DK148390B

DK148390B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af 16-deacetoxy-16beta-acylthiofusidinsyrederivater

Info

Publication number: DK148390B
Application number: DK294177AA
Authority: DK
Inventors: Welf Von Daehne; Poul Roedbroe Rasmussen
Original assignee: Leo Pharm Prod Ltd
Priority date: 1976-07-05
Filing date: 1977-07-01
Publication date: 1985-06-24
Also published as: SE436752B; PT66759B; GB1581335A; YU165477A; ATA455777A; FR2357574A1; DE2730196C2; PT66759A; AU516152B2; GR63210B; FI58136C; FI58136B; FR2357574B1; PH14058A; IT1083082B; ZA773739B; DK294177A; NZ184408A; IE45217L; AU2643877A

Description

143390

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte fusidinsyrederivater med den almene formel I

J3 OOR3 S-CO-R1 1

Ql AXJ

! H

fcH3 2 148330 i hvilken den punkterede linie mellem C-24 og C-25 indicerer, at de pågældende C-atomer er forbundet med enten en dobbelt- eller en enkeltbinding, og i hvilken repræsenterer oxygen eller en af grupperne eller „ js» , hvor Z er en hydroxygruppe, et Z-'-' il-- halogenatom, en methylsulfonyloxy- eller tolylsulfonyloxygruppe, 2 Hs.

en azido- eller en nitrogruppe, Q er oxygen eller gruppen » og R^ betyder en lige eller forgrenet alkylgruppe med fra 1 til 6 C-atomer, en fenylgruppe eller en heterocyklylgruppe med 5 eller 6 ringatomer og indeholdende nitrogen-, oxygen- og/eller svovlatomer, hvilke grupper om ønsket kan være monosubstitueret med halogen, nitro-, C^-C^-alkyl- eller C^-C^-alkoxygrupper, og R^ betyder hydrogen eller en C^-Cg-alkanoyloxy-C^-C^-alkyl, phenyl-t^-Cg-alkanoyloxy-C^-C^-alkyl-, benzoyloxy-C^-C^-alkyl, C^-Cg-alk-oxycarbonyloxy-C^-C^-alkyl-, C^-C^-laktonyl eller di-C^-C^-alkyl-amino -C^- C alkylgruppe , eller farmaceutisk acceptable salte deraf.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er egendommelig ved det i kravets kendetegnende del angivne.

De ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser kan benyttes som sådanne eller i form af salte eller let hydrolyserbare estre. Saltene af forbindelserne er navnlig farmaceutisk acceptable, ugiftige salte, såsom alkalimetalsalte og jordalkalimetalsalte, fx natrium-, kalium-, magnium- eller kalciumsalte, såvel som salte med ammoniak eller egnede ugiftige aminer. Til visse formål kan også sølvsalte af forbindelserne anvendes, navnlig til topisk behandling.

De antibakterielle egenskaber hos fusidinsyre er velkendte, og det vides også, at variationer i strukturen kan bevirke et betydeligt eller endog fuldstændigt tab af en sådan aktivitet.

Nu har det imidlertid vist sig, at forbindelserne fremstillet ifølge den foreliggende opfindelse både _in vitro og _in vivo udviser interessante antimicrobielle og pharmacokinetiske egenskaber. Således kan disse forbindelser anvendes ved behandlingen af bakterieinfektioner hos mennesker og dyr. In vitro undersøgelse har fx vist, at forbindelserne er mere virksomme end fusidinsyre samt derivater heraf overfor et antal bakterier, fx staphylococci, streptococci, corynebacteriae, neisseriea, clostridiae og bakteroides arter samt bacillus subtilis, således som det fremgår af følgende tabel, der viser den antibakterielle aktivitet af en række af de ifølge de nedenfor anførte eksempler fremstillede forbindelser af formel I sammenlignet med dels fusidinsyre og dels nogle forbindelser fremstillet ifølge de danske patentansøgninger nr. 2857/76 og 5394/76.

3 148390 ' in φ τ)

•ri IQ CV! VO NO

0 ft ON Ο h H <l| iNiONOOOCMOnvOO NO Ο Ό \ \

φ -h ft .......... · ·· _ Pift &J3 OOHCMWncMHHlA H -d- ft CM O NO u-\ ON

0 d 0 ^ CM ft 00 ON

d ti Φ CM »Λ D3 Ch til_______ ^ · · · H A CM ti ti

p to SO

< -Ο o >n on on OO

6D ftH CMCMNOOOONONONOO NO Η^ΛΟ'ΌνΟ . .

a. φ .......... · ..... w fl -w< ti O OOOCMCMHHHOCM Η OOHHH g g η +> φ «: <; ω en j H 0---- Φ ft tn = ti Φ u φ a o o ® «η -h ω o o o ch g >*ω onoo cm on n on o on .g- no ο o on

d -H ft CMftCMOOONE^NONO-d· NO O ft UN 1Λ NO

Q ·········· · ·····

k -^5. . φ OOOHHOOOOO O OOOOO

Φ O ft 1-1 tn m φ Η ίπ Φ 0+5 Ό O Cfi g ft---- H „ « O ti 3 <! ti 0 φ o £ ti 00 ti d h

0) in ON CM NO O NO Ο O 3 On O NO. no I

ft ft ·υ ar. ..... .ο·· Φ g y C 050 NOONi—lONO-CfftCMCMUN NO CM t^· ft ft ft 0 Ό O ® A CMH ft ΟΝ Λ fa ft g o d o w I to ti -μ Φ φ C h 0 ftOCCJ ti ft CM fa d fa >νΌ φ i λ

“““ M ft ti g O

ft M tn g tn >, φ ft φ -H g pq ·Η 3 « -ri o ft Ό O Ό fa ti Ό ft ft ti ti 00 ft O ft I ft > ® 3 r* tn ti τ) -d- fa H > ttj ft O 00 O O ON ΟΝ UN NO O NO 3 "d ft CM ti p ^ ftOOCMCM0N{>O NO CM ft -d- ft ft >, tn .. g ,¾ s >c oomooHO»ANOo o ooonono 0rg g^ ft d £ fa o .......... · ’···· ti ft fa r- ti ft ΟΟΟΟΟΟΟΟΗΟ O ΟΟΟΗΗ »g 3 H d O fal fa>—' ft Φ -P <D g ΙΛχη i ft CO til ft CM O ft “

ti __J___t I CM

Φ i pf ft d w

-p un cm Φ fa I

ij UN δβ HftHHH CM I ti ft CQ.

d CMti dftftoftoftoftft »ft o to no O -ft ,οφφ,οφ,οφ,οφφ j· >, 3 3 η

•H -g- fa fafafafa^fa fafa^fa CM ti H ft I

ft CMti OtitiOCOCOCri I ft ti O Jn Φ ti I ft ·ζ)φφΤ3Φ73ΦΤ)φφ 0 fa ft ft H ti C O fa ® ft ft ti fa O fa --ti fa 35 ft ft ti tn ononuncncnononcnonon fa -ft> en i ft το —i ΜΚΚΚΕΕΕΪίΕΜ m ft ft - fa fa fa

Ph OONOOOOOOOO ti fa fa CM ti -P fa X

O *n ft ft ·* ΰ Η Ή O

..... " " -»- — V o O · ί! Ό i ti K titi Pti KSKMM ft ti ti cm ft tn i ti ® OOO OOOOO tn Aft«lEsd S ^ I 1 I O O I I I I I ti 0 0- oa. ti H o ti Cr 8 8 8 8 8 S B 8 fa ffltnCMNOftftl

Φ ·*·»·«. ·* ·» λ »n ·* ·ΗΉ ^ H 5h ·* H

3 35 K E E E E E E i t i i ft B cm "Γ___ oa.tn.cQ. fa d ον i ft NO Ό NO * ti ti -£ EEEEEtitiftoNON η η h o fad ® 0000005050¾¾ I I I ti - d ft •9 H^, I I I I I I I I I I >. >, >, -d Φ Ό

ti σ B B B 8 B to. n ca. CO. B

UJ O O O ti ΐΝΗ-ί dtititititititititi ft ft ft ft tn d cm __ Φ Φ Φ 05 H tn - o ο ο i !>> H dddBXtii''

Φ Φ Φ Φ H O ft H

ft P Q O H til tiw E HCrN-d- C'-OOi-ICMONOONO | | | . 5 p n

Φ ftl 01 W CM n NO NO NO B d d H

Si < 05 O Ω fa fa ..........

____________ ______-i <; m o q fa k 148390

In vivo undersøgelser foretaget i rotter, hunde, samt frivillige humane forsøgspersoner, har vist, at forbindelserne fremstillet ifølge opfindelsen absorberes effektivt fra mave-tarmkanalen og er praktisk taget ugiftige.

Forbindelserne af formel I fremstilles ved hjælp af en metode, som består i, at en forbindelse af den almene formel II omsættes med en forbindelse af den almene formel III under inversion af konfigurationen ved C-l6 til dannelse af en forbindelse af den almene formel IV:

Vis' 'jljf 2 LW Y00*2 ,

Q Yry «SVxs-°°-R

Qi,Xtjr a-s-°°-e1

II III IV

1 iflL· i hvilke formler Q 1 betyder oxygen eller én af grupperne eller „ JV, hvor Z1 er en hydroxy- eller formyloxygruppe, en alkyl-11' sulfonyloxy- eller arylsulfonyloxygruppe, fx en methansulfonyloxy- eller p-toluensulfonyloxygruppe, eller et chlor-, brom- eller o i jodatom, Q~, R og den punkterede linie mellem C-24 og C-25 har den ovenfor beskrevne betydning, A betyder hydrogen eller en kation, såsom Na+, K+, Ag+, en ammonium- eller trialkylammoniumjon, X er 2 et chlor-, brom- eller jodatom, og R betyder en alkanoyloxyalkyl-eller aroyloxyalkylgruppe, fx en acetoxymethyl—, pivaloyloxymethyl-eller benzoyloxymethylgruppe, en benzylgruppe eller en substitueret benzylgruppe, fx en p-nitrobenzyl- eller p-methoxybenzylgruppe.

Reaktionerne udføres i et inert opløsningsmiddel, fx dimethyl-formamid, og ved en temperatur mellem 0°C og 40°C, fortrinsvis ved stuetemperatur.

Fremstillingen af udgangsmaterialerne af formel II er beskrevet i vor danske patentansøgning nr. 2857/76 eller kan fremstilles ved analoge metoder.

Forbindelserne af formel IV, i hvilke betyder én af grup- jr 21 perne eller » hvor Z’ er en alkyl sulfonyloxy- eller aryl sulf onyloxygruppe, eller et chlor-, brom- eller jodatom, kan omdannes, under inversion af konfigurationen ved C-3, til de tilsva- 5 148390 rende forbindelser af formel IV, i hvilke Z' betyder et halogenatom, en azido- eller en nitrogruppe, ved omsætning med nucleophile midler, såsom alkalimetaljodider, -azider eller -nitriter, tetra-butylammoniumchlorid, -bromid eller -jodid eller sølvfluorid. Oisse omdannelser gennemføres i reaktions-inerte organiske opløsningsmidler, fx dimethylformamid, acetone eller acetonitril og ved tempe-taturer mellem 0°C og 80°C.

Forbindelserne af formel IV omdannes til forbindelserne af formel I ved forskellige fremgangsmåder, afhængig af betydningen 2 af R . En mild hydrolyse i nærværelse af en uorganisk eller organisk syre, fx saltsyre eller p-toluensulfonsyre, i vandig methanol eller ethanol, eller alkoholyse i nærværelse af en svag base, fx 2 natrium- eller kaliumcarbonat, er foretrukket, hvis R repræsenterer en alkanoyloxyalkyl- eller aroyloxyalkylgruppe, og katalytisk hydrogenering under anvendelse af palladium-på-carbon som katalysator 2 foretrækkes i de tilfælde, hvor R betyder en benzylgruppe eller en substitueret benzylgruppe.

Forbindelser af den almene formel I, i hvilke Q1 og/eller 2 Q betyder oxygen, kan også fremstilles ud fra de tilsvarende for- 1 2 bindeiser af formel I, i hvilke Q og/eller Q betyder gruppen ved oxidationsmetoder, som vil være kendte af fagmanden.

HO"

Forbindelser af formel I, i hvilke Q indeholder et halogenatom, en azido- eller en nitrogruppe, som defineret ovenfor, kan også fremstilles direkte ud fra forbindelser af formel I, i hvilke 1 H"'~_ 2« 0 betyder eller hvor Z" er en hydroxygruppe eller en alkyl- eller arylsulfonyloxygruppe ved velkendte processer, fx omdannelse under inversion af konfigurationen ved C-3 af en hydro-xygruppe til halogen, eller nucleophil substitution af en alkyl-eller arylsulfonyloxygruppe med sølvfluorid, et tetrabutylammonium-halogenid eller et alkalimetalazid eller -nitrit.

Saltene af de let hydrolyserbare estre af forbindelserne af formel I kan fremstilles på kendt måde ved metoder beskrevet i litteraturen.

Forbindelser fremstillet ifølge den foreliggende opfindelse, 1 hvilke der er enkeltbinding mellem C-24 og C-25> kan også fremstilles ud fra de tilsvarende umættede ved reduktion, fx en katalytisk hydrogenering under anvendelse af fx palladium-på-carbon som katalysator.

De foreliggende forbindelser kan indgå i farmaceutiske præparater, som er nyttige ved behandlingen af infektionssygsomme i den humane og veterinære praksis. Sådanne præparater indeholder 6 148390 som aktiv forbindelse i det mindste én forbindelse af formel I eller et salt deraf med ugiftige farmaceutisk acceptable baser, i forbindelse med faste eller flydende farmaceutiske bærere og/eller fortyndingsmidler.

I sådanne præparater er forholdet mellem terapeutisk aktivt materiale og bærerstof mellem 1 og 95 vægtprocent. Præparaterne kan oparbejdes til forskellige farmaceutiske indgivelsesformer, såsom granulater, tabletter, piller, dragéer, suppositorier, kapsler, tabletter med forsinket afgivelse, suspensioner, salver, cremer, eller som injektionsmedicin, og hvad blandinger angår, kan de fyldes på flasker eller tuber eller lignende beholdere.

Farmaceutiske organiske eller uorganiske, faste eller flydende bærere og/eller hjælpestoffer, som er egnede til oral, enteral, parenteral eller lokal administrering kan anvendes ved oparbejdelsen af præparater indeholdende de ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser. Vand, gelatine, laktose, stivelse, magnesiumstearat, talkum, vegetabilske og animalske fedtstoffer og olier, benzylalkohol, gummiarter, polyalkylenglykol, vaselin, kakaosmør, lanolin eller andre velkendte bærere for medikamenter er alle brugbare, medens stabiliseringsmidler, befugtningsmidler, emulsionsmidler, salte til variering af osmotisk tryk eller buffere til at sikre et adækvat pH, kan bruges som hjælpestoffer.

Det farmaceutiske præparat kan endvidere indeholde andre farmaceutisk aktive komponenter, som passende kan indgives sammen med forbindelserne ifølge opfindelsen ved behandling af infektionssygdomme, såsom andre egnede antibiotika, i særdeleshed sådanne antibiotika, som forøger aktiviteten og/eller forhindrer udviklingen af resistensdannelse. Sådanne antibiotika omfatter penicilliner, cephalosporiner, tetracykliner, rifamyciner, erythromycin, linco-mycin, clindamycin, fusidinsyre og andre fusidinsyrederivater, fx de derivater, som er beskrevet i dansk patentansøgning nr. 2857/76, og dansk patentansøgning nr. 539^/76. Andre forbindelser, som med fordel kan kombineres med de ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser, navnlig i topiske præparater, inkluderer fx cortico-steroider, såsom hydrocortison, triamcinolon eller fluocinolon.

Farmaceutiske præparater i form af granulater, tabletter, kapsler eller dragéer indeholder med fordel fra 25 til af den aktive bestanddel, medens mængden i orale suspensioner ligger på ca. 2—255^·

Til parenteral brug indgives de ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser fortrinsvis ved intravenøs infusion af en η 148390 vandig opløsning indeholdende fra 0,1 til 2°/o af den aktive bestanddel, eller forbindelsen kan indgives ved injektion af farmaceutiske præparater indeholdende fra 1 til 20°/o af den aktive bestanddel.

Når forbindelserne indgives i form af salte med farmaceutisk acceptable, ugiftige baser, er de foretrukne salte fx de i vand letopløselige natrium-, kalium- eller diethanolaminsalte, men andre farmaceutisk acceptable, ugiftige salte kan anvendes, fx salte, som kun er lidt opløselige i vand, hvorved man kan opnå en særlig og tilsigtet resorptionshastighed.

Som anført ovenfor kan de ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser oparbejdes på forskellige farmaceutiske indgivelsesformer, herunder suspensioner, salver og cremer. Et farmaceutisk præparat kan også være i form af ..en.· suspension af en forbindelse af formel I som sådan eller i form af et kun lidt opløseligt salt med en farmaceutisk acceptabel base, eller en let hydrolyserbar ester, hvilket præparat indeholder fra 20 til 100 mg/ml bærer.

Et farmaceutisk præparat til topisk behandling kan være i form af en salve eller creme indeholdende en forbindelse af formel I eller et salt deraf i en mængde fra 0,5 til 10 g pr. 100 g præparat.

De foreliggende forbindelser skal indgives i sådanne doser, at den ønskede aktivitet opnås uden samtidige bivirkninger. Ved den humane systemiske behandling indgives forbindelserne og deres salte og let hydrolyserbare estre med fordel (til voksne) i dosis— enheder indeholdende mindst 50 mS og °P 'til 1000 mg, fortrinsvis fra 200 til 750 mg, beregnet som en forbindelse af formel I.

Ved betegnelsen "dosisenhed" forstås en enhedsdosis, dvs. en enkelt dose, som kan indgives til en patient, og som let kan håndteres og emballeres, idet den forbliver fysisk stabil, hvilken enhedsdosis enten omfatter det aktive materiale som sådant eller en blanding heraf med faste eller flydende farmaceutiske fortyndingsmidler eller bærere.

I form af en doseringsenhed kan en forbindelse indgives én eller flere gange dagligt med passende intervaller, dog altid afhængigt af patientens tilstand og i overensstemmelse med de forskrifter, som den behandlende læge giver.

Ved systemisk behandling vil en daglig dosis fortrinsvis være en mængde på fra 0,5 til 3 g af en forbindelse ifølge opfindelsen.

Ved betegnelsen dosisenhed i forbindelse med topisk anven- 2 delse forstås en enhedsdosis bestående i, at man pr. cm af det 8 148390 inficerede areal påfører 0,1 mg til 10 mg, fortrinsvis fra 0,2 mg til 1 mg, af den omhandlede forbindelse.

Hvis et præparat skal injiceres, kan det med fordel leveres i en forseglet ampul, et hætteglas eller tilsvarende beholder indeholdende en parenteralt acceptabel, vandig eller olieagtig, injicer-bar opløsning eller dispersion af det aktive materiale. De parente-rale præparater er navnlig nyttige ved behandlingen af tilstande, hvor en hurtigt reaktion på behandlingen er ønskelig. Ved den kontinuerlige behandling af patienter, som lider af infektionssygdomme, kan tabletter eller kapsler være den mest velegnede form som følge af den forlængede virkning, der opnås, når præparatet indgives oralt, navnlig i form af tabletter med forsinket afgivelse.

Ved behandlingen af infektionssygdomme kan sådanne tabletter med fordel indeholde andre aktive bestanddele, som nævnt ovenfor.

I det følgende er anført nogle eksempler på fremstilling af mellemprodukter.

Præparation 1 3-Deoxy-l6-deacetoxy-3g,l6q-dibromfusidinsvrens acetoxymethyl-ester 3,78 ml fenylchlorformiat (30 mmol) blev dråbevis ved 0°C sat til en omrørt opløsning af 3,09 g natriumbromid (30 mmol) og 1,73 S af l6-epideacetylfusidinsyrens acetoxymethylester (5 mmol) i 30 ml dimethylformamid. Efter omrøring ved 0-5°C i fire timer fik blandingen lov at henstå i fem dage v.ed stuetemperatur. Ved tilsætning af k5 ml methanol-vand 1:1 udfældedes et olieagtigt produkt, som blev vasket gentagne gange ved dekantering med methanol-vand 1:1, hvorefter det blev optaget i 50 ml ether, vasket med vand, tørret og inddampet i vakuum. Den således fremstillede amorfe remanens blev renset ved tør kolonnekromatografi på silica-gel (petroleuraether-ethylacetat 9:l)> hvorved man fik den ønskede forbindelse som et farveløst skum, som krystalliserede fra ether--petroleumether og havde et smeltepunkt på 125-126°C.

Præparation 2 3-Deoxy-l6-deacetoxy-33 . l6oc-dibrom-24.2 q-dihydrofusidinsyrens acetoxymethylester

Ved i fremgangsmåden ifølge præparation 1 at erstatte l6-epideacetylfusidinsyrens acetoxymethylester med l6—epi—deacetyl— -24,25-dihydrofusidinsyrens acetoxymethylester fik man titelforbindelsen som et farveløst skum.

9 148390 NMR-spektret (CD.C1 ) udviser signaler ved - 0,77 (s, 3H; CH^-l8), 0,87 (d,J=5>5, 6H; CH3-26 og CH3-27), 1,05 (s, 3H; CH^-19), 1,08 (d,J=7, 3H; CH3-30), 1,43 (s, 3H; CH.^-32) , 2,10 (s, 3H; C0CH3) , 3,46 (in, 1H; CH-13), 3,60 (bm, IH; CH-3.)..,. 4,33 (m, 1H; CH-ll), 5,56 (bt, IH; CH-I6), og 5,80 og 5,90 (dd, J=6, 2H; OC^o) ppm. Tetramethylsilan blev anvendt som intern reference.

Præparation 3 3.11- Diketo-l6-deacetoxv-l6a-bromfusidinsyrens acetoxymethylester

Til en omrørt opløsning af 3,05 g af l6-deacetoxy-l6a-brom- fusidinsyrens acetoxymethylester (5 mmol) i 50 ml acetone blev o , der drabevis ved .0 C tilsat 3,12 ml Jones' reagens, (en opløsning af 26,72 g chromtrioxid i 23 ml koncentreret svovlsyre, fortyndet med vand til 100 ml). Efter at tilsætningen var tilendebragt, blev blandingen omrørt ved 0-5°C i 40 minutter. Der tilsattes 5° ml vand og 150 ml ethylacetat under omrøring, det organiske lag blev fraskilt, og det vandige lag blev ekstraheret med 25 ml- ethylacetat.

De kombinerede organiske ekstrakter blev vasket med 4 x 20 ml vand, blev tørret og inddampet i vakuum-, hvorved man fik den ønskede forbindelse som et farveløst skum, der ikke krystalliserede.

Præparation 4 3.11- Dlketo-l6-deacetoxv-l6g-brom-24.25-dihvdrofusidixisvrens acetoxymethylester

Ved at følge den i præparation 3 beskrevne fremgangsmåde, idet man erstatter l6-deacetoxy-l6<x-bromfusidinsyrehs acetoxymethylester med l6-deacetoxy-l6a-brom-24,25-dihydrofusidinsyrens acetoxy-methylester, fik man titelforbindelsen som et farveløst skum. NMR-spektret (CDC13) udviser signaler ved cf = 0,88 (d, J=5,5, 6H; CH3-26 og CH3-27), .1,04 (s, 3H; CH3-18), 1,07 (d, J=7, 3H; C^-30) , 1,08 (s, 3H; CH3-19), 1,25 (s, 3Hj.CH.j-32), 2,l4 (s, 3H} COCH^, 3,30 (bm, IH; CH-13), 5,73 (bt, IH; CH-16), og 5,86 og 5,94 (dd, J=6, 2H; 0CH20) ppm.

Tetramethylsilan blev anvendt som intern reference.

Præparation 5 3-Epi-l6-deacetoxy-l6g-bromfusidinsyrens acetoxymethylester

0,17 g natriumbprhydrid blev ved 0°C sat til en opløsning af 1,82 g. 3»ll-diketo-l6-deacetoxy-l6cc-bromfusidinsyrens acetoxymethylester (3 mmol) i 30 ml ethanol. Efter omrøring ved.0-5°C

148390 ίο 1 10 minutter blev der tilsat en yderligere portion på 0,17 S natriumborhydrid, og blandingen blev omrørt ved den lave temperatur 1 yderligere 30 minutter. Overskud af natriumborhydrid blev fjernet ved tilsætning af eddikesyre, blandingen blev gjort sur med fortyndet saltsyre, og der tilsattes 5° ml vand. Det således fremkomne olieagtige bundfald blev ekstraheret med 2 x 25 ml ether, ether-ekstrakterne blev vasket med vand indtil neutral reaktion, blev tørret og inddampet i vakuum, hvorved man fik den ønskede forbindelse som et farveløst skum.

Præparation 6 3-Epi-l6-deacetoxy-l6a-brom-24.2 5-dihvdrofusidinsvrens acetoxvmethvl-ester

Denne forbindelse blev fremstillet ved at følge den i præparation 5 beskrevne fremgangsmåde, idet man erstattede 3»H-diketo--l6-deacetoxy-l6a-bromfusidinsyrens acetoxymethylester med 3,11--diketo-l6-deacetoxy-l6a-brom-24,25-dihydrofusidinsyrens acetoxymethylester.

NMR-spektret (CDCl^) udviser signaler ved <f = 0,77 (s, 3H; CH^-18), 0,87 (d, J=6, 6H; CH3-26 og CH^-27) , 0,95 (d, J=6, 3H; CH^O), 1,01 (s, 3H; CH3-19), 1,42 (s, 3H; CH.j-32) , 2,12 (s, 3«; COCH^, 3,10 (b, IH; CH-3), 3,42 (bm, IH; CH-13), 4,37 (bm, IH; CH-ll), 5,62 (bt, IH; CH-16), og 5,83 og 5,92 (dd, J=6, 2H; 0CH20) ppm. Tetramethylsilan blev anvendt som intern reference.

Præparation 7-12 3-Q-Mesyl- og 3-0-tosylderivater af acetoxymethylestrene af l6--deacetoxy-l6<x-bromfusidinsyre, 3-epi-l6-deacetoxy-l6g-bromfusidin-syre og deres tilsvarende 24.25-dihydroanaloger

Generel procedures Til en omrørt opløsning af udgangsmaterialet (10 mmol; = H,a-0H eller Η,β-0Η i nedenstående formel) i kO ml methylenchlorid-pyridin Isl blev der dråbevis ved -15°C sat en 2 M opløsning af methansulfonyl- eller p-toluensulfonylchlorid i 15 ml methylenchlorid. Blandingen blev omrørt ved -15°C i én time og derefter henstillet i køleskab natten over. Til blandingen blev der sat 30 ml isvand, og efter omrøring i 30 minutter blev den organiske fase fraskilt. Den vandige fase blev ekstraheret med 2 x 4θ ml ether, og de kombinerede organiske ekstrakter blev vasket med 2 N saltsyre, efterfulgt af 0,5 M vandig natriumbicarbonat og vand, de tørredes og inddampedes i vakuum, hvorved man fik den 11 148390 ønskede forbindelse som et skum.

De ifølge ovenstående fremgangsmåde fremstillede forbindelser er anført i tabel I nedenfor:

Tabel I: — ' Ϊ

I..C00CH OCOCH

m"'CA"sr

Resulterende forbindelse

Eks. „1 C-24,25 Smeltepunkt NMR (CDC1 ),chemical shift “ binding (°C) 3 7 H,a-0S02CH3 dobbelt 115-116 <f=3,04(s, 3H; OSC^CH^) og . 4,85(m,IH; CH-3) ppm 8 H,p-0S02CH3 dobbelt amorf ^=3,02(s,3H; OSOgCH^) og 4,20(b,IH; CH-3) ppm 9 H,a-0S02CH3 enkelt amorf </=3,00(s,3H; OSOgCJ^) og 4,78(m,IH; CH-3) ppm 10 H,p-0S02CH3 enkelt amorf =3,03( s, 3H; OSOgC^) og 4,18(b,IH; CH-3) ppm 11 Η,α-OSO ^0)-CH dobbelt amorf (f=2,47 (s, 3H; arom. CH ) , W J 4,70(m,lH; CH-3), 7,37 Og 7,87 (2d, J=8, 4H; arom. CH) ppm 12 Η,β-OSO -/0\-CH enkelt amorf <f=2,45(s , 3H; arom. CH ) , 3 4,12(b,IH; CH-3), 3 7,35 og 7,83 (2d, J=8, 4H; arom. CH) ppm -----—--_i

Præparation 13 3-Deoxy-l6-deacetoxy-3a,l6q-dibromfusidinsyrens acetoxymethylester

Til en opløsning af 1,22 g 3-epi-l6-deacetoxy-l6a-bromfusidin-syrens acetoxymethylester (2 mmol) og 1,18 g trifenylfosfin (4,5 mmol) 12 U8390 i 25 ml tør ether blev der sat 1,33 S tetrabrommethan (4 mmol), og blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 18 timer. Udfældet tri-fenylfosfinoxyd blev frafiltreret, vasket med tør ether, og filtratet blev inddampet i vakuum. Den således fremkomne olieagtige remanens blev renset ved tør kolonnekromatografi på silicagel (ethyl-acetat-petroleumether 1:9), hvorved man fik den ønskede forbindelse som et farveløst skum.

Præparation 14 3-Deoxy-l6-deacetoxv-3oc. l6q-dibrom-24,2 5-dihvdrofusidinsvrens acetoxymethylester

Denne forbindelse opnåedes ved i fremgangsmåden ifølge præparation 13 at erstatte 3-epi-l6-deacetoxy-l6a-bromfusidinsyrens acetoxymethylester med 3-epi-l6-deacetoxy-l6oC-brom-24,25-dihydro-fusidinsyrens acetoxymethylester.

Opfindelsen skal yderligere beskrives ved hjælp af nogle eksempler.

Eksempel 1 l6-Peacetoxy-l6B-(acetvlthio)-fusidinsvre A. l6-Deacetoxy-l6B-(acetylthio)fusidinsvrens acetoxymethylester Til en opløsning af 4,88 g l6-deacetoxy-l6a-bromfusidinsyrens acetoxymethylester (8 mmol) i 50 ml dimethylformamid blev der sat 1,47 g kaliumthioacetat (l2 mmol), og blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 20 timer. Efter fortynding med 200 ml ether blev reaktionsblandingen vasket med 2 x 50 ml og 4 x 25 ml vand, og den organiske fase blev tørret og inddampet i vakuum, hvorved man fik 4,8 g af den ønskede forbindelse som et farveløst skum.

B. l6-Peacetoxy-l63-(acetylthio)fusidinsyre 2,22 g kaliumkarbonat (l6 mmol) blev sat til en iskold opløsning af 4,8 g af den ovenfor fremstillede l6-deacetoxy-l6p-(acetylthio) fusidinsyres acetoxymethylester (ca. 8 mmol) i 80 ml methanol, og blandingen blev omrørt ved 0-5°C i 20 minutter. Reaktionsblandingen blev hældt i ca. 250 ml isvand, gjort sur med 4 N saltsyre, og det således fremkomne olieagtige bundfald blev ekstraheret med 2 x 100 ml ether. De kombinerede etherekstrakter blev vasket med vand indtil neutral reaktion, blev tørret og inddampet i vakuum. Den resulterende amorfe remanens krystalliserede fra diisopropylether, hvorved man fik 3,22 g l6-deacetoxy-l6p-(acetylthio)fusidinsyre med smeltepunkt 208-210°C. To omkrystallisationer fra methanol-diisopropylether gav den analytisk rene forbindelse med smeltepunkt: 213-2l4°C.

13 140390

Eksempel 2 l6-Deacetoxy-l6B-(benzoylthio)fusidinsyre A. 3-0-Formvl-l6-deacetoxy-l6B-(benzoylthio)fusidinsyrens benzoyloxymethylester

Ved at følge den i eksempel 1A beskrevne fremgangsmåde, idet man erstatter l6-deacetoxy-l6a-bromfusidinsyrens acetoxymethylester med 3-0-formyl-l6-deacetoxy-l6a-bromfusidinsyrens benzoyloxymethylester og kaliumthioacetatet med kaliumthiobenzoat fik man 3-O-f'ormyl--l6-deacetoxy-l6p-(benzoylthio)fusidinsyrens benzoyloxymethylester med smeltepunkt: 102-104°C.

B. l6-Deacetoxy-l6B-(benzoylthio)fusidinsyre

Til en suspension af 9»84 g af 3-0-formyl-l6-deacetoxy-l6p--(benzoylthio)fusidinsyrens benzoyloxymethylester (13 mmol) i 260 ml methanol blev der sat 3»64 g kaliumcarbonat (26 mmol), og blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i to timer. Den således fremkomne klare opløsning blev fortyndet med 750 ml ether, der tilsattes 25Ο ml vand, og den omrørte blanding blev gjort sur med 4 N saltsyre. Den organiske fase blev fraskilt, og den vandige fase blev igen ekstraheret med 100 ml ether. De kombinerede organiske ekstrakter blev vasket med vand indtil neutral reaktion, blev tørret, og inddampet i vakuum. Den således fremkomne amorfe remanens krystalliserede fra diisopropylether, hvorved man fik 6,36 g l6-deacetoxy-l6p-(benzo-ylthio)fusidinsyre, som havde et smeltepunktsinterval på l60-172°C. Omkrystallisation fra methanol-diisopropylether gav den analytisk rene forbindelse, hvis smeltepunkt stadig var udefineret.

Eksempel 3 l6-Deacetoxy-l6B-acetylthio-24.2 5-dihydrofusidinsyre A. 3-0-Formyl-l6-deacetoxy-l63-acetylthio-24.2 5-dihydrofusidin syrens acetoxymethylester

Til en opløsning af 31»98 g af 3-0-formyl-l6-deacetoxy-l6o--brom-24,25-dihydrofusidinsyrens acetoxymethylester (50 mmol) i 200 ml dimethylformamid blev der sat 8,55 S kaliumthioacetat (75 mmol), og blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 18 timer. Efter fortyndingen med 800 ml ether blev .blandingen vasket med 2 x 200 ml og 4 x 100 ml vand, og det organiske lag blev tørret og inddampet til et rumfang på ca. 150 ml ved formindsket tryk. Det farveløse, krystallinske produkt, som udskiltes, blev henstillet i køleskab i 2 timer og derefter frafiltreret, vasket med ether og tørret, hvor- ik 148390 ved man fik 21,50 S af den ønskede forbindelse med smeltepunkts l66-l68°C. Efter fortynding af moderluden med 75 ml diisopropylether og inddampning til ca. 50 ml fik man et yderligere udbytte af krystallinsk produkt. Krystallerne blev opsamlet, vasket med diisopropylether og tørret, hvorved man fik 5>24 g af 3-0-formyl-l6-deacetoxy--16p~acetylthio-24,25-dihydrofusidinsyrens acetoxymethylester med smeltepunkt: l64-l66°C.

B. l6-Deacetoxy-l6B-acetylthio-24.25-dihydrofusidinsyre

Til en suspension af 25,4 g af 3-0-formyl-l6-deacetoxy-l6p--acetylthio-24,25-dihydrofusidinsyrens acetoxymethylester (40 mmol) i 200 ml methanol blev der sat 4 N saltsyre, og blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 24 timer. Den således fremkomne klare opløsning blev hældt i 600 ml vand, og det resulterende olieagtige bundfald blev ekstraheret med 2 x 200 ml ether. De kombinerede ether-ekstrakter blev vasket med vand indtil neutral reaktion, blev tørret og inddampet til ca. 50 ml. Der tilsattes 200 ml diisopropylether, og efter yderligere inddampning til ca. 150 ml begyndte et farveløst produkt at udkrystallisere. Blandingen fik lov at henstå ved stuetemperatur i to timer, og krystallerne blev frafiltreret, vasket med diisopropylether og tørret, hvorved man fik 19,64 g l6-deacetoxy-l6p~ -acetylthio-24,25-dihydrofusidinsyre med smeltepunkt 189-191°C. To omkrystallisationer fra methanol-diisopropylether gav en analytisk prøve med smeltepunkt 193-194 C.

Eksempel 4 l6-Deacetoxy-l6S-benzoylthio-24,25-dihydrofusidinsyre A. l6-Deacetoxy-l6B-benzoylthio-24,25-dihydrofusidinsyrens acetoxymethylester

Ved i fremgangsmåden ifølge eksempel 1A at erstatte l6-deacet-oxy-l6a-bromfusidinsyrens acetoxymethylester med l6-deacetoxy-l6a--brom-24,25-dihydrofusidinsyrens acetoxymethylester og ved at anvende kaliumthiobenzoat i stedet for det tilsvarende thioacetat fik man l6-deacetoxy-l6(3-benzoylthio-24,25-dihydrofusidinsyrens acetoxymethylester.

B. l6-Deacetoxy-163—benzoylthio-24.2 5-dihydrofusidinsyre

Ved at følge den i eksempel IB beskrevne fremgangsmåde, idet man erstatter l6-deacetoxy-l63-(acetylthio)fusidinsyrens acetoxymethylester med l6-deacetoxy-l6p-benzoylthio-24,25-dihydrofusidinsyrens acetoxymethylester fik man l6-deacetoxy-l6p-benzoylthio-24,25--dihydrofusidinsyre med et smeltepunktsinterval på l65-175°C.

1I5 148390

Id

Eksempel 5-8 3-Keto-l6-deacetoxv-l6e-(acetylthio)fusidinsvre ll-keto-l6-deacetoxv--ΐ6β-(acetylthio)fusidinsvre og deres tilsvarende 24,25-dihydroderivater A. Ved i fremgangsmåden ifølge eksempel JA at erstatte S-O-formyl--l6-deacetoxy-l6a-brom-24,25-dihydrofusidinsyrens acetoxymethylester med acetoxymethylestrene af henholdsvis 3-keto-l6-deacetoxy-l6a--bromfusidinsyre, 3-O-formyl-ll-keto-l6-deacetoxy-l6a-bromfusidin-syre og deres tilsvarende 24,25-dihydroderivater fik man de i tabel II nedenfor nævnte l6p-acetylthioestre.

B. Ved at følge den i eksempel 3B beskrevne fremgangsmåde, idet man erstatter acetoxymethylestren af 3-0-formyl-l6-deacetoxy-l6p--acetylthio-24,25-dihy±rofusidinsyre med de i tabel X angivne ΐ6β-acetylthioestre, fik man de i tabel II anførte l6p-acetylthiosyrer.

Tabel II: S>ji|25 J'24

[ COOR

i1 !

Resulterende forbindelse

Eks. _1 n2 C-24,25 0 .. /O v Q Q R binding Smeltepunkt ( c) 5A 0 H, oc-OH CH^OCOCH^ dobbelt 1^3-144 6a O Η,α-ΟΗ CH2OCOCH3 enkelt 146-147 7A Η,α-OCHO O CHgOCOCH^ dobbelt 136-137 8A Η,α-OCHO O CH2OCOCH3 enkelt 167-168 5B O Η,α-ΟΗ H dobbelt amorf 6b O Η,α-ΟΗ H enkelt amorf 7B Η,α-ΟΗ O H dobbelt 193-194 8B Η,α-ΟΗ O H enkelt 196-197 16 148390

Eksempel 5 B

NMR-spektret (CDCl^) udviser signaler ved δ = 0,92 (s, 3H; CH^-l8), 1,00 (d, J=7, 3H; CH3-30), 1,13 (s, 3H; CI^-9), 1,29 (s, 3H; CH -32), 1,58 og 1,64 (2 bs, 6H; CI^-26 og 0^-2?), 2,25 (s, 3H; SCOCH,^) , 3,08 (m, IH} CH-13), 4,38 (m, IH; CH-ll), 5,10 (m, IH; CH-24) og 5.13 (d, J=8; CH-l6) ppm. Tetramethylsilan anvendtes som intern reference.

Eksempel 6 B

NMR-spektret (CDC13) udviser signaler ved δ = 0,87 (d, J=5,5, 6H; CH3-26 og CH3-27), 0,90 (s, 3H; CH.j-18) , 1,00 (d, J=7, 3H; CH3-30), 1,15 (s, 3H; CH3-Q), 1,30 (s, 3H; CI^-32) , 2,27 (s, 3H; SCOCH^ , 3,10 (m, IH; CH-13), 4,39 (m, IH; CH-ll), 5,12 (m, IH; CH-24) og 5.14 (d, J=8, IH; CH-l6) ppm. Tetramethylsilan anvendtes som intern reference.

Eksempel 9-12 3-Keto-l6-deacetoxy-l6B-(benzoylthio)fusidinsyre, ll-keto-l6-deacet-oxy-l6B-(benzoylthio)fusidinsyre og deres tilsvarende 24,25-dihydro-derivater A. Ved at følge den i eksempel 3A beskrevne fremgangsmåde, idet man erstatter acetoxymethylestren af 3-0-formyl-l6—deacetoxy-l6cc--brom-24,25-dihydrofusidinsyre med acetoxymethylestrene af henholdsvis 3-keto-l6-deacetoxy-l6a-bromfusidinsyre, 3-0-formyl-ll-keto-l6-deacet-oxy-l6a-bromfusidinsyre og deres tilsvarende 24,25-dihydroderivater og thioacetatet med kaliumthiobenzoat fik man de i tabel III nedenfor angivne l6p-benzoylthioestre, B. Ved i fremgangsmåden ifølge eksempel-3B at erstatte acetoxymethylestren af 3—0-formyl—l6-deacetoxy-l6p~acetylthio-24,25-dihydro-fusidinsyre med de i tabel III viste l6p-benzoylthioestre fik man de i tabel III anførte ΐββ-benzoylthiosyrer.

Tabel III; se næste side I noOR '

✓V. 3 , i wJ

Q

17 148390

Resulterende forbindelse

Eks< „1 2 C-24,25 Smeltepunkt Q Q R binding (°C) 9A 0 Η,α-ΟΗ CH2OCOCH^ dobbelt amorf 10A O Η,α-ΟΗ CH^COCH^ enkelt amorf 11A Η,α-OCHO O CH^OCOCH^ dobbelt amorf 12A Η,α-OCHO O CHgOCOCH^ enkelt amorf 9B O Η,α-ΟΗ H dobbelt 227-228 10B 0 Η,α-ΟΗ H enkelt 198-199 11B Η,α-ΟΗ O H dobbelt 220-222 12B Η,α-ΟΗ 0 H enkelt 216-218

Eksempel 13-l6 3,11-Diketo-l6-deacetoxy-l63-(acetylthio)fusidinsyre. 3-epi-l6-deacet-οχγ-ΐ6β-(acetylthio)fusidinsyre og deres tilsvarende 24.25-dihvdro-derivater A. Ved i fremgangsmåden ifølge eksempel 1A at erstatte l6-deacet-oxy-l6a-bromfusidinsyrens acetoxymethylester med acetoxymethylestrene af henholdsvis 35Il-diketo-l6-deacetoxy-l6a-bromfusidinsyre, 3-epi--l6-deacetoxy-l6a-bromfusidinsyre og deres tilsvarende 2k,25-dihydro-derivater fik man de i tabel IV nedenfor viste l6p-acetylthioestre.

B. Ved at følge den i eksempel IB angivne fremgangsmåde, idet man erstatter l6-deacetoxy-l6p-(acetylthio)fusidinsyrens acetoxymethylester med de i tabel IV angivne lép-acetylthioestre, fik man de i tabel IV anførte l6p-acetylthiosyrer.

Tabel IV: ''V25

Se næste side J'24

L/COOR

Q . || -ch3 Q = is 148390

Resulterende forbindelse

Eks. 1 ~2 C-24,25 - ,+ - a /θ„\ Q Q R binding SmeltePunkt ( c) 13A 0 0 CH2OCOCH3 dobbelt amorf 14A Η,β-ΟΗ Η,α-ΟΗ CH2OCOCH3 dobbelt 154-156 15A 0 0 CHgOCOCH^ enkelt amorf . 16a Η,β-ΟΗ Η,α-ΟΗ CHgOCOCH^ enkelt 177-179 13B O O H dobbelt 200-202 l4B Η,β-ΟΗ Η,α-ΟΗ H dobbelt amorf 15B O O H enkelt 220-222 16b Η,β-ΟΗ Η,α-ΟΗ H enkelt amorf

Eksempel l4B

NMR-spektret (CDCl^) udviser signaler ved δ = 0,92 (s, 3H; CH^-18), 1,00 (s, 3H; CH3-9), 1,32 (s, 3H; CH.j-32), 1,60 og 1,67 (2 bs, 6H; CH3-26 og CH3-27), 2,28 (s, 3H; SCOCl^) , 3,08 (bm, 2H; CH-3 og CH-13), 4,33 (m, IH; CH-ll), 5,02 (d, J=8, IH; CH-l6) og 5,08 (m, IH; CH-24) ppm, Tetramethylsilan anvendtes som intern reference.

Eksempel I6B

NMR-spektret (CDC13) udviser signaler ved δ = 0,88 (d, J=5»5, 6H; CH3-26 og CH3-27), 0,92 (s, 3H; C^-18), 0,99 (s, 3H; CI^-9) , 1,33 (s, 3H; CH3-32), 2,27 (s, 3H; SCOCH^ , 3,06 (bm, 2H; CIJ3 og CH-13), 4,32 (m, IH; CH-ll) og 5,03 (d, J=3, IH; CH-l6) ppm. Tetramethyl-silan anvendtes som intern reference.

Eksempel 17-20 3-0-Mesylderivater af l6-deacetoxy-l6B-(acetylthio)fusidinsyre. 3-epi-l6-deacetoxy-l63-(acetylthio)fusidinsyre og deres tilsvarende 24.25-dihydroforbindelser A. Ved at følge den i eksempel 1A beskrevne fremgangsmåde, idet man erstatter l6-deacetoxy-l6a-bromfusidinsyrens acetoxymethylester med acetoxymethylestrene af henholdsvis 3-0-mesyl-l6-deacetoxy~l6a--bromfusidinsyre, 3-epi-0-mesyl-l6-deacetoxy-l6a-bromfusidinsyre og deres tilsvarende 24,25-dihydroderivater, og ved at formindske reaktionstiden fra 20 timer til 4-8 timer, fik man de i tabel V nedenfor anførte ΐόβ^οβΐνΙΐϊιϊοθΞΐΓβ.

19 148380 B. Ved i fremgangsmåden ifølge eksempel IB at erstatte l6p-deacet- οχγ-ΐ6β-(acetylthio)fusidinsyrens acetoxymethylester med de i tabel V anførte l6p-&cetylthioestre, fik man de i tabel V anførte ΐ6β--acetylthiosyrer.

Tabel V: JS

L^COOR

Resulterende forbindelse

* R Sining (°Q

17A Η,α-OSO CH CH OCOCH dobbelt 106-108

^ ^ 4. J

18A H^-0S02CH3 CH2OCOCH3 dobbelt amorf 19A H,«-0S02CH3 CH2OCOCH3 enkelt 110-112 2 OA Η,β-ΟβΟ^Η^ CH2OCOCH3 enkelt amorf 17B Η,α-OSO CH H dobbelt amorf

G, J

18B H,p-0S02CH3 H dobbelt 153-154 19B H,a-0S02CH^ H enkelt amorf 20B H^-0S02CH3 H enkelt 150-151

Eksempel 17B

NMR-spektret (CDCl^) udviser signaler ved δ = 0,90 (s, 3H; CH^-18), 0,97 (s, 3H; CH3-9), 1,59 og 1,66 (2 bs, 6H; Cg3-26 og CH3-27), 2,26 (s, 3H; SC0CH3), 3,00 (s, 3H; 0S0,,CH3) , 3,05 (m, IH; CH-13), 4,33 (m, IH; CH-ll), 4,76 (m, IH; CH-3), 5,10 (m, IH, CH-24) og 5,13 (d, J=8, IH; CH-16) ppm, Tetramethylsilan anvendtes som intern reference.

Eksepel 19B

NMR-spektret (CDC13) udviser signaler ved δ = 0,86 (d, J=5>5, 6H; CH3-26 og CH3-27), 0,90 (s, 3H; CH3-18), 0,98 (s, 3H; CH.j-19), 2,27 (s, 3H; SC0CH3), 3,00 (s, 3H; OSO^I^) , 3,06 (m, IH; CH-13), 4,31 (m, IH; CH-ll), 4,78 (m, IH; CH-3) og 5,12 (s, J=8, IH; CH-l6) ppm. Tetramethylsilan anvendtes som intern refernce.

20 148390

Eksempel 21-24 3-Bromderivater af 3-deoxy-l6-deacetoxy-l63-(acetylthio)fusid±nsyre og dens 24. 25-dihydroforbindelser A. Ved at følge den i eksempel 1A beskrevne fremgangsmåde, idet man erstatter l6-deacetoxy-l6a-bromfusidinsyrens acetoxymethylester med acetoxymethylestrene af henholdsvis 3-deoxy-l6-deacetoxy-3oc, l6a--dibromfusidinsyre, 3-deoxy-l6-deacetoxy-3P , l6a-dibromfusidinsyre og deres tilsvarende 24,25-dihydroderivater, og ved at formindske reaktionstiden fra 20 timer til 4-8 timer, fik man de i tabel VI nedenfor angivne l6p-acetylthioestre.

B. Ved at erstatte l6-deacetoxy-l6p-(acetylthio)-fusidinsyrens acetoxymethylester i den i eksempel IB beskrevne fremgangsmåde med de i tabel VI viste l6p-acetylthioestre fik man de i tabel VI beskrevne l6p-acetylthiosyrer.

Tabel VI; /*' 24

IXOOR

S-CO-CH^

Resulterende forbindelse Q1 R binding Smeltepunkt (°C) 21A H,p-Br CH^OCOCH^ dobbelt amorf 22A H,p-Br CH^OCOCH^ enkelt amorf 23A Η,α-Br CH^OCOCH^ dobbelt amorf 24a Η,α-Br CH2OCOCH3 enkelt amorf 21B H,p-Br H dobbelt 183-184 22B H,p-Br H enkelt 179-180 23B Η,α-Br H dobbelt 172-174 24b Η,α-Br H enkelt 189-191 2i 148390

Eksempel 25 3-Deoxy-33-brom-l6-deacetoxy-l6B-(acetylthio)fusidinsyre A. 3-Deoxv-3B-brom-l6-deacetoxy-l6B-(acetylthio)fusidinsyrens acetoxymethylester

Fenyl-N,N-dimethylformimidat-bromid blev fremstillet ved dråbevis tilsætning af 6,5 ml fenylchlorformiat (50 mmol) til en omrørt opløsning af 5»l4 S natriumbromid (50 mmol) i dimethylformamid o ved 0-5 C. Der udfældedes natriumklorid, og den resulterende suspension blev omrørt ved 0-5°C i 4 timer og derefter ved stuetemperatur o natten over. Blandingen blev afkølet til 0 C, og der tilsattes 6,07 S af l6-deacetoxy-l63-(acetylthio)fusidinsyrens acetoxymethylester (lO mmol) under omrøring. Efter omrøring ved 0-5°C i 4 timer fik blandingen lov at henstå ved stuetemperatur i yderligere 4 dage. Ved fortynding af den omrørte reaktionsblanding med 75 ml methanol-vand 1:1 udfældedes et olieagtigt produkt, som vaskedes gentagne gange ved dekantering med methanol-vand 1:1, og produktet blev optaget i ether, tørret og inddampet i vakuum. Den således fremkomne amorfe remanens blev renset ved tør kolonnekromatografi på silicagel (petro-leumether-ethylacetat 85rl5), hvilket gav den ønskede forbindelse som et farveløst skum.

B. 3-Deoxv-3S-brom-l6-deacetoxy-l63-(acetylthio)fusidinsyre Til en iskold opløsning af 2,67 g af den ovennævnte ester (4 mmol) i 40 ml methanol blev der sat 0,56 g kaliumkarbonat (4 mmol), og blandingen blev omrørt ved 0°C i 20 minutter. Efter tilsætning af 120 ml ether og 80 ml vand blev den omrørte blanding gjort sur med fortyndet saltsyre, og den organiske fase blev fraskilt. Den vandige fase blev genekstraheret med 40 ml ether, og de kombinerede organiske faser blev vasket med 4x25 ml vand, tørret og inddampet i vakuum. Den resulterende amorfe remanens krystalliserede fra ether--petroleumether, hvorved man fik 3-deoxy-3P-brom-l6-deacetoxy-l6p--(acetylthio)fusidinsyre med smeltepunkt: 182-184°C.

Eksempel 26 3-Deoxy-3B-brom-l6-deacetoxy-l6B-acetylthio-24.25-dihydrofusidinsyre Ved at følge den i eksempel 25 beskrevne fremgangsmåde, idet man erstatter acetoxymethylestren af l6-deacetoxy-l6p-(acetylthio)-fusidinsyre med acetoxymethylestren af l6-deacetoxy-l6(3-acetylthio--24,25-dihydrofusidinsyre, fik man den ønskede forbindelse med smeltepunkt: 178-180°C.

22 148390

Eksempel g7 3-Deoxy-3B-azido-l6-deacetoxy-l63-( acetyl thio) fusidinsyre A. 3-Deoxy-3B-azido-l6-deacetoxy-l6B-(acetylthio)fusidlnsyrens acetoxymethylester

En opløsning af 2,32 g af 3-0-mesyl-l6-deacetoxy-l6p-(acetyl-thio)fusidinsyrens acetoxymethylester (3,4 mmol) og. 0,33 g lithium-azid (6,8 mmol) i 20 ml dimethylformamid blev omrørt ved stuetemperatur i 48 timer. Blandingen blev fortyndet med 80 ml ether og vasket med 4 x 20 ml vand, og den organiske fase blev tørret og inddampet i vakuum, hvorved man fik den ønskede forbindelse som et farveløst skum.

IR-spektret (KBr) udviser et kraftigt bånd ved V = 2100 cm"·*- (N^) .

B. 3-Deoxy-3B-azido-l6-deacetoxy-l63- (acetyl thioΊ fusidinsvre Til en opløsning af 2,14 g af den amorfe acetoxymethylester af 3-deoxy-3P-azido-l6-deacetoxy-l6p-(acetylthio)fusidinsyre (rså 3,4 mmol) i 34 ml methanol blev der ved 0°C sat 0,94 g kaliumkarbonat (6,8 mmol), og blandingen blev omrørt ved den lave temperatur i 20 minutter. Efter tilsætning af 100 ml vand og efter at have gjort sur med 4 N saltsyre blev det således dannede olieagtige bundfald ekstraheret med 2 x 50 ml ether. De kombinerede etherekstrakter blev vasket med vand indtil neutral reaktion og blev tørret og inddampet i vakuum. Den resulterende amorfe remanens blev renset ved tør kolonnekromatografi på silicagel (ether-petroleumether-eddike-syre 50:50:0,5), hvorved man fik den ønskede forbindelse som et farveløst skum, der krystalliserede fra diisopropylether med smeltepunkt: 185-187°C.

Eksempel 28-34 33-Substituerede derivater af 3-deoxy-l6-deacetoxy-l63-(acetylthio)--fusidinsyre og dens tilsvarende 24.25-dihydroforbindelse A. Ved at omsætte 3-0-mesyl-l6-deacetoxy-l6p-(acetylthio)fusidin-syrens acetoxymethylester eller dens 24,25-dihydroderivat med de i tabel VII anførte nukleofile midler og ved at anvende samme fremgangsmåde som beskrevet i eksempel 27A fik man de i tabel VII nedenfor anførte 3P-substituerede estre.

B. Ved at følge den i eksempel 27B beskrevne fremgangsmåde, idet man erstatter acetoxymethylestren af 3-deoxy-3p-azido-l6-deacetoxy--ΐ6β-(acetylthio)fusidinsyre med de i tabel VII viste 3P-substitue-rede estre, fik man de i tabel VII viste 3P-substituerede syrer.

Table VII : 23 143390

l^XOOR

H0X^A/ °“C0“CH3 z

Resulterende forbindelse

Eks. Nukleofilt middel D C-24,25 Smeltepunkt binding (°C) 28A Lithiumazid N CH OCOCH enkelt 105-107

3 — J

29A Tetrabutylammonium- Cl CH OCOCH dobbelt amorf chlorid 30A Tetrabutylammonium- Cl CHpOCOCH- enkelt amorf chlorid.

31A Tetrabutylammonium- Br CH OCOCH dobbelt amorf bromid ^ 32A Tetrabutylammonium- Br CH 0C0CH_ enkelt amorf bromid 33A Natriumjodid 1 CH^OCOCH^ enkelt amorf 34a Lithiumnitrit NO^ CH^OCOCH^ enkelt amorf 28B N3 H enkelt 179-180 29B Cl H dobbelt 186-187 30B Cl H enkelt 202-203 3 IB Br H dobbelt 182-184 32B Br H enkelt 178-180 33B I H enkelt 180-181 34B N02 H enkelt 210-213 ; .,, · 2k 148390

Eksempel 35 3-Deoxv-3a-azido-l6-deacetoxv-l66-(acetvlthio)fusidinsvre A. 3-Deoxy- 3ct-azido-l6-deacetoxy-l6B-( acetyl thio ) fusldinsvrens acetoxvmethylester 1,50 g af 3-epi-0-mesyl-l6-deacetoxy-l6p-(acetylthio)fusidin-syrens acetoxymethylester (2,2 mmol) og 0,22 g lithiumazid (4,4 mmol) blev opløst 1 15 ml dimethylformamid, og den resulterende opløsning blev omrørt ved 50-55°C i 48 timer. Efter fortynding med 60 ml ether blev blandingen vasket med 4 x 15 ml vand, og den tilbageblevne organiske fase blev tørret og inddampet i vakuum. Den således fremkomne amorfe remanens blev renset ved tør kolonnekromatografi på silicagel (petroleumether-ethylacetat 85:15), hvorved man fik den ønskede forbindelse som et farveløst skum.

IR-spektret (KBr) udviser et kraftigt bånd ved ^ = 2100 cm ^ (N^).

B. 3-Deoxy-3«-azido-l6-deacetoxv-l6B-(acetylthio)fusidinsyre Til en iskold opløsning af 0,44 g af 3-deoxy-3a—azido-l6-dea- cetoxy-l6p-(acetylthio)fusidinsyrens acetoxymethylester (0,7 mmol) i 7 ml methanol blev der sat 0,19 g kaliumkarbonat (l,4 mmol), og bian-

O

dingen blev· omrørt ved 0 C i 20 minutter. Der tilsattes 35 ml vand og 0,8 ml 2 N saltsyre, og det dannede olieagtige bundfald blev ekstraheret med 2 x 25 ml ether. De kombinerede etherekstrakter blev vasket med vand indtil neutral reaktion, blev tørret og inddampet i vakuum, hvorved man fik den ønskede forbindelse, der krystalliserede fra ether-petroleumether.

NMR-spektret (CDCl^) udviser signaler ved ^ - 5,18 (d, J=8, IH; CH-16), 5,10 (m, IH; CH-24), 4,35 (m, IH; CH-ll), 3,70 (m, IH; CH-3), 3,15 (bm, IH; CH-13), 2,32 (s, 3H; COCI^), 1,67 og 1,60 (2 bs, 6H; CH3-26 og CH3-27), 1,38 (s, 3H; CH3-32), 0,98 (s, 3H; CH.j-9), og 0,92 (s, 3H; CH3-18) ppm.

Tetramethylsilan blev anvendt som intern reference.

Eksempel 36 3-Deoxv-3a-azido-l6-deacetoxy-l6S-acetylthio-24.25-dihvdrofusidinsyre A. 3-Deoxy-3a-azido-l6-deacetoxy-l6B-acetvlthio-24.2 5-dihydro- fusidinsyrens acetoxymethylester

Ved i fremgangsmåden ifølge eksempel 35A at erstatte 3-epi-0--mesyl-l6-deacetoxy-ΐδβ-(acetylthio)fusidinsyrens acetoxymethylester med acetoxymethylestren af 3-epi-0-mesyl-l6-deacetoxy-l6p-acetylthio--24,25-dihydrofusidinsyre fik man den ønskede forbindelse med et smeltepunkt på l65-l67°C.

25 148390 B. 3-Deoxy- 3oc-azido-l6-deacetoxv-l6B-acetylthio-2^. 2 ^-dihydro- fusidinsvre

Ved at følge den i eksempel 35B beskrevne fremgangsmåde, idet man erstatter 3-deoxy-3a-azido-l6-deacetoxy-l6p-(acetylthio)fusidin-syrens acetoxymethylester med 3-deoxy-3a-azido-l6-deacetoxy-l6p-acet-ylthio-24,25-dihydrofusidinsyrens acetoxymethylester, fik man den ønskede forbindelse med smeltepunkt: l63-l65°C.

Eksempel 37—38 3-Deoxy-3a-chlor-l6-deacetoxy-l66-(acetylthio)fusidinsyre og dens tilsvarende 2^.25-dihvdroderivat A. Ved at følge de i eksempel 35A og 36A beskrevne fremgangsmåder, idet man erstatter lithiumazid med tetrabutylammoniumchlorid, fik man de 3<x-chlorestre, som er vist i tabel VIII nedenfor.

B. Ved at erstatte acetoxymethylestren af 3-deoxy-3oc-azido-l6--deacetoxy-l6p-(acetylthio)fusidinsyre i den i eksempel 35B beskrevne fremgangsmåde med de i tabel VIII viste 3d-chlorestre fik map <je i tabel VIII anførte 3oc-chlorsyrer.

Tabel VIII: i

k^/COOR

H0^rrr“3

Resulterende forbindelse

Eksempel _ C-24,25 „ T, /o_v R binding Smeltepunkt ( C) 37A CH2OCOCH3 dobbelt amorf 38a CH OCOCH enkelt amorf 37B H dobbelt I83-I85 38b H enkelt 211-212 26 148390

Eksempel S9 Ί-Epi—0-tosvl-l6-deacetoxy-l6B-acetylthio-24.25- dilivdrofusidinsvre A. 3-Epi-0-.tosvl-l6-deacetoxv-l6B-acetylthio-24.25-dihvdro fusidin-syrens acetoxymethylester

Ved at følge den i eksempel 1A beskrevne fremgangsmåde, idet man erstatter acetoxymethylestren af l6-deacetoxy-l6ot-bromfusidin-syre med acetoxymethylestren af 3-epi-0-tosyl-l6-deacetoxy—l6a-brom--24,25-dihydrofusidinsyre fik man titelforbindelsen.

B. 3-Epi-0-tosyl-l6-deacetoxy-l6B-acetylthio-24.25-dihydrofusidin-syre

Ved at følge den i eksempel IB beskrevne fremgangsmåde, idet man erstatter acetoxymethylestren af l6-deacetoxy-l6p-(acetylthio)--fusidinsyre med acetoxymethylestren af 3-epi-0-tosyl-l6-deacetoxy--l6p-acetylthio-24,25-dihydrofusidinsyre fik man titelforbindelsen med smeltepunkt: 131-133°C.

Eksempel 40 l6-Deacetoxy-l6B-acetvlthio-24.2 5-dihydrofusidlnsyre A. l6-Deacetoxv-l6B-(acetylthio)fusidinsyrens benzvlester 0,69 g Kaliumthioacetat (6 mmol) blev sat til en opløsning af 2,51 g af l6-deacetoxy-l6a-bromfusidinsyrens benzylester i 20 ml dimethylformamid, og blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i l6 timer. Efter fortynding med 80 ml ether blev blandingen vasket med 4 x 20 ml vand, og den organiske fase blev tørret og inddampet ved formindsket tryk, hvorved man fik den ønskede forbindelse som et gulligt skum.

NMR-spektret (CDCl^) udviser signaler ved d = 7,35 (s, 5H; arom. CH), 5,10 (m, IH; CH-24), 5,03 (ABq, J=12, 2H; OCI^CgH^), 5,02 (d, J=8; CH-16), 4,41 (m, IH; CH-ll), 3,71 (m, IH; CH-3), 3,03 (bm, IH; CH-13), 2,22 (s, 3H; C0CH3), 1,65 og 1,53 (2 bs, 6H; C^-26 og CH3-27), 1,37 (s, 3H; CH3-32), 0,97 (s, 3H; CH3-19), 0,90 (s, 3H5 CH -18)-, og 0,89 (d, J=7, 3H; CH -30) f ppm.

Tetramethylsilan blev benyttet som intern reference.

B. l6-Deacetoxy-l6B-acetvlthio-24.25-dihydrofusidinsvre 0,4 g 10^έ Palladium-på-kulstof-katalysator blev sat til en opløsning af 1,25 g af den ovennævnte benzylester af l6-deacetoxy--l6p-(acetylthio)fusidinsyre (2 mmol) i 15 ml ethanol, og blandingen blev rystet i en hydrogenatmosfære. Efter at hydrogenforbruget var ophørt, blev katalysatoren frafiltreret og vasket med methanol. Det 27 143390 kombinerede filtrat og vaskevæsker blev inddampet i vakuum, og den resulterende remanens blev krystalliseret fra ether-diisopropylether, hvorved man fik den ønskede forbindelse med smeltepunkt: 191-193°^·

Eksempel hl-k2

Yderligere l6-deacetoxy-l6B-(acetylthio)fusidinsyrer

Generel procedure: Til en opløsning af 2,bh g af l6-deacetoxy--l6oc-bromfusidinsyrens acetoxymethylester mmol) i 25 ml dimethyl-formamid blev der sat et natrium- eller kaliumsalt af den tilsvarende thiolcarboxylsyre (6 mmol, se tabel IX), og blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 18 timer. Efter fortynding med 100 ml ethyl-acetat blev blandingen vasket med k x 25 ml vand, tørret og inddampet i vakuum. Den resulterende remanens blev opløst i h0 ml methanol, der tilsattes 1,12 g kaliumkarbonat (8 mmol), og blandingen blev omrørt ved 0-5°C i 20 minutter. Der tilsattes 120 ml vand til reaktionsblandingen, og efter at denne var gjort sur med fortyndet saltsyre, blev det således fremkomne olieagtige bundfald ekstraheret med 2 x 50 ml ethylacetat. De kombinerede organiske ekstrakter blev vasket med vand indtil neutral reaktion, blev tørret og inddampet i vakuum, hvorved man fik den ønskede forbindelse. Under anvendelse af ovennævnte fremgangsmåde fik man de i tabel IX anførte l6-deacetoxy-l6p-(acylthio)fusidinsyrer.

Tabel IX; i

i^/COOH

H0/-VS-CO-R HO'''' 5

Resulterende forbindelse

Eksempel Thiolcarboxylsyre -------------- —-- "1

R

4l Thiopropionsyre CH^CH^ b2 Thiosmørsyre CHgCH^CH^

Eksempel 4l 28 148390 NMR-spektret (CDCl^) udviser signaler ved δ = 0,98 (bm, 9H; CH^-18, CH3-9 Og CH3-30), 1,37 (s, 3H; CH.j-32), 1,08 (t, J=7, 3H; SCOCH2CH3), 1.60 og 1,68 (2 bs, 6Hj 0^-26 og 0^-27), 3,10 (m, 1H; CH-13), 3,79 (m, IH; CH-3), 4,35 (m, 1H; CH-ll), 5,12 (m, IH? CH-24) og 5,10 (d, J=7, 1H; CH-l6) ppm. Tetramethylsilan anvendtes som intern reference.

Eksempel 42 NMR-spektret (CDCl^ udviser signaler ved δ = 0,95 (bm, 9H; CH^lS), CH3-9 og CH3-30), 1,11 (bt, 3H; SC0CH2GH2CH3) , 1,39 (s, 3H} CH.j-32) , 1.61 og 1,69 (2 bs, 6H} CH3-26 og CH3-27), 3,10 (m, 1H; CH-13), 3,75 (m, 1H$ CH-3), 4,34 (m, 1H; CH-ll), 5,09 (m, IH; CH-24) og 5,10 (m, 1H; CH-16) ppm. Tetramethylsilan anvendtes som intern reference.

Eksempel 43-50

Kai-inm- og natriumsalte af et antal l6-deacetoxv-l6B-acylthiosvrer af formel I

Krystallinske kalium og/eller natriumsalte af forbindelserne beskrevet i eksemplerne 1-6 samt l6 blev fremstillet på følgende måde: Til en opløsning af den pågældende syre (lO mmol) i et passende, inert opløsningsmiddel (50 - 100 ml) blev der sat en 1 N opløsning af kalium- eller natrium-2-ethylhexanoat i 15 ml af samme opløsningsmiddel, og næsten omgående begyndte der at udfælde et krystallinsk produkt. Blandingen blev henstillet ved stuetemperatur i 2 timer, krystallerne blev frafiltreret, vasket med acetone, tørret, hvilket gav det rene kalium- eller natriumsalt af den ønskede forbindelse.

De ifølge denne metode fremstillede salte er anført i tabel X. Mikroanalyse, IR- og NMR-data for disse forbindelser er i overensstemmelse med deres struktur.

Alle IR-spektrene af disse salte (KBr) udviste to bånd ved 1540-1550 og 1630-1640 cm .

De tilsvarende syrer ville have udvist båndet ved ~>1700 cm Eksistencen af de to ovennævnte bånd og fravær af bånd ved 1700 cm 1 viser fremstillingen af de pågældende salte. Smeltepunkterne er ikke veldefinerede.

29 1A 8 3 9 O

Tabel X;

l^COOA

H0- /^JL^S-C-R1 1Αυ'/γ Ύ jj

Resulterende forbindelse anvendt Λ t\i -1-1. ......... — , . Syre beskrevet kS· „1 „1 0-24,25 »P^s"“es- i Eksempel O B A binding ”lddel 43 Η,α-ΟΗ CH^ K dobbelt acetone 1 44 Η,α-OH CgHj. Na dobbelt ether 2 45 Η,α-ΟΗ CH^ K enkelt acetone 3 46 Η,α-ΟΗ C^H_ Na enkelt ether 4 47 Η,α-ΟΗ CgH^ K enkelt ethylacetat 4 48 0 CH^ K dobbelt acetone 5 49 0 CH K enkelt acetone 6 3 50 Η,α-ΟΗ CH^ K enkelt acetone l6

Claims

30 148390 Analogifremgangsmåde til fremstilling af l6-deacetoxy-l6p--acylthiofusidinsyrederivater med den almene formel I ! 25 J24 L / COOR3 2 9 1 x «*[ w_j ,,χκίν ί Η bH3 i hvilken den punkterede linie mellem C-24 og C-25 indicerer, at dé pågældende C-atomer er forbundet med enten en dobbelt- eller en enkeltbinding, og i hvilken Q"*- repræsenterer oxygen eller en af grupperne z eller » hvor Z er en hydroxy gruppe, et halogenatom, en methylsulfonyloxy- eller tolylsulfonyloxygruppe,
2 H\ en azido- eller en nitrogruppe, Q er oxygen eller gruppen » og R·*· betyder en lige eller forgrenet alkylgruppe med fra 1 til 6 C-atomer, en fenylgruppe eller en heterocyklylgruppe med 5 eller 6 ringatomer og indeholdende nitrogen-, oxygen- og/eller svovlatomer, hvilke grupper om ønsket kan være monosubstitueret med halogen, nitro-, C^-C^-alkyl- eller C^C^-alkoxygrupper, og R3 betyder hydrogen eller en C^-Cg-alkanoyloxy-C^-C^-alkyl, phenyl-C^-Cg-alkanoyloxy-Cj^Cyalkyl-, benzoyl oxy-C ^-C alkyl, C^-Cg-alk-oxycarbonyloxy-C^-C^-alkyl-, C^-C^-laktonyl eller di-C^-Calkyl— amino-C^-C^-alkylgruppe, eller farmaceutisk acceptable salte deraf, kendetegnet ved, at en forbindelse af den almene formel XX omsættes med en forbindelse af den almene formel III til dannelse af, med inversion af konfigurationen ved C-l6, en forbindelse af deri almene formel IV: