DE69937562T2

DE69937562T2 - Verbessertes angereichertes blutplättchen wundheilmittel

Info

Publication number: DE69937562T2
Application number: DE69937562T
Authority: DE
Inventors: Charles E. Little Rock WORDEN
Original assignee: Cytomedix Inc
Current assignee: Cytomedix Inc
Priority date: 1998-06-22
Filing date: 1999-06-21
Publication date: 2008-10-23
Anticipated expiration: 2019-06-22
Also published as: AU2763099A; DE69937562D1; WO1999066797A1; US6303112B1; ES2297931T3; MXPA00000009A; ATE378060T1; BR9906477A; KR20010071577A

Description

HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Die hierin offenbarte Erfindung betrifft im Allgemeinen eine Stoffzusammensetzung, die zur Behandlung von Wunden verwendet wird, sowie ein Verfahren für ihre Herstellung.
Zur Behandlung von Wunden wurden in der Vergangenheit je nach Art, Ort und Schwere der Wunde viele verschiedene Substanzen und Verfahren entwickelt. Eine Wunde wird im Allgemeinen als eine Verletzung eines Bereichs des Körpers eines Menschen oder Tieres definiert. Eine Verletzung der Hautoberfläche ist zwar der bekannteste Wundentyp, aber die Oberfläche von inneren Organen kann ebenfalls verletzt werden, zum Beispiel bei einer Operation, einem Milz- oder Leberriss oder infolge traumatischer Schläge auf die Körperoberfläche in der Nähe eines inneren Organs.
In der medizinischen Praxis werden Wunden je nach ihrer Hartnäckigkeit und Schwere als chronisch oder akut bezeichnet. Eine chronische Wunde ist eine solche, die lang anhaltend oder langwierig ist, anstatt schnell zu heilen. Eine akute Wunde tritt relativ schnell auf und heilt auch relativ schnell wieder. Gewebewunden können eine breites Spektrum von Erscheinungsformen haben und so klein wie nur ein anormaler mikroskopisch kleiner Riss oder Spalt im Gewebe (oder einer Oberfläche davon) oder so groß wie eine Abrasion oder Ablation der Haut sein, die einen wesentlichen Teil des Körpers erfasst, wie zum Beispiel bei Brandopfern. Akute Wunden, die eine große oder bewegliche Oberfläche bedecken, sind gewöhnlich am schwierigsten vor Infektionen zu schützen und zu heilen.
Die hierin beschriebene Erfindung betrifft in erster Linie Substanzen, die topisch auf die Außenfläche chronischer Wunden aufgetragen werden, obschon die hierin beschriebene Erfindung auch in gewissem Maße zur Unterstützung der Heilung anderer Wunden wie akuter Wunden Anwendung findet. Die hierin beschriebene Stoffzusammensetzung ist besonders für das topische Aufbringen auf Brandwunden und chronische Läsionen wie Geschwüre an Füßen von Diabetikern geeignet. Die hierin beschriebenen Stoffzusammensetzungen und Verfahren sind jedoch nicht nur auf diese topische Anwendung begrenzt.
Die Wundheilung wird durch die Anwesenheit verschiedener im Blut und in Körperflüssigkeiten zu findenden Substanzen beeinflusst. Blut ist das Hauptmedium für die Zuführung von Heilmitteln zur Wundstelle und für den Abtransport fremder oder schädlicher Substanzen von der Wunde. Vollblut besteht in erster Linie aus drei Hauptarten von Zellen, die in einer proteinreichen Lösung suspendiert sind, die als Plasma bekannt ist.
Die drei Hauptzellarten von Vollblut sind Erythrozyten (alias rote Blutkörperchen), Leukozyten (alias weiße Blutkörperchen) und Thrombozyten (alias Blutplättchen). Die roten Blutkörperchen sind die eisenhaltigen Zellen, die den Transport und Transfer von Sauerstoff zum Körpergewebe und die Beseitigung von Kohlendioxid erleichtern. Die weißen Blutkörperchen erfüllen Funktionen wie die Phagozytose von Fremdkörpern und die Produktion von Antikörpern, die in erster Linie für die Bekämpfung von Infektionen und Fremdsubstanzen im Blut oder in der Wundstelle verantwortlich sind. Blutplättchen erfüllen viele Funktionen wie das Verstopfen undichter Stellen in Blutgefäßen und die Unterstützung der Einleitung des Prozesses, der zur Bildung eines Blutgerinnsels führt; Blutplättchen enthalten Substanzen, die als Wachstumsfaktoren bekannt sind, die die Bildung von neuem Gewebe unterstützen.
Es gibt zwar mehrere Verfahren zum Auftrennen von Vollblut in seine verschiedenen Komponenten, doch wird eines der praktischsten und schnellsten Verfahren durch differentielles Zentrifugieren von Blut oder einigen seiner Komponenten vollzogen (d. h. Apherese). Auf diese Weise können die roten und weißen Blutkörperchen und das Plasma herausgetrennt und dem Körper des Spenders oder Patienten wieder zugeführt werden, so dass die sequestrierten Blutplättchen in im Wesentlichen konzentrierter Form zur Verwendung in Wundheilungstechniken zurückbleiben. Die Blutplättchen können daher von Blut, das einem Patienten entnommen wird, gewonnen und zur Verwendung am selben Patienten aktiviert werden; Verfahren, bei denen patienteneigenes Blut verwendet wird, werden „autologe" oder „autogene" Spendeverfahren genannt. Verfahren, bei denen von einem oder mehreren Drittspendern gespendetes Blut für einen Patienten verwendet wird, werden „homologe" oder „heterologe" Spendeverfahren oder kollektiv „allogene" Verfahren genannt.
Eines der in Plasma suspendierten Proteine ist Fibrinogen, das mit Substanzen reagiert, die in Wundstellen freigegeben (oder von diesen angezogen) werden, um klebrige Fibrinstränge zu bilden. Solche Reaktionen resultieren in der Vernetzung der Stränge, so dass ein Geflecht entsteht, das die Ablagerung oder das Wachstum anderer Gewebematerialien an der Wundstelle festhält bzw. unterstützt.
Man geht davon aus, dass der Wundheilungsprozess für gewöhnlich in mehreren Stufen erfolgt, die allgemein als Heilungskaskade bekannt sind. Nach der Gewebeverletzung gehören Blutplättchen zu den ersten Zellen, die in der Nähe der Wunde auftreten. Die Aktivierung eines Blutplättchens durch einen Agonisten wie Thrombin oder andere Agonisten, wie solche, die anderswo hierin aufgeführt sind, führt zur Freisetzung von granulärem Material aus dem Inneren des Blutplättchens. Eine solche Granulationsaktivierung führt zur Freisetzung von Proteinen, die als Wachstumsfaktoren bekannt sind, die in erster Linie in den Alpha-Körnchen von Blutplättchen konzentriert sind. Diese freigesetzten Wachstumsfaktoren stimulieren die Bildung von neuem Gewebe; beim Auftragen auf Wunden erhöhen Wachstumsfaktoren bekanntlich die Geschwindigkeit von Kollagenablage, Gefäßeinwuchs, Fibroblastenproliferation und Gesamtheilung. Die Freisetzung eines Proteins, das als Blutplättchen-Wachstumsfaktor (PDGF) bekannt ist, ist eine Chemotaxis für Monozyten, Neutrophile und Fibroblasten in die Wunde, um die Entzündungsstufe des Heilungsprozesses zu starten. Während dieser Zeit scheiden Monozyten PDGF und ein anderes Blutplättchenprotein ab, das als von transformierten Zellen gebildeter Wachstumsfaktor-β1 bekannt ist, wodurch Fibroblasten, ein Vorläufer von Fibrinogen, rekrutiert und aktiviert werden, um die Reparaturphase des Heilungsprozesses zu starten. Anschließend setzt sich die Wundheilung über den Prozess der Kollagenremodellierung innerhalb der Wunde fort.
Durch die Anwesenheit von Wachstumsfaktoren wird die Wundheilung gefördert. Die hierin beschriebene Erfindung erhöht die Menge an Wachstumsfaktoren in der Wunde und trägt somit zur Förderung der Heilungsgeschwindigkeit bei. Dies kann vor allem bei „verwundeten" Patienten von Bedeutung sein, insbesondere bei solchen mit chronischen Wunden, denen es möglicherweise an einer ausreichenden Zirkulation mangelt, um die Heilungskaskade zu unterstützen. Die hierin beschriebene Erfindung erleichtert außerdem das Bedecken des Wundbereichs mit einer Substanz, die Infektionen, die von den meisten Bakterien verursacht werden, verhindert und reduzieren hilft; und insofern als das Wundbehandlungsmaterial aus autologem Blut oder ähnlichen biologischen Materialien besteht, reduziert die hierin beschriebene Erfindung die mit der Verwendung von Behandlungsmaterialien aus biologischen Materialien, die von einem oder mehreren Drittspendern erhalten werden, verbundenen Risiken. Ein autologes Produkt verhindert einige der Probleme, die gewöhnlich mit der Verwendung biologischer Materialien von Drittspendern verbunden sind, wie (zum Beispiel) das Screening zur Gewährleistung, dass der Spender mit dem Patienten biologisch oder immunologisch kompatibel und ansonsten frei von Hepatitis, HIV und dergleichen ist.
Auf der Basis der vorangehenden allgemeinen wissenschaftlichen Prinzipien sind in der Technik bereits Wundversiegelungsmittel aus biologischen Materialien bekannt, die vorwiegend von anderem Gewebe als Blutplättchen gewonnen werden. Zu Wundversiegelungsmitteln gehört zum Beispiel „Fibrinklebstoff", der oft im Wesentlichen ein Gemisch aus Co-Koagulationsmitteln (Thrombin und Calcium), konzentriertem Fibrinogen und anderen Koagulationsproteinen ist. In den meisten Anwendungsbereichen besteht die Hauptaufgabe von Fibrinklebstoff darin, Wundoberflächen zu versiegeln, um einen Verlust von Blut und anderen Körperflüssigkeiten nach einer Operation zu verhindern und um eine Adhäsion zwischen benachbarten Gewebeoberflächen zu erreichen. Diese Produkte bilden einen harten, gipsartigen Überzug auf dem zu versiegelnden Bereich und sind gegenüber einer Gliederbewegung gewöhnlich nicht nachgiebig.
Die Produktion von Fibrinklebstoff setzt oft die Gewinnung von Fibrinogen aus Blut über einen Prozess voraus, der als Kryopräzipitation bekannt ist, einschließlich sowohl Gefrier-Tau-Zyklen als auch eine relativ lang andauernde Zentrifugation von Plasma in kontrollierten Umgebungen, um das Fibrinogen in ausreichend großen Mengen zu konzentrieren, die für den Gebrauch erforderlich sind; der so gewonnene Präzipitant wird vor dem Aufbewahren auf –20° bis –30°C gefroren. Aufgrund dieser Voraussetzungen sind diese Materialien für eine Anwendung im Laufe einer Operation, vor allem einer Notoperation, ohne eine Vorlaufzeit von einer Stunde oder mehr ungeeignet; insofern als dieser Prozess von der Verwendung autologer biologischer Materialien abhängig ist, kann die Anwendung dieses Prozesses kurz vor oder während einer Operation ferner zu einem Verlust äußerst wichtiger Körperflüssigkeiten zu einem Zeitpunkt führen, da der Körper des Patienten solche Flüssigkeiten dringend benötigt. Im Gegensatz dazu können wesentlich größere Mengen konzentrierter Blutplättchen bequemer innerhalb von ein paar Minuten anhand neuerer Verfahren der differentiellen Blutzentrifugation gewonnen werden, die kein Gefrieren voraussetzen, ohne dass es zu einem bedeutenden Verlust von Körperflüssigkeiten kommt.
Bis heute wurde Fibrinklebstoff eingehend erforscht. Dies wird als ein separater Bereich zur vorliegenden Erfindung angesehen, in erster Linie deshalb, weil Fibrinklebstoffe typischerweise kryopräzipitierte Proteine ohne Blutplättchen enthalten. Die Verwendung von Fibrinklebstoff wird in der wissenschaftlichen Literatur ausführlich diskutiert (siehe z. B. die in dem am 17. Dezember 1996 an Antanavich et al. ausgestellten US-Patent Nr. 5,585,007 enthaltenen Quellenangaben).
Ein differentielles Zentrifugationsverfahren ermöglicht im Wesentlichen die Trennung des patienteneigenen Bluts in wenigstens drei verschiedene Komponenten: gepackte Erythrozyten (rote Blutkörperchen), Plasma und Blutplättchenkonzentrat. Blutplättchenkonzentrat kann oft mit einer Lösung aus Natrium oder Calcium vermischt mit Thrombin („kalzifiziertes Thrombin) kombiniert werden, um eine gelatinöse Zusammensetzung aus aktivierten Blutplättchen zu bilden, die, wenn sie mit der notwendigen Viskosität hergestellt wird, als ein Wundversiegelungsmittel verwendet werden kann. Solche Versiegelungsmittel erhärten typischerweise zu einer harten Masse, die den Applikationsort bedeckt, wodurch der Ort versiegelt wird. Der anfänglich klebrige, gelatinöse Zustand härtet gewöhnlich aus, um die folgenden Funktionen zu erfüllen: (1) Stoppen des Verlustes von Blut und anderen Körperflüssigkeiten, da es effektiv als Pflaster wirkt; (2) Versiegeln von Wunden gegen externe Kontaminanten und (3) Verhindern herkömmlicher Probleme in Verbindung mit dem bloßen Nähen von Wunden.
Wundheilungszusammensetzungen mit Blutplättchen haben gegenüber Materialien ohne Blutplättchen Vorteile. Ein Grund dafür ist, dass natürliche Wundheilmittel von den Blutplättchen freigesetzt werden. Ferner ermöglicht die Konzentration von Blutplättchen ebenso eine konzentrierte Menge von Wundheilungsfaktoren. Insofern als die Wundheilungszusammensetzung aus den biologischen Materialien des Patienten hergestellt wird, werden außerdem die Risiken in Verbindung mit heterologen Spendern (wie Krankheiten, immunologische Reaktionen oder dergleichen) ausgeschlossen.
Die Arbeiten im Hinblick auf den Bereich von autologem Blutplättchengel haben sich bisher auf die perioperative Blutbehandlung (hämostatischer Effekt) konzentriert – die Verhinderung eines Blutverlusts während oder sofort nach einer Operation. Normalerweise verliert ein Patient je nach Art der Operation auf dem Operationstisch große Mengen an Blut und anderen Körperflüssigkeiten. Zum Ausgleichen dieses Blutverlusts wird dem Patienten gewöhnlich Blut infundiert, das gewöhnlich von einem oder mehreren Drittspendern stammt (oder zuweilen vom Patienten in Erwartung eines Operationsbedarfs gespendet wird). Es gibt viele verschiedene Arten von Verfahren zum Sammeln von Blut, die normalerweise in dieser Situation angewendet werden.
Da offensichtlich ein erhöhtes Risiko für eine Erkrankung, immunologische Reaktion oder andere Komplikationen in Verbindung mit Verfahren besteht, die heterologe Blutspenden beinhalten, wurden in jüngster Zeit Anstrengungen im Hinblick auf die Verwendung von Blut unternommen, das von einem Patienten zeitgleich während einer Operation gewonnen wird. Dieses Blut kann fraktioniert und/oder filtriert und anschließend wieder in den Patienten infundiert werden, wodurch viel Zeit, viele Kosten und Körperflüssigkeiten gespart und die oben erörterten normalen Risiken vermieden werden.
Autologes Blutplättchengel wurde schwerpunktmäßig im Bereich der perioperativen Blutbehandlung eingesetzt. Die Verwendung von Blutplättchengel auf offenen Wunden infolge einer Operation war in letzter Zeit sehr erfolgreich. Durch diese spezielle Verwendung kann der Patient sein eigenes Blut behalten und es werden außerdem Kosten gesenkt.

Die folgenden Patente sind wohl mit der hierin offenbarten Erfindung verwandt:

Patent Nummer	Erfinder	Datum
5,733,545	Hood	31. März 1998
5,585,007	Antanavich, et al.	17. Dezember 1996
5,165,938	Knighton	24. November 1992
5,674,912	Martin	7. Oktober 1997

Die dort offenbarten Erfindungen unterscheiden sich jedoch auf patentierbare Weise von der hierin offenbarten Erfindung.
Das Patent von Hood beansprucht ein Plasma-„Buffy Coat"-Konzentrat, das Plasma, Blutplättchen (in einer Konzentration von wenigstens 10⁹ Zellen/ml), Fibrinogen (in einer Konzentration von wenigstens 5 mg/ml) und weiße Blutkörperchen (in einer Konzentration von wenigstens 3 × 10⁷ Zellen/ml) umfasst. Die Erfindung von Hood erreicht eine Hämokonzentration durch die Beseitigung von Wasser aus Plasma. Die Erfindung von Hood versäumt es außerdem, die Vorzüge erhöhter Anteile von Vitaminen, Antibiotika und anderen Substanzen anzuerkennen. Man geht zum Beispiel davon aus, dass höhere Vitamin-C-Mengen die Viskosität und Langlebigkeit einer gelatinösen Zusammensetzung eines fibrinösen Stoffs verlängern, der im Wesentlichen von Blutplättchen gewonnen wird. Als ein weiteres Beispiel versäumt es die Erfindung von Hood, die Vorzüge einer Zugabe von Retinoiden, wie Vitamin A (Retinol) und/oder Vitamin E, anzuerkennen. Patienten, die einer Behandlung mit Steroiden unterzogen werden, haben zum Beispiel oft ein Immunsystem, das unterdrückt ist oder anderweitig nicht auf Reize anspricht; erhöhte Mengen an Vitamin A wirken bekanntlich diesem Nichtansprechen entgegen und tragen somit zur Förderung der Wundheilung bei. Ebenso geht man davon aus, dass durch das Erhöhen des Vitamin-E-Niveaus die Förderung der Wundheilung unterstützt wird.
Das Patent von Knighton offenbart die Verwendung von isolierten multiplen Wachstumsfaktoren in Kombination mit einer biologisch kompatiblen Trägersubstanz nach der Sequestrierung (und Beseitigung) der/des gesamten Blutplättchenmembranen und Plasmas mit Fibrin von dem präparierten Wachstumsfaktorexsudat. Durch das Wegwerfen solcher Membranen werden aus der Zusammensetzung im Wesentlichen restliche Wachstumsfaktoren, die in den Membranen bekanntlich konzentriert sind, und potentielle Rezeptorstellen zur Erleichterung der Matrixbildung entfernt. Das von Knighton angewendete Verfahren setzt außerdem eine Reihe zeitaufwendiger und arbeitsintensiver Schritte voraus, einschließlich einer Aufbewahrung bei –20° bis –30°C vor der Verwendung. Das Verfahren von Knighton setzt außerdem voraus, dass Wundbehandlungen täglich wiederholt werden.
Das Patent von Antanavich offenbart eine Zusammensetzung, die in erster Linie auf Plasma basiert und wie Knighton einen biologisch akzeptablen Träger zur Verabreichung eines Plasmakonzentrats aus Blutplättchen, Fibrinogen und Fibrinektin erfordert. Die Zusammensetzung von Antanavich ist im Wesentlichen ein Fibrinklebstoff, der eine hohe Zugfestigkeit (Viskosität) haben soll, die ausreicht, um eine Wunde zu versiegeln.
Insofern als das Patent von Martin relevant ist, offenbart Martin eine Zusammensetzung, die ein Sonnenschutzmittel, ein entzündungshemmendes Mittel und eine Wundheilungszusammensetzung umfasst (Martin, Spalte 6, Zeile 66 bis Spalte 7, Zeile 2). Die genannte Wundheilungszusammensetzung umfasst die Kombination aus Pyruvat, einem Antioxydationsmittel (einschließlich Vitamin A, C und E) und Fettsäuren, die zur Reparatur von Zellmembranen notwendig sind (Martin, Spalte 7, Zeile 2 bis 8). Nützlichkeit und Funktion der genannten Vitamine für die Zusammensetzung von Martin, die zur Verwendung in Sonnenlicht gedacht ist, anstatt vor Sonnenlicht geschützt zu werden, unterscheiden sich eindeutig von Nützlichkeit und Funktion der Vitamine für die hierin offenbarte Erfindung, wie im Folgenden erläutert wird.
Die chemischen Reaktionen und Kaskaden, die normalerweise stattfinden, wenn Thrombin zu den konzentrierten Blutplättchen gegeben wird, sind in der Tat komplex. Sie werden in dem wissenschaftlichen Artikel von Reeder et al. in Proceedings of the American Academy of Cardiovascular Perfusion, Bd. 14, Januar 1993 erörtert. Die Zugabe von Konservierungsmitteln oder Heilförderungsmaterialien, die diese verschiedenen Reaktionen nicht beeinträchtigen, wesentlich stören oder sogar zunichte machen, ist der Kernpunkt der vorliegenden Erfindung.
Eine Aufgabe der Erfindung ist es, ein Wundbehandlungsmaterial bereitzustellen, das in Anwesenheit des Patienten schnell und bequem produziert werden kann, das die Förderung der Wundheilung unterstützt und das die Verhinderung einer Wundinfektion unterstützt.
Eine weitere Aufgabe ist es, ein Verfahren zur Herstellung eines Wundbehandlungsmaterials bereitzustellen, das die ausdrücklichen Zielsetzungen erfüllt.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Ganz allgemein ausgedrückt, dehnt die hierin beschriebene Erfindung die Verwendungsmöglichkeiten von konzentrierten Blutplättchenmaterialien, vor allem von solchen in Gelform, aus, indem sie die Herstellung der Zusammensetzung beschleunigt und erleichtert. Die hierin beschriebene Erfindung verbessert außerdem die Leistung der konzentrierten Blutplättchenzusammensetzung, indem sie ihre Verwendbarkeit für Anwendungen über längere Zeiträume verbessert und indem sie die Wundheilungs- und Infektionsbekämpfungseigenschaften verbessert. Damit autologes Blutplättchengel nützlicher ist, muss der gelatinöse Zustand über einen angemessenen Zeitraum beibehalten werden können. Ein Aspekt der vorliegenden Erfindung ist die Zugabe eines Konservierungsmittels zum Blutplättchengel, wie Ascorbinsäure.
In einer bevorzugten Ausgestaltung der Erfindung wird ein Verfahren zur Herstellung einer Wundheilmittelzusammensetzung bereitgestellt, das das Bereitstellen einer therapeutisch wirksamen Menge aktivierter Wachstumsfaktoren durch Aktivieren einer Zusammensetzung, die konzentrierte Blutplättchen umfasst, und die Zugabe einer wirksamen Gelviskositäterhaltungsmenge von Ascorbinsäure beinhaltet.
In einer weiteren bevorzugten Ausgestaltung der Erfindung wird ein Verfahren zur Herstellung eines Wundheilmittels bereitgestellt, dass die folgenden Schritte beinhaltet: Mischen therapeutisch wirksamer Mengen von konzentrierten Blutplättchen, Ascorbinsäure, wenigstens einem Retinoid und wenigstens einem Antibiotikum, das für wenigstens Pseudomonas- und Klebsella-Batketerien bakteriozidal ist, und dann Beimischen von Thrombin.
In einer weiteren bevorzugten Ausgestaltung wird eine Wundheilmittelzusammensetzung bereitgestellt, die eine therapeutisch wirksame Menge aktivierter Wachstumsfaktoren, die von konzentrierten Blutplättchen stammen, eine effektive Gelviskositäterhaltungsmenge von Ascorbinsäure und einen Aktivierungsagonisten umfasst, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Thrombin, Kollagen, Serotonin, Adenosindiphosphat (ADP) und Acetylcholin (ACH) und Kombinationen davon, wobei dieser Agonist die genannten Wachstumsfaktoren von den genannten konzentrierten Blutplättchen produziert.
Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung beinhaltet das Hinzufügen von einer oder mehreren antibiotischen Substanzen ein oder mehrere Male im Laufe der Verarbeitungsperiode, so dass die resultierende konzentrierte Blutplättchenzusammensetzung eines der oder eine Vielfalt der Antibiotika enthält. Die hierin offenbarten Ausgestaltungen beinhalten die Zugabe antibiotischer Zusammensetzungen in einer solchen Weise, die diese verschiedenen Reaktionen, das pH-Gleichgewicht und die Wirksamkeit nicht beeinträchtigt, im Wesentlichen stört oder sogar zunichte macht.
Eine weitere Ausgestaltung der vorliegenden Erfindung beinhaltet die Zugabe von einem oder mehreren Vitaminen, die bekanntlich die Wundheilung fördern, wie Vitamin A und Vitamin E.
Das hierin beschriebene Verfahren zur Realisierung der Erfindung in Gelform beinhaltet das Mischen von wenigstens einem der beschriebenen Zusatzstoffe mit den plasmaarmen konzentrierten Blutplättchen eine ausreichende Zeit vor der Zugabe von kalzifiziertem Thrombin (oder einem anderen, vorzugsweise kalzifizierten, Agonist), um die gewünschte Dispersion eines solchen/solcher Zusatzstoffe(s) in einer solchen Zusammensetzung zu ermöglichen, bevor eine Gelierung eine weitere Dispersion verhindert.
AUSFÜHRLICHE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Die hierin angegebenen biologischen Materialien können von einem zu behandelnden Patienten, von einem einzigen Drittspender oder von mehreren Drittspendern stammen; ferner können die genannten Drittspender zur gleichen Spezies wie der Patient oder zu einer anderen Spezies gehören, solange das von einem solchen biologischen Material gewonnene Wundbehandlungsmaterial mit dem Patienten biokompatibel ist.
Es ist außerdem zu verstehen, dass die hierin verwendete Terminologie nicht begrenzend sein soll, da der Umfang der vorliegenden Erfindung lediglich durch die Ansprüche und Entsprechungen davon begrenzt wird. Die hierin verwendeten Singularformen schließen außerdem den Plural ein und umgekehrt, sofern der Kontext nichts anderes angibt.
Ganz allgemein ausgedrückt beinhaltet die Erfindung eine Wundheilmittelzusammensetzung, die aktivierte Wachstumsfaktoren und Ascorbinsäure umfasst. In der vorherrschenden Version der Erfindung sind die genannten Wachstumsfaktoren in Blutplättchen enthalten. Der Körper produziert viele Substanzen, die allgemein als Wachstumsfaktoren bekannt sind, und die Wachstumsfaktoren der vorliegenden Erfindung sind ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus aus Blutplättchen gewonnenem Wachstumsfaktor (PDGF), aus Blutplättchen gewonnenem Angiogenese-Faktor (PDAF), vaskulärem Endothelwachstumsfaktor (VEGF), aus Blutplättchen gewonnenem epidermalem Wachstumsfaktor (PDEGF), Blutplättchenfaktor 4 (PF-4), von transformierten Zellen gebildeter Wachstumsfaktor P (TGF-B), azidischem Fibroblastenwachstumsfaktor (FGF-A), basischem Fibroblastenwachstumsfaktor (FGF-B), von transformierten Zellen gebildeter Wachstumsfaktor α (TFG-A), Insulinähnlichen Wachstumsfaktoren 1 und 2 (IGF-1 und IGF-2), β-Thromboglobulin-verwandten Proteinen (BTG), Thrombospondin (TSP), Fibronektin, von-Willebrand-Faktor (vWF), Fibropeptid A, Fibrinogen, Albumin, Plasminogen-Aktivator-Inhibitor 1 (PAI-1), Osteonektin, RANTES (regulated upon activation, normal T cell expressed and presumably secreted), gro-α, Vitronektin, Fibrin-D-Dimer, Faktor V, Antithrombin III, Immunglobulin-G (IgG), Immunglobulin-M (IgM), Immunglobulin-A (IgA), a2-Macroglobulin, Angiogenin, Fg-D, Elastase, Keratinozytenwachstumsfaktor (KGF), epidermalem Wachstumsfaktor (EGF), Fibroblastenwachstumsfaktor (FGF), Tumornekrosefaktor (TNF), Fibroblastenwachstumsfaktor (FGF) und Interleukin-1-(IL-1) und Kombinationen davon. Eine der wichtigen Charakteristiken, die allen Substanzen gemein sind und die Einbeziehung von jeder in dieser speziellen Gruppe unterstützen, ist, dass jede dieser Substanzen bekanntlich oder vermutlich Zell- oder Gewebewachstum verbessert. Ferner funktionieren die genannten Substanzen oder verschiedenen Kombinationen davon bekanntlich oder vermutlich in einer unerwarteten synergistischen Weise zusammen, um die Wundheilung zu fördern.
Die Blutplättchen werden von den roten Blutkörperchen und weißen Blutkörperchen von Vollblut hauptsächlich durch Differentialzentrifugation getrennt. Die Gesamtzusammensetzung der hierin offenbarten Erfindung kann jedoch unwesentliche Mengen weißer Blutkörperchen enthalten, und zwar aufgrund der Tatsache, dass die Blutplättchen selten völlig von den anderen Blutkomponenten isoliert werden. Man geht davon aus, dass die vorliegende Erfindung nur minimale oder Spurenmengen weißer Blutkörperchen enthält; man nimmt an, dass die Zahl der weißen Blutkörperchen der vorliegenden Erfindung typischerweise unter etwa 3 × 10 Zellen/ml liegt. Im Rahmen der vorliegenden Erfindung wird kein Wasser entfernt, um eine Konzentration von Zellen zu erreichen. Die erfindungsgemäßen Biomaterialien kommen fast ausschließlich von Blutplättchen. Das mittlere Blutplättchenvolumen der sequestrierten Blutplättchen liegt im Bereich von etwa 6,6 bis 8,4 Femtoliter, mit einem Durchschnitt von etwa 7,7 Femtoliter; dies ist möglicherweise ein Hinweis darauf, dass die sequestrierten Blutplättchen verhältnismäßig größer oder jünger sind als die Gesamtpopulation von Blutplättchen.
Die Aktivierung von Wachstumsfaktoren kann auf vielfältige Weise durch eine Vielfalt von Substanzen erfolgen, die als Aktivatoren oder Agonisten bekannt sind. In der hierin beschriebenen Erfindung ergibt sich die genannte Aktivierung aus der Zugabe eines Aktivators oder Agonisten, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Thrombin, Kollagen, Serotonin, Adenosindiphosphat (ADP) und Acetylcholin (ACH) und Kombinationen davon. In einer speziellen Version der Erfindung sind die genannten Wachstumsfaktoren innerhalb konzentrierter Blutplättchen enthalten und die genannte Aktivierung ergibt sich aus der Zugabe von Thrombin. Eine der wichtigen Charakteristiken, die allen Substanzen gemein sind und die Einbeziehung von jeder in dieser speziellen Gruppe unterstützen, ist, dass jede dieser Substanzen bekanntlich oder vermutlich Zell- oder Gewebewachstum fördert. Ferner funktionieren die genannten Substanzen oder verschiedenen Kombinationen davon bekanntlich oder vermutlich in einer unerwarteten synergistischen Weise zusammen, um die Wundheilung zu fördern.
Die Erfindung ist nicht auf autologe biologische Materialien begrenzt, wie z. B. die Gewinnung der genannten konzentrierten Blutplättchen von dem eigenen biologischen Material des Verwundeten. Die Erfindung schließt die Verwendung biologischer Materialien ein, die von einem oder mehreren Drittspendern erhalten werden, der/die nicht zur gleichen Spezies wie der Patient gehören muss/müssen, dessen Wunde mit der hierin beschriebenen Wundheilmittelzusammensetzung behandelt wird, sofern es zu keiner Bioinkompatibilität infolge der Verwendung der biologischen Materialien eines solchen Drittspenders kommt.
In einer allgemeinen Version der Erfindung beinhaltet die Wundheilmittelzusammensetzung konzentrierte Blutplättchen, Thrombin und Ascorbinsäure. Ascorbinsäure hat bekanntlich Konservierungseigenschaften, sofern sie nicht abgebaut wird, wie es nach der Einwirkung von Sonnenlicht oder einer anderen Quelle von ultravioletten (UV) Lichtstrahlen geschieht. Die meisten Versionen der hierin beschriebenen Erfindung werden jedoch fast unmittelbar nach dem Aufbringen auf die Wundstelle von Bandagen bedeckt oder anderweitig vor UV-Strahlen geschützt.
Da durch die Beimischung von Thrombin oder anderen Agonisten Wachstumsfaktoren aktiviert werden, sollte Thrombin (oder andere Agonisten/Aktivatoren) gewöhnlich die letzte Substanz sein, die unmittelbar vor dem Zeitpunkt beigemischt wird, da der gelatinöse Zustand aufgebaut werden soll.
Eine weitere Version der Erfindung beinhaltet die Zugabe von wenigstens einem Retinoid zum Gemisch zusätzlich zur oder als Ersatz für die Ascorbinsäure. Zwar könnte die Wundheilmittelzusammensetzung eine Kombination aus Retinoiden enthalten, doch enthält eine Version der Erfindung lediglich Vitamin A zusätzlich zur oder als Ersatz für die Ascorbinsäure. Vitamin A wirkt bekanntlich einer Nebenwirkung von einigen Behandlungen mit Steroiden entgegen, nämlich der verminderten Reaktivität des Immunsystems des Körpers auf Reize. Ferner hemmt oder verringert Vitamin A bekanntlich oder vermutlich die Bioaktivität von Mangan, Magnesium und Kupfer in der zellulären und interstitiellen Umgebung; die genannten Elemente sind bekanntlich oder vermutlich im Hinblick auf die Bildung von Keloiden und Narbengewebe aktiv oder förderlich (siehe Effects of Pantothenic Acid and Ascorbic Acid Supplementation an Human Skin Wound Healing Process von Vaxman et al., Eur. Surg. Res. 1995, 28:4, 158–166). Die Versionen der hierin beschriebenen Erfindung, die Vitamin A enthalten, fördern demzufolge vermutlich die Heilung, ohne dass es zu einer starken Narben- oder Keloidbildung kommt. In einer anderen Version ist das genannte Retinoid Vitamin E, das die Heilung bekanntlich unterstützt. In jedem Fall scheinen die hierin offenbarten Vitamine (oder Kombinationen davon) die Wundheilung in einer unerwartet synergistischen Weise zu verbessern.
Die Nützlichkeit und Funktion der genannten Vitamine sind von jeglichen antioxidativen Eigenschaften unabhängig. Es ist zu verstehen, dass keines der genannten Vitamine in der vorliegenden Erfindung voraussichtlich irgendwelche antioxidativen Eigenschaften nach dem topischen Auftragen und Kontakt mit UV-Strahlen aufweist (wie bei Martin). UV-Strahlen bauen solche Vitamine schnell ab oder machen sie anderweitig praktisch unwirksam; ferner zeigen sich keine antioxidativen Eigenschaften, wenn das Vitamin intern und nicht über eine reine topische Aufbringung absorbiert wird.
Ferner unterscheiden sich Nützlichkeit und Funktion der genannten Vitamine für die hierin offenbarte Erfindung eindeutig von der Nützlichkeit und Funktion der Vitamine für die Martin-Zusammensetzung. Die Ascorbinsäure senkt zum Beispiel den pH-Wert des umliegenden Mediums und erschwert folglich das Wachstum von saprophytischen Bakterien im Wundbett.
Zwar könnte die Wundheilmittelzusammensetzung eine Kombination von Antikörpern enthalten, doch umfasst eine Version der Erfindung lediglich wenigstens ein Antibiotikum zusätzlich zur oder als Ersatz für die Ascorbinsäure. Da viele Wundstellen entweder bereits mit Bakterien infiziert sind oder für eine solche Infektion anfällig sind, ist es erwünscht, dass eine Wundheilmittelzusammensetzung entweder Bakterien abtöten oder die Mobilität oder Reproduktion von Bakterien verhindern kann. Die hierin beschriebene Erfindung beinhaltet eine Wundheilmittelzusammensetzung, die konzentrierte Blutplättchen, Thrombin und wenigstens ein Antibiotikum umfasst. Insbesondere beinhaltet die Erfindung ein Wundheilmittel, wobei das genannte Antibiotikum für wenigstens die Pseudomonas und Klebsella Bakteriengattungen bakteriozidal ist, die an Wundstellen vorherrschen und vor denen man sich nur schwer schützen kann. Alternativ ist das genannte Antibiotikum ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Neosporin, Vancomycin und Gentamycin und Kombinationen davon. Eines der wichtigen Charakteristiken, die allen Substanzen gemein sind und die Einbeziehung von jeder in dieser speziellen Gruppe unterstützen, ist, dass jede dieser Substanzen die genannten Bakterien bekanntlich abtötet.
Wie oben erwähnt, kann die Erfindung eine Wundheilmittelzusammensetzung beinhalten, die konzentrierte Blutplättchen, Thrombin, Ascorbinsäure, wenigstens ein Retinoid und wenigstens ein Antibiotikum umfasst, das für die Pseudomonas- und Klebsella Bakteriengattungen bakteriozidal ist.
Abgesehen von der auf Wundstellen aufzutragenden Wundheilmittelsubstanz beinhaltet die Erfindung ferner ein Verfahren zur Herstellung einer Wundheilmittelzusammensetzung. Im Rahmen einer Methode zur Herstellung der plasmaarmen konzentrierten Blutplättchen der vorliegenden Erfindung werden etwa 450 ml Vollblut in Antikoagulationsmittel (wie Natriumcitrat oder jedes beliebige in der Technik bekannte Antikoagulationsmittel) aufgefangen. Dieses Blut wird dann mit wenigstens einer Drehzahl im Bereich zwischen etwa 2000 rpm und 3000 rpm (vorzugsweise etwa 2400 rpm) über einen Zeitraum zwischen etwa 15 Minuten und 25 Minuten (vorzugsweise etwa 20 Minuten) zentrifugiert, um eine Bande (oder ähnliche Gruppierung) aus (a) Plasma und den meisten weißen Blutkörperchen; (b) Blutplättchen (und unwesentliche weiße Blutkörperchen) und (c) roten Blutkörperchen abzuscheiden. Der Blutplättchenteil kann dann erneut zentrifugiert werden, um Plasma (und unwesentliche weiße Blutkörperchen) abzuscheiden; die genannte erneute Zentrifugation kann mit wenigstens einer Drehzahl im Bereich zwischen etwa 4000 rpm und 5600 rpm (vorzugsweise etwa 4800 rpm) für eine Dauer zwischen etwa 5 Minuten und 10 Minuten (vorzugsweise etwa 7 1/2 Minuten) erfolgen.
Die Endausbeute beträgt etwa 40 bis 50 ml an plasmaarmen konzentrierten Blutplättchen (in Spuren- oder unwesentlichen Mengen von restlichem Plasma und restlichen weißen Blutkörperchen). Sowohl der Plasma/Leukozytenteil als auch der rote Blutkörperchenteil kann in den Patienten zurück reinfundiert werden. Die plasmaarmen konzentrierten Blutplättchen können dann durch ein Gemisch aus Thrombin und (vorzugsweise) Calcium aktiviert werden. Vorzugsweise ergibt sich eine Lösung aus 5000 Einheiten Thrombin je ml Calciumchloridlösung; da Blut-Antikoagulationsmittel typischerweise Blutcalcium binden, um das Auftreten der Gerinnungskaskade zu verhindern, wird kalzifiziertes Thrombin verwendet, um die plasmaarmen konzentrierten Blutplättchen wieder mit mehr Calcium zu versorgen, um die Gerinnungskaskade an der Wundstelle zu erleichtern. Je nach den relativen Konzentrationen der Bestandteile kann das resultierende Gemisch entweder eine Flüssigkeit sein oder es kann zu einem harten Material oder (vorzugsweise) zu einem Gel erhärten, mit einer Viskosität, die von den relativen Mengen von Thrombin und Blutplättchen abhängig ist; das Konzentrationsverhältnis zwischen kalzifiziertem Thrombin und Blutplättchen bestimmt, wie schnell die Zusammensetzung erhärtet und wie hart sie schließlich sein wird. Einige Gemische bringen eine Zusammensetzung hervor, die innerhalb von Sekunden zu einem Gel erhärtet, wohingegen einige Gemische eine Zusammensetzung ergeben, die einige Minuten zum Erhärten zu einem Gel braucht.
Unabhängig vom Umfang der Erhärtungszeit beinhaltet die vorliegende Erfindung ein Konservierungsmittel, das es dem Gel ermöglicht, seine Viskosität über einen längeren Zeitraum beizubehalten. Man geht zum Beispiel davon aus, dass Ascorbinsäure die Langlebigkeit der Gelviskosität bewahrt. Ein weiteres Verfahren zur Herstellung der Wundheilungszusammensetzung beinhaltet das Mischen aktivierter Wachstumsfaktoren mit Ascorbinsäure. Die genannten aktivierten Wachstumsfaktoren können auf vielerlei Arten und Weisen gewonnen werden, wie zum Beispiel durch Sequestrieren konzentrierter Blutplättchen von Blut und Mischen von Thrombin mit den genannten Blutplättchen. Die genannte Ascorbinsäure muss in ausreichender Menge vorliegen, um den gelatinösen Zustand der endgültigen Wundheilungszusammensetzung besser erhalten zu können, und das genannte Thrombin muss in einer ausreichenden Menge vorliegen, um die Bildung des Koagulums (Gel) mit dem gewünschten Viskositätsniveau zu unterstützen, während Wachstumsfaktoren in der Zusammensetzung und der Wunde ausreichend aktiviert werden.
In einer bevorzugten Version der Zusammensetzung wird etwa 1 ml Ascorbinsäure mit etwa 8 ml konzentrierten Blutplättchen vermischt, anschließend wird etwa 1 ml kalzifiziertes Thrombin in dieses 9-ml-Gemisch eingemischt. Es können aber auch andere Verhältnisse zwischen konzentrierten Blutplättchen, Ascorbinsäure und Thrombin von Nutzen sein, je nach der gewünschten Heilmittelmenge, Gelierungszeit, Gelviskosität und Langlebigkeit.
Ein weiteres Verfahren zur Herstellung der Zusammensetzung ermöglicht die Entnahme von Blut, die Sequestrierung von plasmaarmen konzentrierten Blutplättchen, das Mischen von Zusatzstoffen und die Rückführung ungenutzter Blutkomponenten zum Patienten, alles in etwa 20 bis 30 Minuten und mit nur einer Punktion beim Patienten. Etwa 125 bis 250 ml Blut werden einem Patienten entnommen, wobei die Blutentnahmevorrichtung optional am Patienten angeschlossen bleibt (zur späteren Benutzung bei der Rückführung ungenutzter Blutkomponenten zum Patienten). Dieses Blut wird in eine Lathum-Schale gegeben und mit einer Zentrifuge wie der, die von Haemonetics, Inc., hergestellt wird, mit etwa 4800 rpm zentrifugiert, bis eine Bande (oder eine ähnliche Gruppierung) von Plasma am oberen Rand (etwa 5 bis 15 Minuten) und eine Bande (oder ähnliche Gruppierung) von roten Blutkörperchen am Boden der Schale entsteht; die Mitte beinhaltet plasmaarme konzentrierte Blutplättchen. Die Plasmabande wird zur Rückführung zum Patienten entfernt und die verbleibenden Blutkomponenten werden wieder mit dieser Drehzahl (für eine ausreichende Dauer) zentrifugiert, wobei Plasma und weiße Blutkörperchen weiterhin von den plasmaarmen konzentrierten Blutplättchen entfernt werden. Die plasmaarmen konzentrierten Blutplättchen werden dann entfernt, um mit den anderen hierin beschriebenen Zusatzstoffen (Thrombin, Ascorbinsäure und/oder Retanoide) gemischt zu werden.
Das Verfahren zur Herstellung eines Wundheilmittels kann ferner vor oder während dem Mischen des genannten Thrombins das Mischen von wenigstens einem der zuvor erwähnten Retinoide in ausreichender/n Menge(n) beinhalten, um die Wundheilung weiter zu verbessern. In einer Version wird 1 ml einer wässrigen Vitamin-A- und Vitamin-E-Lösung zu 8 ml konzentrierten Blutplättchen und 1 ml Ascorbinsäure gegeben, bevor 1 ml Thrombin beigemischt wird.
Alternativ kann das genannte Verfahren vor oder während dem Mischen des genannten Thrombins das Mischen von wenigstens einem der zuvor erwähnten Antibiotika in ausreichender/n Menge(n) beinhalten, um Infektionen durch Bakterien zu reduzieren.
Die Wundheilmittelzusammensetzung der Erfindung kann zum Behandeln einer Wunde verwendet werden, indem eine ausreichende Menge der genannten Wundheilmittelzusammensetzung aufgetragen wird, um die Heilung der Wunde verbessern.
Nach dem Auftragen auf eine Wunde kann die Zusammensetzung je nach den Umständen wie dem Ort der Wunde und anderen Wundenmerkmalen 5 Tage lang und vielleicht sogar länger auf der Wunde bleiben. Die hierin beschriebene Zusammensetzung ist zwar für die Behandlung chronischer Wunden besonders nützlich, doch kann sie auch für die Behandlung akuter Wunden von Nutzen sein.
1. Beispiel
Fallstudie: Patient P ist ein 57 Jahre alter, weißer, männlicher LKW-Fahrer, der seit 11 Monaten ein diabetisches Geschwür an der rechten Ferse hat. Sein Behandlungsplan bestand aus Ruhe, Entlastung und täglicher Wundenreinigung mit Seife und Wasser und anschließendem Anlegen eines Mullverbands. Über einen kurzen Zeitraum wurde Carrasyn-Gel verordnet, allerdings ohne Verbesserung. Nach der Überweisung an eine physikalische Therapieambulanz zur Wundbehandlung umfasst die Therapie von P derzeit eine wöchentliche scharfe Wundausschneidung, mit Kochsalzlösung befeuchteten Verbandsmull und einen Vollkontaktgips. P hat eine Anamnes für Bluthochdruck, der zurzeit kontrolliert wird. Seit 15 Jahren leidet er an Diabetes mellitus mit Neuropathie, der mit oralen hypoglykämischen Elementen kontrolliert wird.

P begann eine Behandlung mit der hierin offenbarten Erfindung. Nach dem scharfen Ausschneiden seiner Wunde wurde das Gelkoagulum aufgetragen und die Wunde wurde mit einem mit Kochsalzlösung befeuchteten Verband bedeckt. Anschließend wurde ein Vollkontaktgipsverband angelegt, der eine Woche lang darauf blieb. Nach Ablauf von Woche 1 wurde der Gipsverband entfernt und die Wundstelle wurde gereinigt und erneut mit einem feuchten Verband bedeckt; die Gliedmaße wurde für Woche 2 erneut mit einem Gipsverband versehen. Nach Ablauf von Woche 2 wurde das gleiche Verfahren durchgeführt, mit der Ausnahme, dass das Gelkoagulum wieder auf die Wundstelle aufgetragen wurde, bevor diese mit einem feuchten Verband bedeckt wurde. Nach Ablauf von Woche 3 wurde das gleiche Verfahren wie für Woche 2 durchgeführt. Dieser Behandlungsplan wurde insgesamt 36 Tage lang fortgesetzt. In der folgenden Tabelle 1 sind Daten enthalten, die die Verringerung des Wundstellenvolumens und des Oberflächenbereichs von Woche 1 bis 4 reflektieren. Tabelle 1

Woche Nr.	Volumen (mm³)	Bereich (mm²)
0	3121	674
1	1561	562
2	279	301
3	26	282
4	15	159

2. Beispiel

Patient Nr.	Volumen (mm³)	Bereich (mm²)
	Start	Ende	Start	Ende
1	3121 mm³	15 mm³	674 mm²	159 mm²
2	358 mm³	0,0 mm³	65 mm²	4 mm²
3	293 mm³	3,0 mm³	63 mm²	3 mm²
4	192 mm³	18 mm³	104 mm²	39 mm²
5	336 mm³	0,0 mm³	181 mm²	0,0 mm²

Die fünf Patienten, die an dieser Studie teilnahmen, wurden von ihren Ärzten überwiesen. Die Patienten wurden unter Verwendung der Ausschluss-/Einschluss-Kriterien gescreent. Die für diese Studie ausgewählten Patienten hatten ein Geschwür an der unteren Extremität, das nach einer vier- bis sechswöchigen Behandlung durch eine herkömmliche Wundpflege alleine oder durch eine herkömmliche Pflege plus Regranex¹ nicht geheilt war.

¹ Ein Einzel-Wachstumsfaktorprodukt von Ortho-McNeal, vermarktet von Johnson&Johnson.

Alle fünf Patienten der Studie hatten eine Blutplättchenzahl von 100.000 Zellen/mm³ oder darüber, einen Hämoglobin-Wert von > 10 g und einen HCT-Wert von 30% oder darüber. Die Patienten wurden auf eine Infektion in der Wunde hin und im Hinblick auf Osteomyelitis untersucht. Keiner der untersuchten Patienten wies Anzeichen für eine Infektion oder Knochenbeteiligung auf.
Es wurde eine aggressive Wundausschneidung durchgeführt, um die chronische Wunde im Wesentlichen in eine akute Wunde umzuwandeln. Geschwür und umliegender Kallus wurden bis auf normales, nicht beteiligtes Gewebe vollständig exzidiert. Alle Patienten wurden ambulant behandelt. Alle Patienten waren mit einer völligen Gewichtsentlastung einverstanden. Mit Ausnahme von einem Patient erhielten die Patienten einen Halbschuh, der das Gewicht auf den nicht betroffenen Bereich des Fußes übertrug. Dem Patienten, der keinen Halbschuh erhielt, wurde ein Vollgipsverband am Unterschenkel angelegt. Durch eine direkte Befragung der Patienten und ihrer Familie wurde der Compliance-Aspektbeurteilt. Nur ein Patient erwies sich als nicht kooperationsbereit (non-compliant). Der Blutzuckerwert von Patientin Nr. 4 überstieg 400 mg/dl, sie wurde verwirrt und ging auf ihrem Fuß am 2. Tag nach der Behandlung. Dies führte zu einer erneuten Behandlung von Patientin 4². In Tabelle 2 sind die Wundgröße und das Volumen zu Beginn und am Ende der Behandlung mit dem hierin offenbarten Koagulum dargestellt. Der Verschluss dauerte im Durchschnitt weniger als vier Wochen. Im Durchschnitt kam es innerhalb von 25 Tagen zu einem 99%igen Verschluss der Wunde bei den Patienten.

² Patientin Nr. 4 NG war im Laufe der gesamten Studie nicht kooperationsbereit und versäumte drei Klinikbesuche.

QUELLENANGABEN IN DER BESCHREIBUNG
Die von der Anmelderin angeführten Quellen werden lediglich der Information halber gegeben. Sie stellen keinen Bestandteil des europäischen Patentdokuments dar. Obschon größte Sorgfalt bei der Zusammenstellung der Quellenangaben angewendet wurde, können Fehler oder Auslassungen nicht ausgeschlossen werden. Das EPA übernimmt diesbezüglich keine Haftung.
In der Beschreibung werden die folgenden Patentdokumente genannt:

• US 5585007 A , Antanavich [0013]
• WO 5733545 A [0019]
• WO 5585007 A [0019]
• WO 5165938 A [0019]
• WO 5674912 A [0019]

In der Beschreibung angeführte Nicht-Patentliteratur

• REEDER et al. Proceedings of the American Academy of Cardiovascular Perfusion, Januar 1993, Bd. 14 [0025]
• VAXMAN et al. Effects of Pantothenic Acid and Ascorbic Acid Supplementation an Human Skin Wound Healing Process. Eur. Surg. Res, 1995, Bd. 28 (4), 158–166 [0043]

Claims

Verfahren zur Herstellung einer Wundheilmittelzusammensetzung, das die Bereitstellung einer therapeutisch wirksamen Menge aktivierter Wachstumsfaktoren durch Aktivieren einer Zusammensetzung, die konzentrierte Blutplättchen umfasst, und die Zugabe einer wirksamen Gelviskositäterhaltungsmenge von Ascorbinsäure beinhaltet.
Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Aktivierung von der Zugabe eines Agonisten resultiert, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Thrombin, Kollagen, Serotonin, Adenosindiphosphat (ADP) und Acetylcholin (ACH) und Kombinationen davon.
Verfahren nach Anspruch 1, wobei die genannte Aktivierung durch Mischen der Zusammensetzung mit Thrombin erfolgt.
Verfahren nach Anspruch 3, wobei die genannten konzentrierten Blutplättchen von anderen Blutkomponenten abgeschieden werden, indem Blut 15 bis 25 Minuten lang mit wenigstens einer Drehzahl im Bereich zwischen 2000 und 3000 rpm zentrifugiert, dann durch Zentrifugieren desselben 5 bis 10 Minuten lang mit wenigstens einer Drehzahl im Bereich zwischen 4000 und 5600 rpm weiter konzentriert und dann mit Ascorbinsäure und danach mit Thrombin in ausreichenden Mengen gemischt wird, so dass eine Gelierung mit einem/r gewünschten Viskositätsniveau und Langlebigkeit erzielt wird, und mit therapeutisch wirksamen Mengen des Heilmittels.
Verfahren nach Anspruch 4, wobei: für das erste Abscheiden der genannten Blutplättchen die genannte Zentrifugaldrehzahl etwa 2400 rpm und die genannte Zentrifugationsdauer etwa 20 Minuten beträgt; für das weitere Konzentrieren der genannten Blutplättchen die genannte Zentrifugaldrehzahl etwa 4800 rpm und die genannte Zentrifugationsdauer etwa 7½ Minuten betragen; und 1 ml der genannten Ascorbinsäure mit 8 ml der genannten konzentrierten Blutplättchen gemischt wird.
Verfahren nach einem der Ansprüche 3 bis 5, wobei die genannte Thrombinmenge etwa 5000 Einheiten in etwa 1,0 ml wässriger Calciumchloridlösung beträgt.
Verfahren nach einem der Ansprüche 3 bis 6, wobei das genannte Verfahren ferner das Mischen von wenigstens einem Retinoid in ausreichender/n Menge(n) beinhaltet, um die Wundheilung vor dem Mischen mit dem genannten Thrombin zu verbessern.
Verfahren nach Anspruch 7, wobei das genannte Retinoid Vitamin A in einer ausreichenden Menge ist, um ein Nichtansprechen des Immunsystems des Verwundeten auf Reize zu reduzieren, und Vitamin E in ausreichender Menge ist, um die Wundheilung noch weiter zu verbessern.
Verfahren nach Anspruch 8, wobei etwa 1 ml Vitamin A und Vitamin E mit etwa 8 ml der genannten konzentrierten Blutplättchen und etwa 1 ml der genannten Ascorbinsäure und dann mit etwa 5000 Einheiten Thrombin in etwa 1,0 ml wässriger Calciumchloridlösung gemischt werden.
Verfahren nach einem der Ansprüche 3 bis 9, das das Mischen mit wenigstens einem Antibiotikum in ausreichender/n Menge(n) umfasst, um Bakterieninfektionen vor dem Mischen des genannten Thrombin zu reduzieren.
Verfahren nach Anspruch 10, bei dem das genannte Antibiotikum wenigstens für Pseudomonas- und Klebsella-Bakterien bakteriozidal ist.
Verfahren nach Anspruch 10, wobei das genannte Antibiotikum ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Neosporin, Vancomycin und Gentamycin und Kombinationen davon.
Verfahren zur Herstellung eines Wundheilmittels, das die folgenden Schritte beinhaltet: Mischen therapeutisch wirksamer Mengen von konzentrierten Blutplättchen, Ascorbinsäure, wenigstens einem Retinoid und wenigstens einem Antibiotikum, das für wenigstens Pseudomonas- und Klebsella-Bakterien bakteriozidal ist, und dann Beimischen von Thrombin.
Wundheilmittelzusammensetzung, die Folgendes umfasst: eine therapeutisch wirksame Menge aktivierter Wachstumsfaktoren, die von konzentrierten Blutplättchen stammen, eine effektive Gelviskositäterhaltungsmenge von Ascorbinsäure, und einen Aktivierungsagonisten, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Thrombin, Kollagen, Serotonin, Adenosindiphosphat (ADP) und Acetylcholin (ACH) und Kombinationen davon, wobei dieser Agonist die genannten Wachstumsfaktoren von den genannten konzentrierten Blutplättchen produziert.
Wundheilmittelzusammensetzung nach Anspruch 14, wobei der genannte Agonist Thrombin ist.
Wundheilmittelzusammensetzung nach Anspruch 14 oder 15, wobei das genannte Blutplättchenkonzentrat vom eigenen biologischen Material des Verwundeten genommen wurde, das eine Zahl von weißen Blutkörperchen von weniger als 3 × 10⁷ Zellen/ml hat.
Wundheilmittelzusammensetzung nach Anspruch 14, die zusätzlich wenigstens ein Retinoid, wenigstens ein Antibiotikum, das gegenüber wenigstens Pseudomonas und Klebsella bakteriozidal ist, und Thrombin umfasst.
Wundheilmittelzusammensetzung nach Anspruch 14 oder 17, die etwa 8 ml konzentrierte Blutplättchen, etwa 1 ml Ascorbinsäure und etwa 1 ml Thrombin umfasst.
Wundheilmittelzusammensetzung nach Anspruch 18, die ferner 1 ml Vitamin A und Vitamin E umfasst.