EA012625B1

EA012625B1 - Цитотоксические агенты, содержащие новые таксаны

Info

Publication number: EA012625B1
Application number: EA200701251A
Authority: EA
Inventors: Майкл Л. Миллер; Рави В. Дж. Чари; Эркан Балоглу; Ален Коммерсон
Original assignee: Авентис Фарма С.А.
Priority date: 2004-12-07
Filing date: 2005-12-02
Publication date: 2009-10-30
Also published as: KR20070085781A; PE20061060A1; EP1669358A1; UY29249A1; US20060178427A1; MX2007006765A; ZA200704790B; US7667054B2; WO2006061258A3; BRPI0518869A2; MA29103B1; NO20073033L; EP1824858A2; EA200701251A1; AR054100A1; CA2588587A1; JP2008523019A; AU2005313444A1; TW200637836A; DOP2005000248A

Abstract

Настоящее изобретение относится к новым цитотоксическим агентам и их терапевтическому применению. Более конкретно, настоящее изобретение относится к новым цитотоксическим агентам, содержащим таксаны, и их терапевтическому применению. Эти новые цитотоксические агенты имеют терапевтическое применение благодаря доставке таксанов в специфическую клеточную популяцию путем нацеливания посредством химического связывания таксана с клеточным связующим агентом.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к новым цитотоксическим агентам и их терапевтическому применению. Более конкретно изобретение относится к новым цитотоксическим агентам, содержащим таксаны, и их терапевтическому применению. Эти новые цитотоксические агенты имеют терапевтическое применение благодаря доставке таксанов в специфическую клеточную популяцию путем нацеливания посредством химического связывания таксана с клеточным связующим агентом.

Уровень техники

Опубликовано множество сообщений, в которых описана попытка специфического нацеливания конъюгатов моноклональное антитело-лекарственное вещество на раковые клетки (8е1а е! а1., ίη 1ттипосоп)ида!ек 189-216 (С. Уоде1, еб. 1987); Сйоке е! а1., ίη Тагде!еб Эгидк 1-22 (Е. Оо1бЬегд, еб. 1983); Э1епег е! а1., ίη АпйЬобу теб1а!еб бейуегу кук!етк 1-23 (1. Воб^е11. еб. 1988); Р|е1ег8/ е! а1., ίη АпйЬобу теб1а!еб бейуегу кук!етк 25-53 (1. Вобте11, еб. 1988); Вито1 е! а1., ίη АпйЬобу теб1а!еб бейуегу кук!етк 55-79 (1. Воб^ей, еб. 1988). Все ссылки и патенты включены в настоящее описание во всей своей полноте в качестве ссылки.

Цитотоксические лекарственные средства, такие как метотрексат, даунорубицин, доксорубицин, винкристин, винбластин, мелфалан, митомицин С и хлорамбуцил использовали в конъюгатах с множеством различных мышиных моноклональных антител. В некоторых случаях молекулы лекарственных веществ связывали с молекулами антител, используя промежуточную молекулу-носитель, такую как сывороточный альбумин (Сате!! е! а1., 46 Сапсег Век. 2407-2412 (1986); 011ка\га е! а1., 23 Сапсег 1ттипо1. 1ттипо!йег. 81-86 (1986); Епбо е! а1., 47 Сапсег Век. 1076-1080 (1980)), декстран (ΗιιπνίΙζ е! а1., 2 Арр1. Вюсйет. 25-35 (1980); МапаЬ1 е! а1., 34 Вюсйет. Рйагтасо1. 289-291 (1985); ЭШтап е! а1., 46 Сапсег Век. 4886-4891 (1986); 8йоуа1 е! а1., 85 Ргос. №а!1. Асаб. 8ск 8276-8280 (1988)), или полиглутаминовая кислота (Ткикаба е! а1., 73 1. №а!1. Сапе. 1пк!. 721-729 (1984); Ка!о е! а1., 27 1. Меб. Сйет. 1602-1607 (1984); Ткикаба е! а1., 52 Вг. 1. Сапсег 111-116 (1985)).

Для получения таких иммуноконъюгатов использовался широкий набор способов с использованием связующих групп, и были исследованы как расщепляемые, так и нерасщепляемые связующие группы. Однако в большинстве случаев можно было наблюдать полную цитотоксическую активность лекарственных веществ, только если молекулы лекарственных веществ могли высвобождаться из конъюгатов в немодифицированном виде в целевом участке.

Одна из расщепляемых связующих групп, которая использовалась для получения конъюгатов антитело-лекарственное средство, представляет собой неустойчивую в кислой среде связующию группу на основе цис-аконитовой кислоты, которую предпочтительно использовать в кислой среде различных внутриклеточных компартментов, таких как эндосомы, которые образуются во время рецепторопосредованного эндоцитоза, и лизосомы. 8йеп и Вукег внедрили этот способ для получения конъюгатов даунорубицина с макромолекулярными носителями (102 Вюсйет. Вюрйук. Век. Соттип. 1048-1054 (1981)). Уапд и Ве1к!ё1б использовали такой же способ для получения конъюгатов даунорубицина с антителом против меланомы (80 1. №111. Сапе. 1пк!. 1154-1159 (1988)). ЭШтап и др. также использовали связующую группу, неустойчивую в кислой среде, таким же способом для получения конъюгатов даунорубицина с анти Т-клеточным антителом (48 Сапсег Век. 6097-6102 (1988)).

Альтернативный подход, описанный у Тгоие! и др., включал связывание даунорубицина с антителом посредством пептидной ножки (79 Ргос. №111. Асаб. 8ск 626-629 (1982)). Это было сделано, исходя из предположения, что свободное лекарственное вещество может быть высвобождено из такого конъюгата под воздействием лизосомальных пептидаз.

Однако цитотоксические тесты ίη уйго выявили, что конъюгаты антитело-лекарственное вещество редко достигают такой же цитотоксической активности, какой обладают свободные неконъюгированные лекарственные вещества. Это подтверждает, что механизмы, при помощи которых молекулы лекарственных веществ высвобождаются из антител, являются очень неэффективными. В области иммунотоксинов показано, что конъюгаты, образованные при помощи дисульфидных мостиков между моноклональными антителами и каталитически активными белковыми токсинами, являются более цитотоксическими по сравнению с конъюгатами, содержащими другие связующие группы. См. БатЬег! и др., 260 1. Вю1. Сйет. 12035-12041 (1985); БатЬей е! а1., ίη 1ттипо!охшк 175-209 (А. Бгапке1, еб. 1988); Ойейе и др., 48 Сапсег Век. 2610-2617 (1988). Это объясняли наличием высокой внутриклеточной концентрации глутатиона, способствующего эффективному расщеплению дисульфидной связи между молекулой антитела и токсином. Несмотря на это, имеется только несколько опубликованных примеров использования дисульфидных мостиков для получения конъюгатов между лекарственными веществами и макромолекулами. 8йеп и др. (260 1. Вю1. Сйет. 10905-10908 (1985)) описали превращение метатрексата в производное меркаптоэтиламида с последующей конъюгацией с поли-Э-лизином посредством дисульфидной связи. В другой работе описано получение конъюгата трисульфида, содержащего токсическое лекарственное вещество калихеамицин, с антителом (Нштап е! а1., 53 Сапсег Век. 3336-3342 (1993)).

Одна из причин отсутствия конъюгатов антитело-лекарственное вещество с дисульфидными связями заключается в том, что цитотоксические лекарственные вещества с фрагментом, содержащим атом серы, которые можно с легкостью использовать, не способны связывать лекарственное вещество с анти

- 1 012625 телом через дисульфидный мостик. Более того, трудно осуществлять химическую модификацию существующих лекарственных веществ, не снижая при этом их цитотоксическую активность.

Другой важный недостаток существующих конъюгатов антитело-лекарственное вещество заключается в их неспособности поставлять достаточную концентрацию лекарственного вещества к целевому участку из-за ограниченного количества целевых антигенов и относительно умеренной цитотоксичности канцеростатических лекарственных веществ, таких как метотрексат, даунорубицин и винкристин. Для получения значимой цитотоксичности большое количество молекул лекарственных веществ необходимо связывать либо непосредственно с антителом, либо при помощи молекулы полимерного носителя. Однако такие сильно модифицированные антитела часто показывают слабое связывание с целевым антигеном и быстрое выведение из кровотока ίη νίνο.

Несмотря на вышеописанные трудности, были опубликованы сообщения о полезных цитотоксических агентах, содержащих клеточные связующие фрагменты и группы цитотоксических лекарственных веществ, известных как майтанзиноиды (И8Р 5208020, И8Р 5416064, апб К. V. 1. Сйап, 31 Аб\^гапееб Эгид Ос1й'сгу Кс\зс\\ъ 89-104 (1998)). Аналогично, также было опубликовано сообщение о полезных цитотоксических агентах, содержащих клеточные связующие фрагменты, аналоги и производные потенциального противоопухолевого антибиотика СС-1065 (И8Р 5475092 и И8Р 5585499).

Паклитаксель (таксол), природный цитотоксический продукт, и доцетаксель (таксотер), полусинтетическое производное, широко используются при лечении рака. Эти соединения принадлежат к семейству соединений, которые называются таксанами. Таксаны представляют собой яд для митотического веретена, который ингибирует деполимеризацию тубулина, приводя к увеличению скорости сборки микротрубочек и гибели клетки. Несмотря на то, что доцетаксель и паклитаксель являются полезными агентами в раковой терапии, их противоопухолевая активность ограничена из-за их неспецифической токсичности в отношении аномальных клеток.

Более того, соединения, подобные паклитакселю и доцетакселю, сами по себе не являются эффективными в достаточной степени для использования их в конъюгатах клеточных связующих агентов. Недавно было описано несколько новых аналогов доцетакселя, которые являются более эффективными по сравнению с доцетакселем или паклитакселем (Оцта с1 а1., 39, 1. Меб. Сйет. 3889-3896 (1996)). Однако у этих соединений отсутствует подходящая функциональная группа, которая предоставляет возможность для связывания с клеточными связующими агентами посредством расщепляемой связи.

Следовательно, способ лечения заболеваний с использованием таксанов, у которых снижены побочные эффекты без ослабления их цитотоксичности, является чрезвычайно востребованным.

В патентах США № 6436931; 6372738 и И8 6340701 описаны таксаны, связанные с моноклональным антителом при помощи дисульфидного мостика. По-видимому, эти таксаны не являются в достаточной степени эффективными для использования.

Сущность изобретения

Как раскрыто в первом варианте осуществления целью настоящего изобретения является предоставление таксанов, которые являются высокотоксичными и которые все еще могут эффективно использоваться для лечения многих заболеваний.

Другой целью настоящего изобретения является предоставление новых таксанов.

Эти и другие цели достигнуты предоставлением цитотоксического агента, содержащего один или несколько таксанов, связанных с клеточным связующим агентом.

Во втором варианте осуществления настоящее изобретение предоставляет терапевтическую композицию, содержащую:

(Α) эффективное количество одного или нескольких таксанов, связанных с клеточным связующим агентом, и (В) фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.

В третьем варианте осуществления настоящее изобретение предоставляет способ уничтожения выбранной клеточной популяции, содержащий приведение в контакт целевых клеток или ткани, содержащей целевые клетки, с цитотоксическим количеством цитотоксического агента, содержащего один или несколько таксанов, связанных с клеточным связующим агентом.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение основано на синтезе новых таксанов, которые сохраняют высокую цитотоксичность и могут эффективно связываться с клеточными связующими агентами. Ранее было показано, что связывание высокотоксичных лекарственных веществ с антителами, используя расщепляемую связь, такую как дисульфидная связь, гарантирует высвобождение внутри клетки полностью активных лекарственных веществ, и такие конъюгаты являются цитотоксическими благодаря антиген-специфичности (ϋδ 6340701; υδ 6372738; υδ 6436931). Однако из уровня техники известно, что достаточно сложно модифицировать существующие лекарственные вещества без ослабления их цитотоксической активности. В настоящем изобретении эта задача решена путем модификации таксанов при помощи химических фрагментов. В результате описанные новые таксаны сохраняют, а в некоторых случаях даже увеличивают цитотоксическую активность известных таксанов. Применение комплексов клеточный связующий агенттаксан позволяет в полной мере использовать цитотоксическое действие таксанов путем нацеливания

- 2 012625 только против нежелательных клеток, избегая, таким образом, побочных эффектов вследствие повреждения нецелевых здоровых клеток. Таким образом, настоящее изобретение предлагает полезные агенты для элиминации больных или аномальных клеток, которые должны быть уничтожены или лизированы, таких как клетки опухоли (в частности, клетки солидных опухолей).

Цитотоксический агент согласно настоящему изобретению содержит один или несколько таксанов, связанных с клеточным связующим агентом посредством связующей группы. Связующая группа представляет собой часть химического фрагмента, который ковалентно связан с таксаном при помощи обычных способов. В предпочтительном варианте осуществления химический фрагмент может быть ковалентно связан с таксаном при помощи сложно-эфирной связи.

Таксаны, используемые в настоящем изобретении, имеют нижеприведенную формулу (I):

Ζ=Η или радикал формулы II,

К.1 представляет собой связующую группу или необязательно замещенный арил или гетероциклический радикал, алкил, имеющий 1-10 атомов углерода, алкенил или алкинил, имеющие 2-10 атомов углерода, циклоалкил или циклоалкенил, имеющие 3-10 атомов углерода, -ОК₂ или карбамат, образованный из любого из указанных алкила, имеющих 1-10 атомов углерода, алкенила или алкинила, имеющих 2-10 атомов углерода, циклоалкила или циклоалкенила, имеющих 3-10 атомов углерода, или необязательно замещенного арила или гетероциклического радикала.

Предпочтительно Κι представляет собой -ОК₂ или необязательно замещенный арил или гетероциклический радикал.

К₂ представляет собой алкильный радикал, имеющий 1-10 атомов углерода, алкенил или алкинил, имеющие 2-10 атомов углерода, циклоалкил или циклоалкенил, имеющие 3-10 атомов углерода, необязательно замещенный арил или гетероциклический радикал. Предпочтительно К₂ представляет собой алкильную группу и более предпочтительно замещенную алкильную группу, такую как тербутильная группа.

К3 представляет собой связующую группу или необязательно замещенный арил или гетероциклический радикал, алкил, имеющий 1-10 атомов углерода, алкенил или алкинил, имеющие 2-10 атомов углерода, циклоалкил или циклоалкенил, имеющие 3-10 атомов углерода.

К₄ представляет собой связующую группу, Н, гидроксирадикал, алкокси, алкенилокси, необязательно замещенный алканоилокси, ароилокси, алкеноилокси, алкиноилокси, циклоалканоилокси, алкоксиацетил, алкилтиоацетил, алкилоксикарбонилокси, циклоалкилокси, циклоалкенилокси, карбамоилокси, алкилкарбамоилокси или диалкилкарбамоилокси, гетероциклический или арильный простой эфир, сложный эфир или карбамат, или линейный, разветвленный или циклический алкиловый или алкениловый сложный эфир или простой эфир, имеющий 1-10 атомов углерода, или карбамат формулы -ОСОХ, где X представляет собой азотсодержащий гетероцикл, такой как незамещенный или замещенный пиперидино, морфолино, пиперазино, Ν-метилпиперазино, или карбамат формулы -ΟίΌΝΚ,Κ|₀. где К₉ и К₁₀ являются одинаковыми или различными и представляют собой Н, линейный, разветвленный или циклический алкил, имеющий 1-10 атомов углерода, или простой или замещенный арил, имеющий 1-10 атомов углерода. Предпочтительно К4 представляет собой связующую группу или алканоилоксирадикал.

К₅ или К₇ представляет собой Н.

К₆ представляет собой Н.

К7 или К5 и К образуют связь (циклический простой эфир).

К₈ = необязательно замещенный арил или гетероциклический радикал.

Ниже настоящее изобретение описано более полно при помощи 3 основных вариантов осуществления.

Вариант осуществления 1: К₄ представляет собой связующую группу Ζ=Η или радикал формулы II.

К1 представляет собой необязательно замещенный арил или гетероциклический радикал, алкил, имеющие 1-10 атомов углерода, алкенил или алкинил, имеющие 2-10 атомов углерода, циклоалкил или циклоалкенил, имеющие 3-10 атомов углерода, -ОК₂ или карбамат, образованный из любого из указанных алкила, имеющего 1-10 атомов углерода, алкенила или алкинила, имеющих 2-10 атомов углерода, циклоалкила или циклоалкенила, имеющих 3-10 атомов углерода, или необязательно замещенного арила или гетероциклического радикала.

К2 представляет собой алкильный радикал, имеющий 1-10 атомов углерода, алкенил или алкинил, имеющие 2-10 атомов углерода, циклоалкил или циклоалкенил, имеющие 3-10 атомов углерода, необязательно замещенный арил или гетероциклический радикал.

- 3 012625

Предпочтительно Κι представляет собой трет-бутокси, кротил, диметилакрилил, изобутенил, гексенил, циклопентенил, циклогексенил, фурил, пироллил, тиенил, тиазолил, имидазолил, пиридил, морфолино, пиперидино, пиперазино, оксазолил, индолил, бензофуранил или бензотиенил.

Более предпочтительно В! представляет собой трет-бутокси, изобутенил, кротил, диметилакрилил, тиенил, тиазолил или фурил.

В₃ представляет собой необязательно замещенный арил или гетероциклический радикал, алкил, имеющий 1-10 атомов углерода, алкенил или алкинил, имеющие 2-10 атомов углерода, циклоалкил или циклоалкенил, имеющие 3-10 атомов углерода.

Предпочтительно В.3 представляет собой кротил, диметилакрилил, пропенил, изобутенил, гексенил, циклопентенил, циклогексенил, фурил, пироллил, тиенил, тиазолил, пиридил, оксазолил, индолил, бензофуранил или бензотиенил.

Более предпочтительно В3 представляет собой изобутенил, кротил, диметилакрилил, тиенил, тиазолил, пиридил, трет-бутил или фурил.

В₄ представляет собой связующую группу.

Подходящие связующие группы хорошо известны в данной области техники и включают дисульфидные группы, тиоэфирные группы, группы, не устойчивые в кислой среде, светонеустойчивые группы, группы, не устойчивые к воздействию пептидаз, и группы, не устойчивые к воздействию эстераз. Предпочтительными являются дисульфидные группы и тиоэфирные группы.

Если связующая группа представляет собой тиол- или дисульфидсодержащую группу, то боковая цепь, несущая тиольную или дисульфидную группу, может быть линейной или разветвленной, ароматической или гетероциклической. Специалист в данной области техники может легко идентифицировать подходящие боковые цепи.

Специфические примеры тиол- или дисульфидсодержащих заместителей включает -О(СВ1зВ14)_т(СВ15В1₆)_п(ОСН2СН2)_у82', -ОСОССВпВмЫСВ^бМОСЩОД^', -О(СВ1зВ14)_т(СВ1₇=СВ1₈)(СВ1₅В1₆)_т(ОСН2СН2)_у82', -ОСО-(СВ1зВ14)т(СВ1₇=СВ1₈)(СВ15В1б)т(ОСН2СН2)у82', -ОСОЫВ₁₂(СВ₁₃В₁₄)_т(СВ₁₅В₁₆)_п(ОСН₂СН₂)у82', -ОСО-фенил-Х'82', -ОСО-фурил-Χ'δΖ', -ОСО-оксазолилΧ’δΖ’, -ОСО-тиазолил-Х^’, -ОСО-тиенил-Χ’δΖ’, -ОСО-имидазолил-Х^’, -ОСО-морфолино-Х^'. -ОСО-пиперазино-Х^', -ОСО-пиперидино-Х^' и -ОСО-Л-метилпиперазино-Х^' или -ОСО-Νметилпиперазино-Х ’δΖ', где Ζ' представляет собой Н, тиолзащищающую группу или δВ', где Χ' представляет собой непосредственно связь или линейный алкил или разветвленный алкил, имеющий 1-10 атомов углерода, или полиэтиленгликолевый-спейсер с 2-20 повторяющимися этиленоксифрагментами;

В' и В₁₂ являются одинаковыми или различными и представляют собой линейный алкил, разветвленный алкил или циклический алкил, имеющий 1-10 атомов углерода, или простой или замещенный арил или гетероциклический радикал, и В₁₂, кроме того, может представлять собой Н,

В₁₃, В₁₄, В₁₅ и В₁₆ являются одинаковыми или различными и представляют собой Н или линейный или разветвленный алкил, имеющий 1-4 атома углерода,

В₁₇ и В₁₈ представляют собой Н или алкил, п равно целому числу от 1 до 10, т равно целому числу от 1 до 10 и также может быть равным 0, у равно целому числу от 1 до 20 и также может быть равным 0, В5 или В7 представляет собой Н, В6 представляет собой Н,

В7 или В5 и В образуют связь (циклический простой эфир),

В8 представляет собой необязательно замещенный арил или гетероциклический радикал.

Предпочтительно В₈ представляет собой 3-метоксифенил, 3-хлорфенил, 2,5-диметоксифенил, фурил, пироллил, тиенил, тиазолил, имидазол, пиридил, индолил, оксазолил, бензофуранил или бензотиенил.

Вариант осуществления 2.

В1 представляет собой связующую группу,

Ζ представляет собой радикал формулы II,

В1 представляет собой связующую группу.

Подходящие связующие группы хорошо известны в данной области техники и включают дисульфидные группы, тиоэфирные группы, группы, неустойчивые в кислой среде, светонеустойчивые группы, группы, неустойчивые к воздействию пептидазы, и группы, неустойчивые к воздействию эстеразы. Предпочтительными являются дисульфидные группы и тиоэфирные группы.

- 4 012625

Специфические примеры тиол- или дисульфидсодержащих заместителей включают -(СК₁зЯ₁4)_т(СК₁₅К₁₆)_п(ОСН₂СН₂)_у82', -О(СК₁зК₁4)_т(СК₁₅К₁₆)_п(ОСН₂СН₂)_у82', -(СК₁зК₁4)_т(СК₁₇=СК₁₈)(СК₁₅К₁₆)_т(ОСН₂СН₂)_у82', -О-(СК1зК14)т(СК1₇=СК1₈)(СК15К1б)т(ОСН2СН2)у82', -ПК₁₂(СК₁₃К₁₄)_т(СК₁₅К₁₆)_п(ОСН₂СН₂)_у82', фенил-Χ'δΖ', фурил-ΧδΖ', оксазолил-Х^', тиазолил-Х^', тиенил-Х^', имидазолил-Χ'δΖ', морфолино-Х^', пиперазино-Х^', пиперидино-ΧδΖ', -фурил-Χ'δΖ', -тиенил-Х^', -тиазолил-Х^' и Ы-метилпиперазино-Х^', -морфолино-Х^', -пиперазино-Х^', -пиперидино-Х^' или -N-метилпиперазино-Х'δΖ', где

Ζ' представляет собой Н, тиолзащищающую группу или δΚ',

Χ' представляет собой непосредственно связь, или линейный алкил, или разветвленный алкил, имеющий 1-10 атомов углерода, или полиэтиленгликолевый спейсер с 2-20 повторяющимися этиленоксифрагментами;

К' и К₁₂ являются одинаковыми или различными и представляют собой линейный алкил, разветвленный алкил или циклический алкил, имеющий 1-10 атомов углерода, или простой или замещенный арил, или гетероциклический радикал, и К₁₂, кроме того, может представлять собой Н,

К₁₃, К₁₄, К₁₅ и К₁₆ являются одинаковыми или различными и представляют собой Н или линейный или разветвленный алкил, имеющий 1-4 атома углерода,

К₁₇ и К₁₈ представляют собой Н или алкил, п равно целому числу от 1 до 10, т равно целому числу от 1 до 10 и также может быть равным 0, у равно целому числу от 1 до 20 и также может быть равным 0.

К₃ представляет собой необязательно замещенный арил или гетероциклический радикал, алкил, имеющий 1-10 атомов углерода, алкенил или алкинил, имеющие 2-10 атомов углерода, циклоалкил или циклоалкенил, имеющие з-10 атомов углерода.

Предпочтительно К₃ представляет собой кротил, диметилакрилил, пропенил, изобутенил, гексенил, циклопентенил, циклогексенил, фурил, пироллил, тиенил, тиазолил, имидазолил, пиридил, оксазолил, индолил, бензофуранил или бензотиенил.

Более предпочтительно К₃ представляет собой изобутенил, кротил, диметилакрилил, тиенил, тиазолил, пиридил, трет-бутил или фурил.

К₄ представляет собой Н, гидроксирадикал, алкокси, алкенилокси, необязательно замещенный алканоилокси, ароилокси, алкеноилокси, алкиноилокси, циклоалканоилокси, алкоксиацетил, алкилтиоацетил, алкилоксикарбонилокси, циклоалкилокси, циклоалкенилокси, карбамоилокси, алкилкарбамоилокси или диалкилкарбамоилокси, гетероциклический или арильный простой эфир, сложный эфир или карбамат, или, линейный, разветвленный или циклический алкиловый или алкениловый сложный эфир или простой эфир, имеющий 1-10 атомов углерода, или карбамат формулы -ОСОХ, где Χ представляет собой азотсодержащий гетероцикл, такой как незамещенный или замещенный пиперидино, морфолино, пиперазино, Ν-метилпиперазино, или карбамат формулы -ОСОЫК₉К₁₀, где К₉ и К₁₀ являются одинаковыми или различными и представляют собой Н, линейный, разветвленный или циклический алкил, имеющий 1-10 атомов, или простой или замещенный арил, имеющий 5-10 атомов углерода;

К₅ или К₇ представляют собой Н,

К₆ представляет собой Н,

К₇ или К₅ и К образуют связь (циклический простой эфир),

К₈ представляет собой необязательно замещенный арил или гетероциклический радикал.

Предпочтительно К₈ представляет собой 3-метоксифенил, 3-хлорфенил, 2,5-диметоксифенил, фурил, пироллил, тиенил, тиазолил, оксазолил, имидазол, пиридил, индолил, бензофуранил или бензотиенил.

Вариант осуществления 3.

К₃ представляет собой связующую группу,

Ζ представляет собой радикал формулы II,

К₁ представляет собой необязательно замещенный арил или гетероциклический радикал, алкил, имеющий 1-10 атомов углерода, алкенил или алкинил, имеющие 2-10 атомов углерода, циклоалкил или циклоалкенил, имеющие 3-10 атомов углерода, -ОК₂ или карбамат, образованный из любого из указанных алкила, имеющего 1-10 атомов углерода, алкенила или алкинила, имеющих 2-10 атомов углерода, циклоалкила или циклоалкенила, имеющих 3-10 атомов углерода, или необязательно замещенного арила или гетероциклического радикала.

К₂ представляет собой алкильный радикал, имеющий 1-10 атомов углерода, алкенил или алкинил, имеющие 2-10 атомов углерода, циклоалкил или циклоалкенил, имеющие 3-10 атомов углерода, необязательно замещенный арил или гетероциклический радикал.

Предпочтительно К₁ представляет собой трет-бутокси, кротил, диметилакрилил, изобутенил, гексенил, циклопентенил, циклогексенил, фурил, пироллил, тиенил, тиазолил, имидазолил, пиридил, морфолино, пиперидино, пиперазино, оксазолил, индолил, бензофуранил или бензотиенил.

Более предпочтительно К₁ представляет собой трет-бутокси, изобутенил, кротил, диметилакрилил, тиенил, тиазолил или фурил.

- 5 012625

Я₃ представляет собой связующую группу.

Подходящие связующие группы хорошо известны в данной области техники и включают дисульфидные группы, тиоэфирные группы, группы, неустойчивые в кислой среде, светонеустойчивые группы, группы, не устойчивые к воздействию пептидаз, и группы, не устойчивые к воздействию эстераз. Предпочтительными являются дисульфидные группы и тиоэфирные группы.

Специфические примеры тиол- или дисульфидсодержащих заместителей включают -(СК₁зК₁4)_т(СК₁5К₁₆)_п(ОСН₂СН₂)_у§2', -(СК₁₁К₁4)_т(СК₁₇=СК1₈)(СК₁5К₁₆)_т(ОСН₂СН₂)_у§2', фенил-Χ'δΖ', фурил-Χ'δΖ', оксазолил-Χ'δΖ', тиазолил-Х^', тиенил-Х'^'. имидазолил-Х^', где

Ζ' представляет собой Н, тиолзащищающую группу или §Я',

Χ' представляет собой непосредственно связь или линейный алкил или разветвленный алкил, имеющий 1-10 атомов углерода, или полиэтиленгликолевый спейсер с 2-20 повторяющимися этиленоксифрагментами;

Я' представляет собой линейный алкил, разветвленный алкил или циклический алкил, имеющие 110 атомов углерода, или простой или замещенный арил, или гетероциклический радикал,

Я₁₃, Я₁₄, Я₁₅ и Я₁₆ являются одинаковыми или различными и представляют собой Н или линейный или разветвленный алкил, имеющий 1-4 атома углерода,

Я₁₇ и Я₁₈ представляют собой Н или алкил, п равно целому числу от 1 до 10, т равно целому числу от 1 до 10 и также может быть равным 0, у равно целому числу от 1 до 20 и также может быть равным 0.

Я₄ представляет собой Н, гидроксирадикал, алкокси, алкенилокси, необязательно замещенный алканоилокси, ароилокси, алкеноилокси, алкиноилокси, циклоалканоилокси, алкоксиацетил, алкилтиоацетил, алкилоксикарбонилокси, циклоалкилокси, циклоалкенилокси, карбамоилокси, алкилкарбамоилокси или диалкилкарбамоилокси, гетероциклический или арильный простой эфир, сложный эфир или карбамат, или линейный, разветвленный или циклический алкиловый или алкениловый сложный эфир, или простой эфир, имеющий 1-10 атомов углерода, или карбамат формулы -ОСОХ, где X представляет собой азотсодержащий гетероцикл, такой как незамещенный или замещенный пиперидино, морфолино, пиперазино, Ν-метилпиперазино, или карбамат формулы -ОСОХК9Я₁₀, где Я₉ и Я₁₀ являются одинаковыми или различными и представляют собой Н, линейный, разветвленный или циклический алкил, имеющий 1-10 атомов, или простой или замещенный арил, имеющий 5-10 атомов углерода;

Я₅ или Я₇ представляют собой Н,

Я₆ представляет собой Н,

Я₇ или Я₅ и Я образуют связь (циклический простой эфир),

Я₈ представляет собой необязательно замещенный арил или гетероциклический радикал.

Предпочтительно Я₈ представляет собой 3-метоксифенил, 3-хлорфенил, 2,5-диметоксифенил, фурил, пироллил, тиенил, тиазолил, имидазолил, пиридил, оксазолил, индолил, бензофуранил или бензотиенил.

Были синтезированы нижеприведенные соединения изобретения

- 6 012625

2'-(Триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель.

- 7 012625

К раствору 10-ацетокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2(2,5-диметоксибензоил)доцетакселя (1,30 г, 1,25 ммоль) в этаноле (25 мл) добавляли моногидрат гидразина (10,5 мл) при помешивании. Через 15 мин реакционную смесь разбавляли этилацетатом (50 мл) и органический слой экстрагировали хлоридом аммония (50 мл), водой (50 мл) и солевым раствором (50 мл). Затем органический слой сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали на колонке с силикагелем, используя 40% этилацетат в гексане в качестве элюента. Фракции, содержащие желаемый продукт, собирали и концентрировали для получения 1,1 г 2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетакселя в виде твердого вещества белого цвета.

Ή ЯМР (СБС1₃) δ 1,08 (с, 24Н), 1,23 (с, 3Н), 1,36 (с, 9Н), 1,67 (с, 3Н), 1,70 (с, 3Н), 1,76 (с, 3Н), 1,82 (м, 1Н), 1,88 (с, 3Н), 2,16 (с, 3Н), 2,31 (м, 1Н), 2,50 (м, 2Н), 3,17 (ушир.с, 1Н), 3,79 (с, 3Н), 3,85 (д, 1=6,4 Гц, 1Н), 3,95 (с, 1Н), 4,18 (м, 2Н), 4,29 (д, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,37 (д, 1=2 Гц, 1Н), 4,41 (д, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,74 (т, 1=9 Гц, 1Н), 4,90 (т, 1=9,8 Гц, 2Н), 5,17 (д, 1=1,6 Гц, 1Н), 5,32 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 5,65 (д, 1=6,8 Гц, 1Н), 6,10 (т, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,93 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,05 (дд, 1=9,2, 3,0 Гц, 1Н), 7,28 (д, 1=3,0 Гц, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для ί.’_5;Η-₉ΝΟ₁₆8ί№ί: вычислено: 1024,5; найдено: 1024,3.

Точная масса: 1133,47

7-(Трифторметансульфонилокси)-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель. Раствор 2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетакселя (1,1 г, 1,1 ммолъ) в метиленхлориде (7 мл) и пиридин (0,44 мл, 5,5 ммоль) охлаждали до -30°С в бане с сухим льдом и ацетоном. Раствор, содержащий ангидрид трифторметансульфокислоты (0,37 мл, 2,2 ммоль), растворенный в метиленхлориде (0,3 мл), добавляли по каплям. Полученную смесь оставили постепенно нагреваться до комнатной температуры при помешивании. Спустя час реакционную смесь разбавляли этилацетатом (25 мл) и органический слой экстрагировали хлоридом аммония (25 мл), водой (25 мл) и солевым раствором (25 мл). Затем органический слой сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали на колонке с силикагелем, используя 20% этилацетат в гексане в качестве элюента. Фракции, содержащие желаемый продукт, собирали и концентрировали для получения 565 мг 7-(трифторметансульфонилокси)-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2(2,5-диметоксибензоил)доцетакселя в виде твердого вещества.

Ή ЯМР (СОС1₃) δ 1,10 (м, 24Н), 1,26 (с, 3Н), 1,38 (с, 9Н), 1,68 (с, 3Н), 1,72 (с, 3Н), 1,92 (с, 3Н), 1,95 (с, 3Н), 2,20 (с, 3Н), 2,28 (м, 1Н), 2,31 (м, 1Н), 2,50 (м, 1Н), 2,80 (м, 1Н), 3,80 (с, 3Н), 3,95 (д, 1=6,4 Гц, 1Н),

3,98 (с, 3Н), 4,36 (д, 1=8,0 Гц, 1Н), 4,38 (д, 1=2,4 Гц, 1Н), 4,44 (д, 1=8,0 Гц, 1Н), 4,76 (т, 1=9,2 Гц, 1Н), 4,88 (м, 2Н), 5,33 (м, 2Н), 5,38 (дд, 1=6,8, 10,4 Гц, 1Н), 5,68 (д, 1=6,4 Гц, 1Н), 6,13 (т, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,95 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,07 (дд, 1=3,2, 9,2 Гц, 1Н), 7,26 (д, 1=3,2 Гц, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для С5зΗ7₈ΡзNΟ1₈88^Nа⁺: вычислено: 1156,4; найдено: 1156,1.

¢-53^76^3^01 д331

Точная масса; 1131,45

7-(Трифторметансульфонилокси)-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-10-оксо2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель. В перемешанный раствор 7-(трифторметансульфонилокси)-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил) доцетакселя (565 мг, 0,5 ммоль) в метиленхлориде (20 мл) добавляли 4-метилморфолин Ν-оксид (ΝΜΟ) (117 мг, 1,00 ммоль) с последующим добавлением перрутената тетрапропиламмония (ТРАР) (10 мг, 0,03 ммоль). Полученную смесь оставили перемешиваться под наблюдением при комнатной температуре. Спустя 8 ч реакционную смесь фильтровали через целит и слой целита промывали метиленхлоридом. Объединенный супернатант концентрировали под вакуумом и полученный остаток очищали на колонке с силикагелем, используя 25% этилацетат в гексане. Фракции, содержащие продукт, собирали и концен

- 8 012625 трировали для получения 325 мг 7-(трифторметансульфонилокси)-2'-(триизопропилсилилокси)-3'дефенил-3'-(изобутенил)-10-оксо-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетакселя в виде твердого вещества.

Ή ЯМР (СОС1₃) δ 1,10 (м, 21Н), 1,20 (с, 3Н), 1,30 (с, 3Н), 1,38 (с, 9Н), 1,68 (с, 3Н), 1,72 (с, 3Н), 1,92 (с, 3Н), 1,94 (с, 3Н), 2,18 (с, 3Н), 2,23 (м, 1Н), 2,35 (м, 1Н), 2,63 (м, 1Н), 2,83 (м, 1Н), 3,71 (м, 2Н), 3,81 (с, 3Н), 4,00 (с, 3Н), 4,34 (д, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,39 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 4,45 (д, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,78 (т, 1=9,2 Гц, 1Н), 4,87 (м, 2Н), 5,19 (дд, 1=8,0, 10,0 Гц, 1Н), 5,34 (д, 1=8,8 Гц, 1Н), 5,79 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 6,09 (т, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,98 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,09 (дд, 1=3,2 9,2 Гц, 1Н), 7,25 (д, 1=3,2 Гц, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для 05₃Η₇₆Ρ₃ΝΘι₈§§ίΝα⁺: вычислено: 1154,4; найдено: 1154,4.

7а,9а-Эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетакаель.

К хорошо перемешанному раствору 7-(трифторметансульфонилокси)-2'-(триизопропилсилилокси)3'-дефенил-3'-(изобутенил)-10-оксо-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетакселя (323 мг, 0,286 ммоль) в этаноле (3,5 мл) добавляли боргидрид натрия (58 мг, 1,5 ммоль). После 10 мин реакционную смесь разбавляли этилацетатом (15 мл) и дважды экстрагировали солевым раствором (15 мл). Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали на силикагеле тонкослойной хроматографией (РТЬС), используя 50% этилацетат в гексане в качестве проявляющего растворителя, для получения желаемого продукта, 7а,9а-эпокси-2'(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетакселя (171 мг) и побочного продукта 7а,10а-эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетакселя (78 мг).

7а,9а-Эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель:

Ή ЯМР (СПС1₃) δ 1,09 (м, 24Н), 1,24 (с, 3Н), 1,38 (с, 9Н), 1,68 (с, 3Н), 1,71 (с, 3Н), 1,78 (с, 3Н), 1,97 (с, 3Н), 2,10 (с, 3Н), 2,23-2,33 (м, 2Н), 2,34-2,45 (м, 2Н), 2,50 (д, 1=3,2 Гц, 1Н), 3,80 (с, 3Н), 3,98 (с, 3Н), 4,02 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 4,25 (д, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,34 (д, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,45 (д, 1=2,4 Гц, 1Н), 4,73-4,83 (м, 4Н),

4,98 (м, 2Н), 5,35 (д, 1=8,8 Гц, 1Н), 5,67 (д, 1=6,4 Гц, 1Н), 5,97 (т, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,96 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,06 (дд, 1=3,2 9,2 Гц, 1Н), 7,29 (д, 1=3,2 Гц, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для С5₂Η₇9NΟ15§^Nа⁺: вычислено: 1008,5; найдено: 1008,4.

7а,10а-Эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель:

'Н ЯМР (СПС1₃) δ 1,10 (м, 21Н), 1,19 (с, 3Н), 1,34 (с, 3Н), 1,39 (с, 9Н), 1,66 (с, 3Н), 1,70 (с, 3Н), 1,84 (с, 3Н), 1,88 (с, 3Н), 2,07 (с, 3Н), 2,21 (м, 1Н), 2,29 (м, 1Н), 2,38 (м, 2Н), 3,66 (д, 1=7,6 Гц, 1Н), 3,81 (с, 3Н), 3,96 (с, 3Н), 4,39-4,47 (м, 4Н), 4,74 (т, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,82 (ушир.с, 1Н), 4,90 (м, 1Н), 5,08 (д, 1=4,4 Гц, 1Н), 5,35 (д, 1=8,8 Гц, 1Н), 5,42 (д, 1-6,0 Гц, 1Н), 6,12 (т, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,95 (д, 1=8,8 Гц, 1Н), 7,07 (дд, 1=3,2, 8,8 Гц, 1Н), 7,32 (д, 1=3,2 Гц, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для ί’₅₂Η--ΝΟ|₅8ίΝα': вычислено: 1006,5; найдено: 1006,4.

θ43^Η57^ΝΟ15

Точная масса: 827,37

7а,10а-Эпокси-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель.

Раствор, содержащий 7а,10а-эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель (20 мг, 0,02 ммоль), растворенный в 1:1 смеси ацетонитрил: пиридин (2 мл), охлаждали до 0°С в ледяной бане. К нему добавляли фтороводородпиридин (0,2 мл) и раствор оставляли медленно нагреваться до комнатной температуры. Спустя 16 ч реакционную

- 9 012625 смесь разбавляли этилацетатом (15 мл) и гасили реакцию насыщенным раствором бикарбоната натрия (15 мл). Органический слой промывали один раз солевым раствором (20 мл) и затем сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный остаток очищали на силикагеле тонкослойной хроматографией, используя 70% этилацетат в гексане в качестве проявляющего растворителя. Полоску, содержащую желаемый продукт, соскребали и промывали на фильтре этилацетатом. Органические слои объединяли и концентрировали под вакуумом для получения 12 мг 7α,10αэпокси-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетакселя в виде твердого вещества белого цвета.

Ή ЯМР (СИС1₃) δ 1,19 (с, 3Н), 1,32 (с, 3Н), 1,41 (с, 9Н), 1,73 (с, 6Н), 1,85 (с, 3Н), 1,89 (с, 3Н), 2,03 (с, 3Н), 2,28-2,42 (м, 4Н), 3,69 (дд, 1=2,0, 7,2 Гц, 1Н), 3,81 (с, 3Н), 3,89 (с, 3Н), 4,25 (дд, 1=2,4, 4,4 Гц, 1Н), 4,34 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 4,36 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 4,53 (д, 1=7,6 Гц, 1Н), 4,82 (м, 2Н), 5,00 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 5,08 (м, 1Н), 5,25 (д, 1=8,8 Гц, 1Н), 5,35 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 6,17 (т, 1=7,6 Гц, 1Н), 6,94 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,06 (дд, 1=3,2, 9,2 Гц, 1Н), 7,28 (д, 1=3,2 Гц, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для 0.·|₃Η-ΝΟ|₅Να': вычислено: 850,4; найдено: 85 0,3.

СдзНбдМОщ

Точная масса: 829,39

7а,9а-Эпокси-3'-дефенил-3-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель.

Раствор, содержащий 7а,9а-эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель (25 мг, 0,025 ммоль), растворенный в 1:1 смеси ацетонитрил: пиридин (2 мл), охлаждали до 0°С в ледяной бане. К нему добавляли фтороводород-пиридин (0,25 мл) и раствор оставляли медленно нагреваться до комнатной температуры. Спустя 16 ч реакционную смесь разбавляли этилацетатом (15 мл) и гасили реакцию насыщенным раствором бикарбоната натрия (15 мл). Органический слой промывали один раз солевым раствором (20 мл) и затем сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный остаток очищали на силикагеле тонкослойной хроматографией, используя 70% этилацетат в гексане в качестве проявляющего растворителя. Полоску, содержащую желаемый продукт, соскребали и промывали на фильтре этилацетатом. Органические слои объединяли и концентрировали под вакуумом для получения 12 мг из 7а,9а-эпокси-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетакселя в виде твердого вещества белого цвета.

Ή ЯМР (СОС1₃) δ 1,12 (с, 3Н), 1,23 (с, 3Н), 1,41 (с, 9Н), 1,73 (с, 6Н), 1,80 (с, 3Н), 2,01 (с, 3Н), 2,07 (с, 3Н), 2,15-2,21 (м, 1Н), 2,23-2,28 (м, 1Н), 2,36-2,44 (м, 1Н), 2,43-2,49 (м, 1Н), 2,52 (д, 1=6,8 Гц, 1Н), 3,75 (ушир.с, 1Н), 3,80 (с, 3Н), 3,93 (с, 3Н), 4,05 (д, 1=6,4 Гц, 1Н), 4,26 (д, 1=2,4, 4,8 Гц, 1Н), 4,30 (д, 1=7,6 Гц, 1Н), 4,32 (д, 1=7,6 Гц, 1Н), 4,76-4,83 (м, 4Н), 4,91 (т, 1=2,0 Гц, 1Н), 4,98 (д, 1=9,6 Гц, 1Н), 5,26 (д, 1=8,4 Гц, 1Н), 5,65 (д, 1=6,4 Гц, 1Н), 6,01 (т, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,95 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,06 (дд, 1=3,2 9,2 Гц, 1Н), 7,28 (д, 1=3,2 Гц, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для Ον,Ηψ,,ΝΟ^Να': вычислено: 852,4; найдено: 8 52,3.

054ΗΒΐΝΟΐ6δί Точная масса: 1027,53

7а,9а-Эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-ацетоксидоцетаксель.

К раствору 7а,9а-эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2(2,5-диметоксибензоил)доцетакселя (85 мг, 0,086 ммоль), растворенному в пиридине (1 мл) в атмосфере азота, добавляли диметиламинопиридин (ОМАР) (16 мг, 0,13 ммоль) и ангидрид уксусной кислоты (0,025 мл, 0,26 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре и спустя 4 ч разбавляли этилацетатом (20 мл) и промывали один раз солевым раствором (25 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали на силикагеле тонкослойной хроматографией, используя 50% этилацетат в гексане в каче

- 10 012625 стве проявляющего растворителя. Полоску, содержащую желаемый продукт, соскребали и промывали на фильтре этилацетатом. Органические слои объединяли и концентрировали под вакуумом для получения 75 мг 7а,9а-эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-ацетоксидоцетакселя в виде твердого вещества белого цвета.

Ή ЯМР (СБС1з) δ 1,10 (м, 21Н), 1,22 (с, 6Н), 1,38 (с, 9Н), 1,67 (с, 3Н), 1,70 (с, 3Н), 1,73 (с, 3Н), 1,94 (с, 3Н), 2,07 (с, 3Н), 2,10 (с, 3Н), 2,31 (м, 3Н), 2,48 (м, 1Н), 3,78 (с, 3Н), 3,97 (с, 3Н), 3,98 (д, 1=6,0 Гц, 1Н),

4,24 (д, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,32 (д, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,45 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 4,77 (м, 2Н), 4,82 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 4,91 (с, 1Н), 4,93 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 5,36 (д, 1=8,4 Гц, 1Н), 5,68 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 5,70 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 5,89 (т, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,94 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,05 (дд, 1=3,2 9,2 Гц, 1Н), 7,29 (д, 1=3,2 Гц, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для С5₄Н₈1ЫО1₆§1Ма⁺: вычислено: 1050,5; найдено: 1050,5.

ΟΛδΗδιΝΟιβ Точная масса: 871,40

7а,9а-Эпокси-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-ацетоксидоцетаксель.

Раствор, содержащий 7а,9а-эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-ацетоксидоцетаксель (75 мг, 0,073 ммоль), растворенный в 1:1 смеси ацетонитрил: пиридин (3 мл), охлаждали до 0°С в ледяной бане. К нему добавляли фтороводородпиридин (0,5 мл) и раствор оставляли медленно нагреваться до комнатной температуры. Спустя 16 ч реакционную смесь разбавляли этилацетатом (25 мл) и гасили реакцию насыщенным раствором бикарбоната натрия (25 мл). Органический слой промывали один раз солевым раствором (30 мл) и затем сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный остаток очищали на силикагеле тонкослойной хроматографией, используя 70% этилацетат в гексане в качестве проявляющего растворителя. Полоску, содержащую желаемый продукт, соскребали и промывали на фильтре этилацетатом. Органические слои объединяли и концентрировали под вакуумом для получения 52 мг 7а,9а-эпокси-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-ацетоксидоцетакселя.

Ή ЯМР (СБС1з) δ 1,26 (с, 3Н), 1,28 (с, 3Н), 1,41 (с, 9Н), 1,74 (с, 6Н), 1,76 (с, 3Н), 1,99 (с, 3Н), 2,09 (с, 3Н), 2,11 (с, 3Н), 2,18 (м, 1Н), 2,27 (м, 1Н), 2,36 (м, 1Н), 2,49 (м, 1Н), 3,81 (с, 3Н), 3,91 (с, 1Н), 3,94 (с, 3Н), 4,02 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 4,28 (м, 2Н), 4,33 (д, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,80 (м, 2Н), 4,86 (д, 1=6,4 Гц, 1Н), 4,91 (с, 1Н), 5,00 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 5,29 (д, 1=8,4 Гц, 1Н), 5,67 (д, 1=6,4 Гц, 1Н), 5,71 (д, 1=6,4 Гц, 1Н), 6,01 (т, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,96 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,07 (дд, 1=3,2 9,2 Гц, 1Н), 7,28 (д, 1=3,2 Гц, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для С₄5Н₆1ЫО1₆Ма⁺: вычислено: 894,4; найдено: 894,5.

О

С_мН_в1МО_1Г3>

Точная масса: 1043,53

7а,9а-Эпокси-2'-(триизопропилсилилокси:)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-метоксикарбонилоксидоцетаксель.

Раствор 7а,9а-эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5диметоксибензоил)доцетакселя (28 мг, 0,029 ммоль), растворенный в безводном тетрагидрофуране (0,65 мл) в атмосфере азота, охлаждали до -40°С в бане с сухим льдом и ацетоном. В этот раствор добавляли 1,0М ЫНМЭЗ (0,04 мл, 0,039 ммоль) и оставляли перемешиваться в течение 15 мин. К нему добавляли метилхлорформат (0,003 мл, 0,036 ммоль) и проводили реакцию под наблюдением при температуре -40°С. Через 1 ч реакционную смесь разбавляли этилацетатом (15 мл) и экстрагировали водой (15 мл) с последующим промыванием органического слоя солевым раствором (15 мл). Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали на селикагеле тонкослойной хроматографией, используя 5% метанол в метиленхлориде в качестве проявляющего растворителя. Полоску, содержащую желаемый продукт, соскребали и промывали на фильтре

- 11 012625 этилацетатом. Органические слои объединяли и концентрировали под вакуумом для получения 9 мг 7а,9а-эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-метоксикарбонилоксидоцетакселя в виде твердого вещества белого цвета.

Ή ЯМР (СБС1з) δ 1,10 (м, 21Н), 1,22 (с, 3Н), 1,24 (с, 3Н), 1,39 (с, 9Н), 1,68 (с, 3Н), 1,71 (с, 3Н), 1,75 (с, 3Н), 1,96 (с, 3Н), 2,08 (с, 3Н), 2,30 (м, 3Н), 2,50 (м, 1Н), 3,78 (с, 3Н), 3,80 (с, 3Н), 3,98 (д, 1=6,0 Гц, 1Н),

3,99 (с, 3Н), 4,25 (д, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,34 (д, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,46 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 4,78 (м, 2Н), 4,91 (м, 3Н), 5,37 (д, 1=8,4 Гц, 1Н), 5,57 (д, 1=6,4 Гц, 1Н), 5,70 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 5,93 (т, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,95 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,06 (дд, 1=3,2 9,2 Гц, 1Н), 7,30 (д, 1=3,2 Гц, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для Οι,Η^ΝΟκδίΝα': вычислено: 1066,5; найдено: 1066,3.

О

СдэНвтЫОп

Точная масса 887,39

7а,9а-Эпокси-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-метоксикарбонилоксидоцетаксель.

Раствор, содержащий 7а,9а-эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-метоксикарбонилоксидоцетаксель (9 мг, 0,008 ммоль), растворенный в 1:1 смеси ацетонитрил: пиридин (1,2 мл), охлаждали до 0°С на ледяной бане. К нему добавляли фтороводородпиридин (0,15 мл) и оставляли раствор медленно нагреваться до комнатной температуры. Спустя 16 ч реакционную смесь разбавляли этилацетатом (15 мл) и гасили реакцию насыщенным раствором бикарбоната натрия (15 мл). Органический слой промывали один раз солевым раствором (15 мл) и затем сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный остаток очищали на силикагеле тонкослойной хроматографией, используя 60% этилацетат в гексане в качестве проявляющего растворителя.

Полоску, содержащую желаемый продукт, соскребали и промывали на фильтре этилацетатом. Органические слои объединяли и концентрировали под вакуумом для получения 4 мг 7а,9а-эпокси-3'дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-метоксикарбонилоксидоцетакселя.

Ή ЯМР (СБС1з) δ 1,25 (с, 3Н), 1,27 (с, 3Н), 1,40 (с, 9Н), 1,73 (с, 6Н), 1,76 (с, 3Н), 1,99 (с, 3Н), 2,07 (с, 3Н), 2,18 (м, 1Н), 2,25 (м, 1Н), 2,34 (м, 1Н), 2,48 (м, 1Н), 3,78 (с, 3Н), 3,80 (с, 3Н), 3,83 (с, 1Н), 3,93 (с, 3Н), 4,01 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 4,28 (м, 2Н), 4,31 (д, 1=7,6 Гц, 1Н), 4,80 (м, 2Н), 4,90 (с, 1Н), 4,94 (д, 1=7,6 Гц, 1Н), 4,97 (д, 1=9, 6 Гц, 1Н), 5,27 (д, 1=7,6 Гц, 1Н), 5,55 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 5,70 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 6,03 (т, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,95 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,06 (дд, 1=3,2, 9,2 Гц, 1Н), 7,28 (д, 1=3,2 Гц, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для ί’.^Η^ΝΟκΝα': вычислено: 910,4; найдено: 910,4.

О

Точная масса: 1056,58

7а,9а-Эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-димеатоксибензоил)-10-диметиламинокарбонилоксидоцетаксель.

Раствор 7а,9а-эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5диметоксибензоил)доцетаксель (28 мг, 0,029 ммоль), растворенный в безводном тетрагидрофуране (0,65 мл) в атмосфере азота, охлаждали до -40°С в бане с сухим льдом и ацетоном. В этот раствор добавляли 1,0М Ь1НМО§ (0,04 мл, 0,039 ммоль) и оставляли перемешиваться в течение 15 мин. К нему добавляли диметилкарбамилхлорид (0,003 мл, 0,031 ммоль) и проводили реакцию под наблюдением при температуре -40°С. Через 1 ч реакционную смесь разбавляли этилацетатом (15 мл) и экстрагировали водой (15 мл) с последующим промыванием органического слоя солевым раствором (15 мл). Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали на селикагеле тонкослойной хроматографией, используя 5% метанол в метиленхлориде в качестве проявляющего растворителя. Полоску, содержащую желаемый продукт, соскребали и промывали на фильтре

- 12 012625 этилацетатом. Органические слои объединяли и концентрировали под вакуумом для получения 20 мг 7а,9а-эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-диметиламинокарбонилоксидоцетакселя в виде твердого вещества белого цвета.

Ίΐ ЯМР (СОС1₃) δ 1,10 (м, 21Н), 1,23 (с, 6Н), 1,39 (с, 9Н), 1,68 (с, 3Н), 1,71 (с, 3Н), 1,73 (с, 3Н), 1,98 (с, 3Н), 2,09 (с, 3Н), 2,31 (м, 3Н), 2,49 (м, 1Н), 2,93 (с, 6Н), 3,80 (с, 3Н), 3,98 (с, 3Н), 3,96 (д, 1=6,0 Гц, 1Н),

4,25 (д, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,33 (д, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,46 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 4,77 (м, 2Н), 4,88 (д, 1=6,4 Гц, 1Н), 4,92 (м, 2Н), 5,36 (д, 1=8,4 Гц, 1Н), 5,68 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 5,71 (д, 1=6,4 Гц, 1Н), 5,93 (т, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,95 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,05 (дд, 1=3,2, 9,2 Гц, 1Н), 7,30 (д, 1=3,2 Гц, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для ί%Η₈.·|Ν₂Ο|₆δίΝ;·ι': вычислено: 1079,6; найдено: 1079,5.

О

Точная масса: 900,43

7а,9а-Эпокси-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-диметиламинокарбонилоксидоцетаксель.

Раствор, содержащий 7а,9а-эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-диметиламинокарбонилоксидоцетаксель (20 мг, 0,016 ммоль), растворенный в 1:1 смеси ацетонитрил:пиридин (1,2 мл), охлаждали до 0°С на ледяной бане. К нему добавляли фтороводородпиридин (0,25 мл) и оставляли раствор медленно нагреваться до комнатной температуры. Спустя 16 ч реакционную смесь разбавляли этилацетатом (15 мл) и гасили реакцию насыщенным раствором бикарбоната натрия (15 мл). Органический слой промывали один раз солевым раствором (15 мл) и затем сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный остаток очищали на силикагеле тонкослойной хроматографией, используя 70% этилацетат в гексане в качестве проявляющего растворителя. Полоску, содержащую желаемый продукт, соскребали и промывали на фильтре этилацетатом. Органические слои объединяли и концентрировали под вакуумом для получения 12 мг 7а,9а-эпокси-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-диметиламинокарбонилоксидоцетакселя.

Ίΐ ЯМР (СОС1₃) δ 1,24 (с, 3Н), 1,26 (с, 3Н), 1,40 (с, 9Н), 1,73 (с, 6Н), 1,74 (с, 3Н), 2,00 (с, 3Н), 2,07 (с, 3Н), 2,17 (м, 1Н), 2,25 (м, 1Н), 2,36 (м, 1Н), 2,48 (м, 1Н), 2,93 (с, 3Н), 2,94 (с, 3Н), 3,79 (с, 3Н), 3,86 (с, 1Н), 3,92 (с, 3Н), 4,02 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 4,28 (м, 2Н), 4,31 (д, 1=7,6 Гц, 1Н), 4,80 (м, 2Н), 4,89 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 4,90 (с, 1Н), 4,97 (д, 1=9,6 Гц, 1Н), 5,28 (д, 1=8,4 Гц, 1Н), 5,67 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 5,70 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 6,02 (т, 1=8,4 Гц, 1Н), 6,94 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,05 (дд, 1=3,2, 9,2 Гц, 1Н), 7,29 (д, 1=3,2 Гц, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для С₄бН₆₄М₂О1₆Ма⁺: вычислено: 923,4; найдено: 923,4.

3'-(2-Фурил) ряд

- 13 012625

ΟβοΗ^ΝΟυ&ί

Точная масса: 1169,58

10-Ацетокси-7-(триэтилсилил)-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель.

Смесь (3Я,48)-1-трет-бутоксикарбонил-3-триизопропилсилилокси-4-(2-фурил)азетидин-2-он (1,27 г, 3,11 ммоль) и 7-(триэтилсилил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)баккатин III (1,9 г, 2,5 ммоль) растворяли в безводном ТГФ (20 мл). Смесь охлаждали до -40°С и по каплям добавляли 1,0М ЫНМОБ (3,5 мл, 3,5 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при температуре от -40 до -20°С в течение 1 ч, после чего реакцию завершали. Реакцию гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония и проводили экстракцию этилацетатом (100 млх2). Объединенные органические слои промывали водой (30 млх1), сушили над сульфатом магния и концентрировали под вакуумом. Неочищенный остаток очищали на колонке с силикагелем, используя в качестве элюента 30% этилацетат в гексане, получая 10-ацетокси-7-(триэтилсилил)-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5диметоксибензоил)доцетаксель в виде твердого вещества белого цвета (2,88 г, 98%).

¹Н ЯМР (СОС1₃) δ 0,53 (м, 6Н), 0,89 (м, 30Н), 1,18 (с, 6Н), 1,36 (с, 9Н), 1,69 (с, 3Н), 1,85 (м, 1Н), 1,96 (с, 3Н), 2,11 (с, 3Н), 2,25 (с, 3Н), 2,35 (м, 2Н), 2,46 (м, 1Н), 3,33 (с, 1Н), 3,71 (с, 3Н), 3,72 (д, 1=6,8 Гц, 1Н),

3,87 (с, 3Н), 4,22 (д, 1=8,0 Гц, 1Н), 4,40 (м, 2Н), 4,84 (д, 1=8,0 Гц, 1Н), 4,89 (д, 1=1,2 Гц, 1Н), 5,24 (м, 2Н),

5,61 (д, 1=6,8 Гц, 1Н), 6,12 (т, 1=8,4 Гц, 1Н), 6,18 (д, 1=3,2 Гц, 1Н), 6,27 (дд, 1=3,2, 2,0 Гц, 1Н), 6,41 (с, 1Н),

6,88 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,97 (дд, 1=9,2, 3,2 Гц, 1Н), 7,20 (д, 1=3,2 Гц, 1Н), 7,28 (ушир.с, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для С₆₀Н₉^О1₈81₂№⁺: вычислено: 1192,6; найдено: 1192,3.

10-Ацетокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель.

10-Ацетокси-7-(триэтилсилил)-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель (670 мг, 0,57 ммоль) растворяли в этаноле (2,5 мл). Раствор 5% соляной кислоты в этаноле (5,0 мл) добавляли по каплям. Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 5 ч, затем реакцию завершали. Реакцию гасили насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, а продукт экстрагировали этилацетатом (75 млх2). Объединенные слои этилацетата промывали водой (25 млх 1) и солевым раствором (25 млх 1), сушили над сульфатом магния и концентрировали под вакуумом. Неочищенный 10-ацетокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель использовали без очистки.

'Н ЯМР (ϋϋα₃) δ 0,92 (м, 21Н), 1,12 (с, 3Н), 1,25 (с, 3Н), 1,39 (с, 9Н), 1,70 (с, 3Н), 1,85 (м, 4Н), 2,19 (с, 3Н), 2,27 (с, 3Н), 2,37 (м, 2Н), 2,51 (м, 1Н), 3,33 (с, 1Н), 3,74 (м, 4Н), 3,89 (с, 3Н), 4,26 (д, 1=8,4 Гц, 1Н),

4,38 (м, 2Н), 4,90 (м, 2Н), 5,24 (м, 2Н), 5,62 (д, 1=6,8 Гц, 1Н), 6,19 (м, 2Н), 6,30 (м, 2Н), 6,88 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,00 (дд, 1=9,2 3,2 Гц, 1Н), 7,21 (д, 1=3,2 Гц, 1Н), 7,30 (ушир.с, 1Н).

МУЛЛ Г' ГТ ХТО С1Л.Т^⁺. 1£ПО С. 1 то о т/ζ ЖХ/МС для С54Н77NО18δ^Nа⁺: вычислено: 1078,5; найдено: 1078,3.

^н0. Р он

2'-(Триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель.

10-Ацетокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель (605 мг, 0,573 ммоль) растворяли в этаноле (12,0 мл). Моногидрат гидразина (5,0

- 14 012625 мл) добавляли по каплям в течение 5 мин, затем реакцию завершали. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и гасили реакцию насыщенным водным раствором хлорида аммония. Продукт экстрагировали этилацетатом (75 млх2), промывали водой (25 млх1) и солевым раствором (25 млх1), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Неочищенный остаток очищали на колонке с силикагелем, используя 40% этилацетат в гексане в качестве элюента, получая 2'(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель в виде твердого вещества белого цвета (507,6 мг, 87%, два этапа).

¹Н ЯМР (ΟΌΟ1₃) δ 0,95 (м, 21Н), 1,11 (с, 3Н), 1,24 (с, 3Н), 1,40 (с, 9Н), 1,79 (с, 3Н), 1,86 (м, 1Н), 1,91 (с, 3Н), 2,29 (с, 3Н), 2,36 (м, 2Н), 2,57 (м, 1Н), 3,29 (ушир.с, 1Н), 3,76 (с, 3Н), 3,88 (д, 1=6,8 Гц, 1Н), 3,92 (с, 3Н), 4,19 (м, 2Н), 4,43 (д, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,45 (д, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,91 (м, 2Н), 5,24 (м, 3Н), 5,65 (д, 1=6,8 Гц, 1Н), 6,21 (м, 2Н), 6,31 (дд, 1=3,2, 1,6 Гц, 1Н), 6,90 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,02 (дд, 1=9,2, 3,2 Гц, 1Н), 7,23 (д, 1=3,2 Гц, 1Н), 7,30 (ушир.с, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для ΓνΗ-^ΝΟι-δίΝα': вычислено: 1036,5; найдено: 1036,3.

С5зН74РзМО₁₉63! МеО-^/=^<

Точная масса; 1145,43

7-(Трифторметансульфонилокси)-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель.

2'-(Триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель (1,7 г, 1,68 ммоль) разбавляли в метиленхлориде (10,0 мл) и охлаждали до -30°С. Добавляли пиридин (0,68 мл, 8,4 ммоль) с последующим добавлением ангидрида трифторметансульфокислоты (0,57 мл, 3,4 ммоль) в метиленхлориде (0,5 мл) при этом реакционный раствор принимал желтую окраску. Реакционную смесь оставляли медленно нагреваться до 0°С в течение 1 ч, после чего реакцию завершали. Продукт экстрагировали этилацетатом (150 млх1), промывали водой (50 млх1) и солевым раствором (50 млх1), сушили над сульфатом магния и концентрировали под вакуумом. Неочищенный остаток очищали на колонке с силикагелем, используя 25% этилацетат в гексане в качестве элюента, получая 7(трифторметансульфонилокси)-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5диметоксибензоил)доцетаксель в виде твердого вещества белого цвета (1,44 г, 75%).

Ή ЯМР (СОС1₃) δ 0,94 (м, 21Н), 1,09 (с, 3Н), 1,22 (с, 3Н), 1,39 (с, 9Н) 1,92 (м, 6Н), 2,30 (м, 5Н), 2,40 (м, 1Н), 2,79 (м, 1Н), 3,44 (с, 1Н), 3,74 (с, 3Н), 3,91 (с, 3Н), 3,95 (д, 1=6,4 Гц, 1Н), 4,01 (д, 1=1,6 Гц, 1Н), 4,30 (д, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,42 (д, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,89 (м, 2Н), 5,24 (м, 2Н), 5,36 (м, 2Н), 5,64 (д, 1=6,4 Гц, 1Н), 6,21 (м, 2Н), 6,30 (дд, 1=3,2, 1,6 Гц, 1Н), 6,90 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,02 (дд, 1=9,2, 3,2 Гц, 1Н), 7,19 (д, 1=3,2 Гц, 1Н), 7,30 (ушир.с, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для С₅₃Н₇₄Р^О19881№⁺: вычислено: 1168,4; найдено: 1168,4.

С5зН7гРзМО1₉8& Точная масса; 1143,41 ^“~ОМе

7-(Трифторметансульфонилокси)-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-10-оксо-2дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель.

В перемешанный раствор 7-(трифторметансульфонилокси)-2'-(триизопропилсилилокси)-3'дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетакселя (1,44 г, 1,26 ммоль) в метиленхлориде (30 мл) добавляли 4-метилморфолин-Жоксид (ΝΜΟ) (590 мг, 5 ммоль) с последующим добавлением перрутената тетрапропиламмония (ТРАР) (62 мг, 0,18 ммоль). Полученную смесь оставляли перемешиваться под наблюдением при комнатной температуре. Спустя 8 ч реакционную смесь фильтровали через целит и слой целита промывали метиленхлоридом. Объединенный супернатант концентрировали под вакуумом и полученный остаток очищали на колонке с силикагелем, используя 10% этилацетат в гексане. Фракции, содержащие продукт, собирали и концентрировали для получения 619 мг 7(трифторметансульфонилокси)-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-10-оксо-2-дебензо

- 15 012625 ил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетакселя в виде твердого вещества.

¹Н ЯМР (СПС1₃) δ 0,91 (м, 21Н), 1,15 (с, 3Н), 1,25 (с, 3Н), 1,37 (с, 9Н), 1,89 (с, 6Н), 2,14 (м, 1Н), 2,27 (с, 3Н), 2,32 (м, 1Н) 2,51, (м, 1Н), 2,79 (м, 1Н), 3,67 (д, 1=6,4 Гц, 1Н), 3,73 (с, 3Н), 3,85 (с, 1Н), 3,91 (с, 3Н), 4,38 (д, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,40 (д, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,81 (д, 1=8,8 Гц, 1Н), 4,89 (д, 1=1,2 Гц, 1Н), 5,17 (м, 1Н), 5,24 (м, 2Н), 5,72 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 6,14 (т, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,20 (д, 1=3,2 Гц, 1Н), 6,28 (д, 1=3,2, 1,6 Гц, 1Н), 6,90 (Ц, 1-9,2 Гц, 1Н), 7,01 (дд, 1=9,2, 3,2 Гц, 1Н), 7,15 (д, 1=3,2 Гц, 1Н), 7,29 (ушир.с, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для С₅₃,Н-₂Е₃,ЛО|<^|№1': вычислено: 1166,4; найдено: 1166,1.

7а,9а-Эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель и 7а,10а-эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель.

Боргидрид натрия (102 мг, 2,7 ммоль) добавляли в 7-(трифторметансульфонилокси)-2'(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-10-оксо-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетакселя (618 мг, 0,54 ммоль), растворенный в этаноле (7,0 мл). После 5 мин реакцию завершали, а реакционную смесь разбавляли этилацетатом. Продукт экстрагировали этилацетатом (100 млх1), промывали насыщенным водным раствором хлоридом натрия (50 млх1), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Неочищенный остаток очищали на колонке с силикагелем, используя 50% этилацетат в гексане в качестве элюента, получая 7а,9а-эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель (258 мг, 48%) и 7а,10а-эпокси2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель (231 мг, 43%).

7а,9а-Эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель.

¹Н ЯМР (СИС1₃) δ 0,92 (м, 21Н), 1,08 (с, 3Н), 1,23 (с, 3Н), 1,41 (с, 9Н), 1,77 (с, 3Н), 1,99 (с, 3Н), 2,15 (с, 3Н), 2,33 (м, 4Н), 2,56 (д, 1=6,8 Гц, 1Н), 3,55 (с, 1Н), 3,76 (с, 3Н), 3,93 (с, 3Н), 4,01 (д, 1=6,0 Гц, 1Н),

4,25 (д, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,32 (д, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,77 (м, 3Н), 4,92 (ушир.с, 1Н), 4,95 (ушир.с, 1Н), 5,7 (м, 2Н), 5,64 (д, 1=6,4 Гц, 1Н), 6,06 (т, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,20 (д, 1=2,8 Гц, 1Н), 6,29 (дд, 1=3,2, 2,0 Гц, 1Н), 6,90 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,00 (дд, 1=9,2, 3,2 Гц, 1Н), 7,23 (д, 1=3,2 Гц, 1Н), 7,31 (с, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для С₅₂Н₇₅ЛО1^1Ла⁺: вычислено: 1020,5; найдено: 1020,4.

7а,10а-Эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель.

¹Н ЯМР (СИС1₃) δ 0,95 (м, 21Н), 1,15 (с, 3Н), 1,31 (с, 3Н), 1,39 (с, 9Н), 1,83 (м, 6Н), 2,11 (с, 3Н), 2,202,36 (м, 4Н), 3,62 (м, 2Н), 3,75 (с, 3Н), 3,89 (с, 3Н), 4,40 (м, 3Н), 4,78 (ушир.с, 1Н), 4,92 (ушир.с, 1Н), 5,06 (д, 1=4,0 Гц, 1Н), 5,25 (м, 2Н), 5,36 (ц, 1=6,0 Гц, 1Н), 6,18 (м, 2Н), 6,27 (дд, 1=2,8, 1,6 Гц, 1Н), 6,88 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,99 (дд, 1=9,2, 3,2 Гц, 1Н), 7,22 (д, 1=3,2 Гц, 1Н), 7,29 (ушир.с, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для С₅₂Н₇₃ЛО1^1Ла⁺: вычислено: 1018,5; найдено: 1018,4.

043Η53ΝΟ-Ι6 Точная масса: 339,34

7а,10а-Эпокси-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель. 7а,10а-Эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель (49,1 мг, 0,049 ммоль) растворяли в смеси пиридин-ацетонитрил (1/1, 2,0 мл) и охлаждали до 0°С. Добавляли НГ/пиридин (70:30, 0,5 мл) и реакционную смесь оставляли медленно нагреваться до комнатной температуры в течение ночи. Реакцию гасили насыщенным водным раствором

- 16 012625 бикарбоната натрия и разбавляли этилацетатом. Слой этилацетата промывали дополнительным насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (15 млх2) и затем промывали объединенные водные слои этилацетатом (40 млх2). Объединенные слои этилацетата промывали водой (15 млх2), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Неочищенный остаток очищали на силикагеле, используя 50% этилацетат в гексане в качестве элюента, получая 7а,10а-эпокси-3'-дефенил-3'(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель (33,5 мг, 81%).

Ή ЯМР (СБС1₃) δ 1,16 (с, 3Н), 1,30 (с, 3Н), 1,40 (с, 9Н), 1,79 (с, 3Н), 1,87 (с, 3Н), 2,03 (с, 3Н), 2,06 (м, 1Н), 2,34 (м, 3Н), 3,58 (с, 1Н), 3,66 (дд, 1=7,2, 2,8 Гц, 1Н), 3,78 (с, 3Н), 3,88 (с, 3Н), 3,93 (д, 1=4,0 Гц,

1Н), 4,34 (м, 2Н), 4,49 (д, 1=7,6 Гц, 1Н), 4,67 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 4,81 (ушир.с, 1Н), 5,04 (д, 1=2, 0 Гц, 1Н), 5,34 (м, 3Н), 6,18 (ушир.с, 1Н), 6,26 (д, 1=3,2 Гц, 1Н), 6,31 (дд, 1=3,2, 2,0 Гц, 1Н), 6,92 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,03 (дд, 1=9,2, 3,2 Гц, 1Н), 7,24 (д, 1=3,2 Гц, 1Н), 7,34 (д, 1=1,2 Гц, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для Ο_|3Η₅₃Ν0₁₆Να': вычислено: 862,3; найдено: 862,3.

С₄₃Н₅5^О₁₆ ΜβΟ^/^Ζ

Точная масса-841,35

7а,9а-Эпокси-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель. 7а,9а-эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель растворяли в смеси пиридин-ацетонитрил (1/1, 1,5 мл) и охлаждали до 0°С. Добавляли НЕ/пиридин (70:30, 0,2 мл) и реакционную смесь оставляли медленно нагреваться до комнатной температуры в течение ночи. Реакцию гасили насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и разбавляли этилацетатом. Слой этилацетата промывали дополнительным насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (10 млх 2). Объединенные водные слои промывали этилацетатом (20 млх 2). Затем объединенные слои этилацетата промывали водой (10 млх 2), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Неочищенный остаток очищали на силикагеле, используя 75% этилацетат в гексане в качестве элюента, получая 7а,9а-эпокси-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5диметоксибензоил)доцетаксель в виде твердого вещества белого цвета (10,26 мг, 70%).

Ή ЯМР (СПС1₃) δ 1,09 (с, 3Н), 1,23 (с, 3Н), 1,40 (с, 9Н), 1,77 (с, 3Н), 1,95 (с, 3Н), 2,07 (с, 3Н), 2,21 (м, 2Н), 2,37 (м, 2Н), 2,50 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 5,51 (с, 1Н), 3,71 (д, 1=4,0 Гц, 1Н), 3,77 (с, 3Н), 3,91 (с, 3Н), 4,02 (д, 1=6,4 Гц, 1Н), 4,26 (д, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,29 (д, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,68 (д, 1=2,8 Гц, 1Н), 4,78 (м, 3Н), 4,88 (ушир.с, 1Н), 5,32 (м, 2Н), 5,63 (д, 1=6,4 Гц, 1Н), 6,01 (т, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,27 (д, 1=3,2 Гц, 1Н), 6,31 (дд, 1=3,2, 2,0 Гц, 1Н), 6,92 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,20 (дд, 1=9,2, 3,2 Гц, 1Н), 7,24 (д, 1=3,2 Гц, 1Н), 7,34 (д, 1=0,8 Гц, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для Ο_|3Η₅₅Ν0₁₆Να': вычислено: 864,5; найдено: 864,3.

054Ητ7ΝΟ·|7δϊ

Точная масса: 1039,50 ч^^'-'-ОМе

7а,9а-Эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-ацетоксидоцетаксель.

Уксусный ангидрид (8,1 мкл, 0,858 ммоль) и ΌΜΆΡ (5 мг, 0,043 ммоль) добавляли в раствор 7α,9αэпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель (28,5 мг, 0,0286 ммоль) в пиридине (0,5 мл). Реакцию завершали после перемешивания при комнатной температуре в течение 3 ч. Продукт экстрагировали этилацетатом (30 млх1), промывали водой (15 млх1) и солевым раствором (15 млх1), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Неочищенный остаток очищали на силикагеле, используя 50% этилацетат в гексане в качестве элюента, получая 7а,9а-эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил2-(2,5-диметоксибензоил)-10-ацетоксидоцетаксель в виде твердого вещества белого цвета (25 мг, 85%).

Ή ЯМР (СПС1₃) δ 0,95 (м, 21Н), 1,26 (м, 6Н), 1,44 (с, 9Н), 1,76 (с, 3Н), 1,99 (с, 3Н), 2,13 (с, 3Н), 2,18 (с, 3Н), 2,40 (м, 4Н), 3,66 (с, 1Н), 3,80 (с, 3Н), 3,97 (с, 3Н), 4,02 (д, 1=6,4 Гц, 1Н), 4,27 (д, 1=7,2 Гц, 1Н),

- 17 012625

4,35 (д, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,82 (дд, 1=8,4, 6,0 Гц, 1Н), 4,86 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 4,95 (ушир.с, 1Н), 5,01 (с, 1Н), 5,31 (с, 2Н), 5,72 (м, 2Н), 6,01 (т, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,24 (д, 1=3,2 Гц, 1Н), 6,32 (дд, 1=3,2, 1,6 Гц, 1Н), 6,94 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,05 (дд, 1=9,2, 3,2 Гц, 1Н), 7,27 (д, 1=3,2 Гц, 1Н), 7,34 (д, 1=0,8 Гц, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для ί.\·|Η-ΝΟ|-8ίΝ;·ι': вычислено: 1062,5; найдено: 1062,5.

\=О

04δΗ57Ν0₁₇ МеО^Ч

Точная масса: 883,36

7а,9а-Эпокси-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-димеаюксибензоил)-10-ацетоксидоцетаксель.

7а,9а-Эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-ацетоксидоцетаксель (25 мг, 0,025 ммоль) растворяли в смеси пиридин-ацетонитрил (1/1, 1,5 мл) и охлаждали до 0°С. Добавляли ΗΡ/пиридин (70:30, 0,25 мл) и оставляли реакционную смесь медленно нагреваться до комнатной температуры в течение ночи. Реакцию гасили насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и растворяли этилацетатом. Слой этилацетата промывали дополнительным насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (10 млх2). Объединенные водные слои промывали этилацетатом (25 млх2). Объединенные слои этилацетата затем промывали водой (10 млх2), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Неочищенный остаток очищали на силикагеле, используя 80% этилацетата в гексане в качестве элюента, получая конечный продукт, 7α,9αэпокси-3-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-ацетоксидоцетаксель (17,2 мг, 78%).

Ή ЯМР (СОС1₃) δ 1,24 (с, 6Н), 1,41 (с, 9Н), 1,74 (с, 3Н), 1,94 (с, 3Н), 2,10 (с, 6Н), 2,27 (м, 2Н), 2,33 (м, 1Н), 2,46 (м, 1Н), 3,62 (с, 1Н), 3,79 (с, 4Н), 3,93 (с, 3Н), 4,01 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 4,26 (д, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,30 (д, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,72 (д, 1=3,6 Гц, 1Н), 4,80 (дд, 1=5,6, 8,8 Гц, 1Н), 4,85 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 4,89 (ушир.с, 1Н), 5,34 (м, 2Н), 5,65 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 5,70 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 6,02 (т, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,29 (д, 1=3,2 Гц, 1Н), 6,33 (м, 1Н), 6,94 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,05 (дд, 1=9,2, 3,2 Гц, 1Н), 7,26 (д, 1=3,2 Гц, 1Н), 7,36 (д, 1=1,2 Гц, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для ί’.^Η-ΝΟκΝα': вычислено: 906,4; найдено: 906,4.

3'-Изобутенильный ряд с 88 связующими группами

Нижеприведенные промежуточные вещества описаны выше.

7-(Трифторметансульфонилокси)-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель.

7-(Трифторметансульфонилокси)-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-10-оксо2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель.

7а,9а-Эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель.

- 18 012625

Ο^ΗβτΝΟ-ιβδϊ^·

Точная масса: 1133,52

7а,9а-Эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-(4-метилдитиобутаноил)доцетаксель.

В раствор 7а,9а-эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2(2,5-диметоксибензоил)доцетаксель (28 мг, 0,029 ммоль), растворенный в метиленхлориде (1,5 мл) в атмосфере азота, добавляли ΌΜΆΡ (3,5 мг, 0,028 ммоль) и 4-метилдитиобутановую кислоту (50 мг, 0,28 ммоль). В эту смесь добавляли диизопропилкарбодиимид (0,045 мл, 0,28 ммоль) и полученную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи. Затем реакцию гасили хлоридом аммония (15 мл) и проводили экстракцию метиленхлоридом (20 мл). Затем органический слой промывали солевым раствором (15 мл), сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали на силикагеле тонкослойной хроматографией, используя 40% этилацетат в гексане в качестве проявляющего раствора. Полоску, содержащую желаемый продукт, соскребали и промывали на фильтре этилацетатом. Органические слои объединяли и концентрировали под вакуумом для получения 23 мг 7а,9а-эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-(4-метилдитиобутаноил)доцетакселя в виде твердого вещества белого цвета.

Ή ЯМР (СБС1₃) δ 1,10 (м, 21Н), 1,21 (с, 3Н), 1,23 (с, 3Н), 1,39 (с, 9Н), 1,68 (с, 3Н), 1,71 (с, 3Н), 1,74 (с, 3Н), 1,95 (с, 3Н), 2,06 (дт, 1=2,0, 7,2 Гц, 2Н), 2,08 (с, 3Н), 2,31 (м, 3Н), 2,40 (с, 3Н), 2,49 (м, 3Н), 2,74 (дт, 1=2,0, 7,2 Гц, 2Н), 3,80 (с, 3Н), 3,98 (с, 4Н), 4,25 (д, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,33 (д, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,46 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 4,77 (м, 2Н), 4,84 (д, 1=6,4 Гц, 1Н), 4,92 (с, 1Н), 4,92 (д, 1=7,2 Гц, 1Н), 5,36 (д, 1=8,4 Гц, 1Н), 5,71 (перекрывающийся д, 1=6,4 Гц, 2Н), 5,90 (т, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,95 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,06 (дд, 1=3,2, 9,2 Гц, 1Н), 7,30 (д, 1=3,2 Гц, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для С57Н₈₇МО1₆8₂81Ма⁺: вычислено: 1156,5; найдено: 1156,2.

С4₈Н₆7МО1вЗг

Точная масса: 977,39

7а,9а-Эпокси-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-(4-метилдитиобутаноил)доцетаксель.

Раствор, содержащий 7а,9а-эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-(4-метилдитиобутаноил)доцетаксель (23 мг, 0,02 ммоль), растворенный в 1:1 смеси ацетонитрил:пиридин (1,6 мл), охлаждали до 0°С на ледяной бане. К нему добавляли фтороводородпиридин (0,25 мл) и оставляли раствор медленно нагреваться до комнатной температуры. Спустя 16 ч реакционную смесь разбавляли этилацетатом (15 мл) и гасили реакцию насыщенным раствором бикарбоната натрия (15 мл). Органический слой промывали один раз солевым раствором (15 мл) и затем сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный остаток очищали на силикагеле тонкослойной хроматографией, используя 65% этилацетат в гексане в качестве проявляющего растворителя. Полоску, содержащую желаемый продукт, соскребали и промывали на фильтре этилацетатом. Органические слои объединяли и концентрировали под вакуумом для получения 16 мг 7а,9а-эпокси-3'-дефенил-3'-(изобутенил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10(4-метилдитиобутаноил)доцетакселя.

'11 ЯМР (СБС1з) δ 1,25 (с, 3Н), 1,29 (с, 3Н), 1,40 (с, 9Н), 1,73 (с, 6Н), 1,74 (с, 3Н), 1,97 (с, 3Н), 2,04 (м, 2Н), 2,07 (с, 3Н), 2,17 (м, 1Н), 2,25 (м, 1Н), 2,33 (м, 1Н), 2,39 (с, 3Н), 2,51 (м, 1Н), 2,73 (т, 1=7,2 Гц, 1Н), 3,79 (с, 3Н), 3,83 (с, 1Н), 3,93 (с, 3Н), 4,00 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 4,26 (м, 2Н), 4,31 (д, 1=7,6 Гц, 1Н), 4,78 (м, 2Н), 4,84 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 4,90 (с, 1Н), 4,96 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 5,27 (д, 1=8,4 Гц, 1Н), 5,68 (д, 1=6,4 Гц,

- 19 012625

1Н), 5,70 (д, 1=6, 0 Гц, 1Н), 6,00 (т, 1=8,4 Гц, 1Н), 6,94 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,05 (дд, 1=3,2, 9,2 Гц, 1Н), 7,28 (д, 1=3,2 Гц, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для С₁₈Н₆^О₁₆8₂№1': вычислено: 1000,4; найдено: 1000,2. 3'-2-Фурильный ряд с 88 связующими группами

7а,9а-Эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-(4-метилдитиобутаноил)доцетаксель.

ИМАР (4,6 мг, 0,037 4 ммоль), 4-метилдитиобутановую кислоту (62 мг, 0,374 ммоль) и Э1С (58,5 мкл, 0,0374 ммоль) добавляли в раствор 7а,9а-эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)доцетакселя (37,3 мг, 0,0374 ммоль) в метиленхлориде (0,5 мл). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи, затем реакцию завершали и гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония. Продукты экстрагиро вали этилацетатом (25 млх2), промывали водой (15 млх1), сушили над сульфатом магния и концентрировали под вакуумом. Неочищенный остаток очищали на силикагеле, используя 50% этилацетат в гексане в качестве элюента, получая 7а,9а-эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-(4-метилдитиобутаноил)доцетаксель (48,2 мг, 100+%).

Ή ЯМР (СОС1₃) δ 0,92 (м, 21Н), 1,24 (м, 6Н), 1,41 (с, 9Н), 1,73 (с, 3Н), 1,95 (с, 3Н), 2,05 (м, 2Н), 2,15 (с, 3Н), 2,32 (м, 3Н), 2,38 (с, 3Н), 2,44-2,56 (м, 3Н), 2,72 (м, 2Н), 3,65 (с, 1Н), 3,77 (с, 3Н), 3,94 (с, 3Н), 3,98 (м, 1Н), 4,26 (м, 2Н), 4,77 (дд, 1=8,4, 6,0 Гц, 1Н), 4,83 (д, 1=6,4 Гц, 1Н), 4,92 (ушир.с, 1Н), 4,97 (с, 1Н), 5,28 (с, 2Н) 5,68 (м, 2Н), 5,98 (т, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,20 (д, 1=3,2 Гц, 1Н), 6,29 (дд, 1=3,2, 2,0 Гц, 1Н), 6,90 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,01 (дд, 1=9,2, 3,2 Гц, 1Н), 7,24 (д, 1=3,2 Гц, 1Н), 7,31 (д, 1=1,2 Гц, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для С57Н₈₃ЫО178₂81Ма⁺: вычислено: 1168,5; найдено: 1168,4.

Точная масса: 98ί

7а,9а-Эпокси-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-(4-метилдитио- 20 012625 бутаноил)доцетаксель. 7а,9а-Эпокси-2'-(триизопропилсилилокси)-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-(4-метилдитиобутаноил)доцетаксель (42,8 мг, 0,0374 ммоль) растворяли в смеси пиридинацетонитрил (1/1, 3,0 мл) и охлаждали до 0°С. Добавляли НР/пиридин (70:30, 0,5 мл) и реакционную смесь оставляли медленно нагреваться до комнатной температуры в течение ночи. Реакцию гасили насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и разбавляли этилацетатом. Слой этилацетата промывали дополнительным насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (15 млх2) и затем объединенные водные слои промывали этилацетатом (40 млх2). Объединенные слои этилацетата промывали водой (15 млх2), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Неочищенный остаток очищали на силикагеле, используя 50% этилацетат в гексане в качестве элюента, получая 7а,9а-эпокси-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-(4-метилдитиобутаноил)доцетаксель (22,9 мг, 62%, 2 этапа).

^!Н ЯМР (СОС1₃) δ 1,24 (м, 6Н), 1,41 (с, 9Н), 1,74 (с, 3Н), 1,93 (с, 3Н), 2,04 (м, 2Н), 2,09 (с, 3Н), 2,24 (м, 2Н), 2,33 (м, 1Н), 2,37 (с, 3Н), 2,42-2,56 (м, 3Н), 2,72 (т, 1=6,8 Гц, 2Н), 3,62 (с, 1Н), 3,75 (д, 1=8,4 Гц, 1Н), 3,78 (с, 3Н), 3,93 (с, 3Н), 3,99 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 4,26 (д, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,30 (д, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,70 (д, 1=3,6 Гц, 1Н), 4,77 (дд, 1=8,8, 5,6 Гц, 1Н), 4,83 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 4,88 (ушир.с, 1Н), 5,33 (ушир.с, 2Н), 5,67 (м, 2Н), 6,01 (т, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,28 (д, 1=3,2 Гц, 1Н), 6,32 (дд, 1=3,2, 2,0 Гц, 1Н), 6,92 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,03 (дд, 1=9,2, 3,2 Гц, 1Н), 7,25 (д, 1=3,2 Гц, 1Н), 7,35 (м, 1Н).

т/ζ ЖХ/МС для Ο|₈Η₆₃,Ν0|-δ₂Ν;ί: вычислено: 1012,3; найдено: 1012,3.

Активность соединений настоящего изобретения определяли, следуя процедуре, описанной у Кюи, Ναιιάίη апб Бауе11е ίη Вюс11ет1са1 апб Вюрйущса! Кекеагсй Соттишсабопк; νο1.187, № 1, 1992, рр. 164170.

ют#

А549 МСЕ7

Таксоид не дисульфиды

(6Т-11-031

КЭТ-11-032 » ЮТ-15-006

ЮТ-15-013

ЮТ-15-014 о ЮТ-18-067

ЮТ-18-053

ЮТ-18-063

0,043 0,043

0,014 0,014

0,03 0,014

0,039 0,017

0,03 0,024

0,13 0,041

0,03 0,04

0,35 0,021

- 21 012625

Конъюгаты таксанов изобретения и клеточного связующего агента могут быть образованы при помощи любого из способов, которые известны в настоящее время или будут разработаны в будущем. Многочисленные способы конъюгации раскрыты в патентах США №№ 5416064 и 5475092. Сложный эфир таксана может быть модифицирован для получения свободной аминогруппы и затем связан с антителом или другим клеточным связующим агентом при помощи связующей группы, не устойчивой в кислой среде, или светонеустойчивой связующей группы. Эфир таксана может быть конденсирован с пептидом и затем связан с клеточным связующим агентом для получения связующей группы, не устойчивой к действию пептидаз. Гидроксильная группа в эфире таксана может быть сукцинилирована и связана с клеточным связующим агентом для получения конъюгата, который может быть расщеплен внутриклеточными эстеразами для высвобождения свободного лекарственного вещества. Наиболее предпочтительно эфиры, эстеры или карбаматы таксанов обрабатывают для получения свободной или защищенной тиольной группы и затем дисульфид- или тиолсодержащие таксаны связывают с клеточным связующим агентом при помощи дисульфидных связей.

Характерные конъюгаты изобретения представляют собой антитело-таксан, фрагмент антителатаксан, эпидермальный фактор роста (ЕСР)-таксан, меланоцитстимулирующий гормон (МБН)-таксан, тироидстимулирующий гормон (1ЪН)-таксан, эстроген-таксан, аналог эстрогена-таксан, андрогентаксан, аналог андрогена-таксан и фолат-таксан.

Конъюгаты таксанов с антителами, фрагментами антител, белками или пептидными гормонами, белками или пептидными факторами роста и другими белками синтезируют таким же образом при помощи известных способов. Например, пептиды и антитела могут быть модифицированы известными способами при помощи реагентов для образования поперечных связей, такими как Ν-сукцинимидил 3-(2пиридилдитио)пропионат, Ν-сукцинимидил 4-(2-пиоидилдитио)пентаноат (δΡΡ), 4-сукцинимидилоксикарбонил-а-метил-а-(2-пиридилдитио)толуол (δΜΡΤ), Ы-сукцинимидил-3 -(2-пиридилдитио)бутират (δΌΡΒ), Ы-сульфосукцинимидил-3-(2-(5-нитропиридилдитио)бутират (δδΝΡΒ), 2-иминотиолан или ангидрид δ-ацетилянтарной кислоты. См. Сагккоп и др., 173 Вюсйет. 1. 723-737 (1978); В1а111ег и др., 24 Вюсйет. 1517-1524 (1985); БатЬей и др., 22 Вюсйет. 3913-3920 (1983); Κίοΐζ и др., 96 Лгсй. Вюсйет. В1орйу5. 605 (1962); и Бш и др., 18 Вюсйет. 690 (1979), В1акеу апб Тйогре, 1 ЛпйЬобу, 1ттипосои)ида1е8 & Кайюрйагтасеийсак, 1-16 (1988), \Уогге11 и др. 1 Лпй-Сапсег Эгид Эечдп 179-184 (1986). Полученный таким образом клеточный связующий агент, содержащий свободную или защищенную тиольную группу, затем подвергают реакции с дисульфид- или тиолсодержащим таксаном для получения конъюгатов. Конъюгаты могут быть очищены при помощи ВЭЖХ или гель-фильтрации.

Предпочтительно конъюгаты моноклональное антитело- или клеточный связующий агент-таксан представляют собой конъюгаты, которые соединены при помощи дисульфидной связи, как обсуждалось выше, которые способны доставлять молекулы таксанов. Такие клеточные связующие конъюгаты получают известными способами, такими как модификация моноклональных антител сукцинимидилпиридилдитиопропионатом (δΡΌΡ) (Сагккоп е1 а1., 173 Вюсйет. 1. 723-737 (1978)). Полученную тиопиридильную группу затем замещают обработкой тиолсодержащими таксанами для получения конъюгатов, имеющих дисульфидные связи. В качестве альтернативы, в случае арилдитио-таксанов образование клеточного связующего конъюгата осуществляется прямым замещением арилтиола таксана сульфгидрильными группами ранее введенными в молекулы антител. Конъюгаты, содержащие 1-10 таксановых лекарственных веществ, связанных дисульфидным мостиком, легко образуются любым способом.

Более конкретно раствор дитио-нитропиридил-модифицированного антитела с концентрацией 2,5 мг/мл в 0,05М калий-фосфатном буфере, рН 7,5, содержащем 2 мМ ЭДТА, обрабатывают тиолсодержащим таксаном (1,3 мол.экв./дитиопиридильная группа). Высвобождение тионитропиридина из модифицированного антитела, которое завершается примерно за 16 ч, контролируют при помощи спек

- 22 012625 трофотометрии при 325 нм. Конъюгат антитело-таксан очищают и от них отделяют непрореагировавшее лекарственное вещество и другое низкомолекулярное вещество при помощи гель-фильтрации, используя колонку с сефадексом С-25 или с сефакрилом 8300. Количество связанных фрагментов таксана на молекулу антитела можно определить путем измерения отношения поглощения при 230 и 275 нм. Этим способом посредством дисульфидных связей может быть связано в среднем 1-10 таксановых молекул/молекула антитела.

Влияние конъюгации на аффинность связывания в отношении антиген-экспрессирующих клеток может быть определено при помощи способов, описанных ранее у Ьш и др., 93 Ргос. №а!1. Асаб. 8с1 86188623 (1996). Цитотоксичность таксанов и их конъюгатов с антителами в неадгезивных клеточных линиях, таких как №ата1\га и НЬ-60, может быть измерена при помощи обратной экстраполяции кривых клеточной пролиферации, как описано у Со1бтасйег и др., 135 1. 1ттипо1. 3648-3651 (1985). Цитотоксичность этих соединений к адгезивным клеточным линиям, таким как С0Ь0 205 и А-375, может быть определена при помощи клоногенного анализа, как описано у Со1бтасйег и др., 102 1 Се11 Вю1. 1312-1319 (1986).

Примеры

Синтез 1СТ-15-075-8Н для конъюгации.

7а,9а-Эпокси-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5-диметоксибензоил)-10-(№-2,2-диметил-2сульфгидрилэтилкарбамоил)доцетаксель (1СТ -15-075-8Н).

В небольшой пробирке растворяли 7а,9а-эпокси-3'-дефенил-3'-(2-фурил)-2-дебензоил-2-(2,5диметоксибензоил)-10-(№-2,2-диметил-2-метилдитиоэтилкарбамоил)доцетаксель (36 мг, 0,0353 ммоль) в смеси метанола (1,0 мл) и этилацетата (0,73 мл). В отдельной пробирке растворяли ОТТ (55 мг, 0,343 ммоль) в 50 ммоль калий-фосфатного буфера (0,73 мл), рН 7,5, который затем добавляли в раствор таксоида. Реакцию контролировали при помощи тонкослойной хроматографии до тех пор, пока не обнаружили, что она завершилась (-19 ч). Реакцию гасили 50 мМ калий-фосфатного буфера (6 мл), рН 6,5 и проводили экстракцию этилацетатом (3x20 мл). Объединенные органические слои промывали водой, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали. Остаток очищали тонкослойной хроматографией, используя диоловую колонку для получения желаемого продукта (27 мг, 79%), который сразу аликвотировали и хранили для использования в конъюгации, т/ζ ЖХ/МС для С₄₈Н₆₄№₂01₇8№а⁺: вычислено: 995,4; найдено: 995,5.

Конъюгация таксоидов с моноклональными антителами.

НиС242 антитело, которое связывается с СапАд антигеном предпочтительно экспрессировали на поверхности клеток рака толстой кишки человека и на других солидных опухолях, было выбрано для конъюгации с таксоидами.

На первом этапе проводили реакцию антитела с модифицирующим агентом №сульфосукцинимидил 5-нитро-2-пиридилдитиобутаноатом (88№РВ) для введения групп нитропиридилдитио. Раствор йиС242 антитела (525 мг, 0,0036 ммоль) с концентрацией 8 мг/мл в водном буфере (65,6 мл), рН 6,5, содержащем 0,05 М фосфата калия, 0,05 М хлорида натрия и 2 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), обрабатывали раствором 88№РВ (0,0288 ммоль, 13,62 мг) в диметилацетамиде (ОМА) (3,28 мл), взятым в 8-кратном молярном избытке. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 90 мин и затем загружали в колонку с сефадексом С25 для гель-фильтрации (50 мм 35,5 мм, объем колонки = 700 мл), которую предварительно уравновешивали водным буфером, содержащим 0,05 М фосфата калия, 0,05 М хлорида натрия и 2 мМ ЭДТА, рН 7,5 (65,6 мл). Модифицированные фракции, содержащие антитело, собирали и объединяли для получения 502,4 мг (95,7%) продукта. Небольшую аликвоту модифицированного антитела обрабатывали дитиотриэтолом для расщепления нитропиридилдисульфида и освобожденный нитропиридин-2-тион анализировали спектрофотометрически (ε_{325 нм}=10964М^-1см^-1 и ε280 нм=3344М^-1см^-1 для нитропиридин-2-тиона, и ε280 нм=217560 М^-1см^-1для антитела). В среднем было связано 4,53 нитропиридилдисульфидных молекул с одной молекулой антитела.

Модифицированное антитело (502,0 мг, 0,0034 ммоль) разбавляли в 2,5 мг/мл вышеуказанного буфера, рН 7,5 и затем обрабатывали раствором таксоида 1СТ-15-075-8Н (0,020 ммоль, 19,5 мг) в ОМА так, чтобы конечная концентрация ОМА в буфере составила 20%. Смесь для конъюгации перемешивали при

- 23 012625 комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь очищали, пропуская через колонку с сефакрилом §300 для гель-фильтрации (50 мм 42 см, объем колонки = 825 мл), которую перед этим уравновешивали физраствором, забуференным фосфатами, РВ§ буфером, рН 6,5. Фракции, содержащие мономерные конъюгаты антитело-таксоид, объединяли и диализовали против РВ§ буфера. Конечный конъюгат (251 мг) анализировали спектрофотометрически, используя нижеприведенные коэффициенты экстинкции: (ε_{323 нм}=4299 М^-1см^-1, ε280 нм=565 М^-1см^-1 для таксоида и ε280 нм=217560 М^-1см^-1с для антитела). В среднем конъюгаты содержали 4,16 таксоида.

Анализ связывания.

Относительную аффинность связывания 1шС24 2 антитела и конъюгата таксоида с антигенэкспрессирующими клетками рака толстой кишки человека НТ-29 определяли, используя флуоресцентный анализ. Конъюгат антитело-таксоид и голое антитело с начальной концентрацией 1 на 10^-7 М добавляли в 96-луночные круглодонные планшеты и титровали, используя 3-кратное серийное разведение, дублируя каждую концентрацию. В каждую лунку, содержащую различные концентрации антитела или конъюгата, а также в контрольные лунки добавляли НТ-29 клетки по 50000 клеток на лунку. Планшеты инкубировали на льду в течение 3 ч. После инкубации клетки в планшете промывали и добавляли флуоресцентно меченные вторичные антитела, которые связываются с гуманизированными ^С, такими как 1иС242, и планшеты инкубировали в течение 1 ч на льду. После инкубации планшеты снова промывали и клетки фиксировали 1% раствором формальдегид/РВ§. Считывали флуоресценцию в каждой лунке планшеты, используя флуоресцентный анализатор ВесЮп ΩίοΚιηδοη ЕЛС§Са11Ьиг. Данные представляли в виде графиков как процент от максимальной флуоресценции, которая получена при самой большой концентрации антитела или конъюгата (фиг. 1).

Результаты показывают, что конъюгация таксоидов с антителами не изменяет аффинность связывания с клетками-мишенями.

Активность ίη νίίτο и специфичность конъюгата 1иС242-таксоид. Образцы свободных таксоидных конъюгатов ог1шС242-таксоид добавляли в 96-луночную плоскодонную планшету для тканевых культур и титровали, используя серийные разведения в диапазоне от 1х10^-12 до 3х10^-7 М. Клетки рака толстой кишки человека, СОЬО 205, или клетки человеческой меланомы, А-375, добавляли в лунки так, чтобы для каждой концентрации лекарственного вещества для каждой линии клеток было по три повтора. Планшеты инкубировали при 37°С в атмосфере 5% СО₂ в течение 4 дней.

В конце периода инкубации 20 мкл реагента татразолия ^§Т-8, (2-(2-метоксинитрофенил)-3-(4нитрофенил)-5-(2,4-дисульфофенил)-2-тетразолия, мононатриевая соль), добавляли в каждую лунку, и планшеты продолжали инкубировать в течение 2 ч. Затем в каждой лунке планшеты измеряли поглощение, используя устройство для считывания планшет Мо1еси1аг Όβνίεβδ при 450 нм. Выжившие фракции клеток для каждой концентрации таксоида или конъюгата представлены графически на фиг. 2а, Ь.

Результаты показывают, что конъюгация с антителами демонстрирует высокую специфичность мишеней к таксоидам. Таким образом, 1иС242-таксоид является очень эффективным при уничтожении целевых клеток рака толстой кишки человека, СОЬО 205, со значением ^₅₀, равным 8х10^-11 М. Напротив, антигеннегативные клетки являются примерно в 150 раз менее чувствительными, со значением ^50, равным 1,2х10^-8 М, демонстрируя антигенную специфичность цитотоксического эффекта (фиг. 2а). С другой стороны, свободный таксоид имеет одинаковую эффективность в отношении обеих клеточных линий (^50~1χ10^-10 М) (фиг. 2Ь).

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Таксаны, имеющие следующую формулу (I):

где Ζ означает радикал формулы II;

К1 представляет собой трет-бутоксигруппу;

К3 представляет собой изобутенил или фурил;

К4 представляет собой связующую группу, выбранную из дисульфидной группы и тиоэфирной группы, гидроксигруппу, ацетоксигруппу, (С₂-С₄)алкилоксикарбонилоксигруппу, (С1-С₂)диалкилкарбамоилоксигруппу, причем ацетоксигруппа, (С₂-С₄)алкилоксикарбонилоксигруппа и (С1-С₂)диалкилкарбамоилоксигруппа могут содержать терминальную дисульфидную или тиоэфирную группу;

К₅ или К₇ представляет собой Н;

К6 представляет собой Н;

К7 или К5 и К образуют связь (циклический простой эфир);

- 24 012625

К₈ представляет собой фенил, 3-метоксифенил, 3-хлорфенил, 2,5-диметоксифенил, фурил, пироллил, тиенил, тиазолил, имидазолил, пиридил, оксазолил, индолил, бензофуранил или бензотиенил.
2. Соединение по п.1, в котором связующая группа представляет собой дисульфидную группу.
3. Соединение по п.2, в котором связующая группа представляет собой дисульфидную группу, в которой боковая цепь, несущая дисульфидную группу, может быть линейной или разветвленной.
4. Соединение по п.3, в котором связующую группу при К₄ выбирают из нижеследующих заместителей: -ОСО(СК13К_и)т(СК15К16)п(ОСН2СН2)_у82' или -0σ0ΝΗ1;(σΗ1_;Η)^.(σΗ1,Η)η(0σΗ;σΗ;),8/'.

где Ζ' представляет собой Н, тиолзащищающую группу или 8К';

К' и Κι₂ являются одинаковыми или различными и представляют собой линейный алкил, разветвленный алкил или циклический алкил, имеющие 1-10 атомов углерода, и Κι₂, кроме того, может представлять собой Н;

К.₁₃. К₁₄, К₁₅ и К1₆ являются одинаковыми или различными и представляют собой Н или линейный или разветвленный алкил, имеющий 1-4 атомов углерода;

η равно целому числу от 1 до 10;

т равно целому числу от 1 до 10 и также может быть равным 0; у равно целому числу от 1 до 20 и также может быть равным 0.
5. Соединение по п.1, в котором К₈ представляет собой 3-метоксифенил, 3-хлорфенил, 2,5диметоксифенил, фурил, пироллил, тиенил, тиазолил, имидазолил, пиридил, оксазолил, индолил, бензофуранил или бензотиенил.
6. Соединение по п.1, в котором К₅ представляет собой Н и К и К₇ образуют связь.
7. Цитотоксический агент, содержащий один или несколько таксанов, ковалентно связанных с клеточным связующим агентом посредством связующей группы, в котором по меньшей мере один из указанных таксанов представляет собой соединение, представленное формулой (III) где Κι представляет собой трет-бутоксигруппу;

К₃ представляет собой изобутенил или фурил;

К₄ представляет собой связующую группу, выбранную из дисульфидной группы или тиоэфирной группы;

К₅ или К₇ представляет собой Н;

К₆ представляет собой Н;

К₇ или К₅ и К образуют связь (циклический простой эфир);

К₈ представляет собой фенил, 3-метоксифенил, 3-хлорфенил, 2,5-диметоксифенил, фурил, пироллил, тиенил, тиазолил, имидазолил, пиридил, оксазолил, индолил, бензофуранил или бензотиенил.
8. Терапевтическая композиция, включающая:

(A) терапевтически эффективное количество цитотоксического агента по п.7 и (B) фармацевтически приемлемый носитель.
9. Цитотоксический агент по п.7, в котором клеточный связующий агент выбирают из группы, состоящей из антител, фрагмента антитела, интерферонов, лимфокинов, гормонов, витаминов, факторов роста, колонийстимулирующих факторов и трансферрина.
10. Цитотоксический агент по п.7, в котором клеточный связующий агент представляет собой антитело.
11. Цитотоксический агент по п.7, в котором клеточный связующий агент представляет собой моноклональное антитело.
12. Цитотоксический агент по п.7, в котором клеточный связующий агент представляет собой фрагмент антигенспецифического антитела.
13. Цитотоксический агент по п.7, в котором фрагмент антитела представляет собой &ΕΎ, РаЬ, РаЬ' или Р(аЬ')₂.
14. Цитотоксический агент по п.7, в котором клеточный связующий агент представляет собой фактор роста или колонийстимулирующий фактор.
15. Способ уничтожения выбранных клеточных популяций, включающий приведение в контакт целевых клеток или тканей, содержащих целевые клетки, с эффективным количеством цитотоксического агента по п.7.