DE69019423T2

DE69019423T2 - Epoxybernsteinsäurederivate, verwendbar als spezifische Hemmer von Cathepsin B.

Info

Publication number: DE69019423T2
Application number: DE69019423T
Authority: DE
Inventors: Kazunori Hanada; Mitsuo Murata; Chihiro Yokoo
Original assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1989-05-18
Filing date: 1990-05-16
Publication date: 1995-09-14
Anticipated expiration: 2010-05-17
Also published as: CA2016261A1; KR900018083A; JPH0372478A; EP0407017A1; US5068354A; EP0407017B1; DE69019423D1; ATE122683T1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft Epoxybernsteinsäurederivate und insbesondere Epoxybernsteinsäurederivate, die Cathepsin B spezifisch inhibieren, mit niedriger Toxizität und die Synthese-Zwischenprodukte davon.
Es wird angenommen, daß Calcium-aktivierte neutrale Protease (CANP), Cathepsin B und Cathepsin L, die zu den Thiol-Proteasen gehören, mit der Zersetzung des muskulären Strukturproteins bei malignen muskulären Atrophieerkrankungen, wie muskulärer Dystrophie und distaler Myopathie, assoziiert sind.
N-(L-3-trans-Carboxyoxiran-2-carbonyl)-L-leucylagmatin [Agric. Biol. Chem., Bd. 42, S. 523-528 (1978)], Epoxybernsteinsäuredipeptidderivate (GB-PS 2 046 730) und ähnliche waren in der Vergangenheit als Verbindungen bekannt, welche verschiedene Thiol-Proteasen inhibieren. Bis jetzt sind jedoch keine Epoxybernsteinsäurederivate bekannt, die spezifisch nur eine der Thiol-Proteasen inhibieren.
Als Ergebnis von ausgedehnten Forschungen mit Verbindungen mit einem Epoxyring haben die benannten Erfinder gefunden, daß die Verbindungen, die aus Verbindungen hergestellt wurden, welche unter die Strukturformel der GB-PS 2 046 730 fallen, aber nicht spezifisch in der Patentschrift beschrieben werden, Cathepsin B spezifisch inhibieren, im Gegensatz zu den bekannten Verbindungen. Dadurch wurde die vorliegende Erfindung gemacht.

ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG

Der vorliegenden Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, Epoxybernsteinsäurederivate, die durch die Formel:
dargestellt werden, worin R¹ ein Wasserstoffatom oder eine Alkylgruppe, die 1 bis 4 Kohlenstoffatome enthält, bedeutet, und die pharmazeutisch annehmbaren Salze davon zur Verfügung zu stellen.
Erfindungsgemäß sollen weiterhin die synthetischen Zwischenprodukte für die Verbindung der Formel I zur Verfügung gestellt werden. Diese Zwischenprodukte sind Epoxybernsteinsäurederivate, die durch die Formel:
dargestellt werden, worin R² und R³ gleich oder unterschiedlich sind und je eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder eine Schutzgruppe für die Carboxylgruppe bedeuten.

GENAUE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG

Bei der vorliegenden Erfindung bedeutet die Alkylgruppe, die 1 bis 4 Kohlenstoffatome enthält, eine geradkettige Alkylgruppe, wie beispielsweise eine Methylgruppe, eine Ethylgruppe, eine Propylgruppe und eine Butylgruppe. Die Schutzgruppe der Carboxylgruppe ist eine solche, wie sie üblicherweise auf dem Gebiet der Peptidsynthese verwendet wird, beispielsweise eine Benzylgruppe, eine p-Methoxybenzylgruppe, eine p-Nitrobenzylgruppe, eine t-Butylgruppe und eine Benzhydrylgruppe.
Die erfindungsgemäßen pharmazeutisch annehmbaren Salze sind Salze mit anorganischen Basen einschließlich Natrium, Kalium, Magnesium, Ammonium und ähnliche, Salze mit organischen Basen (beispielsweise Triethylamin und Cyclohexylamin), Salze mit basischen Aminosäuren (beispielsweise Arginin und Lysin), Salze mit Mineralsäuren (beispielswiese Schwefelsäure, Chlorwasserstoffsäure und Phosphorsäure), Salze mit organischen Säuren (beispielsweise Essigsäure, Milchsäure, Weinsäure, Fumarsäure und Maleinsäure) und Salze mit sauren Aminosäuren (beispielsweise Glutaminsäure und Asparaginsäure).
Bevorzugte Verbindungen der Formel I sind N-(L-3-trans-Ethoxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L-isoleucyl-L-prolin, N-(L-3-trans-Carboxyoxiran-2-carbonyl)-L-isoleucyl-L-prolin, N-(L-3-trans-Ethoxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L-isoleucyl-L-prolin-Natriumsalz und N-(L-3-trans- Methoxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L-isoleucyl-L-prolin.
Die Verbindungen der Formel I können beispielsweise nach dem folgenden Verfahren hergestellt werden.
Die Verbindung der folgenden Formel:
worin R² die oben gegebene Definition besitzt, wird mit einer Verbindung der folgenden Formel:
worin R³ die oben gegebene Definition besitzt, in einem Lösungsmittel (beispielsweise Chloroform, Ethylacetat und N,N-Dimethylformamid) gemäß einem Verfahren, das üblicherweise auf dem Gebiet der Peptidsynthese- Chemie verwendet wird, wie einem N,N-Dicyclohexylcarbodiimid-Verfahren, einem gemischten Anhydrid-Verfahren und einem aktivierten Ester-Verfahren, kondensiert, wobei die Verbindung der Formel II erhalten wird.
Die erfindungsgemäße Verbindung der Formel II kann der Entfernung der Alkylgruppe und/oder der Schutzgruppe der Carboxylgruppe nach einem Verfahren, das üblicherweise auf dem Gebiet der Peptidsynthese- Chemie verwendet wird, unterworfen werden, wobei die erfindungsgemäße Verbindung der Formel I erhalten wird. Beispiele für ein solches Verfahren sind die katalytische Reduktion und die katalytische Übertragungshydrierung (CTH) in einem Lösungsmittel, wie Methanol, Ethanol und N,N-Dimethylformamid, mit einem Katalysator, wie Palladium-Kohlenstoff und Palladium- Schwarz, ein Verfahren, bei dem Säuren verwendet werden (beispielsweise Trifluoressigsäure, Methansulfonsäure, Bromwasserstoffsäure und Chlorwasserstoffsäure), und die Hydrolyse. Die Alkylgruppe für R¹ in der Formel I ist gleich wie die Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen für R² in der Formel II.
Die Verbindungen der Formel III können nach dem Verfahren, wie es in Chem. Pharm. Bull., Bd. 35, S. 1098 bis 1104 (1987) beschrieben wird, hergestellt werden. Die Verbindungen der Formel IV können ebenfalls aus Isoleucin und Prolin gemäß einem Verfahren, das üblicherweise auf dem Gebiet der Peptidsynthese-Chemie verwendet wird, hergestellt werden.
Die so erhaltenen Verbindungen der Formel I inhibieren CANP und Papain, welches ebenfalls zu den Thiol-Proteasen gehört, kaum, aber inhibieren Cathepsin B stark spezifisch. Bei der Verwendung der Verbindungen der Formel I für die Behandlung von muskulären Atrophieerkrankungen werden diese Verbindungen oral oder parenteral in Form von Tabletten, Pillen, Kapseln, Granulaten und Injektionspräparaten verabreicht. Diese Präparate können nach an sich bekannten Verfahren unter Verwendung von üblichen Zusatzstoffen, wie Füllstoffen, Bindemitteln, Zerfallsmitteln, pH-Einstellungsmitteln und Solubilisatoren, hergestellt werden.
Die Dosis der Verbindung der Formel I für die Therapie eines Patienten hängt von dem Alter des Patienten, der Art und dem Zustand der Krankheit ab, liegt aber im allgemeinen im Bereich von 10 bis 20.000 mg für eine einzige Dosis oder für mehrfach unterteilte Dosen pro Tag.
Die Testbeispiele sind im folgenden angegeben.

Testbeispiel 1 [Inhibitoraktivität gegenüber CANP]

Die Aktivität wurde gemäß dem Verfahren von S. Ishiura et al. [J. Biochem., Bd. 84, S. 225 (1978)] bestimmt.
Je 0,45 ml der Reaktionslösungen, welche 25 mM 2-Mercaptoethanol, 5 mM Calciumchlorid, 0,1 M Natriumglycerophosphat-HCl (pH 7,5), 0,24% Alkali-denaturiertes Casein, 1% Dimethylsulfoxid und verschiedene Konzentrationen des Test-Arzneimittels enthielten, wurden bei 30ºC während 5 Minuten vorinkubiert, und 5 ug uCANP (50 ul) (Calpain I, Nacalai Tesque Inc.) wurden zugegeben, um die Reaktion in Gang zu setzen. Nach der Inkubation bei 30ºC während 20 Minuten wurde die Reaktion durch Zugabe von 0,5 ml 10%iger Trichloressigsäure beendet. Nachdem bei Raumtemperatur während 60 Minuten stehengelassen wurde, wurde das Gemisch bei 3000 x g während 5 Minuten zentrifugiert, und die Absorption bei 280 nm des Überstands wurde bestimmt. Die verbleibende Aktivität wurde erhalten, indem der Blindwert von dem obigen Wert abgezogen wurde, wobei der Blindwert auf ähnliche Weise wie oben erhalten wurde, jedoch 10%ige Trichloressigsäure vor der Zugabe von uCANP zugegeben wurde. Die Konzentration des Test-Arzneimittels, die für eine 50%ige Inhibierung (IC&sub5;&sub0;) erforderlich ist, wurde aus der Inhibierungsrate berechnet, welche unter Verwendung des Wertes erhalten wurde, der auf ähnliche Weise, wie oben beschrieben, aber ohne Test-Arzneimittel, gemessen wurde. Der IC&sub5;&sub0;-Wert der in Beispiel 5 erhaltenen Verbindung war höher als 200.000 nM.

Testbeispiel 2 [Inhibitoraktivität gegenüber Papain]

Die Aktivität wurde gemäß dem Verfahren von A.J. Barrett et al. [Biochem. J., Bd. 201, S. 189 (1982)] bestimmt.
Zu je 0,95 ml der Reaktionslösungen, welche 2,5 mM 2-Mercaptoethanol, 1 mM Dinatriumethylendiamintetraacetat, 0,1 M Natriumkaliumphosphat (pH 6,8), 0,1% Brij-35 (Nacalai Tesque Inc.), 1% Dimethylsulfoxid und verschiedene Konzentrationen des Test-Arzneimittels enthielten, wurden 25 ul 400 nM Papainlösung (Sigma Chemical Co.) zugegeben, und das Gemisch wurde bei 40ºC während 3 Minuten vorinkubiert. Danach wurden 25 ul von 200 uM Benzyloxycarbonyl-L-phenylaranyl-L-arginin-4-methylcumaryl-7-amid (Peptide Institute Inc.) zugegeben, um die Reaktion in Gang zu setzen. Nach der Inkubation bei 40ºC während 10 Minuten wurde die Reaktion durch Zugabe von 1 ml von 100 mM Natriumchloracetat in 100 mM Natriumacetat (pH 4,3) beendet. Die Fluoreszenz des freigesetzten 7-Amino-4-methylcumarins wurde unter Verwendung eines Shimazu-Fluorimeters RF-5000 mit Anregung bei 380 nm bestimmt, und die Emission wurde bei 440 nm gemessen. Die Konzentration des Test-Arzneimittels, die für eine 50%ige Inhibierung (IC&sub5;&sub0;) erforderlich ist, wurde aus der Inhibierungsrate berechnet, wobei der Wert, welcher auf ähnliche Weise wie oben, aber ohne Test-Arzneimittel, gemessen wurde, verwendet wurde. Der IC&sub5;&sub0;-Wert der gemäß Beispiel 5 erhaltenen Verbindung betrug 16.000 nM.

Testbeispiel 3 [Inhibitoraktivität gegenüber Cathepsin B]

Die Aktivität wurde gemäß dem Verfahren von A.J. Barrett et al. [Biochem. J., Bd. 201, S. 189 (1982)] gemessen.
Zu je 0,95 ml der Reaktionslösungen, welche 2,5 mM 2-Mercaptoethanol, 1 mM Dinatriumethylendiamintetraacetat, 0,1 M Natriumkaliumphosphat-Puffer (pH 6,0), 0,1% Brij-35 (Nacalai Tesque Inc.), 1% Dimethylsulfoxid und verschiedene Konzentrationen des Test-Arzneimittels enthielten, wurden 25 ul einer 200 nM Cathepsin-B-Lösung (Sigma Chemical Co.) zugegeben, und das Gemisch wurde bei 40ºC während 10 Minuten vorinkubiert. Danach wurden 25 ul von 200 uM Benzyloxycarbonyl-L-phenylaranyl-L-arginin- 4-methylcumaryl-7-amid (Peptide Institute Inc.) zugegeben, um die Reaktion in Gang zu setzen. Nach der Inkubation bei 40ºC während 10 Minuten wurde die Reaktion durch Zugabe von 1 ml von 100 mM Natriumchloracetat in 100 mM Natriumacetat (pH 4,3) beendet. Die Fluoreszenz des freigesetzten 7-Amino- 4-methylcumarins wurde unter Verwendung eines Shimazu-Fluorimeters RP-5000 mit Anregung bei 380 nm bestimmt, und die Emission wurde bei 440 nm gemessen. Die Konzentration an Test-Arzneimittel, die für eine 50%ige Inhibierung (IC&sub5;&sub0;) erforderlich ist, wurde aus der Inhibierungsrate berechnet. Die Inhibierungsrate wurde unter Verwendung des Wertes, der auf ähnliche Weise wie oben, aber ohne Test-Arzneimittel, erhalten wurde, berechnet. Als Vergleichs-Arzneimittel wurde der N-(L-3-trans-Carboxyoxiran-2-carbonyl)-L-isoleucyl-L-prolin-methylester verwendet, der unter die Strukturformel des obigen britischen Patents fällt und der die nächste Verbindung zu der Verbindung der Formel I hinsichtlich der Struktur ist. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 angegeben. Tabelle 1 Inhibitoraktivitätswert [IC&sub5;&sub0; (nM)] Arzneimittel Cathepsin B

Bemerkung:

A: Verbindung, erhalten gemäß Beispiel 5
B: N-(L-3-trans-Carboxyoxiran-2-carbonyl)-L-isoleucyl- L-prolin-methylester (Referenzbeispiel)
Aus den obigen Testbeispielen ist erkennbar, daß die Verbindung der Formel I starke und spezifische Inhibitoraktivität gegenüber Cathepsin B aufweist.
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung genauer.

Beispiel 1

Herstellung von N-(L-3-trans-Ethoxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L- isoleucyl-L-prolin-benzylester

In 5 ml 4 N Chlorwasserstoffsäure in Dioxan wurden 437 mg (1,0 mmol) N-t-Butoxycarbonyl-L-isoleucyl-L-prolin-benzylester gelöst, und die Lösung wurde bei Raumtemperatur 1 Stunde lang gerührt. Die Reaktionslösung wurde zur Trockene bei verringertem Druck eingedampft, und der Rückstand wurde in 4 ml Chloroform gelöst, und 323 mg (1,23 mmol) L-trans- Epoxybernsteinsäureethyl-p-nitrophenylester wurden zugegeben. Eine Lösung aus 116 mg (1,2 mmol) Triethylamin in 1 ml Chloroform wurde unter Eiskühlung und Rühren zugegeben, und das Gemisch wurde unter Eiskühlung 2 Stunden lang und dann bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Zu der Reaktionslösung wurden 100 ml Ethylacetat gegeben, und das Gemisch wurde zweimal mit 100 ml Salzlösung gewaschen. Die organische Schicht wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und bei verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie an Silicagel (Eluierungsmittel: Ethylacetat/n-Hexan = 1 : 1) gereinigt, wobei 387 mg der Titelverbindung erhalten wurden.
IR νreinmax cm&supmin;¹:
3273, 2966, 1746, 1693, 1629, 1542, 1455, 1277, 1200, 1171, 1026
NMR (CDCl&sub3;) δ (ppm): 0,85 (3H, t, J=7Hz); 0,95-1,18 (1H, m); 0,97 (3H, d, J=7Hz); 1,32 (3H, t, J=7Hz); 1,35-1,60 (1H, m); 1,70-2,40 (5H, m); 3,47 (1H, d, J=2Hz); 3,60-3,90 (2H, m); 3,65 (1H, d, J=2Hz); 4,26 (2H, dq, J=2, 7Hz); 4,50-4,70 (2H, m); 5,13 (1H, d, J=12Hz); 5,20 (1H, d, J=12Hz); 6,72 (1H, d, J=9Hz); 7,35 (5H, s)
MS (EI); m/e: 460 (M&spplus;)

Beispiel 2

Herstellung von N-(L-3-trans-Benzyloxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L-isoleucyl-L-prolin-methylester

Auf ähnliche Weise wie im Beispiel 1 wurden 2,00 g (5,8 mmol) N-t-Butoxycarbonyl-L-isoleucyl-L-prolin-methylester mit 10 ml 4 N Chlorwasserstoffsäure in Dioxan zur Entfernung der t-Butoxycarbonylgruppe behandelt, und dann wurde das entstehende Produkt mit 2,19 g (6,4 mmol) L-trans-Epoxybernsteinsäurebenzyl-p-nitrophenylester in Anwesenheit von 650 mg (6,4 mmol) Triethylamin in 12 ml Chloroform kondensiert. Nach einer ähnlichen Aufarbeitung wie im Beispiel 1 ergab die Reinigung durch Säulenchromatographie an Silicagel (Eluierungsmittel: Ethylacetat/n-Hexan = 1 : 1) 2,39 g der Titelverbindung.
IR νreinmax cm&supmin;¹: 3276, 2965, 1747, 1693, 1627, 1541, 1451, 1280, 1246, 1195, 897
NMR (CDCl&sub3;) δ (ppm): 0,90 (3H, t, J=7Hz); 0,95-1,17 (1H, m); 0,98 (3H, d, J=7Hz); 1,39-1,60 (1H, m); 1,75-2,36 (5H, m); 3,52 (1H, d, J=2Hz); 3,57-3,90 (2H, m); 3,69 (1H, d, J=2Hz); 3,72 (3H, s); 4,45-4,55 (1H, m); 4,61 (1H, dd, J= 8, 9Hz); 5,17 (1H, d, J=12Hz); 5,27 (1H, d, J=12Hz); 6,74 (1H, d, J=9Hz); 7,38 (5H, s)
MS (EI); m/e: 446 (M&spplus;)

Beispiel 3

Herstellung von N-(L-3-trans-Benzyloxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L-isoleucyl-L-prolin-benzylester

Auf ähnliche Weise wie im Beispiel 1 wurden 427 mg (1,0 mmol) N-t-Butoxycarbonyl-L-isoleucyl-L-prolin-benzylester mit 5 ml 4 N Chlorwasserstoffsäure in Dioxan zur Entfernung der t-Butoxycarbonylgruppe behandelt, und dann wurde das entstehende Produkt mit 385 mg (1,1 mmol) L- trans-Epoxybernsteinsäurebenzyl-p-nitrophenylester in Anwesenheit von 114 mg (1,1 mmol) Triethylamin in 5 ml Chloroform kondensiert. Nach einer ähnlichen Aufarbeitung wie im Beispiel 1 erfolgte die Reinigung durch Säulenchromatographie an Silicagel (Eluierungsmittel: Ethylacetat/n-Hexan = 2 : 3), wobei 393 mg der Titelverbindung erhalten wurden.
IR νreinmax cm&supmin;¹: 3725, 2965, 1733, 1688, 1652, 1541, 1456, 1384, 1348, 1168, 1102, 897
NMR (CDCl&sub3;) δ (ppm): 0,85 (3H, t, J=7Hz); 0,95 (3H, d, J=7Hz); 0,95-1,15 (1H, m); 1,33-1,58 (1H, m); 1,70-2,35 (5H, m); 3,51 (1H, d, J=2Hz); 3,58-3,88 (2H, m); 3,68 (1H, d, J=2Hz); 4,50-4,55 (2H, m); 5,13 (1H, d, J=12Hz); 5,15 (1H, d, J=12Hz); 5,20 (1H, d, J=12Hz); 5,27 (1H, d, J=12Hz); 6,71 (1H, d, J=9Hz); 7,35 (5H, s); 7,39 (5H, s)
MS (EI); m/e: 522 (M&spplus;)

Beispiel 4

Herstellung von N-(L-3-trans-Methoxycarbonyloxiran-2-carbonyl)- L-isoleucyl-L-prolin-benzylester

Auf ähnliche Weise wie im Beispiel 1 wurden 1,41 g (3,4 mmol) N-t-Butoxycarbonyl-L-isoleucyl-L-prolin-benzylester mit 10 ml 4 N Chlorwasserstoffsäure in Dioxan zur Entfernung der t-Butoxycarbonylgruppe behandelt, und dann wurde die entstehende Verbindung mit 990 mg (3,7 mmol) L-trans-Epoxybernsteinsäuremethyl-p-nitrophenylester in Anwesenheit von 375 mg (3,7 mmol) Triethylamin in 30 ml Chloroform kondensiert. Nach einer ähnlichen Aufarbeitung wie im Beispiel 1 erfolgte die Reinigung durch Säulenchromatographie an Silicagel (Eluierungsmittel: Ethylacetat/n-Hexan = 1 : 1), wodurch 1,25 g der Titelverbindung erhalten wurden.
IR νKBrmax cm&supmin;¹: 3274, 2964, 1747, 1693, 1627, 1542, 1446, 1352, 1210, 1173, 1003, 895
NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 0,79 (3H, t, J=7Hz); 0,85 (3H, d, J=7Hz); 0,92-1,25 (1H, m); 1,35-1,60(1H, m); 1,65-2,30 (5H, m); 3,50-3,85 (2H, m); 3,63 (1H, d, J=2Hz); 3,71 (3H, s); 3,77 (1H, d, J=2Hz); 4,33-4,50 (2H, m); 5,12 (2H, s); 7,36 (5H, s); 8,78 (1H, d, J=8Hz)
MS (FAB); m/e: 447 (MH&spplus;)

Beispiel 5

Herstellung von N-(L-3-trans-Ethoxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L- isoleucyl-L-prolin

In 5 ml Ethanol wurden 15 mg 10%iger Palladium-Kohlenstoff suspendiert, und eine Lösung von 467 mg (1,0 mmol) der gemäß Beispiel 1 erhaltenen Verbindung in 5 ml Ethanol wurde zugegeben. Das Gemisch wurde bei Raumtemperatur unter Wasserstoff gerührt, und der Katalysator wurde durch Filtration entfernt und mit Ethanol gewaschen. Das Filtrat und die Waschlösungen wurden vereinigt und unter verminderten Druck eingedampft, wodurch 324 mg der Titelverbindung erhalten wurden.
IR νKBrmax cm&supmin;¹: 3276, 2970, 1747, 1682, 1627, 1546, 1452, 1201, 1026, 899
NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 0,84 (3H, t, J=7Hz); 0,93 (3H, d, J=7Hz); 0,95-1,25 (1H, m); 1,23 (3H, t, J=7Hz); 1,38-1,62 (1H, m); 1,65-2,30 (5H, m); 3,49-3,85 (2H, m); 3,60 (1H, d, J=2Hz); 3,77 (1H, d, J=2Hz); 4,19 (2H, q, J=7Hz); 4,19-4,30 (1H, m); 4,43 (1H, dd, J=9, 9Hz); 8,79 (1H, d, J=9Hz); 12,30-12,80 (1H, br.)
MS (FAB); m/e: 371 (MH&spplus;)

Beispiel 6

Herstellung von N-(L-3-trans-Carboxyoxiran-2-carbonyl)-L-isoleucyl-L-prolin

Auf ähnliche Weise wie im Beispiel 5 wurden 697 mg (1,3 mmol) der gemäß Beispiel 3 erhaltenen Verbindung über 70 mg 10%igem Palladium- Kohlenstoff in 12 ml Methanol hydriert. Das entstehende Rohprodukt wurde an einer vorgepackten Labor-Lichroprep-RP-18-Säule (Merck Co., Eluierungsmittel: 0,1% wäßrige Trifluoressigsäure-Lösung/Acetonitril = 75 : 25) und dann an einer Säule, die mit Sephadex G-10 (Pharmacia Fine Chemicals, Eluierungsmittel: Wasser) gepackt war, chromatographiert, wobei Fraktionen, welche die Titelverbindung enthielten, erhalten wurden. Diese wurden dann lyophilisiert, wobei 244 mg der Titelverbindung erhalten wurden.
IR νKBrmax cm&supmin;¹: 3421, 2970, 1734, 1624, 1551, 1456, 1192, 897
NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 0,84 (3H, t, J=7Hz); 0,92 (3H, d, J=7Hz); 0,95-1,27 (1H, m); 1,35-1,62 (1H, m); 1,65-2,30 (5H, m); 3,47 (1H, d, J=2Hz); 3,50-3,85 (2H, m); 3,71 (1H, d, J=2Hz); 4,20-4,31 (1H, m); 4,44 (1H, dd, J=9, 9Hz); 8,74 (1H, d, J=9Hz); 11,30-14,00 (2H, br)
MS (FAB); m/e: 343 (MH&spplus;)

Beispiel 7

Herstellung von N-(L-3-trans-Ethoxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L- isoleucyl-L-prolin-Natriumsalz

Zu einer Lösung aus 450 mg (1,2 mmol) der gemäß Beispiel 5 erhaltenen Verbindung in einer kleinen Menge an Ethanol wurde eine Lösung aus 112 mg (1,3 mmol) Natriumhydrogencarbonat in 2 ml Wasser gegeben. Dann wurde die erhaltene Lösung an einer Säule, gepackt mit Sephadex G-10 (Pharmacia Fine Chemicals, Eluierungsmittel: Wasser), chromatographiert, wobei Fraktionen, welche die Titelverbindung enthielten, erhalten wurden. Diese wurden dann lyophilisiert, wobei 370 mg der Titelverbindung erhalten wurden.
IR νKBrmax cm&supmin;¹: 3436, 2970, 1751, 1688, 1626, 1544, 1453, 1397, 1203, 1027, 900
NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 0,75-1,18 (7H, m); 1,23, 1,24 (3H, t, J=7Hz); 1,30-1,60 (1H, m); 3,50-3,85 (1H, m); 3,60, 3,73 (1H, d, J=2Hz); 3,77, 3,88 (1H, d, J=2Hz); 4,00-4,25 (3H, m); 4,35-4,55 (1H, m); 8,41, 8,71 (1H, d, J=9Hz)
MS (FAB); m/e: 393 (MH&spplus;)

Beispiel 8

Herstellung von N-(L-3-trans-Methoxycarbonyloxiran-2-carbonyl)- L-isoleucyl-L-prolin

Auf ähnliche Weise wie im Beispiel 5 wurden 930 mg (2,1 mmol) der gemäß Beispiel 4 erhaltenen Verbindung über 10 mg 10%igem Palladium- Kohlenstoff in 20 ml Methanol hydriert. Der Katalysator wurde abfiltriert und mit Methanol gewaschen. Das Filtrat und die Waschlösungen wurden vereinigt und bei verringertem Druck eingedampft, wobei 690 mg der Titelverbindung erhalten wurden.
IR νKBrmax cm&supmin;¹: 3277, 2967, 1752, 1681, 1627, 1547, 1449, 1212, 896
NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 0,83 (3H, t, J=7Hz); 0,92 (3H, d, J=7Hz); 0,95-1,28 (1H, m); 1,36-1,64 (1H, m); 1,65-2,28 (5H, m); 3,50-3,85 (2H, m); 3,64 (1H, d, J=2Hz); 3,72 (3H, s); 3,77 (1H, d, J=2Hz); 4,19-4,30 (1H, m); 4,44 (1H, dd, J=9, 9Hz); 8,76 (1H, d, J=9Hz); 12,30-12,70 (2H, br)
MS (FAB); m/e: 357 (MH&spplus;)

Referenzbeispiel

Herstellung von N-(L-3-trans-Carboxyoxiran-2-carbonyl)-L-isoleucyl-L-prolin-methylester

Auf ähnliche Weise wie im Beispiel 5 wurden 1,50 g (3,4 mmol) der gemäß Beispiel 2 erhaltenen Verbindung über 30 mg 10%igem Palladium- Kohlenstoff in 12 ml Methanol hydriert. Das entstehende Rohprodukt wurde an einer vorgepackten Labor-Lichroprep RP-18-Säule (Merck Co., Eluierungsmittel: Wasser/Acetonitril = 7 : 3) chromatographiert, wobei Fraktionen, welche die Titelverbindung enthielten, erhalten wurden. Diese wurden bei verringertem Druck eingedampft, wobei 835 mg der Titelverbindung erhalten wurden.
IR νKBrmax cm&supmin;¹: 3284, 2966, 1747, 1682, 1626, 1546, 1451, 1280, 1198, 1178, 897
NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 0,83 (3H, t, J=7Hz); 0,92 (3H, d, J=7Hz); 0,95-1,25 (1H, m); 1,35-1,61 (1H, m); 1,65-2,30 (5H, m); 3,45 (1H, d, J=2Hz); 3,50-3,85 (2H, m); 3,60 (3H, s); 3,70 (1H, d, J=2Hz); 4,26-4,38 (1H, m); 4,43 (1H, dd, J=9, 9Hz); 8,73 (1H, d, J=9Hz)
MS (FAB); m/e: 367 (MH&spplus;)

Claims

1. Epoxybernsteinsäurederivate der Formel:

worin R¹ ein Wasserstoffatom oder eine Alkylgruppe, die 1 bis 4 Kohlenstoffatome enthält, bedeutet, und die pharmazeutisch annehmbaren Salze davon.

2. Epoxybernsteinsäurederivate der Formel:

worin R² und R³ gleich oder unterschiedlich sind und je eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder eine Schutzgruppe für die Carboxylgruppe bedeuten.

3. N-(L-3-trans-Ethoxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L-isoleucyl-L-prolin.

4. N-(L-3-trans-Carboxyoxiran-2-carbonyl)-L-isoleucyl-L- prolin.

5. N-(L-3-trans-Ethoxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L-isoleucyl-L-prolin-Natriumsalz.

6. N-(L-3-trans-Methoxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L-isoleucyl-L-prolin.

7. Pharmazeutisches Mittel, dadurch gekennzeichnet, daß es eine Verbindung nach Anspruch 1 zusammen mit einem pharmazeutischen Träger oder Verdünnungsmittel enthält.