DK174920B1 - Octapeptidsomastatinanloger, fremgangsmåde til fremstilling deraf samt en farmaceutisk præparat - Google Patents
Octapeptidsomastatinanloger, fremgangsmåde til fremstilling deraf samt en farmaceutisk præparat Download PDFInfo
- Publication number
- DK174920B1 DK174920B1 DK198601854A DK185486A DK174920B1 DK 174920 B1 DK174920 B1 DK 174920B1 DK 198601854 A DK198601854 A DK 198601854A DK 185486 A DK185486 A DK 185486A DK 174920 B1 DK174920 B1 DK 174920B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- cys
- trp
- thr
- phe
- lys
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/655—Somatostatins
- C07K14/6555—Somatostatins at least 1 amino acid in D-form
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/16—Somatostatin; related peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
i DK 174920 B1 • · · · 1 1 1 -
Somatostatin er et cyclisk tetradecapeptid, som inhiberer sekretionen af hypofysært væksthormon. Der er tidligere blevet beskrevet adskillige analoger af somatostatin. Verber et al., Nature 292, 1981, s. 55 har beskrevet syntesen og virkningen af en cyclisk hexapeptidanalog, der er fremkommet ved at erstatte 9 af de 14 aminosyrer i somatosta-5 tin med ét enkelt prolin. Endvidere har samme forskergruppe beskrevet hexapeptidderivater med høj styrke, Life Sciences 34, 1984, s. 1371. Bauer et al., i "Peptides", 1982, s. 583, Red. K. Blaha, P.Malon, 1983, Walter de Gruyter & Co., Berlin,
New York, beskriver syntesen og aktiviteten af octapeptidanaloger (jfr. også Life Sciences, 31, 1982, s. 1133).
10
Andre somastatinanaloger er præsenteret i Peptides, Proc. Eur. Pept. Symp. 17th. Det mest potente octapeptid blandt disse, målt på evne til at hæmme frigivelsen af væksthormon, er SMS-201-995, hvor den C-terminale aminosyre er reduceret threonin.
15 Octapeptiderne ifølge den foreliggende opfindelse er strukturelt forskellige fra de octapeptider der er beskrevet i Peptides, Proc. Eur. Pept. Symp. 17lh og har nyttige farmakologiske egenskaber, der er anvendelige til behandling af forskellige typer af cancer. Desuden har de langt større affinitet for membranreceptorer hos forskellige cancerceller end det mest potente kendte octapeptid, SMS-201-995, beskrevet i Peptides, 20 Proc. Eur. Pept. Symp. 17lh.
1 almindelighed er de i nærværende beskrivelse anvendte forkortelser til betegnelse af aminosyrerne og beskyttelsesgrupperne baseret på anbefalinger fra IUPAC-IUB Commission of Biochemical Nomenclature, jfr. Biochemistry 11, 1972, s. 1726-1732. Fx 25 betegner Abu, Ala, Gly, Cys, Lys, Asn, Asp, Phe, Trp, L-Trp, D-Trp, DL-Trp, D-5-Br-Trp, L- 5-F-Trp, Thr og Ser "resterne" af henholdsvis o-aminosmørsyre, L-alanin, glycin, L-cystein, L-lysin, L-asparagin, L-asparaginsyre, L-phenylalanin, L-tryptophan, L-tryptophan, D-tryptophan, DL-tryptophan, D-5-bromtryptophan, L-5-fluortryptophan, L-threonin og l-serin. “Rest" betegner et radikal afledt af den tilsvarende π-aminosyre ved fjernelse af 30 carboxylgruppens hydroxygruppe og ét hydrogen fra a-aminogruppen.
1 den foreliggende opfindelse betegner Cys alene D-cystein i sulfhydrylform, hvorimod en bro mellem to Cys-grupper skal forstås som en disulfidbro, med mindre der er nogen supplerende indikationer. MBz er p-methoxybenzyl, 2-CIZ er 2-chlorcarbobenzyloxy, 35 ligesom 2-BrZ er den tilsvarende 2-bromcarbobenzyloxygruppe. Hvis sådanne grupper forekommer ved siden af en aminosyre, enten foranstående eller efterfølgende, men mellem bindestreger, så er en sådan gruppe en substituent på den aminosyre, som den støder op til.
DK 174920 B1 2
Den foreliggende opfindelse angår octapeptid-somastatinanaloger med formlen I A - Cys - X * D-Trp - Lys - Y - Cys - B I 5 hvor a) X betegner L-tyrosin (L-Tyr), og Y betegner L-valin (L-Val); eller b) X betegner L-phenylalanin (L-Phe), og Y betegner L-threonin (L-Thr); og A betegner en L-, D- eller DL-aminosyre, der er valgt fra gruppen bestående af phenylalanin (Phe), para-chlorphenylalanin (p-CI-Phe), tryptophan (Trp) og deres acetylerede derivater; 10 og B betegner en L-, D- eller DL-aminosyre, der er valgt fra gruppen bestående af threoninamid (Thr-NH2), og tryptophanamid (Trp-NH2); og de farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf; med det forbehold, at B ikke kan betegne D-Thr*NH2, når A er D-Phe, X er L-Phe, og Y er L-Thr.
15
Endvidere omfatter den foreliggende opfindelse fremgangsmåder og præparater, der anvender disse hidtil ukendte octapepttder til behandling af forskellige pattedyrsygdomme.
Disse octapeptider inhiberer frigørelsen af hormoner såsom væksthormon, prolactin, 20 insulin, glucagon, gastrin, sekretin og cholecystokinin samt formindsker gastrin-stimuleret sekretion af mavesyre. Disse virkninger kan være uafhængige af indgivelse af andre fysiologisk aktive forbindelser eller kan være en effekt af kombinationen af præparatet ifølge opfindelsen med andre fysiologisk aktive forbindelser.
25 Octapeptiderne ifølge den foreliggende opfindelse kan således anvendes til behandling af sygdomstilstande såsom diabetisk retinopati, diabetes, ulcera, akut pankreatitis og akromegali. Hvis endvidere væksten af onkogent væv er påvirket af ét af de hormoner, der styres af octapeptider, kan disse octapeptider være nyttige ved behandling af sådanne tumorer. Sådanne tumorer er fx prostatiske adenocarcinomer, brystcarcinomer (påvirket af 30 prolactin og væksthormon) såvel som insulinomer, gastrinomer, væksthormon- og insulinafhængige tumorer såsom chondrosarcomer og osteosarcomer såvel som pankreatiske duktale og acinare tumorer (pankreatiske carcinomer), der er afhængige af gastrointestinale hormoner.
35 Octapeptiderne ifølge opfindelsen er omfattet af den ovenstående almene formel I. Disse octapeptider foreligger i cyclisk form på grund af en bro mellem Cys-substituenterne.
Denne bro er en disulfidbro (-S-S-). De reducerede former af octapeptiderne med den almene formel 1 er omfattet af den almene formel Γ nedenfor. Disse reducerede former er 3 DK 174920 B1 mellemprodukter ved fremgangsmåden til fremstilling af forbindelserne med den almene formel I.
Octapeptiderne ifølge opfindelsen kan fås i form af den frie base eller i form af et 5 farmaceutisk eller terapeutisk acceptabelt syreadditionssalt. Octapeptiderne i form af de frie baser kan ved konventionelle metoder let fås ud fra det tilsvarende syreadditionssatt, idet fx en opløsning af syreadditionssaltet passeres gennem en anionbytterharpiks (OH-form), hvilket giver den frie base. Den frie base kan også fås ud fra eddikesyreadditionssaltet ved gentagen lyofilisering af sidstnævnte salt ud fra en vandig opløsning.
10 Eddikesyreadditionssaltet fås let ud fra et andet syreadditionssalt ved behandling med den relevante ionbytterharpiks, fx Sephadex® G-15 under anvendelse af 50% eddikesyre som beskrevet af Coy et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 1973, s. 1267-1273.
Octapeptiderne ifølge opfindelsen kan fås i form af et farmaceutisk eller terapeutisk 15 acceptabelt syreadditionssalt enten direkte ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen eller ved at omsætte peptidet med én eller flere ækvivalenter af den relevante syre. Eksempler på foretrukne ikke-toxiske salte er salte med farmaceutisk eller terapeutisk acceptable organiske syrer, fx eddikesyre, mælkesyre, ravsyre, benzoesyre, salicylsyre, methan-sulfonsyre, toluensulfonsyre eller pamoinsyre, såvel som polymere syrer såsom garvesyre -----—20 eilercarboxymethyicellnlo5e_og_salte medUorganiské syrer såsom halogénbrintesyrerne, fx saltsyre, eller svovlsyre eller phosphorsyre.
Octapeptiderne ifølge opfindelsen kan fremstilles ved fastfasesyntese. Syntesen begynder ved peptidets C-terminale ende. Den første beskyttede aminosyre bindes til benzhydryl-25 aminharpiksen ved reaktion med den carboxylgruppebeskyttede aminosyre i nærværelse af Ν,Ν'-dicyclohexylcarbodiimid eller Ν,Ν’-diisopropylcarbodiimid og 1-hydroxybenzotriazol (HOBT). Den sekventielle opbygning af peptidet medfører trinvis addition af hver aminosyre i peptidkædens N-terminale del.
30 Fraspaltningen af den N-terminale beskyttelsesgruppe udføres under anvendelse af tnfluoreddikesyre. De andre beskyttelsesgrupper, der er til stede på peptidkæden, er stabile under betingelserne for fraspaltningen af N-terminalbeskyttelsesgruppen. Nar først den N-terminale afbeskyttelse er foretaget, vil det resulterende produkt normalt være i form af syreadditionssaltet af trifluoreddikesyre. Den frie terminale aminoforbindelse 35 dannes ved behandling med en mild base, typisk en tertiær amin såsom triethylamin eller diisopropylethylamin. Peptidharpiksen er derefter klar til kobling med den næste aminosyre, som har en fri carboxylgruppe, men som er beskyttet ved a-aminogruppen.
4 DK 174920 B1
Nar først den ønskede aminosyresekvens er fremstillet, fjernes det resulterende peptid fra harpiksbæreren. Dette udføres ved behandling af peptidharpiksen med hydrogenfluorid. Hydrogenfluoridet spalter peptidet fra harpiksen og spalter desuden alle tilbageværende beskyttelsesgrupper med undtagelse af formylgruppen på Trp. Denne behandling med 5 hydrogenfluorid udføres i nærværelse af m-cresol og anisol, som har vist sig at inhibere den potentielle alkylering af visse aminosyrer, der er til stede i peptidkaeden.
Nar spaltningsreaktionen er udført, fås produktet i den reducerede form, dvs. med den almene formel Γ 10 A - Cys - X · D-Trp - Lys - Y - Cys - B 1' hvor A, X, Z, Y og B er som defineret i krav 1. Oxidation vil danne en disulfidbro og tillade, at produkterne fås i den cycliserede form med den almene formel 1.
15
Selv om udvælgelsen af de specifikke beskyttelsesgrupper, der skal anvendes ved fremstilling af forbindelserne ifølge opfindelsen, er let for fagfolk, bør det gøres klart, at den rigtige udvælgelse af beskyttelsesgrupperne er afhængig af de specifikke efterfølgende reaktioner, som skal udføres. Således må den valgte beskyttelsesgruppe være en gruppe, 20 der er stabil både over for reagenserne og under de betingelser, der anvendes i de efterfølgende trin i reaktionssekvensen. Som allerede diskuteret ovenfor må den specifikke anvendte beskyttelsesgruppe fx være én, der forbliver intakt under de betingelser, der anvendes til fraspaltning af o-aminobeskyttelsesgruppen på den terminale aminosyrerest i peptidfragmentet som forberedelse til koblingen af det næstfølgende aminosyrefragment til 25 peptidkæden. Det er også vigtigt, at der som beskyttelsesgruppe vælges en gruppe, som vil forblive intakt under opbygningen af peptidkæden, og som let vil kunne fjernes ved fuldførelse af syntesen af det ønskede octapeptidprodukt. Alle disse overvejelser ligger helt inden for fagfolks viden og forståelse.
30 Octapeptiderne fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen samt deres tilsvarende farmaceutisk eller terapeutisk acceptable syreadditionssalte, er nyttige, fordi de besidder den farmakologiske aktivitet hos det naturlige tetradecapeptid somatostatin. En sådan virkning påvises let i farmakologiske tests såsom en modifikation af in v/tro-metoden beskrevet af Saffran og Schally, Can. J. Biochem. Physiol. 33, 1955, s. 405 som angivet i 35 Schally et al., Biochem. Biophys. Res. Common. 52, 1973, s. 1314 og River et al., C.R.
Acad. Sci. Paris., Ser. D. 276, 1973, s. 2337.
Evnen hos octapeptiderne »følge opfindelsen til at inhibere hormonfrigivelse in vitro demonstreres ved metoden beskrevet af Meyers et al., Biochem. Biophys. Res. Commun.
5 DK 174920 B1 74, 1977, s. 630. Ved denne metode vises det, at octapeptiderne ifølge opfindelsen inhiberer frigørelsen af radioimmunomileligt væksthormon og prolactin in vitro fra enzymatisk dispergerede rottehypofyseforlapceller fremstillet som beskrevet af Labrie et al., Sixth KaroUnska Symp. on Res. Meth. in Reprod. Endocrinol., (E. Diczfalusy, Red.), 5 1973, s. 301-328. Efter fire dages dyrkning vaskes cellerne og inkuberes i 5 timer ved 37°C i Dulbecco-modificeret Eagle's medium i nærværelse eller fraværelse af stigende koncentrationer of hver cctapeptiuanaioy. Vækbuiurmon- og proiaccinmveauer bestemmes ved radioimmunoassay under anvendelse af metoder beskrevet af Birge et al., Endocrinol.
81, 1967, s. 195-204 for rottevæksthormon og Niswender et al., Proc. Soc. Exp. Biol. Med.
10 V130, 1969, s. 793 for prolactin. Der blev som standarder her anvendt N1AMDD rotte-GH og prolactin RIA-kits. Den nødvendige dosis til en 50%'s inhibering af væksthormonfrigørelsen (EDjjq) beregnes for hver analog ved metoden beskrevet af Rodbard,
Endocrinol 94, 1974, s. 1427-1437.
15 In v/tro-inhibering af væksthormon og prolactin miles også i et hypofysecellesuper-fusionssystem som beskrevet af Vigh og Schally (Peptides 5, Suppl. 1, s. 241-247).
Voksne Sprague-Dawley-han- eller- hunrotter dekapiteres til hvert eksperiment. Hypofyseforlapperne skæres i små stykker og inkuberes i en Dubnoff-inkubator i 45 minutter ved 37°C i 10 ml oxygeneret medium 199 (GIBCO) indeholdende 0,5% kollagenase, ^0~0125%“bovint'serumal&LJmifr(B'SA)_og_50 μΙ/ml Gentamicinsulphat. Efter denne inkubering kan fragmenterne let adskilles i enkelte celler ved gentagen indsugning og udblæsning fra en Gilson Pipetman. Efter 30-60 Pipetman-operationer falder vævet fra hinanden. Cellesuspensionen centrifugeres ved stuetemperatur i 10 minutter ved 100 x g.
Cellepellet'en resuspenderes derefter i 1,0 ml medium. En lille portion fortyndes til tælling 25 af cellerne, og resten af suspensionen deles i 4 lige store volumener. Hvert volumen (indeholdende ca. 5 x 10^ celler) blandes med 0,5 ml Sephadex® G-15, som er blevet ækvilibreret med på forhånd oxygeneret medium. Blandingen af hypofyseceller og Sephadex® overføres til fire kamre i superfusionsapparatet bestående af et antal 1 ml's plastiksprøjtecylindre (modificeret ved afskæring af den distale ende) og monteret lodret i 30 en plexiglasholder, som blev holdt ved 37"C ved hjælp af cirkulerende vand. Strømningen gennem systemet (0,5 ml/minut) styres ved hjælp af en peristaltisk multikanalpumpe (jfr.
Vigh og Schally, Peptides S, Suppl. 1, s. 214-247). Rotteprolactin og rotte-GH blev målt i portioner af superfusater ved hjælp af RJA til bestemmelse af enten basal eller inhiberet sekretion.
Det anvendte in vivo væksthormon-bioassay er som følger:
Charles River CD-hanrotter (200-300 g) med fri adgang til foder og vand blev bedøvet ved hjælp af natriumpentobarbital (60 mg/kg intrapentonealt). 30 minutter senere indsprøjtes 35 6 DK 174920 B1 saltvand eller octapeptid subcutant, og blodprøver udtages fra halspulsåren 15 minutter efter subcutan injektion. Plasmaet skilles fra og analyseres for væksthormon ved hjælp af RIA som beskrevet ovenfor. Dette in vivo bioassay er en modifikation af metoderne anvendt af Schally et al., "Hypothalamic Peptide Hormones: Basic and Clinical Studies”, 5 Hormonal Proteins and Peptides", C.H. Li, Red. Academic Press, New York 7, 1978, s. 1-54; C.A. Meyers, W.A. Murphy, T.W. Redding, D.H. Coy og A.V. Schally, Proc. Natl. Acad.
Scl. USA 77, 1980, s. 6171; W.A. Murphy, C.A. Meyers og D.H. Coy, Endoc. 109, 1981, s.
491 såvel som Veber et al., Pro. Natl. Acad. Sci., USA 75, 1978, s. 2636-2640. Forvisse analoger er doser så lave som 0,02 pg/100 g eller endog 0,005 pg/100 g aktive. Styrken 10 af octapeptiderne ifølge opfindelsen i forhold til somatostatin er illustreret i tabellerne A, B og C. Enkeltdosis-assays er vist i tabel A og 4-punktassays ved 2 dosisniveauer i tabellerne B og C.
TABEL A 15
Enkeltdosis-assays af octapeptid-somatostatinanaloger i forhold til somatostatin 14 (SS-14). Inhibering af GH-frigørelse
Afprøvet stof Injiceret mængde/100 g GH-niveau (ng/ml)
20 B.W. (pg) gennemsnit ± SEM
RC-121-2H 0,05 61 db 17* RC-114-2H 0,05 55 ± 10* SS-14 2,00 95 ± 31* 25 Kontrol saltvand 754 ± 155 RC-122-2H 0,20 23 ± 3* SS-14 2,00 50 ± 12*
Kontrolsaltvand 374 ± 69 30 __ *p >0,01 i forhold til kontrol (Duncan’s test).
RC-121-2H = D-Phe-Cys-L-Tyr-D-Trp-Lys-L-Val-Cys-Thr-NH^, RC-114-2H = D-Phe-Cys-L-Tyr-D-Trp-Lys-L-Val-Cys-Ser-NH^,
35 FOR
RC-122-2H = D-Phe-Cys-L-Tyr-D-Trp-Lys-L-Val-Cys-Trp-NH2,
FOR
hvor Cys = cystein; Trp = N-formyl-tryptophan.
7 DK 174920 B1
TABEL B
4-punktsassay af GH-frigivelsesinhiberende aktivitet af octapeptidsomatostatin 5 analoger i forhold til somatostatin-14 i rotter
Afprøvet stof Injiceret mængde/100 g GH-niveau (ng/ml)
B.W. (pg) gennemsnit ± SEM
10 Kontrol Saltvand 277 ± 166 SS-14 0,4 86 ± 16 SS-14 1,6 47 ± 17 15 RC-121-2H 0,02 39 ± 10 RC-121-2H 0,08 21 ± 4 RC-114-2H 0,02 44 ± 11 RC-114-2H 0,08 34 ± 9 — ---- 20---------------- ~ RC-121-2H i forhold til SS-14: M = 0,7709, Antilog M = 5,9, Potens = 118 gange i forhold til SS-14, RC-114-2H i forhold til SS-14: M = 0,6757, Antilog M = 4,74, Potens = 95,8 gange i 25 forhold til SS-14, RC-121-2H = D-Phe-Cys-L-Tyr-D-Trp-Lys-L-Val-Cys-Thr-NH2, RC-114-2H = D-Phe-Cys-L-Tyr-D-Trp-Lys-L-Val-Cys-Ser-NH2,
Statistiske faktorialanalyser og beregning af styrker i 4-punkts design-assays blev udført 30 ved metoden beskrevet af Bliss og Marks (C.I. Bliss og H.P. Marks: Quart. J. Pharm. and Pharmacol. 12, 1946, s. 82 og 182), og Pugsley (L.I. Pugsley: Endocr. 39, 1946, s. 161-176).
8 DK 174920 B1
TABEL C
Relative styrker af somatostatin og octapeptidsomatostatinanaloger ved inhibe- ring af GH- og insulinfrigørelse in vivo baseret pi 4-punkts assays 5 Kode Peptid, SS-14 Inhibe- Potens (somatostatin) ring GH insulin in vivo in vivo 100 100 10 RC-15 Ac-p-CI-D-Phe- C^s-L- Phe-D-T rp- Lys- L-Thr-dys-Thr-NH^ 860 15 RC-76-2H Ac-D-Phe-Cys-L-Phe-D-Trp-Lys- L-Thr-Cys-Pro-NH2 1070 RC-127-2H D-Val-Cys-L-Phe-D-Trp-Lys-L-Thr-
Cys-Thr-NH2 790 20 RC-138-2H D-Phe-Cys-L-Tyr-D-Trp-Lys-L-Val-
Cys-Ala-NH2 1570 RC-88 p-CI-D-Phe- 25 Cys-L-Phe-D-Trp-Lys-L-Thr-Cys-
Thr-NH2 2130 RC-88-p- Cl-D-Phe-Cys-L-Tyr-D-Trp-Lys- II-2H L-Val-Cys-Thr-NH2 3020 1860 30 I- RC-88-I1 p-CI-D-Phe-Cys-L-Tyr-D-Trp-Lys- L-Val-Cys-Thr-NH2 1740 RC-122-2H D-Phe-Cys-L-Tyr-D-Trp-Lys-L-Val-
35 FOR
Cys-Trp-NH2 5540 9 DK 174920 B1
Tabel C fortsat
Relative styrker af somatostatin og octapeptidsomatostatinanaloger ved inhibering af GH- og insulinfrigørelse in vivo baseret på 4-punkts assays 5 Kode Peptid, SS-14 Inhibe- Potens (somatostatin) ring GH insulin in vivo in vivo 100 100 10 RC-114-2H D-Phe-Cys-L-Tyr-D-Trp-Lys-L-Val-
Cys-Ser-NH2 9580 440 RC-121-2H D-Phe-Cys-L-Tyr-D-Trp-Lys-L-Val-
Cys-Thr-NH2 11800 15 RC-121 D-Phe- I-1
Cys-L-Tyr-D-Trp-Lys-L-Val-Cys-
Thr-NH2 19900 910 20 RC-101- Ac-D-Phe-Cys-L-Phe-D-Trp- II-2H Lys-L-Thr-Cys-Thr-NH2 12900 RC-101- Ac-Phe-Cys-L-Phe-D-Trp-Lys- I-2H L-Thr-Cys-Thr-NH2 11320 25 RC-159- D-Phe- II Cys-L-Tyr-D-Trp-Lys-L-Val-Cys-
Thr-NH2 2380 30 RC-160 D-Phe-
Cys-L-Tyr-D-Trp-Lys-L-Val-Cys-Trp-NH2 13400 r-- RC-122 D-Phe-Cys-l-Tyr-D-Trp-Lys-L-Val-
35 FOR
T i
Cys-Trp-NH2 4980 10 DK 174920 B1
Tabel C fortsat
Relative styrker af somatostatin og octapeptidsomatostatinanaloger ved inhibering af GN-og insulinfrigørelse in vivo baseret på 4-punkts assays 5
Kode Peptid, SS-14 Inhibe- Potens (somatostatin) ring GH insulin in vivo in vivo 100 100 10 _ RC-113-2H D- Phe-Cys- L-Ty r-D-T rp- Lys- L-Val-
Cys-Tyr-NH2 3020 I- 15 RC-161 Ac-D-Phe-Cys-L-Tyr-D-Trp-Lys- L-Val-Cys-Thr-NH2 5520 I- RC-101-I Ac-Phe-Cys-L-Phe-D-Trp-Lys- L-Thr-Cys-Thr-NH2 13560 20 RC-95-1 D-Phe-_
Cys- L-Phe- D-T rp- Lys- L-Thr-Cys-Trp-NH2 5280 25 Statistiske faktorialanalyser og beregning af styrker i 4-punkts design-assays blev udført ved metoden beskrevet af Bliss og Marks (C.I. Bliss og H.P. Marks: Quart. J. Pharm. and Pharmacol. 12, 1946, s. 82 og 182), og Pugsley (L.I. Pugsley: Endocr. 39, 1946, s.
161-176).
30 Med henblik på at bestemme tidsforløbet hos forbindelserne ifølge opfindelsen bedøves hanrotter med nembutal og får indsprøjtet saltvand eller testoctapeptidet ligesom i væksthormonstyrke-assayet ovenfor. Der udtages blod fra halsvenen 15, 30, 45, 60, 90, 120 og 180 minutter efter subcutan indsprøjtning som ovenfor beskrevet. Dette tidsforløbseksperiment for octapeptider over for væksthormonfrigivelse in vivo viser en 35 signifikant undertrykkelse af plasmavæksthormon. I en dosis på 0,1 pg/100 g indgivet subcutant inhiberer octapeptidet 11 DK 174920 B1 I-1 D-Phe-Cys-L-Tyr-D-Trp-Lys-L-Val-Cys-Thr-Nh^ signifikant væksthormonfrigørelsen i mindst 3 timer. 1 en dosis pi 2 pg/100 g observeres den inhiberende virkning af somatostatin på væksthormonfrigørelse ikke længere efter 30 minutter (jfr. Hg. 1). De syntetiske octapeptider undertrykte også væksthormon- og prolactinniveauer in vitro.
5
Octapeptiderne ifølge den foreliggende opfindelse sammenlignes også med syntetisk somatostatin for deres evne til at inhibere frigørelsen af insulin og glucagon in vivo i hanrotter (CD-stamme, Charles River) med en vægt på 250-300 g. Rotterne holdes ved kontrollerede temperaturbetingelser (24°C) og lysforhold (kl. 05.00 til 19.00) i én uge før 10 assayet. Rotterne faster 27-30 timer med fri adgang til vand og bedøves derefter med nembutal (6 mg/100 g intraperitonealt). Efter 30 minutter injiceres saltvand eller testpeptid i halsvenen, og blod opsamles 5 minutter senere fra den hepatiske portvene og føres derefter over i afkølede glas indeholdende EDTA (2,5 mg/ml) og trasylol (500 K.l.U./ml). Plasma skilles fra og opbevares ved -20'C indtil analyse for insulin og glucagon.
15 Plasmainsulin bestemmes ved dobbelt antistofradioimmunoassay under anvendelse af et kit fra Cambridge Medical Diagnostics, Mass., USA.
Plasmaglucagon bestemmes ved metoden beskrevet af Faloona et al., 1974 i Methods of Hormone Radioimmunoassay, Red. B. Jaffre og H.R. Behrman, Academic Press, New York,
---20—s. 317-330runderanvendeise af'krystallmsITglucagon (EliTilly) og kaninantiserum 30K
125 o mod glucagon (Unger pool 4, lot 8). Porcint 1-glucagon blev også indkøbt fra Cambridge Medical Diagnostics, Cambridge, Mass., USA.
I de ovenfor beskrevne testsystemer viste octapeptiderne ifølge opfindelsen sig at inhibere 25 insulinfrigørelse in vivo kraftigere end somatostatin beregnet på vægtbasis (jfr. tabel C).
Pa grund af den høje styrke hos octapeptiderne ifølge opfindelsen, manglen på toxicitet og deres lange virkningsvarighed, er disse octapeptider nyttige til anvendelse ved behandling af en række sygdomme og tilstande. Fx kan octapeptiderne ifølge opfindelsen anvendes til at bedømme insulinmodstandsdygtighed hos overvægtige patienter. Anvendelse af denne 30 forbindelse forhindrer endogen insulinsekretion. Tidligere blev somatostatin eller propranolol anvendt til dette formål (Shen et a!., J. CUn. Inv. 49, 1970, s. 2151). Til påvisning af total legemsmodstandsdygtighed over for exogent insulin i overvægtige patienter infuseres der ved denne metode standardmængder af glucose, insulin og octapeptider i 150 minutter. Et steady-state-niveau af plasmainsulin og glucose bør nås efter 35 90 minutter. Endogen insulinsekretion bestemt ved C-peptidmåling og glucagonsekretion forbliver undertrykt i hele perioden. Nar der i patienterne opretholdes steady-state-niveau-er af plasmainsulin, kan højden af steady-state-plasmaglucosekoncentrationen betragtes som et udtryk for total legemsfølsomhed over for insulinmedieret glucoseoptagelse. En 12 DK 174920 B1 positiv korrelation mellem steady-state-plasmaglucosekoncentration og graden af overvægt kan pivises. Dette undersøøttes af lignende undersøgelser med somatostatin af Magulesparan et al., Diabetes 28, 1979, s. 980, men octapeptiderne er overlegne på grund af deres forlængede undertrykkelse af insulin.
5
Ved at inhibere væksthormon- og glucagonsekretion ved anvendelse af octapeptiderne ifølge opfindelsen, skulle insulindosen til diabetespatienter, som ikke danner insulin, kunne reduceres til 1/4-1/3 af den, der kræves af patienten, når der ikke foreligger octapeptider.
Dette understøttes af arbejde udført af Besser et al., Brit. Med. Journal 4, 1974, s. 622-10 627 og Gerich et al-, Diabetologia 13, 1977, s. 537. Disse undersøgelser anvendte somatostatin som et adjunkt til insulin. På lignende måde kan octapeptiderne ifølge opfindelsen med fordel anvendes i stedet for somatostatin. Endvidere er octapeptiderne også nyttige til behandling af diabetisk retinopati, idet de inhiberer væksthormonsekretion, som forårsager vasculær beskadigelse.
15
Efter fjernelse af hypofysen og efter bromcryptinbehandling observeres der hos visse patienter stadig et forøget væksthormonniveau. Ved anvendelse af octapeptiderne ifølge opfindelsen i kombination med bromcryptin eller et andet lignende virksomt lægemiddel reduceres væksthormonniveauet. Der kan endvidere også anvendes LHRH-agonister, som, 20 når de gives kronisk, fører til paradoksale inhiberende virkninger. En kombineret hormonbehandling bestående af octapeptider, LH-RH-analoger og bromcryptin kan anvendes til behandling af akromegali, medens lignende kombinationsbehandlinger er nyttige til andre neoplasmaer. Hvis tumorerne er hormonafhængige, og disse hormoner inhiberes af octapeptider, kan disse tumorer behandles ved hjælp af octapeptider. Fx er 25 murine og andre pattedyrs-chondrosarkomer væksthormonafhængige. McCumbee, Fed.
Proc. 30, 1979, s. 428 beskrev, at rotte-chondrosarkomer (Swarm) er væksthormonafhængige. Humane chondrosarkomer minder om Swarm-chondrosarkomer. Somatostatinanaloger inhiberer væksten af Swarm-chondrosarkomer (Redding og Schally, A.V. Proc. Nat. Acad. Sciences 80, 1983, s. 1078-1082) og octapeptiderne ifølge 30 opfindelsen er ligeledes nyttige til inducering af regression af humane chondrosarkom-tumorer, som ikke kan kontrolleres ved kemoterapi. På lignende måde minder Dunn sosteosarkomer C3H/HeJ ί mus om humane tumorer og synes at være hormonalt (GH)-afhængige (Ghanta et al., Natl. Cancer Inst. 57, 1976, s. 837-839). Forskellige analoger af somatostatin inhiberer væksten af Dunn osteosarkomer (Schally et al., Cancer Treatment 35 Reports 68, 1984, s. 281, Schally et al., Proc. Soc. Exp. Med. 175, 1984, s. 259).
Octapeptid RC-15, Ac-D-p-CI-Phe-Cys-L-Phe-D-Trp-Lys-L-Thr-Cys-ThrNH^, i doser på 5 pg/dag viste sig at forlænge overlevelsestiden for mus med Dunn sosteosarkomer signifikant. Octapeptid RC-121-2H, D-Phe-Cys(SH)-L-Tyr-D-Trp-Lys-L-Val-Cys(SH)- 13 DK 174920 B1
ThrNH2, i doser på 2,5 pg/ b.i.d. inhiberer også signifikant vækst af Dunns osteosarkom-tumorer i C3H hunmus. Ved dag 16 var den procentuelle overlevelse 100% ± 0,0% sammenlignet med 75% ± 22% for kontroller.
5 Målingen af antitumoraktivitet hos octapeptiderne »felge opfindelsen i en brystcancerdyremodel sker som følger: Adskillige hormonafhængige brysttumorer hos rotter og mus har vist sig at være østiOyenafhængige og/eiier prolactinafhængige (Arafah et al.,
Endocrinology 107, 1980, s: 1364; Schally et al., Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 175, 1984, s.
259. Det er kendt, at ca. 1/3 afalle humane brystcancere er østrogenafhængige. Nylige 10 resultater indikerer, at en betragtelig del (30-40%) af humane brystcancere også kan være prolactinafhængige (Malarkey et al., J. din. Endoc. Metab. 56, 1983, s. 673-677;
Ben et al., Israeli J. Med. Sci. 17, 1981, s. 965). Endvidere er væksthormon også forbundet med væksten af brystcancere. Ved at inhibere prolactin-og væksthormonsekretion kan octapeptiderne ifølge opfindelsen være nyttige til at inducere regression af 15 humane brystcarcinomer. Antitumoraktiviteten hos octapeptiderne ifølge opfindelsen måles i MT/W9A-rottebrystadenocarcinommodellen. Det østrogenafhængige MT/W9A rottebrystadenocarcinom fås fra Roswell Park Memorial Institute, Buffalo, New York, USA. MT/W9A-brysttumoren er blevet karakteriseret som østrogenafhængig med hensyn til vækst (Kim og Depowski, Cancer Research 35, 1975, s. 2068-2077). Tumorvæv skæres _ __20__fint_tiLca. JLmmp3p-stykkes^e!!er-indtil-der-er-blevet-fremst>iiet"en"fin·opslæmning og injiceres gennem en 18 G-kanyle ind i den inguinale brystfedtpude hos WistarFurth-hunrotter (kropsvægt 90 g). Efter ca. 3 1/2 måned var tumorerne følelige, og I---—-1 eksperimentet startes. Octapeptid RC-15, Ac-D-p-CI-Phe-Cys-L-Phe-D-Trp-Lys-L-Thr-Cys-ThrNH^, i doser på 3 pg/b.i.d. (to gange daglig) inhiberede kraftigt væksten af MT/W9A- 25 rottebrysttumor og reducerede den procentuelle forandring i tumorvolumen til 1106 ± 447% sammenlignet med 2808 ± 812% for kontroller efter 16 dages behandling. Octapeptiderne ifølge den foreliggende opfindelse kan således være anvendelige ved behandling af humant brystcarcinom. Den terapeutiske virkning af octapeptider skyldes inhiberingen af væksthormon- og prolactinsekretionen. Octapeptidet kan indgives alene eller i kombination 30 med LH-RH-analoger såsom D-Trp-6-LH-RH, som inhiberer væksten af østrogenafhængig brysttumor (Redding og Schally, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 80, 1983, s. 1459-1462).
Med henblik på at bestemme virkningen på pankreatisk carcinom, anvendes der dyremodeller på pankreatisk cancer med acinare og duktale fænotypiske karakteristika 35 (Redding og Schally, A. V. Proc. Nat. Acad. Sci. 81, 1984, s. 248-252). De transplanterbare veldifferentierede acinare pankreatiske tumorer DNCP-322 (CA-20948) i Wistar/Lewis-rotter (Longnecker et al., Cancer Research 42, 1982, s. 19-24 og Longnecker et al., Cancer Letters 7, 1979, s. 197-202 fås fra Department og Pathology, Dartmouth Medical School, 14 DK 174920 B1
Hanover, New Hampshire, USA. Der anvendes syriske guldhamstere, der bærer det veldifferentierede (WD), kemisk inducerede duktale adenocarcinom (Scarpelli et al.,
Cancer Res. 39, 1979, s. 452-458). Donortumorvaev fra begge arterne dissekeres hurtigt ud og vaskes i iskold Hanks pufrede saltvandsopløsning, pH 7,4, og kapselmaterialet 5 fjernes omhyggeligt. Tumorvæv skæres derefter i små stykker og lades passere gennem en nr. 30 rustfri stålsigte ned i et bægerglas med iskold puffer. Pellet’en resuspenderes i puffer, og portioner på 1-2 mg tumorvæv injiceres subcutant ind i den midterste rygregion på fravænnede handyr af hver model, dvs. Wistar/Lewis-rotter eller LAS- syriske hamstere. Subcutant transplanterede Longnecker DNCP-322-tumorer opnår en diameter 10 på ca. 5 cm i løbet af ca. 4 uger. WD-tumor vokser langsomt hos guldhamstere og tredobler sin størrelse på ca. 45 dage. Hos rotter, der bærer de acinare pankreatiske tumorer, formindskede kronisk indgift af octapeptiderne ifølge opfindelsen signifikant tumorvægte og -volumen. Hos syriske hamstere med duktal form af pankreatisk cancer, formindskede kronisk indgift af octapeptiderne tumorvægte og -volumen (Redding og 15 Schally, Proc. Nat. Acad. Sci. 81, 1984, s. 248-252). Den procentuelle ændring i tumorvolumen var signifikant formindsket sammenlignet med kontroldyr. LHRH-agonisten D-Trp- 6-LH-RH indgivet to gange daglig eller injiceret i form af langsomt frigivne mikrokapsler formindskede signifikant tumorvægt og -volumen. Octapeptiderne reducerer væksten af pankreatiske duktale og acinare cancere, sandsynligvis ved at inhibere frigivelsen og/eller 20 den stimulerende virkning af gastrointestinale hormoner, gastrin, sekretm og cholecystokinin på tumorceller (Schally et al., Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 175, 1984, s.
259). En kombineret indgift med et octapeptid ifølge opfindelsen og en LH-RH-agonist fører til en større inhibering af cancere på pankreas end den, som kan opnås alene ved hjælp af somatostatinanaloger.
25
Med henblik på at sammenligne nogen af de biologiske virkninger af octapeptiderne ifølge opfindelsen og somatostatin på gastrointestinale sekretioner og på frigivelsen af nogle gastrointestinale hormoner i hunde, anvendes følgende procedurer: 30 Bastardhunde med en vægt på 15-20 kg præpareres kirurgisk med gastriske (GF) og pankreatiske fistler (PF) som beskrevet af Konturek et al., 3. Physiol. Lond. 225, 1976, s.
497 og Konturek et al., Gastroenterology 58, 1976, s. 1-6. Sekretioner fra GF og PF opsamles kontinuerligt med 15-minutters intervaller. Hydrogenion- og pepsinkon-centrationer i pankreasvæsken måles også i 15- eller 30-minutters ydelser (Konturek et 35 al., 3. Physiol. Lond. 225, 1976, s. 497 og Konturek et al., 1976, nævnt ovenfor). Basal sekretion opsamles først i to 15-minutters perioder, og derefter indgives sekretionsstimulansen til gastrisk og/eller pankreatisk sekretion i 3 1/2 time. Når sekretionshastigheden når et fast plateau, gives octapeptiderne eller somatostatin 15 DK 174920 B1 intravenøst i standarddoser (2-4 pg/kg/time) i en 1-times periode. I kontroleksperimenter modtog dyrene sekretionsstimulanser alene, så længe eksperimenterne varede.
I tests for gastrisk stimulation infuseres pentagastrin eller desglugastrin (glutaroyl-Ala-Tyr-5 Gly-Trp-Leu-Asp-Phe-NH2) intravenøst i en konstant dosis (3 pg/kg/time) som tidligere var blevet påvist at udløse næsten maksimal mavesyresekretion. Gastrisk sekretion måles, og syreindhold bestemmes ved titrering med 0,1N NaOH. 1 tests for pankreatisk sekretion anvendes der syntetisk sekretion (Squibb and Sons, Inc., New York, N.Y.) og caerulein (Farmitalia, Italien) i konstante doser, som tidligere var blevet påvist at bevirke næsten 10 maksimal stimulation af hydrogencarbonat i pankreatisk enzymsekretion (Konturek et al., 1976, nævnt ovenfor).
Eksperimenter vedrørende pankreatisk stimulation af endogene stimulanser udføres under anvendelse af duodenal instillation af 0,1N HCI eller et kødmåltid (500 g), (Konturek et al., 15 1976, nævnt ovenfor). Blodprøver udtages før og hvert 15. - 20. minut til bestemmelse af serumgastrin (Yalow et al., 58, 1970, s. 1-14).
De observerede resultater for octapeptiderne ifølge opfindelsen og somatostatin med hensyn til mavesyrerespons over for pentagastrin er som følger: ------ ^0 Både de indgivne ocfapeptidef og somatostatin har vist sig stærkt at inhibere pentagastrin- eller desglugastrininduceret mavesyresekretion fra GF. Inhibering af Proc.
Natl. Acad. Sti., USA, 81, 1984, s. 5845-5848) og lignende.
Yderligere eksempler på overtræksmaterialer og på de anvendte fremgangsmåder til 25 mikroindkapsling er beskrevet af J.A. Herbig i "Encyclopedia of Chemical Technology”, bind 13. 2. Red. 1967, s. 436-456, Wiley, New York. sådanne formuleringer samt suspensioner af salte af peptidet, som kun er svagt opløselige i legemsvæsker, fx salte med pamoinsyre eller garvesyre, er beregnet til at frigøre fra ca. 0,1 pg til ca. 100 pg af den aktive forbindelse pr. kg legemsvægt pr. dag og indgives fortrinsvis ved intramuskulær injektion.
30 Nogle af de faste doseringsformer er anført ovenfor, fx visse svagt vandopløselige salte eller dispersioner i eller adsorbater på faste bærere af salte af octapeptiderne, fx dispersioner i en neutral hydrogel af en polymer af ethylenglycolmethacrylat eller lignende monomerer, der er tværbundne som beskrevet i US patent nr. 3.551.556, kan alternativt også formuleres i form af pellets, der frigiver ca. de samme mængder som vist ovenfor og 35 kan implanteres subcutant eller intramuskulært.
Opfindelsen vil fremgå mere klart af de nedenstående eksempler. Disse eksempler er kun givet som illustration. I disse eksempler anvendes følgende oprensningsteknikker: 16 DK 174920 B1 (Forkortelser: HFBA = heptafluorsmørsyre HPLC = højtryksvaeskechromatografi TFA = trifluoreddikesyre 5 UV = ultraviolet)
Til fremstilling af HPLC-eluenterne blev der indkøbt acetonitril af UV-kvalitet fra Burdick & Jackson, TFA og HFBA er af sequanal-kvalitet fra Pierce, og vand dobbeltdestilleres i glasudstyr og passeres gennem et milli-Q-system (Millipore).
10 Højtryksvaeskechromatografi udføres på et Waters HPLC-system bestående af en M 680 Automated Gradient styreenhed, to M6000A pumper, en U6K injektor og en Schoeffell SF 770 UV-detektor med variabel bølgelængde.
15 Både til analysering og oprensning af forbindelserne anvendes der omvendt-fase HPLC på C18-kolonner. Kvaliteten og elueringskarakteristikaene af de rå peptider bestemmes ved analytisk HPLC på en Vydac 2l8TP5-kolonne (4,6 mm x 25 cm) under anvendelse af binære gradienter af opløsningsmiddel A: 0,1% TFA i vand, og opløsningsmiddel B: 0,1% TFA i CH^CN/vand 70:30. Den gode kvalitet af de rå synteseprodukter kombineret med 20 optimerede separationsbetingelser tillader et hurtigt et-trins oprensningsforløb. En opløsningsevne, der var sammenlignelig med opløsningsevnen i analytiske separationer, blev opnået ved at anvende et pakkemateriale med en partikelstørrelse på 5 pm og en prøvebelastning under kolonnens kapacitet. 6-23 mg octapeptid injiceres i portioner på 2-5 mg på en semipræparativ Vydac 218TP5 kolonne (10 mm x 25 cm) og elueres isokratisk 25 eller med en flad gradient (0,1-0,2% B/min.) under anvendelse af opløsningsmiddelsystemet indeholdende 0,1% TFA som beskrevet nedenfor.
Med henblik på maksimal top-”afskæring“ opsamles hovedkomponenterne manuelt. Den let flygtige eluent fjernes ved frysetørring, hvorefter produkterne genlyofiliseres fra 1M 30 AcOH, hvilket giver 0,7 mg (10-45%) af det oprensede octapeptid. Homogeniteten af octapeptiderne kontrolleres ved analytisk HPLC i to forskellige opløsningsmiddelsystemer (I: 0,1% TFA/CH^CN/vand, 11:0,13% HBA/CH^CN/vand). Renheden under anvendelse af disse teknikker er mere end 90% baseret på UV-absorbans undersøgt ved 210 nm.
35 EKSEMPEL 1 17 DK 174920 B1
Ac-D-p-CI'Phe-Cys-L-Phe-D-Trp-Lys-L-Thr-Cys-ThrNH^ og Ac-D-p-CI-Phe-Cys-L-Phe-D*Trp-Lys-L-Thr-Cys-ThrNH2 5 0,50 g benzhydrylaminharpiks (BHA) (ca. η,'ί mmo! NH^g harpiks) sættes ti! en IC mi’s reaktionsbeholder med et specielt frittefilter med mellemstor porøsitet og behandles med 10% triethylamin i CH2CI2 to gange i tre minutter hver gang og vasket seks gange med ch2ci2.
10 harpiksen blandes med 0,75 mmol Boc-Thr(Bz) og 0,82 mmol HOBt i DMF-i 3 minutter.
Der tilsættes 5%’s diisopropylcarbodiimid i Ch2CI2 (0,82 mmol). Blandingen rystes ved stuetemperatur i 90 minutter. Den resulterende harpiks vaskes seks gange med CH2CI2 og underkastes en ninhydrintest (Kaiser et al., Analytical Biochemistry 34, 1970, s. 595).
15 Denne bør være negativ på dette trin.
Afbeskyttelsen af Boc-gruppen fra Boc-Thr(Bz)-BHA-harpiksen udføres på følgende måde:___ l^arpjl<sen behandles med en opløsning af trifluoreddikesyre og methylenchlorid (1:1) i 5 minutter, filtreres og behandles igen i 25 minutter, filtreres og vaskes derefter seks gange 20 medCH2CI2.
Behandling med 10% triethylamin udføres som beskrevet for benzhydrylaminharpiksen.
De efterfølgende aminosyrerester indføres derefter sekventielt ved kobling på samme måde som beskrevet ovenfor.
25
Afbeskyttelsen udføres som beskrevet for Boc-Thr(Bz)-BHA-harpiks. Efter inkorporering af Boc-D-Trp sættes der 5% mercaptoethanol til 50%‘s trifluoreddikesyre i CH2CI2; der fås
Boc-D-p-CI-Phe-Cys (MBz)-L-Phe-D-Trp-Lys(2-CIZ)-L-Thr-(Bz)-Cys(MBz)-Thr(Bz)-BHA.
Efter afbeskyttelse og neutralisering foretages acetylering under anvendelse af Ac20 i CH2 30 Cl2 i 60 minutter (12,5 mmol).
Endelig vaskes peptidharpiksen tre gange med hver af methanol og Ch2CI2 og tørres i vakuum. Der fås 0,902 g Ac-D-p-CI-Phe-Cys(MBz)-L-Phe-D-Trp-Lys-(2-CIZ)-L-Thr(Bz)-Cys(MBz)-Thr(Bz)-BHA-harpiks.
18 DK 174920 B1 500 mg beskyttet octapeptid-BHA-harpiks blandes med 0,5 ml cresol og 0,5 ml 1,2-ethandithiol og omrøres i 10 ml hydrogenfluorid ved 0°C i 1 time. Overskud af hydrogenfluorid dampes bort i vakuum. Peptid- og harpiksblandingen vaskes med 5 ethylacetat og ekstraheres med 30% HOAc og lyofiliseres. Der fis 112 mg råt produktpulver bestående af Ac-D-p-CI-Phe-Cys-L-Phe-D-Trp-Lys-L-Thr-Cys-Thr-NH^· 110 mg af en rå reduceret form opløses i 20 ml 50%'s HOAc og fortyndes til 500 ml med afluftet vand (N^), justeres til pH 6,8 ved hjælp af 28%'s ammoniumhydroxid, hvorefter 10 0,005N kaliumferrocyanidopløsning dryppes til under omrøring, indtil der observeres en permanent gul farve. Efter omrøring i 15 minutter justeres pH igen til 5 ved hjælp af HOAc. Der indføres 5 g Bio Red AG3-X4A-harpiks (chloridform) for at fjerne ferri- og ferrocyanidsalte. Filtratet lyofiliseres. Remanensen underkastes gelfiltrering på en søjle (1 x 120 cm) af Sephadex® GI5 og elueres med 50%’s eddikesyre. Hovedtoppen lyofiliseres, 15 og der fås 57 mg af den rå oxiderede form, Ac-D-p-CI-Phe-Cys-L-Phe-D-Trp-Lys-L-Thr-Cys-Thr-NH^, og oprenses derefter ved chromatografi (højtryksvæskechromatografi), hvilket giver 10,56 mg rent octapeptid.
20 EKSEMPEL 2 D-Phe-Cys-L-Tyr-D-Trp-Lys-L-Val-Cys-Thr-NH2 (reduceret form) og D-Phe-Cys-L-Tyr-D-Trp-Lys-L-Val-Cys-Thr-NH2 (oxideret form) 25 185 mg BHA-harpiks (0,5 mmol BHA/g harpiks) placeres i en 20 ml's reaktionsbeholder, som er monteret på en mekanisk rysteblander.
Følgende aminosyrerester, Boc-Thr(Bz), Boc-Cys(MBz), Boc-Val, Boc-Lys(2-CIZ), Boc-D-Trp, Boc-Tyr (2-BrZ), Boc-Cys(MBz), og Boc-D-Phe indføres sekventielt ved kobling og 30 afbeskytteise på samme måde som beskrevet i eksempel 1. Der fås til slut 330 mg TFA-D-Phe-Cys(MBz)*Tyr(2-BrZ)-D-Trp-Lys(2-CIZ)-Val-Cys(MBz)-Thr(Bz)-BHA-harpiks.
Den beskyttede octapeptidamidharpiks behandles med HF og giver 68,1 mg rå reduceret form. En mængde på 6,1 mg rå reduceret form oprenses ved HPLC, hvilket giver 1,0 mg 35 rent D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp- Lys-Val-Cys-Thr-NH2· 40 mg rå form oxideres som beskrevet i eksempel 1. Det lyofiliserede pulver bestående af oxideret form og salte underkastes gelfiltrering ved hjælp af Sephadex® GI5 og elueres med 50%‘s eddikesyre. Hoved- 19 DK 174920 B1 toppen lyofiliseres derefter, hvilket giver 38,1 mg, hvoraf 24,7 mg oprenses ved HPLC og giver 9,0 mg rent D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-C'!'s-Thr-NH2.
5 EKSEMPEL 3
Ac-D-Phe-Cys-L-Phe-D-5F-Trp-Lys-L-Thr-Cys-ProNH2 og Ac-D-Phe-cVs-L-Phe-D-5F-Trp-Lys-L-Thr-Cys-ProNH2 10 230 mg benzhydrylaminharpiks (ca. 0,5 mmol BHA/g harpiks) anbringes i en 5 ml’s reaktionsbeholder, som er monteret på en mekanisk rysteblander. Den beskyttede octapeptidharpiks fås efter trinvis kobling af følgende: Boc-Pro, Boc-Cys(MBz), Boc-Thr(Bz), Boc- Lys(2-CIZ), Boc-D/L-5F-Trp, Boc-Phe, Boc-Cys(MBz), Boc-D-Phe.
15 Der foretages acetylering efter sidste afbeskyttelse. Der fås til slut 351 mg Ac-D-Phe-Cys(MBz)-Phe-D/L-5F-Trp-Lys(2Clz)-Thr(Bz)-Cys(MBz)-Pro-BHA-harpiks, som behandles med HF, hvilket giver 74,5 mg rå reduceret form. Det rå peptid i reduceret form oxideres som beskrevet i eksempel 1. Efter gelfiltrering udføres yderligere oprensning og adskillelse - “af'D/Lrdiastereomere ved“hjælp”af HPLC.
20 EKSEMPEL 4 D-Phe-Cys-L-Tyr-D-5F-Trp-Lys-L-Val-Cys-Thr-NH2 og 25 D-Phe-Cys-L-Tyr-D-5F-Trp-Lys-L-Val-Cys-Thr-NH2 200 mg benzhydrylaminharpiks (ca. 0,36 mmol NH2/g harpiks) anbringes i en rystereaktionsbeholder. Efter tilsætning af de beskyttede aminosyrer fås der 394 mg TFA-D-Phe-Cys(MBz)-Tyr{2-BrZ)-D/L- 5F-Trp-Lys(2-CIZ)-Val-Cys(MBz)-Thr(Bz)-BHA-harpiks.
30 Den beskyttede harpiks behandles med HF, hvilket giver 97,5 mg råt peptid af D-Phe-Cys-Tyr*D/L-5F-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2 (i reduceret form). 80 mg rå reduceret form oxideres som beskrevet i eksempel 1. Efter gelfiltrering lyofiliseres toppene I og II, hvilket giver henholdsvis 19,8 mg. Yderligere oprensning og adskillelse af D/L-diastereomere udføres ved hjælp af HPLC.
35 EKSEMPEL 5 20 DK 174920 B1 D-Trp-Cys-L-Phe-D-Trp-Lys-L-Thr-Cys-Thr-NH2 (reduceret form) og D-Trp-Cys-L-Phe-D-Trp-Lys-L-Thr-Cys-Thr-NH2 (oxideret form) 5 292 mg TFA-D-Trp-Cys (MBz)-Phe-D-Trp-Lys(2-CIZ)Thr(Bz)-Cys(MBz)-Thr(Bz)-BHA-harpiks blev vundet ud fra 150 mg BHA-harpiks (0,5 mmol BHA/g harpiks) efter trinvis kobling. Den beskyttede octapeptidamidharpiks blev behandlet med HF, hvilket giver 72,8 mg rå reduceret form. En mængde pi 22,5 mg rå reduceret form blev oprenset ved hjælp 10 af HPLC, hvilket gav 8,0 mg rent D-Trp-Cys-L-Phe-D-Trp-Lys-L-Thr-Cys-Thr-NH^ (RC-98-I- 2H).
Oxidationen af den reducerede form blev udført ved hjælp af iod pi grund af den reducerede forms ringe opløselighed under betingelserne anvendt til oxidation med 15 kaliumferricyanid. Proceduren er beskrevet i det følgende: 50 mg rå reduceret form blev opløst i 100 ml 95%'s AcOH, hvorefter en 0,005M iodopløsning i iseddike blev tildryppet, indtil den gule farve varede ved. Overskud af iod blev fjernet ved tilsætning af zinkpulver. Efter oxidation blev det rå disulfidpeptid 20 underkastet gelfiltrering på en Sephadex® G15-søjle. For octapeptiderne indeholdende to Trp-rester, blev der anvendt en to-trins eluering. Det rå oxiderede produkt blev opløst i 50%'s AcOH og sat på Sephadex-søjlen, som var blevet ækvilibreret med vand. Saltene blev vasket af søjlen ved hjælp af vand, hvorefter peptidet blev elueret og fraktioneret under anvendelse af 50%’s AcOH. Hovedtoppen blev lyofiliseret, hvilket gav 30 mg råt 25 oxideret produkt. Yderligere oprensninger blev udført ved semipræparativ HPLC, hvilket gav 9,4 mg rent D-Trp-Cys-L-Phe-D-Trp-Lys-L-Thr-Cys-Thr-NH2 (RC-98-I). Det oprensede octapeptid blev karakteriseret ved aminosyreanalyser, og analytisk HPLC viste de forventede resultater.
21 DK 174920 B1
Styrkeassay nr. 1 af octapeptid-somatostatinanaloger og somastatinanaloger (eksperiment nr. 89)
Kode Injiceret dosis GH-niveau (ng/ml) 5 (pg/100 g B.W.) 15 min. 30 min. 60 min.
0,2% uuvint
Kontrol serumalbumin 116 ± 10 SS-14 10 (Somatostatin nr. 14) 0,4 88 ± 22 SS-14 1,6 53 ± 10 RC-98.I.2H 0,02 50 ± 10 RC-98.I.2H 0,08 28 ± 4 15 RC-98.I.2H i forhold til SS-14: M = 0,6653, Antilog M = 4,63, Styrke = 92,6 gange i forhold til SS-14.
22 DK 174920 B1
Styrkeassay nr. 2 af octapeptid-somatostatinanaloger og somastatinanaloger (eksperiment nr. 108)
Kode Injiceret dosis GH-niveau (ng/ml) (pg/100 g B.W.) 15 min. 30 min. 60 min.
5 __ 0,2% bovint
Kontrol serumalbumin 211 ± 56 SS-14 (Somatosta- 10 tin nr. 14) 0,2 171 ± 26 SS-14 0,8 91 ± 12 RC-98-I 0,01 85 ± 16 72 ± 81 82 ± 25 RC-98-I 0,04 52 ± 4 38 ± 3 100 ± 26 15 _
Styrke, %
Kode 15 min. 30 min.
20 RC-98-I
i forhold 9139,65 (2864,7- 12388,8 (3883,28- til SS-14 29159,5) 39524,2) 25 Styrkeassay nr. 3 af octapeptidsomatostatinanaloger
Kode Injiceret dosis GH-RH-niveau SS-14 2,0 0,1032 30 RC-98-I 0,1 0,4340 RC 98-1 i forhold til SS-14 Styrke* = 84,1 gange i forhold til SS-14 35 * Baseret på tidsforløb af CPZ- og morfinstimuleret GH-sekretion.
Som vist på fig. 1 er det klart, at tilbagespringet for SS-14 på kontrolkurven er yderst uønsket.
23 DK 174920 B1 EKSEMPEL 6 5 På lignende måde og under anvendelse af de i eksemplerne 1-5 beskrevne teknikker og procedurer fås der følgende forbindelser ifølge opfindelsen: TABEL 1
Formel (I) og (Γ) 10 A. Cys. L-Phe. D-Trp. Lys. L-Thr. Cys. B (I) (reduceret form) A. Cys. L-Phe. D-Trp. Lys. L-Thr. Cys. B (Γ) (oxideret form) A B Formel
15 Ac.Phe Thr NH2I
D-Phe Thr NH2 I
D-Phe Thr NH2 Γ
Ac.D-Phe Thr NH2 I
--------1 p.CiTD-Pfie TfiFNH2 I
20 p.CI.D-Phe Thr NH2 Γ
Ac.p.CI.D-Phe Thr NH2 I
Ac.p.CI.D-Phe Thr NH2 Γ
Ac.Trp. Thr NH2 I
Ac.D-Trp Thr NH2 I
25 D-Trp Thr NH2 I
Ac.D-Phe Trp NH2 ]
Ac.D-Phe D-Trp NH2 I
Ac.D-Trp D-Thp NH2 I
Ac.Trp D-Trp NH2 I
30 _______ 24 DK 174920 B1 TABEL 2
Formel (II) og (ΙΓ) A. Cys. L-Tyr. D-Trp. Lys. L-Val. Cys. B (II) i--1 5 A. Cys. L-Tyr. D-Trp. Lys. L-Val. Cys. B (ΙΓ) A B Formel
Ac.Phe Thr NH2 II
10 D-Phe ThrNH2 II
D-Phe Thr NH2 11’
Ac.D-Phe ThrNH2 II
Ac.D-Phe Thr NH2 ΙΓ
p.CI.D-Phe Thr NH2 II
15 p.CI.D-Phe Thr NH2 ΙΓ
Ac. Pro Thr NH2 II
D-Trp Thr NH2 II
D-Phe Trp NH2 II’
p.CI D-Phe Trp NH2 II
20 D-Phe Trp NH2 11 D-Phe Trp N«2 ΙΓ 25 DK 174920 B1 TABEL 3
Beregning af gastrisk og inhiberende virkning af octapeptid RC-88-II = p-CI-D-Phe-Cys-L-Tyr-D-Trp-Lys-L-Val-Cys-Thr-NH^ baseret pi 16 5 eksperimenter i hunde med gastriske fistler.
Rådata, standarddosis Testet materialedosis
Lav Høj Lav Høj 10 _ 3 6 3 6 49 23,6 22,5 12 48 25,8 23 9 15 71 35,9 35,6 27 53 27 22,8 16
Sum af Gennemsnit- F-for- kvadrater DF ligt kvadrat hold _ _ 20 Række (materiale) 1709,82 1 1709,82 27,6527 Søjle (dosis) 1380,12 1 1380,12 22,3205
Interaktion 295,839 1 295,839 4,78456 25 Subtotal indenfor 3385,79 3 1128,6
Doser 741,984 12 61,185
Total: 4127,77 15 275,185
Std. afvigelse: 7,86333 F-værdier 30 Række (prøver) 27,6527 signifikant Søjle (hældning) 22,3205 signifikant
Interaktion (parallel) 4,78458 signifikant
Prøvepotens = 216,303% 35 Styrkeområde fra 140,669% til 332,605% γ (præcisionsgrad) = 0,234861E-01
Claims (9)
1. Octapeptid-somastatinanalog med formlen I i -—j
2. Octapeptid-somastatinanalog med formlen (I) ifølge krav 1, hvor A er phenylalanin (Phe), B er threoninamid (Thr-NH2) eller tryptophanamid (Trp-NH2), X betegner L-tyrosin (L-Tyr), og Y 20 betegner L-valin (L-Val).
3. Octapeptid-somastatinanalog med formlen (I) ifølge krav 1, hvor A er phenylalanin (Phe), acetylphenylalanin (AcPhe) eller tryptophan (Trp), B er threoninamid (Thr-NH2) eller tryptophanamid (Trp-NH2), X betegner L-phenylalanin (L-Phe), og Y betegner L-threonin (L-Thr). 25
4. Forbindelse med formlen (I) ifølge krav 1, hvilken forbindelse er valgt fra gruppen bestående af D- Phe-Cys-L-T yr- D-T rp-Lys- L-Val-Cys-Thr-N H2 30 I-1 D-Phe-Cys-L-Tyr-D-Trp-Lys-L-Val-Cys-Thr-NH2 t 1---1 D-Phe-Cys-L- Phe- D-T rp- Lys- L-Thr-Cys-Thr-NH2 I--»
35 D-T rp-Cys-L-Phe-D-T rp-Lys- L-Thr-Cys-Thr- NH2 i--1 AcPhe-Cys-L-Phe-D-Trp-Ly$-L-Thr-Cys-Thr-NH2 27 DK 174920 B1
5. Fremgangsmåde til fremstilling af en octapeptid-somastatinanalog med formlen (I) ifølge krav 1, hvilken fremgangsmåde består i, at en forbindelse med formlen A - Cys - X - D-Trp - Lys - Y - Cys - B (Γ) 5 hvor symbolerne A, B, X og Y er som defineret i krav 1, oxideres.
, 6. Farmaceutisk præparat til behandling af cancertumorer, hvilket præparat som en aktiv bestanddel omfatter en forbindelse med formlen (I) ifølge krav 1 eller et farmaceutisk 10 acceptabelt syreadditionssalt deraf i en farmaceutisk acceptabel flydende eller fast bærer derfor.
5 A - Cys - X - D-Trp - Lys - Y - Cys - B I hvor a) X betegner L-tyrosin (L-Tyr), og Y betegner L-valin (L-Val); eller b) X betegner L-phenylalanin (L-Phe), og Y betegner L-threonin (L*Thr); og 10. betegner en L-, D- eller DL-aminosyre, der er valgt fra gruppen bestående af phenylalanin (Phe), para-chlorphenylalanin (p-CI-Phe), tryptophan (Trp) og deres acetylerede derivater; og B betegner en L-, D- eller DL-aminosyre, der er valgt fra gruppen bestående af threoninamid (Thr-NH2), og tryptophanamid (Trp-NH2); og de farmaceutisk acceptable syreadditionssalte 15 deraf; med det forbehold, at B ikke kan betegne D-Thr-NH2, når A er D-Phe, X er L-Phe, og Y er L-Thr.
7. Farmaceutisk præparat ifølge krav 6 til behandling af prostatiske adenocarcinomer, brystcarcinomer, insulinomer, gastrinomer, chondrosarcomer, osteosarcomer og pankreatiske carcinomer. 15
8. Farmaceutisk præparat ifølge krav 6 eller 7, hvilket præparat omfatter den farmaceutisk aktive bestanddel indkapslet i poly(d,l-lactid-co-glycolid)-mikrokapsler.
9. Farmaceutisk præparat ifølge et hvilket som helst af kravene 6-8, hvilket præparat som en '20 akfiv~Bestanddel omfatter en forbindelse med formlen-(I)“ifølgé“krav"l_valgTfra^ruppen _ bestående af i-f D- Phe-Cys-L-T yr- D-Trp-Lys- L-Val-Cys-Thr-NH2 25 •-i D-Phe-Cys-L-Tyr-D-Trp-Lys-L-Val-Cys-Thr-NH2 i--1 D-Phe-Cys-L-Phe-D-Trp-Lys-L-Thr-Cys-Thr-NH2 • 30 D-Trp-Cys-L-Phe-D Trp-Lys-L-Thr-Cys-Thr-NH2 i--- —I ' AcPhe-Cys-L- Phe- D-Trp- Lys- L-Thr-Cys-Thr- NH2 35 eller et farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt deraf.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US72710585 | 1985-04-25 | ||
| US06/727,105 US4650787A (en) | 1985-04-25 | 1985-04-25 | Biologically active octapeptides |
| US84353986 | 1986-03-28 | ||
| US06/843,539 US4725577A (en) | 1985-04-25 | 1986-03-28 | Biologically active lysine containing octapeptides |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK185486D0 DK185486D0 (da) | 1986-04-22 |
| DK185486A DK185486A (da) | 1986-10-26 |
| DK174920B1 true DK174920B1 (da) | 2004-02-23 |
Family
ID=27111452
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK198601854A DK174920B1 (da) | 1985-04-25 | 1986-04-22 | Octapeptidsomastatinanloger, fremgangsmåde til fremstilling deraf samt en farmaceutisk præparat |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4725577A (da) |
| EP (1) | EP0203031B1 (da) |
| AT (1) | ATE78831T1 (da) |
| AU (1) | AU600895B2 (da) |
| CA (1) | CA1333646C (da) |
| DE (1) | DE3686200T2 (da) |
| DK (1) | DK174920B1 (da) |
| HK (1) | HK68793A (da) |
| IE (1) | IE59621B1 (da) |
| SG (1) | SG57793G (da) |
Families Citing this family (53)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH085913B2 (ja) * | 1985-09-12 | 1996-01-24 | ザ・アドミニストレ−タ−ズ・オブ・ザ・ツ−レイン・エデユケイシヨナル・フアンド | 治療用ソマトスタチン同族体 |
| US4904642A (en) * | 1985-09-12 | 1990-02-27 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Therapeutic somatostatin analogs |
| GR862206B (en) * | 1985-09-12 | 1986-12-31 | Univ Tulane | Therapeutic somatostatin analogs |
| US4853371A (en) * | 1986-06-17 | 1989-08-01 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Therapeutic somatostatin analogs |
| DE3726517A1 (de) * | 1986-08-18 | 1988-03-03 | Sandoz Ag | Nasale zusammensetzungen, welche octreotid enthalten |
| DE3845000C2 (de) * | 1987-07-10 | 1998-11-19 | Novartis Ag | Anwendung von Octreotid zur Behandlung von Brustkrebs |
| AU639371B2 (en) * | 1987-07-10 | 1993-07-22 | Novartis Ag | Method of treating breast cancer |
| US5073541A (en) * | 1987-11-18 | 1991-12-17 | Administrators Of The Tulane Educational Fund | Treatment of small cell lung cancer with somatostatin analogs |
| US5068221A (en) * | 1989-05-09 | 1991-11-26 | Mathias John R | Treatment of motility disorders with a gnrh analog |
| US5538739A (en) * | 1989-07-07 | 1996-07-23 | Sandoz Ltd. | Sustained release formulations of water soluble peptides |
| HU221294B1 (en) * | 1989-07-07 | 2002-09-28 | Novartis Ag | Process for producing retarde compositions containing the active ingredient in a polymeric carrier |
| PH30995A (en) * | 1989-07-07 | 1997-12-23 | Novartis Inc | Sustained release formulations of water soluble peptides. |
| DK0457888T3 (da) * | 1989-12-08 | 1996-08-12 | Univ Tulane | Octapeptidanaloger af somatostatin med threonin i 6-stillingen |
| GB9004017D0 (en) * | 1990-02-22 | 1990-04-18 | Krenning Eric P | Improvements in or relating to organic compounds |
| DE69110519T2 (de) * | 1990-04-06 | 1995-11-30 | Univ Tulane | Somatostatinanaloge. |
| IT1240643B (it) * | 1990-05-11 | 1993-12-17 | Mediolanum Farmaceutici Spa | Peptidi biologicamente attivi contenenti in catena 2-alchiltriptofano |
| US5872100A (en) * | 1990-05-11 | 1999-02-16 | Deghenghi; Romano | Peptides containing D-2-Alkyl-Tryptophan |
| US5668254A (en) * | 1990-05-11 | 1997-09-16 | Romano Deghenghi | D-2-alkyl-tryptophan and peptides containing same |
| US5434136A (en) * | 1990-12-14 | 1995-07-18 | Mathias; John R. | Treatment of motility disorders with a GNRH analog |
| HU207104B (en) * | 1991-01-25 | 1993-03-01 | Biosignal Kutato Fejlesztoe Kf | Process for producing new somatostatin analogs inhibiting tumour growth and pharmaceutical compositions comprising such compounds |
| US5443815A (en) * | 1991-11-27 | 1995-08-22 | Diatech, Inc. | Technetium-99m labeled peptides for imaging |
| US5620675A (en) | 1992-06-23 | 1997-04-15 | Diatech, Inc. | Radioactive peptides |
| US6017512A (en) * | 1992-06-23 | 2000-01-25 | Diatide, Inc. | Radiolabeled peptides |
| US5504069A (en) * | 1993-02-11 | 1996-04-02 | Biomeasure, Inc. | Inhibition of trauma-induced tumor growth |
| FR2701952B1 (fr) * | 1993-02-22 | 1995-03-31 | Adir | Nouveaux dérivés cyclopeptidiques de l'angiopeptine, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent. |
| EP0720621B1 (en) | 1993-06-23 | 2001-02-07 | Diatide, Inc. | Radiolabeled somatostatin-derived peptides for imaging and therapeutic uses |
| US6051206A (en) * | 1994-06-03 | 2000-04-18 | Diatide, Inc | Radiolabeled somatostatin-derived peptides for imaging and therapeutic uses |
| US6100377A (en) * | 1994-06-10 | 2000-08-08 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Constrained peptides |
| HU221481B (en) * | 1994-09-27 | 2002-10-28 | Romano Deghenghi | Oligopeptides containing d-2-alkyltryptophan capable of promoting the release of growth hormone, their use and pharmaceutical compositions comprising thereof |
| US5597894A (en) * | 1995-06-05 | 1997-01-28 | The Louisiana State University Medical Center Foundation | Multi-tyrosinated somatostatin analogs |
| US5830431A (en) * | 1995-06-07 | 1998-11-03 | Mallinckrodt Medical, Inc. | Radiolabeled peptide compositions for site-specific targeting |
| US5770687A (en) * | 1995-06-07 | 1998-06-23 | Peptor Limited | Comformationally constrained backbone cyclized somatostatin analogs |
| IT1277391B1 (it) * | 1995-07-28 | 1997-11-10 | Romano Deghenghi | Peptidi ciclici analoghi della somatostatina ad attivita' inibitrice dell'ormone della crescita |
| JPH09328499A (ja) * | 1996-02-20 | 1997-12-22 | American Cyanamid Co | 純粋なソマトスタチンアンタゴニストおよびその使用方法 |
| US6262229B1 (en) | 1996-12-04 | 2001-07-17 | Biomeasure Incorporated | Somatostatin antagonists |
| US5972895A (en) * | 1996-12-11 | 1999-10-26 | A. Glenn Braswell | Composition and method for increasing growth hormone levels |
| EP1332762A1 (en) * | 1997-05-01 | 2003-08-06 | Cedars-Sinai Medical Center | Method of treating hyperprolactinemia and prolactinomas |
| ATE234113T1 (de) * | 1997-05-01 | 2003-03-15 | Cedars Sinai Medical Center | Verfahren zur behandlung von hyperprolaktinämia und prolaktinomen |
| US5972893A (en) * | 1997-05-06 | 1999-10-26 | Cedars-Sinai Medical Center | Method of treating hyperprolactinemia and prolactinomas |
| US6004928A (en) * | 1997-05-13 | 1999-12-21 | Biomeasure, Incorporated | Method of treating hyperlipidemia |
| ATE245998T1 (de) * | 1997-05-13 | 2003-08-15 | Sod Conseils Rech Applic | Somatostatin agoniste zur reduzierung von körpergewicht |
| EP0981364B1 (en) * | 1997-05-13 | 2006-03-01 | Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques S.A.S. | Method and compositions for treating hyperlipidemia |
| PT980253E (pt) * | 1997-05-13 | 2004-08-31 | Conseils De Rec Appl Scient S | Somatostatina e agonistas de somatostatina para tratar a insensibilidade a insulina e a sindrome x |
| US5968903A (en) * | 1998-05-07 | 1999-10-19 | Biomeasure, Incorporated | Inhibition of H. pylori proliferation |
| ES2325880T3 (es) | 2001-06-08 | 2009-09-23 | Ipsen Pharma | Analogos quimericos de somatostatina-dopamina. |
| US8709998B2 (en) | 2003-04-22 | 2014-04-29 | Ipsen Pharma S.A.S. | Peptide vectors |
| US20070111930A1 (en) * | 2005-11-10 | 2007-05-17 | Palle Venkata Raghavendra A | Process for preparing vapreotide |
| US8691761B2 (en) | 2006-10-16 | 2014-04-08 | Jean E. F. Rivier | Somatostatin receptor 2 antagonists |
| PL2076535T3 (pl) | 2006-10-16 | 2013-08-30 | Salk Inst Biological Studies | Antagoniści somatostatyny selektywni względem receptora (SSTR2) |
| KR101642363B1 (ko) | 2008-06-12 | 2016-07-25 | 입센 바이오이노베이션 리미티드 | 신경내분비계 질환의 억제 |
| CN102083451A (zh) | 2008-06-12 | 2011-06-01 | 赛恩泰新公司 | 癌症的抑制 |
| GB0820970D0 (en) | 2008-11-17 | 2008-12-24 | Syntaxin Ltd | Suppression of cancer |
| WO2014197938A1 (en) | 2013-06-13 | 2014-12-18 | Antisense Therapeutics Ltd | Combination therapy |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4209426A (en) * | 1979-05-29 | 1980-06-24 | American Home Products Corporation | Polypeptides related to somatostatin |
| ATE2512T1 (de) * | 1979-11-27 | 1983-03-15 | Sandoz Ag | Polypeptide, verfahren zu ihrer herstellung, pharmazeutische zusammensetzungen, die diese polypeptide enthalten, und ihre verwendung. |
| US4282143A (en) * | 1980-06-13 | 1981-08-04 | American Home Products Corporation | Octapeptides lowering growth hormone |
| DK81082A (da) * | 1981-03-06 | 1982-09-07 | Sandoz Ag | Fremgangsmaade til fremstilling af polypeptider |
| US4443434A (en) * | 1982-08-18 | 1984-04-17 | American Home Products Corporation | Antiulcer agent |
| CH655505B (da) * | 1982-08-24 | 1986-04-30 | ||
| US4451394A (en) * | 1982-10-25 | 1984-05-29 | American Home Products Corporation | Dodecapeptides preventing glucose and triglyceride assimilation |
| US4440904A (en) * | 1983-01-31 | 1984-04-03 | American Home Products Corporation | Nonapeptide anti-secretory agents |
| US4684620A (en) * | 1984-09-04 | 1987-08-04 | Gibson-Stephens Neuropharmaceuticals, Inc. | Cyclic polypeptides having mu-receptor specificity |
| JPH085913B2 (ja) * | 1985-09-12 | 1996-01-24 | ザ・アドミニストレ−タ−ズ・オブ・ザ・ツ−レイン・エデユケイシヨナル・フアンド | 治療用ソマトスタチン同族体 |
-
1986
- 1986-03-28 US US06/843,539 patent/US4725577A/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-04-15 EP EP86810174A patent/EP0203031B1/en not_active Expired
- 1986-04-15 AT AT86810174T patent/ATE78831T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-04-15 DE DE8686810174T patent/DE3686200T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-04-16 IE IE100486A patent/IE59621B1/en not_active IP Right Cessation
- 1986-04-17 AU AU56338/86A patent/AU600895B2/en not_active Expired
- 1986-04-22 DK DK198601854A patent/DK174920B1/da not_active IP Right Cessation
- 1986-04-24 CA CA000507490A patent/CA1333646C/en not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-05-04 SG SG577/93A patent/SG57793G/en unknown
- 1993-07-15 HK HK687/93A patent/HK68793A/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU5633886A (en) | 1986-10-30 |
| AU600895B2 (en) | 1990-08-30 |
| SG57793G (en) | 1993-07-09 |
| EP0203031A3 (en) | 1988-09-21 |
| HK68793A (en) | 1993-07-23 |
| DK185486D0 (da) | 1986-04-22 |
| DE3686200T2 (de) | 1993-03-11 |
| EP0203031A2 (en) | 1986-11-26 |
| IE861004L (en) | 1986-10-25 |
| ATE78831T1 (de) | 1992-08-15 |
| DK185486A (da) | 1986-10-26 |
| DE3686200D1 (de) | 1992-09-03 |
| US4725577A (en) | 1988-02-16 |
| EP0203031B1 (en) | 1992-07-29 |
| CA1333646C (en) | 1994-12-20 |
| IE59621B1 (en) | 1994-03-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK174920B1 (da) | Octapeptidsomastatinanloger, fremgangsmåde til fremstilling deraf samt en farmaceutisk præparat | |
| US4650787A (en) | Biologically active octapeptides | |
| EP0301087B1 (en) | Peptide | |
| FI83660C (fi) | Foerfarande foer framstaellning bukspottskoertelns grf hos maenniskan. | |
| US6307017B1 (en) | Octapeptide bombesin analogs | |
| AU657723B2 (en) | Nonapeptide bombesin antagonists | |
| KR100629013B1 (ko) | Ｉｇｆ-ⅰ 및 -ⅱ를 억제하는 ｇｈ-ｒｈ의 길항 유사체 | |
| JP2007526900A (ja) | Ｇｈ−ｒｈのアンタゴニスト誘導体（２００３） | |
| FI94356C (fi) | Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisen kasvuhormonia vapauttavan tekijän synteettisen peptidianalogin tai sen ei-myrkyllisen suolan valmistamiseksi | |
| CA1247599A (en) | Mammalian pgrf | |
| AU669636B2 (en) | Amylin antagonists and agonists | |
| Pless | From Somatostatin to Sandostatin [R]: History and Chemistry | |
| CZ196399A3 (cs) | Antagonisté somatostatinu |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |