EA001866B1

EA001866B1 - ПЕПТИД, СПОСОБНЫЙ СВЯЗЫВАТЬСЯ С ИНТЕРЛЕЙКИН-1-beta-КОНВЕРТИРУЮЩИМ ФЕРМЕНТОМ (ICE), И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ НА ЕГО ОСНОВЕ

Info

Publication number: EA001866B1
Application number: EA199900432A
Authority: EA
Inventors: Марта Муцио; Мартино Интрона; Альберто Мантовани
Original assignee: Апплайд Резеч Системз Арс Холдинг Н.В.
Priority date: 1996-10-31
Filing date: 1996-10-31
Publication date: 2001-10-22
Also published as: WO1998018823A8; CA2269638A1; BR9612755A; ES2225893T3; EP0938500A1; NO992079D0; DE69633463T2; KR20000052858A; EP0938500B1; DK0938500T3; AU729946B2; NO323517B1; ATE277079T1; JP4018154B2; DE69633463D1; AR011269A1; EA199900432A1; IL129669A0; ZA979712B; PT938500E

Abstract

Настоящее изобретение касается пептидов, способных связываться с ICE и(или) с ферментами семейства ICE, при том, что этот пептид содержит аминокислотную последовательность по SEQ ID NO: 1, приведенную в списке последовательностей, в которой Хаа выбран из аспарагиновой кислоты и аланина, необязательно содержащей одну или несколько аминокислот на ее N-конце и(или) С-конце. Оно также касается применения указанного пептида при лечении заболеваний, требующих ингибирования ICE, и для приготовления фармацевтических композиций, активных при заболеваниях, требующих ингибирования ICE и(или) подавления ферментов семейства ICE, а также фармацевтических композиций на их основе.

Description

Область изобретения

Настоящее изобретение касается пептидов, способных связываться с 1СЕ и (или) с ферментами семейства 1СЕ, при том, что этот пептид содержит аминокислотную последовательность по БЕЦ ГО N0:1, приведенную в списке последовательностей, в которой Хаа выбран из аспарагиновой кислоты и аланина, необязательно содержащей одну или несколько аминокислот на ее Ν-конце и (или) С-конце.

Оно также касается применения указанного пептида при лечении заболеваний, требующих ингибирования 1СЕ и для приготовления фармацевтических композиций, активных при заболеваниях, требующих ингибирования 1СЕ и (или) подавления ферментов семейства 1СЕ, а также фармацевтических композиций на их основе.

Предпосылки изобретения

1СЕ (интерлейкин-1β-конвертирующий фермент) является гетеродимерной цистеин-протеазой, которая недавно была очищена и клонирована [1]. Интерлейкин-1β (Ю-1 β) синтезируется в виде неактивного предшественника с молекулярной массой 33 или 31 кД (ρΙΕ-1β); характеризующаяся полной активностью зрелая форма Ю— 1 β с молекулярной массой 17,5 кД начинается с остатка А1а¹¹⁷ и образуется в результате процессинга между остатками Акр¹¹⁶ и А1а¹¹⁷ [2, 3]. Таким образом, белок-предшественник Ю-1 β расщепляется с участием 1СЕ с образованием зрелой и биологически активной формы.

Активность 1СЕ была установлена в моноцитах и клетках ТНР1, в которых расщепление ρΙΕ-1β осуществляется как по Акр¹¹⁶-А1а¹¹⁷, так и по А§р²⁷-61у²⁸ с образованием продуктов с молекулярными массами 17,5 и 28 кД, соответственно [3, 4]. Расщепление по каждому из этих сайтов является зависимым от остатка аспарагиновой кислоты, находящегося в положении Р1 [4, 6, 7].

Становится понятным, что цистеиновые протеазы, родственные белку гибели клеток себ3 нематоды СаеиогйаЬбйщ е1едаи8, представляют эффекторный компонент в комплексе механизмов апоптоза. Ιί'Έ был первым охарактеризованным гомологом СЕО-3, и известно, что избыточная экспрессия Κ.Έ или СЕО-3 в фибробластах Ка1-1 индуцирует апоптоз [8]. Дальнейшие исследования также подтверждают, что протеазы семейства Ιί'Έ могут играть важную роль в механизмах апоптоза.

Предположительно Κ'Έ является специфичным ферментом процессинга рШ-1 β, потому что он не расщепляет Ю--1 а или ряд других белков, включающих большое число связей А§р-Х.

Интерлейкины ΙΕ-1α, и Ш-1 β являются полейотропными цитокинами, которые при наличии весьма низкого уровня сходства последовательностей проявляют ряд сходных эффектов в различных тканях и действуют при многих па тологических состояниях человека, в частности, при формировании иммунного ответа организма и при воспалительных процессах [9]. Оба белка характеризуются молекулярной массой около 17,5 кД и исходно синтезируются в виде молекул-предшественников большего размера с молекулярной массой около 31 кД.

Интерлейцины-1 являются потенциальными воспалительными и пирогенными цитокинами, которые обычно проявляют благоприятное действие, но также могут иметь и резко отрицательное влияние на здоровье организма. Они могут, например, участвовать в патогенезе аутоиммунных заболеваний, таких как системная красная волчанка, и, в частности, они вовлечены в качестве медиаторов в усиление повреждения тканей, например, при ревматоидном артрите.

Многие из биологических действий интерлейкинов-1 сходны с таковыми, которые могут быть выявлены при сепсисе. Недавние исследования показали, что внутривенное введение Ш-1 в дозах 1-10 нг/кг приводит к лихорадке, бессоннице, анорексии, генерализованной миалгии, артралгии (суставным болям) и сильным головным болям.

Поскольку интерлейкины-1 обладают плейотропными биологическими активностями, многие из которых негативно влияют на организм, мощное влияние Ш-1 должно находиться под жестким физиологическим контролем.

Синтез Ш-1 ингибируется противопоспалительными цитокинами, простагландинами и глюкокортикоидами, и существование множественных уровней ингибирования Ш-1 указывает на необходимость жесткого контроля этого медиатора.

Существуют два типа рецепторов Ш-1, обозначаемых Ш-1К1 и Ш-1КН. Ш-1КП является неинформационной молекулой, связывающей Ш-1, которая активна как регулируемая мишень-ловушка для Ш-1 [10, 11, 12].

Полипептид, являющийся антагонистом рецептора Ш-1, к настоящему времени описан третьим известным на сегодня компонентом семейства рецептор-связывающих белков, является антагонист рецептора Ш-1 (Ш-1та) [13, 14, 15]. Все три компонента (Ш-1а, ΙΕ-1β, Ш-1та) распознают и связываются с одним и тем же рецептором клеточной поверхности (Ш-1К); связывание Ш-1а и ΙΕ-1β на Ш-1К является информационным (передает сигнал), в то время как связывание Ш-1та неинформационно.

Ш-1та является полипептидом, который связывается с ΙΕ-1ΚΙ и с меньшей аффинностью с Ш-1КП, при отсутствии какой-либо агонистической активности. Выработка Ш-1га индуцируется действием иммуноглобулина-С, цитокинов и бактериальных продуктов в клетках различного типа, включая моноядерные фагоциты, полиморфоядерные клетки (ΡΜΝ) и фибробласты.

К настоящему времени две молекулярные формы 1Ь-1та идентифицированы и клонированы: 1) секретируемый 1Ь-1та (§1Ь-1га) включает классическую основную последовательность из 25 аминокислот, дающую зрелый белок из 152 аминокислот; 2) внутриклеточный 1Ь-1та (1е1Ь1га) утрачивает основную последовательность, что позволяет предсказать, что такой белок остается внутри клетки.

§1Ь-1га и 1с1Ь-1т генерируются одним и тем же геном. Транскрипты 1с1Ь-1та образуются вследствие использования альтернативного сайта начала транскрипции и сплайсинга первого альтернативного экзона по внутреннему акцепторному сайту сплайсинга, расположенному в первом экзоне 81Ь-1та. Таким образом, предсказанные белки характеризуются идентичной аминокислотной последовательностью, за исключением их ИН₂-концов, в которых 21 аминокислота 81Ь-1та замещена 4 аминокислотами в 1с1Ь-1та.

Экспрессия транскриптов, кодирующих §1Ь-1га и 1с1Ь-1та, регулируется по-разному. Биологическое значение ю1Ь-1га пока не установлено.

Принимая во внимание, что ТС-1 участвует в патогенезе многих заболеваний, ясна необходимость наличия медикаментов, применимых для ограничения негативных проявлений 1Ь-1.

Новая молекулярная форма ЙИ была недавно идентифицирована и клонирована [16, РСТ/ЕР 95/04023]. Эта молекула образуется путем вставки в кодирующую рамку нового 63нуклеотидного экзона, расположенного между первым и вторым экзонами специфичной для 1с1Ь-1та формы. Экспрессия этого нового транскрипта была обнаружена в фибробластах, кератиноцитах, активированных моноцитах и полиморфоядерных клетках. Экспрессия в клетках СО8 указывает на то, что эта новая молекула в основном является внутриклеточной и характеризуется молекулярной массой приблизительно 25 кД по данным 8Ό8-ΡΆ-6Ε (электрофорез в полиакриламидном геле с натрийдодецилсульфатом). Эта новая молекула была обозначена 1с1Ь-1га типа II (ЫЬ-ИаП). С учетом того, что юШИтаП является внутриклеточным белком, так же как и 1СЕ, заявитель также исследовал способность ШИгаИ подавлять активность 1СЕ. Результаты представлены в примерах в настоящем изобретении, и они показывают, что 1с1Б-1га11 ингибирует активность 1СЕ.

Описание изобретения

Основным объектом настоящего изобретения является обеспечение новыми пептидами, способными связываться с 1СЕ, блокируя таким образом образование активной формы !Ь-1 β и (или), в более общем виде, способными связываться с ферментами семейства 1СЕ, блокируя тем самым активность таких ферментов. Соответственно, настоящее изобретение относится к пептиду, способному связываться с 1СЕ и (или) с ферментами семейства 1СЕ, при том, что этот пептид содержит аминокислотную последовательность по 8ЕО Ш N0: 1, приведенную в списке последовательностей, в которой Хаа выбран из аспарагиновой кислоты и аланина, как особо показано в 8Е0 ΙΌ N0: 2 или 3, необязательно содержащий одну или несколько аминокислот на ее Ν-конце и (или) С-конце. Соответственно, пептид по настоящему изобретению может состоять из 19-40, а предпочтительнее из 19-25 аминокислот.

В особенности, в соответствии с одним из аспектов изобретения, пептид содержит аминокислотную последовательность по 8Е0 ΙΌ N0: 4 или 5.

Неограниченный список цистеиновых протеаз семейства 1СЕ включает: СЕЭ-3 [17], №бб2/1СН-1 [18, 19], Уата/СРР-32/апопаин [20, 21, 22], Тх/1СН-2/1СЕ-подобный II [23, 24, 25], 1СЕподобный III [25], Мсй-2 [26], ΚΈ-1 .арУМсй3/СМН-1 [27, 28, 29], ΚΈ-1.ΑΡ-6 [30] и

ЕМСЕ/МАСН [31, 32].

Другой задачей настоящего изобретения является представление пептида в существенно очищенном виде так, чтобы он был пригодным для использования в составе фармацевтических композиций в качестве активного ингредиента при патологиях, при которых необходимо ингибирование ΚΈ и (или) ингибирование ферментов из семейства Κ'Έ.

Примерами патологий, при которых новый антагонист, согласно настоящему изобретению, может быть эффективно использован для решения профилактических, терапевтических или диагностических задач, являются смертельные вирусные и бактериальные инфекции, равно как аутоиммунные и воспалительные заболевания. Специфические примеры включают: ревматоидный артрит, септический шок, острый миеломоноцитарный лейкоз, иммунореакция отторжения при трансплантации, синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД), язвенный колит и рассеянный склероз.

Другие задачи и преимущества настоящего изобретения будут видны из последующего описания.

Воплощение изобретения представляет введение фармакологически активного количества пептида по настоящему изобретению донорам в случае риска развития заболевания, при которых требуется ингибирование ΚΈ и (или) ингибирование фермента семейства ΚΈ. или донорам, у которых такие заболевания уже имеют место.

Может быть использован любой тип введения активного начала, однако наиболее предпочтительным считается парентеральное введение, поскольку оно позволяет достигать системного эффекта в короткое время. С этой точки зрения предпочтительным является введение в виде внутривенного шарика до, в ходе или после хирургической операции. Доза вводимого пептида зависит от медицинских показаний, связанных с возрастом, весом тела и индивидуальной реакцией пациента.

Дозы могут находиться в пределах от 0,05 до 30 мг на 1 кг веса тела, а предпочтительные дозы составляют 0,1-10 мг/кг веса тела.

Фармацевтические композиции для парентерального применения могут быть приготовлены в инъекционной форме, включающей активное начало и удобный носитель. Носители для парентерального введения хорошо известны в данной области техники и включают, например, воду, солевой раствор, физиологический раствор и декстрозу. Носитель может включать меньшее количество наполнителя с целью поддержания стабильности и изотоничности раствора.

Приготовление указанных растворов может быть проведено в соответствии со стандартными процедурами, а предпочтительное содержание пептида должно составлять 1-10 мг/мл.

Настоящее изобретение описано в отношении специальных его воплощений, но содержание описания включает все модификации и замещения, которые могут быть произведены специалистом в данной области техники без выхода за пределы задач и целей, охватываемых формулой изобретения.

Изобретение будет теперь охарактеризовано посредством следующих примеров, которые не должны рассматриваться как каким-либо образом ограничивающие настоящее изобретение. Примеры будут иметь ссылки на рисунки, описанные ниже.

Описание чертежей

Фиг. 1 показывает данные анализа методом Нозерн-блоттинга экспрессии мРНК 1СЕ в трансфицированных клетках С08. Общий пул мРНК, экстрагированных клетками СО8, трансфицированных пустым вектором или кДНК, кодирующей 1СЕ человека, анализировали методом Нозерн-блоттинга с целью подтверждения экспрессии, специфичной для 1СЕ мРНК. В частности:

линия 1 - пустой вектор, линия 2 - 1СЕ.

Фиг. 2 показывает данные Вестернблоттинга, р1Ь-1 β инкубировали с лизатом моноцитов, приготовленным согласно описанному в литературе методу [4]: спустя 60 мин инкубации при 37°С реакционную смесь разгоняли электрофорезом в полиакриламидном геле с натрийдодецилсульфатом, а присутствие предшественника или зрелого ΣΠ-1β маркировали с помощью Вестерн-блоттинга. В частности, линия 1 - р1Ь-1;

линия 2: р1Ь-1 + лизат моноцитов.

Фиг. 3 показывает аминокислотные последовательности изучаемых пептидов. Пептид А (8ЕО ГО N0: 6) и пептид С (8ЕО ГО N0: 4) были определены на базе последовательности 1еГЬ1гаГГ. Пептид Х (8Е0 ГО N0: 7) является случайно выбранным пептидом. Пептид 8 (8Е0 ГО N0: 5) идентичен пептиду С, за исключением присутствия двух остатков аланина, замещающих два остатка аспарагиновой кислоты. Пептид В (8Е0 ГО N0: 8) является известным ингибитором ГСЕ [1а].

Фиг. 4 показывает ингибирование активности ГСЕ низкими концентрациями изучаемых пептидов. рГЬ-1 β (5 нг) инкубировали с ГСЕ в присутствии или в отсутствии пептидов (0,25 или 2,5 мккМ), а присутствие предшественника или зрелого ГЬ-1в было подтверждено также, как это описано для фиг. 2. В частности, линия 1: рГЬ-1;

линия 2: рГЬ-1 + пептид А; линия 3: рГЬ-1 + пептид В; линия 4: рГЬ-1 + пептид С; линия 5: рГЬ-1 + ГСЕ;

линия 6: рГЬ-1 + ГСЕ + пептид-А [2,5 мкМ); линия 7: рГЬ-1 + ГСЕ + пептид-А (0,25 мкМ);

линия 8: рГЬ-1 + ГСЕ + пептид-В (2,5 мкМ); линия 9: рГЬ-1 + ГСЕ + пептид-В (0,25 мкМ);

линия 10: рГЬ-1 + ГСЕ + пептид-С (2,5 мкМ);

линия 11: рГЬ-1 + ГСЕ + пептид-С (0,25 мкМ).

Фиг. 5 показывает ингибирование активности ГСЕ высокими концентрациями изучаемых пептидов. рГЬ-1 β (5 нг) инкубировали с ГСЕ в присутствии или в отсутствии пептидов (40 или 400 мкМ), а присутствие предшественника или зрелого ΕΗ-1β было подтверждено также, как это описано для фиг. 2. В частности, линия 1: рГЬ-1 + пептид-А; линия 2: рГЬ-1 + пептид-В; линия 3: рГЬ-1 + пептид-С; линия 4: рГЬ-1 + пептид-Х; линия 5: рГЬ-1;

линия 6: рГЬ-1 + ГСЕ;

линия 7: рГЬ-1 + ГСЕ + пептид-А (400

мкМ);

линия 8: рГЬ-1 + ГСЕ + пептид-В (400

мкМ);

линия 9: рГЬ-1 + ГСЕ + пептид-С (400

мкМ);

линия 10: рГЬ-1 + ГСЕ + пептид-Х (400

мкМ);

линия 11: рГЬ-1 + ГСЕ + пептид-А (40

мкМ);

линия 12: рГЬ-1 + ГСЕ + пептид-В (40

мкМ);

линия 13: рГЬ-1 + ГСЕ + пептид-С (40

мкМ); и

линия 14: рГЬ-1 + ГСЕ + пептид-Х (40

мкМ).

Фиг. 6 показывает ингибирование активности ГСЕ пептидами С и 8. рГЬ-1 β (5 нг) инку001866 бировали с 1СЕ в присутствии или в отсутствии пептидов (100, 300 или 1000 мкМ) , а присутствие предшественника или зрелого ΙΕ-1β было подтверждено также, как это описано для фиг. 2. В частности, линия 1: р1Ь-1;

линия 2: р1Ь-1 + пептид-С; линия 3: р1Ь-1 + пептид-8; линия 4: р1Ь-1 + пептид-В;

линия 5: р1Ь-1 + 1СЕ;

линия 6: р1Ь-1 + 1СЕ + пептид-С (0,1 мМ); линия 7: р1Ь-1 + 1СЕ + пептид-С (0,3 мМ); линия 8: р1Ь-1 + 1СЕ + пептид-С (1 мМ); линия 9: р1Ь-1 + 1СЕ + пептид-8 (0,1 мМ); линия 10: рШ-1 + ЮЕ + пептид-8 (0,3 мМ); линия 11: р1Ь-1 + 1СЕ + пептид-8 (1 мМ); линия 12: р1Ь-1 + 1СЕ + пептид-В (1 мМ).

Примеры

Материалы и методы

Реагенты.

Следующие стандартные реагенты были использованы для культивирования и сепарирования клеток:

Είοοίΐ (8етате6, Вет1ш, Германия), Регсо11 (Р11агтас1а. иррка1а, Швеция), ΒΡΜΙ-1640 (8етате6, Ветйп, Германия), ГС8 (Нус1опе ЬаЬота!от1е8, Ьодап, Великобритания), глутамин (8етате6, Ветйп, Германия) и Нерек (Мегк, Эагтак1аб! Германия).

Клетки.

Моноядерные клетки были получены из периферической крови здоровых доноров с использованием центрифугирования в градиенте Фиколл. Очищенные моноциты сепарировали из моноядерных клеток с помощью центрифугирования в градиенте Перколл при 2000 об/мин в течение 30 мин при комнатной температуре [10]. Клетки СО8-7 (взяты из колекции АТСС, Роквилл, Мэрилэнд, США) и моноциты культивировали в среде ΒΡΜΙ-1640 с добавлением 10% плодной телячьей сыворотки, 2 мМ глутамина, 20 мМ НЕРЕ8. Рекомбинантный предшественник ΙΕ-1β человека был получен от СШтоп Вю!есйио1о§у, РтеЬтоот, N1 (США). Поликлональное антитело, активное в отношении и предшественника, и зрелого ΙΕ-1β, было получено в этой же лаборатории.

ПЦР.

кДНК Ιί,Έ была получена с помощью полимеразной цепной реакции с ревертированием с использованием опубликованных последовательностей (8а).

Полимеразная цепная реакция с ревертированием была проведена в соответствии с описанной процедурой [16] на протяжении 30 циклов при 95°С в течение 1,5 мин, при 55°С в течение 1,5 мин и при 72°С в течение 1,5 мин. Олигонуклеотиды были получены от ЭноЮсЬ (Мйап, Италия). Последовательности олигонуклеотидов, использовавшиеся для амплификации ГСЕ, были следующими:

прямая затравка ΙΕΈ Ι: 5'АААА6ССАТ0ССС6АСАА0ОТС-3' (81 Г) ΙΌ N0: 9) обратная затравка IСЕ 2: 5'ТСТСТТСАСССТОСССАСАОАС-3' (8ЕС) П) N0: 10)

Результаты

Экспрессия рекомбинантного фермента Ιί,Έ в клетках СО8 кДНК, кодирующая Κ.Έ человека, была амплифицирована с применением ПЦР. Последовательность была подтверждена, а кДНК была субклонирована в состав экспрессирующего вектора р8О5. Клетки СО8 были трансфицированы пустым вектором или вектором, включающим кДНК Κ.Έ и спустя 48 ч клетки анализировали по экспрессии мРНК, специфичной для Κ.Έ. Как показано на фиг. 3, клетки СО8, трансфицированные кДНК ЮЕ, экспрессируют высокий уровень мРНК Κ.Έ.

Лизат моноцитов, приготовленный в соответствии с описанным ранее методом [ΙΙ], также был способен конвертировать рШ-Ц! в зрелую форму (фиг. 2). Таким образом, рекомбинантный Κ.Έ или свежеизолированные моноциты человека были использованы в качестве источника каталитической активности Κ.Έ для дальнейших экспериментов .

Ингибирование активности Κ.Έ

Готовили источник активности ГСЕ, а его способность расщеплять рЕС-1в тестировали путем инкубации смеси при 37°С в течение 1 ч. Затем смесь разгоняли электрофорезом в полиакриламидном геле с натрийдодецилсульфатом, а присутствие рШ-ф или зрелой формы оценивали методом Вестерн-блоттинга.

Четыре различающихся пептида были обозначены, синтезированы и их тестировали по способности ингибировать активность Κ.Έ. Эти пептиды указаны на фиг. 3: они были получены путем синтеза в твердой фазе на оборудовании АррНеб ВюкукЮтк (Рок!ег Сйу, СА). Чистоту этих пептидов проверяли методом жидкостной хроматографии под высоким давлением.

В качестве позитивного контроля использовали тетрапептид В (ВасЬет, ВиЬепботГ, Швейцария), упомянутый на фиг. 3, который является известным ингибитором Κ.Έ [1а].

Список литературы [1] [1а] ТЬогпЬеггу е! а1., А поуе1 сук!ете рго!еаке ίκ гесццгеб Гог ш1ет1еикш-1 β ртосекктд щ топосу!е8, №!ите, 356, 768-774, 1990;

[1Ь] Сетей! е! а1., Мо1еси1аг с1ошп§ оГ !Ье йЛеНеиктЛ β сопуегйпд еп/уте, 8с1епсе, 256, 97-100, 1992.

[2] Сатегоп е! а1., Атто асИ кесщепсе апа1у515 оГ Ьитап ГЬ-1. Еу16епсе Гог Ьюсйеткайу 618!шс! Гогтк оГ Ш-1, 1. Ехр. Меб., 162, 790-801, 1985;

[3] Мок1еу е! а1., ТЬе т!ег1еикт-1 гесер!ог Ыпбк !Ье Ьитап 1п1ег1еик1п-1 α ргесигког Ьи! по! !Ье т!ет1еикт-1 β ргесигког, 1. Вю1. СЬет., 262, 2941-2944, 1987;

[4] Коз!ига е! а1., ИейШсаНоп о! а топосу!е зрес1йс рге-т1ег1еикт-1в сопуебазе асбуйу, Ргос. Ыа11. Асаб. 8ск И8А, 86, 5227-5231, 1989;

[5] В1аск е! а1., Асбуабоп о! 1п1ег1еик1п-1 β Ьу а сотбисеб рго!еазе, РЕВ8 Ьей., 427, 386-390, 1989;

[6] Но^агб е! а1., 1Ь-1 сопуегбпд еп/уте гес.|шгез азрагбс ас1б Гог ргосеззтд о! 1ке 1Ь-1 β ргесигзог а! !νο б1збпс! збез апб боез по! с1еауе 31 кОа 1Ь-1а, 1. 1ттипо1., 147, 2964-2969, 1991;

[7] СпГПп е! а1., III 1п!. I. Мазз. 8рес!гот. 1оп. РНуз., 11, 131-149, 1991;

[8] Мшга е! а1., 1пбисНоп о! арор!оз1з т йЬгоЬ1аз!з Ьу т1ег1еикт-1в-сопуег1тд епхуте. а таттабап Ното1одие о! !Не С. е1едапз се11 беа!Н депе себ-3, Се11, 75, 653-660, 1993.

[9] О1таге11о, 1п!ег1еикт-1 апб т!ег1еикт-1 аШадотзт., В1ооб, 77, 1627-1652, 1991;

[10] Со1о!!а е! а1., 1п!ег1еикт-1 !уре II гесер!ог: а бесоу 1агде! !ог (Ь-1 !На! 1з геди1а!еб Ьу ГО-4, 8с1епсе, 261, 472-475, 1993;

[11] 81тз е! а1., !п1ег1еик|п-1 з1дпаШпд оссигз ехс1из1уегу У1а !Не !уре I гесер!огз, Ргос. №111. Асаб. И8А, 90, 6155-6159, 1993;

[12] Со1о!!а е! а1., Iттипо1. Тобау, 15, 562566, 1994;

[13] Наппит е! а1., !п1ег1еик1п-1 гесер!ог ап!адошз! асбубу о! а Нитап т!ег1еикт-1 1пЫЫ!ог, Ыа!иге, 343, 336-340, 1990;

[14] Е1зепЬегд е! а1., Рптагу з!гис!иге апб 1ипсбопа1 ехргеззюп !огт сотр1етеп!агу ΌΝΑ о! а Нитап т!ег1еикт-1 гесер!ог ап!адошз!. №!иге, 343, 341-346, 1990;

[15] Сабег е! а1., Риггйсабоп, с1ошпд, ехргеззюп апб Ыо1од1са1 сНагас!ебза!юп о! ап т!ег1еикт-1 гесер!ог ап!адошз! рго!ет, №!иге, 344, 633-638, 1990;

[16] Μηζίο е! а1., С1ошпд апб сНагас!ебзабоп о! а пе\у 1зо!огт о! т!ег1еикт-1 (ГО-1) гесер!ог аШадошз! (ЕЪ-1 1га), I. Ехр. Меб. , 182623, 1995;

[17] Уиап е! а1.. ТНе С. е1едапз се11 беа!Н депе себ-3 епсобез а рго!ет з1тбаг !о таттабап т!ег1еикт-1в-сопуебтд епζуте, Се11, 75, 641652, 1993;

[18] Китаг е! а1., Шбисбоп о! арор!оз1з Ьу !Не тоизе пебб2 депе, \\'ЫсН епсобез а рго!ет з1тбаг !о !Не ргобис! о! !Не С. е1едапз се11 беа!Н депе себ-3 апб !Не таттабап 1п1ег1еик1п-1 βсопуегбпд епζуте, Сепез Оеу. 8, 1613-1626, 1994;

[19] \Уапд е! а1., ΣοΗ-1, ап Iсе/себ-3-^е1а!еб депе, епсобез Ьо!Н розб1уе апб педабуе геди1а!огз о! ргодгаттеб себ беа!Н, Се11, 78, 739-750, 1994;

[20] Регпапбез-А1петп е! а1., СРР-32, а поуе1 Нитап арор!обс рго!ет \\6Н Ното1оду !о СаепогбаЬбШз е1едапз се11 деа!Н рго!ет СОЕ-3 апб таттабап т!ег1еикт-1 β-сопуегбпд епζуте, I. Вю1. СНет., 269, 30761-30764, 1994;

[21] №сНо1зоп е! а1., Шепбйсабоп апб 1пЫЬбюп о! Κ'Έ/ί'ΈΟ-3 рго!еазе песеззагу !ог таттабап арор!оз1з, №!иге, 376, 37-43, 1995;

[22] Те\\ап е! а1., Υата/СРР-32β, а таттабап Ното1одие о! СЕО-3, 1з а СтАбпЫЬйаЫе рго!еазе 1ба! с1еауез !Не беа!Н зиЬз!га!е ро1у(АОРпЬозе) робтегазе, Се11, 81, 801-809, 1995;

[23] РаисНеи е! а1., А поуе1 Нитап рго!еазе з1тбаг !о !Не т!ег1еикт-1 β-сопуегбпд епζуте тбисеб арор!оз1з т 1гапз!ес!еб се11з, ЕМВО I., 14, 1914-1922, 1995;

[24] Катепз е! а1., Иепбйсабоп апб сНагас!епзабоп о! ГСН-2, а поуе1 тетЬег о! !Не т!ег1еикт-1-сопуебтд епζуте !атбу о! суз!ете рго!еазез, I. В1о1. СНет., 270, 15250-15256, 1995;

[25] Мипбау е! а1., Мо1еси1аг с1ошпд апб ргоарор!обс асбубу о! Κ'Έ ге1-П апб Κ'Έ ге1-Ш, тетЬегз о! !Не ГСЕ/СЕО-3 !атбу о! а суз!ете рго!еазез, I. В1о1. СНет., 270, 15870-15876, 1995;

[26] Ретапбез-А1петп е! а1., МсН-2, а пе\у тетЬег о! !Не арор!обс СЕО-3ДСЕ суз!ете рго!еазе депе !ат11у, Сапсег Кез., 55, 2737-2742, 1995;

[27] Оиап е! а1., IСЕ-^ΑР3, а поуе1 таттабап Ното1одие о! !Не СаепогНаЬбЮз е1едапз са11 беа!Н рго!ет СЕО-3, 1з асбуа!еб бибпд Разапб ΤΝΡ-тбисеб арор!оз1з, I. Вю1. СНет., 2271, 35013-35035, 1996;

[28] Ретапбез-А1петп е! а1., МсН-3, а поуе1 Нитап арор!оз1з суз!ете рго!еазе ЫдН1у ге1а!еб !о СРР-32, Сапсег Кез., 55, 6045-6052, 1995;

[29] Ыррке е! а1, Шепбйсабоп апб сНагас!епзабоп о! СРР-32/МсН-2 Ното1одие 1, а поуе1 суз!ете рго!еазе з1тбаг !о СРР-32, I. В1о1. СНет., 271, 1825-1828, 1996;

[30] Оиап е! а1., IСЕ-^ΑР6, а поуе1 тетЬег о! !Не ГСЕ/Себ-3 депе !атбу, 1з асбуа!еб Ьу !Не су!о!ох1с Т се11 рго!еазе д^апζуте В., I. Вю1. СНет., ш ргезз 1996;

[31] Мкио е! а1., РМСЕ а поуе1 РАООНото1одоиз Κ'Έ/ί.ΈΟ-3-1ί1^ рго!еазе, 1з гесгибеб !о !Не С095(Раз/Аро-1) ОеаНбпбисбпд 81дпа1бпд Сотр1ех, Се11., 85, 817-827, 1996;

[32] Во1бт е! а1., Шуокетеп! о! МАСН, а поуе1 МОКТ-1/РАОО-т!егасбпд рго!еазе, ш Раз/Аро-1- апб Т№ гесер!ог-тбисеб се11 беа!Н, Се11., 85, 803-815, 1996.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Пептид, способный связываться с интерлейкин- 1 -β -конвертирующим ферментом (ГСЕ), имеющий, согласно Списку последовательностей, аминокислотную последовательность 8ЕО ГО ΝΟ: 1, в которой Хаа представляет собой Азр или А1а.
2. Пептид по п.1, имеющий, согласно Списку последовательностей, аминокислотную последовательность 8ЕО ГО ΝΟ: 2.
3. Пептид по п.1, имеющий, согласно Списку последовательностей, аминокислотную последовательность 8ЕО ГО ΝΟ: 3.
4. Пептид по п.1, дополнительно содержащий одну или более аминокислот на Νконцевом и(или) С-концевом участке и состоящий из 20-40 аминокислот.
5. Пептид по п.4, имеющий согласно Списку последовательностей, аминокислотную последовательность 8Ер ГО N0: 4.
6. Пептид по п.4, имеющий согласно Списку последовательностей, аминокислотную последовательность 8ЕР ГО N0: 5.
7. Применение пептида по любому из пп.1-6 при лечении заболеваний, требующих ингибирования 1СЕ.
8. Применение пептида по любому из пп.1-6 в качестве активного начала для приготовления фармацевтических препаратов, используемых при лечении заболеваний, требующих ингибирования 1СЕ.
9. Применение по п.8, отличающееся тем, что заболевание представляет собой аутоиммунное заболевание.
10. Применение по п.8, отличающееся тем, что заболевание является бактериальной или вирусной инфекцией со смертельным исходом.
11. Применение по п.8, отличающееся тем, что заболевание представляет собой воспалительное заболевание.
12. Фармацевтическая композиция, предназначенная для использования в профилактике, терапии или диагностике заболеваний, требующих ингибирования 1СЕ, содержащая пептид, по любому из пп.1-6 вместе с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями и/или наполнителями.
13. Фармацевтическая композиция по п.12, отличающаяся тем, что заболевание представляет собой аутоиммунное заболевание.
14. Фармацевтическая композиция по п.12, отличающаяся тем, что заболевание является бактериальной или вирусной инфекцией со смертельным исходом.
15. Фармацевтическая композиция по п.12, отличающаяся тем, что заболевание представляет собой воспалительное заболевание.