DE69033926T2

DE69033926T2 - Verwendung von Piperazin-Acetamid-Derivaten gegen Reperfusionsschaden

Info

Publication number: DE69033926T2
Application number: DE69033926T
Authority: DE
Inventors: Herman Van Belle; Willy Johannes Carolus Van Laerhoven
Original assignee: Janssen Pharmaceutica NV
Current assignee: Janssen Pharmaceutica NV
Priority date: 1989-11-22
Filing date: 1990-11-19
Publication date: 2002-10-24
Anticipated expiration: 2010-11-20
Also published as: SG118494G; ATE102831T1; HU9102436D0; PT95959A; NO982078L; PT102145B; RU2093156C1; KR920700644A; ZA909345B; NO912511D0; KR0165686B1; EP0455789A1; CY1869A; IE904209A1; NO982078D0; PT95959B; EP0577171A2; DE69007471D1; NO311701B1; CA2044143A1

Description

Ein bei der Reperfusion, d. h. der Wiederherstellung des Blutstroms durch zuvor von der Versorgung mit Blut abgeschnittenen Geweben bzw. Organen (z. B. nach Thrombolyse, beim Herzen nach offener Herzchirurgie oder bei Herzen für Transplantationen), immer wieder auftretendes Problem ist der weitere Abbau dieses Gewebes bzw. Organs durch Leukozyten und ihre zytotoxischen Produkte.
Die vorliegende Erfindung stellt ein neues Verfahren zur Verhinderung bzw. Begrenzung von Reperfusionsschäden durch besondere N-Aryl-piperazinalkanamidderivate sowie ein neues Verfahren zur wesentlich längeren Konservierung von Herzen für Transplantationen bereit.
Einige der Verbindungen, die sich für die vorliegende Erfindung verwenden lassen, sind aus dem US-Patent Nr. 4,766,125 als Mittel bekannt, die sich zum Schutz des Herzens vor durch Ischämie, Anoxie oder Hypoxie verursachte Myokardverletzungen eignen.
Einige der Verbindungen sind auch in dem US-Patent Nr. 4,880,808 als wertvolle therapeutische Mittel beschrieben, die den Schlaf verbessern und Schlafstörungen entgegenwirken.
Die vorliegende Erfindung betrifft eine Zusammensetzung zur Verwendung bei einem Verfahren zur Verhinderung und/oder Begrenzung von Reperfusionsschäden bei Reperfusion eines Organs oder Muskelgewebes mit reduzierter oder fehlender Perfusion mit Blut, bei dem man dem Organ bzw. Muskelgewebe eine wirksame, Reperfusionsschäden verhindernde und/oder begrenzende Menge einer unter die Formel
fallenden Verbindung, einer stereochemisch isomeren Form davon oder einer pharmazeutisch unbedenklichen Säureadditionssalzform davon verabreicht, wobei
L für einen Rest der Formel
Ar¹ für gegebenenfalls durch Halogen oder C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyloxy substituiertes Phenyl steht,
Ar² für gegebenenfalls durch Halogen oder C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyloxy substituiertes Phenyl oder für Pyridinyl steht,
R¹ für C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl, Aminocarbonyl oder (C&sub1;&submin;&sub4;- Alkyl)aminocarbonyl steht,
Ar für einen Rest der Formel
steht,
R² und R³ jeweils unabhängig voneinander für Halogen oder C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl stehen,
R&sup4; für Wasserstoff, Halogen, Nitro, Amino, Mono- oder Di- (C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl) amino, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylcarbonylamino, Aminocarbonylamino, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyloxy, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyloxycarbonyl, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylcarbonyl, Aminocarbonyl, Mono- oder Di-(C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl)aminocarbonyl, Cyano oder Aminomethyl steht,
R&sup5; für C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylcarbonyl steht,
R&sup6; für Wasserstoff, Amino, Mono- oder Di-(C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl)- amino, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylcarbonylamino, Aminocarbonylamino, Aminocarbonyl oder Cyano steht,
R&sup7; für C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl steht,
R&sup8; für Halogen oder C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylcarbonyl steht,
R&sup9; für Wasserstoff oder C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl steht,
R¹&sup0; für Halogen oder C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl steht,
R¹¹ für Wasserstoff, Hydroxy oder C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl steht,
R¹² für Halogen oder C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl steht,
R¹³ für Wasserstoff steht oder
R¹² und R¹³ zusammen auch einen C&sub3;&submin;&sub5;-Alkandiylrest bilden können,
R¹&sup9; jewels für C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl steht und
R¹&sup5; für C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl oder Amino steht.
In den voranstehenden Definitionen steht der Ausdruck "Halogen" generisch für Fluor, Chlor, Brom und Iod, der Ausdruck "C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl" definiert geradkettige und verzweigte, gesättigte Kohlenwasserstoffreste mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen wie beispielsweise Methyl, Ethyl, Propyl, 1-Methylethyl, Butyl, 1,1-Dimethylethyl und dergleichen, und der Ausdruck "C&sub3;&submin;&sub5;-Alkandiyl" definiert geradkettige und verzweigte, gesättigte, zweiwertige Kohlenwasserstoffreste mit 3 bis 5 Kohlenstoffatomen wie beispielsweise 1,3-Propandiyl, 1,4-Butandiyl und 1,5-Pentandiyl.
Verbindungen der Formel (I), in denen R¹¹ für Hydroxy steht, können auch in der tautomeren Oxoform vorliegen.
Die Verbindungen der Formel (I) weisen in ihrer Struktur wenigstens ein asymmetrisches Kohlenstoffatom, nämlich das den R¹-Rest tragende Piperazinkohlenstoffatom, auf, das in der R- oder in der S- Konfiguration vorliegen kann. Als Folge können die Verbindungen der Formel (I) in zwei verschiedenen enantiomeren Formen vorliegen, die voneinander getrennt werden können, beispielsweise indem man die Enantiomerenmischung mit einer optisch aktiven Säure in deren Säureadditionssalzform umwandelt, die diastereomeren Salze trennt, z. B. durch selektive Kristallisation, und die reinen Enantiomere durch Behandeln mit Alkali freisetzt.
Weist L ein oder mehrere zusätzliche chirale Zentren auf, so können diese chiralen Zentren jeweils in der R- oder der S-Konfiguration vorliegen und die Verbindungen der Formel (I) können verschiedene diastereochemische Formen haben, die voneinander durch physikalische Trennmethoden wie selektive Kristallisation und chromatographische Verfahren, z. B. Gegenstromverteilung, Säulenchromatographie und ähnliche Verfahren, getrennt werden können.
Reine stereochemisch isomere Formen können auch aus den entsprechenden reinen stereochemisch isomeren Formen der entsprechenden Ausgangsverbindungen erhalten werden, vorausgesetzt, die Umsetzung verläuft stereospezifisch.
Die Verbindungen der Formel (I) können als solche oder als eine pharmazeutisch unbedenkliche Säureadditionssalzform verwendet werden, wobei man letztere einfach durch Behandeln der Basenform mit einer geeigneten Säure erhält. Als Säuren eignen sich beispielsweise anorganische Säuren wie Halogenwasserstoffsäuren, z. B. Chlorwasserstoff- oder Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Salpetersäure, Phosphorsäure und dergleichen, oder organische Säuren wie beispielsweise Essigsäure, Propionsäure, Hydroxyessigsäure, 2-Hydroxypropionsäure, 2-Oxopropionsäure, Ethandisäure, Propandisäure, Butandisäure, (Z)- 2-Butendisäure, (E)-2-Butendisäure, 2-Hydroxybutandisäure, 2,3-Dihydroxybutandisäure, 2-Hydroxy- 1,2,3-propantricarbonsäure, Methansulfonsäure, Ethansulfonsäure, Benzolsulfonsäure, 4-Methylbenzolsulfonsäure, Cyclohexansulfaminsäure, 2-Hydroxybenzoesäure, 4-Amino-2-hydroxybenzoesäure und ähnliche Säuren.
Der vorstehend verwendete Ausdruck "Säureadditionssalzform" umfaßt auch die Solvate, die von den Verbindungen der Formel (I) und ihren Säureadditionssalzen gebildet werden können. Beispiele für solche Solvate sind z. B. die Hydrate, Alkoholate und dergleichen.
Die eigentlichen Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind (1)-(-)-2- (Aminocarbonyl)-N-(4-amino- 2,6-dichlorphenyl)-4-[5,5-bis(4-fluorphenyl)pentyl]-1- piperazinacetamid (I-b), dessen pharmazeutisch unbedenkliche Säureadditionssalzformen und die hydratisierten Formen davon, insbesondere die Mono- und Hemihydrate davon. In diesen Verbindungen sind in einzigartiger Weise pharmakologische Selektivität und vorteilhafte Eigenschaften vereinigt, was bei den bisher offenbarten N-Arylpiperazinalkanamidverbindungen nicht der Fall ist. Die vorliegenden Verbindungen sind nicht nur wirksame, selektive Nukleosidtransportinhibitoren, sie weisen auch keine Ca²&spplus;-antagonistischen Eigenschaften auf. Ihre akute und chronische Toxizität ist sehr niedrig. Weiterhin zeigen diese Verbindungen eine nur geringe Bindung an Plasmaproteine, und ihre Bioverfügbarkeit ist infolgedessen hervorragend. Ihre therapeutische Anwendung wird dadurch, daß sie leicht resorbiert und daher oral verabreicht werden können, sehr vereinfacht und ausgeweitet. Zusammen mit den oben erwähnten Eigenschaften sind die Verbindungen durch diese bequeme Verabreichungsweise besonders für eine länger andauernde Verwendung geeignet, z. B. als Prophylaktika bei hochgefährdeten Patienten oder als Erhaltungstherapie, wie im folgenden ausgeführt. Ein weiterer Vorteil der Verwendung von enantiomerenreinen Verbindungen beruht darauf, daß man die zu verabreichende Menge an Arzneimittel herabsetzen kann, da die nicht erwünschte, unwirksame enantiomorphe Form nicht mehr vorhanden ist. Dieser Ansatz ist besonders vorteilhaft, da so das Risiko einer Überdosierung und die möglichen unerwünschten Nebenwirkungen bei einer Überdosierung (wie Kardiodepression) vermindert werden.
Eine Reihe von Verbindungen der Formel (I) sowie ihre Synthesen und ihre pharmakologischen Eigenschaften sind aus dem US-Patent Nr. 4,766,125 und aus EP-A-0,285,219 bekannt. Die neuen enantiomerenreinen Verbindungen der Formel (I) lassen sich leicht aus enantiomerenreinen Piperazinen der Formel
in denen R¹ wie unter Formel (I) definiert ist und wobei ein oder zwei Piperazin-Stickstoffatome gegebenenfalls durch eine selektiv abspaltbare Gruppe wie beispielsweise eine 1-Arylalkylgruppe, z. B. Phenylmethyl, 1-Phenylethyl und dergleichen, eine (Aryl- oder C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl)oxycarbonylgruppe, z. B. Phenoxycarbonyl, Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, tert.- Butyloxycarbonyl und ähnliche Schutzgruppen, geschützt sein können, darstellen. Diese Schutzgruppen lassen sich durch im Stand der Technik bekannte Vorschriften wie Hydrogenolyse und Hydrolyse wieder abspalten.
Die Darstellung umfaßt eine sukzessive N-Alkylierung bzw. reduktive N-Alkylierung der einzelnen Piperazin- Stickstoffatome mit der entsprechenden L-Einheit bzw. N-Arylalkanamideinheit nach im Stand der Technik bekannten Vorschriften. Die Darstellung läuft normalerweise wie folgt ab:
(a) bei ungeschützten Piperazinderivaten wird zunächst der reaktivste, am wenigsten sterisch gehinderte Stickstoff in der 4-Stellung N-alkyliert und dann das verbliebene freie Stickstoffatom in der ursprünglichen 1-Stellung der Piperazinausgangsverbindung umgesetzt,
(b) bei einfach geschützten Piperazinderivaten wird das freie Stickstoffatom N-alkyliert, die Schutzgruppe abgespalten und das dann ungeschützte Stickstoffatom umgesetzt; oder
(c) bei zweifach geschützten Piperazinderivaten werden beide Schutzgruppen abgespalten und weiter wie unter (a) fortgefahren, oder eine der Gruppen wird selektiv abgespalten und es wird weiter wie in (b) fortgefahren.
So kann man beispielsweise die neue Verbindung (l)-(-)- 2-(Aminocarbonyl)-N-(4-amino-2,6-dichlorphenyl)-4-[5,5- bis(4-fluorphenyl)pentyl]-1-piperazinacetamid der Formel
einfach ausgehend von (-)-(S,S)-N¹,N²-Bis (1- phenylethyl)-1,2-ethandiamin (II) darstellen.
Das Zwischenprodukt (II) wird durch doppelte N- Alkylierung mit 2,3-Dibrompropanamid (III) in einem reaktionsinerten Lösungsmittel in Gegenwart einer Base cyclisiert. Als Lösungsmittel eignen sich aromatische Kohlenwasserstoffe, z. B. Benzol, Methylbenzol und dergleichen und halogenierte Kohlenwasserstoffe, z. B. Tetrachlormethan, Chlorbenzol und dergleichen. Als Basen eignen sich Alkali- und Erdalkalicarbonate wie beispielsweise Natrium- und Kaliumcarbonat. Die Cyclisierung wird vorzugsweise bei der Rückflußtemperatur der Reaktionsmischung durchgeführt.
Das Zwischenprodukt der Formel (IV) wird durch Hydrogenolyse unter einer Wasserstoffatmosphäre in einem Alkanol wie beispielsweise Methanol, Ethanol und dergleichen in Gegenwart eines Hydrierungskatalysators wie Palladium auf Aktivkohle, Platin auf Aktivkohle und dergleichen in das Piperazin (+)-(V) umgewandelt.
Als nächstes wird das Zwischenprodukt (+)-(V) durch Reaktion mit 5,5-Bis(4-fluorphenyl)pentaldehyd (VI) unter einer Wasserstoffatmosphäre in einem Alkanol wie beispielsweise Methanol, Ethanol und dergleichen in Gegenwart eines Hydrierungskatalysators wie Palladium auf Aktivkohle, Platin auf Aktivkohle und dergleichen reduktiv N-alkyliert. Damit das Reaktionsprodukt nicht weiterreagiert, ist es vorteilhaft, der Reaktionsmischung ein Katalysatorgift wie Thiophen zuzusetzen. Die Reaktionsgeschwindigkeit wird durch leichtes Erhitzen der Reaktionsmischung auf insbesondere etwa 40ºC bis 60ºC erhöht.
Alternativ dazu kann man das Zwischenprodukt (VII) durch N-Alkylierung von Zwischenprodukt (+)-(V) mit einem 5,5-Bis-(4-fluorphenyl)pentan-1-halogenid oder -sulfonat der Formel
wobei W für Halogen, z. B. Chlor oder Brom, oder Sulfonyloxy, z. B. Methansulfonyloxy, 4-Methylbenzolsulfonyloxy und dergleichen steht, darstellen. Die Alkylierung läßt sich einfach in einem reaktionsinerten Lösungsmittel wie beispielsweise einem Alkanol, z. B. Methanol, Butanol, Cyclohexanol und dergleichen oder einem dipolaren aprotischen Lösungsmittel, z. B. N,N- Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid und dergleichen, in Gegenwart einer Base, z. B. einem Alkali- oder Erdalkalihydroxid oder -carbonat, z. B. Natrium- oder Kaliumhydroxid oder -carbonat, durchführen.
Das so erhaltene Zwischenprodukt (VII) wird mit einem Reagens der Formel (VIII), wobei W für eine reaktive Abgangsgruppe wie Chlor, Brom und dergleichen steht, in einem reaktionsinerten Lösungsmittel in Gegenwart einer Base N-alkyliert.
Diese N-Alkylierungsreaktion läßt sich einfach durch Rühren und Erhitzen der Reaktionspartner, insbesondere durch Erhitzen auf etwa 70ºC bis 100ºC, durchführen. Als Lösungsmittel eignen sich beispielsweise Alkanole, z. B. Methanol, Ethanol, Butanol und dergleichen, dipolare aprotische Lösungsmittel, z. B. N,N- Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid und dergleichen, oder Mischungen dieser Lösungsmittel. Als Basen eignen sich Alkali- und Erdalkalihydroxide, -carbonate, -hydrogencarbonate und dergleichen, und organische Amine wie beispielsweise N,N-Diethylethanamid, Pyridin, Morpholin und ähnliche Basen. Zum Erhöhen der Reaktionsgeschwindigkeit kann man ein Alkaliiodid, z. B. Kaliumiodid, zugeben.
Das Zwischenprodukt der Formel (IX) wird dann schließlich durch einen Nitro-zu-Amino- Reduktionsschritt in die neue Verbindung (l)-(-)-(I-b) umgewandelt.
Diese Reduktion läßt sich einfach nach im Stand der Technik bekannten Reduktionsvorschriften in einem reaktionsinerten Lösungsmittel durchführen. So kann man beispielsweise das Zwischenprodukt (IX) unter einer Wasserstoffatmosphäre in einem Alkanol wie Methanol, Ethanol und dergleichen in Gegenwart eines Hydrierungskatalysators wie Palladium auf Aktivkohle, Platin auf Aktivkohle, Raney-Nickel und dergleichen rühren. Alternativ dazu läßt sich die Reduktion auch durch Behandeln des Zwischenprodukts (IX) mit einem Reagens wie beispielsweise Natriumsulfit, Natriumsulfid, Natriumhydrogensulfid, Titan(III)- chlorid und dergleichen durchführen.
Bei allen der vorhergehenden Reaktionsschritte können Zwischenprodukte und Endprodukte nach im Stand der Technik bekannten Vorschriften, insbesondere durch Flüssigchromatographie und Kristallisieren, isoliert und gereinigt werden.
Wie bereits erwähnt eignen sich die Verbindungen der Formel (I) dazu, das Herz vor Myokardverletzungen zu schützen und den Schlaf zu verbessern und Schlafstörungen entgegenzuwirken. Eine Reihe dieser Verbindungen, insbesondere 3-(Aminocarbonyl)-4-[4,4- bis(4-fluorphenyl)butyl]-N-(2,6-dichlorphenyl)-1- piperazinacetamid-dihydrochlorid-monohydrat, das generisch als Mioflazin bekannt ist, sind als Inhibitoren des transmembranen Nukleosidtransports beschrieben [Molecular Physiology, 8, 615-630 (1985)]. Ein wichtiger Vorteil der vorliegenden Verbindungen der Formel (I-b) bei der Verwendung in den weiter unten beschriebenen Verfahren ist die Tatsache, daß sie oral aktiv sind und im Gegensatz zu Mioflazin über eine hervorragende Bioverfügbarkeit verfügen, da sie sich im allgemeinen nicht an Plasmaproteine binden.
Bei dem oben erwähnten Organ bzw. Muskelgewebe handelt es sich insbesondere um das Herz bzw. um Herzgewebe. Typische Situationen, in denen die Reperfusion mit Blut in diesem Organ bzw. Muskelgewebe verringert ist bzw. fehlt, sind zum Beispiel Thrombose und Kardioplegie, d. h. das Anhalten des Herzens vor offener Herzchirurgie oder vor einer Transplantation. Zu Reperfusionsschäden kommt es im allgemeinen, wenn die normale Durchblutung nach Eintritt einer der obenerwähnten Situationen wiederhergestellt wird, z. B. bei natürlicher oder stimulierter Thrombolyse oder bei Reperfusion des Herzens nach Kardioplegie. Der Ausdruck "Reperfusionsschäden", auch "Reperfusionsverletzung" genannt, bezeichnet bei der vorliegenden Anwendung den Schaden, der an Geweben und Organen, deren Blutzufuhr zuvor unterbrochen worden war, bei Reperfusion, d. h. der Wiederherstellung der Durchblutung der Gewebe bzw. Organe, auftritt. Reperfusionsschäden sind ein akutes Phänomen, das unmittelbar nach einer Reperfusion auftritt, und müssen daher rechtzeitig behandelt werden.
Die Menge an Wirkstoff der Formel (I-b) ist so bemessen, daß bei der Verabreichung an das Organ bzw. Muskelgewebe die Reperfusionsschäden wirksam verhindert bzw. begrenzt werden.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können in einem Verfahren zur Behandlung eines Patienten, der eine natürliche Thrombolyse, eine stimulierte Thrombolyse (Thrombolysetherapie) oder eine Reperfusion des Herzens nach offener Herzchirurgie oder nach Erhalt eines Spenderherzens durchmacht, in einer Menge Anwendung finden, die Reperfusionsschäden wirksam verhindert und/oder begrenzt.
So wie der Ausdruck hier verwendet wird, bezeichnet "Thrombolyse" die Lyse von Thromben, insbesondere die durch die lokale Wirkung des proteolytischen Enzyms Plasmin innerhalb der Thrombensubstanz bewirkte Lyse. Der hier verwendete Ausdruck "Thrombolysetherapie" definiert die Verabreichung einer thrombolytisch wirksamen Menge eines thrombolytisch wirksamen Mittels an einen an einem oder mehreren Thromben leidenden Patienten, gegebenenfalls mit einer anschließenden Erhaltungstherapie mit einem Antikoagulationsmittel wie beispielsweise Heparin, Biscuminessigsäureethylester, Ticlopidin und dergleichen. Zu den herkömmlich in dieser Therapie verwendeten thrombolytisch wirksamen Mitteln gehören Urokinase, Streptokinase, Gewebeplasminogenaktivator (tissue plasminogen activator, t-PA), Fibrinolysin und ähnliche Mittel. Mit dem Verfahren zur Verwendung der Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung wird somit ein Verfahren zur Verhinderung bzw. Begrenzung von Reperfusionsschäden bei Reperfusion nach stimulierter Thrombolyse bereitgestellt, bei dem man dem in der thrombolytischen Therapie befindlichen Patienten eine zur Verhinderung bzw. Begrenzung von Reperfusionsschäden wirksame Menge einer Verbindung der Formel (I-b) verabreicht.
Das Verfahren beinhaltet insbesondere die gleichzeitige, getrennte oder aufeinanderfolgende Verabreichung einer thrombolytisch wirksamen Menge eines thrombolytisch wirksamen Mittels, insbesondere eines der oben spezifisch aufgeführten thrombolytisch wirksamen Mittels, und einer wirksamen, Reperfusionsschäden verhindernden und/oder begrenzenden Menge einer Verbindung der Formel (I-b) an den Patienten. Das Verfahren beinhaltet weiterhin die gleichzeitige, getrennte oder aufeinanderfolgende Verabreichung während einer Erhaltungstherapie bzw. die prophylaktische gleichzeitige, getrennte oder aufeinanderfolgende Verabreichung jeweils einer antikoagulierend wirksamen Menge eines Antikoagulationsmittels, insbesondere eines der oben spezifisch aufgeführten Antikoagulationsmittel, und einer wirksamen Menge einer Verbindung der Formel (I-b) an den Patienten.
Die Menge der einzelnen Wirkstoffe, d. h. des thrombolytisch wirksamen Mittels und der Verbindung der Formel (I-b) in dem Verfahren ist so bemessen, daß man bei der Verabreichung an die Patienten eine wirksame Thrombolyse erzielt und gleichzeitig Reperfusionsschäden wirksam verhindert bzw. begrenzt. Ist eine Erhaltungstherapie vorgesehen, so wird die Menge der einzelnen Wirkstoffe, d. h. des Antikoagulationsmittels und der Verbindung der Formel (I-b) in dem Verfahren so bemessen, daß man bei der Verabreichung der einzelnen Wirkstoffe an die Patienten eine wirksame Verhinderung von Thrombenbildung erzielt und gleichzeitig Reperfusionsschäden wirksam verhindert bzw. begrenzt. Die Menge an thrombolytisch wirksamen Mittel zur Verwendung beim vorliegenden Verfahren kann zufriedenstellend der gewöhnlich bei im Stand der Technik bekannten Thrombolysetherapien verwendeten Menge an thrombolytisch wirksamem Mittel entsprechen. So kann man beispielsweise Streptokinase in einer Initialdosis von 250000 bis 600000 Einheiten über 30 bis 60 Minuten verabreichen, gefolgt von einer Erhaltungsdosis von etwa 100000 Einheiten pro Stunde über bis zu 72 Stunden und manchmal bis zu 144 Stunden; Urokinase kann durch intravenöse Infusion mit einer Initialdosis von etwa 4400 Einheiten pro kg Körpergewicht über 10 Minuten, gefolgt von einer Erhaltungsdosis von etwa 4400 Einheiten pro kg Körpergewicht jede Stunde über bis zu 12 Stunden, verabreicht werden und Gewebeplasminogenaktivator kann durch intravenöse Infusion von etwa 100 mg über 3 Stunden verabreicht werden. Die beim vorliegenden Verfahren verwendete Menge der Verbindung der Formel (I-b) liegt normalerweise im Bereich von etwa 0,01 bis etwa 100 mg/kg Körpergewicht, insbesondere von etwa 0,1 bis etwa 10 mg/kg Körpergewicht und ganz besonders von etwa 0,2 bis etwa 5 mg/kg Körpergewicht.
Die Verbindungen der Formel (I-b) bzw. deren pharmazeutisch unbedenklichen Säureadditionssalze können vor, während oder kurz nach der Verabreichung des thrombolytisch wirksamen Mittels verabreicht werden, vorausgesetzt, daß die Zeit zwischen der Verabreichung des thrombolytisch wirksamen Mittels und der Verabreichung der Verbindung der Formel (I-b) so bemessen ist, daß Reperfusionsschäden wirksam verhindert bzw. begrenzt werden. Beabsichtigt man eine gleichzeitige Verabreichung von thrombolytisch wirksamen Mittel und einer Verbindung der Formel (I-b), so kann eine Zusammensetzung, die sowohl ein thrombolytisch wirksames Mittel als auch eine Verbindung der Formel (I-b) enthält, besonders zweckmäßig sein, oder das thrombolytisch wirksame Mittel und die Verbindung der Formel (I-b) werden getrennt in Form geeigneter Zusammensetzungen verabreicht. Ähnlich kann man bei einer Erhaltungstherapie oder bei der Prophylaxe mit einem Antikoagulationsmittel die Verbindungen der Formel (Ib) vor, während oder nach der Verabreichung des Antikoagulationsmittels verabreichen.
Die vorliegende Erfindung stellt weiterhin Zusammensetzungen zur Verhinderung bzw. Begrenzung von Reperfusionsschäden bei Reperfusion nach natürlicher oder stimulierter Thrombolyse oder nach Kardioplegie bereit, wobei die Zusammensetzungen einen pharmazeutisch unbedenklichen Trägerstoff und als Wirkstoff eine wirksame, Reperfusionsschäden verhindernde bzw. begrenzende Menge der Verbindung der Formel (I-b) enthalten.
Zusammensetzungen zur Verhinderung bzw. Begrenzung von Reperfusionsschäden bei Reperfusion nach natürlicher oder stimulierter Thrombolyse können weiterhin eine thrombolytisch wirksame Menge eines thrombolytisch wirksamen Mittels, insbesondere eines der oben spezifisch erwähnten thrombolytisch wirksamen Mittel, enthalten.
Zusammensetzungen zur prophylaktischen Anwendung oder zur Erhaltungstherapie können weiterhin eine antikoagulierend wirksame Menge eines Antikoagulationsmittels, insbesondere eines der oben spezifisch erwähnten Antikoagulationsmittel, enthalten.
Die Menge an den einzelnen Wirkstoffen, d. h. der Verbindung der Formel (I-b) und gegebenenfalls des thrombolytisch wirksamen Mittels oder des Antikoagulationsmittels, in den obigen Zusammensetzungen ist so bemessen, daß bei der Verabreichung eine wirksame Verhinderung bzw. Begrenzung von Reperfusionsschäden erzielt wird, falls zutreffend gleichzeitig mit wirksamer Thrombolyse oder mit wirksamer Koagulationsverhinderung.
Interessante Zusammensetzungen aus der oben und im folgenden beschriebenen Gruppe von Zusammensetzungen sind die Zusammensetzungen, die Cyclodextrin (CD) oder ein Etherderivat davon als Komplexiermittel und/oder Lösungsvermittler enthalten. Als Beispiele für solche Cyclodextrine können α-CD, β-CD und γ-CD und deren Ether- oder gemischte Etherderivate erwähnt werden. Besondere Cyclodextrinderivate sind in US-3,459,731, EP-A-0,149,197 und in EP-A-0,197,571 beschrieben.
Normalerweise umfassen solche Ether- oder gemischten Etherderivate α-, β- und γ-CD, in denen eine oder mehrere Hydroxylgruppen mit C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl, insbesondere Methyl, Ethyl oder Isopropyl, Hydroxy-C&sub1;&submin;&sub6;-alkyl, insbesondere Hydroxyethyl, Hydroxypropyl oder Hydroxybutyl, Carboxy-C&sub1;&submin;&sub6;-alkyl, insbesondere Carboxymethyl oder Carboxyethyl, oder C&sub1;&submin;&sub6;- Alkyloxycarbonyl-C&sub1;&submin;&sub6;-alkyl substituiert sind. Besonders interessante Komplexiermittel und/oder Lösungsvermittler sind β-CD, 2,6-Dimethyl-β-CD und insbesondere 2-Hydroxypropyl-β-CD, 2-Hydroxyethyl-β-CD, 2-Hydroxyethyl-γ-CD und 2-Hydroxypropyl-γ-CD. Bei den oben erwähnten Cyclodextrinderivaten liegt der SG (Substitutionsgrad, d. h. die durchschnittliche Anzahl substituierter Hydroxyfunktionen pro Glucoseeinheit) vorzugsweise im Bereich von 0,125 bis 3, insbesondere von 0,3 bis 2 und ganz besonders von 0,3 bis 1. Der MS (molekulare Substitutionsgrad, d. h. die durchschnittliche Anzahl von Mol des Substitutionsmittels pro Glucoseeinheit) liegt im Bereich von 0,125 bis 10, insbesondere von 0,3 bis 3 und ganz besonders von 0,3 bis 1,5, vorzugsweise von 0,35 bis 0,50. Diese Zusammensetzungen lassen sich einfach durch Lösen des Cyclodextrins bzw. dessen Etherderivats in Wasser und Zusetzen einer Verbindung der Formel (I) sowie anderer Zusatzstoffe und Komponenten wie beispielsweise Natriumchlorid, Kaliumnitrat, Glucose, Mannit, Sorbit, Xylit und Puffern wie beispielsweise Phosphat-, Acetat- oder Citratpuffern und gegebenenfalls durch Konzentrieren oder Trocknen der Lösung durch Eindampfen im Vakuum oder durch Lyophilisieren herstellen. Die Menge an Cyclodextrin oder dessen Etherderivat in der Endzusammensetzung liegt im allgemeinen im Bereich von etwa 1 Gew.-% bis etwa 40 Gew.-%, insbesondere von 2, 5 Gew.-% bis 25 Gew.-% und ganz besonders von 5 Gew.-% bis 20 Gew.-%. Die Menge an Wirkstoff der Formel (I-b) in der Endzusammensetzung liegt im allgemeinen im Bereich von etwa 0,01 Gew.-% bis etwa 1,0 Gew.-%, insbesondere von 0,025 Gew.-% bis 0,5 Gew.-% und ganz besonders von 0,05 Gew.-% bis 0,2 Gew.-%. Besonders interessante Zusammensetzungen sind die, die (l)-(-)-2- (Aminocarbonyl)-N-(4-amino-2,6-dichlorphenyl)-4-[5,5- bis(4-fluorphenyl)pentyl]-1-piperazinacetamid als Wirkstoff und 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin als Komplexiermittel und/oder Lösungsvermittler enthalten.
Zur Herstellung der erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzungen vereinigt man eine wirksame Menge der Wirkstoffe in Säure- oder Basenadditionssalz- oder Basen-Form in Form einer innigen Mischung mit einem pharmazeutisch unbedenklichen Träger, der je nach der zur Verabreichung gewünschten Darreichungsform verschiedenste Formen annehmen kann. Diese pharmazeutischen Zusammensetzungen liegen wünschenswerterweise in Einzeldosisform vor, die sich vorzugsweise zur oralen, rektalen oder perkutanen Verabreichung oder zur parenteralen Injektion eignet. Bei der Herstellung der Zusammensetzungen in oraler Dosisform können beispielsweise alle üblichen pharmazeutischen Medien verwendet werden, wie beispielsweise Wasser, Glykole, Öle, Alkohole und dergleichen bei oralen Flüssigpräparaten wie Suspensionen, Sirupen, Elixieren und Lösungen, oder feste Träger wie Stärken, Zucker, Kaolin, Gleitmittel, Bindemittel, Sprengmittel und dergleichen bei Pulvern, Pillen, Kapseln und Tabletten. Aufgrund ihrer leichten Verabreichbarkeit stellen Tabletten und Kapseln die vorteilhafteste orale Einzeldosisform dar, wobei man natürlich feste pharmazeutische Träger verwendet. Bei Zusammensetzungen zur parenteralen Applikation besteht der Träger in der Regel zumindest größtenteils aus sterilem Wasser, wenngleich auch andere Bestandteile, z. B. zur Förderung der Löslichkeit, vorhanden sein können. Es lassen sich beispielsweise Injektionslösungen herstellen, bei denen der Träger aus Kochsalzlösung, Glucoselösung oder einer Mischung aus Kochsalz- und Glucoselösung besteht. Ferner lassen sich auch Injektionssuspensionen herstellen, wobei geeignete flüssige Träger, Suspendiermittel und dergleichen verwendet werden können. Bei den zur perkutanen Verabreichung geeigneten Zusammensetzungen enthält der Träger gegebenenfalls ein Penetriermittel und/oder ein geeignetes Netzmittel, gegebenenfalls in Kombination mit kleineren Mengen geeigneter Zusatzstoffe jeglicher Art, wobei diese Zusatzstoffe keine wesentliche negative Wirkung auf die Haut ausüben. Derartige Zusatzstoffe können die Aufbringung auf die Haut erleichtern und/oder für die Herstellung der gewünschten Zusammensetzungen von Nutzen sein. Diese Zusammensetzungen können auf verschiedenen Wegen verabreicht werden, z. B. als transdermales Pflaster, Direktauftrag oder Salbe. Säureadditionssalze von (I-b) sind aufgrund ihrer gegenüber der entsprechenden Basenform erhöhten Wasserlöslichkeit offensichtlich besser für die Herstellung von wäßrigen Zusammensetzungen geeignet.
Ein besonders interessantes Merkmal der Verbindungen der Formel (I-b) ist die Tatsache, daß die Verbindungen oral verabreicht werden können, wodurch die Verabreichung der Verbindungen an Hochrisikopatienten, insbesondere die Verabreichung an Patienten, die einer Erhaltungstherapie unterzogen werden oder Antikoagulationsmittel erhalten, wesentlich vereinfacht.
Zwecks einfacher Verabreichung und einheitlicher Dosierung ist es besonders vorteilhaft, die obengenannten pharmazeutischen Zusammensetzungen in Einzeldosisform zu formulieren. Unter dem Begriff Einzeldosisform sind in der Beschreibung und in den Ansprüchen physikalisch diskrete Einheiten zu verstehen, die sich als Einheitsdosen eignen, wobei jede Einheit eine vorbestimmte Menge des Wirkstoffs enthält, die so berechnet ist, daß in Verbindung mit dem erforderlichen pharmazeutischen Träger die gewünschte therapeutische Wirkung erzielt wird. Beispiele für solche Einzeldosisformen sind Tabletten (darunter Tabletten mit Bruchrille und Dragees), Kapseln, Pillen, Pulverbeutel, Oblaten, Injektionslösungen, Injektionssuspensionen, ein Teelöffel voll, ein Eßlöffel voll und dergleichen sowie deren getrennt vorliegende Vielfache.
Die vorliegende Erfindung umfaßt weiterhin Produkte, die eine Verbindung der Formel (I-b) und ein thrombolytisch wirksames Mittel als Kombinationspräparat zur gleichzeitigen, getrennten oder aufeinanderfolgenden Verwendung in der Thrombolysetherapie mit damit einhergehender Verhinderung bzw. Begrenzung von Reperfusionsschäden enthalten. Solche Produkte können beispielsweise ein Kit umfassen, das einen Behälter mit einer geeigneten, eine Verbindung der Formel (I-b) oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Säureadditionssalz davon enthaltenden Zusammensetzung und einen anderen Behälter mit einer ein thrombolytisch wirksames Mittel enthaltenden Zusammensetzung enthält. Solch ein Produkt bietet den Vorteil, daß der Arzt, der die Thrombolysetherapie mit gleichzeitiger Verhinderung bzw. Begrenzung von Reperfusionsschäden durchführen will, die geeigneten Mengen der jeweiligen Komponenten und deren Verabreichungsreihenfolge und -zeiten auf Grundlage der Diagnose des zu behandelnden Patienten bestimmen kann.
Der hier verwendete Ausdruck "offene Herzchirurgie" definiert chirurgische Eingriffe an einem Herzen, bei dem die Kreislauffunktionen vorübergehend aufgehoben sind. Mit dem Verfahren zur Verwendung der Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung wird insbesondere ein Verfahren zur Verhinderung bzw. Begrenzung von Reperfusionschäden bei der Reperfusion des Herzens nach einer Operation bereitgestellt, bei dem man dem Patienten, der sich einer offenen Herzchirurgie unterzieht, eine zur Verhinderung bzw. Begrenzung von Reperfusionsschäden wirksame Menge einer Verbindung der Formel (I-b) verabreicht. Ganz besonders behandelt man bei dem Verfahren den Patienten vor, während und nach der Operation mit einer wirksamen, Reperfusionsschäden verhindernden bzw. begrenzenden Menge einer Verbindung der Formel (I-b). Bei einer besonders vorteilhaften Vorgehensweise hält man das Herz an und führt dann die Operation mit einer wirksamen, Reperfusionsschäden verhindernden bzw. begrenzenden Menge einer Verbindung der Formel (I-b) enthaltenden kardioplegen Lösung durch.
Der hier verwendete Ausdruck "Transplantation" definiert die Transplantation von Geweben, insbesondere Organen und ganz besonders von Herzen eines Warmblüters zu einer identischen Empfängerstelle in einem anderen Warmblüter, wobei es sich bei dem Warmblüter insbesondere um Menschen handelt. Mit dem Verfahren zur Verwendung der Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung wird insbesondere ein Verfahren zur Verhinderung bzw. Begrenzung von Reperfusionschäden bei der Reperfusion eines transplantierten Herzens bereitgestellt, bei dem man dem Patienten, der das Spenderherz empfängt, sowie dem zu verpflanzenden Herzen eine wirksame Menge einer Verbindung der Formel (I-b) verabreicht.
Ganz besonders hält man bei dem Verfahren ein Spenderherz für eine Transplantation mit einer kardioplegen Lösung an, wobei die kardioplege Lösung eine wirksame Menge einer Verbindung der Formel (I-b) enthält, man bewahrt das Herz gekühlt in der kardioplegen Lösung auf und verpflanzt das Herz in einen anderen Patienten, der mit einer wirksamen Menge einer Verbindung der Formel (I-b) vorbehandelt wurde, und reperfundiert das Herz anschließend mit oxygeniertem Blut.
Mit dem hier verwendeten Ausdruck "kardioplege Lösung" werden die normalen Formulierungen mit ausgewogenem Salzgehalt definiert, die allgemein für Kardioplegie verwendet werden. Zu den kardioplegen Lösungen, die gewöhnlich zum Anhalten eines Herzens verwendet werden, gehören beispielsweise hyperkalämische kardioplege NIH- Lösungen, kardioplege UW-Lösungen, kardioplege Collins- Lösung M (115 mäq K&spplus;/l), kardioplege St.-Thomas'- Hospital-Lösung, mit Tromethamin (3,6%) gepufferte Ringer-Injektionslösung, mit Natriumhydrogencarbonat- Injektionslösung (8,4%) gepuffertes Plegisol® (Abbott), modifizierte Krebs-Lösung mit hohem K-Anteil (34 mäq/l) und ähnliche kardioplege Lösungen. Die Temperaturen für die Aufbewahrung von Transplantationsherzen können im Bereich von 0ºC bis etwa 10ºC liegen, insbesondere von etwa 0ºC bis etwa 7ºC und ganz besonders von etwa 0ºC bis etwa 4ºC.
Die Menge an den einzelnen Wirkstoffen, der kardioplegen Lösung und der Verbindung der Formel (I-b) bei dem Verfahren ist so bemessen, daß man bei der Verabreichung eine wirksame Kardioplegie erzielt, gleichzeitig mit einer wirksamen Verhinderung bzw. Begrenzung von Reperfusionsschäden bei der Reperfusion des Herzens, an dem operiert wurde, und der Reperfusion des verpflanzten Herzens. So kann beispielsweise die Menge an der Verbindung der Formel (I-b) in der kardioplegen Lösung zur Verwendung bei dem Verfahren typischerweise im Bereich von etwa 0,1 uM bis etwa 10 pM, insbesondere von etwa 0,5 uM bis etwa 5 uM und ganz besonders von etwa 0,8 uM bis etwa 2 uM liegen.
Die dem ein Spenderherz empfangenden Patienten verabreichte Menge an Wirkstoff, d. h. an der Verbindung der Formel (I-b), ist so bemessen, daß man bei der Reperfusion des verpflanzten Herzens Reperfusionsschäden wirksam verhindert bzw. begrenzt. So kann die in dem vorliegenden Verfahren verwendete Menge an der Verbindung der Formel (I-b) typischerweise im Bereich von etwa 0,01 bis etwa 100 mg/kg Körpergewicht, insbesondere von etwa 0,1 bis etwa 10 mg/kg Körpergewicht und ganz besonders von etwa 0,2 bis etwa 5 mg/kg Körpergewicht liegen.
Noch ein weiterer durch die vorliegende Erfindung bereitgestellter Aspekt ist ein Verfahren zur Aufbewahrung eines Herzens zur Transplantation in einer gekühlten kardioplegen Lösung, bei dem man der kardioplegen Lösung eine zur Verlängerung der Aufbewahrung des Herzens wirksame Menge einer wie oben definierten Verbindung der Formel (I-b) zusetzt.
Ein besonders interessantes Merkmal des Verfahrens zur Aufbewahrung eines Herzens für die Transplantation ist es, daß sich die Dauer einer erfolgreichen Lagerung eines zu verpflanzenden Herzens in einer eine Verbindung der Formel (I-b) enthaltenden Lösung drastisch verlängern läßt. Während Herzen für die Transplantation in einer gekühlten, gewöhnlichen kardioplegen Lösung ohne eine Verbindung der Formel (Ib) etwa 4 Stunden lang erfolgreich gelagert werden können, ermöglicht das neue Verfahren zur Aufbewahrung eines zu verpflanzenden Herzens in einer gekühlten, eine Verbindung der Formel (I-b) enthaltenden kardioplegen Lösung eine Lagerung von wenigstens 24 Stunden, wobei das Herz anschließend erfolgreich verpflanzt werden kann. Somit stellt die vorliegende Erfindung weiterhin ein Verfahren zur gekühlten Aufbewahrung eines zu verpflanzenden Herzens in einer kardioplegen Lösung bereit, insbesondere in einer oben spezifisch erwähnten kardioplegen Lösung, die eine das Spenderherz wirksam schützende Menge einer Verbindung der Formel (I-b) enthält. Eine das Spenderherz wirksam schützende Menge einer Verbindung der Formel (I-b) in der kardioplegen Lösung zur Verwendung bei dem vorliegenden Verfahren zur Aufbewahrung eines Herzens zur Transplantation kann typischerweise im Bereich von etwa 0,1 uM bis etwa 10 uM, insbesondere von etwa 0,5 uM bis etwa 5 uM und ganz besonders von etwa 0,8 uM bis etwa 2 uM liegen.

EXPERIMENTELLER TEIL

Beispiel 1 Darstellung von (-)-2-(Aminocarbonyl)-N- (4-amino-2,6-dichlorphenyl)-4-[5,5- bis(4-fluorphenyl)pentyl]-1-piperazinacetamid

Eine Mischung von 108, 4 Teilen (-)-(S,S)-N¹,N²-Bis (1- phenylethyl)-1,2-ethandiamin, 93,8 Teilen 2,3- Dibrompropionsäureamid, 334,5 Teilen Kaliumcarbonat und 2958 Teilen Methylbenzol wurde an einem Wasserabscheider 24 Stunden lang unter Rückfluß erhitzt. Die Reaktionsmischung wurde heiß filtriert und der Niederschlag zwischen Wasser und Dichlormethan verteilt. Die organische Phase wurde abgetrennt und mit dem Filtrat vereinigt. Das Ganze wurde getrocknet, filtriert und eingedampft. Der Rückstand wurde säulenchromatographisch gereinigt (Lichroprep RP18; H&sub2;O (0,5% CH&sub3;COONH&sub4;)/CH&sub3;CN 55 : 45). Von der gewünschten Fraktion wurde das Laufmittel abgedampft, wodurch man 20, 8 Teile (15,4%) [1(S),2A,4(S)]-1,4-Bis(1-phenylethyl)-2-piperazincarbonsäureamid (Zwischenpr. 1) erhielt.
Eine Mischung von 20,8 Teilen Zwischenpr. (I) und 198 Teilen Methanol wurde bei Normaldruck und Raumtemperatur mit 2 Teilen Palladium auf Aktivkohle- Katalysator (10%) hydriert. Nachdem die berechnete Menge an Wasserstoff aufgenommen worden war, wurde der Katalysator abfiltriert und das Filtrat eingedampft, wodurch man 7,8 Teile (98,0%) (+ )-2-Piperazincarbonsäureamid (Zwischenpr. 2) erhielt.
Eine Mischung von 3,9 Teilen Zwischenprodukt (2), 8,3 Teilen 5,5-Bis(4-fluorphenyl)pentaldehyd, 2 Teilen einer Lösung von Thiophen in Methanol (4%) und 198 Teilen Methanol wurde bei Normaldruck und 50ºC mit 2 Teilen Palladium auf Aktivkohle-Katalysator (10%) hydriert. Nachdem die berechnete Menge an Wasserstoff aufgenommen worden war, wurde der Katalysator abfiltriert und das Filtrat eingedampft. Der Rückstand wurde in Ethanol in das Ethandioatsalz umgewandelt. Das Salz wurde aus einer Mischung aus Ethanol und Methanol umkristallisiert. Das Produkt wurde abfiltriert und getrocknet, wodurch man 8,82 Teile (61,6%) (+)-4-[5,5- Bis(4-fluorphenyl)pentyl]-2-piperazincarbonsäureamidethandioat (1 : 1); [α]²&sup0;D = +10,02º (c = 0,5% in DMF) (Zwischenpr. 3) erhielt.
8,82 Teile Zwischenprodukt (3) wurden in Wasser aufgenommen und mit NH&sub4;OH in die freie Base umgewandelt. Die Base wurde mit Dichlormethan extrahiert (3x), und die vereinigten Extrakte wurden getrocknet, filtriert und eingedampft. Der Rückstand wurde mit 6,5 Teilen 1- Chlor-N-(2,6-dichlor-4-nitrophenyl)acetamid, 3,75 Teilen N,N-Diethylethanamin und 113 Teilen N,N-Dimethylformamid versetzt. Das Ganze wurde über das Wochenende bei 70ºC gerührt und dann eingedampft. Der Rückstand wurde zwischen NaHCO&sub3; (5%, wäßrig) und Dichlormethan verteilt. Die organische Phase wurde abgetrennt, getrocknet, filtriert und eingedampft. Der Rückstand wurde säulenchromatographisch gereinigt (Kieselgel; CH&sub2;Cl&sub2;/(CH&sub2;Cl&sub2; + 10% CH&sub3;OH) 70 : 30). Das Laufmittel der gewünschten Fraktion wurde abgedampft und der Rückstand in 2-Propanol in das Hydrochloridsalz umgewandelt. Das Produkt wurde abfiltriert und im Vakuum bei 50ºC getrocknet, wodurch man 3,78 Teile (30,5%)(-)-2- (Aminocarbonyl)-4-[5,5-bis(4-fluorphenyl)pentyl]-N-(2,6- dichlor-4-nitrophenyl)-1-piperazinacetamidmonohydrochlorid; [α]²&sup0;D = -18,47º (c = 0,5% in CH&sub3;OH) (Zwischenpr. 4) erhielt.
Eine Mischung von 3,6 Teilen Zwischenprodukt (4), 1 Teil einer Lösung von Thiophen in Methanol (4%) und 119 Teilen Methanol wurde bei Normaldruck und Raumtemperatur mit 2 Teilen Palladium auf Aktivkohle- Katalysator (10%) hydriert. Nachdem die berechnete Menge an Wasserstoff aufgenommen worden war, wurde der Katalysator abfiltriert und das Filtrat eingedampft.
Der Rückstand wurde säulenchromatographisch gereinigt (Lichroprep RP-18; H&sub2;O (0,5% CH&sub3;COONH&sub4;)/CH&sub3;OH/CH&sub3;CN 40 : 20 : 40). Die gewünschten Fraktionen wurden eingedampft und das Produkt wurde aus der so erhaltenen wäßrigen Lösung auskristallisieren gelassen. Es wurde abfiltriert und im Vakuum bei 60ºC getrocknet, wodurch man 1,49 Teile (43,4%)(-)-2-(Aminocarbonyl)-N-(4- amino-2,6-dichlorphenyl)-4-[5,5-bis(4-fluorphenyl)- pentyl]-1-piperazinacetamid-hemihydrat; Schmp. 123,4ºC; [α]²&sup0;D = -29,63º (c = 0,5% in CH&sub3;OH) (Verb. I-b) erhielt.

Beispiel 2: Biologisches Beispiel

Hundeherzen wurden entweder mit hyperkalämischer kardiopleger NIH-Lösung (Gruppe I, n = 6) oder mit der selben kardioplegen Lösung nach Zugabe von 2-(Aminocarbonyl)-N-(4-amino-2,6-dichlorphenyl)-4-[5,5- bis(4-fluorphenyl)pentyl]-1-piperazinacetamid (Gruppe II, n = 6) angehalten. Die Herzen wurden 24 Stunden lang bei 0-5ºC (Eiswasser) in der kardioplegen Lösung aufbewahrt und dann orthotopisch verpflanzt. Den Empfängerhunden wurde vor der Transplantation 0,1 mg/kg Körpergewicht 2-(Aminocarbonyl)-N-(4-amino-2,6-dichlorphenyl)-4-[5,5-bis(4-fluorphenyl)pentyl]-1-piperazinacetamid verabreicht.
Der myokardiale Gehalt an energiereichen Phosphaten (high energy phosphates, HEP) wurde durch Reihenbiopsien bestimmt. In der Gruppe I waren die ATP- und CrP-Konzentrationen nach 24stündiger Lagerung 50% bzw. 18% des Kontrollwertes. Während einer 60minütigen Reperfusion an kardiopulmonarem Bypass (cardiopulmonary bypass, CPB) nahm der HEP-Gehalt ab (p < 0,05), und bei den Tieren war nach der Transplantation die Kontraktion des Myokards gestört ("stone heart"). In der Gruppe II waren die ATP- und CrP-Konzentrationen nach 24stündiger Lagerung 82% bzw. 28% des Kontrollwertes (p < 0,05 im Vergleich zu Gruppe I). Nach der Transplantation blieb der HEP-Gehalt stabil, und alle Herzen konnten ohne inotropische Unterstützung mit Ausnahme von Isoprenalin vom CPB abgenommen werden. Es wurde somit mit der Kombination von Kardioplegie und Nukleosidtransportinhibierung eine optimale myokardiale Konservierung erzielt.

Beispiel 3: Zusammensetzungsbeispiele

1. Injektionslösung

Wirkstoff* 1 g
0,1 N Salzsäure 0,04 l
2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin 50 g
Natriumchlorid 5,5 g
1 N Natronlauge ad pH 3,7-3,9
Wasser ad 1 l
* 2-(Aminocarbonyl)-N-(4-amino-2,6-dichlorphenyl)-4- [5,5-bis(4-fluorphenyl)pentyl]-1-piperazinacetamid.

Herstellungsverfahren

50 g HP-β-cyclodextrin werden in 0,5 l Wasser gelöst. Dann werden nacheinander 0,04 l 0,1 N Salzsäure und 1 g 2-(Aminocarbonyl)-N-(4-amino-2,6-dichlorphenyl)-4-[5,5- bis(4-fluorphenyl)pentyl]-1-piperazinacetamid zugegeben. Das Ganze wird gerührt, bis man eine klare Lösung erhält. Mit Wasser wird auf 0,9 l verdünnt, und dann werden unter Rühren 5,5 Teile Natriumchlorid gelöst. Die Azidität wird mit 1 N Natronlauge auf einen pH-Wert von 3,7-3,9 eingestellt. Die Lösung wird mit Wasser auf 1 l verdünnt, wodurch man eine Injektionslösung mit 1 mg/ml Wirkstoff erhält.

2. Orale Lösung

Wirkstoff* 1 g
2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin 50 g
0,1 N Salzsäure 0,04 l
Sorbit (70%) 0,1 l
Propylenglykol 0,1 l
Dinatriumethylendiamintetraacetat 2 g
Benzoesäure 3 g
Mundwassergeschmack 1 g
1 N Natronlauge ad pH 4,0
Gereinigtes Wasser ad 1 l
* 2-(Aminocarbonyl)-N-(4-amino-2,6-dichlorphenyl)-4- [5,5-bis(4-fluorphenyl)pentyl]-1-piperazinacetamid.

Herstellungsverfahren

50 g HP-β-cyclodextrin werden in 0,6 l Wasser gelöst. Dann werden nacheinander 0,04 l 0,1 N Salzsäure und 1 g 2-(Aminocarbonyl)-N-(4-amino-2,6-dichlorphenyl)-4-[5,5- bis(4-fluorphenyl)pentyl]-1-piperazinacetamid zugegeben. Das Ganze wird gerührt, bis man eine klare Lösung erhält. Unter Rühren werden 2 g Na&sub2;(EDTA) gelöst, und dann wird 0,1 l Sorbit (70%) zugegeben. Die homogene Lösung wird nacheinander mit einer Lösung von. 3 g Benzoesäure in 0,1 l Propylenglykol und 1 g Mundwassergeschmack versetzt. Die Azidität wird mit 1 N Natronlauge auf einen pH-Wert von 3,7-3,9 eingestellt. Die Lösung wird mit Wasser auf 1 l verdünnt, wodurch man eine orale Lösung mit 1 mg/ml Wirkstoff erhält.

Claims

1. Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend einen inerten Trägerstoff und, als Wirkstoff, eine zur Verhinderung bzw. Begrenzung von Reperfusionsschäden wirksame Menge an enantiomerenreinem (l)-(-)-2-(Aminocarbonyl)-N-(4-amino-2,6-dichlorphenyl)-4-[5,5-bis(4-fluorphenyl)pentyl]-1-piperazinacetamid, ein pharmazeutisch unbedenkliches Säureadditionssalz davon oder ein Hydrat davon.

2. Zusammensetzung nach Anspruch 1, weiterhin enthaltend eine thrombolytisch wirksame Menge eines Thrombolytikums.

3. Zusammensetzung nach Anspruch 1 oder 2, weiterhin enthaltend von 1% bis 40% eines Cyclodextrins oder eines Etherderivates davon.

4. Zusammensetzung nach Anspruch 3, enthaltend von 0,01 % bis 1,0% des Wirkstoffs (l)-(-)-2- (Aminocarbonyl)-N-(4-amino-2,6-dichlorphenyl)-4- [5,5-bis(4-fluorphenyl)pentyl]-1-piperazinacetamid.

5. Verfahren zur Herstellung einer Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß man den Wirkstoff innig mit dem Trägerstoff mischt.

6. Produkt, enthaltend ein Thrombolytikum und eine wie in Anspruch 1 definierte Zusammensetzung, als Kombinationspräparat zur gleichzeitigen, getrennten oder aufeinanderfolgenden Verwendung in der thrombolytischen Therapie mit gleichzeitiger Verhinderung bzw. Begrenzung von Reperfusionsschäden.

7. Verfahren zur Darstellung der enantiomerenreinen Verbindung (l)-(-)-2-(Aminocarbonyl)-N-(4-amino- 2,6-dichlorphenyl)-4-[5,5-bis(4-fluorphenyl)- pentyl]-1-piperazinacetamid

dadurch gekennzeichnet,

daß man (-)-(S,S)-N¹,N²-Bis(1-phenylethyl)-1,2- ethandiamin (II) mit 2,3-Dibrompropionsäureamid (III) in einem reaktionsinerten Lösungsmittel in Gegenwart einer Base cyclisiert und so ein Zwischenprodukt der Formel

erhält, das Zwischenprodukt (IV) unter einer Wasserstoffatmosphäre in einem Alkanol in Gegenwart eines Hydrierungskatalysators hydrogenolisiert;

das so erhaltene (+)-2-Aminocarbonylpiperazin (V) mit 5,5-Bis(4-fluorphenyl)pentaldehyd unter einer Wasserstoffatmosphäre in einem Alkanol in Gegenwart eines Hydrierungskatalysators reduktiv N-alkyliert;

das so erhaltene Piperazinderivat der Formel

mit einem Alkylierungsmittel der Formel

wobei W für eine reaktive Abgangsgruppe steht, in einem reaktionsinerten Lösungsmittel in Gegenwart einer Base N-alkyliert; und

das so erhaltene Zwischenprodukt der Formel

in Gegenart eines Reduktionsmittels in einem reaktionsinerten Lösungsmittel reduziert.