DK1632501T3 - Fremgangsmåde til fremstilling af et koncentrat af von Willebrand-faktor (FvW) ved hjælp af kromatografi og koncentrat af FvW, der således kan opnås - Google Patents

Claims (13)

1. Fremgangsmåde til fremstilling af et koncentrat af von Willebrand-faktor af meget høj renhed fra en biologisk fraktion, som indeholder von Willebrand-faktor, kendetegnet ved, at den omfatter en adskillelse ved hjælp af anion-udvekslingskromatografi, som anvender en bærer af vinylpolymer af den svage basistype, hvor adskillelsen omfatter de følgende trin a) - ladning af den kromatografiske bærer med en fraktion, som indeholder von Willebrand-faktor, der forinden er afbalanceret med en passende buffer, med en forudbestemt gennemstrømning, hvilket gør det muligt at holde von Willebrand-faktoren tilbage; b) - vaskning af bæreren ved hjælp af en syrebuffer med en gennemstrømning, som er større end gennemstrømningen i trin a), indtil proteiner og ikke-tilbageholdte urenheder er fjernet; c) - rensning og afbalancering af den kromatografiske bærer med bufferen og gennemstrømningen fra trin a); og d) - elution af von Willebrand-faktoren ved at forhøje ionstyrken af bufferen fra trin c).

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den kromatografiske adskillelse udføres på en bærer af vinylpolymertypen, der er podet med an-ionudvekslingsgrupper, som repræsenterer DEAE.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved, at den kromatografiske bærer står for en copolymer af oligoethylenglykol, af glykodiylmethacrylat og af pentaerythritoldimethacrylat, på hvilken der er podet anionudvekslings-grupper af den svage basetype, så som DEAE.

4. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 3, kendetegnet ved, at afbalanceringsbufferen fra trin a) eller c) består af natriumchlorid.

5. Fremgangsmåde ifølge krav 4, kendetegnet ved, at koncentrationen af natriumchlorid er 0,11 M.

6. Fremgangsmåde ifølge krav 4 eller 5, kendetegnet ved, at afbalanceringsbufferen yderligere omfatter trinatriumcitrat, calciumchlorid, glycin og lysin, med en pFI-værdi, som ligger mellem 6,9 og 7,1.

7. Fremgangsmåde ifølge krav 6, kendetegnet ved, at koncentrationerne af bufferafbalanceringskomponenterne står for henholdsvis 0,01 M, 0,001 M, 0,12 M og 0,016 M.

8. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 7, kendetegnet ved, at syrevaskebufferen består af et alkalisk eller jordalkalisk salt af eddikesyre, citronsyre eller phosphorsyre i en koncentration, som ligger mellem 10 og 30 mM, og med en pFI-værdi, som ligger mellem 3,9 og 5,2.

9. Fremgangsmåde ifølge krav 8, kendetegnet ved, at syrevaskebufferen står for en natriumacetatbuffer 20 mM med en pFI-værdi på 4,35.

10. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 9, kendetegnet ved, at gennemstrømningen af vaskningstrinnet b) svarer til en værdi, der er større end værdien af afbalanceringstrinnet a) med en faktor på ca. 1,5 til 2.

11. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 10, kendetegnet ved, at i trin d), forøges ionstyrken af bufferen af trin c) ved tilsætning af natriumchlorid, hvis endelige koncentrering justeres til 0,15-0,17 M.

12. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 11, kendetegnet ved, at den omfatter et trin med viral inaktivering af den biologiske fraktion med opløsningsdetergent.

13. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 12, kendetegnet ved, at den efter elutionstrinnet d) omfatter et eller flere yderligere trin med - sterilfiltrering, - filtrering til fjernelse af virus, - diafiltrering, - koncentrerende ultrafiltrering, - tilsætning af en farmaceutisk acceptabel stabilisator, - frysetørring, - tør opvarmning til viral inaktivering og - rekonstitution af det opvarmede frysetørrede produkt i et vandigt miljø til klinisk anvendelse.