DE69534075T2

DE69534075T2 - Vorbeugungs- und heilmittel für erkrankungen, die durch fibrin- oder thrombusbildung hervorgerufen werden

Info

Publication number: DE69534075T2
Application number: DE69534075T
Authority: DE
Inventors: Masayuki Miyata; Reiji Fukushima-shi KASUKAWA; Masanobu Naruto; Nobutaka Ida; Yu-Ichiro Sato; Katsuaki Yokohama-shi KOJIMA; Nobuo Ida
Original assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1994-06-07
Filing date: 1995-06-06
Publication date: 2005-07-21
Anticipated expiration: 2015-06-07
Also published as: DE69534075D1; CA2168963A1; US6083501A; EP0721783B1; EP0721783A4; CA2168963C; EP0721783A1; WO1995033483A1; JP3783873B2

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung eines Inhibitors für Interleukin 6 zur Herstellung eines Medikamentes zur Behandlung von Krankheiten, die durch Fibrinoidbildung oder Thrombusbildung in der Lunge hervorgerufen wurden, sowie auch die Behandlung von Tieren mit diesen Erkrankungen, um ein wirksames therapeutisches Verfahren zu untersuchen.
ALLGEMEINER STAND DER TECHNIK
Eine Lungen-Herz-Krankheit (Cor pulmonale) ist das Stadium, das eine Druckbelastung des rechten Ventrikels oder eine Fehlfunktion des rechten Ventrikels durch eine Erhöhung des Widerstands des pulmonalen Gefäßes zeigt, der durch Erkrankungen des Parenchyms der Lunge, pulmonale Gefäßerkrankungen oder extrapulmonale Erkrankungen hervorgerufen wird, die zu einer Hypoventilation der Alveolen führen. Auf dem klinischen Verlauf und dem pathologischen Stadium basierend, wird eine Lungen-Herz-Erkrankung in drei Gruppen unterteilt, und zwar akute Lungen-Herz-, subakute Lungen-Herz- und chronische Lungen-Herz-Erkrankung, und die Art der primären Erkrankungen aus diesen drei Gruppen unterscheidet sich jeweils untereinander. Die repräsentative Ursache einer akuten Lungen-Herz-Erkrankung ist eine pulmonale Thromboembolie, bei der das rechte Ventrikel deutlich erweitert ist, ohne daß dabei eine Hypertrophie des rechten Ventrikels auftritt, gefolgt vom Versagen des rechten Herzens. Zu den Ursachen für eine subakute Lungen-Herz-Erkrankung gehören eine multiple oder periodisch auftretende Lungenembolie, deren pathologisches Stadium ist jedoch dem der akuten Lungen-Herz-Erkrankung ähnlich. Zu den Ursachen einer chronischen Lungen-Herz-Erkrankung gehören eine chronische okklusive Lungenkrankheit und Lungenhypertonie. Die chronische Lungen-Herz-Erkranung begleiten eine Hyperplasie des Herzmuskels des rechten Ventrikels, Atemprobleme bei der Bewegung, eine Kardiopulsation und Ödeme, und die Prognose ist dabei schlecht. Eine Fibrinoidbildung oder Thrombusbildung in der Lunge spielt bei der Ausbildung dieses pathologischen Stadiums eine zentrale Rolle.
Heutige therapeutische Verfahren für eine Lungen-Herz-Erkrankung basieren auf einer Therapie und Kontrolle der primären Erkrankungen. Es gibt keine wirksamen, spezifisch wirkenden Verfahren, und es wird nur eine nosotrope Behandlung durchgeführt.
Als Tiermodelle, die zur Klärung des pathologischen Stadiums und zur Untersuchung eines wirksamen therapeutischen Verfahrens o. dgl. verwendet werden, wurden mit Monocrotalin behandelte Rattenmodelle als Tiermodell einer pulmonalen Hypertonie benutzt. Dieses Modell ist pathologisch hauptsächlich durch Hyperplasie des Tunica media der muskulären Lungenarterie, Muskelgewebeumbildung der Lungenarteriole und Hyperplasie der intraalveolaren Septa gekennzeichnet.
Beim herkömmlichen Tiermodell einer Monocrotalin-Ratte wird jedoch bei der Ausbildung des Krankheitsstadiums kaum eine Fibrinoidbildung und eine Thrombusbildung in der Lunge beobachtet, und das Tiermodell der Monocrotalin-Ratte wird als Modell für die sogenannte sekundäre pulmonale Hypertonie aufgestellt, wobei die pulmonale Hypertonie und die interstitielle Pneumonie kompliziert sind. Das Monocrotalin-Rattenmodell ist somit zur Klärung des pathologischen Stadiums der Lungen-Herz-Erkrankung und für die Untersuchung eines therapeutischen Verfahrens für die Lungen-Herz-Erkrankung in Abhängigkeit von der Schwere der Erkrankung unzureichend. Für diese Lungen-Herz-Erkrankung gibt es kein vielversprechendes therapeutisches Verfahren.
OFFENBARUNG DER ERFINDUNG
Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht in der Bereitstellung eines Medikamentes zur Verhinderung und zur Therapie von Erkrankungen, die durch Fibrinoidbildung oder Thrombusbildung im vaskulären System der Lunge hervorgerufen werden, wie eine Lungen-Herz-Erkrankung. Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht darin, ein Tiermodell bereitzustellen, das zu einer Lungen-Herz-Erkrankung führt, die durch Fibrinoidbildung oder Thrombusbildung im Blutkreislauf der Lunge hervorgerufen wird.
Die hier genannten Erfinder haben entdeckt, daß durch die Verabreichung von Interleukin 6 (hier nachstehend auch als "IL-6" bezeichnet) an Ratten eine Fibrinoid- oder Thrombusbildung in der Lunge hervorgerufen wird, so daß sich eine Lungen-Herz-Erkrankung ausbildet, und daß die Verhinderung und Therapie der durch Fibrinoidbildung oder Thrombusbildung in der Lunge hervorgerufenen Erkrankungen erreicht werden kann, wenn ein IL-6-Inhibitor verabreicht wird, und gelangten somit zur vorliegenden Erfindung.
Das heißt, die vorliegende Erfindung gibt die Verwendung eines Inhibitors für Interleukin 6 für die Herstellung eines Medikamentes zur Behandlung von Krankheiten an, die durch Fibrinoidbildung oder Thrombusbildung in der Lunge hervorgerufen werden, wobei der Inhibitor aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Antikörpern für Interleukin 6, die das Interleukin 6 neutralisieren, und Immunsuppressionsmitteln besteht.
Die vorliegende Erfindung gibt auch die Behandlung eines Rattenmodells mit einer Lungen-Herz-Erkrankung (Cor pulmonale) an, die durch Fibrinoidbildung oder Thrombusbildung in der Lunge hervorgerufen wird, wobei die Fibrinoidbildung oder die Thrombusbildung in der Lunge tatsächlich durch exogene Verabreichung von IL-6 auftritt, um ein wirksames therapeutisches Verfahren zu untersuchen.
Durch die vorliegende Erfindung wurde zum ersten Mal ein Medikament bereitgestellt, das eine Erkrankung verhindern und behandeln kann, die durch Fibrinoidbildung oder Thrombusbildung in der Lunge hervorgerufen wird. Außerdem wurde durch die vorliegende Erfindung zum ersten Mal ein Tiermodell für eine Krankheit bereitgestellt, die durch Fibrinoidbildung oder Thrombusbildung im Gefäßsystem der Lunge verursacht wird. Beim erfindungsgemäßen Tiermodell unterscheidet sich der Mechanismus für den Beginn der Krankheit von dem bei einem herkömmlichen Monocrotalin-Modell, und die Fibrinoidbildung oder Thrombusbildung wird im Zusammenhang mit der exogen verabreichten Dosis von IL-6 hervorgerufen und die Hypertrophie des rechten Ventrikels schreitet in Zusammenhang damit fort. Folglich ist das durch die vorliegende Erfindung bereitgestellte Tiermodell für die Klärung des pathologischen Stadiums einer Lungen-Herz-Erkrankung und für die Untersuchung eines wirksamen therapeutischen Modells einer Lungen-Herz-Erkrankung geeignet.
KURZE BESCHREIBUNG DER ZEICHNUNGEN
1: zeigt das Gewichtsverhältnis von rechtem Ventrikel/(linkes Ventrikel + Septum) im feuchten Zustand eines isolierten Herzens und die Menge des IL-6 neutralisierenden Antikörpers in Beispiel 1; und
2: zeigt das Gewichtsverhältnis von rechtem Ventrikel/(linkes Ventrikel + Septum) im feuchten Zustand in jeder Gruppe in Beispiel 2.
BESTE ART UND WEISE DER DURCHFÜHRUNG DER ERFINDUNG
Die hier genannten Erfinder haben entdeckt, daß durch die Verabreichung von IL-6 an Ratten bewirkt wird, daß die Fibrinoidbildung und Thrombusbildung in der Lunge eine Hypertrophie des rechten Ventrikels zeigen, und eine Lungen-Herz-Erkrankung hervorgerufen wird. Andererseits entwickelte sich durch die Verabreichung eines IL-6 neutralisierenden Antikörpers zusammen mit IL-6 an Ratten keine Hypertrophie des rechten Ventrikels, und der Beginn einer Lungen-Herz-Erkrankung wurde verhindert. Die hier genannten Erfinder haben bestätigt, daß durch kontinuierliche Verabreichung von Human-IL-6 an Ratten ein Antikörper erzeugt wird, der vom Menschen stammendes IL-6 neutralisiert, und daß die Hypertrophie des rechten Ventrikels mit der Zunahme der Menge des erzeugten neutralisierenden Antikörpers abnimmt, und daß die Ausbildung einer Lungen-Herz-Erkrankung bei Ratten mit der Zunahme der Menge des erzeugten Human-IL-6-Antikörpers gehemmt wird, womit sie die therapeutische Wirkung von IL-6-Antikörpern festgestellt haben. Die hier genannten Erfinder haben auch die verhindernde Wirkung des IL-6-Antikörpers entdeckt, als sie die Tatsache beobachtet haben, daß der Beginn einer Lungen-Herz-Erkrankung verhindert wird, wenn gleichzeitig mit der Verabreichung von Human-IL-6 ein Human-IL-6-Antikörper verabreicht wird, und gelangten dadurch zur vorliegenden Erfindung.
Irgendwelche Krankheiten, die durch Fibrinoidbildung oder Thrombusbildung in der Lunge gekennzeichnet sind, können mit dem erfindungsgemäßen Medikament verhindert oder behandelt werden. Folglich können auch kausale Lungen-Herz-Erkrankung verhindert oder behandelt werden. Zu Beispielen solcher Erkrankungen gehören eine Thromboembolie der Lunge, eine Lungenembolie, eine chronische okklusive Lungenerkrankung, Pneumokoniose (pneumoconiocis), verschiedene interstitielle Lungenerkrankungen, Lungenhypertonie u. dgl., obwohl die Erkrankungen nicht darauf begrenzt sind.
Das erfindungsgemäße Medikament umfaßt einen IL-6-Inhibitor als Wirkstoff. Der IL-6-Inhibitor ist eine Substanz, die die Wirkung von IL-6 neutralisiert oder die die Produktion von IL-6 verringert oder hemmt. Zu Beispielen des IL-6-Inhibitors gehören IL-6 neutralisierende Antikörper, PGE₁ und dessen Derivate, PGE₂ und dessen Derivate, wie Beraprost u. dgl., und Immunsuppressionsmittel, wie Cyclophosphamid.
Als IL-6 neutralisierende Antikörper können sowohl polyklonale als auch monoklonale Antikörper verwendet werden, und monoklonale Antikörper sind bevorzugt. Ein Beispiel der IL-6-Antikörper, die IL-6 neutralisieren können, ist IG61, das in der offengelegten japanischen Patentanmeldung (Kokai) Nr. 3-139292 und in der europäischen Patentveröffentlichung 0 399 429 A1 beschrieben ist, obwohl der IL-6 neutralisierende Antikörper nicht auf diesen Antikörper begrenzt ist. IG61 wurde am 27. April 1990 unter der Zugangsnummer FERM BP-2878 beim National Institute of Bioscience and Human-Technology, Agency of Industrial Science and Technology in 1–3, Higashi 1-chome, Tsukubashi, Ibaraki-ken, Japan, hinterlegt.
Das erfindungsgemäße Medikament kann einen IL-6-Inhibitor allein umfassen oder kann ferner einen oder mehrere pharmazeutisch akzeptable Träger oder Zusätze umfassen. Zu Beispielen solcher Träger und Zusätze gehören Wasser, organische Lösungsmittel, wie Ethanol, Collagen, Polyvinylalkohol, Polyvinylpyrrolidon, Carboxyvinylpolymere, Natriumcarboxymethylcellulose, Natriumpolyacrylat, Natriumalginat, wasserlösliches Dextran, Natriumcarboxymethylstärke, Pektin, Methylcellulose, Ethylcellulose, Xanthangummi, Gummi arabicum, Casein, Gelatine, Agar, Polyethylenglycol, Diglycerin, Glycerin, Propylenglycol, Polyethylenglycol, Vaseline, Paraffin, Stearylalkohol, Stea rinsäure, Humanserumalbumin, Manitol, Sorbitol, Lactose, Tenside u. dgl.
Die Zusätze können in Abhängigkeit von der Formulierung des erfindungsgemäßen therapeutischen Mittels aus den vorstehend genannten ausgewählt werden, obwohl die Zusätze nicht auf die vorstehend genannten begrenzt sind.
Das vorstehend beschriebene therapeutische Mittel kann gleichzeitig zusammen mit einem oder mehreren anderen Medikamenten oder nacheinander verabreicht werden. Solche anderen Medikamente können aus therapeutischen Medikamenten für primäre Erkrankungen, therapeutischen Mitteln für das Versagen des rechten Herzens, wie Digitalis, Diuretika und dgl., gerinnungshemmenden Mitteln, Vasodilatoren, Serotonin-Antagonisten, Immunsuppressionmitteln und Pharmazeutika ausgewählt werden, die die Aktivität des erfindungsgemäßen Medikamentes verstärken oder dessen Funktion unterstützen.
Das Verabreichungsverfahren des Medikamentesist nicht begrenzt, und in Abhängigkeit vom Zweck kann irgendein geeignetes Verabreichungsverfahren ausgewählt werden. Formulierungen für die externe Anwendung und die Injektion sind bevorzugt. Zu Formulierungen für die externe Anwendung gehören Pulver und Spray, die über die Lunge verabreicht werden, obwohl die Formulierungen nicht darauf begrenzt sind. Ein geeignetes Verfahren zum Verabreichen von Injektionsformulierungen wird aus einer intravenösen Injektion, einer subkutanen Injektion, einer intramuskulären Injektion, einer intravenösen Infusion über einen Tropf, einer intraperitonealen Injektion und dgl. ausgewählt. Das Medikament kann auch als Präparat mit Langzeitwirkung, wie eine verweilende osmotische Pumpe, formuliert werden.
Die Verabreichungsdosis des IL-6-Inhibitors, wie eines IL-6 neutralisierenden Antikörpers, kann vorzugsweise aus dem Bereich von 0,001 bis 100 mg, stärker bevorzugt von 0,01 bis 10 mg pro 1 kg Körpergewicht pro Tag ausgewählt werden. Da sich die Verabreichungsdosis in Abhängigkeit vom Symptom ändert, ist die Verabreichungsdosis nicht auf den vorstehend genannten Bereich begrenzt. Das Medikament kann einmal oder zweimal am Tag oder einmal pro zwei oder einige Tage verabreicht werden, obwohl dies nicht darauf begrenzt ist.
Ein bestimmtes Beispiel der Zusammensetzung des erfindungsgemäßen Medikamentes ist nachstehend gezeigt, obwohl die Zusammensetzung nicht darauf begrenzt ist.

IL-6 neutralisierender Antikörper 50 mg

Physiologische Kochsalzlösung 1 ml
Wie vorstehend erwähnt, gibt die vorliegende Erfindung ein Rattenmodell für Erkrankungen an, die durch Fibrinoidbildung oder Thrombusbildung in der Lunge hervorgerufen werden, wobei die Fibrinoidbildung oder Thrombusbildung in der Lunge tatsächlich durch Verabreichung von Interleukin 6 hervorgerufen wird. IL-6 wurde zum ersten Mal als Differenzierungsfaktor für die Maturation von B-Zellen in Antikörper erzeugende Zellen identifiziert. Seit dessen cDNA 1986 geklont worden ist (Hirano, T. et al.; Nature, 324, 73–76, 1986), wurde aufgeklärt, daß IL-6 Ursachen und pathologische Stadien verschiedener Erkrankungen betrifft (Kishimoto, T.: Blood 74: 1–10, 1989, Kawano, M. et al.: Nature 332: 83–85, 1988, Yee, C. et al.: Blood 74: 798–804, 1989, Everson, M. R., et al.: Blood 74: 1472–1476, 1989, Yoshizaki, K. et al.: Blood 74: 1360–1367, 1989, Najima, K. et al.: J. Immunol. 142: 531–536, 1989, Horii, Y. et al.: J. Immunol. 143: 3949–3955, 1989). Bisher wurde jedoch noch nicht berichtet, daß IL-6 zu einer Fibrinoidbildung oder Thrombusbildung führt, so daß eine Hypertrophie des rechten Ventrikels verursacht wird, und daß es mit dem Beginn einer Lungen-Herz-Erkrankung in Zusammenhang steht.
Die hier genannten Erfinder haben bestätigt, daß die tatsächliche Verabreichung von IL-6 an Ratten die Fibrinoidbildung oder Thrombusbildung sowie auch eine Hypertrophie des rechten Ventrikels einleitet, was zu einer Lungen-Herz-Erkrankung führt, und gelangten damit zur vorliegenden Erfindung. Das Ausmaß der Hypertrophie des rechten Ventrikels war bei unserem Modell etwa das gleiche wie das, das beim Monocrotalin-Rattenmodell hervorgerufen wurde, beim Monocrotalin-Rattenmodell wurden eine Hyperplasie der Medien der muskulären Lungenarterie, eine Muskelgewebeumbildung der Lungenarteriole und die Hyperplasie der Wand der intraalveolaren Septa pathologisch beobachtet, während beim erfindungsgemäßen Modell die Fibrinoidbildung und die Thrombusbildung in der Lunge verursacht werden, so daß die Mechanismen des Beginns der Erkrankungen unterschiedlich sind. Ferner ist beim Monocrotalin-Rattenmodell die interstitielle Pneumonie kompliziert, während beim erfindungsgemäßen Modell keine Komplikation mit interstitieller Pneumonie beobachtet wird. Wenn Monocrotalin verabreicht wird, wird ferner unabhängig von der Dosis des verabreichten Monocrotalins eine Hypertrophie des rechten Ventrikels beobachtet, während beim erfindungsgemäßen Modell das Ausmaß der Hypertrophie des rechten Ventrikels dosisabhängig mit der Dosis des verabreichten IL-6 zunimmt. Somit ist das erfindungsgemäße Modell für die Klärung des pathologischen Stadiums der Lungen-Herz-Erkrankung und für die Untersuchung eines wirksamen therapeutischen Verfahrens für die Lungen-Herz-Erkrankung geeignet.
Das erfindungsgemäße Rattenmodell kann als Modell für irgendwelche Krankheiten dienen, die durch Fibrinoidbildung und Thrombusbildung in der Lunge hervorgerufen werden. Zu Beispielen dieser Erkrankungen gehören die vorstehend genannten Erkrankungen.
Das erfindungsgemäße Rattenmodell kann erzeugt werden, wenn einer Ratte IL-6 verabreicht wird. Der Typ und die Spezies des hier verwendeten IL-6 sind nicht begrenzt, und vorzugsweise kann IL-6 von einem Säuger, das nach einem bekannten Verfahren erhalten wird, verwendet werden. Es können zum Beispiel IL-6, das durch Züchten von IL-6 produzierenden Zellen erhalten wird, und rekombinantes IL-6, das durch ein genetisches Rekombinationsverfahren erhalten wird, verwendet werden. Der Begriff "durch Züchten von IL-6 erzeugenden Zellen erhaltenes IL-6" bedeutet, daß das IL-6 durch Züchten von Mammaliazellen erhalten wird. Als Mammaliazellen können vorzugsweise Fibroblastenzellen, Endothelzellen, Stromazellen u. dgl. verwendet werden, obwohl die Mammaliazellen nicht darauf begrenzt sind. Ein Verfahren zum Züchten der Zellen und zum Reinigen von IL-6 ist in der offengelegten japanischen Patentanmeldung (Kokai) Nr. 5-176788 beschrieben, obwohl das Verfahren nicht darauf begrenzt ist.
Andererseits kann rekombinantes IL-6 nach einem bekannten Verfahren produziert werden, wobei Escherichia coli verwendet wird (z. B. die offengelegte japanische Patentanmeldung (Kokai) Nr. 63-157996). Rekombinantes IL-6 kann auch produziert werden, wenn ein IL-6-Gen zusätzlich zu Zellen von E. coli in prokaryotische Zellen, wie Bacillus subtilis; Hefezellen; Mammaliazellen, wie Zellen vom Hamster, der Maus, vom Affen und Human-Zellen; Insektenzellen; oder Insekten eingeführt wird. Das IL-6-Gen kann in einen Wirt eingeführt werden, indem das IL-6-Gen in die stromabwärtige Region eines Promotors ligiert wird, der als Wirt wirkt, und das entstandene Produkt kann in Form einer DNA oder eines Virus eingeführt werden.
Die Krankheit kann bei einer Ratte vorzugsweise eingeleitet werden, indem der Ratte IL-6 nach einem geeigneten Verfahren, wie intravenöse Injektion, subkutane Injektion, intramuskuläre Injektion, intravenöse Infusion mittels Tropf, intraperitoneale Injektion o. dgl., verabreicht wird. In der vorliegenden Erfindung können auch nach einem bekannten Verfahren erzeugte IL-6-transgene Tiere verwendet werden. Verfahren für die Erzeugung von IL-6-transgenen Tieren sind bei Suematsu, S. et al., (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 7547–7551, 1989) und in der offengelegten japanischen Patentanmeldung (Kokai) Nr. 5-48093 beschrieben, obwohl die Verfahren nicht darauf begrenzt sind.
Eine wirksame Verabreichungsdosis von IL-6 an ein Tier wird aus dem Bereich von 0,0001 bis 500 μg, vorzugsweise von 0,01 bis 300 μg pro Tag pro 1 kg Körpergewicht ausgewählt. Da die Verabreichungsdosis in Abhängigkeit von den Versuchsbedingungen schwankt, muß nicht erwähnt werden, daß die Verabreichungsdosis von IL-6 nicht auf den vorstehend genannten Bereich begrenzt ist. IL-6 kann einmal oder zweimal am Tag oder einmal pro zwei oder einige Tage verabreicht werden, obwohl dies nicht darauf begrenzt ist. Gewöhnlich kommt es in der Lunge zu einer Fibrinoidbildung oder Thrombusbildung, wenn die vorstehend genannte Verabreichung über 7 bis 14 Tage fortgesetzt wird.
Die vorliegende Erfindung wird nachstehend anhand von Beispielen beschrieben. Die nachstehend beschriebenen Beispiele dienen nur der Erläuterung und sollten nicht einschränkend interpretiert werden.
Beispiel 1
Schaffung eines Modells für eine Lungen-Herz-Erkrankung durch Verabreichung von IL-6
1. Methoden

1) Es wurden Sprague-Dawley-Ratten verwendet (6 Wochen alt, männlich, Körpergewicht 150 bis 200 g, FUNABASHI NOJO, Sendai, Miyagi-ken, Japan). 60 Ratten wurden willkürlich wie folgt in Gruppen aufgeteilt, von denen jede aus 15 Ratten bestand. IL-6 wurde durch Züchten von Human-Fibroblastenzellen und Reinigen des produ zierten des IL-6 nach dem Verfahren erhalten, das in der offengelegten japanischen Patentanmeldung (Kokai) Nr. 5-176788 beschrieben ist.
Gruppe 1: Gruppe, der IL-6 verabreicht wurde (200 μg/kg/Tag, 16 Tage, s. c.)
Gruppe 2: Gruppe, der Monocrotalin verabreicht wurde (40 mg/kg, nur am ersten Tag, s. c.)
Gruppe 3 Kontrollgruppe (physiologische Kochsalzlösung, 16 Tage, s. c.)
2) Die Beobachtung erfolgte am Tag 0, 4, 8 und 16. An jedem Beobachtungstag wurden aus jeder Gruppe willkürlich 5 Ratten ausgewählt und nach folgenden Fakten beobachtet.
3) Beobachtete Fakten
(1) Das Ausmaß der Lungenhypertonie wurde auf der Basis des Gewichtsverhältnisses von rechtem Ventrikel/(linkes Ventrikel + Septum) im feuchten Zustand gemäß Fulton et al. (Brit. Heart J. 14: 413–420, 1952) ausgewertet.
(2) Die pathologische Beobachtung von Lungengeweben erfolgte nach dem Präparieren von Proben nach einem herkömmlichen Fixierverfahren, gefolgt vom Färben der Proben mit Hämatoxylin-Eosin oder Masson-Trichrome. Die immunopathologische Beobachtung, um das Auftreten einer Änderung des Wachstums des Endotheliums und des inneren Hohlraums der Blutgefäße zu prüfen, erfolgte bei mit BrdU gefärbten Proben gemäß Gratzner (Science 218: 474–475, 1982).
(3) Mengenmäßige Erfassung des IL-6 neutralisierenden Antikörpers
➀ Eine ELISA-Platte (Dynatech Laboratories Inc., USA) wurde mit IL-6 ausgestrichen (1 μg/ml, 0,05 m Carbonat-Bicarbonat-Puffer, pH = 9,6), und die entstandene Platte wurde 3 Stunden bei 37°C und danach 24 Stunden bei 4°C inkubiert.
➁ Die Platte wurde dreimal mit Phosphatpuffer (0,1 m PBS-T, pH = 7,4) gewaschen, der 0,05% Tween 20 enthielt, und danach wurde PBS (PBS-BSA) zugesetzt, das 3% Rinderserumalbumin (BSA) enthielt.
➂ Eine 1 : 50 mit PBS-BSA verdünnte Serumprobe wurde in die Vertiefungen gegeben, und die Platte wurde 1 Stunde bei 37°C inkubiert, daraufhin wurde sie dreimal mit PBS-T gewaschen.
➃ Mit alkalischer Phosphatase konjugierter Anti-Ratten-IgG-Kaninchen-Antikörper F(ab')₂, 1 : 1000 mit PBS-BSA verdünnt, wurde in die Vertiefungen gegeben, und die Platte wurde 1 Stunde inkubiert.
➄ Nachdem die Vertiefungen dreimal mit PBS-T gewaschen worden waren, wurde den Vertiefungen eine Nitrophenylphosphatlösung (Sigma Diagnostics, USA, Carbonat-Bicarbonat-Puffer, 0,05 m, pH = 9,8) zugesetzt, und es wurde die Absorption bei 405 nm gemessen.

2. Ergebnisse
1) Gewichtsverhältnis von rechtem Ventrikel/(linkes Ventrikel + Septum)
Wie in 1 gezeigt, war das Gewichtsverhältnis von rechtem Ventrikel/(linkes Ventrikel + Septum) der Gruppe 1 an allen Beobachtungstagen deutlich höher als das der Gruppe 3. Beim Gewichtsverhältnis gab es keinen deutlichen Unterschied zwischen der Gruppe 1 und der Gruppe 2.
2) Histologische Beobachtung der Lunge
In der Gruppe 1 wurden am Tag 4 und danach eine Fibrinoidbildung und eine Thrombusbildung in den Arteriolengefäßen der Lunge und in den kapillaren Blutgefäßen beobachtet. In der Gruppe 2 wurde eine Hyperplasie der Tunica media der muskulären Lungenarterie und eine Infiltration von Zellen in die Nebentunica der muskulären Lungenarterie beobachtet. Nur bei der Gruppe 2 wurde das Wachstum von BrdU(+)-Zellen beobachtet, und zwischen der Gruppe 1 und der Gruppe 3 bestand kein Unterschied.
3) Menge des IL-6 neutralisierenden Antikörpers
In Gruppe 2 liegt die Menge des IL-6 neutralisierenden Antikörpers an allen Tagen, an denen der Antikörper gemessen wurde, unter der Nachweisgrenze, während in der Gruppe 1 die Antikörpermenge am Tag 8 und danach zunahm (1).
Wie in 1 gezeigt, nahm während des 16-tägigen Prozesses der täglichen Verabreichung von IL-6 das Verhältnis von rechtem Ventrikel/(linkes Ventrikel + Septum) mit der Zeit zu, das wurde am Tag 4 und am Tag 7 gemessen, so daß der Verlauf des pathologischen Stadiums beobachtet wurde. Vom Tag 8 bis zum Tag 16 wurde jedoch der Krankheitsverlauf unterbrochen oder der Krankheitszustand verbessert. Andererseits wurde bei der Gruppe, der Monocrotalin verabreicht wurde, bis zum Tag 16 nach der Verabreichung linear eine zunehmende Verschlechterung des pathologischen Stadiums beobachtet. Da das verabreichte IL-6 eine Human-Spezies war, wird theoretisch die Produktion des Human-IL-6-Antikörpers erwartet, die durch die Verabreichung von IL-6 an unterschiedliche Spezies hervorgerufen wird.
Folglich wurden die Mengen der IL-6-Antikörper in den zurückgehaltenen Seren jeder Gruppe gemessen. Als Ergebnis wurde zweifelsfrei eine Zunahme des Titers des Human-IL-6-Antikörpers vom Tag 8 bis zum Tag 16 beobachtet. Damit wird deutlich, daß eine Unterbrechung des Verlaufs oder eine Verbesserung des pathologischen Stadiums mit der Produktion des Human-IL-6-Antikörpers in Übereinstimmung steht. Die Tatsache, daß der Human-IL-6-Antikörper selbst nach Beginn der Erkrankung wirksam ist, zeigt die therapeutischen Wirkungen der Verbindungen deutlich, die die Produktion oder die Wirkungen von IL-6 unterdrücken.
Beispiel 2
Versuche zum Neutralisieren durch den IL-6-Antikörper
Um zu prüfen, ob eine Verbindung, die die Produktion oder Wirkungen von IL-6 unterdrückt, den Beginn der Erkrankung verhindert, haben wir Versuche durchgeführt, bei denen der IL-6-Antikörper gleichzeitig mit der Verabreichung von IL-6 verabreicht wird. Ein Anti-Human-IL-6-Ratten-Antikörper wurde wie folgt hergestellt. Dabei wurde IL-6 den in Beispiel 1 verwendeten Ratten mit einer Dosis von 200 μg/kg subkutan verabreicht. Zwei Wochen später wurde den Ratten Blut entnommen, und den Seren wurde Ammoniumsulfat bis zu einer Konzentration von 30% zugesetzt. Die entstandenen Fällungsprodukte wurden aufgefangen und gegenüber PBS dialysiert. Die so erhaltene Fraktion (die einen polyklonalen IL-6-Antikörper enthielt) wird hier nachstehend als immunisierte IgG-Fraktion bezeichnet. Es wurde bestätigt, daß 20 μg dieser IgG-Fraktion eine Aktivität des rekombinanten IL-6 von 25 IE ausreichend neutralisiert.
11 Ratten wurden in die nachstehend genannten 5 Gruppen aufgeteilt, und es wurden IL-6 und/oder die vorstehend genannte IgG-Fraktion verabreicht. IL-6 wurde 7 Tage lang jeden Tag subkutan verabreicht, und die IgG-Fraktion wurde 7 Tage lang intravenös verabreicht. Die immunisierte IgG-Fraktion wurde gleichzeitig mit der Verabreichung von IL-6 verabreicht. Als Kontrollgruppen wurden auch eine Gruppe (Gruppe A), der weder IL-6 noch IgG verabreicht wurde, und eine Gruppe (Gruppe E) bereitgestellt, der die intakte IgG-Fraktion des Serums einer normalen Ratte (einer nicht mit IL-6 immunisierten Ratte) anstelle des vorstehend genannten immunisierten IgG verabreicht wurde. Am 7. Tag nach Beginn der Verabreichung wurde das Herz entnommen, und es wurde das Gewichtsverhältnis von rechtem Ventrikl/(linkes Ventrikel + Septum) gemessen. In den Gruppen, denen IL-6 verabreicht worden war, betrug die Dosis des verabreichten IL-6 in jedem Fall 200 μg/kg/Tag.
Gruppe A: Unbehandelte Gruppe (Individuen, denen weder IL-6 noch IgG verabreicht wurde)
Gruppe B: Gruppe, der allein IL-6 verabreicht wurde
Gruppe C: Gruppe, der sowohl IL-6 als auch die immunisierte IgG-Fraktion verabreicht wurde (die Verabreichungsdosis der IgG-Fraktion betrug 20 mg/kg/Tag)
Gruppe D: Gruppe, der sowohl IL-6 als auch die immunisierte IgG-Fraktion verabreicht wurde (die Verabreichungsdosis der IgG-Fraktion betrug 2 mg/kg/Tag)
Gruppe E: Gruppe, der sowohl IL-6 als auch die intakte IgG-Fraktion vom Serum von normalen Ratten verabreicht wurde (die Verabreichungsdosis der IgG-Fraktion betrug 20 mg/kg/Tag)
Die Ergebnisse sind in 1 gezeigt. Wie in 1 gezeigt, wurde bei der Auswertung am Tag 7 im Vergleich mit der unbehandelten Gruppe (Gruppe A) bei der Gruppe zweifelsfrei eine Lungenhypertonie eingeleitet, der IL-6 allein verabreicht worden war (Gruppe B). Das stellt eine Reproduktion der Ergebnisse von Beispiel 1 dar. Durch Verabreichen der den IL-6-Antikörper anthaltenden IgG-Fraktion mit einer Dosis von 20 mg/kg/Tag gleichzeitig mit der subkutanen Verabreichung von IL-6 wurde der Beginn der Lungenhypertonie vollkommen verhindert (Gruppe C). Selbst wenn die Dosis des IL-6-Antikörpers 1/10 betrug, war die Verabreichung des IL-6-Antikörpers wirksam (Gruppe D). Demgegenüber wurde bei der Gruppe (Gruppe E), der die von normalen Ratten erhaltene IgG-Fraktion zusätzlich zu IL-6 verabreicht worden war, der Beginn der Lungenhypertonie nicht verhindert.

Claims

Verwendung eines Interleukin 6-Inhibitors für die Herstellung eines Medikamentes für die Behandlung von Erkrankungen, die durch Fibrinoidbildung oder Thrombusbildung in der Lunge hervorgerufen werden, wobei dieser Inhibitor aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Interleukin 6-Antikörpern, die Interleukin 6 neutralisieren, und Immunsuppressionsmitteln besteht.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei die durch Fibrinoidbildung oder Thrombusbildung hervorgerufenen Erkrankungen Lungen-Herz-Krankheiten (Cor pulmonale) sind.
Verwendung nach Anspruch 2, wobei die primäre Lungen-Herz-Krankheit eine primäre akute Lungen-Herz-, subakute Lungen-Herz- und chronische Lungen-Herz-Krankheit ist.
Behandlung eines Rattenmodells mit einer Lungen-Herz-Krankheit (Cor pulmonale), die durch Fibrinoidbildung oder Thrombusbildung in der Lunge hervorgerufen wurde, wobei die Fibrinoidbildung oder die Thrombusbildung tatsächlich durch Einleitung mit Interleukin 6 auftritt, um ein wirksames therapeutisches Verfahren zu untersuchen.