NO167588B - Fremgangsmaate til bestemmelse av den fibrinolytiske tilstanden for plasma, og reagens for anvendelse ved fremgangsmaaten. - Google Patents
Fremgangsmaate til bestemmelse av den fibrinolytiske tilstanden for plasma, og reagens for anvendelse ved fremgangsmaaten. Download PDFInfo
- Publication number
- NO167588B NO167588B NO860089A NO860089A NO167588B NO 167588 B NO167588 B NO 167588B NO 860089 A NO860089 A NO 860089A NO 860089 A NO860089 A NO 860089A NO 167588 B NO167588 B NO 167588B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- fibrin
- thrombin
- reagent
- plasma
- time
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 230000003480 fibrinolytic effect Effects 0.000 title claims abstract description 18
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 title claims abstract description 16
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 26
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 30
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 claims abstract description 25
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 claims abstract description 25
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims abstract description 15
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims abstract description 14
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 claims abstract description 12
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 10
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 claims abstract description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 108010001014 Plasminogen Activators Proteins 0.000 claims description 16
- 102000001938 Plasminogen Activators Human genes 0.000 claims description 16
- 229940127126 plasminogen activator Drugs 0.000 claims description 16
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 12
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 12
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 claims description 11
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 claims description 10
- 101000772006 Bombus ignitus Venom serine protease Bi-VSP Proteins 0.000 claims description 8
- 108010027612 Batroxobin Proteins 0.000 claims description 7
- 229960002210 batroxobin Drugs 0.000 claims description 7
- 108010023197 Streptokinase Proteins 0.000 claims description 6
- 229960005202 streptokinase Drugs 0.000 claims description 6
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 5
- 108010073651 fibrinmonomer Proteins 0.000 claims description 5
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 claims description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 4
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 claims description 4
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 claims description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 4
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 claims description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 3
- 108010001779 Ancrod Proteins 0.000 claims description 2
- 108050006599 Metalloproteinase inhibitor 1 Proteins 0.000 claims 1
- 230000004992 fission Effects 0.000 abstract 2
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 11
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical group [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 102000005686 Serum Globulins Human genes 0.000 description 2
- 108010045362 Serum Globulins Proteins 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- JMANVNJQNLATNU-UHFFFAOYSA-N oxalonitrile Chemical compound N#CC#N JMANVNJQNLATNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940093429 polyethylene glycol 6000 Drugs 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- PEHDMKYTTRTXSH-GOTSBHOMSA-N (2s)-n-[(2s)-6-amino-1-(4-nitroanilino)-1-oxohexan-2-yl]-1-[2-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]acetyl]pyrrolidine-2-carboxamide Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)NCC(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NC=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)CCC1 PEHDMKYTTRTXSH-GOTSBHOMSA-N 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 description 1
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- MUCZHBLJLSDCSD-UHFFFAOYSA-N diisopropyl fluorophosphate Chemical compound CC(C)OP(F)(=O)OC(C)C MUCZHBLJLSDCSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229960005051 fluostigmine Drugs 0.000 description 1
- 230000000988 hyperfibrinolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- LZGUHMNOBNWABZ-UHFFFAOYSA-N n-nitro-n-phenylnitramide Chemical compound [O-][N+](=O)N([N+]([O-])=O)C1=CC=CC=C1 LZGUHMNOBNWABZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VBEGHXKAFSLLGE-UHFFFAOYSA-N n-phenylnitramide Chemical compound [O-][N+](=O)NC1=CC=CC=C1 VBEGHXKAFSLLGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000002806 plasmin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2337/00—N-linked chromogens for determinations of peptidases and proteinases
- C12Q2337/10—Anilides
- C12Q2337/12—Para-Nitroanilides p-NA
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
- G01N2333/315—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci
- G01N2333/3153—Streptokinase
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/4609—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates from reptiles
- G01N2333/4613—Snake venom
- G01N2333/462—Snake venom from Agkistrodon sp., e.g. acutase, ACTE
- G01N2333/4623—Snake venom from Agkistrodon sp., e.g. acutase, ACTE from Agkistrodon rhodostama (Malayan pit viper); Arvin (R); Batroboxin; Ancrod
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/745—Assays involving non-enzymic blood coagulation factors
- G01N2333/75—Fibrin; Fibrinogen
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/972—Plasminogen activators
- G01N2333/9723—Urokinase
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/972—Plasminogen activators
- G01N2333/9726—Tissue plasminogen activator
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/974—Thrombin
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Drying Of Semiconductors (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Control Of Indicators Other Than Cathode Ray Tubes (AREA)
- Crystals, And After-Treatments Of Crystals (AREA)
- Discharge Heating (AREA)
- Electrotherapy Devices (AREA)
- Control Of Stepping Motors (AREA)
- Measuring Oxygen Concentration In Cells (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte til bestemmelse av den fibrinolytiske tilstanden for plasma, og reagens for anvendelse ved fremgangsmåten.
Fibrinolyse er den motsatte reaksjonen av blodkoagulerlng. Ved blodkoagulerlng oppstår fra fibrinogen fibrinmonomerer under innflytelse av enzymet trombin, disse polymeriserer under innflytelse av kalslumioner og andre faktorer til et uoppløselig gitter av fibrin. Fibrinmolekylene som oppstår bevirker at blodkoagulatene blir fastere. Siden dette forløpet med fibrindannelse stadig forløper i karsystemet, er et motsatt system, det fibrinolytiske systemet, også stadig aktivt for å forhindre at det uten grunn dannes tromber. Dette fibrinolytiske systemet fører under innflytelse av plasminogenaktivator til dannelse av plasmin fra plasmlnogen og plasmin bevirker oppløsning av fibrin under dannelse av fibrinspaltningsprodukter. Bestemmelsen av den fibrinolytiske tilstanden i et plasma er følgelig av stor betydning for å bedømme faren for trombose.
Forsøksmetoder som måler den spontane fibrinolytiske aktiviteten i blodet (plasma) henholdsvis den fibrinolytiske reaksjonen på stimulanser, som setter plasmlnogenaktlvatoren fri fra karveggen, er allerede kjente. Herved er det påkrevet å utelukke innflytelsen av plasmainhibitorer, dette oppnås i praksis ikke 1 tilstrekkelig grad og betyr samtidig også en kunstig forandring av prøven.
Ved bestemmelsen av euglobulin-lyseringstiden går man ut fra citratplasma. Dette blandes med eddlksyre og frasentrifu-geres. Bunnfallet løses i buffer og blandes med trombin. Det inkuberes ved 37°C, og tiden til oppløsning av koagulatet måles. Måletiden forkortes imidlertid herved betydelig, man bestemmer likevel en in vitro fibrinolyseaktivitet som ikke nødvendigvis korrelerer med in vivo aktiviteten.
Man har følgelig også allerede utviklet fremgangsmåter som gjennomføres uten eliminering av plasmainhibitorene. En slik fremgangsmåte er f.eks. bestemmelsen av fullblods-lyseringstiden.
Ved bestemmelsen av fullblods-lyseringstiden blandes fullblod med trombin og det dannede koagulatet inkuberes ved 37"C og tiden inntil oppløsning måles. Denne tiden utgjør ved normalverdier ikke under 24 timer. Denne fremgangsmåten er følgelig tidkrevende, ikke automatiserbar og bare egnet til en grov vurdering av den fibrinolytiske tilstanden. En unormalt lav fibrinolytisk aktivitet kan i det hele tatt ikke bestemmes.
Noe kortere tider oppnås når man arbeider med fortynnet blod, de nevnte ulempene består imidlertid.
Nøyaktigere resultater skal den såkalte fibrinplate-testen gi, med denne arbeides det med citratplasma eller resuspen-dert euglobulinbunnfall. Hovedulempen ligger her i den lange inkubasjonstiden på 18 timer ved 37°C.
Til grunn for oppfinnelsen ligger følgelig den oppgaven å tilveiebringe en universell fibrlnolysetest, hvorved man unngår ulempene forbundet med de tidligere kjente fremgangs-måtene og som spesielt gir resultater på relativt kort tid, som gjenspeiler in vivo tilstanden på en pålitelig måte, som lar seg automatisere og som kan bedømmes fotometrisk.
Denne oppgaven løses ifølge oppfinnelsen ved en fremgangsmåte til bestemmelse av den fibrinolytiske tilstanden 1 plasma, som er kjennetegnet ved at man i en naturlig plasmaprøve
a) tilsetter en mengde fibrin som er tilstrekkelig til dannelse av uklarhet eller frembringer denne in situ ved å
tilsette trombin eller et trombln-llgnende enzym og den
tidsavhengige uklarhetsendrIngen eller den tidsavhengige dannelsen av fibrin-spaltningsprodukter måles, eller b) tilsetter et kromogent plasminsubstrat og en mengde fibrin som ikke er tilstrekkelig for dannelse av uklarhet,
fibrinogen-spaltnlngsprodukter eller et enzym som in situ gir fibrin og måler den tidsavhengige fargedannelsen.
Med betegnelsen "uklarhetsmåling" forstås innenfor rammen av oppfinnelsen målingen av uklarhetsøkningen eller -reduksjonen pr. tidsenhet, måling av tiden for oppnåelse av uklarhets-maksimum eller måling av tiden inntil oppnåelse av en spesiell uklarhetsreduksjon eller -økning, relativt til uklarhetsmaksimumet. Også en kombinasjon av disse måle-mulighetene kan anvendes. Foretrukket er måling av tiden inntil oppnåelse av en definert uklarhetsreduksjon eller tiden til oppnåelse av uklarhetsmaksimumet.
FargemålIngen kan foregå ved kinetisk å følge fargedannelsen, herved angis ekstinksjonsendringen pr. tidsenhet. Videre kan den etter en angitt tid oppnådde ekstinksjonen bestemmes eller fargedannelsesreaksjonen kan stoppes etter en angitt tid og på et hvilket som helst senere tidspunkt kan den dannede fargen måles.
Målingen av det dannede flbrin-spaltningsproduktet kan foregå med handelsvanlige forsøksreagenser henholdsvis -fremgangsmåter. Eksempler er stafylokokk-clumping-forsøk (fremstilt av Boehringer Mannheim GmbH) eller immunologiske fremgangsmåter f.eks. ved antistoff-belagte latekspartikler (fremstilt av Wellcome Corp.).
Stoppingen av fargedannelsesreaksjonen kan foregå ved tllsats av egnede inhibitorer, fortrinnsvis plasmininhibitorer eller syrer som f.eks. eddlksyre eller sitronsyre. Fortrinnsvis måles tiden inntil oppnåelse av en bestemt ekstlnksjon.
Den ovenfor angitte fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen gir en bestemmelse av den hyperfibrinolytiske aktiviteten for plasma. Herved utløses reaksjonen av plasminogenaktivatorer som er tilstede eller oppstår i plasma. Denne utførelses-formen av fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen egner seg spesielt til å følge en fibrinolyseterapi. Man kan herved fastslå hvordan den fibrinolytiske tilstanden for utgangs-plasmaet endrer seg under forløpet av terapien.
Ifølge en ytterligere utførelsesform av fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen, tilsettes dessuten en bestemt mengde plasminogenaktivator, hvorved fortrinnsvis terapeutisk anvendelige konsentrasjoner anvendes. Ved denne utførelsesformen av fremgangsmåten bestemmer man den mulige reaktiviteten for plasma i nærvær, av definerte mengder plasminogenaktivator. Dette er spesielt viktig for innledningen av en fibrinolyseterapi. Man kan derved fastslå hvordan den fibrinolytiske tilstanden i plasma endrer seg når man tilsetter et tera-peutikum som skal anvendes for fibrinolyseterapi, som f.eks. t-PA (EPA), uroklnase eller streptokinase.
Ifølge en foretrukket utførelsesform oppnås fibrinet in situ ved tilsats av trombin eller et trombin-lignende enzym som batroxobin eller arvin.
Som fibrinogenspaltningsprodukter anvendes fortrinnsvis produkter som oppnås ved behandling av fibrinogen med bromcyan (I.H. Verheijen, Thromb. Haemostas 48, 266-269
(1982)). Fortrinnsvis anvendes konsentrasjoner på 10-150 pg/ml.
Flbrinmonomerer fremstilles ved behandling av fibrinogen med batroxobin, inaktivering av batroxobinet med diisopropyl-fluorfosfat, fjernelse og deretter oppløsning av fibrin-klumpene i 1-3 molar urinstoffoppløsning. Fortrinnsvis anvendes konsentrasjoner på 1-100 jjg/ml fibrinmonomer.
Som kromogent plasmlnsubstrat kan ethvert plasminsubstrat anvendes fra hvilket det under Innflytelse av plasmin avspaltes en gruppe som er egnet til fargedannelse. Som fargedannende grupper kommer både grupper på tale som kan måles direkte fotometrisk, f.eks. nltroanilin, dinltroanilln og derivater derav, og også forbindelser som ved reaksjon med ytterligere en komponent bevirker fargedannelse.
Ved utførelsesformen av fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen under tllsats av en plasmlnaktlvator, kan man som plasmlno-genaktivator EPA (Extrinsic Plasmlnogen-aktivator t-PA), anvende uroklnase eller streptokinase. Et foretrukket kromogent plasmlnsubstrat er Tos-Gly-Pro-Lys-p-nitroanilin.
Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kan gjennomføres ved en hvilken som helst temperatur mellom 20 og 40<*>C.
En ytterligere gjenstand for oppfinnelsen er en reagens til bestemmelse av den fibrinolytiske tilstanden i plasma som er egnet for gjennomføring av fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen. En slik reagens er kjennetegnet ved at den Inneholder plasminogenaktivator, trombin eller trombinlignende enzym og buffer.
Istedet for trombin eller trombin-lignende enzym kan reagensen også inneholde fibrinspaltningsprodukter eller fibrinmonomer.
Dersom reagensen ifølge oppfinnelsen er bestemt for variant b) av fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen, dvs. fargemålIngen, inneholder den i tillegg et kromogent plasminsubstrat.
Ifølge en foretrukket utførelsesform inneholder reagensen Ifølge oppfinnelsen videre minst et stoff fra gruppen polyetylenglykol, ikke-ionogent, overflateaktivt middel og okseserumalbumln.
I en første utførelsesform av reagensen Ifølge oppfinnelsen inneholder denne EPA, batroxobin, trisbuffer pH 7-8, polyetylenglykol og Ikke-Ionogent overflateaktlvt middel.
For fargemållng inneholder denne reagensen istedet for batroxobin med fordel fibrinogen-spaltningsprodukter fremstilt ved bromcyanbehandling av fibrinogen eller istedet for dette, fibrinmonomer og dessuten Tos-Gly-Pro-Lys-p-nitroanilin.
For de enkelte bestanddelene av reagensen Ifølge oppfinnelsen, gjelder tilsvarende de utførelsesformene som er omtalt 1 forbindelse med beskrivelsen av fremgangsmåten.
De følgende eksemplene illustrerer oppfinnelsen med referanse til den vedlagte tegningen.
I denne er:
Fig. 1 en kalibreringskurve for et uklarhetsforsøk med EPA som plasminogenaktivator.
Eksempel 1
Uklarhetsforsøk med EPA som plasminogenaktivator.
Reagenssammensetning:
Trls/HCl, 0,1 mol/l, pH 7,5
Polyetylenglykol 6000, 2 vekt-*
Overflateaktivt middel ("Tveen 80"), 0,1 vekt-* Okseserumalbumln (RSA), 1 vekt-*
Batroxobin 0,02 BU/ml
EPA (0,01-10 ng/ml forsøksblandlng).
Forsøksblandlng: 50 pl prøve (plasma)
1000 pl reagens
Reagens og prøve blandes ved 25 "C og uklarhetsdannelsen forfølges straks med et fotometer ved X - 334 nm. Ekstinksjonsendringen registreres med en skriver (papir-hastighet 0,1 cm/min).
Bestemmelsen av en kalibreringskurve foregår enten ved bestemmelse av tiden t^ til uklarhetsmaksimumet er oppnådd (fig. 1, kurve 1) eller tiden t£ til en ekstlnksjonsreduksjon på 100 mE er oppnådd med utgangspunkt fra uklarhetsmaksimumet (fig. 1, kurve 2).
Eksempel 2
Uklarhetsforsøk med streptokinase henholdsvis urokinase som plasminogenaktivator.
Reagenssammensetning, forsøksblandlng og forsøksgjennomføring tilsvarende eksempel 1, hvorved istedet for EPA, streptokinase henholdsvis urokinase tilsettes i forskjellige konsentrasjoner.
Derved oppnås følgende måleverdier:
a) Streptokinase
b) Urokinase
Konsentrasjon
Eksempel 3
Fargeforsøk med EPA som plasminogenaktivator.
Reagenssammensetning:
Tris/HCl 0,1 mol/1, pH 7,5
Polyetylenglykol 6000, 2 vekt-*
"Tween 80", 0,1 vekt-*
RSA, 1 vekt-*
EPA, 0,1 til 10 ng/ml forsøksblandlng BrCN-fragmenter av fibrin, 75 pg/ml
Plasminsubstrat TOS-Gly-Pro-Lys-pNA, 0,15 mmol/1
Forsøksblandlng: 50 pl prøve (plasma)
1000 pl reagens
Reagens og prøve blandes ved 25"C og fargedannelsen følges med et fotometer ved X - 405 nm. Ekst inksjonsendr ingen registreres med en skriver (paplrhastighet 0,1 cm/min). Man måler tiden t3 inntil en ekstinksjonsøkning på 100 mE er oppnådd med utgangspunkt fra basislinjen (0-reagensverdi ).
Som resultater oppnås:
Claims (13)
1.
Fremgangsmåte til bestemmelse av den fibrinolytiske tilstanden for plasma, karakterisert ved at man i en naturlig plasmaprøve a) tilsetter en mengde fibrin som er tilstrekkelig til dannelse av uklarhet eller frembringer denne in situ ved å tilsette trombin eller et trombin-lignende enzym, og den tidsavhengige uklarhetsendringen eller den tidsavhengige dannelsen av fibrin-spaltningsprodukter måles, eller b) tilsetter et kromogent plasminsubstrat og en mengde fibrin som ikke er tilstrekkelig for dannelse av uklarhet, fibrinogen-spaltningsprodukter eller et enzym som in situ gir fibrin og måler den tidsavhengige fargedannelsen.
2.
Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at man dessuten tilsetter en bestemt mengde plasminogenaktivator .
3.
Fremgangsmåte ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at man oppnår fibrinet in situ ved tilsats av trombin eller et trombinlignende enzym som batroxobin eller arvin.
4.
Fremgangsmåte ifølge krav 2 eller 3, karakterisert ved at man som plasminogenaktivator tilsetter EPA, urokinase eller streptokinase.
5.
Fremgangsmåte Ifølge et av de foregående krav, karakterisert ved at man som f ibrinogen-spaltningsprodukter anvender produkter som oppnås ved behandling av fibrinogen med bromcyan.
6.
Fremgangsmåte ifølge et av de foregående krav, karakterisert ved at man som kromogent plasmin
substrat anvender Tos-Gly-Pro-Lys-p-nitroanilin.
7.
Reagens til bestemmelse av den fibrinolytiske tilstanden for plasma ved fremgangsmåten ifølge et av kravene 1 til 6, karakterisert ved at den inneholder plasminogenaktivator, trombin eller trombinllgnende enzym og buffer.
8.
Reagens til bestemmelse av den fibrinolytiske tilstanden for plasma ved fremgangsmåten ifølge et av kravene 1 til 6, karakterisert ved at den inneholder plasminogenaktivator og fibrinogen-spaltningsprodukter eller fibrinmonomer.
9.
Reagens ifølge krav 7 eller 8, karakterisert ved at den i tillegg inneholder et kromogent plasminsubstrat .
10.
Reagens ifølge kravene 7-9, karakterisert ved at den inneholder polyetylenglykol, et ikke-ionogent, overflateaktivt middel og/eller okseserumalbumin.
11.
Reagens ifølge et av kravene 7-10, karakterisert ved at den inneholder EPA, batroxin, trisbuffer pH 7-8, polyetylenglykol og ikke-ionogent overflateaktivt middel.
12.
Reagens ifølge krav 11, karakterisert ved at den inneholder EPA, tris-buffer pH 7-8, polyetylenglykol, ikke-ionogent overflateaktivt middel og ved bromcyanbehandling av fibrinogen fremstilte fibrinogen-spaltningsprodukter eller fibrinmonomer og Tos-Gly-Pro-Lys-p-nitroanilin.
13.
Anvendelsen av trombin eller trombinlignende enzym sammen med buffer som reagens til bestemmelse av den fibrinolytiske tilstanden for plasma ved fremgangsmåten ifølge kravene 1 til 6.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19853502878 DE3502878A1 (de) | 1985-01-29 | 1985-01-29 | Verfahren zur bestimmung des fibrinolytischen zustands von plasma |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO860089L NO860089L (no) | 1986-07-30 |
NO167588B true NO167588B (no) | 1991-08-12 |
NO167588C NO167588C (no) | 1991-11-20 |
Family
ID=6261029
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO860089A NO167588C (no) | 1985-01-29 | 1986-01-13 | Fremgangsmaate til bestemmelse av den fibrinolytiske tilstanden for plasma, og reagens for anvendelse ved fremgangsmaaten. |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0189910B1 (no) |
JP (1) | JPS61178000A (no) |
AT (1) | ATE45771T1 (no) |
CA (1) | CA1276097C (no) |
DE (2) | DE3502878A1 (no) |
DK (1) | DK163189C (no) |
ES (1) | ES8701841A1 (no) |
NO (1) | NO167588C (no) |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
HU193126B (en) * | 1985-08-15 | 1987-08-28 | Valeria Duschanek | Method for forecasting quality of flesh of the livestocks and for selecting livestocks on the basis of this |
DE3705744A1 (de) * | 1987-02-23 | 1988-09-01 | Behringwerke Ag | Verfahren zur funktionellen bestimmung von protein c-inhibitor |
DE3838529A1 (de) * | 1988-11-14 | 1990-05-17 | Behringwerke Ag | Globaltest zur erfassung der hauptkomponenten des fibrinolysesystems |
DE3900493A1 (de) * | 1989-01-10 | 1990-07-12 | Thomae Gmbh Dr K | Verfahren zur bestimmung der fibrinolytischen gesamtaktivitaet im plasma |
WO1993011260A1 (en) * | 1991-11-25 | 1993-06-10 | Baxter Diagnostics Inc. | Method for measuring fibrinolytic capacity within whole human plasma |
DK0556906T3 (da) * | 1992-02-17 | 1996-09-02 | Akzo Nobel Nv | Kalibrator og dens anvendelse til en immunanalyse |
US5708591A (en) | 1995-02-14 | 1998-01-13 | Akzo Nobel N.V. | Method and apparatus for predicting the presence of congenital and acquired imbalances and therapeutic conditions |
US6429017B1 (en) | 1999-02-04 | 2002-08-06 | Biomerieux | Method for predicting the presence of haemostatic dysfunction in a patient sample |
US6898532B1 (en) | 1995-06-07 | 2005-05-24 | Biomerieux, Inc. | Method and apparatus for predicting the presence of haemostatic dysfunction in a patient sample |
US6321164B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-11-20 | Akzo Nobel N.V. | Method and apparatus for predicting the presence of an abnormal level of one or more proteins in the clotting cascade |
US6502040B2 (en) | 1997-12-31 | 2002-12-31 | Biomerieux, Inc. | Method for presenting thrombosis and hemostasis assay data |
WO2000046603A1 (en) | 1999-02-04 | 2000-08-10 | Akzo Nobel N.V. | A method and apparatus for predicting the presence of haemostatic dysfunction in a patient sample |
US7179612B2 (en) | 2000-06-09 | 2007-02-20 | Biomerieux, Inc. | Method for detecting a lipoprotein-acute phase protein complex and predicting an increased risk of system failure or mortality |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2431342C3 (de) * | 1973-07-27 | 1978-10-26 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur Messung des Plasminogengehaltes durch Bestimmung der Bildung von Fibrin in einer Probe |
DE2525804B2 (de) * | 1975-06-10 | 1980-04-03 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Stabiler Clumping-Faktor, Verwendung desselben zum Nachweis von Fibrinogen- und Fibrinspaltprodukten und Herstellung desselben |
JPS59210900A (ja) * | 1983-05-14 | 1984-11-29 | Mihama Hisaharu | 血中プラスミン活性の測定法 |
DE3330699A1 (de) * | 1983-08-25 | 1985-03-07 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur gleichzeitigen bestimmung von fibrinogen und fibrinogen-spaltprodukten im plasma |
-
1985
- 1985-01-29 DE DE19853502878 patent/DE3502878A1/de not_active Withdrawn
-
1986
- 1986-01-08 CA CA000499236A patent/CA1276097C/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-01-13 NO NO860089A patent/NO167588C/no unknown
- 1986-01-21 DK DK030686A patent/DK163189C/da active
- 1986-01-28 JP JP61014897A patent/JPS61178000A/ja active Pending
- 1986-01-29 AT AT86101150T patent/ATE45771T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-01-29 ES ES551389A patent/ES8701841A1/es not_active Expired
- 1986-01-29 EP EP86101150A patent/EP0189910B1/de not_active Expired
- 1986-01-29 DE DE8686101150T patent/DE3665196D1/de not_active Expired
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DK30686A (da) | 1986-07-30 |
DK163189B (da) | 1992-02-03 |
ES551389A0 (es) | 1986-12-16 |
NO167588C (no) | 1991-11-20 |
EP0189910B1 (de) | 1989-08-23 |
JPS61178000A (ja) | 1986-08-09 |
DK163189C (da) | 1992-06-22 |
ES8701841A1 (es) | 1986-12-16 |
EP0189910A3 (en) | 1986-12-10 |
ATE45771T1 (de) | 1989-09-15 |
DE3502878A1 (de) | 1986-07-31 |
EP0189910A2 (de) | 1986-08-06 |
DE3665196D1 (en) | 1989-09-28 |
DK30686D0 (da) | 1986-01-21 |
CA1276097C (en) | 1990-11-13 |
NO860089L (no) | 1986-07-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Soria et al. | A new type of congenital dysfibrinogenaemia with defective fibrin lysis—Dusard syndrome: possible relation to thrombosis | |
JP4361986B2 (ja) | 血液凝固第vii因子を活性化するプロテアーゼ | |
Nesheim et al. | Thrombin-catalyzed activation of single chain bovine factor V. | |
Francis et al. | Physiologic regulation and pathologic disorders of fibrinolysis | |
NO167588B (no) | Fremgangsmaate til bestemmelse av den fibrinolytiske tilstanden for plasma, og reagens for anvendelse ved fremgangsmaaten. | |
CA2108282C (en) | Quantitative clotting assay for activated factor vii | |
JP3792198B2 (ja) | 抗血小板剤をモニターする方法及び装置 | |
Astrup et al. | The estimation of fibrinogen A revision | |
US8008086B2 (en) | Protocol for monitoring direct thrombin inhibition | |
US4234682A (en) | Method and reagent for determining biologically active heparin in plasma | |
JP6300793B2 (ja) | 血漿及び全血中のトロンビン産生と血餅強度との同時測定 | |
JP4718833B2 (ja) | 複合生物媒体における、一時的なタンパク質分解活性の濃度を決定するための診断試験 | |
Retzios et al. | A direct-acting fibrinolytic enzyme from the venom of Agkistrodon contortrix contortrix: effects on various components of the human blood coagulation and fibrinolysis systems | |
Van Wijk et al. | Mechanized amidolytic technique for determination of factor X and factor-X antigen, and its application to patients being treated with oral anticoagulants. | |
Kaplan et al. | Molecular mechanisms of fibrinolysis in man | |
EP0472205B1 (en) | Assays using a soluble fibrin-like monomer | |
US5188940A (en) | Method of determining the total fibrinolytic activity in the plasma | |
Heimburger et al. | Blood coagulation and fibrinolysis | |
Stafford | The fibrinolytic mechanism in haemostasis: a review | |
Stief | A direct approach in fibrinolysis diagnostic: mimicry of the leukocyte attack by oxidants | |
US5096811A (en) | Novel assay system for measuring human plasminogen actuator activity | |
De Cristofaro et al. | Effect of sodium on the energetics of thrombin–Thrombomodulin interaction and its relevance for protein C hydrolysis | |
JP2818673B2 (ja) | 繊維素溶解系の主要成分を測定する包括的試験 | |
EP0237332A1 (en) | Assay for thrombosis-related materials | |
Van Wersch | Adaptation and evaluation of a chromogenic test procedure for fibrin monomers on a centrifugal analyzer |