DK172754B1

DK172754B1 - 9-R-azacykliske erythromycinantibiotika og farmaceutisk middel indeholdende disse antibiotika

Info

Publication number: DK172754B1
Application number: DK198902762A
Authority: DK
Inventors: Clarence J Maring; Larry L Klein; Richard J Pariza; Paul A Lartey
Original assignee: Abbott Lab
Priority date: 1988-06-07
Filing date: 1989-06-06
Publication date: 1999-06-28
Also published as: GR3023617T3; DE68927967T2; DE68927967D1; JPH0267294A; EP0345627A3; CA1328258C; AU3610289A; JP2922922B2; EP0345627B1; EP0345627A2; KR0132671B1; DK276289A; US5075289A; KR910000785A; AU609307B2; NZ229328A; IL90434A0; DK276289D0; ES2103257T3; ATE151772T1

Description

i DK 172754 B1

Den foreliggende opfindelse angår antibiotika til anvendelse i kemoterapi af antimikrobi-elle infektioner og nærmere bestemt erythromycinderivater, som udviser høj antimikrobi-el aktivitet og forbedrede terapeutiske indekser. Opfindelsen angår også et farmaceutisk middel indeholdende disse antibiotika.

5

Erythromycin og almindelige derivater finder bred anvendelse og udviser ønskelig aktivitet over for en række grampositive pathogener. Eftersom nogle pathogener er mindre følsomme end andre for disse legemidler, er høje doser af disse antibiotika 10 af og til nødvendige til behandling af alvorlige eller vidt udbredte infektioner. Som ved alle legemidler observeres nogle gange toksiske effekter ved højere dosisniveauer, isar hos patienter, som er alvorligt 1 fare på grund af infektion og således har mest behov for behandling. Forbedringer i styrke og 15 spektrum ledsages uheldigvis ofte af en stigning i toksicitet, således at den sidste generation af lægemidler sædvanligvis repræsenterer et kompromis mellem disse konkurrerende overvejelser. Som et resultat er der en fortsat forskning 1 antibiotika, som er mere potente over for visse organismer eller for-20 trinsvis over for alle organismer, end sådanne, der anvendes for tiden. Sådanne lægemidler vil ønskeligt have et forbedret terapeutisk indeks, som er forholdet mellem den effektive terapeutiske eller profylaktiske dosis og den toksiske dosis og sædvanligvis udtrykkes som EDso/LOso-forholdet.

25

Det er et formål med den foreliggende opfindelse at tilvejebringe hidtil ukendte forbindelser, som er erythromycinderivater, og som har større in vitro og in vivo potens end erythromycin over for visse organismer og større terapeutiske in-30 dekser end erythromycin.

Dette og andre formål med den foreliggende opfindelse vil nærmere forstås ved reference til den følgende beskrivelse.

35 Ifølge den foreliggende opfindelse tilvejebringes hidtil ukendte erythromycin A 9-R-azacyk1 i ske forbindelser og farmaceutisk acceptable salte og estere deraf. Udtrykt ved struktur 2 DK 172754 B1 t i 1 vejebri nges ifølge opfindelsen forbindelser, som er ejendommelige ved, at de har formlen CH3N .OH, 5 CH3 y n. : HO, 1

\ ' OH

HO \.-·<^1ν'οχΓ'οη3

HO^J L H H

10 CH3* Γλ Γ^ο H H

I ΟχΑ 0^! ch3 ch3 i "chj y y n o 1 L--H1 >C*R2 ch3' och3 15 hvori Ri er hydrogen, OH, earbamoy1oxy eller NR3R4, hvori R3 og R4 uafhængigt er valgt blandt H og lavere alkyl; R2 er hydrogen, når Ri er andet end hydrogen, eller R2 er NR3R4, når Ri er hydrogen; og R er en substitueret eller usubsti tueret 20 heterocykli sk ring med formlen

yS

(CHj)p 25 VCM2lm (Rs)q hvori m er 1-3, q er 0 eller 1, p er 1-2, og R5 er valgt 30 blandt CH2, 0, S, C = 0, C=S, SO2, SO, -CH=CH-, CH(OH)CH(OH), NH og CR5R7, hvori Rg og R7 sammen danner en ethylendioxybro; eller R er en heterocyklisk ring som defineret ovenfor med sub-stituenter valgt blandt lavere alkyl, hydroxy, alkoxy, halogen, phenyl, alkanoyl, benzoyl, benzyloxycarbonyl, t-butyloxy-35 carbonyl, arylalkoxyalkyloxy og alkoxyalkyloxy; eller R er 4,4-tetramethylenpiperidino, 4,4-pentamethylenpiperidino, 3,4-benzpiperi di no eller 3,5-ethanpi per idi no; og farmaceutisk acceptable salte eller estere deraf.

! 3 DK 172754 B1

Betegnelsen "lavere alkyl" som anvendt heri skal betyde lige eller forgrenede C^-Cø kæderadikaler, herunder men ikke begrænset til methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, sek-butyl, isobutyl, tert-butyl, 2-ethylhexyl , n-octyl, 2,4-dime-5 thylpentyl og lignende.

Betegnelsen "halogen" som anvendt heri betyder fluor, chlor, brom eller jod.

10 Betegnelsen "alkoxy" som anvendt heri betyder RaO-, hvori Re er en lavere alkylgruppe.

Betegnelsen "alkanoyl" som anvendt heri betyder RgCO-, hvori Rg er en lavere alkylgruppe.

15

Betegnelsen "aryl" som anvendt heri skal betyde aromatiske radikaler, herunder, men ikke begrænset til phenyl, 1-naphthyl, 2-naphthyl og lignende.

20 Betegnelsen "cykloalkyl" som anvendt heri betyder en alifa-tisk, cyklisk gruppe med 3-7 carbonatomer.

Betegnelsen "arylalkoxyalkyloxy" som anvendt heri betyder Rio r11_0_r12“0' hvori R10 er *ryl» og Ru og R12 er lavere alkyl.

25

Betegnelsen "alkoxyalkyloxy" som anvendt heri betyder R13-O-R14~0“» hvori R13 er Ris-O-Rjg, hvori Rjg og Rie er lavere alkyl, eller Ri3 er lavere alkyl, og Ru er lavere alkyl.

30 Forbindelserne ifølge opfindelsen omfatter kun R-epimerer i 9-stilHngen. Forbindelserne ifølge opfindelsen omfatter imidlertid bade 4”-R- og 4"-S-epimerer.

Med "farmaceutisk acceptabel" skal forstås sådanne salte og 35 estere, som inden for rammerne af sund medicinsk vurdering er velegnede til anvendelse i kontakt med de humane væv og lavere dyr uden unødig toksicitet, irritation, allergisk reaktion og 4 DK 172754 B1 lignende, og som har et rimeligt, fornuftigt fordel/risiko-forhold, og som er effektive til deres tilsigtede anvendelse i kemoterapi og profylakse af anti mi krobie 11e infektioner.

5 Foretrukne heterocykli ske forbindelser omfatter piperidin, morfolin, azepin og arylsubstitueret piperidin. Den mest foretrukne heterocykliske forbindelse er morfolin.

Foretrukne forbindelser omfatter 9-R-morfolino-erythromycin A, 10 9-R-pi per idino-4"-amino-erythromyei η A og 9-R-azepino-erythro- mycin A. Den mest foretrukne forbindelse er 9-R-moforlino-ery-thromyein A.

Forbindelserne ifølge opfindelsen viser også overraskende for-15 bedret in vitro og in vivo antibiotisk styrke over for visse organismer i sammenligning med erythromycin. Disse forbindelser tilvejebringer yderligere et forbedret terapeutisk indeks i sammenligning med kendte, potente erythromycinderivater.

20 Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse kan anvendes i form af farmaceutisk acceptable salte hidrørende fra uorganiske eller organiske syrer. Blandt de mere almindelige farmaceutisk acceptable salte og estere af makroli dant ibi ot ika er acetat, estolat (laurylsulfatsalt af propionatesteren), ethyl-25 succinat, gluceptat (giucoheptonat), lactobionat, stearat og hydrochlorid. Andre syresalte, som anvendes inden for det farmaceutiske område, er følgende: adipat, alginat, aspartat, benzoat, benzensul fonat, bisulfat, butyrat, citrat, camphorat, camphersul fonat, cyk1opentanpropionat, digluconat, dodecylsul-30 fat, ethansu1 fonat, fumarat, gluconat, g 1ycerophosphat, hemi- sulfat, heptonat, hexanoat, hydrobromid, hydrojodid, 2-hydro-xy-ethansulfonat, lactat, maleat, methansulfonat, 2-naphtha-lensulfonat, nikotinat, oxalat, pamoat, pantothenat, pectinat, persulfat, 3-pheny1 prop i onat, picrat, pivalat, propionat, suc-35 cinat, tartrat, thiocyanat, tosylat og undecanoat. Selv om kvaternær i serede makro 1 idforbinde1 ser generelt er drastisk mindre aktive end moderforb inde1 sen in vivo kan nitrogenhol- 5 DK 172754 B1 dige basisgrupper kvaterner i seres med sådanne midler som lavere alkylhalogenider, såsom methyl-, ethyl-, propyl- og buty lchlor id, -brom id og -jodid; dialkylsulfater, såsom dimethyl-, diethyl-, dibutyl- og diamy1su1fat; langkædede haloge-5 nider, såsom decyl-, lauryl-, myristyl- og stearylchlorid, -bromid og -jodid; ara 1 kyl halogeni der, såsom benzyl- og phen-ethylbromid, og andre. Vand- eller olieopløselige eller dis-pergerbare produkter opnås derved.

10 Ifølge den foreliggende opfindelse tilvejebringes også farmaceutiske midler i enhedsdoseringsform, som omfatter en effektiv mangde af en forbindelse ifølge den foreliggende opfindelse i kombination med en konventionel, farmaceutisk barer. Som anvendt heri betyder betegnelsen "farmaceutisk bærer" et fast 15 eller flydende fyldstof, fortyndingsmiddel eller indkapslingsmateriale. Nogle eksempler på materialer, som kan tjene som farmaceutiske barere, er sukkerarter, såsom lactose, glucose og saccharose; stivelser, såsom majsstivelse og kartoffelstivelse; cellulose og derivater heraf, såsom natriumcarboxyme-20 thylcel1ulose, ethylcellulose og celluloseacetat; pulveriseret tragant; malt; gelatine; talkum; excipienser, såsom cacaosmør og suppositorievoksarter; olier, såsom jordnøddeolie, bomuldsfrøolie, farvetidselol ie, sesamolie, olivenolie, majsolie og sojabønneolie; polyoler, såsom propylenglycol, glycerol, sor-25 bitol, mannitol og polyethy1englycol; estere, såsom ethyloleat og ethyllaurat; agar; midler til at give stødpudeevne, såsom magnesiumhydroxid og aluminiumhydroxid; alginsyre; pyrogenfrit vand; isotonisk saltvand; Ringers opløsning, ethylalkohol og phosphatpufferopløsninger; såvel som andre ikke-toksiske, for-30 ligelige materialer, som anvendes i farmaceutiske formulerin ger. Befugtningsmidler, emulgatorer og smøre- eller glittemid-ler, såsom natriumlaurylsulfat og magnesiumstearat, såvel som farvemidler, frigivelsesmidler, overtræksmidler, sødemidler, aromamidler, parfumemidler og konserveringsmidler kan også 35 være til stede i midlerne alt efter ønske. Mængden af aktiv bestanddel, som kan kombineres med baremateri alerne til dannelse af en enhedsdoseringsform, vil variere afhængigt af den 6 DK 172754 B1 behandlede vært og den særlige administrationsmåde.

Injektionspræparater, såsom sterile, vandige injektionspræparater eller olieagtige injektionssuspensioner, kan formuleres på kendt måde under anvendelse af velegnede dispergerings- el-5 ler befugtningsmidler og suspenderingsmidler. Oet sterile injektionspræparat kan også være en steril injektionsopløsning eller -suspension i et ikke-toksi sk, parenteralt acceptabelt fortyndingsmiddel eller opløsningsmiddel, f.eks. i form af en opløsning i 1,3-butandiol. Blandt de acceptable vehikler og 10 opløsningsmidler, som kan anvendes, er vand. Ringers injektionsvæske, U.S.P. og isotonisk natriumchloridopløsning. Endvidere anvendes sterile, ikke-flygtige olier konventionelt som et opløsnings- eller suspenderingsmedium. Til dette formål kan en hvilken som helst mild, ikke-flygtig olie anvendes, herun-15 der syntetiske og halvsyntetiske mono-, di- eller triglyceri-der. Endvidere kan fedtsyrer, såsom oleinsyre, finde anvendelse til fremstillingen af injektionspræparater.

Suppositorier til rektal administration kan fremstilles ved blanding af lægemidlet med en velegnet, ikke-irriterende ex-20 cipiens, såsom cacaosmør eller polyethylenglycol, som er fast ved stuetemperatur, men flydende ved rektal-temperaturen og derfor vil smelte i endetarmen og frigive lægemidlet.

Faste doseringsformer til oral administration kan omfatte kapsler, tabletter, piller, pulvere, prills og granule. I så-25 danne faste doser ingsformer kan den aktive forbindelse være sammenblandet med mindst et inaktivt fortyndingsmiddel, såsom saccharose, lactose eller stivelse. Sådanne doseringsformer kan også, som det er normal praksis, omfatte yderligere materialer ud over inaktive fortyndingsmidler, f.eks. tabletglit- 1(1 temidler og andre tablethjælpestoffer, såsom magnesiumstearat og mi krokryst a 11 i nsk cellulose. I tilfældet af kapsler, tabletter og piller kan doser ingsformerne også omfatte midler til at give stødpudeevne. Tabletter og piller kan endvidere fremstilles med enteroovertræk og andre overtræk til styring 7 DK 172754 B1 af frigivelse.

Flydende doseringsformer til oral administration kan omfatte farmaceutisk acceptable emulsioner, mikroemulsioner, opløsninger, suspensioner, sirupper og eleksirer, som indeholder 5 inaktive fortyndingsmidler, der sædvanligvis anvendes på området, såsom vand. Sådanne midler kan også omfatte hjælpemidler, såsom befugtn ingsmid 1 er, emulgerings- og suspenderingsmidler samt søde-, aroma- og parfumemidler.

Betegnelsen "administration" af antibiotikumet eller midlet 10 heri omfatter systemisk anvendelse som ved intramuskulær, intravenøs, intraperitoneal eller subkutan injektion og kontinuerlig intravenøs infusion samt oral administration deraf såvel som topisk anvendelse af forbindelserne og midlerne på infektionsstedet eller det potentielle infektionssted.

15 Med "en terapeutisk effektiv mængde" af antibiotikumet skal heri forstås en tilstrækkelig mængde af forbindelsen til behandling eller forebyggelse af følsomme bakterielle eller andre mikrobielle infektioner i et fornuftigt fordel/risiko-forhold, som er praktisk anvendeligt til enhver medicinsk be-20 handling. Det totale daglige brug af midlerne heri vil naturligvis bestemmes af den behandlende læge inden for rammerne af sund medicinsk dømmekraft. Den effektive mængde af antibiotikumet ifølge den foreliggende opfindelse vil variere med den pågældende organisme, som behandles, infektionens alvorlighed, 25 behandlingens varighed, den specifikke forbindelse, ester eller salt, der anvendes, patientens alder og vægt og lignende faktorer, som er velkendte inden for medicinområdet. Behandlings- og forebyggelseskure ifølge den foreliggende opfindelse omfatter generelt indgivelse til en patient med behov for en 20 sådan behandling af fra ca. 100 mg til ca. 5.000 mg (fortrinsvis 500 til 2.000 mg) af forbindelsen ifølge den foreliggende opfindelse per dag i flere doser eller fortrinsvis i en enkelt dosis på fra ca. 250 mg til ca. 1.000 mg.

8 DK 172754 B1

Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse syntetiseres generelt som vist skematisk i skema I og/eller skema II.

Forbindelser ifølge den foreliggende opfindelse blev syntetiseret ud fra 9R-amino-9-deoxoerythromycin A (a) ved omsætning 5 af (a) med et reagens, såsom (b), som typisk har en funktionel gruppe valgt blandt aldehyd, halogen, alkyl sulfonat eller ary1 sul fonat.

Når reagens (b) funktionaliseres ved hjælp af et aldehyd, involverer reaktionstrin I en reduktiv al kyler i ngsproces, hvori 10 katalytisk hydrogenering under anvendelse af hydrogen og en katalysator, såsom palladium, kan anvendes. Alternativt kan et homogent, reduktivt a 1kyler ingsreagens, såsom natriumcyanobor-hydrid, anvendes.

Når reagens (b) funktionaliseres ved hjælp af et sulfonat eller 15 et halogen, fremstilles den ønskede forbindelse ved omsætning af (a) med reagenset (b) i nærværelse af en base, såsom tri-ethylamin, i et opløsningsmiddel, såsom acetonitril. I dette tilfælde kan omsætningen være underkastet opvarmning i et passende tidsrum til forbedring af produktudbytte.

20 Forbindelser, som er repræsenteret ved den generelle struktur (f), blev syntetiseret ved hjælp af den i skema II beskrevne metode. Udgangsmaterialet (c) fra skema I underkastes beskyttelse ved 21-OH-gruppen, fortrinsvis med et acetat. Efterfølgende oxidation af det resulterende mellemprodukt finder der-J efter sted ved 4 "-sti 11 i ngen. Indførsel af en aminogruppe i denne stilling opnås ved hjælp af indledende omdannelse af mellemproduktet til et oxim og dets efterfølgende reduktion til aminen.

Skema I

DK 172754 B1 9 5 H CH’WCH’

• CH3 N

h-n : ho% I

\ .A. OH

ch3'« r 'ia.chj j i HO-.^ !^OxTsCH3

HO«^J I Η H

io CH y> fCCH3 3 cC°YV0\Lo4ch3

CH3 Π "qh ^ \V

o II

a S< *OH

CH^ 'och3 15 I b CH, CH,^CH’

R\ i OH TO-. X CH,.. Jl>CH, ] I

m"T V-o-'So-'Sch,

HO-J I HH

25 ΟΗ,'Χ^Ι C™’ CH°°\L°vXCH3 ch3 n ch3 t

o II

yC'*0H

c ch3' '*och3 30 35 DK 172754 B1 10

Skema II

CH3v ch3

CH N

1. Ac20/Pyr R ; AcO, 1 v , / 0H Ά

2. >N = C=N-< / CH3.. Γ |A<CH3 I I

c -- HOX.-O^O^CHj

ci2chcooh/ ho^J 1 H H

DMSO CH,''^I N CHa ^M3 Γ o 1>0 H H„

* XA

ch3 Π ch3 γ γ

o IL

ch3N ^ch3 SK***0 ch3 n ch3' ‘och3 X : OH ^'.A L h2noh.hci d CH3. rVCH3 T Ί MeOH^-^^ “•f r''° λ 0 λ CH3 ^^ΑΓει,Ν/Μβοιι

HO-»J I HH J

t^s, <^ch3 CHl 'cVS °\1°Χ· ch3 π λοη3 S' o i

V^^SNOH

CH3^'*OCH3 e v N\ RaNi/MeOH/H, X* ch3 ch3

\ ch3 N

X R. : Λ ho, 1

\ ' OH

CH3\fXCH3 I I

ΗΟ-^> \-"Ο^Ο^0Η3

HO*J I Η H

<^ch3 CHl' 0v\ °xI°xCH’

ch3T Xh/A X

0 I L'Rl A; Rz ch/ 'och3 f 11 DK 172754 B1 4"-aminogruppen kan yderligere underkastes omsætninger til dannelse af 4"-arainoderivater. Således frembringer alkylering af forbindelse (f) 4"-N-alkylderivater som i eksempel 33 og 34.

5

Synteseskemaerne I og II beskrives nermere ved reference til eksemplerne nedenfor.

Eksempel If al 10 9(R)ervthromvcvlamin 100 g erythromycin A 9-oxim blev opløst i 1500 ml methanol og behandlet med 200 g Raney-nikkel-katalysator. Blandingen blev anbragt i en Parr-omryster og omrystet i 18 timer under et hy-15 drogentryk på 4 atmosfære. Katalysatoren blev frafiltreret og vasket grundigt med methanol. Den klare opløsning blev genfiltreret gennem 0,45 μ (μιη) nylon, og methanolen blev fjernet under reduceret tryk. Det resulterende hvide skum vejede ca.

93 g. Det blev opløst i 600 ml varmt acetonitril og filtreret 20 igen. Efter henstand ved stuetemperatur natten over blev krystaller høstet, vasket med en lille smule ether og tørret til en konstant masse under reduceret tryk ved 50*C, hvilket gav 45 g (46%) tilstrækkeligt rent/TLC og NMR til anvendelse i eksemplerne nedenfor. Spor af 9(S)-isomer kan fjernes ved en 25 anden krystallisation fra acetonitril.

Alternativt kan 9(R)erythromycy1 am in fremstilles ifølge US patentskrift nr. 3.652.537, som er inkorporeret heri ved reference .

30

Eksempel 1 2,0 g af (a) fra eksempel 1(a) blev opløst i 35 ml acetonitril efterfulgt af tilsætning af 10 ml methanol og 1 ml eddikesyre.

35 Reagenset 2,2-dimethy1-pent-1,5-di aldehyd (1 g) blev tilsat efterfulgt af 250 mg NaB^CN. Reaktionsblandingen blev omrørt i ca. 1% time ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen blev 12 DK 172754 B1 fortyndet med 300 ml 5% vandigt NaK^PO^ og ekstraheret med CHC13. Den vandige fase blev behandlet med NH4OH og ekstraheret igen med CHC13· CHC13-op løsn i ngerne blev kombineret, tørret over MgS04, filtreret, og filtratet blev koncentreret ved 5 fjernelse af opløsningsmiddel. Råproduktet blev oprenset ved hj*lp af kromatografi over silicagel til frembringelse af 1,0 g ifølge eksempel 1. Se tabel 1 vedrørende struktur og fysiske data.

10 Eksempel 2

To g (a) fra eksempel 1(a) blev opløst i ca. 20 ml acetoni-tril. Til denne opløsning blev sat 2,4 ml triethylamin efterfulgt af 2 g 1,6-di-0-methansu1fony 1 -hexan-1,6-diol. Genne op-15 løsning blev kogt under tilbagesvaling i 5 til 7 dage. Reak tionsblandingen blev koncentreret ved fjernelse af opløsningsmiddel ved hjælp af destillation; og det resulterende råprodukt blev oprenset ved hjælp af kromatografi over silicagel til opnåelse af 0,2 g ifølge eksempel 2. Se tabel 1 vedrørende 20 struktur og fysiske data.

Eksempel 3

Et g af (a) fra eksempel 1(a) blev opløst i 15 ml toluen. Til 25 denne opløsning blev sat 2,39 ml N-methylmorfolin efterfulgt af 0,72 ml 1,4-di jodbutan. Reaktionen blev omrørt ved 100*C under nitrogen i 68 timer. Opløsningsmidlet blev fjernet til koncentrering af reaktionsblandingen, som derefter blev genopløst i 400 ml ethylacetat, og den organiske opløsning blev 30 vasket med 0,2 N NaOH og mættet vandigt NaCl i rækkefølge.

Ethylacetatopløsningen blev derefter tørret over MgS04, koncentreret ved fjernelse af opløsningsmiddel, og det resulterende råprodukt blev oprenset ved hjælp af kromatografi til frembringelse af 730 mg ifølge eksempel 3. Se tabel 1 vedrø-35 rende struktur og fysiske data.

13 DK 172754 B1

Eksempel 4-30

Ved at følge den 1 eksempel 1 beskrevne syntese og under anvendelse af det pågældende reagens, blev andre forbindelser 5 4-10, 13 og 15-30 som beskrevet i tabel 1 fremstillet. Ved at følge den i eksempel 2 beskrevne syntese og under anvendelse af det pågsldende reagens blev eksempel 11, 12 og 14, som beskrevet i tabel I, fremstillet.

10 Strukturen hos hver forbindelse blev fastslået ved iH-NMR, 13C-NMR, grundstofanalyse og/eller højopløsningsmassespektre som angivet.

Eksempel 31-32 15

Eksemplerne 31-32 kan fremstilles på samme måde som eksempel 33-34 ved anvendelse af produktet ifølge eksempel 5 som udgangsmateriale, i stedet for produktet ifølge eksempel 19.

20 Eksempel 33-34

En opløsning af 1 g af produktet ifølge eksempel 19 i 20 ml CH2CI2 blev acetyleret ved tilsætning af 1 ml eddikesyreanhy-drid og omrøring ved stuetemperatur i ca. 3 timer. Opløsnings-25 middel blev fjernet, og det resulterende produkt blev genopløst i CHC13 og vasket med NaHC03 . CHC13-opløsni ngen blev tørret over MgS04 og filtreret, og opløsningsmiddel blev fjernet til opnåelse af 2'-0-acetylmel1 emproduktet. Mellemproduktet blev genopløst i 9 ml toluen indeholdende 1 ml DMS0. 1,1 ml 30 di isopropy1carbodiimid og 0,11 ml dich1oreddikesyre blev tilsat, og blandingen blev omrørt i 2 timer. Blandingen blev fortyndet med 100 ml ethylacetat og vasket med NaHC03, filtreret og koncentreret ved fjernelse af opløsningsmiddel til dannelse af 580 mg af mellemprodukt (d) efter kromatografi. Massespek-35 trum: m/e 845 (M+H).

En opløsning af 537 mg (d) i 20 ml methanol blev kogt under tilbagesvaling i 3 timer til fjernelse af acetatet i 2'-0- 14 DK 172754 B1 stillingen. Til den resulterende opløsning blev sat 0,27 ml triethylamin og 133 mg hydroxy 1aminhydrochlorid. Reaktionsblandingen blev omrørt ved 50* i ca. 2 dage. Blandingen blev fortyndet med 100 ml ethylaeetat og vasket i rækkefølge med 5 mættet, vandigt NaHC03 og mættet NaCl . Det organiske lag blev tørret over MgS04 og filtreret, hvorefter opløsningsmidlerne blev fjernet. Råproduktet gav 330 mg oxim (e) efter kromatografi. Massespektrum: m/e 818 (M+H).

10 Til en opløsning af 317 mg (e) i 40 ml methanol blev sat 1,28 g Raney-nikkel. Blandingen blev omrystet under 4 atmosfære H2 1 20 timer. Den resulterende blanding blev filtreret, og op løsningsmidlet blev fjernet til frembringelse af råprodukterne. Blandingen blev kromatograferet til frembringelse af 22,1 15 mg ifølge eksempel 33 og 10 mg ifølge eksempel 34. Se tabel 1 vedrørende struktur og fysiske data.

Eksempel 35 20 Til en opløsning af 0,1 g af produktet ifølge eksempel 34 i 15 ml methanol blev sat 0,02 ml formalin og 0,11 g 10¾ Pd/C. Blandingen blev hydrogeneret ved 4 atmosfære og omgivelsernes temperatur i 2 til 6 timer. Blandingen blev filtreret, og opløsningsmiddel blev fjernet fra filtratet ved hjælp af destil-25 lation til tilvejebringelse af råprodukt ifølge eksempel 35.

Råblandingen blev oprenset ved søjlekromatografi til dannelse af 0,9 g ifølge eksempel 35.

Eksempel 36 30

Ved at følge den i eksempel 35 beskrevne syntese fremstilledes forbindelsen ifølge eksempel 36 ud fra forbindelsen ifølge eksempel 33.

35 15 DK 172754 B1

In vitro antibakteriel aktivitet

De ant imikrobi el 1e spektre hos en række forbindelser ifølge opfindelsen blev undersøgt ved hjalp af den følgende metode: 5

Tolv petriskåle indeholdende på hinanden følgende vandige fortyndinger af testforbindelsen blandet med 10 ml steriliseret hjerne-hjerte-infusionsagar (Difco 0418-01-5) blev fremstillet. Hver plade blev podet med 1:100 (eller 1:10 for langsomt 10 voksende stammer, primært Micrococcus og Streptococcus)-for tyndinger af op til 32 forskellige mikroorganismer under anvendelse af Steers-replikatorblok. De podede plader blev inkuberet ved 3 5-3 7 * C i 20-24 timer. Endvidere fremstilledes en kontrolplade under anvendelse af BHI-agar, som ikke indeholdt 15 nogen testforbindelse, og som blev inkuberet ved begyndelsen og afslutningen på hver test.

En yderligere plade indeholdende en forbindelse med kendte følsomhedsmønstre over for de afprøvede organismer og hørende 20 til den samme antibiotiske klasse som testforbindelse blev også fremstillet og inkuberet som en yderligere kontrol såvel som for at give sammenlignelighed fra test til test. Erythromycin A blev anvendt til dette formål.

25 Efter inkubering blev hver plade aflast. MIC er defineret som den laveste koncentration af legemiddel, som ikke giver nogen vakst, en svag uklarhed eller sparsomme, isolerede kolonier på podningsstedet i sammenligning med vækstkontrollen.

30 Resultaterne er anført i tabel 2-3.

In vivo antibakteriel aktivitet

Den akutte-muse-beskyttelses-test udføres på 10 mus med hver 3 35 niveauer af lagemiddel. Musedødelighed anvendes til beregning af en ED5o~vardi, dvs. den lagemiddeIdos i s, som kræves til beskyttelse af 50% af testdyrene mod død på grund af podestoftruslen.

16 DK 172754 B1

Den akutte-muse-beskyttelsestest udføres på schweiziske albinomus af hunkøn med en vægt på 18-20 g. Musene får en intrape-ritoneal injektion med en 18 timer gammel kultur af de anførte testorganismer, som er fortyndet tilstrækkeligt til at frem-5 bringe den ønskede LDso-vxrdi. For at kontrollere podestoffets styrke blev en titrering af den anførte testorganisme udført på kontroldyr. Dyrebehandlingsgruppen doseres med testforbindelsen 1 og 5 timer efter infektion og observeres i 7 dage. ED5g-v»rdierne beregnes under anvendelse af de indsamlede dø-10 delighedsdata. Resultaterne er vist i tabel 4.

Den foreliggende opfindelse er blevet beskrevet i form af detaljerede, specifikke udførelsesformer. Det skal imidlertid forstås, at disse udførelsesformer kun er givet til illustra-15 tionsformål, og at opfindelsen ikke nødvendigvis er begrenset dertil. Modifikationer og ændringer inden for de efterfølgende kravs ånd og rammer vil ud fra beskrivelsen være åbenbare for fagfolk på området.

20 25 30 35 17 DK 172754 B1 TABEL 1

EKSEMPEL R1 b TO»1 NMR MASSESPEKTRUM

- REAKTIONS- ' δ ppm fra TMS

TYPE.

3’N(CHj)2 QCH, m/zJM+H) . 11 V» V2 821 V OHC CHO 1 2 N Ib 2,28 3,33 816 j MsO^ **OMs

3 i—I

jJ L, Ic 2,29 3,37 789

4 \ / CICH2-CHO

y la 2,29 3,32 761 5 C J la 2,28 3,32

N OHC CHO

6 [j Λ la 2.29 3,32 817

OHC CHO

« 2 n i1; la 2,29 3,32 831

OHC CHO

8 ζΧ "r^V Ia

. OHC CHO

t 9 YY W Ia k J OHC CHO 1

N

10 Y^r- VY Ia . .

I J OHC CHO

ΥΓ i « 3l er hydroxy og R£ er hydrogen 18 DK 172754 B1

EKSEMPEL R1 b TYPISK NMR MASSESPEKTRUM

- REAKTIONS- S PP™ fra TMS

TYPE 3'N(CH3)2 QCH, m/z (M+H) u K ,b -

MsO^ kOMs 12 S<? Ib 2,3 1 3,32 870

LnJ MsO ^OMs 13 la 2,30 3,33 850

L J OHC CHO

N

» 14 [Ο] Γ Ί la 2,29 3,33 828

MsOH2C^"^CH2OMs

H

, . {Via afbeskyttelse 13 f ^ af forbindelse 18) 2,29 3,31 804 a £c Ac 16 la 2,29 3,31 846

OHC CHO

» °^Ph O. Ph lNJ OHC IhO ,a 2'M 3'31 908 » °V°v^Ph °vO^Ph IS fNv) Ia 2,29 3,31 938

OHC CHO

R^ er hydroxy og R2 er hydrogen 19 DK 172754 B1 EKSEMPEL R1 b __ ™ISK NMR^

- REAKTIONS- δ Ppm f»- TMS

TYPE - 3'N(CH3)2 OCH, m/zJM+fl) 19 Γ0ν1 Γ0ν1 la 2,29 3,32 805

k S OHC CHO N

20 f 'i f ^ la -

OHC CHO

?: o 21 CD OH(C 'cHO la -

N

®s’° 2 2 f > Γ1 la 2,29 3.32 853 I J · OHC CHO ' ' 23 O OHC ino h 2'2» 3'31 861 ''u i och3 ?CHj 24 |A r^l la . .

I I OHC CHO

N

i OH 9« 25 il Ia

I I OHC CHO

i

Ph “ Λ Λ ,a ' ·

OHC CHO

R1 er hydroxy og R2 er hydrogen 20 DK 172754 B1

TYPISK NMR MASSESPEKTRUM

EKSEMPEL R1 κ REAKTIONS- _ ____ ___χ _ S ppm fra- TMS - CH.OOCH, CH0ooCHi 1lÆ!±B> ” o «1«> ia 2,29 3,32 863 0 o 2S Λ, r^S I. -

L J OHC CHO

N

1 I

O^OCHa O^OCHj 29 f'S <1 la - 1

II OHC CHO

N

0 1 OBn Γ°Βη 30 Γ^Ί 'I la - 1

J0 L J OHC CHO

N

1 I

R ^ er hydroxy og er hydrogen.

"Bn" som anvendt ovenfor betyder -CH^-phenyl (dvs. benzyl).

21 DK 172754 B1

TYPISK NMR MASSESPEKTRUM

EKSEMPEL R R1 R2 C —- - 8 ppm ;fra* TMS m/z (M+H) 3'N(CH3)2 OCH3 31 N H j H EKSEMPEL S 2,28 3,32 3 2 H NHj EKSEMPEL 5 2,29 3,33 ( 33 f ^ NH2 H EKSEMPEL *9 2,28 3,29 804 34 r°> H NHj EKSEMPEL 19 2,28 3,30 804 ,. .0.

3:5 J I II ·Ν(ΟΗ3)2 EKSEMPEL 19 - 36 f ^ -n(ch3)2 h eksempel 19 .

35 DK 172754 B1 22 O & 9 9 9 9 9 ιΛ 9» W1 a· * μ r* r·* μα,ογ^γ^ο — — n» a* a* » *· s ***** ^ ss s«»s «· ^ » v * 4 O O <s» 4 r** * O 4 — 0 9 ·4449«<ιΑ« is» n n ui >- N 4 - - · o ^ iA N n « O N *

A

«19* 9» O 9 9 β <A ^ N ιΑ ΙΑ 4 r* »9 r*» * r** r-iArsoocAOOO n N N * ia «MB'*«« s h > V · » *4 O *4 *4 « — * 9 9¾ \0 9 9 9 9 — r* r·» m — »NfiBi/innn wi N rt 0 4 4 4 * »A 9 rt — O 9 O O 9 N O 0 0 0 0 9

A A A A A

Φ &> Φ 9 ^ A ΙΑ Μ

Al Π M Λ rfnAON«"*QQ p* N <H

·* «· ** " « VMAB-.BAA«. t. B w 9 9 O *4 Ο O *4 — 0 4 4

A

SO 0*4 044 O 9» 4 S S Λ S ιΛ P**fX — ΜΛΟ^Ι — 4 — o μ — ο μ ο * ο ο — — ιλ — α ο *η

A A

4 Ο <44 44 0^0 9* 4 4 Γ» — ΙΑ ΙΑ )Α\ΑΝΝ»ΐη(Μη — fs — IS» * — — — — 040*00 " — ΟΝΟ 99

A A A A

444 9 9 9 4 SO O 9 Λ lit lA - ΙΑΜ1«ΑΝι/)Γ«μΑ·· li) — 4 — — O — * — — — — o o o — o o "· 4 04004

9 AAA

Ld 3 9 9 9 4 S"^*-» — is» 4 4 AJIS»r*4 — 44444 4 ^4 0 4 * 4 Ο Μ M 4 4 4 * (Si »s» — _ _ 000»00 o — — — — ooooo

Λ AAA

M ^ 9 (A 9 9 9 «Λ N

j I Α» ·· M f*· * M **OM — O — — .. 4 P4 _

®4 * a A IM lA A

CVJ U O — IM

H 5 Φ ^ 9 9 9 9 Φ 44 9%

¢) «5 A) <A Μ Γ* P* Α1ΠΑ* — A4 — — OO A* <A

£S CQ _ »A -..A Β-..·^β*.Α B A

{A t—i 4 4 04004 ^ O 4 4 rv*

Z A

^ 4 0 4 4 4 9 9 «9 99

4 Γ4 A. 4 4 4 44 — rs.lSI — AJAJ 4 A

O ^ .. ^ A«« A. O Ai o 0 4

CC o — ο O M

H A A " 44 04 9449*09* **

4 4 N 4 U1W)t/TAAA — Nb /A

k n * A '«B··«»···' n

Z * — — 4 — B - - OOOOO

Is* 0 4 0 0 4

4 A A

O — IT ^ ^ S* ^ ^ Ο M IS» 4 4 ai nr4A)r»psr^r>fAai— oaoo 4 b _ b

A S “» “ *» * * ββ,,,ββ«.· » *. * S S

m o ο <χ ο ο m »9 o — — GA OOOO 004 is» * N rt S S S A fs Ο — — O — *m rs» n B 9 o 4 o 4 Ο (V 4 x o 0 »- y

O ^ O 9 14 Q

* a <s» 4 < — * 4 *2

49 0**4 Ψ O «A

4 P** < 44 *9*0 £4 O

U ^s OC < CJ 4*4 u 4 O 9· ox— Mh-XX «-J*^O0* W * 4 ^£444«ος£ο u 4 9 y ^ n <0<**4ZUU-U<Jt- — * 300<4 b444

4 *4 4 ·/) VI 4 V» m 4 . W t· < »-* » <U U — MO

333333333»<<S U C C C « *9 4IVVlieiVV«U9 S4i94»3»fti3404

U U L· U.UW \« W W - /1 /) - b — 9 9 9 *9 (Λ O S

333333333θ33υ»903β 9i9-99i999»99C»«»liDOa»XXX — ·— — ·— -* -j «ο 9 αοα.— — — — 4 4 4 lil 4 4 4 4 4 4 3 3 »*- 0300

3333333333 — — 4 4 4 4 4UUUO

., ououu*j<j<j<ju 433333 LU (JOUUOUU(J^I0 4 4 3UUUUU<99<99 JT 000003033033UUUUUU - B - B — ?Λ UO'JUU jUOUUlJtJO0000Q.£C££ —1 1 , 00003 JQOOOWwOUOOOUUtJUO 3 C3 — — — — — — — — — b-03uooooo»-a.^,- a Z XXXXXXXXXX J(j3bJ-*w-#.*UUU'« o < CCCCC£C4£^30«-oaaaa«9V3 * S aaa3aaa3.a3-uuKi»oii4ircj3^ <9999999 -9 9<9UOxWIbWXUU,.JU,J 4 Ο ίΛ4(44444'4 44££^ΙΙ/ΐ4ΐ/Ι44000Ι4 ·— 23 DK 172754 B1 bnu·» cn m cm cm m m m m cm cm co — cvj — <m cm ·m esi 5 vo l/l rg un O cm m P t· ^ ·' CM ^ m

CM

— -rNCC'JVCNaNVN ^ ^ CM

10 f 3 w Wf> ui m cm u-> t_j ^ *· „ <- X — — csi — — — — — — ~ ~ C-J ~ H un tø un cm {·* ~ " Μ Ό — — CM — — CM—· — ~ — — — — CM ~ 15 > A ^ w S in m cn cm in j - gj m O — OCM — «Τ — — — OO — CM —

M

co ω iH S & CO — « 2 oc ec cn — — Æ CQ Q- o cm 20 « m 5 9= i r~ σ> o HH < Σ jg σ> — —

S ao <«c<<<(_> _I r- LO <_J t_> CJ

ficovosor^r'·!'·» — o O O — bocombOtTm — Q.O*— >— >— g minvnmm^bor'C^Omm — — < < < ^ ΦΦΦΦΦΦΦΦΦΦΦΦΦΦΦΦΦ

^ (¾ /¾ ^ iQ *Q /¾ /¾ ifl ^ /ή flj ifl /Q /Q

ΙΜΜΝΜΝΝΜΜΜΜΝΜ/ΜΝΙΜΓΜΓΜ * cceceescececcccce μ. φφφφφφφφφ1^φ^^α;φφφ J33333333333333333 o scecccecececceccc 33333333333333333 W — — — — — ·π

tfj — O

Η ο.α.α.ο.α&α&α.α.α.α.α.α.α.α.α. oo S igggggggggggggggg 7 O αι&φφφφαίιφφφφαίφφφφ 30 w 35 24 DK 172754 B1 z < ^ — O σι

V* PQ o — O

5 3 S

s u 55

U Φ J

O /9 U — o c 4-» g >-*.

α S m Φ30 — oi r-* oo ai u a> η ά - - * - 4-» C Ό w ff ff» m — ai Q» w o -—cm 10 3 E? Ό — 33 30 § O <M O — »/» c/} s/ to u * ^ o Cl O <✓» £ ,* O Φ cA σ' cl φ m mS ΦΟ'Ο*— oiuio>o

CO UOCNJ 'O

JO *- »* i u r- o r- cm ro al UiaCJOv CM —

£ O

Γ» ^ <r ε ^ S3

? n 4) CQ

to ω

H CO Z

£ <ί c-, αΐ οι r*- o q o ^ r** oi ui o

> U fft fl3 #— CM JM

M O ff *g > g g w H >» ui

.C 3 U

0 c CL K H- —

£ D <flUO Ό ff» OO O

*-» 3 Z o - - ^ ι/t fl v O — <r ui ao ff ^ CM ff»

U

>> J

J £ O

W O O

ft- w co 1 Λ Q Ol ff» — ^ \ 3u ΙΛ — m >» ai N4 o cn U Φ w 35

Claims

1. Forbindelse, kendetegnet ved, at den har form-5 len: CHaN CHj CH3 N R. : ho% i 10 ·0Η Ά CH3>. Γ fc>CH3 I I HO«^i L Η H CHj CH3' fSo u u I X 0^ Η H ru CHj ,. CH3 II CHa^P Ν' _

15. L L·'"1 CH3^ ‘’OCHj hvori ftj er hydrogen, OH carbamoyloxy eller NR3R4, hvori R3 20 og R4 uafhængigt er valgt blandt hydrogen eller lavere alkyl; R2 en hydrogen, når R* er andet end hydrogen, eller R2 er NR3R4 som defineret ovenfor, når R1 er hydrogen; og R er en substitueret eller usubstltueret heterocyk11sk ring med formlen: ·· v 7 (Rs)q hvori m er 1-3, q er 0 eller 1, p er 1-2, og R5 er valgt blandt CH2, -CH=CH-, CH(0H)CH(0H) , 0, S, NH, C = 0, C = S, S02, SO 35 og CReR7» hvori Rg og R7 sammen danner en ethylendioxybro; eller R er en heterocyklIsk ring som defineret ovenfor med sub-stituenter valgt blandt lavere alkyl, hydroxy, alkoxy, halo- DK 172754 B1 gen, phenyl, alkanoyl, benzoyl, benzyloxycarbonyl, t-butyloxy-carbonyl, arylalkoxyalkyloxy og alkoxyalkyloxy; eller R er 4,4-tetramethylenpiperidino, 4,4-pentamethylenpiperidi no, 3,4-benzpiperidino eller 3,5-ethanpiperidino; eller farmaceutisk 5 acceptable salte eller estre deraf.

2. Forbindelse Ifølge krav 1, kendetegnet ved, at R er substitueret eller usubst1 tueret piperldino, morfollno eller azeplno. 10

3. Forbindelse Ifølge krav 1, kendetegnet ved, at R er morfollno, plperidlno, ary 1-subst1 tueret piperldino eller azep1 no.

4. Forbindelse ifølge krav 3, kendetegnet ved, at Ri og R2 er forskellige og er valgt blandt hydrogen eller amino. 5. 9-R-morfoli no-erythromycin A. 20 6. 9-R-pIperidino-4"-amino-erythromyci η A. 7. 9-R-azepino-erythromycin A.

8. Farmaceutisk middel 1 enhedsdoseringsform, k e n d e - tegnet ved, at det omfatter en terapeutisk effektiv mengde af en forbindelse ifølge krav 1 i kombination med en farmaceutisk bmrer. 30