DE69524567T2

DE69524567T2 - Arzneizusammensetzungen enthaltnd HIV - Proteaseinhibitoren

Info

Publication number: DE69524567T2
Application number: DE69524567T
Authority: DE
Inventors: Laman Al-Razzak; Dilip Kaul; P. Manning; C. Marsh
Original assignee: Abbott Laboratories
Current assignee: Abbott Laboratories
Priority date: 1994-01-28
Filing date: 1995-01-03
Publication date: 2002-09-05
Anticipated expiration: 2015-01-04
Also published as: AU700942B2; CA2178632C; WO1995020384A1; PT732923E; DE69524567D1; ES2169121T3; EP0732923A1; AU1524895A; DK0732923T3; ATE210441T1; CA2178632A1; KR100360963B1; IL111991A; JP4353542B2; HK1011609A1; US5484801A; IL111991A0; EP0732923B1

Description

Technisches Feld

Eine flüssige pharmazeutische Zusammensetzung, durch die eine verbesserte orale Bioverfügbarkeit bereitgstellt wird zur Verbindungen, welche Inhibitoren der HIV-Protease (insbesondere HIV-1 und HIV-2-Protease) sind. Insbesondere umfasst die Zusammensetzung den HIV-Protease Inhibitor und ein oder mehrere pharmazeutisch verträgliche organische Lösungsmittel.

Hintergrund der Erfindung

Ein Maß der möglichen Nützlichkeit einer oralen Dosierungsform eines neuen pharmazeutischen Wirkstoffes ist die Bioverfügbarkeit, welche nach oraler Verabreichung der Dosierungsform beobachtet wird. Zahlreiche Faktoren körnen die Bioverfügbarkeit eines Arzneistoffes beeinflussen, wenn dieser oral verabreicht wird. Diese Faktoren umfassen die wässerige Löslichkeit, die Arzneistoffabsorption innerhalb des gastrointestinalen Traktes, die Dosierungsstärke und den "first pass" Effekt. Die wässerige Löslichkeit ist einer der wichtigsten dieser Faktoren. Wenn ein Arzneistoff eine schlechte wässerige Löslichkeit besitzt, werden oft Versuche unternommen, Salze oder andere Derivate des Arzneistoffes zu finden, welch eine verbesserte wässerige Löslichkeit besitzen. Falls ein Salz oder ein anderes Derivat des Arzneistoffes gefunden wird, welches eine gute wässerige Löslichkeit besitzt, wird im Allgemeinen angenommen, dass eine wässerige Lösungsformulierung dieses Salzes oder Derivates die optimale Bioverfügbarkeit liefern wird. Die Bioverfügbarkeit der wässerigen oralen Lösungsformulierung eines Medikamentes wird dann im Allgemeinen als Standard- oder ideale Bioverfügbarkeit verwendet, gegen jene andere orale Dosierungsformen gemessen werden.
Es wurde kürzlich festgestellt, dass HIV-Protease inhibierende Verbindungen nützlich sind zur Hemmung der HIV- Protease in vitro und in vivo und nützlich sind zur Inhibition einer HIV (humanes Immundefizienzvirus) Infektion und nützlich sind zur Behandlung von AIDS (erworbenes Immundefizienzsyndrom). Die HIV-Protease inhibierenden Verbindungen sind üblicherweise dadurch charakterisiert, dass sie eine schlechte orale Bioverfügbarkeit aufweisen.
Beispiele von HIV-Protease inhibierenden Verbindungen umfassen N-(2(R)-Hydroxy-1(S)-indanyl)-2(R)-phenylmethyl-4(S)- hydroxy-5-(1-(4-(3-pyridylmethyl)-2(S)-N-(t-butylcarboxamido)- piperazinyl))-pentaneamide und verwandte Verbindungen, beschrieben in der Europäischen Patentanmeldung Nr. EP 541168, veröffentlicht am 12. Mai 1993;
N-tert-Butyl-decahydro-2-[2(R)-hydroxy-4-phenyl-3(S)-[[N-(2- quinolylcarbonyl)-L-asparaginyl]amino]butyl]-(4aS,8aS)- isoquinoline-3(S)-carboxiamid und und verwandte Verbindungen, beschrieben im U.S. Patent Nr. 5,196,438, veröffentlicht am 23. März 1993;
[1S-[1R*(R*),2S*)=-N¹[3-[[[(1,1-Dimethylethyl)amino]carbonyl]2- methylpropyl)amino]-2-hydroxy-1-(phenylmethyl)propyl]-2-[(2- quinolinylcarbonyl)amino]-butandiamid und verwandte Verbindungen, beschrieben in der PCT Patentanmeldung Nr. WO92/08701, veröffentlicht am 29. Mai 1992; und
und verwandte Verbindungen, beschrieben in der PCT Patentanmeldung Nr. WO93/07128, veröffentlicht am 15. April 1993.
Es wurde kürzlich festgestellt, dass Verbindungen gemäß der Strukturformel I:
worin R&sub1; ein Niederalkyl und R&sub2; und R&sub3; Phenyl sind, Inhibitoren der HIV-1 und HIV-2 Protease sind und nützlich sind zur Inhibition der HIV-Protease in vitro und in vito und nützlich sind zur Inhibition von HIV (humanes Immundefizienzvirus) Infektionen und nützlich sind für die Behandlung von AIDS ( erworbenes Immundefizienzsyndrom).
Insbesondere war die Verbindung gemäß Strukturformel II nachweislich besonders wirksam als ein Inhibitor der HIV-1 und HIV-2-Protease.
Die am stärksten bevorzugte Verbindung der Strukturformel II ist (2S,3S,5S)-5-(N-(N-((N-Methyl-N-((2-isopropyl-4- thiazolyl)methyl)-amino)carbonyl)valinyl)amino)-2-(N((5- thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan (Verbindung III).
Die Verbindung III hat eine wässerige Löslichkeit von ca. 6 ug pro ml bei einem pH > 2. Dies wird als eine extrem schlechte Löslichkeit angesehen und daher wird vermutet, dass die Verbindung III in der freien Basenform eine sehr niedrige orale Bioverfügbarkeit aufweist. Tatsächlich wird die freie Basenform der Verbindung III, verabreicht als ein unformulierter Feststoff in einer Kapseldosierform, charakterisiert durch eine Bioverfügbarkeit von weniger als 2%, nach einer oralen Dosierung von 5 mg/kg bei Hunden.
Saure Zusatzsalze von Verbindung III (zum Beispiel bis- Hydrochlorid, bis-Tosylat, bis-Methansulfonat und dergleichen) haben wässerige Löslichkeiten von < 0,1 mg/ml. Dies ist nur eine geringe Verbesserung gegenüber der Löslichkeit der freien Base. Diese niedrige wässerige Löslichkeit würde die Verabreichung von therapeutischen Mengen der Verbindung III als eine wässerige Lösung unpraktisch machen. Weiterhin, unter Berücksichtigung dieser niedrigen wässerigen Löslichkeit, ist es nicht verwunderlich, dass das bis-Tosylat der Verbindung III, verabreicht als ein unformulierter Feststoff in einer Kapseldosierform, charakterisiert ist, durch eine Bioverfügbarkeit von weniger als 2%, nach einer oralen Dosierung von 5 mg/kg bei Hunden.
Um eine geeignete orale Dosierungsform der Verbindung III zu besitzen, sollte die orale Bioverfügbarkeit der Verbindung III mindestens 20% betragen. Vorzugsweise sollte die orale Bioverfügbarkeit der Verbindung III aus der Dosierform größer sein, als etwa 40% und am stärksten bevorzugt größer als etwa 50%.
Während einige Arzneistoffe vermutlich eine gute Löslichkeit in organischen Lösungsmitteln aufweisen können, folgt daraus nicht notwendigerweise, dass die orale Verabreichung einer solchen organischen Lösung ein gute Bioverfügbarkeit für den Arzneistoff ergeben muss. Es wurde herausgefunden, dass die Verbindung III eine gute Löslichkeit in pharmazeutisch verträglichen Lösungsmitteln ausweist. Zusätzlich wird Löslichkeit der Verbindung III in einigen organischen Lösungsmitteln verstärkt, in Anwesenheit einer pharmazeutisch verträglichen Säure. Unerwarteterweise besitzen Lösungen der Verbindung III in pharmazeutisch verträglichen Lösungsmitteln eine orale Bioverfügbarkeit von etwa 40% bis etwa 100% bei Hunden.

Beschreibung der Erfindung

Gemäß der vorliegenden Erfindung ergibt sich eine pharmazeutische Zusammensetzung, bestehend aus einer Lösung von 1% bis 15% des Gewichtes der gesamten Lösung einer HIV Protease inhibierenden Verbindung gemäß der Strukturformel II in einem pharmazeutisch verträglichen organischen Lösungsmittel, welches Propylenglykol in der Menge von etwa 15% bsi 95% des Gewichtes der gesamten Lösung umfaßt oder eine Mischung aus (1)(a) einem Lösungsmittel gewählt aus Propylenglykol und Polyethylenglykol in der Menge von 10% bis 50% des Gewichtes der gesamten Lösung oder (b) ein Lösungsmittel gewählt aus Polyoxyethylenglyceroltriricinololeat, Polyethylenglykol 40 hydrogeniertes Kastoröl, fraktioniertem Kokosnußöl, Polyoxyethylen (20) Sorbitanmonooleat und 2-(2- Ethoxyethoxy)ethanol in der Menge von 5% bis 35% des Gewichtes der gesamten Lösung oder (c) eine Mischung davon und (2) Ethanol oder Propylenglykol in der Menge von 5% bis 45% des Gewichtes der gesamten Lösung.
Eine bevorzugte Zusammensetzung der Erfindung umfaßt eine Lösung von 1% bis 15% des Gewichtes der gesamten Lösung eine HIV Protease inhibierenden Verbindung gemäß Formel II in einem pharmazeutisch verträglichen organischen Lösungsmittel bestehend aus einer Mischung von (1) Propylenglykol in der Menge von 10% bis 50% des Gewichtes der Gesamtlösung oder Polyoxyethylenglyceroltriricinololeat in der Menge von 5% bis 35% des Gewichtes der Gesamtlösung oder eine Mischung davon und (2) Ethanol in der Menge von 5% bis 45% des Gewichtes der gesamten Lösung.
Die Lösungszusammensetzung der Erfindung kann ebenfalls andere, pharmazeutisch verträgliche, organische Lösungsmittel umfassen.
Die Lösungszusammensetzung der Erfindung kann ebenfalls eine pharmazeutisch verträgliche Säure oder eine Mischung von pharmazeutisch verträglichen Säuren umfassen, vorzugsweise in der Menge von 0% bis 20% (stärker bevorzugt von 0,2% bis 16% und am stärksten bevorzugt von 0,2% bis 6%) des Gewichtes der gesamten Lösung.
Die Lösungszusammensetzung der Erfindung kann ebenfalls von 0% bis 25% (vorzugsweise von 0% bis 19%, des Gewichtes der gesamten Lösung) Wasser umfassen.
Die Lösungszusammensetzung der Erfindung kann ebenfalls eines oder mehrere pharmazeutisch verträgliche Öle umfassen.
Die Lösung der Erfindung kann ebenfalls pharmazeutisch verträgliche Süßstoffe und/oder pharmazeutisch verträgliche Geschmacksstoffe (z. Beispiel Saccharose, Aspartam, Sorbitol, Saccharinnatrium und dergleichen und/oder Kirschengeschmack, künstlichen Bananengeschmack, Karamel, Schokoladenminzgeschmack, Traubengeschmack, Wildkirschengeschmack, Himbeerengeschmack, Erdbeerengeschmack, Zitrusgeschmack, Orangengeschmack, Ananasgeschmack, Zitruslimettengeschmack, Zitrussahnegeschmack, Kirschvanillengeschmack, Creme-de-Menthegeschmack und dergleichen) umfassen.
Zusätzlich kann die Lösungszusammensetzung der Erfindung einen oder mehrere pharmazeutisch verträgliche Tenside umfassen.
Zusätzlich kann die Lösungszusammensetzung der Erfindung zum Zwecke der chemischen Stabilität Antioxidantien umfassen (beispielsweise Ascorbinsäure, BHA (butyliertes Hydroxyanisol, BHT (butyliertes Hydroxytoluen), Vitamin E, Vitamin E PEG 1000 Succinat und dergleichen).
Die Zusammensetzungen dieser Erfindung liefern eine verbesserte orale Bioverfügbarkeit für eine Verbindung gemäß Strukturformel II bei Vergleich mit einer nicht formulierten Verbindung gemäß der Strukturformel II (Base) oder einer nicht formulierten Verbindung der Strukturformel II (saures Zusatzsalz), oder selbst im Vergleich zu einer gemischten wässerig/organischen Lösung (50% Wasser, 20% Ethanol, 30% Propylenglykol) einer Verbindung gemäß Strukturformel II (Methansulfonat saures Zusatzsalz).
Der Ausdruck " pharmazeutisch verträgliches organisches Lösungsmittel ", wie hierin verwendet, bezeichnet Propylenglykol; Polypropylenglykol; Polyethylenglykol (z. B. Polyethylenglykol 300, Polyethylenglykol 400, Polyethylenglykol 600, Polyethylenglykol 900, Polyethylenglykol 540 (alle erhältlich von Union Carbide) und dergleichen); pharmazeutisch verträgliche Alkohole (z. B. Ethanol oder 2-(2- Ethoxyethoxy)ethanol (Trascutol®, Gattefosse, Westwood, NJ 07675) und dergleichen); Polyoxyethylenkastorölderivate (z. B. Polyoxyethylenglyceroltriricinololeat oder Polyoxyl 35 Kastoröl (Cremophor®EL, BASF Corp.), Polyoxyethylenglyceroloxystearat (Cremophor®RH 40 (Polyethylenglykol 40 hydrogeniertes Kastoröl) oder Cremophor®RH 60 (Polyethylenglykol 60 hydrogeniertes Kastoröl), BASF Corp.) und dergleichen); fraktioniertes Kokosnußöl (z. B. gemischte Triglyzeride mit Octansäure und Decansäure (Miglyol®812, verfügbar von Huls AG, Witten, Deutschland) und dergleichen); Tween®80; Isopropylpalmitat, Isopropylmyristat, pharmazeutisch verträgliche Silikonflüssigkeiten; und dergleichen.
Der Ausdruck " pharmazeutisch verträgliche Säure ", wie hierin verwendet, bezeichnet (i) eine anorganische Säure wie z. B. Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Jodwasserstoffsäure und dergleichen, (ii) eine organische mono-, di- oder tri- Carbonsäure (z. B. Ameisensäure, Essigsäure, Adipinsäure, Alginsäure, Zitronensäure, Ascorbinsäure, Asparaginsäure, Benzoesäure, Buttersäure, Camphorsäure, Gluconsäure, Glucuronsäure, Galactaronsäure, Glutaminsäure, Heptansäure, Hexansäure, Fumarsäure, Milchsäure, Lactobionsäure, Malonsäure, Maleinsäure, Nikotinsäure, Oxalsäure, Pamoesäure, Pectinsäure, 3-Phenylpropionsäure, Picrinsäure, Pivalinsäure, Propionsäure, Bernsteinsäure, Weinsäure, Undecansäure und dergleichen) oder (iii) eine Sulfonsäure (z. B. Benzesulfonsäure, Natriumbisulfat, Schwefelsäure, Camphorsulfonsäure, Dodecylsulfonsäure, Ethansulfonsäure, Methansulfonsäure, Isethionsäure, Naphthalensulfonsäure, p-Toluensulfonsäure und dergleichen).
Der Ausdruck " pharmazeutisch verträgliches Öl ", wie hierin verwendet, bezeichnet Mineralöle oder ein pflanzliches Öl (z. B. Saffloweröl, Ernußöl, Olivenöl, fraktioniertes Kokosnußöl (z. B. gemischte Triglyceride mit Octansäure und Decansäure (Miglycol®812, verfügbar von Huls AG, Witten, Deutschland) und dergleichen.
Der Ausdruck " pharmazeutisch verträgliches Tensid", wie hierin verwendet, bezeichnet ein pharmazeutisch verträgliches nicht ionisches Tensid (beispielsweise Polyethylenpolypropylenglykol, wie z. B. Poloxamer®68 (BASF Wyandotte Corp.) oder einen mono Fettsäureester von Polyoxyethylen (20) Sorbitan (beispielsweise Polyoxyethylen (20) Sorbitanmonooleat (Tween®80), Polyoxyethylen (20) Sorbitanmonostearat (Tween®60), Polyoxyethylen (20) Sorbitanmonopalmitat (Tween®40), Polyoxyethylen (20) Sorbitanmonolaurat (Tween®20) und dergleichen) und dergleichen) oder ein pharmazeutisch verträgliches anionisches Tensid (beispielsweise Natriumlaurylsulfat und dergleichen).
Eine bevorzugte Zusammensetzung der Erfindung, wie oben definiert, umfaßt eine HIV Protease inhibierende Verbindung gemäß der Strukturformel II in der Menge von 2,5% bis 10% des Gewichtes der gesamten Lösung.
Eine bevorzugte Zusammensetzung der Erfindung umfaßt (2) Ethanol oder Propylenglykol in der Menge von 20% bis 35% des Gewichtes der gesamten Lösung.
Vorzugsweise umfaßt, in der Zusammensetzung der Erfindung, die Mischung der pharmazeutisch verträglichen organischen Lösungsmittel (einschließlich Ethanol) von 50% bis 95% des Gewichtes der gesamten Lösung. Stärker bevorzugt umfaßt die Mischung der pharmazeutisch verträglichen organischen Lösungsmittel von 70% bis 95% des Gewichtes der gesamten Lösung.
In der Zusammensetzung der Erfindung ist eine weitere bevorzugte Mischung von pharmazeutisch verträglichen Lösungsmitteln, eine Mischung von Propylenglykol (42% des Gewichtes der gesamten Lösung) Ethanol (32% des Gewichtes der gesamten Lösung) und Wasser (von 16% bis 17% des Gewichtes der gesamten Lösung).
In der Zusammensetzung der Erfindung ist eine bevorzugte Mischung der pharmazeutisch verträglichen Lösungsmittel eine Mischung von Propylenglykol (32% des Gewichtes der gesamten Lösung), Ethanol (37% des Gewichtes der gesamten Lösung) und Wasser (15% des Gewichtes der gesamten Lösung).
In der Zusammensetzung der Erfindung, ist eine weitere bevorzugte Mischung von pharmazeutisch verträglichen Lösungsmitteln, eine Mischung von Propylenglykol (von 44% bis 45% des Gewichts der gesamten Lösung, Polyoxyethylenglyceroltriricinoleat (20% des Gewichts der gesamten Lösung) und Ethanol (von 24% bis 25% des Gewichts der gesamten Lösung).
In der Zusammensetzung der Erfindung, ist eine weitere bevorzugte Mischung von pharmazeutisch verträglichen Lösungsmitteln eine Mischung von Propylenglykol (von 39% bis 40% des Gewichts der gesamten Lösung), Polyoxyethylenglyceroltriricinoleat (20% des Gewichts der gesamten Lösung) und Ethanol (24% des Gewichts der gesamten Lösung).
In der Zusammensetzung der Erfindung ist eine weitere bevorzugte Mischung von pharmazeutisch verträglichen Lösungsmitteln eine Mischung von Propylenglykol (43% des Gewichts der gesamten Lösung), Ethanol (33% des Gewichts der gesamten Lösung) und Wasser (17% des Gewichts der gesamten Lösung).
In der Zusammensetzung der Erfindung ist eine weitere bevorzugte Mischung von pharmazeutisch verträglichen Lösungsmitteln eine Mischung von Propylenglykol (36% des Gewichts der gesamten Lösung), Ethanol (36% des Gewichts der gesamten Lösung) und Wasser (19% des Gewichts der gesamten Lösung).
In der Zusammensetzung der Erfindung ist eine weitere bevorzugte Mischung von pharmazeutisch verträglichen Lösungsmitteln eine Mischung von Propylenglykol (35% des Gewichts der gesamten Lösung), Ethanol (35% des Gewichts der gesamten Lösung) und Wasser (18% des Gewichts der gesamten Lösung).
In der Zusammensetzung der Erfindung ist eine weitere bevorzugte Mischung von pharmazeutisch verträglichen Lösungsmitteln eine Mischung von Propylenglykol (31% des Gewichts der gesamten Lösung), Polyoxyethylenglyceroltriricinoleat (10% des Gewichts der gesamten Lösung), Ethanol (32% des Gewichts der gesamten Lösung) und Wasser (14% des Gewichts der gesamten Lösung).
In der Zusammensetzung der Erfindung ist eine weitere bevorzugte Mischung von pharmazeutisch verträglichen Lösungsmitteln eine Mischung von Propylenglykol (46% des Gewichts der gesamten Lösung), Ethanol (21% des Gewichts der gesamten Lösung) und Polyoxyethylenglyceroltriricinoleat (24% des Gewichts der gesamten Lösung).
Eine bevorzugte pharmazeutisch verträgliche Säure ist Zitronensäure.
In der am meisten bevorzugten Zusammensetzung der Erfindung sind die bevorzugten pharmazeutisch verträglichen Lösungsmitteln und Säuren so wie oben für die bevorzugte Zusammensetzung der Erfindung beschrieben.
Eine noch stärker bevorzugte Zusammensetzung der Erfindung umfaßt eine Lösung der Verbindung III in der Menge von 5% bis 8% des Gewichts der gesamten Lösung in einem pharmazeutisch verträglichen organischen Lösungsmittel bestehend aus einer Mischung von (1) Propylenglykol in der Menge von 34% bis 36% des Gewichts der gesamten Lösung, (2) Ethanol in der Menge von 34% bis 36% des Gewichts der gesamten Lösung und (3) Wasser in der Menge von 18% bis 19% des Gewichts der gesamten Lösung. Die noch stärker bevorzugte Zusammensetzung umfaßt ebenfalls Zitronensäure in der Menge von 0,3% bis 0,4% des Gewichts der gesamten Lösung.
Andere bevorzugte Zusammensetzungen der Erfindung sind beschrieben in den Beispielen, insbesondere in den Beispielen 5- 19 und fallen in den Bereich des Schutzes der Erfindung.
Eine noch ausgeprägter bevorzugte Zusammensetzung der Erfindung umfaßt eine Lösung der Verbindung III in der Menge von 7% bis 8% des Gewichts der gesamten Lösung in einem pharmazeutisch verträglichen organischen Lösungsmittel, bestehend aus einer Mischung von (1) Propylenglykol in der Menge von 45% bis 46% des Gewichts der gesamten Lösung, (2) Ethanol in der Menge von 21% des Gewichts der gesamten Lösung und (3) Polyoxyethylenglyceroltriricinoleat in der Menge von 24% bis 25% des Gewichts der gesamten Lösung. Die noch stärker bevorzugte Zusammensetzung umfaßt ebenfalls Zitronensäure in der Menge von 0,5% des Gewichts der gesamten Lösung.
Eine am stärksten bevorzugte Zusammensetzung der Erfindung umfaßt eine Lösung der Verbindung III in der Menge von 7% bis 8% des Gewichts der gesamten Lösung in einem pharmazeutisch verträglichen organischen Lösungsmittel bestehend aus einer Mischung von (1) Propylenglykol in der Menge von 31% bis 32% des Gewichts der gesamten Lösung, (2) Ethanol in der Menge von etwa 32% des Gewichts der gesamten Lösung, (3) Polyoxyethylenglyceroltriricinoleat in der Menge von 10% bis 11% des Gewichts der gesamten Lösung und (4) Wasser in der Menge von 14% bis 15% des Gewichts der gesamten Lösung. Die noch stärker bevorzugte Zusammensetzung umfaßt ebenfalls Zitronensäure in der Menge von 0,2% bis 0,3% des Gewichts der gesamten Lösung.
Die Verbindungen gemäß Formel II enthalten zwei oder mehr asymmetrische Kohlenstoffatome und können somit als reine Diastereomere, Mischungen von Diastereomeren, diastereomerische Racemate oder Mischungen von diastereomerischen Racematen vorliegen. Die vorliegende Erfindung soll innerhalb ihres Bereiches alle diese Isomerformen umfassen. Die Ausdrücke "R" und "S" Kofigurationen, wie hierin verwendet, sind so wie definiert durch die IUPAC 1974 Empfehlungen für Abschnitt E, fundamentale Stereochemie, Pure Appl. Chem. (1976) 45, 13-30.
Das bevorzugte Isomer der Verbindung gemäß Formel II ist (2S,3S,5S)-5-(N-(N-((N-Methyl-N-((2-isopropyl-4- thiazolyl)methyl)-amino)carbonyl)-valinyl)amino)-2-(N-((5- thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan (Verbindung III).
Der Ausdruck " Niederalkyl ", wie hierin verwendet, bezeichnet gerad- oder verzweigtkettige Alkylradikale, welche 1 bis 6 Kohlenstoffatome enthalten, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf Methyl, Ethyl, n-Propyl, iso-Propyl, n-Butyl, iso-Butyl, sec-Butyl, n-Pentyl, 1-Methylbutyl, 2,2- Dimethylbutyl, 2-Methylpentyl, 2,2-Dimethylpropyl, n-Hexyl und dergleichen.
Im Allgemeinen können die Zusammensetzungen dieser Erfindung hergestellt werden in der folgenden Art und Weise. Das Ethanol und die pharmazeutisch verträgliche Säure (falls vorhanden) und das Wasser (falls vorhanden) und der Süßstoff (falls vorhanden) werden gemischt. Zu dieser Lösung wird das Propylenglykol oder Polyethylenglykol und/oder Polyoxyethylenglyceroltriricinoleat, Polyethylenglykol 40 hydrogeniertes Kastoröl, fraktioniertes Kokosnußöl, Polyoxyethylen (20) Sorbitanmonooleat oder 2-(2- Ethoxyethoxy)ethanol hinzugesetzt, bis die entstehende Lösung klar ist. Die Verbindung III (zusammen mit jeglichen anderen Lösungsmitteln, Ölen oder anderen Zusatzmitteln) werden zu der Lösung hinzugesetzt und gemischt bis die Lösung klar ist. Die entstehende Lösung wird zum gewünschten endgültigen Volumen gebracht durch den Zusatz von Propylenglykol oder Polyethylenglykol und/oder Polyoxyethylenglyceroltriricinoleat, Polyethylenglykol 40, hydrogeniertes Kastoröl, fraktioniertes Kokosnußöl, Polyoxyethylen (20) Sorbitanmonooleat oder 2-(2- Ethoxyethoxy)ethanol.
Alternativ werden das Ethanol und die pharmazeutisch verträgliche Säure (falls vorhanden) gemischt, gefolgt durch den Zusatz der Verbindung III. Zu dieser Mischung wird das Propylenglykol oder Polyethylenglykol und/oder Polyoxyethylenglyceroltriricinoleat, Polyethylenglykol 40 hydrogeniertes - Kastoröl, fraktioniertes Kokosnußöl, Polyoxyethylen (20) Sorbitanmonooleat oder 2-(2- Ethoxyethoxy)ethanol hinzugesetzt, bis die entstehende Lösung klar ist. Dann wird das Wasser (falls vorhanden) und der Süßstoff (falls vorhanden), zusammen mit jeglichen anderen Lösungsmitteln, Ölen, oder anderen Zusatzstoffen hinzugesetzt unter Rühren bis die Lösung klar ist. Die entstehende Lösung wird zu dem endgültigen gewünschten Volumen durch den Zusatz von Propylenglykol oder Polyethylenglykol und/oder Polyoxyethylenglyceroltriricinoleat, Polyethylenglykol 40 hydrogeniertes Kastoröl, fraktioniertes Kokosnußöl, Polyoxyethylen 20) Sorbitanmonoleat oder 2-(2- Ethoxyethoxy)ethanol gebracht.
Die folgenden Beispiele werden dazu dienen die Erfindung weiter zu verdeutlichen. Insbesondere betreffen die Beispiele 5- 19 spezifisch diese Erfindung.

Beispiel 1 (nicht formulierte Kapsel)

Eine Menge von Verbindung III (freie Base) entsprechend einer 5 mg/kg Dosis wurde in harte Gelatinekapseln (grau, Größe 0) eingebracht. Diese Kapseln wurden nüchternen Hunden mit 10 ml Wasser verabreicht.

Beispiel 2 (Kapsel)

Eine Menge von Verbindung III (freie Base), äquivalent zu einer 5 mg/kg Dosis wurde in harte Gelatinekapseln (grau, Größe 0) eingebracht. Diese Kapseln wurden nicht nüchternen Hunden mit zehn Milliliter Wasser verabreicht.

Beispiel 3 (Kapsel)

Eine Menge des bis-Tosylatsalzes der Verbindung III äquivalent zu einer 5 mg/kg Dosis von Verbidung III (Basenäquivalent) wurde in harte Gelatinekapseln (grau, Größe 0) eingefüllt. Diese Kapseln wurden nicht nüchternen Hunden mit zehn Milliliter Wasser verabreicht.

Beispiel 4 (Lösung)

Eine 5 mg (freies Basenäquivalent)/ml Lösung der basischen Verbindung III in 20% Ethanol : 30% Propylenglykol : Dextrose, 2- molare Äquivalente Methansulfonsäure enthaltend.

Bestandteil % des Gewiches

Verbindung III (freie Base) 0,5
Propylenglykol (Aldrich, Reagenzie) 31,9
Ethanol (USP, 200 proof) 16,2
Methansulfonsäure (Aldrich Reagenzie) 0,14
Dextrose 3,6
Wasser für Injektionszwecke (USP) 47,6

Beispiel 5

Eine 50 mg/ml Lösung der basischen Verbindung III.

Bestandteil % des Gewiches

Verbindung III (freie Base) 5,1
Propylenglykol (USP) 42,22
Ethanol (USP, 200 proof, dehydriert) 32,21
Zitronensäure (USP, wasserfrei, Pulver) 3,93
Wasser für Injektionszwecke (USP) 16,54
Zitronensäure (77,0 g) wurde mit Wasser (300 ml) gemischt und gerührt bis die Lösung klar war. Wasser wurde hinzugesetzt um das Volumen der Lösung auf 400 ml zu bringen. Propylenglykol (300 g) und Ethanol (800 g) wurden in einem Edelstahlbecher gemischt bis die Lösung klar war. Zu der Propylenglykol/Ethanollösung wurde Verbindung III (100,4 g) unter Rühren hinzugesetzt und das Mischen wurde fortgesetzt bis die Lösung klar war. Zu dieser Lösung wurde die Zitronensäurelösung zugesetzt bis das endgültige Volumen 2000 ml betrug.
Falls ein Geschmacksstoff eingeschlossen werden soll, würde es zu der Lösung von Verbindung III zugesetzt werden vor dem Zusatz der Zitronensäurelösung.

Beispiel 6

Eine 25 mg/ml Lösung der basischen Verbindung III.

Bestandteil % des Gewiches

Verbindung III (freie Base) 2,6
Propylenglykol (USP) 43,4
Ethanol (USP, 200 proof, dehydriert) 33,04
Zitronensäure (USP, wasserfrei, Pulver) 4,0
Wasser für Injektionszwecke (USP) 16,95

Beispiel 7

Eine 50 mg/ml Lösung der basischen Verbindung III.

Bestandteil % des Gewiches

Verbindung III (freie Base) 5,37
Propylenglykol (USP) 28,85
Ethanol (USP, 200 proof, dehydriert) 43,35
Zitronensäure (USP, wasserfrei, Pulver) 4,3
Wasser für Injektionszwecke (USP) 18,14

Beispiel 8

Eine 50 mg/ml Lösung der basischen Verbindung III.

Bestandteil % des Gewiches

Verbindung III (freie Base) 5,3
Propylenglykol (USP) 31
Ethanol (USP, 200 proof, dehydriert) 42,1
Zitronensäure (USP, wasserfrei, Pulver) 3,8
Wasser für Injektionszwecke (USP) 16,05
Aspartam 1,60
Wildkirschgeschmack 0,14

Beispiel 9

Eine 50 mg/ml Lösung der basischen Verbindung III.

Bestandteil % des Gewiches

Verbindung III (freie Base) 5,39
Cremophor® EL (Polyoxyl 35 Kastoröl, NF) 32,18
Ethanol (USP, 200 proof, dehydriert) 32,2
Miglyol® 812 30,13

Beispiel 10

Eine 50 mg/ml Lösung der basischen Verbindung III.

Bestandteil % des Gewiches

Verbindung III (freie Base) 5,01
Propylenglykol (USP) 44,6
Ethanol (USP, 200 proof, dehydriert) 24,53
Zitronensäure (USP, wasserfrei, Pulver) 5,76
Cremophor® EL (Polyoxyl 35 Kastoröl, NF 20,1

Beispiel 11

Eine 50 mg/ml Lösung der basischen Verbindung III.

Bestandteil % des Gewiches

Verbindung III (freie Base) 5,04
Propylenglykol (USP) 44,39
Ethanol (USP, 200 proof, dehydriert) 24,42
Zitronensäure (USP, wasserfrei, Pulver) 5,82
Cremophor® EL (Polyoxyl 35 Kastoröl, NF 20,33
Zitronensäure (153,6 g) und Ethanol (800 ml) wurden gemischt, bis die Lösung klar war. Zu dieser Lösung wurde unter Rühren Polyoxyl 35 Kastoröl (400 g) und ausreichend Propylenglykol hinzugesetzt, bis die Lösung klar war. Die Verbindung III (100 g) wurde unter Rühren zugesetzt bis die Lösung klar war. Propylenglykol wurde zugesetzt um das endgültige Volumen auf 2000 ml zu bringen.
Alternativ wurden Zitronensäure (153,6 g) und Ethanol (800 ml) gemischt, bis die Lösung klar war. Die Verbindung III (100 g) wurde unter Rühren zugesetzt bis die Lösung klar war. Zu dieser Lösung wurde unter Rühren Polyoxyl 35 Kastoröl (400 g) zugesetzt und ausreichend Propylenglykol zugesetzt bis die Lösung klar war. Propylenglykol wurde hinzugesetzt um das endgültige Volumen der Lösung auf 2000 ml zu bringen.

Beispiel 12

Eine 50 mg/ml Lösung der basischen Verbindung III.

Bestandteil % des Gewiches

Verbindung III (freie Base) 5,11
Propylenglykol (USP) 24,05
Ethanol (USP, 200 proof, dehydriert) 20,29
Cremophor® EL (Polyoxyl 35 Kastoröl, NF) 35,59
Miglyol® 812 5,0
Tween® 80 9,97

Beispiel 13

Eine 100 mg/ml Lösung der basischen Verbindung III.

Bestandteil % des Gewiches

Verbindung III (freie Base) 10,05
Propylenglykol (USP) 39,64
Ethanol (USP, 200 proof, dehydriert) 24,3
Cremophor® EL (Polyoxyl 35 Kastoröl, NF) 20,23
Zitronensäure (USP, wasserfrei, Pulver) 5,76

Beispiel 14

Eine 100 mg/ml Lösung der basischen Verbindung III.

Bestandteil % des Gewiches

Verbindung III (freie Base) 4,99
Propylenglykol (USP) 43,52
Ethanol (USP, 200 proof, dehydriert) 24,2
Cremophor® EL (Polyoxyl 35 Kastoröl, NF) 19,96
Zitronensäure (USP, wasserfrei, Pulver) 5,76
Bananengeschmack 0,5
Erdbeergeschmack 0,59
Natriumsaccharin 0,5

Beispiel 15

Eine 130 mg/ml Lösung der basischen Verbindung III.

Bestandteil % des Gewiches

Verbindung III (freie Base) 12,0
Propylenglykol (USP) 32,4
Ethanol (USP, 200 proof, dehydriert) 37,0
Zitronensäure (USP, wasserfrei, Pulver) 3,6
Wasser für Injektionszwecke 15,0

Beispiel 16

Eine 50 mg/ml Lösung der basischen Verbindung III.

Bestandteil % des Gewichtes

Verbindung III (freie Base) 5,125
Propylenglykol (USP) 35,8
Ethanol (USP, 200 proof, dehydriert) 35,75
Zitronensäure (USP, wasserfrei, Pulver) 0,362
Wasser für Injektionszwecke (USP) 18,86
Natriumsaccharin (USP, Pulver, Dihydrat) 1,02
Wildkirschengeschmack, künstlich 3,0
Geschmacksverstärker (Prosweet® Liquid "K") (Prosweet® Liquid "K" ist erhältlich von Virginia Dare, 882 third Ave., Brooklyn, NY) 0,08
Farbstoff, Red D&C Nr. 33 0,01

Beispiel 17

Eine 80 mg/ml Lösung der basischen Verbindung III.

Bestandteil % des Gewichtes

Verbindung III (freie Base) 7,96
Propylenglykol (USP) 34,72
Ethanol (USP, 200 proof, dehydriert) 34,7
Zitronensäure (USP, wasserfrei, Pulver) 0,35
Wasser für Injektionszwecke (USP) 18,3
Natriumsaccharin (USP, Pulver, Dihydrat) 0,99
Wildkirschengeschmack, künstlich 2,9
Geschmacksverstärker (Prosweet® Liquid "K") 0,08
Farbstoff, Red D&C Nr. 33 0,01

Beispiel 18

Eine 80 mg/ml Lösung der basischen Verbindung III.

Bestandteil % des Gewichtes

Verbindung III (freie Base) 7,88
Propylenglykol (USP) 31,31
Ethanol (USP, 200 proof, dehydriert) 32,0
Zitronensäure (USP, wasserfrei, Pulver) 0,27
Wasser für Injektionszwecke (USP) 14,18
Cremophor® EL 10,4
Natriumsaccharin (USP, Pulver, Dihydrat) 0,98
Wildkirschengeschmack, künstlich 2,875
Geschmacksverstärker (Prosweet® Liquid "K") 0,08
Farbstoff, Red D&C Nr. 33 0,01
Das Wasser (14,4 ml) und Ethanol (41,2 ml) wurden gemischt und die Zitronensäure (276 mg) wurde unter Rühren zugesetzt. Das Natriumsaccharin (1,0 g), der Geschmacksverstärker (0,1 ml), Propylenglykol (30,7 ml), Verbindung III (8,0 g), der rote Farbstoff (10,0 mg) und der Kirschengeschmack (3,7 ml) wurden sequenziell unter Rühren hinzugesetzt. Die entstehende Lösung wurde durch den Zusatz von Cremophor® EL auf ein endgültiges Volumen von 100 ml gebracht. Die endgültige Lösung wurde bei 2- 8ºC gelagert bis sie in 15 ml Glasfläschchen gefüllt wurde.

Beispiel 19

Eine 80 mg/ml Lösung der basischen Verbindung III.

Bestandteil % des Gewichtes

Verbindung III (freie Base) 7,57
Propylenglykol (USP) 45,7
Ethanol (USP, 200 proof, dehydriert) 21,0
Zitronensäure (USP, wasserfrei, Pulver) 0,51
Cremophor® EL 24,29
Natriumsaccharin (USP, Pulver, Dihydrat) 0,47
Geschmacksverstärker (Prosweet® Liquid "K") 0,148
Geschmacksstoff, Schokoladenminze 0,37
Das Ethanol (28,4 ml) wurde gemischt und die Zitronensäure (545 mg) wurde unter Rühren hinzugesetzt. Genügend von dem Propylenglykol wurde unter Rühren zugesetzt, um die entstehende Lösung klar werden zu lassen. Das Natriumsaccharin (500 mg), der Geschmacksverstärker (0,2 ml), die Verbindung III (8,0 g), Cremophor® EL (24,5 ml) und der Schokoladenminzegeschmack (0,5 ml) wurden hintereinander unter Rühren hinzugesetzt. Die entstehende Lösung wurde durch den Zusatz von Propylenglykol auf ein endgültiges Volumen von 100 ml gebracht. Die endgültige Lösung wurde bei 2-8ºC gelagert, bis sie in 15 ml Glasfläschchen gefüllt wurde.
Die restlichen Beispiele zeigen die Herstellung von Verbindung III.

Beispiel 20

(2S,3S,5S)-5-(N-(N-((N-Methyl-N-((2-isopropyl-4- thiazolyl)methyl)amino)carbonyl)valinyl)amino)-2-(N-((5- thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan

A. N-(((Benzyl)oxy)carbonyl)-L-phenylalaninal

Eine Lösung von 24,5 ml wasserfreiem Dimethylsulfoxid in 870 ml wasserfreiem Dichlormethan wurde unter einer N&sub2; Atmosphäre auf -60ºC gekühlt und über einen Zeitraum von 15 Minuten mit 131 ml einer 2 M Lösung Oxalylchlorid in Dichlormethan behandelt damit die interne Temperatur unterhalb von -50ºC blieb. Nach dem Zusatz wurde die Lösung bei -60ºC 15 Minuten gerührt und über einen Zeitraum von 20 Minuten mit einer Lösung von 50 g (0,175 mol) N-(((Benzyl)oxy)carbonyl)-L-phenylalaninol in 200 ml Dichlormethan behandelt. Die entstehende Lösung wurde bei -60ºC für 1 Stunde gerührt, dann über einen Zeitraum von 15 Minuten mit 97 ml Triethylamin behandelt, so daß die interne Temperatur unterhalb -50ºC blieb. Nach dem Zusatz wurde die Lösung bei -60ºC für 15 Minuten gerührt, dann mit dem Kühlbad an der gleichen Stelle, wurde sie schnell (über einen Zeitraum von 1 Minute) mit einer Lösung von 163 g Zitronensäure in 550 ml Wasser behandelt. Die entstehende Aufschlämmug wurde energisch für 10 Minuten gerührt, dann wurde ihr gestattet sich aufzuwärmen, sie wurde mit 1 Liter Wasser verdünnt, und getrennt. Die organische Schicht wurde mit 700 ml Wasser, gefolgt durch eine Mischung von 550 ml Wasser und 150 ml gesättigter wässeriger NaHCO&sub3; gewaschen, über MgSO&sub4; getrocknet und in vakuo bei 20ºC konzentriert, um die rohe gewünschte Verbindung als einen leicht gelben Feststoff zu ergeben.

B. (2S,3R,4R,5S)-2,5-Bis-(N-(((Benzyl)oxy)carbonyl)amino)-3,4- dihydroxy-1,6-diphenylhexan und (2S,3S,4S,5S)-2,5- Bis-(N-(((benzyl)oxy)carbonyl)amino)-3,4-dihydroxy-1,6- diphenylhexan

Eine Suspension von 78,5 g VCl&sub3; (Tetrahydrofuran)3 und 16 g Zinkstaub in 400 ml trockenem Dichlormethan wurde unter einer N&sub2;- Atmosphäre für 1 Stunden bei 25ºC gerührt. Eine Lösung von -0,175 mol N-(((Benzyl)oxy)carbonyl)-L-phenylalaninal in 200 ml Dichlormethan wurde dann in einem Anteil hinzugefügt, und die entstehende Mischung wurde bei Raumtemperatur unter einer N&sub2; Atmosphäre für 16 Stunden gerührt. Die entstehende Mischung wurde zu 500 ml 1 M wässeriger HCl hinzugefügt, mit 500 ml heißem Chloroform und energisch geschüttelt für 2 Minuten. Die Schichten wurden getrennt und die organische Schicht wurde gewaschen mit 1 M wässerigem HCl und getrennt. Die Filtration der organischen Phase lieferte das rohe gewünschte Produkt als einen festen Rückstand. Der Rückstand wurde aufgeschlämmt in 1,25 Litern Aceton, mit 5 ml konzentrierter H&sub2;SO&sub4; behandelt, und für 16 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die entstehende Mischung wurde gefiltert und der Rückstand (Rückstand A) wurde mit 50 ml Aceton gewaschen. Die kombinierten Filtrate wurden konzentriert auf ein Volumen von 250 ml, mit 1000 ml Dichlormethan verdünnt, dreimal mit Wasser und einmal mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über MgSO&sub4; getrocknet, und konzentriert um ein visköses Öl zu ergeben. Das Öl wurde aufgenommen in 1000 ml 1 M HCl in Methanol (hergestellt aus 71 ml Acetylchlorid und 1000 ml Methanol) und bei Raumtemperatur für 2 Stunden gerührt. Der entstehende Niederschlag wurde gefiltert, mit Methanol gewaschen, und auf dem Filter luftgetrocknet um 26,7 g der gewünschten Verbindung als einen weißen Feststoff zu ergeben. Das Filtrat wurde konzentriert und gefiltert um einen zweiten Ertrag (8,3 g) (2S,3R,4R,5S)-2,5- bis-(N-(((BEnzyl)oxy)carbonyl)amino)-3,4-dihydroxy-1,6- diphenylhexan zu ergeben. ¹H NMR (d&sub6;-DMSO) 8 2.59 (dd, J = 13,5 Hz, 2H), 2.74 (dd, J = 13,9 Hz, 2H), 3.26 (br, 2H), 4.19 (m, 2 H), 4.54 (m, 2H), 4.92 (m, 4H), 6.82 (d, J = 9 Hz, 2H), 7.0- 7.35 (m, 20H). Massenspektrum: (M + H)&spplus; = 569.
Rückstand A (oben 2,65 g) wurde suspendiert in 75 ml Tetrahydrofuran (THF) und 75 ml 1M wässeriger HCl und unter Rücklauf für 24 Stunden erhitzt. Nach Konzentration der entstehenden Lösung in vakuo wurde der Rückstand aufgenommen in 10% Methanol in Chloroform, zweimal mit Wasser gewaschen, über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet, und in vakuo konzentriert um (2S,3S,4S,5S)- 2,5-bis-(N-(((Benzyl)oxy)carbonyl)amino)-3,4-dihydroxy-1,6- diphenylhexan als einen weißen Feststoff zu ergeben. ¹H NMR (d&sub6;- DMSO) 8 2.64 (m, 2H), 3.04 (m, 2H), 3.49 (m, 2H), 3.78 (m, 2 H), 4.70 (d, J = 7 Hz, 2H), 4.93 (AA', 4H), 7.1-7.4 (m, 20H). Massenspektrum: (M + H)&spplus; = 569.

C. (2S,3R,45,5S)-3-Acetoxy-2,5- bis-(N-(((benzyl)oxy)carbonyl)amino)-3-brom-1,6-diphenylhexan

Eine Suspension von 25 g (44 mmol) (2S,3R,4R,5S)-2,5- bis-(N-(((benzyl)oxy)carbonyl)amino)-3,4-dihydroxy-1,6- diphenylhexan in 500 ml 2 : 1 Dichlormethan/Hexan wurde behandelt mit 23 g α-Acetoxyisobutyrylbromid. Die entstehende Lösung wurde bei Raumtemperatur gerührt, bis die Reaktion klar wurde, mit zwei 200 ml Portionen gesättigter wässeriger NaHCO&sub3; gewaschen, über MgSO&sub4; getrocknet und in vakuo konzentriert um 30,8 g der rohen gewünschten Verbindung zu ergeben. Ein Anteil wurde gereinigt durch Silicagelchromatographie unter Verwendung von 9 : 1 Dichlormethan : Ethylacetat um die reine gewünschte Verbindung als einen weißen Feststoff zu ergeben. ¹H NMR (CDCl&sub3;) 8 2.21 (s, 3H), 2.62 (dd, J = 13,11 Hz, 1H), 2.75 (d, J = 7 Hz, 2H), 2.95 (br d, J = 15 Hz, 1H), 4.03 (br t, J = 10 Hz, 1h), 4.40 (br d, J = 10 Hz, 1H), 4.6-5.0 (m, 6H), 5.12 (br d, J = 13 Hz, 1H), 5.33 (br d, J = 11 Hz, 1H), 7.0-7.4 (m, 10H). Massenspektrum: (M + NH&sub4;)&spplus; = 690,692.

D. (2S,3R,4R,5S)-2,5-Bis-(N-(((Benzyl)oxy)carbonyl)amino)-3,4- epoxy-1,6-diphenylhexan

Eine Lösung von 35,56 g (52,8 mmol) (2S,3R,4S,5S)-3-Acetoxy- 2,5-bis-(N-(((benzyl)oxy)carbonyl)amino)-3-brom-1,6- diphenylhexan in 375 ml Dioxan wurde behandelt mit 255 ml 1 N wässerigen Natriumhydroxid und bei Raumtemperatur für 16 Stunden gerührt, während dessen die gewünschte Verbindung ausfiel. Die entstehende Mischung wurde gefiltert, und der Rückstand wurde gewaschen mit Wasser und getrocknet, um 22,23 g (76%) der Verbindung als einen weißen Feststoff zu ergeben. ¹H NMR (CDCl&sub3;) δ 2.7-2.9 (m, 6H), 3.9-4.0 (m, 2H), 4.6-4.7 (m, 2H), 5.03 (m, 4 H), 7.1-7.4 (m, 10H).

E. (2S,3S,5S)-2,5-Bis-N-(((Benzyl)oxy)carbonyl)amino)-1,6- diphenyl-3-hydroxyhexan

Eine Mischung von 39,2 g (71,2 mmol) (2S,3R,4R,5S)-2,5-bis- (N-(((Benzyl)oxy)carbonyl)amino)-3,4-epoxy-1,6-diphenylhexan in 600 ml THF wurde unter N&sub2; Atmosphäre mit 13 g (0,36 mol) Natriumborhydrid behandelt. Die entstehende Mischung wurde tropfenweise mit 27,7 ml (0,36 mol) Trifluoressigsäure behandelt. Nach dem sie 3,5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt wurde, wurde die entstehende Mischung mit 1 N wässerigen HCl gestillt, mit Wasser verdünnt und für 16 Stunden gerührt. Die entstehende Mischung wurde gefiltert, mit Wasser gewaschen, und getrocknet, um 22,85 g (58%) der gewünschten Verbindung als einen weißen Feststoff zu ergeben.

F. (2S,3S,5S)-2,5-Diamin-1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan

Eine Suspension von 32 g der rohen entstehenden Verbindung aus Beispiel 20E und 55,5 g (176 mmol) Bariumhydroxidoctahydrat in 400 ml 1,4-Dioxan und 400 ml Wasser wurde unter Rücklauf für 4 Stunden erhitzt. Die entstehende Mischung wurde gefiltert, und der Rückstand wurde mit Dioxan gespült. Die kombinierten Filtrate wurden konzentriert auf ein Volumen von ca. 200 ml und extrahiert mit vier 400 ml Portionen Chloroform. Die kombinierten organischen Schichten wurden über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet, gefiltert und in vakuo konzentriert. Der Rückstand wurde gereinigt durch Silicagelchromatographie unter Verwendung von zunächst 2% Isopropylamin in Chloroform und dann 2% Isopropylamin/2% Methanol in Chloroform um 10,1 g (81%) der reinen gewünschten Verbindung als einen weißen Feststoff zu ergeben. ¹H NMR (CDCl&sub3;) 8 1.54 (dt, J = 14,10 Hz, 1H), 1.67 (dt, J = 14,3 Hz, 1H), 2.50 (dd, J = 13,8 Hz, 1H), 2.58 (dd, J = 13,8 Hz, 1H), 2.8 (m, 2H), 2.91 (dd, J = 13,5 Hz, 1H), 3.10 (m, 1H), 3.72 (ddd, J = 11,3,2 Hz, 1H), 7.1-7.4 (m, 10H). Massenspektrum: (M + H)&spplus; = 285.

6. (4S,6S,1'S)-6-(1-Amino-2-phenylethyl)-4-benzyl-2-phenyl-3- aza-2-bor-1-oxacyclohexan

Eine Lösung von 11,28 g (40 mmol) (2S,3S,5S)-2,5-Diamino-1,6- diphenyl-3-hydroxyhexan und 4,88 g (40 mmol) von Phenylborsäure in 1 Liter Toluen wurde unter Rücklauf erhitzt und das Wasser azeotropisch entfernt mit der Hilfe einer Dean Stark Falle bis das Destillat klar war. Das Lösungsmittel wurde dann in vakuo entfernt um die rohe gewünschte Verbindung zu ergeben, welche sofort, ohne weitere Reinigung, verwendet wurde.

H. Thioformamid

Zu einem gekühlten (0ºC) dreihälsigen 2 Liter Kolben mit rundem Boden, ausgestattet mit einem Überkopfrührer, beladen mit einer Lösung von Formamid (30,5 ml, 0,76 mol) in 1 Liter Diethylether wurden 89 g (0,19 mol) Phosphorpentasulfid in kleinen Portionen zugesetzt. Die Reaktionmischung ließ man dann auf Raumtemperatur erwärmen, sie wurde für 2 Stunden gerührt, gefiltert, und in vakuo konzentriert um Thioformamid als einen gelbes, unangenehm riechendes Öl zu ergeben, welches ohne Reinigung verwendet wurde.

I. Ethyl 2-Chlor-2-formylacetat

Zu einem dreihälsigen 2 Liter Kolben mit rundem Boden, beladen mit Kalium t-Butoxid (0,5 mol, 500 ml einer 1 M Lösung in THF) und 500 ml trockenem THF, gekühlt auf 0ºC, wurde tropfenweise durch einen Zusatztrichter einer Lösung von Ethylchloracetat (0,5 mol, 53,5 ml) und Ethylformat (0,5 mol, 40,4 ml) in 200 ml THF über 3 Stunden hinzugesetzt. Nach dem Abschluß des Zusatzes wurde die Reaktionmischung für 1 Stunden gerührt und über Nacht stehen gelassen. Der entstehende Feststoff wurde verdünnt mit Diethylether und in einem Eisbad gekühlt. Dann wurde der pH auf ca. 3 abgesenkt unter Verwendung von 6 N HCl. Die organische Phase wurde getrennt und die wässerige Schicht wurde dreimal mit Diethylether gewaschen. Die kombinierten ätherischen Anteile wurden über NaSO&sub4; getrocknet, und in vakuo konzentriert. Die rohe gewünschte Verbindung wurde bei -30ºC gelagert und ohne weitere Reinigung verwendet.

J. Ethyl Thiazol-5-carboxylate

Zu einem Kolben mit rundem Boden wurden 250 ml trockenes Aceton, 7,5 g (0,123 mol) Thioformamid, und 18,54 g (0,123 mol) Ethyl 2-Chlor-2-formylacetat hinzugefügt. Die Reaktion wurde unter Rücklauf für 2 Stunden erhitzt. Das Lösungsmittel wurde in vakuo entfernt, und der Rückstand wurde durch Chromatographie gereinigt (SiO&sub2;, 6 cm o.d. Säule 100% CHCl&sub3;, Rf = 0,25) um 11,6 g (60%) der gewünschten Verbindung als ein leicht gelbes Öl zu ergeben. NMR (CDCl&sub3;) 5 1.39 (t, J = 7 Hz, 3H), 4.38 (q, J = 7 Hz, 2H), 8.50 (s, 1H), 8.95 (s, 1H).

K. 5-(Hydroxymethyl)thiazol

Zu einem vorgekühlten (Eisbad) dreihälsigen 500 ml Kolben, welcher Lithiumaluminiumhydrid (76 mmol) in 250 ml THF enthielt, wurde Ethylthiazol-5-carboxylat (11,82 g, 75,68 mmol) in 100 ml THF tropfenweise über 1,5 Stunden hinzugefügt um überschüssiges Schäumen zu vermeiden. Die Reaktion wurde eine weitere Stunde gerührt und vorsichtig mit 2,9 ml Wasser, 2,9 ml 15%igem NaOH, und 8,7 ml Wasser behandelt. Die festen Salze wurden gefiltert, und das Filtrat zur Seite gestellt. Die rohen Salze wurden unter Rücklauf in 100 ml Ethylacetat für 30 Minuten erhitzt. Die entstehende Mischung wurde gefiltert, und die beiden Filtrate wurden kombiniert, über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und in vakuo konzentriert. Das Produkt wurde gereinigt durch Silicagelchromatographie unter Elution hintereinander mit 0%- 2%-4% Methanol in Chloroform, um die gewünschte Verbindung zu ergeben, Rf = 0,3 (4% Methanol in Chloroform), welches beim Stehen lassen in 75%igem Ertrag verfestigte. NMR (CDCl&sub3;) 8 4.92 (s, 2H), 7.78 (s, 1H), 8.77 (s, 1H). Massenspektrum: (M + H)&spplus; = 116.

L. ((5-Thiazolyl)methyl)-(4-nitrophenyl)carbonat

Eine Lösung von 3,11 g (27 mmol) 5-(Hydroxymethyl)thiazol und überschüssiges N-Methylmorpholin in 100 ml Methylenchlorid wurde auf 0ºC gekühlt und mit 8,2 g (41 mmol) 4-Nitrophenylchlorformat behandelt. Nach einstündigem Rühren wurde die Reaktionmischung mit CHCl&sub3; verdünnt, hinter einander gewaschen mit 1 N HCl, gesättigter wässeriger NaHCO&sub3; und gesättigter Kochsalzlösung, über NaSO&sub4; getrocknet und in vakuo konzentriert. Der Rückstand wurde gereinigt durch Silicagelchromatographie (SiO&sub2;, 1-2% MeOH/CHCl&sub3;, Rf = 0,5 in 4% MeOH/CHCl&sub3;), um 5,9 g (78%) der gewünschten Verbindung als einen gelben Feststoff zu ergeben. NMR (CDCl&sub3;) 8 5.53 (s, 2H), 7.39 (dt, J = 9,3 Hz, 2H), 8.01 (s, 1H), 8.29 (dt, J = 9,3 Hz, 2H), 8.90 (s, 1H). Massenspektrum: (M + H)&spplus; = 281.

M. (2S,3S,5S)-5-Amino-2-(N-((5-thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)- 1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan und (2S,3S,5S)-2-Amino-5-(N-((5- thiazolyl)-methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan

Eine Lösung von 500 mg (1,76 mmol) von (2S,3S,5S)-2,5- Diamino-1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan und 480 mg (1,71 mmol) von ((5-Thiazolyl)methyl)-(4-nitrophenyl)carbonat in 20 ml THF wurde bei Raumtemperatur für 4 Stunden gerührt. Nach Entfernung des Lösungsmittel in vakuo wurde der Rückstand gereinigt durch Silicagelchromatographie unter Verwendung von zunächst 2% dann 5% Methanol in Chloroform um eine Mischung der beiden gewünschten Verbindungen zu ergeben. Die Silicagelchromatographie der Mischung unter Verwendung eines Gradienten von 0-1-2% Methanol in 93 : 2 Isopropylamin : Chloroform ergab 110 mg (16%) von (2S,3S,5S)-5-Amino-2-(N-((5- thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan (Rf 0,48, 96 : 2 : 2 Chloroform : Methanol : Isopropylamin) und 185 mg (28%) von (2S,3S,5S)-2-Amino-5-(N-((5- thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan (Rf 0,44, 96 : 2 : 2 Chloroform : Methano : Isopropylamin)
(2S,3S,5S)-5-Amino-2-(N-((5-thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)- 1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan: NMR (CDCl&sub3;) 81.3-1.6 (m, 2H), 2.40 (dd, J = 14,8 Hz, 1H), 2.78 (dd, J = 5 Hz, 1H), 2.88 (d, J = 7 Hz, 2H), 3.01 (m, 1H), 3.72 (br q, 1H), 3.81 (br d, J = 10 Hz, 1H), 5.28 (s, 2H), 5.34 (br d, J = 9 Hz, 1H), 7.07 (br d, J = 7 Hz, 2H), 7.15-7.35 (m, 8H), 7.87 (s, 1H), 8.80 (s, 1 H). Massenspektrum: (M + H)&spplus; = 426.
(2S,3S,5S)-2-Amino-5-(N-((5-thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)- 1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan: NMR (CDCl&sub3;) 61.55 (dt, J = 14,8 Hz, 1H). 1.74 (m, 1H), 2.44 (dd, J = 15,1 Hz, 1H), 2.75-3.0 (m, 4 H), 3.44 (m, 1H), 4.00 (brt, 1H), 5.28 (m, 3H), 7.1-7.4 (m, 10H), 7.86 (s, 1H), 8.80 (s, 1H). Massenspektrum: (M + H)&spplus; = 426.

N. (2S,3S,5S)-5-Amino-2-(N-((5-thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)- 1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan

Eine Lösung von 40 mmol rohem (4S,6S,1'S)-6-(1-Amino-2- phenylethyl-4-benzyl-2-phenyl-3-aza-2-bora-1-oxacyclohexan in 700 ml wasserfreiem THF wurde auf -40ºC gekühlt und tropfenweise über einen Zeitraum von 1 Stunde mit einer Lösung von 7,83 g (27,9 mmol) ((5-Thiazolyl)methyl)-(4-nitrophenyl)carbonat in 300 ml trockenem THF behandelt. Die entstehende Lösung wurde auf 0ºC erwärmt für 3 Stunden, dann auf Raumtemperatur für 16 Stunden. Das Lösungsmittel wurde in vakuo entfernt und der Rückstand wurde in 700 ml Ethylacetat aufgenommen und mit drei 150 ml Anteilen 1 N wässrigem NaOH und mit einer 150 ml Portion Kochsalzlösung gewaschen. Die organische Phase wurde über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und in vakuo konzentriert. Die Reinigung des Rückstandes durch Silicagelchromatographie unter Verwendung von Methanol/Chloroformmischungen ergab die gewünschte Verbindung mit ihrem Regioisomer. Eine zweite Chromatographie unter Verwendung von 1-3% Isopropylamin in Chloroform ergab 5,21 g der gewünschten Verbindung, welche beim Stehen lassen verfestigte.

O. 2-Methylpropan-thioamid

Eine Suspension von 100 g (1,15 mol) Isobutyramid in 4 Liter Diethylether wurde heftig gerührt und in Portionen behandelt mit 51 g (0,115 mol) P&sub4;S&sub1;&sub0;. Die entstehende Mischung wurde bei Raumtemperatur für 2 Stunden gerührt, gefiltert und in vakuo konzentriert um 94,2 g (80%) der rohen gewünschten Verbindung zu ergeben. ¹H NMR (DMSO-d&sub6;) 81. 08 (d, J = 7 Hz, 6H), 2.78 (heptet, J = 7 Hz, 1H), 9.06 (br, 1H), 9.30 (br, 1H). Massenspektrum: (M + H)&spplus; = 104.

P. 4-(Chlormethyl)-2-isopropylthiazolhydrochlorid

Eine Mischung von 94,0 g (0,91 mol) 2-Methylpropan-thioamid, 115,7 g (0,91 mol) 1,3-Dichloraceton und 109,7 g (0,91 mol) MgSO&sub4; in 1,6 Litern Aceton wurde unter Rücklauf für 3,5 Stunden erhitzt. Die entstehende Mischung ließ man abkühlen, sie wurde gefiltert und das Lösungsmittel wurde in vakuo entfernt um die rohe gewünschte Verbindung als ein gelbes Öl zu ergeben. ¹H NMR (DMSO- d&sub6;) 8 1.32 (d, J = 7 Hz, 6H), 3.27 (heptet, J = 7 Hz, 1H), 4.78 (s, 2H), 7.61 (s, 1H). Massenspektrum: (M + H)&spplus; = 176.

Q. 2-Isopropyl-4-(((N-methyl)amino)methyl)thiazol

Eine Lösung von 40 g (4-(Chlormethyl)-2- isopropylthiazolhydrochlorid in 100 ml Wasser wurde tropfenweise unter Rühren zu 400 ml 40%igem wässerigen Methylamin hinzugefügt. Die entstehende Lösung wurde 1 Stunde lang gerührt, dann in vakuo konzentriert. Der Rückstand wurde in Chloroform aufgenommen, über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und in vakuo konzentriert. Die Reinigung des Rückstandes durch Silicagelchromatographie unter Verwendung von 10% Methanol in Chloroform ergab 21,35 g (55%) der gewünschten Verbindung. ¹H NMR (DMSO-d&sub6;) 8 1.34 (d, J = 7 Hz, 6H), 2.56 (s, 3H), 3.30 (heptet, J = 7 Hz, 1H), 4.16 (s, 2H), 7.63 (s, 1H). Massenspektrum: (M + H)&spplus; = 171.

R. N-(((4-Nitrophenyl)oxy)carbonyl)-L-valin Methylester

Eine Lösung von 66,1 g (0,328 mol) 4-Nitrophenylchlorformat in 1,2 Liter CH&sub2;Cl&sub2; und auf 0ºC gekühlt und mit L- Valinmethylesterhydrochlorid behandelt. Die entstehende Mischung wurde langsam unter Rühren, mit 68,9 ml (0,626 mol) 4- Methylmorpholin behandelt. Die entstehende Lösung ließ man langsam auf Raumtemperatur erwärmen und sie wurde über Nacht gerührt. Nach Waschen mit 3 Anteilen 10%igem wässerigen NaHCO&sub3;, wurde die Lösung über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und in vakuo konzentriert. Der Rückstand wurde gereinigt durch Silicagelchromatographie durch Elution mit Chloroform um die gewünschte Verbindung zu ergeben. ¹H NMR (DMSO-d&sub6;) 8 0.94 (d, J = 7 Hz, 3H), 0.95 (d, J = 7 Hz, 3H), 2.12 (octet, J = 7 Hz, 1 H), 3.69 (s, 3H), 4.01 (dd, J = 8,6 Hz, 1H), 7.41 (dt, J = 9,3 Hz, 2H), 8.27 (dt, J = 9,3 Hz, 2H), 8.53 (d, J = 8 Hz, 1H). Massenspektrum: (M + NH&sub4;)&spplus; = 314.

S. N-((N-Methyl-N-((2-isopraoyl-4- thiazolyl)methyl)amino)carbonyl)-L-valin Methylester

Eine Lösung von 15,7 g (92 mmol) 2-Isopropyl-4-(((Nmethyl)amino)-methyl)thiazol in 200 ml THF wurde kombiniert mit einer Lösung von 20,5 g (69 mmol) N-(((4- Nitrophenyl)oxy)carbonyl)-L-valin Methylester. Die entstehende Lösung wurde mit 1,6 g 4-Dimethylaminopyridin und 12,9 ml (92 mmol) Triethylamin behandelt, unter Rücklauf für 2 Stunden erhitzt, abgekühlen gelassen und in vakuo konzentriert. Der Rückstand wurde aufgenommen in CH&sub2;Cl&sub2;, eingehend mit 5%igem wässerigen K&sub2;CO&sub3; gewaschen, über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und in vakuo konzentriert. Die entstehende Produktmischung wurde gereinigt durch Silicagelchromatographie unter Verwendung von Chloroform als Laufmittel um 16,3 g (54%) der gewünschten Verbindung zu ergeben. ¹H NMR (DMSO-d&sub6;) 8 0.88 (d, J = 7 Hz, 3H), 0.92 (d, J = 7 Hz, 3 H), 1.32 (d, J = 7 Hz, 3H), 2.05 (octet, J = 7 Hz, 1H), 2.86 (s, 3H), 3.25 (heptet, J = 7 Hz, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.96 (dd, J = 8,7 Hz, 1H), 4.44 (AA', 2H), 6.58 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.24 (s, 1H). Massenspektrum: (M + H)&spplus; = 328.

T. N-((N-Methyl-N-((2-isopropyl-4- thiazolyl)methyl)amino)carbonyl)-L-valin

Eine Lösung von 1,42 g (4,3 mmol) der entstehenden Verbindung aus Beispiel 20S in 17 ml Dioxan wurde behandelt mit 17,3 ml 0,50 M wässerigem LiOH. Die entstehende Lösung wurde bei Raumtemperatur für 30 Minuten gerührt, mit 8,7 ml 1M HCl behandelt, und in vakuo konzentriert. Der Rückstand wurde aufgenommen in Dichlormethan, mit Wasser gewaschen, über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet, und in vakuo konzentriert um 1,1 g (81%) der gewünschten Verbindung zu ergeben. Massenspektrum: (M + H)&spplus; = 314.

U. (2S,3S,5S)-5-(N-(N-((N-Methyl-N-((2-isopronyl-4- thiazolyl)methyl)amino)carbonyl)valinyl)amino)-2-(N-((5- thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan

Eine Lösung von 70 mg (0,223 mmol) N-((N-Methyl-N-((2- isopropyl-4-thiazolyl)methyl)amino)carbonyl-L-valin, 79 mg (0,186 mmol) von (2S,3S,5S)-5-amino-2-(N-((5- thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan, 30 mg (0,223 mmol) 1-Hydroxybenzotriazolhydrat und 51 mg (0,266 mmol) von N-Ethyl-N'-dimethylaminpropylcarbodiimid in 2 ml THF wurde bei Raumtemperatur für 16 Stunden gerührt. Die entstehende Lösung wurde in vakuo konzentriert und der Rückstand wurde gereinigt durch Silicagelchromatographie unter Verwendung von 97 : 3 CH&sub2;Cl&sub2; : CH3OH um 100 mg (74%) der gewünschten Verbindung (Rf 0,4, 95 : 5 CH&sub2;Cl&sub2; : CH3OH) als einen Feststoff zu ergeben, Smp. 61-63ºC. Massenspektrum: (M + H)&spplus; = 721. Analyse berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub4;&sub9;N&sub6;O&sub5;S&sub2;·0.5H&sub2;O: C, 60.88; H, 6.77; N, 11.51. Gefunden: C, 60.68; H, 6.53; N, 11.36.

Beispiel 21

(2S,3S,5S)-2-Amino-3-hydroxy-5-(t-butyloxycarbonylamino)-1,6- diphenylhexan

Beispiel 21A

(2S,3S,5S)-2-(N,N-Dibenzylamino)-3-hydroxy-5-(t- butyloxycarbonylamino)-1,6-diphenylhexan

Zu einer gerührten Lösung von (2S,3S,5S)-2-(N,N- Dibenzylamino)-3-hydroxy-5-amino-1,6-diphenylhexan (10,0 g, 21,6 mmol) in Tetrahydrofuran (200 ml) wurde Kaliumcarbonat (6,0 g, 43,2 mmol) in H&sub2;O (200 ml) hinzugefügt. Zu dieser Lösung wurde di- t-Butyldicarbonat (5,64 g, 25,9 mmol) in Tetrahydrofuran (10 ml) hinzugefügt. Die Lösung, welche entstand, wurde bei Raumtemperatur für 3 Stunden gerührt. N,N-Dimethylethylendiamin (1 ml, 8,6 mmol) wurde hinzugefügt und die Reaktionmischung wurde bei Raumtemperatur eine weitere Stunde gerührt. Ethylacetat (400 ml) wurde hinzugefügt und die organische Schicht wurde getrennt und mit 5% KH&sub2;PO&sub4; (2 · 200 ml), Wasser (1 · 200 ml), gesättigter NaHCO&sub3; (2 · 200 ml) und Wasser (1 · 200 ml) gewaschen. Die organische Lösung wurde dann über Natriumsulfat getrocknet und konzentriert unter reduziertem Druck, um das gewünschte Produkt als ein leicht gelbes Öl zu ergeben. 300 MHz ¹H NMR (CDCl&sub3;) 6 1.40 (s, 9H), 1.58 (s, 2H), 2.45-2.85 (m, 4H), 3.05 (m, 1H), 3.38 (d, 2H), 3.6 (m, 1H), 3.79 (m, 1H), 3.87 (d, 2H), 4.35 (s, 1H), 4.85 (s, breit, 1H), 7.0-7.38 (m, 20H).

Beispiel 21B

(2S,3S,5S)-2-Amino-3-hydroxy-5-(t-butyloxycarbonylamino)-1,6- diphenylhexan

Zu einer gerührten Lösung von (2S,3S,5S)-2-(N,N- Dibenzylamino)-3-hydroxy-5-(t-butyloxycarbonylamino)-1,6- diphenylhexan (12 g, 21,3 mmol) in Methanol (350 ml) wurde Ammoniumformat (8,05 g, 128 mmol, 6,0 Äquivalente) und 10% Palladium auf Kohlenstoff (2,4 g) geladen. Die Lösung wurde unter Stickstoff bei 60ºC für drei Stunden gerührt und dann bei 75ºC für 12 Stunden. Eine Zusätzliche Menge von Ammoniumformat (6 g) und 10%iges Palladium auf Kohlenstoff (1,5 g) wurde hinzugefügt, ebenso wie 1 ml Eisessig. Die Reaktion wurde zum Abschluß geführt innerhalb von 2 Stunden bei einer Rücklauftemperatur. Die Reaktionmischung wurde dann auf Raumtemperatur gekühlt und dann durch ein Celitebett gefiltert. Der Filterkuchen wurde mit Methanol (75 ml) gewaschen und die kombinierten Filtrate wurden unter reduziertem Druck konzentriert. Der Rückstand wurde aufgenommen in 1 N NaOH (300 ml) und in Methylenchlorid (2 · 200 ml) extrahiert. Die kombinierten organischen Schichten wurden mit Kochsalzlösung (250 ml) gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Die Konzentration der Lösung unter reduziertem Druck lieferte das gewünschte Produkt als ein leicht gefärbtes Öl, welches beim Stehen lassen langsam kristallisierte (5 g). Die weitere Reinigung des Produktes konnte durch Flashchromatographie (Silicagel, 5% Methanol in Methylenchlorid) erzielt werden. 300 MHz ¹H NMR (CDCl&sub3;) 8 1.42 (s, 9H), 1.58 (m, 1H), 1.70 (m, 1H), 2.20 (s, breit, 2H), 2.52 (m, 1H), 2.76-2.95 (m, 4H), 3.50 (m, 1H), 3.95 (m, 1H), 4.80 (d, broad, 1H),7.15-7.30 (m, 10H).

Beispiel 22

Alternative Herstellung von (2S,3S,5S)-2-Amino-3-hydroxy-5-(t- butyloxycarbonylamino)-1,6-diphenylhexan

Beispiel 22A

(5S)-2-(t-Butyloxycarbonylamino)-5-(N,N-dibenzylamino)-1,6- diphenyl-4-oxo-2-hexen

Zu 9,21 gm (20 mmol) (Stunden)-2-Amino-5-(N,N-dibenzylamino)- 1,6-diphenyl-4-oxo-2-hexen und 0,37 gm (3 mmol) 4-N,N- Dimethylaminopyridin in 100 ml Methyl tert-Butylether wurde über eine Spritzenpumpe eine Lösung hinzugefügt bestehend aus 4,80 gm (22 mmol) di-tert-Butyldicarbonat in dem gleichen Lösungsmittel (25 ml) über eine Zeitraum von 6 Stunden. Eine zusätzliche Menge (3 ml) Methyl tert-Butylther wurde dann hinzugefügt, um den Zusatz abzuschließen. Nach Rühren bei Raumtemperatur für 18 Stunden wurde die Reaktionmischung mit Hilfe eines Eiswasserbades gekühlt. Der entstehende Feststoff wurde durch Saugfilterung gesammelt und mit kaltem (0ºC) Methyl tert- Butylther und Hexan gewaschen und unter Vakuum getrocknet um 9,9 gm rohen Materials aus einen weißen Feststoff zu ergeben. Das so isolierte Material wurde aufgelöst in einer minimalen Menge von Dichlormethan und gereinigt durch Flashchromatographie auf Silicagel. Die Elution der Säule mit einer Mischung von Hexan- Ethylacetat-Dichlormethan (8 : 1 : 1) ergab, nach Konzentration der geeigneten Fraktionen, 8,1 gm (72%) der gewünschten Verbindung: Smp. 191-193ºC. [α]D-183.7 (c = 1.05, CHCl&sub3;). ¹H NMR (CDCl&sub3;, 6): 11.68 (bs, 1H), 7.05-7.47 (m, 20H), 5.28 (s, 1H), 4.27 (d, J = 16 Hz, 1H), 4.02 (d, J = 16 Hz, 1H), 3.58 (m, 4H), 3.40 (m, 1 H), 3.11 (m, 1H), 2.90 (m, 1H), 1.48 (s, 9H).

Beispiel 22B

Alternative Herstellung von (5S)-2-(t-Butyloxycarbonylamino)- 5-(N,N-dibenzylamino)-1,6-diphenyl-4-oxo-2-hexen

Eine Suspension von (S)-2-Amino-5-(N,N-dibenzylamino)-1,6- diphenyl-4-oxo-2-hexen (100,0 g, 0,217 mol) in 15% Ethylacetat/Hexane (2 Liter) unter N&sub2; wurde auf etwa 40ºC erwärmt. Die entstehende Lösung wurde auf Raumtemperatur gekühlt bevor 4,0 g (33 mmol) N,N-dimethyl-4-aminopyridin und 49,7 g (0,228 mol) di-tert-Butyldicarbonat hinzugefügt worden. Die Reaktionmischung wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. (Nach ca. 1 Stunde begann sich ein weißer Niederschlag zu bilden). Die Suspension wurde gefiltert und der Niederschlag wurde mit Hexanen gewaschen, um das gewünschte Produkt als farblose Kristalle zu ergeben. TLC: 25% Ethylacetat/Hexane Rf 0,38.

Beispiel 22C

(2S,3S,5S)-2-(N,N-Dibenzylamino)-5-(t-butyloxycarbonylamino)-3- hydroxy-1,6-diphenylhexan

Eine Lösung des Produktes aus Beispiel 22a (5 g, 8,9 mmol) in Dichlormethan (100 ml) und 1,4-Dioxolan (100 ml) wurde auf zwischen -10ºC und -15ºC gekühlt und tropfenweise mit 1M BH&sub3;THF (26,7 ml, 26,7 mmol) behandelt. Die Lösung wurde bei dieser Temperatur für 3 Stunden gerührt. Die klare Lösung wurde gestillt mit überschüssigem Methanol (20 ml) und bei Raumtemperatur für 30 Minuten gerührt. Das Lösungsmittel wurde in vakuo entfernt.
Der entstehende weiße Schaum wurde in THF (75 ml) aufgelöst und auf -40ºC gekühlt. Eine Lösung von LAH (9 ml, 1M in THF, 9 mmol) wurde tropfenweise hinzugefügt. Nach 10 Minuten wurde die Lösung gestillt mit Wasser gefolgt durch verdünntes wässeriges HCl. Die organischen Stoffe wurden entfernt und die wässerige Schicht mit Ethylacetat (3 · 20 ml)extrahiert. Die kombinierten organischen Stoffe wurden gewaschen (gesättigtes wässeriges Bicarbonat, gefolgt durch Kochsalzlösung), getrocknet (Na&sub2;SO&sub4;), gefiltert und verdampft um 4,9 g (99%) des gewünschten Produktes als einen weißen Schaum zu ergeben.
Alternativ wurde der weiße Schaum, der aus dem BH&sub3;THF Reaktionsschritt entsteht, aufgelöst in MeOH (45 ml), auf +3ºC gekühlt und portionsweise mit KBH&sub4; (1,44 g, 26,7 mmol) behandelt. Nach Zusatz des letzten Anteils von KBH&sub4; wurde die Reaktion weitere 4 Stunden bei +4 bis +5ºC gerührt. Die Lösung wurde konzentriert auf die Hälfte des Volumens in vakuo, verdünnt mit 1/1 Hexan-EtOAc (70 ml) und gestillt (unter Kühlung, die Temperatur wurde < 30ºC gehalten) durch den Zusatz einer 10%igen Lösung von KHSO&sub4; zu einem pH von ca. 5. NaOH (15% wässerig) wurde zugesetzt für einen pH von 12-13. Die unlöslichen Salze wurden durch Filtration entfernt und der Filterkuchen 3 mal mit 7 ml 1 : 1 Hexan/EtOAc gewaschen. Das Filtrat und die Waschlösungen wurden übergeleitet in einen Trenntrichter, verdünnt mit 15 ml Hexan und 15 ml H&sub2;O. Die organischen Stoffe wurden entfernt und die wässerige Schicht wurde einmal extrahiert mit 20 ml (1 : 1) Hexan- EtOAc. Die kombinierten organischen Stoffe wurden gewaschen, gesättigte Kochsalzlösung), getrocknet (Na&sub2;SO&sub4;), gefiltert, und verdampft, um 5,2 g des gewünschten Produktes zu ergeben, welches ohne weitere Reinigung in den folgenden Reaktionen verwendet wurde.
Rf 0.5 (25% EtOAc/Hexan) ¹H NMR (CDCl&sub3;) 5 7.37-7.10 (m 20H); 6.78 (br. s, 1H); 4.62 (d, 1H); 4.50 (s, 1H); 4.18 (dd, 1H); 3.9 (d, 2H); 3.65 (dd, 2H); 3.40 (d, 2H); 3.00 (m, 2H); 2.77 (m, 1H); 1.39 (s, 9H). MS (EI) m/e565 (M+H).

Beispiel 22D

(2S,3S,5S)-2-Amino-3-hydroxy-5-(t-butyloxycarbonylamino)-1,6- diphenylhexan

Eine Lösung des Produktes aus Beispiel 22C (150 gm, 250 mmol) aufgelöst in absolutem EtOH (2 Liter) wurde behandelt mit 10% Pd/C (148 gm, angefeuchtet), gefolgt durch den Zusatz von Ammoniumformat (78,6 gm, 1,25 mol) aufgelöst in H&sub2;O (200 ml). Die entstehende Mischung wurde bei Rücklauf für 2,5 Stunden gerührt. Die Mischung wurde auf Raumtemperatur gekühlt und gefiltert durch ein Kissen aus Diatomenerde (20 g). Der Filterkuchen wurde 3 mal mit EtOH (70 ml jeweils) gewaschen. Das Filtrat wurde in vakuo konzentriert. Der Rückstand wurde aufgelöst in EtOac (11) und gewaschen (1 N NaOH, gefolgt durch H&sub2;O, gefolgt durch Kochsalzlösung), getrocknet (Na&sub2;SO&sub4;), gefiltert und in vakuo konzentriert zu einem konstanten Gewicht von 95 g. (99,2% des theoretischen Gewichtes). Der weißgelbe Feststoff (91,5 gm der 95 gm) wurde aufgeschlämmt in heißem Heptan (600 ml) (Dampfbad) und mit Isopropanol (45 ml) behandelt und verwirbelt um eine Lösung zubewirken. Die Lösung wurde langsam über 3 Stunden auf Raumtemperatur abkühlen gelassen, da eine Raumtemperatur für 2 weitere Stunden gehalten und dann gefiltert. Der Filterkuchen wurde 10 mal mit 9/1 Hexan-Isopropanol (30 ml jeweils) gewaschen um das gewünschte Produkt als einen überweißen feinen kristallinen Feststoff zu ergeben, welcher getrocknet wurde zu einem konstanten Gewicht von 57,5 gm.
Das rohe Produkt (20 gm) wurde rekristallisiert aus heißen 140 ml Heptan/17 ml Isopropanol. Nachdem die Lösung langsam auf Raumtemperatur abkühlen gelassen wurde, wurde die Mischung bei Raumtemperatur für 2 Stunden stehen gelassen und dann gefiltert. Der Filterkuchen wurde gespült (5 · 15 ml (8/1) Heptan/Isopropanol) und getrocknet zu einem konstanten Gewicht von 18,5 gm.

Beispiel 23

Alterative Herstellung von (2S,3S,5S)-(N-(N-((N-Methyl-N-((2- isopropyl-4-thiazolyl)methyl)amino)carbonyl)valinyl)amino)- 2-(N-((5-thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3- hyroxyhexan

Beispiel 23A

(2S,3S,5S)-5-(t-Butyloxycarbonylamino)-2-(N-((5- thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan

Das Produkt aus Beispiel 22D (6,09, 15,6 mmol) wurde aufgelöst in 60 ml DMF unter einer Stickstoffatmosphäre. Zu dieser gerührten Lösung bei Raumtemperatur wurde 5-(p- Nitrophenyloxycarbonyloxymethyl)thiazol (4,67 g, 15,6 mmol) hinzugefügt und die entstehende Lösung wurde für 4 Stunden gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter reduziertem Druck durch Rotationsverdampfung entfernt und der Rückstand aufgelöst in 150 ml EtOAc. Diese Lösung wurde mit 5 · 75 ml 1 N NaOH Lösung und 100 ml Kochsalzlösung gewaschen, und über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet. Das Lösungsmittel wurde entfernt um 8,02 g eines leicht gelblichen Öls zu ergeben. Das Material wurde aus 30 ml EtOAc und 40 ml Hexan kristallisiert, um 6,53 g (80%) des gewünschten Produktes als einen weißen Feststoff zu ergeben. Smp. 118-120ºC. H ¹NMR (CDCl&sub3;) 6 8.79 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.307.15 (m, 8H), 7.08 (m, 2H), 5.23 (s, 2H), 5.14 (d, 1H, J = 9 Hz), 4.52 (m, 1H), 3.92-3.72 (m, 3H), 3.65 (m, 1H), 2.85 (d-offensichtlich, 2H, J = 7.5 Hz), 2.72 (d-offensichtlich, 2H, J = 7 Hz), 1.61 (m, 2H), 1.38 (s, 9H). CIMS m/z (526) (M + H)&spplus;, 543 (M + 18)&spplus;.

Beispiel 23B

(2S,3S,5S)-5-Amino-2-(N-((5-thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)- 1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan

Das Produkt aus Beispiel 23A (6,43 g, 12,23 mmol) wurde aufgelöst in 25 ml Dioxan bei Raumtemperatur unter einer Stickstoffatmosphäre. Zu dieser gerührten Lösung wurden 20,25 ml 4 N HCl in Dioxan hinzugefügt und nach ca. 10 Minuten bildete sich ein dicker Niederschlag. Weitere 10 ml Dioxan wurden hinzugefügt, um die Aufschlämmung aufzulockern. Diese Mischung wurde 1 Stunden lang gerührt und dann gefiltert. Der Filterkuchen des Produkt bis-HCl Salzes wurde mit 20 ml Dioxan gewaschen, luftgetrocknet und dann in 175 ml Wasser aufgelöst. Zu dieser Lösung wurden 175 ml Ethylacetat hinzugefügt und die 2Phasenmischung rasch gerührt. Der pH dieser Mischung wurde auf einen pH von 10 eingestellt durch den tropfenweisen Zusatz von 3 N NaOH zu der rasch gerührten Lösung. Die organischen Schicht wurde isoliert, mit Kochsalzlösung (150 ml) gewaschen und über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet. Das Lösungsmittel wurde entfernt um 5,18 g (99%) des gewünschten Produktes als ein klares Öl zu ergeben. H¹ NMR (CDCl&sub3;) 8 8.81 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.35-7.05 (m, 10H), 5.33 (d, 1H, J = 9.3 Hz), 5.28 (m, 2H), 3.81 (m, 1H), 3.72 (m, 1H), 3.01 (m, 1H), 2.88 (m, 2H), 2.78 (dd, 1H, J = 13.5, 5.1 Hz), 2.39 (dd, 1H, J = 9.0,4.5 Hz), 1.57-1.30 (m, 2H). CIMS m/z 426 (M + H)&spplus;.

Beispiel 23C

(2S,3S,5S)-5-(N,(N-((N-Methyl-N((2-isopropyl-4- thiazolyl)methyl)amino)carbonyl)valinyl)amino)-2-(N-((5- thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan

N-((N-Methyl-N-((2-isopropyl-4- thiazolyl)methyl)amino)carbonyl)-L-valin (4,13 g, 13,18 mmol) und Hydroxybenztriazol (2,23 g, 16,48 mmol) wurden aufgelöst in 70 ml THF und dann wurde Dicyclohexyl-carbodiimid (2,71 g, 13,18 mmol) in einem Anteil zu der gerührten Lösung unter einer Stickstoffatmosphäre hinzugefügt. Diese Mischung wurde 4 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und dann gefiltert um den Dicyclohexylharnstoffniederschlag zu entfernen. (2S,3S,5S)-5- Amino-2-(N-((5-thiazolyl)-methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3- hydroxyhexan (5,1 g, 11,99 mmol) wurde aufgelöst in 100 ml THF unter einer Stickstoffatmosphäre. Zu dieser gerührten Lösung wurde das Filtrat des HOBT-aktiven Esters hinzugefügt und die entstehende Lösung wurde bei Raumtemperatur für 4 Stunden gerührt und das Lösungsmittel über Rotationsverdampfung entfernt. Der Rückstand wurde aufgelöst in 150 ml Ethylacetat und gewaschen mit 2 · 100 ml 1 N NaOH, 100 ml Kochsalzlösung, 100 ml 1% w/w wässerigem KHSO&sub4; und das Lösungsmittel wurde durch Rotationsverdampfung entfernt, um einen Rückstand zu ergeben.
Der Rückstand wurde aufgelöst in 150 ml 1 N HCl und die Lösung gefiltert, um die kleine Menge Dicyclohexylharnstoff zu entfernen. Die Filtratlösung wurde zu 175 ml Ethylacetat hinzugefügt und die 2-Phasenmischung rasch gemischt. Der pH dieser rasch gemischten Mischung wurde auf einen pH von 7 eingestellt durch den tropfenweisen Zusatz von kaltem 3 N NaOH. Die organische Schicht wurde isoliert mit 100 ml Kochsalzlösung gewaschen, über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet, gefiltert, und das Lösungsmittel wurde entfernt um 8,6 g eines farblosen Schaums zu ergeben. Dieses Material wurde kristallisiert aus 42 ml EtOAc und 21 ml Hexan um 7,85 g des gewünschten Produktes als einen weißen Feststoff zu ergeben. Smp. 122-123ºC. CIMS m/z 721 (M + H)&spplus;.

Beispiel 24

Alternative Herstellung von (2S,3S,5S)-5-Amino-2-(N-((5- thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan

Alternative A

Das Produkt aus Beispiel 17F (9,5 g, 33,4 mmol) und Phenylboronsäure (4,1 g, 33,6 mmol) wurden in Toluen (150 ml) kombiniert und unter Rücklauf erhitzt für 2,5 Stunden mit azeotropischer Wasserentfernung (Dean-Stark Falle). Toluen (100 ml) wurde bei atmosphärischem Druck herausdestilliert, dann wurde das restliche Toluen unter. Vakuum entfernt, um einen gelben Sirup zu ergeben, welcher aufgelöst wurde in DMF (50 ml) und auf -60ºC gekühlt wurde. Eine Lösung von 5-(p- Nitrophenyloxycarbonyloxymethyl)thiazol (9,5 g, 33,5 mmol) in DMF (50 ml) wurde über 45 Minuten hinzugesetzt. Die entstehende Mischung wurde 8 Stunden bei -55±5ºC gerührt, dann 14 Stunden bei -25ºC, dann wurde gestattet das sie sich auf Raumtemperatur erwärmte. Die Reaktionmischung wurde verdünnt mit 1 N HCl (250 ml) und gewaschen mit CH&sub2;Cl&sub2; (2 · 80 ml). Die kombinierten organischen Schichten wurden rückextrahiert mit 1 N HCl (60 ml). Die kombinierten wässerigen HCl Schichten wurden in einem Eisbad auf 2ºC gekühlt und konzentriert (37%). HCl (30 ml) wurde über 5 Minuten hinzugefügt. Das gewünschte Produkt (bis HCl-Salz) begann innerhalb von 30 Minuten auszufallen. Die Aufschlämmung wurde 3 Stunden bei 2-5ºC gerührt, dann wurde das Produkt (bis HCl-Salz) durch Filtration gesammelt und in einem Vakuumofen bei 55-60ºC getrocknet. Ertrag 11,4 g (68%).
Gewinnung des zweiten Ertrages:
Die HCl Ausgangsflüssigkeiten wurden mit Ethylacetat (190 ml) gerührt und neutralisiert auf einen pH von 9-10 mit wässerigem H&sub2;CO&sub3; (200-300 g von 25% w/w K&sub2;CO&sub3; wurde benötigt). Die Ethylacetatschicht wurde konzentriert unter Vakuum zu einem Öl, welches erneut aufgelöst wurde in 1 N HCl (90 ml) und gewaschen wurde mit Methylenchlorid (45 ml). Die wässerige Schicht wurde auf 2ºC gekühlt. Konzentrierte (37%) HCl (9,0 ml) wurde hinzugesetzt um eine zweite Auslese auszufällen. Nach Rühren für 1-3 Stunden bei 2-5ºC wurde der Feststoff durch Filtration gesammelt und durch einen Vakuumofen bei 55-60ºC getrocknet. Ertrag 2,1 g (12,6%).
Neutralisation des Bis HCl Salzes:
Das bis HCl-Salz (10,66 g, 21,4 mmol, Mischung des ersten und zweiten Ertrages) wurde mit CH&sub2;Cl&sub2; (110 ml) und 5% wässerigem NaHCO&sub3; (110 ml)gerührt bis alle Feststoffe aufgelöst waren (2 Stunden). Die wässerige Schicht wurde getrennt und mit weiteren 50 ml CH&sub2;Cl&sub2; extrahiert. Die kombinierten organischen Extrakte wurden mit Na&sub2;SO&sub4; (10 g)getrocknet, gefiltert und unter Vakuum bei 540ºC zu einem Öl konzentriert. Das Öl wurde auf einer Vakuumpumpe getrocknet, um die Titelverbindung als einen gelben Schaum 9,1 g (100%) zu ergeben.

Alternative B

Das Produkt aus Beispiel 17F (15,0 g, 0,053 mol) wurde in DMF (75 ml)aufgelöst. Triisopropylborat (24,4 ml, 0,105 mol) wurde hinzugefügt und bei Raumtemperatur für ca. 1,5 Stunden gerührt. Die Lösung wurde auf -10ºC gekühlt und eine Lösung von 5-(p- Nitrophenyloxycarbonyloxymethyl)thiazol (15,0 g, 0,054 mol) in DMF (75 ml) wurde über 80 Minuten hinzugesetzt. Die Reaktion wurde für ca. 1 Stunde bei -10ºC gerührt, und wurde dann mit Methylenchlorid (250 ml) verdünnt und gestillt mit einer Mischung von Triethanolamin (24,8 g) und 5% wässerigem Natriumbicarbonat (300 ml). Die biphasische Mischung wurde für 1 Stunde gerührt, dann wurden die Schichten getrennt und die wässerige wurde mit einem weiteren Anteil von Methylenchlorid (50 ml)extrahiert. Die kombinierten organischen Schichten wurden mit 1 N HCl (1 · 390 ml, dann 1 · 95 ml)extrahiert. Die sauren Schichten wurden kombiniert, mit einem Eisbad gekühlt und mit konzentrierter HCl (50 ml) weiter angesäuert, was eine weiße Aufschlämmung von Produkt erzeugte. Die Aufschlämmung wurde für ca. 1 Stunde bei 2ºC gerührt. Das gewünschte Produkt (bis HCl-Salz) wurde durch Filtration gesammelt und bei 55ºC in einem Vakuumofen getrocknet. Ertrag 18,5 g (70%).

Beispiel 25

Alternative Herstellung von (2S,3S,5S)-5-(N-(N-((N-Methyl-N-((2- isopropyl-4-thiazolyl)methyl)amino)carbonyl)valinyl)amino) - 2-(N-((5-thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3- hydroxyhexan

Zu einer Lösung des Produktes aus Beispiel 24 (9,1 g, 21,4 mmol), HOBT (3,6 g, 23,5 mmol) und N-((N-Methyl-N-((2- isopropyl-4-thiazolyl)methyl)amino)-carbonyl)-L-valin (7,37 g, 23,5 mmol) in THF (170 ml) wurde DCC (4,85 g, 23,5 mmol) hinzugefügt. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur für 16 Stunden gerührt (DCU Niederschläge). THF wurde unter Vakuum entfernt und die entstehende Paste wurde mit kaltem 1 N HCl (106 ml bei 5ºC) für 3 Stunden verrührt, um das rohe Produkt aufzulösen. Das DCU wurde durch Filtration entfernt und der Filterkuchen wurde gewaschen mit 1 N HCl (30 ml). KH&sub2;PO&sub4; (3,2 g) wurde in den kombinierten HCl Filtraten aufgelöst. Die Lösung wurde gemischt mit Ethylacetat (80 ml) und auf einen pH von 7 neutralisiert mit wässerigem NaOH (60,3 g von 10% w/w NaOH). Die wässerige Schicht wurde extrahiert mit weiteren 25 ml Ethylacetat und die kombinierten Ethylacetatextrakte wurden mit wässerigem NaHCO&sub3; (2 · 37 ml von 5% w/w NaHCO&sub3;) gewaschen. Die organische Schicht wurde getrocknet mit Na&sub2;SO&sub4; (13 g), gefiltert und unter Vakuum bei ≤ 45ºC konzentriert. Der Rückstand wurde in einer 1 : 1 Ethylacetat/Heptanmischung (200 ml) bei 70ºC aufgelöst. Der Lösung wurde gestattet langsam abzukühlen und sie wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt, um eine dicke Aufschlämmung zu ergeben. Das Produkt wurde durch Filtration gesammelt und mit 1 : 1 Ethylacetat/Heptan (20 ml) gewaschen. Das Produkt wurde kurz bei 55ºC in einem Vakuumofen getrocknet um ein geschätztes Gewicht zu erzielen vor der zweiten Kristallisation (12,85 g, 83%).
Eine zweite Kristallisation aus 144 ml 2 : 1 Ethylacetat/Heptan (aufgelöst bei ~70ºC, dann bei Raumtemperatur für 12 Stunden gerührt), ergab eine dicke Aufschlämmung von feinem weißen Feststoff. Das Produkt wurde durch Filtration gesammelt und gewaschen mit 15 ml 2 : 1 Ethylacetat/Heptan, dann in einen Vakuumofen bei 55ºC für 2 Tage getrocknet um das gewünschte Produkt zu ergeben. Ertrag 11,9 g (77%).

Beispiel 26

Alternative Herstellung von ((5-Thiazolyl)methyl)-(4- nitrophenyl)carbonat

Beispiel 26A

2-Amino-5-(ethoxycarbonyl)thiazolhydrochlorid

Zu einer -10ºC Lösung von Kalium tert-Butoxid (110 g, 0,98 mol) in THF (1,91) wurde eine Lösung von Ethylchloracetat (100 ml, 0,934 mol) und Ethylformat (75 ml, 0,928 mol) in THF (400 ml) tropfenweise über 2 Stunden hinzugesetzt unter starkem mechanischen Rühren. Die dicke Lösung wurde weitere 2 Stunden bei ca -1ºC gerührt, dann wurde die Reaktion gestillt durch den Zusatz einer Lösung von NaCl (150 g) in 1 N HCl (750 ml). Der Mischung wurde gestattet, auf 20ºC zu erwärmen, und die untere wässerige Schicht (die etwas niedergeschlagenes Salz enthielt) wurde getrennt. Die organische Schicht wurde unter Vakuum auf einem Rotationsverdampfer abgetrennt. Das Öl wurde erneut in 500 ml Ethylacetat aufgelöst, mit 75 g Na&sub2;SO&sub4; für 1 Stunde getrocknet, gefiltert und unter Vakuum (40-50ºC Badtemperatur) zu einem Öl konzentriert. Das entstehende rohe Chloraldehyd (161 g) und Thioharnstoff (70 g, 0,92 mol) wurden in THF (21) aufgelöst und zu einem schwachen Rücklauf (60ºC) erwärmt. Der Thioharnstoff löste sich während der Erwärmung, und innerhalb 20 Minuten fiel ein Produkt aus der Lösung aus. Nach 100 Minuten wurde die Suspension auf Raumtemperatur abgekühlt und wurde dann in einem Eisbad für 1 Stunde gekühlt. Das Produkt wurde auf einem Buchner Filtertrichter gesammelt und mit 2 · 100 ml kaltem THF gewaschen, dann über Nacht getrocknet in einem Vakuumofen bei 50ºC. Ertrag: 122 g der Titelverbindung als ein gelbbraun gefärbter Feststoff, Smp. 182-185ºC (dec.). ¹H NMR (DMSO-d&sub6;) 87.86 (s, 1H), 4.19 (q, 2H), 1.21 (t, 3H). ¹³C NMR (DMSO-d&sub6;) 8 171.9, 160.4, 140.4, 114.4, 61.1, 14.2.

Beispiel 26B

2-Amino-5-(ethoxycarbonyl)thiazol

Zu einer -10ºC Lösung von Kalium tert-Butoxid (150 g, 1,3 mol) in THF (1,351) wurde eine Lösung von Ethylchloracetat (139 ml, 1,3 mol) und Ethylformat (103 ml, 1,27 mol) in THF (150 ml) topfenweise über 75 Minuten unter gutem mechanischem Rühren hinzugefügt. Eine THF Spülung (25 ml) wurde nach 5 Minuten hinzugefügt. Die dicke Lösung wurde weitere 3 Stunden bei ca. 5ºC bis 0ºC gerührt, dann wurde die Reaktion gestillt durch den Zusatz einer Lösung von NaCl (240 g) und konzentrierte HCl (90 ml) in Wasser (960 ml). Der Mischung wurde gestattet auf 15ºC zu erwärmen und die untere wässerige Schicht wurde verworfen. Thioharnstoff (97 g, 1,27 mol) wurde aufgelöst in der rohen THF Lösung von Chloraldehyd. Die Lösung wurde auf 65ºC erwärmt und für 1 Stunde unter Rücklauf erhitzt, dann auf 30ºC gekühlt. Der Zusatz einer Lösung von K&sub2;CO&sub3; (88 g, 0,64 mol) in 1500 ml Wasser erzeugte zwei Schichten (wässerig pH = 7). Das THF wurde unter Vakuum bei ≤ 45ºC entfernt, was dazu führte das das Produkt als ein gelber Feststoff ausfiel. Die Aufschlämmung wurde auf 15ºC gekühlt, und das Produkt wurde mit einem Buchner Filtertrichter gesammelt und mit 3 · 200 ml Wasser gewaschen, dann 24 Stunden in einem Vakuumofen bei 55ºC getrocknet, um 151g der Titelverbindung als einen gelben Feststoff zu ergeben, Smp. 155- 158ºC. ¹H NMR (DMSO-d&sub6;) 8 7.8 (br s, 2H, NH&sub2;), 7.62 (s, 1H), 4.13 (q, 2H), 1.18 (t, 3H). ¹³C NMR (DMSO-d&sub6;) 8 173.4, 161.3, 147.9, 114.5, 60.1, 14.3.

Beispiel 26C

5-(Ethoxycarbonyl)thiazol

Eine Lösung von 2-Amino-5-(ethoxycarbonyl)thiazol (50 g, 0,29 mmol) in einer Mischung von DMF (83 ml) und THF (317 ml) wurde tropfenweise über 87 Minuten zu einer gerührten 41ºC Lösung von Isoamylnitrit (59 ml, 0,44 mol) in DMF (130 ml) hinzugefügt. Eine maximale Temperatur von 60ºC wurde während des exothermen Zusatzes beobachtet. Nach weiteren 40 Minuten wurde das THF unter Vakuum bei 45ºC entfernt. Die konzentrierte DMF Lösung wurde auf 25ºC gekühlt und mit Toluen (420 ml) und Wasser (440 ml)verdünnt. Die Toluenschicht wurde extrahiert mit 3 · 120 ml Wasser, dann mit Na&sub2;SO&sub4; (50 g) für 1 Stunde getrocknet. Nach der Filtration wurde die Toluenschicht auf einem Rotationsverdampfer bei 50ºC Badtemperatur abgelöst, dann auf einer Vakuumpumpe bei 21ºC. Der rohe Rückstand, welcher die Titelverbindung enthielt, wog 65,6 g. Dieses Material wurde direkt in den nächsten Schritt verwendet. Eine Probe von ähnlich hergestellten Material wurde durch Säulenchromatographie gereinigt um ein gelbes Öl zu ergeben. ¹H NMR (CDCl&sub3;) 6 8.95 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 4.39 (q, 2H), 1.40 (t, 3H). ¹³C NMR (CDCl&sub3;) 8 161.0, 157.9, 148.6, 129.8, 61.6, 14.1.

Beispiel 26D

5-(Hydroxymethyl)thiazol

Zu einer Aufschlämmung von Lithiumaluminiumhydrid (9,0 g) in THF (633 ml) wurde eine Lösung von rohem 5-(Ethoxycarbonyl)thiazol (65,6 g) in THF (540 ml) über 95 Minuten bei 0-5ºC hinzugefügt. Nach weiteren 25 Minuten wurde die Reaktion gestillt bei 5ºC durch den sequenziellen Zusatz von Wasser (8,1 ml), 15% NaOH (8,1 ml) und Wasser (24,3 ml). Nach Trocknen mit Na&sub2;SO&sub4; (44 g) für 2 Stunden, wurde die Aufschlämmung gefiltert, und der Filterkuchen wurde gewaschen mit 100 ml THF. Die kombinierten Filtrate wurden unter Vakuum bei 45ºC zu einem braunen Öl (39 g) konzentriert. Das Öl wurde dann fraktionell destilliert durch eine Kurzwegvorrichtung. Die Produktfraktionen destillierten bei 97-104ºC Raumtemperatur bei 3-5mm, was das 20,5 g der Titelverbindung als ein trübes orangefarbenes Öl ergab. ¹H NMR (CDCl&sub3;) 6 8.74 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 4.89 (s, 2H), 3.4 (br s, 1H, OH). ¹³C NMR (CDCl&sub3;) 8 153.4, 140.0, 139.5, 56.6.

Beispiel 26E

5-(p-Nitrophenyloxycarboyloxymethyl)thiazol Hydrochlorid

Destilliertes 5-(Hydroxymethyl)thiazol (14,1 g, 123 mmol) und Triethylamin (17,9 ml, 129 mmol) wurden aufgelöst in Ethylacetat (141 ml) und auf -1ºC (Eis/Salzbad) gekühlt. Eine Lösung von 4- Nitrophenylchlorformat (26,0 g, 129 mmol) aufgelöst in Ethylacetat (106 ml) wurde tropfenweise hinzugefügt über 50 Minuten bei einer internen Temperatur von 0-4ºC. Eine Ethylacetatkolbenspülung (20 ml) wurde ebenfalls hinzugefügt. Salze fielen aus der Lösung während des Zusatzes aus. Die gelbe Mischung wurde weitere 1 Stunde 45 Minuten bis 0-2ºC gerührt, dann wurde eine Lösung von verdünntem HCl (3,1 g, 31 mmol konzentrierter HCl in 103 ml Wasser) in einem Anteil hinzugefügt. Die Mischung wurde 0,5 Stunden gerührt, während sie auf 15ºC erwärmt wurde, dann wurde das Rühren beendet. Die organische Schicht wurde zwei mal mit wässeriger 5%iger K&sub2;CO&sub3; Lösung (2 · 70 ml) gewaschen, dann mit Na&sub2;SO&sub4; (30 g) getrocknet. Nach der Filtration wurde die Lösung unter Vakuum auf einem Rotationsverdampfer (Badtemperatur von 41ºC) zu einem braunen Öl (38 g)konzentriert. Das rohe 5-(p- Nitrophenyloxycarbonyloxymethyl)-thiazol wurde aufgelöst in Ethylacetat (282 ml), dann in einem Eisbad auf 2ºC gekühlt. Trocknes HCl Gas (7,1 g, 195 mmol) wurde langsam über 50 Minuten (Temperatur 2-4ºC) eingeleitet. Nach weiterem Rühren für 1 Stunde 45 Minuten bei 2-4ºC wurde der feste Niederschlag auf einem Sinterglastrichter unter einer Stickstoffwolke gesammelt und der Kolben wurde mit 50 ml kaltem Ethylacetat ausgewaschen, welches verwendet wurde, um den Filterkuchen zu spülen. Der Kuchen wurde auf dem Trichter unter starker Stickstoffspülung für 15 Minuten getrocknet, dann in einem Vakuumofen bei 50ºC mit einer Stickstoffspülung getrocknet um 29,05 g der Titelverbindung als ein gelb braunes Pulver zu ergeben, Smp. 131-135ºC (dec.). ¹H NMR (DMSO-d&sub6;) b 9.21 (d, 1H), 8.27 (m, 2H), 8.06 (d, 1H), 7.52 (m, 2H), 5.54 (s, 2H). NMR (DMSO-d&sub6;) 8 157.3, 155.2, 151.8, 145.3, 143.7, 131.9, 125.5, 122.7, 62.1.

Beispiel 26F

5-(p-Nitrophenoxycarbonyloxymethyl)thiazol

5-(p-Nitrophenoxycarbonyloxymethyl)thiazolhydrochlorid (3,09) wurde aufgeschlämmt in Ethylacetat (30 ml) und auf 10-15ºC gekühlt. Eine Lösung von 5% wässerigem Kaliumcarbonat (30 ml) wurde hinzugefügt unter raschem Rühren. Nach 15 Minuten wurde das Rühren beendet und die wässerige Schicht wurde getrennt. Die organische Schicht wurde mit Na&sub2;SO&sub4; (3 g) getrocknet, gefiltert und das Lösungsmittel wurde unter Vakuum destilliert, um 2,49 g der Titelverbindung als einen braunen Sirup zu ergeben, welcher langsam verfestigte, Smp. 62-64ºC. ¹H NMR (CDCl&sub3;) 8 8.90 (d, 1H), 8.29 (m, 2H), 8.01 (d, 1H), 7.39 (m, 2H), 5.52 (s, 2H). ¹³C NMR (CDCl&sub3;) 82, 152.2, 145.4, 144.9, 130.6, 125.3, 121.6, 61.9.

Beispiel 27

Alternative Herstellung von N-((N-Methyl-N-((2-isopropyl-4- thiazolyl)methyl)amino)carbonyl)-L-valin

Beispiel 27A

Thioisobutyramid

Zu einem 1 Liter dreihälsigen Kolben mit rundem Boden, ausgestattet mit einem mechanischem Rührer, einer Stickstoffatomsphäre, einem Kondensor, Thermokopplung und 15ºC Wasserbad wurde (26,0 g, 0,298 mol) Isobutyramid gefolgt duch (19,9 g, 0,045 mol) Phosphorpentasulfid und 375 ml THF. Diese Lösung wurde bei 20 ± 5ºC für 3 Stunden gerührt, wurde dann auf 60ºC erwärmt und dann für weitere 3 Stunden gerührt. Das THF wurde unter Vakuum mit einer 50ºC Badtemperatur entfernt, um ein gelbes Öl zu ergeben. Dieses Öl wurde mit einer Lösung von 5 g NaOH, 10 g NaCl und 90 g Wasser neutralisiert. Als nächstes wurde das Produkt in EtOAc (2 · 250 ml) extrahiert und die kombinierten organischen Stoffe unter Vakuum zu einem Öl reduziert. Das Öl wurde in 50 ml THF aufgelöst und erneut wurde das Lösungsmittel unter Vakuum entfernt, um das gewünschte Produkt als ein gelbes Öl zu ergeben. (Ertrag ca. 27 Gramm, 88%).

Beispiel 27B

2-Isopropyl-4-(((N-methyl)amino)methyl)thiazol

Das Thioisobutyramid, das aus Beispiel 24A entsteht, wurde aufgelöst in 70 ml THF und langsam zu einer Lösung von (34,1 g, , 27 mol) 1,3-Dichloraceton in 40 ml THF hinzugefügt. Eine 10 ml Spülung THF wurde verwendet um das Thioamid vollständig zu übertragen. Die Reaktion wurde durchgeführt in einem 250 ml Kolben mit mechanischem Rühren unter einer Stickstoffatmosphäre. Die Reaktionstemperatur wurde unterhalb von 25ºC während des Zusatzes gehalten mittels eines 15±5ºC Bades. Das Bad wurde an seiner Stelle gehalten für eine Stunde, wonach es entfernt wurde, und die Reaktion wurde 18 Stunden lang gerührt. Als nächstes wurde diese gerührte Chlormethyl-thiazol Lösung zu 376 ml (4,37 mol) 40%iger wässeriger Methylaminlösung bei 15ºC in einem 1 Liter Kolben hinzugefügt. Die Temperatur wurde während des Zusatzes unter 25ºC gehalten. Nach einer halben Stunde wurde das Bad entfernt und die Reaktion für 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum mit einem 50ºC Bad zu einem Endvolumen von 310 ml entfernt. Der Rückstand wurde dann basisch gemacht mit 50 g 10% NaOH auf einen pH von 12 und extrahiert in Methylenchlorid (2 · 160 ml). Die kombinierten organischenStoffe wurden dann gewaschen mit 1 · 150g 20%igem Ammoniumchlorid gefolgt durch 1 · 90 g von 20%igem Ammoniumchlorid. Die kombinierten wässerigen Wäschen wurden dann rückextrahiert mit 150 ml Ethylenchlorid. Die kombinierten Produktmethylenchloridschichten wurden dann extrahiert mit 100 g einer Lösung von 25 g konzentrierter HCl und 75 g Wasser. Diese saure Produktlösung wurde dann gewaschen mit 135 ml Methylenchlorid. Als nächstes wurde die saure Produktlösung gekühlt, dann neutralisiert mit 100 g 20%iger NaOH Lösung. Das Produkt wurde aus dieser Mischung mittels Methylenchlorid (2 · 135 ml)extrahiert. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum entfernt, um das gewünschte Produkt als ein bersteinfarbenes Öl zu ergeben. (Ertrag ca. 28 Gramm).

Beispiel 27C

N-((N-Methyl-N-((2-isopropyl-4-thiazolyl)methyl)amino)carbonyl- L-valin Methylester

In einen 500 ml 3-hälsigen, Kolben mit rundem Boden, ausgestattet mit einem mechanischen Rührer, einer Stickstoffatmosphäre, einer Thermokopplung, einem Heizmantel und einem Kondensator wurde das Produkt aus Beispiel 27E, (28,1g, .165 mol), Phenoxycarbonyl-(1)-valin (41,5 g, .165 mol) und 155 ml Toluen geladen. Diese Lösung wurde erwärmt bis zum Rücklauf (110ºC) und für drei Stunden gerührt, dann gekühlt auf 20±5ºC und gewaschen mit 2 · 69 ml 10% Zitronensäure gefolgt durch 1 · 69 ml Wasser, 1 · 116 ml 4%igem Natriumhydroxid, 1 · 58 ml 4% Natriumhydroxid und schließlich 1 · 58 ml Wasser. Die organische Produktlösung wurde dann behandelt mit 3 Gramm aktiviertem Kohlenstoff unter Rücklauf für 15 Minten, gefiltert durch Diatomenerde um den Kohlenstoff zu entfernen, und der Kohlenstoff/Diatomenerdekuchen wurde gewaschen mit 25 ml heißem Toluen. Als nächstes wurde das Lösungsmittel entfernt um ein braunes Öl zu ergeben, welches sich bei Abkühlung verfestigte. Dieser braune Feststoff wurde unter Erwärmung in 31 ml EtCAc und 257 ml Heptan bei 60±5ºC aufgelöst. Diese Lösung wurde langsam auf 25ºC gekühlt, 12 Stunden gerührt, weiter auf 0ºC gekühlt und 3 Stunden gerührt. Die Kristalle wurden durch Filtration gesammelt und mit 50 ml 1 : 9 EtOAc/Heptan gewaschen. Der Feststoff wurde in einem 50ºC Vakuumofen für 12 Stunden getrocknet, um 41,5 Gramm des gewünschten Produktes als einen gelbbraun gefärbten Feststoff (76, 9%) zu ergeben.

Beispiel 27D

N-((N-Methyl-N-((2-isopropyl-4-thiazolyl)methyl)amino)carbonyl)- L-valin

Zu einem ein Liter, dreihälsigen Kolben wurde das Produkt aus Beispiel 27C (50 g, 0,153 mol), Lithiumhydroxidmonohydrat (13 g, 0,310 mol), 200 ml THF und 190 ml Wasser geladen. Diese trübe Lösung wurde 2 Stunden lang gerührt. Die Reaktion wurde gestillt mit einer Lösung von konzentrierter HCl (32,4 g, 0,329 mol) in 65 ml Wasser, das THF wurde unter Vakuum entfernt und das Produkt extrahiert in Methylenchlorid (3 · 210 ml). (Anmerkung: falls notwendig, sollte der ph der wässerigen Schicht eingestellt werden um einen pH von 1-4 zu erhalten, während der Extraktionen). Die kombinierten organischen Stoffe wurden dann getrocknet mit 50 g Natriumsulfat, gefiltert mit einer 150 ml Methylenchloridspülung des Natriumsulfates und das Lösungsmittel wurde unter Vakuum entfernt. Das Produkt wurde in 450 ml THF aufgelöst und erneut wurde das Lösungsmittel entfernt. Als nächstes wurde das Produkt aufgelöst mit 475 ml THF, welches 0,12 g butyliertes Hydroxytoluen (BHT) zur Lagerung enthielt. Falls erwünscht kann das Lösungsmittel unter Vakuum entfernt werden und der rückbleibende Sirup in einem Vakuumofen bei 55ºC getrocknet werden um einen glasartigen Feststoff zu ergeben.
Das obige Verfahren zur Herstellung der Verbindung III ist offengelegt in der PCT Patentanmeldung Nr. WO94/14436, veröffentlicht am 7. July 1994, welche hiermit durch die Bezugnahme eingeschlossen ist.

Protokoll für die oralen Bioverfügbarkeitsstudien

Protokoll A (feste Dosierformen)

Hunde (Beagle Hunde, gemischte Geschlechter, Gewicht - 14 kg) ließ man über Nacht vor der Dosierung fasten, sie erhielten jedoch Wasser ad libitum. Jeder Hund erhielt eine 0,5 mg/kg subkutane Dosierung von Histamin ca. 30 Minuten vor der Dosierung. Jeder Hund erhielt eine einzelen feste Dosierform entsprechend einer 5 mg/kg Dosis des Medikamentes. Der Dosis folgten ca. 10 Milliliter Wasser. Blutproben wurden vor jedem Tier vor der Dosierung und bei 0,25, 0,5, 1,0, 1,5, 2, 3, 4, 6, 8, 10 und 12 Stunden nach der Arzneistoffverabreichung entnommen. Das Plasma wurde von den roten Zellen durch Zentrifugation getrennt und eingefroren (-30ºC) bis zur Analyse. Die Konzentrationen des Ausgangsarzneistoffes wurden festgestellt durch reverse Phase HPLC mit UV Nachweis bei niedriger Wellenlänge nach Flüssigkeits-Flüssigkeits-Extraktions der Plasmaproben. Die Ausgangsarzneistoff-Fläche unter der Kurve wurde berechnet durch das trapezoidale Verfahren über den Zeitverlauf der Studie. Die absolute Bioverfügbarkeit jeder Testverbindung wurde berechnet durch den Vergleich der Fläche unter der Kurve nach oral er Dosierung zu jener welche erzielt wurde zu einer einzelnen intravenösen Dosierung. Jede Kapsel oder Kapsel Zusammensetzung wurde beurteilt in einer Gruppe, welche sechs Hunde enthielt; die berichteten Werte sind Durchschnitte für jede Gruppe von Hunden. Die mittleren Bioverfügbarkeitsdaten für die Zusammensetzungen der Beispiele sind in Tabelle 1 gezeigt.

Protokoll B (flüssige Dosierformen)

Hunde (Beagle Hunde, gemischte Geschlechter, Gewicht 14 kg) ließ man über Nacht vor der Dosierung fasten, sie erhielten jedoch Wasser ad libitum. Jeder Hund erhielt eine 0,5 mg/kg subkutane Dosis von Histamin ca. 30 Minuten vor der Dosierung. Eine 5 mg/kg Dosis, abgemessen in einer entsorgbaren Spritze, wurde in den hinteren Abschnitt des Halses jedes Tieres eingeführt. Der Dosis folgten ca. 10 ml Wasser. Blutproben wurden von jedem Tier vor der Dosierung und bei 0,25, 0,5, 1,0, 1,5, 2, 3, 4, 6, 8, 10 und 12 Stunden nach der Medikamentenverabreichung entnommen. Das Plasma wurde von den roten Zellen durch Zentrifugation getrennt und bis zur Analyseeingefroren (-30ºC. Die Konzentrationen der Ausgangsarzneistoffe wurden festgestellt durch reverse Phase HPLC mit UV Detektion bei niederer Wellenlänge nach Flüssigkeits-Flüssigkeits-Extraktion der Plasmaproben. Die Ausgangsarzneistoff-Fläche unter der Kurve wurde berechnet durch das trapezoidale Verfahren über den Zeitverlauf der Studie. Die absolute Bioverfügbarkeit jeder Testzusammensetzung wurde berechnet durch den Verglich der Fläche unter der Kurve nach oraler Dosierung zu jener, welche nach einer einzelnen intravenösen Dosierung erzielt wurde. Jede flüssige Zusammensetzung wurde beurteilt in einer Gruppe welche sechs Hunde enthielt; die berichteten Werte sind Durchschnittswerte für jede Gruppe von Hunden. Die mittlere Bioverfügbarkeitsdaten für die Zusammensetzungen der Beispiele sind in Tabelle I gezeigt.

Protokoll C (flüssige Dosierform, gefolgt durch Milch)

Die Tiere wurden ausgewählt und vorbehandelt mit Histamin wie beschrieben in Protokoll B überhalb. Die flüssige Dosierform (5 mg/kg Dosis), abgemessen in einer Plastikprobe spritze eingeführt in den hinteren Rachen jedes Tieres. Ein 10 ml Aliquot Milch wurde ebenfalls in den hinteren Rachen jedes Hundes eingeführt. Die flüssige Dosierform/Milchkombination wurde vertrieben mit einem zusätzlichen Aliquot Wasser, wie in Protokoll B oberhalb beschrieben. Die Probenentnahmezeiten, Probenherstellung und Datenanalyse waren wie in Protokoll 3 beschrieben.

Protokoll D (flüssige Dosierform mit Milch)

Die Tiere wurden ausgewählt und vorbehandelt mit Histamin wie beschrieben in Protokoll B oberhalb. Die flüssige Dosierform. (5 mg/kg Dosis) wurde zehnfach mit Milch verdünnt. Die verdünnte Dosierform wurde in einer Plastikspritze abgemessen und in den hinteren Rachen jedes Tieres eingeführt. Die flüssige Dosierform wurde vertrieben mit einem zusätzlichen Aliquot Wasser wie beschrieben in Protokoll B oberhalb. Die Probenzeiten, Probenherstellung und Datenanalyse waren wie in Protokoll B beschrieben. Tabelle 1
Diese Daten zeigen, das die Lösungsformulierungen eine signifikant besser Bioverfügbarkeit zeigen als die nicht formulierte Verbindung III.
Eine Verbindung gemäß der Strukturformel II und die Verbindung III sind Inhibitoren der HIV-1 und HIV-2 Protease. Sie sind nützlich zur Inhibition einer HIV-Infektion und zur Behandlung von AIDS bei Menschen. Die gesamte tägliche Dosis einer Verbindung gemäß Formel II oder Verbindung III, die einen Menschen in einzelnen oder aufgetrennten Dosen Dosis verabreicht werden kann, kann in Mengen sein von beispielsweise 0,001 bis 1000 mg/kg Körpergewicht täglich, aber üblicherweise Dosis von 0,1 bis 50 mg/kg Körpergewicht pro Tag. Die Dosiereinheitszusammensetzungen können solche Mengen von Bruchteilen davon enthalten, um die gesamte tägliche Dosis auszumachen. Es soll jedoch verstanden werden, dass das spezifische Dosierniveau für jeden einzelnen Patienten abhängig sein wird von einer Vielzahl von Faktoren einschließlich des Alters, des Körpergewichtes des allgemeinen Gesundheitszustands, des Geschlechts, der Ernährung, der Verabreichungszeit, der Ausscheidungsrate, der in Kombination verabreichten Medikamente und der Schwere der bestimmten Erkrankung, die therapiert wird.

Claims

1. Eine pharmazeutische Zusammensetzung, die eine Lösung aus von 1 Gew-% bis 15 Gew-% der gesamten Lösung Verbindung der Formel II umfaßt:

in einem pharmazeutisch verträglichen organischen Lösungsmittel, das Propylenglykol in der Menge von 15 Gew-% bis 95 Gew-% der gesamten Lösung oder eine Mischung umfaßt aus (1) (a) einem Lösungsmittel, gewählt aus Propylenglykol und Polyethylenglykol in der Menge von 10 Gew-% bis 50 Gew-% der gesamten Lösung, oder (b) einem Lösungsmittel, gewählt aus Polyoxyethylenglyceroltriricinoleat, Polyethylenglykol 40, hydriertem Rizinusöl, fraktioniertem Kokosnußöl, Polyoxyethylen(20)sorbitanmonooleat und 2-(2- ethoxyethoxy)ethanol in der Menge von 5 Gew-% bis 35 Gew-% der gesamten Lösung, oder (c) einer Mischung daraus, und (2) Ethanol oder Propylenglykol in der Menge von 5 Gew-% bis 45 Gew-% der gesamten Lösung.

2. Die Zusammensetzung gemäß Anspruch 1, die weiterhin eine pharmazeutisch verträgliche Säure oder eine Mischung aus pharmazeutisch verträglichen Säuren umfaßt.

3. Die Zusammensetzung gemäß Anspruch 1, die weiterhin Wasser in der Menge von 0 Gew-% bis 25 Gew-% der gesamten Lösung umfaßt.

4. Die Zusammensetzung gemäß Anspruch 1, die weiterhin einen oder mehrere Additive umfaßt, die unabhängig gewählt sind aus pharmazeutisch verträglichen organischen Lösungsmitteln, pharmazeutisch verträglichen Ölen, pharmazeutisch verträglichen Süßungsmitteln, pharmazeutisch verträglichen Geschmacksstoffen, pharmazeutisch verträglichen oberflächenaktiven Stoffen unc Antioxidantien.

5. Die Zusammensetzung gemäß Anspruch 1, die eine Lösung aus von 1 Gew-% bis 15 Gew-% der gesamten Lösung einer Verbindung gemäß Formel II umfaßt, in einem pharmazeutisch verträglichen organischen Lösungsmittel, das eine Mischung umfaßt aus

(1) Propylenglykol in der Menge von 10 Gew-% bis 50 Gew-% der gesamten Lösung oder Polyoxyethylenglyceroltriricinoleat in der Menge von 5 Gew-% bis 35 Gew-% der gesamten Lösung und

(2) Ethanol in der Menge von 5 Gew-% bis 45 Gew-% der gesamten Lösung.

6. Die Zusammensetzung gemäß Anspruch 5, die weiterhin eine pharmazeutisch verträgliche Säure in der Menge von 0,2 Gew-% bis 16 Gew-% der gesamten Lösung umfaßt.

7. Die Zusammensetzung gemäß Anspruch 5, die eine Lösung umfaßt aus von 1 Gew-% bis 15 Gew-% der gesamten Lösung an (2S, 3S,5S)-5-(N-(N-((N-Methyl-N-((2-isopropyl-4-thiazolyl)methyl)- amino)carbonyl)valinyl)amino)-2-(N-((5- thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan (Verbindung III) in einem pharmazeutisch verträglichen organischen Lösungsmittel, das eine Mischung umfaßt aus

(1) Propylenglykol in der Menge von 10 Gew-% bis 50 Gew-% der gesamten Lösung oder Polyoxyethylenglyceroltriricinoleat in der Menge von 5 Gew-% bis 35 Gew-% der gesamten Lösung, oder eine Mischung davon und

(2) Ethanol in der Menge von 5 Gew-% bis 45 Gew-% der gesamten Lösung.

8. Die Zusammensetzung gemäß Anspruch 7, die weiterhin eine pharmazeutisch verträgliche Säure in der Menge von 0,2 Gew-% bis 16 Gew-% der gesamten Lösung umfaßt.

9. Die Zusammensetzung gemäß Anspruch 8, wobei die pharmazeutisch verträgliche Säure Zitronensäure ist.

10. Die Zusammensetzung gemäß Anspruch 9, die eine Lösung umfaßt aus 5 Gew-% der gesamten Lösung an (2S,3S,5S)- 5-(N-(N-((N-Methyl-N-((2-isopropyl-4-thiazolyl)methyl)- amino)carbonyl)valinyl)amino)-2-(N-((5- thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan (Verbindung III) und 4 Gew-% der gesamten Lösung an Zitronensäure in einem pharmazeutisch verträglichen organischen Lösungsmittel, das eine Mischung umfaßt aus (1) Propylenglykol in der Menge von 42 Gew-% der gesamten Lösung, (2) Ethanol in der Menge von 32 Gew-% der gesamten Lösung und (3) Wasser in der Menge von 17 Gew-% der gesamten Lösung.

11. Die Zusammensetzung gemäß Anspruch 9, die eine Lösung umfaßt aus 12 Gew-% der gesamten Lösung an (2S,3S,5S)- 5-(N-(N-((N-Methyl-N-((2-isopropyl-4-thiazolyl)methyl)- amino)carbonyl)valinyl)amino)-2-(N-((5- thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan (Verbindung III) und von 3 Gew-% bis 4 Gew-% der gesamten Lösung an Zitronensäure in einem pharmazeutisch verträglichen organischen Lösungsmittel, das eine Mischung umfaßt aus (1) Propylenglykol in der Menge von 32 Gew-% der gesamten Lösung, (2) Ethanol in der Menge von 37 Gew-% der gesamten Lösung und (3) Wasser in der Menge von 15 Gew-% der gesamten Lösung.

12. Die Zusammensetzung gemäß Anspruch 9, die eine Lösung umfaßt aus 5 Gew-% der gesamten Lösung an (2S,3S,5S)- 5-(N-(N-((N-Methyl-N-((2-isopropyl-4-thiazolyl)methyl)- amino)carbonyl)valinyl)amino)-2-(N-((5- thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan (Verbindung III) und von 5 Gew-% bis 6 Gew-% der gesamten Lösung an Zitronensäure in einem pharmazeutisch verträglichen organischen Lösungsmittel, das eine Mischung umfaßt aus (1) Propylenglykol in der Menge von 44 Gew-% bis 45 Gew-% der gesamten Lösung, (2) Ethanol in der Menge von 24 Gew-% der gesamten Lösung und (3) Polyoxyethylenglyceroltriricinoleat in der Menge von 20 Gew-% der gesamten Lösung.

13. Die Zusammensetzung gemäß Anspruch 9, die eine Lösung umfaßt aus 10 Gew-% der gesamten Lösung an (2S,3S,5S)- 5-(N-(N-((N-Methyl-N-((2-isopropyl-4-thiazolyl)methyl)- amino)carbonyl)valinyl)amino)-2-(N-((5- thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan (Verbindung III) und von 5 Gew-% bis 6 Gew-% der gesamten Lösung an Zitronensäure in einem pharmazeutisch verträglichen organischen Lösungsmittel, das eine Mischung umfaßt aus (1) Propylenglykol in der Menge von 39 Gew-% bis 40 Gew-% der gesamten Lösung, (2) Ethanol in der Menge von 24 Gew-% der gesamten Lösung und (3) Polyoxyethylenglyceroltriricinoleat in der Menge von 20 Gew-% der gesamten Lösung.

14. Die Zusammensetzung gemäß Anspruch 9, die eine Lösung umfaßt aus 2 Gew-% bis 3 Gew-% der gesamten Lösung an (2S,3S, 5S)-5-(N-(N-((N-Methyl-N-((2-isopropyl-4-thiazolyl)methyl)- amino)carbonyl)valinyl)amino)-2-(N-((5- thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan (Verbindung III) und 4 Gew-% der gesamten Lösung an Zitronensäure in einem pharmazeutisch verträglichen organischen Lösungsmittel, das eine Mischung umfaßt aus (1) Propylenglykol in der Menge von 43 Gew-% der gesamten Lösung, (2) Ethanol in der Menge von 33 Gew-% der gesamten Lösung und (3) Wasser in der Menge von 17 Gew-% der gesamten Lösung.

15. Die Zusammensetzung gemäß Anspruch 9, die eine Lösung umfaßt aus 5 Gew-% der gesamten Lösung an (2S,3S,5S)- 5-(N-(N-((N-Methyl-N-((2-isopropyl-4-thiazolyl)methyl)- amino)carbonyl)valinyl)amino)-2-(N-((5- thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan (Verbindung III) und von 0,3 Gew-% bis 0,4 Gew-% der gesamten Lösung an Zitronensäure in einem pharmazeutisch verträglichen organischen Lösungsmittel, das eine Mischung umfaßt aus (1) Propylenglykol in der Menge von 36 Gew-% der gesamten Lösung, (2) Ethanol in der Menge von 36 Gew-% der gesamten Lösung und (3) Wasser in der Menge von 19 Gew-% der gesamten Lösung.

16. Die Zusammensetzung gemäß Anspruch 9, die eine Lösung umfaßt aus 8 Gew-% der gesamten Lösung an (2S,3S,5S- 5-(N-(N-((N-Methyl-N-((2-isopropyl-4-thiazolyl)methyl)- amino)carbonyl)valinyl)amino)-2-(N-((5- thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan (Verbindung III) und von 0,3 Gew-% bis 0,4 Gew-% der gesamten Lösung an Zitronensäure in einem pharmazeutisch verträglichen organischen Lösungsmittel, das eine Mischung umfaßt aus (1) Propylenglykol in der Menge von 35 Gew-% der gesamten Lösung, (2) Ethanol in der Menge von 35 Gew-% der gesamten Lösung und (3) Wasser in der Menge von 18 Gew-% der gesamten Lösung.

17. Die Zusammensetzung gemäß Anspruch 9, die eine Lösung umfaßt aus 7 Gew-% bis 8 Gew-% der gesamten Lösung an (2S,3S, 5S)-5-(N-(N-((N-Methyl-N-((2-isopropyl-4-thiazolyl)methyl)- amino)carbonyl)valinyl)amino)-2-(N-((5- thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan (Verbindung III) und 0,5 Gew-% der gesamten Lösung an Zitronensäure in einem pharmazeutisch verträglichen organischen Lösungsmittel, das eine Mischung umfaßt aus (1) Propylenglykol in der Menge von 45 Gew-% bis 46 Gew-% der gesamten Lösung, (2) Ethanol in der Menge von 21 Gew-% der gesamten Lösung und (3) Polyoxyethylenglyceroltriricinoleat In der Menge von 24 Gew-% bis 25 Gew-% der gesamten Lösung.

18. Die Zusammensetzung gemäß Anspruch 9, die eine Lösung umfaßt aus von 7 Gew-% bis 8 Gew-% der gesamten Lösung an (2S, 3S,5S)-5-(N-(N-((N-Methyl-N-((2-isopropyl-4-thiazolyl)methyl'- amino)carbonyl)valinyl)amino)-2-(N-((5- thiazolyl)methoxycarbonyl)amino)-1,6-diphenyl-3-hydroxyhexan (Verbindung III) und von 0,2 Gew-% bis 0,3 Gew-% der gesamten Lösung an Zitronensäure in einem pharmazeutisch verträglichen organischen Lösungsmittel, das eine Mischung umfaßt aus (1) Propylenglykol in der Menge von 31 Gew-% bis 32 Gew-% der gesamten Lösung, (2) Ethanol in der Menge von 32 Gew-% dar gesamten Lösung und (3) Polyoxyethylenglyceroltriricinoleat in der Menge von 10 Gew-% bis 11 Gew-% der gesamten Lösung und (4) Wasser in der Menge von 14 Gew-% bis 15 Gew-% der gesamten Lösung.