эфиры.
Примерами линейных, разветвленных или циклических алкиловых или алкениловых простых эфиров включают метиловый, этиловый, изопропиловый аллиловый пропениловый и циклогексиловый простые эфиры.
Таксаны, используемые в соответствии с настоящим изобретением, имеют формулу (I), приведенную ниже
О
Указанные новые таксаны могут быть подразделены на девять вариантов, обозначенных цифрами от (1) до (9).
Примеры вариантов (1)-(4) показаны на фиг. 2. Примеры вариантов (5)-(9) показаны на фиг. 6.
Варианты (1)-(4).
В вариантах (1)-(4) Κ1 представляет собой Н, электрон-акцепторную группу, такую, как Г, ΝΟ2, С^ С1, СНГ2 и СГ3, или электрон-донорную группу, такую как -ОСН3, -ОСН2СН3, ΝΚ7Κ8 и ΟΚ9. Κ1' и Κ1 являются одинаковыми или различными и представляют собой Н, электрон-акцепторную группу, такую как Г, ΝΟ2, СН С1, СНГ2 и СГ3, или электрон-донорную группу, такую как -ОСН3, -ОСН2СН3, ΝΚ^Κ и ΟΚ9.
Κ7 и К8 являются одинаковыми или различными и представляют собой линейные, разветвленные или циклические алкильные группы, имеющие от 1 до 10 атомов углерода, или простой или разветвленный арил. Предпочтительно число атомов углерода для К7 и К8 составляет от 1 до 4. Также предпочти
- 5 008058 тельно, чтобы К7 и К8 были одинаковыми. Примерами предпочтительных -ΝΚ7Κ8 групп являются диметиламино, диэтиламино, диизопропиламино и дибутиламино, где бутил может быть первичным, вторичным или четвертичным или же изобутилом.
К9 представляет собой линейный, разветвленный или циклический алкил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода. К1 предпочтительно является -ОСН3, С1, Ε, ΝΟ2 и СЕ3.
Более предпочтительно, К1 является -ОСН3 и находится в мета-положении, а один из радикалов К1' и КГ является -ОСН3 и другой является Н.
В вариантах (1), (2) и (4) К2 является Н или вместе с атомом кислорода в положении С-10, гетероциклическим или ариловым простым эфиром, гетероциклическим или ариловым сложным эфиром, гетероциклическим или ариловым карбаматом, линейным, разветвленным или циклическим алкиловым сложным эфиром, имеющим от 1 до 10 атомов углерода в алкиле, линейным, разветвленным или циклическим алкениловым сложным эфиром, имеющим от 2 до 10 атомов углерода в алкениле, линейным, разветвленным или циклическим алкиловым простым эфиром, имеющим от 1 до 10 атомов углерода, линейным, разветвленным или циклическим алкениловым простым эфиром, имеющим от 2 до 10 атомов углерода, карбаматом формулы -ОСОХ, где X представляет собой азотсодержащий гетероцикл, такой как пиперидино, морфолино, пиперазино и Ν-метилпиперазино, или карбаматом формулы -ΟСΟNК10К11, где К10 и К11 являются одинаковыми или различаются между собой и представляют собой Н, линейный, разветвленный или циклический алкил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, или простой или замещенный арил.
Предпочтительными примерами ариловых простых и сложных эфиров и карбаматов являются фениловый и нафтиловый простые и сложные эфиры и карбаматы.
Предпочтительными примерами алкиловых и алкениловых сложных эфиров являются -ОСОСН3, -ОСОСН2СН3, кротонил и диметилакрилоил. Предпочтительными примерами алкиловых и алкениловых простых эфиров являются метиловый, этиловый, аллиловый, пропиловый, пропениловый и изобутениловый простые эфиры. Предпочтительными примерами карбаматов являются -ОСОМНСН2СН3, -ОСОМНСН2СН2СН3, -ОСО-морфолино, -ОСО-пиперазино, -ОСО-пиперидино и -ОСОГО-метилпиперазино. Предпочтительно К2 является Н.
В варианте (3) К2 является связывающей группой.
В вариантах (1), (3) и (4) К3 представляет собой алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, циклоалкил или циклоалкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, арил или гетероцикл.
Предпочтительно, К3 является пропенилом, изобутенилом, гексенилом, циклопентенилом, циклогексинилом, фурилом, пироллилом, тиофенеилом, тиазолилом, имидазолилом, пиридилом, морфолино, пиперидино, пиперазино, оксазолилом, индолилом, бензофуранилом или бензотиофенилом.
Более предпочтительно К3 является ΐ-ВОС, изобутенилом, пропенилом, тиофенилом, тиазолилом или фурилом.
В варианте (2) К3 является -СН=С(СН3)2.
В вариантах (1)-(4) К4 представляет собой алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, циклоалкил или циклоалкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, арил, гетероцикл, -ОС(СН3)3 или вместе с группой -СΟNН- в положении С-3' карбамат, образованный любым из указанных выше алкилом, алкенилом, циклоалкилом, циклоалкенилом, арилом или азотсодержащим гетероциклом и атомом кислорода.
Предпочтительно К4 является пропенилом, изобутенилом, гексенилом, циклопентенилом, циклогексинилом, фурилом, пироллилом, тиофенеилом, тиазолилом, имидазолилом, пиридилом, морфолино, пиперидино, пиперазино, оксазолилом, индолилом, бензофуранилом или бензотиофенеилом.
Более предпочтительно, К4 является ί-бутокси, изобутенилом, пропенилом, тиофенилом, тиазолилом или фурилом.
В вариантах (1) и (2) К5 является связывающей группой, а К6 имеет те же самые значения, что и указанные выше для К2 в вариантах (1), (2) и (4).
В варианте (3) К5 имеет те же самые значения, что и указанные выше для К2 в вариантах (1), (2) и (4).
В варианте (3) Кб имеет те же самые значения, что и указанные выше для К2 в вариантах (1), (2) и (4).
В варианте (4) К6 является связывающей группой, а К5 имеет те же самые значения, что и указанные выше для К2 в вариантах (1), (2) и (4).
Подходящие связывающие группы хорошо известны из уровня техники и включают такие группы, которые формируют дисульфидные связи, тиоэфировые связи, кислотно-лабильные связи, фотолабильные связи, пептидазо-лабильные связи и эстеразо-лабильные связи. Предпочтительными являются такие группы, которые формируют дисульфидные связи и тиоэфировые связи.
Когда связывающая группа является группой, содержащей тиол или дисульфид, боковая цепь, имеющая тиоловую или дисульфидную группу, может быть линейной или разветвленной, ароматической или гетероциклической. Специалист в данной области без труда идентифицирует подходящие боковые цепи.
Специфические примеры заместителей, содержащих тиол или дисульфид, включают -(СК13К14)т(СК15К1б)п(ОСН2СН2)у82, -СОЩКпКмЩСК^бМОСЩСЩ)^, -(СК13К14)т(СК17=СК18) (СК15К1б)т(ОСН2СН2)у82, -СО(СК13К14)т(СК17=СК18)(СК15К1б)т(ОСН2СН2)у82,
- 6 008058
-СОХК12(СЯ1зЯ14)т(СЯ15Я16)п(ОСН2СН2)у82, фурил-ΧδΖ, оксазолил-ΧδΖ, тиазолил-ΧδΖ, тиофенил-ΧδΖ, имидазолил-ΧδΖ, морфолино-ΧδΖ, пиперазино-ΧδΖ, пиперидино-ΧδΖ, СО-фурил-ΧδΖ, СО-тиофенилΧδΖ, СО-тиазолил-ΧδΖ и -СО-М-метилпиперазино-ΧδΖ, -СО-морфолино-ΧδΖ, -СО-пиперазино-ΧδΖ, -СО-пиперидино-ΧδΖ и -СО-Н-метилпиперазино-ΧδΖ, причем
Ζ представляет собой Н или δΚ,
Χ является линейным или разветвленным алкилом, имеющим от 1 до 10 атомов углерода, или полиэтиленгликолевым спейсером с 2-20 повторяющимися оксиэтиленовыми единицами;
Κ и Κ12 являются одинаковыми или различными и представляют собой линейный или разветвленный алкил или циклический алкил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода или простой или замещенный арил или гетероцикл, а Κ12 дополнительно может быть Н,
Κ13, Κ14, Κ15 и Κ16 являются одинаковыми или различными и представляют собой Н или линейный или разветвленный алкил, имеющий от 1 до 4 атомов углерода,
Κ17 и Κ18 являются Н или метилом, п является целым числом от 1 до 10, т является целым числом от 1 до 10 и также может быть 0, у является целым числом от 1 до 20 и также может быть 0.
Предпочтительными таксанами в соответствии с первым аспектом изобретения являются таксаны, которые имеют свободную гидроксильную группу в положении С-10 (т.е. Κ2) и связывающую группу в положении С-7 (т.е. Κ5). Наиболее предпочтительными таксанами, заявленными в соответствии с настоящим изобретением, являются таксаны 2' и 3', показанные на фиг. 3.
Варианты (5)-(9).
В вариантах (5)-(9) Κ1 представляет собой Н, электрон-акцепторную группу, такую как Ρ, ЫО2 , СЫ, С1, СНР2 и СР3, или электрон-донорную группу, такую как -ОСН3, -ОСН2СН3, ΝΚ7Κ8 и ОК9. Κ1' и Κ1 являются одинаковыми или различными и представляют собой Н, электрон-акцепторную группу, такую как Ρ, ЫО2, СЫ, С1, СНР2 и СР3, или электрон-донорную группу, такую, как -ОСН3, -ОСН2СН3, ΝΚ7Κ8 и ОК9.
Κ7 и Κ8 являются одинаковыми или различными и представляют собой линейные, разветвленные или циклические алкильные группы, имеющие от 1 до 10 атомов углерода, или простой или разветвленный арил. Предпочтительно, число атомов углерода для Κ7 и Κ8 составляет от 1 до 4. Также предпочтительно, чтобы Κ7 и Κ8 были одинаковыми. Примерами предпочтительных -ΝΚ7Κ8 групп являются диметиламино, диэтиламино, дипропиламино, диизопропиламино и дибутиламино, где бутил может быть первичным, вторичным или четвертичным или же изобутилом.
Κ9 представляет собой линейный, разветвленный или циклический алкил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода.
Κ1 предпочтительно является -ОСН3, С1, Ρ, ЫО2 и СР3.
Более предпочтительно Κ1 является -ОСН3 и находится в мета-положении, а один из радикалов Κ1' и Κ1 является -ОСН3 и другой является Н.
В вариантах (5), (6) и (7) Κ3 и Κ4 являются одинаковыми или различными и представляют собой алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, циклоалкил или циклоалкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, арил или гетероцикл, а Κ4 дополнительно может быть -ОС(СН3)3 или вместе с группой -СОЫН- в положении С-3' карбаматом, образованным любым из указанных выше алкилом, алкенилом, циклоалкилом, циклоалкенилом, арилом или азотсодержащим гетероциклом и атомом кислорода.
Предпочтительно один или оба радикала Κ3 и Κ4 являются пропенилом, изобутенилом, гексенилом, циклопентенилом, циклогексинилом, фурилом, пироллилом, тиофенеилом, тиазолилом, имидазолилом, пиридилом, морфолино, пиперидино, пиперазино, оксазолилом, индолилом, бензофуранилом или бензотиофенеилом.
Более предпочтительно один или оба радикала Κ3 и являются ΐ-ВОС, изобутенилом, пропенилом, тиофенилом, тиазолилом или фурилом.
В вариантах (8) и (9) Κ2, Κ5 и Κ6 являются одинаковыми или различными и являются Н или вместе с атомами кислорода в положениях С-10, С-7 и С-2 соответственно гетероциклическим или ариловым простым эфиром, гетероциклическим или ариловым сложным эфиром, гетероциклическим или ариловым карбаматом, линейным, разветвленным или циклическим алкиловым сложным эфиром, имеющим от 1 до 10 атомов углерода в алкиле, линейным, разветвленным или циклическим алкениловым сложным эфиром, имеющим от 2 до 10 атомов углерода в алкениле, линейным, разветвленным или циклическим алкиловым простым эфиром, имеющим от 1 до 10 атомов углерода, линейным, разветвленным или циклическим алкениловым простым эфиром, имеющим от 2 до 10 атомов углерода, карбаматом формулы -ОСОХ, где Χ представляет собой азотсодержащий гетероцикл, такой как пиперидино, морфолино, пиперазино и Ν-метилпиперазино, или карбаматом формулы -ОСОЫК10К11, где Κ10 и Κ11 являются одинаковыми или различаются между собой и представляют собой Н, линейный, разветвленный или циклический алкил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, или простой или замещенный арил.
Предпочтительными примерами ариловых простых и сложных эфиров и карбаматов являются фениловый и нафтиловый простые и сложные эфиры и карбаматы.
Предпочтительными примерами алкиловых и алкениловых сложных эфиров являются -ОСОСН3,
- 7 008058
-ОСОСН2СН3, кротонил и диметилакрилоил. Предпочтительными примерами алкиловых и алкениловых простых эфиров являются метиловый, этиловый, аллиловый, пропиловый, пропениловый и изобутениловый простые эфиры. Предпочтительными примерами карбаматов являются -ОСОЫНСН2СН3, -ОСОморфолино, -ОСО-пиперазино, -ОСО-И-метилпиперазино.
Предпочтительно К6 является Н и один из радикалов К2 и К5 является Н. В варианте (5) К2 является связывающей группой, а К5 и К6 имеют те же самые значения, что и указанные выше для вариантов (8) и (9).
В варианте (6) К5 является связывающей группой, а К2 и Кб имеют те же самые значения, что и указанные выше для вариантов (8) и (9).
В варианте (7) К6 является связывающей группой или Н, а К2 и К5 имеют те же самые значения, что и указанные выше для вариантов (8) и (9).
В варианте (8) К3 является связывающей группой, а К4 имеет те же самые значения, что и указанные выше для вариантов (5), (6) и (7).
В варианте (9) К4 является связывающей группой, а К3 имеет те же самые значения, что и указанные выше для вариантов (5), (6) и (7).
Подходящие связывающие группы хорошо известны из уровня техники и включают такие группы, которые формируют дисульфидные связи, тиоэфировые связи, кислотно-лабильные связи, фотолабильные связи, пептидазо-лабильные связи и эстеразо-лабильные связи. Предпочтительными являются такие группы, которые формируют дисульфидные связи и тиоэфировые связи. Когда связывающая группа является группой, содержащей тиол или дисульфид, боковая цепь, имеющая тиоловую или дисульфидную группу, может быть линейным или разветвленным алкилом, алкенилом, циклоалкенилом ароматической или гетероциклической или полиэтиленгликолевой. Специалист в данной области без труда идентифицирует подходящие боковые цепи.
Специфические примеры заместителей, содержащих тиол или дисульфид, включают -(СВ1зК14)т(СВ15К1б)п(ОСН2СН2)у82, -СО(СК ЗКД..(СК Ш )..(ОС1 РС11.+ ^ -(СК А зтСК (ΊΧ.ι (СК^бЫОСЩСЩ)^, -СО-(СК1зВ14)т(СВ17=СВ18)(СВ15К1б)т(ОСН2СН2)у82, -СОХКчСККД..
(СК45К46)п(ОСН2СН2)у82, фурил-Х82, оксазолил-Х82, тиазолил-Х82, тиофенил-Х82, имидазолил-Х82, морфолино-Х82, пиперазино-Х82, пиперидино-Х82, СО-фурил-Х82, СО-тиофенил-Х82, СО-тиазолилХ82 и -СО-Ы-метилпиперазино-Х82, -СО-морфолино-Х82, -СО-пиперазино-Х82, -СО-пиперидино-Х82 и -СО-Ы-метилпиперазино-Х82, причем
Ζ представляет собой Н или 8К,
Х является линейным или разветвленным алкилом, имеющим от 1 до 10 атомов углерода, или полиэтиленгликолевым спейсером с 2-20 повторяющимися оксиэтиленовыми единицами;
К и К12 являются одинаковыми или различными и представляют собой линейный или разветвленный алкил или циклический алкил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода или простой или замещенный арил или гетероцикл, а К12 дополнительно может быть Н,
К13, К14, К15 и К16 являются одинаковыми или различными и представляют собой Н или линейный или разветвленный алкил, имеющий от 1 до 4 атомов углерода,
К17 и К18 являются Н или метилом, п является целым числом от 1 до 10, т является целым числом от 1 до 10 и также может быть 0, у является целым числом от 1 до 20 и также может быть 0.
Таксаны в соответствии с заявленным изобретением могут быть синтезированы известными методами. Исходным соединением для их синтеза является коммерчески доступный 10-деацетилбаккатин III, показанный на фиг. 7. Химические реакции введения в исходное соединение различных заместителей описаны в различных публикациях (Оцта е! а1., I. Мей. СЬет. 39:3889-3896 (1996), Оцта е! а1., I. Мей. СЬет. 40:267-278 (1997), О,цта е! а1., Ргос. Иа!1. Асай. 8с1., 96:4256-4261 (1999), Оцта е! а1., И8Р 5475 и 5811452). Приготовление выборочных таксанов в соответствии с настоящим изобретением описано ниже в примерах.
Заместитель К1 фенильного кольца и положение заместителя К1 могут подвергаться изменениям до тех пор, пока не будет получена желаемая токсичность. Более того, степень замещения фенильного кольца может изменяться до получения заданной токсичности. Таким образом, фенильное кольцо может иметь от одного или более заместителей (например, моно-, ди- или тризамещение фенильного кольца), что обеспечивает иной подход к достижению необходимой токсичности. Высокая цитотоксичность определяется как имеющая значение 1С50, равное 1х10-12-3х10-9 М при измерении ίη νίΐτο при использовании культивируемых раковых клеток в течение 72 ч воздействия лекарственного препарата. Специалист в данной области может определить подходящую химическую структуру для К1 и подходящее положение для К1 с помощью рутинных экспериментов.
Например, электрон-донорная группа в мета-положении, предположительно, будет увеличивать цитотоксическую активность, в то время как для замещения в пара-положении этого не ожидается по сравнению с исходным таксаном. Обычно сначала получают несколько выборочных таксанов с замещениями в различных положениях (орто, мета и пара) и оценивают ίη νίΐτο цитотоксичность.
- 8 008058
Новые таксоиды, показанные на фиг. 5 и 16, могут быть получены β-лактам-синтонным методом (Орта, I.; НаЬик, I.; 2йао, М.; 2исео, М.; Рагк, Υ.Η.; 8ии, С.М.; Впдаиб, Т. ТеЕайебтои Ьекк., 48:6985 (1992); Но1кои, К.А.; В1еб1дег, К.1.; Воактаи, Ρ.Ό. ίη Тахо1:8с1еисе апб АррЕсаЕоик; 8иГГпе55. М., Еб.; СКС:Воса Какой, 1995, р. 97) при использовании подходящего дериватизованного аналога баккатина III (7) и β-лактамов в качестве исходных соединений. β-Лактамы 4-6б, 19-25 и 38-44 могут быть получены ранее описанными методами (Впеуа, К. СпсЕ Ι.Ζ.; 81й, С.1.1. Огд. Сйет., 58:1068 (1993); Ра1ото, С.; Аптека, А.; СокЕо, Е., Αί/ριπυ-ι, 1.М.; М1е1до, А.; Аштекоекхеа, N. Тектайебгои Ьекк., 1990, 31, 6429). Аналог баккатина III (7) может быть получен при использовании коммерчески доступного 10деацетилбаккатина III (10-ЭАВ) (фиг. 7) в качестве исходного соединения.
β-Лактамы 6а-б, 21-25 и 40-44 могут быть связаны с аналогом баккатина III (7) в присутствии №1Н или ЫНМОЗ с получением защищенных таксоидов 8-11, 26-30 и 45-49. Силиловые защитные группы могут быть в конечном счете сняты в присутствии НЕ-пиридина с получением нужных таксанов 12-15, 31-35 и 50-54 (фиг. 16а, 16Ь и 16с).
Дисульфидсодержащие таксоиды в соответствии с настоящим изобретением (фиг. 6 и 17) могут быть синтезированы из промежуточных соединений, описанных выше (8-11, 26-30, 45-49). Ацетат С-10 может быть успешно удален с помощью моногидрата гидразина. Повторная этерификация в положении С-10 затем может быть осуществлена в присутствии ΕΌΕ (1-[3-(диметиламино)пропил]-3-этилкарбодиимид гидрохлорида) на основе карбодиимидной методики связывания при использовании дисульфидных производных карбоновых кислот. Продукты связывания освобождают от защиты с помощью НЕпиридина с получением нужных дисульфидсодержащих таксоидов (фиг. 17а и 17Ь).
Заместитель, содержащий дисульфид или тиол, может быть также введен в одно из других положений, где уже находится гидроксильная группа. Химические методы, обеспечивающие защиту различных гидроксильных групп в то время как в реакцию вступает одна из них, описаны ранее (см., например, ссылки, процитированные выше). Заместитель вводится простым преобразованием свободной гидроксильной группы в дисульфидсодержащий простой эфир, дисульфидсодержащий сложный эфир или дисульфидсодержащий карбамат. Альтернативно, полиэтиленгликолевый спейсер может быть введен между дисульфидным или тиоловым заместителем и гидроксильной группой, которая дериватизуется (см., например, заявку И8 10/144042, поданную 14 мая 2002 г.). Такая трансформация осуществляется следующим образом. Нужную гидроксильную группу депротеинизируют обработкой коммерчески доступным реагентом гексаметилдисилазаном лития (1,2 экв.) в тетрагидрофуране при -40°С, как описано Орта ек а1., см. выше. Полученный алкоксидный анион затем вводят в реакцию с избытком дигало-соединения, такого как дибромэтан, с получением простого гало-эфира. Замещение галогена тиолом (путем реакции с тиоацетатом калия и обработки средней силы основанием или гидроксиламином) приведет к получению нужного тиолсодержащего таксана. Тиоловая группа может быть преобразована в метиловую или пиридил-дисульфидную путем реакции с метиловым метантиосульфонатом или дитиодипиридином соответственно. Данный метод описан в И8 5416064.
Нужная гидроксильная группа может быть также этерифицирована прямой реакцией с ацилгалидом, таким как 3-бромопропионил хлорид, с получением простого эфира брома. Замещение группы брома путем обработки тиоацетатом калия и осуществление последующих стадий, описанных выше, обеспечивает получение содержащего тиол или дисульфид простого эфира таксана. Для получения дисульфидсодержащих карбаматов гидроксильную группу вводят в реакцию с коммерчески доступным хлорформиатом, таким как паранитрофенил хлорформиат, с последующей обработкой аминоалкильным дисульфидом (например, метилдитиоцистеамином).
Альтернативно, тиоловый или дисульфидный заместитель может быть введен в субъединицу βлактама, который затем вводят в реакцию с подходящим образом защищенным 10-деацетилбаккатином III с получением нужных таксанов, имеющих тиоловую или дисульфидную связывающую группу в положении С-3'.
Новые таксаны и лекарственные средства, содержащие таксаны, включающие дисульфид, заявленные в соответствии с изобретением, могут быть оценены на их способность супрессировать пролиферацию линий опухолевых клеток человека ίη У1кто.
Линии опухолевых клеток человека А-549 (карцинома легкого человека) и МСЕ-7 (опухоль груди), используются для оценки цитотоксичности указанных соединений. Клетки экспонируют с соединениями в течение 72 ч и фракции выживших клеток оценивают прямым методом эффективности образования монослоя, как известно из уровня техники (6о1бтасйет ек а1., 1. Се11. Вю1. 102:1312-1319 (1986)) и на основании этих данных вычисляют значение ТС50.
Результаты определения ίη У1кто цитотоксичности таксоидов и дисульфидсодержащих таксоидов в соответствии со вторым аспектом изобретения приведены на фиг. 18 и 19. На фиг. 18 показаны результаты цитотоксической детерминации двенадцати новых таксанов, заявленных в соответствии с изобретением. За исключением таксана 52, который имеет фенильный заместитель в положении >, все остальные новые таксаны являются экстремально сильнодействующими по отношению к обеим клеточным линиям А-549 и МСЕ-7 с ГС50 в диапазоне 10-10-10-11 М. Таксан 52 менее цитотоксичен и обладает ГС50 3х10-9 М
- 9 008058 по отношению к обеим тестированным клеточным линиям. Сходным образом, заявленные в соответствии с настоящим изобретением дисульфидсодержащие таксоиды также являются экстремально сильнодействующими по отношению к клеточным линиям А-549 и МСЕ-7, что подтверждается крутым наклоном кривых гибели клеток, приведенных на фиг. 19.
Эффективность заявленных соединений как терапевтических средств зависит от тщательного выбора подходящего агента, связывающего клетки. Такой агент может быть любым такого рода известным агентом или же агентом, который стал известен в качестве такового в результате текущих исследований, и являться пептидным и непептидным веществом. В целом, указанными агентами могут быть антитела или их фрагменты (в особенности моноклональные антитела), лимфокины, гормоны, ростовые факторы, витамины, молекулы, переносящие питательные вещества (такие как трансферрин) или любые другие молекулы или вещества, связывающие клетки.
Более специфические примеры агентов, связывающих клетки, которые могут быть использованы в соответствии с данным изобретением, включают фрагменты антител, такие как κΕν, РаЬ, РаЬ' и Р(аЬ)'2 (Ратйат, 1. 1ттипо1. 131:2895-2902 (1983); 8рппд е! а1., 1. 1ттипо1 113:470-478 (1974); №1копоЕЕ е! а1., Агсй. Вюсйет. Вюрйук. 89:230-244 (1969));
интерфероны (например, альфа, бета, гамма);
лимфокины, такие как 1Ь-2, 1Ь-3, 1Ь-4, 1Ь-6;
гормоны, такие как инсулин, тиреотропин-рилизинг гормоны, меланоцит-стимулирующий гормон; стероидные гормоны, такие как андрогены и эстрогены;
витамины, такие как фолиевая кислота;
ростовые факторы и колониестимулирующие факторы, такие как ЕОЕ, ТСР-α. О-С8Е, М-С8Е и ОМ-СзЕ (Вигдекк, 1ттипо1оду Тобау 5:155-158 (1984)); и трансферрин (О'КееЕе е! а1., 1. Вю1. СЬет. 260:932-937 (1985)).
Технология моноклональных антител обеспечивает возможность получения агентов, связывающих клетки с исключительной специфичностью, в форме моноклональных антител или их фрагментов. В особенности хорошо известны технологии получения моноклональных антител или их фрагментов путем иммунизации мышей, крыс, хомячков или любых других млекопитающих представляющим интерес антигеном, таким как интактная клетка-мишень, антиген, выделенный из клетки-мишени, целый вирус, аттенуированный целый вирус и вирусные белки, например белки оболочки. Могут использоваться сенсибилизированные клетки человека. Другой метод получения моноклональных антител или их фрагментов включает использование фаговых библиотек фрагментов κΕν (одноцепочечных фрагментов, включающих вариабельный участок), в особенности, κΕν человека. (См., например, ΟπΓΓίΙΙικ е! а1., И8Р 5885793; МсСаГГеПу е! а1., АО 92/01047; Ытшд е! а1., АО 99/06587).
Выбор подходящих агентов, связывающих клетки, зависит от клеточной популяции, к которой нужно направить лекарство, но в целом моноклональные антитела являются предпочтительными, если они доступны.
Например, моноклональное антитело МУ9 представляет собой антитело мыши 1дО1, которое специфически связывается с антигеном СЭ33 (ΙΌ. Οτίίίϊη е! а1., Беикепна Век., 8:521 (1984)) и может быть использовано в том случае, если клетки-мишени экспрессируют СЭ33, например, как в случае острого миелогенного лейкоза (ЛМЬ). Сходным образом, моноклональное антитело к В4 представляет собой антитело мыши 1дС1, которое специфически связывается с антигеном СЭ19 на В-клетках (№аб1ег е! а1., 1. 1ттипо1. 131:244-250 (1983)) и может быть использовано в том случае, если клетки-мишени представляют собой В-клетки или клетки, которые экспрессируют СЭ19, например, как в случае неходжкинской лимфомы или хронической лимфобластной лимфомы. Аналогично, антитело Ν901 представляет собой антитело мыши 1дС1, которое специфически связывается с антигеном СЭ56 на мелких клетках легочной карциномы и клетках других опухолей нейроэндокринного происхождения (Воу е! а1. 1. №11. Сапсег 1пк!. 88:1136-1145 (1996)).
Антитела, которые направлены к мишеням твердых опухолей, также могут использоваться, например, такое антитело, как С242, которое связывается с углеводной частью антигена МСИ1 на опухолевых клетках поджелудочной железы и толстого кишечника (И8Р 5552293); антитело 1591, которое связывается с антигеном Р8МЛ (специфический мембранный антиген клеток простаты), экспрессируемом на опухолевых клетках простаты и эндотелиальных клетках вновь образуемых кровеносных сосудов опухолей (И8Р 6107090, Не Ь1и е! а1. Сапсег Век. 57:3629-3634 (1997)) и антитела к антигену НЕВ-2, который сверхэкспрессируется на клетках некоторых опухолей груди. Примерами антител к НЕВ-2 являются антитело ТА1 (Ь.Л. Ма1ет е! а1. Сапсег Век. 51:5361-5369 (1991)) и антитело к 4Ό5 (И8Р 6387063).
Дополнительно, ОМ-С8Е, который связывается с миелоидными клетками, может быть использован как агент, взаимодействующий с больными клетками при остром миелогенном лейкозе. 1Ь-2, который связывается с активированными Т-клетками, может быть использован для предотвращения отторжения трансплантата, для терапии и предотвращения болезни «трансплантат против хозяина» и для лечения острого Т-клеточного лейкоза. М8Н, который связывается с меланоцитами, может быть использован для лечения меланомы. Фолиевая кислота, которая связывается с фолатным рецептором, экспрессируемым на опухолевых клетках яичников и клетках других опухолей, также может служить подходящим агентом,
- 10 008058 связывающим клетки.
На опухолевые клетки груди и тестикулов лекарственные препараты могут быть эффективно направлены с помощью эстрогена (или его аналогов) или андрогена (или его аналогов) соответственно, которые в данном случае выступают в роли агентов, взаимодействующих с клетками.
Конъюгаты заявленных в соответствии с данным изобретением таксанов и агента, взаимодействующего с клетками, могут быть получены с помощью любой методики, известной из уровня техники, или впоследствии разработанной. Многочисленные способы конъюгации описаны в И8 5416064 и 5475092. Сложный эфир таксана может быть модифицирован с формированием свободной аминогруппы и далее лигирован с антителом или другим агентом, взаимодействующим с клетками, посредством кислотолабильного линкера или фотолабильного линкера. Сложный эфир таксана может быть сконденсирован с пептидом и далее связан с агентом, взаимодействующим с клетками, с получением пептидазолабильного линкера. Гидроксильная группа на сложном эфире таксана может быть сукцинилирована и соединена с агентом, взаимодействующим с клетками, с получением конъюгата, способного расщепляться под действием внутриклеточных эстераз для высвобождения свободного лекарственного препарата. Более предпочтительно сложные или простые эфиры таксана или карбаматы обрабатывают для формирования свободной или защищенной тиоловой группы и затем таксаны, содержащие дисульфид или тиол, связывают с агентом, взаимодействующим с клетками, посредством дисульфидных связей.
Примерами конъюгатов, заявленных в соответствии с настоящим изобретением, являются конъюгаты таксана с антителами, конъюгаты таксана с фрагментами антител, конъюгаты таксана с эпидермальным ростовым фактором (ЕРС), конъюгаты таксана с меланоцитстимулирующим гормоном (М8Н), конъюгаты таксана с тироидстимулирующим гормоном (Т8Н), конъюгаты таксана с эстрогеном, конъюгаты таксана с аналогами эстрогена, конъюгаты таксана с андрогеном, конъюгаты таксана с аналогами андрогена и конъюгаты таксана с фолатом.
Конъюгаты таксана с антителами, фрагментами антител, белковыми или пептидными гормонами, белковыми или пептидными ростовыми факторами и другими белками получают обычными методами, известными из уровня техники. Например, пептиды и антитела могут быть модифицированы с помощью перекрестно-связывающих реагентов, таких как Ν-сукцинимидил 3-(2-пиридилдитио)пропионат, Ν-сукцинимидил 4-(2-пиридилдитио)пентаноат (8РР), 4-сукцинимидил-оксикарбонил-а-метил-(2-пиридилдитио)толуол (8МРТ), №сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)бутират (8ЭРВ), 2-иминотиолан или 8-ацетилсукциниловый ангидрид, известными способами. См., например, Саг1ккоп е! а1., ВюсНет. 1. 173:723-737 (1978); В1ай1ег е! а1., ВюсНет. 24:1517-1524 (1985); ЬатЬей е! а1., ВюсНет. 22:3913-3920 (1983); Κίοΐζ е! а1., АгсН. ВюсНет. ВюрНук. 96:605 (1962); Ьш е! а1., ВюсНет. 18:690 (1979); В1акеу апб ТНогре, АпНЬобу, 1ттипосоп)ида!ек & ВабюрНагтасеи!1са1к, 1:1-16 (1988); \Уогге1 е! а1,, Апй-Сапсег Эгид Эекфп 1:179-184 (1986). Таким образом измененный свободный или защищенный содержащий тиол агент, взаимодействующий с клетками, далее вводят в реакцию с дисульфид- или тиолсодержащим таксаном с получением конъюгатов. Конъюгаты могут быть очищены методом НРЬС или гель-фильтрацией.
Сходным образом, например, эстрогеновый и андрогеновый агенты, взаимодействующие с клетками, такие как эстрадиол и андростэндиол, могут быть этерифицированы по С-17 гидроксигруппе с помощью подходящей карбоновой кислоты, содержащей дисульфид, при использовании, например, дициклогексилкарбодиимида в качестве конденсирующего агента. Примерами таких карбоновых кислот служат 3-(2-пиридилдитио)пропановая кислота, 3-метилдитиопропановая кислота, 4-(2-пиридилдитио)пентановая кислота и 3-фенилдитиопропановая кислота. Этерификация С-17 гидроксигруппы может быть также достигнута в реакции с подходящим образом защищенным хлоридом карбоновой кислоты, содержащим тиоловую группу, таким как 3-8-ацетилпропаноилхлорид. Другие методы этерификации, описанные в литературе, также могут быть использованы (Нак1ат, Те!гаНебгоп 36:2409-2433 (1980)). Защищенный или свободный содержащий тиол андроген или эстроген далее может быть введен в реакцию с таксаном, содержащим дисульфид или тиол, с получением конъюгата. Конъюгат может быть очищен колоночной хроматографией на силикагеле или методом НРЬС. Фолиевая кислота может быть конденсирована с подходящим гидразидом, таким как гидразид 4-(2-пиридилдитио)пентановой кислоты, в присутствии конденсирующего агента, такого как дициклогексил карбодиимид, с получением гидразона, содержащего активный дисульфид. Дисульфидсодержащий фолат затем может быть введен в реакцию с тиолсодержащим таксаном с получением конъюгата, который может быть очищен колоночной хроматографией на силикагеле или методом НРЬС.
Предпочтительно конъюгаты таксана с моноклональными антителами или агентом, взаимодействующим с клетками, представляют собой такие конъюгаты, которые образованы дисульфидной связью, как описано выше, и способны направленно доставлять молекулы таксанов. Такие связывающиеся с клетками конъюгаты получают известными методами, такими как модификация моноклональных антител с помощью сукцинимидил пиридилдитиопропионата (8РЭР) (Саг1ккоп е! а1., ВюсНет. 1. 173: 723-737 (1078)). Полученную в результате указанной реакции тиопиридиловую группу далее замещают обработкой тиолсодержащим таксаном с получением конъюгатов, образованных дисульфидной связью. Альтернативно, в случае арилдитио-таксанов формирование конъюгата, связывающегося с клетками, обеспечивается прямым замещением арилтиоловой группы таксана сульфгидрильными группами, предварительно
- 11 008058 введенными в молекулы антитела. Конъюгаты, содержащие 1-10 молекул таксана, связанные посредством дисульфидного мостика, легко получают тем же самым методом.
Более точно, раствор модифицированного дитиопиридилом антитела в концентрации 1 мг/мл в 0,1М калиевом фосфатном буфере, содержащем 1 мМ ЭДТА, при рН 6,5 обрабатывают тиолсодержащим таксаном (1,25 мол.экв./дитиопиридиловая группа). Высвобождение тиопиридина из модифицированного антитела контролируют спектрофотометрически при 343 нм и оно завершается примерно в течение 20 ч. Конъюгат антитела и таксана очищают и освобождают от непрореагировавшего лекарства и другого низкомолекулярного материала гель-фильтрацией на колонке с сефадексом С-25 или сефакрилом 8300. Число молекул таксана, связавшихся с молекулой антитела, может быть определено измерением отношения поглощения при 230 и 275 нм. Примерно от 1 до 10 молекул таксана в расчете на молекулу антитела могут быть связаны посредством дисульфидных связей при использовании данного метода.
Могут быть получены конъюгаты антитела с таксаном с нерасщепляемыми связями. Антитело может быть модифицировано с помощью перекрестно-связывающих реагентов, таких как Ν-сукцинимидил 4-(малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (8МСС), сульфо-8МСС, Ν-сукцинимидил 4-малеимидобутират (8МВ), сульфо-8МВ, Ν-сукцинимидил 6-малеимидокапроат (8МС), сульфо-8МС, т-малеимидобензоил-№гидроксисукцинимидный сложный эфир (МВС), сульфо-МВС или сукцинимидилиодоацетат, как описано в литературе, для введения 1-10 реакционноспособных групп. См. Уокййаке с! а1., Еиг. 1. Вюсйет. 101:395-399 (1979); НакЫба е! а1., 1. Лррйеб Вюсйет. 6:56-63 (1984); и Ьш е! а1., Вюсйет. 18:690-697 (1979). Модифицированное антитело затем вводят в реакцию с производным тиолсодержащего таксана с получением конъюгата. Конъюгат может быть очищен гель-фильтрацией на колонке с сефадексом С-25.
Модифицированные антитела или их фрагменты обрабатывают тиолсодержащими таксанами (1,25 мол. экв. в расчете на малеимидную группу). Смеси инкубируют в течение ночи при температуре около 4°С. Конъюгаты антитела с таксаном очищают гель-фильтрацией на колонке с сефадексом С-25. Обычно примерно от 1 до 10 молекул таксана связывается с молекулой антитела.
Предпочтительный способ модификации антител или их фрагментов включает использование сукцинимидил 4-(малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилата (8МСС) для введения малеимидных групп с последующим обеспечением реакции модифицированного антитела или его фрагмента с тиолсодержащими таксанами с получением связанного через тиоэфирную связь конъюгата. В этом случае также от 1 до 10 молекул таксана связываются с молекулой антитела.
Цитотоксичность антительных конъюгатов указанных таксоидов по отношению к неприкрепляющимся клеткам определенных линий, таких как Ν;·ιιη;·ι1\ν;·ι и НЬ-60, может быть измерена обратной экстраполяцией кривых клеточной пролиферации, как описано СоИтасйет е! а1., 1. 1ттипо1. 135:3648-3651 (1985). Цитотоксичность указанных соединений по отношению к неприкрепляющимся клеткам определенных линий, таких как 8КВК.3 и А431, может быть определена клоногенными исследованиями, как раскрыто Со1бтасйет е! а1., 1. Се11. Вю1. 102:1312-1319 (1986).
Настоящее изобретение также относится к терапевтической композиции, содержащей:
а) эффективное количество одного или более таксанов, связанных с агентом, взаимодействующим с клетками, и
б) фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.
Сходным образом настоящее изобретение относится к способу индуцирования клеточной гибели в отобранных клеточных популяциях, включающему обеспечение контактирования клеток-мишеней или тканей, содержащих клетки-мишени, с эффективным количеством цитотоксического агента, содержащего один или более таксанов, связанных с агентом, взаимодействующим с клетками. Цитотоксический агент получают, как описано выше.
Подходящие фармацевтически приемлемые носители, разбавители и наполнители хорошо известны и могут быть определены специалистом в данной области знаний в зависимости от клинической ситуации.
Примерами подходящих носителей, разбавителей и/или наполнителей являются: (1) фосфатный буферный раствор Дульбекко, рН около 7,4, содержащий или не содержащий около 1-25 мг/мл сывороточного альбумина человека, (2) 0,9%-ный физиологический раствор (0,9% вес на объем №1С1) и (3) 5%-ный (вес на объем) раствор декстрозы. Указанные растворы могут также содержать антиоксидант, такой как триптамин, и стабилизирующий агент, такой как Твин 20.
Способ индуцирования клеточной гибели в отобранных популяциях может быть осуществлен ίη νίΙΐΌ. ίη νί\Ό или ех у|уо.
Примерами осуществления способа ίη ν Иго являются обработка аутологичного костного мозга до его пересадки тому же самому пациенту для уничтожения больных или злокачественных клеток, обработка костного мозга до его пересадки для уничтожения компетентных Т-клеток и предотвращения болезни трансплантат против хозяина, обработка клеточных культур для уничтожения всех клеток за исключением нужных вариантов, которые не экспрессируют антиген-мишень, или уничтожение вариантов, которые экспрессируют нежелательный антиген.
Условия неклинического индуцирования клеточной гибели ίη νίΙΐΌ легко определяются специалистом в данной области знаний.
Примерами клинического осуществления способа ех νί\Ό являются удаление опухолевых клеток
- 12 008058 или лимфоидных клеток из костного мозга до аутологичной трансплантации при лечении рака или лечении аутоиммунного заболевания или удаление Т-клеток и других лимфоидных клеток из аутологичного или аллогенного костного мозга или ткани до трансплантации с целью предотвращения болезни трансплантат против хозяина. Обработка может быть осуществлена следующим образом. Костный мозг получают у больного или другого индивидуума и инкубируют в среде, содержащей сыворотку, к которой добавлен заявленный в соответствии с настоящим изобретением цитотоксический агент в концентрации от около 10 мкМ до 1 пкМ в течение от около 30 мин до около 48 ч при температуре около 37°С. Точные значения концентрации и времени инкубации, т.е. доза, легко определяются специалистом в данной области знаний. После инкубирования клетки костного мозга отмывают средой, содержащей сыворотку, и возвращают больному внутривенно известными методами. В условиях, когда больной получает другое лечение, такое, как курс полной химиотерапии или тотальное облучение организма, в промежутке между временем забора костного мозга и реинфузией обработанных клеток, обработанные клетки костного мозга могут быть заморожены и сохранены в жидком азоте при использовании стандартного медицинского оборудования.
Для клинического использования ίη νίνο заявленный в соответствии с настоящим изобретением цитотоксический агент может быть приготовлен в виде раствора или лиофилизированного порошка, протестированных на стерильность и уровни эндотоксина. Примерами подходящих методик для использования конъюгатов являются следующие подходы. Конъюгаты применяют еженедельно в течение 4 недель в виде внутривенных болюсов. Болюсные дозы используют в 50-100 мл обычного физиологического раствора, к которому может быть добавлено 5-10 мл сывороточного альбумина человека. Дозы составляют от 10 мкг до 2000 мг на внутривенное введение (уровень разброса от 100 нг до 20 мг/кг веса в день). Через 4 недели лечения больной может продолжить еженедельную терапию. Специальные клинические схемы в соответствии с порядком использования препаратов, временем, дозами, разбавителями, наполнителями и т. д. могут быть определены специалистом в данной области знаний в зависимости от конкретной клинической ситуации.
Примерами медицинских состояний для клинического осуществления заявленного способа ех νίνο или ίη νίνο с целью индуцирования гибели клеток в отобранных клеточных популяциях являются злокачественные опухоли, в том числе рак легких, груди, толстого кишечника, простаты, почек, поджелудочной железы, яичников, лимфатических органов; аутоиммунные заболевания, такие как системная красная волчанка, ревматоидный артрит, множественный склероз; отторжение трансплантата, например трансплантата почки, печени, легкого, сердца и костного мозга; болезнь трансплантат против хозяина; вирусные инфекции, такие как инфекция СМУ, Ηΐν, ΑΙΌ8 и т.д.; паразитарные инвазии, в частности, вызываемые гиардиями, амебами, шистозомами и т.д., а также другие состояния, установленные специалистом в данной области знаний.
Примеры
Изобретение может быть проиллюстрировано ссылками на примеры, которые не ограничивают его объема. Если специальным образом не оговорено иное, все проценты, отношения, части и т.д. взяты по весу.
Пример 1. Получение таксана 2'.
Таксан 2' (3'-дефенил-3'-(изобутенил)-7-(метилдисульфонилпропаноил)доцетаксель) получают из коммерчески доступного 10-деацетилбаккатина ΐΐΐ (фиг. 7) согласно схеме, приведенной на фиг. 8.
Соединения 4-6' получают, как описано Огеепе е! а1. в 1. Ат. СНеш. 8ое. 110:5917-5919 (1988) и Орта е1 а1., в 1. Меб. СНет. 39:3889-3896 (1996), а также в других цитируемых источниках информации.
Соединение 7' (7'-(триэтилсилил)-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)доцетаксель) получают добавлением моногидрата гидразина (1 мл) к раствору 6' (65 мг, 0,059 ммоль) в этаноле (2 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивают и контролируют тонкослойной хроматографией при использовании 40%-ного этилацетата в гексане. Через 1 ч завершение реакции при добавлении насыщенного раствора водного хлорида аммония (10 мл) подтверждают тонкослойной хроматографией. Водный слой экстрагируют этилацетатом (10 мл х3). Объединенные экстракты высушивают над безводным сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Концентрат очищают на колонке с силикагелем при использовании 40%-ного этилацетата в гексане с получением продукта 7', представляющего собой твердое вещество белого цвета (элюант) (42 мг, 69%) со следующими свойствами:
'Н ЯМЕ (СОС13) δ 0,53 (ш, 6Н), 0,92 (ΐ, 1=8,0 Гц, 9Н), 1,11 (ш, 24Η), 1,20 (δ, 3Η), 1,23 (δ, 3Η), 1,32 (8, 9Η), 1,71 (8, 3Η), 1,72 (ш, 3Η), 1,78 (δ, 3Η), 1,92 (ш, 4Η), 2,35 (ш, 5Η), 3,89 (б, 1=6,8 Гц, 1Η), 4,18 (б, 1=8,4 Гц, 1Η), 4,23 (б, 1=2,0 Гц, 1Η), 4,28 (б, 1=8,4 Гц, 1Η), 4,37 (бб, 1=6,4, 10,4 Гц, 1Η), 4,41 (б, 1=3,2 Гц, 1Η), 4,80 (ш, 2Η), 4,91 (б, 1=8,0 Гц, 1Η), 5,10 (б, 1=2,0 Гц, 1Η), 5,31 (б, 1=8,8 Гц, 1Η), 5,63 (б, 1=7,2 Гц, 1Η), 6,13 (!, 1=9,0 Гц, 1Η), 7,43 (!, 1=8,0 Гц, 2Η), 7,57 (ΐ, 1=8,0 Гц, 1Η), 8,07 (б, 1=8,0 Гц, 2Η).
ш/ζ ЬС/М8 для С56Η89NО148^2Nа+: вычисл. 1078,58; обнаружено: 1078,40.
Соединение 8' (2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)доцетаксель) получают следующим образом. Раствор соединения 7' (35 мг, 0,029 ммоль) получают добавлением раствора 0,1Ν НС1 в этаноле (5 мл) при 0°С. Раствор перемешивают при градуированном повышении температуры до комнатной и оставляют перемешиваться в течение 16 ч. Реакцию останавливают добавлением насыщенного раствора водного бикарбоната натрия (10 мл) и водный слой экстрагируют этилацетатом (15 мл х 3).
- 13 008058
Объединенные экстракты высушивают над безводным сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Концентрат очищают на колонке с силикагелем при использовании 50%-ного этилацетата в гексане с получением продукта 8', представляющего собой твердое вещество белого цвета (элюант) (20 мг, 64%) со следующими свойствами:
!Н ЯМК (СОС13) δ 1,11 (т, 24Н), 1,23 (8, 3Н), 1,26 (8, 3Н), 1,30 (8, 9Н), 1,74 (8, 6Н), 1,79 (8, 3Н), 1,84 (т, 1Н), 1,92 (8, 3Н), 2,36 (8, 3Н), 2,38 (т, 1Н), 2,57 (т, 1Н), 3,92 (б, 1=6,8 Гц, 1Н), 4,17 (б, 1=1,2 Гц, 1Н), 4,22 (б, 1=8,0 Гц, 1Н), 4,23 (т, 1Н), 4,31 (б, 1=8,0 Гц, 1Н), 4,42 (б, 1=2,8 Гц, 1Н), 4,75 (т, 1 Н), 4,85 (т, 1Н), 4,95 (б, 1=7,6 Гц, 1Н), 5,20 (8, 1Н), 5,33 (б, 1=8,8 Гц, 1Н), 5,68 (б, 1=7,2 Гц, 1Н), 6,14 (1, 1=8,8 Гц, 1Н), 7,46 (1, 1=8,0 Гц, 2Н), 7,60 (1, 1=8,0 Гц, 1Н), 8,10 (б, 1=8,0 Гц, 1Н).
Соединение 9' (2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-7-(метилдисульфамилпропаноил)доцетаксель) получают следующим образом. К раствору 8' (20 мг, 0,020 ммоль) в метиленхлориде (3 мл) добавляют ΌΜΛΡ (3 мг, 0,02 ммоль), дитиокислоту (3 мг, 0,018 ммоль) и БОС (8 мг, 0,042 ммоль). Полученную смесь перемешивают в течение ночи. Тонкослойная хроматография при использовании 25%-ного этилацетата в гексане выявляет, что практически весь исходный материал израсходован и существует новое пятно. Реакцию останавливают добавлением насыщенного раствора водного хлорида аммония (10 мл) и конечный продукт экстрагируют метиленхлоридом (10 мл х 3). Объединенные экстракты высушивают над безводным сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Концентрат очищают на колонке с силикагелем при использовании 25%-ного этилацетата в гексане с получением продукта 9', представляющего собой твердое вещество белого цвета (элюант) (9 мг, 41%) со следующими свойствами:
!Н ЯМК (СОС13) δ 1,11 (т, 24Н), 1,22 (8, 3Н), 1,34 (8, 9Н), 1,76 (8, 3Н), 1,80 (8, 3Н), 1,85 (8, 3Н), 1,95 (т, 4Н), 2,36 (8, 3Н), 2,41 (т, 1Н), 2,42 (8, 3Н), 2,54 (т, 1Н), 2,70 (1, 1=7,2 Гц, 2Н), 2,88 (т, 2Н), 3,93 (Ьг 8, 1Н), 4,04 (б, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,24 (б, 1=8,8 Гц, 1Н), 4,33 (б, 1=8,8 Гц, 1Н), 4,43 (б, 1=2,8 Гц, 1Н), 4,77 (т, 1Н), 4,86 (т, 1Н), 4,94 (б, 1=8,0 Гц, 1Н), 5,32 (т, 2Н), 5,54 (бб, 1=6,8, 10,4 Гц, 1Н), 5,69 (б, 1=7,2 Гц, 1Н), 6,13 (1, 1=8,8 Гц, 1Н), 7,47 (1, 1=8,0 Гц, 2Н), 7,61 (1, 1=8,0 Гц, 1Н), 8,10 (б, 1=8,0 Гц, 1Н).
т/ζ БС/М8 для С54Н81ЫО15812Ма+: вычисл. 1098,48; обнаружено: 1098,28.
Таксан 2' (3'-дефенил-3'-(изобутенил)-7-(метилдисульфонилпропаноил)доцетаксель) получают следующим образом. К раствору 9' (9 мг, 0,008 ммоль) в пиридин-ацетонитриле (1/1, 2 мл) добавляют НР/пиридин (70:30, 0,1 мл) при 0°С и полученную смесь перемешивают в течение 24 ч при градуированном повышении температуры до комнатной. Реакцию останавливают добавлением насыщенного раствора водного бикарбоната натрия. Затем реакционную смесь разводят этилацетатом (5 мл х 2), объединенные органические слои отмывают водой (5 мл), высушивают над безводным сульфатом натрия и концентрируют в вакууме. Концентрат очищают на колонке с силикагелем при использовании 60%-ного этилацетата в гексане с получением продукта 2', представляющего собой твердое вещество белого цвета (элюант) (5 мг, 64%) со следующими свойствами:
!Н ЯМК (СОС13) δ 1,10 (8, 3Н), 1,21 (8, 3Н), 1,36 (8, 9Н), 1,56 (8, 3Н), 1,77 (8, 6Н), 1,86 (8, 3Н), 1,94 (т, 1Н), 1,97 (8, 3Н), 2,35 (т, 1Н), 2,37 (8, 3Н), 2,42 (8, 3Н), 2,56 (т, 1Н), 2,70 (1, 1=7,2 Гц, 2Н), 2,88 (бб, 1=2,4, 6,8 Гц, 2Н), 3,36 (Ьг б, 1=4,8 Гц, 1Н), 3,95 (б, 1=3,2 Гц, 1Н), 4,01 (б, 1=6,8 Гц, 1Н), 4,23 (т, 2Н), 4,33 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,77 (т, 2Н), 4,94 (б, 1=7,6 Гц, 1Н), 5,31 (т, 1Н), 5,32 (б, 1=1,6 Гц, 1Н), 5,51 (бб, 1=7,2, 10,8 Гц, 1Н), 5,68 (б, 1=7,2 Гц, 1Н), 6,16 (1, 1=9,0 Гц, 1Н), 7,48 (1, 1=8,0 Гц, 2Н), 7,62 (1, 1=8,0 Гц, 1Н), 8,11 (б, 1=8,0 Гц, 1Н).
т/ζ БС/М8 для С’,|5Н61НО158|2№1': вычисл. 942,35; обнаружено: 942,47.
Пример 2. Получение таксана 3'.
Таксан 3' (3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-7-(метилдисульфонилпропаноил)доцетаксель получают из коммерчески доступного соединения 10 согласно схеме, приведенной на фиг. 9.
Соединение 10' (7'-(триэтилсилил)-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензозоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель) получают следующим образом. К раствору 9' (36 мг, 0,031 ммоль) в этаноле (1,5 мл) добавляют моногидрат гидразина (1 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре и контролируют тонкослойной хроматографией при использовании 40%-ного этилацетата в гексане. Через 1 ч завершение реакции при добавлении насыщенного раствора водного хлорида аммония (10 мл) подтверждают тонкослойной хроматографией. Водный слой экстрагируют этилацетатом (10 мл х 3). Объединенные экстракты высушивают над безводным сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Концентрат очищают на колонке с силикагелем при использовании 35%-ного этилацетата в гексане с получением деацетилированного продукта 10', представляющего собой твердое вещество белого цвета (элюант) (19 мг, 57%) со следующими свойствами:
!Н ЯМК (СОС13) δ 0,56 (т, 6Н), 0,92 (1, 1=8,0 Гц, 9Н), 1,11 (т, 27Н), 1,22 (8, 3Н), 1,23 (8, 3Н), 1,38 (т, 10Н), 1,69 (8, 3Н), 1,72 (т, 3Н), 1,78 (8, 3Н), 1,89 (8, 3Н), 1,93 (т, 1Н), 2,18 (8, 3Н), 2,32 (т, 1Н), 2,44 (т, 2Н), 3,81 (8, 3Н), 3,82 (б, 1=6,8 Гц, 1Н), 3,96 (8, 3Н), 4,25 (б, 1=2,0 Гц, 1Н), 4,29 (б, 1=8,0 Гц, 1Н), 4,34 (бб, 1=6,4, 10,4 Гц, 1Н), 4,39 (б, 1=2,0 Гц, 1Н), 4,42 (б, 1=8,0 Гц, 1Н), 4,76 (1, 1=9,2 Гц, 1Н), 4,89 (т, 2Н), 5,11 (б, 1=2,0 Гц, 1Н), 5,34 (б, 1=8,8 Гц, 1Н), 5,64 (б, 1=6,4 Гц, 1Н), 6,13 (1, 1=9,0 Гц, 1Н), 6,94 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,06
- 14 008058 (аа, 1=9,2, 3,2 Гц, 1Η), 7,29 (ά, 1=2,8 Гц, 1Η).
т/ζ ЬС/М8 для С58Н9з^Ок5ь№': вычисл. 1138,60; обнаружено: 1138,43.
Соединение 11' (2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель) получают следующим образом. Раствор 5%-ной хлористо-водородной кислоты в этаноле (9,0 мл) добавляют к соединению 10' (86,4 мг, 0,0774 ммоль) при 0°С. Раствор перемешивают при градуированном повышении температуры до комнатной под N2. Через 5 ч реакцию останавливают добавлением насыщенного раствора водного бикарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом (25 мл х 2). Объединенные этилацетатные слои далее промывают водой (25 мл х 2), высушивают над безводным сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Сырой остаток очищают на колонке с силикагелем при использовании 50%-ного этилацетата в гексане с получением продукта 11', представляющего собой твердое вещество белого цвета (элюант) (61,5 мг, 79%) со следующими свойствами:
!Н ЯМК (СОС13) δ 1,08 (8, 27Н), 1,23 (δ, 3Н), 1,36 (δ, 9Н), 1,58 (т, 1Н), 1,67 (δ, 3Н), 1,70 (δ, 3Н), 1,76 (8, 3Н), 1,82 (т, 2Н), 1,88 (δ, 3Н), 2,16 (δ, 3Н), 2,31 (т, 1Н), 2,50 (т, 2Н), 3,17 (Ьг δ, 1Н), 3,79 (δ, 3Н), 3,85 (а, 1=6,4 Гц, 1Н), 3,95 (δ, 1Н), 4,18 (т, 2Н), 4,29 (а, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,37 (а, 1=2 Гц, 1Н), 4,41 (а, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,74 (ί, 1=9 Гц, 1Н), 4,90 (ί, 1=9,8 Гц, 2Н), 5,17 (а, 1=1,6 Гц, 1Н), 5,32 (а, 1=9,2 Гц, 1Н), 5,65 (а, 1=6,8 Гц, 1Н), 6,10 (ί, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,93 (а, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,05 (аа, 1=9,2, 3,0 Гц, 1Н), 7,28 (а, 1=3,0 Гц, 1Н).
т/ζ БС/М8 для С5;Н-^О|68|;№1': вычисл. 1024,52; обнаружено: 1024,31.
Соединение 12' (2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-7-(метилдисульфамилпропаноил)доцетаксель) получают следующим образом. К раствору 11' (25 мг, 0,025 ммоль), ЕЭС (10 мг, 0,05 ммоль) и ОМАР (3 мг, 0,025 ммоль) в метиленхлориде (0,8 мл) добавляют метилдитиопропионовую кислоту (3,6 мг, 0,024 ммоль) в метиленхлориде (4,0 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре под N в течение 5 ч. Далее реакцию останавливают добавлением насыщенного раствора водного хлорида аммония и экстрагируют метиленхлоридом (25 мл х 2). Объединенные этилацетатные слои далее промывают водой (15 мл х 1), высушивают над безводным сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Сырой остаток очищают на колонке с силикагелем при использовании 30%-ного этилацетата в гексане с получением продукта 12', представляющего собой твердое вещество белого цвета (элюант) (21,3 мг, 75%) со следующими свойствами:
!Н ЯМК (СОС13) δ 1,12 (δ, 27Н), 1,23 (δ, 6Н), 1,37 (δ, 9Н), 1,68 (δ, 3Н), 1,72 (δ, 3Н), 1,88 (δ, 3Н), 1,93 (δ, 3Н), 2,17 (δ, 3Н), 2,41 (δ, 3Н), 2,69 (ί, 1=6,8 Гц, 2Н), 2,86 (т, 2Н), 3,22 (Ьг δ, 1Н), 3,80 (δ, 3Н), 3,95 (т, 4Н), 4,31 (а, 1=8,0 Гц, 1Н), 4,38 (а, 1=2,4 Гц, 1Н), 4,45 (а, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,76 (а, 1=9,8 Гц, 1Н), 5,56 (а, 1=6,4 Гц, 1Н), 6,11 (ί, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,95 (ί, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,06 (аа, 1=3,2, 9,2 Гц, 1Н), 7,28 (а, 1=3,2 Гц, 1Н).
т/ζ БС/М8 для С.’56Н8^О1-8|2№1': вычисл. 1158,50; обнаружено: 1158,33.
Таксан 3' (3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-7-(метилдисульфонилпропаноил)доцетаксель) получают следующим образом. Под N к соединению 12' (27,6 мг, 0,0243 ммоль) растворяют в пиридин-ацетонитриле (1/1, 2 мл). НЕ/пиридин (70:30, 0,28 мл) добавляют к полученному раствору при 0°С и полученную смесь перемешивают в течение 24 ч при градуированном повышении температуры до комнатной. Реакцию останавливают добавлением насыщенного раствора водного бикарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом (30 мл х 3). Объединенные этилацетатные слои затем дополнительно промывают насыщенным раствором водного бикарбоната натрия (25 мл х 1) и далее насыщенным раствором водного сульфата меди (25 мл х 3). Объединенные органические слои далее промывают водой (25 мл х 1), высушивают над безводным сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Сырой остаток очищают на колонке с силикагелем при использовании 50%-ного этилацетата в гексане с получением продукта 3' (элюант) (19,7 мг, 82,8%) со следующими свойствами:
!Н ЯМК (СПС13) δ 1,25 (δ, 6Н), 1,38 (δ, 9Н), 1,69 (δ, 3Н), 1,74 (δ, 3Н), 1,87 (δ, 3Н), 1,94 (δ, 3Н), 2,18 (δ, 3Н), 2,41 (δ, 3Н), 2,68 (ί, 1=6,8 Гц, 2Н), 2,86 (т, 2Н), 3,12 (Ьг δ, 1Н), 3,29 (а, 1=6,4 Гц, 1Н), 3,80 (δ, 3Н), 3,92 (т, 4Н), 4,16 (а, 1=2,0, 6,4 Гц, 1Н), 4,30 (а, 1=8,0 Гц, 1Н), 4,43 (а, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,75 (т, 2Н), 4,90 (а, 1=8,0 Гц, 1Н), 5,29 (δ, 1Н), 5,33 (а, 1=8,0 Гц, 1Н), 5,46 (аа, 1=7,2, 10,8 Гц, 1Н), 5,65 (а, 1=6,4 Гц, 1Н), 6,14 (ί, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,95 (ί, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,06 (аа, 1=3,2, 9,2 Гц, 1Н), 7,28 (а, 1=3,2 Гц, 1Н).
т/ζ ЬС/М8 для С-гНз.^Ог^Ш': вычисл. 1002,37; обнаружено: 1001,99.
Пример 3. Цитотоксические исследования ίη νίίτο.
Лекарственные таксаны, содержащие сульфид, дисульфид и сульфгидрил, заявленные в соответствии с настоящим изобретением, могут быть оценены на их способность супрессировать пролиферацию различных клеточных линий опухолей человека ίη νίίτο. Прикрепляющиеся клеточные линии А431 (эпидермальная карцинома человека), 8КВК3 (опухоль груди человека), А549 (легочная карцинома человека) и МСЕ-7 (опухоль груди человека) и неприкрепляющаяся клеточная линия №ипа1\\'а (лимфома Бэркитта) используются для оценки цитотоксичности заявленных соединений. Клетки обрабатывают соединениями в течение 72 ч и выжившие фракции клеток исследуют прямыми методами. Линии А431, 8КВК3, А549 и МСЕ-7 исследуют на эффективность роста в планшетах (СсШтасЬег еί а1., 1. Се11. Βίο1. 102:1312-1319 (1986)), а клетки Nата1^а исследуют экстраполяцией обратного роста (ΌοΗιηηοΙκΓ еί а1., 1. Iттиηο1. 135:3648-3651 (1985)). На основании полученных данных оценивают и вычисляют 1С50.
Цитотоксичность таксанов 2' и 3' определяют следующим образом.
- 15 008058
Клетки линий А431, А549 и МСГ-7 высевают в 6-луночные планшеты при различной плотности в среде ΌΜΕΜ, дополненной 10%-ной эмбриональной телячьей сывороткой. Таксан 2' в различных концентрациях добавляют к клеткам и клетки поддерживают во влажной атмосфере при 37°С и 6% СО2, пока не сформируются колонии, состоящие примерно из 20 или более клеток (6-10 дней). В контрольные планшеты таксан не добавляют. Затем клетки фиксируют формальдегидом, окрашивают кристаллическим фиолетовым и подсчитывают под микроскопом с низким разрешением. Эффективность роста клеток определяют по числу колоний и выживаемости клеточных фракций как отношение соответствующих эффективностей в обработанном образце и контроле.
На фиг. 8 показаны результаты определения цитотоксичности. Таксан 2', имеющий свободную гидроксильную группу в положении С-10 и связывающую группу в положении С-7, наиболее эффективен по оценке значения 1С50 (8х10-10 М) при исследовании клеток А431. В противоположность этому, таксан 1' (фиг. 3), имеющий группу простого эфира в положении С-10, является нетоксичным по отношению к указанным клеткам даже при 3х10-9 М. Приведенные результаты показывают, что положение С-10 в таксанах не является положением, которое должно быть обязательно защищено для поддержания высокой активности.
Цитотоксичность таксана 3' определяют сходным образом. Клетки линий А549 и МСГ-7 высевают в 6-луночные планшеты при различной плотности в среде ΌΜΕΜ, дополненной 10%-ной эмбриональной телячьей сывороткой. Таксан 3' в различных концентрациях добавляют к клеткам и клетки поддерживают во влажной атмосфере при 37°С и 6% СО2, пока не сформируются колонии, состоящие примерно из 20 или более клеток (6-10 дней). В контрольные планшеты таксан не добавляют. Затем клетки фиксируют формальдегидом, окрашивают кристаллическим фиолетовым и подсчитывают под микроскопом с низким разрешением. Эффективность роста клеток определяют по числу колоний и выживаемости клеточных фракций как отношение соответствующих эффективностей в обработанном образце и контроле.
На фиг. 11 показаны результаты определения цитотоксичности. Таксан 3', имеющий свободную гидроксильную группу в положении С-10 и связывающую группу в положении С-7, проявляет даже более сильную активность по отношению к двум опухолевым линиям клеток по оценке значения 1С50 1,8х10-10 М и 6,3х10-11 М при исследовании клеток А549 и МСГ-7 соответственно. Приведенные результаты показывают, что положение С-10 в таксанах не является положением, которое должно быть обязательно защищено для поддержания высокой активности.
Пример 4. Конъюгация с антителами.
Конъюгация тиолсодержащего таксана с антителами посредством дисульфидных связей.
Конъюгацию тиолсодержащего таксана с антителами или их фрагментами посредством дисульфидных связей осуществляют в два этапа. На первом этапе дитиопиридиловые группы вводят в антитела или их фрагменты при использовании сукцинимидилпиридилдитиопентаноата (8ΡΡ), как описано Сагккои с1 а1. Тиопиридиловые группы затем замещают в реакции с тиолсодержащим таксаном с получением конъюгата.
Получение конъюгатов антитело-88-таксан.
Антитела к В4, рецептору Ε6Τ и Ν901 или их фрагменты модифицируют при использовании 8ΡΌΡ и 8ΡΡ, как описано в литературе. В среднем от 1 до 10 дитиопиридиловых групп вводят в одну молекулу антитела.
Раствор модифицированного дитиопиридилом антитела в концентрации 1 мг/мл в 0,1М калиевом фосфатном буфере (рН 6,5), содержащем 1 мМ ΕΌΤΑ, при 25°С обрабатывают тиолсодержащим таксаном (1,25 мол. экв. в расчете на дитиопиридиловую группу). Высвобождение тиопиридина из модифицированного антитела или его фрагмента контролируют спектрофотометрически при 343 нм и оно полностью завершается примерно в течение 20 ч. Конъюгат антитела с таксаном очищают и освобождают от непрореагировавшего лекарственного препарата и других низкомолекулярных примесей гельфильтрацией на колонке с сефадексом 6-25.
Количество молекул таксана, связавшихся с молекулой антитела, определяют измерением отношения поглощений при 230 и 275 нм. При использовании указанного способа с одной молекулой антитела посредством дисульфидной связи может быть соединено 1-10 молекул таксана.
Конъюгация тиолсодержащего таксана с антителами посредством нерасщепляемой тиоэфирной связи.
Конъюгацию тиолсодержащего таксана с антителами или их фрагментами осуществляют в два этапа. На первом этапе малеимидные группы вводят в антитела или их фрагменты при использовании малеимидометилциклогексанкарбоксилата (8МСС). Затем модифицированное антитело вводят в реакцию с тиолсодержащим таксаном с получением тиоэфирной связи.
Получение конъюгатов антитела с таксаном (нерасщепляемых).
Антитела к В4, рецептору Ε6Τ и Ν901 или их фрагменты модифицируют при использовании 8МСС, как описано в литературе.
Модифицированные антитела или их фрагменты обрабатывают тиолсодержащим таксаном (1,25 мол.экв. в расчете на малеимидную группу). Смеси инкубируют в течение ночи при 4°С. Конъюгаты антитела с таксаном очищают, как описано выше. При использовании указанного способа, в среднем, с одной молекулой антитела может быть соединено 1-10 молекул таксана.
Пример 5. Специфическое получение конъюгатов антитела с таксаном.
- 16 008058
Получают мышиные моноклональные антитела к рецептору ЕСЕ человека (ЕСЕК). Известно, что рецептор ЕСЕ сверхэкспрессируется при некоторых чешуеклеточных формах раковых опухолей человека, таких как рак груди, легких, шеи и головы. Четыре антитела, а именно К8-61 (1д2а), К8-77 (1дС1), К8-78 (1д2а) и К8-62 (1дС2а) связывают с таксанами посредством дисульфидных связей. Моноклональное антитело мыши ТА1, направленное к онкогену ней. сверхэкспрессируемому на клетках рака груди и яичников человека, используют для приготовления конъюгатов таксана и ТА1. Получение этих конъюгатов описано ниже.
Получение конъюгата антитела К8-61 к ЕСЕК с таксаном.
Антитело К8-61 к ЕСЕК сначала модифицируют №сукцинимидил-4-[2-пиридилдитио]пентаноатом (8РР) для введения дитиопиридиловых групп. Антитело (2.3 мг/мл) в 50 мМ калий-фосфатном буфере, рН 6,5, содержащем №1С1 (50 мМ) и ЕЭТА (2 мМ) затем обрабатывают 8РР (11 мол.экв. в этаноле). Конечная концентрация этанола составляет 1,4% (ν/ν). Через 90 мин при комнатной температуре добавляют лизин (50 мМ) для облегчения удаления ковалентно не связавшегося 8РР. Реакцию осуществляют в течение 2 ч и затем очищают продукт гель-фильтрацией на колонке с сефадексом С25, уравновешенной указанным выше буфером. Фракции, содержащие антитела, объединяют и определяют степень модификации обработкой образца дитиотреитолом и измерением изменений поглощения при 343 нм (высвобождение пиридин-2-тиона с ε343=8,080 М-1 см-1). Выход антитела составляет около 90%; при этом с молекулой антитела связывается 5,0 дитиопиридиловых групп.
Модифицированное антитело разводят калий-фосфатным буфером, 50 мМ, рН 6,5, содержащем №1С1 (50 мМ) и ЕЭТА (2 мМ) до конечной концентрации 1,28 мг/мл. Таксан-8Н (1,7 экв. на дитиопиридиловую группу) в этаноле (10%, ν/ν в конечной реакционной смеси) затем добавляют к раствору модифицированного антитела. Реакцию осуществляют при комнатной температуре под аргоном в течение 24 ч. Развитие реакции контролируют спектрофотометрически при 343 нм для определения высвобождения пиридин-2-тиона, вызываемого дисульфидным обменом между таксаном-δΗ и дитипиридиловыми группами антитела. Увеличение поглощения при 343 нм свидетельствует о том, что таксан связался с антителом. Реакционную смесь далее наслаивают на сефадекс С25 8Е в гель-фильтрационной колонке, уравновешенной фосфатным буферным раствором (РВ8, рН 6,5), содержащим 20% пропиленгликоля. Основной пик содержит мономерный конъюгат К8-61 с таксаном. Концентрацию конъюгата определяют измерением поглощения при 280 нм. В конъюгат добавляют Твин 80 (0,05%) и сывороточный альбумин человека (Н8А, 1 мг/мл).
Получение конъюгата антитела К8-77 к ЕСЕК с таксаном.
Антитело К8-77 к ЕСЕК сначала модифицируют №сукцинимидил-4-[2-пиридилдитио]пентаноатом (8РР) для введения дитиопиридиловых групп. Антитело (5,0 мг/мл) в 50 мМ калий-фосфатном буфере, рН 6,5, затем обрабатывают 8РР (11 мол.экв. в этаноле). Конечная концентрация этанола составляет 2% (ν/ν). Через 90 мин при комнатной температуре добавляют лизин (50 мМ) для облегчения удаления ковалентно не связавшегося 8РР. Реакцию осуществляют в течение 2 ч и затем очищают продукт гель-фильтрацией на колонке с сефадексом С25, уравновешенной указанным выше буфером. Фракции, содержащие антитела, объединяют и определяют степень модификации обработкой образца дитиотреитолом и измерением изменений поглощения при 343 нм (высвобождение 2-меркаптопиридина с ε343=8,080 М-1 см-1). Выход антитела составляет около 90%, при этом с молекулой антитела связывается 4,24 пиридилдитиогрупп.
Модифицированное антитело разводят калийфосфатным буфером, 50 мМ, рН 6,5, содержащим №1С1 (50 мМ) и ЭДТА (2 мМ), до конечной концентрации 1,4 мг/мл. Затем к раствору модифицированного антитела добавляют таксан-8Н (1,7 эквивалентов на дитиопиридиловую группу) в этаноле (10% ν/ν в конечной реакционной смеси). Реакцию осуществляют при комнатной в течение 24 ч под аргоном. Увеличение поглощения при 343 нм свидетельствует о высвобождении пиридин-2-тиона и о том, что таксан связался с антителом. Реакционную смесь далее наслаивают на сефакрил 8300НК в гель-фильтрационной колонке, уравновешенной фосфатным буферным раствором (РВ8, рН 6,5). Основной пик содержит мономерный конъюгат К8-77 с таксаном. Концентрацию конъюгата антитела К8-77 с таксаном определяют измерением поглощения при 280 нм. В конъюгат добавляют Твин 80 (0,06%) и сывороточный альбумин человека (1 мг/мл).
Получение конъюгата антитела К8-62 к ЕСЕК с таксаном.
Конъюгат антитела К8-62 к ЕСЕК с таксаном получают аналогично получению конъюгата антитела К8-77 к ЕСЕК с таксаном, как описано выше. Модифицированное антитело разводят калийфосфатным буфером, рН 6,5, содержащим №1С1 (50 мМ) и ЭДТА (2 мМ) до конечной концентрации 2,5 мг/мл. Антитело модифицируют 8РР для введения 5,25 пиридилтиогрупп на молекулу, затем к модифицированному раствору антитела добавляют таксан-8Н (1,7 экв.) в этаноле (10% ν/ν в конечной реакционной смеси). Реакцию осуществляют при комнатной температуре в течение 24 ч под аргоном. Конъюгат очищают гель-фильтрацией на колонке с сефакрилом 8300НК, уравновешенной фосфатным буфером (РВ8, рН 6,5). Основной пик содержит мономерный конъюгат К8-62 с таксаном. К конъюгату добавляют РВ8, содержащий Твин 80 (0,01%, ^/ν) и НА8 (1 мг/мл).
Получение конъюгата антитела К8-78 к ЕСЕК с таксаном.
- 17 008058
Конъюгат антитела К8-78 к ЕСЕК с таксаном получают аналогично получению конъюгата антитела К8-77 к ЕСЕК с таксаном, как описано выше. Модифицированное антитело разводят калий-фосфатным буфером 50 мМ, рН 6,5, содержащим ЫаС1 (50 мМ) и ЭДТА (2 мМ) до конечной концентрации 1,6 мг/мл. Антитело модифицируют 8РР для введения 4,0 пиридилтиогрупп на молекулу антитела. Затем к модифицированному раствору антитела добавляют таксан-8Н (1,7 экв.) в этаноле (15% ν/ν в конечной реакционной смеси). Реакцию осуществляют при комнатной температуре под аргоном в течение 24 ч. Затем раствор разделяют на две порции, порцию А и порцию В, с которыми далее работают отдельно. Осуществляют диализ порции А против РВ8. рН 6,5, который содержит 2 мМ СНАР8 (3-[(хлорамидопропил) диметиламмонио]-1-пропансульфонат) и 20% (ν/ν) пропиленгликоль. рН конечного раствора 6,0. Осуществляют диализ порции В против РВ8. рН 6,5, который содержит 20% (ν/ν) пропиленгликоль. После диализа в обе порции добавляют НА8 (1 мг/мл). Порцию В дополнительно обрабатывают Твином 80 (0,05%, ^/ν).
Получение конъюгата ТА1 с таксаном.
Для приготовления конъюгата используют мышиное моноклональное антитело ТА1, связывающее онкоген пей, экспрессируемый опухолями груди и яичников. ТА1 (3,2 мг/мл) в калий-фосфатном буфере 50 мМ, рН 6,5, содержащем ЫаС1 (50 мМ) и ЭДТА (2 мМ) обрабатывают 8РР (8,0 мол. экв. в этаноле). Конечная концентрация этанола составляет 5% (ν/ν). Через 90 мин при комнатной температуре добавляют лизин (50 мМ) для облегчения удаления ковалентно не связавшегося 8РР. Реакцию осуществляют в течение 2 ч и затем продукт очищают продукт гель-фильтрацией на колонке с сефадексом 25, уравновешенной вышеуказанным буфером. Фракции, содержащие антитела, объединяют и определяют степень модификации обработкой образца дитиотреитолом и измерением изменений поглощения при 343 нм (высвобождение пиридин-2-тиона с ε343=8,080 М-1 см-1). Выход антитела составляет около 90%, при этом с молекулой антитела связывается 4,9 пиридилдитиогрупп.
Модифицированное антитело разводят 50 мМ калий-фосфатного буфера, рН 6,5, содержащего ЫаС1 (50 мМ) и ЭДТА (2 мМ) до конечной концентрации 1,0 мг/мл. Затем к модифицированному раствору антитела добавляют таксан-8Н (1,7 экв. на пиридилдитиогруппу) в этаноле (10% ν/ν в конечной реакционной смеси). Реакцию осуществляют при комнатной температуре под аргоном в течение 24 ч. Высвобождение пиридин-2-тиона (контролируют при 343 нм) свидетельствует о завершении обмена дисульфидными группами между таксаном-8Н и пиридилтиогруппой антитела. Порцию реакционной смеси (4,0 мг) затем наслаивают на сефакрил 8300НК в гель-фильтрационной колонке, уравновешенной фосфатным буфером (РВ8, рН 6,5). Основной пик содержит мономерный конъюгат ТА1 с таксаном. Полученный конъюгат разводят до 0,5 мг/мл и осуществляют его диализ против 50 мМ калий-фосфатного буфера, рН 6,5, содержащего ЫаС1 (50 мМ) и ЭДТА (2 мМ) и 20% пропиленгликоль. Концентрацию антитела ТА1 определяют в обоих образцах путем измерения поглощения при 280 нм. В конъюгат добавляют РВ8. содержащий Твин 80 (0,01%) и НА8 (1 мг/мл).
Пример 6. Другие способы связывания таксанов.
Кислотолабильные линкеры.
Таксаны могут быть этерифицированы с Ν-защищенными аминокислотами, такими как Ы-1Ьос-Еаланин, в присутствии дициклогексил-карбодиимида и диметиламинопиридина (ОМАР) с помощью стандартных технологий, описанных в химической литературе. Расщепление ΐ-Ьос защитной группы трифторуксусной кислотой приводит к образованию таксанового эфира, содержащего концевую аминогруппу. Посредством этой концевой аминогруппы возможно связывание таксана с антителами или их фрагментами, а также другими агентами, взаимодействующими с клетками, посредством кислотолабильных линкеров, как описано у (В1а!11ег е! а1., ВюсНетМгу. 24: 1517-1524 (1985), И.8. Ра1еп1 Νο§. 4, 542, 225, 4, 569, 789 и 4, 764, 384).
Фотолабильные линкеры.
Производные таксанов, имеющие концевую аминогруппу, описанные выше, могут связываться с агентами, взаимодействующими с клетками, посредством фотолабильных линкеров, как описано выше. (8еп1ет е! а1., РНоЮсНетМгу апб Р6о!оЬю1оду, 42: 231-237 (1985), И.8. Ра!еп! 4, 625, 014).
Пептидазолабильные линкеры.
Таксаны, имеющие концевую аминогруппу, описанные выше, могут также связываться с агентами, взаимодействующими с клетками, посредством пептидных спейсерных линкеров. Как было показано ранее, короткие пептидные спейсеры между лекарственными препаратами и макромолекулярными белковыми носителями остаются стабильными в сыворотке, но быстро гидролизуются внутриклеточными лизосомальными пептидазами (Тгоие! е! а1., Ргос. N1'1. Асаб. 8сь, 79: 626-629 (1982)). Таксаны, имеющие концевую аминогруппу, могут быть конденсированы с пептидами, такими как Ала-Лей, Лей-Ала или димер Ала-Лей, с помощью конденсирующих агентов, таких как 1-[3-(диметиламино)пропил]-3-этил карбодиимид-НС1, для получения пептидных производных таксанов, которые могут связываться с агентами, взаимодействующими с клетками.
Эстеразолабильные линкеры.
Таксаны могут быть этерифицированы путем взаимодействия их гидроксильной группы с янтарным ангидридом, после чего они могут связываться с агентом, взаимодействующим с клетками, для получе
- 18 008058 ния конъюгата, который может быть распщеплен с помощью внутриклеточных эстераз для получения чистого лекарственного препарата. (Примеры описаны у АЬоиб-Рпак е! а1., Вюсйет. Ркагтасо1., 38: 641648 (1989), 1,ащ|//а е! а1., 1. Меб. Скет., 32: 549-555 (1989).)
Пример 7. Противоопухолевая активность ίη νΐνο.
Определяли противоопухолевый эффект конъюгатов антител к ЕСЕ рецептору с таксаном на ксенотранплантатах раковых клеток чешуеклеточных опухолей человека (А431), пересаженных 8СГО мышам. Противоопухолевый эффект двух различных конъюгатов антител к человеческому эпидермальному фактору роста с таксаном (анти-ЕСЕК-таксан конъюгаты), К8-61 с таксаном и К8-77 с таксаном определяли на ксенотрансплантатах раковых клеток человека, пересаженных 8СГО мышам.
Пятинедельным самкам 8СГО мышей (25 животных) подкожно в область правого бока вводили клетки чешуеклеточного рака человека А-431 (1,5х106 клеток одной мыши) в 0,1 мл среды, не содержащей сыворотку. Опухоли росли в течение 11 дней до достижения размера около 100,0 мм3 (в пределах от 54 до 145 мм3). Затем животных разделили на четыре группы (от 3 до 5 животных в каждой группе) в зависимости от размеров имеющейся опухоли. Первая группа получала конъюгат К8-61 с таксаном (10 мг/кг, с.|б х 5), вводившийся внутривенно. Вторая группа получала конъюгат К8-77 с таксаном (10 мг/кг, с.|б х 5), вводившийся внутривенно. Третья группа получала свободный (неконъюгированный) таксан (0,24 мг/кг, с.|б х 5, внутривенно) в такой же дозе, что и в конъюгате. Четвертая группа, контрольная группа животных, получала РВ8 по такой же схеме, что группы 1-3.
Размер опухолей измеряли 2 раза в неделю, объем опухоли рассчитывали по формуле: 1/2 (длина х ширина х высота). Вес животных также измеряли 2 раза в неделю.
Результаты представлены на фиг. 12 и 13. Размер опухолей у мышей контрольной группы за 31 день достиг приблизительно 1000 мм3. Терапия свободным таксаном не дала положительного эффекта, и опухоли у мышей этой группы выросли до размеров опухолей у мышей контрольной группы, получавших РВ8.
В противоположность этому, применение конъюгатов антител к ЕСЕК с таксаном выявило значительную противоопухолевую активность последних, проявляющуюся в полном ингибировании опухолевого роста у всех получавших терапию животных, при продолжительности эксперимента в течение 34 дней для конъюгата К8-61-таксан и 27 дней для конъюгата К8-77-таксан. Данное исследование также показало необходимость использования для целенаправленной доставки таксана к тканям и достижения противоопухолевой активности специфических противоопухолевых антител, в то время как введение эквивалентных доз неконъюгированного таксана не привело к достижению противоопухолевого эффекта на данных моделях. Важно отметить, что вводимые дозы конгьюгатов антител с таксаном не являлись токсичными, о чем свидетельствует отсутствие потери веса у мышей (см. фиг. 13).
Пример 8. Цитотоксичность конъюгатов антитело-таксан ίη νίίτο.
Цитотоксичность конъюгатов анти-ЕСЕК-таксан, К8-78-таксан измеряли в клоногенном исследовании с использованием клеточной линии человека А431, позитивной по ЕСЕ рецептору (АТСС СКЬ 1555). Конъюгат Ν-901-таксан, представляющий собой аналогичный тестируемому конъюгат, полученный с моноклональным антителом мыши N901 к человеческому СО56, тестировали в качестве специфического контроля, пока клетки А431 не экспрессировали свой антиген СЭ56. Цитотоксичность конъюгата ТА1-таксан, полученного с моноклональным антителом мыши ТА1 к человеческому №и антигену, измеряли на антиген-позитивной клеточной линии человека 8К-ВК-3 (АТСС НТВ 30) и на антигеннегативной клеточной линии А431. Клетки поместили при различной плотности на 6-луночные планшеты для культивирования тканей в среду ИМЕМ, обогащенную 10% эмбриональной сывороткой теленка. Затем добавили иммуноконъюгаты в различных концентрациях, после чего клетки выдерживали во влажной атмосфере при 37°С и 6% СО2 до тех пор, пока не сформировались колонии из приблизительно 20 или более клеток (от 6 до 10 дней). Контрольные планшеты не содержали иммуноконъюгатов. Затем клетки зафиксировали формальдегидом, окрасили генциан фиолетовым и подсчитали под микроскопом с небольшим увеличением. Затем определяли эффективность роста на планшетах на основании числа колонии и выживаемости фракций клеток как отношение эффективности роста на планшетах обработанных клеток к эффективности роста на планшетах контрольных клеток.
Фиг. 14 демонстрирует результаты определения цитотоксичности двух образцов конъюгатов К8-78 с таксаном на антиген-позитивной клеточной линии А431. У конъюгатов обоих образцов выявили одинаковую токсичность по отношению к клеткам мишеням; после экспозиции в течение 6 дней при концентрации 10-8 М выжило менее 10-2 фракций (менее 1% клеток выжило). У контрольного конъюгата, Ν901-таксан, для которого использовались клетки А431, не имеющие на своей поверхности антигенов, определили отсутствие токсичности по отношению к клеткам при концентрации, достигающей 3х10-8 М. У неконъюгированного антитела К8-78 также выявили минимальный цитотоксический эффект. Данные результаты свидетельствуют о антиген-специфической цитотоксичности конъюгата К8-78 с таксаном.
Цитотоксический потенциал и селективность конъюгата ТА1-таксан исследовали на антигенпозитивной клеточной линии 8К-ВК-3 и на антиген-негативной клеточной линии А431. Результаты исследования приведены на фиг. 15. При концентрации конъюгата, равной 10-9 М, более чем 90% клетокмишеней линии 8К-ВК-3 погибли (выжило менее 0,1 фракций), в то время как не было выявлено цито
- 19 008058 токсичности по отношению к антиген-негативным клеткам линии А431. Приведенные результаты подтверждают избирательное уничтожение антиген-позитивных клеток и тот факт, что цитотоксический эффект конъюгата зависит от специфического связывания посредством антительного компонента.
Примеры 9 и 10. Общие методы.
Химические реактивы получали от фирмы А1бпс11 СЬетюа1 Со. или других фирм и использовали без дальнейшей очистки, если не оговаривается иное. Все безводные реакции проводили в высушенной в печи стеклянной посуде под аргоном. Тетрагидрофуран (ТНЕ) перегоняли над натрий/бензофеноном. Все реакции контролировали аналитической тонкослойной хроматографией (ТЬС) на планшетах (силикагель 60 СЕ, алюминиевая емкость) и анализировали в ультрафиолете при длине волны 254 нм и/или в потоке ваниллин/серная кислота и/или в потоке фосфомолибденовая кислота/этанол. Силикагель для колоночной хроматографии получали от Е. Мегск (230-400 меш). Препаративные планшеты для тонкослойной хроматографии (РТЬС) (силикагель 60 СЕ) получали от Лпа11ес11. Спектры 1Н и 13С ЯМР регистрировали в СЭС13, на спектрометре Вгикег 400 МГц и устанавливали путем сравнения химических сдвигов и констант связывания с таковыми родственных соединений. Химические сдвиги выражали в значениях δ, а константы связывания - в герцах. Массовые спектры получали на масс-спектрометре ЛдПеп1 Е5С.|шге 3000 Е1ес!го5ргау. Фраза доведение обычным образом означает разведение реакционной смеси избытком органического растворителя, отмывание водой и физиологическим раствором, высушивание над сульфатом натрия и выпаривание растворителя в вакууме, если не указано иное. Бета-лактамы 4, 19 и 38 и производное 7 баккатина III получали в соответствии с методами, описанными в литературе (В^^еνа, К. СисЬ, Ι.Ζ.; 81Ь, С.1.1. Ог§. Скет., 58:1068-1075 (1993); Ηο1!οη, К.А.; ΖΙπημ, Ζ.; С1агке, Р.А.; №б1/абеЬ, Н., Ргос1ег, Ι.Ό. Τеΐ^аЬеб^οη Ьей. 39:2883-2886 (1998); СЬещ δ.-Η.; νίΐΐοήο, Е.; ^е1, 1.-М.; Εοη§, В.; ЕайсЬПб, С., МатЬег, δ.ν.; Κη6ο^, 1.Е., Vуа5, Ό.; ^οу1е, Έν. ΒίοοΓβηηΚ Меб. СЬет. Ьей., 4(3): 479-482 (1994)). Данные ЯМР указанных соединений были идентичны с описанными в литературе.
Пример 9. Синтез новых таксоидов 12-15, 31-35 и 50-54 (фиг. 5 и 16), заявленных в соответствии с настоящим изобретением, описаны ниже.
Общий метод связывания производного 7 баккатина III с бета-лактамами 6а-б, 21-25 и 40-44.
Синтез силилзащищенных таксоидов 8-11, 26-30 и 45-49. К перемешиваемому раствору производного 7 баккатина III (0,04 ммоль) в ТНЕ (2 мл) добавляют ΝηΗ (2 ммоль). Реакционную смесь перемешивают 15 мин, вводят в нее бета-лактам 6а-б, 21-25 или 40-44 в количестве 0,08 ммоль и затем реакционную смесь перемешивают еще 4-6 ч. Далее смесь разводят Е!ОАс, останавливают уксусной кислотой и доводят обычным образом. Конечный сырой продукт помещают на планшет РТЬС (30% Е!ОАс/гексан) и выделяют нужный продукт.
Общая методика удаления силиловых защитных групп: синтез таксоидов 12-15, 31-35 и 50-54.
К перемешиваемому раствору каждых 10 мг защищенных таксоидов 8-11, 26-30 или 45-49 в ТНЕ (0,5 мл) добавляют 0,15 мл пиридина при 0°С. Затем через 5 мин в перемешиваемый раствор вводят 0,15 мл НЕ-пиридина. Реакционную смесь оставляют охлаждаться до комнатной температуры и далее перемешивают в течение 24 ч. Затем реакционную смесь разводят Е!ОАс, отмывают насыщенным водным раствором NаΗСОз и доводят обычным образом. Конечный сырой продукт помещают на планшет РТЬС (60% Е!ОАс/гексан) и выделяют нужный продукт.
Синтез репрезентативных дисульфидсодержащих таксоидов (фиг. 6, 17), заявленных в соответствии с настоящим изобретением.
Удаление С-10 ацетатной группы. Синтез 16.
К перемешиваемому раствору таксоида 10 (около 70 мг) в этаноле (1,5 мл) добавляют при комнатной температуре моногидрат гидразина (0,6 мл). Реакционную смесь далее перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч, затем разводят Е!ОАс, отмывают насыщенным водным раствором хлорида аммония и доводят обычным образом. Конечный сырой продукт помещают на планшет РТЬС (10% Е!ОАс/СН2С12) и выделяют нужный продукт.
Этерификация С-10 гидроксильной группы таксоидов. Синтез 17 и 36.
К перемешиваемому раствору карбоновой кислоты в дихлорметане (2 мл на каждые 30 мг кислоты) добавляют ЕЭС (1-[3-(диметиламино)пропил]-3-этилкарбодиимидгидрохлорида) (1 экв.) при комнатной температуре и реакционную смесь перемешивают в течение 15 мин. Затем добавляют ЭМ АР (4-(диметиламино)пиридин) (каталитическое количество) реакционную смесь перемешивают еще в течение 5 мин.
Далее добавляют С-10 деацетил-таксоид 16 (1/15 экв.) при комнатной температуре и смесь еще перемешивают в течение 4 ч. Реакционную смесь затем разводят Е!ОАс, отмывают водой, насыщенным водным раствором NаΗСОз и доводят обычным образом. Конечный сырой продукт помещают на планшет РТЬС (10% Е!ОАс/гексан) и выделяют нужный продукт.
Синтез дисульфидсодержащих таксоидов 18 и 37.
К перемешиваемому раствору каждых 10 мг защищенного таксоида 17 или 36 в ТНЕ (0,5 мл) добавляют 0,15 мл пиридина при 0°С. Затем через 5 мин в перемешиваемый раствор вводят 0,15 мл НЕ-пиридина. Реакционную смесь оставляют охлаждаться до комнатной температуры и далее перемешивают в течение 24 ч. Затем реакционную смесь разводят Е!ОАс, отмывают насыщенным водным раствором NаΗСОз и доводят обычным образом. Конечный сырой продукт помещают на планшет РТЬС (60%
- 20 008058
Е!0Ас/гексан) и выделяют нужные продукты 18 и 37.
Соединение 6а.
Ή ЯМВ (СОС13) δ 7,03 (т, 1Н), 5,26 (б!, 1Н), 4,96 (!, 1Н), 4,94 (!, 1Н), 1,82 (к, 3Н), 1,76 (к, 3Н), 1,63 (т, 8Н), 1,06 (т, 21Н).
Соединение 6Ь.
Ή ЯМВ (СВС13) δ 7,31 (т, 1Н), 5,26 (б!, 1Н), 4,96 (!, 1Н), 4,92 (!, 1Н), 2,6 (т, 6Н), 1,82 (к, 3Н), 1,76 (к, 3Н), 1,06 (т, 21Н).
Соединение 6с.
Ή ЯМВ (ϋϋα3) δ 7,1 (т, 1Н), 6,74 (бб, 1Н), 5,24 (б!, 1Н), 5,02 (б, 1=6 Гц, 1Н), 4,85 (т, 1Н), 1,91 (бб, 3Н), 1,81 (к, 3Н), 1,77 (к, 3Н), 1,06 (т, 21Н);
Ή ЯМВ (СОС13) δ 166,93, 162,99, 145,98, 140,20, 124,01, 117,68, 76,89, 55,77, 26,05, 18,33, 18,28,
17,66, 17,50, 17,46; ЬВМ8 т/ζ для С20Н3;3НО38|№1 (М+Ыа)+: вычисл. 388,23; обнаружено: 388.
Соединение 6б.
Ή ЯМВ (СВС13) δ 6,55 (т, 1Н), 5,24 (б!, 1Н), 4,98 (б, 1=5,6 Гц, 1Н), 4,85 (т, 1Н), 2,17 (к, 3Н), 1,94 (к, 3Н), 1,81 (к, 3Н), 1,77 (к, 3Н), 1,06 (т, 21Н);
Ή ЯМВ (СОС13) δ 166,65, 163,29, 159,81, 139,58, 126,15, 118,27, 117,45, 76,59, 55,71, 27,92, 26,07, 21,25, 18,34, 17,50, 17,46;
ЬВМ8 т/ζ для С21Н3-НО38|На (М+Ыа)+: вычисл. 402,24; обнаружено: 402,1.
Соединение 8.
Ή ЯМВ (СБС13) δ 7,32 (б, 1=3,2 Гц, 1Н), 7,07 (б, 1=3,2 Гц, 1Н), 7,04 (б, 1=3,2 Гц, 1Н), 6,95 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,58 (Ьк, 1Н), 6,43 (к, 1Н), 6,12 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,03 (!, 1Н), 5,67 (б, 1=6,4 Гц, 1Н), 5,38 (б, 1=8,8 Гц, 1Н), 5,09 (!, 1Н), 4,89 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,47 (к, 1Н), 4,42 (т, 2Н), 4,28 (б, 1=8 Гц, 1Н), 3,97 (к, 3Н), 3,79 (к, 3Н), 3,74 (т, 1Н), 2,48 (т, 1Н), 2,36 (б, 1Н), 2,20 (к, 3Н), 2,17 (к, 6Н), 2,08 (т, 2Н), 1,98 (к, 3Н), 1,89 (т, 2Н), 1,72 (к, 9Н), 1,60 (т, 5Н), 1,22 (к, 3Н), 1,21 (к, 3Н), 1,11 (к, 21Н), 0,91 (!, 9Н), 0,56 (т, 6Н).
Соединение 9.
Ή ЯМВ (СБС13) δ 7,32 (б, 1=3,2 Гц, 1Н), 7,07 (б, 1=2,8 Гц, 1Н), 7,04 (б, 1=3,2 Гц, 1Н), 6,95 (б, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,47 (Ьк, 1Н), 6,43 (к, 1Н), 6,07 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,4 (!, 1Н), 5,68 (б, 1=6,8 Гц, 1Н), 5.38 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 5,09 (!, 1Н), 4,89 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,47 (к, 1Н), 4,42 (т, 2Н), 4,28 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 3,96 (к, 3Н), 3,79 (к, 3Н), 3,74 (б, 1=6,4 Гц, 1Н), 2,45 (т, 5Н), 2,35 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 2,17 (к, 3Н), 2,15 (к, 3Н), 1,98 (к, 3Н), 1,89 (т, 4Н), 1,72 (к, 9Н), 1,24 (к, 3Н), 1,22 (к, 3Н), 1,11 (к, 21Н), 0,90 (!, 9Н), 0,55 (т, 6Н).
Соединение 10.
Ή ЯМВ (СБС13) δ 7,29 (б, 1=3,2 Гц, 1Н), 7,05 (бб, 1Н), 6,94 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,71 (т, 1Н), 6,43 (к, 1Н), 6,05 (!, 1Н), 5,74 (т, 2Н), 5,67 (б, 1=6,8 Гц, 1Н), 5,37 (б, 1=8,8 Гц, 1Н), 5,10 (!, 1Н), 4,88 (б, 1=9,6 Гц, 1Н), 4,25-4,47 (т, 5Н), 4,10 (т, 1Н), 3,96 (к, 3Н), 3,79 (к, 3Н), 3,73 (т, 1Н), 2,48 (т, 1Н), 2,36 (Ьк, 1Н), 2,33 (Ьк, 1Н), 2,17 (к, 3Н), 2,15 (к, 3Н), 1,97 (к, 3Н), 1,79 (б, 1=6,8 Гц, 3Н), 1,71 (к, 9Н), 1,21 (т, 7Н), 1,10 (к, 21Н), 0,90 (!, 12Н), 0,55 (т, 6Н);
Ή ЯМВ (СОС13) δ 201,97, 171,67, 169,68, 169,27, 166,77, 164,65, 153,40, 152,83, 140,51, 139,82, 136,79, 133,72, 124,99, 121,57, 120,26, 119,93, 115,91, 113,54, 84,35, 81,00, 77,22, 76,44, 76,24, 75,27, 74,72, 72,19, 71,91, 58,62, 56,78, 55,81, 50,16, 46,54, 42,86, 37,30, 36,47, 26,55, 25,59, 22,54, 21,13, 20,82, 18,47, 18,01, 17,93, 17,63, 14,37, 12,53, 9,98, 6,68, 5,27;
ЬВМ8 т/ζ для С59Н91ЫО1681Ма (М+Ыа)+: вычисл. 1148,58; обнаружено: 1148,5.
Соединение 11.
Ή ЯМВ (СПС13) δ 7,29 (б, 1=3,2 Гц, 1Н), 7,05 (бб, 1Н), 6,94 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,44 (к, 1Н), 6,04 (!, 1Н), 5,65 (т, 2Н), 5,49 (к, 1Н), 5,38 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 5,13 (!, 1Н), 4,89 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,45 (к, 1Н), 4,40 (т, 2Н), 4,27 (б, 1=8 Гц, 1Н), 3,98 (к, 3Н), 3,79 (к, 3Н), 3,74 (т, 1Н), 3,14 (к, 1Н), 2,48 (т, 3Н), 2,17 (к, 3Н), 2,15 (к, 3Н), 2,04 (к, 3Н), 1,98 (к, 3Н), 1,71 (к, 9Н), 1,21 (к, 3Н), 1,10 (к, 3Н), 1,10 (к, 21Н), 0,90 (!, 9Н), 0,55 (т, 6Н);
Ή ЯМВ (СОС13) δ 203,94, 202,03, 171,80, 169,66, 169,28, 166,86, 165,62, 153,42, 152,75, 151,23, 150,56, 140,71, 136,39, 136,17, 133,64, 132,41, 121,83, 120,35, 119,96, 118,46, 115,84, 113,58, 113,49, 106,05, 84,37, 81,03, 77,18, 76,45, 76,40, 75,32, 74,90, 72,20, 72,06, 60,88, 58,64, 56,74, 55,82, 49,78, 46,55, 45,82, 42,84, 37,32, 36,51, 26,96, 26,47, 25,59, 22,55, 21,12, 20,83, 19,68, 18,02, 17,85, 14,40, 12,54, 9,98, 6,69, 5,28;
БК.М8 т/ζ для С60Н9.3НО168|2№1 (М+Ыа)+: вычисл. 1162,59; обнаружено: 1162,3.
Соединение 12.
Ή ЯМВ (СОС13) δ 7,32 (б, 1=3,2 Гц, 1Н), 7,07 (бб, 1Н), 6,94 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,58 (к, 1Н), 6,29 (к,
1Н), 6,18 (!, 1Н), 5,89 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 5,66 (б, 1=6,8 Гц, 1Н), 5,38 (б, 1Н), 5,10 (!, 1Н), 4,93 (б, 1Н), 4,40 (б,
1=8,4 Гц, 1Н), 4,35 (т, 1Н), 4,27 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,24 (т, 1Н), 3,94 (к, 3Н), 3,80 (к, 3Н), 3,74 (б, 1=6,8 Гц,
1Н), 3,61 (б, 1=6,4 Гц, 1Н), 3,00 (к, 1Н), 2,58-2,30 (т, 4Н), 2,23 (к, 3Н), 2,20 (к, 3Н), 2,13 (т, 4Н), 1,86 (к,
3Н), 1,75 (к, 3Н), 1,72 (к, 3Н), 1,69 (к, 3Н), 1,63 (к, 6Н), 1,60 (т, 2Н), 1,29 (к, 3Н), 1,15 (к, 3Н);
БК.М8 т/ζ для С.ГН61НО16№1 (М+Ыа)+: вычисл. 918,39; обнаружено: 918,3.
Соединение 13.
Ή ЯМВ (СОС13) δ 7,33 (б, 1=3,2 Гц, 1Н), 7,06 (бб, 1Н), 6,94 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,50 (к, 1Н), 6,29 (к, 1Н), 6,19 (!, 1Н), 5,86 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 5,66 (б, 1=6,8 Гц, 1Н), 5,38 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 5,08 (!, 1Н), 4,93 (б,
- 21 008058
1=8,4 Гц, 1Н), 4,39 (т, 2Н), 4,29 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,25 (т, 1Н), 3,93 (8, 3Н), 3,80 (8, 3Н), 3,74 (б, 1=6,4 Гц, 1Н), 3,64 (б, 1=6,4 Гц, 1Н), 3,00 (8, 1Н), 2,41-2,56 (т, 7Н), 2,32 (т, 1Н), 2,23 (8, 3Н), 2,22 (8, 3Н), 1,98 (т, 2Н), 1,86 (8, 3Н), 1,75 (т, 11Н), 1,29 (8, 3Н), 1,15 (8, 3Н);
1Н ЯМК (СОС13) δ 203,90, 172,88, 171,24, 170,21, 166,63, 164,86, 153,39, 153,03, 142,25, 139,02, 138,93, 138,60, 133,33, 120,24, 120,14, 119,90, 115,93, 113,55, 84,51, 81,04, 77,74, 76,47, 76,10, 75,77, 73,56, 72,23, 72,17, 58,83, 56,69, 55,86, 49,95, 45,56, 42,88, 36,56, 35,74, 33,14, 31,48, 26,90, 25,67, 23,25, 22,42, 21,72, 20,86, 18,55, 14,97, 9,53;
ΕΚΜδ т/ζ для С46Н5ЭЫО16Ыа (М+Ыа)+: вычисл. 904,37; обнаружено: 904,4.
Соединение 14.
Ή ЯМК (СВС13) δ 7,33 (б, 1=3,2 Гц, 1Н), 7,07 (бб, 1Н), 6,95 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,78 (т, 1Н), 6,29 (8,
1Н), 6,19 (ΐ, 1Н), 5,74 (б, 1=15,2 Гц, 1Н), 5,67 (б, 1=6,4 Гц, 1Н), 5,62 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 5,39 (б, 1=8,8 Гц, 1Н),
5,09 (ΐ, 1Н), 4,93 (б, 1Н), 4,40 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,37 (т, 1Н), 4,30 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,24 (т, 1Н), 3,94 (8,
3Н), 3,80 (8, 3Н), 3,74 (б, 1=6,4 Гц, 1Н), 3,59 (б, 1=6 Гц, 1Н), 2,97 (8, 1Н), 2,31-2,56 (т, 5Н), 2,23 (8, 3Н),
2,21 (8, 3Н), 1,84 (8, 3Н), 1,82 (т, 3Н), 1,75 (8, 3Н), 1,72 (8, 3Н), 1,69 (8, 3Н), 1,60 (8, 3Н), 1,29 (8, 3Н), 1,15 (8, 3Н);
ΕΚΜδ т/ζ для С47Н61ЫО16Ыа (М+Ыа)+: вычисл. 878,36; обнаружено: 878,3.
Соединение 15.
Ή ЯМК (СВС13) δ 7,33 (б, 1=3,2 Гц, 1Н), 7,07 (бб, 1Н), 6,94 (б, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,29 (8, 1Н), 6,18 (ΐ, 1Н), 5,67 (б, 1=6,8 Гц, 1Н), 5,52 (т, 2Н), 5,40 (б, 1=8,8 Гц, 1Н), 5,05 (ΐ, 1Н), 4,93 (б, 1Н), 4,40 (т, 2Н), 4,29 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,23 (т, 1Н), 3,94 (8, 3Н), 3,80 (8, 3Н), 3,75 (б, 1=6,4 Гц, 1Н), 3,57 (б, 1=6,4 Гц, 1Н), 2,97 (8, 1Н), 2,33-2,58 (т, 4Н), 2,23 (8, 3Н), 2,21 (8, 3Н), 2,07 (8, 3Н), 1,87 (8, 3Н), 1,81 (8, 3Н), 1,75 (8, 3Н), 1,72 (8, 3Н), 1,68 (8, 3Н), 1,40 (ΐ, 1Н), 1,29 (8, 3Н), 1,15 (8, 3Н);
!Н ЯМК (СОС13) δ 203,95, 196,43, 173,15, 171,25, 170,08, 166,71, 166,28, 153,41, 152,97, 152,13, 151,25, 142,50, 138,44, 136,19, 133,19, 120,45, 120,19, 119,96, 117,80, 115,85, 113,53, 106,08, 94,84, 91,01, 84,52, 81,01, 77,71, 76,45, 76,24, 75,79, 73,61, 72,50, 72,18, 58,82, 56,64, 55,86, 49,85, 45,84, 45,55, 42,86, 36,63, 35,71, 27,12, 26,80, 25,60, 22,41, 21,75, 20,85, 19,73, 18,48, 14,95, 9,52;
^ΚΜδ т/ζ для С.15Н59ЫО|6Ыа (М+Ыа)+: вычисл. 892,37; обнаружено: 892,3.
Соединение 16.
Ή ЯМК (СОС13) δ 7,30 (ΐ, 1Н), 7,06 (бт, 1Н), 6,95 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,72 (т, 1Н), 6,12 (ф 1Н), 5,75 (т, 2Н), 5,64 (б, 1=6,8 Гц, 1Н), 5,62 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 5,37 (т, 1Н), 5,10 (т, 2Н), 4,89 (б, 1Н), 4,26-4,47 (т, 5Н), 3,97 (8, 3Н), 3,80 (8, 3Н), 3,79 (б, 1Н), 3,10 (б, 1=15,6 Гц, 1Н), 2,31-2,44 (т, 3Н), 2,18 (б, 3Н), 2,09 (ΐ, 1Н), 1,91 (8, 3Н), 1,69-1,82 (т, 12Н), 1,57 (т, 1Н), 1,25 (8, 3Н), 1,12 (т, 25Н), 0,9 (т, 12Н), 0,5 (т, 6Н).
Соединение 17.
Ή ЯМК (СОС13) δ 7,30 (ΐ, 1Н), 7,06 (бт, 1Н), 6,95 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,72 (т, 1Н), 6,47 (8, 1Н), 6,05 (ΐ, 1Н), 5,72 (т, 2Н), 5,38 (т, 1Н), 5,10 (т, 1Н), 4,89 (б, 1Н), 4,40-4,48 (т, 3Н), 4,28 (б, 1=8 Гц, 1Н), 3,98 (8, 3Н), 3,80 (8, 3Н), 3,74 (б, 1=6,4 Гц, 1Н), 3,13 (б, 1=12 Гц, 1Н), 2,82-3,15 (т, 4Н), 2,43 (8, 3Н), 2,35-2,51 (т, 3Н), 2,18 (б, 3Н), 2,09 (т, 1Н), 1,99 (8, 3Н), 1,79-1,93 (т, 2Н), 1,71 (т, 9Н), 1,56 (8, 3Н), 1,22 (8, 6Н), 1,11 (8, 21Н), 0,9 (т, 12Н), 0,5 (т, 6Н).
Соединение 18.
Ή ЯМК (СОС13) δ 7,32 (ΐ, 1Н), 7,06 (бт, 1Н), 6,95 (б, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,72 (т, 1Н), 6,33 (8, 1Н), 6,05 (ф 1Н), 5,67 (б, 1=6,8 Гц, 1Н), 5,60 (б, 1Н), 5,39 (т, 1Н), 5,07 (т, 1Н), 4,93 (б, 1Н), 4,20-4,42 (т, 4Н), 3,95 (8, 3Н), 3,80 (8, 3Н), 3,74 (б, 1=6,4 Гц, 1Н), 2,91-3,04 (т, 5Н), 2,42 (8, 3Н), 2,31-2,53 (т, 3Н), 2,18 (б, 3Н), 2,10 (т, 1Н), 1,87 (8, 3Н), 1,79-1,93 (т, 2Н), 1,75 (8, 3Н), 1,72 (8, 3Н), 1,67 (б, 3Н), 1,51-1,64 (т, 3Н), 1,29 (8, 3Н), 1,15 (8, 3Н), 0,9 (ΐ, 2Н);
^ΚΜδ т/ζ для С46Н61ЫО1^2Ыа (М+Ыа)+: вычисл. 970,33; обнаружено: 970,2.
Соединение 19.
Ή ЯМК (СОС13) δ 7,41 (8, 1Н), 7,30 (т, 2Н), 6,80 (т, 2Н), 6,38 (т, 2Н), 5,24 (б, 1=4,8 Гц, 1Н), 5,20 (б, 1=5,2 Гц, 1Н), 3,75 (8, 3Н), 1,03 (8, 21Н), 13С ЯМК (СПС13) δ 165,33, 156,24, 148,27, 142,83, 130,91, 118,45, 114,29, 110,64, 110,26, 77,94, 57,06, 55,41, 17,55, 17,49, 11,80;
^ΚΜδ т/ζ для С23Н33ЫО^1Ыа (М+Ыа)+: вычисл. 438,21; обнаружено: 438,1.
Соединение 20.
1Н ЯМК (СОС13) δ 7,39 (8, 1Н), 6,54 (Ь8, 1Н), 6,35 (т, 2Н), 5,15 (т, 1Н), 4,81 (б, 1=4,4 Гц, 1Н), 0,98 (8, 21Н), 13С ЯМК (СПС13), δ 169,81, 150,49, 142,53, 110,48, 109,09, 80,03, 53,52, 17,49, 17,43, 11,73;
^ΚΜδ т/ζ для Ск5Н27ЫО^1Ыа (М+Ыа)+: вычисл. 332,17; обнаружено: 332,0.
Соединение 21.
!Н ЯМК (СПС13) δ 7,38 (8, 1Н), 7.13 (т, 1Н), 6,80 (бб, 1Н), 6,35 (т, 2Н), 5,25 (б, 1=5,6 Гц, 1Н), 5,19 (б, 1=5,6 Гц, 1Н), 1,93 (бб, 3Н), 0,98 (т, 21Н), 13С ЯМК (СПС13) δ 166,40, 162,72, 147,47, 146,94, 142,79, 123,57, 110,43, 109,82, 77,51, 54,96, 18,35, 17,45, 17,38, 11,71;
^ΚΜδ т/ζ для С20Н31ЫО^1Ыа (М+Ыа)+: вычисл. 400,19; обнаружено: 400,0.
- 22 008058
Соединение 22.
!Η ЯМЕ (СПС13) δ 7,38 (δ, 1Η), 6,61 (ш, 1Η), 6,34 (ш, 2Η), 5,23 (б, 1=5,6 Гц, 1Η), 5,15 (б, 1=6 Гц, 1Η), 2,18 (δ, 3Η), 1,95 (δ, 3Η), 0,98 (ш, 21Η), 13С ЯМЕ (СПС13), δ 166,08, 162,86, 160,95, 147,82, 142,67, 120,73, 117,02, 115,12, 110,40, 109,62, 77,11, 54,80, 27,96, 27,53, 21,33, 17,44, 17,37, 11,70;
ЬЕМ8 ш/ζ для ^ιΗ33ΝΟ48ίΝα (М+Να)': вычисл. 414,21; обнаружено: 414,0.
Соединение 23.
!Η ЯМЕ (СПС13) δ 8,00 (ш, 2Η), 7,58 (ίί, 1Η), 7,42-7,48 (ш, 3Η), 6,45 (б, 1=3,2 Гц, 1Η), 6,38 (ш, 1Η), 5,47 (б, 1=6 Гц, 1Η), 5,23 (б, 1=6 Гц, 1Η), 0,99 (δ, 21Η), 13С ЯМЕ (СПС13) δ 166,22, 164,95, 147,77, 142,93, 133,34, 131,96, 129,89, 128,13, 110,47, 110,00, 76,81, 55,17, 17,48, 17,41, 11,73;
ЬВМ8 ш/ζ для ί.’23Η3|ΝΟ.·|8ί№ (М+Να)': вычисл. 436,19; обнаружено: 436,0.
Соединение 24.
!Η ЯМЕ (СОС13) δ 7,40 (δ, 1Η), 6,36 (ш, 2Η), 5,14 (б, 1=5,6 Гц, 1Η), 5,11 (б, 1=5,6 Гц, 1Η), 1,43 (δ, 9Η), 0,96 (ш, 21Η), 13С ЯМЕ (СВС13) δ 165,76, 147,97, 147,75, 142,73, 110,45, 109,72, 83,46, 77,83, 56,16, 27,87, 17,38, 11,69;
ЬЕМ8 ш/ζ для ί.’31Η33ΝΟ38ίΝ;·ι (М+Να)': вычисл. 432,22; обнаружено: 432,1.
Соединение 25.
!Η ЯМЕ (СОС13) δ 8,03 (б, 1Η), 7,65 (ш, 1Η), 7,39 (ш, 1Η), 6,56 (ш, 1Η), 6,42 (б, 1=3,2 Гц, 1Η), 6,34 (ш, 1Η), 5,45 (б, 1=5,6 Гц, 1Η), 5,23 (б, 1=6 Гц, 1Η), 0,09 (δ, 21Η), 13С \\1Е (СВС13) δ 164,52, 154,39, 147,56, 147,48, 145,45, 142,88, 120,86, 112,10, 110,44, 110,08, 76,56, 17,45, 17,38, 11,71;
ЬЕМ8 ш/ζ для ί.’31Η39ΝΟ38ίΝ;·ι (М+Να)': вычисл. 426,17; обнаружено: 426,0.
Соединение 26.
!Η ЯМЕ (СБС13) δ 7,32 (δ, 1Η), 7,04 (бб, 1Η), 6,93 (б, 1=9,2 Гц, 1Η), 6,78 (ш, 1Η), 6,45 (δ, 1Η), 6,31 (ш, 1Η), 6,16 (ш, 2Η), 5,86 (бб, 1Η), 5,86 (б, 1=6,8 Гц, 1Η), 5,56 (б, 1=9,2 Гц, 1Η), 5,00 (δ, 1Η), 4,89 (б, 1=8 Гц, 1Η), 4,46 (ш, 1Η), 4,10 (б, 1=8 Гц, 1Η), 4,28 (б, 1=8 Гц, 1Η), 3,94 (δ, 3Η), 3,79 (δ, 3Η), 3,76 (ш, 1Η), 3,47 (ш, 1Η), 2,48 (ш, 1Η), 2,25 (δ, 3Η), 2,11 (δ, 3Η), 1,95 (δ, 3Η), 1,87 (ш, 4Η), 1,74 (δ, 3Η), 1,22 (δ, 6Η), 1,10 (δ, 21Η), 1,03 (ΐ, 12Η), 0,55 (ш, 6Η).
Соединение 27.
!Н ЯМЕ (СПС13) δ 7.32 (δ, 1Η), 7,04 (бб, 1Η), 6,93 (б, 1=9,2 Гц, 1Η), 6,45 (δ, 1Η), 6,31 (ш, 1Η), 6,16 (ш, 2Η), 6,05 (б, 1=9,2 Гц, 1Η), 5,57-5,69 (ш, 3Η), 4,99 (δ, 1Η), 4,91 (б, 1=8 Гц, 1Η), 4,44 (ш, 2Η), 4,28 (б, 1=8 Гц, 1Η), 3,94 (δ, 3Η), 3,79 (δ, 3Η), 3,76 (ш, 1Η), 2,31 (δ, 3Η), 2,11 (δ, 3Η), 2,09 (δ, 3Η), 2,04 (δ, 3Η), 1,87 (δ, 3Η), 1,74 (δ, 3Η), 1,22 (δ, 6Η), 1,10 (δ, 21Η), 1,03 (ΐ, 12Η), 0,55 (ш, 6Η);
ЬМЕ8 ш/ζ для Ο60Η89ΝΟ1-8ί3Να (М+Να)': вычисл. 1174,56; обнаружено: 1174,3.
Соединение 28.
!Η ЯМЕ (СБС13) δ 7,76 (б, 1Η), 7,43-7,56 (ш, 3Η), 7,04 (бб, 1Η), 6,93 (бб, 1Η), 6,44 (δ, 1Η), 6,22 (ш, 1Η), 5,69 (ш, 1Η), 4,90 (ш, 1Η), 4,44 (ш, 2Η), 4,30 (б, 1=8 Гц, 1Η), 3,87 (δ, 3Η), 3,79 (δ, 3Η), 3,76 (ш, 1Η),
2,31 (δ, 1Η), 2,19 (δ, 3Η), 2,02 (ш, 2Η), 1,74 (δ, 3Η), 0,88-1,13 (ш, 33Η), 0,58 (ш, 6Η);
ЬМЕ8 ш/ζ для Ο63Η8-ΝΟ1-8ί3Να (М+Να)': вычисл. 1196,54; обнаружено: 1196,3.
Соединение 29.
1Η ЯМЕ (СОС13) δ 7,32 (δ, 1Η), 7,04 (бб, 1Η), 6,93 (б, 1=9,2 Гц, 1Η), 6,45 (δ, 1Η), 6,32 (ш, 1Η), 6,22 (δ, 1Η), 6,18 (ΐ, 1Η), 5,67 (б, 1=6.4 Гц, 1Η), 5,25 (φ 2Η), 4,94 (δ, 1Η), 4,91 (б, 1=8 Гц, 1Η), 4,44 (ш, 2Η), 4,29 (б, 1=8 Гц, 1Η), 3,93 (δ, 3Η), 3,78 (δ, 3Η), 3,76 (ш, 1Η), 2,50 (ш, 1Η), 2,37 (ш, 1Η), 2,29 (δ, 3Η), 2,17 (δ, 3Η), 2,00 (δ, 3Η), 1,74 (δ, 3Η), 1,41 (δ, 9Η), 1,38 (ш, 2Η), 1,22 (δ, 3Η), 1,20 (δ, 3Η), 1,06 (ш, 6Η), 0,83-0,98 (ш, 30Н), 0,55 (ш, 6Η);
ЬМЕ8 ш/ζ для ί.’60Η91ΝΟ188ί3Ν;·ι (М+Να)': вычисл. 1192,57; обнаружено: 1192,3.
Соединение 30.
1Η ЯМЕ (СБС13) δ 7,48 (δ, 1Η), 7,35 (δ, 1Η), 7,27 (б, 1=3,2 Гц, 1Η), 7,14 (б, 1=9,6 Гц), 7,06 (б, 1Η), 7,04 (б, 1=3,2 Гц, 1Η), 6,94 (б, 1=9,2 Гц, 1Η), 6,51 (ш, 1Η), 6,45 (δ, 1Η), 6,33 (ш, 1Η), 6,24 (δ, 1Η), 6,20 (ΐ, 1Η), 5,69 (б, 1=6,4 Гц, 1Η), 5,64 (б, 1=9,2 Гц), 5,06 (δ, 1Η), 4,91 (б, 1Η), 4,44 (ш, 2Η), 4,29 (б, 1=8 Гц, 1Η), 3,95 (δ, 3Η), 3,81 (δ, 3Η), 3,79 (ш, 1Η), 3,18 (δ, 1Η), 2,50 (ш, 1Η), 2,37 (ш, 1Η), 2,33 (δ, 3Η), 2,16 (δ, 3Η), 2,01 (δ, 3Η),
1.92 (ш, 1Η), 1,74 (δ, 3Н), 1,25 (δ, 3Н); 1,23 (δ, 3Н), 0,88-1,02 (ш, 27Η), 0.55 (ш, 6Η);
ЬЕМ8 ш/ζ для ί.’60Η83ΝΟ188ί3Ν;·ι (М+Να)': вычисл. 1186,52; обнаружено: 1186,3.
Соединение 31.
!Η ЯМЕ (СБС13) δ 7,39 (δ, 1Η), 7,30 (б, 1=3,2 Гц, 1Η), 7,07 (бб, 1Η), 6,95 (б, 1=9,2 Гц, 1Η), 6,84 (ш, 1Η), 6,35 (ш, 1Η), 6,32 (ш, 1Η), 6,29 (δ, 1Η), 6,23 (ΐ, 1Η), 6,05 (б, 1=9,2 Гц, 1Η), 5,83 (бб, 1Η), 5,65 (ш, 2Η),
4.92 (б, 1Η), 4,71 (δ, 1Η), 4,40 (ш, 2Η), 4,30 (б, 1=8 Гц, 1Η), 3,91 (δ, 3Η), 3,75 (δ, 3Η), 3,73 (б, 1Η), 3,40 (ш, 1Η), 3,06 (δ, 1Η), 2,56 (ш, 1Η), 2,34 (ш, 3Η), 2,22 (δ, 3Η), 2,17 (δ, 3Η), 1,85 (δ, 6Η), 1,70 (δ, 3Η), 1,29 (δ, 3Η), 1,25 (δ, 1Η), 1,16 (δ, 3Η);
- 23 008058
ЬКМ8 т/ζ для С44Н53МО17Ма (М+Να)': вычисл. 890,32; обнаружено: 890,2.
Соединение 32.
Ή ЯМК (СБС13) δ 7,39 (8, 1Н), 7,30 (б, 6=3,2 Гц, 1Н), 7,07 (бб, 1Н), 6,95 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,36 (т, 1Н), 6,31 (т, 2Н), 6,22 (!, 1Н), 5,92 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 5,59-5,67 (т, 3Н), 4,92 (б, 1Н), 4,71 (т, 1Н), 4,40 (т, 2Н), 4,30 (б, 1=8 Гц, 1Н), 3,91 (8, 3Н), 3,81 (8, 3Н), 3,74 (б, 1Н), 3,35 (б, 1Н), 3,10 (8, 1Н), 2,95 (8, 1Н), 2,342,58 (т, 4Н), 2,23 (8, 3Н), 2,20 (8, 3Н), 2,09 (8, 3Н), 1,86 (8, 3Н), 1,85 (8, 3Н), 1,73 (8, 3Н), 1,29 (8, 3Н), 1,25 (8, 1Н), 1,16 (8, 3Н);
ЬКМ8 т/ζ для С45Η55NΟ17Nа (М+Να)': вычисл. 904,34; обнаружено: 904,2.
Соединение 33.
Ή ЯМК (СОС13) δ 7,75 (б, 1Н), 7,43-7,56 (т, 4Н), 7,29 (б, 1=2,8 Гц, 1Н), 7,06 (бб, 1Н), 6,95 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,38 (8, 1Н), 6,29 (т, 2Н), 5,83 (б, 1Н), 5,66 (б, 1Н), 4,91 (б, 1Н), 4,79 (т, 1Н), 4,41 (б, 1=8 Гц, 1Н), 4,40 (т, 1Н), 4,33 (б, 1=8 Гц, 1Н), 3,95 (8, 3Н), 3,81 (8, 3Н), 3,77 (т, 1Н), 3,12 (8, 1Н), 2,42 (т, 1Н), 2,25 (8, 3Н), 2,24 (8, 3Н), 1,86 (8, 3Н), 1,73 (8, 3Н), 1,29 (8, 3Н), 1,25 (8, 3Н);
ЬКМ8 т/ζ для С47Η5зNΟ17Nа (М+Να)': вычисл. 926,32; обнаружено: 926,2.
Соединение 34.
Ή ЯМК (СБС13) δ 7,39 (8, 1Н), 7,28 (б, 1=2,8 Гц, 1Н), 7,07 (бб, 1Н), 6,95 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,36 (т, 1Н), 6,31 (т, 2Н), 6,21 (!, 1Н), 5,67 (б, 1=6,4 Гц, 1Н), 5,26 (б, 1Н), 5,19 (б, 1Н), 4,93 (б, 1Н), 4,68 (т, 1Н), 4,40 (т, 2Н), 4,30 (б, 1=8 Гц, 1Н), 3,93 (8, 3Н), 3,80 (8, 3Н), 3,74 (б, 1Н), 3,17 (т, 2Н), 2,38-2,57 (т, 4Н), 2,24 (8, 3Н), 2,22 (8, 3Н), 1,88 (8, 3Н), 1.73 (8, 3Н), 1,41 (8, 9Н), 1,29 (8, 3Н), 1,25 (8, 3Н) 1,16 (8, 3Н);
ЬКМ8 т/ζ для С45Н5^О18№ (М+Να)': вычисл. 922,35; обнаружено: 922,2.
Соединение 35.
Ή ЯМК (СОС13) δ 7,47 (8, 1Н), 7,42 (8, 1Н), 7,30 (б, 1=3,2 Гц, 1Н), 7,05-7,09 (т, 2Н), 6,94-6,99 (т, 2Н), 6,51 (т, 1Н), 6,38 (т, 2Н), 6,28 (т, 2Н), 5,75 (бб, 1Н), 5,68 (б, 1=6,4 Гц, 1Н), 4,93 (б, 1Н), 4,77 (т, 1Н), 4,40 (т, 2Н), 4,31 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 3,95 (8, 3Н), 3,81 (8, 3Н), 3,74 (б, 1Н), 3,46 (б, 1Н), 3,08 (8, 1Н), 2,55 (т, 1Н), 2,36-2,43 (т, 3Н), 2,23 (8, 6Н), 1,85 (8, 3Н), 1,73 (8, 3Н), 1,29 (8, 3Н), 1,16 (8, 3Н);
13С ЯМК (СБС13) δ 204,21, 172,66, 171,62, 170,70, 167,21, 157,98, 153,84, 153,23, 151,08, 147,39, 144,88, 143,11, 142,26, 134,01, 120,59, 120,40, 116,10, 115,69, 113,95, 112,73, 111,16, 108,33, 84,95, 81,51, 78,01, 76,89, 76,61, 76,11, 73,14, 72,58, 72,03, 59,28, 57,11, 56,28, 49,81, 45,99, 43,26, 36,97, 36,15, 27,36, 22,97, 22,10, 21,25, 15,33, 9,94;
ЬКМ8 т/ζ для С45Н51НО18№1 (М+Να)': вычисл. 916,30; обнаружено: 916,2.
Соединение 36.
Ή ЯМК (СОС13) δ 7,30 (!, 1Н), 7,05 (бт, 1Н), 6,95 (бб, 1Н), 6,72 (т, 1Н), 6,45 (8, 1Н), 6,05 (Ы, 1Н), 5,76 (б, 1Н), 5,67 (б, 1=6,4 Гц, 1Н), 5,38 (т, 1Н), 5,09 (т, 1Н), 4,88 (б, 1Н), 4,39-4,48 (т, 3Н), 4,27 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 3,98 (8, 3Н), 3,81 (8, 3Н), 3,64-3,80 (т, 22Н), 3,56 (б, 1Н), 2,90 (!, 2Н), 2,74 (т, 2Н), 2,41 (8, 3Н), 2,16 (б, 3Н), 2,10 (т, 1Н), 2,00 (8, 3Н), 1,90 (т, 1Н), 1,81 (т, 1Н), 1,71 (8, 6Н) 1,69 (б, 3Н), 1,61 (т, 2Н), 1,21-
1,31 (т, 14Н), 1,21 (8, 21Н), 0,92 (т, 16Н), 0,58 (т, 6Н).
Соединение 37.
Ή ЯМК (СОС13) δ 7,32 (!, 1Н), 7,07 (бт, 1Н), 6,95 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,78 (т, 1Н), 6,31 (8, 1Н), 6,16 (ф 1Н), 5,66 (б, 1Н), 5,61 (б, 1Н), 5,39 (т, 1Н), 5,06 (т, 1Н), 4,93 (б, 1Н), 4,39 (т, 2Н), 4,25 (б, 1Н), 4,21 (ббб, 1Н), 3,94 (8, 3Н), 3,85 (б, 1Н), 3,80 (8, 3Н), 3,73 (!, 3Н), 3,64-3,65 (т, 13Н), 2,98 (б, 1Н), 2,90 (!, 2Н), 2,80 (!, 2Н), 2,39 (8, 3Н), 2,21 (б, 3Н), 2,06 (т, 1Н), 1,86 (8, 3Н), 1,84 (т, 2Н), 1,75 (8, 3Н), 1,71 (8, 3Н), 1,69 (б, 3Н), 1,61 (т, 2Н), 1,27 (8, 3Н), 1,14 (8, 3Н), 0,89 (!, 2Н);
13С ЯМК (СВС13) δ 203,72, 173,09, 172,89, 172,28, 171,68, 170,16, 170,04, 166,74, 166,69, 165,27, 153,42, 153,01, 152,94, 142,36, 142,32, 140,84, 138,82, 138,63, 133,27, 124,49, 120,38, 120,26, 120,19, 115,88, 115,85, 113,57, 84,54, 81,03, 77,74, 77,63, 76,46, 75,79, 73,49, 73,28, 72,46, 72,24, 72,17, 70,64, 70,62, 70,56, 70,51, 70,40, 69,76, 66,36, 58,82, 56,70, 56,66, 55,86, 50,08, 49,76, 45,58, 42,84, 38,39, 37,59, 36,58, 35,76, 35,01, 26,93, 26,86, 25,64, 25,59, 23,47, 22,43, 21,77, 19,14, 18,51, 18,46, 17,74, 14,97, 14,94, 13,58, 9,54.
Соединение 38.
Ή ЯМК (СОС13) δ 7,31 (т, 3Н), 7,10 (б, 1Н), 6,99 (бб, 1Н), 6,78 (т, 2Н), 5,41 (б, 1=4,8 Гц, 1Н), 5,23 (б, 1=5,2 Гц, 1Н), 3,73 (8, 3Н), 1,01 (8, 21Н), 13С ЯМК (СВС13) δ 165,34, 156,22, 137,45, 130,81, 127,49, 126,64, 126,15, 118,65, 114,26, 78,02, 59,28, 55,37, 17,55, 17,46, 11,79;
ЬКМ8 т/ζ для С23Н33ЫО3881Ма (М+Να)': вычисл. 454,18; обнаружено: 454,0.
Соединение 40.
Ή ЯМК (СОС13) δ 7,28 (бб, 1Н), 7,11 (т, 2Н), 6,98 (бб, 1Н), 6,78 (бб, 1Н), 5,50 (б, 1=5,6 Гц, 1Н), 5,21 (б, 1=6 Гц, 1Н), 1,93 (бб, 3Н), 1,01 (8, 21Н), 13С ЯМК (СПС13) δ 166,40, 162,70, 147,00, 136,39, 127,61, 126,54, 125,88, 123,61, 77,39, 57,01, 18,35,
17,67, 17,47, 17,37, 12,26, 11,72;
ЬКМ8 т/ζ для С20Н31МО3881Ма (М+Να)': вычисл. 416,17; обнаружено: 416,1.
Соединение 41.
1Н ЯМК (СОС13) δ 7,28 (бб, 1Н), 7,11 (т, 1Н), 7,00 (бб, 1Н), 6,80 (8, 1Н), 6,26 (бб, 1Н), 5,87 (бб, 1Н),
- 24 008058
5,50 (б, 1=6 Гц, 1Н), 5,19 (б, 1=5,6 Гц, 1Н), 2,35 (δ, 1Н), 2,20 (бб, 6Н), 0,98 (т, 21Н), 13С ЯМК (СБС1з) δ 166,04, 164,59, 162,83, 160,70, 148,34, 136,96, 127,39, 126,50, 125,65, 122,38, 120,70, 117,12, 115,25, 77,14, 56,90, 17,48, 17,39, 12,34, 11,82;
ЬКМ8 т/ζ для С21Н33ХО388|№1 (М+№)': вычисл. 430,18; обнаружено: 430,1.
Соединение 42.
!Н ЯМК (СПС13) δ 7,99 (б, 2Н), 7,57 (к, 1Н), 7,47 (к, 2Н), 7,30 (бб, 2Н), 7,18 (б, 1Н), 7,01 (к, 1Н), 5,73 (б, 1=6 Гц, 1Н), 5,25 (б, 1=6,4 Гц, 1Н), 1,04 (т, 21Н), 13С ЯМК (СПС13) δ 166,13, 164,82, 136,86, 129,89, 128,11, 127,80, 126,58, 125,96, 76,89, 57,11, 17,50, 17,41, 11,83;
ЬКМ8 т/ζ для С23Н3^О388|№1 (М+№)': вычисл. 452,17; обнаружено: 452,0.
Соединение 43.
!Н ЯМК (СОС13) δ 7,30 (бб, 1Н), 7,08 (бб, 1Н), 6,99 (бб, 1Н), 5,34 (б, 1=5,6 Гц, 1Н), 5,15 (б, 1=5,6 Гц, 1Н), 1,42 (δ, 9Н), 0,95 (т, 21Н);
13С ЯМК (СБС1з) δ 165,75, 147,74, 136,80, 127,58, 126,48, 125,97, 122,05, 83,53, 77,76, 58,26, 27,88,
17,67, 17,47, 17,37, 12,26, 11,70;
ЬКМ8 т/ζ для С21 Н3^О388|№1 (М+№)+: вычисл. 448,20; обнаружено: 448,1.
Соединение 44.
!Н ЯМК (СОС13) δ 7,98 (б, 1Н), 7,65 (бб, 1Н), 7,29 (бб, 1Н), 7,15 (бб, 1Н), 6,99 (бб, 1Н), 6,56 (т, 1Н), 5,71 (б, 1=6 Гц, 1Н), 5,25 (б, 1=6 Гц, 1Н), 0,99 (т, 21Н);
13С ЯМК (СБС13) δ 164,11, 147,61, 127,96, 126,57, 126,06, 120,95, 112,12, 76,52, 57,17, 17,67, 17,50, 17,39, 11,74;
ЬКМ8 т/ζ для С21Н2<ХО488|№1 (М+№)': вычисл. 442,15; обнаружено: 442,0.
Соединение 45.
1Н ЯМК (СБС13) δ 7,27 (б, 1Н), 7,20 (б, 1Н), 7,05 (бб, 1Н), 6,87-6,95 (т, 4Н), 6,76 (т, 1Н), 6,45 (δ, 1Н), 6,27 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,17 (к, 1Н), 5,85 (б, 1Н), 5,75 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 5,68 (б, 1=6,8 Гц, 1Н), 4,92 (б, 1Н), 4,83 (δ, 1Н), 4,40-4,45 (т, 2Н), 4,28 (б, 1=8 Гц, 1Н), 3,96 (δ, 3Н), 3,84 (б, 1Н), 3,82 (δ, 3Н), 3,79 (б, 1Н), 3,46 (т, 1Н), 3,19 (δ, 1Н), 2,34-2,49 (т, 3Н), 2,30 (δ, 3Н), 2,17 (δ, 3Н), 2,00 (δ, 3Н), 1,85-1,97 (т, 9Н) 1,72 (δ, 3Н), 1,55-1,67 (т, 5Н), 1,23 (δ, 6Н), 1,00 (δ, 21Н), 0,92 (к, 9Н), 0,58 (т, 6Н);
ЬКМ8 т/ζ для С99Н8^О1688ь№1 (М+№)': вычисл. 1176,52; обнаружено: 1176,4.
Соединение 46.
!Н ЯМК (СОС13) δ 7,27 (б, 1Н), 7,20 (б, 1Н), 7,05 (бб, 1Н), 6,87-6,95 (т, 4Н), 6,45 (δ, 1Н), 6,15-6,19 (т, 2Н), 5,78 (б, 1Н), 5,68 (б, 1=6,8 Гц, 1Н), 5,60 (δ, 1Н), 4,90 (б, 1Н), 4,82 (δ, 1Н), 4,40-4,46 (т, 2Н), 4,29 (б, 1=8 Гц, 1Н), 3,96 (δ, 3Н), 3,84 (б, 1Н), 3,82 (δ, 3Н), 3,76 (б, 1Н), 3,46 (т, 1Н), 3,23 (δ, 1Н), 2,49 (т, 1Н), 2,34 (т, 2Н), 2,31 (δ, 3Н), 2,17 (т, 2Н), 2,14 (δ, 3Н), 2,07 (δ, 3Н), 2,01 (δ, 3Н) 1,85-1,97 (т, 9Н), 1,83 (δ, 3Н), 1,71 (δ, 3Н), 1,55-1,67 (т, 3Н), 1,39 (т, 1Н), 1,23 (δ, 6Н), 1,00 (δ, 21Н), 0,92 (к, 9Н), 0,58 (т, 6Н);
ЬКМ8 т/ζ для С60Н8<ХО1688ь№1 (М+№)': вычисл. 1190,53, обнаружено: 1190,5.
Соединение 47.
!Н ЯМК (СБС13) δ 7,53-7,60 (т, 3Н), 7,42-7,46 (к, 2Н), 7,20 (б, 1Н), 7,13-7,15 (т, 3Н), 6,92-7,01 (т, 3Н), 6,45 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,45 (δ, 1Н), 6,20 (б, 1Н), 5,84 (т, 1Н), 5.56 (б, 1=6,4 Гц, 1Н), 4,92 (т, 1Н), 4,84 (δ, 1Н), 4,65 (б, 1Н), 4,64 (б, 1Н), 4,22 (б, 1=8 Гц, 1Н), 4,08 (т, 1Н), 3,79 (т, 2Н), 3,74 (δ, 3Н), 3,30 (т, 1Н), 3,25 (δ, 3Н), 2,67 (т, 1Н), 2,46 (т, 2Н), 2,18 (δ, 3Н), 2,17 (т, 2Н), 2,07 (δ, 3Н), 1,69 (δ, 3Н), 1,21 (δ, 3Н), 1,18 (δ, 3Н), 1,17 (δ, 3Н), 1,13 (т, 21Н), 0,92 (к, 9Н), 0,58 (т, 6Н);
ЬКМ8 т/ζ для С62Н8^О1688ь№1 (М+№)': вычисл. 1212,52, обнаружено: 1212,5.
Соединение 48.
!Н ЯМК (СОС13) δ 7,27 (б, 1Н), 7,21 (б, 1Н), 7,06 (бб, 1Н), 6,90-6.97 (т, 3Н), 6,46 (δ, 1Н), 6,17 (к, 1Н), 5,68 (б, 1=6,8 Гц, 1Н), 5,43 (б, 1Н), 5,42 (б, 1Н), 4,90 (б, 1Н), 4,76 (δ, 1Н), 4,41-4,46 (т, 2Н), 4,29 (б, 1=8 Гц, 1Н), 3,94 (δ, 3Н), 3,79 (δ, 3Н), 3,77 (б, 1Н), 3,24 (δ, 1Н), 3,24 (δ, 1Н), 2,52 (т, 1Н), 2,41 (т, 2Н), 2,30 (δ, 3Н), 2,01 (δ, 3Н), 1,88 (δ, 1Н), 1,73 (δ, 3Н), 1,40 (δ, 9Н), 1,23 (δ, 3Н), 1,22 (δ, 3Н), 1,00 (δ, 21Н), 0,92 (к, 9Н), 0,58 (т, 6Н);
ЬКМ8 т/ζ для С3Н9>О1-88|2№1 (М+№)': вычисл. 1208,54, обнаружено: 1208,5.
Соединение 49.
1Н ЯМК (СБС13) δ 7,47 (δ, 1Н), 7,22-7,29 (т, 3Н), 7,06 (б, 1Н), 7,05 (б, 1Н), 6,94-6,98 (т, 3Н), 6,50 (т, 1Н), 6,44 (δ, 1Н), 6,19 (к, 1Н), 5,84 (б, 1Н), 5,69 (б, 1=6,8 Гц, 1Н), 4,90 (б, 1Н), 4,89 (δ, 1Н), 4,41-4,46 (т, 2Н), 4,29 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 3,98 (δ, 3Н), 3,82 (δ, 3Н), 3,77 (б, 1Н), 3,16 (δ, 1Н), 2,52 (т, 1Н), 2,36 (т, 1Н),
2,31 (δ, 3Н), 2,24 (т, 1Н), 2,15 (δ, 3Н), 2,00 (δ, 3Н), 1,88 (δ, 1Н), 1,72 (δ, 3Н), 1,17 (δ, 6Н), 1,00 (δ, 21Н), 0,92 (к, 9Н), 0,58 (т, 6Н);
ЬКМ8 т/ζ для СТ.Щ^ОгЗЗьЮ! (М+№)': вычисл. 1202,50, обнаружено: 1202,4.
Соединение 50.
!Н ЯМК (СОС13) δ 7,32 (б, 1Н), 7,27 (бб, 1Н), 7,06-7,10 (т, 2Н), 6,95-7,01 (т, 2Н), 6,80 (т, 1Н), 6,28 (δ, 1Н), 6,23 (к, 1Н), 6,10 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 5,77-5,84 (т, 2Н), 5,66 (б, 1=6,8 Гц, 1Н), 4,92 (б, 1Н), 4,67 (δ, 1Н), 4,40 (б, 1=8,8 Гц, 1Н), 4,35 (т, 1Н), 4,29 (б, 1=8 Гц, 1Н), 3,96 (δ, 3Н), 3,82 (δ, 3Н), 3,73 (б, 1=6,4 Гц,
- 25 008058
1Н), 3,54 (Ь§, 1Н), 3,06 (18, 1Н), 2,55 (т, 1Н), 2,38 (т, 3Н), 2,24 (8, 3Н), 2,20 (8, 3Н), 1,84 (бб, 3Н), 1,82 (8, 3Н), 1,29 (8, 3Н), 1,16 (8, 3Н);
13С ЯМК (СИС13) δ 203,82, 172,30, 171,23, 170,22, 166,79, 164,91, 153,44, 152,91, 141,88, 141,56, 140,94, 133,58, 127,06, 125,82, 125,59, 124,25, 120,32, 119,91, 115,68, 113,59, 99,99, 84,15, 77,60, 76,50, 76,12, 75,72, 73,06, 72,76, 72,20, 58,88, 56,74, 55,90, 50,77, 45,58, 42,87, 36,56, 35,75, 26,96, 22,68, 21,67, 20,86, 17,82, 14,98, 9,53;
ЬКМ8 т/ζ для С44Н5зNΟ168Nа (М+Να)': вычисл. 906,3, обнаружено: 906,2.
Соединение 51.
' Н ЯМК (СИС13) δ 7,32 (б, 1Н), 7,27 (бб, 1Н), 7,06-7,09 (т, 2Н), 6,94-6,99 (т, 2Н), 6,29 (8, 1Н), 6,22 (1, 1Н), 6,01 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 5,79 (б, 1Н), 5,66 (б, 1=6,8 Гц, 1Н), 5,56 (8, 1Н), 4,92 (б, 1Н), 4,65 (8, 1Н), 4,40 (б, 1=8 Гц, 1Н), 4,35 (т, 1Н), 4,30 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 3,95 (8, 3Н), 3,82 (8, 3Н), 3,74 (б, 1=6.4 Гц, 1Н), 3,52 (18, 1Н), 3,07 (18, 1Н), 2,34-2,57 (т, 4Н), 2,24 (8, 3Н), 2,21 (8, 3Н), 1,84 (8, 6Н), 1,72 (8, 3Н), 1,29 (8, 3Н), 1,15 (8, 3Н);
13С ЯМК (СИС13) δ 203,82, 172,51, 171,23, 170,14, 166,79, 165,83, 153,43, 153,19, 152,87, 142,01, 141,21, 133,49, 127,05, 125,64, 125,45, 120,32, 119,90, 117,48, 115,62, 113,55, 84,51, 81,11, 77,56, 76,18, 75,73, 73,17, 72,90, 72,18, 58,85, 56,68, 55,89, 50,57, 45,57, 42,86, 35,73, 27,21, 26,85, 22,67, 21,68, 20,86,
19.84, 14,96, 9,52;
ЬКМ8 т/ζ для С45Н55NΟ168Nа (М+Να)': вычисл. 920,31, обнаружено: 920,2.
Соединение 52.
'|| ЯМК (СИС13) δ 7,66 (бб, 2Н), 7,53 (11, 1Н), 7,43 (1, 2Н), 7,33 (б, 1Н), 7,22 (бб, 1Н), 6,97-7,06 (т, 3Н), 6,76 (б, 1Н), 6,27 (8, 1Н), 6,16 (б, 1Н), 5,91 (б, 1Н), 5,62 (б, 1=6,4 Гц, 1Н), 4,96 (18, 1Н), 4,89 (бб, 1Н), 4,74 (8, 1Н), 4,52 (б, 1=7,6 Гц, 1Н), 4,16 (б, 1=7,6 Гц, 1Н), 4,00 (т, 1Н), 3,80 (8, 3Н), 3,63 (8, 3Н), 3,34 (б, 1=6,4 Гц, 1Н), 2,87 (18, 1Н), 2,40-2,61 (т, 4Н), 2,24 (8, 3Н), 1,99 (т, 1Н), 1,77 (8, 3Н), 1,66 (8, 3Н), 1,13 (8, 3Н), 1,12 (8, 3Н);
ЬКМ8 т/ζ для С47Н5зNΟ168Nа (М+Να)': вычисл. 924,30, обнаружено: 942,2.
Соединение 53.
'|| ЯМК (СИС13) δ 7,30 (б, 1Н), 7,27 (бб, 1Н), 7,06-7,09 (т, 2Н), 6,94-7,00 (т, 2Н), 6,30 (8, 1Н), 6,21 (1, 1Н), 5,66 (б, 1=6,8 Гц, 1Н), 5,42 (б, 1Н), 5,28 (б, 1Н), 4,91 (б, 1Н), 4,59 (8, 1Н), 4,41 (б, 1=8 Гц, 1Н), 4,38 (т, 1Н), 4,30 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 3,94 (8, 3Н), 3,81 (8, 3Н), 3,74 (б, 1=6,4 Гц, 1Н), 3,48 (18, 1Н), 3,11 (18, 1Н), 2,342,57 (т, 4Н), 2,22 (8, 3Н), 2,19 (8, 3Н), 1,89 (т, 1Н), 1,85 (8, 3Н), 1,72 (8, 3Н), 1,39 (8, 9Н), 1,29 (8, 3Н), 1,15 (8, 3Н);
13С ЯМК (СИС13) δ 203,83, 172,63, 171,20, 170,00, 166,81, 154,88, 153,45, 152,74, 142,06, 141,29, 133,46, 127,36, 120,23, 119,99, 115,61, 113,47, 84,51, 81,11, 80,36, 77,51, 76,43, 75,72, 73,21, 73,00, 72,15,
58.84, 56,54, 55,85, 45,58, 42,85, 36,47, 35,72, 28,12, 26,73, 22,63, 20,84, 14,95, 9,51;
ЬКМ8 т/ζ для ί^^γΝΟ^δΝΗ (М+Να)': вычисл. 938,32, обнаружено: 938,2.
Соединение 54.
1Н ЯМК (СИС13) δ 7,46 (8, 1Н), 7,32 (б, 1Н), 7,28 (бб, 1Н), 7,16 (б, 1Н), 6,95-7,09 (т, 4Н), 6,50 (т, 1Н), 6,28 (8, 1Н), 6,25 (1, 1Н), 5,93 (б, 1Н), 5,67 (б, 1=6,8 Гц, 1Н), 4,92 (б, 1Н), 4,73 (8, 1Н), 4,41 (б, 1=8.4 Гц, 1Н), 4,38 (т, 1Н), 4,30 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 3,96 (8, 3Н), 3,80 (8, 3Н), 3,74 (б, 1=6,4 Гц, 1Н), 3,63 (18, 1Н), 3,09 (18, 1Н), 2,33-2,58 (т, 4Н), 2,22 (8, 3Н), 2,19 (8, 3Н), 1,89 (т, 1Н), 1,82 (8, 3Н), 1,73 (8, 3Н), 1,28 (8, 3Н), 1,15 (8, 3Н);
ЬКМ8 т/ζ для ^^ΝΟ^Νη (М+Να)': вычисл. 932,28, обнаружено: 932,2.
Пример 10. Исследование цитотоксичности ίη νίίτο.
Исследовалась способность новых таксоидов и дисульфидсодержащих лекарственных препаратов таксанов, заявленных в соответствии с настоящим изобретением, подавлять пролиферацию клеточной опухолевой линии человека ίη νί1Γ0. Для определения цитотоксичности указанных соединений использовали клеточные опухолевые линии человека А-549 (карцинома легких человека) и МСГ-7 (рак груди человека). Клетки подвергали воздействию указанных соединений в течение 72 ч, после чего определяли выжившие фракции клеток различными способами. Исследовали эффективность роста на планшетах А549 и МСЕ-7 (6о1бтас1ег е1 а1., 1.Се11. Βίο1. 102: 1312-1319 (1986) и значение 1С50 расчитывали исходя из полученных данных.
Исследовали цитотоксичность таксоидов 14, 15, 31-35, 50-54 и дисульфидсодержащих таксоидов 18 и 37.
Клетки линий А549 и МСГ-7 поместили при различной плотности на 6-луночные планшеты для культивирования тканей в среду ИМБМ, обогащенную 10% эмбриональной сывороткой теленка. Затем добавили таксаны в различных концентрациях, после чего клетки выдерживали во влажной атмосфере при 37°С и 6% СО2 до тех пор, пока не сформировались колонии из приблизительно 20 или более клеток (от 6 до 10 дней). Контрольные планшеты не содержали таксанов. Затем клетки зафиксировали формальдегидом, окрасили генциан фиолетовым и подсчитали под микроскопом с небольшим увеличением. Затем определяли эффективность роста на планшетах на основании числа колонии и выживаемости фракций клеток как отношение эффективности роста на планшетах обработанных клеток к эффективности роста на планшетах контрольных клеток.
На фиг. 10 представлены результаты определения цитотоксичности двенадцати новых таксоидов,
- 26 008058 заявленных в соответствии с настоящим изобретением. За исключением таксана 52, имеющего фениловый заместитель в положении В4, все остальные новые таксоиды были чрезвычайно активными по отношению к клеточным линиям А-549 и МСР-7 со значениями 1С50 в пределах от 10-10 до 10-11 М. Таксан 52 обладал меньшей цитотоксичностью по отношению к тестируемым клеточным линиям со значением 1С50, равным 3Х10-9 М.
На фиг. 11 представлены кривые цитотоксичности для дисульфидсодержащих таксоидов, заявленных в соответствии с настоящим изобретением. Дисульфидсодержащие таксоиды 18 и 37 были чрезвычайно активными по отношению к клеточным линиям А-549 и МСР-7, их цитотоксичность представлена в виде очень высоких кривых.
Неожиданно оказалось, что таксаны по настоящему изобретению в 2-5 раз более растворимы в воде, чем большинство известных таксоидов, описанных в ряде патентов. Это показано в табл. 1, воспроизведенной ниже.
Таблица 1 Сравнение растворимости в воде наиболее активного таксана, 1СТ-14-022, из патентов США 6340701, 6372738 и 6436931 с таксанами по настоящему изобретению
Партия ΙΜΟΝ Название Структура Растворимость (мкМ)в 50 мМ Растворимость
буфера КР кратность увеличения
01925-022 ЮТ-14-022 1 он он= Μδ£ ЮТ-14-022 •Ο-θ-Ο’* 0.3 - :
01899-161 ЮТ-13-161 νό °н оно δ*ί МоО——ОМ· К5Т-13-1С1 0.6 2 ;
01862-199 ЮТ-12-199 %'5'— У ОН ΟΗδ ОАО 1СТ-12-199 0.7 3.5
01987-061 ЮТ-16-061 о5'5'^Л%_# он ^хЙХ /=^° ЮТ-16-061 МеО—/ ОМе 1.4 4.7
01987-093 ЮТ-16-093 о 3—^1 ?Н ! Д он он 5 н б£ I МеО-Х5®/ | ЮТ-16-093 ’ОоМе 1.5 5 :
Более высокая растворимость в воде важна для таксанов, не конъюгированных с антителами. Два терапевтических таксана, разрешенных в США, а именно паклитаксел и доцетаксел, являются очень липофильными. То есть для внутривенного введения нужно применять специальные препараты, которые могут вызвать побочные эффекты. Например, паклитаксел фирмы Впк!о1-Муегк 8цшЬЬ (таксол) приготовлен в полностью неводном носителе, который содержит 50% кремафора ЕБ и 50% этанола. Общеизвестно, что кремафор ЕБ может вызвать побочные эффекты, такие как реакция гиперчувствительности. Более высокая растворимость в воде могла бы избавить от необходимости в кремафоре ЕБ. Доцетаксел, который немного лучше растворим в воде, для внутривенного введения готовят в полисорбате 80 и разводят 13% водным спиртом.
Цитотоксическая активность известных соединений и предлагаемых показана в нижеприведенных табл.2-4. Цитотоксическую активность определяли, экспонируя клетки т уйго с различными концентрациями соединений для измерения концентрации соединения, которая ингибирует рост клеток на 50%. Эта концентрация представляет собой 1С50 и приводится для каждого соединения, как определенная от
- 27 008058 носительно двух клеточных линий, А549 и МСР7. Более низкое значение относится к величине 1С50, а более высокое относится к активности соединения.
Таблица 2
Ιη уйго активность типичных таксанов из патентов США 6340701, 6372738 и 6436931
Название
Структура
Партия
ΙΜΟΝ
- 28 008058
Таблица 3
Сравнение активности наиболее активного таксана, 1ОТ-14-022, из патентов США 6340701, 6372738 и 6436931 с активностью таксанов по настоящему изобретению
Партия ΙΜΟΝ Название Структура А549 (нМ) Активность МСР7 Активность
кратность увеличения (нМ) кратность увеличения
01925-022 ЮТ-14-022 ДБ'бн он о ”°Ае ЮТ-14-022 0.1 . - 0.04 -
01862-199 I СТ-12-199 ?'5^Ао он 5н он о 5ас М’°~Оом. 0.04 2.5 0.034 1.2
01899-161 ЮТ-13-161 бн ОН| ЙОАс «•θ-Ο-ΟΜ. ΙΟΤ-13-161 0.035 2.9 0.019 2.1
02011-044 ЮТ-17-044 0.03 3.3 0.03 3.3
02011-009 ЮТ-17-009 о он Д бн оно ^ОАс ЮТ-17-009 0.02 5 0.015 6.7
01987-123 ЮТ-16-123 '•'У-Л о ои Μ.Ο-θ-ΟΜ. ЮТ-16-123 0.018 ί I 5.6 I 0.015 6 7
01987-083 ЮТ-16-083 Х&/0' м,о№х ЮТ-16-0ВЗ '*-^омо 0.01 I I I 10 0.01 10 .
Таблица 4
1п νϋΐΌ активность типичных таксанов по настоящему изобретению, несущих алкенильные или циклоалкенильные заместители
Партия ΙΜΘΝ Название Структура 1С5О (нМ) А549 1С50 (нМ) МСР7
01678-051 ЮТ-09-051 ФМ X0 МеО-ДД-ОМе 0.03 0.012
01678-088 ЮТ-09-088 О А о 1 0 .9Н £ он й5ас /=Г0 МеО-ДД-ОМе 0.04 0.043
01678-034 ЮТ-09-034 О А о о Ч ,9 он ^Д* 5н он 5 ^олс мео-0-оме 0.042 0.06
01678-035 ЮТ-09-035 О А 0 о \__& он и Д ОН ОН ό ОАс МеО-ДД-ОМе 0.06 0.042
- 29 008058
В табл. 2 представлены семь наиболее активных таксанов, описанных в трех патентах. Величины их 1С50 находятся в интервале от 0,36 до 0,1 нМ. Среди этих соединений соединение ЮТ-14-022 является наиболее активным соединением с самым низким значением 1С50, равным 0,1 нМ.
В табл. 3 активность соединений по настоящему изобретению сравнивается с наиболее активным известным соединением (ЮТ-14-022). Результаты показывают, что все соединения по настоящему изобретению неожиданно являются более активными с величиной 1С50, до 10 раз более низкой, чем величина 1С50 ЮТ-14-022.
В табл. 4 показана активность соединений 12-15, представленных в настоящем описании, в которых Кд обозначает алкил или алкенил и/или К3 обозначает циклоалкенил. Как видно, все эти соединения обладают высокой активностью. Способы связывания таких соединений с линкерами общеизвестны специалистам в данной области техники.

Claims (30)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ где К1 обозначает Н, электроноакцепторную группу или электронодонорную группу; К1' и К1 одинаковы или различны и обозначают Н, электроноакцепторную группу или электронодонорную группу;
    К2 обозначает Н;
    К3 обозначает алкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, алкенил, содержащий 2-10 углеродных атомов, циклоалкил или циклоалкенил, содержащий 3-10 углеродных атомов, арил или гетероциклический остаток;
    К4 обозначает алкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, алкенил, содержащий 2-10 углеродных атомов, циклоалкил или циклоалкенил, содержащий 3-10 углеродных атомов, арил, гетероциклический остаток, -ОС(СН3)3, или -СОХНКд обозначает карбамат, образованный из любого указанного алкила, содержащего 1-10 углеродных атомов, алкенила, содержащего 2-10 углеродных атомов, циклоалкила или циклоалкенила, содержащего 3-10 углеродных атомов, арила или гетероциклического остатка и атома кислорода;
    К5 обозначает связывающую группу и
    К6 обозначает Н, а ОК6 обозначает группу простого гетероциклического или арилового эфира, группу сложного гетероциклического или арилового эфира, гетероциклил- или арилкарбамат, линейную, разветвленную или циклическую алкильную или циклоалкильную сложноэфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов в алкиле, линейную, разветвленную или циклическую алкенильную или циклоалкенильную сложноэфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов в алкениле, линейную, разветвленную или циклическую алкильную или циклоалкильную простую эфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов, линейную, разветвленную или циклическую алкенильную или циклоалкенильную простую эфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов, карбаматную группу формулы -ОСОХ, где X обозначает азотсодержащую гетероциклическую группу, или карбаматную группу формулы -ОСОХК10Кц, где К10 и Кп одинаковы или различны и обозначают Н, линейный, разветвленный или циклический алкил или циклоалкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, или незамещенный или замещенный арил, содержащий 6-10 углеродных атомов.
  2. 2. Соединение по п.1, в котором К3 обозначает -СН=С(СН3)2.
    - 30 008058 где К2 обозначает связывающую группу;
    К1 обозначает Н, электроноакцепторную группу или электронодонорную группу;
    К1' и К1 одинаковы или различны и обозначают Н, электроноакцепторную группу или электронодонорную группу;
    К3 обозначает алкенил, содержащий 2-10 углеродных атомов, циклоалкенил, содержащий
  3. 3-10 углеродных атомов или гетероциклический остаток;
    К4 обозначает алкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, алкенил, содержащий 2-10 углеродных атомов, циклоалкил или циклоалкенил, содержащий 3-10 углеродных атомов, арил, гетероциклический остаток, -ОС(СН3)3, или -СОЫНК обозначает карбамат, образованный из любого указанного алкила, содержащего 1-10 углеродных атомов, алкенила, содержащего 2-10 углеродных атомов, циклоалкила или циклоалкенила, содержащего 3-10 углеродных атомов, арила или гетероциклического остатка и атома кислорода;
    К5 обозначает Н, или ОК5 обозначает гетероциклическую или арильную простую эфирную группу, гетероциклическую или арильную сложноэфирную группу, гетероциклическую или арильную карбаматную группу, линейную, разветвленную или циклическую алкильную или циклоалкильную сложноэфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов в алкиле, линейную, разветвленную или циклическую алкенильную или циклоалкенильную сложноэфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов в алкениле, линейную, разветвленную или циклическую алкильную или циклоалкильную простую эфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов, линейную, разветвленную или циклическую алкенильную или циклоалкенильную простую эфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов, карбаматную группу формулы -ОСОХ, где X обозначает азотсодержащую гетероциклическую группу, или карбаматную группу формулы -ОСОЫК^Кп, где К10 и К11 одинаковы или различны и обозначают Н, линейный, разветвленный или циклический алкил или циклоалкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, или незамещенный или замещенный арил, содержащий 6-10 углеродных атомов; и
    К6 обозначает Н, или ОК6 обозначает группу простого гетероциклического или арилового эфира, гетероциклическую или ариловую сложноэфирную группу, гетероциклил- или арилкарбамат, линейную, разветвленную или циклическую алкильную или циклоалкильную сложноэфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов в алкиле, линейную, разветвленную или циклическую алкенильную или циклоалкенильную сложноэфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов в алкениле, линейную, разветвленную или циклическую алкильную или циклоалкильную простую эфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов, линейную, разветвленную или циклическую алкенильную или циклоалкенильную простую эфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов, карбаматную группу формулы -ОСОХ, где X обозначает азотсодержащую гетероциклическую группу, или карбаматную группу формулы -ОСОЫк10Кц, где К10 и Кц одинаковы или различны и обозначают Н, линейный, разветвленный или циклический алкил или циклоалкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, или незамещенный или замещенный арил, содержащий 6-10 углеродных атомов, при условии, что, когда К3 обозначает -СН=С(СН3)2, К4 не обозначает арил или -ОС(СН3)3.
  4. 4. Соединение, представленное формулой (I) где К5 обозначает связывающую группу;
    К1 обозначает Н, электроноакцепторную группу или электронодонорную группу;
    К1' и К1 одинаковы или различны и обозначают Н, электроноакцепторную группу или электронодонорную группу;
    К3 обозначает алкенил, содержащий 2-10 углеродных атомов, циклоалкенил, содержащий 3-10 углеродных атомов или гетероциклический остаток;
    К4 обозначает алкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, алкенил, содержащий 2-10 углеродных атомов, циклоалкил или циклоалкенил, содержащий 3-10 углеродных атомов, арил, гетероциклический остаток, -ОС(СН3)3, или -СОЫНК обозначает карбамат, образованный из любого указанного алкила, содержащего 1-10 углеродных атомов, алкенила, содержащего 2-10 углеродных атомов, циклоалкила или циклоалкенила, содержащего 3-10 углеродных атомов, арила или гетероциклического остатка и атома кислорода;
    К2 обозначает Н или ОК2 обозначает гетероциклическую или арильную простую эфирную группу,
    - 31 008058 гетероциклическую или арильную сложноэфирную группу, гетероциклическую или арильную карбаматную группу, линейную, разветвленную или циклическую алкильную или циклоалкильную сложноэфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов в алкиле, линейную, разветвленную или циклическую алкенильную или циклоалкенильную сложноэфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов в алкениле, линейную, разветвленную или циклическую алкильную или циклоалкильную простую эфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов, линейную, разветвленную или циклическую алкенильную или циклоалкенильную простую эфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов, карбаматную группу формулы -ОСОХ, где Х обозначает азотсодержащую гетероциклическую группу, или карбаматную группу формулы -ОСОЫК10К11, где К10 и К11 одинаковы или различны и обозначают Н, линейный, разветвленный или циклический алкил или циклоалкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, или незамещенный или замещенный арил, содержащий 6-10 углеродных атомов; и
    К6 обозначает Н или ОК6 обозначает группу простого гетероциклического или арилового эфира, гетероциклическую или ариловую сложноэфирную группу, гетероциклил- или арилкарбаматную группу, линейную, разветвленную или циклическую алкильную или циклоалкильную сложноэфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов в алкиле, линейную, разветвленную или циклическую алкенильную или циклоалкенильную сложноэфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов в алкениле, линейную, разветвленную или циклическую алкильную или циклоалкильную простую эфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов, линейную, разветвленную или циклическую алкенильную или циклоалкенильную простую эфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов, карбаматную группу формулы -ОСОХ, где Х обозначает азотсодержащую гетероциклическую группу, или карбаматную группу формулы -ОСОЫК10К11, где К10 и К11 одинаковы или различны и обозначают Н, линейный, разветвленный или циклический алкил или циклоалкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, или незамещенный или замещенный арил, содержащий 6-10 углеродных атомов, при условии, что когда К3 обозначает -СН=С(СН3)2, К4 не обозначает арил или -ОС(СН3)3.
  5. 5. Соединение, представленное формулой (I) где К6 обозначает связывающую группу;
    К1 обозначает Н, электроноакцепторную группу или электронодонорную группу;
    К1' и К1 одинаковы или различны и обозначают Н, электроноакцепторную группу или электронодонорную группу;
    К3 обозначает алкенил, содержащий 2-10 углеродных атомов, циклоалкенил, содержащий 3-10 углеродных атомов или гетероциклический остаток;
    К4 обозначает алкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, алкенил, содержащий 2-10 углеродных атомов, циклоалкил или циклоалкенил, содержащий 3-10 углеродных атомов, арил, гетероциклический остаток, -ОС(СН3)3, или -СОЫНК4 обозначает карбамат, образованный из любого указанного алкила, содержащего 1-10 углеродных атомов, алкенила, содержащего 2-10 углеродных атомов, циклоалкила или циклоалкенила, содержащего 3-10 углеродных атомов, арила или гетероциклического остатка и атома кислорода;
    К2 обозначает Н или ОК2 обозначает гетероциклическую или арильную простую эфирную группу, гетероциклическую или арильную сложноэфирную группу, гетероциклическую или арильную карбаматную группу, линейную, разветвленную или циклическую алкильную или циклоалкильную сложноэфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов в алкиле, линейную, разветвленную или циклическую алкенильную или циклоалкенильную сложноэфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов в алкениле, линейную, разветвленную или циклическую алкильную или циклоалкильную простую эфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов, линейную, разветвленную или циклическую алкенильную или циклоалкенильную простую эфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов, карбаматную группу формулы -ОСОХ, где Х обозначает азотсодержащую гетероциклическую группу, или карбаматную группу формулы -ОСОЫК10К11, где К10 и К11 одинаковы или различны и обозначают Н, линейный, разветвленный или циклический алкил или циклоалкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, или незамещенный или замещенный арил, содержащий 6-10 углеродных атомов; и
    К5 обозначает Н или ОК5 обозначает группу простого гетероциклического или арилового эфира, гетероциклическую или ариловую сложноэфирную группу, гетероциклил- или арилкарбаматную группу,
    - 32 008058 линейную, разветвленную или циклическую алкильную или циклоалкильную сложноэфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов в алкиле, линейную, разветвленную или циклическую алкенильную или циклоалкенильную сложноэфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов в алкениле, линейную, разветвленную или циклическую алкильную или циклоалкильную простую эфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов, линейную, разветвленную или циклическую алкенильную или циклоалкенильную простую эфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов, карбаматную группу формулы -ОСОХ, где X обозначает азотсодержащую гетероциклическую группу, или карбаматную группу формулы -Θ№ΝΚ10ΚΠ, где К10 и К11 одинаковы или различны и обозначают Н, линейный, разветвленный или циклический алкил или циклоалкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, или незамещенный или замещенный арил, содержащий 6-10 углеродных атомов, при условии, что, когда К3 обозначает -СН=С(СН3)2, К4 не обозначает арил или -ОС(СН3)3.
  6. 6. Соединение, представленное формулой (I) где К3 обозначает связывающую группу;
    Кц обозначает Н, электроноакцепторную группу или электронодонорную группу;
    К1' и Кд одинаковы или различны и обозначают Н, электроноакцепторную группу или электронодонорную группу;
    К4 обозначает алкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, алкенил, содержащий 2-10 углеродных атомов, циклоалкил или циклоалкенил, содержащий 3-10 углеродных атомов, арил, гетероциклический остаток, -ОС(СН3)3, или -СΟNНК4 обозначает карбамат, образованный из любого указанного алкила, содержащего 1-10 углеродных атомов, алкенила, содержащего 2-10 углеродных атомов, циклоалкила или циклоалкенила, содержащего 3-10 углеродных атомов, арила или гетероциклического остатка и атома кислорода; и
    К2, К5 и К6 одинаковы или различны и обозначают Н, или ОК2, ОК5 или ОК6 обозначают группу простого гетероциклического или арилового эфира, гетероциклическую или ариловую сложноэфирную группу, гетероциклил- или арилкарбаматную группу, линейную, разветвленную или циклическую алкильную или циклоалкильную сложноэфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов в алкиле, линейную, разветвленную или циклическую алкенильную или циклоалкенильную сложноэфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов в алкениле, линейную, разветвленную или циклическую алкильную или циклоалкильную простую эфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов, линейную, разветвленную или циклическую алкенильную или циклоалкенильную простую эфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов, карбаматную группу формулы -ОСОХ, где X обозначает азотсодержащую гетероциклическую группу, или карбаматную группу формулы -Ο^ΝΕ^π, где К10 и К11 одинаковы или различны и обозначают Н, линейный, разветвленный или циклический алкил или циклоалкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, или незамещенный или замещенный арил, содержащий 6-10
    К1 обозначает Н, электроноакцепторную группу или электронодонорную группу;
    К1' и Кц одинаковы или различны и обозначают Н, электроноакцепторную группу или электронодонорную группу;
    - 33 008058
    К3 обозначает алкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, алкенил, содержащий 2-10 углеродных атомов, циклоалкил или циклоалкенил, содержащий 3-10 углеродных атомов, арил или гетероциклический остаток;
    К2, К5 и К6 одинаковы или различны и обозначают Н, или ОК2, ОК5 или ОК6 обозначают группу простого гетероциклического или арилового эфира, гетероциклическую или ариловую сложноэфирную группу, гетероциклил- или арилкарбаматную группу, линейную, разветвленную или циклическую алкильную или циклоалкильную сложноэфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов в алкиле, линейную, разветвленную или циклическую алкенильную или циклоалкенильную сложноэфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов в алкениле, линейную, разветвленную или циклическую алкильную или циклоалкильную простую эфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов, линейную, разветвленную или циклическую алкенильную или циклоалкенильную простую эфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов, карбаматную группу формулы -ОСОХ, где X обозначает азотсодержащую гетероциклическую группу, или карбаматную группу формулы -ОСОNК10К11, где К10 и К11 одинаковы или различны и обозначают Н, линейный, разветвленный или циклический алкил или циклоалкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, или незамещенный или замещенный арил, содержащий 6-10 углеродных атомов.
    где К6 обозначает связывающую группу;
    К1 обозначает Н, электроноакцепторную группу или электронодонорную группу;
    К1' и К/1 одинаковы или различны и обозначают Н, электроноакцепторную группу или электронодонорную группу;
    К2 обозначает Н или вместе с атомом кислорода в положении С-10 обозначает гетероциклическую или арильную простую эфирную группу, гетероциклическую или арильную сложноэфирную группу, гетероциклическую или арильную карбаматную группу, линейную, разветвленную алкильную или циклоалкильную сложноэфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов в алкиле, линейную, разветвленную алкенильную или циклоалкенильную сложноэфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов в алкениле, линейную, разветвленную алкильную или циклоалкильную простую эфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов, линейную, разветвленную алкенильную или циклоалкенильную простую эфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов, карбаматную группу формулы -ОСОХ, где X обозначает азотсодержащую гетероциклическую группу, или карбаматную группу формулы -ОСОNК10К11, где К10 и К11 одинаковы или различны и обозначают Н, линейный, разветвленный алкил или циклоалкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, или незамещенный или замещенный арил, содержащий 6-10 углеродных атомов;
    К3 обозначает алкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, алкенил, содержащий 2-10 углеродных атомов или циклоалкенил, содержащий 3-10 углеродных атомов, арил или гетероциклический остаток;
    К4 обозначает алкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, алкенил, содержащий 2-10 углеродных атомов, циклоалкил или циклоалкенил, содержащий 3-10 углеродных атомов, гетероциклический остаток, или вместе с группой -СОNΗ- обозначает карбамат, образованный из любого указанного алкила, содержащего 1-10 углеродных атомов, алкенила, содержащего 2-10 углеродных атомов, циклоалкила или циклоалкенила, содержащего 3-10 углеродных атомов, арила или гетероциклического остатка и атома кислорода; и
    К5 обозначает Н или вместе с атомом кислорода в положении С-7 обозначает группу простого гетероциклического или арилового эфира, гетероциклическую или ариловую сложноэфирную группу, гетероциклил- или арилкарбаматную группу, линейную, разветвленную алкильную или циклоалкильную сложноэфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов в алкиле, линейную, разветвленную алкенильную или циклоалкенильную сложноэфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов в алкениле, линейную, разветвленную алкильную или циклоалкильную простую эфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов, линейную, разветвленную алкенильную или циклоалкенильную простую эфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов, карбаматную группу формулы -ОСОХ. где X обозначает азотсодержащую гетероциклическую группу, или карбаматную группу формулы -ОСОNК10К11, где К10 и К11 одинаковы или различны и обозначают Н, линейный, разветвленный алкил
    - 34 008058 или циклоалкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, или незамещенный или замещенный арил, содержащий 6-10 углеродных атомов.
  7. 9. Соединение по любому из пп.1-8, отличающееся тем, что связывающая группа представляет собой группу, которая образует дисульфидную связь, тиоэфирную связь, кислотолабильную связь, фотолабильную связь, пептидазолабильную связь и эстеразолабильную связь.
  8. 10. Соединение по любому из пп.1-9, отличающееся тем, что связывающая группа представляет собой группу, которая образует дисульфидную связь или тиоэфирную связь.
  9. 11. Соединение по п.10, отличающееся тем, что боковая цепь, несущая тиольную или дисульфидную группу, является линейным или разветвленным алкилом, алкенилом, циклоалкенилом, ароматической, гетероциклической группой или группой полиэтиленгликоля.
  10. 12. Соединение по п.10 или 11, отличающееся тем, что связывающая группа представляет собой
    -(СК1эК14)т(СК15К16)п(ОСН2СН2)у82, -СО(СК13К14)т(СК15К16)п(ОСН2СН2)у82, -(СК13К14)т(СК17=СК18) (СК15К!6)т(ОСН2СН2)у82, -СО-(СК13К14)т(СК17=СК18)(СК15К16)т(ОСН2СН2)у82, -СΟNК12(СК13К14)т (СК15К16)п(ОСН2СН2)у82, -фурил-ΧδΖ, -оксазолил-ΧδΖ, -тиазолил-ΧδΖ, -тиенил-ΧδΖ, -имидазолил-ΧδΖ, -морфолино-ΧδΖ, -пиперазино-ΧδΖ, -пиперидино-ΧδΖ, -СО-фурил-ΧδΖ, -СО-тиофенил-ΧδΖ, -СОтиазолил-ΧδΖ, -СΟ-N-метилпиперазино-X8Ζ, -СО-морфолино-ΧδΖ, -СО-пиперазино-ΧδΖ, -СОпиперидино-ΧδΖ или -СΟ-N-метилпиперазино-X8Ζ, где
    Ζ обозначает Н или 8К;
    Χ обозначает линейный или разветвленный алкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, или спейсер-полиэтиленгликоль, содержащий 2-20 повторяющихся фрагментов этиленокси;
    К и КХ2 одинаковы или различны и обозначают линейный алкил, разветвленный алкил или циклический алкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, или простой или замещенный арил или гетероцикло, а К12, помимо этого, может обозначать Н;
    КХ3, К14, К15 и КХ6 одинаковы или различны и обозначают Н или линейный или разветвленный алкил, содержащий 1-4 углеродных атома;
    К17 и К18 обозначают Н или метил;
    п обозначает целое число от 1 до 10;
    т обозначает целое число от 1 до 10 и также может обозначать 0 и у обозначает целое число от 1 до 20 и также может обозначать 0.
  11. 13. Соединение по любому из пп.1-12, отличающееся тем, что электроноакцепторную группу, представленную Кь и/или Кх', и/или КГ, выбирают из группы, состоящей из Е, NΟ2, ΟΝ, С1, СНЕ2 и СЕ3.
  12. 14. Соединение по любому из пп.1-13, отличающееся тем, что электронодонорную группу, представленную Кь и/или КГ и/или КГ, выбирают из группы, состоящей из -ОСН3, -ОСН2СН3, ГОК.-К.8 и -ОК9, где К7 и К8 одинаковы или различны и обозначают линейный алкил, разветвленный алкил или циклический алкил, содержащий 1-10 углеродных атомов или незамещенный или замещенный арил, а К9 обозначает линейный алкил, разветвленный алкил или циклический алкил, содержащий 1-10 углеродных атомов.
  13. 15. Соединение по любому из пп.1-14, отличающееся тем, что Кх обозначает -ОСН3.
  14. 16. Соединение по п.14, отличающееся тем, что К7 и/или К8 содержат 1-4 углеродных атома.
  15. 17. Соединение по п.14 или 16, отличающееся тем, что К7 и К8 одинаковы.
  16. 18. Соединение по любому из пп.14, 16 или 17, отличающееся тем, что ГОК.-К.8 обозначает диметиламино, диэтиламино, дипропиламино, диизопропиламино или дибутиламино, где бутильная группа представляет собой любую группу из первичной, вторичной, третичной и изобутильной группы.
  17. 19. Соединение по п.15, отличающееся тем, что Кх находится в мета-положении и один из Кх' и КГ обозначает -ОСН3, а другой обозначает Н.
  18. 20. Соединение по любому из пп.1-5 или 8, отличающееся тем, что один или оба из К3 и обозначают пропенил, изобутенил, гексенил, циклопентенил, циклогексенил, фурил, пироллил, тиофенил, тиазолил, имидазолил, пиридил, морфолино, пиперидино, пиперазино, оксазолил, индолил, бензофуранил или бензотиофенил, или -СΟNНК4 обозначает карбамат, образованный из пропенила, изобутенила, гексенила, циклопентенила, циклогексенила, фурила, пироллила, тиофенила, тиазолила, имидазолила, пиридила, морфолино, пиперидино, пиперазино, оксазолила, индолила, бензофуранила или бензотиофенила и атома кислорода.
  19. 21. Соединение по любому из пп.1-5 или 8, отличающееся тем, что один или оба из К3 и обозначают изобутенил, пропенил, тиофенил, тиазолил или фурил или -СΟNНК4 обозначает карбамат, образованный из изобутенила, пропенила, тиенила, тиазолила или фурила и атома кислорода.
  20. 22. Соединение по любому из пп.1-8, отличающееся тем, что карбамат, образованный ОК2, ОК5 и/или ОК6, обозначает -ΟСΟNНСН2СН3, -ΟСΟNНСН2СН2СН3, -ОСО-морфолино, -ОСО-пиперазино, -ОСО-пиперидино или -ОСОГО-метилпиперазино.
  21. 23. Соединение по п.6, отличающееся тем, что К4 обозначает пропенил, изобутенил, гексенил, циклопентенил, циклогексенил, фурил, пирролил, тиофенил, тиазолил, имидазолил, пиридил, морфолино, пиперидино, пиперазино, оксазолил, индолил, бензофуранил или бензотиофенил, или -СΟNНК4 обозначает карбамат, образованный из пропенила, изобутенила, гексенила, циклопентенила, циклогексенила,
    - 35 008058 фурила, пирролила, тиенила, тиазолила, имидазолила, пиридила, морфолино, пиперидино, пиперазино, оксазолила, индолила, бензофуранила или бензотиенила и атома кислорода.
  22. 24. Соединение по п.6, отличающееся тем, что Кд обозначает изобутенил, пропенил, тиофенил, тиазолил или фурил, или -СО\11К| обозначает карбамат, образованный из изобутенила, пропенила, тиофенила, тиазолила или фурила и атома кислорода.
  23. 25. Соединение по п.7, отличающееся тем, что К3 обозначает пропенил, изобутенил, гексенил, циклопентенил, циклогексенил, фурил, пирролил, тиофенил, тиазолил, имидазолил, пиридил, морфолино, пиперидино, пиперазино, оксазолил, индолил, бензофуранил или бензотиофенил.
  24. 26. Соединение по п.7, отличающееся тем, что К3 обозначает изобутенил, пропенил, тиенил, тиазолил или фурил.
  25. 27. Цитотоксический агент, содержащий одно или более соединений по любому из пп.1-26, ковалентно соединенный с агентом, связывающим клетки, через связывающую группу.
  26. 28. Цитотоксический агент по п.27, отличающийся тем, что агент, связывающий клетки, выбран из антител и их фрагментов, лимфокинов, гормонов, факторов роста, витаминов и молекул, переносящих питательные вещества.
  27. 29. Цитотоксический агент по п.28, отличающийся тем, что антитело представляет собой моноклональное антитело или его фрагмент, а молекула, переносящая питательные вещества, представляет собой трансферрин.
  28. 30. Терапевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество одного или более соединений по любому из пп.1-26, соединенного с агентом, связывающим клетки; и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.
  29. 31. Применение цитотоксического агента по любому из пп.27-29 для индуцирования гибели клеток в выбранной клеточной популяции путем контактирования клеток-мишеней или ткани, содержащей клетки-мишени, с эффективным количеством цитотоксического агента.
    К! обозначает Н, электроноакцепторную группу или электронодонорную группу;
    К1' и К1 одинаковы или различны и обозначают Н, электроноакцепторную группу или электронодонорную группу;
    К3 обозначает алкил или алкенил, содержащий 1-10 углеродных атомов, циклоалкил или циклоалкенил, содержащий 3-10 углеродных атомов, арил или гетероциклический остаток;
    К4 обозначает алкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, алкенил, содержащий 2-10 углеродных атомов, циклоалкил или циклоалкенил, содержащий 3-10 углеродных атомов, гетероциклический остаток, или вместе с группой -СО\Н- в положении С-3' обозначает карбамат, образованный из любого указанного алкила, содержащего 1-10 углеродных атомов, алкенила, содержащего 2-10 углеродных атомов, циклоалкила или циклоалкенила, содержащего 3-10 углеродных атомов, арила или гетероциклического остатка и атома кислорода;
    К5 обозначает Н, или вместе с атомом кислорода в положении С-7 обозначает группу простого гетероциклического или арилового эфира, гетероциклическую или ариловую сложноэфирную группу, гетероциклил- или арилкарбаматную группу, линейную, разветвленную алкильную или циклоалкильную сложноэфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов в алкиле, линейную, разветвленную алкенильную или циклоалкенильную сложноэфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов в алкениле, линейную, разветвленную алкильную или циклоалкильную простую эфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов, линейную, разветвленную алкенильную или циклоалкенильную простую эфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов, карбаматную группу формулы -ОСОХ, где X обозначает азотсодержащую гетероциклическую группу, или карбаматную группу формулы -ОСО\К10Кц, где К10 и Кп одинаковы или различны и обозначают Н, линейный, разветвленный алкил или циклоалкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, или незамещенный или замещенный арил, содержащий 6-10 углеродных атомов; и
    К6 обозначает Н или вместе с атомом кислорода в положении С-2' обозначает группу простого гете
    - 36 008058 роциклического или арилового эфира, гетероциклическую или ариловую сложноэфирную группу, гетероциклил- или арилкарбаматную группу, линейную, разветвленную алкильную или циклоалкильную сложноэфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов в алкиле, линейную, разветвленную алкенильную или циклоалкенильную сложноэфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов в алкениле, линейную, разветвленную алкильную или циклоалкильную простую эфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов, линейную, разветвленную алкенильную или циклоалкенильную простую эфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов, карбаматную группу формулы -ОСОХ, где X обозначает азотсодержащую гетероциклическую группу, или карбаматную группу формулы -ΘΟΘΝΚχοΚπ, где К10 и Кп одинаковы или различны и обозначают Н, линейный, разветвленный алкил или циклоалкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, или незамещенный или замещенный арил, содержащий 6-10 углеродных атомов.
  30. 33. Соединение, представленное формулой (I) где К5 обозначает связывающую группу;
    К1 обозначает Н, электроноакцепторную группу или электронодонорную группу;
    К1' и Κι одинаковы или различны и обозначают Н, электроноакцепторную группу или электронодонорную группу;
    К2 обозначает Н или вместе с атомом кислорода в положении С-10 обозначает гетероциклическую или арильную простую эфирную группу, гетероциклическую или арильную сложноэфирную группу, гетероциклическую или арильную карбаматную группу, линейную, разветвленную алкильную или циклоалкильную сложноэфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов в алкиле, линейную, разветвленную алкенильную или циклоалкенильную сложноэфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов в алкениле, линейную, разветвленную алкильную или циклоалкильную простую эфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов, линейную, разветвленную алкенильную или циклоалкенильную простую эфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов, карбаматную группу формулы -ОСОХ, где X обозначает азотсодержащую гетероциклическую группу, или карбаматную группу формулы -ОСОККщКп, где К10 и Кп одинаковы или различны и обозначают Н, линейный, разветвленный алкил или циклоалкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, или незамещенный или замещенный арил, содержащий 6-10 углеродных атомов;
    К3 обозначает алкил или алкенил, содержащий 1-10 углеродных атомов, циклоалкил или циклоалкенил, содержащий 3-10 углеродных атомов, арил или гетероциклический остаток;
    К4 обозначает алкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, алкенил, содержащий 2-10 углеродных атомов, циклоалкил или циклоалкенил, содержащий 3-10 углеродных атомов, гетероциклический остаток или вместе с группой -СОХН- в положении С-3' обозначает карбамат, образованный из любого указанного алкила, содержащего 1-10 углеродных атомов, алкенила, содержащего 2-10 углеродных атомов, циклоалкила или циклоалкенила, содержащего 3-10 углеродных атомов, арила или гетероциклического остатка и атома кислорода; и
    К6 обозначает Н или вместе с атомом кислорода в положении С-2' обозначает группу простого гетероциклического или арилового эфира, гетероциклическую или ариловую сложноэфирную группу, гетероциклил- или арилкарбаматную группу, линейную, разветвленную алкильную или циклоалкильную сложноэфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов в алкиле, линейную, разветвленную алкенильную или циклоалкенильную сложноэфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов в алкениле, линейную, разветвленную алкильную или циклоалкильную простую эфирную группу, содержащую 1-10 углеродных атомов, линейную, разветвленную алкенильную или циклоалкенильную простую эфирную группу, содержащую 2-10 углеродных атомов, карбаматную группу формулы -ОСОХ, где X обозначает азотсодержащую гетероциклическую группу, или карбаматную группу формулы -ОСОКк10Кц, где К10 и Иц одинаковы или различны и обозначают Н, линейный, разветвленный алкил или циклоалкил, содержащий 1-10 углеродных атомов, или незамещенный или замещенный арил, содержащий 6-10 углеродных атомов.
EA200500300A 2002-08-02 2003-07-14 Цитотоксические агенты, содержащие новые сильнодействующие таксаны, и их терапевтическое применение EA008058B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US21011202A 2002-08-02 2002-08-02
US10/369,563 US7390898B2 (en) 2002-08-02 2003-02-21 Cytotoxic agents containing novel potent taxanes and their therapeutic use
PCT/US2003/019558 WO2004013093A2 (en) 2002-08-02 2003-07-14 Cytotoxic agents containing novel potent taxanes and their therapeutic use

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200500300A1 EA200500300A1 (ru) 2005-08-25
EA008058B1 true EA008058B1 (ru) 2007-02-27

Family

ID=31187214

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200500300A EA008058B1 (ru) 2002-08-02 2003-07-14 Цитотоксические агенты, содержащие новые сильнодействующие таксаны, и их терапевтическое применение

Country Status (7)

Country Link
US (1) US7390898B2 (ru)
EP (1) EP2341050A1 (ru)
JP (2) JP2010111695A (ru)
EA (1) EA008058B1 (ru)
EC (1) ECSP055635A (ru)
NZ (1) NZ538467A (ru)
ZA (1) ZA200501129B (ru)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100056762A1 (en) 2001-05-11 2010-03-04 Old Lloyd J Specific binding proteins and uses thereof
EP1392359B2 (en) 2001-05-11 2013-03-13 Ludwig Institute for Cancer Research Ltd. Specific binding proteins and uses thereof
US20060045877A1 (en) * 2004-08-30 2006-03-02 Goldmakher Viktor S Immunoconjugates targeting syndecan-1 expressing cells and use thereof
AU2006213662B2 (en) 2005-02-11 2010-08-05 Immunogen, Inc. Process for preparing stable drug conjugates
US20110166319A1 (en) * 2005-02-11 2011-07-07 Immunogen, Inc. Process for preparing purified drug conjugates
BRPI0615049B1 (pt) 2005-08-24 2023-04-25 Immunogen, Inc Processo para a preparação de um conjugado de anticorpo- maitansinóide
MY157757A (en) * 2006-07-18 2016-07-15 Sanofi Aventis Antagonist antibody against epha2 for the treatment of cancer
US9090693B2 (en) 2007-01-25 2015-07-28 Dana-Farber Cancer Institute Use of anti-EGFR antibodies in treatment of EGFR mutant mediated disease
US9023356B2 (en) 2007-03-15 2015-05-05 Ludwig Institute For Cancer Research Ltd Treatment method using EGFR antibodies and SRC inhibitors and related formulations
ES2609915T3 (es) 2007-08-14 2017-04-25 Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. Anticuerpo monoclonal 175 direccionado al receptor de EGF y derivados y usos del mismo
CA2742388C (en) * 2007-11-08 2019-02-19 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Thiolated paclitaxels for reaction with gold nanoparticles as drug delivery agents
CN101945892B (zh) * 2007-12-26 2017-11-24 生物测试股份公司 用于改进对表达cd138的肿瘤细胞的靶向的方法和试剂
EP2238169A1 (en) * 2007-12-26 2010-10-13 Biotest AG Method of decreasing cytotoxic side-effects and improving efficacy of immunoconjugates
ES2475201T3 (es) * 2007-12-26 2014-07-10 Biotest Ag Agentes dirigidos contra CD138 y usos de los mismos
PL2242772T3 (pl) * 2007-12-26 2015-05-29 Biotest Ag Immunokonjugaty nakierowane na CD138 i ich zastosowanie
DK2437790T3 (da) 2009-06-03 2019-05-20 Immunogen Inc Konjugeringsfremgangsmåder
WO2012135517A2 (en) 2011-03-29 2012-10-04 Immunogen, Inc. Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
US8795673B2 (en) 2011-03-29 2014-08-05 Immunogen, Inc. Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
MX358680B (es) 2011-12-08 2018-08-31 Biotest Ag Usos de inmunoconjugados dirigidos a cd138.
CN105209592A (zh) 2012-10-04 2015-12-30 伊缪诺金公司 使用pvdf膜纯化细胞结合剂细胞毒性剂缀合物
CN108604765B (zh) * 2016-01-28 2020-09-08 索尼公司 半导体发光装置
WO2017194568A1 (en) 2016-05-11 2017-11-16 Sanofi Treatment regimen using anti-muc1 maytansinoid immunoconjugate antibody for the treatment of tumors
US11401336B2 (en) 2018-02-21 2022-08-02 Celgene Corporation BCMA-binding antibodies and uses thereof

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6340701B1 (en) * 1999-11-24 2002-01-22 Immunogen Inc Cytotoxic agents comprising taxanes and their therapeutic use

Family Cites Families (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4625014A (en) 1984-07-10 1986-11-25 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Cell-delivery agent
US4542225A (en) 1984-08-29 1985-09-17 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Acid-cleavable compound
US4764368A (en) 1984-08-29 1988-08-16 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Acid-cleavable compound
WO1989006692A1 (en) 1988-01-12 1989-07-27 Genentech, Inc. Method of treating tumor cells by inhibiting growth factor receptor function
DE68921982D1 (de) 1988-06-14 1995-05-04 Cetus Oncology Corp Kupplungsmittel und sterisch gehinderte, mit disulfid gebundene konjugate daraus.
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
SE9102074D0 (sv) 1991-07-03 1991-07-03 Kabi Pharmacia Ab Tomour antigen specific antibody
US5399726A (en) * 1993-01-29 1995-03-21 Florida State University Process for the preparation of baccatin III analogs bearing new C2 and C4 functional groups
ATE275198T1 (de) 1991-12-02 2004-09-15 Medical Res Council Herstellung von antikörpern auf phagenoberflächen ausgehend von antikörpersegmentbibliotheken.
CA2076465C (en) 1992-03-25 2002-11-26 Ravi V. J. Chari Cell binding agent conjugates of analogues and derivatives of cc-1065
US5356928A (en) 1992-11-06 1994-10-18 Hauser Chemical Research, Inc. Cytotoxic agents
US5646176A (en) * 1992-12-24 1997-07-08 Bristol-Myers Squibb Company Phosphonooxymethyl ethers of taxane derivatives
IL108443A0 (en) 1993-01-29 1994-04-12 Univ Florida State C7 taxane derivatives and pharmaceutical compositions containing them
US5703247A (en) 1993-03-11 1997-12-30 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. 2-Debenzoyl-2-acyl taxol derivatives and methods for making same
US5475011A (en) * 1993-03-26 1995-12-12 The Research Foundation Of State University Of New York Anti-tumor compounds, pharmaceutical compositions, methods for preparation thereof and for treatment
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
CA2129288C (en) 1993-08-17 2000-05-16 Jerzy Golik Phosphonooxymethyl esters of taxane derivatives
US5824701A (en) * 1993-10-20 1998-10-20 Enzon, Inc. Taxane-based prodrugs
WO1996011683A1 (en) 1994-10-14 1996-04-25 Hauser Chemical Research, Inc. New cytotoxic agents
WO1996023779A1 (fr) 1995-02-02 1996-08-08 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Derives ethers
CN1211919A (zh) * 1995-09-13 1999-03-24 佛罗里达州立大学 放射增敏性紫杉烷及其药物制剂
US6107090A (en) 1996-05-06 2000-08-22 Cornell Research Foundation, Inc. Treatment and diagnosis of prostate cancer with antibodies to extracellur PSMA domains
DE69703294T2 (de) 1996-05-22 2001-05-17 Protarga Inc Zusammensetzungen die konjugate von cis-docosahexaenoic-säure und taxotere enthalten
WO1998019705A1 (en) 1996-11-05 1998-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Branched peptide linkers
US5811452A (en) * 1997-01-08 1998-09-22 The Research Foundation Of State University Of New York Taxoid reversal agents for drug-resistance in cancer chemotherapy and pharmaceutical compositions thereof
JP2002502376A (ja) 1997-05-21 2002-01-22 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティ 生物学的膜を横切る輸送を増強するための組成物および方法
WO1999006587A2 (en) 1997-08-01 1999-02-11 Morphosys Ag Novel method and phage for the identification of nucleic acid sequences encoding members of a multimeric (poly)peptide complex
WO1999018113A1 (fr) 1997-10-08 1999-04-15 Bio Research Corporation Of Yokohama Derives taxoides et leur procede de production
WO1999025729A1 (fr) 1997-11-18 1999-05-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Composes possedant une activite antitumorale
US6958212B1 (en) * 1999-02-01 2005-10-25 Eidgenossische Technische Hochschule Zurich Conjugate addition reactions for the controlled delivery of pharmaceutically active compounds
JP4808846B2 (ja) 1999-02-24 2011-11-02 ザ ユーエイビー リサーチ ファンデイション 癌の標的付けられた治療のためのタキサン誘導体
US6175023B1 (en) * 2000-01-31 2001-01-16 Jian Liu Synthesis of water soluble 9-dihydro-paclitaxel derivatives from 9-dihydro-13-acetylbaccatin III
WO2001057029A1 (en) 2000-02-02 2001-08-09 Florida State University Research Foundation, Inc. C7 heterosubstituted acetate taxanes as antitumor agents
BR0104358A (pt) 2000-02-02 2002-01-02 Univ Florida State Res Found Formulações de taxana tendo solubilidade aperfeiçoada
JP2003521514A (ja) 2000-02-02 2003-07-15 フロリダ・ステイト・ユニバーシティ・リサーチ・ファウンデイション・インコーポレイテッド 抗腫瘍剤としてのｃ１０ヘテロ置換アセテートタキサン
RU2265019C2 (ru) 2000-02-02 2005-11-27 Флорида Стейт Юниверсити Рисерч Фаундейшн, Инк. Таксаны, фармацевтические композиции, способы ингибирования
DE60133600T2 (de) 2000-02-02 2009-06-10 Florida State University Research Foundation, Inc., Tallahassee C7-carbamoyloxysubstituierte taxane als antitumormittel
US6596757B1 (en) 2002-05-14 2003-07-22 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising polyethylene glycol-containing taxanes and their therapeutic use

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6340701B1 (en) * 1999-11-24 2002-01-22 Immunogen Inc Cytotoxic agents comprising taxanes and their therapeutic use

Also Published As

Publication number Publication date
NZ538467A (en) 2008-07-31
EA200500300A1 (ru) 2005-08-25
US7390898B2 (en) 2008-06-24
JP2010111695A (ja) 2010-05-20
ZA200501129B (en) 2006-12-27
US20040024049A1 (en) 2004-02-05
JP2010106040A (ja) 2010-05-13
EP2341050A1 (en) 2011-07-06
ECSP055635A (es) 2006-01-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA008058B1 (ru) Цитотоксические агенты, содержащие новые сильнодействующие таксаны, и их терапевтическое применение
US7495114B2 (en) Cytotoxic agents containing novel potent taxanes and their therapeutic use
CA2485424C (en) Cytotoxic agents comprising polyethylene glycol-containing taxanes and their therapeutic use
ES2276708T3 (es) Agentes citotoxicos que comprenden taxanos y su uso terapeutico.
EA012625B1 (ru) Цитотоксические агенты, содержащие новые таксаны
JP2008523020A (ja) 新規ｃ−２修飾タキサンを包含する細胞毒性物質

Legal Events

Date Code Title Description
NF4A Restoration of lapsed right to a eurasian patent

Designated state(s): AM AZ KZ KG MD TJ TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM BY KZ MD TJ RU