DE60311861T2

DE60311861T2 - Pyrazolochinoline mit immunmodulierender wirkung

Info

Publication number: DE60311861T2
Application number: DE60311861T
Authority: DE
Inventors: Ian Richard GB-Abingdon MATTHEWS; Thomas Stephen Abington COULTER; Chiara Abingdon GHIRON; Chris James Abingdon BRENNAN; Muhammed Kamal Abingdon UDDIN; Lars Olof Göran PETTERSSON; Dorthe Da Graca Thrige; Philip Abingdon HUXLEY
Original assignee: Active Biotech AB
Current assignee: Active Biotech AB
Priority date: 2002-11-22
Filing date: 2003-11-21
Publication date: 2007-11-22
Anticipated expiration: 2023-11-22
Also published as: WO2004048378A1; HK1086562A1; US7291612B2; CN1729191A; RU2005119639A; NO20053018D0; US20060217411A1; EP1813616A3; RU2328496C2; EP1813616B1; US20040116461A1; ES2282693T3; NO20053018L; EP1813616A2; DE60311861D1; US7081456B2; ATE353898T1; CA2506524A1; CN100347173C; JP2006509047A

Description

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf neue heterocyclische Verbindungen, auf Verfahren zu ihrer Herstellung, auf Zusammensetzungen, welche sie enthalten, und auf Verfahren und die Verwendung zur klinischen Behandlung von medizinischen Zuständen, welche von einer Immunmodulation profitieren können, zu denen rheumatoide Arthritis, multiple Sklerose, Diabetes, Asthma, eine Transplantation, systemischer Lupus erythematodes und Psoriasis gehören. Genauer gesagt bezieht sich die vorliegende Erfindung auf neue heterocyclische Verbindungen, welche CD80-Antagonisten sind, die im Stande sind, die Wechselwirkungen zwischen CD80 und CD28 zu hemmen.
Hintergrund der Erfindung
Das Immunsystem besitzt die Fähigkeit, die Homöostase zwischen der Aktivierung und Inaktivierung von Lymphozyten durch verschiedene regulatorische Mechanismen während und nach einer Immunantwort zu steuern bzw. kontrollieren. Zu diesen gehören Mechanismen, welche eine Immunantwort spezifisch hemmen und/oder abschalten. So werden, wenn ein Antigen durch MHC-Moleküle dem T-Zell-Rezeptor präsentiert wird, die T-Zellen nur in Gegenwart von zusätzlichen costimulatorischen Signalen richtig aktiviert. In Abwesenheit von hinzukommenden Signalen gibt es keine Lymphozytenaktivierung und es wird entweder ein Zustand einer funktionellen Inaktivierung, der als Anergie oder Toleranz bezeichnet wird, induziert, oder die T-Zelle wird durch Apoptose spezifisch entfernt. Ein solches costimulatorisches Signal bezieht die Wechselwirkung von CD80 an spezialisierten Antigen-präsentierenden Zellen mit CD28 an T-Zellen ein, von der gezeigt wurde, dass sie für die volle T-Zell-Aktivierung wesentlich ist. (Lenschow et al. (1996) Annu. Rev. Immunol., 14, 233–258)
Ein Aufsatz von Erbe et al. in J. Biol. Chem. Band 277, Nr. 9, Seiten 7363–7368 (2002) beschreibt drei kleinmolekulare Liganden, welche an CD80 binden und die Bindung von CD80 an CD28 und CTLA4 hemmen. Zwei der offenbarten Liganden sind kondensierte Pyrazolone mit den Strukturen A und B:
Beschreibung der Erfindung
Gemäß der vorliegenden Erfindung wird eine Verbindung der Formel (I) oder ein pharmazeutisch oder tierärztlich annehmbares Salz davon bereitgestellt:
wobei
R₁ und R₃ unabhängig voneinander H; F; Cl; Br; -NO₂; -CN; C₁-C₆-Alkyl, gegebenenfalls substituiert durch F oder Cl; oder C₁-C₆-Alkoxy, gegebenenfalls substituiert durch F bedeuten;
R₂ H oder gegebenenfalls substituiertes C₁-C₆-Alkyl, C₃-C₇-Cycloalkyl oder gegebenenfalls substituiertes Phenyl bedeutet;
Y -O-, -S-, N-Oxid oder -N(R₅)- bedeutet, wobei R₅ H oder C₁-C₆-Alkyl bedeutet;
X eine Bindung oder einen zweiwertigen C₁-C₆-Alkylenrest bedeutet;
R₄ -C(=O)NR₆R₇ bedeutet, wobei
R₆ einen Rest der Formel -(Alk)_b-Q bedeutet, wobei b 1 ist, und
Alk ein gegebenenfalls substituierter zweiwertiger geradkettiger oder verzweigter C₁-C₁₂-Alkylen-, C₂-C₁₂-Alkenylen- oder C₂-C₁₂-Alkinylenrest ist, welcher durch einen oder mehrere nicht angrenzende -O-, -S- oder -N(R₈)- -Reste unterbrochen sein kann, wobei R₈ H oder C₁-C₄-Alkyl, C₃-C₄-Alkenyl, C₃-C₄-Alkinyl oder C₃-C₆-Cycloalkyl bedeutet, und
Q H; -CF₃; -OH; -SH; -NR₈R₈, wobei jedes R₈ gleich oder verschieden sein kann; eine Estergruppe; oder ein gegebenenfalls substituiertes Phenyl, C₃-C₇-Cycloalkyl, C₅-C₇-Cycloalkenyl oder einen heterocyclischen Ring mit 5 bis 8 Ringatomen bedeutet; und
R₇ H oder C₁-C₆-Alkyl bedeutet; oder R₆ und R₇ bilden zusammen mit dem Atom oder den Atomen, an das bzw. die sie gebunden sind, einen gegebenenfalls substituierten heterocyclischen Ring mit 5 bis 8 Ringatomen.
Verbindungen der allgemeinen Formel (I) sind CD80-Antagonisten. Sie hemmen die Wechselwirkung zwischen CD80 und CD28 und somit die Aktivierung von T-Zellen, wodurch sie die Immunantwort modulieren.
Entsprechend umfasst die Erfindung auch:

(i) Eine Verbindung der Formel (I) oder ein pharmazeutisch oder tiermedizinisch annehmbares Salz davon zur Verwendung bei der Behandlung von Zuständen bzw. Leiden, die von einer Immunmodulation profitieren.
(ii) Die Verwendung einer Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch oder tiermedizinisch annehmbaren Salzes davon bei der Herstellung eines Medikaments für die Behandlung von Zuständen bzw. Leiden, die von einer Immunmodulation profitieren.
(iii) Ein Verfahren zur Immunmodulation bei Menschen und nicht-menschlichen Primaten, umfassend die Verabreichung einer immunmodulatorisch wirksamen Dosis einer Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch oder tiermedizinisch annehmbaren Salzes davon an ein Subjekt, das eine solche Behandlung benötigt.
(iv) Eine pharmazeutische oder tiermedizinische Zusammensetzung, umfassend eine Verbindung der Formel (I) oder ein pharmazeutisch oder tiermedizinisch annehmbares Salz davon zusammen mit einem pharmazeutisch oder tiermedizinisch annehmbaren Exzipiens oder Träger.

Zu Zuständen bzw. Leiden, welche von einer Immunmodulation profitieren, gehören:
Nebenniereninsuffizienz
Allergische Angiitis und Granulomatose
Amyloidose
Spondylitis ankylosans
Asthma
Autoimmune Addison-Krankheit
Autoimmune chronisch-aktive Hepatitis
Autoimmunhämolytische Anämie
Autoimmunneutropenie
Autoimmune thrombozytopenische Purpura
Autoimmune Vaskulitiden
Behçet-Krankheit
Kleinhirndegeneration
Chronisch-aktive Hepatitis
Chronische entzündliche demyelinisierende Polyradikuloneuropathie
Dermatitis herpetiformis
Diabetes
Eaton-Lambert-Myasthenie-Syndrom
Enzephalomyelitis
Epidermolysis bullosa
Erythema nodosum
Glutensensitive Enteropathie
Goodpasture-Syndrom
Transplantat-Wirt-Reaktion
Guillain-Barré-Syndrom
Hashimoto-Thyreoiditis
Hyperthyreoidismus
Idiopathische Hämochromatose
Idiopathische membranöse Glomerulonephritis
Minimal Change-Nierenkrankheit
Gemischte Bindegewebserkrankung (Mischkollagenose)
Multifokale motorische Neuropathie
Multiple Sklerose
Myastenia gravis
Opsoklonus-Myoklonus-Syndrom
Pemphigoid
Pemphigus
Perniziöse Anämie
Polyarteriitis nodosa
Polymyositis/Dermatomyositis
Postinfektiöse Arthritiden
Primäre biliäre Sklerose
Psoriasis
Reaktive Arthritiden
Reiter-Krankheit
Retinopathie
Rheumatoide Arthritis
Primär-sklerosierende Cholangitis
Sjögren-Syndrom
Stiff-man-Syndrom
Subakute Thyreoiditis
Systemischer Lupus erythematodes
Systemische Sklerose (Sklerodermie)
Riesenzellarteriitis
Thromboangiitis obliterans
Transplantatabstoßung
Autoimmun-polyglanduläres Syndrom Typ I und Typ II
Colitis ulcerosa
Uveitis
Wegener-Granulomatose
So wie er in dieser Anmeldung verwendet wird, bezieht sich der Begriff „Alkylen" auf eine gerade oder verzweigte Alkylkette mit zwei ungesättigten Valenzen, z.B. -CH₂-, -CH₂CH₂-, -CH₂CH₂CH₂-, -CH(CH₃)CH₂-, -CH(CH₂CH₃)CH₂CH₂CH₃ und -C(CH₃)₃.
So wie er in dieser Anmeldung verwendet wird, bezieht sich der Begriff „Heteroaryl" auf einen 5- oder 6-gliedrigen aromatischen Ring, der ein oder mehrere Heteroatome enthält. Anschauliche Beispiele für solche Gruppen sind Thienyl, Furyl, Pyrrolyl, Imidazolyl, Benzimidazolyl, Thiazolyl, Pyrazolyl, Isoxazolyl, Isothiazolyl, Triazolyl, Thiadiazolyl, Oxadiazolyl, Pyridinyl, Pyridazinyl, Pyrimidinyl, Pyrazinyl, Triazinyl.
So wie er in dieser Anmeldung verwendet wird, schließt der uneingeschränkte Begriff „Heterocyclyl" oder „heterocyclisch" das wie vorstehend definierte „Heteroaryl" ein und bedeutet insbesondere einen 5- bis 8-gliedrigen aromatischen oder nichtaromatischen heterocyclischen Ring, der ein oder mehrere Heteroatome, ausgewählt aus S, N und O, enthält, welcher z. B. Pyrrolyl, Furanyl, Thienyl, Piperidinyl, Imidazolyl, Oxazolyl, Isoxazolyl, Thiazolyl, Thiadiazolyl, Pyrazolyl, Pyridinyl, Pyrrolidinyl, Pyrimidinyl, Morpholinyl, Piperazinyl, Indolyl, Morpholinyl, Benzofuranyl, Pyranyl, Isoxazolyl, Chinuclidinyl, Aza-bicyclo[3.2.1]-octanyl, Benzimidazolyl, Methylendioxyphenyl, Maleimido und Succinimidogruppen einschließt.
Sofern in dem Zusammenhang, in dem er auftritt, nichts anderes angegeben ist, bedeutet der Begriff „substituiert", wenn er auf eine beliebige Einheit in dieser Anmeldung angewandt wird, substituiert mit einem oder mehreren der folgenden Substituenten, nämlich (C₁-C₆)-Alkyl, Trifluormethyl, (C₁-C₆)-Alkoxy (einschließlich des speziellen Falls, bei dem ein Ring an angrenzenden Ring-C-Atomen durch Methylendioxy oder Ethylendioxy substituiert ist), Trifluormethoxy, (C₁-C₆)-Alkylthio, Phenyl, Benzyl, Phenoxy, (C₃-C₈)-Cycloalkyl, Hydroxy, Mercapto, Amino, Fluor, Chlor, Brom, Cyano, Nitro, Oxo, -COOH, -SO₂OH, -CONH₂, -SO₂NH₂, -COR^A, -COOR^A, -SO₂OR^A, -NHCOR^A, -NHSO₂R^A, -CONHR^A, -SO₂NHR^A, -NHR^A, -NR^AR^B, -CONR^AR^B oder -SO₂NR^AR^B, worin R^A und R^B unabhängig voneinander eine (C₁-C₆)-Alkylgruppe sind. In dem Fall, dass "substituiert" substituiert durch (C₃-C₈)-Cycloalkyl, Phenyl, Benzyl oder Phenoxy bedeutet, kann der Ring davon selbst mit beliebigen der vorstehenden, außer (C₃-C₈)-Cycloalkyl, Phenyl, Benzyl oder Phenoxy, substituiert sein.
So wie er in dieser Anmeldung verwendet wird, bezieht sich der uneingeschränkte Begriff „Carbocyclyl" oder „carbocyclisch" auf einen 5-8-gliedrigen Ring, dessen Ringatome alle Kohlenstoff sind.
Einige Verbindungen der Erfindung enthalten ein oder mehrere chirale Zentren aufgrund des Vorhandenseins von asymmetrischen Kohlenstoffatomen. Das Vorhandensein von asymmetrischen Kohlenstoffatomen führt zu Stereoisomeren oder Diastereomeren mit R oder S-Stereochemie an jedem chiralen Zentrum. Die Erfindung schließt alle solchen Stereoisomere und Diastereomere und Gemische davon ein.
Salze von salzbildenden Verbindungen der Erfindung schließen physiologisch annehmbare Säureadditionssalze, z.B. Hydrochloride, Hydrobromide, Sulfate, Methansulfonate, p-Toluolsulfonate, Phosphate, Acetate, Citrate, Succinate, Lactate, Tartrate, Fumarate und Maleate; und Basenadditionssalze, z.B. Natrium-, Kalium-, Magnesium- und Calciumsalze ein. Wenn die Verbindung eine Aminogruppe enthält, sind auch quaternäre Aminosalze möglich und sind in der Erfindung eingeschlossen.
In den Verbindungen der Erfindung sind die folgenden Beispiele für die verschiedene Strukturvariablen:
R₁ kann z. B. H, F, Cl, Methyl, Methoxy oder Methylendioxy sein. Derzeit ist es bevorzugt, dass R₁ H, Cl oder insbesondere F ist;
R₂ kann z.B. H, Methyl, Methoxy, Cyclopropyl, Phenyl oder Fluor-, Chlor-, Methyl- oder Methoxy-substituiertes Phenyl sein. Hoder Cyclopropyl ist derzeit bevorzugt.
R₃ kann z. B. H, F, Cl, Methyl oder Methoxy sein. Derzeit ist es bevorzugt, dass R₃ F oder Cl ist und es ist am meisten bevorzugt, dass R₃ H ist;
Y kann z. B. -O-, -S- oder -N(R₅)- sein, wobei R₅ H oder Methyl bedeutet. -NH- oder -S- ist derzeit bevorzugt.
X kann z. B. eine Bindung oder ein -CH₂- oder -CH₂CH₂- Rest sein. Eine Bindung ist derzeit bevorzugt.
R₄ bedeutet -C(=O)NR₆R₇. R₇ ist vorzugsweise H, aber ein großer Bereich von R₆-Substituenten hat zu hochaktiven Verbindungen der Erfindung geführt. Viele beispielhafte R₆-Substituenten erscheinen in den Verbindungen der nachstehenden Beispiele.
R₆ kann z.B. H oder ein Rest der Formel -Alk_b-Q sein, wobei b 0 oder 1 ist, und
Alk kann z. B. ein -(CH₂)_n-, -CH((CH₂)_mCH₃)(CH₂)_n-, -CH((CH₂)_mCH₃)((CH₂)_pCH₃)(CH₂)_n-, -(CH₂)_n-O-(CH₂)_m-, -(CH₂)_n-NH-(CH₂)_m- oder -(CH₂)_n-NH-(CH₂)_m-NH-(CH₂)_p- Rest sein, wobei n 1, 2, 3 oder 4 ist und m und p unabhängig voneinander 0, 1, 2, 3 oder 4 sind, und
Q kann H, -OH, -COOCH₃, Phenyl, Cyclopropyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl, Pyridyl, Furyl, Thienyl oder Oxazolyl bedeuten; und
R₇ kann z. B. H sein oder R₆ und R₇ können zusammen mit dem Atom oder den Atomen, an das bzw. die sie gebunden sind, einen heterocyclischen Ring mit 5, 6 oder 7 Gliedern bilden.
Zu spezifischen Beispielen für R₄-Gruppen gehören diejenigen, die in den Verbindungen der Beispiele in dieser Anmeldung vorhanden sind.
Verbindungen der Erfindung können durch Syntheseverfahren, die in der Literatur bekannt sind, aus Verbindungen hergestellt werden, welche im Handel erhältlich sind oder aus im Handel erhältlichen Verbindungen zugänglich sind. Zum Beispiel können Verbindungen der Formel (I), worin R₄ eine Gruppe -NR₇C(=O)R₆ ist, durch Acylierung eines Amins der Formel (II) mit einem Säurechlorid der Formel (III) hergestellt werden:
Verbindungen der Erfindung, worin R₄ eine Gruppe -NHC(=O)NHR₆ ist, können durch Reaktion eines Amins der Formel (IIA) mit einem Isocyanat der Formel (IIIA) hergestellt werden:
Verbindungen der Erfindung, worin R₄ eine Gruppe -C(=O)NHR₆ ist, können durch Reaktion eines Säurechlorids der Formel (IIB) mit einem Amin NHR₆R₇ hergestellt werden:
Verbindungen der Erfindung, worin R₄ eine Gruppe -NR₇C(=O)OR₆ ist, können durch Reaktion eines Amins der Formel (II) mit einem Chlorformiat CIC(=O)OR₆ hergestellt werden. Die folgenden Beispiele veranschaulichen die Herstellung von Verbindungen der Erfindung: Herstellung von Zwischenprodukt 1 2-(4-Nitrophenyl)-6-fluor-2,5-dihydropyrazolo[4,3-c]-chinolin-3-on
4-Nitrophenylhydrazin (2,28 g, 0,014 mol) wurde in einer Portion zu einer gerührten Lösung von 4-Chlor-8-fluor-chinolin-3-carbonsäure-ethylester (3,58 g, 0,014 mol) in wasserfreiem n-Butylalkohol (50 ml) bei Raumtemperatur zugegeben. Das Gemisch wurde 16 h unter Stickstoff refluxiert, auf Raumtemperatur gekühlt und anschließend filtriert, wobei ein orangefarbener Feststoff zurückblieb. Der Feststoff wurde durch aufeinanderfolgendes Waschen mit Ethylacetat (20 ml) und Heptan (20 ml) gereinigt und dann schließlich unter Absaugen getrocknet, wobei das Pyrazolon (3,93 g, 87 %) als ein dunkelorangefarbener Feststoff erhalten wurde, LCMS m/z 325,24 [M+H]⁺ @ R_T 1,47 min.
Herstellung von Zwischenprodukt 2 2-(4-Aminophenyl)-6-fluor-2,5-dihydropyrazolo[4,3-c]-chinolin-3-on
Zinn(II)-chlorid-dihydrat (12,5 g, 0,055 mol) wurde in einer Portion zu einer gerührten Lösung von 2-(4-Nitrophenyl)-6-fluor-2,5-dihydro-pyrazolo[4,3-c]-chinolin-3-on (Zwischenprodukt 1) (3,59 g, 0,011 mol) in Ethylalkohol (110 ml) bei Raumtemperatur zugegeben. Das Gemisch wurde dann 8 h auf 80 °C erhitzt, auf Raumtemperatur gekühlt und filtriert, wobei ein gelber Feststoff zurückblieb. Der Feststoff wurde in einer zweiphasigen Lösung von Ethylacetat (1 L), einer gesättigten Lösung von Rochellesalz (500 ml) und einer gesättigten Lösung von Natriumhydrogencarbonat (500 ml) suspendiert und 2 h bei Raumtemperatur gerührt. Das Gemisch wurde filtriert und der verbleibende Feststoff wurde mit Wasser gewaschen und unter Vakuum getrocknet, wobei die Titelverbindung (3,39 g, 99 %) als ein hellgelber Feststoff erhalten wurde, LCMS m/z 295,30 [M+H]⁺ @ R_T 0,84 min.
Beispiel 1 N-[4-(6-Fluor-3-oxo-3,5-dihydropyrazolo[4,3-c]chinolin-2-yl)-phenyl]-2-methyl-butyramid
(±)-2-Methylbutyrylchlorid (13,6 μl, 0,11 mmol) wurde tropfenweise im Laufe von 30 s zu einer gerührten Lösung von 2-(4-Amino-phenyl)-6-fluor-2,5-dihydro-pyrazolo[4,3-c]chinolin-3-on (Zwischenprodukt 2) (30 mg, 0,10 mmol), Triethylamin (14 μl, 0,11 mmol) und 4-Dimethylaminopyridin (2,4 mg, 0,02 mmol) in Dichlormethan (1 ml) bei Raumtemperatur zugegeben. Das Gemisch wurde 16 h bei Raumtemperatur gerührt. Der gelbe Feststoff wurde anschließend filtriert und durch aufeinanderfolgendes Waschen mit einer ge sättigten Lösung von Natriumhydrogencarbonat (1 ml), Ethylacetat (1 ml) und Ethylalkohol (0,5 ml) gereinigt und schließlich unter Absaugen getrocknet, wobei die Titelverbindung (10 mg, 26 %) als hellgelber Feststoff erhalten wurde, LCMS m/z 379,36 [M+H]⁺ @ R_T 1,18 min. δ_H (400 MHz, (CD₃)₂SO) 9,89 (1H, s), 8,52 (1H, s), 8,15 (2H, d J 9,0 Hz), 8,01 (1H, d J 7,0 Hz), 7,69 (2H, d J 9,0 Hz) 7,57–7,46 (2H, m), 2,46–2,39 (1H, m), 1,69–1,36 (2H, m), 1,11 (3H, d J 6,8 Hz), 0,91 (3H, t J 7,3 Hz).
Die Titelverbindung und Verbindungen der nachfolgenden Beispiele wurden in dem nachstehend in dem Assay-Abschnitt beschriebenen Assay getestet, um ihre Aktivitäten als Inhibitoren der CD80-CD28-Wechselwirkung zu bestimmen. Die vorliegende Titelverbindung hatte eine Aktivitätsbewertung von ***.
Beispiele 2–49
Die folgenden Verbindungen wurden auf dem in Beispiel 1 beschriebenen Weg synthetisiert, wobei das (±)-2-Methylbutyrylchlorid durch das passende Säurechlorid ersetzt wurde. Beispiel 2 2-Methyl-pentansäure-[4-(6-fluor-3-oxo-3,5-dihydropyrazolo[4,3-c]chinolin-2-yl)-phenyl]amid

δ_H (400 MHz, (CD₃)₂SO) 9,92 (1H, s), 8,53 (1H, s), 8,12 (2H, d J 9,2 Hz), 8,05 (1H, d J 7,6 Hz), 7,70 (2H, d J 9,2 Hz), 7,63–7,53 (2H, m), 1,68–1,58 (1H, m), 1,38–1,28 (3H, m), 1,11 (3H, d J 6,6 Hz), 0,91 (3H, t J 7,1 Hz).

δ_H (400 MHz, (CD₃)₂SO) 9,76 (1H, s), 8,50 (1H, s), 8,26 (2H, d 9,0 Hz), 7,97–7,94 (1H, m), 7,73 (2H, d J 9,0 Hz), 7,39–7,28 (2H, m), 7,07–7,01 (2H, m), 3,91 (3H, s).

δ_H (400 MHz, (CD₃)₂SO) 9,92 (1H, s), 8,52 (1H, s), 8,14 (2H, d J 9,2 Hz), 8,01 (1H, d J 7,3 Hz), 7,67 (2H d J 9,2 Hz), 7,57–7,47 (2H, m), 2,21 (2H, d J 6,8 Hz), 2,14–2,07 (1H, m), 0,96 (6H, d J 6,6 Hz).

δ_H (400 MHz, (CD₃)₂SO) 9,93 (1H, s), 8,53 (1H, s), 8,11 (2H, d J 9,0 Hz), 8,05 (1H, d J 7,8 Hz), 7,70 (2H d J 9,0 Hz), 7,59–7,46 (2H, m), 2,46–2,35 (1H, m), 1,63–1,27 (4H, m), 0,90 (6H, t J 7,1 Hz).

δ_H (400 MHz, (CD₃)₂SO) 9,85 (1H, s), 8,47 (1H, s), 8,25 (2H, d J 9,0 Hz), 7,91–7,90 (1H, m), 7,59 (2H, d J 9,0 Hz), 7,29–7,20 (2H, m), 3,61 (3H, s), 2,38–2,28 (4H, m), 1,64–1,50 (4H, m).

δ_H (400 MHz, (CD₃)₂SO) 9,26 (1H, s), 8,52 (1H, s), 8,15 (2H, d J 9,2 Hz), 8,03 (1H, d J 8,8 Hz), 7,71 (2H, d J 9,2 Hz) 7,56–7,47 (2H, m), 1,26 (9H, s).

Aktivität **
Die Beispiele 8 bis 28 wurden ebenfalls durch das Verfahren von Beispiel 1 unter Verwendung des passenden Säurechlorids hergestellt:

Herstellung von Zwischenprodukt 3 3-(6-Fluor-3-oxo-3,5-dihydro-pyrazolo[4,3-c]chinolin-2-yl)-benzoesäure
3-Hydrazinobenzoesäure (1,91 g, 0,013 mol) wurde in einer Portion zu einer gerührten Lösung von 4-Chlor-8-fluor-chinolin-3-carbonsäure-ethylester (2,93 g, 0,011 mol) in n-Butanol (60 ml) bei Raumtemperatur zugegeben. Die Lösung wurde 16 h zum Rückfluss erhitzt, auf Raumtemperatur gekühlt und der resultierende gelbe Feststoff wurde abfiltriert, mit tert-Butylmethylether gewaschen und anschließend getrocknet. Der Feststoff wurde in einer Lösung von Tetrahydrofuran:Wasser (2:1; 21 ml) wieder gelöst und Lithiumhydroxid (1,27 g, 0,031 mol) wurde anschließend zugegeben. Nach 16 h Rühren bei Raumtemperatur wurde konzentrierte Chlorwasserstoffsäure (3 ml) tropfenweise zu dem Gemisch zugegeben, um einen gelben Feststoff auszufällen, welcher abfiltriert und unter Vakuum getrocknet wurde, wobei die Titelverbindung (Zwischenprodukt 3) (2,32 g, 63 %) als hellgelber Feststoff erhalten wurde.
Herstellung von Zwischenprodukt 4 3-(6-Fluor-3-oxo-3,5-dihydro-pyrazolo[4,3-c]chinolin-2-yl)-benzoylchlorid
Oxalylchlorid (20 ml, 0,2 mol) wurde tropfenweise im Laufe von 2 min zu einer gerührten Lösung von 3-(6-Fluor-3-oxo-3,5-dihydro-pyrazolo[4,3-c]chinolin-2-yl)-benzoesäure (Zwischenprodukt 3) (2,0 g, 6,1 mmol) in Dichlormethan (10 ml) bei Raumtemperatur zugegeben. Dann wurde N,N-Dimethylformamid (50 μl) zugegeben und das resultierende Gemisch 1 h auf 50 °C erhitzt. Die Lösung wurde anschließend auf Raumtemperatur gekühlt und dann im Vakuum konzentriert, wobei die Titelverbindung (Zwischenprodukt 4) (2,0 g, 96 %) als ein sandfarbener Feststoff zurückblieb. Beispiel 50 3-(6-Fluor-3-oxo-3,5-dihydro-pyrazolo[4,3-c]chinolin-2-yl)-N-(3-methoxy-propyl)-benzamid
3-Methoxypropylamin (0,026 g, 0,29 mmol) wurde zu einer gerührten Lösung von 3-(6-Fluor-3-oxo-3,5-dihydro-pyrazolo[4,3-c]chinolin-2-yl)-benzoylchlorid (Zwischenprodukt 4) (26 mg, 0,29 mmol) in Tetrahydrofuran (2 ml) zugegeben und das Gemisch wurde 15 min bei Raumtemperatur gerührt. Dann wurde Triethylamin (0,2 ml, 1,4 mmol) zugegeben und das resultierende Gemisch über Nacht gerührt. 1M Chlorwasserstoffsäure (3–4 ml) wurde tropfenweise zugegeben, um einen gelben Feststoff auszufällen, welcher abfiltriert und unter Absaugen getrocknet wurde, wobei das Amid (79 mg, 0,20 mmol) als ein gelber Feststoff erhalten wurde, LCMS m/z 395,25 [M+H]⁺ @ R_T 1,04 min; δ_H (400 MHz, (CD₃)₂SO) 8,59 (1H, m), 8,57 (1H, s), 8,39 (1H, scheinbares d J 9,3 Hz), 8,08 (1H, scheinbares d J 7,3 Hz), 7,66–7,53 (5H, m), 3,37–3,33 (4H, m) 3,27 (3H, s), 1,83–1,77 (2H, m). Aktivität ** Beispiel 51 N-Ethyl-3-(6-fluor-3-oxo-3,5-dihydro-pyrazolo[4,3-c]chinolin-2-yl)benzamid
Hergestellt durch das Verfahren von Beispiel 53, wobei 3-Methoxypropylamin durch Ethylamin ersetzt wurde.

δ_H (400 MHz, (CD₃)₂SO) Hauptrotamer angegeben; 8,56 (1H, br s), 8,47 (1H, m), 8,21 (2H, d J 8,5 Hz), 7,94 (2H, d J 8,5 Hz), 3,96 (3H, s), 3,31 (2H, q J 7,3 Hz) 2,58 (3H, s), 1,15 (3H, t J 7,4 Hz).

Hergestellt durch das Verfahren von Beispiel 53, wobei 3-Methoxypropylamin durch Benzylamin ersetzt wurde.

LCMS m/z 427,16 [M+H]⁺ @ R_T 1,28 min.

Aktivität *
Die Beispiele 53 bis 64 wurden durch das Verfahren von Beispiel 50 hergestellt, wobei das passende Amin verwendet wurde.
Beispiel 65 N-(3-Dimethylaminopropyl)-4-(4-cyclopropyl-3-oxo-3,5-dihydro-pyrazolo[4,3-c]chinolin-2-yl]-benzamid Schritt 1 2-Cyclopropyl-4-oxo-1,4-dihydro-chinolin-3-carbonsäure-ethylester
Eine Lösung von 3-Cyclopropyl-3-oxo-propionsäure-methylester (6,2 g, 0,038 mol), 2-Aminobenzoesäureethylester (4,95 g, 0,03 mol) und p-Toluol-sulfonsäure (0,04 g, 0,2 mmol) in Toluol (25 ml) wurde 2 h auf 125 °C erhitzt; anschließend wurden 15 ml Lösungsmittel abdestilliert. Zu der zurückbleibenden orangefarbenen Lösung wurde Natriumethoxid (2 M, 15 ml) in Ethanol zugegeben (das Reaktionsgemisch färbt sich rot). Dieses rote Gemisch wurde 2 h bei 120 °C gerührt; es wurden erneut 15 ml Lösungsmittel abdestilliert. Das Reaktionsgemisch wurde auf Raumtemperatur abkühlen gelassen, mit Ethylacetat (1 Liter) verdünnt, mit 0,1 M HCl und Wasser extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum konzentriert, wobei ein orangefarbener Rückstand zurückblieb, welcher einmal mit kaltem Ethylacetat gewaschen wurde, wobei 2-Cyclopropyl-4-oxo-1,4-dihydro-chinolin-3-carbonsäure-ethylester (3,87 g, 53 %) als ein gebrochen weißer Feststoff erhalten wurde. LCMS m/z 244,14 [M+H]⁺ @ R_T 0,78 min, 89 %, m/z 230,11 [Säure+H]⁺ @ R_T 1,27, 11 %.

δ_H (400 MHz, (CD₃)₂SO) 11,04 (1H, s), 8,06 (1H, dd, J, 1,1, J₂ 8,1), 7,76–7,66 (2H, m), 7,36 (1H, td, J₁ 1,1, J₂ 7,5), 3,89 (3H, s), 2,16 (1H, m), 1,18 (4H, d, J 7,0).

Schritt 2 4-Chlor-2-cyclopropyl-chinolin-3-carbonsäure-ethylester
Phosphoroxychlorid (0,77 ml, 0,082 mol) wurde in einer Portion zu einer Suspension von 2-Cycoopropyl-4-oxo-1,4-dihydro-chinolin-3-carbonsäure-ethylester (1,0 g, 0,041 mol) in Acetonitril zugegeben und das Gemisch wurde 90 Minuten auf 75 °C erhitzt (wird über 65 °C eine klare Lösung). Die resultierende hellbraune Lösung wurde in gesättigtes Natriumhydrogencarbonat (100 ml) gegossen; die Suspension wurde mit Ethylacetat extrahiert und die vereinigten organischen Extrakte wurden getrocknet und im Vakuum konzentriert, wobei 4-Chlor-2-cyclopropyl-chinolin-3-carbonsäure-ethylester (1,15 g, 106 %) als ein gebrochen weißer Feststoff zurückblieb. R_f (AcOEt) = 0,73.
Schritt 3 4-(4-Cyclopropyl-3-oxo-3,5-dihydro-pyrazolo[4,3-clchinolin-2-yl)-benzoesäure
4-Chlor-2-cyclopropyl-chinolin-3-carbonsäure-ethylester (1,15 g, 0,0041 mol) und 4-Hydrazino-benzoesäure (1,0 g, 0,0068 mol) wurden in Ethanol (30 ml) 16 h am Rückfluss gerührt. Die hellgelbe Suspension wurde mit Heptan verdünnt, filtriert, mit kaltem t-Butylmethylether gewaschen und unter Absaugen trocknen gelassen, wobei ein roher Feststoff erhalten wurden, der Hydrazin enthielt. Dieser Feststoff wurde in 1 M HCl suspendiert, abfiltriert, mit Wasser gewaschen und anschließend im Vakuum getrocknet, wobei 4-(4-Cyclopropyl-3-oxo-3,5-dihydro-pyrazolo(4,3-c]chinolin-2-yl)-benzoesäure (1,135 g, 80 %) als ein gelber Feststoff erhalten wurde, LCMS m/z 346,20 [M+H]⁺ @ R_T 1,05 min: 96 Reinheit.

δ_H (400 MHz, (CD₃)₂SO) 11,4 (1H, s), 8,43 (2H, d, J 8,1), 8,21 (1H, dd, J₁ 1,2, J₂ 8,1), 8,07 (2H, d, J 8,1), 7,92 (1H, d, J 8,1), 7,67 (1H, t, J 6,6), 7,52 (1H, t, J 6,5), 3,43 (1H, m), 1,59 (2H, m), 1,43 (2H, m).

Schritt 4 4-(4-Cyclopropyl-3-oxo-3,5-dihydro-pyrazolo[4,3-c]chinolin-2-yl)-benzoylchlorid
Zu einer Suspension von fein gemahlener 4-(4-Cyclopropyl-3-oxo-3,5-dihydro-pyrazolo[4,3-c]chinolin-2-yl)-benzoesäure (0,19 g, 0,55 mmol) in Dichlormethan (4 ml) wurde Oxalylchlorid (1,6 ml, 0,01 mol), gefolgt von einem Tropfen Dimethylformamid zugegeben. Das Gemisch wurde 8 h unter Stickstoff bei 45 °C gerührt. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt, wobei 4-(4-Cyclopropyl-3-oxo-3,5-dihydro-pyrazolo[4,3-c]chinolin-2-yl)-benzoylchlorid als ein blassgelber Feststoff erhalten wurde, LCMS m/z [M+MeOH-Cl]⁺ @ R_T 1,46 min: 95 % Reinheit. Ohne weitere Reinigung verwendet.
Schritt 5 N-(3-Dimethylaminopropyl)-4-(4-cyclopropyl-3-oxo-3,5-dihydro-pyrazolo[4,3-c]chinolin-2-yl)-benzamid
Zu einer partiellen Lösung von 4-(4-Cyclopropyl-3-oxo-3,5-dihydro-pyrazolo[4,3-c]chinolin-2-yl)-benzoylchlorid (0,1 g, 0,28 mmol) in Tetrahydrofuran (6 ml) unter Stickstoff wurde eine Lösung von 3-Dimethylamino-propylamin (0,03 g, 0,3 mmol) in Tetrahydrofuran (3 ml) zugegeben. Das Gemisch wurde 3 h bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt und der gelbe Feststoff wurde mit ein wenig gesät tigtem Natriumhydrogencarbonat und Wasser gewaschen und unter Vakuum getrocknet, wobei N-(3-Dimethylaminopropyl)-4(4-cyclopropyl-3-oxo-3,5-dihydro-pyrazolo[4,3-c]chinolin-2-yl)-benzamid (57 mg, 47 %) als ein gelber Feststoff erhalten wurde. LCMS m/z 430,11 [M+H]⁺ @ R_T 0,99 min: 100 % Reinheit.
Aktivität * Herstellung von Zwischenprodukt 5 4-(6-Fluor-3-oxo-3,5-dihydro-pyrazolo[4,3-c]chinolin-2-yl-benzoylchlorid
Zu einer Suspension von fein gemahlener 4-(6-Fluor-3-oxo-3,5-dihydro-pyrazolo[4,3-c]chinolin-2-yl)-benzoesäure (1,1 g, 3,4 mmol) in Dichlormethan (6 ml) wurde Oxalylchlorid (2,4 ml, 29 mmol), gefolgt von einem Tropfen Dimethylformamid zugegeben. Das Gemisch wurde 3 h bei 45 °C unter Stickstoff gerührt. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt, wobei 4-(6-Fluor-3-oxo-3,5-dihydro-pyrazolo[4,3-c]chinolin-2-yl)-benzoylchlorid (1,15 g, quantitativ) als blassgelber Feststoff erhalten wurde, welcher ohne wertere Reinigung verwendet wurde.
Beispiel 66 N-(3-Dimethylaminopropyl)-4-(6-fluor-3-oxo-3,5-dihydro-pyrazolo[4,3-c]chinolin-2-yl)-benzamid-hydrochlorid
Zu einer partiellen Lösung von 4-(6-Fluor-3-oxo-3,5-dihydro-pyrazolo[4,3-c]chinolin-2-yl)-benzoylchlorid (0,1 g, 0,3 mmol) in Tetrahydrofuran (5 ml) unter Stickstoff wurde eine Lösung von 3-Dimethylamino-propylamin (0,03 g, 0,3 mmol) in Tetrahydrofuran zugegeben. Das Gemisch wurde 90 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt und der gelbe Feststoff wurde über ein FCC-Silicagel (Gradientenelution, MeOH:H₂O Fluka C₁₈-Umkehrphase) gereinigt, wobei N-(3-Dimethylaminopropyl)-4-(6-fluor-3-oxo-3,5-dihydro-pyrazolo[4,3-c]chinolin-2-yl)-benzamid-hydrochlorid (70 mg, 53 %) als ein gelber Feststoff erhalten wurde.

LCMS m/z 408,39 [M+H]⁺ @ R_T 0,89 min: 90 % Reinheit.

Aktivität ***
Die Beispiele 67–141 wurden analog aus dem passenden Benzoylchlorid und dem passenden Amin hergestellt.
Beispiel 142 {3-[4-(6-Fluor-3-oxo-3,5-dihydro-pyrazolo[4,3-c]chinolin-2-yl)-phenyl]-ureido}essigsäure-ethylester
Ethylcyanatoacetat (31 mg, 0,24 mmol) wurde in einer Portion zu einer gerührten Lösung von 2-(4-Aminophenyl)-6-fluor-2,5-dihydropyrazolo[4,3-c]chinolin-3-on (Zwischenprodukt 2) (50 mg, 0,17 mmol) in N,N-Dimethylformamid (2 ml) zugegeben und das Gemisch wurde 16 h bei Raumtemperatur gerührt. Wasser (1 ml) wurde dann zu dem Gemisch zugegeben, um einen Feststoff auszufällen, welcher abfiltriert, mit Wasser (1 ml) und anschließend Ethylacetat (1 ml) gewaschen und schließlich durch Absaugen getrocknet wurde, wobei der Harnstoff als ein gelber Feststoff zurückblieb, LCMS m/z 424,40 [M+H]⁺ @ R_T 1,06 min.
Aktivität *** Beispiele 143 und 144
Die folgenden Verbindungen wurden durch das Verfahren von Beispiel 142 synthetisiert, wobei Ethylcyanatoacetat durch das passende Isocyanat, Isothiocyanat oder Chlorformiat ersetzt wurde.
Zwischenprodukt 6: Herstellung von Methyl-4-oxothiochroman-3-carboxylat
Trockenes Tetrahydrofuran (60 ml) wurde unter einer Stickstoffatmosphäre auf –50 bis –60 °C gekühlt. Eine 1M Lithium-bis(trimethylsilyl)amidlösung in Hexan (56 ml, 56 mmol) wurde zugegeben. Die Temperatur wurde bei –50 bis –60 °C gehalten und Thiochroman-4-on wurde im Laufe von 20 min tropfenweise zugegeben. Das Rühren wurde 60 min bei niedriger Temperatur fortgesetzt. Methylcyanoformiat (4,84 ml, 60,9 mmol) wurde im Laufe von 5 min tropfenweise zu dem Reaktionsgemisch zugegeben. Die erhaltene Suspension wurde 80 min bei –50 bis –60 °C gerührt und anschließend auf Raumtemperatur aufwärmen gelassen. Eine gesättigte Ammoniumchloridlösung (100 ml) wurde zugegeben. Die Phasen wurden getrennt, die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (2 × 100 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit Wasser (50 ml) gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und unter Vakuum konzentriert. Ein orangefarbenes Öl wurde erhalten und durch Säulenchromatographie gereinigt. Die Titelverbindung wurde als ein gelber Feststoff isoliert (4,70 g, 21,1 mmol, 42 %). LCMS: m/z 221 [M-H]⁺.
Zwischenprodukt 7: Herstellung von 4-(3-Oxo-3a,4-dihydro-3H-thiochromeno[4,3-c]pyrazol-2-yl)-benzoesäure
4-Oxothiochroman-3-carboxylat (0,50 g, 2,25 mmol) und Hydrazinobenzoesäure (0,377 g, 2,48 mmol) wurden in Essigsäure (6 ml) vermischt. Das Gemisch wurde 30 min zum Rückfluss erhitzt. Überschüssige Essigsäure wurde abdestilliert, wobei ein braunes Öl erhalten wurde. Diethylether wurde zugegeben, es bildete sich ein Niederschlag, welcher durch Filtration gesammelt und unter Vakuum getrocknet wurde. Das Rohprodukt wurde als rotbrauner Feststoff isoliert (797 mg). LCMS: m/z 325 [M+H]⁺. Es wurde keine Reinigung durchgeführt.
Zwischenprodukt 8: Herstellung von 4-(3-Oxothiochromeno[4,3-c]pyrazol-2(3H)-yl)benzoesäure
Rohe 4-(3-Oxo-3a,4-dihydro-3N-thiochromeno[4,3-c]pyrazol-2-yl)-benzoesäure (250 mg, 0,77 mmol) wurde in Dimethylsulfoxid (6 ml) gelöst. o-Chloranil (189 mg, 0,77 mmol) wurde zugegeben und das Gemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Wasser (20 ml) wurde zugegeben und die Feststoffe wurden durch Filtration gesammelt und mit Wasser gewaschen. Der Filterkuchen wurde mit Toluol verrieben, filtriert und unter Vakuum getrocknet. Die Titelverbindung wurde als ein dunkelbrauner Feststoff isoliert (230 mg, 0,71 mmol, 92 %). LCMS: m/z 323 [M+H]⁺.
Alternativ kann rohe 4-(3-Oxo-3a,4-dihydro-3H-thiochromeno[4,3-c]pyrazol-2-yl)-benzoesäure in Dimethylsulfoxid unter Luftzutritt gerührt werden. Es wurde festgestellt, dass die Luftoxidation ein reines Produkt ergibt, die Reaktion ist jedoch viel langsamer.
Beispiel 165 Herstellung von N-[3-(Dimethylamino)propyl]-4-(3-oxothiochromeno[4,3-c)pyrazol-2(3H)-yl)benzamid
4-(3-Oxothiochromeno[4,3-c]pyrazol-2(3H)-yl)benzoesäure (55 mg, 0,17 mmol) wurde in wasserfreiem Dimethylacetamid (1 ml) suspendiert. Diisopropyl-ethylamin (46,5 mg, 0,36 mmol, 62 μl) wurde zugegeben, gefolgt von 3-Dimethylaminopropylamin (17,5 mg, 0,17 mmol) und [(Benzotriazol-1-yloxy)-dimethylamino-methylen]dimethyl-ammonium-hexafluorophosphat (65 mg, 0,17 mmol). Das Gemisch wurde 4 h bei Raumtemperatur gerührt und durch präparative HPLC gereinigt. Die Titelverbindung wurde als ein brauner Feststoff isoliert. LCMS: m/z 407 [M+H]⁺.
Aktivität ** Beispiel 166 Herstellung von N-[(Cyclohexylamino)propyl]-4-(3-oxothiochromeno[4,3-c]pyrazol-2(3H)-yl)benzamid
Die Reaktion wurde wie vorstehend beschrieben durchgeführt. LCMS: m/z 461 [M+H]⁺. Aktivität *** Beispiel 167 Herstellung von N-(Pyrrolidin-1-yl-butyl)-4-(3-oxothiochromeno[4,3-c]pyrazol-2(3H)-yl)-benzamid
Die Reaktion wurde wie vorstehend beschrieben durchgeführt. LCMS: m/z 447 [M+H]⁺. Aktivität * Beispiel 168 Herstellung von 4-(3-Oxothiochromeno[4,3-c]pyrazol-2(3H)-yl)-N-1,2,2,6,6-pentamethyl-piperidin-4-ylbenzamid
Die Reaktion wurde wie vorstehend beschrieben durchgeführt. LCMS: m/z 475 [M+H]⁺. Aktivität ** Zwischenprodukt 9: Herstellung von 3-[(2-Fluorphenyl)sulfanyl]propansäure
2-Fluorthiophenol (5,0 g, 39 mmol) wurde in Tetrahydrofuran (50 ml) unter einer Stickstoffatmosphäre gelöst. Triethylamin (3,94 g, 5,33 ml, 85,8 mmol) wurde zugegeben. Acrylsäure (2,81 g, 2,67 ml, 39 mmol) wurde in Tetrahydrofuran gelöst und im Laufe von 2 Stunden bei Raumtemperatur tropfenweise zu der Reaktionslösung zugegeben. Das Gemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. 1M Chlorwasserstoffsäure (50 ml) wurde zugegeben und die Phasen wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (2 × 50 ml) gewaschen. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und unter Vakuum konzentriert. Ein gelbes Öl wurde erhalten, welches sich beim Aufbewahren bei Raumtemperatur verfestigte. Der Feststoff wurde mit Hexan verrieben, filtriert und unter Vakuum getrocknet. Die Titelverbindung wurde als ein gebrochen weißer Feststoff isoliert (4,19 g, 20,9 mmol, 54 %).
Zwischenprodukt 10: Herstellung von 8-Fluor-2,3-dihydro-4H-thiochromen-4-on
3-[(2-Fluorphenyl)sulfanyl]propansäure (4,0 g, 20 mmol) wurde mit konzentrierter Schwefelsäure (20 ml) bei 0–5 °C vermischt. Die Reaktionslösung wurde 3 h bei 0 bis 5 °C gerührt und anschließend über Nacht auf Raumtemperatur aufwärmen gelassen. Das Gemisch wurde tropfenweise in Eis eingebracht, um die Reaktion zu beenden, wobei eine weiße Suspension erhalten wurde. Die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (1 × 200 ml, 1 × 100 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung (1 × 50 ml), Wasser (1 × 50 ml), 1M Chlorwasserstoffsäure (50 ml) und Wasser (2 × 50 ml) gewaschen. Die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und unter Vakuum konzentriert. Die Titelverbindung wurde als ein gelber Feststoff isoliert (2,10 g, 11,5 mmol, 58 %).
Zwischenprodukt 11: Herstellung von Methyl-8-fluor-4-oxothiochroman-3-carboxylat
1M Lithium-hexamethyldisilazid-Lösung in Hexan (13,2 ml) wurde in wasserfreiem Tetrahydrofuran (20 ml) unter einer Stickstoffatmosphäre gelöst. Die Lösung wurde auf –78 °C gekühlt. 8-Fluor-2,3-dihydro-4H-thiochromen-4-on (2,00 g, 11 mmol) wurde in Tetrahydrofuran (40 ml) gelöst, die Lösung wurde in den Tropftrichter überführt und im Laufe von 30 min tropfenweise zu dem Reaktionsgemisch zugegeben, wobei die Temperatur unter –60 °C gehalten wurde. Eine orangefarbene klare Lösung wurde erhalten, welche 2 h bei –78 °C bis –65 °C gerührt wurde. Methylcyanoformiat (0,935 g, 0,87 ml) wurde in Tetrahydrofuran (2 ml) gelöst und tropfenweise zu der Reaktionslösung zugegeben. Das Rühren wurde bei niedriger Temperatur 1 h fortgesetzt, das Gemisch wurde dann auf Raumtemperatur aufwärmen gelassen. Gesättigte Ammoniumchloridlösung (20 ml) und Wasser (10 ml) wurden zugegeben, die Phasen 5 min gemischt und getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (2 × 100 ml) gewaschen und die vereinigten organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Gemisch wurde filtriert und das Lösungsmittel unter Vakuum entfernt, wobei ein orangefarbenes Öl erhalten wurde. Das rohe Öl wurde durch Säulenchromatografie gereinigt; mobile Phase: Hexane, Gradient zu Hexanen/Ethylacetat [90:10]. Die Titelverbindung wurde als ein gelber Feststoff isoliert (1,19 g, 4,95 mmol, 45 %).
Zwischenprodukt 12: Herstellung von 4-(6-Fluor-3-oxothiochromeno[4,3-c]pyrazol-2(3H)-yl)benzoesäure
Methyl-8-fluor-4-oxothiochroman-3-carboxylat (1,19 g, 4,95 mmol) und 4-Hydrazinobenzoesäure (755 mg, 4,95 mmol) wurden mit Eisessig (10 ml) vermischt. Das Gemisch wurde 4 h zum Rückfluss erhitzt. Überschüssige Essigsäure wurde unter Vakuum entfernt, wobei ein orangefarbenes Öl erhalten wurde. Ethylacetat (10 ml) wurde zugegeben und das Gemisch beschallt. Es wurde eine Ausfällung eines orangefarbenen Feststoffs beobachtet. Die Feststoffe wurden durch Filtration gesammelt und mit Ethylacetat gewaschen. Der Filterkuchen wurde in Dimethylsulfoxid (10 ml) aufgenommen und bei Raumtemperatur eine Woche lang luftoxidiert. Wasser (20 ml) wurde zu dem Reaktionsgemisch zugegeben, die Feststoffe wurden durch Filtration gesammelt, in Ethylacetat aufgeschlämmt, filtriert und unter Vakuum getrocknet. Die Titelverbindung wurde als ein orangefarbenes Pulver isoliert (175 mg, 0,51 mmol, 10 %). LCMS: m/z 341.
Beispiel 169 Herstellung von N-[3-(Dimethylamino)propyl]-4-(6-fluor-3-oxothiochromeno[4,3-c]pyrazol-2(3H)-yl)benzamid
4-(6-Fluor-3-oxothiochromeno[4,3-c]pyrazol-2(3H)-yl)benzoesäure (41 mg, 0,12 mmol) wurde in wasserfreiem Dimethylacetamid (1 ml) gelöst. Diisopropyl-ethylamin (46 mg, 0,36 mmol, 62 μl) wurde zugegeben, gefolgt von [(Benzotriazol-1-yloxy)-dimethylamino-methylen]-dimethyl-ammonium-hexafluorophosphat (65 mg, 0,17 mmol) und 3-Dimethylaminopropylamin (12 mg, 0,12 mmol). Das Gemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt und durch präparative HPLC gereinigt. Die Titelverbindung wurde als ein blauner Feststoff isoliert. LCMS m/z 425 [M+H]⁺.
Aktivität ** Beispiel 170 Herstellung von N-[(Cyclohexylamino)propyl]-4-(6-fluor-3-oxothiochromeno[4,3-c]pyrazol-2(3H)-yl)benzamid
Die Reaktion wurde wie vorstehend beschrieben durchgeführt. LCMS: m/z 479 [M+H]⁺. Aktivität ** Beispiel 171 Herstellung von N-(Pyrrolidin-1-yl-butyl)-4-(6-fluor-3-oxothiochromeno[4,3-c]pyrazol-2(3H)-yl)benzamid
Die Reaktion wurde wie vorstehend beschrieben durchgeführt. LCMS: m/z 465 [M+H]⁺. Aktivität *** Beispiel 173 Herstellung von 4-(6-Fluor-3-oxothiochromeno[4,3-c]pyrazol-2(3H)-yl)-N-1,2,2,6,6-pentamethylpiperidin-4-ylbenzamid
Die Reaktion wurde wie vorstehend beschrieben durchgeführt. LCMS: m/z 493 [M+H]⁺.
Aktivität ***
Assay-Abschnitt
Die vorstehend beschriebenen Beispiele wurden in einem zellfreien homogenen zeitaufgelösten Fluoreszenz-Assay (HTRF-Assay) getestet, um ihre Aktivität als Inhibitoren der CD80-CD28-Wechselwirkung zu bestimmen.
In dem Assay werden Europium und Allophycocyanin (APC) indirekt (durch Antikörper-Linker) mit CD28 und CD80 assoziiert, um einen Komplex zu bilden, welcher das Europium und APC in unmittelbare Nähe bringt, um ein Signal zu erzeugen. Der Komplex umfasst die folgenden sechs Proteine: Fluoreszenzmarker 1, Linker-Antikörper 1, CD28-Fusionsprotein, CD80-Fusionsprotein, Linker-Antikörper 2 und Fluoreszenzmarker 2. Die nachstehende Tabelle beschreibt diese Reagenzien ausführlicher.
Bei der Bildung des Komplexes werden Europium und APC nahe zusammen gebracht und es wird ein Signal erzeugt.
Die nicht-spezifische Wechselwirkung wurde durch Ersetzen des CD80-Maus-Fab-Fragment-Fusionsproteins (1,9 μg/ml) durch ein Maus-Fab-Fragment (C215) gemessen. Der Assay wurde in schwarzen Platten mit 384 Vertiefungen in einem Endvolumen von 30 μl durchgeführt. Assaypuffer: 50 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl pH 7,8, enthaltend 0,1 % BSA (Gew./Vol.), das unmittelbar vor der Verwendung zugegeben wurde.
Die Verbindungen wurden den vorstehenden Reagenzien in einer Konzentrationsreihe im Bereich zwischen 100 μM–1,7 nM zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 4 Stunden bei Raumtemperatur inkubiert. Doppelte Messungen wurden unter Verwendung eines Wallac Victor 1420 Multilabel Counter durchgeführt. Erste Messung: Anregung 340 nm, Emission 665 nm, Verzögerung 50 μs, Zeitfenster 200 μs. Zweite Messung: Anregung 340 nm, Emission 615 nm, Verzögerung 50 μs, Zeitfenster 200 μs. Die Zählungen wurden automatisch korrigiert hinsichtlich Fluoreszenz-Crossover, Löschung und Hintergrund.
Zum Zweck der Veranschaulichung betragen die EC₅₀-Ergebnisse für die Verbindungen der Beispiele 15, 21, 29, 35 und 83 8 μM, 1,9 μM, 950 nM, 148 nM bzw. 90 nM. Der Einfachheit halber werden die EC₅₀-Aktivitäten der getesteten Verbindungen vorstehend in Summenform wie folgt angegeben:

EC50: * = > 10 μM, ** = 1–10 μM, *** = < 1 μM:

Claims

Verbindung der Formel (I) oder ein pharmazeutisch oder tierärztlich annehmbares Salz davon:
wobei R₁ und R₃ unabhängig voneinander H; F; Cl; Br; -NO₂; -CN; C₁-C₆-Alkyl, gegebenenfalls substituiert durch F oder Cl; oder C₁-C₆-Alkoxy, gegebenenfalls substituiert durch F bedeuten; R₂ bedeutet H oder C₁-C₆-Alkyl, C₃-C₇-Cycloalkyl oder Phenyl, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren von (C₁-C₆)-Alkyl, Trifluormethyl, (C₁-C₆)-Alkoxy, Trifluormethoxy, (C₁-C₆)-Alkylthio, Phenyl, Benzyl, Phenoxy, (C₃-C₈)-Cycloalkyl, Hydroxy, Mercapto, Amino, Fluor, Chlor, Brom, Cyano, Nitro, Oxo, -COOH, -SO₂OH, -CONH₂, -SO₂NH₂, -COR^A, -COOR^A, -SO₂OR^A, -NHCOR^A, -NHSO₂R^A, -CONHR^A, -SO₂NHR^A, -NHR^A, -NR^AR^B, -CONR^AR^B oder -SO₂NR^AR^B, wobei R^A und R^B unabhängig voneinander eine (C₁-C₆-Alkylgruppe sind, und in dem Fall, dass "substituiert" substituiert durch (C₃-C₈)-Cycloalkyl, Phenyl, Benzyl oder Phenoxy bedeutet, kann der Ring davon selbst gegebenenfalls mit beliebigen der vorstehenden, außer (C₃-C₈)-Cycloalkyl, Phenyl, Benzyl oder Phenoxy, substituiert sein; Y bedeutet -O-, -S-, N-Oxid oder -N(R_S)-, wobei R₅ H oder C₁-C₆-Alkyl bedeutet; X bedeutet eine Bindung oder einen zweiwertigen C₁-C₆-Alkylenrest; R₄ bedeutet -C(=O)NR₆R₇, wobei R₆ einen Rest der Formel -(Alk)_b-Q bedeutet, wobei b 1 ist und Alk ein zweiwertiger geradkettiger oder verzweigter C₁-C₁₂-Alkylen-, C₂-C₁₂-Alkenylen- oder C₂-C₁₂-Alkinylenrest ist, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren von (C₁-C₆)-Alkyl, Trifluormethyl, (C₁-C₆)-Alkoxy, Trifluormethoxy, (C₁-C₆)-Alkylthio, Phenyl, Benzyl, Phenoxy, (C₃-C₈)-Cycloalkyl, Hydroxy, Mercapto, Amino, Fluor, Chlor, Brom, Cyano, Nitro, Oxo, -COOH, -SO₂OH, -CONH₂, -SO₂NH₂, -COR^A, -COOR^A, SO₂OR^A, -NHCOR^A, -NHSO₂R^A, -CONHR^A, SO₂NHR^A, -NHR^A, -NR^AR^B, -CONR^AR^B oder -SO₂NR^AR^B, wobei R^A und R^B unabhängig voneinander eine (C₁-C₆)-Alkylgruppe sind, und in dem Fall, dass "substituiert" substituiert durch (C₃-C₈)-Cycloalkyl, Phenyl, Benzyl oder Phenoxy bedeutet, kann der Ring davon selbst gegebenenfalls mit beliebigen der vorstehenden, außer (C₃-C₈)-Cycloalkyl, Phenyl, Benzyl oder Phenoxy, substituiert sein, wobei dieser zweiwertige geradkettige oder verzweigte C₁-C₁₂-Alkylen-, C₂-C₁₂-Alkenylen- oder C₂-C₁₂-Alkinylenrest unterbrochen sein kann durch einen oder mehrere nicht angrenzende -O-, -S- oder -N(R₈)- -Reste, wobei R₈ H oder C₁-C₄-Alkyl, C₃-C₄-Alkenyl, C₃-C₄-Alkinyl oder C₃-C₆-Cycoalkyl bedeutet, und Q bedeutet H; -CF₃; -OH; -SH; -NR₈R₈, wobei jedes R₈ gleich oder verschieden sein kann; eine Estergruppe; oder ein Phenyl, C₃-C₇-Cycloalkyl, C₅-C₇-Cycloalkenyl oder einen heterocyclischen Ring mit 5 bis 8 Ringatomen, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren von (C₁-C₆)-Alkyl, Trifluormethyl, (C₁-C₆)-Alkoxy, Trifluormethoxy, (C₁-C₆)-Alkylthio, Phenyl, Benzyl, Phenoxy, (C₃-C₈)-Cycloalkyl, Hydroxy, Mercapto, Amino, Fluor, Chlor, Brom, Cyano, Nitro, Oxo, -COOH, -SO₂OH, -CONH₂, SO₂NH₂, -COR^A, -COOR^A, -SO₂OR^A, -NHCOR^A, -NHSO₂R^A, -CONHR^A, -SO₂NNR^A, -NHR^A, -NR^AR^B, -CONR^AR^B oder -SO₂NR^AR^B, wobei R^A und R^B unabhängig voneinander eine (C₁-C₆)-Alkylgruppe sind, und in dem Fall, dass "substituiert" substituiert durch (C₃-C₈)-Cycloalkyl, Phenyl, Benzyl oder Phenoxy bedeutet, kann der Ring davon selbst gegebenenfalls mit beliebigen der vorstehenden, außer (C₃-C₈)-Cycloalkyl, Phenyl, Benzyl oder Phenoxy substituiert sein; und R₇ bedeutet H oder C₁-C₆-Alkyl; oder R₆ und R₇ bilden zusammen mit dem Atom oder den Atomen, an das bzw. die sie gebunden sind, einen heterocyclischen Ring mit 5 bis 8 Ringatomen, wobei dieser Ring gegebenenfalls substituiert sein kann mit einem oder mehreren von (C₁-C₆)-Alkyl, Trifluormethyl, (C₁-C₆)-Alkoxy, Trifluormethoxy, (C₁-C₆)-Alkylthio, Phenyl, Benzyl, Phenoxy, (C₃-C₈)-Cycloalkyl, Hydroxy, Mercapto, Amino, Fluor, Chlor, Brom, Cyano, Nitro, Oxo, -COOH, SO₂OH, -CONH₂, -SO₂NH₂, -COR^A, -COOR^A, -SO₂OR^A, -NHCOR^A, -NHSO₂R^A, -CONHR^A, -SO₂NHR^A, -NHR^A, -NR^AR^B, -CONR^AR^B oder -SO₂NR^AR^B, wobei R^A und R^B unabhängig voneinander eine (C₁-C₆)-Alkylgruppe sind, und in dem Fall, dass "substituiert" substituiert durch (C₃-C₈)-Cycloalkyl, Phenyl, Benzyl oder Phenoxy bedeutet, kann der Ring davon selbst gegebenenfalls mit beliebigen der vorstehenden, außer (C₃-C₈)-Cycloalkyl, Phenyl, Benzyl oder Phenoxy substituiert sein.
Verbindung wie in Anspruch 1 beansprucht, wobei R₁ H, F, Cl, Methyl oder Methoxy ist.
Verbindung wie in Anspruch 1 oder Anspruch 2 beansprucht, wobei R₂ H, Methyl, Methoxy, Cyclopropyl, Phenyl, oder Fluor-, Chlor-, Methyl- oder Methoxy-substituiertes Phenyl ist.
Verbindung wie in einem der vorangehenden Ansprüche beansprucht, wobei R₃ H, F, Cl, Methyl oder Methoxy ist.
Verbindung wie in einem der vorangehenden Ansprüche beansprucht, wobei Y -O- -S- oder -N(R₅)- ist, wobei R₅ H oder Methyl bedeutet.
Verbindung wie in einem der vorangehenden Ansprüche beansprucht, wobei X eine Bindung oder ein -CH₂- oder -CH₂CH₂- -Rest ist.
Verbindung wie in einem der vorangehenden Ansprüche beansprucht, wobei R₄ -C(=O)NHR₆ bedeutet, wobei R₆ ein Rest der Formel -Alk_b-Q ist, wobei b 1 ist und Alk ein -(CH₂)_n-, -CH((CH₂)_mCH₃)(CH₂)_n-, -CH((CH₂)_mCH₃)((CH)_pCH₃)(CH₂)_n-, -(CH₂)_n-O-(CH₂)_m-, oder -(CH₂)_n-O-(CH₂)_n-O-(CH₂)_m- -Rest ist, wobei n 1, 2, 3 oder 4 ist und m und p unabhängig voneinander 0, 1, 2, 3 oder 4 sind, und Q H, -OH, -COOCH₃, Phenyl, Cyclopropyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl, Pyridyl, Furyl, Thienyl oder Oxazolyl bedeutet
Verbindung wie in Anspruch 1 beansprucht, wobei R, H, F oder Cl ist; R₂ H ist; R₃ H, F oder Cl ist; Y -NH- ist; X eine Bindung ist; und R₄ -C(=O)NHR₆ bedeutet, wobei: R₆ ein Rest der Formel -Alk_b-Q ist, wobei b 1 ist und Alk ein -(CH₂)_n-, -CH((CH₂)_mCH₃)(CH₂)_n-, -CH((CH₂)_mCH₃)(CH₂)_pCH₂)_n-, -(CH₂)_n-O-(CH)_m- oder -(CH₂)_n-O-(CH₂)_n-O-(CH₂)_m- -Rest ist, wobei n 1, 2, 3 oder 4 ist und m und p unabhängig voneinander 0, 1, 2, 3 oder 4 sind, und Q H, -OH, -COOCH₃, Phenyl, Cyclopropyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl, Pyridyl, Furyl, Thienyl oder Oxazolyl bedeutet.
Verbindung wie in Anspruch 1 beansprucht, wobei R₁ F ist, R₂ H oder Cyclopropyl ist, R₃ H ist, X eine Bindung ist und R₄ -C(=O)NHR₆ ist
N-(3-Dimethylaminopropyl)-4-(4-cyclopropyl-3-oxo-3,5-dihydro-pyrazolo[4,3-c]chinolin-2-yl]-benzamid oder ein pharmazeutisch oder tierärztlich annehmbares Salz davon.
Verbindung wie in einem der Ansprüche 1 bis 10 beansprucht zur Verwendung bei der Behandlung von Zuständen bzw. Leiden, die von einer Immunmodulation profitieren.
Verwendung einer Verbindung wie in einem der Ansprüche 1 bis 10 beansprucht bei der Herstellung eines Medikaments für die Behandlung von Zuständen bzw. Leiden, die von einer Immunmodulation profitieren.
Pharmazeutische oder tierärztliche Zusammensetzung, umfassend eine Verbindung wie in einem der Ansprüche 1 bis 10 beansprucht, zusammen mit einem pharmazeutisch oder tierärztlich annehmbaren Exzipiens oder Träger.