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Hintergrund
der Erfindung
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Die
Erfindung betrifft heterocyclische Hydroxyamidderivate, solche Derivate
enthaltende pharmazeutische Kompositionen und die Verwendung solcher
Derivate zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von
Arthritis, Krebs und anderen Krankheiten.
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Die
erfindungsgemäßen Verbindungen
sind Inhibitoren von Zink-Metalloendopeptidasen, besonders derer,
die zu den Unterfamilien der Matrixmetalloproteinase (auch MMP oder
Matrixin genannt) und des Reprolysin (auch Adamylsin genannt) der
Metzincine gehören
(vgl. Rawlings et al., Methods in Enzymology, 248, 183–228 (1995)
und Stocker et al., Protein Science, 4, 823–840 (1995)).
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Die
Enzym-Unterfamilie der MMP umfasst gegenwärtig 17 Enzyme (MMP-1, MMP-2,
MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14,
MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20). Die meisten MMPs
sind bekannt für
ihre Beteiligung an der Regulation des Umsatzes an extrazellulären Matrixproteinen
und spielen so eine wichtige Rolle bei normalen physiologischen
Vorgängen wie
Vermehrung, Entwicklung und Differentiation. Darüber hinaus werden MMPs in vielen
pathologischen Situationen mit abnormalem Bindegewebeumsatz exprimiert.
Beispielsweise ist nachgewiesen worden, dass MMP-13, ein bei der
Zersetzung des Typ-II-Collagens (des wichtigsten Collagens in Knorpel)
sehr wirksames Enzym, in osteoarthritischem Knorpel überexprimiert
wird (vgl. Mitchell et al., J. Clin. Invest., 97, 761 (1996)). Andere
MMPs (MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-12) werden ebenfalls in osteoarthritischem
Knorpel überexprimiert,
und man geht davon aus, dass die Inhibierung einiger oder aller
dieser MMPs den beschleunigten Verlust an Knorpel, der für Gelenkkrankheiten
wie Osteoarthritis oder primärchronische
Polyarthritis typisch ist, verlangsamt oder stoppt.
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Die
Reprolysine der Säugetiere
sind als ADAMs ("A
Disintregrin And Metalloproteinase) bekannt (vgl. Wolfberg et al.,
J. Cell. Biol., 131, 275–278
(1995)) und enthalten zusätzlich
zu einer Metalloproteinase-ähnlichen
Domäne
eine Disintegrin-Domäne. Bis
heute sind 23 unterschiedliche ADAMs identifiziert worden.
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ADAM-17,
auch bekannt als Tumor-Nekrose-Faktor-(TNF-)alpha-Converting Enzym
(TACE), ist die bekannteste ADAM. ADAM-17 (TACE) ist verantwortlich
für die
Spaltung von an Zellen gebundenem Tumor-Nekrose-Faktor-alpha (TNF-α, auch unter
der Bezeichnung Cachectin bekannt). TNF-α ist bekanntermassen an vielen
Infektions- und Autoimmunkrankheiten beteiligt (vgl. W. Friers,
FEBS Letters, 285, 199 (1991)). Weiter ist nachgewiesen worden,
dass TNF-α den
primären
Mediator der Entzündungsreaktion
bei Sepsis und septischem Schock darstellt (vgl. Spooner et al.,
Clinical Immunology and Immunopathology, 62 S11 (1992)). Es gibt
zwei Formen des TNF-α,
nämlich
ein Typ II-Membranprotein mit einer relativen Molekularmasse von 26
000 (26 kD) und eine lösliche
Form mit 17 kD, die durch eine spezielle proteolytische Spaltung
aus dem an die Zelle gebundenen Protein entsteht. Die lösliche 17
kD-Form des TNF-α wird
von der Zelle freigesetzt und steht in Zusammenhang mit den schädlichen
Wirkungen des TNF-α.
Diese Form des TNF-α ist
auch in der Lage, an Orten zu wirken, die vom Syntheseort weit entfernt
sind. Somit verhindern TACE-Inhibitoren die Bildung von löslichem
TNF-α und
die schädlichen
Wirkungen des löslichen
Faktors (vgl. US-Patent Nr. 5,830,742, ausgegeben am 3. November
1998).
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Bestimmte
erfindungsgemäße Verbindungen
stellen wirksame Inhibitoren der Aggrecanase dar, einem Enzym, das
bei dem Abbau von Knorpel-Aggrecan eine wichtige Rolle spielt. Man
nimmt an, dass auch die Aggrecanase eine ADAM ist. Der Verlust von
Aggrecan aus der Knorpelmatrix stellt einen wichtigen Faktor bei
der Progression von Gelenkkrankheiten wie Osteoarthritis und Gelenkrheumatismus
dar, und es ist davon auszugehen, dass die Inhibierung der Aggrecanase
den Knorpelverlust bei diesen Krankheiten verlangsamt oder stoppt.
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Weitere
ADAMs, die in pathologischen Situationen exprimiert werden, sind
die ADAM TS-1 (vgl. Kuno et al., J. Biol. Chem., 272, 556–562 (1997))
und die ADAMs 10, 12 und 15 (vgl. Wu et al., Biochem. Biophys. Res.
Comm., 235, 437–442
(1997)). Angesichts der Kenntnis der Expression, der physiologischen
Substrate und des Zusammenhangs mit Krankheiten liegt der volle
Umfang der Bedeutung der Inhibierung dieser Klasse von ADAM-Enzymen
auf der Hand.
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Die
erfindungsgemäßen Verbindungen
können
eingesetzt werden zur Behandlung von Arthritis (einschließlich Osteoarthritis
und Gelenkrheumatismus), entzündlichen
Darmerkrankungen, Morbus Crohn, Emphysem, akutem Lungenversagen
(ARDS), Asthma, chronischer obstruktiver Lungenerkrankung (COPD),
Alzheimer, Toxizität
nach Organtransplantation, Cachexie, allergischen Reaktionen, allergischer
Kontakthypersensibilität,
Krebs (darunter aus soliden Tumoren bestehender Krebs wie Dickdarmkrebs,
Brustkrebs, Lungenkrebs und Prostatakrebs und haematopoietische
bösartige
Formen wie Leukämien
und Lymphome), Geschwürbildung
in Geweben, Restenose, Parodontitis, Epidermolysis bullosa, Osteoporose,
Lockerung künstlicher
Gelenkimplantate, Atherosklerose (einschließlich Ruptur atherosklerotischer
Plaque), Aorten-Aneurysma (einschließlich Bauchaorten- und Hirnaorten-Aneurysma),
dekompensierter Herzinsuffizienz, Myocardinfarkt, Schlaganfall,
zerebraler Ischämie,
Schädelverletzungen,
Verletzungen des Rückenmarks,
akuten und chronischen neurodegenerativen Störungen, Autoimmunkrankheiten,
Chorea Huntington, Parkinson, Migräne, Depression, peripherer
Neuropathie, Schmerzen, zerebraler Amyloidangiopathie (CAA), nootropem
Enhancement und Cognition Enhancement, amyotropher Lateralsklerose,
multipler Sklerose, okulärer
Angiogenesis, Verletzungen der Hornhaut, Degeneration der Macula,
abnormaler Wundheilung, Verbrennungen, Diabetes, Tumorinvasion,
Tumorwachstum, Tumormetastasen, Vernarbung der Hornhaut, Scleritis,
AIDS, Sepsis oder septischem Schock.
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Die
erfindungsgemäßen Verbindungen
können
auch zur Behandlung von Krankheiten eingesetzt werden, bei denen
die Inhibierung von MMPs und/oder ADAMs von therapeutischem Vorteil
ist, beispielsweise Krankheiten, die durch Expression von Matrixmetalloproteinase
oder ADAM gekennzeichnet sind.
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Die
Erfinder haben auch entdeckt, dass Inhibitoren mit unterschiedlicher
Wirkung bezüglich
Metalloprotease und Reprolysin (bevorzugt inhibierender Wirkung
bezüglich
TACE) identifiziert werden können.
Eine Gruppe bevorzugter Inhibitoren umfasst jene, die selektiv TACE
inhibieren, bevorzugt im Vergleich zu MMP-1. Eine weitere Gruppe
bevorzugter Inhibitoren umfasst Moleküle, die selektiv TACE und Matrixmetalloprotease-13
(MMP-13) inhibieren, bevorzugt im Vergleich zu MMP-1. Wieder eine
andere Gruppe bevorzugter Inhibitoren sind jene Moleküle, die
selektiv Aggrecanase und Matrixmetalloprotease (MMP-13) inhibieren,
bevorzugt im Vergleich zu MMP-1. Eine wieder andere Gruppe bevorzugter
Inhibitoren umfasst Moleküle,
die selektiv Aggrecanase und TACE inhibieren, bevorzugt im Vergleich
zu MMP-1. Wiederum eine weitere Gruppe bevorzugter Inhibitoren umfasst
Moleküle,
die selektiv Aggrecanase inhibieren, bevorzugt im Vergleich zu MMP-1.
Eine weitere Gruppe bevorzugter Inhibitoren umfasst Moleküle, die
selektiv MMP-13 inhibieren, bevorzugt im Vergleich zu MMP-1. Und
eine weitere Gruppe bevorzugter Inhibitoren umfasst Moleküle, die
selektiv Aggrecanase, TACE und MMP-13 inhibieren, bevorzugt im Vergleich
zu MMP-1.
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Matrixmetalloproteinase-
und Reprolysin-Inhibitoren sind in der Literatur allgemein bekannt.
Insbesondere sind im Europäischen
Patent mit der Veröffentlichungsnummer
606 046, veröffentlicht
am 13. Juli 1994, bestimmte heterocyclische MMP-Inhibitoren erwähnt. Im US-Patent 5,861,510,
ausgegeben am 19. Januar 1999, sind cyclische Arylsulfonylamino-hydroxamsäuren erwähnt, die
als MMP-Inhibitoren eingesetzt werden können. In der PCT-Anmeldung
mit der Veröffentlichungsnummer
WO 98/34918, veröffentlicht
am 13. August 1998, sind heterocyclische Hydroxamsäuren erwähnt, die
bestimmte Dialkyl-substituierte Verbindungen umfassen, die als MMP-Inhibitoren
verwendet werden können.
Die PCT-Anmeldungen
mit den Veröffentlichungsnummern
WO 96/27583 und WO 98/07697, veröffentlicht
am 7. März
1996 bzw. 26. Februar 1998, erwähnen Arylsulfonyl-Hydroxamsäuren. In
der PCT-Anmeldung mit der Veröffentlichungsnummer
WO 98/03516, veröffentlicht
am 29. Januar 1998, sind Phosphinate mit MMP-Wirkung genannt. Die
PCT-Anmeldung mit der Veröffentlichungsnummer
WO 98/33768, veröffentlicht
am 6. August 1998, bezieht sich auf N-unsubstituierte Arylsulfonylamino-Hydroxamsäuren, und
die PCT-Anmeldung mit der Veröffentlichungsnummer
WO 98/08825, veröffentlicht
am 5. März
1998, auf bestimmte MMP-Inhibitoren.
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Kurzbeschreibung
der Erfindung
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Die
Erfindung betrifft eine Verbindung der Formel
oder deren pharmazeutisch
akzeptables Salz, worin
X für
Sauerstoff, Schwefel, SO, SO
2 oder NR
7 steht,
R
1,
R
2, R
3, R
4, R
5 und R
6 ausgewählt
sind aus Wasserstoff, Hydroxy, (C
1-C
6)Alkyl, -CN, (C
2-C
6)Alkenyl, (C
6-C
10)Aryl(C
2-C
6)alkenyl, (C
2-C
9)Heteroaryl(C
2-C
6)alkenyl, (C
2-C
6)Alkynyl, (C
6-C
10)Aryl(C
2-C
6)alkynyl, (C
2-C
9)Heteroaryl(C
2-C
6)alkynyl, (C
1-C
6)Alkylamino, (C
1-C
6)Alkylthio, (C
1-C
6)Alkoxy, Perfluor(C
1-C
6)alkyl, (C
6-C
10)Aryl, (C
2-C
9)Heteroaryl, (C
6-C
10)Arylamino, (C
6-C
10)Arylthio, (C
6-C
10)Aryloxy, (C
2-C
9)Heteroarylamino, (C
2-C
9)Heteroarylthio, (C
2-C
9)Heteroaryloxy, (C
3-C
6)Cycloalkyl, (C
1-C
6)Alkyl(hydroxymethylen), Piperidyl, (C
1-C
6)Alkylpiperidyl,
(C
1-C
6)Acylamino,
(C
1-C
6)Acylthio,
(C
1-C
6)Acyloxy,
(C
1-C
6)Alkoxy-(C=O)-, -CO
2H, (C
1-C
6)Alkyl-NH-(C=O)-
und [(C
1-C
6)Alkyl]
2-N-(C=O)-;
wobei das (C
1-C
6)Alkyl optional substituiert ist durch ein
oder zwei Gruppen, die unabhängig
ausgewählt
sind aus (C
1-C
6)Alkylthio,
(C
1-C
6)Alkoxy, Trifluormethyl,
Halogen, -CN, (C
6-C
10)Aryl,
(C
2-C
9)Heteroaryl, (C
6-C
10)-Arylamino, (C
6-C
10)Arylthio, (C
6-C
10)Aryloxy, (C
2-C
9)Heteroarylamino,
(C
2-C
9)-Heteroarylthio, (C
2-C
9)Heteroaryloxy,
(C
6-C
10)Aryl(C
6-C
10)aryl, (C
3-C
6)-Cycloalkyl, Hydroxy,
Piperazinyl, (C
6-C
10)Aryl(C
1-C
6)alkoxy, (C
2-C
9)Heteroaryl(C
1-C
6)alkoxy, (C
1-C
6)Acylamino, (C
1-C
6)Acylthio, (C
1-C
6)Acyloxy, (C
1-C
5)Alkylsulfinyl, (C
6-C
10)Arylsulfinyl,
(C
1-C
6)Alkylsulfonyl,
(C
6-C
10)Arylsulfonyl,
Amino, (C
1-C
6)Alkylamino
und ((C
1-C
6)Alkyl)
2amino;
R
7 für Wasserstoff
steht oder für
(C
1-C
6)Alkyl, das
optional einfach oder mehrfach substituiert ist durch Hydroxy, -CN,
(C
1-C
6)Alkylamino,
(C
1-C
6)-Alkylthio, (C
1-C
6)Alkoxy, Perfluor(C
1-C
6)alkyl, (C
6-C
10)Aryl, (C
6-C
10)Arylthio, (C
6-C
10)Aryloxy, (C
2-C
9)Heteroarylamino, (C
3-C
6)Cycloalkyl, (C
1-C
6)Alkyl(hydroxymethylen), Piperidyl, (C
1-C
6)Alkylpiperidyl,
(C
1-C
6)Acylamino,
(C
1-C
6)-Acyloxy, (C
1-C
6)Alkoxy-(C=O)-,
-CO
2H, (C
1-C
6)Alkyl-NH-(C=O)- and [(C
1-C
6)Alkyl]
2-N-(C=O)-,
für (C
6-C
10)Arylsulfonyl,
(C
1-C
6)Alkylsulfonyl,
(C
1-C
6)Alkyl-NH-(C=O)-,
(C
1-C
6)Alkoxy-(C=O)-,
(C
1-C
6)Alkyl-(C=O)-,
[(C
1-C
6)-Alkyl]
2-N-(C=O)-,
(R
8R
9N)-(C=O), worin
R
8 und R
9 gemeinsam
mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, Azetidinyl, Pyrrolidinyl,
Piperidinyl, Morpholinyl oder Thiomorphonyl bilden;
Q für (C
6-C
10)Aryl(C
1-C
6)alkoxy(C
6-C
10)ary1, (C
6-C
10)Aryl(C
1-C
6)alkoxy(C
2-C
9)heteroaryl,
(C
2-C
9)Heteroaryl(C
1-C
6)alkoxy(C
6-C
10)aryl oder (C
2-C
9)Heteroaryl(C
1-C
6)alkoxy(C
2-C
9)heteroaryl steht,
wobei jede der genannten (C
6-C
10)-Aryl- oder (C
2-C
9)Heteroarylgruppen
substituiert sein kann durch einen oder mehrere Substituenten, bevorzugt
einen bis drei Substituenten pro Ring, besonders bevorzugt durch
einen bis drei Substituenten am terminalen Ring (d.h. dem Ring,
der am weitesten von der Bindungsstelle entfernt ist), wobei die
Substituenten unabhängig
ausgewählt
sind aus Halogen, -CN, optional durch ein oder mehrere (bevorzugt
1–3) Fluoratome
substituiertem (C
1-C
6)Alkyl,
Hydroxy, Hydroxy-(C
1-C
6)alkyl,
optional durch ein oder mehrere (bevorzugt 1– 3) Fluoratome substituiertem
(C
1-C
6)Alkoxy, (C
1-C
6)Alkoxy(C
1-C
6)alkyl, HO-(C=O)-, (C
1-C
6)Alkyl-O-(C=O)-,
HO-(C=O)-(C
1-C
6)Alkyl,
(C
1-C
6)Alkyl-O-(C=O)-(C
1-C
6)alkyl, (C
1-C
6)Alkyl-(C=O)-O-, (C
1-C
6)Alkyl-(C=O)-O-(C
1-C
6)alkyl, H(O=C)-, H(O=C)-(C
1-C
6)Alkyl, (C
1-C
6)Alkyl(O=C)-, (C
1-C
6)Alkyl(O=C)-(C
1-C
6)alkyl, NO
2, Amino,
(C
1-C
6)Alkylamino,
[(C
1-C
6)Alkyl]
2amino, Amino(C
1-C
6)alkyl, (C
1-C
6)Alkylamino(C
1-C
6)alkyl, [(C
1-C
6)Alkyl]
2amino(C
1-C
6)alkyl, H
2N-(C=O)-, (C
1-C
6)Alkyl-NH-(C=O)-, [(C
1-C
6)Alkyl]
2N-(C=O)-, H
2N(C=O)-(C
1-C
6)Alkyl, (C
1-C
6)Alkyl-NH(C=O)-C
1-C
6)alkyl, [(C
1-C
6)Alkyl]
2N-(C=O)-(C
1-C
6)alkyl, H(O=C)-NH-, (C
1-C
6)Alkyl(C=O)-NH,
(C
1-C
6)Alkyl(C=O)-[NH](C
1-C
6)alkyl, (C
1-C
6)Alkyl(C=O)-[N(C
1-C
6)alkyl](C
1-C
6)alkyl, (C
1-C
6)Alkyl-S-, (C
1-C
6)Alkyl-(S=O)-,
(C
1-C
6)Alkyl-SO
2-, (C
1-C
6)Alkyl-SO
2-NH-,
(C
1-C
6)Alkyl-SO
2-[N(C
1-C
6)alkyl]-, H
2N-SO
2-, H
2N-SO
2-(C
1-C
6)Alkyl, (C
1-C
6)Alkyl-HN-SO
2-(C
1-C
6)alkyl,
[(C
1-C
6)Alkyl]
2N-SO
2-(C
1-C
6)alkyl, CF
3SO
3-, (C
1-C
6)Alkyl-SO
3-, Phenyl,
Phenyl(C
1-C
6)alkyl,
(C
3-C
10)Cycloalkyl,
(C
2-C
9)Heterocycloalkyl
und (C
2-C
9)Heteroaryl;
unter
der Bedingung, dass, wenn X für
SO oder SO
2 steht und R
3 und
R
4 ein Heteroatom enthaltende Reste darstellen,
das Heteroatom nicht an den Ring gebunden sein kann;
und unter
der Bedingung, dass wenigstens einer der Reste R
1 bis
R
6 für
(C
1-C
6)Alkyl steht;
sowie
unter der Bedingung, dass, wenn X für Sauerstoff oder Schwefel
steht und R
3 bis R
6 Wasserstoff
bedeuten, R
1 und R
2 nicht
beide Methyl sein können.
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Bevorzugt
sind Verbindungen, worin X für
NR7, Schwefel oder Sauerstoff steht.
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Weiter
bevorzugt sind Verbindungen, worin Q für (C6-C10)Aryl(C1-C6)alkoxy(C6-C10)aryl, (C6-C10)Aryl(C1-C6)alkoxy(C2-C9)heteroaryl, (C2-C9)Heteroaryl(C1-C6)alkoxy(C6-C10)aryl oder (C2-C9)Heteroaryl(C1-C6)alkoxy(C2-C9)heteroaryl steht, die optional substituiert
sind durch einen oder mehrere Substituenten, bevorzugt einen bis
drei Substituenten pro Ring, besonders bevorzugt durch einen bis
drei Substituenten am terminalen Ring, wobei die Substituenten ausgewählt sind
aus Halogen, (C1-C6)Alkyl,
(C1-C6)Alkoxy und
Perfluor-(C1-C3)alkyl.
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Außerdem bevorzugt
sind Verbindungen, worin Q für
(C6-C10)Arylmethoxy(C6-C10)aryl, (C6-C10)Arylmethoxy(C2-C9)heteroaryl,
(C2-C9)Heteroarylmethoxy(C6-C10)aryl oder (C2-C9)Heteroarylmethoxy(C2-C9)heteroaryl steht,
die optional substituiert sind durch einen oder mehrere Substituenten,
bevorzugt einen bis drei Substituenten pro Ring, besonders bevorzugt
durch einen bis drei Substituenten am terminalen Ring, wobei die Substituenten
ausgewählt
sind aus Halogen, (C1-C6)Alkyl,
(C1-C6)Alkoxy und
Perfluor-(C1-C3)alkyl.
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Besonders
bevorzugt sind Verbindungen, worin Q optional substituiertes (C6-C10)Arylmethoxyoxyphenyl,
(C6-C10)Arylmethoxypyridyl,
(C6-C10)Arylmethoxyfuryl,
(C6-C10)Arylmethoxypyroyl,
(C6-C10)Arylmethoxythienyl,
(C6-C10)Arylmethoxyisothiazolyl,
(C6-C10)Arylmethoxyimidazolyl,
(C6-C10)Arylmethoxybenzimidazolyl,
(C6-C10)Arylmethoxytetrazolyl,
(C6-C10)Arylmethoxypyrazinyl,
(C6-C10)Arylmethoxypyrimidyl,
(C6-C10)Arylmethoxychinolyl,
(C6-C10)Arylmethoxyisochinolyl,
(C6-C10)Arylmethoxybenzofuryl,
(C6-C10)Arylmethoxyisobenzofuryl,
(C6-C10)Arylmethoxybenzothienyl,
(C6-C10)Arylmethoxypyrazolyl,
(C6-C10)Arylmethoxyindolyl, (C6-C10)Arylmethoxyisoindolyl,
(C6-C10)Arylmethoxypurinyl,
(C6-C10)Arylmethoxycarbazolyl,
(C6-C10)Arylmethoxyisoxazolyl,
(C6-C10)Arylmethoxythiazolyl,
(C6-C10)-Arylmethoxyoxazolyl,
(C6-C10)Arylmethoxybenzthiazolyl, (C6-C10)Arylmethoxybenzoxazolyl,
Pyridylmethoxyphenyl,
Furylmethoxyphenyl, Pyrrolylmethoxyphenyl, Thienylmethoxyphenyl,
Isothiazolylmethoxyphenyl, Imidazolylmethoxyphenyl, Benzimidazolylmethoxyphenyl,
Tetrazolylmethoxyphenyl, Pyrazinylmethoxyphenyl, Pyrimidylmethoxyphenyl,
Chinolylmethoxyphenyl, Isochinolylmethoxyphenyl, Benzofurylmethoxyphenyl,
Isobenzofurylmethoxyphenyl, Benzothienylmethoxyphenyl, Pyrazolylmethoxyphenyl,
Indolylmethoxyphenyl, Isoindolylmethoxyphenyl, Purinylmethoxyphenyl,
Carbazolylmethoxyphenyl, Isoxalolylmethoxyphenyl, Thiazolylmethoxy phenyl,
Oxazolylmethoxyphenyl, Benzthiazolylmethoxyphenyl, Benzoxazolylmethoxyphenyl,
Pyridylmethoxypyridyl,
Pyridylmethoxyfuryl, Pyridylmethoxypyroyl, Pyridylmethoxythienyl,
Pyridylmethoxyisothiazolyl, Pyridylmethoxyimidazolyl, Pyridylmethoxybenzimidazolyl,
Pyridylmethoxytetrazolyl, Pyridylmethoxypyrazinyl, Pyridylmethoxypyrimidyl,
Pyridylmethoxychinolyl, Pyridylmethoxyisochinolyl, Pyridylmethoxybenzofuryl,
Pyridylmethoxyisobenzofuryl, Pyridylmethoxybenzothienyl, Pyridylmethoxypyrazolyl,
Pyridylmethoxyindolyl, Pyridylmethoxyisoindolyl, Pyridylmethoxypurinyl,
Pyridylmethoxycarbazolyl, Pyridylmethoxyisoxazolyl, Pyridylmethoxythiazolyl,
Pyridylmethoxyoxazolyl, Pyridylmethoxybenzthiazolyl, Pyridylmethoxybenzoxazolyl,
Furylmethoxypyridyl,
Furylmethoxyfuryl, Furylmethoxypyroyl, Furylmethoxythienyl, Furylmethoxyisothiazolyl, Furylmethoxyimidazolyl,
Furylmethoxybenzimidazolyl, Furylmethoxytetrazolyl, Furylmethoxypyrazinyl,
Furylmethoxypyrimidyl, Furylmethoxychinolyl, Furylmethoxyisochinolyl,
Furylmethoxybenzofuryl, Furylmethoxyisobenzofuryl, Furylmethoxybenzothienyl,
Furylmethoxypyrazolyl, Furylmethoxyindolyl, Furylmethoxyisoindolyl, Furylmethoxypurinyl,
Furylmethoxycarbazolyl, Furylmethoxyisoxazolyl, Furylmethoxythiazolyl,
Furylmethoxyoxazolyl, Furylmethoxybenzthiazolyl, Furylmethoxybenzoxazolyl,
Pyrroylmethoxypyridyl,
Pyrroylmethoxyfuryl, Pyrroylmethoxypyroyl, Pyrroylmethoxythienyl,
Pyrroylmethoxyisothiazolyl, Pyrroylmethoxyimidazolyl, Pyrroylmethoxybenzimidazolyl,
Pyrroylmethoxytetrazolyl, Pyrroylmethoxypyrazinyl, Pyrroylmethoxypyrimidyl,
Pyrroylmethoxychinolyl, Pyrroylmethoxyisochinolyl, Pyrroylmethoxybenzofuryl,
Pyrroylmethoxyisobenzofuryl, Pyrroylmethoxybenzothienyl, Pyrroylmethoxypyrazolyl,
Pyrroylmethoxyindolyl, Pyrroylmethoxyisoindolyl, Pyrroylmethoxypurinyl,
Pyrroylmethoxycarbazolyl, Pyrroylmethoxyisoxazolyl, Pyrroylmethoxythiazolyl,
Pyrroylmethoxyoxazolyl, Pyrroylmethoxybenzthiazolyl, Pyrroylmethoxybenzoxazolyl,
Thienylmethoxypyridyl,
Thienylmethoxyfuryl, Thienylmethoxypyroyl, Thienylmethoxythienyl,
Thienylmethoxyisothiazolyl, Thienylmethoxyimidazolyl, Thienylmethoxybenzimidazolyl,
Thienylmethoxytetrazolyl, Thienylmethoxypyrazinyl, Thienylmethoxypyrimidyl,
Thienylmethoxychinolyl, Thienylmethoxyisochinolyl, Thienyl methoxybenzofuryl,
Thienylmethoxyisobenzofuryl, Thienylmethoxybenzothienyl, Thienylmethoxypyrazolyl,
Thienylmethoxyindolyl, Thienylmethoxyisoindolyl, Thienylmethoxypurinyl,
Thienylmethoxycarbazolyl, Thienylmethoxyisoxazolyl, Thienylmethoxythiazolyl,
Thienylmethoxyoxazolyl, Thienylmethoxybenzthiazolyl, Thienylmethoxybenzoxazolyl,
Pyrazinylmethoxypyridyl,
Pyrazinylmethoxyfuryl, Pyrazinylmethoxypyroyl, Pyrazinylmethoxythienyl,
Pyrazinylmethoxyisothiazolyl, Pyrazinylmethoxyimidazolyl, Pyrazinylmethoxybenzimidazolyl,
Pyrazinylmethoxytetrazolyl, Pyrazinylmethoxypyrazinyl, Pyrazinylmethoxypyrimidyl,
Pyrazinylmethoxychinolyl, Pyrazinylmethoxyisochinolyl, Pyrazinylmethoxybenzofuryl,
Pyrazinylmethoxyisobenzofuryl, Pyrazinylmethoxybenzothienyl, Pyrazinylmethoxypyrazolyl,
Pyrazinylmethoxyindolyl, Pyrazinylmethoxyisoindolyl, Pyrazinylmethoxypurinyl,
Pyrazinylmethoxycarbazolyl, Pyrazinylmethoxyisoxazolyl, Pyrazinylmethoxythiazolyl,
Pyrazinylmethoxyoxazolyl, Pyrazinylmethoxybenzthiazolyl, Pyrazinylmethoxybenzoxazolyl,
Pyrimidylmethoxypyridyl, Pyrimidylmethoxyfuryl, Pyrimidylmethoxypyroyl,
Pyrimidylmethoxythienyl, Pyrimidylmethoxyisothiazolyl, Pyrimidylmethoxyimidazolyl,
Pyrimidylmethoxybenzimidazolyl, Pyrimidylmethoxytetrazolyl, Pyrimidylmethoxypyrazinyl,
Pyrimidylmethoxypyrimidyl, Pyrimidylmethoxychinolyl, Pyrimidylmethoxyisochinolyl,
Pyrimidylmethoxybenzofuryl, Pyrimidylmethoxyisobenzofuryl, Pyrimidylmethoxybenzothienyl,
Pyrimidylmethoxypyrazolyl, Pyrimidylmethoxyindolyl, Pyrimidylmethoxyisoindolyl,
Pyrimidylmethoxypurinyl, Pyrimidylmethoxycarbazolyl, Pyrimidylmethoxyisoxazolyl,
Pyrimidylmethoxythiazolyl, Pyrimidylmethoxyoxazolyl, Pyrimidylmethoxybenzthiazolyl,
Pyrimidylmethoxybenzoxazolyl,
Thiazolylmethoxypyridyl, Thiazolylmethoxyfuryl,
Thiazolylmethoxypyroyl, Thiazolylmethoxythienyl, Thiazolylmethoxyisothiazolyl,
Thiazolylmethoxyimidazolyl, Thiazolylmethoxybenzimidazolyl, Thiazolylmethoxytetrazolyl,
Thiazolylmethoxypyrazinyl, Thiazolylmethoxypyrimidyl, Thiazolylmethoxychinolyl,
Thiazolylmethoxyisochinolyl, Thiazolylmethoxybenzofuryl, Thiazolylmethoxyisobenzofuryl,
Thiazolylmethoxybenzothienyl, Thiazolylmethoxypyrazolyl, Thiazolylmethoxyindolyl,
Thiazolylmethoxyisoindolyl, Thiazolylmethoxypurinyl, Thiazolylmethoxycarbazolyl,
Thiazolylmethoxyisoxazolyl, Thiazolylmethoxythiazolyl, Thiazolylmethoxyoxazolyl,
Thiazolylmethoxybenzthiazolyl, Thiazolylmethoxybenzoxazolyl,
Oxazolylmethoxypyridyl,
Oxazolylmethoxyfuryl, Oxazolylmethoxypyroyl, Oxazolylmethoxythienyl,
Oxazolylmethoxyisothiazolyl, Oxazolylmethoxyimidazolyl, Oxazolylmethoxybenzimidazolyl,
Oxazolylmethoxytetrazolyl, Oxazolylmethoxypyrazinyl, Oxazolylmethoxypyrimidyl,
Oxazolylmethoxychinolyl, Oxazolylmethoxyisochinolyl, Oxazolylmethoxybenzofuryl,
Oxazolylmethoxyisobenzofuryl, Oxazolylmethoxybenzothienyl, Oxazolylmethoxypyrazolyl,
Oxazolylmethoxyindolyl, Oxazolylmethoxyisoindolyl, Oxazolylmethoxypurinyl,
Oxazolylmethoxycarbazolyl, Oxazolylmethoxyisoxazolyl, Oxazolylmethoxythiazolyl,
Oxazolylmethoxyoxazolyl, Oxazolylmethoxybenzthiazolyl oder Oxazolylmethoxybenzoxazolyl
steht.
-
Ganz
besonders bevorzugt sind Verbindungen, worin Q optional substituiertes
(C6-C10)Arylmethoxyoxyphenyl,
(C6-C10)Arylmethoxypyridyl,
(C6-C10)Arylmethoxyfuryl,
(C6-C10)Arylmethoxypyroyl,
(C6-C10)Arylmethoxythienyl,
(C6-C10)Arylmethoxyisothiazolyl,
(C6-C10)Arylmethoxyimidazolyl,
(C6-C10)Arylmethoxybenzimidazolyl,
(C6-C10)Arylmethoxytetrazolyl,
(C6-C10)Arylmethoxypyrazinyl,
(C6-C10)Arylmethoxypyrimidyl,
(C6-C10)Arylmethoxychinolyl,
(C6-C10)Arylmethoxyisochinolyl,
(C6-C10)Arylmethoxybenzofuryl,
(C6-C10)Arylmethoxyisobenzofuryl,
(C6-C10)Arylmethoxybenzothienyl,
(C6-C10)Arylmethoxypyrazolyl,
(C6-C10)Arylmethoxyindolyl, (C6-C10)Arylmethoxyisoindolyl,
(C6-C10)Arylmethoxypurinyl,
(C6-C10)Arylmethoxycarbazolyl,
(C6-C10)Arylmethoxyisoxazolyl,
(C6-C10)Arylmethoxythiazolyl,
(C6-C10)-Arylmethoxyoxazolyl,
(C6-C10)Arylmethoxybenzthiazolyl, (C6-C10)Arylmethoxybenzoxazolyl,
Pyridylmethoxyphenyl,
Furylmethoxyphenyl, Pyroylmethoxyphenyl, Thienylmethoxyphenyl, Isothiazolylmethoxyphenyl,
Imidazolylmethoxyphenyl, Benzimidazolylmethoxyphenyl, Tetrazolylmethoxyphenyl,
Pyrazinylmethoxyphenyl, Pyrimidylmethoxyphenyl, Chinolylmethoxyphenyl,
Isochinolylmethoxyphenyl, Benzofurylmethoxyphenyl, Isobenzofurylmethoxyphenyl,
Benzothienylmethoxyphenyl, Pyrazolylmethoxyphenyl, Indolylmethoxyphenyl,
Isoindolylmethoxyphenyl, Purinylmethoxyphenyl, Carbazolylmethoxyphenyl,
Isoxalolylmethoxyphenyl, Thiazolylmethoxyphenyl, Oxazolylmethoxyphenyl,
Benzthiazolylmethoxyphenyl oder Benzoxazolylmethoxyphenyl bedeutet.
-
Die
am meisten bevorzugten erfindungsgemäßen Verbindungen sind jene,
worin Q für
optional substituiertes (C6-C10)Arylmethoxyphenyl,
Pyridylmethoxyphenyl, Thienylmethoxyphenyl, Pyrazinylmethoxyphenyl, Pyrimidylmethoxyphenyl,
Pyridazinylmethoxyphenyl, Thiazolylmethoxyphenyl oder Oxazolylmethoxyphenyl steht.
-
Weiter
sind jene erfindungsgemäßen Verbindungen
am meisten bevorzugt, worin Q für
(C6-C10)Arylmethoxy(C6)aryl steht, das optional durch einen oder
mehrere, bevorzugt einen bis drei Substituenten pro Ring, besonders
bevorzugt einen bis drei Substituenten am terminalen Ring substituiert
ist, wobei die Substituenten unabhängig ausgewählt sind aus Halogen, (C1-C6)Alkyl, (C1-C6)Alkoxy und Perfluor(C1-C3)Alkyl.
-
Weiterhin
sind jene erfindungsgemäßen Verbindungen
am meisten bevorzugt, worin Q für (C6-C10)Arylmethoxy(C2-C9)heteroaryl steht,
das optional durch einen oder mehrere, bevorzugt einen bis drei Substituenten
pro Ring, besonders bevorzugt einen bis drei Substituenten am terminalen
Ring substituiert ist, wobei die Substituenten unabhängig ausgewählt sind
aus Halogen, (C1-C6)Alkyl,
(C1-C6)Alkoxy und
Perfluor(C1-C3)Alkyl.
-
Außerdem sind
jene erfindungsgemäßen Verbindungen
am meisten bevorzugt, worin Q für
(C2-C9)Heteroarylmethoxy(C6)aryl steht, das optional durch einen oder
mehrere, bevorzugt einen bis drei Substituenten pro Ring, besonders
bevorzugt einen bis drei Substituenten am terminalen Ring substituiert
ist, wobei die Substituenten unabhängig ausgewählt sind aus Halogen, (C1-C6)Alkyl, (C1-C6)Alkoxy und Perfluor(C1-C3)Alkyl.
-
Weiter
sind jene erfindungsgemäßen Verbindungen
am meisten bevorzugt, worin Q für
(C2-C9)Heteroarylmethoxy(C2-C9)heteroaryl steht,
das optional durch einen oder mehrere, bevorzugt einen bis drei
Substituenten pro Ring, besonders bevorzugt einen bis drei Substituenten
am terminalen Ring substituiert ist, wobei die Substi tuenten unabhängig ausgewählt sind
aus Halogen, (C1-C6)Alkyl,
(C1-C6)Alkoxy und
Perfluor(C1-C3)Alkyl.
-
Weiter
sind jene erfindungsgemäßen Verbindungen
besonders bevorzugt, worin R4 für Wasserstoff steht.
-
Weiter
sind jene erfindungsgemäßen Verbindungen
besonders bevorzugt, worin R2 oder R3 für
Wasserstoff steht.
-
Weiter
sind jene erfindungsgemäßen Verbindungen
besonders bevorzugt, worin mindestens einer der Reste R2 und
R3 von Wasserstoff verschieden ist.
-
Weiter
sind jene erfindungsgemäßen Verbindungen
besonders bevorzugt, worin mindestens einer der Reste R1 bis
R3 für
(C1-C6)Alkyl steht,
vorzugsweise mindestens einer der Reste R1 bis
R3 für
Methyl steht, insbesondere R1 und R4 für
Methyl stehen.
-
Weiter
sind jene erfindungsgemäßen Verbindungen
besonders bevorzugt, worin R1 und R2 für (C1-C6)Alkyl stehen
und R3 oder R6 für (C1-C6)Alkyl steht.
-
Weiter
sind jene erfindungsgemäßen Verbindungen
besonders bevorzugt, worin R1 und R2 für
Methyl stehen und R3 oder R6 für (C1-C6)Alkyl steht.
-
Weiter
sind jene erfindungsgemäßen Verbindungen
besonders bevorzugt, worin mindestens einer der Reste R1 bis
R3 für
Methyl steht.
-
Weiter
sind jene erfindungsgemäßen Verbindungen
besonders bevorzugt, worin R1 für Methyl
und R2 für
Wasserstoff steht.
-
Weiter
sind jene erfindungsgemäßen Verbindungen
besonders bevorzugt, worin R1 für Wasserstoff und
R3 für
Methyl steht.
-
Weiter
sind jene erfindungsgemäßen Verbindungen
besonders bevorzugt, worin X für
Stickstoff und R7 für (C1-C6)Alkyl steht.
-
Weiter
sind jene erfindungsgemäßen Verbindungen
besonders bevorzugt, worin X für
Stickstoff und R7 für (C1-C6)Alkylsulfonyl steht.
-
Weiter
sind jene erfindungsgemäßen Verbindungen
besonders bevorzugt, worin X für
Stickstoff und R7 für (C6-C10)Arylsulfonyl steht.
-
Weiter
sind jene erfindungsgemäßen Verbindungen
besonders bevorzugt, worin X für
Stickstoff und R7 für [(C1-C6)Alkyl]2N-(C=O)
oder (C1-C6)Alkyl-NH-(C=O)
steht.
-
Weiter
sind jene erfindungsgemäßen Verbindungen
besonders bevorzugt, worin X für
Stickstoff und R7 für (C1-C6)Alkyl(C=O)- steht.
-
Am
meisten bevorzugte erfindungsgemäße Verbindungen
sind ausgewählt
aus:
(2S,3R)-4-[4-(3,5-Difluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2-methyl-thiomorpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(2S,3R)-4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2-methyl-thiomorpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(2S,3R,6S)-2,6-Dimethyl-4-[4-(2-methyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-(4-Benzyloxy-benzolsulfonyl)-2-methyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(2S,3R,6S)-4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2,6-dimethyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(3R,6S)-4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2,2,6-trimethyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(2S,3R,6S)-6-Ethyl-4-[4-(4-fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2-methyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(2R,3R,6S)-4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2,6-dimethyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(2R,3R,6R)-4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2,6-dimethyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(2S,3R,6S)-2,6-Dimethyl-4-[4-(pyridin-4-ylmethoxy)-benzolsulfonyl]-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(2S,3R,6S)-2,6-Dimethyl-4-[4-(pyridin-2-ylmethoxy)-benzolsulfonyl]-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(2S,3R,6S)-2,6-Dimethyl-4-[4-(pyridin-3-ylmethoxy)-benzolsulfonyl]-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(2S,3R,6S)-2,6-Dimethyl-4-[4-(2-methyl-pyridin-3-ylmethoxy)-benzolsulfonyl]-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(3R,6S)-2,2,6-Trimethyl-4-[4-(2-trifluormethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(2S,3R)-2,6,6-Trimethyl-4-[4-(pyridin-4-ylmethoxy)-benzolsulfonyl]-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(3R,6S)-2,2,6-Trimethyl-4-[4-(2-methyl-pyridin-3-ylmethoxy)-benzolsulfonyl]-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(2S,3R,6S)-[4-(2,5-Dimethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2,6-dimethyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(2S,3R,6S)-4-[4-(3,5-Difluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2,6-dimethyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(2S,3R,6S)-4-[4-(3-Methoxy-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2,6-dimethyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(2S,3R,6S)-4-[4-(5-Fluor-2-methyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2,6-dimethyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(2S,3R,6S)-4-[4-(Furan-3-ylmethoxy)-benzolsulfonyl]-2,6-dimethyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(2S,3R,6S)-4-[4-(2-Fluor-3-methyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2,6-dimethyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(2S,3R)-4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2,6,6-trimethyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(3R)-4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-6,6-dimethyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(3R)-6,6-Dimethyl-4-[4-(pyridin-4-ylmethoxy)-benzolsulfonyl]-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(3R)-6,6-Dimethyl-4-[4-(2-methyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(2S,3R,6S)-4-(4-Cyclohexylmethoxy-benzolsulfonyl)-2,6-dimethyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(3R,6S)-4-[4-(2,5-Dimethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2,2,6-trimethyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(2S,3R)-4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-6-methoxymethyl-2-methyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(2S,3R,6S)-4-[4-(3-Chlor-benzyloxy)-benzolsulfonylj-6-[(ethyl-methyl-amino)-methyl]-2-methyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(2S,3R)-4-[4-(3-Chlor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-6-methoxy-2-methyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(2S,3R,6R)-4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-6-hydroxymethyl-2-methylmorpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid.
-
Weitere
erfindungsgemäße Verbindungen
sind u.a. folgende:
4-[4-(3-Fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2-methyl-thiomorpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-[4-(3-Chlor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2-methyl-thiomorpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2-methyl-1-oxo-thiomorpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2-methyl-1,1-dioxid-thiomorpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(4-[4-(3,5-Difluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2-methyl-1-oxo-thiomorpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(4-[4-(3,5-Difluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2-methyl-1,1-dioxid-thiomorpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
(4-[4-(3-Fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2-methyl-1-oxo-thiomorpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-[4-(3-Fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2-methyl-1,1-dioxid-thiomorpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-[4-(3-Chlor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2-methyl-1,1-dioxid-thiomorpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-[4-(3-Chlor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2-methyl-1-oxo-thiomorpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
3-Methyl-1-[4-(2-methyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
1-(4-Benzyloxy-benzolsulfonyl)-3-methyl-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
3-Methyl-1-[4-(2-methyl-pyridin-3-ylmethoxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
3-Methyl-1-[4-(2-trifluormethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
1-[4-(5-Fluor-2-trifluormethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-3-methyl-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
1-[4-(5-Fluor-2-methyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-3-methyl-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
1-[4-(2,5-Dimethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-3-methyl-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
3-Methyl-1-[4-(2-methyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
1-[4-(2-Methyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-Methyl-1-[4-(2-methyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
3,4-Dimethyl-1-[4-(2-methyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
1-[4-(2,5-Dimethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-3,4-dimethyl-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
1-[4-(5-Fluor-2-methyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-3,4-dimethyl-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
1-[4-(5-Fluor-2-trifluormethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-3,4-dimethyl-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
3,4-Dimethyl-1-[4-(2-trifluormethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
3,4-Dimethyl-1-[4-(2-methyl-pyridin-3-ylmethoxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-Methansulfonyl-1-[4-(2-methyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-Methansulfonyl-1-[4-(2-trifluormethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
1-[4-(5-Fluor-2-trifluormethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-4-methansulfonyl-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
1-[4-(2,5-Dimethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-4-methansulfonyl-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
1-[4-(5-Fluor-2-methyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-4-methansulfonyl-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-Methansulfonyl-1-[4-(2-methyl-pyridin-3-ylmethoxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-Acetyl-1-[4-(2-trifluormethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-Acetyl-1-[4-(5-fluor-2-trifluormethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-Acetyl-1-[4-(5-fluor-2-methyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-Acetyl-1-[4-(2-methyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-Acetyl-1-[4-(2,5-dimethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-Acetyl-1-[4-(2-methyl-pyridin-3-ylmethoxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-Methyl-1-[4-(2-methyl-pyridin-3-ylmethoxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
1-[4-(2,5-Dimethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-4-methyl-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-Acetyl-3-methyl-1-[4-(2-methyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-Acetyl-1-[4-(2,5-dimethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-3-methyl-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-Acetyl-1-[4-(5-fluor-2-methyl-benzyloxy)-benzolsulfonylj-3-methyl-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-Acetyl-1-[4-(5-fluor-2-trifluormethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-3-methyl-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-Acetyl-3-methyl-1-[4-(2-trifluormethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-Acetyl-3-methyl-1-[4-(2-methyl-pyridin-3-ylmethoxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-Methansulfonyl-3-methyl-1-[4-(2-methyl-pyridin-3-ylmethoxy)-benzolsulfonyl]piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-Methansulfonyl-3-methyl-1-[4-(2-trifluormethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
1-[4-(5-Fluor-2-trifluormethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-4-methansulfonyl-3-methyl-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
1-[4-(5-Fluor-2-methyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-4-methansulfonyl-3-methyl-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
1-[4-(2,5-Dimethyl-benzy(oxy)-benzolsulfonyl]-4-methansulfonyl-3-methyl-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-Methansulfonyl-3-methyl-1-[4-(2-methyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
1-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-3-methyl-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
1-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-3,4-dimethyl-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-Acetyl-1-[4-(4-fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-3-methyl-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
1-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-4-methansulfonyl-3-methyl-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
3,5-Dimethyl-1-[4-(2-methyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
3,3-Dimethyl-1-[4-(2-methyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-Methansulfonyl-3,3-dimethyl-1-[4-(2-methyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
1-(4-Benzyloxy-benzolsulfonyl)-4-(4-methoxy-benzolsulfonyl)-3-methyl-piperazin-2-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-3-hydroxycarbamoyl-2-methyl-piperazin-1-carbonsäure-methylester;
4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2-methyl-piperazin-1,3-dicarbonsäure-1-dimethylamid-3-Hydroxyamid;
4-[4-(2-Ethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2,2,6-trimethyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-[4-(2-Ethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-6-(2-hydroxy-2-methyl-propyl)-2,2-dimethylmorpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-[4-(2-Ethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-6-(2-hydroxy-2-methyl-propyl)-2-methyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-[4-(2-Ethyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2,5-dimethyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-(4-Benzyloxy-benzolsulfonyl)-2,5,6-trimethyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-(4-Benzyloxy-benzolsulfonyl)-2,2,5,6-tetramethyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-(4-Benzyloxy-benzolsulfonyl)-5-hydroxymethyl-2,6-dimethyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-(4-Benzyloxy-benzolsulfonyl)-2-methyl-6-methylcarbamoylmethyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid;
4-(4-Benzyloxy-benzolsulfonyl)-2-isopropyl-6-methyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid und
4-(5-Benzyloxy-pyridin-2-sulfonyl)-2,6-dimethyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid.
-
Im
Rahmen des vorliegenden Dokuments steht "Alkyl", sofern nicht anders angegeben, für gesättigte monovalente
Kohienwassestoff-Reste mit geradkettigen, verzweigten oder cyclischen
Gruppen oder deren Kombinationen.
-
Im
Rahmen des vorliegenden Dokuments steht "Alkoxy" für
O-Alkylgruppen, wobei "Alkyl" der obigen Definition
entspricht.
-
Im
Rahmen des vorliegenden Dokuments steht "Aryl",
sofern nicht anders angegeben, für
einen organischen Rest, abgeleitet von einem aromatischen Kohlenwasserstoff
durch Entfernen eines Wasserstoffatoms, beispielsweise Phenyl oder
Naphthyl, optional substituiert durch 1–3 geeignete Substituenten
wie Fluor, Chlor, Cyano, Nitro, Trifluormethyl, (C1-C6)Alkoxy, (C6-C10)Aryloxy, Trifluormethoxy, Difluormethoxy
und (C1-C6)Alkyl.
-
Im
Rahmen des vorliegenden Dokuments steht "Heteroaryl", sofern nicht anders angegeben, für einen organischen
Rest, abgeleitet von einer aromatischen heterocyclischen Verbindung
durch Entfernen eines Wasserstoffatoms, beispielsweise Pyridyl,
Furyl, Pyroyl, Thienyl, Isothiazolyl, Imidazolyl, Benzimidazolyl,
Tetrazolyl, Pyrazinyl, Pyrimidyl, Chinolyl, Isochinolyl, Benzofuryl,
Isobenzofuryl, Benzothienyl, Pyrazolyl, Indolyl, Isoindolyl, Purinyl,
Carbazolyl, Isoxazolyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Benzthiazolyl oder
Benzoxazolyl, optional substituiert durch 1–3 geeignete Substituenten
wie Fluor, Chlor, Trifluormethyl, (C1-C6)Alkoxy, (C6-C10)Aryloxy, Trifluormethoxy, Difluormethoxy
und (C1-C6)Alkyl.
-
Im
Rahmen des vorliegenden Dokuments steht "Acyl",
sofern nicht anders angegeben, für
einen Rest der Formel RCO, worin R Alkyl, Alkoxy (wie z.B. Methyloxycarbonyl),
Aryl, Arylalkyl oder Arylalkyloxy darstellt und die Begriffe "Alkyl" und "Aryl" der obigen Definition
entsprechen.
-
Im
Rahmen des vorliegenden Dokuments steht "Acyloxy" für
O-Acylgruppen, wobei "Acyl" der obigen Definition
entspricht.
-
Unter
einem "geeigneten
Substituenten" ist
eine chemisch und pharmazeutisch akzeptable funktionelle Gruppe
zu verstehen, d.h. eine Gruppe, die die inhibierende Wirkung der
erfindungsgemäßen Verbindungen nicht
aufhebt. Solche geeigneten Substituenten kann der Fachmann durch
Routineverfahren auswählen.
Geeignete Substituenten sind z.B. Alkylgruppen, Hydroxygruppen,
Oxogruppen, Mercaptogruppen, Alkylthiogruppen, Alkoxygruppen, Aryl-
oder Heteroarylgruppen, Aralkyl- oder Heteroaralkylgruppen, Aralkoxy-
oder Heteroaralkoxygruppen, Carboxygruppen, Aminogruppen, Alkyl-
oder Dialkylaminogruppen, Carbamoylgruppen, Alkylcarbonylgruppen,
Alkoxycarbonylgruppen, Alkylaminocarbonylgruppen, Dialkylaminocarbonylgruppen,
Arylcarbonylgruppen, Aryloxycarbonylgruppen, Alkylsulfonylgruppen,
Arylsulfonylgruppen und dergleichen.
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Im
Rahmen des vorliegenden Dokuments steht "D- oder L-Aminosäure", sofern nicht anders angegeben, für Glycin,
Alanin, Valin, Leucin, Isoleucin, Phenylalanin, Asparagin, Glutamin,
Tryptophan, Prolin, Serin, Threonin, Tyrosin, Hydroxyprolin, Cystein,
Cystin, Methionin, Asparaginsäure,
Glutaminsäure,
Lysin, Arginin oder Histidin.
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Die
Stellungen am Ring der Formel I sind im Rahmen des vorliegenden
Dokuments wie folgt definiert:
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Die
Verbindung der Formel I kann chirale Zentren aufweisen und daher
in verschiedenen enantiomeren Formen vorliegen. Die Erfindung bezieht
sich auf alle optischen Isomeren, Diastereomeren, Atropisomeren,
Stereoisomeren und Tautomeren der Verbindungen der Formel I sowie
deren Mischungen.
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Im
Rahmen des vorliegenden Dokuments bezieht sich ein kleines Molekül auf Moleküle, die
keine DNA-, RNA- oder Polypeptidmoleküle sowie keine Moleküle monoclonaler
Antikörper
darstellen und ein Molekulargewicht von unter 1000 AMV aufweisen.
Bevorzugte kleine Moleküle
besitzen eine Hydroxamsäuregruppe
(-(C=O)(NH)OH), eine heterocyclische Gruppe, eine Sulfonamidgruppe
und/oder eine Arylgruppe.
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Unter
einem "Wirkstoff" (z.B. einem Wirkstoff,
der TNF-α selektiv
inhibiert) ist im Rahmen dieses Dokuments jedes chemische oder pharmazeutische
Molekül
zu verstehen, das die beanspruchte inhibierende Wirkung aufweist,
beispielsweise eine DNA, RNA, ein Antisense- oder Sense-Oligonucleotid,
ein mono- oder polyclonaler Antikörper oder ein kleines Molekül.
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Die
vorliegende Erfindung umfasst auch die pharmazeutisch akzeptablen
Säureadditionssalze
der Verbindungen der Formel I. Zur Herstellung der pharmazeutisch
akzeptablen Säureadditionssalze
der vorgenannten erfindungsgemäßen basischen
Verbindungen können
jene Säuren
genommen werden, die nichttoxische Säureadditionssalze bilden, d.h.
Salze, die pharmakologisch akzeptable Anionen enthalten, wie beispielsweise
das Hydrochlorid, Hydrobromid, Hydroiodid, Nitrat, Sulfat, Bisulfat,
Phosphat, saures Phosphat, Acetat, Lactat, Citrat, Säurecitrat,
Tartrat, Bitartrat, Succinat, Maleat, Fumarat, Gluconat, Saccharat,
Benzoat, Methansulfonat, Ethansulfonat, Benzolsulfonat, p-Toluolsulfonat
und Pamoat [d.h., 1,1'-Methylen-bis-(2-hydroxy-3-naphthoat)].
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Die
Erfindung bezieht sich auch auf die Basenadditionssalze der Verbindungen
der Formel I. Zur Herstellung von pharmazeutisch akzeptablen Basensalzen
der Verbindungen der Formel I, die saurer Natur sind, können Basen
genommen werden, die mit diesen Verbindungen nichttoxische Basensalze
bilden. Solche nichttoxischen Basensalze sind z.B. jene, die von
pharmakologisch akzeptablen Kationen wie beispielsweise Alkalimetall-Kationen
(z.B. Kalium und Natrium) und Erdalkalimetall-Kationen (z.B. Calcium
und Magnesium) abgeleitet sind, sowie Ammonium oder wasserlösliche Aminadditionssalze
wie N-Methylglucamin-(meg lumin), und die niederen Alkanolammonium-
und andere Basensalze pharmazeutisch akzeptabler organischer Amine.
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Die
vorliegende Erfindung bezieht sich auch auf isotopisch markierte
Verbindungen, die mit denen der Formel I identisch sind, mit Ausnahme
dessen, dass ein oder mehrere Atome durch ein Atom ersetzt sind,
dessen Atommasse oder Massezahl sich von der natürlich vorkommenden Atommasse
oder Massezahl unterscheidet. Beispiele solcher Isotope, die in
die erfindungsgemäßen Verbindungen
eingebaut werden können, sind
Isotope von Wasserstoff, Kohlenstoff, Stickstoff, Sauerstoff, Phosphor,
Fluor und Chlor, wie 2N, 3H, 13C, 14C, 15N, 16O, 17O, 31P, 32P, 35S, 18F und 36Cl. Die
Erfindung umfasst auch die erfindungsgemäßen Verbindungen, deren Prodrugs
und die pharmazeutisch akzeptablen Salze dieser Verbindungen und
Prodrugs, die die vorgenannten Isotope und/oder andere Isotope anderer
Atome enthalten. Bestimmte isotop markierte erfindungsgemäße Verbindungen,
beispielsweise die, in die radioaktive Isotope wie 3H
und 14C inkorporiert sind, sind bei Distributionsassays
von Arzneimitteln und/oder Substraten in Geweben von Vorteil. Wegen
ihrer einfachen Herstellung und Nachweisbarkeit sind tritiierte
Isotope, d.h. 3H-Isotope, und Kohlenstoff-14-Isotope,
d.h. 14C-Isotope, besonders bevorzugt. Weiterhin
kann die Substitution mit schwereren Isotopen wie Deuterium, d.h. 2H, wegen der höheren metabolischen Stabilität, beispielsweise
höheren
Halbwertszeit in vivo oder geringeren Mindestdosen, bestimmte Vorteile
bei der Therapie haben und somit unter gewissen Umständen bevorzugt
sein. Isotop markierte Verbindungen der Formel I und deren Prodrugs
können
im Allgemeinen durch die in den Schemata und/oder den im Folgenden
angeführten
Beispielen beschriebenen Verfahren erhalten werden, wobei ein nicht
isotop markiertes Reagens durch ein leicht erhältliches isotop markiertes
Reagens ersetzt wird.
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Die
Erfindung betrifft auch eine pharmazeutische Komposition zur Behandlung
eines Zustands, der ausgewählt
ist aus Arthritis (einschließlich
Osteoarthritis und Gelenkrheumatismus), entzündlichen Darmerkrankungen,
Morbus Crohn, Emphysem, akutem Lungenversagen (ARDS), Asthma, chronischer
obstruktiver Lungenerkrankung (COPD), Alzheimer, Toxizität nach Organtransplantation,
Cachexie, allergischen Reaktionen, allergischer Kontakthypersensibilität, Krebs
(darunter aus soliden Tumoren bestehender Krebs wie Dickdarmkrebs,
Brustkrebs, Lungenkrebs und Prostatakrebs und haematopoietische
bösartige
Formen wie Leukämien
und Lymphome), Geschwürbildung
in Geweben, Restenose, Parodontitis, Epidermolysis bullosa, Osteoporose,
Lockerung künstlicher
Gelenkimplantate, Atherosklerose (einschließlich Ruptur atherosklerotischer Plaque),
Aorten-Aneurysma (einschließlich
Bauchaorten- und Hirnaorten-Aneurysma), dekompensierter Herzinsuffizienz,
Myocardinfarkt, Schlaganfall, zerebraler Ischämie, Schädelverletzungen, Verletzungen
des Rückenmarks,
akuten und chronischen neurodegenerativen Störungen, Autoimmunkrankheiten,
Chorea Huntington, Parkinson, Migräne, Depression, peripherer
Neuropathie, Schmerzen, zerebraler Amyloidangiopathie (CAA), nootropem
Enhancement und Cognition Enhancement, amyotropher Lateralsklerose,
multipler Sklerose, okulärer
Angiogenesis, Verletzungen der Hornhaut, Degeneration der Macula,
abnormaler Wundheilung, Verbrennungen, Diabetes, Tumorinvasion,
Tumorwachstum, Tumormetastasen, Vernarbung der Hornhaut, Scleritis,
AIDS, Sepsis und septischem Schock bei Säugetieren einschließlich Menschen,
enthaltend eine für eine
solche Behandlung wirksame Menge einer Verbindung der Formel I oder
deren pharmazeutisch akzeptablen Salzes und einen pharmazeutisch
akzeptablen Träger.
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Die
Erfindung betrifft auch die Verwendung einer Verbindung der Formel
I oder deren pharmazeutisch akzeptablen Salzes zur Herstellung eines
Arzneimittels zur Behandlung eines Zustands, der ausgewählt ist aus
Arthritis (einschließlich
Osteoarthritis und Gelenkrheumatismus), entzündlichen Darmerkrankungen,
Morus Crohn, Emphysem, akutem Lungenversagen (ARDS), Asthma, chronischer
obstruktiver Lungenerkrankung (COPD), Alzheimer, Toxizität nach Organtranslantation,
Cachexie, allergischen Reaktionen, allergischer Kontakthypersensibilität, Krebs
(darunter aus soliden Tumoren bestehender Krebs wie Dickdarmkrebs,
Brustkrebs, Lungenkrebs und Prostatakrebs und haematopoietischen
bösartigen
Formen wie Leukämien
und Lymphome), Geschwürbildung
in Geweben, Restenose, Parodontitis, Epidermolysis bullosa, Osteoporose,
Lockerung künstlicher
Gelenkimplantate, Atherosklerose (einschließlich Ruptur atherosklerotischer
Plaque), Aorten-Aneurysma (einschließlich Bauchaorten- und Hirnaorten-Aneurysma),
dekompensierter Herzinsuffizienz, Myocardinfarkt, Schlaganfall,
zerebraler Ischämie,
Schädelverletzungen,
Verletzungen des Rückenmarks, akuten
und chronischen neurodegenerativen Störungen, Autoimmunkrankheiten,
Chorea Huntington, Parkinson, Migräne, Depression, peripherer
Neuropathie, Schmerzen, zerebraler Amyloidangiopathie (CAA), nootropem
Enhancement und Cognition Enhancement, amyotropher Lateralsklerose,
multipler Sklerose, okulärer Angiogenesis,
Verletzungen der Hornhaut, Degeneration der Macula, abnormaler Wundheilung,
Verbrennungen, Diabetes, Tumorinvasion, Tumorwachstum, Tumormetastasen,
Vernarbung der Hornhaut, Scleritis, AIDS, Sepsis und septischem
Schock.
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Der
Begriff "Behandeln" bezieht sich im
Rahmen des vorliegenden Dokuments auf die Umkehrung, Milderung oder
Prävention
der Störung
oder des Zustands oder eines oder mehrerer ihrer/seiner Symptome, oder
die Inhibierung der Progression der Störung oder des Zustands oder
eines oder mehrerer ihrer/seiner Symptome. Der Begriff "Behandlung" bezieht sich auf
den Vorgang des Behandelns gemäß der vorstehenden Definition.
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Die
Verbindungen der Formel I, die freie Amino-, Amido-, Hydroxy- oder
Carboxy-Gruppen
aufweisen, können
in Prodrugs überführt werden.
Prodrugs sind Verbindungen, in denen ein Aminosäurerest oder eine Polypeptidkette
mit zwei oder mehr (beispielsweise zwei, drei oder vier) Aminosäureresten über Peptidbindungen
kovalent an freie Amino-, Hydroxy- oder Carboxy-Gruppen von Verbindungen
der Formel I gebunden ist. Die Aminosäurereste umfassen die 20 natürlich vorkommenden
Aminosäuren,
die allgemein durch drei Buchstaben wiedergegeben werden, und 4-Hydroxyprolin,
Hydroxylysin, Citrullin, Homocystein, Homoserin, Ornithin und Methioninsulfon.
Prodrugs sind auch Verbindungen, in denen Carbonate, Carbamate,
Amide und Alkylester über
die Carbonyl-Kohlenstoff-Prodrug-Seitenkette kovalent an die oben
aufgeführten
Substituenten der Formel I gebunden sind.
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Der
Fachmann wird erkennen, dass die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung
einer großen
Zahl der verschiedensten Krankheiten verwendet werden können. Der
Fachmann wird auch erkennen, dass beim Einsatz der erfindungsgemäßen Verbindungen
zur Behandlung einer bestimmten Krankheit diese mit verschiedenen
bereits existierenden therapeutischen Wirkstoffen, die zur Behandlung
dieser Krankheit verwendet werden, kombiniert werden können.
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Zur
Behandlung des Gelenkrheumatismus können die erfindungsgemäßen Verbindungen
mit Wirkstoffen wie TNF-α-Inhibitoren
wie beispielsweise monoclonalen anti-TNF-Antikörpern und TNF-Rezeptoren-Immunoglobulin-Molekülen (wie
Enbrel®),
COX-2-Inhibitoren, niedrig dosiertem Methotrexat, Lefunimide, Hydroxychlorochin,
d-Penicilamin, Auranofin
oder parenteral oder oral verabreichtem Gold kombiniert werden.
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Die
erfindungsgemäßen Verbindungen
können
auch in Kombination mit bereits existierenden therapeutischen Wirkstoffen
zur Behandlung der Osteorathristis verwendet werden. Zur kombinierten
Verwendung geeignete Wirkstoffe sind u.a. übliche nicht-steroidale entzündungshemmende
Wirkstoffe (non-steroidal anti-inflammatory agents, im Folgenden:
NSAIDs) wie Piroxicam, Diclofenac, Propionsäuren wie Naproxen, Flubiprofen,
Fenoprofen, Ketoprofen und Ibuprofen, Fenamate wie Mefenamsäure, Indomethacin,
Sulindac, Apazon, Pyrazolone wie Phenylbutazon, Salicylate wie z.B.
Acetylsalicylsäure,
COX-2-Inhibitoren wie Celecoxib und Rofecoxib, Analgetika und intraartikuläre therapeutische
Wirkstoffe wie Corticosteroide und Hyaluronsäuren wie Hyalgan und Synvisc.
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Die
erfindungsgemäßen Verbindungen
können
weiter in Kombination mit Wirkstoffen gegen Krebs verwendet werden,
z.B. Endostatin und Angiostatin, oder cytotoxischen Wirkstoffen
wie Adriamycin, Daunomycin, cis-Platin, Etoposid, Taxol, Taxoter
und Alkaloiden wie Vincristin sowie mit Antimetaboliten wie Methotrexat.
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Die
erfindungsgemäßen Verbindungen
können
auch in Kombination mit cardiovasculären Wirkstoffen wie Calciumkanalblockern,
fettsenkenden Wirkstoffen wie Statinen, Fibraten, Betablockern,
ACE-Inhibitoren, Angiotensin-2-Rezeptor-Antagonisten und Thrombocytenaggregation-Inhibitoren
verwendet werden.
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Weiterhin
können
die erfindungsgemäßen Verbindungen
kombiniert werden mit CNS-Wirkstoffen wie Antidepressiva (z.B. Sertralin),
Wirkstoffen gegen Parkinson (z.B. Deprenyl, L-Dopa, Requip, Miratex,
MAOB-Inhibitoren wie Seiegin und Rasagilin, comP-Inhibitoren wie
Tasmar, A-2-Inhibitoren, Dopamin-Reuptake-Inhibitoren, NMDA-Antagonisten,
Nikotinagonisten, Dopaminagonisten und Inhibitoren der neuronalen Stickstoffmonoxid-Synthase)
und Wirkstoffen gegen Alzheimer wie Donepezil, Tacrin, COX-2-Inhibitoren,
Propentofyllin oder Metryfonat.
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Die
erfindungsgemäßen Verbindungen
können
auch in Kombination mit Osteoporosewirkstoffen wie Roloxifen, Droloxifen
oder Fosomax und mit Immunsuppressiva wie FK-506 und Rapamycin verwendet
werden.
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Ausführliche Beschreibung der Erfindung
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Die
folgenden Reaktionsschemata illustrieren die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen. Sofern
nicht anders angegeben, weisen Q, X und R1 bis
R9 in den Reaktionsschemata und in den daran
anschließenden
Ausführungen
die oben angegebenen Bedeutungen auf.
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Schema
1 betrifft die Herstellung von Verbindungen der Formel I. Gemäß Schema
1 werden die Verbindungen der Formel I aus Verbindungen der Formel
II hergestellt durch Aktivierung der Carbonsäuregruppe von Verbindungen
der Formel II und anschließende
Behandlung der aktivierten Säure
mit einem Hydroxylamin oder einem geschützten Hydroxylamin-Äquivalent,
von dem dann zur Bildung der Hydroxamgruppe die Schutzgruppe abgespalten
wird. Die Aktivierung der Carboxygruppe der Verbindung der Formel
II erfolgt mit Hilfe der Einwirkung mit einem geeigneten Aktivierungsmittel
wie beispielsweise Dialkylcarbodiimiden, Benzotriazol-1-yloxy-tris(dialky(amino)-phosphoniumsalzen
oder Oxalylchlorid in Gegenwart einer katalytischen Menge von N,N-Dimethylformamid.
Bevorzugt wird als Aktivierungsmittel Benzotriazol-1-yloxy-tris(dimethylamino)phosphonium-Hexafluorphosphat
genommen. Im Allgemeinen wird das Hydroxylamin oder geschützte Hydroxylamin-Äquivalent in situ aus einem
Salz, wie Hydroxylamin-Hydrochlorid, in Gegenwart eines basischen
Amins, wie Triethylamin oder Diisopropylethylamin, gebildet. Geeignete
geschützte
Hydroxylamine umfassen u.a. O-tert-Butylhydroxylamin, O-Allylhydroxylamin,
O-tert-Butyldimethylsilylhydroxylamin, O-Trimethylsilylethylhydroxylamin,
O-Benzylhydroxylamin oder N,O-bis-Trimethylsilylethylhydroxylamin.
Die Abspaltung der Schutzgruppe erfolgt durch Hydrogenolyse im Falle
der Verwendung von O-Benzylhydroxylamin (bevorzugter Katalysator
ist 5%-iges Palladium auf Bariumsulfat) oder durch Behandlung mit
einer starken Säure wie
Trifluoressigsäure
im Falle der Verwendung von O-tert-Butylhydroxylamin oder O-Trimethylsilylethylhydroxylamin.
Wenn O-Allylhydroxylamin eingesetzt wird, wird die Allylgruppe entweder
durch Behandlung mit Ammoniumformiat in wässrigem Acetonitril bei 60°C in Gegenwart
einer katalytischen Menge von Tetrakis(triphenylphosphin)palladium(0)
oder durch Behandlung mit Piperidin in Tetrahydrofuran bei 23°C in Gegenwart
einer katalytischen Menge von dimerem Allylpalladiumchlorid und
Diphenylphosphinoethan abgespalten. Im Falle der Verwendung von
N,O-bis-Trimethylsilylhydroxylamin
(bevorzugt in situ gebildet aus Trimethylsilylchlorid und Hydroxylamin-Hydrochlorid
in Pyridin bei 0°C)
werden die Silyl-Schutzgruppen durch Behandlung mit verdünnter wässriger
Säure wie
1 N Salzsäure
abgespalten. Geeignete Lösungsmittel
für die
genannte Aktivierung und die Hydroxylaminbildung sind u.a. Methylenchlorid,
N,N-Dimethylformamid oder Tetrahydrofuran, bevorzugt Methylenchlorid.
Die genannte Aktivierung und die Hydroxylaminbildung werden bei
Temperaturen zwischen etwa 0°C
und etwa 60°C
(bevorzugt bei 23°C)
im Verlauf von etwa 1 h bis etwa 20 h (bevorzugt 4 h) durchgeführt.
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Die
Verbindungen der Formel II werden durch Abspalten der Schutzgruppe
P unter Bildung einer Carbonsäure
aus Verbindungen der Formel III hergestellt. Wenn die Schutzgruppe
P tert-Butyl darstellt, geschieht diese Umwandlung durch Einwirken
einer entsprechend starken Säure
wie Salzsäure
oder Trifluoressigsäure (bevorzugt
Trifluoressigsäure).
Vorzugsweise wird diese Reaktion in einem Lösungsmittel wie Ethylacetat, 1,4-Dioxan
oder Methylenchlorid (bevorzugt Methylenchlorid) durchgeführt. Falls
die Schutzgruppe P Methyl oder Ethyl darstellt, erfolgt die Umwandlung
durch Verseifen mit einer geeigneten Hydroxidquelle wie beispielsweise
Natrium- oder Lithiumhydroxid,
wobei Lithiumhydroxid bevorzugt ist. Vorzugsweise wird die Verseifung unter
Rühren
in einem wässrigen
Lösungsmittelgemisch
wie Tetrahydrofuran-Methanol-Wasser oder 1,4-Dioxan-Methanol-Wasser
bei einer Temperatur zwischen etwa 0°C und nahe dem Siedepunkt des
Lösungsmittelsystems
(bevorzugt bei 60°C)
durchgeführt.
Falls die Schutzgruppe P Trialkylsilyl darstellt, kann die Silylgruppe durch
Behandlung mit einer verdünnten
wässrigen
Säure wie
z.B. verdünnter
Salzsäure,
in wässrigem
Methanol oder durch Erhitzen zum Rückfluss in Methanol abgespalten
werden. Falls die Schutzgruppe P Benzyl darstellt, kann die Umwandlung
durch Hydrierung der Benzylgruppe erfolgen, die in einem geeigneten
Lösungsmittel
wie Ethanol, Methanol oder Ethylacetat unter Wasserstoff in Gegenwart
eines Katalysators, z.B. 10%-iges Palladium auf Kohle, durchgeführt wird.
Im Allgemeinen werden die Reaktionen zur Abspaltung der Schutzgruppe
P im Verlauf von etwa 30 Minuten bis etwa 8 h durchgeführt, vorzugsweise
im Verlauf von etwa 4 h. Sofern nicht anders angegeben, werden die
vorstehend beschriebenen Reaktionen bei einer Temperatur zwischen
etwa 0°C
und etwa 25°C,
bevorzugt bei etwa 23°C,
durchgeführt.
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Alternativ
können
die Verbindungen der Formel III durch Einwirken von Hydroxylamin
direkt in Verbindungen der Formel I überführt werden. Vorzugsweise ist
die Schutzgruppe P Methyl. Geeignete Lösungsmittel sind z.B. Methanol,
Ethanol oder 2-Propanol, wobei Methanol bevorzugt ist. Für diese
Reaktion wird das Hydroxylamin bevorzugt durch Behandlung von Hydroxylamin-Hydrochlorid
mit Kaliumhydroxid gebildet. Die Reaktion wird bei etwa 0°C bis etwa
23°C (bevorzugt
bei 0°C)
im Verlauf von etwa 10 min. bis etwa 4 h (bevorzugt 2 h) durchgeführt.
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Die
Verbindungen der Formel III, d.h. Thiomorpholine, Morpholine oder
Piperazine, werden aus Verbindungen der Formel IV, in denen Y für Halogen
oder Hydroxy steht, durch intramolekulare Ringschlussverfahren,
je nach Natur der Gruppe Y, hergestellt. Falls Y Chlor oder Brom
darstellt, kann sich der Ring spontan bilden oder durch Behandlung
mit einer geeigneten Base wie Diisopropylethylamin oder einem Erdalkalicarbonat.
Vorzugsweise erfolgt dieser Ringschluss in einem Lösungsmittel
wie Tetrahydrofuran, Benzol, Chloroform oder N,N-Dimethylformamid
(bevorzugt Tetrahydrofuran). Die Reaktion wird vorzugsweise unter
Rühren
ungefähr
bei einer Temperatur zwischen ungefähr Raumtemperatur (22°C) und dem
Siedepunkt des eingesetzten Lösungsmittels
im Verlauf von etwa 30 min. bis etwa 24 h (bevorzugt 12 h) durchgeführt. Falls
Y Hydroxy darstellt, wird die Hydroxylgruppe bevorzugt durch Einwirkung
eines eine Mischung aus einem Trialkylphosphin und einem Dialkylazodicarboxylat
(vorzugsweise Triphenylphosphin und Dimethylazodicarboxylat) darstellenden
Komplexes in einem geeigneten Lösungsmittel
wie beispielsweise Tetrahydrofuran aktiviert. Die bevorzugte Abfolge
umfasst die Zugabe von Verbindungen der Formel III zu dem zuvor
gebildeten Komplex aus einem Trialkylphosphin und einem Dialkylazodicarboxylat.
Die Reaktion wird unter Rühren
bei etwa 0°C
bis etwa 25°C,
bevorzugt bei etwa 0°C,
im Verlauf von etwa 10 min. bis etwa 4 h, und anschließend im
Verlauf von etwa 16 h bei 23°C
durchgeführt.
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Die
Verbindungen der Formel IV werden erhalten durch Reaktion einer
Verbindung der Formel VI mit einer Verbindung der Formel
worin R
3,
R
4, R
5, R
6 und Y die oben angegebenen Bedeutungen
aufweisen und X für
Sauerstoff, Schwefel oder NR
7 steht, worin
R
7 die oben angegebenen Bedeutungen aufweist.
Bevorzugt wird die Reaktion in einem geeigneten Lösungsmittel
wie Chloroform, Methylenchlorid, Tetrahydrofuran oder Benzol (bevorzugt
Methylenchlorid) in Gegenwart eines Katalysators wie z.B. einer
Lewissäure,
beispielsweise Zinkchlorid oder Magnesiumchlorid, oder Bortrifluorid-etherat
(bevorzugt Bortrifluorid-etherat) durchgeführt. Die Reaktion erfolgt unter Rühren bei
einer Temperatur zwischen etwa 0°C
und dem Siedepunkt des eingesetzten Lösungsmittels, vorzugsweise
bei Raumtemperatur (22–23°C), im Verlauf
von etwa 1 h bis 4 Tagen, bevorzugt etwa 2 Tagen.
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Verbindungen
der Formel VI, die einen Aziridinring enthalten, werden aus Verbindungen
der Formel VII durch Aktivierung der Hydroxylgruppe unter Bildung
einer abspaltbaren Gruppe und anschließenden intramolekularen Ringschluss
erhalten. Vorzugsweise erfolgt die Aktivierung durch Überführen des
Alkohols in den entsprechenden Sulfonatester (bevorzugt Mesyl),
oder durch Einwirkung eines eine Mischung aus einem Trialkylphosphin
und einem Dialkylazodicarboxylat (bevorzugt Triphenylphosphin und
Dimethylazodicarboxylat) darstellenden Komplexes in einem geeigneten
Lösungsmittel
wie z.B. Tetrahydrofuran. Im erstgenannten Falle des Sulfonats wird
der Aziridinring vorzugsweise durch anschließende Behandlung mit einer
Base wie Diisopropylethylamin oder Kalium-tert-butoxid gebildet.
Im letzteren Falle umfasst die bevorzugte Abfolge die Zugabe von
Verbindungen der Formel VII zu dem zuvor gebildeten Trialkylphosphin-Dialkylazodicarboxylat-Komplex. Die
Reaktion wird unter Rühren
bei einer Temperatur von etwa 0°C
bis etwa 25°C,
bevorzugt bei 0°C,
im Verlauf von etwa 10 min. bis etwa 4 h, und anschließend im
Verlauf von etwa 16 h bei 23°C
durchgeführt.
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Die
Verbindungen der Formel VII, in denen P Methyl, Ethyl, tert-Butyl,
Trialkylsilyl oder Benzyl darstellt (Methyl und tert-Butyl sind
bevorzugt), werden hergestellt durch Reaktion einer geschützen Aminosäure der Formel
IX, in der P für
Methyl, Ethyl, tert-Butyl,
Trialkylsilyl oder Benzyl steht (Methyl und tert-Butyl sind bevorzugt),
mit einem Sulfonylchlorid der Formel
in Gegenwart einer Base in
einem in der Reaktion inerten Lösungsmittel.
Geeignete Lösungsmittel
sind u.a. Methylenchlorid, Tetrahydrofuran, N,N-Dimethylformamid, eine
Mischung von 1,4-Dioxan und Wasser oder eine Mischung von Ethylacetat
und Wasser. Geeignete Basen sind u.a. Triethylamin, Diisopropylethylamin,
ein Erdalkalicarbonat oder -hydroxid. Bevorzugt werden Methylenchlorid
als Lösungsmittel
und Diisopropylethylamin als Base eingesetzt. Die Reaktion wird
unter Rühren
bei einer Temperatur von etwa 0°C
bis etwa 25°C, bevorzugt
bei 0°C,
im Verlauf von etwa 10 min. bis etwa 1 Tag, bevorzugt etwa 12 h,
durchgeführt.
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Die
Verbindungen der Formel IX sind geschützte Aminosäuren, die im Handel erhältlich oder
durch dem Fachmann bekannte Verfahren herstellbar sind, beispielsweise
durch Verfahren, die beschrieben sind bei Willliams in "Synthesis of Optically
Active α-Amino
Acids", Hrsg. J.
E. Baldwin, Pergamon Press, Oxford, 1989, oder bei Coppola und Schuster
in "Asymmetric Synthesis.
Construction of Chiral Molecules Using Amino Acids", John Wiley & Son, New York,
1987, sowie in den dort genannten Literaturquellen.
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Die
Verbindungen der Formel VIII sind im Handel erhältlich oder können auf
bekannte Weise erhalten werden. Die Verbindungen der Formel V sind
im Handel erhältlich
oder können
durch dem Fachmann bekannte Verfahren hergestellt werden. Verfahren
zur Herstellung von Verbindungen der Formel V sind u.a. beschrieben bei
Einhorn in "An Easy
and Efficient Epoxide Opening to give Halohydrins using Tin(II)
Halides", J. Chem.
Soc. Chem. Comm. 1368–1369
(1986), bei Cambie in "Reactions
of Alkenes with Electrophilic Iodine in Tetramethylene Sulphone-Chlorform", J. Chem. Soc. Perkin
Trans 1, 226–230
(1986) und bei Ciacco in "Dilithium
Tetrachlorocuprate. A Reagent for Regioselective Cleavage of Epoxides
to Chlorohydrins",
Tetrahedron Lett. 27 3697–3700
(1986). Dem Fachmann ist bekannt, dass weitere chemische Modifikationen
der durch die in den oben angegebenen Quellen aufgeführten Verfahren
erhaltenen Produkte zu weiteren Analogen der Formel V führen können.
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Schema
2 bezieht sich auf die Herstellung von Verbindungen der Formel X.
Die Verbindungen der Formel X stellen Verbindungen der Formel III
gemäß Schema
1 dar, in denen P Methyl ist. Die Verbindungen der Formel X können durch
die in Schema 1 dargestellten Verfahren in Verbindungen der Formel
I überführt werden.
Gemäß Schema
2 werden die Verbindungen der Formel X durch Ringschluss aus Verbindungen
der Formel XI erhalten. Dem Fachmann ist klar, dass R3 in
Formel XI entweder R3 oder R4 sein
kann, weswegen R3 und R4 in
Formel X ohne Stereochemie angegeben sind. Vorzugsweise wird der
Ringschluss durch Aktivierung oder oxidative Spaltung des Olefins
durchgeführt.
Dabei versteht sich für
den Fachmann, dass die Art der Olefinaktivierung oder -spaltung
die Natur von R3 oder von R4 bestimmt.
Dem Fachmann ist auch bekannt, dass in einigen Fällen die Gruppe X der Verbindung
der Formel XI vor der Olefinaktivierung oder oxidativen Spaltung des
Olefins zeitweise durch eine Schutzgruppe geschützt werden muss. Zu den Verfahren
der Olefinaktivierung gehört
z.B. die Behandlung von Verbindungen der Formel XI mit elektrophilen
Mitteln wie starken Säuren, Quecksilbersalzen,
Palladium(II), Jod oder Persäuren.
Gemäß einem
dieser Verfahren werden Verbindungen der Formel XI mit einem Quecksilber(II)-salz
behandelt. Der dabei als Zwischenverbindung erhaltene organische
Quecksilberkomplex kann zur Bildung von Verbindungen der Formel
X mit verschiedenen Reagenzien behandelt werden. Geeignete Quecksilbersalze
sind u.a. Quecksilber(II)-acetat und Quecksilber(II)-trifluoracetat, wobei
letzteres bevorzugt ist. Vorzugsweise wird die vorstehende Reaktion
in Gegenwart einer Base wie Kaliumcarbonat in einem Lösungsmittel
wie Tetrahydrofuran bei einer Temperatur von etwa –10°C bis etwa 30°C, bevorzugt
0°C bis
etwa 25°C,
im Verlauf von etwa 30 min. bis etwa 2 h, bevorzugt etwa 1 h, durchgeführt. Geeignete
Reagenzien zur Umwandlung des organischen Quecksilber-Komplexes in Verbindungen
der Formel X sind beispielsweise Natrium-Amalgam, Natriumborhydrid,
Natriumborhydrid in Gegenwart von Triethylboran, Natriumborhydrid
in Gegenwart von Sauerstoff, Jod u.a. Die Verwendung von Natriumborhydrid
mit Triethylboran ist das bevorzugte Verfahren, um das Quecksilber
durch ein Wasserstoffatom zu ersetzen. Zum Ersetzen des Quecksilbers
durch eine Hydroxygruppe wird bevorzugt Natriumborhydrid in Gegenwart
von Sauerstoff verwendet, und zum Ersetzen des Quecksilbers durch
Jod wird Jod verwendet. Dem Fachmann ist klar, dass die Verbindungen
der Formel X, die durch Ersetzen des Quecksilberatoms erhalten wurden,
weiter funktionalisiert werden können
unter Erhalt weiterer Verbindungen der Formel X. Die Reaktionen
des organischen Quecksilberkomplexes werden in einem Lösungsmittel
wie beispielsweise Tetrahydrofuran oder Methylenchlorid (bevorzugt
Tetrahydrofuran) bei einer Temperatur von etwa –10°C bis etwa 20°C im Verlauf
von etwa 30 min. bis etwa 2 h, bevorzugt etwa 1 h, durchgeführt. Alternativ
kann das Olefin oxidativ gespalten werden, z.B. durch Behandlung
von Verbindungen der Formel XI mit Ozon, Rutheniumtetroxid oder
Osmiumtetroxid und Natriummetaperiodat, unter Erhalt von Verbindungen
der Formel X. Vorzugsweise werden zur Spaltung des Olefins Osmiumtetroxid
und Natriummetaperiodat eingesetzt, und bevorzugt wird die Spaltung
in einem Lösungsmittelgemisch
wie Tetrachlormethan und Wasser, einer Mischung von Dioxan und Wasser
oder einer Mischung von Tetrahydrofuran und Wasser, im Verlauf von
etwa 1 h bis etwa 24 h, bevorzugt 12 h, durchgeführt.
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Die
Verbindungen der Formel XI werden aus Verbindungen der Formel XII
durch Reaktion mit einer geeigneten Allylverbindung wie einem Allylhalogenid,
einem Allylsulfonatester oder einem Allylacetat hergestellt. Wie
dem Fachmann bekannt ist, sind solche Allylverbindungen im Handel
erhältlich
oder auf einfache Weise aus im Handel erhältlichen Stoffen herstellbar.
Bevorzugt wird die Allylierungsreaktion in Gegenwart einer geeigneten
Base oder eines geeigneten Katalysators durchgeführt. Geeignete Basen sind u.a.
Trialkylamine wie Diisopropylethylamin, Erdalkalicarbonate und Natriumhydrid.
Geeignete Katalysatoren sind Palladium(0)-, Nickel(0)-, Wolfram(0)-
oder Molybdänsalze
in Gegenwart von Liganden wie Trialkylphosphinen, Cyclooctadien,
Dibenzylidenaceton, Kohlenmonoxid und Acetylacetonat. Vorzugsweise
werden die Allylierungsreaktionen in einem Lösungsmittel wie N,N-Dimethylformamid,
Tetrahydrofuran oder Methylenchlorid durchgeführt. Dem Fachmann ist klar,
dass in einigen Fällen
die Gruppe X der Verbindung der Formel XII vor der Allylierung zeitweise
mit einer Schutzgruppe geschützt
werden muss. Die bevorzugte Allylierungsreaktion ist die Reaktion
von Verbindungen der Formel XII mit Allyliodid in Gegenwart von
Cäsiumcarbonat
in N,N-Dimethylformamid bei einer Temperatur von etwa 0°C bis etwa
60°C (bevorzugt
bei 23°C)
im Verlauf von etwa 1 h bis 24 h (bevorzugt 2,5 h).
-
Die
Verbindung der Formel XII wird durch Bildung des entsprechenden
Methylesters und anschließende
Reaktion mit einem Arylsulfonylchlorid der Formel QSO2Cl
(worin Q die oben angegebenen Bedeutungen aufweist) aus einer Verbindung
der Formel XIII hergestellt. Der Methylester kann durch Behandlung
von Verbindungen der Formel XIII mit einer starken Säure wie
Toluolsulfonsäure,
Salzsäure
oder Schwefelsäure
in Methanol erhalten werden. Bevorzugt ist die Verwendung von wasserfreiem
Chlorwasserstoff oder von Salzsäure, gebildet
durch die Zugabe von Thionylchlorid zu Methanol. Die genannte Reaktion
wird bei Temperaturen zwischen etwa 0°C und etwa dem Siedepunkt des
Methanols im Verlauf von etwa 1 h bis etwa 24 h (bevorzugt 14 h)
durchgeführt.
Vorzugsweise wird die Reaktion des Arylsulfonylchlorids der Formel
QSO2Cl mit dem Methylester in einem Lösungsmittel
wie Methylenchlorid, Dioxan und Wasser, N,N-Dimethylformamid oder
Tetrafuran (bevorzugt Methylenchlorid) in Gegenwart einer Base wie
beispielsweise Diisopropylethylamin oder Kaliumcarbonat (bevorzugt
Diisopropylethylamin) im Verlauf von etwa 2 h bis etwa 2 Tagen (bevorzugt
14 h) bei einer Temperatur von etwa 0°C bis etwa 60°C (bevorzugt
23°C) durchgeführt.
-
Die
Verbindungen der Formel XIII sind im Handel erhältlich oder können durch
dem Fachmann bekannte Verfahren hergestellt werden, wie diese z.B.
beschrieben sind bei Goodman in "An
Enantiomeric Synthesis of allo-Threonine and β-Hydroxyvalines.", J. Org. Chem. 61, 2582–2583 (1996)
und den dort genannten Literaturquellen. Die Verbindungen der Formel
QSO2Cl können
nach den in den PCT-Anmeldungen mit den Veröffentlichungsnummern WO 98/07697,
veröffentlicht
am 26. Februar 1998, und WO 98/33768, veröffentlicht am 6. August 1998,
beschriebenen Verfahren erhalten werden.
-
Das
Schema 3 betrifft ein Verfahren zum Einführen verschiedener Gruppen
Q in Verbindungen der Formel XIV. Die Verbindungen der Formeln XIV
und XVI stellen Verbindungen der Formel III in Schema 1 dar, in
denen P Methyl ist. Die Verbindungen der Formel XIV können gemäß den Verfahren
nach Schema 1 in Verbindungen der Formel I überführt werden. Gemäß Schema
3 können
Verbindungen der Formel XIV hergestellt werden durch Behandlung
einer Verbindung der Formel XV mit einem optional substituierten (C6-C10)Aryl(C1-C6)alkylhalogenid
oder (C2-C9)Heteroaryl(C1-C6)alkylhalogenid
(bevorzugt einem Bromid oder Chlorid) in Gegenwart einer Base wie
z.B. Cäsiumcarbonat
in einem polaren Lösungsmittel
wie z.B. N,N-Dimethylformamid. Das Reaktionsgemisch wird bei einer
Temperatur von etwa 0°C
bis etwa 60°C,
bevorzugt bei etwa 40°C,
im Verlauf von etwa 30 min. bis etwa 4 h, bevorzugt etwa 1 h, gerührt.
-
Die
Verbindung der Formel XV kann mit Hilfe eines Spaltungsagens aus
einer Verbindung der Formel XVI hergestellt werden. Geeignete Spaltungsagentien
sind Trimethylsilyliodid, Bortrichlorid und Bortribromid, wobei
letzteres bevorzugt ist. Vorzugsweise wird die Spaltungsreaktion
in einem geeigneten Lösungsmittel
wie beispielsweise Methylenchlorid bei einer Temperatur von etwa –78°C bis etwa
23°C im
Verlauf von etwa 1 h bis etwa 8 h durchgeführt. Alternativ kann die Spaltung
durch Hydrierung erfolgen, wenn X in der Formel XV nicht für Schwefel
steht. Bevorzugt erfolgt die Hydrierung in Gegenwart eines geeigneten
Katalysators wie 10%-iges Palladium auf Kohle in einem geeigneten
Lösungsmittel
wie Methanol, Ethanol oder Ethylacetat (bevorzugt Methanol) unter
Wasserstoff (bevorzugt bei 35 psi) bei Raumtemperatur im Verlauf
von etwa 4 h bis etwa 24 h (bevorzugt 12 h).
-
Die
Verbindung der Formel XVI stellt die Verbindung der Formel III gemäß Schema
1 dar, in der P Methyl ist und Q in einer Benzylgruppe endet. Optional
substituiertes (C6-C10)Aryl(C1-C6)alkylhalogenid
oder (C2-C9)Heteroaryl(C1-C6)alkylhalogenid
(bevorzugt Bromid oder Chlorid) sind im Handel erhältlich oder
können mit
Hilfe dem Fachmann bekannter Verfahren erhalten werden.
-
Schema
4 betrifft die Herstellung von Verbindungen der Formel I, in denen
X für SO
oder SO2 steht, aus anderen Verbindungen
der Formel I, in denen X für
S steht. Gemäß Schema
4 werden Verbindungen der Formel IB, in denen X für Schwefel
steht, durch selektive Oxidation des Schwefelatoms in Sulfoxide
(n = 1) oder Sulfone (n = 2) der Formel IA überführt. Vorzugsweise wird diese
Oxidation mit einem milden Oxidationsmittel wie "Oxone"TM (Kaliumperoxymonosulfat,
Aldrich Chemical Co.), Natriumperiodat oder Natriumperborattetrahydrat
durchgeführt,
wobei Oxone bevorzugt ist. Weiterhin erfolgt die Oxidation vorzugsweise
in einem geeigneten Lösungsmittel
oder Lösungsmittelgemisch
wie Methanol-Wasser, Aceton-Wasser, Tetrahydrofuran-Methanol-Wasser
oder 1,4-Dioxan-Methanol-Wasser (bevorzugt Methanol-Wasser). Das
Reaktionsgemisch wird bei einer Temperatur von etwa 0°C bis etwa
25°C, bevorzugt
bei 22°C,
im Verlauf von etwa 5 min. bis etwa 4 h, bevorzugt etwa 30 min.,
gerührt.
-
Die
Verbindungen der Formel IB werden gemäß den Verfahren nach Schema
1 hergestellt.
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Die
Fähigkeit
der Verbindungen der Formel I oder deren pharmazeutisch akzeptabler
Salze (im Folgenden auch als erfindungsgemäße Verbindungen bezeichnet),
Metalloproteinasen oder Reprolysin bei Säugetieren zu inhibieren und
folglich bei der Behandlung von Krankheiten wirksam zu sein, die
durch Metalloproteinase oder die Produktion des Tumor-Nekrose-Faktors
charakterisiert sind, ist durch die im Folgenden angeführten in
vitro-Versuche dargestellt.
-
Biologischer Assay
-
Inhibierung der Produktion
von löslichem
TNF
-
Die
Fähigkeit
von Verbindungen oder deren pharmazeutisch akzeptabler Salze zur
Inhibierung der zellulären
Produktion bzw. Abgabe von TNF und folglich bei der Behandlung von
Krankheiten wirksam zu sein, die mit der Dysregulation des TNF in
Zusammenhang stehen, zeigt der folgende in vitro-Assay:
-
Verfahren zur Bestimmung
der Wirksamkeit in Bezug auf rekombinantes TNFα-Converting Enzym
-
Herstellung von rekombinantem
TACE:
-
Ein
für die
Signalsequenz, die Prodomäne
und die katalytische Domäne
von TACE kodierendes DNA-Fragment (Aminosäuren 1–473) wurde durch Polymerase-Kettenreaktion unter
Verwendung einer humanen Lungen-cDNA-Bibliothek als Matrize amplifiziert.
Das amplifizierte Fragment wurde in einen pFastBac-Vektor geklont.
Die DNA-Sequenz des Inserts wurde für beide Stränge bestätigt. Ein unter Verwendung von
pFastBac in E. coli DH10Bac hergestelltes Bacmid wurde in SF9-Insektenzellen transfeziert.
Die Viruspartikel wurden auf die Stufen P1, P2 und P3 amplifiziert.
Sowohl SF9-, als auch High Five-Insektenzellen wurden mit dem P3-Virus infiziert,
und es wurde bei 27°C
im Verlauf von 48 h kultiviert. Das gewonnene Medium wurde für die Assays
und für
die weitere Reinigung verwendet.
-
Herstellung von fluoreszierendem
gequenchtem Substrat
-
Ein
Modell-TNF-α-Peptidstubstrat
(LY-LeucinAlaninGlutaminAlaninValinArgininSerin-SerinLysin(CMTR)-Arginin (LY = Lucifer
Yellow; CMTR = 5-Carboxytetramethylrhodamin)) wurde hergestellt,
und die Konzentration wurde über
die Absorbierung bei 560 nm (Esso, 60 000 M-1 CM-1) nach der Methode
von K. F. Geoghegan, "Improved
method for converting an unmodified peptide into an energy-transfer
substrate for a proteinase.",
Bioconiugate Chem. 7, 385–391
(1995) geschätzt.
Dieses Peptid enthält
die Spaltstelle auf pro-TNF, die in vivo durch TACE gespalten wird.
-
Enzymreaktion:
-
Die
Reaktion wurde in einer 96-Vertiefungen-Platte (Dynatech) durchgeführt mit
70 μl Pufferlösung (25 mM
Hepes-HCl, pH 7,5, plus 20 μM
ZnCl2), 10 μl des 100 μM fluoreszierenden gequenchten
Substrats, 10 μl einer
5%-igen Lösung
der Testverbindung in DMSO und r-TACE-Enzym in einer Menge, die
in einem Gesamtvolumen von 100 μl
in 60 min. 50% Spaltung ergibt. Die spezifische enzymatische Spaltung
an der Amidbindung zwischen Alanin und Valin wurde durch HPLC und
Massespektrometrie verifiziert. Die anfängliche Spaltrate wurde durch
Messung der Steigerungsrate der Fluoreszenz bei 530 nm (Anregung
bei 409 nm) im Verlauf von 30 min. beobachtet. Der Versuch wurde
wie folgt überprüft: 1) hinsichtlich
Hintergrundfluoreszenz des Substrats; 2) hinsichtlich Fluoreszenz
des vollständig
gespaltenen Substrats; 3) hinschichtlich Quenchen oder Steigerung
der Fluoreszenz im Falle von Testverbindung enthaltenden Lösungen.
-
Die
Daten wurden wie folgt analysiert. Der Durchschnitt der Ergebnisse
aus den keine Testverbindung enthaltenden "Kontroll"reaktionen wurde zur Festsetzung des
100%-Wertes verwendet. Das Ausmaß der Reaktion in Gegenwart
einer Test verbindung wurde mit der Reaktion ohne Testverbindung
verglichen und als "Prozentsatz
der keine Testverbindung enthaltenden Kontrolle" bezeichnet. Die Ergebnisse wurden als "% der Kontrolle" in Bezug auf den
log der Konzentration der Testverbindung und einen ermittelten "halben Maximum-Punkt" oder IC50-Wert
in Form eines Diagramms erstellt. Der IC50-Wert
für den
obigen Assay stellt ein Maß für die Inhibierung
der proteolytischen TNF-α-Aktivität des TACE
dar. Die hier verwendete Blockade der Bindung von TNF-α an TACE
ist wie beschrieben in US-Patent
5,830,742, ausgegeben am 3. November 1998.
-
Die
bevorzugten erfindungsgemäßen Verbindungen
weisen bezüglich
r-MMP1 eine um mindestens das 100-fache geringere Wirkung als in
dem obigen TACE-Assay auf. Tabelle A zeigt die Aktivität einiger
repräsentativer
erfindungsgemäßer Verbindungen
hinsichtlich der Inhibierung von TACE, MMP-1 und MMP-13.
-
-
-
Monocyten-Assay
-
Humane
mononukleare Zellen wurden mit Hilfe einer einstufigen Ficoll-hypaque-Trenntechnik aus
anti-coaguliertem humanem Blut isoliert. (2) Die mononuklearen Zellen
wurden dreimal in HBSS (Hanks balanced salt solution) mit divalenten
Kationen gewaschen und auf eine Dichte von 2 × 106/ml
in 1% BSA enthaltender HBSS resuspendiert. Differentialzählungen,
die mit dem Abbott Cell Dyn 3500 Analyzer durchgeführt wurden,
ergaben, dass 17–24%
der Zellen insgesamt in diesen Präparaten Monocyten waren.
-
180 μl der Zellsuspension
wurden in Aliquote aufgeteilt und in 96-Vertiefungen-Platten mit flachem
Boden (Costar) gegeben. Nach Zugabe der Testverbindungen und LPS
(100 ng/ml Endkonzentration) erhielt man ein Endvolumen von 200 μl. Alle Bedingungen
wurden dreifach durchgeführt.
Nach 4 h Inkubation bei 37°C
in einem CO2-Inkubator mit Feuchtatmosphäre wurden
die Platten herausgenommen und 10 min. bei etwa 250 × g zentrifugiert,
und der Überstand
wurde abgetrennt und mit Hilfe des R&D ELISA Kits auf TNF-α getestet.
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MMP-Assays
-
Unter
selektiven Collagenase-3 (Matrixmetalloproteinase-13)-Inhibitoren
sind im Rahmen dieses Dokuments Stoffe zu verstehen, deren Selektivität für die Inhibierung
der Collagenase-3-Enzymaktivität
wenigstens 100 Mal größer ist
als für
die Inhibierung der Collagenase-1-Enzymaktivität, und die Wirkung bei weniger als
100 nM zeigen, definiert durch die in den unten beschriebenen MMP-13-/MMP-1-Fluoreszenz-Assays
erhaltenen IC50-Werte. Collagenase-3 selektive
Inhibitoren können
durch Screening der erfindungsgemäßen Inhibitoren mit Hilfe der
unten beschriebenen MMP-13-/MMP-1-Fluoreszenz-Assays und Auswahl
der Wirkstoffe, die ein Verhältnis
der IC50-Werte für die Inhibierung von MMP-13
zu MMP-1 von 100 oder größer und
eine Wirkung bei weniger als 100 nM besitzen, identifiziert werden.
-
Unter
nicht-selektiven Collagenase-Inhibitoren sind im Rahmen dieses Dokuments
Stoffe zu verstehen, deren Selektivität für die Inhibierung der Collagenase-3- Enzymaktivität weniger
als das 100-fache ihrer Selektivität für die Inhibierung der Collagenase-1-Enzymaktivität beträgt oder
deren Wirkung bei mehr als 100 nM liegt, definiert durch die in
den unten beschriebenen MMP-13-/MMP-1-Fluoreszenz-Assays erhaltenen IC50-Werte.
-
Die
Fähigkeit
von Collagenase-Inhibitoren zur Inhibierung der Collagenase-Aktivität ist allgemein
bekannt. Die folgenden Assays können
zur Identifizierung von Matrixmetalloproteinase-Inhibitoren verwendet werden.
-
Inhibierung von humaner
Collagenase (MMP-1)
-
Humane
rekombinante Collagenase wird mit Trypsin unter Verwendung des folgenden
Verhältnisses aktiviert:
10 μg Trypsin
auf 100 μg
Collagenase. Trypsin und Collagenase werden 10 min. bei Raumtemperatur inkubiert,
und darauf wird ein fünffacher Überschuss
(50 μg/10 μg Trypsin)
an Sojabohnen-Trypsin-Inhibitor zugegeben.
-
Es
werden 10 mM Stammlösungen
der Inhibitoren in Dimethylsulfoxid hergestellt, die dann nach dem folgenden
Schema verdünnt
werden: 10 mM → 120 μM → 12 μM → 1,2 μM → 0,12 μM
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25 μl jeder Konzentration
werden in je drei Vertiefungen einer 96-Vertiefungen-Microfluor-Platte
gegeben. Die Endkonzentration von Inhibitor ist nach Zugabe von
Enzym und Substrat eine 1:4-Verdünnung.
Die positiven Kontrollen (mit Enzym, kein Inhibitor) werden in die
Vertiefungen D1–D6
gegeben, und die Leerkontrollen (kein Enzym, kein Inhibitor) werden
in die Vertiefungen D7–D12
gegeben.
-
Collagenase
wird auf 400 ng/ml verdünnt,
und es werden je 25 μl
in die entsprechenden Vertiefungen der Microfluor-Platte gegeben.
Die Endkonzentration er Collagenase im Assay beträgt 100 ng/ml.
-
Zunächst wird
eine 5mM Stammlösung
von Substrat (DNP-Pro-Cha-Gly-Cys(Me)-His-Ala-Lys(NMS)-NH2)
in Dimethylsulfoxid hergestellt, und dann wird das Substrat mit
Assay-Puffer auf 20 mM verdünnt.
Der Assay wird gestartet durch Zugabe von 50 μl Substrat pro Vertiefung der
Microfluor-Platte, wodurch eine Endkonzentration von 10 μM erhalten
wird.
-
Die
Bestimmung der Fluoreszenz (360 nM Anregung, 460 nM Emission) erfolgte
zum Zeitpunkt 0 und dann in Abständen
von je 20 min. Der Assay wird bei Raumtemperatur für die typische
Assaydauer von 3 h durchgeführt.
-
Danach
wird ein Diagramm, betreffend die Fluoreszenz in Bezug zum zeitlichen
Verlauf für
die Leerprobe und für
die Collagenase enthaltenden Proben erstellt (es wird der Durchschnitt
der Daten von jeweils drei gleichen Proben gebildet). Zur Bestimmung
der IC50-Werte wird ein Zeitpunkt gewählt, der
ein gutes Signal liefert (die Leerprobe) und auf einem linearen
Abschnitt der Kurve liegt (normalerweise um die 120 min.). Der Wert
zum Zeitpunkt 0 wird als Leerprobe für jede Verbindung bei jeder
Konzentration verwendet, und dieser Wert wird von den 120-Minuten-Daten
abgezogen. Die Daten werden als Konzentration des Inhibitors gegen %
der Kontrolle (Fluoreszenz des Inhibitors geteilt durch Fluoreszenz
der Collagenase allein × 100)
dargestellt. Die IC50-Werte werden anhand
der Konzentration von Inhibitor, die ein Signal ergibt, das 50%
der Kontrolle darstellt, bestimmt.
-
Wenn
die IC50-Werte kleiner als 0,03 μM sind, werden
die Inhibitoren im Assay in Konzentrationen von 0,3 μM, 0,03 μM, 0,003 μM und 0,0003 μM verwendet.
-
Inhibition der Gelatinase
(MMP-2)
-
Die
Inhibierung der Gelatinase-Aktivität wird unter Verwendung des Dnp-Pro-Cha-Gly-Cys(Me)-His-Ala-Lys(NMA)-H2-Substrats
(10 μM)
unter denselben Bedingungen wie die Inhibierung der humanen Collagenase
(MMP-1) untersucht.
-
72
kD -Gelatinase wird mit 1 mM APMA (p-Aminophenyl-quecksilberacetat)
im Verlauf von 15 h bei 4°C
aktiviert und für
den Assay auf eine Endkonzentration von 100 mg/ml verdünnt. Die
Inhibitoren werden wie für
die Inhibierung der humanen Collagenase (MMP-1) auf Assay-Endkonzentrationen
von 30 μM,
3 μM, 0,3 μM und 0,03 μM verdünnt. Jede
Konzentration wird dreifach getestet.
-
Die
Bestimmung der Fluoreszenz (360 nM Anregung, 460 Emission) erfolgt
zum Zeitpunkt 0 und dann in Abständen
von je 20 min. im Verlauf von 4 h.
-
Die
IC50-Werte werden wie für die Inhibierung der humanen
Collagenase (MMP-1) bestimmt. Wenn die IC50-Werte
kleiner als 0,03 μM
sind, werden die Inhibitoren im Assay in Endkonzentrationen von
0,3 μM,
0,03 μM,
0,003 μM
und 0,0003 μM
getestet.
-
Inhibierung der Stromelysin-Aktivität (MMP-3)
-
Die
Inhibierung der Stromelysin-Aktivität basiert auf einem modifizierten
spektrophotometrischen Assay, beschrieben von Weingarten und Feder
(H. Weingarten und J. Feder, Spectrophotometric Assay for Vertebrate
Collagenase, Anal. Biochem. 147, 437–440 (1985)). Hydrolyse des
Thiopeptolidsubstrats [Ac-Pro-Leu-Gly-SCH[CH2CH(CH3)2]CO-Leu-Gly-OC2H5] ergibt ein Mercaptanfragment,
das in Gegenwart eines Ellman-Reagens festgestellt werden kann.
-
Humanes
rekombinantes Prostromelysin wird mit Trypsin bei einem Verhältnis von
1 μl einer 10mg/ml-Trypsin-Zubereitung
pro 26 mg Stromelysin aktiviert. Trypsin und Stromelysin werden
bei 37°C
15 min. inkubiert, danach erfolgt Inkubation bei 37°C im Verlauf
von 10 min. mit 10 μl
eines 10 μg/ml
Sojabohnen-Trypsin-Inhibitors, um die Trypsin-Aktivität zu stoppen.
-
Die
Assays werden in einem Gesamtvolumen von 250 ml Assaypuffer (200
mM Natriumchlorid, 50 mM MES und 10 mM Calciumchlorid, pH 6,0) in
96-Vertiefungen-Microtiter-Platten
durchgeführt.
Das aktivierte Stromelysin wird mit Assaypuffer auf 25 μg/ml verdünnt. Vom
Ellman-Reagens (3-Carboxy-4-nitrophenyldisulfid) wird eine 1 M Stammlösung in
Dimethylformamid hergestellt, und diese wird in Assaypuffer auf
5 mM verdünnt,
was bei 50 ml pro Vertiefung eine Endkonzentration von 1 mM ergibt.
-
Weiter
werden 10 mM-Stammlösungen
der Inhibitoren in Dimethylsulfoxid hergestellt, und von diesen werden
Serienverdünnungen
in Assaypuffer zubereitet, so dass sich bei Zugabe von 50 μl in die
entsprechenden Vertiefungen Endkonzentrationen von 3 μM, 0,3 μM, 0,003 μM und 0,0003 μM ergeben.
Alle Bedingungen werden jeweils dreifach durchgeführt.
-
Eine
300 mM Stammlösung
des Peptidsubstrats in Dimethylsulfoxid wird in Assaypuffer auf
15 mM verdünnt,
und der Assay wird durch Zugabe von 50 μl in jede Vertiefung gestartet,
wobei sich eine Endkonzentration von Substrat von 3 mM ergibt. Die
Leerproben bestehen aus dem Peptidsubstrat und Ellman-Reagens ohne
Enzym. Die Produktbildung wurde bei 405 nm mit einem Molecular Devices
UVmax Plattenzähler
kontrolliert.
-
Die
IC50-Werte wurden auf dieselbe Weise wie
für die
Collagenase bestimmt.
-
Inhibierung von MMP-13
-
Humanes
rekombinantes MMP-13 wird mit 2 mM APMA (p-Aminophenyl-quecksilberacetat)
im Verlauf von 1,5 h bei 37°C
aktiviert und auf 400 mg/ml in Assaypuffer (50 mM Tris, pH 7,5,
200 mM Natriumchlorid, 5 mM Calciumchlorid, 20 μM Zinkchlorid, 0,02% Brij) verdünnt. In
die Vertiefungen einer 96-Vertiefungen-Microfluor-Platte werden
je 25 μl
verdünntes
Enzym gegeben. Danach wird das Enzym im Assay durch Zugabe von Inhibitor
und Substrat im Verhältnis
1 : 4 verdünnt,
wobei eine Assay-Endkonzentration von 100 mg/ml erhalten wird.
-
Es
werden 10 mM-Stammlösungen
der Inhibitoren in Dimethylsulfoxid hergestellt, und diese werden nach
demselben Inhibitor-Verdünnungsschema
verdünnt
wie für
die Inhibierung von humaner Collagenase (MMP-1); 25 μl jeder Konzentration
werden in je drei Vertiefungen der Microfluor-Platte gegeben. Die
Endkonzentrationen im Assay betragen 30 μM, 3 μM, 0,3 μM und 0,03 μM.
-
Substrat
(Dnp-Pro-Cha-Gly-Cys(Me)-His-Ala-Lys(NMA)-NH2)
wird wie für
die Inhibierung humaner Collagenase (MMP-1) hergestellt, und in
die Vertiefungen werden je 50 ml gegeben auf eine Endkonzentration von
10 μM. Die
Fluoreszenzbestimmung (360 nM Anregung, 450 Emission) erfolgt zum
Zeitpunkt 0 und danach alle 5 min. für die Dauer einer Stunde.
-
Die
positiven Kontrollen bestehen aus Enzym und Substrat ohne Inhibitor,
und die Leerproben bestehen nur aus Substrat.
-
Die
IC50-Werte werden wie für die Inhibierung humaner Collagenase
(MMP-1) bestimmt. Wenn die IC50-Werte mit
weniger als 0,03 μM
angegeben werden, werden die Inhibitoren bei Endkonzentrationen
von 0,3 μM,
0,03 μM,
0,003 μM
und 0,0003 μM
getestet.
-
Collagen-Film-MMP-13-Assay
-
Typ
I-Collagen der Ratte wird mit 14C-Essigsäureanhydrid
(T. E. Cawston und A. J. Barnett, Anal. Biochem., 99, 340–345 (1979))
radiomarkiert und zur Vorbereitung von 96-Vertiefungen-Platten mit
radiomarkierten Collagenfilmen (Barbara Johnson-Wint, Anal. Biochem., 104, 175–181 (1980))
verwendet. Wenn eine Collagenase enthaltende Lösung in die Vertiefung gegeben
wird, spaltet das Enzym das unlösliche
Collagen, das sich aufdreht und so solubilisiert wird. Die Collagenaseaktivität ist direkt
proportional zur Menge des solubilisierten Collagen und wird durch
den Anteil der in den Überstand
abgegebenen Radioaktivität
gemäß Messung mit
einem üblichen
Scintillationszähler
bestimmt. Collagenaseinhibitoren sind somit Verbindungen, die die
gezählte
freigesetzte Radioaktivität
im Vergleich zu den Kontrollen ohne Inhibitor verringern. Eine bestimmte
Ausführungsform
dieses Assay ist im Folgenden im Detail beschrieben.
-
Zur
Bestimmung der Selektivität
von Verbindungen für
MMP-13 im Vergleich zu MMP-1 wird bei Verwendung von Collagen als
Substrat das folgende Verfahren verwendet. Rekombinates humanes
proMMP-13 oder proMMP-1 wird gemäß den oben
angeführten
Verfahren aktiviert. Das aktivierte MMP-13 oder MMP-1 wird mit Puffer
(50 mM Tris pH 7,5, 150 mM NaCl, 10 mM CaCl2,
1 μM ZnCl2, 0,05% Brij-35, 0,02% Natriumazid) auf
0,6 μg/ml
verdünnt.
-
Es
werden Stammlösungen
von Testverbindung (10 mM) in Dimethylsulfoxid hergestellt, die
im obigen Tris-Puffer auf 0,2, 2,0, 20, 200, 2000 und 20000 nM verdünnt werden.
-
100 μl der entsprechenden
Wirkstoffverdünnung
und 100 μl
verdünntes
Enzym werden mit einer Pipette in die Vertiefungen einer 96-Vertiefungen-Platte
gegeben, die mit 14C-Collagen markierte
Collagenfilme enthält.
Die Enzym-Endkonzentration ist 0,3 μg/ml, wohingegen die Wirkstoff-Endkonzentration
0,1, 1,0, 10, 100 und 1000 nM ist. Jede Wirkstoffkonzentration und
Kontrolle wird dreifach analysiert. Ebenso werden jeweils dreifach
Kontrollproben untersucht, bei denen entweder kein Enzym oder das
Enzym, aber in Aabwesenheit der Testverbindung, verwendet werden.
-
Die
Platten werden bei 37°C
so lange inkubiert, bis etwa 30–50%
des vorhandenen Collagen solubilisiert ist – bestimmt durch Auszählen der
zusätzlichen
Kontrollvertiefungen zu verschiedenen Zeitpunkten. In den meisten
Fällen
werden etwa 9 h Inkubation benötigt.
Wenn der Assay genügend
weit fortgeschritten ist, wird der Überstand aus den Vertiefungen
entfernt und in einem Scintillationszähler ausgezählt. Die Hintergrundzählungen
(die ausgezählten
Werte der Vertiefungen ohne Enzym) werden jeweils von den Proben
abgezogen, und der Prozentsatz der Freisetzung wird im Verhältnis zu
den Vertiefungen nur mit Enzym und ohne Inhibitor berechnet. Es
wird der Durchschnittswert der drei für jeden Zeitpunkt ermittelten
Werte bestimmt, und die erhaltenen Daten werden dargestellt als
Prozentsatz der Freisetzung gegen die Arzneimittelkonzentration. Die
IC50-Werte werden ab dem Punkt bestimmt,
an dem eine 50%-ige Inhibierung der Freisetzung von radiomarkiertem
Collagen erreicht ist.
-
Um
die Identität
der aktiven Collagenase in Knorpel-konditioniertem Medium zu bestimmen,
wurden Assays unter Verwendung von Collagen als Substrat, aktive
Collagenase enthaltendem Knorpel-konditioniertem Medium und Inhibitoren
ver schiedener Selektivität
durchgeführt.
Das Knorpel-konditionierte Medium wurde zu dem Zeitpunkt gesammelt,
bei dem Collagenabbau erfolgte, und ist somit repräsentativ
für die
für die Zerstörung des
Collagen verantwortlichen Collagenasen. Die Assays wurden wie oben
beschrieben durchgeführt,
mit der Ausnahme, dass statt rekombinantem MMP-13 oder rekombinantem
MMP-1 Knorpel-konditioniertes Medium als Enzymquelle verwendet wurde.
-
IL-1-induzierter
Knorpelcollagenabbau beim Nasenknorpel des Rindes Für diesen
Assay werden Nasenknorpel-Explantate des Rindes verwendet, wie sie üblicherweise
zum Testen der Wirksamkeit verschiedener Verbindungen hinsichtlich
der Inhibierung entweder von IL-1-induziertem Proteoglycanabbau
oder von IL-1-induziertem
Collagenabbau genommen werden. Der Nasenknorpel des Rindes ist ein
Gewebe, das dem Gelenkknorpel sehr ähnelt, d.h. die Chondrocyten
sind von einer Matrix umgeben, die primär Typ II-Collagen und Aggrecan
darstellt. Das Gewebe wird verwendet, weil es (1) dem Gelenkknorpel
sehr ähnlich
ist, (2) leicht zugänglich
ist, (3) relativ homogen ist und (4) sich nach Stimulierung mit
IL-1 mit einer voraussagbaren Kinetik abbaut.
-
Zum
Testen der Verbindungen wurden zwei Varianten dieses Assays verwendet.
Beide Varianten ergeben ähnliche
Daten. Sie sind im Folgenden beschrieben:
-
Variante 1
-
Drei
Stopfen aus Nasenknorpel vom Rind (etwa 2 mm im Durchmesser und
1,5 mm lang) werden in die Vertiefungen einer 24-Vertiefungen-Gewebekulturplatte
gegeben. Danach wird in die Vertiefungen 1 ml serumloses Medium
gegeben. Von den Verbindungen werden 10 mM-Stammlösungen in
DMSO hergestellt, die dann entsprechend in serumlosem Medium auf
die Endkonzentrationen, z.B. 50, 500 und 5000 nM, verdünnt werden.
Jede Konzentration wird dreifach getestet.
-
Humanes
rekombinantes IL-1α (5
ng/ml) (IL-1) wird in drei Kontrollvertiefungen sowie in die Wirksoff enthaltenden
Vertiefungen gegeben. Außerdem
werden drei Kontrollvertiefungen vorbereitet, denen weder Wirkstoff
noch IL-1 zugefügt
werden. Das Medium wird entfernt, und am Tag 6, 12, 18 und 24 oder,
falls erforderlich, alle 3–4
Tage, wird frisches Medium zugegeben, das IL-1 und Wirkstoff in
den entsprechenden Konzentrationen enthält. Das jeweils entfernte Medium
wird zur späteren
Analyse bei –20°C gelagert.
Wenn der Knorpel in den nur IL-1 enthaltenden Vertiefungen beinahe
vollständig
resorbiert ist (etwa um den 21. Tag), wird der Versuch beendet.
Das Medium wird entfernt und gelagert. Aliquote (100 μl) aus allen
Vertiefungen von allen Zeitpunkten werden vereinigt, mit Papain
verdaut und dann auf ihren Hydroxyprolingehalt analysiert. Das Hintergrundhydroxyprolin
(Durchschnitt aus den Vertiefungen ohne IL-1 und ohne Wirkstoff)
wird von allen Daten abgezogen, und für jede Dreiergruppe wird der
Durchschnitt berechnet. Das Ergebnis wird dann als Prozentsatz des
Durchschnitts bei IL-1 allein ausgedrückt und als Diagramm dargestellt,
das zur Bestimmung des IC50-Wertes herangezogen
wird.
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Variante 2
-
Die
Versuchsdurchfürhung
ist bis zum Tag 12 wie für
Variante 1 beschrieben. Am 12. Tag wird das konditionierte Medium
aus jeder Vertiefung entfernt und eingefroren. Danach wird in jede
Vertiefung 1 ml phosphatgepufterte Salzlösung (PBS), enthaltend 0,5 μg/ml Trypsin,
gegeben, und es wird für
weitere 48 h bei 37°C inkubiert.
Nach 48 h Inkubation in Trypsin wird die PBS-Lösung entfernt. Aliquote (50 μl) der PBS/Trypsin-Lösung und
der vorangegangenen zwei Zeitpunkte (Tage 6 und 12) werden vereinigt
und hydrolysiert, und es wird der Hydroxyprolingehalt bestimmt.
Das Hintergrundhydroxyprolin (Durchschnitt aus den Vertiefungen ohne
IL-1 und ohne Wirkstoff) wird von allen Daten abgezogen, und für jede Dreiergruppe
wird der Durchschnitt berechnet. Das Ergebnis wird dann als Prozentsatz
des Durchschnitts bei IL-1 allein ausgedrückt und als Diagramm dargestellt,
das zur Bestimmung des IC50-Wertes dient.
Bei dieser Variante ist die Versuchsdauer beträchtlich verkürzt. Die
Zugabe von Trypsin für
48 h 12 Tage nach der IL-Stimulierung führt wahrscheinlich zur Freisetzung
des gesamten Typ II-Collagen, das durch die Collagenaseaktivität beschädigt, aber
noch nicht aus der Knorpelmatrix freigesetzt wurde. Ohne IL-1-Stimulierung
führt die
Behandlung mit Trypsin nur zu einem niedrigen Grundniveau an Collagenabbau
in den Knorpelexplantaten.
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Inhibierung von humaner
92 kD-Gelatinase (MMP-9)
-
Die
Inhibierung der Aktivität
von 92 kD-Gelatinase (MMP-9) wird unter Verwendung des Substrats Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2 (10 μM)
unter ähnlichen
Bedingungen wie für
die Inhibierung von humaner Collagenase (MMP-1) untersucht.
-
Humane
rekombinante 92 kD-Gelatinase (MMP-9, Gelatinase B) wird 2 h mit
1 mM p-Aminophenyl-quecksilberacetat (aus einer frisch hergestellten
100 mM-Lösung
in 0,2 N NaOH) bei 37°C
aktiviert.
-
Aus
10 mM Inhibitor-Stammlösungen
in Dimethylsulfoxid werden Serienverdünnungen in Assaypuffer (50
mM TRIS, pH 7,5, 200 mM NaCl, 5 mM CaCl2,
20 μM ZnCl2, 0,02 Vol.-% BRIJ-35) nach folgendem Schema hergestellt: 10 mM → 120 μM → 12 μM → 1,2 μM → 0,12 μM
-
Erforderlichenfalls
werden nach demselben Schema weitere Verdünnungen hergestellt. In jedem
Assay werden für
jede Verbindung mindestens vier Inhibitorkonzentrationen verwendet.
25 μl jeder
Konzentration wird in je drei Vertiefungen einer schwarzen 96-Vertiefungen-Microfluor-Platte
mit Rundboden gegeben. Da das Assay-Endvolumen 100 μl beträgt, ergeben
sich die Inhibitor-Endkonzentrationen aus einer weiteren 1 : 4-Verdünnung (d.h.
30 μM → 3 μM → 0,3 μM → 0,03 μM usw.).
Es werden auch eine Leerprobe (ohne Enzym, ohne Inhibitor) und eine
positive Enzym-Kontrollprobe (mit Enzym, ohne Inhibitor) jeweils
dreifach hergestellt.
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Aktiviertes
Enzym wird in Assaypuffer auf 100 ng/ml verdünnt, und je 25 μl werden
in die entsprechenden Vertiefungen der Microplatte gegeben. Die
Enzym-Endkonzentration im Assay beträgt 25 ng/ml (0,27 nM).
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Eine
5 mM Substrat-Stammlösung
in Dimethylsulfoxid (Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2)
wird in Assaypuffer auf 20 μM
verdünnt.
Der Assay wird durch Zugabe von 50 μl verdünntem Substrat gestartet, was
eine Assay-Endkonzentration von 10 μM Substrat ergibt. Es wird unverzüglich eine
Fluoreszenzbestimmung (320 Anregung, 390 Emission) zum Zeitpunkt
0 vorgenommen, und weitere Bestimmungen werden alle 15 Minuten bei
Raumtemperatur mit Hilfe eines PerSeptive Biosystems CytoFluor Multi-Well
Plattenzählers
mit Verstärkung
bei 90 Einheiten durchgeführt.
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Der
Fluoreszenz-Durchschnittswert von Enzym und Leerprobe wird im Bezug
zur Zeit als Kurve dargestellt. Zur Bestimmung der IC50-Werte
wird ein früher
Zeitpunkt auf dem linearen Teil der Kurve gewählt. Der Zeitpunkt null für jede Verbindung
bei jeder Verdünnung
wird von dem späteren
Zeitpunkt abgezogen, und das Ergebnis wird dann als Prozentsatz
der Enzymkontrolle (Fluoreszenz mit Inhibitor geteilt durch Fluoreszenz der
positiven Enzymkontrolle × 100)
ausgedrückt.
Das Ergebnis wird als Inhibitorkonzentration im Bezug zum Prozentsatz
der Enzymkontrolle als Diagramm dargestellt. Die IC50-Werte
sind definiert als die Konzentration von Inhibitor, die ein Signal
ergibt, das 50% der positiven Enzymkontrolle darstellt.
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Aggrecanase-Assay
-
Primäre Chondrocyten
aus dem Gelenkknorpel des Schweins werden durch aufeinanderfolgende
Verdauung mit Trypsin und Collagenase und anschließend durch
Verdauung mit Collagenase über
Nacht isoliert und mit 2 × 105 Zellen pro Vertiefung in die Vertiefungen
von 48-Vertiefungen-Platten gegeben, wobei die Platten mit 5 μCi/ml 35S (1000 Ci/mmol) in Typ-1-Collagen beschichtet
sind. Man lagert die Platten etwa 1 Woche bei 37°C unter 5% CO2,
bis die Zellen den Marker in ihre Proteoglycanmatrix inkorporiert
haben.
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In
der Nacht vor dem Start des Assay werden die Chondrocyten-Monoschichten
zweimal in DMEM, enthaltend 1% PSF/G, gewaschen, und danach lässt man
sie in frischem DMEM, enthaltend 1% FBS, über Nacht inkubieren.
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Am
nächsten
Morgen werden die Chondrocyten einmal in DMEM/1% PSF/G gewaschen.
Die letzte Wäsche
belässt
man während
der Herstellung der Verdünnungen
auf den Platten im Inkubator.
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Die
Medien und die Verdünnungen
können
wie in der Tabelle angegeben hergestellt werden.
-
-
Die
Platten werden markiert, und es werden nur die inneren 24 Vertiefungen
der Platte benutzt. Auf einer der Platten werden einige Reihen als
IL-1 (ohne Arzneimittel) und Kontrolle (ohne IL-1, ohne Wirkstoff) gekennzeichnet.
Diese Kontrollreihen werden periodisch ausgezählt, um die Freisetzung von 35S-Proteoglycan zu bestimmen. Zum Starten
des Assay werden Kontrolle und IL-1-Medium (450 μl) und anschließend 50 μl Verbindung
in die Vertiefungen gegeben. Die Platten werden bei 37°C unter 5%
CO2 inkubiert.
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Bei
einer Freisetzung von 40–50%
(wenn das CPM aus dem IL-1-Medium das Kontrollmedium um das 4–5-fache übersteigt),
festgestellt durch Flüssigkeitsscintillationszählung (LSC)
von Mediumproben, wird der Assay beendet (nach 9–12 h). Das Medium wird aus
allen Vertiefungen entfernt und in Scintillationsgläser gegeben.
Scintillat wird zugefügt,
und es wird die Radioaktivität
bestimmt (LSC). Zur Solubilisierung der Zellschichten werden je
500 μl Papain-Verdauungspuffer
(0,2 M Tris, pH 7,0, 5 mM EDTA, 5 mM DTT, 1 mg/ml Papain) in die
Vertiefungen gegeben. Die Platten werden mit der Verdauungslösung bei
60°C über Nacht
inkubiert. Am nächsten
Tag wird die Zellschicht aus den Platten entfernt und in Scintillationsgläser gegeben.
Es wird Scintillat zugefügt,
und die Proben werden gemessen (LSC).
-
Es
wird der Prozentsatz der freigesetzten Radioaktivität in Bezug
auf die gesamte Radioaktivität
in jeder Vertiefung bestimmt. Von den Dreiergruppen der Proben wird
der Durchschnitt gebildet, wobei von jeder Vertiefung der Hintergrundwert
der Kontrolle abgezogen wird. Der Prozentsatz der Inhibierung durch
die Verbindung wird auf die IL-1-Proben mit 0% Inhibierung bezogen
(100% der gesamten Radioaktivität).
-
Die
getesteten erfindungsgemäßen Verbindungen
hatten wenigstens in einem der oben beschriebenen Assays eine IC50 von weniger als 1 μM, bevorzugt weniger als 50
nM. Die erfindungsgemäßen Verbindungen
besitzen auch eine differenzierte Wirkung (d.h., sie sind selektiv)
hinsichtlich Reprolysin und/oder MMP. In diesem Zusammenhang bezieht
sich die Selektivität
auf das Verhältnis
der Inhibierungswerte, ausgedrückt durch
IC50, aus zwei oder mehreren der obigen
Protokolle. Bei den erfindungsgemäßen Verbindungen, die als selektiv
bezeichnet werden, beträgt
dieses Verhältnis
mindestens 10. Die erfindungsgemäßen Verbindungen, die
die gewünschte
Wirkung oder Selektivität
aufweisen, können
durch Testen der Verbindungen der Formel I gemäß den oben beschriebenen Versuchen
und Ermitteln der IC50 und der Selektivitätsverhältnisse
identifiziert werden.
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Eine
Gruppe bevorzugter Verbindungen der Formel I, die durch die erfindungsgemäßen Verfahren identifiziert
werden können,
sind solche, die selektiv wirksam sind gegen TACE im Vergleich zu
MMP-1, und zwar wenigstens 40-fach, besonders bevorzugt wenigstens
100-fach selektiver bezüglich
TACE als bezüglich MMP-1
sind und besonders bevorzugt eine IC50 für TACE von
weniger als 50 nM, ganz besonders bevorzugt von weniger als 10 nM
besitzen. Eine weitere Gruppe bevorzugter Verbindungen der Formel
I die durch die erfindungsgemäßen Verfahren
identifiziert werden können,
umfasst die Inhibitoren, die eine starke Wirksamkeit für TACE und
MMP-13 (bevorzugt eine IC50 von weniger
als 100 nM, besonders bevorzugt 50 nM, ganz besonders bevorzugt
10 nM) besitzen, wobei vorzugsweise die inhibitorische Wirksamkeit
bezüglich
MMP-13 und TACE selektiv ist gegenüber MMP-1, und wobei die Verbindungen
vorzugsweise TACE und MMP-13 gleich wirksam inhibieren (IC50-Wert), wie in wenigstens einem der oben
beschriebenen TACE- oder MMP-13-Assays beschrieben. Besonders bevorzugt
besitzen die genannten Verbindungen eine wenigstens 100-fache Selektivität für TACE und
MMP-13 gegenüber
MMP-1. Eine weitere Gruppe bevorzugter Verbindungen der Formel I,
die durch die erfindungsgemäßen Verfahren
identifiziert werden können,
umfasst die Inhibitoren, die eine starke Wirksamkeit (bevorzugt
eine IC50 von weniger als 500 nM, besonders
bevorzugt 100 nM, ganz besonders bevorzugt 50 nM) bezüglich TACE
und Aggrecanase besitzen, wobei vorzugsweise die inhibierende Wirkung
bezüglich
TACE und Aggrecanase selektiv ist gegenüber MMP-1, und wobei diese
Selektivität
bezüglich
TACE und Aggrecanase besonders bevorzugt das 10-fache, ganz besonders
bevorzugt das 40-fache der Wirkung bezüglich MMP-1 darstellt.
-
Eine
weitere Gruppe bevorzugter Verbindungen der Formel I, die durch
die erfindungsgemäßen Verfahren
identifiziert werden können,
umfasst die Inhibitoren, die eine selektive Wirkung für MMP-13
gegenüber MMP-1
zeigen (bevorzugt eine IC50 von weniger
als 500 nM, besonders bevorzugt 100 nM, ganz besonders bevorzugt
50 nM besitzen), wobei die Selektivität bezüglich MMP-13 wenigstens das
10-fache, besonders bevorzugt das 40-fache der Wirkung bezüglich MMP-1
darstellt.
-
Eine
weitere Gruppe bevorzugter Verbindungen der Formel 1, die durch
die erfindungsgemäßen Verfahren
identifiziert werden können,
umfasst die Inhibitoren, die eine starke inhibierende Wirkung (bevorzugt eine
IC50 von weniger als 500 nM, besonders bevorzugt
100 nM, ganz besonders bevorzugt 50 nM), für MMP-13 und Aggrecanase zeigen,
wobei die inhibierende Wirkung bezüglich MMP-13 und Aggrecanase
bevorzugt selektiv ist gegenüber
der Wirkung bezüglich
MMP-1 und vorzugsweise wenigstens das 10-fache, besonders bevorzugt
das 40-fache der Wirkung bezüglich
MMP-1 darstellt.
-
Eine
weitere Gruppe bevorzugter Verbindungen der Formel I, die durch
die erfindungsgemäßen Verfahren
identifiziert werden können,
umfasst die Inhibitoren, die eine starke inhibierende Wirkung bezüglich Aggrecanase
besitzen (bevorzugt eine IC50 von weniger
als 500 nM, besonders bevorzugt 100 nM, ganz besonders bevorzugt
50 nM), wobei die inhibierende Wirkung bezüglich Aggrecanase bevorzugt
selektiv ist gegenüber
der Wirkung bezüglich
MMP-1 und vorzugsweise wenigstens das 10-fache, besonders bevorzugt
das 40-fache der Wirkung bezüglich
MMP-1 darstellt.
-
Eine
weitere Gruppe bevorzugter Verbindungen der Formel I, die durch
die erfindungsgemäßen Verfahren
identifiziert werden können,
umfasst die Inhibitoren, die eine starke inhibierende Wirkung bezüglich Aggrecanase,
MMP-13 und TACE besitzen (bevorzugt eine IC50 von
weniger als 500 nM, besonders bevorzugt 100 nM, ganz besonders bevorzugt
50 nM), wobei die inhibierende Wirkung bezüglich Aggrecanase, MMP-13 und
TACE bevorzugt selektiv ist gegenüber der Wirkung bezüglich MMP-1
und vorzugsweise wenigstens das 10-fache der Wirkung bezüglich MMP-1
darstellt.
-
Die
Verabreichung bei Säugetieren
einschließlich
Menschen zur Inhibierung von Matrixmetalloproteinasen oder Säugetier-Reprolysin
(vorzugsweise zur Inhibierung von TACE) kann auf verschiedenen üblichen Wegen
erfolgen, u.a. oral, parenteral und topisch. Im Allgemeinen wird
der Wirkstoff oral oder parenteral in Tagesdosen zwischen etwa 0,1
und 25 mg, bevorzugt zwischen etwa 0,3 und 5 mg pro kg Körpergewicht
des zu behandelnden Patienten verabreicht. Jedoch kann in Abhängigkeit
vom Zustand des behandelten Patienten die Dosierung variieren. Die
für den
individuellen Patienten geeignete Dosis wird in jedem Falle durch
die für die
Verabreichung verantwortliche Person festgesetzt.
-
Die
erfindungsgemäßen Verbindungen
können
in den verschiedensten Darreichungsformen verabreicht werden. Im
Allgemeinen liegen die therapeutisch wirksamen erfindungsgemäßen Verbindungen
in solchen Präparaten
in Konzentrationen zwischen etwa 5,0 Gew.-% und etwa 70 Gew.-% vor.
-
Für die orale
Verabreichung können
Tabletten verwendet werden, die verschiedene Streckmittel wie mikrokristalline
Cellulose, Natriumcitrat, Calciumcarbonat, Dicalciumphosphat und
Glycin sowie verschiedene Sprengmittel wie Stärke (bevorzugt Mais-, Kartoffel-
oder Tapiokastärke),
Alginsäure
und bestimmte komplexe Silikate, und Granulat-Bindemittel wie Polyvinylpyrrolidon,
Saccharose, Gelatine und Gummiarabicum enthalten können. Weiter
sind zur Herstellung von Tabletten Gleitmittel wie Magnesiumstearat,
Natriumlaurylsulfat und Talk oft sehr zweckmäßig. Feste Kompositionen ähnlicher
Art können
auch als Füllung
für Gelatinekapseln verwendet
werden; bevorzugte Materialien sind in diesem Zusammenhang auch
Lactose oder Milchzucker sowie Polyethylenglycole mit hohem Molekulargewicht.
Wenn wässrige
Suspensionen und/oder Elixiere für
die orale Verabreichung gewünscht
werden, so kann der Wirkstoff mit verschiedenen Süß- oder
Geschmacksstoffen, Farbstoffen oder Färbemitteln, gewünschtenfalls
mit Emulgier- und/oder
Suspendiermitteln und mit Verdünnern
wie Wasser, Ethanol, Propylenglycol, Glycerin und deren Kombinationen
kombiniert werden.
-
Für die parenterale
(intramuskuläre,
intraperitoneale, subcutane und intravenöse) Verabreichung wird gewöhnlich eine
sterile Injektionslösung
des Wirkstoffs hergestellt. Es können
Lösungen
der erfindungsgemäßen therapeutischen
Verbindung in Sesam- oder Erdnussöl oder in wässrigem Propylenglycol verwendet
werden. Die wässrigen
Lösungen
sollten in geeigneter Weise eingestellt und gepuffert werden, erforderlichenfalls bevorzugt
bei einem pH-Wert über
8, und der flüssige
Verdünner
sollte zunächst
isotonisch gemacht werden. Solche wässrigen Lösungen sind für die intravenöse Injektion
geeignet. Die öligen
Lösungen
sind für
die intraartikuläre,
intramuskuläre
und subcutane Injektion geeignet. Die Zubereitung all dieser Lösungen unter
sterilen Bedingungen erfolgt nach üblichen pharmazeutischen Verfahren,
die dem Fachmann geläufig
sind.
-
Die
folgenden Beispiele illustrieren die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen.
Die Schmelzpunkte sind nicht korrigiert. Die NMR-Daten sind in Teilen
pro Million (δ)
angegeben und auf das Deuteriumsignal aus dem Lösungsmittel der Probe (Deuteriodimethylsulfoxid,
sofern nicht anders angegeben) bezogen. Im Handel erhältliche
Reagentien wurden ohne weitere Reinigung verwendet. THF steht für Tetrahydrofuran.
DMF steht für
N,N-Dimethylformamid. Chromatographie steht für Säulenchromatographie unter Verwendung
von 32–63
mm-Silikagel, durchgeführt
unter Stickstoff (Flash-Chromatographie). Raumtemperatur bezieht
sich auf 20–25°C. Alle nichtwässrigen
Reaktionen wurden zur leichteren Handhabung und zur Maximierung
der Ausbeute unter Stickstoff durchgeführt. Einengung unter vermindertem
Druck bedeutet, dass ein Rotationsverdampfer verwendet wurde.
-
BEISPIEL
1 (2S,3S)-4-[4-(3,5-DIFLUOR-BENZYLOXY)-BENZOLSULFONYL]-2-METHYL-THIOMORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
-
- (a) Chlorwasserstoff wurde 15 min. durch eine
gerührte,
20°C aufweisende
Suspension von 25 g (21 mmol) D-Threonin in 150 ml Methanol geleitet.
Das erhaltene Gemisch wurde 24 h unter Stickstoff zum Rückfluss erhitzt.
Dann wurde das Gemisch auf Raumtemperatur (23°C) abgekühlt und unter Erhalt von (2R,3S)-2-Amino-3-hydroxybuttersäure-methylester-Hydrochlorid
in Form eines klaren Öls
eingeengt, das ohne Reinigung für
die nächste
Stufe verwendet wurde.
- (b) Einer gerührten
kalten (0°C)
Lösung
von (2R,3S)-2-Amino-3-hydroxybuttersäuremethylester-Hydrochlorid
und 16,5 ml (94,3 mmol) Diisopropylethylamin in 95 ml Methylenchlorid
wurden unter Stickstoff 15 g (47,2 mmol) 4-(3,5-Difluor-benzyloxy)benzolsulfonylchlorid
in 5 ml Methylenchlorid zugesetzt. Das erhaltene Gemisch wurde 7,5
h bei 0°C
gerührt
und danach weitere 17 h in einen Kühlschrank (4°C) gestellt. Danach
wurde das Gemisch in Wasser gegeben und mit Ethylacetat extrahiert.
Die vereinigten Ethylacetat-Extrakte wurden mit wässrigem
Natriumcarbonat, verdünnter
wässriger
Salzsäure,
Wasser und Salzlösung
gewaschen und über
Natriumsulfat getrocknet. Nach Filtrieren und Einengen des Filtrats
wurde der erhaltene rohe Feststoff in Diethylether suspendiert und
16 h gerührt.
Nach Filtrieren und Trocknen erhielt man (2R,3S)-2-[4-(3,5-Difluor-benzyloxy)-benzolsulfonylamino]-3-hydroxybuttersäure-methylester
als blassrosa Feststoff.
- (c) Einer gerührten,
kalten (0°C)
Lösung
von 2,1 g (7,9 mmol) Triphenylphosphin in 18 ml Tetrahydrofuran wurden
1,2 ml (7,6 mmol) Dimethylazodicarboxylat zugetropft. Nach 20 min.
wurde eine Lösung
von 3 g (7,2 mmol) (2R,3S)-2-[4-(3,5-Difluorbenzyloxy)-benzolsulfonylamino]-3-hydroxybuttersäure-methylester
in 18 ml Tetrahydrofuran zugetropft. Das erhaltene Gemisch wurde
unter Stickstoff bei Raumtemperatur (23°C) 48 h gerührt. Danach wurde das Reaktionsgemisch
eingeengt und durch Chromatographie an Silikagel (Eluent: Hexane/Ethylacetat
65 35) gereinigt; man erhielt (2R,3R)-1-[4-(3,5-Difluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-3-methyl-aziridin-2-carbonsäure-methylester
als blassrosa Öl.
- (d) Einer gerührten
Lösung
von 421 mg (1,1 mmol) (2R,3R)-1-[4-(3,5-Difluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-3-methyl-aziridin-2-carbonsäure-methylester
und 3,7 ml (52,9 mmol) 2-Mercaptoethanol in 2,6 ml Methylenchlorid
wurde unter Stickstoff bei Raumtemperatur (23°C) eine katalytische Menge Bortrifluorid-Etherat
zugegeben. Nach 42,5 h wurde das Reaktionsgemisch in Phosphatpuffer
(pH 7) gegeben und mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen
Extrakte wurden über
Natriumsulfat getrocknet. Nach Filtrieren und Einengen des Filtrats
wurde das erhaltene Rohprodukt durch Chromatographie an Silikagel
(Eluent: Ethylacetat/Hexane 5:3) gereinigt, und man erhielt (2S,3S)-2-[4-(3,5-Difluor-benzyloxy)benzolsulfonylamino]-3-(2-hydroxy-ethylsulfonyl)-buttersäure-methylester
als weißen
Feststoff.
- (e) Einer gerührten
Lösung
von 116 mg (0,44 mmol) Triphenylphosphin in 1,0 ml Tetrahydrofuran
wurden 56 μl
(420 μmol)
Dimethylazodicarboxylat zugetropft. Nach 30 min. wurde eine Lösung von
192 mg (0,40 mmol) (2S,3S)-2-[4-(3,5-Difluorbenzyloxy)-benzolsulfonylamino]-3-(2-hydroxy-ethylsulfonyl)-buttersäure-methylester
in 1,0 ml Tetrahydrofuran zugetropft. Das erhaltene Gemisch wurde
unter Stickstoff bei Raumtemperatur (23°C) 48 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde
eingeengt und durch Chromatographie an Silikagel (Eluent: Hexane/Ethylacetat
75 : 25) gereinigt, und man erhielt (2S,3S)-4-[4-(3,5-Difluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2-methyl-thiomorpholin-3-carbonsäure-methylester
als weißen
Schaum.
- (f) Eine gerührte
Lösung
von 113 mg (0,25 mmol) (2S,3S)-4-[4-(3,5-Difluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2-methyl-thiomorpholin-3-carbonsäure-methylester,
41 mg (0,99 mmol) Lithiumhydroxid-Monohydrat, 6 ml 1,4-Dioxan, 3
ml Methanol und 7 ml Wasser wurde unter Stickstoff 5 h bei 60°C erwärmt. Dann
wurde das Reaktionsgemisch zu verdünnter wässriger Salzsäure gegeben.
Die wässrige
Phase wurde abgetrennt, durch Zugabe von wässriger 1 N Salzsäure weiter
auf einen pH-Wert
von 2,5 angesäuert
und mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte
wurden über
Natriumsulfat getrocknet und filtriert, und das Filtrat wurde unter
Erhalt von (2S,3S)-4-[4-(3,5-Difluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2-methylthiomorpholin-3-carbonsäure eingeengt,
die ohne Reinigung für
die nächste
Stufe verwendet wurde.
- (g) Einer gerührten
Suspension von 96 mg (0,22 mmol) (2S,3S)-4-[4-(3,5-Difluorbenzyloxy)-benzolsulfonyl]-2-methyl-thiomorpholin-3-carbonsäure und
0,3 μl (4 μmol) Dimethylformamid
in 900 μl
Methylenchlorid wurden bei 0°C
unter Stickstoff 21 μl
ol) (240 μmOxalylchlorid
zugetropft. Während
dessen wurden 83 μl (650 μmol) Chlortrimethylsilan
einer gerührten,
kalten (0°C)
Lösung
von 19,6 mg (0,28 mmol) Hydroxylamin-Hydrochlorid in 130 μl Pyridin
zugetropft. Beide Reaktionsgemische wurden auf Raumtemperatur (23°C) erwärmt. Nach
20 h wurden die beiden Reaktionsgemische auf 0°C abgekühlt, und die Säurechloridlösung wurde über eine
Kanüle
der gerührten
Suspension von bis-(Trimethylsilyl)hydroxylamin zugefügt. Das erhaltene
Gemisch wurde 2 h bei 0°C
und 2 h bei 23°C
gerührt,
worauf 10 μl
wässrige
1 N Salzsäure zugegeben
wurden und weitere 4 h gerührt
wurde. Das Reaktionsgemisch wurde in Wasser gegeben und mit Ethylacetat
extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden mit Wasser
gewaschen, mit Natriumsulfat getrocknet und filtriert, und das Filtrat
wurde eingeengt. Das erhaltene Rohmaterial wurde durch Chromatographie
an Silikagel (Eluent: Ethylacetat / Hexane 1 : 1) gereinigt, und
man erhielt (2S,3S)-4-[4-(3,5-Difluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2-methyl-thiomorpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid als
blassgelben Feststoff. Massenspektrum: m/z 459 (M + H).
-
BEISPIEL
2 (2S,3S)-4-[4-(4-FLUOR-BENZYLOXY)-BENZOLSULFONYL]-2-METHYL-THIOMORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
-
(2S,3S)-4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-2-methyl-thiomorpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid
wurde auf ähnliche
Weise aus (2R,3S)-2-[4-(4-Fluor-benzyloxy)benzolsulfonyl]-3-hydroxybuttersäure-methylester
hergestellt, wobei jedoch in den Stufen c und e Diisopropylazodicarboxylat
verwendet wurde. Massenspektrum: m/z 441 (M + H).
-
BEISPIEL 3
-
(2S,3R,6S)-2,6-DIMETHYL-4-[4-(2-METHYL-BENZYLOXY)-BENZOLSULFONYL]-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
-
Stufe 1: Herstellung des
Acyl-Sulfonamids
-
(2R,3S)-2-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-benzolsulfonylamino]-3-hydroxy-buttersäuremethylester
-
26
ml Thionylchlorid wurden zimmerwarmem Methanol zugetropft. Die Lösung wurde
auf 0°C
abgekühlt,
und es wurden 14,0 g (118 mmol) D-Threonin in drei Portionen über 30 Minuten
zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde zunächst 1 h bei 0°C und dann über Nacht
bei Raumtemperatur gerührt.
Darauf wurde das Lösungsmittel
im Verlauf von 48 h im Hochvakuum entfernt. Der erhaltene glasartige
weiße
Feststoff wurde bei 0°C
in 170 ml Ethylacetat und 80 ml Wasser gelöst. Darauf wurden nacheinander
22,8 g (165 mmol) Kaliumcarbonat und 46,9 g (118 mmol) 4-(4-Fluorbenzyloxy)-benzolsulfonylchlorid
zugegeben. Das erhaltene Gemisch wurde 30 min. bei 0°C und danach
20 h bei Raumtemperatur gerührt.
Darauf wurden 200 ml Ethylacetat zugegeben. Die organische Phase
wurde abgetrennt, dreimal mit je 20 ml Wasser und einmal mit 20
ml Salzlösung
extrahiert und über
Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum
entfernt, und man erhielt 42,8 g (91,3%) der Titelverbindung.
-
Stufe 2: Allylierung des
Acylsulfonamids.
-
(2R,3S)-2-{Allyl-[4-(4-fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-amino}-3-hydroxy-buttersäuremethylester
-
20
g (50,3 mmol) (2R,3S)-2-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-benzolsulfonylamino]-3-hydroxybuttersäure-methylester
wurden in 100 ml Dimethylformamid gelöst. Darauf wurden nacheinander
16,8 g (100 mmol) Allyliodid und 17 g (52,3 mmol) Cäsiumcarbonat
zugegeben. Die Lösung
wurde 2,5 h bei Raumtemperatur gerührt. Es wurden 800 ml Diethylether
zugegeben, und es bildete sich ein Niederschlag. Die flüssige Phase
wurde entfernt, fünfmal
mit je 20 ml Wasser und zweimal mit je 20 ml Salzlösung extrahiert
und über
Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum
entfernt. Das erhaltene Öl
wurde durch Chromatographie an Silikagel (40 μM) mit Ethylacetat in Hexanen
gereinigt, und man erhielt 17 g (77%) der Titelverbindung.
-
Stufe 3: Cyclisierung
-
(2S,3R,6S)-4-]4-(4-Fluor-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-2,6-dimethyl-morpholin-3-carbonsäure-methylester
-
12,5
g (28,6 mmol) (2R,3S)-2-{Allyl-[4-(4-fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-amino}-3-hydroxy-buttersäure-methylester
wurden in 286 ml Tetrahydrofuran gelöst. Darauf wurden nacheinander
bei Raumtemperatur 4,7 g (34,3 mmol) Kaliumcarbonat und 14,6 g (34,4
mmol) Quecksilber(II)trifluoracetat zugegeben. Das Gemisch wurde
75 min. bei Raumtemperatur gerührt
und dann in einem Trockeneis-Diethylether-Bad gekühlt. Es wurden
30 ml (30 mmol) 1 M Triethylboran in Hexanen zugegeben. Nach 5 min.
wurden 1,1 g (33,4 mmol) Natriumborhydrid zugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde
1 h im Kühlbad
gerührt,
dann auf Raumtemperatur erwärmt
und mit 100 ml Wasser versetzt. Darauf wurde das Gemisch viermal
mit je 200 ml Ethylacetat extrahiert. Die organischen Phasen wurden
vereinigt, mit 25 ml Salzlösung
extrahiert und über
Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum
entfernt, und man erhielt 12,0 g (96%) der Titelverbindung.
-
Stufe 4: Debenzylierung.
-
(2S,3R,6S)-4-(4-Hydroxy-phenylsulfanyl)-2,6-dimethyl-morpholin-3-carbonsäuremethylester
-
2,0
g (27,4 mmol) (2S,3R,6S)-4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-2,6-dimethylmorpholin-3-carbonsäure-methylester
wurden in 75 ml Methanol gelöst,
und es wurden 1,5 g Palladium auf Kohle zugegeben. Das erhaltene
Gemisch wurde unter Wasserstoff (35 psi) über Nacht geschüttelt. Der
Katalysator wurde abfiltriert, und das Lösungsmittel wurde im Vakuum
entfernt unter Erhalt von 9,0 g (99%) der Titelverbindung.
-
Stufe 5: Benzylierung.
-
(2S,3R,6S)-2,6-Dimethyl-4-[4-(2-methyl-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-morpholin-3-carbonsäure-methylester
-
0,66
g (2,0 mmol) (2S,3R,6S)-4-(4-Hydroxy-phenylsulfanyl)-2,6-dimethyl-morpholin-3-carbonsäure-methylester
wurden in 4 ml Dimethylformamid gelöst. Dem Reaktionsgemisch wurden
0,407 g (2,2 mmol) 2-Methylbenzylbromid und 1,3 g (4 mmol) Cäsiumcarbonat
zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 5 h bei Raumtemperatur gerührt und
1 h bei 40°C
erwärmt.
Es wurden 75 ml Diethylether und 25 ml Ethylacetat zugefügt, und
es bildete sich ein Niederschlag. Die flüssige Phase wurde entfernt,
viermal mit je 10 ml wässriger 1
N Salzsäure
und einmal mit 10 ml Salzlösung
extrahiert und über
Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum
entfernt. Durch Chromatographie des erhaltenen Öls an Silikagel mit Ethylacetat
in Hexanen erhielt man von 0,42 g der Titelverbindung (48%).
-
Stufe 6: Hydroxamatbildung.
-
(2S,3R,6S)-2 6-Dimethyl-4-[4-(2-methyl-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-morpholin-3-carbonsäure-allyloxyamid
-
0,42
g (0,97 mmol) (2S,3R,6S)-2,6-Dimethyl-4-[4-(2-methyl-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-morpholin-3-carbonsäure-methylester
wurden mit 420 mg (10 mmol) Lithiumhydroxid-Monohydrat in 5 ml Wasser,
10 ml Tetrahydrofuran und 5 ml Methanol vereinigt. Die Lösung wurde
bei Raumtemperatur 3 h gerührt.
Danach wurden 100 ml Ethylacetat, 25 ml wässrige 1 N Salzsäure und
ein Überschuss
an Natriumchlorid zugefügt.
Die wässrige
Phase wurde dreimal mit je 25 ml Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten
organischen Phasen wurden mit 10 ml Salzlösung extrahiert und über Magnesiumsulfat
getrocknet, und das Lösungsmittel
wurde im Vakuum entfernt. Die rohe Säure wurde mit 0,44 g (4 mmol)
Allylhydroxylamin-Hydrochlorid und 0,03 g (0,2 mmol) Hydroxybenzotriazol
in 10 ml Dichlormethan vereinigt. Dann wurden 1,23 ml (7 mmol) Diisopropylamin
und danach 0,575 g (3,0 mmol) 1-(3-Dimethyl-aminopropyl)-3-ethylcarbodiimid zugegeben,
und das Reaktionsgemisch wurde über
Nacht bei Raumtemperatur gerührt.
Es wurden 100 ml Ethylacetat hinzugefügt, und die Lösung wurde
viermal mit je 10 ml wässriger
1 N Salzsäure
und mit 10 ml Salzlösung
extrahiert. Die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet,
und das Lösungsmittel
wurde im Vakuum entfernt. Chromatographie des erhaltenen Rohprodukts
an Silikagel mit Ethylacetat in Hexanen ergab 0,23 g (50%) der Titelverbindung.
-
Stufe 7: Freisetzung der
Hydroxamsäure.
-
(2S,3R,6S)-2,6-Dimethyl-4-[4-(2-methyl-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid
-
0,23
g (0,48 mmol) (2S,3R,6S)-2,6-Dimethyl-4-[4-(2-methyl-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-morpholin-3-carbonsäure-allyloxy-amid
wurden in 10 ml Tetrahydrofuran ge löst. Darauf wurden nacheinander
bei Raumtemperatur 0,012 g (0,033 mmol) dimeres Allylpalladiumchlorid,
0,041 g (0,1 mmol) bis-1,2-(Diphenylphosphino)ethan und 50 ml (0,5
mmol) Piperidin zugegeben. Nach der Zugabe des Amins wechselte die
Farbe von Blassgelb zu Leuchtendgelb. Das Reaktionsgemisch wurde
2 h gerührt,
wobei es langsam eine orange Farbe annahm. Dann wurde das Tetrahydrofuran
im Vakuum entfernt. Der feste Rückstand
wurde in 10 ml wässriger
1 N Salzsäure
und 100 ml Ethylacetat gelöst.
Das Gemisch wurde an der Luft 30 min. gerührt, und die Phasen trennten
sich. Die organische Phase wurde zweimal mit je 10 ml wässriger
1 N Salzsäure
und mit 10 ml Salzlösung
extrahiert und danach über
Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum
entfernt. Das Rohprodukt wurde durch Chromatographie mit einer Mischung
von Ethylacetat, Hexan und Essigsäure gereinigt. Nach Lösen in Diethylether
und Entfernen des Lösungsmittels
am Rotationsverdampfer wurden 0,108 g (50%) der Titelverbindung
isoliert.
-
BEISPIEL 4
-
4-(4-BENZYLOXY-BENZOLSULFONYL)-2-METHYL-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
-
2-(4-Benzyloxy-benzolsulfonylamino)-3-hydroxy-buttersäure-methylester
-
Die
Titelverbindung wurde ähnlich
wie der (2R,3S)-2-[4-(4-Fluorbenzyloxy)-benzolsulfonylamino]-3-hydroxy-buttersäure-methylester
in Stufe 1 des Beispiels 3 erhalten, mit der Ausnahme, dass 4-Benzyloxy-benzolsulfonylchlorid
statt 4-(4-Fluorbenzyloxy)-benzolsulfonylchlorid eingesetzt wurde.
-
1-(4-Benzyloxy-benzolsulfonyl)-3-methyl-aziridin-2-carbonsäure-methylester
-
7
g (18,5 mmol) 2-(4-Benzyloxy-benzolsulfonylamino)-3-hydroxy-buttersäure-methylester
wurden in 300 ml Tetrahydrofuran gelöst, und es wurden 7,27 g (27,2
mmol) Triphenylphosphin zugegeben. Darauf wurden im Verlauf von
5 min. 4,29 ml (27,7 mmol) Diethylazodicarboxylat zugetropft. Das
Reaktionsgemisch wurde 12 h gerührt
und zwischen Ethylacetat und Wasser verteilt. Die organische Phase
wurde mit Salzlösung extrahiert
und über
Natriumsulfat getrocknet. Nach Entfernen des Lösungsmittels im Vakuum und
Chromatographie des Rohprodukts an Silikagel mit 20% Ethylacetat
in Hexanen erhielt man 4,2 g (63%) der Titelverbindung.
-
2-(4-Benzyloxy-benzolsulfonylamino)-3-(2-brom-ethoxy)-buttersäure-methylester
-
4
g (11,08 mmol) 1-(4-Benzyloxy-benzolsulfonyl)-3-methyl-aziridin-2-carbonsäuremethylester
wurden bei Raumtemperatur mit 10 ml Bromethanol und 1,85 ml Bortrifluorid-etherat
vereinigt. Das Reaktionsgemisch wurde 12 h gerührt, und die flüchtige Phase
wurde im Vakuum entfernt. Der Rückstand
wurde zwischen Ethylacetat und Wasser verteilt. Die organische Phase
wurde über
Natriumsulfat getrocknet, und das Lösungsmittel wurde im Vakuum
entfernt. Chromatographie des Rückstands
an Silikagel mit 20% Ethylacetat in Hexan ergab 4 g (84%) der Titelverbindung.
-
4-(4-Benzyloxy-benzolsulfonylamino)-2-methyl-morpholin-carbonsäure-Hydroxyamid
-
4,0
g (11,1 mmol) 2-(4-Benzyloxy-benzolsulfonylamino)-3-(2-bromethoxy)-buttersäure-ethylester
wurden in 40 ml Dimethylformamid gelöst, und es wurde 2 h bei Raumtemperatur
mit 4,0 g (28,9 mmol) Kaliumcarbonat gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde
zwischen Ethylacetat und Wasser verteilt. Die organische Phase wurde
mit Salzlösung
gewaschen und über
Natriumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel
wurde im Vakuum entfernt, und das erhaltene Material wurde analog
Beispiel 3 in die Hydroxamsäure überführt.
-
BEISPIEL 5
-
(2S,3R,6S)-4-[4-(4-FLUOR-BENZYLOXY)-BENZOLSULFONYL]-2,6-DIMETHYL-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
-
Die
Titelverbindung wurde ähnlich
Beispiel 3 erhalten, mit der Ausnahme, dass die Stufen 4 und 5 weggelassen
wurden.
-
BEISPIEL 6
-
(3R,6S)-4-[4-(4-FLUOR-BENZYLOXY)-BENZOLSULFONYL]-2,2,6-TRIMETHYL-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
-
Die
Titelverbindung wurde ähnlich
Beispiel 3 erhalten, mit der Ausnahme, dass in Stufe 1 (2R)-2-Amino-3-hydroxy-3-methyl-buttersäure statt
D-Threonin verwendet wurde und die Stufen 4 und 5 weggelassen wurden.
-
BEISPIEL 7
-
(2S,3R,6S)-6-ETHYL-4-[4-(4-FLUOR-BENZYLOXY)-BENZOLSULFONYL]-2-METHYL-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
-
Die
Titelverbindung wurde ähnlich
Beispiel 3 erhalten, mit der Ausnahme, dass in Stufe 2 Crotylbromid statt
Allyliodid verwendet wurde und die Stufen 4 und 5 weggelassen wurden.
-
BEISPIEL 8
-
[2R,3R,6S)-4-[4-(4-FLUOR-BENZYLOXY)-BENZOLSULFONYL]-2,6-DIMETHYL-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
UND (2R,3R,6R)-4-[4-(4-FLUOR-BENZYLOXY)-BENZOLSULFONYL]-2,6-DIMETHYL-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
-
Die
Titelverbindungen wurden ähnlich
Beispiel 3 erhalten, mit der Ausnahme, dass in Stufe 1 D-allo-Threonin
statt D-Threonin verwendet wurde und die Stufen 4 und 5 weggelassen
wurden. Es wurde ein Isomerengemisch erhalten, das durch Chromatographie
an Silikagel in Stufe 3 aufgetrennt wurde, und die Synthese erfolgte
getrennt.
-
BEISPIELE 9–12
-
(2S,3R,6S)-2,6-DIMETHYL-4-[4-(PYRIDIN-4-YLMETHOXY)-BENZOLSULFONYL]-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID]
-
(2S,3R,6S)-2,6-DIMETHYL-4-[4-(PYRIDIN-2-YLMETHOXY)-BENZOLSULFONYL]-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID]
-
(2S,3R,6S)-2,6-DIMETHYL-4-[4-(PYRIDIN-3-YLMETHOXY)-BENZOLSULFONYL]-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
und
-
(2S,3R,6S)-2,6-DIMETHYL-4-[4-(2-METHYL-PYRIDIN-3-YLMETHOXY)-BENZOLSULFONYLI-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
-
Die
Titelverbindungen wurden ähnlich
Beispiel 3 erhalten, mit der Ausnahme, dass in Stufe 5 eine entsprechende
Menge des erforderlichen Pyridylchlorid verwendet wurde. Außerdem wurde
die Hydroxamsäure direkt
aus der Säure
wie folgt gebildet: 0,487 g (1,2 mmol) (2S,3R,6S)-2,6-Dimethyl 4-[4-(pyridin-4-ylmethoxy)-benzolsulfonyl]-morpholin-3-carbonsäure wurden
in 10 ml Dichlormethan und 0,1 ml Dimethylformamid gelöst und auf
0°C gekühlt. Darauf
wurden langsam 0,27 ml Oxalylchlorid zugegeben, und das Reaktionsgemisch wurde
bei 0°C
1 h gerührt.
Das Lösungsmittel
wurde am Rotationsverdampfer entfernt, und das feste Rohprodukt
wurde in einer Mindestmenge Tetrahydrofuran suspendiert. Die erhaltene
Suspension wurde bei 0°C
langsam einer Lösung
von 0,08 ml 50% wässrigem
Hydroxylamin in 2 ml Tetrahydrofuran zugesetzt. Nach Rühren bei
0°C im Verlauf
einer Stunde wurde das Reaktionsgemisch zwischen Ethylacetat und
Wasser verteilt. Der pH-Wert der wässrigen Phase wurde durch Zugabe
von Natriumbicarbonat auf 8 eingestellt. Die organischen Phasen
wurden über
Natriumsulfat getrocknet, und das Lösungsmittel wurde im Vakuum
entfernt. Nach Chromatographie des Rückstands an Silikagel mit 5%
Methanol und 2% Essigsäure
in Dichlormethan erhielt man die Titelverbindung als weißen Feststoff.
-
BEISPIEL 13
-
(3R,6S)-2,2,6-TRIMETHYL-4-[4-(2-TRIFLUORMETHYL-BENZYLOXY)-BENZOLSULFONYL]-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
-
Die
Titelverbindung wurde ähnlich
Beispiel 3 erhalten, mit der Ausnahme, dass in Stufe 1 (2R)-2-Amino-3-hydroxy-3-methyl-buttersäure und
in Stufe 5 eine entsprechende Menge an 4-(2-Trifluormethyl-benzyloxy)-benzolsulfonylchlorid
verwendet wurde.
-
BEISPIEL 14
-
(2S,3R)-2,2,6-TRIMETHYL-4-[4-(PYRIDIN-4-YLMETHOXY)-BENZOLSULFONYL]-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
-
Die
Hydroxamsäure
wurde ähnlich
Beispiel 9 aus einem Ester erhalten. Dieser wurde ähnlich Beispiel 3
hergestellt, mit der Ausnahme, dass in Stufe 2 eine entsprechende
Menge 1-Brom-2-methylpropen statt Allyliodid und in Stufe 5 4-Chlormethyl-pyridin
verwendet wurde. Die Titelverbindung wurde durch Ausfällen aus Diethylether
in Form des Hydrochlorids erhalten.
-
BEISPIEL 15
-
2,2,6-TRIMETHYL-4-[4-(2-METHYL-PYRIDIN-3-YLMETHOXY)-BENZOLSULFONYL]-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
-
Die
Titelverbindung wurde ähnlich
Beispiel 12 hergestellt, mit der Ausnahme, dass eine Zwischenverbindung
verwendet wurde, die durch Einsatz einer entsprechenden Menge (2R)-2-Amino-3-hydroxy-3-methyl-buttersäure statt
D-Threonin in Stufe 1 des Beispiels 3 erhalten wurde.
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BEISPIELE 16–21
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(2S,3R,6S)-[4-(2,5-DIMETHYL-BENZYLOXY)-BENZOLSULFONYL]-2,6-DIMETHYL-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID(2S,3R,6S)-4-[4-(3,5-DIFLUOR-BENZYLOXY)-BENZOLSULFONYL]-2,6-DIMETHYL-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID;
-
(2S,3R,6S)-4-[4-(3-METHOXY-BENZYLOXY)-BENZOLSULFONYL]-2,6-DIMETHYL-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID;
-
(2S,3R,6S)-4-[4-(5-FLUOR-2-METHYL-BENZYLOXY)-BENZOLSULFONYL]-2,6-DIMETHYL-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID;
-
(2S,3R,6S)-4-[4-(FURAN-3-YLMETHOXY)-BENZOLSULFONYL]-2,6-DIMETHYL-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
und
-
(2S,3R,6S)-4-[4-(2-FLUOR-3-METHYL-BENZYLOXY)-BENZOLSULFONYL]-2,6-DIMETHYL-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
-
Die
Titelverbindungen wurden ähnlich
Beispiel 3 hergestellt, mit der Ausnahme, dass in Stufe 5 die erforderliche
Menge eines entsprechend substituierten Arylbromids oder -chlorids
verwendet wurde.
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BEISPIEL 22
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[2S,3R)-4-[4-(4-FLUOR-BENZYLOXY)-BENZOLSULFONYL]-2,6,6-TRIMETHYL-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
-
Die
Titelverbindung wurde ähnlich
Beispiel 3 hergestellt, mit der Ausnahme, dass in Stufe 2 eine entsprechende
Menge 1-Brom-2-methylpropen verwendet wurde und die Stufen 4 und
5 weggelassen wurden.
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BEISPIEL 23
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(3R)-4-[4-(4-FLUOR-BENZYLOXY)-BENZOLSULFONYL]-6,6-DIMETHYL-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
-
Die
Titelverbindung wurde ähnlich
Beispiel 3 hergestellt, mit der Ausnahme, dass in Stufe 1 statt D-Threonin
eine entsprechende Menge D-Serin und in Stufe 2 eine entsprechende
Menge 1-Brom-2-methylpropen verwendet wurde und die Stufen 4 und
5 weggelassen wurden.
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BEISPIEL 24
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(3R)-6,6-DIMETHYL-4-[4-(PYRIDIN-4-YLMETHOXY)-BENZOLSULFONYL]-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
-
Die
Titelverbindung wurde ähnlich
Beispiel 9 hergestellt, mit der Ausnahme, dass ein Zwischenprodukt verwendet
wurde, das in Stufe 1 des Beispiels 3 durch Ersatz von D-Threonin
durch eine entsprechende Menge D-Serin erhalten wurde.
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BEISPIEL 25
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(3R)-6,6-DIMETHYL-4-[4-(2-METHYL-BENZYLOXY)-BENZOLSULFONYL]-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
-
Die
Titelverbindung wurde ähnlich
Beispiel 3 hergestellt, mit der Ausnahme, dass in Stufe 1 statt D-Threonin
eine entsprechende Menge D-Serin und in Stufe 5 eine entsprechende
Menge 2-Methylbenzylbromid genommen wurde.
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BEISPIEL 26
-
(2S,3R,6S)-4-(4-CYCLOHEXYLMETHOXY-BENZOLSULFONYL)-2,6-DIMETHYL-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
-
Die
Titelverbindung wurde ähnlich
Beispiel 3 hergestellt, mit der Ausnahme, dass in Stufe 5 eine entsprechende
Menge (Brommethyl)cyclohexan verwendet wurde.
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BEISPIEL 27
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(3R,6S)-4-[4-(2,5-DIMETHYL-BENZYLOXY)-BENZOLSULFONYL]-2,2,6-TRIMETHYL-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
-
Die
Titelverbindung wurde ähnlich
Beispiel 3 hergestellt, mit der Ausnahme, dass in Stufe 1 eine entsprechende
Menge (2R)-2-Amino-3-hydroxy-3-methylbuttersäure statt D-Threonin und in
Stufe 5 2,5-Dimethylbenzylbromid verwendet wurde.
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BEISPIEL 28
-
(2S,3R,6R)-4-[4-(4-FLUOR-BENZYLOXY)-BENZOLSULFONYL]-6-METHOXYMETHYL-2-METHYL-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
-
(2S,3R,6R)-4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-6-iodmethyl-2-methyl-morpholin-3-carbonsäure-methylester
-
1,14
g (2,6 mmol) (2R,3S)-2-{Allyl-[4-(4-fuor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-amino}-3-hydroxy-buttersäure-methylester
wurden in 28 ml Tetrahydrofuran gelöst. Darauf wurden nacheinander
bei Raumtemperatur 0,47 g (3,4 mmol) Kaliumcarbonat und 1,46 g (3,4
mmol) Quecksilber(II)trifluoracetat zugegeben. Das Gemisch wurde
bei Raumtemperatur 75 min. gerührt,
wonach 1,65 g (6,5 mmol) Jod zugefügt wurden. Nach 1 h wurde das
Reaktionsgemisch zwischen Ethylacetat und wässriger 1 N Salzsäure verteilt.
Die organische Phase wurde mit wässrigem
gesättigtem
Natriumbisulfit gewaschen und über
Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum
entfernt, und Chromatographie des Rückstands an Silikagel mit 30%
Ethylacetat in Hexanen ergab die Titelverbindung (1,5 g, 60%).
-
2S,3R,6R)-4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-6-methoxymethyl-2-methylmorpholin-3-carbonsäure-methylester
-
0,365
g (0,65 mmol) (2S,3R,6R)-4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-6-iodmethyl-2-methyl-morpholin-3-carbonsäure-methylester
wurden in 10 ml Methanol und 10 ml Tetrachlormethan gelöst, und
durch die Lösung
wurde 20 sec. Chlorgas geleitet. Nach Rühren im Verlauf von 5 min.
wurde Ethylacetat zugegeben. Die Lösung wurde mit Natriumbisulfit
und Natriumbicarbonat extrahiert und über Magnesiumsulfat getrocknet. Nach
Entfernen des Lösungsmittels
im Vakuum und Chromatographie des Rückstands an Silikagel mit 30% Ethylacetat
in Hexanen erhielt man 0,211 g (69%) der Titelverbindung.
-
(2S,3R,6R)-4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-benzoisulfonyl]-6-methoxymethyl-2-methylmorpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid
-
4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-6-methoxymethyl-2-methyl-morpholin-3-carbonsäure-methylester
wurde ähnlich
den Stufen 6 und 7 des Beispiels 3 in die entsprechende Hydroxamsäure umgewandelt.
-
BEISPIEL 29
-
(2S,3R,6S)-4-[4-(3-CHLOR-BENZYLOXY)-BENZOLSULFONYL]-6-[(ETHYL-METHYL-AMINO)-METHYL]-2-METHYL-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
-
(2S,3R,6R)-4-[4-(3-Chlor-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-6-iodmethyl-2-methyl-morpholin-3-carbonsäure-methylester
-
Die
Titelverbindung wurde ähnlich
wie (2S,3R,6R)-4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)phenylsulfanyl]-6-iodmethyl-2-methyl-morpholin-3-carbonsäure-methylester
in Beispiel 28 erhalten.
-
(2S,3R,6S)-4-[4-(3-Chlor-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-6-[(ethyl-methyl-amino)-methyl]-2-methyl-morpholin-3-carbonsäure-methylester
-
3,8
g (6,6 mmol) 4-[4-(3-Chlor-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-6-iodmethyl-2-methylmorpholin-3-carbonsäure-methylester
wurden in 10 ml Dimethylformamid und 10 ml Ethylmethylamin gelöst und bei
60°C 12
h gerührt.
Das Reaktionsgemisch wurde zwischen Ethylacetat und Wasser verteilt.
Die organische Phase wurde über
Natriumsulfat getrocknet, und die Lösungsmittel wurden im Vakuum
entfernt.
-
(2S,3R,6S)-4-[4-(3-Chlor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-6-[(ethyl-methyl-amino)-methyl]-2-methyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid
-
1,0
g (14,4 mmol) Hydroxylamin-Hydrochlorid wurde in 8 ml Methanol suspendiert.
1,0 g (17,8 mmol) Kaliumhydroxid wurde in 4 ml Methanol gelöst und zu
der Hydroxylaminlösung
gegeben. Nach Rühren
im Verlauf von 15 min. wurde 1,0 g (1,96 mmol) (2S,3R,6S)-4-[4-(3-Chlor-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-6-[(ethyl-methyl-amino)methyl]-2-methyl-morpholin-3-carbonsäure-methylester
zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 1 h bei Raumtemperatur gerührt, und
das Lösungsmittel
wurde im Vakuum entfernt. Der Rückstand
wurde zwischen Ethylacetat und 1 N Salzsäure verteilt. Die organische
Phase wurde über
Natriumsulfat getrocknet, und das Lösungsmittel wurde im Vakuum
entfernt. Die Titelverbindung (0,175 g, 17%) wurde durch Chromatographie
an Silikagel mit 80% Ethylacetat in Hexanen isoliert.
-
BEISPIEL 30
-
(2S,3R)-4-[4-(3-CHLOR-BENZYLOXY)-BENZOLSULFONYL]-6-METHOXY-2-METHYL-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
-
2-[[4-(3-Chlor-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-(3-methyl-but-2-enyl)-amino]-3-hydroxybuttersäure-methylester
-
Die
Titelverbindung wurde ähnlich
wie 2-{Allyl-[4-(4-fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]amino}-3-hydroxy-buttersäure-methylester
gemäß Stufe
2 in Beispiel 3 erhalten.
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4-[4-(3-Chlor-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-6-methoxy-2-methyl-morpholin-3-carbonsäure-methylester
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1,5
g (3,11 mmol) 2-[[4-(3-Chlor-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-(3-methyl-but-2-enyl)amino]-3-hydroxy-buttersäure-methylester,
1,46 g (6,8 mmol) Natriumperiodat und einige Tropfen 4% Osmiumtetroxid
in Wasser wurden in 30 ml Dioxan und 15 ml Wasser vereinigt. Es
wurde über
Nacht gerührt,
und danach wurde die Lösung
zwischen Ethylacetat und Wasser verteilt. Die organische Phase wurde über Natriumsulfat
getrocknet, und das Lösungsmittel
wurde im Vakuum entfernt. Der Rückstand
und eine katalytischen Menge Toluolsulfonsäure wurden in 100 ml Methanol
gelöst
und über
Nacht zum Rückfluss
erhitzt. Das Lösungsmittel
wurde im Vakuum entfernt, und nach Chromatographie des Rückstands
an Silikagel mit Ethylacetat in Hexanen erhielt man 0,93 g (64%)
der Titelverbindung.
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4-[4-(3-Chlor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-6-methoxy-2-methyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid
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Die
Titelverbindung wurde durch Überführung von
4-[4-(3-Chlor-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-6-methoxy-2-methyl-morpholin-3-carbonsäure-methylester
direkt in die Hydroxamsäure
erhalten, ähnlich
dem Verfahren gemäß Beispiel
29.
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BEISPIEL 31
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4-(4-(4-FLUOR-BENZYLOXY)-BENZOLSULFONYL]-6-HYDROXYMETHYL-2-METHYL-MORPHOLIN-3-CARBONSÄURE-HYDROXYAMID
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2-{[4-(4-Fluor-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-oxiranylmethyl-amino}-3-hydroxybuttersäure-methylester
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1,5
g (3,43 mmol) 2-{Allyl-[4-(4-fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-amino}-3-hydroxybuttersäure-methylester
wurden in 10 ml Dichlormethan gelöst. Darauf wurden nacheinander
1,41 g (16,7 mmol) Natriumbicarbonat und 0,785 g (3,4 mmol) m-Chlorperoxybenzoesäure zugegeben.
Das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur 14,5 h gerührt. Dann
wurde eine weitere Portion m-Chlorperbenzoesäure (0,4 g, 1,75 mmol) zugegeben.
Nach Rühren
im Verlauf von 4 h wurden 100 ml Diethylether und 50 ml Ethylacetat
zugefügt.
Diese Lösung
wurde zweimal mit je 10 ml Natriumbisulfit, viermal mit je 10 ml
Natriumbicarbonat und einmal mit 10 ml Salzlösung extrahiert. Die organische
Phase wurde über
Magnesiumsulfat getrocknet, und die Lösungsmittel wurden im Vakuum
entfernt. Nach Chromatographie des Rückstands an Silikate) (Biotage
40M-Säule)
mit 50% Ethylacetat in Hexanen wurden 1,23 g Titelverbindung (79%)
erhalten.
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4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-6-hydroxymethyl-2-methyl-morpholin-3-carbonsäure-methylester
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1,15
g (2,54 mmol) 2-{[4-(4-Fluor-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-oxiranylmethyl-amino}-3-hydroxy-buttersäure-methylester
wurden in 20 ml Dichlormethan gelöst und auf 0°C gekühlt. Es
wurden 0,05 g (0,26 mmol) p-Toluolsulfonsäure-Monohydrat zugegeben, und
das Reaktionsgemisch wurde 2 h bei 0°C gerührt. Danach wurde ein Überschuss
an Natriumbicarbonat zugefügt
und auf Raumtemperatur erwärmt.
Der Feststoff wurde abfiltriert und das Lösungsmittel im Vakuum entfernt.
Nach Chromatographie des Rückstands
an Silikagel (Biotage 40M-Säule)
mit 15 Ethylacetat in Dichlormethan wurden die aufgetrennten Diastereomeren
der Titelverbindung (je 0,5 g, 87%) erhalten.
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6-(tert.-Butyl-dimethyl-silanyloxymethyl)-4-[4-(4-fluor-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-2-methyl-morpholin-3-carbonsäure-methylester
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0,4
g (5,9 mmol) Imidazol und 0,4 g (2,65 mmol) t-Butyldimethylsilylchlorid
wurden nacheinander zu 10 ml Dichlormethan zugegeben. Die Lösung wurde
5 min. gerührt,
und es bildete sich ein Niederschlag. Der Feststoff wurde abfiltriert,
und die Lösung
wurde dem 4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-6-hydroxymethyl-2-methylmorpholin-3-carbonsäure-methylester
(0,495 g, 1,09 mmol) zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 2 h bei
Raumtemperatur gerührt,
wonach mit Diethylether verdünnt
wurde. Die erhaltene Lösung
wurde mit 1 N Natriumhydroxid, 1 N Salzsäure und Salzlösung extrahiert.
Die organische Phase wurde über
Magnesiumsulfat getrocknet, und das Lösungsmittel im Vakuum entfernt.
Nach Chromatographie des Rückstands
an Silikagel (Biotage 40S-Säule)
mit einer Mischung von Ethylacetat und Hexan erhielt man 0,54 g
(87%) der Titelverbindung.
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6-(tert.-Butyl-dimethyl-silanyloxymethyl)-4-[4-[4-fluor-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-2-methyl-morpholin-3-carbonsäure-allyloxy-amid
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Aus
0,54 g (0,95 mmol) 6-(tert.-Butyl-dimethyl-silanyloxymethyl)-4-[4-(4-fluor-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-2-methyl-morpholin-3-carbonsäure-methylester
wurden 0,230 g (40%) der Titelverbindung erhalten, ähnlich dem
in Stufe 6 von Beispiel 3 beschriebenen Verfahren.
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4-[4-(4-Fluor-benzyloxy)-benzolsulfonyl]-6-hydroxymethyl-2-methyl-morpholin-3-carbonsäure-Hydroxyamid
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Die
Hydroxamsäure
wurde aus 0,23 g (0,38 mmol) 6-(tert.-Butyl-dimethyl-silanyloxymethyl)-4-[4-(4-fluor-benzyloxy)-phenylsulfanyl]-2-methyl-morpholin-3-carbonsäure-allyloxy-amid ähnlich dem
in Stufe 7 von Beispiel 3 beschriebenen Verfahren erhalten und ohne
Reinigung weiterverwendet. Die rohe Hydroxamsäure wurde in 10 ml Tetrahydrofuran
gelöst
und auf 0°C
gekühlt. Dann
wurde 1,0 mmol Tetra-n-Butylammoniumfluorid (1 M in Tetrahydrofuran)
zugegeben und zunächst
bei 0°C
im Verlauf einer Stunde und dann bei Raumtemperatur im Verlauf von
2 h gerührt.
Das Tetrahydrofuran wurde am Rotationsverdampfer entfernt, und der
Rückstand
wurde zwischen Ethylacetat und 1 N Salzsäure verteilt. Die organische
Phase wurde über
Magnesiumsulfat getrocknet. Darauf wurde das Lösungsmittel im Vakuum entfernt.
Nach Chromatographie des Rückstands
an Silikagel (Biotage 40S-Säule)
mit 1 Essigsäure in
Ethylacetat erhielt man 0,068 g (39%) der Titelverbindung.
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