DK163189B - Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af plasmas fibrinolytiske tilstand - Google Patents

Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af plasmas fibrinolytiske tilstand Download PDF

Info

Publication number
DK163189B
DK163189B DK030686A DK30686A DK163189B DK 163189 B DK163189 B DK 163189B DK 030686 A DK030686 A DK 030686A DK 30686 A DK30686 A DK 30686A DK 163189 B DK163189 B DK 163189B
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
fibrin
plasma
reagent
thrombin
fibrinogen
Prior art date
Application number
DK030686A
Other languages
English (en)
Other versions
DK163189C (da
DK30686D0 (da
DK30686A (da
Inventor
Knut Bartl
Helmut Lill
Original Assignee
Boehringer Mannheim Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Mannheim Gmbh filed Critical Boehringer Mannheim Gmbh
Publication of DK30686D0 publication Critical patent/DK30686D0/da
Publication of DK30686A publication Critical patent/DK30686A/da
Publication of DK163189B publication Critical patent/DK163189B/da
Application granted granted Critical
Publication of DK163189C publication Critical patent/DK163189C/da

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2337/00—N-linked chromogens for determinations of peptidases and proteinases
    • C12Q2337/10—Anilides
    • C12Q2337/12—Para-Nitroanilides p-NA
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
    • G01N2333/315—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci
    • G01N2333/3153—Streptokinase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/4609—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates from reptiles
    • G01N2333/4613—Snake venom
    • G01N2333/462—Snake venom from Agkistrodon sp., e.g. acutase, ACTE
    • G01N2333/4623—Snake venom from Agkistrodon sp., e.g. acutase, ACTE from Agkistrodon rhodostama (Malayan pit viper); Arvin (R); Batroboxin; Ancrod
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/745—Assays involving non-enzymic blood coagulation factors
    • G01N2333/75—Fibrin; Fibrinogen
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/972—Plasminogen activators
    • G01N2333/9723—Urokinase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/972—Plasminogen activators
    • G01N2333/9726—Tissue plasminogen activator
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/974—Thrombin

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Drying Of Semiconductors (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
  • Control Of Indicators Other Than Cathode Ray Tubes (AREA)
  • Crystals, And After-Treatments Of Crystals (AREA)
  • Discharge Heating (AREA)
  • Electrotherapy Devices (AREA)
  • Control Of Stepping Motors (AREA)
  • Measuring Oxygen Concentration In Cells (AREA)

Description

DK 163189 B
i
Fibrinolyse er den modsatte reaktion af blodkoagulering. Ved 5 blodkoagulering opstår der udfra fibrinogen under indflydelse af enzymet thrombin fibrinmonomer, som under indflydelse af kalciumioner og andre faktorer polymeriserer til et uopløseligt skelet af fibrin. Det fremkomne fibrinmolekyle bevirker, at den koagulerede blodmasse stivner. Da denne fibrindannelses-jO proces stadig forløber i karsystemet, er et modsat rettet system, det fibrinolytiske system, ligeledes stadig aktivt for at forhindre, at der uden særlig anledning sker dannelse af thromber. Dette fibrinolytiske system fører under indflydelse af plasmi-nogenaktivator til dannelse af plasminud fra plasminogen og 15 plasmin forårsager opløsning af fibrin under dannelse af fibrin-spalteprodukter. Bestemmelsen af et plasmas fibrinolytiske tilstand er derfor af stor betydning til vurdering af thrombosefa-rer.
20 Der kendes allerede prøvemetoder, der måler blods (plasmas) spontane fibrinolytiske aktivitet eller den fibrinolytiske reaktion på stimulanter, der frigør plasminogenaktivator fra karvæggen. Det er her nødvendigt at udkoble indvirkningen af plasmainhibitorer, hvilket imidlertid i praksis for det meste kun 25 lykkes utilstrækkeligt og samtidigt også betyder en kunstig forandring af prøven.
Ved bestemmelsen af euglobulin-lyse-tid går man ud fra Citratplasma. Til dette sættes der eddikesyre og der fracentrifugeres. 30 Bundfaldet opløses i puffer, og der tilsættes thrombin·Der inkuberes ved 37°C, og tiden indtil opløsning af den koagulerede masse måles. Måletiden bliver herved ganske vist væsentligt for-. kortet, men man bestemmer herved en in vitro fibrinolyseaktivi- tet, der ikke nødvendigvis er korreleret med aktiviteten in vivo. 35
Man har derfor også allerede udviklet metoder, der gennemføres uden eliminering af plasmasinhibitorer. En sådan metode er f.eks.
DK 163189 B
2 bestemmelsen af helblod^-lyse-tiden.
5 Således sættes der ved bestemmelsen af helblod-lyse-tiden thrombin til helblod, og den dannede koagulerede masse inkuberes ved 37°C, og tiden indtil dens opløsning måles. Denne tid udgør ved normale værdier ikke under 24 timer. Metoden er derfor 10 tidskrævende, kan ikke automatiseres og egner sig- kun til grov vurdering af den fibrinolytiske tilstand. En unormal lav fibri-nolytisk aktivitet kan endog slet ikke bestemmes.
Der opnås noget kortere tider, når der arbejdes med fortyndet 15 blod, men for øvrigt er de nævnte ulemper der stadig.
Den såkaldte fibrinpladeprøve, der arbejder med citratplasma eller gensuspenderet euglobulinbundfaid, skulle give nøjagtige resultater.Hovedulempen ligger her ved den lange inkubations-20 tid på 18 timer ved 37°C.
Det er således formålet med den foreliggende opfindelse at tilvejebringe en global fibrinolyseprøve, som undgår ulemperne ved de ovennævnte kendte metoder og navnlig på forholdsvis 25 kort tid giver resultater, der på pålidelig måde genspejler tilstanden in vivo, lader sig automatisere og kan udnyttes fotometrisk .
Dette opnås ifølge opfindelsen ved hjælp af en fremgangsmåde 30 til bestemmelse af plasmas fibrinolytiske tilstand, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at man til en naturlig plasmaprøve « a) tilsætter en til uklarhedsdannelse tilstrækkelig mængde 35 fibrin eller tilvejebringer dette in situ og måler uklarheden eller de dannede fibrin-spalteprodukter, eller
DK 163189B
3 b) tilsætter et farvedannende plasminsubstrat og en til uklar-g hedsdannelse ikke tilstrækkelig mængde af fibrin, fibrino- gen-spalteprodukter eller et enzym, der danner fibrin in situ og måler den dannede farve.
Med uklarhedsmåling forstås her indenfor den foreliggende op-10 findelses rammer målingen af uklarhedens formindskelse eller forøgelse pr. tidsenhed, målingen af tiden indtil opnåelse af uklarhedsmaksimum eller måling af tiden indtil opnåelse af en bestemt nedsættelse eller forøgelse af uklarheden, regnet i forhold til uklarhedsmaksimummet. Der kan også anvendes en 15 kombination af disse målemuligheder. Særligt foretrækkes det at måle tiden indtil opnåelse _ af en defineret uklarhedsnedsættelse eller tiden indtil opnåelse af uklarhedsmaksimum.
Farvemålingen kan foregå ved at følge farvedannelsen kinetisk, 20 idet ekstinktionsændringen pr. tidsenhed fastsættes. Ligeledes kan man bestemme den efter en i forvejen angivet tid opnåede ekstinktion eller farvedannelsesreaktionen kan efter en i forvejen angivet tid afbrydes, og derefter kan man på et vilkårligt senere tidspunkt måle den dannede farve.
25 Målingen af de dannede fibrin-spalteprodukter kan foregå ved hjælp af i handelen almindeligt tilgængelige prøvereagenser eller prøvemetoder. Eksempler er stafylokok-dumping-test (fremstillet af Boehringer Mannheim GmbH) eller immunologiske 30 metoder f.eks. ved hjælp af antistofbelagte latexpartikler (fremstillet af Wellcome Corp.).
. Afbrydelsen af farvedannelsesreaktionen kan ske ved tilsætning af egnede inhibitorer, fortrinsvis plasmininhibitorer eller 35 syrer som f.eks. eddikesyre eller citronsyre. Fortrinsvis måles tiden indtil opnåelsen af en bestemt ekstinktion.
4
DK 163189 B
Den ovenfor definerede fremgangsmåde ifølge opfindelsen giver 5 en bestemmelse af plasmas hyperfibrinolytiske aktivitet. Her ved udløser allerede i plasmaen tilstedeværende eller fremkomne plasminogenaktivatorer reaktionen. Denne udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen egner sig navnlig til at følge en fibrinolyseterapi. Man kan dermed fastslå, hvorledes det 10 naturlige plasmas fibrinolytiske tilstand ændrer sig i løbet af terapien.
Ifølge en yderligere udføreIsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen tilsættes der yderligere en bestemt mængde plasmi-15 nogenaktivator, idet der fortrinsvis benyttes terapeutisk an vendte koncentrationer. Ved denne udførelsesform for fremgangsmåden bestemmer man plasmaets mulige reaktivitet i nærværelse af definerede mængder plasminogenaktivator. Dette er særlig vigtigt for indledningen af en fibrinolyseterapi. Man kan der-20 ved fastslå, hvorledes plasmaets fibrinolytiske tilstand ændrer sig, når der tilsættes de til.en fibrinolyseterapi påtænkte terapeutika, såsom t-PA (EPA) , urokinase eller streptokinase.
Ifølge en foretrukket udførelsesform tilvejebringes fibrinet 25 in situ ved tilsætning af thrombin eller et thrombinlignende enzym, såsom batroxobin eller arvin.
Som fibrinogenspalteprodukter anvendes fortrinsvis sådanne, der opnås ved behandling af fibrinogen med bromcyan (I.H.Ver-30 heijen, Thromb. Haemostas 48, 266-269 (1982). Fortrinsvis anvendes en koncentration fra 10 til 150 μ g/ml.
. Fibrinmonomerer fremstilles ved behandling af fibrinogen med batroxobin, inaktivering af batroxobin med diisopropylfluor-35 fosfat, fjernelse og efterfølgende opløsning af fibrinklumper i 1 til 3 molær -urinstofopløsning. Fortrinsvis anvendes koncentrationer på 1 til 100 μ g/ml fibrinmonomer.
5
DK 163189 B
Som farvedannende plasminsubstrat kan anvendes ethvert plas-5 minsusbstrat, hvorfra der under indvirkning af plasmin fra spaltes en til farvedannelse egnet gruppe. Som farvedannende grupper kommer her både sådanne på tale, der kan måles direkte fotometrisk som f.eks. nitroanilin,. dinitroanilin og derivater deraf, såvel som sådanne forbindelser, der ved reaktion med en 10 yderligere komponent bevirker en farvedannelse. Eksempler her på er:
Ved en udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen under tilsætning af en plasminogenaktivator' kan man som plas-15 minogenaktivator anvende EPA (Extrinsic Plasminogen-Aktivator t-PA), urokinase eller streptokinase. Et foretrukket kromogent plasminsubstrat er Tos-Gly-Pro-Lys-p-nitroanilin.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan gennemføres ved en vil-20 kårlig temperatur mellem ca. 20 og 40°C.
En yderligere genstand for opfindelsen er et reagens til bestemmelse af plasmas fibrinolytiske tilstand, som er egnet til gennemføring af fremgangsmåden ifølge opfindelsen. Et sådant 25 reagens er ejendommelig ved, at det indeholder plasminogenakti vator, thrombin eller et thrombinlignende enzym og puffer.
I stedet for thrombin eller thrombinlignende enzym kan reagenset også indeholde fibrinspalteprodukter eller fibrinmomo-30 mer.
Dersom reagenset ifølge opfindelsen er bestemt±il varianten . b) ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, dvs. farvemålingen, indeholder det yderligere et farvegivende plasminsubstrat.
35
Ifølge en foretrukket udførelsesform indeholder reagenset i-følge opfindelsen desuden mindst et stof fra gruppen polyethy- 6
DK 163189 B
lenglokol, ikke-ionisk, overfaIdeaktivt middel og okseserum-5 albumin.
I en første udførelsesform for reagenset ifølge opfindelsen indeholder dette EPA, batroxobin, trispuffer pH 7 til 8, poly-ethylenglykol og ikke-ionisk-overfladektivt middel.
10
Til farvemåling indeholder dette reagens hensigtsmæssigt i stedet for batroxobin fibrinogen-spalteprodukter fremstillet ved bromcyanbehandling af fibrinogen eller i stedet fibrinmo-nomer og desuden Tos-Gly-Pro-Lys-p-nitroanilin, 15
For de enkelte bestanddele af reagenset ifølge opfindelsen gælder tilsvarende de ovennævnte udførelsesformer i sammenhæng med den nærmere forklaring af fremgangsmåden.
20 De følgende eksempler belyser opfindelsen yderligere i forbindelse med den vedføjede tegning.
På tegningen viser: 25 fig.l en justeringskurve for en uklarhedsprøve med EPA som plas-minogenaktivator.
Eksempel 1 30
Uklarhedsprøve med EPA som plasminogenaktivator
Reagenssammensætning: * Tris/HCL, 0,1 mol/1, pH 7,5
Polyethylenglykol 6000, 2 vægt% 35 l p\ overfladeaktivt middel ("Tween"v '80) 0,1 vægt% okseserumalbumin (RSA) , 1 vægt% batroxobin 0,02 BU/ml EPA (0,01 - 10 ng/ml prøveportion) 7
DK 163189 B
Prøveportion: 50 μΐ prøve (plasma) 5 1000 μΐ reagens
Reagens og prøve blandes ved 25°C, og uklarheden følges straks med et fotometer ved λ = 334 nm
Ekstinktionsændringen registreres ved hjælp af en skriver (pa-10 pirhastighed 0,1 cm/min).
Fremstillingen af en justeringskurve sker enten ved at fastlægge tiden t^ indtil der nås uklarhedsmaksimum (fig. 1, kurve 1) eller den tid t„ indtil der - udgående fra uklarhedsmaksimum -15 ^ opnås en ekstinktionsnedsættelse på 100 mE (fig. 1, kurve 2). Eksempel 2 20 Uklarhedsprøve med streptokinase eller urokinase som plasmino-genaktivator.
Reagenssammensætning, prøveportion og prøvegennemførelse svarer til eksempel 1, idet der i stedet for EPA tilsættes strep-25 tokinase eller urokinase i forskellige koncentrationer.
Der opnås derved følgende måleværdier; a) streptokinase koncentration iU/ml prøveportion 0 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 t^ [min] (jvf. eksempel 1) 55 40 36,5 17,0 15,0 10,5 t- [min] 35 ^ (jvf. eksempel 1) 35 27 23 15 14 8
DK 163189 B
b) Urokinase 5 koncentration ng/ml prøveportion 0 10 50 100 200 300 400 t^ [min] 65 50 23,5 16f5 12,0 9,5 8,5 10 t2 [min] °° 55 13 7,5 4,0 · 3,5 3,0
Eksempel 3 15
Farveprøve med EPA som plasminogenaktivator
Reagens sammensætning: 20 Tris/HCL 0,1 mol/1, pH 7,5
Polyeth^lenglyko1 6000, 2 vægt% "Tween” 80, 0,1 vægt% RSA, 1 vægt% EPA: 0,01 til 10 ng/ml prøveportion 25 BirCN-fragmenter af fibrin, 75 μg/ml
Plasminsubstrat Tos-Gly-Pro-Lys-pNA, 0,15 mmol/1
Prøveportion: 50 μΐ prøve (plasma) 1000 jjI reagens 30 o
Reagens og prøve blandes ved 25 C, og farvedannelsen følges med et fotometer ved \ = 405 nm. Ekstinktionsændringen registreres ved hjælp af en skriver (papirhastighed 0,1 cm/min).
*
Der måles den tid t^ indtil der gående ud fra grundlinien (re- gensblindværdi) - er opnået en ekstinktionsforøgelse på 100 mE. 35

Claims (11)

1. Fremgangsmåde til bestemmelse af plasmas fibrinolytiske tilstand, kendetegnet ved, at man til en naturlig plasmaprøve a) tilsætter en til uklarhedsdannelse tilstrækkelig mængde fi- *1 2 brin eller tilvejebringer denne in situ og måler uklarheden eller de dannede fibrin-spalteprodukter, eller b) tilsætter et farvedannende plasminsubstrat og en til uklarhedsdannelse ikke tilstrækkelig mængde fibrin, fibrinogen- 20 spalteprodukter eller et enzym, der danner fibrin in situ, og måler den dannede farve.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man yderligere tilsætter en bestemt mængde plasminogenaktiva- 25 tor.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at man tilvejebringer fibrin in situ ved tilsætning af thrombin eller et thrombinlignende enzym såsom batroxobin el- 30 , ler arvin. Fremgangsmåde ifølge krav 2 eller 3, kendetegnet ved, at man som plasminogenaktivator tilsætter EPA, urokinase eller streptokinase. 35 2 Fremgangsmåde ifølge et af de foregående krav, kendetegnet ved, at man som fibrinogen-spalteprodukter anven- DK 163189 B der sådanne, der vindes ved behandling af fibrinogen med bromcyan .
6. Fremgangsmåde ifølge et af de foregående krav, kende-5 tegnet ved, at man som farvedannende pi asmi nsubstrat anvender Tos-Gly-Pro-Lys-p-nitroani 1 in.
7. Reagens til bestemmelse af plasmas fibrinolytiske tilstand ved fremgangsmåden ifølge krav 1-6, kendetegnet 10 ved, at det indeholder plasminogenaktivator, thrombin eller thrombinlignende enzym og puffer.
8. Reagens til bestemmelse af plasmas fibrinolytiske tilstand ved fremgangsmåden ifølge krav 1-6, kendetegnet 15. ved, at det indeholder plasminogenaktivator og fibrinogen- spalteprodukter eller fibrinmonomer.
9. Reagens ifølge krav 7 eller 8, kendetegnet ved, at det yderligere indeholder et farvedannende plasminsubstrat. 20
10. Reagens ifølge krav 7-9, kendetegnet ved, at det indeholder polyethylenglykol, et ikke-ionisk overfladeaktivt middel og/eller okseserumalbumin.
11. Reagens ifølge et af kravene 7 - 10, kendetegnet ved, at det indeholder EPA, batroxobin, trispuffer pH 7 til 8, polyethylenglykol og ikke-ionisk overfladeaktivt middel.
12. Reagens ifølge krav 11, kendetegnet ved, at det 30 indeholder EPA, trispuffer pH 7 til 8, polyethylenglykol, ikke-ionisk overfladeaktivt middel og ved bromcyanbehandling af fibrinogen fremstillede fibrinogen-spalteprodukter eller fibrin-monomer og Tos-Gly-Pro-Lys-p-nitroani1 in.
13. Anvendelse af thrombin eller thrombinlignende enzym sammen med puffer som reagens til bestemmelse af plasmas fibrinolyti-ske tilstand.
DK030686A 1985-01-29 1986-01-21 Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af plasmas fibrinolytiske tilstand DK163189C (da)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE3502878 1985-01-29
DE19853502878 DE3502878A1 (de) 1985-01-29 1985-01-29 Verfahren zur bestimmung des fibrinolytischen zustands von plasma

Publications (4)

Publication Number Publication Date
DK30686D0 DK30686D0 (da) 1986-01-21
DK30686A DK30686A (da) 1986-07-30
DK163189B true DK163189B (da) 1992-02-03
DK163189C DK163189C (da) 1992-06-22

Family

ID=6261029

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK030686A DK163189C (da) 1985-01-29 1986-01-21 Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af plasmas fibrinolytiske tilstand

Country Status (8)

Country Link
EP (1) EP0189910B1 (da)
JP (1) JPS61178000A (da)
AT (1) ATE45771T1 (da)
CA (1) CA1276097C (da)
DE (2) DE3502878A1 (da)
DK (1) DK163189C (da)
ES (1) ES8701841A1 (da)
NO (1) NO167588C (da)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HU193126B (en) * 1985-08-15 1987-08-28 Valeria Duschanek Method for forecasting quality of flesh of the livestocks and for selecting livestocks on the basis of this
DE3705744A1 (de) * 1987-02-23 1988-09-01 Behringwerke Ag Verfahren zur funktionellen bestimmung von protein c-inhibitor
DE3838529A1 (de) * 1988-11-14 1990-05-17 Behringwerke Ag Globaltest zur erfassung der hauptkomponenten des fibrinolysesystems
DE3900493A1 (de) * 1989-01-10 1990-07-12 Thomae Gmbh Dr K Verfahren zur bestimmung der fibrinolytischen gesamtaktivitaet im plasma
CA2100882A1 (en) * 1991-11-25 1993-05-26 Rosa M. F. Denis Method for measuring fibrinolytic capacity within whole human plasma
ATE138478T1 (de) * 1992-02-17 1996-06-15 Akzo Nobel Nv Kalibrator und verwendung davon in einer immuntest
US5708591A (en) 1995-02-14 1998-01-13 Akzo Nobel N.V. Method and apparatus for predicting the presence of congenital and acquired imbalances and therapeutic conditions
US6898532B1 (en) 1995-06-07 2005-05-24 Biomerieux, Inc. Method and apparatus for predicting the presence of haemostatic dysfunction in a patient sample
US6321164B1 (en) 1995-06-07 2001-11-20 Akzo Nobel N.V. Method and apparatus for predicting the presence of an abnormal level of one or more proteins in the clotting cascade
US6429017B1 (en) 1999-02-04 2002-08-06 Biomerieux Method for predicting the presence of haemostatic dysfunction in a patient sample
US6502040B2 (en) 1997-12-31 2002-12-31 Biomerieux, Inc. Method for presenting thrombosis and hemostasis assay data
JP4486260B2 (ja) 1999-02-04 2010-06-23 バイオメリュー・インコーポレイテッド 患者サンプルにおける止血機能不全の存在を予測するための方法および装置
US7179612B2 (en) 2000-06-09 2007-02-20 Biomerieux, Inc. Method for detecting a lipoprotein-acute phase protein complex and predicting an increased risk of system failure or mortality

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2431342C3 (de) * 1973-07-27 1978-10-26 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Verfahren zur Messung des Plasminogengehaltes durch Bestimmung der Bildung von Fibrin in einer Probe
DE2525804B2 (de) * 1975-06-10 1980-04-03 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Stabiler Clumping-Faktor, Verwendung desselben zum Nachweis von Fibrinogen- und Fibrinspaltprodukten und Herstellung desselben
JPS59210900A (ja) * 1983-05-14 1984-11-29 Mihama Hisaharu 血中プラスミン活性の測定法
DE3330699A1 (de) * 1983-08-25 1985-03-07 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren zur gleichzeitigen bestimmung von fibrinogen und fibrinogen-spaltprodukten im plasma

Also Published As

Publication number Publication date
ES551389A0 (es) 1986-12-16
DK163189C (da) 1992-06-22
DE3502878A1 (de) 1986-07-31
EP0189910B1 (de) 1989-08-23
DE3665196D1 (en) 1989-09-28
JPS61178000A (ja) 1986-08-09
DK30686D0 (da) 1986-01-21
CA1276097C (en) 1990-11-13
ATE45771T1 (de) 1989-09-15
EP0189910A2 (de) 1986-08-06
NO167588C (no) 1991-11-20
NO167588B (no) 1991-08-12
EP0189910A3 (en) 1986-12-10
NO860089L (no) 1986-07-30
ES8701841A1 (es) 1986-12-16
DK30686A (da) 1986-07-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0420332B1 (en) Method for determining the endogenous thrombin potential of plasma and blood, and also a kit for use in said method
EP2677037B1 (en) Simultaneous measurement of thrombin generation and clot strength in plasma and whole blood
DK163189B (da) Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af plasmas fibrinolytiske tilstand
JP4718833B2 (ja) 複合生物媒体における、一時的なタンパク質分解活性の濃度を決定するための診断試験
DK171086B1 (da) Fremgangsmåde til fotometrisk bestemmelse af protein C- og/eller protein S-aktivitet
Myrmel et al. Characteristics of the association between prothrombin fragment 2 and α-thrombin
Tans et al. Autoactivation of human plasma prekallikrein.
TWI443193B (zh) 蛋白質檢測方法
EP2529221B1 (en) Thrombin generation determination method
JP2676792B2 (ja) セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼインヒビターの活性測定法
JPH0258920B2 (da)
Eisen Kinin formation and fibrinolysis in human plasma
US5188940A (en) Method of determining the total fibrinolytic activity in the plasma
Lauritsen Urokinase inhibitor in human plasma
JPH06504682A (ja) タンパクｓ発色原アッセイ
JP4721519B2 (ja) タンパク質分解酵素の生物学的に活性な形態の決定
US3778352A (en) Plasminogen assay system
Donaldson C′ l activation in hereditary angioneurotic edema plasma: role of urokinase and inhibitors
US8163513B2 (en) Method for determining the total clotting activity of a blood or plasma sample
Stafford The fibrinolytic mechanism in haemostasis: a review
US5529905A (en) Method of assaying plasma proteins with prothrombin fragments
CA1313488C (en) Assay
US4210420A (en) Detection of fibrin monomer and composition therefor
Valeri et al. Reaction of antithrombin with proteases. Evidence for a specific reaction with papain
Detwiler et al. Stimulus-response coupling in the thrombin-platelet interaction