ES2225893T3 - Peptidos que inhiben la enzima convertidora de interleuquina-1beta (ice). - Google Patents

Peptidos que inhiben la enzima convertidora de interleuquina-1beta (ice).

Info

Publication number
ES2225893T3
ES2225893T3 ES96937313T ES96937313T ES2225893T3 ES 2225893 T3 ES2225893 T3 ES 2225893T3 ES 96937313 T ES96937313 T ES 96937313T ES 96937313 T ES96937313 T ES 96937313T ES 2225893 T3 ES2225893 T3 ES 2225893T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
baselineskip
peptide
eci
gly
asp
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES96937313T
Other languages
English (en)
Inventor
Marta Muzio
Martino Introna
Alberto Mantovani
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Applied Research Systems ARS Holding NV
Original Assignee
Applied Research Systems ARS Holding NV
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Applied Research Systems ARS Holding NV filed Critical Applied Research Systems ARS Holding NV
Application granted granted Critical
Publication of ES2225893T3 publication Critical patent/ES2225893T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/02—Non-specific cardiovascular stimulants, e.g. drugs for syncope, antihypotensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

ESTA INVENCION SE REFIERE A UN PEPTIDO CAPAZ DE UNIRSE A UNA ICE Y/O A UNAS ENZIMAS DE LA FAMILIA DE LOS ICE, CONSISTIENDO ESTE PEPTIDO BASICAMENTE EN UNA SECUENCIA DE ACIDOS AMINADOS DE SEQ ID NO:1 MENCIONADA EN LA LISTA DE LAS SECUENCIAS, EN LA CUAL XAA SE SELECCIONA ENTRE ASP Y ALA, Y CONTENIENDO EVENTUALMENTE UNO O VARIOS ACIDOS AMINADOS EN SU(SUS) EXTREMIDAD(ES) N TERMINAL Y/O C - TERMINAL. ESTA INVENCION SE REFIERE TAMBIEN AL USO DEL PEPTIDO MENCIONADO ANTERIORMENTE, DESTINADO A LA PREPARACION DE LAS COMPOSICIONES FARMACEUTICAS ACTIVAS EN PATOLOGIAS QUE REQUIEREN UNA INHIBICION DE ICE Y/O UNA INHIBICION DE ENZIMAS DE LA FAMILIA DE LOS ICE.

Description

Péptidos que inhiben la enzima convertidora de interleuquina-1\beta (ICE).
Campo de la invención
La presente invención se refiere a un péptido capaz de unirse a ECI y/o a las enzimas de la familia de ECI, péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº:1, en la cual Xaa se selecciona entre Asp y Ala, opcionalmente con uno o más aminoácidos en su extremo N-terminal y/o C-terminal.
También se refiere al uso del péptido anterior para la preparación de composiciones farmacéuticas activas en las patologías que requieren la inhibición de ECI y/o la inhibición de las enzimas de la familia de ECI.
Antecedentes de la invención
ECI (enzima convertidor de interleuquina 1\beta) es una protejas heterdimérica de cisteína que recientemente se ha purificado y clonado (1). La interleuquina 1\beta (IL-1\beta) se sintetiza como un precursor inactivo de 33 kDa o de 31 kDa (pIL-1\beta); la forma plenamente activa madura de IL-1\beta de 17,5 kDa empieza en Ala^{117} y parece ser el resultado de un tratamiento entre Asp^{116} y Ala^{117} (2, 3). Por lo tanto, la proteína precursora de IL-1\beta se fragmenta en presencia de ECI para proporcionar la forma madura y biológicamente activa.
La actividad de ECI se ha identificado en monocitos y THP1, que provocan la fragmentación de pIL-1\beta en
Asp^{116}-Ala^{117}, así como en Asp^{27}-Gly^{28} para proporcionar los productos de 17,5 kDa y 28 kDa, respectivamente (3, 4). La fragmentación en cada sitio depende del ácido aspártico en la posición P1 (4, 6, 7).
Está resultando evidente de que las proteasas de cisteína relacionadas con la proteína de la muerte de la célula de Caenorhabditis elegans ced-3 representan los componentes efectores de la maquinaria apoptótica. ECI fue el primer homólogo de CED-3 en ser descrita y se sabe que la sobreexpresión de ECI o CED-3 en fibroblastos Rat-1 indujo la apoptosis (8). Estudios adicionales también apuntan a que las proteasas de la familia de ECI pueden desempeñar un papel importante en el mecanismo apoptótico.
ECI parece ser una enzima especifica para procesar pIL-1\beta, porque no provoca la fragmentación de IL-1\alpha u otras varias proteínas que contienen muchos enlaces Asp-X.
Las interleuquinas IL-1\alpha y IL-1\beta son citoquinas pleiotrópicas que, a pesar de que sus secuencias muestren escasa analogía, ejercen una diversidad de efectos similares en tejidos diferentes y actúan en muchas patologías humanas, sobre todo en la respuesta inmunitaria del organismo y en procesos inflamatorios (9). Ambas proteínas tienen un peso molecular de aproximadamente 17,5 kDa y se sintetizan previamente como moléculas precursores de tamaño más grande con pesos moleculares de aproximadamente 31 KDa.
Las IL-1s son citoquinas inflamatorias y pirogénicas potentes que normalmente ejercen efectos beneficiosos pero que también pueden tener efectos muy poco saludables para el organismo. Por ejemplo, pueden participar en la patogénesis de síntomas de patologías autoinmunológicas como lupus eritematoso sistémico y, en particular, están implicadas como mediadores para provocar daños en tejidos como en la artritis reumatoide, por ejemplo.
Muchos de los efectos biológicos de IL-1 se parecen a los que se pueden observar en un episodio séptico. Estudios recientes han demostrado que la administración intravenosa de IL-1 en dosis que van de 1 a 10 ng/kg produce fiebre, somnolencia, anorexia, mialgia generalizada, artralgia y cefaleas.
Dado que las IL-1s tienen actividades pleiotrópicas biológicas, muchas de las cuales tienen efectos negativos para el organismo, los efectos potentes de IL-1 deberían mantenerse bajo un control fisiológico estricto.
La síntesis de IL-1 es inhibida por citoquinas antiinflamatorias, prostaglandinas y glucocorticoides y la existencia de niveles múltiples de inhibición de IL-1 apunta a la necesidad de un control estricto de este mediador.
Hay dos tipos de receptores de IL-1 denominados IL-1RI y IL-1RII. IL-1RII es una molécula de IL-1 no implicada en la señalización que actúa como una diana regulada de señuelo para IL-1 (10-12).
Hasta la fecha, se ha descrito un polipéptido antagonista para el receptor de IL-1: el tercer componente hasta la actualidad de la familia de las proteínas que se unen a los receptores es el antagonista para el receptor IL-1 (IL-1ra) (13-15). Los tres componentes (IL-1\alpha, IL-1\beta, IL-1ra) reconocen y se unen al mismo receptor en la superficie celular (IL-1R); cuando IL-1\alpha y IL-1\beta se unen a IL-1R se trasmite una señal, mientras que IL-1ra no lo hace.
IL-1ra es un polipéptido que se une a IL-1RI, y con menos afinidad a IL-1RII, sin ninguna actividad agonista. La producción de IL-1ra se induce en diferentes tipos de células, tales como fagocitos mononucleares, células polimorfonucleares (PMN) y fibroblastos por IgG, citoquinas y productos bacterianos.
Hasta la actualidad, se han identificado y clonado dos formas moleculares de IL-1ra: 1) IL-1ra segregada (sIL-1ra) contiene una secuencia clásica de 25 aminoácidos que proporcionan una proteína madura de 152 aminoácidos; 2) IL-1ra intracelular (icIL-1ra) a la que le falta una secuencia guía, lo que permite predecir que dicha proteína permanece intracelular.
sIL-1ra e icIL-1ra se generan del mismo gen. Las transcripciones de icIL-1ra tienen su origen en un sitio alternativo de iniciación y en la modificación por corte y empalme de un primer exon alternativo en un sitio aceptador de un corte y empalme interno situado en el primer exón de sIL-1ra. Por lo tanto, las proteínas predichas son idénticas salvo en sus extremos NH_{2}, en donde los primeros 21 aminoácidos de sIL-1ra se sustituyen por cuatro aminoácidos en icIL-1ra.
La expresión de las transcripciones que codifican sIL-1ra e icIL-1ra se regulan de forma diferente. La importancia biológica de icIL-1ra todavía no está clara.
Teniendo en cuenta que IL-1 está implicada con la patogénesis de muchas enfermedades, es evidente que existe la necesidad de tener medicamentos disponibles que sean útiles para limitar los efectos insaludables de IL-1.
Recientemente, se ha identificado y clonado una forma molecular nueva de icIL-1ra (16 y documento PCT/EP95/
04023). Esta molécula se genera mediante la inserción en el marco de un exón nuevo de 63 pb entre el primero y el segundo exón es de la forma específica de icIL-1ra. Se ha encontrado que este transcripto nuevo se expresa en fibroblastos, queratinocitos, monocitos activados y células polimorfonucleares. La expresión en células COS ha revelado que esta nueva molécula es principalmente intracelular y que tiene un peso molecular de aproximadamente 25 kDa según SDS-PAGE. Esta nueva molécula se ha denominado icIL-1ra tipo II (icIL-1raII). Teniendo en cuenta que icIL-1raII es una proteína intracelular así como ECI, la solicitante también ha ensayado la capacidad de
icIL-1raII para inhibir la actividad de ECI. Los resultados se dan a conocer en los Ejemplos de esta solicitud de patente y demuestran que icIL-1raII inhibe la actividad de ECI.
Descripción de la invención
El objeto principal de la presente invención es proporcionar nuevos péptidos capaces de unirse a ECI, bloqueando así la producción de la forma activa de IL-1\beta y/o, de forma más general, capaces de unirse a las enzimas de la familia de ECI, bloqueando así la actividad de dichas enzimas. Por lo tanto, la presente invención se refiere a un péptido capaz de unirse a ECI y/o a enzimas de la familia ECI, péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº:1, en que Xaa se selecciona entre Asp y Ala, tal como se describe específicamente en SEC ID Nº: 2 ó 3. Opcionalmente, el péptido también contiene uno o más aminoácidos en el extremo N-terminal y/o el extremo C-terminal. Por lo tanto, el péptido de la invención puede tener una longitud de 19-40 aminoácidos, preferiblemente de 19-25 amino-
ácidos.
En particular, según una realización de la invención, el péptido consiste en la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº. 5. Las secuencias de SEC ID Nº. 4 así como Ala-Asp-Leu-Tyr-Glu-Glu-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Glu-Gly-Glu-Asp-Asn- Ala-Asp-Ser-Lys se describen el documento PCT/EP05/04023.
Una lista no limitante de proteasas de cisteína de la familia de ECI incluye: CED-3 (17), Nedd-2/ICH-1 (18, 19), Yama/CPP-32/Apopain (20, 21, 22), Tx/ICH-2/ICE rel-II (23, 24, 25), ECI rel-III (25), Mch-2 (26), ECI-LAP3/Mch-3/CMH-1 (27, 28, 29), ECI-LAP-6 (30) y FLICE/MACH (31,32).
Otro objeto de la presente invención es proporcionar el péptido en forma esencialmente purificada con el fin de ser apropiado para el uso en composiciones farmacéuticas como principio activo en patologías que requieren la inhibición de ECI y/o la inhibición de enzimas de la familia de ECI.
Ejemplos de patologías en que el nuevo antagonista según la invención puede utilizarse ventajosamente con fines profilácticos, terapéuticos o diagnósticos son infecciones bacterianas y virales letales así como en enfermedades autoinmunológicas e inflamatorias. Ejemplos específicos incluyen: artritis reumatoide, choque séptico, leucemia mielomonocitica aguda, reacción inmunológica de transplante contra el huésped, síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), colitis ulcerosa y esclerosis múltiple.
Objetos y ventajas adicionales de la invención resultarán evidentes en la siguiente descripción.
Una realización de la invención es la administración de una cantidad farmacológicamente activa del péptido de la invención a individuos con riesgo de desarrollar las patologías que requieren la inhibición de ECI y/o la inhibición de enzimas de la familia ECI o a individuos que ya exhiben dichas patologías.
Puede utilizarse cualquier vía de administración compatible con el principio activo, pero una vía especialmente preferida es la administración parenteral porque permite efectos sistémicos en un plazo corto de tiempo. Por esta razón, es preferible la administración de un bolo intravenoso justo antes, durante o después de la operación quirúrgica. La dosis de péptido a administrar depende de los criterios de las indicaciones médicas según edad, peso, y la respuesta individual del paciente.
La dosificación pueden estar entre 0,05 y 30 mg/kg de peso corporal y la dosis preferible está entre 0,1 y 10 mg/kg de peso corporal.
La composición farmacéutica para el uso parenteral puede prepararse en forma de inyección que comprende el principio activo y un vehículo apropiado. Vehículos para la administración parenteral son bien conocidos en la técnica y comprenden, por ejemplo, agua, solución salina, solución de Ringer y dextrosa. El vehículo puede contener cantidades más pequeñas de excipientes con el propósito de mantener la estabilidad e isotonicidad de la solución.
La preparación de dichas soluciones puede llevarse a cabo según las modalidades normales y, preferiblemente, el contenido del péptido estará comprendido entre 1 mg/ml y 10 mg/ml.
La presente invención se ha descrito con referencia a las realizaciones específicas, pero el contenido de la descripción comprende todas las modificaciones y sustituciones que pueden ser efectuadas por una persona experta en la técnica sin que se exceda el sentido y la finalidad de las reivindicaciones.
La invención se describirá ahora mediante los siguientes Ejemplos, que de ninguna forma deben tomarse como limitantes de la presente invención. Los Ejemplos harán referencia a las Figuras que se especifican abajo.
Descripción de las figuras
Figura 1: Muestra un análisis Northern de la expresión de ARNm de ECI en células transfectadas COS. El ARNm total extraído mediante células COS transfectadas con un vector simulado o con ADNc que codifica ECI humana se analiza mediante análisis Northern para evidenciar la expresión de ARNm específico a ECI. En particular, pista 1: SIMULADO; pista 2: ECI.
Figura 2: Muestra una transferencia Western. pIL-1\beta se incubó con un lisado de monocitos preparado tal como se describe en la bibliografía (4); después de 60 minutos de incubación a 37ºC se sometió la mezcla de reacción a
SDS-PAGE y la presencia del precursor o de IL-1\beta madura se evidenció mediante la transferencia Western. En particular,
pista 1: pIL-1; y
pista 2: pIL-1 + lisado de monocitos
Figura 3: Muestra las secuencias de aminoácidos de los péptidos bajo estudio. Péptido A (SEC ID Nº: 6) y péptido C (SEC ID Nº: 4) se han diseñado sobre la base de la secuencia icIL-1raII. Péptido X (SEC ID Nº: 7) es un péptido elegido al azar. Péptido S (SEC ID Nº: 5) es idéntico al péptido C, salvo la presencia de dos Ala en sustitución de los dos residuos de As. Péptido B (SEC ID Nº: 8) es un inhibidor conocido de ECI (1a).
Figura 4: Muestra la inhibición de la actividad de ECI por concentraciones bajas de los péptidos bajo estudio.
pIL-1\beta (5 ng) se incubó con ECI en presencia o ausencia de péptidos (0,25 o 2,5 \muM) y la presencia de precursor o
IL- 1\beta madura se evidenció tal como se describe para la Figura 2. En concreto,
pista 1: p1IL-1;
pista 2: p1IL-1 + péptido A;
pista 3: p1IL-1 + péptido B;
pista 4: p1IL-1 + péptido C;
pista 5: p1IL-1 + ECI
pista 6: p1IL-1 + ECI + péptido A (2,5 \muM);
pista 7: p1IL-1 + ECI + péptido A (0,25 \muM);
pista 8: p1IL-1 + ECI + péptido B (2,5 \muM);
pista 9: p1IL-1 + ECI + péptido B (0,25 \muM);
pista 10: p1IL-1 + ECI + péptido C (2,5 \muM); y
pista 11: p1IL-1 + ECI + péptido C (0,25 \muM).
Figura 5: Muestra la inhibición de actividad de ECI por concentraciones altas de los péptidos bajo estudio. pIL-1\beta (5 ng) se incubó con ECI en presencia o ausencia de péptidos (40 o 400 \muM) y la presencia de precursor o IL-1\beta madura se evidenció tal como se describe para la Figura 2. En concreto,
pista 1: p1IL-1 + péptido A;
pista 2: p1IL-1 + péptido B;
pista 3: p1IL-1 + péptido C;
pista 4: p1IL-1 + péptido X;
pista 5: p1IL-1;
pista 6: p1IL-1 + ECI;
pista 7: p1IL-1 + ECI + péptido A (400 \muM);
pista 8: p1IL-1 + ECI + péptido B (400 \muM);
pista 9: p1IL-1 + ECI + péptido C (400 \muM);
pista 10: p1IL-1 + ECI + péptido X (400 \muM);
pista 11: p1IL-1 + ECI + péptido A (40 \muM);
pista 12: p1IL-1 + ECI + péptido B (40 \muM);
pista 13: p1IL-1 + ECI + péptido C (40 \muM); y
pista 14: p1IL-1 + ECI + péptido X (40 \muM);
Figura 6: Muestra la inhibición de actividad de ECI por péptidos C y S. pIL-1\beta (5 ng) se incubó con ECI en la presencia o ausencia de péptidos (100, 300 ó 1.000 \muM) y la presencia del precursor o IL-1\beta madura se evidenció tal como se describe para la Figura 2. En concreto,
pista 1: p1IL-1;
pista 2: p1IL-1 + péptido C;
pista 3: p1IL-1 + péptido S;
pista 4: p1IL-1 + péptido B;
pista 5: p1IL-1 + ECI
pista 6: p1IL-1 + ECI + péptido C (0,1 mM);
pista 7: p1IL-1 + ECI + péptido C (0,3 mM);
pista 8: p1IL-1 + ECI + péptido C (1 mM);
pista 9: p1IL-1 + ECI + péptido S (0,1 mM);
pista 10: p1IL-1 + ECI + péptido S (0,3 mM);
pista 11: p1IL-1 + ECI + péptido S (1 mM); y
pista 12: pIL-1 + ECI + péptido B (1 mM).
Ejemplos Materiales y métodos Reactivos
Los siguientes reactivos disponibles comercialmente se utilizaron para el cultivo y la separación de las células:
Ficoll (Seramed, Berlín, Alemania), Percoll (Pharmacia, Uppsala, Suecia), RPMI 1640 (Seramed, Berlín, Alemania), FCS (HycloneLaboratories, Logan, Reino Unido), Glutamina (Seramed, Berlín, Alemania) y Hepes (Merk, Darmastadt, Alemania).
Células
Las células mononucleares se obtuvieron de la sangre periférica de donantes humanos sanos mediante centrifugación de gradiente en Ficoll. Los monocitos purificados se separaron de las células mononucleares mediante centrifugaciones de gradiente en Percoll a 2.000 rpm durante 30 minutos a temperatura ambiente (10). Las células COS-7 (adquiridas de ATCC, Rockville, MD, EE.UU.) y los monocitos se cultivaron en medio RPMI 1640 + FCS al 10% - glutamina 2 mM + Hepes 20 mM. El precursor recombinante humano de IL-1\beta se obtuvo de Cistron Biotechnology, Pinebroom, NJ, EE.UU. Un anticuerpo policlonal reactivo con IL-1\beta tanto madura como precursora se generó en el laboratorio de los autores de esta patente.
RCP
ADNc de ECI se obtuvo mediante RCP-TR, según la secuencia publicada (8a). RCP-TR se llevó a cabo tal como se describe (16) para 30 ciclos a 95ºC durante 1 minuto y 30 segundos, a 55ºC durante 1 minuto y 30 segundos y a 72ºC durante 1 minuto y 30 segundos. Los oligonucleótidos se obtuvieron de Duotech (Mílan, Italia). Las secuencias de oligos que se utilizaron para amplificar ECI selectivamente fueron las siguientes:
"ADE" ECI 1: 5'-AAAAGCCATGGCCGACAAGGTC-3' (SEQ ID No: 9)
"REV" ECI 2: 5'-TCTCTTCACCCTGCCCACAGAC-3' (SEQ ID No: 10).
Resultados Expresión de enzima recombinante ECI en células COS
ADNc que codifica ECI humana se ha amplificado mediante RCP. La secuencia se confirmó y el ADNc se subclonó en el vector de expresión pSG5. Células COS se transfectaron con el vector vacío (simulado) o el vector que contenía ADNc de ECI y, después de 48 horas, las células se analizaron en cuanto a la expresión de ARNm específica de ECI. Tal como se muestra en la Figura 3, las células COS, transfectadas con ADNc de ECI, expresaron altos niveles de ARNm de ECI.
Un lisado de monocitos, preparado tal como se ha descrito previamente (11), también pudo convertir pIL-1\beta en una forma madura (Figura 2). Por lo tanto, ECI recombinante o monocitos humanos recientemente aislados se utilizaron como una fuente de actividad enzimática de ECI para experimentos adicionales.
Inhibición de actividad de ECI
Se preparó una fuente de actividad de ECI y su capacidad para fragmentar pIL-1\beta se ensayó mediante la incubación de la reacción a 37ºC durante 1 hora. A continuación, la mezcla se sometió a SDS-PAGE y la presencia de pIL-1\beta o la forma madura se evidenció con transferencia Western.
Se diseñaron, sintetizaron y ensayaron cuatro tipos diferentes de péptidos en cuanto a su capacidad para inhibir la actividad de ECI. Estos péptidos se indican en la Figura 3 y se obtuvieron con el sintetizador en fase sólida de Applied Biosystems (Foster City, CA). La pureza de estos péptidos se verificó mediante cromatografía líquida de alto rendimiento.
El tetrapéptido B (Bachem, Bubendorf, Suiza) descrito en la Figura 3, que es un inhibidor conocido de ECI (1a), se utilizó como control positivo.
Bibliografía
1. a) Thornberry et al., A novel cysteine protease is required for interleukin-1\beta processing in monocytes, Nature, 356, 768-774, 1990;
b) Ceretti et al., Molecular cloning of the interleukin-1\beta converting enzyme, Science, 256, 97-100, 1992;
2. Cameron et al., Amino acid sequence analysis of human IL-1. Evidence for biochemically distinct forms of IL-1, J. Exp. Med., 162, 790-801, 1985;
3. Mosley et al., The interleukin-1 receptor binds the human interleukin-1\alpha precursor but not the interleukin-1\beta precursor, J. Biol. Chem., 262, 2941-2944, 1987;
4. Kostura et al., Identification of a monocyte specific pre-interleukin-1\beta convertase activity, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86, 5227-5231, 1989;
5. S. Black et al., Activation of interleukin-1\beta by a co-induced protease, FEBS Lett., 427, 386-390, 1989;
6. Howard et al., IL-1 converting enzyme requires aspartic acid for processing of the IL-1\beta precursor at two distinct sites and does not cleave 31 kDa IL-1\alpha, J. Immunol., 147,2964-2969, 1991;
7. Griffin et al., III Int. J. Mass. Spectrom. Ion. Phys., 11, 131-149, 1991;
8. Miura et al., Induction of apoptosis in fibroblasts by interleukin-1\beta-converting enzyme, a mammalian homologue of the C. elegans cell death gene ced-3, Cell, 75, 653-660, 1993;
9. Dinarello, Interleukin-1 and interleukin-1 antagonism, Blood, 77, 1627-1652, 1991;
10. Colotta et al., Interleukin-1 type II receptor: a decoy target for IL-1 that is regulated by IL-4, Science, 261, 472-475, 1993;
11. Sims et al., Interleukin-1 signalling occurs exclusively via the type I receptor, Proc. Natl. Acad USA, 90, 6155-6159, 1993;
12. Colotta et al, Immunol. Today, 15, 562-566, 1994;
13. Hannum et al., Interleukin-1 receptor antagonist activity of a human interleukin-1 inhibitor, Nature, 343, 336-340, 1990;
14. Eisenberg et al., Primary structure and functional expression form complementary DNA of a human interleukin-1 receptor antagonist, Nature, 343, 341-346, 1990;
15. Carter et al., Purification, cloning, expression and biological characterisation of an interleukin-1 receptor antagonist protein, Nature, 344, 633-638, 1990;
16. Muzio et al, Cloning and characterisation of a new isoform of interleukin-1 (IL-1) receptor antagonist (IIIra), J. Exp. Med., 182623, 1995;
17. Yuan et al., The C. elegans cell death gene ced-3 encodes a protein similar to mammalian interleukin-l\beta-converting enzyme, Cell, 75, 641-652, 1993;
18. Kumar et al., Induction of apoptosis by the mouse nedd2 gene, which encodes a protein similar to the product of the C. elegans cell death gene ced-3 and the mammalian mterleukin-1\beta-converting enzyme, Genes Dev. 8, 1613-1626, 1994;
19. Wang et al., Ich-1, an Ice/ced-3-related gene, encodes both positive and negative regulators of programmed call death, Cell, 78, 739-750, 1994;
20. Fernandes-Alnemri et al., CPP-32, a novel human apoptotic protein with homology to Caenorhabditis elegans cell death protein CDE-3 and mammalian interleukin-1\beta-converting enzyme, J. Biol. Chem., 269, 30761-30764, 1994;
21. Nicholson et al, Identification and inhibition of ICE/CED-3 protease necessary for mammalian apoptosis, Nature, 376, 37-43, 1995;
22. Tewari et al., Yama/CPP-32\beta, a mammalian homologue of CED-3, is a CmA-inhibitable protease that cleaves the death substrate poly(ADP-ribose) polymerase, Cell, 81, 801-809, 1995;
23. Faucheu et al., A novel human protease similar to the interleukin-1\beta-converting enzyme induces apoptosis in transfected cells, EMBO J., 14, 1914-1922, 1995;
24. Kamens et al., Identification and characterisation of ICH-2, a novel member of the iuterleukin-1\beta-converting enzyme family of cysteine proteases, J. Biol. Chem., 270, 15250-15256, 1995;
25. Munday et al., Molecular cloning and proapoptotic activity of ICE rel-II and ICE rel-III, members of the ICE/CED-3 family of cysteine proteases, J. Biol. Chem., 270, 15870-15876, 1995;
26. Fernandes-Alnemri et al., Mch-2, a new member of the apoptotic CED-3/ICE cysteine protease gene family, Cancer Res., 55, 2737-2742, 1995;
27. Duan et al., ICE-LAP3, a novel mammalian homologue of the Caenorhabditis elegans cell death protein
CED-3, is activated during Fas- and TNF-induced apoptosis, J. Biol. Chem., 2271, 35013-35035, 1996;
28. FernandesrAlnemri et al., Mch-3, a novel human apoptotic cysteine protease highly related to CPP 32, Cancer Res., 55, 6045-6052, 1995;
29. Lippke et al., Identification and characterisation of CPP-32/Mch-2 homologue 1, a novel cysteine protease similar to CPP-32, J. Biol. Chem., 271, 1825-1828, 1996;
30. Duan et al., ICE-LAP6, a novel member of the ICE/Ced-3 gene family, is activated by the cytotoxic T cell protease granzynne B, J. Biol. Chem., en prensa, 1996;
31. Muzio et al, FLICE a novel FADD-homologous ICE/CED-3-like protease, is recruited to the CD95(Fas/Apo-1) Death-Inducing Signalling Complex, Cell, 85, 817-827, 1996;
32. Boldin et al., Involvement of MACH, a novel MORT 1/FADD-interacting protease, in Fas/Apo-1- and TNF receptor-induced cell death, Cell, 83, 803-815, 1996.
(1) INFORMACIÓN GENERAL
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
SOLICITANTE:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE: APPLIED RESEARCH SYSTEMS ARS HOLDING N.V.
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
CALLE: 14, JOHN B. GORSIRAWEG
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
CIUDAD: CURACAO
\vskip0.500000\baselineskip
(E)
PAÍS: ANTILLAS HOLANDESAS
\vskip0.500000\baselineskip
(F)
CÓDIGO POSTAL: NINGUNO
\vskip0.500000\baselineskip
(G)
TELÉFONO: 599-9-639300
\vskip0.500000\baselineskip
(H)
TELEFAX: 599-9-614129
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TÍTULO DE LA INVENCIÓN: PÉPTIDOS INHIBIDORES DE ECI
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
NÚMERO DE SECUENCIAS: 10
\vskip0.800000\baselineskip
(iv)
FORMA LEGIBLE POR ORDENADOR
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
TIPO DE MEDIO: Disquete
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
ORDENADOR: IBM PC compatible
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
SOFTWARE: PatentIN Release nº 1.0, Versión nº 1.30 (EPA)
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEC. ID Nº 1:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 19 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: Aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 2
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /nota = "Xaa es un aminoácido preferiblemente seleccionado entre Asp y Ala. Más preferiblemente, es Asp."
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 19
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /nota = "Xaa es un aminoácido preferiblemente seleccionado entre Asp y Ala. Más preferiblemente, es Asp."
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. ID. Nº 1:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Xaa Leu Tyr Glu Glu Gly Gly Gly Gly Gly Gly Glu Gly Glu Asp}
\sac{Asn Ala Xaa}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEC. ID Nº 2:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 19 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: Aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: Péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. ID. Nº 2:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Asp Leu Tyr Glu Glu Gly Gly Gly Gly Gly Gly Glu Gly Glu Asp}
\sac{Asn Ala Asp}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEC. ID Nº 3:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 19 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: Aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: Péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. ID. Nº 3:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Ala Leu Tyr Glu Glu Gly Gly Gly Gly Gly Gly Glu Gly Glu Asp}
\sac{Asn Ala Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEC. ID Nº 4:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 24 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: Aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: Péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. ID. Nº 4:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Met Ala Leu Ala Asp Leu Tyr Glu Glu Gly Gly Gly Gly Gly Gly Glu}
\sac{Gly Glu Asp Asn Ala Asp Ser Lys}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEC. ID Nº 5:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 24 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: Aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: Linear
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: Péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. ID. Nº 5:
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Met Ala Leu Ala Ala Leu Tyr Glu Glu Gly Gly Gly Gly Gly Gly Glu}
\sac{Gly Glu Asp Asn Ala Ala Ser Lys}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEC. ID Nº 6:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: Aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: Linear
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: Péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. ID. Nº 6:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Glu Gly Glu Asp Asn Ala Asp Ser Lys}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEC. ID Nº 7:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 13 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: Aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: Péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. ID. Nº 7:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Phe Lys Asp Pro His Gly Leu Trp Lys Gly Leu Ser His}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEC. ID Nº 8:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: Aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: Linear
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: Péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(iv)
ANTI-SENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 1
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /nota= "Xaa es acetilo."
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 6
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTROS DATOS: /nota= "Xaa es -CHO."
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. ID. Nº 8:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Xaa Tyr Val Ala Asp Xaa}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEC. ID Nº 9:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 22 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: Ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: otro ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
DESCRIPCIÓN: /des = "oligonucleótido"
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(iv)
ANTI-SENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 9:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
AAAAGCCATG GCCGACAAGG TC 
\hfill
22 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEC. ID Nº 10:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 22 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: Ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: otro ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
DESCRIPCIÓN: /des = "oligonucleótido"
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(iv)
ANTI-SENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº: 10:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
TCTCTTCACC CTGCCCACAG AC 
\hfill
22

Claims (14)

1. El péptido capaz de unirse a la enzima convertidor de interleuquina-1\beta (ECI), péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos SEC ID Nº: 1, en la cual Xaa se selecciona entre Asp y Ala y además, opcionalmente contiene uno o más aminoácidos en el extremo N-terminal y/o C-terminal, con lo que consiste en 19-40 aminoácidos, con la condición de que el péptido de SEC ID Nº: 4, así como el péptido que tiene la secuencia Ala-Asp-Leu-Tyr-Glu-Glu-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly- Gly-Glu-Gly-Glu-Asp-Asn-Ala-Asp-Ser-Lys están excluidos.
2. El péptido según la reivindicación 1, que consiste en la secuencia de aminoácidos SEC ID Nº: 1.
3. El péptido según la reivindicación 1, que consiste en la secuencia de aminoácidos SEC ID Nº: 2.
4. El péptido según la reivindicación 1, que consiste en la secuencia de aminoácidos SEC ID Nº: 3.
5. El péptido según la reivindicación 1, que consiste en la secuencia de aminoácidos SEC ID Nº: 5.
6. Un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para usar como un medicamento.
7. Un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos SEC ID Nº: 4 para usar como un medicamento.
8. Uso de un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades autoinmunes, enfermedades inflamatorias, infecciones bacterianas y virales letales.
9. Uso de un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos SEC ID Nº: 4 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades autoinmunes, enfermedades inflamatorias, infecciones bacterianas y virales letales.
10. Uso según la reivindicación 8 ó 9, caracterizado por el hecho de que la patología se selecciona del grupo de enfermedades autoinmunes.
11. Uso según la reivindicación 8 ó 9, caracterizado por el hecho de que la patología se selecciona del grupo que consiste en infecciones bacterianas y virales letales.
12. Uso según la reivindicación 8 ó 9, caracterizado por el hecho de que la patología se selecciona del grupo que consiste en enfermedades inflamatorias.
13. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12, en donde la patología se selecciona del grupo que consiste en artritis reumatoide, choque séptico, leucemia aguda mielomonocítica, reacción inmunológica de trasplante contra el huésped, síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), colitis ulcerosa y esclerosis múltiple.
14. Una composición farmacéutica que comprende un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, junto con uno o más vehículos y/o excipientes farmacéuticamente aceptables.
ES96937313T 1996-10-31 1996-10-31 Peptidos que inhiben la enzima convertidora de interleuquina-1beta (ice). Expired - Lifetime ES2225893T3 (es)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/EP1996/004738 WO1998018823A1 (en) 1996-10-31 1996-10-31 Ice inhibiting peptides

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2225893T3 true ES2225893T3 (es) 2005-03-16

Family

ID=8166387

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES96937313T Expired - Lifetime ES2225893T3 (es) 1996-10-31 1996-10-31 Peptidos que inhiben la enzima convertidora de interleuquina-1beta (ice).

Country Status (20)

Country Link
US (1) US6380162B1 (es)
EP (1) EP0938500B1 (es)
JP (1) JP4018154B2 (es)
KR (1) KR100502211B1 (es)
AR (1) AR011269A1 (es)
AT (1) ATE277079T1 (es)
BR (1) BR9612755A (es)
CA (1) CA2269638C (es)
DE (1) DE69633463T2 (es)
DK (1) DK0938500T3 (es)
EA (1) EA001866B1 (es)
EE (1) EE04782B1 (es)
ES (1) ES2225893T3 (es)
IL (1) IL129669A0 (es)
NO (1) NO323517B1 (es)
PT (1) PT938500E (es)
SI (1) SI0938500T1 (es)
UA (1) UA70291C2 (es)
WO (1) WO1998018823A1 (es)
ZA (1) ZA979712B (es)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2569917T3 (es) * 2005-06-21 2016-05-13 Xoma (Us) Llc Anticuerpos y fragmentos de los mismos que se unen a IL-1beta

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1270662B (it) 1994-10-13 1997-05-07 Applied Research Systems Antagonista della interleuchina-1
US5981713A (en) * 1994-10-13 1999-11-09 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Antibodies to intereleukin-1 antagonists

Also Published As

Publication number Publication date
DK0938500T3 (da) 2005-01-17
NO992079L (no) 1999-06-16
NO323517B1 (no) 2007-06-04
AR011269A1 (es) 2000-08-16
ZA979712B (en) 1999-02-05
BR9612755A (pt) 1999-10-19
KR20000052858A (ko) 2000-08-25
KR100502211B1 (ko) 2005-07-19
IL129669A0 (en) 2000-02-29
EP0938500B1 (en) 2004-09-22
JP4018154B2 (ja) 2007-12-05
AU729946B2 (en) 2001-02-15
SI0938500T1 (en) 2005-02-28
UA70291C2 (en) 2004-10-15
EP0938500A1 (en) 1999-09-01
JP2001510452A (ja) 2001-07-31
EE04782B1 (et) 2007-02-15
WO1998018823A8 (en) 1999-06-17
NO992079D0 (no) 1999-04-29
EA199900432A1 (ru) 1999-10-28
DE69633463D1 (de) 2004-10-28
CA2269638C (en) 2005-01-18
DE69633463T2 (de) 2006-02-23
EE9900178A (et) 1999-12-15
WO1998018823A1 (en) 1998-05-07
AU2702399A (en) 1999-08-16
EA001866B1 (ru) 2001-10-22
US6380162B1 (en) 2002-04-30
ATE277079T1 (de) 2004-10-15
PT938500E (pt) 2005-02-28
CA2269638A1 (en) 1998-05-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Zou et al. Molecular cloning of interleukin 1β from rainbow trout Oncorhynchus mykiss reveals no evidence of an ice cut site
Stennicke et al. Caspases–controlling intracellular signals by protease zymogen activation
Weining et al. A chicken homolog of mammalian interleukin‐1β: cDNA cloning and purification of active recombinant protein
Miller The role of the caspase family of cysteine proteases in apoptosis
EP3047024B1 (en) Compositions and methods for treatment of autoimmune and inflammatory diseases and disorders
US20080159986A1 (en) Modulators of the functions of receptors of the tnf/ngf receptor family and other proteins
KR19990029051A (ko) 에프에이에스 수용체들 및 다른 단백질들의 기능조절인자들
ES2225893T3 (es) Peptidos que inhiben la enzima convertidora de interleuquina-1beta (ice).
AU763721B2 (en) New caspase homologue
AU740223B2 (en) CASH (Caspase Homologue) with death effector domain, modulators of the function of FAS receptors
AU729946C (en) Ice inhibiting peptides
Tisljar et al. Cathepsin J, a novel murine cysteine protease of the papain family with a placenta-restricted expression
Johnson et al. Characterization of the avian Ich-1 cDNA and expression of Ich-1L mRNA in the hen ovary
MXPA99004046A (es) Peptidos inhibidores de ice
Wardlow et al. Nucleotide sequence of equine caspase-1 cDNA
US6586225B2 (en) ICE/CED-3 like protease designated FMH-1
Gaucher et al. Gerbil interleukin-18 and caspase-1: cloning, expression and characterization
Young et al. Molecular characterization of interleukin-1Beta in the tammar wallaby (Macropus eugenii)
Yao Induction of interleukin-1 (beta) converting enzyme in the brain and its role in anorexia induced by centrally administered lipopolysaccharide
US20050152877A1 (en) CASH (CASPASE HOMOLOGUE) with death effector domain, modulators of the function of FAS receptors