EA005168B1 - Способ индуцирования у растительной клетки или растения устойчивости к вирусу, растение и растительная клетка, обладающие такой устойчивостью - Google Patents

Способ индуцирования у растительной клетки или растения устойчивости к вирусу, растение и растительная клетка, обладающие такой устойчивостью Download PDF

Info

Publication number
EA005168B1
EA005168B1 EA200100884A EA200100884A EA005168B1 EA 005168 B1 EA005168 B1 EA 005168B1 EA 200100884 A EA200100884 A EA 200100884A EA 200100884 A EA200100884 A EA 200100884A EA 005168 B1 EA005168 B1 EA 005168B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
virus
plant
sequence
promoter
transgenic plant
Prior art date
Application number
EA200100884A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200100884A1 (ru
Inventor
Жерар Жонар
Эммануэль Лобер
Убер Гийе
Кеннет Ричард
Original Assignee
Сантр Насьональ Де Ла Решерш Сьентифик (Снрс)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Сантр Насьональ Де Ла Решерш Сьентифик (Снрс) filed Critical Сантр Насьональ Де Ла Решерш Сьентифик (Снрс)
Publication of EA200100884A1 publication Critical patent/EA200100884A1/ru
Publication of EA005168B1 publication Critical patent/EA005168B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
    • C12N15/8283—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for virus resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/00022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение касается способа индуцирования у растительной клетки или растения устойчивости к вирусу, содержащему последовательность 2 из тройного блока генов (TGB2), включающего следующие этапы: получение конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность TGB2 указанного вируса, или соответствующую ей кДНК, или их варианты, основанные на вырожденности генетического кода, связанные с одной или более регуляторными последовательностями, активными в растении; трансформацию растительной клетки полученной конструкцией нуклеиновой кислоты и, при необходимости, регенерацию трансгенного растения из трансформированной растительной клетки. Настоящее изобретение также относится к растениям и растительным клеткам, обладающим такой устойчивостью.

Description

Область изобретения
Данное изобретение относится к способу индуцирования у клетки и растения устойчивости к вирусам, особенно устойчивости клетки и растения сахарной свеклы к вирусу ΒΝΥνν.
Предпосылки изобретения и уровень техники
Широко распространенное вирусное заболевание сахарной свеклы (Бе1а тиЦагй). называемое ризомания, вызывается бенивирусом вирусом некротического пожелтения жилок свеклы (ΒΝΥνν) (10, 11), который передается корнеплодам свеклы обитающими в почве грибами Ро1утуха Ье1ае (12).
В Европе, США и Японии заболевание в значительной степени поражает посевные площади, на которых выращивается сахарная свекла для промышленного использования, и до сих пор распространено в отдельных районах Западной Европы (13, 14). Поскольку не существует практического способа для эффективного контроля за распространением вируса в больших масштабах с помощью химических или физических методов ни в растениях, ни в почве, основная цель заключалась в том, чтобы определить природный источник устойчивости, находящийся внутри зародышевой плазмы сахарной свеклы, и вывести путем селекции сорта сахарной свеклы, экспрессирующие гены устойчивости. Разновидности таких толерантных к вирусу генов установлены, и некоторые успешно используются для выведения сортов сахарной свеклы, имеющих промышленное значение (16, 17, 18).
Только использование ΒΝΥνν-устойчивых либо толерантных сортов позволит фермерам выращивать сахарную свеклу на зараженных вирусом ΒΝΥνν территориях, где сахарная свекла является существенным компонентом севооборота и обеспечивает значительную часть дохода растениеводов.
Подробные исследования показали, что различие в восприимчивости к ΒΝΥνν-инфекции среди генотипов или сортов сахарной свеклы, в основном, отражает различие в распространении или транслокации вируса в тканях корнеплодов (19).
Однако все же существует несколько сообщений, которые ясно показывают, что толерантные гены именно из различающихся источников зародышевой плазмы сахарной свеклы или из зародышевой плазмы диких сортов (20) давали различные механизмы устойчивости. Такая ситуация могла бы быть более подходящей для создания долгосрочных стратегий по выработке у растений устойчивости к вирусу ΒΝΥνν.
С 1986г. в ряде сообщений и публикаций было описано использование изолированных вирусных генных последовательностей, экспрессирующихся в растениях, для обеспечения высокого уровня толерантности по отношению к данному вирусу или даже для обеспечения широкого спектра устойчивости к ряду родственных вирусов (21, 22, 23). Одна из наиболее обоснованных стратегий создания устойчивости к вирусам во многих культивируемых видах, таких как картофель, тыква, огурец или томат, основанная на генетической инженерии, заключается в использовании вирусной генной последовательности, которая под контролем регуляторных элементов растения кодирует белок оболочки вируса-мишени (24).
Однако, что касается устойчивости, опосредованной белком оболочки, экспрессия определенного уровня устойчивости в трансгенном растении могла бы быть приписана другим механизмам, таким как косуппрессия РНК, а не только лишь продукции белковой последовательности.
В общих чертах, вирусная последовательность будет переноситься в подходящую культуру клеток или ткани видов растений с помощью системы трансформации, опосредованной агробактериями (АдтоЬас1егшт), или методом прямого переноса гена с учетом ограничений метода тканевой или клеточной культуры, который с успехом может применяться к данным видам. Будет регенерировано целое растение и охарактеризована экспрессия трансгена.
Несмотря на то, что сахарная свекла известна как вид, не поддающийся воздействию на уровне клеточной культуры, что ограничивает степень практического применения методов генетической инженерии для этого вида, существует ряд отдельных сообщений об успешной трансформации и регенерации целых растений (25). Также опубликовано (26, \УО 91/13159) несколько примеров создания толерантности к вирусу ΒΝΥνν путем трансформации и экспрессии белковой последовательности оболочки вируса ΒΝΥνν в геноме сахарной свеклы, хотя в них редко сообщаются данные о полностью функциональных трансгенных растениях сахарной свеклы (27). В частности, сообщения содержат ограниченные данные об уровне устойчивости, наблюдаемом в условиях инфицирования у трансгенных растений сахарной свеклы, трансформированных с помощью гена, кодирующего белковую последовательность оболочки вируса ΒΝΥνν (28, 29).
Полная технологическая программа, включающая метод трансформации сахарной свеклы и использование экспрессии белковой последовательности оболочки вируса ΒΝΥνν в качестве источника устойчивости в трансгенном растении сахарной свеклы, полученном с помощью упомянутого метода трансформации, описана в патентной заявке ^091/13159.
На основании опубликованной информации невозможно сделать вывод о том, что механизм устойчивости, опосредованный белками оболочки, обеспечивает какую-либо возможность для придания растению сахарной свеклы общего иммунитета к ΒΝΥνν-инфекции путем полного ингибирования механизмов размножения и распространения вируса. Идентификация механизма устойчивости, который в значительной степени блокирует распространение вируса на ранней стадии процесса заражения, станет важным шагом к успешно развивающейся такой трансгенной устойчивости. Кроме того, такая устойчивость порождала бы многообразие механизмов уже имеющейся устойчивости.
Поскольку, как показано, заболевание распространяется во многих странах или районах со скоростью, зависящей от сочетания многочисленных местных условий окружающей среды и сельскохозяйственных факторов, существует значительный интерес к варьированию механизмов генетической устойчивости, которые могут, по отдельности либо в сочетании, предоставлять постоянную и долгосрочную стратегию устойчивости для ныне существующих и будущих сортов сахарной свеклы, которые выращиваются для промышленных нужд.
Геном бенивируса (ΒΝΥνν) некротического пожелтения жилок свеклы состоит из пяти (+)-цепей РНК, две из которых (РНК 1 и 2) кодируют функции, необходимые для заражения всех растений, тогда как остальные три (РНК 3, 4 и 5) принимают участие в вектор-опосредованном заражении корнеплодов растений-хозяев (Ве1а тасгосагра, Ве1а уи1дап5, 8ршасеаг о1егасеа, Сйепоробшт с.|ишоа и др.) (1). Перемещение вируса ΒΝΥνν из клетки в клетку управляется набором трех последовательных, слегка перекрывающихся вирусных генов на РНК 2, известных как тройной блок генов (ТСВ) (2), который кодирует вирусные белки Р42, Р13 и Р15 (генные продукты обозначены по их вычисленной молекулярной массе Мг в килодальтонах (3)).
В последующем описании гены ТСВ и соответствующие белки будут определяться с помощью следующих терминов: ТСВ1, ТСВ2, ТСВ3 или с помощью кодируемых ими вирусных белков Р42, Р13 и Р15. Аналоги ТСВ присутствуют в других вирусах растений, и характеристики их ТСВ позволили классифицировать указанные вирусы по двум группам: вирусы I группы, которая включает гордеивирусы, бенивирусы, пеклавирусы и помовирусы; и вирусы II группы, представленной потексвирусами и карлавирусами (4, 5, 6, 31).
Для вирусов II группы в перемещение вируса из клетки в клетку вовлекается также белок капсида.
Выработка устойчивости к вирусным инфекциям у растения путем блокирования перемещения из клетки в клетку описано для вируса Х картофеля (ΡνΧ) (32) и для вируса мозаики белого клевера (\ν01Μν) (33) в МсоПапа Ьеп1йат1аиа. Оба этих вируса относятся к описанной выше II группе. В обоих случаях некоторые аминокислоты в гидрофильной части ТСВ последовательности, находящейся ниже Ν-концевого гидрофобного домена вышеупомянутой аминокислотной последовательности, были замещены аланином. Однако с помощью вышеуказанных мутантов невозможно было получить общую устойчивость, особенно в том случае, когда концентрация контрольного вируса в растении повышалась.
Цели изобретения
Настоящее изобретение ставит своей целью предоставить новый способ индуцирования в клетке и растении устойчивости к различным вирусам и получения устойчивых к вирусам клетки и растения.
Основная цель изобретения заключается в предоставлении нового способа индуцирования в клетке и растении устойчивости к вирусу ΒNΥVV и получении устойчивых к вирусу ΒNΥVV клетки и растения, в частности клетки и растения сахарной свеклы (Ве!а уи1дап5 55р.).
Сущность изобретения
Данное изобретение предусматривает использование альтернативной последовательности растительного вируса, особенно вируса ΒNΥVV, для получения высокой степени толерантности к вирусной инфекции, в частности для обеспечения быстрого и полного блокирования механизмов размножения и распространения вируса в растении, особенно в растении сахарной свеклы (Ве1а уи1дап5). включая кормовую свеклу, швейцарский мангольд и столовую свеклу, которые также могут подвергаться данной вирусной инфекции. Экспрессия устойчивости будет получена в трансгенной клетке и растении, особенно в клетках и растениях сахарной свеклы, полученных с помощью метода трансформации, представленного в патентной заявке νθ95/10178, либо другими методами трансформации, основанными на АдгоЬас!егшт 1ите1ас1еп5, или прямым переносом гена. Благодаря своей высокой эффективности метод трансформации, описанный в заявке νθ95/10178, позволяет получить большое количество трансформированных растений, особенно растений сахарной свеклы, и будет предпочтительным для создания трансгенных растений, которые могут быть проанализированы и охарактеризованы по уровню их устойчивости к вирусам, особенно к вирусу ΒNΥVV, включая их оценку в полевых условиях.
В таблице представлены вирусы, имеющие ТСВ2 последовательность, молекулярный вес ТСВ2 в указанных вирусах, их хозяин и ссылки.
Вирус Размер ТСВ2, (Юа) Хозяин Ссылка
I ГРУППА
Вирус некротического пожелтения жилок свеклы 13 свекла ВоигоиЬа е1 а1., λ Оеп. νΐτοί. 67, 1689-1700 (1986)
Вирус пггриховатой мозаики ячменя 14 ячмень СизиГзоп е1 а1., Ыис1. АсИз Кез. 14, 3895-3909 (1986)
Вирус курчавости верхушки картофеля 13 картофель 5соп е1 а1., I. Оеп. νίτοί. 75,3561-3568 (1994)
Вирус кустистости арахиса 14 арахис Негхс>2 е! а!., I. Оеп. νϊτοί. 75,3147-3155(1994)
Вирус свеклы, передаваемый через почву 13 сахарная свекла Коегид е! а!., У1го1оду 216, 202-207(1996)
II ГРУППА
Вирус ямчатости ствола яблони 13 яблоня 1е1кшап, Λ Оеп. νίτοί. 75, 1535-1542(1994)
Вирус ожога черники 12 черника СауЦеег ес а1., I Оеп. νϊΓοΙ. 75,711-720 (1994)
Вирус М картофеля 12 картофель Ζβντίβν е1 ак, ]. Оеп. νίτοί. 72, 9-14(1991)
Вирус мозаики белого клевера 13 клевер Гог81ег е( а!., Ναοί. Ас1бз Кез. 16, 291-303 (1988)
Вирус мозаики орхидеи атЫсНит 14 орхидея Νβο е1 а1., Р1аМ Мок ΒίοΙ. 18,1027-1029(1992)
Авторы изобретения предлагают новый способ придания растениям устойчивости к растительным вирусам посредством блокирования механизмов размножения и распространения вируса в вышеупомянутом растении, особенно в его корнеплодной ткани. Для того, чтобы продемонстрировать вышеупомянутую устойчивость, авторы описывают влияние сверхэкспрессии ТСВ2 последовательности, одной или в сочетании, на механизм размножения и распространения вируса ΒΝΥνν в растениях С. цишоа, которые также являются хозяевами вируса ΒΝΥνν и с которыми специалистам легче работать.
Известно, что вирус ΒΝΥνν для создания локальных повреждений на листьях хозяев, таких как Сйепоробшш с.|шпоа (7), не нуждается в синтезе вирусных белков оболочки, что свидетельствует о том, что для перемещения вируса из клетки в клетку образование вириона не требуется.
Однако способ, с помощью которого компоненты ТСВ принимают участие в процессе движения, непонятен, хотя сравнения последовательностей с помощью компьютера показали характерные консервативные последовательности, которые могут дать ключ к пониманию их функций. Так, 5'-проксимальный белок ТСВ (ТСВ1) постоянно содержит ряд мотивов, характерных для АТФ/ГТФ-связывающей геликазы, а второй белок (ТСВ2) всегда имеет два потенциально мембраносвязывающих гидрофобных домена, разделенных гидрофильной последовательностью, которая содержит высококонсервативный пептидный мотив неизвестного назначения (6).
До сих пор не сообщалось ни одного примера вируса I группы, в котором три члена ТСВ располагались бы иначе в той же РНК или распределялись между различными геномными РНК, что предполагает, что их объединение в определенном порядке может быть важным для регуляции их функции.
Данное изобретение касается способа индуцирования у растительной клетки или растения устойчивости к вирусу, содержащему последовательность 2 из тройного блока генов (ТСВ2). Вышеупомянутые вирусы включают гордеивирусы, бенивирусы, пеклавирусы и помовирусы, предпочтительно вирусы, выбранные из группы, состоящей из вируса некротического пожелтения жилок свеклы, вируса штриховатой мозаики ячменя, вируса курчавости верхушки картофеля, вируса кустистости арахиса и вируса свеклы, передаваемого через почву; вышеупомянутый способ включает следующие этапы:
получение конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность ТСВ2 указанного вируса, или соответствующую ей кДНК, или их варианты, основанные на вырожденности генетического кода, связанные с одной или более регуляторными последовательностями, активными в растении;
трансформацию растительной клетки полученной конструкцией нуклеиновой кислоты и, при необходимости, регенерацию трансгенного растения из трансформированной растительной клетки.
Предпочтительно, чтобы указанная нуклеотидная последовательность, аналогичная, по крайней мере, на 70% ТСВ2 нуклеотидной последовательности дикого типа или соответствующей ей кДНК, включала в себя замену, по крайней мере, одной аминокислоты на другую, отличную аминокислоту в ТСВ2 последовательности дикого типа 8Е0 ГО N0. 1 (фиг. 1). Предпочтительно, чтобы замена, по крайней мере, одной аминокислоты на другую, отличную аминокислоту, осуществлялась в участках, обогащенных гидрофильными аминокислотами, обычно присутствующими на поверхности соответствующего белка в его нативной конфигурации. Предпочтительно, чтобы модификация осуществлялась в гидрофильном участке последовательности дикого типа, находящемся ниже Ν-концевого гидрофобного домена и несколько выше консервативного центрального домена.
В соответствии с предпочтительной реализацией данного изобретения каждая из упомянутых выше аминокислот замещается аланином.
Предпочтительно, чтобы растение или растительная клетка являлись растением или растительной клеткой, которые могут быть инфицированы вышеописанным вирусом и предпочтительно выбирались из группы, состоящей из картофеля, ячменя, арахиса и сахарной свеклы.
Данное изобретение касается также полученной растительной клетки и трансгенного (или трансформированного) растения (полученного из упомянутых выше растительных клеток), устойчивых к вышеупомянутым вирусам и содержащих вышеупомянутую нуклеотидную конструкцию.
Авторы изобретения также неожиданно обнаружили, что можно индуцировать у растения устойчивость к вирусу ВХТУУ способом, включающим следующие этапы:
получение конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, аналогичную, по крайней мере, на 70%, предпочтительно, по крайней мере, на 80%, еще более предпочтительно, по крайней мере, на 90%, нуклеотидной последовательности дикого типа, заключенной между нуклеотидами 3287 и 3643 5'-цепи геномной либо субгеномной РНК2 дикого типа вируса ВХТУУ, или ее соответствующей кДНК, и связанной с одной или более регуляторными последовательностями, активными в растении;
трансформацию растительной клетки с помощью вышеуказанной конструкции и, при необходимости, регенерацию трансгенного растения из трансформированной растительной клетки.
Нуклеотидная последовательность, заключенная между нуклеотидами 3287 и 3643 5'-цепи геномной или субгеномной РНК2, кодирующая белок Р13, описана на фиг. 1 (8ЕО ГО N0. 1). Предпочтительная мутантная нуклеотидная последовательность и ее соответствующая мутантная аминокислотная последовательность описаны в следующем перечне как 8Е0 ГО N0. 3 (фиг. 2).
Другой аспект данного изобретения касается растительной клетки и трансгенного растения (полученного из вышеупомянутых растительных клеток), устойчивых к вирусу ΒΝΥνν и содержащих нуклеотидную конструкцию, имеющую нуклеотидную последовательность, аналогичную, по крайней мере, на 70%, предпочтительно, по крайней мере, на 80%, еще более предпочтительно, по крайней мере, на 90%, нуклеотидной последовательности, заключенной между нуклеотидами 3287 и 3643 5'-цепи геномной или субгеномной РНК2 дикого типа вируса ΒΝΥνν, или ее соответствующей кДНК, и связанной с одной или более регуляторными последовательностями, активными в растении.
Предпочтительно, чтобы указанная выше растительная клетка или трансгенное растение (полученное из вышеупомянутых растительных клеток), устойчивые к вирусу ΒΝΥνν, были получены способом в соответствии с данным изобретением.
Варианты нуклеотидной последовательности дикого типа (8Е0 ГО N0. 1) включают вставку, замену или делецию нуклеотидов, кодирующих ту же самую или другую аминокислоту(ы) (см. фиг. 2). Поэтому данное изобретение касается также вышеупомянутых вариантов нуклеотидной последовательности 8Е0 ГО N0. 1, например 8Е0 ГО N0. 3, которая обнаруживает, по крайней мере, на 70%, предпочтительно, по крайней мере, на 80%, еще более предпочтительно, по крайней мере, на 90% сходство с упомянутой выше нуклеотидной последовательностью и которая предпочтительно способна гибридизоваться с указанной выше нуклеотидной последовательностью в жестких или нежестких условиях, как описано у 8ашЬгоок с1 а1., §§ 9.47-9.51 в Мо1еси1аг С1оишд: А ЬаЬога1огу Мапиа1, Со1й 8ргшд НагЬог, ЬаЬога1огу Ргекк, Со1й 8ргшд НагЬог, №\ν Уогк (1989).
Нуклеотидная последовательность, аналогичная, по крайней мере, на 70%, предпочтительно, по крайней мере, на 80%, еще более предпочтительно, по крайней мере, на 90%, нуклеотидной последовательности, заключенной между нуклеотидами 3287 и 3643 5'-цепи геномной или субгеномной РНК2 дикого типа вируса В№ГУУ, или ее соответствующей кДНК, предпочтительно является последовательностью, включающей в себя замену, по крайней мере, одной аминокислоты на другую, отличную аминокислоту в последовательности РНК2 дикого типа вируса В№ГУУ или в ее соответствующей кДНК. Предпочтительно, чтобы вышеуказанная замена осуществлялась в участках, в которых гидрофильные аминокислоты обычно присутствуют на поверхности белка в его нативной конфигурации (34), как описано на фиг. 2 (А=замена аланином). Предпочтительно, чтобы вышеуказанная замена одной или более аминокислот представляла собой мутацию, позволяющую замену одной или более аминокислот на одну или более аминокислоту аланин.
В соответствии с предпочтительной реализацией данного изобретения вышеуказанной нуклеотидной последовательностью является 8ЕО ГО N0. 3.
Предпочтительно, чтобы вышеупомянутые последовательности также были способны индуцировать у растения устойчивость к вирусу В№ГУУ.
Термины индуцировать у растения устойчивость к вирусу(ам) означают индукцию возможного уменьшения или значительного замедления проявления симптомов заражения, размножения вируса или механизмов его распространения в растении, особенно в тканях корнеплодов.
На фиг. 3 представлены результаты, показывающие способность растения, одновременно зараженного вирусом, содержащим репликонную конструкцию, и нуклеотидной последовательностью согласно данному изобретению, главным образом, последовательностью 8Е0 ГО N0. 3, ингибировать перемещение вируса Β№Υνν в С. Ошпоа. Инфекционный фактор вируса ΒΚ^νν проявляется появлением локальных повреждений на листьях вышеупомянутого растения после одновременного заражения (соинокуляции) вирусом 812 дикого типа. Фиг. 3 представляет количество локальных повреждений на листьях растения, вызванных изолятом вируса ΒNΥVV 812 (содержащего РНК1 и РНК2) при соинокуляции с различными репликонами, включающими в себя либо мутантные последовательности, содержащие 8Е0 ГО N0. 3, определенную на фиг. 2, либо нуклеотидную последовательность дикого типа (Т).
Через 8 дней после вышеупомянутой инокуляции определяются локальные повреждения. Результаты трех экспериментов показывают, что уменьшение упомянутого выше воздействия большей частью наблюдается при соинокуляции мутантной последовательностью 8Е0 ГО N0. 3 (вплоть до 100% ингибирования). Этот результат не является следствием возможного блокирующего влияния на репликацию РНК1 и РНК2, но репликоны согласно данному изобретению позволяют блокировать биохимические механизмы, вовлеченные в процесс перемещения инфекционного вируса из клетки в клетку.
Регуляторная последовательность (последовательности) нуклеотидной последовательности согласно данному изобретению представляет со бой промоторную последовательность (последовательности) и терминторную последовательность (последовательности), активные в растении.
Нуклеотидная конструкция может включать в себя также селектируемый маркерный ген, который мог бы использоваться для идентификации трансформированной клетки или растения и экспрессии нуклеотидной конструкции согласно данному изобретению.
Предпочтительно, чтобы клетка являлась клеткой устьица листа, а растение - сахарной свеклой (Ве!а уи1дапк ккр.), полученной из указанных клеток.
Согласно изобретению промоторная последовательность представляет собой конститутивную или чужеродную промоторную последовательность. Примерами таких промоторов являются 358 промоторная последовательность вируса мозаики цветной капусты, полиубиквитиновый промотор АтаЫборкк (бабаиа (30); промотор, который активен, главным образом, в тканях корнеплодов, как, например, раг промотор гена гемоглобина из Ретокроша аибеткопи (Ьапбктаи е! а1., Мо1. беи. бепе!. 214: 68-73 (1988)), или их смесь.
Последний аспект настоящего изобретения касается ткани трансгенного растения, такой как плод, стебель, корнеплод, клубень, семя трансгенного растения, согласно данному изобретению или структуры, способной воспроизводиться (предпочтительно отобранной из группы, состоящей из каллусов, почек или зародышей), полученной из трансгенного растения или клетки согласно данному изобретению.
Методики трансформации растения, тканевой культуры и регенерации, использованные в способе согласно данному изобретению, хорошо известны специалистам в данной области. Предпочтительными являются методики, описанные в международных патентных заявках XV О 95/10178 или XVО 91/13159, соответствующих европейской патентной заявке ЕР-В0517833, которые включены здесь в ссылки. Эти методики предпочтительно используются для получения трансгенной сахарной свеклы согласно данному изобретению.
Список литературы
1. Ятсбатбк К.Е. & Татаба Т., Лили. Ксу. Рбу!ора!бо1. 30, рр. 291-313 (1992)
2. бйтет Ό. е! а1., У1го1оду 189, рр. 40-47 (1992)
3. Воихонбаа 8. е! а1., 1. беи. Уйо1. 68, рр. 615-626 (1987)
4. Негход Е. е! а1., 1. беи. У1го1. 18, рр. 3147-3155 (1994)
5. 8со!! К.Р. е! а1., 1. беп. У1го1. 75, рр. 3561-3568 (1994)
6. Коошп Е.У. & ЭоЦа У.У., Стй. Ксу. Вюсбет. апб Мо1. Вю1. 28, рр. 375-430 (1993)
7. 8сбтб1 С. е! а1., Ргос. №а!1. Асаб. 8с1. И8А. 89, рр. 5715-5719 (1992)
8. Могохоу 8.Υ. е! а1., 1. беп. У1го1. 72, рр. 2039-2042 (1991)
9. Ре11ебег 1. & 8опепЬегд Ν., №а!иге 334, рр. 320-325 (1988)
10. Татаба Т. & ВаЬа Т., Аппа1к ок !бе Рбу!ора!бо1од1са1 8ос1е1у ок 1арап 39, рр. 325-332 (1973)
11. Кикха1а М. &. Ри1х С., Аппак ок Рбу!ора!бо1оду 9, рр. 435-446 (1977)
12. Татаба Т., СМ1/ЛЛВ Эекспрбоп ок Р1апк Уиикек 44, (1975)
13. Акбег М.1.С., Шбхоташа 1п Тбе кидаг Ьее! сгор, еб. Э.А. Сооке апб К.К. 8сой, Сбартап & На11, Ьопбоп, рр. 312-338 (1593)
14. Кксбатб-Мо1атб М., Шпхоташе 1п 1пкй!и! Ггапсат бе 1а Ьейетауе шбик!пе11е. Сотр!е-гепби бек !тауаих еГГес!иек еп 1994, 1ТВ, Ратк рр. 225229 (1995)
15. Непгу С.М. е! а1., Р1ап! Ра!бо1оду 41, рр. 483-489 (1992)
16. бгакк1 б. е! а1., Рбу!ора!б. Мебй. 28, рр. 131-139 (1989)
17. Мегбшод1и Ό. е! а1., Асаб. Адлс. Ег. 79, по.6, рр. 85-98 (1993)
18. 8со1!еп О.Е. е! а1., Атсб1уек ок У1го1оду 136, рр. 345-361 (1994)
19. Вийепт б. & Витску К., Ртосеебшдк ок !бе Είτκ! 8утрокшт ок !бе 1п!егпайопа1 Vо^к^пд бгоир оп Р1ап! У1тикек χνίΐΐι Еипда1 Уес!огк, Втаипксбете1д бегтапу, Аидик! 21-24 (1990)
20. Χνΐιίίικν Е.Э., Р1ап! Экеаке 73, рр. 287289 (1989)
21. РохуеН Л.Р. е! а1., 8с1епсе 232, рр. 738743 (1986)
22. Етйсбеп ЬН. & Веасбу Κ.Ν., Апп. Ксу. М1стсЬю1. 47, рр. 739-763 (1993)
23. '№11коп Т.М.А., Ргос. №111. Асаб. 8ск И8А 90, рр. 3134-3141 (1993)
24. бопка1уек Ό. & 8бдб!от ЬЬ., 8еттатк т У1го1оду 4, рр. 397-405 (1993)
25. ЭНаИшп К. е! а1., Вю!есбпо1оду 10, рр. 309-314 (1992)
26. Ка11егбок 1. е! а1., Р1ап! Се11 Керогк 9, рр. 224-228 (1990)
27. Еб1егк и. е! а1., Тбеогейса1 апб Аррбеб бепейс 81, рр. 777-782 (1991)
28. Кгаик 1. е! а1., Е1е1б регкогтапсе ок !гапкдешс кидаг Ьее! р1ап!к ехртекшд ВNΥУУ соа! рто!еш р1ап!к, Еоийб 1п!етпа!юпа1 Сопдгекк ок Р1ап! Мо1еси1аг В1о1оду, 1п!. 8ос. ког Р1ап! Мо1еси1аг Вю1оду, Атк!егбат (1994)
29. Макк Е. е! а1., Ртосеебшдк ок !бе Тблб 1п!ета!юпа1 8утрокшт оп !бе ВюкакеЦ Кеки1!к ок Е1е1б Тек!к ок бепейсабу МобШеб Р1ап!к апб Мкгоогдапктк, Моп!егеу, рр. 129-139 (1994)
30. Мтк е! а1., Р1ап! Мо1еси1аг Вю1оду 21, рр. 895-906 (1993)
31. 8о1оууеу е! а1., Убо1оду 219, рр. 9-18 (1996)
32. 8еррапеп Р. е! а1., 1. ок бепега1 Уйо1оду 78, рр. 1241-1246 (1997)
33. Веск е! а1., Ргос. №111. Асаб. 8ск И8А 91, рр. 10310-10314 (1994)
34. Сипшпдбат е! Vе11κ, 8с1епсек 244, рр. 1031-1085 (1939)
Перечень последовательностей <110> САНТР НАСЬОНАЛЬ ДЕ ЛА РЕШЕРШ СЬЕНТИФИК
<120> СПОСОБ ПРИДАНИЯ РАСТЕНИЯМ УСТОЙЧИВОСТИ К ВИРУСАМ
<130> Ρ.3Ξ3 -03/ЕР
<140> 99200773 . 2
<141> 1999- 03-12
<160> 4
<170> РаеепСХп Уег. 2.1
<210> 1 <211> 3=7 <212> ДНК
<213> Вирус некротического пожелтения жилок свеклы
<220> <221> СОЗ
<222> (1).. [354)
<40О> 1 асд ссс адд даа аса асе дсс еда ссс аас аад аас дед ссс асе дсс 48
Мес 5ег Агд С1и Не ТЬг Айа Агд Рго Азп Ьуз Азп Уай Рго Не Уай
1 5 10 15
дес ддс дсс еде дес дед дсс ссс ссс деа сед сед дед ссс аед сад 96
Уай С1у Уай Суз Уай V*! А1а РЬе РЬе Бай Ьеи Ьеи Айа РЬе Мес Сйп
20 25 30
саа ааа сас аад аса сас ссс 995 ддс дас сас дда асе сса аса ссс 144
О1п Ьуз Нйз Ьуз ТЬг Нйз Зег С1у Сйу Азр Тут Сйу Уай Рго ТЬг РЬе
35 40 45
Ссс аас аде ддс аса сае ада да с ддс аса ада сса дсс дас ссс аас 192
Зег Азп С1у бйу Не Туг Агд Азр Сйу ТЬг Агд Зег Айа Азр РЬе Азп
50 55 €0
аде аас ааС сас еде дсс сас 999 еде ддс 999 ссс 99= аде аде дес 240
Зег Αδη Азп Εί δ Агд Айа Туг Сйу Суз Сйу Сйу Зег сйу Сйу Зег Уа1
65 70 75 80
аде аде еда де- дад сад саа ссс асе дед сса дсс асе ссс ссс дед 288
Зег Зег Агд Уа1 Сйу Сйп Сйп Ьеи Не Уай Ьеи Айа 11е Уай Зег Уай
85 90 95
сса аса дед сса сса сса саа еда Беа адд ссс сса сса даа сас асе 336
Ьеи Не Уай Зег Ьеи Ьеи Сйп Агд Ьеи Агд Зег Рго РГО Сйи Нйз Не
100 105 110
еде аас ддс дсс еде ддс саа 357
Суз Азп Сйу Айа Суз Сйу
115 <210> 2 <2н> на <212> Белок <213> Вирус некротического пожелтения жилок свеклы <400> 2
МеС 1 Зег Агд Сйи Не 5 тпг Айа Агд Рго А8П 10 Ьуз Азг. Уай Рго Не 15 Уай
Уай Сйу Уай Суз Уай Уай Айа РЬе РЬе Уай Ьеи Ьеи Айа Рпе Мес Сйп
20 25 30
Сйп Ьуз Нйз Ьуз ТЬг Нйз Зег Сйу Сйу Азр Туг Сйу Уай Рго ТЬг РЬе
35 40 4 =
Зег Азп Сйу Сйу Не Туг Агд Азр Сйу ТЬг Агд Зег Айа А.зр РЬе Азп
50 55 60
Зет Азп Азп Нйз Агд Айа Тут Сйу Суз Сйу Сйу Зег Сйу Сйу Зег Уай
65 70 75 80
Зег Зег Агд Уай Сйу сйп Сйп Ьеи 1йе Уай Ьеи Айа Не Уай Зег Уай
85 90 95
Ьеи Не Уай Зег Ьеи Ьеи сйп Агд Ьеи Агд Зег Рго Рго Сйи Нйз Не
100 105 110
Суз Азп С1у А1а Суз С1у
115 <210> 3 ч211> 357 <212> днк <213> Вирус некротического пожелтения жилок свеклы <220>
<221> СОЗ <222> (1)..(354) <40О> 3 асе ссс адд даа аса асе дсс еда ссс аас аад аас дед ссс асе дес 48
Мес Зег Агд Сйи Не ТЬг А1а Агд Рго Азп Ьуз Азп Уай Рго Не Уай
1 5 10 15
дсс ддс дее еде дсе дед дсп еес еес дса сед сед дед ссс аед сад 96
Уай Сйу Уай Суз Уай Уай Айа РЬе РЬе Уай Ьеи Ьеи Айа РЬе Мес Сйп
20 25 30
саа дса дсе дед аса сас ссс 999 ддс дас Сас дда дес сса аса еес 144
Сйп Айа Айа Айа ТЬг Нйз Зег Сйу Сйу Азр Туг Сйу Уай Рго ТЬг РЬе
35 40 45
ССС аас ддс ддс аса еае ада дас ддс аса ада сса дсс дас ссс аас 192
Зег Азп Сйу Сйу Не Туг Агд Азр Сйу ТЬг Агд Зег Айа Азр РЬе Азп
50 55 60
аде аас аас сас еде дсь сас 999 еде ддс 999 ссс 999 ддс аде дес 240
Зег Азп Азп Нйз Агд Айа Туг Сйу Суз Сйу Сйу Зег Сйу Сйу Зег Уай
65 70 75 80
аде аде еда дес 999 сад саа се е асе дед ССа дсс асе дес ссс сед 28В
Зег Зет Агд Уай Сйу Сйп Сйп Ьеи Не Уай Ьеи Айа Не Уа1 Зег Уай
90 95
ста Ьеи аса дед сса сса ста саа еда ста адд сет Ьеи Агд Зег 105 сса сса даа сас аСТ 3 Рго Рго Сйи Нйз Не НО
IX, Уай Зег 100 Ьеи Ьеи Сйп Агд
СдС Суз аас Азп асе С-йу дсс Айа еде Суз ддс Сйу саа 3;
115 <210> 4 <211> 118 <212> Белок <213> Вирус некротического пожелтения жилок свеклы <400> 4
Мес 1 Зег Агд Сйи Не 5 ТЬг Айа Агд Рго Азп Ьуз Азп Уай Рго Не Уай
10 15
Уай Сйу Уай Суз Уа1 Уай Айа РЬе РЬе Уай Ьеи Ьеи Айа РЬе Мес Сйп
20 25 30
Сйп Айа Айа Айа ТЬг Нйз Зег сйу Сйу Азр Туг Сйу Уай Рго ТЬг Рпе
35 40 45
Зег Азп Сйу Сйу Не Туг Агд Азр Сйу ТЬг Агд Зет Айа Азр РЬе Азп
50 55 60
Зег Азп Азг. Нйз Агд Айа Тут бйу Суз Сйу Сйу Зег Сйу Сйу Зег Уай
65 70 75 80
Зег Зег Агд Уай Сйу бйп Сйп Ьеи Не Уай Ьеи Айа Не Уай Зег Уай
83 90 95
Ьеи Х1е Уай Зег Ьеи Ьеи бйп Агд Ьеи Агд Зег Рго Рго Сйи Нйз Не
100 105 НО
Суз Азп С1у А1а Суз Сйу

Claims (23)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ индуцирования у растительной клетки или растения устойчивости к вирусу, содержащему последовательность 2 из тройного блока генов (ТОВ2), включающий следующие этапы:
    получение конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность ТОВ2 указанного вируса или соответствующую ей кДНК или их варианты, основанные на вырожденности генетического кода, связанные с одной или более регуляторными последовательностями, активными в растении;
    трансформацию растительной клетки полученной конструкцией нуклеиновой кислоты и, при необходимости, регенерацию трансгенного растения из трансформированной растительной клетки.
  2. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что вирус выбирают из группы, состоящей из гордеивирусов, бенивирусов, пеклавирусов и помовирусов, предпочтительно вируса некротического пожелтения жилок свеклы, вируса штриховатой мозаики ячменя, вируса курчавости верхушки картофеля, вируса кустистости арахиса и передаваемого через почву вируса свеклы.
  3. 3. Способ по п.2, отличающийся тем, что последовательность конструкции нуклеиновой кислоты представляет собой последовательность 8ЕО ΙΌ N0. 3 вируса ΒΝΥνν.
  4. 4. Способ по пп.1-3, отличающийся тем, что растительная клетка представляет собой клетку устьица листа.
  5. 5. Способ по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что растение выбирают из группы, состоящей из сахарной свеклы, картофеля, ячменя или арахиса.
  6. 6. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный вирус представляет собой вирус некротического пожелтения жилок свеклы (ΒΝΥνν) с последовательностью ТОВ2 8Е0 ΙΌ
    N0. 1, которая заключена между нуклеотидами 3287 и 3643 5'-цепи геномной или субгеномной РНК2 вируса ΒΝΥνν, а растение представляет собой свеклу, предпочтительно сахарную свеклу (Ве!а уи1дапк).
  7. 7. Способ по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что регуляторная последовательность представляет собой промоторную последовательность или терминаторную последовательность, активную в растении.
  8. 8. Способ по п.7, отличающийся тем, что промоторная последовательность является конститутивной или чужеродной растительной промоторной последовательностью.
  9. 9. Способ по п.8, отличающийся тем, что промоторную последовательность выбирают из группы, состоящей из 358 промотора вируса мозаики цветной капусты и полиубиквитинового промотора ЛтаЫборщк !йайаиа.
  10. 10. Способ по любому из пп.7-9, отличающийся тем, что промоторной последовательностью является промотор, который активен, главным образом, в тканях корнеплодов растений, например раг промотор гена гемоглобина из Ретокроша апбеткопи.
  11. 11. Трансгенное растение, устойчивое к вирусу, полученное способом, охарактеризованным в п.1.
  12. 12. Трансгенное растение по п.11, отличающееся тем, что оно получено с использованием конструкции нуклеиновой кислоты, имеющей последовательность 8 ЕС ΙΌ N0. 3 вируса ΒΝΥνν.
  13. 13. Трансгенное растение по п.11 или 12, отличающееся тем, что вирус выбирают из группы, состоящей из гордеивирусов, бенивирусов, пеклавирусов и помовирусов, предпочтительно из вируса некротического пожелтения жилок свеклы, вируса штриховатой мозаики ячменя, вируса курчавости верхушки картофеля, вируса кустистости арахиса и передаваемого через почву вируса свеклы.
  14. 14. Трансгенное растение по пп.11-13, являющееся растением, выбранным из группы, состоящей из сахарной свеклы, картофеля, ячменя или арахиса.
  15. 15. Трансгенное растение по п.11, отличающееся тем, что оно является свеклой, предпочтительно сахарной свеклой (Ве!а уи1дапк) вирус представляет собой вирус ΒΝΥνν с последовательностью ТСВ2 8Е0 ΙΌ N0:1, которая заключена между нуклеотидами 3287 и 3643 5'цепи геномной или субгеномной РНК2 вируса ΒΝΥνν.
  16. 16. Трансгенное растение по любому из пп.11-15, отличающееся тем, что регуляторная последовательность представляет собой промоторную последовательность или терминаторную последовательность, активную в растении.
  17. 17. Трансгенное растение по любому из пп.11-16, отличающееся тем, что промоторная последовательность является конститутивной или чужеродной растительной промоторной последовательностью.
  18. 18. Трансгенное растение по п.17, отличающееся тем, что промоторная последовательность выбрана из группы, состоящей из 358 промотора вируса мозаики цветной капусты и полиубиквитинового промотора ЛтаЫборкщ ШаПапа.
  19. 19. Трансгенное растение по п.17 или 18, отличающееся тем, что промоторной последовательностью является промотор, который активен, главным образом, в тканях корнеплодов, например раг промотор гена гемоглобина из Ретокроша апбеткопи.
  20. 20. Трансгенное растение по любому из пп.11-19, отличающееся тем, что оно дополнительно имеет природную толерантность к вирусам, указанным в п.2.
  21. 21. Трансгенное растение по любому из пп.11-20, отличающееся тем, что оно дополнительно обладает устойчивостью к пестицидам, гербицидам или фунгицидам, устойчивостью к нематодам, предпочтительно глифосатной устойчивостью, глюфосоматной устойчивостью и/или устойчивостью к ацетохлориду.
  22. 22. Трансформированная растительная клетка, полученная способом, охарактеризованным в п.1.
  23. 23. Трансформированная растительная клетка по п.22, из которой может быть регенерировано трансгенное растение, охарактеризованное в пп.11-21.
EA200100884A 1999-03-16 2000-03-07 Способ индуцирования у растительной клетки или растения устойчивости к вирусу, растение и растительная клетка, обладающие такой устойчивостью EA005168B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP99200773A EP1038961A1 (en) 1999-03-16 1999-03-16 Method for inducing viral resistance into a plant
PCT/EP2000/002176 WO2000055301A2 (en) 1999-03-12 2000-03-07 Method for inducing viral resistance into a plant

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200100884A1 EA200100884A1 (ru) 2002-04-25
EA005168B1 true EA005168B1 (ru) 2004-12-30

Family

ID=8239983

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200100884A EA005168B1 (ru) 1999-03-16 2000-03-07 Способ индуцирования у растительной клетки или растения устойчивости к вирусу, растение и растительная клетка, обладающие такой устойчивостью

Country Status (8)

Country Link
EP (2) EP1038961A1 (ru)
AU (1) AU3810500A (ru)
EA (1) EA005168B1 (ru)
EE (1) EE200100481A (ru)
HU (1) HUP0200240A3 (ru)
PL (1) PL351521A1 (ru)
SK (1) SK12842001A3 (ru)
WO (1) WO2000055301A2 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MD719Z (ru) * 2013-06-11 2014-08-31 Институт Зоологии Академии Наук Молдовы Способ обработки картофеля против нематоды Ditylenchus destructor

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE0004755D0 (sv) * 2000-12-21 2000-12-21 Plant Science Sweden Ab Virus resistance in plants

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998007875A1 (en) * 1996-08-19 1998-02-26 Ses Europe N.V./S.A. Method for inducing viral resistance into a plant

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MD719Z (ru) * 2013-06-11 2014-08-31 Институт Зоологии Академии Наук Молдовы Способ обработки картофеля против нематоды Ditylenchus destructor

Also Published As

Publication number Publication date
SK12842001A3 (sk) 2002-04-04
EE200100481A (et) 2002-12-16
WO2000055301A2 (en) 2000-09-21
HUP0200240A3 (en) 2003-12-29
EP1038961A1 (en) 2000-09-27
EP1161538A2 (en) 2001-12-12
HUP0200240A2 (hu) 2002-05-29
AU3810500A (en) 2000-10-04
PL351521A1 (en) 2003-04-22
WO2000055301A3 (en) 2001-01-25
EA200100884A1 (ru) 2002-04-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2016399292A1 (en) Herbicide tolerant protein, encoding gene and use thereof
US20210324404A1 (en) Herbicide tolerance protein, encoding gene thereof and use thereof
JPH08506489A (ja) Ｐｌｒｖ感染に耐性の植物
US10752912B2 (en) Nucleic acid sequences and peptides/proteins of the FT family providing flower repressing properties in tobacco and transgenic plants transformed therewith
PT81227B (pt) Celulas vegetais resistentes a inibidores herbicidas de glutamina sintetase
CN112410347A (zh) 玉米ZmHsf21基因及其应用
ES2627863B1 (es) Composiciones y métodos para determinar la alimentación por psílidos
CN110184276A (zh) 一种转基因抗除草剂玉米事件的创制方法
CZ319995A3 (en) Dna-structures providing resistance against viruses, plant containing such structures and process for preparing thereof
US6015942A (en) Transgenic plants exhibiting heterologous virus resistance
EA005168B1 (ru) Способ индуцирования у растительной клетки или растения устойчивости к вирусу, растение и растительная клетка, обладающие такой устойчивостью
EA004328B1 (ru) Способ придания растительной клетке или растению устойчивости к вирусу, содержащему последовательность 3 тройного блока генов (tgb3), и трансгенное растение, устойчивое к указанному вирусу
US5773701A (en) Plants resistant to infection by PVX
Sudarshana et al. Nucleotide sequence of both genomic RNAs of a North American tobacco rattle virus isolate
WO2022166955A1 (zh) 新型抗除草剂乙酰辅酶a羧化酶突变体及其应用
EP4082332A1 (en) Solanaceous plant and solanaceous plant cell having resistance to tomato spotted wilt virus, and method for producing solanaceous plant
JPH08509599A (ja) 植物体にウイルスに対する耐性を付与し得るポリリゾザイムおよびこのポリリゾザイムを産生する耐性植物体
JP7264832B2 (ja) ウイルス抵抗性植物及びその作出方法
Flores et al. Viroids and viroid diseases of plants
KR100255474B1 (ko) 형질전환된 벼 고엽고 바이러스 저항성 벼 및 그 제조방법
Lee et al. Characterization of the 3′-terminal nucleotide sequence of two Korean isolates of Daphne virus S support its placement as a distinct species of the genus Carlavirus
ES2278451T3 (es) Procedimiento de modificacion genetica de una secuencia viral de tipo natural.
AU763298B2 (en) Ribozymes capable of conferring resistance to potyvirus infection, and plants expressing said ribozymes
US20150259700A1 (en) Transgenic Plants With RNA Interference-Mediated Resistance Against Root-Knot Nematodes
Pavli Molecular characterization of Beet necrotic yellow vein virus in Greece and transgenic approaches towards enhancing rhizomania disease resistance

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU